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TW202449167A - 用於治療肌肉萎縮性脊髓側索硬化症之組成物及方法 - Google Patents

用於治療肌肉萎縮性脊髓側索硬化症之組成物及方法 Download PDF

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泰勒 克里斯多福 莫耶
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坎蘇 科爾潘
麥可 Ｄ 格蘭南
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Abstract

本揭示案係關於可用於治療肌肉萎縮性脊髓側索硬化症(ALS)之編碼SOD1靶向多核苷酸之AAV，以及用於治療包括ALS在內之脊髓相關病症之遞送方法。

Description

用於治療肌肉萎縮性脊髓側索硬化症之組成物及方法
本揭示案係關於用於遞送SOD1靶向多核苷酸，例如小干擾RNA (siRNA)雙鏈體、shRNA、微小RNA (miRNA)或其前驅物之腺相關病毒(AAV)衣殼蛋白及其變異體之組成物、製備、用途及/或調配物，該等多核苷酸靶向或編碼靶向超氧化物歧化酶1 (SOD1)基因以干擾SOD1基因表現及/或SOD1酶產生之分子。
肌肉萎縮性脊髓側索硬化症(ALS)，亦稱為盧伽雷氏病(Lou Gehrig's disease)，係一種致命的進行性神經退化疾病，其特徵在於初級運動皮質、腦幹及脊髓中上運動神經元及下運動神經元(MN)之主要損失。上運動神經元(例如，皮質)及下運動神經元(例如，脊髓)通常將訊息自腦傳遞至肌肉以產生隨意運動。當此等神經元退化及/或死亡時，傳遞至肌肉之訊息之損失導致肌肉逐漸減弱及/或萎縮且無法起始或控制隨意運動，直至最終罹患ALS之個體失去肌肉力量及行動、說話、進食甚至呼吸的能力。大多數患者將需要某種形式之呼吸輔助來存活，且即便如此，大多數ALS患者在診斷後2-5年內由於呼吸衰竭而死亡。在疾病進展期間，一些患者(例如FTD-ALS)亦可發展為額顳葉失智症。
已描述了兩種形式之ALS：一種為散發性ALS (sALS)，其為美國最常見的ALS形式，佔所有診斷病例之90%至95%；另一種為家族性ALS (fALS)，其發生在主要具有顯性遺傳之家族譜系中，且僅占美國所有病例之約5%至10%。sALS及fALS在臨床上無法區分。病理學研究已將許多細胞過程與疾病發病機制聯繫起來，諸如ER應激增加、自由基(亦即活性含氧物(ROS))之產生、粒線體功能障礙、蛋白質聚集、細胞凋亡、發炎及麩胺酸興奮毒性，尤其在運動神經元(MN)中。
ALS為一種複雜遺傳病症，其中多種基因與環境暴露相結合使個體易感。已發現十多種與ALS相關之基因，包括SOD1 (Cu 2+/Zn 2+超氧化物歧化酶)、TDP-43 (TARDBP、TAR DNA結合蛋白-43)、FUS (肉瘤融合/肉瘤易位)、ANG (血管生成素)、ATXN2 (Ataxin-2)、含纈酪肽蛋白(VCP)、OPTN (Optineurin)及9號染色體開放閱讀框72 (C9ORF72)中之非編碼GGGGCC六核苷酸重複之擴增。然而，運動神經元退化之確切機制仍不清楚。
目前，無用於ALS之治癒性治療。因此，醫學上需要用於預防、治療及診斷與異常SOD1表現相關之疾病(包括ALS)之改良之組成物及方法。
本揭示案提供了編碼SOD1靶向多核苷酸以調節，例如干擾SOD1基因表現及/或SOD1蛋白產生的AAV顆粒及其使用方法。本揭示案亦包括用於治療與運動神經元退化相關之疾病(諸如肌肉萎縮性脊髓側索硬化症(ALS))之方法。
因此，在一個態樣中，本揭示案提供了一種包含AAV衣殼變異體及編碼SOD1靶向多核苷酸(例如，SOD1靶向RNA劑，例如siRNA雙鏈體)之核酸之AAV顆粒，其中該AAV衣殼變異體包含具有下式之胺基酸序列：[N1]-[N2]-[N3]，其中：(i)視情況地，[N1]包含X1、X2及X3，其中X1、X2或X3中之至少一者係G；(ii) [N2]包含SPH之胺基酸序列；且(iii) [N3]包含X4、X5及X6，其中X4、X5或X6中之至少一者係鹼性胺基酸，例如K或R。在一些實施例中，[N3]之位置X4係K。在一些實施例中，[N3]之位置X5係K。在一些實施例中，[N3]係或包含SKA。在一些實施例中，[N3]係或包含KSG。在一些實施例中，根據SEQ ID NO: 138、981或982編號，[N2]-[N3]緊接在位置455之後存在。在一些實施例中，相對於根據SEQ ID NO: 138、981或982之胺基酸序列編號之參考序列，[N1]緊接在位置452之後存在。在一些實施例中，相對於根據SEQ ID NO: 138編號之參考序列，[N1]替換位置453-455 (例如，G453、S454及G455)。在一些實施例中，根據SEQ ID NO: 138或982編號，AAV衣殼變異體包含位置454之H及位置455之D。在一些實施例中，根據SEQ ID NO: 138或981編號，AAV衣殼變異體包含位置454之S及位置455之G。在一些實施例中，根據SEQ ID NO: 138編號，8個胺基酸之插入物替換了位置454-455處之SG。在一些實施例中，根據SEQ ID NO: 138、981或982編號，6個胺基酸之插入物緊接在位置455之後存在。
在又一態樣中，本揭示案提供了一種包含AAV衣殼變異體及編碼SOD1靶向多核苷酸(例如，SOD1靶向RNA劑，例如siRNA雙鏈體)之核酸之AAV顆粒，其中該AAV衣殼變異體包含具有下式之胺基酸序列：[N1]-[N2]-[N3] (SEQ ID NO: 3963)，其中：(i) [N1]包含位置X1、X2及X3，其中位置X2係S，且位置X3係G；(ii) [N2]包含胺基酸序列SPH；且(iii) [N3]包含位置X4、X5及X6，其中位置X5係K。在一些實施例中，根據SEQ ID NO: 138或982編號，[N1]-[N2]-[N3]緊接在位置452之後存在且替換位置453-455。在一些實施例中，[N1]-[N2]-[N3]係或包含GSGSPHSKA (SEQ ID NO: 1369)。
在另一態樣中，本揭示案提供了一種包含AAV衣殼變異體及編碼SOD1靶向多核苷酸(例如，SOD1靶向RNA劑，例如siRNA雙鏈體)之核酸之AAV顆粒，其中該AAV衣殼變異體包含具有下式之胺基酸序列：[N1]-[N2]-[N3] (SEQ ID NO: 4647)，其中：(i) [N1]包含位置X1、X2及X3，其中位置X2為除S以外之胺基酸且位置X3為除G以外之胺基酸；(ii) [N2]包含胺基酸序列SPH；且(iii) [N3]包含位置X4、X5及X6，其中位置X4為K。在一些實施例中，根據SEQ ID NO: 138或982編號，[N1]-[N2]-[N3]緊接在位置452之後存在且替換位置453-455。在一些實施例中，[N1]-[N2]-[N3]係或包含GHDSPHKSG (SEQ ID NO: 1370)。
在另一態樣中，本揭示案提供了一種包含AAV衣殼變異體及編碼SOD1靶向多核苷酸(例如，SOD1靶向RNA劑，例如siRNA雙鏈體)之核酸之AAV顆粒，其中該AAV衣殼變異體包含(a)表1A、2A、2B、21-23、25、26或30中提供之任何序列之胺基酸序列；(b)包含來自表1A、2A、2B、21-23、25、26或30中提供之任一序列之至少3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16或17個連續胺基酸之胺基酸序列；(c)相對於表1A、2A、2B、21-23、25、26或30中提供之任一序列，包含至少一個、兩個或三個但不超過四個不同胺基酸之胺基酸序列；或(d)相對於表1A、2A、2B、21-23、25、26或30中提供之任一序列之胺基酸序列，包含至少一個、兩個或三個但不超過四個修飾，例如取代(例如保守取代)之胺基酸序列。在一些實施例中，胺基酸序列存在於環IV中。在一些實施例中，相對於根據SEQ ID NO: 138之胺基酸序列編號之參考序列，胺基酸序列緊接在位置448、452、453、455之後存在。
在又一態樣中，本揭示案提供了一種包含AAV衣殼變異體及編碼SOD1靶向多核苷酸(例如，SOD1靶向RNA劑，例如siRNA雙鏈體)之核酸之AAV顆粒，其中該AAV衣殼變異體包含(a) SEQ ID NO: 945-980或985-986中任一者之胺基酸序列；(b)包含來自SEQ ID NO: 945-980或985-986中任一者之至少3、4或5個連續胺基酸之胺基酸序列；(c)相對於SEQ ID NO: 945-980或985-986中任一者之胺基酸序列，包含至少一個、兩個或三個但不超過四個不同胺基酸之胺基酸序列；(d)相對於SEQ ID NO: 945-980或985-986中任一者之胺基酸序列，包含至少一個、兩個或三個但不超過四個修飾，例如取代(例如保守取代)之胺基酸序列。在一些實施例中，胺基酸序列存在於環IV中。在一些實施例中，相對於根據SEQ ID NO: 138之胺基酸序列編號之參考序列，胺基酸序列緊接在位置448、452、453、455之後存在。
在又一態樣中，本揭示案提供了一種包含AAV衣殼變異體及編碼SOD1靶向多核苷酸(例如，SOD1靶向RNA劑，例如siRNA雙鏈體)之核酸之AAV顆粒，其中該AAV衣殼變異體包含(a) SEQ ID NO: 2、200、201、941、943、204、208、404或903-909中任一者之胺基酸序列；(b)包含來自SEQ ID NO: 2、200、201、941、943、204、208、404或903-909中任一者之至少3、4、5、6、7、8、9、10、11、12或13個連續胺基酸之胺基酸序列；(c)相對於SEQ ID NO: 2、200、201、941、943、204、208、404或903-909中任一者之胺基酸序列，包含至少一個、兩個或三個但不超過四個不同胺基酸之胺基酸序列；或(d)相對於SEQ ID NO: 2、200、201、941、943、204、208、404或903-909中任一者之胺基酸序列，包含至少一個、兩個或三個但不超過四個修飾，例如取代(例如保守取代)之胺基酸序列。在一些實施例中，胺基酸序列存在於環IV中。在一些實施例中，相對於根據SEQ ID NO: 138之胺基酸序列編號之參考序列，胺基酸序列緊接在位置448、452、453、455之後存在。
在又一態樣中，本揭示案提供了一種包含AAV衣殼變異體及編碼SOD1靶向多核苷酸(例如，SOD1靶向RNA劑，例如siRNA雙鏈體)之核酸之AAV顆粒，其中該AAV衣殼變異體包含SPH之胺基酸序列，其中根據SEQ ID NO: 69、70、71、4、5、6、7、8、36-59、138、981或982中任一者之胺基酸序列編號，該胺基酸序列緊接在位置455之後存在。
在又一態樣中，本揭示案提供了一種包含AAV衣殼變異體及編碼SOD1靶向多核苷酸(例如，SOD1靶向RNA劑，例如siRNA雙鏈體)之核酸之AAV顆粒，其中該AAV衣殼變異體包含SPHSKA (SEQ ID NO: 941)之胺基酸序列，其中根據SEQ ID NO: 138之胺基酸序列編號，該胺基酸序列緊接在位置455之後存在。
在又一態樣中，本揭示案提供了一種包含AAV衣殼變異體及編碼SOD1靶向多核苷酸(例如，SOD1靶向RNA劑，例如siRNA雙鏈體)之核酸之AAV顆粒，其中該AAV衣殼變異體包含SPHSKA (SEQ ID NO: 941)之胺基酸序列，其中根據SEQ ID NO: 981之胺基酸序列編號，該胺基酸序列緊接在位置455之後存在。
在又一態樣中，本揭示案提供了一種包含AAV衣殼變異體及編碼SOD1靶向多核苷酸(例如，SOD1靶向RNA劑，例如siRNA雙鏈體)之核酸之AAV顆粒，其中該AAV衣殼變異體包含HDSPHK (SEQ ID NO: 2)之胺基酸序列，其中根據SEQ ID NO: 138之胺基酸序列編號，該胺基酸序列緊接在位置453之後存在。
在又一態樣中，本揭示案提供了一種包含AAV衣殼變異體及編碼SOD1靶向多核苷酸(例如，SOD1靶向RNA劑，例如siRNA雙鏈體)之核酸之AAV顆粒，其中該AAV衣殼變異體包含HDSPHK (SEQ ID NO: 2)之胺基酸序列，其中根據SEQ ID NO: 982之胺基酸序列編號，該胺基酸序列緊接在位置453之後存在。
在又一態樣中，本揭示案提供了一種包含AAV衣殼變異體及編碼靶向人類SOD1之多核苷酸之核酸之AAV顆粒，其中該AAV衣殼變異體包含具有下式之胺基酸序列：[N1]-[N2]-[N3]，其中：(i) [N1]包含X1、X2及X3，其中X1、X2或X3中之至少一者為G；(ii) [N2]包含SPH之胺基酸序列；且(iii) [N3]包含X4、X5及X6，其中X4、X5或X6中之至少一者為鹼性胺基酸，例如K或R；其中[N1]-[N2]-[N3]存在於超變環IV中；且其中該AAV衣殼變異體包含與SEQ ID NO: 138之位置203-736之胺基酸序列至少95%一致的胺基酸序列。
在又一態樣中，本揭示案提供一種包含AAV衣殼變異體及編碼靶向人類SOD1之多核苷酸之核酸之AAV顆粒，其中該AAV衣殼變異體包含超變環IV中之SPHSKA (SEQ ID NO: 941)之胺基酸序列。在一些實施例中，根據SEQ ID NO: 138編號，超變環環IV包含胺基酸449-460。在一些實施例中，根據SEQ ID NO: 981編號，SEQ ID NO: 941之胺基酸序列緊接在位置455之後存在。在一些實施例中，根據SEQ ID NO: 981編號，AAV衣殼變異體包含位置451處之胺基酸E。在一些實施例中，根據SEQ ID NO: 981編號，AAV衣殼變異體包含位置453處之胺基酸V。在一些實施例中，AAV衣殼變異體包含SPHSKA (SEQ ID NO: 941)之胺基酸序列；根據SEQ ID NO: 981編號之位置451處之胺基酸E；及根據SEQ ID NO: 69或981編號之位置453處之胺基酸V。
在又一態樣中，本揭示案提供一種包含AAV衣殼變異體及編碼靶向人類SOD1之多核苷酸之核酸之AAV顆粒，其中該AAV衣殼變異體包含超變環IV中之SPHSKA (SEQ ID NO: 941)之胺基酸序列。在一些實施例中，根據SEQ ID NO: 138編號，超變環環IV包含胺基酸449-460。在一些實施例中，根據SEQ ID NO: 981編號，SEQ ID NO: 941之胺基酸序列緊接在位置455之後存在。在一些實施例中，根據SEQ ID NO: 981編號，AAV衣殼變異體包含位置451處之胺基酸E。在一些實施例中，根據SEQ ID NO: 981編號，AAV衣殼變異體包含位置452處之胺基酸R。在一些實施例中，根據SEQ ID NO: 981編號，AAV衣殼變異體包含位置453處之胺基酸V。在一些實施例中，AAV衣殼變異體包含SPHSKA (SEQ ID NO: 941)之胺基酸序列；根據SEQ ID NO: 981編號之位置451處之胺基酸E；根據SEQ ID NO: 981編號之位置452處之胺基酸R；及根據SEQ ID NO: 36或981編號之位置453處之胺基酸V。
在又一態樣中，本揭示案提供了一種AAV顆粒，其包含：(i)包含SEQ ID NO: 69之胺基酸序列之AAV衣殼變異體；及(ii)編碼靶向人類SOD1之多核苷酸之核酸，其中該經編碼之多核苷酸包含有包含有義股序列及反義股序列之siRNA，其中該經編碼之有義股序列包含SEQ ID NO: 2525，且該經編碼之反義股序列包含SEQ ID NO: 2507。
在又一態樣中，本揭示案提供了一種AAV顆粒，其包含：(i)包含SEQ ID NO: 36之胺基酸序列之AAV衣殼變異體；及(ii)編碼靶向人類SOD1之多核苷酸之核酸，其中該經編碼之多核苷酸包含有包含有義股序列及反義股序列之siRNA，其中該經編碼之有義股序列包含SEQ ID NO: 2525，且該經編碼之反義股序列包含SEQ ID NO: 2507。
在又一態樣中，本揭示案提供了一種AAV顆粒，其包含：(i)包含SEQ ID NO: 982之胺基酸序列之AAV衣殼變異體；及(ii)編碼靶向人類SOD1之多核苷酸之核酸，其中該經編碼之多核苷酸包含有包含有義股序列及反義股序列之siRNA，其中該經編碼之有義股序列包含SEQ ID NO: 2525，且該經編碼之反義股序列包含SEQ ID NO: 2507。
在又一態樣中，本揭示案提供了一種AAV顆粒，其包含：(i)包含SEQ ID NO: 981之胺基酸序列之AAV衣殼變異體；及(ii)編碼靶向人類SOD1之多核苷酸之核酸，其中該經編碼之多核苷酸包含有包含有義股序列及反義股序列之siRNA，其中該經編碼之有義股序列包含SEQ ID NO: 2525，且該經編碼之反義股序列包含SEQ ID NO: 2507。
在又一態樣中，本揭示案提供了一種AAV顆粒，其包含：(i)包含SEQ ID NO: 69之胺基酸序列之AAV衣殼變異體；及(ii)編碼靶向人類SOD1之多核苷酸之核酸，其中該經編碼之多核苷酸包含SEQ ID NO: 5013之核苷酸序列。
在又一態樣中，本揭示案提供了一種AAV顆粒，其包含：(i)包含SEQ ID NO: 36之胺基酸序列之AAV衣殼變異體；及(ii)編碼靶向人類SOD1之多核苷酸之核酸，其中該經編碼之多核苷酸包含SEQ ID NO: 5013之核苷酸序列。
在又一態樣中，本揭示案提供了一種AAV顆粒，其包含：(i)包含SEQ ID NO: 982之胺基酸序列之AAV衣殼變異體；及(ii)編碼靶向人類SOD1之多核苷酸之核酸，其中該經編碼之多核苷酸包含SEQ ID NO: 5013之核苷酸序列。
在又一態樣中，本揭示案提供了一種AAV顆粒，其包含：(i)包含SEQ ID NO: 981之胺基酸序列之AAV衣殼變異體；及(ii)編碼靶向人類SOD1之多核苷酸之核酸，其中該經編碼之多核苷酸包含SEQ ID NO: 5013之核苷酸序列。
在又一態樣中，本揭示案提供了一種AAV顆粒，其包含：(i)包含SEQ ID NO: 69之胺基酸序列之AAV衣殼變異體；及(ii)編碼靶向人類SOD1之多核苷酸之核酸，其中該多核苷酸包含SEQ ID NO: 2562之核苷酸序列。
在又一態樣中，本揭示案提供了一種AAV顆粒，其包含：(i)包含SEQ ID NO: 36之胺基酸序列之AAV衣殼變異體；及(ii)編碼靶向人類SOD1之多核苷酸之核酸，其中該多核苷酸包含SEQ ID NO: 2562之核苷酸序列。
在又一態樣中，本揭示案提供了一種AAV顆粒，其包含：(i)包含SEQ ID NO: 982之胺基酸序列之AAV衣殼變異體；及(ii)編碼靶向人類SOD1之多核苷酸之核酸，其中該多核苷酸包含SEQ ID NO: 2562之核苷酸序列。
在又一態樣中，本揭示案提供了一種AAV顆粒，其包含：(i)包含SEQ ID NO: 981之胺基酸序列之AAV衣殼變異體；及(ii)編碼靶向人類SOD1之多核苷酸之核酸，其中該多核苷酸包含SEQ ID NO: 2562之核苷酸序列。
在又一態樣中，本揭示案提供了一種AAV顆粒，其包含：(i)包含SEQ ID NO: 69之胺基酸序列之AAV衣殼變異體；及(ii)包含SEQ ID NO: 109之核苷酸序列之病毒基因體。
在又一態樣中，本揭示案提供了一種AAV顆粒，其包含：(i)包含SEQ ID NO: 36之胺基酸序列之AAV衣殼變異體；及(ii)包含SEQ ID NO: 109之核苷酸序列之病毒基因體。
在又一態樣中，本揭示案提供了一種AAV顆粒，其包含：(i)包含SEQ ID NO: 982之胺基酸序列之AAV衣殼變異體；及(ii)包含SEQ ID NO: 109之核苷酸序列之病毒基因體。
在又一態樣中，本揭示案提供了一種AAV顆粒，其包含：(i)包含SEQ ID NO: 981之胺基酸序列之AAV衣殼變異體；及(ii)編碼靶向人類SOD1之多核苷酸之核酸，其中該經編碼之多核苷酸包含SEQ ID NO: 5013之核苷酸序列。
在又一態樣中，本揭示案提供了一種包含AAV衣殼變異體及編碼SOD1靶向多核苷酸(例如，SOD1靶向RNA劑，例如siRNA雙鏈體)之核酸之AAV顆粒，其中該AAV衣殼變異體包含有包含來自SPHSKA (SEQ ID NO: 941)之胺基酸序列之至少3、4、5或6個連續胺基酸之胺基酸序列，其中：(i)至少3個連續胺基酸包含SPH；(ii)至少4個連續胺基酸包含SPHS (SEQ ID NO: 1371)；(iii)至少5個連續胺基酸包含SPHSK (SEQ ID NO: 1372)；或(iv)至少6個連續胺基酸包含SPHSKA (SEQ ID NO: 941)；其中AAV衣殼變異體包含：(a) VP1蛋白，其包含SEQ ID NO: 138或SEQ ID NO: 981之胺基酸序列；(b) VP2蛋白，其包含SEQ ID NO: 138之位置138-736或SEQ ID NO: 981之位置138-742之胺基酸序列；(c) VP3蛋白，其包含SEQ ID NO: 138之位置203-736或SEQ ID NO: 981之位置203-742之胺基酸序列；或(d)與(a)-(c)中之任何胺基酸序列具有至少90% (例如，至少約95%、96%、97%、98%或99%)序列一致性之胺基酸序列。在一些實施例中，根據SEQ ID NO: 138或981編號，該胺基酸序列緊接在位置455之後存在。
在又一態樣中，本揭示案提供了一種包含AAV衣殼變異體及編碼SOD1靶向多核苷酸(例如，SOD1靶向RNA劑，例如siRNA雙鏈體)之核酸之AAV顆粒，其中該AAV衣殼變異體相對於SPHSKA (SEQ ID NO: 941)之胺基酸序列包含一個或兩個但不超過三個取代，其中AAV衣殼變異體包含：(a) VP1蛋白，其包含SEQ ID NO: 138或SEQ ID NO: 981之胺基酸序列；(b) VP2蛋白，其包含SEQ ID NO: 138之位置138-736或SEQ ID NO: 981之位置138-742之胺基酸序列；(c) VP3蛋白，其包含SEQ ID NO: 138之位置203-736或SEQ ID NO: 981之位置203-742之胺基酸序列；或(d)與(a)-(c)中之任何胺基酸序列具有至少90% (例如，至少約95%、96%、97%、98%或99%)序列一致性之胺基酸序列。在一些實施例中，根據SEQ ID NO: 138或981編號，該胺基酸序列緊接在位置455之後存在。
在另一態樣中，本揭示案提供了一種包含AAV衣殼變異體及編碼SOD1靶向多核苷酸(例如，SOD1靶向RNA劑，例如siRNA雙鏈體)之核酸之AAV顆粒，其中該AAV衣殼變異體包含來自HDSPHK (SEQ ID NO: 2)之胺基酸序列之至少3、4、5或6個連續胺基酸，其中：(i)至少3個連續胺基酸包含HDS；(ii)至少4個連續胺基酸包含HDSP (SEQ ID NO: 1373)；(iii)至少5個連續胺基酸包含HDSPH (SEQ ID NO: 1374)；及/或(iv)至少6個連續胺基酸包含HDSPHK (SEQ ID NO: 2)；其中AAV衣殼變異體包含：(a) VP1蛋白，其包含SEQ ID NO: 138或SEQ ID NO: 982之胺基酸序列；(b) VP2蛋白，其包含SEQ ID NO: 138之位置138-736或SEQ ID NO: 982之位置138-742之胺基酸序列；(c) VP3蛋白，其包含SEQ ID NO: 138之位置203-736或SEQ ID NO: 982之位置203-742之胺基酸序列；或(d)與(a)-(c)中之任何胺基酸序列具有至少90% (例如，至少約95%、96%、97%、98%或99%)序列一致性之胺基酸序列。在一些實施例中，根據SEQ ID NO: 138或982編號，該胺基酸序列緊接在位置453之後存在。
在另一態樣中，本揭示案提供了一種包含AAV衣殼變異體及編碼SOD1靶向多核苷酸(例如，SOD1靶向RNA劑，例如siRNA雙鏈體)之核酸之AAV顆粒，其中該AAV衣殼變異體相對於HDSPHK (SEQ ID NO: 2)之胺基酸序列包含一個或兩個但不超過三個取代，其中AAV衣殼變異體包含：(a) VP1蛋白，其包含SEQ ID NO: 138或SEQ ID NO: 982之胺基酸序列；(b) VP2蛋白，其包含SEQ ID NO: 138之位置138-736或SEQ ID NO: 982之位置138-742之胺基酸序列；(c) VP3蛋白，其包含SEQ ID NO: 138之位置203-736或SEQ ID NO: 982之位置203-742之胺基酸序列；或(d)與(a)-(c)中之任何胺基酸序列具有至少90% (例如，至少約95%、96%、97%、98%或99%)序列一致性之胺基酸序列。在一些實施例中，根據SEQ ID NO: 138或982編號，該胺基酸序列緊接在位置453之後存在。
根據本揭示案之一些態樣，SOD1靶向多核苷酸，例如SOD1靶向RNA劑係抑制SOD1表現之單股反義RNA分子、單股siRNA或雙股RNA (例如siRNA雙鏈體)。舉例而言，SOD1靶向多核苷酸可為siRNA雙鏈體，該siRNA雙鏈體包含：(i)有義股序列，其包含與表10或表14中所列之有義序列相差不超過3個(例如不超過0個、1個或2個)核苷酸之至少15個(例如至少16個、17個、18個、19個、20個、21個、22個或23個)鄰接核苷酸；及(ii)反義股序列，其包含與表10或表14中之反義序列相差不超過3個(例如不超過0個、1個或2個)核苷酸之至少15個(例如至少16個、17個、18個、19個、20個、21個、22個或23個)鄰接核苷酸。
在又一態樣中，本揭示案提供了一種細胞，例如宿主細胞，其包含本文所述之AAV顆粒。製造AAV顆粒之方法可包含：(i)提供包含病毒基因體之宿主細胞；及(ii)在適於將病毒基因體包裹在AAV衣殼變異體(例如本文所述之AAV衣殼變異體)中之條件下孵育宿主細胞；由此製造AAV顆粒。
進一步揭示醫藥組成物，其包括如本文所述之AAV顆粒及醫藥學上可接受之賦形劑。醫藥組成物之投與可用於治療患有或經診斷患有神經病症(例如神經退化病症)之個體之方法中。在一些實施例中，與SOD1表現相關之神經病症、神經退化病症或疾病係肌肉萎縮性脊髓側索硬化症(ALS)。在一些實施例中，AAV顆粒係靜脈內或藉由ICM或其組合投與。
在一些態樣中，ALS為與SOD1突變相關之家族性ALS。在其他態樣中，ALS為散發性ALS，其特徵在於SOD1蛋白之異常聚集或SOD1蛋白功能或定位之破壞，但不一定係遺傳突變之結果。藉由本發明方法改善之ALS症狀可包括運動神經元退化、肌肉無力、肌肉僵硬、言語不清及/或呼吸困難。ALS可為早期ALS、中期ALS；及/或晚期ALS。
熟習此項技術者將認識到或能夠僅使用常規實驗來確定本文描述之本發明之特定實施例之許多等效物。此類等效物意欲被以下列舉之實施例所涵蓋。 所列舉之實施例
1. 一種AAV顆粒，其包含AAV衣殼變異體及編碼SOD1 (例如人類SOD1)靶向多核苷酸(例如SOD1靶向RNA劑，例如siRNA)之核酸，其中該AAV衣殼變異體包含具有下式之胺基酸序列：[N1]-[N2]-[N3]，其中： (i) 視情況地，[N1]包含X1、X2及X3，其中X1、X2或X3中之至少一者係G； (ii) [N2]包含SPH之胺基酸序列；且 (iii) [N3]包含X4、X5及X6，其中X4、X5或X6中之至少一者係鹼性胺基酸，例如K或R。
2. 如實施例1之AAV顆粒，其中[N3]之X4、X5或兩者係K。
3. 如實施例1或2之AAV顆粒，其中[N3]之X4、X5或X6係R。
4. 如實施例1至3中任一項之AAV顆粒，其中： (a) [N3]之位置X4係：K、S、A、V、T、G、F、W、V、N或R； (b) [N3]之位置X5係：S、K、T、F、I、L、Y、H、M或R；及/或 (c) [N3]之位置X6係：G、A、R、M、I、N、T、Y、D、P、V、L、E、W、N、Q、K或S； 視情況地其中該AAV衣殼變異體包含(a)-(c)中任何上述胺基酸之胺基酸修飾，例如保守取代。
5. 如實施例1至4中任一項之AAV顆粒，其中[N3]包含SK、KA、KS、AR、RM、VK、AS、SR、VK、KR、KK、KN、VR、RS、RK、KT、TS、KF、FG、KI、IG、KL、LG、TT、TY、KY、YG、KD、KP、TR、RG、VR、GA、SL、SS、FL、WK、SA、RA、LR、KW、RR、GK、TK、NK、AK、KV、KG、KH、KM、TG、SE、SV、SW、SN、HG、SQ、LW、MG、MA或SG。
6. 如實施例1至5中任一項之AAV顆粒，其中[N3]係或包含SKA、KSG、ARM、VKS、ASR、VKI、KKN、VRM、RKA、KTS、KFG、KIG、KLG、KTT、KTY、KYG、SKD、SKP、TRG、VRG、KRG、GAR、KSA、KSR、SKL、SRA、SKR、SLR、SRG、SSR、FLR、SKW、SKS、WKA、VRR、SKV、SKT、SKG、GKA、TKA、NKA、SKL、SKN、AKA、KTG、KSL、KSE、KSV、KSW、KSN、KHG、KSQ、KSK、KLW、WKG、KMG、KMA或RSG。
7. 如實施例1至6中任一項之AAV顆粒，其中[N2]-[N3]包含SPHSK (SEQ ID NO: 1372)、SPHKS (SEQ ID NO: 1375)、SPHAR (SEQ ID NO: 1376)、SPHVK (SEQ ID NO: 1377)、SPHAS (SEQ ID NO: 1378)、SPHKK (SEQ ID NO: 1379)、SPHVR (SEQ ID NO: 1380)、SPHRK (SEQ ID NO: 1381)、SPHKT (SEQ ID NO: 1382)、SPHKF (SEQ ID NO: 1383)、SPHKI (SEQ ID NO: 1384)、SPHKL (SEQ ID NO: 1385)、SPHKY (SEQ ID NO: 1386)、SPHTR (SEQ ID NO: 1387)、SPHKR (SEQ ID NO: 1388)、SPHGA (SEQ ID NO: 1389)、SPHSR (SEQ ID NO: 1390)、SPHSL (SEQ ID NO: 1391)、SPHSS (SEQ ID NO: 1392)、SPHFL (SEQ ID NO: 1393)、SPHWK (SEQ ID NO: 1394)、SPHGK (SEQ ID NO: 1395)、SPHTK (SEQ ID NO: 1396)、SPHNK (SEQ ID NO: 1397)、SPHAK (SEQ ID NO: 1398)、SPHKH (SEQ ID NO: 1399)、SPHKM (SEQ ID NO: 1400)或SPHRS (SEQ ID NO: 1401)。
8. 如實施例1至7中任一項之AAV顆粒，其中[N2]-[N3]係或包含： (i) SPHSKA (SEQ ID NO: 941)、SPHKSG (SEQ ID NO: 946)、SPHARM (SEQ ID NO: 947)、SPHVKS (SEQ ID NO: 948)、SPHASR (SEQ ID NO: 949)、SPHVKI (SEQ ID NO: 950)、SPHKKN (SEQ ID NO: 954)、SPHVRM (SEQ ID NO: 955)、SPHRKA (SEQ ID NO: 956)、SPHKFG (SEQ ID NO: 957)、SPHKIG (SEQ ID NO: 958)、SPHKLG (SEQ ID NO: 959)、SPHKTS (SEQ ID NO: 963)、SPHKTT (SEQ ID NO: 964)、SPHKTY (SEQ ID NO: 965)、SPHKYG (SEQ ID NO: 966)、SPHSKD (SEQ ID NO: 967)、SPHSKP (SEQ ID NO: 968)、SPHTRG (SEQ ID NO: 972)、SPHVRG (SEQ ID NO: 973)、SPHKRG (SEQ ID NO: 974)、SPHGAR (SEQ ID NO: 975)、SPHKSA (SEQ ID NO: 977)、SPHKSR (SEQ ID NO: 951)、SPHSKL (SEQ ID NO: 960)、SPHSRA (SEQ ID NO: 969)、SPHSKR (SEQ ID NO: 978)、SPHSLR (SEQ ID NO: 952)、SPHSRG (SEQ ID NO: 961)、SPHSSR (SEQ ID NO: 970)、SPHFLR (SEQ ID NO: 979)、SPHSKW (SEQ ID NO: 953)、SPHSKS (SEQ ID NO: 1402)、SPHWKA (SEQ ID NO: 971)、SPHVRR (SEQ ID NO: 980)、SPHSKT (SEQ ID NO: 1403)、SPHSKG (SEQ ID NO: 1404)、SPHGKA (SEQ ID NO: 1405)、SPHNKA (SEQ ID NO: 1406)、SPHSKN (SEQ ID NO: 1407)、SPHAKA (SEQ ID NO: 1408)、SPHSKV (SEQ ID NO: 1409)、SPHKTG (SEQ ID NO: 1410)、SPHTKA (SEQ ID NO: 1411)、SPHKSL (SEQ ID NO: 1412)、SPHKSE (SEQ ID NO: 1413)、SPHKSV (SEQ ID NO: 1414)、SPHKSW (SEQ ID NO: 1415)、SPHKSN (SEQ ID NO: 1416)、SPHKHG (SEQ ID NO: 1417)、SPHKSQ (SEQ ID NO: 1418)、SPHKSK (SEQ ID NO: 1419)、SPHKLW (SEQ ID NO: 1420)、SPHWKG (SEQ ID NO: 1421)、SPHKMG (SEQ ID NO: 1422)、SPHKMA (SEQ ID NO: 1423)或SPHRSG (SEQ ID NO: 976)； (ii) 包含(i)中胺基酸序列之任何部分之胺基酸序列，例如其任何2、3、4或5個胺基酸，例如連續胺基酸； (iii) 相對於(i)中之該等胺基酸序列中之任一者，包含一個、兩個或三個但不超過四個修飾，例如取代(例如保守取代)、插入或缺失的胺基酸序列；或 (iv) 相對於(i)中之該等胺基酸序列中之任一者，包含一個、兩個或三個但不超過四個不同胺基酸之胺基酸序列。
9. 如實施例1至8中任一項之AAV顆粒，其中該AAV衣殼變異體包含位置453處之除G以外之胺基酸(例如，V、R、D、E、M、T、I、S、A、N、L、K、H、P、W或C)，位置454處之除S以外之胺基酸(V、L、N、D、H、R、P、G、T、I、A、E、Y、M或Q)，及/或位置455處之除G以外之胺基酸(例如，C、L、D、E、Y、H、V、A、N、P或S)，根據SEQ ID NO: 69、70、71、4、5、6、7、8、36-59、138、981或982中任一者編號。
10. 如實施例1至8中任一項之AAV顆粒，其中該AAV衣殼變異體包含位置453處之胺基酸G、位置454處之胺基酸S及位置455處之胺基酸G，根據SEQ ID NO: 138或981編號。
11. 如實施例1至9中任一項之AAV顆粒，其中該AAV衣殼變異體包含位置453處之胺基酸G、位置454處之胺基酸H及位置455處之胺基酸D，根據SEQ ID NO: 138或982編號。
12. 如實施例1至11中任一項之AAV顆粒，其中[N1]包含X1、X2及X3，其中X1、X2或X3中之至少一者係G。
13. 如實施例1至12中任一項之AAV顆粒，其中： (a) [N1]之位置X1係：G、V、R、D、E、M、T、I、S、A、N、L、K、H、P、W或C； (b) [N1]之位置X2係：S、V、L、N、D、H、R、P、G、T、I、A、E、Y、M或Q；及/或 (c) [N1]之位置X3係：G、C、L、D、E、Y、H、V、A、N、P或S； 視情況地其中該AAV衣殼變異體包含(a)-(c)中任何上述胺基酸之胺基酸修飾，例如保守取代。
14. 如實施例1至13中任一項之AAV顆粒，其中[N1]包含GS、SG、GH、HD、GQ、QD、VS、CS、GR、RG、QS、SH、MS、RN、TS、IS、GP、ES、SS、GN、AS、NS、LS、GG、KS、GT、PS、RS、GI、WS、DS、ID、GL、DA、DG、ME、EN、KN、KE、AI、NG、PG、TG、SV、IG、LG、AG、EG、SA、YD、HE、HG、RD、ND、PD、MG、QV、DD、HN、HP、GY、GM、GD或HS。
15. 如實施例1至14中任一項之AAV顆粒，其中[N1]係或包含GSG、GHD、GQD、VSG、CSG、GRG、CSH、GQS、GSH、RVG、GSC、GLL、GDD、GHE、GNY、MSG、RNG、TSG、ISG、GPG、ESG、SSG、GNG、ASG、NSG、LSG、GGG、KSG、HSG、GTG、PSG、GSV、RSG、GIG、WSG、DSG、IDG、GLG、DAG、DGG、MEG、ENG、GSA、KNG、KEG、AIG、GYD、GHG、GRD、GND、GPD、GMG、GQV、GHN、GHP或GHS。
16. 如實施例1至15中任一項之AAV顆粒，其中[N1]-[N2]包含 (i) SGSPH (SEQ ID NO: 1424)、HDSPH (SEQ ID NO: 1374)、VGSPH (SEQ ID NO: 1432)、QDSPH (SEQ ID NO: 1425)、RGSPH (SEQ ID NO: 1426)、SHSPH (SEQ ID NO: 1427)、QSSPH (SEQ ID NO: 1428)、DDSPH (SEQ ID NO: 1429)、HESPH (SEQ ID NO: 1430)、NYSPH (SEQ ID NO: 1431)、SCSPH (SEQ ID NO: 1433)、LLSPH (SEQ ID NO: 1434)、NGSPH (SEQ ID NO: 1435)、PGSPH (SEQ ID NO: 1436)、GGSPH (SEQ ID NO: 1437)、TGSPH (SEQ ID NO: 1438)、SVSPH (SEQ ID NO: 1439)、IGSPH (SEQ ID NO: 1440)、DGSPH (SEQ ID NO: 1441)、LGSPH (SEQ ID NO: 1442)、AGSPH (SEQ ID NO: 1443)、EGSPH (SEQ ID NO: 1444)、SASPH (SEQ ID NO: 1445)、YDSPH (SEQ ID NO: 1446)、HGSPH (SEQ ID NO: 1447)、RDSPH (SEQ ID NO: 1448)、NDSPH (SEQ ID NO: 1449)、PDSPH (SEQ ID NO: 1450)、MGSPH (SEQ ID NO: 1451)、QVSPH (SEQ ID NO: 1452)、HNSPH (SEQ ID NO: 1453)、HPSPH (SEQ ID NO: 1454)或HSSPH (SEQ ID NO: 1455)； (ii) 包含(i)中胺基酸序列之任何部分之胺基酸序列，例如其任何2、3或4個胺基酸，例如連續胺基酸； (iii) 相對於(i)中之該等胺基酸序列中之任一者，包含一個、兩個或三個但不超過四個修飾，例如取代(例如保守取代)、插入或缺失的胺基酸序列；或 (iv) 相對於(i)中之該等胺基酸序列中之任一者，包含一個、兩個或三個但不超過四個不同胺基酸之胺基酸序列。
17. 如實施例1至16中任一項之AAV顆粒，其中[N1]-[N2]係或包含： (i) GSGSPH (SEQ ID NO: 1456)、GHDSPH (SEQ ID NO: 1457)、VSGSPH (SEQ ID NO: 1459)、GQDSPH (SEQ ID NO: 1458)、CSGSPH (SEQ ID NO: 1460)、GRGSPH (SEQ ID NO: 1461)、CSHSPH (SEQ ID NO: 1462)、GQSSPH (SEQ ID NO: 1463)、GSHSPH (SEQ ID NO: 1464)、GDDSPH (SEQ ID NO: 1465)、GHESPH (SEQ ID NO: 1466)、GNYSPH (SEQ ID NO: 1467)、RVGSPH (SEQ ID NO: 1468)、GSCSPH (SEQ ID NO: 1469)、GLLSPH (SEQ ID NO: 1470)、MSGSPH (SEQ ID NO: 1471)、RNGSPH (SEQ ID NO: 1472)、TSGSPH (SEQ ID NO: 1473)、ISGSPH (SEQ ID NO: 1474)、GPGSPH (SEQ ID NO: 1475)、ESGSPH (SEQ ID NO: 1476)、SSGSPH (SEQ ID NO: 1477)、GNGSPH (SEQ ID NO: 1478)、ASGSPH (SEQ ID NO: 1479)、NSGSPH (SEQ ID NO: 1480)、LSGSPH (SEQ ID NO: 1481)、GGGSPH (SEQ ID NO: 1482)、KSGSPH (SEQ ID NO: 1483)、HSGSPH (SEQ ID NO: 1484)、GTGSPH (SEQ ID NO: 1485)、PSGSPH (SEQ ID NO: 1486)、GSVSPH (SEQ ID NO: 1487)、RSGSPH (SEQ ID NO: 1488)、GIGSPH (SEQ ID NO: 1489)、WSGSPH (SEQ ID NO: 1490)、DSGSPH (SEQ ID NO: 1491)、IDGSPH (SEQ ID NO: 1492)、GLGSPH (SEQ ID NO: 1493)、DAGSPH (SEQ ID NO: 1494)、DGGSPH (SEQ ID NO: 1495)、MEGSPH (SEQ ID NO: 1496)、ENGSPH (SEQ ID NO: 1497)、GSASPH (SEQ ID NO: 1498)、KNGSPH (SEQ ID NO: 1499)、KEGSPH (SEQ ID NO: 1500)、AIGSPH (SEQ ID NO: 1501)、GYDSPH (SEQ ID NO: 1502)、GHGSPH (SEQ ID NO: 1503)、GRDSPH (SEQ ID NO: 1504)、GNDSPH (SEQ ID NO: 1505)、GPDSPH (SEQ ID NO: 1506)、GMGSPH (SEQ ID NO: 1507)、GQVSPH (SEQ ID NO: 1508)、GHNSPH (SEQ ID NO: 1509)、GHPSPH (SEQ ID NO: 1510)或GHSSPH (SEQ ID NO: 1511)； (ii) 包含(i)中胺基酸序列之任何部分之胺基酸序列，例如其任何2、3、4或5個胺基酸，例如連續胺基酸； (iii) 相對於(i)中之該等胺基酸序列中之任一者，包含一個、兩個或三個但不超過四個修飾，例如取代(例如保守取代)、插入或缺失的胺基酸序列；或 (iv) 相對於(i)中之該等胺基酸序列中之任一者，包含一個、兩個或三個但不超過四個不同胺基酸之胺基酸序列。
18. 如實施例1至17中任一項之AAV顆粒，其中[N1]-[N2]-[N3]包含: (i) SGSPHSK (SEQ ID NO: 1512)、HDSPHKS (SEQ ID NO: 1513)、VGSPHSK (SEQ ID NO: 1540)、SGSPHAR (SEQ ID NO: 1514)、SGSPHVK (SEQ ID NO: 1515)、QDSPHKS (SEQ ID NO: 1516)、SGSPHKK (SEQ ID NO: 1517)、SGSPHVR (SEQ ID NO: 1518)、SGSPHAS (SEQ ID NO: 1519)、SGSPHRK (SEQ ID NO: 1520)、SGSPHKT (SEQ ID NO: 1521)、SHSPHKS (SEQ ID NO: 1522)、QSSPHRS (SEQ ID NO: 1523)、RGSPHAS (SEQ ID NO: 1524)、RGSPHSK (SEQ ID NO: 1525)、SGSPHKF (SEQ ID NO: 1526)、SGSPHKI (SEQ ID NO: 1527)、SGSPHKL (SEQ ID NO: 1528)、SGSPHKY (SEQ ID NO: 1529)、SGSPHTR (SEQ ID NO: 1530)、SHSPHKR (SEQ ID NO: 1531)、SGSPHGA (SEQ ID NO: 1532)、HDSPHKR (SEQ ID NO: 1533)、DDSPHKS (SEQ ID NO: 1534)、HESPHKS (SEQ ID NO: 1535)、NYSPHKI (SEQ ID NO: 1536)、SGSPHSR (SEQ ID NO: 1537)、SGSPHSL (SEQ ID NO: 1538)、SGSPHSS (SEQ ID NO: 1539)、SCSPHRK (SEQ ID NO: 1541)、SGSPHFL (SEQ ID NO: 1542)、LLSPHWK (SEQ ID NO: 1543)、NGSPHSK (SEQ ID NO: 1544)、PGSPHSK (SEQ ID NO: 1545)、GGSPHSK (SEQ ID NO: 1546)、TGSPHSK (SEQ ID NO: 1547)、SVSPHGK (SEQ ID NO: 1548)、SGSPHTK (SEQ ID NO: 1549)、IGSPHSK (SEQ ID NO: 1550)、DGSPHSK (SEQ ID NO: 1551)、SGSPHNK (SEQ ID NO: 1552)、LGSPHSK (SEQ ID NO: 1553)、AGSPHSK (SEQ ID NO: 1554)、EGSPHSK (SEQ ID NO: 1555)、SASPHSK (SEQ ID NO: 1556)、SGSPHAK (SEQ ID NO: 1557)、HDSPHKI (SEQ ID NO: 1558)、YDSPHKS (SEQ ID NO: 1559)、HDSPHKT (SEQ ID NO: 1560)、RGSPHKR (SEQ ID NO: 1561)、HGSPHSK (SEQ ID NO: 1562)、RDSPHKS (SEQ ID NO: 1563)、NDSPHKS (SEQ ID NO: 1564)、QDSPHKI (SEQ ID NO: 1565)、PDSPHKI (SEQ ID NO: 1566)、PDSPHKS (SEQ ID NO: 1567)、MGSPHSK (SEQ ID NO: 1568)、HDSPHKH (SEQ ID NO: 1569)、QVSPHKS (SEQ ID NO: 1570)、HNSPHKS (SEQ ID NO: 1571)、NGSPHKR (SEQ ID NO: 1572)、HDSPHKY (SEQ ID NO: 1573)、NDSPHKI (SEQ ID NO: 1574)、HDSPHKL (SEQ ID NO: 1575)、HPSPHWK (SEQ ID NO: 1576)、HDSPHKM (SEQ ID NO: 1577)或HSSPHRS (SEQ ID NO: 1578)； (ii) 包含(i)中胺基酸序列之任何部分之胺基酸序列，例如其任何2、3、4、5或6個胺基酸，例如連續胺基酸； (iii) 相對於(i)中之該等胺基酸序列中之任一者，包含一個、兩個或三個但不超過四個修飾，例如取代(例如保守取代)、插入或缺失的胺基酸序列；或 (iv) 相對於(i)中之該等胺基酸序列中之任一者，包含一個、兩個或三個但不超過四個不同胺基酸之胺基酸序列。
19. 如實施例1至18中任一項之AAV顆粒，其中[N1]-[N2]-[N3]係或包含： (i) GSGSPHSKA (SEQ ID NO: 1369)、GHDSPHKSG (SEQ ID NO: 1370)、VSGSPHSKA (SEQ ID NO: 1586)、GSGSPHARM (SEQ ID NO: 1579)、GSGSPHVKS (SEQ ID NO: 1580)、GQDSPHKSG (SEQ ID NO: 1581)、GSGSPHASR (SEQ ID NO: 1582)、GSGSPHVKI (SEQ ID NO: 1583)、GSGSPHKKN (SEQ ID NO: 1584)、GSGSPHVRM (SEQ ID NO: 1585)、CSGSPHSKA (SEQ ID NO: 1587)、GSGSPHRKA (SEQ ID NO: 1588)、CSGSPHKTS (SEQ ID NO: 1589)、CSHSPHKSG (SEQ ID NO: 1590)、GQSSPHRSG (SEQ ID NO: 1591)、GRGSPHASR (SEQ ID NO: 1592)、GRGSPHSKA (SEQ ID NO: 1593)、GSGSPHKFG (SEQ ID NO: 1594)、GSGSPHKIG (SEQ ID NO: 1595)、GSGSPHKLG (SEQ ID NO: 1596)、GSGSPHKTS (SEQ ID NO: 1597)、GSGSPHKTT (SEQ ID NO: 1598)、GSGSPHKTY (SEQ ID NO: 1599)、GSGSPHKYG (SEQ ID NO: 1600)、GSGSPHSKD (SEQ ID NO: 1601)、GSGSPHSKP (SEQ ID NO: 1602)、GSGSPHTRG (SEQ ID NO: 1603)、GSGSPHVRG (SEQ ID NO: 1604)、GSHSPHKRG (SEQ ID NO: 1605)、GSHSPHKSG (SEQ ID NO: 1606)、VSGSPHASR (SEQ ID NO: 1607)、VSGSPHGAR (SEQ ID NO: 1608)、VSGSPHKFG (SEQ ID NO: 1609)、GHDSPHKRG (SEQ ID NO: 1610)、GDDSPHKSG (SEQ ID NO: 1611)、GHESPHKSA (SEQ ID NO: 1612)、GHDSPHKSA (SEQ ID NO: 1613)、GNYSPHKIG (SEQ ID NO: 1614)、GHDSPHKSR (SEQ ID NO: 1615)、GSGSPHSKL (SEQ ID NO: 1616)、GSGSPHSRA (SEQ ID NO: 1617)、GSGSPHSKR (SEQ ID NO: 1618)、GSGSPHSLR (SEQ ID NO: 1619)、GSGSPHSRG (SEQ ID NO: 1620)、GSGSPHSSR (SEQ ID NO: 1621)、RVGSPHSKA (SEQ ID NO: 1622)、GSCSPHRKA (SEQ ID NO: 1623)、GSGSPHFLR (SEQ ID NO: 1624)、GSGSPHSKW (SEQ ID NO: 1625)、GSGSPHSKS (SEQ ID NO: 1626)、GLLSPHWKA (SEQ ID NO: 1627)、GSGSPHVRR (SEQ ID NO: 1628)、GSGSPHSKV (SEQ ID NO: 1629)、MSGSPHSKA (SEQ ID NO: 1630)、RNGSPHSKA (SEQ ID NO: 1631)、TSGSPHSKA (SEQ ID NO: 1632)、ISGSPHSKA (SEQ ID NO: 1633)、GPGSPHSKA (SEQ ID NO: 1634)、GSGSPHSKT (SEQ ID NO: 1635)、ESGSPHSKA (SEQ ID NO: 1636)、SSGSPHSKA (SEQ ID NO: 1637)、GNGSPHSKA (SEQ ID NO: 1638)、ASGSPHSKA (SEQ ID NO: 1639)、NSGSPHSKA (SEQ ID NO: 1640)、LSGSPHSKA (SEQ ID NO: 1641)、GGGSPHSKA (SEQ ID NO: 1642)、KSGSPHSKA (SEQ ID NO: 1643)、GGGSPHSKS (SEQ ID NO: 1644)、GSGSPHSKG (SEQ ID NO: 1645)、HSGSPHSKA (SEQ ID NO: 1646)、GTGSPHSKA (SEQ ID NO: 1647)、PSGSPHSKA (SEQ ID NO: 1648)、GSVSPHGKA (SEQ ID NO: 1649)、RSGSPHSKA (SEQ ID NO: 1650)、GSGSPHTKA (SEQ ID NO: 1651)、GIGSPHSKA (SEQ ID NO: 1652)、WSGSPHSKA (SEQ ID NO: 1653)、DSGSPHSKA (SEQ ID NO: 1654)、IDGSPHSKA (SEQ ID NO: 1655)、GSGSPHNKA (SEQ ID NO: 1656)、GLGSPHSKS (SEQ ID NO: 1657)、DAGSPHSKA (SEQ ID NO: 1658)、DGGSPHSKA (SEQ ID NO: 1659)、MEGSPHSKA (SEQ ID NO: 1660)、ENGSPHSKA (SEQ ID NO: 1661)、GSASPHSKA (SEQ ID NO: 1662)、GNGSPHSKS (SEQ ID NO: 1663)、KNGSPHSKA (SEQ ID NO: 1664)、KEGSPHSKA (SEQ ID NO: 1665)、AIGSPHSKA (SEQ ID NO: 1666)、GSGSPHSKN (SEQ ID NO: 1667)、GSGSPHAKA (SEQ ID NO: 1668)、GHDSPHKIG (SEQ ID NO: 1669)、GYDSPHKSG (SEQ ID NO: 1670)、GHESPHKSG (SEQ ID NO: 1671)、GHDSPHKTG (SEQ ID NO: 1672)、GRGSPHKRG (SEQ ID NO: 1673)、GQDSPHKSG (SEQ ID NO: 1581)、GHDSPHKSL (SEQ ID NO: 1674)、GHGSPHSKA (SEQ ID NO: 1675)、GHDSPHKSE (SEQ ID NO: 1676)、VSGSPHSKA (SEQ ID NO: 1586)、GRDSPHKSG (SEQ ID NO: 1677)、GNDSPHKSV (SEQ ID NO: 1678)、GQDSPHKIG (SEQ ID NO: 1679)、GHDSPHKSV (SEQ ID NO: 1680)、GPDSPHKIG (SEQ ID NO: 1681)、GPDSPHKSG (SEQ ID NO: 1682)、GHDSPHKSW (SEQ ID NO: 1683)、GHDSPHKSN (SEQ ID NO: 1684)、GMGSPHSKT (SEQ ID NO: 1685)、GHDSPHKHG (SEQ ID NO: 1686)、GQVSPHKSG (SEQ ID NO: 1687)、GDDSPHKSV (SEQ ID NO: 1688)、GHNSPHKSG (SEQ ID NO: 1689)、GNGSPHKRG (SEQ ID NO: 1690)、GHDSPHKYG (SEQ ID NO: 1691)、GHDSPHKSQ (SEQ ID NO: 1692)、GNDSPHKIG (SEQ ID NO: 1693)、GHDSPHKSK (SEQ ID NO: 1694)、GHDSPHKLW (SEQ ID NO: 1695)、GHPSPHWKG (SEQ ID NO: 1696)、GHDSPHKMG (SEQ ID NO: 1697)、GHDSPHKMA (SEQ ID NO: 1698)或GHSSPHRSG (SEQ ID NO: 1699)； (ii) 包含(i)中胺基酸序列之任何部分之胺基酸序列，例如其任何2、3、4、5、6、7或8個胺基酸，例如連續胺基酸； (iii) 相對於(i)中之該等胺基酸序列中之任一者，包含一個、兩個或三個但不超過四個修飾，例如取代(例如保守取代)、插入或缺失的胺基酸序列；或 (iv) 相對於(i)中之該等胺基酸序列中之任一者，包含一個、兩個或三個但不超過四個不同胺基酸之胺基酸序列。
20. 如實施例1至19中任一項之AAV顆粒，其中[N3]包含SK、KA、KS或SG。
21. 如實施例1至20中任一項之AAV顆粒，其中[N3]係或包含SKA、KSG或KYG。
22. 如實施例1至21中任一項之AAV顆粒，其中[N2]-[N3]包含SPHSK (SEQ ID NO: 1372)、SPHKS (SEQ ID NO: 1375)或SPHKY (SEQ ID NO: 1386)。
23. 如實施例1至22中任一項之AAV顆粒，其中[N2]-[N3]係或包含SPHSKA (SEQ ID NO: 941)。
24. 如實施例1至22中任一項之AAV顆粒，其中[N2]-[N3]係或包含SPHKSG (SEQ ID NO: 946)。
25. 如實施例1至22中任一項之AAV顆粒，其中[N2]-[N3]係或包含SPHKYG (SEQ ID NO: 966)。
26. 如實施例1至25中任一項之AAV顆粒，其中[N1]包含GS、SG、GH或HD。
27. 如實施例1至26中任一項之AAV顆粒，其中[N1]係或包含GSG。
28. 如實施例1至26中任一項之AAV顆粒，其中[N1]係或包含GHD。
29. 如實施例1至23或26至27中任一項之AAV顆粒，其中[N1]-[N2]-[N3]包含SGSPHSK (SEQ ID NO: 1512)。
30. 如實施例1至22、24、26或28中任一項之AAV顆粒，其中[N1]-[N2]-[N3]包含HDSPHKS (SEQ ID NO: 1513)。
31. 如實施例1至22或25至27中任一項之AAV顆粒，其中[N1]-[N2]-[N3]包含SGSPHKYG (SEQ ID NO: 1700)。
32. 如實施例1至8、10、12至23、26至27或29中任一項之AAV顆粒，其中[N1]-[N2]-[N3]係或包含GSGSPHSKA (SEQ ID NO: 1369)。
33. 如實施例1至9、11至22、24、26、28或30中任一項之AAV顆粒，其中[N1]-[N2]-[N3]係或包含GHDSPHKSG (SEQ ID NO: 1370)。
34. 如實施例1至8、10、12至22、25至27或31中任一項之AAV顆粒，其中[N1]-[N2]-[N3]係或包含GSGSPHKYG (SEQ ID NO: 1600)。
35. 如實施例1至34中任一項之AAV顆粒，其中[N1]-[N2]-[N3]替換位置453-455，根據SEQ ID NO: 138之胺基酸序列編號。
36. 如實施例1至35中任一項之AAV顆粒，其中該AAV衣殼變異體包含位置456處之除Q以外之胺基酸(例如，W、K、R、G、L、V、S、P、H、K、I、M、A、E或F)，位置457處之除N以外之胺基酸(例如，Y、C、K、T、H、R、D、V、S、P、G、W、E、F、A、I、M、Q或L)，位置458處之除Q以外之胺基酸(例如，G、K、H、R、T、L、D、A、P、I、F、V、M、W、Y、S、E、N或Y)，及/或位置459處之除Q以外之胺基酸(例如，H、L、R、W、K、A、P、E、M、I、S、G、N、Y、C、V、T、D或V)，相對於根據SEQ ID NO: 138編號之參考序列。
37. 如實施例1至36中任一項之AAV顆粒，其中該AAV衣殼變異體包含位置462處之除Q以外之胺基酸(例如，W、K、R、G、L、V、S、P、H、K、I、M、A、E或F)，位置463處之除N以外之胺基酸(例如，Y、C、K、T、H、R、D、V、S、P、G、W、E、F、A、I、M、Q或L)，位置464處之除Q以外之胺基酸(例如，G、K、H、R、T、L、D、A、P、I、F、V、M、W、Y、S、E、N或Y)，及/或位置465處之除Q以外之胺基酸(例如，H、L、R、W、K、A、P、E、M、I、S、G、N、Y、C、V、T、D或V)，相對於根據SEQ ID NO: 981、982、36、37、39、40、42-46、48、49、50、52、53、56或57編號之參考序列。
38. 如實施例1至37中任一項之AAV顆粒，其中該AAV衣殼變異體包含： (a) 位置456處之胺基酸Q，位置457處之胺基酸N，位置458處之胺基酸Q，及/或位置459處之胺基酸Q，相對於根據SEQ ID NO: 138編號之參考序列；或 (b) 位置462處之胺基酸Q，位置463處之胺基酸N，位置464處之胺基酸Q，及/或位置465處之胺基酸Q，相對於根據SEQ ID NO: 981、982、36、37、39、40、42-46、48、49、50、52、53、56或57編號之參考序列。
39. 如實施例1至38中任一項之AAV顆粒，其中該AAV衣殼變異體進一步包含[N4]，其中[N4]包含X7 X8 X9 X10，且其中： (a) 位置X7係：Q、W、K、R、G、L、V、S、P、H、K、I、M、A、E或F； (b) 位置X8係：N、Y、C、K、T、H、R、D、V、S、P、G、W、E、F、A、I、M、Q或L； (c) 位置X9係：Q、G、K、H、R、T、L、D、A、P、I、F、V、M、W、Y、S、E、N或Y；並且 (d) 位置X10係：Q、H、L、R、W、K、A、P、E、M、I、S、G、N、Y、C、V、T、D或V； 視情況地其中該AAV衣殼變異體包含(a)-(d)中任何上述胺基酸之胺基酸修飾，例如保守取代。
40. 如實施例39之AAV顆粒，其中： (a) [N4]之位置X7係Q或R； (b) [N4]之位置X8係N或R； (c) [N4]之位置X9係Q或R；並且 (d) [N4]之位置X10係Q、L或R。
41. 如實施例39或40之AAV顆粒，其中[N4]係或包含： (i) QNQQ (SEQ ID NO: 1701)、WNQQ (SEQ ID NO: 1702)、QYYV (SEQ ID NO: 1703)、RRQQ (SEQ ID NO: 1704)、GCGQ (SEQ ID NO: 1705)、LRQQ (SEQ ID NO: 1706)、RNQQ (SEQ ID NO: 1707)、VNQQ (SEQ ID NO: 1708)、FRLQ (SEQ ID NO: 1709)、FNQQ (SEQ ID NO: 1710)、LLQQ (SEQ ID NO: 1711)、SNQQ (SEQ ID NO: 1712)、RLQQ (SEQ ID NO: 1713)、LNQQ (SEQ ID NO: 1714)、QRKL (SEQ ID NO: 1715)、LRRQ (SEQ ID NO: 1716)、QRLR (SEQ ID NO: 1717)、QRRL (SEQ ID NO: 1718)、RRLQ (SEQ ID NO: 1719)、RLRQ (SEQ ID NO: 1720)、SKRQ (SEQ ID NO: 1721)、QLYR (SEQ ID NO: 1722)、QLTV (SEQ ID NO: 1723)、QNKQ (SEQ ID NO: 1724)、KNQQ (SEQ ID NO: 1725)、QKQQ (SEQ ID NO: 1726)、QTQQ (SEQ ID NO: 1727)、QNHQ (SEQ ID NO: 1728)、QHQQ (SEQ ID NO: 1729)、QNQH (SEQ ID NO: 1730)、QHRQ (SEQ ID NO: 1731)、LTQQ (SEQ ID NO: 1732)、QNQW (SEQ ID NO: 1733)、QNTH (SEQ ID NO: 1734)、RRRQ (SEQ ID NO: 1735)、QYQQ (SEQ ID NO: 1736)、QNDQ (SEQ ID NO: 1737)、QNRH (SEQ ID NO: 1738)、RDQQ (SEQ ID NO: 1739)、PNLQ (SEQ ID NO: 1740)、HVRQ (SEQ ID NO: 1741)、PNQH (SEQ ID NO: 1742)、HNQQ (SEQ ID NO: 1743)、QSQQ (SEQ ID NO: 1744)、QPAK (SEQ ID NO: 1745)、QNLA (SEQ ID NO: 1746)、QNQL (SEQ ID NO: 1747)、QGQQ (SEQ ID NO: 1748)、LNRQ (SEQ ID NO: 1749)、QNPP (SEQ ID NO: 1750)、QNLQ (SEQ ID NO: 1751)、QDQE (SEQ ID NO: 1752)、QDQQ (SEQ ID NO: 1753)、HWQQ (SEQ ID NO: 1755)、PNQQ (SEQ ID NO: 1756)、PEQQ (SEQ ID NO: 1757)、QRTM (SEQ ID NO: 1758)、LHQH (SEQ ID NO: 1759)、QHRI (SEQ ID NO: 1760)、QYIH (SEQ ID NO: 1761)、QKFE (SEQ ID NO: 1762)、QFPS (SEQ ID NO: 1763)、QNPL (SEQ ID NO: 1764)、QAIK (SEQ ID NO: 1765)、QNRQ (SEQ ID NO: 1766)、QYQH (SEQ ID NO: 1767)、QNPQ (SEQ ID NO: 1768)、QHQL (SEQ ID NO: 1769)、QSPP (SEQ ID NO: 1770)、QAKL (SEQ ID NO: 1771)、KSQQ (SEQ ID NO: 1772)、QDRP (SEQ ID NO: 1773)、QNLG (SEQ ID NO: 1774)、QAFH (SEQ ID NO: 1775)、QNAQ (SEQ ID NO: 1776)、HNQL (SEQ ID NO: 1777)、QKLN (SEQ ID NO: 1778)、QNVQ (SEQ ID NO: 1779)、QAQQ (SEQ ID NO: 1780)、QTPP (SEQ ID NO: 1781)、QPPA (SEQ ID NO: 1782)、QERP (SEQ ID NO: 1783)、QDLQ (SEQ ID NO: 1784)、QAMH (SEQ ID NO: 1785)、QHPS (SEQ ID NO: 1786)、PGLQ (SEQ ID NO: 1787)、QGIR (SEQ ID NO: 1788)、QAPA (SEQ ID NO: 1789)、QIPP (SEQ ID NO: 1790)、QTQL (SEQ ID NO: 1791)、QAPS (SEQ ID NO: 1792)、QNTY (SEQ ID NO: 1793)、QDKQ (SEQ ID NO: 1794)、QNHL (SEQ ID NO: 1795)、QIGM (SEQ ID NO: 1796)、LNKQ (SEQ ID NO: 1797)、PNQL (SEQ ID NO: 1798)、QLQQ (SEQ ID NO: 1799)、QRMS (SEQ ID NO: 2897)、QGIL (SEQ ID NO: 2907)、QDRQ (SEQ ID NO: 2917)、RDWQ (SEQ ID NO: 3081)、QERS (SEQ ID NO: 3238)、QNYQ (SEQ ID NO: 3590)、QRTC (SEQ ID NO: 3849)、QIGH (SEQ ID NO: 3850)、QGAI (SEQ ID NO: 3851)、QVPP (SEQ ID NO: 3852)、QVQQ (SEQ ID NO: 3853)、LMRQ (SEQ ID NO: 3854)、QYSV (SEQ ID NO: 3855)、QAIT (SEQ ID NO: 3856)、QKTL (SEQ ID NO: 3857)、QLHH (SEQ ID NO: 3858)、QNII (SEQ ID NO: 3859)、QGHH (SEQ ID NO: 3860)、QSKV (SEQ ID NO: 3861)、QLPS (SEQ ID NO: 3862)、IGKQ (SEQ ID NO: 3863)、QAIH (SEQ ID NO: 3864)、QHGL (SEQ ID NO: 3865)、QFMC (SEQ ID NO: 3866)、QNQM (SEQ ID NO: 3867)、QHLQ (SEQ ID NO: 3868)、QPAR (SEQ ID NO: 3869)、QSLQ (SEQ ID NO: 3870)、QSQL (SEQ ID NO: 3871)、HSQQ (SEQ ID NO: 3872)、QMPS (SEQ ID NO: 3873)、QGSL (SEQ ID NO: 3874)、QVPA (SEQ ID NO: 3875)、HYQQ (SEQ ID NO: 3876)、QVPS (SEQ ID NO: 3877)、RGEQ (SEQ ID NO: 3878)、PGQQ (SEQ ID NO: 3879)、LEQQ (SEQ ID NO: 3880)、QNQS (SEQ ID NO: 3881)、QKVI (SEQ ID NO: 3882)、QNND (SEQ ID NO: 3883)、QSVH (SEQ ID NO: 3884)、QPLG (SEQ ID NO: 3885)、HNQE (SEQ ID NO: 3886)、QIQQ (SEQ ID NO: 3887)、QVRN (SEQ ID NO: 3888)、PSNQ (SEQ ID NO: 3889)、QVGH (SEQ ID NO: 3890)、QRDI (SEQ ID NO: 3891)、QMPN (SEQ ID NO: 3892)、RGLQ (SEQ ID NO: 3893)、PSLQ (SEQ ID NO: 3894)、QRDQ (SEQ ID NO: 3895)、QAKG (SEQ ID NO: 3896)、QSAH (SEQ ID NO: 3897)、QSTM (SEQ ID NO: 3898)、QREM (SEQ ID NO: 3899)、QYRA (SEQ ID NO: 3900)、QRQQ (SEQ ID NO: 3901)、QWQQ (SEQ ID NO: 3902)、QRMN (SEQ ID NO: 3903)、GDSQ (SEQ ID NO: 3904)、QKIS (SEQ ID NO: 3905)、PSMQ (SEQ ID NO: 3906)、SPRQ (SEQ ID NO: 3907)、MEQQ (SEQ ID NO: 3908)、QYQN (SEQ ID NO: 3909)、QIRQ (SEQ ID NO: 3910)、QSVQ (SEQ ID NO: 3911)、RSQQ (SEQ ID NO: 3912)、QNKL (SEQ ID NO: 3913)、QIQH (SEQ ID NO: 3914)、PRQQ (SEQ ID NO: 3915)、HTQQ (SEQ ID NO: 3916)、QRQH (SEQ ID NO: 3917)、RNQE (SEQ ID NO: 3918)、QSKQ (SEQ ID NO: 3919)、QNQP (SEQ ID NO: 3920)、QSPQ (SEQ ID NO: 3921)、 QTRQ (SEQ ID NO: 3922)、QNLH (SEQ ID NO: 3923)、QNQE (SEQ ID NO: 3924)、LNQP (SEQ ID NO: 3925)、QNQD (SEQ ID NO: 3926)、QNLL (SEQ ID NO: 3927)、QLVI (SEQ ID NO: 3928)、RTQE (SEQ ID NO: 3929)、QTHQ (SEQ ID NO: 3930)、QDQH (SEQ ID NO: 3931)、QSQH (SEQ ID NO: 3932)、VRQQ (SEQ ID NO: 3933)、AWQQ (SEQ ID NO: 3934)、QSVP (SEQ ID NO: 3935)、QNIQ (SEQ ID NO: 3936)、LDQQ (SEQ ID NO: 3937)、PDQQ (SEQ ID NO: 3938)、ESQQ (SEQ ID NO: 3939)、QRQL (SEQ ID NO: 3940)、QIIV (SEQ ID NO: 3941)、QKQS (SEQ ID NO: 3942)、QSHQ (SEQ ID NO: 3943)、QFVV (SEQ ID NO: 3944)、QSQP (SEQ ID NO: 3945)、QNEQ (SEQ ID NO: 3946)、INQQ (SEQ ID NO: 3947)、RNRQ (SEQ ID NO: 3948)、RDQK (SEQ ID NO: 3949)、QWKR (SEQ ID NO: 3950)、ENRQ (SEQ ID NO: 3951)、QTQP (SEQ ID NO: 3952)、QKQL (SEQ ID NO: 3953)、RNQL (SEQ ID NO: 3954)、ISIQ (SEQ ID NO: 3955)、QTVC (SEQ ID NO: 3956)、QQIM (SEQ ID NO: 3957)、LNHQ (SEQ ID NO: 3958)、QNQA (SEQ ID NO: 3959)、QMIH (SEQ ID NO: 3960)、RNHQ (SEQ ID NO: 3961)或QKMN (SEQ ID NO: 3962)； (ii) 包含(i)中胺基酸序列之任何部分之胺基酸序列，例如其任何2或3個胺基酸，例如連續胺基酸； (iii) 相對於(i)中之該等胺基酸序列中之任一者，包含一個、兩個或三個但不超過四個修飾，例如取代(例如保守取代)、插入或缺失的胺基酸序列；或 (iv) 相對於(i)中之該等胺基酸序列中之任一者，包含一個、兩個或三個但不超過四個不同胺基酸之胺基酸序列。
42. 如實施例39至41中任一項之AAV顆粒，其中[N1]-[N2]-[N3]-[N4]係或包含： (i) SEQ ID NO: 1800-2241中任一者之胺基酸序列； (ii) 包含(i)中胺基酸序列之任何部分之胺基酸序列，例如其任何2、3、4、5、6、7、8、9、10、11或12個胺基酸，例如連續胺基酸； (iii) 相對於(i)中之該等胺基酸序列中之任一者，包含一個、兩個或三個但不超過四個修飾，例如取代(例如保守取代)、插入或缺失的胺基酸序列；或 (iv) 相對於(i)中之該等胺基酸序列中之任一者，包含一個、兩個或三個但不超過四個不同胺基酸之胺基酸序列。
43. 如實施例37至42中任一項之AAV顆粒，其中[N1]-[N2]-[N3]-[N4]係或包含GSGSPHSKAQNQQ (SEQ ID NO: 1801)。
44. 如實施例37至42中任一項之AAV顆粒，其中[N1]-[N2]-[N3]-[N4]係或包含GHDSPHKSGQNQQ (SEQ ID NO: 1800)。
45. 如實施例37至42中任一項之AAV顆粒，其中[N1]-[N2]-[N3]-[N4]係或包含GSGSPHKYGQNQQT (SEQ ID NO: 910)。
46. 如實施例1至45中任一項之AAV顆粒，其中該AAV衣殼變異體包含位置450處之除T以外之胺基酸(例如，S、Y、M、A、C、I、R、L、D、F、V、Q、N、H、E或G)，位置451處之除I以外之胺基酸(例如，M、P、E、N、D、S、A、T、G、Q、F、V、L、C、H、R、W或L)，及/或位置452處之除N以外之胺基酸(例如，M、E、G、Y、W、T、I、Q、F、V、A、L、I、P、K、R、H、S、D或S)，相對於根據SEQ ID NO: 69、70、71、4、5、6、7、8、36-59、138、981或982中任一者編號之參考序列。
47. 如實施例1至46中任一項之AAV顆粒，其中該AAV衣殼變異體包含： (i) 位置450處之胺基酸T、位置451處之胺基酸I，及/或位置452處之胺基酸N，相對於根據SEQ ID NO: 138、981或982中任一者編號之參考序列； (ii) 位置450處之胺基酸T、位置451處之胺基酸E，及/或位置452處之胺基酸R，根據SEQ ID NO: 36編號；或 (iii) 位置450處之胺基酸T、位置451處之胺基酸E，及/或位置452處之胺基酸N，根據SEQ ID NO: 69編號。
48. 如實施例1至47中任一項之AAV顆粒，其中該AAV衣殼變異體進一步包含[N0]，其中[N0]包含XA XB及XC，且其中： (a) 位置XA係：T、S、Y、M、A、C、I、R、L、D、F、V、Q、N、H、E或G； (b) 位置XB係：I、M、P、E、N、D、S、A、T、G、Q、F、V、L、C、H、R、W或L；並且 (c) 位置XC係：N、M、E、G、Y、W、T、I、Q、F、V、A、L、I、P、K、R、H、S、D或S；並且 視情況地其中該AAV衣殼變異體包含(a)-(c)中任何上述胺基酸之胺基酸修飾，例如保守取代。
49. 如實施例48之AAV顆粒，其中[N0]係或包含TIN、TEN、TER、SMN、TIM、YLS、GLS、MPE、MEG、MEY、AEW、CEW、ANN、IPE、ADM、IEY、ADY、IET、MEW、CEY、RIN、MEI、LEY、ADW、IEI、DIM、FEQ、MEF、CDQ、LPE、IEN、MES、AEI、VEY、IIN、TSN、IEV、MEM、AEV、MDA、VEW、AEQ、LEW、MEL、MET、MEA、IES、MEV、CEI、ATN、MDG、QEV、ADQ、NMN、IEM、ISN、TGN、QQQ、HDW、IEG、TII、TFP、TEK、EIN、TVN、TFN、SIN、TSY、ELH、AIN、SVN、TDN、TFH、TVH、TSS、TID、TCN、NIN、TEH、AEM、AIK、TDK、TFK、SDQ、TEI、NTN、TET、SIK、TEL、TEA、TAN、TIY、TFS、TES、TTN、TED、TNN、EVH、TIS、TVR、TDR、TIK、NHI、TIP、ESD、TDL、TVP、TVI、AEH、NCL、TVK、NAD、TIT、NCV、TIR、NAL、VIN、TIQ、TEF、TRE、QGE、SEK、NVN、GGE、EFV、SDK、TEQ、EVQ、TEY、NCW、TDV、SDI、NSI、NSL、EVV、TEP、SEL、TWQ、TEV、AVN、GVL、TLN、TEG、TRD、NAI、AEN、AET、ETA、NNL，或其任何二肽。
50. 如實施例48或49之AAV顆粒，其中[N0]-[N1]-[N2]-[N3]-[N4]係或包含： (i) SEQ ID NO: 2242-2886中任一者之胺基酸序列； (ii) 包含(i)中胺基酸序列之任何部分之胺基酸序列，例如其任何2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14或15個胺基酸，例如連續胺基酸； (iii) 相對於(i)中之該等胺基酸序列中之任一者，包含一個、兩個或三個但不超過四個修飾，例如取代(例如保守取代)、插入或缺失的胺基酸序列；或 (iv) 相對於(i)中之該等胺基酸序列中之任一者，包含一個、兩個或三個但不超過四個不同胺基酸之胺基酸序列。
51. 如實施例48至50中任一項之AAV顆粒，其中[N0]-[N1]-[N2]-[N3]-[N4]係或包含TINGSGSPHSKAQNQQ (SEQ ID NO: 2242)。
52. 如實施例48至50中任一項之AAV顆粒，其中[N0]-[N1]-[N2]-[N3]-[N4]係或包含TINGHDSPHKSGQNQQ (SEQ ID NO: 2243)。
53. 如實施例48至50中任一項之AAV顆粒，其中[N0]-[N1]-[N2]-[N3]-[N4]係或包含TINGSGSPHKYGQNQQT (SEQ ID NO: 5246)。
54. 如實施例1至53中任一項之AAV顆粒，其中[N1]-[N2]-[N3]存在於該AAV衣殼變異體之環IV中。
55. 如實施例48至54中任一項之AAV顆粒，其中[N0]及[N4]存在於該AAV衣殼變異體之環IV中。
56. 如實施例48至55中任一項之AAV顆粒，其中相對於根據SEQ ID NO: 138之胺基酸序列編號之參考序列，[N0]緊接在位置449之後存在。
57. 如實施例48至55中任一項之AAV顆粒，其中相對於根據SEQ ID NO: 69、70、71、4、5、6、7、8、36-59、981或982中任一者之胺基酸序列編號之參考序列，[N0]緊接在位置449之後存在。
58. 如實施例48至57中任一項之AAV顆粒，其中相對於根據SEQ ID NO: 138編號之參考序列，[N0]替換位置450、451及452 (例如，T450、I451及N452)。
59. 如實施例48至58中任一項之AAV顆粒，其中相對於根據SEQ ID NO: 69、70、71、4、5、6、7、8、36-59、981或982中任一者編號之參考序列，[N0]替換位置450-452 (例如，T450、I451及N452)。
60. 如實施例48至59中任一項之AAV顆粒，其中[N0]對應於SEQ ID NO: 69、70、71、4、5、6、7、8、36-59、138、981或982中任一者之位置450-452。
61. 如實施例48至60中任一項之AAV顆粒，其中相對於根據SEQ ID NO: 138編號之參考序列，[N0]緊接在位置449之後存在且其中[N0]替換位置450-452 (例如，T450、I451及N452)。
62. 如實施例48至61中任一項之AAV顆粒，其中相對於根據SEQ ID NO: 69、70、71、4、5、6、7、8、36-59、981或982編號之參考序列，[N0]緊接在位置449之後存在且其中[N0]替換位置450-452 (例如，T450、I451及N452)。
63. 如實施例1至62中任一項之AAV顆粒，其中相對於根據SEQ ID NO: 138之胺基酸序列編號之參考序列，[N1]緊接在位置452之後存在。
64. 如實施例1至63中任一項之AAV顆粒，其中相對於根據SEQ ID NO: 981或982之胺基酸序列編號之參考序列，[N1]緊接在位置452之後存在。
65. 如實施例1至64中任一項之AAV顆粒，其中相對於根據SEQ ID NO: 138編號之參考序列，[N1]替換位置453-455 (例如，G453、S454及G455)。
66. 如實施例1至65中任一項之AAV顆粒，其中相對於根據SEQ ID NO: 138編號之參考序列，[N1]替換位置453 (例如，G453)。
67. 如實施例1至66中任一項之AAV顆粒，其中相對於根據SEQ ID NO: 981編號之參考序列，[N1]替換位置453-455 (例如，G453、S454及G455)。
68. 如實施例1至66或67中任一項之AAV顆粒，其中相對於根據SEQ ID NO: 982編號之參考序列，[N1]替換位置453-455。
69. 如實施例1至68中任一項之AAV顆粒，其中相對於根據SEQ ID NO: 138編號之參考序列，[N1]緊接在位置452之後存在且其中[N1]替換位置453-455 (例如，G453、S454及G455)。
70. 如實施例1至64或66中任一項之AAV顆粒，其中相對於根據SEQ ID NO: 138編號之參考序列，[N1]緊接在位置452之後存在且其中[N1]替換位置453 (例如，G453)。
71. 如實施例1至64、66或70中任一項之AAV顆粒，其中相對於根據SEQ ID NO: 981或982編號之參考序列，[N1]緊接在位置452之後存在且其中[N1]替換位置453-455。
72. 如實施例1至71中任一項之AAV顆粒，其中[N1]對應於SEQ ID NO: 69、70、71、4、5、6、7、8、36-59、981或982中任一者之位置453-455。
73. 如實施例1至72中任一項之AAV顆粒，其中該AAV衣殼變異體包含位置454處之除S以外之胺基酸及/或位置455處之除G以外之胺基酸，根據SEQ ID NO: 138、981或982編號。
74. 如實施例1至73中任一項之AAV顆粒，其中該AAV衣殼變異體包含位置454處之胺基酸H及位置455處之胺基酸D，根據SEQ ID NO: 138編號。
75. 如實施例1至74中任一項之AAV顆粒，其中該AAV衣殼變異體包含位置454處之取代(例如，S454H)及/或位置455處之取代(例如，G455D)，根據SEQ ID NO: 138或982編號。
76. 如實施例1至75中任一項之AAV顆粒，其中該AAV衣殼變異體包含位置454處之胺基酸H及位置455處之胺基酸D，且進一步包含緊接在位置455之後的胺基酸序列SPHSKA (SEQ ID NO: 941)，相對於根據SEQ ID NO: 138編號之參考序列。
77. 如實施例1至71中任一項之AAV顆粒，其中該AAV衣殼變異體包含位置454處之胺基酸H及位置455處之胺基酸D，相對於根據SEQ ID NO: 982編號之參考序列。
78. 如實施例1至77中任一項之AAV顆粒，其中該AAV衣殼變異體包含位置454處之胺基酸H及位置455處之胺基酸D，且進一步包含緊接在位置455之後的胺基酸序列SPHSKA (SEQ ID NO: 941)，相對於根據SEQ ID NO: 982編號之參考序列。
79. 如實施例1至71中任一項之AAV顆粒，其中該AAV衣殼變異體包含位置454處之胺基酸S及位置455處之胺基酸G，相對於根據SEQ ID NO: 138編號之參考序列。
80. 如實施例1至71或79中任一項之AAV顆粒，其中該AAV衣殼變異體包含位置454處之胺基酸S及位置455處之胺基酸G，且進一步包含緊接在位置455之後的胺基酸序列SPHSKA (SEQ ID NO: 941)，相對於根據SEQ ID NO: 138編號之參考序列。
81. 如實施例1至71、79或80中任一項之AAV顆粒，其中該AAV衣殼變異體包含位置454處之胺基酸S及位置455處之胺基酸G，相對於根據SEQ ID NO: 981編號之參考序列。
82. 如實施例1至71或79至81中任一項之AAV顆粒，其中該AAV衣殼變異體包含位置454處之胺基酸S及位置455處之胺基酸G，且進一步包含緊接在位置455之後的胺基酸序列SPHSKA (SEQ ID NO: 941)，相對於根據SEQ ID NO: 981編號之參考序列。
83. 如實施例1至82中任一項之AAV顆粒，其中相對於根據SEQ ID NO: 138之胺基酸序列編號之參考序列，[N2]緊接在位置455之後存在。
84. 如實施例1至82中任一項之AAV顆粒，其中[N2]對應於SEQ ID NO: 981或982之位置456-458 (例如，S456、P457、H458)。
85. 如實施例1至84中任一項之AAV顆粒，其中[N2]對應於SEQ ID NO: 69、70、71、4、5、6、7、8或36-59中任一者之位置456-458 (例如，S456、P457、H458)。
86. 如實施例1至85中任一項之AAV顆粒，其中相對於根據SEQ ID NO: 138之胺基酸序列編號之參考序列，[N2]-[N3]緊接在位置455之後存在。
87. 如實施例1至86中任一項之AAV顆粒，其中相對於根據SEQ ID NO: 981或982之胺基酸序列編號之參考序列，[N2]緊接在位置455之後存在。
88. 如實施例1至87中任一項之AAV顆粒，其中相對於根據SEQ ID NO: 981或982之胺基酸序列編號之參考序列，[N2]-[N3]緊接在位置455之後存在。
89. 如實施例1至88中任一項之AAV顆粒，其中[N2]-[N3]對應於SEQ ID NO: 981之位置456-461 (例如，S456、P457、H458、S459、K460、A461)。
90. 如實施例1至88中任一項之AAV顆粒，其中[N2]-[N3]對應於SEQ ID NO: 982之位置456-461 (例如，S456、P457、H458、K459、S460、G461)。
91. 如實施例1至88中任一項之AAV顆粒，其中[N2]緊接在[N1]之後存在。
92. 如實施例1至64、66、70或71中任一項之AAV顆粒，其中根據SEQ ID NO: 138編號，[N3]緊接在[N2]之後存在且替換位置454及455 (例如，S454及G455)。
93. 如實施例1至64、66、70、71或92中任一項之AAV顆粒，其中根據SEQ ID NO: 138編號，[N3]緊接在[N1]-[N2]之後存在且替換位置454及455 (例如，S454及G455)。
94. 如實施例39至93中任一項之AAV顆粒，其中相對於根據SEQ ID NO: 138之胺基酸序列編號之參考序列，[N4]緊接在位置455之後存在。
95. 如實施例39至94中任一項之AAV顆粒，其中相對於根據SEQ ID NO: 138之胺基酸序列編號之參考序列，[N4]替換位置456-459 (例如，Q456、N457、Q458及Q459)。
96. 如實施例39至95中任一項之AAV顆粒，其中[N4]對應於SEQ ID NO: 981或982之位置462-465 (例如，Q462、N463、Q464、Q465)。
97. 如實施例39至96中任一項之AAV顆粒，其中相對於根據SEQ ID NO: 138之胺基酸序列編號之參考序列，[N2]-[N3]-[N4]替換位置456-459 (例如，Q456、N457、Q458及Q459)。
98. 如實施例39至97中任一項之AAV顆粒，其中相對於根據SEQ ID NO: 138之胺基酸序列編號之參考序列，[N2]-[N3]-[N4]緊接在位置455之後存在，且其中[N2]-[N3]-[N4]替換位置456-459 (例如，Q456、N457、Q458及Q459)。
99. 如實施例39至98中任一項之AAV顆粒，其中[N2]-[N3]-[N4]對應於SEQ ID NO: 981之位置456-465 (例如，S456、P457、H458、S459、K460、A461、Q462、N463、Q464、Q465)。
100. 如實施例39至99中任一項之AAV顆粒，其中[N2]-[N3]-[N4]對應於SEQ ID NO: 982之位置456-465 (例如，S456、P457、H458、K459、S460、G461、Q462、N463、Q464、Q465)。
101. 如實施例39至100中任一項之AAV顆粒，其中[N2]-[N3]-[N4]對應於SEQ ID NO: 69、70、71、4、5、6、7、8或36-59中任一者之位置456-465。
102. 如實施例39至101中任一項之AAV顆粒，其中相對於根據SEQ ID NO: 138之胺基酸序列編號之參考序列，[N1]-[N2]-[N3]-[N4]替換位置453-459 (例如，G453、S454、G455、Q456、N457、Q458及Q459)。
103. 如實施例39至102中任一項之AAV顆粒，其中相對於根據SEQ ID NO: 138之胺基酸序列編號之參考序列，[N1]-[N2]-[N3]-[N4]緊接在位置452之後存在，且其中[N1]-[N2]-[N3]-[N4]替換位置453-459 (例如，G453、S454、G455、Q456、N457、Q458及Q459)。
104. 如實施例39至99、102或103中任一項之AAV顆粒，其中[N1]-[N2]-[N3]-[N4]對應於SEQ ID NO: 981之位置453-465 (例如，G453、S454、G455、S456、P457、H458、S459、K460、A461、Q462、N463、Q464、Q465)。
105. 如實施例39至98或100至103中任一項之AAV顆粒，其中[N1]-[N2]-[N3]-[N4]對應於SEQ ID NO: 982之位置453-465 (例如，G453、H454、D455、S456、P457、H458、K459、S460、G461、Q462、N463、Q464、Q465)。
106. 如實施例39至98或101至103中任一項之AAV顆粒，其中[N1]-[N2]-[N3]-[N4]對應於SEQ ID NO: 69、70、71、4、5、6、7、8或36-59中任一者之位置453-465。
107. 如實施例1至98或102至104中任一項之AAV顆粒，其中[N1]-[N2]-[N3]對應於SEQ ID NO: 981之位置453-461 (例如，G453、S454、G455、S456、P457、H458、S459、K460、A461)。
108. 如實施例1至98、100、102、103或105中任一項之AAV顆粒，其中[N1]-[N2]-[N3]對應於SEQ ID NO: 982之位置453-461 (例如，G453、H454、D455、S456、P457、H458、K459、S460、G461)。
109. 如實施例40至98、101至103或106中任一項之AAV顆粒，其中[N1]-[N2]-[N3]對應於SEQ ID NO: 69、70、71、4、5、6、7、8或36-59中任一者之位置453-461。
110. 如實施例39至109中任一項之AAV顆粒，其中相對於根據SEQ ID NO: 138之胺基酸序列編號之參考序列，[N0]-[N1]-[N2]-[N3]-[N4]替換位置450-459 (例如，T450、I451、N452、G453、S454、G455、Q456、N457、Q458及Q459)。
111. 如實施例39至110中任一項之AAV顆粒，其中相對於根據SEQ ID NO: 138之胺基酸序列編號之參考序列，[N0]-[N1]-[N2]-[N3]-[N4]緊接在位置449之後存在，且其中[N0]-[N1]-[N2]-[N3]-[N4]替換位置450-459 (例如，T450、I451、N452、G453、S454、G455、Q456、N457、Q458及Q459)。
112. 如實施例39至99、102至104、110或111中任一項之AAV顆粒，其中[N0]-[N1]-[N2]-[N3]-[N4]對應於SEQ ID NO: 981之位置450-465 (例如，T450、I451、N452、G453、S454、G455、S456、P457、H458、S459、K460、A461、Q462、N463、Q464、Q465)。
113. 如實施例39至98、100至103或105至111中任一項之AAV顆粒，其中[N0]-[N1]-[N2]-[N3]-[N4]對應於SEQ ID NO: 982之位置450-465 (例如，T450、I451、N452、G453、H454、D455、S456、P457、H458、K459、S460、G461、Q462、N463、Q464、Q465)。
114. 如實施例48至98、101至103、106或109中任一項之AAV顆粒，其中[N0]-[N1]-[N2]-[N3]-[N4]對應於SEQ ID NO: 69、70、71、4、5、6、7、8或36-59中任一者之位置450-465。
115. 如實施例39至113中任一項之AAV顆粒，其中相對於根據SEQ ID NO: 981或982之胺基酸序列編號之參考序列，[N4]替換位置462-465 (例如，Q462、N463、Q464及Q465)。
116. 如實施例39至115中任一項之AAV顆粒，其中相對於根據SEQ ID NO: 981或982之胺基酸序列編號之參考序列，[N2]-[N3]-[N4]替換位置462-465 (例如，Q462、N463、Q464及Q465)。
117. 如實施例39至116中任一項之AAV顆粒，其中相對於根據SEQ ID NO: 981或982之胺基酸序列編號之參考序列，[N2]-[N3]-[N4]緊接在位置455之後存在，且其中[N2]-[N3]-[N4]替換位置462-465 (例如，Q462、N463、Q464及Q465)。
118. 如實施例1至117中任一項之AAV顆粒，其中[N3]緊接在[N2]之後存在。
119. 如實施例1至118中任一項之AAV顆粒，其中該AAV衣殼變異體自N末端至C末端，包含[N2]-[N3]。
120. 如實施例1至119中任一項之AAV顆粒，其中該AAV衣殼變異體自N末端至C末端，包含[N1]-[N2]-[N3]。
121. 如實施例28至120中任一項之AAV顆粒，其中該AAV衣殼變異體自N末端至C末端，包含[N0]-[N1]-[N2]-[N3]。
122. 如實施例25至121中任一項之AAV顆粒，其中該AAV衣殼變異體自N末端至C末端，包含[N1]-[N2]-[N3]-[N4]。
123. 如實施例25至122中任一項之AAV顆粒，其中該AAV衣殼變異體自N末端至C末端，包含[N0]-[N1]-[N2]-[N3]-[N4]。
124. 如前述實施例中任一項之AAV顆粒，其中該AAV衣殼變異體包含位置460處之除T以外之胺基酸(例如，N、I、C、H、R、L、D、Y、A、M、Q、I、E、K、P、G或S)，根據SEQ ID NO: 138之胺基酸序列編號。
125. 如前述實施例中任一項之AAV顆粒，其中該AAV衣殼變異體包含位置460處之胺基酸N、I、C、H、R、L、D、Y、A、M、Q、I、E、K、P、G或S，根據SEQ ID NO: 138之胺基酸序列編號。
126. 如前述實施例中任一項之AAV顆粒，其中該AAV衣殼變異體包含位置466處之除T以外之胺基酸(例如，N、I、C、H、R、L、D、Y、A、M、Q、I、E、K、P、G或S)，根據SEQ ID NO: 69、70、71、4、5、6、7、8、36-59、981或982中任一者之胺基酸序列編號。
127. 如前述實施例中任一項之AAV顆粒，其中該AAV衣殼變異體包含位置466處之胺基酸N、I、C、H、R、L、D、Y、A、M、Q、I、E、K、P、G或S，根據SEQ ID NO: 69、70、71、4、5、6、7、8、36-59、981或982中任一者之胺基酸序列編號。
128. 如前述實施例中任一項之AAV顆粒，其中該AAV衣殼變異體包含位置449處之除K以外之胺基酸(例如，E、N或T)，根據SEQ ID NO: 69、70、71、4、5、6、7、8、36-59、138、981或982中任一者之胺基酸序列編號。
129. 如前述實施例中任一項之AAV顆粒，其中該AAV衣殼變異體包含位置449處之胺基酸E、N或T，根據SEQ ID NO: 69、70、71、4、5、6、7、8、36-59、138、981或982中任一者之胺基酸序列編號。
130. 一種AAV顆粒，其包含AAV衣殼變異體及編碼SOD1靶向多核苷酸(例如SOD1靶向RNA劑，例如siRNA)之核酸，其中該AAV衣殼變異體包含具有下式之胺基酸序列：[N1]-[N2]-[N3] (SEQ ID NO: 3963)，其中： (i) [N1]包含位置X1、X2及X3，其中位置X2係S，且位置X3係G； (ii) [N2]包含胺基酸序列SPH；並且 (iii) [N3]包含位置X4、X5及X6，其中位置X5係K。
131. 如實施例130之AAV顆粒，其中： (i) [N3]之X4係S、T、N或A；且 (ii) [N3]之X5係A、V、T、S、G、R、L或N； 視情況地其中該AAV衣殼變異體包含(i)或(ii)中任何上述胺基酸之胺基酸修飾，例如保守取代。
132. 如實施例130或131之AAV顆粒，其中X4係S及/或X5係A。
133. 如實施例130至132中任一項之AAV顆粒，其中[N3]包含SK、TK、NK、AK、KA、KV、KT、KS、KG、KR、KL或KN。
134. 如實施例130至133中任一項之AAV顆粒，其中[N3]係或包含SKA、SKV、SKT、SKS、SKG、SKR、TKA、NKA、SKL、SKN或AKA。
135. 如實施例130至134中任一項之AAV顆粒，其中[N3]係或包含SKA。
136. 如實施例130至135中任一項之AAV顆粒，其中[N2]-[N3]包含SPHSK (SEQ ID NO: 1372)、SPHTK (SEQ ID NO: 1396)、SPHNK (SEQ ID NO: 1397)或SPHAK (SEQ ID NO: 1398)。
137. 如實施例130至136中任一項之AAV顆粒，其中[N2]-[N3]係或包含： (i) SPHSKA (SEQ ID NO: 941)、SPHSKV (SEQ ID NO: 1409)、SPHSKT (SEQ ID NO: 1403)、SPHSKS (SEQ ID NO: 962)、SPHSKG (SEQ ID NO: 1404)、SPHSKR (SEQ ID NO: 978)、SPHTKA (SEQ ID NO: 1411)、SPHNKA (SEQ ID NO: 1406)、SPHSKL (SEQ ID NO: 960)、SPHSKN (SEQ ID NO: 1407)或SPHAKA (SEQ ID NO: 1408)； (ii) 包含(i)中胺基酸序列之任何部分之胺基酸序列，例如其任何2、3、4或5個胺基酸，例如連續胺基酸； (iii) 相對於(i)中之該等胺基酸序列中之任一者，包含一個、兩個或三個但不超過四個修飾，例如取代(例如保守取代)、插入或缺失的胺基酸序列；或 (iv) 相對於(i)中之該等胺基酸序列中之任一者，包含一個、兩個或三個但不超過四個不同胺基酸之胺基酸序列。
138. 如實施例130至137中任一項之AAV顆粒，其中[N2]-[N3]係或包含SPHSKA (SEQ ID NO: 941)。
139. 如實施例130至138中任一項之AAV顆粒，其包含位置453處之除G以外之胺基酸(例如，M、T、I、E、S、A、N、V、L、K、H、P、R、W或D)，根據SEQ ID NO: 138或981編號。
140. 如實施例130至139中任一項之AAV顆粒，其包含位置453處之胺基酸G，根據SEQ ID NO: 138或981編號。
141. 如實施例130至140中任一項之AAV顆粒，其中[N1]之X1選自：G、M、T、I、E、S、A、N、V、L、K、H、P、R、W或D；視情況地其中該AAV衣殼變異體包含任何上述胺基酸之胺基酸修飾，例如保守取代。
142. 如實施例130至141中任一項之AAV顆粒，其中[N1]包含SG、GS、MS、TS、IS、ES、SS、AS、NS、VS、LS、KS、HS、PS、RS、WS或DS。
143. 如實施例130至142中任一項之AAV顆粒，其中[N1]係或包含：GSG、MSG、TSG、ISG、ESG、SSG、ASG、NSG、VSG、LSG、KSG、HSG、PSG、RSG、WSG或DSG。
144. 如實施例130至143中任一項之AAV顆粒，其中[N1]係或包含GSG或VSG。
145. 如實施例130至144中任一項之AAV顆粒，其中[N1]-[N2]包含SGSPH (SEQ ID NO: 1424)。
146. 如實施例130至145中任一項之AAV顆粒，其中[N1]-[N2]係或包含： (i) GSGSPH (SEQ ID NO: 1456)、VSGSPH (SEQ ID NO: 1459)、MSGSPH (SEQ ID NO: 1471)、TSGSPH (SEQ ID NO: 1473)、ISGSPH (SEQ ID NO: 1474)、ESGSPH (SEQ ID NO: 1476)、SSGSPH (SEQ ID NO: 1477)、ASGSPH (SEQ ID NO: 1479)、NSGSPH (SEQ ID NO: 1480)、LSGSPH (SEQ ID NO: 1481)、KSGSPH (SEQ ID NO: 1483)、HSGSPH (SEQ ID NO: 1484)、PSGSPH (SEQ ID NO: 1486)、RSGSPH (SEQ ID NO: 1488)、WSGSPH (SEQ ID NO: 1490)、DSGSPH (SEQ ID NO: 1491)； (ii) 包含(i)中胺基酸序列之任何部分之胺基酸序列，例如其任何2、3、4或5個胺基酸，例如連續胺基酸； (iii) 相對於(i)中之該等胺基酸序列中之任一者，包含一個、兩個或三個但不超過四個修飾，例如取代(例如保守取代)、插入或缺失的胺基酸序列；或 (iv) 相對於(i)中之該等胺基酸序列中之任一者，包含一個、兩個或三個但不超過四個不同胺基酸之胺基酸序列。
147. 如實施例130至146中任一項之AAV顆粒，其中[N1]-[N2]-[N3]係或包含： (i) GSGSPHSKA (SEQ ID NO: 1369)、VSGSPHSKA (SEQ ID NO: 1586)、GSGSPHSKV (SEQ ID NO: 1629)、MSGSPHSKA (SEQ ID NO: 1630)、TSGSPHSKA (SEQ ID NO: 1632)、ISGSPHSKA (SEQ ID NO: 1633)、GSGSPHSKT (SEQ ID NO: 1635)、ESGSPHSKA (SEQ ID NO: 1636)、SSGSPHSKA (SEQ ID NO: 1637)、GSGSPHSKS (SEQ ID NO: 1626)、ASGSPHSKA (SEQ ID NO: 1639)、NSGSPHSKA (SEQ ID NO: 1640)、LSGSPHSKA (SEQ ID NO: 1641)、KSGSPHSKA (SEQ ID NO: 1643)、GSGSPHSKG (SEQ ID NO: 1645)、GSGSPHSKR (SEQ ID NO: 1618)、HSGSPHSKA (SEQ ID NO: 1646)、PSGSPHSKA (SEQ ID NO: 1648)、RSGSPHSKA (SEQ ID NO: 1650)、GSGSPHTKA (SEQ ID NO: 1651)、WSGSPHSKA (SEQ ID NO: 1653)、DSGSPHSKA (SEQ ID NO: 1654)、GSGSPHNKA (SEQ ID NO: 1656)、GSGSPHSKL (SEQ ID NO: 1616)、GSGSPHSKN (SEQ ID NO: 1667)或GSGSPHAKA (SEQ ID NO: 1668)； (ii) 包含(i)中胺基酸序列之任何部分之胺基酸序列，例如其任何2、3、4、5、6、7、8或9個胺基酸，例如連續胺基酸； (iii) 相對於(i)中之該等胺基酸序列中之任一者，包含一個、兩個或三個但不超過四個修飾，例如取代(例如保守取代)、插入或缺失的胺基酸序列；或 (iv) 相對於(i)中之該等胺基酸序列中之任一者，包含一個、兩個或三個但不超過四個不同胺基酸之胺基酸序列。
148. 如實施例130至147中任一項之AAV顆粒，其中[N1]-[N2]-[N3]係或包含GSGSPHSKA (SEQ ID NO: 1369)或VSGSPHSKA (SEQ ID NO: 1586)。
149. 如實施例130至148中任一項之AAV顆粒，其中該AAV衣殼變異體包含位置456處之除Q以外之胺基酸(例如，R、P、H、L、K、I、G、S、M或E)、位置457處之除N以外之胺基酸(例如，D、V、S、P、T、G、Y、W、E、R、H、K、F、A、I、L或M)、位置458處之除Q以外之胺基酸(例如，R、L、A、P、H、T、I、F、K、V、M、G、W、Y、S、E、N或D)、位置459處之除Q以外之胺基酸(例如，H、K、A、L、P、E、M、I、S、N、R、Y、C、V、T、W、D、G)及/或位置460處之除T以外之胺基酸(例如，I、N、S、H、R、L、D、Y、A或Q)，相對於根據SEQ ID NO: 138編號之參考序列。
150. 如實施例130至149中任一項之AAV顆粒，其中該AAV衣殼變異體包含位置462處之除Q以外之胺基酸(例如，R、P、H、L、K、I、G、S、M或E)、位置463處之除N以外之胺基酸(例如，D、V、S、P、T、G、Y、W、E、R、H、K、F、A、I、L或M)、位置464處之除Q以外之胺基酸(例如，R、L、A、P、H、T、I、F、K、V、M、G、W、Y、S、E、N或D)、位置465處之除Q以外之胺基酸(例如，H、K、A、L、P、E、M、I、S、N、R、Y、C、V、T、W、D、G)及/或位置466處之除T以外之胺基酸(例如，I、N、S、H、R、L、D、Y、A或Q)，相對於根據SEQ ID NO: 981編號之參考序列。
151. 如實施例130至150中任一項之AAV顆粒，其中該AAV衣殼變異體包含位置456處之胺基酸Q、位置457處之胺基酸N、位置458處之胺基酸Q、位置459處之胺基酸Q及/或位置460處之胺基酸T，相對於根據SEQ ID NO: 138編號之參考序列。
152. 如實施例130至151中任一項之AAV顆粒，其中該AAV衣殼變異體包含位置462處之胺基酸Q、位置463處之胺基酸N、位置464處之胺基酸Q、位置465處之胺基酸Q及/或位置466處之胺基酸T，根據SEQ ID NO: 981編號。
153. 如實施例130至152中任一項之AAV顆粒，其中該AAV衣殼變異體進一步包含[N4]，其中[N4]包含X7、X8、X9、X10及X11，其中： (a) X7係Q、R、P、H、L、K、I、G、S、M或E； (b) X8係N、D、V、S、P、T、G、Y、W、E、R、H、K、F、A、I、L或M； (c) X9係Q、R、L、A、P、H、T、I、F、K、V、M、G、W、Y、S、E、N、D； (d) X10係Q、H、K、A、L、P、E、M、I、S、N、R、Y、C、V、T、W、D、G；並且 (e) X11係T、I、N、S、H、R、L、D、Y、A、Q； 視情況地其中該AAV衣殼變異體包含(a)-(e)中任何上述胺基酸之胺基酸修飾，例如保守取代。
154. 如實施例153之AAV顆粒，其中[N4]係或包含： (i) QNQQT (SEQ ID NO: 3964)、QNRHT (SEQ ID NO: 3965)、RDQQT (SEQ ID NO: 3966)、PNLQT (SEQ ID NO: 3967)、HVRQT (SEQ ID NO: 3968)、PNQHT (SEQ ID NO: 3969)、QSQQT (SEQ ID NO: 3970)、QNQQI (SEQ ID NO: 3971)、QPAKT (SEQ ID NO: 3972)、QTQQN (SEQ ID NO: 3973)、QNLAT (SEQ ID NO: 3974)、QNQLT (SEQ ID NO: 3975)、QGQQT (SEQ ID NO: 3976)、LNRQS (SEQ ID NO: 3977)、HNQQT (SEQ ID NO: 3978)、QNPPT (SEQ ID NO: 3979)、QNLQT (SEQ ID NO: 3980)、QYQQT (SEQ ID NO: 3981)、QDQET (SEQ ID NO: 3982)、QNHQT (SEQ ID NO: 3983)、QDQQT (SEQ ID NO: 3984)、HWQQT (SEQ ID NO: 3985)、PNQQT (SEQ ID NO: 3986)、QNQLI (SEQ ID NO: 3987)、PEQQT (SEQ ID NO: 3988)、QRTMT (SEQ ID NO: 3989)、QNQQH (SEQ ID NO: 3990)、LHQHT (SEQ ID NO: 3991)、QHRIT (SEQ ID NO: 3992)、QYIHT (SEQ ID NO: 3993)、QKFET (SEQ ID NO: 3994)、QFPST (SEQ ID NO: 3995)、HNQQR (SEQ ID NO: 3996)、QAIKT (SEQ ID NO: 3997)、QNRQT (SEQ ID NO: 3998)、QYQHT (SEQ ID NO: 3999)、QNPQS (SEQ ID NO: 4002)、QHQLT (SEQ ID NO: 4005)、QSPPT (SEQ ID NO: 4006)、QAKLT (SEQ ID NO: 4007)、KSQQT (SEQ ID NO: 4010)、QDRPT (SEQ ID NO: 4049)、QSQQL (SEQ ID NO: 4050)、QAFHT (SEQ ID NO: 4051)、QKQQD (SEQ ID NO: 4052)、QNAQT (SEQ ID NO: 4053)、HNQLT (SEQ ID NO: 4054)、QNQQY (SEQ ID NO: 4055)、QKLNT (SEQ ID NO: 4056)、QNVQT (SEQ ID NO: 4057)、QAQQT (SEQ ID NO: 4058)、QNLQA (SEQ ID NO: 4059)、QTPPT (SEQ ID NO: 4060)、QYQHA (SEQ ID NO: 4061)、QGQQA (SEQ ID NO: 4063)、QPPAT (SEQ ID NO: 4064)、QERPT (SEQ ID NO: 4065)、QDLQT (SEQ ID NO: 4066)、QAMHT (SEQ ID NO: 4067)、LNQQT (SEQ ID NO: 4068)、QHPST (SEQ ID NO: 4069)、PGLQT (SEQ ID NO: 4070)、QGIRT (SEQ ID NO: 4071)、QAPAT (SEQ ID NO: 4072)、QSQQI (SEQ ID NO: 4073)、QIPPT (SEQ ID NO: 4074)、QTQLT (SEQ ID NO: 4075)、QAPST (SEQ ID NO: 4076)、QNTYA (SEQ ID NO: 4077)、QNQHI (SEQ ID NO: 4078)、QNHLT (SEQ ID NO: 4079)、QIGMT (SEQ ID NO: 4080)、LNKQT (SEQ ID NO: 4082)、QLQQT (SEQ ID NO: 4083)、QRMST (SEQ ID NO: 4084)、QGILT (SEQ ID NO: 4085)、QDRQT (SEQ ID NO: 4086)、RDWQT (SEQ ID NO: 4087)、QNTHD (SEQ ID NO: 4088)、PNLQI (SEQ ID NO: 4089)、QERST (SEQ ID NO: 4090)、QNYQT (SEQ ID NO: 4091)、QRTCT (SEQ ID NO: 4092)、QIGHT (SEQ ID NO: 4093)、QGAIT (SEQ ID NO: 4094)、QVPPT (SEQ ID NO: 4095)、QVQQI (SEQ ID NO: 4096)、LMRQT (SEQ ID NO: 4097)、QYSVT (SEQ ID NO: 4487)、QAITT (SEQ ID NO: 4488)、QKTLT (SEQ ID NO: 4489)、QNQWT (SEQ ID NO: 4490)、QLHHT (SEQ ID NO: 4491)、QNIII (SEQ ID NO: 4492)、QGHHT (SEQ ID NO: 4493)、QSKVT (SEQ ID NO: 4494)、QLPST (SEQ ID NO: 4495)、IGKQT (SEQ ID NO: 4496)、QAIHT (SEQ ID NO: 4497)、QHGLT (SEQ ID NO: 4498)、QFMCT (SEQ ID NO: 4499)、QHLQT (SEQ ID NO: 4500)、QNHQN (SEQ ID NO: 4501)、QPART (SEQ ID NO: 4502)、QSLQT (SEQ ID NO: 4503)、QSQLT (SEQ ID NO: 4504)、QDRQS (SEQ ID NO: 4505)、QMPST (SEQ ID NO: 4506)、QGSLT (SEQ ID NO: 4507)、QVPAT (SEQ ID NO: 4508)、QDKQT (SEQ ID NO: 4509)、HYQQT (SEQ ID NO: 4510)、QVPST (SEQ ID NO: 4511)、RGEQT (SEQ ID NO: 4512)、PGQQT (SEQ ID NO: 4513)、QSLQI (SEQ ID NO: 4514)、LEQQT (SEQ ID NO: 4515)、QNQST (SEQ ID NO: 4516)、QKVIT (SEQ ID NO: 4517)、QNNDQ (SEQ ID NO: 4518)、QSVHT (SEQ ID NO: 4519)、QPLGT (SEQ ID NO: 4520)、HNQET (SEQ ID NO: 4521)、QNLQI (SEQ ID NO: 4522)、QIQQT (SEQ ID NO: 4523)、QVRNT (SEQ ID NO: 4524)、PSNQT (SEQ ID NO: 4525)、QVGHT (SEQ ID NO: 4526)、QRDIT (SEQ ID NO: 4527)、QMPNT (SEQ ID NO: 4528)、RGLQT (SEQ ID NO: 4529)、QKQQT (SEQ ID NO: 4530)、PSLQT (SEQ ID NO: 4531), QRDQT (SEQ ID NO: 4532), QAKGT (SEQ ID NO: 4533)、QSAHT (SEQ ID NO: 4534)、QSTMT (SEQ ID NO: 4535)、QREMT (SEQ ID NO: 4536)、QYRAT (SEQ ID NO: 4537)、QWQQT (SEQ ID NO: 4538)、QRMNT (SEQ ID NO: 4539)、GDSQT (SEQ ID NO: 4540)、QKIST (SEQ ID NO: 4541)、PSMQT (SEQ ID NO: 4542)、SPRQT (SEQ ID NO: 4543)、MEQQT (SEQ ID NO: 4544)、QYQNT (SEQ ID NO: 4545)、QHQQT (SEQ ID NO: 4546)、INQQT (SEQ ID NO: 4547)、PNQQH (SEQ ID NO: 4548)、ENRQT (SEQ ID NO: 4549)、QTQQA (SEQ ID NO: 4550)或QNQAT (SEQ ID NO: 4551)； (ii) 包含(i)中胺基酸序列之任何部分之胺基酸序列，例如其任何2、3或4個胺基酸，例如連續胺基酸； (iii) 相對於(i)中之該等胺基酸序列中之任一者，包含一個、兩個或三個但不超過四個修飾，例如取代(例如保守取代)、插入或缺失的胺基酸序列；或 (iv) 相對於(i)中之該等胺基酸序列中之任一者，包含一個、兩個或三個但不超過四個不同胺基酸之胺基酸序列。
155. 如實施例153或154之AAV顆粒，其中[N1]-[N2]-[N3]-[N4]係或包含： (i) SEQ ID NO: 200或2887-3076中任一者之胺基酸序列； (ii) 包含(i)中胺基酸序列之任何部分之胺基酸序列，例如其任何2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12或13個胺基酸，例如連續胺基酸； (iii) 相對於(i)中之該等胺基酸序列中之任一者，包含一個、兩個或三個但不超過四個修飾，例如取代(例如保守取代)、插入或缺失的胺基酸序列；或 (iv) 相對於(i)中之該等胺基酸序列中之任一者，包含一個、兩個或三個但不超過四個不同胺基酸之胺基酸序列。
156. 如實施例153至155中任一項之AAV顆粒，其中[N1]-[N2]-[N3]-[N4]係或包含GSGSPHSKAQNQQT (SEQ ID NO: 200)。
157. 如實施例153至155中任一項之AAV顆粒，其中[N1]-[N2]-[N3]-[N4]係或包含VSGSPHSKAQNQQT (SEQ ID NO: 903)。
158. 如實施例130至157中任一項之AAV顆粒，其中該AAV衣殼變異體包含位置449處之除K以外之胺基酸(例如，T、E或N)、位置450處之除T以外之胺基酸(例如，S、E、A、N、V、Q或G)、位置451處之除I以外之胺基酸(例如，F、E、V、L、D、S、C、T、A、N、H、R、G或W)及/或位置452處之除N以外之胺基酸(例如，I、P、K、R、H、S、M、Q、D、T、L、A、Y、V、F、E、W或G)，相對於根據SEQ ID NO: 138編號之參考序列。
159. 如實施例130至157中任一項之AAV顆粒，其中該AAV衣殼變異體包含： (i) 位置449處之胺基酸K，位置450處之胺基酸T，位置451處之胺基酸I，及/或位置452處之胺基酸N，相對於根據SEQ ID NO: 138或981編號之參考序列； (ii) 位置449處之胺基酸K，位置450處之胺基酸T，位置451處之胺基酸E，及/或位置452處之胺基酸N，相對於根據SEQ ID NO: 69編號之參考序列；或 (iii) 位置449處之胺基酸K，位置450處之胺基酸T，位置451處之胺基酸E，及/或位置452處之胺基酸R，相對於根據SEQ ID NO: 36編號之參考序列。
160. 如實施例130至159中任一項之AAV顆粒，其中該AAV衣殼變異體進一步包含[N0]，其中[N0]包含X A、X B、X C及X D，其中： (a) X A係K、T、E或N； (b) X B係T、S、E、A、N、V、Q或G； (c) X C係I、F、E、V、L、D、S、C、T、A、N、H、R、G或W；且 (d) X D係N、I、P、K、R、H、S、M、Q、D、T、L、A、Y、V、F、E、W或G； 視情況地其中該AAV衣殼變異體包含(a)-(d)中任何上述胺基酸之胺基酸修飾，例如保守取代。
161. 如實施例160之AAV顆粒，其中[N0]係或包含： (i) KTIN (SEQ ID NO: 4557)、KTEN (SEQ ID NO: 4568)、KTER (SEQ ID NO: 4560)、KTII (SEQ ID NO: 4552)、KTFP (SEQ ID NO: 4553)、KTEK (SEQ ID NO: 4554)、KTVN (SEQ ID NO: 4555)、KTFN (SEQ ID NO: 4556)、TTIN (SEQ ID NO: 4558)、KSIN (SEQ ID NO: 4559)、KELH (SEQ ID NO: 4561)、KAIN (SEQ ID NO: 4562)、KTDN (SEQ ID NO: 4563)、KTFH (SEQ ID NO: 4564)、KTSN (SEQ ID NO: 4565)、ETIN (SEQ ID NO: 4566)、NTIN (SEQ ID NO: 4567)、KTSS (SEQ ID NO: 4569)、KTCN (SEQ ID NO: 4570)、KTEH (SEQ ID NO: 4571)、KAEM (SEQ ID NO: 4572)、KATN (SEQ ID NO: 4573)、KAIK (SEQ ID NO: 4574)、KTDK (SEQ ID NO: 4575)、KTFK (SEQ ID NO: 4576)、KSDQ (SEQ ID NO: 4577)、KTEI (SEQ ID NO: 4578)、KTID (SEQ ID NO: 4579)、KNTN (SEQ ID NO: 4580)、KTET (SEQ ID NO: 4581)、KTEL (SEQ ID NO: 4582)、KNIN (SEQ ID NO: 4583)、KTEA (SEQ ID NO: 4584)、KTAN (SEQ ID NO: 4585)、NTIY (SEQ ID NO: 4586)、KTFS (SEQ ID NO: 4587)、KTES (SEQ ID NO: 4588)、KTTN (SEQ ID NO: 4589)、KTED (SEQ ID NO: 4590)、KTNN (SEQ ID NO: 4591)、KEVH (SEQ ID NO: 4592)、KTIS (SEQ ID NO: 4593)、KTVR (SEQ ID NO: 4594)、KTDR (SEQ ID NO: 4595)、ETIK (SEQ ID NO: 4596)、KNHI (SEQ ID NO: 4597)、KESD (SEQ ID NO: 4598)、KTIK (SEQ ID NO: 4599)、KTDL (SEQ ID NO: 4600)、KTVP (SEQ ID NO: 4601)、KTVI (SEQ ID NO: 4602)、KAEH (SEQ ID NO: 4603)、KNCL (SEQ ID NO: 4604)、KTVK (SEQ ID NO: 4605)、KNAD (SEQ ID NO: 4606)、KTIT (SEQ ID NO: 4607)、KNCV (SEQ ID NO: 4608)、KNAL (SEQ ID NO: 4609)、KVIN (SEQ ID NO: 4610)、KTEF (SEQ ID NO: 4611)、KTRE (SEQ ID NO: 4612)、KQGE (SEQ ID NO: 4613)、KSEK (SEQ ID NO: 4614)、KNVN (SEQ ID NO: 4615)、KGGE (SEQ ID NO: 4616)、KEFV (SEQ ID NO: 4617)、KSDK (SEQ ID NO: 4618)、KTEQ (SEQ ID NO: 4619)、KEVQ (SEQ ID NO: 4620)、KTEY (SEQ ID NO: 4621)、KNCW (SEQ ID NO: 4622)、KTDV (SEQ ID NO: 4623)、KSDI (SEQ ID NO: 4624)、KNSI (SEQ ID NO: 4625)、KNSL (SEQ ID NO: 4626)、KEVV (SEQ ID NO: 4627)、KTEP (SEQ ID NO: 4628)、KSEL (SEQ ID NO: 4629)、KTWQ (SEQ ID NO: 4630)、KTEV (SEQ ID NO: 4631)、KAVN (SEQ ID NO: 4632)、KGVL (SEQ ID NO: 4633)、KTEG (SEQ ID NO: 4634)、KTRD (SEQ ID NO: 4635)、KTGN (SEQ ID NO: 4636)、KNAI (SEQ ID NO: 4637)、KAEN (SEQ ID NO: 4638)、KAET (SEQ ID NO: 4639)、KTVH (SEQ ID NO: 4640)、KETA (SEQ ID NO: 4641)、KNNL (SEQ ID NO: 4642)、EAIN (SEQ ID NO: 4643)、KSLN (SEQ ID NO: 4644)、KTIP (SEQ ID NO: 4645)或KTIH (SEQ ID NO: 4646)； (ii) 包含(i)中胺基酸序列之任何部分之胺基酸序列，例如其任何2或3個胺基酸，例如連續胺基酸； (iii) 相對於(i)中之該等胺基酸序列中之任一者，包含一個、兩個或三個但不超過四個修飾，例如取代(例如保守取代)、插入或缺失的胺基酸序列；或 (iv) 相對於(i)中之該等胺基酸序列中之任一者，包含一個、兩個或三個但不超過四個不同胺基酸之胺基酸序列。
162. 如實施例160或161之AAV顆粒，其中[N0]-[N1]-[N2]-[N3]-[N4]係或包含： (i) SEQ ID NO: 3239-3526或3591-3605中任一者之胺基酸序列； (ii) 包含(i)中胺基酸序列之任何部分之胺基酸序列，例如其任何2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16或17個胺基酸，例如連續胺基酸； (iii) 相對於(i)中之該等胺基酸序列中之任一者，包含一個、兩個或三個但不超過四個修飾，例如取代(例如保守取代)、插入或缺失的胺基酸序列；或 (iv) 相對於(i)中之該等胺基酸序列中之任一者，包含一個、兩個或三個但不超過四個不同胺基酸之胺基酸序列。
163. 如實施例160至162中任一項之AAV顆粒，其中[N0]-[N1]-[N2]-[N3]-[N4]係或包含KTINGSGSPHSKAQNQQT (SEQ ID NO: 5660)。
164. 如實施例160至162中任一項之AAV顆粒，其中[N0]-[N1]-[N2]-[N3]-[N4]係或包含KTERVSGSPHSKAQNQQT (SEQ ID NO: 3589)或KTENVSGSPHSKAQNQQT (SEQ ID NO: 3272)。
165. 一種AAV顆粒，其包含AAV衣殼變異體及編碼SOD1靶向多核苷酸(例如SOD1靶向RNA劑，例如siRNA)之核酸，其中該AAV衣殼變異體包含具有下式之胺基酸序列：[N1]-[N2]-[N3] (SEQ ID NO: 4647)，其中： (i) [N1]包含位置X1、X2及X3，其中位置X2係除S以外之胺基酸，且位置X3係除G以外之胺基酸； (ii) [N2]包含胺基酸序列SPH；並且 (iii) [N3]包含位置X4、X5及X6，其中位置X4係K。
166. 如實施例165之AAV顆粒，其中： (i) [N3]之X5係S、I、T、R、H、Y、L或M；且 (ii) [N3]之X6係G、A、L、E、V、R、W、N、Q或K； 視情況地其中該AAV衣殼變異體包含(i)或(ii)中任何上述胺基酸之胺基酸修飾，例如保守取代。
167. 如實施例165或166之AAV顆粒，其中X5係S及/或X 6係G。
168. 如實施例165至167中任一項之AAV顆粒，其中[N3]包含KS、KI、KT、KR、KH、KY、KL、KM、SG、IG、TG、RG、SA、SL、SE、SV、SR、SW、SN、HG、YG、SQ、IV、SK、LW、MG或MA。
169. 如實施例165至168中任一項之AAV顆粒，其中[N3]係或包含KSG、KIG、KTG、KRG、KSA、KSL、KSE、KSV、KSR、KSW、KSN、KHG、KYG、KSQ、KIV、KSK、KLW、KMG或KMA。
170. 如實施例165至169中任一項之AAV顆粒，其中[N3]係或包含KSG。
171. 如實施例165至170中任一項之AAV顆粒，其中[N2]-[N3]包含SPHKS (SEQ ID NO: 1375)、SPHKI (SEQ ID NO: 1384)、SPHKT (SEQ ID NO: 1382)、SPHKR (SEQ ID NO: 1388)、NPHKS (SEQ ID NO: 4648)、SPHKH (SEQ ID NO: 1399)、SPHKY (SEQ ID NO: 1386)、SPHKL (SEQ ID NO: 1385)或SPHKM (SEQ ID NO: 1400)。
172. 如實施例165至171中任一項之AAV顆粒，其中[N2]-[N3]係或包含： (i) SPHKSG (SEQ ID NO: 946)、SPHKIG (SEQ ID NO: 958)、SPHKTG (SEQ ID NO: 1410)、SPHKRG (SEQ ID NO: 974)、NPHKSG (SEQ ID NO: 4649)、SPHKSA (SEQ ID NO: 977)、SPHKSL (SEQ ID NO: 1412)、SPHKSE (SEQ ID NO: 1413)、SPHKSV (SEQ ID NO: 1414)、SPHKSR (SEQ ID NO: 951)、SPHKSW (SEQ ID NO: 1415)、SPHKSN (SEQ ID NO: 1416)、SPHKHG (SEQ ID NO: 1417)、SPHKYG (SEQ ID NO: 966)、SPHKSQ (SEQ ID NO: 1418)、SPHKIV (SEQ ID NO: 4650)、SPHKSK (SEQ ID NO: 1419)、SPHKLW (SEQ ID NO: 1420)、SPHKMG (SEQ ID NO: 1422)或SPHKMA (SEQ ID NO: 1423)； (ii) 包含(i)中胺基酸序列之任何部分之胺基酸序列，例如其任何2、3、4或5個胺基酸，例如連續胺基酸； (iii) 相對於(i)中之該等胺基酸序列中之任一者，包含一個、兩個或三個但不超過四個修飾，例如取代(例如保守取代)、插入或缺失的胺基酸序列；或 (iv) 相對於(i)中之該等胺基酸序列中之任一者，包含一個、兩個或三個但不超過四個不同胺基酸之胺基酸序列。
173. 如實施例165至172中任一項之AAV顆粒，其中[N2]-[N3]係或包含SPHKSG (SEQ ID NO: 946)。
174. 如實施例165至173中任一項之AAV顆粒，其中該AAV衣殼變異體包含位置453處之除G以外之胺基酸(例如，A、K、W、R、L、I、M、N、T、E、Q、Y、H、F或V)，根據SEQ ID NO: 138或981編號。
175. 如實施例165至173中任一項之AAV顆粒，其中該AAV衣殼變異體包含位置453處之胺基酸G，根據SEQ ID NO: 138或981編號。
176. 如實施例165至175中任一項之AAV顆粒，其中： (i) [N1]之位置X1係G、A、K、W、R、L、I、M、N、T、E、Q、Y、H、F或V； (ii) [N1]之位置X2係H、Y、R、Q、N、P或D； (iii) [N1]之位置X3係D、E、G、V或N； 視情況地其中該AAV衣殼變異體包含(i)、(ii)或(iii)中任何上述胺基酸之胺基酸修飾，例如保守取代。
177. 如實施例165至176中任一項之AAV顆粒，其中[N1]之位置X2係H且[N1]之位置X3係D。
178. 如實施例165至177中任一項之AAV顆粒，其中[N1]之位置X1係G，[N1]之位置X2係H且[N1]之位置X3係D。
179. 如實施例165至178中任一項之AAV顆粒，其中[N1]包含GH、HD、GY、GR、GQ、AH、GN、KH、GP、WH、RH、LH、IH、MH、GD、NH、TH、EH、QH、YH、HH、FH、VH、YD、HE、RG、QD、RD、ND、PD、QV、DD、HN或NG。
180. 如實施例165至179中任一項之AAV顆粒，其中[N1]係或包含GHD、GYD、GHE、GRG、GQD、GRD、AHD、GND、KHD、GPD、WHD、RHD、LHD、GQV、IHD、MHD、GDD、GHN、NHD、THD、GNG、EHD、QHD、YHD、HHD、FHD或VHD。
181. 如實施例165至180中任一項之AAV顆粒，其中[N1]係或包含GHD。
182. 如實施例165至181中任一項之AAV顆粒，其中[N1]-[N2]包含HDSPH (SEQ ID NO: 1374)。
183. 如實施例165至182中任一項之AAV顆粒，其中[N1]-[N2]係或包含： (i) GHDSPH (SEQ ID NO: 1457)、GYDSPH (SEQ ID NO: 1502)、GHESPH (SEQ ID NO: 1466)、GRGSPH (SEQ ID NO: 1461)、GHDNPH (SEQ ID NO: 4651)、GQDSPH (SEQ ID NO: 1458)、GRDSPH (SEQ ID NO: 1504)、AHDSPH (SEQ ID NO: 4652)、GNDSPH (SEQ ID NO: 1505)、KHDSPH (SEQ ID NO: 4653)、GPDSPH (SEQ ID NO: 1506)、WHDSPH (SEQ ID NO: 4654)、RHDSPH (SEQ ID NO: 4655)、LHDSPH (SEQ ID NO: 4656)、GQVSPH (SEQ ID NO: 1508)、IHDSPH (SEQ ID NO: 4657)、MHDSPH (SEQ ID NO: 4658)、GDDSPH (SEQ ID NO: 1465)、GHNSPH (SEQ ID NO: 1509)、NHDSPH (SEQ ID NO: 4659)、THDSPH (SEQ ID NO: 4660)、GNGSPH (SEQ ID NO: 1478)、EHDSPH (SEQ ID NO: 4661)、QHDSPH (SEQ ID NO: 4662)、YHDSPH (SEQ ID NO: 4663)、HHDSPH (SEQ ID NO: 4664)、FHDSPH (SEQ ID NO: 4665)或VHDSPH (SEQ ID NO: 4666)； (ii) 包含(i)中胺基酸序列之任何部分之胺基酸序列，例如其任何2、3、4或5個胺基酸，例如連續胺基酸； (iii) 相對於(i)中之該等胺基酸序列中之任一者，包含一個、兩個或三個但不超過四個修飾，例如取代(例如保守取代)、插入或缺失的胺基酸序列；或 (iv) 相對於(i)中之該等胺基酸序列中之任一者，包含一個、兩個或三個但不超過四個不同胺基酸之胺基酸序列。
184. 如實施例165至183中任一項之AAV顆粒，其中[N1]-[N2]-[N3]係或包含： (i) GHDSPHKSG (SEQ ID NO: 1370)、GHDSPHKIG (SEQ ID NO: 1669)、GYDSPHKSG (SEQ ID NO: 1670)、GHESPHKSG (SEQ ID NO: 1671)、GHDSPHKTG (SEQ ID NO: 1672)、GRGSPHKRG (SEQ ID NO: 1673)、GHDNPHKSG (SEQ ID NO: 4667)、GQDSPHKSG (SEQ ID NO: 1581)、GHDSPHKSA (SEQ ID NO: 1613)、GHDSPHKSL (SEQ ID NO: 1674)、GHDSPHKSE (SEQ ID NO: 1676)、GRDSPHKSG (SEQ ID NO: 1677)、AHDSPHKSG (SEQ ID NO: 4668)、GNDSPHKSV (SEQ ID NO: 1678)、AHDSPHKIG (SEQ ID NO: 4669)、GHESPHKSA (SEQ ID NO: 1612)、GQDSPHKIG (SEQ ID NO: 1679)、GHDSPHKSV (SEQ ID NO: 1680)、GHDSPHKSR (SEQ ID NO: 1615)、KHDSPHKSG (SEQ ID NO: 4670)、GPDSPHKIG (SEQ ID NO: 1681)、GPDSPHKSG (SEQ ID NO: 1682)、GHDSPHKSW (SEQ ID NO: 1683)、WHDSPHKSG (SEQ ID NO: 4671)、RHDSPHKSG (SEQ ID NO: 4672)、GHDSPHKSN (SEQ ID NO: 1684)、GHDSPHKRG (SEQ ID NO: 1610)、GHDSPHKHG (SEQ ID NO: 1686)、LHDSPHKSG (SEQ ID NO: 4673)、GQVSPHKSG (SEQ ID NO: 1687)、IHDSPHKSG (SEQ ID NO: 4674)、MHDSPHKSG (SEQ ID NO: 4675)、GDDSPHKSV (SEQ ID NO: 1688)、GHNSPHKSG (SEQ ID NO: 1689)、NHDSPHKSG (SEQ ID NO: 4676)、THDSPHKSG (SEQ ID NO: 4677)、GNGSPHKRG (SEQ ID NO: 1690)、EHDSPHKSG (SEQ ID NO: 4678)、GHDSPHKYG (SEQ ID NO: 1691)、GHDSPHKSQ (SEQ ID NO: 1692)、QHDSPHKSG (SEQ ID NO: 4680)、RHDSPHKIV (SEQ ID NO: 4681)、YHDSPHKSG (SEQ ID NO: 4682)、GNDSPHKIG (SEQ ID NO: 1693)、HHDSPHKSG (SEQ ID NO: 4683)、GHDSPHKSK (SEQ ID NO: 1694)、FHDSPHKSG (SEQ ID NO: 4684)、GHDSPHKLW (SEQ ID NO: 1695)、VHDSPHKSG (SEQ ID NO: 4685)、GHDSPHKMG (SEQ ID NO: 1697)、GHDSPHKMA (SEQ ID NO: 1698)或GDDSPHKSG (SEQ ID NO: 1611)； (ii) 包含(i)中胺基酸序列之任何部分之胺基酸序列，例如其任何2、3、4、5、6、7、8或9個胺基酸，例如連續胺基酸； (iii) 相對於(i)中之該等胺基酸序列中之任一者，包含一個、兩個或三個但不超過四個修飾，例如取代(例如保守取代)、插入或缺失的胺基酸序列；或 (iv) 相對於(i)中之該等胺基酸序列中之任一者，包含一個、兩個或三個但不超過四個不同胺基酸之胺基酸序列。
185. 如實施例165至184中任一項之AAV顆粒，其中[N1]-[N2]-[N3]係或包含GHDSPHKSG (SEQ ID NO: 1370)。
186. 如實施例165至185中任一項之AAV顆粒，其中該AAV衣殼變異體包含位置456處之除Q以外之胺基酸(例如，R、P、H、K、L、V、A、E或I)、位置457處之除N以外之胺基酸(例如，I、K、S、H、R、T、D、Y、L、W、F、A、Q或M)、位置458處之除Q以外之胺基酸(例如，R、V、K、P、Y、H、L、I、E或M)、位置459處之除Q以外之胺基酸(例如，H、L、E、P、W、D、I、V、S、K、R、C、M或N)及/或位置460處之除T以外之胺基酸(例如，A、E、K、S、I、P、G或N)，相對於根據SEQ ID NO: 138編號之參考序列。
187. 如實施例165至186中任一項之AAV顆粒，其中該AAV衣殼變異體包含位置462處之除Q以外之胺基酸(例如，R、P、H、K、L、V、A、E或I)、位置463處之除N以外之胺基酸(例如，I、K、S、H、R、T、D、Y、L、W、F、A、Q或M)、位置464處之除Q以外之胺基酸(例如，R、V、K、P、Y、H、L、I、E或M)、位置465處之除Q以外之胺基酸(例如，H、L、E、P、W、D、I、V、S、K、R、C、M或N)及/或位置466處之除T以外之胺基酸(例如，A、E、K、S、I、P、G或N)，相對於根據SEQ ID NO: 982編號之參考序列。
188. 如實施例165至187中任一項之AAV顆粒，其中該AAV衣殼變異體包含位置456處之胺基酸Q、位置457處之胺基酸N、位置458處之胺基酸Q、位置459處之胺基酸Q及/或位置460處之胺基酸T，相對於根據SEQ ID NO: 138編號之參考序列。
189. 如實施例165至188中任一項之AAV顆粒，其中該AAV衣殼變異體包含位置462處之胺基酸Q、位置463處之胺基酸N、位置464處之胺基酸Q、位置465處之胺基酸Q及/或位置466處之胺基酸T，相對於根據SEQ ID NO: 982編號之參考序列。
190. 如實施例165至189中任一項之AAV顆粒，其中該AAV衣殼變異體進一步包含[N4]，其中[N4]包含X7、X8、X9、X10及X11，其中： (a) X7係Q、R、P、H、L、K、I、G、S、M或E； (b) X8係N、D、V、S、P、T、G、Y、W、E、R、H、K、F、A、I、L或M； (c) X9係Q、R、L、A、P、H、T、I、F、K、V、M、G、W、Y、S、E、N、D； (d) X10係Q、H、K、A、L、P、E、M、I、S、N、R、Y、C、V、T、W、D、G；並且 (e) X11係T、I、N、S、H、R、L、D、Y、A、Q； 視情況地其中該AAV衣殼變異體包含(a)-(e)中任何上述胺基酸之胺基酸修飾，例如保守取代。
191. 如實施例190之AAV顆粒，其中[N4]係或包含： (i) QNQQT (SEQ ID NO: 3964)、QIRQT (SEQ ID NO: 4686)、QNQHA (SEQ ID NO: 4687)、QKQQT (SEQ ID NO: 4530)、QSVQT (SEQ ID NO: 4688)、RSQQT (SEQ ID NO: 4689)、QNKLE (SEQ ID NO: 4690)、QNQQK (SEQ ID NO: 4691)、QHQQA (SEQ ID NO: 4692)、QIQHT (SEQ ID NO: 4693)、PRQQT (SEQ ID NO: 4694)、HTQQT (SEQ ID NO: 4695)、QRQHT (SEQ ID NO: 4696)、QSQQT (SEQ ID NO: 3970)、QNQQS (SEQ ID NO: 4697)、RNQET (SEQ ID NO: 4698)、QTQLT (SEQ ID NO: 4075)、KNQQT (SEQ ID NO: 4699)、QDQQT (SEQ ID NO: 3984)、HNQQT (SEQ ID NO: 3978)、QNQLT (SEQ ID NO: 3975)、QTQQT (SEQ ID NO: 4700)、QTQQI (SEQ ID NO: 4701)、QSKQA (SEQ ID NO: 4702)、QNQPP (SEQ ID NO: 4703)、QSPQT (SEQ ID NO: 4704)、QNYQT (SEQ ID NO: 4091)、QNHQT (SEQ ID NO: 3983)、QNRQT (SEQ ID NO: 3998)、QNQQG (SEQ ID NO: 4705)、QNHLT (SEQ ID NO: 4079)、QYQHT (SEQ ID NO: 3999)、QNQWT (SEQ ID NO: 4490)、QNQHT (SEQ ID NO: 4706)、QTRQT (SEQ ID NO: 4707)、QNLHT (SEQ ID NO: 4708)、LNQQT (SEQ ID NO: 4068)、QNQET (SEQ ID NO: 4709)、QHLQT (SEQ ID NO: 4500)、LNQPT (SEQ ID NO: 4710)、QNQDT (SEQ ID NO: 4711)、RNQQT (SEQ ID NO: 4712)、QNLLT (SEQ ID NO: 4713)、QLVIT (SEQ ID NO: 4714)、RTQET (SEQ ID NO: 4715)、QTHQT (SEQ ID NO: 4716)、QNQPA (SEQ ID NO: 4717)、QDQHT (SEQ ID NO: 4718)、QSQHT (SEQ ID NO: 4719)、RNQQI (SEQ ID NO: 4720)、VRQQT (SEQ ID NO: 4721)、QNQHS (SEQ ID NO: 4722)、AWQQT (SEQ ID NO: 4723)、QSVPT (SEQ ID NO: 4724)、QNIQP (SEQ ID NO: 4725)、QNHLN (SEQ ID NO: 4726)、LDQQT (SEQ ID NO: 4727)、PDQQS (SEQ ID NO: 4728)、ESQQT (SEQ ID NO: 4729)、QNKQT (SEQ ID NO: 4730)、QRQLT (SEQ ID NO: 4731)、QIIVT (SEQ ID NO: 4732)、QKQST (SEQ ID NO: 4733)、QSHQT (SEQ ID NO: 4734)、QFVVT (SEQ ID NO: 4735)、QNLQT (SEQ ID NO: 3980)、QNQQI (SEQ ID NO: 3971)、QSQPT (SEQ ID NO: 4736)、QNEQT (SEQ ID NO: 4737)、QSLQT (SEQ ID NO: 4503)、RNRQT (SEQ ID NO: 4738)、QSKQT (SEQ ID NO: 4739)、QNPLT (SEQ ID NO: 4740)、RDQKT (SEQ ID NO: 4741)、HNQQN (SEQ ID NO: 4742)、QWKRT (SEQ ID NO: 4743)、QSQQI (SEQ ID NO: 4073)、QAQQT (SEQ ID NO: 4058)、QNHQI (SEQ ID NO: 4744)、QNQQA (SEQ ID NO: 4745)、QNQLN (SEQ ID NO: 4746)、QTQPT (SEQ ID NO: 4747)、INQQT (SEQ ID NO: 4547)、QKQLT (SEQ ID NO: 4748)、RNQLA (SEQ ID NO: 4749)、RNQQS (SEQ ID NO: 4750)、ISIQT (SEQ ID NO: 4751)、QNQQN (SEQ ID NO: 4752)、QSQQS (SEQ ID NO: 4753)、QTVCT (SEQ ID NO: 4754)、QYQQI (SEQ ID NO: 4755)、QQIMT (SEQ ID NO: 4756)、QNEQS (SEQ ID NO: 4757)、LNHQT (SEQ ID NO: 4758)、QMIHT (SEQ ID NO: 4759)、RNHQS (SEQ ID NO: 4760)、QKMNT (SEQ ID NO: 4761)、QSQQN (SEQ ID NO: 4762)、QYQHA (SEQ ID NO: 4061)； (ii) 包含(i)中胺基酸序列之任何部分之胺基酸序列，例如其任何2、3或4個胺基酸，例如連續胺基酸； (iii) 相對於(i)中之該等胺基酸序列中之任一者，包含一個、兩個或三個但不超過四個修飾，例如取代(例如保守取代)、插入或缺失的胺基酸序列；或 (iv) 相對於(i)中之該等胺基酸序列中之任一者，包含一個、兩個或三個但不超過四個不同胺基酸之胺基酸序列。
192. 如實施例190或191之AAV顆粒，其中[N1]-[N2]-[N3]-[N4]係或包含： (i) SEQ ID NO: 201或3160-3237中任一者之胺基酸序列； (ii) 包含(i)中胺基酸序列之任何部分之胺基酸序列，例如其任何2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12或13個胺基酸，例如連續胺基酸； (iii) 相對於(i)中之該等胺基酸序列中之任一者，包含一個、兩個或三個但不超過四個修飾，例如取代(例如保守取代)、插入或缺失的胺基酸序列；或 (iv) 相對於(i)中之該等胺基酸序列中之任一者，包含一個、兩個或三個但不超過四個不同胺基酸之胺基酸序列。
193. 如實施例190至192中任一項之AAV顆粒，其中[N1]-[N2]-[N3]-[N4]係或包含GHDSPHKSGQNQQT (SEQ ID NO: 201)。
194. 如實施例165至193中任一項之AAV顆粒，其中該AAV衣殼變異體包含位置449處之除K以外之胺基酸(例如，T)、位置450處之除T以外之胺基酸(例如，A、S、I、V、N、E、Y、C、G、W或Q)、位置451處之除I以外之胺基酸(例如，E、V、S、T、N、D、C、G、Q、L、P、A)及/或位置452處之除N以外之胺基酸(例如，S、Y、I、K、F、T、D、E、G、V、L、A、M、Q、H、P或R)，相對於根據SEQ ID NO: 138或982編號之參考序列。
195. 如實施例165至193中任一項之AAV顆粒，其中該AAV衣殼變異體包含位置449處之胺基酸K、位置450處之胺基酸T、位置451處之胺基酸I及/或位置452處之胺基酸N，相對於根據SEQ ID NO: 138編號之參考序列。
196. 如實施例165至195中任一項之AAV顆粒，其中該AAV衣殼變異體進一步包含[N0]，其中[N0]包含X A、X B、X C及X D，其中： (a) X A係K或T； (b) X B係T、A、S、I、V、N、E、Y、C、G、W或Q； (c) X C係I、E、V、S、T、N、D、C、G、Q、L、P、A；且 (d) X D係N、S、Y、I、K、F、T、D、E、G、V、L、A、M、Q、H、P或R； 視情況地其中該AAV衣殼變異體包含(a)-(d)中任何上述胺基酸之胺基酸修飾，例如保守取代。
197. 如實施例196之AAV顆粒，其中[N0]係或包含： (i) KAIN (SEQ ID NO: 4562)、KTIN (SEQ ID NO: 4557)、KTES (SEQ ID NO: 4588)、TTIN (SEQ ID NO: 4558)、KSIN (SEQ ID NO: 4559)、KTVN (SEQ ID NO: 4555)、KSIY (SEQ ID NO: 4763)、KTSN (SEQ ID NO: 4565)、KTTN (SEQ ID NO: 4589)、KIIN (SEQ ID NO: 4764)、KTIS (SEQ ID NO: 4593)、KAII (SEQ ID NO: 4765)、KTIK (SEQ ID NO: 4599)、KTEF (SEQ ID NO: 4611)、KTIT (SEQ ID NO: 4607)、KTNN (SEQ ID NO: 4591)、KTID (SEQ ID NO: 4579)、KAIS (SEQ ID NO: 4766)、KTVD (SEQ ID NO: 4767)、KTIE (SEQ ID NO: 4768)、KTEG (SEQ ID NO: 4634)、KVIN (SEQ ID NO: 4610)、KAVN (SEQ ID NO: 4632)、KTIY (SEQ ID NO: 4769)、KTDN (SEQ ID NO: 4563)、KTCN (SEQ ID NO: 4570)、KNVV (SEQ ID NO: 4770)、KTEL (SEQ ID NO: 4582)、KTDA (SEQ ID NO: 4771)、KTEV (SEQ ID NO: 4631)、KSEL (SEQ ID NO: 4629)、KTEM (SEQ ID NO: 4772)、KTEQ (SEQ ID NO: 4619)、KTII (SEQ ID NO: 4552)、KIVN (SEQ ID NO: 4773)、KTEK (SEQ ID NO: 4554)、KTEN (SEQ ID NO: 4568)、KIGN (SEQ ID NO: 4774)、KEVM (SEQ ID NO: 4775)、KYQV (SEQ ID NO: 4776)、KTEA (SEQ ID NO: 4584)、KATN (SEQ ID NO: 4573)、KTEH (SEQ ID NO: 4571)、KTVE (SEQ ID NO: 4777)、KAID (SEQ ID NO: 4778)、KTIM (SEQ ID NO: 4779)、KEVG (SEQ ID NO: 4780)、KSEM (SEQ ID NO: 4781)、KAQQ (SEQ ID NO: 4782)、KCGE (SEQ ID NO: 4783)、KASN (SEQ ID NO: 4784)、KTET (SEQ ID NO: 4581)、KTIG (SEQ ID NO: 4785)、KTDP (SEQ ID NO: 4786)、KELV (SEQ ID NO: 4787)、KELM (SEQ ID NO: 4788)、KNEI (SEQ ID NO: 4789)、KTPN (SEQ ID NO: 4790)、KITN (SEQ ID NO: 4791)、KTDI (SEQ ID NO: 4792)、KTDQ (SEQ ID NO: 4793)、KGIN (SEQ ID NO: 4794)、KSEI (SEQ ID NO: 4795)、KSEK (SEQ ID NO: 4614)、KWSA (SEQ ID NO: 4796)、KELA (SEQ ID NO: 4797)、KQTQ (SEQ ID NO: 4798)、KGAD (SEQ ID NO: 4799)、KVGE (SEQ ID NO: 4800)、KANE (SEQ ID NO: 4801)、KTDT (SEQ ID NO: 4802)、KTCI (SEQ ID NO: 4803)、KELR (SEQ ID NO: 4804)、KCQI (SEQ ID NO: 4805)、KGVM (SEQ ID NO: 4806)、KACD (SEQ ID NO: 4807)、KNEL (SEQ ID NO: 4808)、KAAE (SEQ ID NO: 4809)、KGQN (SEQ ID NO: 4810)、KNEF (SEQ ID NO: 4811)、KTSI (SEQ ID NO: 4812)、KAEH (SEQ ID NO: 4603)、KCDQ (SEQ ID NO: 4813)、KEIL (SEQ ID NO: 4814)、KTER (SEQ ID NO: 4560)、KNAI (SEQ ID NO: 4637)、KTDK (SEQ ID NO: 4575)、KTPD (SEQ ID NO: 4815)、KTIH (SEQ ID NO: 4646)或KTEI (SEQ ID NO: 4578)； (ii) 包含(i)中胺基酸序列之任何部分之胺基酸序列，例如其任何2或3個胺基酸，例如連續胺基酸； (iii) 相對於(i)中之該等胺基酸序列中之任一者，包含一個、兩個或三個但不超過四個修飾，例如取代(例如保守取代)、插入或缺失的胺基酸序列；或 (iv) 相對於(i)中之該等胺基酸序列中之任一者，包含一個、兩個或三個但不超過四個不同胺基酸之胺基酸序列。
198. 如實施例196或197之AAV顆粒，其中[N0]-[N1]-[N2]-[N3]-[N4]係或包含： (i) SEQ ID NO: 3606-3836中任一者之胺基酸序列； (ii) 包含(i)中胺基酸序列之任何部分之胺基酸序列，例如其任何2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16或17個胺基酸，例如連續胺基酸； (iii) 相對於(i)中之該等胺基酸序列中之任一者，包含一個、兩個或三個但不超過四個修飾，例如取代(例如保守取代)、插入或缺失的胺基酸序列；或 (iv) 相對於(i)中之該等胺基酸序列中之任一者，包含一個、兩個或三個但不超過四個不同胺基酸之胺基酸序列。
199. 如實施例196至198中任一項之AAV顆粒，其中[N0]-[N1]-[N2]-[N3]-[N4]係或包含KTINGHDSPHKSGQNQQT (SEQ ID NO: 5828)。
200. 如實施例196至198中任一項之AAV顆粒，其中[N0]-[N1]-[N2]-[N3]-[N4]係或包含KAEIGHDSPHKSGQNQQT (SEQ ID NO: 1754)。
201. 如實施例196至198中任一項之AAV顆粒，其中[N0]-[N1]-[N2]-[N3]-[N4]係或包含KTEKMSGSPHSKAQNQQT (SEQ ID NO: 3241)。
202. 如實施例130至200中任一項之AAV顆粒，其中[N1]-[N2]-[N3]存在於該AAV衣殼變異體之環IV中。
203. 如實施例160至164或196至202中任一項之AAV顆粒，其中[N0]及[N4]存在於該AAV衣殼變異體之環IV中。
204. 如實施例160至164或196至203中任一項之AAV顆粒，其中相對於根據SEQ ID NO: 138、981或982之胺基酸序列編號之參考序列，[N0]緊接在位置448之後存在。
205. 如實施例160至164或196至204中任一項之AAV顆粒，其中相對於根據SEQ ID NO: 138、981或982編號之參考序列，[N0]替換位置449-452 (例如，K449、T450、I451及N452)。
206. 如實施例160至164或196至205中任一項之AAV顆粒，其中相對於根據SEQ ID NO: 138、981或982編號之參考序列，[N0]緊接在位置448之後存在且其中[N0]替換位置449-452 (例如，K449、T450、I451及N452)。
207. 如實施例160至164或196至206中任一項之AAV顆粒，其中[N0]對應於SEQ ID NO: 981或982中任一者之位置449-452 (例如，K449、T450、I451及N452)。
208. 如實施例130至207中任一項之AAV顆粒，其中相對於根據SEQ ID NO: 138、981或982之胺基酸序列編號之參考序列，[N1]緊接在位置452之後存在。
209. 如實施例130至208中任一項之AAV顆粒，其中相對於根據SEQ ID NO: 138、981或982編號之參考序列，[N1]替換位置453-455 (例如，G453、S454及G455)。
210. 如實施例130至208中任一項之AAV顆粒，其中相對於根據SEQ ID NO: 138、981或982編號之參考序列，[N1]替換位置453 (例如，G453)。
211. 如實施例130至164或200至209中任一項之AAV顆粒，其中： (i) [N1]之位置X1替換位置453 (例如，G453)； (ii) [N1]之位置X2對應於位置454 (例如，S454)；且 (iii) [N1]之位置X3對應於位置455 (例如，G455)， 其中(i)、(ii)及(iii)根據SEQ ID NO: 138或SEQ ID NO: 981編號。
212. 如實施例130至164或200至209中任一項之AAV顆粒，其中： (i) [N1]之位置X1對應於位置453 (例如，G453)； (ii) [N1]之位置X2對應於位置454 (例如，S454)；且 (iii) [N1]之位置X3對應於位置455 (例如，G455)， 其中(i)、(ii)及(iii)根據SEQ ID NO: 138或SEQ ID NO: 981編號。
213. 如實施例165至209中任一項之AAV顆粒，其中： (i) [N1]之位置X1對應於位置453 (例如，G453)； (ii) [N1]之位置X2替換位置454 (例如，S454)；且 (iii) [N1]之位置X3替換位置455 (例如，G455)； 其中(i)、(ii)及(iii)根據SEQ ID NO: 138或SEQ ID NO: 982編號。
214. 如實施例165至209中任一項之AAV顆粒，其中[N1]對應於SEQ ID NO 982之位置453-455 (例如，G453、H454、D455)。
215. 如實施例165至209中任一項之AAV顆粒，其中[N1]對應於SEQ ID NO: 138或981之位置453-455 (例如，G453、S454、G455)。
216. 如實施例130至215中任一項之AAV顆粒，其中相對於根據SEQ ID NO: 138、981或982之胺基酸序列編號之參考序列，[N2]緊接在位置455之後存在。
217. 如實施例130至216中任一項之AAV顆粒，其中[N2]對應於SEQ ID NO: 981或982之位置456-458 (例如，S456、P457及H458)。
218. 如實施例130至216中任一項之AAV顆粒，其中[N2]對應於SEQ ID NO: 69、70、71、4、5、6、7、8或36-59中任一者之位置456-458 (例如，S456、P457及H458)。
219. 如實施例130至218中任一項之AAV顆粒，其中[N2]緊接在[N1]之後存在。
220. 如實施例130至219中任一項之AAV顆粒，其中[N3]對應於SEQ ID NO 981之位置459-460 (例如，S459、K460、A461)。
221. 如實施例130至220中任一項之AAV顆粒，其中[N3]對應於SEQ ID NO: 69、36、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、57或59之位置459-460 (例如，S459、K460、A461)。
222. 如實施例130至220中任一項之AAV顆粒，其中相對於根據SEQ ID NO: 138、981或982之胺基酸序列編號之參考序列，[N2]-[N3]緊接在位置455之後存在。
223. 如實施例130至164或200至222中任一項之AAV顆粒，其中相對於根據SEQ ID NO: 981之胺基酸序列編號之參考序列，[N2]-[N3]緊接在位置455之後存在。
224. 如實施例130至164或200至223中任一項之AAV顆粒，其中[N2]-[N3]對應於SEQ ID NO: 981之位置456-461 (例如，S456、P457、H458、S459、K460、A461)。
225. 如實施例130至164或200至223中任一項之AAV顆粒，其中[N2]-[N3]對應於SEQ ID NO: 69、36、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、57或59中任一者之位置456-461 (例如，S456、P457、H458、S459、K460、A461)。
226. 如實施例165至222中任一項之AAV顆粒，其中[N3]對應於SEQ ID NO: 982之位置459-460 (例如，K459、S460、G461)。
227. 如實施例165至219或222至226中任一項之AAV顆粒，其中[N3]對應於SEQ ID NO: 37之位置459-460 (例如，K459、S460、G461)。
228. 如實施例165至222或227中任一項之AAV顆粒，其中相對於根據SEQ ID NO: 982之胺基酸序列編號之參考序列，[N2]-[N3]緊接在位置455之後存在。
229. 如實施例165至228中任一項之AAV顆粒，其中根據SEQ ID NO: 138編號，[N3]替換位置454及455 (例如，S454及G455)。
230. 如實施例165至229中任一項之AAV顆粒，其中根據SEQ ID NO: 138編號，[N3]緊接在[N2]之後存在且替換位置454及455 (例如，S454及G455)。
231. 如實施例165至230中任一項之AAV顆粒，其中根據SEQ ID NO: 138編號，[N3]緊接在[N1]-[N2]之後存在且替換位置454及455 (例如，S454及G455)。
232. 如實施例165至222、226或228中任一項之AAV顆粒，其中[N2]-[N3]對應於SEQ ID NO: 982之位置456-461 (例如，S456、P457、H458、K459、S460、G461)。
233. 如實施例165至222、226或228中任一項之AAV顆粒，其中[N2]-[N3]對應於SEQ ID NO: 37之位置456-461 (例如，S456、P457、H458、K459、S460、G461)。
234. 如實施例153至164或190至233中任一項之AAV顆粒，其中相對於根據SEQ ID NO: 138之胺基酸序列編號之參考序列，[N4]緊接在位置455之後存在。
235. 如實施例153至164或190至234中任一項之AAV顆粒，其中相對於根據SEQ ID NO: 138之胺基酸序列編號之參考序列，[N4]替換位置456-460 (例如，Q456、N457、Q458、Q459及T460)。
236. 如實施例153至164或190至235中任一項之AAV顆粒，其中[N4]對應於SEQ ID NO: 981或982之位置462-466 (例如，Q462、N463、Q464、Q465及T466)。
237. 如實施例153至164或190至235中任一項之AAV顆粒，其中[N4]對應於SEQ ID NO: 69、70、71、4、5、6、7、8或36-59中任一者之位置462-466。
238. 如實施例153至164或190至235中任一項之AAV顆粒，其中[N4]對應於SEQ ID NO: 138之位置456-460 (例如，Q456、N457、Q458、Q459及T460)。
239. 如實施例153至164或190至236中任一項之AAV顆粒，其中相對於根據SEQ ID NO: 138之胺基酸序列編號之參考序列，[N2]-[N3]-[N4]替換位置456-460 (例如，Q456、N457、Q458、Q459及T460)。
240. 如實施例153至164或190至239中任一項之AAV顆粒，其中相對於根據SEQ ID NO: 138之胺基酸序列編號之參考序列，[N2]-[N3]-[N4]緊接在位置455之後存在，且其中[N2]-[N3]-[N4]替換位置456-460 (例如，Q456、N457、Q458、Q459及T460)。
241. 如實施例153至164或190至240中任一項之AAV顆粒，其中相對於根據SEQ ID NO: 138之胺基酸序列編號之參考序列，[N1]-[N2]-[N3]-[N4]替換位置453-460 (例如，G453、S454、G455、Q456、N457、Q458、Q459及T460)。
242. 如實施例153至164或190至241中任一項之AAV顆粒，其中相對於根據SEQ ID NO: 138之胺基酸序列編號之參考序列，[N1]-[N2]-[N3]-[N4]緊接在位置452之後存在，且其中[N1]-[N2]-[N3]-[N4]替換位置453-460 (例如，G453、S454、G455、Q456、N457、Q458、Q459及T460)。
243. 如實施例153至164或190至242中任一項之AAV顆粒，其中[N1]-[N2]-[N3]-[N4]對應於SEQ ID NO: 981之位置453-466 (例如，G453、S454、G455、S456、P457、H458、S459、K460、A461、Q462、N463、Q464、Q465、T466)。
244. 如實施例153至164或190至243中任一項之AAV顆粒，其中[N1]-[N2]-[N3]對應於SEQ ID NO: 981之位置453-461 (例如，G453、S454、G455、S456、P457、H458、S459、K460、A461)。
245. 如實施例153至164或190至242中任一項之AAV顆粒，其中[N1]-[N2]-[N3]-[N4]對應於SEQ ID NO: 982之位置453-466 (例如，G453、H454、D455、S456、P457、H458、K459、S460、G461、Q462、N463、Q464、Q465、T466)。
246. 如實施例153至164、190至242或245中任一項之AAV顆粒，其中[N1]-[N2]-[N3]對應於SEQ ID NO: 982之位置453-461 (例如，G453、H454、D455、S456、P457、H458、K459、S460、G461)。
247. 如實施例153至164、190至242或245中任一項之AAV顆粒，其中[N1]-[N2]-[N3]-[N4]對應於SEQ ID NO: 69、70、71、4、5、6、7、8或36-59中任一者之位置453-466。
248. 如實施例160至164或196至245中任一項之AAV顆粒，其中相對於根據SEQ ID NO: 138之胺基酸序列編號之參考序列，[N0]-[N1]-[N2]-[N3]-[N4]替換位置449-460 (例如，K449、T450、I451、N452、G453、S454、G455、Q456、N457、Q458、Q459、T460)。
249. 如實施例160至164或196至248中任一項之AAV顆粒，其中相對於根據SEQ ID NO: 138之胺基酸序列編號之參考序列，[N0]-[N1]-[N2]-[N3]-[N4]緊接在位置448之後存在，且其中[N0]-[N1]-[N2]-[N3]-[N4]替換位置449-460 (例如，K449、T450、I451、N452、G453、S454、G455、Q456、N457、Q458、Q459、T460)。
250. 如實施例160至164或202至249中任一項之AAV顆粒，其中[N0]-[N1]-[N2]-[N3]-[N4]對應於SEQ ID NO: 981之位置449-466 (例如，K449、T450、I451、N452、G453、S454、G455、S456、P457、H458、S459、K460、A461、Q462、N463、Q464、Q465、T466)。
251. 如實施例202至249中任一項之AAV顆粒，其中[N0]-[N1]-[N2]-[N3]-[N4]對應於SEQ ID NO: 982之位置449-466 (例如，K449、T450、I451、N452、G453、H454、D455、S456、P457、H458、K459、S460、G461、Q462、N463、Q464、Q465、T466)。
252. 如實施例202至249中任一項之AAV顆粒，其中[N0]-[N1]-[N2]-[N3]-[N4]對應於SEQ ID NO: 69、70、71、4、5、6、7、8或36-59中任一者之位置449-466。
253. 如實施例153至164或190至251中任一項之AAV顆粒，其中相對於根據SEQ ID NO: 981或982之胺基酸序列編號之參考序列，[N4]緊接在位置461之後存在。
254. 如實施例153至164或190至253中任一項之AAV顆粒，其中相對於根據SEQ ID NO: 981或982之胺基酸序列編號之參考序列，[N4]替換位置462-466 (例如，Q462、N463、Q464、Q465及T466)。
255. 如實施例153至164或190至254中任一項之AAV顆粒，其中相對於根據SEQ ID NO: 981或982之胺基酸序列編號之參考序列，[N2]-[N3]-[N4]替換位置462-466 (例如，Q462、N463、Q464、Q465及T466)。
256. 如實施例153至164或190至255中任一項之AAV顆粒，其中相對於根據SEQ ID NO: 981或982之胺基酸序列編號之參考序列，[N2]-[N3]-[N4]緊接在位置455之後存在，且其中[N2]-[N3]-[N4]替換位置462-466 (例如，Q462、N463、Q464、Q465及T466)。
257. 如實施例130至256中任一項之AAV顆粒，其中該AAV衣殼變異體自N末端至C末端，包含[N2]-[N3]。
258. 如實施例130至257中任一項之AAV顆粒，其中該AAV衣殼變異體自N末端至C末端，包含[N1]-[N2]-[N3]。
259. 如實施例130至258中任一項之AAV顆粒，其中該AAV衣殼變異體自N末端至C末端，包含[N0]-[N1]-[N2]-[N3]。
260. 如實施例130至259中任一項之AAV顆粒，其中該AAV衣殼變異體自N末端至C末端，包含[N1]-[N2]-[N3]-[N4]。
261. 如實施例130至260中任一項之AAV顆粒，其中該AAV衣殼變異體自N末端至C末端，包含[N0]-[N1]-[N2]-[N3]-[N4]。
262. 一種AAV顆粒，其包含AAV衣殼變異體及編碼SOD1靶向多核苷酸(例如SOD1靶向RNA劑，例如siRNA)之核酸，其中該AAV衣殼變異體： (i) 例如，與SEQ ID NO: 138之參考序列相比，在至少二至三個物種，例如非人類靈長類動物及囓齒動物(例如，小鼠)之腦中富集，例如至少約10、15、20、25、30、35、40、45、50、55、60、65、70、75、80、85、90、95、100、105、115、120、125、130、135、140、145、150、155、160、165、170、175、180、190、200、205或210倍，視情況地其中該至少二至三個物種為長尾獼猴( Macaca fascicularis)、綠猴( Chlorocebus sabaeus)、普通狨( Callithrix jacchus)及/或小鼠(例如，BALB/c小鼠、C57Bl/6小鼠及/或CD-1遠交系小鼠)；及/或 (ii) 能夠轉導神經元細胞(例如NeuN+神經元或多巴胺能神經元(例如酪胺酸羥化酶(TH)+神經元))及非神經元細胞，例如神經膠質細胞、寡樹突細胞(例如Olig2陽性寡樹突細胞)及/或星狀細胞(例如Sox9+星狀細胞或Olig2陽性星狀細胞)。
263. 一種AAV顆粒，其包含AAV衣殼變異體及編碼SOD1靶向多核苷酸(例如SOD1靶向RNA劑，例如siRNA)之核酸，其中該AAV衣殼變異體包含： (a) 表1A、2A、2B、21-23，25、26或30中提供之任何序列之胺基酸序列； (b) 包含來自表1A、2A、2B、21-23，25、26或30中提供之任一序列的至少3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16或17個連續胺基酸的胺基酸序列； (c) 相對於表1A、2A、2B、21-23，25、26或30中提供之任一序列，包含至少一個、兩個或三個但不超過四個不同胺基酸之胺基酸序列；或 (d) 相對於表1A、2A、2B、21-23，25、26或30中提供之任一序列之胺基酸序列，包含至少一個、兩個或三個但不超過四個修飾，例如取代(例如保守取代)的胺基酸。
264. 一種AAV顆粒，其包含AAV衣殼變異體及編碼SOD1靶向多核苷酸(例如SOD1靶向RNA劑，例如siRNA)之核酸，其中該AAV衣殼變異體包含： (a) SEQ ID NO: 945-980或985-986中任一者之胺基酸序列； (b) 包含來自SEQ ID NO: 945-980或985-986中任一者之至少3、4或5個連續胺基酸之胺基酸序列； (c) 相對於SEQ ID NO: 945-980或985-986中任一者之胺基酸序列，包含至少一個、兩個或三個但不超過四個不同胺基酸之胺基酸序列；或 (d) 相對於SEQ ID NO: 945-980或985-986中任一者之胺基酸序列，包含至少一個、兩個或三個但不超過四個修飾，例如取代(例如保守取代)之胺基酸序列。
265. 一種AAV顆粒，其包含AAV衣殼變異體及編碼SOD1靶向多核苷酸(例如SOD1靶向RNA劑，例如siRNA)之核酸，其中該AAV衣殼變異體包含： (a) SEQ ID NO: 2、200、201、941、943、204、208、404或903-909中任一者之胺基酸序列； (b) 包含來自SEQ ID NO: 2、200、201、941、943、204、208、404或903-909中任一者之至少3、4、5、6、7、8、9、10、11、12或13個連續胺基酸之胺基酸序列； (c) 相對於SEQ ID NO: 2、200、201、941、943、204、208、404或903-909中任一者之胺基酸序列，包含至少一個、兩個或三個但不超過四個不同胺基酸之胺基酸序列；或 (d) 相對於SEQ ID NO: 2、200、201、941、943、204、208、404或903-909中任一者之胺基酸序列，包含至少一個、兩個或三個但不超過四個修飾，例如取代(例如保守取代)之胺基酸序列。
266. 如實施例262、263或265中任一項之AAV顆粒，其中該AAV衣殼變異體包含有包含來自SEQ ID NO: 2、200、201、941、943、204、208、404或903-909中任一者之至少4、5、6、7、8、9、10、11、12或13個連續胺基酸之胺基酸序列。
267. 如實施例262至266中任一項之AAV顆粒，其中該至少3個連續胺基酸包含SPH。
268. 如實施例262至267中任一項之AAV顆粒，其中該至少4個連續胺基酸包含SPHS (SEQ ID NO: 1371)。
269. 如實施例262至268中任一項之AAV顆粒，其中該至少5個連續胺基酸包含SPHSK (SEQ ID NO: 1372)。
270. 如實施例262至269中任一項之AAV顆粒，其中該至少6個連續胺基酸包含SPHSKA (SEQ ID NO: 941)。
271. 如實施例262至266之AAV顆粒，其中該至少3個連續胺基酸包含HDS。
272. 如實施例262至266或271中任一項之AAV顆粒，其中該至少4個連續胺基酸包含HDSP (SEQ ID NO: 1373)。
273. 如實施例262至266、271或272中任一項之AAV顆粒，其中該至少5個連續胺基酸包含HDSPH (SEQ ID NO: 1374)。
274. 如實施例262至266或271至273中任一項之AAV顆粒，其中該至少6個連續胺基酸包含HDSPHK (SEQ ID NO: 2)。
275. 如實施例262至267中任一項之AAV顆粒，其中： (i) 該至少3個連續胺基酸包含SPH； (ii) 該至少4個連續胺基酸包含SPHK (SEQ ID NO: 4816)； (iii) 該至少5個連續胺基酸包含SPHKY (SEQ ID NO: 1386)；及/或 (iv) 該至少6個連續胺基酸包含SPHKYG (SEQ ID NO: 966)。
276. 如實施例262、263、265或266之AAV顆粒，其中該AAV衣殼變異體包含相對於SEQ ID NO: 2、200、201、941、943、204、208、404或903-909中任一者之胺基酸序列，包含至少一個、兩個或三個但不超過四個修飾，例如取代(例如保守取代)之胺基酸序列。
277. 如實施例262至270或276中任一項之AAV顆粒，其中該AAV衣殼變異體包含相對於SPHSKA (SEQ ID NO: 941)之胺基酸序列，包含至少一個、兩個或三個但不超過四個修飾，例如取代(例如保守取代)之胺基酸序列。
278. 如實施例262至266、271至274或276中任一項之AAV顆粒，其中該AAV衣殼變異體包含相對於HDSPHK (SEQ ID NO: 2)之胺基酸序列，包含至少一個、兩個或三個但不超過四個修飾，例如取代(例如保守取代)之胺基酸序列。
279. 如實施例262至267、275或276中任一項之AAV顆粒，其中該AAV衣殼變異體包含相對於SPHKYG (SEQ ID NO: 966)之胺基酸序列，包含至少一個、兩個或三個但不超過四個修飾，例如取代(例如保守取代)之胺基酸序列。
280. 如實施例262或263之AAV顆粒，其中該AAV衣殼變異體包含： (i) 相對於KTENVSGSPHSKAQNQQT (SEQ ID NO: 3272)之胺基酸序列，包含至少一個、兩個或三個但不超過四個修飾，例如取代(例如保守取代)之胺基酸序列； (ii) 相對於KTERVSGSPHSKAQNQQT (SEQ ID NO: 3589)之胺基酸序列，包含至少一個、兩個或三個但不超過四個修飾，例如取代(例如保守取代)之胺基酸序列； (iii) 相對於KAEIGHDSPHKSGQNQQT (SEQ ID NO: 1754)之胺基酸序列，包含至少一個、兩個或三個但不超過四個修飾，例如取代(例如保守取代)之胺基酸序列； (iv) 相對於KTEKMSGSPHSKAQNQQT (SEQ ID NO: 3241)之胺基酸序列，包含至少一個、兩個或三個但不超過四個修飾，例如取代(例如保守取代)之胺基酸序列； (v) 相對於KTINGHDSPHSKAQNLQT (SEQ ID NO: 4100)之胺基酸序列，包含至少一個、兩個或三個但不超過四個修飾，例如取代(例如保守取代)之胺基酸序列；或 (vi) 相對於KTVNGHDSPHSKAQNQQT (SEQ ID NO: 4062)之胺基酸序列，包含至少一個、兩個或三個但不超過四個修飾，例如取代(例如保守取代)之胺基酸序列。
281. 如實施例262、263、265、266或276中任一項之AAV顆粒，其中該AAV衣殼變異體包含相對於SEQ ID NO: 200、201、941、943、204、208、404或903-909中任一者之胺基酸序列，包含至少一個、兩個或三個但不超過四個不同胺基酸之胺基酸序列。
282. 如實施例262至270、276至277或281中任一項之AAV顆粒，其中該AAV衣殼變異體包含相對於SPHSKA (SEQ ID NO: 941)之胺基酸序列，包含至少一個、兩個或三個但不超過四個不同胺基酸之胺基酸序列。
283. 如實施例262至266、271-275、276、278或281中任一項之AAV顆粒，其中該AAV衣殼變異體包含相對於HDSPHK (SEQ ID NO: 2)之胺基酸序列，包含至少一個、兩個或三個但不超過四個不同胺基酸之胺基酸序列。
284. 如實施例262至267、275至276或281中任一項之AAV顆粒，其中該AAV衣殼變異體包含相對於SPHKYG (SEQ ID NO: 966)之胺基酸序列，包含至少一個、兩個或三個但不超過四個不同胺基酸之胺基酸序列。
285. 如實施例262、263或280中任一項之AAV顆粒，其中該AAV衣殼變異體包含： (i) 相對於KTERVSGSPHSKAQNQQT (SEQ ID NO: 3589)之胺基酸序列，包含至少一個、兩個或三個但不超過四個不同胺基酸之胺基酸序列； (ii) 相對於KAEIGHDSPHKSGQNQQT (SEQ ID NO: 1754)之胺基酸序列包含至少一個、兩個或三個但不超過四個不同胺基酸之胺基酸序列； (iii) 相對於KTEKMSGSPHSKAQNQQT (SEQ ID NO: 3241)之胺基酸序列，包含至少一個、兩個或三個但不超過四個不同胺基酸之胺基酸序列； (iv) 相對於KTINGHDSPHSKAQNLQT (SEQ ID NO: 4100)之胺基酸序列，包含至少一個、兩個或三個但不超過四個不同胺基酸之胺基酸序列； (v) 相對於KTVNGHDSPHSKAQNQQT (SEQ ID NO: 4062)之胺基酸序列，包含至少一個、兩個或三個但不超過四個不同胺基酸之胺基酸； (vi) 相對於KTENVSGSPHSKAQNQQT (SEQ ID NO: 3272)之胺基酸序列，包含至少一個、兩個或三個但不超過四個不同胺基酸之胺基酸序列； (vii) 相對於KTEKVSGSPHSKAQNQQT (SEQ ID NO: 3274)之胺基酸序列，包含至少一個、兩個或三個但不超過四個不同胺基酸之胺基酸序列； (viii) 相對於KTINGSGSPHKSGQNKTS (SEQ ID NO: 4406)之胺基酸序列，包含至少一個、兩個或三個但不超過四個不同胺基酸之胺基酸序列； (ix) 相對於KTSNASGSPHSKAHNQQT (SEQ ID NO: 3382)之胺基酸序列，包含至少一個、兩個或三個但不超過四個不同胺基酸之胺基酸序列； (x) 相對於KNSIGSGSPHSKAQNQQT (SEQ ID NO: 3421)之胺基酸序列，包含至少一個、兩個或三個但不超過四個不同胺基酸之胺基酸序列； (xi) 相對於KTVNGHDSPHKSGQRPST (SEQ ID NO: 4478)之胺基酸序列，包含至少一個、兩個或三個但不超過四個不同胺基酸之胺基酸序列； (xii) 相對於KAENGSGSPHSKAQNQQT (SEQ ID NO: 3487)之胺基酸序列，包含至少一個、兩個或三個但不超過四個不同胺基酸之胺基酸序列；或 (xiii) 相對於KTINGSGSPHKSGQNQQP (SEQ ID NO: 4081)之胺基酸序列，包含至少一個、兩個或三個但不超過四個不同胺基酸之胺基酸序列。
286. 如實施例1至129、262、263、265至279或281至284中任一項之AAV顆粒，其中該AAV衣殼變異體包含SEQ ID NO: 200、201、941、943、204、208、404或903-909中任一者之胺基酸序列。
287. 如實施例262、263、267至270、276、277、280至282、285或286中任一項之AAV顆粒，其中該AAV衣殼變異體包含ERVSGSPHSKA (SEQ ID NO: 4817)之胺基酸序列，視情況地其中根據SEQ ID NO: 138編號，該胺基酸序列緊接在位置450之後存在且替換位置451-455。
288. 如實施例262、263、267至270、276、277、280至282或285至287中任一項之AAV顆粒，其中該AAV衣殼變異體包含KTERVSGSPHSKAQNQQT (SEQ ID NO: 3589)之胺基酸序列，其中根據SEQ ID NO: 138編號，該胺基酸序列緊接在位置448之後存在且替換位置449-460。
289. 如實施例262、263、271至274、276、278、280、281、283、285或286中任一項之AAV顆粒，其中該AAV衣殼變異體包含AEIGHDSPHKSG (SEQ ID NO: 4818)之胺基酸序列，其中根據SEQ ID NO: 138編號，該胺基酸序列緊接在位置449之後存在且替換位置450-455。
290. 如實施例262、263、271至274、276、278、280、281、283、285、286或289中任一項之AAV顆粒，其中該AAV衣殼變異體包含KAEIGHDSPHKSGQNQQT (SEQ ID NO: 1754)之胺基酸序列，視情況地其中，根據SEQ ID NO: 138編號，該胺基酸序列緊接在位置448之後存在且替換位置449-460 (例如，K449、T450、I451、N452、G453、S454、G455、Q456、N457、Q458、Q459、T460)。
291. 如實施例262、263、271至274、276、278、280、281、283、285或286中任一項之AAV顆粒，其包含EKMSGSPHSKA (SEQ ID NO: 6401)之胺基酸序列，視情況地其中，根據SEQ ID NO: 138編號，該胺基酸序列緊接在位置450之後存在且替換位置451-455 (例如，I451、N452、G453、S454、G455)。
292. 如實施例262、263、271至274、276、278、280、281、283、285、286或291中任一項之AAV顆粒，其中該AAV衣殼變異體包含KTEKMSGSPHSKAQNQQT (SEQ ID NO: 3241)之胺基酸序列，視情況地其中，根據SEQ ID NO: 138編號，該胺基酸序列緊接在位置448之後存在且替換位置449-460 (例如，K449、T450、I451、N452、G453、S454、G455、Q456、N457、Q458、Q459、T460)。
293. 如實施例262、263、271至274、276、278、280、281、283、285或286中任一項之AAV顆粒，其中該AAV衣殼變異體包含HDSPHSKAQNL (SEQ ID NO: 6402)之胺基酸序列，其中根據SEQ ID NO: 138編號，該胺基酸序列緊接在位置453之後存在且替換位置456-458(例如，Q456、N457、Q458)。
294. 如實施例262、263、271至274、276、278、280、281、283、285、286或293中任一項之AAV顆粒，其中該AAV衣殼變異體包含KTINGHDSPHSKAQNLQT (SEQ ID NO: 4100)之胺基酸序列，視情況地其中，根據SEQ ID NO: 138編號，該胺基酸序列緊接在位置448之後存在且替換位置449-460 (例如，K449、T450、I451、N452、G453、S454、G455、Q456、N457、Q458、Q459、T460)。
295. 如實施例262、263、271至274、276、278、280、281、283、285或286中任一項之AAV顆粒，其中該AAV衣殼變異體包含VNGHDSPHSKA (SEQ ID NO: 6403)之胺基酸序列，視情況地其中根據SEQ ID NO: 138編號，該胺基酸序列緊接在位置450之後存在且替換位置451-455 (例如，I451、N452、G453、S454、G455)。
296. 如實施例262、263、271至274、276、278、280、281、283、285、286或295中任一項之AAV顆粒，其中該AAV衣殼變異體包含KTVNGHDSPHSKAQNQQT (SEQ ID NO: 4062)之胺基酸序列，視情況地其中，根據SEQ ID NO: 138編號，該胺基酸序列緊接在位置448之後存在且替換位置449-460 (例如，K449、T450、I451、N452、G453、S454、G455、Q456、N457、Q458、Q459、T460)。
297. 如實施例262、263、271至274、276、278、280、281、283、285或286中任一項之AAV顆粒，其中該AAV衣殼變異體包含ENVSGSPHSKA (SEQ ID NO: 4819)之胺基酸序列，視情況地其中，根據SEQ ID NO: 138編號，該胺基酸序列緊接在位置450之後存在且替換位置451-455 (例如，I451、N452、G453、S454、G455)；該胺基酸序列對應於SEQ ID NO: 69之位置451至461；或根據SEQ ID NO: 69或981編號，該胺基酸序列存在於位置451至461處。
298. 如實施例262、263、271至274、276、278、280、281、283、285、286或295中任一項之AAV顆粒，其中該AAV衣殼變異體包含KTENVSGSPHSKAQNQQT (SEQ ID NO: 3272)之胺基酸序列，視情況地其中，根據SEQ ID NO: 138編號，該胺基酸序列緊接在位置448之後存在且替換位置449-460 (例如，K449、T450、I451、N452、G453、S454、G455、Q456、N457、Q458、Q459、T460)；該胺基酸序列對應於SEQ ID NO: 69之位置449至466；或根據SEQ ID NO: 69或981編號，該胺基酸序列存在於位置449至466處。
299. 如實施例1至23、26至29、32、35至43、46至51、54至71、79至89、94至99、102至104、106至112、115至164、203至209、212、216至224、234至243、248至250、253至270、276、277、281、282或286至288中任一項之AAV顆粒，其中該AAV衣殼變異體包含由以下編碼之胺基酸序列：SEQ ID NO: 942之核苷酸序列；相對於SEQ ID NO: 942之核苷酸序列包含至少一個、兩個、三個、四個、五個、六個或七個修飾，例如取代但不超過十個修飾，例如取代的核苷酸序列；或相對於SEQ ID NO: 942之核苷酸序列包含至少一個、兩個、三個、四個、五個、六個或七個但不超過十個不同核苷酸之核苷酸序列。
300. 如實施例1至9、11、12至22、24、26、28、30、33、35至42、44、46至50、52、54至78、83至88、90-98、100至103、105至111、113至129、165至211、213至222、226至242、245至249、251至266、271至274、276、278、280、281、283、285、286、289或290中任一項之AAV顆粒，其中該AAV衣殼變異體包含由以下編碼之胺基酸序列：SEQ ID NO: 3之核苷酸序列；相對於SEQ ID NO: 3之核苷酸序列包含至少一個、兩個、三個、四個、五個、六個或七個修飾，例如取代但不超過十個修飾，例如取代的核苷酸序列；或相對於SEQ ID NO: 3之核苷酸序列包含至少一個、兩個、三個、四個、五個、六個或七個但不超過十個不同核苷酸之核苷酸序列。
301. 如實施例1至23、26至29、32、35至43、46至51、54至71、79至89、94至99、102至104、106至112、115至164、203至209、212、216至224、234至243、248至250、253至270、276、277、281、282、286至288或299中任一項之AAV顆粒，其中編碼該AAV衣殼變異體之該核苷酸序列包含SEQ ID NO: 942之核苷酸序列；相對於SEQ ID NO: 942之核苷酸序列包含至少一個、兩個、三個、四個、五個、六個或七個修飾，例如取代但不超過十個修飾，例如取代的核苷酸序列；或相對於SEQ ID NO: 942之核苷酸序列包含至少一個、兩個、三個、四個、五個、六個或七個但不超過十個不同核苷酸之核苷酸序列。
302. 如實施例1至9、11、12至22、24、26、28、30、33、35至42、44、46至50、52、54至78、83至88、90-98、100至103、105至111、113至129、165至211、213至222、226至242、245至249、251至266、271至274、276、278、280、281、283、285、286、289、290或300中任一項之AAV顆粒，其中編碼該AAV衣殼變異體之該核苷酸序列包含SEQ ID NO: 3之核苷酸序列；相對於SEQ ID NO: 3之核苷酸序列包含至少一個、兩個、三個、四個、五個、六個或七個修飾，例如取代但不超過十個修飾，例如取代的核苷酸序列；或相對於SEQ ID NO: 3之核苷酸序列包含至少一個、兩個、三個、四個、五個、六個或七個但不超過十個不同核苷酸之核苷酸序列。
303. 如實施例262至302中任一項之AAV顆粒，其中該胺基酸序列存在於該AAV衣殼變異體之環IV中。
304. 如實施例262至303中任一項之AAV顆粒，其中相對於根據SEQ ID NO: 138之胺基酸序列編號之參考序列，該胺基酸序列緊接在位置448、449、450、451、452、453、454或455之後存在。
305. 如實施例262至304中任一項之AAV顆粒，其中相對於根據SEQ ID NO: 138之胺基酸序列編號之參考序列，該胺基酸序列替換胺基酸449、450、451、452、453、454、455、456、457、458、459及/或460 (例如，K449、T450、I451、N452、G453、S454、G455、Q456、N457、Q458、Q459及/或T460)。
306. 如實施例262至305中任一項之AAV顆粒，其中相對於根據SEQ ID NO: 138之胺基酸序列編號之參考序列，該胺基酸序列緊接在位置455之後存在。
307. 如實施例262至306中任一項之AAV顆粒，其中相對於根據SEQ ID NO: 138之胺基酸序列編號之參考序列，該胺基酸序列緊接在位置453之後存在。
308. 如實施例1至23、26至29、32、35至43、46至51、54至71、79至89、94至99、102至104、106至112、115至164、203至209、212、216至224、234至243、248至250、253至270、276、277、281、282、286至288、299、301或303至307中任一項之AAV顆粒，其中該AAV衣殼變異體包含SPHSKA (SEQ ID NO: 941)之胺基酸序列，其中相對於根據SEQ ID NO: 138之胺基酸序列編號之參考序列，該胺基酸序列緊接在位置455之後存在。
309. 如實施例1至23、26至29、32、35至43、46至51、54至71、79至89、94至99、102至104、106至112、115至164、203至209、212、216至224、234至243、248至250、253至270、276、277、281、282、286至288、299、301或303至308中任一項之AAV顆粒，其中該AAV衣殼變異體包含SPHSKA (SEQ ID NO: 941)之胺基酸序列，其中根據SEQ ID NO: 981之胺基酸序列編號，該胺基酸序列緊接在位置455之後存在(例如，存在於位置456-461處)。
310. 如實施例308或309之AAV顆粒，其中該AAV衣殼變異體進一步包含位置451處之除I以外之胺基酸、位置452處之除N以外之胺基酸及位置453處之除G以外之胺基酸，根據SEQ ID NO: 36、138或981中之任一者編號。
311. 如實施例308至310中任一項之AAV顆粒，其中該AAV衣殼變異體進一步包含位置451處之E、位置452處之R及位置453處之V，根據SEQ ID NO: 36、138或981中之任一者編號。
312. 如實施例308至311中任一項之AAV顆粒，其中該AAV衣殼變異體進一步包含取代I451E、N452R及G453V，根據SEQ ID NO: 36、138或981中之任一者編號。
313. 如實施例308至312中任一項之AAV顆粒，其中該AAV衣殼變異體包含： (i) 位置451處之E、位置452處之R及位置453處之V，根據SEQ ID NO: 36、138或981中之任一者編號；及 (ii) SPHSKA (SEQ ID NO: 941)之胺基酸序列，其中根據SEQ ID NO: 36、138或981中之任一者編號，該胺基酸序列緊接在位置455之後存在(例如，在根據SEQ ID NO: 36或981編號之胺基酸456-461處)。
314. 如實施例308或309之AAV顆粒，其進一步包含位置451處之除I以外之胺基酸、位置452處之除N以外之胺基酸及/或位置453處之除G以外之胺基酸，根據SEQ ID NO: 39或138編號。
315. 如實施例308、309或314中任一項之AAV顆粒，其進一步包含位置451處之E、位置452處之K及/或位置453處之M，根據SEQ ID NO: 138或39編號。
316. 如實施例308、309、314或315中任一項之AAV顆粒，其進一步包含取代I451E、N452K及G453M，根據SEQ ID NO: 39或138編號。
317. 如實施例308、309或314至316中任一項之AAV顆粒，其包含： (i) 位置451處之E、位置452處之K及位置453處之M，根據SEQ ID NO: 39或138編號；及 (ii) SPHSKA (SEQ ID NO: 941)之胺基酸序列，其中根據SEQ ID NO: 39或138編號，該胺基酸序列緊接在位置455之後存在。
318. 如實施例308或309之AAV顆粒，其進一步包含位置454處之除S以外之胺基酸、位置455處之除G以外之胺基酸及/或位置458處之除Q以外之胺基酸，根據SEQ ID NO: 138編號。
319. 如實施例308、309或318中任一項之AAV顆粒，其進一步包含位置454處之H、位置455處之D及/或位置458處之L，根據SEQ ID NO: 138編號。
320. 如實施例308、309、318或319中任一項之AAV顆粒，其進一步包含取代S454H、G455D及Q458L，根據SEQ ID NO: 138編號。
321. 如實施例308、309或318至320中任一項之AAV顆粒，其包含： (i) 位置454處之H、位置455處之D及/或位置458處之L，根據SEQ ID NO: 138編號；及 (ii) SPHSKA (SEQ ID NO: 941)之胺基酸序列，其中根據SEQ ID NO: 138編號，該胺基酸序列緊接在位置455之後存在。
322. 如實施例308或309之AAV顆粒，其進一步包含位置451處之除I以外之胺基酸、位置454處之除S以外之胺基酸及/或位置455處之除G以外之胺基酸，根據SEQ ID NO: 52或138編號。
323. 如實施例308、309或322中任一項之AAV顆粒，其進一步包含位置451處之V、位置454處之H及/或位置455處之D，根據SEQ ID NO: 52或138編號。
324. 如實施例308、309、322或323中任一項之AAV顆粒，其中該AAV衣殼變異體進一步包含取代I451V、S454H及/或G455D，根據SEQ ID NO: 52或138編號。
325. 如實施例308、309或322至324中任一項之AAV顆粒，其中該AAV衣殼變異體包含： (i) 位置451處之V、位置454處之H及/或位置455處之D，根據SEQ ID NO: 52或138編號；及 (ii) SPHSKA (SEQ ID NO: 941)之胺基酸序列，其中根據SEQ ID NO: 52或138編號，該胺基酸序列緊接在位置455之後存在。
326. 如實施例308或309之AAV顆粒，其中該AAV衣殼變異體包含位置451處之除I以外之胺基酸及/或位置453處之除G以外之胺基酸，根據SEQ ID NO: 138編號。
327. 如實施例308、309或326中任一項之AAV顆粒，其中該AAV衣殼變異體包含位置451處之E及/或位置453處之V，根據SEQ ID NO: 138或69編號。
328. 如實施例308、309、326或327中任一項之AAV顆粒，其中該AAV衣殼變異體包含： (i) 位置451處之E及位置453處之V，根據SEQ ID NO: 69或138編號；及 (ii) SPHSKA (SEQ ID NO: 941)之胺基酸序列，其中根據SEQ ID NO: 69或138編號，該胺基酸序列緊接在位置455之後存在於位置456-461處。
329. 如實施例308或309之AAV顆粒，其中該AAV衣殼變異體包含： (i) 位置451處之E、位置452處之K及位置453處之V，根據SEQ ID NO: 70或138編號；及SPHSKA (SEQ ID NO: 941)之胺基酸序列，其中根據SEQ ID NO: 70或138編號，該胺基酸序列緊接在位置455之後存在於位置456-461處； (ii) 位置451處之S、位置453處之A及位置462處之H，根據SEQ ID NO: 4編號；及SPHSKA (SEQ ID NO: 941)之胺基酸序列，其中根據SEQ ID NO: 4或138編號，該胺基酸序列緊接在位置455之後存在於位置456-461處； (iii) 位置450處之N、位置451處之S及位置452處之I，根據SEQ ID NO: 5或138編號；及SPHSKA (SEQ ID NO: 941)之胺基酸序列，其中根據SEQ ID NO: 5或138編號，該胺基酸序列緊接在位置455之後存在於位置456-461處；或 (iv) 位置450處之A及位置451處之E，根據SEQ ID NO: 7或138編號；及SPHSKA (SEQ ID NO: 941)之胺基酸序列，其中根據SEQ ID NO: 7或138編號，該胺基酸序列緊接在位置455之後存在於位置456-461處。
330. 如實施例308、309或329中任一項之AAV顆粒，其中該AAV衣殼變異體包含SEQ ID NO: 3241、3272、3274、3382、3421、3487、3589、4100中任一者之胺基酸序列，視情況地其中： (i) 根據SEQ ID NO: 138編號，該胺基酸序列緊接在位置448之後存在且替換位置449-460 (例如，K449、T450、I451、N452、G453、S454、G455、Q456、N457、Q458、Q459及T460)；或 (ii) 根據SEQ ID NO: 69、70、71、4、5、6、7、8、36-59、981或982中之任一者編號，該胺基酸序列存在於位置449-466處。
331. 如實施例1至9、11、12至22、24、26、28、30、33、35至42、44、46至50、52、54至78、83至88、90至98、100至103、105至111、113至129、165至211、213至222、226至242、245至249、251至266、271至274、276、278、280、281、283、285、286、289、290、300或302至307中任一項之AAV顆粒，其中該AAV衣殼變異體包含HDSPHK (SEQ ID NO: 2)之胺基酸序列，其中相對於根據SEQ ID NO: 138之胺基酸序列編號之參考序列編號，該胺基酸序列緊接在位置453之後存在(例如，在位置454-459處)。
332. 如實施例1至9、11、12至22、24、26、28、30、33、35至42、44、46至50、52、54至78、83至88、90至98、100至103、105至111、113至129、165至211、213至222、226至242、245至249、251至266、271至274、276、278、280、281、283、285、286、289、290、300、302至307或331中任一項之AAV顆粒，其中該AAV衣殼變異體包含HDSPHK (SEQ ID NO: 2)之胺基酸序列，其中相對於根據SEQ ID NO: 982之胺基酸序列編號之參考序列編號，該胺基酸序列緊接在位置453之後存在。
333. 如實施例332之AAV顆粒，其中該AAV衣殼變異體包含： (i) 位置451處之V、位置463處之R、位置464處之P及位置465處之S，根據SEQ ID NO: 6或982編號； (ii) HDSPHK (SEQ ID NO: 2)之胺基酸序列，其中相對於根據SEQ ID NO: 6或982之胺基酸序列編號之參考序列編號，該胺基酸序列緊接在位置453之後存在於位置454-459處。
334. 如實施例332或333中任一項之AAV顆粒，其中該AAV衣殼變異體包含SEQ ID NO: 1754、4062、4100或4478之胺基酸序列，視情況地其中： (i) 根據SEQ ID NO: 138編號，該胺基酸序列緊接在位置448之後存在且替換位置449-460 (例如，K449、T450、I451、N452、G453、S454、G455、Q456、N457、Q458、Q459及T460)；或 (ii) 根據SEQ ID NO: 69、70、71、4、5、6、7、8、36-59、981或982中之任一者編號，該胺基酸序列存在於位置449-466處。
335. 如實施例1至9、11、12至22、24、26、28、30、33、35至42、44、46至50、52、54至78、83至88、90至98、100至103、105至111、113至129、165至211、213至222、226至242、245至249、251至266、271至274、276、278、280、281、283、285、286、289、290、300、302至307、331或332中任一項之AAV顆粒，其中該AAV衣殼變異體包含SPHKSG (SEQ ID NO: 946)之胺基酸序列，其中相對於根據SEQ ID NO: 982之胺基酸序列編號之參考序列編號，該胺基酸序列緊接在位置455之後存在(例如，在位置456-461處)。
336. 如實施例335之AAV顆粒，其中該AAV衣殼變異體包含： (i) 位置464處之K、位置465處之T及位置466處之S，根據SEQ ID NO: 71編號；及SPHKSG (SEQ ID NO: 946)之胺基酸序列，其中相對於根據SEQ ID NO: 71之胺基酸序列編號之參考序列編號，該胺基酸序列緊接在位置455之後存在於位置456-461處；或 (ii) 位置466處之P，根據SEQ ID NO: 8編號；及SPHKSG (SEQ ID NO: 946)之胺基酸序列，其中相對於根據SEQ ID NO: 8之胺基酸序列編號之參考序列編號，該胺基酸序列緊接在位置455之後存在於位置456-461處。
337. 如實施例335或336之AAV顆粒，其中該AAV衣殼變異體包含SEQ ID NO: 4081或4406之胺基酸序列，視情況地其中： (i) 根據SEQ ID NO: 138編號，該胺基酸序列緊接在位置448之後存在且替換位置449-460 (例如，K449、T450、I451、N452、G453、S454、G455、Q456、N457、Q458、Q459及T460)；或 (ii) 根據SEQ ID NO: 69、70、71、4、5、6、7、8、36-59、981或982中之任一者編號，該胺基酸序列存在於位置449-466處。
338. 如實施例1至9、11、12至22、24、26、28、30、33、35至42、44、46至50、52、54至78、83至88、90至98、100至103、105至111、113至129、165至211、213至222、226至242、245至249、251至266、271至274、276、278、280、281、283、285、286、289、290、300、302至307或331至337中任一項之AAV顆粒，其中該AAV衣殼變異體包含： (i) HDSPHSKA (SEQ ID NO: 4486)之胺基酸序列，其緊接在位置453之後存在；及 (ii) 位置454及455處之胺基酸SG之缺失； 其中(i)及(ii)根據SEQ ID NO: 138編號。
339. 如實施例1至9、11、12至22、24、26、28、30、33、35至42、44、46至50、52、54至78、83至88、90至98、100至103、105至111、113至129、165至211、213至222、226至242、245至249、251至266、271至274、276、278、280、281、283、285、286、289、290、300、302至307或331-338中任一項之AAV顆粒，其中該AAV衣殼變異體包含位置454及455處之胺基酸HD，且進一步包含SPHSKA (SEQ ID NO: 941)之胺基酸序列，其相對於SEQ ID NO: 138編號，緊接在位置455之後存在。
340. 如實施例331至339中任一項之AAV顆粒，其中該AAV衣殼變異體進一步包含位置450處之除T以外之胺基酸、位置451處之除I以外之胺基酸及位置452處之除N以外之胺基酸，根據SEQ ID NO: 138或982編號。
341. 如實施例331至340中任一項之AAV顆粒，其中該AAV衣殼變異體進一步包含位置450處之A、位置451處之E及位置452處之I，根據SEQ ID NO: 138或982編號。
342. 如實施例331至341中任一項之AAV顆粒，其中該AAV衣殼變異體進一步包含取代T450A、I451E及N452I，根據SEQ ID NO: 138或982編號。
343. 如實施例331至342中任一項之AAV顆粒，其中該AAV衣殼變異體包含： (i) 位置450處之A、位置451處之E及位置452處之I，根據SEQ ID NO: 138或982編號；及 (ii) HDSPHK (SEQ ID NO: 2)之胺基酸序列，根據SEQ ID NO: 138或982編號，其緊接在位置453之後存在。
344. 如實施例1至22、25至27、31、34至42、45至50、51至63、69、79、83至86、94至98、102、103、110、111、118至129、262至267、275、276、281、284、286或303至307中任一項之AAV顆粒，其中該AAV衣殼變異體包含SPHKYG (SEQ ID NO: 966)之胺基酸序列，其中相對於根據SEQ ID NO: 138之胺基酸序列編號之參考序列，該胺基酸序列緊接在位置455之後存在。
345. 一種AAV顆粒，其包含AAV衣殼變異體及編碼SOD1靶向多核苷酸(例如，SOD1靶向RNA劑，例如siRNA)之核酸，其中該AAV衣殼變異體包含HDSPHK (SEQ ID NO: 2)之胺基酸序列，其中根據SEQ ID NO: 982之胺基酸序列編號，該胺基酸序列緊接在位置453之後存在。
346. 一種AAV顆粒，其包含AAV衣殼變異體及編碼SOD1靶向多核苷酸(例如，SOD1靶向RNA劑，例如siRNA)之核酸，其中該AAV衣殼變異體包含SPHSKA (SEQ ID NO: 941)之胺基酸序列，其中根據SEQ ID NO: 981之胺基酸序列編號，該胺基酸序列緊接在位置455之後存在。
347. 一種AAV顆粒，其包含AAV衣殼變異體及編碼SOD1靶向多核苷酸(例如，SOD1靶向RNA劑，例如siRNA)之核酸，其中該AAV衣殼變異體包含HDSPHK (SEQ ID NO: 2)之胺基酸序列，其中根據SEQ ID NO: 37之胺基酸序列編號，該胺基酸序列緊接在位置453之後存在，且視情況地進一步包含： (i) 位置450處之除T以外之胺基酸、位置541處之除I以外之胺基酸及/或位置452處之除N以外之胺基酸中之一者、兩者或全部，根據SEQ ID NO: 138或37編號； (ii) 位置450處之A、位置451處之E及/或位置452處之I中之一者、兩者或全部，根據SEQ ID NO: 138或37編號。
348. 一種AAV顆粒，其包含AAV衣殼變異體及編碼SOD1靶向多核苷酸(例如，SOD1靶向RNA劑，例如siRNA)之核酸，其中該AAV衣殼變異體包含SPHSKA (SEQ ID NO: 941)之胺基酸序列，其中根據SEQ ID NO: 69、36、38-55、57或59中任一者之胺基酸序列編號，該胺基酸序列緊接在位置455之後存在。
349. 如實施例348之AAV顆粒，其包含位置451處之胺基酸E，根據SEQ ID NO: 69、981或138編號。
350. 如實施例348或349之AAV顆粒，其包含位置453處之胺基酸V，根據SEQ ID NO: 69、981或138編號。
351. 如實施例348至350中任一項之AAV顆粒，其包含位置451處之胺基酸E及位置453處之胺基酸V，根據SEQ ID NO: 69、981或138編號。
352. 如實施例348至351中任一項之AAV顆粒，其包含位置452處之胺基酸R，根據SEQ ID NO: 36、981或138編號。
353. 如實施例348至352中任一項之AAV顆粒，其包含位置451處之胺基酸E、位置452處之胺基酸R及位置453處之胺基酸V，根據SEQ ID NO: 36、981或138編號。
354. 如前述實施例中任一項之AAV顆粒，其中該AAV衣殼變異體進一步包含： (i) 環I、II、VI及/或VIII中之修飾，例如插入、取代(例如保守取代)及/或缺失；及/或 (ii) 位置K449處之取代，例如K449R取代，根據SEQ ID NO: 138編號。
355. 如前述實施例中任一項之AAV顆粒，其中該AAV衣殼變異體包含： (i) 相對於SEQ ID NO: 138之胺基酸序列，包含至少一個、兩個或三個修飾，例如取代(例如保守取代)但不超過30個、20個或10個修飾，例如取代(例如保守取代)的胺基酸序列；或 (ii) 相對於SEQ ID NO: 138之胺基酸序列包含至少一個、兩個或三個但不超過30個、20個或10個不同胺基酸之胺基酸序列。
356. 如前述實施例中任一項之AAV顆粒，其中該AAV衣殼變異體包含SEQ ID NO: 138之胺基酸序列，或與其具有至少80% (例如，至少約85%、90%、95%、96%、97%、98%或99%)序列一致性之胺基酸序列。
357. 如前述實施例中任一項之AAV顆粒，其中該AAV衣殼變異體包含SEQ ID NO: 138之胺基酸序列。
358. 如前述實施例中任一項之AAV顆粒，其中該AAV衣殼變異體包含由SEQ ID NO: 137之核苷酸序列，或與其具有至少80% (例如，至少約85%、90%、95%、96%、97%、98%或99%)序列一致性之序列編碼之胺基酸序列。
359. 如前述實施例中任一項之AAV顆粒，其中編碼該AAV衣殼變異體之該核苷酸序列包含SEQ ID NO: 137之核苷酸序列，或與其具有至少80% (例如，至少約85%、90%、95%、96%、97%、98%或99%)序列一致性之序列。
360. 如前述實施例中任一項之AAV顆粒，其中該AAV衣殼變異體包含VP1蛋白、VP2蛋白、VP3蛋白或其組合。
361. 如實施例1至360中任一項之AAV顆粒，其中該AAV衣殼變異體包含對應於SEQ ID NO: 981、982、69、70、71、4、5、6、7、8或36-59之位置138-742之胺基酸序列，例如VP2，或與其具有至少80% (例如，至少約85%、90%、95%、96%、97%、98%或99%)序列一致性的序列。
362. 如實施例1至360中任一項之AAV顆粒，其中該AAV衣殼變異體包含對應於SEQ ID NO: 981、982、69、70、71、4、5、6、7、8或36-59之位置203-742之胺基酸序列，例如VP3，或與其具有至少80% (例如，至少約85%、90%、95%、96%、97%、98%或99%)序列一致性的序列。
363. 如實施例1至360中任一項之AAV顆粒，其中該AAV衣殼變異體包含對應於SEQ ID NO: 138之位置138-736之胺基酸序列，例如VP2，或與其具有至少80% (例如，至少約85%、90%、95%、96%、97%、98%或99%)序列一致性的序列。
364. 如實施例1至360中任一項之AAV顆粒，其中該AAV衣殼變異體包含對應於SEQ ID NO: 138之位置203-736之胺基酸序列，例如VP3，或與其具有至少80% (例如，至少約85%、90%、95%、96%、97%、98%或99%)序列一致性的序列。
365. 如實施例1至23、26至29、32、35至43、46至51、54至71、79至89、94至99、102至104、106至112、115至164、203至209、212、216至224、234至243、248至250、253至270、276、277、281、282、286至288、299、301、303至309或354中任一項之AAV顆粒，其中該AAV衣殼變異體包含有包含來自SPHSKA (SEQ ID NO: 941)之胺基酸序列的至少3、4、5或6個連續胺基酸之胺基酸序列，其中： (i) 該至少3個連續胺基酸包含SPH； (ii) 該至少4個連續胺基酸包含SPHS (SEQ ID NO: 1371)； (iii) 該至少5個連續胺基酸包含SPHSK (SEQ ID NO: 1372)；或 (iv) 該至少6個連續胺基酸包含SPHSKA (SEQ ID NO: 941)； 其中該AAV衣殼變異體包含：(a) VP1蛋白，其包含SEQ ID NO: 138或SEQ ID NO: 981之胺基酸序列；(b) VP2蛋白，其包含SEQ ID NO: 138之位置138-736或SEQ ID NO: 981之位置138-742之胺基酸序列；(c) VP3蛋白，其包含SEQ ID NO: 138之位置203-736或SEQ ID NO: 981之位置203-742之胺基酸序列；或(d)與(a)-(c)中之任何胺基酸序列具有至少90% (例如，至少約95%、96%、97%、98%或99%)序列一致性的胺基酸序列。
366. 如實施例1至23、26至29、32、35至43、46至51、54至71、79至89、94至99、102至104、106至112、115至164、203至209、212、216至224、234至243、248至250、253至270、276、277、281、282、286至288、299、301、303至309、354或365中任一項之AAV顆粒，其中該AAV衣殼變異體包含有包含來自SPHSKA (SEQ ID NO: 941)之胺基酸序列的至少3、4、5或6個連續胺基酸之胺基酸序列，其中： (i) 該至少3個連續胺基酸包含SPH； (ii) 該至少4個連續胺基酸包含SPHS (SEQ ID NO: 1371)； (iii) 該至少5個連續胺基酸包含SPHSK (SEQ ID NO: 1372)；或 (iv) 該至少6個連續胺基酸包含SPHSKA (SEQ ID NO: 941)； 其中該AAV衣殼變異體包含與SEQ ID NO: 981之胺基酸序列至少90% (例如，至少約95%、96%、97%、98%或99%)一致的胺基酸序列。
367. 如實施例1至23、26至29、32、35至43、46至51、54至71、79至89、94至99、102至104、106至112、115至164、203至209、212、216至224、234至243、248至250、253至270、276、277、281、282、286至288、299、301、303至309、354、365或366中任一項之AAV顆粒，其中相對於SPHSKA (SEQ ID NO: 941)之胺基酸序列，該AAV衣殼變異體包含一個或兩個但不超過三個取代，其中該AAV衣殼變異體包含： (a) VP1蛋白，其包含SEQ ID NO: 138或SEQ ID NO: 981之胺基酸序列； (b) VP2蛋白，其包含SEQ ID NO: 138之位置138-736或SEQ ID NO: 981之位置138-742之胺基酸序列； (c) VP3蛋白，其包含SEQ ID NO: 138之位置203-736或SEQ ID NO: 981之位置203-742之胺基酸序列；或 (d) 與(a)-(c)中之任何胺基酸序列具有至少90% (例如，至少約95%、96%、97%、98%或99%)序列一致性之胺基酸序列。
368. 如實施例1至23、26至29、32、35至43、46至51、54至71、79至89、94至99、102至104、106至112、115至164、203至209、212、216至224、234至243、248至250、253至270、276、277、281、282、286至288、299、301、303至309、354或365至367中任一項之AAV顆粒，其中相對於SPHSKA (SEQ ID NO: 941)之胺基酸序列，該AAV衣殼變異體包含一個或兩個但不超過三個取代，其中該AAV衣殼變異體包含與SEQ ID NO: 138或SEQ ID NO: 981之胺基酸序列至少90% (例如，至少約95%、96%、97%、98%或99%)一致的胺基酸序列。
369. 如實施例365至368中任一項之AAV顆粒，其中根據SEQ ID NO: 138或981編號，該胺基酸序列緊接在位置455之後存在。
370. 如實施例1至9、11、12至22、24、26、28、30、33、35至42、44、46至50、52、54至78、83至88、90至98、100至103、105至111、113至129、165至211、213至222、226至242、245至249、251至266、271至274、276、278、280、281、283、285、286、289、290、300、302至307、331至339或354中任一項之AAV顆粒，其中該AAV衣殼變異體包含有包含來自HDSPHK (SEQ ID NO: 2)之胺基酸序列之至少3、4、5或6個連續胺基酸之胺基酸序列，其中： (i) 該至少3個連續胺基酸包含HDS； (ii) 該至少4個連續胺基酸包含HDSP (SEQ ID NO: 1373)； (iii) 該至少5個連續胺基酸包含HDSPH (SEQ ID NO: 1374)；或 (iv) 該至少6個連續胺基酸包含HDSPHK (SEQ ID NO: 2)； 其中該AAV衣殼變異體包含：(a) VP1蛋白，其包含SEQ ID NO: 138或SEQ ID NO: 982之胺基酸序列；(b) VP2蛋白，其包含SEQ ID NO: 138之位置138-736或SEQ ID NO: 982之位置138-742之胺基酸序列；(c) VP3蛋白，其包含SEQ ID NO: 138之位置203-736或SEQ ID NO: 982之位置203-742之胺基酸序列；或(d)與(a)-(c)中之任何胺基酸序列具有至少90% (例如，至少約95%、96%、97%、98%或99%)序列一致性的胺基酸序列。
371. 如實施例1至9、11、12至22、24、26、28、30、33、35至42、44、46至50、52、54至78、83至88、90至98、100至103、105至111、113至129、165至211、213至222、226至242、245至249、251至266、271至274、276、278、280、281、283、285、286、289、290、300、302至307、331至339、354或370中任一項之AAV顆粒，其中該AAV衣殼變異體包含有包含來自HDSPHK (SEQ ID NO: 2)之胺基酸序列之至少3、4、5或6個連續胺基酸之胺基酸序列，其中： (i) 該至少3個連續胺基酸包含HDS； (ii) 該至少4個連續胺基酸包含HDSP (SEQ ID NO: 1373)； (iii) 該至少5個連續胺基酸包含HDSPH (SEQ ID NO: 1374)；或 (iv) 該至少6個連續胺基酸包含HDSPHK (SEQ ID NO: 2)； 其中該AAV衣殼變異體包含與SEQ ID NO: 982之胺基酸序列至少90% (例如，至少約95%、96%、97%、98%或99%)一致的胺基酸序列。
372. 如實施例1至9、11、12至22、24、26、28、30、33、35至42、44、46至50、52、54至78、83至88、90至98、100至103、105至111、113至129、165至211、213至222、226至242、245至249、251至266、271至274、276、278、280、281、283、285、286、289、290、300、302至307、331至339、354、370或371中任一項之AAV顆粒，其中相對於HDSPHK (SEQ ID NO: 2)之胺基酸序列，該AAV衣殼變異體包含一個或兩個但不超過三個取代，其中該AAV衣殼變異體包含： (a) VP1蛋白，其包含SEQ ID NO: 138或SEQ ID NO: 982之胺基酸序列； (b) VP2蛋白，其包含SEQ ID NO: 138之位置138-736或SEQ ID NO: 982之位置138-742之胺基酸序列； (c) VP3蛋白，其包含SEQ ID NO: 138之位置203-736或SEQ ID NO: 982之位置203-742之胺基酸序列；或 (d) 與(a)-(c)中之任何胺基酸序列具有至少90% (例如，至少約95%、96%、97%、98%或99%)序列一致性之胺基酸序列。
373. 如實施例1至9、11、12至22、24、26、28、30、33、35至42、44、46至50、52、54至78、83至88、90至98、100至103、105至111、113至129、165至211、213至222、226至242、245至249、251至266、271至274、276、278、280、281、283、285、286、289、290、300、302至307、331至339、354、370至372中任一項之AAV顆粒，其中相對於HDSPHK (SEQ ID NO: 2)之胺基酸序列，該AAV衣殼變異體包含一個或兩個但不超過三個取代，其中該AAV衣殼變異體包含與SEQ ID NO: 982之胺基酸序列至少90% (例如，至少約95%、96%、97%、98%或99%)一致的胺基酸序列。
374. 如實施例370至373中任一項之AAV顆粒，其中根據SEQ ID NO: 138或982編號，該胺基酸序列緊接在位置453之後存在。
375. 如實施例1至373中任一項之AAV顆粒，其中該AAV衣殼變異體包含SEQ ID NO: 981或982中任一者之胺基酸序列，或與其具有至少80% (例如，至少約85%、90%、95%、96%、97%、98%或99%)序列一致性之胺基酸序列。
376. 如實施例1至375中任一項之AAV顆粒，其中該AAV衣殼變異體包含相對於SEQ ID NO: 981或982之胺基酸序列，包含至少一個、兩個或三個修飾，例如取代(例如保守取代)但不超過30個、20個或10個修飾，例如取代(例如保守取代)之胺基酸序列。
377. 如實施例1至376中任一項之AAV顆粒，其中該AAV衣殼變異體包含相對於SEQ ID NO: 981或982之胺基酸序列，包含至少一個、兩個或三個但不超過30個、20個或10個不同胺基酸的胺基酸序列。
378. 如實施例1至23、26至29、32、35至43、46至51、54至71、79至89、94至99、102至104、106至112、115至164、203至209、212、216至224、234至243、248至250、253至270、276、277、281、282、286至288、299、301、303至309、354、365至368或375至377中任一項之AAV顆粒，其中該AAV衣殼變異體包含SEQ ID NO: 981之胺基酸序列，或與其具有至少80% (例如，至少約85%、90%、95%、96%、97%、98%或99%)序列一致性的胺基酸序列。
379. 如實施例1至23、26至29、32、35至43、46至51、54至71、79至89、94至99、102至104、106至112、115至164、203至209、212、216至224、234至243、248至250、253至270、276、277、281、282、286至288、299、301、303至309、354、365至368或375至377中任一項之AAV顆粒，其中該AAV衣殼變異體包含相對於SEQ ID NO: 981之胺基酸序列，包含至少一個、兩個或三個修飾，例如取代(例如保守取代)但不超過30個、20個或10個修飾，例如取代(例如保守取代)之胺基酸序列。
380. 如實施例1至23、26至29、32、35至43、46至51、54至71、79至89、94至99、102至104、106至112、115至164、203至209、212、216至224、234至243、248至250、253至270、276、277、281、282、286至288、299、301、303至309、354、365至368或375至379中任一項之AAV顆粒，其中該AAV衣殼變異體包含相對於SEQ ID NO: 981之胺基酸序列，包含至少一個、兩個或三個但不超過30個、20個或10個不同胺基酸的胺基酸序列。
381. 如實施例1至9、11、12至22、24、26、28、30、33、35至42、44、46至50、52、54至78、83至88、90至98、100至103、105至111、113至129、165至211、213至222、226至242、245至249、251至266、271至274、276、278、280、281、283、285、286、289、290、300、302至307、331至339、354或370至377中任一項之AAV顆粒，其中該AAV衣殼變異體包含SEQ ID NO: 982之胺基酸序列，或與其具有至少80% (例如，至少約85%、90%、95%、96%、97%、98%或99%)序列一致性的胺基酸序列。
382. 如實施例1至9、11、12至22、24、26、28、30、33、35至42、44、46至50、52、54至78、83至88、90至98、100至103、105至111、113至129、165至211、213至222、226至242、245至249、251至266、271至274、276、278、280、281、283、285、286、289、290、300、302至307、331至339、354、370至377或381中任一項之AAV顆粒，其中該AAV衣殼變異體包含相對於SEQ ID NO: 982之胺基酸序列，包含至少一個、兩個或三個修飾，例如取代(例如保守取代)但不超過30個、20個或10個修飾，例如取代(例如保守取代)之胺基酸序列。
383. 如實施例1至9、11、12至22、24、26、28、30、33、35至42、44、46至50、52、54至78、83至88、90至98、100至103、105至111、113至129、165至211、213至222、226至242、245至249、251至266、271至274、276、278、280、281、283、285、286、289、290、300、302至307、331至339、354、370至377、381或382中任一項之AAV顆粒，其中該AAV衣殼變異體包含相對於SEQ ID NO: 982之胺基酸序列，包含至少一個、兩個或三個但不超過30個、20個或10個不同胺基酸的胺基酸序列。
384. 如實施例1至383中任一項之AAV顆粒，其中該AAV衣殼變異體包含由SEQ ID NO: 983或984之核苷酸序列，或與其具有至少80% (例如，至少約85%、90%、95%、96%、97%、98%或99%)序列一致性的核苷酸序列編碼的胺基酸序列。
385. 如前述實施例1至384中任一項之AAV顆粒，其中編碼該AAV衣殼變異體之該核苷酸序列包含SEQ ID NO: 983或984之核苷酸序列，或與其具有至少80% (例如，至少約85%、90%、95%、96%、97%、98%或99%)序列一致性的核苷酸序列。
386. 如前述實施例1至23、26至29、32、35至43、46至51、54至71、79至89、94至99、102至104、106至112、115至164、203至209、212、216至224、234至243、248至250、253至270、276、277、281、282、286至288、299、301、303至309、354、365至368、375至380、384或385中任一項之AAV顆粒，其中編碼該AAV衣殼變異體之該核苷酸序列包含SEQ ID NO: 983之核苷酸序列，或與其具有至少80% (例如，至少約85%、90%、95%、96%、97%、98%或99%)序列一致性的核苷酸序列。
387. 如前述實施例1至9、11、12至22、24、26、28、30、33、35至42、44、46至50、52、54至78、83至88、90至98、100至103、105至111、113至129、165至211、213至222、226至242、245至249、251至266、271至274、276、278、280、281、283、285、286、289、290、300、302至307、331至339、354、370至377、381或382至385中任一項之AAV顆粒，其中編碼該AAV衣殼變異體之該核苷酸序列包含SEQ ID NO: 984之核苷酸序列，或與其具有至少80% (例如，至少約85%、90%、95%、96%、97%、98%或99%)序列一致性的核苷酸序列。
388. 如前述實施例中任一項之AAV顆粒，其中編碼該衣殼變異體之該核苷酸序列係密碼子最佳化的。
389. 一種AAV顆粒，其包含AAV衣殼變異體及編碼SOD1靶向多核苷酸(例如SOD1靶向RNA劑，例如siRNA)之核酸，其中AAV衣殼變異體包含SEQ ID NO: 981之胺基酸序列。
390. 如實施例389之AAV顆粒，其中編碼該AAV衣殼變異體之核苷酸序列包含SEQ ID NO: 983之核苷酸序列，或與其至少90%、95%或99%一致之核苷酸序列。
391. 一種AAV顆粒，其包含AAV衣殼變異體及編碼SOD1靶向多核苷酸(例如SOD1靶向RNA劑，例如siRNA)之核酸，其中AAV衣殼變異體包含SEQ ID NO: 982之胺基酸序列。
392. 如實施例391之AAV顆粒，其中編碼該AAV衣殼變異體之核苷酸序列包含SEQ ID NO: 984之核苷酸序列，或與其至少90%、95%或99%一致之核苷酸序列。
393. 一種AAV顆粒，其包含AAV衣殼變異體及編碼SOD1靶向多核苷酸(例如SOD1靶向RNA劑，例如siRNA)之核酸，其中該AAV衣殼變異體包含SEQ ID NO: 69、70、71、4、5、6、7、8或36-59中任一者之胺基酸序列。
394. 一種AAV顆粒，其包含AAV衣殼變異體及編碼SOD1靶向多核苷酸(例如SOD1靶向RNA劑，例如siRNA)之核酸，該AAV衣殼變異體包含由SEQ ID NO: 9、72、73、74、75、76、77、78、79、80、81或22-35中之任一者之核苷酸序列，或與其至少95%一致之核苷酸序列編碼之胺基酸序列。
395. 如實施例393或394之AAV顆粒，其中編碼該AAV衣殼變異體之該核苷酸序列包含SEQ ID NO: 9、72、73、74、75、76、77、78、79、80、81或22-35中之任一者之核苷酸序列，或與其至少95%一致之核苷酸序列。
396. 如前述實施例中任一項之AAV顆粒，其中相對於包含SEQ ID NO: 138之胺基酸序列之參考序列之向性，該AAV衣殼變異體具有增加的對CNS細胞或組織，例如腦細胞、腦組織、脊髓細胞或脊髓組織之向性。
397. 如實施例1至396中任一項之AAV顆粒，其中該AAV衣殼變異體轉導腦區域，例如，殼核、尾狀核、內嗅皮質、海馬體、視丘、黑質、運動皮質、額葉皮質、顳葉皮質、大腦皮質、齒狀核及/或側膝核(LGN)，視情況地其中，例如，當藉由例如免疫組織化學檢定或qPCR檢定之檢定量測時，例如，如實例3中所述，轉導水準與SEQ ID NO: 138之參考序列相比至少5、10、15、20、25、30、35、40、45、50、55、60或65倍高。
398. 如實施例1至397中任一項之AAV顆粒，其中該AAV衣殼變異體轉導腦區域，例如，殼核、尾狀核、內嗅皮質、海馬體、視丘、黑質、運動皮質、額葉皮質、顳葉皮質、大腦皮質、齒狀核及/或側膝核(LGN)，視情況地其中，例如，當藉由例如免疫組織化學檢定或qPCR檢定之檢定量測時，例如，如實例3中所述，轉導水準與SEQ ID NO: 138之參考序列相比至少30、35、40、45、50、55、60或65倍高。
399. 如實施例1至398中任一項之AAV顆粒，其中例如，當藉由如實例2中所述之檢定量測時，與SEQ ID NO: 138之參考序列相比，該AAV衣殼變異體在腦中富集至少約3、4、5、6、7、8、9或10倍。
400. 如實施例1至399中任一項之AAV顆粒，其中例如，當藉由如實例2中所述之檢定量測時，與SEQ ID NO: 138之參考序列相比，該AAV衣殼變異體在腦中富集至少約20、25、30、35、40、45、50、55、60、65、70、75、80或85倍。
401. 如實施例1至400中任一項之AAV顆粒，其中例如，與SEQ ID NO: 138之參考序列相比，該AAV衣殼變異體在至少二至三個物種，例如非人類靈長類動物及囓齒動物(例如，小鼠)之腦中富集。
402. 如實施例1至401中任一項之AAV顆粒，其中例如，當藉由如實例2或5中所述之檢定量測時，與SEQ ID NO: 138之參考序列相比，該AAV衣殼變異體在至少二至三個物種，例如非人類靈長類動物及囓齒動物(例如，小鼠)之腦中富集至少約10、15、20、25、30、35、40、45、50、55、60、65、70、75、80、85、90、95、100、105、115、120、125、130、135、140、145、150、155、160、165、170、175、180、190、200、205或210倍。
403. 如實施例401或402之AAV顆粒，其中該至少二至三個物種係長尾獼猴、綠猴、普通狨及/或小鼠(例如，BALB/c小鼠、C57Bl/6小鼠及/或CD-1遠交系小鼠)。
404. 如實施例1至403中任一項之AAV顆粒，其中該AAV衣殼變異體將增加水準之酬載遞送至腦區域，視情況地其中，例如當藉由檢定，例如qRT-PCR或qPCR檢定(例如，如實例3或7中所述)量測時，與SEQ ID NO: 138之參考序列相比，該酬載水準增加至少5、10、12、15、17、18、19、20、25、30、35、40、45、50、55、60、65或70倍。
405. 如實施例1至404中任一項之AAV顆粒，其中該AAV衣殼變異體將增加水準之病毒基因體遞送至腦區域，視情況地其中，例如當藉由檢定，例如qRT-PCR或qPCR檢定(例如，如實例3或7中所述)量測時，與SEQ ID NO: 138之參考序列相比，病毒基因體水準增加至少5、10、15、17、18、19、20、25、30、35、40、45或50倍。
406. 如實施例1至405中任一項之AAV顆粒，其中該AAV衣殼變異體能夠轉導： (i) 例如，當藉由如實例7中所述之檢定量測時，腦區域(例如，殼核、尾狀核、內嗅皮質、海馬體、視丘、黑質、運動皮質、額葉皮質、顳葉皮質、大腦皮質、小腦皮質、小腦、齒狀核及/或側膝核(LGN))中至少20%、25%、30%、40%、50%、55%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%或95%之細胞； (ii) 例如，當藉由如實例7中所述之檢定量測時，腦區域(例如，殼核、尾狀核、內嗅皮質、海馬體、視丘、黑質、運動皮質、額葉皮質或顳葉皮質)中至少45%、50%、55%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、95%、97%或99%之星狀細胞(例如，Sox9+星狀細胞)；及/或 (iii) 例如，當藉由如實例7中所述之檢定量測時，腦區域(例如，殼核、尾狀核、內嗅皮質、海馬體、視丘、黑質、運動皮質、額葉皮質或顳葉皮質)中至少25%、30%、35%、40%、45%、50%、55%、60%、65%或70%之神經元(例如，NeuN+神經元)。
407. 如實施例404至406中任一項之AAV顆粒，其中該腦區域係殼核、尾狀核、內嗅皮質、海馬體、視丘、黑質、運動皮質、額葉皮質、顳葉皮質、大腦皮質、齒狀核及/或側膝核(LGN)。
408. 如實施例1至407中任一項之AAV顆粒，其中例如，當藉由如實例2或7中所述之檢定量測時，與SEQ ID NO: 138之參考序列相比，該AAV衣殼變異體在脊髓中富集至少約5、10、15、20、25、30或35倍，視情況地其中脊髓區域係胸脊髓區域、頸脊髓區域、C5腹角區域、腰脊髓區域或L5腹角區域。
409. 如實施例1至408中任一項之AAV顆粒，其中例如，當藉由如實例7中所述之檢定量測時，該AAV衣殼變異體能夠轉導脊髓(例如，頸脊髓、胸脊髓或腰脊髓)中至少70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%或97%之星狀細胞(例如，Sox9+星狀細胞)。
410. 如實施例1至409中任一項之AAV顆粒，其中相對於背根神經節(DRG)中之轉導，該AAV衣殼變異體展示在腦區域中之優先轉導。
411. 如實施例1至410中任一項之AAV顆粒，其中相對於肝臟，該AAV衣殼變異體展示在腦區域中之優先轉導。
412. 如實施例1至411中任一項之AAV顆粒，其中相對於心臟中之轉導，該AAV衣殼變異體展示在腦區域中之優先轉導。
413. 如實施例1至412中任一項之AAV顆粒，其中相對於背根神經節(DRG)及心臟中之轉導，該AAV衣殼變異體展示在腦區域中之優先轉導。
414. 如前述實施例中任一項之AAV顆粒，其中該AAV衣殼變異體能夠轉導神經元細胞，例如NeuN+神經元或多巴胺能神經元(例如黑質中之多巴胺能神經元)，例如酪胺酸羥化酶(TH)+神經元。
415. 如前述實施例中任一項之AAV顆粒，其中該AAV衣殼變異體能夠轉導NeuN+細胞(例如，NeuN+神經元)及/或TH+細胞(例如，TH+神經元，例如，多巴胺能神經元)。
416. 如前述實施例中任一項之AAV顆粒，其中該AAV衣殼變異體能夠轉導非神經元細胞，例如神經膠質細胞(例如，寡樹突細胞或星狀細胞)。
417. 如實施例416之AAV顆粒，其中該非神經元細胞包含神經膠質細胞、寡樹突細胞(例如，Olig2陽性寡樹突細胞)或星狀細胞(例如，Olig2陽性星狀細胞或Sox9+星狀細胞)。
418. 如前述實施例中任一項之AAV顆粒，其中該AAV衣殼變異體能夠轉導Olig2陽性細胞，例如Olig2陽性星狀細胞或Olig2陽性寡樹突細胞。
419. 如前述實施例中任一項之AAV顆粒，其中該AAV衣殼變異體能夠轉導Sox9+細胞，例如Sox9+星狀細胞。
420. 如前述實施例中任一項之AAV顆粒，其中經編碼之SOD1靶向多核苷酸包含siRNA、shRNA、pre-miRNA、pri-miRNA、miRNA、stRNA、lncRNA、piRNA、反義寡核苷酸劑(ASO)或snoRNA。
421. 如實施例420之AAV顆粒，其中該經編碼之SOD1靶向多核苷酸包含有包含有義股及反義股之siRNA。
422. 如前述實施例中任一項之AAV顆粒，其中SOD1包含野生型SOD1基因、mRNA及/或蛋白質；包含至少一個突變之突變SOD1基因、mRNA及/或蛋白質；或其組合。
423. 如前述實施例中任一項之AAV顆粒，其中SOD1包含人類SOD1基因、mRNA及/或蛋白質。
424. 如前述實施例中任一項之AAV顆粒，其中SOD1包含靈長類動物(例如，食蟹猴)或犬SOD1基因、mRNA及/或蛋白質。
425. 如實施例421至424中任一項之AAV顆粒，其中該經編碼之siRNA結合至SOD1 (例如，人類SOD1、靈長類動物SOD1或犬SOD1)之編碼區。
426. 如實施例421至425中任一項之AAV顆粒，其中該經編碼之反義股包含與SOD1基因(例如，人類SOD1基因)之mRNA轉錄物之至少一部分實質上互補(例如，至少70%、75%、80%、85%、90%、95%、99%或100%互補)的區域。
427. 如實施例421至426中任一項之AAV顆粒，其中該經編碼之反義股包含與SOD1基因(例如，人類SOD1基因)之至少一部分實質上互補(例如，至少70%、75%、80%、85%、90%、95%、99%或100%互補)的區域。
428. 如實施例421至427中任一項之AAV顆粒，其中該經編碼之反義股包含與SOD1基因之mRNA編碼區或SOD1基因之非編碼區(例如包含SEQ ID NO: 110之核苷酸序列或表19中提供之核苷酸序列之SOD1基因)實質上互補(例如，至少70%、75%、80%、85%、90%、95%、99%或100%互補)的區域。
429. 如實施例421至428中任一項之AAV顆粒，其中該經編碼之反義股與同包含SEQ ID NO: 110之核苷酸序列或表19中提供之核苷酸序列的SOD1序列具有0、1、2或3個錯配的至少15、16、17、18、19、20或21個鄰接核苷酸互補。
430. 如實施例421至429中任一項之AAV顆粒，其中該經編碼之有義股包含與包含SEQ ID NO: 110之核苷酸序列或表19中提供之核苷酸序列的SOD1序列具有0、1、2或3個錯配的至少15、16、17、18、19、20或21個鄰接核苷酸。
431. 如實施例421至430中任一項之AAV顆粒，其中該反義股包含至少一個與靶mRNA之錯配。
432. 如實施例426至431中任一項之AAV顆粒，其中該實質上互補之區域為30個核苷酸或更少(例如，長度為19-24個核苷酸)。
433. 如實施例421至432中任一項之AAV顆粒，其中該經編碼之有義股序列、反義股序列或兩者各自獨立地包含9至36個核苷酸之長度、15至30個核苷酸之長度、15至25個核苷酸之長度，或17至22個核苷酸之長度。
434. 如實施例420至432中任一項之AAV顆粒，其中該經編碼之siRNA包含有包含與表10或表14中之反義股序列相差不超過3、2、1或0個核苷酸的至少15、16、17、18、19、20、21個鄰接核苷酸之反義股序列。
435. 如實施例420至434中任一項之AAV顆粒，其中該經編碼之siRNA包含有包含與表10或表14中之有義股序列相差不超過3、2、1或0個核苷酸的至少15、16、17、18、19、20、21個鄰接核苷酸之有義股序列。
436. 如實施例420至435中任一項之AAV顆粒，其中該經編碼之siRNA包含： (i) 包含與表10或表14中之有義股序列相差不超過3、2、1或0個核苷酸的至少15、16、17、18、19、20、21個鄰接核苷酸之有義股序列；及 (ii) 包含與表10或表14中之反義股序列相差不超過3、2、1或0個核苷酸的至少15、16、17、18、19、20、21個鄰接核苷酸之反義股序列； 其中該有義股序列及該反義股序列包含至少15個核苷酸的互補區。
437. 如實施例420至433中任一項之AAV顆粒，其中該經編碼之siRNA包含： (i) 來自表10或表14之有義股序列，或與表10中之有義股序列至少80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致之核苷酸；及/或 (ii) 來自表10或表14之反義股序列，或與表10或表14中之反義股序列至少80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致之核苷酸； 其中該有義股序列及該反義股序列包含至少15個核苷酸的互補區。
438. 如實施例420至437中任一項之AAV顆粒，其中該經編碼之siRNA包含有包含與SEQ ID NO: 2507、2365或2363相差不超過3、2、1或0個核苷酸的至少15、16、17、18、19、20、21個鄰接核苷酸之反義股序列。
439. 如實施例420至438中任一項之AAV顆粒，其中該經編碼之siRNA包含有包含與SEQ ID NO: 2525、2376或2381相差不超過3、2、1或0個核苷酸的至少15、16、17、18、19、20、21個鄰接核苷酸之有義股序列。
440. 如實施例420至439中任一項之AAV顆粒，其中該經編碼之siRNA包含： (i) 包含與SEQ ID NO: 2525、2376或2381相差不超過3、2、1或0個核苷酸的至少15、16、17、18、19、20、21個鄰接核苷酸之有義股序列；及 (ii) 包含與SEQ ID NO: 2507、2365或2363相差不超過3、2、1或0個核苷酸的至少15、16、17、18、19、20、21個鄰接核苷酸之反義股序列； 其中該有義股序列及該反義股序列包含至少15個核苷酸的互補區。
441. 如實施例420至440中任一項之AAV顆粒，其中該經編碼之有義股序列包含與SEQ ID NO: 2525或2381相差不超過3、2、1或0個核苷酸的至少18、19、20、21個鄰接核苷酸。
442. 如實施例420至441中任一項之AAV顆粒，其中該經編碼之反義股序列包含與SEQ ID NO: 2507或2363相差不超過3、2、1或0個核苷酸的至少18、19、20、21個鄰接核苷酸。
443. 如實施例420至442中任一項之AAV顆粒，其中： (i) 該經編碼之有義股序列包含SEQ ID NO: 2525，或與SEQ ID NO: 2525相差不超過3、2、1或0個核苷酸的至少18、19、20或21個鄰接核苷酸，且該經編碼之反義股序列包含與SEQ ID NO: 2507相差不超過3、2、1或0個核苷酸的至少18、19、20或21個鄰接核苷酸；或 (ii) 該經編碼之有義股序列包含與SEQ ID NO: 2381相差不超過3、2、1或0個核苷酸的至少18、19、20或21個鄰接核苷酸，且該經編碼之反義股序列包含與SEQ ID NO: 2363相差不超過3、2、1或0個核苷酸的至少18、19、20或21個鄰接核苷酸。
444. 如實施例420至443中任一項之AAV顆粒，其中該經編碼之siRNA包含： (i) 包含SEQ ID NO: 2525，或與SEQ ID NO: 2525相差不超過3、1或0個核苷酸之核苷酸之有義股序列，及包含SEQ ID NO: 2507，或與SEQ ID NO: 2507相差不超過3個(例如，不超過0、1或2個)核苷酸之核苷酸之反義股序列； (ii) 包含SEQ ID NO: 2376，或與SEQ ID NO: 2376相差不超過3、2、1或0個核苷酸之核苷酸之有義股序列，及包含SEQ ID NO: 2365，或與SEQ ID NO: 2365相差不超過3個(例如，不超過0、1或2個)核苷酸之核苷酸之反義股序列；及/或 (iii) 包含SEQ ID NO: 2381，或與SEQ ID NO: 2381相差不超過3、2、1或0個核苷酸之核苷酸之有義股序列，及包含SEQ ID NO: 2363，或與SEQ ID NO: 2363相差不超過3個(例如，不超過0、1或2個)核苷酸之核苷酸之反義股序列。
445. 如實施例420至444中任一項之AAV顆粒，其中該經編碼之siRNA包含： (i) 包含SEQ ID NO: 2525之有義股序列，及包含SEQ ID NO: 2507之反義股序列； (ii) 包含SEQ ID NO: 2376之有義股序列，及包含SEQ ID NO: 2365之反義股序列；及/或 (iii) 包含SEQ ID NO: 2381之有義股序列，及包含SEQ ID NO: 2363之反義股序列。
446. 如實施例420至445中任一項之AAV顆粒，其中該經編碼之siRNA包含有包含SEQ ID NO: 2525之有義股序列，及包含SEQ ID NO: 2507之反義股序列。
447. 如實施例421至446中任一項之AAV顆粒，其中： (i) 編碼該有義股序列之該核苷酸序列包含SEQ ID NO: 66；及 (ii) 編碼該有義股序列之該核苷酸序列包含SEQ ID NO: 1351。
448. 一種AAV顆粒，其包含： (i) 包含SEQ ID NO: 69之胺基酸序列之AAV衣殼變異體；及 (ii) 編碼靶向人類SOD1之多核苷酸之核酸，其中該經編碼之多核苷酸包含有包含有義股序列及反義股序列之siRNA，其中該經編碼之有義股序列包含SEQ ID NO: 2525，且該經編碼之反義股序列包含SEQ ID NO: 2507。
449. 一種AAV顆粒，其包含： (i) 包含SEQ ID NO: 36之胺基酸序列之AAV衣殼變異體；及 (ii) 編碼靶向人類SOD1之多核苷酸之核酸，其中該經編碼之多核苷酸包含有包含有義股序列及反義股序列之siRNA，其中該經編碼之有義股序列包含SEQ ID NO: 2525，且該經編碼之反義股序列包含SEQ ID NO: 2507。
450. 一種AAV顆粒，其包含： (i) 包含SEQ ID NO: 982之胺基酸序列之AAV衣殼變異體；及 (ii) 編碼靶向人類SOD1之多核苷酸之核酸，其中該經編碼之多核苷酸包含有包含有義股序列及反義股序列之siRNA，其中該經編碼之有義股序列包含SEQ ID NO: 2525，且該經編碼之反義股序列包含SEQ ID NO: 2507。
451. 如實施例421至450中任一項之AAV顆粒，其中該有義股序列及該反義股序列包含長度為至少17-20個核苷酸之互補區。
452. 如實施例421至451中任一項之AAV顆粒，其中該有義股序列及該反義股序列中之至少一者包含至少1或2個核苷酸之3'懸突。
453. 如實施例421至452中任一項之AAV顆粒，其中有義股及/或反義股之長度為至少20、21或22個核苷酸。
454. 如實施例420至453中任一項之AAV顆粒，其中該經編碼之SOD1靶向多核苷酸進一步包含有包含siRNA之調節多核苷酸。
455. 如實施例454之AAV顆粒，其中該經編碼之調節多核苷酸包含： (i) 5’側接區； (ii) 環區；及/或 (iii) 3’側接區。
456. 如實施例455之AAV顆粒，其中： (i) 該經編碼之5’側接區包含SEQ ID NO: 5000-5003中任一者之核苷酸序列；與SEQ ID NO: 5000-5003中任一者之核苷酸序列至少70%、75%、80%、85%、90%、92%、95%、97%、98%或99%一致之核苷酸序列；或相對於SEQ ID NO: 5000-5003中任一者之核苷酸序列具有至少一個、兩個、三個、四個、五個、六個或七個修飾但不超過十個修飾之核苷酸序列； (ii) 該經編碼之環區包含SEQ ID NO: 5004-5007中任一者之核苷酸序列；與SEQ ID NO: 5004-5007中任一者之核苷酸序列至少70%、75%、80%、85%、90%、92%、95%、97%、98%或99%一致之核苷酸序列；或相對於SEQ ID NO: 5004-5007中任一者之核苷酸序列具有至少一個、兩個、三個或四個修飾但不超過六個修飾之核苷酸序列；及/或 (iii) 該經編碼之3’側接區包含SEQ ID NO: 5008-5012中任一者之核苷酸序列；與SEQ ID NO: 5008-5012中任一者之核苷酸序列至少70%、75%、80%、85%、90%、92%、95%、97%、98%或99%一致之核苷酸序列；或相對於SEQ ID NO: 5008-5012中任一者之核苷酸序列具有至少一個、兩個、三個、四個、五個、六個或七個修飾但不超過十個修飾之核苷酸序列。
457. 如實施例455或456之AAV顆粒，其中： (i) 編碼該5’側接區之核苷酸序列包含SEQ ID NO: 2547-2549或5014中任一者之核苷酸序列；與SEQ ID NO: 2547-2549或5014中任一者之核苷酸序列至少70%、75%、80%、85%、90%、92%、95%、97%、98%或99%一致之核苷酸序列；或相對於SEQ ID NO: 2547、2548、2549或5014中任一者之核苷酸序列具有至少一個、兩個、三個、四個、五個、六個或七個修飾但不超過十個修飾之核苷酸序列； (ii) 編碼該環區之核苷酸序列包含SEQ ID NO: 2550-2553中任一者之核苷酸序列；與SEQ ID NO: 2550-2553中任一者之核苷酸序列至少70%、75%、80%、85%、90%、92%、95%、97%、98%或99%一致之核苷酸序列；或相對於SEQ ID NO: 2550-2553中任一者之核苷酸序列具有至少一個、兩個、三個或四個修飾但不超過六個修飾之核苷酸序列；及/或 (iii) 編碼該3’側接區之核苷酸序列包含SEQ ID NO: 2554-2558中任一者之核苷酸序列；與SEQ ID NO: 2554-2558中任一者之核苷酸序列至少70%、75%、80%、85%、90%、92%、95%、97%、98%或99%一致之核苷酸序列；或相對於SEQ ID NO: 2554-2558中任一者之核苷酸序列具有至少一個、兩個、三個、四個、五個、六個或七個修飾但不超過十個修飾之核苷酸序列。
458. 如實施例455至457中任一項之AAV顆粒，其中： (i) 該經編碼之5'側接區包含SEQ ID NO: 5000、5001或5002之核苷酸序列；或相對於SEQ ID NO: 5000、5001或5002之核苷酸序列具有至少一個、兩個、三個、四個、五個、六個或七個修飾但不超過十個修飾之核苷酸序列； (ii) 該經編碼之環區包含SEQ ID NO: 5004、5005或5006中任一者之核苷酸序列，或相對於SEQ ID NO: 5004、5005或5006中任一者之核苷酸序列具有至少一個、兩個、三個或四個修飾但不超過六個修飾之核苷酸序列；及/或 (iii)  3'側接區包含SEQ ID NO: 5008、5009或5012中任一者之核苷酸序列，或相對於SEQ ID NO: 5008、5009或5012中任一者之核苷酸序列具有至少一個、兩個、三個、四個、五個、六個或七個修飾但不超過十個修飾之核苷酸序列。
459. 如實施例455至458中任一項之AAV顆粒，其中： (i) 編碼該5'側接區之核苷酸序列包含SEQ ID NO: 2547、2548或2549之核苷酸序列；相對於SEQ ID NO: 2547、2548或2549之核苷酸序列具有至少一個、兩個、三個、四個、五個、六個或七個修飾但不超過十個修飾之核苷酸序列； (ii) 編碼該環區之核苷酸序列包含SEQ ID NO: 2550、2551或2552中任一者之核苷酸序列；或相對於SEQ ID NO: 2550、2551或2552中任一者之核苷酸序列具有至少一個、兩個、三個或四個修飾但不超過六個修飾之核苷酸序列；及/或 (iii) 編碼該3'側接區之核苷酸序列包含SEQ ID NO: 2554、2555或2558中任一者之核苷酸序列；或相對於SEQ ID NO: 2554、2555或2558中任一者之核苷酸序列具有至少一個、兩個、三個、四個、五個、六個或七個修飾但不超過十個修飾之核苷酸序列。
460. 如實施例455至459中任一項之AAV顆粒，其中： (i) 該經編碼之5'側接區包含SEQ ID NO: 5000之核苷酸序列，或與其至少80%、85%、90%、95%、97%、98%或99%一致之核苷酸序列； (ii) 該經編碼之環區包含SEQ ID NO: 5004之核苷酸序列，或與其至少80%、85%、90%、95%、97%、98%或99%一致之核苷酸序列；及/或 (iii) 該經編碼之3'側接區包含SEQ ID NO: 5008之核苷酸序列，或與其至少80%、85%、90%、95%、97%、98%或99%一致之核苷酸序列。
461. 如實施例455至459中任一項之AAV顆粒，其中： (i) 編碼該5'側接區之核苷酸序列包含SEQ ID NO: 2547，或與其至少80%、85%、90%、95%、97%、98%或99%一致之核苷酸序列； (ii) 編碼該環區之核苷酸序列包含SEQ ID NO: 2550，或與其至少80%、85%、90%、95%、97%、98%或99%一致之核苷酸序列；及/或 (iii) 編碼該3'側接區之核苷酸序列包含SEQ ID NO: 2554，或與其至少80%、85%、90%、95%、97%、98%或99%一致之核苷酸序列。
462. 如實施例454至461中任一項之AAV顆粒，其中該經編碼之調節多核苷酸包含SEQ ID NO: 5013之核苷酸序列，或與其至少70%、75%、80%、85%、90%、92%、95%、97%、98%或99%一致之核苷酸序列。
463. 如實施例454至462中任一項之AAV顆粒，其中： (i) 該經編碼之調節多核苷酸包含SEQ ID NO: 4821之核苷酸序列，或與其至少70%、75%、80%、85%、90%、92%、95%、97%、98%或99%一致之核苷酸序列；或 (ii) 編碼該調節多核苷酸之核苷酸序列包含SEQ ID NO: 2562、2579、5022、2559、2560、2561、2563、2564、2565、2566、2567、2568、2569、2570、2571、2572、2573、2574、2575、2576、2577、2578中之任一者，或與其至少70%、75%、80%、85%、90%、92%、95%、97%、98%或99%一致之核苷酸序列。
464. 如實施例454至463中任一項之AAV顆粒，其中編碼該調節多核苷酸之核苷酸序列包含SEQ ID NO: 2562、2579或5022中之任一者，或與其至少70%、75%、80%、85%、90%、92%、95%、97%、98%或99%一致之核苷酸序列。
465. 如實施例454至464中任一項之AAV顆粒，其中編碼該調節多核苷酸之核苷酸序列包含SEQ ID NO: 2562之核苷酸序列，或與其至少70%、75%、80%、85%、90%、92%、95%、97%、98%或99%一致之核苷酸序列。
466. 一種AAV顆粒，其包含： (i) 包含SEQ ID NO: 69之胺基酸序列之AAV衣殼變異體；及 (ii) 編碼靶向人類SOD1之多核苷酸之核酸，其中該經編碼之多核苷酸包含SEQ ID NO: 5013之核苷酸序列。
467. 一種AAV顆粒，其包含： (i) 包含SEQ ID NO: 36之胺基酸序列之AAV衣殼變異體；及 (ii) 編碼靶向人類SOD1之多核苷酸之核酸，其中該經編碼之多核苷酸包含SEQ ID NO: 5013之核苷酸序列。
468. 一種AAV顆粒，其包含： (i) 包含SEQ ID NO: 982之胺基酸序列之AAV衣殼變異體；及 (ii) 編碼靶向人類SOD1之多核苷酸之核酸，其中該經編碼之多核苷酸包含SEQ ID NO: 5013之核苷酸序列。
469. 如前述實施例中任一項之AAV顆粒，其包含病毒基因體，該病毒基因體包含可操作地連接至編碼該SOD1靶向多核苷酸(例如SOD1靶向RNA劑，例如siRNA)之該核酸序列之啟動子。
470. 如請求項469之AAV顆粒，其中該啟動子係遍在啟動子。
471. 如實施例469之AAV顆粒，其中該啟動子係組織特異性啟動子。
472. 如實施例469至471中任一項之AAV顆粒，其中該啟動子選自H1啟動子、人類延長因子1α次單元(EF1α)、巨細胞病毒(CMV)立即早期增強子及/或啟動子、雞β-肌動蛋白(CBA)及其衍生物CAG、β葡萄糖醛酸苷酶(GUSB)或泛素C (UBC)、神經元特異性烯醇化酶(NSE)、血小板衍生生長因子(PDGF)、血小板衍生生長因子B鏈(PDGF-β)、細胞間黏附分子2 (ICAM-2)、突觸蛋白(Syn)、甲基-CpG結合蛋白2 (MeCP2)、Ca2+/鈣調蛋白依賴性蛋白激酶II (CaMKII)、代謝型麩胺酸受體2 (mGluR2)、神經絲輕鏈(NFL)或重鏈(NFH)、β-球蛋白袖珍基因nβ2、前腦啡肽原(PPE)、腦啡肽(Enk)及興奮性胺基酸轉運蛋白2 (EAAT2)、膠質原纖維酸性蛋白(GFAP)、髓磷脂鹼性蛋白(MBP)、磷酸甘油酸激酶(PGK)、胰島素、心血管啟動子(例如αMHC、cTnT及CMV-MLC2k)、肝臟啟動子(例如hAAT、TBG)、骨骼肌啟動子(例如，結蛋白、MCK、C512)或其片段，例如截短片段，或功能變異體。
473. 如實施例469至472中任一項之AAV顆粒，其中該啟動子係H1啟動子、EF-1a啟動子變異體，例如經截短之EF-1a啟動子、CBA啟動子變異體，例如經截短之CBA啟動子、胰島素啟動子變異體，例如經截短之胰島素啟動子，或SYN啟動子變異體，例如經截短之SYN啟動子。
474. 如實施例469、470、472或473中任一項之AAV顆粒，其中該啟動子係H1啟動子。
475. 如實施例469、470、472或474中任一項之AAV顆粒，其中該啟動子包含SEQ ID NO: 4000-4026中任一者之核苷酸序列，相對於SEQ ID NO: 4000-4026之核苷酸序列包含至少一個、兩個或三個但不超過四個修飾，例如取代(例如，保守取代)、插入或缺失之核苷酸序列，或與SEQ ID NO: 4000-4026中之任一者具有至少80% (例如85%、90%、95%、96%、97%、98%或99%)序列一致性的核苷酸序列。
476. 如實施例469、470、472或474中任一項之AAV顆粒，其中該啟動子係H1啟動子，其包含SEQ ID NO: 128或SEQ ID NO: 83，或與SEQ ID NO: 128或SEQ ID NO: 83具有至少80% (例如，85%、90%、95%、96%、97%、98%或99%)序列一致性的核苷酸序列。
477. 如實施例469至476中任一項之AAV顆粒，其中該病毒基因體進一步包含第一外顯子、第二外顯子或第一外顯子及第二外顯子兩者。
478. 如實施例477中任一項之AAV顆粒，其中該第一外顯子或第二外顯子包含SEQ ID NO: 4045-4048中任一者之核苷酸序列，相對於SEQ ID NO: 4045-4048中任一者之核苷酸序列包含至少一個、兩個或三個但不超過四個修飾，例如取代、插入或缺失之核苷酸序列，或與SEQ ID NO: 4045-4048中之任一者具有至少80% (例如85%、90%、95%、96%、97%、98%或99%)序列一致性的核苷酸序列。
479. 如實施例477或478中任一項之AAV顆粒，其中該病毒基因體包含第一外顯子及第二外顯子，其中： (a) 該第一外顯子包含SEQ ID NO: 4045或4046之核苷酸序列，相對於SEQ ID NO: 4045或4046包含至少一個、兩個或三個但不超過四個修飾，例如取代、插入或缺失之核苷酸序列，或與SEQ ID NO: 4045或4046具有至少80% (例如85%、90%、95%、96%、97%、98%或99%)序列一致性的核苷酸序列；及 (b) 該第二外顯子包含SEQ ID NO: 4047或4048之核苷酸序列，相對於SEQ ID NO: 4047或4048包含至少一個、兩個或三個但不超過四個修飾，例如取代、插入或缺失之核苷酸序列，或與SEQ ID NO: 4047或4048具有至少80% (例如85%、90%、95%、96%、97%、98%或99%)序列一致性的核苷酸序列。
480. 如實施例477至479中任一項之AAV顆粒，其中該第一外顯子、第二外顯子或兩者係密碼子最佳化的。
481. 如實施例477至480中任一項之AAV顆粒，其中該第一外顯子、第二外顯子或兩者中之一或多個或所有CpG序列係耗竭的。
482. 如實施例477至481中任一項之AAV顆粒，其中該病毒基因體進一步包含內含子。
483. 如實施例482之AAV顆粒，其中該內含子位於相對於(a) 5' ITR、(b)該啟動子，及/或(c)該第一外顯子之3'。
484. 如實施例482或483之AAV顆粒，其中該內含子位於相對於(a)該第二外顯子、(b)該調節多核苷酸、(c)聚A信號序列及/或(d) 3' ITR之5'。
485. 如實施例469至484中任一項之AAV顆粒，其中該病毒基因體包含第一外顯子、內含子及第二外顯子，其中該內含子位於相對於該第一外顯子之3'及相對於該第二外顯子之5'。
486. 如實施例482至485中任一項之AAV顆粒，其中該內含子包含SEQ ID NO: 4044之核苷酸序列，相對於SEQ ID NO: 4044包含至少一個、兩個或三個但不超過四個修飾，例如取代、插入或缺失之核苷酸序列，或與SEQ ID NO: 4044具有至少80% (例如85%、90%、95%、96%、97%、98%或99%)序列一致性的核苷酸序列。
487. 如實施例469至486中任一項之AAV顆粒，其中該病毒基因體包含第一外顯子、內含子及第二外顯子(「外顯子-內含子-外顯子盒」)。
488. 如實施例487之AAV顆粒，其中該外顯子-內含子-外顯子盒包含SEQ ID NO: 4042或4043之核苷酸序列，相對於SEQ ID NO: 4042或4043包含至少一個、兩個或三個但不超過四個修飾，例如取代、插入或缺失之核苷酸序列，或與SEQ ID NO: 4042或4043具有至少80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%或99%序列一致性的核苷酸序列。
489. 如實施例487或488之AAV顆粒，其中該外顯子-內含子-外顯子盒位於相對於該啟動子之3'及相對於編碼該調節多核苷酸(例如SOD1靶向RNA劑，例如siRNA)之該核苷酸序列之5'。
490. 如實施例487至489中任一項之AAV顆粒，其中編碼該調節多核苷酸(例如SOD1靶向RNA劑，例如siRNA)之該核苷酸序列存在於該外顯子-內含子-外顯子盒之內含子中(例如插入其中)。
491. 如實施例487至490中任一項之AAV顆粒，其中編碼該調節多核苷酸(例如SOD1靶向RNA劑，例如siRNA)之該核苷酸序列替換該外顯子-內含子-外顯子盒中之部分或全部內含子。
492. 如實施例469至491中任一項之AAV顆粒，其中該病毒基因體進一步包含聚A信號序列。
493. 如實施例492之AAV顆粒，其中該聚A信號序列包含SEQ ID NO: 129或4027，或與SEQ ID NO: 129或4027具有至少80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%或99%序列一致性的核苷酸序列。
494. 如實施例469至493中任一項之AAV顆粒，其中該病毒基因體進一步包含反向末端重複(ITR)序列。
495. 如實施例469至494中任一項之AAV顆粒，其中該病毒基因體包含相對於該經編碼之SOD1靶向多核苷酸位於5’之ITR序列。
496. 如實施例469至495中任一項之AAV顆粒，其中該病毒基因體包含相對於該經編碼之SOD1靶向多核苷酸位於3’之ITR序列。
497. 如實施例469至496中任一項之AAV顆粒，其中該病毒基因體包含相對於該經編碼之SOD1靶向多核苷酸位於5’之ITR序列及相對於該經編碼之SOD1靶向多核苷酸位於3’之ITR序列。
498. 如實施例497之AAV顆粒，其中相對於該經編碼之SOD1靶向多核苷酸位於5'之該ITR序列及相對於該SOD1靶向多核苷酸位於3'之ITR序列包含SEQ ID NO: 126或130，或與其具有至少80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%或99%序列一致性的核苷酸序列。
499. 如實施例497或498之AAV顆粒，其中： (i) 相對於該經編碼之SOD1靶向多核苷酸位於5'之該ITR序列包含SEQ ID NO: 126之核苷酸序列，或與其至少80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%或99%一致之核苷酸序列；及/或 (ii) 相對於該經編碼之SOD1靶向多核苷酸位於3'之該ITR序列包含SEQ ID NO: 130之核苷酸序列，或與其至少80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%或99%一致之核苷酸序列。
500. 如實施例469至499中任一項之AAV顆粒，其中該病毒基因體進一步包含填充序列。
501. 如實施例500之AAV顆粒，其中該填充序列包含SEQ ID NO: 82之核苷酸序列，或與其至少70%、75%、80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%或99%一致之核苷酸序列。
502. 如實施例469至501中任一項之AAV顆粒，其中該病毒基因體進一步包含增強子、Kozak序列、內含子區及/或外顯子區。
503. 如實施例469至502中任一項之AAV顆粒，其中該病毒基因體自5’至3’包含： (a) 5' ITR，例如包含SEQ ID NO: 126或130之核苷酸序列之5' ITR或其變異體； (b) 啟動子，例如包含SEQ ID NO: 4000-4026中任一者之核苷酸序列之啟動子或其變異體； (c) 外顯子，例如包含SEQ ID NO: 4045-4048中任一者之核苷酸序列之外顯子或其變異體； (d) 編碼調節多核苷酸之核苷酸序列，例如編碼SEQ ID NO: 2559-2579及5022中任一者之調節多核苷酸之核苷酸序列或其變異體； (e) 聚A信號序列，例如包含SEQ ID NO: 129或4027之核苷酸序列之聚A信號序列或其變異體，及 (f) 3' ITR，例如包含SEQ ID NO: 126或130之核苷酸序列之3' ITR或其變異體； 其中(a)-(f)中任一者之該變異體包含相對於該參考序列相差不超過15、14、13、12、11、10、9、8、7、6、5、4、3、2或1個核苷酸(例如取代、插入或缺失)之序列，或相對於該參考序列具有至少70%、75%、80%、85%、90%、95%、99%或100%一致性之序列，例如，其中該參考序列係野生型序列。
504. 如實施例469至503中任一項之AAV顆粒，其中該病毒基因體自5’至3’包含： (a) 5' ITR，例如包含SEQ ID NO: 126或130之核苷酸序列之5' ITR或其變異體， (b) 啟動子，例如包含SEQ ID NO: 4000-4026中任一者之核苷酸序列之啟動子或其變異體， (c) 第一外顯子，例如包含SEQ ID NO: 4045-4048中任一者之核苷酸序列之第一外顯子或其變異體， (d) 內含子，例如包含SEQ ID NO: 4044之核苷酸序列之內含子或其變異體， (e) 編碼調節多核苷酸之核苷酸序列，例如編碼SEQ ID NO: 2559-2579及5022中任一者之調節多核苷酸之核苷酸序列或其變異體， (f) 聚A信號序列，例如包含SEQ ID NO: 129或4027之核苷酸序列之聚A信號序列或其變異體，及 (g) 3' ITR，例如包含SEQ ID NO: 126或130之核苷酸序列之3' ITR或其變異體， 其中該變異體包含相對於該參考序列相差不超過15、14、13、12、11、10、9、8、7、6、5、4、3、2或1個核苷酸(例如取代、插入或缺失)之序列，或相對於該參考序列具有至少70%、75%、80%、85%、90%、95%、99%或100%一致性之序列，例如，其中該參考序列係野生型序列。
505. 如實施例469至504中任一項之AAV顆粒，其中該病毒基因體自5’至3’包含： (a) 5' ITR，例如包含SEQ ID NO: 126或130之核苷酸序列之5' ITR或其變異體， (b) 啟動子，例如包含SEQ ID NO: 4000-4026中任一者之核苷酸序列之啟動子或其變異體， (c) 第一外顯子，例如包含SEQ ID NO: 4045-4048中任一者之核苷酸序列之第一外顯子或其變異體， (d) 內含子，例如包含SEQ ID NO: 4044之核苷酸序列之內含子或其變異體， (e) 第二外顯子，例如包含SEQ ID NO: 4045-4048中任一者之核苷酸序列之第二外顯子或其變異體， (f) 編碼調節多核苷酸之核苷酸序列，例如編碼SEQ ID NO: 2559-2579及5022中任一者之調節多核苷酸之核苷酸序列或其變異體， (g) 聚A信號序列，例如包含SEQ ID NO: 129或4027之核苷酸序列之聚A信號序列或其變異體，及 (h) 3' ITR，例如包含SEQ ID NO: 126或130之核苷酸序列之3' ITR或其變異體， 其中該變異體包含相對於該參考序列相差不超過15、14、13、12、11、10、9、8、7、6、5、4、3、2或1個核苷酸(例如取代、插入或缺失)之序列，或相對於該參考序列具有至少70%、75%、80%、85%、90%、95%、99%或100%一致性之序列，例如，其中該參考序列係野生型序列。
506. 如實施例469至505中任一項之AAV顆粒，其中該病毒基因體進一步包含編碼miR結合位點，例如調節，例如降低由該病毒基因體編碼之SOD1靶向多核苷酸在表現對應miRNA之細胞或組織中之表現的miR結合位點之核苷酸序列。
507. 如實施例506之AAV顆粒，其中該經編碼之miRNA結合位點與DRG、肝臟、心臟、造血譜系或其組合之細胞或組織中表現之miRNA互補，例如完全互補或部分互補。
508. 如實施例506或507之AAV顆粒，其中該經編碼之miR結合位點調節，例如降低DRG、肝臟、心臟、造血譜系或其組合之細胞或組織中該經編碼之SOD1靶向多核苷酸之表現。
509. 如實施例506至508中任一項之AAV顆粒，其中該病毒基因體包含該經編碼之miR結合位點之至少1-5個拷貝，例如至少1個、2個、3個、4個或5個拷貝。
510. 如實施例506至509中任一項之AAV顆粒，其中該病毒基因體包含經編碼之miR結合位點之至少3個拷貝，視情況地其中所有三個拷貝包含相同miR結合位點，或至少一個、兩個、三個或所有拷貝包含不同miR結合位點。
511. 如實施例510之AAV顆粒，其中該經編碼之miR結合位點之該至少3個拷貝係連續的(例如，未由間隔子隔開)，或由間隔子隔開，視情況地其中該間隔子包含核苷酸序列GATAGTTA，或相對於GATAGTTA具有至少一個、兩個或三個修飾，例如取代但不超過四個修飾，例如取代之核苷酸序列。
512. 如實施例407至415中任一項之AAV顆粒，其中該病毒基因體包含經編碼之miR結合位點之至少4個拷貝，視情況地其中所有四個拷貝包含相同miR結合位點，或至少一個、兩個、三個或所有拷貝包含不同miR結合位點。
513. 如實施例512之AAV顆粒，其中該經編碼之miR結合位點之該至少4個拷貝係連續的(例如，未由間隔子隔開)，或由間隔子隔開，視情況地其中該間隔子包含核苷酸序列GATAGTTA，或相對於GATAGTTA具有至少一個、兩個或三個修飾，例如取代但不超過四個修飾，例如取代之核苷酸序列。
514. 如實施例506至513中任一項之AAV顆粒，其中該經編碼之miR結合位點包含miR122結合位點、miR183結合位點、miR-1結合位點、miR-142-3p或其組合，視情況地其中： (i) 該經編碼之miR122結合位點包含SEQ ID NO: 61之核苷酸序列，或與其實質上一致(例如具有至少70%、75%、80%、85%、90%、92%、95%、97%、98%或99%序列一致性)之核苷酸序列；或相對於SEQ ID NO: 61，具有至少一個、兩個、三個、四個、五個、六個或七個修飾，例如取代但不超過十個修飾，例如取代的核苷酸序列； (ii) 該經編碼之miR183結合位點包含SEQ ID NO: 60之核苷酸序列，或與其實質上一致(例如，具有至少70%、75%、80%、85%、90%、92%、95%、97%、98%或99%序列一致性)之核苷酸序列；或相對於SEQ ID NO: 60，具有至少一個、兩個、三個、四個、五個、六個或七個修飾，例如取代但不超過十個修飾，例如取代的核苷酸序列； (iii) 該經編碼之miR-1結合位點包含SEQ ID NO: 4679之核苷酸序列，或與其實質上一致(例如，具有至少70%、75%、80%、85%、90%、92%、95%、97%、98%或99%序列一致性)之核苷酸序列；或相對於SEQ ID NO: 4679，具有至少一個、兩個、三個、四個、五個、六個或七個修飾，例如取代但不超過十個修飾，例如取代之核苷酸序列；及/或 (iv) 該經編碼之miR-142-3p結合位點包含SEQ ID NO: 65之核苷酸序列，或與其實質上一致(例如具有至少70%、75%、80%、85%、90%、92%、95%、97%、98%或99%序列一致性)之核苷酸序列；或相對於SEQ ID NO: 65，具有至少一個、兩個、三個、四個、五個、六個或七個修飾，例如取代但不超過十個修飾，例如取代的核苷酸序列。
515. 如實施例469至514中任一項之AAV顆粒，其中該病毒基因體包含經編碼之miR122結合位點。
516. 如實施例469至515中任一項之AAV顆粒，其中該病毒基因體包含miR122結合位點的至少1-5個拷貝，例如1、2或3個拷貝，視情況地其中各拷貝係連續的(例如未由間隔子隔開)，或各拷貝由間隔子隔開，視情況地其中該間隔子包含核苷酸序列GATAGTTA，或相對於GATAGTTA具有一個、兩個或三個修飾，例如取代但不超過四個修飾，例如取代的核苷酸序列。
517. 如實施例514至516中任一項之AAV顆粒，其中該經編碼之miR122結合位點包含SEQ ID NO: 61之核苷酸序列，或與其實質上一致(例如具有至少70%、75%、80%、85%、90%、92%、95%、97%、98%或99%序列一致性)之核苷酸序列；或相對於SEQ ID NO: 61，具有至少一個、兩個、三個、四個、五個、六個或七個修飾，例如取代但不超過十個修飾，例如取代的核苷酸序列。
518. 如實施例469至517中任一項之AAV顆粒，其中該病毒基因體包含： (A) (i) 第一經編碼之miR122結合位點，其包含SEQ ID NO: 61之核苷酸序列，或與其實質上一致(例如具有至少70%、75%、80%、85%、90%、92%、95%、97%、98%或99%序列一致性)之核苷酸序列；或相對於SEQ ID NO: 61，具有至少一個、兩個、三個、四個、五個、六個或七個修飾，例如取代但不超過十個修飾，例如取代的核苷酸序列； (ii) 第一間隔子，其包含核苷酸序列SEQ ID NO: 1848，或相對於GATAGTTA，具有至少一個、兩個或三個修飾，例如取代但不超過四個修飾，例如取代之核苷酸序列；及 (iii) 第二經編碼之miR122結合位點，其包含SEQ ID NO: 61之核苷酸序列，或與其實質上一致(例如具有至少70%、75%、80%、85%、90%、92%、95%、97%、98%或99%序列一致性)之核苷酸序列；或相對於SEQ ID NO: 61，具有至少一個、兩個、三個、四個、五個、六個或七個修飾，例如取代但不超過十個修飾，例如取代的核苷酸序列；或 (B) (i) 第一經編碼之miR122結合位點，其包含SEQ ID NO: 61之核苷酸序列，或與其實質上一致(例如具有至少70%、75%、80%、85%、90%、92%、95%、97%、98%或99%序列一致性)之核苷酸序列；或相對於SEQ ID NO: 61，具有至少一個、兩個、三個、四個、五個、六個或七個修飾，例如取代但不超過十個修飾，例如取代的核苷酸序列； (ii) 第一間隔子，其包含核苷酸序列GATAGTTA，或相對於GATAGTTA，具有至少一個、兩個或三個修飾，例如取代但不超過四個修飾，例如取代之核苷酸序列； (iii) 第二經編碼之miR122結合位點，其包含SEQ ID NO: 61之核苷酸序列，或與其實質上一致(例如具有至少70%、75%、80%、85%、90%、92%、95%、97%、98%或99%序列一致性)之核苷酸序列；或相對於SEQ ID NO: 61，具有至少一個、兩個、三個、四個、五個、六個或七個修飾，例如取代但不超過十個修飾，例如取代的核苷酸序列； (iv) 第二間隔子，其包含GATAGTTA之核苷酸序列，或相對於GATAGTTA，具有至少一個、兩個或三個修飾，例如取代但不超過四個修飾，例如取代之核苷酸序列；及 (v) 第三經編碼之miR122結合位點，其包含SEQ ID NO: 61之核苷酸序列，或與其實質上一致(例如具有至少70%、75%、80%、85%、90%、92%、95%、97%、98%或99%序列一致性)之核苷酸序列；或相對於SEQ ID NO: 61，具有至少一個、兩個、三個、四個、五個、六個或七個修飾，例如取代但不超過十個修飾，例如取代的核苷酸序列。
519. 如實施例469至518中任一項之AAV顆粒，其中該病毒基因體包含經編碼之miR183結合位點。
520. 如實施例469至519中任一項之AAV顆粒，其中該病毒基因體包含miR183結合位點的至少1-5個拷貝，例如1、2或3個拷貝，視情況地其中各拷貝係連續的(例如未由間隔子隔開)，或各拷貝由間隔子隔開，視情況地其中該間隔子包含核苷酸序列GATAGTTA，或相對於GATAGTTA具有一個、兩個或三個修飾，例如取代但不超過四個修飾，例如取代的核苷酸序列。
521. 如實施例520之AAV顆粒，其中該經編碼之miR183結合位點包含SEQ ID NO: 60之核苷酸序列，或與其實質上一致(例如具有至少70%、75%、80%、85%、90%、92%、95%、97%、98%或99%序列一致性)之核苷酸序列；或相對於SEQ ID NO: 60，具有至少一個、兩個、三個、四個、五個、六個或七個修飾，例如取代但不超過十個修飾，例如取代的核苷酸序列。
522. 如實施例469至521中任一項之AAV顆粒，其中該病毒基因體包含： (A) (i) 第一經編碼之miR183結合位點，其包含SEQ ID NO: 60之核苷酸序列，或與其實質上一致(例如具有至少70%、75%、80%、85%、90%、92%、95%、97%、98%或99%序列一致性)之核苷酸序列；或相對於SEQ ID NO: 60，具有至少一個、兩個、三個、四個、五個、六個或七個修飾，例如取代但不超過十個修飾，例如取代的核苷酸序列； (ii) 第一間隔子，其包含核苷酸序列GATAGTTA，或相對於GATAGTTA，具有至少一個、兩個或三個修飾，例如取代但不超過四個修飾，例如取代之核苷酸序列；及 (iii) 第二經編碼之miR183結合位點，其包含SEQ ID NO: 60之核苷酸序列，或與其實質上一致(例如具有至少70%、75%、80%、85%、90%、92%、95%、97%、98%或99%序列一致性)之核苷酸序列；或相對於SEQ ID NO: 60，具有至少一個、兩個、三個、四個、五個、六個或七個修飾，例如取代但不超過十個修飾，例如取代的核苷酸序列；或 (B) (i) 第一經編碼之miR183結合位點，其包含SEQ ID NO: 60之核苷酸序列，或與其實質上一致(例如具有至少70%、75%、80%、85%、90%、92%、95%、97%、98%或99%序列一致性)之核苷酸序列；或相對於SEQ ID NO: 60，具有至少一個、兩個、三個、四個、五個、六個或七個修飾，例如取代但不超過十個修飾，例如取代的核苷酸序列； (ii) 第一間隔子，其包含核苷酸序列GATAGTTA，或相對於GATAGTTA，具有至少一個、兩個或三個修飾，例如取代但不超過四個修飾，例如取代之核苷酸序列； (iii) 第二經編碼之miR183結合位點，其包含SEQ ID NO: 60之核苷酸序列，或與其實質上一致(例如具有至少70%、75%、80%、85%、90%、92%、95%、97%、98%或99%序列一致性)之核苷酸序列；或相對於SEQ ID NO: 60，具有至少一個、兩個、三個、四個、五個、六個或七個修飾，例如取代但不超過十個修飾，例如取代的核苷酸序列； (iv) 第二間隔子，其包含GATAGTTA之核苷酸序列，或相對於GATAGTTA，具有至少一個、兩個或三個修飾，例如取代但不超過四個修飾，例如取代之核苷酸序列；及 (v) 第三經編碼之miR183結合位點，其包含SEQ ID NO: 60之核苷酸序列，或與其實質上一致(例如具有至少70%、75%、80%、85%、90%、92%、95%、97%、98%或99%序列一致性)之核苷酸序列；或相對於SEQ ID NO: 60，具有至少一個、兩個、三個、四個、五個、六個或七個修飾，例如取代但不超過十個修飾，例如取代的核苷酸序列。
523. 如實施例469至522中任一項之AAV顆粒，其中該病毒基因體包含經編碼之miR122結合位點及miR-1結合位點。
524. 如實施例469至523中任一項之AAV顆粒，其中該病毒基因體包含： (i) SEQ ID NO: 125、109、4820或4028-4041中任一者之核苷酸序列；相對於SEQ ID NO: 125、109、4820或4028-4041中之任一者，包含至少1個、2個、3個、4個、5個但不超過30個、20個或10個不同核苷酸之核苷酸序列；相對於SEQ ID NO: 125、109、4820或4028-4041中任一者之核苷酸序列包含至少1個、2個、3個、4個、5個但不超過30個、20個或10個取代之核苷酸序列；或與SEQ ID NO: 125、109、4820或4028-4041中之任一者具有至少70%、75%、80%、85%、90%、95%、99%或100%序列一致性之核苷酸序列； (ii) SEQ ID NO: 109之核苷酸序列；相對於SEQ ID NO: 109，包含至少1個、2個、3個、4個、5個但不超過30個、20個或10個不同核苷酸之核苷酸序列；相對於SEQ ID NO: 109之核苷酸序列包含至少1個、2個、3個、4個、5個但不超過30個、20個或10個取代之核苷酸序列；或與SEQ ID NO: 109具有至少70%、75%、80%、85%、90%、95%、99%或100%序列一致性之核苷酸序列； (iii) SEQ ID NO: 125之核苷酸序列；相對於SEQ ID NO: 125，包含至少1個、2個、3個、4個、5個但不超過30個、20個或10個不同核苷酸之核苷酸序列；相對於SEQ ID NO: 125之核苷酸序列包含至少1個、2個、3個、4個、5個但不超過30個、20個或10個取代之核苷酸序列；或與SEQ ID NO: 125具有至少70%、75%、80%、85%、90%、95%、99%或100%序列一致性之核苷酸序列； (iv) SEQ ID NO: 4820之核苷酸序列；相對於SEQ ID NO: 4820，包含至少1個、2個、3個、4個、5個但不超過30個、20個或10個不同核苷酸之核苷酸序列；相對於SEQ ID NO: 4820之核苷酸序列包含至少1個、2個、3個、4個、5個但不超過30個、20個或10個取代之核苷酸序列；或與SEQ ID NO: 4820具有至少70%、75%、80%、85%、90%、95%、99%或100%序列一致性之核苷酸序列。
525. 如實施例469至524中任一項之AAV顆粒，其中該病毒基因體自5’至3’包含： (a) ITR； (b) 填充序列； (c) 啟動子； (d) 編碼靶向人類SOD1之多核苷酸之核酸； (e) 聚A信號區；及 (f) ITR。
526. 如實施例469至525中任一項之AAV顆粒，其中該病毒基因體自5’至3’包含： (a) ITR，其包含SEQ ID NO: 126之核苷酸序列，或與其至少90%、95%、96%、97%、98%或99%一致之核苷酸序列； (b) 填充序列，其包含SEQ ID NO: 82之核苷酸序列，或與其至少90%、95%、96%、97%、98%或99%一致之核苷酸序列； (c) 啟動子，其包含SEQ ID NO: 83之核苷酸序列，或與其至少90%、95%、96%、97%、98%或99%一致之核苷酸序列； (d) 編碼靶向人類SOD1之多核苷酸之核酸，其包含SEQ ID NO: 2562之核苷酸序列，或與其至少90%、95%、96%、97%、98%或99%一致之核苷酸序列； (e) 聚A信號區，其包含SEQ ID NO: 129之核苷酸序列，或與其至少90%、95%、96%、97%、98%或99%一致之核苷酸序列；及 (f) ITR，其包含SEQ ID NO: 130之核苷酸序列，或與其至少90%、95%、96%、97%、98%或99%一致之核苷酸序列。
527. 如實施例469至526中任一項之AAV顆粒，其中該病毒基因體包含： (i) SEQ ID NO: 109、125、4820或4028-4041中任一者之核苷酸序列；相對於SEQ ID NO: 109、125或4028-4041中任一者之核苷酸序列包含至少1個、2個、3個、4個或5個但不超過30個、20個或10個不同核苷酸之核苷酸序列；或與SEQ ID NO: 109、125、4820或4028-4041中之任一者至少90%、95%、99%或100%一致之核苷酸序列； (ii) SEQ ID NO: 109之核苷酸序列；相對於SEQ ID NO: 109，包含至少1個、2個、3個、4個或5個但不超過30個、20個或10個不同核苷酸之核苷酸序列；或與SEQ ID NO: 109具有至少90%、95%、99%或100%序列一致性之核苷酸序列； (iii) SEQ ID NO: 125之核苷酸序列；相對於SEQ ID NO: 125，包含至少1個、2個、3個、4個或5個但不超過30個、20個或10個不同核苷酸之核苷酸序列；或與SEQ ID NO: 125具有至少90%、95%、99%或100%序列一致性之核苷酸序列；或 (iv) SEQ ID NO: 4820之核苷酸序列；相對於SEQ ID NO: 4820，包含至少1個、2個、3個、4個或5個但不超過30個、20個或10個不同核苷酸之核苷酸序列；或與SEQ ID NO: 4820具有至少90%、95%、99%或100%序列一致性之核苷酸序列。
528. 如實施例469至527中任一項之AAV顆粒，其中該病毒基因體包含SEQ ID NO: 109之核苷酸序列；相對於SEQ ID NO: 109，包含至少1個、2個、3個、4個或5個但不超過30個、20個或10個不同核苷酸之核苷酸序列；或與SEQ ID NO: 109具有至少90%、95%、99%或100%序列一致性之核苷酸序列。
529. 一種AAV顆粒，其包含： (i) 包含SEQ ID NO: 69之胺基酸序列之AAV衣殼變異體；及 (ii) 包含SEQ ID NO: 109之核苷酸序列之病毒基因體。
530. 一種AAV顆粒，其包含： (i) 包含SEQ ID NO: 36之胺基酸序列之AAV衣殼變異體；及 (ii) 包含SEQ ID NO: 109之核苷酸序列之病毒基因體。
531. 一種AAV顆粒，其包含： (i) 包含SEQ ID NO: 982之胺基酸序列之AAV衣殼變異體；及 (ii) 包含SEQ ID NO: 109之核苷酸序列之病毒基因體。
532. 如實施例469至531中任一項之AAV顆粒，其中該病毒基因體係單股的或自互補的。
533. 如實施例469至532中任一項之AAV顆粒，其中該病毒基因體進一步包含編碼Rep蛋白，例如非結構蛋白之核苷酸序列，其中該Rep蛋白包含Rep78蛋白、Rep68、Rep52蛋白及/或Rep40蛋白。
534. 如實施例533之AAV顆粒，其中該Rep78蛋白、該Rep68蛋白、該Rep52蛋白及/或該Rep40蛋白由至少一個Rep基因編碼。
535. 一種細胞，例如宿主細胞，其包含如前述實施例中任一項之AAV顆粒。
536. 如實施例535之細胞，其中該細胞係哺乳動物細胞或昆蟲細胞。
537. 如實施例535或536之細胞，其中該細胞係腦區域或脊髓區域之細胞，視情況地額葉皮質、感覺皮質、運動皮質、尾狀核、齒狀核、小腦皮質、大腦皮質、腦幹、海馬體、視丘、殼核、頸脊髓區域、胸脊髓區域及/或腰脊髓區域之細胞。
538. 如實施例535至537中任一項之細胞，其中該細胞係神經元(例如NeuN+神經元)、感覺神經元、運動神經元、多巴胺能神經元(例如TH+神經元)、星狀細胞(例如Sox9+星狀細胞)或神經膠質細胞。
539. 一種製造如實施例1至534中任一項之AAV顆粒之方法，其包含： (i) 提供包含病毒基因體之宿主細胞；及 (ii) 在適於將該病毒基因體包裹在AAV衣殼變異體，例如本文所述之AAV衣殼變異體中之條件下培育該宿主細胞； 由此製造該AAV顆粒。
540. 如實施例539之方法，其進一步包含在步驟(i)之前，將包含該病毒基因體之第一核酸分子引入該宿主細胞中。
541. 如實施例539或540之方法，其中該宿主細胞包含編碼該衣殼變異體之第二核酸。
542. 如實施例541之方法，其中在引入該第一核酸分子之前、同時或之後將該第二核酸分子引入該宿主細胞中。
543. 一種醫藥組成物，其包含如實施例1至534中任一項之AAV顆粒，及醫藥學上可接受之賦形劑。
544. 一種將酬載遞送至細胞或組織(例如CNS細胞或CNS組織)之方法，其包含投與有效量之如實施例543之醫藥組成物或如實施例1至534中任一項之AAV顆粒。
545. 如實施例544之方法，其中該細胞係腦區域或脊髓區域之細胞，視情況地額葉皮質、感覺皮質、運動皮質、尾狀核、齒狀核、小腦皮質、大腦皮質、腦幹、海馬體、視丘、殼核、頸脊髓區域、胸脊髓區域及/或腰脊髓區域之細胞。
546. 如實施例544或545之方法，其中該細胞係神經元(例如NeuN+神經元或多巴胺能神經元(例如TH+陽性神經元))、感覺神經元、運動神經元或星狀細胞(例如Sox9+星狀細胞)。
547. 如實施例544至546中任一項之方法，其中該細胞或組織在個體內。
548. 如實施例547之方法，其中該個體患有、已經診斷患有或有風險患有神經病症，例如神經退化病症。
549. 如實施例547或548之方法，其中該個體患有、已經診斷患有或有風險患有與SOD1表現或活性相關之疾病。
550. 如實施例547至549中任一項之方法，其中該個體患有、已經診斷患有或有風險患有與SOD1表現或活性相關之疾病。
551. 如實施例547至550中任一項之方法，其中該個體患有、已經診斷患有或有風險患有肌肉萎縮性脊髓側索硬化症。
552. 一種治療患有或診斷患有神經病症，例如神經退化病症之個體之方法，其包含向該個體投與有效量之如實施例543之醫藥組成物或如實施例1至534中任一項之AAV顆粒。
553. 一種治療患有或診斷患有與SOD1之表現相關之疾病之個體的方法，其包含向該個體投與有效量之如實施例543之醫藥組成物或如實施例1至534中任一項之AAV顆粒。
554. 一種治療患有或診斷患有與SOD1表現或活性相關之疾病之個體的方法，其包含向該個體投與有效量之如實施例543之醫藥組成物或如實施例1至534中任一項之AAV顆粒。
555. 如實施例548至554中任一項之方法，其中該神經病症、神經退化病症或與SOD1表現相關之疾病包含肌肉萎縮性脊髓側索硬化症(ALS)。
556. 如實施例555之方法，其中該ALS係： (i) 家族性ALS； (ii) 散發性ALS； (iii) 早期ALS； (iv) 中期ALS；及/或 (v) 晚期ALS。
557. 如實施例552至556中任一項之方法，其中治療包含預防該個體之疾病或病症之進展。
558. 如實施例547至557中任一項之方法，其中該個體為人類。
559. 如實施例555至558中任一項之方法，其中治療包含改善該個體之ALS之症狀。
560. 如實施例559之方法，其中該症狀包含運動神經元退化、肌肉無力、肌肉僵硬(stiffness of muscles)、肌肉萎縮、肌肉僵硬(muscle stiffness)、肌束震顫發展、額顳葉失智症、言語不清、呼吸困難或其組合。
561. 如實施例547至560中任一項之方法，其中該AAV顆粒或醫藥組成物係靜脈內、經由大池內注射(ICM)、大腦內、鞘內、腦室內、經由實質內投與或肌肉內投與該個體。
562. 如實施例547至561中任一項之方法，其中該AAV顆粒或醫藥組成物係經由聚焦超音波(FUS)，例如FUS結合微泡之靜脈內投與(FUS-MB)，或MRI引導之FUS結合靜脈內投與來投與該個體。
563. 如實施例547至561中任一項之方法，其中該AAV顆粒或醫藥組成物係靜脈內投與該個體。
564. 如實施例544至563中任一項之方法，其中該AAV顆粒或醫藥組成物之投與導致基因、mRNA、蛋白質或其組合之存在、水準及/或活性降低。
565. 如實施例544至564中任一項之方法，其中相對於未接受AAV顆粒或醫藥組成物之個體，該AAV顆粒或醫藥組成物之投與導致例如該個體之脊髓中之SOD1 mRNA表現減少至少30-60%。
566. 如實施例544至563中任一項之方法，其中該AAV顆粒或醫藥組成物之投與導致基因、mRNA、蛋白質或其組合之存在、水準及/或活性增加。
567. 如實施例543之醫藥組成物或如實施例1至534中任一項之AAV顆粒，其用於將酬載遞送至細胞或組織之方法中。
568. 如實施例543之醫藥組成物或如實施例1至534中任一項之AAV顆粒，其用於治療神經病症、神經退化病症、與SOD1表現或活性相關之疾病之方法中。
569. 如實施例543之醫藥組成物或如實施例1至534中任一項之AAV顆粒，其用於製造藥劑。
570. 一種如實施例543之醫藥組成物或如實施例1至534中任一項之AAV顆粒在製造藥劑中的用途。
571. 一種如實施例543之醫藥組成物或如實施例1至534中任一項之AAV顆粒在製造用於治療神經病症、神經退化病症、與SOD1表現或活性相關之疾病之藥劑中的用途。
下文闡述本揭示案之各個態樣或實施例之細節。本揭示案之其他特徵、目的及優點將自說明書及申請專利範圍中變得明顯。在說明書中，除非上下文另有明確規定，否則單數形式亦包括複數形式。除非另有定義，否則本文使用之所有技術及科學術語具有與本揭示案之領域中之一般熟習此項技術者通常理解的相同的含義。在衝突之情況下，以本說明書為準。
相關申請案
本申請案主張2023年4月26日提出申請之美國臨時申請案第63/462,127號、2023年10月26日提出申請之美國臨時申請案第63/545,873號及2024年3月12日提出申請之美國臨時申請案第63/564,293號之優先權；其中每一者之整個內容特此以全文引用方式整體併入。 序列表
本申請案與電子格式的序列表一起提交。序列表檔案標題為V2071-3013PCT_SL.xml，創建於2024年4月10日，且大小係4,955,197個位元組。序列表之電子格式中之資訊以全文引用之方式併入本文。 I. 概 觀 與脊髓相關之病症
脊髓為共同表徵中樞神經系統(CNS；腦及脊髓)之兩個組分之一。脊髓將身體連接至腦，充當運動及感覺所需之訊息及通訊之管道。脊髓為由容納於脊柱內之神經纖維及細胞體以及支持細胞組成的脆弱、薄之管狀束。
脊髓之運動神經元及路徑對於運動之起始、執行、修改及精確度係重要的。當此等神經元及/或路徑以某種方式受損時，諸如但不限於創傷、腫瘤生長、心血管缺陷、發炎、脫髓鞘、神經病變、退化及/或細胞死亡，結果通常為某種形式之運動出現缺陷。類似地，脊髓之感覺神經元及路徑對於本體感受及感覺至關重要，且當受損時，可導致無法感知某些刺激及/或疼痛症候群。
與脊髓相關之病症(諸如上述彼等病症)之非限制性實例包括但不限於運動神經元疾病、肌肉萎縮性脊髓側索硬化症(ALS；盧伽雷氏病)、進行性延髓麻痺、假性延髓麻痺、原發性脊髓側索硬化症、進行性肌肉萎縮、脊髓性肌肉萎縮、脊髓灰質炎後症候群、延髓麻痺、肯尼迪氏病(Kennedy's disease)、遺傳性痙攣性截癱、弗里德賴希氏共濟失調(Friedreich’s ataxia)、恰克-馬利-杜斯氏病(Charcot-Marie-Tooth disease)、遺傳性運動及感覺神經病變、腓骨肌萎縮、神經病變、脫髓鞘疾病、病毒性脫髓鞘、代謝性脫髓鞘、多發性硬化、視神經脊髓炎(德維克氏病(Devic’s disease))、同心圓硬化症(巴羅氏硬化症(Baló's sclerosis))、共濟失調、截癱、脊髓小腦性共濟失調、急性播散性腦脊髓炎、複雜性局部疼痛症候群(CPRS I及CPRS II)、共濟失調毛細血管擴張症、陣發性共濟失調、多系統萎縮、散發性共濟失調、脂質貯積病、尼曼-匹克病(Niemann-Pick disease)、法布立氏病(Fabry disease)、法伯氏病(Faber's disease)、GM1或GM2神經節苷脂貯積症、泰-薩克斯病(Tay-Sachs disease)、桑霍夫病(Sandhoff disease)、克拉培氏病(Krabbe disease)、異染性腦白質失養症、馬查多-約瑟病(Machado-Joseph disease) (3型脊髓小腦性共濟失調)、腦膜炎、脊髓炎、肌病、粒線體肌病、腦肌病、巴特症候群(Barth syndrome)、慢性進行性眼外肌麻痺、Kearns-Sayre症候群、Leigh症候群、粒線體DNA耗竭症候群、具有破損性紅肌纖維之肌陣攣性癲癇、NARP (神經病變、共濟失調及色素性視網膜炎)、神經肌肉接合處之疾病、重症肌無力、肌陣攣、神經病性疼痛、神經退化疾病、帕金森氏病(Parkinson's disease)、阿茲海默氏病(Alzheimer's disease)、杭丁頓氏症(Huntington's disease)、路易氏體病(Lewy body disease)、維生素B12缺乏症、脊髓亞急性合併變性(利希海姆氏症(Lichtheim's disease))、熱帶痙攣性截癱、遠端遺傳性運動神經病變、莫凡氏症候群(Morvan's syndrome)、腦白質失養症及/或雷特氏症候群(Rett syndrome)。
在一些實施例中，本揭示案之組成物及方法可用於治療中樞神經系統之任何疾病。
在一些實施例中，本揭示案之組成物及方法可用於治療與脊髓相關之疾病。
在一些實施例中，本揭示案之組成物及方法可用於治療神經退化疾病。
在一些實施例中，本揭示案之組成物及方法可用於治療運動神經元疾病。
在一些實施例中，本揭示案之組成物及方法可用於治療肌肉萎縮性脊髓側索硬化症(ALS)。 肌肉萎縮性脊髓側索硬化症(ALS)及SOD1
肌肉萎縮性脊髓側索硬化症(ALS)為成人發作之神經退化病症，係一種進行性且致命之疾病，其特徵在於運動皮質、腦幹及脊髓中之運動神經元之選擇性死亡。診斷患有ALS之患者發展出進行性肌肉表型，其特徵在於痙攣、反射亢進或反射減退、肌束震顫、肌肉萎縮及麻痺。此等運動損傷係由運動神經元損失引起之肌肉去神經支配引起。ALS之主要病理特徵包括皮質脊髓束退化及下運動神經元(LMN)或前角細胞之廣泛損失(Ghatak等人， J Neuropathol Exp Neurol., 1986, 45, 385-395)、初級運動皮質中Betz細胞及其他錐體細胞之退化及損失(Udaka等人， Acta Neuropathol, 1986, 70, 289-295；Maekawa等人， Brain, 2004, 127, 1237-1251)以及運動皮質及脊髓中之反應性神經膠質增生(Kawamata等人， Am J Pathol., 1992, 140,691-707；及Schiffer等人， J Neurol Sci., 1996, 139, 27-33)。由於呼吸道缺陷及/或發炎，ALS通常在診斷後3至5年內致命(Rowland LP及Shneibder NA, N Engl. J. Med., 2001, 344, 1688-1700)。
ALS之細胞標誌係退化運動神經元及周圍細胞(例如星狀細胞)中存在蛋白質性泛素化細胞質包涵體。泛素化包涵體(亦即，路易氏體樣包涵體或絞線樣包涵體)為ALS中最常見及特定類型之包涵體，且在脊髓及腦幹之LMN以及皮質脊髓上運動神經元(UMN)中發現(Matsumoto等人， J Neurol Sci., 1993, 115, 208-213；及Sasak及Maruyama, Acta Neuropathol., 1994, 87, 578-585)。已鑑別出一些蛋白質為包涵體之組分，包括泛素、Cu/Zn超氧化物歧化酶1 (SOD1)、外周蛋白及Dorfin。神經絲狀包涵體通常在ALS之脊髓運動神經元中之透明聚集包涵體(hyaline conglomerate inclusion，HCI)及軸突「球狀體」中發現。其他類型及不太特定之包涵體包括皮質上層中之布尼納小體(Bunina bodies)(含有胱抑素C之包涵體)及新月形包涵體(Crescent shaped inclusion，SCI)。在ALS中所見之其他神經病理學特徵包括高爾基體之片段化、粒線體空泡化及突觸末端之超微結構異常(Fujita等人， Acta Neuropathol. 2002, 103, 243-247)。
另外，在額顳葉失智症ALS (FTD-ALS)中，亦觀測到皮質萎縮(包括額葉及顳葉)，此可導致FTD-ALS患者之認知障礙。
ALS為一種複雜且多因素之疾病，且被假設為引起ALS發病機制之多種機制包括蛋白質降解功能障礙、麩胺酸興奮毒性、粒線體功能障礙、細胞凋亡、氧化應激、發炎、蛋白質錯誤折疊及聚集、異常RNA代謝及改變之基因表現。
約10%之ALS病例具有疾病家族史，且此等患者稱為家族性ALS (fALS)或遺傳性患者，通常具有孟德爾顯性遺傳模式及高外顯率。其餘(約90%-95%)分類為散發性ALS (sALS)，因為其與有記載之家族史無關，其被認為係由其他風險因素引起，包括環境因素、遺傳多態性、體細胞突變，以及可能的基因-環境相互作用。在大多數情況下，家族性(或遺傳性) ALS作為體染色體顯性疾病遺傳，但存在具有體染色體隱性及X連鎖遺傳及不完全外顯率之譜系。散發性及家族性形式在臨床上無法區分，表明共同之發病機制。ALS中運動神經元選擇性死亡之確切原因仍然難以捉摸。在理解fALS中之遺傳因素方面取得的進展可揭示該疾病之兩種形式。
最近，對ALS之遺傳原因之研究及理解的爆炸式增長已導致現在已知引起fALS之超過10種不同基因中之突變的發現。在編碼Cu/Zn超氧化物歧化酶1 (SOD1；約20%) (Rosen DR等人， Nature, 1993, 362, 59-62)、肉瘤融合/脂肪肉瘤轉譯(fused in sarcoma/translated in liposarcoma，FUS /TLS；1-5%)及TDP-43 (TARDBP；1-5%)之基因中發現最常見者。最近，C9orf72基因中之六核苷酸重複擴增(GGGGCC) n經鑑別為西方群體中fALS之最常見原因(約40%) (Renton等人， Nat. Neurosci., 2014, 17, 17-23綜述)。ALS中突變之其他基因包括alsin (ALS2)、senataxin (SETX)、囊泡相關膜蛋白(VAPB)、血管生成素(ANG)。fALS基因控制不同細胞機制，此表明ALS之發病機制為複雜的，且可能與最終導致運動神經元退化之若干不同過程有關。
SOD1係在哺乳動物中鑑別及表徵之三種人類超氧化物歧化酶之一：銅-鋅超氧化物歧化酶(Cu/ZnSOD或SOD1)、錳超氧化物歧化酶(MnSOD或SOD2)及細胞外超氧化物歧化酶(ECSOD或SOD3)。SOD1係每個次單元具有一個銅結合位點及一個鋅結合位點之153個殘基多肽之32 kDa同二聚體，其由人類21號染色體上之SOD1基因(GeneBank登錄號：NM_000454.4)編碼(參見表19)。SOD1催化超氧化物陰離子(O 2 −)在結合之銅離子處反應成分子氧(O 2)及過氧化氫(H 2O 2)。SOD1之細胞內濃度較高(在10至100 μM範圍內)，佔中樞神經系統(CNS)中總蛋白質含量之1%。該蛋白質不僅定位於細胞質中，而且定位於真核細胞中之細胞核、溶酶體、過氧化物酶體及粒線體膜間隙中(Lindenau J等人， Glia, 2000, 29, 25-34)。不希望受理論束縛，據信在一些情況下，在SOD1-ALS中，超氧化物歧化酶1 (SOD1)之突變導致在運動神經元中形成不溶性SOD1聚集物且導致神經退化。
15-20%之fALS患者及1-2%之所有ALS病例攜帶SOD1基因突變。目前，已發現分佈在整個153個胺基酸之SOD1多肽中之至少170種不同突變引起ALS，且更新清單可在ALS線上基因資料庫(ALSOD)中找到(Wroe R等人， Amyotroph Lateral Scler., 2008, 9, 249-250)。表53列出ALS中之SOD1突變之一些實例。此等突變主要為單胺基酸取代(亦即錯義突變)，但亦存在缺失、插入及C末端截短。不同SOD1突變顯示不同地理分佈模式。舉例而言，在患有由SOD1基因突變引起之ALS之所有美國人中，約一半具有特定突變Ala4Val (或A4V)。A4V突變通常與更嚴重之徵象及症狀相關。I113T突變係迄今為止在英國最常見之突變。歐洲最普遍之突變係D90A取代。 表53. ALS中之SOD1突變之實例
突變
外顯子1 (220bp) Q22L；E21K，G；F20C；N19S；G16A，S；V14M，S；G12R；G10G，V，R；L8Q，V；V7E；C6G，F；V5L；A4T，V，S
外顯子2 (97bp) T54R；E49K；H48R，Q；V47F，A；H46R；F45C；H43R；G41S，D；G37R；V29，insA
外顯子3 (70bp) D76Y，V；G72S，C；L67R；P66A；N65S；S59I，S
外顯子4 (118bp) D124G，V；V118L，InsAAAAC；L117V；T116T；R115G；G114A；I113T，F；I112M，T；G108V；L106V，F；S106L，delTCACTC；I104F；D101G，Y，H，N；E100G，K；I99V；V97L，M；D96N，V；A95T，V；G93S，V，A，C，R，D；D90V，A；A89T，V；T88delACTGCTGAC；V87A，M；N86I，S，D，K；G85R，S；L84V，F；H80R
外顯子5 (461bp) I151T，S；I149T；V148I，G；G147D，R；C146R，終止；A145T，G；L144F，S；G141E，終止；A140A，G；N139D，K，H，N；G138E；T137R；S134N；E133V，delGAA、insTT；E132insTT；G127R，InsTGGG；L126S，delITT，終止；D126，delTT
為研究與SOD1基因缺陷相關之神經元死亡機制，在此項技術中開發了若干 SOD1關聯之ALS之囓齒動物模型，其表現具有不同突變(包括錯義突變、小缺失或插入)之人類SOD1基因。ALS小鼠模型之一些實例包括SOD1 G93A、SOD1 A4V、SOD1 G37R、SOD1 G85R、SOD1 D90A、SOD1 L84V、SOD1 I113T、SOD1 H36R/H48Q、SOD1 G127X、SOD1 L126X及SOD1 L126delTT。存在兩種攜帶兩種不同人類SOD1突變之轉殖基因大鼠模型：SOD1 H46R及SOD1 G93R。此等囓齒動物ALS模型可發展出類似於人類ALS患者之肌肉無力及反映人類疾病之若干特徵之其他致病特徵，具體而言，脊髓運動神經元之選擇性死亡、運動神經元中蛋白質包涵體之聚集及小神經膠質細胞活化。此項技術中熟知，基因轉殖囓齒動物係人類 SOD1相關之ALS疾病之良好模型且提供用於研究疾病發病機制及開發疾病治療之模型。
動物及細胞模型中之研究展示，SOD1致病變異體藉由功能獲得引起ALS。亦即，超氧化物歧化酶在藉由SOD1突變改變時獲得新的但有害之性質。舉例而言，ALS中之一些SOD1突變變異體藉由破壞氧化還原循環來增加氧化應激(例如，增加的有毒超氧自由基之積累)。其他研究亦指示，ALS中之一些SOD1突變變異體可能獲得不依賴於其正常生理功能之毒性性質(諸如錯誤折疊之SOD1變異體之異常聚集)。在異常氧化還原化學模型中，突變體SOD1係不穩定的，且經由異常化學與非習用受質相互作用，導致活性含氧物(ROS)過量產生。在蛋白質毒性模型中，不穩定、錯誤折疊之SOD1聚集成細胞質包涵體，從而隔離對細胞過程至關重要之蛋白質。此兩個假設並不相互排斥。已證明，結合活性位點中之金屬的所選組胺酸殘基之氧化介導SOD1聚集。
聚集之突變體SOD1蛋白亦可誘導粒線體功能障礙(Vehvilainen P等人， Front Cell Neurosci., 2014, 8, 126)、軸突轉運受損、RNA代謝異常、神經膠質細胞病理學及麩胺酸興奮毒性。在一些散發性ALS病例中，在患病運動神經元中發現錯誤折疊之野生型SOD1蛋白，其形成類似於家族性ALS關聯之SOD1變異體之「毒性構形」(Rotunno MS及Bosco DA, Front Cell Neurosci., 2013, 16, 7, 253)。此類證據表明，ALS為類似於其他神經退化疾病(諸如阿茲海默氏病及帕金森氏病)之蛋白質錯誤折疊疾病。
目前，對於罹患ALS之患者，尚無治癒性治療。直到最近，唯一經FDA批准之藥物為利魯唑(Riluzole) (亦稱為利魯特(Rilutek))，其係麩胺酸釋放抑制劑，對ALS具有中等效果，若服用18個月，則僅將存活期延長2-3個月。不幸的是，服用利魯唑之患者未經歷疾病進展之任何減緩或肌肉功能之改良。因此，利魯唑不提供治癒，或甚至不提供有效治療。2017年，FDA批准Radicava (依達拉奉(edaravone))用於治療ALS，為22年來首次獲批。Radicava靜脈內投與且用作自由基清除劑及抗氧化劑，已證明可減緩疾病進展。在137名患者之臨床3期試驗(NCT01492686)中，如與服用安慰劑之彼等患者相比，且如根據修訂的ALS功能評定量表(ALSFRS-R)上之評分所確定，Radicava減緩了身體功能之衰退(編寫組；依達拉奉(MCI-186) ALS 19研究組 Lancet Neurol.2017年7月;16(7):505-512)。Radicava之批准被視為在ALS治療方面的進步，然而其仍不能治癒。研究人員繼續尋找更好的治療劑。
抑制異常SOD1蛋白聚集之一種方法係沉默/抑制ALS中之SOD1基因表現。據報導，用於突變對偶基因之特異性基因沉默之小干擾RNA在治療上對fALS之治療有益(例如，Ralgh GS等人， Nat. Medicine, 2005, 11(4), 429-433；及Raoul C等人， Nat. Medicine, 2005, 11(4), 423-428；及Maxwell MM等人， PNAS, 2004, 101(9), 3178-3183；及Ding H等人， China Medical J., 2011, 124(1), 106-110；及Scharz DS等人， Plos Genet., 2006, 2(9), e140；其中每一者之內容以全文引用之方式併入本文)。
此項技術中教示了靶向SOD1基因且調節ALS中之SOD1表現的許多其他RNA治療劑，此類基於RNA之劑包括反義寡核苷酸及雙股小干擾RNA。參見例如Wang H等人， J Biol. Chem., 2008, 283(23), 15845-15852；美國專利第7,498,316號；第7,632,938號；第7,678,895號；第7,951,784號；第7,977,314號；第8,183,219號；第8,309,533號及第8,586,554號；及美國專利公開案第2006/0229268號及第2011/0263680號；其中每一者之內容以全文引用之方式併入本文。
本揭示案採用病毒載體(諸如腺相關病毒(AAV)載體)將siRNA或SOD1靶向多核苷酸高效遞送至細胞中。包含RNAi分子(例如本揭示案之siRNA分子)之AAV載體可增加活性劑遞送至運動神經元中。SOD1靶向多核苷酸可能能夠顯著抑制細胞內之SOD1基因表現(例如mRNA水準)；因此，改善SOD1表現誘導之細胞內之應激，諸如蛋白質聚集及包涵體形成、自由基增加、粒線體功能障礙及RNA代謝。
此類SOD1靶向多核苷酸可用於治療ALS。根據本揭示案，提供了用於治療及/或改善患者之ALS之方法，其包含向患者投與有效量之至少一種編碼一或多種siRNA之SOD1靶向多核苷酸至細胞中且允許抑制/沉默SOD1基因表現。 腺相關病毒(AAV)載體
本文尤其描述了包含分離之例如重組之病毒顆粒，例如AAV顆粒，以用於遞送例如載體化遞送多核苷酸(例如SOD1靶向siRNA)之組成物，以及製備及使用其之方法。腺相關病毒(AAV)係細小病毒科(Parvoviridae)之小無包膜二十面體衣殼病毒，其特徵在於單股DNA病毒基因體。細小病毒科病毒由兩個亞科組成：感染脊椎動物之細小病毒亞科及感染無脊椎動物之濃核病毒亞科(Densovirinae)。細小病毒科包括依賴病毒屬(Dependovirus)，其包括AAV，能夠在脊椎動物宿主中複製，包括但不限於人類、靈長類動物、牛、犬、馬及綿羊物種。
細小病毒及細小病毒科之其他成員概括描述於Kenneth I. Berns, 「Parvoviridae: The Viruses and Their Replication」，第69章，Fields Virology (第3版，1996)，其內容以全文引用之方式併入。
已證明AAV被用作生物工具，因為其結構相對簡單，它們能夠感染廣泛之細胞(包括靜止及分裂細胞)而不整合至宿主基因體中且不複製，以及它們相對良性之免疫原性特徵。病毒之基因體可經操縱以含有用於組裝功能重組病毒或病毒顆粒之最少組分，其負載有所需酬載或經工程化以靶向特定組織且表現或遞送所需酬載。病毒之基因體可經修飾以含有用於組裝功能重組病毒或病毒顆粒之最少組分，其負載有所需核酸構築體或酬載或經工程化以表現或遞送所需核酸構築體或酬載，例如編碼siRNA之多核苷酸，例如可遞送至靶細胞、組織或生物體之SOD1靶向siRNA。在一些實施例中，靶細胞係CNS細胞。在一些實施例中，靶組織係CNS組織。靶CNS組織可為腦組織。在一些實施例中，CNS區域為腦或脊髓區域，例如實質、皮質、黑質、小腦尾狀核、紋狀體、胼胝體、小腦、腦幹尾狀殼核、視丘、上丘、脊髓或其組合。
基因療法為ALS及共享單基因病因之疾病(諸如高歇氏病(Gaucher disease)及路易氏體失智及相關病症)提供替代方法。由於許多有利特徵，AAV通常用於基因治療方法中。不希望受理論束縛，據信在一些實施例中，表現載體，例如腺相關病毒載體(AAV)或AAV顆粒，例如本文所述之AAV顆粒，可用於投與及/或遞送siRNA (例如，SOD1靶向siRNA)，以達成持續之高濃度，相對於非AAV療法，允許更持久之功效、更少劑量治療、廣泛生物分佈及/或更一致水準之siRNA。
如下文一些實例所示，本文所述之某些AAV衣殼變異體展示出優於野生型AAV9之多種優點，包括(i)靜脈內投與後透過血腦障壁之穿透性增加，(ii)在多個腦區域分佈更廣，例如額葉皮質、感覺皮質、運動皮質、殼核、視丘、小腦皮質、齒狀核、尾狀核及/或海馬體，及/或(iii)多個腦區域之酬載表現升高。不希望受理論束縛，據信此等優點可能部分歸因於AAV衣殼變異體經由腦脈管系統之散佈。在一些實施例中，本文所述之AAV衣殼增強了酬載，例如編碼siRNA之多核苷酸，例如如本文所述之SOD1靶向siRNA，向腦的多個區域之遞送，包括例如額葉皮質、感覺皮質、運動皮質、殼核、視丘、小腦皮質、齒狀核、尾狀核及/或海馬體。在一些實施例中，增強酬載(例如本文所述之SOD1靶向siRNA)對CNS中之多種細胞類型(例如神經元、寡樹突細胞及/或神經膠質細胞)之表現。不希望受理論束縛，用於載體化遞送本文所述之SOD1靶向siRNA之包含AAV衣殼多肽(例如本文所述之AAV衣殼變異體)之AAV顆粒可導致透過血腦障壁之穿透性增加，例如在靜脈內投與後，及/或SOD1靶向siRNA在中樞神經系統(例如腦及脊髓)中之生物分佈增加。 II. 組 成物 載體
在一些實施例中，本文所述之siRNA分子可插入載體(諸如質體或病毒載體)中或由其編碼。較佳地，siRNA分子插入病毒載體中或由其編碼。
病毒載體可為疱疹病毒(HSV)載體、反轉錄病毒載體、腺病毒載體、腺相關病毒載體、慢病毒載體及諸如此類。在一些特定實施例中，病毒載體為AAV載體。 腺相關病毒(AAV)顆粒
AAV之基因體長度為約5,000個核苷酸，其含有編碼負責複製之蛋白質(Rep)及衣殼結構蛋白(Cap)之兩個開放閱讀框。開放閱讀框側接有兩個反向末端重複(ITR)序列，其用作病毒基因體之複製起點。野生型AAV病毒基因體包含兩個開放閱讀框之核苷酸序列，一個用於四種非結構Rep蛋白(Rep78、Rep68、Rep52、Rep40，由Rep基因編碼)，一個用於三種衣殼或結構蛋白(VP1、VP2、VP3，由衣殼基因或Cap基因編碼)。Rep蛋白對於複製及包裝很重要，而衣殼蛋白經組裝以便產生AAV之蛋白外殼或AAV衣殼。選擇式剪接及替代性起始密碼子及啟動子可自單一開放閱讀框生成四種不同的Rep蛋白且自單一開放閱讀框生成三種衣殼蛋白。儘管因AAV血清型而異，但作為非限制性實例，對於AAV9/hu.14 (US 7,906,111之SEQ ID NO: 123，其內容以全文引用之方式併入本文；SEQ ID NO: 138，表2，本文)，VP1係指胺基酸1-736，VP2係指胺基酸138-736，且VP3係指胺基酸203-736。作為另一非限制性實例，VP1係指根據SEQ ID NO: 1編號之胺基酸1-743，VP2係指根據SEQ ID NO: 1編號之胺基酸138-743，且VP3係指根據SEQ ID NO: 1編號之胺基酸203-743。作為另一非限制性實例，VP1係指根據SEQ ID NO: 981或982編號之胺基酸1-742，VP2係指根據SEQ ID NO: 981或982編號之胺基酸138-742，且VP3係指根據SEQ ID NO: 981或982編號之胺基酸203-742。換句話說，VP1係全長衣殼序列，而VP2及VP3係整體中較短之組成部分。結果，VP3區域中序列之變化亦為VP1及VP2之變化，然而，與親本序列相比，VP3之百分比差異最大，因為其為三個序列中之最短序列。儘管此處描述了與胺基酸序列有關之內容，但編碼此等蛋白質之核酸序列亦可類似地描述。三種衣殼蛋白一起組裝產生AAV衣殼蛋白。儘管不希望受理論束縛，AAV衣殼蛋白典型地包含莫耳比為1:1:10之VP1:VP2:VP3。如本文所用，「AAV血清型」主要由AAV衣殼定義。在一些情況下，ITR亦尤其藉由AAV血清型(例如，AAV2/9)來描述。
AAV載體通常需要共輔助子(例如腺病毒)以在細胞中經歷生產性感染。在不存在此類輔助功能之情況下，AAV病毒體基本上進入宿主細胞，但不整合至細胞之基因體中。
由於若干獨特特徵，已針對遞送基因治療劑研究AAV載體。特徵之非限制性實例包括(i)感染分裂細胞及非分裂細胞兩者之能力；(ii)感染性之廣泛宿主範圍，包括人類細胞；(iii)野生型AAV未與任何疾病相關且未證明在感染細胞中複製；(iv)缺乏針對載體之細胞介導之免疫反應，及(v)宿主染色體中之非整合性質，由此降低長期遺傳改變之可能性。此外，用AAV載體感染對改變細胞基因表現模式之影響最小(Stilwell及Samulski等人，Biotechniques, 2003, 34, 148，其內容以全文引用之方式併入本文)。
通常，用於遞送siRNA (例如，如本文所述之SOD1靶向siRNA)之AAV顆粒可為重組病毒載體，其係複製缺陷的，因為其缺乏編碼病毒基因體內之功能性Rep及Cap蛋白之序列。在一些情況下，缺陷AAV基因體可能缺乏大多數或所有編碼序列且基本上僅含有一個或兩個AAV ITR序列及酬載序列。在某些實施例中，病毒基因體編碼用於靶向SOD1之siRNA。
在一些實施例中，本揭示案之AAV顆粒可引入哺乳動物細胞中。
AAV顆粒可經修飾以增強遞送效率。本揭示案之此類經修飾之AAV顆粒可高效地包裝且可用於以高頻率且以最小毒性成功感染靶細胞。
在其他實施例中，本揭示案之AAV顆粒可用於將siRNA (例如，如本文所述之靶向SOD1之siRNA)遞送至中樞神經系統(參見例如，美國專利第6,180,613號；其內容以全文引用之方式整體併入本文)或CNS之特定組織。
應理解，本文所述之組成物可具有額外保守或非必需胺基酸取代，該等取代對其功能無實質性影響。 AAV 衣殼及其變異體
在一些實施例中，AAV顆粒(例如，用於載體化遞送本文所述之siRNA (例如，用於靶向SOD1之siRNA)之AAV顆粒)可包含AAV衣殼多肽，例如AAV衣殼變異體。
在一些實施例中，AAV衣殼多肽(例如AAV衣殼變異體)允許在靜脈內投與後穿透血腦障壁。在一些實施例中，AAV衣殼(例如AAV衣殼變異體)允許在聚焦超音波(FUS)，例如FUS結合微泡之靜脈內投與(FUS-MB)，或MRI引導之FUS結合靜脈內投與後透過血腦障壁。在一些實施例中，AAV衣殼(例如AAV衣殼變異體)允許增加分佈至腦區域。在一些實施例中，腦區域包含額葉皮質、感覺皮質、運動皮質、尾狀核、齒狀核、小腦皮質、大腦皮質、腦幹、海馬體、視丘、殼核或其組合。在一些實施例中，相對於背根神經節(DRG)中之轉導，AAV衣殼(例如AAV衣殼變異體)允許腦區域中之優先轉導。
在一些實施例中，AAV衣殼多肽(例如AAV衣殼變異體)允許增加分佈至脊髓區域。在一些實施例中，脊髓區域包含頸脊髓區域、胸脊髓區域及/或腰脊髓區域。
在一些實施例中，AAV衣殼多肽(例如AAV衣殼變異體)包含VOY101衣殼多肽、PHPeB衣殼多肽、AAVPHP.B (PHP.B)衣殼多肽、AAVPHP.N (PHP.N)衣殼多肽、AAV1衣殼多肽、AAV2衣殼多肽、AAV5衣殼多肽、AAV9衣殼多肽、AAV9 K449R衣殼多肽、AAVrh10衣殼多肽或其功能變異體。在一些實施例中，AAV衣殼多肽(例如AAV衣殼變異體)包含表1中AAV衣殼多肽中之任一者之胺基酸序列，或與其實質上一致(例如，具有至少70%、75%、80%、85%、90%、92%、95%、97%、98%或99%序列一致性)的胺基酸序列。在一些實施例中，編碼AAV衣殼多肽之核苷酸序列包含表1中之核苷酸序列中之任一者，或與其實質上一致(例如，具有至少70%、75%、80%、85%、90%、92%、95%、97%、98%或99%序列一致性)之核苷酸序列。 表1. 示 範性全長衣殼序列
描 述 SEQ ID NO: 序列資訊
VOY101 1 MAADGYLPDWLEDNLSEGIREWWALKPGAPQPKANQQHQDNARGLVLPGYKYLGPGNGLDKGEPVNAADAAALEHDKAYDQQLKAGDNPYLKYNHADAEFQERLKEDTSFGGNLGRAVFQAKKRLLEPLGLVEEAAKTAPGKKRPVEQSPQEPDSSAGIGKSGAQPAKKRLNFGQTGDTESVPDPQPIGEPPAAPSGVGSLTMASGGGAPVADNNEGADGVGSSSGNWHCDSQWLGDRVITTSTRTWALPTYNNHLYKQISNSTSGGSSNDNAYFGYSTPWGYFDFNRFHCHFSPRDWQRLINNNWGFRPKRLNFKLFNIQVKEVTDNNGVKTIANNLTSTVQVFTDSDYQLPYVLGSAHEGCLPPFPADVFMIPQYGYLTLNDGSQAVGRSSFYCLEYFPSQMLRTGNNFQFSYEFENVPFHSSYAHSQSLDRLMNPLIDQYLYYLSKTINGSGQNQQTLKFSVAGPSNMAVQGRNYIPGPSYRQQRVSTTVTQNNNSEFAWPGASSWALNGRNSLMNPGPAMASHKEGEDRFFPLSGSLIFGKQGTGRDNVDADKVMITNEEEIKTTNPVATESYGQVATNHQSDGTLAVPFKAQAQTGWVQNQGILPGMVWQDRDVYLQGPIWAKIPHTDGNFHPSPLMGGFGMKHPPPQILIKNTPVPADPPTAFNKDKLNSFITQYSTGQVSVEIEWELQKENSKRWNPEIQYTSNYYKSNNVEFAVNTEGVYSEPRPIGTRYLTRNL
AAV9/hu.14 K449R 11 MAADGYLPDWLEDNLSEGIREWWALKPGAPQPKANQQHQDNARGLVLPGYKYLGPGNGLDKGEPVNAADAAALEHDKAYDQQLKAGDNPYLKYNHADAEFQERLKEDTSFGGNLGRAVFQAKKRLLEPLGLVEEAAKTAPGKKRPVEQSPQEPDSSAGIGKSGAQPAKKRLNFGQTGDTESVPDPQPIGEPPAAPSGVGSLTMASGGGAPVADNNEGADGVGSSSGNWHCDSQWLGDRVITTSTRTWALPTYNNHLYKQISNSTSGGSSNDNAYFGYSTPWGYFDFNRFHCHFSPRDWQRLINNNWGFRPKRLNFKLFNIQVKEVTDNNGVKTIANNLTSTVQVFTDSDYQLPYVLGSAHEGCLPPFPADVFMIPQYGYLTLNDGSQAVGRSSFYCLEYFPSQMLRTGNNFQFSYEFENVPFHSSYAHSQSLDRLMNPLIDQYLYYLSRTINGSGQNQQTLKFSVAGPSNMAVQGRNYIPGPSYRQQRVSTTVTQNNNSEFAWPGASSWALNGRNSLMNPGPAMASHKEGEDRFFPLSGSLIFGKQGTGRDNVDADKVMITNEEEIKTTNPVATESYGQVATNHQSAQAQAQTGWVQNQGILPGMVWQDRDVYLQGPIWAKIPHTDGNFHPSPLMGGFGMKHPPPQILIKNTPVPADPPTAFNKDKLNSFITQYSTGQVSVEIEWELQKENSKRWNPEIQYTSNYYKSNNVEFAVNTEGVYSEPRPIGTRYLTRNL
AAV9/hu.14 WT (胺基酸) 138 MAADGYLPDWLEDNLSEGIREWWALKPGAPQPKANQQHQDNARGLVLPGYKYLGPGNGLDKGEPVNAADAAALEHDKAYDQQLKAGDNPYLKYNHADAEFQERLKEDTSFGGNLGRAVFQAKKRLLEPLGLVEEAAKTAPGKKRPVEQSPQEPDSSAGIGKSGAQPAKKRLNFGQTGDTESVPDPQPIGEPPAAPSGVGSLTMASGGGAPVADNNEGADGVGSSSGNWHCDSQWLGDRVITTSTRTWALPTYNNHLYKQISNSTSGGSSNDNAYFGYSTPWGYFDFNRFHCHFSPRDWQRLINNNWGFRPKRLNFKLFNIQVKEVTDNNGVKTIANNLTSTVQVFTDSDYQLPYVLGSAHEGCLPPFPADVFMIPQYGYLTLNDGSQAVGRSSFYCLEYFPSQMLRTGNNFQFSYEFENVPFHSSYAHSQSLDRLMNPLIDQYLYYLSKTINGSGQNQQTLKFSVAGPSNMAVQGRNYIPGPSYRQQRVSTTVTQNNNSEFAWPGASSWALNGRNSLMNPGPAMASHKEGEDRFFPLSGSLIFGKQGTGRDNVDADKVMITNEEEIKTTNPVATESYGQVATNHQSAQAQAQTGWVQNQGILPGMVWQDRDVYLQGPIWAKIPHTDGNFHPSPLMGGFGMKHPPPQILIKNTPVPADPPTAFNKDKLNSFITQYSTGQVSVEIEWELQKENSKRWNPEIQYTSNYYKSNNVEFAVNTEGVYSEPRPIGTRYLTRNL
AAV9/hu.14 WT (DNA) 137 ATGGCTGCCGATGGTTATCTTCCAGATTGGCTCGAGGACAACCTTAGTGAAGGAATTCGCGAGTGGTGGGCTTTGAAACCTGGAGCCCCTCAACCCAAGGCAAATCAACAACATCAAGACAACGCTCGAGGTCTTGTGCTTCCGGGTTACAAATACCTTGGACCCGGCAACGGACTCGACAAGGGGGAGCCGGTCAACGCAGCAGACGCGGCGGCCCTCGAGCACGACAAGGCCTACGACCAGCAGCTCAAGGCCGGAGACAACCCGTACCTCAAGTACAACCACGCCGACGCCGAGTTCCAGGAGCGGCTCAAAGAAGATACGTCTTTTGGGGGCAACCTCGGGCGAGCAGTCTTCCAGGCCAAAAAGAGGCTTCTTGAACCTCTTGGTCTGGTTGAGGAAGCGGCTAAGACGGCTCCTGGAAAGAAGAGGCCTGTAGAGCAGTCTCCTCAGGAACCGGACTCCTCCGCGGGTATTGGCAAATCGGGTGCACAGCCCGCTAAAAAGAGACTCAATTTCGGTCAGACTGGCGACACAGAGTCAGTCCCAGACCCTCAACCAATCGGAGAACCTCCCGCAGCCCCCTCAGGTGTGGGATCTCTTACAATGGCTTCAGGTGGTGGCGCACCAGTGGCAGACAATAACGAAGGTGCCGATGGAGTGGGTAGTTCCTCGGGAAATTGGCATTGCGATTCCCAATGGCTGGGGGACAGAGTCATCACCACCAGCACCCGAACCTGGGCCCTGCCCACCTACAACAATCACCTCTACAAGCAAATCTCCAACAGCACATCTGGAGGATCTTCAAATGACAACGCCTACTTCGGCTACAGCACCCCCTGGGGGTATTTTGACTTCAACAGATTCCACTGCCACTTCTCACCACGTGACTGGCAGCGACTCATCAACAACAACTGGGGATTCCGGCCTAAGCGACTCAACTTCAAGCTCTTCAACATTCAGGTCAAAGAGGTTACGGACAACAATGGAGTCAAGACCATCGCCAATAACCTTACCAGCACGGTCCAGGTCTTCACGGACTCAGACTATCAGCTCCCGTACGTGCTCGGGTCGGCTCACGAGGGCTGCCTCCCGCCGTTCCCAGCGGACGTTTTCATGATTCCTCAGTACGGGTATCTGACGCTTAATGATGGAAGCCAGGCCGTGGGTCGTTCGTCCTTTTACTGCCTGGAATATTTCCCGTCGCAAATGCTAAGAACGGGTAACAACTTCCAGTTCAGCTACGAGTTTGAGAACGTACCTTTCCATAGCAGCTACGCTCACAGCCAAAGCCTGGACCGACTAATGAATCCACTCATCGACCAATACTTGTACTATCTCTCAAAGACTATTAACGGTTCTGGACAGAATCAACAAACGCTAAAATTCAGTGTGGCCGGACCCAGCAACATGGCTGTCCAGGGAAGAAACTACATACCTGGACCCAGCTACCGACAACAACGTGTCTCAACCACTGTGACTCAAAACAACAACAGCGAATTTGCTTGGCCTGGAGCTTCTTCTTGGGCTCTCAATGGACGTAATAGCTTGATGAATCCTGGACCTGCTATGGCCAGCCACAAAGAAGGAGAGGACCGTTTCTTTCCTTTGTCTGGATCTTTAATTTTTGGCAAACAAGGAACTGGAAGAGACAACGTGGATGCGGACAAAGTCATGATAACCAACGAAGAAGAAATTAAAACTACTAACCCGGTAGCAACGGAGTCCTATGGACAAGTGGCCACAAACCACCAGAGTGCCCAAGCACAGGCGCAGACCGGCTGGGTTCAAAACCAAGGAATACTTCCGGGTATGGTTTGGCAGGACAGAGATGTGTACCTGCAAGGACCCATTTGGGCCAAAATTCCTCACACGGACGGCAACTTTCACCCTTCTCCGCTGATGGGAGGGTTTGGAATGAAGCACCCGCCTCCTCAGATCCTCATCAAAAACACACCTGTACCTGCGGATCCTCCAACGGCCTTCAACAAGGACAAGCTGAACTCTTTCATCACCCAGTATTCTACTGGCCAAGTCAGCGTGGAGATCGAGTGGGAGCTGCAGAAGGAAAACAGCAAGCGCTGGAACCCGGAGATCCAGTACACTTCCAACTATTACAAGTCTAATAATGTTGAATTTGCTGTTAATACTGAAGGTGTATATAGTGAACCCCGCCCCATTGGCACCAGATACCTGACTCGTAATCTGTAA
PHP.eB (胺基酸) 10 MAADGYLPDWLEDNLSEGIREWWALKPGAPQPKANQQHQDNARGLVLPGYKYLGPGNGLDKGEPVNAADAAALEHDKAYDQQLKAGDNPYLKYNHADAEFQERLKEDTSFGGNLGRAVFQAKKRLLEPLGLVEEAAKTAPGKKRPVEQSPQEPDSSAGIGKSGAQPAKKRLNFGQTGDTESVPDPQPIGEPPAAPSGVGSLTMASGGGAPVADNNEGADGVGSSSGNWHCDSQWLGDRVITTSTRTWALPTYNNHLYKQISNSTSGGSSNDNAYFGYSTPWGYFDFNRFHCHFSPRDWQRLINNNWGFRPKRLNFKLFNIQVKEVTDNNGVKTIANNLTSTVQVFTDSDYQLPYVLGSAHEGCLPPFPADVFMIPQYGYLTLNDGSQAVGRSSFYCLEYFPSQMLRTGNNFQFSYEFENVPFHSSYAHSQSLDRLMNPLIDQYLYYLSRTINGSGQNQQTLKFSVAGPSNMAVQGRNYIPGPSYRQQRVSTTVTQNNNSEFAWPGASSWALNGRNSLMNPGPAMASHKEGEDRFFPLSGSLIFGKQGTGRDNVDADKVMITNEEEIKTTNPVATESYGQVATNHQSDGTLAVPFKAQAQTGWVQNQGILPGMVWQDRDVYLQGPIWAKIPHTDGNFHPSPLMGGFGMKHPPPQILIKNTPVPADPPTAFNKDKLNSFITQYSTGQVSVEIEWELQKENSKRWNPEIQYTSNYYKSNNVEFAVNTEGVYSEPRPIGTRYLTRNL
PHP.B (胺基酸) 12 MAADGYLPDWLEDNLSEGIREWWALKPGAPQPKANQQHQDNARGLVLPGYKYLGPGNGLDKGEPVNAADAAALEHDKAYDQQLKAGDNPYLKYNHADAEFQERLKEDTSFGGNLGRAVFQAKKRLLEPLGLVEEAAKTAPGKKRPVEQSPQEPDSSAGIGKSGAQPAKKRLNFGQTGDTESVPDPQPIGEPPAAPSGVGSLTMASGGGAPVADNNEGADGVGSSSGNWHCDSQWLGDRVITTSTRTWALPTYNNHLYKQISNSTSGGSSNDNAYFGYSTPWGYFDFNRFHCHFSPRDWQRLINNNWGFRPKRLNFKLFNIQVKEVTDNNGVKTIANNLTSTVQVFTDSDYQLPYVLGSAHEGCLPPFPADVFMIPQYGYLTLNDGSQAVGRSSFYCLEYFPSQMLRTGNNFQFSYEFENVPFHSSYAHSQSLDRLMNPLIDQYLYYLSRTINGSGQNQQTLKFSVAGPSNMAVQGRNYIPGPSYRQQRVSTTVTQNNNSEFAWPGASSWALNGRNSLMNPGPAMASHKEGEDRFFPLSGSLIFGKQGTGRDNVDADKVMITNEEEIKTTNPVATESYGQVATNHQSAQTLAVPFKAQAQTGWVQNQGILPGMVWQDRDVYLQGPIWAKIPHTDGNFHPSPLMGGFGMKHPPPQILIKNTPVPADPPTAFNKDKLNSFITQYSTGQVSVEIEWELQKENSKRWNPEIQYTSNYYKSNNVEFAVNTEGVYSEPRPIGTRYLTRNL
PHP.N (胺基酸) 13 MAADGYLPDWLEDNLSEGIREWWALKPGAPQPKANQQHQDNARGLVLPGYKYLGPGNGLDKGEPVNAADAAALEHDKAYDQQLKAGDNPYLKYNHADAEFQERLKEDTSFGGNLGRAVFQAKKRLLEPLGLVEEAAKTAPGKKRPVEQSPQEPDSSAGIGKSGAQPAKKRLNFGQTGDTESVPDPQPIGEPPAAPSGVGSLTMASGGGAPVADNNEGADGVGSSSGNWHCDSQWLGDRVITTSTRTWALPTYNNHLYKQISNSTSGGSSNDNAYFGYSTPWGYFDFNRFHCHFSPRDWQRLINNNWGFRPKRLNFKLFNIQVKEVTDNNGVKTIANNLTSTVQVFTDSDYQLPYVLGSAHEGCLPPFPADVFMIPQYGYLTLNDGSQAVGRSSFYCLEYFPSQMLRTGNNFQFSYEFENVPFHSSYAHSQSLDRLMNPLIDQYLYYLSRTINGSGQNQQTLKFSVAGPSNMAVQGRNYIPGPSYRQQRVSTTVTQNNNSEFAWPGASSWALNGRNSLMNPGPAMASHKEGEDRFFPLSGSLIFGKQGTGRDNVDADKVMITNEEEIKTTNPVATESYGQVATNHQSAQTLAVPFSNPAQTGWVQNQGILPGMVWQDRDVYLQGPIWAKIPHTDGNFHPSPLMGGFGMKHPPPQILIKNTPVPADPPTAFNKDKLNSFITQYSTGQVSVEIEWELQKENSKRWNPEIQYTSNYYKSNNVEFAVNTEGVYSEPRPIGTRYLTRNL
AAVrh10 (胺基酸) 14 MAADGYLPDWLEDNLSEGIREWWDLKPGAPKPKANQQKQDDGRGLVLPGYKYLGPFNGLDKGEPVNAADAAALEHDKAYDQQLKAGDNPYLRYNHADAEFQERLQEDTSFGGNLGRAVFQAKKRVLEPLGLVEEGAKTAPGKKRPVEPSPQRSPDSSTGIGKKGQQPAKKRLNFGQTGDSESVPDPQPIGEPPAGPSGLGSGTMAAGGGAPMADNNEGADGVGSSSGNWHCDSTWLGDRVITTSTRTWALPTYNNHLYKQISNGTSGGSTNDNTYFGYSTPWGYFDFNRFHCHFSPRDWQRLINNNWGFRPKRLNFKLFNIQVKEVTQNEGTKTIANNLTSTIQVFTDSEYQLPYVLGSAHQGCLPPFPADVFMIPQYGYLTLNNGSQAVGRSSFYCLEYFPSQMLRTGNNFEFSYQFEDVPFHSSYAHSQSLDRLMNPLIDQYLYYLSRTQSTGGTAGTQQLLFSQAGPNNMSAQAKNWLPGPCYRQQRVSTTLSQNNNSNFAWTGATKYHLNGRDSLVNPGVAMATHKDDEERFFPSSGVLMFGKQGAGKDNVDYSSVMLTSEEEIKTTNPVATEQYGVVADNLQQQNAAPIVGAVNSQGALPGMVWQNRDVYLQGPIWAKIPHTDGNFHPSPLMGGFGLKHPPPQILIKNTPVPADPPTTFSQAKLASFITQYSTGQVSVEIEWELQKENSKRWNPEIQYTSNYYKSTNVDFAVNTDGTYSEPRPIGTRYLTRNL
AAVrh10 (DNA) 15 ATGGCTGCCGATGGTTATCTTCCAGATTGGCTCGAGGACAACCTCTCTGAGGGCATTCGCGAGTGGTGGGACTTGAAACCTGGAGCCCCGAAACCCAAAGCCAACCAGCAAAAGCAGGACGACGGCCGGGGTCTGGTGCTTCCTGGCTACAAGTACCTCGGACCCTTCAACGGACTCGACAAGGGGGAGCCCGTCAACGCGGCGGACGCAGCGGCCCTCGAGCACGACAAGGCCTACGACCAGCAGCTCAAAGCGGGTGACAATCCGTACCTGCGGTATAACCACGCCGACGCCGAGTTTCAGGAGCGTCTGCAAGAAGATACGTCTTTTGGGGGCAACCTCGGGCGAGCAGTCTTCCAGGCCAAGAAGCGGGTTCTCGAACCTCTCGGTCTGGTTGAGGAAGGCGCTAAGACGGCTCCTGGAAAGAAGAGACCGGTAGAGCCATCACCCCAGCGTTCTCCAGACTCCTCTACGGGCATCGGCAAGAAAGGCCAGCAGCCCGCGAAAAAGAGACTCAACTTTGGGCAGACTGGCGACTCAGAGTCAGTGCCCGACCCTCAACCAATCGGAGAACCCCCCGCAGGCCCCTCTGGTCTGGGATCTGGTACAATGGCTGCAGGCGGTGGCGCTCCAATGGCAGACAATAACGAAGGCGCCGACGGAGTGGGTAGTTCCTCAGGAAATTGGCATTGCGATTCCACATGGCTGGGCGACAGAGTCATCACCACCAGCACCCGAACCTGGGCCCTCCCCACCTACAACAACCACCTCTACAAGCAAATCTCCAACGGGACTTCGGGAGGAAGCACCAACGACAACACCTACTTCGGCTACAGCACCCCCTGGGGGTATTTTGACTTTAACAGATTCCACTGCCACTTCTCACCACGTGACTGGCAGCGACTCATCAACAACAACTGGGGATTCCGGCCCAAGAGACTCAACTTCAAGCTCTTCAACATCCAGGTCAAGGAGGTCACGCAGAATGAAGGCACCAAGACCATCGCCAATAACCTTACCAGCACGATTCAGGTCTTTACGGACTCGGAATACCAGCTCCCGTACGTCCTCGGCTCTGCGCACCAGGGCTGCCTGCCTCCGTTCCCGGCGGACGTCTTCATGATTCCTCAGTACGGGTACCTGACTCTGAACAATGGCAGTCAGGCCGTGGGCCGTTCCTCCTTCTACTGCCTGGAGTACTTTCCTTCTCAAATGCTGAGAACGGGCAACAACTTTGAGTTCAGCTACCAGTTTGAGGACGTGCCTTTTCACAGCAGCTACGCGCACAGCCAAAGCCTGGACCGGCTGATGAACCCCCTCATCGACCAGTACCTGTACTACCTGTCTCGGACTCAGTCCACGGGAGGTACCGCAGGAACTCAGCAGTTGCTATTTTCTCAGGCCGGGCCTAATAACATGTCGGCTCAGGCCAAAAACTGGCTACCCGGGCCCTGCTACCGGCAGCAACGCGTCTCCACGACACTGTCGCAAAATAACAACAGCAACTTTGCCTGGACCGGTGCCACCAAGTATCATCTGAATGGCAGAGACTCTCTGGTAAATCCCGGTGTCGCTATGGCAACCCACAAGGACGACGAAGAGCGATTTTTTCCGTCCAGCGGAGTCTTAATGTTTGGGAAACAGGGAGCTGGAAAAGACAACGTGGACTATAGCAGCGTTATGCTAACCAGTGAGGAAGAAATTAAAACCACCAACCCAGTGGCCACAGAACAGTACGGCGTGGTGGCCGATAACCTGCAACAGCAAAACGCCGCTCCTATTGTAGGGGCCGTCAACAGTCAAGGAGCCTTACCTGGCATGGTCTGGCAGAACCGGGACGTGTACCTGCAGGGTCCTATCTGGGCCAAGATTCCTCACACGGACGGAAACTTTCATCCCTCGCCGCTGATGGGAGGCTTTGGACTGAAACACCCGCCTCCTCAGATCCTGATTAAGAATACACCTGTTCCCGCGGATCCTCCAACTACCTTCAGTCAAGCTAAGCTGGCGTCGTTCATCACGCAGTACAGCACCGGACAGGTCAGCGTGGAAATTGAATGGGAGCTGCAGAAAGAAAACAGCAAACGCTGGAACCCAGAGATTCAATACACTTCCAACTACTACAAATCTACAAATGTGGACTTTGCTGTTAACACAGATGGCACTTATTCTGAGCCTCGCCCCATCGGCACCCGTTACCTCACCCGTAATCTGTAA
AAV2 (胺基酸) 16 MAADGYLPDWLEDTLSEGIRQWWKLKPGPPPPKPAERHKDDSRGLVLPGYKYLGPFNGLDKGEPVNEADAAALEHDKAYDRQLDSGDNPYLKYNHADAEFQERLKEDTSFGGNLGRAVFQAKKRVLEPLGLVEEPVKTAPGKKRPVEHSPVEPDSSSGTGKAGQQPARKRLNFGQTGDADSVPDPQPLGQPPAAPSGLGTNTMATGSGAPMADNNEGADGVGNSSGNWHCDSTWMGDRVITTSTRTWALPTYNNHLYKQISSQSGASNDNHYFGYSTPWGYFDFNRFHCHFSPRDWQRLINNNWGFRPKRLNFKLFNIQVKEVTQNDGTTTIANNLTSTVQVFTDSEYQLPYVLGSAHQGCLPPFPADVFMVPQYGYLTLNNGSQAVGRSSFYCLEYFPSQMLRTGNNFTFSYTFEDVPFHSSYAHSQSLDRLMNPLIDQYLYYLSRTNTPSGTTTQSRLQFSQAGASDIRDQSRNWLPGPCYRQQRVSKTSADNNNSEYSWTGATKYHLNGRDSLVNPGPAMASHKDDEEKFFPQSGVLIFGKQGSEKTNVDIEKVMITDEEEIRTTNPVATEQYGSVSTNLQRGNRQAATADVNTQGVLPGMVWQDRDVYLQGPIWAKIPHTDGHFHPSPLMGGFGLKHPPPQILIKNTPVPANPSTTFSAAKFASFITQYSTGQVSVEIEWELQKENSKRWNPEIQYTSNYNKSVNVDFTVDTNGVYSEPRPIGTRYLTRNL
AAV2 (DNA) 17 ATGGCTGCCGATGGTTATCTTCCAGATTGGCTCGAGGACACTCTCTCTGAAGGAATAAGACAGTGGTGGAAGCTCAAACCTGGCCCACCACCACCAAAGCCCGCAGAGCGGCATAAGGACGACAGCAGGGGTCTTGTGCTTCCTGGGTACAAGTACCTCGGACCCTTCAACGGACTCGACAAGGGAGAGCCGGTCAACGAGGCAGACGCCGCGGCCCTCGAGCACGACAAAGCCTACGACCGGCAGCTCGACAGCGGAGACAACCCGTACCTCAAGTACAACCACGCCGACGCGGAGTTTCAGGAGCGCCTTAAAGAAGATACGTCTTTTGGGGGCAACCTCGGACGAGCAGTCTTCCAGGCGAAAAAGAGGGTTCTTGAACCTCTGGGCCTGGTTGAGGAACCTGTTAAGACGGCTCCGGGAAAAAAGAGGCCGGTAGAGCACTCTCCTGTGGAGCCAGACTCCTCCTCGGGAACCGGAAAGGCGGGCCAGCAGCCTGCAAGAAAAAGATTGAATTTTGGTCAGACTGGAGACGCAGACTCAGTACCTGACCCCCAGCCTCTCGGACAGCCACCAGCAGCCCCCTCTGGTCTGGGAACTAATACGATGGCTACAGGCAGTGGCGCACCAATGGCAGACAATAACGAGGGCGCCGACGGAGTGGGTAATTCCTCGGGAAATTGGCATTGCGATTCCACATGGATGGGCGACAGAGTCATCACCACCAGCACCCGAACCTGGGCCCTGCCCACCTACAACAACCACCTCTACAAACAAATTTCCAGCCAATCAGGAGCCTCGAACGACAATCACTACTTTGGCTACAGCACCCCTTGGGGGTATTTTGACTTCAACAGATTCCACTGCCACTTTTCACCACGTGACTGGCAAAGACTCATCAACAACAACTGGGGATTCCGACCCAAGAGACTCAACTTCAAGCTCTTTAACATTCAAGTCAAAGAGGTCACGCAGAATGACGGTACGACGACGATTGCCAATAACCTTACCAGCACGGTTCAGGTGTTTACTGACTCGGAGTACCAGCTCCCGTACGTCCTCGGCTCGGCGCATCAAGGATGCCTCCCGCCGTTCCCAGCAGACGTCTTCATGGTGCCACAGTATGGATACCTCACCCTGAACAACGGGAGTCAGGCAGTAGGACGCTCTTCATTTTACTGCCTGGAGTACTTTCCTTCTCAGATGCTGCGTACCGGAAACAACTTTACCTTCAGCTACACTTTTGAGGACGTTCCTTTCCACAGCAGCTACGCTCACAGCCAGAGTCTGGACCGTCTCATGAATCCTCTCATCGACCAGTACCTGTATTACTTGAGCAGAACAAACACTCCAAGTGGAACCACCACGCAGTCAAGGCTTCAGTTTTCTCAGGCCGGAGCGAGTGACATTCGGGACCAGTCTAGGAACTGGCTTCCTGGACCCTGTTACCGCCAGCAGCGAGTATCAAAGACATCTGCGGATAACAACAACAGTGAATACTCGTGGACTGGAGCTACCAAGTACCACCTCAATGGCAGAGACTCTCTGGTGAATCCGGGCCCGGCCATGGCAAGCCACAAGGACGATGAAGAAAAGTTTTTTCCTCAGAGCGGGGTTCTCATCTTTGGGAAGCAAGGCTCAGAGAAAACAAATGTGGACATTGAAAAGGTCATGATTACAGACGAAGAGGAAATCAGGACAACCAATCCCGTGGCTACGGAGCAGTATGGTTCTGTATCTACCAACCTCCAGAGAGGCAACAGACAAGCAGCTACCGCAGATGTCAACACACAAGGCGTTCTTCCAGGCATGGTCTGGCAGGACAGAGATGTGTACCTTCAGGGGCCCATCTGGGCAAAGATTCCACACACGGACGGACATTTTCACCCCTCTCCCCTCATGGGTGGATTCGGACTTAAACACCCTCCTCCACAGATTCTCATCAAGAACACCCCGGTACCTGCGAATCCTTCGACCACCTTCAGTGCGGCAAAGTTTGCTTCCTTCATCACACAGTACTCCACGGGACAGGTCAGCGTGGAGATCGAGTGGGAGCTGCAGAAGGAAAACAGCAAACGCTGGAATCCCGAAATTCAGTACACTTCCAACTACAACAAGTCTGTTAATGTGGACTTTACTGTGGACACTAATGGCGTGTATTCAGAGCCTCGCCCCATTGGCACCAGATACCTGACTCGTAATCTGTAA
AAV1 (胺基酸) 18 MAADGYLPDWLEDNLSEGIREWWDLKPGAPKPKANQQKQDDGRGLVLPGYKYLGPFNGLDKGEPVNAADAAALEHDKAYDQQLKAGDNPYLRYNHADAEFQERLQEDTSFGGNLGRAVFQAKKRVLEPLGLVEEGAKTAPGKKRPVEQSPQEPDSSSGIGKTGQQPAKKRLNFGQTGDSESVPDPQPLGEPPATPAAVGPTTMASGGGAPMADNNEGADGVGNASGNWHCDSTWLGDRVITTSTRTWALPTYNNHLYKQISSASTGASNDNHYFGYSTPWGYFDFNRFHCHFSPRDWQRLINNNWGFRPKRLNFKLFNIQVKEVTTNDGVTTIANNLTSTVQVFSDSEYQLPYVLGSAHQGCLPPFPADVFMIPQYGYLTLNNGSQAVGRSSFYCLEYFPSQMLRTGNNFTFSYTFEEVPFHSSYAHSQSLDRLMNPLIDQYLYYLNRTQNQSGSAQNKDLLFSRGSPAGMSVQPKNWLPGPCYRQQRVSKTKTDNNNSNFTWTGASKYNLNGRESIINPGTAMASHKDDEDKFFPMSGVMIFGKESAGASNTALDNVMITDEEEIKATNPVATERFGTVAVNFQSSSTDPATGDVHAMGALPGMVWQDRDVYLQGPIWAKIPHTDGHFHPSPLMGGFGLKNPPPQILIKNTPVPANPPAEFSATKFASFITQYSTGQVSVEIEWELQKENSKRWNPEVQYTSNYAKSANVDFTVDNNGLYTEPRPIGTRYLTRPL
AAV1 (DNA) 19 atggctgccgatggttatcttccagattggctcgaggacaacctctctgagggcattcgcgagtggtgggacttgaaacctggagccccgaagcccaaagccaaccagcaaaagcaggacgacggccggggtctggtgcttcctggctacaagtacctcggacccttcaacggactcgacaagggggagcccgtcaacgcggcggacgcagcggccctcgagcacgacaaggcctacgaccagcagctcaaagcgggtgacaatccgtacctgcggtataaccacgccgacgccgagtttcaggagcgtctgcaagaagatacgtcttttgggggcaacctcgggcgagcagtcttccaggccaagaagcgggttctcgaacctctcggtctggttgaggaaggcgctaagacggctcctggaaagaaacgtccggtagagcagtcgccacaagagccagactcctcctcgggcatcggcaagacaggccagcagcccgctaaaaagagactcaattttggtcagactggcgactcagagtcagtccccgatccacaacctctcggagaacctccagcaacccccgctgctgtgggacctactacaatggcttcaggcggtggcgcaccaatggcagacaataacgaaggcgccgacggagtgggtaatgcctcaggaaattggcattgcgattccacatggctgggcgacagagtcatcaccaccagcacccgcacctgggccttgcccacctacaataaccacctctacaagcaaatctccagtgcttcaacgggggccagcaacgacaaccactacttcggctacagcaccccctgggggtattttgatttcaacagattccactgccacttttcaccacgtgactggcagcgactcatcaacaacaattggggattccggcccaagagactcaacttcaaactcttcaacatccaagtcaaggaggtcacgacgaatgatggcgtcacaaccatcgctaataaccttaccagcacggttcaagtcttctcggactcggagtaccagcttccgtacgtcctcggctctgcgcaccagggctgcctccctccgttcccggcggacgtgttcatgattccgcaatacggctacctgacgctcaacaatggcagccaagccgtgggacgttcatccttttactgcctggaatatttcccttctcagatgctgagaacgggcaacaactttaccttcagctacacctttgaggaagtgcctttccacagcagctacgcgcacagccagagcctggaccggctgatgaatcctctcatcgaccaatacctgtattacctgaacagaactcaaaatcagtccggaagtgcccaaaacaaggacttgctgtttagccgtgggtctccagctggcatgtctgttcagcccaaaaactggctacctggaccctgttatcggcagcagcgcgtttctaaaacaaaaacagacaacaacaacagcaattttacctggactggtgcttcaaaatataacctcaatgggcgtgaatccatcatcaaccctggcactgctatggcctcacacaaagacgacgaagacaagttctttcccatgagcggtgtcatgatttttggaaaagagagcgccggagcttcaaacactgcattggacaatgtcatgattacagacgaagaggaaattaaagccactaaccctgtggccaccgaaagatttgggaccgtggcagtcaatttccagagcagcagcacagaccctgcgaccggagatgtgcatgctatgggagcattacctggcatggtgtggcaagatagagacgtgtacctgcagggtcccatttgggccaaaattcctcacacagatggacactttcacccgtctcctcttatgggcggctttggactcaagaacccgcctcctcagatcctcatcaaaaacacgcctgttcctgcgaatcctccggcggagttttcagctacaaagtttgcttcattcatcacccaatactccacaggacaagtgagtgtggaaattgaatgggagctgcagaaagaaaacagcaagcgctggaatcccgaagtgcagtacacatccaattatgcaaaatctgccaacgttgattttactgtggacaacaatggactttatactgagcctcgccccattggcacccgttaccttacccgtcccctgtaa
AAV5 (胺基酸) 20 MSFVDHPPDWLEEVGEGLREFLGLEAGPPKPKPNQQHQDQARGLVLPGYNYLGPGNGLDRGEPVNRADEVAREHDISYNEQLEAGDNPYLKYNHADAEFQEKLADDTSFGGNLGKAVFQAKKRVLEPFGLVEEGAKTAPTGKRIDDHFPKRKKARTEEDSKPSTSSDAEAGPSGSQQLQIPAQPASSLGADTMSAGGGGPLGDNNQGADGVGNASGDWHCDSTWMGDRVVTKSTRTWVLPSYNNHQYREIKSGSVDGSNANAYFGYSTPWGYFDFNRFHSHWSPRDWQRLINNYWGFRPRSLRVKIFNIQVKEVTVQDSTTTIANNLTSTVQVFTDDDYQLPYVVGNGTEGCLPAFPPQVFTLPQYGYATLNRDNTENPTERSSFFCLEYFPSKMLRTGNNFEFTYNFEEVPFHSSFAPSQNLFKLANPLVDQYLYRFVSTNNTGGVQFNKNLAGRYANTYKNWFPGPMGRTQGWNLGSGVNRASVSAFATTNRMELEGASYQVPPQPNGMTNNLQGSNTYALENTMIFNSQPANPGTTATYLEGNMLITSESETQPVNRVAYNVGGQMATNNQSSTTAPATGTYNLQEIVPGSVWMERDVYLQGPIWAKIPETGAHFHPSPAMGGFGLKHPPPMMLIKNTPVPGNITSFSDVPVSSFITQYSTGQVTVEMEWELKKENSKRWNPEIQYTNNYNDPQFVDFAPDSTGEYRTTRPIGTRYLTRPL
AAV5 (DNA) 21 atgtcttttgttgatcaccctccagattggttggaagaagttggtgaaggtcttcgcgagtttttgggccttgaagcgggcccaccgaaaccaaaacccaatcagcagcatcaagatcaagcccgtggtcttgtgctgcctggttataactatctcggacccggaaacggtctcgatcgaggagagcctgtcaacagggcagacgaggtcgcgcgagagcacgacatctcgtacaacgagcagcttgaggcgggagacaacccctacctcaagtacaaccacgcggacgccgagtttcaggagaagctcgccgacgacacatccttcgggggaaacctcggaaaggcagtctttcaggccaagaaaagggttctcgaaccttttggcctggttgaagagggtgctaagacggcccctaccggaaagcggatagacgaccactttccaaaaagaaagaaggcccggaccgaagaggactccaagccttccacctcgtcagacgccgaagctggacccagcggatcccagcagctgcaaatcccagcccaaccagcctcaagtttgggagctgatacaatgtctgcgggaggtggcggcccattgggcgacaataaccaaggtgccgatggagtgggcaatgcctcgggagattggcattgcgattccacgtggatgggggacagagtcgtcaccaagtccacccgaacctgggtgctgcccagctacaacaaccaccagtaccgagagatcaaaagcggctccgtcgacggaagcaacgccaacgcctactttggatacagcaccccctgggggtactttgactttaaccgcttccacagccactggagcccccgagactggcaaagactcatcaacaactactggggcttcagaccccggtccctcagagtcaaaatcttcaacattcaagtcaaagaggtcacggtgcaggactccaccaccaccatcgccaacaacctcacctccaccgtccaagtgtttacggacgacgactaccagctgccctacgtcgtcggcaacgggaccgagggatgcctgccggccttccctccgcaggtctttacgctgccgcagtacggttacgcgacgctgaaccgcgacaacacagaaaatcccaccgagaggagcagcttcttctgcctagagtactttcccagcaagatgctgagaacgggcaacaactttgagtttacctacaactttgaggaggtgcccttccactccagcttcgctcccagtcagaacctcttcaagctggccaacccgctggtggaccagtacttgtaccgcttcgtgagcacaaataacactggcggagtccagttcaacaagaacctggccgggagatacgccaacacctacaaaaactggttcccggggcccatgggccgaacccagggctggaacctgggctccggggtcaaccgcgccagtgtcagcgccttcgccacgaccaataggatggagctcgagggcgcgagttaccaggtgcccccgcagccgaacggcatgaccaacaacctccagggcagcaacacctatgccctggagaacactatgatcttcaacagccagccggcgaacccgggcaccaccgccacgtacctcgagggcaacatgctcatcaccagcgagagcgagacgcagccggtgaaccgcgtggcgtacaacgtcggcgggcagatggccaccaacaaccagagctccaccactgcccccgcgaccggcacgtacaacctccaggaaatcgtgcccggcagcgtgtggatggagagggacgtgtacctccaaggacccatctgggccaagatcccagagacgggggcgcactttcacccctctccggccatgggcggattcggactcaaacacccaccgcccatgatgctcatcaagaacacgcctgtgcccggaaatatcaccagcttctcggacgtgcccgtcagcagcttcatcacccagtacagcaccgggcaggtcaccgtggagatggagtgggagctcaagaaggaaaactccaagaggtggaacccagagatccagtacacaaacaactacaacgacccccagtttgtggactttgccccggacagcaccggggaatacagaaccaccagacctatcggaacccgataccttacccgacccctttaa
TTD-0019聚體肽加下劃線，自位置587開始(緊接在位置586之後)； 743 aa 3636 MAADGYLPDWLEDNLSEGIREWWALKPGAPQPKANQQHQDNARGLVLPGYKYLGPGNGLDKGEPVNAADAAALEHDKAYDQQLKAGDNPYLKYNHADAEFQERLKEDTSFGGNLGRAVFQAKKRLLEPLGLVEEAAKTAPGKKRPVEQSPQEPDSSAGIGKSGAQPAKKRLNFGQTGDTESVPDPQPIGEPPAAPSGVGSLTMASGGGAPVADNNEGADGVGSSSGNWHCDSQWLGDRVITTSTRTWALPTYNNHLYKQISNSTSGGSSNDNAYFGYSTPWGYFDFNRFHCHFSPRDWQRLINNNWGFRPKRLNFKLFNIQVKEVTDNNGVKTIANNLTSTVQVFTDSDYQLPYVLGSAHEGCLPPFPADVFMIPQYGYLTLNDGSQAVGRSSFYCLEYFPSQMLRTGNNFQFSYEFENVPFHSSYAHSQSLDRLMNPLIDQYLYYLSKTINGSGQNQQTLKFSVAGPSNMAVQGRNYIPGPSYRQQRVSTTVTQNNNSEFAWPGASSWALNGRNSLMNPGPAMASHKEGEDRFFPLSGSLIFGKQGTGRDNVDADKVMITNEEEIKTTNPVATESYGQVATNHQS PLNGAVHLY AQAQTGWVQNQGILPGMVWQDRDVYLQGPIWAKIPHTDGNFHPSPLMGGFGMKHPPPQILIKNTPVPADPPTAFNKDKLNSFITQYSTGQVSVEIEWELQKENSKRWNPEIQYTSNYYKSNNVEFAVNTEGVYSEPRPIGTRYLTRNL
TTD-0019聚體肽加下劃線 3623 atggctgccgatggttatcttccagattggctcgaggacaaccttagtgaaggaattcgcgagtggtgggctttgaaacctggagcccctcaacccaaggcaaatcaacaacatcaagacaacgctcgaggtcttgtgcttccgggttacaaataccttggacccggcaacggactcgacaagggggagccggtcaacgcagcagacgcggcggccctcgagcacgacaaggcctacgaccagcagctcaaggccggagacaacccgtacctcaagtacaaccacgccgacgccgagttccaggagcggctcaaagaagatacgtcttttgggggcaacctcgggcgagcagtcttccaggccaaaaagaggcttcttgaacctcttggtctggttgaggaagcggctaagacggctcctggaaagaagaggcctgtagagcagtctcctcaggaaccggactcctccgcgggtattggcaaatcgggtgcacagcccgctaaaaagagactcaatttcggtcagactggcgacacagagtcagtcccagaccctcaaccaatcggagaacctcccgcagccccctcaggtgtgggatctcttacaatggcttcaggtggtggcgcaccagtggcagacaataacgaaggtgccgatggagtgggtagttcctcgggaaattggcattgcgattcccaatggctgggggacagagtcatcaccaccagcacccgaacctgggccctgcccacctacaacaatcacctctacaagcaaatctccaacagcacatctggaggatcttcaaatgacaacgcctacttcggctacagcaccccctgggggtattttgacttcaacagattccactgccacttctcaccacgtgactggcagcgactcatcaacaacaactggggattccggcctaagcgactcaacttcaagctcttcaacattcaggtcaaagaggttacggacaacaatggagtcaagaccatcgccaataaccttaccagcacggtccaggtcttcacggactcagactatcagctcccgtacgtgctcgggtcggctcacgagggctgcctcccgccgttcccagcggacgttttcatgattcctcagtacgggtatctgacgcttaatgatggaagccaggccgtgggtcgttcgtccttttactgcctggaatatttcccgtcgcaaatgctaagaacgggtaacaacttccagttcagctacgagtttgagaacgtacctttccatagcagctacgctcacagccaaagcctggaccgactaatgaatccactcatcgaccaatacttgtactatctctcaaagactattaacggttctggacagaatcaacaaacgctaaaattcagtgtggccggacccagcaacatggctgtccagggaagaaactacatacctggacccagctaccgacaacaacgtgtctcaaccactgtgactcaaaacaacaacagcgaatttgcttggcctggagcttcttcttgggctctcaatggacgtaatagcttgatgaatcctggacctgctatggccagccacaaagaaggagaggaccgtttctttcctttgtctggatctttaatttttggcaaacaaggaactggaagagacaacgtggatgcggacaaagtcatgataaccaacgaagaagaaattaaaactactaacccggtagcaacggagtcctatggacaagtggccacaaaccaccagagt ccgcttaatggtgccgtccatctttat gctcaggcgcagaccggctgggttcaaaaccaaggaatacttccgggtatggtttggcaggacagagatgtgtacctgcaaggacccatttgggccaaaattcctcacacggacggcaactttcacccttctccgctgatgggagggtttggaatgaagcacccgcctcctcagatcctcatcaaaaacacacctgtacctgcCgatcctccaacggccttcaacaaggacaagctgaactctttcatcacccagtattctactggccaagtcagcgtggagatcgagtgggagctgcagaaggaaaacagcaagcgGtggaacccggagatccagtacacttccaactattacaagtctaataatgttgaatttgctgttaatactgaaggtgtatatagtgaaccccgccccattggcaccagatacctgactcgtaatctgtaa
在一些實施例中，AAV衣殼多肽(例如AAV衣殼變異體)包含SEQ ID NO: 1、10、11、138、12、13、14、16、18、20、3636中任一者之胺基酸序列，或與其實質上一致(例如，具有至少70%、75%、80%、85%、90%、92%、95%、97%、98%或99%序列一致性)之胺基酸序列。在一些實施例中，AAV衣殼多肽(例如AAV衣殼變異體)包含相對於SEQ ID NO: 1、10、11、138、12、13、14、16、18、20或3636中任一者之胺基酸序列，包含至少一個、兩個或三個修飾(例如取代(例如保守取代)、插入或缺失)、但不超過30個、20個或10個修飾(例如取代(例如保守取代)、插入或缺失)之胺基酸序列。在一些實施例中，AAV衣殼多肽(例如AAV衣殼變異體)包含由SEQ ID NO: 137、15、17、19、21、3623中任一者之核苷酸序列或與其實質上一致(例如，具有至少70%、75%、80%、85%、90%、92%、95%、97%、98%或99%序列一致性)之核苷酸序列編碼的胺基酸序列。
在一些實施例中，編碼AAV衣殼多肽(例如AAV衣殼變異體)之核苷酸序列包含SEQ ID NO: 137、15、17、19、21或3623中任一者之核苷酸序列，或與其實質上一致(例如，具有至少70%、75%、80%、85%、90%、92%、95%、97%、98%或99%序列一致性)之核苷酸序列。在一些實施例中，編碼AAV衣殼多肽(例如AAV衣殼變異體)之核苷酸序列包含相對於SEQ ID NO: 137、15、17、19、21或3623中任一者之核苷酸序列包含至少一個、兩個或三個修飾(例如取代(例如保守取代)、插入或缺失)、但不超過30個、20個或10個修飾(例如取代(例如保守取代)、插入或缺失)之核苷酸序列。
在一些實施例中，AAV衣殼多肽(例如AAV衣殼變異體)包含SEQ ID NO: 138之胺基酸序列，或與其實質上一致(例如，具有至少70%、75%、80%、85%、90%、92%、95%、97%、98%或99%序列一致性)之胺基酸序列。在一些實施例中，AAV衣殼多肽(例如AAV衣殼變異體)包含相對於SEQ ID NO: 138之胺基酸序列，包含至少一個、兩個或三個修飾(例如取代，例如保守取代)但不超過30個、20個或10個修飾(例如取代，例如保守取代)之胺基酸序列。在一些實施例中，AAV衣殼多肽(例如AAV衣殼變異體)包含由SEQ ID NO: 137之核苷酸序列或與其實質上一致(例如，具有至少70%、75%、80%、85%、90%、92%、95%、97%、98%或99%序列一致性)之核苷酸序列編碼的胺基酸序列。在一些實施例中，編碼AAV衣殼多肽(例如AAV衣殼變異體)之核苷酸序列包含SEQ ID NO: 137之核苷酸序列，或與其實質上一致(例如，具有至少70%、75%、80%、85%、90%、92%、95%、97%、98%或99%序列一致性)之核苷酸序列。在一些實施例中，AAV衣殼多肽(例如AAV衣殼變異體)包含根據SEQ ID NO: 138編號之位置K449之取代，例如K449R取代。
在一些實施例中，AAV衣殼多肽(例如AAV衣殼變異體)包含SEQ ID NO: 11之胺基酸序列，或與其實質上一致(例如，具有至少70%、75%、80%、85%、90%、92%、95%、97%、98%或99%序列一致性)之胺基酸序列。在一些實施例中，AAV衣殼多肽(例如AAV衣殼變異體)包含相對於SEQ ID NO: 11之胺基酸序列，包含至少一個、兩個或三個修飾(例如取代，例如保守取代)但不超過30個、20個或10個修飾(例如取代(保守取代))之胺基酸序列，視情況地其中位置449不為R。
在一些實施例中，衣殼多肽包含SEQ ID NO: 1之胺基酸序列，或與其實質上一致(例如，具有至少70%、75%、80%、85%、90%、92%、95%、97%、98%或99%序列一致性)之胺基酸序列。在一些實施例中，AAV衣殼多肽(例如AAV衣殼變異體)包含相對於SEQ ID NO: 1之胺基酸序列，包含至少一個、兩個或三個修飾(例如取代，例如保守取代)但不超過30個、20個或10個修飾(例如取代，例如保守取代)之胺基酸序列。
在一些實施例中，衣殼多肽包含SEQ ID NO: 10之胺基酸序列，或與其實質上一致(例如，具有至少70%、75%、80%、85%、90%、92%、95%、97%、98%或99%序列一致性)之胺基酸序列。在一些實施例中，AAV衣殼多肽(例如AAV衣殼變異體)包含相對於SEQ ID NO: 10之胺基酸序列，包含至少一個、兩個或三個修飾(例如取代，例如保守取代)、但不超過30個、20個或10個修飾(例如取代，例如保守取代)之胺基酸序列。在一些實施例中，AAV衣殼多肽(例如AAV衣殼變異體)包含有包含TLAVPFK (SEQ ID NO: 1262)之胺基酸序列之肽。在一些實施例中，相對於根據SEQ ID NO: 138編號之參考序列，肽存在於緊接位置588之後。在一些實施例中，衣殼多肽包含根據SEQ ID NO: 138編號之A587D及Q588G之胺基酸取代。
在一些實施例中，AAV衣殼多肽(例如AAV衣殼變異體)包含根據SEQ ID NO: 138編號之K449R之胺基酸取代；及包含TLAVPFK (SEQ ID NO: 1262)之胺基酸序列之肽，其中相對於根據SEQ ID NO: 138編號之參考序列，肽存在於緊接位置588之後。
在一些實施例中，AAV衣殼多肽(例如AAV衣殼變異體)包含根據SEQ ID NO: 138編號之K449R之胺基酸取代；包含TLAVPFK (SEQ ID NO: 1262)之胺基酸序列之肽，其中相對於根據SEQ ID NO: 138編號之參考序列，插入物存在於緊接位置588之後；及根據SEQ ID NO: 138編號之A587D及Q588G之胺基酸取代。
在一些實施例中，AAV衣殼多肽(例如AAV衣殼變異體)包含含有TLAVPFK (SEQ ID NO: 1262)之胺基酸序列之肽，其中相對於根據SEQ ID NO: 138編號之參考序列，插入物存在於緊接位置588之後；及根據SEQ ID NO: 138編號之A587D及Q588G之胺基酸取代。
在一些實施例中，AAV衣殼變異體在緊接相對於SEQ ID NO: 138編號之位置448、449、452、453、455之後，或在對應於任何其他AAV血清型(例如，AAV1；AAV2；AAV3；AAV3b；AAV4；AAV5；AAV6；AAV7；AAV8；AAVrh8；AAVrh10；AAVrh32.33；AAVrh74；SEQ ID NO: 1、10、11-14、16、18、20或3636；PHP.N；PHP.B；或如在WO 2021/230987 (其內容特此以全文引用之方式併入)之表6提供之AAV血清型)之等效位置之後，包含表1A、2A、2B、21-23、25、26或30中提供之任何胺基酸序列之至少3、4、5、6、7、8、9、10、11、12或13個連續胺基酸。在一些實施例中，表1A、2A、2B、21-23、25、26或30中提供之任何胺基酸序列之至少3、4、5、6、7、8、9、10、11、12或13個連續胺基酸替換根據SEQ ID NO: 138編號之位置K449、T450、I451、N452、G453、S454、G455、Q456、N457、Q458及/或Q459中之至少一個、兩個、三個、四個、五個、六個、七個、八個、九個、十個或所有位置，或對應於任何其他AAV血清型(例如，AAV1；AAV2；AAV3；AAV3b；AAV4；AAV5；AAV6；AAV7；AAV8；AAVrh8；AAVrh10；AAVrh32.33；AAVrh74、SEQ ID NO: 1、10、11-14、16、18、20或3636；PHP.N；PHP.B；或如在WO 2021/230987 (其內容特此以全文引用之方式併入)之表6提供之AAV血清型)之等效位置。在一些實施例中，表1A、2A、2B、21-23、25、26或30中提供之任何胺基酸序列之至少3、4、5、6、7、8、9、10、11、12或13個連續胺基酸替換根據SEQ ID NO: 138編號之位置S454、G455或S454及G455兩者，或對應於任何其他AAV血清型(例如，AAV1；AAV2；AAV3；AAV3b；AAV4；AAV5；AAV6；AAV7；AAV8；AAVrh8；AAVrh10；AAVrh32.33；AAVrh74；SEQ ID NO: 1、10、11-14、16、18、20或3636；PHP.N；PHP.B；或如在WO 2021/230987 (其內容特此以全文引用之方式併入)之表6提供之AAV血清型)之等效位置。在一些實施例中，AAV衣殼變異體在根據SEQ ID NO: 138編號之位置T450、I451、N452、G453、S454、G455、Q456、N457、Q458及/或Q459中之一個、兩個、三個、四個、五個、六個、七個、八個、九個或所有位置，或對應於任何其他AAV血清型(例如，AAV1；AAV2；AAV3；AAV3b；AAV4；AAV5；AAV6；AAV7；AAV8；AAVrh8；AAVrh10；AAVrh32.33；AAVrh74；SEQ ID NO: 1、10、11-14、16、18、20或3636；PHP.N；PHP.B；或如在WO 2021/230987 (其內容特此以全文引用之方式併入)之表6提供之AAV血清型)之等效位置處包含除野生型例如天然胺基酸以外之胺基酸。在一些實施例中，AAV衣殼變異體在根據SEQ ID NO: 138編號之位置S454、G455或S454及G455兩者，或對應於任何其他AAV血清型(例如，AAV1；AAV2；AAV3；AAV3b；AAV4；AAV5；AAV6；AAV7；AAV8；AAVrh8；AAVrh10；AAVrh32.33；AAVrh74；SEQ ID NO: 1、10、11-14、16、18、20或3636；PHP.N；PHP.B；或如在WO 2021/230987 (其內容特此以全文引用之方式併入)之表6提供之AAV血清型)之等效位置處包含除野生型例如天然胺基酸以外之胺基酸。在一些實施例中，AAV衣殼變異體在根據SEQ ID NO: 138編號之位置K449、T450、I451、N452、G453、S454、G455、Q456、N457、Q458及/或Q459中之一個、兩個、三個、四個、五個、六個、七個、八個、九個、十個或所有位置，或對應於任何其他AAV血清型(例如，AAV1；AAV2；AAV3；AAV3b；AAV4；AAV5；AAV6；AAV7；AAV8；AAVrh8；AAVrh10；AAVrh32.33；AAVrh74；SEQ ID NO: 1、10、11-14、16、18、20或3636；PHP.N；PHP.B；或如在WO 2021/230987 (其內容特此以全文引用之方式併入)之表6提供之AAV血清型)之等效位置處包含修飾，例如取代。在一些實施例中，AAV衣殼變異體在根據SEQ ID NO: 138編號之位置S454、G455或S454及G455兩者，或對應於任何其他AAV血清型(例如，AAV1；AAV2；AAV3；AAV3b；AAV4；AAV5；AAV6；AAV7；AAV8；AAVrh8；AAVrh10；AAVrh32.33；AAVrh74；SEQ ID NO: 1、10、11-14、16、18、20或3636；PHP.N；PHP.B；或如在WO 2021/230987 (其內容特此以全文引用之方式併入)之表6提供之AAV血清型)之等效位置處包含修飾，例如取代。
在一些實施例中，AAV衣殼變異體，例如本文所述之AAV衣殼變異體(例如，包含本文所述肽之AAV衣殼變異體)。在一些實施例中，AAV衣殼變異體包含如表1A、2A、2B、21-23、25、26或30中任一者中所列之肽。 表1A. 示 範性肽序列
肽序列 SEQ ID NO: 肽序列 SEQ ID NO: 肽序列 SEQ ID NO: 肽序列 SEQ ID NO:
GSGSPHSKAQNQQT 200 GSLHHDNHGQNQQT 385 GSVFGVPSGQNQQT 570 GSIAMTSHGQNQQT 755
GHDSPHKSGQNQQT 201 GIMARDSSGQNQQT 386 GSGLPDRNLQNQQT 571 GSPGVSPSGQNQQT 756
GSGSPHARMQNQQT 202 GVVHITNSGQNQQT 387 GSGTHNSAIQNQQT 572 GSGQNQQTGSSSRV 757
GSGSPHVKSQNQQT 203 GSGQNQHSAPFNQT 388 GSGMIIASMQNQQT 573 GSGQHLPLLGNQQT 758
GQDSPHKSGQNQQT 204 GSGQTSGLKQNQQT 389 GGITWTDSGQNQQT 574 GSDHSHRGGQNQQT 759
GSGSPHASRQNQQT 205 GSGQNQQTSLSNTA 390 GSGQNQQASGRQQT 575 GSGIVTKLGQNQQT 760
GSGSPHASRQNKQT 206 GSGQNQAVHNKSQT 391 GSGQNQQPHLKSLT 576 GSGQDVTKTGNQQT 761
GSGSPHVKIQNQQT 207 GVHTHLPSGQNQQT 392 GPPQHMTSGQNQQT 577 GSGQNQQSHGRIGT 762
GSGSPHSKAKNQQT 208 GHLTMHNSGQNHQT 393 GSGQNQQASLPSRT 578 GSGQNQQINHRSPT 763
GSGSPHKKNQNQQT 209 GSGSSSRPYQNQQT 394 GSGQIVSTQTNQQT 579 GSGDDSRVGQNQQT 764
GSGSPHVRMQNQQT 210 GILLATPSGQNQQT 395 GSGKGHSAGQNQQT 580 GSGQSTLKRINQQT 765
GSGSPHASRQKQQT 211 GSGQNAGSFPNQQT 396 GSGQNTRLQLGQQT 581 GSGSQHSKAQNQQT 766
GHSSPHRSGQNQQT 212 GSRDGHTVGQNQQT 397 GSVGSRPVGQNQQT 582 GSGQNQQHASSNNT 767
GMRTYHLSGQNQQT 213 GSLLISTSGQNQQT 398 GSSHTLALGQNQQT 583 GSRTYQVSGQNQQT 768
GSGSPHTRGQNQQT 214 GSGAMPSHGQNQQT 399 GMYEYSQSGQNQQT 584 GSGQNQGLLSSPQT 769
GSGIIPVSSQNQQT 215 GALVSPISGQNQQT 400 GNGQNQQHSILHGT 585 GSGGGLQHNQNQQT 770
GSEYGHKSGQNQQT 216 GSLSSHGVGQNQQT 401 GSGYNQPHLQNQQT 586 GSGQNQQTTAATRM 771
GRGQNVSSVHRQQT 217 GSGQNQQASLAMRT 402 GPLVNASSGQNQQT 587 GSGQNQRASILVQT 772
GSSHRFYGGQNQQT 218 GPGLGSHSGQNQQT 403 GSGQNQQVLTTART 588 GSGQNLGLLGAQQT 773
GYFVAAWSGQNQQT 219 GHDSQHKSGQNQQT 404 GSGQNQHSVHNDQT 589 GSLDLGRSGQNQQT 774
GSVLHSHAAQNQQT 220 GSGLTLSATQNQQT 405 GAGLIMHSGQNQQT 590 GNSQVKVSGQNQQT 775
GSGDLVVSTQNQQT 221 GSGQVVAHVGNQQT 406 GMGRHSASGQNQQT 591 GSSGSHQYGQNQQT 776
GSYGMAASGQNQQT 222 GSGLRTMTTQNQQT 407 GSHSQSGHGQNQQT 592 GSGQNQQQRDGTLT 777
GLNHFGASGQNQQT 223 GSGQVGRLLQNQQT 408 GSSTTIVSGQNHQT 593 GRGQHVSVANNQQT 778
GSTGSHSAGQNQHT 224 GSGQLSHQSVNQQT 409 GRHLVTASGQNQQT 594 GDSSSRISGQNQQT 779
GLAGHTVSGQNQQT 225 GSGDRYQTLQNQQT 410 GSGQNQQHANLNQT 595 GSGQNQQHSLSSQT 780
GIILGASSGQNQQT 226 GSGQNQQLKSSAQT 411 GSGSTHSKAQNQQT 596 GSLMDVHRGQNQQT 781
GSGVSTYNIQNQQT 227 GSGQNQYSIPVAQT 412 GSGQNKQMLSGNTT 597 GSIQYQSSGQNQQT 782
GSLVSVQTGQNQQT 228 GSGERLHLTQNQQT 413 GSGQVHNPTQNQQT 598 GLGSKNPSGQNQQT 783
GQSSPHRSGQNQQT 229 GSGHNQQVRTAPNT 414 GSGQNQQIPHVHQT 599 GSGQLVLTLQNQQT 784
GREYGHKSGQNQQT 230 GGLSHVMSGQNQQT 415 GSLHAGLSGQNQQT 600 GSGQNQQTSQPLPG 785
GHTLTLSSGQNQQT 231 GSGQSHRDVLNQQT 416 GPAQHGTSGQNQQT 601 GSGQNQQNLGKLNT 786
GSITLIPSGQNQQT 232 GSGQNLAGRMDQQT 417 GEKAVTSSGQNQQT 602 GTTAHQPSGQNQQT 787
GSNGFTALGQNQQT 233 GSGQNQQTNRGNPM 418 GSGQNQQTMANGQR 603 GSGQNRAQIGTQQT 788
GSGHSSHSVQNQQT 234 GSGQSYQRDHNQQT 419 GSGSPHSKDQNQQT 604 GSGQYVHVSSNQQT 789
GSGIPQRSGKNQQT 235 GSLLSAGMGQNQHT 420 GSFSMGYGGQNQQT 605 GSGQNQQTAHAFNI 790
GSGDTLHMLQNQQT 236 GSGQNQQTAIYRNI 421 GSGTHLVSLQNQQT 606 GSGQNQRTMVATQT 791
GERHTVLSGQNQQT 237 GSGQNQQTSGTTNC 422 GSGQMQPHVQNQQT 607 GSGQNPIRGAMQQT 792
GSGMPQSHIQNQQT 238 GMTSHSVSGQNQQT 423 GSGQNQQVAGLNNT 608 GSGYVITGSQNQQT 793
GSGQLSGIGGNQQT 239 GSSQSTGYQPNQQT 424 GSSQNQQHDMRLRT 609 GRGPKQSNIQNQQT 794
GSGQNRKPASFAQT 240 GSLKPTTLGQNQQT 425 GPASLPISGQNQQT 610 GSGQNQQTMLGKPC 795
GSGSVSQLGQNQQT 241 GRMFSLGSGQNQQT 426 GSGQNQQPPLATRT 611 GSGQNQQVGSTVRT 796
GSDFLGTHGQNQQT 242 GSGQNQQTALGVKC 427 GSSRVPVSGQNQQT 612 GNVTTQKSGQNQQT 797
GQIVQNPSGQNQQT 243 GAMVSHSSGQNQQT 428 GSGQNQQTNLGHTT 613 GSGNPVSHLQNQQT 798
GSGTQIPSQQNQQT 244 GSGQNQQRNSDSVT 429 GSGQNQQLVSRVQT 614 GSLSHMESGQNQQT 799
GSGQNQQSAREGLT 245 GSGQSMTLHLNQQT 430 GPNSYPVSGQKQQT 615 GRAPTNLSGQNQQT 800
GSGLGMSTGQNQQT 246 GSGQVHQAEVNQQT 431 GHAHYQASGQNQQT 616 GSGQNQQTVMTARA 801
GSGLPVLSGQNQQT 247 GSGQNQSQNHLQQT 432 GSGQALLSTGNQQT 617 GSGMPASRLQNQQT 802
GSGHSIRTDQNQQT 248 GSLLTTASGQNQQT 433 GSGQLPRQMTNQQT 618 GVVRNHQSGQNQQT 803
GSGQSVQTVVNQQT 249 GSGLIRTAAQNQQT 434 GSGFPKSTEQNQQT 619 GSGQNQHSVQVRQT 804
GSGQNRAQSRFQQT 250 GSGQNQQTVSRQST 435 GSRETSLSGQNQQT 620 GSGQNTGHLTMQQT 805
GGGDLGRSSQNQQT 251 GSGQYANHGINQQT 436 GSGQNQQGTGVSHT 621 GSGQNQQYAGKILT 806
GGGTKMDSGQNQQT 252 GSRSTGPSGQNQQT 437 GSRTVPVYGQNQQT 622 GSGNPHVRNQNQQT 807
GSGSPHPSRQNQQT 253 GRGVQQKLQQNQQT 438 GSNAQSAHGQNQQT 623 GSGQNGGSSNRQQT 808
GSGQFTNAGMNQQT 254 GSGQNQQVHLSTGT 439 GAFHLAASGQNQQT 624 GSGQRLSQGVNHQT 809
GGRNGHTVGQNQQT 255 GSGQNQQLSAKSST 440 GSGQYRSSSDNQQT 625 GSGQNAHAKEGQQT 810
GSGFGPQTGQNQQT 256 GSGYKAARPQNQQT 441 GSGQVYISTPNQQT 626 GSSPAPNSGQNQQT 811
GRTDSHTSGQNQQT 257 GSAGISPSGQNQQT 442 GSGVSTQLLQNQQT 627 GLAHKTSSGQNQQT 812
GYEVLGSSGQNQQT 258 GSGQNRAHAFLQQT 443 GSGQLGLSVTNQQT 628 GSGQNQQTPGAHKT 813
GSVHLSVTGQNQQT 259 GSGLSGITMQNQQT 444 GSGSNMRLSQNQQT 629 GSGQNQQSLSGSFT 814
GFMSYKGSGQNQQT 260 GPGSAHSSGQNQQT 445 GSGQNLHSGLPQQT 630 GSGQNQQSTGTSRT 815
GNIAGSVSGQNQQT 261 GSSHTQALGQNQQT 446 GSSHTLALGQNKQT 631 GSGQNQQTVQSNLV 816
GSGSHRDVSQNQQT 262 GSGVHGVSSQNQQT 447 GSGQNQHSLPAHRT 632 GSGQNQQLGSRQCT 817
GGLGSMSSGQNQQT 263 GSSGRDMGGQNQQT 448 GSGQNQGTVYPNQT 633 GSGQNQYLRLELQT 818
GSGHLPQSAQNQQT 264 GERAFPTSGQNQQT 449 GSGQNQQPSLRQST 634 GSGQNQQTSPRLQT 819
GGVLVGGSGQNQQT 265 GGRIVSLSGQNQQT 450 GSGQNARLKDNQQT 635 GSGQNQQTTSSNMT 820
GTHPYTSSGQNQQT 266 GSGQNSYSHTSQQT 451 GHAGSTGSGQNQQT 636 GTASTYNSGQNQQT 821
GSGQNQQLKENRST 267 GLGYPGSSGQNQQT 452 GSGQALSSSGNQQT 637 GSGQNQQTMPQHKI 822
GSGQNQQTSPHNHT 268 GSGPQSHTGQNQQT 453 GSGASESHRQNQQT 638 GSGQSHLHTGNQQT 823
GSGTLYPQSQNQQT 269 GSGQNQQLSRDAST 454 GVGVITSSGQNQQT 639 GVKGVGHSGQNQQT 824
GSGQNQQSNWITKT 270 GSGQILHSVPNQQT 455 GSLYGQSLGQNQQT 640 GSGKVTKQSQNQQT 825
GSGYTSLFLQNQQT 271 GSGFHTDSRQNQQT 456 GSGQMSDVHGNQQT 641 GSGQNQQTALEKSL 826
GSGVMTHVLQNQQT 272 GSGQSHSLATNQQT 457 GSGQNQQHSSKATT 642 GSGYKDTYGQNQQT 827
GSVSDVRAGQNQQT 273 GSGQNQQTLSKPWT 458 GSGQNQQTSVSQQT 643 GSGQNQQSGTFLST 828
GSGQSHMATLNQQT 274 GSGHAAISQQNQQT 459 GSGQKMWKLDNQQT 644 GSGQNTGQHMMQQT 829
GSGLSVHLAQNQQT 275 GSGQNQQQIGGNST 460 GSGQNVSMQVNQQT 645 GSGKNQQRPGLDQT 830
GSGLSHATQQNQQT 276 GGGPMAGSGQNQQT 461 GSGQNQRATLSNQT 646 GSGQSREISLNQQT 831
GSGLSVQSGQNQQT 277 GMRMEYQSGQNQQT 462 GSGQASSKSANQQT 647 GTPTSPSSGQNQQT 832
GSGHMTYREKNQQT 278 GSGQNQQGTLLHQT 463 GSGKNQTPIPKGQT 648 GKPAGGLSGQNQQT 833
GSKGVPTPGQNQQT 279 GSGQNQRSSGGVQT 464 GSGQNQQTRQEGST 649 GSGQNHRSADMQQT 834
GSGLLPLSSQNQQT 280 GSGQNQRGALATQT 465 GASSLATSGQNQQT 650 GSGQNQQTLPSLSL 835
GNGLYAVSGQNQQT 281 GSGTVHAATQNQQT 466 GSGQRGSLTENQQT 651 GSPYMGATGQNQQT 836
GFNGSPSSGQNQQT 282 GSRMTQQFGQNQQT 467 GSEQTRQRGQNQQT 652 GSGHAKAVGQNQQT 837
GSGQIRHSDQNQQT 283 GSSSPGASGQNQQT 468 GSGQNQQTLTASKE 653 GHMKGVTSGQNQQT 838
GGQVAPSSGQNQQT 284 GHPSPHVSGQNQQT 469 GSGTSGKTGKNQQT 654 GSGQNQKILTLDQT 839
GSFSMHTHGQNQQT 285 GSGSHHASRQNQQT 470 GQLVTFTSGQNQQT 655 GSGQNQQTKVGHSA 840
GSGQNQQVIQGSNT 286 GAVGHSYSGQNQQT 471 GSGQNQQSANKILT 656 GIARTTISGQNQQT 841
GRVLHSHAGQNQQT 287 GSRSQYDIGQNQQT 472 GSGQNQQHHSSHTT 657 GSGQNQQTSVGFRT 842
GSGQNQQTSLQDQT 288 GSGQGPQERGNQQT 473 GSGQNQKGMQPNQT 658 GSGQNQQTMIANIR 843
GSGLGRAPVQNQQT 289 GSIAHVGTGQNQQT 474 GSGQLVSGLYNQQT 659 GDMTRSSSGQNQQT 844
GNGFSSASGQNQQT 290 GSGQNQQKQNHGNT 475 GSSVGVPSGQNQQT 660 GSGHMSDLRQNQQT 845
GSGQMASRESNQQT 291 GSGQNQQALGSQRT 476 GSGQNQQWDSRRQT 661 GRGAVMASGQNQQT 846
GPGLPNHSGQNQQT 292 GSGAITHMPQNQQT 477 GSEQTRQSGQNQQT 662 GSGQNQQLSGKSVT 847
GNIQWQGSGQNQQT 293 GSGQRNPLLLNQQT 478 GSGIGSHIPQNQQT 663 GSHTLVVSGQNQQT 848
GMSAHMSSGQNQQT 294 GSSGIPVSHQNQQT 479 GSGQNQRLHGVDQT 664 GSGPWSAGLQNQQT 849
GHSFVNRSGQNQQT 295 GVHSLTPSGQNQQT 480 GEVSRVLSGQNQQT 665 GSGQHSPHALNQQT 850
GRAVMDHSGQNQQT 296 GVIVLHGSGQNQQT 481 GSGQNQQKVSPLLT 666 GSGQNQQPNSGSMT 851
GALTVMQSGQNQQT 297 GGTRVVDSGQNQQT 482 GSGLALERSQNQQT 667 GSGLAHLGGQNQQT 852
GSGQRSPVLPNQQT 298 GSGGVTYQSQNQQT 483 GPDRIGSSGQNQQT 668 GSSVRYEPKQNQQT 853
GSGQNGHLSLKQQT 299 GSGQNQAGHGPGQT 484 GSGQNQDHQNKQQT 669 GSGQNQQARPLELT 854
GSLPRGTSDQNQQT 300 GSGQLVTSGPNQQT 485 GSGQNQQTALYNNT 670 GSGQPRSTGINQQT 855
GVAGSLVSGQNQQT 301 GSGIAAQRTQNQQT 486 GSGAVHLTAQNQQT 671 GSGQNQANWVKVQT 856
GRGGIPQSGQNQQT 302 GSTPAGVGGQNQQT 487 GSLVSTQSGQNQQT 672 GSGHLFQSGQNQQT 857
GSGQYASSIPNQQT 303 GSGQNQQTSTGVHS 488 GSGVSARMVQNQQT 673 GSGQNRGISISQQT 858
GTDFGRQSSQNQQT 304 GSGQIRQLVDNQQT 489 GSGQTRMPLANQQT 674 GSGTHYDNRQNQQT 859
GIFMQTPSGQNQQT 305 GSLIGMQSGQNQQT 490 GSGISSRNMQNQQT 675 GSGQNQQTSTTPLP 860
GSGQNQQTRLVDLT 306 GSGQIKGKMDNQQT 491 GSGEKVHSGQNQQT 676 GSGQVHASQVNQKT 861
GTREMPLSGQNQQT 307 GSGSDMSSWQNQQT 492 GSGQNQQKLSSMST 677 GSSGHRESGQNQQT 862
GSRLVHVHGQNQQT 308 GRGQNQQHTGLATT 493 GSGQNQQTGQHMRV 678 GLSAEKSSGQNQQT 863
GSGRLVPNGPNQQT 309 GSGQNQQTLYSSNT 494 GSGMIHTTAQNQQT 679 GSGQEHRSLANQQT 864
GSGYLRESPQNQQT 310 GSGQTQVLKSNQQT 495 GSGQNWPALKGQQT 680 GSGQTVVRIANQQT 865
GARIQNASGQKQQT 311 GSRTLSNVGQNQQT 496 GASHMSISGQNQQT 681 GSGQNVSSVHRQQT 866
GLSNPMPSGQNQQT 312 GSGVQHSLPQNQQT 497 GSDQNQQLGYSKQT 682 GSGASRMSIQNQQT 867
GSTVQDTRGQNQQT 313 GNYLHQASGQNQQT 498 GIPSIRESGQNQQT 683 GVAFIGSSGQNQQT 868
GPFGMPSSGQNQQT 314 GSGGTSVHQQNQQT 499 GSGIPSVKFQNQQT 684 GSGQNQQTVPTRQT 869
GSGQNHGVLSNQQT 315 GMDHSRPSGQNQQT 500 GSGQNQQTSVSQNV 685 GSGQAAKSSQNQQT 870
GSGYSMSQAQNQQT 316 GSGQNQQSMGTFTT 501 GSGQNQQIGESRMT 686 GSGQNQQVAIRTST 871
GSGMLTHTLQNQQT 317 GSGQNQQTPLRPPT 502 GSGSSSMSFQNQQT 687 GSVHMQNAGQNQQT 872
GRGSPHASRQNQQT 318 GSGQNQHHSVSQQT 503 GSGQKQERAVSKQT 688 GSGMRQAGVQNQQT 873
GLSWPSTSGQNQQT 319 GSGQLRSLSTNQQT 504 GCTTRLNSGQNQQT 689 GSGQNQQVGGKTVT 874
GNSMERTSGQNQQT 320 GSGSPRQLSQNQQT 505 GSGQNQQIISTKIT 690 GVHDMRVSGQNQQT 875
GSGMSPSTLQNQQT 321 GSGQNQQTTASSHT 506 GSGQNQQKSLNGNT 691 GSGQHVSVANNQQT 876
GSGHGQVLSQNQQT 322 GRGQVVSTHQNQQT 507 GSGIPAPRLQNQQT 692 GSAAMSVRGQNQQT 877
GRGQIYSTGGNQQT 323 GSAQVSMVGQNQQT 508 GSGQIRESMGNQQT 693 GVSRGGPSGQNQQT 878
GVVAAHNSGQNQQT 324 GSSTLVTIGKNQQT 509 GSGQNSGVHFNQQT 694 GSGQMVHTIGNQQT 879
GDSSLRHSGQNQQT 325 GFAHQASSGQNQQT 510 GSGQNIGHSLPQQT 695 GRGGSMAETQNQQT 880
GSLVSQGAGQNQQT 326 GSGQPVLSISNQQT 511 GSGERSISVQNQQT 696 GSGHTNPTRQNQQT 881
GSLLQAHSGQNQQT 327 GSGQSHRSELNQQT 512 GSGLKPNVLQNQQT 697 GSGEAARYEQNQQT 882
GSGHIYVGIQNQQT 328 GSSVGSPIGQNQQT 513 GSGQVAYAQGNQQT 698 GSGQNERHLVLQQT 883
GHHTTVQSGQNQQT 329 GSGMPIRNVQNQQT 514 GSGQSSYGSGNQQT 699 GSGQNQQSKQQVLT 884
GSRQSKRNELNQQT 330 GSSTRVDSGQNQQT 515 GSGQNQAMTHGDQT 700 GSGQARAHRGNQQT 885
GSGQNQQHVSSPRT 331 GSGQNQQTAMRSTT 516 GSGQNQALVSMGQT 701 GSGQNQQPLDTSRT 886
GSSKELLWGQNQQT 332 GSGQNQQHSSSHLT 517 GSGQNPSFMRGQQT 702 GSGQNQQLANMVTT 887
GSLSTPSSGQNQQT 333 GSRNGHAVGQNQQT 518 GSGQNQQSHLRTNT 703 GSGQMKDLHRNQQT 888
GSIGYAGQGQNQQT 334 GLGAYQSSGQNQQT 519 GYTRLETSGQNQQT 704 GSGQNQHLSSFVQT 889
GSGQNQRVSNSQQT 335 GPGLSGHSGQNQQT 520 GSGQSYDMRGNQQT 705 GSGQNQQPSSRVTT 890
GSGYASHVQQNQQT 336 GSTGIVSSGQNQQT 521 GSRTTQDIGQNQQT 706 GSGQNQQLAITLGT 891
GSGEYSRSGQNQQT 337 GSRTTQVIGQNQQT 522 GSGHPYKAAQNQQT 707 GSGQNQQTVGNPAT 892
GSVSTHSSGQNQQT 338 GSGLLHRAQQNQQT 523 GRLSNAHGGQNQQT 708 GSGQNQGRAHPMQT 893
GSGQNQHSLGNYQT 339 GSGQNAQQAAAQQT 524 GSGQNQRAVLNDQT 709 GSGQLIASVVNQQT 894
GSGGLDTRGQNQQT 340 GSGQNQQSALRTQT 525 GGSHTYGGGQNQQT 710 GSSVRSLVGQNQQT 895
GNILHATSGQNQQT 341 GSGFLSDTRQNQQT 526 GSSVNSMIGQNQQT 711 GGAGSAHSGQNQQT 896
GSGQSYTMTQNQQT 342 GSGLLYHDQQNQQT 527 GNSSMMGSGQNQQT 712 GSDQNQQTMSSTRT 897
GSGQNQHSAPNSQT 343 GSGQNQHYSLHKQT 528 GNRDRPSSGQNQQT 713 GSGQNQQMAGAFRT 898
GSGQNQQTMDHNRT 344 GSGHSPLPQQNQQT 529 GSGNMHASRQNQQT 714 GSLGNLQRGQNQQT 899
GSNGGVGTGQNQQT 345 GNGHSMRPNQNQQT 530 GFIFPKVSGQNQQT 715 GSGPSISHGQNQQT 900
GAGSIIPSGQNQQT 346 GSGLKWSTLQNQQT 531 GSGQNQQLKNSTST 716 GSGQNQQSSFNVQT 901
GSGQTHGGQHNQQT 347 GSGQMGRQAVNQQT 532 GSGQNQQSQYMPRT 717 GSGQNQQTGQATHN 902
GSNLSFQSGQNQQT 348 GSGQNQQTSGVLTL 533 GSGQRMADIGNQQT 718 VSGSPHSKAQNQQT 903
GATLQVHSGQNQQT 349 GSGQNQQALHNPHT 534 GSGQNQSHYPSQQT 719 CSGSPHSKAQNQQT 904
GSGFNQRSEQNQQT 350 GSGQNQQVIPNSKT 535 GSDGKMHRGQNQQT 720 GSGSPHRKAQNQQT 905
GSGSLRDFDQNQQT 351 GSPLQDRVGQNQQT 536 GSGSVGFIGQNQQT 721 GRGSPHSKAQNQQT 906
GSGDSITGKQNQQT 352 GSGQNQYSSTNPQT 537 GLHGMTLSGQNQQT 722 GSGSPHSKAQNKQT 907
GSGQDRNIVQNQQT 353 GAMTVTISGQNQQT 538 GSDQSKRGDSNQQT 723 GSGSPHSKAQTQQT 908
GSGLSHSHQQNQQT 354 GSGQNQQLQTLIRT 539 GSLFLATGGQNQQT 724 GSGSTHASRQNQQT 909
GSGQNQQTGMSSVK 355 GSGLRQTSQQNQQT 540 GSGQNQQPSAFSKT 725 GSGSPHKYGQNQQT 910
GSVTHGISGQNQQT 356 GSGQNQQTGLRQQT 541 GSGQLPQSGLNQQT 726 GSGSPHKFGQNQQT 911
GVVAHQPSGQNQQT 357 GSGQTRQMKDNQQT 542 GSGSKQNALQNQQT 727 VSGSPHKFGQNQQT 912
GSGPILGQLQNQQT 358 GSGQNHGLQSGQQT 543 GSGQRRELSQNQQT 728 GSGSPHSKAQNHQT 913
GSGHVPNSGLNQQT 359 GSGQSHRQPENQQT 544 GSGQREPKASNQQT 729 GSGSPHSKAQHQQT 914
GDAGVRSSGQNQQT 360 GSGQDRHIVQNQQT 545 GSGQNQQHPSTQQT 730 GSGSPHKTYQNQQT 915
GSGSQLMSLQNQQT 361 GSGQNQQLPHSNLT 546 GSQSTLGLGQNQQT 731 VSGSPHASRQNQQT 916
GSGLDYSQRQNQQT 362 GSGQLSVPYDNQQT 547 GSGQNQQMPGLSST 732 GSGSPHKFGKNQQT 917
GSGQSSGRLINKQT 363 GSGRNPQTQPLQQT 548 GSGQNQQTVGGKNL 733 GSGSPHASRQNQHT 918
GSSVSPSSGQNQQT 364 GSGQPYSTGLNQQT 549 GSSREFHSGQNQQT 734 GSHSPHKSGQNQQT 919
GSGQVVGLSGNQQT 365 GSGQNQQTHGGLRD 550 GSGQNQQTVPSNLV 735 GSGQNQQRRMSPST 920
GSNMGVPLGQNQQT 366 GAYGMVSSGQNQQT 551 GSGQNAYSSQAQQT 736 GSGSPHSKPQNQQT 921
GSFYPSSTGQNQQT 367 GSGIQSSYSQNQQT 552 GSGQNKDHSTRRQT 737 GSGSPHKFGQKQQT 922
GSGQNQQTRLTDLT 368 GPRLSDQSGQNQQT 553 GQLGSVGSGQDQQT 738 VSGSPHGARQNQQT 923
GPTNGRSSGQNQQT 369 GSGQNQQTHPSPCT 554 GSGQHAAPGHNQQT 739 GSGSPHSKAQKQQT 924
GSGLLHGKLQNQQT 370 GSGQSFQMHTNQQT 555 GSGQNQQTSQSPPT 740 GSHSPHKRGQNQQT 925
GANMGHVSGQNQQT 371 GSGQNQQTGNPKHT 556 GSGNYRDHEQNQQT 741 GSGQNRQRLKGLET 926
GSGQNQQSGRGDLT 372 GFSSAVHSGQNQQT 557 GSGQHSNQHVNQQT 742 GSGSPHKLGQNQQT 927
GSHGHYASGQKQQT 373 GSGQNQQTSMSNAT 558 GSGQTARNGINQQT 743 GSGSPHKTSKNQQT 928
GSGDLRISPQNQQT 374 GSGQDMKQHHNQQT 559 GSGQNQQHYGSQGT 744 GSGSPHKIGQNQQT 929
GSGMPVILGQNQQT 375 GLRLSTPSGQNQQT 560 GSGSPQASRQNQQT 745 GSGQDSPHVRNQQT 930
GRGVITSSGQNHQT 376 GSGQNQQTSVYMNT 561 GSGFSHSMGKNQQT 746 GSGSPHKTSQNQQT 931
GSGHSVSGPQNQQT 377 GSGQNQYSQSSMQT 562 GSGQSHSLETNQQT 747 GSGSPHASRKNQQT 932
GSRNGHTVGRNQQT 378 GSGQNQQSMADHTT 563 GTEQTRQSGQNQQT 748 GSHSPHKSGQKQQT 933
GAGVHMVSGQNQQT 379 GWERSFVSGQNQQT 564 GSGRHLASVQNQQT 749 GSGSPHKTSQKQQT 934
GSGQNHRPSVLQQT 380 GLLAGKSSGQNQQT 565 GLGSKNHSGQNQQT 750 GSGSPHVRGQNKQT 935
GSGSPRDSIQNQQT 381 GKSFVPQSGQNQQT 566 GSGQNQQTSHFPSA 751 GSGSPHKTTQNQQT 936
GSGQGIHSSVNQQT 382 GSGQMQSAGSNQQT 567 GSGQLSGTPQNQQT 752 GSGPVRALRQNQQT 937
GSGQQLSITPNQQT 383 GSDQNQRLTSSMQT 568 GSGQNQQAPHKKET 753 GSGSPHVRGQKQQT 938
GGYHSQTSGQNQQT 384 GESRAVLSGQNQQT 569 GSGQNQQTLRGSLE 754 CSGSPHKTSQNQQT 939
CSHSPHKSGQNQQT 940 DAGSPHSKAQNQQ 1909 GSGSPHASRQNQQ 2019 GNDSPHKSVQNQQ 2129
GHDSPHKSGQNQQ 1800 GSGSPHSKGQNQQ 1910 GSGSPHASRQNKQ 2020 GHDSPHKSAQNYQ 2130
GSGSPHSKAQNQQ 1801 DGGSPHSKAQNQQ 1911 GSGSPHVKIQNQQ 2021 GSASPHSKALNQQ 2131
GSGSPHSKAQNRH 1802 ASGSPHSKAHNQQ 1912 GSGSPHSKAKNQQ 2022 GHESPHKSAQNRQ 2132
GSGSPHSKVQNQQ 1803 GSGSPHSKAQNTY 1913 GSGSPHKKNQNQQ 2023 GQDSPHKIGQNQQ 2133
MSGSPHSKAQNQQ 1804 GSGSPHSKSQNQH 1914 GSGSPHVRMQNQQ 2024 GHDSPHKSGQNHL 2134
GRGSPHSKAQNQQ 1805 GGGSPHSKAQDKQ 1915 GSGSPHASRQKQQ 2025 GHDSPHKSGQYQH 2135
RNGSPHSKAQNQQ 1806 GSGSPHSKAQNHL 1916 GHSSPHRSGQNQQ 2026 GNDSPHKSVQNHQ 2136
GSGSPHSKARDQQ 1807 GSGSPHSKAQIGM 1917 GSGSPHTRGQNQQ 2027 GHDSPHKSGQNQW 2137
GSGSPHSKAPNLQ 1808 GSGSPHSKALNKQ 1918 CSGSPHSKAQNQQ 2028 GHDSPHKSVQNQH 2138
TSGSPHSKAQNQQ 1809 GGGSPHSKAQNPQ 1919 GSGSPHRKAQNQQ 2029 GHDSPHKSGQNQH 2139
GSGSPHSKAHVRQ 1810 GTGSPHSKAPNQL 1920 GSGSPHSKAQNKQ 2030 GHDSPHKSGQTRQ 2140
GSGSPHSKAPNQH 1811 GSGSPHSKAQLQQ 1921 GSGSPHSKAQTQQ 2031 GHDSPHKSGQNLH 2141
ISGSPHSKAQNQQ 1812 GGGSPHSKAQYQQ 1922 CSGSPHKTSQNQQ 2032 GHDSPHKSAQNQE 2142
GPGSPHSKAHNQQ 1813 GGGSPHSKAQHQQ 1923 CSHSPHKSGQNQQ 2033 GHDSPHKSGQHLQ 2143
GSGSPHSKTQSQQ 1814 GSGSPHSKAQRMS 1924 GQSSPHRSGQNQQ 2034 GHDSPHKSRLNQP 2144
ESGSPHSKAQNQQ 1815 GSGSPHSKAQGIL 1925 GRGSPHASRQNQQ 2035 GQDSPHKSGQNQD 2145
GSGSPHSKAQPAK 1816 GSGSPHSKAQDRQ 1926 GSGSPHASRKNQQ 2036 GHDSPHKSGRNQQ 2146
SSGSPHSKAQNQQ 1817 GSGSPHSKARDWQ 1927 GSGSPHASRQNQH 2037 GHDSPHKSGQNLL 2147
GNGSPHSKAQNQQ 1818 GSGSPHSKAQNTH 1928 GSGSPHKFGKNQQ 2038 GHDSPHKSGQLVI 2148
GSGSPHSKSQTQQ 1819 GSGSPHSKAQERS 1929 GSGSPHKFGQKQQ 2039 GHDSPHKSRQSQQ 2149
ASGSPHSKAQNQQ 1820 GSGSPHSKAQNYQ 1930 GSGSPHKFGQNQQ 2040 GHDSPHKSGRTQE 2150
GSGSPHSKAQNLA 1821 GSGSPHSKAQRTC 1931 GSGSPHKIGQNQQ 2041 GHDSPHKSVQTHQ 2151
GSGSPHSKSQNQL 1822 GSGSPHSKAQIGH 1932 GSGSPHKLGQNQQ 2042 GHDSPHKSGQNQP 2152
NSGSPHSKAQNQQ 1823 GSGSPHSKAQGAI 1933 GSGSPHKTSKNQQ 2043 GHDSPHKSGQTQQ 2153
GSGSPHSKAQGQQ 1824 GSGSPHSKAQVPP 1934 GSGSPHKTSQKQQ 2044 GPDSPHKIGQNQQ 2154
VSGSPHSKAQNQQ 1825 GSGSPHSKAQVQQ 1935 GSGSPHKTSQNQQ 2045 GHDSPHKSVQNQQ 2155
GSGSPHSKALNRQ 1826 GSGSPHSKALMRQ 1936 GSGSPHKTTQNQQ 2046 GHDSPHKSRQDQH 2156
LSGSPHSKAQNQQ 1827 GSGSPHSKAQYSV 1937 GSGSPHKTYQNQQ 2047 GPDSPHKSGQKQQ 2157
GSGSPHSKAHNQQ 1828 GSGSPHSKVPNLQ 1938 GSGSPHKYGQNQQ 2048 GHDSPHKSRQSQH 2158
GSGSPHSKTQNQQ 1829 GSGSPHSKAQAIT 1939 GSGSPHSKAQHQQ 2049 GHDSPHKSVQNQL 2159
GGGSPHSKAQTQQ 1830 GSGSPHSKAQKTL 1940 GSGSPHSKDQNQQ 2050 GYDSPHKSGQYQH 2160
GSGSPHSKAQNPP 1831 GSGSPHSKAQNQW 1941 GSGSPHSKPQNQQ 2051 GHDSPHKSRQNQQ 2161
GSGSPHSKAQNLQ 1832 GSGSPHSKAQLHH 1942 GSGSPHVRGQKQQ 2052 GHDSPHKSWVRQQ 2162
GGGSPHSKAQNQQ 1833 GSGSPHSKAQNII 1943 GSGSPHVRGQNKQ 2053 GHESPHKSGQNQH 2163
GSGSPHSKAQYQQ 1834 MEGSPHSKAQNQQ 1944 GSHSPHKRGQNQQ 2054 GHDSPHKIGHNQQ 2164
GGGSPHSKAQNKQ 1835 GSGSPHSKAQGHH 1945 GSHSPHKSGQKQQ 2055 GHDSPHKSNAWQQ 2165
GSGSPHSKAQDQE 1836 GSGSPHSKAQSKV 1946 GSHSPHKSGQNQQ 2056 GHDSPHKSGQSVP 2166
KSGSPHSKAQNQQ 1837 GSGSPHSKAQLPS 1947 VSGSPHASRQNQQ 2057 GHESPHKSGQNIQ 2167
GGGSPHSKAQNQL 1838 GSGSPHSKAIGKQ 1948 VSGSPHGARQNQQ 2058 GHDSPHKSVQNHL 2168
GSGSPHSKAQNHQ 1839 GGGSPHSKSQNQQ 1949 VSGSPHKFGQNQQ 2059 GHDSPHKIGLDQQ 2169
GSGSPHSKAQDQQ 1840 GSGSPHSKAQAIH 1950 GSGSPHSKAQYYV 2060 ASGSPHSKAQHQQ 2170
GGGSPHSKSQNQL 1841 GSGSPHSKAQHGL 1951 GSGSPHSKLRRQQ 2061 GHDSPHKRGPDQQ 2171
GNGSPHSKAQNKQ 1842 GSGSPHSKAQFMC 1952 GSGSPHSKAGCGQ 2062 GMGSPHSKTQNQQ 2172
GSGSPHSKGHWQQ 1843 VSGSPHSKAQGQQ 1953 GSGSPHSRAQNQQ 2063 GHDSPHKSGESQQ 2173
GSGSPHSKAPNQQ 1844 GGGSPHSKAQNQM 1954 GSGSPHSKRLRQQ 2064 GHDSPHKHGQNHQ 2174
GSGSPHSKAQNQL 1845 GSGSPHSKAQHLQ 1955 GSGSPHSLRRNQQ 2065 GTGSPHSKAQNQL 2175
GSGSPHSKRPEQQ 1846 ENGSPHSKAQNQQ 1956 GSGSPHSRGRNQQ 2066 GHDSPHKSVQNKQ 2176
GSGSPHSKAQRTM 1847 GSGSPHSKTQNHQ 1957 GSGSPHSSRRNQQ 2067 GQVSPHKSGQNQQ 2177
GNGSPHSKAQNQH 1848 GSGSPHSKAQPAR 1958 GSGSPHSKAFRLQ 2068 GHDSPHKSGQRQL 2178
HSGSPHSKAQNQQ 1849 GSGSPHSKAQSLQ 1959 GSCSPHRKAQNQQ 2069 GHDSPHKIGQNQL 2179
GGGSPHSKALNQQ 1850 GSGSPHSKSQSQL 1960 GSGSPHFLRQNQQ 2070 GHDSPHKSGQIIV 2180
GSGSPHSKALHQH 1851 GSASPHSKAHSQQ 1961 GSGSPHSLRFNQQ 2071 GYDSPHKSGQKQS 2181
GTGSPHSKAQNHQ 1852 GSGSPHSKAQMPS 1962 GSGSPHSKWLLQQ 2072 GNGSPHSKAQNQE 2182
GSGSPHSKAQHRI 1853 GSGSPHSKAQGSL 1963 GSGSPHSKRRLQQ 2073 GDDSPHKSVQNQQ 2183
GSGSPHSKAQYIH 1854 GSGSPHSKSQNQQ 1964 GSGSPHSKAQRKL 2074 GHDSPHKSVQSHQ 2184
GGGSPHSKAHNQQ 1855 GNGSPHSKSQNQQ 1965 GSGSPHSKALRRQ 2075 GHDSPHKSGQFVV 2185
GSGSPHSKAQKFE 1856 GSGSPHSKAQVPA 1966 GSGSPHSKAQRLR 2076 GHDSPHKSRQNLQ 2186
ESGSPHSKAQNHQ 1857 GNGSPHSKAQNLQ 1967 GSGSPHSKAQRRL 2077 GHNSPHKSGQNQE 2187
GSGSPHSKAQFPS 1858 GSGSPHSKAQDKQ 1968 GSGSPHSKARRQQ 2078 GHDSPHKSGQSQP 2188
PSGSPHSKAQNQQ 1859 GSGSPHSKAHYQQ 1969 GSGSPHSKARRLQ 2079 GHESPHKSGQNEQ 2189
GNGSPHSKAQNPL 1860 GSGSPHSKAQVPS 1970 GSGSPHSKSRRQQ 2080 GHDSPHKSGQNQL 2190
GGGSPHSKAQSQQ 1861 GGGSPHSKAQNHQ 1971 GLLSPHWKAQNQQ 2081 GHDSPHKSAQNLL 2191
GSGSPHSKAQAIK 1862 GSGSPHSKARGEQ 1972 GSGSPHSKARLRQ 2082 ASGSPHSKAINQQ 2192
GSGSPHSKGQNRQ 1863 GGGSPHSKAQYQH 1973 GSGSPHSKASKRQ 2083 GNGSPHKRGQNQQ 2193
GSGSPHSKAQSQQ 1864 GSGSPHSKAPGQQ 1974 GSGSPHVRRQNQQ 2084 GHDSPHKSGQSLQ 2194
GSVSPHGKAQNQL 1865 KNGSPHSKAQNQQ 1975 GSGSPHSKAQLYR 2085 GHDSPHKSAQNHQ 2195
ASGSPHSKAQNQL 1866 GSGSPHSKRLEQQ 1976 GSGSPHSKAQLTV 2086 GHDSPHKSGRNRQ 2196
RSGSPHSKAQNQQ 1867 GSGSPHSKAQNQS 1977 GHDSPHKRGQHRQ 2087 GHDSPHKYGQNEQ 2197
GSGSPHSKAQYQH 1868 GSGSPHSKAQKVI 1978 GHDSPHKSGQKQQ 2088 GNGSPHSKAPNLQ 2198
GSGSPHTKAQNPQ 1869 GSGSPHSKAQNND 1979 GHDSPHKSGLTQQ 2089 GHDSPHKSQQNQQ 2199
GSGSPHSKGQNPP 1870 GSGSPHSKAQSVH 1980 GDDSPHKSGRNQQ 2090 GHDSPHKSVQSKQ 2200
GSGSPHSKAQHQL 1871 GSGSPHSKAQPLG 1981 GHDSPHKSGLNQQ 2091 GNDSPHKIGHNQQ 2201
GSGSPHSKAQSPP 1872 KEGSPHSKAQNQQ 1982 GHESPHKSAQNHQ 2092 GGGSPHSKAQDQQ 2202
GSGSPHSKAQAKL 1873 GSGSPHSKAHNQE 1983 GHDSPHKSAQNQW 2093 GQDSPHKSGQNPL 2203
GSGSPHSKTKSQQ 1874 GSGSPHSKAQIQQ 1984 GHDSPHKSGQNTH 2094 ASGSPHSKAQNHQ 2204
GSGSPHSKAQDRP 1875 GSGSPHSKAQVRN 1985 GHDSPHKSGRRRQ 2095 GHDSPHKSGRDQK 2205
GIGSPHSKAQNLG 1876 GSGSPHSKAPSNQ 1986 GHDSPHKSAQNQQ 2096 GHDSPHKSVHNQQ 2206
GSGSPHSKAQAFH 1877 GSGSPHSKAQVGH 1987 GHDSPHKSGQYQQ 2097 GHDSPHKSGQWKR 2207
GSGSPHSKAQKQQ 1878 GSGSPHSKAQRDI 1988 GNYSPHKIGQNQQ 2098 GSGSPHSKAENRQ 2208
GSGSPHSKAQNAQ 1879 GSGSPHSKAQMPN 1989 GHDSPHKSRQNDQ 2099 GHDSPHKSGQSQQ 2209
WSGSPHSKAQNQQ 1880 AIGSPHSKAQNQQ 1990 GHDSPHKSGQIRQ 2100 GHDSPHKSRQAQQ 2210
GSGSPHSKAHNQL 1881 GSGSPHSKARGLQ 1991 GHDSPHKIGQNQH 2101 GHDSPHKSVQNHQ 2211
GNGSPHSKAQNHQ 1882 GSGSPHSKLQKQQ 1992 GYDSPHKSGQKQQ 2102 GHDSPHKSKQNQQ 2212
GGGSPHSKAQNLQ 1883 GSGSPHSKAPSLQ 1993 GHDSPHKSGQSVQ 2103 GHDSPHKSAQNQL 2213
GSGSPHSKAQKLN 1884 GSGSPHSKAQRDQ 1994 GHESPHKSGRSQQ 2104 GHDSPHKSGQTQP 2214
GGGSPHSKSQNQH 1885 GSGSPHSKNRDQQ 1995 GHDSPHKSGQNKL 2105 GHDSPHKLWINQQ 2215
GSGSPHSKSQNVQ 1886 GSGSPHSKAQAKG 1996 GHDSPHKTGQNQQ 2106 GPDSPHKSGQNQQ 2216
GSGSPHSKAQAQQ 1887 GSGSPHSKAQSAH 1997 GRGSPHKRGQNQQ 2107 GHDSPHKSVQKQL 2217
DSGSPHSKAQNQQ 1888 GNGSPHSKSQNQH 1998 GSGSPHTKAQNPP 2108 GHPSPHWKGQNQQ 2218
ASGSPHSKAPNQQ 1889 GSGSPHSKSQNHQ 1999 GQDSPHKSGQHQQ 2109 GHDSPHKSGRNQL 2219
GSGSPHSKAQTPP 1890 RSGSPHSKAQDQQ 2000 GHDSPHKSGQIQH 2110 GSGSPHSKVQDQQ 2220
IDGSPHSKAQNQQ 1891 GSGSPHSKAQSTM 2001 GHDSPHKSGPRQQ 2111 GHDSPHKMGRNQQ 2221
GSGSPHNKAQNHQ 1892 GSGSPHSKAQREM 2002 GHDSPHKSGHTQQ 2112 GHDSPHKSGISIQ 2222
GSGSPHSKAQPPA 1893 GGGSPHSKSQNRQ 2003 GHDSPHKSGQRQH 2113 GHDSPHKSVQNLQ 2223
GSGSPHSKAQERP 1894 GSGSPHSKAQYRA 2004 GSGSPHTKAQNQQ 2114 GHDSPHKMAHNQQ 2224
GSGSPHSKAQDLQ 1895 GGGSPHSKAQRQQ 2005 GHDSPHKSAQSQQ 2115 GHDSPHKHGQNQQ 2225
GGGSPHSKAQNPP 1896 GSGSPHSKNQWQQ 2006 GHESPHKSGQNQQ 2116 GHDSPHKSVQSQQ 2226
GSGSPHSKAQAMH 1897 GSGSPHSKAQRMN 2007 GHDSPHKSLQNQQ 2117 GHDSPHKSGQTVC 2227
GSGSPHSKALNQQ 1898 GSGSPHAKAQNHQ 2008 GHGSPHSKAQNPQ 2118 GQDSPHKSGQYQQ 2228
GSGSPHSKAQHPS 1899 GSGSPHSKAGDSQ 2009 GHDSPHKSGRNQE 2119 GHDSPHKSGQQIM 2229
GLGSPHSKSQNQQ 1900 GSGSPHSKLKSQQ 2010 GHDSPHKSGQTQL 2120 GHDSPHKSRQNEQ 2230
GTGSPHSKAQNQQ 1901 GSGSPHSKAQKIS 2011 GHDSPHKSEKNQQ 2121 GHDSPHKSGLNHQ 2231
GSGSPHSKAPGLQ 1902 GSGSPHSKAPSMQ 2012 GRDSPHKSGQDQQ 2122 GYDSPHKSGQNQQ 2232
GSGSPHSKAQGIR 1903 GSGSPHSKASPRQ 2013 GHDSPHKTGHNQQ 2123 GHDSPHKSGQNLQ 2233
GSGSPHSKAQAPA 1904 GSGSPHSKRMEQQ 2014 GYDSPHKSGQTQQ 2124 GHDSPHKSRQDQQ 2234
GSGSPHSKSQSQQ 1905 GSGSPHSKAQYQN 2015 GHESPHKSGQTQQ 2125 GDDSPHKSGQKQL 2235
GSGSPHSKAQIPP 1906 GSGSPHARMQNQQ 2016 GHDSPHKSGQSKQ 2126 GSGSPHSKAQNQA 2236
GSGSPHSKAQTQL 1907 GSGSPHVKSQNQQ 2017 GHDSPHKTGQNQP 2127 GDDSPHKSGHNQQ 2237
GSGSPHSKAQAPS 1908 GQDSPHKSGQNQQ 2018 GHDSPHKSGQSPQ 2128 GHDSPHKSGQMIH 2238
GHDSPHKSGRNHQ 2239 GHDSPHKSVQNRQ 2240 GHDSPHKSGQKMN 2241 TINGHDSPHKSRLNQP 2728
TINGSGSPHSKAQNQQ 2242 TDRGSGSPHSKAQNQQ 2404 TINGSGSPHSKAQSTM 1314 TVDGHDSPHKSGQKQQ 2729
TINGHDSPHKSGQNQQ 2243 TINGSGSPHSKAQIPP 2405 TVNASGSPHSKAQNQL 1315 TINGQDSPHKSGQNQD 2730
TIIGSGSPHSKAQNRH 2244 TVKGSGSPHSKAQDQQ 2406 TINGSGSPHSKAQREM 1316 TIEGHDSPHKSGRNQQ 2731
TFPGSGSPHSKVQNQQ 2245 NADGSGSPHSKAQNQQ 2407 TVHGSGSPHSKAQSQQ 1317 TTNGHDSPHKSGQNLL 2732
TEKMSGSPHSKAQNQQ 2246 TDKVSGSPHSKAQNQQ 2408 TINGGGSPHSKSQNRQ 1318 TINGHDSPHKSGQLVI 2733
EINGRGSPHSKAQNQQ 2247 TITGSGSPHSKAQTQL 2409 TINGSGSPHSKAQYRA 1319 TVNGHDSPHKSRQSQQ 2734
TVNRNGSPHSKAQNQQ 2248 TINGSGSPHSKAQAPS 2410 TINGGGSPHSKAQRQQ 1320 TINGHDSPHKSGRTQE 2735
TVNGSGSPHSKARDQQ 2249 NCVGSGSPHSKAQNQQ 2411 TEPMSGSPHSKAQNQQ 1321 TINGHDSPHKSVQTHQ 2736
TFNGSGSPHSKAPNLQ 2250 TIRDAGSPHSKAQNQQ 2412 TINGSGSPHSKNQWQQ 1322 TSNGHDSPHKSGQNQP 2737
TEKTSGSPHSKAQNQQ 2251 TVKDSGSPHSKAQNQQ 2413 ETAGSGSPHSKAQNQQ 1323 VINGHDSPHKSGQTQQ 2738
TINGSGSPHSKAHVRQ 2252 NALGSGSPHSKAQNQQ 2414 TINGSGSPHSKAQRMN 1324 TINGPDSPHKIGQNQQ 2739
TVNGSGSPHSKAPNQH 2253 VINGSGSPHSKGQNQQ 2415 NNLGSGSPHSKAQNQQ 1325 AVNGHDSPHKSVQNQQ 2740
TEKISGSPHSKAQNQQ 2254 TVNGGGSPHSKAQNQQ 2416 TINGSGSPHAKAQNHQ 1326 TINGHDSPHKSRQDQH 2741
TINGPGSPHSKAHNQQ 2255 TIQDGGSPHSKAQNQQ 2417 TIIKNGSPHSKAQNQQ 1327 AINGPDSPHKSGQKQQ 2742
TVNGSGSPHSKTQSQQ 2256 TISGGGSPHSKAQNQQ 2418 TINGSGSPHSKAGDSQ 2580 TINGHDSPHKSRQSQH 2743
SINESGSPHSKAQNQQ 2257 TSNASGSPHSKAHNQQ 2419 TINGSGSPHSKLKSQQ 2581 TIYGHDSPHKSVQNQL 2744
TERTSGSPHSKAQNQQ 2258 TINGSGSPHSKAQNTY 2420 TINGSGSPHSKAQKIS 2582 TVNGHDSPHKSGQNLL 2745
TINGSGSPHSKAQPAK 2259 TINGSGSPHSKSQNQH 2421 TEYNSGSPHSKAQNQQ 2583 TENKSGSPHSKAQNQQ 2746
TEKSSGSPHSKAQNQQ 2260 TINGGGSPHSKAQDKQ 2422 TINGSGSPHSKAPSMQ 2584 TTNGQDSPHKSGQNQQ 2747
TSYGNGSPHSKAQNQQ 2261 TEFVSGSPHSKAQNQQ 2423 AINGSGSPHSKAQNQQ 2585 TDKGSGSPHSKAQNQQ 2748
TEKGSGSPHSKAQNQQ 2262 TVNGSGSPHSKAQNHL 2424 TINGSGSPHSKASPRQ 2586 TIDGHDSPHKSGRNQQ 2749
TINGSGSPHSKSQTQQ 2263 TREISGSPHSKAQNQQ 2425 TINGSGSPHSKRMEQQ 2587 TINGYDSPHKSGQYQH 2750
TERISGSPHSKAQNQQ 2264 TINGSGSPHSKAQIGM 2426 TINGSGSPHSKAQYQN 2588 TDNGHDSPHKSRQNQQ 2751
TERASGSPHSKAQNQQ 2265 TIDGSGSPHSKALNKQ 2427 TINGSGSPHSKAQYYV 2589 TINGHDSPHKSWVRQQ 2752
ELHGSGSPHSKAQNQQ 2266 TIIGGGSPHSKAQNPQ 2428 TINGSGSPHSKLRRQQ 2590 TINGHESPHKSGQNQH 2753
AINGSGSPHSKAQNLA 2267 QGEGSGSPHSKAQNQQ 2429 TINGSGSPHSKAGCGQ 2591 TVNGHDSPHKIGHNQQ 2754
TVNGSGSPHSKSQNQL 2268 TINGTGSPHSKAPNQL 2430 SMNGSGSPHSRAQNQQ 2592 TCNGHDSPHKSGRNQQ 2755
TERNSGSPHSKAQNQQ 2269 TVNGSGSPHSKAQLQQ 2431 TINGSGSPHSKRLRQQ 2593 TINGNGSPHSKAQNHQ 2756
SVNGNGSPHSKAQNQQ 2270 TFNGGGSPHSKAQYQQ 2432 TINGSGSPHSLRRNQQ 2594 NVVGHDSPHKSGQNQQ 2757
TFNGSGSPHSKAQGQQ 2271 SINGSGSPHSKTQSQQ 2433 TINGSGSPHSRGRNQQ 2595 TINGHDSPHKSNAWQQ 2758
TERVSGSPHSKAQNQQ 2272 TVNGGGSPHSKAQHQQ 2434 TINGSGSPHSSRRNQQ 2596 TDAGHDSPHKSGQNQQ 2759
TINGSGSPHSKALNRQ 2273 SEKGSGSPHSKAQNQQ 2435 TINGSGSPHSKAFRLQ 2597 TEVGHDSPHKSGQNQQ 2760
TERLSGSPHSKAQNQQ 2274 NVNGSGSPHSKAQNQQ 2436 TINGSCSPHRKAQNQQ 2598 SELGHDSPHKSGQNQQ 2761
TDNGSGSPHSKAHNQQ 2275 GGEGSGSPHSKAQNQQ 2437 TINGSGSPHFLRQNQQ 2599 TINGHDSPHKSGQSVP 2762
TFHGSGSPHSKTQNQQ 2276 TINGSGSPHSKAQRMS 2438 TINGSGSPHSLRFNQQ 2600 TINGHESPHKSGQNIQ 2763
TINGGGSPHSKAQTQQ 2277 TINGSGSPHSKAQGIL 2439 TINGSGSPHSKWLLQQ 2601 TINGHDSPHKSVQNHL 2764
TSNGSGSPHSKAQNPP 2278 EFVGSGSPHSKAQNQQ 2440 TINGSGSPHSKRRLQQ 2602 TINGHDSPHKIGLDQQ 2765
TINGSGSPHSKAQNLQ 2279 TIIGSGSPHSKAQDRQ 2441 TINGSGSPHSKAQRKL 2603 TSNASGSPHSKAQHQQ 2766
TVHGNGSPHSKAQNQQ 2280 SDKGSGSPHSKAQNQQ 2442 TINGSGSPHSKALRRQ 2604 TINGHDSPHKRGPDQQ 2767
TINGGGSPHSKAQNQQ 2281 TEQVSGSPHSKAQNQQ 2443 TINGSGSPHSKAQRLR 2605 TINGMGSPHSKTQNQQ 2768
TENMSGSPHSKAQNQQ 2282 TEHVSGSPHSKAQNQQ 2444 YLSGSGSPHSKAQNQQ 2606 TIKGHDSPHKSGESQQ 2769
TENVSGSPHSKAQNQQ 2283 TINGSGSPHSKARDWQ 2445 TINGSGSPHSKAQRRL 2607 TINGHDSPHKHGQNHQ 2770
TSSGSGSPHSKAQYQQ 2284 TENASGSPHSKAQNQQ 2446 TINGSGSPHSKARRQQ 2608 TVNGTGSPHSKAQNQL 2771
TIDGGGSPHSKAQNKQ 2285 EVQGSGSPHSKAQNQQ 2447 TINGSGSPHSKARRLQ 2609 TIIGHDSPHKSGQYQH 2772
TEKVSGSPHSKAQNQQ 2286 TINGSGSPHSKAQNTH 2448 TINGSGSPHSKSRRQQ 2610 TSNGHDSPHKSVQNKQ 2773
AINGSGSPHSKAQDQE 2287 TINGSGSPHSKAPNLQ 2449 TINGLLSPHWKAQNQQ 2611 IVNGQVSPHKSGQNQQ 2774
TCNKSGSPHSKAQNQQ 2288 TINGSGSPHSKAQERS 2450 TINGSGSPHSKARLRQ 2612 TVNGHDSPHKSGQRQL 2775
TINGGGSPHSKAQNQL 2289 TSNGSGSPHSKAQNYQ 2451 TINGSGSPHSKASKRQ 2613 TVNGHDSPHKIGQNQL 2776
NINGGGSPHSKAQNQQ 2290 TEYISGSPHSKAQNQQ 2452 TINGSGSPHVRRQNQQ 2614 TINGHDSPHKSGQIIV 2777
TEHLSGSPHSKAQNQQ 2291 TINGSGSPHSKAQRTC 2453 TINGSGSPHSKAQLYR 2615 IGNGHESPHKSGQNQQ 2778
AEMGSGSPHSKAQNQQ 2292 TINGSGSPHSKAQIGH 2454 GLSGSGSPHSKAQNQQ 2616 EVMGHDSPHKSGQNQQ 2779
ATNGSGSPHSKAQNHQ 2293 NCWGSGSPHSKAQNQQ 2455 TINGSGSPHSKAQLTV 2617 TINGYDSPHKSGQKQS 2780
AIKGSGSPHSKAQDQQ 2294 TINGSGSPHSKAQGAI 2456 TINGHDSPHKRGQHRQ 2618 TIHGNGSPHSKAQNQE 2781
TINGGGSPHSKSQNQL 2295 TDVNSGSPHSKAQNQQ 2457 MPEGHDSPHKSGQNQQ 2619 YQVGHDSPHKSGQNQQ 2782
TVNGNGSPHSKAQNKQ 2296 SDIGSGSPHSKAQNQQ 2458 MEGGHDSPHKSGQNQQ 2620 TIKGDDSPHKSVQNQQ 2783
TINGSGSPHSKGHWQQ 2297 TINGSGSPHSKAQVPP 2459 MEYGHDSPHKSGQNQQ 2621 TINGHDSPHKSVQSHQ 2784
TDKTSGSPHSKAQNQQ 2298 TINGSGSPHSKAQVQQ 2460 AEWGHDSPHKSGQNQQ 2622 TINGHDSPHKSGQFVV 2785
TFKGSGSPHSKAPNQQ 2299 TINGSGSPHSKALMRQ 2461 CEWGHDSPHKSGQNQQ 2623 TVNGHDSPHKSRQNLQ 2786
TVNGSGSPHSKAQNQL 2300 TINGSGSPHSKAQYSV 2462 ANNGQDSPHKSGQNQQ 2624 ATNGHNSPHKSGQNQE 2787
TINGSGSPHSKRPEQQ 2301 NSIGSGSPHSKAQNQQ 2463 IPEGHDSPHKSGQNQQ 2625 AINGHDSPHKSAQNQQ 2788
TINGSGSPHSKAQRTM 2302 TINGSGSPHSKVPNLQ 2464 ADMGHDSPHKSGQNQQ 2626 TEHGHDSPHKSGQNQQ 2789
TEKASGSPHSKAQNQQ 2303 AINGSGSPHSKAQSQQ 2465 IEYGHDSPHKSGQNQQ 2627 TIYGHDSPHKSGQSQP 2790
SDQGSGSPHSKAQNQQ 2304 TINGSGSPHSKAQAIT 2466 ADYGHDSPHKSGQNQQ 2628 TISGHESPHKSGQNEQ 2791
TEITSGSPHSKAQNQQ 2305 TINGSGSPHSKAQKTL 2467 IETGHDSPHKSGQNQQ 2629 AIIGHDSPHKSAQNQQ 2792
TDKSSGSPHSKAQNQQ 2306 TVNGSGSPHSKAQNQW 2468 MEWGHDSPHKSGQNQQ 2630 AIDGHDSPHKSGQNQL 2793
TIDGSGSPHSKAQNQQ 2307 TINGSGSPHSKAQLHH 2469 CEYGHDSPHKSGQNQQ 2631 TIMGHDSPHKSVQNQQ 2794
TVNGNGSPHSKAQNQH 2308 TEQTSGSPHSKAQNQQ 2470 RINGHDSPHKSGQKQQ 2632 EVGGHDSPHKSGQNQQ 2795
NTNGSGSPHSKAQNQQ 2309 TINGSGSPHSKAQNII 2471 MEIGHDSPHKSGQNQQ 2633 TINGHDSPHKSAQNLL 2796
TETHSGSPHSKAQNQQ 2310 NSLGSGSPHSKAQNQQ 2472 LEYGHDSPHKSGQNQQ 2634 TINASGSPHSKAINQQ 2797
TINGGGSPHSKALNQQ 2311 TIPMEGSPHSKAQNQQ 2473 ADWGHDSPHKSGQNQQ 2635 AINGNGSPHKRGQNQQ 2798
TINGSGSPHSKALHQH 2312 TINGSGSPHSKAQGHH 2474 IEIGHDSPHKSGQNQQ 2636 SEMGHDSPHKSGQNQQ 2799
TINGTGSPHSKAQNHQ 2313 TDRTSGSPHSKAQNQQ 2475 DIMGHDSPHKSGQNQQ 2637 AQQGHDSPHKSGQNQQ 2800
TINGSGSPHSKAQHRI 2314 TINGSGSPHSKAQSKV 2476 FEQGHDSPHKSGQNQQ 2638 AINGHDSPHKSGQSLQ 2801
TINGSGSPHSKAQYIH 2315 EVVGSGSPHSKAQNQQ 2477 MEFGHDSPHKSGQNQQ 2639 TINGSGSPHSKAPNQQ 2802
TENISGSPHSKAQNQQ 2316 TINGSGSPHSKAQLPS 2478 CDQGHDSPHKSGQNQQ 2640 CGEGHDSPHKSGQNQQ 2803
TIIGGGSPHSKAHNQQ 2317 TINGSGSPHSKAIGKQ 2479 LPEGHDSPHKSGQNQQ 2641 TVNGHDSPHKSAQNHQ 2804
TINGSGSPHSKAQKFE 2318 TEPTSGSPHSKAQNQQ 2480 IENGHDSPHKSGQNQQ 2642 TVNGHDSPHKSGQTQL 2805
TSNESGSPHSKAQNHQ 2319 TVNGGGSPHSKSQNQQ 2481 MESGHDSPHKSGQNQQ 2643 TNNGHDSPHKSGRNRQ 2806
TINGSGSPHSKAQFPS 2320 TINGSGSPHSKAQAIH 2482 AEIGHDSPHKSGQNQQ 2644 TINGHDSPHKYGQNEQ 2807
TERPSGSPHSKAQNQQ 2321 TINGSGSPHSKAQHGL 2483 VEYGHDSPHKSGQNQQ 2645 TINGNGSPHSKAPNLQ 2808
TINGNGSPHSKAQNPL 2322 SELGSGSPHSKAQNQQ 2484 IINGHDSPHKSGLTQQ 2646 SINGHDSPHKSQQNQQ 2809
SIKGNGSPHSKAQNQQ 2323 TINGSGSPHSKAQFMC 2485 TSNGDDSPHKSGRNQQ 2647 TIGGHDSPHKSGQNQQ 2810
TERMSGSPHSKAQNQQ 2324 TINVSGSPHSKAQGQQ 2486 IEVGHDSPHKSGQNQQ 2648 TINGHDSPHKSVQSKQ 2811
TERSSGSPHSKAQNQQ 2325 TINGGGSPHSKAQNQM 2487 MEMGHDSPHKSGQNQQ 2649 ELVGHDSPHKSGQNQQ 2812
TELHSGSPHSKAQNQQ 2326 TVNGSGSPHSKAQHLQ 2488 AEVGHDSPHKSGQNQQ 2650 ELMGHDSPHKSGQNQQ 2813
TELTSGSPHSKAQNQQ 2327 TIRENGSPHSKAQNQQ 2489 MDAGHDSPHKSGQNQQ 2651 TINGNDSPHKIGHNQQ 2814
TINGSGSPHSKAHNQQ 2328 TINGSGSPHSKTQNHQ 2490 VEWGHDSPHKSGQNQQ 2652 TIKGGGSPHSKAQDQQ 2815
TINGGGSPHSKAQSQQ 2329 TINGSGSPHSKAQPAR 2491 AEQGHDSPHKSGQNQQ 2653 TVNGHDSPHKSGQTQQ 2816
TINGSGSPHSKAQAIK 2330 TVNGSGSPHSKAQSLQ 2492 LEWGHDSPHKSGQNQQ 2654 TINGQDSPHKSGQNPL 2817
TENTSGSPHSKAQNQQ 2331 TINGSGSPHSKSQSQL 2493 MELGHDSPHKSGQNQQ 2655 TVNASGSPHSKAQNHQ 2818
TIDGSGSPHSKGQNRQ 2332 TINGSASPHSKAHSQQ 2494 METGHDSPHKSGQNQQ 2656 TINGHDSPHKSGRDQK 2819
NINGSGSPHSKAQSQQ 2333 TWQNSGSPHSKAQNQQ 2495 MEAGHDSPHKSGQNQQ 2657 TINGHDSPHKSVHNQQ 2820
TINGSVSPHGKAQNQL 2334 TINGSGSPHSKAQDRQ 2496 IESGHDSPHKSGQNQQ 2658 TINGHDSPHKSGQWKR 2821
TSNASGSPHSKAQNQL 2335 TINGSGSPHSKAQMPS 2497 MEVGHDSPHKSGQNQQ 2659 TIDGSGSPHSKAENRQ 2822
TEARSGSPHSKAQNQQ 2336 TNNGGGSPHSKAQNLQ 2498 CEIGHDSPHKSGQNQQ 2660 NEIGHDSPHKSGQNQQ 2823
TEKNSGSPHSKAQNQQ 2337 TINGSGSPHSKAQGSL 2499 ATNGHDSPHKSGLNQQ 2661 AINGHDSPHKSGQSQQ 2824
TANGSGSPHSKAQYQQ 2338 TEVTSGSPHSKAQNQQ 2500 MDGGHDSPHKSGQNQQ 2662 IINGHDSPHKSRQAQQ 2825
TVNGSGSPHSKAQYQH 2339 SINGGGSPHSKAQYQQ 2501 QEVGHDSPHKSGQNQQ 2663 TPNGHDSPHKSGQNQQ 2826
TINGSGSPHTKAQNPQ 2340 TVIGSGSPHSKSQNQQ 2502 ADQGHDSPHKSGQNQQ 2664 ITNGHDSPHKSGQTQQ 2827
TINGSGSPHSKGQNPP 2341 AVNVSGSPHSKAQNQQ 2503 TINGHESPHKSAQNHQ 2665 TINGHDSPHKSVQNHQ 2828
TIIGSGSPHSKAQHQL 2342 TVNGNGSPHSKSQNQQ 2504 TINGHDSPHKSAQNQW 2666 TINGHDSPHKSKQNQQ 2829
TINGSGSPHSKAQSPP 2343 TDRNSGSPHSKAQNQQ 2505 NMNGHDSPHKSGQNTH 2667 TINGHDSPHKSAQNQL 2830
TIYGSGSPHSKAQNQQ 2344 TINGSGSPHSKAQVPA 2506 IEMGHDSPHKSGQNQQ 2668 TVNGHDSPHKSGQTQP 2831
TINGSGSPHSKAQAKL 2345 GVLGSGSPHSKAQNQQ 1279 TINGHDSPHKSGRRRQ 2669 TDQGHDSPHKSGQNQQ 2832
TDKNSGSPHSKAQNQQ 2346 TLNGNGSPHSKAQNLQ 2508 ISNGHDSPHKSAQNQQ 2670 TINGHDSPHKLWINQQ 2833
TINGSGSPHSKTKSQQ 2347 AINGSGSPHSKAQDKQ 2509 TGNGHDSPHKSGQYQQ 2671 GINGPDSPHKSGQNQQ 2834
TINGSGSPHSKAQDRP 2348 TSNGSGSPHSKAHYQQ 2510 TINGNYSPHKIGQNQQ 2672 SEIGHDSPHKSGQNQQ 2835
TINGIGSPHSKAQNLG 2349 TINGSGSPHSKAQVPS 2511 TINGHDSPHKSRQNDQ 2673 TINGHDSPHKSVQKQL 2836
TINGSGSPHSKAQSQQ 2350 TELRSGSPHSKAQNQQ 2512 QQQGHDSPHKSGQNQQ 2674 TINGHPSPHWKGQNQQ 2837
TENLSGSPHSKAQNQQ 2351 NINGSGSPHSKAQNHQ 2513 HDWGHDSPHKSGQNQQ 2675 TVNGHDSPHKSGRNQL 2838
TINGSGSPHSKAQAFH 2352 TVNGGGSPHSKAQNHQ 2514 IEGGHDSPHKSGQNQQ 2676 TIKGSGSPHSKVQDQQ 2839
TINGSGSPHSKAQKQQ 2353 TINGSGSPHSKARGEQ 2515 TFNRSGSPHSKAQNQQ 2677 SEKGHDSPHKSGQNQQ 2840
TFSGSGSPHSKAQNLQ 2354 TINGGGSPHSKAQYQH 2516 AINGHDSPHKSGQIRQ 2678 WSAGHDSPHKSGQNQQ 2841
AINGSGSPHSKAQNAQ 2355 TEDLSGSPHSKAQNQQ 2517 TINGHDSPHKIGQNQH 2679 ELAGHDSPHKSGQNQQ 2842
TESWSGSPHSKAQNQQ 2356 TINGSGSPHSKAPGQQ 2518 AINGYDSPHKSGQKQQ 2680 TINGHDSPHKMGRNQQ 2843
TTNGSGSPHSKAHNQL 2357 TIPKNGSPHSKAQNQQ 2519 TESGHDSPHKSGQNQQ 2681 TINGHDSPHKSGISIQ 2844
TVNGNGSPHSKAQNHQ 2358 TINGSGSPHSKAQSLQ 2520 TINGHDSPHKSGQSVQ 2682 TSNGHDSPHKSVQNLQ 2845
TEDKSGSPHSKAQNQQ 2359 TINGSGSPHSKRLEQQ 2521 TINGHESPHKSGRSQQ 2683 QTQGHDSPHKSGQNQQ 2846
TESASGSPHSKAQNQQ 2360 TERGSGSPHSKAQNQQ 2522 TINGHDSPHKSGQNKL 2684 TINGHDSPHKMAHNQQ 2847
TNNGSGSPHSKAQNQQ 2361 TVNGSGSPHSKAPNQQ 2523 TINGHDSPHKTGQNQQ 2685 AINGSGSPHSKAQTQQ 2848
TSNGGGSPHSKAQNLQ 2362 TSNGSGSPHSKAQNQS 2524 TINGRGSPHKRGQNQQ 2686 TINGHDSPHKHGQNQQ 2849
TDKMSGSPHSKAQNQQ 1242 TINGSGSPHSKAQKVI 1286 TINGSGSPHTKAQNPP 2687 GADGHDSPHKSGQNQQ 2850
EVHGSGSPHSKAQNQQ 2364 TEGISGSPHSKAQNQQ 2526 TINGQDSPHKSGQHQQ 2688 VGEGHDSPHKSGQNQQ 2851
TINGSGSPHSKAQKLN 1244 TINGSGSPHSKAQNND 2527 SINGHDSPHKSGQIQH 2689 ANEGHDSPHKSGQNQQ 2852
TINGGGSPHSKSQNQH 2366 TINGSGSPHSKAQSVH 2528 AINGHDSPHKSGPRQQ 2690 TEAKSGSPHSKAQNQQ 2853
TVNGGGSPHSKAQSQQ 2367 TINGSGSPHSKAQPLG 2529 TVNGHDSPHKSGHTQQ 2691 TINGHDSPHKSVQSQQ 2854
TTNGSGSPHSKAQYQH 2368 TINKEGSPHSKAQNQQ 2530 SINGHDSPHKSGQRQH 2692 TIPGSGSPHSKAQNLQ 2855
TISGSGSPHSKAQYQH 2369 TCNASGSPHSKAQNQQ 2531 SLNGSGSPHTKAQNQQ 2693 TINGHDSPHKSGQTVC 2856
TESTSGSPHSKAQNQQ 2370 AINGSGSPHSKAHNQE 2532 AINGHDSPHKSAQSQQ 2694 ELRGHDSPHKSGQNQQ 2857
TINGSGSPHSKSQNVQ 2371 TEGLSGSPHSKAQNQQ 2533 SIYGHESPHKSGQNQQ 2695 CQIGHDSPHKSGQNQQ 2858
SINGSGSPHSKAQAQQ 2372 TRDASGSPHSKAQNQQ 2534 TVNGHDSPHKSLQNQQ 2696 GVMGHDSPHKSGQNQQ 2859
TVNGSGSPHSKAQNLQ 2373 TSNGSGSPHSKAQNLQ 2535 TINGHGSPHSKAQNPQ 2697 ACDGHDSPHKSGQNQQ 2860
TVRDSGSPHSKAQNQQ 2374 TGNGSGSPHSKAQIQQ 2536 TSNGYDSPHKSGQKQQ 2698 TINGQDSPHKSGQYQQ 2861
TFNASGSPHSKAPNQQ 2375 TVNGGGSPHSKAQNLQ 2537 TVNGHDSPHKSGRNQE 2699 TINGHDSPHKSGQQIM 2862
TDRMSGSPHSKAQNQQ 1255 TDRSSGSPHSKAQNQQ 2538 TTNGHDSPHKSGQTQL 2700 TINGHDSPHKSRQNEQ 2863
TINGSGSPHSKAQTPP 2377 TINGSGSPHSKAQVRN 2539 AINGHDSPHKSEKNQQ 2701 ASNGHDSPHKSGLNHQ 2864
TIKGSGSPHSKAQNQQ 2378 TINGSGSPHSKAPSNQ 2540 IINGRDSPHKSGQDQQ 2702 TVNGHDSPHKSGQSQP 2865
NHIGSGSPHSKAQNQQ 2379 TINGSGSPHSKAQVGH 2541 TISGHDSPHKTGHNQQ 2703 NELGHDSPHKSGQNQQ 2866
TINGSGSPHSKAQYQH 2380 NAIGSGSPHSKAQNQQ 2542 SINGYDSPHKSGQTQQ 2704 AAEGHDSPHKSGQNQQ 2867
TIPIDGSPHSKAQNQQ 1260 AENGSGSPHSKAQNQQ 2543 TINGHESPHKSGQTQQ 2705 GQNGHDSPHKSGQNQQ 2868
TINGSGSPHSKAQGQQ 2382 TINGSGSPHSKAQRDI 2544 TINGHDSPHKSGQSKQ 2706 NEFGHDSPHKSGQNQQ 2869
TFNGSGSPHNKAQNHQ 2383 TINGSGSPHSKAQMPN 2545 AIIGHESPHKSGQNQQ 2707 TSIGYDSPHKSGQNQQ 2870
ESDGSGSPHSKAQNQQ 2384 TVNGSGSPHSKSQNQQ 2546 TINGHDSPHKTGQNQP 2708 TDNGHDSPHKSGQNLQ 2871
TINGSGSPHSKAQPPA 2385 TIPAIGSPHSKAQNQQ 1295 AINGHDSPHKSGQSPQ 2709 TITGHDSPHKSRQDQQ 2872
TINGSGSPHSKAQERP 2386 TINGSGSPHSKARGLQ 1296 TIKGNDSPHKSVQNQQ 2710 AEHGHDSPHKSGQNQQ 2873
TIKGSGSPHSKAQDLQ 2387 TELGSGSPHSKAQNQQ 1297 TEFGHDSPHKSGQNQQ 2711 TINGDDSPHKSGQKQL 2874
TDLKSGSPHSKAQNQQ 2388 AETGSGSPHSKAQNQQ 1298 TINGHDSPHKSAQNYQ 2712 EILGHDSPHKSGQNQQ 2875
TINGGGSPHSKAQNPP 2389 TINGSGSPHSKLQKQQ 1299 TFNGSASPHSKALNQQ 2713 TIHGSGSPHSKAQNQA 2876
TINGSGSPHSKAQAMH 2390 TINGSGSPHSKAPSLQ 1300 TINGHESPHKSAQNRQ 2714 AINGDDSPHKSGHNQQ 2877
TVPNSGSPHSKAQNQQ 2391 TINGSGSPHSKAQRDQ 1301 TTNGHDSPHKSGQNQQ 2715 TSNGHNSPHKSGQNQE 2878
TVIGSGSPHSKALNQQ 2392 TDVGSGSPHSKAQNQQ 1302 TIKGQDSPHKIGQNQQ 2716 TINGHDSPHKSGQMIH 2879
TINGSGSPHSKAQHPS 2393 TINGSGSPHSKNRDQQ 1303 TVNGHDSPHKSGQNHL 2717 NAIGHDSPHKSGQNQQ 2880
TINGLGSPHSKSQNQQ 2394 SINGSGSPHSKAPNLQ 1304 SINGHDSPHKSGQYQH 2718 VINGHDSPHKSGRNHQ 2881
TINGTGSPHSKAQNQQ 2395 TINGSGSPHSKAQAKG 1305 TINGNDSPHKSVQNHQ 2719 TITGHDSPHKSVQNRQ 2882
TINGSGSPHSKAPGLQ 2396 TVNGSGSPHSKAQDKQ 1306 TITGHDSPHKSGQNQW 2720 TINGHDSPHKSGQKMN 2883
TINGSGSPHSKAQGIR 2397 TINGGGSPHSKAQNPQ 1307 TNNGHDSPHKSVQNQH 2721 TIHGHDSPHKSGQSQQ 2884
TESHSGSPHSKAQNQQ 2398 TINGSGSPHSKAQSAH 1308 TIDGHDSPHKSGQNQH 2722 TEIGHDSPHKSGQNQQ 2885
TINGSGSPHSKAQAPA 2399 TINGNGSPHSKSQNQH 1309 TVNGHDSPHKSGQTRQ 2723 TINGHDSPHKSGQYQH 2886
TINGSGSPHSKSQSQQ 2400 TVPTSGSPHSKAQNQQ 1310 TVNGHDSPHKSGQNLH 2724 NCLGSGSPHSKAQNQQ 2403
AEHGSGSPHSKAQNQQ 2401 TIDGSGSPHSKSQNHQ 1311 AISGHDSPHKSGLNQQ 2725 AINRSGSPHSKAQDQQ 1313
TEDRSGSPHSKAQNQQ 2402 TDVKSGSPHSKAQNQQ 1312 AINGHDSPHKSAQNQE 2726 TITGHDSPHKSGQHLQ 2727
GSGSPHSKAQNRHT 2887 GSGSPHSKAQSQQT 2936 GSGSPHSKAQRMST 2985 GSGSPHSKAQNNDQ 3034
GSGSPHSKVQNQQT 2888 ASGSPHSKAQNQLT 2937 GSGSPHSKAQGILT 2986 GSGSPHSKAQSVHT 3035
MSGSPHSKAQNQQT 2889 RSGSPHSKAQNQQT 2938 GSGSPHSKAQDRQT 2987 GSGSPHSKAQPLGT 3036
GSGSPHSKARDQQT 2890 GSGSPHSKAQYQHT 2939 GSGSPHSKARDWQT 2988 GSGSPHSKAHNQET 3037
GSGSPHSKAPNLQT 2891 GSGSPHTKAQNPQS 2940 GSGSPHSKAQNTHD 2989 GSGSPHSKAQNLQI 3038
TSGSPHSKAQNQQT 2892 GSGSPHSKGQNPPT 2941 GSGSPHSKAPNLQI 2990 GSGSPHSKAQIQQT 3039
GSGSPHSKAHVRQT 2893 GSGSPHSKAQHQLT 2942 GSGSPHSKAQERST 2991 GSGSPHSKAQVRNT 3040
GSGSPHSKAPNQHT 2894 GSGSPHSKAQSPPT 2943 GSGSPHSKAQNYQT 2992 GSGSPHSKAPSNQT 3041
ISGSPHSKAQNQQT 2895 GSGSPHSKAQAKLT 2944 GSGSPHSKAQRTCT 2993 GSGSPHSKAQVGHT 3042
GSGSPHSKTQSQQT 2896 GSGSPHSKTKSQQT 2945 GSGSPHSKAQIGHT 2994 GSGSPHSKAQRDIT 3043
GSGSPHSKAQNQST 3032 GSGSPHSKAQDRPT 2946 GSGSPHSKAQGAIT 2995 GSGSPHSKAQMPNT 3044
ESGSPHSKAQNQQI 2898 GSGSPHSKAQSQQL 2947 GSGSPHSKAQVPPT 2996 GSGSPHSKARGLQT 3045
GSGSPHSKAQPAKT 2899 GSGSPHSKAQAFHT 2948 GSGSPHSKAQVQQI 2997 GSGSPHSKLQKQQT 3046
SSGSPHSKAQNQQT 2900 GSGSPHSKAQKQQD 2949 GSGSPHSKALMRQT 2998 GSGSPHSKAPSLQT 3047
GSGSPHSKSQTQQN 2901 GSGSPHSKAQNAQT 2950 GSGSPHSKAQYSVT 2999 GSGSPHSKAQRDQT 3048
ASGSPHSKAQNQQT 2902 WSGSPHSKAQNQQT 2951 GSGSPHSKVPNLQT 3000 GSGSPHSKNRDQQT 3049
GSGSPHSKAQNLAT 2903 GSGSPHSKAHNQLT 2952 GSGSPHSKAQSQQI 3001 GSGSPHSKAQAKGT 3050
GSGSPHSKSQNQLT 2904 GSGSPHSKAQNQQY 2953 GSGSPHSKAQAITT 3002 GSGSPHSKAQSAHT 3051
NSGSPHSKAQNQQT 2905 GSGSPHSKAQKLNT 2954 GSGSPHSKAQKTLT 3003 GSGSPHSKSQNHQT 3052
GSGSPHSKAQGQQT 2906 GSGSPHSKSQNVQT 2955 GSGSPHSKAQNQWT 3004 RSGSPHSKAQDQQT 3053
VSGSPHSKAQNQQT 903 GSGSPHSKAQAQQT 2956 GSGSPHSKAQLHHT 3005 GSGSPHSKAQSTMT 3054
GSGSPHSKALNRQS 2908 GSGSPHSKAQNLQA 2957 GSGSPHSKAQNIII 3006 GSGSPHSKAQREMT 3055
LSGSPHSKAQNQQT 2909 DSGSPHSKAQNQQT 2958 GSGSPHSKAQGHHT 3007 GSGSPHSKAQYRAT 3056
GSGSPHSKAHNQQT 2910 ASGSPHSKAPNQQT 2959 GSGSPHSKAQSKVT 3008 GSGSPHSKNQWQQT 3057
GSGSPHSKTQNQQT 2911 GSGSPHSKAQTPPT 2960 GSGSPHSKAQLPST 3009 GSGSPHSKAQRMNT 3058
GSGSPHSKAQNPPT 2912 GSGSPHSKAQYQHA 2961 GSGSPHSKAIGKQT 3010 GSGSPHAKAQNHQT 3059
GSGSPHSKAQNLQT 2913 GSGSPHSKAQGQQA 2962 GSGSPHSKAQAIHT 3011 GSGSPHSKAGDSQT 3060
GSGSPHSKAQYQQT 2914 GSGSPHNKAQNHQT 2963 GSGSPHSKAQHGLT 3012 GSGSPHSKLKSQQT 3061
GSGSPHSKAQDQET 2915 GSGSPHSKAQPPAT 2964 GSGSPHSKAQFMCT 3013 GSGSPHSKAQKIST 3062
KSGSPHSKAQNQQT 2916 GSGSPHSKAQERPT 2965 VSGSPHSKAQGQQT 3014 GSGSPHSKAPSMQT 3063
GSGSPHSKAQNHQT 913 GSGSPHSKAQDLQT 2966 GSGSPHSKAQHLQT 3015 GSGSPHSKASPRQT 3064
GSGSPHSKAQDQQT 2918 GSGSPHSKAQAMHT 2967 GSGSPHSKTQNHQN 3016 GSGSPHSKRMEQQT 3065
GSGSPHSKGHWQQT 2919 GSGSPHSKALNQQT 2968 GSGSPHSKAQPART 3017 GSGSPHSKAQYQNT 3066
GSGSPHSKAPNQQT 2920 GSGSPHSKAQHPST 2969 GSGSPHSKAQSLQT 3018 RSGSPHSKAQNQQI 3067
GSGSPHSKAQNQLI 2921 GSGSPHSKAPGLQT 2970 GSGSPHSKSQSQLT 3019 GSGSPHTKAQNPPT 3068
GSGSPHSKRPEQQT 2922 GSGSPHSKAQGIRT 2971 GSGSPHSKAQDRQS 3020 GSGSPHTKAQNQQT 3069
GSGSPHSKAQRTMT 2923 GSGSPHSKAQAPAT 2972 GSGSPHSKAQMPST 3021 ASGSPHSKAQHQQT 3070
GSGSPHSKAQNQQH 2924 GSGSPHSKSQSQQI 2973 GSGSPHSKAQGSLT 3022 ASGSPHSKAINQQT 3071
HSGSPHSKAQNQQT 2925 GSGSPHSKAQIPPT 2974 GSGSPHSKSQNQQT 3023 GSGSPHSKAPNQQH 3072
GSGSPHSKALHQHT 2926 GSGSPHSKAQTQLT 2975 GSGSPHSKAQVPAT 3024 ASGSPHSKAQNHQT 3073
GSGSPHSKAQHRIT 2927 GSGSPHSKAQAPST 2976 GSGSPHSKAQDKQT 3025 GSGSPHSKAENRQT 3074
GSGSPHSKAQYIHT 2928 GSGSPHSKGQNQQT 2977 GSGSPHSKAHYQQT 3026 GSGSPHSKVQDQQT 3075
GSGSPHSKAQKFET 2929 ASGSPHSKAHNQQT 2978 GSGSPHSKAQVPST 3027 GSGSPHSKAQTQQA 3076
ESGSPHSKAQNHQT 2930 GSGSPHSKAQNTYA 2979 GSGSPHSKARGEQT 3028 GSGSPHSKAQNQAT 3077
GSGSPHSKAQFPST 2931 GSGSPHSKSQNQHI 2980 GSGSPHSKAPGQQT 3029 GSGSPHSKGQNRQT 2935
PSGSPHSKAQNQQT 2932 GSGSPHSKAQNHLT 2981 GSGSPHSKAQSLQI 3030 GSGSPHSKAQLQQT 2984
GSGSPHSKAHNQQR 2933 GSGSPHSKAQIGMT 2982 GSGSPHSKRLEQQT 3031 GSGSPHSKAQKVIT 3033
GSGSPHSKAQAIKT 2934 GSGSPHSKALNKQT 2983 GHDSPHKHGQNHQT 3160 GHDSPHKSGQWKRT 3202
GHDSPHKSGQIRQT 3078 GHDSPHKSGQNQHA 3119 LHDSPHKSGQNQQT 3161 GHDSPHKSGQSQQI 3203
GHDSPHKIGQNQHA 3079 GHDSPHKSGQTRQT 3120 GHDSPHKSVQNKQT 3162 GHDSPHKSRQAQQT 3204
GYDSPHKSGQKQQT 3080 GHDSPHKSGQNLHT 3121 GQVSPHKSGQNQQT 3163 GHDSPHKSVQNHQI 3205
GHDSPHKSGQNQQT 201 GHDSPHKSGLNQQT 3122 GHDSPHKSGQRQLT 3164 GHDSPHKSKQNQQA 3206
GHDSPHKSGQSVQT 3082 GHDSPHKSAQNQET 3123 GHDSPHKIGQNQLT 3165 GHDSPHKSAQNQLN 3207
GHESPHKSGRSQQT 3083 GHDSPHKSGQHLQT 3124 GHDSPHKSGQIIVT 3166 GHDSPHKSGQTQPT 3208
GHDSPHKSGQNKLE 3084 GHDSPHKSRLNQPT 3125 IHDSPHKSGQNQQT 3167 FHDSPHKSGQNQQT 3209
GHDSPHKTGQNQQK 3085 GHDSPHKSGQKQQT 3126 GYDSPHKSGQKQST 3168 GHDSPHKLWINQQT 3210
GRGSPHKRGQNQQT 3086 GQDSPHKSGQNQDT 3127 MHDSPHKSGQNQQT 3169 GPDSPHKSGQNQQT 3211
GHDNPHKSGQNQQT 3087 GHDSPHKSGRNQQT 3128 GDDSPHKSVQNQQT 3170 GHDSPHKSVQKQLT 3212
GQDSPHKSGQHQQA 3088 GHDSPHKSGQNLLT 3129 GHDSPHKSVQSHQT 3171 GHDSPHKSGRNQLA 3213
GHDSPHKSGQIQHT 3089 GHDSPHKSGQLVIT 3130 GHDSPHKSGQFVVT 3172 VHDSPHKSGQNQQS 3214
GHDSPHKSGPRQQT 3090 GHDSPHKSRQSQQT 3131 GHDSPHKSRQNLQT 3173 GHDSPHKMGRNQQS 3215
GHDSPHKSGHTQQT 3091 GHDSPHKSGRTQET 3132 GHNSPHKSGQNQET 3174 GHDSPHKSGISIQT 3216
GHDSPHKSGQRQHT 3092 GHDSPHKSVQTHQT 3133 GHDSPHKSAQNQQI 3175 VHDSPHKSGQNQQT 3217
GHDSPHKSAQSQQT 3093 GHDSPHKSGQNQPA 3134 NHDSPHKSGQNQQT 3176 GHDSPHKSVQNLQT 3218
GHESPHKSGQNQQS 3094 KHDSPHKSGQNQQT 3135 GHDSPHKSGQSQPT 3177 GHDSPHKMAHNQQT 3219
GHDSPHKSLQNQQT 3095 GHDSPHKSGQTQQT 3136 GHESPHKSGQNEQT 3178 GHDSPHKHGQNQQN 3220
GHDSPHKSGRNQET 3096 GPDSPHKIGQNQQS 3137 GHDSPHKSAQNQQT 3179 GHDSPHKSVQSQQS 3221
GHDSPHKSGQTQLT 3097 GHDSPHKSVQNQQT 3138 GHDSPHKSGQNQLT 3180 GHDSPHKSGQTVCT 3222
GHDSPHKSEKNQQT 3098 GHDSPHKSRQDQHT 3139 GHDSPHKSAQNLLT 3181 GQDSPHKSGQYQQI 3223
GRDSPHKSGQDQQT 3099 GPDSPHKSGQKQQT 3140 THDSPHKSGQNQQT 3182 GHDSPHKSGQQIMT 3224
GHDSPHKTGHNQQT 3100 GHDSPHKSRQSQHT 3141 GNGSPHKRGQNQQT 3183 GHDSPHKSRQNEQS 3225
AHDSPHKSGQNQLT 3101 GHDSPHKSVQNQLT 3142 GHDSPHKSGQSLQT 3184 GHDSPHKSGLNHQT 3226
GYDSPHKSGQTQQT 3102 AHDSPHKSGQNQQT 3143 GHDSPHKSAQNHQT 3185 GYDSPHKSGQNQQT 3227
GHESPHKSGQTQQI 3103 GQDSPHKSGQNQQS 3144 GHDSPHKSGRNRQT 3186 GHDSPHKSGQNLQT 3228
GHDSPHKSGQSKQA 3104 GHDSPHKSGRNQQI 3145 EHDSPHKSGQNQQT 3187 GHDSPHKSRQDQQT 3229
GHESPHKSGQNQQT 3105 GYDSPHKSGQYQHT 3146 GHDSPHKYGQNEQT 3188 GDDSPHKSGQKQLT 3230
GHDSPHKTGQNQPP 3106 GHDSPHKSRQNQQT 3147 RHDSPHKSGHNQQT 3189 GDDSPHKSGHNQQT 3231
GHDSPHKSGQSPQT 3107 GHDSPHKSWVRQQT 3148 GHDSPHKSQQNQQT 3190 GHDSPHKSGQMIHT 3232
GNDSPHKSVQNQQT 3108 GHESPHKSGQNQHS 3149 GHDSPHKSGQNQQI 3191 GHDSPHKSGRNHQS 3233
GHDSPHKSAQNYQT 3109 GHDSPHKIGHNQQT 3150 QHDSPHKSGQNQQT 3192 GHDSPHKSVQNRQT 3234
AHDSPHKIGQNHQT 3110 WHDSPHKSGQNQQT 3151 RHDSPHKIVQNQQT 3193 GHDSPHKSGQKMNT 3235
GHESPHKSAQNRQT 3111 RHDSPHKSGQNQQT 3152 YHDSPHKSGQNQQT 3194 GHDSPHKSGQSQQN 3236
GHDSPHKSGQNQQG 3112 GHDSPHKSNAWQQT 3153 GHDSPHKSVQSKQT 3195 GHDSPHKSGQYQHA 3237
GQDSPHKIGQNQQT 3113 GHDSPHKSGQSVPT 3154 GNDSPHKIGHNQQT 3196 GHDSPHKSGQNQWT 3117
GHDSPHKSGQNHLT 3114 GHESPHKSGQNIQP 3155 HHDSPHKSGQNQQT 3197 GHDSPHKRGPDQQS 3158
GHDSPHKSGQYQHT 3115 GHDSPHKSVQNHLN 3156 GHDSPHKSGQTQQI 3198 GHDSPHKSGRDQKT 3200
GNDSPHKSVQNHQT 3116 GHDSPHKIGLDQQT 3157 GQDSPHKSGQNPLT 3199 GHDSPHKSVHNQQN 3201
GHDSPHKSVQNQHT 3118 GHDSPHKSGESQQT 3159 KTISKRGSPHSKAQNQQT 4098 KGLGGSGSPHSKAQNQQT 4099
KTINGHDSPHSKAQNLQT 4100 KTINGSGSPHSKTCIQQT 4196 KEIYGSGSPHSKAQNQQT 4292 KTINGSGSPHKRGQKQQT 4388
KTINGHDSPHSKAQNQQI 4101 KTINGSGSPHSKWLTQQT 4197 KELSGSGSPHSKAQNQQT 4293 KTINGSGSPHKRGQNQET 4389
KTINGSGSPHFTRQNQQT 4102 KTINGSGSPHSKWVVQQT 4198 KETIGSGSPHSKAQNQQT 4294 KTINGSGSPHKRGQNQLT 4390
KTINGSGSPHSLPWNQQT 4103 KTINGSGSPHSKYRLQQT 4199 KEVLGSGSPHSKAQNQQT 4295 KTINGSGSPHKRGRNQQT 4391
KTINGHDSPHSKAQNHQT 4104 KTINGSGSPHSKYSKQQT 4200 KFALGHDSPHKSGQKQQT 4296 KTINGSGSPHKSGGNQQT 4392
KTMNGHDSPHSKAQNQQT 4105 KTINGSGSPHSKYSRQQT 4201 KIINGHDSPHKSGQNLVL 4297 KTINGSGSPHKSGHNQET 4393
KPYKGSGSPHSKAQNQQT 4106 KTINGSGSPHSLKRNQQT 4202 KIINGHDSPHKSGQRNYT 4298 KTINGSGSPHKSGHNQLT 4394
KRLWGSGSPHSKAQNQQT 4107 KTINGSGSPHSLWFNQQT 4203 KIINGHDSPHSKAQNQQT 4299 KTINGSGSPHKSGHNQQN 4395
KRMRGSGSPHSKAQNQQT 4108 KTINGSGSPHSLWPNQQT 4204 KLNPGHDSPHKSGQTQQT 4300 KTINGSGSPHKSGLNQLT 4396
KRTYGSGSPHSKAQNQQT 4109 KTINGSGSPHSLWTNQQT 4205 KLNRGHDSPHKSGQNQQS 4301 KTINGSGSPHKSGPNQQT 4397
KTINCLRSPHSKAQNQQT 4110 KTINGSGSPHSMRRNQQT 4206 KLSSGHDSPHKSGQNQQN 4302 KTINGSGSPHKSGQGQQT 4398
KTINFSRSPHSKAQNQQT 4111 KTINGSGSPHSPCLNQQT 4207 KNINGHDSPHSKAQNQQT 4303 KTINGSGSPHKSGQHLQT 4399
KTINGLRSPHFKAQNQQT 4112 KTINGSGSPHSQWQNQQT 4208 KNNDGSGSPHSKAQNQQT 4304 KTINGSGSPHKSGQHQQT 4400
KTINGNRSPHNKAQNQQT 4113 KTINGSGSPHSRCANQQT 4209 KNVMGSGSPHSKAQNQQT 4305 KTINGSGSPHKSGQKHQT 4401
KTINGPRSPHYKAQNQQT 4114 KTINGSGSPHSRIRNQQT 4210 KPINGHDSPHKSGQNKLS 4306 KTINGSGSPHKSGQKQQS 4402
KTINGQASPHWKAQNQQT 4115 KTINGSGSPHSRKSNQQT 4211 KPINGHDSPHKSGQNLSS 4307 KTINGSGSPHKSGQNEQT 4403
KTINGRCSPHSKAQNQQT 4116 KTINGSGSPHSRLWNQQT 4212 KPINGHDSPHSKAQNQQT 4308 KTINGSGSPHKSGQNHQT 4404
KTINGRHSPHSKAQNQQT 4117 KTINGSGSPHSRRFNQQT 4213 KRINGHDSPHSKAQNQQT 4309 KTINGSGSPHKSGQNKQT 4405
KTINGRKSPHRKAQNQQT 4118 KTINGSGSPHSRRPNQQT 4214 KSCSGHDSPHKSGQNQQS 4310 KTINGSGSPHKSGQNKTS 4406
KTINGRLSPHWKAQNQQT 4119 KTINGSGSPHSRSCNQQT 4215 KSINGHDSPHKSGQNLAS 4311 KTINGSGSPHKSGQNQEA 4407
KTINGRLSPHYKAQNQQT 4120 KTINGSGSPHSRSKNQQT 4216 KSINGHDSPHKSGQNLFL 4312 KTINGSGSPHKSGQNQET 4408
KTINGRPSPHMKAQNQQT 4121 KTINGSGSPHSRTKNQQT 4217 KSINGHDSPHKSGQNLLM 4313 KTINGSGSPHKSGQNQKT 4409
KTINGRSSPHWKAQNQQT 4122 KTINGSGSPHSRWLNQQT 4218 KSINGHDSPHKSGQNLLQ 4314 KTINGSGSPHKSGQNQQI 4410
KTINGRWSPHSKAQNQQT 4123 KTINGSGSPHSSVCNQQT 4219 KSINGHDSPHKSGQNSLG 4315 KTINGSGSPHKSGQNQQR 4411
KTINGSGSPHAPCQNQQT 4124 KTINGSGSPHSSWRNQQT 4220 KSINGHDSPHKSGQNTLQ 4316 KTINGSGSPHKSGQNQRT 4412
KTINGSGSPHAWAQNQQT 4125 KTINGSGSPHSVCQNQQT 4221 KSINGHDSPHKSSSNQQT 4317 KTINGSGSPHKSGQNQYT 4413
KTINGSGSPHCMRQNQQT 4126 KTINGSGSPHSVLCNQQT 4222 KSINGHDSPHKYKLNQQT 4318 KTINGSGSPHKSGQRQQT 4414
KTINGSGSPHFCSQNQQT 4127 KTINGSGSPHSVRRNQQT 4223 KSINGSGSPHKSGQKQQT 4319 KTINGSGSPHKSGQSQQT 4415
KTINGSGSPHFLFQNQQT 4128 KTINGSGSPHSVSCNQQT 4224 KSINGSGSPHKSGQNQQT 4320 KTINGSGSPHKSGQYQRT 4416
KTINGSGSPHFWAQNQQT 4129 KTINGSGSPHSWALNQQT 4225 KSINGSGSPHSKAQGLST 4321 KTINGSGSPHKSGRNQQA 4417
KTINGSGSPHLCAQNQQT 4130 KTINGSGSPHSWITNQQT 4226 KSINGSGSPHSKAQLLGT 4322 KTINGSGSPHKSRHNQQT 4418
KTINGSGSPHLRYQNQQT 4131 KTINGSGSPHSWPMNQQT 4227 KSINGSGSPHSKTSWQQT 4323 KTINGSGSPHKSRQYQQT 4419
KTINGSGSPHLYYQNQQT 4132 KTINGSGSPHSWRSNQQT 4228 KSMNGHDSPHSKAQNQQT 4324 KTINGSGSPHRKAQAPGT 4420
KTINGSGSPHPLCQNQQT 4133 KTINGSGSPHSYFLNQQT 4229 KSTLGSGSPHSKAQNQHT 4325 KTINGSGSPHSKAAMKQT 4421
KTINGSGSPHRIRQNQQT 4134 KTINGSGSPHSYTYNQQT 4230 KSTLGSGSPHSKAQNQQN 4326 KTINGSGSPHSKAGRQQT 4422
KTINGSGSPHRLFQNQQT 4135 KTINGSGSPHSYWQNQQT 4231 KSTVGSGSPHSKAQTQQT 4327 KTINGSGSPHSKAGRTQT 4423
KTINGSGSPHSCGQNQQT 4136 KTINGSGSPHTLCQNQQT 4232 KTCKESGSPHSKAQNQQT 4328 KTINGSGSPHSKAKSNQT 4424
KTINGSGSPHSCLRNQQT 4137 KTINGSGSPHWLRQNQQT 4233 KTCKGSGSPHSKAQNQQT 4329 KTINGSGSPHSKALKTQT 4425
KTINGSGSPHSCLSNQQT 4138 KTINGSGSPHWPSQNQQT 4234 KTCKSSGSPHSKAQNQQT 4330 KTINGSGSPHSKAPRTQT 4426
KTINGSGSPHSCRLNQQT 4139 KTINGSGSPHYLRQNQQT 4235 KTDMGSGSPHSKAQNQQT 4331 KTINGSGSPHSKAQAART 4427
KTINGSGSPHSCSLNQQT 4140 KTINGSGSPHYTRQNQQT 4236 KTDNGIGSPHSKAQNQQT 4332 KTINGSGSPHSKAQAILT 4428
KTINGSGSPHSKACTLQT 4141 KTINGSLSPHLWAQNQQT 4237 KTEGGSGSPHSKAQNQQT 4333 KTINGSGSPHSKAQCRGT 4429
KTINGSGSPHSKAFRAQT 4142 KTINGSPSPHCQAQNQQT 4238 KTEHHSGSPHSKAQNQQT 4334 KTINGSGSPHSKAQGLRT 4430
KTINGSGSPHSKAIRKQT 4143 KTINGSRSPHLCAQNQQT 4239 KTEKDSGSPHSKAQNQQT 4335 KTINGSGSPHSKAQKGVL 4431
KTINGSGSPHSKAQASRT 4144 KTINGSRSPHWRAQNQQT 4240 KTELGHDSPHKRGQNQQT 4336 KTINGSGSPHSKAQKSNT 4432
KTINGSGSPHSKAQFELT 4145 KTINGSVSPHWLAQNQQT 4241 KTESVSGSPHSKAQNQQT 4337 KTINGSGSPHSKAQNNKF 4433
KTINGSGSPHSKAQIVIT 4146 KTINGTFSPHRKAQNQQT 4242 KTETNSGSPHSKAQNQQT 4338 KTINGSGSPHSKAQNRRT 4434
KTINGSGSPHSKAQLART 4147 KTINGWTSPHRKAQNQQT 4243 KTETYSGSPHSKAQNQQT 4339 KTINGSGSPHSKAQPKQT 4435
KTINGSGSPHSKAQLQRT 4148 KTINRGISPHSKAQNQQT 4244 KTEWLSGSPHSKAQNQQT 4340 KTINGSGSPHSKAQRAPT 4436
KTINGSGSPHSKAQNARR 4149 KTINTVRSPHSKAQNQQT 4245 KTFNGSGSPHKSGQNQQT 4341 KTINGSGSPHSKAQREHT 4437
KTINGSGSPHSKAQNCPR 4150 KTKLRSGSPHSKAQNQQT 4246 KTGLRHDSPHKSGQKQQT 4342 KTINGSGSPHSKAQRFGT 4438
KTINGSGSPHSKAQNMRR 4151 KTRLRSGSPHSKAQNQQT 4247 KTGLRHDSPHKSGQNQQS 4343 KTINGSGSPHSKAQRPCT 4439
KTINGSGSPHSKAQNRRV 4152 KWLLGSGSPHSKAQNQQT 4248 KTGVTHDSPHKSGQKQQT 4344 KTINGSGSPHSKAQRQAT 4440
KTINGSGSPHSKAQPSRT 4153 KWSQGSGSPHSKAQNQQT 4249 KTIDGHESPHSKAQNQQT 4345 KTINGSGSPHSKAQRQPT 4441
KTINGSGSPHSKAQQVKT 4154 KWYLGSGSPHSKAQNQQT 4250 KTIEGHDSPHKSGQTQQT 4346 KTINGSGSPHSKAQTKLT 4442
KTINGSGSPHSKAQQVRT 4155 KYHSGSGSPHSKAQNQQT 4251 KTIHGHDSPHSKAQNQQT 4347 KTINGSGSPHSKAQTTHT 4443
KTINGSGSPHSKAQRLKT 4156 KYLPGSGSPHSKAQNQQT 4252 KTIHGHESPHSKAQNQQT 4348 KTINGSGSPHSKAQVQRT 4444
KTINGSGSPHSKAQRRAT 4157 KAINGGGSPHSKTQNQQT 4253 KTIIGHDSPHKSGQNRSS 4349 KTINGSGSPHSKAQVVRT 4445
KTINGSGSPHSKAQRRGT 4158 KAINGHDSPHKRSPNQQT 4254 KTIIGHDSPHKSGQRLGT 4350 KTINGSGSPHSKAQWPNT 4446
KTINGSGSPHSKAQRRRT 4159 KAINGHDSPHKSFSPQQT 4255 KTIIGSGSPHKSGQNQQT 4351 KTINGSGSPHSKAQYPST 4447
KTINGSGSPHSKAQRTRT 4160 KAINGHDSPHKSGENQQP 4256 KTIKGHDSPHKSGQNMLF 4352 KTINGSGSPHSKARALQT 4448
KTINGSGSPHSKAQRVHT 4161 KAINGHDSPHKSGQLART 4257 KTILGSGSPHSKAQNLQT 4353 KTINGSGSPHSKARDQHT 4449
KTINGSGSPHSKAQTYRT 4162 KAINGHDSPHKSGQNAFL 4258 KTINGCSSPHWKAQNQQT 4354 KTINGSGSPHSKARFQQT 4450
KTINGSGSPHSKAQVRKT 4163 KAINGHDSPHKSGQNAYT 4259 KTINGGGSTHSKAQNQQT 4355 KTINGSGSPHSKARRTQT 4451
KTINGSGSPHSKARGRQT 4164 KAINGHDSPHKSGQNFAS 4260 KTINGHDSPHKAGQSQQT 4356 KTINGSGSPHSKARSLQT 4452
KTINGSGSPHSKARLCQT 4165 KAINGHDSPHKSGQNLAS 4261 KTINGHDSPHKRGQNVPS 4357 KTINGSGSPHSKARVIQT 4453
KTINGSGSPHSKARLKQT 4166 KAINGHDSPHKSGQNLGS 4262 KTINGHDSPHKRGRSYQT 4358 KTINGSGSPHSKAWYLQT 4454
KTINGSGSPHSKARNSQT 4167 KAINGHDSPHKSGQNLKF 4263 KTINGHDSPHKTGQNPPT 4359 KTINGSGSPHSKGGGQQT 4455
KTINGSGSPHSKARWVQT 4168 KAINGHDSPHKSGQNLLK 4264 KTINGHDSPHSKAENQQT 4360 KTINGSGSPHSKGSRQQT 4456
KTINGSGSPHSKAVRWQT 4169 KAINGHDSPHKSGQNLSR 4265 KTINGHDSPHSKALSLQT 4361 KTINGSGSPHSKLQRQQT 4457
KTINGSGSPHSKAYTRQT 4170 KAINGHDSPHKSGQNLSS 4266 KTINGHDSPHSKAQGQQT 4362 KTINGSGSPHSKMLRQQT 4458
KTINGSGSPHSKCQSQQT 4171 KAINGHDSPHKSGQNSLG 4267 KTINGHDSPHSKAQHQQT 4363 KTINGSGSPHSKSSIKQT 4459
KTINGSGSPHSKFLRQQT 4172 KAINGHDSPHKSGQNTLQ 4268 KTINGHDSPHSKAQIQQT 4364 KTINGSGSPHSKVRFQQT 4460
KTINGSGSPHSKFRFQQT 4173 KAINGHDSPHKSGQNTSL 4269 KTINGHDSPHSKAQKQQT 4365 KTINGSGSPHSVVWNQQT 4461
KTINGSGSPHSKFRLQQT 4174 KAINGHDSPHKSGQRLGT 4270 KTINGHDSPHSKAQNLSS 4366 KTINGSTSPHKLAQNQQP 4462
KTINGSGSPHSKFRRQQT 4175 KAINGHDSPHKSGQRNYT 4271 KTINGHDSPHSKAQNPQT 4367 KTINRHDSPHKSGQRPST 4463
KTINGSGSPHSKGMKQQT 4176 KAINGHDSPHKSGQRPST 4272 KTINGHDSPHSKAQNQET 4368 KTINRIMSPHSKAQNQQT 4464
KTINGSGSPHSKKLRQQT 4177 KAINGHDSPHKSGQRPVT 4273 KTINGHDSPHSKAQNQHT 4369 KTINTARSPHSKAQNQQT 4465
KTINGSGSPHSKKRPQQT 4178 KAINGHDSPHKSGQVPST 4274 KTINGHDSPHSKAQNQLT 4370 KTISGHDSPHSKAQNQQT 4466
KTINGSGSPHSKKSRQQT 4179 KAINGHDSPHKSLSNQQT 4275 KTINGHDSPHSKAQNQPT 4371 KTISGSGSPHKSGQNQQT 4467
KTINGSGSPHSKLYRQQT 4180 KAINGHDSPHKSVLSQQT 4276 KTINGHDSPHSKAQNQQA 4372 KTITGHDSPHKSGQRLGT 4468
KTINGSGSPHSKLYWQQT 4181 KAINGHDSPHKTLQNQQT 4277 KTINGHDSPHSKAQNTGS 4373 KTITGSGSPHKSGQNQQT 4469
KTINGSGSPHSKPRMQQT 4182 KAINGHNSPHSKAQNQQT 4278 KTINGHDSPHSKAQSQQT 4374 KTIYGHDSPHKSGQRLGT 4470
KTINGSGSPHSKRFPQQT 4183 KAINGLDSPHSKAQNQQT 4279 KTINGHDSPHSKAQTQQT 4375 KTLNGHDSPHKSGQNLFL 4471
KTINGSGSPHSKRFRQQT 4184 KAINGSGSPHKSGQNQQT 4280 KTINGHDSPHSKAQYQQT 4376 KTLNGHDSPHKSGQNLSS 4472
KTINGSGSPHSKRPYQQT 4185 KAINGSGSPHSKAQGQQT 4281 KTINGHDSPHSKARNQQT 4377 KTLSFHDSPHKSGQNQQS 4473
KTINGSGSPHSKRRMQQT 4186 KAINGSGSPHSKAQLSGT 4282 KTINGHDSPHSKLPGQQT 4378 KTSNGSGSPHSKAQNTMT 4474
KTINGSGSPHSKRSKQQT 4187 KAINGSGSPHSKAQNGSL 4283 KTINGHDSPHSKSPNQQT 4379 KTTNGHDSPHSKAQNQQT 4475
KTINGSGSPHSKRSRQQT 4188 KAINGSGSPHSKAQNSLL 4284 KTINGHESPHKSGQNAFL 4380 KTVNGGGSPHSKAQNQQT 4476
KTINGSGSPHSKRTMQQT 4189 KAINGSGSPHSKAVGLQT 4285 KTINGIGSPHSKAPNEQT 4381 KTVNGHDSPHKSGQNVSL 4477
KTINGSGSPHSKRTRQQT 4190 KAINGSGSPHSKSLLQQT 4286 KTINGQDSPHKSGQNLHM 4382 KTVNGHDSPHKSGQRPST 4478
KTINGSGSPHSKRVRQQT 4191 KAINGSGSPHSKSLPQQT 4287 KTINGRGSPHSKAQIGMT 4383 KTVNGHDSPHKSGQTQQA 4479
KTINGSGSPHSKRYIQQT 4192 KAINGSGSPHSKSTFQQT 4288 KTINGRGSPHSKAQNQVL 4384 KTVNGHESPHSKAQNQQT 4480
KTINGSGSPHSKRYNQQT 4193 KAITGHDSPHSKAQNQQT 4289 KTINGRGSPHSKAQSPTT 4385 KTVNGSGSPHSKAQGLST 4481
KTINGSGSPHSKRYPQQT 4194 KDVMGSGSPHSKAQNQQT 4290 KTINGRGSPHSKATSFQT 4386 KTVNGSGSPHSKAQNVTS 4482
KTINGSGSPHSKRYSQQT 4195 KEIVGSGSPHSKAQNQQT 4291 KTINGSGSPHFVVQNQQT 4387 KTVPASGSPHSKAQNQQT 4483
NTINGSGSPHSKAHNQQT 4484 TTINGGGSPHSKAQNQQT 4485 KTINGSGSPHKSGQNQQP 4081
表2A. 示 範性肽序列
SEQ ID NO: 胺基酸序列 SEQ ID NO: 核苷酸序列
941 SPHSKA 942 AGCCCACACAGCAAAGCA
943 HDSPHKSG 944 CACGACAGCCCACACAAAAGCGGA
2 HDSPHK 3 CACGACAGCCCACACAAA
表2B. 示 範性肽序列
胺基酸序列 SEQ ID NO: 胺基酸序列 SEQ ID NO: 胺基酸序列 SEQ ID NO: 胺基酸序列 SEQ ID NO:
SPHSKA 945 SPHKKN 954 SPHKTS 963 SPHTRG 972
SPHKSG 946 SPHVRM 955 SPHKTT 964 SPHVRG 973
SPHARM 947 SPHRKA 956 SPHKTY 965 SPHKRG 974
SPHVKS 948 SPHKFG 957 SPHKYG 966 SPHGAR 975
SPHASR 949 SPHKIG 958 SPHSKD 967 SPHRSG 976
SPHVKI 950 SPHKLG 959 SPHSKP 968 SPHKSA 977
SPHKSR 951 SPHSKL 960 SPHSRA 969 SPHSKR 978
SPHSLR 952 SPHSRG 961 SPHSSR 970 SPHFLR 979
SPHSKW 953 SPHSKS 962 SPHWKA 971 SPHVRR 980
STHASR 985 SQHKSG 986 HDSPHK 2 HDSPHSKA 4486
在一些實施例中，本文所述之AAV衣殼變異體包含具有下式之胺基酸序列：[N1]-[N2]-[N3]，其中[N2]包含SPH之胺基酸序列且[N3]包含X4、X5及X6，其中X4、X5或X6中之至少一者係鹼性胺基酸，例如K或R。在一些實施例中，[N2]之位置X4係K。在一些實施例中，[N2]之位置X5係K。
在一些實施例中，[N1]包含X1、X2及X3，其中X1、X2或X3中之至少一者係G。在一些實施例中，[N1]之位置X1係：G、V、R、D、E、M、T、I、S、A、N、L、K、H、P、W或C。在一些實施例中，[N1]之位置X2係：S、V、L、N、D、H、R、P、G、T、I、A、E、Y、M或Q。在一些實施例中，[N1]之位置X3係：G、C、L、D、E、Y、H、V、A、N、P或S。在一些實施例中，[N1]包含GS、SG、GH、HD、GQ、QD、VS、CS、GR、RG、QS、SH、MS、RN、TS、IS、GP、ES、SS、GN、AS、NS、LS、GG、KS、GT、PS、RS、GI、WS、DS、ID、GL、DA、DG、ME、EN、KN、KE、AI、NG、PG、TG、SV、IG、LG、AG、EG、SA、YD、HE、HG、RD、ND、PD、MG、QV、DD、HN、HP、GY、GM、GD或HS。在一些實施例中，[N1]包含GS、SG、GH或HD。在一些實施例中，[N1]係或包含GSG、GHD、GQD、VSG、CSG、CSH、GQS、GRG、GSH、RVG、GSC、GLL、GDD、GHE、GNY、MSG、RNG、TSG、ISG、GPG、ESG、SSG、GNG、ASG、NSG、LSG、GGG、KSG、HSG、GTG、PSG、GSV、RSG、GIG、WSG、DSG、IDG、GLG、DAG、DGG、MEG、ENG、GSA、KNG、KEG、AIG、GYD、GHG、GRD、GND、GPD、GMG、GQV、GHN、GHP或GHS。在一些實施例中，[N1]係或包含GSG。在一些實施例中，[N1]係或包含GHD。在一些實施例中，[N1]-[N2]包含SGSPH (SEQ ID NO: 1424)、HDSPH (SEQ ID NO: 1374)、QDSPH (SEQ ID NO: 1425)、RGSPH (SEQ ID NO: 1426)、SHSPH (SEQ ID NO: 1427)、QSSPH (SEQ ID NO: 1428)、DDSPH (SEQ ID NO: 1429)、HESPH (SEQ ID NO: 1430)、NYSPH (SEQ ID NO: 1431)、VGSPH (SEQ ID NO: 1432)、SCSPH (SEQ ID NO: 1433)、LLSPH (SEQ ID NO: 1434)、NGSPH (SEQ ID NO: 1435)、PGSPH (SEQ ID NO: 1436)、GGSPH (SEQ ID NO: 1437)、TGSPH (SEQ ID NO: 1438)、SVSPH (SEQ ID NO: 1439)、IGSPH (SEQ ID NO: 1440)、DGSPH (SEQ ID NO: 1441)、LGSPH (SEQ ID NO: 1442)、AGSPH (SEQ ID NO: 1443)、EGSPH (SEQ ID NO: 1444)、SASPH (SEQ ID NO: 1445)、YDSPH (SEQ ID NO: 1446)、HGSPH (SEQ ID NO: 1447)、RDSPH (SEQ ID NO: 1448)、NDSPH (SEQ ID NO: 1449)、PDSPH (SEQ ID NO: 1450)、MGSPH (SEQ ID NO: 1451)、QVSPH (SEQ ID NO: 1452)、HNSPH (SEQ ID NO: 1453)、HPSPH (SEQ ID NO: 1454)或HSSPH (SEQ ID NO: 1455)；包含其任何上述胺基酸序列之任何部分(例如，任何2、3或4個胺基酸，例如連續胺基酸)之胺基酸序列；相對於任何上述胺基酸序列，包含一個、兩個或三個但不超過四個修飾，例如取代(例如保守取代)、插入或缺失的胺基酸序列；或相對於上述任一胺基酸序列，包含一個、兩個或三個但不超過四個不同胺基酸之胺基酸序列。在一些實施例中，[N1]-[N2]係或包含GSGSPH (SEQ ID NO: 1456)、GHDSPH (SEQ ID NO: 1457)、GQDSPH (SEQ ID NO: 1458)、VSGSPH (SEQ ID NO: 1459)、CSGSPH (SEQ ID NO: 1460)、GRGSPH (SEQ ID NO: 1461)、CSHSPH (SEQ ID NO: 1462)、GQSSPH (SEQ ID NO: 1463)、GSHSPH (SEQ ID NO: 1464)、GDDSPH (SEQ ID NO: 1465)、GHESPH (SEQ ID NO: 1466)、GNYSPH (SEQ ID NO: 1467)、RVGSPH (SEQ ID NO: 1468)、GSCSPH (SEQ ID NO: 1469)、GLLSPH (SEQ ID NO: 1470)、MSGSPH (SEQ ID NO: 1471)、RNGSPH (SEQ ID NO: 1472)、TSGSPH (SEQ ID NO: 1473)、ISGSPH (SEQ ID NO: 1474)、GPGSPH (SEQ ID NO: 1475)、ESGSPH (SEQ ID NO: 1476)、SSGSPH (SEQ ID NO: 1477)、GNGSPH (SEQ ID NO: 1478)、ASGSPH (SEQ ID NO: 1479)、NSGSPH (SEQ ID NO: 1480)、LSGSPH (SEQ ID NO: 1481)、GGGSPH (SEQ ID NO: 1482)、KSGSPH (SEQ ID NO: 1483)、HSGSPH (SEQ ID NO: 1484)、GTGSPH (SEQ ID NO: 1485)、PSGSPH (SEQ ID NO: 1486)、GSVSPH (SEQ ID NO: 1487)、RSGSPH (SEQ ID NO: 1488)、GIGSPH (SEQ ID NO: 1489)、WSGSPH (SEQ ID NO: 1490)、DSGSPH (SEQ ID NO: 1491)、IDGSPH (SEQ ID NO: 1492)、GLGSPH (SEQ ID NO: 1493)、DAGSPH (SEQ ID NO: 1494)、DGGSPH (SEQ ID NO: 1495)、MEGSPH (SEQ ID NO: 1496)、ENGSPH (SEQ ID NO: 1497)、GSASPH (SEQ ID NO: 1498)、KNGSPH (SEQ ID NO: 1499)、KEGSPH (SEQ ID NO: 1500)、AIGSPH (SEQ ID NO: 1501)、GYDSPH (SEQ ID NO: 1502)、GHGSPH (SEQ ID NO: 1503)、GRDSPH (SEQ ID NO: 1504)、GNDSPH (SEQ ID NO: 1505)、GPDSPH (SEQ ID NO: 1506)、GMGSPH (SEQ ID NO: 1507)、GQVSPH (SEQ ID NO: 1508)、GHNSPH (SEQ ID NO: 1509)、GHPSPH (SEQ ID NO: 1510)或GHSSPH (SEQ ID NO: 1511)；包含其任何上述胺基酸序列之任何部分(例如，任何2、3、4或5個胺基酸，例如連續胺基酸)之胺基酸序列；相對於任何上述胺基酸序列，包含一個、兩個或三個但不超過四個修飾，例如取代(例如保守取代)、插入或缺失的胺基酸序列；或相對於上述任一胺基酸序列，包含一個、兩個或三個但不超過四個不同胺基酸之胺基酸序列。在一些實施例中，[N1]-[N2]係或包含GSGSPH (SEQ ID NO: 1456)。在一些實施例中，[N1]-[N2]係或包含GHDSPH (SEQ ID NO: 1457)。
在一些實施例中，[N3]之X4、X5或兩者係K。在一些實施例中，[N3]之X4、X5或X6係R。在一些實施例中，[N3]之位置X4係：A、K、V、S、T、G、F、W、V、N或R。在一些實施例中，[N3]之位置X5係：S、K、T、F、I、L、Y、H、M或R。在一些實施例中，[N3]之位置X6係：G、R、A、M、I、N、T、Y、D、P、V、L、E、W、N、Q、K或S。在一些實施例中，[N3]包含SK、KA、KS、AR、RM、VK、AS、SR、VK、KR、KK、KN、VR、RS、RK、KT、TS、KF、FG、KI、IG、KL、LG、TT、TY、KY、YG、KD、KP、TR、RG、VR、GA、SL、SS、FL、WK、SA、RA、LR、KW、RR、GK、TK、NK、AK、KV、KG、KH、KM、TG、SE、SV、SW、SN、HG、SQ、LW、MG、MA或SG。在一些實施例中，[N3]包含SK、KA、KS或SG。在一些實施例中，[N3]係或包含SKA、KSG、ARM、VKS、ASR、VKI、KKN、VRM、RKA、KTS、KFG、KIG、KLG、KTT、KTY、KYG、SKD、SKP、TRG、VRG、KRG、GAR、KSA、KSR、SKL、SRA、SKR、SLR、SRG、SSR、FLR、SKW、SKS、WKA、VRR、SKV、SKT、SKG、GKA、TKA、NKA、SKL、SKN、AKA、KTG、KSL、KSE、KSV、KSW、KSN、KHG、KSQ、KSK、KLW、WKG、KMG、KMA或RSG。在一些實施例中，[N3]係或包含SKA。在一些實施例中，[N3]係或包含KSG。在一些實施例中，[N2]-[N3]包含SPHSK (SEQ ID NO: 1372)、SPHKS (SEQ ID NO: 1375)、SPHAR (SEQ ID NO: 1376)、SPHVK (SEQ ID NO: 1377)、SPHAS (SEQ ID NO: 1378)、SPHKK (SEQ ID NO: 1379)、SPHVR (SEQ ID NO: 1380)、SPHRK (SEQ ID NO: 1381)、SPHKT (SEQ ID NO: 1382)、SPHKF (SEQ ID NO: 1383)、SPHKI (SEQ ID NO: 1384)、SPHKL (SEQ ID NO: 1385)、SPHKY (SEQ ID NO: 1386)、SPHTR (SEQ ID NO: 1387)、SPHKR (SEQ ID NO: 1388)、SPHGA (SEQ ID NO: 1389)、SPHSR (SEQ ID NO: 1390)、SPHSL (SEQ ID NO: 1391)、SPHSS (SEQ ID NO: 1392)、SPHFL (SEQ ID NO: 1393)、SPHWK (SEQ ID NO: 1394)、SPHGK (SEQ ID NO: 1395)、SPHTK (SEQ ID NO: 1396)、SPHNK (SEQ ID NO: 1397)、SPHAK (SEQ ID NO: 1398)、SPHKH (SEQ ID NO: 1399)、SPHKM (SEQ ID NO: 1400)或SPHRS (SEQ ID NO: 1401)。在一些實施例中，[N2]-[N3]包含SPHSK (SEQ ID NO: 1372)或SPHKS (SEQ ID NO: 1375)。在一些實施例中，[N2]-[N3]係或包含SPHSKA (SEQ ID NO: 941)、SPHKSG (SEQ ID NO: 946)、SPHARM (SEQ ID NO: 947)、SPHVKS (SEQ ID NO: 948)、SPHASR (SEQ ID NO: 949)、SPHVKI (SEQ ID NO: 950)、SPHKKN (SEQ ID NO: 954)、SPHVRM (SEQ ID NO: 955)、SPHRKA (SEQ ID NO: 956)、SPHKFG (SEQ ID NO: 957)、SPHKIG (SEQ ID NO: 958)、SPHKLG (SEQ ID NO: 959)、SPHKTS (SEQ ID NO: 963)、SPHKTT (SEQ ID NO: 964)、SPHKTY (SEQ ID NO: 965)、SPHKYG (SEQ ID NO: 966)、SPHSKD (SEQ ID NO: 967)、SPHSKP (SEQ ID NO: 968)、SPHTRG (SEQ ID NO: 972)、SPHVRG (SEQ ID NO: 973)、SPHKRG (SEQ ID NO: 974)、SPHGAR (SEQ ID NO: 975)、SPHKSA (SEQ ID NO: 977)、SPHKSR (SEQ ID NO: 951)、SPHSKL (SEQ ID NO: 960)、SPHSRA (SEQ ID NO: 969)、SPHSKR (SEQ ID NO: 978)、SPHSLR (SEQ ID NO: 952)、SPHSRG (SEQ ID NO: 961)、SPHSSR (SEQ ID NO: 970)、SPHFLR (SEQ ID NO: 979)、SPHSKW (SEQ ID NO: 953)、SPHSKS (SEQ ID NO: 962)、SPHWKA (SEQ ID NO: 971)、SPHVRR (SEQ ID NO: 980)、SPHSKT (SEQ ID NO: 1403)、SPHSKG (SEQ ID NO: 1404)、SPHGKA (SEQ ID NO: 1405)、SPHNKA (SEQ ID NO: 1406)、SPHSKN (SEQ ID NO: 1407)、SPHAKA (SEQ ID NO: 1408)、SPHSKV (SEQ ID NO: 1409)、SPHKTG (SEQ ID NO: 1410)、SPHTKA (SEQ ID NO: 1411)、SPHKSL (SEQ ID NO: 1412)、SPHKSE (SEQ ID NO: 1413)、SPHKSV (SEQ ID NO: 1414)、SPHKSW (SEQ ID NO: 1415)、SPHKSN (SEQ ID NO: 1416)、SPHKHG (SEQ ID NO: 1417)、SPHKSQ (SEQ ID NO: 1418)、SPHKSK (SEQ ID NO: 1419)、SPHKLW (SEQ ID NO: 1420)、SPHWKG (SEQ ID NO: 1421)、SPHKMG (SEQ ID NO: 1422)、SPHKMA (SEQ ID NO: 1423)或SPHRSG (SEQ ID NO: 976)。在一些實施例中，[N2]-[N3]係SPHSKA (SEQ ID NO: 941)。在一些實施例中，[N2]-[N3]係或包含SPHKSG (SEQ ID NO: 946)。
在一些實施例中，[N1]-[N2]-[N3]包含SGSPHSK (SEQ ID NO: 1512)、HDSPHKS (SEQ ID NO: 1513)、SGSPHAR (SEQ ID NO: 1514)、SGSPHVK (SEQ ID NO: 1515)、QDSPHKS (SEQ ID NO: 1516)、SGSPHKK (SEQ ID NO: 1517)、SGSPHVR (SEQ ID NO: 1518)、SGSPHAS (SEQ ID NO: 1519)、SGSPHRK (SEQ ID NO: 1520)、SGSPHKT (SEQ ID NO: 1521)、SHSPHKS (SEQ ID NO: 1522)、QSSPHRS (SEQ ID NO: 1523)、RGSPHAS (SEQ ID NO: 1524)、RGSPHSK (SEQ ID NO: 1525)、SGSPHKF (SEQ ID NO: 1526)、SGSPHKI (SEQ ID NO: 1527)、SGSPHKL (SEQ ID NO: 1528)、SGSPHKY (SEQ ID NO: 1529)、SGSPHTR (SEQ ID NO: 1530)、SHSPHKR (SEQ ID NO: 1531)、SGSPHGA (SEQ ID NO: 1532)、HDSPHKR (SEQ ID NO: 1533)、DDSPHKS (SEQ ID NO: 1534)、HESPHKS (SEQ ID NO: 1535)、NYSPHKI (SEQ ID NO: 1536)、SGSPHSR (SEQ ID NO: 1537)、SGSPHSL (SEQ ID NO: 1538)、SGSPHSS (SEQ ID NO: 1539)、VGSPHSK (SEQ ID NO: 1540)、SCSPHRK (SEQ ID NO: 1541)、SGSPHFL (SEQ ID NO: 1542)、LLSPHWK (SEQ ID NO: 1543)、NGSPHSK (SEQ ID NO: 1544)、PGSPHSK (SEQ ID NO: 1545)、GGSPHSK (SEQ ID NO: 1546)、TGSPHSK (SEQ ID NO: 1547)、SVSPHGK (SEQ ID NO: 1548)、SGSPHTK (SEQ ID NO: 1549)、IGSPHSK (SEQ ID NO: 1550)、DGSPHSK (SEQ ID NO: 1551)、SGSPHNK (SEQ ID NO: 1552)、LGSPHSK (SEQ ID NO: 1553)、AGSPHSK (SEQ ID NO: 1554)、EGSPHSK (SEQ ID NO: 1555)、SASPHSK (SEQ ID NO: 1556)、SGSPHAK (SEQ ID NO: 1557)、HDSPHKI (SEQ ID NO: 1558)、YDSPHKS (SEQ ID NO: 1559)、HDSPHKT (SEQ ID NO: 1560)、RGSPHKR (SEQ ID NO: 1561)、HGSPHSK (SEQ ID NO: 1562)、RDSPHKS (SEQ ID NO: 1563)、NDSPHKS (SEQ ID NO: 1564)、QDSPHKI (SEQ ID NO: 1565)、PDSPHKI (SEQ ID NO: 1566)、PDSPHKS (SEQ ID NO: 1567)、MGSPHSK (SEQ ID NO: 1568)、HDSPHKH (SEQ ID NO: 1569)、QVSPHKS (SEQ ID NO: 1570)、HNSPHKS (SEQ ID NO: 1571)、NGSPHKR (SEQ ID NO: 1572)、HDSPHKY (SEQ ID NO: 1573)、NDSPHKI (SEQ ID NO: 1574)、HDSPHKL (SEQ ID NO: 1575)、HPSPHWK (SEQ ID NO: 1576)、HDSPHKM (SEQ ID NO: 1577)或HSSPHRS (SEQ ID NO: 1578)。在一些實施例中，[N1]-[N2]-[N3]係或包含GSGSPHSKA (SEQ ID NO: 1369)、GHDSPHKSG (SEQ ID NO: 1370)、GSGSPHARM (SEQ ID NO: 1579)、GSGSPHVKS (SEQ ID NO: 1580)、GQDSPHKSG (SEQ ID NO: 1581)、GSGSPHASR (SEQ ID NO: 1582)、GSGSPHVKI (SEQ ID NO: 1583)、GSGSPHKKN (SEQ ID NO: 1584)、GSGSPHVRM (SEQ ID NO: 1585)、VSGSPHSKA (SEQ ID NO: 1586)、CSGSPHSKA (SEQ ID NO: 1587)、GSGSPHRKA (SEQ ID NO: 1588)、CSGSPHKTS (SEQ ID NO: 1589)、CSHSPHKSG (SEQ ID NO: 1590)、GQSSPHRSG (SEQ ID NO: 1591)、GRGSPHASR (SEQ ID NO: 1592)、GRGSPHSKA (SEQ ID NO: 1593)、GSGSPHKFG (SEQ ID NO: 1594)、GSGSPHKIG (SEQ ID NO: 1595)、GSGSPHKLG (SEQ ID NO: 1596)、GSGSPHKTS (SEQ ID NO: 1597)、GSGSPHKTT (SEQ ID NO: 1598)、GSGSPHKTY (SEQ ID NO: 1599)、GSGSPHKYG (SEQ ID NO: 1600)、GSGSPHSKD (SEQ ID NO: 1601)、GSGSPHSKP (SEQ ID NO: 1602)、GSGSPHTRG (SEQ ID NO: 1603)、GSGSPHVRG (SEQ ID NO: 1604)、GSHSPHKRG (SEQ ID NO: 1605)、GSHSPHKSG (SEQ ID NO: 1606)、VSGSPHASR (SEQ ID NO: 1607)、VSGSPHGAR (SEQ ID NO: 1608)、VSGSPHKFG (SEQ ID NO: 1609)、GHDSPHKRG (SEQ ID NO: 1610)、GDDSPHKSG (SEQ ID NO: 1611)、GHESPHKSA (SEQ ID NO: 1612)、GHDSPHKSA (SEQ ID NO: 1613)、GNYSPHKIG (SEQ ID NO: 1614)、GHDSPHKSR (SEQ ID NO: 1615)、GSGSPHSKL (SEQ ID NO: 1616)、GSGSPHSRA (SEQ ID NO: 1617)、GSGSPHSKR (SEQ ID NO: 1618)、GSGSPHSLR (SEQ ID NO: 1619)、GSGSPHSRG (SEQ ID NO: 1620)、GSGSPHSSR (SEQ ID NO: 1621)、RVGSPHSKA (SEQ ID NO: 1622)、GSCSPHRKA (SEQ ID NO: 1623)、GSGSPHFLR (SEQ ID NO: 1624)、GSGSPHSKW (SEQ ID NO: 1625)、GSGSPHSKS (SEQ ID NO: 1626)、GLLSPHWKA (SEQ ID NO: 1627)、GSGSPHVRR (SEQ ID NO: 1628)、GSGSPHSKV (SEQ ID NO: 1629)、MSGSPHSKA (SEQ ID NO: 1630)、RNGSPHSKA (SEQ ID NO: 1631)、TSGSPHSKA (SEQ ID NO: 1632)、ISGSPHSKA (SEQ ID NO: 1633)、GPGSPHSKA (SEQ ID NO: 1634)、GSGSPHSKT (SEQ ID NO: 1635)、ESGSPHSKA (SEQ ID NO: 1636)、SSGSPHSKA (SEQ ID NO: 1637)、GNGSPHSKA (SEQ ID NO: 1638)、ASGSPHSKA (SEQ ID NO: 1639)、NSGSPHSKA (SEQ ID NO: 1640)、LSGSPHSKA (SEQ ID NO: 1641)、GGGSPHSKA (SEQ ID NO: 1642)、KSGSPHSKA (SEQ ID NO: 1643)、GGGSPHSKS (SEQ ID NO: 1644)、GSGSPHSKG (SEQ ID NO: 1645)、HSGSPHSKA (SEQ ID NO: 1646)、GTGSPHSKA (SEQ ID NO: 1647)、PSGSPHSKA (SEQ ID NO: 1648)、GSVSPHGKA (SEQ ID NO: 1649)、RSGSPHSKA (SEQ ID NO: 1650)、GSGSPHTKA (SEQ ID NO: 1651)、GIGSPHSKA (SEQ ID NO: 1652)、WSGSPHSKA (SEQ ID NO: 1653)、DSGSPHSKA (SEQ ID NO: 1654)、IDGSPHSKA (SEQ ID NO: 1655)、GSGSPHNKA (SEQ ID NO: 1656)、GLGSPHSKS (SEQ ID NO: 1657)、DAGSPHSKA (SEQ ID NO: 1658)、DGGSPHSKA (SEQ ID NO: 1659)、MEGSPHSKA (SEQ ID NO: 1660)、ENGSPHSKA (SEQ ID NO: 1661)、GSASPHSKA (SEQ ID NO: 1662)、GNGSPHSKS (SEQ ID NO: 1663)、KNGSPHSKA (SEQ ID NO: 1664)、KEGSPHSKA (SEQ ID NO: 1665)、AIGSPHSKA (SEQ ID NO: 1666)、GSGSPHSKN (SEQ ID NO: 1667)、GSGSPHAKA (SEQ ID NO: 1668)、GHDSPHKIG (SEQ ID NO: 1669)、GYDSPHKSG (SEQ ID NO: 1670)、GHESPHKSG (SEQ ID NO: 1671)、GHDSPHKTG (SEQ ID NO: 1672)、GRGSPHKRG (SEQ ID NO: 1673)、GQDSPHKSG (SEQ ID NO: 1581)、GHDSPHKSL (SEQ ID NO: 1674)、GHGSPHSKA (SEQ ID NO: 1675)、GHDSPHKSE (SEQ ID NO: 1676)、VSGSPHSKA (SEQ ID NO: 1586)、GRDSPHKSG (SEQ ID NO: 1677)、GNDSPHKSV (SEQ ID NO: 1678)、GQDSPHKIG (SEQ ID NO: 1679)、GHDSPHKSV (SEQ ID NO: 1680)、GPDSPHKIG (SEQ ID NO: 1681)、GPDSPHKSG (SEQ ID NO: 1682)、GHDSPHKSW (SEQ ID NO: 1683)、GHDSPHKSN (SEQ ID NO: 1684)、GMGSPHSKT (SEQ ID NO: 1685)、GHDSPHKHG (SEQ ID NO: 1686)、GQVSPHKSG (SEQ ID NO: 1687)、GDDSPHKSV (SEQ ID NO: 1688)、GHNSPHKSG (SEQ ID NO: 1689)、GNGSPHKRG (SEQ ID NO: 1690)、GHDSPHKYG (SEQ ID NO: 1691)、GHDSPHKSQ (SEQ ID NO: 1692)、GNDSPHKIG (SEQ ID NO: 1693)、GHDSPHKSK (SEQ ID NO: 1694)、GHDSPHKLW (SEQ ID NO: 1695)、GHPSPHWKG (SEQ ID NO: 1696)、GHDSPHKMG (SEQ ID NO: 1697)、GHDSPHKMA (SEQ ID NO: 1698)或GHSSPHRSG (SEQ ID NO: 1699)；包含其任何上述胺基酸序列之任何部分(例如，任何2、3、4、5、6、7或8個胺基酸，例如連續胺基酸)之胺基酸序列；相對於任何上述胺基酸序列，包含一個、兩個或三個但不超過四個修飾，例如取代(例如保守取代)、插入或缺失的胺基酸序列；或相對於上述任一胺基酸序列，包含一個、兩個或三個但不超過四個不同胺基酸之胺基酸序列。在一些實施例中，[N1]-[N2]-[N3]係或包含GSGSPHSKA (SEQ ID NO: 1369)。在一些實施例中，[N1]-[N2]-[N3]係或包含GHDSPHKSG (SEQ ID NO: 1370)。
在一些實施例中，包含具有式[N1]-[N2]-[N3]之胺基酸序列的AAV衣殼變異體進一步包含[N4]，其中[N4]包含X7 X8 X9 X10。在一些實施例中，[N4]之位置X7係W、Q、K、R、G、L、V、S、P、H、K、I、M、A、E或F。在一些實施例中，[N4]之位置X8係N、Y、C、K、T、H、R、D、V、S、P、G、W、E、F、A、I、M、Q或L。在一些實施例中，[N4]之位置X9係Q、G、K、H、R、T、L、D、A、P、I、F、V、M、W、Y、S、E、N或Y。在一些實施例中，[N4]之位置X10係Q、H、L、R、W、K、A、P、E、M、I、S、G、N、Y、C、V、T、D或V。在一些實施例中，[N4]包含QNQQ (SEQ ID NO: 1701)、WNQQ (SEQ ID NO: 1702)、QYYV (SEQ ID NO: 1703)、RRQQ (SEQ ID NO: 1704)、GCGQ (SEQ ID NO: 1705)、LRQQ (SEQ ID NO: 1706)、RNQQ (SEQ ID NO: 1707)、VNQQ (SEQ ID NO: 1708)、FRLQ (SEQ ID NO: 1709)、FNQQ (SEQ ID NO: 1710)、LLQQ (SEQ ID NO: 1711)、SNQQ (SEQ ID NO: 1712)、RLQQ (SEQ ID NO: 1713)、LNQQ (SEQ ID NO: 1714)、QRKL (SEQ ID NO: 1715)、LRRQ (SEQ ID NO: 1716)、QRLR (SEQ ID NO: 1717)、QRRL (SEQ ID NO: 1718)、RRLQ (SEQ ID NO: 1719)、RLRQ (SEQ ID NO: 1720)、SKRQ (SEQ ID NO: 1721)、QLYR (SEQ ID NO: 1722)、QLTV (SEQ ID NO: 1723)、QNKQ (SEQ ID NO: 1724)、KNQQ (SEQ ID NO: 1725)、QKQQ (SEQ ID NO: 1726)、QTQQ (SEQ ID NO: 1727)、QNHQ (SEQ ID NO: 1728)、QHQQ (SEQ ID NO: 1729)、QNQH (SEQ ID NO: 1730)、QHRQ (SEQ ID NO: 1731)、LTQQ (SEQ ID NO: 1732)、QNQW (SEQ ID NO: 1733)、QNTH (SEQ ID NO: 1734)、RRRQ (SEQ ID NO: 1735)、QYQQ (SEQ ID NO: 1736)、QNDQ (SEQ ID NO: 1737)、QNRH (SEQ ID NO: 1738)、RDQQ (SEQ ID NO: 1739)、PNLQ (SEQ ID NO: 1740)、HVRQ (SEQ ID NO: 1741)、PNQH (SEQ ID NO: 1742)、HNQQ (SEQ ID NO: 1743)、QSQQ (SEQ ID NO: 1744)、QPAK (SEQ ID NO: 1745)、QNLA (SEQ ID NO: 1746)、QNQL (SEQ ID NO: 1747)、QGQQ (SEQ ID NO: 1748)、LNRQ (SEQ ID NO: 1749)、QNPP (SEQ ID NO: 1750)、QNLQ (SEQ ID NO: 1751)、QDQE (SEQ ID NO: 1752)、QDQQ (SEQ ID NO: 1753)、HWQQ (SEQ ID NO: 1755)、PNQQ (SEQ ID NO: 1756)、PEQQ (SEQ ID NO: 1757)、QRTM (SEQ ID NO: 1758)、LHQH (SEQ ID NO: 1759)、QHRI (SEQ ID NO: 1760)、QYIH (SEQ ID NO: 1761)、QKFE (SEQ ID NO: 1762)、QFPS (SEQ ID NO: 1763)、QNPL (SEQ ID NO: 1764)、QAIK (SEQ ID NO: 1765)、QNRQ (SEQ ID NO: 1766)、QYQH (SEQ ID NO: 1767)、QNPQ (SEQ ID NO: 1768)、QHQL (SEQ ID NO: 1769)、QSPP (SEQ ID NO: 1770)、QAKL (SEQ ID NO: 1771)、KSQQ (SEQ ID NO: 1772)、QDRP (SEQ ID NO: 1773)、QNLG (SEQ ID NO: 1774)、QAFH (SEQ ID NO: 1775)、QNAQ (SEQ ID NO: 1776)、HNQL (SEQ ID NO: 1777)、QKLN (SEQ ID NO: 1778)、QNVQ (SEQ ID NO: 1779)、QAQQ (SEQ ID NO: 1780)、QTPP (SEQ ID NO: 1781)、QPPA (SEQ ID NO: 1782)、QERP (SEQ ID NO: 1783)、QDLQ (SEQ ID NO: 1784)、QAMH (SEQ ID NO: 1785)、QHPS (SEQ ID NO: 1786)、PGLQ (SEQ ID NO: 1787)、QGIR (SEQ ID NO: 1788)、QAPA (SEQ ID NO: 1789)、QIPP (SEQ ID NO: 1790)、QTQL (SEQ ID NO: 1791)、QAPS (SEQ ID NO: 1792)、QNTY (SEQ ID NO: 1793)、QDKQ (SEQ ID NO: 1794)、QNHL (SEQ ID NO: 1795)、QIGM (SEQ ID NO: 1796)、LNKQ (SEQ ID NO: 1797)、PNQL (SEQ ID NO: 1798)、QLQQ (SEQ ID NO: 1799)、QRMS (SEQ ID NO: 2897)、QGIL (SEQ ID NO: 2907)、QDRQ (SEQ ID NO: 2917)、RDWQ (SEQ ID NO: 3081)、QERS (SEQ ID NO: 3238)、QNYQ (SEQ ID NO: 3590)、QRTC (SEQ ID NO: 3849)、QIGH (SEQ ID NO: 3850)、QGAI (SEQ ID NO: 3851)、QVPP (SEQ ID NO: 3852)、QVQQ (SEQ ID NO: 3853)、LMRQ (SEQ ID NO: 3854)、QYSV (SEQ ID NO: 3855)、QAIT (SEQ ID NO: 3856)、QKTL (SEQ ID NO: 3857)、QLHH (SEQ ID NO: 3858)、QNII (SEQ ID NO: 3859)、QGHH (SEQ ID NO: 3860)、QSKV (SEQ ID NO: 3861)、QLPS (SEQ ID NO: 3862)、IGKQ (SEQ ID NO: 3863)、QAIH (SEQ ID NO: 3864)、QHGL (SEQ ID NO: 3865)、QFMC (SEQ ID NO: 3866)、QNQM (SEQ ID NO: 3867)、QHLQ (SEQ ID NO: 3868)、QPAR (SEQ ID NO: 3869)、QSLQ (SEQ ID NO: 3870)、QSQL (SEQ ID NO: 3871)、HSQQ (SEQ ID NO: 3872)、QMPS (SEQ ID NO: 3873)、QGSL (SEQ ID NO: 3874)、QVPA (SEQ ID NO: 3875)、HYQQ (SEQ ID NO: 3876)、QVPS (SEQ ID NO: 3877)、RGEQ (SEQ ID NO: 3878)、PGQQ (SEQ ID NO: 3879)、LEQQ (SEQ ID NO: 3880)、QNQS (SEQ ID NO: 3881)、QKVI (SEQ ID NO: 3882)、QNND (SEQ ID NO: 3883)、QSVH (SEQ ID NO: 3884)、QPLG (SEQ ID NO: 3885)、HNQE (SEQ ID NO: 3886)、QIQQ (SEQ ID NO: 3887)、QVRN (SEQ ID NO: 3888)、PSNQ (SEQ ID NO: 3889)、QVGH (SEQ ID NO: 3890)、QRDI (SEQ ID NO: 3891)、QMPN (SEQ ID NO: 3892)、RGLQ (SEQ ID NO: 3893)、PSLQ (SEQ ID NO: 3894)、QRDQ (SEQ ID NO: 3895)、QAKG (SEQ ID NO: 3896)、QSAH (SEQ ID NO: 3897)、QSTM (SEQ ID NO: 3898)、QREM (SEQ ID NO: 3899)、QYRA (SEQ ID NO: 3900)、QRQQ (SEQ ID NO: 3901)、QWQQ (SEQ ID NO: 3902)、QRMN (SEQ ID NO: 3903)、GDSQ (SEQ ID NO: 3904)、QKIS (SEQ ID NO: 3905)、PSMQ (SEQ ID NO: 3906)、SPRQ (SEQ ID NO: 3907)、MEQQ (SEQ ID NO: 3908)、QYQN (SEQ ID NO: 3909)、QIRQ (SEQ ID NO: 3910)、QSVQ (SEQ ID NO: 3911)、RSQQ (SEQ ID NO: 3912)、QNKL (SEQ ID NO: 3913)、QIQH (SEQ ID NO: 3914)、PRQQ (SEQ ID NO: 3915)、HTQQ (SEQ ID NO: 3916)、QRQH (SEQ ID NO: 3917)、RNQE (SEQ ID NO: 3918)、QSKQ (SEQ ID NO: 3919)、QNQP (SEQ ID NO: 3920)、QSPQ (SEQ ID NO: 3921)、 QTRQ (SEQ ID NO: 3922)、QNLH (SEQ ID NO: 3923)、QNQE (SEQ ID NO: 3924)、LNQP (SEQ ID NO: 3925)、QNQD (SEQ ID NO: 3926)、QNLL (SEQ ID NO: 3927)、QLVI (SEQ ID NO: 3928)、RTQE (SEQ ID NO: 3929)、QTHQ (SEQ ID NO: 3930)、QDQH (SEQ ID NO: 3931)、QSQH (SEQ ID NO: 3932)、VRQQ (SEQ ID NO: 3933)、AWQQ (SEQ ID NO: 3934)、QSVP (SEQ ID NO: 3935)、QNIQ (SEQ ID NO: 3936)、LDQQ (SEQ ID NO: 3937)、PDQQ (SEQ ID NO: 3938)、ESQQ (SEQ ID NO: 3939)、QRQL (SEQ ID NO: 3940)、QIIV (SEQ ID NO: 3941)、QKQS (SEQ ID NO: 3942)、QSHQ (SEQ ID NO: 3943)、QFVV (SEQ ID NO: 3944)、QSQP (SEQ ID NO: 3945)、QNEQ (SEQ ID NO: 3946)、INQQ (SEQ ID NO: 3947)、RNRQ (SEQ ID NO: 3948)、RDQK (SEQ ID NO: 3949)、QWKR (SEQ ID NO: 3950)、ENRQ (SEQ ID NO: 3951)、QTQP (SEQ ID NO: 3952)、QKQL (SEQ ID NO: 3953)、RNQL (SEQ ID NO: 3954)、ISIQ (SEQ ID NO: 3955)、QTVC (SEQ ID NO: 3956)、QQIM (SEQ ID NO: 3957)、LNHQ (SEQ ID NO: 3958)、QNQA (SEQ ID NO: 3959)、QMIH (SEQ ID NO: 3960)、RNHQ (SEQ ID NO: 3961)或QKMN (SEQ ID NO: 3962)，或其任何二肽或三肽。在一些實施例中，[N1]-[N2]-[N3]-[N4]係或包含：SEQ ID NO: 1800-2241中任一者之胺基酸序列；包含其任何上述胺基酸序列之任何部分(例如，任何2、3、4、5、6、7、8、9、10、11或12個胺基酸，例如連續胺基酸)之胺基酸序列；相對於任何上述胺基酸序列，包含一個、兩個或三個但不超過四個修飾，例如取代(例如保守取代)、插入或缺失的胺基酸序列；或相對於上述任一胺基酸序列，包含一個、兩個或三個但不超過四個不同胺基酸之胺基酸序列。在一些實施例中，[N1]-[N2]-[N3]-[N4]係或包含GSGSPHSKAQNQQ (SEQ ID NO: 1801)。在一些實施例中，[N1]-[N2]-[N3]-[N4]係或包含GHDSPHKSGQNQQ (SEQ ID NO: 1800)。
在一些實施例中，包含具有式[N1]-[N2]-[N3]之胺基酸序列的AAV衣殼變異體進一步包含[N0]，其中[N0]包含XA XB及XC。在一些實施例中，[N0]之XA係：T、S、Y、M、A、C、I、R、L、D、F、V、Q、N、H、E或G。在一些實施例中，[N0]之XB係：I、M、P、E、N、D、S、A、T、G、Q、F、V、L、C、H、R、W或L。在一些實施例中，[N0]之XC係：N、M、E、G、Y、W、T、I、Q、F、V、A、L、I、P、K、R、H、S、D或S。在一些實施例中，[N0]包含TIN、SMN、TIM、YLS、GLS、MPE、MEG、MEY、AEW、CEW、ANN、IPE、ADM、IEY、ADY、IET、MEW、CEY、RIN、MEI、LEY、ADW、IEI、DIM、FEQ、MEF、CDQ、LPE、IEN、MES、AEI、VEY、IIN、TSN、IEV、MEM、AEV、MDA、VEW、AEQ、LEW、MEL、MET、MEA、IES、MEV、CEI、ATN、MDG、QEV、ADQ、NMN、IEM、ISN、TGN、QQQ、HDW、IEG、TII、TFP、TEK、EIN、TVN、TFN、SIN、TER、TSY、ELH、AIN、SVN、TDN、TFH、TVH、TEN、TSS、TID、TCN、NIN、TEH、AEM、AIK、TDK、TFK、SDQ、TEI、NTN、TET、SIK、TEL、TEA、TAN、TIY、TFS、TES、TTN、TED、TNN、EVH、TIS、TVR、TDR、TIK、NHI、TIP、ESD、TDL、TVP、TVI、AEH、NCL、TVK、NAD、TIT、NCV、TIR、NAL、VIN、TIQ、TEF、TRE、QGE、SEK、NVN、GGE、EFV、SDK、TEQ、EVQ、TEY、NCW、TDV、SDI、NSI、NSL、EVV、TEP、SEL、TWQ、TEV、AVN、GVL、TLN、TEG、TRD、NAI、AEN、AET、ETA、NNL，或其任何二肽。在一些實施例中，[N0]-[N1]-[N2]-[N3]-[N4]係或包含SEQ ID NO: 2242-2886中任一者之胺基酸序列；包含其任何上述胺基酸序列之任何部分(例如，任何2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14或15個胺基酸，例如連續胺基酸)之胺基酸序列；相對於任何上述胺基酸序列，包含一個、兩個或三個但不超過四個修飾，例如取代(例如保守取代)、插入或缺失的胺基酸序列；或相對於上述任一胺基酸序列，包含一個、兩個或三個但不超過四個不同胺基酸之胺基酸序列。在一些實施例中，[N0]-[N1]-[N2]-[N3]-[N4]係或包含TINGSGSPHSKAQNQQ (SEQ ID NO: 2242)。在一些實施例中，[N0]-[N1]-[N2]-[N3]-[N4]係或包含TINGHDSPHKSGQNQQ (SEQ ID NO: 2243)。
在一些實施例中，[N1]-[N2]-[N3]存在於AAV衣殼變異體之環IV中。在一些實施例中，[N0]及[N4]存在於AAV衣殼變異體之環IV中。在一些實施例中，[N0]-[N1]-[N2]-[N3]-[N4]存在於AAV衣殼變異體之環IV中。
在一些實施例中，相對於根據SEQ ID NO: 138之胺基酸序列編號之參考序列，[N0]緊接在位置449之後存在。在一些實施例中，相對於根據SEQ ID NO: 981或982之胺基酸序列編號之參考序列，[N0]緊接在位置449之後存在。在一些實施例中，相對於根據SEQ ID NO: 138、981或982編號之參考序列，[N0]替換位置450、451及452 (例如胺基酸T450、I451及N452)。相對於根據SEQ ID NO: 138、981或982編號之參考序列，其中[N0]緊接在位置449之後存在，並且其中[N0]替換位置450-452 (例如，T450、I451及N452)。在一些實施例中，相對於根據SEQ ID NO: 138、981或982之胺基酸序列編號之參考序列，[N1]緊接在位置452之後存在。在一些實施例中，相對於根據SEQ ID NO: 138、981或982編號之參考序列，[N1]替換位置453-455 (例如，G453、S454及G455)。在一些實施例中，相對於根據SEQ ID NO: 138、981或982編號之參考序列，[N1]緊接在位置452之後存在，並且其中[N1]替換位置453-455 (例如，G453、S454及G455)。在一些實施例中，相對於根據SEQ ID NO: 138、981或982之胺基酸序列編號之參考序列，[N2]緊接在位置455之後存在。在一些實施例中，相對於根據SEQ ID NO: 138、981或982之胺基酸序列編號之參考序列，[N2]-[N3]緊接在455位置之後存在。在一些實施例中，相對於SEQ ID NO: 138、981或982編號，[N1]-[N2]-[N3]緊接在位置452之後存在。在一些實施例中，相對於根據SEQ ID NO: 138、981或982編號之參考序列，[N1]-[N2]-[N3]替換位置453-455 (例如，G453、S454及G455)。在一些實施例中，相對於根據SEQ ID NO: 138、981或982編號之參考序列，[N1]緊接在位置452之後存在並且其中[N1]-[N2]-[N3]替換位置453-455 (例如，G453、S454及G455)。在一些實施例中，相對於根據SEQ ID NO: 138之胺基酸序列編號之參考序列，[N4]緊接在位置455之後存在。在一些實施例中，相對於根據SEQ ID NO: 138之胺基酸序列編號之參考序列，[N4]替換位置456-459 (例如，Q456、N457、Q458及Q459)。在一些實施例中，相對於根據SEQ ID NO: 138之胺基酸序列編號之參考序列，[N4]緊接在位置455之後存在，並且[N4]替換位置456-459 (例如，Q456、N457、Q458及Q459)。在一些實施例中，相對於根據SEQ ID NO: 138之胺基酸序列編號之參考序列，[N2]-[N3]-[N4]替換位置456-459 (例如，Q456、N457、Q458及Q459)。在一些實施例中，相對於根據SEQ ID NO: 138之胺基酸序列編號之參考序列，[N2]-[N3]-[N4]緊接在位置455之後存在，並且其中[N2]-[N3]-[N4]替換位置456-459 (例如，Q456、N457、Q458及Q459)。在一些實施例中，相對於根據SEQ ID NO: 138之胺基酸序列編號之參考序列，[N1]-[N2]-[N3]-[N4]替換位置453-459 (例如，G453、S454、G455、Q456、N457、Q458及Q459)。在一些實施例中，相對於根據SEQ ID NO: 138之胺基酸序列編號之參考序列，[N1]-[N2]-[N3]-[N4]緊接在位置452之後存在，且其中[N1]-[N2]-[N3]-[N4]替換位置453-459 (例如，G453、S454、G455、Q456、N457、Q458及Q459)。在一些實施例中，相對於根據SEQ ID NO: 138之胺基酸序列編號之參考序列，[N0]-[N1]-[N2]-[N3]-[N4]替換位置450-459 (例如，T450、I451、N452、G453、S454、G455、Q456、N457、Q458及Q459)。在一些實施例中，相對於根據SEQ ID NO: 138之胺基酸序列編號之參考序列，[N0]-[N1]-[N2]-[N3]-[N4]緊接在位置449之後存在，且其中[N0]-[N1]-[N2]-[N3]-[N4]替換位置450-459 (例如，T450、I451、N452、G453、S454、G455、Q456、N457、Q458及Q459)。
在一些實施例中，[N3]緊接在[N2]之後存在。
在一些實施例中，AAV衣殼變異體自N末端至C末端包含[N2]-[N3]。在一些實施例中，AAV衣殼變異體自N末端至C末端包含[N1]-[N2]-[N3]。在一些實施例中，AAV衣殼變異體自N末端至C末端包含[N1]-[N2]-[N3]-[N4]。在一些實施例中，AAV衣殼變異體自N末端至C末端包含[N0]-[N1]-[N2]-[N3]。在一些實施例中，AAV衣殼變異體自N末端至C末端包含[N0]-[N1]-[N2]-[N3]-[N4]。
在一些實施例中，本文所述之AAV衣殼變異體包含有包含來自表1A、2A、2B、21-23、25、26或30中提供之任一序列之至少3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、16或17個連續胺基酸之胺基酸序列。在一些實施例中，AAV衣殼變異體包含有包含來自SEQ ID NO: 945-980或985-986中任一者之至少3、4或5個連續胺基酸之胺基酸序列。在一些實施例中，AAV衣殼變異體包含有包含來自SEQ ID NO: 200、201、941、943、204、208、404或903-909中任一者之至少3、4、5、6、7、8、9、10、11、12或13個連續胺基酸之胺基酸序列。在一些實施例中，胺基酸序列存在於環IV中。在一些實施例中，相對於根據SEQ ID NO: 138、981或982之胺基酸序列編號之參考序列，胺基酸序列緊接在位置448、452、453、455之後存在。在一些實施例中，根據SEQ ID NO: 982編號，胺基酸序列緊接在位置455之後存在。在一些實施例中，根據SEQ ID NO: 138編號，胺基酸序列緊接在位置455之後存在。在一些實施例中，根據SEQ ID NO: 981編號，胺基酸序列緊接在位置453之後存在。在一些實施例中，根據SEQ ID NO: 138編號，胺基酸序列緊接在位置453之後存在。在一些實施例中，根據SEQ ID NO: 138編號，胺基酸序列替換位置499 (例如，K499)、450 (例如，T450)、451 (例如，I451)、452 (例如，N452)、453 (例如，G453)、454 (例如，S454)、455 (例如，G455)、456 (例如，Q456)、457 (例如，N457)、458 (例如，Q458)、459 (例如，Q459)及460 (例如，T460)中之1個、2個、3個、4個、5個、6個、7個、8個、9個、10個、11個或全部。在一些實施例中，根據SEQ ID NO: 138編號，AAV衣殼變異體包含位置499 (例如，K499)、450 (例如，T450)、451 (例如，I451)、452 (例如，N452)、453 (例如，G453)、454 (例如，S454)、455 (例如，G455)、456 (例如，Q456)、457 (例如，N457)、458 (例如，Q458)、459 (例如，Q459)及460 (例如，T460)處之一或多個胺基酸取代。
在一些實施例中，至少3個連續胺基酸包含SPH。在一些實施例中，至少4個連續胺基酸包含SPHS (SEQ ID NO: 1371)。在一些實施例中，至少5個連續胺基酸包含SPHSK (SEQ ID NO: 1372)。在一些實施例中，至少6個連續胺基酸包含SPHSKA (SEQ ID NO: 941)。
在一些實施例中，SPHSKA (SEQ ID NO: 941)之胺基酸序列存在於根據SEQ ID NO: 981編號之胺基酸456-461處。在一些實施例中，SPHSKA (SEQ ID NO: 941)之胺基酸序列存在於根據SEQ ID NO: 69編號之胺基酸456-461處。在一些實施例中，SPHSKA (SEQ ID NO: 941)之胺基酸序列存在於根據SEQ ID NO: 36編號之胺基酸456-461處。
在一些實施例中，至少3個連續胺基酸包含HDS。在一些實施例中，至少4個連續胺基酸包含HDSP (SEQ ID NO: 1373)。在一些實施例中，至少5個連續胺基酸包含HDSPH (SEQ ID NO: 1374)。在一些實施例中，至少6個連續胺基酸包含HDSPHK (SEQ ID NO: 2)。
在一些實施例中，HDSPHK (SEQ ID NO: 2)之胺基酸序列存在於根據SEQ ID NO: 982編號之胺基酸454-459處。
在一些實施例中，本文所述之AAV衣殼變異體包含相對於表1A、2A、2B、21-23，25、26或30中提供之任一序列之胺基酸序列，包含至少一個、兩個或三個但不超過四個修飾，例如取代(例如保守取代)、插入或缺失之胺基酸序列。在一些實施例中，AAV衣殼變異體包含相對於表1A、2A、2B、21-23，25、26或30中提供之任一序列之胺基酸序列，包含至少一個、兩個或三個但不超過四個不同胺基酸之胺基酸序列。在一些實施例中，AAV衣殼變異體包含相對於SEQ ID NO: 945-980或985-986中任一者之胺基酸序列，包含至少一個、兩個或三個但不超過四個修飾，例如取代(例如保守取代)、插入或缺失之胺基酸序列。在一些實施例中，AAV衣殼變異體包含相對於SEQ ID NO: 945-980或985-986中任一者之胺基酸序列，包含至少一個、兩個或三個但不超過四個不同胺基酸之胺基酸序列。在一些實施例中，AAV衣殼變異體包含相對於SEQ ID NO: 2、200、201、941、943、204、208、404或903-909中任一者之胺基酸序列，包含至少一個、兩個或三個但不超過四個修飾，例如取代(例如保守取代)、插入或缺失之胺基酸序列。在一些實施例中，AAV衣殼變異體包含相對於SEQ ID NO: 2、200、201、941、943、204、208、404或903-909中任一者之胺基酸序列，包含至少一個、兩個或三個但不超過四個不同胺基酸之胺基酸序列。在一些實施例中，胺基酸序列存在於環IV中。在一些實施例中，相對於根據SEQ ID NO: 138、981或982之胺基酸序列編號之參考序列，胺基酸序列緊接在位置448、452、453、455之後存在。在一些實施例中，根據SEQ ID NO: 982編號，胺基酸序列緊接在位置455之後存在。在一些實施例中，根據SEQ ID NO: 138編號，胺基酸序列緊接在位置455之後存在。在一些實施例中，根據SEQ ID NO: 981編號，胺基酸序列緊接在位置453之後存在。在一些實施例中，根據SEQ ID NO: 138編號，胺基酸序列緊接在位置453之後存在。在一些實施例中，根據SEQ ID NO: 138編號，胺基酸序列替換位置499 (例如，K499)、450 (例如，T450)、451 (例如，I451)、452 (例如，N452)、453 (例如，G453)、454 (例如，S454)、455 (例如，G455)、456 (例如，Q456)、457 (例如，N457)、458 (例如，Q458)、459 (例如，Q459)及460 (例如，T460)中之1個、2個、3個、4個、5個、6個、7個、8個、9個、10個、11個或全部。
在一些實施例中，AAV衣殼變異體包含相對於SPHSKA (SEQ ID NO: 941)之胺基酸序列，包含至少一個、兩個或三個但不超過四個修飾，例如取代(例如保守取代)、插入或缺失之胺基酸序列。在一些實施例中，AAV衣殼變異體包含相對於SPHSKA (SEQ ID NO: 941)之胺基酸序列包含至少一個、兩個或三個但不超過四個不同胺基酸之胺基酸序列。
在一些實施例中，AAV衣殼變異體包含相對於HDSPHK (SEQ ID NO: 2)之胺基酸序列，包含至少一個、兩個或三個但不超過四個修飾，例如取代(例如保守取代)、插入或缺失之胺基酸序列。在一些實施例中，AAV衣殼變異體包含相對於HDSPHK (SEQ ID NO: 2)之胺基酸序列，包含至少一個、兩個或三個但不超過四個不同胺基酸之胺基酸序列。
在一些實施例中，AAV衣殼變異體包含表1A、2A、2B、21-23、25、26或30中提供之任何序列之胺基酸序列。在一些實施例中，肽包含SEQ ID NO: 945-980或985-986中任一者之胺基酸序列。在一些實施例中，AAV衣殼變異體包含SEQ ID NO: 2、200、201、941、943、204、208、404或903-909中任一者之胺基酸序列。在一些實施例中，AAV衣殼變異體包含SEQ ID NO: 2之胺基酸序列。在一些實施例中，AAV衣殼變異體包含SEQ ID NO: 941之胺基酸序列。在一些實施例中，AAV衣殼變異體包含SEQ ID NO:943之胺基酸序列。在一些實施例中，AAV衣殼變異體包含SEQ ID NO: 3589之胺基酸序列。在一些實施例中，AAV衣殼變異體包含SEQ ID NO: 1754之胺基酸序列。在一些實施例中，AAV衣殼變異體包含SEQ ID NO:3241之胺基酸序列。在一些實施例中，AAV衣殼變異體包含SEQ ID NO:4100之胺基酸序列。在一些實施例中，AAV衣殼變異體包含SEQ ID NO:4062之胺基酸序列。在一些實施例中，AAV衣殼變異體包含SEQ ID NO:4486之胺基酸序列。在一些實施例中，胺基酸序列存在於環IV中。在一些實施例中，相對於根據SEQ ID NO: 138之胺基酸序列編號之參考序列，胺基酸序列緊接在位置448之後存在。在一些實施例中，相對於SEQ ID NO: 138編號，胺基酸序列替換位置449-460 (例如，K449、T450、I451、N452、G453、S454、G455、Q456、N457、Q458、Q459及T460)。在一些實施例中，相對於SEQ ID NO: 138編號，胺基酸序列緊接在位置448之後存在並且替換位置449-460 (例如，K449、T450、I451、N452、G453、S454、G455、Q456、N457、Q458、Q459及T460)。在一些實施例中，相對於根據SEQ ID NO: 138之胺基酸序列編號之參考序列，胺基酸序列緊接在位置449之後存在。在一些實施例中，相對於SEQ ID NO: 138編號，胺基酸序列替換位置450-460 (例如，T450、I451、N452、G453、S454、G455、Q456、N457、Q458、Q459及T460)。在一些實施例中，相對於SEQ ID NO: 138編號，胺基酸序列緊接在位置449之後存在，並且替換位置450-460 (例如，T450、I451、N452、G453、S454、G455、Q456、N457、Q458、Q459及T460)。在一些實施例中，相對於根據SEQ ID NO: 138之胺基酸序列編號之參考序列，胺基酸序列緊接在位置450之後存在。在一些實施例中，相對於SEQ ID NO: 138編號，胺基酸序列替換位置451-460 (例如，I451、N452、G453、S454、G455、Q456、N457、Q458、Q459及T460)。在一些實施例中，相對於SEQ ID NO: 138編號，胺基酸序列緊接在位置450之後存在並且替換位置451-460 (例如，I451、N452、G453、S454、G455、Q456、N457、Q458、Q459及T460)。在一些實施例中，相對於根據SEQ ID NO: 138之胺基酸序列編號之參考序列，胺基酸序列緊接在位置451之後存在。在一些實施例中，相對於SEQ ID NO: 138編號，胺基酸序列替換位置452-460 (例如，N452、G453、S454、G455、Q456、N457、Q458、Q459及T460)。在一些實施例中，相對於SEQ ID NO: 138編號，胺基酸序列緊接在位置之451後存在並且替換位置452-460 (例如，N452、G453、S454、G455、Q456、N457、Q458、Q459及T460)。在一些實施例中，相對於根據SEQ ID NO: 138之胺基酸序列編號之參考序列，胺基酸序列緊接在位置452之後存在。在一些實施例中，相對於SEQ ID NO: 138編號，胺基酸序列替換位置453-460 (例如，G453、S454、G455、Q456、N457、Q458、Q459及T460)。在一些實施例中，相對於SEQ ID NO: 138編號，胺基酸序列緊接在位置452之後存在，並且替換位置453-460 (例如，G453、S454、G455、Q456、N457、Q458、Q459及T460)。在一些實施例中，相對於根據SEQ ID NO: 138之胺基酸序列編號之參考序列，胺基酸序列緊接在位置453之後存在。在一些實施例中，根據SEQ ID NO: 138編號，胺基酸序列替換位置454及455 (例如，S454及G455)。在一些實施例中，根據SEQ ID NO: 138編號，胺基酸序列緊接在位置453之後存在，並且替換位置454及455 (例如，S454及G455)。在一些實施例中，相對於SEQ ID NO: 138編號，胺基酸序列替換位置454-460 (例如，S454、G455、Q456、N457、Q458、Q459及T460)。在一些實施例中，相對於SEQ ID NO: 138編號，胺基酸序列緊接在位置453之後存在，並且替換位置454-460 (例如，S454、G455、Q456、N457、Q458、Q459及T460)。在一些實施例中，相對於根據SEQ ID NO: 138之胺基酸序列編號之參考序列，胺基酸序列緊接在位置454之後存在。在一些實施例中，相對於根據SEQ ID NO: 981之胺基酸序列編號之參考序列，胺基酸序列緊接在位置454之後存在。在一些實施例中，相對於SEQ ID NO: 138編號，胺基酸序列替換位置455-460 (例如，位置G455、Q456、N457、Q458、Q459及T460)。在一些實施例中，相對於SEQ ID NO: 138編號，胺基酸序列緊接在位置454之後存在，並且替換位置455-460 (例如，位置G455、Q456、N457、Q458、Q459及T460)。在一些實施例中，相對於根據SEQ ID NO: 138之胺基酸序列編號之參考序列，胺基酸序列緊接在位置455之後存在。在一些實施例中，相對於根據SEQ ID NO: 982之胺基酸序列編號之參考序列，胺基酸序列緊接在位置455之後存在。在一些實施例中，相對於SEQ ID NO: 138編號，胺基酸序列替換位置456-460 (例如，Q456、N457、Q458、Q459及T460)。在一些實施例中，相對於SEQ ID NO: 138編號，胺基酸序列緊接在位置455之後存在，且替換位置456-460 (例如，Q456、N457、Q458、Q459及T460)。
在一些實施例中，AAV衣殼變異體(例如，本文所述之AAV衣殼變異體)包含由SEQ ID NO: 3或942之核苷酸序列或與其實質上一致(例如，具有至少70%、75%、80%、85%、90%、92%、95%、97%、98%或99%序列一致性)之核苷酸序列編碼的胺基酸序列。在一些實施例中，本文所述之AAV衣殼變異體包含由SEQ ID NO: 3或942之核苷酸序列或相對於SEQ ID NO: 3或942之核苷酸序列包含至少一個、兩個、三個、四個、五個、六個或七個修飾，例如取代(例如保守取代)、插入或缺失但不超過十個修飾，例如取代(例如保守取代)、插入或缺失的核苷酸序列編碼之胺基酸序列。在一些實施例中，AAV衣殼變異體包含由相對於SEQ ID NO: 3或942之核苷酸序列包含至少一個、兩個、三個、四個、五個、六個或七個但不超過十個不同核苷酸之核苷酸序列編碼之胺基酸序列。
在一些實施例中，編碼AAV衣殼變異體(例如，本文所述之AAV衣殼變異體)之核苷酸序列包含SEQ ID NO: 942之核苷酸序列，或與其實質上一致(例如，具有至少70%、75%、80%、85%、90%、92%、95%、97%、98%或99%序列一致性)之核苷酸序列。在一些實施例中，編碼AAV衣殼變異體之核酸序列包含相對於SEQ ID NO: 942之核苷酸序列包含至少一個、兩個、三個、四個、五個、六個或七個修飾，例如取代(例如保守取代)、插入或缺失但不超過十個修飾，例如取代(例如保守取代)、插入或缺失之核苷酸序列。在一些實施例中，編碼本文所述之AAV衣殼變異體之核苷酸序列包含相對於SEQ ID NO: 942之核苷酸序列包含至少一個、兩個、三個、四個、五個、六個或七個但不超過十個不同核苷酸之核苷酸序列。
在一些實施例中，編碼AAV衣殼變異體(例如，本文所述之AAV衣殼變異體)之核苷酸序列包含SEQ ID NO: 3之核苷酸序列，或與其實質上一致(例如，具有至少70%、75%、80%、85%、90%、92%、95%、97%、98%或99%序列一致性)之核苷酸序列。在一些實施例中，編碼AAV衣殼變異體之核酸序列包含相對於SEQ ID NO: 3之核苷酸序列包含至少一個、兩個、三個、四個、五個、六個或七個修飾，例如取代(例如保守取代)、插入或缺失但不超過十個修飾，例如取代(例如保守取代)、插入或缺失之核苷酸序列。在一些實施例中，編碼本文所述之AAV衣殼變異體之核苷酸序列包含相對於SEQ ID NO: 3之核苷酸序列包含至少一個、兩個、三個、四個、五個、六個或七個但不超過十個不同核苷酸之核苷酸序列。
在一些實施例中，本文所述之AAV衣殼變異體包含SPHSKA (SEQ ID NO: 941)之胺基酸序列，其中相對於根據SEQ ID NO: 138之胺基酸序列編號之參考序列，胺基酸序列緊接在位置455之後存在。在一些實施例中，本文所述之AAV衣殼變異體包含SPHSKA (SEQ ID NO: 941)之胺基酸序列，其中相對於根據SEQ ID NO: 981之胺基酸序列編號之參考序列，胺基酸序列緊接在位置455之後存在。
在一些實施例中，本文所述之AAV衣殼變異體包含HDSPHK (SEQ ID NO: 2)之胺基酸序列，其中相對於根據SEQ ID NO: 138之胺基酸序列編號之參考序列，胺基酸序列緊接在位置453之後存在。在一些實施例中，本文所述之AAV衣殼變異體包含HDSPHK (SEQ ID NO: 2)之胺基酸序列，其中相對於根據SEQ ID NO: 982之胺基酸序列編號之參考序列，胺基酸序列緊接在位置453之後存在。
在一些實施例中，本文所述之AAV衣殼變異體包含(i) HDSPHK (SEQ ID NO: 2)之胺基酸序列，其緊接在位置453之後存在；(ii)位置454及455之胺基酸SG之缺失；其中(i)及(ii)根據SEQ ID NO: 138編號。
在一些實施例中，根據SEQ ID NO: 138編號，本文所述之AAV衣殼變異體包含位置454處之除S以外之胺基酸及/或位置455處之除G以外之胺基酸。在一些實施例中，根據SEQ ID NO: 138編號，AAV衣殼變異體包含位置454處之胺基酸H及位置455處之胺基酸D。在一些實施例中，AAV衣殼變異體進一步包含SPHSKA (SEQ ID NO: 941)之胺基酸序列。在一些實施例中，AAV衣殼變異體包含：(i)位置454處之胺基酸H及位置455處之胺基酸D，及(ii)胺基酸序列SPHSKA (SEQ ID NO: 941)，其中SPHSKA (SEQ ID NO: 941)之胺基酸序列緊接在位置455之後存在，其中(i)及(ii)根據SEQ ID NO: 138編號。
在一些實施例中，相對於SEQ ID NO: 138，本文所述之AAV衣殼變異體包含修飾，例如取代。在一些實施例中，相對於SEQ ID NO: 138編號，AAV衣殼變異體在位置S454及/或G455包含修飾，例如取代。在一些實施例中，相對於SEQ ID NO: 138編號，AAV衣殼變異體包含S454H取代及/或G455D取代。在一些實施例中，相對於SEQ ID NO: 138編號，AAV衣殼變異體包含S454H取代及G455D取代。在一些實施例中，AAV衣殼變異體進一步包含SPHSKA (SEQ ID NO: 941)之胺基酸序列。在一些實施例中，AAV衣殼變異體包含：(i) S454H取代及G455D取代，及(ii)胺基酸序列SPHSKA (SEQ ID NO: 941)，其中SPHSKA (SEQ ID NO: 941)之胺基酸序列緊接在位置455之後存在，其中(i)及(ii)根據SEQ ID NO: 138編號。
在一些實施例中，相對於根據SEQ ID NO: 138之胺基酸序列編號之參考序列，AAV衣殼變異體進一步包含位置450處之除T以外之胺基酸(例如，S、Y或G)、位置451處之除I以外之胺基酸(例如，M或L)及/或位置452處之除N以外之胺基酸(例如，S)中之一者、兩者或全部。在一些實施例中，相對於根據SEQ ID NO: 138之胺基酸序列編號之參考序列，AAV衣殼變異體進一步包含位置450處之S及位置451處之M。在一些實施例中，相對於根據SEQ ID NO: 138之胺基酸序列編號之參考序列，AAV衣殼變異體進一步包含位置450處之Y、位置451處之L及位置452處之S。在一些實施例中，相對於根據SEQ ID NO: 138之胺基酸序列編號之參考序列，AAV衣殼變異體進一步包含位置450處之G、位置451處之L及位置452處之S。
在一些實施例中，相對於根據SEQ ID NO: 138之胺基酸序列編號之參考序列，AAV衣殼變異體進一步包含位置456處之除Q以外之胺基酸(例如，R或L)、位置457處之除N以外之胺基酸(例如，H、K或R)、位置458處之除Q以外之胺基酸(例如，R或T)、位置459處之除Q以外之胺基酸(H)及/或位置460處之除T以外之胺基酸(N或S)中之一者、兩者、三者、四者或全部。在一些實施例中，相對於根據SEQ ID NO: 138之胺基酸序列編號之參考序列，AAV衣殼變異體進一步包含位置456處之R。在一些實施例中，相對於根據SEQ ID NO: 138之胺基酸序列編號之參考序列，AAV衣殼變異體進一步包含位置456處之L。在一些實施例中，相對於根據SEQ ID NO: 138之胺基酸序列編號之參考序列，AAV衣殼變異體進一步包含位置457處之H及位置458處之R。在一些實施例中，相對於根據SEQ ID NO: 138之胺基酸序列編號之參考序列，AAV衣殼變異體進一步包含位置457處之K及位置460處之N。在一些實施例中，相對於根據SEQ ID NO: 138之胺基酸序列編號之參考序列，AAV衣殼變異體進一步包含位置458處之T、位置459處之H及位置460處之S。在一些實施例中，相對於根據SEQ ID NO: 138之胺基酸序列編號之參考序列，AAV衣殼變異體進一步包含位置456處之R、位置457處之R及位置458處之R。
在一些實施例中，根據SEQ ID NO: 138或981編號，本文所述之AAV衣殼變異體包含位置451處之除I以外之胺基酸、位置452處之除N以外之胺基酸及位置453處之除G以外之胺基酸。在一些實施例中，根據SEQ ID NO: 138或981編號，AAV衣殼變異體包含位置451處之E、位置452處之R及位置453處之V。在一些實施例中，根據SEQ ID NO: 138或981編號，AAV衣殼變異體包含取代I451E、N452R及G453V。
在一些實施例中，AAV衣殼變異體包含SPHSKA之胺基酸序列(SEQ ID NO: 941)，其中根據SEQ ID NO: 138或981之胺基酸序列編號，胺基酸序列緊接在位置455之後存在並且其中AAV衣殼變異體包含位置451處之E、位置452處之R及位置453處之V。在一些實施例中，AAV衣殼變異體包含取代I451E、N452R及G453V，且進一步包含SPHSKA之胺基酸序列(SEQ ID NO: 941)，其中胺基酸序列緊接在位置455之後存在，全部根據SEQ ID NO: 138或981編號。在一些實施例中，AAV衣殼變異體包含ERVSGSPHSKA (SEQ ID NO: 4817)之胺基酸序列，且其中根據SEQ ID NO: 138編號，胺基酸序列緊接在位置450之後存在且替換位置451-455。在一些實施例中，AAV衣殼變異體包含KTERVSGSPHSKAQNQQT (SEQ ID NO: 3589)之胺基酸序列，其中根據SEQ ID NO: 138編號，胺基酸序列緊接在位置448之後存在且替換位置449-460。
在一些實施例中，AAV衣殼變異體包含：(i) SPHSKA (SEQ ID NO: 941)之胺基酸序列，其中根據SEQ ID NO: 138、981或69編號，胺基酸序列緊接在位置455之後存在；及(ii)根據SEQ ID NO: 69、138或981編號，位置451處之E及/或位置453處之V中之一或兩者。
在一些實施例中，AAV衣殼變異體包含：(i) SPHSKA (SEQ ID NO: 941)之胺基酸序列，其中根據SEQ ID NO: 138、981或69編號，胺基酸序列緊接在位置455之後存在；及(ii)根據SEQ ID NO: 69、138或981編號，位置451處之E及位置453處之V。
在一些實施例中，AAV衣殼變異體包含：(i) SPHSKA (SEQ ID NO: 941)之胺基酸序列，其中根據SEQ ID NO: 981或69編號，胺基酸序列存在於胺基酸456-461處；及(ii)根據SEQ ID NO: 69、138或981編號，位置451處之E及/或位置453處之V中之一或兩者。
在一些實施例中，AAV衣殼變異體包含：(i) SPHSKA (SEQ ID NO: 941)之胺基酸序列，其中根據SEQ ID NO: 981或69編號，胺基酸序列存在於胺基酸456-461處；及(ii)根據SEQ ID NO: 69、138或981編號，位置451處之E及位置453處之V。
在一些實施例中，AAV衣殼變異體包含：(i) SPHSKA (SEQ ID NO: 941)之胺基酸序列，其中根據SEQ ID NO: 981或36編號，胺基酸序列存在於胺基酸456-461處；及(ii)根據SEQ ID NO: 36、138或981編號，位置451處之E、位置452處之R及/或位置453處之V中之一者、兩者或全部。
在一些實施例中，AAV衣殼變異體包含：(i) SPHSKA (SEQ ID NO: 941)之胺基酸序列，其中根據SEQ ID NO: 981或36編號，胺基酸序列存在於胺基酸456-461處；及(ii)根據SEQ ID NO: 36、138或981編號，位置451處之E、位置452處之R及位置453處之V。
在一些實施例中，根據SEQ ID NO: 138或982編號，本文所述之AAV衣殼變異體包含位置450處之除T以外之胺基酸、位置451處之除I以外之胺基酸及位置452處之除N以外之胺基酸。在一些實施例中，根據SEQ ID NO: 138或982編號，AAV衣殼變異體包含位置450處之A、位置451處之E及位置452處之I。在一些實施例中，根據SEQ ID NO: 138或982編號，AAV衣殼變異體包含取代T450A、I451E及N452I。
在一些實施例中，AAV衣殼變異體包含緊接在位置455之後存在的SPHKSG (SEQ ID NO: 946)之胺基酸序列，且進一步包含位置450處之A、位置451處之E、位置452處之I、位置454處之H及位置455處之D，全部根據SEQ ID NO: 138或982編號。在一些實施例中，AAV衣殼變異體包含取代T450A、I451E或N452I，且進一步包含緊接在位置453之後存在的胺基酸序列HDSPHK (SEQ ID NO: 2)，全部根據SEQ ID NO: 138或982編號。在一些實施例中，AAV衣殼變異體包含AEIGHDSPHKSG (SEQ ID NO: 4818)之胺基酸序列，其中根據SEQ ID NO: 138編號，胺基酸序列緊接在位置449之後存在且替換位置450-455。在一些實施例中，AAV衣殼變異體包含KAEIGHDSPHKSGQNQQT (SEQ ID NO:1754)之胺基酸序列，其中根據SEQ ID NO: 138編號，胺基酸序列緊接在位置448之後存在且替換位置449-460。
在一些實施例中，根據SEQ ID NO: 138編號，AAV衣殼變異體進一步包含位置K449處之取代，例如，K449R取代。在一些實施例中，相對於根據SEQ ID NO: 138之胺基酸序列編號之參考序列，AAV衣殼變異體進一步包含位置449處之除K以外之胺基酸(例如，R)。在一些實施例中，相對於根據SEQ ID NO: 138之胺基酸序列編號之參考序列，AAV衣殼變異體包含位置449處之R。在一些實施例中，AAV衣殼變異體進一步包含環I、II、VI及/或VIII中之修飾，例如插入、取代及/或缺失。
在一些實施例中，AAV衣殼變異體進一步包含相對於SEQ ID NO: 138之胺基酸序列，包含至少一個、兩個或三個修飾，例如取代(例如保守取代)、插入或缺失但不超過30個、20個或10個修飾，例如取代(例如保守取代)、插入或缺失之胺基酸序列。在一些實施例中，AAV衣殼變異體進一步包含相對於SEQ ID NO: 138之胺基酸序列包含至少一個、兩個或三個但不超過30個、20個或10個不同胺基酸之胺基酸序列。在一些實施例中，AAV衣殼變異體進一步包含SEQ ID NO: 138之胺基酸序列，或與其具有至少70% (例如，至少約80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%或99%)序列一致性之胺基酸序列。
在一些實施例中，AAV衣殼變異體進一步包含(a) VP1蛋白，其包含SEQ ID NO: 138、981或982之胺基酸序列；(b) VP2蛋白，其包含SEQ ID NO: 138之位置138-736或SEQ ID NO: 981或982之位置138-742之胺基酸序列；(c) VP3蛋白，其包含SEQ ID NO: 138之位置203-736或SEQ ID NO: 981或982之位置203-742之胺基酸序列；或(d)與(a)-(c)中之任何胺基酸序列具有至少70% (例如，至少約80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%或99%)序列一致性之胺基酸序列，相對於(a)-(c)中之任何胺基酸序列，包含至少一個、兩個或三個但不超過30個、20個或10個不同胺基酸之胺基酸序列，或相對於(a)-(c)中之任何胺基酸序列，包含至少一個、兩個或三個修飾，例如取代(例如保守取代)、插入或缺失但不超過30個、20個或10個修飾，例如取代(例如保守取代)、插入或缺失之胺基酸序列。
在一些實施例中，AAV衣殼變異體進一步包含由SEQ ID NO: 137之核苷酸序列，或與其具有至少70% (例如，至少約80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%或99%)序列一致性之序列編碼之胺基酸序列。在一些實施例中，AAV衣殼變異體進一步包含由相對於SEQ ID NO: 137之核苷酸序列包含至少一個、兩個或三個修飾，例如取代(例如保守取代)、插入或缺失但不超過30個、20個或10個修飾，例如取代(例如保守取代)、插入或缺失之核苷酸序列編碼的胺基酸序列。在一些實施例中，AAV衣殼變異體進一步包含由相對於SEQ ID NO: 137之核苷酸序列包含至少一個、兩個或三個但不超過30個、20個或10個不同核苷酸之核苷酸序列編碼之胺基酸序列。
在一些實施例中，編碼AAV衣殼變異體之核苷酸序列進一步包含SEQ ID NO: 137之核苷酸序列，或與其具有至少70% (例如，至少約80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%或99%)序列一致性的序列。在一些實施例中，編碼AAV衣殼變異體之核苷酸序列進一步包含相對於SEQ ID NO: 137之核苷酸序列包含至少一個、兩個或三個修飾，例如取代(例如保守取代)、插入或缺失但不超過30個、20個或10個修飾，例如取代(例如保守取代)、插入或缺失的核苷酸序列。在一些實施例中，編碼AAV衣殼變異體之核苷酸序列進一步包含相對於SEQ ID NO: 137之核苷酸序列包含至少一個、兩個或三個但不超過30個、20個或10個不同核苷酸之核苷酸序列。
在一些實施例中，本揭示案之AAV衣殼變異體包含如本文所述之胺基酸序列，例如TTM-001或TTM-002之AAV衣殼變異體之胺基酸序列，例如，如表3及表4中所述。在一些實施例中，本揭示案之AAV衣殼變異體包含如本文所述之胺基酸序列，例如TTM-003、TTM-004、TTM-005、TTM-006、TTM-007、TTM-008、TTM-009、TTM-010、TTM-011、TTM-012、TTM-013、TTM-014、TTM-015、TTM-016、TTM-017、TTM-018、TTM-019、TTM-020、TTM-021、TTM-022、TTM-023、TTM-024、TTM-025、TTM-026、TTM-027、TTM-028、TTM-029、TTM-030、TTM-031、TTM-032、TTM-033或TTM-034之AAV衣殼變異體之胺基酸序列，例如，如表4中所述。
在一些實施例中，本文所述之AAV衣殼變異體包含有包含本文所述胺基酸序列之VP1、VP2及/或VP3蛋白，例如，TTM-001或TTM-002之AAV衣殼變異體之胺基酸序列，例如，如表3及表4中所述。在一些實施例中，本文所述之AAV衣殼變異體包含有包含本文所述胺基酸序列之VP1、VP2及/或VP3蛋白，例如，TTM-003、TTM-004、TTM-005、TTM-006、TTM-007、TTM-008、TTM-009、TTM-010、TTM-011、TTM-012、TTM-013、TTM-014、TTM-015、TTM-016、TTM-017、TTM-018、TTM-019、TTM-020、TTM-021、TTM-022、TTM-023、TTM-024、TTM-025、TTM-026、TTM-027、TTM-028、TTM-029、TTM-030、TTM-031、TTM-032、TTM-033或TTM-034之AAV衣殼變異體之胺基酸序列，例如，如表4中所述。
在一些實施例中，本文所述之AAV衣殼變異體包含由本文所述之核苷酸序列編碼之胺基酸序列，例如TTM-001或TTM-002之AAV衣殼變異體之核苷酸序列，例如，如表3及表5中所述。在一些實施例中，本文所述之AAV衣殼變異體包含由本文所述之核苷酸序列編碼之胺基酸序列，例如TTM-003、TTM-004、TTM-005、TTM-006、TTM-007、TTM-008、TTM-009、TTM-010、TTM-011、TTM-012、TTM-013、TTM-014、TTM-015、TTM-016、TTM-017、TTM-018、TTM-019、TTM-020、TTM-021、TTM-022、TTM-023、TTM-024、TTM-025、TTM-026或TTM-027之AAV衣殼變異體之核苷酸序列，例如，如表5中所述。
在一些實施例中，編碼本揭示案之AAV衣殼變異體之多核苷酸或核酸包含本文所述核苷酸序列，例如，TTM-001或TTM-002之AAV衣殼變異體之核苷酸序列，例如，如表3及表5中所述。在一些實施例中，編碼本揭示案之AAV衣殼變異體之多核苷酸或核酸包含本文所述核苷酸序列，例如，TTM-003、TTM-004、TTM-005、TTM-006、TTM-007、TTM-008、TTM-009、TTM-010、TTM-011、TTM-012、TTM-013、TTM-014、TTM-015、TTM-016、TTM-017、TTM-018、TTM-019、TTM-020、TTM-021、TTM-022、TTM-023、TTM-024、TTM-025、TTM-026或TTM-027之AAV衣殼變異體之核苷酸序列，例如，如表5中所述。 表3. 示 範性全長衣殼序 列
名稱 VP1 DNA SEQ ID NO: VP1 ( 胺基酸) SEQ ID NO: 肽(胺基酸) SEQ ID NO: 肽DNA SEQ ID NO:
TTM-001 983 981 941 942
TTM-002 984 982 2 3
表4. 示 範性全長衣殼胺基酸序 列
名稱及註 釋 SEQ ID NO: 胺基酸序列
TTM-0016聚體肽加下劃線，於位置456開始(緊接在位置455之後)； 742 aa 981 MAADGYLPDWLEDNLSEGIREWWALKPGAPQPKANQQHQDNARGLVLPGYKYLGPGNGLDKGEPVNAADAAALEHDKAYDQQLKAGDNPYLKYNHADAEFQERLKEDTSFGGNLGRAVFQAKKRLLEPLGLVEEAAKTAPGKKRPVEQSPQEPDSSAGIGKSGAQPAKKRLNFGQTGDTESVPDPQPIGEPPAAPSGVGSLTMASGGGAPVADNNEGADGVGSSSGNWHCDSQWLGDRVITTSTRTWALPTYNNHLYKQISNSTSGGSSNDNAYFGYSTPWGYFDFNRFHCHFSPRDWQRLINNNWGFRPKRLNFKLFNIQVKEVTDNNGVKTIANNLTSTVQVFTDSDYQLPYVLGSAHEGCLPPFPADVFMIPQYGYLTLNDGSQAVGRSSFYCLEYFPSQMLRTGNNFQFSYEFENVPFHSSYAHSQSLDRLMNPLIDQYLYYLSKTINGSG SPHSKA QNQQTLKFSVAGPSNMAVQGRNYIPGPSYRQQRVSTTVTQNNNSEFAWPGASSWALNGRNSLMNPGPAMASHKEGEDRFFPLSGSLIFGKQGTGRDNVDADKVMITNEEEIKTTNPVATESYGQVATNHQSAQAQAQTGWVQNQGILPGMVWQDRDVYLQGPIWAKIPHTDGNFHPSPLMGGFGMKHPPPQILIKNTPVPADPPTAFNKDKLNSFITQYSTGQVSVEIEWELQKENSKRWNPEIQYTSNYYKSNNVEFAVNTEGVYSEPRPIGTRYLTRNL
TTM-0026聚體肽加下劃線，於位置454開始(緊接在位置453之後)； 742 aa 982 MAADGYLPDWLEDNLSEGIREWWALKPGAPQPKANQQHQDNARGLVLPGYKYLGPGNGLDKGEPVNAADAAALEHDKAYDQQLKAGDNPYLKYNHADAEFQERLKEDTSFGGNLGRAVFQAKKRLLEPLGLVEEAAKTAPGKKRPVEQSPQEPDSSAGIGKSGAQPAKKRLNFGQTGDTESVPDPQPIGEPPAAPSGVGSLTMASGGGAPVADNNEGADGVGSSSGNWHCDSQWLGDRVITTSTRTWALPTYNNHLYKQISNSTSGGSSNDNAYFGYSTPWGYFDFNRFHCHFSPRDWQRLINNNWGFRPKRLNFKLFNIQVKEVTDNNGVKTIANNLTSTVQVFTDSDYQLPYVLGSAHEGCLPPFPADVFMIPQYGYLTLNDGSQAVGRSSFYCLEYFPSQMLRTGNNFQFSYEFENVPFHSSYAHSQSLDRLMNPLIDQYLYYLSKTING HDSPHK SGQNQQTLKFSVAGPSNMAVQGRNYIPGPSYRQQRVSTTVTQNNNSEFAWPGASSWALNGRNSLMNPGPAMASHKEGEDRFFPLSGSLIFGKQGTGRDNVDADKVMITNEEEIKTTNPVATESYGQVATNHQSAQAQAQTGWVQNQGILPGMVWQDRDVYLQGPIWAKIPHTDGNFHPSPLMGGFGMKHPPPQILIKNTPVPADPPTAFNKDKLNSFITQYSTGQVSVEIEWELQKENSKRWNPEIQYTSNYYKSNNVEFAVNTEGVYSEPRPIGTRYLTRNL
TTM-0036聚體肽加下劃線，於位置456開始(緊接在位置455之後)；位置451、452及453之修飾加下劃線； 742 aa 36 MAADGYLPDWLEDNLSEGIREWWALKPGAPQPKANQQHQDNARGLVLPGYKYLGPGNGLDKGEPVNAADAAALEHDKAYDQQLKAGDNPYLKYNHADAEFQERLKEDTSFGGNLGRAVFQAKKRLLEPLGLVEEAAKTAPGKKRPVEQSPQEPDSSAGIGKSGAQPAKKRLNFGQTGDTESVPDPQPIGEPPAAPSGVGSLTMASGGGAPVADNNEGADGVGSSSGNWHCDSQWLGDRVITTSTRTWALPTYNNHLYKQISNSTSGGSSNDNAYFGYSTPWGYFDFNRFHCHFSPRDWQRLINNNWGFRPKRLNFKLFNIQVKEVTDNNGVKTIANNLTSTVQVFTDSDYQLPYVLGSAHEGCLPPFPADVFMIPQYGYLTLNDGSQAVGRSSFYCLEYFPSQMLRTGNNFQFSYEFENVPFHSSYAHSQSLDRLMNPLIDQYLYYLSKT ERV SG SPHSKA QNQQTLKFSVAGPSNMAVQGRNYIPGPSYRQQRVSTTVTQNNNSEFAWPGASSWALNGRNSLMNPGPAMASHKEGEDRFFPLSGSLIFGKQGTGRDNVDADKVMITNEEEIKTTNPVATESYGQVATNHQSAQAQAQTGWVQNQGILPGMVWQDRDVYLQGPIWAKIPHTDGNFHPSPLMGGFGMKHPPPQILIKNTPVPADPPTAFNKDKLNSFITQYSTGQVSVEIEWELQKENSKRWNPEIQYTSNYYKSNNVEFAVNTEGVYSEPRPIGTRYLTRNL
TTM-0046聚體肽加下劃線，於位置454開始(緊接在位置453之後)；位置450、451及452之修飾加下劃線； 742 aa 37 MAADGYLPDWLEDNLSEGIREWWALKPGAPQPKANQQHQDNARGLVLPGYKYLGPGNGLDKGEPVNAADAAALEHDKAYDQQLKAGDNPYLKYNHADAEFQERLKEDTSFGGNLGRAVFQAKKRLLEPLGLVEEAAKTAPGKKRPVEQSPQEPDSSAGIGKSGAQPAKKRLNFGQTGDTESVPDPQPIGEPPAAPSGVGSLTMASGGGAPVADNNEGADGVGSSSGNWHCDSQWLGDRVITTSTRTWALPTYNNHLYKQISNSTSGGSSNDNAYFGYSTPWGYFDFNRFHCHFSPRDWQRLINNNWGFRPKRLNFKLFNIQVKEVTDNNGVKTIANNLTSTVQVFTDSDYQLPYVLGSAHEGCLPPFPADVFMIPQYGYLTLNDGSQAVGRSSFYCLEYFPSQMLRTGNNFQFSYEFENVPFHSSYAHSQSLDRLMNPLIDQYLYYLSK AEI G HDSPHK SGQNQQTLKFSVAGPSNMAVQGRNYIPGPSYRQQRVSTTVTQNNNSEFAWPGASSWALNGRNSLMNPGPAMASHKEGEDRFFPLSGSLIFGKQGTGRDNVDADKVMITNEEEIKTTNPVATESYGQVATNHQSAQAQAQTGWVQNQGILPGMVWQDRDVYLQGPIWAKIPHTDGNFHPSPLMGGFGMKHPPPQILIKNTPVPADPPTAFNKDKLNSLITQYSTGQVSVEIEWELQKENSKRWNPEIQYTSNYYKSNNVEFAVNTEGVYSEPRPIGTRYLTRNL
TTM-0056聚體肽加下劃線，於位置456開始(緊接在位置455之後)；位置452、464及465之修飾加下劃線； 742 aa 38 MAADGYLPDWLEDNLSEGIREWWALKPGAPQPKANQQHQDNARGLVLPGYKYLGPGNGLDKGEPVNAADAAALEHDKAYDQQLKAGDNPYLKYNHADAEFQERLKEDTSFGGNLGRAVFQAKKRLLEPLGLVEEAAKTAPGKKRPVEQSPQEPDSSAGIGKSGAQPAKKRLNFGQTGDTESVPDPQPIGEPPAAPSGVGSLTMASGGGAPVADNNEGADGVGSSSGNWHCDSQWLGDRVITTSTRTWALPTYNNHLYKQISNSTSGGSSNDNAYFGYSTPWGYFDFNRFHCHFSPRDWQRLINNNWGFRPKRLNFKLFNIQVKEVTDNNGVKTIANNLTSTVQVFTDSDYQLPYVLGSAHEGCLPPFPADVFMIPQYGYLTLNDGSQAVGRSSFYCLEYFPSQMLRTGNNFQFSYEFENVPFHSSYAHSQSLDRLMNPLIDQYLYYLSKTI I GSG SPHSKA QN RH TLKFSVAGPSNMAVQGRNYIPGPSYRQQRVSTTVTQNNNSEFAWPGASSWALNGRNSLMNPGPAMASHKEGEDRFFPLSGSLIFGKQGTGRDNVDADKVMITNEEEIKTTNPVATESYGQVATNHQSAQAQAQTGWVQNQGILPGMVWQDRDVYLQGPIWAKIPHTDGNFHPSPLMGGFGMKHPPPQILIKNTPVPADPPTAFNKDKLNSFITQYSTGQVSVEIEWELQKENSKRWNPEIQYTSNYYKSNNVEFAVNTEGVYSEPRPIGTRYLTRNL
TTM-0066聚體肽加下劃線，於位置456開始(緊接在位置455之後)；位置451、452及453之修飾加下劃線； 742 aa 39 MAADGYLPDWLEDNLSEGIREWWALKPGAPQPKANQQHQDNARGLVLPGYKYLGPGNGLDKGEPVNAADAAALEHDKAYDQQLKAGDNPYLKYNHADAEFQERLKEDTSFGGNLGRAVFQAKKRLLEPLGLVEEAAKTAPGKKRPVEQSPQEPDSSAGIGKSGAQPAKKRLNFGQTGDTESVPDPQPIGEPPAAPSGVGSLTMASGGGAPVADNNEGADGVGSSSGNWHCDSQWLGDRVITTSTRTWALPTYNNHLYKQISNSTSGGSSNDNAYFGYSTPWGYFDFNRFHCHFSPRDWQRLINNNWGFRPKRLNFKLFNIQVKEVTDNNGVKTIANNLTSTVQVFTDSDYQLPYVLGSAHEGCLPPFPADVFMIPQYGYLTLNDGSQAVGRSSFYCLEYFPSQMLRTGNNFQFSYEFENVPFHSSYAHSQSLDRLMNPLIDQYLYYLSKT EKM SG SPHSKA QNQQTLKFSVAGPSNMAVQGRNYIPGPSYRQQRVSTTVTQNNNSEFAWPGASSWALNGRNSLMNPGPAMASHKEGEDRFFPLSGSLIFGKQGTGRDNVDADKVMITNEEEIKTTNPVATESYGQVATNHQSAQAQAQTGWVQNQGILPGMVWQDRDVYLQGPIWAKIPHTDGNFHPSPLMGGFGMKHPPPQILIKNTPVPADPPTAFNKDKLNSFITQYSTGQVSVEIEWELQKENSKRWNPEIQYTSNYYKSNNVEFAVNTEGVYSEPRPIGTRYLTRNL
TTM-0076聚體肽加下劃線，於位置456開始(緊接在位置455之後)；位置450及454之修飾加下劃線； 742 aa 40 MAADGYLPDWLEDNLSEGIREWWALKPGAPQPKANQQHQDNARGLVLPGYKYLGPGNGLDKGEPVNAADAAALEHDKAYDQQLKAGDNPYLKYNHADAEFQERLKEDTSFGGNLGRAVFQAKKRLLEPLGLVEEAAKTAPGKKRPVEQSPQEPDSSAGIGKSGAQPAKKRLNFGQTGDTESVPDPQPIGEPPAAPSGVGSLTMASGGGAPVADNNEGADGVGSSSGNWHCDSQWLGDRVITTSTRTWALPTYNNHLYKQISNSTSGGSSNDNAYFGYSTPWGYFDFNRFHCHFSPRDWQRLINNNWGFRPKRLNFKLFNIQVKEVTDNNGVKTIANNLTSTVQVFTDSDYQLPYVLGSAHEGCLPPFPADVFMIPQYGYLTLNDGSQAVGRSSFYCLEYFPSQMLRTGNNFQFSYEFENVPFHSSYAHSQSLDRLMNPLIDQYLYYLSK E ING R G SPHSKA QNQQTLKFSVAGPSNMAVQGRNYIPGPSYRQQRVSTTVTQNNNSEFAWPGASSWALNGRNSLMNPGPAMASHKEGEDRFFPLSGSLIFGKQGTGRDNVDADKVMITNEEEIKTTNPVATESYGQVATNHQSAQAQAQTGWVQNQGILPGMVWQDRDVYLQGPIWAKIPHTDGNFHPSPLMGGFGMKHPPPQILIKNTPVPADPPTAFNKDKLNSFITQYSTGQVSVEIEWELQKENSKRWNPEIQYTSNYYKSNNVEFAVNTEGVYSEPRPIGTRYLTRNL
TTM-0086聚體肽加下劃線，於位置456開始(緊接在位置455之後)；位置451、462及464之修飾加下劃線； 742 aa 41 MAADGYLPDWLEDNLSEGIREWWALKPGAPQPKANQQHQDNARGLVLPGYKYLGPGNGLDKGEPVNAADAAALEHDKAYDQQLKAGDNPYLKYNHADAEFQERLKEDTSFGGNLGRAVFQAKKRLLEPLGLVEEAAKTAPGKKRPVEQSPQEPDSSAGIGKSGAQPAKKRLNFGQTGDTESVPDPQPIGEPPAAPSGVGSLTMASGGGAPVADNNEGADGVGSSSGNWHCDSQWLGDRVITTSTRTWALPTYNNHLYKQISNSTSGGSSNDNAYFGYSTPWGYFDFNRFHCHFSPRDWQRLINNNWGFRPKRLNFKLFNIQVKEVTDNNGVKTIANNLTSTVQVFTDSDYQLPYVLGSAHEGCLPPFPADVFMIPQYGYLTLNDGSQAVGRSSFYCLEYFPSQMLRTGNNFQFSYEFENVPFHSSYAHSQSLDRLMNPLIDQYLYYLSKT F NGSG SPHSKAP N L QTLKFSVAGPSNMAVQGRNYIPGPSYRQQRVSTTVTQNNNSEFAWPGASSWALNGRNSLMNPGPAMASHKEGEDRFFPLSGSLIFGKQGTGRDNVDADKVMITNEEEIKTTNPVATESYGQVATNHQSAQAQAQTGWVQNQGILPGMVWQDRDVYLQGPIWAKIPHTDGNFHPSPLMGGFGMKHPPPQILIKNTPVPADPPTAFNKDKLNSFITQYSTGQVSVEIEWELQKENSKRWNPEIQYTSNYYKSNNVEFAVNTEGVYSEPRPIGTRYLTRNL
TTM-0096聚體肽加下劃線，於位置456開始(緊接在位置455之後)；位置451、452及453之修飾加下劃線； 742 aa 42 MAADGYLPDWLEDNLSEGIREWWALKPGAPQPKANQQHQDNARGLVLPGYKYLGPGNGLDKGEPVNAADAAALEHDKAYDQQLKAGDNPYLKYNHADAEFQERLKEDTSFGGNLGRAVFQAKKRLLEPLGLVEEAAKTAPGKKRPVEQSPQEPDSSAGIGKSGAQPAKKRLNFGQTGDTESVPDPQPIGEPPAAPSGVGSLTMASGGGAPVADNNEGADGVGSSSGNWHCDSQWLGDRVITTSTRTWALPTYNNHLYKQISNSTSGGSSNDNAYFGYSTPWGYFDFNRFHCHFSPRDWQRLINNNWGFRPKRLNFKLFNIQVKEVTDNNGVKTIANNLTSTVQVFTDSDYQLPYVLGSAHEGCLPPFPADVFMIPQYGYLTLNDGSQAVGRSSFYCLEYFPSQMLRTGNNFQFSYEFENVPFHSSYAHSQSLDRLMNPLIDQYLYYLSKT EKT SG SPHSKA QNQQTLKFSVAGPSNMAVQGRNYIPGPSYRQQRVSTTVTQNNNSEFAWPGASSWALNGRNSLMNPGPAMASHKEGEDRFFPLSGSLIFGKQGTGRDNVDADKVMITNEEEIKTTNPVATESYGQVATNHQSAQAQAQTGWVQNQGILPGMVWQDRDVYLQGPIWAKIPHTDGNFHPSPLMGGFGMKHPPPQILIKNTPVPADPPTAFNKDKLNSFITQYSTGQVSVEIEWELQKENSKRWNPEIQYTSNYYKSNNVEFAVNTEGVYSEPRPIGTRYLTRNL
TTM-0106聚體肽加下劃線，於位置456開始(緊接在位置455之後)；位置451、454及455之修飾加下劃線； 742 aa 43 MAADGYLPDWLEDNLSEGIREWWALKPGAPQPKANQQHQDNARGLVLPGYKYLGPGNGLDKGEPVNAADAAALEHDKAYDQQLKAGDNPYLKYNHADAEFQERLKEDTSFGGNLGRAVFQAKKRLLEPLGLVEEAAKTAPGKKRPVEQSPQEPDSSAGIGKSGAQPAKKRLNFGQTGDTESVPDPQPIGEPPAAPSGVGSLTMASGGGAPVADNNEGADGVGSSSGNWHCDSQWLGDRVITTSTRTWALPTYNNHLYKQISNSTSGGSSNDNAYFGYSTPWGYFDFNRFHCHFSPRDWQRLINNNWGFRPKRLNFKLFNIQVKEVTDNNGVKTIANNLTSTVQVFTDSDYQLPYVLGSAHEGCLPPFPADVFMIPQYGYLTLNDGSQAVGRSSFYCLEYFPSQMLRTGNNFQFSYEFENVPFHSSYAHSQSLDRLMNPLIDQYLYYLSKT M NG HDSPHSKA QNQQTLKFSVAGPSNMAVQGRNYIPGPSYRQQRVSTTVTQNNNSEFAWPGASSWALNGRNSLMNPGPAMASHKEGEDRFFPLSGSLIFGKQGTGRDNVDADKVMITNEEEIKTTNPVATESYGQVATNHQSAQAQAQTGWVQNQGILPGMVWQDRDVYLQGPIWAKIPHTDGNFHPSPLMGGFGMKHPPPQILIKNTPVPADPPTAFNKDKLNSFITQYSTGQVSVEIEWELQKENSKRWNPEIQYTSNYYKSNNVEFAVNTEGVYSEPRPIGTRYLTRNL
TTM-0116聚體肽加下劃線，於位置456開始(緊接在位置455之後)；位置452、454及455之修飾加下劃線； 742 aa 44 MAADGYLPDWLEDNLSEGIREWWALKPGAPQPKANQQHQDNARGLVLPGYKYLGPGNGLDKGEPVNAADAAALEHDKAYDQQLKAGDNPYLKYNHADAEFQERLKEDTSFGGNLGRAVFQAKKRLLEPLGLVEEAAKTAPGKKRPVEQSPQEPDSSAGIGKSGAQPAKKRLNFGQTGDTESVPDPQPIGEPPAAPSGVGSLTMASGGGAPVADNNEGADGVGSSSGNWHCDSQWLGDRVITTSTRTWALPTYNNHLYKQISNSTSGGSSNDNAYFGYSTPWGYFDFNRFHCHFSPRDWQRLINNNWGFRPKRLNFKLFNIQVKEVTDNNGVKTIANNLTSTVQVFTDSDYQLPYVLGSAHEGCLPPFPADVFMIPQYGYLTLNDGSQAVGRSSFYCLEYFPSQMLRTGNNFQFSYEFENVPFHSSYAHSQSLDRLMNPLIDQYLYYLSKTI D G HDSPHSKA QNQQTLKFSVAGPSNMAVQGRNYIPGPSYRQQRVSTTVTQNNNSEFAWPGASSWALNGRNSLMNPGPAMASHKEGEDRFFPLSGSLIFGKQGTGRDNVDADKVMITNEEEIKTTNPVATESYGQVATNHQSAQAQAQTGWVQNQGILPGMVWQDRDVYLQGPIWAKIPHTDGNFHPSPLMGGFGMKHPPPQILIKNTPVPADPPTAFNKDKLNSFITQYSTGQVSVEIEWELQKENSKRWNPEIQYTSNYYKSNNVEFAVNTEGVYSEPRPIGTRYLTRNL
TTM-0126聚體肽加下劃線，於位置456開始(緊接在位置455之後)；位置452、454及455之修飾加下劃線； 742 aa 45 MAADGYLPDWLEDNLSEGIREWWALKPGAPQPKANQQHQDNARGLVLPGYKYLGPGNGLDKGEPVNAADAAALEHDKAYDQQLKAGDNPYLKYNHADAEFQERLKEDTSFGGNLGRAVFQAKKRLLEPLGLVEEAAKTAPGKKRPVEQSPQEPDSSAGIGKSGAQPAKKRLNFGQTGDTESVPDPQPIGEPPAAPSGVGSLTMASGGGAPVADNNEGADGVGSSSGNWHCDSQWLGDRVITTSTRTWALPTYNNHLYKQISNSTSGGSSNDNAYFGYSTPWGYFDFNRFHCHFSPRDWQRLINNNWGFRPKRLNFKLFNIQVKEVTDNNGVKTIANNLTSTVQVFTDSDYQLPYVLGSAHEGCLPPFPADVFMIPQYGYLTLNDGSQAVGRSSFYCLEYFPSQMLRTGNNFQFSYEFENVPFHSSYAHSQSLDRLMNPLIDQYLYYLSKTN N G HDSPHSKA QNQQTLKFSVAGPSNMAVQGRNYIPGPSYRQQRVSTTVTQNNNSEFAWPGASSWALNGRNSLMNPGPAMASHKEGEDRFFPLSGSLIFGKQGTGRDNVDADKVMITNEEEIKTTNPVATESYGQVATNHQSAQAQAQTGWVQNQGILPGMVWQDRDVYLQGPIWAKIPHTDGNFHPSPLMGGFGMKHPPPQILIKNTPVPADPPTAFNKDKLNSFITQYSTGQVSVEIEWELQKENSKRWNPEIQYTSNYYKSNNVEFAVNTEGVYSEPRPIGTRYLTRNL
TTM-0136聚體肽加下劃線，於位置456開始(緊接在位置455之後)；位置451、452及453之修飾加下劃線； 742 aa 46 MAADGYLPDWLEDNLSEGIREWWALKPGAPQPKANQQHQDNARGLVLPGYKYLGPGNGLDKGEPVNAADAAALEHDKAYDQQLKAGDNPYLKYNHADAEFQERLKEDTSFGGNLGRAVFQAKKRLLEPLGLVEEAAKTAPGKKRPVEQSPQEPDSSAGIGKSGAQPAKKRLNFGQTGDTESVPDPQPIGEPPAAPSGVGSLTMASGGGAPVADNNEGADGVGSSSGNWHCDSQWLGDRVITTSTRTWALPTYNNHLYKQISNSTSGGSSNDNAYFGYSTPWGYFDFNRFHCHFSPRDWQRLINNNWGFRPKRLNFKLFNIQVKEVTDNNGVKTIANNLTSTVQVFTDSDYQLPYVLGSAHEGCLPPFPADVFMIPQYGYLTLNDGSQAVGRSSFYCLEYFPSQMLRTGNNFQFSYEFENVPFHSSYAHSQSLDRLMNPLIDQYLYYLSKT QRK SG SPHSKA QNQQTLKFSVAGPSNMAVQGRNYIPGPSYRQQRVSTTVTQNNNSEFAWPGASSWALNGRNSLMNPGPAMASHKEGEDRFFPLSGSLIFGKQGTGRDNVDADKVMITNEEEIKTTNPVATESYGQVATNHQSAQAQAQTGWVQNQGILPGMVWQDRDVYLQGPIWAKIPHTDGNFHPSPLMGGFGMKHPPPQILIKNTPVPADPPTAFNKDKLNSFITQYSTGQVSVEIEWELQKENSKRWNPEIQYTSNYYKSNNVEFAVNTEGVYSEPRPIGTRYLTRNL
TTM-0146聚體肽加下劃線，於位置456開始(緊接在位置455之後)；位置463、464及465之修飾加下劃線； 742 aa 47 MAADGYLPDWLEDNLSEGIREWWALKPGAPQPKANQQHQDNARGLVLPGYKYLGPGNGLDKGEPVNAADAAALEHDKAYDQQLKAGDNPYLKYNHADAEFQERLKEDTSFGGNLGRAVFQAKKRLLEPLGLVEEAAKTAPGKKRPVEQSPQEPDSSAGIGKSGAQPAKKRLNFGQTGDTESVPDPQPIGEPPAAPSGVGSLTMASGGGAPVADNNEGADGVGSSSGNWHCDSQWLGDRVITTSTRTWALPTYNNHLYKQISNSTSGGSSNDNAYFGYSTPWGYFDFNRFHCHFSPRDWQRLINNNWGFRPKRLNFKLFNIQVKEVTDNNGVKTIANNLTSTVQVFTDSDYQLPYVLGSAHEGCLPPFPADVFMIPQYGYLTLNDGSQAVGRSSFYCLEYFPSQMLRTGNNFQFSYEFENVPFHSSYAHSQSLDRLMNPLIDQYLYYLSKTINGSG SPHSKA Q ARK TLKFSVAGPSNMAVQGRNYIPGPSYRQQRVSTTVTQNNNSEFAWPGASSWALNGRNSLMNPGPAMASHKEGEDRFFPLSGSLIFGKQGTGRDNVDADKVMITNEEEIKTTNPVATESYGQVATNHQSAQAQAQTGWVQNQGILPGMVWQDRDVYLQGPIWAKIPHTDGNFHPSPLMGGFGMKHPPPQILIKNTPVPADPPTAFNKDKLNSFITQYSTGQVSVEIEWELQKENSKRWNPEIQYTSNYYKSNNVEFAVNTEGVYSEPRPIGTRYLTRNL
TTM-0156聚體肽加下劃線，於位置456開始(緊接在位置455之後)；位置450及452之修飾加下劃線； 742 aa 48 MAADGYLPDWLEDNLSEGIREWWALKPGAPQPKANQQHQDNARGLVLPGYKYLGPGNGLDKGEPVNAADAAALEHDKAYDQQLKAGDNPYLKYNHADAEFQERLKEDTSFGGNLGRAVFQAKKRLLEPLGLVEEAAKTAPGKKRPVEQSPQEPDSSAGIGKSGAQPAKKRLNFGQTGDTESVPDPQPIGEPPAAPSGVGSLTMASGGGAPVADNNEGADGVGSSSGNWHCDSQWLGDRVITTSTRTWALPTYNNHLYKQISNSTSGGSSNDNAYFGYSTPWGYFDFNRFHCHFSPRDWQRLINNNWGFRPKRLNFKLFNIQVKEVTDNNGVKTIANNLTSTVQVFTDSDYQLPYVLGSAHEGCLPPFPADVFMIPQYGYLTLNDGSQAVGRSSFYCLEYFPSQMLRTGNNFQFSYEFENVPFHSSYAHSQSLDRLMNPLIDQYLYYLSK Y I V GSG SPHSKA QNQQTLKFSVAGPSNMAVQGRNYIPGPSYRQQRVSTTVTQNNNSEFAWPGASSWALNGRNSLMNPGPAMASHKEGEDRFFPLSGSLIFGKQGTGRDNVDADKVMITNEEEIKTTNPVATESYGQVATNHQSAQAQAQTGWVQNQGILPGMVWQDRDVYLQGPIWAKIPHTDGNFHPSPLMGGFGMKHPPPQILIKNTPVPADPPTAFNKDKLNSFITQYSTGQVSVEIEWELQKENSKRWNPEIQYTSNYYKSNNVEFAVNTEGVYSEPRPIGTRYLTRNL
TTM-0166聚體肽加下劃線，於位置456開始(緊接在位置455之後)；位置452、453及454之修飾加下劃線； 742 aa 49 MAADGYLPDWLEDNLSEGIREWWALKPGAPQPKANQQHQDNARGLVLPGYKYLGPGNGLDKGEPVNAADAAALEHDKAYDQQLKAGDNPYLKYNHADAEFQERLKEDTSFGGNLGRAVFQAKKRLLEPLGLVEEAAKTAPGKKRPVEQSPQEPDSSAGIGKSGAQPAKKRLNFGQTGDTESVPDPQPIGEPPAAPSGVGSLTMASGGGAPVADNNEGADGVGSSSGNWHCDSQWLGDRVITTSTRTWALPTYNNHLYKQISNSTSGGSSNDNAYFGYSTPWGYFDFNRFHCHFSPRDWQRLINNNWGFRPKRLNFKLFNIQVKEVTDNNGVKTIANNLTSTVQVFTDSDYQLPYVLGSAHEGCLPPFPADVFMIPQYGYLTLNDGSQAVGRSSFYCLEYFPSQMLRTGNNFQFSYEFENVPFHSSYAHSQSLDRLMNPLIDQYLYYLSKTI SKR G SPHSKA QNQQTLKFSVAGPSNMAVQGRNYIPGPSYRQQRVSTTVTQNNNSEFAWPGASSWALNGRNSLMNPGPAMASHKEGEDRFFPLSGSLIFGKQGTGRDNVDADKVMITNEEEIKTTNPVATESYGQVATNHQSAQAQAQTGWVQNQGILPGMVWQDRDVYLQGPIWAKIPHTDGNFHPSPLMGGFGMKHPPPQILIKNTPVPADPPTAFNKDKLNSFITQYSTGQVSVEIEWELQKENSKRWNPEIQYTSNYYKSNNVEFAVNTEGVYSEPRPIGTRYLTRNL
TTM-0176聚體肽加下劃線，於位置456開始(緊接在位置455之後)；位置450、451及452之修飾加下劃線； 742 aa 50 MAADGYLPDWLEDNLSEGIREWWALKPGAPQPKANQQHQDNARGLVLPGYKYLGPGNGLDKGEPVNAADAAALEHDKAYDQQLKAGDNPYLKYNHADAEFQERLKEDTSFGGNLGRAVFQAKKRLLEPLGLVEEAAKTAPGKKRPVEQSPQEPDSSAGIGKSGAQPAKKRLNFGQTGDTESVPDPQPIGEPPAAPSGVGSLTMASGGGAPVADNNEGADGVGSSSGNWHCDSQWLGDRVITTSTRTWALPTYNNHLYKQISNSTSGGSSNDNAYFGYSTPWGYFDFNRFHCHFSPRDWQRLINNNWGFRPKRLNFKLFNIQVKEVTDNNGVKTIANNLTSTVQVFTDSDYQLPYVLGSAHEGCLPPFPADVFMIPQYGYLTLNDGSQAVGRSSFYCLEYFPSQMLRTGNNFQFSYEFENVPFHSSYAHSQSLDRLMNPLIDQYLYYLSK GLG GSG SPHSKA QNQQTLKFSVAGPSNMAVQGRNYIPGPSYRQQRVSTTVTQNNNSEFAWPGASSWALNGRNSLMNPGPAMASHKEGEDRFFPLSGSLIFGKQGTGRDNVDADKVMITNEEEIKTTNPVATESYGQVATNHQSAQAQAQTGWVQNQGILPGMVWQDRDVYLQGPIWAKIPHTDGNFHPSPLMGGFGMKHPPPQILIKNTPVPADPPTAFNKDKLNSFITQYSTGQVSVEIEWELQKENSKRWNPEIQYTSNYYKSNNVEFAVNTEGVYSEPRPIGTRYLTRNL
TTM-0186聚體肽加下劃線，於位置456開始(緊接在位置455之後)；位置454、455及464之修飾加下劃線； 742 aa 51 MAADGYLPDWLEDNLSEGIREWWALKPGAPQPKANQQHQDNARGLVLPGYKYLGPGNGLDKGEPVNAADAAALEHDKAYDQQLKAGDNPYLKYNHADAEFQERLKEDTSFGGNLGRAVFQAKKRLLEPLGLVEEAAKTAPGKKRPVEQSPQEPDSSAGIGKSGAQPAKKRLNFGQTGDTESVPDPQPIGEPPAAPSGVGSLTMASGGGAPVADNNEGADGVGSSSGNWHCDSQWLGDRVITTSTRTWALPTYNNHLYKQISNSTSGGSSNDNAYFGYSTPWGYFDFNRFHCHFSPRDWQRLINNNWGFRPKRLNFKLFNIQVKEVTDNNGVKTIANNLTSTVQVFTDSDYQLPYVLGSAHEGCLPPFPADVFMIPQYGYLTLNDGSQAVGRSSFYCLEYFPSQMLRTGNNFQFSYEFENVPFHSSYAHSQSLDRLMNPLIDQYLYYLSKTING HDSPHSKA QN L QTLKFSVAGPSNMAVQGRNYIPGPSYRQQRVSTTVTQNNNSEFAWPGASSWALNGRNSLMNPGPAMASHKEGEDRFFPLSGSLIFGKQGTGRDNVDADKVMITNEEEIKTTNPVATESYGQVATNHQSAQAQAQTGWVQNQGILPGMVWQDRDVYLQGPIWAKIPHTDGNFHPSPLMGGFGMKHPPPQILIKNTPVPADPPTAFNKDKLNSFITQYSTGQVSVEIEWELQKENSKRWNPEIQYTSNYYKSNNVEFAVNTEGVYSEPRPIGTRYLTRNL
TTM-0196聚體肽加下劃線，於位置456開始(緊接在位置455之後)；位置451、454及455之修飾加下劃線； 742 aa 52 MAADGYLPDWLEDNLSEGIREWWALKPGAPQPKANQQHQDNARGLVLPGYKYLGPGNGLDKGEPVNAADAAALEHDKAYDQQLKAGDNPYLKYNHADAEFQERLKEDTSFGGNLGRAVFQAKKRLLEPLGLVEEAAKTAPGKKRPVEQSPQEPDSSAGIGKSGAQPAKKRLNFGQTGDTESVPDPQPIGEPPAAPSGVGSLTMASGGGAPVADNNEGADGVGSSSGNWHCDSQWLGDRVITTSTRTWALPTYNNHLYKQISNSTSGGSSNDNAYFGYSTPWGYFDFNRFHCHFSPRDWQRLINNNWGFRPKRLNFKLFNIQVKEVTDNNGVKTIANNLTSTVQVFTDSDYQLPYVLGSAHEGCLPPFPADVFMIPQYGYLTLNDGSQAVGRSSFYCLEYFPSQMLRTGNNFQFSYEFENVPFHSSYAHSQSLDRLMNPLIDQYLYYLSKT V NG HDSPHSKA QNQQTLKFSVAGPSNMAVQGRNYIPGPSYRQQRVSTTVTQNNNSEFAWPGASSWALNGRNSLMNPGPAMASHKEGEDRFFPLSGSLIFGKQGTGRDNVDADKVMITNEEEIKTTNPVATESYGQVATNHQSAQAQAQTGWVQNQGILPGMVWQDRDVYLQGPIWAKIPHTDGNFHPSPLMGGFGMKHPPPQILIKNTPVPADPPTAFNKDKLNSFITQYSTGQVSVEIEWELQKENSKRWNPEIQYTSNYYKSNNVEFAVNTEGVYSEPRPIGTRYLTRNL
TTM-0206聚體肽加下劃線，於位置456開始(緊接在位置455之後)；位置454、455及462之修飾加下劃線； 742 aa 53 MAADGYLPDWLEDNLSEGIREWWALKPGAPQPKANQQHQDNARGLVLPGYKYLGPGNGLDKGEPVNAADAAALEHDKAYDQQLKAGDNPYLKYNHADAEFQERLKEDTSFGGNLGRAVFQAKKRLLEPLGLVEEAAKTAPGKKRPVEQSPQEPDSSAGIGKSGAQPAKKRLNFGQTGDTESVPDPQPIGEPPAAPSGVGSLTMASGGGAPVADNNEGADGVGSSSGNWHCDSQWLGDRVITTSTRTWALPTYNNHLYKQISNSTSGGSSNDNAYFGYSTPWGYFDFNRFHCHFSPRDWQRLINNNWGFRPKRLNFKLFNIQVKEVTDNNGVKTIANNLTSTVQVFTDSDYQLPYVLGSAHEGCLPPFPADVFMIPQYGYLTLNDGSQAVGRSSFYCLEYFPSQMLRTGNNFQFSYEFENVPFHSSYAHSQSLDRLMNPLIDQYLYYLSKTING HDSPHSKAL NQQTLKFSVAGPSNMAVQGRNYIPGPSYRQQRVSTTVTQNNNSEFAWPGASSWALNGRNSLMNPGPAMASHKEGEDRFFPLSGSLIFGKQGTGRDNVDADKVMITNEEEIKTTNPVATESYGQVATNHQSAQAQAQTGWVQNQGILPGMVWQDRDVYLQGPIWAKIPHTDGNFHPSPLMGGFGMKHPPPQILIKNTPVPADPPTAFNKDKLNSFITQYSTGQVSVEIEWELQKENSKRWNPEIQYTSNYYKSNNVEFAVNTEGVYSEPRPIGTRYLTRNL
TTM-0216聚體肽加下劃線，於位置456開始(緊接在位置455之後)；位置454、455及466之修飾加下劃線； 742 aa 54 MAADGYLPDWLEDNLSEGIREWWALKPGAPQPKANQQHQDNARGLVLPGYKYLGPGNGLDKGEPVNAADAAALEHDKAYDQQLKAGDNPYLKYNHADAEFQERLKEDTSFGGNLGRAVFQAKKRLLEPLGLVEEAAKTAPGKKRPVEQSPQEPDSSAGIGKSGAQPAKKRLNFGQTGDTESVPDPQPIGEPPAAPSGVGSLTMASGGGAPVADNNEGADGVGSSSGNWHCDSQWLGDRVITTSTRTWALPTYNNHLYKQISNSTSGGSSNDNAYFGYSTPWGYFDFNRFHCHFSPRDWQRLINNNWGFRPKRLNFKLFNIQVKEVTDNNGVKTIANNLTSTVQVFTDSDYQLPYVLGSAHEGCLPPFPADVFMIPQYGYLTLNDGSQAVGRSSFYCLEYFPSQMLRTGNNFQFSYEFENVPFHSSYAHSQSLDRLMNPLIDQYLYYLSKTING HDSPHSKA QNQQ S LKFSVAGPSNMAVQGRNYIPGPSYRQQRVSTTVTQNNNSEFAWPGASSWALNGRNSLMNPGPAMASHKEGEDRFFPLSGSLIFGKQGTGRDNVDADKVMITNEEEIKTTNPVATESYGQVATNHQSAQAQAQTGWVQNQGILPGMVWQDRDVYLQGPIWAKIPHTDGNFHPSPLMGGFGMKHPPPQILIKNTPVPADPPTAFNKDKLNSFITQYSTGQVSVEIEWELQKENSKRWNPEIQYTSNYYKSNNVEFAVNTEGVYSEPRPIGTRYLTRNL
TTM-0226聚體肽加下劃線，於位置456開始(緊接在位置455之後)；位置454、455及466之修飾加下劃線； 742 aa 55 MAADGYLPDWLEDNLSEGIREWWALKPGAPQPKANQQHQDNARGLVLPGYKYLGPGNGLDKGEPVNAADAAALEHDKAYDQQLKAGDNPYLKYNHADAEFQERLKEDTSFGGNLGRAVFQAKKRLLEPLGLVEEAAKTAPGKKRPVEQSPQEPDSSAGIGKSGAQPAKKRLNFGQTGDTESVPDPQPIGEPPAAPSGVGSLTMASGGGAPVADNNEGADGVGSSSGNWHCDSQWLGDRVITTSTRTWALPTYNNHLYKQISNSTSGGSSNDNAYFGYSTPWGYFDFNRFHCHFSPRDWQRLINNNWGFRPKRLNFKLFNIQVKEVTDNNGVKTIANNLTSTVQVFTDSDYQLPYVLGSAHEGCLPPFPADVFMIPQYGYLTLNDGSQAVGRSSFYCLEYFPSQMLRTGNNFQFSYEFENVPFHSSYAHSQSLDRLMNPLIDQYLYYLSKTING HDSPHSKA QNQQ I LKFSVAGPSNMAVQGRNYIPGPSYRQQRVSTTVTQNNNSEFAWPGASSWALNGRNSLMNPGPAMASHKEGEDRFFPLSGSLIFGKQGTGRDNVDADKVMITNEEEIKTTNPVATESYGQVATNHQSAQAQAQTGWVQNQGILPGMVWQDRDVYLQGPIWAKIPHTDGNFHPSPLMGGFGMKHPPPQILIKNTPVPADPPTAFNKDKLNSFITQYSTGQVSVEIEWELQKENSKRWNPEIQYTSNYYKSNNVEFAVNTEGVYSEPRPIGTRYLTRNL
TTM-0236聚體肽加下劃線，於位置456開始(緊接在位置455之後)； 742 aa 56 MAADGYLPDWLEDNLSEGIREWWALKPGAPQPKANQQHQDNARGLVLPGYKYLGPGNGLDKGEPVNAADAAALEHDKAYDQQLKAGDNPYLKYNHADAEFQERLKEDTSFGGNLGRAVFQAKKRLLEPLGLVEEAAKTAPGKKRPVEQSPQEPDSSAGIGKSGAQPAKKRLNFGQTGDTESVPDPQPIGEPPAAPSGVGSLTMASGGGAPVADNNEGADGVGSSSGNWHCDSQWLGDRVITTSTRTWALPTYNNHLYKQISNSTSGGSSNDNAYFGYSTPWGYFDFNRFHCHFSPRDWQRLINNNWGFRPKRLNFKLFNIQVKEVTDNNGVKTIANNLTSTVQVFTDSDYQLPYVLGSAHEGCLPPFPADVFMIPQYGYLTLNDGSQAVGRSSFYCLEYFPSQMLRTGNNFQFSYEFENVPFHSSYAHSQSLDRLMNPLIDQYLYYLSKTINGSG SPHFTR QNQQTLKFSVAGPSNMAVQGRNYIPGPSYRQQRVSTTVTQNNNSEFAWPGASSWALNGRNSLMNPGPAMASHKEGEDRFFPLSGSLIFGKQGTGRDNVDADKVMITNEEEIKTTNPVATESYGQVATNHQSAQAQAQTGWVQNQGILPGMVWQDRDVYLQGPIWAKIPHTDGNFHPSPLMGGFGMKHPPPQILIKNTPVPADPPTAFNKDKLNSFITQYSTGQVSVEIEWELQKENSKRWNPEIQYTSNYYKSNNVEFAVNTEGVYSEPRPIGTRYLTRNL
TTM-0246聚體肽加下劃線，於位置456開始(緊接在位置455之後)；位置451、454及455之修飾加下劃線； 742 aa 57 MAADGYLPDWLEDNLSEGIREWWALKPGAPQPKANQQHQDNARGLVLPGYKYLGPGNGLDKGEPVNAADAAALEHDKAYDQQLKAGDNPYLKYNHADAEFQERLKEDTSFGGNLGRAVFQAKKRLLEPLGLVEEAAKTAPGKKRPVEQSPQEPDSSAGIGKSGAQPAKKRLNFGQTGDTESVPDPQPIGEPPAAPSGVGSLTMASGGGAPVADNNEGADGVGSSSGNWHCDSQWLGDRVITTSTRTWALPTYNNHLYKQISNSTSGGSSNDNAYFGYSTPWGYFDFNRFHCHFSPRDWQRLINNNWGFRPKRLNFKLFNIQVKEVTDNNGVKTIANNLTSTVQVFTDSDYQLPYVLGSAHEGCLPPFPADVFMIPQYGYLTLNDGSQAVGRSSFYCLEYFPSQMLRTGNNFQFSYEFENVPFHSSYAHSQSLDRLMNPLIDQYLYYLSKT S NG HDSPHSKA QNQQTLKFSVAGPSNMAVQGRNYIPGPSYRQQRVSTTVTQNNNSEFAWPGASSWALNGRNSLMNPGPAMASHKEGEDRFFPLSGSLIFGKQGTGRDNVDADKVMITNEEEIKTTNPVATESYGQVATNHQSAQAQAQTGWVQNQGILPGMVWQDRDVYLQGPIWAKIPHTDGNFHPSPLMGGFGMKHPPPQILIKNTPVPADPPTAFNKDKLNSFITQYSTGQVSVEIEWELQKENSKRWNPEIQYTSNYYKSNNVEFAVNTEGVYSEPRPIGTRYLTRNL
TTM-0256聚體肽加下劃線，於位置456開始(緊接在位置455之後)；位置462之修飾加下劃線； 742 aa 58 MAADGYLPDWLEDNLSEGIREWWALKPGAPQPKANQQHQDNARGLVLPGYKYLGPGNGLDKGEPVNAADAAALEHDKAYDQQLKAGDNPYLKYNHADAEFQERLKEDTSFGGNLGRAVFQAKKRLLEPLGLVEEAAKTAPGKKRPVEQSPQEPDSSAGIGKSGAQPAKKRLNFGQTGDTESVPDPQPIGEPPAAPSGVGSLTMASGGGAPVADNNEGADGVGSSSGNWHCDSQWLGDRVITTSTRTWALPTYNNHLYKQISNSTSGGSSNDNAYFGYSTPWGYFDFNRFHCHFSPRDWQRLINNNWGFRPKRLNFKLFNIQVKEVTDNNGVKTIANNLTSTVQVFTDSDYQLPYVLGSAHEGCLPPFPADVFMIPQYGYLTLNDGSQAVGRSSFYCLEYFPSQMLRTGNNFQFSYEFENVPFHSSYAHSQSLDRLMNPLIDQYLYYLSKTINGSG SPHSLPW NQQTLKFSVAGPSNMAVQGRNYIPGPSYRQQRVSTTVTQNNNSEFAWPGASSWALNGRNSLMNPGPAMASHKEGEDRFFPLSGSLIFGKQGTGRDNVDADKVMITNEEEIKTTNPVATESYGQVATNHQSAQAQAQTGWVQNQGILPGMVWQDRDVYLQGPIWAKIPHTDGNFHPSPLMGGFGMKHPPPQILIKNTPVPADPPTAFNKDKLNSFITQYSTGQVSVEIEWELQKENSKRWNPEIQYTSNYYKSNNVEFAVNTEGVYSEPRPIGTRYLTRNL
TTM-0266聚體肽加下劃線，於位置456開始(緊接在位置455之後)；位置454、455及464之修飾加下劃線； 742 aa 59 MAADGYLPDWLEDNLSEGIREWWALKPGAPQPKANQQHQDNARGLVLPGYKYLGPGNGLDKGEPVNAADAAALEHDKAYDQQLKAGDNPYLKYNHADAEFQERLKEDTSFGGNLGRAVFQAKKRLLEPLGLVEEAAKTAPGKKRPVEQSPQEPDSSAGIGKSGAQPAKKRLNFGQTGDTESVPDPQPIGEPPAAPSGVGSLTMASGGGAPVADNNEGADGVGSSSGNWHCDSQWLGDRVITTSTRTWALPTYNNHLYKQISNSTSGGSSNDNAYFGYSTPWGYFDFNRFHCHFSPRDWQRLINNNWGFRPKRLNFKLFNIQVKEVTDNNGVKTIANNLTSTVQVFTDSDYQLPYVLGSAHEGCLPPFPADVFMIPQYGYLTLNDGSQAVGRSSFYCLEYFPSQMLRTGNNFQFSYEFENVPFHSSYAHSQSLDRLMNPLIDQYLYYLSKTING HDSPHSKA QN H QTLKFSVAGPSNMAVQGRNYIPGPSYRQQRVSTTVTQNNNSEFAWPGASSWALNGRNSLMNPGPAMASHKEGEDRFFPLSGSLIFGKQGTGRDNVDADKVMITNEEEIKTTNPVATESYGQVATNHQSAQAQAQTGWVQNQGILPGMVWQDRDVYLQGPIWAKIPHTDGNFHPSPLMGGFGMKHPPPQILIKNTPVPADPPTAFNKDKLNSFITQYSTGQVSVEIEWELQKENSKRWNPEIQYTSNYYKSNNVEFAVNTEGVYSEPRPIGTRYLTRNL
TTM-0276聚體肽加下劃線，於位置456開始(緊接在位置455之後)；位置451及453之修飾加下劃線； 742 aa 69 MAADGYLPDWLEDNLSEGIREWWALKPGAPQPKANQQHQDNARGLVLPGYKYLGPGNGLDKGEPVNAADAAALEHDKAYDQQLKAGDNPYLKYNHADAEFQERLKEDTSFGGNLGRAVFQAKKRLLEPLGLVEEAAKTAPGKKRPVEQSPQEPDSSAGIGKSGAQPAKKRLNFGQTGDTESVPDPQPIGEPPAAPSGVGSLTMASGGGAPVADNNEGADGVGSSSGNWHCDSQWLGDRVITTSTRTWALPTYNNHLYKQISNSTSGGSSNDNAYFGYSTPWGYFDFNRFHCHFSPRDWQRLINNNWGFRPKRLNFKLFNIQVKEVTDNNGVKTIANNLTSTVQVFTDSDYQLPYVLGSAHEGCLPPFPADVFMIPQYGYLTLNDGSQAVGRSSFYCLEYFPSQMLRTGNNFQFSYEFENVPFHSSYAHSQSLDRLMNPLIDQYLYYLSKT E N V SG SPHSKA QNQQTLKFSVAGPSNMAVQGRNYIPGPSYRQQRVSTTVTQNNNSEFAWPGASSWALNGRNSLMNPGPAMASHKEGEDRFFPLSGSLIFGKQGTGRDNVDADKVMITNEEEIKTTNPVATESYGQVATNHQSAQAQAQTGWVQNQGILPGMVWQDRDVYLQGPIWAKIPHTDGNFHPSPLMGGFGMKHPPPQILIKNTPVPADPPTAFNKDKLNSFITQYSTGQVSVEIEWELQKENSKRWNPEIQYTSNYYKSNNVEFAVNTEGVYSEPRPIGTRYLTRNL
TTM-0286聚體肽加下劃線，於位置456開始(緊接在位置455之後)；位置451、452及453之修飾加下劃線； 742 aa 70 MAADGYLPDWLEDNLSEGIREWWALKPGAPQPKANQQHQDNARGLVLPGYKYLGPGNGLDKGEPVNAADAAALEHDKAYDQQLKAGDNPYLKYNHADAEFQERLKEDTSFGGNLGRAVFQAKKRLLEPLGLVEEAAKTAPGKKRPVEQSPQEPDSSAGIGKSGAQPAKKRLNFGQTGDTESVPDPQPIGEPPAAPSGVGSLTMASGGGAPVADNNEGADGVGSSSGNWHCDSQWLGDRVITTSTRTWALPTYNNHLYKQISNSTSGGSSNDNAYFGYSTPWGYFDFNRFHCHFSPRDWQRLINNNWGFRPKRLNFKLFNIQVKEVTDNNGVKTIANNLTSTVQVFTDSDYQLPYVLGSAHEGCLPPFPADVFMIPQYGYLTLNDGSQAVGRSSFYCLEYFPSQMLRTGNNFQFSYEFENVPFHSSYAHSQSLDRLMNPLIDQYLYYLSKT EKV SG SPHSKA QNQQTLKFSVAGPSNMAVQGRNYIPGPSYRQQRVSTTVTQNNNSEFAWPGASSWALNGRNSLMNPGPAMASHKEGEDRFFPLSGSLIFGKQGTGRDNVDADKVMITNEEEIKTTNPVATESYGQVATNHQSAQAQAQTGWVQNQGILPGMVWQDRDVYLQGPIWAKIPHTDGNFHPSPLMGGFGMKHPPPQILIKNTPVPADPPTAFNKDKLNSFITQYSTGQVSVEIEWELQKENSKRWNPEIQYTSNYYKSNNVEFAVNTEGVYSEPRPIGTRYLTRNL
TTM-0296聚體肽加下劃線，於位置456開始(緊接在位置455之後)；位置464、465及466之修飾加下劃線； 742 aa 71 MAADGYLPDWLEDNLSEGIREWWALKPGAPQPKANQQHQDNARGLVLPGYKYLGPGNGLDKGEPVNAADAAALEHDKAYDQQLKAGDNPYLKYNHADAEFQERLKEDTSFGGNLGRAVFQAKKRLLEPLGLVEEAAKTAPGKKRPVEQSPQEPDSSAGIGKSGAQPAKKRLNFGQTGDTESVPDPQPIGEPPAAPSGVGSLTMASGGGAPVADNNEGADGVGSSSGNWHCDSQWLGDRVITTSTRTWALPTYNNHLYKQISNSTSGGSSNDNAYFGYSTPWGYFDFNRFHCHFSPRDWQRLINNNWGFRPKRLNFKLFNIQVKEVTDNNGVKTIANNLTSTVQVFTDSDYQLPYVLGSAHEGCLPPFPADVFMIPQYGYLTLNDGSQAVGRSSFYCLEYFPSQMLRTGNNFQFSYEFENVPFHSSYAHSQSLDRLMNPLIDQYLYYLSKTINGSG SPHKSG QN KTS LKFSVAGPSNMAVQGRNYIPGPSYRQQRVSTTVTQNNNSEFAWPGASSWALNGRNSLMNPGPAMASHKEGEDRFFPLSGSLIFGKQGTGRDNVDADKVMITNEEEIKTTNPVATESYGQVATNHQSAQAQAQTGWVQNQGILPGMVWQDRDVYLQGPIWAKIPHTDGNFHPSPLMGGFGMKHPPPQILIKNTPVPADPPTAFNKDKLNSFITQYSTGQVSVEIEWELQKENSKRWNPEIQYTSNYYKSNNVEFAVNTEGVYSEPRPIGTRYLTRNL
TTM-0306聚體肽加下劃線，於位置456開始(緊接在位置455之後)；位置451、453及462之修飾加下劃線； 742 aa 4 MAADGYLPDWLEDNLSEGIREWWALKPGAPQPKANQQHQDNARGLVLPGYKYLGPGNGLDKGEPVNAADAAALEHDKAYDQQLKAGDNPYLKYNHADAEFQERLKEDTSFGGNLGRAVFQAKKRLLEPLGLVEEAAKTAPGKKRPVEQSPQEPDSSAGIGKSGAQPAKKRLNFGQTGDTESVPDPQPIGEPPAAPSGVGSLTMASGGGAPVADNNEGADGVGSSSGNWHCDSQWLGDRVITTSTRTWALPTYNNHLYKQISNSTSGGSSNDNAYFGYSTPWGYFDFNRFHCHFSPRDWQRLINNNWGFRPKRLNFKLFNIQVKEVTDNNGVKTIANNLTSTVQVFTDSDYQLPYVLGSAHEGCLPPFPADVFMIPQYGYLTLNDGSQAVGRSSFYCLEYFPSQMLRTGNNFQFSYEFENVPFHSSYAHSQSLDRLMNPLIDQYLYYLSKT S N A SG SPHSKAH NQQTLKFSVAGPSNMAVQGRNYIPGPSYRQQRVSTTVTQNNNSEFAWPGASSWALNGRNSLMNPGPAMASHKEGEDRFFPLSGSLIFGKQGTGRDNVDADKVMITNEEEIKTTNPVATESYGQVATNHQSAQAQAQTGWVQNQGILPGMVWQDRDVYLQGPIWAKIPHTDGNFHPSPLMGGFGMKHPPPQILIKNTPVPADPPTAFNKDKLNSFITQYSTGQVSVEIEWELQKENSKRWNPEIQYTSNYYKSNNVEFAVNTEGVYSEPRPIGTRYLTRNL
TTM-0316聚體肽加下劃線，於位置456開始(緊接在位置455之後)；位置450、451及452之修飾加下劃線； 742 aa 5 MAADGYLPDWLEDNLSEGIREWWALKPGAPQPKANQQHQDNARGLVLPGYKYLGPGNGLDKGEPVNAADAAALEHDKAYDQQLKAGDNPYLKYNHADAEFQERLKEDTSFGGNLGRAVFQAKKRLLEPLGLVEEAAKTAPGKKRPVEQSPQEPDSSAGIGKSGAQPAKKRLNFGQTGDTESVPDPQPIGEPPAAPSGVGSLTMASGGGAPVADNNEGADGVGSSSGNWHCDSQWLGDRVITTSTRTWALPTYNNHLYKQISNSTSGGSSNDNAYFGYSTPWGYFDFNRFHCHFSPRDWQRLINNNWGFRPKRLNFKLFNIQVKEVTDNNGVKTIANNLTSTVQVFTDSDYQLPYVLGSAHEGCLPPFPADVFMIPQYGYLTLNDGSQAVGRSSFYCLEYFPSQMLRTGNNFQFSYEFENVPFHSSYAHSQSLDRLMNPLIDQYLYYLSK NSI GSG SPHSKA QNQQTLKFSVAGPSNMAVQGRNYIPGPSYRQQRVSTTVTQNNNSEFAWPGASSWALNGRNSLMNPGPAMASHKEGEDRFFPLSGSLIFGKQGTGRDNVDADKVMITNEEEIKTTNPVATESYGQVATNHQSAQAQAQTGWVQNQGILPGMVWQDRDVYLQGPIWAKIPHTDGNFHPSPLMGGFGMKHPPPQILIKNTPVPADPPTAFNKDKLNSFITQYSTGQVSVEIEWELQKENSKRWNPEIQYTSNYYKSNNVEFAVNTEGVYSEPRPIGTRYLTRNL
TTM-0326聚體肽加下劃線，於位置454開始(緊接在位置453之後)；位置451、463、464及465之修飾加下劃線； 742 aa 6 MAADGYLPDWLEDNLSEGIREWWALKPGAPQPKANQQHQDNARGLVLPGYKYLGPGNGLDKGEPVNAADAAALEHDKAYDQQLKAGDNPYLKYNHADAEFQERLKEDTSFGGNLGRAVFQAKKRLLEPLGLVEEAAKTAPGKKRPVEQSPQEPDSSAGIGKSGAQPAKKRLNFGQTGDTESVPDPQPIGEPPAAPSGVGSLTMASGGGAPVADNNEGADGVGSSSGNWHCDSQWLGDRVITTSTRTWALPTYNNHLYKQISNSTSGGSSNDNAYFGYSTPWGYFDFNRFHCHFSPRDWQRLINNNWGFRPKRLNFKLFNIQVKEVTDNNGVKTIANNLTSTVQVFTDSDYQLPYVLGSAHEGCLPPFPADVFMIPQYGYLTLNDGSQAVGRSSFYCLEYFPSQMLRTGNNFQFSYEFENVPFHSSYAHSQSLDRLMNPLIDQYLYYLSKT V NG HDSPHK SGQ RPS TLKFSVAGPSNMAVQGRNYIPGPSYRQQRVSTTVTQNNNSEFAWPGASSWALNGRNSLMNPGPAMASHKEGEDRFFPLSGSLIFGKQGTGRDNVDADKVMITNEEEIKTTNPVATESYGQVATNHQSAQAQAQTGWVQNQGILPGMVWQDRDVYLQGPIWAKIPHTDGNFHPSPLMGGFGMKHPPPQILIKNTPVPADPPTAFNKDKLNSFITQYSTGQVSVEIEWELQKENSKRWNPEIQYTSNYYKSNNVEFAVNTEGVYSEPRPIGTRYLTRNL
TTM-0336聚體肽加下劃線，於位置456開始(緊接在位置455之後)；位置450及451之修飾加下劃線； 742 aa 7 MAADGYLPDWLEDNLSEGIREWWALKPGAPQPKANQQHQDNARGLVLPGYKYLGPGNGLDKGEPVNAADAAALEHDKAYDQQLKAGDNPYLKYNHADAEFQERLKEDTSFGGNLGRAVFQAKKRLLEPLGLVEEAAKTAPGKKRPVEQSPQEPDSSAGIGKSGAQPAKKRLNFGQTGDTESVPDPQPIGEPPAAPSGVGSLTMASGGGAPVADNNEGADGVGSSSGNWHCDSQWLGDRVITTSTRTWALPTYNNHLYKQISNSTSGGSSNDNAYFGYSTPWGYFDFNRFHCHFSPRDWQRLINNNWGFRPKRLNFKLFNIQVKEVTDNNGVKTIANNLTSTVQVFTDSDYQLPYVLGSAHEGCLPPFPADVFMIPQYGYLTLNDGSQAVGRSSFYCLEYFPSQMLRTGNNFQFSYEFENVPFHSSYAHSQSLDRLMNPLIDQYLYYLSK AE NGSG SPHSKA QNQQTLKFSVAGPSNMAVQGRNYIPGPSYRQQRVSTTVTQNNNSEFAWPGASSWALNGRNSLMNPGPAMASHKEGEDRFFPLSGSLIFGKQGTGRDNVDADKVMITNEEEIKTTNPVATESYGQVATNHQSAQAQAQTGWVQNQGILPGMVWQDRDVYLQGPIWAKIPHTDGNFHPSPLMGGFGMKHPPPQILIKNTPVPADPPTAFNKDKLNSFITQYSTGQVSVEIEWELQKENSKRWNPEIQYTSNYYKSNNVEFAVNTEGVYSEPRPIGTRYLTRNL
TTM-0346聚體肽加下劃線，於位置456開始(緊接在位置455之後)；位置466之修飾加下劃線； 742 aa 8 MAADGYLPDWLEDNLSEGIREWWALKPGAPQPKANQQHQDNARGLVLPGYKYLGPGNGLDKGEPVNAADAAALEHDKAYDQQLKAGDNPYLKYNHADAEFQERLKEDTSFGGNLGRAVFQAKKRLLEPLGLVEEAAKTAPGKKRPVEQSPQEPDSSAGIGKSGAQPAKKRLNFGQTGDTESVPDPQPIGEPPAAPSGVGSLTMASGGGAPVADNNEGADGVGSSSGNWHCDSQWLGDRVITTSTRTWALPTYNNHLYKQISNSTSGGSSNDNAYFGYSTPWGYFDFNRFHCHFSPRDWQRLINNNWGFRPKRLNFKLFNIQVKEVTDNNGVKTIANNLTSTVQVFTDSDYQLPYVLGSAHEGCLPPFPADVFMIPQYGYLTLNDGSQAVGRSSFYCLEYFPSQMLRTGNNFQFSYEFENVPFHSSYAHSQSLDRLMNPLIDQYLYYLSKTINGSG SPHKSG QNQQ P LKFSVAGPSNMAVQGRNYIPGPSYRQQRVSTTVTQNNNSEFAWPGASSWALNGRNSLMNPGPAMASHKEGEDRFFPLSGSLIFGKQGTGRDNVDADKVMITNEEEIKTTNPVATESYGQVATNHQSAQAQAQTGWVQNQGILPGMVWQDRDVYLQGPIWAKIPHTDGNFHPSPLMGGFGMKHPPPQILIKNTPVPADPPTAFNKDKLNSFITQYSTGQVSVEIEWELQKENSKRWNPEIQYTSNYYKSNNVEFAVNTEGVYSEPRPIGTRYLTRNL
表5. 示 範性全長衣殼核酸序 列
名稱及註釋 SEQ ID NO: NT 序 列
TTM-0019聚體肽加下劃線 983 ATGGCTGCCGATGGTTATCTTCCAGattggcTCGAGGACAACCTTAGTGAAGGAATTCGCGAGTGGTGGGCTTTGAAACCTGGAGCCCCTCAACCCAAGGCAAATCAACAACATCAAGACAACGCTCGAGGTCTTGTGCTTCCGGGTTACAAATACCTTGGACCCGGCAACGGACTCGACAAGGGGGAGCCGGTCAACGCAGCAGACGCGGCGGCCCTCGAGCACGACAAGGCCTACGACCAGCAGCTCAAGGCCGGAGACAACCCGTACCTCAAGTACAACCACGCCGACGCCGAGTTCCAGGAGCGGCTCAAAGAAGATACGTCTTTTGGGGGCAACCTCGGGCGAGCAGTCTTCCAGGCCAAAAAGAGGCTTCTTGAACCTCTTGGTCTGGTTGAGGAAGCGGCTAAGACGGCTCCTGGAAAGAAGAGGCCTGTAGAGCAGTCTCCTCAGGAACCGGACTCCTCCGCGGGTATTGGCAAATCGGGTGCACAGCCCGCTAAAAAGAGACTCAATTTCGGTCAGACTGGCGACACAGAGTCAGTCCCAGACCCTCAACCAATCGGAGAACCTCCCGCAGCCCCCTCAGGTGTGGGATCTCTTACAATGGCTTCAGGTGGTGGCGCACCAGTGGCAGACAATAACGAAGGTGCCGATGGAGTGGGTAGTTCCTCGGGAAATTGGCATTGCGATTCCCAATGGCTGGGGGACAGAGTCATCACCACCAGCACCCGAACCTGGGCCCTGCCCACCTACAACAATCACCTCTACAAGCAAATCTCCAACAGCACATCTGGAGGATCTTCAAATGACAACGCCTACTTCGGCTACAGCACCCCCTGGGGGTATTTTGACTTCAACAGATTCCACTGCCACTTCTCACCACGTGACTGGCAGCGACTCATCAACAACAACTGGGGATTCCGGCCTAAGCGACTCAACTTCAAGCTCTTCAACATTCAGGTCAAAGAGGTTACGGACAACAATGGAGTCAAGACCATCGCCAATAACCTTACCAGCACGGTCCAGGTCTTCACGGACTCAGACTATCAGCTCCCGTACGTGCTCGGGTCGGCTCACGAGGGCTGCCTCCCGCCGTTCCCAGCGGACGTTTTCATGATTCCTCAGTACGGGTATCTGACGCTTAATGATGGAAGCCAGGCCGTGGGTCGTTCGTCCTTTTACTGCCTGGAATATTTCCCGTCGCAAATGCTAAGAACGGGTAACAACTTCCAGTTCAGCTACGAGTTTGAGAACGTACCTTTCCATAGCAGCTACGCTCACAGCCAAAGCCTGGACCGACTAATGAATCCACTCATCGACCAATACTTGTAtTActTgagtAAaACaATTAACGGAAGCGGA AGCCCACACAGCAAAGCA CAAAACCAACAGACCtTgAAgTTttcgGTaGCtGGtCCtAGCAACATGGCTGTCCAGGGAAGAAACTACATACCTGGACCCAGCTACCGACAACAACGTGTCTCAACCACTGTGACTCAAAACAACAACAGCGAATTTGCTTGGCCTGGAGCTTCTTCTTGGGCTCTCAATGGACGTAATAGCTTGATGAATCCTGGACCTGCTATGGCCAGCCACAAAGAAGGAGAGGACCGTTTCTTTCCTTTGTCTGGATCTTTAATTTTTGGCAAACAAGGAACTGGAAGAGACAACGTGGATGCGGACAAAGTCATGATAACCAACGAAGAAGAAATTAAAACTACTAACCCGGTAGCAACGGAGTCCTATGGACAAGtggccacaaaccaccagagtGCCCAAGCACAGGCGCAGaccggctgggttcaaaaccaAGGAATACTTCCGGGTATGGTTTGGCAGGACAGAGATGTGTACCTGCAAGGACCCATTTGGGCCAAAATTCCTCACACGGACGGCAACTTTCACCCTTCTCCGCTGATGGGAGGGTTTGGAATGAAGCACCCGCCTCCTCAGATCCTCATCAAAAACACACCTGTACCTGCGGATCCTCCAACGGCCTTCAACAAGGACAAGCTGAACTCTTTCATCACCCAGTATTCTACTGGCCAAGTCAGCGTGGAGATCGAGTGGGAGCTGCAGAAGGAAAACAGCAAGCGCTGGAACCCGGAGATCCAGTACACTTCCAACTATTACAAGTCTAATAATGTTGAATTTGCTGTTAATACTGAAGGTGTATATAGTGAACCCCGCCCCATTGGCACgcGgTAttTAACgaGgAActTaTAA
TTM-0027聚體肽加下劃線 984 ATGGCTGCCGATGGTTATCTTCCAGattggcTCGAGGACAACCTTAGTGAAGGAATTCGCGAGTGGTGGGCTTTGAAACCTGGAGCCCCTCAACCCAAGGCAAATCAACAACATCAAGACAACGCTCGAGGTCTTGTGCTTCCGGGTTACAAATACCTTGGACCCGGCAACGGACTCGACAAGGGGGAGCCGGTCAACGCAGCAGACGCGGCGGCCCTCGAGCACGACAAGGCCTACGACCAGCAGCTCAAGGCCGGAGACAACCCGTACCTCAAGTACAACCACGCCGACGCCGAGTTCCAGGAGCGGCTCAAAGAAGATACGTCTTTTGGGGGCAACCTCGGGCGAGCAGTCTTCCAGGCCAAAAAGAGGCTTCTTGAACCTCTTGGTCTGGTTGAGGAAGCGGCTAAGACGGCTCCTGGAAAGAAGAGGCCTGTAGAGCAGTCTCCTCAGGAACCGGACTCCTCCGCGGGTATTGGCAAATCGGGTGCACAGCCCGCTAAAAAGAGACTCAATTTCGGTCAGACTGGCGACACAGAGTCAGTCCCAGACCCTCAACCAATCGGAGAACCTCCCGCAGCCCCCTCAGGTGTGGGATCTCTTACAATGGCTTCAGGTGGTGGCGCACCAGTGGCAGACAATAACGAAGGTGCCGATGGAGTGGGTAGTTCCTCGGGAAATTGGCATTGCGATTCCCAATGGCTGGGGGACAGAGTCATCACCACCAGCACCCGAACCTGGGCCCTGCCCACCTACAACAATCACCTCTACAAGCAAATCTCCAACAGCACATCTGGAGGATCTTCAAATGACAACGCCTACTTCGGCTACAGCACCCCCTGGGGGTATTTTGACTTCAACAGATTCCACTGCCACTTCTCACCACGTGACTGGCAGCGACTCATCAACAACAACTGGGGATTCCGGCCTAAGCGACTCAACTTCAAGCTCTTCAACATTCAGGTCAAAGAGGTTACGGACAACAATGGAGTCAAGACCATCGCCAATAACCTTACCAGCACGGTCCAGGTCTTCACGGACTCAGACTATCAGCTCCCGTACGTGCTCGGGTCGGCTCACGAGGGCTGCCTCCCGCCGTTCCCAGCGGACGTTTTCATGATTCCTCAGTACGGGTATCTGACGCTTAATGATGGAAGCCAGGCCGTGGGTCGTTCGTCCTTTTACTGCCTGGAATATTTCCCGTCGCAAATGCTAAGAACGGGTAACAACTTCCAGTTCAGCTACGAGTTTGAGAACGTACCTTTCCATAGCAGCTACGCTCACAGCCAAAGCCTGGACCGACTAATGAATCCACTCATCGACCAATACTTGTAtTActTgagtAAaACaATTAACGGA CACGACAGCCCACACAAA AGCGGACAAAACCAACAGACCtTgAAgTTttcgGTaGCtGGtCCtAGCAACATGGCTGTCCAGGGAAGAAACTACATACCTGGACCCAGCTACCGACAACAACGTGTCTCAACCACTGTGACTCAAAACAACAACAGCGAATTTGCTTGGCCTGGAGCTTCTTCTTGGGCTCTCAATGGACGTAATAGCTTGATGAATCCTGGACCTGCTATGGCCAGCCACAAAGAAGGAGAGGACCGTTTCTTTCCTTTGTCTGGATCTTTAATTTTTGGCAAACAAGGAACTGGAAGAGACAACGTGGATGCGGACAAAGTCATGATAACCAACGAAGAAGAAATTAAAACTACTAACCCGGTAGCAACGGAGTCCTATGGACAAGtggccacaaaccaccagagtGCCCAAGCACAGGCGCAGaccggctgggttcaaaaccaAGGAATACTTCCGGGTATGGTTTGGCAGGACAGAGATGTGTACCTGCAAGGACCCATTTGGGCCAAAATTCCTCACACGGACGGCAACTTTCACCCTTCTCCGCTGATGGGAGGGTTTGGAATGAAGCACCCGCCTCCTCAGATCCTCATCAAAAACACACCTGTACCTGCGGATCCTCCAACGGCCTTCAACAAGGACAAGCTGAACTCTTTCATCACCCAGTATTCTACTGGCCAAGTCAGCGTGGAGATCGAGTGGGAGCTGCAGAAGGAAAACAGCAAGCGCTGGAACCCGGAGATCCAGTACACTTCCAACTATTACAAGTCTAATAATGTTGAATTTGCTGTTAATACTGAAGGTGTATATAGTGAACCCCGCCCCATTGGCACgcGgTAttTAACgaGgAActTaTAA
TTM-003 72 ATGGCTGCCGATGGTTATCTTCCAGattggcTCGAGGACAACCTTAGTGAAGGAATTCGCGAGTGGTGGGCTTTGAAACCTGGAGCCCCTCAACCCAAGGCAAATCAACAACATCAAGACAACGCTCGAGGTCTTGTGCTTCCGGGTTACAAATACCTTGGACCCGGCAACGGACTCGACAAGGGGGAGCCGGTCAACGCAGCAGACGCGGCGGCCCTCGAGCACGACAAGGCCTACGACCAGCAGCTCAAGGCCGGAGACAACCCGTACCTCAAGTACAACCACGCCGACGCCGAGTTCCAGGAGCGGCTCAAAGAAGATACGTCTTTTGGGGGCAACCTCGGGCGAGCAGTCTTCCAGGCCAAAAAGAGGCTTCTTGAACCTCTTGGTCTGGTTGAGGAAGCGGCTAAGACGGCTCCTGGAAAGAAGAGGCCTGTAGAGCAGTCTCCTCAGGAACCGGACTCCTCCGCGGGTATTGGCAAATCGGGTGCACAGCCCGCTAAAAAGAGACTCAATTTCGGTCAGACTGGCGACACAGAGTCAGTCCCAGACCCTCAACCAATCGGAGAACCTCCCGCAGCCCCCTCAGGTGTGGGATCTCTTACAATGGCTTCAGGTGGTGGCGCACCAGTGGCAGACAATAACGAAGGTGCCGATGGAGTGGGTAGTTCCTCGGGAAATTGGCATTGCGATTCCCAATGGCTGGGGGACAGAGTCATCACCACCAGCACCCGAACCTGGGCCCTGCCCACCTACAACAATCACCTCTACAAGCAAATCTCCAACAGCACATCTGGAGGATCTTCAAATGACAACGCCTACTTCGGCTACAGCACCCCCTGGGGGTATTTTGACTTCAACAGATTCCACTGCCACTTCTCACCACGTGACTGGCAGCGACTCATCAACAACAACTGGGGATTCCGGCCTAAGCGACTCAACTTCAAGCTCTTCAACATTCAGGTCAAAGAGGTTACGGACAACAATGGAGTCAAGACCATCGCCAATAACCTTACCAGCACGGTCCAGGTCTTCACGGACTCAGACTATCAGCTCCCGTACGTGCTCGGGTCGGCTCACGAGGGCTGCCTCCCGCCGTTCCCAGCGGACGTTTTCATGATTCCTCAGTACGGGTATCTGACGCTTAATGATGGAAGCCAGGCCGTGGGTCGTTCGTCCTTTTACTGCCTGGAATATTTCCCGTCGCAAATGCTAAGAACGGGTAACAACTTCCAGTTCAGCTACGAGTTTGAGAACGTACCTTTCCATAGCAGCTACGCTCACAGCCAAAGCCTGGACCGACTAATGAATCCACTCATCGAtCAgTAtcTGTAtTActTgagtAAGACGGAGCGTGTGTCTGGTTCTCCGCATTCTAAGGCGCAGAATCAGCAGACGtTgAAgTTttcgGTaGCtGGtCCtAGcAAcATGGCTGTCCAGGGAAGAAACTACATACCTGGACCCAGCTACCGACAACAACGTGTCTCAACCACTGTGACTCAAAACAACAACAGCGAATTTGCTTGGCCTGGAGCTTCTTCTTGGGCTCTCAATGGACGTAATAGCTTGATGAATCCTGGACCTGCTATGGCCAGCCACAAAGAAGGAGAGGACCGTTTCTTTCCTTTGTCTGGATCTTTAATTTTTGGCAAACAAGGAACTGGAAGAGACAACGTGGATGCGGACAAAGTCATGATAACCAACGAAGAAGAAATTAAAACTACTAACCCGGTAGCAACGGAGTCCTATGGACAAGtggccacaaaccaccagagtGCCCAAGCACAGGCGCAGaccggctgggttcaaaaccaAGGAATACTTCCGGGTATGGTTTGGCAGGACAGAGATGTGTACCTGCAAGGACCCATTTGGGCCAAAATTCCTCACACGGACGGCAACTTTCACCCTTCTCCGCTGATGGGAGGGTTTGGAATGAAGCACCCGCCTCCTCAGATCCTCATCAAAAACACACCTGTACCTGCGGATCCTCCAACGGCCTTCAACAAGGACAAGCTGAACTCTTTCATCACCCAGTATTCTACTGGCCAAGTCAGCGTGGAGATCGAGTGGGAGCTGCAGAAGGAAAACAGCAAGCGCTGGAACCCGGAGATCCAGTACACTTCCAACTATTACAAGTCTAATAATGTTGAATTTGCTGTTAATACTGAAGGTGTATATAGTGAACCCCGCCCCATTGGCACgcGgTAttTAACgaGgAActTa
TTM-004 73 ATGGCTGCCGATGGTTATCTTCCAGattggcTCGAGGACAACCTTAGTGAAGGAATTCGCGAGTGGTGGGCTTTGAAACCTGGAGCCCCTCAACCCAAGGCAAATCAACAACATCAAGACAACGCTCGAGGTCTTGTGCTTCCGGGTTACAAATACCTTGGACCCGGCAACGGACTCGACAAGGGGGAGCCGGTCAACGCAGCAGACGCGGCGGCCCTCGAGCACGACAAGGCCTACGACCAGCAGCTCAAGGCCGGAGACAACCCGTACCTCAAGTACAACCACGCCGACGCCGAGTTCCAGGAGCGGCTCAAAGAAGATACGTCTTTTGGGGGCAACCTCGGGCGAGCAGTCTTCCAGGCCAAAAAGAGGCTTCTTGAACCTCTTGGTCTGGTTGAGGAAGCGGCTAAGACGGCTCCTGGAAAGAAGAGGCCTGTAGAGCAGTCTCCTCAGGAACCGGACTCCTCCGCGGGTATTGGCAAATCGGGTGCACAGCCCGCTAAAAAGAGACTCAATTTCGGTCAGACTGGCGACACAGAGTCAGTCCCAGACCCTCAACCAATCGGAGAACCTCCCGCAGCCCCCTCAGGTGTGGGATCTCTTACAATGGCTTCAGGTGGTGGCGCACCAGTGGCAGACAATAACGAAGGTGCCGATGGAGTGGGTAGTTCCTCGGGAAATTGGCATTGCGATTCCCAATGGCTGGGGGACAGAGTCATCACCACCAGCACCCGAACCTGGGCCCTGCCCACCTACAACAATCACCTCTACAAGCAAATCTCCAACAGCACATCTGGAGGATCTTCAAATGACAACGCCTACTTCGGCTACAGCACCCCCTGGGGGTATTTTGACTTCAACAGATTCCACTGCCACTTCTCACCACGTGACTGGCAGCGACTCATCAACAACAACTGGGGATTCCGGCCTAAGCGACTCAACTTCAAGCTCTTCAACATTCAGGTCAAAGAGGTTACGGACAACAATGGAGTCAAGACCATCGCCAATAACCTTACCAGCACGGTCCAGGTCTTCACGGACTCAGACTATCAGCTCCCGTACGTGCTCGGGTCGGCTCACGAGGGCTGCCTCCCGCCGTTCCCAGCGGACGTTTTCATGATTCCTCAGTACGGGTATCTGACGCTTAATGATGGAAGCCAGGCCGTGGGTCGTTCGTCCTTTTACTGCCTGGAATATTTCCCGTCGCAAATGCTAAGAACGGGTAACAACTTCCAGTTCAGCTACGAGTTTGAGAACGTACCTTTCCATAGCAGCTACGCTCACAGCCAAAGCCTGGACCGACTAATGAATCCACTCATCGAtCAgTAtcTGTAtTActTgagtAAGGCGGAGATTGGTCATGATTCTCCGCATAAGTCTGGTCAGAATCAGCAGACGtTgAAgTTttcgGTaGCtGGtCCtAGcAAcATGGCTGTCCAGGGAAGAAACTACATACCTGGACCCAGCTACCGACAACAACGTGTCTCAACCACTGTGACTCAAAACAACAACAGCGAATTTGCTTGGCCTGGAGCTTCTTCTTGGGCTCTCAATGGACGTAATAGCTTGATGAATCCTGGACCTGCTATGGCCAGCCACAAAGAAGGAGAGGACCGTTTCTTTCCTTTGTCTGGATCTTTAATTTTTGGCAAACAAGGAACTGGAAGAGACAACGTGGATGCGGACAAAGTCATGATAACCAACGAAGAAGAAATTAAAACTACTAACCCGGTAGCAACGGAGTCCTATGGACAAGtggccacaaaccaccagagtGCCCAAGCACAGGCGCAGaccggctgggttcaaaaccaAGGAATACTTCCGGGTATGGTTTGGCAGGACAGAGATGTGTACCTGCAAGGACCCATTTGGGCCAAAATTCCTCACACGGACGGCAACTTTCACCCTTCTCCGCTGATGGGAGGGTTTGGAATGAAGCACCCGCCTCCTCAGATCCTCATCAAAAACACACCTGTACCTGCGGATCCTCCAACGGCCTTCAACAAGGACAAGCTGAACTCTTTAATCACCCAGTATTCTACTGGCCAAGTCAGCGTGGAGATCGAGTGGGAGCTGCAGAAGGAAAACAGCAAGCGCTGGAACCCGGAGATCCAGTACACTTCCAACTATTACAAGTCTAATAATGTTGAATTTGCTGTTAATACTGAAGGTGTATATAGTGAACCCCGCCCCATTGGCACgcGgTAttTAACgaGgAActTa
TTM-005 74 ATGGCTGCCGATGGTTATCTTCCAGattggcTCGAGGACAACCTTAGTGAAGGAATTCGCGAGTGGTGGGCTTTGAAACCTGGAGCCCCTCAACCCAAGGCAAATCAACAACATCAAGACAACGCTCGAGGTCTTGTGCTTCCGGGTTACAAATACCTTGGACCCGGCAACGGACTCGACAAGGGGGAGCCGGTCAACGCAGCAGACGCGGCGGCCCTCGAGCACGACAAGGCCTACGACCAGCAGCTCAAGGCCGGAGACAACCCGTACCTCAAGTACAACCACGCCGACGCCGAGTTCCAGGAGCGGCTCAAAGAAGATACGTCTTTTGGGGGCAACCTCGGGCGAGCAGTCTTCCAGGCCAAAAAGAGGCTTCTTGAACCTCTTGGTCTGGTTGAGGAAGCGGCTAAGACGGCTCCTGGAAAGAAGAGGCCTGTAGAGCAGTCTCCTCAGGAACCGGACTCCTCCGCGGGTATTGGCAAATCGGGTGCACAGCCCGCTAAAAAGAGACTCAATTTCGGTCAGACTGGCGACACAGAGTCAGTCCCAGACCCTCAACCAATCGGAGAACCTCCCGCAGCCCCCTCAGGTGTGGGATCTCTTACAATGGCTTCAGGTGGTGGCGCACCAGTGGCAGACAATAACGAAGGTGCCGATGGAGTGGGTAGTTCCTCGGGAAATTGGCATTGCGATTCCCAATGGCTGGGGGACAGAGTCATCACCACCAGCACCCGAACCTGGGCCCTGCCCACCTACAACAATCACCTCTACAAGCAAATCTCCAACAGCACATCTGGAGGATCTTCAAATGACAACGCCTACTTCGGCTACAGCACCCCCTGGGGGTATTTTGACTTCAACAGATTCCACTGCCACTTCTCACCACGTGACTGGCAGCGACTCATCAACAACAACTGGGGATTCCGGCCTAAGCGACTCAACTTCAAGCTCTTCAACATTCAGGTCAAAGAGGTTACGGACAACAATGGAGTCAAGACCATCGCCAATAACCTTACCAGCACGGTCCAGGTCTTCACGGACTCAGACTATCAGCTCCCGTACGTGCTCGGGTCGGCTCACGAGGGCTGCCTCCCGCCGTTCCCAGCGGACGTTTTCATGATTCCTCAGTACGGGTATCTGACGCTTAATGATGGAAGCCAGGCCGTGGGTCGTTCGTCCTTTTACTGCCTGGAATATTTCCCGTCGCAAATGCTAAGAACGGGTAACAACTTCCAGTTCAGCTACGAGTTTGAGAACGTACCTTTCCATAGCAGCTACGCTCACAGCCAAAGCCTGGACCGACTAATGAATCCACTCATCGAtCAgTAtcTGTAtTActTgagtAAGACGATTATTGGTTCTGGTTCTCCGCATTCTAAGGCGCAGAATCGTCATACGtTgAAgTTttcgGTaGCtGGtCCtAGCAACATGGCTGTCCAGGGAAGAAACTACATACCTGGACCCAGCTACCGACAACAACGTGTCTCAACCACTGTGACTCAAAACAACAACAGCGAATTTGCTTGGCCTGGAGCTTCTTCTTGGGCTCTCAATGGACGTAATAGCTTGATGAATCCTGGACCTGCTATGGCCAGCCACAAAGAAGGAGAGGACCGTTTCTTTCCTTTGTCTGGATCTTTAATTTTTGGCAAACAAGGAACTGGAAGAGACAACGTGGATGCGGACAAAGTCATGATAACCAACGAAGAAGAAATTAAAACTACTAACCCGGTAGCAACGGAGTCCTATGGACAAGtggccacaaaccaccagagtGCCCAAGCACAGGCGCAGaccggctgggttcaaaaccaAGGAATACTTCCGGGTATGGTTTGGCAGGACAGAGATGTGTACCTGCAAGGACCCATTTGGGCCAAAATTCCTCACACGGACGGCAACTTTCACCCTTCTCCGCTGATGGGAGGGTTTGGAATGAAGCACCCGCCTCCTCAGATCCTCATCAAAAACACACCTGTACCTGCGGATCCTCCAACGGCCTTCAACAAGGACAAGCTGAACTCTTTCATCACCCAGTATTCTACTGGCCAAGTCAGCGTGGAGATCGAGTGGGAGCTGCAGAAGGAAAACAGCAAGCGCTGGAACCCGGAGATCCAGTACACTTCCAACTATTACAAGTCTAATAATGTTGAATTTGCTGTTAATACTGAAGGTGTATATAGTGAACCCCGCCCCATTGGCACgcGgTAttTAACgaGgAActTa
TTM-006 75 ATGGCTGCCGATGGTTATCTTCCAGattggcTCGAGGACAACCTTAGTGAAGGAATTCGCGAGTGGTGGGCTTTGAAACCTGGAGCCCCTCAACCCAAGGCAAATCAACAACATCAAGACAACGCTCGAGGTCTTGTGCTTCCGGGTTACAAATACCTTGGACCCGGCAACGGACTCGACAAGGGGGAGCCGGTCAACGCAGCAGACGCGGCGGCCCTCGAGCACGACAAGGCCTACGACCAGCAGCTCAAGGCCGGAGACAACCCGTACCTCAAGTACAACCACGCCGACGCCGAGTTCCAGGAGCGGCTCAAAGAAGATACGTCTTTTGGGGGCAACCTCGGGCGAGCAGTCTTCCAGGCCAAAAAGAGGCTTCTTGAACCTCTTGGTCTGGTTGAGGAAGCGGCTAAGACGGCTCCTGGAAAGAAGAGGCCTGTAGAGCAGTCTCCTCAGGAACCGGACTCCTCCGCGGGTATTGGCAAATCGGGTGCACAGCCCGCTAAAAAGAGACTCAATTTCGGTCAGACTGGCGACACAGAGTCAGTCCCAGACCCTCAACCAATCGGAGAACCTCCCGCAGCCCCCTCAGGTGTGGGATCTCTTACAATGGCTTCAGGTGGTGGCGCACCAGTGGCAGACAATAACGAAGGTGCCGATGGAGTGGGTAGTTCCTCGGGAAATTGGCATTGCGATTCCCAATGGCTGGGGGACAGAGTCATCACCACCAGCACCCGAACCTGGGCCCTGCCCACCTACAACAATCACCTCTACAAGCAAATCTCCAACAGCACATCTGGAGGATCTTCAAATGACAACGCCTACTTCGGCTACAGCACCCCCTGGGGGTATTTTGACTTCAACAGATTCCACTGCCACTTCTCACCACGTGACTGGCAGCGACTCATCAACAACAACTGGGGATTCCGGCCTAAGCGACTCAACTTCAAGCTCTTCAACATTCAGGTCAAAGAGGTTACGGACAACAATGGAGTCAAGACCATCGCCAATAACCTTACCAGCACGGTCCAGGTCTTCACGGACTCAGACTATCAGCTCCCGTACGTGCTCGGGTCGGCTCACGAGGGCTGCCTCCCGCCGTTCCCAGCGGACGTTTTCATGATTCCTCAGTACGGGTATCTGACGCTTAATGATGGAAGCCAGGCCGTGGGTCGTTCGTCCTTTTACTGCCTGGAATATTTCCCGTCGCAAATGCTAAGAACGGGTAACAACTTCCAGTTCAGCTACGAGTTTGAGAACGTACCTTTCCATAGCAGCTACGCTCACAGCCAAAGCCTGGACCGACTAATGAATCCACTCATCGAtCAgTAtcTGTAtTActTgagtAAGACGGAGAAGATGTCTGGTTCTCCGCATTCTAAGGCGCAGAATCAGCAGACGtTgAAgTTttcgGTaGCtGGtCCtAGCAACATGGCTGTCCAGGGAAGAAACTACATACCTGGACCCAGCTACCGACAACAACGTGTCTCAACCACTGTGACTCAAAACAACAACAGCGAATTTGCTTGGCCTGGAGCTTCTTCTTGGGCTCTCAATGGACGTAATAGCTTGATGAATCCTGGACCTGCTATGGCCAGCCACAAAGAAGGAGAGGACCGTTTCTTTCCTTTGTCTGGATCTTTAATTTTTGGCAAACAAGGAACTGGAAGAGACAACGTGGATGCGGACAAAGTCATGATAACCAACGAAGAAGAAATTAAAACTACTAACCCGGTAGCAACGGAGTCCTATGGACAAGtggccacaaaccaccagagtGCCCAAGCACAGGCGCAGaccggctgggttcaaaaccaAGGAATACTTCCGGGTATGGTTTGGCAGGACAGAGATGTGTACCTGCAAGGACCCATTTGGGCCAAAATTCCTCACACGGACGGCAACTTTCACCCTTCTCCGCTGATGGGAGGGTTTGGAATGAAGCACCCGCCTCCTCAGATCCTCATCAAAAACACACCTGTACCTGCGGATCCTCCAACGGCCTTCAACAAGGACAAGCTGAACTCTTTCATCACCCAGTATTCTACTGGCCAAGTCAGCGTGGAGATCGAGTGGGAGCTGCAGAAGGAAAACAGCAAGCGCTGGAACCCGGAGATCCAGTACACTTCCAACTATTACAAGTCTAATAATGTTGAATTTGCTGTTAATACTGAAGGTGTATATAGTGAACCCCGCCCCATTGGCACgcGgTAttTAACgaGgAActTa
TTM-007 76 ATGGCTGCCGATGGTTATCTTCCAGattggcTCGAGGACAACCTTAGTGAAGGAATTCGCGAGTGGTGGGCTTTGAAACCTGGAGCCCCTCAACCCAAGGCAAATCAACAACATCAAGACAACGCTCGAGGTCTTGTGCTTCCGGGTTACAAATACCTTGGACCCGGCAACGGACTCGACAAGGGGGAGCCGGTCAACGCAGCAGACGCGGCGGCCCTCGAGCACGACAAGGCCTACGACCAGCAGCTCAAGGCCGGAGACAACCCGTACCTCAAGTACAACCACGCCGACGCCGAGTTCCAGGAGCGGCTCAAAGAAGATACGTCTTTTGGGGGCAACCTCGGGCGAGCAGTCTTCCAGGCCAAAAAGAGGCTTCTTGAACCTCTTGGTCTGGTTGAGGAAGCGGCTAAGACGGCTCCTGGAAAGAAGAGGCCTGTAGAGCAGTCTCCTCAGGAACCGGACTCCTCCGCGGGTATTGGCAAATCGGGTGCACAGCCCGCTAAAAAGAGACTCAATTTCGGTCAGACTGGCGACACAGAGTCAGTCCCAGACCCTCAACCAATCGGAGAACCTCCCGCAGCCCCCTCAGGTGTGGGATCTCTTACAATGGCTTCAGGTGGTGGCGCACCAGTGGCAGACAATAACGAAGGTGCCGATGGAGTGGGTAGTTCCTCGGGAAATTGGCATTGCGATTCCCAATGGCTGGGGGACAGAGTCATCACCACCAGCACCCGAACCTGGGCCCTGCCCACCTACAACAATCACCTCTACAAGCAAATCTCCAACAGCACATCTGGAGGATCTTCAAATGACAACGCCTACTTCGGCTACAGCACCCCCTGGGGGTATTTTGACTTCAACAGATTCCACTGCCACTTCTCACCACGTGACTGGCAGCGACTCATCAACAACAACTGGGGATTCCGGCCTAAGCGACTCAACTTCAAGCTCTTCAACATTCAGGTCAAAGAGGTTACGGACAACAATGGAGTCAAGACCATCGCCAATAACCTTACCAGCACGGTCCAGGTCTTCACGGACTCAGACTATCAGCTCCCGTACGTGCTCGGGTCGGCTCACGAGGGCTGCCTCCCGCCGTTCCCAGCGGACGTTTTCATGATTCCTCAGTACGGGTATCTGACGCTTAATGATGGAAGCCAGGCCGTGGGTCGTTCGTCCTTTTACTGCCTGGAATATTTCCCGTCGCAAATGCTAAGAACGGGTAACAACTTCCAGTTCAGCTACGAGTTTGAGAACGTACCTTTCCATAGCAGCTACGCTCACAGCCAAAGCCTGGACCGACTAATGAATCCACTCATCGAtCAgTAtcTGTAtTActTgagtAAGGAGATTAATGGTCGTGGTTCTCCGCATTCTAAGGCGCAGAATCAGCAGACGtTgAAgTTttcgGTaGCtGGtCCtAGCAACATGGCTGTCCAGGGAAGAAACTACATACCTGGACCCAGCTACCGACAACAACGTGTCTCAACCACTGTGACTCAAAACAACAACAGCGAATTTGCTTGGCCTGGAGCTTCTTCTTGGGCTCTCAATGGACGTAATAGCTTGATGAATCCTGGACCTGCTATGGCCAGCCACAAAGAAGGAGAGGACCGTTTCTTTCCTTTGTCTGGATCTTTAATTTTTGGCAAACAAGGAACTGGAAGAGACAACGTGGATGCGGACAAAGTCATGATAACCAACGAAGAAGAAATTAAAACTACTAACCCGGTAGCAACGGAGTCCTATGGACAAGtggccacaaaccaccagagtGCCCAAGCACAGGCGCAGaccggctgggttcaaaaccaAGGAATACTTCCGGGTATGGTTTGGCAGGACAGAGATGTGTACCTGCAAGGACCCATTTGGGCCAAAATTCCTCACACGGACGGCAACTTTCACCCTTCTCCGCTGATGGGAGGGTTTGGAATGAAGCACCCGCCTCCTCAGATCCTCATCAAAAACACACCTGTACCTGCGGATCCTCCAACGGCCTTCAACAAGGACAAGCTGAACTCTTTCATCACCCAGTATTCTACTGGCCAAGTCAGCGTGGAGATCGAGTGGGAGCTGCAGAAGGAAAACAGCAAGCGCTGGAACCCGGAGATCCAGTACACTTCCAACTATTACAAGTCTAATAATGTTGAATTTGCTGTTAATACTGAAGGTGTATATAGTGAACCCCGCCCCATTGGCACgcGgTAttTAACgaGgAActTa
TTM-008 77 ATGGCTGCCGATGGTTATCTTCCAGattggcTCGAGGACAACCTTAGTGAAGGAATTCGCGAGTGGTGGGCTTTGAAACCTGGAGCCCCTCAACCCAAGGCAAATCAACAACATCAAGACAACGCTCGAGGTCTTGTGCTTCCGGGTTACAAATACCTTGGACCCGGCAACGGACTCGACAAGGGGGAGCCGGTCAACGCAGCAGACGCGGCGGCCCTCGAGCACGACAAGGCCTACGACCAGCAGCTCAAGGCCGGAGACAACCCGTACCTCAAGTACAACCACGCCGACGCCGAGTTCCAGGAGCGGCTCAAAGAAGATACGTCTTTTGGGGGCAACCTCGGGCGAGCAGTCTTCCAGGCCAAAAAGAGGCTTCTTGAACCTCTTGGTCTGGTTGAGGAAGCGGCTAAGACGGCTCCTGGAAAGAAGAGGCCTGTAGAGCAGTCTCCTCAGGAACCGGACTCCTCCGCGGGTATTGGCAAATCGGGTGCACAGCCCGCTAAAAAGAGACTCAATTTCGGTCAGACTGGCGACACAGAGTCAGTCCCAGACCCTCAACCAATCGGAGAACCTCCCGCAGCCCCCTCAGGTGTGGGATCTCTTACAATGGCTTCAGGTGGTGGCGCACCAGTGGCAGACAATAACGAAGGTGCCGATGGAGTGGGTAGTTCCTCGGGAAATTGGCATTGCGATTCCCAATGGCTGGGGGACAGAGTCATCACCACCAGCACCCGAACCTGGGCCCTGCCCACCTACAACAATCACCTCTACAAGCAAATCTCCAACAGCACATCTGGAGGATCTTCAAATGACAACGCCTACTTCGGCTACAGCACCCCCTGGGGGTATTTTGACTTCAACAGATTCCACTGCCACTTCTCACCACGTGACTGGCAGCGACTCATCAACAACAACTGGGGATTCCGGCCTAAGCGACTCAACTTCAAGCTCTTCAACATTCAGGTCAAAGAGGTTACGGACAACAATGGAGTCAAGACCATCGCCAATAACCTTACCAGCACGGTCCAGGTCTTCACGGACTCAGACTATCAGCTCCCGTACGTGCTCGGGTCGGCTCACGAGGGCTGCCTCCCGCCGTTCCCAGCGGACGTTTTCATGATTCCTCAGTACGGGTATCTGACGCTTAATGATGGAAGCCAGGCCGTGGGTCGTTCGTCCTTTTACTGCCTGGAATATTTCCCGTCGCAAATGCTAAGAACGGGTAACAACTTCCAGTTCAGCTACGAGTTTGAGAACGTACCTTTCCATAGCAGCTACGCTCACAGCCAAAGCCTGGACCGACTAATGAATCCACTCATCGAtCAgTAtcTGTAtTActTgagtAAGACGTTTAATGGTTCTGGTTCTCCGCATTCTAAGGCGCCGAATCTGCAGACGtTgAAgTTttcgGTaGCtGGtCCtAGCAACATGGCTGTCCAGGGAAGAAACTACATACCTGGACCCAGCTACCGACAACAACGTGTCTCAACCACTGTGACTCAAAACAACAACAGCGAATTTGCTTGGCCTGGAGCTTCTTCTTGGGCTCTCAATGGACGTAATAGCTTGATGAATCCTGGACCTGCTATGGCCAGCCACAAAGAAGGAGAGGACCGTTTCTTTCCTTTGTCTGGATCTTTAATTTTTGGCAAACAAGGAACTGGAAGAGACAACGTGGATGCGGACAAAGTCATGATAACCAACGAAGAAGAAATTAAAACTACTAACCCGGTAGCAACGGAGTCCTATGGACAAGtggccacaaaccaccagagtGCCCAAGCACAGGCGCAGaccggctgggttcaaaaccaAGGAATACTTCCGGGTATGGTTTGGCAGGACAGAGATGTGTACCTGCAAGGACCCATTTGGGCCAAAATTCCTCACACGGACGGCAACTTTCACCCTTCTCCGCTGATGGGAGGGTTTGGAATGAAGCACCCGCCTCCTCAGATCCTCATCAAAAACACACCTGTACCTGCGGATCCTCCAACGGCCTTCAACAAGGACAAGCTGAACTCTTTCATCACCCAGTATTCTACTGGCCAAGTCAGCGTGGAGATCGAGTGGGAGCTGCAGAAGGAAAACAGCAAGCGCTGGAACCCGGAGATCCAGTACACTTCCAACTATTACAAGTCTAATAATGTTGAATTTGCTGTTAATACTGAAGGTGTATATAGTGAACCCCGCCCCATTGGCACgcGgTAttTAACgaGgAActTa
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TTM-018 27 ATGGCTGCCGATGGTTATCTTCCAGattggcTCGAGGACAACCTTAGTGAAGGAATTCGCGAGTGGTGGGCTTTGAAACCTGGAGCCCCTCAACCCAAGGCAAATCAACAACATCAAGACAACGCTCGAGGTCTTGTGCTTCCGGGTTACAAATACCTTGGACCCGGCAACGGACTCGACAAGGGGGAGCCGGTCAACGCAGCAGACGCGGCGGCCCTCGAGCACGACAAGGCCTACGACCAGCAGCTCAAGGCCGGAGACAACCCGTACCTCAAGTACAACCACGCCGACGCCGAGTTCCAGGAGCGGCTCAAAGAAGATACGTCTTTTGGGGGCAACCTCGGGCGAGCAGTCTTCCAGGCCAAAAAGAGGCTTCTTGAACCTCTTGGTCTGGTTGAGGAAGCGGCTAAGACGGCTCCTGGAAAGAAGAGGCCTGTAGAGCAGTCTCCTCAGGAACCGGACTCCTCCGCGGGTATTGGCAAATCGGGTGCACAGCCCGCTAAAAAGAGACTCAATTTCGGTCAGACTGGCGACACAGAGTCAGTCCCAGACCCTCAACCAATCGGAGAACCTCCCGCAGCCCCCTCAGGTGTGGGATCTCTTACAATGGCTTCAGGTGGTGGCGCACCAGTGGCAGACAATAACGAAGGTGCCGATGGAGTGGGTAGTTCCTCGGGAAATTGGCATTGCGATTCCCAATGGCTGGGGGACAGAGTCATCACCACCAGCACCCGAACCTGGGCCCTGCCCACCTACAACAATCACCTCTACAAGCAAATCTCCAACAGCACATCTGGAGGATCTTCAAATGACAACGCCTACTTCGGCTACAGCACCCCCTGGGGGTATTTTGACTTCAACAGATTCCACTGCCACTTCTCACCACGTGACTGGCAGCGACTCATCAACAACAACTGGGGATTCCGGCCTAAGCGACTCAACTTCAAGCTCTTCAACATTCAGGTCAAAGAGGTTACGGACAACAATGGAGTCAAGACCATCGCCAATAACCTTACCAGCACGGTCCAGGTCTTCACGGACTCAGACTATCAGCTCCCGTACGTGCTCGGGTCGGCTCACGAGGGCTGCCTCCCGCCGTTCCCAGCGGACGTTTTCATGATTCCTCAGTACGGGTATCTGACGCTTAATGATGGAAGCCAGGCCGTGGGTCGTTCGTCCTTTTACTGCCTGGAATATTTCCCGTCGCAAATGCTAAGAACGGGTAACAACTTCCAGTTCAGCTACGAGTTTGAGAACGTACCTTTCCATAGCAGCTACGCTCACAGCCAAAGCCTGGACCGACTAATGAATCCACTCATCGAtCAgTAtcTGTAtTActTgagtAAGACGATTAATGGTCATGATTCTCCGCATTCTAAGGCGCAGAATCTGCAGACGtTgAAgTTttcgGTaGCtGGtCCtAGCAACATGGCTGTCCAGGGAAGAAACTACATACCTGGACCCAGCTACCGACAACAACGTGTCTCAACCACTGTGACTCAAAACAACAACAGCGAATTTGCTTGGCCTGGAGCTTCTTCTTGGGCTCTCAATGGACGTAATAGCTTGATGAATCCTGGACCTGCTATGGCCAGCCACAAAGAAGGAGAGGACCGTTTCTTTCCTTTGTCTGGATCTTTAATTTTTGGCAAACAAGGAACTGGAAGAGACAACGTGGATGCGGACAAAGTCATGATAACCAACGAAGAAGAAATTAAAACTACTAACCCGGTAGCAACGGAGTCCTATGGACAAGtggccacaaaccaccagagtGCCCAAGCACAGGCGCAGaccggctgggttcaaaaccaAGGAATACTTCCGGGTATGGTTTGGCAGGACAGAGATGTGTACCTGCAAGGACCCATTTGGGCCAAAATTCCTCACACGGACGGCAACTTTCACCCTTCTCCGCTGATGGGAGGGTTTGGAATGAAGCACCCGCCTCCTCAGATCCTCATCAAAAACACACCTGTACCTGCGGATCCTCCAACGGCCTTCAACAAGGACAAGCTGAACTCTTTCATCACCCAGTATTCTACTGGCCAAGTCAGCGTGGAGATCGAGTGGGAGCTGCAGAAGGAAAACAGCAAGCGCTGGAACCCGGAGATCCAGTACACTTCCAACTATTACAAGTCTAATAATGTTGAATTTGCTGTTAATACTGAAGGTGTATATAGTGAACCCCGCCCCATTGGCACgcGgTAttTAACgaGgAActTa
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TTM-020 29 ATGGCTGCCGATGGTTATCTTCCAGattggcTCGAGGACAACCTTAGTGAAGGAATTCGCGAGTGGTGGGCTTTGAAACCTGGAGCCCCTCAACCCAAGGCAAATCAACAACATCAAGACAACGCTCGAGGTCTTGTGCTTCCGGGTTACAAATACCTTGGACCCGGCAACGGACTCGACAAGGGGGAGCCGGTCAACGCAGCAGACGCGGCGGCCCTCGAGCACGACAAGGCCTACGACCAGCAGCTCAAGGCCGGAGACAACCCGTACCTCAAGTACAACCACGCCGACGCCGAGTTCCAGGAGCGGCTCAAAGAAGATACGTCTTTTGGGGGCAACCTCGGGCGAGCAGTCTTCCAGGCCAAAAAGAGGCTTCTTGAACCTCTTGGTCTGGTTGAGGAAGCGGCTAAGACGGCTCCTGGAAAGAAGAGGCCTGTAGAGCAGTCTCCTCAGGAACCGGACTCCTCCGCGGGTATTGGCAAATCGGGTGCACAGCCCGCTAAAAAGAGACTCAATTTCGGTCAGACTGGCGACACAGAGTCAGTCCCAGACCCTCAACCAATCGGAGAACCTCCCGCAGCCCCCTCAGGTGTGGGATCTCTTACAATGGCTTCAGGTGGTGGCGCACCAGTGGCAGACAATAACGAAGGTGCCGATGGAGTGGGTAGTTCCTCGGGAAATTGGCATTGCGATTCCCAATGGCTGGGGGACAGAGTCATCACCACCAGCACCCGAACCTGGGCCCTGCCCACCTACAACAATCACCTCTACAAGCAAATCTCCAACAGCACATCTGGAGGATCTTCAAATGACAACGCCTACTTCGGCTACAGCACCCCCTGGGGGTATTTTGACTTCAACAGATTCCACTGCCACTTCTCACCACGTGACTGGCAGCGACTCATCAACAACAACTGGGGATTCCGGCCTAAGCGACTCAACTTCAAGCTCTTCAACATTCAGGTCAAAGAGGTTACGGACAACAATGGAGTCAAGACCATCGCCAATAACCTTACCAGCACGGTCCAGGTCTTCACGGACTCAGACTATCAGCTCCCGTACGTGCTCGGGTCGGCTCACGAGGGCTGCCTCCCGCCGTTCCCAGCGGACGTTTTCATGATTCCTCAGTACGGGTATCTGACGCTTAATGATGGAAGCCAGGCCGTGGGTCGTTCGTCCTTTTACTGCCTGGAATATTTCCCGTCGCAAATGCTAAGAACGGGTAACAACTTCCAGTTCAGCTACGAGTTTGAGAACGTACCTTTCCATAGCAGCTACGCTCACAGCCAAAGCCTGGACCGACTAATGAATCCACTCATCGAtCAgTAtcTGTAtTActTgagtAAGACGATTAATGGTCATGATTCTCCGCATTCTAAGGCGCTGAATCAGCAGACGtTgAAgTTttcgGTaGCtGGtCCtAGCAACATGGCTGTCCAGGGAAGAAACTACATACCTGGACCCAGCTACCGACAACAACGTGTCTCAACCACTGTGACTCAAAACAACAACAGCGAATTTGCTTGGCCTGGAGCTTCTTCTTGGGCTCTCAATGGACGTAATAGCTTGATGAATCCTGGACCTGCTATGGCCAGCCACAAAGAAGGAGAGGACCGTTTCTTTCCTTTGTCTGGATCTTTAATTTTTGGCAAACAAGGAACTGGAAGAGACAACGTGGATGCGGACAAAGTCATGATAACCAACGAAGAAGAAATTAAAACTACTAACCCGGTAGCAACGGAGTCCTATGGACAAGtggccacaaaccaccagagtGCCCAAGCACAGGCGCAGaccggctgggttcaaaaccaAGGAATACTTCCGGGTATGGTTTGGCAGGACAGAGATGTGTACCTGCAAGGACCCATTTGGGCCAAAATTCCTCACACGGACGGCAACTTTCACCCTTCTCCGCTGATGGGAGGGTTTGGAATGAAGCACCCGCCTCCTCAGATCCTCATCAAAAACACACCTGTACCTGCGGATCCTCCAACGGCCTTCAACAAGGACAAGCTGAACTCTTTCATCACCCAGTATTCTACTGGCCAAGTCAGCGTGGAGATCGAGTGGGAGCTGCAGAAGGAAAACAGCAAGCGCTGGAACCCGGAGATCCAGTACACTTCCAACTATTACAAGTCTAATAATGTTGAATTTGCTGTTAATACTGAAGGTGTATATAGTGAACCCCGCCCCATTGGCACgcGgTAttTAACgaGgAActTa
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TTM-025 34 ATGGCTGCCGATGGTTATCTTCCAGattggcTCGAGGACAACCTTAGTGAAGGAATTCGCGAGTGGTGGGCTTTGAAACCTGGAGCCCCTCAACCCAAGGCAAATCAACAACATCAAGACAACGCTCGAGGTCTTGTGCTTCCGGGTTACAAATACCTTGGACCCGGCAACGGACTCGACAAGGGGGAGCCGGTCAACGCAGCAGACGCGGCGGCCCTCGAGCACGACAAGGCCTACGACCAGCAGCTCAAGGCCGGAGACAACCCGTACCTCAAGTACAACCACGCCGACGCCGAGTTCCAGGAGCGGCTCAAAGAAGATACGTCTTTTGGGGGCAACCTCGGGCGAGCAGTCTTCCAGGCCAAAAAGAGGCTTCTTGAACCTCTTGGTCTGGTTGAGGAAGCGGCTAAGACGGCTCCTGGAAAGAAGAGGCCTGTAGAGCAGTCTCCTCAGGAACCGGACTCCTCCGCGGGTATTGGCAAATCGGGTGCACAGCCCGCTAAAAAGAGACTCAATTTCGGTCAGACTGGCGACACAGAGTCAGTCCCAGACCCTCAACCAATCGGAGAACCTCCCGCAGCCCCCTCAGGTGTGGGATCTCTTACAATGGCTTCAGGTGGTGGCGCACCAGTGGCAGACAATAACGAAGGTGCCGATGGAGTGGGTAGTTCCTCGGGAAATTGGCATTGCGATTCCCAATGGCTGGGGGACAGAGTCATCACCACCAGCACCCGAACCTGGGCCCTGCCCACCTACAACAATCACCTCTACAAGCAAATCTCCAACAGCACATCTGGAGGATCTTCAAATGACAACGCCTACTTCGGCTACAGCACCCCCTGGGGGTATTTTGACTTCAACAGATTCCACTGCCACTTCTCACCACGTGACTGGCAGCGACTCATCAACAACAACTGGGGATTCCGGCCTAAGCGACTCAACTTCAAGCTCTTCAACATTCAGGTCAAAGAGGTTACGGACAACAATGGAGTCAAGACCATCGCCAATAACCTTACCAGCACGGTCCAGGTCTTCACGGACTCAGACTATCAGCTCCCGTACGTGCTCGGGTCGGCTCACGAGGGCTGCCTCCCGCCGTTCCCAGCGGACGTTTTCATGATTCCTCAGTACGGGTATCTGACGCTTAATGATGGAAGCCAGGCCGTGGGTCGTTCGTCCTTTTACTGCCTGGAATATTTCCCGTCGCAAATGCTAAGAACGGGTAACAACTTCCAGTTCAGCTACGAGTTTGAGAACGTACCTTTCCATAGCAGCTACGCTCACAGCCAAAGCCTGGACCGACTAATGAATCCACTCATCGAtCAgTAtcTGTAtTActTgagtAAGACGATTAATGGTTCTGGTTCTCCGCATTCTCTGCCGTGGAATCAGCAGACGtTgAAgTTttcgGTaGCtGGtCCtAGCAACATGGCTGTCCAGGGAAGAAACTACATACCTGGACCCAGCTACCGACAACAACGTGTCTCAACCACTGTGACTCAAAACAACAACAGCGAATTTGCTTGGCCTGGAGCTTCTTCTTGGGCTCTCAATGGACGTAATAGCTTGATGAATCCTGGACCTGCTATGGCCAGCCACAAAGAAGGAGAGGACCGTTTCTTTCCTTTGTCTGGATCTTTAATTTTTGGCAAACAAGGAACTGGAAGAGACAACGTGGATGCGGACAAAGTCATGATAACCAACGAAGAAGAAATTAAAACTACTAACCCGGTAGCAACGGAGTCCTATGGACAAGtggccacaaaccaccagagtGCCCAAGCACAGGCGCAGaccggctgggttcaaaaccaAGGAATACTTCCGGGTATGGTTTGGCAGGACAGAGATGTGTACCTGCAAGGACCCATTTGGGCCAAAATTCCTCACACGGACGGCAACTTTCACCCTTCTCCGCTGATGGGAGGGTTTGGAATGAAGCACCCGCCTCCTCAGATCCTCATCAAAAACACACCTGTACCTGCGGATCCTCCAACGGCCTTCAACAAGGACAAGCTGAACTCTTTCATCACCCAGTATTCTACTGGCCAAGTCAGCGTGGAGATCGAGTGGGAGCTGCAGAAGGAAAACAGCAAGCGCTGGAACCCGGAGATCCAGTACACTTCCAACTATTACAAGTCTAATAATGTTGAATTTGCTGTTAATACTGAAGGTGTATATAGTGAACCCCGCCCCATTGGCACgcGgTAttTAACgaGgAActTa
TTM-026 35 ATGGCTGCCGATGGTTATCTTCCAGattggcTCGAGGACAACCTTAGTGAAGGAATTCGCGAGTGGTGGGCTTTGAAACCTGGAGCCCCTCAACCCAAGGCAAATCAACAACATCAAGACAACGCTCGAGGTCTTGTGCTTCCGGGTTACAAATACCTTGGACCCGGCAACGGACTCGACAAGGGGGAGCCGGTCAACGCAGCAGACGCGGCGGCCCTCGAGCACGACAAGGCCTACGACCAGCAGCTCAAGGCCGGAGACAACCCGTACCTCAAGTACAACCACGCCGACGCCGAGTTCCAGGAGCGGCTCAAAGAAGATACGTCTTTTGGGGGCAACCTCGGGCGAGCAGTCTTCCAGGCCAAAAAGAGGCTTCTTGAACCTCTTGGTCTGGTTGAGGAAGCGGCTAAGACGGCTCCTGGAAAGAAGAGGCCTGTAGAGCAGTCTCCTCAGGAACCGGACTCCTCCGCGGGTATTGGCAAATCGGGTGCACAGCCCGCTAAAAAGAGACTCAATTTCGGTCAGACTGGCGACACAGAGTCAGTCCCAGACCCTCAACCAATCGGAGAACCTCCCGCAGCCCCCTCAGGTGTGGGATCTCTTACAATGGCTTCAGGTGGTGGCGCACCAGTGGCAGACAATAACGAAGGTGCCGATGGAGTGGGTAGTTCCTCGGGAAATTGGCATTGCGATTCCCAATGGCTGGGGGACAGAGTCATCACCACCAGCACCCGAACCTGGGCCCTGCCCACCTACAACAATCACCTCTACAAGCAAATCTCCAACAGCACATCTGGAGGATCTTCAAATGACAACGCCTACTTCGGCTACAGCACCCCCTGGGGGTATTTTGACTTCAACAGATTCCACTGCCACTTCTCACCACGTGACTGGCAGCGACTCATCAACAACAACTGGGGATTCCGGCCTAAGCGACTCAACTTCAAGCTCTTCAACATTCAGGTCAAAGAGGTTACGGACAACAATGGAGTCAAGACCATCGCCAATAACCTTACCAGCACGGTCCAGGTCTTCACGGACTCAGACTATCAGCTCCCGTACGTGCTCGGGTCGGCTCACGAGGGCTGCCTCCCGCCGTTCCCAGCGGACGTTTTCATGATTCCTCAGTACGGGTATCTGACGCTTAATGATGGAAGCCAGGCCGTGGGTCGTTCGTCCTTTTACTGCCTGGAATATTTCCCGTCGCAAATGCTAAGAACGGGTAACAACTTCCAGTTCAGCTACGAGTTTGAGAACGTACCTTTCCATAGCAGCTACGCTCACAGCCAAAGCCTGGACCGACTAATGAATCCACTCATCGAtCAgTAtcTGTAtTActTgagtAAGACGATTAATGGTCATGATTCTCCGCATTCTAAGGCGCAGAATCATCAGACGtTgAAgTTttcgGTaGCtGGtCCtAGCAACATGGCTGTCCAGGGAAGAAACTACATACCTGGACCCAGCTACCGACAACAACGTGTCTCAACCACTGTGACTCAAAACAACAACAGCGAATTTGCTTGGCCTGGAGCTTCTTCTTGGGCTCTCAATGGACGTAATAGCTTGATGAATCCTGGACCTGCTATGGCCAGCCACAAAGAAGGAGAGGACCGTTTCTTTCCTTTGTCTGGATCTTTAATTTTTGGCAAACAAGGAACTGGAAGAGACAACGTGGATGCGGACAAAGTCATGATAACCAACGAAGAAGAAATTAAAACTACTAACCCGGTAGCAACGGAGTCCTATGGACAAGtggccacaaaccaccagagtGCCCAAGCACAGGCGCAGaccggctgggttcaaaaccaAGGAATACTTCCGGGTATGGTTTGGCAGGACAGAGATGTGTACCTGCAAGGACCCATTTGGGCCAAAATTCCTCACACGGACGGCAACTTTCACCCTTCTCCGCTGATGGGAGGGTTTGGAATGAAGCACCCGCCTCCTCAGATCCTCATCAAAAACACACCTGTACCTGCGGATCCTCCAACGGCCTTCAACAAGGACAAGCTGAACTCTTTCATCACCCAGTATTCTACTGGCCAAGTCAGCGTGGAGATCGAGTGGGAGCTGCAGAAGGAAAACAGCAAGCGCTGGAACCCGGAGATCCAGTACACTTCCAACTATTACAAGTCTAATAATGTTGAATTTGCTGTTAATACTGAAGGTGTATATAGTGAACCCCGCCCCATTGGCACgcGgTAttTAACgaGgAActTa
TTM-027 9 ATGGCTGCCGATGGTTATCTTCCAGattggcTCGAGGACAACCTTAGTGAAGGAATTCGCGAGTGGTGGGCTTTGAAACCTGGAGCCCCTCAACCCAAGGCAAATCAACAACATCAAGACAACGCTCGAGGTCTTGTGCTTCCGGGTTACAAATACCTTGGACCCGGCAACGGACTCGACAAGGGGGAGCCGGTCAACGCAGCAGACGCGGCGGCCCTCGAGCACGACAAGGCCTACGACCAGCAGCTCAAGGCCGGAGACAACCCGTACCTCAAGTACAACCACGCCGACGCCGAGTTCCAGGAGCGGCTCAAAGAAGATACGTCTTTTGGGGGCAACCTCGGGCGAGCAGTCTTCCAGGCCAAAAAGAGGCTTCTTGAACCTCTTGGTCTGGTTGAGGAAGCGGCTAAGACGGCTCCTGGAAAGAAGAGGCCTGTAGAGCAGTCTCCTCAGGAACCGGACTCCTCCGCGGGTATTGGCAAATCGGGTGCACAGCCCGCTAAAAAGAGACTCAATTTCGGTCAGACTGGCGACACAGAGTCAGTCCCAGACCCTCAACCAATCGGAGAACCTCCCGCAGCCCCCTCAGGTGTGGGATCTCTTACAATGGCTTCAGGTGGTGGCGCACCAGTGGCAGACAATAACGAAGGTGCCGATGGAGTGGGTAGTTCCTCGGGAAATTGGCATTGCGATTCCCAATGGCTGGGGGACAGAGTCATCACCACCAGCACCCGAACCTGGGCCCTGCCCACCTACAACAATCACCTCTACAAGCAAATCTCCAACAGCACATCTGGAGGATCTTCAAATGACAACGCCTACTTCGGCTACAGCACCCCCTGGGGGTATTTTGACTTCAACAGATTCCACTGCCACTTCTCACCACGTGACTGGCAGCGACTCATCAACAACAACTGGGGATTCCGGCCTAAGCGACTCAACTTCAAGCTCTTCAACATTCAGGTCAAAGAGGTTACGGACAACAATGGAGTCAAGACCATCGCCAATAACCTTACCAGCACGGTCCAGGTCTTCACGGACTCAGACTATCAGCTCCCGTACGTGCTCGGGTCGGCTCACGAGGGCTGCCTCCCGCCGTTCCCAGCGGACGTTTTCATGATTCCTCAGTACGGGTATCTGACGCTTAATGATGGAAGCCAGGCCGTGGGTCGTTCGTCCTTTTACTGCCTGGAATATTTCCCGTCGCAAATGCTAAGAACGGGTAACAACTTCCAGTTCAGCTACGAGTTTGAGAACGTACCTTTCCATAGCAGCTACGCTCACAGCCAAAGCCTGGACCGACTAATGAATCCACTCATCGACCAATACTTGTACTATCTCTCtAAGACTGAGAATGTGAGCGGGAGCCCTCATAGCAAGGCTCAGAATCAGCAGACTCTAAAATTCAGTGTGGCCGGACCCAGCAACATGGCTGTCCAGGGAAGAAACTACATACCTGGACCCAGCTACCGACAACAACGTGTCTCAACCACTGTGACTCAAAACAACAACAGCGAATTTGCTTGGCCTGGAGCTTCTTCTTGGGCTCTCAATGGACGTAATAGCTTGATGAATCCTGGACCTGCTATGGCCAGCCACAAAGAAGGAGAGGACCGTTTCTTTCCTTTGTCTGGATCTTTAATTTTTGGCAAACAAGGAACTGGAAGAGACAACGTGGATGCGGACAAAGTCATGATAACCAACGAAGAAGAAATTAAAACTACTAACCCGGTAGCAACGGAGTCCTATGGACAAGtggccacaaaccaccagagtGCCCAAGCACAGGCGCAGaccggctgggttcaaaaccaAGGAATACTTCCGGGTATGGTTTGGCAGGACAGAGATGTGTACCTGCAAGGACCCATTTGGGCCAAAATTCCTCACACGGACGGCAACTTTCACCCTTCTCCGCTGATGGGAGGGTTTGGAATGAAGCACCCGCCTCCTCAGATCCTCATCAAAAACACACCTGTACCTGCGGATCCTCCAACGGCCTTCAACAAGGACAAGCTGAACTCTTTCATCACCCAGTATTCTACTGGCCAAGTCAGCGTGGAGATCGAGTGGGAGCTGCAGAAGGAAAACAGCAAGCGCTGGAACCCGGAGATCCAGTACACTTCCAACTATTACAAGTCTAATAATGTTGAATTTGCTGTTAATACTGAAGGTGTATATAGTGAACCCCGCCCCATTGGCACCAGATACCTGACTCGTAATCTG
在一些實施例中，編碼本文所述之AAV衣殼變異體之多核苷酸包含SEQ ID NO:983或984之核苷酸序列，或與其具有至少70% (例如，至少約80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%或99%)序列一致性之核苷酸序列。
在一些實施例中，編碼本文所述之AAV衣殼變異體之多核苷酸包含SEQ ID NO: 9、72、73、74、75、76、77、78、79、80、81或22-35中任一者之核苷酸序列，或與其具有至少70% (例如，至少約80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%或99%)序列一致性之核苷酸序列。
在一些實施例中，編碼本文所述之AAV衣殼變異體之多核苷酸包含SEQ ID NO: 983之核苷酸序列，或與其具有至少70% (例如，至少約80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%或99%)序列一致性之核苷酸序列。在一些實施例中，編碼本文所述之AAV衣殼變異體之核苷酸序列包含相對於SEQ ID NO: 983之核苷酸序列包含至少一個、兩個或三個修飾，例如取代(例如保守取代)、插入或缺失但不超過30個、20個或10個修飾，例如取代(例如保守取代)、插入或缺失之核苷酸序列。在一些實施例中，編碼本文所述之AAV衣殼變異體之核苷酸序列包含相對於SEQ ID NO: 983之核苷酸序列包含至少一個、兩個或三個但不超過30個、20個或10個不同核苷酸之核苷酸序列。在一些實施例中，編碼本文所述之AAV衣殼變異體之核酸序列係密碼子最佳化的。
在一些實施例中，編碼本文所述之AAV衣殼變異體之多核苷酸包含SEQ ID NO: 984之核苷酸序列，或與其具有至少70% (例如，至少約80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%或99%)序列一致性之核苷酸序列。在一些實施例中，編碼本文所述之AAV衣殼變異體之核苷酸序列包含相對於SEQ ID NO: 984之核苷酸序列包含至少一個、兩個或三個修飾，例如取代(例如保守取代)、插入或缺失但不超過30個、20個或10個修飾，例如取代(例如保守取代)、插入或缺失之核苷酸序列。在一些實施例中，編碼本文所述之AAV衣殼變異體之核苷酸序列包含相對於SEQ ID NO: 984之核苷酸序列包含至少一個、兩個或三個但不超過30個、20個或10個不同核苷酸之核苷酸序列。在一些實施例中，編碼本文所述之AAV衣殼變異體之核酸序列係密碼子最佳化的。
在一些實施例中，本文所述之AAV衣殼變異體包含SEQ ID NO: 69、70、71、4、5、6、7、8、36-59、981或982之胺基酸序列，或與其具有至少70% (例如，至少約80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%或99%)序列一致性之胺基酸序列。在一些實施例中，本文所述之AAV衣殼變異體包含相對於SEQ ID NO: 69、70、71、4、5、6、7、8、36-59、981或982之胺基酸序列，包含至少一個、兩個或三個修飾，例如取代(例如保守取代)、插入或缺失但不超過30個、20個或10個修飾，例如取代(例如保守取代)、插入或缺失之胺基酸序列。在一些實施例中，AAV衣殼變異體包含相對於SEQ ID NO: 69、70、71、4、5、6、7、8、36-59、981或982之胺基酸序列，包含至少一個、兩個或三個但不超過30個、20個或10個不同胺基酸之胺基酸序列。
在一些實施例中，本文所述之AAV衣殼變異體包含SEQ ID NO: 36之胺基酸序列，或與其具有至少70% (例如，至少約80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%或99%)序列一致性之胺基酸序列。在一些實施例中，本文所述之AAV衣殼變異體包含相對於SEQ ID NO: 36之胺基酸序列，包含至少一個、兩個或三個修飾，例如取代(例如保守取代)、插入或缺失但不超過30個、20個或10個修飾，例如取代(例如保守取代)、插入或缺失之胺基酸序列。在一些實施例中，AAV衣殼變異體包含相對於SEQ ID NO: 36之胺基酸序列，包含至少一個、兩個或三個但不超過30個、20個或10個不同胺基酸之胺基酸序列。
在一些實施例中，本文所述之AAV衣殼變異體包含SEQ ID NO: 39之胺基酸序列，或與其具有至少70% (例如，至少約80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%或99%)序列一致性之胺基酸序列。在一些實施例中，本文所述之AAV衣殼變異體包含相對於SEQ ID NO: 39之胺基酸序列，包含至少一個、兩個或三個修飾，例如取代(例如保守取代)、插入或缺失但不超過30個、20個或10個修飾，例如取代(例如保守取代)、插入或缺失之胺基酸序列。在一些實施例中，AAV衣殼變異體包含相對於SEQ ID NO: 39之胺基酸序列，包含至少一個、兩個或三個但不超過30個、20個或10個不同胺基酸之胺基酸序列。
在一些實施例中，本文所述之AAV衣殼變異體包含SEQ ID NO: 51之胺基酸序列，或與其具有至少70% (例如，至少約80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%或99%)序列一致性之胺基酸序列。在一些實施例中，本文所述之AAV衣殼變異體包含相對於SEQ ID NO: 51之胺基酸序列，包含至少一個、兩個或三個修飾，例如取代(例如保守取代)、插入或缺失但不超過30個、20個或10個修飾，例如取代(例如保守取代)、插入或缺失之胺基酸序列。在一些實施例中，AAV衣殼變異體包含相對於SEQ ID NO: 51之胺基酸序列，包含至少一個、兩個或三個但不超過30個、20個或10個不同胺基酸之胺基酸序列。
在一些實施例中，本文所述之AAV衣殼變異體包含SEQ ID NO: 52之胺基酸序列，或與其具有至少70% (例如，至少約80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%或99%)序列一致性之胺基酸序列。在一些實施例中，本文所述之AAV衣殼變異體包含相對於SEQ ID NO: 52之胺基酸序列，包含至少一個、兩個或三個修飾，例如取代(例如保守取代)、插入或缺失但不超過30個、20個或10個修飾，例如取代(例如保守取代)、插入或缺失之胺基酸序列。在一些實施例中，AAV衣殼變異體包含相對於SEQ ID NO: 52之胺基酸序列，包含至少一個、兩個或三個但不超過30個、20個或10個不同胺基酸之胺基酸序列。
在一些實施例中，本文所述之AAV衣殼變異體包含SEQ ID NO: 69之胺基酸序列，或與其具有至少70% (例如，至少約80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%或99%)序列一致性之胺基酸序列。在一些實施例中，本文所述之AAV衣殼變異體包含相對於SEQ ID NO: 69之胺基酸序列，包含至少一個、兩個或三個修飾，例如取代(例如保守取代)、插入或缺失但不超過30個、20個或10個修飾，例如取代(例如保守取代)、插入或缺失之胺基酸序列。在一些實施例中，AAV衣殼變異體包含相對於SEQ ID NO: 69之胺基酸序列，包含至少一個、兩個或三個但不超過30個、20個或10個不同胺基酸之胺基酸序列。在一些實施例中，AAV衣殼變異體包含與SEQ ID NO: 69至少90%一致之胺基酸序列。在一些實施例中，AAV衣殼變異體包含與SEQ ID NO: 69至少95%一致之胺基酸序列。在一些實施例中，AAV衣殼變異體包含與SEQ ID NO: 69至少97%一致之胺基酸序列。在一些實施例中，AAV衣殼變異體包含與SEQ ID NO: 69至少98%一致之胺基酸序列。在一些實施例中，AAV衣殼變異體包含與SEQ ID NO: 69至少99%一致之胺基酸序列。在一些實施例中，AAV衣殼變異體包含SEQ ID NO: 69之胺基酸序列。
在一些實施例中，本文所述之AAV衣殼變異體包含SEQ ID NO: 981之胺基酸序列，或與其具有至少70% (例如，至少約80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%或99%)序列一致性之胺基酸序列。在一些實施例中，本文所述之AAV衣殼變異體包含相對於SEQ ID NO: 981之胺基酸序列，包含至少一個、兩個或三個修飾，例如取代(例如保守取代)、插入或缺失但不超過30個、20個或10個修飾，例如取代(例如保守取代)、插入或缺失之胺基酸序列。在一些實施例中，本文所述之AAV衣殼變異體包含相對於SEQ ID NO: 981之胺基酸序列，包含至少一個、兩個或三個但不超過30個、20個或10個不同胺基酸的胺基酸序列。
在一些實施例中，本文所述之AAV衣殼變異體包含SEQ ID NO: 982之胺基酸序列，或與其具有至少70% (例如，至少約80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%或99%)序列一致性之胺基酸序列。在一些實施例中，本文所述之AAV衣殼變異體包含相對於SEQ ID NO: 982之胺基酸序列，包含至少一個、兩個或三個修飾，例如取代(例如保守取代)、插入或缺失但不超過30個、20個或10個修飾，例如取代(例如保守取代)、插入或缺失之胺基酸序列。在一些實施例中，AAV衣殼變異體包含相對於SEQ ID NO: 982之胺基酸序列，包含至少一個、兩個或三個但不超過30個、20個或10個不同胺基酸的胺基酸序列。
在一些實施例中，本文所述之AAV衣殼變異體包含由SEQ ID NO: 983或984之核苷酸序列或與其具有至少70% (例如，至少約80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%或99%)序列一致性之核苷酸序列編碼的胺基酸序列。在一些實施例中，本文所述之AAV衣殼變異體包含由相對於SEQ ID NO: 983或984之核苷酸序列包含至少一個、兩個或三個但不超過30個、20個或10個不同核苷酸之核苷酸序列編碼之胺基酸序列。在一些實施例中，本文所述之AAV衣殼變異體包含由相對於SEQ ID NO: 983或984之核苷酸序列包含至少一個、兩個或三個修飾，例如取代、插入或缺失但不超過30個、20個或10個修飾，例如取代、插入或缺失之核苷酸序列編碼之胺基酸序列。
在一些實施例中，本文所述之AAV衣殼變異體包含由SEQ ID NO: 9、72、73、74、75、76、77、78、79、80、81或22-35中任一者之核苷酸序列，或與其具有至少70% (例如，至少約80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%或99%)序列一致性之核苷酸序列編碼之胺基酸序列。在一些實施例中，本文所述之AAV衣殼變異體包含由相對於SEQ ID NO: 9、72、73、74、75、76、77、78、79、80、81或22-35中任一者之核苷酸序列包含至少一個，兩個或三個但不超過30個、20個或10個不同核苷酸之核苷酸序列編碼之胺基酸序列。在一些實施例中，本文所述之AAV衣殼變異體包含由相對於SEQ ID NO: 9、72、73、74、75、76、77、78、79、80、81或22-35中任一者之核苷酸序列包含至少一個、兩個或三個修飾，例如取代、插入或缺失但不超過30個、20個或10個修飾，例如取代、插入或缺失之核苷酸序列編碼之胺基酸序列。
在一些實施例中，本文所述之AAV衣殼變異體包含VP1、VP2、VP3蛋白或其組合。在一些實施例中，AAV衣殼變異體包含對應於SEQ ID NO: 981或982之位置138-742之胺基酸序列，例如VP2，或與其具有至少70% (例如，至少約80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%或99%)序列一致性之序列。在一些實施例中，AAV衣殼蛋白包含對應於SEQ ID NO: 981或982之位置203-742之胺基酸序列，例如VP3，或與其具有至少70% (例如，至少約80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%或99%)序列一致性之序列。在一些實施例中，AAV衣殼變異體包含對應於SEQ ID NO: 981或982之位置1-742之胺基酸序列，例如VP1，或與其具有至少70% (例如，至少約80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%或99%)序列一致性之胺基酸序列。
在一些實施例中，本文所述之AAV衣殼變異體包含VP1、VP2、VP3蛋白或其組合。在一些實施例中，AAV衣殼變異體包含對應於SEQ ID NO: 36-59、69、70、71、4、5、6、7或8中任一者之位置138-742之胺基酸序列，例如VP2，或與其具有至少70% (例如，至少約80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%或99%)序列一致性之序列。在一些實施例中，AAV衣殼蛋白包含對應於SEQ ID NO: 36-59、69、70、71、4、5、6、7或8中任一者之位置203-742之胺基酸序列，例如VP3，或與其具有至少70% (例如，至少約80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%或99%)序列一致性之序列。在一些實施例中，AAV衣殼變異體包含對應於SEQ ID NO: 36-59、69、70、71、4、5、6、7或8中任一者之位置1-742之胺基酸序列，例如VP1，或與其具有至少70% (例如，至少約80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%或99%)序列一致性之胺基酸序列。
在一些實施例中，本文所述之AAV衣殼變異體包含VP1、VP2、VP3蛋白或其組合。在一些實施例中，AAV衣殼變異體包含對應於SEQ ID NO: 36之位置138-742之胺基酸序列，例如VP2，或與其具有至少70% (例如，至少約80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%或99%)序列一致性之序列。在一些實施例中，AAV衣殼蛋白包含對應於SEQ ID NO: 36之位置203-742之胺基酸序列，例如VP3，或與其具有至少70% (例如，至少約80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%或99%)序列一致性之序列。在一些實施例中，AAV衣殼變異體包含對應於SEQ ID NO: 36之位置1-742之胺基酸序列，例如VP1，或與其具有至少70% (例如，至少約80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%或99%)序列一致性之胺基酸序列。
在一些實施例中，本文所述之AAV衣殼變異體包含VP1、VP2、VP3蛋白或其組合。在一些實施例中，AAV衣殼變異體包含對應於SEQ ID NO: 69之位置138-742之胺基酸序列，例如VP2，或與其具有至少70% (例如，至少約80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%或99%)序列一致性之序列。在一些實施例中，AAV衣殼蛋白包含對應於SEQ ID NO: 69之位置203-742之胺基酸序列，例如VP3，或與其具有至少70% (例如，至少約80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%或99%)序列一致性之序列。在一些實施例中，AAV衣殼變異體包含對應於SEQ ID NO: 69之位置1-742之胺基酸序列，例如VP1，或與其具有至少70% (例如，至少約80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%或99%)序列一致性之胺基酸序列。
在一些實施例中，AAV衣殼變異體包含SEQ ID NO: 36之胺基酸203-742或與其至少70%、75%、80%、85%、90%、92%、95%、96%、97%、98%或99%一致之胺基酸序列。在一些實施例中，AAV衣殼變異體包含SEQ ID NO: 36之胺基酸138-742或與其至少70%、75%、80%、85%、90%、92%、95%、96%、97%、98%或99%一致之胺基酸序列。在一些實施例中，AAV衣殼變異體包含SEQ ID NO: 36之胺基酸序列或與其至少70%、75%、80%、85%、90%、92%、95%、96%、97%、98%或99%一致之胺基酸序列。
在一些實施例中，AAV衣殼變異體包含SEQ ID NO: 69之胺基酸203-742或與其至少70%、75%、80%、85%、90%、92%、95%、96%、97%、98%或99%一致之胺基酸序列。在一些實施例中，AAV衣殼變異體包含SEQ ID NO: 69之胺基酸138-742或與其至少70%、75%、80%、85%、90%、92%、95%、96%、97%、98%或99%一致之胺基酸序列。在一些實施例中，AAV衣殼變異體包含SEQ ID NO: 69之胺基酸序列或與其至少70%、75%、80%、85%、90%、92%、95%、96%、97%、98%或99%一致之胺基酸序列。
在一些實施例中，相對於包含SEQ ID NO: 138之胺基酸序列之參考序列之向性，本文所述之AAV衣殼變異體具有增加的對CNS細胞或組織，例如腦細胞、腦組織、脊髓細胞或脊髓組織之向性。
在一些實施例中，本文所述之AAV衣殼變異體轉導腦區域，例如中腦區域(例如，海馬體或視丘)或腦幹。在一些實施例中，轉導水準與SEQ ID NO: 138之參考序列相比至少5、10、15、20、25、30、35、40、45、50、55、60或65倍高。在一些實施例中，轉導水準與SEQ ID NO: 138之參考序列相比至少30、35、40、45、50、55、60或65倍高。
在一些實施例中，與SEQ ID NO: 138之參考序列相比，本文所述之AAV衣殼變異體在腦中富集至少約3、4、5、6、7、8、9或10倍。在一些實施例中，與SEQ ID NO: 138之參考序列相比，本文所述之AAV衣殼變異體在腦中富集至少約20、25、30、35、40、45、50、55、60、65、70、75、80或85倍。
在一些實施例中，與SEQ ID NO: 138之參考序列相比，本文所述之AAV衣殼變異體在至少二至三個物種，例如非人類靈長類動物及囓齒動物(例如，小鼠)物種之腦中富集。在一些實施例中，與SEQ ID NO:138之參考序列相比，本文所述之AAV衣殼變異體在至少二至三個物種，例如非人類靈長類動物及囓齒動物(例如，小鼠)物種之腦中富集至少約10、15、20、25、30、35、40、45、50、55、60、65、70、75、80、85、90、95或100倍。在一些實施例中，至少二至三個物種係長尾獼猴、綠猴、普通狨及/或小鼠(例如，BALB/c小鼠、C57Bl/6小鼠及/或CD-1遠交系小鼠)。
在一些實施例中，與SEQ ID NO: 981之參考序列相比，本文所述之AAV衣殼變異體在腦中富集至少約2、2.5、3、3.5、4、4.5、5、5.5、6、6.5、7、7.5或8倍。在一些實施例中，與SEQ ID NO: 982之參考序列相比，本文所述之AAV衣殼變異體在腦中富集至少約2、2.5、3、3.5、4、4.5、5或5.5倍。
在一些實施例中，本文所述之AAV衣殼變異體將增加水準之病毒基因體遞送至腦區域。在一些實施例中，與SEQ ID NO: 138之參考序列相比，病毒基因體之水準增加至少20、25、30、35、40、45或50倍。在一些實施例中，腦區域包含中腦區域(例如，海馬體或視丘)及/或腦幹。
在一些實施例中，本文所述之AAV衣殼變異體將增加水準之酬載遞送至腦區域。在一些實施例中，與SEQ ID NO: 138之參考序列相比，酬載水準增加至少20、25、30、35、40、45、50、55、60、65或70倍。在一些實施例中，腦區域包含中腦區域(例如，海馬體或視丘)及/或腦幹。
在一些實施例中，與SEQ ID NO: 138之參考序列相比，本文所述之AAV衣殼變異體在脊髓中富集至少約5、10、15、20、25、30或35倍。
在一些實施例中，相對於背根神經節(DRG)中之轉導，本文所述之AAV衣殼變異體展示在腦區域中之優先轉導。在一些實施例中，相對於肝臟中之轉導，AAV衣殼變異體展示在腦區域中之優先轉導。在一些實施例中，相對於肝臟及DRG中之轉導，AAV衣殼變異體展示在腦區域中之優先轉導。在一些實施例中，相對於心臟中之轉導，AAV衣殼變異體展示在腦區域中之優先轉導。在一些實施例中，相對於心臟及DRG中之轉導，AAV衣殼變異體展示在腦區域中之優先轉導。在一些實施例中，相對於心臟、DRG及肝臟中之轉導，AAV衣殼變異體展示在腦區域中之優先轉導。
在一些實施例中，本文所述之AAV衣殼變異體能夠轉導非神經元細胞，例如神經膠質細胞(例如，寡樹突細胞或星狀細胞)。在一些實施例中，本文所述之AAV衣殼變異體能夠轉導神經元細胞及非神經元細胞，例如神經膠質細胞(例如，寡樹突細胞或星狀細胞)。在一些實施例中，非神經元細胞係神經膠質細胞、寡樹突細胞(例如，Olig2陽性寡樹突細胞)或星狀細胞(例如，Olig2陽性星狀細胞)。在一些實施例中，AAV衣殼變異體能夠轉導Olig2陽性細胞，例如Olig2陽性星狀細胞或Olig2陽性寡樹突細胞。
在一些實施例中，本揭示案之AAV衣殼多肽(例如AAV衣殼變異體)具有減小的肝向性。在一些實施例中，AAV衣殼變異體包含導致肝中之向性(例如去靶向)及/或活性降低之修飾，例如取代(例如保守取代)、插入或缺失。在一些實施例中，將肝中降低的向性與不包含修飾之其他相似之衣殼(例如野生型衣殼多肽)進行比較。在一些實施例中，所述AAV衣殼變異體包含導致以下性質中之一或多者之修飾，例如取代(例如保守取代)、插入或缺失：(1)肝中之向性降低；(2)肝中之去靶向表現；(3)肝中之活性降低；及/或(4)與半乳糖之結合減少。在一些實施例中，將性質(1)-(3)中之任一者或全部之降低與不包含修飾之其他相似之AAV衣殼變異體進行比較。示範性修飾提供於以下文獻中：WO 2018/119330；Pulicherla等人(2011) Mol. Ther.19(6): 1070-1078；Adachi等人(2014) Nature Communications5(3075), DOI: 10.1038/ncomms4075；及Bell等人(2012) J. Virol.86(13): 7326-33；該等文獻之內容特此以全文引用之方式併入。在一些實施例中，相對於根據SEQ ID NO: 138編號之參考序列，AAV衣殼變異體包含以下修飾，例如取代(例如保守取代)、插入或缺失：位置N470 (例如N470A)、D271 (例如D271A)、N272 (例如N272A)、Y446 (例如Y446A)、N498 (例如N498Y或N498I)、W503 (例如W503R或W503A)、L620 (例如L620F)或其組合。在一些實施例中，相對於根據SEQ ID NO: 138編號之參考序列，AAV衣殼變異體包含以下胺基酸中之一者、兩者、三者、四者、五者或全部：位置470之除N外之胺基酸(例如A)、位置271之除D外之胺基酸(例如A)、位置272之除N外之胺基酸(例如A)、位置446之除Y外之胺基酸(例如A)及位置498之除N外之胺基酸(例如Y或I)以及位置503之除W外之胺基酸(例如R或A)及位置620之除L外之胺基酸(例如F)。在一些實施例中，相對於根據SEQ ID NO: 138編號之參考序列，AAV衣殼變異體包含以下修飾，例如取代(例如保守取代)、插入或缺失：位置N470 (例如N470A)、D271 (例如D271A)、N272 (例如N272A)、Y446 (例如Y446A)及W503 (例如W503R或W503A)。在一些實施例中，AAV衣殼變異體包含以下修飾，例如取代(例如保守取代)、插入或缺失：N498 (例如N498Y)及L620 (例如L620F)。
在一些實施例中，本文包含之AAV衣殼變異體包含如Adachi等人(2014) Nature Communications5(3075), DOI: 10.1038/ncomms4075中所述之修飾，其內容特此以全文引用之方式併入。改變或不改變至少腦、肝臟、心臟、肺及/或腎臟中之組織轉導之示範性修飾可參見補充資料2，其展示用Adachi等人(見上文)之AAV9-AA-VBCLib獲得之AAV條碼-Seq資料，該文獻之內容特此以全文引用之方式併入。
在一些實施例中，本揭示案之AAV衣殼多肽(例如AAV衣殼變異體)係經分離的，例如重組的。在一些實施例中，本揭示案之編碼AAV衣殼多肽(例如AAV衣殼變異體)之多核苷酸係經分離的，例如重組的。
本揭示案係關於由衣殼(Cap)基因編碼之結構衣殼蛋白(包括VP1、VP2及VP3)。此等衣殼蛋白形成病毒載體(諸如AAV)之蛋白質結構外殼(亦即衣殼)。自Cap多核苷酸合成之VP衣殼蛋白通常包括甲硫胺酸作為肽序列中之第一胺基酸(Met1)，其與對應Cap核苷酸序列中之起始密碼子(AUG或ATG)相關。然而，第一甲硫胺酸(Met1)殘基或通常任何第一個胺基酸(AA1)在多肽合成之後或期間被蛋白質加工酶(諸如Met-胺基肽酶)裂解掉係很常見的。該「Met/AA修剪」過程通常與多肽序列中第二個胺基酸(例如丙胺酸、纈胺酸、絲胺酸、蘇胺酸等)之對應乙醯化相關。Met修剪通常發生在VP1及VP3衣殼蛋白中，但亦可能發生在VP2衣殼蛋白中。
如果Met/AA修剪不完整，則可產生一或多種(一種、兩種或三種)包含病毒衣殼之VP衣殼蛋白之混合物，其中一些可能包括Met1/AA1胺基酸(Met+/AA+)，其中一些作為Met/AA修剪之結果，可能缺乏Met1/AA1胺基酸(Met-/AA-)。關於衣殼蛋白中Met/AA修剪之進一步討論，參見Jin等人，Direct Liquid Chromatography/Mass Spectrometry Analysis for Complete Characterization of Recombinant Adeno-Associated Virus Capsid Proteins. Hum Gene Ther Methods. 2017年10月，28(5):255-267; Hwang等人，N-Terminal Acetylation of Cellular Proteins Creates Specific Degradation Signals. Science. 2010年2月19日. 327(5968): 973-977；該等文獻之內容之全文各自以引用方式併入本文。
根據本揭示案，提及衣殼蛋白不限於剪切的(Met-/AA-)或未剪切的(Met+/AA+)，且在上下文中，可指獨立的衣殼蛋白、由衣殼蛋白之混合物組成的病毒衣殼及/或多核苷酸序列(或其片段)，該等多核苷酸序列編碼、描述、產生或導致本揭示案之衣殼蛋白。直接提及衣殼蛋白或衣殼多肽(諸如VP1、VP2或VP2)亦可包含包括Met1/AA1胺基酸(Met+/AA+)之VP衣殼蛋白，以及作為Met/AA修剪之結果而缺乏Met1/AA1胺基酸(Met-/AA-)的對應VP衣殼蛋白。
進一步根據本揭示案，對特定SEQ ID NO: (無論係蛋白質還是核酸)之提及，其分別包含或編碼一或多種衣殼蛋白，該等衣殼蛋白包括Met1/AA1胺基酸(Met+/AA+)，應理解為教示缺乏Met1/AA1胺基酸之VP衣殼蛋白，因為在審查序列時，很容易看出任何僅缺少第一個列出之胺基酸之序列(無論是否為Met1/AA1)。
作為非限制性實例，對長度為736個胺基酸且包括由AUG/ATG起始密碼子編碼之「Met1」胺基酸(Met+)的VP1多肽序列之提及亦可理解為教示長度為735個胺基酸且不包括736個胺基酸之Met+序列之「Met1」胺基酸(Met-)的VP1多肽序列。作為第二非限制性實例，對長度為736個胺基酸且包括由任一NNN起始密碼子編碼之「AA1」胺基酸(AA1+)的VP1多肽序列之提及亦可理解為教示長度為735個胺基酸且不包括736個胺基酸之AA1+序列之「AA1」胺基酸(AA1-)的VP1多肽序列。
對自VP衣殼蛋白形成之病毒衣殼之提及(諸如對特定AAV衣殼血清型之提及)可併入包括Met1/AA1胺基酸(Met+/AA1+)之VP衣殼蛋白、因Met/AA1剪切而缺少Met1/AA1胺基酸(Met-/AA1-)之對應VP衣殼蛋白及其組合(Met+/AA1+及Met-/AA1-)。
作為非限制性實例，AAV衣殼血清型可包括VP1 (Met+/AA1+)、VP1 (Met-/AA1-)或VP1 (Met+/AA1+)及VP1 (Met-/AA1-)之組合。AAV衣殼血清型亦可包括VP3 (Met+/AA1+)、VP3 (Met-/AA1-)或VP3 (Met+/AA1+)及VP3 (Met-/AA1-)之組合；且亦可包括VP2 (Met+/AA1)及VP2 (Met-/AA1-)之類似的視情況存在之組合。
本文亦提供了編碼上文所述之AAV衣殼變異體中之任一者的多核苷酸序列及包含該等序列之AAV顆粒、載體及細胞。 病毒基因體
在一些態樣中，本揭示案之AAV顆粒用作包含編碼SOD1靶向siRNA之病毒基因體之表現載體。在一些實施例中，表現載體不限於AAV且可為腺病毒、反轉錄病毒、慢病毒、質體、載體或其任何變異體。
在一些實施例中，AAV顆粒，例如用於載體化遞送本文所述之siRNA (例如SOD1靶向siRNA)之AAV顆粒包含病毒基因體，例如AAV病毒基因體(例如載體基因體或AAV載體基因體)。在一些實施例中，病毒基因體(例如AAV病毒基因體)進一步包含反向末端重複(ITR)區、增強子、啟動子、內含子區、Kozak序列、外顯子區、編碼酬載(例如，本文所述之SOD1靶向siRNA)之核酸、編碼miR結合位點之核苷酸序列、聚A信號區或其組合。
在一些實施例中，包含本文所述之AAV衣殼多肽(例如AAV衣殼變異體)之如本文所述之AAV顆粒可用於將病毒基因體遞送至組織(例如CNS、DRG及/或肌肉)。在一些實施例中，包含本文所述之AAV衣殼多肽(例如AAV衣殼變異體)之AAV顆粒可用於將病毒基因體遞送至組織或細胞，例如CNS、DRG或肌肉細胞或組織。在一些實施例中，本揭示案之AAV顆粒係重組AAV顆粒。在一些實施例中，本揭示案之AAV顆粒係分離的AAV顆粒。
病毒基因體可編碼任何酬載，諸如但不限於多肽(例如治療性多肽)、抗體、酶、RNAi劑及/或基因編輯系統之組分(例如多核苷酸，例如SOD1靶向siRNA)。在一個實施例中，本文所述之AAV顆粒用於在靜脈內遞送後將酬載遞送至CNS之細胞。在另一實施例中，本文所述之AAV顆粒用於在靜脈內遞送後將酬載遞送至DRG之細胞。在一些實施例中，本文所述之AAV顆粒用於在靜脈內遞送後將酬載遞送至肌肉，例如心肌之細胞。
在一些實施例中，如本文所述之包含AAV衣殼多肽，例如AAV衣殼變異體之AAV顆粒之病毒基因體包含編碼酬載(例如SOD1靶向siRNA)之核酸。在一些實施例中，病毒基因體包含反向末端重複(ITR)序列。在一些實施例中，病毒基因體包含兩個ITR序列，例如，一個在病毒基因體之5'端(例如，相對於經編碼的酬載之5’)且另一個在病毒基因體的3'端(例如，相對於經編碼的酬載之3’)。在一些實施例中，本文所述之AAV顆粒(例如，包含本文所述之AAV衣殼變異體)之病毒基因體可包含調控元件(例如啟動子)、非轉譯區(UTR)、miR結合位點、多聚腺苷酸化序列(聚A)、填充或填塞序列、內含子及/或連接子序列，例如用於增強酬載表現。
在一些實施例中，選擇及/或工程化病毒基因體組分用於在靶組織(例如，CNS組織、肌肉組織(例如心臟)或DRG)中表現酬載。 病毒基因體組分：反向末端重複(ITR)
在一些實施例中，本文所述之AAV顆粒(例如包含AAV衣殼多肽，例如本文所述之AAV衣殼變異體之AAV顆粒)包含病毒基因體(例如編碼本文所述之SOD1 siRNA之病毒基因體)，具有至少一個ITR及酬載區。在一個實施例中，病毒基因體具有兩個ITR。此兩個ITR在5'及3'端側接酬載區。ITR充當包含用於複製之識別位點之複製起點。ITR包含可互補及對稱排列之序列區。如本文所述併入病毒基因體中之ITR可由天然存在之多核苷酸序列或重組衍生之多核苷酸序列組成。
ITR可衍生自與衣殼多肽，例如衣殼變異體相同之血清型，選自任何已知之血清型，或其衍生物。ITR可具有與衣殼不同之血清型。在一個實施例中，AAV顆粒具有多於一個ITR。在非限制性實例中，AAV顆粒具有包含兩個ITR之病毒基因體。在一個實施例中，ITR彼此具有相同血清型。在另一實施例中，ITR具有不同血清型。非限制性實例包括與衣殼具有相同血清型之零個、一個或兩個ITR。在一個實施例中，AAV顆粒之病毒基因體之兩個ITR均為AAV2 ITR。
在一些實施例中，ITR序列(例如5’ ITR序列)包含SEQ ID NO: 126之核苷酸序列。在一些實施例中，ITR序列(例如5' ITR序列)包含與SEQ ID NO: 126具有至少90%一致性、至少95%一致性、至少98%一致性或至少99%一致性之核苷酸序列。在一些實施例中，ITR序列(例如5' ITR序列)具有相對於SEQ ID NO: 126具有至少1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、1-5、1-10、1-20、10-20、1-30、10-30或20-30個核苷酸修飾(例如，取代、插入及/或缺失)之核苷酸序列。
在一些實施例中，ITR序列(例如3’ ITR序列)包含SEQ ID NO: 130之核苷酸序列。在一些實施例中，ITR序列(例如3' ITR序列)包含與SEQ ID NO: 130具有至少90%一致性、至少95%一致性、至少98%一致性或至少99%一致性之核苷酸序列。在一些實施例中，ITR序列(例如3' ITR序列)具有相對於SEQ ID NO: 130具有至少1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、1-5、1-10、1-20、10-20、1-30、10-30或20-30個核苷酸修飾(例如，取代、插入及/或缺失)之核苷酸序列。 病毒基因體組分：啟動子
在一個實施例中，病毒基因體之酬載區包含增強酬載靶標特異性及表現之至少一種元件(參見例如，Powell等人Viral Expression Cassette Elements to Enhance Transgene Target Specificity and Expression in Gene Therapy, 2015；該文獻之內容以全文引用之方式併入本文)。增強酬載靶標特異性及表現之元件之非限制性實例包括啟動子、內源性miRNA、轉錄後調控元件(PRE)、多聚腺苷酸化(聚A)信號序列及上游增強子(USE)、CMV增強子及內含子。
在一些實施例中，包含本文所述之AAV衣殼變異體之AAV顆粒包含有包含編碼酬載之核酸的病毒基因體，其中核酸可操作地連接至啟動子。在一些實施例中，啟動子係物種特異性啟動子、誘導型啟動子、組織特異性啟動子或細胞週期特異性啟動子(Parr等人， Nat. Med.3:1145-9 (1997)；其內容以全文引用之方式併入本文)。
在一些實施例中，啟動子可為天然存在的或非天然存在的。啟動子之非限制性實例包括來自病毒、植物、哺乳動物或人類之啟動子。在一些實施例中，啟動子可為來源自人類細胞或系統之啟動子。在一些實施例中，啟動子可經截短或突變，例如啟動子變異體。
在一些實施例中，當啟動子驅動由AAV顆粒之病毒基因體編碼之酬載之表現時，該啟動子被視為高效的。
在一些實施例中，啟動子為當其驅動所靶向細胞中之表現時被視為高效之啟動子。
在一些實施例中，啟動子係對所靶向之細胞具有向性之啟動子。
在一些實施例中，啟動子驅動酬載(例如，本文所述之SOD1靶向siRNA)在靶向組織中表現一段時間。作為非限制性實例，啟動子經選擇用於在中樞或周圍神經系統之組織及/或細胞中持續表現酬載。
在一些實施例中，啟動子係遍在啟動子，例如能夠在多種組織中表現。在一些實施例中，啟動子係人類延長因子1α次單元(EF1α)啟動子或其變異體或片段、巨細胞病毒(CMV)立即早期增強子及/或啟動子、雞β-肌動蛋白(CBA)啟動子或其變異體或片段及其衍生物CAG、β葡萄糖醛酸苷酶(GUSB)啟動子、磷酸甘油酸激酶(PGK)啟動子或泛素C (UBC)啟動子。在一些實施例中，啟動子係細胞或組織特異性啟動子，例如，能夠在中樞或周圍神經系統之組織或細胞、內部區域(例如，額葉皮質)，及/或其中之細胞亞組(例如，興奮性神經元)中表現。在一些實施例中，啟動子係能夠在興奮性神經元(例如，麩胺酸能)、抑制性神經元(例如，GABA能)、交感或副交感神經系統之神經元、感覺神經元、背根神經節之神經元、運動神經元或神經系統之支持細胞，諸如小神經膠質細胞、星狀細胞、寡樹突細胞及/或神經鞘細胞中表現酬載之細胞類型特異性啟動子。
在一些實施例中，啟動子係肝臟啟動子(例如，hAAT、TBG)、骨骼肌特異性啟動子(例如，結蛋白、MCK、C512)、B細胞啟動子、單核細胞啟動子、白細胞啟動子、巨噬細胞啟動子、胰臟腺泡細胞啟動子、內皮細胞啟動子、肺組織啟動子及/或心臟或心血管啟動子(例如，αMHC、cTnT及CMV-MLC2k)。
在一些實施例中，啟動子係用於在中樞神經系統之細胞或組織中表現酬載之組織特異性啟動子。在一些實施例中，啟動子係突觸蛋白(Syn)啟動子或其變異體或片段、麩胺酸囊泡轉運蛋白(VGLUT)啟動子、囊泡GABA轉運蛋白(VGAT)啟動子、小白蛋白(PV)啟動子、鈉通道Na v1.8啟動子、酪胺酸羥化酶(TH)啟動子、膽鹼乙醯轉移酶(ChaT)啟動子、甲基-CpG結合蛋白2 (MeCP2)啟動子、Ca 2+/鈣調蛋白依賴性蛋白激酶II (CaMKII)啟動子、代謝型麩胺酸受體2 (mGluR2)啟動子、神經絲輕鏈(NFL)或重鏈(NFH)啟動子、神經元特異性烯醇化酶(NSE)啟動子、β-球蛋白袖珍基因nβ2啟動子、前腦啡肽原(PPE)啟動子、腦啡肽(Enk)啟動子及興奮性胺基酸轉運蛋白2 (EAAT2)啟動子。在一些實施例中，啟動子係能夠在星狀細胞中表現之細胞類型特異性啟動子，例如，膠質原纖維酸性蛋白(GFAP)啟動子及EAAT2啟動子。在一些實施例中，啟動子係能夠在寡樹突細胞中表現之細胞類型特異性啟動子，例如髓磷脂鹼性蛋白(MBP)啟動子。
在一些實施例中，啟動子係GFAP啟動子。在一些實施例中，啟動子係突觸蛋白(syn或syn1)啟動子或其片段。
在一些實施例中，啟動子包含胰島素啟動子或其片段。
在某些實施例中，啟動子係本文所述啟動子中任一者之變異體或片段。
在一些實施例中，啟動子係H1啟動子。在一些實施例中，H1啟動子包含SEQ ID NO: 83之核苷酸序列，或與其至少90%、至少92%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%一致之核苷酸序列。
在一些實施例中，啟動子包含SEQ ID NO: 83之核苷酸序列，或與其至少90%、至少92%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%一致之核苷酸序列。
在一些實施例中，本文所述之病毒基因體之啟動子(例如，包含在包含本文所述之AAV衣殼變異體之AAV顆粒內)包含EF-1α啟動子或其片段或變異體、雞β-肌動蛋白(CBA)啟動子或其片段或變異體、PGK啟動子或其片段或變異體、胰島素啟動子或其片段或變異體、突觸蛋白(SYN)啟動子或其片段或變異體，例如，如表7中所提供。在一些實施例中，啟動子包含SEQ ID NO: 4000-4026中任一者之核苷酸序列，相對於SEQ ID NO: 4000-4026之核苷酸序列包含至少一個、兩個或三個但不超過四個修飾(例如取代、插入及/或缺失)之核苷酸序列，或與SEQ ID NO: 4000-4026中任一者具有至少70% (例如，80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%或99%)序列一致性之核苷酸序列。 表7. 示 範性啟動子序列及變異體
描述 序列 SEQ ID NO:
EF1a啟動子(內含子加下劃線) CGTGAGGCTCCGGTGCCCGTCAGTGGGCAGAGCGCACATCGCCCACAGTCCCCGAGAAGTTGGGGGGAGGGGTCGGCAATTGAACCGGTGCCTAGAGAAGGTGGCGCGGGGTAAACTGGGAAAGTGATGTCGTGTACTGGCTCCGCCTTTTTCCCGAGGGTGGGGGAGAACCGTATATAAGTGCAGTAGTCGCCGTGAACGTTCTTTTTCGCAACGGGTTTGCCGCCAGAACACAG GTAAG TGCCGTGTGTGGTTCCCGCGGGCCTGGCCTCTTTACGGGTTATGGCCCTTGCGTGCCTTGAATTACTTCCACCTGGCTGCAGTACGTGATTCTTGATCCCGAGCTTCGGGTTGGAAGTGGGTGGGAGAGTTCGAGGCCTTGCGCTTAAGGAGCCCCTTCGCCTCGTGCTTGAGTTGAGGCCTGGCCTGGGCGCTGGGGCCGCCGCGTGCGAATCTGGTGGCACCTTCGCGCCTGTCTCGCTGCTTTCGATAAGTCTCTAGCCATTTAAAATTTTTGATGACCTGCTGCGACGCTTTTTTTCTGGCAAGATAGTCTTGTAAATGCGGGCCAAGATCTGCACACTGGTATTTCGGTTTTTGGGGCCGCGGGCGGCGACGGGGCCCGTGCGTCCCAGCGCACATGTTCGGCGAGGCGGGGCCTGCGAGCGCGGCCACCGAGAATCGGACGGGGGTAGTCTCAAGCTGGCCGGCCTGCTCTGGTGCCTGGCCTCGCGCCGCCGTGTATCGCCCCGCCCTGGGCGGCAAGGCTGGCCCGGTCGGCACCAGTTGCGTGAGCGGAAAGATGGCCGCTTCCCGGCCCTGCTGCAGGGAGCTCAAAATGGAGGACGCGGCGCTCGGGAGAGCGGGCGGGTGAGTCACCCACACAAAGGAAAAGGGCCTTTCCGTCCTCAGCCGTCGCTTCATGTGACTCCACGGAGTACCGGGCGCCGTCCAGGCACCTCGATTAGTTCTCGAGCTTTTGGAGTACGTCGTCTTTAGGTTGGGGGGAGGGGTTTTATGCGATGGAGTTTCCCCACACTGAGTGGGTGGAGACTGAAGTTAGGCCAGCTTGGCACTTGATGTAATTCTCCTTGGAATTTGCCCTTTTTGAGTTTGGATCTTGGTTCATTCTCAAGCCTCAGACAGTGGTTCAAAGTTTTTTTCTTCCATTTCAGGTGTCGTGA 4000
miniEF1a gcccgtcagtgggcagagcgcacatcgcccacagtccccgagaagttggggggaggggtcggcaattgaaccggtgcctagagaaggtggcgcggggtaaactgggaaagtgatgtcgtgtactggctccgcctttttcccgagggtgggggagaaccgtatataagtgcagtagtcgccgtgaacgttctttttcgcaacgggtttgccgccagaacacgcgtaAG 4001
啟動子變異體1 gcatg
啟動子變異體2 ggtggagaagagcatg 4003
啟動子變異體3 gtcatcactgaggtggagaagagcatg 4004
啟動子變異體4 cgtgag
啟動子變異體5 gt
啟動子變異體6 gctccggt
啟動子變異體19 GCCCGTCAGTGGGCAGAGCGCACATCGCCCACAGTCCCCGAGAAGTTGGGGGGAGGGGTCGGCAATTGAACCGGTGCCTAGAGAAGGTGGCGCGGGGTAAACTGGGAAAGTGATGTCGTGTACTGGCTCCGCCTTTTTCCCGAGGGTGGGGGAGAACCGTATATAAGTGCAGTAGTCGCCGTGAACGTTCTTTTTCGCAACGGGTTTGCCGCCAGAACACAG 4008
啟動子變異體20 gcccgtcagtgggcagagcgcacatcgcccacagtccccgagaagttggggggaggggtcggcaattgaaccggtgcctagagaaggtggcgcggggtaaactgggaaagtgatgtcgtgtactggctccgcctttttcccgagggtgggggagaaccgtatataagtgcagtagtcgccgtgaacgttctttttcgcaacgggtttgccgccagaacacgc 4009
啟動子變異體7 gtaAG
啟動子變異體8 gtgcccgtcagtgggcagagcgcacatcgcccacagtccccgagaagttggggggaggggtcggcaattgaaccggtgcctagagaaggtggcgcggggtaaactgggaaagtgatgtcgtgtactggctccgcctttttcccgagggtgggggagaaccgtatataagtgcagtagtcgccgtgaacgttctttttcgcaacgggtttgccgccagaacacgcgtaAG 4011
啟動子變異體9 gctccggtgcccgtcagtgggcagagcgcacatcgcccacagtccccgagaagttggggggaggggtcggcaattgaaccggtgcctagagaaggtggcgcggggtaaactgggaaagtgatgtcgtgtactggctccgcctttttcccgagggtgggggagaaccgtatataagtgcagtagtcgccgtgaacgttctttttcgcaacgggtttgccgccagaacacgcgtaAG 4012
啟動子變異體10 cgtgaggctccggtgcccgtcagtgggcagagcgcacatcgcccacagtccccgagaagttggggggaggggtcggcaattgaaccggtgcctagagaaggtggcgcggggtaaactgggaaagtgatgtcgtgtactggctccgcctttttcccgagggtgggggagaaccgtatataagtgcagtagtcgccgtgaacgttctttttcgcaacgggtttgccgccagaacacgcgtaAG 4013
啟動子變異體11 cgtgaggctccggtgcccgtcagtgggcagagcgcacatcgcccacagtccccgagaagttggggggaggggtcggcaattgaaccggtgcctagagaaggtggcgcggggtaaactgggaaagtgatgtcgtgtactggctccgcctttttcccgagggtgggggagaaccgtatataagtgcagtagtcgccgtgaacgttctttttcgcaacgggtttgccgccagaacacag 4014
啟動子變異體12 gcatgcgtgaggctccggtgcccgtcagtgggcagagcgcacatcgcccacagtccccgagaagttggggggaggggtcggcaattgaaccggtgcctagagaaggtggcgcggggtaaactgggaaagtgatgtcgtgtactggctccgcctttttcccgagggtgggggagaaccgtatataagtgcagtagtcgccgtgaacgttctttttcgcaacgggtttgccgccagaacacgcgtaAG 4015
啟動子變異體13 gcatgcgtgaggctccggtgcccgtcagtgggcagagcgcacatcgcccacagtccccgagaagttggggggaggggtcggcaattgaaccggtgcctagagaaggtggcgcggggtaaactgggaaagtgatgtcgtgtactggctccgcctttttcccgagggtgggggagaaccgtatataagtgcagtagtcgccgtgaacgttctttttcgcaacgggtttgccgccagaacacag 4016
啟動子變異體14 ggtggagaagagcatgcgtgaggctccggtgcccgtcagtgggcagagcgcacatcgcccacagtccccgagaagttggggggaggggtcggcaattgaaccggtgcctagagaaggtggcgcggggtaaactgggaaagtgatgtcgtgtactggctccgcctttttcccgagggtgggggagaaccgtatataagtgcagtagtcgccgtgaacgttctttttcgcaacgggtttgccgccagaacacgcgtaAG 4017
啟動子變異體15 ggtggagaagagcatgcgtgaggctccggtgcccgtcagtgggcagagcgcacatcgcccacagtccccgagaagttggggggaggggtcggcaattgaaccggtgcctagagaaggtggcgcggggtaaactgggaaagtgatgtcgtgtactggctccgcctttttcccgagggtgggggagaaccgtatataagtgcagtagtcgccgtgaacgttctttttcgcaacgggtttgccgccagaacacag 4018
啟動子變異體16 gtcatcactgaggtggagaagagcatgcgtgaggctccggtgcccgtcagtgggcagagcgcacatcgcccacagtccccgagaagttggggggaggggtcggcaattgaaccggtgcctagagaaggtggcgcggggtaaactgggaaagtgatgtcgtgtactggctccgcctttttcccgagggtgggggagaaccgtatataagtgcagtagtcgccgtgaacgttctttttcgcaacgggtttgccgccagaacacgcgtaAG 4019
啟動子變異體18 gtcatcactgaggtggagaagagcatgcgtgaggctccggtgcccgtcagtgggcagagcgcacatcgcccacagtccccgagaagttggggggaggggtcggcaattgaaccggtgcctagagaaggtggcgcggggtaaactgggaaagtgatgtcgtgtactggctccgcctttttcccgagggtgggggagaaccgtatataagtgcagtagtcgccgtgaacgttctttttcgcaacgggtttgccgccagaacacag 4020
雞β-肌動蛋白(CBA)啟動子 cgacattgattattgactagttattaatagtaatcaattacggggtcattagttcatagcccatatatggagttccgcgttacataacttacggtaaatggcccgcctggctgaccgcccaacgacccccgcccattgacgtcaataatgacgtatgttcccatagtaacgccaatagggactttccattgacgtcaatgggtggagtatttacggtaaactgcccacttggcagtacatcaagtgtatcatatgccaagtacgccccctattgacgtcaatgacggtaaatggcccgcctggcattatgcccagtacatgaccttatgggactttcctacttggcagtacatctacgtattagtcatcgctattaccatgtcgaggccacgttctgcttcactctccccatctcccccccctccccacccccaattttgtatttatttattttttaattattttgtgcagcgatgggggcggggggggggggcgcgcgccaggcggggcggggcggggcgaggggcggggcggggcgaggcggagaggtgcggcggcagccaatcagagcggcgcgctccgaaagtttccttttatggcgaggcggcggcggcggcggccctataaaaagcgaagcgcgcggcgggcgggagc 4021
小CBA啟動子 CCACGTTCTGCTTCACTCTCCCCATCTCCCCCCCCTCCCCACCCCCAATTTTGTATTTATTTATTTTTTAATTATTTTGTGCAGCGATGGGGGCGGGGGGGGGGGGCGCGCGCCAGGCGGGGCGGGGCGGGGCGAGGGGCGGGGCGGGGCGAGGCGGAGAGGTGCGGCGGCAGCCAATCAGAGCGGCGCGCTCCGAAAGTTTCCTTTTATGGCGAGGCGGCGGCGGCGGCGGCCCTATAAAAAGCGAAGCGCGCGGCGGG 4022
PGK啟動子 GGGTAGGGGAGGCGCTTTTCCCAAGGCAGTCTGGAGCATGCGCTTTAGCAGCCCCGCTGGGCACTTGGCGCTACACAAGTGGCCTCTGGCCTCGCACACATTCCACATCCACCGGTAGGCGCCAACCGGCTCCGTTCTTTGGTGGCCCCTTCGCGCCACCTTCTACTCCTCCCCTAGTCAGGAAGTTCCCCCCCGCCCCGCAGCTCGCGTCGTGCAGGACGTGACAAATGGAAGTAGCACGTCTCACTAGTCTCGTGCAGATGGACAGCACCGCTGAGCAATGGAAGCGGGTAGGCCTTTGGGGCAGCGGCCAATAGCAGCTTTGCTCCTTCGCTTTCTGGGCTCAGAGGCTGGGAAGGGGTGGGTCCGGGGGCGGGCTCAGGGGCGGGCTCAGGGGCGGGGCGGGCGCCCGAAGGTCCTCCGGAGGCCCGGCATTCTGCACGCTTCAAAAGCGCACGTCTGCCGCGCTGTTCTCCTCTTCCTCATCTCCGGGCCTTTCG 4023
胰島素啟動子片段 CCCTAATGGGCCAGGCGGCAGGGGTTGAGAGGTAGGGGAGATGGGCTCTGAGACTATAAAGCCAGCGGGGGCCCAGCAGCCCTC 4024
人類突觸蛋白(SYN)啟動子(長) CGCGTggggttatttctctactttcgtgtctctgagtgtgcttccagtgcccccctccccccaaaaaatgccttctgagttgaatatcaacactacaaaccTagtatctgcagagggccctgcgtatgagtgcaagtgggttttaggaccaggatgaggcggggtgggggtgcctacctgacgaccgaccccgacccactggacaagcacccaacccccattccccaaattgcgcatcccctatcagagagggggaggggaaacaggatgcggcgaggcgcgtgcgcactgccagcttcagcaccgcggacagtgccttcgcccccgcctggcggcgcgcgccaccgccgcctcagcactgaaggcgcgctgacgtcactcgccggtcccccgcaaactccccttcccggccaccttggtcgcgtccgcgccgccgccggcccagccggaccgcaccacgcgaggcgcgagataggggggcacgggcgcgaccatctgcgctgcggcgccggcgactcagcgctgcctcAGTCTGCGGTGGGCAGCGGAGGAGTCGTGTCGTGCCTGAGAGCGCAGCTGTGCTCCTGGGCACCGCGCAGTCCGCCCCCGCGGCTCCTGGCCAGACCACCCCTAGGACCCCCTGCCCCAAGTCGCAGCC 4025
人類SYN啟動子(短) TAGTATCTGCAGAGGGCCCTGCGTATGAGTGCAAGTGGGTTTTAGGACCAGGATGAGGCGGGGTGGGGGTGCCTACCTGACGACCGACCCCGACCCACTGGACAAGCACCCAACCCCCATTCCCCAAATTGCGCATCCCCTATCAGAGAGGGGGAGGGGAAACAGGATGCGGCGAGGCGCGTGCGCACTGCCAGCTTCAGCACCGCGGACAGTGCCTTCGCCCCCGCCTGGCGGCGCGCGCCACCGCCGCCTCAGCACTGAAGGCGCGCTGACGTCACTCGCCGGTCCCCCGCAAACTCCCCTTCCCGGCCACCTTGGTCGCGTCCGCGCCGCCGCCGGCCCAGCCGGACCGCACCACGCGAGGCGCGAGATAGGGGGGCACGGGCGCGACCATCTGCGCTGCGGCGCCGGCGACTCAGCGCTGCCTCAGTCTGCGGTGGGCAGCGGAGGAGTCGTGTCGTGCCTGAGAGCGCAGCTGTGCTCCTGGGCACCGCGCAGTCCGCCCCCGCGGCTCCTGGCCAGACCACCCCTAGGACCCCCTGCCCCAAGTCGCAGCC 4026
病毒基因體組分：非轉譯區(UTR)
在一些實施例中，基因之野生型非轉譯區(UTR)被轉錄但不被轉譯。通常，5’ UTR起始於轉錄起始位點，終止於起始密碼子，並且3’ UTR緊接在終止密碼子之後開始，一直持續到轉錄終止信號。
通常在特定靶器官(例如，CNS組織、肌肉或DRG)之大量表現基因中發現之特徵可經工程化至UTR中以增強穩定性及蛋白質產生。作為非限制性實例，來自正常在腦中表現之mRNA (例如杭丁頓蛋白)之5’ UTR可用於本文所述之AAV顆粒之病毒基因體中以增強在神經元細胞或中樞神經系統之其他細胞中之表現。
雖然不希望受理論束縛，但野生型5’非轉譯區(UTR)包括在轉譯起始中起作用之特徵。眾所周知，Kozak序列參與核糖體啟動許多基因轉譯之過程，通常包含在5’ UTR中。Kozak序列具有共有的CCR(A/G)CCAUGG，其中R係起始密碼子(ATG)上游三個鹼基處之嘌呤(腺嘌呤或鳥嘌呤)，其後係另一個「G」。
在一個實施例中，病毒基因體中之5’ UTR包括Kozak序列。
在一個實施例中，病毒基因體中之5’ UTR不包括Kozak序列。
雖然不希望受理論束縛，但已知野生型3’ UTR中嵌入了一段腺苷及尿苷。此等富含AU之特徵在具有高周轉率之基因中特別普遍。基於它們的序列特徵及功能特性，可將富含AU之元件(ARE)分為三類(Chen等人，1995，其內容以全文引用之方式併入本文)：I類ARE，諸如但不限於c-Myc及MyoD，在富含U之區域內包含幾個分散之AUUUA模體拷貝。II類ARE，諸如但不限於GM-CSF及TNF-a，具有兩個或更多個重疊UUAUUUA(U/A)(U/A)九聚體。III類ARE，諸如但不限於c-Jun及肌細胞生成素，定義不太明確。此等富含U之區域不包含AUUUA模體。已知大多數與ARE結合之蛋白質會破壞傳訊者之穩定性，而ELAV家族之成員，尤其係HuR，已被證明可增加mRNA之穩定性。HuR結合到所有三個類別之ARE。將HuR特異性結合位點工程化到核酸分子之3' UTR中將導致HuR結合，從而在活體內穩定訊息。
3' UTR富含AU之元件(ARE)之引入、移除或修飾可用於調節多核苷酸之穩定性。當工程化特定多核苷酸，例如病毒基因體之酬載區時，可引入一或多個ARE拷貝以使多核苷酸不太穩定，由此減少所得蛋白質之轉譯且減少其產生。同樣，可鑑別且移除或突變ARE以增加細胞內穩定性，且因此增加所得蛋白質之轉譯及產生。
在一些實施例中，病毒基因體之3' UTR可包括用於模板添加poly-A尾之寡(dT)序列。
在一些實施例中，病毒基因體可包括至少一種miRNA種子、結合位點或完整序列。微小RNA (或miRNA或miR)係19-25個核苷酸之非編碼RNA，它們與核酸靶位點結合且藉由降低核酸分子穩定性或藉由抑制轉譯來下調基因表現。在一些實施例中，微小RNA序列包含種子區，例如成熟微小RNA之位置2-8區域中之序列，其具有與核酸之miRNA靶序列完全或部分互補之Watson-Crick序列。
在一些實施例中，病毒基因體可經工程化以包括、改變或移除至少一個miRNA結合位點、完整序列或種子區。
來自此項技術中已知之任一基因之任一UTR可併入AAV顆粒之病毒基因體中。此等UTR或其部分之置放取向可與從中選擇其之基因相同，或其取向或位置可改變。在一個實施例中，AAV顆粒之病毒基因體中使用之UTR可經倒置、縮短、加長、由此項技術中已知之一或多個其他5' UTR或3' UTR製成。如本文所用，與UTR相關之術語「改變」係指UTR相對於參考序列已以某種方式改變。舉例而言，3'或5' UTR相對於野生型或天然UTR可藉由如上教示之取向或位置之改變而改變，或者可以藉由包含額外之核苷酸、核苷酸之缺失、核苷酸之交換或轉座來改變。
在一些實施例中，AAV顆粒之病毒基因體包含至少一個人工UTR，其不為野生型UTR之變異體。
在一些實施例中，AAV顆粒之病毒基因體包含選自轉錄物家族之UTR，該等轉錄物之蛋白質具有共同功能、結構、特徵或特性。 病毒基因體組分：多聚腺苷酸化序列
編碼本文所述之SOD1 siRNA之病毒基因體可包含至少一種多聚腺苷酸化序列。在一些實施例中，AAV顆粒(例如包含本文所述之AAV衣殼多肽，例如AAV衣殼變異體之AAV顆粒)之病毒基因體包含酬載編碼區之3’端與3’ITR之5’端之間的多聚腺苷酸化序列。
在一些實施例中，AAV顆粒包含編碼siRNA分子之核酸序列，其可位於表現載體中之多聚腺苷酸化序列之上游。此外，AAV顆粒包含可位於表現載體中之啟動子下游之編碼siRNA分子之核酸序列，該啟動子諸如但不限於CMV、U6、CAG、CBA或具有SV40內含子或人類β球蛋白內含子之CBA啟動子。
在一些實施例中，AAV顆粒包含兔球蛋白多聚腺苷酸化(聚A)信號序列(rBGpA)。
在一些實施例中，AAV顆粒包含人類生長激素(hGH)多聚腺苷酸化(聚A)信號序列。
在一些實施例中，多聚腺苷酸化信號序列包含SEQ ID NO: 129或4027之核苷酸序列、相對於SEQ ID NO: 129或4027包含至少一個、兩個或三個但不超過四個修飾(例如取代、插入及/或缺失)之核苷酸序列，或與SEQ ID NO: 129或4027具有至少70% (例如80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%或99%)序列一致性的核苷酸序列。
在一些實施例中，多聚腺苷酸化信號序列包含SEQ ID NO: 129之核苷酸序列、相對於SEQ ID NO: 129包含至少一個、兩個或三個但不超過四個修飾(例如取代、插入及/或缺失)之核苷酸序列，或與SEQ ID NO: 129具有至少70%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%序列一致性的核苷酸序列。 表8：示範性聚A序列
描述 序列 SEQ ID NO:
rBGpA聚A信號序列 GATCTTTTTCCCTCTGCCAAAAATTATGGGGACATCATGAAGCCCCTTGAGCATCTGACTTCTGGCTAATAAAGGAAATTTATTTTCATTGCAATAGTGTGTTGGAATTTTTTGTGTCTCTCACTCG 129
人類生長激素(hGH)聚A信號序列 gggtggcatccctgtgacccctccccagtgcctctcctggccctggaagttgccactccagtgcccaccagccttgtcctaataaaattaagttgcatcattttgtctgactaggtgtccttctataatattatggggtggaggggggtggtatggagcaaggggcaagttgggaagacaacctgtagggcctgcggggtctattgggaaccaagctggagtgcagtggcacaatcttggctcactgcaatctccgcctcctgggttcaagcgattctcctgcctcagcctcccgagttgttgggattccaggcatgcatgaccaggctcagctaatttttgtttttttggtagagacggggtttcaccatattggccaggctggtctccaactcctaatctcaggtgatctacccaccttggcctcccaaattgctgggattacaggcgtgaaccactgctcccttccctgtcctt 4027
病毒基因體組分：外顯子及內含子
在一些實施例中，編碼本文所述之SOD1靶向siRNA之病毒基因體包含增強酬載靶標特異性及表現之至少一種元件(參见例如，Powell等人Viral Expression Cassette Elements to Enhance Transgene Target Specificity and Expression in Gene Therapy, Discov. Med, 2015, 19(102): 49-57，該文獻之內容以全文引用之方式併入本文)，諸如外顯子及/或內含子。內含子之非限制性實例包括MVM (67-97 bp)、F.IX截短之內含子1 (300 bp)、β-球蛋白SD/免疫球蛋白重鏈剪接受體(250 bp)、腺病毒剪接供體/免疫球蛋白剪接受體(500 bp)、SV40晚期剪接供體/剪接受體(19S/16S)(180 bp)及雜交腺病毒剪接供體/IgG剪接受體(230 bp)。在一個實施例中，內含子係β球蛋白內含子。
在一個實施例中，內含子或內含子部分之長度可為100-500個核苷酸。內含子可具有80、90、100、110、120、130、140、150、160、170、171、172、173、174、175、176、177、178、179、180、190、200、210、220、230、240、250、260、270、280、290、300、310、320、330、340、350、360、370、380、390、400、410、420、430、440、450 、460、470、480、490或500個核苷酸之長度。內含子可具有在80-100、80-120、80-140、80-160、80-180、80-200、80-250、80-300、80-350、80-400、80-450、80-500、200-300、200-400、200-500、300-400、300-500或400-500個核苷酸之間的長度。
在一些實施例中，編碼本文所述之SOD1靶向siRNA之病毒基因體包含內含子，該內含子包含SEQ ID NO: 4044之核苷酸序列；相對於SEQ ID NO: 4044包含至少一個、兩個或三個但不超過四個修飾(例如取代、插入及/或缺失)之核苷酸序列，或與SEQ ID NO: 4044具有至少70% (例如80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%或99%)序列一致性的核苷酸序列。
在一些實施例中，內含子位於相對於5'ITR及/或啟動子之3'及相對於編碼調節多核苷酸(例如SOD1靶向RNA劑，例如siRNA)之核苷酸序列、聚A信號序列及/或3'ITR之5'。
在一些實施例中，編碼本文所述之SOD1靶向siRNA之病毒基因體包含一或多個外顯子(例如1、2、3、4、5、6、7或8個或更多個外顯子)。在一些實施例中，病毒基因體包含第一外顯子、第二外顯子或第一外顯子及第二外顯子兩者。
在一些實施例中，第一或第二外顯子包含SEQ ID NO: 4045-4048中任一者之核苷酸序列、相對於SEQ ID NO: 4045-4048中任一者之核苷酸序列包含至少一個、兩個或三個但不超過四個修飾，例如取代、插入或缺失之核苷酸序列，或與SEQ ID NO: 4045-4048中之任一者具有至少80% (例如85%、90%、95%、96%、97%、98%或99%)序列一致性的核苷酸序列。在一些實施例中，病毒基因體包含第一外顯子及第二外顯子，其中：(a)第一外顯子包含SEQ ID NO: 4045或4046之核苷酸序列、相對於SEQ ID NO: 4045或4046之核苷酸序列包含至少一個、兩個或三個但不超過四個修飾，例如取代、插入或缺失之核苷酸序列，或與SEQ ID NO: 4045或4046具有至少80% (例如85%、90%、95%、96%、97%、98%或99%)序列一致性的核苷酸序列；且(b)第二外顯子包含SEQ ID NO: 4047或4048之核苷酸序列、相對於SEQ ID NO: 4047或4048之核苷酸序列包含至少一個、兩個或三個但不超過四個修飾，例如取代、插入或缺失之核苷酸序列，或與SEQ ID NO: 4047或4048具有至少80% (例如85%、90%、95%、96%、97%、98%或99%)序列一致性的核苷酸序列。
在一些實施例中，一或多個或所有外顯子係密碼子最佳化的。在一些實施例中，一或多個或所有外顯子中之一或多個或所有CpG序列經耗竭(諸如，改變以移除CpG序列，諸如藉由取代、插入或缺失)。
在一些實施例中，病毒基因體包含第一外顯子、內含子(例如，包含SEQ ID NO: 4044之序列或其變異體之內含子)及第二外顯子(在本文中稱為「外顯子-內含子-外顯子盒」)。
在一些實施例中，病毒基因體包含第一外顯子、內含子(例如，包含SEQ ID NO: 4044之序列或其變異體之內含子)及第二外顯子，其中內含子位於相對於第一外顯子之3’及相對於第二外顯子之5’。
在一些實施例中，外顯子-內含子-外顯子盒包含SEQ ID NO: 4042或4043之核苷酸序列、相對於SEQ ID NO: 4042或4043包含至少一個、兩個或三個但不超過四個修飾，例如取代、插入或缺失之核苷酸序列，或與SEQ ID NO: 4042或4043具有至少80% (例如85%、90%、95%、96%、97%、98%或99%)序列一致性的核苷酸序列。
在一些實施例中，外顯子-內含子-外顯子盒位於相對於5'ITR及/或啟動子之3'及相對於編碼調節多核苷酸(例如SOD1靶向RNA劑，例如siRNA)之核苷酸序列、聚A信號序列及/或3'ITR之5'。
在一些實施例中，編碼調節多核苷酸(例如SOD1靶向RNA劑，例如siRNA)之核苷酸序列位於外顯子-內含子-外顯子盒之內含子內(例如插入其中)。
在一些實施例中，編碼調節多核苷酸(例如SOD1靶向RNA劑，例如siRNA)之核苷酸序列替換外顯子-內含子-外顯子盒中之全部或部分內含子。 表9：示範性外顯子、內含子及外顯子-內含子-外顯子盒序列
描述 序列 SEQ ID NO:
人類β球蛋白(hβG)外顯子-內含子-外顯子盒 [CpG加下劃線] tcagat cg cctggaga cg ccatcca cg ctgttttgacctccatagaagacac cg ggac cg atccagcctc cgcg gatt cg aatcc cg gc cg ggaa cg gtgcattggaa cgcg gattccc cg tgccaagagtgacgtaagtaccgcctatagagtctataggcccacaaaaaatgctttcttcttttaatatacttttttgtttatcttatttctaatactttccctaatctctttctttcagggcaataatgatacaatgtatcatgcctctttgcaccattctaaagaataacagtgataatttctgggttaaggcaatagcaatatttctgcatataaatatttctgcatataaattgtaactgatgtaagaggtttcatattgctaatagcagctacaatccagctaccattctgcttttattttatggttgggataaggctggattattctgagtccaagctaggcccttttgctaatcatgttcatacctcttatcttcctcccacagctcctgggcaa cg tgctggtctgtgtgctggcccatcactttggcaaagaatt 4042
hβG外顯子-內含子-外顯子盒[CpG耗竭] tcagatcacctggagacaccatccacactgttttgacctccatagaagacaccaggaccaatccagcctccacagattccaatcccagccaggaacagtgcattggaacacagattccccttgccaagagtgacgtaagtaccgcctatagagtctataggcccacaaaaaatgctttcttcttttaatatacttttttgtttatcttatttctaatactttccctaatctctttctttcagggcaataatgatacaatgtatcatgcctctttgcaccattctaaagaataacagtgataatttctgggttaaggcaatagcaatatttctgcatataaatatttctgcatataaattgtaactgatgtaagaggtttcatattgctaatagcagctacaatccagctaccattctgcttttattttatggttgggataaggctggattattctgagtccaagctaggcccttttgctaatcatgttcatacctcttatcttcctcccacagctcctgggcaacctgctggtctgtgtgctggcccatcactttggcaaagaatt 4043
hβG內含子 gtaagtaccgcctatagagtctataggcccacaaaaaatgctttcttcttttaatatacttttttgtttatcttatttctaatactttccctaatctctttctttcagggcaataatgatacaatgtatcatgcctctttgcaccattctaaagaataacagtgataatttctgggttaaggcaatagcaatatttctgcatataaatatttctgcatataaattgtaactgatgtaagaggtttcatattgctaatagcagctacaatccagctaccattctgcttttattttatggttgggataaggctggattattctgagtccaagctaggcccttttgctaatcatgttcatacctcttatcttcctcccacag 4044
hβG外顯子(第一外顯子) [CpG加下劃線] Tcagat cgcctggaga cgccatcca cgctgttttgacctccatagaagacac cgggac cgatccagcctc cgcggatt cgaatcc cggc cgggaa cggtgcattggaa cgcggattccc cgtgccaagagtgac 4045
hβG外顯子(第一外顯子) [CpG耗竭] tcagatcacctggagacaccatccacactgttttgacctccatagaagacaccaggaccaatccagcctccacagattccaatcccagccaggaacagtgcattggaacacagattccccttgccaagagtgac 4046
hβG外顯子(第二外顯子) [CpG加下劃線] ctcctgggcaa cgtgctggtctgtgtgctggcccatcactttggcaaagaatt 4047
hβG外顯子(第二外顯子) [CpG耗竭] ctcctgggcaacctgctggtctgtgtgctggcccatcactttggcaaagaatt 4048
在一些實施例中，經編碼之siRNA分子可位於表現載體中之啟動子下游，該啟動子係諸如但不限於CMV、U6、H1、CBA、CAG或具有內含子(諸如SV40或此項技術中已知之其他內含子)之CBA啟動子。另外，經編碼之siRNA分子亦可位於表現載體中之多聚腺苷酸化序列上游。
在一些實施例中，編碼siRNA之核苷酸序列可位於內含子內(例如，插入內含子中)，或替換內含子序列之全部或一部分。
在一些實施例中，編碼siRNA之核苷酸序列可位於內含子內(例如，插入內含子中)，或替換外顯子-內含子-外顯子盒(例如，SEQ ID NO: 4042或4043之外顯子-內含子-外顯子盒)之內含子序列的全部或一部分。 病毒基因體組分：填塞或填充序 列
在一些實施例中，編碼本文所述之SOD1靶向siRNA之病毒基因體包含改良包裝效率及表現之至少一種元件，諸如填塞或填充序列。填塞序列之非限制性實例包括白蛋白及/或α-1抗胰蛋白酶。任一已知病毒、哺乳動物或植物序列可經操縱以用作填塞序列。
在一個實施例中，填塞或填充序列之長度可為約100-3500個核苷酸。填塞序列可具有約100、200、300、400、500、600、700、800、900、1000、1100、1200、1300、1400、1500、1600、1700、1800、1900、2000、2100、2200、2300、2400、2500、2600、2700、2800、2900或3000個核苷酸之長度。
在一些實施例中，填充序列可包含慢病毒之區域或一部分。在一些實施例中，填充序列包含SEQ ID NO: 82之核苷酸序列，或與其至少70%、75%、80%、85%、90%、92%、95%、96%、97%、98%或99%一致之核苷酸序列。在一些實施例中，填充序列包含SEQ ID NO: 82之核苷酸序列，或與其至少90%、92%、95%、96%、97%、98%或99%一致之核苷酸序列。在一些實施例中，填充序列包含SEQ ID NO: 82之核苷酸序列，或與其至少95%、96%、97%、98%或99%一致之核苷酸序列。
在一些實施例中，填充序列可包含白蛋白基因之區域或一部分。在某些實施例中，填充序列可包含人類白蛋白基因(NCBI參考序列：NG_009291.1)之區域或一部分。 病毒基因體組分：miRNA
在一些實施例中，病毒基因體包含編碼miRNA之序列以減少組織或細胞(例如DRG (背根神經節)或其他神經節之神經元，諸如交感或副交感神經系統之神經元)中酬載之表現。在一些實施例中，可在病毒基因體中編碼miRNA (例如miR183、miR182及/或miR96)以調節(例如減少) DRG神經元中病毒基因體之表現。作為另一個非限制性實例，可在病毒基因體中編碼miR-122 miRNA以調節(例如減少)肝臟中病毒基因體之表現。在一些實施例中，可在病毒基因體中編碼miRNA，例如miR-142-3p，以調節(例如減少)造血譜系之細胞或組織中病毒基因體之表現，包括例如免疫細胞(例如，抗原呈遞細胞或APC，包括樹突細胞(DC)、巨噬細胞及B淋巴球)。在一些實施例中，可在病毒基因體中編碼miRNA (例如miR-1)以調節(例如減少)心臟細胞或組織中病毒基因體之表現。 病毒基因體組分：miR結合位 點
本發明之AAV病毒顆粒之組織或細胞特異性表現可藉由引入組織或細胞特異性調控序列(例如啟動子、增強子、微小RNA結合位點，例如去靶向位點)來增強。不希望受限於理論，人們認為，基於組織或細胞(例如非靶向細胞或組織)中對應內源微小RNA (miRNA)或對應受控外源miRNA之表現，經編碼之miR結合位點可調節(例如防止、阻抑或以其他方式抑制)本發明病毒基因體上所關注基因之表現。在一些實施例中，miR結合位點調節(例如，減少)由本文所述之AAV顆粒之病毒基因體編碼之酬載在表現對應mRNA之細胞或組織中的表現。在一些實施例中，miR結合位點調節(例如減少) DRG、肝臟、造血譜系或其組合之細胞或組織中針對SOD1之經編碼siRNA之表現。
在一些實施例中，本文所述之AAV顆粒之病毒基因體包含編碼微小RNA結合位點(例如去靶向位點)之核苷酸序列。在一些實施例中，本文所述之AAV顆粒之病毒基因體包含編碼miR結合位點、微小RNA結合位點系列(miR BS)或其反向補體之核苷酸序列。
在一些實施例中，編碼miR結合位點系列或miR結合位點之核苷酸序列位於病毒基因體之3’-UTR區(例如編碼酬載之核酸序列之3’，例如在聚A序列之前)、病毒基因體之5’-UTR區(例如編碼酬載之核酸序列之5’)或二者中。
在一些實施例中，經編碼之miR結合位點系列包含miR結合位點(miR BS)之至少1-5個拷貝，例如至少1-3個、2-4個、3-5個、1個、2個、3個、4個、5個或更多個拷貝。在一些實施例中，經編碼之miR結合位點系列包含miR結合位點之4個拷貝。在一些實施例中，所有拷貝係一致的，例如包含相同之miR結合位點。在一些實施例中，經編碼之miR結合位點系列內之miR結合位點係連續的且未由間隔子隔開。在一些實施例中，經編碼之miR結合位點系列內之miR結合位點由間隔子(例如非編碼序列)隔開。在一些實施例中，間隔子之長度係約1至6個核苷酸或約5至10個核苷酸，例如約7-8個核苷酸。在一些實施例中，間隔子之長度係約8個核苷酸。在一些實施例中，間隔子序列包含以下中之一或多者：(i) GGAT；(ii) CACGTG；(iii) GCATGC，或(i)-(iii)中之一或多者之重複。在一些實施例中，間隔子包含核苷酸序列GATAGTTA，或具有GATAGTTA之至少一個、兩個、或三個修飾(例如，取代、插入或缺失)但不超過四個修飾(例如，取代、插入或缺失)之核苷酸序列。
在一些實施例中，經編碼之miR結合位點系列包含miR結合位點(miR BS)之至少1-5個拷貝，例如至少1-3個、2-4個、3-5個、1個、2個、3個、4個、5個或更多個拷貝。在一些實施例中，至少1個、2個、3個、4個、5個或所有拷貝係不同的，例如包含不同之miR結合位點。在一些實施例中，經編碼之miR結合位點系列內之miR結合位點係連續的且未由間隔子隔開。在一些實施例中，經編碼之miR結合位點系列內之miR結合位點由間隔子(例如非編碼序列)隔開。在一些實施例中，間隔子之長度為約1至6個核苷酸或約5至10個核苷酸，例如約7-8個核苷酸或約8個核苷酸。在一些實施例中，間隔子序列包含以下中之一或多者：(i) GGAT；(ii) CACGTG；(iii) GCATGC，或(i)-(iii)中之一或多者之重複。在一些實施例中，間隔子包含GATAGTTA之核苷酸序列，或具有GATAGTTA之至少一個、兩個、或三個修飾(例如，取代、插入或缺失)但不超過四個修飾(例如，取代、插入或缺失)之核苷酸序列。
在一些實施例中，經編碼之miR結合位點與宿主細胞中之miR實質上一致(例如至少70%、75%、80%、85%、90%、95%、99%或100%一致)。在一些實施例中，編碼之miR結合位點相對於宿主細胞中之miR包含至少1個、2個、3個、4個或5個錯配或不超過6個、7個、8個、9個或10個錯配。在一些實施例中，錯配核苷酸係鄰接的。在一些實施例中，錯配核苷酸係非鄰接的。在一些實施例中，錯配核苷酸出現在miR結合位點之種子區結合序列外，諸如miR結合位點之一或兩端。在一些實施例中，經編碼之miR結合位點與宿主細胞中之miR 100%一致。
在一些實施例中，編碼miR結合位點之核苷酸序列與宿主細胞中之miR實質上互補(例如至少70%、75%、80%、85%、90%、95%、99%或100%互補)。在一些實施例中，與編碼miR結合位點之核苷酸序列互補之序列相對於宿主細胞中之對應miR包含至少1個、2個、3個、4個或5個錯配或不超過6個、7個、8個、9個或10個錯配。在一些實施例中，錯配核苷酸係鄰接的。在一些實施例中，錯配核苷酸係非鄰接的。在一些實施例中，錯配核苷酸出現在miR結合位點之種子區結合序列外，諸如miR結合位點之一或兩端。在一些實施例中，經編碼之miR結合位點與宿主細胞中之miR 100%互補。
在一些實施例中，經編碼之miR結合位點或經編碼之miR結合位點系列之長度係約10至約125個核苷酸，例如長度係約10至50個核苷酸、10至100個核苷酸、50至100個核苷酸、50至125個核苷酸、或100至125個核苷酸。在一些實施例中，經編碼之miR結合位點或經編碼之miR結合位點系列之長度係約7至約28個核苷酸，例如長度係約8-28個核苷酸、7-28個核苷酸、8-18個核苷酸、12-28個核苷酸、20-26個核苷酸、22個核苷酸、24個核苷酸或26個核苷酸，且視情況地包含與miRNA (例如miR122、miR142、miR-1、miR183)之種子序列互補(例如完全互補或部分互補)之至少一個連續區域(例如7個或8個核苷酸)。
在一些實施例中，經編碼之miR結合位點與在肝或肝細胞中表現之miR (諸如miR122)互補(例如完全互補或部分互補)。在一些實施例中，經編碼之miR結合位點或經編碼之miR結合位點系列包含miR122結合位點序列。在一些實施例中，經編碼之miR122結合位點包含ACAAACACCATTGTCACACTCCA (SEQ ID NO: 61)之核苷酸序列，或相對於SEQ ID NO: 61包含至少50%、55%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、至少95%、至少99%或100%序列一致性，或具有至少一個、兩個、三個、四個、五個、六個或七個修飾，例如取代、插入或缺失但不超過十個修飾，例如取代、插入或缺失的核苷酸序列，例如其中修飾可導致經編碼之miR結合位點與對應miRNA之間的錯配。在一些實施例中，病毒基因體包含經編碼之miR122結合位點(例如經編碼之miR122結合位點系列)之至少3個、4個或5個拷貝，視情況地其中經編碼之miR122結合位點系列包含以下核苷酸序列：ACAAACACCATTGTCACACTCCACACAAACACCATTGTCACACTCCACACAAACACCATTGTCACACTCCA (SEQ ID NO: 62)，或相對於SEQ ID NO: 62包含至少50%、55%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、至少95%、至少99%或100%序列一致性、或具有至少一個、兩個、三個、四個、五個、六個或七個修飾，例如取代、插入或缺失但不超過十個修飾，例如取代、插入或缺失的核苷酸序列，例如，其中修飾可導致經編碼之miR結合位點與對應miRNA之間的錯配。在一些實施例中，經編碼之miR122結合位點中之至少兩個直接連接，例如沒有間隔子。在其他實施例中，至少兩個經編碼之miR122結合位點由間隔子(例如長度為1個、2個、3個、4個、5個、6個、7個、8個、9個或10個核苷酸)隔開，該間隔子位於兩條或更多條連續經編碼之miR122結合位點序列之間。在實施例中，間隔子之長度係約1至6個核苷酸或約5至10個核苷酸，例如約7-8個核苷酸或約8個核苷酸。在一些實施例中，間隔子序列包含以下中之一或多者：(i) GGAT；(ii) CACGTG；(iii) GCATGC，或(i)-(iii)中之一或多者之重複。在一些實施例中，間隔子包含GATAGTTA之核苷酸序列，或包含GATAGTTA之至少一個、兩個、或三個修飾(例如，取代、插入或缺失)但不超過四個修飾(例如，取代、插入或缺失)之核苷酸序列。
在一些實施例中，經編碼之miR結合位點與在心臟中表現之miR互補(例如完全或部分互補)。在實施例中，經編碼之miR結合位點或經編碼之miR結合位點系列包含miR-1結合位點。在一些實施例中，經編碼之miR-1結合位點包含ATACATACTTCTTTACATTCCA (SEQ ID NO: 4679)之核苷酸序列、相對於SEQ ID NO: 4679包含至少50%、55%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、至少95%、至少99%或100%序列一致性，或具有至少一個、兩個、三個、四個、五個、六個或七個修飾，例如取代、插入或缺失但不超過十個修飾，例如取代、插入或缺失的核苷酸序列，例如其中修飾可導致經編碼之miR結合位點與對應miRNA之間的錯配。在一些實施例中，病毒基因體包含經編碼之miR-1結合位點之至少2、3、4或5個拷貝，例如經編碼之miR-1結合位點系列。在一些實施例中，編碼之miR-1結合位點之至少2、3、4或5個拷貝(例如，2或3個拷貝)係連續的(例如，未由間隔子隔開)或由間隔子隔開。在一些實施例中，間隔子之長度為約1至6個核苷酸或約5至10個核苷酸，例如約7-8個核苷酸或約8個核苷酸。在一些實施例中，間隔子序列包含以下中之一或多者：(i) GGAT；(ii) CACGTG；(iii) GCATGC，或(i)-(iii)中之一或多者之重複。在一些實施例中，間隔子包含GATAGTTA之核苷酸序列，或具有GATAGTTA之至少一個、兩個、或三個修飾(例如，取代、插入或缺失)但不超過四個修飾(例如，取代、插入或缺失)之核苷酸序列。
在一些實施例中，經編碼之miR結合位點與在造血譜系(包括免疫細胞，例如抗原呈遞細胞或APC，包括樹突細胞(DC)、巨噬細胞及B淋巴球)中表現之miR互補(例如完全互補或部分互補)。在一些實施例中，經編碼之miR結合位點與在造血譜系中表現之miR互補(例如完全互補或部分互補)，包含例如US 2018/0066279中所揭示之核苷酸序列，該專利之內容以全文引用之方式併入本文。
在一些實施例中，經編碼之miR結合位點或經編碼之miR結合位點系列包含miR-142-3p結合位點序列。在一些實施例中，經編碼之miR-142-3p結合位點包含TCCATAAAGTAGGAAACACTACA (SEQ ID NO: 65)之核苷酸序列、相對於SEQ ID NO: 65包含至少50%、55%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、至少95%、至少99%或100%序列一致性，或具有至少一個、兩個、三個、四個、五個、六個或七個修飾，例如取代、插入或缺失但不超過十個修飾，例如取代、插入或缺失的核苷酸序列，例如其中修飾可導致經編碼之miR結合位點與對應miRNA之間的錯配。在一些實施例中，病毒基因體包含經編碼之miR-142-3p結合位點之至少3個、4個或5個拷貝，例如經編碼之miR-142-3p結合位點系列。在一些實施例中，經編碼之miR-142-3p結合位點之至少3個、4個或5個拷貝(例如4個拷貝)係連續的(例如未由間隔子隔開)或由間隔子隔開。在一些實施例中，間隔子之長度為約1至6個核苷酸或約5至10個核苷酸，例如約7-8個核苷酸或約8個核苷酸。在一些實施例中，間隔子序列包含以下中之一或多者：(i) GGAT；(ii) CACGTG；(iii) GCATGC，或(i)-(iii)中之一或多者之重複。在一些實施例中，間隔子包含GATAGTTA之核苷酸序列，或具有GATAGTTA之至少一個、兩個、或三個修飾(例如，取代、插入或缺失)但不超過四個修飾(例如，取代、插入或缺失)之核苷酸序列。
在一些實施例中，經編碼之miR結合位點與在DRG (背根神經節)神經元中表現之miR (例如miR183、miR182及/或miR96結合位點)互補(例如完全互補或部分互補)。在一些實施例中，經編碼之miR結合位點與在DRG神經元中表現之miR互補(例如完全互補或部分互補)。在一些實施例中，經編碼之miR結合位點包含例如WO2020/132455中所揭示之核苷酸序列，該專利之內容以全文引用之方式併入本文。
在一些實施例中，經編碼之miR結合位點或經編碼之miR結合位點系列包含miR183結合位點序列。在一些實施例中，經編碼之miR183結合位點包含AGTGAATTCTACCA GTGCCATA (SEQ ID NO: 60)之核苷酸序列，或相對於SEQ ID NO: 60包含至少50%、55%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、至少95%、至少99%或100%序列一致性，或具有至少一個、兩個、三個、四個、五個、六個或七個修飾，例如取代、插入或缺失但不超過十個修飾，例如取代、插入或缺失的核苷酸序列，例如其中修飾可導致經編碼之miR結合位點與對應miRNA之間的錯配。在一些實施例中，與種子序列互補(例如完全互補或部分互補)之序列對應於經編碼之miR-183結合位點序列之加雙下劃線之序列。在一些實施例中，病毒基因體包含經編碼之miR183結合位點(例如經編碼之miR183結合位點)之至少3個、4個或5個拷貝(例如4個拷貝)。在一些實施例中，病毒基因體包含經編碼之miR183結合位點(例如包含miR183結合位點之4個拷貝之經編碼之miR183結合位點)之至少4個拷貝。在一些實施例中，經編碼之miR183結合位點之至少3個、4個或5個拷貝(例如4個拷貝)係連續的(例如未由間隔子隔開)或由間隔子隔開。在一些實施例中，間隔子之長度為約1至6個核苷酸或約5至10個核苷酸，例如約7-8個核苷酸或約8個核苷酸。在一些實施例中，間隔子包含GATAGTTA之核苷酸序列，或具有GATAGTTA之至少一個、兩個、或三個修飾(例如，取代、插入或缺失)但不超過四個修飾(例如，取代、插入或缺失)之核苷酸序列。在一些實施例中，間隔子序列包含以下中之一或多者：(i) GGAT；(ii) CACGTG；(iii) GCATGC，或(i)-(iii)中之一或多者之重複。
在一些實施例中，經編碼之miR結合位點或經編碼之miR結合位點系列包含miR182結合位點序列。在一些實施例中，經編碼之miR182結合位點包含AGTGTGAGTTCTACCATTGCCAAA (SEQ ID NO: 63)之核苷酸序列、相對於SEQ ID NO: 63包含至少50%、55%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、至少95%、至少99%或100%序列一致性，或具有至少一個、兩個、三個、四個、五個、六個或七個修飾，例如取代、插入或缺失但不超過十個修飾，例如取代、插入或缺失的核苷酸序列，例如其中修飾可導致經編碼之miR結合位點與對應miRNA之間的錯配。在一些實施例中，病毒基因體包含經編碼之miR182結合位點之至少2、3、4或5個拷貝，例如經編碼之miR182結合位點系列。在一些實施例中，經編碼之miR182結合位點之至少2、3、4或5個拷貝(例如，2或3個拷貝)係連續的(例如，未由間隔子隔開)或由間隔子隔開。在一些實施例中，間隔子之長度為約1至6個核苷酸或約5至10個核苷酸，例如約7-8個核苷酸或約8個核苷酸。在一些實施例中，間隔子包含GATAGTTA之核苷酸序列，或具有GATAGTTA之至少一個、兩個、或三個修飾(例如，取代、插入或缺失)但不超過四個修飾(例如，取代、插入或缺失)之核苷酸序列。在一些實施例中，間隔子序列包含以下中之一或多者：(i) GGAT；(ii) CACGTG；(iii) GCATGC，或(i)-(iii)中之一或多者之重複。
在一些實施例中，經編碼之miR結合位點或經編碼之miR結合位點系列包含miR96結合位點序列。在一些實施例中，經編碼之miR96結合位點包含AGCAAAAATGTGCTAGTGCCAAA (SEQ ID NO: 64)之核苷酸序列、相對於SEQ ID NO: 64包含至少50%、55%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、至少95%、至少99%或100%序列一致性，或具有至少一個、兩個、三個、四個、五個、六個或七個修飾，例如取代、插入或缺失但不超過十個修飾，例如取代、插入或缺失的序列，例如其中修飾可導致經編碼之miR結合位點與對應miRNA之間的錯配。在一些實施例中，病毒基因體包含經編碼之miR96結合位點之至少2、3、4或5個拷貝，例如經編碼之miR96結合位點系列。在一些實施例中，經編碼之miR96結合位點之至少2、3、4或5個拷貝(例如，2或3個拷貝)係連續的(例如，未由間隔子隔開)或由間隔子隔開。在一些實施例中，間隔子之長度為約1至6個核苷酸或約5至10個核苷酸，例如約7-8個核苷酸或約8個核苷酸。在一些實施例中，間隔子包含GATAGTTA之核苷酸序列，或具有GATAGTTA之至少一個、兩個、或三個修飾(例如，取代、插入或缺失)但不超過四個修飾(例如，取代、插入或缺失)之核苷酸序列。在一些實施例中，間隔子序列包含以下中之一或多者：(i) GGAT；(ii) CACGTG；(iii) GCATGC，或(i)-(iii)中之一或多者之重複。
在一些實施例中，經編碼之miR結合位點系列包含miR122結合位點、miR-1、miR142結合位點、miR183結合位點、miR182結合位點、miR96結合位點或其組合。在一些實施例中，經編碼之miR結合位點系列包含miR122結合位點、miR142結合位點、miR183結合位點、miR182結合位點、miR96結合位點或其組合之至少2、3、4或5個拷貝。在一些實施例中，經編碼之miR結合位點中之至少兩個直接連接，例如沒有間隔子。在其他實施例中，至少兩個經編碼之miR結合位點由間隔子隔開，例如長度為1、2、3、4、5、6、7、8、9或10個核苷酸，其位於兩個或更多個連續編碼之miR結合位點序列之間。在實施例中，間隔子之長度為約5至10個核苷酸，例如約7-8個核苷酸或約8個核苷酸。在一些實施例中，間隔子編碼序列或其反向互補序列包含以下中之一或多種：(i) GGAT；(ii) CACGTG；(iii) GCATGC，或(i)-(iii)中之一或多者之重複。在一些實施例中，間隔子包含GATAGTTA之核苷酸序列，或具有GATAGTTA之至少一個、兩個、或三個修飾(例如，取代、插入或缺失)但不超過四個修飾(例如，取代、插入或缺失)之核苷酸序列。
在一些實施例中，經編碼之miR結合位點系列包含miR-1、miR122結合位點、miR142結合位點、miR183結合位點、miR182結合位點、miR96結合位點中之至少兩個、三個、四個、五個或所有之組合之至少2-5個拷貝(例如，2或3個拷貝)，其中系列中之各miR結合位點係連續的(例如，未由間隔子隔開)或由間隔子隔開。在一些實施例中，間隔子之長度為約1至6個核苷酸或約5至10個核苷酸，例如約7-8個核苷酸或約8個核苷酸。在一些實施例中，間隔子序列包含以下中之一或多者：(i) GGAT；(ii) CACGTG；(iii) GCATGC，或(i)-(iii)中之一或多者之重複。在一些實施例中，間隔子包含GATAGTTA之核苷酸序列，或具有GATAGTTA之至少一個、兩個、或三個修飾(例如，取代、插入或缺失)但不超過四個修飾(例如，取代、插入或缺失)之核苷酸序列。
在一些實施例中，經編碼之miR結合位點系列包含miR-122結合位點及miR-1結合位點之組合之至少2-5個拷貝(例如，2或3個拷貝)，其中系列中之各miR結合位點係連續的(例如，未由間隔子隔開)或由間隔子隔開。在一些實施例中，間隔子之長度為約1至6個核苷酸或約5至10個核苷酸，例如約7-8個核苷酸或約8個核苷酸。在一些實施例中，間隔子序列包含以下中之一或多者：(i) GGAT；(ii) CACGTG；(iii) GCATGC，或(i)-(iii)中之一或多者之重複。在一些實施例中，間隔子包含GATAGTTA之核苷酸序列，或具有GATAGTTA之至少一個、兩個、或三個修飾(例如，取代、插入或缺失)但不超過四個修飾(例如，取代、插入或缺失)之核苷酸序列。 酬載
在一些實施例中，AAV顆粒，例如用於載體化遞送RNA劑，例如siRNA (例如本文所述之SOD1靶向siRNA)之AAV顆粒包含酬載。在一些實施例中，AAV顆粒，例如用於載體化遞送本文所述之siRNA (例如SOD1靶向siRNA)之AAV顆粒包含編碼酬載之病毒基因體。在一些實施例中，病毒基因體包含可操作地連接至編碼酬載之核酸之啟動子。在一些實施例中，酬載包含siRNA。
在一些實施例中，本文之揭示內容提供允許改良由基因療法載體遞送之SOD1靶向siRNA之表現的構築體。
在一些實施例中，本揭示案提供允許改良由基因療法載體遞送之SOD1靶向siRNA之生物分佈的構築體。
在一些實施例中，本揭示案提供允許改良由基因療法載體遞送之SOD1靶向siRNA之亞細胞分佈或輸送的構築體。
在一些實施例中，本揭示案提供允許改良由基因療法載體遞送之SOD1靶向siRNA向中樞神經系統(例如腦及脊髓)中之細胞輸送的構築體。
在一些態樣中，本揭示案係關於含有或包含編碼SOD1靶向siRNA或其功能片段或變異體之核酸序列之組成物，以及活體外或活體內向個體(例如，疾病例如與SOD1之表現相關的疾病之人類及/或動物模型)投與組成物之方法。
本揭示案之AAV顆粒可包含編碼至少一種酬載之核酸序列。在一些實施例中，酬載或酬載區包含由病毒基因體編碼或在病毒基因體內編碼之多核苷酸或多核苷酸區或此類多核苷酸或多核苷酸區之表現產物，例如編碼SOD1靶向多核苷酸(例如SOD1靶向RNA劑，例如siRNA，例如用於抑制SOD1表現之siRNA)或其片段或變異體之多核苷酸。酬載可包含此項技術中已知的任何核酸，其可用於在用攜帶酬載之AAV顆粒轉導或與其接觸的靶細胞中表現(藉由補充SOD1 siRNA或使用調節核酸進行基因替換) SOD1靶向siRNA。
酬載構築體可包含編碼及非編碼核酸序列之組合。
病毒基因體之任何區段、片段或整體以及其中之酬載區可經密碼子最佳化。
在一些實施例中，病毒基因體編碼多於一種酬載。作為非限制性實例，可複製編碼多於一種酬載之病毒基因體且將其包裝至病毒顆粒中。經包含多於一種酬載之病毒顆粒轉導之靶細胞可在單個細胞中表現酬載中之各者。
在一些實施例中，病毒基因體可編碼編碼或非編碼RNA。在某些實施例中，腺相關病毒載體顆粒進一步包含至少一個選自由Kozak序列、主鏈序列及內含子序列組成之群的順式元件。
在一些實施例中，酬載為多肽，其可為肽或蛋白質。由酬載構築體編碼之蛋白質可包含分泌蛋白、細胞內蛋白、細胞外蛋白及/或膜蛋白。經編碼之蛋白質可為結構性或功能性的。由病毒基因體編碼之蛋白質包括但不限於哺乳動物蛋白質。在某些實施例中，AAV顆粒含有編碼SOD1靶向多核苷酸(例如SOD1靶向RNAi，例如用於抑制SOD1表現之siRNA)或其片段或變異體之病毒基因體。本文所述之AAV顆粒可用於人類疾病、獸醫應用及多種活體內及活體外背景領域。
在一些實施例中，酬載可包含用作評估細胞轉型及表現之標記蛋白之多肽、融合蛋白、具有所需生物活性之多肽、可補充遺傳缺陷之基因產物、RNA分子、轉錄因子及其他與調控及/或表現有關的基因產物。在一些實施例中，酬載可包含提供所需效果或調控功能之核苷酸序列(例如，轉位子、轉錄因子)。
經編碼之酬載可包含基因療法產物。基因療法產物可包括，但不限於多肽、RNA分子或當在靶細胞中表現時提供所需治療效果之其他基因產物。在一些實施例中，基因療法產物可包含非功能基因或不存在、表現量不足或突變之基因的替代物。在一些實施例中，基因療法產物可包含非功能蛋白或多肽，或不存在、表現量不足、錯誤折疊、降解過快或突變之蛋白質或多肽之替代物。舉例而言，基因療法產物可包含SOD1 siRNA或編碼SOD1 siRNA之多核苷酸以治療SOD1相關病症。
在一些實施例中，酬載編碼傳訊RNA (mRNA)。如本文所用，術語「傳訊RNA」(mRNA)係指編碼所關注多肽且能夠經轉譯以在活體外、活體內、原位或離體產生經編碼之所關注多肽之任何多核苷酸。
mRNA之組分包括但不限於編碼區、5'-UTR (非轉譯區)、3'-UTR、5'-帽及聚A尾。在一些實施例中，AAV基因體之經編碼mRNA或任何部分可經密碼子最佳化。
編碼酬載之酬載構築體可包含或編碼可選擇標記物。可選擇標記物可包含在宿主細胞中表現之基因序列或由基因序列編碼之蛋白質或多肽，其允許自可表現或可不表現可選擇標記物之細胞群體中鑑別、選擇及/或純化宿主細胞。在一些實施例中，可選擇標記物提供抗性以在原本會殺死宿主細胞之選擇過程(諸如用抗生素處理)中存活。在一些實施例中，抗生素可選擇標記物可包含一或多種抗生素抗性因子，包括但不限於新黴素抗性(例如neo)、潮黴素抗性、康黴素抗性及/或嘌呤黴素抗性。
在一些實施例中，編碼酬載之酬載構築體可包含可選擇標記物，包括但不限於β-內醯胺酶、螢光素酶、β-半乳糖苷酶或此項技術中該術語所理解之任何其他報告基因，包括細胞表面標記物，諸如CD4或截短神經生長因子(NGFR) (關於GFP，參見WO 96/23810；Heim等人， Current Biology2:178-182 (1996)；Heim等人， Proc. Natl. Acad. Sci. US A(1995)；或Heim等人， Science373:663-664 (1995)；關於β-內醯胺酶，參見WO 96/30540)；該等文獻中之每一者之內容以全文引用之方式併入本文。
在一些實施例中，編碼可選擇標記物之酬載構築體可包含螢光蛋白。如本文所述之螢光蛋白可包含任何螢光標記物，包括但不限於綠色、黃色及/或紅色螢光蛋白(GFP、YFP及/或RFP)。在一些實施例中，編碼可選擇標記物之酬載構築體可包含人類流感血球凝集素(HA)標籤。
在某些實施例中，用於在靶細胞中表現酬載之核酸將併入病毒基因體中且位於兩個ITR序列之間。
在一些實施例中，酬載構築體進一步包含編碼肽之核酸序列，該肽以高親和力結合至陽離子非依賴性甘露糖6-磷酸(M6P)受體(CI-MPR)，如國際專利申請公開案第WO2019213180A1號中所述，該文獻之揭示內容以全文引用之方式併入本文。結合CI-MPR之肽可為例如IGF2肽或其變異體。CI-MPR之結合可促進由基因療法載體提供之治療性蛋白質之細胞攝取或遞送以及細胞內或亞細胞靶向。
酬載區可以反映類似於或鏡像mRNA (例如由SOD1編碼之mRNA)之天然組織之區域的方式來構築。 調節多核苷 酸
在一些實施例中，調節多核苷酸(例如RNA或DNA分子)可用於治療神經退化疾病，例如肌肉萎縮性脊髓側索硬化症(ALS)。
在一些實施例中，調節多核苷酸包含編碼pri-miRNA、pre-miRNA、miRNA或siRNA之核苷酸序列。在一些實施例中，pri-miRNA或pre-miRNA由細胞酶(例如切丁酶(Dicer))裂解以產生miRNA或siRNA。在一些實施例中，調節多核苷酸包含編碼pri-miRNA或pre-miRNA支架序列內之siRNA之核苷酸序列。在此類情況下，細胞酶(例如切丁酶)對pre-miRNA或pri-miRNA之裂解產生siRNA。
在一些實施例中，調節多核苷酸可包含至少一個編碼至少一個siRNA分子之核酸序列。若存在多於一個，則核酸可獨立地編碼1、2、3、4、5、6、7、8、9個或多於9個siRNA分子。
本揭示案部分地係關於用於治療神經退化病症之RNA干擾(RNAi)誘導之基因表現抑制。提供靶向SOD1基因之siRNA或dsRNA。此類siRNA或dsRNA可使細胞(諸如運動神經元)中之SOD1基因表現沉默，因此改善ALS之症狀，諸如運動死亡及肌肉萎縮。SOD1 siRNA可在重組AAV基因體之多核苷酸中編碼。
靶向特定mRNA之siRNA雙鏈體或dsRNA可經設計且在活體外合成為靶標SOD1靶向多核苷酸之一部分，且引入細胞中以用於活化RNAi過程。 siRNA分子
本揭示案係關於用於治療神經退化病症之RNA干擾(RNAi)誘導之基因表現抑制。本文提供靶向所關注基因之RNA劑，例如siRNA雙鏈體或經編碼之dsRNA。此類siRNA雙鏈體或經編碼之dsRNA可減少或沉默細胞(諸如但不限於中等棘神經元、皮質神經元及/或星狀細胞)中之基因表現。
RNAi (亦稱為轉錄後基因沉默(PTGS)、平息或共阻抑)係其中RNA分子以序列特異性方式、通常藉由破壞特定mRNA分子來抑制基因表現之轉錄後基因沉默過程。RNAi之活性組分係短/小雙股RNA (dsRNA)，稱為小干擾RNA (siRNA)，其通常含有15-30個核苷酸(例如19至25個、19至24個或19-21個核苷酸)及2個核苷酸3’懸突，且與靶基因之核酸序列相匹配。此等短RNA種類可藉由切丁酶介導之較大dsRNA裂解在活體內天然產生且其在哺乳動物細胞中具有功能。
天然表現之小RNA分子(稱為微小RNA (miRNA))藉由調控mRNA表現來引發基因沉默。含有miRNA之RNA誘導沉默複合物(RISC)靶向與miRNA之5’區(稱為種子區)中之核苷酸2-7呈現完美序列互補性之mRNA，以及與該miRNA之3’區呈現完美序列互補性之其他鹼基對。miRNA介導之基因表現下調可由靶mRNA之裂解、靶mRNA之轉譯抑制或mRNA衰變引起。miRNA靶向序列通常位於靶mRNA之3’-UTR中。單一miRNA可靶向來自不同基因之超過100種轉錄物，且一種mRNA可由不同之miRNA靶向。
靶向特定mRNA之siRNA雙鏈體或dsRNA可經活體外設計且合成，並且引入細胞中用於活化RNAi過程(例如，如Elbashir SM等人，Nature, 2001, 411, 494-498中所述，其內容特此以全文引用之方式併入)。
活體外合成的siRNA分子可引入細胞中以活化RNAi。與內源性dsRNA類似，外源性siRNA雙鏈體在引入細胞時，可經組裝形成RNA誘導之沉默複合物(RISC)，此為與RNA序列相互作用之多單元複合物，該等RNA序列與siRNA雙鏈體之兩股中之一者(亦即，反義股)互補。在該過程中，siRNA之有義股(或過客股)自複合物丟失，而siRNA之反義股(或指導股)與其互補RNA相匹配。具體而言，含有siRNA之RISC複合物之靶係呈現完美序列互補性之mRNA。然後，藉由裂解、釋放及降解靶標，發生siRNA介導之基因沉默。
與使用單股(ss)-siRNA (例如，反義股RNA或反義寡核苷酸)相比，包含與靶RNA轉錄物同源之有義股及與靶RNA轉錄物互補之反義股的siRNA雙鏈體在破壞靶RNA之效率方面提供了更多優勢。在許多情況下，需要更高濃度的ss-siRNA以達成對應雙鏈體之有效基因沉默效力。
儘管不希望受理論束縛，但載體基因體可編碼pri-miRNA或pre-miRNA，當其在靶細胞中表現時，經由細胞之內源性路徑加工成miRNA雙鏈體。一旦miRNA雙鏈體解開，指導股可能與其互補的mRNA受質結合且募集RNA誘導之沉默複合物，導致受質mRNA裂解。因此，包含編碼RNAi前驅物(pre-miR或pri-miR)之載體基因體之AAV顆粒的遞送在與例如直接投與shRNA或siRNA時不同的步驟進入加工路徑。
任一前述分子可由AAV病毒基因體編碼。在一些實施例中，將編碼此類siRNA分子之核酸序列或siRNA分子之單股插入AAV顆粒之載體基因體中且引入細胞，特別是神經元，包括中間神經元及/或中樞神經系統中之其他周圍細胞中。
在一些實施例中，SOD1靶向多核苷酸係抑制SOD1表現之單股反義RNAi分子、單股siRNA或雙股RNAi (例如，siRNA雙鏈體)。在一些實施例中，SOD1靶向多核苷酸係包含有義股及反義股之siRNA雙鏈體。
本揭示案提供用於靶向SOD1之小干擾RNA (siRNA)及AAV病毒基因體AAV顆粒，及/或編碼該siRNA之調節多核苷酸。
在一些實施例中，siRNA可包含至少一個核苷酸之懸突；或者懸突可包含至少兩個核苷酸、至少三個核苷酸、至少四個核苷酸、至少五個核苷酸或更多個核苷酸。在一些實施例中，懸突係或包含核苷酸/核苷類似物，包括去氧核苷酸/核苷。懸突可處於有義股、反義股或其任一組合上。此外，懸突之核苷酸可存在於siRNA之反義或有義股之5'端、3'端或兩端。
本揭示案之經編碼siRNA含有雜交在一起形成雙鏈體結構之反義股及有義股。在一些實施例中，反義股與靶向SOD1基因之核酸序列互補，且有義股與靶向SOD1基因之核酸序列同源。
在一些實施例中，SOD1靶向多核苷酸係包含有義股及反義股之siRNA。
在一些實施例中，本揭示案之siRNA分子包含有義股及對應反義股。在一些實施例中，反義股與SOD1基因(例如，表19中所述之SOD1基因)或其變異體(例如，人類SOD1基因)之至少一部分互補，例如實質上互補或完全互補。在一些實施例中，反義股與SOD1轉錄物之區域互補，例如部分互補或完全互補，如表19中所述。
在一些實施例中，反義股序列包含與靶序列(例如SOD1靶標)互補之區域，其長度為15-30個、19-21個或25-30個核苷酸，例如長度為15個、16個、17個、18個、19個、20個、21個、22個、23個、24個、25個、26個、27個、28個、29個或30個核苷酸。在一些實施例中，反義股序列與靶序列完全互補(例如，100%互補)。在一些實施例中，反義股序列與靶序列實質上互補。在一些實施例中，反義股序列包含與靶序列之一部分(例如表19中所提供之SOD1序列或其變異體)互補的區域，例如相對於靶序列包含一個、兩個或三個錯配之至少15、16、17、18、19、20或21個鄰接核苷酸之部分。
在一些實施例中，有義股序列包含具有SOD1序列(例如，表19中所提供之SOD1序列)或其變異體之對應部分的0、1、2或3個錯配的至少15、16、17、18、19、20或21個鄰接核苷酸。
在一些實施例中，siRNA包含與SOD1基因(例如SOD1基因之人類變異體)之mRNA轉錄物之至少一部分實質上互補(例如，至少70%、75%、80%、85% 、90%、95%、99%或100%互補)的區域，例如長度為30個核苷酸或更少、通常為19-24個核苷酸的區域。在一些實施例中，反義序列包含與SOD1轉錄物之核苷酸完全互補或實質上互補(例如至少70%、75%、80%、85%、90%、95%、99%或100%互補)之核苷酸序列或由其組成。
在實施例中，由本文所述之siRNA靶向之SOD1基因包含野生型SOD1基因、mRNA及/或蛋白質(例如，表19中所提供之SOD1序列)；包含至少一個突變之突變SOD1基因、mRNA及/或蛋白質；或其組合(例如，如表1中所述之突變)。
在一些實施例中，實質上互補之區域可為30個核苷酸或更少(例如，29、28、27、26、25、24、23、22、21、20、19、18、17、16或15個核苷酸長度)。在一些實施例中，互補區域之長度範圍可為15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28或29個核苷酸至多達16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29或30個核苷酸。
在一些實施例中，本揭示案之siRNA分子包含有義股及互補的反義股，其中兩股雜交在一起以形成雙鏈體結構。反義股與SOD1 mRNA序列具有足夠之互補性以引導靶標特異性RNAi，例如，siRNA分子具有足以觸發RNAi機器或過程破壞靶mRNA之序列。
在某些實施例中，本揭示案之siRNA分子包含有義股及互補的反義股，其中兩股雜交在一起以形成雙鏈體結構且其中與SOD1 mRNA雜交之起始位點在SOD1 mRNA序列上之核苷酸15與1000之間。作為非限制性實例，起始位點可在SOD1 mRNA序列上之核苷酸15-25、15-50、15-75、15-100、100-150、150-200、200-250、250-300、300-350、350-400、400-450、450-500、500-550、550-600、600-650、650-700、700-750、750-800、800-850、850-900、900-950及950-1000之間。
在一些實施例中，反義股及靶SOD1 mRNA序列完全互補，例如100%互補。反義股可與靶SOD1 mRNA序列(例如表19之SOD1序列)之任何部分互補。或者，反義股與靶SOD1 mRNA序列(例如表19之SOD1序列)可具有0個、1個、2個或3個錯配或不超過4個、5個或6個錯配。在一些實施例中，錯配核苷酸係鄰接的。在一些實施例中，錯配核苷酸係非鄰接的。在一些實施例中，錯配核苷酸出現在SOD1靶mRNA結合位點之外，諸如在反義股之一端或兩端。作為非限制性實例，反義股及SOD1 mRNA序列(例如表19之SOD1序列)具有至少80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87 %、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%或至少80-90%、80-95%、80-99%、90-95%、90-99%或95-99%互補性。
在一些實施例中，本文所述之siRNA之有義股序列及反義股序列包含互補區，其長度為15-30、19-21或25-30個核苷酸，例如長度為17、18、20、21、22、25或30個核苷酸。在一些實施例中，有義股、反義股或二者包含長度為至少15-30、19-21或25-30之核苷酸，例如長度為17、18、20、21、22、25或30之核苷酸。在一些實施例中，有義股、反義股或有義股及反義股二者包含一或兩個核苷酸懸突，例如在有義股之5’端及反義股之3’端，或在反義股之5’端及有義股之3’端。在一些實施例中，有義股及反義股包含一個錯配。在一些實施例中，反義股序列包含與靶序列之一個錯配。在一些實施例中，有義股及反義股完全互補。
根據本揭示案，靶向SOD1之siRNA分子具有約10-50個或更多個核苷酸之長度，例如各股包含10-50個核苷酸(或核苷酸類似物)。在一些實施例中，siRNA分子在各股中具有約15-30個，例如15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29或30個核苷酸之長度。在某些實施例中，siRNA分子之各股具有約19至25、19至24或19至21個核苷酸之長度。在一些實施例中，siRNA分子之各股具有在15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29或30個核苷酸至多達16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30或31個核苷酸範圍內之長度。在一些實施例中，siRNA分子之至少一條股(例如，有義股及/或反義股)之長度為19、20、21、22、23、24或25個核苷酸。
在一些實施例中，siRNA分子包含反義(例如指導)股序列。在一些實施例中，反義股序列包含與表10中所提供之反義股序列中之任一者相差3、2、1或0個核苷酸的至少15、16、17、18、19、20、21個鄰接核苷酸。在一些實施例中，反義股序列包含表10或表14中所提供之反義股序列中之任一者的核苷酸序列，或與其70%、80%、85%、90%、95%一致之核苷酸序列。在一些實施例中，反義股序列包含表10或表14中所提供之反義股序列中之任一者的核苷酸序列之至少15、16、17、18、19個或超過19個連續核苷酸。在一些實施例中，反義股序列包含表10或表14中所提供之反義股序列中之任一者的核苷酸1至19、1至18、1至17、1至16、2至19或2至18、2至17。在一些實施例中，反義序列可包含dTdT懸突，例如在反義股序列之3'端。在一些實施例中，反義序列不包含dTdT懸突，例如在序列之3'端處不包含dTdT懸突。在一些實施例中，反義股序列係DNA序列(例如，在表10中所提供序列中之任一者中包含T替代U)。在一些實施例中，反義股序列係RNA序列(例如，在表14中所提供序列中之任一者中包含U替代T)。
在一些實施例中，siRNA分子包含有義(例如過客)股序列。在一些實施例中，有義股序列包含與表10或表14中所提供之有義股序列中之任一者相差3、2、1或0個核苷酸的至少15、16、17、18、19、20、21個鄰接核苷酸。在一些實施例中，有義股序列包含表10或表14中所提供之有義股序列中之任一者的核苷酸序列，或與其70%、80%、85%、90%、95%一致之核苷酸序列。在一些實施例中，有義股序列包含表10或表14中所提供之有義股序列中之任一者的核苷酸序列之至少15、16、17、18、19個或超過19個連續核苷酸。在一些實施例中，有義序列包含表10或表14中所提供之有義股序列中之任一者的核苷酸1至19、1至18、1至17、1至16、2至19或2至18、2至17。在一些實施例中，有義序列可包含dTdT懸突，例如在有義股序列之3'端。在一些實施例中，有義序列不包含dTdT懸突，例如在序列之3'端處不包含dTdT懸突。在一些實施例中，有義股序列係DNA序列(例如，在表10中所提供序列中之任一者中包含T替代U)。在一些實施例中，有義股序列係RNA序列(例如，在表14中所提供序列中之任一者中包含U替代T)。
在一些實施例中，siRNA包含反義股序列，其包含有包含與表10或表14中所提供之反義股序列相差不超過3個、2個、1個或0個核苷酸之至少15個、16個、17個、18個、19個、20個或21個鄰接核苷酸之核苷酸序列；及有義股序列，其包含有包含與表10或表14中所提供之有義股序列相差不超過3個、2個、1個或0個核苷酸之至少15個、16個、17個、18個、19個、20個或21個鄰接核苷酸之核苷酸序列，視情況地其中有義股序列及反義股序列包含至少15個核苷酸之互補區。在一些實施例中，本揭示案之siRNA分子可包含如表10或表14中所述之siRNA雙鏈體或其變異體(例如功能變異體)。
應理解，在一些實施例中，本文表10中之任一序列可包含替代序列(例如RNA分子)內之任一或所有T核苷酸(胸腺嘧啶)之U核苷酸(尿苷)。亦應理解，在一些實施例中，本文所提供之任一序列可包含替代序列(例如DNA分子)內之任一或所有U核苷酸(尿嘧啶)之T核苷酸(胸腺嘧啶)。
在一些實施例中，siRNA分子可為未經修飾之RNA分子。在其他態樣中，siRNA分子可含有至少一個經修飾之核苷酸，諸如鹼基、糖或主鏈修飾。在一些實施例中，有義股及反義股中每一者之3’-端之懸突核苷酸係dTdT懸突。在一些實施例中，有義股、反義股或有義股及反義股兩者均不包含dTdT懸突。 表10. SOD1 dsRNA之有義股及反義股序列
名稱 siRNA 雙鏈體ID 有義 股 ID 有義股序列(5'-3') (過客) SS SEQ ID AS ID 反義股序列(5'-3') (指導) AS SEQ ID
D-2741 7414 CGGAGGUCUGGCCUAUAACdTdT 84 7415 UUUAUAGGCCAGACCUCCGdTdT 1052
D-2742 7416 GGAGGUCUGGCCUAUAAACdTdT 85 7417 UUUUAUAGGCCAGACCUCCdTdT 1053
D-2743 7418 GAGGUCUGGCCUAUAAAGCdTdT 86 7419 UCUUUAUAGGCCAGACCUCdTdT 1054
D-2744 7420 AGGUCUGGCCUAUAAAGUCdTdT 87 7421 UACUUUAUAGGCCAGACCUdTdT 1055
D-2745 7422 GGUCUGGCCUAUAAAGUACdTdT 88 7423 UUACUUUAUAGGCCAGACCdTdT 1056
D-2746 7424 UCUGGCCUAUAAAGUAGUCdTdT 89 7425 UACUACUUUAUAGGCCAGAdTdT 1057
D-2747 7426 CUGGCCUAUAAAGUAGUCCdTdT 90 7427 UGACUACUUUAUAGGCCAGdTdT 1058
D-2748 7428 UGGCCUAUAAAGUAGUCGCdTdT 91 7429 UCGACUACUUUAUAGGCCAdTdT 1059
D-2749 7430 GGCCUAUAAAGUAGUCGCCdTdT 92 7431 UGCGACUACUUUAUAGGCCdTdT 1060
D-2750 7432 GCCUAUAAAGUAGUCGCGCdTdT 93 7433 UCGCGACUACUUUAUAGGCdTdT 1061
D-2751 7434 CCUAUAAAGUAGUCGCGGCdTdT 94 7435 UCCGCGACUACUUUAUAGGdTdT 1062
D-2752 7436 GUCGUAGUCUCCUGCAGCCdTdT 95 7437 UGCUGCAGGAGACUACGACdTdT 1063
D-2753 7438 CGUAGUCUCCUGCAGCGUCdTdT 96 7439 UACGCUGCAGGAGACUACGdTdT 1064
D-2754 7440 GUAGUCUCCUGCAGCGUCCdTdT 97 7441 UGACGCUGCAGGAGACUACdTdT 1065
D-2755 7442 UAGUCUCCUGCAGCGUCUCdTdT 98 7443 UAGACGCUGCAGGAGACUAdTdT 1066
D-2756 7444 AUGGCGACGAAGGCCGUGCdTdT 99 7445 UCACGGCCUUCGUCGCCAUdTdT 1067
D-2757 7446 CGACGAAGGCCGUGUGCGCdTdT 100 7447 UCGCACACGGCCUUCGUCGdTdT 1068
D-2758 7448 GAAGGCCGUGUGCGUGCUCdTdT 101 7449 UAGCACGCACACGGCCUUCdTdT 1069
D-2759 7450 GGCCGUGUGCGUGCUGAACdTdT 102 7451 UUUCAGCACGCACACGGCCdTdT 1070
D-2760 7452 AGGGCGACGGCCCAGUGCCdTdT 103 7453 UGCACUGGGCCGUCGCCCUdTdT 1071
D-2761 7454 UGCAGGGCAUCAUCAAUUCdTdT 104 7455 UAAUUGAUGAUGCCCUGCAdTdT 1072
D-2762 7456 GCAGGGCAUCAUCAAUUUCdTdT 105 7457 UAAAUUGAUGAUGCCCUGCdTdT 1073
D-2763 7458 AGGGCAUCAUCAAUUUCGCdTdT 106 7459 UCGAAAUUGAUGAUGCCCUdTdT 1074
D-2764 7460 GGGCAUCAUCAAUUUCGACdTdT 107 7461 UUCGAAAUUGAUGAUGCCCdTdT 1075
D-2765 7462 GGCAUCAUCAAUUUCGAGCdTdT 108 7463 UCUCGAAAUUGAUGAUGCCdTdT 1076
D-2766 7464 GCAUCAUCAAUUUCGAGCCdTdT 113 7465 UGCUCGAAAUUGAUGAUGCdTdT 1077
D-2767 7466 CAUCAUCAAUUUCGAGCACdTdT 114 7467 UUGCUCGAAAUUGAUGAUGdTdT 1078
D-2768 7468 AAUUUCGAGCAGAAGGAACdTdT 115 7469 UUUCCUUCUGCUCGAAAUUdTdT 1079
D-2769 7470 UUCGAGCAGAAGGAAAGUCdTdT 116 7471 UACUUUCCUUCUGCUCGAAdTdT 1080
D-2770 7472 UCGAGCAGAAGGAAAGUACdTdT 117 7473 UUACUUUCCUUCUGCUCGAdTdT 1081
D-2771 7474 AAGGUGUGGGGAAGCAUUCdTdT 118 7475 UAAUGCUUCCCCACACCUUdTdT 1082
D-2772 7476 GGUGUGGGGAAGCAUUAACdTdT 119 7477 UUUAAUGCUUCCCCACACCdTdT 1083
D-2773 7478 GACUGACUGAAGGCCUGCCdTdT 120 7479 UGCAGGCCUUCAGUCAGUCdTdT 1084
D-2774 7480 CUGACUGAAGGCCUGCAUCdTdT 121 7481 UAUGCAGGCCUUCAGUCAGdTdT 1085
D-2775 7482 UGACUGAAGGCCUGCAUGCdTdT 122 7483 UCAUGCAGGCCUUCAGUCAdTdT 1086
D-2776 7484 UGAAGGCCUGCAUGGAUUCdTdT 123 7485 UAAUCCAUGCAGGCCUUCAdTdT 1087
D-2777 7486 GAAGGCCUGCAUGGAUUCCdTdT 124 7487 UGAAUCCAUGCAGGCCUUCdTdT 1088
D-2778 7488 UGCAUGGAUUCCAUGUUCCdTdT 131 7489 UGAACAUGGAAUCCAUGCAdTdT 1089
D-2779 7490 CAUGGAUUCCAUGUUCAUCdTdT 132 7491 UAUGAACAUGGAAUCCAUGdTdT 1090
D-2780 7492 GGAUUCCAUGUUCAUGAGCdTdT 133 7493 UCUCAUGAACAUGGAAUCCdTdT 1091
D-2781 7494 UUCCAUGUUCAUGAGUUUCdTdT 134 7495 UAAACUCAUGAACAUGGAAdTdT 1092
D-2782 7496 GUUCAUGAGUUUGGAGAUCdTdT 135 7497 UAUCUCCAAACUCAUGAACdTdT 1093
D-2783 7498 UUCAUGAGUUUGGAGAUACdTdT 136 7499 UUAUCUCCAAACUCAUGAAdTdT 1094
D-2784 7500 UGAGUUUGGAGAUAAUACCdTdT 139 7501 UGUAUUAUCUCCAAACUCAdTdT 1095
D-2785 7502 GAGUUUGGAGAUAAUACACdTdT 140 7503 UUGUAUUAUCUCCAAACUCdTdT 1096
D-2786 7504 AGGCUGUACCAGUGCAGGCdTdT 141 7505 UCCUGCACUGGUACAGCCUdTdT 1097
D-2787 7506 GGCUGUACCAGUGCAGGUCdTdT 142 7507 UACCUGCACUGGUACAGCCdTdT 1098
D-2788 7508 GCAGGUCCUCACUUUAAUCdTdT 143 7509 UAUUAAAGUGAGGACCUGCdTdT 1099
D-2789 7510 CAGGUCCUCACUUUAAUCCdTdT 144 7511 UGAUUAAAGUGAGGACCUGdTdT 1100
D-2790 7512 UCACUUUAAUCCUCUAUCCdTdT 145 7513 UGAUAGAGGAUUAAAGUGAdTdT 1101
D-2791 7514 CUAUCCAGAAAACACGGUCdTdT 146 7515 UACCGUGUUUUCUGGAUAGdTdT 1102
D-2792 7516 UAUCCAGAAAACACGGUGCdTdT 147 7517 UCACCGUGUUUUCUGGAUAdTdT 1103
D-2793 7518 AUCCAGAAAACACGGUGGCdTdT 148 7519 UCCACCGUGUUUUCUGGAUdTdT 1104
D-2794 7520 CCAGAAAACACGGUGGGCCdTdT 149 7521 UGCCCACCGUGUUUUCUGGdTdT 1105
D-2795 7522 GAAAACACGGUGGGCCAACdTdT 150 7523 UUUGGCCCACCGUGUUUUCdTdT 1106
D-2796 7524 AAAACACGGUGGGCCAAACdTdT 151 7525 UUUUGGCCCACCGUGUUUUdTdT 1107
D-2797 7526 CGGUGGGCCAAAGGAUGACdTdT 152 7527 UUCAUCCUUUGGCCCACCGdTdT 1108
D-2798 7528 AGGAUGAAGAGAGGCAUGCdTdT 153 7529 UCAUGCCUCUCUUCAUCCUdTdT 1109
D-2799 7530 AUGAAGAGAGGCAUGUUGCdTdT 154 7531 UCAACAUGCCUCUCUUCAUdTdT 1110
D-2800 7532 GAGAGGCAUGUUGGAGACCdTdT 155 7533 UGUCUCCAACAUGCCUCUCdTdT 1111
D-2801 7534 AGAGGCAUGUUGGAGACUCdTdT 156 7535 UAGUCUCCAACAUGCCUCUdTdT 1112
D-2802 7536 AUGUUGGAGACUUGGGCACdTdT 157 7537 UUGCCCAAGUCUCCAACAUdTdT 1113
D-2803 7538 GUUGGAGACUUGGGCAAUCdTdT 158 7539 UAUUGCCCAAGUCUCCAACdTdT 1114
D-2804 7540 GGAGACUUGGGCAAUGUGCdTdT 159 7541 UCACAUUGCCCAAGUCUCCdTdT 1115
D-2805 7542 GGCAAUGUGACUGCUGACCdTdT 160 7543 UGUCAGCAGUCACAUUGCCdTdT 1116
D-2806 7544 CAAUGUGACUGCUGACAACdTdT 161 7545 UUUGUCAGCAGUCACAUUGdTdT 1117
D-2807 7546 CUGACAAAGAUGGUGUGGCdTdT 162 7547 UCCACACCAUCUUUGUCAGdTdT 1118
D-2808 7548 UGACAAAGAUGGUGUGGCCdTdT 163 7549 UGCCACACCAUCUUUGUCAdTdT 1119
D-2809 7550 CUCAGGAGACCAUUGCAUCdTdT 164 7551 UAUGCAAUGGUCUCCUGAGdTdT 1120
D-2810 7552 UCAGGAGACCAUUGCAUCCdTdT 165 7553 UGAUGCAAUGGUCUCCUGAdTdT 1121
D-2811 7554 AGACCAUUGCAUCAUUGGCdTdT 166 7555 UCCAAUGAUGCAAUGGUCUdTdT 1122
D-2812 7556 GACCAUUGCAUCAUUGGCCdTdT 167 7557 UGCCAAUGAUGCAAUGGUCdTdT 1123
D-2813 7558 AUUGCAUCAUUGGCCGCACdTdT 168 7559 UUGCGGCCAAUGAUGCAAUdTdT 1124
D-2814 7560 CAUUGGCCGCACACUGGUCdTdT 169 7561 UACCAGUGUGCGGCCAAUGdTdT 1125
D-2815 7562 CGCACACUGGUGGUCCAUCdTdT 170 7563 UAUGGACCACCAGUGUGCGdTdT 1126
D-2816 7564 CACACUGGUGGUCCAUGACdTdT 171 7565 UUCAUGGACCACCAGUGUGdTdT 1127
D-2817 7566 ACACUGGUGGUCCAUGAACdTdT 172 7567 UUUCAUGGACCACCAGUGUdTdT 1128
D-2818 7568 UGGUGGUCCAUGAAAAAGCdTdT 173 7569 UCUUUUUCAUGGACCACCAdTdT 1129
D-2819 7570 UGGUCCAUGAAAAAGCAGCdTdT 174 7571 UCUGCUUUUUCAUGGACCAdTdT 1130
D-2820 7572 AAAGCAGAUGACUUGGGCCdTdT 175 7573 UGCCCAAGUCAUCUGCUUUdTdT 1131
D-2821 7574 GCAGAUGACUUGGGCAAACdTdT 176 7575 UUUUGCCCAAGUCAUCUGCdTdT 1132
D-2822 7576 AUGACUUGGGCAAAGGUGCdTdT 177 7577 UCACCUUUGCCCAAGUCAUdTdT 1133
D-2823 7578 UGACUUGGGCAAAGGUGGCdTdT 178 7579 UCCACCUUUGCCCAAGUCAdTdT 1134
D-2824 7580 GACUUGGGCAAAGGUGGACdTdT 179 7581 UUCCACCUUUGCCCAAGUCdTdT 1135
D-2825 7582 GUACAAAGACAGGAAACGCdTdT 180 7583 UCGUUUCCUGUCUUUGUACdTdT 1136
D-2826 7584 ACAAAGACAGGAAACGCUCdTdT 181 7585 UAGCGUUUCCUGUCUUUGUdTdT 1137
D-2827 7586 CAAAGACAGGAAACGCUGCdTdT 182 7587 UCAGCGUUUCCUGUCUUUGdTdT 1138
D-2828 7588 AGGAAACGCUGGAAGUCGCdTdT 183 7589 UCGACUUCCAGCGUUUCCUdTdT 1139
D-2829 7590 GUCGUUUGGCUUGUGGUGCdTdT 184 7591 UCACCACAAGCCAAACGACdTdT 1140
D-2830 7592 UCGUUUGGCUUGUGGUGUCdTdT 185 7593 UACACCACAAGCCAAACGAdTdT 1141
D-2831 7594 CGUUUGGCUUGUGGUGUACdTdT 186 7595 UUACACCACAAGCCAAACGdTdT 1142
D-2832 7596 GUUUGGCUUGUGGUGUAACdTdT 187 7597 UUUACACCACAAGCCAAACdTdT 1143
D-2833 7598 UUGGCUUGUGGUGUAAUUCdTdT 188 7599 UAAUUACACCACAAGCCAAdTdT 1144
D-2834 7600 GGCUUGUGGUGUAAUUGGCdTdT 189 7601 UCCAAUUACACCACAAGCCdTdT 1145
D-2835 7602 GCUUGUGGUGUAAUUGGGCdTdT 190 7603 UCCCAAUUACACCACAAGCdTdT 1146
D-2836 7604 CUUGUGGUGUAAUUGGGACdTdT 191 7605 UUCCCAAUUACACCACAAGdTdT 1147
D-2837 7606 UGUGGUGUAAUUGGGAUCCdTdT 192 7607 UGAUCCCAAUUACACCACAdTdT 1148
D-2838 7608 GUGGUGUAAUUGGGAUCGCdTdT 193 7609 UCGAUCCCAAUUACACCACdTdT 1149
D-2839 7610 UGGUGUAAUUGGGAUCGCCdTdT 194 7611 UGCGAUCCCAAUUACACCAdTdT 1150
D-2840 7612 GUAAUUGGGAUCGCCCAACdTdT 195 7613 UUUGGGCGAUCCCAAUUACdTdT 1151
D-2841 7614 UAAUUGGGAUCGCCCAAUCdTdT 196 7615 UAUUGGGCGAUCCCAAUUAdTdT 1152
D-2842 7616 AAUUGGGAUCGCCCAAUACdTdT 197 7617 UUAUUGGGCGAUCCCAAUUdTdT 1153
D-2843 7618 AUUGGGAUCGCCCAAUAACdTdT 198 7619 UUUAUUGGGCGAUCCCAAUdTdT 1154
D-2844 7620 UUGGGAUCGCCCAAUAAACdTdT 199 7621 UUUUAUUGGGCGAUCCCAAdTdT 1155
D-2845 7622 UGGGAUCGCCCAAUAAACCdTdT 987 7623 UGUUUAUUGGGCGAUCCCAdTdT 1156
D-2846 7624 GGGAUCGCCCAAUAAACACdTdT 988 7625 UUGUUUAUUGGGCGAUCCCdTdT 1157
D-2847 7626 AUCGCCCAAUAAACAUUCCdTdT 989 7627 UGAAUGUUUAUUGGGCGAUdTdT 1158
D-2848 7628 CCAAUAAACAUUCCCUUGCdTdT 990 7629 UCAAGGGAAUGUUUAUUGGdTdT 1159
D-2849 7630 CAAUAAACAUUCCCUUGGCdTdT 991 7631 UCCAAGGGAAUGUUUAUUGdTdT 1160
D-2850 7632 AAUAAACAUUCCCUUGGACdTdT 992 7633 UUCCAAGGGAAUGUUUAUUdTdT 1161
D-2851 7634 AUAAACAUUCCCUUGGAUCdTdT 993 7635 UAUCCAAGGGAAUGUUUAUdTdT 1162
D-2852 7636 UAAACAUUCCCUUGGAUGCdTdT 994 7637 UCAUCCAAGGGAAUGUUUAdTdT 1163
D-2853 7638 AAACAUUCCCUUGGAUGUCdTdT 995 7639 UACAUCCAAGGGAAUGUUUdTdT 1164
D-2854 7640 AACAUUCCCUUGGAUGUACdTdT 996 7641 UUACAUCCAAGGGAAUGUUdTdT 1165
D-2855 7642 AUUCCCUUGGAUGUAGUCCdTdT 997 7643 UGACUACAUCCAAGGGAAUdTdT 1166
D-2856 7644 CUUGGAUGUAGUCUGAGGCdTdT 998 7645 UCCUCAGACUACAUCCAAGdTdT 1167
D-2857 7646 CUGAGGCCCCUUAACUCACdTdT 999 7647 UUGAGUUAAGGGGCCUCAGdTdT 1168
D-2858 7648 GAGGCCCCUUAACUCAUCCdTdT 1000 7649 UGAUGAGUUAAGGGGCCUCdTdT 1169
D-2859 7650 AGGCCCCUUAACUCAUCUCdTdT 1001 7651 UAGAUGAGUUAAGGGGCCUdTdT 1170
D-2860 7652 CCCCUUAACUCAUCUGUUCdTdT 1002 7653 UAACAGAUGAGUUAAGGGGdTdT 1171
D-2861 7654 CCCUUAACUCAUCUGUUACdTdT 1003 7655 UUAACAGAUGAGUUAAGGGdTdT 1172
D-2862 7656 CCUUAACUCAUCUGUUAUCdTdT 1004 7657 UAUAACAGAUGAGUUAAGGdTdT 1173
D-2863 7658 CUUAACUCAUCUGUUAUCCdTdT 1005 7659 UGAUAACAGAUGAGUUAAGdTdT 1174
D-2864 7660 UUAACUCAUCUGUUAUCCCdTdT 1006 7661 UGGAUAACAGAUGAGUUAAdTdT 1175
D-2865 7662 UAACUCAUCUGUUAUCCUCdTdT 1007 7663 UAGGAUAACAGAUGAGUUAdTdT 1176
D-2866 7664 AACUCAUCUGUUAUCCUGCdTdT 1008 7665 UCAGGAUAACAGAUGAGUUdTdT 1177
D-2867 7666 GUUAUCCUGCUAGCUGUACdTdT 1009 7667 UUACAGCUAGCAGGAUAACdTdT 1178
D-2868 7668 CUGCUAGCUGUAGAAAUGCdTdT 1010 7669 UCAUUUCUACAGCUAGCAGdTdT 1179
D-2869 7670 UGCUAGCUGUAGAAAUGUCdTdT 1011 7671 UACAUUUCUACAGCUAGCAdTdT 1180
D-2870 7672 GCUGUAGAAAUGUAUCCUCdTdT 1012 7673 UAGGAUACAUUUCUACAGCdTdT 1181
D-2871 7674 CUGUAGAAAUGUAUCCUGCdTdT 1013 7675 UCAGGAUACAUUUCUACAGdTdT 1182
D-2872 7676 UGUAGAAAUGUAUCCUGACdTdT 1014 7677 UUCAGGAUACAUUUCUACAdTdT 1183
D-2873 7678 GUAGAAAUGUAUCCUGAUCdTdT 1015 7679 UAUCAGGAUACAUUUCUACdTdT 1184
D-2874 7680 AAAUGUAUCCUGAUAAACCdTdT 1016 7681 UGUUUAUCAGGAUACAUUUdTdT 1185
D-2875 7682 GUAUCCUGAUAAACAUUACdTdT 1017 7683 UUAAUGUUUAUCAGGAUACdTdT 1186
D-2876 7684 UUAAACACUGUAAUCUUACdTdT 1018 7685 UUAAGAUUACAGUGUUUAAdTdT 1187
D-2877 7686 ACUGUAAUCUUAAAAGUGCdTdT 1019 7687 UCACUUUUAAGAUUACAGUdTdT 1188
D-2878 7688 CUGUAAUCUUAAAAGUGUCdTdT 1020 7689 UACACUUUUAAGAUUACAGdTdT 1189
D-2879 7690 UGUAAUCUUAAAAGUGUACdTdT 1021 7691 UUACACUUUUAAGAUUACAdTdT 1190
D-2880 7692 GUAAUCUUAAAAGUGUAACdTdT 1022 7693 UUUACACUUUUAAGAUUACdTdT 1191
D-2881 7694 CUUAAAAGUGUAAUUGUGCdTdT 1023 7695 UCACAAUUACACUUUUAAGdTdT 1192
D-2882 7696 UACCUGUAGUGAGAAACUCdTdT 1024 7697 UAGUUUCUCACUACAGGUAdTdT 1193
D-2883 7698 UUAUGAUCACUUGGAAGACdTdT 1025 7699 UUCUUCCAAGUGAUCAUAAdTdT 1194
D-2884 7700 AUGAUCACUUGGAAGAUUCdTdT 1026 7701 UAAUCUUCCAAGUGAUCAUdTdT 1195
D-2885 7702 AUCACUUGGAAGAUUUGUCdTdT 1027 7703 UACAAAUCUUCCAAGUGAUdTdT 1196
D-2886 7704 UGGAAGAUUUGUAUAGUUCdTdT 1028 7705 UAACUAUACAAAUCUUCCAdTdT 1197
D-2887 7706 UAUAAAACUCAGUUAAAACdTdT 1029 7707 UUUUUAACUGAGUUUUAUAdTdT 1198
D-2888 7708 AAACUCAGUUAAAAUGUCCdTdT 1030 7709 UGACAUUUUAACUGAGUUUdTdT 1199
D-2889 7710 GUCUGUUUCAAUGACCUGCdTdT 1031 7711 UCAGGUCAUUGAAACAGACdTdT 1200
D-2890 7712 AUGACCUGUAUUUUGCCACdTdT 1032 7713 UUGGCAAAAUACAGGUCAUdTdT 1201
D-2891 7714 ACCUGUAUUUUGCCAGACCdTdT 1033 7715 UGUCUGGCAAAAUACAGGUdTdT 1202
D-2892 7716 CCUGUAUUUUGCCAGACUCdTdT 1034 7717 UAGUCUGGCAAAAUACAGGdTdT 1203
D-2893 7718 UAAAUCACAGAUGGGUAUCdTdT 1035 7719 UAUACCCAUCUGUGAUUUAdTdT 1204
D-2894 7720 AUCACAGAUGGGUAUUAACdTdT 1036 7721 UUUAAUACCCAUCUGUGAUdTdT 1205
D-2895 7722 UCACAGAUGGGUAUUAAACdTdT 1037 7723 UUUUAAUACCCAUCUGUGAdTdT 1206
D-2896 7724 ACAGAUGGGUAUUAAACUCdTdT 1038 7725 UAGUUUAAUACCCAUCUGUdTdT 1207
D-2897 7726 CAGAUGGGUAUUAAACUUCdTdT 1039 7727 UAAGUUUAAUACCCAUCUGdTdT 1208
D-2898 7728 AGAUGGGUAUUAAACUUGCdTdT 1040 7729 UCAAGUUUAAUACCCAUCUdTdT 1209
D-2899 7730 AUGGGUAUUAAACUUGUCCdTdT 1041 7731 UGACAAGUUUAAUACCCAUdTdT 1210
D-2900 7732 UAAACUUGUCAGAAUUUCCdTdT 1042 7733 UGAAAUUCUGACAAGUUUAdTdT 1211
D-2901 7734 UCAUUCAAGCCUGUGAAUCdTdT 1043 7735 UAUUCACAGGCUUGAAUGAdTdT 1212
D-2902 7736 CAUUCAAGCCUGUGAAUACdTdT 1044 7737 UUAUUCACAGGCUUGAAUGdTdT 1213
D-2903 7738 AAUAAAAACCCUGUAUGGCdTdT 1045 7739 UCCAUACAGGGUUUUUAUUdTdT 1214
D-2904 7740 AUAAAAACCCUGUAUGGCCdTdT 1046 7741 UGCCAUACAGGGUUUUUAUdTdT 1215
D-2905 7742 AACCCUGUAUGGCACUUACdTdT 1047 7743 UUAAGUGCCAUACAGGGUUdTdT 1216
D-2906 7744 ACCCUGUAUGGCACUUAUCdTdT 1048 7745 UAUAAGUGCCAUACAGGGUdTdT 1217
D-2907 7746 GAGGCUAUUAAAAGAAUCCdTdT 1049 7747 UGAUUCUUUUAAUAGCCUCdTdT 1218
D-2908 7748 AAAGAAUCCAAAUUCAAACdTdT 1050 7749 UUUUGAAUUUGGAUUCUUUdTdT 1219
D-2909 7750 GAAUCCAAAUUCAAACUACdTdT 1051 7751 UUAGUUUGAAUUUGGAUUCdTdT 1220
VOYpre-001_D-2806_起始構築體(18個天然核苷酸且位置19為C；3'末端CC二核苷酸) D-2910 7752 CAAUGUGACUGCUGACAA CCC 1221 7753 UUUGUCAGCAGUCACAUUGUU 1222
VOYpre-002_D-2806_p19MMU (位置19為U形成錯配) D-2911 7754 CAAUGUGACUGCUGACAA UCC 1223 7753 UUUGUCAGCAGUCACAUUGUU 1222
VOYpre-003_D-2806_p19GU對(位置19為G以形成GU對) D-2912 7755 CAAUGUGACUGCUGACAA GCC 1224 7753 UUUGUCAGCAGUCACAUUGUU 1222
VOYpre-004_D-2806_p19AU對(位置19為A以形成AU對) D-2913 7756 CAAUGUGACUGCUGACAA ACC 1225 7753 UUUGUCAGCAGUCACAUUGUU 1222
VOYpre-005_D-2806_CMM (中心錯配) D-2914 7757 CAAUGUGAC AGCUGACAAACC 1226 7753 UUUGUCAGC AGUCACAUUGUU 1222
VOYpre-006_D-2806_p19DEL (位置19缺失) D-2915 7758 CAAUGUGACUGCUGACAACC 1227 7753 UUUGUCAGCAGUCACAUUGUU 1222
VOYpre-007_D-2806_p19ADD (在位置19處添加之核苷酸；添加為U；保留C及末端CC二核苷酸) D-2916 7759 CAAUGUGACUGCUGACAAUCCC 1228 7753 UUUGUCAGCAGUCACAUUGUU 1222
VOYpre-008_D-2806_U環 D-2917 7752 CAAUGUGACUGCUGACAACCC 1221 7753 UUUGUCAGCAGUCACAUUGUU 1222
VOYpre-009_D-2806_AU環 D-2918 7752 CAAUGUGACUGCUGACAACCC 1221 7753 UUUGUCAGCAGUCACAUUGUU 1222
VOYpre-010_D-2806_mir-22-環 D-2919 7760 CAAUGUGACUGCUGACAACAC 1229 7753 UUUGUCAGCAGUCACAUUGUU 1222
VOYmiR-101_pre-001 hsa-mir-155；D-2806 D-2923 7752 CAAUGUGACUGCUGACAACCC 1221 7753 UUUGUCAGCAGUCACAUUGUU 1222
VOYmiR-102_pre-001經工程化；D-2806；let-7b莖 D-2924 7752 CAAUGUGACUGCUGACAACCC 1221 7753 UUUGUCAGCAGUCACAUUGUU 1222
VOYmiR-103_pre-002經工程化；D-2806_p19MMU；let-7b莖 D-2925 7754 CAAUGUGACUGCUGACAA UCC 1223 7753 UUUGUCAGCAGUCACAUUGUU 1222
VOYmiR-104_pre-003經工程化；D-2806_p19GU對；let-7b莖 D-2926 7755 CAAUGUGACUGCUGACAA GCC 1224 7753 UUUGUCAGCAGUCACAUUGUU 1222
VOYmiR-105_pre-004經工程化; D-2806_p19AU對; let-7b莖 D-2927 7756 CAAUGUGACUGCUGACAA ACC 1225 7753 UUUGUCAGCAGUCACAUUGUU 1222
VOYmiR-106_pre-005經工程化；D-2806_CMM；let-7b莖 D-2928 7757 CAAUGUGAC AGCUGACAAACC 1226 7753 UUUGUCAGC AGUCACAUUGUU 1222
VOYmiR-107_pre-006經工程化；D-2806_p19DEL；let-7b莖 D-2929 7758 CAAUGUGACUGCUGACAACC 1227 7753 UUUGUCAGCAGUCACAUUGUU 1222
VOYmiR-108_pre-007經工程化；D-2806_p19ADD；let-7b莖 D-2930 7765 CAAUGUGACUGCUGACAA UCCC 1234 7753 UUUGUCAGCAGUCACAUUGUU 1222
VOYmiR-109_pre-008經工程化；D-2806_U環；let-7b莖 D-2931 7752 CAAUGUGACUGCUGACAACCC 1221 7753 UUUGUCAGCAGUCACAUUGUU 1222
VOYmiR-110_pre-009經工程化；D-2806_AU環；let-7b莖 D-2932 7752 CAAUGUGACUGCUGACAACCC 1221 7753 UUUGUCAGCAGUCACAUUGUU 1222
VOYmiR-111_pre-010經工程化；D-2806_mir-22-環；let-7b莖 D-2933 7760 CAAUGUGACUGCUGACAACAC 1229 7753 UUUGUCAGCAGUCACAUUGUU 1222
VOYmiR-112_pre-001經工程化；PD；D-2806；let-7b基底莖不穩定 D-2934 7752 CAAUGUGACUGCUGACAACCC 1221 7753 UUUGUCAGCAGUCACAUUGUU 1222
VOYmiR-113_pre-002經工程化；D-2806_p19MMU；let-7b基底莖不穩定 D-2935 7754 CAAUGUGACUGCUGACAA UCC 1223 7753 UUUGUCAGCAGUCACAUUGUU 1222
VOYmiR-114_pre-005經工程化；D-2806_CMM；let-7b基底莖不穩定 D-2936 7757 CAAUGUGAC AGCUGACAAACC 1226 7753 UUUGUCAGC AGUCACAUUGUU 1222
VOYmiR-115_pre-010經工程化；D-2806_mir-22-環；let-7b基底莖不穩定 D-2937 7760 CAAUGUGACUGCUGACAACAC 1229 7753 UUUGUCAGCAGUCACAUUGUU 1222
VOYmiR-116_pre-003經工程化；D-2806_p19GU對；let-7b基底莖不穩定 D-2938 7755 CAAUGUGACUGCUGACAA GCC 1224 7753 UUUGUCAGCAGUCACAUUGUU 1222
VOYmiR-117_pre-001經工程化；D-2757；let-7b莖 D-2939 7766 CGACGAAGGCCGUGUGCGCCC 1235 7767 UCGCACACGGCCUUCGUCGUU 1236
VOYmiR-118_pre-001經工程化；D-2823；let-7b莖 D-2940 7768 UGACUUGGGCAAAGGUGGCCC 1237 7769 UCCACCUUUGCCCAAGUCAUU 1238
VOYmiR-119_pre-001經工程化；D-2866；let-7b莖 D-2941 7770 AACUCAUCUGUUAUCCUGCCC 1239 7771 UCAGGAUAACAGAUGAGUUUU 1240
VOYpre-011_D-2806_過客-指導股與過客股上之末端3' C交換 D-2920 7761 UUUGUCAGCAGUCACAUUGUC 1230 7762 CAAUGUGACUGCUGACAAAUC 1231
VOYpre-012_D-2806_過客-指導股與過客股上之末端3' C交換 D-2921 7761 UUUGUCAGCAGUCACAUUGUC 1230 7763 CAAUGUGACUGCUGACAAUUC 1232
VOYpre-013_D-2806_過客-指導股與過客股上之末端3' C交換 D-2922 7764 UUUGUCAGCAGUCACAUUGAC 1233 7762 CAAUGUGACUGCUGACAAAUC 1231
VOYmiR-127 D-2942 7752 CAAUGUGACUGCUGACAACCC 1221 7753 UUUGUCAGCAGUCACAUUGUU 1222
VOYmiR-102.860 D-2943 7772 CCCCUUAACUCAUCUGUUCCC 1241 7773 UAACAGAUGAGUUAAGGGGUU 2363
VOYmiR102.861 D-2944 7774 CCCUUAACUCAUCUGUUACCC 1243 7775 UUAACAGAUGAGUUAAGGGUU 2365
VOYmiR-102.866 D-2945 7776 AACUCAUCUGUUAUCUUGCCC 1245 7771 UCAGGAUAACAGAUGAGUUUU 1240
VOYmiR-102.870 D-2946 7777 GCUGUGGAAAUGUAUCUUCCC 1246 7778 UAGGAUACAUUUCUACAGCUU 1247
VOYmiR-102.823 D-2947 7779 UGACUUGGGCAAAGGUGAGCC 1248 7769 UCCACCUUUGCCCAAGUCAUU 1238
VOYmiR-104.860 D-2948 7780 CCCCUUAACUCAUCUGUUGCC 1249 7773 UAACAGAUGAGUUAAGGGGUU 2363
VOYmiR-104.861 D-2949 7781 CCCUUAACUCAUCUGUUAGCC 1250 7775 UUAACAGAUGAGUUAAGGGUU 2365
VOYmiR-104.866 D-2950 7782 AACUCAUCUGUUAUCUUAGCC 1251 7771 UCAGGAUAACAGAUGAGUUUU 1240
VOYmiR-104.870 D-2951 7783 GCUGUGGAAAUGUAUCUUGCC 1252 7778 UAGGAUACAUUUCUACAGCUU 1247
VOYmiR-104.823 D-2952 7784 UGACUUGGGCAAAGGUAGGCC 1253 7769 UCCACCUUUGCCCAAGUCAUU 1238
VOYmiR-109.860 D-2953 7772 CCCCUUAACUCAUCUGUUCCC 1241 7773 UAACAGAUGAGUUAAGGGGUU 2363
VOYmiR-104.861 D-2954 7774 CCCUUAACUCAUCUGUUACCC 1243 7775 UUAACAGAUGAGUUAAGGGUU 2365
VOYmiR-104.866 D-2955 7776 AACUCAUCUGUUAUCUUGCCC 1245 7771 UCAGGAUAACAGAUGAGUUUU 1240
VOYmiR-109.870 D-2956 7777 GCUGUGGAAAUGUAUCUUCCC 1246 7778 UAGGAUACAUUUCUACAGCUU 1247
VOYmiR-109.823 D-2957 7779 UGACUUGGGCAAAGGUGAGCC 1248 7769 UCCACCUUUGCCCAAGUCAUU 1238
VOYmiR-114.860 D-2958 7785 CCCCUUAACACAUCUGUUACC 1254 7773 UAACAGAUGAGUUAAGGGGUU 2363
VOYmiR-114.861 D-2959 7786 CCCUUAACUGAUCUGUUAACC 2376 7775 UUAACAGAUGAGUUAAGGGUU 2365
VOYmiR-114.866 D-2960 7787 AACUCAUCUCUUAUCUUGCCC 1256 7771 UCAGGAUAACAGAUGAGUUUU 1240
VOYmiR-114.870 D-2961 7788 GCUGUGGAAUUGUAUCUUGCC 1257 7778 UAGGAUACAUUUCUACAGCUU 1247
VOYmiR-114.823 D-2962 7789 UGACUUGGGGAAAGGUGAGCC 1258 7769 UCCACCUUUGCCCAAGUCAUU 1238
VOYmiR-116.860 D-2963 7780 CCCCUUAACUCAUCUGUUGCC 1249 7773 UAACAGAUGAGUUAAGGGGUU 2363
VOYmiR-116.861 D-2964 7781 CCCUUAACUCAUCUGUUAGCC 1250 7775 UUAACAGAUGAGUUAAGGGUU 2365
VOYmiR-116.866 D-2965 7790 AACUCAUCUGUUAUCUUGGCC 1259 7771 UCAGGAUAACAGAUGAGUUUU 1240
VOYmiR-116.870 D-2966 7783 GCUGUGGAAAUGUAUCUUGCC 1252 7778 UAGGAUACAUUUCUACAGCUU 1247
VOYmiR-116.823 D-2967 7784 UGACUUGGGCAAAGGUAGGCC 1253 7769 UCCACCUUUGCCCAAGUCAUU 1238
VoymiR-127.860 D-2968 7791 CCCCUUAACUCAUUUGUUCCC 2381 7773 UAACAGAUGAGUUAAGGGGUU 2363
VoymiR-127.861 D-2969 7774 CCCUUAACUCAUCUGUUACCC 1243 7775 UUAACAGAUGAGUUAAGGGUU 2365
VoymiR-127.866 D-2970 7776 AACUCAUCUGUUAUCUUGCCC 1245 7771 UCAGGAUAACAGAUGAGUUUU 1240
VoymiR-127.870 D-2971 7777 GCUGUGGAAAUGUAUCUUCCC 1246 7778 UAGGAUACAUUUCUACAGCUU 1247
VoymiR-127.823 D-2972 7792 UGACUUGGGCAAAGGUAGCCC 1261 7769 UCCACCUUUGCCCAAGUCAUU 1238
VOYmiR-120 D-2973 7793 CAAUGUGACUGCUGACAAA 1263 7794 UUUGUCAGCAGUCACAUUGUC 1264
dVOYmiR-102.788 D-2974 7795 GCAGGUCCUCACUUUAAUGCC 1265 7796 GAUUAAAGUGAGGACCUGCUU 1266
dVOYmiR-102.805 D-2975 7797 GGCAAUGUGACUGCUGACCCC 1267 7798 UGUCAGCAGUCACAUUGCCUU 1268
dVOYmiR-104.788 D-2976 7799 GCAGGUCCUCACUUUAAUUCC 1269 7796 GAUUAAAGUGAGGACCUGCUU 1266
dVOYmiR-104.805 D-2977 7800 GGCAAUGUGACUGCUGAUGCC 1270 7798 UGUCAGCAGUCACAUUGCCUU 1268
dVOYmiR-109.788 D-2978 7801 GCAGGUCCUCACUUUAAUCCC 1271 7796 GAUUAAAGUGAGGACCUGCUU 1266
dVOYmiR-109.805 D-2979 7802 GGCAAUGUGACUGCUGAUACC 1272 7798 UGUCAGCAGUCACAUUGCCUU 1268
dVOYmiR-114.788 D-2980 7803 GCAGGUCCUGACUUUAAUCCC 1273 7796 GAUUAAAGUGAGGACCUGCUU 1266
dVOYmiR-114.805 D-2981 7804 GGCAAUGUGUCUGCUGAUACC 1274 7798 UGUCAGCAGUCACAUUGCCUU 1268
dVOYmiR-116.788 D-2982 7801 GCAGGUCCUCACUUUAAUCCC 1271 7796 GAUUAAAGUGAGGACCUGCUU 1266
dVOYmiR-116.805 D-2983 7802 GGCAAUGUGACUGCUGAUACC 1272 7798 UGUCAGCAGUCACAUUGCCUU 1268
dVoymiR-127.788 D-2984 7801 GCAGGUCCUCACUUUAAUCCC 1271 7805 GAUUAAAGUGAGGACCUGCUUU 1275
dVoymiR-127.805 D-2985 7802 GGCAAUGUGACUGCUGAUACC 1272 7806 UGUCAGCAGUCACAUUGCCUUU 1276
D-4009 S-4000 GUCGUUUGGCUUGUGGUGGCU 1283 A-4000 UCACCACAAGCCAAACGACUU 1277
D-4010 S-4001 CAGGUCCUCACUUUAAUCGCU 1284 A-4001 UGAUUAAAGUGAGGACCUGUU 1278
D-4011 S-4002 GCAGGUCCUCACUUUAAUGCC 1285 A-4002 UAUUAAAGUGAGGACCUGCUU 2507
D-4012 S-4003 GCAGGUCCUCACUUUAAUGCU 2525 A-4002 UAUUAAAGUGAGGACCUGCUU 2507
D-4013 S-4004 UCGUUUGGCUUGUGGUGUGCU 1287 A-4003 UACACCACAAGCCAAACGAUU 1280
D-4015 S-4006 GUCGUUUGGCUUGUGGUGGCC 1288 A-4005 UCACCACAAGCCAAACGACUUU 1281
D-4016 S-4007 CAGGUCCUCACUUUAAUCGCC 1289 A-4001 UGAUUAAAGUGAGGACCUGUU 1278
D-4017 S-4008 UCGUUUGGCUUGUGGUGUGCC 1290 A-4003 UACACCACAAGCCAAACGAUU 1280
D-4018 S-4009 GGCAAUGUGACUGCUGGUGCC 1291 A-4006 UGCCAGCAGUCACAUUGCCUU 1282
D-4019 S-4010 GGCAAUGUGACUGCUGGUACC 1292 A-4006 UGCCAGCAGUCACAUUGCCUU 1282
D-4020 S-4011 GGCAAUGUGUCUGCUGGUACC 1293 A-4006 UGCCAGCAGUCACAUUGCCUU 1282
D-4021 S-4012 GGCAAUGUGACUGCUGGCCCC 1294 A-4006 UGCCAGCAGUCACAUUGCCUU 1281
在一些實施例中，siRNA之有義股及/或反義股之dTdT核苷酸可經任兩個核苷酸(例如，UU、UC、AA、AG、AC等)替換。替代地，有義股及/或反義股之dTdT核苷酸可經單一核苷酸(例如，U、A、C或G)替換。
在一些實施例中，本揭示案之siRNA分子可由載體，例如質體載體、病毒基因體(例如AAV病毒基因體)或用於遞送至細胞之另一核酸表現載體編碼。在一些實施例中，siRNA分子由AAV顆粒之病毒基因體編碼。
DNA表現質體可用於在細胞中穩定表現本揭示案之siRNA雙鏈體或dsRNA，且達成對靶基因表現之長期抑制。在一個態樣中，siRNA雙鏈體之有義股及反義股典型地藉由短間隔子序列連接，導致表現稱為短髮夾RNA (shRNA)之莖-環結構。髮夾由切丁酶識別且裂解，從而產生成熟siRNA分子。
在一些實施例中，siRNA雙鏈體之有義股及反義股可藉由短間隔子序列連接，該短間隔子序列可視情況連接至額外側接序列，導致表現稱為初級微小RNA (pri-miRNA)之側接臂-莖-環結構。pri-miRNA可由Drosha及切丁酶識別且裂解，從而產生成熟siRNA分子。
在其他實施例中，本揭示案之siRNA分子可在用於遞送至細胞之質體載體、AAV顆粒、病毒基因體或其他核酸表現載體中編碼。
在一些實施例中，提供一種用於抑制SOD1表現之siRNA，其中該siRNA包含有義股及反義股，反義股包含與SOD1 RNA轉錄物互補之區域，該反義股包含與表10或表14中任一雙鏈體中所列之反義序列相差不超過3個(例如，不超過0、1或2個)核苷酸的至少15個(例如，至少16、17、18、19、20、21、22或23個)鄰接核苷酸。在一個實施例中，反義序列包含與SEQ ID NO: 2507、2363或2365之反義序列相差不超過3個(例如，不超過0、1或2個)核苷酸的至少15個(例如，至少16、17、18、19、20、21、22或23個)鄰接核苷酸。
在一些實施例中，反義股包含與SEQ ID NO: 2507相差不超過3、2、1或0個核苷酸的至少15、16、17、18、19、20或21個鄰接核苷酸。在一些實施例中，反義股包含與SEQ ID NO: 2507相差不超過3、2、1或0個核苷酸的至少18、19、20或21個鄰接核苷酸。在一些實施例中，反義股包含SEQ ID NO: 2507之至少18個鄰接核苷酸。在一些實施例中，反義股包含SEQ ID NO: 2507之至少19個鄰接核苷酸。在一些實施例中，反義股包含SEQ ID NO: 2507之至少20個鄰接核苷酸。在一些實施例中，反義股序列包含SEQ ID NO: 2507之核苷酸序列之核苷酸1-15、1-16、1-17、1-18、1-19或1-20。在一些實施例中，反義股序列包含SEQ ID NO: 2507之核苷酸序列。在一些實施例中，有義股包含與SEQ ID NO: 2525相差不超過3、2、1或0個核苷酸的至少15、16、17、18、19、20或21個鄰接核苷酸。在一些實施例中，有義股包含與SEQ ID NO: 2525相差不超過3、2、1或0個核苷酸的至少18、19、20或21個鄰接核苷酸。在一些實施例中，有義股包含SEQ ID NO: 2525之至少18個鄰接核苷酸。在一些實施例中，有義股包含SEQ ID NO: 2525之至少19個鄰接核苷酸。在一些實施例中，有義股包含SEQ ID NO: 2525之至少20個鄰接核苷酸。在一些實施例中，有義股序列包含SEQ ID NO: 2525之核苷酸序列之核苷酸1-15、1-16、1-17、1-18、1-19或1-20。在一些實施例中，有義股序列包含SEQ ID NO: 2525之核苷酸序列。
在一些實施例中，反義股包含與SEQ ID NO: 2507相差不超過3、2、1或0個核苷酸的至少15、16、17、18、19、20或21個鄰接核苷酸；且有義股包含與SEQ ID NO: 2525相差不超過3、2、1或0個核苷酸的至少15、16、17、18、19、20或21個鄰接核苷酸。在一些實施例中，反義股包含與SEQ ID NO: 2507相差不超過3、2、1或0個核苷酸的至少18、19、20或21個鄰接核苷酸；且有義股包含與SEQ ID NO: 2525相差不超過3、2、1或0個核苷酸的至少18、19、20或21個鄰接核苷酸。在一些實施例中，反義股包含SEQ ID NO: 2507之至少18個鄰接核苷酸；且有義股包含SEQ ID NO: 2525之至少18個鄰接核苷酸。在一些實施例中，反義股包含SEQ ID NO: 2507之至少19個鄰接核苷酸；且有義股包含SEQ ID NO: 2525之至少19個鄰接核苷酸。在一些實施例中，反義股包含SEQ ID NO: 2507之至少20個鄰接核苷酸；且有義股包含SEQ ID NO: 2525之至少20個鄰接核苷酸。在一些實施例中，反義股序列包含SEQ ID NO: 2507之核苷酸序列之核苷酸1-15、1-16、1-17、1-18、1-19或1-20；且有義股序列包含SEQ ID NO: 2525之核苷酸序列之核苷酸1-15、1-16、1-17、1-18、1-19或1-20。在一些實施例中，反義股序列包含SEQ ID NO: 2507之核苷酸序列；且有義股序列包含SEQ ID NO: 2525之核苷酸序列。
在一些實施例中，反義股包含與SEQ ID NO: 2363相差不超過3、2、1或0個核苷酸的至少15、16、17、18、19、20或21個鄰接核苷酸。在一些實施例中，反義股包含與SEQ ID NO: 2363相差不超過3、2、1或0個核苷酸的至少18、19、20或21個鄰接核苷酸。在一些實施例中，反義股包含SEQ ID NO: 2363之至少18個鄰接核苷酸。在一些實施例中，反義股包含SEQ ID NO: 2363之至少19個鄰接核苷酸。在一些實施例中，反義股包含SEQ ID NO: 2363之至少20個鄰接核苷酸。在一些實施例中，反義股序列包含SEQ ID NO: 2363之核苷酸序列之核苷酸1-15、1-16、1-17、1-18、1-19或1-20。在一些實施例中，反義股序列包含SEQ ID NO: 2363之核苷酸序列。在一些實施例中，有義股包含與SEQ ID NO: 2381相差不超過3、2、1或0個核苷酸的至少15、16、17、18、19、20或21個鄰接核苷酸。在一些實施例中，有義股包含與SEQ ID NO: 2381相差不超過3、2、1或0個核苷酸的至少18、19、20或21個鄰接核苷酸。在一些實施例中，有義股包含SEQ ID NO: 2381之至少18個鄰接核苷酸。在一些實施例中，有義股包含SEQ ID NO: 2381之至少19個鄰接核苷酸。在一些實施例中，有義股包含SEQ ID NO: 2381之至少20個鄰接核苷酸。在一些實施例中，有義股序列包含SEQ ID NO: 2381之核苷酸序列之核苷酸1-15、1-16、1-17、1-18、1-19或1-20。在一些實施例中，有義股序列包含SEQ ID NO: 2381之核苷酸序列。
在一些實施例中，反義股包含與SEQ ID NO: 2363相差不超過3、2、1或0個核苷酸的至少15、16、17、18、19、20或21個鄰接核苷酸；且有義股包含與SEQ ID NO: 2381相差不超過3、2、1或0個核苷酸的至少15、16、17、18、19、20或21個鄰接核苷酸。在一些實施例中，反義股包含與SEQ ID NO: 2363相差不超過3、2、1或0個核苷酸的至少18、19、20或21個鄰接核苷酸；且有義股包含與SEQ ID NO: 2381相差不超過3、2、1或0個核苷酸的至少18、19、20或21個鄰接核苷酸。在一些實施例中，反義股包含SEQ ID NO: 2363之至少18個鄰接核苷酸；且有義股包含SEQ ID NO: 2381之至少18個鄰接核苷酸。在一些實施例中，反義股包含SEQ ID NO: 2363之至少19個鄰接核苷酸；且有義股包含SEQ ID NO: 2381之至少19個鄰接核苷酸。在一些實施例中，反義股包含SEQ ID NO: 2363之至少20個鄰接核苷酸；且有義股包含SEQ ID NO: 2381之至少20個鄰接核苷酸。在一些實施例中，反義股序列包含SEQ ID NO: 2363之核苷酸序列之核苷酸1-15、1-16、1-17、1-18、1-19或1-20；且有義股序列包含SEQ ID NO: 2381之核苷酸序列之核苷酸1-15、1-16、1-17、1-18、1-19或1-20。在一些實施例中，反義股序列包含SEQ ID NO: 2363之核苷酸序列；且有義股序列包含SEQ ID NO: 2381之核苷酸序列。
可用於本申請案之siRNA雙鏈體之額外有義股及反義股序列揭示於PCT專利申請公開案WO2016077687、WO2019079240、WO2018204786、WO2019079242、WO 2020010042及WO2020223296中，該等專利特此以全文引用之方式併入。
在一些實施例中，本揭示案之siRNA雙鏈體或經編碼之dsRNA阻抑(或降解) SOD1 mRNA。因此，siRNA雙鏈體或經編碼之dsRNA可用於實質上抑制細胞(例如神經元)中之SOD1。
SOD1之表現可基於SOD1 mRNA、SOD1蛋白之表現水準或與SOD1之表現水準在功能上相關之另一參數之水準來評估。在一些實施例中，SOD1之表現被抑制至少5%、至少10%、至少15%、至少20%、至少25%、至少30%、至少35%、至少40%、至少45%、至少50%、至少55%、至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%或至少95%。在一些實施例中，siRNA具有介於0.001-0.01 nM、0.001-0.10 nM、0.001-1.0 nM、0.001-10 nM、0.01-0.05 nM、0.01-0.50 nM、0.02-0.60 nM、0.01-1.0 nM、0.01-1.5 nM、0.01-10 nM範圍內之IC 50。IC 50值可相對於適當對照值(例如非靶向siRNA之IC 50)正規化。因此，SOD1之蛋白質產物可能受抑制。在一些實施例中，本揭示案之siRNA雙鏈體或經編碼之dsRNA阻抑(或降解)脊髓運動神經元中之靶mRNA (例如運動神經元形態之vg+細胞中之RNA)。
根據本揭示案，設計且測試siRNA分子降低所培養細胞中之SOD1 mRNA水準之能力。此類siRNA分子可形成雙鏈體，諸如但不限於包括表10或表14中所列之彼等雙鏈體。作為非限制性實例，siRNA雙鏈體可為siRNA雙鏈體ID D-4012、D-2968或D-2959。
在一些實施例中，siRNA雙鏈體包含：(i)包含SEQ ID NO: 2525之有義股序列，及包含SEQ ID NO: 2507之反義股序列；(ii)包含SEQ ID NO: 2376之有義股序列，及包含SEQ ID NO: 2365之反義股序列；或(iii)包含SEQ ID NO: 2381之有義股序列，及包含SEQ ID NO: 2363之反義股序列。
在一些實施例中，有義股序列及反義股序列包含互補區，其中該互補區之長度為17-20個核苷酸之間。
在某些實施例中，siRNA分子包含位於指導股中之針對SOD1之miRNA種子匹配。在另一實施例中，siRNA分子包含位於過客股中之針對SOD1之miRNA種子匹配。在又一實施例中，靶向SOD1基因之siRNA雙鏈體或經編碼之dsRNA不包含位於指導股或過客股中之針對SOD1之種子匹配。
在某些實施例中，設計靶向SOD1之siRNA雙鏈體，使得有義或反義序列與非SOD1序列不存在miRNA種子匹配。
在一些實施例中，靶向SOD1之siRNA雙鏈體或經編碼之dsRNA可對於指導股及/或過客股幾乎不具有顯著之全長脫靶效應。
在某些實施例中，siRNA分子在活體外具有高指導股活性及低過客股活性。指導股之靶敲低(KD)可為至少40%、50%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、95%、99%、99.5%或100%。作為非限制性實例，靶敲低可持續至少4週、至少8週、至少12週或更長時間之時間段。在一些實施例中，在注射部位周圍觀察到siRNA分子之遞送之最高敲低。在一些實施例中，在遞送siRNA分子後，在腹角中及注射部位周圍觀察到敲低。
在一些實施例中，活體外或活體內指導股與過客股(G:P) (亦稱為反義股與有義股)之比率為1:10、1:9、1:8、1:7、1:6、1:5、1:4、1:3、1:2、1:1、2:10、2:9、2:8、2:7、2:6、2:5、2:4、2:3、2:2、2:1、3:10、3:9、3:8、3:7、3:6、3:5、3:4、3:3、3:2、3:1、4:10、4:9、4:8、4:7、4:6、4:5、4:4、4:3、4:2、4:1、5:10、5:9、5:8、5:7、5:6、5:5、5:4、5:3、5:2、5:1、6:10、6:9、6:8、6:7、6:6、6:5、6:4、6:3、6:2、6:1、7:10、7:9、7:8、7:7、7:6、7:5、7:4、7:3、7:2、7:1、8:10、8:9、8:8、8:7、8:6、8:5、8:4、8:3、8:2、8:1、9:10、9:9、9:8、9:7、9:6、9:5、9:4、9:3、9:2、9:1、10:10、10:9、10:8、10:7、10:6、10:5、10:4、10:3、10:2、10:1、1:99、5:95、10:90、15:85、20:80、25:75、30:70、35:65、40:60、45:55、50:50、55:45、60:40、65:35、70:30、75:25、80:20、85:15、90:10、95:5或99:1。在一些實施例中，指導股與過客股之比率係指細胞內加工pri-微小RNA之後的指導股與過客股之比。舉例而言，若指導股與過客股之比率為80:20，則自前驅物加工得到每2條過客股就有8條指導股。
在一些實施例中，活體外或活體內過客股與指導股(P:G) (亦稱為有義股與反義股)之比率為1:10、1:9、1:8、1:7、1:6、1:5、1:4、1:3、1:2、1;1、2:10、2:9、2:8、2:7、2:6、2:5、2:4、2:3、2:2、2:1、3:10、3:9、3:8、3:7、3:6、3:5、3:4、3:3、3:2、3:1、4:10、4:9、4:8、4:7、4:6、4:5、4:4、4:3、4:2、4:1、5:10、5:9、5:8、5:7、5:6、5:5、5:4、5:3、5:2、5:1、6:10、6:9、6:8、6:7、6:6、6:5、6:4、6:3、6:2、6:1、7:10、7:9、7:8、7:7、7:6、7:5、7:4、7:3、7:2、7:1、8:10、8:9、8:8、8:7、8:6、8:5、8:4、8:3、8:2、8:1、9:10、9:9、9:8、9:7、9:6、9:5、9:4、9:3、9:2、9:1、10:10、10:9、10:8、10:7、10:6、10:5、10:4、10:3、10:2、10:1、1:99、5:95、10:90、15:85、20:80、25:75、30:70、35:65、40:60、45:55、50:50、55:45、60:40、65:35、70:30、75:25、80:20、85:15、90:10、95:5或99:1。在一些實施例中，過客股與指導股之比率係指在切除指導股之後的過客股與指導股之比。舉例而言，若過客股與指導股之比為80:20，則自前驅物加工得到每2條指導股就有8條過客股。
在某些實施例中，siRNA分子可用於藉由靶向所關注基因序列上之至少一個外顯子來沉默所關注基因之野生型或突變體型式。外顯子可為外顯子1、外顯子2、外顯子3、外顯子4、外顯子5、外顯子6、外顯子7、外顯子8、外顯子9、外顯子10、外顯子11、外顯子12、外顯子13、外顯子14、外顯子15、外顯子16、外顯子17、外顯子18、外顯子19、外顯子20、外顯子21、外顯子22、外顯子23、外顯子24、外顯子25、外顯子26、外顯子27、外顯子28、外顯子29、外顯子30、外顯子31、外顯子32、外顯子33、外顯子34、外顯子35、外顯子36、外顯子37、外顯子38、外顯子39、外顯子40、外顯子41、外顯子42、外顯子43、外顯子44、外顯子45、外顯子46、外顯子47、外顯子48、外顯子49、外顯子50、外顯子51、外顯子52、外顯子53、外顯子54、外顯子55、外顯子56、外顯子57、外顯子58、外顯子59、外顯子60、外顯子61、外顯子62、外顯子63、外顯子64、外顯子65、外顯子66，及/或外顯子67。 分子支架
在一些實施例中，本文所述之病毒基因體編碼包含siRNA (例如靶向SOD1之本文所述siRNA)之調節多核苷酸。在一些實施例中，本文所述之病毒基因體包含編碼siRNA (例如靶向SOD1之本文所述siRNA)之調節多核苷酸。在一些實施例中，調節多核苷酸包含分子支架。在一些實施例中，分子支架包含形成設計或製造後續分子之序列或結構基礎之框架或起始分子。在一些實施例中，調節多核苷酸包含5’側接區、環區及3’側接區。在一些實施例中，調節多核苷酸進一步包含過客股(例如，用於靶向本文所述之SOD1的siRNA之過客股或指導股序列)及/或指導股(例如，用於靶向本文所述之SOD1的siRNA之指導股或反義股序列)。在一些實施例中，調節多核苷酸為RNA分子，例如經編碼之調節多核苷酸。在一些實施例中，調節多核苷酸為DNA分子，例如編碼RNA調節多核苷酸之DNA分子。
在一些實施例中，經編碼之調節多核苷酸以5’至3’順序包含：5’側接區、過客股(例如，本文所述之靶向SOD1之siRNA之過客股或指導股序列)、環區、指導股(例如，本文所述之靶向SOD1之siRNA之指導股或反義股序列)及3’側接區。在一些實施例中，經編碼之調節多核苷酸係RNA分子。
在一些實施例中，調節多核苷酸以5’至3’順序包含：5’側接區、指導股(例如，本文所述之靶向SOD1之siRNA之指導股或反義股序列)、環區、過客股(例如，本文所述之靶向SOD1之siRNA之過客股或有義股序列)及3’側接區。在一些實施例中，調節多核苷酸為DNA分子。
在一些實施例中，調節多核苷酸包含莖-環結構。在一些實施例中，過客股及指導股分別位於莖環結構之5’臂及3’臂上，其中過客股位於5’側接區與環區之間，且指導股位於環區與3’側接區之間。在一些實施例中，指導股及過客股分別位於莖環結構之5’臂及3’臂上，其中指導股位於5’側接區與環區之間，且過客股位於環區與3’側接區之間。
在一些實施例中，5’及3’側接序列包含相同之核苷酸序列。在一些實施例中，5’及3’側接區包含不同之核苷酸序列。在一些實施例中，環序列包含編碼至少一個UGUG模體之核酸序列。在一些實施例中，編碼UGUG模體之核酸序列位於環序列之5’末端。
在一些實施例中，本文所述之分子支架包含表11-13中所提供之5’側接區、環區及3’側接區之核苷酸序列或其片段。在一些實施例中，5’側接區、環區及3’側接區包含表11-13中所提供之核苷酸序列或其片段或由其編碼。 表11. 分 子支架之示範性5'側接區
名稱 序列 SEQ ID NO
5F1 (DNA) CTCCCGCAGAACACCATGCGCTCCACGGAA 2547
5F1 (RNA) CUCCCGCAGAACACCAUGCGCUCCACGGAA 5000
5F2 (DNA) GAAGCAAAGAAGGGGCAGAGGGAGCCCGTGAGCTGAGTGGGCCAGGGACTGGGAGAAGGAGTGAGGAGGCAGGGCCGGCATGCCTCTGCTGCTGGCCAGA 2548
5F2 (RNA) GAAGCAAAGAAGGGGCAGAGGGAGCCCGUGAGCUGAGUGGGCCAGGGACUGGGAGAAGGAGUGAGGAGGCAGGGCCGGCAUGCCUCUGCUGCUGGCCAGA 5001
5F3 (DNA) GTGCTGGGCGGGGGGCGGCGGGCCCTCCCGCAGAACACCATGCGCTCTTCGGAA 2549
5F3 (RNA) GUGCUGGGCGGGGGGCGGCGGGCCCUCCCGCAGAACACCAUGCGCUCUUCGGAA 5002
5F4 (DNA) GTGCTGGGCGGGGGGCGGCGGGCCCTCCCGCAGAACACCATGCGCTCCACGGAA 5014
5F4 (RNA) GUGCUGGGCGGGGGGCGGCGGGCCCUCCCGCAGAACACCAUGCGCUCCACGGAA 5003
表12. 分 子支架之示範性環區
名稱 序列 SEQ ID NO
L1 (DNA) GTGGCCACTGAGAAG 2550
L1 (RNA) GUGGCCACUGAGAAG 5004
L2 (DNA) GTCTGCACCTGTCACTAG 2551
L2 (RNA) GUCUGCACCUGUCACUAG 5005
L3 (DNA) TGTGACCTGG 2552
L3 (RNA) UGUGACCUGG 5006
L4 (DNA) TGTGATTTGG 2553
L4 (RNA) UGUGAUUUGG 5007
表13. 分 子支架之示範性3'側接 區
名稱 序列 SEQ ID NO
3F1 (DNA) CTGAGGAGCGCCTTGACAGCAGCCATGGGAGGGCC 2554
3F1 (RNA) CUGAGGAGCGCCUUGACAGCAGCCAUGGGAGGGCC 5008
3F2 (DNA) TGGCCGTGTAGTGCTACCCAGCGCTGGCTGCCTCCTCAGCATTGCAATTCCTCTCCCATCTGGGCACCAGTCAGCTACCCTGGTGGGAATCTGGGTAGCC 2555
3F2 (RNA) UGGCCGUGUAGUGCUACCCAGCGCUGGCUGCCUCCUCAGCAUUGCAAUUCCUCUCCCAUCUGGGCACCAGUCAGCUACCCUGGUGGGAAUCUGGGUAGCC 5009
3F3 (DNA) GGCCGTGTAGTGCTACCCAGCGCTGGCTGCCTCCTCAGCATTGCAATTCCTCTCCCATCTGGGCACCAGTCAGCTACCCTGGTGGGAATCTGGGTAGCC 2556
3F3 (RNA) GGCCGUGUAGUGCUACCCAGCGCUGGCUGCCUCCUCAGCAUUGCAAUUCCUCUCCCAUCUGGGCACCAGUCAGCUACCCUGGUGGGAAUCUGGGUAGCC 5010
3F4 (DNA) CTGAGGAGCGCCTTGACAGCAGCCATGGGAGGGCCGCCCCCTACCTCAGTGA 2557
3F4 (RNA) CUGAGGAGCGCCUUGACAGCAGCCAUGGGAGGGCCGCCCCCUACCUCAGUGA 5011
3F5 (DNA) CTGTGGAGCGCCTTGACAGCAGCCATGGGAGGGCCGCCCCCTACCTCAGTGA 2558
3F5 (RNA) CUGUGGAGCGCCUUGACAGCAGCCAUGGGAGGGCCGCCCCCUACCUCAGUGA 5012
表11、表12及表13中所述之區域中之任一者、或其片段或變異體可用於本文所提供之分子支架，例如編碼或包含用於靶向SOD1的siRNA之分子支架。應理解，在一些實施例中，本文表11-13中之任一序列可包含替代序列(例如RNA分子)內之任一或所有T核苷酸(胸腺嘧啶)之U核苷酸(尿苷)。應理解，在一些實施例中，本文表11-13中之任一序列可包含替代序列(例如DNA分子)內之任一或所有U核苷酸(尿苷)之T核苷酸(胸腺嘧啶)。
在一些實施例中，調節多核苷酸包含5’側接區、其片段或變異體，例如如表11中所列出或如WO2016077689、WO2017201248、WO2018204797、WO2017201258、WO2018204803或WO2021016505中所提供，該等專利之內容特此以全文引用之方式併入。
在一些實施例中，5'側接區包含SEQ ID NO: 2547-2549或5014中任一者之核苷酸序列；與其實質上一致(例如，具有至少70%、75%、80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%、99%序列一致性)之核苷酸序列；相對於SEQ ID NO: 2547-2549或5014中任一者之核苷酸序列包含一個、兩個、三個、四個、五個、六個或七個但不超過十個不同核苷酸之核苷酸序列；或相對於SEQ ID NO: 2547-2549或5014中任一者之核苷酸序列包含一個、兩個、三個、四個、五個、六個或七個但不超過十個修飾之核苷酸序列。
在一些實施例中，經編碼之5’側接區包含SEQ ID NO: 5000-5003中之任一者之核苷酸序列；與其實質上一致(例如，具有至少70%、75%、80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%、99%序列一致性)之核苷酸序列；相對於SEQ ID NO: 5000-5003中之任一者之核苷酸序列包含一個、兩個、三個、四個、五個、六個或七個但不超過十個不同核苷酸之核苷酸序列；或相對於SEQ ID NO: 5000-5003中之任一者之核苷酸序列包含一個、兩個、三個、四個、五個、六個或七個但不超過十個修飾之核苷酸序列。
在一些實施例中，編碼5’側接區之核苷酸序列包含SEQ ID NO: 2547-2549或5014中任一者之核苷酸序列；與其實質上一致(例如，具有至少70%、75%、80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%、99%序列一致性)之核苷酸序列；相對於SEQ ID NO: 2547-2549或5014中任一者之核苷酸序列包含一個、兩個、三個、四個、五個、六個或七個但不超過十個不同核苷酸之核苷酸序列；或相對於SEQ ID NO: 2547-2549或5014中任一者之核苷酸序列包含一個、兩個、三個、四個、五個、六個或七個但不超過十個修飾之核苷酸序列。
在一些實施例中，5’側接區包含SEQ ID NO: 2547之核苷酸序列；與SEQ ID NO: 2547實質上一致(例如，具有至少70%、75%、80%、85%、90%、95% 96%、97%、98%、99%序列一致性)之核苷酸序列；相對於SEQ ID NO: 2547之核苷酸序列包含一個、兩個、三個、四個、五個、六個或七個但不超過十個不同核苷酸之核苷酸序列；或相對於SEQ ID NO: 2547之核苷酸序列包含一個、兩個、三個、四個、五個、六個或七個但不超過十個修飾之核苷酸序列。
在一些實施例中，經編碼之5’側接區包含SEQ ID NO: 5000之核苷酸序列；與SEQ ID NO: 5000實質上一致(例如，具有至少70%、75%、80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%、99%序列一致性)之核苷酸序列；相對於SEQ ID NO: 5000之核苷酸序列包含一個、兩個、三個、四個、五個、六個或七個但不超過十個不同核苷酸之核苷酸序列；或相對於SEQ ID NO: 5000之核苷酸序列包含一個、兩個、三個、四個、五個、六個或七個但不超過十個修飾之核苷酸序列。在一些實施例中，編碼5’側接區之核苷酸序列包含SEQ ID NO: 2547之核苷酸序列；與SEQ ID NO: 2547實質上一致(例如，具有至少70%、75%、80%、85%、90%、95% 96%、97%、98%、99%序列一致性)之核苷酸序列；相對於SEQ ID NO: 2547之核苷酸序列包含一個、兩個、三個、四個、五個、六個或七個但不超過十個不同核苷酸之核苷酸序列；或相對於SEQ ID NO: 2547之核苷酸序列包含一個、兩個、三個、四個、五個、六個或七個但不超過十個修飾之核苷酸序列。
在一些實施例中，經編碼之5’側接區包含SEQ ID NO: 5001之核苷酸序列；與SEQ ID NO: 5001實質上一致(例如，具有至少70%、75%、80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%、99%序列一致性)之核苷酸序列；相對於SEQ ID NO: 5001之核苷酸序列包含一個、兩個、三個、四個、五個、六個或七個但不超過十個不同核苷酸之核苷酸序列；或相對於SEQ ID NO: 5001之核苷酸序列包含一個、兩個、三個、四個、五個、六個或七個但不超過十個修飾之核苷酸序列。在一些實施例中，編碼5’側接區之核苷酸序列包含SEQ ID NO: 2548之核苷酸序列；與SEQ ID NO: 2548實質上一致(例如，具有至少70%、75%、80%、85%、90%、95% 96%、97%、98%、99%序列一致性)之核苷酸序列；相對於SEQ ID NO: 2548之核苷酸序列包含一個、兩個、三個、四個、五個、六個或七個但不超過十個不同核苷酸之核苷酸序列；或相對於SEQ ID NO: 2548之核苷酸序列包含一個、兩個、三個、四個、五個、六個或七個但不超過十個修飾之核苷酸序列。
在一些實施例中，調節多核苷酸包含環區、其片段或變異體，例如如表12中所提供或如WO2016077689、WO2017201248、WO2018204797、WO2017201258、WO2018204803或WO2021016505中所提供，該等專利之內容特此以全文引用之方式併入。
在一些實施例中，環區包含SEQ ID NO: 2550-2553中任一者之核苷酸序列；與其實質上一致(例如，具有至少70%、75%、80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%、99%序列一致性)之核苷酸序列；相對於SEQ ID NO: 2550-2553中任一者之核苷酸序列包含一個、兩個、三個或四個但不超過五個不同核苷酸之核苷酸序列；或相對於SEQ ID NO: 2550-2553中任一者之核苷酸序列包含一個、兩個、三個或四個但不超過五個修飾之核苷酸序列。
在一些實施例中，經編碼之環區包含SEQ ID NO: 5004-5007中任一者之核苷酸序列；與其實質上一致(例如，具有至少70%、75%、80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%、99%序列一致性)之核苷酸序列；相對於SEQ ID NO: 5004-5007中任一者之核苷酸序列包含一個、兩個、三個或四個但不超過五個不同核苷酸之核苷酸序列；或相對於SEQ ID NO: 5004-5007中任一者之核苷酸序列包含一個、兩個、三個或四個但不超過五個修飾之核苷酸序列。
在一些實施例中，編碼環區之核苷酸序列包含SEQ ID NO: 2550-2553中之任一者之核苷酸序列；與其實質上一致(例如，具有至少70%、75%、80%、85%、90%、95% 96%、97%、98%、99%序列一致性)之核苷酸序列；相對於SEQ ID NO: 2550-2553中之任一者之核苷酸序列包含一個、兩個、三個或四個但不超過五個不同核苷酸之核苷酸序列；或相對於SEQ ID NO: 2550-2553中之任一者之核苷酸序列包含一個、兩個、三個或四個但不超過五個修飾之核苷酸序列。
在一些實施例中，環區包含SEQ ID NO: 2550之核苷酸序列；與SEQ ID NO: 2550實質上一致(例如，具有至少70%、75%、80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%、99%序列一致性)之核苷酸序列；相對於SEQ ID NO: 2550之核苷酸序列包含一個、兩個、三個或四個但不超過五個不同核苷酸之核苷酸序列；或相對於SEQ ID NO: 2550之核苷酸序列包含一個、兩個、三個或四個但不超過五個修飾之核苷酸序列。
在一些實施例中，經編碼之環區包含5004之核苷酸序列；與SEQ ID NO: 5004實質上一致(例如，具有至少70%、75%、80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%、99%序列一致性)之核苷酸序列；相對於SEQ ID NO: 4887之核苷酸序列包含一個、兩個、三個或四個但不超過五個不同核苷酸之核苷酸序列；或相對於SEQ ID NO: 5004之核苷酸序列包含一個、兩個、三個或四個但不超過五個修飾之核苷酸序列。在一些實施例中，編碼環區之核苷酸序列包含SEQ ID NO: 2550之核苷酸序列；與SEQ ID NO: 2550實質上一致(例如，具有至少70%、75%、80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%、99%序列一致性)之核苷酸序列；相對於4363之核苷酸序列包含一個、兩個、三個或四個但不超過五個不同核苷酸之核苷酸序列；或相對於SEQ ID NO: 2550之核苷酸序列包含一個、兩個、三個或四個但不超過五個修飾之核苷酸序列。
在一些實施例中，經編碼之環區包含5005之核苷酸序列；與SEQ ID NO: 5005實質上一致(例如，具有至少70%、75%、80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%、99%序列一致性)之核苷酸序列；相對於4887之核苷酸序列包含一個、兩個、三個或四個但不超過五個不同核苷酸之核苷酸序列；或相對於SEQ ID NO: 5005之核苷酸序列包含一個、兩個、三個或四個但不超過五個修飾之核苷酸序列。在一些實施例中，編碼環區之核苷酸序列包含SEQ ID NO: 2551之核苷酸序列；與SEQ ID NO: 2551實質上一致(例如，具有至少70%、75%、80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%、99%序列一致性)之核苷酸序列；相對於4363之核苷酸序列包含一個、兩個、三個或四個但不超過五個不同核苷酸之核苷酸序列；或相對於SEQ ID NO: 2551之核苷酸序列包含一個、兩個、三個或四個但不超過五個修飾之核苷酸序列。
在一些實施例中，調節多核苷酸包含3’側接區、其片段或變異體，例如如表13中所列出或如WO2016077689、WO2017201248、WO2018204797、WO2017201258、WO2018204803或WO2021016505中所提供，該等專利之內容特此以全文引用之方式併入。
在一些實施例中，3’側接區包含SEQ ID NO: 2554-2558中之任一者之核苷酸序列；與其實質上一致(例如，具有至少70%、75%、80%、85%、90%、95% 96%、97%、98%、99%序列一致性)之核苷酸序列；相對於SEQ ID NO: 2554-2558中之任一者之核苷酸序列包含一個、兩個、三個、四個、五個、六個或七個但不超過十個不同核苷酸之核苷酸序列；或相對於SEQ ID NO: 2554-2558中之任一者之核苷酸序列包含一個、兩個、三個、四個、五個、六個或七個但不超過十個修飾之核苷酸序列。
在一些實施例中，經編碼之3’側接區包含SEQ ID NO: 5008-5012中之任一者之核苷酸序列；與其實質上一致(例如，具有至少70%、75%、80%、85%、90%、95% 96%、97%、98%、99%序列一致性)之核苷酸序列；相對於SEQ ID NO: 5008-5012中之任一者之核苷酸序列包含一個、兩個、三個、四個、五個、六個或七個但不超過十個修飾之核苷酸序列；或相對於SEQ ID NO: 5008-5012中之任一者之核苷酸序列包含一個、兩個、三個、四個、五個、六個或七個但不超過十個修飾之核苷酸序列。
在一些實施例中，編碼3’側接區之核苷酸序列包含SEQ ID NO: 2554-2558中之任一者之核苷酸序列；與其實質上一致(例如，具有至少70%、75%、80%、85%、90%、95% 96%、97%、98%、99%序列一致性)之核苷酸序列；相對於SEQ ID NO: 2554-2558中之任一者之核苷酸序列包含一個、兩個、三個、四個、五個、六個或七個但不超過十個不同核苷酸之核苷酸序列；或相對於SEQ ID NO: 2554-2558中之任一者之核苷酸序列包含一個、兩個、三個、四個、五個、六個或七個但不超過十個修飾之核苷酸序列。
在一些實施例中，3’側接區包含SEQ ID NO: 2554之核苷酸序列；與SEQ ID NO: 2554實質上一致(例如，具有至少70%、75%、80%、85%、90%、95% 96%、97%、98%、99%序列一致性)之核苷酸序列；相對於SEQ ID NO: 2554之核苷酸序列包含一個、兩個、三個、四個、五個、六個或七個但不超過十個修飾之核苷酸序列；或相對於SEQ ID NO: 2554之核苷酸序列包含一個、兩個、三個、四個、五個、六個或七個但不超過十個修飾之核苷酸序列。
在一些實施例中，經編碼之3’側接區包含SEQ ID NO: 5008之核苷酸序列；與SEQ ID NO: 5008實質上一致(例如，具有至少70%、75%、80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%、99%序列一致性)之核苷酸序列；相對於5008之核苷酸序列包含一個、兩個、三個、四個、五個、六個或七個但不超過十個不同核苷酸之核苷酸序列；或相對於SEQ ID NO: 5008之核苷酸序列包含一個、兩個、三個、四個、五個、六個或七個但不超過十個修飾之核苷酸序列。在一些實施例中，編碼3’側接區之核苷酸序列包含2554之核苷酸序列；與SEQ ID NO: 2554實質上一致(例如，具有至少70%、75%、80%、85%、90%、95% 96%、97%、98%、99%序列一致性)之核苷酸序列；相對於SEQ ID NO: 2554之核苷酸序列包含一個、兩個、三個、四個、五個、六個或七個但不超過十個不同核苷酸之核苷酸序列；或相對於SEQ ID NO: 2554之核苷酸序列包含一個、兩個、三個、四個、五個、六個或七個但不超過十個修飾之核苷酸序列。
在一些實施例中，經編碼之3’側接區包含SEQ ID NO: 5009之核苷酸序列；與SEQ ID NO: 5009實質上一致(例如，具有至少70%、75%、80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%、99%序列一致性)之核苷酸序列；相對於5009之核苷酸序列包含一個、兩個、三個、四個、五個、六個或七個但不超過十個不同核苷酸之核苷酸序列；或相對於SEQ ID NO: 5009之核苷酸序列包含一個、兩個、三個、四個、五個、六個或七個但不超過十個修飾之核苷酸序列。在一些實施例中，編碼3’側接區之核苷酸序列包含2555之核苷酸序列；與SEQ ID NO: 2555實質上一致(例如，具有至少70%、75%、80%、85%、90%、95% 96%、97%、98%、99%序列一致性)之核苷酸序列；相對於SEQ ID NO: 2555之核苷酸序列包含一個、兩個、三個、四個、五個、六個或七個但不超過十個不同核苷酸之核苷酸序列；或相對於SEQ ID NO: 2555之核苷酸序列包含一個、兩個、三個、四個、五個、六個或七個但不超過十個修飾之核苷酸序列。
在一些實施例中，經編碼之調節多核苷酸包含：(i) 5’側接區，其包含SEQ ID NO: 5000-5003中之任一者之核苷酸序列；與其實質上一致(例如，具有至少70%、75%、80%、85%、90%、95% 96%、97%、98%、99%序列一致性)之核苷酸序列；相對於SEQ ID NO: 5000-5003中之任一者之核苷酸序列包含一個、兩個、三個、四個、五個、六個或七個但不超過十個不同核苷酸之核苷酸序列；或相對於SEQ ID NO: 5000-5003中之任一者之核苷酸序列包含一個、兩個、三個、四個、五個、六個或七個但不超過十個不同核苷酸之核苷酸序列；(ii)環區，其包含SEQ ID NO: 5004-5007中之任一者之核苷酸序列；與其實質上一致(例如，具有至少70%、75%、80%、85%、90%、95% 96%、97%、98%、99%序列一致性)之核苷酸序列；相對於SEQ ID NO: 5004-5007中之任一者之核苷酸序列包含一個、兩個、三個或四個但不超過五個不同核苷酸之核苷酸序列；或相對於SEQ ID NO: 5004-5007中之任一者之核苷酸序列包含一個、兩個、三個或四個但不超過五個不同核苷酸之核苷酸序列；及(iii) 3’側接區，其包含SEQ ID NO: 5008-5012中之任一者之核苷酸序列；與其實質上一致(例如，具有至少70%、75%、80%、85%、90%、95% 96%、97%、98%、99%序列一致性)之核苷酸序列；相對於SEQ ID NO: 5008-5012中之任一者之核苷酸序列包含一個、兩個、三個、四個、五個、六個或七個但不超過十個不同核苷酸之核苷酸序列；相對於SEQ ID NO: 5008-5012中之任一者之核苷酸序列包含一個、兩個、三個、四個、五個、六個或七個但不超過十個修飾之核苷酸序列。
在一些實施例中，調節多核苷酸包含：(i) 5’側接區，其包含SEQ ID NO: 2547-2548或5014中任一者之核苷酸序列；與其實質上一致(例如，具有至少70%、75%、80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%、99%序列一致性)之核苷酸序列；相對於SEQ ID NO: 2547-2548或5014中任一者之核苷酸序列包含一個、兩個、三個、四個、五個、六個或七個但不超過十個不同核苷酸之核苷酸序列；或相對於SEQ ID NO: 2547-2548或5014中任一者之核苷酸序列包含一個、兩個、三個、四個、五個、六個或七個但不超過十個不同核苷酸之核苷酸序列；(ii)環區，其包含SEQ ID NO: 2550-2553中任一者之核苷酸序列；與其實質上一致(例如，具有至少70%、75%、80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%、99%序列一致性)之核苷酸序列；相對於SEQ ID NO: 2550-2553中任一者之核苷酸序列包含一個、兩個、三個或四個但不超過五個不同核苷酸之核苷酸序列；或相對於SEQ ID NO: 2550-2553中任一者之核苷酸序列包含一個、兩個、三個或四個但不超過五個不同核苷酸之核苷酸序列；及(iii) 3’側接區，其包含SEQ ID NO: 2554-2558中任一者之核苷酸序列；與其實質上一致(例如，具有至少70%、75%、80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%、99%序列一致性)之核苷酸序列；相對於SEQ ID NO: 2554-2558中任一者之核苷酸序列包含一個、兩個、三個、四個、五個、六個或七個但不超過十個不同核苷酸之核苷酸序列；相對於SEQ ID NO: 2554-2558中任一者之核苷酸序列包含一個、兩個、三個、四個、五個、六個或七個但不超過十個修飾之核苷酸序列。
在一些實施例中，經編碼之調節多核苷酸包含：(i) 5’側接區，其包含SEQ ID NO: 5000之核苷酸序列；與SEQ ID NO: 5000實質上一致(例如，具有至少70%、75%、80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%、99%序列一致性)之核苷酸序列；相對於SEQ ID NO: 5000之核苷酸序列包含一個、兩個、三個、四個、五個、六個或七個但不超過十個不同核苷酸之核苷酸序列；或相對於SEQ ID NO: 5000之核苷酸序列包含一個、兩個、三個、四個、五個、六個或七個但不超過十個不同核苷酸之核苷酸序列；(ii)環區，其包含SEQ ID NO: 5004之核苷酸序列；與SEQ ID NO: 5004實質上一致(例如，具有至少70%、75%、80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%、99%序列一致性)之核苷酸序列；相對於SEQ ID NO: 5004之核苷酸序列包含一個、兩個、三個或四個但不超過五個不同核苷酸之核苷酸序列；或相對於SEQ ID NO: 5004之核苷酸序列包含一個、兩個、三個或四個但不超過五個不同核苷酸之核苷酸序列；及(iii) 3’側接區，其包含SEQ ID NO: 5008之核苷酸序列；與SEQ ID NO: 5008實質上一致(例如，具有至少70%、75%、80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%、99%序列一致性)之核苷酸序列；相對於SEQ ID NO: 5008之核苷酸序列包含一個、兩個、三個、四個、五個、六個或七個但不超過十個不同核苷酸之核苷酸序列；相對於SEQ ID NO: 5008之核苷酸序列包含一個、兩個、三個、四個、五個、六個或七個但不超過十個修飾之核苷酸序列。
在一些實施例中，調節多核苷酸包含：(i) 5’側接區，其包含SEQ ID NO: 2547之核苷酸序列；與SEQ ID NO: 2547實質上一致(例如，具有至少70%、75%、80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%、99%序列一致性)之核苷酸序列；相對於SEQ ID NO: 2547之核苷酸序列包含一個、兩個、三個、四個、五個、六個或七個但不超過十個不同核苷酸之核苷酸序列；或相對於SEQ ID NO: 2547之核苷酸序列包含一個、兩個、三個、四個、五個、六個或七個但不超過十個不同核苷酸之核苷酸序列；(ii)環區，其包含SEQ ID NO: 2550之核苷酸序列；與SEQ ID NO: 2550實質上一致(例如，具有至少70%、75%、80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%、99%序列一致性)之核苷酸序列；相對於SEQ ID NO: 2550之核苷酸序列包含一個、兩個、三個或四個但不超過五個不同核苷酸之核苷酸序列；或相對於SEQ ID NO: 2550之核苷酸序列包含一個、兩個、三個或四個但不超過五個不同核苷酸之核苷酸序列；及(iii) 3’側接區，其包含SEQ ID NO: 2554之核苷酸序列；與SEQ ID NO: 2554實質上一致(例如，具有至少70%、75%、80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%、99%序列一致性)之核苷酸序列；相對於SEQ ID NO: 2554之核苷酸序列包含一個、兩個、三個、四個、五個、六個或七個但不超過十個不同核苷酸之核苷酸序列；相對於SEQ ID NO: 2554之核苷酸序列包含一個、兩個、三個、四個、五個、六個或七個但不超過十個修飾之核苷酸序列。
在一些實施例中，經編碼之調節多核苷酸包含：(i) 5’側接區，其包含SEQ ID NO: 5001之核苷酸序列；與SEQ ID NO: 5001實質上一致(例如，具有至少70%、75%、80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%、99%序列一致性)之核苷酸序列；相對於SEQ ID NO: 5001之核苷酸序列包含一個、兩個、三個、四個、五個、六個或七個但不超過十個不同核苷酸之核苷酸序列；或相對於SEQ ID NO: 5001之核苷酸序列包含一個、兩個、三個、四個、五個、六個或七個但不超過十個不同核苷酸之核苷酸序列；(ii)環區，其包含SEQ ID NO: 5005之核苷酸序列；與SEQ ID NO: 5005實質上一致(例如，具有至少70%、75%、80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%、99%序列一致性)之核苷酸序列；相對於SEQ ID NO: 5005之核苷酸序列包含一個、兩個、三個或四個但不超過五個不同核苷酸之核苷酸序列；或相對於SEQ ID NO: 5005之核苷酸序列包含一個、兩個、三個或四個但不超過五個不同核苷酸之核苷酸序列；及(iii) 3’側接區，其包含SEQ ID NO: 5009之核苷酸序列；與SEQ ID NO: 5009實質上一致(例如，具有至少70%、75%、80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%、99%序列一致性)之核苷酸序列；相對於SEQ ID NO: 5009之核苷酸序列包含一個、兩個、三個、四個、五個、六個或七個但不超過十個不同核苷酸之核苷酸序列；相對於SEQ ID NO: 5009之核苷酸序列包含一個、兩個、三個、四個、五個、六個或七個但不超過十個修飾之核苷酸序列。
在一些實施例中，調節多核苷酸包含：(i) 5’側接區，其包含SEQ ID NO: 2548之核苷酸序列；與SEQ ID NO: 2548實質上一致(例如，具有至少70%、75%、80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%、99%序列一致性)之核苷酸序列；相對於SEQ ID NO: 2548之核苷酸序列包含一個、兩個、三個、四個、五個、六個或七個但不超過十個不同核苷酸之核苷酸序列；或相對於SEQ ID NO: 2548之核苷酸序列包含一個、兩個、三個、四個、五個、六個或七個但不超過十個不同核苷酸之核苷酸序列；(ii)環區，其包含SEQ ID NO: 2551之核苷酸序列；與SEQ ID NO: 2551實質上一致(例如，具有至少70%、75%、80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%、99%序列一致性)之核苷酸序列；相對於SEQ ID NO: 2551之核苷酸序列包含一個、兩個、三個或四個但不超過五個不同核苷酸之核苷酸序列；或相對於SEQ ID NO: 2551之核苷酸序列包含一個、兩個、三個或四個但不超過五個不同核苷酸之核苷酸序列；及(iii) 3’側接區，其包含SEQ ID NO: 2555之核苷酸序列；與SEQ ID NO: 2555實質上一致(例如，具有至少70%、75%、80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%、99%序列一致性)之核苷酸序列；相對於SEQ ID NO: 2555之核苷酸序列包含一個、兩個、三個、四個、五個、六個或七個但不超過十個不同核苷酸之核苷酸序列；相對於SEQ ID NO: 2555之核苷酸序列包含一個、兩個、三個、四個、五個、六個或七個但不超過十個修飾之核苷酸序列。
在某些實施例中，分子支架可為天然pri-miRNA支架。作為非限制性實例，分子支架可為衍生自人類miR155支架之支架。
在某些實施例中，分子支架可包含此項技術中已知之一或多種連接子。連接子可將區域或一個分子支架與另一個隔開。作為非限制性實例，分子支架可為多順反子。 包含分子支架及靶向SOD1之siRNA分子之調節多核苷酸
在一些實施例中，調節多核苷酸包含如表14中所述之5'及3'側接區、環區以及編碼有義序列及反義序列之核酸序列。
在一些實施例中，調節多核苷酸包含SEQ ID NO: 2562、2579、5022、2559、2560、2561、2563-2578中任一者之核苷酸序列，或與其至少70%、75%、80%、85%、90%、95%或99%一致之核苷酸序列。在一些實施例中，調節多核苷酸包含相對於SEQ ID NO: 2562、2579、5022、2559、2560、2561或2563-2578中任一者之核苷酸序列包含至少一個、兩個、三個、四個、五個、六個或七個但不超過十個不同核苷酸之核苷酸序列。在一些實施例中，調節多核苷酸包含相對於SEQ ID NO: 2562、2579、5022、2559、2560、2561、2563-2578中任一者之核苷酸序列包含至少一個、兩個、三個、四個、五個、六個或七個但不超過十個修飾之核苷酸序列。
在一些實施例中，調節多核苷酸包含SEQ ID NO: 2562之核苷酸序列；與SEQ ID NO: 2562至少70%、75%、80%、85%、90%、95%或99%一致之核苷酸序列；相對於SEQ ID NO: 2562之核苷酸序列包含至少一個、兩個、三個、四個、五個、六個或七個但不超過十個不同核苷酸之核苷酸序列；或相對於SEQ ID NO: 2562之核苷酸序列包含至少一個、兩個、三個、四個、五個、六個或七個但不超過十個修飾之核苷酸序列。
在一些實施例中，經編碼之調節多核苷酸包含SEQ ID NO: 5013之核苷酸序列；與SEQ ID NO: 5013至少70%、75%、80%、85%、90%、95%或99%一致之核苷酸序列；相對於SEQ ID NO: 5013之核苷酸序列包含至少一個、兩個、三個、四個、五個、六個或七個但不超過十個不同核苷酸之核苷酸序列；或相對於SEQ ID NO: 5013之核苷酸序列包含至少一個、兩個、三個、四個、五個、六個或七個但不超過十個修飾之核苷酸序列。
應理解，在一些實施例中，本文表14中之任一序列可包含替代序列(例如RNA分子)內之任一或所有T核苷酸(胸腺嘧啶)之U核苷酸(尿苷)。應理解，在一些實施例中，本文表14中之任一序列可包含替代序列(例如DNA分子)內之任一或所有U核苷酸(尿苷)之T核苷酸(胸腺嘧啶)。 表14. SOD1調節多核苷酸序列區(5'至3')
調節多核苷酸構築體名稱 SEQ ID NO 描述 序列
VOYSOD1miR104-788.2 2562 5’側接至3’側接(DNA) CTCCCGCAGAACACCATGCGCTCCACGGAAGCAGGTCCTCACTTTAATGCTGTGGCCACTGAGAAGTATTAAAGTGAGGACCTGCTTCTGAGGAGCGCCTTGACAGCAGCCATGGGAGGGCC
5013 5’側接至3’側接(RNA) CUCCCGCAGAACACCAUGCGCUCCACGGAAGCAGGUCCUCACUUUAAUGCUGUGGCCACUGAGAAGUAUUAAAGUGAGGACCUGCUUCUGAGGAGCGCCUUGACAGCAGCCAUGGGAGGGCC
2547 5’側接 CTCCCGCAGAACACCATGCGCTCCACGGAA
66 過客 GCAGGTCCTCACTTTAATGCT
2550 環 GTGGCCACTGAGAAG
1351 指導 TATTAAAGTGAGGACCTGCTT
2554 3’側接 CTGAGGAGCGCCTTGACAGCAGCCATGGGAGGGCC
VOYSOD1miR127-860 2579 5’側接至3’側接 GAAGCAAAGAAGGGGCAGAGGGAGCCCGTGAGCTGAGTGGGCCAGGGACTGGGAGAAGGAGTGAGGAGGCAGGGCCGGCATGCCTCTGCTGCTGGCCAGACCCCTTAACTCATTTGTTCCCGTCTGCACCTGTCACTAGTAACAGATGAGTTAAGGGGTTTGGCCGTGTAGTGCTACCCAGCGCTGGCTGCCTCCTCAGCATTGCAATTCCTCTCCCATCTGGGCACCAGTCAGCTACCCTGGTGGGAATCTGGGTAGCC
4821 5’側接至3’側接 GAAGCAAAGAAGGGGCAGAGGGAGCCCGUGAGCUGAGUGGGCCAGGGACUGGGAGAAGGAGUGAGGAGGCAGGGCCGGCAUGCCUCUGCUGCUGGCCAGACCCCUUAACUCAUUUGUUCCCGUCUGCACCUGUCACUAGUAACAGAUGAGUUAAGGGGUUUGGCCGUGUAGUGCUACCCAGCGCUGGCUGCCUCCUCAGCAUUGCAAUUCCUCUCCCAUCUGGGCACCAGUCAGCUACCCUGGUGGGAAUCUGGGUAGCC
2548 5’側接 GAAGCAAAGAAGGGGCAGAGGGAGCCCGTGAGCTGAGTGGGCCAGGGACTGGGAGAAGGAGTGAGGAGGCAGGGCCGGCATGCCTCTGCTGCTGGCCAGA
1347 過客 CCCCTTAACTCATTTGTTCCC
2551 環 GTCTGCACCTGTCACTAG
1368 指導 TAACAGATGAGTTAAGGGGTT
2555 3’側接 TGGCCGTGTAGTGCTACCCAGCGCTGGCTGCCTCCTCAGCATTGCAATTCCTCTCCCATCTGGGCACCAGTCAGCTACCCTGGTGGGAATCTGGGTAGCC
VOYSOD1miR114-861 5022 5’側接至3’側接 GTGCTGGGCGGGGGGCGGCGGGCCCTCCCGCAGAACACCATGCGCTCTTCGGAACCCTTAACTGATCTGTTAACCTGTGACCTGGTTAACAGATGAGTTAAGGGTTCTGTGGAGCGCCTTGACAGCAGCCATGGGAGGGCCGCCCCCTACCTCAGTGA
2549 5’側接 GTGCTGGGCGGGGGGCGGCGGGCCCTCCCGCAGAACACCATGCGCTCTTCGGAA
5023 過客 CCCTTAACTGATCTGTTAACC
2552 環 TGTGACCTGG
5024 指導 TTAACAGATGAGTTAAGGGTT
2558 3’側接 CTGTGGAGCGCCTTGACAGCAGCCATGGGAGGGCCGCCCCCTACCTCAGTGA
VOYSOD1miR102-788 2559 5’側接至3’側接 GTGCTGGGCGGGGGGCGGCGGGCCCTCCCGCAGAACACCATGCGCTCTTCGGAAGCAGGTCCTCACTTTAATGCCTGTGACCTGGGATTAAAGTGAGGACCTGCTTCTGAGGAGCGCCTTGACAGCAGCCATGGGAGGGCCGCCCCCTACCTCAGTGA
2549 5’側接 GTGCTGGGCGGGGGGCGGCGGGCCCTCCCGCAGAACACCATGCGCTCTTCGGAA
1328 過客 GCAGGTCCTCACTTTAATGCC
2552 環 TGTGACCTGG
1348 指導 GATTAAAGTGAGGACCTGCTT
2557 3’側接 CTGAGGAGCGCCTTGACAGCAGCCATGGGAGGGCCGCCCCCTACCTCAGTGA
VOYSOD1miR102-805c 2560 5’側接至3’側接 GTGCTGGGCGGGGGGCGGCGGGCCCTCCCGCAGAACACCATGCGCTCTTCGGAAGGCAATGTGACTGCTGGCCCCTGTGACCTGGTGCCAGCAGTCACATTGCCTTCTGAGGAGCGCCTTGACAGCAGCCATGGGAGGGCCGCCCCCTACCTCAGTGA
2549 5’側接 GTGCTGGGCGGGGGGCGGCGGGCCCTCCCGCAGAACACCATGCGCTCTTCGGAA
1329 過客 GGCAATGTGACTGCTGGCCCC
2552 環 TGTGACCTGG
1349 指導 TGCCAGCAGTCACATTGCCTT
2557 3’側接 CTGAGGAGCGCCTTGACAGCAGCCATGGGAGGGCCGCCCCCTACCTCAGTGA
VOYSOD1miR104-788 2561 5’側接至3’側接 GTGCTGGGCGGGGGGCGGCGGGCCCTCCCGCAGAACACCATGCGCTCTTCGGAAGCAGGTCCTCACTTTAATTCCTGTGACCTGGGATTAAAGTGAGGACCTGCTTCTGAGGAGCGCCTTGACAGCAGCCATGGGAGGGCCGCCCCCTACCTCAGTGA
2549 5’側接 GTGCTGGGCGGGGGGCGGCGGGCCCTCCCGCAGAACACCATGCGCTCTTCGGAA
1330 過客 GCAGGTCCTCACTTTAATTCC
2552 環 TGTGACCTGG
1350 指導 GATTAAAGTGAGGACCTGCTT
2557 3’側接 CTGAGGAGCGCCTTGACAGCAGCCATGGGAGGGCCGCCCCCTACCTCAGTGA
VOYSOD1miR104-789 2563 5’側接至3’側接 CTCCCGCAGAACACCATGCGCTCCACGGAACAGGTCCTCACTTTAATCGCTGTGGCCACTGAGAAGTGATTAAAGTGAGGACCTGTTCTGAGGAGCGCCTTGACAGCAGCCATGGGAGGGCC
2547 5’側接 CTCCCGCAGAACACCATGCGCTCCACGGAA
1331 過客 CAGGTCCTCACTTTAATCGCT
2550 環 GTGGCCACTGAGAAG
1352 指導 TGATTAAAGTGAGGACCTGTT
2554 3’側接 CTGAGGAGCGCCTTGACAGCAGCCATGGGAGGGCC
VOYSOD1miR104-805c 2564 5’側接至3’側接 GTGCTGGGCGGGGGGCGGCGGGCCCTCCCGCAGAACACCATGCGCTCTTCGGAAGGCAATGTGACTGCTGGTGCCTGTGACCTGGTGCCAGCAGTCACATTGCCTTCTGAGGAGCGCCTTGACAGCAGCCATGGGAGGGCCGCCCCCTACCTCAGTGA
2549 5’側接 GTGCTGGGCGGGGGGCGGCGGGCCCTCCCGCAGAACACCATGCGCTCTTCGGAA
1332 過客 GGCAATGTGACTGCTGGTGCC
2552 環 TGTGACCTGG
1353 指導 TGCCAGCAGTCACATTGCCTT
2557 3’側接 CTGAGGAGCGCCTTGACAGCAGCCATGGGAGGGCCGCCCCCTACCTCAGTGA
VOYSOD1miR104-829 2565 5’側接至3’側接 CTCCCGCAGAACACCATGCGCTCCACGGAAGTCGTTTGGCTTGTGGTGGCTGTGGCCACTGAGAAGTCACCACAAGCCAAACGACTTCTGAGGAGCGCCTTGACAGCAGCCATGGGAGGGCC
2547 5’側接 CTCCCGCAGAACACCATGCGCTCCACGGAA
1333 過客 GTCGTTTGGCTTGTGGTGGCT
2550 環 GTGGCCACTGAGAAG
1354 指導 TCACCACAAGCCAAACGACTT
2554 3’側接 CTGAGGAGCGCCTTGACAGCAGCCATGGGAGGGCC
VOYSOD1miR104-830 2566 5’側接至3’側接 CTCCCGCAGAACACCATGCGCTCCACGGAATCGTTTGGCTTGTGGTGTGCTGTGGCCACTGAGAAGTACACCACAAGCCAAACGATTCTGAGGAGCGCCTTGACAGCAGCCATGGGAGGGCC
2547 5’側接 CTCCCGCAGAACACCATGCGCTCCACGGAA
1334 過客 TCGTTTGGCTTGTGGTGTGCT
2550 環 GTGGCCACTGAGAAG
1355 指導 TACACCACAAGCCAAACGATT
2554 3’側接 CTGAGGAGCGCCTTGACAGCAGCCATGGGAGGGCC
VOYSOD1miR109-788 2567 5’側接至3’側接 GTGCTGGGCGGGGGGCGGCGGGCCCTCCCGCAGAACACCATGCGCTCTTCGGAAGCAGGTCCTCACTTTAATCCCTGTGATTTGGGATTAAAGTGAGGACCTGCTTCTGAGGAGCGCCTTGACAGCAGCCATGGGAGGGCCGCCCCCTACCTCAGTGA
2549 5’側接 GTGCTGGGCGGGGGGCGGCGGGCCCTCCCGCAGAACACCATGCGCTCTTCGGAA
1335 過客 GCAGGTCCTCACTTTAATCCC
2553 環 TGTGATTTGG
1356 指導 GATTAAAGTGAGGACCTGCTT
2557 3’側接 CTGAGGAGCGCCTTGACAGCAGCCATGGGAGGGCCGCCCCCTACCTCAGTGA
VOYSOD1miR109-805c 2568 5’側接至3’側接 GTGCTGGGCGGGGGGCGGCGGGCCCTCCCGCAGAACACCATGCGCTCTTCGGAAGGCAATGTGACTGCTGGTACCTGTGATTTGGTGCCAGCAGTCACATTGCCTTCTGAGGAGCGCCTTGACAGCAGCCATGGGAGGGCCGCCCCCTACCTCAGTGA
2549 5’側接 GTGCTGGGCGGGGGGCGGCGGGCCCTCCCGCAGAACACCATGCGCTCTTCGGAA
1336 過客 GGCAATGTGACTGCTGGTACC
2553 環 TGTGATTTGG
1357 指導 TGCCAGCAGTCACATTGCCTT
2557 3’側接 CTGAGGAGCGCCTTGACAGCAGCCATGGGAGGGCCGCCCCCTACCTCAGTGA
VOYSOD1miR114-788 2569 5’側接至3’側接 GTGCTGGGCGGGGGGCGGCGGGCCCTCCCGCAGAACACCATGCGCTCTTCGGAAGCAGGTCCTGACTTTAATCCCTGTGACCTGGGATTAAAGTGAGGACCTGCTTCTGTGGAGCGCCTTGACAGCAGCCATGGGAGGGCCGCCCCCTACCTCAGTGA
2549 5’側接 GTGCTGGGCGGGGGGCGGCGGGCCCTCCCGCAGAACACCATGCGCTCTTCGGAA
1337 過客 GCAGGTCCTGACTTTAATCCC
2552 環 TGTGACCTGG
1358 指導 GATTAAAGTGAGGACCTGCTT
2558 3’側接 CTGTGGAGCGCCTTGACAGCAGCCATGGGAGGGCCGCCCCCTACCTCAGTGA
VOYSOD1miR114-805c 2570 5’側接至3’側接 GTGCTGGGCGGGGGGCGGCGGGCCCTCCCGCAGAACACCATGCGCTCTTCGGAAGGCAATGTGTCTGCTGGTACCTGTGACCTGGTGCCAGCAGTCACATTGCCTTCTGTGGAGCGCCTTGACAGCAGCCATGGGAGGGCCGCCCCCTACCTCAGTGA
2549 5’側接 GTGCTGGGCGGGGGGCGGCGGGCCCTCCCGCAGAACACCATGCGCTCTTCGGAA
1338 過客 GGCAATGTGTCTGCTGGTACC
2552 環 TGTGACCTGG
1359 指導 TGCCAGCAGTCACATTGCCTT
2558 3’側接 CTGTGGAGCGCCTTGACAGCAGCCATGGGAGGGCCGCCCCCTACCTCAGTGA
VOYSOD1miR116-788 2571 5’側接至3’側接 GTGCTGGGCGGGGGGCGGCGGGCCCTCCCGCAGAACACCATGCGCTCTTCGGAAGCAGGTCCTCACTTTAATCCCTGTGACCTGGGATTAAAGTGAGGACCTGCTTCTGTGGAGCGCCTTGACAGCAGCCATGGGAGGGCCGCCCCCTACCTCAGTGA
2549 5’側接 GTGCTGGGCGGGGGGCGGCGGGCCCTCCCGCAGAACACCATGCGCTCTTCGGAA
1339 過客 GCAGGTCCTCACTTTAATCCC
2552 環 TGTGACCTGG
1360 指導 GATTAAAGTGAGGACCTGCTT
2558 3’側接 CTGTGGAGCGCCTTGACAGCAGCCATGGGAGGGCCGCCCCCTACCTCAGTGA
VOYSOD1miR116-805c 2572 5’側接至3’側接 GTGCTGGGCGGGGGGCGGCGGGCCCTCCCGCAGAACACCATGCGCTCTTCGGAAGGCAATGTGACTGCTGGTACCTGTGACCTGGTGCCAGCAGTCACATTGCCTTCTGTGGAGCGCCTTGACAGCAGCCATGGGAGGGCCGCCCCCTACCTCAGTGA
2549 5’側接 GTGCTGGGCGGGGGGCGGCGGGCCCTCCCGCAGAACACCATGCGCTCTTCGGAA
1340 過客 GGCAATGTGACTGCTGGTACC
2552 環 TGTGACCTGG
1361 指導 TGCCAGCAGTCACATTGCCTT
2558 3’側接 CTGTGGAGCGCCTTGACAGCAGCCATGGGAGGGCCGCCCCCTACCTCAGTGA
VOYSOD1miR127-788 2573 5’側接至3’側接 GAAGCAAAGAAGGGGCAGAGGGAGCCCGTGAGCTGAGTGGGCCAGGGACTGGGAGAAGGAGTGAGGAGGCAGGGCCGGCATGCCTCTGCTGCTGGCCAGAGCAGGTCCTCACTTTAATCCCGTCTGCACCTGTCACTAGGATTAAAGTGAGGACCTGCTTTGGCCGTGTAGTGCTACCCAGCGCTGGCTGCCTCCTCAGCATTGCAATTCCTCTCCCATCTGGGCACCAGTCAGCTACCCTGGTGGGAATCTGGGTAGCC
2548 5’側接 GAAGCAAAGAAGGGGCAGAGGGAGCCCGTGAGCTGAGTGGGCCAGGGACTGGGAGAAGGAGTGAGGAGGCAGGGCCGGCATGCCTCTGCTGCTGGCCAGA
1341 過客 GCAGGTCCTCACTTTAATCCC
2551 環 GTCTGCACCTGTCACTAG
1362 指導 GATTAAAGTGAGGACCTGCTT
2555 3’側接 TGGCCGTGTAGTGCTACCCAGCGCTGGCTGCCTCCTCAGCATTGCAATTCCTCTCCCATCTGGGCACCAGTCAGCTACCCTGGTGGGAATCTGGGTAGCC
VOYSOD1miR127-788.2 2574 5’側接至3’側接 GAAGCAAAGAAGGGGCAGAGGGAGCCCGTGAGCTGAGTGGGCCAGGGACTGGGAGAAGGAGTGAGGAGGCAGGGCCGGCATGCCTCTGCTGCTGGCCAGAGCAGGTCCTCACTTTAATGCCGTCTGCACCTGTCACTAGTATTAAAGTGAGGACCTGCTTTGGCCGTGTAGTGCTACCCAGCGCTGGCTGCCTCCTCAGCATTGCAATTCCTCTCCCATCTGGGCACCAGTCAGCTACCCTGGTGGGAATCTGGGTAGCC
2548 5’側接 GAAGCAAAGAAGGGGCAGAGGGAGCCCGTGAGCTGAGTGGGCCAGGGACTGGGAGAAGGAGTGAGGAGGCAGGGCCGGCATGCCTCTGCTGCTGGCCAGA
1342 過客 GCAGGTCCTCACTTTAATGCC
2551 環 GTCTGCACCTGTCACTAG
1363 指導 TATTAAAGTGAGGACCTGCTT
2555 3’側接 TGGCCGTGTAGTGCTACCCAGCGCTGGCTGCCTCCTCAGCATTGCAATTCCTCTCCCATCTGGGCACCAGTCAGCTACCCTGGTGGGAATCTGGGTAGCC
VOYSOD1miR127-789 2575 5’側接至3’側接 GAAGCAAAGAAGGGGCAGAGGGAGCCCGTGAGCTGAGTGGGCCAGGGACTGGGAGAAGGAGTGAGGAGGCAGGGCCGGCATGCCTCTGCTGCTGGCCAGACAGGTCCTCACTTTAATCGCCGTCTGCACCTGTCACTAGTGATTAAAGTGAGGACCTGTTTGGCCGTGTAGTGCTACCCAGCGCTGGCTGCCTCCTCAGCATTGCAATTCCTCTCCCATCTGGGCACCAGTCAGCTACCCTGGTGGGAATCTGGGTAGCC
2548 5’側接 GAAGCAAAGAAGGGGCAGAGGGAGCCCGTGAGCTGAGTGGGCCAGGGACTGGGAGAAGGAGTGAGGAGGCAGGGCCGGCATGCCTCTGCTGCTGGCCAGA
1343 過客 CAGGTCCTCACTTTAATCGCC
2551 環 GTCTGCACCTGTCACTAG
1364 指導 TGATTAAAGTGAGGACCTGTT
2555 3’側接 TGGCCGTGTAGTGCTACCCAGCGCTGGCTGCCTCCTCAGCATTGCAATTCCTCTCCCATCTGGGCACCAGTCAGCTACCCTGGTGGGAATCTGGGTAGCC
VOYSOD1miR127-805c 2576 5’側接至3’側接 GAAGCAAAGAAGGGGCAGAGGGAGCCCGTGAGCTGAGTGGGCCAGGGACTGGGAGAAGGAGTGAGGAGGCAGGGCCGGCATGCCTCTGCTGCTGGCCAGAGGCAATGTGACTGCTGGTACCGTCTGCACCTGTCACTAGTGCCAGCAGTCACATTGCCTTTGGCCGTGTAGTGCTACCCAGCGCTGGCTGCCTCCTCAGCATTGCAATTCCTCTCCCATCTGGGCACCAGTCAGCTACCCTGGTGGGAATCTGGGTAGCC
2548 5’側接 GAAGCAAAGAAGGGGCAGAGGGAGCCCGTGAGCTGAGTGGGCCAGGGACTGGGAGAAGGAGTGAGGAGGCAGGGCCGGCATGCCTCTGCTGCTGGCCAGA
1344 過客 GGCAATGTGACTGCTGGTACC
2551 環 GTCTGCACCTGTCACTAG
1365 指導 TGCCAGCAGTCACATTGCCTT
2555 3’側接 TGGCCGTGTAGTGCTACCCAGCGCTGGCTGCCTCCTCAGCATTGCAATTCCTCTCCCATCTGGGCACCAGTCAGCTACCCTGGTGGGAATCTGGGTAGCC
VOYSOD1miR127-829 2577 5’側接至3’側接 GAAGCAAAGAAGGGGCAGAGGGAGCCCGTGAGCTGAGTGGGCCAGGGACTGGGAGAAGGAGTGAGGAGGCAGGGCCGGCATGCCTCTGCTGCTGGCCAGAGTCGTTTGGCTTGTGGTGGCCGTCTGCACCTGTCACTAGTCACCACAAGCCAAACGACTTTGGCCGTGTAGTGCTACCCAGCGCTGGCTGCCTCCTCAGCATTGCAATTCCTCTCCCATCTGGGCACCAGTCAGCTACCCTGGTGGGAATCTGGGTAGCC
2548 5’側接 GAAGCAAAGAAGGGGCAGAGGGAGCCCGTGAGCTGAGTGGGCCAGGGACTGGGAGAAGGAGTGAGGAGGCAGGGCCGGCATGCCTCTGCTGCTGGCCAGA
1345 過客 GTCGTTTGGCTTGTGGTGGCC
2551 環 GTCTGCACCTGTCACTAG
1366 指導 TCACCACAAGCCAAACGACTTT
2556 3’側接 GGCCGTGTAGTGCTACCCAGCGCTGGCTGCCTCCTCAGCATTGCAATTCCTCTCCCATCTGGGCACCAGTCAGCTACCCTGGTGGGAATCTGGGTAGCC
VOYSOD1miR127-830 2578 5’側接至3’側接 GAAGCAAAGAAGGGGCAGAGGGAGCCCGTGAGCTGAGTGGGCCAGGGACTGGGAGAAGGAGTGAGGAGGCAGGGCCGGCATGCCTCTGCTGCTGGCCAGATCGTTTGGCTTGTGGTGTGCCGTCTGCACCTGTCACTAGTACACCACAAGCCAAACGATTTGGCCGTGTAGTGCTACCCAGCGCTGGCTGCCTCCTCAGCATTGCAATTCCTCTCCCATCTGGGCACCAGTCAGCTACCCTGGTGGGAATCTGGGTAGCC
2548 5’側接 GAAGCAAAGAAGGGGCAGAGGGAGCCCGTGAGCTGAGTGGGCCAGGGACTGGGAGAAGGAGTGAGGAGGCAGGGCCGGCATGCCTCTGCTGCTGGCCAGA
1346 過客 TCGTTTGGCTTGTGGTGTGCC
2551 環 GTCTGCACCTGTCACTAG
1367 指導 TACACCACAAGCCAAACGATT
2555 3’側接 TGGCCGTGTAGTGCTACCCAGCGCTGGCTGCCTCCTCAGCATTGCAATTCCTCTCCCATCTGGGCACCAGTCAGCTACCCTGGTGGGAATCTGGGTAGCC
在一些實施例中，分子支架可包含5'側接至3'側接區序列，其包含與表14中之5'側接至3'側接區序列中之任一者相差不超過5、4、3、2或1個核苷酸之至少20個(例如，至少21、22、23、24、25、26、27、28、29或30個)鄰接核苷酸。此等不同核苷酸可為鄰接的，或替代地，其在整個序列中可為非鄰接的。在一些實施例中，不同核苷酸位於序列之末端。在一些實施例中，編碼siRNA雙鏈體之核苷酸序列包含SEQ ID NO: 2562、2579、5022、2559、2560、2561、2563、2564、2565、2566、2567、2568、2569、2570、2571、2572、2573、2574、2575、2576、2577、2578中任一者之核苷酸序列，或與其至少70% (例如，至少75%、80%、85%、90%、92%、95%、97%、98%或99%)一致之核苷酸序列。
在一些實施例中，分子支架可包含5'側接區序列，其包含與表14中之5'側接區序列中之任一者相差不超過3、2或1個核苷酸之至少15個(例如，至少16、17、18、19、20、21、22或23個)鄰接核苷酸。此等不同核苷酸可為鄰接的，或替代地，其在整個序列中可為非鄰接的。在一些實施例中，不同核苷酸位於序列之末端。在一些實施例中，5'側接區包括來自表14中5'側接區序列中任一者之核苷酸，或與其實質上一致(例如，具有至少70%、75%、80%、85%、90%、92%、95%、97%、98%或99%序列一致性)之核苷酸序列。
在一些實施例中，分子支架可包含過客序列，其包含與表14中之過客序列中之任一者相差不超過3、2或1個核苷酸之至少15個(例如，至少16、17、18、19、20、21、22或23個)鄰接核苷酸。此等不同核苷酸可為鄰接的，或替代地，其在整個序列中可為非鄰接的。在一些實施例中，不同核苷酸位於序列之末端。在一些實施例中，過客序列包括來自表14中過客序列中任一者之核苷酸，或與其實質上一致(例如，具有至少70%、75%、80%、85%、90%、92%、95%、97%、98%或99%序列一致性)之核苷酸序列。
在一些實施例中，分子支架可包含環序列，其包含與表14中之環序列中之任一者相差不超過3、2或1個核苷酸之至少7個(例如，至少8、9或10個)鄰接核苷酸。此等不同核苷酸可為鄰接的，或替代地，其在整個序列中可為非鄰接的。在一些實施例中，不同核苷酸位於序列之末端。在一些實施例中，環序列包括來自表14中環序列中任一者之核苷酸，或與其實質上一致(例如，具有至少70%、75%、80%、85%、90%、92%、95%、97%、98%或99%序列一致性)之核苷酸序列。
在一些實施例中，分子支架可包含指導序列，其包含與表14中之指導序列中之任一者相差不超過3、2或1個核苷酸之至少15個(例如，至少16、17、18、19、20、21、22或23個)鄰接核苷酸。此等不同核苷酸可為鄰接的，或替代地，其在整個序列中可為非鄰接的。在一些實施例中，不同核苷酸位於序列之末端。在一些實施例中，指導序列包括來自表14中指導序列中任一者之核苷酸，或與其實質上一致(例如，具有至少70%、75%、80%、85%、90%、92%、95%、97%、98%或99%序列一致性)之核苷酸序列。
在一些實施例中，分子支架可包含3'側接區序列，其包含與表14中之3'側接區序列中之任一者相差不超過3、2或1個核苷酸之至少15個(例如，至少16、17、18、19、20、21、22或23個)鄰接核苷酸。此等不同核苷酸可為鄰接的，或替代地，其在整個序列中可為非鄰接的。在一些實施例中，不同核苷酸位於序列之末端。在一些實施例中，3'側接區序列包括來自表14中3'側接區序列中任一者之核苷酸，或與其實質上一致(例如，具有至少70%、75%、80%、85%、90%、92%、95%、97%、98%或99%序列一致性)之核苷酸序列。
在一些實施例中，經編碼之調節多核苷酸包含SEQ ID NO: 5013之核苷酸序列，或與其至少80%、85%、90%、92%、95%、97%、98%或99%一致之核苷酸序列。在一些實施例中，編碼調節多核苷酸之核苷酸序列包含SEQ ID NO: 2562之核苷酸序列，或與其至少80%、85%、90%、92%、95%、97%、98%或99%一致之核苷酸序列。
在一些實施例中，靶向SOD1之多核苷酸包含SEQ ID NO: 2562之核苷酸序列，或與其至少80%、85%、90%、92%、95%、97%、98%或99%一致之核苷酸序列。在一些實施例中，靶向SOD1之經編碼多核苷酸包含SEQ ID NO: 5013之核苷酸序列，或與其至少80%、85%、90%、92%、95%、97%、98%或99%一致之核苷酸序列。 包含調節多核苷酸之AAV顆粒
在某些實施例中，AAV顆粒包含病毒基因體，其具有包含調節多核苷酸序列之酬載區。在此類實施例中，編碼多於一種多肽之病毒基因體可經複製且包裝至病毒顆粒中。經包含調節多核苷酸之病毒顆粒轉導的靶細胞可在單一細胞中表現經編碼之有義及/或反義序列。
在一些實施例中，AAV顆粒可用於治療、預防、減緩或改善神經疾病及/或病症之醫學領域。
在某些實施例中，可將包含調節多核苷酸序列之AAV顆粒引入哺乳動物細胞中，該調節多核苷酸序列包含編碼至少一種siRNA分子之核酸序列。
在AAV顆粒酬載區包含調節多核苷酸之情況下，調節多核苷酸可包含有義及/或反義序列以敲低靶基因。編碼本文所述調節多核苷酸之AAV病毒基因體可用於人類疾病、病毒、感染、獸醫應用及多種活體內及活體外背景領域。
在某些實施例中，AAV顆粒病毒基因體可包含至少一個反向末端重複(ITR)區。在一些實施例中，AAV顆粒病毒基因體可包含一或多個反向末端重複(ITR)區。在一些實施例中，AAV顆粒包括一個ITR區。在一些實施例中，AAV顆粒包括兩個ITR序列區。作為非限制性實例，病毒基因體包含長度為約105個核苷酸及長度為141個核苷酸之ITR。作為非限制性實例，病毒基因體包含長度為約105個核苷酸及長度為130個核苷酸之ITR。作為非限制性實例，病毒基因體包含長度為約130個核苷酸及長度為141個核苷酸之ITR。
在某些實施例中，AAV顆粒病毒基因體可包含至少一個填充序列區。
在某些實施例中，AAV顆粒病毒基因體可包含至少一個增強子序列區。
在某些實施例中，AAV顆粒病毒基因體可包含至少一個外顯子序列區。
在某些實施例中，AAV顆粒病毒基因體可包含至少一個內含子序列區。
在某些實施例中，AAV顆粒病毒基因體可包含至少一個多聚腺苷酸化信號序列區。
在某些實施例中，AAV顆粒病毒基因體包含多於一個聚A序列區。
可用於編碼本文所述之SOD1靶向多核苷酸之核酸中的額外ITR區核苷酸、填充區核苷酸、增強子區核苷酸、外顯子及內含子區核苷酸及聚A信號序列核苷酸揭示於PCT專利申請公開案WO2016077687、WO2019079240、WO2018204786、WO2019079242、WO 2020010042及WO2020223296中，該等專利特此以全文引用之方式併入。
包含病毒基因體之AAV顆粒的ITR至ITR序列之非限制性實例描述於例如表15中，該病毒基因體具有包含調節多核苷酸序列之酬載區。表15提供具有慢病毒衍生填充物之H1.mir104-788.2之ITR至ITR序列。表15中亦提供包含在ITR至ITR序列內之組分。在一些實施例中，組分可藉由載體主鏈序列彼此分開。在一些實施例中，AAV病毒基因體包含SEQ ID NO: 109之核苷酸序列，或與其實質上一致(例如，具有至少70%、75%、80%、85%、90%、92%、95%、97%、98%、或99%序列一致性)之核苷酸序列；或具有SEQ ID NO: 109之至少一個、兩個、三個、四個、五個、六個或七個修飾但不超過十個修飾之核苷酸序列。在一些實施例中，AAV病毒基因體包含SEQ ID NO: 2562之核苷酸序列，或與其實質上一致(例如，具有至少70%、75%、80%、85%、90%、92%、95%、97%、98%、或99%序列一致性)之核苷酸序列；或具有SEQ ID NO: 2562之至少一個、兩個、三個、四個、五個、六個或七個修飾但不超過十個修飾之核苷酸序列。
在一些實施例中，AAV病毒基因體包含SEQ ID NO: 109之核苷酸序列，或與其至少80%、85%、90%、92%、95%、97%、98%或99%一致之核苷酸序列。在一些實施例中，AAV病毒基因體包含SEQ ID NO: 109之核苷酸序列，或與其至少95%一致之核苷酸序列。在一些實施例中，AAV病毒基因體包含SEQ ID NO: 109之核苷酸序列，或與其至少98%一致之核苷酸序列。在一些實施例中，AAV病毒基因體包含SEQ ID NO: 109之核苷酸序列，或與其至少99%一致之核苷酸序列。在一些實施例中，AAV病毒基因體包含SEQ ID NO: 109之核苷酸序列。 表 15. 包 含調節多核苷酸之AAV顆粒H1.mir.104-788.2 (具有慢病毒衍生填充物)之I TR至I TR序列
ITR 至ITR 構築體名稱 區域 SEQ ID NO 序列
具有慢病毒衍生填充物之H1.mir.104-788.2 (VOYSOD16) ITR-ITR序列 109 CTGCGCGCTCGCTCGCTCACTGAGGCCGCCCGGGCAAAGCCCGGGCGTCGGGCGACCTTTGGTCGCCCGGCCTCAGTGAGCGAGCGAGCGCGCAGAGAGGGAGTGTAGCCATGCTCTAGGAAGATCAATTCAATTCACGCGTCCATGGCTTAGAAGGCAAGAATCCTGGCTGTGGAAAGATACCTAAAGGATCAACAGCTCCTGGGGATTTGGGGTTGCTCTGGAAAACTCATTTGCACCACTGCTGTGCCTTGGAATGCTAGTTGGAGTAATAAATCTCTGGAACAGATTTGGAATCACACGACCTGGATGGAGTGGGACAGAGAAATTAACAATTACACAAGCTTAATACACTCCTTAATTGAAGAATCGCAAAACCAGCAAGAAAAGAATGAACAAGAATTATTGGAATTAGATAAATGGGCAAGTTTGTGGAATTGGTTTAACATAACAAATTGGCTGTGGTATATAAAATTATTCATAATGATAGTAGGAGGCTTGGTAGGTTTAAGAATAGTTTTTGCTGTACTTTCTATAGTGAATAGAGTTAGGCAGGGATATTCACCATTATCGTTTCAGACCCACCTCCCAACCCCGAGGGGACCCGACAGGCCCGAAGGAATAGAAGAAGAAGGTGGAGAGAGAGACAGAGACAGATCCATTCGATTAGTGAACGGATCTCGACGGTATCGATCACGAGACTAGCCTCGAGCGGCCGCAATTCGAACGCTGACGTCATCAACCCGCTCCAAGGAATCGCGGGCCCAGTGTCACTAGGCGGGAACACCCAGCGCGCGTGCGCCCTGGCAGGAAGATGGCTGTGAGGGACAGGGAGTGGCGCCCTGCAATATTTGCATGTCGCTATGTGTTCTGGGAAATCACCATAAACGTGAAATGTCTTTGGATTTGGGAATCTTATAAGTTCTGTATGAGACCACACCGGTACCGAGCTCTCCCGCAGAACACCATGCGCTCCACGGAAGCAGGTCCTCACTTTAATGCTGTGGCCACTGAGAAGTATTAAAGTGAGGACCTGCTTCTGAGGAGCGCCTTGACAGCAGCCATGGGAGGGCCTCGAGGACGGGGTGAACTACGCCTGAGGATCCGATCTTTTTCCCTCTGCCAAAAATTATGGGGACATCATGAAGCCCCTTGAGCATCTGACTTCTGGCTAATAAAGGAAATTTATTTTCATTGCAATAGTGTGTTGGAATTTTTTGTGTCTCTCACTCGGCCTAGGTAGATAAGTAGCATGGCGGGTTAATCATTAACTACAAGGAACCCCTAGTGATGGAGTTGGCCACTCCCTCTCTGCGCGCTCGCTCGCTCACTGAGGCCGGGCGACCAAAGGTCGCCCGACGCCCGGGCTTTGCCCGGGCGGCCTCAGTGAGCGAGCGAGCGCGCAG
調節多核苷酸 2562 CTCCCGCAGAACACCATGCGCTCCACGGAAGCAGGTCCTCACTTTAATGCTGTGGCCACTGAGAAGTATTAAAGTGAGGACCTGCTTCTGAGGAGCGCCTTGACAGCAGCCATGGGAGGGCC
H1.mir104-788.2 ( 具有慢病毒衍生填充物)之ITR-ITR組分
5’ITR 126 CTGCGCGCTCGCTCGCTCACTGAGGCCGCCCGGGCAAAGCCCGGGCGTCGGGCGACCTTTGGTCGCCCGGCCTCAGTGAGCGAGCGAGCGCGCAGAGAGGGAGTG
慢病毒衍生填充物 82 ccatggctTAGaaggcaagaatcctggctgtggaaagatacctaaaggatcaacagctcctggggatttggggttgctctggaaaactcatttgcaccactgctgtgccttggaatgctagttggagtaataaatctctggaacagatttggaatcacacgacctggatggagtgggacagagaaattaacaattacacaagcttaatacactccttaattgaagaatcgcaaaaccagcaagaaaagaatgaacaagaattattggaattagataaatgggcaagtttgtggaattggtttaacataacaaattggctgtggtatataaaattattcataatgatagtaggaggcttggtaggtttaagaatagtttttgctgtactttctatagtgaatagagttaggcagggatattcaccattatcgtttcagacccacctcccaaccccgaggggacccgacaggcccgaaggaatagaagaagaaggtggagagagagacagagacagatccattcgattagtgaacggatctcgacggtatcgatcacgagactagcctcga
H1啟動子 83 GAACGCTGACGTCATCAACCCGCTCCAAGGAATCGCGGGCCCAGTGTCACTAGGCGGGAACACCCAGCGCGCGTGCGCCCTGGCAGGAAGATGGCTGTGAGGGACAGGGAGTGGCGCCCTGCAATATTTGCATGTCGCTATGTGTTCTGGGAAATCACCATAAACGTGAAATGTCTTTGGATTTGGGAATCTTATAAGTTCTGTATGAGACCAC
調節多核苷酸(VOYSOD1-miR104-788.2) 2562 CTCCCGCAGAACACCATGCGCTCCACGGAAGCAGGTCCTCACTTTAATGCTGTGGCCACTGAGAAGTATTAAAGTGAGGACCTGCTTCTGAGGAGCGCCTTGACAGCAGCCATGGGAGGGCC
rBGpA 129 GATCTTTTTCCCTCTGCCAAAAATTATGGGGACATCATGAAGCCCCTTGAGCATCTGACTTCTGGCTAATAAAGGAAATTTATTTTCATTGCAATAGTGTGTTGGAATTTTTTGTGTCTCTCACTCG
3' ITR 130 AGGAACCCCTAGTGATGGAGTTGGCCACTCCCTCTCTGCGCGCTCGCTCGCTCACTGAGGCCGGGCGACCAAAGGTCGCCCGACGCCCGGGCTTTGCCCGGGCGGCCTCAGTGAGCGAGCGAGCGCGCAG
表16提供具有白蛋白衍生填充物之H1.mir104-788.2之ITR至ITR序列。表16中亦提供構成ITR至ITR序列之組分。在一些實施例中，組分可藉由載體主鏈序列彼此分開。在一些實施例中，AAV病毒基因體包含SEQ ID NO: 125之核苷酸序列，或與其實質上一致(例如，具有至少70%、75%、80%、85%、90%、92%、95%、97%、98%、或99%序列一致性)之核苷酸序列；或具有SEQ ID NO: 125之至少一個、兩個、三個、四個、五個、六個或七個修飾但不超過十個修飾之核苷酸序列。在一些實施例中，AAV病毒基因體包含SEQ ID NO: 2562之核苷酸序列，或與其實質上一致(例如，具有至少70%、75%、80%、85%、90%、92%、95%、97%、98%、或99%序列一致性)之核苷酸序列；或具有SEQ ID NO: 2562之至少一個、兩個、三個、四個、五個、六個或七個修飾但不超過十個修飾之核苷酸序列。 表16. 包 含調節多核苷酸之AAV顆粒H1.mir104-788.2 (具有白蛋白衍生填充物)之ITR至ITR及其組分
描述 SEQ ID NO 序列
具有白蛋白衍生填充物之H1.mir104-788.2之ITR至ITR 125 CTGCGCGCTCGCTCGCTCACTGAGGCCGCCCGGGCAAAGCCCGGGCGTCGGGCGACCTTTGGTCGCCCGGCCTCAGTGAGCGAGCGAGCGCGCAGAGAGGGAGTGTAGCCATGCTCTAGGAAGATCAATTCAATTCACGCGTATAGTCTTCTGCACAGGGCATTCTTTTTGCTTCAGGATGTTTACAACATTTGCTGCCCACTTTTCCTAGGTTTCTTGAGACCTCTACAAGAGTTGGAGTTGACACTTGGGGTACTTTCTTGGTGTAACGAACTAATAGCCTGAAAAAAAGAAGTCATGTGTTTTCAGCAAGGCAAGAAACTGTCTAACATAGTAGATAAAACAGAGAACACTTGGCCGGAATCAACTAAGATGTTGCTATGTTCCATTCATCATATTATCTCCATCTGCAGAGTAGTGGGTTAGTGGAGGGTAGAAAACATTCTCCTGAACAACTAGTTAAACTTGGCTTTGAGTTCCACCTGTACCACTTGCATAATCTTGGGAAAGTGAGTTGCCTAATTCAGTGACATTAATAAATTTATTAATTTCTTCTTTCAATAAAACCTGGAGAGAGCTTCATATGTATCAGCATATGCTAAACTTGAAAGATACAAGTAGAAAATGGAAGGAAATATATCTGACTCAATAGGGATAGTTCAAGGGTTAAATTAAAAGTAGTAAAGTATTATAATTAATCTGACATGGTACCCTCTAGCGGCCGCAATTCGAACGCTGACGTCATCAACCCGCTCCAAGGAATCGCGGGCCCAGTGTCACTAGGCGGGAACACCCAGCGCGCGTGCGCCCTGGCAGGAAGATGGCTGTGAGGGACAGGGAGTGGCGCCCTGCAATATTTGCATGTCGCTATGTGTTCTGGGAAATCACCATAAACGTGAAATGTCTTTGGATTTGGGAATCTTATAAGTTCTGTATGAGACCACACCGGTACCGAGCTCTCCCGCAGAACACCATGCGCTCCACGGAAGCAGGTCCTCACTTTAATGCTGTGGCCACTGAGAAGTATTAAAGTGAGGACCTGCTTCTGAGGAGCGCCTTGACAGCAGCCATGGGAGGGCCTCGAGGACGGGGTGAACTACGCCTGAGGATCCGATCTTTTTCCCTCTGCCAAAAATTATGGGGACATCATGAAGCCCCTTGAGCATCTGACTTCTGGCTAATAAAGGAAATTTATTTTCATTGCAATAGTGTGTTGGAATTTTTTGTGTCTCTCACTCGGCCTAGGTAGATAAGTAGCATGGCGGGTTAATCATTAACTACAAGGAACCCCTAGTGATGGAGTTGGCCACTCCCTCTCTGCGCGCTCGCTCGCTCACTGAGGCCGGGCGACCAAAGGTCGCCCGACGCCCGGGCTTTGCCCGGGCGGCCTCAGTGAGCGAGCGAGCGCGCAG
H1.mir104-788.2 ( 具有白蛋白衍生填充物)之ITR-ITR組分
5'ITR 126 CTGCGCGCTCGCTCGCTCACTGAGGCCGCCCGGGCAAAGCCCGGGCGTCGGGCGACCTTTGGTCGCCCGGCCTCAGTGAGCGAGCGAGCGCGCAGAGAGGGAGTG
白蛋白衍生填充物 127 ATAGTCTTCTGCACAGGGCATTCTTTTTGCTTCAGGATGTTTACAACATTTGCTGCCCACTTTTCCTAGGTTTCTTGAGACCTCTACAAGAGTTGGAGTTGACACTTGGGGTACTTTCTTGGTGTAACGAACTAATAGCCTGAAAAAAAGAAGTCATGTGTTTTCAGCAAGGCAAGAAACTGTCTAACATAGTAGATAAAACAGAGAACACTTGGCCGGAATCAACTAAGATGTTGCTATGTTCCATTCATCATATTATCTCCATCTGCAGAGTAGTGGGTTAGTGGAGGGTAGAAAACATTCTCCTGAACAACTAGTTAAACTTGGCTTTGAGTTCCACCTGTACCACTTGCATAATCTTGGGAAAGTGAGTTGCCTAATTCAGTGACATTAATAAATTTATTAATTTCTTCTTTCAATAAAACCTGGAGAGAGCTTCATATGTATCAGCATATGCTAAACTTGAAAGATACAAGTAGAAAATGGAAGGAAATATATCTGACTCAATAGGGATAGTTCAAGGGTTAAATTAAAAGTAGTAAAGTATTATAATTAATCTGACATGGTACC
H1啟動子 128 AATTCGAACGCTGACGTCATCAACCCGCTCCAAGGAATCGCGGGCCCAGTGTCACTAGGCGGGAACACCCAGCGCGCGTGCGCCCTGGCAGGAAGATGGCTGTGAGGGACAGGGAGTGGCGCCCTGCAATATTTGCATGTCGCTATGTGTTCTGGGAAATCACCATAAACGTGAAATGTCTTTGGATTTGGGAATCTTATAAGTTCTGTATGAGACCAC
調節多核苷酸(VOYSOD1-miR104-788.2) 2562 CTCCCGCAGAACACCATGCGCTCCACGGAAGCAGGTCCTCACTTTAATGCTGTGGCCACTGAGAAGTATTAAAGTGAGGACCTGCTTCTGAGGAGCGCCTTGACAGCAGCCATGGGAGGGCC
rBGpA 129 GATCTTTTTCCCTCTGCCAAAAATTATGGGGACATCATGAAGCCCCTTGAGCATCTGACTTCTGGCTAATAAAGGAAATTTATTTTCATTGCAATAGTGTGTTGGAATTTTTTGTGTCTCTCACTCG
3'ITR 130 AGGAACCCCTAGTGATGGAGTTGGCCACTCCCTCTCTGCGCGCTCGCTCGCTCACTGAGGCCGGGCGACCAAAGGTCGCCCGACGCCCGGGCTTTGCCCGGGCGGCCTCAGTGAGCGAGCGAGCGCGCAG
包含病毒基因體之AAV顆粒的ITR至ITR序列之非限制性實例描述於例如表48中，該病毒基因體具有包含調節多核苷酸序列之酬載區。表48提供具有慢病毒衍生填充物之H1.mir127-860之ITR至ITR序列。表48中亦提供包含在ITR至ITR序列內之組分。在一些實施例中，組分可藉由主鏈序列彼此分開。在一些實施例中，AAV病毒基因體包含SEQ ID NO: 4820之核苷酸序列，或與其實質上一致(例如，具有至少70%、75%、80%、85%、90%、92%、95%、97%、98%、或99%序列一致性)之核苷酸序列；或具有SEQ ID NO: 4820之至少一個、兩個、三個、四個、五個、六個或七個修飾但不超過十個修飾之核苷酸序列。在一些實施例中，AAV病毒基因體包含SEQ ID NO: 2579之核苷酸序列，或與其實質上一致(例如，具有至少70%、75%、80%、85%、90%、92%、95%、97%、98%、或99%序列一致性)之核苷酸序列；或具有SEQ ID NO: 2579之至少一個、兩個、三個、四個、五個、六個或七個修飾但不超過十個修飾之核苷酸序列。 表48. 包 含調節多核苷酸之AAV顆粒H1.mir.127-860 (具有慢病毒衍生填充物)之I TR至I TR序列
ITR 至ITR 構築體名稱 區域 SEQ ID NO 序列
具有慢病毒衍生填充物之H1.mir.127-860 (VOYSOD6) ITR-ITR序列 4820 CTGCGCGCTCGCTCGCTCACTGAGGCCGCCCGGGCAAAGCCCGGGCGTCGGGCGACCTTTGGTCGCCCGGCCTCAGTGAGCGAGCGAGCGCGCAGAGAGGGAGTGTAGCCATGCTCTAGGAAGATCAATTCAATTCACGCGTCCATGGCTTAGAAGGCAAGAATCCTGGCTGTGGAAAGATACCTAAAGGATCAACAGCTCCTGGGGATTTGGGGTTGCTCTGGAAAACTCATTTGCACCACTGCTGTGCCTTGGAATGCTAGTTGGAGTAATAAATCTCTGGAACAGATTTGGAATCACACGACCTGGATGGAGTGGGACAGAGAAATTAACAATTACACAAGCTTAATACACTCCTTAATTGAAGAATCGCAAAACCAGCAAGAAAAGAATGAACAAGAATTATTGGAATTAGATAAATGGGCAAGTTTGTGGAATTGGTTTAACATAACAAATTGGCTGTGGTATATAAAATTATTCATAATGATAGTAGGAGGCTTGGTAGGTTTAAGAATAGTTTTTGCTGTACTTTCTATAGTGAATAGAGTTAGGCAGGGATATTCACCATTATCGTTTCAGACCCACCTCCCAACCCCGAGGGGACCCGACAGGCCCGAAGGAATAGAAGAAGAAGGTGGAGAGAGAGACAGAGACAGATCCATTCGATTAGTGAACGGATCTCGACGGTATCGATCACGAGACTAGCCTCGAGCGGCCGCAATTCGAACGCTGACGTCATCAACCCGCTCCAAGGAATCGCGGGCCCAGTGTCACTAGGCGGGAACACCCAGCGCGCGTGCGCCCTGGCAGGAAGATGGCTGTGAGGGACAGGGAGTGGCGCCCTGCAATATTTGCATGTCGCTATGTGTTCTGGGAAATCACCATAAACGTGAAATGTCTTTGGATTTGGGAATCTTATAAGTTCTGTATGAGACCACACCGGTGAAGCAAAGAAGGGGCAGAGGGAGCCCGTGAGCTGAGTGGGCCAGGGACTGGGAGAAGGAGTGAGGAGGCAGGGCCGGCATGCCTCTGCTGCTGGCCAGACCCCTTAACTCATTTGTTCCCGTCTGCACCTGTCACTAGTAACAGATGAGTTAAGGGGTTTGGCCGTGTAGTGCTACCCAGCGCTGGCTGCCTCCTCAGCATTGCAATTCCTCTCCCATCTGGGCACCAGTCAGCTACCCTGGTGGGAATCTGGGTAGCCCTCGAGGACGGGGTGAACTACGCCTGAGGATCCGATCTTTTTCCCTCTGCCAAAAATTATGGGGACATCATGAAGCCCCTTGAGCATCTGACTTCTGGCTAATAAAGGAAATTTATTTTCATTGCAATAGTGTGTTGGAATTTTTTGTGTCTCTCACTCGGCCTAGGTAGATAAGTAGCATGGCGGGTTAATCATTAACTACAAGGAACCCCTAGTGATGGAGTTGGCCACTCCCTCTCTGCGCGCTCGCTCGCTCACTGAGGCCGGGCGACCAAAGGTCGCCCGACGCCCGGGCTTTGCCCGGGCGGCCTCAGTGAGCGAGCGAGCGCGCAG
調節多核苷酸 2579 GAAGCAAAGAAGGGGCAGAGGGAGCCCGTGAGCTGAGTGGGCCAGGGACTGGGAGAAGGAGTGAGGAGGCAGGGCCGGCATGCCTCTGCTGCTGGCCAGACCCCTTAACTCATTTGTTCCCGTCTGCACCTGTCACTAGTAACAGATGAGTTAAGGGGTTTGGCCGTGTAGTGCTACCCAGCGCTGGCTGCCTCCTCAGCATTGCAATTCCTCTCCCATCTGGGCACCAGTCAGCTACCCTGGTGGGAATCTGGGTAGCC
H1.mir127-860 ( 具有慢病毒衍生填充物)之ITR-ITR組分
5’ ITR 126 CTGCGCGCTCGCTCGCTCACTGAGGCCGCCCGGGCAAAGCCCGGGCGTCGGGCGACCTTTGGTCGCCCGGCCTCAGTGAGCGAGCGAGCGCGCAGAGAGGGAGTG
慢病毒衍生填充物 82 ccatggctTAGaaggcaagaatcctggctgtggaaagatacctaaaggatcaacagctcctggggatttggggttgctctggaaaactcatttgcaccactgctgtgccttggaatgctagttggagtaataaatctctggaacagatttggaatcacacgacctggatggagtgggacagagaaattaacaattacacaagcttaatacactccttaattgaagaatcgcaaaaccagcaagaaaagaatgaacaagaattattggaattagataaatgggcaagtttgtggaattggtttaacataacaaattggctgtggtatataaaattattcataatgatagtaggaggcttggtaggtttaagaatagtttttgctgtactttctatagtgaatagagttaggcagggatattcaccattatcgtttcagacccacctcccaaccccgaggggacccgacaggcccgaaggaatagaagaagaaggtggagagagagacagagacagatccattcgattagtgaacggatctcgacggtatcgatcacgagactagcctcga
H1啟動子 83 GAACGCTGACGTCATCAACCCGCTCCAAGGAATCGCGGGCCCAGTGTCACTAGGCGGGAACACCCAGCGCGCGTGCGCCCTGGCAGGAAGATGGCTGTGAGGGACAGGGAGTGGCGCCCTGCAATATTTGCATGTCGCTATGTGTTCTGGGAAATCACCATAAACGTGAAATGTCTTTGGATTTGGGAATCTTATAAGTTCTGTATGAGACCAC
調節多核苷酸(VOYSOD1-miR127-860) 2579 GAAGCAAAGAAGGGGCAGAGGGAGCCCGTGAGCTGAGTGGGCCAGGGACTGGGAGAAGGAGTGAGGAGGCAGGGCCGGCATGCCTCTGCTGCTGGCCAGACCCCTTAACTCATTTGTTCCCGTCTGCACCTGTCACTAGTAACAGATGAGTTAAGGGGTTTGGCCGTGTAGTGCTACCCAGCGCTGGCTGCCTCCTCAGCATTGCAATTCCTCTCCCATCTGGGCACCAGTCAGCTACCCTGGTGGGAATCTGGGTAGCC
rBGpA 129 GATCTTTTTCCCTCTGCCAAAAATTATGGGGACATCATGAAGCCCCTTGAGCATCTGACTTCTGGCTAATAAAGGAAATTTATTTTCATTGCAATAGTGTGTTGGAATTTTTTGTGTCTCTCACTCG
3' ITR 130 AGGAACCCCTAGTGATGGAGTTGGCCACTCCCTCTCTGCGCGCTCGCTCGCTCACTGAGGCCGGGCGACCAAAGGTCGCCCGACGCCCGGGCTTTGCCCGGGCGGCCTCAGTGAGCGAGCGAGCGCGCAG
表17及表18提供具有不同啟動子之mir104-788.2之ITR至ITR序列之其他變異體。在一些實施例中，組分可藉由載體主鏈序列彼此分開。在一些實施例中，AAV病毒基因體包含表17或18中提供之核苷酸序列，或與其實質上一致(例如，具有至少70%、75%、80%、85%、90%、92%、95%、97%、98%、或99%序列一致性)之核苷酸序列；或相對於其具有至少一個、兩個、三個、四個、五個、六個或七個修飾但不超過十個修飾之核苷酸序列。 表17. 包 含調節多核苷酸之mir104-788.2之AAV顆粒之額外ITR至ITR序列及其組分
描述 序列 SEQ ID NO
具有hβG外顯子/內含子/外顯子之CBA.mir104-788.2之ITR至ITR (構築體1) ctgcgcgctcgctcgctcactgaggccgcccgggcaaagcccgggcgtcgggcgacctttggtcgcccggcctcagtgagcgagcgagcgcgcagagagggagtgtagccatgctctaggaagatcaattcaattcacgcgtcgacattgattattgactagttattaatagtaatcaattacggggtcattagttcatagcccatatatggagttccgcgttacataacttacggtaaatggcccgcctggctgaccgcccaacgacccccgcccattgacgtcaataatgacgtatgttcccatagtaacgccaatagggactttccattgacgtcaatgggtggagtatttacggtaaactgcccacttggcagtacatcaagtgtatcatatgccaagtacgccccctattgacgtcaatgacggtaaatggcccgcctggcattatgcccagtacatgaccttatgggactttcctacttggcagtacatctacgtattagtcatcgctattaccatgtcgaggccacgttctgcttcactctccccatctcccccccctccccacccccaattttgtatttatttattttttaattattttgtgcagcgatgggggcggggggggggggcgcgcgccaggcggggcggggcggggcgaggggcggggcggggcgaggcggagaggtgcggcggcagccaatcagagcggcgcgctccgaaagtttccttttatggcgaggcggcggcggcggcggccctataaaaagcgaagcgcgcggcgggcgggagcaagcttcgtttagtgaaccgtcagatcgcctggagacgccatccacgctgttttgacctccatagaagacaccgggaccgatccagcctccgcggattcgaatcccggccgggaacggtgcattggaacgcggattccccgtgccaagagtgacgtaagtaccgcctatagagtctataggcccacaaaaaatgctttcttcttttaatatacttttttgtttatcttatttctaatactttccctaatctctttctttcagggcaataatgatacaatgtatcatgcctctttgcaccattctaaagaataacagtgataatttctgggttaaggcaatagcaatatttctgcatataaatatttctgcatataaattgtaactgatgtaagaggtttcatattgctaatagcagctacaatccagctaccattctgcttttattttatggttgggataaggctggattattctgagtccaagctaggcccttttgctaatcatgttcatacctcttatcttcctcccacagctcctgggcaacgtgctggtctgtgtgctggcccatcactttggcaaagaattgggattcgaaccggtACCGAGCTCTCCCGCAGAACACCATGCGCTCCACGGAAGCAGGTCCTCACTTTAATGCTGTGGCCACTGAGAAGTATTAAAGTGAGGACCTGCTTCTGAGGAGCGCCTTGACAGCAGCCATGGGAGGGCCtcgaggggtggcatccctgtgacccctccccagtgcctctcctggccctggaagttgccactccagtgcccaccagccttgtcctaataaaattaagttgcatcattttgtctgactaggtgtccttctataatattatggggtggaggggggtggtatggagcaaggggcaagttgggaagacaacctgtagggcctgcggggtctattgggaaccaagctggagtgcagtggcacaatcttggctcactgcaatctccgcctcctgggttcaagcgattctcctgcctcagcctcccgagttgttgggattccaggcatgcatgaccaggctcagctaatttttgtttttttggtagagacggggtttcaccatattggccaggctggtctccaactcctaatctcaggtgatctacccaccttggcctcccaaattgctgggattacaggcgtgaaccactgctcccttccctgtccttatcgatgcctagggttaatcattaactacaaggaacccctagtgatggagttggccactccctctctgcgcgctcgctcgctcactgaggccgggcgaccaaaggtcgcccgacgcccgggctttgcccgggcggcctcagtgagcgagcgagcgcgcag 4028
具有hBG外顯子/內含子/外顯子之miniCBA.mir104-788.2之ITR至ITR (構築體2) ctgcgcgctcgctcgctcactgaggccgcccgggcaaagcccgggcgtcgggcgacctttggtcgcccggcctcagtgagcgagcgagcgcgcagagagggagtgtagccatgctctaggaagatcaattcaattcacgcgtCCACGTTCTGCTTCACTCTCCCCATCTCCCCCCCCTCCCCACCCCCAATTTTGTATTTATTTATTTTTTAATTATTTTGTGCAGCGATGGGGGCGGGGGGGGGGGGCGCGCGCCAGGCGGGGCGGGGCGGGGCGAGGGGCGGGGCGGGGCGAGGCGGAGAGGTGCGGCGGCAGCCAATCAGAGCGGCGCGCTCCGAAAGTTTCCTTTTATGGCGAGGCGGCGGCGGCGGCGGCCCTATAAAAAGCGAAGCGCGCGGCGGGaagcttcgtttagtgaaccgtcagatcgcctggagacgccatccacgctgttttgacctccatagaagacaccgggaccgatccagcctccgcggattcgaatcccggccgggaacggtgcattggaacgcggattccccgtgccaagagtgacgtaagtaccgcctatagagtctataggcccacaaaaaatgctttcttcttttaatatacttttttgtttatcttatttctaatactttccctaatctctttctttcagggcaataatgatacaatgtatcatgcctctttgcaccattctaaagaataacagtgataatttctgggttaaggcaatagcaatatttctgcatataaatatttctgcatataaattgtaactgatgtaagaggtttcatattgctaatagcagctacaatccagctaccattctgcttttattttatggttgggataaggctggattattctgagtccaagctaggcccttttgctaatcatgttcatacctcttatcttcctcccacagctcctgggcaacgtgctggtctgtgtgctggcccatcactttggcaaagaattgggattcgaaccggtaccgagctCTCCCGCAGAACACCATGCGCTCCACGGAAGCAGGTCCTCACTTTAATGCTGTGGCCACTGAGAAGTATTAAAGTGAGGACCTGCTTCTGAGGAGCGCCTTGACAGCAGCCATGGGAGGGCCtcgaggggtggcatccctgtgacccctccccagtgcctctcctggccctggaagttgccactccagtgcccaccagccttgtcctaataaaattaagttgcatcattttgtctgactaggtgtccttctataatattatggggtggaggggggtggtatggagcaaggggcaagttgggaagacaacctgtagggcctgcggggtctattgggaaccaagctggagtgcagtggcacaatcttggctcactgcaatctccgcctcctgggttcaagcgattctcctgcctcagcctcccgagttgttgggattccaggcatgcatgaccaggctcagctaatttttgtttttttggtagagacggggtttcaccatattggccaggctggtctccaactcctaatctcaggtgatctacccaccttggcctcccaaattgctgggattacaggcgtgaaccactgctcccttccctgtccttatcgatgcctagggttaatcattaactacaaggaacccctagtgatggagttggccactccctctctgcgcgctcgctcgctcactgaggccgggcgaccaaaggtcgcccgacgcccgggctttgcccgggcggcctcagtgagcgagcgagcgcgcag 4029
具有hBG外顯子/內含子/外顯子之miniEF1aV2.mir104-788.2之ITR至ITR (構築體3) ctgcgcgctcgctcgctcactgaggccgcccgggcaaagcccgggcgtcgggcgacctttggtcgcccggcctcagtgagcgagcgagcgcgcagagagggagtgtagccatgctctaggaagatcaattcaattcacgcgtCGTGAGGCTCCGGTGCCCGTCAGTGGGCAGAGCGCACATCGCCCACAGTCCCCGAGAAGTTGGGGGGAGGGGTCGGCAATTGAACCGGTGCCTAGAGAAGGTGGCGCGGGGTAAACTGGGAAAGTGATGTCGTGTACTGGCTCCGCCTTTTTCCCGAGGGTGGGGGAGAACCGTATATAAGTGCAGTAGTCGCCGTGAACGTTCTTTTTCGCAACGGGTTTGCCGCCAGAACACAGaagcttcgtttagtgaaccgtcagatcgcctggagacgccatccacgctgttttgacctccatagaagacaccgggaccgatccagcctccgcggattcgaatcccggccgggaacggtgcattggaacgcggattccccgtgccaagagtgacgtaagtaccgcctatagagtctataggcccacaaaaaatgctttcttcttttaatatacttttttgtttatcttatttctaatactttccctaatctctttctttcagggcaataatgatacaatgtatcatgcctctttgcaccattctaaagaataacagtgataatttctgggttaaggcaatagcaatatttctgcatataaatatttctgcatataaattgtaactgatgtaagaggtttcatattgctaatagcagctacaatccagctaccattctgcttttattttatggttgggataaggctggattattctgagtccaagctaggcccttttgctaatcatgttcatacctcttatcttcctcccacagctcctgggcaacgtgctggtctgtgtgctggcccatcactttggcaaagaattgggattcgaaccggtaccgagctCTCCCGCAGAACACCATGCGCTCCACGGAAGCAGGTCCTCACTTTAATGCTGTGGCCACTGAGAAGTATTAAAGTGAGGACCTGCTTCTGAGGAGCGCCTTGACAGCAGCCATGGGAGGGCCtcgaggggtggcatccctgtgacccctccccagtgcctctcctggccctggaagttgccactccagtgcccaccagccttgtcctaataaaattaagttgcatcattttgtctgactaggtgtccttctataatattatggggtggaggggggtggtatggagcaaggggcaagttgggaagacaacctgtagggcctgcggggtctattgggaaccaagctggagtgcagtggcacaatcttggctcactgcaatctccgcctcctgggttcaagcgattctcctgcctcagcctcccgagttgttgggattccaggcatgcatgaccaggctcagctaatttttgtttttttggtagagacggggtttcaccatattggccaggctggtctccaactcctaatctcaggtgatctacccaccttggcctcccaaattgctgggattacaggcgtgaaccactgctcccttccctgtccttatcgatgcctagggttaatcattaactacaaggaacccctagtgatggagttggccactccctctctgcgcgctcgctcgctcactgaggccgggcgaccaaaggtcgcccgacgcccgggctttgcccgggcggcctcagtgagcgagcgagcgcgcag 4030
具有hBG外顯子/內含子/外顯子之PGK.mir104-788.2之ITR至ITR (構築體4) ctgcgcgctcgctcgctcactgaggccgcccgggcaaagcccgggcgtcgggcgacctttggtcgcccggcctcagtgagcgagcgagcgcgcagagagggagtgtagccatgctctaggaagatcaattcaattcacgcgtGGGTAGGGGAGGCGCTTTTCCCAAGGCAGTCTGGAGCATGCGCTTTAGCAGCCCCGCTGGGCACTTGGCGCTACACAAGTGGCCTCTGGCCTCGCACACATTCCACATCCACCGGTAGGCGCCAACCGGCTCCGTTCTTTGGTGGCCCCTTCGCGCCACCTTCTACTCCTCCCCTAGTCAGGAAGTTCCCCCCCGCCCCGCAGCTCGCGTCGTGCAGGACGTGACAAATGGAAGTAGCACGTCTCACTAGTCTCGTGCAGATGGACAGCACCGCTGAGCAATGGAAGCGGGTAGGCCTTTGGGGCAGCGGCCAATAGCAGCTTTGCTCCTTCGCTTTCTGGGCTCAGAGGCTGGGAAGGGGTGGGTCCGGGGGCGGGCTCAGGGGCGGGCTCAGGGGCGGGGCGGGCGCCCGAAGGTCCTCCGGAGGCCCGGCATTCTGCACGCTTCAAAAGCGCACGTCTGCCGCGCTGTTCTCCTCTTCCTCATCTCCGGGCCTTTCGaagcttcgtttagtgaaccgtcagatcgcctggagacgccatccacgctgttttgacctccatagaagacaccgggaccgatccagcctccgcggattcgaatcccggccgggaacggtgcattggaacgcggattccccgtgccaagagtgacgtaagtaccgcctatagagtctataggcccacaaaaaatgctttcttcttttaatatacttttttgtttatcttatttctaatactttccctaatctctttctttcagggcaataatgatacaatgtatcatgcctctttgcaccattctaaagaataacagtgataatttctgggttaaggcaatagcaatatttctgcatataaatatttctgcatataaattgtaactgatgtaagaggtttcatattgctaatagcagctacaatccagctaccattctgcttttattttatggttgggataaggctggattattctgagtccaagctaggcccttttgctaatcatgttcatacctcttatcttcctcccacagctcctgggcaacgtgctggtctgtgtgctggcccatcactttggcaaagaattgggattcgaaccggtaccgagctCTCCCGCAGAACACCATGCGCTCCACGGAAGCAGGTCCTCACTTTAATGCTGTGGCCACTGAGAAGTATTAAAGTGAGGACCTGCTTCTGAGGAGCGCCTTGACAGCAGCCATGGGAGGGCCtcgaggggtggcatccctgtgacccctccccagtgcctctcctggccctggaagttgccactccagtgcccaccagccttgtcctaataaaattaagttgcatcattttgtctgactaggtgtccttctataatattatggggtggaggggggtggtatggagcaaggggcaagttgggaagacaacctgtagggcctgcggggtctattgggaaccaagctggagtgcagtggcacaatcttggctcactgcaatctccgcctcctgggttcaagcgattctcctgcctcagcctcccgagttgttgggattccaggcatgcatgaccaggctcagctaatttttgtttttttggtagagacggggtttcaccatattggccaggctggtctccaactcctaatctcaggtgatctacccaccttggcctcccaaattgctgggattacaggcgtgaaccactgctcccttccctgtccttatcgatgcctagggttaatcattaactacaaggaacccctagtgatggagttggccactccctctctgcgcgctcgctcgctcactgaggccgggcgaccaaaggtcgcccgacgcccgggctttgcccgggcggcctcagtgagcgagcgagcgcgcag 4031
具有hBG外顯子/內含子/外顯子之MP84.mir104-788.2之ITR至ITR (構築體5) ctgcgcgctcgctcgctcactgaggccgcccgggcaaagcccgggcgtcgggcgacctttggtcgcccggcctcagtgagcgagcgagcgcgcagagagggagtgtagccatgctctaggaagatcaattcaattcacgcgtCCCTAATGGGCCAGGCGGCAGGGGTTGAGAGGTAGGGGAGATGGGCTCTGAGACTATAAAGCCAGCGGGGGCCCAGCAGCCCTCaagcttcgtttagtgaaccgtcagatcgcctggagacgccatccacgctgttttgacctccatagaagacaccgggaccgatccagcctccgcggattcgaatcccggccgggaacggtgcattggaacgcggattccccgtgccaagagtgacgtaagtaccgcctatagagtctataggcccacaaaaaatgctttcttcttttaatatacttttttgtttatcttatttctaatactttccctaatctctttctttcagggcaataatgatacaatgtatcatgcctctttgcaccattctaaagaataacagtgataatttctgggttaaggcaatagcaatatttctgcatataaatatttctgcatataaattgtaactgatgtaagaggtttcatattgctaatagcagctacaatccagctaccattctgcttttattttatggttgggataaggctggattattctgagtccaagctaggcccttttgctaatcatgttcatacctcttatcttcctcccacagctcctgggcaacgtgctggtctgtgtgctggcccatcactttggcaaagaattgggattcgaaccggtaccgagctCTCCCGCAGAACACCATGCGCTCCACGGAAGCAGGTCCTCACTTTAATGCTGTGGCCACTGAGAAGTATTAAAGTGAGGACCTGCTTCTGAGGAGCGCCTTGACAGCAGCCATGGGAGGGCCtcgaggggtggcatccctgtgacccctccccagtgcctctcctggccctggaagttgccactccagtgcccaccagccttgtcctaataaaattaagttgcatcattttgtctgactaggtgtccttctataatattatggggtggaggggggtggtatggagcaaggggcaagttgggaagacaacctgtagggcctgcggggtctattgggaaccaagctggagtgcagtggcacaatcttggctcactgcaatctccgcctcctgggttcaagcgattctcctgcctcagcctcccgagttgttgggattccaggcatgcatgaccaggctcagctaatttttgtttttttggtagagacggggtttcaccatattggccaggctggtctccaactcctaatctcaggtgatctacccaccttggcctcccaaattgctgggattacaggcgtgaaccactgctcccttccctgtccttatcgatgcctagggttaatcattaactacaaggaacccctagtgatggagttggccactccctctctgcgcgctcgctcgctcactgaggccgggcgaccaaaggtcgcccgacgcccgggctttgcccgggcggcctcagtgagcgagcgagcgcgcag 4032
具有hBG外顯子/內含子/外顯子之hSYN(長).mir104-788.2之ITR至ITR (構築體6) ctgcgcgctcgctcgctcactgaggccgcccgggcaaagcccgggcgtcgggcgacctttggtcgcccggcctcagtgagcgagcgagcgcgcagagagggagtgtagccatgctctaggaagatcaattcaattcacgcgtCGCGTggggttatttctctactttcgtgtctctgagtgtgcttccagtgcccccctccccccaaaaaatgccttctgagttgaatatcaacactacaaaccTagtatctgcagagggccctgcgtatgagtgcaagtgggttttaggaccaggatgaggcggggtgggggtgcctacctgacgaccgaccccgacccactggacaagcacccaacccccattccccaaattgcgcatcccctatcagagagggggaggggaaacaggatgcggcgaggcgcgtgcgcactgccagcttcagcaccgcggacagtgccttcgcccccgcctggcggcgcgcgccaccgccgcctcagcactgaaggcgcgctgacgtcactcgccggtcccccgcaaactccccttcccggccaccttggtcgcgtccgcgccgccgccggcccagccggaccgcaccacgcgaggcgcgagataggggggcacgggcgcgaccatctgcgctgcggcgccggcgactcagcgctgcctcAGTCTGCGGTGGGCAGCGGAGGAGTCGTGTCGTGCCTGAGAGCGCAGCTGTGCTCCTGGGCACCGCGCAGTCCGCCCCCGCGGCTCCTGGCCAGACCACCCCTAGGACCCCCTGCCCCAAGTCGCAGCCaagcttcgtttagtgaaccgtcagatcgcctggagacgccatccacgctgttttgacctccatagaagacaccgggaccgatccagcctccgcggattcgaatcccggccgggaacggtgcattggaacgcggattccccgtgccaagagtgacgtaagtaccgcctatagagtctataggcccacaaaaaatgctttcttcttttaatatacttttttgtttatcttatttctaatactttccctaatctctttctttcagggcaataatgatacaatgtatcatgcctctttgcaccattctaaagaataacagtgataatttctgggttaaggcaatagcaatatttctgcatataaatatttctgcatataaattgtaactgatgtaagaggtttcatattgctaatagcagctacaatccagctaccattctgcttttattttatggttgggataaggctggattattctgagtccaagctaggcccttttgctaatcatgttcatacctcttatcttcctcccacagctcctgggcaacgtgctggtctgtgtgctggcccatcactttggcaaagaattgggattcgaaccggtaccgagctCTCCCGCAGAACACCATGCGCTCCACGGAAGCAGGTCCTCACTTTAATGCTGTGGCCACTGAGAAGTATTAAAGTGAGGACCTGCTTCTGAGGAGCGCCTTGACAGCAGCCATGGGAGGGCCtcgaggggtggcatccctgtgacccctccccagtgcctctcctggccctggaagttgccactccagtgcccaccagccttgtcctaataaaattaagttgcatcattttgtctgactaggtgtccttctataatattatggggtggaggggggtggtatggagcaaggggcaagttgggaagacaacctgtagggcctgcggggtctattgggaaccaagctggagtgcagtggcacaatcttggctcactgcaatctccgcctcctgggttcaagcgattctcctgcctcagcctcccgagttgttgggattccaggcatgcatgaccaggctcagctaatttttgtttttttggtagagacggggtttcaccatattggccaggctggtctccaactcctaatctcaggtgatctacccaccttggcctcccaaattgctgggattacaggcgtgaaccactgctcccttccctgtccttatcgatgcctagggttaatcattaactacaaggaacccctagtgatggagttggccactccctctctgcgcgctcgctcgctcactgaggccgggcgaccaaaggtcgcccgacgcccgggctttgcccgggcggcctcagtgagcgagcgagcgcgcag 4033
具有hBG外顯子/內含子/外顯子之hSYN(短).mir104-788.2之ITR至ITR (構築體7) ctgcgcgctcgctcgctcactgaggccgcccgggcaaagcccgggcgtcgggcgacctttggtcgcccggcctcagtgagcgagcgagcgcgcagagagggagtgtagccatgctctaggaagatcaattcaattcacgcgtTAGTATCTGCAGAGGGCCCTGCGTATGAGTGCAAGTGGGTTTTAGGACCAGGATGAGGCGGGGTGGGGGTGCCTACCTGACGACCGACCCCGACCCACTGGACAAGCACCCAACCCCCATTCCCCAAATTGCGCATCCCCTATCAGAGAGGGGGAGGGGAAACAGGATGCGGCGAGGCGCGTGCGCACTGCCAGCTTCAGCACCGCGGACAGTGCCTTCGCCCCCGCCTGGCGGCGCGCGCCACCGCCGCCTCAGCACTGAAGGCGCGCTGACGTCACTCGCCGGTCCCCCGCAAACTCCCCTTCCCGGCCACCTTGGTCGCGTCCGCGCCGCCGCCGGCCCAGCCGGACCGCACCACGCGAGGCGCGAGATAGGGGGGCACGGGCGCGACCATCTGCGCTGCGGCGCCGGCGACTCAGCGCTGCCTCAGTCTGCGGTGGGCAGCGGAGGAGTCGTGTCGTGCCTGAGAGCGCAGCTGTGCTCCTGGGCACCGCGCAGTCCGCCCCCGCGGCTCCTGGCCAGACCACCCCTAGGACCCCCTGCCCCAAGTCGCAGCCaagcttcgtttagtgaaccgtcagatcgcctggagacgccatccacgctgttttgacctccatagaagacaccgggaccgatccagcctccgcggattcgaatcccggccgggaacggtgcattggaacgcggattccccgtgccaagagtgacgtaagtaccgcctatagagtctataggcccacaaaaaatgctttcttcttttaatatacttttttgtttatcttatttctaatactttccctaatctctttctttcagggcaataatgatacaatgtatcatgcctctttgcaccattctaaagaataacagtgataatttctgggttaaggcaatagcaatatttctgcatataaatatttctgcatataaattgtaactgatgtaagaggtttcatattgctaatagcagctacaatccagctaccattctgcttttattttatggttgggataaggctggattattctgagtccaagctaggcccttttgctaatcatgttcatacctcttatcttcctcccacagctcctgggcaacgtgctggtctgtgtgctggcccatcactttggcaaagaattgggattcgaaccggtaccgagctCTCCCGCAGAACACCATGCGCTCCACGGAAGCAGGTCCTCACTTTAATGCTGTGGCCACTGAGAAGTATTAAAGTGAGGACCTGCTTCTGAGGAGCGCCTTGACAGCAGCCATGGGAGGGCCtcgaggggtggcatccctgtgacccctccccagtgcctctcctggccctggaagttgccactccagtgcccaccagccttgtcctaataaaattaagttgcatcattttgtctgactaggtgtccttctataatattatggggtggaggggggtggtatggagcaaggggcaagttgggaagacaacctgtagggcctgcggggtctattgggaaccaagctggagtgcagtggcacaatcttggctcactgcaatctccgcctcctgggttcaagcgattctcctgcctcagcctcccgagttgttgggattccaggcatgcatgaccaggctcagctaatttttgtttttttggtagagacggggtttcaccatattggccaggctggtctccaactcctaatctcaggtgatctacccaccttggcctcccaaattgctgggattacaggcgtgaaccactgctcccttccctgtccttatcgatgcctagggttaatcattaactacaaggaacccctagtgatggagttggccactccctctctgcgcgctcgctcgctcactgaggccgggcgaccaaaggtcgcccgacgcccgggctttgcccgggcggcctcagtgagcgagcgagcgcgcag 4034
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具有CpG缺失hBG外顯子/內含子/外顯子之miniCBA.mir104-788.2之ITR至ITR (構築體9) ctgcgcgctcgctcgctcactgaggccgcccgggcaaagcccgggcgtcgggcgacctttggtcgcccggcctcagtgagcgagcgagcgcgcagagagggagtgtagccatgctctaggaagatcaattcaattcacgcgtCCACGTTCTGCTTCACTCTCCCCATCTCCCCCCCCTCCCCACCCCCAATTTTGTATTTATTTATTTTTTAATTATTTTGTGCAGCGATGGGGGCGGGGGGGGGGGGCGCGCGCCAGGCGGGGCGGGGCGGGGCGAGGGGCGGGGCGGGGCGAGGCGGAGAGGTGCGGCGGCAGCCAATCAGAGCGGCGCGCTCCGAAAGTTTCCTTTTATGGCGAGGCGGCGGCGGCGGCGGCCCTATAAAAAGCGAAGCGCGCGGCGGGaagcttcgtttagtgaaccgtcagatcacctggagacaccatccacactgttttgacctccatagaagacaccaggaccaatccagcctccacagattccaatcccagccaggaacagtgcattggaacacagattccccttgccaagagtgacgtaagtaccgcctatagagtctataggcccacaaaaaatgctttcttcttttaatatacttttttgtttatcttatttctaatactttccctaatctctttctttcagggcaataatgatacaatgtatcatgcctctttgcaccattctaaagaataacagtgataatttctgggttaaggcaatagcaatatttctgcatataaatatttctgcatataaattgtaactgatgtaagaggtttcatattgctaatagcagctacaatccagctaccattctgcttttattttatggttgggataaggctggattattctgagtccaagctaggcccttttgctaatcatgttcatacctcttatcttcctcccacagctcctgggcaacctgctggtctgtgtgctggcccatcactttggcaaagaattgggattcgaaccggtaccgagctCTCCCGCAGAACACCATGCGCTCCACGGAAGCAGGTCCTCACTTTAATGCTGTGGCCACTGAGAAGTATTAAAGTGAGGACCTGCTTCTGAGGAGCGCCTTGACAGCAGCCATGGGAGGGCCtcgaggggtggcatccctgtgacccctccccagtgcctctcctggccctggaagttgccactccagtgcccaccagccttgtcctaataaaattaagttgcatcattttgtctgactaggtgtccttctataatattatggggtggaggggggtggtatggagcaaggggcaagttgggaagacaacctgtagggcctgcggggtctattgggaaccaagctggagtgcagtggcacaatcttggctcactgcaatctccgcctcctgggttcaagcgattctcctgcctcagcctcccgagttgttgggattccaggcatgcatgaccaggctcagctaatttttgtttttttggtagagacggggtttcaccatattggccaggctggtctccaactcctaatctcaggtgatctacccaccttggcctcccaaattgctgggattacaggcgtgaaccactgctcccttccctgtccttatcgatgcctagggttaatcattaactacaaggaacccctagtgatggagttggccactccctctctgcgcgctcgctcgctcactgaggccgggcgaccaaaggtcgcccgacgcccgggctttgcccgggcggcctcagtgagcgagcgagcgcgcag 4036
具有CpG缺失hBG外顯子/內含子/外顯子之miniEF1aV2.mir104-788.2之ITR至ITR (構築體10) ctgcgcgctcgctcgctcactgaggccgcccgggcaaagcccgggcgtcgggcgacctttggtcgcccggcctcagtgagcgagcgagcgcgcagagagggagtgtagccatgctctaggaagatcaattcaattcacgcgtCGTGAGGCTCCGGTGCCCGTCAGTGGGCAGAGCGCACATCGCCCACAGTCCCCGAGAAGTTGGGGGGAGGGGTCGGCAATTGAACCGGTGCCTAGAGAAGGTGGCGCGGGGTAAACTGGGAAAGTGATGTCGTGTACTGGCTCCGCCTTTTTCCCGAGGGTGGGGGAGAACCGTATATAAGTGCAGTAGTCGCCGTGAACGTTCTTTTTCGCAACGGGTTTGCCGCCAGAACACAGaagcttcgtttagtgaaccgtcagatcacctggagacaccatccacactgttttgacctccatagaagacaccaggaccaatccagcctccacagattccaatcccagccaggaacagtgcattggaacacagattccccttgccaagagtgacgtaagtaccgcctatagagtctataggcccacaaaaaatgctttcttcttttaatatacttttttgtttatcttatttctaatactttccctaatctctttctttcagggcaataatgatacaatgtatcatgcctctttgcaccattctaaagaataacagtgataatttctgggttaaggcaatagcaatatttctgcatataaatatttctgcatataaattgtaactgatgtaagaggtttcatattgctaatagcagctacaatccagctaccattctgcttttattttatggttgggataaggctggattattctgagtccaagctaggcccttttgctaatcatgttcatacctcttatcttcctcccacagctcctgggcaacctgctggtctgtgtgctggcccatcactttggcaaagaattgggattcgaaccggtaccgagctCTCCCGCAGAACACCATGCGCTCCACGGAAGCAGGTCCTCACTTTAATGCTGTGGCCACTGAGAAGTATTAAAGTGAGGACCTGCTTCTGAGGAGCGCCTTGACAGCAGCCATGGGAGGGCCtcgaggggtggcatccctgtgacccctccccagtgcctctcctggccctggaagttgccactccagtgcccaccagccttgtcctaataaaattaagttgcatcattttgtctgactaggtgtccttctataatattatggggtggaggggggtggtatggagcaaggggcaagttgggaagacaacctgtagggcctgcggggtctattgggaaccaagctggagtgcagtggcacaatcttggctcactgcaatctccgcctcctgggttcaagcgattctcctgcctcagcctcccgagttgttgggattccaggcatgcatgaccaggctcagctaatttttgtttttttggtagagacggggtttcaccatattggccaggctggtctccaactcctaatctcaggtgatctacccaccttggcctcccaaattgctgggattacaggcgtgaaccactgctcccttccctgtccttatcgatgcctagggttaatcattaactacaaggaacccctagtgatggagttggccactccctctctgcgcgctcgctcgctcactgaggccgggcgaccaaaggtcgcccgacgcccgggctttgcccgggcggcctcagtgagcgagcgagcgcgcag 4037
具有CpG缺失hBG外顯子/內含子/外顯子之PGK.mir104-788.2之ITR至ITR (構築體11) ctgcgcgctcgctcgctcactgaggccgcccgggcaaagcccgggcgtcgggcgacctttggtcgcccggcctcagtgagcgagcgagcgcgcagagagggagtgtagccatgctctaggaagatcaattcaattcacgcgtGGGTAGGGGAGGCGCTTTTCCCAAGGCAGTCTGGAGCATGCGCTTTAGCAGCCCCGCTGGGCACTTGGCGCTACACAAGTGGCCTCTGGCCTCGCACACATTCCACATCCACCGGTAGGCGCCAACCGGCTCCGTTCTTTGGTGGCCCCTTCGCGCCACCTTCTACTCCTCCCCTAGTCAGGAAGTTCCCCCCCGCCCCGCAGCTCGCGTCGTGCAGGACGTGACAAATGGAAGTAGCACGTCTCACTAGTCTCGTGCAGATGGACAGCACCGCTGAGCAATGGAAGCGGGTAGGCCTTTGGGGCAGCGGCCAATAGCAGCTTTGCTCCTTCGCTTTCTGGGCTCAGAGGCTGGGAAGGGGTGGGTCCGGGGGCGGGCTCAGGGGCGGGCTCAGGGGCGGGGCGGGCGCCCGAAGGTCCTCCGGAGGCCCGGCATTCTGCACGCTTCAAAAGCGCACGTCTGCCGCGCTGTTCTCCTCTTCCTCATCTCCGGGCCTTTCGaagcttcgtttagtgaaccgtcagatcacctggagacaccatccacactgttttgacctccatagaagacaccaggaccaatccagcctccacagattccaatcccagccaggaacagtgcattggaacacagattccccttgccaagagtgacgtaagtaccgcctatagagtctataggcccacaaaaaatgctttcttcttttaatatacttttttgtttatcttatttctaatactttccctaatctctttctttcagggcaataatgatacaatgtatcatgcctctttgcaccattctaaagaataacagtgataatttctgggttaaggcaatagcaatatttctgcatataaatatttctgcatataaattgtaactgatgtaagaggtttcatattgctaatagcagctacaatccagctaccattctgcttttattttatggttgggataaggctggattattctgagtccaagctaggcccttttgctaatcatgttcatacctcttatcttcctcccacagctcctgggcaacctgctggtctgtgtgctggcccatcactttggcaaagaattgggattcgaaccggtaccgagctCTCCCGCAGAACACCATGCGCTCCACGGAAGCAGGTCCTCACTTTAATGCTGTGGCCACTGAGAAGTATTAAAGTGAGGACCTGCTTCTGAGGAGCGCCTTGACAGCAGCCATGGGAGGGCCtcgaggggtggcatccctgtgacccctccccagtgcctctcctggccctggaagttgccactccagtgcccaccagccttgtcctaataaaattaagttgcatcattttgtctgactaggtgtccttctataatattatggggtggaggggggtggtatggagcaaggggcaagttgggaagacaacctgtagggcctgcggggtctattgggaaccaagctggagtgcagtggcacaatcttggctcactgcaatctccgcctcctgggttcaagcgattctcctgcctcagcctcccgagttgttgggattccaggcatgcatgaccaggctcagctaatttttgtttttttggtagagacggggtttcaccatattggccaggctggtctccaactcctaatctcaggtgatctacccaccttggcctcccaaattgctgggattacaggcgtgaaccactgctcccttccctgtccttatcgatgcctagggttaatcattaactacaaggaacccctagtgatggagttggccactccctctctgcgcgctcgctcgctcactgaggccgggcgaccaaaggtcgcccgacgcccgggctttgcccgggcggcctcagtgagcgagcgagcgcgcag 4038
具有CpG缺失hBG外顯子/內含子/外顯子之MP84.mir104-788.2之ITR至ITR (構築體12) ctgcgcgctcgctcgctcactgaggccgcccgggcaaagcccgggcgtcgggcgacctttggtcgcccggcctcagtgagcgagcgagcgcgcagagagggagtgtagccatgctctaggaagatcaattcaattcacgcgtCCCTAATGGGCCAGGCGGCAGGGGTTGAGAGGTAGGGGAGATGGGCTCTGAGACTATAAAGCCAGCGGGGGCCCAGCAGCCCTCaagcttcgtttagtgaaccgtcagatcacctggagacaccatccacactgttttgacctccatagaagacaccaggaccaatccagcctccacagattccaatcccagccaggaacagtgcattggaacacagattccccttgccaagagtgacgtaagtaccgcctatagagtctataggcccacaaaaaatgctttcttcttttaatatacttttttgtttatcttatttctaatactttccctaatctctttctttcagggcaataatgatacaatgtatcatgcctctttgcaccattctaaagaataacagtgataatttctgggttaaggcaatagcaatatttctgcatataaatatttctgcatataaattgtaactgatgtaagaggtttcatattgctaatagcagctacaatccagctaccattctgcttttattttatggttgggataaggctggattattctgagtccaagctaggcccttttgctaatcatgttcatacctcttatcttcctcccacagctcctgggcaacctgctggtctgtgtgctggcccatcactttggcaaagaattgggattcgaaccggtaccgagctCTCCCGCAGAACACCATGCGCTCCACGGAAGCAGGTCCTCACTTTAATGCTGTGGCCACTGAGAAGTATTAAAGTGAGGACCTGCTTCTGAGGAGCGCCTTGACAGCAGCCATGGGAGGGCCtcgaggggtggcatccctgtgacccctccccagtgcctctcctggccctggaagttgccactccagtgcccaccagccttgtcctaataaaattaagttgcatcattttgtctgactaggtgtccttctataatattatggggtggaggggggtggtatggagcaaggggcaagttgggaagacaacctgtagggcctgcggggtctattgggaaccaagctggagtgcagtggcacaatcttggctcactgcaatctccgcctcctgggttcaagcgattctcctgcctcagcctcccgagttgttgggattccaggcatgcatgaccaggctcagctaatttttgtttttttggtagagacggggtttcaccatattggccaggctggtctccaactcctaatctcaggtgatctacccaccttggcctcccaaattgctgggattacaggcgtgaaccactgctcccttccctgtccttatcgatgcctagggttaatcattaactacaaggaacccctagtgatggagttggccactccctctctgcgcgctcgctcgctcactgaggccgggcgaccaaaggtcgcccgacgcccgggctttgcccgggcggcctcagtgagcgagcgagcgcgcag 4039
具有CpG缺失hBG外顯子/內含子/外顯子之hSYN(長).mir104-788.2之ITR至ITR (構築體13) ctgcgcgctcgctcgctcactgaggccgcccgggcaaagcccgggcgtcgggcgacctttggtcgcccggcctcagtgagcgagcgagcgcgcagagagggagtgtagccatgctctaggaagatcaattcaattcacgcgtCGCGTggggttatttctctactttcgtgtctctgagtgtgcttccagtgcccccctccccccaaaaaatgccttctgagttgaatatcaacactacaaaccTagtatctgcagagggccctgcgtatgagtgcaagtgggttttaggaccaggatgaggcggggtgggggtgcctacctgacgaccgaccccgacccactggacaagcacccaacccccattccccaaattgcgcatcccctatcagagagggggaggggaaacaggatgcggcgaggcgcgtgcgcactgccagcttcagcaccgcggacagtgccttcgcccccgcctggcggcgcgcgccaccgccgcctcagcactgaaggcgcgctgacgtcactcgccggtcccccgcaaactccccttcccggccaccttggtcgcgtccgcgccgccgccggcccagccggaccgcaccacgcgaggcgcgagataggggggcacgggcgcgaccatctgcgctgcggcgccggcgactcagcgctgcctcAGTCTGCGGTGGGCAGCGGAGGAGTCGTGTCGTGCCTGAGAGCGCAGCTGTGCTCCTGGGCACCGCGCAGTCCGCCCCCGCGGCTCCTGGCCAGACCACCCCTAGGACCCCCTGCCCCAAGTCGCAGCCaagcttcgtttagtgaaccgtcagatcacctggagacaccatccacactgttttgacctccatagaagacaccaggaccaatccagcctccacagattccaatcccagccaggaacagtgcattggaacacagattccccttgccaagagtgacgtaagtaccgcctatagagtctataggcccacaaaaaatgctttcttcttttaatatacttttttgtttatcttatttctaatactttccctaatctctttctttcagggcaataatgatacaatgtatcatgcctctttgcaccattctaaagaataacagtgataatttctgggttaaggcaatagcaatatttctgcatataaatatttctgcatataaattgtaactgatgtaagaggtttcatattgctaatagcagctacaatccagctaccattctgcttttattttatggttgggataaggctggattattctgagtccaagctaggcccttttgctaatcatgttcatacctcttatcttcctcccacagctcctgggcaacctgctggtctgtgtgctggcccatcactttggcaaagaattgggattcgaaccggtaccgagctCTCCCGCAGAACACCATGCGCTCCACGGAAGCAGGTCCTCACTTTAATGCTGTGGCCACTGAGAAGTATTAAAGTGAGGACCTGCTTCTGAGGAGCGCCTTGACAGCAGCCATGGGAGGGCCtcgaggggtggcatccctgtgacccctccccagtgcctctcctggccctggaagttgccactccagtgcccaccagccttgtcctaataaaattaagttgcatcattttgtctgactaggtgtccttctataatattatggggtggaggggggtggtatggagcaaggggcaagttgggaagacaacctgtagggcctgcggggtctattgggaaccaagctggagtgcagtggcacaatcttggctcactgcaatctccgcctcctgggttcaagcgattctcctgcctcagcctcccgagttgttgggattccaggcatgcatgaccaggctcagctaatttttgtttttttggtagagacggggtttcaccatattggccaggctggtctccaactcctaatctcaggtgatctacccaccttggcctcccaaattgctgggattacaggcgtgaaccactgctcccttccctgtccttatcgatgcctagggttaatcattaactacaaggaacccctagtgatggagttggccactccctctctgcgcgctcgctcgctcactgaggccgggcgaccaaaggtcgcccgacgcccgggctttgcccgggcggcctcagtgagcgagcgagcgcgcag 4040
具有CpG缺失hBG外顯子/內含子/外顯子之hSYN(短).mir104-788.2之ITR至ITR (構築體14) ctgcgcgctcgctcgctcactgaggccgcccgggcaaagcccgggcgtcgggcgacctttggtcgcccggcctcagtgagcgagcgagcgcgcagagagggagtgtagccatgctctaggaagatcaattcaattcacgcgtTAGTATCTGCAGAGGGCCCTGCGTATGAGTGCAAGTGGGTTTTAGGACCAGGATGAGGCGGGGTGGGGGTGCCTACCTGACGACCGACCCCGACCCACTGGACAAGCACCCAACCCCCATTCCCCAAATTGCGCATCCCCTATCAGAGAGGGGGAGGGGAAACAGGATGCGGCGAGGCGCGTGCGCACTGCCAGCTTCAGCACCGCGGACAGTGCCTTCGCCCCCGCCTGGCGGCGCGCGCCACCGCCGCCTCAGCACTGAAGGCGCGCTGACGTCACTCGCCGGTCCCCCGCAAACTCCCCTTCCCGGCCACCTTGGTCGCGTCCGCGCCGCCGCCGGCCCAGCCGGACCGCACCACGCGAGGCGCGAGATAGGGGGGCACGGGCGCGACCATCTGCGCTGCGGCGCCGGCGACTCAGCGCTGCCTCAGTCTGCGGTGGGCAGCGGAGGAGTCGTGTCGTGCCTGAGAGCGCAGCTGTGCTCCTGGGCACCGCGCAGTCCGCCCCCGCGGCTCCTGGCCAGACCACCCCTAGGACCCCCTGCCCCAAGTCGCAGCCaagcttcgtttagtgaaccgtcagatcacctggagacaccatccacactgttttgacctccatagaagacaccaggaccaatccagcctccacagattccaatcccagccaggaacagtgcattggaacacagattccccttgccaagagtgacgtaagtaccgcctatagagtctataggcccacaaaaaatgctttcttcttttaatatacttttttgtttatcttatttctaatactttccctaatctctttctttcagggcaataatgatacaatgtatcatgcctctttgcaccattctaaagaataacagtgataatttctgggttaaggcaatagcaatatttctgcatataaatatttctgcatataaattgtaactgatgtaagaggtttcatattgctaatagcagctacaatccagctaccattctgcttttattttatggttgggataaggctggattattctgagtccaagctaggcccttttgctaatcatgttcatacctcttatcttcctcccacagctcctgggcaacctgctggtctgtgtgctggcccatcactttggcaaagaattgggattcgaaccggtaccgagctCTCCCGCAGAACACCATGCGCTCCACGGAAGCAGGTCCTCACTTTAATGCTGTGGCCACTGAGAAGTATTAAAGTGAGGACCTGCTTCTGAGGAGCGCCTTGACAGCAGCCATGGGAGGGCCtcgaggggtggcatccctgtgacccctccccagtgcctctcctggccctggaagttgccactccagtgcccaccagccttgtcctaataaaattaagttgcatcattttgtctgactaggtgtccttctataatattatggggtggaggggggtggtatggagcaaggggcaagttgggaagacaacctgtagggcctgcggggtctattgggaaccaagctggagtgcagtggcacaatcttggctcactgcaatctccgcctcctgggttcaagcgattctcctgcctcagcctcccgagttgttgggattccaggcatgcatgaccaggctcagctaatttttgtttttttggtagagacggggtttcaccatattggccaggctggtctccaactcctaatctcaggtgatctacccaccttggcctcccaaattgctgggattacaggcgtgaaccactgctcccttccctgtccttatcgatgcctagggttaatcattaactacaaggaacccctagtgatggagttggccactccctctctgcgcgctcgctcgctcactgaggccgggcgaccaaaggtcgcccgacgcccgggctttgcccgggcggcctcagtgagcgagcgagcgcgcag 4041
表18. 表17中AAV顆粒之ITR至ITR序列之組分之總結
構築體(來自表17) 5'ITR 啟動子 hβG 外顯子/內含子/外顯子 調節多核苷酸 hGH 聚A信號序列 3'ITR
1 (SEQ ID NO: 4028) SEQ ID: 126 SEQ ID: 4021 SEQ ID NO: 4042 SEQ ID NO: 2562 SEQ ID NO: 4027 SEQ ID: 130
2 (SEQ ID NO: 4029) SEQ ID: 126 SEQ ID: 4022 SEQ ID NO: 4042 SEQ ID NO: 2562 SEQ ID NO: 4027 SEQ ID: 130
3 (SEQ ID NO: 4030) SEQ ID: 126 SEQ ID: 4014 SEQ ID NO: 4042 SEQ ID NO: 2562 SEQ ID NO: 4027 SEQ ID: 130
4 (SEQ ID NO: 4031) SEQ ID: 126 SEQ ID: 4023 SEQ ID NO: 4042 SEQ ID NO: 2562 SEQ ID NO: 4027 SEQ ID: 130
5 (SEQ ID NO: 4032) SEQ ID: 126 SEQ ID: 4024 SEQ ID NO: 4042 SEQ ID NO: 2562 SEQ ID NO: 4027 SEQ ID: 130
6 (SEQ ID NO: 4033) SEQ ID: 126 SEQ ID: 4025 SEQ ID NO: 4042 SEQ ID NO: 2562 SEQ ID NO: 4027 SEQ ID: 130
7 (SEQ ID NO: 4034) SEQ ID: 126 SEQ ID: 4026 SEQ ID NO: 4042 SEQ ID NO: 2562 SEQ ID NO: 4027 SEQ ID: 130
8 (SEQ ID NO: 4035) SEQ ID: 126 SEQ ID: 4021 SEQ ID NO: 4043 SEQ ID NO: 2562 SEQ ID NO: 4027 SEQ ID: 130
9 (SEQ ID NO: 4036) SEQ ID: 126 SEQ ID: 4022 SEQ ID NO: 4043 SEQ ID NO: 2562 SEQ ID NO: 4027 SEQ ID: 130
10 (SEQ ID NO: 4037) SEQ ID: 126 SEQ ID: 4014 SEQ ID NO: 4043 SEQ ID NO: 2562 SEQ ID NO: 4027 SEQ ID: 130
11 (SEQ ID NO: 4038) SEQ ID: 126 SEQ ID: 4023 SEQ ID NO: 4043 SEQ ID NO: 2562 SEQ ID NO: 4027 SEQ ID: 130
12 (SEQ ID NO: 4039) SEQ ID: 126 SEQ ID: 4024 SEQ ID NO: 4043 SEQ ID NO: 2562 SEQ ID NO: 4027 SEQ ID: 130
13 (SEQ ID NO: 4040) SEQ ID: 126 SEQ ID: 4025 SEQ ID NO: 4043 SEQ ID NO: 2562 SEQ ID NO: 4027 SEQ ID: 130
14 (SEQ ID NO: 4041) SEQ ID: 126 SEQ ID: 4026 SEQ ID NO: 4043 SEQ ID NO: 2562 SEQ ID NO: 4027 SEQ ID: 130
在某些實施例中，AAV顆粒包含病毒基因體，其包含與SEQ ID NO: 109具有一定百分比一致性之序列。病毒基因體可與SEQ ID NO: 9具有至少70%、75%、80%、85%、90%、95%、99%或100%一致性。病毒基因體可與SEQ ID NO: 109具有70-80%、70-90%、70-99%、70-100%、80-85%、80-90%、80-95%、80-99%、80-100%、90-95%、90-99%或90-100%一致性。作為非限制性實例，病毒基因體包含與SEQ ID NO: 109具有至少80%一致性之序列。作為另一非限制性實例，病毒基因體包含與SEQ ID NO: 109具有至少85%一致性之序列。作為另一非限制性實例，病毒基因體包含與SEQ ID NO: 109具有至少90%一致性之序列。作為另一非限制性實例，病毒基因體包含與SEQ ID NO: 109具有至少95%一致性之序列。作為另一非限制性實例，病毒基因體包含與SEQ ID NO: 109具有至少99%一致性之序列。在一些實施例中，AAV顆粒包含與SEQ ID NO: 109相差不超過15、14、13、12、11、10、9、8、7、6、5、4、3、2或1個核苷酸之SEQ ID NO: 109之病毒基因體序列。此等不同核苷酸可為鄰接的，或替代地，其在整個序列中可為非鄰接的。在一些實施例中，不同核苷酸位於序列之末端。
在某些實施例中，AAV顆粒包含病毒基因體，其包含與SEQ ID NO: 125具有一定百分比一致性之序列。病毒基因體可與SEQ ID NO: 125具有至少70%、75%、80%、85%、90%、95%、99%或100%一致性。病毒基因體可與SEQ ID NO: 125具有70-80%、70-90%、70-99%、70-100%、80-85%、80-90%、80-95%、80-99%、80-100%、90-95%、90-99%或90-100%一致性。作為非限制性實例，病毒基因體包含與SEQ ID NO: 125具有至少80%一致性之序列。作為另一非限制性實例，病毒基因體包含與SEQ ID NO: 125具有至少85%一致性之序列。作為另一非限制性實例，病毒基因體包含與SEQ ID NO: 125具有至少90%一致性之序列。作為另一非限制性實例，病毒基因體包含與SEQ ID NO: 125具有至少95%一致性之序列。作為另一非限制性實例，病毒基因體包含與SEQ ID NO: 125具有至少99%一致性之序列。在一些實施例中，AAV顆粒包含與SEQ ID NO: 125相差不超過15、14、13、12、11、10、9、8、7、6、5、4、3、2或1個核苷酸之SEQ ID NO: 125之病毒基因體序列。此等不同核苷酸可為鄰接的，或替代地，其在整個序列中可為非鄰接的。在一些實施例中，不同核苷酸位於序列之末端。
在某些實施例中，AAV顆粒包含病毒基因體，其包含與SEQ ID NO: 4028-4041中之任一者具有一定百分比一致性之核苷酸序列。病毒基因體可與SEQ ID NO: 4028-4041中之任一者具有至少70%、75%、80%、85%、90%、95%、99%或100%一致性。病毒基因體可與SEQ ID NO: 4028-4041中之任一者具有70-80%、70-90%、70-99%、70-100%、80-85%、80-90%、80-95%、80-99%、80-100%、90-95%、90-99%或90-100%一致性。作為非限制性實例，病毒基因體包含與SEQ ID NO: 4028-4041中之任一者具有至少80%一致性之核苷酸序列。作為另一非限制性實例，病毒基因體包含與SEQ ID NO: 4028-4041中之任一者具有至少85%一致性之核苷酸序列。作為另一非限制性實例，病毒基因體包含與SEQ ID NO: 4028-4041中之任一者具有至少90%一致性之核苷酸序列。作為另一非限制性實例，病毒基因體包含與SEQ ID NO: 4028-4041中之任一者具有至少95%一致性之核苷酸序列。作為另一非限制性實例，病毒基因體包含與SEQ ID NO: 4028-4041中之任一者具有至少99%一致性之核苷酸序列。在一些實施例中，AAV顆粒包含相對於SEQ ID NO: 4028-4041中之任一者相差不超過15、14、13、12、11、10、9、8、7、6、5、4、3、2或1個核苷酸之病毒基因體序列。此等不同核苷酸可為鄰接的，或替代地，其在整個序列中可為非鄰接的。在一些實施例中，不同核苷酸位於序列之末端。
在一些實施例中，SEQ ID NO: 4028-4041中任一者之調節多核苷酸序列位於hβG外顯子-內含子-外顯子盒之內含子內(例如插入其中)，或替換部分或全部內含子，而非位於相對於hβG外顯子-內含子-外顯子盒之3'。在一些實施例中，表17及表18中之SEQ ID NO: 4028-4041中任一者之ITR至ITR序列之5' ITR、啟動子、外顯子-內含子-外顯子盒、編碼調節多核苷酸之核苷酸序列、聚A信號序列及3'ITR中之一或多者可經變異體5' ITR、啟動子、外顯子-內含子-外顯子盒、編碼調節多核苷酸之核苷酸序列、聚A信號序列及/或3'ITR序列，例如一或多種變異體組分替換，該一或多種變異體組分包含相對於該一或多種組分之未經修飾型式之核苷酸序列具有至少一個、兩個或三個但不超過四個修飾(例如取代、插入及/或缺失)之核苷酸序列，或與該一或多種組分之未經修飾型式具有至少70% (例如80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%或99%)序列一致性之核苷酸序列。
在一些實施例中，AAV顆粒包含病毒基因體，該病毒基因體自5'至3'包含：5' ITR、啟動子(例如CBA、mini-CBA、EF-1、PGK、MP84、SYN之啟動子或任一前述啟動子之變異體(例如，截短型式))、外顯子-內含子-外顯子盒(例如，來自hβG)、編碼調節多核苷酸之核苷酸序列(其中調節多核苷酸包含靶向SOD1之siRNA編碼序列)、聚A信號序列(例如rBGpA或hGH聚A信號序列)及3'ITR。
在一些實施例中，AAV顆粒包含病毒基因體，該病毒基因體自5'至3'包含：5' ITR、啟動子(例如CBA、mini-CBA、EF-1、PGK、MP84、SYN之啟動子或任一前述啟動子之變異體(例如，截短型式))、外顯子-內含子-外顯子盒(例如，來自hβG)、編碼包含靶向SOD1 (例如hSOD1)之siRNA編碼序列之調節多核苷酸之核苷酸序列，其中調節多核苷酸插入外顯子-內含子-外顯子盒中的內含子中或替換部分或全部內含子、聚A信號序列(例如rBGpA或hGH聚A信號序列)及3'ITR。
在一些實施例中，AAV顆粒包含病毒基因體，該病毒基因體自5'至3'包含：包含例如SEQ ID NO: 126之5' ITR序列、選自例如SEQ ID NO: 4000-4026之啟動子序列、選自例如SEQ ID NO: 4042或4043之外顯子-內含子-外顯子盒、編碼包含靶向SOD1 (例如hSOD1)之siRNA編碼序列之調節多核苷酸之核苷酸序列、選自例如SEQ ID NO: 129或4027之聚A信號序列，及包含例如SEQ ID NO: 130之3' ITR序列。
在一些實施例中，AAV顆粒包含病毒基因體，該病毒基因體自5'至3'包含：包含例如SEQ ID NO: 126之5' ITR序列、選自例如SEQ ID NO: 4000-4026之啟動子序列、選自例如SEQ ID NO: 4042或4043之外顯子-內含子-外顯子盒、編碼包含靶向SOD1 (例如hSOD1)之siRNA編碼序列之調節多核苷酸之核苷酸序列，其中調節多核苷酸插入外顯子-內含子-外顯子盒中的內含子中或替換部分或全部內含子、選自例如SEQ ID NO: 129或4027之聚A信號序列，及包含例如SEQ ID NO: 130之3' ITR序列。
在一些實施例中，病毒基因體自5'至3'包含：(a) 5' ITR，例如包含SEQ ID NO: 126或130之核苷酸序列或其變異體之5'ITR，(b)啟動子，例如包含SEQ ID NO: 4000-4026中之任一者之核苷酸序列或其變異體之啟動子，(c)外顯子，例如包含SEQ ID NO: 4045-4048中任一者之核苷酸序列或其變異體的外顯子，(d)編碼調節多核苷酸(例如SOD1靶向RNA劑，例如siRNA雙鏈體)，例如包含SEQ ID NO: 2559-2579及5022中任一者之核苷酸序列或其變異體之調節多核苷酸之核苷酸序列，(e)聚A信號序列，例如包含SEQ ID NO: 129或4027之核苷酸序列或其變異體之聚A信號序列，及(f) 3'ITR，例如包含SEQ ID NO: 126或130之核苷酸序列或其變異體之3'ITR，其中該變異體包含相對於參考序列，例如參考序列，相差不超過15、14、13、12、11、10、9、8、7、6、5、4、3、2或1個核苷酸，例如取代、插入或缺失之序列，或相對於參考序列具有至少70%、75%、80%、85%、90%、95%、99%或100%一致性之序列，例如其中參考序列為野生型序列。
在一些實施例中，病毒基因體自5'至3'包含：(a) 5' ITR，例如包含SEQ ID NO: 126或130之核苷酸序列或其變異體之5'ITR，(b)啟動子，例如包含SEQ ID NO: 4000-4026中之任一者之核苷酸序列或其變異體之啟動子，(c)第一外顯子，例如包含SEQ ID NO: 4045-4048中任一者之核苷酸序列或其變異體的第一外顯子，(d)內含子，例如包含SEQ ID NO:4044之核苷酸序列或其變異體的內含子，(e)編碼調節多核苷酸(例如SOD1靶向RNA劑，例如siRNA雙鏈體)，例如包含SEQ ID NO: 2559-2579及5022中任一者之核苷酸序列或其變異體之SOD1靶向多核苷酸之核苷酸序列，(f)聚A信號序列，例如包含SEQ ID NO: 129或4027之核苷酸序列或其變異體之聚A信號序列，及(g) 3'ITR，例如包含SEQ ID NO: 126或130之核苷酸序列或其變異體之3'ITR，其中該變異體包含相對於參考序列，例如參考序列，相差不超過15、14、13、12、11、10、9、8、7、6、5、4、3、2或1個核苷酸，例如取代、插入或缺失之序列，或相對於參考序列具有至少70%、75%、80%、85%、90%、95%、99%或100%一致性之序列，例如其中參考序列為野生型序列。
在一些實施例中，病毒基因體自5'至3'包含：(a) 5' ITR，例如包含SEQ ID NO: 126或130之核苷酸序列或其變異體之5'ITR，(b)啟動子，例如包含SEQ ID NO: 4000-4026中之任一者之核苷酸序列或其變異體之啟動子，(c)第一外顯子，例如包含SEQ ID NO: 4045-4048中任一者之核苷酸序列或其變異體的第一外顯子，(d)內含子，例如包含SEQ ID NO:4044之核苷酸序列或其變異體的內含子，(e)第二外顯子，例如包含SEQ ID NO: 4045-4048中任一者之核苷酸序列或其變異體的第二外顯子，視情況地其中第一外顯子及第二外顯子不為相同之序列，(f)編碼調節多核苷酸(例如SOD1靶向RNA劑，例如siRNA雙鏈體)，例如包含SEQ ID NO: 2559-2579及5022中任一者之核苷酸序列或其變異體之SOD1靶向多核苷酸之核苷酸序列，(g)聚A信號序列，例如包含SEQ ID NO: 129或4027之核苷酸序列或其變異體之聚A信號序列，及(h) 3'ITR，例如包含SEQ ID NO: 126或130之核苷酸序列或其變異體之3'ITR，其中該變異體包含相對於參考序列，例如參考序列，相差不超過15、14、13、12、11、10、9、8、7、6、5、4、3、2或1個核苷酸，例如取代、插入或缺失之序列，或相對於參考序列具有至少70%、75%、80%、85%、90%、95%、99%或100%一致性之序列，例如其中參考序列為野生型序列。
在一些實施例中，病毒基因體包含SEQ ID NO: 4028-4041中任一者之核苷酸序列、相對於SEQ ID NO: 4028-4041中之任一者相差不超過15、14、13、12、11、10、9、8、7、6、5、4、3、2或1個核苷酸，例如取代(例如保守取代)、插入或缺失之核苷酸序列，或與SEQ ID NO: 4028-4041中之任一者具有至少70%、75%、80%、85%、90%、95%、99%或100%一致性之核苷酸序列。
在一些實施例中，AAV顆粒包含5'ITR序列，其包含與表16-18中之5' ITR序列相差不超過3、2或1個核苷酸的至少15個(例如至少16、17、18、19、20、21、22或23個)鄰接核苷酸。此等不同核苷酸可為鄰接的，或替代地，其在整個序列中可為非鄰接的。在一些實施例中，不同核苷酸位於序列之末端。5’ITR序列可與表16中之5’ ITR序列具有70-80%、70-90%、70-99%、70-100%、80-85%、80-90%、80-95%、80-99%、80-100%、90-95%、90-99%或90-100%一致性。
在一些實施例中，AAV顆粒包含白蛋白衍生填充序列，其包含與表16中之白蛋白衍生填充序列相差不超過3、2或1個核苷酸的至少15個(例如至少16、17、18、19、20、21、22或23個)鄰接核苷酸。此等不同核苷酸可為鄰接的，或替代地，其在整個序列中可為非鄰接的。在一些實施例中，不同核苷酸位於序列之末端。白蛋白衍生填充序列可與表16中之白蛋白衍生填充序列具有70-80%、70-90%、70-99%、70-100%、80-85%、80-90%、80-95%、80-99%、80-100%、90-95%、90-99%或90-100%一致性。
在一些實施例中，AAV顆粒包含慢病毒衍生填充序列，其包含與SEQ ID NO: 82相差不超過3、2或1個核苷酸的至少15個(例如至少16、17、18、19、20、21、22或23個)鄰接核苷酸。此等不同核苷酸可為鄰接的，或替代地，其在整個序列中可為非鄰接的。在一些實施例中，不同核苷酸位於序列之末端。慢病毒衍生填充序列可與SEQ ID NO: 82具有70-80%、70-90%、70-99%、70-100%、80-85%、80-90%、80-95%、80-99%、80-100%、90-95%、90-99%或90-100%一致性。
在一些實施例中，AAV顆粒包含啟動子序列(例如H1啟動子序列或表17、18或7中之啟動子序列，例如SEQ ID NO: 128或83)，其包含與表16中之H1啟動子序列或表17、18或7中之啟動子序列相差不超過7、6、5、4、3、2或1個核苷酸的至少15個(例如至少16、17、18、19、20、21、22或23個)鄰接核苷酸。此等不同核苷酸可為鄰接的，或替代地，其在整個序列中可為非鄰接的。在一些實施例中，不同核苷酸位於序列之末端。啟動子序列(例如H1啟動子序列或表17、18或6中之啟動子序列)與表16中之H1啟動子序列或表17、18或7中之啟動子序列可具有70-80%、70-90%、70-99%、70-100%、80-85%、80-90%、80-95%、80-99%、80-100%、90-95%、90-99%或90-100%一致性。
在一些實施例中，AAV顆粒包含第一及/或第二外顯子、內含子，或第一外顯子、內含子及第二外顯子(「外顯子-內含子-外顯子盒」) (例如，來自表17、18或7之第一外及/或第二外顯子、內含子或外顯子-內含子-外顯子盒，例如hβG第一及/或第二外顯子、內含子或外顯子-內含子-外顯子盒)，其包含與表17、18或9中之第一及/或第二外顯子、內含子或外顯子-內含子-外顯子盒相差不超過7、6、5、4、3、2或1個核苷酸之至少15個(例如，至少16、17、18、19、20、21、22或23個)鄰接核苷酸。此等不同核苷酸可為鄰接的，或替代地，其在整個序列中可為非鄰接的。在一些實施例中，不同核苷酸位於序列之末端。第一及/或第二外顯子、內含子或外顯子-內含子-外顯子盒(例如，來自表17、18或9之第一外及/或第二外顯子、內含子或外顯子-內含子-外顯子盒，例如hβG第一及/或第二外顯子、內含子或外顯子-內含子-外顯子盒)與表17、18或9中之第一及/或第二外顯子、內含子或外顯子-內含子-外顯子盒可具有70-80%、70-90%、70-99%、70-100%、80-85%、80-90%、80-95%、80-99%、80-100%、90-95%、90-99%或90-100%一致性。
在一些實施例中，AAV顆粒包含聚A序列，其包含與表16-18或8中之聚A序列相差不超過3、2或1個核苷酸的至少15個(例如，至少16、17、18、19、20、21、22或23個)鄰接核苷酸。此等不同核苷酸可為鄰接的，或替代地，其在整個序列中可為非鄰接的。在一些實施例中，不同核苷酸位於序列之末端。聚A序列可與表16-18或8中之聚A序列具有70-80%、70-90%、70-99%、70-100%、80-85%、80-90%、80-95%、80-99%、80-100%、90-95%、90-99%或90-100%一致性。
在一些實施例中，AAV顆粒包含3'ITR序列，其包含與表16-18中之3' ITR序列相差不超過3、2或1個核苷酸的至少15個(例如至少16、17、18、19、20、21、22或23個)鄰接核苷酸。此等不同核苷酸可為鄰接的，或替代地，其在整個序列中可為非鄰接的。在一些實施例中，不同核苷酸位於序列之末端。3’ITR序列可與表16-18中之3’ ITR序列具有70-80%、70-90%、70-99%、70-100%、80-85%、80-90%、80-95%、80-99%、80-100%、90-95%、90-99%或90-100%一致性。
AAV顆粒可經修飾以增強遞送效率。此類包含編碼本揭示案之siRNA分子之核酸序列的經修飾AAV顆粒可高效地包裝且可用於以高頻率且以最小毒性成功感染靶細胞。
在其他實施例中，包含用於編碼本揭示案之siRNA分子之核酸序列之AAV顆粒可為假型雜合或嵌合AAV顆粒，其含有源自至少兩種不同AAV血清型之序列及/或組分。假型AAV顆粒可為包含衍生自一種AAV血清型之AAV基因體及至少部分衍生自不同AAV血清型之衣殼蛋白之載體。作為非限制性實例，此類假型AAV顆粒可為在AAV1衍生之衣殼中包含AAV2衍生之基因體的載體；或在AAV6衍生之衣殼中包含AAV2衍生之基因體的載體；或在AAV4衍生之衣殼中包含AAV2衍生之基因體或在AAV9衍生之衣殼中包含AAV2衍生之基因體的載體。以類似方式，本揭示案考慮任何雜合或嵌合AAV顆粒。
在其他實施例中，包含編碼本揭示案之siRNA分子之核酸序列的AAV顆粒可用於將siRNA分子遞送至中樞神經系統(例如，美國專利第6,180,613號；該專利之內容以全文引用之方式併入本文)。
在一些態樣中，包含編碼本揭示案之siRNA分子之核酸序列的AAV顆粒可進一步包含經修飾衣殼，包括來自非病毒來源之肽。在其他態樣中，AAV顆粒可含有CNS特異性嵌合衣殼以促進經編碼之siRNA雙鏈體遞送至腦及脊髓中。舉例而言，可構築展現CNS向性之AAV變異體之帽核苷酸序列之比對以鑑別可變區(VR)序列及結構。
在其他實施例中，本揭示案之siRNA分子可在用於遞送至細胞之質體載體、病毒載體(例如AAV載體)、基因體或其他核酸表現載體中編碼。
DNA表現質體可用於在細胞中穩定表現本揭示案之siRNA雙鏈體或dsRNA，且達成對靶基因之長期抑制。
在一個態樣中，由SOD1靶向多核苷酸編碼之siRNA雙鏈體之有義股及反義股通常藉由短間隔子序列連接，導致稱為短髮夾RNA (shRNA)之莖-環結構表現。髮夾由切丁酶識別且裂解，從而產生成熟siRNA分子。
根據本揭示案，包含靶向SOD1 mRNA之siRNA分子之核酸的AAV顆粒可進一步包含選自以下之衣殼蛋白：VOY101、AAVPHP.B (PHP.B)、AAVPHP.N (PHP.N)、AAV1、AAV2、AAV5、AAV9、AAV9 K449R、AAVrh10及其變異體。
在一些實施例中，本揭示案之siRNA雙鏈體或dsRNA在表現時阻抑(或降解)靶mRNA (例如SOD1)。因此，由SOD1靶向多核苷酸編碼之siRNA雙鏈體或dsRNA可用於實質上抑制細胞(例如運動神經元)中之SOD1基因表現。在一些態樣中，SOD1基因表現之抑制係指抑制至少約20%，較佳至少約30%、40%、50%、60%、70%、80%、85%、90%、95%及100%。因此，靶向基因之蛋白質產物可被抑制至少約20%，較佳至少約30%、40%、50%、60%、70%、80%、85%、90%、95%及100%。SOD1基因可為野生型基因或具有至少一個突變之突變SOD1基因。因此，蛋白質為野生型蛋白質或具有至少一個突變之突變多肽。 III. 病 毒產生 一般病毒產生過程
在一些實施例中，用於產生AAV (例如rAAV)顆粒之細胞可包括哺乳動物細胞(諸如HEK293細胞)及/或昆蟲細胞(諸如Sf9細胞)。
在多個實施例中，AAV產生包括產生AAV顆粒及載體之過程及方法，該等顆粒及載體可接觸靶細胞以遞送酬載，例如包括編碼酬載分子之核苷酸之重組病毒構築體。在某些實施例中，病毒載體係腺相關病毒(AAV)載體，諸如重組腺相關病毒(rAAV)載體。在某些實施例中，AAV顆粒係腺相關病毒(AAV)顆粒，諸如重組腺相關病毒(rAAV)顆粒。
在一些實施例中，本文揭示包含本揭示案之病毒基因體之載體。在一些實施例中，本文揭示包含本揭示案之病毒基因體之細胞。在一些實施例中，細胞係細菌細胞、哺乳動物細胞(例如HEK293細胞)或昆蟲細胞(例如Sf9細胞)。
在一些實施例中，本文揭示製造病毒基因體之方法。該方法包含提供編碼本文所述之病毒基因體的核酸及適合於在細胞例如細菌細胞中複製病毒基因體之主鏈區(例如，其中主鏈區包含細菌複製起點及可選標記中之一或兩者)，且自主鏈區切除病毒基因體，例如藉由裂解病毒基因體上游及下游之核酸分子。在一些實施例中，包含可操作地連接至編碼多核苷酸(例如本文所述之SOD1靶向siRNA)之核酸之啟動子的病毒基因體將併入在細胞中產生之AAV顆粒中。在一些實施例中，細胞係細菌細胞、哺乳動物細胞(例如HEK293細胞)或昆蟲細胞(例如Sf9細胞)。
在一些實施例中，本文揭示製造本揭示案之重組AAV顆粒之方法，該方法包含(i)提供包含本文所述之病毒基因體之宿主細胞，及在適於將病毒基因體包裹在衣殼蛋白，例如本文所述之衣殼蛋白(例如表2中所列之衣殼蛋白，例如VOY101衣殼蛋白或其功能變異體)中之條件下培育宿主細胞，由此製造重組AAV顆粒。在一些實施例中，該方法包含在步驟(i)之前，將包含病毒基因體之第一核酸引入細胞中。在一些實施例中，宿主細胞包含編碼衣殼蛋白之第二核酸。在一些實施例中，第二核酸係在第一核酸分子之前、與其同時或在其之後引入宿主細胞中。在一些實施例中，宿主細胞係細菌細胞、哺乳動物細胞(例如HEK293細胞)或昆蟲細胞(例如Sf9細胞)。
在多個實施例中，本文提供藉由以下方式產生AAV顆粒或載體之方法：(a)使病毒產生細胞與編碼至少一種AAV衣殼蛋白之一或多種病毒表現構築體及編碼酬載分子之一或多種酬載構築體接觸，該酬載分子可選自：轉殖基因、多核苷酸編碼蛋白及調節核酸；(b)在使得產生至少一種AAV顆粒或載體之條件下培養病毒產生細胞，及(c)自產生流分離AAV顆粒或載體。
在該等方法中，病毒表現構築體可編碼至少一種結構蛋白及/或至少一種非結構蛋白。結構蛋白可包括天然或野生型衣殼蛋白VP1、VP2及/或VP3中之任一者或其嵌合蛋白。非結構蛋白可包括天然或野生型Rep78、Rep68、Rep52及/或Rep40蛋白中之任一者或其嵌合蛋白。
在某些實施例中，接觸係經由瞬時轉染、病毒轉導及/或電穿孔來進行。
在某些實施例中，病毒產生細胞選自哺乳動物細胞及昆蟲細胞。在某些實施例中，昆蟲細胞包括草地貪夜蛾( Spodoptera frugiperda)昆蟲細胞。在某些實施例中，昆蟲細胞包括Sf9昆蟲細胞。在某些實施例中，昆蟲細胞包括Sf21昆蟲細胞。
在多個實施例中，本揭示案之酬載構築體載體可包括至少一個反向末端重複(ITR)且可包括哺乳動物DNA。
亦提供根據本文所述之方法產生之AAV顆粒及病毒載體。
在多個實施例中，本揭示案之AAV顆粒可與一或多種可接受之賦形劑一起調配為醫藥組成物。
在某些實施例中，AAV顆粒或病毒載體可藉由本文所述之方法來產生。
在某些實施例中，AAV顆粒可藉由使病毒產生細胞(例如昆蟲細胞或哺乳動物細胞)與編碼至少一種衣殼蛋白之至少一種病毒表現構築體及至少一種酬載構築體載體接觸來產生。可藉由瞬時轉染、病毒轉導及/或電穿孔來接觸病毒產生細胞。酬載構築體載體可包括編碼酬載分子(諸如但不限於多核苷酸編碼蛋白及調節核酸)之酬載構築體。可在使得產生、分離(例如，使用溫度誘導之溶解、機械溶解及/或化學溶解)及/或純化(例如，使用過濾、層析及/或免疫親和純化)至少一種AAV顆粒或載體之條件下培養病毒產生細胞。作為非限制性實例，酬載構築體載體可包括哺乳動物DNA。
在某些實施例中，AAV顆粒係在昆蟲細胞(例如，草地貪夜蛾(Sf9)細胞)中使用本文所述之方法產生。作為非限制性實例，使用病毒轉導接觸昆蟲細胞，該病毒轉導可包括桿狀病毒轉導。
在某些實施例中，AAV顆粒係在哺乳動物細胞(例如HEK293細胞)中使用本文所述之方法產生。作為非限制性實例，使用病毒轉導接觸哺乳動物細胞，該病毒轉導可包括多質體瞬時轉染(諸如三質體瞬時轉染)。
在某些實施例中，本文所述之AAV顆粒產生方法在病毒產生細胞中產生大於10 1個、大於10 2個、大於10 3個、大於10 4個或大於10 5個AAV顆粒。
在某些實施例中，本揭示案之過程包括在病毒產生細胞中使用病毒產生系統產生病毒顆粒，該系統包括至少一種病毒表現構築體及至少一種酬載構築體。至少一種病毒表現構築體及至少一種酬載構築體可共轉染(例如雙重轉染、三重轉染)至病毒產生細胞中。轉染係使用熟習此項技術者已知及通常執行之標準分子生物學技術來完成。病毒產生細胞提供表現蛋白質及其他生物材料所需之細胞機構，該等蛋白質及其他生物材料為產生AAV顆粒所必需，包括複製酬載構築體之Rep蛋白及組裝形成包裹複製的酬載構築體之衣殼之Cap蛋白。自病毒產生細胞提取所得AAV顆粒且將其處理成用於投與之醫藥製劑。
在多個實施例中，不受限於理論，一旦投與，本文所揭示之AAV顆粒便可立即接觸靶細胞且進入細胞，例如在胞內體中。AAV顆粒(例如自胞內體釋放之AAV顆粒)隨後可接觸靶細胞之細胞核以遞送酬載構築體。酬載構築體(例如重組病毒構築體)可遞送至靶細胞之細胞核，在細胞核中可表現由酬載構築體編碼之酬載分子。
在某些實施例中，產生病毒顆粒之過程利用包括一或多種桿狀病毒之病毒產生細胞之種子培養物(例如，已經病毒表現構築體及酬載構築體載體轉染之桿狀病毒表現載體(BEV)或桿狀病毒感染之昆蟲細胞(BIIC))。在某些實施例中，收穫種子培養物，分成等份並冷凍，且可在後續時間點用於起始產生細胞之幼稚群體之感染。
在一些實施例中，AAV顆粒之大規模生產利用生物反應器。不受限於理論，使用生物反應器可允許精確地量測及/或控制支持病毒產生細胞之生長及活性之變量，諸如質量、溫度、混合條件(葉輪RPM或波振盪)、CO 2濃度、O 2濃度、氣體噴射速率及體積、氣體覆蓋速率及體積、pH、活細胞密度(VCD)、細胞活力、細胞直徑及/或光學密度(OD)。在某些實施例中，生物反應器用於批量生產，其中在實驗確定之時間點收穫整個培養物且純化AAV顆粒。在一些實施例中，生物反應器用於連續生產，其中在實驗確定之時間點收穫培養物之一部分用於純化AAV顆粒，且用額外生長培養基組分復蘇生物反應器中之剩餘培養物。
在多個實施例中，可在包括細胞溶解、澄清、滅菌及純化之過程中自病毒產生細胞提取AAV病毒顆粒。細胞溶解包括破壞病毒產生細胞之結構、由此釋放AAV顆粒之任一過程。在某些實施例中，細胞溶解可包括熱震、化學或機械溶解方法。澄清可包括溶解細胞、培養基組分及AAV顆粒之混合物之粗略純化。在某些實施例中，澄清包括離心及/或過濾，包括但不限於深度端、切向流及/或中空纖維過濾。
在多個實施例中，病毒產生之最終結果係經純化之AAV顆粒集合，其包括兩種組分：(1)酬載構築體(例如重組AAV病毒基因體構築體)及(2)病毒衣殼。
在某些實施例中，本揭示案之病毒產生系統或過程包括使用病毒產生細胞(VPC)及質體構築體產生桿狀病毒感染之昆蟲細胞(BIIC)之步驟。將來自細胞庫(CB)之病毒產生細胞(VPC)解凍且擴增以提供目標工作體積及VPC濃度。將所得VPC池分成Rep/Cap VPC池及酬載VPC池。將一或多個Rep/Cap質體構築體(病毒表現構築體)處理成Rep/Cap桿粒多核苷酸且轉染至Rep/Cap VPC池中。將一或多個酬載質體構築體(酬載構築體)處理成酬載桿粒多核苷酸且轉染至酬載VPC池中。孵育兩個VPC池以產生P1 Rep/Cap桿狀病毒表現載體(BEV)及P1酬載BEV。將兩個BEV池擴增成噬菌斑之集合，其中選擇單一噬菌斑用於純系噬菌斑(CP)純化(亦稱為單一噬菌斑擴增)。該過程可包括單一CP純化步驟或可包括串聯或由其他處理步驟分隔之多個CP純化步驟。一或多個CP純化步驟提供CP Rep/Cap BEV池及CP酬載BEV池。然後可將此兩個BEV池儲存且用於將來生產步驟，或然後可將其轉染至VPC中以產生Rep/Cap BIIC池及酬載BIIC池。
在某些實施例中，本揭示案之病毒產生系統或過程包括使用病毒產生細胞(VPC)及桿狀病毒感染之昆蟲細胞(BIIC)產生AAV顆粒之步驟。將來自細胞庫(CB)之病毒產生細胞(VPC)解凍且擴增以提供目標工作體積及VPC濃度。將工作體積之病毒產生細胞接種至生產生物反應器中且可以用於BIIC感染之目標VPC濃度將其進一步擴增至200-2000 L之工作體積。然後以目標VPC:BIIC比率及目標BIIC:BIIC比率用Rep/Cap BIIC及酬載BIIC共感染生產生物反應器中工作體積之VPC。VCD感染亦可利用BEV。在生產生物反應器中孵育及擴增受共感染之VPC以產生AAV顆粒及VPC之大量收穫。 病毒表現構築體
在多個實施例中，本揭示案之病毒產生系統包括可轉染/轉導至病毒產生細胞中之一或多種病毒表現構築體。在某些實施例中，本揭示案之病毒表現構築體或酬載構築體可為桿粒，亦稱為桿狀病毒質體或重組桿狀病毒基因體。在某些實施例中，病毒表現包括編碼蛋白質之核苷酸序列及用於在病毒產生細胞中表現之至少一條表現控制序列。在某些實施例中，病毒表現包括可操作地連接至用於在病毒產生細胞中表現之至少一條表現控制序列之編碼蛋白質之核苷酸序列。在某些實施例中，病毒表現構築體含有處於一或多個啟動子控制下之小病毒基因。小病毒基因可包括編碼非結構AAV複製蛋白之核苷酸序列，諸如編碼Rep52、Rep40、Rep68或Rep78蛋白之Rep基因。小病毒基因可包括編碼結構AAV蛋白之核苷酸序列，諸如編碼VP1、VP2及VP3蛋白之Cap基因。
本揭示案之病毒表現構築體可包括促進用核酸轉型、轉染或轉導細胞之任一化合物或調配物、生物品或化學品。示範性生物病毒表現構築體包括質體、線性核酸分子及重組病毒(包括桿狀病毒)。示範性化學載體包括脂質複合物。病毒表現構築體用於將核酸序列併入本揭示案之病毒複製細胞中。(O'Reilly、David R.、Lois K. Miller及Verne A. Luckow. Baculovirus expression vectors: a laboratory manual. Oxford University Press, 1994.)；Maniatis等人編輯Molecular Cloning. CSH Laboratory, NY, N.Y. (1982)；以及Philiport及Scluber編輯Liposomes as tools in Basic Research and Industry. CRC Press, Ann Arbor, Mich. (1995)，該等文獻中每一者之與病毒表現構築體及其用途相關之內容以全文引用之方式併入本文。
在某些實施例中，病毒表現構築體係AAV表現構築體，其包括編碼非結構AAV複製蛋白、結構AAV衣殼蛋白或其組合之一或多條核苷酸序列。
在某些實施例中，本揭示案之病毒表現構築體可為質體載體。在某些實施例中，本揭示案之病毒表現構築體可為桿狀病毒構築體。
本揭示案不受用於產生AAV顆粒或病毒載體之病毒表現構築體數量之限制。在某些實施例中，可採用一種、兩種、三種、四種、五種、六種或更多種病毒表現構築體在本揭示案之病毒產生細胞中產生AAV顆粒。在本揭示案之某些實施例中，病毒表現構築體可用於在昆蟲細胞中產生AAV顆粒。在某些實施例中，可對衣殼及/或rep基因之野生型AAV序列進行修飾，例如以改良病毒顆粒之屬性，諸如增加感染力或特異性，或增強產量。
在某些實施例中，病毒表現構築體可含有包括起始密碼子區域之核苷酸序列，諸如編碼包括一或多個起始密碼子區域之AAV衣殼蛋白之序列。在某些實施例中，起始密碼子區域可處於表現控制序列內。起始密碼子可為ATG或非ATG密碼子(亦即次最佳起始密碼子，其中AAV VP1衣殼蛋白之起始密碼子係非ATG)。
在某些實施例中，用於AAV產生之病毒表現構築體可含有編碼AAV衣殼蛋白之核苷酸序列，其中AAV VP1衣殼蛋白之起始密碼子係非ATG，例如次最佳起始密碼子，允許在產生系統中表現經修改比率之病毒衣殼蛋白，以提供改良之宿主細胞感染力。在非限制性實例中，病毒構築體載體可含有包含編碼AAV VP1、VP2及VP3衣殼蛋白之核苷酸序列之核酸構築體，其中用於轉譯AAV VP1衣殼蛋白之起始密碼子係CTG、TTG或GTG，如美國專利第US 8,163,543號中所述，該專利之與AAV衣殼蛋白及其產生相關之內容以全文引用之方式併入本文。
在某些實施例中，本揭示案之病毒表現構築體可為編碼用於在昆蟲細胞中表現之小病毒rep蛋白之質體載體或桿狀病毒構築體。在某些實施例中，將單一編碼序列用於Rep78及Rep52蛋白，其中用於轉譯Rep78蛋白之起始密碼子係選自由ACG、TTG、CTG及GTG組成之群之次最佳起始密碼子，其在昆蟲細胞中表現時實現部分外顯子跳躍，如美國專利第8,512,981號中所述，該專利之內容以全文引用之方式併入本文，例如以促進Rep78與Rep52相比較低豐度之表現，此可促進高載體產量。
在某些實施例中，VP編碼區編碼特定AAV血清型之一或多種AAV衣殼蛋白。VP編碼區之AAV血清型可為相同或不同的。在某些實施例中，VP編碼區可經密碼子最佳化。在某些實施例中，VP編碼區或核苷酸序列可經密碼子最佳化用於哺乳動物細胞。在某些實施例中，VP編碼區或核苷酸序列可經密碼子最佳化用於昆蟲細胞。在某些實施例中，VP編碼區或核苷酸序列可經密碼子最佳化用於草地貪夜蛾細胞。在某些實施例中，VP編碼區或核苷酸序列可經密碼子最佳化用於Sf9或Sf21細胞株。
在某些實施例中，編碼一或多種VP衣殼蛋白之核苷酸序列可經密碼子最佳化以與參考核苷酸序列具有小於100%之核苷酸同源性。在某些實施例中，經密碼子最佳化之VP核苷酸序列與參考VP核苷酸序列之間的核苷酸同源性小於100%、小於99%、小於98%、小於97%、小於96%、小於95%、小於94%、小於93%、小於92%、小於91%、小於90%、小於89%、小於88%、小於87%、小於86%、小於85%、小於84%、小於83%、小於82%、小於81%、小於80%、小於78%、小於76%、小於74%、小於72%、小於70%、小於68%、小於66%、小於64%、小於62%、小於60%、小於55%、小於50%及小於40%。
在某些實施例中，本揭示案之病毒表現構築體或酬載構築體可為桿粒，亦稱為桿狀病毒質體或重組桿狀病毒基因體。在某些實施例中，本揭示案之病毒表現構築體或酬載構築體(例如桿粒)可包括藉由熟習此項技術者已知及執行之標準分子生物學技術藉由同源重組(轉位子供體/受體系統)併入桿粒中之多核苷酸。
在某些實施例中，併入桿粒中之多核苷酸(亦即多核苷酸插入物)可包括可操作地連接至編碼蛋白質之核苷酸序列之表現控制序列。在某些實施例中，併入桿粒中之多核苷酸可包括表現控制序列，其包括啟動子(諸如p10或polh)，且可操作地連接至編碼結構AAV衣殼蛋白(例如VP1、VP2、VP3或其組合)之核苷酸序列。在某些實施例中，併入桿粒中之多核苷酸可包括表現控制序列，其包括啟動子(諸如p10或polh)，且可操作地連接至編碼非結構AAV衣殼蛋白(例如Rep78、Rep52或其組合)之核苷酸序列。
本揭示案之方法不受特定表現控制序列之使用的限制。然而，當達成某一化學計量之VP產物(VP1、VP2及VP3分別接近1:1:10)時亦及當Rep52或Rep40 (亦稱為p19 Rep)之水準顯著高於Rep78或Rep68 (亦稱為p5 Rep)時，可在產生細胞(諸如昆蟲細胞)中獲得改良之AAV產量。在某些實施例中，p5/p19比率低於0.6、低於0.4或低於0.3，但始終至少係0.03。此等比率可在蛋白質層級上進行量測或可根據特定mRNA之相對水準來推斷。
在某些實施例中，AAV顆粒係在病毒產生細胞(諸如哺乳動物或昆蟲細胞)中產生，其中所有三種VP蛋白係以接近、約或為以下之化學計量表現：1:1:10 (VP1:VP2:VP3)；2:2:10 (VP1:VP2:VP3)；2:0:10 (VP1:VP2:VP3)；1-2:0-2:10 (VP1:VP2:VP3)；1-2:1-2:10 (VP1:VP2:VP3)；2-3:0-3:10 (VP1:VP2:VP3)；2-3:2-3:10 (VP1:VP2:VP3)；3:3:10 (VP1:VP2:VP3)；3-5:0-5:10 (VP1:VP2:VP3)；或3-5:3-5:10 (VP1:VP2:VP3)。
在某些實施例中，表現控制區經改造以產生選自由以下組成之群之VP1:VP2:VP3比率：約或恰好1:0:10；約或恰好1:1:10；約或恰好2:1:10；約或恰好2:1:10；約或恰好2:2:10；約或恰好3:0:10；約或恰好3:1:10；約或恰好3:2:10；約或恰好3:3:10；約或恰好4:0:10；約或恰好4:1:10；約或恰好4:2:10；約或恰好4:3:10；約或恰好4:4:10；約或恰好5:5:10；約或恰好1-2:0-2:10；約或恰好1-2:1-2:10；約或恰好1-3:0-3:10；約或恰好1-3:1-3:10；約或恰好1-4:0-4:10；約或恰好1-4:1-4:10；約或恰好1-5:1-5:10；約或恰好2-3:0-3:10；約或恰好2-3:2-3:10；約或恰好2-4:2-4:10；約或恰好2-5:2-5:10；約或恰好3-4:3-4:10；約或恰好3-5:3-5:10；及約或恰好4-5:4-5:10。
在本揭示案之某些實施例中，自桿狀病毒源性多面體啟動子(polh)轉錄Rep52或Rep78。Rep52或Rep78亦可自較弱啟動子轉錄，該較弱啟動子係例如ie-1啟動子之缺失突變體，即Δie-1啟動子，其具有該ie-1啟動子之約20%之轉錄活性。可使用與Δie-1啟動子實質上同源之啟動子。相對於啟動子至少50%、60%、70%、80%、90%或更大之同源性認為係實質上同源啟動子。 哺乳動物細胞
本文所揭示之本揭示案之病毒產生闡述產生AAV顆粒或病毒載體之過程及方法，該等AAV顆粒或病毒載體接觸靶細胞以遞送酬載構築體，例如包括編碼酬載分子之核苷酸之重組AAV顆粒或病毒構築體。病毒產生細胞可選自任一生物生物體，包括原核(例如細菌)細胞，及真核細胞，包括昆蟲細胞、酵母細胞及哺乳動物細胞。
在某些實施例中，本揭示案之AAV顆粒可在包括哺乳動物細胞之病毒產生細胞中產生。病毒產生細胞可包括哺乳動物細胞，諸如A549、WEH1、3T3、10T1/2、BHK、MDCK、COS 1、COS 7、BSC 1、BSC 40、BMT 10、VERO、W138、HeLa、HEK293、HEK293T (293T)、Saos、C2C12、L細胞、HT1080、Huh7、HepG2、C127、3T3、CHO、HeLa細胞、KB細胞、BHK及衍生自哺乳動物之原代纖維母細胞、肝細胞及肌母細胞。病毒產生細胞可包括衍生自任何哺乳動物物種(包括但不限於人類、猴、小鼠、大鼠、兔及倉鼠)或細胞類型(包括但不限於纖維母細胞、肝細胞、腫瘤細胞、細胞株轉型細胞 等)之細胞。
常用於產生重組AAV顆粒之AAV病毒產生細胞包括但不限於如以下專利中所述之其他哺乳動物細胞株：美國專利第6,156,303號、第5,387,484號、第5,741,683號、第5,691,176號、第6,428,988號及第5,688,676號；美國專利申請案2002/0081721及國際專利公開案第WO 00/47757號、第WO 00/24916號及第WO 96/17947號，該等專利中每一者之內容在不與本揭示案衝突之範圍內以全文引用之方式併入本文。在某些實施例中，AAV病毒產生細胞係提供自複製缺陷型輔助病毒缺失之功能之反式互補包裝細胞株，例如HEK293細胞或其他Ea反式互補細胞。
在某些實施例中，包裝細胞株293-10-3 (ATCC登錄號PTA-2361)可用於產生AAV顆粒，如美國專利第US 6,281,010號中所述，該專利之與293-10-3包裝細胞株及其用途相關之內容以全文引用之方式併入本文。
在本揭示案之某些實施例中，可將用於在磷酸甘油酸激酶(PGK)啟動子控制下編碼腺病毒E1a及腺病毒E1b之反式互補E1缺失腺病毒載體之細胞株(諸如HeLA細胞株)用於AAV顆粒產生，如美國專利第6365394號中所述，該專利之與HeLa細胞株及其用途相關之內容之全文皆以引用方式併入本文。
在某些實施例中，AAV顆粒係在哺乳動物細胞中使用多質體瞬時轉染方法(諸如三質體瞬時轉染)產生。在某些實施例中，多質體瞬時轉染方法包括轉染以下三種不同之構築體：(i)酬載構築體，(ii) Rep/Cap構築體(小病毒Rep及小病毒Cap)，及(iii)輔助構築體。在某些實施例中，AAV顆粒產生之三種組分之三重轉染方法可用於產生小批量之病毒，用於包括轉導效率、靶組織(向性)評價及穩定性之檢定。在某些實施例中，AAV顆粒產生之三種組分之三重轉染方法可用於產生大批量之材料，用於臨床或商業應用。
欲調配之AAV顆粒可藉由三重轉染或桿狀病毒介導之病毒產生或此項技術中已知之任何其他方法來產生。可採用此項技術中已知之任何適宜允許的或包裝細胞來產生載體。在某些實施例中，使用提供自複製缺陷型輔助病毒缺失之功能之反式互補包裝細胞株，例如293細胞或其他E1a反式互補細胞。
基因盒可含有一些或所有小病毒(例如AAV) cap及rep基因。在某些實施例中，藉由將編碼衣殼及/或Rep蛋白之包裝載體引入細胞中來反式提供一些或所有cap及rep功能。在某些實施例中，基因盒並不編碼衣殼或Rep蛋白。替代地，使用經穩定轉型以表現cap及/或rep基因之包裝細胞株。
在某些實施例中，根據如US2016/0032254中所述之程序自培養物上清液產生及純化重組AAV病毒顆粒，該專利之與重組AAV病毒顆粒之產生及處理相關之內容以全文引用之方式併入。產生亦可涉及此項技術中已知之方法，包括使用293T細胞之方法、三重轉染方法或任何適宜之產生方法。
在某些實施例中，哺乳動物病毒產生細胞(例如293T細胞)可呈黏附/貼壁狀態(例如與磷酸鈣)或懸浮狀態(例如與聚乙烯亞胺(PEI))。用產生AAV所需之質體(亦即，AAV rep/cap構築體、腺病毒輔助構築體及/或ITR側接酬載構築體)轉染哺乳動物病毒產生細胞。在某些實施例中，轉染過程可包括視情況存在之培養基更換(例如若需要，更換呈黏附形式之細胞之培養基、不更換呈懸浮形式之細胞之培養基、更換呈懸浮形式之細胞之培養基)。在某些實施例中，轉染過程可包括轉染培養基，諸如DMEM或F17。在某些實施例中，轉染培養基可包括血清或可為無血清的(例如與磷酸鈣及與血清呈黏附狀態之細胞、與PEI及不與血清呈懸浮狀態之細胞)。
隨後可藉由刮擦(貼壁形式)及/或沈澱(懸浮形式及刮擦的貼壁形式)收集細胞且轉移至容器中。可視需要重複收集步驟以完全收集所產生之細胞。然後，可藉由連續冷凍-解凍週期(-80℃至37℃)、化學溶解(諸如添加清潔劑triton)、機械溶解或藉由允許細胞培養物在達到約0%活力後降解來達成細胞溶解。藉由離心及/或深度過濾移除細胞碎片。藉由DNA qPCR藉由DNase抗性基因體滴定量化樣品之AAV顆粒。
根據基因體拷貝數(基因體顆粒/毫升)量測AAV顆粒效價。基因體顆粒濃度係基於載體DNA之DNA qPCR，如先前所報導(Clark等人(1999) Hum. Gene Ther., 10:1031-1039；Veldwijk等人(2002) Mol. Ther., 6:272-278，該等文獻之與量測顆粒濃度相關之內容之全文各自以引用方式併入)。 昆蟲細胞
本揭示案之病毒產生包括產生AAV顆粒或病毒載體之過程及方法，該等AAV顆粒或病毒載體接觸靶細胞以遞送酬載構築體，例如包括編碼酬載分子之核苷酸之重組病毒構築體。在某些實施例中，本揭示案之AAV顆粒或病毒載體可在包括昆蟲細胞之病毒產生細胞中產生。
培養物中昆蟲細胞之生長條件及在培養物中之昆蟲細胞中產生異源產物為此項技術中所熟知，參見美國專利第6,204,059號，該專利之與病毒產生中昆蟲細胞之生長及使用相關之內容以全文引用之方式併入本文。
可根據本揭示案使用允許小病毒複製且可維持在培養物中之任一昆蟲細胞。常用於產生重組AAV顆粒之AAV病毒產生細胞包括但不限於草地貪夜蛾，包括但不限於Sf9或Sf21細胞株、果蠅( Drosophila)細胞株或蚊子細胞株，諸如亞洲虎蚊( Aedes albopictus)源性細胞株。與將核酸(諸如載體，例如昆蟲細胞相容性載體)引入此類細胞中之方法及將此類細胞維持在培養物中之方法一樣，使用昆蟲細胞來表現異源蛋白已經充分記載。參見例如Methods in Molecular Biology, Richard編輯，Humana Press, NJ (1995)；O'Reilly等人，Baculovirus Expression Vectors, A Laboratory Manual, Oxford Univ. Press (1994)；Samulski等人，J. Vir.63:3822-8 (1989)；Kajigaya等人，Proc. Nat'l. Acad. Sci. USA 88: 4646-50 (1991)；Ruffing等人，J. Vir.66:6922-30 (1992)；Kimbauer等人，Vir.219:37-44 (1996)；Zhao等人，Vir.272:382-93 (2000)；及Samulski等人，美國專利第6,204,059號，該等文獻中每一者之與病毒產生中昆蟲細胞之使用相關之內容以全文引用之方式併入本文。
在一些實施例中，AAV顆粒係使用WO2015/191508中所述之方法產生，該專利之內容在不與本揭示案衝突之範圍內以全文引用之方式併入本文。
在某些實施例中，可使用昆蟲宿主細胞系統與桿狀病毒系統之組合(例如，如Luckow等人，Bio/Technology 6: 47 (1988)所述)。在某些實施例中，用於製備嵌合肽之表現系統係粉夜蛾( Trichoplusia ni), Tn 5B1-4昆蟲細胞/桿狀病毒系統，其可用於高水準之蛋白質，如美國專利第6660521號中所述，該專利之與病毒顆粒之產生相關之內容以全文引用之方式併入本文。
昆蟲細胞之擴增、培養、轉染、感染及儲存可在此項技術中已知之任何細胞培養基、細胞轉染培養基或儲存培養基中實施，包括Hyclone TMSFX-Insect TM細胞培養基、表現系統ESF AF TM昆蟲細胞培養基、ThermoFisher Sf-900II TM培養基、ThermoFisher Sf-900III TM培養基或ThermoFisher Grace昆蟲培養基。本揭示案之昆蟲細胞混合物亦可包括本揭示案中所述之調配物添加劑或元素中之任一者，包括但不限於鹽、酸、鹼、緩衝劑、表面活性劑(諸如泊洛沙姆(Poloxamer) 188/普朗尼克(Pluronic) F-68)及其他已知之培養基元素。調配物添加劑可逐步併入或作為「尖峰」併入(在短時間內併入大體積)。 桿狀病毒產生系統
在某些實施例中，本揭示案之過程可包括在桿狀病毒系統中使用病毒表現構築體及酬載構築體載體產生AAV顆粒或病毒載體。在某些實施例中，桿狀病毒系統包括桿狀病毒表現載體(BEV)及/或桿狀病毒感染之昆蟲細胞(BIIC)。在某些實施例中，本揭示案之病毒表現構築體或酬載構築體可為桿粒，亦稱為桿狀病毒質體或重組桿狀病毒基因體。在某些實施例中，本揭示案之病毒表現構築體或酬載構築體可為藉由熟習此項技術者已知及執行之標準分子生物學技術藉由同源重組(轉位子供體/受體系統)併入桿粒中之多核苷酸。單獨病毒複製細胞群體之轉染產生兩組或更多組(例如兩組、三組)桿狀病毒(BEV)，可包括病毒表現構築體(表現BEV)之一或多組及可包括酬載構築體(酬載BEV)之一或多組。桿狀病毒可用於感染病毒產生細胞以產生AAV顆粒或病毒載體。
在某些實施例中，該過程包括轉染單一病毒複製細胞群體以產生包括病毒表現構築體及酬載構築體二者之單一桿狀病毒(BEV)組。此等桿狀病毒可用於感染病毒產生細胞以產生AAV顆粒或病毒載體。
在某些實施例中，BEV係使用桿粒轉染劑(諸如Promega FuGENE® HD、WFI水或ThermoFisher Cellfectin® II試劑)來產生。在某些實施例中，BEV係在病毒產生細胞(諸如昆蟲細胞)中產生及擴增。
在某些實施例中，該方法利用病毒產生細胞之種子培養物，該等細胞包括一或多種BEV，包括桿狀病毒感染之昆蟲細胞(BIIC)。已用包括病毒表現構築體之表現BEV亦及包括酬載構築體之酬載BEV轉染/轉導/感染種子BIIC。在某些實施例中，收穫種子培養物，分成等份並冷凍，且可在後續時間用於起始產生細胞之幼稚群體之轉染/轉導/感染。在某些實施例中，將種子BIIC庫儲存在-80℃或LN2蒸氣中。
桿狀病毒由桿狀病毒之功能及複製所必需之若干必需蛋白構成，諸如複製蛋白、包膜蛋白及衣殼蛋白。因此，桿狀病毒基因體包括編碼必需蛋白之若干必需基因核苷酸序列。作為非限制性實例，基因體可包括必需基因區域，其包括編碼桿狀病毒構築體之必需蛋白之必需基因核苷酸序列。必需蛋白質可包括：GP64桿狀病毒包膜蛋白、VP39桿狀病毒衣殼蛋白或桿狀病毒構築體之其他類似必需蛋白。
在昆蟲細胞(包括但不限於草地貪夜蛾(Sf9)細胞)中產生AAV顆粒之桿狀病毒表現載體(BEV)提供高效價之病毒載體產物。編碼病毒表現構築體及酬載構築體之重組桿狀病毒起始病毒載體複製細胞之生產性感染。自初次感染釋放之感染性桿狀病毒顆粒會再次感染培養物中之額外細胞，從而在多個感染週期中以指數方式感染整個細胞培養物群體，其係初始感染複數之函數，參見Urabe, M.等人，J Virol. 2006年2月;80(4):1874-85，該文獻之與BEV及病毒顆粒之產生及使用相關之內容以全文引用之方式併入本文。
在昆蟲細胞系統中用桿狀病毒產生AAV顆粒可解決已知之桿狀病毒遺傳及物理不穩定性。
在某些實施例中，本揭示案之產生系統藉由利用無效價之感染細胞保存及放大系統解決桿狀病毒在多次傳代中之不穩定性。用編碼AAV顆粒之結構及/或非結構組分之病毒表現構築體轉染病毒產生細胞之小規模種子培養物。將桿狀病毒感染之病毒產生細胞收穫成可在液氮中冷凍保存之等份試樣；等份試樣保留感染大規模病毒產生細胞培養物之活力及感染力。Wasilko DJ等人，Protein Expr Purif. 2009年6月;65(2):122-32，該文獻之與BEV及病毒顆粒之產生及使用相關之內容以全文引用之方式併入本文。
可使用遺傳穩定之桿狀病毒來產生用於在脊椎動物細胞中產生AAV顆粒之一或多種組分之來源。在某些實施例中，缺陷型桿狀病毒表現載體可以游離方式維持在昆蟲細胞中。在此類實施例中，對應桿粒載體經改造具有複製控制元件，包括但不限於啟動子、增強子及/或細胞週期調控之複製元件。
在某些實施例中，允許桿狀病毒感染之穩定病毒產生細胞經改造具有AAV複製及載體產生所需之任一元件之至少一個穩定整合之拷貝，該等元件包括但不限於整個AAV基因體、Rep及Cap基因、Rep基因、Cap基因、作為單獨轉錄盒之各Rep蛋白、作為單獨轉錄盒之各VP蛋白、AAP (組裝活化蛋白)或具有天然或非天然啟動子之至少一種桿狀病毒輔助基因。
在一些實施例中，本揭示案之AAV顆粒可在昆蟲細胞(例如Sf9細胞)中產生。
在一些實施例中，本揭示案之AAV顆粒可使用三重轉染產生。
在一些實施例中，本揭示案之AAV顆粒可在哺乳動物細胞中產生。
在一些實施例中，本揭示案之AAV顆粒可藉由三重轉染在哺乳動物細胞中產生。
在一些實施例中，本揭示案之AAV顆粒可藉由三重轉染在HEK293細胞中產生。
編碼本文所述之SOD1靶向siRNA之AAV病毒基因體可用於人類疾病、獸醫應用及多種活體內及活體外背景領域。本揭示案之AAV顆粒可適用於治療、預防、減緩或改善神經或神經肌肉疾病及/或病症之醫學領域。在一些實施例中，本揭示案之AAV顆粒用於預防及/或治療SOD1相關病症。
本文之揭示內容之多個實施例提供一種醫藥組成物，其包含本文所述之AAV顆粒及醫藥學上可接受之賦形劑。
本文之揭示內容之多個實施例提供一種治療有需要之個體的方法，其包含向個體投與治療有效量之本文所述之醫藥組成物。
該方法之某些實施例表明，個體藉由選自由以下組成之群的醫藥組成物投與途徑來治療：靜脈內、腦室內、實質內、鞘內、軟膜下及肌肉內、或其組合。該方法之某些實施例表明，個體針對SOD1相關病症來進行治療。在該方法之一態樣中，SOD1相關病症之病理特徵得以減輕及/或SOD1相關病症之進展得以停止、減緩、改善或逆轉。
本文之揭示內容之多個實施例描述一種增加有需要之個體之中樞神經系統中的SOD1靶向siRNA水準的方法，其包含經由輸注向該個體投與有效量之本文所述之醫藥組成物。
本文亦描述用於設計、製備、製造及/或調配AAV顆粒之組成物、方法、過程、套組及裝置。在一些實施例中，酬載(諸如但不限於包含SOD1靶向siRNA之酬載)可由酬載構築體編碼或包含於質體或載體或重組腺相關病毒(AAV)內。
本揭示案亦提供用於治療或改善SOD1相關病症之載體及病毒顆粒(例如，AAV顆粒)之投與及/或遞送方法。此類方法可涉及基因替換或基因活化。此類結果係藉由利用本文所教示之方法及組成物來達成。 IV. 引 入細胞中
為確保siRNA雙鏈體之化學及生物穩定性，將編碼siRNA之多核苷酸遞送至靶細胞內部非常重要。可使用多種方法中之任一者將本揭示案之多核苷酸引入細胞中。
在一些實施例中，藉由使細胞與多核苷酸接觸將本揭示案之多核苷酸引入細胞中。在一些實施例中，藉由使細胞與包含多核苷酸及親脂性載劑之組成物接觸將多核苷酸引入細胞中。在其他實施例中，藉由用包含核酸序列之載體轉染或感染細胞將多核苷酸引入細胞中，該等核酸序列在細胞中轉錄時能夠產生siRNA雙鏈體。
在一些實施例中，藉由將包含核酸序列之載體注射至細胞中將siRNA雙鏈體引入細胞中，該等核酸序列在細胞中轉錄時能夠產生siRNA雙鏈體。
在其他實施例中，可藉由電穿孔將本揭示案之多核苷酸遞送至細胞中(例如美國專利公開案第20050014264號；該公開案之內容以全文引用之方式併入本文)。
另外，可藉由病毒感染將插入病毒載體(例如AAV載體)中之siRNA分子遞送至細胞中。此等病毒載體經改造及最佳化以促進siRNA分子進入不易於轉染之細胞中。另外，一些合成病毒載體具有將shRNA整合至細胞基因體中之能力，由此導致穩定的siRNA表現及長期的靶基因敲低。以此方式，將病毒載體改造為用於特異性遞送、同時缺少在野生型病毒中發現之有害複製及/或整合特徵之媒劑。
在一些實施例中，細胞可包括但不限於哺乳動物起源之細胞、人類起源之細胞、胚胎幹細胞、誘導多能幹細胞、神經幹細胞及神經前驅細胞。 V. 醫 藥組成物及調配物
本揭示案另外提供治療哺乳動物個體(包括人類個體)之SOD1相關病症及與SOD1之功能或表現缺陷相關之病症的方法，其包含投與個體本文所述之AAV多核苷酸或AAV基因體中之任一者(亦即「載體基因體」、「病毒基因體」或「VG」)，或投與個體包含該AAV多核苷酸或AAV基因體之AAV顆粒，或投與個體任一所述之組成物，包括醫藥組成物。
如本文所用，術語「組成物」包含AAV多核苷酸或AAV基因體或AAV顆粒及至少一種賦形劑。
如本文所用，術語「醫藥組成物」包含AAV多核苷酸或AAV基因體或AAV顆粒及一或多種醫藥學上可接受之賦形劑。
儘管本文所提供之醫藥組成物(例如包含編碼欲遞送之SOD1靶向siRNA之酬載之AAV)之描述主要針對適於投與人類之醫藥組成物，但熟習此項技術者應理解，此類組成物通常適於投與任何其他動物，例如非人類動物，例如非人類哺乳動物。為使適於投與人類之醫藥組成物適於投與各種動物而對該等組成物進行之修飾為此項技術中所熟知，且普通熟練獸醫藥理學家可僅用普通(若有)實驗設計及/或執行此種修飾。考慮投與醫藥組成物之個體包括但不限於人類及/或其他靈長類動物；哺乳動物，包括商業上相關之哺乳動物，例如牛、豬、馬、綿羊、貓、狗、小鼠及/或大鼠；及/或鳥，包括商業上相關之鳥，諸如家禽、雞、鴨、鵝及/或火雞。
在一些實施例中，將組成物投與人類、人類患者或個體。
在一些實施例中，本文所述之AAV顆粒調配物可含有編碼至少一種酬載之核酸。在一些實施例中，調配物可含有編碼1種、2種、3種、4種或5種酬載之核酸。在一些實施例中，調配物可含有編碼選自諸如但不限於以下類別之酬載構築體編碼蛋白之核酸：人類蛋白、家畜蛋白、細菌蛋白、生物蛋白、抗體、免疫原性蛋白、治療肽及蛋白、分泌蛋白、質膜蛋白、細胞質蛋白、細胞骨架蛋白、細胞內膜結合蛋白、核蛋白、與人類疾病相關之蛋白及/或與非人類疾病相關之蛋白。在一些實施例中，調配物含有至少三種酬載構築體編碼蛋白。某些實施例提供，至少一種酬載係本文所述之SOD1靶向多核苷酸(例如SOD1靶向RNAi，例如用於抑制SOD1表現之siRNA雙鏈體)或其變異體。
根據本揭示案之醫藥組成物可整體、作為單一單位劑量及/或作為複數個單一單位劑量來製備、包裝及/或出售。如本文所用之「單位劑量」係指包含預定量之活性成分之醫藥組成物之離散量。活性成分之量通常等於將投與個體之活性成分之劑量及/或方便分數之此一劑量，諸如例如此一劑量之一半或三分之一。 VI. 調 配物
本文所述之AAV醫藥組成物之調配物可藉由藥理學技術中已知或後來開發出之任一方法製備。一般而言，此類製備方法包括以下步驟：使活性成分與賦形劑及/或一或多種其他輔助成分締合，且然後若必要及/或需要，將產物分成、成型及/或包裝成所需單劑量或多劑量單位。
本揭示案之醫藥組成物中活性成分、醫藥學上可接受之賦形劑及/或任何額外成分之相對量將端視所治療個體之身份、大小及/或疾患且進一步視欲投與組成物之途徑而變化。
舉例而言，組成物可包含介於0.1%與99% (w/w)之間的活性成分。舉例而言，組成物可包含介於0.1%與100%之間，例如介於0.5%與50%之間、介於1%-30%之間、介於5%-80%之間或至少80% (w/w)之活性成分。
在一些實施例中，本文所述之調配物可含有至少一種SOD1靶向多核苷酸(例如SOD1靶向RNAi，例如用於抑制SOD1表現之siRNA雙鏈體)。作為非限制性實例，調配物可含有靶向SOD1基因之不同位點之1種、2種、3種、4種或5種多核苷酸。
本揭示案之AAV顆粒可使用一或多種賦形劑來調配以：(1)增加穩定性；(2)增加細胞轉染或轉導；(3)允許持續或延遲釋放；(4)改變生物分佈(例如，使病毒顆粒靶向特定組織或細胞類型)；(5)增加活體內經編碼蛋白質之轉譯；(6)改變活體內經編碼蛋白質之釋放概況，及/或(7)允許酬載之可調控表現。
本揭示案之調配物可包括但不限於鹽水、類脂質、脂質體、脂質奈米顆粒、聚合物、脂質體複合物、核心-外殼奈米顆粒、肽、蛋白質、經病毒載體轉染之細胞(例如，用於移植至個體中)、奈米顆粒模擬物及其組合。此外，本揭示案之病毒載體可使用自組裝核酸奈米顆粒調配。
在一些實施例中，編碼SOD1靶向多核苷酸之病毒載體可經調配以最佳化比重比及/或滲透壓。在一些實施例中，調配物之比重比及/或滲透壓可經最佳化以確保中樞神經系統或中樞神經系統之區域或組分中之最佳藥物分佈。
在一些實施例中，本揭示案之AAV顆粒可調配於pH為約7.0之含有0.001%普朗尼克酸(F-68)之PBS中。
在一些實施例中，本揭示案之AAV顆粒可與氧化乙烯/氧化丙烯共聚物(亦稱為普朗尼克或泊洛沙姆)組合調配於PBS中。
在一些實施例中，本揭示案之AAV顆粒可調配於pH為約7.0之含有0.001%普朗尼克酸(F-68) (泊洛沙姆188)之PBS中。
在一些實施例中，本揭示案之AAV顆粒可調配於pH為約7.3之含有0.001%普朗尼克酸(F-68) (泊洛沙姆188)之PBS中。
在一些實施例中，本揭示案之AAV顆粒可調配於pH為約7.4之含有0.001%普朗尼克酸(F-68) (泊洛沙姆188)之PBS中。
在一些實施例中，本揭示案之AAV顆粒可調配於包含氯化鈉、磷酸鈉及氧化乙烯/氧化丙烯共聚物之溶液中。
在一些實施例中，本揭示案之AAV顆粒可調配於包含氯化鈉、磷酸氫二鈉、氯化鉀、磷酸二氫鉀及泊洛沙姆188/普朗尼克酸(F-68)之溶液中。
在一些實施例中，本揭示案之AAV顆粒可調配於pH 7.4之包含192 mM氯化鈉、10 mM磷酸鈉(二元)、2.7 mM氯化鉀、2 mM磷酸鉀(一元)及0.001%普朗尼克F-68 (v/v)之溶液中。此調配物在本揭示案中稱為調配物1。
在一些實施例中，本揭示案之AAV顆粒可調配於pH為約7.3之包含約192 mM氯化鈉、約10 mM磷酸氫二鈉及約0.001%泊洛沙姆188之溶液中。最終溶液中氯化鈉之濃度可為150 mM-200 mM。作為非限制性實例，最終溶液中氯化鈉之濃度可為150 mM、160 mM、170 mM、180 mM、190 mM或200 mM。最終溶液中磷酸氫二鈉之濃度可為1 mM-50 mM。作為非限制性實例，最終溶液中磷酸氫二鈉之濃度可為1 mM、2 mM、3 mM、4 mM、5 mM、6 mM、7 mM、8 mM、9 mM、10 mM、15 mM、20 mM、25 mM、30 mM、40 mM或50 mM。泊洛沙姆188 (普朗尼克酸(F-68))之濃度可為0.0001%-1%。作為非限制性實例，泊洛沙姆188 (普朗尼克酸(F-68))之濃度可為0.0001%、0.0005%、0.001%、0.005%、0.01%、0.05%、0.1%、0.5%或1%。最終溶液可具有6.8-7.7之pH。最終溶液之pH之非限制性實例包括6.8、6.9、7.0、7.1、7.2、7.3、7.4、7.5、7.6或7.7之pH。
在一些實施例中，本揭示案之AAV顆粒可調配於pH為約7.4之包含約1.05%氯化鈉、約0.212%磷酸氫二鈉七水合物、約0.025%磷酸二氫鈉單水合物及0.001%泊洛沙姆188之溶液中。作為非限制性實例，此調配溶液中AAV顆粒之濃度可為約0.001%。最終溶液中氯化鈉之濃度可為0.1-2.0%，且非限制性實例為0.1%、0.25%、0.5%、0.75%、0.95%、0.96%、0.97%、0.98%、0.99%、1.00%、1.01%、1.02%、1.03%、1.04%、1.05%、1.06%、1.07%、1.08%、1.09%、1.10%、1.25%、1.5%、1.75%、或2%。最終溶液中磷酸氫二鈉之濃度可為0.100-0.300%，且非限制性實例包括0.100%、0.125%、0.150%、0.175%、0.200%、0.210%、0.211%、0.212%、0.213%、0.214%、0.215%、0.225%、0.250%、0.275%、0.300%。最終溶液中磷酸二氫鈉之濃度可為0.010-0.050%，且非限制性實例為0.010%、0.015%、0.020%、0.021%、0.022%、0.023%、0.024%、0.025%、0.026%、0.027%、0.028%、0.029%、0.030%、0.035%、0.040%、0.045%或0.050%。泊洛沙姆188 (普朗尼克酸(F-68))之濃度可為0.0001%-1%。作為非限制性實例，泊洛沙姆188 (普朗尼克酸(F-68))之濃度可為0.0001%、0.0005%、0.001%、0.005%、0.01%、0.05%、0.1%、0.5%或1%。最終溶液可具有6.8-7.7之pH。最終溶液之pH之非限制性實例包括6.8、6.9、7.0、7.1、7.2、7.3、7.4、7.5、7.6或7.7之pH。 賦形劑
本揭示案之調配物可包括一或多種賦形劑，其各自之量共同增加AAV顆粒之穩定性、增加病毒顆粒對細胞之轉染或轉導、增加病毒顆粒編碼蛋白之表現及/或改變AAV顆粒編碼蛋白之釋放概況。在一些實施例中，醫藥學上可接受之賦形劑可為至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%純。在一些實施例中，賦形劑經核准用於人類及獸醫用途。在一些實施例中，賦形劑可由美國食品藥品管理局(United States Food and Drug Administration)核准。在一些實施例中，賦形劑可為藥品級。在一些實施例中，賦形劑可滿足美國藥典(United States Pharmacopoeia，USP)、歐洲藥典(European Pharmacopoeia，EP)、英國藥典(British Pharmacopoeia)及/或國際藥典之標準。
如本文所用之賦形劑包括但不限於如適於所需具體劑量形式之任何及所有溶劑、分散介質、稀釋劑或其他液體媒劑、分散或懸浮助劑、表面活性劑、等滲劑、增稠或乳化劑、防腐劑及諸如此類。用於調配醫藥組成物之各種賦形劑及製備該組成物之技術為此項技術中已知(參見Remington: The Science and Practice of Pharmacy,第21版, A. R. Gennaro, Lippincott, Williams & Wilkins, Baltimore, MD, 2006；該文獻之內容以全文引用之方式併入本文)。習用賦形劑介質之使用可考慮在本揭示案之範圍內，可能與物質或其衍生物不相容之任何習用賦形劑介質除外，諸如藉由產生任何不需要之生物效應或另外以有害方式與醫藥組成物之任何其他組分相互作用。 無活性成分
在一些實施例中，AAV調配物可包含至少一種賦形劑，其係無活性成分。如本文所用之術語「無活性成分」係指對調配物中所包括之醫藥組成物之活性無貢獻之一或多種劑。在一些實施例中，可用於本揭示案之調配物中之所有、無或一些無活性成分可經美國食品藥品管理局(FDA)核准。
本文所揭示之AAV顆粒之調配物可包括陽離子或陰離子。在一些實施例中，調配物包括金屬陽離子，諸如但不限於Zn 2+、Ca 2+、Cu 2+、Mg +或其組合。在一些實施例中，調配物可包括與金屬陽離子錯合之聚合物或多核苷酸(參見例如美國專利第6,265,389號及第6,555,525號，該等專利中每一者之內容以全文引用之方式併入本文)。 VII. 用 途及應用
本揭示案提供用於將本文所述之SOD1靶向多核苷酸引入細胞中之方法，該方法包含將任一多核苷酸以足以發生靶SOD1 mRNA降解之量引入該等細胞中。在一些態樣中，細胞可為幹細胞、神經元(諸如運動神經元)、肌肉細胞及神經膠質細胞(諸如星狀細胞)。
本文描述用於將AAV顆粒遞送至脊髓以治療與脊髓相關之病症(諸如但不限於運動神經元疾病(例如ALS))之方法。在某些實施例中，此等方法導致跨突觸傳遞。
本文亦揭示用於治療需要治療之個體之與異常SOD1功能相關之ALS的方法。該方法視情況地包含向個體投與治療有效量之組成物，其包含或編碼靶向SOD1基因之至少一種siRNA雙鏈體。該siRNA雙鏈體將沉默SOD1基因表現且抑制SOD1蛋白產生且減輕個體ALS之一或多個症狀，使得在治療上治療ALS。
在某一實施例中，投與個體將減少中樞神經系統(例如腦組織、脊髓及/或運動神經元)中突變體及/或野生型SOD1之表現，及/或突變體及/或野生型SOD1之表現減少將減少個體中ALS之效應。
在某一實施例中，投與係針對處於ALS早期之個體。早期症狀包括但不限於肌肉無力且柔軟或僵硬、緊繃且痙攣、肌肉痙攣及抽搐(肌束震顫)、肌肉體積損失(萎縮)、疲勞、平衡不良、言語含糊、抓握無力及/或行走時絆倒。症狀可限於單個身體區域，或輕度症狀可影響多於一個區域。作為非限制性實例，AAV病毒顆粒之投與可降低ALS症狀之嚴重程度及/或發生。
在某一實施例中，投與係針對處於ALS中期之個體。ALS中期包括但不限於與早期相比更廣泛的肌肉症狀，一些肌肉麻痺，而其他肌肉減弱或不受影響，持續的肌肉抽搐(肌束震顫)，未使用的肌肉可能導致關節攣縮變得僵硬、疼痛且有時變形，吞嚥肌肉無力可導致窒息及進食及唾液管理之更大困難，呼吸肌肉無力可導致呼吸功能不全，該呼吸功能不全在躺下時可尤為明顯，及/或個體可有發作不受控制及不適當的大笑或哭泣(假性延髓情感)。作為非限制性實例，AAV顆粒之投與可降低ALS症狀之嚴重程度及/或發生。
在一個實施例中，投與係針對處於ALS晚期之個體。ALS晚期包括但不限於大部分麻痺之隨意肌，幫助空氣進出肺之肌肉嚴重受損，行動能力極其有限，呼吸不良可能導致疲勞、思維模糊、頭痛及對感染或疾病(例如肺炎)之易感性、言語困難且可能無法經口進食或飲水。
在一些實施例中，AAV顆粒可用於治療具有C9orf72突變、TDP-43突變及/或FUS突變之ALS個體。
在一些實施例中，將本揭示案之SOD1靶向多核苷酸或包含或編碼該等多核苷酸之組成物投與個體之中樞神經系統。在其他實施例中，將本揭示案之siRNA雙鏈體或包含其之組成物投與個體之肌肉。
具體而言，可將SOD1靶向多核苷酸遞送至特定類型之靶向細胞，包括運動神經元；神經膠質細胞，包括寡樹突細胞、星狀細胞及小神經膠質細胞；及/或神經元周圍之其他細胞，諸如T細胞中。人類ALS患者及動物SOD1 ALS模型中之研究表明神經膠質細胞在ALS神經元之功能障礙及死亡中起早期作用。周圍保護性神經膠質細胞中之正常SOD1可防止運動神經元死亡，即使突變體SOD1存在於運動神經元中(例如，Philips及Rothstein, Exp. Neurol., 2014年5月22日. pii: S0014-4886(14)00157-5綜述；其內容以全文引用之方式併入本文)。
在一些特定實施例中，將用作ALS之療法的至少一個靶向SOD1基因之siRNA雙鏈體插入AAV病毒基因體中。
在一些實施例中，本發明組成物係作為用於治療ALS之單一治療劑或組合治療劑來投與。
包含或編碼靶向SOD1基因之siRNA雙鏈體之病毒載體可與一或多種其他治療劑組合使用。「與……組合」不欲暗示劑必須同時投與及/或調配在一起遞送，儘管此等遞送方法在本揭示案之範圍內。組成物可與一或多種其他所需治療劑或醫學程序同時、在其之前或之後投與。一般而言，各劑將以針對該劑確定之劑量及/或時間表投與。
可與本揭示案之SOD1靶向多核苷酸組合使用之治療劑可為小分子化合物，其為抗氧化劑、抗炎劑、抗細胞凋亡劑、鈣調節劑、抗麩胺酸能劑、結構蛋白抑制劑及參與金屬離子調控之化合物。
組合用於治療ALS之化合物可包括但不限於減少氧化應激之劑，諸如自由基清除劑或Radicava (依達拉奉)；抗麩胺酸能劑：利魯唑、托吡酯(Topiramate)、他侖帕奈(Talampanel)、拉莫三嗪(Lamotrigine)、右旋美沙芬(Dextromethorphan)、加巴噴丁(Gabapentin)及AMPA拮抗劑；抗細胞凋亡劑：米諾四環素(Minocycline)、苯基丁酸鈉及阿莫氯莫(Arimoclomol)；抗炎劑：神經節苷脂、塞來昔布(Celecoxib)、環孢素、硫唑嘌呤、環磷醯胺、血漿分離術、乙酸格拉替雷(Glatiramer acetate)及沙利度胺(thalidomide)；頭孢曲松(Ceftriaxone) (Berry等人， Plos One, 2013, 8(4))；β-內醯胺抗生素；普拉克索(Pramipexole) (多巴胺促效劑) (Wang等人， Amyotrophic Parties., 2008, 9(1), 50-58)；美國專利公開案第20060074991號中之尼美舒利(Nimesulide)；美國專利公開案第20130143873號中揭示之二氮嗪；美國專利公開案第20080161378號中揭示之吡唑酮衍生物；抑制氧化應激誘導之細胞死亡之自由基清除劑，諸如溴隱亭(bromocriptine) (美國專利公開案第20110105517號)；PCT專利公開案第2013100571號中論述之胺基甲酸苯酯化合物；美國專利第6,933,310號及第8,399,514號以及美國專利公開案第20110237907號及第20140038927號中揭示之神經保護化合物；及美國專利公開案第20070185012號中教示之糖肽；該等文獻中之每一者之內容以全文引用之方式併入本文。
可與本揭示案之靶向SOD1基因之siRNA雙鏈體一起用於組合療法中的治療劑可為可保護神經元損失之激素或變異體，諸如促腎上腺皮質激素(ACTH)或其片段(例如，美國專利公開案第20130259875號)；雌激素(例如美國專利第6,334,998號及第6,592,845號)；該等文獻中之每一者之內容以全文引用之方式併入本文。
神經營養因子可與本揭示案之靶向SOD1基因之siRNA雙鏈體一起用於組合療法中來治療ALS。通常，神經營養因子定義為促進神經元之存活、生長、分化、增殖及/或成熟，或刺激神經元活性增加之物質。在一些實施例中，本發明方法進一步包含將一或多種營養因子遞送至需要治療之個體中。營養因子可包括但不限於IGF-I、GDNF、BDNF、CTNF、VEGF、Colivelin、紮利羅登(Xaliproden)、促甲狀腺激素釋放激素及ADNF，及其變異體。
在一個態樣中，包含至少一種靶向SOD1基因之siRNA雙鏈體之AAV顆粒可與表現神經營養因子之AAV顆粒，諸如AAV-IGF-I (Vincent等人， Neuromolecular medicine, 2004, 6, 79-85；該文獻之內容以全文引用之方式併入本文)及AAV-GDNF (Wang等人， J Neurosci., 2002, 22, 6920-6928；該文獻之內容以全文引用之方式併入本文)共投與。 VIII. 給 藥及投與 投與
在一些態樣中，本揭示案提供用於預防、治療或改善CNS疾病或病症之載體及病毒顆粒，例如AAV顆粒、SOD1靶向多核苷酸或其變異體的投與及/或遞送方法。舉例而言，投與AAV顆粒預防、治療或改善SOD1相關病症。因此，SOD1靶向siRNA在整個CNS及外周之穩健的廣泛分佈為最大效能所需。用於投與或遞送之特定靶組織包括CNS組織，更具體而言腦組織。
在一些態樣中，本揭示案係關於將用於抑制SOD1表現之外源siRNA雙鏈體遞送至個體之方法，其包含向個體投與有效量之本文所述之醫藥組成物或AAV顆粒，由此將外源siRNA雙鏈體遞送至個體。
在特定實施例中，包括包含至少一種SOD1靶向多核苷酸之AAV顆粒之組成物可以允許其進入中樞神經系統且滲透至運動神經元中之方式投與。
本揭示案之AAV顆粒可藉由產生治療有效結果之任一途徑來投與。
在一些實施例中，投與本揭示案之AAV顆粒以遞送至靶細胞或組織。遞送至靶細胞導致SOD1靶向siRNA表現。靶細胞可為認為需要增加SOD1靶向siRNA表現水準之任何細胞。靶細胞可為CNS細胞。此類細胞及/或組織之非限制性實例包括背根神經節及背柱、本體感受感覺神經元、克拉克氏柱(Clark’s column)、細長核及楔形核、小腦齒狀核、皮質脊髓束及構成其之細胞、Betz細胞及心臟細胞。
在一些實施例中，組成物可以允許其穿過血腦障壁、血管障壁或其他上皮障壁之方式投與。
在一些實施例中，藉由腺相關病毒(AAV)顆粒將SOD1靶向siRNA遞送至中樞神經系統(例如實質)之細胞包含輸注至腦脊液(CSF)中。CSF係由構成位於腦室中之脈絡叢之特殊室管膜細胞產生。在腦內產生之CSF隨後循環且圍繞中樞神經系統，包括腦及脊髓。CSF持續在中樞神經系統(包括腦室及圍繞腦及脊髓二者之蛛膜下腔)周圍循環，同時維持產生及再吸收至血管系統中之穩態平衡。整個體積之CSF大約每天更換四至六次或大約每四小時更換一次，但個體之值可發生變化。
在一些實施例中，AAV顆粒可藉由全身性遞送來遞送。在一些實施例中，全身性遞送可藉由血管內投與來進行。在一些實施例中，全身性遞送可藉由靜脈內(IV)投與來進行。
在一些實施例中，AAV顆粒可藉由靜脈內遞送來遞送。
在一些實施例中，AAV顆粒係經由聚焦超音波(FUS)，例如FUS結合微泡之靜脈內投與(FUS-MB)，或MRI引導之FUS結合靜脈內投與來投與個體，例如如Terstappen等人(Nat Rev Drug Discovery, https://doi.org/10.1038/s41573-021-00139-y (2021))、Burgess等人(Expert Rev Neurother. 15(5): 477-491 (2015))及/或Hsu等人(PLOS One 8(2): 1-8)中所述，該等文獻之內容之全文皆以引用方式併入本文。
在一些實施例中，AAV顆粒可藉由注射至CSF路徑中來遞送。遞送至CSF路徑之非限制性實例包括鞘內及腦室內投與。
在一些實施例中，AAV顆粒可藉由視丘遞送來遞送。
在一些實施例中，AAV顆粒可藉由大腦內遞送來遞送。
在一些實施例中，AAV顆粒可藉由心內遞送來遞送。
在一些實施例中，AAV顆粒可藉由顱內遞送來遞送。(參見例如美國專利第8,119,611號；該專利之內容以全文引用之方式併入本文)。
在一些實施例中，AAV顆粒可藉由大池內(ICM)遞送(亦即，經由顱骨與脊柱頂部之間的開口，在小腦周圍及下方之空間)來遞送。在某些實施例中，本揭示案之醫藥組成物可以治療有效量投與大池以轉導脊髓運動神經元及/或星狀細胞。在一些實施例中，AAV顆粒可經由輸注或注射至大池來遞送。大池之投與可經由濃注注射進行。視症狀之嚴重程度及個體對療法之反應性，可每週一次、每月一次、每兩個月一次、每三個月一次、每6個月一次或每年投與濃注注射。大池之投與可經由導管或套管進行。在其他實施例中，投與係藉由使用輸注幫浦來達成。投與可在至少幾天之時段內連續進行。
在一些實施例中，AAV顆粒可藉由直接(實質內)注射至器官(例如CNS (腦或脊髓))中來遞送。在一些實施例中，實質內遞送可針對腦或CNS之任一區域。在一些實施例中，AAV顆粒可藉由實質內注射至CNS、腦及/或脊髓來投與。作為非限制性實例，本揭示案之AAV顆粒可藉由實質內注射投與個體。在某些實施例中，實質內注射可為脊柱實質內注射，其中可將醫藥組成物直接投與脊髓之組織。在某些實施例中，實質內注射可為CNS (中樞神經系統)實質內注射，其中可將醫藥組成物直接投與CNS之組織。
在一些實施例中，AAV顆粒可藉由實質內注射及鞘內注射來投與。在某些實施例中，本揭示案之醫藥組成物可藉由實質內注射及紋狀體內注射來投與。
在一些實施例中，AAV顆粒可藉由紋狀體內注射來遞送。
在一些實施例中，可將AAV顆粒遞送至殼核中。
在一些實施例中，可將AAV顆粒遞送至脊髓中。
在一些實施例中，可將本揭示案之AAV顆粒投與腦室。
在一些實施例中，可藉由腦室內遞送將本揭示案之AAV顆粒投與腦室。
在一些實施例中，本揭示案之AAV顆粒可藉由肌肉內遞送來投與。Rizvanov等人首次證明靶向突變體人類SOD1 mRNA之siRNA分子由坐骨神經攝取，逆行轉運至運動神經元之核週，且抑制SOD1 G93A基因轉殖ALS小鼠中之突變體SOD1 mRNA (Rizvanov AA等人， Exp. Brain Res., 2009, 195(1), 1-4；該文獻之內容以全文引用之方式併入本文)。另一項研究亦證明，表現針對突變體SOD1基因之小髮夾RNA (shRNA)之AAV的肌肉遞送導致肌肉以及支配運動神經元中之顯著突變體SOD1敲低(Towne C等人， Mol Ther., 2011; 19(2): 274–283；其內容以全文引用之方式併入本文)。
在一些實施例中，表現本揭示案之siRNA雙鏈體之AAV顆粒可藉由外周注射及/或鼻內遞送投與個體。在此項技術中揭示，siRNA雙鏈體之AAV顆粒之周圍投與可轉運至中樞神經系統，例如運動神經元(例如美國專利公開案第20100240739號；及第20100130594號；該等美國專利公開案中之每一者之內容以全文引用之方式併入本文)。
在一些實施例中，本揭示案之AAV顆粒係藉由上文所述之多於一種途徑投與。作為非限制性實例，AAV顆粒可藉由靜脈內遞送及視丘遞送來投與。
在一些實施例中，本揭示案之AAV顆粒係藉由上文所述之多於一種途徑投與。作為非限制性實例，AAV顆粒可藉由靜脈內遞送及大腦內遞送來投與。
在一些實施例中，本揭示案之AAV顆粒係藉由上文所述之多於一種途徑投與。作為非限制性實例，AAV顆粒可藉由靜脈內遞送及顱內遞送來投與。
在一些實施例中，本揭示案之AAV顆粒係藉由上文所述之多於一種途徑投與。在一些實施例中，本揭示案之AAV顆粒可藉由鞘內及腦室內投與來遞送。
在一些實施例中，可將AAV顆粒遞送至個體來保持神經元。神經元可為初級及/或次級感覺神經元。在一些實施例中，將AAV顆粒遞送至背根神經節及/或其神經元。在一些實施例中，將AAV顆粒遞送至運動神經元。
在一些實施例中，可將AAV顆粒遞送至個體來改良及/或校正粒線體功能障礙。
在一些實施例中，AAV顆粒之投與可保持及/或校正感覺路徑之功能。
在一些實施例中，AAV顆粒可經由靜脈內(IV)、腦室內(ICV)、實質內及/或鞘內(IT)輸注來遞送，且治療劑亦可經由肌肉內(IM)肢體輸注遞送至個體以將治療劑遞送至骨骼肌。藉由血管內肢體輸注遞送AAV闡述於Gruntman及Flotte, Human Gene Therapy Clinical Development, 2015, 26(3), 159-164，該文獻之內容以全文引用之方式併入本文。
在一些實施例中，將根據本揭示案之病毒載體醫藥組成物遞送至中樞神經系統(例如實質)之細胞包含由VG/小時= mL/小時* VG/mL定義之遞送速率，其中VG係病毒基因體，VG/mL係組成物濃度，且mL/小時係輸注速率。
在一些實施例中，將根據本揭示案之AAV顆粒醫藥組成物遞送至中樞神經系統(例如，實質)之細胞包含至多1 mL之輸注。在一些實施例中，將根據本揭示案之病毒載體醫藥組成物遞送至中樞神經系統(例如，實質)之細胞可包含0.0001、0.0002、0.001、0.002、0.003、0.004、0.005、0.008、0.010、0.015、0.020、0.025、0.030、0.040、0.050、0.060、0.070、0.080、0.090、0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8或0.9 mL之輸注。
在某些實施例中，本文所述之AAV顆粒經由實質內(IPa)輸注在脊髓之任一水準、在單個或多個部位、以超過1 uL之體積投與。在某些實施例中，投與1 uL-100 uL之體積。
脊髓位於脊柱內。脊椎由一系列椎段組成。有7個頸椎(C1-C7)、12個胸椎(T1-T12)、5個腰椎(L1-L5)及5個薦椎(S1-S5)椎段。將本文所述之AAV顆粒實質內注射或輸注至脊髓中可在此等椎段中之一或多個處進行。舉例而言，本文所述之AAV顆粒實質內注射或輸注至脊髓中可在1個、2個、3個、4個、5個或超過5個部位處進行。實質內注射或輸注部位可在獨立地選自頸脊髓、胸脊髓、腰脊髓及薦脊髓之一或多個區域處。在一些實施例中，本文所述之AAV顆粒經由實質內(IPa)輸注在兩個部位處投與至脊髓中。
在一些實施例中，本文所述之AAV顆粒可經由實質內(IPa)輸注投與至選自以下之一或多個部位(例如，2個、3個、4個或5個部位)：C1、C2、C3、C4、C5、C6及C7。在一些實施例中，本文所述之AAV顆粒可經由實質內(IPa)輸注投與至選自以下之一或多個部位(例如，2個、3個、4個或5個部位)：T1、T2、T3、T4、T5、T6、T7、T8、T9、T10、T11及T12。在一些實施例中，本文所述之AAV顆粒可經由實質內(IPa)輸注投與至選自以下之一或多個部位(例如，2個、3個、4個或5個部位)：L1、L2、L3、L4及L5。在一些實施例中，本文所述之AAV顆粒可經由實質內(IPa)輸注投與至選自以下之一或多個部位(例如，2個、3個、4個或5個部位)：S1、S2、S3、S4及S5。
在一些實施例中，本文所述之AAV顆粒可經由實質內(IPa)輸注在選自以下之一或多個部位(例如，2個、3個、4個或5個部位)處投與：C1、C2、C3、C4、C5、C6、C7、T1、T2、T3、T4、T5、T6、T7、T8、T9、T10、T11、T12、L1、L2、L3、L4、L5、S1、S2、S3、S4、S5。作為非限制性實例，投與係在兩個部位且可包括來自頸脊髓區(例如，C1-C7)之一個部位及來自胸脊髓區(例如，T1-T12)之一個部位。作為非限制性實例，投與係在兩個部位且可包括來自胸脊髓區(例如，T1-T12)之一個部位及來自腰脊髓區(例如，L1-L5)之一個部位。
在某些實施例中，本文所述之編碼siRNA分子之AAV顆粒可經由實質內(IPa)輸注在兩個部位處投與。對於兩個部位，AAV顆粒可以相同或不同體積遞送。對於兩個部位，AAV顆粒可以相同或不同體積遞送。對於兩個部位，AAV顆粒可以相同或不同輸注速率遞送。
在一些實施例中，IPa輸注(例如脊髓)可導致沿著脊髓之頭-尾軸之範圍遞送醫藥組成物(亦即AAV顆粒)。在一些實施例中，IPa輸注(例如脊髓)產生AAV顆粒傳遞之頭尾梯度。在一些實施例中，IPa輸注(例如脊髓)導致將醫藥組成物遞送至注射部位遠端之區域。儘管不希望受理論束縛，但本揭示案之AAV顆粒可在特定位點處之IPa輸注之後行進脊髓之頭尾軸之長度。換言之，AAV顆粒可不限於緊鄰注射部位。作為非限制性實例，AAV顆粒可藉由跨突觸(跨越突觸)機制轉運。此跨突觸機制可遵循沿著脊髓之頭-尾軸存在之管道或通道。與IPa投與相關之其他方法為此項技術中已知，包括例如美國專利申請公開案US20210254103，該專利申請公開案特此以全文引用之方式併入。關於SOD1 siRNA活體外及活體內之效應以及包裝於AAV中之SOD1 siRNA之實質內投與的細節描述於PCT專利申請公開案WO2020010042中，該專利申請公開案特此以全文引用之方式併入，參見例如，第154-175頁。
在一些實施例中，將根據本揭示案之AAV顆粒醫藥組成物遞送至中樞神經系統(例如，實質)之細胞包含約1 mL至約120 mL之間的輸注。在一些實施例中，將根據本揭示案之病毒載體醫藥組成物遞送至中樞神經系統(例如，實質)之細胞可包含0.1、1、1.1、1.2、1.3、1.4、1.5、1.6、1.7、1.8、1.9、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24 、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、64、65、66、67、68、69、70、71、72、73、74、75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99、100、101、102、103、104、105、106、107、108、109、110、111、112、113、114、115、116、117、118、119或120 mL之輸注。在一些實施例中，將AAV顆粒遞送至中樞神經系統(例如，實質)之細胞包含至少3 mL之輸注。在一些實施例中，將AAV顆粒遞送至中樞神經系統(例如，實質)之細胞由3 mL之輸注組成。在一些實施例中，將AAV顆粒遞送至中樞神經系統(例如，實質)之細胞包含至少10 mL之輸注。在一些實施例中，將AAV顆粒遞送至中樞神經系統(例如，實質)之細胞由10 mL之輸注組成。
在一些實施例中，遞送至個體中樞神經系統(例如，實質)之細胞之AAV顆粒醫藥組成物之體積為2 μl、20 μl、50 μl、80 μl、100 μl、200 μl、300 μl、400 μl、500 μl、600 μl、700 μl、800 μl、900 μl、1000 μl、1100 μl、1200 μl、1300 μl、1400 μl、1500 μl、1600 μl、1700 μl、1800 μl、1900 μl、2000 μl，或超過2000 μl。
在一些實施例中，遞送至個體大腦兩個半球中之一個區域之AAV顆粒醫藥組成物之體積為2 μl、20 μl、50 μl、80 μl、100 μl、200 μl、300 μl、400 μl、500 μl、600 μl、700 μl、800 μl、900 μl、1000 μl、1100 μl、1200 μl、1300 μl、1400 μl、1500 μl、1600 μl、1700 μl、1800 μl、1900 μl、2000 μl，或超過2000 μl。
在某些實施例中，根據本揭示案之AAV顆粒或病毒載體醫藥組成物可以約10至約600 μl/部位、約50至約500 μl/部位、約100至約400 μl/部位、約120 μl/部位至約300 μl/部位、約140至約200 μl/部位或約160 μl/部位投與。
在一些實施例中，遞送至個體之總體積可在一或多個投與部位，例如1個、2個、3個、4個、5個或超過5個部位之間分配。在一些實施例中，總體積在向左半球與右半球投與之間分配。 AAV 顆粒之遞送
在一些實施例中，本揭示案之AAV顆粒或醫藥組成物可使用美國專利第8,999,948號或國際公開案第WO2014178863號中所述之治療疾病之方法來投與或遞送，該等專利之內容以全文引用之方式併入本文。
在一些實施例中，本揭示案之AAV顆粒或醫藥組成物可使用如美國申請案第20150126590號中所述之在阿茲海默氏病(Alzheimer’s Disease)或其他神經退化疾患中遞送基因療法之方法來投與或遞送，該申請案之內容以全文引用之方式併入本文。
在一些實施例中，本揭示案之AAV顆粒或醫藥組成物可使用如美國專利第6,436,708號及第8,946,152號以及國際公開案第WO2015168666號中所述之遞送CNS基因療法之方法來投與或遞送，該等專利之內容以全文引用之方式併入本文。
在一些實施例中，本揭示案之AAV顆粒可使用歐洲專利申請案第EP1857552號中所述之遞送AAV病毒體之方法來投與或遞送，該申請案之內容以全文引用之方式併入本文。
在一些實施例中，本揭示案之AAV顆粒或醫藥組成物可使用歐洲專利申請案第EP2678433號中所述之使用AAV顆粒遞送蛋白質之方法來投與或遞送，該申請案之內容以全文引用之方式併入本文。
在一些實施例中，編碼SOD1靶向siRNA之病毒載體可使用美國專利第US 5858351號中所述之使用AAV顆粒遞送DNA分子之方法來投與或遞送，該專利之內容以全文引用之方式併入本文。
在一些實施例中，本揭示案之AAV顆粒或醫藥組成物可使用美國專利第US 6,211,163號中所述之將DNA遞送至血流之方法來投與或遞送，該專利之內容以全文引用之方式併入本文。
在一些實施例中，編碼SOD1靶向siRNA之病毒載體可使用美國專利第US 6325998號中所述之遞送AAV病毒體之方法來投與或遞送，該專利之內容以全文引用之方式併入本文。
在一些實施例中，編碼SOD1靶向siRNA之病毒載體可使用美國專利第US 6335011號中所述之將DNA遞送至肌肉細胞之方法來投與或遞送，該專利之內容以全文引用之方式併入本文。
在一些實施例中，編碼SOD1靶向siRNA之病毒載體可使用美國專利第US 6610290號中所述之將DNA遞送至肌肉細胞及組織之方法來投與或遞送，該專利之內容以全文引用之方式併入本文。
在一些實施例中，編碼SOD1靶向siRNA之病毒載體可使用美國專利第US 7704492號中所述之將DNA遞送至肌肉細胞之方法來投與或遞送，該專利之內容以全文引用之方式併入本文。
在一些實施例中，編碼SOD1靶向siRNA之病毒載體可使用美國專利第US 7112321號中所述之將酬載遞送至骨骼肌之方法來投與或遞送，該專利之內容以全文引用之方式併入本文。
在一些實施例中，本揭示案之AAV顆粒或醫藥組成物可使用美國專利第US 7,588,757號中所述之將酬載遞送至中樞神經系統之方法來投與或遞送，該專利之內容以全文引用之方式併入本文。
在一些實施例中，本揭示案之AAV顆粒或醫藥組成物可使用美國專利第US 8,283,151號中所述之遞送酬載之方法來投與或遞送，該專利之內容以全文引用之方式併入本文。
在一些實施例中，本揭示案之AAV顆粒或醫藥組成物可使用美國專利第US 8318687號中所述之遞送用於治療阿茲海默氏病之酬載之方法來投與或遞送，該專利之內容以全文引用之方式併入本文。
在一些實施例中，本揭示案之AAV顆粒或醫藥組成物可使用國際專利公開案第WO2012144446號中所述之遞送酬載之方法來投與或遞送，該公開案之內容以全文引用之方式併入本文。
在一些實施例中，本揭示案之AAV顆粒或醫藥組成物可使用國際專利公開案第WO2001089583號中所述之使用麩胺酸去羧酶(GAD)遞送載體遞送酬載之方法來投與或遞送，該公開案之內容以全文引用之方式併入本文。
在一些實施例中，本揭示案之AAV顆粒或醫藥組成物可使用國際專利公開案第WO2012057363號中所述之將酬載遞送至神經細胞之方法來投與或遞送，該公開案之內容以全文引用之方式併入本文。
在一些實施例中，本揭示案之AAV顆粒或醫藥組成物可使用國際專利公開案第WO2001096587號中所述之遞送酬載之方法來投與或遞送，該公開案之內容以全文引用之方式併入本文。
在一些實施例中，本揭示案之AAV顆粒或醫藥組成物可使用國際專利公開案第WO2002014487號中所述之將酬載遞送至肌肉組織之方法來投與或遞送，該公開案之內容以全文引用之方式併入本文。
在一些實施例中，導管可用於投與AAV顆粒。在某些實施例中，導管或套管可位於脊柱中之多於一個部位處以進行多部位遞送。病毒顆粒編碼可在連續及/或濃注輸注中遞送。各遞送部位可為不同的給藥方案，或者相同的給藥方案可用於各遞送部位。在一些實施例中，遞送部位可在頸區及腰區中。在一些實施例中，遞送部位可在頸區中。在一些實施例中，遞送部位可在腰區中。
在一些實施例中，可在遞送本文所述之AAV顆粒之前分析個體之脊柱解剖學及病理學。作為非限制性實例，與無脊柱側彎之個體相比，患有脊柱側彎之個體可具有不同給藥方案及/或導管位置。
在一些實施例中，選擇遞送方法及持續時間以在脊髓中提供廣泛轉導。在一些實施例中，鞘內遞送用於沿著脊髓之頭-尾長度提供廣泛轉導。在一些實施例中，多部位輸注沿著脊髓之頭-尾長度提供更均勻之轉導。 遞送至細胞
在一些態樣中，本揭示案提供將任一上述AAV顆粒遞送至細胞或組織之方法，其包含使細胞或組織與該AAV顆粒接觸，或使細胞或組織與包含該AAV顆粒之調配物接觸，或使細胞或組織與任一所述組成物(包括醫藥組成物)接觸。將AAV顆粒遞送至細胞或組織之方法可在活體外、離體或在活體內實現。 遞送至個體
在一些態樣中，本揭示案另外提供將任一上述AAV顆粒遞送至個體(包括哺乳動物個體)之方法，其包含向個體投與該AAV顆粒，或向個體投與包含該AAV顆粒之調配物，或向個體投與任一所述組成物(包括醫藥組成物)。
在一些實施例中，AAV顆粒可經遞送以繞過解剖學阻塞，諸如但不限於血腦障壁。
在一些實施例中，AAV顆粒可藉由與口服遞送相比增加藥物效應之速度之途徑調配及遞送至個體。
在一些實施例中，AAV顆粒可藉由提供脊髓及背根神經節(DRG)之均勻轉導之方法來遞送。在一些實施例中，AAV顆粒可使用鞘內輸注來遞送。
在一些實施例中，可使用濃注輸注向個體投與本文所述之AAV顆粒。如本文所用之「濃注輸注」意謂物質或組成物之單一及快速輸注。
在一些實施例中，編碼SOD1靶向siRNA之AAV顆粒可以連續及/或濃注輸注來遞送。各遞送部位可為不同的給藥方案，或者相同的給藥方案可用於各遞送部位。作為非限制性實例，遞送部位可在頸區及腰區中。作為另一非限制性實例，遞送部位可在頸區中。作為另一非限制性實例，遞送部位可在腰區中。
在一些實施例中，AAV顆粒可經由單一途徑投與遞送至個體。
在一些實施例中，AAV顆粒可經由多部位投與途徑遞送至個體。舉例而言，可在2個、3個、4個、5個或5個以上之部位向個體投與AAV顆粒。
在一些實施例中，可在數分鐘、數小時或數天之時段內使用持續遞送向個體投與本文所述之AAV顆粒。輸注速率可視個體、分佈、調配物或熟習此項技術者已知之另一遞送參數而變化。
在一些實施例中，若使用AAV顆粒之連續遞送(連續輸注)，則連續輸注可持續1小時、2小時、3小時、4小時、5小時、6小時、7小時、8小時、9小時、10小時、11小時、12小時、13小時、14小時、15小時、16小時、17小時、18小時、19小時、20小時、21小時、22小時、23小時、24小時或24小時以上。
在一些實施例中，可在投與之前評價顱內壓。途徑、體積、AAV顆粒濃度、輸注持續時間及/或載體效價可基於個體之顱內壓進行最佳化。
在一些實施例中，AAV顆粒可藉由全身性遞送來遞送。在一些實施例中，全身性遞送可藉由血管內投與來進行。
在一些實施例中，AAV顆粒可藉由注射至CSF路徑中來遞送。遞送至CSF路徑之非限制性實例包括鞘內及腦室內投與。
在一些實施例中，AAV顆粒可藉由直接(實質內)注射至器官之實質(例如腦之一或多個區域)中來遞送。
在一些實施例中，AAV顆粒可藉由軟膜下注射至脊髓中來遞送。舉例而言，可將個體置於脊柱固定設備中。可執行背側椎板切除術以暴露脊髓。導引管及XYZ操縱器可用於輔助導管放置。可藉由使導管自導引管前進而將軟膜下導管置於軟膜下空間中，且可經由導管注射AAV顆粒(Miyanohara等人，Mol Ther Methods Clin Dev. 2016; 3: 16046)。在一些情況下，可將AAV顆粒注射至頸軟膜下空間中。在一些情況下，可將AAV顆粒注射至胸軟膜下空間中。
在一些實施例中，AAV顆粒可藉由直接注射至個體之CNS來遞送。在一些實施例中，直接注射係大腦內注射、實質內注射、鞘內注射、大池內注射或其任一組合。在一些實施例中，直接注射至個體之CNS包含對流增強之遞送(CED)。在一些實施例中，投與包含外周注射。在一些實施例中，外周注射係靜脈內注射。
在一些實施例中，可將AAV顆粒遞送至個體，以與內源水準相比降低尾狀核-殼核、視丘、上丘、皮質及/或胼骶體中之SOD1活性。在一些實施例中，可將AAV顆粒遞送至個體，以與內源水準相比降低運動及感覺顱神經以及皮質、海馬體及杏仁核之神經元中之SOD1活性。與內源水準相比，降低可為0.1×至5×、0.5×至5×、1×至5×、2×至5×、3×至5×、4×至5×、0.1×至4×、0.5×至4×、1×至4×、2×至4×、3×至4×、0.1×至3×、0.5×至3×、1×至3×、2×至3×、0.1×至2×、0.5×至2×、0.1×至1×、0.5×至1×、0.1×至0.5×、1×至2×、0.1×、0.2×、0.3×、0.4×、0.5×、0.6×、0.7×、0.8×、0.9×、1.0×、1.1×、1.2×、1.3×、1.4×、1.5×、1.6×、1.7×、1.8×、1.9×、2.0×、2.1×、2.2×、2.3×、2.4×、2.5×、2.6×、2.7×、2.8×、2.9×、3.0×、3.1×、3.2×、3.3×、3.4×、3.5×、3.6×、3.7×、3.8×、3.9×、4.0×、4.1×、4.2×、4.3×、4.4×、4.5×、4.6×、4.7×、4.8×、4.9×或5×以上。
在一些實施例中，可將AAV顆粒遞送至個體，以藉由轉導尾狀核、殼核、視丘、上丘、皮質及/或胼骶體中之細胞來降低此等CNS區域之SOD1活性水準。在一些實施例中，可將AAV顆粒遞送至個體，以藉由轉導運動及感覺顱神經以及皮質、海馬體及杏仁核之神經元中之細胞來轉導此等CNS區域中之細胞。轉導亦可提及為對SOD1靶向siRNA呈陽性之細胞量。轉導可大於或等於此等CNS區域中之細胞之1%、5%、10%、15%、20%、25%、30%、35%、40%、45%、50%、55%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、95%或99%。
在一些實施例中，將包含編碼本文所述之SOD1靶向siRNA之病毒基因體之AAV顆粒遞送至運動神經元(例如運動神經元或腹角運動神經元)；神經膠質細胞，包括寡樹突細胞、星狀細胞及小神經膠質細胞；及/或圍繞神經元之其他細胞(諸如T細胞)會降低SOD1之活性。SOD1之活性降低可改良此等CNS區域中多種細胞類型之存活及功能且後續改良SOD1相關之病症症狀。
在具體實施例中，可將AAV顆粒遞送至個體，以藉由將AAV顆粒投與個體之視丘來建立SOD1靶向siRNA在整個神經系統中之廣泛分佈。
在一些實施例中，用於治療ALS之本揭示案之組成物係靜脈內、肌肉內、皮下、腹膜內、鞘內、視丘內、實質內(CNS、腦及/或脊髓)及/或室內投與有需要之個體，使得siRNA雙鏈體或包含該等siRNA雙鏈體之載體穿過血腦障壁及血液脊髓障壁中之一或兩者。在一些態樣中，該方法包括直接向個體之中樞神經系統(CNS)投與(例如實質內投與、室內投與及/或鞘內投與) (使用例如輸注幫浦及/或遞送支架)治療有效量之組成物，沉默/阻抑SOD1基因表現，以及減少個體之ALS之一或多種症狀，使得在治療上治療ALS，該組成物包含至少一種靶向SOD1基因之siRNA雙鏈體或包含至少一種靶向SOD1基因之siRNA雙鏈體的AAV顆粒。
在一些實施例中，用於治療ALS之本揭示案之組成物係實質內(CNS、腦及/或脊髓)投與有需要之個體，使得siRNA雙鏈體或包含該等siRNA雙鏈體之載體穿過血腦障壁及血液脊髓障壁中之一或兩者。
在某些態樣中，在所治療之個體中，包括運動神經元退化、肌肉無力、肌肉萎縮、肌肉僵硬、呼吸困難、言語不清、肌束震顫發展、額顳葉失智症及/或過早死亡之ALS之症狀得到改良。在其他態樣中，將本揭示案之組成物應用於腦及脊髓中之一或兩者。在其他態樣中，肌肉協調及肌肉功能中之一者或兩者得到改良。在其他態樣中，個體之存活期延長。 給藥
在一些態樣中，本揭示案提供包含向有需要之個體投與本揭示案之病毒顆粒及其酬載之方法。病毒載體藥物、其成像、診斷或預防組成物可使用有效地預防、治療、診斷疾病、病症及/或疾患(例如與SOD1相關之疾病、病症及/或疾患)或使其成像之任一量及任一投與途徑投與個體。在一些實施例中，疾病、病症及/或疾患係SOD1相關病症。所需之確切量將自個體至個體而變化，此視個體之物種、年齡及一般狀況、疾病之嚴重程度、具體組成物、其投與模式、其活動模式及諸如此類而定。本揭示案之組成物通常係以單位劑量形式調配以便於投與及劑量均勻性。然而，應理解，本揭示案組成物之總日用量可由主治醫師在合理醫學判斷範圍內決定。任一特定患者之具體治療有效劑量水準、預防有效劑量水準或適當成像劑量水準將視多種因素而定，包括所治療之病症及病症之嚴重程度；所採用具體化合物之活性；所採用之具體組成物；患者之年齡、體重、一般健康狀況、性別及飲食；所採用具體肽之投與時間、投與途徑及排泄速率；治療持續時間；與所採用之具體化合物組合或同時使用之藥物；及醫學技術中所熟知之類似因素。
在某些實施例中，本揭示案之AAV顆粒醫藥組成物可以足以每天一或多次遞送以下SOD1靶向siRNA之劑量水準投與：約0.0001 mg/kg至約100 mg/kg、約0.001 mg/kg至約0.05 mg/kg、約0.005 mg/kg至約0.05 mg/kg、約0.001 mg/kg至約0.005 mg/kg、約0.05 mg/kg至約0.5 mg/kg、約0.01 mg/kg至約50 mg/kg、約0.1 mg/kg至約40 mg/kg、約0.5 mg/kg至約30 mg/kg、約0.01 mg/kg至約10 mg/kg、約0.1 mg/kg至約10 mg/kg、或約1 mg/kg至約25 mg/kg個體體重/天，以獲得所需治療、診斷、預防或成像效果。應理解，上述給藥濃度可轉化成每kg之VG或病毒基因體，或轉化成熟習此項技術者投與之總病毒基因體。
在某些實施例中，所需劑量可使用多次投與(例如兩次、三次、四次、五次、六次、七次、八次、九次、十次、十一次、十二次、十三次、十四次或更多次投與)來遞送。當採用多次投與時，可使用分次給藥方案，諸如本文所述之分次給藥方案。如本文所用之「分次劑量」係將單一單位劑量或總日劑量分成兩個或更多個劑量，例如投與兩次或更多次單一單位劑量。如本文所用之「單一單位劑量」係以一個劑量/一次性/單一途徑/單一接觸點投與之任一治療組成物之劑量，亦即單一投與事件。在一些實施例中，單一單位劑量提供為離散劑量形式(例如錠劑、膠囊、貼片、裝載之注射器、小瓶 等)。如本文所用之「總日劑量」係在24小時時段中給予或開處方之量。其可作為單一單位劑量來投與。病毒顆粒可僅調配於緩衝液中或調配於本文所述之調配物中。
本文所述之醫藥組成物可調配成本文所述之劑量形式，諸如外用、鼻內、肺、氣管內或可注射劑量形式(例如靜脈內、眼內、玻璃體內、肌肉內、心內、腹膜內及/或皮下)。
在一些實施例中，本文所述之AAV顆粒之遞送導致最小的因AAV顆粒之遞送而導致的嚴重不良事件(SAE)。
在一些實施例中，將根據本揭示案之AAV顆粒醫藥組成物遞送至中樞神經系統(例如，實質)之細胞可包含約1x10 6VG/mL至約1x10 16VG/mL之間的總濃度。在一些實施例中，遞送可包含約1x10 6、2x10 6、3x10 6、4x10 6、5x10 6、6x10 6、7x10 6、8x10 6、9x10 6、1x10 7、2x10 7、3x10 7、4x10 7、5x10 7、6x10 7、7x10 7、8x10 7、9x10 7、1x10 8、2x10 8、3x10 8、4x10 8、5x10 8、6x10 8、7x10 8、8x10 8、9x10 8、1x10 9、2x10 9、3x10 9、4x10 9、5x10 9、6x10 9、7x10 9、8x10 9、9x10 9、1x10 10、2x10 10、3x10 10、4x10 10、5x10 10、6x10 10、7x10 10、8x10 10、9x10 10、1x10 11、1.6x10 11、1.8x10 11、2x10 11、3x10 11、4x10 11、5x10 11、5.5x10 11、6x10 11、7x10 11、8x10 11、9x10 11、0.8x10 12、0.83x10 12、1x10 12、1.1x10 12、1.2x10 12、1.3x10 12、1.4x10 12、1.5x10 12、1.6x10 12、1.7x10 12、1.8x10 12、1.9x10 12、2x10 12、2.1x10 12、2.2x10 12、2.3x10 12、2.4x10 12、2.5x10 12、2.6x10 12、2.7x10 12、2.8x10 12、2.9x10 12、3x10 12、3.1x10 12、3.2x10 12、3.3x10 12、3.4x10 12、3.5x10 12、3.6x10 12、3.7x10 12、3.8x10 12、3.9x10 12、4x10 12、4.1x10 12、4.2x10 12、4.3x10 12、4.4x10 12、4.5x10 12、4.6x10 12、4.7x10 12、4.8x10 12、4.9x10 12、5x10 12、6x10 12、7x10 12、8x10 12、9x10 12、1x10 13、2x10 13、2.3x10 13、3x10 13、4x10 13、5x10 13、6x10 13、7x10 13、8x10 13、9x10 13、1x10 14、1.9x10 14、2x10 14、3x10 14、4x10 14、5x10 14、6x10 14、7x10 14、8x10 14、9x10 14、1x10 15、2x10 15、3x10 15、4x10 15、5x10 15、6x10 15、7x10 15、8x10 15、9x10 15或1x10 16VG/mL之組成物濃度。
在一些實施例中，將根據本揭示案之AAV顆粒醫藥組成物遞送至中樞神經系統(例如，實質)之細胞可包含每個個體約1x10 6VG/mL至約1x10 16VG/mL之間的總濃度。在一些實施例中，遞送可包含約1x10 6、2x10 6、3x10 6、4x10 6、5x10 6、6x10 6、7x10 6、8x10 6、9x10 6、1x10 7、2x10 7、3x10 7、4x10 7、5x10 7、6x10 7、7x10 7、8x10 7、9x10 7、1x10 8、2x10 8、3x10 8、4x10 8、5x10 8、6x10 8、7x10 8、8x10 8、9x10 8、1x10 9、2x10 9、3x10 9、4x10 9、5x10 9、6x10 9、7x10 9、8x10 9、9x10 9、1x10 10、2x10 10、3x10 10、4x10 10、5x10 10、6x10 10、7x10 10、8x10 10、9x10 10、1x10 11、1.6x10 11、2x10 11、2.1x10 11、2.2x10 11、2.3x10 11、2.4x10 11、2.5x10 11、2.6x10 11、2.7x10 11、2.8x10 11、2.9x10 11、3x10 11、4x10 11、4.6x10 11、5x10 11、6x10 11、7x10 11、7.1x10 11、7.2x10 11、7.3x10 11、7.4x10 11、7.5x10 11、7.6x10 11、7.7x10 11、7.8x10 11、7.9x10 11、8x10 11、9x10 11、1x10 12、1.1 x10 12、1.2x10 12、1.3x10 12、1.4x10 12、1.5x10 12、1.6x10 12、1.7x10 12、1.8x10 12、1.9x10 12、2x10 12、2.3x10 12、3x10 12、4x10 12、4.1x10 12、4.2x10 12、4.3x10 12、4.4x10 12、4.5x10 12,4.6x10 12、4.7x10 12、4.8x10 12、4.9x10 12、5x10 12、6x10 12、7x10 12、8x10 12、8.1x10 12、8.2x10 12、8.3x10 12、8.4x10 12、8.5x10 12、8.6x10 12、8.7x10 12、8.8 x10 12、8.9x10 12、9x10 12、1x10 13、2x10 13、3x10 13、4x10 13、5x10 13、6x10 13、7x10 13、8x10 13、9x10 13、1x10 14、2x10 14、3x10 14、4x10 14、5x10 14、6x10 14、7x10 14、8x10 14、9x10 14、1x10 15、2x10 15、3x10 15、4x10 15、5x10 15、6x10 15、7x10 15、8x10 15、9x10 15或1x10 16VG/個體之組成物濃度。
在一些實施例中，將AAV顆粒遞送至中樞神經系統(例如，實質)之細胞可包含約1x10 6VG至約1x10 16VG之間的總劑量。在一些實施例中，遞送可包含約1 × 10 6、2 × 10 6、3 × 10 6、4 × 10 6、5 × 10 6、6 × 10 6、7 × 10 6、8 × 10 6、9 × 10 6、1 × 10 7、2 × 10 7、3 × 10 7、4 × 10 7、5 × 10 7、6 × 10 7、7 × 10 7、8 × 10 7、9 × 10 7、1 × 10 8、2 × 10 8、3 × 10 8、4 × 10 8、5 × 10 8、6 × 10 8、7 × 10 8、8 × 10 8、9 × 10 8、1 × 10 9、2 × 10 9、3 × 10 9、4 × 10 9、5 × 10 9、6 × 10 9、7 × 10 9、8 × 10 9、9 × 10 9、1 × 10 10、1.9 × 10 10、2 × 10 10、3 × 10 10、3.73 × 10 10、4 × 10 10、5 × 10 10、6 × 10 10、7 × 10 10、8 × 10 10、9 × 10 10、1 × 10 11、2 × 10 11、2.5 × 10 11、3 × 10 11、4 × 10 11、5 × 10 11、6 × 10 11、7 × 10 11、8 × 10 11、9 × 10 11、1 × 10 12、2 × 10 12、3 × 10 12、4 × 10 12、5 × 10 12、6 × 10 12、7 × 10 12、8 × 10 12、9 × 10 12、1 × 10 13、2 × 10 13、3 × 10 13、4 × 10 13、5 × 10 13、6 × 10 13、7 × 10 13、8 × 10 13、9 × 10 13、1 × 10 14、2 × 10 14、3 × 10 14、4 × 10 14、5 × 10 14、6 × 10 14、7 × 10 14、8 × 10 14、9 × 10 14、1 × 10 15、2 × 10 15、3 × 10 15、4 × 10 15、5 × 10 15、6 × 10 15、7 × 10 15、8 × 10 15、9 × 10 15或1 × 10 16VG之總劑量。 裝置
如本文所用之術語「裝置」係指經構築或修改以適合特定目的(諸如，促進醫藥組成物遞送至個體或在個體中偵測所投與之醫藥組成物)之任一物品。
在一些實施例中，裝置可用於實質內注射醫藥組成物。裝置亦可用於將醫藥組成物投與脊髓。
在一些實施例中，裝置可為定制浮動套管。在某些實施例中，使用具有窄直徑之定制輸注套管進行注射。套管可包括固定長度之30號斜針，其連接至可變長度之30號撓性矽橡膠管。遠端可配備有Hamilton魯爾鎖(luer lock)，其進而可連接至微量注射幫浦。近端矽橡膠管可裝在24號剛性外套管內，該外套管位於注射針凸緣之近端上。凸緣使外套管定位且可用作注射針之深度止點。
在某些實施例中，裝置可為脊柱內套管。脊柱內套管可包括近端注射器連接及遠端尖端。近端注射器連接包含母魯爾鎖(female luer lock)注射器連接件，其可連接至具有保護罩之3-20'套管。套管可包括自遠端尖端至注射器之單一內腔。套管可包括遠端尖端附近之4-6"撓性部分。遠端尖端包括凸緣/深度止點及鈍的剛性尖端。脊柱內套管亦可包括連接至個體之機制。
在某些實施例中，裝置可為複雜的立體定位框架。
在某些實施例中，裝置可為簡化的立體定位框架。
在某些實施例中，醫藥組成物可在無框架之情況下遞送。
在某些實施例中，裝置可為磁共振成像儀。此類成像儀在與對比劑(諸如釓)結合使用時可偵測個體中投與之醫藥組成物。
在某些實施例中，本文所述之任一裝置可組合遞送及/或偵測所投與之醫藥組成物。 組合
AAV顆粒可與一或多種其他治療劑、預防劑、診斷劑或成像劑組合使用。片語「與……組合」不欲要求劑必須同時投與及/或調配在一起遞送，儘管此等遞送方法在本揭示案之範圍內。組成物可與一或多種其他所需治療劑或醫學程序同時、在其之前或之後投與。一般而言，各劑將以針對該劑確定之劑量及/或時間表投與。在一些實施例中，本揭示案涵蓋與可改良其生物利用度、降低及/或修飾其代謝、及/或修飾其在身體內之分佈的劑組合之醫藥組成物、預防組成物、診斷組成物或成像組成物之遞送。
治療劑可由美國食品藥品管理局核准或可處於臨床試驗或臨床前研究期。治療劑可利用此項技術中已知之任一治療模式，且非限制性實例包括基因沉默或干擾(亦即miRNA、siRNA、RNAi、shRNA)、基因編輯(亦即TALEN、CRISPR/Cas9系統、鋅指核酸酶)及基因、蛋白質或酶替換。 表現之量測
在一些實施例中，投與進一步包含評價(例如量測)個體中，例如個體之細胞、組織或體液中之SOD1表現，例如SOD1基因、SOD1 mRNA及/或SOD1蛋白表現之水準。可在用AAV顆粒治療之前、期間或之後進行SOD1表現水準之量測。
可使用此項技術中已知之各種方法來確定來自病毒基因體之SOD1靶向siRNA之表現，諸如但不限於免疫化學(例如IHC)、酶聯免疫吸附檢定(ELISA)、親和ELISA、ELISPOT、流式細胞術、免疫細胞學、表面電漿子共振分析、動力學排阻檢定、液相層析-質譜(LCMS)、高效液相層析(HPLC)、BCA檢定、免疫電泳、西方墨點、SDS-PAGE、蛋白質免疫沉澱、PCR及/或原位雜交(ISH)。在一些實施例中，在不同AAV衣殼中遞送之編碼SOD1靶向siRNA之核酸可在不同CNS組織中具有不同表現水準。
在某些實施例中，SOD1靶向siRNA可藉由西方墨點法偵測。 IX. 套 組及裝置 套組
在一些態樣中，本揭示案提供用於方便地及/或有效地實施本揭示案方法之多種套組。通常，套組將包含足夠量及/或數量之組分以允許使用者執行個體之多種治療及/或執行多種實驗。
套組中可包含本揭示案之載體、構築體或SOD1靶向siRNA中之任一者。在一些實施例中，套組可進一步包括用於產生及/或合成本揭示案之化合物及/或組成物之試劑及/或說明書。在一些實施例中，套組亦可包括一或多種緩衝劑。在一些實施例中，本揭示案之套組可包括製造蛋白質或核酸陣列或文庫之組分，且因此可包括例如固體支持物。
在一些實施例中，套組組分可在水性介質中或以凍乾形式包裝。套組之容器構件通常將包括可放置組分且適當等分之至少一個小瓶、試管、燒瓶、瓶子、注射器或其他容器構件。倘若存在一種以上之套組組分(標記試劑及標記可包裝在一起)，則套組亦可通常含有可單獨放置額外組分之第二、第三或其他額外容器。在一些實施例中，套組亦可包含用於容納無菌的醫藥學上可接受之緩衝劑及/或其他稀釋劑之第二容器構件。在一些實施例中，組分之各種組合可包含在一或多個小瓶中。本揭示案之套組亦可通常包括用於容納本揭示案之化合物及/或組成物(例如蛋白質、核酸)之構件，及用於商業銷售之任何其他密閉試劑容器。此類容器可包括保留所需小瓶之注射或吹塑塑膠容器。
在一些實施例中，套組組分係以一種及/或多種液體溶液提供。在一些實施例中，液體溶液係水溶液，尤其使用無菌水溶液。在一些實施例中，套組組分可提供為乾燥粉末。當試劑及/或組分提供為乾燥粉末時，此類粉末可藉由添加適宜體積之溶劑來復原。在一些實施例中，設想溶劑亦可提供在另一容器構件中。在一些實施例中，標記染料提供為乾燥粉末。在一些實施例中，考慮10毫克、20毫克、30毫克、40毫克、50毫克、60毫克、70毫克、80毫克、90毫克、100毫克、120毫克、120毫克、130毫克、140毫克、150毫克、160毫克、170毫克、180毫克、190毫克、200毫克、300毫克、400毫克、500毫克、600毫克、700毫克、800毫克、900毫克、1000毫克或至少或至多彼等量之乾燥染料提供於本揭示案之套組中。在此類實施例中，然後可將染料重懸浮於任一適宜溶劑(諸如DMSO)中。
在一些實施例中，套組可包括採用套組組分以及使用套組中不包括之任何其他試劑的說明書。說明書可包括可實施之變化形式。 裝置
在一些實施例中，本揭示案之化合物及/或組成物可與裝置組合、包被至該裝置上或嵌入該裝置中。裝置可包括但不限於牙植入物、支架、骨替代物、人工關節、瓣膜、起搏器及/或其他可植入治療裝置。
本揭示案提供可併入編碼一或多種SOD1靶向多核苷酸之病毒載體之裝置。此等裝置在穩定調配物中含有可立即遞送至有需要之個體(諸如人類患者)之病毒載體。
根據本文所教示之單次、多次或分開給藥方案，可採用投與裝置來遞送編碼本揭示案之SOD1靶向多核苷酸之病毒載體。
此項技術中已知之用於多次投與細胞、器官及組織之方法及裝置考慮與本文所揭示之方法及組成物結合使用作為本揭示案之實施例。 X. 定 義
在本說明書多處，本揭示案化合物之取代基係以組或範圍揭示。本揭示案特定意欲包括該等組及範圍之成員之每一及每個個別子組合。以下係術語定義之非限制性清單。
諸如「一(a/an)」及「該」之冠詞可能意謂一或多個(種)，除非有相反說明或自上下文中明顯看出。如果一個、多於一個或所有組成員存在於給定產品或過程中、在給定產品或過程中使用或以其他方式與給定產品或過程相關，則認為在一個組之一或多個成員之間包括「或」之技術方案或描述被滿足，除非有相反說明或自上下文中明顯看出。本揭示案包括其中該組中之一個成員恰好存在於給定產品或過程中、在其中使用或以其他方式與給定產品或過程相關之實施例。本揭示案包括其中多於一個或全部組成員存在於給定產品或過程中、在其中使用或以其他方式與給定產品或過程相關之實施例。
腺相關病毒：如本文所用，術語「腺相關病毒」或「AAV」係指依賴病毒屬之成員或其變異體，例如功能變異體。在一些實施例中，AAV係野生型或天然存在的。在一些實施例中，AAV係重組的。
AAV 顆粒：如本文所用，「AAV顆粒」係指包含AAV衣殼(例如AAV衣殼變異體)及多核苷酸(例如病毒基因體或載體基因體)之顆粒或病毒體。在一些實施例中，AAV顆粒之病毒基因體包含至少一個酬載區及至少一個ITR。在一些實施例中，本揭示案之AAV顆粒為包含AAV衣殼多肽，例如具有至少一個肽插入物之親代衣殼序列之AAV顆粒。在一些實施例中，AAV顆粒能夠將編碼酬載之核酸(例如酬載區)遞送至細胞，通常係哺乳動物細胞，例如人類細胞。在一些實施例中，本揭示案之AAV顆粒可重組產生。在一些實施例中，AAV顆粒可源自本文所述或此項技術中已知之任何血清型，包括血清型之組合(例如，「假型」AAV)或來自各種基因體(例如，單股或自互補)。在一些實施例中，AAV顆粒可能係複製缺陷的及/或靶向的。在一些實施例中，AAV顆粒可包含存在於(例如插入)衣殼中以增強對所需靶組織之向性之肽。應理解，提及本揭示案之AAV顆粒亦包括其醫藥組成物，即使沒有明確記載。
改善：如本文所用之術語「改善(amelioration)」或「改善(ameliorating)」係指減輕疾患或疾病之至少一種指標之嚴重程度。舉例而言，在神經退化病症之上下文中，改善包括減少或穩定神經元損失。
反義股：如本文所用，術語siRNA分子之「反義股」或「第一股」或「指導股」係指與靶序列實質上互補的股。在一些實施例中，反義股與經靶向用於沉默之基因之mRNA的約10-50個核苷酸，例如約15-30、16-25、18-23或19-22個核苷酸之部分實質上互補。在一些實施例中，反義股與所需靶mRNA序列充分互補以引導靶標特異性沉默，例如，互補性足以觸發RNAi機製或過程對所需靶mRNA之破壞。
大約 ：如本文所用之術語「大約」或「約」在應用於一或多個所關注值時係指與所述參考值相似之值。當提及可量測值(諸如量、持續時間及諸如此類)時，該術語意欲涵蓋自指定值±20%或在一些情況下±10%或在一些情況下±5%或在一些情況下±1%或在一些情況下±0.1%之變化，此乃因此類變化適於執行所揭示之方法。
衣殼：如本文所用之術語「衣殼」係指病毒顆粒(例如AAV顆粒)之外部，例如蛋白質外殼，其實質上(例如＞50%、＞90%或100%)係蛋白質。在一些實施例中，衣殼係包含本文描述之AAV衣殼蛋白例如VP1、VP2、及/或VP3多肽之AAV衣殼。AAV衣殼蛋白可為野生型AAV衣殼蛋白或變異體，例如野生型或參考衣殼蛋白之結構及/或功能變異體，本文稱為「AAV衣殼變異體」。在一些實施例中，本文所述之AAV衣殼變異體具有包裹，例如囊封病毒基因體之能力及/或能夠進入細胞，例如哺乳動物細胞。在一些實施例中，與野生型AAV衣殼(例如對應野生型衣殼)之向性相比，本文所述之AAV衣殼變異體可具有經修飾之向性 。
囊封：如本文所用之術語「囊封」意指包裹、圍繞或包圍。例如，衣殼蛋白，例如AAV衣殼變異體，通常囊封病毒基因體。在一些實施例中，囊封在衣殼，例如，AAV衣殼變異體內涵蓋藉由衣殼之100%覆蓋度，以及少於100%覆蓋度，例如，95%或更少。舉例而言，只要病毒基因體保留在衣殼中，例如在進入細胞之前，衣殼中即可能存在間隙或中斷。
互補及實質上互補：如本文所用，術語「互補」係指多核苷酸彼此形成鹼基對之能力。鹼基對通常由反平行多核苷酸股中核苷酸單元之間之氫鍵形成。互補之多核苷酸股可以Watson-Crick方式(例如，A與T、A與U、C與G)或以允許形成雙鏈體之任何其他方式形成鹼基對。如本領域技術人員所知，當使用RNA而不是DNA時，認為與腺嘌呤互補之鹼基係尿嘧啶而不是胸腺嘧啶。然而，當在本揭示案之上下文中表示U時，暗示了替代T之能力，除非另有說明。完全互補或100%互補係指一條多核苷酸股之各核苷酸單元可與另一條多核苷酸股之核苷酸單元形成氫鍵之情況。不完全互補係指兩股之一些(但不是全部)核苷酸單元可彼此形成氫鍵之情況。舉例而言，對於兩個20聚體，如果各股上只有兩個鹼基對可彼此形成氫鍵，則多核苷酸股展現出10%之互補性。在同一實例中，如果各股上之18個鹼基對可彼此形成氫鍵，則多核苷酸股展現出90%之互補性。如本文所用，術語「互補」可涵蓋完全互補、部分互補或實質上互補。如本文所用，術語「實質上互補」係指siRNA具有足以結合所需靶mRNA並觸發靶mRNA之RNA沉默之序列(例如，在反義股中)。「完全互補」、「完美互補性」或「100%互補性」係指其中一條多核苷酸或寡核苷酸股之各核苷酸單元可與第二多核苷酸或寡核苷酸股之核苷酸單元鹼基配對之情形。
保守胺基酸取代：如本文所用之「保守胺基酸取代」係其中胺基酸殘基經具有相似側鏈之胺基酸殘基替換之取代。此項技術中已定義具有相似側鏈之胺基酸殘基之家族。此等家族包括具有鹼性側鏈之胺基酸(例如離胺酸、精胺酸、組胺酸)、具有酸性側鏈之胺基酸(例如天冬胺酸、麩胺酸)、具有不帶電極性側鏈之胺基酸(例如甘胺酸、天冬醯胺、麩醯胺酸、絲胺酸、蘇胺酸、酪胺酸、半胱胺酸)、具有非極性側鏈之胺基酸(例如丙胺酸、纈胺酸、白胺酸、異白胺酸、脯胺酸、苯丙胺酸、甲硫胺酸、色胺酸)、具有β-分枝側鏈之胺基酸(例如蘇胺酸、纈胺酸、異白胺酸)及具有芳族側鏈之胺基酸(例如酪胺酸、苯丙胺酸、色胺酸、組胺酸)。
保守：如本文所用之術語「保守」係指分別在所比較之兩條或更多條序列之相同位置未發生變化之多核苷酸序列或多肽序列之核苷酸或胺基酸殘基。相對保守的核苷酸或胺基酸為與在序列中別處出現之核苷酸或胺基酸相比，在更相關序列之間保守之彼等核苷酸或胺基酸。
在某些實施例中，若兩條或更多條序列彼此係100%一致，則稱其係「完全保守的」。在某些實施例中，若兩條或更多條序列彼此係至少70%一致、至少80%一致、至少90%一致或至少95%一致，則稱其係「高度保守的」。在某些實施例中，若兩條或更多條序列彼此係約70%一致、約80%一致、約90%一致、約95%、約98%或約99%一致，則稱其係「高度保守的」。在某些實施例中，若兩條或更多條序列彼此係至少30%一致、至少40%一致、至少50%一致、至少60%一致、至少70%一致、至少80%一致、至少90%一致或至少95%一致，則稱其係「保守的」。在某些實施例中，若兩條或更多條序列彼此係約30%一致、約40%一致、約50%一致、約60%一致、約70%一致、約80%一致、約90%一致、約95%一致、約98%一致或約99%一致，則稱其係「保守的」。序列保守可適用於多核苷酸或多肽之整個長度或可適用於其部分、區域或特徵。
有效量：如本文所用之術語劑之「有效量」係例如在將單一或多個劑量投與個體或細胞時，足以在治癒、減輕、緩解或改良病症之一或多個症狀方面實現有益或所需結果之量，且因此「有效量」視施用其之背景而定。舉例而言，在投與治療肌肉萎縮性脊髓側索硬化症(ALS)及相關病症之劑之背景下，劑之有效量係例如與不投與該劑獲得之反應相比，足以達成如本文所定義之SOD1相關病症的治療之量。
表現：如本文所用之核酸序列之「表現」係指自DNA序列產生RNA模板(例如藉由轉錄)。在一些實施例中，表現進一步包含以下中之一或多者：(1)加工RNA轉錄物(例如，藉由剪接、編輯、5′帽形成及/或3′端加工)；(2)將RNA轉譯成多肽或蛋白質；及(3)多肽或蛋白質之轉譯後修飾。
片段：如本文所用，「片段(fragment)」係指一部分。舉例而言，抗體片段可包含CDR、或重鏈可變區、或scFv等。在一些實施例中，片段為核酸片段。
同源性：如本文所用之術語「同源性」係指聚合物分子之間、例如多核苷酸分子(例如DNA分子及/或RNA分子)之間及/或多肽分子之間的總體相關性。在某些實施例中，若聚合物分子之序列係至少25%、30%、35%、40%、45%、50%、55%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、95%或99%一致或相似，則認為該等聚合物分子彼此「同源」。術語「同源」必要地指至少兩條序列(多核苷酸或多肽序列)之間的比較。根據本揭示案，若兩條多核苷酸序列編碼之多肽的至少約20個胺基酸之至少一段係至少約50%、60%、70%、80%、90%、95%或甚至99%一致，則認為該兩條多核苷酸序列同源。在某些實施例中，同源多核苷酸序列之特徵在於編碼一段至少4-5個唯一指定之胺基酸的能力。對於長度小於60個核苷酸之多核苷酸序列，根據編碼一段至少4-5個唯一指定之胺基酸的能力確定同源性。根據本揭示案，若兩條蛋白質序列之至少約20個胺基酸之至少一段係至少約50%、60%、70%、80%或90%一致，則認為該等蛋白質同源。
一致性：如本文所用之「一致性」係指兩個聚合物分子之間、例如兩個核酸分子(諸如兩個DNA分子或兩個RNA分子)之間或兩個多肽分子之間的次單元序列一致性。當兩個分子中之次單元位置皆經相同之單體次單元佔據時；例如，若兩個DNA分子中每一者之位置經腺嘌呤佔據，則其在該位置係一致的。兩條序列之間的一致性係匹配位置數之直接函數；例如，若兩條序列之一半(例如，長度為十個次單元之聚合物中之五個位置)位置係一致的，則該兩條序列係50%一致的；若90%之位置(例如10個中之9個)相匹配，則該兩條序列係90%一致的。例如，兩條多核苷酸序列之一致性百分比之計算可出於最佳比較之目的藉由比對兩條序列來執行(例如，可在第一及第二核酸序列中之一者或兩者中引入空位用於最佳比對，且可出於比較目的忽略不一致之序列)。在某些實施例中，經比對用於比較目的之序列長度係參考序列長度之至少30%、至少40%、至少50%、至少60%、至少70%、至少80%、至少90%、至少95%或100%。然後比較對應核苷酸位置之核苷酸。當第一序列中之一個位置被與第二序列中對應位置相同之核苷酸佔據時，則分子在該位置係一致的。考慮到為了最佳比對兩個序列而需要引入之空位數量及各空位之長度，兩個序列之間之一致性百分比係序列共享之一致位置之數量的函數。可使用數學演算法完成序列之比較及兩個序列之間一致性百分比之確定。舉例而言，兩個核苷酸序列之間之一致性百分比可使用諸如以下描述之方法來確定：Computational Molecular Biology ,Lesk, A. M.編, Oxford University Press, New York, 1988; Biocomputing: Informatics and Genome Projects, Smith, D. W.編, Academic Press, New York, 1993；Sequence Analysis in Molecular Biology ,von Heinje, G., Academic Press, 1987；Computer Analysis of Sequence Data, Part I, Griffin, A. M.及Griffin, H. G.編, Humana Press, New Jersey, 1994；及Sequence Analysis Primer, Gribskov, M.及Devereux, J.編, M Stockton Press, New York, 1991；其中每一個之內容以全文引用之方式併入本文。舉例而言，兩個核苷酸序列之間之一致性百分比可使用Meyers及Miller之演算法(CABIOS, 1989, 4:11-17)確定，它已併入ALIGN程式(2.0版)，使用PAM120權重殘基表，空位長度罰分為12，空位罰分為4。或者，可使用GCG套裝軟體中之GAP程式，使用NWSgapdna.CMP矩陣，確定兩個核苷酸序列之間之一致性百分比。通常用於確定序列之間一致性百分比之方法包括但不限於Carillo, H.及Lipman, D., SIAM J Applied Math., 48:1073 (1988)揭示之方法；以引用方式併入本文。確定一致性之技術被編入公開可用之電腦程式中。確定兩個序列之間同源性之示範性電腦軟體包括但不限於GCG套裝程式(Devereux, J.等人， Nucleic Acids Research, 12(1), 387 (1984))、BLASTP、BLASTN及FASTA (Altschul, S. F.等人， J. Molec. Biol., 215, 403 (1990))。
抑制基因之表現：如本文所用之片語「抑制基因之表現」意指使基因之表現產物之量減少。表現產物可為自基因轉錄之RNA (例如mRNA)或自基因轉錄之mRNA轉譯之多肽。通常，mRNA水準之降低導致自其轉譯之多肽水準之降低。表現水準可使用用於量測mRNA或蛋白質之標準技術來確定。
分離的：如本文所用，術語「分離的」係指自天然狀態改變或移除，例如自與它在天然狀態相關聯之至少一些組分改變或移除之物質或實體。舉例而言，活體動物中天然存在之核酸或肽不係「分離的」，但與其天然狀態之共存材料部分或完全分離之相同核酸或肽係「分離的」。分離之核酸或蛋白質可以實質上純化之形式存在，或者可存在於非天然環境中，諸如例如宿主細胞。此等多核苷酸可為載體之一部分及/或此等多核苷酸或多肽可為組成物之一部分，且仍然係分離的，因為此等載體或組成物不是在自然界中發現它之環境之一部分。在一些實施例中，分離之核酸係重組的，例如併入載體中。
miR 結合位點系列：如本文所用，「miR結合位點」包含例如藉由完全或部分雜交，全部或部分能夠結合或結合微小RNA (miR)之核酸序列(無論RNA抑或DNA，例如，不同之處在於RNA之「U」或DNA中之「T」)。通常，此結合以反向互補取向發生在miR與miR結合位點之間。在一些實施例中，miR結合位點自編碼miR結合位點之AAV病毒基因體轉錄。
在一些實施例中，miR結合位點可經連續編碼或轉錄。此「miR結合位點系列」或「miR BS」可包括兩個或更多個具有相同或不同核酸序列之miR結合位點。
調節多核苷酸：如本文所用之「調節多核苷酸」係用於調節(增加或降低)靶基因表現、轉錄物表現及/或蛋白質產生之水準或量之任何核酸序列。
變異體：術語「變異體」係指具有與參考序列實質上一致(例如，具有至少70%、75%、80%、85%、90%、95%或99%序列一致性)之胺基酸或核苷酸序列之多肽或多核苷酸。在一些實施例中，變異體係功能變異體。
功能變異體：術語「功能變異體」係指具有參考序列之至少一種活性之多肽變異體或多核苷酸變異體。
插入變異體：當提及多肽時，「插入變異體」係具有一或多個胺基酸與胺基酸序列中之位置例如緊鄰或緊接其後插入的多肽。與胺基酸「緊鄰」或「緊接其後」係指與胺基酸之α-羧基或α-胺基官能基連接。
核酸：如本文所用，術語「核酸」、「核酸分子」、「多核苷酸」或「多核苷酸分子」係指呈單股或雙股形式之去氧核糖核酸(DNA)或核糖核酸(RNA)及其聚合物。除非特定限制，否則該術語涵蓋含有已知天然核苷酸類似物之核酸，該等類似物具有與參考核酸相似之結合性質且以與天然核苷酸相似之方式代謝。在一些實施例中，「核酸」、「核酸分子」、「多核苷酸」或「多核苷酸分子」包含核苷酸/核苷衍生物或類似物。除非另有指示，否則特定核酸序列亦含蓄地涵蓋其經保守修飾之變異體(例如簡併密碼子取代，例如保守取代)、對偶基因、異種同源物、SNP及互補序列以及明確指示之序列。特定而言，簡併密碼子取代(例如保守取代)可藉由生成以下序列來達成：一或多個所選(或所有)密碼子之第三位置經混合鹼基及/或去氧肌苷殘基取代(Batzer等人，Nucleic Acid Res.19:5081 (1991)；Ohtsuka等人，J. Biol. Chem. 260:2605-2608 (1985)；及Rossolini等人，Mol. Cell. Probes 8:91-98 (1994))。
酬載區：如本文所用，「酬載區」為編碼本揭示案之一或多個「酬載」之任何核酸序列(例如，在病毒基因體內)。作為非限制性實例，酬載區可為AAV顆粒之病毒基因體內之核酸序列，其編碼酬載，其中酬載係RNAi劑或多肽。本揭示案之酬載可為(但不限於)肽、多肽、蛋白質、抗體、RNAi劑等。
醫藥學上可接受：本文使用之片語「醫藥學上可接受」係指適用於與人類及動物之組織接觸的彼等化合物、材料、組成物及/或劑型。
多肽：如本文所用，「多肽」係指最常藉由肽鍵連接在一起之胺基酸殘基(天然或非天然)之聚合物。如本文所用，該術語係指任何大小、結構或功能之蛋白質、多肽及肽。在一些情況下，經編碼之多肽小於約50個胺基酸，則將該多肽稱為肽。如果多肽係肽，它將係至少約2、3、4個或至少5個胺基酸殘基長。因此，多肽包括基因產物、天然存在之多肽、合成多肽、同源物、異種同源物、同種同源物、片段及前述之其他等效物、變異體及類似物。多肽可為單分子或可為多分子複合物，諸如二聚體、三聚體或四聚體。它們亦可包含單鏈或多鏈多肽，並且可為締合的或連接的。術語多肽亦可適用於胺基酸聚合物，其中一或多個胺基酸殘基係對應天然存在之胺基酸之人工化學類似物。
多肽變異體：術語「多肽變異體」係指其胺基酸序列與天然或參考序列不同之分子。與天然或參考序列相比，胺基酸序列變異體可能在胺基酸序列中某些位置具有取代、缺失及/或插入。在一些實施例中，變異體包含與天然或參考序列至少約50%、至少約80%或至少約90%一致(同源)的序列。
肽：如本文所用，「肽」長度小於或等於50個胺基酸，例如，約5、10、15、20、25、30、35、40、45或50個胺基酸長。
預防：如本文所用，術語「預防(preventing)」係指部分或完全延遲感染、疾病、病症及/或疾患之發作；部分或完全延遲特定感染、疾病、病症及/或疾患之一或多種症狀、特徵或臨床表現之發作；部分或完全延遲特定感染、疾病、病症及/或疾患之一或多種症狀、特徵或表現之發作；部分或完全延遲感染、特定疾病、病症及/或疾患之進展；及/或降低發展出與感染、疾病、病症及/或疾患相關之病變之風險。
區域：如本文所用，術語「區域」係指地帶或一般區域。在一些實施例中，當提及蛋白質或蛋白質模塊時，區域可包含沿著蛋白質或蛋白質模塊之線性胺基酸序列或可包含三維區域、表位及/或表位簇。在一些實施例中，區域包含末端區域。如本文所用，術語「末端區域」係指位於給定劑之終端或末端之區域。當提及蛋白質時，末端區域可以包含N末端及/或C末端。
在一些實施例中，當提及多核苷酸時，區域可包含沿著多核苷酸之線性核酸序列或可包含三維區域、二級結構或三級結構。在一些實施例中，區域包含末端區域。如本文所用，術語「末端區域」係指位於給定劑之終端或末端之區域。當提及多核苷酸時，末端區域可以包含5'末端及/或3'末端。
RNA 或RNA分子：如本文所用，術語「RNA」或「RNA分子」或「核糖核酸分子」係指核糖核苷酸之聚合物；術語「DNA」或「DNA分子」或「去氧核糖核酸分子」係指去氧核糖核苷酸之聚合物。DNA及RNA可天然合成，例如分別藉由DNA複製及DNA轉錄；或化學合成。DNA及RNA可為單股的(亦即分別為ssRNA或ssDNA)或多股的(例如雙股，亦即分別為dsRNA及dsDNA)。如本文所用，術語「mRNA」或「傳訊RNA」係指編碼一或多條多肽鏈之胺基酸序列之單股RNA。
RNA 劑：如本文所用，術語「RNAi劑」係指可誘導靶基因及/或其蛋白質產物之表現的抑制、干擾或「沉默」之RNA分子或其衍生物。RNAi劑可敲除(實際上消除或消除)表現，或敲低(減少或降低)表現。RNAi劑可為但不限於dsRNA、siRNA、shRNA、pre-miRNA、pri-miRNA、miRNA、stRNA、lncRNA、piRNA或snoRNA。
RNAi ：如本文所用，術語「RNA干擾」或「RNAi」係指由RNA分子介導之序列特異性調控機制，其導致對應蛋白質編碼基因之表現的抑制或干擾或「沉默」。已在許多類型之生物體中觀測到RNAi，包括植物、動物及真菌。RNAi在細胞中天然發生以移除外源RNA (例如病毒RNA)。天然RNAi藉由自游離dsRNA裂解之片段進行，此等片段將降解機制引導至其他類似RNA序列。RNAi由RNA誘導之沉默複合物(RISC)控制，並由細胞質中之短/小dsRNA分子來引發，在那裡它們與催化RISC組分argonaute相互作用。dsRNA分子可外源引入細胞中。外源dsRNA藉由激活核糖核酸酶蛋白切丁酶來引發RNAi，切丁酶結合且裂解dsRNA，產生21-25個鹼基對之雙股片段，各端有幾個未配對之懸突鹼基。此等短的雙股片段稱為小干擾RNA (siRNA)。
樣品：如本文所用之術語「樣品」或「生物樣品」係指其組織、細胞、核酸或組成部分之亞組(例如體液，包括但不限於血液、血清、黏液、淋巴液、滑液、腦脊液、唾液、羊水、羊膜臍帶血、尿液、陰道液及精液)。
有義股：如本文所用之術語siRNA分子之「有義股」或「第二股」或「過客股」係指與反義股或第一股互補之股。siRNA分子之反義股及有義股雜交形成雙鏈體結構。如本文所用，「siRNA雙鏈體」包括與靶向沉默之基因之mRNA之約10-50個核苷酸部分具有足夠互補性之siRNA股，及與siRNA股具有足以形成雙鏈體之互補性之siRNA股。根據本揭示案，重組AAV基因體可編碼有義股及/或反義股。
siRNA：如本文所用，術語「短干擾RNA」、「小干擾RNA」或「siRNA」係指包含約5-60個核苷酸(或核苷酸類似物)之RNA分子(或RNA類似物)，其能夠引導或介導RNAi。較佳地，siRNA分子包含約15-30個核苷酸或核苷酸類似物，諸如約16-25個核苷酸(或核苷酸類似物)、約18-23個核苷酸(或核苷酸類似物)、約19-22個核苷酸(或核苷酸類似物)(例如，19、20、21或22個核苷酸或核苷酸類似物)、約19-25個核苷酸(或核苷酸類似物)及約19-24個核苷酸(或核苷酸類似物)。術語「短」siRNA係指包含5-23個核苷酸，較佳21個核苷酸(或核苷酸類似物)，例如19、20、21或22個核苷酸之siRNA。術語「長」siRNA係指包含24-60個核苷酸，較佳約24-25個核苷酸，例如23、24、25或26個核苷酸之siRNA。在一些情況下，短siRNA可包括少於19個核苷酸，例如16、17或18個核苷酸，或少至5個核苷酸，條件係較短siRNA保留介導RNAi之能力。同樣，在一些情況下，長siRNA可包括超過26個核苷酸，例如27、28、29、30、35、40、45、50、55或甚至60個核苷酸，條件係較長siRNA保留在沒有進一步加工(例如酶加工)成短siRNA之情況下，介導RNAi或轉譯壓制的能力。siRNA可為單股RNA分子(ss-siRNA)或雙股RNA分子(ds-siRNA)，雙股RNA分子包含有義股及反義股，它們雜交形成稱為siRNA雙鏈體之雙鏈體結構。
間隔子：如本文所用，「間隔子」通常係任何選定之核酸序列，例如長度為1、2、3、4、5、6、7、8、9或10個核苷酸，其位於兩個或更多個連續miR結合位點序列之間。間隔子之長度亦可超過10個核苷酸，例如20、30、40或50或超過50個核苷酸。
個體：如本文所用，術語「個體(subject)」或「患者(patient)」係指用於實驗、診斷、預防、及/或治療目的，可向其投與根據本揭示案之組成物之任何生物體。典型個體包括動物(例如，哺乳動物，諸如小鼠、大鼠、兔、非人類靈長類動物及人類)及/或植物。
靶向細胞：如本文所用，「靶細胞」或「靶組織」係指任何一或多種所關注細胞。細胞可在活體外、活體內、原位或在生物體之組織或器官中發現。在一些實施例中，生物體可為動物，例如哺乳動物，例如人類，例如人類患者。
治療劑：術語「治療劑」係指當投與個體時，具有治療、診斷及/或預防作用及/或引發所需之生物學及/或藥理學作用的任何劑。
治療有效量：如本文所用，術語「治療有效量」意謂當投與罹患或易患感染、疾病、病症及/或疾患之個體時，足以治療感染、疾病、病症及/或疾患、改良其症狀、對其進行診斷、預防及/或延遲其發作的待遞送之劑(例如，核酸、藥物、治療劑、診斷劑、預防劑等)之量。在一些實施例中，治療有效量以單劑量提供。
治療：如本文所用，術語「治療」係指部分或完全減輕、改善、改良、緩解、逆轉特定感染、疾病、病症及/或疾患之一或多種症狀或特徵、延遲其發作、抑制其進展、降低其嚴重程度，及/或降低其發生率。出於降低發展出與疾病、病症及/或疾患相關之病變之風險之目的，可對沒有展現疾病、病症及/或疾患之體徵之個體及/或對僅展現疾病、病症及/或病狀之早期體徵之個體投與治療。
載體 ：如本文所用之術語「載體」係指轉運、轉導或以其他方式充當異源分子之載劑之任一分子或部分。在一些實施例中，載體可為質體。本揭示案之載體可重組產生。異源分子可為多核苷酸及/或多肽。
病毒基因體：如本文所用，術語「病毒基因體(viral genome)」係指囊封於AAV顆粒中之核酸序列。病毒基因體包含具有編碼酬載之至少一個酬載區及至少一個ITR之核酸序列。
本揭示案藉由以下非限制性實例進一步例示。 實例 實例1. SOD1靶向多核苷酸設計(siRNA)
進行siRNA設計以鑑別靶向人類SOD1基因之siRNA。該設計使用分別來自人類(GenBank登錄號NM_ 000454.4 (SEQ ID NO: 110))、食蟹猴(GenBank登錄號NM_001285406.1 (SEQ ID NO: 111))、恒河猴SOD1轉錄物(GenBank登錄號NM_001032804.1 (SEQ ID NO: 4822))及野豬(GenBank登錄號NM_001190422.1 (SEQ ID NO: 112))之SOD1轉錄物(表19)。siRNA雙鏈體經設計為對於反義股之位置2-18與人類SOD1轉錄物具有100%一致性，且對於反義股之位置2-18與非人類SOD1轉錄物具有部分或100%一致性。在所有siRNA雙鏈體中，反義股之位置1經工程化為U，且有義股之位置19經工程化為C，以便在該位置處取消雙鏈體之配對。 表19. SOD1基因序列
SOD1 轉錄物 登錄號 SEQ ID NO. 序列
人類(智人) SOD1 cDNA (981 bp) NM_000454.4 110 GTTTGGGGCCAGAGTGGGCGAGGCGCGGAGGTCTGGCCTATAAAGTAGTCGCGGAGACGGGGTGCTGGTTTGCGTCGTAGTCTCCTGCAGCGTCTGGGGTTTCCGTTGCAGTCCTCGGAACCAGGACCTCGGCGTGGCCTAGCGAGTTATGGCGACGAAGGCCGTGTGCGTGCTGAAGGGCGACGGCCCAGTGCAGGGCATCATCAATTTCGAGCAGAAGGAAAGTAATGGACCAGTGAAGGTGTGGGGAAGCATTAAAGGACTGACTGAAGGCCTGCATGGATTCCATGTTCATGAGTTTGGAGATAATACAGCAGGCTGTACCAGTGCAGGTCCTCACTTTAATCCTCTATCCAGAAAACACGGTGGGCCAAAGGATGAAGAGAGGCATGTTGGAGACTTGGGCAATGTGACTGCTGACAAAGATGGTGTGGCCGATGTGTCTATTGAAGATTCTGTGATCTCACTCTCAGGAGACCATTGCATCATTGGCCGCACACTGGTGGTCCATGAAAAAGCAGATGACTTGGGCAAAGGTGGAAATGAAGAAAGTACAAAGACAGGAAACGCTGGAAGTCGTTTGGCTTGTGGTGTAATTGGGATCGCCCAATAAACATTCCCTTGGATGTAGTCTGAGGCCCCTTAACTCATCTGTTATCCTGCTAGCTGTAGAAATGTATCCTGATAAACATTAAACACTGTAATCTTAAAAGTGTAATTGTGTGACTTTTTCAGAGTTGCTTTAAAGTACCTGTAGTGAGAAACTGATTTATGATCACTTGGAAGATTTGTATAGTTTTATAAAACTCAGTTAAAATGTCTGTTTCAATGACCTGTATTTTGCCAGACTTAAATCACAGATGGGTATTAAACTTGTCAGAATTTCTTTGTCATTCAAGCCTGTGAATAAAAACCCTGTATGGCACTTATTATGAGGCTATTAAAAGAATCCAAATTCAAACTAAAAAAAAAAAAAAAAAA
食蟹猴(長尾獼猴) SOD1 cDNA (465 bp) NM_001285406.1 111 ATGGCGATGAAGGCCGTGTGCGTGTTGAAGGGCGACAGCCCAGTGCAGGGCACCATCAATTTCGAGCAGAAGGAAAGTAATGGACCAGTGAAGGTGTGGGGAAGCATTACAGGATTGACTGAAGGCCTGCATGGATTCCATGTTCATCAGTTTGGAGATAATACACAAGGCTGTACCAGTGCAGGTCCTCACTTTAATCCTCTATCCAGACAACACGGTGGGCCAAAGGATGAAGAGAGGCATGTTGGAGACCTGGGCAATGTGACTGCTGGCAAAGATGGTGTGGCCAAGGTGTCTTTCGAAGATTCTGTGATCTCGCTCTCAGGAGACCATTCCATCATTGGCCGCACATTGGTGGTCCATGAAAAAGCAGATGACTTGGGCAAAGGTGGAAATGAAGAAAGTAAAAAGACAGGAAACGCTGGAGGTCGTCTGGCTTGTGGTGTAATTGGGATCGCCCAATAA
恒河猴(恆河獼猴) SOD1 cDNA (465 bp) NM_001032804.1 4822 ATGGCGATGAAGGCCGTGTGCGTGTTGAAGGGCGACAGCCCAGTGCAGGGCACCATCAATTTCGAGCAGAAGGAAAGTAATGGACCAGTGAAGGTGTGGGGAAGCATTACAGGATTGACTGAAGGCCTGCATGGATTCCATGTTCATCAGTTTGGAGATAATACACAAGGCTGTACCAGTGCAGGTCCTCACTTTAATCCTCTATCCAGACAACACGGTGGGCCAAAGGATGAAGAGAGGCATGTTGGAGACCTGGGCAATGTGACTGCTGGCAAAGATGGTGTGGCCAAGGTGTCTTTCGAAGATTCTGTGATCTCGCTCTCAGGAGACCATTCCATCATTGGCCGCACATTGGTGGTCCATGAAAAAGCAGATGACTTGGGCAAAGGTGGAAATGAAGAAAGTAAAAAGACAGGAAACGCTGGAGGTCGTCTGGCTTGTGGTGTAATTGGGATCGCCCAATAA
豬(野豬) SOD1 cDNA (658 bp) NM_001190422.1 112 CGTCGGCGTGTACTGCGGCCTCTCCCGCTGCTTCTGGTACCCTCCCAGCCCGGACCGGAGCGCGCCCCCGCGAGTCATGGCGACGAAGGCCGTGTGTGTGCTGAAGGGCGACGGCCCGGTGCAGGGCACCATCTACTTCGAGCTGAAGGGAGAGAAGACAGTGTTAGTAACGGGAACCATTAAAGGACTGGCTGAAGGTGATCATGGATTCCATGTCCATCAGTTTGGAGATAATACACAAGGCTGTACCAGTGCAGGTCCTCACTTCAATCCTGAATCCAAAAAACATGGTGGGCCAAAGGATCAAGAGAGGCACGTTGGAGACCTGGGCAATGTGACTGCTGGCAAAGATGGTGTGGCCACTGTGTACATCGAAGATTCTGTGATCGCCCTCTCGGGAGACCATTCCATCATTGGCCGCACAATGGTGGTCCATGAAAAACCAGATGACTTGGGCAGAGGTGGAAATGAAGAAAGTACAAAGACGGGAAATGCTGGAAGTCGTTTGGCCTGTGGTGTAATTGGGATCACCCAGTAAACATTCCCTCATGCCATGGTCTGAATGCCAGTAACTCATCTGTTATCTTGCTAGTTGTAGTTGTAGAAATTTAACTTGATAAACATTAAACACTGTAACCTTAAAAAAAAAAAAAAAAAA
實例2. NHP及小鼠中TRACER AAV文庫之高通量篩選
WO2020072683、WO 2021/202651及WO2021230987 (其內容以全文引用之方式併入本文)中描述之基於TRACER之方法用於產生本文所述之AAV衣殼變異體。正交進化方法與藉由NGS之高通量篩選相結合。簡而言之，使用滑動窗口方法(sliding window approach)生成AAV衣殼變異體文庫，其中6個胺基酸序列插入AAV9環IV之8個不同位置，包括緊接在位置453、454、455、456、457、458、459及460之後，相對於根據SEQ ID NO: 138編號之參考序列。初始文庫藉由非人類靈長類動物(NHP，2-4歲)兩次傳代。在第二次傳代後(例如，注射到兩個NHP後28天)，自六個腦區域提取RNA。在RNA回收及RT-PCR擴增之後，進行系統NGS富集分析以計算相對於AAV9野生型對照之富集倍數。在此兩次傳代之後，鑑別出大約21195種變異體，其平均變化倍數大於野生型。在21195種變異體中，1558種變異體顯示出與野生型相比大於6之變化倍數，並且在所有研究之腦區域中都偵測到。在此1558種變異體中，選擇了大約1470種變異體用於構築合成文庫及藉由兩個NHP之第三次傳代。在選擇用於進一步表徵及研究之1470種變異體中，用於生成初始文庫之滑動窗口之各插入位置之分佈相對均勻。
在使用次選擇之變異體來建置合成文庫後，在第一次跨物種進化篩選中，在兩個NHP (2-4歲)及兩個小鼠品系BALB/c (n=3，6-8週齡)及C57Bl/6小鼠(n=3，6-8週齡)中篩選(第3代)合成文庫。動物被靜脈內注射合成文庫。在活體內一段時間後(例如，28天)，自神經組織中提取RNA，例如，NHP之腦、脊髓及DRG以及小鼠之腦。在RNA回收及RT-PCR擴增之後，進行了系統NGS富集分析，鑑別了變異體中包含之肽，且計算了各變異體與野生型AAV9對照相比之衣殼富集比(相對於野生型AAV9之富集倍數) ( 表21)。高於1之值表示相對於AAV9之表現增加。所有動物在篩選中以2-3 VG/kg靜脈內給藥。
如 表21所示，大約700種變異體顯示出相對於AAV9之表現增加，且幾種變異體顯示出相對於AAV9在NHP腦中之大於10倍之富集。此外，在腦中顯示出最大富集倍數之變異體亦顯示出相對於AAV9在NHP脊髓中之最大富集倍數。此等變異體亦顯示出DRG中之去靶向(資料未示出)。例如，相對於AAV9，包含GSGSPHSKAQNQQT (SEQ ID NO: 200)之變異體顯示出NHP腦中之76.6倍富集、NHP脊髓中之29.4倍富集以及NHP之DRG中之0.4倍富集；並且相對於AAV9，包含GHDSPHKSGQNQQT (SEQ ID NO: 201)之變異體顯示出NHP腦中之62.6倍富集、NHP脊髓中之15.6倍富集及NHP之DRG中之0.0倍富集。此外，在NHP腦中相對於野生型AAV9具有最大富集倍數之AAV衣殼變異體中包含之肽中，觀測到此等肽中之各者包含在相同位置之SPH模體(例如，相對於根據SEQ ID NO: 138之胺基酸序列編號之參考序列，緊接在位置455之後)，無論變異體衣殼內之插入位置如何，以及SPH模體後面之三個殘基中之一個中之陽性胺基酸(例如，K或R)。
那些在NHP之腦中具有最大富集倍數之變異體在兩種小鼠之腦中亦具有最大富集倍數。此外，當比較所研究之兩種小鼠(C57Bl/6及BALB/c小鼠)之間各變異體相對於野生型之富集倍數時，它們高度相關(R 2=0.8591)。 表21. NHP及小鼠中AAV衣殼變異體之NGS富集倍數
肽序列 SEQ ID NO: NHP 腦中相對於AAV9之富集倍 數 NHP 脊髓中相對於AAV9之富集倍 數 小鼠(C57Bl/6)腦中相對於AAV9之富集倍數 小鼠(BALB/c)腦中相對於AAV9之富集倍數
GSGSPHSKAQNQQT 200 73.615 29.402 25.293 41.304
GHDSPHKSGQNQQT 201 62.612 15.641 63.993 49.760
GSGSPHARMQNQQT 202 56.138 22.690 7.795 4.164
GSGSPHVKSQNQQT 203 37.551 13.649 8.069 15.861
GQDSPHKSGQNQQT 204 24.569 3.548 57.344 42.615
GSGSPHASRQNQQT 205 18.265 7.804 28.028 36.577
GSGSPHASRQNKQT 206 17.520 35.029 13.096 18.114
GSGSPHVKIQNQQT 207 16.854 9.068 2.173 2.227
GSGSPHSKAKNQQT 208 14.458 0.049 21.494 23.556
GSGSPHKKNQNQQT 209 12.991 0.379 25.958 7.415
GSGSPHVRMQNQQT 210 11.574 6.764 9.121 10.076
GSGSPHASRQKQQT 211 11.417 0.005 7.413 12.400
GHSSPHRSGQNQQT 212 10.357 1.887 23.197 25.442
GMRTYHLSGQNQQT 213 9.241 1.939 2.033 1.586
GSGSPHTRGQNQQT 214 7.092 3.815 10.801 6.240
GSGIIPVSSQNQQT 215 6.352 0.000 0.642 0.253
GSEYGHKSGQNQQT 216 6.308 2.750 5.198 5.332
GRGQNVSSVHRQQT 217 5.404 0.000 1.206 0.691
GSSHRFYGGQNQQT 218 4.732 0.000 0.787 0.110
GYFVAAWSGQNQQT 219 4.488 0.000 0.071 0.175
GSVLHSHAAQNQQT 220 4.150 6.448 0.675 0.423
GSGDLVVSTQNQQT 221 3.874 1.177 0.411 0.273
GSYGMAASGQNQQT 222 3.817 10.052 1.274 0.829
GLNHFGASGQNQQT 223 3.802 3.188 0.774 0.579
GSTGSHSAGQNQHT 224 3.717 0.285 1.190 0.850
GLAGHTVSGQNQQT 225 3.632 0.229 0.972 0.202
GIILGASSGQNQQT 226 3.630 4.868 1.378 0.865
GSGVSTYNIQNQQT 227 3.609 2.912 0.769 0.520
GSLVSVQTGQNQQT 228 3.534 6.043 0.903 0.469
GQSSPHRSGQNQQT 229 3.496 2.142 12.352 19.366
GREYGHKSGQNQQT 230 3.453 0.000 1.422 0.959
GHTLTLSSGQNQQT 231 3.405 5.648 0.648 0.606
GSITLIPSGQNQQT 232 3.361 3.917 0.326 0.435
GSNGFTALGQNQQT 233 3.361 2.663 0.830 0.332
GSGHSSHSVQNQQT 234 3.339 3.318 0.942 0.424
GSGIPQRSGKNQQT 235 3.331 0.000 1.418 1.685
GSGDTLHMLQNQQT 236 3.317 1.174 0.393 0.482
GERHTVLSGQNQQT 237 3.289 3.008 1.027 0.607
GSGMPQSHIQNQQT 238 3.289 11.609 0.514 0.334
GSGQLSGIGGNQQT 239 3.266 0.287 0.993 0.626
GSGQNRKPASFAQT 240 3.204 0.000 0.892 1.061
GSGSVSQLGQNQQT 241 3.184 2.307 0.596 0.375
GSDFLGTHGQNQQT 242 3.171 0.348 1.038 0.750
GQIVQNPSGQNQQT 243 3.133 0.406 1.446 0.635
GSGTQIPSQQNQQT 244 3.112 1.224 0.470 0.151
GSGQNQQSAREGLT 245 3.111 5.632 1.221 1.104
GSGLGMSTGQNQQT 246 3.110 5.499 0.458 0.660
GSGLPVLSGQNQQT 247 3.100 4.149 0.631 0.210
GSGHSIRTDQNQQT 248 3.074 15.600 0.229 0.148
GSGQSVQTVVNQQT 249 3.057 5.441 0.582 0.240
GSGQNRAQSRFQQT 250 3.043 0.000 0.619 1.788
GGGDLGRSSQNQQT 251 3.036 4.830 0.916 0.539
GGGTKMDSGQNQQT 252 3.034 0.000 0.733 0.297
GSGSPHPSRQNQQT 253 3.017 1.993 1.869 0.975
GSGQFTNAGMNQQT 254 2.969 0.936 0.565 0.418
GGRNGHTVGQNQQT 255 2.965 3.732 1.105 1.003
GSGFGPQTGQNQQT 256 2.964 2.861 1.280 0.849
GRTDSHTSGQNQQT 257 2.913 1.510 1.299 0.704
GYEVLGSSGQNQQT 258 2.891 0.000 2.459 0.319
GSVHLSVTGQNQQT 259 2.882 1.157 0.741 0.282
GFMSYKGSGQNQQT 260 2.865 0.209 1.808 0.569
GNIAGSVSGQNQQT 261 2.849 1.187 0.446 0.257
GSGSHRDVSQNQQT 262 2.843 4.022 0.626 0.550
GGLGSMSSGQNQQT 263 2.812 1.405 1.802 0.822
GSGHLPQSAQNQQT 264 2.803 7.828 0.826 0.496
GGVLVGGSGQNQQT 265 2.778 0.178 1.527 0.688
GTHPYTSSGQNQQT 266 2.775 1.684 0.758 0.471
GSGQNQQLKENRST 267 2.765 0.062 1.149 1.118
GSGQNQQTSPHNHT 268 2.761 3.132 1.524 0.845
GSGTLYPQSQNQQT 269 2.761 5.558 0.324 0.160
GSGQNQQSNWITKT 270 2.711 0.000 0.540 0.634
GSGYTSLFLQNQQT 271 2.710 0.010 0.490 1.044
GSGVMTHVLQNQQT 272 2.692 0.347 0.370 0.533
GSVSDVRAGQNQQT 273 2.661 1.647 0.267 0.747
GSGQSHMATLNQQT 274 2.657 0.724 1.173 0.504
GSGLSVHLAQNQQT 275 2.657 1.234 0.806 0.508
GSGLSHATQQNQQT 276 2.640 7.819 1.111 0.638
GSGLSVQSGQNQQT 277 2.637 2.929 1.695 1.005
GSGHMTYREKNQQT 278 2.633 5.267 1.257 0.540
GSKGVPTPGQNQQT 279 2.625 1.292 1.452 0.459
GSGLLPLSSQNQQT 280 2.612 1.130 0.501 0.293
GNGLYAVSGQNQQT 281 2.611 9.148 0.322 0.213
GFNGSPSSGQNQQT 282 2.609 12.197 2.338 0.924
GSGQIRHSDQNQQT 283 2.600 12.884 1.170 0.320
GGQVAPSSGQNQQT 284 2.581 2.427 1.433 0.709
GSFSMHTHGQNQQT 285 2.535 0.118 1.027 0.693
GSGQNQQVIQGSNT 286 2.521 8.778 0.935 0.810
GRVLHSHAGQNQQT 287 2.513 0.826 1.294 0.908
GSGQNQQTSLQDQT 288 2.505 0.500 0.315 0.968
GSGLGRAPVQNQQT 289 2.503 2.214 0.841 0.383
GNGFSSASGQNQQT 290 2.493 0.772 0.240 0.182
GSGQMASRESNQQT 291 2.492 0.300 0.341 0.288
GPGLPNHSGQNQQT 292 2.486 1.992 1.197 0.659
GNIQWQGSGQNQQT 293 2.468 6.266 1.182 0.837
GMSAHMSSGQNQQT 294 2.456 5.255 1.310 0.947
GHSFVNRSGQNQQT 295 2.447 11.148 1.305 0.756
GRAVMDHSGQNQQT 296 2.408 3.209 0.728 0.283
GALTVMQSGQNQQT 297 2.381 0.430 0.246 0.199
GSGQRSPVLPNQQT 298 2.369 6.230 0.434 0.526
GSGQNGHLSLKQQT 299 2.362 1.896 0.718 0.270
GSLPRGTSDQNQQT 300 2.362 0.000 0.453 0.495
GVAGSLVSGQNQQT 301 2.358 7.670 1.321 1.160
GRGGIPQSGQNQQT 302 2.352 8.683 1.639 1.181
GSGQYASSIPNQQT 303 2.346 3.321 1.022 0.489
GTDFGRQSSQNQQT 304 2.346 3.196 1.021 0.797
GIFMQTPSGQNQQT 305 2.344 6.198 0.938 0.252
GSGQNQQTRLVDLT 306 2.342 9.348 1.268 0.490
GTREMPLSGQNQQT 307 2.339 2.830 1.436 0.538
GSRLVHVHGQNQQT 308 2.334 1.174 1.277 0.934
GSGRLVPNGPNQQT 309 2.314 3.925 0.639 0.411
GSGYLRESPQNQQT 310 2.311 0.878 0.331 0.677
GARIQNASGQKQQT 311 2.300 2.103 1.220 1.039
GLSNPMPSGQNQQT 312 2.280 6.033 1.190 0.829
GSTVQDTRGQNQQT 313 2.270 4.979 0.576 0.473
GPFGMPSSGQNQQT 314 2.260 2.700 0.727 0.560
GSGQNHGVLSNQQT 315 2.254 1.603 1.113 0.701
GSGYSMSQAQNQQT 316 2.250 4.479 0.519 0.329
GSGMLTHTLQNQQT 317 2.246 2.272 0.496 0.199
GRGSPHASRQNQQT 318 2.241 0.000 5.050 5.856
GLSWPSTSGQNQQT 319 2.238 0.000 0.910 0.610
GNSMERTSGQNQQT 320 2.221 4.177 1.047 0.935
GSGMSPSTLQNQQT 321 2.216 3.053 0.318 0.153
GSGHGQVLSQNQQT 322 2.213 12.133 1.880 0.661
GRGQIYSTGGNQQT 323 2.210 11.629 1.329 0.743
GVVAAHNSGQNQQT 324 2.202 1.301 1.196 1.336
GDSSLRHSGQNQQT 325 2.194 0.000 0.662 0.412
GSLVSQGAGQNQQT 326 2.188 4.414 1.436 1.246
GSLLQAHSGQNQQT 327 2.182 1.008 0.575 0.748
GSGHIYVGIQNQQT 328 2.178 6.428 0.989 0.337
GHHTTVQSGQNQQT 329 2.177 6.245 0.851 0.755
GSRQSKRNELNQQT 330 2.177 0.000 1.325 0.232
GSGQNQQHVSSPRT 331 2.176 1.279 1.847 0.938
GSSKELLWGQNQQT 332 2.163 0.000 0.506 0.883
GSLSTPSSGQNQQT 333 2.159 1.279 1.094 0.669
GSIGYAGQGQNQQT 334 2.157 4.951 1.604 0.712
GSGQNQRVSNSQQT 335 2.146 0.492 1.086 0.985
GSGYASHVQQNQQT 336 2.146 3.038 1.157 0.758
GSGEYSRSGQNQQT 337 2.145 0.745 0.617 0.205
GSVSTHSSGQNQQT 338 2.145 3.446 1.198 0.918
GSGQNQHSLGNYQT 339 2.143 1.896 1.077 0.606
GSGGLDTRGQNQQT 340 2.139 6.216 0.236 0.197
GNILHATSGQNQQT 341 2.136 0.125 1.159 0.424
GSGQSYTMTQNQQT 342 2.136 6.755 0.297 0.231
GSGQNQHSAPNSQT 343 2.134 4.143 1.187 0.731
GSGQNQQTMDHNRT 344 2.130 4.944 0.642 0.440
GSNGGVGTGQNQQT 345 2.130 0.788 1.191 1.087
GAGSIIPSGQNQQT 346 2.129 7.164 0.595 0.249
GSGQTHGGQHNQQT 347 2.125 12.251 1.448 1.098
GSNLSFQSGQNQQT 348 2.122 5.853 1.087 0.719
GATLQVHSGQNQQT 349 2.122 2.219 0.623 0.545
GSGFNQRSEQNQQT 350 2.121 4.491 1.770 0.758
GSGSLRDFDQNQQT 351 2.120 6.846 0.586 0.272
GSGDSITGKQNQQT 352 2.112 1.295 0.793 0.306
GSGQDRNIVQNQQT 353 2.112 0.229 0.454 0.632
GSGLSHSHQQNQQT 354 2.109 5.852 1.256 0.592
GSGQNQQTGMSSVK 355 2.109 4.544 1.451 0.679
GSVTHGISGQNQQT 356 2.105 4.542 1.135 0.789
GVVAHQPSGQNQQT 357 2.103 0.152 0.910 2.267
GSGPILGQLQNQQT 358 2.097 2.058 0.470 0.123
GSGHVPNSGLNQQT 359 2.091 0.653 1.636 1.154
GDAGVRSSGQNQQT 360 2.068 3.918 1.033 1.193
GSGSQLMSLQNQQT 361 2.065 3.559 0.563 0.172
GSGLDYSQRQNQQT 362 2.056 0.837 0.484 0.217
GSGQSSGRLINKQT 363 2.055 28.135 0.543 0.277
GSSVSPSSGQNQQT 364 2.054 0.579 1.064 0.787
GSGQVVGLSGNQQT 365 2.052 7.212 0.785 0.881
GSNMGVPLGQNQQT 366 2.049 2.448 0.334 0.420
GSFYPSSTGQNQQT 367 2.047 2.374 0.420 0.277
GSGQNQQTRLTDLT 368 2.046 8.470 0.910 0.776
GPTNGRSSGQNQQT 369 2.034 8.903 0.936 1.308
GSGLLHGKLQNQQT 370 2.032 2.521 1.068 0.917
GANMGHVSGQNQQT 371 2.020 0.810 1.302 1.138
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GSGQNQQVGSTVRT 796 1.124 2.040 0.918 0.614
GNVTTQKSGQNQQT 797 1.122 2.546 1.215 0.922
GSGNPVSHLQNQQT 798 1.121 1.037 0.583 0.310
GSLSHMESGQNQQT 799 1.120 0.829 0.489 0.265
GRAPTNLSGQNQQT 800 1.118 0.687 0.757 0.169
GSGQNQQTVMTARA 801 1.117 1.535 0.995 0.843
GSGMPASRLQNQQT 802 1.117 1.689 0.790 0.372
GVVRNHQSGQNQQT 803 1.116 5.801 0.899 0.868
GSGQNQHSVQVRQT 804 1.116 1.909 0.782 0.916
GSGQNTGHLTMQQT 805 1.114 0.078 1.026 0.595
GSGQNQQYAGKILT 806 1.112 0.300 1.078 0.431
GSGNPHVRNQNQQT 807 1.112 0.873 0.732 0.755
GSGQNGGSSNRQQT 808 1.109 2.594 1.255 0.844
GSGQRLSQGVNHQT 809 1.108 3.394 0.931 1.141
GSGQNAHAKEGQQT 810 1.108 0.000 0.875 1.179
GSSPAPNSGQNQQT 811 1.106 2.229 0.719 0.368
GLAHKTSSGQNQQT 812 1.106 0.915 0.427 0.690
GSGQNQQTPGAHKT 813 1.105 3.827 0.957 0.277
GSGQNQQSLSGSFT 814 1.105 0.735 0.745 0.883
GSGQNQQSTGTSRT 815 1.103 4.054 1.209 0.935
GSGQNQQTVQSNLV 816 1.103 2.350 0.577 0.698
GSGQNQQLGSRQCT 817 1.102 0.183 0.987 0.407
GSGQNQYLRLELQT 818 1.101 0.000 0.416 0.839
GSGQNQQTSPRLQT 819 1.100 0.795 1.156 1.091
GSGQNQQTTSSNMT 820 1.099 0.569 0.638 0.698
GTASTYNSGQNQQT 821 1.099 2.560 0.250 0.625
GSGQNQQTMPQHKI 822 1.097 2.394 0.479 0.197
GSGQSHLHTGNQQT 823 1.096 2.584 0.721 0.295
GVKGVGHSGQNQQT 824 1.096 2.485 0.994 0.783
GSGKVTKQSQNQQT 825 1.095 0.000 0.928 1.035
GSGQNQQTALEKSL 826 1.092 0.000 0.625 0.702
GSGYKDTYGQNQQT 827 1.091 0.854 0.717 0.448
GSGQNQQSGTFLST 828 1.090 5.673 1.021 0.742
GSGQNTGQHMMQQT 829 1.090 1.058 1.147 0.917
GSGKNQQRPGLDQT 830 1.089 1.557 0.583 0.385
GSGQSREISLNQQT 831 1.088 6.954 0.594 0.282
GTPTSPSSGQNQQT 832 1.086 4.558 0.833 0.662
GKPAGGLSGQNQQT 833 1.085 2.805 0.708 0.739
GSGQNHRSADMQQT 834 1.084 12.001 0.417 0.212
GSGQNQQTLPSLSL 835 1.084 1.758 0.527 0.175
GSPYMGATGQNQQT 836 1.083 5.364 0.918 0.254
GSGHAKAVGQNQQT 837 1.081 4.357 0.703 0.824
GHMKGVTSGQNQQT 838 1.081 2.814 0.807 0.413
GSGQNQKILTLDQT 839 1.080 0.371 0.291 0.314
GSGQNQQTKVGHSA 840 1.079 1.256 0.669 1.019
GIARTTISGQNQQT 841 1.078 1.783 0.819 0.330
GSGQNQQTSVGFRT 842 1.077 3.737 0.648 0.534
GSGQNQQTMIANIR 843 1.076 0.000 0.379 0.458
GDMTRSSSGQNQQT 844 1.075 0.802 1.145 1.038
GSGHMSDLRQNQQT 845 1.073 4.291 0.555 0.328
GRGAVMASGQNQQT 846 1.072 0.923 0.783 0.605
GSGQNQQLSGKSVT 847 1.070 1.524 1.276 0.930
GSHTLVVSGQNQQT 848 1.069 1.535 0.671 0.748
GSGPWSAGLQNQQT 849 1.067 0.947 0.700 0.539
GSGQHSPHALNQQT 850 1.064 1.412 0.885 0.573
GSGQNQQPNSGSMT 851 1.064 0.925 0.588 0.339
GSGLAHLGGQNQQT 852 1.064 2.191 0.749 0.794
GSSVRYEPKQNQQT 853 1.063 1.564 0.450 0.501
GSGQNQQARPLELT 854 1.061 0.059 0.389 0.252
GSGQPRSTGINQQT 855 1.061 0.693 0.650 0.542
GSGQNQANWVKVQT 856 1.059 0.126 0.683 0.532
GSGHLFQSGQNQQT 857 1.057 0.615 0.751 0.386
GSGQNRGISISQQT 858 1.057 2.166 0.686 0.566
GSGTHYDNRQNQQT 859 1.054 0.072 0.612 0.486
GSGQNQQTSTTPLP 860 1.052 2.823 0.828 0.741
GSGQVHASQVNQKT 861 1.049 0.503 0.855 0.767
GSSGHRESGQNQQT 862 1.048 4.398 0.641 0.691
GLSAEKSSGQNQQT 863 1.047 7.203 0.629 0.303
GSGQEHRSLANQQT 864 1.046 0.000 0.507 0.344
GSGQTVVRIANQQT 865 1.046 4.156 0.661 0.390
GSGQNVSSVHRQQT 866 1.045 0.712 0.383 0.271
GSGASRMSIQNQQT 867 1.045 0.111 0.801 0.417
GVAFIGSSGQNQQT 868 1.043 0.000 0.744 0.648
GSGQNQQTVPTRQT 869 1.040 1.207 0.629 0.138
GSGQAAKSSQNQQT 870 1.036 0.681 0.778 0.737
GSGQNQQVAIRTST 871 1.035 2.447 0.963 0.370
GSVHMQNAGQNQQT 872 1.034 3.608 1.004 0.625
GSGMRQAGVQNQQT 873 1.032 0.811 0.736 0.775
GSGQNQQVGGKTVT 874 1.032 6.195 1.094 0.821
GVHDMRVSGQNQQT 875 1.032 8.083 1.171 0.818
GSGQHVSVANNQQT 876 1.029 5.734 0.974 0.577
GSAAMSVRGQNQQT 877 1.029 2.386 0.202 0.287
GVSRGGPSGQNQQT 878 1.028 1.611 0.750 0.591
GSGQMVHTIGNQQT 879 1.026 1.328 0.406 0.430
GRGGSMAETQNQQT 880 1.024 2.853 0.799 0.669
GSGHTNPTRQNQQT 881 1.021 0.688 0.726 0.807
GSGEAARYEQNQQT 882 1.020 0.000 0.107 0.125
GSGQNERHLVLQQT 883 1.019 5.354 0.416 0.150
GSGQNQQSKQQVLT 884 1.019 1.494 1.428 1.256
GSGQARAHRGNQQT 885 1.017 0.000 0.254 0.386
GSGQNQQPLDTSRT 886 1.015 0.775 0.491 0.376
GSGQNQQLANMVTT 887 1.014 1.739 1.253 0.987
GSGQMKDLHRNQQT 888 1.014 1.068 0.587 0.506
GSGQNQHLSSFVQT 889 1.013 0.110 1.090 0.364
GSGQNQQPSSRVTT 890 1.012 2.179 0.784 0.504
GSGQNQQLAITLGT 891 1.011 0.000 0.877 0.143
GSGQNQQTVGNPAT 892 1.008 3.014 0.856 0.395
GSGQNQGRAHPMQT 893 1.007 2.364 0.684 0.453
GSGQLIASVVNQQT 894 1.005 0.086 0.197 0.359
GSSVRSLVGQNQQT 895 1.004 3.840 0.412 0.608
GGAGSAHSGQNQQT 896 1.003 6.108 0.474 1.092
GSDQNQQTMSSTRT 897 1.003 2.428 1.306 0.835
GSGQNQQMAGAFRT 898 1.003 1.784 1.307 0.762
GSLGNLQRGQNQQT 899 1.003 0.895 0.947 0.385
GSGPSISHGQNQQT 900 1.000 0.000 0.614 0.665
GSGQNQQT 6406 1.000 1.000 1.000 1.000
GSGQNQQSSFNVQT 901 0.998 0.000 1.307 0.675
GSGQNQQTGQATHN 902 0.996 2.199 0.877 0.527
使用AAV衣殼變異體文庫進行第二次跨物種進化篩選，其中如上所述引入環IV中之修飾，並藉由NHP傳代一次(第1代)，然後將其注射到兩種不同小鼠品系中(第2代)，即C57Bl/6及BALB/c。在RNA回收及RT-PCR擴增之後，藉由系統NGS富集分析來計算各小鼠物種之腦中各變異體之富集倍數。將小鼠第二次傳代中之富集倍數值與如上所述在NHP中進行之第二次傳代之彼等富集倍數值進行比較。如 表22所示，當比較小鼠與NHP之第二次傳代富集倍數值時，鑑別出在所有三個動物組中富集倍數值大於10之12種變異體。此外，此12種變異體中之10種包含SPH模體及在接下來之三個後續殘基之一中之陽性殘基( 表22)。 表22. 在NHP中第一次傳代之後，NHP或小鼠(C57Bl/6或BALB/c)中第二次傳代(P2)之AAV衣殼變異體之NGS富集倍數
肽序列 SEQ ID NO: NHP P2中相對於AAV9之富集倍數 BALB/c P2中相對於AAV9之富集倍數 C57Bl/6 P2中相對於AAV9之富集倍數
VSGSPHSKAQNQQT 903 99.76 92.99 34.29
CSGSPHSKAQNQQT 904 85.1 66.74 22.19
GSGSPHSKAQNQQT 200 56.33 44.58 14.48
GSGSPHRKAQNQQT 905 46.39 42.47 14.11
GRGSPHSKAQNQQT 906 43.68 59.65 28.13
GHDSPHKSGQNQQT 201 33.96 59.14 27.15
GSGSPHSKAKNQQT 208 31.27 41.51 14
GSGSPHSKAQNKQT 907 29.52 44.1 13.69
GSGSPHSKAQTQQT 908 24.27 41.75 18
GQDSPHKSGQNQQT 204 22.7 32.37 16.02
GSGSTHASRQNQQT 909 11.04 23.71 10.67
GHDSQHKSGQNQQT 404 10.36 21.3 13.55
在小鼠中進行第二次傳代後，使用此等變異體生成了合成文庫，此等變異體顯示出相對於野生型AAV9之富集變化倍數，在任一小鼠品系之腦中均高於10，如在RNA回收及RT-PCR擴增之後，藉由系統NGS富集分析所量測。此合成文庫中有大約500種變異體。然後將該合成文庫注射回兩種小鼠品系中(C57Bl/6及BALB/c；第3代)。自小鼠腦中回收RNA，進行RT-PCR擴增，且藉由NGS分析來計算相對於野生型AAV9之富集倍數，其提供於 表23中。如 表23所示，在各品系之腦中具有最大富集倍數之變異體在品系之間高度相關(R 2=0.8458)。 表23. 在小鼠中第一次及第二次傳代後，小鼠(C57Bl/6或BALB/c)中第三次傳代(P3)腦中AAV衣殼變異體之NGS富集倍數
肽序列 SEQ ID NO: BALB/c 中相對於AAV9之富集倍數 C57Bl/6 中相對於AAV9之富集倍數 平均值
GSGSPHKYGQNQQT 910 150.445 103.488 126.966
GSGSPHKFGQNQQT 911 73.364 60.304 66.834
GHDSPHKSGQNQQT 201 82.460 51.125 66.792
GSGSPHSKAQNQQT 200 60.312 65.853 63.083
VSGSPHKFGQNQQT 912 60.186 59.142 59.664
GSGSPHSKAQNHQT 913 63.486 51.647 57.566
VSGSPHSKAQNQQT 903 73.555 37.429 55.492
GQDSPHKSGQNQQT 204 63.898 43.752 53.825
GSGSPHSKAQHQQT 914 45.309 45.600 45.454
GSGSPHKTYQNQQT 915 50.283 35.460 42.871
GSGSPHSKAQTQQT 908 43.120 39.098 41.109
VSGSPHASRQNQQT 916 46.572 32.480 39.526
GSGSPHSKAQNKQT 907 39.848 35.596 37.722
GSGSPHKFGKNQQT 917 31.948 34.899 33.423
GSGSPHASRQNQHT 918 28.145 30.928 29.537
GSHSPHKSGQNQQT 919 22.948 35.412 29.180
GSGQNQQRRMSPST 920 4.576 53.520 29.048
GSGSPHASRQNQQT 205 28.866 29.139 29.003
GSGSPHSKPQNQQT 921 26.958 28.599 27.779
GSGSPHKFGQKQQT 922 39.597 14.927 27.262
VSGSPHGARQNQQT 923 30.985 22.634 26.810
GSGSPHSKAQKQQT 924 25.052 27.459 26.256
GHSSPHRSGQNQQT 212 16.982 35.081 26.032
GSGSPHSKAKNQQT 208 21.069 25.711 23.390
GSHSPHKRGQNQQT 925 24.054 20.262 22.158
GRGSPHSKAQNQQT 906 20.939 22.720 21.830
GQSSPHRSGQNQQT 229 9.916 26.608 18.262
GSGQNRQRLKGLET 926 3.937 31.022 17.480
GSGSPHKLGQNQQT 927 18.905 14.732 16.818
GSGSPHKTSKNQQT 928 14.654 17.606 16.130
GSGSPHKIGQNQQT 929 16.999 14.794 15.897
GSGSPHKKNQNQQT 209 25.633 5.605 15.619
GSGSPHASRQNKQT 206 10.738 20.347 15.542
GSGSPHTRGQNQQT 214 16.899 13.869 15.384
GSGQDSPHVRNQQT 930 15.340 14.646 14.993
GSGSPHKTSQNQQT 931 20.428 8.818 14.623
GSGSPHASRKNQQT 932 13.799 12.749 13.274
GSGSPHASRQKQQT 211 13.624 11.188 12.406
GSHSPHKSGQKQQT 933 6.700 17.736 12.218
GSGSPHKTSQKQQT 934 12.621 11.720 12.170
GSGSPHVRGQNKQT 935 13.174 11.017 12.095
GSGSPHKTTQNQQT 936 9.722 13.381 11.552
CSGSPHSKAQNQQT 904 11.772 9.447 10.610
GSGPVRALRQNQQT 937 3.369 17.431 10.400
GSGSPHVRGQKQQT 938 7.573 12.498 10.036
GSGSPHRKAQNQQT 905 12.308 7.349 9.828
GRGSPHASRQNQQT 318 11.903 6.780 9.342
CSGSPHKTSQNQQT 939 11.167 6.631 8.899
CSHSPHKSGQNQQT 940 11.356 6.304 8.830
GSGSPHSKDQNQQT 604 3.492 10.236 6.864
總之，此等結果表明，在NHP及小鼠中對該具有環IV修飾之AAV9變異體文庫進行3輪篩選後，許多AAV衣殼變異體優於野生型AAV9，例如，在穿透血腦障壁(BBB)及脊髓表現方面。此等衣殼變異體能夠跨物種，NHP腦/脊髓中以及兩種不同小鼠物種之腦中之表現及向性證明了這一點。 實例3. 小鼠中之個別衣殼表徵
此等實驗之目的係在小鼠中靜脈內注射後，確定選自實例2中描述之研究之兩種衣殼變異體相對於AAV9之轉導水準、向性、穿過血腦障壁之能力及中樞神經系統(CNS)中之總體空間分佈。兩種衣殼變異體係TTM-001 (SEQ ID NO: 981 (胺基酸)及983 (DNA)，包含SEQ ID NO: 941)及TTM-002 (SEQ ID NO: 982 (胺基酸)及984 (DNA)，包含SEQ ID NO: 2)，如上表3中所述。TTM-001及TTM-002之胺基酸及DNA序列分別在例如表4及表5中提供。
AAV顆粒係由此等衣殼變異體中之各者囊封單股病毒基因體中由CMV/雞β肌動蛋白啟動子驅動之螢光素酶-EGFP轉殖基因產生的。各衣殼變異體及AAV9對照藉由尾靜脈注射，將AAV顆粒調配物以5e11 VG/劑量(2.5E13 vg/kg)靜脈內投與三隻雌性BALB/c小鼠來進行測試。生存期(in-life period)為28天，然後收集各種CNS及周圍組織用於量測轉殖基因mRNA、轉殖基因蛋白及病毒DNA (生物分佈)。
在注射囊封在TTM-001衣殼變異體中之AAV顆粒(AAV_TTM-001)後28天，小鼠被注射了螢光素，它們的腦被採集用於IVIS成像。在注射了囊封在TTM-001衣殼變異體中之AAV顆粒之小鼠中觀測到了穩健的螢光素酶信號，並且相對於囊封在野生型AAV9對照衣殼中之AAV顆粒，此信號大大增加。
自注射了囊封在TTM-001衣殼變異體(AAV_TTM-001)或TTM-002衣殼變異體(AAV_TTM-002)中之AAV顆粒之小鼠中分離出之腦藉由qPCR檢定轉殖基因RNA之存在作為轉殖基因表現之量度，以及病毒DNA之存在作為病毒基因體水準之量度。資料以相對於AAV9之倍數提供( 表24)。如 表24所示，當與野生型AAV9衣殼對照相比時，TTM-001及TTM-002分別顯示出腦中之轉殖基因mRNA水準及表現的30倍及66倍增加，表明酬載遞送增強。這與腦中病毒基因體(DNA)濃度相對於AAV9衣殼對照之分別32倍(TTM-001)及47倍(TTM-002)增加相關，這表明CNS向性及轉導增強( 表24)。 表24. 相對於AAV9對照，小鼠中之轉殖基因mRNA及病毒基因體水準(DNA)
量度 組織 AAV9 TTM-001 TTM-002
mRNA (轉殖基因表現) 腦 1.0 30.4503 66.2161
DNA (病毒基因體量化) 腦 1.0 32.0315 47.2810
mRNA (轉殖基因表現) 肝臟 1.0 1.2356 0.2016
DNA (病毒基因體量化) 肝臟 1.0 0.4802 0.0277
亦對小鼠之腦組織及脊髓進行抗GFP免疫組織化學染色，以評價總體CNS向性及生物分佈。免疫組織化學染色與qPCR分析相關，因為與AAV9對照相比，TTM-001及TTM-002在腦及脊髓中展示出明顯更強的染色及酬載表現。更具體而言，與AAV9相比，TTM-001及TTM-02在中腦區域顯示出定位以及強酬載表現及轉導，在海馬體及視丘以及腦幹中觀測到染色增加。與中腦相比，在腦的皮質區域觀測到之染色較少。然而，與AAV9對照相比，TTM-001及TTM-002在此等皮質區域之染色更強。TTM-001及TTM-002衣殼變異體似乎亦能夠轉導非神經元細胞，包括神經膠質細胞及寡樹突細胞。關於脊髓，TTM-01及TTM-002之染色及酬載表現定位於灰質之腹角。
亦自靜脈內注射了囊封在TTM-001衣殼變異體或TTM-002衣殼變異體中之AAV顆粒之小鼠中分離出周圍組織，以藉由qPCR及/或GFP免疫組織化學染色進行分析。藉由qPCR量化肝臟中之轉殖基因mRNA水準及病毒基因體DNA水準，且計算各衣殼變異體相對於AAV9之倍數( 表24)。與野生型AAV9相比，TTM-001產生了相似水準之酬載表現(mRNA水準)，但與AAV9相比，肝臟中病毒基因體DNA之量化只有一半。與AAV9相比，TTM-002顯示出肝臟中之mRNA及病毒基因體DNA水準大大降低。與注射了囊封在野生型AAV9對照衣殼中之AAV顆粒之小鼠相比，注射了囊封在TTM-001衣殼變異體或TTM-002衣殼變異體中之AAV顆粒之小鼠之脾臟、心臟、骨骼肌、腎臟及肺之GFP免疫組織化學染色展示出類似酬載表現水準。
總之，此等資料表明TTM-001及TTM-002係小鼠中增強之CNS向性衣殼，可感染非神經元細胞。另外，此等衣殼變異體能夠在靜脈內注射後成功穿透血腦障壁。 實例4. TTM-001及TTM-002衣殼在NHP中之成熟
本實例描述了AAV9衣殼變異體TTM-001 (SEQ ID NO: 981 (胺基酸)及983 (DNA)，包含SEQ ID NO: 941)及TTM-002 (SEQ ID NO: 982 (胺基酸)及984 (DNA)，包含SEQ ID NO: 2)在NHP中之成熟，以進一步增強它們在中樞神經系統及其他組織中之轉導及生物分佈，且使AAV衣殼變異體進化以提供進一步跨物種相容性。使用兩種方法使TTM-001及TTM-002衣殼序列成熟，以便在衣殼變異體之環IV內包含之肽插入物內及周圍隨機化及突變。由於在NHP腦中相對於野生型AAV9顯示出最大富集倍數之許多AAV衣殼變異體在相同位置包含SPH模體(例如，相對於根據SEQ ID NO: 138之胺基酸序列編號之參考序列，緊接在位置455之後) (參見 實例2)，故SPH模體在任一方法中均未突變以使TTM-001及TTM-002衣殼變異體成熟。在第一種成熟方法中，三個鄰接胺基酸的組隨機分佈在TTM-001及TTM-002序列中之誘變區域，其自位置450跨越到位置466，根據SEQ ID NO: 981及982編號。在第二種成熟方法中，誘變引子用於以低頻率引入點突變，分散在TTM-001及TTM-002序列之誘變區域，自位置449到位置466，根據SEQ ID NO: 981及982編號。將TTM-001及TTM-002之各成熟方法產生之AAV衣殼變異體匯集在一起，用於NHP中之後續測試及表徵。
使用TTM-001及TTM-002 AAV衣殼變異體之第一種成熟方法及第二種成熟方法生成之匯集成熟AAV衣殼變異體文庫被注射到兩個NHP中。在生存期後，分離NHP之腦、心臟、肝臟、肌肉及DRG，且提取RNA。在RNA回收及RT-PCR擴增之後，進行系統NGS富集分析以計算相對於AAV9對照之富集倍數比，且鑑別包含在變異體中之肽。
在第二種成熟方法之RNA回收及NGS分析之後，鑑別了大約680,000種衣殼變異體。然後根據原始病毒計數大於10且變異係數(CV)小於1之樣品過濾680,000種成熟衣殼變異體，變異係數(CV)係針對自兩個NHP提取之腦樣品中之各肽計算的。CV值＜1之肽被鑑別，因為此等係在自兩個NHP之腦中分離之大多數樣品中可靠偵測到之肽。使用此過濾準則，此產生了大約64,000種成熟衣殼變異體。
表25提供了成熟衣殼變異體之肽序列，對於分離之腦樣品，原始病毒計數大於10，CV小於1，且在小鼠及NHP中亦顯示出相對於AAV9對照在腦中表現之50倍或更大增加。 表25中之成熟變異體亦係相對於AAV9對照在肝臟及DRG中之表現變化倍數小於2之彼等變異體。應用此等準則，鑑別了大約350種成熟衣殼變異體，相對於AAV9對照，此等變異體在NHP及小鼠中顯示出腦中之高轉導，在小鼠及NHP中具有跨物種相容性，且在肝臟及DRG中經去靶向。 表25中所示之幾種變異體導致相對於AAV9在NHP及/或小鼠腦中之大於100倍之表現增加，其中一種變異體導致相對於AAV9在兩種物種中之大於200倍之表現增加。
表25中展示NHP及小鼠腦中表現增加之TTM-001及TTM-002成熟變異體之表現變化倍數亦在各成熟方法之後，針對NHP之DRG、肌肉、肝臟(RNA及DNA)及心臟進行了計算。如 表25所示，許多變異體在周圍組織中經去靶向，具有相對於AAV9對照較低之表現變化倍數，證明了CNS特異性向性以及腦及CNS之優先轉導。一些變異體在包括腦及周圍組織在內之多種組織中顯示出相對於AAV9增加之表現，證明了泛向性。 表25. NHP及小鼠腦中TTM-001及TTM-002成熟AAV衣殼變異體之NGS富集倍數
序列 SEQ ID NO: 相對於AAV9之富集倍數
腦(NHP) DRG (NHP) 心臟(NHP) 肌肉(NHP) 肝臟RNA (NHP) 肝臟DNA (NHP) 腦(小鼠)
KTIIGSGSPHSKAQNRHT 3239 217.176 0.000 0.000 0.000 0.000 0.000 210.515
KTFPGSGSPHSKVQNQQT 3240 199.720 0.000 0.000 0.000 0.000 0.967 97.703
KTEKMSGSPHSKAQNQQT 3241 169.461 0.523 0.000 0.000 0.000 0.158 109.161
KEINGRGSPHSKAQNQQT 3527 134.390 0.239 0.000 0.000 0.000 0.232 52.311
KTVNRNGSPHSKAQNQQT 3528 133.016 0.000 0.416 0.000 0.000 0.000 85.361
KTVNGSGSPHSKARDQQT 3242 124.789 0.123 0.039 0.312 0.569 0.454 132.137
KTFNGSGSPHSKAPNLQT 3243 121.436 0.000 0.167 0.000 0.000 0.015 168.920
KTEKTSGSPHSKAQNQQT 3244 120.337 0.000 0.355 0.000 0.000 0.119 101.467
KTINGSGSPHSKAHVRQT 3245 119.798 0.000 0.000 0.262 0.694 1.039 165.590
KTVNGSGSPHSKAPNQHT 3246 117.207 0.000 0.109 0.000 0.000 0.074 51.008
KTEKISGSPHSKAQNQQT 3247 116.603 0.000 0.000 0.000 0.000 0.426 102.978
KTINGPGSPHSKAHNQQT 3529 115.742 0.146 0.000 0.235 0.000 0.513 52.508
KTVNGSGSPHSKTQSQQT 3248 115.086 0.000 0.726 0.000 0.000 0.340 63.248
TTINGSGSPHSKAQNQQT 3249 114.856 1.340 14.856 0.827 1.281 0.957 72.058
KSINESGSPHSKAQNQQI 3250 113.833 0.000 0.000 0.000 0.000 0.000 67.649
KTERTSGSPHSKAQNQQT 3251 112.957 0.000 0.009 0.000 1.128 0.207 117.374
KTINGSGSPHSKAQPAKT 3252 111.472 0.331 0.000 1.089 0.044 1.796 215.275
KTEKSSGSPHSKAQNQQT 3253 107.470 0.000 0.016 0.014 0.977 0.179 100.177
KTSYGNGSPHSKAQNQQT 3530 105.937 0.000 0.000 0.000 0.000 0.114 105.894
KTEKGSGSPHSKAQNQQT 3254 105.614 0.053 0.031 0.000 0.586 0.169 84.653
KTINGSGSPHSKSQTQQN 3255 104.474 0.000 0.131 0.000 0.084 0.038 54.021
KTERISGSPHSKAQNQQT 3256 103.692 0.000 0.000 0.000 0.062 0.370 89.637
KTERASGSPHSKAQNQQT 3257 103.669 0.000 0.000 0.000 0.127 0.070 115.550
KELHGSGSPHSKAQNQQT 3258 102.680 0.000 0.000 0.000 1.634 0.592 96.554
KAINGSGSPHSKAQNLAT 3259 101.954 0.000 10.954 8.655 0.298 0.239 116.685
KTVNGSGSPHSKSQNQLT 3260 101.327 0.000 0.035 0.000 0.000 0.025 80.716
KTERNSGSPHSKAQNQQT 3261 99.892 0.000 0.000 0.000 0.000 0.107 87.392
KSVNGNGSPHSKAQNQQT 3531 99.385 0.000 1.329 0.000 0.359 0.079 51.016
KTFNGSGSPHSKAQGQQT 3262 99.253 0.000 0.208 0.000 0.128 0.099 81.459
KTINGSGSPHGWVQNQQT 3532 97.122 0.000 0.000 0.000 1.240 1.975 290.720
KTERVSGSPHSKAQNQQT 3263 96.943 0.000 0.000 0.000 0.000 0.144 135.438
KTINGSGSPHSKALNRQS 3264 96.843 0.136 0.532 0.000 0.042 0.178 55.945
KTERLSGSPHSKAQNQQT 3265 95.857 0.000 0.004 0.005 0.126 0.260 102.372
KTDNGSGSPHSKAHNQQT 3266 95.164 0.000 0.000 0.000 0.000 0.027 55.313
KTFHGSGSPHSKTQNQQT 3267 94.714 0.000 0.210 0.120 0.000 0.000 51.119
KTINGGGSPHSKAQTQQI 3533 92.345 0.000 0.000 0.000 0.000 0.023 54.199
KTSNGSGSPHSKAQNPPT 3268 91.528 0.000 0.000 0.000 0.000 0.039 51.541
ETINGSGSPHSKAQNLQT 3269 90.969 0.221 1.023 0.197 0.179 0.813 107.216
KTVHGNGSPHSKAQNQQT 3534 90.073 0.000 0.000 0.000 0.000 0.304 97.003
NTINGSGSPHSKAQNQQT 3270 90.017 1.712 1.261 1.171 0.923 0.540 55.179
KTINGGGSPHSKAQNQQC 3535 89.301 0.219 0.000 0.000 0.287 0.319 53.840
KTENMSGSPHSKAQNQQT 3271 89.247 0.000 0.000 0.000 0.000 0.260 130.568
KTENVSGSPHSKAQNQQT 3272 88.506 0.000 0.000 0.000 0.964 0.112 108.591
KTSSGSGSPHSKAQYQQT 3273 87.304 0.000 0.000 0.000 0.000 0.299 58.143
KTIDGGGSPHSKAQNKQT 3536 85.019 0.000 0.000 0.000 0.000 0.477 55.517
KTEKVSGSPHSKAQNQQT 3274 84.558 0.000 0.022 0.000 0.873 0.424 112.185
KAINGSGSPHSKAQDQET 3275 84.080 0.000 0.000 0.000 0.194 0.027 87.637
KTCNKSGSPHSKAQNQQT 3276 83.992 0.000 0.000 0.165 0.283 0.000 119.496
KTINGGGSPHSKAQNQLI 3537 83.881 0.000 0.000 0.000 0.046 0.387 78.383
KNINGGGSPHSKAQNQQT 3538 83.083 0.000 0.042 0.000 0.000 0.000 75.913
KTEHLSGSPHSKAQNQQT 3277 83.080 0.000 0.000 0.012 0.021 0.189 69.494
KAEMGSGSPHSKAQNQQT 3278 83.049 0.000 0.020 0.000 0.768 0.112 135.019
KATNGSGSPHSKAQNHQT 3279 82.627 0.000 0.176 0.000 0.155 0.057 66.207
KAIKGSGSPHSKAQDQQT 3280 82.258 0.000 0.000 0.000 0.108 0.000 85.178
KTINGGGSPHSKSQNQLT 3539 82.231 0.000 0.070 0.000 0.000 0.498 126.986
KTVNGNGSPHSKAQNKQT 3540 81.481 0.000 0.000 0.000 0.000 0.122 69.455
KTINGSGSPHSKGHWQQT 3281 81.434 0.000 0.000 0.000 0.000 1.011 65.252
KTDKTSGSPHSKAQNQQT 3282 81.430 0.000 0.000 0.000 1.362 0.291 169.515
KTFKGSGSPHSKAPNQQT 3283 80.890 0.000 0.000 0.000 0.000 0.017 71.144
KTVNGSGSPHSKAQNQLI 3284 80.509 0.000 0.000 0.000 0.000 0.166 71.156
KTINGSGSPHSKRPEQQT 3285 80.418 0.000 0.013 0.000 0.149 0.361 50.319
KTINGSGSPHSKAQRTMT 3286 80.388 0.000 0.022 0.170 1.812 1.025 100.248
KTEKASGSPHSKAQNQQT 3287 80.285 0.000 0.041 0.000 0.000 0.261 90.390
KSDQGSGSPHSKAQNQQT 3288 80.076 0.000 0.000 0.000 0.993 0.124 151.911
KTEITSGSPHSKAQNQQT 3289 79.620 0.000 0.163 0.000 0.332 0.074 76.686
KTDKSSGSPHSKAQNQQT 3290 79.470 0.055 0.012 0.000 1.437 0.367 141.351
KTIDGSGSPHSKAQNQQH 3291 79.090 0.000 0.000 0.000 0.136 0.049 57.914
KTVNGNGSPHSKAQNQHT 3541 78.849 0.000 0.000 0.000 0.000 0.045 54.086
KNTNGSGSPHSKAQNQQT 3292 78.445 0.000 0.000 0.000 0.571 0.177 89.719
KTETHSGSPHSKAQNQQT 3293 77.974 0.000 0.067 0.000 0.000 0.512 57.287
KTINGGGSPHSKALNQQN 3542 77.822 0.000 0.131 0.000 0.000 0.274 69.884
KTINGSGSPHSKALHQHT 3294 77.502 0.000 0.052 0.041 0.000 0.188 68.196
KTINGTGSPHSKAQNHQI 3543 77.089 0.171 0.000 0.000 0.000 0.166 54.281
KTINGSGSPHSKAQHRIT 3295 76.849 0.105 0.499 0.170 1.424 0.214 127.000
KTINGSGSPHSKAQYIHT 3296 76.170 0.000 0.014 0.033 1.523 0.168 59.649
KTENISGSPHSKAQNQQT 3297 76.072 0.000 0.000 0.000 0.115 0.132 83.118
KTIIGGGSPHSKAHNQQT 3544 75.872 0.000 0.050 0.000 0.000 0.235 65.492
KTINGSGSPHSKAQKFET 3298 75.788 0.000 0.000 0.028 0.108 0.093 65.588
KTSNESGSPHSKAQNHQT 3299 75.720 0.000 0.000 0.000 0.169 0.217 70.590
KTINGSGSPHSKAQFPST 3300 75.677 0.000 0.004 0.000 0.849 0.127 119.712
KTERPSGSPHSKAQNQQT 3301 75.669 0.000 0.029 0.000 0.000 0.156 73.894
KTINGNGSPHSKAQNPLT 3545 75.269 0.000 0.000 0.000 0.366 0.000 53.583
KSIKGNGSPHSKAQNQQT 3546 75.196 0.000 0.000 0.000 0.000 0.000 90.251
KTERMSGSPHSKAQNQQT 3302 74.910 0.000 0.000 0.000 0.100 0.151 122.812
KTERSSGSPHSKAQNQQT 3303 74.853 0.000 0.071 0.000 1.036 0.056 125.538
KTELHSGSPHSKAQNQQT 3304 74.620 0.000 0.000 0.000 0.021 0.089 53.124
KTELTSGSPHSKAQNQQT 3305 74.548 0.000 0.000 0.000 0.537 0.421 100.311
KTINGSGSPHSKAHNQQR 3306 74.272 0.562 0.486 0.047 0.956 0.057 107.301
KTINGGGSPHSKAQSQQI 3547 74.264 0.000 0.000 0.000 0.000 0.235 67.651
KTINGSGSPHSKAQAIKT 3307 74.261 0.255 0.000 0.000 0.186 0.132 73.560
KTENTSGSPHSKAQNQQT 3308 74.061 0.000 0.000 0.218 0.233 0.730 96.249
KTIDGSGSPHSKGQNRQT 3309 73.930 0.000 0.000 0.000 0.106 0.091 63.626
KNINGSGSPHSKAQSQQT 3310 73.757 0.000 0.000 0.000 0.000 0.041 57.432
KTINGSVSPHGKAQNQLT 3548 73.525 0.000 0.061 0.067 0.000 0.053 51.358
KTSNASGSPHSKAQNQLT 3311 73.501 0.000 0.000 0.297 0.000 0.313 150.401
KTEARSGSPHSKAQNQQT 3312 73.349 0.000 0.000 0.000 0.695 0.118 62.903
KTEKNSGSPHSKAQNQQT 3313 73.347 0.000 0.000 0.044 0.159 0.021 74.393
KTANGSGSPHSKAQYQQT 3314 73.038 0.000 0.000 0.000 0.153 0.160 139.451
KTVNGSGSPHSKAQYQHT 3315 72.847 0.000 0.000 0.000 0.000 0.130 54.158
KTINGSGSPHTKAQNPQS 3316 72.594 0.000 0.000 0.000 0.000 0.130 62.508
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KTIPMEGSPHSKAQNQQT 3567 56.560 0.000 0.000 0.000 1.824 0.371 89.951
KTINGSGSPHSKAQGHHT 3431 56.559 0.000 0.000 0.000 0.632 0.117 71.050
KTDRTSGSPHSKAQNQQT 3432 56.466 0.000 0.000 0.000 0.062 0.160 148.498
KTINGSGSPHSKAQSKVT 3433 56.373 0.000 0.050 0.014 1.021 0.390 76.115
KEVVGSGSPHSKAQNQQT 3434 56.371 0.000 0.000 0.000 0.000 0.323 116.964
KTINGSGSPHSKAQLPST 3435 56.238 0.005 4.258 0.001 1.040 0.185 84.918
KTINGSGSPHSKAIGKQT 3436 56.158 0.000 0.000 0.000 0.887 0.088 110.132
KTEPTSGSPHSKAQNQQT 3437 56.134 0.000 0.000 0.000 0.061 0.527 143.397
KTVNGGGSPHSKSQNQQT 3568 56.114 0.116 0.000 0.000 0.000 0.040 170.548
KTINGSGSPHSKAQAIHT 3438 56.047 0.000 0.000 212.32 0.887 0.890 81.908
KTINGSGSPHSKAQHGLT 3439 55.999 0.000 0.000 0.101 1.913 0.244 117.191
KSELGSGSPHSKAQNQQT 3440 55.997 0.000 0.005 0.000 0.881 0.239 120.521
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KTINVSGSPHSKAQGQQT 3442 55.870 0.000 0.191 0.000 0.592 0.040 87.211
KTINGGGSPHSKAQNQMT 3569 55.778 0.000 0.000 0.000 0.866 0.012 73.177
KTVNGSGSPHSKAQHLQT 3443 55.739 0.091 0.036 0.000 0.062 0.409 62.743
KTIRENGSPHSKAQNQQT 3570 55.605 0.000 0.000 0.016 0.131 0.257 95.931
KTINGSGSPHSKTQNHQN 3444 55.551 0.000 0.048 0.000 0.000 0.099 64.846
KTINGSGSPHSKAQPART 3445 55.513 0.000 0.000 0.328 1.294 0.991 127.301
KTVNGSGSPHSKAQSLQT 3446 55.497 0.000 0.060 0.000 0.000 0.143 69.033
KTINGSGSPHSKSQSQLT 3447 55.430 0.000 0.035 0.000 0.050 0.013 125.577
KTINGSASPHSKAHSQQT 3571 55.293 0.000 0.000 0.000 0.000 0.166 66.252
KTWQNSGSPHSKAQNQQT 3448 55.245 0.000 0.000 0.000 0.111 0.265 114.258
KTINGSGSPHSKAQDRQS 3449 55.137 1.146 0.016 0.106 0.644 0.086 55.701
KTINGSGSPHSKAQMPST 3450 54.986 1.691 0.039 0.028 0.450 0.202 114.331
KTNNGGGSPHSKAQNLQT 3572 54.963 0.000 0.000 0.000 0.000 0.089 80.506
KTINGSGSPHSKAQGSLT 3451 54.717 0.000 0.006 0.013 0.480 0.298 142.786
KTEVTSGSPHSKAQNQQT 3452 54.663 0.000 0.000 0.000 0.323 0.185 81.482
KSINGGGSPHSKAQYQQT 3573 54.612 0.000 0.000 0.000 0.105 0.010 65.952
KTVIGSGSPHSKSQNQQT 3453 54.603 0.000 0.000 0.000 0.000 0.106 69.121
KAVNVSGSPHSKAQNQQT 3454 54.586 0.000 0.000 0.000 0.000 0.023 57.835
KTVNGNGSPHSKSQNQQT 3574 54.586 0.000 0.000 0.000 0.256 0.168 95.384
KTDRNSGSPHSKAQNQQT 3455 54.495 0.000 0.000 0.000 0.823 0.241 85.823
KTINGSGSPHSKAQVPAT 3456 54.475 0.000 0.002 0.000 0.782 0.223 137.743
KGVLGSGSPHSKAQNQQT 3457 54.472 0.000 0.007 0.027 0.359 0.189 145.740
KTLNGNGSPHSKAQNLQT 3575 54.458 0.668 0.000 0.000 0.161 0.172 159.134
KAINGSGSPHSKAQDKQT 3458 54.452 0.000 0.000 0.057 0.044 0.223 56.004
KTSNGSGSPHSKAHYQQT 3459 54.414 0.000 0.251 0.000 0.249 0.204 54.162
KTINGSGSPHSKAQVPST 3460 54.366 0.000 1.001 0.000 0.202 0.139 117.223
KTINGSGSSHSKAQNQQT 3576 54.292 1.709 1.870 1.287 1.075 0.458 67.731
KTELRSGSPHSKAQNQQT 3461 54.289 0.000 0.007 0.040 0.790 0.239 57.814
KNINGSGSPHSKAQNHQT 3462 54.248 0.000 0.034 0.000 0.340 0.075 74.979
KTVNGGGSPHSKAQNHQT 3577 54.246 0.375 0.024 0.000 0.000 0.146 67.188
KTINGSGSPHSKARGEQT 3463 54.207 0.025 0.006 0.005 0.309 0.327 128.098
KTINGGGSPHSKAQYQHT 3578 54.188 0.000 0.000 0.000 0.000 0.223 82.256
KTEDLSGSPHSKAQNQQT 3464 54.156 0.000 0.000 0.000 1.193 0.132 70.198
KTINGSGSPHSKAPGQQT 3465 54.071 0.065 0.000 0.004 0.542 0.179 73.440
KTIPKNGSPHSKAQNQQT 3579 53.824 0.000 0.032 0.000 0.115 0.178 77.458
KTINGSGSPHSKAQSLQI 3466 53.778 0.000 0.186 0.000 0.022 0.047 51.543
KTINGSGSPHSKRLEQQT 3467 53.512 0.000 0.118 0.003 0.161 0.292 71.704
KTERGSGSPHSKAQNQQT 3468 53.475 0.000 0.030 0.000 1.416 0.175 85.368
KTVNGSGSPHSKAPNQQT 3469 53.444 0.833 2.206 0.006 0.156 0.178 58.080
KTSNGSGSPHSKAQNQST 3470 53.353 0.000 0.000 0.000 0.000 0.014 120.897
KTINGSGSPHSKAQKVIT 3471 53.273 0.000 0.000 0.000 0.357 0.402 95.147
KTEGISGSPHSKAQNQQT 3472 53.270 0.000 0.000 0.000 0.000 0.010 78.303
KTINGSGSPHSKAQNNDQ 3473 53.226 0.000 0.000 0.000 0.593 0.046 59.664
KTINGSGSPHSKAQSVHT 3474 53.226 0.000 0.004 0.000 0.446 0.217 76.110
KTINGSGSPHSKAQPLGT 3475 53.049 0.015 0.004 0.001 0.515 0.222 68.656
KTINKEGSPHSKAQNQQT 3580 53.006 0.000 0.029 0.000 0.177 0.111 64.520
KTCNASGSPHSKAQNQQT 3476 52.998 0.000 0.011 0.000 0.897 0.141 67.934
KAINGSGSPHSKAHNQET 3477 52.973 0.000 0.030 0.000 0.035 0.058 71.809
KTEGLSGSPHSKAQNQQT 3478 52.891 0.000 0.000 0.020 0.104 0.155 104.529
KTRDASGSPHSKAQNQQT 3479 52.861 0.000 0.000 0.010 1.062 0.402 52.089
KTSNGSGSPHSKAQNLQI 3480 52.843 0.000 0.000 1.605 0.178 0.214 74.823
KTGNGSGSPHSKAQIQQT 3481 52.809 0.000 0.000 0.000 0.000 0.012 98.291
KTVNGGGSPHSKAQNLQT 3581 52.788 0.000 0.031 0.000 0.000 0.165 83.215
KTDRSSGSPHSKAQNQQT 3482 52.737 0.000 0.000 0.000 0.995 0.085 123.421
KTINGSGSPHSKAQVRNT 3483 52.735 0.000 0.101 0.011 0.230 0.423 68.893
KTINGSGSPHSKAPSNQT 3484 52.680 1.494 4.762 0.003 0.330 0.208 87.951
KTINGSGSPHSKAQVGHT 3485 52.624 0.000 0.000 0.006 0.535 0.192 106.448
KNAIGSGSPHSKAQNQQT 3486 52.516 0.000 0.000 0.000 0.165 0.198 117.939
KAENGSGSPHSKAQNQQT 3487 52.487 0.000 0.157 0.029 0.000 0.242 120.256
KTINGSGSPHSKAQRDIT 3488 52.415 0.098 0.000 0.008 1.784 0.605 88.122
KTINGSGSPHSKAQMPNT 3489 52.408 0.084 0.036 0.025 0.057 0.359 66.040
KTVNGSGSPHSKSQNQQT 3490 52.395 0.033 0.077 0.013 0.105 0.175 58.000
KTIPAIGSPHSKAQNQQT 3582 52.346 0.000 0.009 0.000 0.034 0.134 51.949
KTINGSGSPHSKARGLQT 3491 52.275 0.000 0.000 0.036 1.235 1.425 169.881
KTELGSGSPHSKAQNQQT 3492 52.232 0.000 0.007 0.006 0.532 0.088 87.314
KAETGSGSPHSKAQNQQT 3493 52.219 0.000 0.047 0.581 0.009 0.188 132.940
KTINGSGSPHSKLQKQQT 3494 52.144 0.615 0.477 1.071 1.113 0.429 61.833
KTINGSGSPHSKAPSLQT 3495 52.137 0.041 1.614 0.002 0.902 0.222 70.363
KTINGSGSPHSKAQRDQT 3496 51.897 0.069 0.014 0.040 0.867 0.554 102.317
KTDVGSGSPHSKAQNQQT 3497 51.849 0.000 0.007 0.000 0.385 0.560 115.774
KTINGSGSPHSKNRDQQT 3498 51.830 0.000 0.008 0.000 0.480 0.138 100.300
KSINGSGSPHSKAPNLQT 3499 51.812 0.000 0.256 0.000 0.085 0.139 59.270
KTINGSGSPHSKAQAKGT 3500 51.727 0.048 0.016 0.000 0.271 0.525 104.917
KTVNGSGSPHSKAQDKQT 3501 51.580 0.428 0.000 0.069 0.041 0.063 69.225
KTINGGGSPHSKAQNPQA 3583 51.574 0.000 0.000 0.000 0.192 0.000 102.792
KTINGSGSPHSKAQSAHT 3502 51.569 0.068 0.070 0.000 0.589 0.249 79.498
KTINGNGSPHSKSQNQHT 3584 51.379 0.000 0.054 0.000 0.000 0.082 56.614
KTVPTSGSPHSKAQNQQT 3503 51.348 0.013 0.000 0.000 1.017 0.338 102.651
KTIDGSGSPHSKSQNHQT 3504 51.307 0.000 0.000 0.000 0.000 0.269 63.174
KTDVKSGSPHSKAQNQQT 3505 51.296 0.000 0.000 0.000 0.515 0.224 53.601
KAINRSGSPHSKAQDQQT 3506 51.262 0.000 0.000 0.000 0.000 0.036 54.631
KTINGSGSPHSKAQSTMT 3507 51.249 0.018 0.002 0.002 0.321 0.341 73.213
KTVNASGSPHSKAQNQLT 3508 51.249 0.000 0.000 0.000 0.000 0.268 99.559
KTINGSGSPHSKAQREMT 3509 51.076 0.000 24.900 143.49 1.564 0.476 70.961
KTVHGSGSPHSKAQSQQT 3510 51.057 0.000 0.000 0.000 0.143 0.146 54.185
KTINGGGSPHSKSQNRQT 3585 51.017 0.000 0.000 0.000 0.000 0.421 149.370
KTINGSGSPHSKAQYRAT 3511 51.008 0.000 0.158 0.000 0.690 0.120 50.650
KTINGGGSPHSKAQRQQT 3586 50.998 0.000 0.041 0.000 0.991 0.142 147.942
KTEPMSGSPHSKAQNQQT 3512 50.960 0.203 0.000 0.000 1.816 0.415 126.322
KTINGSGSPHSKNQWQQT 3513 50.800 0.000 0.044 0.047 0.111 0.324 65.506
KETAGSGSPHSKAQNQQT 3514 50.762 0.000 0.027 0.000 1.706 0.054 212.795
KTINGSGSPHSKAQRMNT 3515 50.686 0.000 108.747 0.019 0.943 0.264 97.975
KNNLGSGSPHSKAQNQQT 3516 50.670 0.000 0.019 0.000 0.406 0.121 102.408
KTINGSGSPHAKAQNHQT 3517 50.667 0.211 0.140 0.051 0.101 0.090 80.603
KTIIKNGSPHSKAQNQQT 3587 50.587 0.000 0.000 0.000 0.000 0.751 75.547
KTINGSGSPHSYHVNQQT 3588 50.486 0.000 0.056 0.059 0.528 0.275 179.489
KTINGSGSPHSKAGDSQT 3518 50.457 0.614 0.236 0.008 1.062 0.071 74.355
KTINGSGSPHSKLKSQQT 3519 50.368 0.000 0.296 0.000 1.796 1.096 95.240
KTINGSGSPHSKAQKIST 3520 50.285 0.000 0.000 0.088 0.108 0.302 51.115
KTEYNSGSPHSKAQNQQT 3521 50.256 0.000 0.000 0.000 0.000 0.009 62.679
KTINGSGSPHSKAPSMQT 3522 50.249 0.000 0.000 0.004 0.941 0.460 75.504
EAINGSGSPHSKAQNQQT 3523 50.243 0.629 0.094 0.000 0.057 1.519 117.305
KTINGSGSPHSKASPRQT 3524 50.227 0.088 0.005 0.068 1.761 0.530 67.241
KTINGSGSPHSKRMEQQT 3525 50.177 0.000 0.000 0.000 1.327 0.208 81.769
KTINGSGSPHSKAQYQNT 3526 50.099 0.000 0.008 0.000 0.017 0.119 71.846
KTERVSGSPHSKAQNQQT 3589 96.943 0.000 0.000 0.000 0.000 0.144 135.438
KAEIGHDSPHKSGQNQQT 1754 63.249 0.000 0.000 0.000 0.060 0.024 27.173
表26提供了341種成熟衣殼變異體之肽序列，以及此等成熟衣殼變異體相對於AAV9對照之富集倍數，其顯示出相對於AAV9對照在NHP之腦中表現之75倍或更多增加，且相對於AAV9對照在肝臟及DRG中具有小於2之表現變化倍數。 表26. NHP腦中TTM-001及TTM-002成熟AAV衣殼變異體之NGS富集倍數
序列 SEQ ID NO: 相對於AAV9之富集倍數
腦(NHP) DRG (NHP) 心臟(NHP) 肌肉(NHP) 肝臟RNA (NHP) 肝臟DNA (NHP) 腦(小鼠)
KTFNRSGSPHSKAQNQQI 3591 86.359 0.000 113.67 0.000 0.000 0.092 25.568
KTIIGSGSPHSKAQNRHT 3239 217.176 0.000 0.000 0.000 0.000 0.000 210.515
KTFPGSGSPHSKVQNQQT 3240 199.720 0.000 0.000 0.000 0.000 0.967 97.703
KTEKMSGSPHSKAQNQQT 3241 169.461 0.523 0.000 0.000 0.000 0.158 109.161
KAINGHDSPHKSGQIRQT 3606 108.510 0.000 23.908 0.000 0.132 0.261 8.862
KTINGHDSPHKIGQNQHA 3607 77.321 0.000 18.836 0.028 0.220 0.132 7.578
KEINGRGSPHSKAQNQQT 3527 134.390 0.239 0.000 0.000 0.000 0.232 52.311
KTVNRNGSPHSKAQNQQT 3528 133.016 0.000 0.416 0.000 0.000 0.000 85.361
KAINGYDSPHKSGQKQQT 3608 83.803 0.041 9.491 0.000 0.031 0.150 13.057
KTVNGSGSPHSKARDQQT 3242 124.789 0.123 0.039 0.312 0.569 0.454 132.137
KTESGHDSPHKSGQNQQT 3609 86.513 0.000 7.414 0.000 0.000 0.038 13.163
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KSEIGHDSPHKSGQNQQT 3774 84.789 0.000 0.000 0.000 0.000 0.013 15.955
KTINGHDSPHKSVQKQLT 3775 84.351 0.000 0.000 0.000 0.038 0.103 11.890
KTINGHPSPHWKGQNQQT 3848 84.153 0.000 0.000 0.000 0.000 0.058 3.280
KTVNGHDSPHKSGRNQLA 3776 83.858 0.000 0.000 0.000 0.000 0.132 21.252
KTNNVHDSPHKSGQNQQS 3777 83.697 0.000 0.000 0.000 0.176 0.000 7.117
KTIKGSGSPHSKVQDQQT 3601 83.077 0.000 0.000 0.034 0.000 0.107 21.001
KSEKGHDSPHKSGQNQQT 3778 82.982 0.000 0.000 0.000 0.000 0.105 16.662
KWSAGHDSPHKSGQNQQT 3779 82.949 0.000 0.000 0.000 0.000 0.211 12.499
KELAGHDSPHKSGQNQQT 3780 82.876 0.000 0.000 0.000 0.000 0.093 18.063
KTINGHDSPHKMGRNQQS 3781 82.787 0.000 0.000 0.000 0.000 0.000 6.467
KTDQAHDSPHKSGQNQQT 3782 82.402 0.000 0.000 0.141 0.000 0.000 13.397
KTETQHDSPHKSGQNQQT 3783 82.316 0.000 0.000 0.000 0.000 0.198 10.823
KTEMTHDSPHKSGQNQQT 3784 82.221 0.000 0.000 0.000 0.000 0.000 8.431
KTINGHDSPHKSGISIQT 3785 82.019 0.000 0.000 0.000 0.191 0.044 7.310
KTDAVHDSPHKSGQNQQT 3786 81.968 0.000 0.000 0.000 0.297 0.107 13.596
KTSNGHDSPHKSVQNLQT 3787 81.921 0.000 0.000 0.072 0.000 0.330 11.544
KTEKYHDSPHKSGQNQQT 3788 81.637 0.000 0.000 0.000 0.000 0.013 7.580
KQTQGHDSPHKSGQNQQT 3789 81.581 0.000 0.000 0.000 0.000 0.133 15.225
KTINGHDSPHKMAHNQQT 3790 81.329 0.000 0.000 0.000 0.000 0.094 15.949
KAINGSGSPHSKAQTQQA 3602 81.207 0.000 0.000 0.000 0.000 0.016 40.435
KTINGHDSPHKHGQNQQN 3791 81.065 0.000 0.000 0.000 0.000 0.000 4.110
KGADGHDSPHKSGQNQQT 3792 80.981 0.000 0.000 0.000 0.000 0.074 11.423
KVGEGHDSPHKSGQNQQT 3793 80.775 0.084 0.000 0.000 0.000 0.019 16.378
KANEGHDSPHKSGQNQQT 3794 80.470 0.000 0.000 0.000 0.000 0.000 12.818
KTDTMHDSPHKSGQNQQT 3795 80.364 0.000 0.000 0.000 0.000 0.000 13.166
KTEAKSGSPHSKAQNQQT 3603 80.088 0.192 0.000 0.000 0.000 0.613 47.130
KTINGHDSPHKSVQSQQS 3796 80.000 0.000 0.000 0.000 1.055 0.082 17.620
KTIPGSGSPHSKAQNLQT 3604 79.973 0.871 0.000 0.000 0.000 0.000 32.693
KTCIAHDSPHKSGQNQQT 3797 79.857 0.000 0.000 0.066 0.000 0.093 1.930
KTINGHDSPHKSGQTVCT 3798 79.730 0.000 0.000 0.000 0.050 0.030 7.873
KELRGHDSPHKSGQNQQT 3799 79.596 0.000 0.000 0.000 0.000 0.006 22.001
KCQIGHDSPHKSGQNQQT 3800 79.359 0.000 0.000 0.000 0.000 0.000 2.614
KGVMGHDSPHKSGQNQQT 3801 79.170 0.000 0.000 0.000 0.138 0.086 17.287
KACDGHDSPHKSGQNQQT 3802 78.648 0.000 0.000 0.000 0.000 0.128 17.767
KTINGQDSPHKSGQYQQI 3803 78.585 0.000 0.000 0.000 0.286 0.672 5.664
KTINGHDSPHKSGQQIMT 3804 78.534 0.000 0.000 0.000 0.000 0.058 7.067
KTINGHDSPHKSRQNEQS 3805 78.534 0.000 0.000 0.000 0.112 0.188 13.388
KASNGHDSPHKSGLNHQT 3806 78.451 0.000 0.000 0.000 0.000 0.000 17.975
KTVNGHDSPHKSGQSQPT 3807 78.309 0.000 0.000 0.000 0.000 0.231 10.627
KNELGHDSPHKSGQNQQT 3808 78.135 0.000 0.000 0.000 0.000 0.182 17.457
KTETFHDSPHKSGQNQQT 3809 78.070 0.000 0.000 0.000 0.782 0.007 4.693
KAAEGHDSPHKSGQNQQT 3810 77.793 0.000 0.000 0.000 0.000 0.060 13.552
KGQNGHDSPHKSGQNQQT 3811 77.770 0.000 0.000 0.000 0.107 0.056 13.618
KNEFGHDSPHKSGQNQQT 3812 77.740 0.000 0.000 0.000 0.000 0.029 16.318
KTSIGYDSPHKSGQNQQT 3813 77.730 0.000 0.000 0.000 0.057 0.178 4.831
KTDNGHDSPHKSGQNLQT 3814 77.565 0.504 0.000 0.000 0.000 0.000 16.184
KTEGQHDSPHKSGQNQQT 3815 77.423 0.000 0.000 0.000 0.000 0.748 20.310
KTITGHDSPHKSRQDQQT 3816 77.127 0.000 0.000 0.000 0.000 0.000 6.250
KAEHGHDSPHKSGQNQQT 3817 77.026 0.000 0.000 0.000 0.000 0.017 20.937
KTINGDDSPHKSGQKQLT 3818 76.968 0.000 0.000 0.000 0.163 0.014 15.820
KCDQGHDSPHKSGQNQQT 3819 76.887 0.000 0.000 0.000 0.193 0.013 27.317
KEILGHDSPHKSGQNQQT 3820 76.770 0.000 0.000 0.000 0.804 0.009 10.771
KTIHGSGSPHSKAQNQAT 3605 76.765 0.000 0.000 0.000 0.000 0.215 43.969
KTERNHDSPHKSGQNQQT 3821 76.751 0.000 0.000 0.000 0.000 0.000 14.979
KAINGDDSPHKSGHNQQT 3822 76.578 0.000 0.000 0.000 0.032 0.059 17.755
KTSNGHNSPHKSGQNQET 3823 76.515 0.000 0.000 0.000 0.000 0.000 4.764
KTINGHDSPHKSGQMIHT 3824 76.364 0.000 0.000 0.000 0.000 0.000 9.486
KNAIGHDSPHKSGQNQQT 3825 76.289 0.000 0.000 0.000 0.009 0.072 15.178
KTDKFHDSPHKSGQNQQT 3826 76.204 0.000 0.000 0.000 0.000 0.000 7.096
KTEGFHDSPHKSGQNQQT 3827 76.191 0.000 0.000 0.000 0.000 0.080 13.163
KVINGHDSPHKSGRNHQS 3828 75.961 0.000 0.000 0.000 0.000 0.000 13.568
KTITGHDSPHKSVQNRQT 3829 75.940 0.000 0.000 0.000 0.621 0.000 4.310
KTPDMHDSPHKSGQNQQT 3830 75.871 0.659 0.000 0.000 0.000 0.048 11.277
KTINGHDSPHKSGQKMNT 3831 75.820 0.000 0.000 0.000 0.000 0.167 6.373
KTELQHDSPHKSGQNQQT 3832 75.814 0.000 0.000 0.000 0.105 0.000 11.798
KTIHGHDSPHKSGQSQQN 3833 75.777 0.000 0.000 0.059 0.000 0.166 7.426
KTEIGHDSPHKSGQNQQT 3834 75.525 0.000 0.000 0.016 0.012 0.000 9.593
KTINGHDSPHKSGQYQHA 3835 75.308 0.000 0.000 0.000 0.000 0.017 17.081
KTELYHDSPHKSGQNQQT 3836 75.235 0.000 0.000 0.000 0.000 0.042 10.354
在NHP中生成及篩選後，鑑別了具有以下特性之其他變異體。對於自NHP分離之腦樣品，包含SEQ ID NO: 4253、4281、4290-4295、4304、4305、4320、4328-4335、4337-4340、4353、4355、4369、4387、4421、4424、4425、4426、4427、4428、4430、4432、4433、4435、4436、4437、4438、4439-4449、4452、4455、4476、4483或4484之胺基酸序列之TTM-001及TTM-002衣殼變異體之原始病毒計數為10或更高，CV小於1，顯示出相對於AAV9在小鼠及NHP腦中表現之50倍或更多增加，且顯示出相對於AAV9在NHP肝臟及DRG中之2倍或更少表現。對於自NHP分離之腦樣品，包含SEQ ID NO: 4098-4105、4254-4280、4282-4289、4296-4303、4306-4327、4336、4341-4352、4354、4356-4361、4362-4420、4422、4423、4425、4429、4431、4434、4444、4450、4451、4453、4454、4456-4471、4472、4473、4474、4475、4477、4478、4479、4480、4481、4482或4485之胺基酸序列之TTM-001及TTM-002衣殼變異體之CV小於1，且顯示出相對於AAV9在NHP腦中表現之100倍或更多增加。對於自NHP分離之肝臟RNA樣品，包含SEQ ID NO: 4102及4106-4252之胺基酸序列之TTM-001及TTM-002衣殼變異體具有大於或等於0.01之正規化病毒計數，CV小於1，且顯示出相對於AAV9在NHP肝臟中表現之20倍或更多增加。對於自NHP分離之肌肉樣品，包含SEQ ID NO: 4105之胺基酸序列之TM-001及TTM-002衣殼變異體具有9.9或更高之原始病毒計數，CV小於1，以及相對於AAV9在NHP肌肉中表現之5倍或更高增加。對於自NHP心臟分離之樣品，包含SEQ ID NO: 4105之胺基酸序列之TM-001及TTM-002衣殼變異體亦具有9.9或更高之原始病毒計數，CV小於1，以及相對於AAV9在NHP心臟中表現之5倍或更高增加。
然後將此等額外成熟變異體併入合成文庫中，該合成文庫與TTM-002衣殼變異體、TTM-001衣殼變異體及AAV9衣殼作為對照一起經由另一NHP或小鼠傳代。在此傳代之後，收集CNS及周圍組織且提取RNA。在RNA回收及RT-PCR擴增之後，進行系統NGS富集分析以計算相對於AAV9野生型對照或TTM-002衣殼變異體對照之富集倍數比。首先藉由衣殼適應度(病毒計數/DNA計數)過濾成熟衣殼變異體，選擇適應度臨限值大於或等於0.75之彼等樣品。在此初始選擇之後，選擇腦向性及心向性成熟衣殼變異體。對於在肝臟(肝臟去靶向)或心臟中表現極少或無表現之腦向性衣殼變異體，成熟衣殼變異體基於以下進一步過濾：自NHP分離之腦RNA樣品中小於0.5之CV，相對於AAV9野生型對照，NHP之肝臟中之DNA表現之變化倍數小於0.2，NHP中腦RNA與肝臟DNA之比率為至少100，相對於TTM-002對照，NHP之腦中之至少2.5或3倍富集或更大，相對於TTM-002對照，小鼠之腦中之至少0.8倍富集或更大，及相對於AAV9對照，心臟中之RNA表現之平均變化倍數小於1.5。導致小鼠及NHP之腦中表現增加之所得腦向性成熟衣殼變異體包含SEQ ID NO: 3272、3274、3421、3487、3589及4478之胺基酸序列，其中許多包含在根據SEQ ID NO: 69、70、71、4、5、6、7、8、36-59、138、981或982編號之位置451 (或根據SEQ ID NO: 3272、3274、3421、3487、3589及4478編號之第三位置)處之E，及根據SEQ ID NO: 69、70、71、4、5、6、7、8、36-59、138、981或982編號之位置452 (或根據SEQ ID NO: 3272、3274、3421、3487、3589及4478編號之第四位置)處之N或帶正電荷之殘基(例如，K或R)。對於心臟向性衣殼，衣殼變異體基於以下進一步過濾：自NHP分離之心臟RNA樣品中小於0.5之CV，相對於AAV9野生型對照，NHP之肝臟中之DNA表現之變化倍數小於0.5，及相對於TTM-002對照，NHP之腦中之RNA表現之變化倍數小於1.5。所得心臟向性之成熟衣殼變異體包含SEQ ID NO: 3382、4081及4406之胺基酸序列。滿足過濾準則之所選腦及心臟向性衣殼變異體之資料及序列提供於 表30中。此等腦及心臟向性成熟衣殼變異體亦顯示在DRG中降低之向性。 表30. 在NHP及小鼠之腦或心臟中表現增加之 TTM-001及 TTM-002成熟AAV衣殼變異體之NGS富集倍數
序列 SEQ ID NO 相對於TTM-002之平均富集倍數 相對於AAV9之平均富集倍數
腦RNA (NHP) 腦RNA (NHP) 脊髓 (NHP) 肝臟DNA (NHP) 心臟RNA (NHP) 肌肉DNA (NHP) 腦RNA (小鼠)
KTENVSGSPHSKAQNQQT 3272 7.333 35.140 12.982 0.088 1.242 2.077 8.619
KTEKVSGSPHSKAQNQQT 3274 6.203 29.725 3.103 0.138 1.165 0.855 6.073
KTERVSGSPHSKAQNQQT 3589 4.147 19.870 4.171 0.123 0.872 5.141 6.080
KNSIGSGSPHSKAQNQQT 3421 3.582 17.164 3.080 0.137 0.798 0.772 7.657
KTVNGHDSPHKSGQRPST 4478 2.890 13.848 5.763 0.110 0.551 4.544 6.833
KAENGSGSPHSKAQNQQT 3487 2.627 12.588 3.183 0.079 0.526 1.945 7.571
KTSNASGSPHSKAHNQQT 3382 1.419 6.799 8.066 0.352 6.641 7.517 8.203
KTINGSGSPHKSGQNQQP 4081 0.784 3.759 1.946 0.206 4.799 21.127 5.882
KTINGSGSPHKSGQNKTS 4406 0.550 2.637 0.655 0.317 7.899 12.738 1.932
KTINGSGSPHSKAQNQQT 5660 1.297 6.216 5.338 0.456 3.062 4.732 5.964
KTINGHDSPHKSGQNQQT 5828 1.000 4.792 2.504 0.181 2.456 4.591 7.103
此等資料表明，在兩種成熟方法之後，產生具有環IV修飾之成熟TTM-001及TTM-002衣殼變異體(AAV9衣殼變異體)，與野生型AAV9對照相比，在NHP及小鼠中之CNS向性顯著增強，同時亦展現出在周圍組織(例如，肝臟及DRG)中之去靶向。因此，此等產生之成熟變異體在NHP及小鼠中都顯示出跨物種之CNS向性。 實例5. 不同靈長類動物物種中TTM-001及TTM-002 AAV衣殼變異體之評價
本實例評價TTM-001 (SEQ ID NO: 981 (胺基酸)及983 (DNA)，包含SEQ ID NO: 941)及TTM-002 (SEQ ID NO: 982 (胺基酸)及984 (DNA)，包含SEQ ID NO: 2)衣殼變異體在兩種不同靈長類動物物種狨(普通狨)及非洲綠猴(綠猴)中之向性及跨物種相容性，與實例2提供的其在食蟹獼猴(長尾獼猴)中之向性進行比較。包含SPHKYG (SEQ ID NO: 966)之胺基酸序列之AAV9衣殼變異體之跨物種相容性及向性亦在本實例中進行了研究。TTM-001及TTM-002之胺基酸及DNA序列分別在例如表4及表5中提供。
為了研究在非洲綠猴中之向性，將突觸蛋白啟動子控制下之包含TTM-001衣殼變異體、TTM-002衣殼變異體、包含SEQ ID NO: 966之AAV9衣殼變異體或AAV9對照之AAV顆粒靜脈內注射至NHP (n=2，3-12歲)中，劑量為2E13 vg/kg。在生存14天後，收集NHP之腦及組織(肝臟、DRG、四頭肌及心臟)並提取RNA。在RNA回收及RT-PCR擴增之後，進行系統NGS富集分析以計算相對於AAV9野生型對照之富集倍數比。
為了研究在狨中之向性，將包含TTM-001衣殼變異體、TTM-002衣殼變異體、包含SEQ ID NO: 966之AAV9衣殼變異體或AAV9對照之AAV顆粒靜脈內注射到NHP (n=2，＞10月齡)中，劑量為2E13 vg/kg (8.75E12 vg/mL)。在生存28天後，收集NHP之腦及組織(肝臟、四頭肌及心臟)並提取RNA。在RNA回收及RT-PCR擴增之後，進行系統NGS富集分析以計算相對於AAV9野生型對照之富集倍數比。
如 表63(非洲綠猴)及 表64(狨)中提供的，TTM-001及TTM-002衣殼變異體在不同靈長類動物物種中都顯示出增加之CNS向性。TTM-001衣殼變異體顯示出相對於AAV9在食蟹獼猴腦中表現之73.6倍增加( 表21，實例2)，相對於AAV9在非洲綠猴腦中表現之43.5倍增加，以及相對於AAV9在狨腦中表現之703.3倍增加。TTM-002衣殼變異體顯示出相對於AAV9在食蟹獼猴腦中表現之62.6倍增加( 表21)，相對於AAV9在非洲綠猴腦中表現之13.8倍增加，以及相對於AAV9在狨腦中表現之366.6倍增加。TTM-001及TTM-002均導致相對於AAV9在非洲綠猴及狨心臟中表現之顯著增加( 表63及 表64)。包含SEQ ID NO: 963之AAV9衣殼變異體亦顯示出相對於AAV9在非洲綠猴及狨之腦及心臟中之表現增加。此外，TTM-001、TTM-002及包含SEQ ID NO: 966之AAV9衣殼變異體亦都導致在BALB/c及C57Bl/6小鼠兩者之腦中之表現增加( 表23，實例2)，顯示出相對於AAV9在兩種小鼠中之表現的平均變化倍數分別為63.1、66.8及126.97。 表63. TTM-001 (包含SEQ ID NO: 941)、TTM-002 (包含SEQ ID NO: 2)及包含SEQ ID NO: 966之AAV9衣殼變異體在非洲綠猴中之NGS富集倍數
序列 SEQ ID NO: 相對於AAV9之富集倍數
腦 DRG 心臟 肝臟DNA 肝臟RNA 肌肉
SPHSKA 941 43.525 1.010 184.789 0.242 1.547 1.715
HDSPHK 2 13.779 0.678 35.991 0.084 0.087 0.144
SPHKYG 966 9.805 0.071 44.865 0.085 0.136 0.234
表64. TTM-001 (包含SEQ ID NO: 941)、TTM-002 (包含SEQ ID NO: 2)及包含SEQ ID NO: 966之AAV9衣殼變異體在狨中之NGS富集倍數
序列 SEQ ID NO: 相對於AAV9之富集倍數
腦 心臟 肝臟DNA 肝臟RNA 肌肉
SPHSKA 941 703.610 48.979 0.268 0.779 0.425
HDSPHK 2 366.625 18.572 0.075 0.276 0.229
SPHKYG 966 150.209 17.232 0.045 0.014 0.146
總之，此等資料表明，TTM-001及TTM-002之AAV9衣殼變異體相對於AAV9對照在三種不同靈長類動物及兩種小鼠中顯示出在CNS中增加之CNS向性，提供了強跨物種能力之證據。包含SEQ ID NO: 966之胺基酸序列之AAV9衣殼變異體相對於AAV9對照在兩種NHP及兩種小鼠中亦顯示出強CNS表現，亦表明了強跨物種能力。 實例6. TTM-002衣殼變異體在小鼠中之高級成熟
該實例描述了TTM-002 (SEQ ID NO: 982 (胺基酸)及984 (DNA)，包含SEQ ID NO: 2)衣殼變異體在小鼠中之額外成熟。為了使TTM-002衣殼變異體成熟，三個鄰接胺基酸的組隨機分佈在TTM-002序列中之誘變區域，該序列自位置450跨越到位置466，根據SEQ ID NO: 982編號。不同於實例4中進行之成熟，其中未破壞在NHP腦中相對於野生型AAV9顯示出最大富集倍數的AAV衣殼變異體中觀測到之SPH模體，在本實例中使用之成熟方法中，SPH模體沒有保持不變以進一步探索該模體在衣殼變異體中之作用。將成熟方法產生之成熟TTM-002衣殼變異體匯集在一起，用於小鼠中之後續測試及表徵。
將自TTM-002成熟AAV衣殼變異體產生之成熟AAV衣殼變異體文庫以1.0 x 10 12VG/劑量之劑量靜脈內注射到三隻CD-1遠交系小鼠(Charles River；6-8週齡)之尾靜脈中。在生存約28天後，分離小鼠之腦並提取RNA。在RNA回收及RT-PCR擴增之後，進行系統NGS富集分析以計算相對於對應TTM-002未成熟對照之富集倍數比，且鑑別包含在變異體中之肽。藉由樣品中原始病毒計數大於10且變異係數(CV)大於1來過濾變異體(鑑別在自三隻小鼠中分離出來之大多數樣品中可靠地偵測到之肽/變異體)。
在變異體之高級成熟篩選及過濾之後，1302種變異體顯示出相對於未成熟TTM-002衣殼變異體在遠交系小鼠腦中之表現增加。在相對於未成熟TTM-002具有改良之向性之1302種變異體中，1283種變異體在與未成熟TTM-002衣殼變異體相同的位置包含SPH模體(例如，相對於根據SEQ ID NO: 138或982之胺基酸序列編號之參考序列，緊接在位置455之後)。存在於未成熟TTM-002衣殼變異體中之SPH模體區域中之突變僅一致地出現在相對於未成熟TTM-002對照在小鼠腦中變化倍數為0.2或0.1或更低的那些變異體中。此表明SPH模體可能對TTM-002衣殼變異體觀測到之腦向性增加很重要。在SPH模體被破壞之情況下，TTM-002成熟變異體相對於包含SPH模體之未成熟TTM-002變異體之變化倍數顯著降低。 實例7. NHP中TTM-001、TTM-002、TTM-003、TTM-006及TTM-027之個別衣殼表徵
本實例描述在非洲綠猴(綠猴)、狨(普通狨)及/或食蟹獼猴(長尾獼猴)中靜脈內投與後，AAV衣殼變異體TTM-002 (SEQ ID NO: 982 (胺基酸)及SEQ ID NO: 984 (DNA)，包含SEQ ID NO: 2)、TTM-001 (SEQ ID NO: 981 (胺基酸)及SEQ ID NO: 983 (DNA)，包含SEQ ID NO: 941)、TTM-003 (SEQ ID NO: 36 (胺基酸)及SEQ ID NO: 72 (DNA)，包含SEQ ID NO: 3589)、TTM-006 (SEQ ID NO: 39 (胺基酸)及SEQ ID NO: 75 (DNA)，包含SEQ ID NO: 3241)，及/或TTM-027 (SEQ ID NO: 69 (胺基酸)及SEQ ID NO: 9 (DNA)，包含SEQ ID NO: 3272)相對於AAV9之轉導水準、向性、穿過血腦障壁的能力及中樞神經系統(CNS)和周圍組織之總體空間分佈。 A. 非 洲綠猴(綠猴)中TTM-002之評價
AAV顆粒係用TTM-002衣殼變異體或AAV9衣殼對照產生的，其包含由遍在CBA啟動子驅動之編碼帶有HA標籤的組織蛋白H2b蛋白之自互補病毒基因體。將包含TTM-002衣殼變異體或AAV9衣殼對照之AAV顆粒靜脈內投與非洲綠猴(綠猴) (n=2)，劑量為1e12 VG/kg或1e13 VG/kg。生存期為28天，且然後收集各種CNS及周圍組織，用於藉由RT-qPCR量測轉殖基因mRNA (表現)及藉由ddPCR量測病毒DNA (生物分佈)。
如 表27所示，在兩種測試劑量下，TTM-002衣殼變異體與AAV9相比在所有研究之腦區域中導致腦生物分佈增加。在兩種測試劑量下，TTM-002衣殼變異體亦導致腦中轉殖基因表現相對於AAV9增加( 表28)。在脊髓中，TTM-002衣殼變異體相對於AAV9以更高之水準分佈到頸脊髓及脊髓腹角( 表27)，且它在全脊髓及腹角中介導比AAV9高之轉殖基因表現( 表28)。當以1e13 VG/kg之劑量投與時，TTM-002在多個腦區域中平均每個細胞遞送1-2個病毒基因體(VG)，其表現優於AAV9 4至24倍，且能夠表現16至186倍之轉殖基因RNA ( 表27及 表28)。TTM-002衣殼變異體相對於AAV9在DRG中展現出較低生物分佈( 表27)及轉殖基因表現( 表28)，表明TTM-002衣殼變異體相對於AAV9在DRG中經去靶向。藉由對此等CNS組織進行之免疫組織化學觀測到類似表現及分佈。免疫組織化學染色之高通量分析指示，TTM-002能夠靶向腦中超過50%之細胞( 圖1A)，包括星狀細胞及神經元( 圖1B)。與如實例12中所提供之小鼠中之向性相比，TTM-002顯示出對Sox9(+)星狀細胞而非神經元(用NeuN或SMI311標記)之偏向( 圖1B)。
亦在肝臟、心臟及四頭肌之周圍組織中量測了分佈及轉殖基因表現。在肝臟中，TTM-002衣殼變異體相對於AAV9展現出較低生物分佈( 表27)及轉殖基因表現( 表28)，表明TTM-002衣殼變異體相對於AAV9在肝臟中經去靶向。在心臟中，TTM-002衣殼變異體相對於AAV9展現出相當之生物分佈水準( 表27)，但相對於AAV9之轉殖基因表現增加( 表28)。在四頭肌中，TTM-002衣殼變異體相對於AAV9展現出較低生物分佈( 表27)及較低轉殖基因表現( 表28)。藉由對此等周圍組織進行之免疫組織化學觀測到類似表現及分佈。 表27：靜脈內投與包含TTM-002衣殼之AAV顆粒後，藉由ddPCR之每個二倍體基因體之病毒基因體拷貝數的量化(生物分佈)
組織 1e12 VG/kg 1e13 VG/kg
AAV9(VG拷貝/二倍體基因體) TTM-002(VG拷貝/二倍體基因體) TTM-002 相對於AAV9 AAV9(VG拷貝/二倍體基因體) TTM-002(VG拷貝/二倍體基因體) TTM-002 相對於AAV9
殼核 0.03 0.37 12.3 0.26 2.4 9.2
尾狀核 0.02 0.58 29 0.14 2.1 14.7
視丘 0.06 0.21 3.5 0.25 1.0 4
海馬體 0.03 0.29 9.7 0.16 1.56 9.8
黑質 0.05 0.34 6.8 0.37 1.38 3.7
運動皮質 0.03 0.56 19 0.27 2.4 8.9
額葉皮質 0.04 0.67 17 0.20 3.6 18
顳葉皮質 0.03 0.31 10 0.11 2.67 24
大腦皮質 0.008 0.08 10 0.03 0.16 5.3
齒狀核 0.06 0.10 1.7 0.32 3.21 10
頸脊髓 0.03 0.12 4 0.19 0.91 4.8
胸脊髓 0.04 0.03 0.75 0.36 0.38 1.1
腰脊髓 0.04 0.03 0.75 0.29 0.37 1.3
C5腹角 0.04 0.25 6.3 0.29 2.2 7.6
L5腹角 0.06 0.28 4.7 0.31 1.9 6.1
頸DRG 0.07 0.01 -7 0.81 0.36 -2.3
胸DRG 0.06 0.01 -6 1.31 0.43 -3
腰DRG 0.07 0.01 -7 1.31 0.57 -2.3
肝臟 9.5 1.2 -7.9 127 7.7 -16.5
心臟 0.6 0.7 1.2 5.4 5.4 1
四頭肌 0.2 0.06 -3.3 1.7 0.6 -2.8
表28：靜脈內投與包含TTM-002衣殼之AAV顆粒後，藉由RT-qPCR之轉殖基因mRNA的量化
組織 1e12 VG/kg 1e13 VG/kg
AAV9(相對於管家基因之轉殖基因mRNA倍數)(2 -dCT) TTM-002(相對於管家基因之轉殖基因mRNA倍數)(2 -dCT) TTM-002 相對於AAV9 AAV9(相對於管家基因之轉殖基因mRNA倍數)(2 -dCT) TTM-002(相對於管家基因之轉殖基因mRNA倍數)(2 -dCT) TTM-002 相對於AAV9
殼核 0.02 0.3 15 0.09 4.22 47
尾狀核 0.02 0.8 40 0.11 4.29 39
視丘 0.04 0.4 10 0.4 5.8 14.5
海馬體 0.02 0.4 20 0.1 4.3 43
黑質 0.1 1.2 12 0.3 11.6 39
運動皮質 0.08 5.00 63 0.36 21.8 61
額葉皮質 0.04 3.1 78 0.3 27.7 92
顳葉皮質 0.02 0.8 40 0.1 26.9 27
大腦皮質 0.04 1.1 28 0.2 17.4 87
齒狀核 0.3 0.9 3 1.8 42.0 23
頸脊髓 0.2 2.0 10 0.8 20.2 25
胸脊髓 0.13 0.25 1.9 0.7 4.8 6.9
腰脊髓 0.4 0.5 1.3 2.2 9.2 4.2
C5腹角 0.2 1.4 7 1.7 33 19
L5腹角 1.1 3.4 3.1 12.4 102 8.2
頸DRG 3.6 1.2 -3 63.1 15.9 -4
胸DRG 1.8 1.3 -1.4 43.9 15.7 -2.8
腰DRG 1.9 1.0 -1.9 34.9 27.6 -1.3
肝臟 0.88 0.25 -3.5 2.2 0.97 -2.3
心臟 8.7 42 4.8 110 363 3.3
四頭肌 9.7 1.1 -8.3 59 21 -2.8
總之，此等資料表明TTM-002係NHP (非洲綠猴)中增強的CNS向性衣殼，可感染非神經元細胞。相對於AAV9，TTM-002在DRG及肝臟中亦經去靶向，但展示相對於AAV9，在心臟中之轉殖基因表現增加。另外，TTM-002衣殼變異體能夠在靜脈內注射之後成功穿透血腦障壁。 B. 狨 ( 普通狨)中TTM-001及TTM-002之評價
AAV顆粒係用TTM-002衣殼變異體、TTM-001衣殼變異體或AAV9衣殼對照產生的，其包含由遍在CAG啟動子驅動之編碼組織蛋白H2b蛋白之自互補病毒基因體，該蛋白帶有MYC標籤(TTM-002衣殼變異體)、His標籤(TTM-001衣殼變異體)或HA標籤(AAV9對照衣殼)。將包含TTM-002衣殼變異體、TTM-001衣殼變異體或AAV9衣殼對照之AAV顆粒以單一溶液之形式以 表29所指示之劑量靜脈內投與至狨(普通狨) (n＝3)。生存期為28天且隨後收集各種CNS及周圍組織，用於藉由RT-qPCR量測轉殖基因mRNA (表現)、藉由IHC量測蛋白質表現及藉由ddPCR量測病毒DNA (生物分佈)。然後將資料正規化至給藥溶液中各病毒載體之劑量。 表29. 在狨中給藥之溶液中包含各種衣殼之AAV顆粒之效價
衣殼變異體 給藥之實際效價 衣殼變異體與AAV9之比率
TTM-001 1.44 x 10 11vg/mL 0.34
AAV9 4.00 x 10 11vg/mL 1.0
TTM-002 4.17 x 10 11vg/mL 1.0
如 表31中所示，相對於AAV9對照，TTM-001及TTM-002衣殼變異體均顯示狨之腦中尾狀核及運動皮質中之生物分佈增加。TTM-001及TTM-002衣殼變異體亦導致狨之腦中尾狀核及運動皮質中之轉殖基因表現增加( 表32)。事實上，相對於AAV9，TTM-001及TTM-002在腦中之生物分佈及轉殖基因表現增加超過100-400倍。與AAV9相比，TTM-002遞送超過280倍之病毒基因體且表現高500倍之轉殖基因RNA水準( 表31及表 32)。藉由免疫組織化學觀測到相似的表現及分佈。更具體而言，在中腦、尾狀核、殼核、視丘及小腦中偵測到針對TTM-001及TTM-002之染色，且此等腦組織中之每一者中的兩種衣殼變異體之此種染色相對於AAV9有所增加。在小腦之分子層及顆粒層中亦觀測到針對TTM-001及TTM-002之染色。
亦在肝臟、心臟及四頭肌之周圍組織中量測了生物分佈及轉殖基因表現。在肝臟中，TTM-002衣殼變異體相對於AAV9展現出較低生物分佈( 表31)及轉殖基因表現( 表32)，表明TTM-002衣殼變異體在狨中相對於AAV9在肝臟中經去靶向。相對於AAV9，TTM-001衣殼變異體顯示出在肝臟中相當之生物分佈及轉殖基因表現( 表31及 表32)以及在心臟及肌肉中相當之轉殖基因表現( 表32)。TTM-001及TTM-002均導致心臟及肌肉中相對於AAV9之生物分佈降低( 表31)，且相對於AAV9，TTM-002亦導致心臟及肌肉中之較低轉殖基因表現 ( 表32)。 表31. 靜脈內投與包含 TTM-001衣殼或 TTM-002衣殼之AAV顆粒後，藉由ddPCR之每個二倍體基因體之病毒基因體拷貝數的量化(生物分佈)，正規化至給藥溶液中病毒載體之實際效價(vg/dg =病毒基因體拷貝數/二倍體基因體)
衣殼 組織
尾狀核 運動皮質 心臟 肌肉 肝臟
vg/dg 相對於AAV9之vg/dg vg/dg 相對於AAV9之vg/dg vg/dg 相對於AAV9之vg/dg vg/dg 相對於AAV9之vg/dg vg/dg 相對於AAV9之vg/dg
TTM-001 1.67 142.70 2.69 124.06 0.28 0.53 0.08 0.39 14.86 0.99
TTM-002 3.55 294.36 5.80 264.86 0.33 0.69 0.08 0.32 6.92 0.49
AAV9 0.01 1.00 0.02 1.00 0.48 1.00 0.23 1.00 13.79 1.00
表32. 靜脈內投與包含 TTM-001衣殼或 TTM-002衣殼之AAV顆粒後，藉由R T-qPCR之轉殖基因mRNA的量化，正規化至給藥溶液中病毒載體之實際效價(mRNA =相對於管家基因之轉殖基因mRNA倍數；相對於AAV9=相對於AAV9的相對於管家基因之轉殖基因mRNA倍數)
衣殼 組織
尾狀核 運動皮質 心臟 肌肉 肝臟
mRNA 相對於AAV9 mRNA 相對於AAV9 mRNA 相對於AAV9 mRNA 相對於AAV9 mRNA 相對於AAV9
TTM-001 17.56 594.71 27.80 586.23 16.05 1.40 0.26 1.19 3.23 1.93
TTM-002 14.21 479.39 19.73 410.40 2.78 0.27 0.06 0.46 0.62 0.36
AAV9 0.03 1.00 0.05 1.00 12.67 1.00 0.15 1.00 1.85 1.00
在狨中TTM-002之此等資料與在非洲綠猴中所觀測到之彼等資料相似，進一步表明TTM-002衣殼變異體之跨物種相容性。總之，此等資料表明TTM-001及TTM-002係狨中增強之CNS向性衣殼。相對於狨中之AAV9，TTM-002亦在肝臟、心臟及肌肉中去靶向，其中與AAV9相比，TTM-001在肝臟、心臟及肌肉中顯示相當之生物分佈及/或轉殖基因表現。另外，TTM-001及TTM-002衣殼變異體能夠在靜脈內注射之後成功穿透血腦障壁。 C. 食 蟹獼猴(長尾獼猴)中TTM-001、TTM-002、TTM-003、TTM-006及TTM-027之評價
AAV顆粒係用TTM-002衣殼變異體、TTM-001衣殼變異體、TTM-003衣殼變異體、TTM-006衣殼變異體、TTM-027衣殼變異體或AAV9衣殼對照產生的，其包含由遍在CAG啟動子驅動之編碼組織蛋白H2b蛋白之自互補病毒基因體。將包含TTM-002衣殼變異體、TTM-001衣殼變異體、TTM-027衣殼變異體或AAV9衣殼對照之AAV顆粒以單一溶液之形式靜脈內投與第一組雄性食蟹獼猴(長尾獼猴；4-6 kg體重；2歲以上)，每組之總劑量為2e13 VG/kg或每個衣殼之劑量為4e12 VG/kg。將包含TTM-003衣殼變異體或TTM-006衣殼變異體之AAV顆粒以單一溶液之形式靜脈內投與第二組雄性食蟹獼猴(長尾獼猴；4-6 kg體重；2歲以上)，每組之總劑量為2e13 VG/kg或每個衣殼之劑量為4e12 VG/kg。兩組之生存期均為28天，且然後收集各種CNS及周圍組織以藉由RT-qPCR量測轉殖基因mRNA (表現)；藉由IHC/顯色染色量測蛋白質表現(例如，針對DAB+細胞百分比之DAB染色指示經轉導之細胞之百分比)；藉由免疫螢光顯微術量測腦及脊髓區中之陽性細胞(例如神經元、運動神經元及星狀細胞)百分比；及藉由ddPCR量測病毒DNA (生物分佈)。
如 表34中所示，TTM-001、TTM-002、TTM-003、TTM-006及TTM-027在以4e12 vg/kg之相對低劑量靜脈內投與後，顯示在食蟹獼猴之腦(對於多種衣殼變異體在若干區域觀測到超過30%之轉導細胞)及脊髓之若干區域中CNS轉導及/或生物分佈增加。更具體而言，TTM-003能夠轉導尾狀核、殼核及皮質中至多40%之細胞；TTM-027能夠轉導尾狀核、殼核及皮質中至多30%之細胞；且在4e12 vg/kg劑量下，兩者均展示相對於AAV9及TTM-002向脊髓之遞送改良。
亦在腦之殼核、黑質及顳葉皮質中進行細胞分型以量測由包含TTM-003及TTM-027衣殼變異體或AAV9對照之AAV顆粒轉導之神經元(NeuN+細胞)及星狀細胞(Sox9+細胞)之百分比( 表35)。TTM-003能夠轉導殼核中至多47.8%之神經元及79.5%之星狀細胞；顳葉皮質中25.3%之神經元及87.5%之星狀細胞；及黑質中33.7%之神經元及18.6%之星狀細胞( 表35)。TTM-027能夠轉導殼核中至多27%之神經元及41.8%之星狀細胞；顳葉皮質中12.3%之神經元及51.4%之星狀細胞；及黑質中21.1%之神經元及12.2%之星狀細胞( 表35)。藉由免疫螢光顯微術在脊髓中亦觀測到TTM-027及TTM-003與運動神經元(ChAT+細胞)之共定位( 表35)。在腰、頸及胸脊髓中，TTM-003能夠轉導78.5%之運動神經元且TTM-027能夠轉導53.5%之運動神經元( 表35)。
在周圍組織中，相對於AAV9，所測試之所有TTM-001、TTM-002、TTM-003、TTM-006及TTM-027衣殼變異體均展現出穩健的肝臟去靶向( 表36)。 表34. 在食蟹獼猴之CNS組織中，藉由ddPCR之每個二倍體基因體之病毒基因體拷貝數(vg/dg) (生物分佈)、藉由R T-qPCR之轉殖基因mRNA (mRNA =相對於管家基因之轉殖基因mRNA倍數)，及DAB+細胞之百分比的量化
衣殼 殼核
vg/dg mRNA DAB+ 細胞%
AAV9 0.1 0.03 2
TTM-001 0.2 0.05 5
TTM-002 0.4 0.2 13
TTM-027 1.2 0.83 29
TTM-006 0.7 0.19 15
TTM-003 1.1 1.69 39
衣殼 尾狀核
vg/dg mRNA DAB+ 細胞%
AAV9 0.04 0.02 2
TTM-001 0.16 0.03 5
TTM-002 0.42 0.15 14
TTM-027 1.09 0.67 23
TTM-006 0.74 0.64 27
TTM-003 1.09 2.99 41
衣殼 運動皮質
vg/dg mRNA DAB+ 細胞%
AAV9 0.1 0.02 1
TTM-001 0.3 0.02 4
TTM-002 0.7 0.07 9
TTM-027 1.5 1.38 22
TTM-006 0.8 1.36 14
TTM-003 1.2 7.43 40
衣殼 頸(C3)脊髓
vg/dg ( 腹角) mRNA ( 腹角) DAB+ 細胞% ( 灰質)
AAV9 0.1 0.4 2
TTM-001 0.1 0.1 2
TTM-002 0.3 0.5 8
TTM-027 0.6 1.9 8
TTM-006 0.9 3.1 15
TTM-003 1.0 10.7 16
衣殼 頸背根神經節
vg/dg mRNA DAB+ 細胞%
AAV9 0.10 3.9 1
TTM-001 0.04 0.3 2
TTM-002 0.04 1.0 2
TTM-027 0.05 1.6 1
TTM-006 0.18 7.4 2
TTM-003 0.12 21.2 1
表35. 殼核、顳葉皮質、黑質及脊髓中經 TTM-003及 TTM-027衣殼變異體轉導之神經元(NeuN陽性細胞%)、運動神經元(chA T陽性細胞%)及/或星狀細胞(Sox9細胞%)之量化
衣殼 殼核
NeuN陽性細胞% Sox9陽性細胞%
AAV9 (對照1) 0.2 2.7
AAV9 (對照2) 0.5 6.5
TTM-003 47.8 79.5
TTM-027 27.0 41.8
衣殼 顳葉皮質
NeuN陽性細胞% Sox9陽性細胞%
AAV9 (對照1) 0.1 2.7
AAV9 (對照2) 0.1 4.9
TTM-003 25.3 87.5
TTM-027 12.3 51.4
衣殼 黑質
NeuN陽性細胞% Sox9陽性細胞%
AAV9 (對照1) 2.7 2.8
AAV9 (對照2) 1.6 7.0
TTM-003 33.7 18.6
TTM-027 21.1 12.2
衣殼 腰、頸及胸脊髓
ChAT陽性細胞%
AAV9 (對照1) 14.9
AAV9 (對照2) 23.8
TTM-003 78.5
TTM-027 53.5
表36. 在食蟹獼猴之周圍組織中，藉由ddPCR之每個二倍體基因體之病毒基因體拷貝數(vg/dg) (生物分佈)、藉由R T-qPCR之轉殖基因mRNA (mRNA =相對於管家基因之轉殖基因mRNA倍數)，及DAB+細胞之百分比的量化
衣殼 肝臟
vg/dg mRNA DAB+ 細胞%
AAV9 147 8.9 93
TTM-001 15 0.2 20
TTM-002 13 0.4 32
TTM-027 2 0.2 7
TTM-006 9 0.4 24
TTM-003 5 0.4 24
衣殼 心臟
vg/dg mRNA DAB+ 細胞%
AAV9 2.2 25.8 27
TTM-001 0.4 3.5 10
TTM-002 1.0 8.0 20
TTM-027 0.6 3.4 9
TTM-006 0.7 9.0 20
TTM-003 0.9 23.6 16
衣殼 肌肉(股外側肌)
vg/dg mRNA
AAV9 0.58 1.38
TTM-001 0.09 0.04
TTM-002 0.24 0.08
TTM-027 0.21 0.05
TTM-006 0.86 9.84
TTM-003 1.01 10.85
衣殼 肌肉(腓腸肌)
vg/dg mRNA
AAV9 0.56 2.13
TTM-001 0.08 0.05
TTM-002 0.22 0.13
TTM-027 0.18 0.05
TTM-006 0.51 1.04
TTM-003 0.58 1.57
綜上所述，此等資料表明，TTM-001、TTM-002、TTM-003、TTM-006及TTM-027為食蟹獼猴中之增強之CNS向性衣殼，即使在4e12 vg/kg之低劑量下，其能夠在靜脈內注射後穿過血腦障壁。TTM-003及TTM-027亦能夠轉導若干腦組織中之神經元及星狀細胞以及脊髓中之運動神經元。相對於AAV9，所有衣殼變異體亦顯示出穩健的肝臟去靶向。 D. 食 蟹獼猴(長尾獼猴)中TTM-003之個別評價
AAV顆粒係用TTM-003衣殼變異體產生的，其包含由遍在CAG啟動子驅動之編碼帶有HA標籤的組織蛋白H2b蛋白之自互補病毒基因體。將包含TTM-003衣殼變異體之AAV顆粒以3e13 VG/kg之劑量靜脈內投與食蟹獼猴(長尾獼猴) (n=3隻雄性猴；4-12歲)。生存期為28天，且然後收集各種CNS及周圍組織以藉由RT-ddPCR量測轉殖基因mRNA (表現)、藉由ddPCR量測病毒DNA (生物分佈)及免疫組織化學(IHC)/顯色量化各種組織中陽性細胞百分比(細胞向性)。
如 表40中所示，在靜脈內投與包含TTM-003衣殼變異體之AAV顆粒後，在NHP之腦及脊髓中觀測到TTM-003之大量且廣泛之轉導。當以3e13 VG/kg之劑量投與時，TTM-003能夠轉導腦及脊髓中之多種細胞類型，包括神經元及星狀細胞，如 表40中所量化。亦在肝臟、心臟及肌肉之周圍組織中量測了分佈及轉殖基因表現，如 表41中所提供。
總之，此等資料表明TTM-003係NHP (食蟹獼猴)中CNS向性衣殼，其可感染神經元及非神經元細胞兩者。另外，TTM-003衣殼變異體能夠在靜脈內注射之後成功穿透血腦障壁。 表40：在NHP之腦及脊髓中，藉由ddPCR之每個二倍體基因體之病毒基因體拷貝數(vg/dg) (生物分佈)；藉由R T-ddPCR之轉殖基因mRNA表現(mRNA =相對於管家基因(m TBP)之轉殖基因mRNA表現)；及藉由HA (酬載標籤)及DAB、NeuN (神經元)或Sox9 (星狀細胞)之共定位染色量測的經 TTM-003衣殼變異體轉導之細胞之百分比的量化(各值代表3個NHP之平均值)
組織 vg/dg mRNA HA 及DAB陽性細胞% HA 及NeuN陽性神經元% HA 及Sox9陽性星狀細胞%
額葉皮質 7.5 1.4 40 8.3 86.2
運動皮質 6.5 7.4 60 13.7 88.4
顳葉皮質 4.5 0.9 47 13.4 95.1
內嗅皮質 - - 34 5.9 87.8
海馬體 3.3 1.5 34 11.2 79.2
視丘 7.6 3.1 46 40.8 91.8
尾狀核 7 2.5 55 - -
殼核 5.3 1.8 52 30.8 88
黑質 3.1 1.5 19 13.1 45.5
側膝核(LGN) - - 74 - -
齒狀核 2.1 1.9 38 - -
小腦皮質 1.4 2.9 - - -
脊髓-頸 4.3 8.2 20 - 78.4
脊髓-胸 - - 28 - 85.9
脊髓-腰 - - 24 - 83.8
DRG-頸 2.1 5.1 62 - -
DRG-胸 6.2 0.9 71 - -
DRG-腰 2.6 4.8 65 - -
表41：在NHP之周圍組織中，藉由ddPCR之每個二倍體基因體之病毒基因體拷貝數(vg/dg) (生物分佈)；藉由R T-ddPCR之轉殖基因mRNA表現(mRNA =相對於管家基因(m TBP)之轉殖基因mRNA)；及藉由共定位HA (酬載標籤)及DAB染色量測的經 TTM-003衣殼變異體轉導之細胞之百分比的量化(各值代表三個個別NHP之平均值)
組織 vg/dg mRNA HA 及DAB細胞%
肝臟 52.2 0.4 48
心臟 5.3 67 40
股外側肌 1.4 0.7 43
腓腸肌 1.6 10.6 39
E. 食 蟹獼猴(長尾獼猴)中TTM-027之評價
AAV顆粒係用TTM-027衣殼變異體或AAV9衣殼對照產生的，其包含由遍在CAG啟動子驅動之編碼組織蛋白H2b蛋白之自互補病毒基因體。將包含TTM-027衣殼變異體或AAV9衣殼對照之AAV顆粒以單一溶液之形式靜脈內投與一組雄性食蟹獼猴(長尾獼猴；8-9 kg體重；4-10歲；n=3)，每組之總劑量為2e13 VG/kg或每個衣殼之劑量為4e12 VG/kg。生存期為28天，且然後收集各種CNS及周圍組織/細胞以藉由RT-ddPCR量測轉殖基因mRNA (表現)；藉由IHC/顯色染色及陽性細胞百分比量化量測蛋白質表現；及藉由ddPCR量測病毒DNA (生物分佈)。
如 表42中所示，TTM-027顯示在以4e12 vg/kg之相對低劑量靜脈內投與後，食蟹獼猴之若干腦區域及脊髓中之CNS轉導增加。 表42. 食蟹獼猴之CNS組織中之DAB+細胞百分比；藉由ddPCR之每個二倍體基因體之病毒基因體拷貝數(vg/dg) (生物分佈)；及藉由R T-ddPCR之轉殖基因mRNA表現(mRNA =相對於管家基因(m TBP)之轉殖基因mRNA表現)的量化
組織 DAB 陽性細胞%
AAV9 TTM-027 相對於AAV9之DAB陽性細胞%
尾狀核 2 46 23
殼核 2 45 22.5
視丘 2 36 18
黑質 2 15 7.5
海馬體 1 32 32
內嗅皮質 2 30 15
顳葉皮質 1 41 41
初級運動皮質 4 47 11.75
齒狀核 8 37 4.63
側膝核(LGN) 8 55 6.88
頸脊髓 10 22 2.2
胸脊髓 14 20 1.43
腰脊髓 13 21 1.62
頸DRG 57 59 1.04
胸DRG 50 49 0.98
腰DRG 51 58 1.14
組織 vg/dg
AAV9 TTM-027 相對於AAV9之vg/dg
尾狀核 0.1 2.9 29.00
殼核 0.1 2.3 23.00
初級運動皮質 0.2 2.4 12.00
頸脊髓 0.4 3.0 7.50
頸DRG 1.4 0.1 0.07
組織 mRNA
AAV9 TTM-027 相對於AAV9之mRNA
尾狀核 0.046 2.5 54.35
殼核 0.1 1.0 10.00
頸DRG 3.5 0.3 0.09
亦量化肝臟、心臟及肌肉之周圍組織中DAB陽性細胞之百分比、生物分佈及mRNA表現，其提供於 表43中。相對於AAV9，TTM-027衣殼變異體展現出穩健之肝臟去靶向( 表43)。 表43. 食蟹獼猴之周圍組織中之DAB+細胞百分比；藉由ddPCR之每個二倍體基因體之病毒基因體拷貝數(vg/dg) (生物分佈)；及藉由R T-ddPCR之轉殖基因mRNA表現(mRNA =相對於管家基因(m TBP)之轉殖基因mRNA表現)的量化
組織 DAB 陽性細胞%
AAV9 TTM-027 相對於AAV9之DAB陽性細胞%
肝臟 65 11 0.17
心臟 19 15 0.79
腓腸肌 9 16 1.78
股外側肌 21 13 0.62
組織 vg/dg
AAV9 TTM-027 相對於AAV9之vg/dg
肝臟 113.9 1.0 0.01
心臟 2.2 0.1 0.05
腓腸肌 1.07 0.04 0.04
股外側肌 1.7 0.1 0.06
組織 mRNA
AAV9 TTM-027 相對於AAV9之mRNA
肝臟 19.6 2.1 0.11
心臟 33.0 1.1 0.03
腓腸肌 6.29 0.51 0.08
股外側肌 0.51 0.02 0.04
總之，此等資料表明，TTM-027為食蟹獼猴中之增強之CNS向性衣殼，即使在4e12 vg/kg之低劑量下，其能夠在靜脈內注射後穿過血腦障壁，此與在上述實例7C中觀測到的一致。 F. 食 蟹獼猴(長尾獼猴)中TTM-027之個別評價
AAV顆粒係用TTM-027衣殼變異體產生的，其各自包含由遍在CAG啟動子驅動之編碼帶有HA標籤的組織蛋白H2b蛋白之自互補病毒基因體。將包含TTM-027衣殼變異體之AAV顆粒以3e13 VG/kg之劑量靜脈內投與食蟹獼猴(長尾獼猴) (n=3隻雄性猴；7.4-11歲)。生存期為28天，且然後收集各種CNS及周圍組織以藉由RT-qPCR量測轉殖基因mRNA (表現)、藉由ddPCR量測病毒DNA (生物分佈)及免疫組織化學(IHC)/顯色及免疫螢光量化各種組織中陽性細胞百分比(細胞向性)。
如 表44中所示，在靜脈內投與包含TTM-027衣殼變異體之AAV顆粒後，在NHP之腦及脊髓中觀測到TTM-027之大量且廣泛之轉導。更具體而言，TTM-027在多種CNS組織及區域中顯示出優異的病毒基因體生物分佈、如藉由轉殖基因mRNA表現及IHC所示之CNS中更廣泛的表現( 表44及 表45)，以及腦及脊髓中高度親神經及星狀細胞向性( 表45及 表46)。當以3e13 vg/kg之劑量靜脈內投與時，TTM-027能夠轉導多個腦區域中至多21-65%之神經元(HA及NeuN陽性細胞)及87-97%之星狀細胞(HA及Sox9陽性細胞)；小腦中至多96%之浦肯頁神經元；脊髓中至多84-94%之運動神經元(HA及ChAT陽性細胞)；及脊髓中至多93-97%之星狀細胞(HA及Sox9陽性細胞) ( 表45)。TTM-027亦能夠轉導黑質中97.9%之多巴胺能神經元，如由酪胺酸羥化酶(TH)及HA (酬載標籤)呈陽性之細胞所指示。TTM-027衣殼變異體在NHP中具有良好耐受性。 表44：在NHP之腦及脊髓中，藉由ddPCR之每個二倍體基因體之病毒基因體拷貝數(vg/dg) (生物分佈)；藉由R T-qPCR之轉殖基因mRNA表現(mRNA =相對於管家基因(m TBP)之轉殖基因mRNA表現)；及藉由HA (酬載標籤)及DAB之共定位染色量測的經 TTM-027衣殼變異體轉導之細胞之百分比的量化(各值代表3個NHP之平均值；對於DRG區域，示出感覺神經元資料)
組織 vg/dg mRNA HA 及DAB陽性細胞%
額葉皮質 6.1 6.1 53.8
運動皮質 7.3 3.1 68.1
顳葉皮質 1.7 3.8 51.8
海馬體 5.4 1.8 34.7
視丘 8.7 5.1 50.3
尾狀核 7.6 5.7 57.5
殼核 6.0 1.8 59.1
黑質 2.6 5.4 37.9
齒狀核 2.7 17.7 55.2
頸脊髓 5.3 5.9 25.0
腰脊髓 4.4 11.4 21.3
頸DRG 1.8 4.1 45.5
胸DRG 6.9 3.1 41.0
腰DRG 2.5 3.7 41.6
組織 DAB 陽性細胞%
內嗅皮質 41.0
側膝核(LGN) 74.5
胸脊髓 23.6
浦肯頁神經元 95.7
腦橋核 52.7
下橄欖核 42.6
表45：在NHP之腦中，藉由HA (酬載標籤)及NeuN (神經元)或Sox9 (星狀細胞)之共定位染色量測的用TTM-027衣殼變異體轉導之細胞之百分比的量化(各值代表3個NHP之平均值)
組織 HA 及NeuN陽性神經元% HA 及Sox9陽性星狀細胞%
尾狀核 58 99
內嗅皮質 25 97
額葉皮質 42 99
海馬體 21 87
運動皮質 43 98
殼核 58 95
黑質 51 89
顳葉皮質 31 97
視丘 66 97
表46：在NHP之脊髓灰質中，藉由HA (酬載標籤)及ChAT (運動神經元)或Sox9 (星狀細胞)之共定位染色量測的用TTM-027衣殼變異體轉導之細胞之百分比的量化(各值代表3個NHP之平均值)
組織 HA 及ChAT陽性神經元% HA 及Sox9陽性星狀細胞%
頸脊髓(C2) 84 96
胸脊髓(T8) 86 97
腰脊髓(L2) 94 92
亦在肝臟、心臟及肌肉(股外側肌及腓腸肌)之周圍組織中量測以3e13 vg/kg之劑量靜脈內投與包含TTM-027衣殼變異體之AAV顆粒後之生物分佈及mRNA表現，如 表47中所提供。TTM-027在NHP之肝臟中展示極低之生物分佈及mRNA表現( 表47)，且顯示實質上降低之肝臟向性。 表47：在NHP之周圍組織中，藉由ddPCR之每個二倍體基因體之病毒基因體拷貝數(vg/dg)(生物分佈)、藉由RT-ddPCR之相對於管家基因(mTBP)之轉殖基因mRNA表現及DAB+細胞百分比的量化(各值代表3個NHP之平均值)
組織 vg/dg 相對於管家基因(mTBP)之轉殖基因mRNA表現 DAB 陽性細胞%
肝臟 13.9 0.5 56.1
心臟 2.7 8.0 38.2
股外側肌 1.5 2.2 18.3
腓腸肌 2.2 9.6 38.9
綜上所述，TTM-027衣殼變異體之個別表徵進一步證明及確認，TTM-027為食蟹獼猴中之增強之CNS向性衣殼，能夠在靜脈內注射後穿過血腦障壁，與上述實例7C及7E中觀測到的一致。 實例8：藉由靜脈內投與AAV之SOD1 mRNA敲低
在本實例中，在SOD1 G93A基因轉殖小鼠ALS模型中評估藉由靜脈內遞送AAV之SOD1 mRNA敲低後的主要終點(體重、神經學評分、存活、功能終點及免疫組織化學)。此小鼠模型表現大量突變體SOD1且展現出成人發作之脊髓運動神經元之神經退化及導致癱瘓之進行性運動缺陷。
簡言之，使約52日齡之B6.Cg-Tg(SOD1 G93A)1Gur小鼠及野生型非攜帶者小鼠之性別、年齡、拷貝數及體重平衡。向小鼠靜脈內投與具有VOY101衣殼及在H1啟動子(AAV_VOY101.SOD1)之控制下編碼SOD1靶向調節多核苷酸miR104-788.2 (SEQ ID NO: 2562，表14)之病毒基因體(SEQ ID NO: 109，表15)的編碼SOD1 miRNA之AAV顆粒。為評估SOD1 miRNA之載體分佈及藥效學效應，在屍體剖檢時收穫頸脊髓、胸脊髓及腰脊髓之上部及下部區域，在液氮中冷凍，且在-80℃下儲存直至使用。將各節段之下部區域均質化、等分，且自同一勻漿中獨立地分離全細胞DNA及總RNA兩者。實驗設計總結於表28中。 表28. 實驗設計。
組別 基因型 檢品 劑量(VG/kg) 體積 (μl) N 讀出
WT-V WT-B6SJL小鼠(B6.Cg-Tg(SOD1 G93A)1Gur非攜帶者) 媒劑 0 100 10M/10F 體重、存活、運動終點、IHC
V B6.Cg-Tg(SOD1 G93A)1Gur 媒劑 0 100 12M/12F
C B6.Cg-Tg(SOD1 G93A)1Gur AAV_VOY101.SOD1 2E13 100 12M/12F
A B6.Cg-Tg(SOD1 G93A)1Gur AAV_VOY101.SOD1 6.3E12 100 12M/12F
B B6.Cg-Tg(SOD1 G93A)1Gur AAV_VOY101.SOD1 2E12 100 12M/12F
脊髓載體基因體分佈
使用針對轉殖基因及宿主靶標之多重ddPCR檢定評估SOD1 G93A基因轉殖小鼠中靜脈內投與後之SOD1 miRNA AAV顆粒之分佈。如 圖2A至圖2C所示，對於各治療組，在所評估之所有脊髓節段(下頸脊髓、下胸脊髓及下腰脊髓)中觀測到幾乎相同之載體分佈。在所有脊髓節段中，2E13 vg/kg組與6.3E12 vg/kg組(C組及A組)之間的平均載體分佈存在2倍差異，且在2E13 vg/kg組與2E12 vg/kg組(C組及B組；單因子ANOVA/Tukey多重比較)之間存在顯著差異。6.3E12 vg/kg組與2E12 vg/kg組(A組及B組)之間的平均載體分佈差異為至少6倍。 脊髓中之SOD1 mRNA減少
圖3A至圖3C展示在靜脈內投與SOD1 miRNA AAV顆粒後，SOD1 G93A基因轉殖小鼠之脊髓中人類SOD1 mRNA減少之量。對於所測試之劑量範圍(2E12至2E13 vg/kg)，觀測到劑量依賴性hSOD1 mRNA減少。在所有測試脊髓區中，在2E13 vg/kg組及6.3E12 vg/kg組(分別為C組及A組)與對照組(V)之間以及在2E13 vg/kg組與2E12 vg/kg組之間(分別為C組及B組；單因子ANOVA及Tukey多重比較)，hSOD1敲低顯著降低。敲低量在2E13 vg/kg組(C組)中為約70%，在6.3E12 vg/kg組(A組)中為約50%，且在2E12 vg/kg組(B組)中為約20%，在脊髓區域中，各組之hSOD1 mRNA之減少量相似。 SOD1 miRNA 在小鼠ALS模型中之功效
測試靜脈內遞送之SOD1 miRNA AAV顆粒對SOD1 G93A基因轉殖小鼠模型之各種特徵的影響。
如 圖4A至圖4C所示，對於所評估之所有三個脊髓區，在投與載體之2個對數內，SOD1 mRNA水準與載體分佈之間存在明顯相關性。在頸脊髓及胸脊髓中觀測到約75%敲低(略高於腰脊髓)，基於4參數非線性曲線擬合，IC50 (約62.5% KD)為約2 vg/dg (IC50下頸脊髓：2.01 vg/dg，範圍：1.58-2.61 vg/dg；IC50下胸脊髓：1.86 vg/dg，範圍：1.38-2.55 vg/dg；IC50下腰脊髓：3.21 vg/dg，範圍：2.54-4.42 vg/dg)。
亦在靜脈內投與SOD1 miRNA AAV顆粒之SOD1 G93A小鼠中評估功能結果。
對雌性及雄性SOD1 G93A小鼠進行神經評分綜合評級評估。此方案涵蓋設計用於評估運動表現(包括盤旋、抓握、運動、一般狀況、翻正反射、爪置放、對側反射、視覺前爪伸展及對側旋轉)之簡單神經評分系統，量表範圍為0-4，其中0=無缺陷，1=首次症狀，2=麻痺發作，3=癱瘓，且4=人道終點。在雄性及雌性小鼠之神經評分綜合評級中均觀測到劑量依賴性改良，但劑量依賴性在雌性小鼠中更明顯( 圖5)。雄性小鼠在AAV顆粒投與時可能展現出更嚴重之表型及進展之病理學，從而導致對SOD1 miRNA表現之敏感性提高及鐘形功效曲線。
類似地，在靜脈內投與SOD1 miRNA AAV顆粒之雌性、雄性及所有SOD1 G93A小鼠中觀測到存活之改良( 圖6A至圖6C)。在雌性小鼠中，媒劑治療組之中位存活期為140天且2E12 vg/kg組之中位存活期為139天。無法在300日齡時計算6.3E12 vg/kg及2E13 vg/kg組之中位存活期，此乃因在此時間點剩餘＞50%之群組。在300日齡時，對於所有測試劑量，存在存活的雌性小鼠，其中6.3E12 vg/kg組及2E13 vg/kg組展示出與2E12 vg/kg組相比相似更高的存活機率( 圖6A)。在雄性小鼠中，媒劑治療組之中位存活期為133天、2E13 vg/kg及2E12 vg/kg組之中位存活期分別為124天(不顯著)及145天(不顯著)，以及6.3E12 vg/kg組之中位存活期為263天(**p=0.003)。在雄性中，6.3E12 vg/kg組展示300日齡時存活小鼠之數量最多，其次為2E13 vg/kg組，而所有2E12 vg/kg小鼠在約280日齡時均已死亡( 圖6B)。使用對數秩(Mantel-Cox)測試進行統計分析。當組合雄性及雌性之資料時，雖然投與媒劑之SOD1 G93A小鼠在160日齡前死亡，但觀測到所有SOD1 miRNA AAV顆粒組之存活小鼠，其中6.3E12 vg/kg組在280日齡時存活小鼠數量最多。在280日齡時，2E12 vg/kg組觀測到最少數量之存活小鼠( 圖6C)。
亦評估握力( 圖7A、圖7B、圖8A、圖8B)。握力藉由量測將小鼠拉離窄條或網格所需之力來提供前爪及後肢肌肉強度之量度。用於測試抓握強度之設備由連接至力換能器之抓握桿組成。各動物經歷五次試驗，且計算平均值。自實驗中移除由於疾病進展而不再能夠抓握條塊或網格之小鼠，如雄性及雌性之2E13 vg/kg治療組中之情況。在雌性及雄性SOD1 G93A小鼠中，6.3E12 vg/kg之中間劑量具有在第130日齡時維持前肢及四肢組合之接近野生型水準之握力的最強效應。在雌性小鼠中，2E12 vg/kg劑量未展示握力之改良，其趨勢與投與媒劑之小鼠相似，而在雄性小鼠中，在此劑量下觀測到握力之明顯改良。此等資料與其他行為發現一致，表明雌性小鼠對更高劑量之AAV顆粒更敏感，而雄性小鼠更易受到SOD1 miRNA之過表現之影響且不耐受最高劑量(2E13 vg/kg)。
總體而言，此等研究顯示在整個脊髓頭-尾範圍內之穩健SOD1敲低，其與載體基因體水準及運動表現及存活延長之顯著改良相關。此等結果表明，強效且可耐受之AAV miRNA介導之敲低與BBB穿透劑衣殼之靜脈內給藥之組合在SOD1-ALS小鼠模型中顯示出實質性表型拯救。 實例9：藉由在不同啟動子下表現之SOD1 miRNA之SOD1 mRNA敲低
在本實例中，藉由量測HEK293T及SH-SY5Y細胞株中剩餘之SOD1 mRNA來評估SOD1 mRNA敲低。簡言之，將HEK293T及SH-SY5Y細胞以15,000個細胞密度平鋪於96孔板中。次日，用編碼SOD1 miRNA之AAV顆粒處理細胞，該AAV顆粒具有AAV2衣殼及在H1啟動子(AAV_VOY101.SOD1) (表16)或其他Pol II啟動子(CBA、miniCBA、miniEF1AV2、PGK、MP84、hSYN、CBA_CpG耗竭外顯子、miniCBA_CpG耗竭外顯子、miniEF1AV2_CpG耗竭外顯子、PGK_CpG耗竭外顯子、MP84_CpG耗竭外顯子及hSYN_CpG耗竭外顯子及hSYN_CpG耗竭外顯子，該等序列包括在表17中)之控制下編碼SOD1靶向調節多核苷酸miR104-788.2 (SEQ ID NO: 2562，表14)之病毒基因體(表16及表17)。在AAV顆粒處理後兩天，收穫細胞且提取總RNA以藉由qRT-PCR量測SOD1 mRNA水準。吾等在HEK293T及SH-SY5Y細胞中均觀測到劑量依賴性SOD1 mRNA敲低(KD)。在H1 (Pol III)啟動子下表現之miRNA的SOD1 KD最高，在所測試之兩個MOI下具有幾乎95% KD ( 圖9)。對於吾等測試之Pol II啟動子，KD水準如下：CBA= CBA_CpG耗竭外顯子＞ miniEF1AV2= miniEF1AV2_CpG耗竭外顯子＞PGK= PGK_CpG耗竭外顯子＞miniCBA=miniCBA_CpG耗竭外顯子＞hSYN= hSYN_CpG耗竭外顯子＞MP84=MP84_CpG耗竭外顯子( 圖9)。在具有完全CpG量之轉殖基因與減少之CpG量之轉殖基因(對於在轉殖基因之外顯子區中已耗竭CpG之轉殖基因)之間未觀測到顯著差異( 圖9)。 實例10. 藉由靜脈內投與AAV之SOD1 mRNA敲低
在本實例中，將在靜脈內投與本文所述之AAV衣殼變異體後評估主要終點(載體基因體組織分佈、載體基因體細胞向性及各種組織中之SOD1 mRNA減少)。簡言之，將使用年齡為2-5歲且體重為2-4 kg之食蟹獼猴(長尾獼猴)進行研究。在給藥日期前大約三週，將自足夠數量之動物收集1 ml血液用於血清製備，使用標準方案進行中和抗體(Nab)篩選，該等動物之身體檢查、臨床化學及全血細胞計數(CBC)均正常。血清學合格之動物將分配至研究。對於各衣殼變異體以及媒劑對照，動物將隨機分為低(1×10 12vg/kg)、中(3×10 12vg/kg)及高(1×10 13vg/kg)劑量組。各個體將在第0天使用輸注幫浦經由隱靜脈或頭靜脈接受單次靜脈內輸注，目標輸注速率為5 ml/kg/小時。將在AAV投與後第28天收穫所選組織組，特別注意腦及脊髓之處理。為評估SOD1 miRNA之載體分佈及藥效學效應，將收穫頸、胸及腰脊髓切片。為評估miRNA之細胞向性，將收穫偶數編號之頸、胸及腰脊髓切片。將評估額外CNS區域/組織(例如，運動皮質及腦幹)，以及大量周圍組織。將使用針對轉殖基因及宿主靶標之多重ddPCR檢定來評估SOD1 miRNA AAV顆粒之分佈。將利用原位雜交來偵測miRNA之細胞分佈及所得SOD1減少。 實例11. TTM-002 AAV衣殼變異體之向性
本實例進一步研究了由TTM-002衣殼變異體(SEQ ID NO: 982 (胺基酸)及984 (DNA)，包含SEQ ID NO: 2)轉導之向性及CNS細胞，如上表3中所述。TTM-002之胺基酸及DNA序列分別在例如表4及表5中提供。
AAV顆粒係用TTM-002衣殼變異體囊封GFP轉殖基因(AAV_TTM-002.GFP)或由異源CBA組成型啟動子驅動之酬載(AAV_TTM-002.Payload)產生的。
對源自中腦區之小鼠細胞進行了兩次串聯單細胞RNA定序(scRNA-Seq)。在第一次運行中，在AAV_TTM-002.Payload顆粒治療後第28天自兩隻小鼠中收集細胞。在第二次運行中，用AAV_TTM-002.GFP顆粒，以相同方式但沒有異種移植物進行處理。作為腫瘤球(在腫瘤球培養基中；Sigma #C-28070)生長之MDA-MB-361-Luc#1高傳代細胞之原位異種移植物被顱內注射(250,000個細胞/2 μL/小鼠)至2月齡雌性SCID CB17 (突變：Icr-Prkdcscid/IcrIcoCrl)同類免疫缺陷小鼠(Charles River Laboratories)中。注射係相對於前囟之2.5 mm (側面)，-1 mm (後部)，降低-3 mm腹側及升高+.5 mm背側到最終-2.5 mm腹側位置。兩天後，製備AAV_TTM-002.Payload顆粒之稀釋液(運行1)，或在沒有異種移植物之情況下，製備AAV_TTM-002.GFP顆粒之稀釋液(運行2)。100 μL (2.5e11 VG/動物)之AAV_TTM-002.payload顆粒或AAV_TTM-002.GFP顆粒之IV注射液經由小鼠之尾靜脈投與(每組n=5隻小鼠)。在注射後7天，來自運行1之小鼠在AmiHTX (光譜成像儀)中進行成像，以觀察人類腫瘤細胞之生物發光，此係由於因應於腹膜內螢光素注射而表現螢光素酶所引起的。
注射AAV_TTM-002.payload顆粒或AAV_TTM-002.GFP顆粒後28天，對各運行之兩隻小鼠進行屍檢，分離腦樣品，解剖且分離中腦。然後將中腦樣品暴露於冷蛋白酶抑制劑(Creative Biomart #NATE-0633)並在6℃下解離。對於自運行1 (AAV_TTM-002.Payload顆粒)之小鼠收集之樣品，進行髓磷脂耗竭(Miltenyi，#130-096-731)，細胞經由40μM網孔過濾以濾除神經元且加載至10X chromium G芯片上。執行scRNA-Seq (10X Genomics)且在NextGen500定序機(Illumina)上對樣品進行定序。對於自運行2 (AAV_TTM-002.GFP顆粒及沒有異種移植物)收集之樣品，細胞沒有進行髓磷脂耗竭或經由40μM網孔過濾以包括神經元。運行2後分離之細胞進行FACS分選GFP+/7AAD- (活的GFP+細胞)。將所得細胞加載到10X chromium G芯片上，且運行及處理scRNA-Seq (10X Genomics)。
對於運行1，過濾scRNA-Seq資料以包括每個細胞僅含有大於1000個基因及小於5000個基因且粒線體基因表現小於20%之細胞。對於運行2，過濾scRNA-Seq資料以包括每個細胞僅含有大於200個基因及小於5000個基因且粒線體基因表現小於20%之細胞。將資料正規化、縮放並整合到一個組合資料集中。以0.3之分辨率生成集群，且使用一組細胞類型特異性基因確定各集群之身份(例如，如Brown等人，2021. 「Deep Parallel Characterization of AAV Tropism and AAV-Mediated Transcriptional Changes via Single-Cell RNA Sequencing」. Front. Immunol.12:730825所述；其內容特此以全文引用之方式併入)。作為TTM-002轉導之平行量度，計算每個集群之GFP分選細胞之百分比，以及每個集群之酬載表現基因之百分比。
對於表現酬載之細胞，內皮細胞具有最高比例之酬載陽性細胞，其次係星狀細胞( 表33)。對於GFP+分選之細胞，當按表現GFP之細胞比例分選時，內皮細胞具有最高比例之GFP陽性細胞，且星狀細胞係第三高的細胞類型( 表33)。此等資料表明TTM-002轉導展現出內皮細胞及星狀細胞向性。此外，星狀細胞集群具有第二高的Olig2表現水準(寡樹突細胞顯示出最大的Olig2表現)。對分離自AAV_TTM-002.GFP感染小鼠之腦樣品進行IHC染色，並且表明GFP與一些但非所有Olig2+細胞共定位。髓磷脂鹼性蛋白(MBP)係寡樹突細胞之標記物，未觀測到共染色。在NeuN陽性細胞(神經元)、GFAP陽性細胞(星狀細胞)及Iba1陽性細胞(小神經膠質細胞)中亦沒有觀測到與GFP之共染色。在整個小鼠腦之矢狀切面上觀測到GFP染色，這表明中腦之染色增加。觀測到的GFP表現細胞沒有像寡樹突細胞前驅細胞(OPC)那樣的雙極形態，因此，連同scRNA-Seq資料一起，此等結果表明在AAV治療後第28天，中腦中之Olig2+星狀細胞被包含TTM-002衣殼之AAV顆粒轉導，具有細胞類型特異性向性。 表33. 酬載陽性細胞及GFP陽性細胞之量化
集群身份 酬載細胞/集群% 集群身份 GFP細胞/集群%
內皮-2 6.58 內皮-2 6.58
星狀細胞 4.50 內皮-1 3.45
外被細胞 4.23 血管及軟腦膜細胞(VLM) 2.38
成熟寡樹突細胞 3.85 星狀細胞 2.37
內皮-1 3.09 血管平滑肌細胞(VSC) 1.03
定型寡樹突細胞 1.90 外被細胞 0.77
血管平滑肌細胞(VSC) 1.72 小神經膠質細胞 0.00
小神經膠質細胞 0.40 定型寡樹突細胞 0.00
巨噬細胞 0.00 巨噬細胞 0.00
血管及軟腦膜細胞(VLM) 0.00 寡樹突細胞 0.00
寡樹突細胞 0.00 定型寡樹突細胞-2 0.00
定型寡樹突細胞-2 0.00 成熟寡樹突細胞 0.00
實例12. TTM-002及TTM-027 AAV衣殼變異體之劑量反應評價
本實例研究TTM-002 (SEQ ID NO: 982 (胺基酸)及SEQ ID NO: 984 (DNA)，包含SEQ ID NO: 2)及TTM-027 (SEQ ID NO: 69 (胺基酸)及SEQ ID NO: 9 (DNA)，包含SEQ ID NO: 3272)衣殼變異體在小鼠中以遞增劑量靜脈內投與後之轉導。
AAV顆粒係用TTM-002衣殼變異體或TTM-027衣殼變異體產生的，其包含由遍在CBA啟動子驅動之編碼帶有HA標籤之組織蛋白(H3F3-HA)及土撥鼠肝炎病毒轉錄後調控元件(WPRE)之單股病毒基因體。經由尾靜脈注射以1e12 vg/kg、3.2e12 vg/kg、1e13 vg/kg、3.2e13 vg/kg或1e14 vg/kg之遞增劑量將包含TTM-002衣殼變異體或TTM-027 AAV衣殼變異體之AAV顆粒投與小鼠(n=3隻小鼠/給藥組；Balb/c；6-8週齡)。3.2e12 vg/kg之劑量大約等於上文實例7C中食蟹獼猴(長尾獼猴)中每個衣殼所用之劑量。生存期為28天，且收集CNS組織以藉由qPCR量測轉殖基因mRNA (表現)及腦中HA陽性細胞之百分比。
如 表37及 圖10A所示，在以遞增劑量靜脈內投與AAV顆粒後，在小鼠皮質中觀測到TTM-002及TTM-027衣殼變異體轉導之劑量依賴性增加。與TTM-002相比，所有劑量下TTM-027在小鼠皮質中轉導的細胞百分比均較高。在所測試之最高劑量1e14 vg/kg下，TTM-027轉導皮質中65%之細胞，而TTM-002轉導38%之細胞，其中TTM-002顯示神經元與星狀細胞之間的均勻分佈，分別藉由NeuN及Sox9標記物鑑別( 表38)。亦觀測到，劑量自3.2e12增加至3.2e13 vg/kg導致陽性細胞百分比增加大於3倍。與TTM-002或TTM-027陽性細胞之百分比一致，在以遞增劑量靜脈內投與TTM-002及TTM-027衣殼變異體後，在小鼠腦中亦觀測到轉殖基因mRNA表現之劑量依賴性增加( 圖10B及 表37)。
綜上所述，此等資料表明在小鼠中之2對數劑量範圍(1e12至1e14 VG/kg)之劑量反應，在最大劑量下未達到飽和( 表37及 表38)。 表37. 藉由顯色HA染色及蘇木精之共定位量測的小鼠皮質中對TTM-002或TTM-027衣殼變異體呈陽性之細胞/mm 2(HA陽性細胞/mm 2)或用TTM-002或TTM-027衣殼變異體轉導之細胞之百分比(HA陽性細胞%)的量化，以及靜脈內投與後小鼠腦中相對於管家基因(mTBP)之轉殖基因mRNA表現之藉由qPCR之量化(各值係自三隻小鼠中分離出的各小鼠皮質內的三個個別量測值的平均值(n=3))
衣殼變異體 劑量(vg/kg) HA 陽性細胞/mm 2 HA 陽性細胞% 相對於管家基因之轉殖基因mRNA表現
TTM-002 1e14 679.147 37.668 9.3349
3.2e13 414.043 26.279 3.7168
1e13 277.497 19.078 2.8445
3.2e12 151.841 8.450 0.9074
1e12 61.018 3.616 0.1681
媒劑 0 0.185 0.011 0.0003
TTM-027 1e14 1019.777 65.451 19.9655
3.2e13 835.525 46.076 14.0024
1e13 585.873 31.717 6.7856
3.2e12 301.636 14.169 0.9269
1e12 78.350 4.427 0.6379
表38. 藉由螢光顯微術及與HA及細胞類型特異性標記物共染色之小鼠皮質中對TTM-002衣殼變異體呈陽性之總細胞/mm 2(HA陽性細胞/mm 2)、神經元(亦為HA陽性之NeuN陽性細胞/mm 2)及星狀細胞(亦為HA陽性之Sox9陽性細胞/mm 2)或用TTM-002衣殼變異體轉導之總細胞(HA陽性細胞%)、神經元(亦為HA陽性之NeuN陽性細胞%)及星狀細胞(亦為HA陽性之Sox9陽性細胞%)之百分比的量化(各值係自三隻小鼠分離之各小鼠皮質內之三個個別量測值之平均值(n=3))
衣殼變異體 劑量(vg/kg) HA 陽性細胞/mm 2 HA 陽性細胞% 亦為HA陽性之NeuN陽性細胞/mm 2 亦為HA陽性之NeuN陽性細胞% 亦為HA陽性之Sox9陽性細胞/mm 2 亦為HA陽性之Sox9陽性細胞%
TTM-002 1e14 495.9 28.6 154.7 13.5 26.2 12.8
3.2e13 344.0 18.8 126.8 9.2 19.8 14.6
1e13 270.7 15.6 73.2 5.5 12.0 8.0
3.2e12 176.9 8.2 59.2 3.6 8.5 4.4
1e12 57.9 3.5 7.3 0.6 4.4 2.3
媒劑 0 0 0 0 0 0 0
實例13：小鼠中TTM-002及TTM-001衣殼變異體之個別表徵
此等實驗之目的係在小鼠中靜脈內注射後，確定TTM-001及TTM-002衣殼及其變異體相對於AAV9在腦、心臟及肝臟中的轉導水準、向性、穿過血腦障壁之能力及總體空間分佈。研究TTM-001 (SEQ ID NO: 981)、TTM-002 (SEQ ID NO: 982)以及在環IV中包含局部修飾之TTM-002及TTM-001衣殼之變異體，包括TTM-003 (SEQ ID NO: : 36)、TTM-006 (SEQ ID NO: 39)、TTM-018 (SEQ ID NO: 51)及TTM-019 (SEQ ID NO: 52)。此等衣殼變異體之胺基酸序列提供於例如表4中。
AAV顆粒係用此等衣殼變異體中之各者囊封由CAG啟動子驅動之編碼螢光報告子構築體ZsGreen-HA之自互補基因體產生的。各衣殼變異體及AAV9對照藉由尾靜脈注射，將AAV顆粒調配物以1e13 VG/kg靜脈內投與三隻BALB/c小鼠來進行測試。生存期為28天，且然後收集各種CNS及周圍組織以量測生物分佈及轉殖基因mRNA表現。
檢定自注射有囊封於TTM-002衣殼、TTM-001衣殼或包含局部修飾之TTM-001或TTM-002衣殼之變異體中之AAV顆粒的小鼠分離之腦，以計算ZsGreen表現及/或轉殖基因DNA。資料以相對於AAV9對照之倍數提供( 表39)。TTM-001及TTM-002衣殼之所有變異體以及TTM-001及TTM-002顯示相對於AAV9增加之CNS向性及在腦中之表現( 表39； 圖11A至 圖11B)。更具體而言，TTM-001及TTM-002展示出在整個腦及脊髓中之廣泛分佈，在病毒DNA生物分佈及轉殖基因RNA表現方面分別優於AAV9對照大約30倍及40倍( 圖11A至圖11B； 表39)。藉由qPCR，相對於AAV9對照，TTM-001及TTM-002衣殼之變異體以及TTM-001及TTM-002亦顯示出肝臟中之mRNA及DNA表現減少，其中TTM-002展示出低於AAV9對照14倍之基因表現( 表39； 圖11C至 圖11D)。藉由用包含所研究之AAV衣殼變異體之AAV顆粒轉導後之腦(包括皮質、視丘及小腦)、脊髓(灰質)及肝臟之免疫組織化學(IHC)染色觀測到類似結果。心臟、骨骼肌及腎臟之轉導在AAV9與TTM-002之間未展示出主要差異。 表39. 小鼠中TTM-001及TTM-002衣殼之變異體相對於AAV9之ZsGreen表現及轉殖基因DNA及/或RNA表現
衣殼變異體 腦 肝臟
相對於AAV9之ZsGreen表現變化倍數 相對於AAV9之轉殖基因DNA變化倍數 相對於AAV9之轉殖基因RNA變化倍數 相對於AAV9之轉殖基因DNA變化倍數
AAV9 1.0 1.0 1.000 1.000
TTM-001 32.3 31.9 0.337 0.348
TTM-002 40.9 37.0 0.072 0.034
TTM-006 16.1 36.9 0.036 0.013
TTM-018 22.8 27.0 0.231 0.223
TTM-019 14.6 14.4 0.117 0.112
TTM-003 17.3 14.6 0.015 0.026
實例14：NHP中活體內靶向SOD1之載體化siRNA之評價
本實例研究包含靶向SOD1之siRNA的調節多核苷酸VOYSOD1miR104-788.2 (SEQ ID NO: 2562 (DNA)或SEQ ID NO: 5013 (RNA))或VOYSOD1miR127-860 (SEQ ID NO: 2579 (DNA)及SEQ ID NO: 4821 (RNA))減少食蟹獼猴(長尾獼猴)中活體內SOD1 mRNA及/或蛋白之表現的能力。
產生各自包含TTM-002衣殼變異體(SEQ ID NO: 982 (胺基酸)及SEQ ID NO: 984 (DNA)，包含SEQ ID NO: 2)、TTM-003衣殼變異體(SEQ ID NO: 36 (胺基酸)及SEQ ID NO: 72 (DNA)，包含SEQ ID NO: 3589)，或TTM-027衣殼變異體(SEQ ID NO: 69 (胺基酸)及SEQ ID NO: 9 (DNA)，其包含SEQ ID NO: 3272)之AAV顆粒。此等AAV顆粒各自囊封在H1啟動子(SEQ ID NO: 83)之控制下編碼VOYSOD1miR104-788.2 (SEQ ID NO: 5013 (RNA))調節多核苷酸或VOYSOD1miR127-860 (SEQ ID NO: 4821 (RNA))調節多核苷酸之自互補病毒基因體。編碼VOYSOD1miR104-788.2調節多核苷酸之病毒基因體包含SEQ ID NO: 109之核苷酸序列；且編碼VOYSOD1miR127-860調節多核苷酸之病毒基因體包含SEQ ID NO: 4820之核苷酸序列。以3e13 vg/kg之劑量向雄性及雌性食蟹獼猴(長尾獼猴；約4 kg體重；2-5歲；n=3)靜脈內投與此等AAV顆粒，且三隻食蟹獼猴(長尾獼猴；約4 kg體重；2-5歲；n=3)接受媒劑對照。生存期為56天，且然後收集CNS及周圍組織以藉由RT-qPCR量測治療後剩餘之SOD1 mRNA水準(將食蟹獼猴SOD1 mRNA正規化至TBP之管家基因，對數轉換且針對媒劑組之平均值校準)；SOD1蛋白水準；及病毒DNA水準(生物分佈)。腹角組織獲自C3及L3脊髓之穿孔。
如 表49中所示，在靜脈內投與包含不同衣殼及酬載組合之所有AAV顆粒後，在第56天時，於脊髓之頸和腰腹角中觀測到2.5-7病毒基因體/二倍體基因體(vg/dg)之病毒生物分佈，其中用包含TTM-027衣殼變異體或TTM-003衣殼變異體之AAV顆粒觀測到最大生物分佈。在靜脈內投與包含TTM-027衣殼變異體或TTM-003衣殼變異體、編碼VOYSOD1miR104-788.2調節多核苷酸且包含SEQ ID NO: 109之病毒基因體序列的AAV顆粒後，在脊髓之頸和腰腹角中觀測到最強SOD1 mRNA敲低。更具體而言，包含TTM-027衣殼且包含SEQ ID NO: 109之病毒基因體(編碼VOYSOD1miR104-788.2)之AAV顆粒導致在NHP中腰腹角中之SOD1 mRNA敲低55%及頸腹角中之SOD1 mRNA敲低41% ( 表49)。在投與編碼VOYSOD1miR127-860且包含SEQ ID NO: 4820之病毒基因體之AAV顆粒後，無論使用何種衣殼變異體，在脊髓中幾乎未觀測到SOD1 mRNA之敲低。
在背根神經節(DRG)中，在靜脈內投與包含TTM-027或TTM-002衣殼變異體且包含SEQ ID NO: 109之病毒基因體(編碼VOYSOD1miR104-788.2調節多核苷酸)或SEQ ID NO: 4820之病毒基因體(編碼VOYSOD1miR127-860調節多核苷酸)之AAV顆粒後第56天，觀測到1.6-8.8 vg/kg之病毒分佈。無論使用何種衣殼變異體，在用包含SEQ ID NO: 109之病毒基因體(編碼VOYSOD1miR104-788.2調節多核苷酸)之所有AAV顆粒投與後觀測到SOD1 mRNA之減少，但包含TTM-027衣殼變異體及SEQ ID NO: 109之病毒基因體之AAV顆粒顯示出SOD1 mRNA水準之最強降低。更具體而言，包含TTM-027衣殼變異體及SEQ ID NO: 109之病毒基因體(編碼VOYSOD1miR104-788.2調節多核苷酸)之AAV顆粒導致腰DRG中48% SOD1 mRNA減少，頸DRG中44% SOD1 mRNA減少，以及胸DRG中SOD1 mRNA之69%敲低。包含TTM-002衣殼變異體及SEQ ID NO: 109之病毒基因體(編碼VOYSOD1miR104-788.2調節多核苷酸)之AAV顆粒在所有水準之DRG中僅產生26-52%之SOD1 mRNA減少。
在運動皮質中，在靜脈內投與包含不同衣殼及酬載組合之所有AAV顆粒後第56天觀測到4-10 vg/dg之病毒生物分佈，其中用包含TTM-027衣殼變異體之AAV顆粒觀測到最大生物分佈( 表49)。相對於TTM-002，包含TTM-027衣殼變異體或TTM-003衣殼變異體之AAV顆粒均顯示增加之生物分佈。與脊髓類似，在靜脈內投與包含TTM-027衣殼變異體或TTM-003衣殼變異體、編碼VOYSOD1miR104-788.2調節多核苷酸且包含SEQ ID NO: 109之病毒基因體序列的AAV顆粒後，在運動皮質中亦觀測到最強SOD1 mRNA敲低( 表49)及SOD1蛋白之減少( 圖12A)。包含TTM-027衣殼且包含SEQ ID NO: 109之病毒基因體(編碼VOYSOD1miR104-788.2)之AAV顆粒導致運動皮質中SOD1 mRNA之37%敲低。另外，在腦幹之舌下核及運動皮質之層V中之Betz細胞中均偵測到來自包含囊封SEQ ID NO: 109之病毒基因體(編碼VOYSOD1miR104-788.2調節多核苷酸)之TTM-027衣殼變異體的AAV顆粒之病毒mRNA之生物分佈。然而，在投與編碼VOYSOD1miR127-860且包含SEQ ID NO: 4820之病毒基因體之AAV顆粒後，無論使用何種衣殼變異體，在運動皮質中幾乎未觀測到SDO1 mRNA之敲低( 表49)或觀測到SOD1蛋白之減少( 圖12B)。
亦量測心臟及肝臟周圍組織中之生物分佈及SOD1 mRNA敲低( 表49)。在肝臟中，在靜脈內投與包含不同衣殼及酬載組合之所有AAV顆粒後第56天觀測到21-92 vg/dg之病毒生物分佈。編碼VOYSOD1miR104-788.2調節多核苷酸且包含SEQ ID NO: 109之病毒基因體序列之AAV顆粒在所測試之所有衣殼變異體中均在肝臟中產生可比之敲低；而在用編碼VOYSOD1miR127-860且包含SEQ ID NO: 4820之病毒基因體之AAV顆粒的肝臟中，幾乎未觀測到SOD1 mRNA之敲低。在心臟中，在靜脈內投與包含不同衣殼及酬載組合之所有AAV顆粒後第56天觀測到0.3-3.1 vg/dg之病毒生物分佈。另外，在心臟中，包含TTM-002衣殼變異體且包含SEQ ID NO: 109之病毒基因體(編碼VOYSOD1miR104-788.2)之AAV顆粒導致SOD1 mRNA之60%敲低；包含TTM-027衣殼變異體且包含SEQ ID NO: 109之病毒基因體(編碼VOYSOD1miR104-788.2)之AAV顆粒導致SOD1 mRNA之37%敲低；並且包含TTM-003衣殼變異體且包含SEQ ID NO: 109之病毒基因體(編碼VOYSOD1miR104-788.2)之AAV顆粒導致SOD1 mRNA之40%敲低。與肝臟類似，在用編碼VOYSOD1miR127-860且包含SEQ ID NO: 4820之病毒基因體之AAV顆粒之心臟中，幾乎未觀測到SOD1 mRNA之敲低。 表49. 在NHP之CNS及周圍組織中用所指示AAV顆粒或媒劑對照治療後第56天時，相對於媒劑對照之生物分佈(每個二倍體基因體之病毒基因體(vg/dg))及剩餘SOD1 mRNA水準之量化
組織 衣殼 調節多核苷酸 病毒基因體序列 vg/dg 剩餘之SOD mRNA ( 正規化至TBP且相對於媒劑) SOD1 mRNA 敲低%
頸腹角 媒劑(1) 媒劑(1) 媒劑(1) 0.0033 1.0 N/A
媒劑(2) 媒劑(2) 媒劑(2) 0.1 1.0 N/A
TTM-002 VOYSOD1miR104-788.2 (SEQ ID NO: 2562) SEQ ID NO: 109 3.3 0.99 1
TTM-027 6.8 0.59 41
TTM-003 2.5 0.42 58
TTM-002 VOYSOD1miR127-860 (SEQ ID NO: 2579) SEQ ID NO: 4820 4.1 1.2 -20
TTM-027 4.6 1.14 -14
TTM-003 5.5 0.78 22
腰腹角 媒劑(1) 媒劑(1) 媒劑(1) 0.0067 1.0 N/A
媒劑(2) 媒劑(2) 媒劑(2) 0.07 1.0 N/A
TTM-002 VOYSOD1miR104-788.2 (SEQ ID NO: 2562) SEQ ID NO: 109 3.2 0.73 27
TTM-027 6.1 0.45 55
TTM-003 4.1 0.37 63
TTM-002 VOYSOD1miR127-860 (SEQ ID NO: 2579) SEQ ID NO: 4820 5.0 1.03 -3
TTM-027 4.0 0.93 7
TTM-003 5.9 0.77 23
運動皮質 媒劑(1) 媒劑(1) 媒劑(1) 0 1.0 N/A
媒劑(2) 媒劑(2) 媒劑(2) 0.04 1.0 N/A
TTM-002 VOYSOD1miR104-788.2 (SEQ ID NO: 2562) SEQ ID NO: 109 4.0 1.04 -4
TTM-027 10.4 0.63 37
TTM-003 5.1 0.56 44
TTM-002 VOYSOD1miR127-860 (SEQ ID NO: 2579) SEQ ID NO: 4820 5.3 0.99 1
TTM-027 8.3 1.15 -15
TTM-003 6.9 0.82 18
肝臟 媒劑(1) 媒劑(1) 媒劑(1) 0 1.0 N/A
媒劑(2) 媒劑(2) 媒劑(2) 0.3 1.0 N/A
TTM-002 VOYSOD1miR104-788.2 (SEQ ID NO: 2562) SEQ ID NO: 109 46.7 0.16 84
TTM-027 45.2 0.17 83
TTM-003 29.3 0.22 78
TTM-002 VOYSOD1miR127-860 (SEQ ID NO: 2579) SEQ ID NO: 4820 91.8 0.87 13
TTM-027 21.2 0.93 7
TTM-003 31.0 0.86 14
心臟 媒劑(1) 媒劑(1) 媒劑(1) 0.01 1.0 N/A
媒劑(2) 媒劑(2) 媒劑(2) 0.08 1.0 N/A
TTM-002 VOYSOD1miR104-788.2 (SEQ ID NO: 2562) SEQ ID NO: 109 0.84 0.4 60
TTM-027 0.29 0.63 37
TTM-003 2.48 0.60 40
TTM-002 VOYSOD1miR127-860 (SEQ ID NO: 2579) SEQ ID NO: 4820 0.46 1.02 -2
TTM-027 0.79 1.13 -13
TTM-003 3.10 0.99 1
頸DRG 媒劑(1) 媒劑(1) 媒劑(1) 0.0033 1.00 N/A
TTM-002 VOYSOD1miR104-788.2 (SEQ ID NO: 2562) SEQ ID NO: 109 1.68 0.73 27
TTM-027 2.56 0.56 44
TTM-002 VOYSOD1miR127-860 (SEQ ID NO: 2579) SEQ ID NO: 4820 1.57 1.08 -8
TTM-027 1.89 1.29 -29
胸DRG 媒劑(1) 媒劑(1) 媒劑(1) 1.18 1.00 N/A
TTM-002 VOYSOD1miR104-788.2 (SEQ ID NO: 2562) SEQ ID NO: 109 4.10 0.48 52
TTM-027 4.59 0.31 69
TTM-002 VOYSOD1miR127-860 (SEQ ID NO: 2579) SEQ ID NO: 4820 8.83 0.81 19
TTM-027 3.46 0.88 12
腰DRG 媒劑(1) 媒劑(1) 媒劑(1) 0.0033 1.00 N/A
TTM-002 VOYSOD1miR104-788.2 (SEQ ID NO: 2562) SEQ ID NO: 109 1.96 0.74 26
TTM-027 2.76 0.52 48
TTM-002 VOYSOD1miR127-860 (SEQ ID NO: 2579) SEQ ID NO: 4820 1.88 1.14 -14
TTM-027 2.05 1.41 -41
如 圖13所示，在靜脈內投與媒劑或包含囊封SEQ ID NO: 109之病毒基因體(編碼VOYSOD1miR104-788.2調節多核苷酸)之TTM-027或TTM-003衣殼變異體之AAV顆粒後第0天、第29天、第43天及第56天，藉由ELISA量測腦脊髓液(CSF)中之SOD1蛋白水準佔給藥前總蛋白的百分比。包含囊封SEQ ID NO: 109之病毒基因體(編碼VOYSOD1miR104-788.2調節多核苷酸)之TTM-027或TTM-003衣殼變異體之AAV顆粒展示出CSF SOD1蛋白減少之趨勢。 圖13中示出之蛋白質水準與SOD1蛋白之半衰期(25.0 + 7.4天)及56天研究中假定之SOD1 pri-miRNA表現一致。
使用雷射捕獲自腹角收集運動神經元以進一步量測SOD mRNA水準及敲低，此乃因雷射捕獲顯微切割允許富集運動神經元池。用媒劑對照或包含囊封SEQ ID NO: 109之病毒基因體(編碼VOYSOD1miR104-788.2調節多核苷酸)的TTM-027或TTM-003衣殼變異體之AAV顆粒治療後，此等運動神經元中相對於媒劑對照，正規化至管家基因(TBP)之剩餘SOD1 mRNA之量及SOD1敲低百分比提供於 表50中。包含囊封SEQ ID NO: 109之病毒基因體(編碼VOYSOD1miR104-788.2調節多核苷酸)之TTM-027或TTM-003衣殼變異體之AAV顆粒導致脊髓中之運動神經元中之SOD1 mRNA敲低超過70-80%。 表50. 在用所指示AAV顆粒或媒劑對照治療後第56天，在NHP之脊髓之頸或腰腹角中，藉由雷射捕獲分離之運動神經元中之相對於媒劑對照之剩餘SOD1 mRNA水準及SOD1敲低百分比之量化
組織 衣殼 調節多核苷酸 病毒基因體序列 剩餘之SOD mRNA ( 正規化至TBP且相對於媒劑) SOD1 mRNA 敲低%
頸腹角 媒劑(1) 媒劑(1) 媒劑(1) 1.0 N/A
媒劑(2) 媒劑(2) 媒劑(2) 1.0 N/A
TTM-027 VOYSOD1miR104-788.2 (SEQ ID NO: 2562) SEQ ID NO: 109 0.27 73
TTM-003 0.15 85
腰腹角 媒劑(1) 媒劑(1) 媒劑(1) 1.0 N/A
媒劑(2) 媒劑(2) 媒劑(2) 1.0 N/A
TTM-027 VOYSOD1miR104-788.2 (SEQ ID NO: 2562) SEQ ID NO: 109 0.18 82
TTM-003 0.17 83
包含囊封SEQ ID NO: 109之病毒基因體(編碼VOYSOD1miR104-788.2調節多核苷酸)之TTM-002衣殼變異體或TTM-027衣殼變異體之AAV顆粒的細胞向性亦藉由量測脊髓之頸、胸及腰區中正規化至媒劑的SOD1 mRNA拷貝數/細胞之拷貝數來量化。細胞中SOD1 mRNA拷貝數相對於媒劑之減少指示酬載活性。 表51總結包含囊封SEQ ID NO: 109之病毒基因體(編碼VOYSOD1miR104-788.2調節多核苷酸)之TTM-002衣殼變異體或TTM-027衣殼變異體之AAV顆粒的細胞及組織向性以及其活性。包含囊封SEQ ID NO: 109之病毒基因體(編碼VOYSOD1miR104-788.2調節多核苷酸)之TTM-027衣殼變異體之AAV顆粒在脊髓中顯示出強SOD1敲低及有利於治療諸如肌肉萎縮性脊髓側索硬化症(ALS)之疾病之向性概況。 表51. NHP中靜脈內投與包含所指示衣殼+病毒基因體組合之AAV顆粒或媒劑對照後第56天脊髓及腦中之細胞及組織向性之總結
衣殼 病毒基因體序列 組織 運動神經元向性 星狀細胞向性 腦幹及運動皮質遞送 SOD mRNA 拷貝數/細胞(正規化至媒劑) SOD1 mRNA 減少%
媒劑(1) 媒劑(1) 頸 N/A N/A N/A 100 0
胸 N/A N/A N/A 100 0
腰 N/A N/A N/A 100 0
TTM-002 SEQ ID NO: 109 頸 是 是 + 75.5 ± 28.0 24.5 ± 28.0
胸 是 是 + 58.1 ± 19.0 41.9 ± 19.0
腰 是 是 + 65.5 ± 25.2 34.5 ± 25.2
TTM-027 SEQ ID NO: 109 頸 是 是 ++ 36.0 ± 7.5 64.0 ± 6.1
胸 是 是 ++ 66.7 ± 29.7 33.3 ± 24.2
腰 是 是 ++ 36.9 ± 5.3 63.1 ± 4.3
亦對用包含TTM-002衣殼變異體或TTM-027衣殼變異體之編碼VOYSOD1miR104-788.2調節多核苷酸或VOYSOD1miR127-860調節多核苷酸之AAV顆粒靜脈內治療後第56天自NHP的頸脊髓分離之RNA進行經由高通量小RNA深度定序以量測指導股與過客股之比率、指導股及過客股相對於總內源性miRNA池之豐度(內源性miRNA路徑之飽和水準)，以及指導股的5'-端處之加工精度的小RNA加工分析。 表52展示成熟外源性SOD1靶向多核苷酸(指導或反義股水準)相對於總內源性miRNA池之水準(指導:內源性miRNA比率%)，以確保不過度利用內源性miRNA生物發生路徑，其中較低的百分比更有利於防止與內源性miRNA路徑飽和相關的任何效應。指導股與過客股水準亦提供於 表52中。較高的指導股與過客股之比率更有利於效力及選擇性，且最大限度地減少任何過客股效應。 表52亦展示所評價調節多核苷酸之5’端精密加工。調節多核苷酸之5’端加工指示構築體在5’端被正確加工且值越高越有利。由於種子區用於識別靶mRNA且起始於相對於指導股之5’端的固定位置，因此需要對指導股之5’端進行準確加工。當囊封於包含TTM-002衣殼變異體或TTM-027衣殼變異體之AAV顆粒中時，編碼VOYSOD1miR127-860調節多核苷酸之病毒基因體SEQ ID NO:4820及編碼VOYSOD1miR104-788.2調節多核苷酸之病毒基因體SEQ ID NO:109均展現出在所需範圍內的低人工miRNA表現( 表52)。當囊封於包含TTM-027衣殼變異體之AAV顆粒中時，指導股與過客股比率及5'精密加工亦有利於編碼VOYSOD1miR104-788.2調節多核苷酸之病毒基因體SEQ ID NO: 109。在接受媒劑對照或包含囊封編碼VOYSOD1miR104-788.2調節多核苷酸之病毒基因體SEQ ID NO: 109之TTM-027衣殼變異體之AAV顆粒的NHP中量測內源微小RNA mir-122a之水準，且水準相等，指示內源性miRNA表現似乎未經破壞。 表52. 靜脈內投與後第56天，由包含TTM-002或TTM-027衣殼變異體之AAV顆粒遞送之VOYSOD1miR104-788.2調節多核苷酸或VOYSOD1miR127-860調節多核苷酸在頸脊髓中的指導與過客比率，指導股相對於miRNA之總內源池之豐度(指導:內源性miRNA比率)，及指導股之5'-端處之加工精度(各值係取自三個NHP之樣品之平均值)
衣殼 病毒基因體序列 調節多核苷酸 組織 指導: 內源性miRNA比率(%) 指導/過客比 5’ 精密加工
TTM-002 SEQ ID NO: 4820 VOYSOD1miR127-860 頸脊髓(腹角) 0.01 24.46 83.04
SEQ ID NO: 109 VOYSOD1miR104-788.2 0.59 202.34 95.80
TTM-027 SEQ ID NO: 4820 VOYSOD1miR127-860 0.02 51.48 74.58
SEQ ID NO: 109 VOYSOD1miR104-788.2 5.26 103.48 92.93
綜上所述，此等資料指示VOYSOD1miR104-788.2調節多核苷酸能夠減少活體內SOD1 mRNA表現且藉由包含本文所述之衣殼變異體(例如，TTM-027、TTM-002及TTM-003)之AAV顆粒投與此調節多核苷酸導致向NHP腦及脊髓之遞送增加且適宜，其中觀測到神經元及星狀細胞向性。 XI. 等效內容及範圍
本文引用之每一及每個專利、專利申請案及出版物之揭示內容均特此以全文引用之方式併入。雖然本發明已經參照某些實施例進行了揭示，但很明顯，本領域之其他技術人員可在不背離本發明之真實精神及範圍之情況下設計本發明之進一步實施例及變化。所附申請專利範圍意欲解釋為包括所有此類實施例及等效變化。
圖1A為展示如藉由在以1e13 VG/kg的劑量靜脈內注射AAV顆粒後第28天非洲綠猴之所指示之腦區域(顳葉皮質、尾狀核、視丘或海馬體)中之核H2B-HA染色及蘇木精之共定位所量測的具有HA+核之經轉導細胞之百分比(HA+細胞%)的量化的圖，該等AAV顆粒包含TTM-002衣殼變異體或AAV9衣殼對照及編碼具有HA標籤之組織蛋白2B蛋白之自互補基因體。 圖1B為展示在以1e13 VG/kg的劑量靜脈內注射AAV顆粒後第28天非洲綠猴之所指示之腦區域(顳葉皮質、尾狀核、視丘或海馬體)中對所指示之標記物呈陽性之細胞(NeuN+神經元、SMI311+神經元、GFAP+星狀細胞或Sox9+星狀細胞)中HA+細胞之百分比的圖，該等AAV顆粒包含TTM-002衣殼變異體及編碼具有HA標籤之組織蛋白2B蛋白之自互補基因體。 圖1A至圖1B中繪製的資料代表每隻猴子的一個切片(n＝2)。根據區域大小對1e3至1e5個細胞進行定量影像分析。所有 P值均源自未配對雙尾t-測試。 圖2A至圖2C為描繪具有VOY101衣殼及在H1啟動子(AAV_VOY101.SOD1)之控制下編碼SOD1靶向調節多核苷酸miR104-788.2 (表14)之病毒基因體(SEQ ID NO: 109，表15)之AAV顆粒於SOD1 G93A基因轉殖小鼠的下頸脊髓( 圖2A)、下胸脊髓( 圖2B)及下腰脊髓( 圖2C)中的分佈的條形圖。分組如下：媒劑(V組)、2E13 vg/kg (C組)、6.3E12 (A組)及2E12 (B組)。**p＜0.01；***p＜0.001；****p＜0.0001 (單因子ANOVA及Tukey多重比較)。 圖3A至圖3C為描繪在靜脈內投與具有VOY101衣殼及在H1啟動子(AAV_VOY101.SOD1)之控制下編碼SOD1靶向調節多核苷酸miR104-788.2 (SEQ ID NO: 2562，表14)之病毒基因體(SEQ ID NO: 109，表15)之編碼SOD1 miRNA之AAV顆粒後，於SOD1 G93A基因轉殖小鼠的下頸脊髓( 圖3A)、下胸脊髓( 圖3B)及下腰脊髓( 圖3C)中的人類SOD1 (hSOD1) mRNA減少的條形圖。分組如下：媒劑(B組)、2E13 vg/kg (C組)、6.3E12 (D組)及2E12 (E組)。*p＜0.05；**p＜0.01；***p＜0.001 (單因子ANOVA及Tukey多重比較)。hSOD1 mRNA水準正規化至GAPDH+PPIA，且結果呈現為相對於媒劑組(B組)之值。 圖4A至圖4C為描繪SOD1 G93A基因轉殖小鼠之下頸脊髓( 圖4A)、下胸脊髓( 圖4B)及下腰脊髓(圖 4C)中hSOD1 mRNA水準與AAV顆粒分佈(VG/dg)之間的相關性的圖。 圖5展示雌性及雄性投與媒劑之野生型小鼠及投與媒劑、2E13 vg/kg、6.3E12或2E12 vg/kg SOD1 miRNA AAV顆粒之SOD1 G93A小鼠之神經評分綜合排名。亦呈現各組中剩餘之動物數量。 圖6A至圖6C為描繪雌性( 圖6A)、雄性( 圖6B)及所有( 圖6C)投與媒劑之野生型小鼠及投與媒劑、2E13 vg/kg、6.3E12或2E12 vg/kg SOD1 miRNA AAV顆粒之SOD1 G93A小鼠之Kaplan-Meier存活曲線的圖。**p=0.003；對數秩(Mantel-Cox)測試。 圖7A及圖7B為描繪在投與媒劑之雌性野生型小鼠及投與媒劑、2E13 vg/kg、6.3E12或2E12 vg/kg SOD1 miRNA AAV顆粒之雌性SOD1 G93A小鼠中前肢( 圖7A)及四肢組合( 圖7B)正規化至基線的握力的圖。基線對應於靜脈內SOD1 miRNA AAV顆粒投與之前的一週。 圖8A及 圖8B為描繪在投與媒劑之雄性野生型小鼠及投與媒劑、2E13 vg/kg、6.3E12或2E12 vg/kg SOD1 miRNA AAV顆粒之雄性SOD1 G93A小鼠中前肢( 圖8A)及四肢組合( 圖8B)正規化至基線的握力的圖。基線對應於靜脈內SOD1 miRNA AAV顆粒投與之前的一週。 圖9為描繪在各種啟動子控制下用SOD1靶向調節多核苷酸miR104-788.2處理後細胞株中剩餘SOD1 mRNA之百分比的圖。 圖10A為展示在靜脈內投與包含TTM-002或TTM-027 AAV衣殼變異體之AAV顆粒後28天，以X軸上之所指示劑量(自最高至最低劑量：1e14 vg/ kg、3.2e13 vg/kg、1e13 vg/kg、3.2e12 vg/kg或1e12 vg/kg)，Y軸上小鼠皮質中HA陽性細胞的百分比(由所指示衣殼變異體轉導之細胞的百分比)的圖。 圖10B為展示在靜脈內投與包含TTM-002或TTM-027 AAV衣殼變異體之AAV顆粒後28天，以X軸上之所指示劑量(自最高至最低劑量：1e14 vg/ kg、3.2e13 vg/kg、1e13 vg/kg、3.2e12 vg/kg或1e12 vg/kg)，Y軸上小鼠腦中相對於管家基因之mRNA轉殖基因表現的圖。 圖11A至圖11D為顯示在以1e13 VG/kg之劑量在小鼠中靜脈內投與後28天，TTM-001及TTM-002相對於AAV9對照在腦及肝臟中之向性的一系列圖。 圖11A展示AAV9對照、TTM-001或TTM-002之腦中之病毒基因體(VG)/二倍體基因體(DG)； 圖11B展示AAV9對照、TTM-001或TTM-002之腦RNA (相對於AAV9之倍數)； 圖11C展示AAV9對照、TTM-001或TTM-002之肝臟中之VG/DG；且 11D展示AAV9對照、TTM-001或TTM-002之肝臟RNA (相對於AAV9之倍數)。各資料點代表個別小鼠，且所有繪製值代表平均值±SD (n=3)。 P值源自未配對雙尾t-測試。 圖12A為展示在靜脈內投與包含在X軸上指示之衣殼及病毒基因體組合之媒劑對照AAV顆粒，自左至右：媒劑(1)；媒劑(2)；包含囊封包含SEQ ID NO: 109之病毒基因體之TTM-002衣殼變異體之AAV顆粒(TTM-002_SEQ ID NO: 109)；包含囊封包含SEQ ID NO: 109之病毒基因體之TTM-027衣殼變異體之AAV顆粒(TTM-027_SEQ ID NO: 109)；或包含囊封包含SEQ ID NO: 109之病毒基因體之TTM-003衣殼變異體的AAV顆粒(TTM-003_SEQ ID NO: 109)後第56天在運動皮質中量測之SOD1蛋白的圖。 圖12B為展示在靜脈內投與包含在X軸上指示之衣殼及病毒基因體組合之媒劑對照AAV顆粒，自左至右：媒劑(2)及包含囊封包含SEQ ID NO: 4820之病毒基因體之TTM-003衣殼變異體之AAV顆粒(TTM-003_SEQ ID NO: 4820)後第56天在運動皮質中量測之SOD1蛋白的圖。 圖13為展示靜脈內注射媒劑(1)；媒劑(2)；包含囊封包含SEQ ID NO: 109之病毒基因體之TTM-027衣殼變異體之AAV顆粒(TTM-027_SEQ ID NO: 109)；或包含囊封包含SEQ ID NO: 109之病毒基因體之TTM-003衣殼變異體之AAV顆粒(TTM-003_SEQ ID NO: 109)後第29天、第42天及第56天之CSF中之SOD1蛋白水準佔給藥前SOD1蛋白水準之百分比(佔給藥前水準之百分比)的圖。
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Claims (62)

  1. 一種AAV顆粒，其包含AAV衣殼變異體及編碼靶向人類SOD1之多核苷酸之核酸，其中該AAV衣殼變異體包含具有下式之胺基酸序列：[N1]-[N2]-[N3]，其中： (i) [N1]包含X1、X2及X3，其中X1、X2或X3中之至少一者為G； (ii) [N2]包含SPH之胺基酸序列；且 (iii) [N3]包含X4、X5及X6，其中X4、X5或X6中之至少一者係鹼性胺基酸，例如K或R； 其中[N1]-[N2]-[N3]存在於超變環IV中；且 其中該AAV衣殼變異體包含與SEQ ID NO: 138之位置203-736之胺基酸序列至少95%一致的胺基酸序列。
  2. 如請求項1之AAV顆粒，其中[N3]包含SKA、KSG、ARM、VKS、ASR、VKI、KKN、VRM、RKA、KTS、KFG、KIG、KLG、KTT、KTY、KYG、SKD、SKP、TRG、VRG、KRG、GAR、KSA、KSR、SKL、SRA、SKR、SLR、SRG、SSR、FLR、SKW、SKS、WKA、VRR、SKV、SKT、SKG、GKA、TKA、NKA、SKL、SKN、AKA、KTG、KSL、KSE、KSV、KSW、KSN、KHG、KSQ、KSK、KLW、WKG、KMG、KMA或RSG。
  3. 如請求項1或2之AAV顆粒，其中[N2]-[N3]包含SPHSKA (SEQ ID NO: 941)、SPHKSG (SEQ ID NO: 946)、SPHARM (SEQ ID NO: 947)、SPHVKS (SEQ ID NO: 948)、SPHASR (SEQ ID NO: 949)、SPHVKI (SEQ ID NO: 950)、SPHKKN (SEQ ID NO: 954)、SPHVRM (SEQ ID NO: 955)、SPHRKA (SEQ ID NO: 956)、SPHKFG (SEQ ID NO: 957)、SPHKIG (SEQ ID NO: 958)、SPHKLG (SEQ ID NO: 959)、SPHKTS (SEQ ID NO: 963)、SPHKTT (SEQ ID NO: 964)、SPHKTY (SEQ ID NO: 965)、SPHKYG (SEQ ID NO: 966)、SPHSKD (SEQ ID NO: 967)、SPHSKP (SEQ ID NO: 968)、SPHTRG (SEQ ID NO: 972)、SPHVRG (SEQ ID NO: 973)、SPHKRG (SEQ ID NO: 974)、SPHGAR (SEQ ID NO: 975)、SPHKSA (SEQ ID NO: 977)、SPHKSR (SEQ ID NO: 951)、SPHSKL (SEQ ID NO: 960)、SPHSRA (SEQ ID NO: 969)、SPHSKR (SEQ ID NO: 978)、SPHSLR (SEQ ID NO: 952)、SPHSRG (SEQ ID NO: 961)、SPHSSR (SEQ ID NO: 970)、SPHFLR (SEQ ID NO: 979)、SPHSKW (SEQ ID NO: 953)、SPHSKS (SEQ ID NO: 1402)、SPHWKA (SEQ ID NO: 971)、SPHVRR (SEQ ID NO: 980)、SPHSKT (SEQ ID NO: 1403)、SPHSKG (SEQ ID NO: 1404)、SPHGKA (SEQ ID NO: 1405)、SPHNKA (SEQ ID NO: 1406)、SPHSKN (SEQ ID NO: 1407)、SPHAKA (SEQ ID NO: 1408)、SPHSKV (SEQ ID NO: 1409)、SPHKTG (SEQ ID NO: 1410)、SPHTKA (SEQ ID NO: 1411)、SPHKSL (SEQ ID NO: 1412)、SPHKSE (SEQ ID NO: 1413)、SPHKSV (SEQ ID NO: 1414)、SPHKSW (SEQ ID NO: 1415)、SPHKSN (SEQ ID NO: 1416)、SPHKHG (SEQ ID NO: 1417)、SPHKSQ (SEQ ID NO: 1418)、SPHKSK (SEQ ID NO: 1419)、SPHKLW (SEQ ID NO: 1420)、SPHWKG (SEQ ID NO: 1421)、SPHKMG (SEQ ID NO: 1422)、SPHKMA (SEQ ID NO: 1423)或SPHRSG (SEQ ID NO: 976)。
  4. 如請求項1至3中任一項之AAV顆粒，其中[N1]包含GSG、GHD、VSG、GQD、CSG、GRG、CSH、GQS、GSH、RVG、GSC、GLL、GDD、GHE、GNY、MSG、RNG、TSG、ISG、GPG、ESG、SSG、GNG、ASG、NSG、LSG、GGG、KSG、HSG、GTG、PSG、GSV、RSG、GIG、WSG、DSG、IDG、GLG、DAG、DGG、MEG、ENG、GSA、KNG、KEG、AIG、GYD、GHG、GRD、GND、GPD、GMG、GQV、GHN、GHP或GHS。
  5. 如請求項1至4中任一項之AAV顆粒，其中[N1]-[N2]-[N3]包含： (i) GSGSPHSKA (SEQ ID NO: 1369)、GHDSPHKSG (SEQ ID NO: 1370)、VSGSPHSKA (SEQ ID NO: 1586)、GSGSPHARM (SEQ ID NO: 1579)、GSGSPHVKS (SEQ ID NO: 1580)、GQDSPHKSG (SEQ ID NO: 1581)、GSGSPHASR (SEQ ID NO: 1582)、GSGSPHVKI (SEQ ID NO: 1583)、GSGSPHKKN (SEQ ID NO: 1584)、GSGSPHVRM (SEQ ID NO: 1585)、CSGSPHSKA (SEQ ID NO: 1587)、GSGSPHRKA (SEQ ID NO: 1588)、CSGSPHKTS (SEQ ID NO: 1589)、CSHSPHKSG (SEQ ID NO: 1590)、GQSSPHRSG (SEQ ID NO: 1591)、GRGSPHASR (SEQ ID NO: 1592)、GRGSPHSKA (SEQ ID NO: 1593)、GSGSPHKFG (SEQ ID NO: 1594)、GSGSPHKIG (SEQ ID NO: 1595)、GSGSPHKLG (SEQ ID NO: 1596)、GSGSPHKTS (SEQ ID NO: 1597)、GSGSPHKTT (SEQ ID NO: 1598)、GSGSPHKTY (SEQ ID NO: 1599)、GSGSPHKYG (SEQ ID NO: 1600)、GSGSPHSKD (SEQ ID NO: 1601)、GSGSPHSKP (SEQ ID NO: 1602)、GSGSPHTRG (SEQ ID NO: 1603)、GSGSPHVRG (SEQ ID NO: 1604)、GSHSPHKRG (SEQ ID NO: 1605)、GSHSPHKSG (SEQ ID NO: 1606)、VSGSPHASR (SEQ ID NO: 1607)、VSGSPHGAR (SEQ ID NO: 1608)、VSGSPHKFG (SEQ ID NO: 1609)、GHDSPHKRG (SEQ ID NO: 1610)、GDDSPHKSG (SEQ ID NO: 1611)、GHESPHKSA (SEQ ID NO: 1612)、GHDSPHKSA (SEQ ID NO: 1613)、GNYSPHKIG (SEQ ID NO: 1614)、GHDSPHKSR (SEQ ID NO: 1615)、GSGSPHSKL (SEQ ID NO: 1616)、GSGSPHSRA (SEQ ID NO: 1617)、GSGSPHSKR (SEQ ID NO: 1618)、GSGSPHSLR (SEQ ID NO: 1619)、GSGSPHSRG (SEQ ID NO: 1620)、GSGSPHSSR (SEQ ID NO: 1621)、RVGSPHSKA (SEQ ID NO: 1622)、GSCSPHRKA (SEQ ID NO: 1623)、GSGSPHFLR (SEQ ID NO: 1624)、GSGSPHSKW (SEQ ID NO: 1625)、GSGSPHSKS (SEQ ID NO: 1626)、GLLSPHWKA (SEQ ID NO: 1627)、GSGSPHVRR (SEQ ID NO: 1628)、GSGSPHSKV (SEQ ID NO: 1629)、MSGSPHSKA (SEQ ID NO: 1630)、RNGSPHSKA (SEQ ID NO: 1631)、TSGSPHSKA (SEQ ID NO: 1632)、ISGSPHSKA (SEQ ID NO: 1633)、GPGSPHSKA (SEQ ID NO: 1634)、GSGSPHSKT (SEQ ID NO: 1635)、ESGSPHSKA (SEQ ID NO: 1636)、SSGSPHSKA (SEQ ID NO: 1637)、GNGSPHSKA (SEQ ID NO: 1638)、ASGSPHSKA (SEQ ID NO: 1639)、NSGSPHSKA (SEQ ID NO: 1640)、LSGSPHSKA (SEQ ID NO: 1641)、GGGSPHSKA (SEQ ID NO: 1642)、KSGSPHSKA (SEQ ID NO: 1643)、GGGSPHSKS (SEQ ID NO: 1644)、GSGSPHSKG (SEQ ID NO: 1645)、HSGSPHSKA (SEQ ID NO: 1646)、GTGSPHSKA (SEQ ID NO: 1647)、PSGSPHSKA (SEQ ID NO: 1648)、GSVSPHGKA (SEQ ID NO: 1649)、RSGSPHSKA (SEQ ID NO: 1650)、GSGSPHTKA (SEQ ID NO: 1651)、GIGSPHSKA (SEQ ID NO: 1652)、WSGSPHSKA (SEQ ID NO: 1653)、DSGSPHSKA (SEQ ID NO: 1654)、IDGSPHSKA (SEQ ID NO: 1655)、GSGSPHNKA (SEQ ID NO: 1656)、GLGSPHSKS (SEQ ID NO: 1657)、DAGSPHSKA (SEQ ID NO: 1658)、DGGSPHSKA (SEQ ID NO: 1659)、MEGSPHSKA (SEQ ID NO: 1660)、ENGSPHSKA (SEQ ID NO: 1661)、GSASPHSKA (SEQ ID NO: 1662)、GNGSPHSKS (SEQ ID NO: 1663)、KNGSPHSKA (SEQ ID NO: 1664)、KEGSPHSKA (SEQ ID NO: 1665)、AIGSPHSKA (SEQ ID NO: 1666)、GSGSPHSKN (SEQ ID NO: 1667)、GSGSPHAKA (SEQ ID NO: 1668)、GHDSPHKIG (SEQ ID NO: 1669)、GYDSPHKSG (SEQ ID NO: 1670)、GHESPHKSG (SEQ ID NO: 1671)、GHDSPHKTG (SEQ ID NO: 1672)、GRGSPHKRG (SEQ ID NO: 1673)、GQDSPHKSG (SEQ ID NO: 1581)、GHDSPHKSL (SEQ ID NO: 1674)、GHGSPHSKA (SEQ ID NO: 1675)、GHDSPHKSE (SEQ ID NO: 1676)、VSGSPHSKA (SEQ ID NO: 1586)、GRDSPHKSG (SEQ ID NO: 1677)、GNDSPHKSV (SEQ ID NO: 1678)、GQDSPHKIG (SEQ ID NO: 1679)、GHDSPHKSV (SEQ ID NO: 1680)、GPDSPHKIG (SEQ ID NO: 1681)、GPDSPHKSG (SEQ ID NO: 1682)、GHDSPHKSW (SEQ ID NO: 1683)、GHDSPHKSN (SEQ ID NO: 1684)、GMGSPHSKT (SEQ ID NO: 1685)、GHDSPHKHG (SEQ ID NO: 1686)、GQVSPHKSG (SEQ ID NO: 1687)、GDDSPHKSV (SEQ ID NO: 1688)、GHNSPHKSG (SEQ ID NO: 1689)、GNGSPHKRG (SEQ ID NO: 1690)、GHDSPHKYG (SEQ ID NO: 1691)、GHDSPHKSQ (SEQ ID NO: 1692)、GNDSPHKIG (SEQ ID NO: 1693)、GHDSPHKSK (SEQ ID NO: 1694)、GHDSPHKLW (SEQ ID NO: 1695)、GHPSPHWKG (SEQ ID NO: 1696)、GHDSPHKMG (SEQ ID NO: 1697)、GHDSPHKMA (SEQ ID NO: 1698)或GHSSPHRSG (SEQ ID NO: 1699)；或 (ii) GSGSPHSKA (SEQ ID NO: 1369)、GHDSPHKSG (SEQ ID NO: 1370)或VSGSPHSKA (SEQ ID NO: 1586)。
  6. 如請求項1至5中任一項之AAV顆粒，其進一步包含： (i) [N0]，其中[N0]包含TIN、TEN、TER、SMN、TIM、YLS、GLS、MPE、MEG、MEY、AEW、CEW、ANN、IPE、ADM、IEY、ADY、IET、MEW、CEY、RIN、MEI、LEY、ADW、IEI、DIM、FEQ、MEF、CDQ、LPE、IEN、MES、AEI、VEY、IIN、TSN、IEV、MEM、AEV、MDA、VEW、AEQ、LEW、MEL、MET、MEA、IES、MEV、CEI、ATN、MDG、QEV、ADQ、NMN、IEM、ISN、TGN、QQQ、HDW、IEG、TII、TFP、TEK、EIN、TVN、TFN、SIN、TSY、ELH、AIN、SVN、TDN、TFH、TVH、TSS、TID、TCN、NIN、TEH、AEM、AIK、TDK、TFK、SDQ、TEI、NTN、TET、SIK、TEL、TEA、TAN、TIY、TFS、TES、TTN、TED、TNN、EVH、TIS、TVR、TDR、TIK、NHI、TIP、ESD、TDL、TVP、TVI、AEH、NCL、TVK、NAD、TIT、NCV、TIR、NAL、VIN、TIQ、TEF、TRE、QGE、SEK、NVN、GGE、EFV、SDK、TEQ、EVQ、TEY、NCW、TDV、SDI、NSI、NSL、EVV、TEP、SEL、TWQ、TEV、AVN、GVL、TLN、TEG、TRD、NAI、AEN、AET、ETA或NNL；及/或 (ii) [N4]，其中[N4]包含QNQQ (SEQ ID NO: 1701)、WNQQ (SEQ ID NO: 1702)、QYYV (SEQ ID NO: 1703)、RRQQ (SEQ ID NO: 1704)、GCGQ (SEQ ID NO: 1705)、LRQQ (SEQ ID NO: 1706)、RNQQ (SEQ ID NO: 1707)、VNQQ (SEQ ID NO: 1708)、FRLQ (SEQ ID NO: 1709)、FNQQ (SEQ ID NO: 1710)、LLQQ (SEQ ID NO: 1711)、SNQQ (SEQ ID NO: 1712)、RLQQ (SEQ ID NO: 1713)、LNQQ (SEQ ID NO: 1714)、QRKL (SEQ ID NO: 1715)、LRRQ (SEQ ID NO: 1716)、QRLR (SEQ ID NO: 1717)、QRRL (SEQ ID NO: 1718)、RRLQ (SEQ ID NO: 1719)、RLRQ (SEQ ID NO: 1720)、SKRQ (SEQ ID NO: 1721)、QLYR (SEQ ID NO: 1722)、QLTV (SEQ ID NO: 1723)、QNKQ (SEQ ID NO: 1724)、KNQQ (SEQ ID NO: 1725)、QKQQ (SEQ ID NO: 1726)、QTQQ (SEQ ID NO: 1727)、QNHQ (SEQ ID NO: 1728)、QHQQ (SEQ ID NO: 1729)、QNQH (SEQ ID NO: 1730)、QHRQ (SEQ ID NO: 1731)、LTQQ (SEQ ID NO: 1732)、QNQW (SEQ ID NO: 1733)、QNTH (SEQ ID NO: 1734)、RRRQ (SEQ ID NO: 1735)、QYQQ (SEQ ID NO: 1736)、QNDQ (SEQ ID NO: 1737)、QNRH (SEQ ID NO: 1738)、RDQQ (SEQ ID NO: 1739)、PNLQ (SEQ ID NO: 1740)、HVRQ (SEQ ID NO: 1741)、PNQH (SEQ ID NO: 1742)、HNQQ (SEQ ID NO: 1743)、QSQQ (SEQ ID NO: 1744)、QPAK (SEQ ID NO: 1745)、QNLA (SEQ ID NO: 1746)、QNQL (SEQ ID NO: 1747)、QGQQ (SEQ ID NO: 1748)、LNRQ (SEQ ID NO: 1749)、QNPP (SEQ ID NO: 1750)、QNLQ (SEQ ID NO: 1751)、QDQE (SEQ ID NO: 1752)、QDQQ (SEQ ID NO: 1753)、HWQQ (SEQ ID NO: 1755)、PNQQ (SEQ ID NO: 1756)、PEQQ (SEQ ID NO: 1757)、QRTM (SEQ ID NO: 1758)、LHQH (SEQ ID NO: 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(SEQ ID NO: 3933)、AWQQ (SEQ ID NO: 3934)、QSVP (SEQ ID NO: 3935)、QNIQ (SEQ ID NO: 3936)、LDQQ (SEQ ID NO: 3937)、PDQQ (SEQ ID NO: 3938)、ESQQ (SEQ ID NO: 3939)、QRQL (SEQ ID NO: 3940)、QIIV (SEQ ID NO: 3941)、QKQS (SEQ ID NO: 3942)、QSHQ (SEQ ID NO: 3943)、QFVV (SEQ ID NO: 3944)、QSQP (SEQ ID NO: 3945)、QNEQ (SEQ ID NO: 3946)、INQQ (SEQ ID NO: 3947)、RNRQ (SEQ ID NO: 3948)、RDQK (SEQ ID NO: 3949)、QWKR (SEQ ID NO: 3950)、ENRQ (SEQ ID NO: 3951)、QTQP (SEQ ID NO: 3952)、QKQL (SEQ ID NO: 3953)、RNQL (SEQ ID NO: 3954)、ISIQ (SEQ ID NO: 3955)、QTVC (SEQ ID NO: 3956)、QQIM (SEQ ID NO: 3957)、LNHQ (SEQ ID NO: 3958)、QNQA (SEQ ID NO: 3959)、QMIH (SEQ ID NO: 3960)、RNHQ (SEQ ID NO: 3961)或QKMN (SEQ ID NO: 3962)。
  7. 如請求項6之AAV顆粒，其中[N0]-[N1]-[N2]-[N3]-[N4]包含： (i) SEQ ID NO: 2242-2886中任一者之胺基酸序列；或 (ii) TENVSGSPHSKAQNQQ (SEQ ID NO: 2283)、TERVSGSPHSKAQNQQ (SEQ ID NO: 2272)、TINGSGSPHSKAQNQQ (SEQ ID NO: 2242)或TINGHDSPHKSGQNQQ (SEQ ID NO: 2243)。
  8. 如請求項6或7之AAV顆粒，其中： (i) [N0]存在於根據SEQ ID NO: 981、982或138編號之胺基酸450-452處； (ii) [N1]存在於根據SEQ ID NO: 981、982或138編號之胺基酸453-455處； (iii) [N2]存在於根據SEQ ID NO: 981或982編號之胺基酸456-458處； (iv) [N3]存在於根據SEQ ID NO: 981或982編號之胺基酸459-461處； (v) [N4]存在於根據SEQ ID NO: 981或982編號之胺基酸462-465處；及/或 (vi) [N0]-[N1]-[N2]-[N3]-[N4]存在於根據SEQ ID NO: 981或982編號之胺基酸450-465處。
  9. 一種AAV顆粒，其包含AAV衣殼變異體及編碼靶向人類SOD1之多核苷酸之核酸，其中該AAV衣殼變異體包含： (i) 超變環IV中之SPHSKA (SEQ ID NO: 941)之胺基酸序列；及 (ii) 與SEQ ID NO: 138之位置203-736之胺基酸序列至少95%一致的胺基酸序列。
  10. 如請求項9之AAV顆粒，其中根據SEQ ID NO: 981編號，SPHSKA (SEQ ID NO: 941)之胺基酸序列緊接在胺基酸455之後存在。
  11. 如請求項9或10之AAV顆粒，其中該AAV衣殼變異體進一步包含位置451處之胺基酸E，根據SEQ ID NO: 981編號。
  12. 如請求項9至11中任一項之AAV顆粒，其中該AAV衣殼變異體包含位置453處之胺基酸V，根據SEQ ID NO: 981編號。
  13. 如請求項9至12中任一項之AAV顆粒，其中該AAV衣殼變異體包含位置452處之胺基酸R，根據SEQ ID NO: 981編號。
  14. 如請求項1至13中任一項之AAV顆粒，其中該AAV衣殼變異體包含： (i) 與SEQ ID NO: 69、36或981之胺基酸203-742至少95%或至少98%一致的胺基酸序列； (ii) 與SEQ ID NO: 69、36或981之胺基酸138-742至少95%或至少98%一致的胺基酸序列；及/或 (iii) 與SEQ ID NO: 69、36或981之胺基酸序列至少95%或至少98%一致的胺基酸序列。
  15. 如請求項1至14中任一項之AAV顆粒，其中該AAV衣殼變異體包含： (i) SEQ ID NO: 69、36或981之胺基酸203-742之胺基酸序列； (ii) SEQ ID NO: 69、36或981之胺基酸138-742之胺基酸序列；及/或 (iii) SEQ ID NO: 69、36或981之胺基酸序列。
  16. 一種AAV顆粒，其包含AAV衣殼變異體及編碼靶向人類SOD1之多核苷酸之核酸，其中該AAV衣殼變異體包含： (i) 超變環IV中之HDSPHK (SEQ ID NO: 2)之胺基酸序列；及 (ii) 與SEQ ID NO: 138之位置203-736之胺基酸序列至少95%一致的胺基酸序列。
  17. 如請求項16之AAV顆粒，其中根據SEQ ID NO: 982編號，HDSPHK (SEQ ID NO: 2)之胺基酸序列緊接在胺基酸453之後存在。
  18. 如請求項1至9、16或17中任一項之AAV顆粒，其中該AAV衣殼變異體包含： (i) 與SEQ ID NO: 982、37或6之胺基酸203-742至少95%或至少98%一致的胺基酸序列； (ii) 與SEQ ID NO: 982、37或6之胺基酸138-742至少95%或至少98%一致的胺基酸序列；及/或 (iii) 與SEQ ID NO: 982、37或6之胺基酸序列至少95%或至少98%一致的胺基酸序列。
  19. 如請求項1至9或16至18中任一項之AAV顆粒，其中該AAV衣殼變異體包含： (i) SEQ ID NO: 982、37或6之胺基酸203-742之胺基酸序列； (ii) SEQ ID NO: 982、37或6之胺基酸138-742之胺基酸序列；及/或 (iii) SEQ ID NO: 982、37或6之胺基酸序列。
  20. 如請求項1至19中任一項之AAV顆粒，其中超變環IV包含胺基酸449-460，根據SEQ ID NO: 138編號。
  21. 如請求項1至20中任一項之AAV顆粒，其中該AAV衣殼變異體： (i) 相對於包含SEQ ID NO: 138之胺基酸序列之參考序列之向性，具有增加的對CNS細胞或組織，例如腦細胞、腦組織、脊髓細胞或脊髓組織之向性； (ii) 轉導腦區域(例如，殼核、尾狀核、內嗅皮質、海馬體、視丘、黑質、運動皮質、額葉皮質、顳葉皮質、大腦皮質、齒狀核及/或側膝核(LGN))，視情況地其中，例如，當藉由例如免疫組織化學檢定或qPCR檢定之檢定量測時，例如，如實例3或7中所述，轉導水準與SEQ ID NO: 138之參考序列相比至少5、10、15、20、25、30、35、40、45、50、55、60或65倍高； (iii) 例如，當藉由如實例1或4中所述之檢定量測時，與SEQ ID NO: 138之參考序列相比，在腦中富集至少約3、4、5、6、7、8、9、10、20、30、40、50、60、70、80、90、100、110、120、130、140、150、160、170、180、190、200或210倍； (iv) 相對於包含SEQ ID NO: 138之胺基酸序列之參考序列之向性，對至少二至三個物種，例如非人類靈長類動物及囓齒動物(例如，長尾獼猴( Macaca fascicularis)、綠猴( Chlorocebus sabaeus)、普通狨( Callithrix jacchus)及/或小鼠(例如，BALB/c小鼠、C57Bl/6小鼠及/或CD-1遠交系小鼠))之CNS細胞或組織，例如腦細胞、腦組織、脊髓細胞或脊髓組織具有增加的向性； (v) 例如，當藉由如實例2、5或8中所述之檢定量測時，與SEQ ID NO: 138之參考序列相比，在至少二至三個物種，例如非人類靈長類動物及囓齒動物(例如，長尾獼猴、綠猴、普通狨及/或小鼠(例如，BALB/c小鼠、C57Bl/6小鼠及/或CD-1遠交系小鼠))之腦中富集至少約10、15、20、25、30、35、40、45、50、55、60、65、70、75、80、85、90、95或100倍； (vi) 將增加水準之酬載遞送至腦區域，視情況地其中，例如，當藉由例如qRT-PCR或qPCR檢定之檢定(例如，如實例2或8中所述)量測時，與SEQ ID NO: 138之參考序列相比，該酬載水準增加至少5、10、15、17、18、19、20、25、30、35、40、45、50、55、60、65或70倍，視情況地其中該腦區域為中腦區域(例如，海馬體或視丘)、額葉皮質、顳葉皮質、運動皮質、大腦皮質、尾狀核、殼核、齒狀核、黑質或腦幹； (vii) 將增加水準之病毒基因體遞送至腦區域，視情況地其中，例如，當藉由例如qRT-PCR或qPCR檢定之檢定(例如，如實例2或8中所述)量測時，與SEQ ID NO: 138之參考序列相比，病毒基因體水準增加至少5、10、15、17、18、19、20、25、30、35、40、45或50倍，視情況地其中該腦區域為殼核、尾狀核、海馬體、視丘、黑質、運動皮質、額葉皮質、顳葉皮質、大腦皮質、齒狀核及/或側膝核(LGN)； (viii) 例如，當藉由如實例1或8中所述之檢定量測時，與SEQ ID NO: 138之參考序列相比，在脊髓中富集至少約5、10、15、20、25、30或35倍，視情況地其中該脊髓區域為胸脊髓區域、頸脊髓區域、C5腹角區域、腰脊髓區域或L5腹角區域； (ix) 相對於背根神經節(DRG)及/或肝臟中之轉導，展示在腦區域中之優先轉導； (x) 能夠轉導神經元細胞及/或非神經元細胞(例如星狀細胞)； (xi) 例如，當藉由如實例7中所述之檢定量測時，能夠轉導腦區域(例如，殼核、尾狀核、內嗅皮質、海馬體、視丘、黑質、運動皮質、額葉皮質、顳葉皮質、大腦皮質、小腦皮質、小腦、齒狀核及/或側膝核(LGN))中至少20%、25%、30%、40%、50%、55%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%或95%之細胞； (xii) 例如，當藉由如實例7中所述之檢定量測時，能夠轉導腦區域(例如，殼核、尾狀核、內嗅皮質、海馬體、視丘、黑質、運動皮質、額葉皮質或顳葉皮質)中至少45%、50%、55%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、95%、97%或99%之星狀細胞(例如，Sox9+星狀細胞)； (xiii) 例如，當藉由如實例7中所述之檢定量測時，能夠轉導腦區域(例如，殼核、尾狀核、內嗅皮質、海馬體、視丘、黑質、運動皮質、額葉皮質或顳葉皮質)中至少25%、30%、35%、40%、45%、50%、55%、60%、65%或70%之神經元(例如，NeuN+神經元)；及/或 (xiv) 例如，當藉由如實例7中所述之檢定量測時，能夠轉導脊髓(例如，頸脊髓、胸脊髓或腰脊髓)中至少70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%或97%之星狀細胞(例如，Sox9+星狀細胞)。
  22. 如請求項1至21中任一項之AAV顆粒，其中該經編碼之多核苷酸包含有包含有義股序列及反義股序列之siRNA，其中該反義股序列與人類SOD1完全或部分互補。
  23. 如請求項22之AAV顆粒，其中： (i) 該經編碼之有義股核苷酸序列包含與包含表10或表14之有義股序列中之任一者的有義股核苷酸序列相差不超過3、2、1或0個核苷酸的至少15、16、17、18、19、20或21個鄰接核苷酸；及/或 (ii) 該經編碼之反義股序列包含與表10或表14之反義股序列中之任一者相差不超過3、2、1或0個核苷酸的至少15、16、17、18、19、20或21個鄰接核苷酸； 其中該經編碼之有義股序列及該經編碼之反義股序列包含至少15個核苷酸的互補區。
  24. 如請求項22或23之AAV顆粒，其中： (i) 該經編碼之有義股序列包含與SEQ ID NO: 2525或2381相差不超過3、2、1或0個核苷酸的至少18、19、20或21個鄰接核苷酸； (ii) 該經編碼之反義股序列包含與SEQ ID NO: 2507或2363相差不超過3、2、1或0個核苷酸的至少18、19、20或21個鄰接核苷酸； (iii) 該經編碼之有義股序列包含與SEQ ID NO: 2525相差不超過3、2、1或0個核苷酸的至少18、19、20或21個鄰接核苷酸；且該經編碼之反義股序列包含與SEQ ID NO: 2507相差不超過3、2、1或0個核苷酸的至少18、19、20或21個鄰接核苷酸；或 (iv) 該經編碼之有義股序列包含與SEQ ID NO: 2381相差不超過3、2、1或0個核苷酸的至少18、19、20或21個鄰接核苷酸，且該經編碼之反義股序列包含與SEQ ID NO: 2363相差不超過3、2、1或0個核苷酸的至少18、19、20或21個鄰接核苷酸。
  25. 如請求項22至24中任一項之AAV顆粒，其中： (i) 該經編碼之有義股序列包含SEQ ID NO: 2525，且該經編碼之反義股序列包含SEQ ID NO: 2507；或 (ii) 該經編碼之有義股序列包含SEQ ID NO: 2381，且該經編碼之反義股序列包含SEQ ID NO: 2363。
  26. 如請求項22至25中任一項之AAV顆粒，其中： (i) 編碼該反義股序列之核苷酸序列包含SEQ ID NO: 1351之核苷酸序列，且編碼該有義股序列之核苷酸序列包含SEQ ID NO: 66之核苷酸序列；或 (ii) 編碼該反義股序列之核苷酸序列包含SEQ ID NO: 1368之核苷酸序列，且編碼該有義股序列之核苷酸序列包含SEQ ID NO: 1347之核苷酸序列。
  27. 一種AAV顆粒，其包含： (i) 包含SEQ ID NO: 69之胺基酸序列之AAV衣殼變異體；及 (ii) 編碼靶向人類SOD1之多核苷酸之核酸，其中該經編碼之多核苷酸包含有包含有義股序列及反義股序列之siRNA，其中該經編碼之有義股序列包含SEQ ID NO: 2525，且該經編碼之反義股序列包含SEQ ID NO: 2507。
  28. 一種AAV顆粒，其包含： (i) 包含SEQ ID NO: 36之胺基酸序列之AAV衣殼變異體；及 (ii) 編碼靶向人類SOD1之多核苷酸之核酸，其中該經編碼之多核苷酸包含有包含有義股序列及反義股序列之siRNA，其中該經編碼之有義股序列包含SEQ ID NO: 2525，且該經編碼之反義股序列包含SEQ ID NO: 2507。
  29. 一種AAV顆粒，其包含： (i) 包含SEQ ID NO: 982之胺基酸序列之AAV衣殼變異體；及 (ii) 編碼靶向人類SOD1之多核苷酸之核酸，其中該經編碼之多核苷酸包含有包含有義股序列及反義股序列之siRNA，其中該經編碼之有義股序列包含SEQ ID NO: 2525，且該經編碼之反義股序列包含SEQ ID NO: 2507。
  30. 如請求項22至29中任一項之AAV顆粒，其中： (i) 該有義股序列及該反義股序列中之至少一者包含至少1或2個核苷酸之3'懸突；及/或 (ii) 該有義股序列、該反義股序列或兩者各自獨立地包含15至30個核苷酸之長度、15至25個核苷酸之長度、17至22個核苷酸或17至20個核苷酸之長度。
  31. 如請求項22至30中任一項之AAV顆粒，其中該經編碼之多核苷酸進一步包含有包含該siRNA之調節多核苷酸，其中該經編碼之調節多核苷酸包含： (i) 5’側接區； (ii) 環區；及/或 (iii) 3’側接區。
  32. 如請求項31之AAV顆粒，其中： (A) (i) 該經編碼之5’側接區包含SEQ ID NO: 5000-5003中任一者之核苷酸序列；與SEQ ID NO: 5000-5003中任一者之核苷酸序列至少90%、92%、95%、97%、98%或99%一致之核苷酸序列；或相對於SEQ ID NO: 5000-5003中任一者之核苷酸序列具有至少一個、兩個、三個、四個、五個、六個或七個修飾但不超過十個修飾之核苷酸序列； (ii) 該經編碼之環區包含SEQ ID NO: 5004-5007中任一者之核苷酸序列；與SEQ ID NO: 5004-5007中任一者之核苷酸序列至少90%、92%、95%、97%、98%或99%一致之核苷酸序列；或相對於SEQ ID NO: 5004-5007中任一者之核苷酸序列具有至少一個、兩個、三個或四個修飾但不超過六個修飾之核苷酸序列；及/或 (iii) 該經編碼之3’側接區包含SEQ ID NO: 5008-5012中任一者之核苷酸序列；與SEQ ID NO: 5008-5012中任一者之核苷酸序列至少90%、92%、95%、97%、98%或99%一致之核苷酸序列；或相對於SEQ ID NO: 5008-5012中任一者之核苷酸序列具有至少一個、兩個、三個、四個、五個、六個或七個修飾但不超過十個修飾之核苷酸序列；及/或 (B) (i) 編碼該5’側接區之核苷酸序列包含SEQ ID NO: 2547-2549或5014中任一者之核苷酸序列；與SEQ ID NO: 2547-2549或5014中任一者之核苷酸序列至少90%、92%、95%、97%、98%或99%一致之核苷酸序列；或相對於SEQ ID NO: 2547-2549或5014中任一者之核苷酸序列具有至少一個、兩個、三個、四個、五個、六個或七個修飾但不超過十個修飾之核苷酸序列； (ii) 編碼該環區之核苷酸序列包含SEQ ID NO: 2550-2553中任一者之核苷酸序列；與SEQ ID NO: 2550-2553中任一者之核苷酸序列至少90%、92%、95%、97%、98%或99%一致之核苷酸序列；或相對於SEQ ID NO: 2550-2553中任一者之核苷酸序列具有至少一個、兩個、三個或四個修飾但不超過六個修飾之核苷酸序列；及/或 (iii) 編碼該3’側接區之核苷酸序列包含SEQ ID NO: 2554-2558中任一者之核苷酸序列；與SEQ ID NO: 2554-2558中任一者之核苷酸序列至少90%、92%、95%、97%、98%或99%一致之核苷酸序列；或相對於SEQ ID NO: 2554-2558中任一者之核苷酸序列具有至少一個、兩個、三個、四個、五個、六個或七個修飾但不超過十個修飾之核苷酸序列。
  33. 如請求項31或32之AAV顆粒，其中： (A) (i) 該經編碼之5’側接區包含SEQ ID NO: 5000之核苷酸序列；與SEQ ID NO: 5000至少90%、92%、95%、96%、97%、98%或99%一致之核苷酸序列；相對於SEQ ID NO: 5000之核苷酸序列包含一個、兩個、三個、四個、五個、六個或七個但不超過十個不同核苷酸之核苷酸序列；或相對於SEQ ID NO: 5000之核苷酸序列包含一個、兩個、三個、四個、五個、六個或七個但不超過十個不同核苷酸之核苷酸序列； (ii) 該經編碼之環區包含SEQ ID NO: 5004之核苷酸序列；與SEQ ID NO: 5004至少90%、92%、95%、96%、97%、98%或99%一致之核苷酸序列；相對於SEQ ID NO: 5004之核苷酸序列包含一個、兩個、三個或四個但不超過五個不同核苷酸之核苷酸序列；或相對於SEQ ID NO: 5004之核苷酸序列包含一個、兩個、三個或四個但不超過五個不同核苷酸之核苷酸序列；且 (iii) 該經編碼之3’側接區包含SEQ ID NO: 5008之核苷酸序列；與SEQ ID NO: 5008至少90%、92%、95%、96%、97%、98%或99%一致之核苷酸序列；相對於SEQ ID NO: 5008之核苷酸序列包含一個、兩個、三個、四個、五個、六個或七個但不超過十個不同核苷酸之核苷酸序列；相對於SEQ ID NO: 5008之核苷酸序列包含一個、兩個、三個、四個、五個、六個或七個但不超過十個修飾之核苷酸序列；及/或 (B) (i) 編碼該5’側接區之核苷酸序列包含SEQ ID NO: 2547之核苷酸序列；與SEQ ID NO: 2547至少90%、92%、95%、96%、97%、98%或99%一致之核苷酸序列；相對於SEQ ID NO: 2547之核苷酸序列包含一個、兩個、三個、四個、五個、六個或七個但不超過十個不同核苷酸之核苷酸序列；或相對於SEQ ID NO: 2547之核苷酸序列包含一個、兩個、三個、四個、五個、六個或七個但不超過十個不同核苷酸之核苷酸序列； (ii) 編碼該環區之核苷酸序列包含SEQ ID NO: 2550之核苷酸序列；與SEQ ID NO: 2550至少90%、92%、95%、96%、97%、98%或99%一致之核苷酸序列；相對於SEQ ID NO: 2550之核苷酸序列包含一個、兩個、三個或四個但不超過五個不同核苷酸之核苷酸序列；或相對於SEQ ID NO: 2550之核苷酸序列包含一個、兩個、三個或四個但不超過五個不同核苷酸之核苷酸序列；且 (iii) 編碼該3’側接區之核苷酸序列包含SEQ ID NO: 2554之核苷酸序列；與SEQ ID NO: 2554至少90%、92%、95%、96%、97%、98%或99%一致之核苷酸序列；相對於SEQ ID NO: 2554之核苷酸序列包含一個、兩個、三個、四個、五個、六個或七個但不超過十個不同核苷酸之核苷酸序列；相對於SEQ ID NO: 2554之核苷酸序列包含一個、兩個、三個、四個、五個、六個或七個但不超過十個修飾之核苷酸序列。
  34. 如請求項31或32之AAV顆粒，其中： (A) (i) 該經編碼之5’側接區包含SEQ ID NO: 5001之核苷酸序列；與SEQ ID NO: 5001至少90%、92%、95%、96%、97%、98%或99%一致之核苷酸序列；相對於SEQ ID NO: 5001之核苷酸序列包含一個、兩個、三個、四個、五個、六個或七個但不超過十個不同核苷酸之核苷酸序列；或相對於SEQ ID NO: 5001之核苷酸序列包含一個、兩個、三個、四個、五個、六個或七個但不超過十個不同核苷酸之核苷酸序列； (ii) 該經編碼之環區包含SEQ ID NO: 5005之核苷酸序列；與SEQ ID NO: 5005至少90%、92%、95%、96%、97%、98%或99%一致之核苷酸序列；相對於SEQ ID NO: 5005之核苷酸序列包含一個、兩個、三個或四個但不超過五個不同核苷酸之核苷酸序列；或相對於SEQ ID NO: 5005之核苷酸序列包含一個、兩個、三個或四個但不超過五個不同核苷酸之核苷酸序列；且 (iii) 該經編碼之3’側接區包含SEQ ID NO: 5009之核苷酸序列；與SEQ ID NO: 5009至少90%、92%、95%、96%、97%、98%或99%一致之核苷酸序列；相對於SEQ ID NO: 5009之核苷酸序列包含一個、兩個、三個、四個、五個、六個或七個但不超過十個不同核苷酸之核苷酸序列；相對於SEQ ID NO: 5009之核苷酸序列包含一個、兩個、三個、四個、五個、六個或七個但不超過十個修飾之核苷酸序列；及/或 (B) (i) 編碼該5’側接區之核苷酸序列包含SEQ ID NO: 2548之核苷酸序列；與SEQ ID NO: 2548至少90%、92%、95%、96%、97%、98%或99%一致之核苷酸序列；相對於SEQ ID NO: 2548之核苷酸序列包含一個、兩個、三個、四個、五個、六個或七個但不超過十個不同核苷酸之核苷酸序列；或相對於SEQ ID NO: 2548之核苷酸序列包含一個、兩個、三個、四個、五個、六個或七個但不超過十個不同核苷酸之核苷酸序列； (ii) 編碼該環區之核苷酸序列包含SEQ ID NO: 2551之核苷酸序列；與SEQ ID NO: 2551至少90%、92%、95%、96%、97%、98%或99%一致之核苷酸序列；相對於SEQ ID NO: 2551之核苷酸序列包含一個、兩個、三個或四個但不超過五個不同核苷酸之核苷酸序列；或相對於SEQ ID NO: 2551之核苷酸序列包含一個、兩個、三個或四個但不超過五個不同核苷酸之核苷酸序列；且 (iii) 編碼該3’側接區之核苷酸序列包含SEQ ID NO: 2555之核苷酸序列；與SEQ ID NO: 2555至少90%、92%、95%、96%、97%、98%或99%一致之核苷酸序列；相對於SEQ ID NO: 2555之核苷酸序列包含一個、兩個、三個、四個、五個、六個或七個但不超過十個不同核苷酸之核苷酸序列；相對於SEQ ID NO: 2555之核苷酸序列包含一個、兩個、三個、四個、五個、六個或七個但不超過十個修飾之核苷酸序列。
  35. 如請求項31至34中任一項之AAV顆粒，其中： (i) 編碼該調節多核苷酸之核苷酸序列包含SEQ ID NO: 2562、2579、5022、2559、2560、2561、2563、2564、2565、2566、2567、2568、2569、2570、2571、2572、2573、2574、2575、2576、2577、2578中任一者之核苷酸序列，或與其至少90%、92%、95%、97%、98%或99%一致之核苷酸序列； (ii) 編碼該調節多核苷酸之核苷酸序列包含SEQ ID NO: 2562之核苷酸序列，或與其至少90%、92%、95%、97%、98%或99%一致之核苷酸序列； (iii) 編碼該調節多核苷酸之核苷酸序列包含SEQ ID NO: 2579之核苷酸序列，或與其至少90%、92%、95%、97%、98%或99%一致之核苷酸序列； (iv) 該經編碼之調節多核苷酸包含SEQ ID NO: 5013之核苷酸序列，或與其至少90%、92%、95%、97%、98%或99%一致之核苷酸序列；或 (v) 該經編碼之調節多核苷酸包含SEQ ID NO: 4821之核苷酸序列，或與其至少90%、92%、95%、97%、98%或99%一致之核苷酸序列。
  36. 一種AAV顆粒，其包含： (i) 包含SEQ ID NO: 69之胺基酸序列之AAV衣殼變異體；及 (ii) 編碼靶向人類SOD1之多核苷酸之核酸，其中該經編碼之多核苷酸包含SEQ ID NO: 5013之核苷酸序列。
  37. 一種AAV顆粒，其包含： (i) 包含SEQ ID NO: 36之胺基酸序列之AAV衣殼變異體；及 (ii) 編碼靶向人類SOD1之多核苷酸之核酸，其中該經編碼之多核苷酸包含SEQ ID NO: 5013之核苷酸序列。
  38. 一種AAV顆粒，其包含： (i) 包含SEQ ID NO: 982之胺基酸序列之AAV衣殼變異體；及 (ii) 編碼靶向人類SOD1之多核苷酸之核酸，其中該經編碼之多核苷酸包含SEQ ID NO: 5013之核苷酸序列。
  39. 如請求項1至38中任一項之AAV顆粒，其包含有包含可操作地連接至編碼該多核苷酸之該核酸的啟動子的病毒基因體。
  40. 如請求項39之AAV顆粒，該啟動子包含： (i) 雞β-肌動蛋白(CBA)啟動子及/或其衍生物CAG、EF-1a啟動子、CMV立即早期增強子及/或啟動子、β葡萄糖醛酸苷酶(GUSB)啟動子、泛素C (UBC)啟動子、神經元特異性烯醇化酶(NSE)、血小板衍生生長因子(PDGF)啟動子、血小板衍生生長因子B鏈(PDGF-β)啟動子、細胞間黏附分子2 (ICAM-2)啟動子、突觸蛋白(Syn)啟動子、甲基-CpG結合蛋白2 (MeCP2)啟動子、Ca2+/鈣調蛋白依賴性蛋白激酶II (CaMKII)啟動子、代謝型麩胺酸受體2 (mGluR2)啟動子、神經絲輕鏈(NFL)或重鏈(NFH)啟動子、β-球蛋白袖珍基因nβ2啟動子、前腦啡肽原(PPE)啟動子、腦啡肽(Enk)及興奮性胺基酸轉運蛋白2 (EAAT2)、膠質原纖維酸性蛋白(GFAP)啟動子、髓磷脂鹼性蛋白(MBP)啟動子、心血管啟動子(例如αMHC、cTnT及CMV-MLC2k)、肝臟啟動子(例如hAAT、TBG)、骨骼肌啟動子(例如，結蛋白、MCK、C512)或其片段，例如截短片段，或功能變異體；或 (ii) H1啟動子，其包含SEQ ID NO: 83之核苷酸序列，或與SEQ ID NO: 83至少90%、95%、96%、97%、98%或99%一致之核苷酸序列。
  41. 如請求項39或40之AAV顆粒，其中該病毒基因體進一步包含以下中之一者、兩者、三者、四者、五者、六者、七者或全部： (i) 反向末端重複(ITR)，視情況地其中該病毒基因體包含相對於該經編碼之多核苷酸位於5’之ITR，及/或相對於該經編碼之多核苷酸位於3’之ITR； (ii) 增強子； (iii) miR結合位點； (iv) 多聚腺苷酸化(聚A)信號區； (v) 內含子區； (vi) 填充序列； (vii) 外顯子區；及 (viii) Kozak序列。
  42. 如請求項39至41中任一項之AAV顆粒，其包含： (i) ITR，其包含SEQ ID NO: 126或130之核苷酸序列，或與其至少90%、95%、96%、97%、98%或99%一致之核苷酸序列； (ii) 聚A信號區，其包含SEQ ID NO: 129之核苷酸序列，或與其至少90%、95%、96%、97%、98%或99%一致之核苷酸序列；及/或 (iii) 填充序列，其包含SEQ ID NO: 82之核苷酸序列，或與其至少90%、95%、96%、97%、98%或99%一致之核苷酸序列。
  43. 如請求項39至42中任一項之AAV顆粒，其中該病毒基因體自5’至3’包含： (a) ITR； (b) 填充序列； (c) 該啟動子； (d) 編碼靶向人類SOD1之該多核苷酸之該核酸； (e) 聚A信號區；及 (f) ITR。
  44. 如請求項39至43中任一項之AAV顆粒，其中該病毒基因體自5’至3’包含： (a) ITR，其包含SEQ ID NO: 126之核苷酸序列，或與其至少90%、95%、96%、97%、98%或99%一致之核苷酸序列； (b) 填充序列，其包含SEQ ID NO: 82之核苷酸序列，或與其至少90%、95%、96%、97%、98%或99%一致之核苷酸序列； (c) 該啟動子，其包含SEQ ID NO: 83之核苷酸序列，或與其至少90%、95%、96%、97%、98%或99%一致之核苷酸序列； (d) 編碼靶向人類SOD1之該多核苷酸之該核酸，其包含SEQ ID NO: 2562之核苷酸序列，或與其至少90%、95%、96%、97%、98%或99%一致之核苷酸序列； (e) 聚A信號區，其包含SEQ ID NO: 129之核苷酸序列，或與其至少90%、95%、96%、97%、98%或99%一致之核苷酸序列；及 (f) ITR，其包含SEQ ID NO: 130之核苷酸序列，或與其至少90%、95%、96%、97%、98%或99%一致之核苷酸序列。
  45. 如請求項39至44中任一項之AAV顆粒，其中該病毒基因體包含： (i) SEQ ID NO: 109、125、4820或4028-4041中任一者之核苷酸序列；相對於SEQ ID NO: 109、125或4028-4041中任一者之核苷酸序列包含至少1個、2個、3個、4個或5個但不超過30個、20個或10個不同核苷酸之核苷酸序列；或與SEQ ID NO: 109、125、4820或4028-4041中之任一者至少90%、95%、99%或100%一致之核苷酸序列； (ii) SEQ ID NO: 109之核苷酸序列；相對於SEQ ID NO: 109，包含至少1個、2個、3個、4個或5個但不超過30個、20個或10個不同核苷酸之核苷酸序列；或與SEQ ID NO: 109至少90%、95%、99%或100%一致之核苷酸序列； (iii) SEQ ID NO: 125之核苷酸序列；相對於SEQ ID NO: 125，包含至少1個、2個、3個、4個或5個但不超過30個、20個或10個不同核苷酸之核苷酸序列；或與SEQ ID NO: 125至少90%、95%、99%或100%一致之核苷酸序列；或 (iv) SEQ ID NO: 4820之核苷酸序列；相對於SEQ ID NO: 4820，包含至少1個、2個、3個、4個或5個但不超過30個、20個或10個不同核苷酸之核苷酸序列；或與SEQ ID NO: 4820至少90%、95%、99%或100%一致之核苷酸序列。
  46. 一種AAV顆粒，其包含： (i) 包含SEQ ID NO: 69之胺基酸序列之AAV衣殼變異體；及 (ii) 包含SEQ ID NO: 109之核苷酸序列之病毒基因體。
  47. 一種AAV顆粒，其包含： (i) 包含SEQ ID NO: 36之胺基酸序列之AAV衣殼變異體；及 (ii) 包含SEQ ID NO: 109之核苷酸序列之病毒基因體。
  48. 一種AAV顆粒，其包含： (i) 包含SEQ ID NO: 982之胺基酸序列之AAV衣殼變異體；及 (ii) 包含SEQ ID NO: 109之核苷酸序列之病毒基因體。
  49. 如請求項39至48中任一項之AAV顆粒，其中該病毒基因體為自互補的或單股的。
  50. 一種細胞，例如宿主細胞，其包含如請求項1至49中任一項之AAV顆粒，視情況地其中該細胞為： (i) 腦或脊髓之細胞(例如，殼核、尾狀核、海馬體、視丘、黑質、運動皮質、額葉皮質、顳葉皮質、大腦皮質、齒狀核、側膝核(LGN)、頸脊髓、腰脊髓及/或胸脊髓之細胞)； (ii) 神經元(例如運動神經元)；及/或 (iii) 星狀細胞。
  51. 一種製造如請求項1至49中任一項之AAV顆粒之方法，其包含： (i) 提供包含病毒基因體之宿主細胞；及 (ii) 在適於將該病毒基因體包裹在該AAV衣殼變異體中之條件下培育該宿主細胞； 由此製造該AAV顆粒。
  52. 一種醫藥組成物，其包含如請求項1至49中任一項之AAV顆粒，及醫藥學上可接受之賦形劑。
  53. 一種將靶向人類SOD1之多核苷酸遞送至個體之方法，該方法包含向該個體投與有效量之如請求項52之醫藥組成物或如請求項1至49中任一項之AAV顆粒，由此將靶向人類SOD1之多核苷酸遞送至該個體。
  54. 一種治療患有或診斷患有與SOD1基因、mRNA或蛋白之表現(例如SOD1基因、mRNA或蛋白之異常表現)相關之神經病症或神經退化病症之個體的方法，該方法包含向該個體投與有效量之如請求項52之醫藥組成物或如請求項1至49中任一項之AAV顆粒，由此治療該個體。
  55. 如請求項54之方法，其中該疾病或病症為肌肉萎縮性脊髓側索硬化症(ALS)。
  56. 如請求項53之方法，其中該個體患有ALS。
  57. 如請求項55或56之方法，其中該ALS為： (i) 家族性ALS； (ii) 散發性ALS； (iii) 早期ALS； (iv) 中期ALS；及/或 (v) 晚期ALS。
  58. 如請求項55至57中任一項之方法，其中治療包含改善該個體之ALS之症狀，視情況地其中該症狀包含運動神經元退化、肌肉無力、肌肉僵硬(stiffness of muscles)、肌肉萎縮、肌肉僵硬(muscle stiffness)、肌束震顫發展、額顳葉失智症、言語不清、呼吸困難或其組合。
  59. 如請求項53至58中任一項之方法，其中該AAV顆粒或該醫藥組成物係靜脈內、大腦內、經由視丘內(ITH)投與、肌肉內、鞘內、腦室內、經由實質內投與、經由聚焦超音波(FUS)，例如FUS結合微泡之靜脈內投與(FUS-MB)或MRI引導之FUS結合靜脈內投與、經由大池內注射(ICM)、或經由雙重ITH及ICM投與來向該個體投與。
  60. 如請求項53至59中任一項之方法，其中相對於未接受該AAV顆粒或該醫藥組成物之個體，該AAV顆粒或該醫藥組成物之投與導致例如該個體之脊髓中之SOD1 mRNA表現減少至少30-60%。
  61. 一種如請求項52之醫藥組成物或如請求項1至49之AAV顆粒的用途，其用於製造用以治療神經病症、神經退化病症、與SOD1基因、mRNA或蛋白之表現(例如SOD1基因、mRNA或蛋白之異常表現)相關之疾病(例如ALS)的藥劑。
  62. 如請求項52之醫藥組成物或如請求項1至49之AAV顆粒，其用於治療神經病症、神經退化病症、與SOD1基因、mRNA或蛋白之表現(例如SOD1基因、mRNA或蛋白之異常表現)相關之疾病(例如ALS)之方法中。
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