TW202426500A

TW202426500A - 抗人類lair1抗體

Info

Publication number: TW202426500A
Application number: TW112135399A
Authority: TW
Inventors: 朱利安戴維斯; 史考特查爾斯波特; 安德魯查爾斯凡朵; 王薇; 雷德馬丁雷尼費爾德曼; 希琳西拉可汗; 莫妮卡瑪卡爾; 瑪麗亞埃琳娜阿亞拉拉米雷斯
Original assignee: 美商美國禮來大藥廠; 美商崔克斯生物公司
Priority date: 2022-09-16
Filing date: 2023-09-15
Publication date: 2024-07-01
Also published as: IL319594A; MX2025003065A; WO2024059789A2; PE20251693A1; EP4587475A2; CO2025003205A2; CA3267700A1; AU2023342134A1; CR20250130A; KR20250080868A; WO2024059789A3; CL2025000695A1; CN120202223A; JP2025532639A; DOP2025000059A; AR130506A1; US20240101670A1

Abstract

本發明係關於結合人類LAIR1之抗體(「抗人類LAIR1抗體」或「抗LAIR1抗體」)、包含此類抗人類LAIR1抗體之組合物及使用此類抗人類LAIR1抗體之方法。

Description

抗人類LAIR1抗體

本發明係關於結合人類LAIR1之抗體(「抗人類LAIR1抗體」或「抗LAIR1抗體」或「人類LAIR1抗體」)、包含此類抗人類LAIR1抗體之組合物及使用此類抗人類LAIR1抗體之方法。

人類白血球相關免疫球蛋白樣受體1 (LAIR1，亦稱為CD305)係在周邊單核細胞，包括自然殺手細胞、T細胞、B細胞、巨噬細胞、樹突狀細胞以及包括人類CD34+細胞之造血前驅細胞上發現的抑制性受體。該受體屬於免疫球蛋白超家族且在調節免疫反應中起作用。抑制性受體調節免疫反應以防止識別為自身之細胞裂解。

在結構上，LAIR1為I型跨膜醣蛋白，其含有胞外C2型免疫球蛋白樣域、莖區域、單一跨膜域及包含兩個稱為基於免疫受體酪胺酸之抑制性模體(ITIM)的保守模體的胞內域。LAIR1在結構上與若干其他抑制性免疫球蛋白超家族成員，包括LILRB (其位於人類染色體19q13.4上之白血球受體複合物(LRC))相關，表明此等分子係自共同的祖先基因進化而來的。

在若干自體免疫疾病，諸如全身性紅斑性狼瘡症(SLE)及類風濕性關節炎(RA)中，LAIR1發生了改變(參見Zhang Y.等人，Clin Exp Immunol. 2018年5月;192(2):193-205)。由於LAIR1之免疫抑制功能，因此需要可調節LAIR1活性的抗體，該等抗體可用作治療自體免疫疾病之治療劑。此類抗體可用於治療自體免疫疾病，包括SLE及狼瘡性腎炎。目前的標準照護包括大量類固醇，此具有多個不利的及/或具有潛在危險的副作用。因此，需要找到針對此類自體免疫疾病的安全且有效的治療性治療。

本文提供新穎抗人類LAIR1抗體或其抗體片段。在一些實施例中，本文所提供之抗人類LAIR1抗體或其抗體片段為LAIR1之促效劑。在一些實施例中，本文所提供之抗人類LAIR1抗體為人類抗體，例如人類IgG2或IgG4同型。在一些實施例中，本文所提供之抗人類LAIR1抗體亦結合食蟹獼猴LAIR1。

在一些實施例中，本文提供結合人類LAIR1之抗體，其中抗體包含VH及VL，其中VH包含HCDR1、HCDR2及HCDR3，且VL包含LCDR1、LCDR2及LCDR3，其中HCDR1包含SEQ ID NO: 1，HCDR2包含SEQ ID NO: 2，HCDR3包含SEQ ID NO: 3，LCDR1包含SEQ ID NO: 4，LCDR2包含SEQ ID NO: 5，且LCDR3包含SEQ ID NO: 6。在一些實施例中，抗人類LAIR1抗體包含有包含SEQ ID NO: 7之VH及包含SEQ ID NO: 8之VL。在一些實施例中，抗人類LAIR1抗體包含VH及VL，該VH包含與SEQ ID NO: 7具有至少95%序列一致性之序列，該VL包含與SEQ ID NO: 8具有至少95%序列一致性之序列。

在一些實施例中，本文提供結合人類LAIR1之抗體，其中抗體包含VH及VL，其中VH包含HCDR1、HCDR2及HCDR3，且VL包含LCDR1、LCDR2及LCDR3，其中HCDR1包含SEQ ID NO: 13，HCDR2包含SEQ ID NO: 14，HCDR3包含SEQ ID NO: 15，LCDR1包含SEQ ID NO: 16，LCDR2包含SEQ ID NO: 5，且LCDR3包含SEQ ID NO: 18。在一些實施例中，抗人類LAIR1抗體包含有包含SEQ ID NO: 19之VH及包含SEQ ID NO: 20之VL。在一些實施例中，抗人類LAIR1抗體包含VH及VL，該VH包含與SEQ ID NO: 19具有至少95%序列一致性之序列，該VL包含與SEQ ID NO: 20具有至少95%序列一致性之序列。

在一些實施例中，抗人類LAIR1抗體具有人類IgG2同型。在一些實施例中，抗體包含有包含SEQ ID NO: 9之重鏈(HC)及包含SEQ ID NO: 10之輕鏈(LC)。在一些實施例中，抗體包含有包含SEQ ID NO: 21之重鏈及包含SEQ ID NO: 22之輕鏈。

在一些實施例中，抗人類LAIR1抗體具有人類IgG4同型。在一些實施例中，抗體包含有包含SEQ ID NO: 25之重鏈(HC)及包含SEQ ID NO: 10之輕鏈(LC)。在一些實施例中，抗體包含有包含SEQ ID NO: 27之重鏈及包含SEQ ID NO: 22之輕鏈。

在另一態樣中，本文提供編碼本文所描述之新穎抗人類LAIR1抗體之重鏈VH或輕鏈VL的核酸，及包含此類核酸之載體或細胞。

在另一態樣中，本文提供包含本文所描述之抗體、核酸或載體之醫藥組合物。

本文所描述之抗人類LAIR1抗體、核酸、載體或醫藥組合物可用於治療自體免疫疾病或纖維化疾病，例如類風濕性關節炎、牛皮癬、全身性紅斑性狼瘡症(SLE)、狼瘡性腎炎、尋常天疱瘡、全身性硬化症、特發性肺部纖維化、硬皮病、潰瘍性結腸炎、克羅恩氏病(Crohn's disease)、化膿性汗腺炎、異位性皮膚炎、多發性硬化症、硬皮病相關之間質性肺病、IgG4相關疾病或慢性纖維化間質性肺病。

在另一態樣中，本發明之抗體為不與LAIR1配位體C1q形成複合物之抗體。

根據本發明之另一態樣，本發明之抗體增加脾臟中之Treg細胞群體。

在本發明之另一態樣中，本發明之抗體不需要完全受體佔有(RO)以引發針對人類LAIR1之促效作用。

對相關申請案之交叉參考根據35 U.S.C. §119(e)，本專利申請案主張於2022年9月16日申請之美國臨時申請案第63/375,936號之權益；其揭示內容以引用之方式併入本文中。 序列表文件

本申請案係與ST.26 XML格式之序列表一起申請。所提供的序列表係標題為「30426序列表」的文本文件，創建於2023年8月10日，且大小為38,000位元組。ST.26 XML格式之序列表資訊以全文引用之方式併入本文中。

本文提供結合人類LAIR1之抗體(「抗人類LAIR1抗體」或「抗LAIR1抗體」)、包含此類抗人類LAIR1抗體之組合物及使用此類抗人類LAIR1抗體之方法。

在一個態樣中，本文提供新穎抗人類LAIR1抗體或其抗體片段。在一些實施例中，本文所提供之抗人類LAIR1抗體或其抗體片段為LAIR1之促效劑。在一些實施例中，本文所提供之抗人類LAIR1抗體或其抗體片段可誘導或增加與人類LAIR1相關之一或多種活性或功能，例如實例中所描述之一或多種活性或功能。與人類LAIR1相關之此類活性或功能包括(但不限於)抑制NFAT活化，如藉由Jurkat-NFAT活化分析所測定；抑制初始T細胞在TCR刺激分析之後的IFN-g反應；抑制初始B細胞在BCR刺激分析之後的IL-6反應；抑制血漿人類促炎性細胞介素IFN-γ、IL-10及TNF-α增加；及/或減少人類PBMC移植之GvHD小鼠模型中的循環型IgM及IgA，如實例中所描述。在一些實施例中，本文所提供之抗人類LAIR1抗體並不阻斷LAIR1與其配位體(例如膠原蛋白I)之間的相互作用。

在一些實施例中，本文所提供之抗人類LAIR1抗體為人類抗體，例如人類IgG2或IgG4同型。在一些實施例中，本文所提供之抗人類LAIR1抗體亦結合食蟹獼猴LAIR1。在一些實施例中，本文所提供之抗人類LAIR1抗體具有較低免疫原性風險。

在一些實施例中，抗人類LAIR1抗體包含重鏈可變區(VH)及輕鏈可變區(VL)，且VH包含重鏈互補決定區HCDR1、HCDR2及HCDR3，且VL包含輕鏈互補決定區LCDR1、LCDR2及LCDR3。在一些實施例中，抗人類LAIR1抗體包含VH，該VH包含選自表1之HCDR1、HCDR2及HCDR3。在一些實施例中，抗人類LAIR1抗體包含VL，該VL包含選自表1之LCDR1、LCDR2及LCDR3。在一些實施例中，抗人類LAIR1抗體包含VH及VL，該VH包含選自表1之HCDR1、HCDR2及HCDR3，該VL包含選自表1之LCDR1、LCDR2及LCDR3。在一些實施例中，抗人類LAIR1抗體包含VH，該VH包含與表1中之VH具有至少95%序列一致性的序列。在一些實施例中，抗人類LAIR1抗體包含VL，該VL包含與表1中之VL具有至少95%序列一致性的序列。在一些實施例中，抗人類LAIR1抗體包含表1中之VH及/或VL。

表 1. 例示性抗 LAIR1 單株抗體之序列

SEQ ID NO	Ab 區	序列
mAb1
1	HCDR1	TAFGGSISGHYWS
2	HCDR2	RIYPSGGTN
3	HCDR3	VRDYWDDYYGMDV
4	LCDR1	RSSQSLLHSDGFNYLD
5	LCDR2	YLGSNRAS
6	LCDR3	MQAYQTPRT
7	VH	QVQLQESGPGLVKPSETLSLTCTAFGGSISGHYWSWIRQPAGKGLEWIGRIYPSGGTNKNPSLKSRVTMSVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCVRDYWDDYYGMDVWGQGTTVTVSS
8	VL	DIVMTQSPLSLPVTPGEPASISCRSSQSLLHSDGFNYLDWYLQKPGQSPQLLIYLGSNRASGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCMQAYQTPRTFGQGTKVEIK
9	HC	QVQLQESGPGLVKPSETLSLTCTAFGGSISGHYWSWIRQPAGKGLEWIGRIYPSGGTNKNPSLKSRVTMSVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCVRDYWDDYYGMDVWGQGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPSSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSNFGTQTYTCNVDHKPSNTKVDKTVERKCCVECPPCPAPPVAGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVQFNWYVDGMEVHNAKTKPREEQFNSTFRVVSVLTVVHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPAPIEKTISKTKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPMLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG
10	LC	DIVMTQSPLSLPVTPGEPASISCRSSQSLLHSDGFNYLDWYLQKPGQSPQLLIYLGSNRASGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCMQAYQTPRTFGQGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
11	HC DNA	CAGGTGCAGCTGCAGGAGTCGGGCCCAGGACTGGTGAAGCCTTCGGAGACCCTGTCCCTCACCTGTACTGCCTTTGGTGGCTCCATCAGTGGTCACTACTGGAGCTGGATCCGGCAGCCCGCCGGGAAGGGACTGGAGTGGATTGGGCGTATTTATCCTAGTGGGGGCACCAACAAAAACCCCTCCCTCAAGAGTCGCGTCACCATGTCAGTAGACACGTCCAAGAATCAGTTCTCCCTGAAGCTGAGTTCTGTGACCGCCGCGGACACGGCCGTGTATTATTGTGTGAGAGATTACTGGGACGACTACTATGGTATGGACGTCTGGGGCCAAGGGACCACGGTCACCGTCTCCTCAGCCTCCACCAAGGGCCCATCGGTCTTCCCCCTGGCGCCCAGCTCCAGGAGCACCTCCGAGAGCACAGCCGCCCTGGGCTGCCTGGTCAAGGACTACTTCCCCGAACCGGTGACGGTGTCGTGGAACTCAGGCGCCCTGACCAGCGGCGTGCACACCTTCCCGGCTGTCCTACAGTCCTCAGGACTCTACTCCCTCAGCAGCGTGGTGACCGTGCCCTCCAGCAACTTCGGCACCCAGACCTACACCTGCAACGTAGATCACAAGCCCAGCAACACCAAGGTGGACAAGACAGTTGAGCGCAAATGTTGTGTCGAGTGCCCACCGTGCCCAGCACCACCTGTGGCAGGACCGTCAGTCTTCCTCTTCCCCCCAAAACCCAAGGACACCCTCATGATCTCCCGGACCCCTGAGGTCACGTGCGTGGTGGTGGACGTGAGCCACGAAGACCCCGAGGTCCAGTTCAACTGGTACGTGGACGGCATGGAGGTGCATAATGCCAAGACAAAGCCACGGGAGGAGCAGTTCAACAGCACGTTCCGTGTGGTCAGCGTCCTCACCGTCGTGCACCAGGACTGGCTGAACGGCAAGGAGTACAAGTGCAAGGTCTCCAACAAAGGCCTCCCAGCCCCCATCGAGAAAACCATCTCCAAAACCAAAGGGCAGCCCCGAGAACCACAGGTGTACACCCTGCCCCCATCCCGGGAGGAGATGACCAAGAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTACCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACAAGACCACACCTCCCATGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTACAGCAAGCTCACCGTGGACAAGAGCAGGTGGCAGCAGGGGAACGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCTCTGCACAACCACTACACACAGAAGAGCCTCTCCCTGTCTCCGGGTTGA
12	LC DNA	GATATTGTGATGACTCAGTCTCCACTCTCCCTGCCCGTCACCCCTGGAGAGCCGGCCTCCATCTCCTGCAGGTCTAGTCAGAGCCTCCTGCATAGTGATGGATTCAACTATTTGGATTGGTACCTGCAGAAGCCAGGGCAGTCTCCACAGCTCCTGATCTATCTGGGTTCTAATCGGGCCTCCGGGGTCCCTGACAGGTTCAGTGGCAGTGGATCAGGCACAGATTTTACACTGAAAATCAGCAGAGTGGAGGCTGAGGATGTTGGGGTTTATTACTGCATGCAAGCTTATCAAACTCCTCGGACGTTCGGCCAAGGGACCAAGGTGGAAATCAAACGAACCGTGGCTGCACCATCTGTCTTCATCTTCCCGCCATCTGATGAGCAGTTGAAATCTGGAACTGCCTCTGTTGTGTGCCTGCTGAATAACTTCTATCCCAGAGAGGCCAAAGTACAGTGGAAGGTGGATAACGCCCTCCAATCGGGTAACTCCCAGGAGAGTGTCACAGAGCAGGACAGCAAGGACAGCACCTACAGCCTCAGCAGCACCCTGACGCTGAGCAAAGCAGACTACGAGAAACACAAAGTCTACGCCTGCGAAGTCACCCATCAGGGCCTGAGCTCGCCCGTCACAAAGAGCTTCAACAGGGGAGAGTGC
mAb2
13	HCDR1	TVSGGSISNNYWS
14	HCDR2	RMYSSGSTQ
15	HCDR3	GPNWGSPYYGVDV
16	LCDR1	RSSPSLLHSDGYNWLD
5	LCDR2	YLGSNRAS
18	LCDR3	MQAHQTPFT
19	VH	QVQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGGSISNNYWSWIRQPAGKGLEWIGRMYSSGSTQKNPSLKSRVTMSVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCVRGPNWGSPYYGVDVWGQGTTVTVSS
20	VL	DIVMTQSPLSLPVTPGEPASISCRSSPSLLHSDGYNWLDWYLQKPGQSPQLLIYLGSNRASGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCMQAHQTPFTFGQGTKVEIK
21	HC	QVQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGGSISNNYWSWIRQPAGKGLEWIGRMYSSGSTQKNPSLKSRVTMSVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCVRGPNWGSPYYGVDVWGQGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPSSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSNFGTQTYTCNVDHKPSNTKVDKTVERKCCVECPPCPAPPVAGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVQFNWYVDGMEVHNAKTKPREEQFNSTFRVVSVLTVVHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPAPIEKTISKTKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPMLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG
22	LC	DIVMTQSPLSLPVTPGEPASISCRSSPSLLHSDGYNWLDWYLQKPGQSPQLLIYLGSNRASGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCMQAHQTPFTFGQGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
23	HC DNA	CAGGTGCAGCTGCAGGAGTCGGGCCCAGGACTGGTGAAGCCTTCGGAGACCCTGTCCCTCACCTGCACTGTCTCTGGTGGCTCCATCAGTAATAACTACTGGAGTTGGATCCGGCAGCCCGCCGGTAAGGGGCTGGAGTGGATTGGGCGTATGTATTCCAGTGGGAGCACCCAGAAAAACCCCTCCCTCAAGAGTCGAGTCACCATGTCAGTAGACACGTCCAAAAACCAGTTCTCCCTGAAGCTGTCCTCTGTGACCGCCGCGGACACGGCCGTGTATTATTGTGTGAGAGGCCCTAACTGGGGATCCCCCTACTACGGTGTGGACGTCTGGGGCCAAGGGACCACGGTCACCGTCTCCTCAGCCTCCACCAAGGGCCCATCGGTCTTCCCCCTGGCGCCCAGCTCCAGGAGCACCTCCGAGAGCACAGCCGCCCTGGGCTGCCTGGTCAAGGACTACTTCCCCGAACCGGTGACGGTGTCGTGGAACTCAGGCGCCCTGACCAGCGGCGTGCACACCTTCCCGGCTGTCCTACAGTCCTCAGGACTCTACTCCCTCAGCAGCGTGGTGACCGTGCCCTCCAGCAACTTCGGCACCCAGACCTACACCTGCAACGTAGATCACAAGCCCAGCAACACCAAGGTGGACAAGACAGTTGAGCGCAAATGTTGTGTCGAGTGCCCACCGTGCCCAGCACCACCTGTGGCAGGACCGTCAGTCTTCCTCTTCCCCCCAAAACCCAAGGACACCCTCATGATCTCCCGGACCCCTGAGGTCACGTGCGTGGTGGTGGACGTGAGCCACGAAGACCCCGAGGTCCAGTTCAACTGGTACGTGGACGGCATGGAGGTGCATAATGCCAAGACAAAGCCACGGGAGGAGCAGTTCAACAGCACGTTCCGTGTGGTCAGCGTCCTCACCGTCGTGCACCAGGACTGGCTGAACGGCAAGGAGTACAAGTGCAAGGTCTCCAACAAAGGCCTCCCAGCCCCCATCGAGAAAACCATCTCCAAAACCAAAGGGCAGCCCCGAGAACCACAGGTGTACACCCTGCCCCCATCCCGGGAGGAGATGACCAAGAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTACCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACAAGACCACACCTCCCATGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTACAGCAAGCTCACCGTGGACAAGAGCAGGTGGCAGCAGGGGAACGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCTCTGCACAACCACTACACACAGAAGAGCCTCTCCCTGTCTCCGGGTTGA
24	LC DNA	GATATTGTGATGACTCAGTCTCCACTCTCCCTGCCCGTCACCCCTGGAGAGCCGGCCTCCATCTCCTGCAGGTCTAGTCCGAGCCTCCTGCATAGTGATGGATACAACTGGTTGGATTGGTACCTGCAGAAGCCAGGGCAGTCTCCACAGCTCCTGATCTATTTGGGTTCTAATCGGGCCTCCGGGGTCCCTGACAGGTTCAGTGGCAGTGGATCAGGCACAGATTTTACACTGAAAATCAGCAGAGTGGAGGCTGAGGATGTTGGGGTTTATTACTGCATGCAAGCTCACCAAACTCCATTCACTTTCGGCCAGGGGACCAAGGTGGAAATCAAACGAACCGTGGCTGCACCATCTGTCTTCATCTTCCCGCCATCTGATGAGCAGTTGAAATCTGGAACTGCCTCTGTTGTGTGCCTGCTGAATAACTTCTATCCCAGAGAGGCCAAAGTACAGTGGAAGGTGGATAACGCCCTCCAATCGGGTAACTCCCAGGAGAGTGTCACAGAGCAGGACAGCAAGGACAGCACCTACAGCCTCAGCAGCACCCTGACGCTGAGCAAAGCAGACTACGAGAAACACAAAGTCTACGCCTGCGAAGTCACCCATCAGGGCCTGAGCTCGCCCGTCACAAAGAGCTTCAACAGGGGAGAGTGC
mAb3
1	HCDR1	TAFGGSISGHYWS
2	HCDR2	RIYPSGGTN
3	HCDR3	VRDYWDDYYGMDV
4	LCDR1	RSSQSLLHSDGFNYLD
5	LCDR2	YLGSNRAS
6	LCDR3	MQAYQTPRT
7	VH	QVQLQESGPGLVKPSETLSLTCTAFGGSISGHYWSWIRQPAGKGLEWIGRIYPSGGTNKNPSLKSRVTMSVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCVRDYWDDYYGMDVWGQGTTVTVSS
8	VL	DIVMTQSPLSLPVTPGEPASISCRSSQSLLHSDGFNYLDWYLQKPGQSPQLLIYLGSNRASGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCMQAYQTPRTFGQGTKVEIK
25	HC	QVQLQESGPGLVKPSETLSLTCTAFGGSISGHYWSWIRQPAGKGLEWIGRIYPSGGTNKNPSLKSRVTMSVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCVRDYWDDYYGMDVWGQGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLG
10	LC	DIVMTQSPLSLPVTPGEPASISCRSSQSLLHSDGFNYLDWYLQKPGQSPQLLIYLGSNRASGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCMQAYQTPRTFGQGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
26	HC DNA	CAGGTGCAGCTGCAGGAGTCGGGCCCAGGACTGGTGAAGCCTTCGGAGACCCTGTCCCTCACCTGTACTGCCTTTGGTGGCTCCATCAGTGGTCACTACTGGAGCTGGATCCGGCAGCCCGCCGGGAAGGGACTGGAGTGGATTGGGCGTATTTATCCTAGTGGGGGCACCAACAAAAACCCCTCCCTCAAGAGTCGCGTCACCATGTCAGTAGACACGTCCAAGAATCAGTTCTCCCTGAAGCTGAGTTCTGTGACCGCCGCGGACACGGCCGTGTATTATTGTGTGAGAGATTACTGGGACGACTACTATGGTATGGACGTCTGGGGCCAAGGGACCACGGTCACCGTCTCCTCAGCTAGCACCAAGGGCCCATCGGTCTTCCCACTAGCGCCCTGCTCCAGGAGCACCTCCGAGAGCACAGCCGCCCTGGGCTGCCTGGTCAAGGACTACTTCCCCGAACCGGTGACGGTGTCGTGGAACTCAGGCGCCCTGACCAGCGGCGTGCACACCTTCCCGGCTGTCCTACAGTCCTCAGGACTCTACTCCCTCAGCAGCGTGGTGACCGTGCCCTCCAGCAGCTTGGGCACGAAGACCTACACCTGCAACGTAGATCACAAGCCCAGCAACACCAAGGTGGACAAGAGAGTTGAGTCCAAATATGGTCCCCCATGCCCACCCTGCCCAGCACCTGAGTTTCTGGGGGGACCATCAGTCTTCCTGTTCCCCCCAAAACCCAAGGACACTCTCATGATCTCCCGGACCCCTGAGGTCACGTGCGTGGTGGTGGACGTGAGCCAGGAAGACCCCGAGGTCCAGTTCAACTGGTACGTGGATGGCGTGGAGGTGCATAATGCCAAGACAAAGCCGCGGGAGGAGCAGTTCAACAGCACGTACCGTGTGGTCAGCGTCCTCACCGTCCTGCACCAGGACTGGCTGAACGGCAAGGAGTACAAGTGCAAGGTCTCCAACAAAGGCCTCCCGTCCTCCATCGAGAAAACCATCTCCAAAGCCAAAGGGCAGCCCCGAGAGCCACAGGTGTACACCCTGCCCCCATCCCAGGAGGAGATGACCAAGAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTACCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAAAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACAAGACCACGCCTCCCGTGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTACAGCAGGCTAACCGTGGACAAGAGCAGGTGGCAGGAGGGGAATGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCTCTGCACAACCACTACACACAGAAGAGCCTCTCCCTGTCTCTGGGT
12	LC DNA	GATATTGTGATGACTCAGTCTCCACTCTCCCTGCCCGTCACCCCTGGAGAGCCGGCCTCCATCTCCTGCAGGTCTAGTCAGAGCCTCCTGCATAGTGATGGATTCAACTATTTGGATTGGTACCTGCAGAAGCCAGGGCAGTCTCCACAGCTCCTGATCTATCTGGGTTCTAATCGGGCCTCCGGGGTCCCTGACAGGTTCAGTGGCAGTGGATCAGGCACAGATTTTACACTGAAAATCAGCAGAGTGGAGGCTGAGGATGTTGGGGTTTATTACTGCATGCAAGCTTATCAAACTCCTCGGACGTTCGGCCAAGGGACCAAGGTGGAAATCAAACGAACCGTGGCTGCACCATCTGTCTTCATCTTCCCGCCATCTGATGAGCAGTTGAAATCTGGAACTGCCTCTGTTGTGTGCCTGCTGAATAACTTCTATCCCAGAGAGGCCAAAGTACAGTGGAAGGTGGATAACGCCCTCCAATCGGGTAACTCCCAGGAGAGTGTCACAGAGCAGGACAGCAAGGACAGCACCTACAGCCTCAGCAGCACCCTGACGCTGAGCAAAGCAGACTACGAGAAACACAAAGTCTACGCCTGCGAAGTCACCCATCAGGGCCTGAGCTCGCCCGTCACAAAGAGCTTCAACAGGGGAGAGTGC
mAb4
13	HCDR1	TVSGGSISNNYWS
14	HCDR2	RMYSSGSTQ
15	HCDR3	VRGPNWGSPYYGVDV
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27	HC	QVQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGGSISNNYWSWIRQPAGKGLEWIGRMYSSGSTQKNPSLKSRVTMSVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCVRGPNWGSPYYGVDVWGQGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLG
22	LC	DIVMTQSPLSLPVTPGEPASISCRSSPSLLHSDGYNWLDWYLQKPGQSPQLLIYLGSNRASGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCMQAHQTPFTFGQGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
28	HC DNA	CAGGTGCAGCTGCAGGAGTCGGGCCCAGGACTGGTGAAGCCTTCGGAGACCCTGTCCCTCACCTGCACTGTCTCTGGTGGCTCCATCAGTAATAACTACTGGAGTTGGATCCGGCAGCCCGCCGGTAAGGGGCTGGAGTGGATTGGGCGTATGTATTCCAGTGGGAGCACCCAGAAAAACCCCTCCCTCAAGAGTCGAGTCACCATGTCAGTAGACACGTCCAAAAACCAGTTCTCCCTGAAGCTGTCCTCTGTGACCGCCGCGGACACGGCCGTGTATTATTGTGTGAGAGGCCCTAACTGGGGATCCCCCTACTACGGTGTGGACGTCTGGGGCCAAGGGACCACGGTCACCGTCTCCTCAGCTAGCACCAAGGGCCCATCGGTCTTCCCACTAGCGCCCTGCTCCAGGAGCACCTCCGAGAGCACAGCCGCCCTGGGCTGCCTGGTCAAGGACTACTTCCCCGAACCGGTGACGGTGTCGTGGAACTCAGGCGCCCTGACCAGCGGCGTGCACACCTTCCCGGCTGTCCTACAGTCCTCAGGACTCTACTCCCTCAGCAGCGTGGTGACCGTGCCCTCCAGCAGCTTGGGCACGAAGACCTACACCTGCAACGTAGATCACAAGCCCAGCAACACCAAGGTGGACAAGAGAGTTGAGTCCAAATATGGTCCCCCATGCCCACCCTGCCCAGCACCTGAGTTTCTGGGGGGACCATCAGTCTTCCTGTTCCCCCCAAAACCCAAGGACACTCTCATGATCTCCCGGACCCCTGAGGTCACGTGCGTGGTGGTGGACGTGAGCCAGGAAGACCCCGAGGTCCAGTTCAACTGGTACGTGGATGGCGTGGAGGTGCATAATGCCAAGACAAAGCCGCGGGAGGAGCAGTTCAACAGCACGTACCGTGTGGTCAGCGTCCTCACCGTCCTGCACCAGGACTGGCTGAACGGCAAGGAGTACAAGTGCAAGGTCTCCAACAAAGGCCTCCCGTCCTCCATCGAGAAAACCATCTCCAAAGCCAAAGGGCAGCCCCGAGAGCCACAGGTGTACACCCTGCCCCCATCCCAGGAGGAGATGACCAAGAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTACCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAAAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACAAGACCACGCCTCCCGTGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTACAGCAGGCTAACCGTGGACAAGAGCAGGTGGCAGGAGGGGAATGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCTCTGCACAACCACTACACACAGAAGAGCCTCTCCCTGTCTCTGGGT
24	LC DNA	GATATTGTGATGACTCAGTCTCCACTCTCCCTGCCCGTCACCCCTGGAGAGCCGGCCTCCATCTCCTGCAGGTCTAGTCCGAGCCTCCTGCATAGTGATGGATACAACTGGTTGGATTGGTACCTGCAGAAGCCAGGGCAGTCTCCACAGCTCCTGATCTATTTGGGTTCTAATCGGGCCTCCGGGGTCCCTGACAGGTTCAGTGGCAGTGGATCAGGCACAGATTTTACACTGAAAATCAGCAGAGTGGAGGCTGAGGATGTTGGGGTTTATTACTGCATGCAAGCTCACCAAACTCCATTCACTTTCGGCCAGGGGACCAAGGTGGAAATCAAACGAACCGTGGCTGCACCATCTGTCTTCATCTTCCCGCCATCTGATGAGCAGTTGAAATCTGGAACTGCCTCTGTTGTGTGCCTGCTGAATAACTTCTATCCCAGAGAGGCCAAAGTACAGTGGAAGGTGGATAACGCCCTCCAATCGGGTAACTCCCAGGAGAGTGTCACAGAGCAGGACAGCAAGGACAGCACCTACAGCCTCAGCAGCACCCTGACGCTGAGCAAAGCAGACTACGAGAAACACAAAGTCTACGCCTGCGAAGTCACCCATCAGGGCCTGAGCTCGCCCGTCACAAAGAGCTTCAACAGGGGAGAGTGC
Ab0 ( 親本 Ab4)
34	HCDR1	TVSGGSISNNYWS
35	HCDR2	RMYSSGSTN
36	HCDR3	ARGPNWGSPYYGVDV
37	LCDR1	RSSQSLLHSDGYNYLD
5	LCDR2	YLGSNRAS
38	LCDR3	MQALQTPFT
39	HC	QVQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGGSISNNYWSWIRQSAGKGLEWIGRMYSSGSTNKNPSLKSRVTMSVDTSKNQFSLKLTSVTAADTAVYYCARGPNWGSPYYGVDVWGQGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
40	LC	DVVMTQSPLSLPVTPGEPASISCRSSQSLLHSDGYNYLDWYLQKPGQSPQVLIYLGSNRASGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCMQALQTPFTFGPGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC

在一些實施例中，抗人類LAIR1抗體為人類抗體。在一些實施例中，抗人類LAIR1抗體具有人類IgG2或IgG4同型。在一些實施例中，抗人類LAIR1抗體具有人類IgG2同型。在一些實施例中，抗人類LAIR1抗體具有包含C131S突變(根據EU索引編號)的經修飾之人類IgG2 Fc區，其降低人類IgG2中之二硫鍵異質性(參見Allen等人，Biochemistry 2009，48: 3755-3766)。在一些實施例中，抗人類LAIR1抗體具有人類IgG4同型。在一些實施例中，抗人類LAIR1抗體具有包含S228P突變(根據EU索引編號)的經修飾之人類IgG4鉸鏈區，其減少活體內IgG4 Fab臂交換(參見Labrijn等人，Nat. Biotechnol. 2009，27(8):767)。

在一些實施例中，本文提供結合人類LAIR1之抗體片段(例如Fab或scFv)，其中抗體片段包含VH及VL，其中VH包含HCDR1、HCDR2及HCDR3，且VL包含LCDR1、LCDR2及LCDR3，其中HCDR1包含SEQ ID NO: 1，HCDR2包含SEQ ID NO: 2，HCDR3包含SEQ ID NO: 3，LCDR1包含SEQ ID NO: 4，LCDR2包含SEQ ID NO: 5，且LCDR3包含SEQ ID NO: 6。在一些實施例中，抗體片段包含有包含SEQ ID NO: 7之VH及包含SEQ ID NO: 8之VL。

在一些實施例中，本文提供結合人類LAIR1之抗體片段(例如Fab或scFv)，其中抗體片段包含VH及VL，其中VH包含HCDR1、HCDR2及HCDR3，且VL包含LCDR1、LCDR2及LCDR3，其中HCDR1包含SEQ ID NO: 13，HCDR2包含SEQ ID NO: 14，HCDR3包含SEQ ID NO: 15，LCDR1包含SEQ ID NO: 16，LCDR2包含SEQ ID NO: 5，且LCDR3包含SEQ ID NO: 18。在一些實施例中，抗體片段包含有包含SEQ ID NO: 19之VH及包含SEQ ID NO: 20之VL。

在另一態樣中，本文提供編碼本文所描述之新穎抗人類LAIR1抗體之重鏈VH或輕鏈VL的核酸，及包含此類核酸之載體。

在一些實施例中，本文提供編碼本文所描述之抗人類LAIR1抗體之重鏈或輕鏈的核酸。在一些實施例中，本文提供包含編碼SEQ ID NO: 9、25、10、21、27或22之序列的核酸。在一些實施例中，本文提供核酸，其包含編碼包含SEQ ID NO: 9、25、21或27之抗體重鏈的序列。舉例而言，核酸可包含選自SEQ ID NO: 11、26、23或28之序列。在一些實施例中，本文提供核酸，其包含編碼包含SEQ ID NO: 10或22之抗體輕鏈的序列。舉例而言，核酸可包含選自SEQ ID NO: 12或24之序列。

本文亦提供包含編碼抗體重鏈或輕鏈之核酸序列的載體。舉例而言，此類載體可包含編碼SEQ ID NO: 9、25、10、21、27或22之核酸序列。在一些實施例中，載體包含SEQ ID NO: 11、26、12、23、28或24。

本文亦提供包含編碼抗體重鏈之第一核酸序列及編碼抗體輕鏈之第二核酸序列的載體。在一些實施例中，載體包含編碼SEQ ID NO: 9或25之第一核酸序列及編碼SEQ ID NO: 10之第二核酸序列。在一些實施例中，載體包含編碼SEQ ID NO: 21或27之第一核酸序列及編碼SEQ ID NO: 22之第二核酸序列。

亦提供包含第一載體及第二載體之組合物，該第一載體包含編碼抗體重鏈之核酸序列，及該第二載體包含編碼抗體輕鏈之核酸序列。在一些實施例中，組合物包含第一載體及第二載體，該第一載體包含編碼SEQ ID NO: 9或25之核酸序列，該第二載體包含編碼SEQ ID NO: 10之核酸序列。在一些實施例中，組合物包含第一載體及第二載體，該第一載體包含編碼SEQ ID NO: 21或27之核酸序列，該第二載體包含編碼SEQ ID NO: 22之核酸序列。

本發明之核酸可在宿主細胞中表現，例如在核酸已可操作地連接至表現控制序列之後表現。表現控制序列能夠表現與之可操作地連接的核酸，此係本領域中熟知的。表現載體可包括編碼一或多個信號肽之序列，該一或多個信號肽促進一或多種多肽自宿主細胞分泌。含有相關核酸(例如編碼抗體之重鏈或輕鏈的核酸)之表現載體可藉由熟知之方法(例如穩定或短暫轉染、轉型、轉導或感染)轉移至宿主細胞中。另外，表現載體可含有一或多個選擇標記物，例如四環素、新黴素及二氫葉酸還原酶，以輔助偵測經所需核酸序列轉型之宿主細胞。

在另一態樣中，本文提供包含本文所描述之核酸、載體或核酸組合物之細胞，例如宿主細胞。宿主細胞可為經表現本文所描述之抗體之全部或一部分的一或多種表現載體穩定或短暫轉染、轉型、轉導或感染的細胞。在一些實施例中，宿主細胞可經表現本發明抗體之HC及LC多肽之表現載體穩定或短暫轉染、轉型、轉導或感染。在一些實施例中，宿主細胞可經表現本文所描述之抗體之HC多肽的第一載體及表現本文所描述之抗體之LC多肽的第二載體穩定或短暫轉染、轉型、轉導或感染。此類宿主細胞，例如哺乳動物宿主細胞，可表現本文所描述之抗人類LAIR1抗體。已知能夠表現抗體之哺乳動物宿主細胞包括CHO細胞、HEK293細胞、COS細胞及NS0細胞。

在一些實施例中，細胞，例如宿主細胞包含載體，該載體包含編碼SEQ ID NO: 9或25之第一核酸序列及編碼SEQ ID NO: 10之第二核酸序列。在一些實施例中，細胞，例如宿主細胞包含載體，該載體包含編碼SEQ ID NO: 21或27之第一核酸序列及編碼SEQ ID NO: 22之第二核酸序列。

在一些實施例中，細胞，例如宿主細胞包含第一載體及第二載體，該第一載體包含編碼SEQ ID NO: 9或25之核酸序列，該第二載體包含編碼SEQ ID NO: 10之核酸序列。在一些實施例中，細胞，例如宿主細胞包含第一載體及第二載體，該第一載體包含編碼SEQ ID NO: 21或27之核酸序列，該第二載體包含編碼SEQ ID NO: 22之核酸序列。

本發明進一步提供一種產生本文所描述之抗人類LAIR1抗體的方法，該方法藉由在使抗體表現之條件下培養上述宿主細胞(例如哺乳動物宿主細胞)及自培養基回收表現之抗體。可藉由習知技術純化其中已分泌有抗體之培養基。可採用各種蛋白質純化方法，且此類方法為此項技術中已知的且描述於例如Deutscher，Method in Enzymology 182:83-89 (1990)及Scopes，Protein Purification: Principles and Practice，第3版，Springer，NY (1994)中。

亦提供藉由本文所描述之方法中之任一者產生的抗體。

在另一態樣中，本文提供包含本文所描述之抗體、核酸或載體之醫藥組合物。此類醫藥組合物亦可包含一或多種醫藥學上可接受之賦形劑、稀釋劑或載劑。醫藥組合物可藉由此項技術中熟知之方法(例如Remington: The Science and Practice of Pharmacy，第22版(2012)，A. Loyd等人，Pharmaceutical Press)製備。

本文所描述之抗人類LAIR1抗體、核酸、載體或醫藥組合物可用於治療自體免疫疾病或纖維化疾病。此類自體免疫疾病或纖維化疾病之實例包括類風濕性關節炎、牛皮癬、全身性紅斑性狼瘡症、狼瘡性腎炎、尋常天疱瘡、全身性硬化症、特發性肺纖維化、硬皮病、硬皮病相關間質性肺病、IgG4相關疾病、慢性纖維化間質性肺病、潰瘍性結腸炎、克羅恩氏病、化膿性汗腺炎、異位性皮膚炎或多發性硬化症。

在一些實施例中，本文提供治療有需要之個體(例如人類患者)之自體免疫疾病或纖維化疾病的方法，該方法係藉由向個體投與治療有效量之抗人類LAIR1抗體、編碼此類抗人類LAIR1抗體之核酸、包含此類核酸之載體或包含此類抗人類LAIR1抗體、核酸或載體之醫藥組合物，如本文所描述。本文所描述之抗體、核酸、載體或醫藥組合物可藉由非經腸途徑(例如皮下或靜脈內)投與。

亦提供本文所描述用於療法中之抗人類LAIR1抗體、核酸、載體或醫藥組合物。此外，本發明亦提供本文所描述之抗人類LAIR1抗體、核酸、載體或醫藥組合物，其用於治療自體免疫疾病或纖維化疾病。

本文亦提供本文所描述之抗人類LAIR1抗體、核酸、載體或醫藥組合物之用途，其用於製造供治療自體免疫疾病或纖維化疾病之藥劑。

亦提供一種結合人類LAIR1蛋白質之抗體或其抗原片段，其中該抗體結合包含以下之抗原決定基：一或多個選自FVCRGPVGVQTFRLER (SEQ ID NO: 32)之胺基酸殘基及一或多個選自VSQASPSESEARFRI (SEQ ID NO: 33)之胺基酸殘基，其中胺基酸殘基選自胺基酸26至41及53至68，其中胺基酸位置對應於SEQ ID NO: 29。

較佳地，結合人類LAIR1蛋白質之抗體或其抗原片段為其中抗體結合包含以下之抗原決定基的抗體或其抗原片段：兩個或更多個選自FVCRGPVGVQTFRLER (SEQ ID NO: 32)之胺基酸殘基及兩個或更多個選自VSQASPSESEARFRI (SEQ ID NO: 33)之胺基酸殘基，其中胺基酸殘基選自胺基酸26至41及53至68，其中胺基酸位置對應於SEQ ID NO: 29。

較佳地，結合人類LAIR1蛋白質之抗體或其抗原片段為其中抗體結合包含以下之抗原決定基的抗體或其抗原片段：三個或更多個選自FVCRGPVGVQTFRLER (SEQ ID NO: 32)之胺基酸殘基及三個或更多個選自VSQASPSESEARFRI (SEQ ID NO: 33)之胺基酸殘基，其中胺基酸殘基選自胺基酸26至41及53至68，其中胺基酸位置對應於SEQ ID NO: 29。

較佳地，結合人類LAIR1蛋白質之抗體或其抗原片段為其中抗體結合包含以下之抗原決定基的抗體或其抗原片段：四個或更多個選自FVCRGPVGVQTFRLER (SEQ ID NO: 32)之胺基酸殘基及四個或更多個選自VSQASPSESEARFRI (SEQ ID NO: 33)之胺基酸殘基，其中胺基酸殘基選自胺基酸26至41及53至68，其中胺基酸位置對應於SEQ ID NO: 29。

較佳地，結合人類LAIR1蛋白質之抗體或其抗原片段為其中抗體結合包含以下之抗原決定基的抗體或其抗原片段：五個或更多個選自FVCRGPVGVQTFRLER (SEQ ID NO: 32)之胺基酸殘基及五個或更多個選自VSQASPSESEARFRI (SEQ ID NO: 33)之胺基酸殘基，其中胺基酸殘基選自胺基酸26至41及53至68，其中胺基酸位置對應於SEQ ID NO: 29。

較佳地，結合人類LAIR1蛋白質之抗體或其抗原片段為其中抗體結合包含以下之抗原決定基的抗體或其抗原片段：六個或更多個選自FVCRGPVGVQTFRLER (SEQ ID NO: 32)之胺基酸殘基及六個或更多個選自VSQASPSESEARFRI (SEQ ID NO: 33)之胺基酸殘基，其中胺基酸殘基選自胺基酸26至41及53至68，其中胺基酸位置對應於SEQ ID NO: 29。

較佳地，結合人類LAIR1蛋白質之抗體或其抗原片段為其中抗體結合包含以下之抗原決定基的抗體或其抗原片段：七個或更多個選自FVCRGPVGVQTFRLER (SEQ ID NO: 32)之胺基酸殘基及七個或更多個選自VSQASPSESEARFRI (SEQ ID NO: 33)之胺基酸殘基，其中胺基酸殘基選自胺基酸26至41及53至68，其中胺基酸位置對應於SEQ ID NO: 29。

較佳地，結合人類LAIR1蛋白質之抗體或其抗原片段為其中抗體結合包含以下之抗原決定基的抗體或其抗原片段：八個、九個、十個、十一個、十二個、十三個或十四個或更多個選自FVCRGPVGVQTFRLER (SEQ ID NO: 32)之胺基酸殘基及八個、九個、十個、十一個、十二個、十三個或十四個或更多個選自VSQASPSESEARFRI (SEQ ID NO: 33)之胺基酸殘基，其中胺基酸殘基選自胺基酸26至41及53至68，其中胺基酸位置對應於SEQ ID NO: 29。

較佳地，抗原決定基包含FVCRGPVGVQTFRLER (SEQ ID NO: 32)及VSQASPSESEARFRI (SEQ ID NO: 33)，其中胺基酸殘基選自胺基酸26至41及53至68，其中胺基酸位置對應於SEQ ID NO: 29。

亦提供一種結合人類LAIR1蛋白質之如上文所定義之抗原決定基的抗體或其抗體片段，其中抗體包含VH及VL，其中VH包含HCDR1、HCDR2及HCDR3，且VL包含LCDR1、LCDR2及LCDR3，其中HCDR1包含SEQ ID NO: 34，HCDR2包含SEQ ID NO: 35，HCDR3包含SEQ ID NO: 36，LCDR1包含SEQ ID NO: 37，LCDR2包含SEQ ID NO: 5及LCDR3包含SEQ ID NO: 38。在一些實施例中，抗人類LAIR1抗體具有人類IgG4同型。在一些實施例中，抗人類LAIR1抗體具有經修飾之人類IgG4同型。在一些實施例中，抗人類LAIR1具有包含S228P突變(根據EU索引編號)的經修飾之人類IgG4鉸鏈區，其減少活體內IgG4 Fab臂交換(參見Labrijn等人，Nat. Biotechnol. 2009，27(8):767)。在一些實施例中，抗體包含有包含SEQ ID NO: 39之重鏈(HC)及包含SEQ ID NO: 40之輕鏈(LC)。在一些實施例中，抗人類LAIR1抗體包含與SEQ ID NO: 39具有至少95%序列一致性之HC及與SEQ ID NO: 40具有至少95%序列一致性之LC。

較佳地，結合人類LAIR1蛋白質之抗體或其抗原片段為Ab0。

較佳地，結合人類LAIR1蛋白質之抗體或其抗原片段為人類抗體。

較佳地，根據本發明之結合抗原決定基之抗體或其抗原片段為促效人類LAIR1蛋白質之抗體。

亦提供一種抗LAIR1抗體或其抗體片段，其與根據本發明定義之抗體中之任一者競爭結合至本發明之抗原決定基。

較佳地，結合抗原決定基之抗LAIR1抗體或其抗原片段為Ab0。

在一些實施例中，與下文定義之抗LAIR1抗體競爭結合至抗原決定基之抗LAIR1抗體或其抗體片段為Ab1、Ab2、Ab3或Ab4。

在一些實施例中，抗LAIR1抗體為結合如上文所定義之人類LAIR1蛋白質之抗原決定基的抗體或其抗體片段，其中抗體包含VH及VL，其中VH包含HCDR1、HCDR2及HCDR3，且VL包含LCDR1、LCDR2及LCDR3，其中HCDR1包含SEQ ID NO: 34，HCDR2包含SEQ ID NO: 35，HCDR3包含SEQ ID NO: 36，LCDR1包含SEQ ID NO: 37，LCDR2包含SEQ ID NO: 5且LCDR3包含SEQ ID NO: 38。在一些實施例中，抗人類LAIR1抗體具有人類IgG4同型。在一些實施例中，抗人類LAIR1具有包含S228P突變(根據EU索引編號)的經修飾之人類IgG4鉸鏈區，其減少活體內IgG4 Fab臂交換(參見Labrijn等人，Nat. Biotechnol. 2009，27(8):767)。在一些實施例中，抗體包含有包含SEQ ID NO: 39之重鏈(HC)及包含SEQ ID NO: 40之輕鏈(LC)。在一些實施例中，抗人類LAIR1抗體包含與SEQ ID NO: 39具有至少95%序列一致性之HC及與SEQ ID NO: 40具有至少95%序列一致性之LC。

抗原決定基較佳藉由氫-氘交換(HDX)定位技術確定。

抗人類LAIR1抗體或其抗原片段之優點為其能夠開啟身體的天然免疫抑制機制。與當前的免疫調節療法相比，此可產生目標細胞特異性功效及關鍵的安全性益處。

本發明之抗人類LAIR1抗體較佳具有一或多種以下關鍵特性： - 結合至人類LAIR1及與食蟹獼猴LAIR1交叉反應 - 結合至獨特的抗原決定基(非配位體阻斷)。 - 展現LAIR1之促效作用。 - 抗體介導之促效作用以劑量依賴性方式引起人類初始B細胞活化減弱 - 在移植物抗宿主疾病之人源化小鼠模型中展現活體內功效。 - 在狼瘡性腎炎之小鼠模型中之臨床前功效

如本文所用，除非本文中另外指示或與上下文明顯矛盾，否則本發明之上下文中(尤其在申請專利範圍之情形中)所用的術語「一(a/an)」、「該」及類似術語應解釋為涵蓋單數及複數兩者。

如本文所用，術語「抗體」係指結合抗原之免疫球蛋白分子。抗體之實施例包括單株抗體、多株抗體、人類抗體、人源化抗體、嵌合抗體或結合抗體。抗體可為任何類別(例如IgG、IgE、IgM、IgD、IgA)及任何子類別(例如IgG1、IgG2、IgG3、IgG4)。

例示性抗體為由四條多肽鏈構成之免疫球蛋白G (IgG)型抗體：經由鏈間二硫鍵交聯之兩條重鏈(HC)及兩條輕鏈(LC)。四條多肽鏈中之各者之胺基端部分包括具有約100至125個或更多個胺基酸之主要負責抗原識別的可變區。四條多肽鏈中之各者之羧基端部分含有主要負責效應功能之恆定區。各重鏈包含重鏈可變區(VH)及重鏈恆定區。各輕鏈包含輕鏈可變區(VL)及輕鏈恆定區。IgG同型可進一步分為子類(例如IgG1、IgG2、IgG3及IgG4)。

VH及VL區可進一步細分為高變區，稱為互補決定區(CDR)，其間穿插有更保守的區，稱為構架區(FR)。CDR暴露於蛋白質之表面上且為對抗體之抗原結合特異性而言重要的區。各VH及VL由自胺基端至羧基端依以下次序佈置之三個CDR及四個FR構成：FR1、CDR1、FR2、CDR2、FR3、CDR3、FR4。在本文中，重鏈之三個CDR稱為「HCDR1、HCDR2及HCDR3」且輕鏈之三個CDR稱為「LCDR1、LCDR2及LCDR3」。CDR含有與抗原形成特異性相互作用之大部分殘基。胺基酸殘基分配至CDR可根據熟知方案進行，其包括描述於以下中之彼等方案：Kabat (Kabat等人，「Sequences of Proteins of Immunological Interest,」 National Institutes of Health，Bethesda，Md. (1991))，Chothia (Chothia等人，「Canonical structures for the hypervariable regions of immunoglobulins」，Journal of Molecular Biology，196，901-917 (1987)；Al-Lazikani等人，「Standard conformations for the canonical structures of immunoglobulins」，Journal of Molecular Biology，273，927-948 (1997))，North (North等人，「A New Clustering of Antibody CDR Loop Conformations」，Journal of Molecular Biology，406，228-256 (2011))，或IMGT (在www.imgt.org可獲得之國際ImMunoGeneTics資料庫; 參見Lefranc等人，Nucleic Acids Res. 1999; 27:209-212)。North CDR定義係用於本文所描述之抗人類LAIR1抗體。

本發明亦包括抗體片段或抗原結合片段，其包含至少一部分保持與抗原，諸如Fab、Fab'、F(ab')2、Fv片段、scFv、scFab、二硫鍵鍵聯之Fv (sdFv)、Fd片段及線性抗體特異性相互作用之能力的抗體。

術語「抗原決定基」係指抗原之胺基酸殘基，其與抗體結合。抗原決定基可為線性抗原決定基、構形抗原決定基或雜交抗原決定基。

術語「抗原決定基」可用於指代結構抗原決定基。根據一些實施例，結構抗原決定基可用於描述由抗體覆蓋之抗原區(例如抗體在結合至抗原時的覆蓋面積)。

抗原決定基可根據不同實驗技術(亦稱為「抗原決定基定位技術」)測定。應理解，抗原決定基之測定可基於所用不同抗原決定基定位技術而變化，且亦可隨不同實驗條件而變化，例如歸因於藉由特定實驗條件誘導的抗體之構形變化或裂解。抗原決定基定位技術為此項技術中已知的(例如Rockberg及Nivebrant，Epitope mapping Protocols: Methods in Molecular Biology，Humana press,第3版. 2018)，包括(但不限於)X射線結晶學、核磁共振(NMR)光譜分析、定點誘變、物種交換誘變、丙胺酸掃描誘變、氫-氘交換(HDX)及交叉阻斷分析。

如本文所用，術語「競爭結合」或「與...競爭」係指交叉競爭(亦即彼此競爭)結合至相同抗原的兩種抗體。在一些實施例中，兩種抗體可競爭結合至相同抗原，其中其結合至相同抗原之空間重疊區。在一些實施例中，兩種抗體可競爭結合至相同的抗原，其中抗體結合至抗原之非重疊區，但例如由於第一抗體誘導之抗原的位阻或構形變化，一種抗體之結合會阻斷另一種抗體結合。可使用許多類型之競爭性結合分析來判定一種抗體是否與另一種競爭，例如固相直接或間接放射免疫分析(RIA)、固相直接或間接酶免疫分析(EIA)、夾心競爭分析(sandwich competition assay)、表面電漿子共振、生物膜干涉量測法或流式細胞分析方法。抗原決定基分箱(Epitope binning)可使用Carterra技術進行(例如PLoS One，2014年3月20日; doi: 10.137/journal.pone. 0092451，Y. Abdiche等人)。

如本文所用，術語「促效劑」或「促效」係指能夠誘導或增加與人類LAIR1相關之一或多種活性或功能，例如與實例中所描述之人類LAIR1相關的一或多種活性或功能的抗體或抗體片段。

除非另外指示，否則如本文所用之術語「結合(bind/binds)」欲意謂蛋白質或分子與另一蛋白質或分子形成化學鍵或吸引相互作用之能力，藉由此項技術中已知之常用方法所測定，其引起兩種蛋白質或分子接近。

「有效量」係指達成所需治療結果所必需之量(對於一定時間段而言及對於投與方式而言)。抗體之有效量可根據各種因素而變化，諸如個體之疾病病況、年齡、性別及體重以及抗體在個體中引發所需反應之能力。治療有效量亦為抗體的治療有益作用超過任何毒性或有害作用的量。

如本文所用之術語「Fc區」係指抗體中包含抗體重鏈之CH2及CH3域的區。視情況而言，Fc區可包括抗體重鏈之鉸鏈區之一部分或整個鉸鏈區。

除非另外說明，否則如本文所用之術語「LAIR1」係指人類白血球相關免疫球蛋白樣受體1 (亦稱為CD305)。人類LAIR1同功異型物a (最長的同功異型物)之胺基酸序列見於NCBI寄存編號NP_002278.2:

MSPHPTALLGLVLCLAQTIHTQEEDLPRPSISAEPGTVIPLGSHVTFVCRGPVGVQTFRLERDSRSTYNDTEDVSQASPSESEARFRIDSVREGNAGLYRCIYYKPPKWSEQSDYLELLVKESSGGPDSPDTEPGSSAGPTQRPSDNSHNEHAPASQGLKAEHLYILIGVSVVFLFCLLLLVLFCLHRQNQIKQGPPRSKDEEQKPQQRPDLAVDVLERTADKATVNGLPEKDRETDTSALAAGSSQEVTYAQLDHWALTQRTARAVSPQSTKPMAESITYAAVARH (SEQ ID NO: 29)

已報導人類LAIR1之若干較短同功異型物，包括同功異型物b (NCBI寄存編號NP_068352.2)、同功異型物c (NCBI寄存編號NP_001275952.2)、同功異型物e (NCBI寄存編號NP_001275954.2)、同功異型物f (NCBI寄存編號NP_001275955.2)、同功異型物g (NCBI寄存編號NP_001275956.2)。術語「LAIR1」在本文中用於統稱所有已知的人類LAIR1同功異型物。

食蟹獼猴LAIR1之胺基酸序列可見於XP_045236925.1 (同功異型物X1)、XP_045236926.1 (同功異型物X2)、XP_045236927.1 (同功異型物X3)或XP_045236928.1 (同功異型物X4)。

術語「核酸」或「聚核苷酸」在本文中可互換使用，係指併入有天然核苷酸、經修飾核苷酸及/或核苷酸類似物之核苷酸之聚合物，其包括單股及/或雙股含核苷酸之分子(諸如DNA、cDNA及RNA分子)。

如本文所用之術語「個體」係指哺乳動物，包括(但不限於)人類、黑猩猩、猿、獼猴、牛、馬、綿羊、山羊、豬、家兔、犬、貓、大鼠、小鼠、天竺鼠及其類似動物。較佳地，個體為人類。

如本文所用，「治療(treatment/treating)」係指所有可減緩、控制、延遲或遏止本文所揭示之病症或疾病之進展，或改善病症或疾病症狀，但未必指示完全消除所有病症或疾病的方法。治療包括投與用於治療患者(尤其人類)之疾病或病況的蛋白質或核酸或載體或組合物。實例

提供以下實例以進行說明，但不限制所主張之本發明。實例 1 ： 抗人類 LAIR1 抗體之產生

使用AlivaMab®人類轉殖基因小鼠及對抗LAIR1可變區進行選殖來產生人類抗人類LAIR1抗體。使用標準程序，在共投與或不共投與融合至具有TEV裂解位點之人類Fc的人類LAIR2 (SEQ ID NO: 31)的情況下，用融合至具有His標籤及TEV裂解位點之人類Fc的人類LAIR1 (SEQ ID NO: 30)免疫小鼠，且藉由標準分選方法使用螢光團標記之LAIR1分離抗原特異性B細胞。

LAIR1免疫原具有以下胺基酸序列： QEEDLPRPSISAEPGTVIPLGSHVTFVCRGPVGVQTFRLERESRSTYNDTEDVSQASPSESEARFRIDSVSEGNAGPYRCIYYKPPKWSEQSDYLELLVKETSGGPDSPDTEPGSSAGPTQRPSDNSHNEHAPASQGLKAEHENLYFQGEPKSSDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGKHHHHHH (SEQ ID NO: 30)。

LAIR2免疫原具有以下胺基酸序列： QEGALPRPSISAEPGTVISPGSHVTFMCRGPVGVQTFRLEREDRAKYKDSYNVFRLGPSESEARFHIDSVSEGNAGLYRCLYYKPPGWSEHSDFLELLVKESSGGPDSPDTEPGSSAGTVPGTEASGFDAPENLYFQGEPKSSDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK (SEQ ID NO:31)。

選殖、表現LAIR1特異性抗體之可變區且藉由ELISA確認重組抗體之活性，且表明對LAIR1具有選擇性且對LAIR2無活性(圖13)。隨後，在誘變CDR殘基且自各CDR之組合殘基中鑑別出增強之突變之後，對抗體進行工程改造以提高親和力。對個別組合純系定序。例示性抗人類LAIR1抗體之重鏈及輕鏈CDR、VH/VL及HC/LC序列提供於表1中。

抗人類LAIR1抗體可藉由重組DNA技術產生。可在使用最佳預定HC:LC載體比率或編碼HC及LC兩者之單一載體系統用表現系統短暫或穩定轉染之哺乳動物細胞株(諸如HEK293或CHO)中表現此類抗體。可使用通常已知的技術來純化其中已分泌抗體之澄清培養基。實例 2 ： 抗人類 LAIR1 抗體之特徵 抗體結合親和力及動力學

藉由表面電漿子共振(SPR)，使用Biacore 8K (Cytivia Life Sciences)測定抗體結合親和力及動力學。在37℃下使用HBS-EP+作為操作緩衝液(150 mM氯化鈉、3 mM EDTA、0.05% (w/v)界面活性劑P-20及10 mM HEPES，pH7.4)進行量測。結合實驗使用以重組方式產生之LAIR1 (SEQ ID NO: 17)之可溶性細胞外域(ECD)，其在含有0.1 mg/mL牛血清白蛋白之HBS-EP+中稀釋至工作濃度。使用胺偶合套組將山羊抗人類κ (Southern Biotech)固定在CM4感測器晶片之所有八個流動細胞上。

LAIR1之可溶性細胞外域(ECD)具有以下胺基酸序列：QEEDLPRPSISAEPGTVIPLGSHVTFVCRGPVGVQTFRLERESRSTYNDTEDVSQASPSESEARFRIDSVSEGNAGPYRCIYYKPPKWSEQSDYLELLVKETSGGPDSPDTPGSSAGPTQRPSDNSHNEHAPASQGLKAEHENLYFQ (SEQ ID NO: 17)。

使用多個分析循環評估結合。各循環以30 µL/min之流動速率進行，且由以下步驟組成：對不同的流動細胞注射抗體(25 μL抗體，0.5 μg/mL，10 µL/min)，注射75 μL (30 µL/min，歷時150 秒)之各LAIR1-ECD稀釋液(自1 µM開始且三倍連續稀釋至1.4 nM以用於各循環，各濃度注射一次)，隨後延遲1200秒進行解離，且使用三次15 μL注射(30 µL/min，歷時30秒)10 mM甘胺酸鹽酸鹽(pH1.7)進行晶片表面再生。藉由使用所提供之儀器分析軟體將生物感測器資料與簡單的1:1締合模型擬合以提取 k _on 及 k _off 速率常數，從而測定各循環之締合及解離速率；使用關係K _d= k _off / k _on 計算平衡結合常數K _D。

表2展示抗人類LAIR1 mAb之結合親和力及動力學。表 2. 在 37 ℃ 下藉由 Biacore 測定抗人類 LAIR1 mAb 之結合親和力及動力學

抗體ID	kon(M-1 s-1)	koff(sec-1)	KD (nM)
mAb1	1.44 × 10 ⁶	1.74 × 10 ^-4	0.121
mAb2	1.09 × 10 ⁶	3.41 × 10 ^-4	0.312
mAb3	1.34 × 10 ⁶	1.68 × 10 ^-4	0.126
mAb4	1.09 × 10 ⁶	3.17 × 10 ^-4	0.291

例示性 LAIR1 抗體之物理化學特性 熱穩定性：

使用差示掃描熱量測定(Differential Scanning Calorimetry；DSC)來評估例示性LAIR1抗體對熱變性之穩定性。使用Malvern MircoCal VP-DSC儀器進行DSC。以60℃/小時之恆定速率將PBS緩衝液中之樣品自20℃加熱至110℃。使用MicroCal VP-Capillary DSC自動分析程式執行分析方法。執行基線校正，且確定Tm起點及TM。如表3中所展示之結果展示例示性LAIR1抗體之Tm起點＞60℃且為熱穩定的。表 3.DSC 結果之概述

樣品	Tm 起點 ( ℃ )	Tm ₁( ℃ )	Tm ₂( ℃ )
mAb1	65.1	72.4	76.5
mAb2	63.5	70.3	80.8
mAb3	61.9	69.2	75.9
mAb4	61.1	68.8	80.3

可溶性：

需要足夠高的溶解度以實現方便的給藥。另外，亦需要在高濃度下維持抗體在單體狀態而無需高分子量(HMW)聚集。藉由用10 K分子量截止過濾器(Amicon U.C.過濾器，Millipore，目錄號UFC903024)將15 mg例示性抗體濃縮至小於100 µl之體積來分析例示性LAIR1抗體之溶解度。藉由SoloVPE分光光度計(C Technologies，INC)來量測樣品之最終濃度。以下程序基本上如上文所描述，例示性抗體呈現大於150 mg/mL (在5 mM組胺酸，pH 6.0下)及200 mg/ml (在PBS緩衝液中，pH 7.4)之溶解度。將濃縮溶液樣品在4℃下儲存1週，隨後在-5℃下儲存1週。使用尺寸排阻層析法(SEC)評定在儲存兩週之後的抗體之聚集概況。如表4中所展現之結果，在高濃度下僅存在低含量之高分子量(HMW)聚集體(約1%)且未觀測到相分離。表 4. 溶解度結果之概述

樣品	5 mM 組胺酸， pH 6	PBS
濃度 (mg/mL)	% HMW (2 w)	濃度 (mg/mL)	% HMW (2 w)
mAb1	167	1	211	1
mAb2	158	0.8	198	1
mAb3	157	0.9	234	1
mAb4	161	1.1	210	1

光穩定性：

在具有賦形劑之5 mM組胺酸緩衝液(pH 6.0)中評定高濃度(大約100 mg/mL)下之例示性抗體的光穩定性。在25℃下在光腔室中，濃縮樣品曝露於20% ICH Q1B最小曝光量40瓦時/平方公尺之UV光(10瓦/平方公尺下4小時)+240 klux小時(8 klux歷時30小時)。將受保護之濃縮樣品(包裹於鋁箔中)用作暗對照且置放於真樣品旁邊。在曝露後，用SEC分析樣品中HMW聚集體增長之百分比(Δ% HMW)。表5中所提供之結果展示，在曝露於20% ICH指南之後，例示性抗體之HMW增長百分比在5%至7%之間。表 5. 在光 曝露後 HMW 增長 % 之概述

樣品	在光曝露後之 Δ% HMW ( 相對於暗對照)
mAb1	7
mAb2	6.7
mAb3	5.8
mAb4	5

化學穩定性：

化學穩定性有助於研發具有足夠儲存壽命之藥物調配物。例示性抗體之化學穩定性係藉由在緩衝溶液(pH 6)中將例示性抗體調配至100 mg/ml之濃度來評定。在加速降解研究中，將經調配樣品在4℃及35℃下培育四週。抗體之分裂及聚集概況之變化係根據標準程序使用毛細電泳法十二烷基硫酸鈉(CE-SDS)及SEC來評定。隨後的程序基本上如上文所描述，例示性抗體展現表6中呈現之化學穩定性結果。表 6. 相對於在 4 ℃ 下培育之樣品 ，在 35 ℃ 下歷時四週 ，藉由 CE-SDS 量測之 Δ % 片段及藉由 SEC 量測之 Δ % HMW 的概述

樣品	在35 ℃ 下4 週之後的 Δ% 片段( 相對於4 ℃)	在35 ℃ 下4 週之後的 Δ% HMW( 相對於4 ℃)
mAb1	0.4	2.5
mAb2	0.2	1
mAb3	1.3	2.5
mAb4	0.5	0.9

表6中所提供之結果展示，在35℃下儲存4週之後，例示性抗體之片段增加百分比在0.2%至1.3%之間。例示性抗體之HMW增長量在0.9%至2.5%之間。

化學穩定性資料表明，例示性抗體具有足夠的化學穩定性以便研發具有足夠儲存壽命之溶液調配物。

總之，例示性LAIR1抗體展現親本治療性投與所必需的良好可溶性、低聚集、化學穩定性及物理穩定性特徵。實例 3 ： 抗人類 LAIR1 抗體之免疫原性評定

使用一組活體外及離體方法來表徵例示性LAIR1 mAb之免疫原性的相對風險，如下文所描述。 樹突狀細胞 (DC) 內化分析：

進行此分析以研究CD14+單核球來源之樹突狀細胞使分子內化。自周邊血液單核細胞(PBMC)分離CD14+單核球，且根據標準方案培養且分化成DC (參見Wen，Y.等人，AAPS J 2020年4月16日;22(3):68)。簡言之，使用密度-梯度離心用Ficoll (#17-1440-02，GE Healthcare)及Sepmate 50 (#15450，STEMCELL Technologies)自LRS-WBC中分離PBMC。使用陽性選擇用CD14+微珠粒套組(#130-050-201，Miltenyi Biotec)遵循製造商手冊分離CD14+單核球。接著，在含有L-麩醯胺酸及25 mM HEPES，補充有10% FBS、1 mM 丙酮酸鈉、1×青黴素-鏈黴素、1×非必需胺基酸及55 μM 2-巰基乙醇之RPMI培養基(下文稱為完全RPMI培養基或培養基，購自Life Technologies)中，將1百萬個/毫升之細胞與1000單位/毫升GM-CSF及600單位/毫升IL-4一起培養6天，以產生未成熟的樹突狀細胞(MDDC)。在第2天及第5天兩次更換培養基。在第6天用細胞刮刀輕輕收集細胞且用於實驗。為獲得成熟的DC，用1 µg/mL LPS處理細胞4小時。

用PBS將單獨的測試分子標準化為1 mg/ml，且接著在完全RPMI培養基中進一步稀釋至8 µg/ml。偵測探針Fab-TAMRA-QSY7在完全RPMI培養基中稀釋至5.33 µg/mL。抗體及Fab-TAMRA-QSY7以相等體積混合，且在暗處在4℃下培育30分鐘用於複合物形成。MDDC以4百萬/ml再懸浮於完全RPMI培養基中，且以50 µl/孔接種在96孔圓底盤中，向其中添加50 µl之抗體/探針複合物。細胞在CO2培育箱中在37℃下培育24小時。用2% FBS PBS洗滌細胞且再懸浮於100 µL具有Cytox綠色活/死細胞染料(Cytox Green live/dead dye)之2% FBS PBS中。在BD LSR Fortessa X-20上收集資料且在FlowJo中分析。對活的單細胞進行閘控，且TAMRA螢光陽性細胞之百分比記錄為讀數。為允許將分子與產生自不同供體之資料進行比較，使用標準化內化指數。使用下式使內化信號根據IgG1同型(經標準化之內化指數=0)及內部陽性對照組PC (經標準化之內化指數=100)標準化：其中XTAMRA、IgG1同型TAMRA及PCTAMRA分別為測試分子X、IgG1同型及PC之TAMRA陽性群體的百分比。對於標準化內化指數，0至15視為低免疫原性風險，＞15-30視為低至中等免疫原性風險，＞30-60視為中等免疫原性風險，且＞60視為高免疫原性風險。表 7 ：例示性 LAIR1 抗體之樹突狀細胞內化結果

例示性抗體	內化指數
mAb1	43.0
mAb2	38.0
mAb3	33.7
mAb4	27.5

如表7中所示，自樹突狀細胞內化分析來看，例示性抗人類LAIR1抗體具有低至中等及中等風險。 MAPP 分析 (MHC 相關肽蛋白質體學 ) ：

MAPP描繪人類白血球抗原II類(HLAII)在先前用測試分子處理之人類樹突狀細胞上呈現肽。藉由分離CD-14陽性細胞自白血球層製備來自一組10位正常人類供體的初代人類樹突狀細胞，且如所描述，藉由在37℃及5% CO2下，在含有5%血清替代物之完全RPMI培養基(Thermo Fisher Scientific，目錄號A2596101)中與20 ng/ml IL-4及40 ng/ml GM-CSF一起培育3天，分化為未成熟的樹突狀細胞(Knierman等，Cell Rep 2020 Dec 1;33(9):108454)。在第4天將三微莫耳之測試抗體添加至大約5×10 ⁶個細胞中，且在培育5小時後更換含有5 µg/ml之LPS以將細胞轉型為成熟樹突狀細胞的新鮮培養基。第二天，成熟的細胞在1 ml具有蛋白酶抑制劑及DNA酶之RIPA緩衝液中裂解。將裂解物儲存在-80℃下直至樣品分析。

使用自動液體處理系統使用生物素化之抗泛HLA II類抗體(純系Tu39)自解凍的裂解物中分離HLA-II分子。結合之受體-肽複合物用5%乙酸、0.1% TFA溶離。溶離之HLA-II肽穿過預洗滌10k MWCO過濾器以移除高分子量蛋白質。使用配備Thermo LUMOS質譜儀之Thermo easy 1200 nLC-HPLC系統，藉由奈米LC/MS分析經分離之HLA-II肽。分離使用75 µm×7 cm YMC-ODS C18管柱進行65分鐘梯度，流動速率為250 nL/min，且0.1%甲酸水溶液作為A溶劑，且含有0.1%甲酸之80%乙腈作為B溶劑。質譜分析以240,000解析度之全掃描模式運作，接著為3秒資料相關的MS/MS循環，該循環由具有HCD及EThcD碎裂之離子阱快速掃描構成。

藉由內部蛋白質體學管道(Higgs等人，Methods Mol Biol. 2008; 428:209-30)，使用多種搜尋演算法(無酶搜尋參數)對含有測試分子序列之牛類/人類資料庫進行搜尋來生成肽鑑別。將自測試分子鑑別之肽與親本序列比對。對所有測試分子進行概述，其中註釋了顯示具有非生殖系殘基之肽的供體百分比，以及測試分子中顯示具有非生殖系殘基的肽的不同區域之數目。顯示非生殖系肽之程度的增加與免疫原性風險增加相關聯。表 8 ： 例示性 LAIR 抗體之 MAPP 結果

例示性抗體	所有供體中具有非生殖系殘基的區域數目	顯示非生殖系區域的供體百分比
mAb1	3	60%
mAb2	2	80%
mAb3	3	60%
mAb4	2	80%

如表8中所示，自MAPP分析來看，例示性抗LAIR1抗體mAb1至4具有中等風險。 T 細胞增殖分析

此分析評定了測試分子藉由誘導細胞增殖活化CD4+ T細胞之能力(參見Walsh，R.E.等人，MAbs. 2020; 12(1): 1764829)。使用來自10個健康供體之冷凍保存的PBMC，且CD8+ T細胞自PBMC中耗盡，且用1 µM羧基螢光素二乙酸琥珀醯亞胺酯(CFSE)標記。將PBMC以4×10 ⁶個細胞/ml/孔接種在含有5% CTSTM Immune Cell SR (Gibco，目錄號A2596101)之AIM-V培養基(Life Technologies，目錄號12055-083)中，且在含有不同測試分子、DMSO對照、培養基對照、匙孔血藍蛋白(KLH；陽性對照)之2.0 mL中一式三份測試。培養細胞且在37℃及5% CO2下培育7天。在第7天，樣品用以下細胞表面標記物染色：抗CD3、抗CD4、抗CD14、抗CD19及DAPI，從而使用配備高通量取樣器(High Throughput Sampler；HTS)之BD LSRFortessaTM藉由流式細胞分析技術偵測活力。使用FlowJo®軟體(FlowJo，LLC，TreeStar)分析資料，且計算細胞分裂指數(Cellular Division Index；CDI)。簡言之，藉由將分子刺激孔中增殖之CFSEdimCD4+ T細胞百分比除以未受刺激孔中增殖之CFSEdimCD4+ T細胞百分比來計算各測試分子的CDI。＞2.5之CDI視為代表陽性反應。評估所有供體中之供體出現率百分比。＜30%供體增殖視為低免疫原性風險，30%至40%為中等免疫原性風險及＞40%為高免疫原性風險。表 9 ： 例示性 LAIR1 抗體之 T 細胞增殖結果

例示性抗體	陽性供體%	陽性供體之數目(CDI＞2.5)
mAb2	0%	0/9
mAb3	0%	0/9
mAb4	0%	0/9

如表9中所示，自T細胞增殖分析來看，例示性抗人類LAIR1抗體mAb 2至4具有低風險。未測試抗人類LAIR1 mAb1。 預先存在之反應性分析：

進行此分析以研究在未曾接受治療之正常人類血清中是否存在來源於預先存在之抗藥物抗體(PEA)及其他可能的交叉反應蛋白的反應性(參見Bivi，N.等人，MAbs. 2019年7月;11(5):861-869)。在塗佈有生物素化測試分子之培養盤上捕獲來自一組至少50個未曾接受治療之供體的經稀釋血清隔夜。在第二天，所獲取之反應性蛋白質經酸溶離，且接著在生物素化及釕化測試分子存在下經中和。若存在抗藥物抗體，則其將橋接經標記之測試候選物且形成複合物。藉由鏈黴抗生物素蛋白塗佈之Mesoscale盤捕獲複合物，且所得信號稱為第1層信號(表示為電化學發光)。在偵測步驟中添加過量未標記之測試分子，此引起第1層信號之抑制，從而在第2層中確認此信號。預先存在之抗藥物抗體之存在表現為第2層抑制之第90個百分點。結果＜30%為低免疫原性風險，30%-55%為中等免疫原性風險及＞55%為高免疫原性風險。表 10 ： 例示性 LAIR1 抗體之預先存在的 反應性結果

例示性抗體	第90個百分點之T2抑制
mAb1	7.1%
mAb2	7.6%
mAb3	8.0%
mAb4	25.8%

如表10中所示，自預先存在之反應性分析來看，例示性抗人類LAIR1抗體mAb 1至4具有低風險。實例 4 ： 抗人類 LAIR1 抗體之活體外活性 基於細胞之結合 ：

評估抗人類LAIR1抗體與人類及食蟹獼猴(cyno) LAIR1工程改造細胞株及內源性表現LAIR1之初代人類T細胞的結合。Jurkat-hLAIR1+ (過度表現人類LAIR1之Jurkat細胞)、Jurkat-LAIR1ko (剔除人類LAIR1之Jurkat細胞)、Jurkat-cyLAIR1+細胞(表現cyno LAIR1之Jurkat LAIR1ko細胞)及初代人類T細胞與抗人類LAIR1測試抗體一起培育。在4℃下將0.0017 µg/mL至3.33 µg/mL範圍內之抗體連續稀釋液與細胞一起培育20分鐘。接著洗滌細胞且在4℃下與抗人類IgG Alexa Fluor 647二級抗體一起培育20分鐘。接著洗滌細胞且藉由流式細胞分析技術評估抗體結合。對於初代人類T細胞，亦對細胞進行CD4及CD8染色以劃定CD4+及CD8+ T細胞。

如表11中所示，所有抗人類LAIR1測試抗體以類似的結合強度與Jurkat-hLAIR1+細胞、初代人類CD4+及CD8+ T細胞結合。與Jurkat-cyLAIR1+細胞結合之EC50在與Jurkat-hLAIR1+細胞結合之EC50的2倍內。測試抗LAIR1抗體展示與LAIR1ko(不表現LAIR1之對照細胞株)不結合。表 11.與Jurkat-hLAIR1+、Jurkat-cyLAIR1+、初代人類CD4+ T細胞及初代人類CD8+ T細胞結合之抗人類LAIR1抗體的EC50。(資料代表1至5個獨立實驗；對2個供體進行初代T細胞結合評估。)

抗體ID	Jurkat-hLAIR1+ (ng/mL)	Jurkat-cyLAIR1+ (ng/mL)	初代人類CD4+ T細胞(ng/mL)	初代人類CD8+ T細胞(ng/mL)

mAb1	54.75	78.44	36.99	48.87
mAb3	53.43	83.38	40.1	53.23
mAb2	58.01	82.39	28.82	41.4
mAb4	56.53	89.34	16.24	34.9

Jurkat-NFAT 活化：

評估抗人類LAIR1抗體對Jurkat細胞NFAT活化之作用。在抗人類LAIR1抗體存在下，用抗人類CD3抗體對表現人類LAIR1之Jurkat-NFAT螢光素酶細胞(Jurkat-hLAIR1+)、cyno LAIR1 (Jurkat-cyLAIR1+)或LAIR1ko缺失(Jurkat-LAIR1ko)進行TCR刺激。特定言之，CHO-K1細胞在96孔平底組織培養物無菌培養盤中接種隔夜。當匯合度達至85%-95%時，用RPMI/5%人類血清洗滌細胞且與10 µg/mL下之抗人類CD3抗體在37℃下一起培育1小時。接著移除未結合之CD3抗體，洗滌細胞，且與指定濃度之抗人類LAIR1抗體在37℃下一起培育20分鐘。添加1×10 ⁵個Jurkat-hLAIR1+、Jurkat-cyLAIR1+或Jurkat-LAIR1ko細胞且在37℃下培育6小時。接著將Jurkat細胞轉移至不透明的96孔透明平底盤且添加等體積BrightGlo螢光素酶。在培育2分鐘進行溶解之後，藉由光度計評估NFAT活性(經由螢光素酶讀數)。在活化分析中，對0.1 ng/mL-1 µg /mL濃度範圍(經8個步驟3倍連續稀釋下調)內之測試抗LAIR1抗體進行評估。

如表12中所示，所有抗人類LAIR1測試抗體抑制表現Jurkat-NFAT細胞之人類及cyno LAIR1中之Jurkat NFAT活化，抑制範圍為60%-70%，而同型對照對NFAT活性無影響。在測試抗人類LAIR1抗體中觀測到類似的IC50值(表12)。Jurkat-cyLAIR1+細胞之IC50值不可獲得。抗人類LAIR1抗體在Jurkat-LAIR1ko細胞中對NFAT活性不起作用。由於抗LAIR1抗體對此對照細胞株沒有抑制作用，因此未顯示Jurkat-LAIR1ko之值。表 12.TCR刺激後抗人類LAIR1抗體對Jurkat細胞之NFAT活性的活體外促效活性。(資料代表2至5個獨立實驗。)

	NFAT活性之抑制	抗體活性之IC ₅₀(ng/mL)
(抑制%對比無抗體)
抗體ID	Jurkat-hLAIR1+	Jurkat-cyLAIR1+	Jurkat-hLAIR1+
mAb1	54.22	44.21	9.42
mAb3	60.28	67.09	11.92
mAb2	49.81	59.56	8.578
mAb4	60.35	65.54	6.661

在活體外基於細胞之促效作用分析中 ， 抗人類 LAIR1 抗體 mAb4 抑制 NFAT 活化：

如下測定LAIR1促效抗體抑制過度表現人類LAIR1之人類T細胞株中NFAT活化的能力。

經由慢病毒轉導來對Jurkat-NFAT-螢光素酶報導細胞進行工程改造以過度表現人類LAIR1 (Jurkat-hLAIR1+)。在交聯抗人類LAIR1 mAb4或hIgG4SP同型對照抗體存在下，用抗人類CD3抗體(純系OKT3)對Jurkat-hLAIR1+細胞進行TCR刺激。抗體使用經工程改造以表現人類Fc γ RIIb之中國倉鼠卵巢(Chinese Hamster Ovary，CHO)細胞株進行交聯。

CHO-K1細胞在37℃下在96孔平底無菌組織培養盤中接種隔夜。當匯合度達至85%-95%時，用RPMI/5%人類血清洗滌細胞且與抗人類CD3抗體一起在37℃下培育1小時。接著移除未結合之CD3抗體，洗滌細胞，且與mAb4或hIgG4SP同型抗體一起在37℃下培育20分鐘。將1×10 ⁵個Jurkat-hLAIR1+細胞添加至培養盤中且在37℃下培育6小時。接著將Jurkat-hLAIR1+細胞轉移至不透明的96孔透明平底盤且添加等體積BrightGlo螢光素酶。在培育2分鐘進行細胞溶解之後，藉由光度計評估NFAT活性(經由螢光素酶讀數)。在0.001-6.7 nM (0.2-1000 ng/mL)之濃度範圍下評估抗體，連續稀釋以對NFAT活性進行IC50評估。

如圖3中所示，mAb4抑制Jurkat-hLAIR1+ NFAT活化，抑制範圍為60%-70% (經計算為NFAT活性%，有抗體對比無抗體)且IC50值為0.045 nM (6.7 ng/mL)，而hIgG4SP同型對照抗體對NFAT活性無影響。作為平行對照，在LAIR1-缺失之Jurkat-NFAT-螢光素酶細胞(Jurkat-hLAIR1ko)情況下評估抗體。mAb4對Jurkat-hLAIR1ko細胞中之NFAT活性不起作用(資料未示出)。 初代人類 B 細胞：

評估抗人類LAIR1抗體對初代人類B細胞細胞介素反應的作用。在濃度範圍為0.00128 ng/mL-8 ng/mL之測試抗人類LAIR1抗體存在下，用抗人類IgM抗體加IL4對初代人類B細胞進行BCR刺激。特定言之，CHO-K1細胞在96孔平底組織無菌培養盤中接種隔夜。當匯合度達至85%-95%時，細胞用RPMI/5%人類血清洗滌且與指定濃度之抗人類LAIR1抗體一起在37℃下培育20分鐘。添加1-1.5×10 ⁵個B細胞，且在室溫下再培育20分鐘以進行細胞/抗體相互作用。接著添加刺激物或對照組(20 ng/mL IL-4 + 5 µg/mL抗人類IgM或單獨培養基作為非刺激對照組)，且在37℃下將細胞培育72小時。亦針對抗人類IgG同型對照來評估測試抗體。在72小時藉由ELISA評估LAIR1參與對B細胞IL-6反應的作用且報導為與無抗體對照相比的抑制%。

如表13中所示，所有抗人類LAIR1測試抗體抑制IL6反應，其中最高劑量8 ng/mL之抑制視供體而定在20-70%範圍內，而同型對照對細胞介素反應無影響。表 13.在BCR刺激之後，抗人類LAIR1抗體對初代B細胞之活體外促效活性。

抗體ID	在8 ng/mL下IL-6反應之抑制
(抑制%對比無抗體)
mAb1	60.2
mAb3	69.57
mAb2	35.41
mAb4	42.66

在活體外基於細胞之促效作用分析中 ， 抗人類 LAIR1 抗體 mAb4 抑制初代 B 細胞細胞介素反應 ：

如下測定LAIR1促效抗體抑制初代人類B細胞中BCR刺激誘導之IL-6反應的能力。

在交聯抗人類LAIR1 mAb4或hIgG4SP同型對照抗體存在下，用抗人類IgM抗體加IL-4對初代人類B細胞(n=6個供體)進行BCR刺激。抗體使用經工程改造以表現人類Fc γ RIIb之中國倉鼠卵巢(CHO)細胞株進行交聯。

CHO-K1細胞在37℃下在96孔平底組織無菌培養盤中接種隔夜。當匯合度達至85%-95%時，用RPMI/5%人類血清洗滌細胞且與mAb4或hIgG4SP同型抗體一起在37℃下培育20分鐘。添加1×10 ⁵個自人類PBMC分離之B細胞，且在室溫下再培育20分鐘以使細胞/抗體相互作用。接著添加刺激物(抗人類IgM+IL-4)或對照組(單獨培養基+/-IL-4)，且在37℃下將細胞培育72小時。在72小時藉由ELISA評估抗體對B細胞IL-6反應的作用且報導為與無抗體對照相比的抑制%。在0.000013 nM-0.0539 nM (0.002 ng/mL-8 ng/mL)之濃度範圍下評估抗體，連續稀釋以對B細胞IL-6反應之抑制進行IC50評估。

如圖4中所示，mAb4抑制B細胞IL-6對BCR刺激起反應，抑制範圍為60%-80% (經計算為IL-6反應%，有抗體對比無抗體)且IC50值為0.0002 nM (0.03 ng/mL)，而hIgG4SP同型對照抗體對IL-6反應無影響。 初代人類 T 細胞：

評估抗人類LAIR1抗體對初代人類T細胞細胞介素反應的作用。在濃度範圍為1 ng/mL-1 µg/mL之抗人類LAIR1抗體存在下，用抗人類CD3及抗人類CD28抗體對初代人類T細胞進行TCR刺激。特定言之，T細胞與培養盤結合之1 µg/mL之抗人類CD3抗體及3 µg/mL之抗人類CD28抗體一起在37℃下培育隔夜。CHO-K1細胞在96孔平底組織無菌培養盤中接種隔夜。當匯合度達至85%-95%時，用RPMI/5%人類血清洗滌細胞且與指定濃度之抗人類LAIR1抗體一起在37℃下培育20分鐘。洗滌經刺激之T細胞且再懸浮於新鮮RPMI/5%人類血清中。接著，在CHO-K1細胞上分層堆積1-1.5×10 ⁵個T細胞，且在37℃下培育72小時。在培育之後，收集上清液且經由ELISA評估IFN-γ分泌。

如表14中所示，所有抗人類LAIR1測試抗體抑制IFN-γ反應，其中最高劑量1 µg/mL之抑制視供體而定在20-80%範圍內，而同型對照無影響。表 14.在TCR刺激之後，抗人類LAIR1抗體對初代T細胞之活體外促效活性。

抗體ID	1 µg/mL下IFN-γ反應之抑制
(抑制%對比無抗體)
mAb1	35.67
mAb3	31.23
mAb2	45.8
mAb4	41.13

實例 5 ： 抗人類 LAIR1 抗體在人類 PBMC 移植之移植物抗宿主疾病 (GvHD) 小鼠模型中的活體內活性

為了測試例示性抗體mAb1-mAb4之免疫調節活性，利用異種GvHD之人源化模型。人類免疫細胞將小鼠識別為外來物且建立免疫反應，導致人類促炎性細胞介素顯著增加、免疫細胞活化及擴增，及產生免疫球蛋白。重要的是，發炎反應係由人類細胞驅動的，且因此可在此模型中探討人類特異性療法。

簡言之，將雌性NSG小鼠(NOD.Cg-Prkdcscid Il2rgtm1Wjl/SzJ，JAX Labs，貨號05557)以每籠3隻在72℃下在12小時光:暗循環下圈養，且隨意取用食物及水。使用SepMate 50 Ficoll製備管，根據製造商之說明書(STEMCELL Technologies，Vancouver，BC)自獲自單個匿名供體(San Diego血庫)之LRS管分離人類PBMC。以1.2×10 ⁸個細胞/毫升將新鮮分離之PBMC懸浮於Pedialyte溶液中且在第0天向小鼠靜脈內移植100µL PBMC懸浮液(1.2×10 ⁷個/小鼠，n=36)。將小鼠分成5組且在第1天及第8天以0.3 mg/kg皮下給藥同型對照或mAb 1-4 (200 µL/小鼠；n=7-8/組)。在第7天，用異氟醚簡單麻醉小鼠且自後眼眶竇獲取血液。在第14天，再次麻醉小鼠，藉由心臟穿刺收集血液，且將小鼠實施處死。在BSL2通風櫃中稱量小鼠且每週評估2至3次病痛之臨床症狀。此模型常見的臨床徵象為頭髮淩亂、駝背、消瘦及呼吸或運動困難。藉由離心使2次收集之血液澄清，且將所得血漿儲存在-80℃下以備將來處理。根據製造商說明書，使用人類促炎性10-Vplex及IgM、IgA及IgG，使用人類同型組(Discovery，Rockville，Maryland)量測血漿細胞介素。

使用Prism軟體(GraphPad，San Diego，CA)繪製資料圖表且計算統計資料。血漿分析物相較於同型對照之差異係藉由單因子ANOVA與Dunnett事後檢定來測定，且若p＜0.05，則視為顯著的。

在基本上如上文所描述進行的實驗中，例示性抗人類LAIR1抗體顯著抑制血漿中與GvHD模型中疾病進展相關之人類促炎性細胞介素(IFN-γ、IL-10及TNF-α)的顯著增加。此外，例示性抗人類LAIR1抗體mAb1-mAb3顯著減少循環免疫球蛋白IgM及IgA，表明對B細胞之抑制作用。

結果表明例示性抗人類LAIR1抗體在疾病之人源化小鼠模型中對人類免疫細胞具有免疫調節作用。 人源化移植物抗宿主疾病 ：

在NOD SCID γ2鏈-/-(NSG)人源化小鼠中測試本文中描述為mAb4之抗體，以評定其在活體內環境中抑制人類T細胞功能的能力。將人類周邊血液單核細胞(PBMC)移植至NSG小鼠中，其中人類免疫細胞將小鼠識別為外來物且建立免疫反應，從而產生移植物抗宿主疾病(GvHD)。目標為評估mAb4促效LAIR1及抑制T細胞活化的能力，如藉由促炎性細胞介素之產生來量測，且將此等作用與藥物暴露及免疫細胞受體佔有率關聯，以幫助預測人類劑量。將1.2e7人類PBMC靜脈內注射至NSG小鼠中。自0.003 mg/kg-3 mg/kg半對數遞增之mAb4或人類IgG4P同型對照(3 mg/kg)在細胞移植後二十四小時皮下給藥一次且在第8天處死小鼠。在第5天自後眼眶竇及第8天藉由心臟穿刺獲得血液，且進行處理以分析血清細胞介素(MSD人類促炎性細胞介素組)及藥物暴露(抗原捕獲ELISA)。在第8天採集脾臟，處理成單細胞形式之脾細胞，且藉由FACS分析免疫表型及受體佔有率(RO)。mAb4以劑量依賴性方式抑制免疫細胞相關之促炎性細胞介素，指示T細胞功能受到抑制(圖5)。對脾細胞進行死後FACS分析，觀測到調節T細胞(Treg)、CD4及CD8 T細胞上LAIR1之受體佔有率與劑量有關(圖6)，此在機理上支持此等活性係有益的。在給藥後第4天及第7天所量測之藥物暴露表明劑量依賴性與受體佔有率類似。有趣的是，PD反應比暴露或RO所暗示之反應更強烈，表明並不需要完全RO來引發有益的促效作用。此外，高劑量組中觀測到的Treg百分比增加提供了另一種潛在治療機制，LAIR1促效作用可藉由該機制證明在治療自體免疫性疾病方面具有優勢(圖8)。總結

在移植物抗宿主疾病之人源化小鼠模型中評估mAb4之藥效學活性。在此模型中，不具有完整免疫系統之小鼠移植有人類供體免疫細胞。移植之後，人類免疫細胞對小鼠發動發炎性攻擊。此係藉由在小鼠周邊血液中人類細胞介素之產生來量測。LAIR1促效抗體mAb4能夠以劑量依賴性方式減少此等細胞介素之產生(圖5)。此減少與mAb4之受體佔有量(圖6)及血清濃度(圖7)相關。此外，mAb4能夠增加脾中之Treg細胞群體百分比(圖8)，此可造成控制此模型中之發炎反應的另一作用機制。實例 6 ： 自發性狼瘡性腎炎之小鼠模型中抗人類 LAIR1 抗體之活體內研究 主要藥效學 I 型干擾素狼瘡性腎炎 ：

NZB/W F1小鼠用作自發性狼瘡性腎炎之經典模型。為加速且同步疾病誘導，吾等對小鼠注射表現小鼠IFNα5之腺病毒相關病毒(AAV)。靶向T細胞及B細胞之療法已展示可減輕此模型中疾病之嚴重程度。此研究之目的係展示在狼瘡性腎炎之臨床前模型中替代物LAIR1促效抗體是否可影響疾病之嚴重程度。 狼瘡模型：

雌性NZB/W F1小鼠(Jackson實驗室)抵達時為10週齡。以每籠5隻圈養所有小鼠，且在研究開始之前使其適應新環境1週。向小鼠飼餵Teklad Irradiated Global 18% Protein Rodent Diet 2908 (Innotiv)，且隨意給水。小鼠圈養於12小時光/暗循環中，環境溫度範圍為68-79℉。基於體重對小鼠進行分選，且一天後(第0天)對小鼠靜脈內注射含LacZ-AAV (非病變對照，10 ¹¹個基因體複本(GC))或小鼠IFNα5-AAV (3×10 ¹²個GC)之100 μl PBS。指定治療組為：(1) LacZ-AAV誘導，用PBS (s.c.，BID在第7天開始，n=5)處理；(2) IFN-AAV誘導，用IgG同型處理，作為替代抗體(10 mg/kg s.c.，BID在第7天開始，n=10)；(3) IFN-AAV誘導，用替代抗體處理(10 mg/kg s.c.，BID在第7天開始，n=10)；(4) IFN-AAV誘導，用替代抗體處理(10 mg/kg s.c.，BID在第21天開始，n=10)；及(5) IFN-AAV誘導，用環磷醯胺處理(15 mg/kg，i.p.，Q10D在第7天開始，n=10)。在基線時及研究期間每2週收集血清及尿液樣品。在AAV注射之後的四十二天，將小鼠處死且收集體重。收集兩個腎臟且作為一對進行稱重。將右側腎臟固定在10%中性緩衝福馬林中24-48小時，且接著轉移至70%乙醇中。 白蛋白及肌酐分析 ：

為監測腎功能，根據製造商說明書，藉由ELISA測定尿液(稀釋度1:500-1:50,000)樣品中之微白蛋白濃度(小鼠微白蛋白ELISA套組，Kamiya Biomedical Co，Seattle，WA)。藉由使用CREP2酶肌酐分析，用Cobas C501臨床化學分析儀(Roche Diagnostics，USA)根據製造商說明書來量測尿液肌酐。 組織學 ：

將來自各小鼠之腎臟包埋於石蠟中，切片且用蘇木素及伊紅PAS染色。 組織學評分 ：對炎症、腎小球變化及管狀蛋白之評分係基於以下標準，加起來得到總分。

發炎：評分0-3係基於受影響區域之數目及受影響區域之量的組合。

腎小球評分：腎小球評分(0-6)係基於對二分之一皮質外側腎小球的評估，且基於此區域中遇到之最常見等級，因為各腎臟內腎小球之間存在差異：- • 1 級-細胞結構增加最少及/或腎小球膜擴增+/-腎小球尺寸增加最少(小於2倍)。 • 2 級-細胞結構輕度增加及腎小球膜擴增，其中大多數腎小球之尺寸大至少2倍。 • 3 級-細胞結構中度增加，且在大部分受影響之腎小球的一些區域出現明顯的腎小球膜擴增及/或毛細管增生，其中腎小球尺寸增加高達3倍。 • 4 級-細胞結構明顯增加，且在大部分受影響之腎小球的一些區域出現明顯的腎小球膜擴增及/或毛細管增殖，其中腎小球尺寸增加高達4倍；罕見的硬化腎小球；腔壁細胞可能肥大。 • 5 級-以上，其中大部分受影響之腎小球中＜25%之腎小球硬化及/或毛細管增生；腎小球尺寸增加高達5倍。 • 6 級-以上，其中＞25%之腎小球硬化，部分特徵為簇細胞含量減少+/-腎小球周圍纖維化+/-腔壁細胞肥大。 PAS 評分：PAS評分0-3係基於與相同厚度之對照切片相比，二分之一皮質外側腎小球膜基質之染色增加。 • 1 級-分散腎小球之腎小球膜染色增加最少。 • 2 級-腎小球膜(且因此PAS染色)更廣泛擴增，影響更多腎小球。 • 3 級-在大部分腎小球中腎小球膜明顯擴增。

管狀蛋白評分：評分0至3係基於含有蛋白質流體之小管的百分比。 • 1 級-＜25%之小管受影響。 • 2 級-25-50%之小管受影響。 • 3 級-＞50%之小管受影響。

使用4個參數之評分之和來計算總組織學評分。 統計分析：

使用單因子ANOVA進行統計分析，隨後進行Dunnett事後檢定，對比IFNα誘導之IgG同型處理。總結

向NZB/W F1小鼠投與mIFNα-AAV會誘發狼瘡性腎炎，其特徵為與投與非病原性LacZ-AAV之小鼠相比，IgG同型組中尿液ACR水平及組織學評分均有所提高(圖5及圖7)。與IgG同型組相比，第21天(D21)開始用替代抗體進行之治療性治療在第44天研究結束時尿液ACR水平降低，但不如第7天(D7)開始投與之陽性對照環磷醯胺(CP)有效(圖9及圖10)。然而，在D7開始用替代抗體進行之預防性治療並未顯著降低尿液ACR (圖9及圖10)。來自小鼠之腎臟的組織學評估表明，當分別在D7及D21開始治療時，替代抗體使組織學評分降低40%及36% (圖11)。相較於IgG同型對照，p值分別為0.06及0.09時，作用為統計上不顯著的(圖11)。

結果表明替代促效抗體在狼瘡性腎炎之臨床前模型中可調節疾病。實例 7 ： 藉由氫氘交換質譜分析進行親本 mAb4 至 LAIR1 細胞外域 (ECD) 蛋白質之抗原決定基定位

進行與質譜分析偶合之氫氘交換(HDX-MS)以確定親本mAb4結合LAIR1之ECD的位置。

對LAIR1 ECD之肽鑑定如下進行：在Waters Synapt G2Si (Waters Corporation)儀器上，使用3.5 µg之LAIR1 ECD蛋白質進行零交換(在含0.1×磷酸鹽緩衝鹽水之H2O中1:10稀釋)，使用豬籠草蛋白酶II (NepII)進行消化。質譜儀設定為HDMSe (Mobility ESI+模式)，使用m/z 255.00-1950.00之質量獲取範圍及0.4 s之掃描時間。使用PLGS 2.3.03 (Waters Corporation)處理資料。對於交換實驗，LAIR1 ECD蛋白質與mAb4之複合物以1:1.2之莫耳比在含有150 mM NaCl之10 mM磷酸鈉緩衝液(pH 7.4) (1×PBS緩衝液)中製備。實驗藉由以下方式開始：使用常規TECAN樣品製備系統，在15℃下將含有0.1×PBS之25 µL D2O緩衝液添加至2.5 µl LAIR1 ECD (0.7 mg/mL)或LAIR1 ECD+mAb4複合物中，持續不同時間(0s、10s、2 min、10 min及60 min) (Espada等人，2019)。反應物在4℃下使用等體積之0.32M TCEP、0.1M磷酸鹽pH 2.5淬滅兩分鐘，且立即在-70℃下冷凍。樣品注射系統由以下構成：UR3機器人、LEAP PAL3 HDX自動進樣器及與Waters Synapt G2Si (Waters Corporation)連接之HPLC系統，如(Espada等人，2019，https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/31724102/)所描述進行修改。LC移動相由各自含有0.2%甲酸之水(A)及乙腈(B)組成。使用50 µL之含0.2%甲酸之水(pH 2.5)解凍各樣品1分鐘，且在4℃下用移動相A以250 µL/min之流動速率注射至Nep II管柱上分解2.5分鐘。所得肽截留在4℃之Waters BEH Vanguard前置管柱上，且使用Waters Acquity UPLC BEH C18分析性管柱在4℃下用200 µL/min之流動速率及3%-85%移動相B之梯度歷經7分鐘進行層析分離，且引導至質譜儀中進行質量分析。在使用之前，用Glu-纖維蛋白肽(Waters Corporation)校準Synapt G2Si。以HDMS模式獲取在255至1950 m/z範圍內之質譜，其中鎖定質量m/z為556.2771 (白胺酸腦啡肽，Waters Corporation)。藉由使用DynamX 3.0 (Waters Corporation)中之已鑑別肽清單處理氘化樣品以及未氘化對照之MS資料來測定各肽之相對氘併入。比較RBD游離態及結合態之肽的氘併入差異以鑑別指示結合抗原決定基之受保護區。

整個LAIR1 ECD之序列覆蓋率為77%。親本mAb4與LAIR1 ECD結合後，在殘基26-41 (FVCRGPVGVQTFRLER) (SEQ ID NO: 32)及53-68 (VSQASPSESEARFRI) (SEQ ID NO: 33)處觀測到氘攝取量下降，此表明可能存在抗原決定基區。親本mAb4序列展示於上表1中。實例 6 ： C1q 結合結果

用100 μL/孔之於DPBS (Dulbecco's HyClone)中稀釋的濃度範圍在10 μg/mL至0.19 μg/mL之各抗體塗佈96孔微量培養盤。在重複孔中執行測試。將盤密封且在4℃下培育隔夜。移除各孔之塗佈反應劑，且添加200 μL/孔之酪蛋白阻斷劑(Thermo)。將盤密封且在室溫(RT)下培育2小時。用洗滌緩衝液(1×TBE，含0.05% Tween 20)洗滌各孔3次。每孔添加一百微升用酪蛋白阻斷劑稀釋為10 μg/mL的人類C1q (MS Biomedical)，在RT下培育3小時。接著將盤用洗滌緩衝液洗滌三次，隨後添加100 μL/孔綿羊抗人類C1q-HRP (Abcam #ab46191)於酪蛋白阻斷劑中之1:800倍稀釋液且在RT下培育1小時。將盤用洗滌緩衝液洗滌6次，且將100 μL/孔之TMB受質(Pierce)添加至各孔中且培育7分鐘。將一百微升1 N HCl添加至各孔中以停止反應。緊接著使用設定為450 nm之比色微量培養盤讀取器量測光密度。結果顯示mAb4及人源化IgG4-P同型對照抗體及人類IgG1同型對照抗體與補體組分C1q不結合。如所預期，抗LAIR1 IgG1抗體及人類IgG1同型對照抗體確實結合補體組分C1q。

結果表明mAb4不大可能在活體內引發Fc介導之效應功能反應。 序列表

SEQ ID NO	序列
1	TAFGGSISGHYWS
2	RIYPSGGTN
3	VRDYWDDYYGMDV
4	RSSQSLLHSDGFNYLD
5	YLGSNRAS
6	MQAYQTPRT
7	QVQLQESGPGLVKPSETLSLTCTAFGGSISGHYWSWIRQPAGKGLEWIGRIYPSGGTNKNPSLKSRVTMSVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCVRDYWDDYYGMDVWGQGTTVTVSS
8	DIVMTQSPLSLPVTPGEPASISCRSSQSLLHSDGFNYLDWYLQKPGQSPQLLIYLGSNRASGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCMQAYQTPRTFGQGTKVEIK
9	QVQLQESGPGLVKPSETLSLTCTAFGGSISGHYWSWIRQPAGKGLEWIGRIYPSGGTNKNPSLKSRVTMSVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCVRDYWDDYYGMDVWGQGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPSSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSNFGTQTYTCNVDHKPSNTKVDKTVERKCCVECPPCPAPPVAGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVQFNWYVDGMEVHNAKTKPREEQFNSTFRVVSVLTVVHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPAPIEKTISKTKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPMLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG
10	DIVMTQSPLSLPVTPGEPASISCRSSQSLLHSDGFNYLDWYLQKPGQSPQLLIYLGSNRASGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCMQAYQTPRTFGQGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
11	CAGGTGCAGCTGCAGGAGTCGGGCCCAGGACTGGTGAAGCCTTCGGAGACCCTGTCCCTCACCTGTACTGCCTTTGGTGGCTCCATCAGTGGTCACTACTGGAGCTGGATCCGGCAGCCCGCCGGGAAGGGACTGGAGTGGATTGGGCGTATTTATCCTAGTGGGGGCACCAACAAAAACCCCTCCCTCAAGAGTCGCGTCACCATGTCAGTAGACACGTCCAAGAATCAGTTCTCCCTGAAGCTGAGTTCTGTGACCGCCGCGGACACGGCCGTGTATTATTGTGTGAGAGATTACTGGGACGACTACTATGGTATGGACGTCTGGGGCCAAGGGACCACGGTCACCGTCTCCTCAGCCTCCACCAAGGGCCCATCGGTCTTCCCCCTGGCGCCCAGCTCCAGGAGCACCTCCGAGAGCACAGCCGCCCTGGGCTGCCTGGTCAAGGACTACTTCCCCGAACCGGTGACGGTGTCGTGGAACTCAGGCGCCCTGACCAGCGGCGTGCACACCTTCCCGGCTGTCCTACAGTCCTCAGGACTCTACTCCCTCAGCAGCGTGGTGACCGTGCCCTCCAGCAACTTCGGCACCCAGACCTACACCTGCAACGTAGATCACAAGCCCAGCAACACCAAGGTGGACAAGACAGTTGAGCGCAAATGTTGTGTCGAGTGCCCACCGTGCCCAGCACCACCTGTGGCAGGACCGTCAGTCTTCCTCTTCCCCCCAAAACCCAAGGACACCCTCATGATCTCCCGGACCCCTGAGGTCACGTGCGTGGTGGTGGACGTGAGCCACGAAGACCCCGAGGTCCAGTTCAACTGGTACGTGGACGGCATGGAGGTGCATAATGCCAAGACAAAGCCACGGGAGGAGCAGTTCAACAGCACGTTCCGTGTGGTCAGCGTCCTCACCGTCGTGCACCAGGACTGGCTGAACGGCAAGGAGTACAAGTGCAAGGTCTCCAACAAAGGCCTCCCAGCCCCCATCGAGAAAACCATCTCCAAAACCAAAGGGCAGCCCCGAGAACCACAGGTGTACACCCTGCCCCCATCCCGGGAGGAGATGACCAAGAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTACCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACAAGACCACACCTCCCATGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTACAGCAAGCTCACCGTGGACAAGAGCAGGTGGCAGCAGGGGAACGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCTCTGCACAACCACTACACACAGAAGAGCCTCTCCCTGTCTCCGGGTTGA
12	GATATTGTGATGACTCAGTCTCCACTCTCCCTGCCCGTCACCCCTGGAGAGCCGGCCTCCATCTCCTGCAGGTCTAGTCAGAGCCTCCTGCATAGTGATGGATTCAACTATTTGGATTGGTACCTGCAGAAGCCAGGGCAGTCTCCACAGCTCCTGATCTATCTGGGTTCTAATCGGGCCTCCGGGGTCCCTGACAGGTTCAGTGGCAGTGGATCAGGCACAGATTTTACACTGAAAATCAGCAGAGTGGAGGCTGAGGATGTTGGGGTTTATTACTGCATGCAAGCTTATCAAACTCCTCGGACGTTCGGCCAAGGGACCAAGGTGGAAATCAAACGAACCGTGGCTGCACCATCTGTCTTCATCTTCCCGCCATCTGATGAGCAGTTGAAATCTGGAACTGCCTCTGTTGTGTGCCTGCTGAATAACTTCTATCCCAGAGAGGCCAAAGTACAGTGGAAGGTGGATAACGCCCTCCAATCGGGTAACTCCCAGGAGAGTGTCACAGAGCAGGACAGCAAGGACAGCACCTACAGCCTCAGCAGCACCCTGACGCTGAGCAAAGCAGACTACGAGAAACACAAAGTCTACGCCTGCGAAGTCACCCATCAGGGCCTGAGCTCGCCCGTCACAAAGAGCTTCAACAGGGGAGAGTGC
13	TVSGGSISNNYWS
14	RMYSSGSTQ
15	GPNWGSPYYGVDV
16	RSSPSLLHSDGYNWLD
17	QEEDLPRPSISAEPGTVIPLGSHVTFVCRGPVGVQTFRLERESRSTYNDTEDVSQASPSESEARFRIDSVSEGNAGPYRCIYYKPPKWSEQSDYLELLVKETSGGPDSPDTEPGSSAGPTQRPSDNSHNEHAPASQGLKAEHENLYFQ
18	MQAHQTPFT
19	QVQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGGSISNNYWSWIRQPAGKGLEWIGRMYSSGSTQKNPSLKSRVTMSVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCVRGPNWGSPYYGVDVWGQGTTVTVSS
20	DIVMTQSPLSLPVTPGEPASISCRSSPSLLHSDGYNWLDWYLQKPGQSPQLLIYLGSNRASGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCMQAHQTPFTFGQGTKVEIK
21	QVQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGGSISNNYWSWIRQPAGKGLEWIGRMYSSGSTQKNPSLKSRVTMSVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCVRGPNWGSPYYGVDVWGQGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPSSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSNFGTQTYTCNVDHKPSNTKVDKTVERKCCVECPPCPAPPVAGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVQFNWYVDGMEVHNAKTKPREEQFNSTFRVVSVLTVVHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPAPIEKTISKTKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPMLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG
22	DIVMTQSPLSLPVTPGEPASISCRSSPSLLHSDGYNWLDWYLQKPGQSPQLLIYLGSNRASGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCMQAHQTPFTFGQGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
23	CAGGTGCAGCTGCAGGAGTCGGGCCCAGGACTGGTGAAGCCTTCGGAGACCCTGTCCCTCACCTGCACTGTCTCTGGTGGCTCCATCAGTAATAACTACTGGAGTTGGATCCGGCAGCCCGCCGGTAAGGGGCTGGAGTGGATTGGGCGTATGTATTCCAGTGGGAGCACCCAGAAAAACCCCTCCCTCAAGAGTCGAGTCACCATGTCAGTAGACACGTCCAAAAACCAGTTCTCCCTGAAGCTGTCCTCTGTGACCGCCGCGGACACGGCCGTGTATTATTGTGTGAGAGGCCCTAACTGGGGATCCCCCTACTACGGTGTGGACGTCTGGGGCCAAGGGACCACGGTCACCGTCTCCTCAGCCTCCACCAAGGGCCCATCGGTCTTCCCCCTGGCGCCCAGCTCCAGGAGCACCTCCGAGAGCACAGCCGCCCTGGGCTGCCTGGTCAAGGACTACTTCCCCGAACCGGTGACGGTGTCGTGGAACTCAGGCGCCCTGACCAGCGGCGTGCACACCTTCCCGGCTGTCCTACAGTCCTCAGGACTCTACTCCCTCAGCAGCGTGGTGACCGTGCCCTCCAGCAACTTCGGCACCCAGACCTACACCTGCAACGTAGATCACAAGCCCAGCAACACCAAGGTGGACAAGACAGTTGAGCGCAAATGTTGTGTCGAGTGCCCACCGTGCCCAGCACCACCTGTGGCAGGACCGTCAGTCTTCCTCTTCCCCCCAAAACCCAAGGACACCCTCATGATCTCCCGGACCCCTGAGGTCACGTGCGTGGTGGTGGACGTGAGCCACGAAGACCCCGAGGTCCAGTTCAACTGGTACGTGGACGGCATGGAGGTGCATAATGCCAAGACAAAGCCACGGGAGGAGCAGTTCAACAGCACGTTCCGTGTGGTCAGCGTCCTCACCGTCGTGCACCAGGACTGGCTGAACGGCAAGGAGTACAAGTGCAAGGTCTCCAACAAAGGCCTCCCAGCCCCCATCGAGAAAACCATCTCCAAAACCAAAGGGCAGCCCCGAGAACCACAGGTGTACACCCTGCCCCCATCCCGGGAGGAGATGACCAAGAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTACCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACAAGACCACACCTCCCATGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTACAGCAAGCTCACCGTGGACAAGAGCAGGTGGCAGCAGGGGAACGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCTCTGCACAACCACTACACACAGAAGAGCCTCTCCCTGTCTCCGGGTTGA
24	GATATTGTGATGACTCAGTCTCCACTCTCCCTGCCCGTCACCCCTGGAGAGCCGGCCTCCATCTCCTGCAGGTCTAGTCCGAGCCTCCTGCATAGTGATGGATACAACTGGTTGGATTGGTACCTGCAGAAGCCAGGGCAGTCTCCACAGCTCCTGATCTATTTGGGTTCTAATCGGGCCTCCGGGGTCCCTGACAGGTTCAGTGGCAGTGGATCAGGCACAGATTTTACACTGAAAATCAGCAGAGTGGAGGCTGAGGATGTTGGGGTTTATTACTGCATGCAAGCTCACCAAACTCCATTCACTTTCGGCCAGGGGACCAAGGTGGAAATCAAACGAACCGTGGCTGCACCATCTGTCTTCATCTTCCCGCCATCTGATGAGCAGTTGAAATCTGGAACTGCCTCTGTTGTGTGCCTGCTGAATAACTTCTATCCCAGAGAGGCCAAAGTACAGTGGAAGGTGGATAACGCCCTCCAATCGGGTAACTCCCAGGAGAGTGTCACAGAGCAGGACAGCAAGGACAGCACCTACAGCCTCAGCAGCACCCTGACGCTGAGCAAAGCAGACTACGAGAAACACAAAGTCTACGCCTGCGAAGTCACCCATCAGGGCCTGAGCTCGCCCGTCACAAAGAGCTTCAACAGGGGAGAGTGC
25	QVQLQESGPGLVKPSETLSLTCTAFGGSISGHYWSWIRQPAGKGLEWIGRIYPSGGTNKNPSLKSRVTMSVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCVRDYWDDYYGMDVWGQGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLG
26	CAGGTGCAGCTGCAGGAGTCGGGCCCAGGACTGGTGAAGCCTTCGGAGACCCTGTCCCTCACCTGTACTGCCTTTGGTGGCTCCATCAGTGGTCACTACTGGAGCTGGATCCGGCAGCCCGCCGGGAAGGGACTGGAGTGGATTGGGCGTATTTATCCTAGTGGGGGCACCAACAAAAACCCCTCCCTCAAGAGTCGCGTCACCATGTCAGTAGACACGTCCAAGAATCAGTTCTCCCTGAAGCTGAGTTCTGTGACCGCCGCGGACACGGCCGTGTATTATTGTGTGAGAGATTACTGGGACGACTACTATGGTATGGACGTCTGGGGCCAAGGGACCACGGTCACCGTCTCCTCAGCTAGCACCAAGGGCCCATCGGTCTTCCCACTAGCGCCCTGCTCCAGGAGCACCTCCGAGAGCACAGCCGCCCTGGGCTGCCTGGTCAAGGACTACTTCCCCGAACCGGTGACGGTGTCGTGGAACTCAGGCGCCCTGACCAGCGGCGTGCACACCTTCCCGGCTGTCCTACAGTCCTCAGGACTCTACTCCCTCAGCAGCGTGGTGACCGTGCCCTCCAGCAGCTTGGGCACGAAGACCTACACCTGCAACGTAGATCACAAGCCCAGCAACACCAAGGTGGACAAGAGAGTTGAGTCCAAATATGGTCCCCCATGCCCACCCTGCCCAGCACCTGAGTTTCTGGGGGGACCATCAGTCTTCCTGTTCCCCCCAAAACCCAAGGACACTCTCATGATCTCCCGGACCCCTGAGGTCACGTGCGTGGTGGTGGACGTGAGCCAGGAAGACCCCGAGGTCCAGTTCAACTGGTACGTGGATGGCGTGGAGGTGCATAATGCCAAGACAAAGCCGCGGGAGGAGCAGTTCAACAGCACGTACCGTGTGGTCAGCGTCCTCACCGTCCTGCACCAGGACTGGCTGAACGGCAAGGAGTACAAGTGCAAGGTCTCCAACAAAGGCCTCCCGTCCTCCATCGAGAAAACCATCTCCAAAGCCAAAGGGCAGCCCCGAGAGCCACAGGTGTACACCCTGCCCCCATCCCAGGAGGAGATGACCAAGAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTACCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAAAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACAAGACCACGCCTCCCGTGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTACAGCAGGCTAACCGTGGACAAGAGCAGGTGGCAGGAGGGGAATGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCTCTGCACAACCACTACACACAGAAGAGCCTCTCCCTGTCTCTGGGT
27	QVQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGGSISNNYWSWIRQPAGKGLEWIGRMYSSGSTQKNPSLKSRVTMSVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCVRGPNWGSPYYGVDVWGQGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLG
28	CAGGTGCAGCTGCAGGAGTCGGGCCCAGGACTGGTGAAGCCTTCGGAGACCCTGTCCCTCACCTGCACTGTCTCTGGTGGCTCCATCAGTAATAACTACTGGAGTTGGATCCGGCAGCCCGCCGGTAAGGGGCTGGAGTGGATTGGGCGTATGTATTCCAGTGGGAGCACCCAGAAAAACCCCTCCCTCAAGAGTCGAGTCACCATGTCAGTAGACACGTCCAAAAACCAGTTCTCCCTGAAGCTGTCCTCTGTGACCGCCGCGGACACGGCCGTGTATTATTGTGTGAGAGGCCCTAACTGGGGATCCCCCTACTACGGTGTGGACGTCTGGGGCCAAGGGACCACGGTCACCGTCTCCTCAGCTAGCACCAAGGGCCCATCGGTCTTCCCACTAGCGCCCTGCTCCAGGAGCACCTCCGAGAGCACAGCCGCCCTGGGCTGCCTGGTCAAGGACTACTTCCCCGAACCGGTGACGGTGTCGTGGAACTCAGGCGCCCTGACCAGCGGCGTGCACACCTTCCCGGCTGTCCTACAGTCCTCAGGACTCTACTCCCTCAGCAGCGTGGTGACCGTGCCCTCCAGCAGCTTGGGCACGAAGACCTACACCTGCAACGTAGATCACAAGCCCAGCAACACCAAGGTGGACAAGAGAGTTGAGTCCAAATATGGTCCCCCATGCCCACCCTGCCCAGCACCTGAGTTTCTGGGGGGACCATCAGTCTTCCTGTTCCCCCCAAAACCCAAGGACACTCTCATGATCTCCCGGACCCCTGAGGTCACGTGCGTGGTGGTGGACGTGAGCCAGGAAGACCCCGAGGTCCAGTTCAACTGGTACGTGGATGGCGTGGAGGTGCATAATGCCAAGACAAAGCCGCGGGAGGAGCAGTTCAACAGCACGTACCGTGTGGTCAGCGTCCTCACCGTCCTGCACCAGGACTGGCTGAACGGCAAGGAGTACAAGTGCAAGGTCTCCAACAAAGGCCTCCCGTCCTCCATCGAGAAAACCATCTCCAAAGCCAAAGGGCAGCCCCGAGAGCCACAGGTGTACACCCTGCCCCCATCCCAGGAGGAGATGACCAAGAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTACCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAAAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACAAGACCACGCCTCCCGTGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTACAGCAGGCTAACCGTGGACAAGAGCAGGTGGCAGGAGGGGAATGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCTCTGCACAACCACTACACACAGAAGAGCCTCTCCCTGTCTCTGGGT
29	MSPHPTALLGLVLCLAQTIHTQEEDLPRPSISAEPGTVIPLGSHVTFVCRGPVGVQTFRLERDSRSTYNDTEDVSQASPSESEARFRIDSVREGNAGLYRCIYYKPPKWSEQSDYLELLVKESSGGPDSPDTEPGSSAGPTQRPSDNSHNEHAPASQGLKAEHLYILIGVSVVFLFCLLLLVLFCLHRQNQIKQGPPRSKDEEQKPQQRPDLAVDVLERTADKATVNGLPEKDRETDTSALAAGSSQEVTYAQLDHWALTQRTARAVSPQSTKPMAESITYAAVARH
30	QEEDLPRPSISAEPGTVIPLGSHVTFVCRGPVGVQTFRLERESRSTYNDTEDVSQASPSESEARFRIDSVSEGNAGPYRCIYYKPPKWSEQSDYLELLVKETSGGPDSPDTEPGSSAGPTQRPSDNSHNEHAPASQGLKAEHENLYFQGEPKSSDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGKHHHHHH
31	QEGALPRPSISAEPGTVISPGSHVTFMCRGPVGVQTFRLEREDRAKYKDSYNVFRLGPSESEARFHIDSVSEGNAGLYRCLYYKPPGWSEHSDFLELLVKESSGGPDSPDTEPGSSAGTVPGTEASGFDAPENLYFQGEPKSSDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
32	FVCRGPVGVQTFRLER
33	VSQASPSESEARFRI
34	TVSGGSISNNYWS
35	RMYSSGSTN
36	ARGPNWGSPYYGVDV
37	RSSQSLLHSDGYNYLD
38	MQALQTPFT
39	QVQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGGSISNNYWSWIRQSAGKGLEWIGRMYSSGSTNKNPSLKSRVTMSVDTSKNQFSLKLTSVTAADTAVYYCARGPNWGSPYYGVDVWGQGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
40	DVVMTQSPLSLPVTPGEPASISCRSSQSLLHSDGYNYLDWYLQKPGQSPQVLIYLGSNRASGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCMQALQTPFTFGPGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC

圖 1A 至圖 1F展示例示性抗人類LAIR1抗體mAb1-mAb4在第7天(1A-1C)及第14天(1D-1F)顯著抑制GvHD模型中血漿人類促炎性細胞介素IFN-γ (1A及1D)、TNF-α (1B及1E)及IL-10 (1C及1F)增加。

圖 2A 至圖 2C展示例示性抗人類LAIR1抗體mAb1-mAb3顯著減少循環型免疫球蛋白IgM及IgA。

圖 3展示mAb4 活體外抑制 Jurkat-hLAIR1+ 細胞中 TCR 刺激之 NFAT 活化。A.在TCR刺激之後抑制NFAT活性報導為抗體介導之抑制%對比在抗體不存在下之NFAT活性。B.計算mAb4 NFAT IC50曲線且自n=2個獨立實驗取平均值。

圖 4 展示 mAb4 促效抗體活體外抑制人類 B 細胞中 BCR 刺激之 IL-6 反應。A.在BCR刺激之後IL-6反應之抑制報導為抗體介導之抑制%對比在抗體不存在下之IL-6反應。B.計算mAb4 B細胞IL-6 IC50曲線且自n=3個獨立實驗取平均值。

圖 5展示與移植後8天(治療後7天)量測的同型對照組相比，mAb4以劑量依賴性方式且顯著抑制血清人類細胞介素產生。單因子ANOVA隨後進行Dunnett事後檢定，對比同型(平均值±SEM，n=7-8)。

圖 6展示在單次SC劑量之後7天，mAb4對3種T細胞子集之劑量依賴性受體佔有率。

圖 7顯示在單次SC劑量後4天(藍條)及7天(紅條)，mAb4之劑量依賴性血清藥物濃度。

圖 8展示mAb4以劑量依賴性方式誘導Treg擴增。

圖 9展示在第7天(D7)或第21天(D21)開始，經IgG同型、替代抗體或環磷醯胺(CP)處理之IFNα誘導之NZB/W F1小鼠之尿白蛋白-肌酐比率(ACR)。單因子ANOVA隨後進行Dunnett事後檢定，對比IFNα誘導之經IgG同型處理，平均值±SEM，n=5-10。

圖 10 ：展示在第7天(D7)或第21天(D21)開始，經IgG同型、替代抗體或環磷醯胺(CP)處理之IFNα誘導之NZB/W F1小鼠之第44天的尿白蛋白-肌酐比率(ACR)。單因子ANOVA隨後進行Dunnett事後檢定，對比IFNα誘導之經IgG同型處理，平均值±SEM，n=5-10。

圖 11 ：展示在第7天(D7)或第21天(D21)開始，經IgG同型、替代抗體或環磷醯胺(CP)處理之IFNα誘導之NZB/W F1小鼠之的腎臟總組織學評分。單因子ANOVA 隨後進行Dunnett事後檢定，對比IFNα誘導之經IgG同型處理，平均值±SEM，n=5-10。

圖 12 ：展示Ab4及人源化IgG4-P同型對照抗體未結合補體組分C1q。如所預期，抗LAIR1 IgG1抗體及人類IgG1同型對照抗體確實結合補體組分C1q。

圖 13 ：展示mAb4對LAIR1具有選擇性且對LAIR2無活性。

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Claims

一種結合人類LAIR1之抗體，其中該抗體包含重鏈可變區(VH)及輕鏈可變區(VL)，其中該VH包含重鏈互補決定區HCDR1、HCDR2及HCDR3，且該VL包含輕鏈互補決定區LCDR1、LCDR2及LCDR3，其中 HCDR1包含SEQ ID NO: 1， HCDR2包含SEQ ID NO: 2， HCDR3包含SEQ ID NO: 3， LCDR1包含SEQ ID NO: 4， LCDR2包含SEQ ID NO: 5，及 LCDR3包含SEQ ID NO: 6。
如請求項1之抗體，其中該VH包含與SEQ ID NO: 7具有至少95%序列一致性之序列，且該VL包含與SEQ ID NO: 8具有至少95%序列一致性之序列。
如請求項1或2之抗體，其中該VH包含SEQ ID NO: 7，且該VL包含SEQ ID NO: 8。
如請求項1或2之抗體，其中該抗體為人類抗體。
如請求項1或2之抗體，其中該抗體具有人類IgG2或IgG4同型。
如請求項1或2之抗體，其中該抗體包含有包含SEQ ID NO: 9之重鏈(HC)及包含SEQ ID NO: 10之輕鏈(LC)。
如請求項1或2之抗體，其中該抗體包含有包含SEQ ID NO: 25之HC及包含SEQ ID NO: 10之LC。
一種結合人類LAIR1之抗體，其中該抗體包含VH及VL，其中該VH包含HCDR1、HCDR2及HCDR3，且該VL包含LCDR1、LCDR2及LCDR3，其中 HCDR1包含SEQ ID NO: 13， HCDR2包含SEQ ID NO: 14， HCDR3包含SEQ ID NO: 15， LCDR1包含SEQ ID NO: 16， LCDR2包含SEQ ID NO: 5，及 LCDR3包含SEQ ID NO: 18。
如請求項8之抗體，其中該VH包含與SEQ ID NO: 19具有至少95%序列一致性之序列，且該VL包含與SEQ ID NO: 20具有至少95%序列一致性之序列。
如請求項8或9之抗體，其中該VH包含SEQ ID NO: 19且該VL包含SEQ ID NO: 20。
如請求項8或9之抗體，其中該抗體為人類抗體。
如請求項8或9之抗體，其中該抗體具有人類IgG2或IgG4同型。
如請求項8或9之抗體，其中該抗體包含有包含SEQ ID NO: 21之HC及包含SEQ ID NO: 22之LC。
如請求項8或9之抗體，其中該抗體包含有包含SEQ ID NO: 27之HC及包含SEQ ID NO: 22之LC。
如請求項1、2、8及9中任一項之抗體，其中該抗體為LAIR1之促效劑。
如請求項1、2、8及9中任一項之抗體，其中該抗體亦結合食蟹獼猴LAIR1。
一種核酸，其包含編碼SEQ ID NO: 9、25、10、21、27或22之序列。
一種載體，其包含如請求項17之核酸。
如請求項18之載體，其中該載體包含編碼SEQ ID NO: 9或25之第一核酸序列及編碼SEQ ID NO: 10之第二核酸序列。
如請求項18之載體，其中該載體包含編碼SEQ ID NO: 21或27之第一核酸序列及編碼SEQ ID NO: 22之第二核酸序列。
一種組合物，其包含第一載體及第二載體，該第一載體包含編碼SEQ ID NO: 9或25之核酸序列，該第二載體包含編碼SEQ ID NO: 10之核酸序列。
一種組合物，其包含第一載體及第二載體，該第一載體包含編碼SEQ ID NO: 21或27之核酸序列，該第二載體包含編碼SEQ ID NO: 22之核酸序列。
一種細胞，其包含如請求項18至20中任一項之載體。
一種細胞，其包含第一載體及第二載體，該第一載體包含編碼SEQ ID NO: 9或25之核酸序列，該第二載體包含編碼SEQ ID NO: 10之核酸序列。
一種細胞，其包含第一載體及第二載體，該第一載體包含編碼SEQ ID NO: 21或27之核酸序列，該第二載體包含編碼SEQ ID NO: 22之核酸序列。
如請求項23至25中任一項之細胞，其中該細胞為哺乳動物細胞。
一種產生抗體之方法，其包含在使該抗體表現之條件下培養如請求項23至26中任一項之細胞，且自培養基回收該經表現之抗體。
一種抗體，其藉由如請求項27之方法產生。
一種醫藥組合物，其包含如請求項1至16或28中任一項之抗體及醫藥學上可接受之賦形劑、稀釋劑或載劑。
如請求項1、2、8、9及28中任一項之抗體，其中該抗體不與LAIR1配位體Clq形成複合物。
如請求項1、2、8、9及28中任一項之抗體，其中該抗體不需要完全受體佔有(RO)以引發促效作用。
一種如請求項1至16、28、30及31中任一項之抗體之用途，其係用於製造供治療自體免疫疾病或纖維化疾病之藥物。
如請求項32之用途，其中該自體免疫疾病或纖維化疾病係選自類風濕性關節炎、牛皮癬、全身性紅斑性狼瘡症、狼瘡性腎炎、尋常天疱瘡、全身性硬化症、特發性肺纖維化、硬皮病、潰瘍性結腸炎、克羅恩氏病(Crohn's disease)、化膿性汗腺炎、異位性皮膚炎、多發性硬化症、硬皮病相關間質性肺病、IgG4相關疾病或慢性纖維化間質性肺病。
如請求項33之用途，其中該自體免疫疾病或纖維化疾病為全身性紅斑性狼瘡症或狼瘡性腎炎。