TW381079B

TW381079B - Biaryl acetylenes as inhibitors of matrix metalloproteases

Info

Publication number: TW381079B
Application number: TW086106283A
Authority: TW
Inventors: Brian R Dixon; Jin-Shan Chen
Original assignee: Bayer Ag
Priority date: 1996-05-15
Filing date: 1997-05-12
Publication date: 2000-02-01
Also published as: EP0912496A1; CN1139570C; CO5080759A1; CN1225623A; CA2253796A1; SV1997000035A; AR007097A1; PA8429301A1; HRP970245A2; WO1997043245A1; HRP970245B1; JP3090957B2; ID16910A; BR9709077A; YU18697A; CA2253796C; TNSN97084A1; AU2938697A; JPH11511179A; HN1997000088A

Description

第861 〇6283號專利申請案中文説明書修正頁(87年11月）五、發明説明（i ) A7 B7 87. ίί.[ 經濟部中央標準局員工消費合作社印？私 _背景發明範圍本發明係關於酶抑制南i 甘❻ ^ ’更特足地説’是關於用於抑制基免金屬蛋白酶的新穎的本、、）0 W方基乙炔的化合物或其衍生物。相關技藝説明基θ至屬蛋白酶（a_k’a.基質金屬内切蛋白酶，或稱MMps) 是鋅内切蛋白酶系，包括，但不限於，間質膠原酶 ah.MMPM)，溶基質素（a k a蛋白聚糖酶，蠢素職⑻ 或MMP :) ’明膠酶A(a.k‘a. 72 kDa_明膠酶或:ΜΜρ·2)及明膠酶B(a.k_a. 9:> kDa-明膠酶或ΜΜρ_9)。此等MMps係由各種細胞，包括纖维細胞及敕骨細胞，與稱作打^11>5(金屬白酶的組織抑制劑）的天然蛋白質性質的抑制劑一起分泌來。所有此等MMPs都能破壞關節軟骨或基底膜的結缔組織叫分。每一種MMP都是以非活性的酶原形式分y出，在發揮其蛋白質分解活性前必須先行裂解。除了其基;質破壞作外，有些MMP，如MMP-3，曾被指出關連於作爲其〜 MMPs(如MMP-1及MMP-9)的活體内激活劑（It〇, et al，Arch Biochem. Biophys. 267., 21 1, 1988 ； Ogata, et al., J. Biol Chem. 2 67, 358 1，1 992) 3所以過量的MMP-3可i激發一連串的蛋白質分解活動。因之，特定的MMP·3抑制_應能限希其他不直接受此抑制劑作用的MMPs的活動。也有人報告，MMP·3能分裂，因而使其他蛋白酶，如召蛋出成他 ---------< ’衣-- (讀先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 訂本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐）第861 〇6283號專利申請案中文説明書修正頁(87年11月）五、發明説明（i ) A7 B7 87. ίί.[ 經濟部中央標準局員工消費合作社印？私 _背景發明範圍本發明係關於酶抑制南i 甘❻ ^ ’更特足地説’是關於用於抑制基免金屬蛋白酶的新穎的本、、）0 W方基乙炔的化合物或其衍生物。相關技藝説明基θ至屬蛋白酶（a_k’a.基質金屬内切蛋白酶，或稱MMps) 是鋅内切蛋白酶系，包括，但不限於，間質膠原酶 ah.MMPM)，溶基質素（a k a蛋白聚糖酶，蠢素職⑻ 或MMP :) ’明膠酶A(a.k‘a. 72 kDa_明膠酶或:ΜΜρ·2)及明膠酶B(a.k_a. 9:> kDa-明膠酶或ΜΜρ_9)。此等MMps係由各種細胞，包括纖维細胞及敕骨細胞，與稱作打^11>5(金屬白酶的組織抑制劑）的天然蛋白質性質的抑制劑一起分泌來。所有此等MMPs都能破壞關節軟骨或基底膜的結缔組織叫分。每一種MMP都是以非活性的酶原形式分y出，在發揮其蛋白質分解活性前必須先行裂解。除了其基;質破壞作外，有些MMP，如MMP-3，曾被指出關連於作爲其〜 MMPs(如MMP-1及MMP-9)的活體内激活劑（It〇, et al，Arch Biochem. Biophys. 267., 21 1, 1988 ； Ogata, et al., J. Biol Chem. 2 67, 358 1，1 992) 3所以過量的MMP-3可i激發一連串的蛋白質分解活動。因之，特定的MMP·3抑制_應能限希其他不直接受此抑制劑作用的MMPs的活動。也有人報告，MMP·3能分裂，因而使其他蛋白酶，如召蛋出成他 ---------< ’衣-- (讀先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 訂本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐）第S61 〇6283號專利申請案中文説明書修正頁(S7年11月） A7 B7

五、發明説明（ 18

R2 0 RJ { Η I Ί "N-C^N—R R2 Ο l II n ~N-C-〇R3 Ό (Rl)u R2 > , N-R2 以及對應的雜芳基，其中含芳基的R7基團土）個N，0，或S雜原子。於.r7基團中 S ; R1之定義如上述’^0，1，或2，先決是 /~^CR)U —N Y V_/ 或 ..R2 N R1 R2 0 —N-C-R2

含4 - 9個碳及，Y代表0或條件是在R7 及A單位是苯基，B單位是伸基，m是1，[ι是2及t爲0 時，則X是1或2。 1 3)-(CH2)vZR8，其中v是1至4的整數，：ζ代表_ -S(O)- ’ -S02- ’或-0-，及R8係選自包括1至12個碳的燒基，6至10個竣的芳基，含4-9個後及至少一個N， (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 訂 j 經濟部中央標李局員工消費合作社印製 0，或S雜原子的雜芳基；芳基烷基，其中芳 1 2個碳而烷基部分含1 - 4個碳；雜芳基烷基基部分含6 - 1 2個碳及至少一個N，0，或S雜原子，而烷基部分含1 - 4個碳；-C(0)R9，其中R9代表2至6個碳的烷基，芳基爲6至10個碳的，含4-9個碳及至 ◦，或S雜原子的雜芳基；及芳基烷基，其中 6-10個破或是含4-9個碳及至少一個N，0，基郅分含6 -，其中雜芳少一個N，芳基部分含或S雜原子的雜芳基，而烷基部分含丨至4個碳，先決條件是在R8是- -21 本紙張尺度適用中國國家標隼（CNS ) A4規格（210X297公瘦〉五、發明説明（2 ) A7 B7 性蛋白酶，的内生性抑制劑不被活化（Winyard, et al.，；FEBS Letts, 1, 91, 1"1)。是以MMP-3抑制劑土藉其改變内生性抑制劑含量而影響其他破壞性蛋白酶的活性一般認爲有些疾病係由過量的或不需要的基質破壞性金屬蛋白酶活性所引起，或由MMPs與TIMPs的比如不平衡所引起。此等疾病包括：a)骨性關節炎（Woessner, et al·, J. Biol. Chem., 259(6). 3633, 1984 ; Phadke Rheumatol. 10, 852, 1983)，b)類風濕關節炎（M Biochim. Biophys. Acta 695. 117，1983 ; Wo Arthritis Rheum. 20., 1231, 1977 ; Gravallese, et Rheum. 11，1076, 1991)，c)化膿性關節炎（Wii et al., J. ullins, et al.， olley, et al., al., Arthritis liams, et al.,

Arthritis Rheum. 11, 533，1990)，d)腫瘤轉移（Reich, et al.，

Cancer Res., 48., 3307, 1988, and Matrisian, et al., Proc.

Nat'l. Acad. Sci., USA 83. 9413, 1986) ’ e)牙周病（Overall, et al., J. Periodontal Res. 22., 81, 1987)，f)角膜漬 al., Invest. Opthalmol ； Vis. Sci. 3_0, 1569, 1989 瘍·（Burns，et hf)蛋白尿 (Baricos, et al., Biochem. J. 254. 609，1988)，h)由粥狀動脈 ------------f I裝-- (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 訂經濟部中央標準局員工消費合作社印製硬化斑破裂引起的冠狀動脈栓塞（Henney， Mat'l ； . Acad, Sci. USA U, 8154-8158, 1991) > et al., Proc. i)動脈瘤性主動脈疾病（Vine, et al.，Clin· Sci, 81, 233，1991)，.j)生育控制（Woessner, et al., Steroids 54., 491, 1989)， k)營養不良性表皮鬆弛大疱（Kronberger，et al·, Invest. E，ermatol_ 79, 208, 1982)，及1)關節受傷後發生的退行性軟骨致發炎反應的疾病，由MMP活性引起的骨質減損失，m)導少，η)顧頷 -5 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) Α4規格（210Χ297公釐）罘跖1〇6283號專利申請案中文説明書修正頁(87年11月） A7 B7 五'發明説明（ 19

C(0)R9時，z 是-S-或;在 Z 是-〇_ 時 (CqH2q〇)rR5，及在A單位是苯基，B單位是 1，η是2，及v是0時，則X是1或2 ;及 14)-(CH2)wSiR103，其中w是1至3的整數，又ί0代表ί至2 個唉的娱:基。此外，任何Τ或R6基團的芳基或雜芳基部分可視需要帶有達二個的取代基，此等取代基選自包括： -(CH2)yC(Ru)(R12)〇H ， -(CH2)yORn ， -(CH2)ySRn ， -(CH2)yS(0)Rn » -(CH2)yS(0)2Ru » -(CH2)yi502N(Rn) '(C H 2 )yN(R'*)2 » -(C H2 )yN(R'!)C0R12 ? -〇C(R R8也可是-ί申苯基，m是 )2〇_ 2 7 其中 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁)

個氧原子都是聯於芳基環上，_(CH2；)yC〇R 11 -(CH2)yCON(R")2，-(CH2)yC02R"，-(CH2)yd 素，-CH0，-CF3，-N〇2，-CN，及-R12，其中 y 代衣H或1 - 4個碳的娱》基；及R 1 2代表1 _ 4個竣的燒基於通式（L)中’ G代表-P〇3H2，-M， 11 COR11，-卣是0-4 ; R11

?t(l —C-NjM

訂經濟部中央標準局員工消費合作社印製及R13代表側鏈= 也在本發明且幸文佳是幾其中 M 代表- CO2H，-CON(Rn)2，或_c〇2R12 : 天然出現於胺基酸上的1 9個非環形側鏈的任— 此等屬於通式（L)化合物的醫藥上可接受的璧範圍内= G單位最佳是於D單位的召碳上聯於e單位， 22- 本紙法尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X 297公缝五、發明説明（3 A7 B7 ry, et al., J. 經濟部中央標準局員工消費合作社印製

關節疾病，Ο)神經系統脱髓鞘疾病（chan Neurochem. 50., 688, 1988)。關節疾病尤需新的治療。骨性關節炎（OA) 炎（RA)及化膿性關節炎的初發性官能病變即+關節軟骨損失因而失去關節功能所致。雖則非類固醇藥物（NSAIDs)能控制疼痛和腫脹，現在尚沒有明顯的醫藥劑能預防或減緩此種軟骨損失。此等疾病的最後結果是完全失去關節功能，只能藉關節置換手術治療。MMP抑制劑期望能停止或倒轉軟骨損失的進行，避免或延緩外科干擾。在腫瘤轉移過程的幾個階段中蛋白酶是重要因素。於此過程中，基底膜結構性蛋白質的蛋白酶分解降解使原發部位的腫瘤得以擴散，由原發部位侵入第二部位瘤所致的血管生成是腫瘤生長所需，也有賴於織的再塑。以各種類型的蛋白酶作交叉感染實驗，顯示基質金屬蛋白酶，特別是明膠酶A及B (分別Λ MMP - 2及 ΜΜΡ-9)在此過程中扮演主要角色。有關此方面的參考見： Mullins, et al., Biochim. Biophys. Acta 695. 177 et al., Eur. Respir. J. 7, 2062, 1994 ： Birkedal-H Crit. Rev. Oral Biol. Med.生，197, 1993。此外，實驗（Moses, et al., Science 248, 140_, 1990)還顯示，以天然的基質金屬蛋白酶抑制劑TIMP-2( 對細胞外基質降解的抑制可停止癌的生長（DeC 類風濕關節。而且，腫蛋白酶解組 ,1983 ； Ray. ansen, et al., -種蛋白質） lerck, et al.,

Cancer Res. 52, 701, 1992)，並且顯示，TIMP-2抑制腫瘤引起的血管生成。參考：DeClerck, et al., Ann. N. Y. Acad. Sci. -1 I ll u Ί - —1- - - i 1^11 n I (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 訂 -6 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐）第86106283號專利申請案中文說明書修正頁(87年11月） A7 B7 五 '發明説明（24 ) 芳基部分含6-1〇個碳；6-10個碳的芳惠 _C02r3 ; _CON(R2)2 ; -(CH2)tR7，其中丈是數；及-(CH2)vZR8，其中V是〇或；1_3的整數或-0-，R1，R7，及R8之定義如前述。較佳的通式（L)化合物，其中—或多個取代及非螺旋壤之形成’有如下構造之E單位. COR/ ; 〕或1 - 4的整而Z代表-S 基R6基團灰 I-

(Hj^Rs.C) \ (H (CRe.H,Jd- -(CRe6H,J. I- (H^R%C) * \ tH^RebC>-

(CR

-iCR'K 、(C,H 以 / i七）經濟部中央標準局員工消費合作社印製 (,CRe.H2_Jd一I \ -—其中 a，b，c，d，（c + d)，e，g，i，k，R U，及R14之定義如前述。取代基T基團較佳是含乙炔的基，有如下的g式 R3〇(CH2)n.C ^C- 此處η，是1 - 4，R30係選自包括：|"10-，1^0-CH3C02-，CH3CH2OC〇2-，H02C-，〇HC-，Ph|·，3-HO-Ph-及PhCH20-，先決條件是在R3Q是Ph或3-H0-Ph時，n，= 0 最佳是，T 是 MeOCH2C = C-，（ τ; -Pr)2NCH2C 兰 C-， CH3C02CH2C = C- ^ Et0C02CH2C = C- » H0CH2C = C-ΗΟ((：Η2；)2(： = (：_，(：Η3(：〇2(：(：ίί2)2(： = (：_，HC^CiCE^hCEC-， OHC(CH2)3C = C- ^ HO(CH2)4C = C- » PhC = C- -27- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐）基囷總數 (n-Pr)2N-，

3-HO-PhC 一私 . 訂------J (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 五、發明説明（4 ) A7 B7 732. 222, 1994。並且進一步顯示，於裸鼠，杜腹腔内給予合成的基質金屬蛋白酶抑制劑巴提瑪斯（batimastat)時，抑制人結腸腫瘤的生長及原位擴散（\\^叫.6131.，€&1^61：^8· M, 4726, 1994)，並延長帶有人卵巢癌移植物约鼠的存活期 (Davies et al., Cancer Res. 53., 2087, 1993)。有關此化合物及相關化合物的使用見Brown, et al., WO-932H42 A2。有幾個專利及專利申請聲稱金屬蛋白酶抑制劑在滯緩腫瘤轉移、促使腫瘤退縮、抑制腫瘤細胞繁殖減緩或預防骨性關節炎所致的軟骨損失上的用途，或治療上述其他疾病上的用途（例如，Levy，et al.，WO-9519965

Al ； Beckett, et al., WO-9519956 Al ； Beckett, et al., WO-9519957 Al ； Beckett, et al·，WO-9519961 Al ; Brown, et ?丄 wr»-Q321942 A2 ； crimmin, et al., WO-9421625 Al ； Dickeni, et al., U.S. Pat. No. 4,599,361 ； Hughes, et al., U.S. Pat. No. 5,190,937 ; Broadhurst, et al” EP 574758 Al ; Ero只Hh'”rst, et al·, EP 276436 ; and Myers, et al., EP 520573 Al)。此等專利較佳的化合物有一肽架（backbone)，其一端有鋅複合基團 (異羥肟酸，硫醇，羧酸或以亞磷爲基礎的酸）支鏈，這都是見於天然胺基酸的，並有新穎官 ---------^ 1¾衣------1T------^ (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 ^並有各種能基團。此類小肽常不易吸收，經口給予時生物利用率較低。而且這些化合物都是很快蛋白酶甲代謝的，是以其半舉例説，如巴提瑪斯（batimastat)，Brown, 9321942 A2所述的化合物，只能作腹腔内給予有些3 -二苯醯'基丙酸及4 -二芳醯基丁酸在文衰期很短。 et al., WO- 獻中稱爲抗 -7 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐）經濟部中央標準局員工消費合作社印製五、發明説明（5 ) 發炎劑，抗血小板凝固劑，抗炎劑，抗增生劑，柷風濕劑，止痛劑，及降血膽固醇劑·。對MMP的抑制，供作上述治療。有些有關的液體晶體的中間體。特別是，Tomcufcik, et al.，US、Pat. No. 3,7 定的經取代的苯甲醯基丙酸用於治療發炎與批合物包括下面所示的3·二苯醯基-丙酸（ (fenbufen)) °

分布芬劑，降血脂一例曾述及 φ合物也用作無斗4,701聲稱特痛。此等化斗.k.a.芬布芬

Child, et al., J. Pharm. Sci., 66., 466，1977説明芬類以物的構造與活性間的關係。此等化合物環經取代的化合物或丙酸部分以苯基、南素、取代的化合物，或羧酸或羰基官.能基團轉化而合物。但並未述及含4 '-經取代的二苯基及經取分同時出現於一分子内的化合物。其説明中物XLIX及LXXVII)及曱基（化合物XLVII)取代的活性的。了幾種芬布包括二苯基巍基或甲基 ^的各種化代的丙酸部爲苯基（化合化合物是非 -------------41¾衣------1T------^ (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 8 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（21〇 X 297公釐）經濟部中央標準局員工消費合作社印製

1.1-------.-41 裝------訂------z' (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 五、發明説明（7 ) A7 B7 經濟部中央標準局員工消費合作社印製

^n. - In 1 I - - 1— I - - (. I n^— (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁)

、1T 五、發明説明（8 ) A7 B7 其中R 1是1 -1 0個碳的烷基。 Thyes, et al·，DE Pat. No. 2854475使用如·下的化合物作爲中間體。二苯基是未經取代的。

Sammour, et al., Egypt. J. Chem. 1^., 311, 197 et al‘，Bull. Soc. Chim. 么 3196, 1971説明- 基取代的二苯醯苯丙酸。二苯基無一是經取代 2 及 Couquelet, -些二烷基胺的0 ------------^ I 裝-- (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁)

0H

、1T 經濟部中央標準局員工消費合作社印製其中R1，R2 =烷基，苄基，Η，或與氮共同成_嗎啉基還有人揭示一系列含二苯基的羧酸，可以如下化合物説明，此等化合物抑制神經内切肽酶（ΝΕΡ24.11]|，爲束缚於膜上的鋅金屬蛋白酶（818111：011，€1&1.,6丨00巧· Lett. 4, 539, 1994 ； Lombaert, et al., Bioorg. Lett. 4, 2715, 1994 ; Lombaert, et al.? Bioorg. Lett.芝，145，1995 ; Lombaert，et al·, Bioorg. Lett. Ul，1995) 〇〇

Med. Chem. Med. Chem. Med. Chem. Med. Chem. J :

〇 II Ph〇 — P、 PhO

^\^C〇2H

本紙張尺度適用中國國家標準（CNS )'A4規格（210X297公釐） A7 B7 五、發明説明（9 ) 衍生物，以 72kDA明膠酶 -9529689)。有人報告含二苯基乙基甘胺酸的Ν·羧基烷| 下不化合物説明，爲溶基質素（ΜΜρ_3)· (ΜΜΡ-2)及膠原酶的抑制劑（Durene，et幻，w〇

CH3 此種化合物 MP活性引起節炎，化膿經濟部中央標準局貝工消費合作社印製現在需要一種有效的MMP抑制劑，此抑制劑與前此技藝已有的以肽爲基礎的化合物相比，有較好的^物利用率及生物安定性，並適於姆抗特定的MMPs目標。爲本發明的目的。有效的MMP抑制劑的開發會提供對由過量μ 的疾病的新治療，包括骨性關節炎，類風濕軺性關節炎，腫瘤轉移，牙週病，角膜潰瘍，及蛋白尿。文獻中曾説明幾種MMPs抑制劑，包括硫醇^682&111；，6131.，1· Med. Chem. 11，4030, 1993)，異羥肪酸（Wahl, etal., Bioorg. Med. Chem. Lett. 5., 349, 1995 ； Conway, et al., J. Exp. Med. 182. 449, 1995 ； Porter, et al., Bioorg. Med. Cliem. Lett. 4, 2741, 1994 ； Tomczuk, et al., Bioorg. Med. Cliem. Lett. 5., 12- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4规格（210X297公釐） A7 B7 五、發明説明（10 y 27, 4299, 1988)。但此等抑制劑一般含有肽支架，由於咮收不佳及快速蛋白酶解所致的半衰期短的關係，其經口生物活性較低。是以需要一種改良的MMP抑制劑本發明概述本發明提供有基質金屬蛋白酶抑制活性的1合物。此等化合物可用於抑制基質金屬蛋白酶，所以可治療由MMP's 引起的疾病。因之，本發明也提供治療此類4病的醫藥组合物及方法經濟部中央榡率局員工消費合作衽印製 343, 1995 ; Castelhano, et al., Bioorg. Med. Chem. Lett, i, 1415，1995)，以亞鱗爲基礎的酸（Bird, et al.，I. Med. Chem. 37., 158, 1994 ； Morphy, et al., Bioorg. Med. Chem. Lett. 4, 2747, 1994 ; Kortylewicz, et al., J. Med. Cliem. 33., 263, 1990) ’ 及幾酸（Chapman, et al., J· Med. ch«:m. 36., 4293, 1993 ； Brown et al., J. Med. Chem. 37, 674, 1<»94 ； Morphy, et al., Bioorg. Med. Chem. Lett. 4, 2747, 1994 ； Stack, et al., Arch. Biochem. Biophys. 287. 240,1991 ； Ye, et al., J. Med. Chem. 37., 206, 1994 ； Crobelny, et al., Biochemistry 24, 6145, 1985 ； Mookhtiar, et al., Biochemistry 所述化合物係關於治療哺乳動物的方法，其包括給予哺乳動物以基質金屬蛋白酶抑制量的本發明化合物足以性關節炎，脈病，營養病，由MMP 系統脱髓鞠 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) a)減輕骨性關節炎，類風濕關節炎，化臈牙週病，角膜潰療，蛋白尿，動脈瘤性主動不良性上皮鬆·弛，大疱，導致發炎反應的疾活性引起的骨質減少，顳頷關節疾病，神經 13- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐）五、發明説明（11 ) 疾病 A7 B7 經 b) 阻止腫瘤轉移或關節受傷後發生^退行性軟骨損 c) 降低由粥狀動脈硬化斑破裂引起的冠狀動脈栓塞或 d) 控制生育力。本發明化合物也是供活體内及活體外研究^質金屬蛋白酶的功能及作用機轉的有用的科學研究工具抑制活性，此等化合物可用於調整MMp作用㈣人員觀察研究中的實驗系統中MMP活性減少所發生的響。本發明係關於有基質金屬蛋白酶抑制活性化合物下的通式： τ ΤχΑ-Β-D-E-G 於上述通式α)中，τχΑ代表經取代的或未纪取代的芳香族6-員環或含1-2個獨立選自Ν，〇族5 - 6員環。Τ代表經取代的乙炔基於通式（L)中，Β代表芳香族6_員環或含有卜失。由於其MMP 由而使研究如或S的原子的雜芳香請先閱讀背之注

I t 裝訂中央標準局員工消費合作杜印製弋 c Β；， ' " 0 1 [ 2 個 Ν，0，==芳香族Η員環。稱爲Β環❹單位。在Β環上，- …ν —> ^ J3 早有Ν與S或〇時，此等雜原子以至少—個碳原子於通式（L)中，D代表隔離 C = 〇

C=NOH C=S

C .Η

OH 1-------- -14- '度侧中國國家轉（CNS )八4祕（21GX297公釐）五、發明説明（12 A7 B7 於通式（L)中，E代表η個碳原予鏈，帶杏m個取代基 R6,其中R6是獨立的取代基，或形成螺旋·或泎螺旋環。各個可以一種方式形成：a)二個R 6基團相聯，與此二個R 6基團相聯的鏈原子及任何插入的鏈原子形成3_7 一個R6基團聯於此R6基團相聯處聯於鏈上，聯的鏈原子及任何插入的鏈原子形成3_7員的環。鏈上鏈原子的數m是2或3，R6取代基的數爲1—3的^數。r6基團的總碳數至少爲2。每一 R6基團是燒基，晞基，块基，雜芳基及視需要以一或多個下述的雜原子取代的雜午香環。於通式（L)中’ E是視需要由一或多個雜原子經取代的單_或二雙環基。於通式（L)中，G代表-Ρ03Η2，-M，員的環；或b ) 與R6基團相非芳•香環 (請先聞讀背面之注意事項再填寫本頁) γ丨裝· 訂 -C-N-C-M Η

R 13 •HM ,或

經濟部中央標準局員工消費合作社印製其中 Μ代表-C02H，-CON(Rn)2，或-C02R12，然出現於胺基酸上的19種非環形支鏈。本發明最佳的化合物是：

〇 R16 R -C=C

及R13代表天其中 R15 是選自：HOCH2，MeOCH2，（n CH3C02CH2 » Et0C02CH2 ^ HO(CH2)2 , CH3(b〇2(CH2)2

Pr)2NCH2 -15- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐）五、發明説明（13 ) A7 B7 H02C(CH2)2，OHC(CH2)3，HO(CH2)4Ph，i-H〇-Ph，及 PhCH2OCH2 ;及R16是 .Ph 或

經濟部中央標準局員工消費合作社印製此等化合物醫藥上可接受的鹽也屬於本發明前此技藝中關係最近的參考化合物中，分子中的聯苯基部分是未經取代的’而丙酸或丁酸部分是未經取代的或有一個甲基或苯基。曾有人報告，有較大的苯基出現時或此动此技藝化合物不具抗炎止痛活性。見，例如，Child，e. al·，J. Pharm. Sci.妓，466 (1977)。相反的，現已發現，展現有效的MMP抑制活性的化合物於分子之丙酸或丁酸部分 * 含的取代基很大。此最佳MMP抑制劑之聯苯基部分較佳於 4 W立也含取代基，雖則當丙酸或丁睃部分作適宜的取代時，本發明未經取代的聯苯基化合物仍有足夠的活性認作是票物候選者。前述説明只是總結本發明的特定方面，絕非不可理解爲，對本發明的限制。此説明中所引利及其他公告全文於此一併附上供參考。較佳具體實施例説明更特定地説，本發明化合物是有基質金屬蛋性的物質，有如下的通式：

ΤχΑ-Β-D-E-G 16- 本紙張尺度適用中國國家標準&叫从麟（2!〇><297公着）範圍内意爲，也衾用的所有4 白酶抑制

(I m- —JT· - I n- —Bn (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) -*° 4 A7 B7 五、發明説明（14 ) 其中Tx A代表經取代的或未經取代的芳香族本團或雜芳香族基團，選自包括： ‘

T广N R

N

T T，，

Ν

N

T，、S R1 τ Λ Τχ飞〆 Τ, , - 1 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 訂其中R1代表Η或1-3個碳的烷基。於整個本説明中，在所示化學構造中，開4键表示此構造聯於另一基團上的點。例如 J · 經濟部中央標準局員工消費合作社印製在其R5()是時，其構造爲〇r r50

-17- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X 297公釐）五、發明説明（15 A7 B7 於此等構造中，芳香環稱爲A環或A單位，每一 T代表取代基，稱爲T基團或T單位。T是經取代的乙炔基，X是1。通式（L )中的B環是經取代的或未取代的芳+環或雜芳香 V 環’其中，任何取代基是不使分子不適合於目標酶的活性位’或擾亂A及B環相對構造以緣被傷害的基[§。此類取代基可以是基團的一邵分（m〇ieties)，如低燒基，低统氧基 CN ’ N〇2，鹵素等，但並不限於此等基圏。於通式（L)中，B代表下列芳香或雜芳香環4團之一：

R1 N-

〇 -N Λ丨 0

...... ... I —II i — -1 ‘：： —ί I ^ I I I - (請先閲讀背面之注意事囔再填寫本頁； 0

N R1 -11*

•0 Ν

R1 Ν

0 Ν

Ν R1

Rl J : 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 •Ν Ν=^\又Ν、 Ν

Ν·

Ν XT

λΤ Ν· .Ν

、νΝ

Xr 其中R之疋義如上述。此等環稱爲Β環或Β單位 -18- 本紙張Α度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（21〇X2^^y

、發明説明（16 於通式（L)中，D代表如下之基團 ,C=〇

C = N〇H ,c=s Η 於通式（L)中，ε代表帶有111個取代基R6的鏈，稱爲R6基團或R6單位。R6基團是獨立&取代基，或 1個碳原子的構成螺旋會非螺旋環。此等環可以二種方式形 a)二個R6基團相聯，與此二個R6基團相聯的成·· 錢原子8及任何插入的鏈原子形成3 -7員的環；或b) —個R6基團聯於此R6 (請先聞讀背面之注意事項再填寫本頁) - Γ ι^ϋ n l· - .1. IA< I - - .1. - I I— m I .-. 經濟部中央標準局員工消費合作社印製基團相聯處聯於鏈上，與R6基團相聯的鏈原的鏈原子形成3-7員的環。鏈上碳原子的數η 取代基的數爲1_3的整數。r6基團的總碳數至每一 R6基團係獨立選自包括下述1) -1 4 )所列 1) 1 -1 0個碳原子的烷基，先決條件是，如果A單位是苯基，B單位是伸苯基，瓜是！，ns2，烷^係位於單位而言的α碳上，則x是1或2 ; 2 ) 6 - 1 〇個碳的芳基，先決條件是，如果基，B單位是伸苯基，芳基為苯基，η是2 2，則X是1或2 ; ' 3) 有4-9個碳及至少一個Ν，〇，或S雜原子 4) 芳基烷基，其中芳、基部分含6 -1 〇個碳而 1 - 8個碳； 5) 雜芳基烷基，其中雜芳基部分含4-9個碳 Ν ’ 〇或S雜原子，而燒基部分含1-8個碳；及任何插入是2或3，R6 少爲2。的取代基。 Α單位是苯，而m是1或的雜芳基；燒基部分含及至少一個、1T_ -19- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X 297公釐） A7 B7 分含碳及至少τ 五、發明説明（17 ) 6 ) 2 - 1 0個碳的締基； 7)芳基晞基’其中芳基部分含6_10個碳而晞基部 2-5個碳； 8) 雜芳基晞基，其中雜芳基部分含4_9個碳及至少—個 N，〇，或S雜原子，而烯基部分含2_5個碳 9) 2-10個碳的炔基； 10) 芳基炔基，其中芳基部分含6-10個碳$烯基部分含 2 · 5個碳； 11) 雜芳基炔基，其中雜芳基部分含4-9偃個N，〇，或S雜原子，而块基部分含2-5個破； -i ^1. 1 {請先閎讀背面之注意事項再填寫本頁} 12)- (C Η 2 )tR7，其中t是0或1-5的整數，R 如下的基團： 7是選自包括、-° 0 —N 6

一N

Ο 0 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 0 N .N Λ-R2

0 〇 -N: Ο -κ Ο /^•NR2 —Jv/ I , Ο -20- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS > Α4規格（21 ΟΧ297公釐）第S61 〇6283號專利申請案中文説明書修正頁(S7年11月） A7 B7

五、發明説明（ 18

含4 - 9個碳及，Y代表0或條件是在R7 及A單位是苯基，B單位是伸基，m是1，[ι是2及t爲0 時，則X是1或2。 1 3)-(CH2)vZR8，其中v是1至4的整數，：ζ代表_ -S(O)- ’ -S02- ’或-0-，及R8係選自包括1至12個碳的燒基，6至10個竣的芳基，含4-9個後及至少一個N， (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 訂 j 經濟部中央標李局員工消費合作社印製 0，或S雜原子的雜芳基；芳基烷基，其中芳 1 2個碳而烷基部分含1 - 4個碳；雜芳基烷基基部分含6 - 1 2個碳及至少一個N，0，或S雜原子，而烷基部分含1 - 4個碳；-C(0)R9，其中R9代表2至6個碳的烷基，芳基爲6至10個碳的，含4-9個碳及至 ◦，或S雜原子的雜芳基；及芳基烷基，其中 6-10個破或是含4-9個碳及至少一個N，0，基郅分含6 -，其中雜芳少一個N，芳基部分含或S雜原子的雜芳基，而烷基部分含丨至4個碳，先決條件是在R8是- -21 本紙張尺度適用中國國家標隼（CNS ) A4規格（210X297公瘦〉罘跖1〇6283號專利申請案中文説明書修正頁(87年11月） A7 B7 五'發明説明（ 19

?t(l —C-NjM

訂經濟部中央標準局員工消費合作社印製及R13代表側鏈= 也在本發明且幸文佳是幾其中 M 代表- CO2H，-CON(Rn)2，或_c〇2R12 : 天然出現於胺基酸上的1 9個非環形側鏈的任— 此等屬於通式（L)化合物的醫藥上可接受的璧範圍内= G單位最佳是於D單位的召碳上聯於e單位， 22- 本紙法尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X 297公缝經濟部中央棣準局員工消費合作杜印製五、發明説明（2〇 ) G單位最佳是於D單位的卢碳上聯於£單位酸基。應了解到，此處所謂，，烷基"一詞意爲直鏈、一或多環形物質。"鹵烷基"—詞音爲3 』 J心馬#为或元聲鹵素化的烷基，如-(CH2)2C1，-CF3，&_c6F13。於其一個具體實施例中，本發明係關於通式其中至少A，B單位之—及R6含有雜芳香環‘ 雜芳香環的化合物是這樣的化合物，其中雜如基是4_9個碳的5-6員的雜芳基，在環爲5_員的時含冇〇，s，或 NR 1，在裱爲6 -員的時含有N。特佳的含有雜芳香環的化合物是這樣的化合物，其中至少A&B單位之一含有嘍吩環。在A單位是遠吩環時，較佳是於2 ·位聯於B單位上且較佳是羧支鏈、環形 L)化合物，較佳的含有並於5 -位帶有取代基T。在B單位是嘍吩環時經由2 -及5 -位聯於D及A單位上。於通式（L)中，A及B環較佳分別是苯基或柃苯基，a環較佳於距聯接B環最遠處帶有τ取代基，D單基，G單位較佳是羧基於另一較佳具體實施例中，本發明係關於通式（L)化合物’於其E單位中η是2，m是1。所以此等化合物於D單位及F單位間有二個碳原子，於此二碳鏈上帶基於另一較佳具體實施例中，本發明係關於遊式（L )化合物，其中A環是經取代的或未經取代的苯基較佳是分別位較佳是羰有一個取代 B環是伸苯基，任何含由芳基的R6基的芳基部分在環上只含有碳。是 -23- 各紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） I ---------^—裝-- (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 訂 A7 經濟部中央標隼局員工消費合作社印¾ 五、發明説明（21 以此等化合物不含雜芳香環於另-較佳具體實施例中，本發明係關於“式⑹化合物，其中m是1 ’ R6獨立是取代基。此等化合物是於e單位上只含單，一取代基R 6的物質，而此取代基與壞次類中較佳的化合物有如下的式

C-ClI,CHR6CO〇H 無關。於此其中X是1，取代基T，相對於A環及B環的聯結位於A環的4-位上。此次類的對位取代基τ較佳下列基團的乙炔：Me〇CH2C三C-，（ 7； _Ργ)2Ν CH3C02CH2C = C- » Et〇C02CH2C ^ C- ^ H〇CH2C ^ C-HO(CH2)2C-C- ’ CH3C〇2(CH2)2C = C-，H02C(CH2)2C 兰 c_ OHC(CH2)3C = C- » HO(CH2)4C = c- » Phc = c-C及PhCH2OCH2C = C-。其他R 6是-(c H2 )tR7的通式（L)化合物之t爲 '較佳的R6是-(CH2)VZR8的通式（L)化合物之數，而Z爲-S-或-〇-。另外的通式（L)化合物烷基，於該烷基上含4或多個碳，以及R6是芳基坑基的通式（L)化合物，其芳基烷塞的烷基部分含2-3個碳於另一較佳具體實施例中，本發明係關於通式（L)化合物’其中E單位上取代基的爪數是2或3 ;當瓜是〗時，二個 R基團疋獨互的取代基，或共同構成螺旋環，或一個尺6基團是獨立的取代基而另一個構成螺旋環；當讯是3時，二個點而言，是是含有選自 CH2C ξ C-， —:--------r —^II (請先聞讀背面之注意事項再填寫本頁) ,11 3-HO-PhC = -5的整數。 V是1 - 4的整，其中R6是

J 24 本紙張尺度適用中國國家榡準（CNS〉A4規格（210X297公釐） Α7 Β7 五、發明説明（22 ) R6基團是獨立的取代基，一個R6基團構成一.環，或二個 R6基團構成一環而一個R6基團是獨立的取代基，或三個 R6基團是獨立的取代基。所以此次類含這樣的化合物，其中E單位是二-或三-取代的，且在爲二取代的時，由一或二個R 6基團構成的任何環是螺旋環，在爲三取代的時，R 6 基團可構成螺旋環或非螺旋環。於另一較佳具體實施例中，本發明係關於通式（L)化合物，其中E單位上取代基的„!數是；當時，R6基團構成非螺旋環；當m是2時，二個r6基團共肖構成非螺旋環，或-個是獨立的取代基而另_韻成非螺旋環。所以此次類含這樣的化合物，其中E單位蒂二個R 6取代基，且至少此等取代基彡，叭丞艾—涉及非螺旋環。

更特定説，通式（L)代表性的化合物，其中—衣 6 取代基涉及於構成非螺旋環，有如下構造的E H S、多個R (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 7— 裝. 訂經濟部中央標準局員工消費合作社印製 -25-

五、發明説明（23 I一 '(H2JRe.C) Ν〇·Η2( I- (H2-tRe·^ iH^RflbCh (H2^r\C) \ (Hi^bC)- (H2j.R".C)\ κι Β7 (CR*,H2J)i一| x Tv 〜 \ -/-(RiA s · i^y (CR'HjJa—丨 '(9^1-b) T。)1 7 (CAfleH2「山—f / ^ 严Vw -(HtJfc v iHh·* ~Y(Rl4)n -(H,.bR%Cr-C^cR9bHvb, \ ；-^~(Rh)h iCRatH2^)d- i-b) (CRe,H2J„- / (C'F^d (R14)«.及乂),i.H,.ybcr—' iH^Rebpj^

Λ IHh，. \ (Hh-. (CRebH

V I- n--]--J I 裝— 11--"―訂— —----^ (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 經濟部中央標準局員工消費合作社印製其中a是0，1，或2 ; b是0或1 ;C是0或1 ; d是是0或 1 ; e是 1-5 ; f是 1-4 ; g是3-5 ; h是2-4 是0-3 ; k是0-2 ; R6基圑的總數是〇，1，或2 S，或NR1 ;及z是1或2 ;每一 R1 4基團係獨立 1-9個碳的烷基，·芳基烷基，其中烷基部分含基部分含6 - 1 0個碳；2 - 9個碳的烯基；芳基取其中烯基部分含2-4個碳，芳基部分含6-1〇碳的块基.，·芳基取代的块基，其中块基邵分含〇戒 1 ; c + d ;1是〇-4 ; j ;0代表0，遽自包括： l|-7個碳，芳代的烯基，碳；2 - 9個 2-4個碳，侗 -26- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐）第86106283號專利申請案中文說明書修正頁(87年11月） A7 B7 五 '發明説明（24 ) 芳基部分含6-1〇個碳；6-10個碳的芳惠 _C02r3 ; _CON(R2)2 ; -(CH2)tR7，其中丈是數；及-(CH2)vZR8，其中V是〇或；1_3的整數或-0-，R1，R7，及R8之定義如前述。較佳的通式（L)化合物，其中—或多個取代及非螺旋壤之形成’有如下構造之E單位. COR/ ; 〕或1 - 4的整而Z代表-S 基R6基團灰 I-

(Hj^Rs.C) \ (H (CRe.H,Jd- -(CRe6H,J. I- (H^R%C) * \ tH^RebC>-

(CR

3-HO-PhC 一私 . 訂------J (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 經濟部中央準局員工合作社印製卜 _A7 Γ ~~~~—--~~___ Β7 ' 五、發明説明（25 ) C-及PhCH2OCH2CsC-。界足T取代基數目的下標X較佳是1或2，最 (圭是1，且當 X疋1時，Τ較佳是位於Α環的4_位上。 A環較佳是苯基或嘍吩環，最佳是苯基環。較佳是1，4·伸苯基或2,5_嘧吩環，最佶是1，4 _伸苯基。 D單位最佳是羰基。於E基團中，R6較佳是： U芳基烷基，其中芳基部分含6_10個碳，烷基部分含 1-8個碳； 2卜（CH2)tR7，其中t是0或1-5的整數，R 7是含香族殘基的亞胺醯基；或 3)-(CH2)vZR8，其中v是〇或ι_4的整數， z是S或〇，及R8是6-10個碳的芳基或芳基烷基，其中芳基部分含6 - 1 2個碳，烷基部分含4個碳。 R6基團最佳是如下的基團，其中任何芳香基彰 :佳是經取代的； 1)芳基烷基，其中芳基部分是苯基，烷基1 卩分含1 - 4個碳； 2)-(CH2)tR7，其中t是1-3的整數，及r7. LN-(1，2-荅 -二羧亞胺醯基），N-(2,3-茬-二羧亞胺越 -基），或N_ (1,8 -審-二叛亞胺酿基）；或N -苯二醯亞胺@| ί基， 3 ) - (C Η 2) v ZR8，其中v是1-3的整數，z是 :S，及R8是苯基。 -28- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） A7 、發明説明（26 更佳的通式（L)化合物由如下構造的R6單位： • Ph 或

精於此技藝者會了解，本發明化合物係以像互體異構物形式存在，此技藝都知道此種立體異構物於生物系统中一般展現不同活性。本發b月包括片·有具對mmp 有抑制活性的可能的立體異構物，不管甚麼樣的立體異構物’以及立體異構物混合物，其.中至少一種成員是具抑制活性的。本發明最佳的化合物如.下表所列： I) R/S 4、（3-控基-1-丙決基）_r_氧基-<5 基）-[1，1·-二苯基]-4-丁酸，對映體或非鏡經濟部中央標準局員工消費合作社印製 II) S-4'-(3-羥基-1_丙炔基hr-氧基· 基）-[1,1·-二苯基]-4-丁酸， III) R-4、（3-羥基-1-丙块基）-r -氧基-α 基）-[1，1· -二苯基]-4-丁酸， 4’-(3-甲氧基-1-丙炔基）-7*-氧基-« 基）-[1,1·-二苯基]-4-丁酸，厂-氧基-α - (3 -苯基丙基）-4·-.(3 -丙基-[1，1，-二苯基]-4-丁酸， 4·-[3-(乙醯氧基）-1-丙炔基]-r-氧基-丙基）-[1，1，-二苯基]-4-丁酸， VII) 4'-[3_(乙氧基羧基）氧基]-1-丙炔基] IV) V) VI) -29 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS〉Α4規格（2!0Χ297公釐） a -(3 -苯基丙 (3-苯基丙 (3-苯基丙 -(3 -苯基两 1 -己块基）_ α _(3 -苯基 --氧基-α _ —i ---il! 11^ --- - 訂---I--^ (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 五、發明説明（27 A7 B7 丁酸， -本基丙基）_ 躂濟部中夬榡隼局員W消費合作衽印製 (3-苯基丙基）-[1，1，-[1,1，_二苯基]-4 VIII) 4，-[4 -羥基-1-丁炔基]-r -氧基-Λ _(3 [1,1·-二苯基]-4-丁酸， Ιχ) 4'-[3-(乙醯氧基）-1-丙炔基]氧基丙基）-[1,1，-二苯基]-4-丁酸’ Χ) 4·-(4-羧基-1 - 丁炔基]-r -氧基-Λ _(3 [Ι,Γ-二苯基]-4-丁酸， Xl) ?*-氧基-4，-(5-氧基-1-戌炔基）-汉-(3 [1 ,1 二苯基]-4- 丁酸， ΧΙΙ) 4，·(6-羥基-1-己块基]-r-氧基-α-(3 [1,1·-二苯基]-4-丁酸， ΧΙΙΙ) 氧基-4’-(苯基乙炔基苯基二苯基]-4-丁酸及 XIV) 4'-[3-(羥基苯基）乙炔基]-r-氧基-基）-[1,1·-二苯基]-4-丁酸， XV) 1,3-二氫-1，3-二氧基-從-[2-氧基-2-[4，-[(3-苯基甲氧基）-1-丙炔基][1,1'-二苯基]-4_基)]乙基]-2H_ 異吲哚-2 - 丁酸，及 XVI) 1,3·二氫-[2-[4'-(羥基乙炔基）[1， 4_基]-2 -氧基乙基]-1 ,3 -二氧基- 2Η-異β哚_2_ 酸。 —般製備方法：本發明化合物可以已知化學反應及工序製伟。下述一般製備方法有助精於此技藝者合成此等抑制劑 -β - ( 3 -苯基 -苯基丙基）- -苯基丙基）- -苯基丙基）- 丙基）-[1，1 '_ a (3 -苯基丙 1，苯基]- 更詳細的實 (請先聞讀背面之注意事項再填寫本頁) "丨裝·

、1T -30- 五、發明説明（28 ) Α7 Β7 例見下述實驗段所述的工作例。此等方法的各種基團，如非特別説明，係以其屬名表示。各可變的下標n係於每一方法中獨立表示。當在一給予構造中可變的釭團以給予的經濟部中央標準局員工消費合作社印製符號（即R 9)作一次以上的使用時，應了解到團是可在其定義範圍内獨立變化的通法A -本發明此等化合物，其中a及Β環分別是經取代的苯基及伸苯基’可用；Friedel -Crafts反應以經取代的二苯基MII與活化的含酿基的中間體，如丁二酸或戍二酸酐衍生物ΜΙΠ或酿基氣MIV在有路易士酸催化劑，如三氣化銘，之存在下於非質子溶劑，如1，1，2,2-四氣乙烷内反應製備。週知的Friedel -Crafts反應可用多種溶劑及酸催化劑完成，如 Berliner所著〇rg. React·, 1，229，1949及Heaney 所著Comp 〇rg. Synth. 2_, 733, 1991所述。如果酐Mill是以不對稱方式作單取代或多取產物MI-A常因在二個羰基上發生不同酐聯結而合物形式存在。這樣生成的異構物可以結晶或色譜分析月此技藝所知的標準方法純化。如在市場上不能購得時，丁二酸酐Mill可用Stobbe縮合;: 以丁二酸二烷基酯與醛或酮（於測鏈R6上生成行催化氫化，將半酯中間體水解成二酸，再以酸酐轉化成酐Mill。或者以亞硫醯氯或草醯氯間體，轉化成醯基氣MIV。有關Stobbe縮合，溶劑及驗見 Johnson and Daub. Org. React.色，1 每一此等基代的，原半以異構物碎反應，然1 乙醯氣或i 處理半酯1 包括適宜< 1951。此法在使用於MIII(R6=H，異丁基及Η，正戍基）製備本紙張尺度適用中國國家標準（CNS )八4規格（2〖0Χ297公釐） -----------^ _ 裝------訂------^ (請先聞讀背面之注意事項再填寫本頁) A7 B7 五、發明説明（29 )

面見评〇131^11,61狂1.，美:國專利4,771,038所述。方法A

.MI-A-3. M1II-A n = 0-3 —^t· n^i ml. a- - ^111 —^n ^in HI a^i— 1^1 I - l^i、一 n^i m· I In (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 驗經濟部中 Jt 標準局 % 工消費合社印製

MI-A-4 方法A特別適宜用於環形化合物’如ΜΙ·Α-3 R6基團聯於亞甲基鏈形成3 -7員的環’的製備員的）只能以其順式異構物購得’生成本發明 -32 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） 0 (CHz)

^COjH

R1 ，其中二個。小環（3 - 5 順式化合物經部中央標準扃員工合作社印製 A7 B7 . 五、發明説明（3〇 ) MI-A-3。用鹼，如 DBU，THF 内處理 MI-A-3 即 Γ製得反式化合物MI-A-4。此經取代的四員環起始物奸，.丨 (αΜΙΠ-Α-l，係以如下所示光化學2 + 2反應製成。此法特另j 適用於製備 R14是乙醯氧基或乙醯氧基亞甲基的化合物。在 Friedel - Crafts反應後，醋酸根可作鹼性水解除去並轉化成2 -(三甲基矽烷基）乙基酯保護羧基。生成的有r14 = c] 12 0 Η的中間體可用其他的R1 4基以通法G所述方法轉化成物。本發明化合 °\>° + V MV 乙赌 t μπι-α-ι \14 在丁酿鏈（例如，來自馬來酸肝或1 -環戊晞 1，2 -二幾酸酐）之C-2及C-3有雙鍵或於側鏈上有雙鍵時 ’此 Friedel - Crafts法特別有用，如使用衣康酸肝作起始物質製備二個 R6基團位於一側鏈碳上共同形成外亞甲基（= 時。此等化合物之後的用途於方法D中敘述。 - Η 2 )的產物通法B ·或者，化合物MI可以一聯串反應製命丨’包括將丙二酸二烷基酯MVI以燒*基鹵素.行單烷基化 4·成中間體 .MVII，再用鹵甲基二苯基酮MVIII行烷基化，生成中間體 MIX。再用水性鹼將構造MIX化合物水解，再 -將丙二酸中間體加熱脱羧酸’生成MI-B-2(方法B - 1)。使 -用一當量的。水性鹼製得R1 2爲烷基的酯MI-B-2，使用一當量以上的鹼，製得.酸化合物（R12 = H)。有.時不加熱製靖 -33- 卜二酸或酸酯本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公瘦）

Λ發明説明（31 H)(Dezeil,

Ml-B-i 〇或者，二酯中間體MIX可用強酸，如濃鹽^，在醋酸中木封閉的管内於110°c加熱约2 4小時製得MI-E -1 (R12= η )。或者，之反應可在與烷基齒素反g之前反應，製得相同的MIX(方法B-2)。或者，可將含R 1 2 =埽丙基的二酯中間體河以乂在有吡咯咬之存在下曝露於Pd催化劑生成MI-B^R12:

Tetrahedron Lett. 28, 4371, 1990)。中間體MVn係用二苯基Mil以Friedel -Craft反應與鹵乙醯 _素，如溴乙醯溴或氣乙醯氯，反應製成。或者，二苯基可與乙醯氯或脆酸酐反應，再將生成的產物與，例如，溴反應使鹵素化，生成中間體MVIII(X=Br)。方法B的優點是能生產單一區域異構物（regi〇 is〇mers)，而万法A產生混合物。在側鏈尺6含芳香或雜芳香環時，方法B特別有用，如果用方法a，此等芳香或雜芳香環會介入分子内醯化反應，生成副產物。在鄰近終產化的R6基團含雜原子，如氧，硫，或氮時，或含能基團，如亞醯胺環時，此法也很有用。 ------------------ 1^.—— (請先聞讀背面之注意事項再填寫本頁) 訂合物的羧基更複雜的官經濟部中央標準局員工消費合作社印製 -34 本紙張尺度適财關家辟（π^ϋ：(210χ297公鲞經濟部中央標準局員工消費合作社印製

I- --------f — 裝-- (讀先閲讀背面之注意事項再填寫本頁} 五、發明説明（33

Ru0 A7 B7 然後異戊二烯基溴 12 2)03,CH2g2 然後 NaBHa, MeOH Ο Ο 3) Milsunobu -MVI 3)CBr4l or ,Ph3P 4)烷基化

通法c-特別有用的是使用對掌性HPLC分離外消旋產物混合物的對映體（見，例如，Arit，et al·; Chem. :[nt. Ed_ Engl. 11，30, 1991)。本發明化合物可用對掌性輔助途徑製成純對經濟部中央標準局員工消費合作社印製映體。見，例如，Evans, Aldrichimica Act 1982，及其他精於此技藝者所知的類似參考文通法D -化合物，其中R6是烷基-或芳基-或基-或雜芳基獄基-硫基亞甲基，係用類似WO 90/05719所述方法製備。將經取代的衣康酸酐MXVI(n=])在Friedel -Crafts條件下反應，生成酸MI-D-1，此可藉色講分析或用少量異構的MI-D-5結晶分離。或用本發明化合物ΜΙ-π-4(由方法Α至C製得）與曱醛在有鹼之存在下反應製成MI-D-5s。然後將化合物MI-D-1或MI-D-5與氫硫基衍生物MXVII或 MXVIII在有催化劑，如碳酸鉀，乙基二異丁基胺，氟化四丁基銨或游離根激發劑，如偶氮二異丁腈（AIBN)之存在下於類如二乙基曱醯胺或四氫呋喃.之溶劑内反應明化合物MI-D-2，MI-D-3，MI-D-6，或MI-D-7 a，11(2)，23, 獻。雜芳基-或酿生成本發 (請先聞讀背面之注意事項再填寫本頁) -36- 本纸張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐）經濟部中央標準局員工消費合作社印製

I-1--^------J I 裝-- (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) -β ~ί ' 五、發明説明（35 ) A7 B7 經濟部中央標準局員工消費合作社印製通法E - 聯芳基化合物，如本申請書之此類化合'物或雜芳基金屬化合物，其中金屬爲鋅；’錫，鑲砂，銅’，叙等，與芳1基雜芳基鹵素或三氟甲 Suzuki或Stille交叉偶合反應製備。與下面方程 X爲金屬，其他爲画素化物或三氟甲烷磺 Pd(com)爲赵的可溶的複合物，如氯化-肆（三苯或雙（三苯基膦）-鈀（III)。此等方法是精於此_藝者所週知的。見，例如，Suziki, Pure Appl. Chem. 63., 213, 1994 ； Suziki, Pure Appl. Chem. 63_, 419, 1991 ;及Far:.na and Roth, "Metal-Organic Chemistry" Volume 5 (Chapter 1 起始物質MXXIII(B = 1，4-伸苯基）可用類似方或D輕易製備，但用画苯代替二苯基作爲起始時，X爲鹵的物料可用此技藝週知的方法轉化爲X位金屬的物料，如用六甲基錫及鈀肆三苯基膦於曱苯内將溴中間體加熱處理，即生成三曱基錫中間體< ΜΧΧΙΙΙ(Β =雜芳基）最易由方法C製備，唯用易芳基而非用二苯基起始物質。中間體ΜΧΧΙΙ可用可購得的物料以此技藝週知的方法製備方法Ε 也可用芳基鋰，硼，燒續酸醋作式中，Met或酸醋（OTf)。基膦）-把（0) )，1994。法A，Β，C 物質。需要起始物質於講得的雜以購得也可 m· I t —^ϋ ϊί 1^. n n (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 訂 (T)XA-Met ΜΧΧΙΙ +

X-B-E-G MXXIH -►

Pd(com)

(T)XA-B-D-E-G MI-E T，x，A，B，E及G如構造（L)中之定義 Met=金.屬及X =鹵化物或三氟甲燒績酸酉旨 38- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐）經濟部中央標準局員工消費合作社印製五、發明説明（36 ) 或 Met=由化物或三氟甲烷磺酸酯及χ=金屬此等通法可用於製備此等化合物，此等； Crafts反應，如法A，B，C，或D，會導致各式的混合物。方法E也特別適用於製備這樣中芳基，A或B，含一或多個雜原子（雜芳基）呋喃，吡啶，噚唑，嘧唑，嘧啶或吡啡環等化合物。通法F_當方法F的R6基團共同形成4_7員的^ 中間體MXXV所示，可用二當量的強鹼，如鐘或六甲基梦贫基酸胺链等，除去與嗣共轆的酸停止反應，製得構造爲MXXVI的化合物。方法，以MXXVI與氫硫基衍生物反應生成環 F-1 或MI-F-2。的以备中 Friedel · 芳基醯化形化合物，其如含p塞吩，代替苯基的 n 形環時，如下異丙基醯胺雙鍵，再以類似通法D 化合物MI- ——•nn H1UI4 I 1 I—I— n I n τ 一 U3.-δ (請先聞讀背面之注意事項再填寫本頁) 39- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐）

五 '發明説明（37

方法F

經濟部中央檩準局員工消費合作社印製 I.-------1 -裝—— (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁} 訂通法G-本發明化合物，其中二個R6基團相勒成經取代的 5 -員的環，最易用方法G製得。於此法中，押Tetrahedron U，Suppl·，411，1981所述方案製得酸CII(R=3)。用偶合劑，如1-(3 -二曱基胺基丙基）-3 -乙基碳化二亞胺鹽酸鹽，使此酸以酯的形式被保護[例如，R=苄基（Bn)或2-(三基甲基矽烷基）乙基（TMSE)]，此方法是精於此技藝者週知的。經取代的溴二苯基cm再以鎂處理轉化成格雷格納試劑，再與c I反應，生成醇C VI。醇C VI經由用其曱基確酸

I ®日作驗以精於此技藝者所知方命處理後，生成烯烴。或者’將CIII於低溫（-7 8 C )以正丁基鐘使其.溴化物作原始 -40 本紙張尺度適用中國國家標隼（CNS ) A4規格（210X297公釐）經濟部中央標準局員工消費合作社印製

------I---J I 批衣-- (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 、-=5 J : A7 B7 五、發明説明（39 ) 關鍵中間體cvin之轉化成本發明目標化合物係以幾種方式完成’視側鏈官能基Z而定。以CVIII與魏惕格（Wittig)試劑反應，再行氫化生成Z是烷基或芳基烷基的產物。醛 C VIII與還原劑，如氫化參[(3_乙基_3_戊基）氧基]鋁鋰 (LTEPA)作選擇性反應生成醇CIX。此醇再於精於此技藝者週知的 Mitsunobu條件（見Mistunobu, Synthesis, 1，1981)下轉化成苯基醚或用於產生側鏈Z的各種雜原子取代的衍化物。或者，以精於此技藝者所週知的條件將^乂轉化成離去基’如甲苯續酸酯或溴化物，然後再用適宜的親核劑取代離去基。此型反應的幾種例可見於N〇rman，et ai，j Med. Chem. 12, 2552，1994。將醇CIX直接醯化即生成本發明化合物，其中Z = OAcyl，以此醇與各種烷基鹵素在有鹼之存在下反應即生成烷基醚。在任何情形下都是視R及Z的安定性用不同的方法除去酸阻斷基R以生成酸（R = H)，但在所有情形下都是用精於此技藝者所知的方法行鹼水解除去芊 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) γ—裝. 經濟部中央標準局員工消費合作社印製基，或用氟化四丁基銨處理除去2-(甲基矽烷通法Η -本發明酸的醯胺可藉在適宜的溶劑或二甲基甲醯胺，内用初級或二級胺及糅合齊碳化二亞胺處理此酸製備。此胺成分可只是烷取代的胺，也可是胺基酸衍化物，其中羧基是阻斷的而胺基是游離的。通法I-本發明化合物，其中（τ)χ是炔基或基，可根據通法I製備（Austin，J. 〇rg. Che )乙基。如二氯曱烷如二環己基基或芳基燒經取代的炔 46, 2280, 1981)。中間體MX係根據方法A，B，C，D或G以市場上 -42- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐）

J 五、發明説明（4〇 ) A7 B7

可購得的MIIRRkBr)起始製備。以MX與經取代的乙炔 MXI在有Cu(I)/鈀試劑之存在下反應，生成本發明化合物 MI-I-1。於特定情形下，r3可以是三蜣基曱妒烷基阻斷的醇。此時.，曱矽烷基可用酸，如·三氟醋酸，或HF -吡啶試劑處理除去。方法I

R3(CH2y-CSCH (Et),N~~—' Cul反式-一乳雙三苯基膦鈀 0 R3(CH2)b-C=C，

MI-I-1 本發明化合物適宜的醫藥上可接受的鹽包括與有機或無經濟部中央標準局員工消費合作社印製機鹼所成的加成鹽。由此等鹼所衍生的形成鹽是金屬離子，例如鋁，鹼金屬離子，如鈉或針金屬離子’如釣或鎮離子，或胺鹽離子、其中技藝已知的。其例包括銨鹽，芳基烷基胺如 N，N-二苄基伸乙基二胺，低烷基胺如甲基胺胺，普魯卡因，低烷基六氫吡啶如N_乙基六氫吡啶，環烷基胺如環己基胺或二環己基胺，i•金剛烷基胺， benzathine，或由胺基酸如精胺酸或賴胺酸等所此等生理上可接受的鹽，如鈉或鉀鹽及胺基酸述的醫學使用，且也是較佳的此等鹽及其他並非生理上可接受的鹽可用於下述目的.所用的產物。例如_，使用市場上可購的離子可以離子，驗土有許多是此二节基胺及，三級丁基衍生的鹽。鹽，可作下分離或純化得的對映體 43- 本纸張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210Χ297公董）經濟部中央標率局員工消費合作社印裝 9溶劑内可生 3反的對映體 ”。由於本發其對映體爲留於液體相 •量的能供應 • ’或於水性 ‘可用鹽以習〇酶 MMP-3，丨抑制，所以 -其他的前面特別是在催 IPs也有不同分上的取代的取代基會的化合物可病理情況有 MMPs。實行於展現用時，ΐ 多種醫I 及其他馬五、發明説明（41 上的純胺，如（ + )-辛可寧（cinch〇nine)於合適白成本發明化合物的單一對映體的鹽結晶，將才留於溶液内，此法即爲通常所謂的”經典解析明特定化合物的一種對映體的生理效果通常車大，此活性異構物即可以結晶方式純化出或内。此類鹽係以本發明化合物的酸的形式與, 鹼性離子的鹼在能沉澱出鹽的介質内反應製4 介貧内製備然後再凍乾。而游離態的酸的形纟用的中和技術製備，例如用硫酸氫卸，鹽酸等現已發現本發明化合物抑制基質金屬蛋白 ΜΜΡ-9及ΜΜΡ-2，並能對ΜΜΙΜ作較小程度分可用於治療或預防於背景段所述的疾病。由索未列出的MMPs與列出的MMPs有高度共同性化邵位，可以設想本發明化合物對其他的程度的抑制。現已顯示，改變分子中聯芳基_ 基，以及改變聲稱化合物上的丙酸或丁酸鏈上影響前列MMPs的相對抑制性。所以，這—類藉選擇特定的取代基加以”調整"，以使與特定關的MMP(S)的抑制得到加強，而不影響無關的治療由基質金屬蛋白酶引起的疾病的方法此疾病的哺乳動物，包括人。本發明抑制劑可使用於獸及人。作此目的使於醫藥組合物，此组合物含有活性成分及—或可接受的載劑，稀釋劑，填充劑，結合劑 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁)

-44 - A7 B7 五、發明説明（42 劑，視給予方式及劑形而定。關節内給用以取得血抑制劑的給予可以是精於此技藝者所知的_何適宜的方式。適宜的非經腸給予的例包括靜脈内给予予，皮下給予，及肌肉内給予。靜脈内給予漿内藥物濃度高峰的快速調整。藥物半衰期^改進及使藥物達於關節腔内可藉將藥物包於脂質體之助特定滑液大分子上的脂質體外面加配位體，γ改進脂質體達於關節腔的性質。或者，肌肉内、關節内、或皮下長效注射液’不管疋否將藥物包裹微球體（例如含聚（D l _丙交酯-共-乙交酯的微球體）内，可用以使藥物延長釋出。爲使劑形方便使用，可用腹腔内植入儲器及隔，如可從 Pharmacia 購得的 Percuseal system。使用注射筆（inject〇r 如由 Bioject，便並減少病投送入滑液下植入的渗經濟部中央標準局負工消費合作社印製 pens)(例如Novo pin或Q-pen)或無針的注射器（例 Mediject，或Becton Dickinson各得者）也可更方人痛苦。使用可植入的系，使藥物經由一管子腔，可準確地控制藥物的釋出。此類例包括成透泵，此泵可從ALZA購得，如ALZET滲透泵。將藥物加於生物粘性顆粒載劑内（<2〇〇微米〕素’聚丙晞酸醋或polycarbophil的生物枯性顆，如含纖維粒載劑，再同時使用合適的吸附增強劑，如磷脂質或醯基肉鹼，可作 os Nova所發經鼻投送。可購得的系統包括DanBiosys及Scl· 展出的系統。與本申請書前面背景段所述的各種肽化合物相較，本發明化合物値得注意的性質是此等化合物的經口给予活性 -45- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐）經濟部中央標準局員工消費合作社印製五、發明説明（43 特疋化合物的於各種動物模型的經口生物〇、’么口技送可藉將藥物加於鍵、塗覆的紀、糖衣錠、硬及軟明膠膠囊、溶液、乳液、或懸浮液内迷成。經口投运也可藉將藥物加於腸衣膠囊内達成，此種膠囊可使藥物釋入消化蛋白酶活性較低的結腸内。此類例 ALZA 及 Scherer Drug Delivery Systems 購 CT/Osmet™及PULSINCAP™系統。其他系統使用由結腸細菌氮還原酶降解的氮交聯聚合物，或對pH敏感的聚丙烯酸酿聚合物，此種聚合物在結腸内p Η增高時會被活化。上述系統可與各種易購得的吸收增強劑合用。經直腸投送可藉將藥加於塞劑内達成。本發明化合物可藉加各種精於此技藝者所知的治療上爲惰性的、無機的或有機的載劑製成上述的調_物。此類載劑的例包括，但不限於，乳糖，玉米澱粉或^衍生物，滑石粉，植物油，蠟，脂肪，多元醇如聚乙二糖，醇，甘油等。爲幫助調配物的穩定，或| 利用率達90· 包括分別由得的OROS- (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 丨裝· 訂醇，水，蔗幫助活性成分的生物利用率，或爲在經口給予時使調配道及氣味，調配物内也可加各種防腐劑，乳劑，矯味劑，濕潤劑，抗氧化劑，甘味劑，增劑，鹽，緩衝劑等。此醫藥組合物的使用量視蜮形劑及所治的病量可由精於此技藝者所知的方案決定。或者，的目標酶的量計算需要量，此目標酶是治療疾的。有較好的味化劑，分散色劑，安定而定。需要也可以測得病必須抑制 46- 本紙張尺度適用中國國家標隼（CNS ) Α4規格（210X 297公釐）五、發明説明（44 本發明基貝金屬蛋白西备、，每不僅可用於治療前迟的生理上的疾病，也可用於金屬Iώ 、、屬蛋白酶的純化及試驗基質金屬蛋白酶、f此種/錄試驗可用天然的或合成的酶製劑於活體外進行’也可用，例如，動物模型於活體内進行，此動物模型中可自然地發現不正常的破壞性酶（使用基㈣變的動物或基因轉移的動物）’或是給予外生性劑或以外科破壞關節穩定所致而有不正常的破壞性酶。實例下述實例只用作説明性目的，無意，也不^理解爲對本發明的限制。通法: 濃縮指使用所有反應，除非另有説明，都是於火燄乾燥的或爐乾燥的玻璃器内在氬氣的正壓下且是用磁性攪拌進行。敏感液體及溶液是用注射筒或管穿過橡皮隔引入反應器内。除非另有説明，反應產物溶液係使用Buchi減壓 Buchi迴轉蒸發器内濃縮。材料：經濟部中央標準局員工消費合作社印製二氯甲有機或有機 st saint Paul M Science，使用商業級試劑及溶劑，不進一步純化，唯乙酸及四氫呋喃（THF)—般係用二苯基酮羰游基在氬氣下^餾烷係用氫化鈣在氬氣下CaH蒸餾。多數特定的金屬起始物質及試劑係購自Aldrich，1001 We Avenue, Milwaukee, WI 53233。溶劑多是取自 E 由 VWR Scientific銷售。色譜分析: -47- 表紙張又度適用中國國家標準（CNS ) Α4規格（210X297公釐）五、發明説明（45 ) A7 B7 完成，此儀器 -254250微米線照明，（b) 分析性薄層色譜分析（TLC)係於Whatman®上有預塗覆的以玻璃爲底的二氧化矽膠60A F 板。點之目測係以如下技術之一完成：（a)紫夕曝露於碘氣下，（c)加熱將板浸入1 〇%的磷鉬酸於乙醇内的溶液中，及（d)將板浸入含有〇. 5 %的濃硫酸的3 %的對-茴香醛於乙醇内之溶液内，然後加熱。柱色譜分析係用230-400網眼的EM Science 成。分析用高效液體色譜分析（HPLC)係於1 4升/分鐘於 4.6x250毫米Microsorb®柱完成，以288毫微米監測，半製備用HPLC係以24毫升/分鐘於21.4x250毫米Micnisorb®柱上完成，以288毫微米監測。儀器：熔點（mp)以Thomas-Hoover溶點儀測定，未作質子（士）核磁共振（NMR)譜係用General OMEGA 300 (300 MHz)分光計測定，碳十三（係用 General Electric GN-OMEGA 300(75 MH 定。下述實驗中合成的多數的化合物都作NMI^分析，每一例的光譜都與設想的構造一致。氧化矽膠完校訂。 Electric GN-C) NMR 譜 z)分光計測 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁)

經濟部中央標準局員工消費合作社印I 質譜（MS)，數據係用Kratos Concept 1-H分光計以液體卸二級離子（LCIMS)(新型的快速原子撞擊（FABj取得。多數下述實例合成的化合物都用低解析質譜分析想的構造一致通論 48 - 本紙張尺度適用中國囤家標準（CNS)八4賴_ (2丨0><297公瘦）光譜都與設五、發明説明（46 於多步驟方法中，序列步驟以數字表示實例1 -化合物I之劁借

OEt 經濟部中央標準局員工消費合作社印裝步驟1 ·於乾燥的2公升圓底三頸燒-瓶上裝配攪拌棒，等壓加料漏斗，氬氣輸入口及溫度計。此燒瓶内載入氫化鈉 (8·4克95o/o的NaH;約0.33莫耳）於無水THF(700毫升）内之懸浮液’用冰水浴冷卻。由加料漏斗用2 5分鐘滴加丙二酸二乙酯（48.54克，0.30莫耳）。繼續攪拌15小時，然後經加料管用10分鐘加1-漠-3-苯基丙烷（47毫升，約61克，約〇.3〇莫耳）·於此反應混合物内加加料漏斗洗液（THf，2χ1〇毫升），繼續攪拌3 0分鐘。用回流·濃縮器及塞換及溫度計，反應物於回流加熱1 9小時。游混溫，再用冰水浴冷卻。在攪拌下緩慢加蒸餾水分離各層，水相用氣仿（100毫升）萃取。合併 10% HC1(250毫升）洗，分離出之水相再用氣仿〔1〇〇毫升）反萃取。合併之有機物用飽和NaHC〇3( 250毫升）洗，分離出之水相再用氯仿（100毫升）反萃取。將有機物乾燥 (Na2S〇4)，濃縮，製得黃色'油體，於Vigreux柱蒸餾純化。於124-138°C沸騰的部分即爲清潔 (57.21克，0.206莫耳；產出率68%)。TLC(50%己烷·二氣甲嫁）：Rf=0.32。裝加料漏斗合物冷至室 (400毫升）。之有機物用減壓（0.4拖）的所需產物 f請先聞讀背面之注意事¾再壤窝本頁j i i Λ— n^— I I w .訂· 49- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐）五、發明説明（47 ) A7 B7 0

Br 步驟2. 於1公升圓底燒瓶上裝配橡皮隔及氳氣輸入口。此燒瓶内載入市場上可購得的4:溴二苯基（5C.00克，0.215 莫耳）於二氣甲烷（1 〇〇毫升）内之溶液。用注身-筒加溴乙醯漠（21.0¾升’ 48.7克’ 0.^30莫耳），用冰水^浴冷至〇°C，同時分批加A1C13(34.3克，0.258莫耳）。由此混漸橄欖綠之反應混合物内有氣體排出。於室溫過2 4小時後物小心倒入冷飽和NaHC03水溶液内。生成之：^合物用醋酸乙酯（3 x200毫升）萃取，合併之有機層於1^2{;〇4上乾燥，濃縮，製得所需產物，.爲黃色固體，產±5率定量 TLC(30%二氯曱烷-己烷）：Rf=0 30。將反應混合經濟部中央標準局員工消費合作社印製

步骤3. 於2公升圓底三頸燒瓶上裝配磁攪拌棒，氬氣輸入口’等壓加料漏斗。此燒瓶内載入步驟1產物（63.0克， 0.227莫耳）於THF(500毫升）内之溶液。將反應器用冰水浴 -50- 本紙張尺度適用中國國家標隼（CNS >八4規格（21〇x 297公釐） (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁)

A7 B7 五、發明説明（48 ) 冷卻。同時小心分批加氫化鈉（5_40克95%的HaIi，0214莫耳）。此反應混合物於〇。(：攪拌1小時，再經由加料漏斗用約 20分鐘加步驟2產物（80.0克，0.215莫耳）於無水THF(3〇〇毫升）内之溶液。將此深橘色反應混合物於室溫在氬氣下携拌3小時。將反應器於冰水浴内冷卻，同時小心加蒸館水 (150毫升）。水相用醋酸乙酯（3>^300毫升）萃取，合併之有機相於MgS〇4上乾燥，濃縮，製得124克暗橘包油體。此物料直接用於下一操作，不必純化。内’再加於此反應混合再於室溫攪 ^ϋ). * m n^i I - -- —^ϋ (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 將橘色油體溶於400毫升1 : 1的THF :甲醇 NaOH水溶液（4當量，500毫升，2.00莫耳）内。物於室溫攪拌2 4小時，於5 0 攪拌4 8小時，訂- 摔24小時。眞空除去大部分MeOH，殘餘物用2〇〇毫升j : i 醋酸乙酯：己嫁及200毫升己燒萃取。水相用]ici酸化，用二份200毫升及三份1〇〇毫升醋酸乙酯萃取。合併之有機相於MgS〇4上乾燥，濃縮，製得定暈產出率的二酸 TLC(10%甲醇-氯仿及1 %醋酸）：Rf=〇.45。

經濟部中央標準局員工消費合作社印製内，加熱至回流2 4小時。眞空除去溶劑，將1 c 二氧化矽廢上作色譜分析（以10-50%醋酸乙酯步驟4 _ 將步骤3未純化的二酸溶於1，4 -二〃号燒（5〇〇毫升）克殘餘物於己烷，含1% 51 五、發明説明（49 醋酸作梯度洗離），製得0.840克（10%)所需產體。熔點174°C。物，爲黃色固

HOCHjCHC

經濟部中央標準局員工消費合作社印裝步驟5. 於裝有橡皮隔及氬氣輸入口的15毫升的一頸燒瓶内載入2.6毫升二乙基胺，步驟4產物（0.3 〇|)克，0.667莫耳），炔丙醇（1.0毫升，17毫莫耳），碘化鋼（ι)(〇·〇220克，〇-115莫耳），及反式-二氯雙（三苯.基膦）鈀（〇_11〇克，〇.157毫莫耳）。此混合物'於室溫攪拌4小時。將反應混合物濃縮 (290毫克殘餘物），部分殘餘物（90毫克）於50克二氧化矽膠上作色譜分析（20%醋酸乙酯-己烷，含0.5% 偶合產物，爲白色固體（0.035克，40%)偶合固固體。熔點130°C 〇實例2及實例3 -化合物II及III之製備實例2及實例3係用Chiralcel AD®柱（2公分‘ χ2 EtOH，4.75% Η20及0.095% HOAc於CH3CN内殊對掌分離至備，流速2 0毫升/分鐘。實例2 :第一次流出Chiralcel AD®柱；1 H NMR CDC13) 8.02 (d, J=8.4 Hz, 2H), 7.67 (d, J=8 7.58 (d, J=8.7 Hz, 2H), 7.53 (d, J=8.4 Hz, 2H)， 5H), 4.54 (s，2H)，3.46 (dd，ϊ=8.1，16.8 Hz，1I|)，3.14.3.02 (m，2H)，2.65 (t，J=7.2 Hz，2H), 1.64-1.84(m，4H) 蝻酸），至得體，爲白色 5公分）以5% (300 MHz， .7 Hz，2H)， 7.17-7.33 (m (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 7丨裝· ',ιτ- -52- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X 297公釐）。生成的混 A7 B7 五、發明説明（5〇 ) 實例 3 :第二次流出 Chiralcel AD®柱；1 H NMR (300 MHz， CDC13) ¢51 8.02 (d，J=8.4 Hz，2H)，7.67 (d，J=i;.7 Hz，2H)， 7.58 (d, J=8.7 Hz，2H), 7.53 (d, J=8.4 Hz，2H)，7.17-7.33 (m, 5H), 4.54 (s, 2H), 3.46 (dd, J=8.1，16.8 Hz，III)，3.14-3.02 (m，2H)，2.65 (t，J = 7.2 Hz，2H)，1.64-1.84(m, 4H)。會例6-化合物VI之製備於裝有橡皮隔及氬氣輸入口的10毫升的一_燒瓶内載入 0.5毫升p比咬，實例1 (0.0070克’ 0.014毫莫耳），及醋酸舒 (0.020毫升，22毫克，0.21毫莫耳）。此反應混合物於室

溫攪拌2小時，然後加於30毫升1當量的HC1A 合物用三份30毫升醋酸乙酯萃取，合併之有機相於MgS04 上乾燥，濃縮。用HPLC純化（2.5%醋酸乙酯-二氯甲烷，含 0.01%三氟醋酸），製得3毫克（38%)實例6產^。熔點137 〇C。實例7-化合物VII之製備於裝有橡皮隔及氬氣輸入口的15毫升的一 1|:燒瓶内載入 2毫升三乙基胺，2毫升THF，化合物1(0.〇570克，0_134毫莫耳），及乳甲酸乙醋（0.032毫升，36毫克，0.3 4毫莫耳）。此反應混合物於室溫攪拌1 6小時，然後加於5 0毫升1當量的H C1内。生成的混合物用三份5 〇毫升醋酸乙酯萃取，合併之有機相於MgS04上乾燥，濃縮。於1〇克二氧化矽膠上作柱色譜分析（40%醋酸乙酯-己烷，含〇·5% E:OAc)，再作 HPLC純化（1.5%醋酸乙酯-二氣甲烷，含〇·〇ι%三氟醋酸），製得 1 毫克（1.5%)實例 7 產物。MS (FAB-LSIMS) 499 -53- 本紙張尺度適用中國囤家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐 ------------f It-- 一 ' (請先聞讀背面之注意事項再填寫本頁) 訂經濟部中央標準局員工消費合作社印製 -ΙΓ n IL . A7 B7 _ 五、發明説明（51 ) [M+H]+。實例11-化合物XI之製備於装有橡皮隔及氬氣輸入口的25毫升的一，燒瓶内載入 1 毫升 CH2C12，實例 12 產物（0.012 克，0.026 Dess-Martin試劑（1 6毫克，0.038毫莫耳）（此試劑係根據Dess, et al·, J. Org. Chem. 41, 4156, 1983製備）。此反應混合物於二份2 0毫升。作HPLC純酸），製得1 〇°C攪拌30分鐘，用30毫升醋酸乙酯稀釋，用 1當量的HC1洗。有機層於MgS04上乾燥，濃縮化（1 .5%醋酸乙酯-二氣甲烷，含0.01%三氟醋毫克（9%)實例 1 1 產物。NMR (300 Mhz, CDC13) (ί 9.70 (t, J=1.3 Hz, 1H), 8.05 (d, J=8.4 Hz, 2H), 7.70 (d, J=8.4 Hz, 2H), 7.65 (d, J=8.4 Hz, 2H), 7.44 (d, J=8.4 Hz, 2H), 7.15-7.35 (m, 5H), 3.46 (dd, J=8.1, 16.8 Hz, 1H), 3.14-3.02 (m, 2H), 2.67 (t, J=7.2 Hz, 2H), 2.48 (t, J=7.5 HZ, ：!H), 2.41 (dt, J=l.3 Hz及6.3 Hz, 2H), 1.96 (m, 2H)，1.64-1.84〔m，4H) 上述製備實例1，實例2，實例6，實例7，及實例i i方法用以製備下述含二苯基的化合物。經濟部中央標準局員工消費合作社印製 -54 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐）經濟部中央標準局員工消費合作社印袋

化合物 R 異構物 m.p.(°cy其他定性

I II hoch2c=c hoch2c=c R，S s

IU HOCHjChC R IV MeOCHjC=C R,S V (/i-Pr)2NCH2OC R,S VI CH3C02CH2ChC R.S VII Et0C02CH2C=C R,S vra HO(CH2)2C=C R,S DC CH3C02(CH2)2C=C R,S X HOACHAOC R,S XI OHC(CH2)3ChC R,S 130 'H NMR (300 MHZ, CDC13) δ 8.02 (d, J = 8.4 Hz, 2 H), 7.67 (d, J = B.7 Hz, 2 H), 7.58 (d, J = 8.7 Hz, 2 H), 7.53 (d, J = 8.4 Hz, 2 H), 7.17- 7.33 (m, 5 H), 4.54 (i, 2 H), 3.46 (dd, J =8.1, 16.8 Hz, 1 H), 3.02-3.14 (m, 2 H), 2.65 (t, J = 7.2 Hz, 2 Η), 1.64-1.84 (m, 4 H). Ή NMR (300 MHz, CDCl^) δ 8.02 (d, J = 8.4 Hz, 2 H), 7.67 (d, J = 8Hz, 2 H), 7 (d, J = 8.7 Hz, 2 H), 7.53 (d J = 8.4 Hz, 2 H), 7.17- 7.33 (m, 5 H), 4.54 (s 2-H), 3.46 (dd, J =8.1,16.8 Hz, 1 H), 3.02-3 14 (m, 2 H), 2.65 (t, J = 7.2 Hz, 2 H), 1.64-1.^4 (m, 4 H). 136 I MS (FAB-LSIMS) 5|i0 [M+H]^ 137 MS (FAB-LSIMS) 4^9 [M+H]* 124 MS (FAB-LSIMS) 483 [M+H]*. 184 Ή NMR (300 MHz, CDClL) δ 9.70 (t, y ^ 1.3 Hz, 1 H), 8.05 (d,J= 8.4 Hz, 2 H), 7.70 (d, J = 8.4 Hz, 2 H), 7.65 (d, J = 8.4 Hz, 2 H), 7.44 (d, J= 8.4 Hz, 2 H), 7.15-7.35 (m, 5 H), 3.46 (dd, J= 8.1, 16.8 Hz, H), 3.14-3.02 (m, 2 H), 2.67 (t, ./= 7.2 Hz 2 H), 2.48 (t,J =7.5 Hz, 2 H), 2.41 (dt, J = 1.3 Hz and 6.3 Hz, 2 Η), 1.96 (m, 2 H), 1.6Ί1.84 (in, 4 H). -55- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS )八4^格（210X297公釐） -----------1 I装-- (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 訂 j 五、發明説明（53

XII HO(CH2)4C = C XIII PhC 三 C XIV 3-HO-PhOC

R,S R,S R，S ιφ 15 23 實例15-化合物XV之劁借_

Ν —^n-i Tn· ml I ^^—^1 n (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 步驟1.將氫化納（4.35克，181毫莫耳）於新蒸餘的 THF(100毫升）内之溶液冷至〇。(：，用市場上^購得的丙二酸二烯丙基（35.0克，190毫莫耳）經由滴漏斗處理4〇分鐘於室溫攪拌30分鐘後，將N-(2-溴乙基）苯鄰 (43.9克，247毫莫耳）一次加於此溶液内，將混回流。4 8小時後將此溶液冷至〇 °C，用2當量的H C1使停止反應，濃縮至原容積的20%。濃縮物以醋酸乙稀釋，相繼用飽和K2C03水溶液及NaCl飽和溶相於MgS〇4上乾燥，過遽，減壓濃縮。作閃柱 5-25%醋酸乙酯-己烷梯度洗離），製得2-苯鄰基乙基丙二酸二烯丙酯（41.2克，64%)，爲 !H NMR (300 MHz, CDC13) ά 7.82 (m, 2Η), 7 5.85 (m, 2H), 5.30 (m, 2H), 5.22 (m, 2H), 4.60 ( -56- 本紙張尺度適用中國國家標隼（CNS )八4規格（公釐）訂二甲醯亞胺合物加熱至經濟部中央樣準局員工消費合作社印製酯（300毫升）液洗。有機色譜分析以二甲醯亞胺無四油體。 .72 (m, 2H), 4H), 3.80

、發明説明（54 於新蒸餾的 J=6.6 Hz, 2H), 3.46 (t, J=7.2 Hz, 1H), 2.3() (dd, J=13.8, 6 9 Hz，2H)。

步驟2. 將步驟1產物（5.20克，14.6毫莫耳 THF(l〇〇毫升）内之溶液冷至〇，同時緩慢加NaH(385毫克’ 16.1毫莫耳）。4 0分鐘後將反應混合物升至室溫，分批加實例1步驟2產物（4.55克，14.6毫莫耳），將此混合物攪拌 2 4小時。再將反應混合物冷至〇。匸，用2當量升）使緩慢停止反應，用一份150毫升二氣甲燒及二份1〇〇毫升二氯甲烷萃取。合併之有機相於MgS04上乾濃縮，製得6.50克（71%)所需產物，不必純化用於步驟3。 TLC(30%醋酸乙酯-級烷）：Rf;〇 4。 -—1% It— I - 1^1 I I I (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 、-β 經濟部中央標準局員工消費合作社印製

步驟3. 將步驟2產物（6.50克，1〇·4毫莫耳）於 (100毫升）内之溶液冷至0。(：，相繼加肆（ (0.180克.，M6毫莫耳）及p比洛咬（2.40毫升，29卫 1，4 -二崎垸苯基膦）鈀毫莫耳）。於 __! -57- 本紙張;^度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） A7 B7 >昆合物倒入2 100毫升二氣滤，濃縮，質的樣品溶。冷至室溫上作色譜分製得所需酸產出率，由熔點 209-210 五、發明説明（55 〇°C攪拌2小時及於室溫攪拌4小時後，將反應當量的HC1(100毫升）内。生成之混合物用四份甲燒萃取’合併之有機相於MgS〇4上乾燥，過製得二酸，，爲黃色固體（9 7〇克）。將3 _ 8克此物於1，4 -二噚烷（150毫升）内，於回流加熱i小_ 後，將溶液濃縮，殘餘物於300克二氧化矽析，（以5 % -15%甲醇-二氣甲烷作梯度洗離）， (〇.3〇〇克），再重結晶純化，製得〇.17〇克（59%雒步驟2開始計算）所需產物，爲白色結晶固體 °C 〇 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 裝- 0、

-C=CH -訂輸入口的100 耳），冷至0 經濟部中央標準局員工消費合作社印製莫耳）’此混内，用一份 (t, J=2.4 Hz, 步驟4. 於含2毫升THF之裝有橡皮隔及氬氣毫升的一頸燒瓶内載入NaH(435毫克17.2毫莫 °C，同時以注射筒用約5分鐘時間加快丙醇（1.0毫升，〇.963 克，17_2毫莫耳）。此混合物於〇°C攪拌10分餘及於室溫擾拌3 0分鐘。加苄基溴（1.8毫升，2.59克，15.1毫合物於室溫攪拌3 6小時，倒入戊烷（150毫升） 100毫升鹽水洗。蒸發移去溶劑.，殘餘物（3.5克黃色油）直接用於步驟5。4 NMR (300 MHz CDC13) ‘d 7.36-7.31 (m. 5H), 4.61 (s, 2H), 4.17 (d, J=2.4 Hz, 2H), 2.47 1H)。 58- 本紙張尺度適用中國國家樣隼（CNS ) M規格（21(rx297公釐五、發明説明(56 A7 B7

步驟3產物作起始物質製備實例15產物。熔點151°C 复圾1 6化合物XVI之製備 t-BuMqSiO、

C = CH (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) -裝· 經濟部中央標準局員工消費合作社印製步驟1. 於裝有橡皮隔及氬氣針輸入口的10+毫升的一頸燒瓶内載入炔丙酮（1.0毫升，0.963克，17.2毫_耳）’醚(20 毫升），冷至0°C，同時缓慢加NaH(435毫克，17.2毫莫耳）此混合物於室溫攪拌1小時，加·三級丁基貳甲基矽烷基氯 (2.6克，17.2毫莫耳）。此反應混合物於室溫攪泮6小時，倒入己烷（150毫升）内，用1當量的HC1洗。有機相於MgS〇4 上乾燥，濃縮，製得2.8 8克黃色固體，不必純化直接用於步驟2。iH NMR (300 MHz, CDC13)汐 4.29 (d，J=2.1 Hz， 2H), 2.37 (t, J=2,l Hz, 1H), 0.89 (s, 9H), 0.11(s, 3H) 、νβ 59- 本紙張尺度適用中國國家標率（CNS ) A4規格（210X297公釐）五、發明説明（57 A7 B7 步驟2 · 用實例1步驟2方法使用市場上可跗得的4 -碘笨基及乙醯氯製得所需乙醯基二苯基。TLC(l·〕％醋酸乙酯-己坑）：Rf=0.3。 0 -C.C 替 ^ 步驟3 . 用實例1步驟5方法使用步驟1產物製得所需二苯基乙炔。TLC(10%醋酸乙酯己烷殳步驟2產物 ):Rf=0.4。 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁)

-C三C

經濟部中央標準局貝工消費合作社印裝 (|毫升的一頸 94毫莫耳），此化鉀（617毫 30分鐘，用 4〇克，2.94 毫此混合物升毫莫耳），任混合物倒入升二氣甲烷於200克二氧己烷梯度洗酸乙酯-己

t-BuMc^SiO 步驟4. 於裝有橡皮隔及氬氣針輸入口的5 燒瓶内載入5毫升THF，步驟3產物（1.06克，2. 冷至-78 °C，同時用注射筒滴加六甲基二矽克，2.94毫莫耳）。此反應混合物於_ 7 8 °C攪拌注射筒滴加三甲基矽烷基氣（Θ:374毫升，0.3 莫耳），生成混合物於-7 8 °C攪拌3小時。再將至0°C 1小時，加N -溴丁二醯胺（0.540克，2.94 此混合物升至室溫，並攪拌1 6小時。將此反應 —份100毫升飽和NH4C1水溶液内，用三份50齋萃取。合併之有機相於MgS04上乾燥，濃縮化矽膠上作柱色譜分析（用〇 - 5 %醋酸乙酯離），製得0.264克（20%)溴甲基酮。TLC(10〇/〇‘ 烷）：Rf=0.5。 -60 本紙張尺度適用中國國家標率（CNS ) A4规格（2KTX297公釐）五、發明説明（58

t-BuMe^SiO A7 B7

-CEC

步驟5. 用實例1 5步驟2-3方法使用步驟41 二苯基苯鄰二甲亞醯胺。TLC(50%醋酸乙酯-醋酸）：Rf=0.3。物製得所需己烷，含1 〇/。 (請先聞讀背面之注意事項再填寫本頁) C----Γ I 裝·

訂經濟部中央標準局員工消費合作杜印製步驟6. 於裝有橡皮隔及氬氣針輸入口的5C 燒瓶内載入10毫升CH2C12，歩驟5產物（〇.〇4( 莫耳），及2毫升H F - p比咬。此混合物於室虛檀用75毫升水稀釋，再用75毫升（：112(：12萃取 MgS〇4上乾燥，濃縮。於5克二氧化矽膠上作 (用25%醋酸乙酯-己烷含1 % HOAc洗離），製得例1 6產物。熔點145°C。實例1 7 本發明化合物之生物學鑑定毫升的一頸克，0.067 摔1 0分鐘。有機柱色譜 6 克（19%) 毫相於分析實 -61 - 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐）五、發明説明（59 ) A7 B7 經濟部中央標隼局負工消費合作社印裝 MMP抑制之P218猝滅熒光鑑定 P218猝滅的熒光鑑定（顯微熒光計輪廓鑑定）是Knight等於 FEBS Lett. 296, 263, 1992最初就樣品池内相關物質及各種基質金屬蛋白酶（MMPs)所述的鑑定的改進。+鑑定是用每一發明化合物及三種MMPs(MMP-3，MMP-9 平行分析，使用9 6凹的微滴定碟及Hamiltoif ATW工作站 (workstation)。 P218熒光團基質:P218爲合成的被作用物，與(N-端位置含有4-乙醯基-7-甲氧基香豆素（MCA)基團，其二硝基苯基]-L-2,3-二胺基丙醯基（DPA) (1992)所報告的用作基質金屬酶被作用物的多一旦P218多肽被裂解（於Ala-Leu鍵的推定截除基的熒光即可以熒光計測出’於328毫微米興微米發射。目前有BACHEM生產P218 ’專門供應Bayer。P218 的構造是： H-MCA-Pro-Lys-Pro-Leu-Ala-Leu-DPA-Ala-Ai 量1332.2) 重組人CHO溶基質素（MMP-3) 重組人CH〇 Pro-MMP·3 ·· Houseley，et al·，j268. 4481，1993説明人 CHO pro-溶基質素-257 的表現於純化。 pro-MMP_3的活化·於5 mM Tris, ρΉ 7.5, 5 nj mM NaCl，及0.005% Brij_35 活化緩衝内有3-[2,4-此爲Knight 肽的改良。位）後，MCA 奮並於393毫 g-NH2 (分子

Biol. Chem. (pro-MMP-3) M CaCl2，25 液内1.72 μΜ (100微克/毫升）的Pro-MMP_3可藉TPCK(N_甲苯磺醯基-(L·)- 62- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公幻 ---r--,-----f -^------ΐτ------f - - (請先聞讀背面之注意事項再填寫本頁) 五、發明説明（60 A7 B7 苯丙胺酸氣甲基酮）胰蛋白酶（1 : 100重量 /重量與pro- MMP-3的比）於2 5 °C培養3 0分鐘活化。此反蛛可藉加大豆胰蛋白酶抑制劑（SBTI ; 5 : 1重量/重量與胰蛋白酶濃度比）停止。此活化方法導致45kDa活性MMP-3的生丰，此活化的 MMP- 3仍含酶的C -端部分。人重組膠原酶A(Pro-MMP-2)的製備重组人pro-MMP-2 :依據Fridman, et al_, J 267. 15398, 1992，所述方法使用牛痘表現系蛛製備人膠原酶A(pro-MMP-2)。 pro-MMP-2之活化：將252毫克/毫升的pro mM的 Tris溶液，pΗ 7.5，5 mM CaCl2，150 mM NaCl，及 0.005% Brij-3 5 (MMP-2活化緩衝液）以1 : 5稀釋至終濃度爲5 0微克/毫升。製成10mM(3.5毫克/毫升）的内的醋酸對位胺基苯基汞（ΑΡΜΑ)。以1 / 2 0 ΑΡΜΑ溶液，使ΑΡΜΑ終濃度爲0.5 mM，此酶 3 0分鐘。以2公升MMP-2活化缓衝液透析活 (1 5毫升）二次（透析膜先以MMP- 2活化缓衝液 BSA處理1分鐘，再用H20徹底洗）。用Centric .Biol. chem. -MMP-2 以 25 於 0.05NaOH 反應容積加於3 7 °C培養化的MMP-2 内含有0.1% pn濃縮器（濃 —^ϋ. I -.1 !-1 - - 1 ΐ·! - — IX 1 - I— I - - (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 訂

J 經濟部中央標準局員工消費合作杜印製縮器也先用MMP- 2活化緩衝液内含有0.1 % _SA處理1分鐘，再用H20洗，再用MMP-2活化緩衝液洗j濃縮酶，再稀釋，再濃縮，重覆二次。用MMP-2活化緩^液將酶稀釋至7.5毫升（原始容積的0.5倍）。人重組膠原酶B (MMP- 9 )之製備重组人 pro-MMP-9 : Wilhelm., et al., J. Biol. chem. 264. -63- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐）經央標準局員工消費合作社印製 A7 B7 五、發明説明⑼） 17213, 1989，説明人膠原酶 B(pro-MMI' -9)衍生自 U937cDNA，用桿狀病毒蛋白質表現系統表現爲全長形式。此酶原係用 Hibbs，et al., J. Biol. Chem. 26 0, 2493, 1984 所述方法純化。 pro-MMP-9 之活化：將 50 mM Tris，pH 7.4 » 10 mM CaCl2，150 mM Naa，及0.005% Brij-35 (MM P-9活化緩衝液）内的pro-MMP-2 20微克/毫升用0.5mM醋酸對位胺基苯基汞（ΑΡΜΑ)於37°C培養3.5小時使活化。此_ t係用相同的緩衝液透析除去ΑΡΜΑ。儀器裝設 Hamilton Microlab AT Plus : ΜΜΡ輪廓鑑定 y 系以 Hamilton MicroLab AT Plus® 全自動完成。給 Hamilton 設計的程式是：（1)以100% DMSO内的2.5mM的儲液自動痛釋至11種可能的抑制劑；（2)分佈被作用物於9 6凹Cytofl our碟内，再分佈抑制刮至此碟内；（3 )加單一酶至碟内並g L合以開使反應。於加被作用物的點重新開始此程式，自食給另外的酶製成另外的碟，重新混合稀釋的抑制劑，再加酶開始反應。這樣，用相同的抑制劑稀釋液完成MMP鑑定。 Millipore Cytoflour II :經培養後，於 Cytofl fur II熒光計碟讀數計上讀碟，於340毫微米興奮，於395¾ :微米發射，放大倍數定於80。緩衝液顯微熒火計反應缓衝液（MRB) ··供顯微熒光 *計鑑定用的試驗化合物稀釋液，酶，及P218被作用物係《 >顯微熒光計 -64- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X 297公釐）請先閲讀背 Φ} 之注意事項再填寫本頁 A7 B7 嗎啉基）乙烷 581079 五、發明説明（62 ) 反應緩衝液製成，此緩衝液内含50 mM 2-(N-橫酸（MES)，pH 65，10 mM CaCl2，150 mM NaCl，0.005%

Brij-35及1% DMSO。方法 MMP顯微熒光計輪廓鑑定：此鑑定係用被作用物mis終濃度爲6 μΜ及約0.5至0.8 nM的MMP以不同的藥物濃度完成。將Hamilton設計成在鑑定中能由2.5 mM儲液（100% DMSO)至1 0倍化合物終濃度系列稀釋達1 1種化合物。開始時，儀器投送不同量的顯微熒光劑反應緩衝液（MRB)至1毫升Marsh稀釋試管的9 6隻試管架。然後此儀器由樣品架取 2 0微升抑制劑（2 _ 5 mM)與Marsh架上A排内的緩衝液混合，製成50μΜ的藥物濃度。再將抑制劑系列稀釋成1 〇，5， 1，0.2，0.05及0.01 μΜ。樣品架上的1號位只含DMSO供鑑定中"只有酶"的凹使用，這樣，從A排至Η排的第1列不含抑制劑。儀器然後分佈107微升Ρ218被作用物（8·2μΜ，於 MRB内）至單一 96凹的Cyt〇flour微滴定碟。儀器重混合，並將14.5微升稀釋的化合物由Marsh架的A排至G排載入微滴定碟的對應的排。（Η排代表"背景"排，只給予39.5微升 MRB，不給予藥物或酶）。每一凹（η排（，，背景排"）除外）内由BSA處理過的試劑儲液槽加2 5微升適宜的酶（酶終濃度的 5_86倍）開始反應。（酶儲液槽先以5〇 mM Tris(pH 7.5，含 150 mM NaCl)内的1%的BSA於室溫處理1小時)，再以H2〇徹底洗過，於室溫乾燥）。在將酶加入並混合後，將碟蓋上，於37 t培養25分鐘 -65- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) Μ^Μ~{2^Γ29η^ ) —^1 · ·<ί· --1In 1^1 1^,- Is —^n I - - (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 訂經濟部中央標準局員工消費合作社印袋 ^81073 ------ 五、發明説明（63 A7 B7

X相同方式’藉Hamilton程式將P218被作用物分佈至微滴疋碟’然後再與藥物混合並由相同的Marsh架分佈至微滴定碟，忒驗其他的酶。然後將要試驗的第二（或 MMP由試劑架分佈至微滴定碟並混合，再蓋起，培養。所有的其他的MMP都以此法試驗〜、微费光计鐘定中的IC50測定：將Cytoflou】據由輸出CSV"構案複製於主Excei散佈頁（spreadsheet) 自動計算由幾種不同的MMps取得的數據（每一MMP-9 6凹的碟）。比較含化合物的凹的水解量（水解2 5分鐘產生的熒光單位）與1列"只含酶"的凹的水甲量就每一鈐物濃度測出抑制百分比。減去背景，以下述公式計算抑制((對照値-治療値）/對照値）X10C 就抑制劑濃度5，1，〇 5，〇」，〇〇2，〇〇〇5及〕〇〇1μΜ藥物測定出抑制百分比。以此抑制百分比的線性谢歸分析與對數抑制劑濃度比較求得j c 5 〇値表II r II產生的數百分比 I-r---------f —^------ΐτ * - (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁)

21 ΜΜΡ-9生熒光團的 IC50 MMlf-2生熒光團的 IC50 經濟部中央標隼局員工消費合作社印製 I ΗΠΙΙνννΙνΙΙ 106 2184 -3 5% 252 5 38 327 36 67 37 704 2630 834 2460 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) Α4規格（210X 297公釐） 21 235 14 103 -66- S81079 A7 B7 五、發明説明（64 ) VIII 32 122 6 IX 57 542 37 X 203 1=27% 108 XI 1730 1=24% 596 XII 56.6 614 36 XIII 405 245 XIV 125 1=46% 85 XV 11 40 5 XVI 4 2 1 精於此技藝者由此説明或此處所揭示的本軎了解到其他具體實施例。此説明及實例只4 質，下述申請專利範圍説明本發明的眞範圍及明的實例會舉例説明性精神。 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) J —裝_ 、?! 經濟部中央標準扃員工消費合作社印製 67- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐）

Claims

公 i第中 S 9 月 8 8 8 8 ABCD 六、申請專利範圍

1. 二如下通式的基質金屬蛋白酶抑制化合物

其中 R15係選由：HOCH, ，（n-Pr)2NCH2， CH3CO2CH； Et0C02CH2 ’ HO(CH2)2，CH3C02(CH2)2，H〇2C(CH2)2，〇HC(CH2)3 ’ HO(CH2)4，3-HO-Ph，及PhCH: 組群；及 3CH2所組成之 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) R16係選自 .Ph 或

' t—·—!*-- ιυ —^—a— fltt— n^i 一 Θ 經濟部中央標隼局員工消費合作社印製及其藥學上可接受之鹽類。 2. —種用於抑制哺乳動物之基質金屬蛋白酶合物，其包含根據申請專利範圍第1項之^ 上可接受的載劑。 3. 根據申請專利範圍第2項之醫藥组合物物是人s 4_根據申請專利範圍第2項之醫藥組合物，其也 a) 減輕骨性關節炎，類風濕關節炎炎，牙週病，角膜潰瘍，蛋白尿，動脈瘤渣性的醫藥組合物及醫藥 _中該哺乳動性用於：化膿性關節主動脈病，衣紙張尺度逋用中囷國家橾準（CNS ) A4規格（210X297公釐） i---------------- 公 i第中 S 9 月 8 8 8 8 ABCD 六、申請專利範圍

1. 二如下通式的基質金屬蛋白酶抑制化合物

其中 R15係選由：HOCH, ，（n-Pr)2NCH2， CH3CO2CH； Et0C02CH2 ’ HO(CH2)2，CH3C02(CH2)2，H〇2C(CH2)2，〇HC(CH2)3 ’ HO(CH2)4，3-HO-Ph，及PhCH: 組群；及 3CH2所組成之 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) R16係選自 .Ph 或

' t—·—!*-- ιυ —^—a— fltt— n^i 一 Θ 經濟部中央標隼局員工消費合作社印製及其藥學上可接受之鹽類。 2. —種用於抑制哺乳動物之基質金屬蛋白酶合物，其包含根據申請專利範圍第1項之^ 上可接受的載劑。 3. 根據申請專利範圍第2項之醫藥组合物物是人s 4_根據申請專利範圍第2項之醫藥組合物，其也 a) 減輕骨性關節炎，類風濕關節炎炎，牙週病，角膜潰瘍，蛋白尿，動脈瘤渣性的醫藥組合物及醫藥 _中該哺乳動性用於：化膿性關節主動脈病，衣紙張尺度逋用中囷國家橾準（CNS ) A4規格（210X297公釐） i---------------- §8i〇79六、申請專利範圍 A8 BS C8 m

應的疾病，由 ’神經系統脱退行性敕骨損的冠狀動脈栓營養不良性上皮鬆弛，大癌，導玫發炎反 MMP活性調節的骨質減少，顳頷關節疾病髓鞘疾病； b ) 阻止腫瘤轉移或關節受傷後發生的失； c ) 降低由粥狀動脈硬化斑破裂引起塞；或 d) 控制生育。 5. 根據申請專利範圍第2項之醫藥組合物，其中該效果是減輕骨性關節炎。 6. 根據申請專利範園第2項之醫藥组合物，其中該效果是阻止腫瘤轉移。 (請先閎讀背面之注意事項再填寫本頁) 裝- 訂 L 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 -2- 私紙張尺度逋用中國國家標隼（CNS ) A4规格（210X297公釐） §8i〇79六、申請專利範圍 A8 BS C8 m

應的疾病，由 ’神經系統脱退行性敕骨損的冠狀動脈栓營養不良性上皮鬆弛，大癌，導玫發炎反 MMP活性調節的骨質減少，顳頷關節疾病髓鞘疾病； b ) 阻止腫瘤轉移或關節受傷後發生的失； c ) 降低由粥狀動脈硬化斑破裂引起塞；或 d) 控制生育。 5. 根據申請專利範圍第2項之醫藥組合物，其中該效果是減輕骨性關節炎。 6. 根據申請專利範園第2項之醫藥组合物，其中該效果是阻止腫瘤轉移。 (請先閎讀背面之注意事項再填寫本頁) 裝- 訂 L 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 -2- 私紙張尺度逋用中國國家標隼（CNS ) A4规格（210X297公釐）