TW202317626A - 抗il-36r抗體及其用途 - Google Patents
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Abstract
提供了抗IL-36R抗體及其用途，具體而言，提供了結合IL-36R的小鼠、嵌合或人源化抗體或其抗原結合片段，還提供了編碼所述抗體或其抗原結合片段的核酸分子，以及用於表現所述抗體或其抗原結合片段的表現載體和宿主細胞。此外，還提供了所述抗體或其抗原結合片段的製備方法和使用方法，包括治療和預防IL-36/IL-36R媒介的相關疾病和病症。
Description
本發明主張於2021年6月18日提交的中國專利申請202110675925.6號的優先權，透過援引加入的方式將其內容整體併入本發明，並用於所有目的。
本發明涉及分離的抗體，具體而言，本發明涉及特異性結合IL-36R的分離的抗體或其抗原結合片段，以及製備和使用所述抗體或其抗原結合片段的方法。
介白素36(IL-36）屬介白素1(IL-1)家族的成員，包括3種促效性細胞因子IL-36α(IL-1F6)、IL-36β(IL-1F8)和IL-36γ(IL-1F9)以及1種抑制性細胞因子IL-36Ra。IL-36受體(IL-36R)是IL-36家族成員的共同受體，也稱為介白素1受體樣2(IL1RL2)或IL-1受體相關蛋白2(IL-1Rrp2）。IL-36α、IL-36β、IL-36γ透過結合IL-36R和IL-1受體輔助蛋白(IL-1RAcP)，活化絲裂原活化蛋白激酶(MAPKs)和核因子kappa B(NF-kB)信號途徑，參與效應細胞活化、促進發炎細胞因子表現和發炎發生。
IL-36α、IL-36β和IL-36γ主要分佈在皮膚、肺臟、關節、腸道等組織中，可由單核細胞、巨噬細胞、T淋巴細胞、B淋巴細胞、角質細胞等多種細胞產生；IL-36R主要分佈於肺臟、附睪等組織中。研究者首次在泛發性膿皰型銀屑病(GPP)和斑塊型銀屑病中發現了IL-36，並觀察到GPP和斑塊型銀屑病病灶中IL-36Rα和IL-36γ mRNA的過表現。多項表明IL-36與銀屑病具有一定的相關性，例如在銀屑病中發現，IL-36γ透過Wnt信號途徑抑制角質形成細胞的分化並誘導角質形成細胞的發炎反應，IL-36γ還能促進IFN-γ、IL-1β和IL-6等促發炎因子的產生(Wang等(2017), Int J Med Sci, 14:1002-1007)；IL-36R缺陷的小鼠不會發生咪喹莫特誘導的銀屑病樣皮炎(Tortola等(2012), J Clin Invest, 122:3965-3976)。另一研究組證實，IL-36α和IL-36γ的表現位準在IBD患者腸黏膜中向上調控，並且能誘發腸上皮細胞表現趨化因子，啟動下游的信號途徑，誘發發炎反應(Nishida 等(2016), Inflamm Bowel Dis, 22:303-314)。
因此，阻斷IL-36與IL-36R結合，抑制IL-36/IL-36R信號途徑，在治療多種自身免疫性疾病和發炎疾病中具有重要作用。Spesolimab(BI655130)是Boehringer Ingelheim開發的一種用於治療泛發性膿皰性銀屑病(GPP)、掌蹠膿皰病(PPP)、克羅氏病(CD)和異位性皮膚炎(AD)的抗IL-36R的單株抗體，已在臨床I期中證明可顯著改善GPP患者的症狀(Bachelez Hervé等(2019), NEJM, 380:981-983)。但是，本領域還需要更多具有更好藥物特性的抗體，例如以高親和力結合IL-36R並且能有效中和IL-36R活性的抗體。
本發明提供了分離的抗體，例如，與IL-36R(例如，人和猴IL-36R)結合的小鼠、嵌合、人源化或人單株抗體或其抗原結合片段。具體而言，本發明的抗體或其抗原結合片段能夠以高親和力結合IL-36R(例如，人和猴IL-36R)，並能夠阻斷IL-36/IL-36R的相互作用。
本發明的抗體或其抗原結合片段具有多種用途，包括檢測IL-36R蛋白，以及治療或預防IL-36/IL-36R媒介的相關疾病和病症，例如自身免疫性疾病、發炎疾病、呼吸系統疾病、代謝失調或癌症等。
一方面，本發明提供了分離的抗IL-36R抗體或其抗原結合片段，其包含：
i) 重鏈CDR1、重鏈CDR2和重鏈CDR3，其中，
(1) 重鏈CDR1包含如SEQ ID NO: 1或85所示的胺基酸序列或與SEQ ID NO: 1或85具有至少80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%相同性的胺基酸序列，重鏈CDR2包含如SEQ ID NO: 2所示的胺基酸序列或與SEQ ID NO: 2具有至少80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%相同性的胺基酸序列，和重鏈CDR3包含如SEQ ID NO: 3所示的胺基酸序列或與SEQ ID NO: 3具有至少80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%相同性的胺基酸序列，
(2) 重鏈CDR1包含如SEQ ID NO: 21或86所示的胺基酸序列或與SEQ ID NO: 21或86具有至少80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%相同性的胺基酸序列，重鏈CDR2包含如SEQ ID NO: 22所示的胺基酸序列或與SEQ ID NO: 22具有至少80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%相同性的胺基酸序列，和重鏈CDR3包含如SEQ ID NO: 23所示的胺基酸序列或與SEQ ID NO: 23具有至少80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%相同性的胺基酸序列，
(3) 重鏈CDR1包含如SEQ ID NO: 45或88所示的胺基酸序列或與SEQ ID NO: 45或88具有至少80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%相同性的胺基酸序列，重鏈CDR2包含如SEQ ID NO: 46所示的胺基酸序列或與SEQ ID NO: 46具有至少80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%相同性的胺基酸序列，和重鏈CDR3包含如SEQ ID NO: 47所示的胺基酸序列或與SEQ ID NO: 47具有至少80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%相同性的胺基酸序列，
(4) 重鏈CDR1包含如SEQ ID NO: 53或89所示的胺基酸序列或與SEQ ID NO: 53或89具有至少80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%相同性的胺基酸序列，重鏈CDR2包含如SEQ ID NO: 54所示的胺基酸序列或與SEQ ID NO: 54具有至少80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%相同性的胺基酸序列，和重鏈CDR3包含如SEQ ID NO: 55所示的胺基酸序列或與SEQ ID NO: 55具有至少80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%相同性的胺基酸序列，或
(5) 重鏈CDR1包含如SEQ ID NO: 61或90所示的胺基酸序列或與SEQ ID NO: 61或90具有至少80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%相同性的胺基酸序列，重鏈CDR2包含如SEQ ID NO: 62所示的胺基酸序列或與SEQ ID NO: 62具有至少80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%相同性的胺基酸序列，和重鏈CDR3包含如SEQ ID NO: 63所示的胺基酸序列或與SEQ ID NO: 63具有至少80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%相同性的胺基酸序列；和/或
ii) 輕鏈CDR1、輕鏈CDR2和輕鏈CDR3，其中，
(1) 輕鏈CDR1包含如SEQ ID NO: 4所示的胺基酸序列或與SEQ ID NO: 4具有至少80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%相同性的胺基酸序列，輕鏈CDR2包含如SEQ ID NO: 5所示的胺基酸序列或與SEQ ID NO: 5具有至少80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%相同性的胺基酸序列，和輕鏈CDR3包含如SEQ ID NO: 6所示的胺基酸序列或與SEQ ID NO: 6具有至少80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%相同性的胺基酸序列，
(2) 輕鏈CDR1包含如SEQ ID NO: 24或87所示的胺基酸序列或與SEQ ID NO: 24或87具有至少80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%相同性的胺基酸序列，輕鏈CDR2包含如SEQ ID NO: 25所示的胺基酸序列或與SEQ ID NO: 25具有至少80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%相同性的胺基酸序列，和輕鏈CDR3包含如SEQ ID NO: 26所示的胺基酸序列或與SEQ ID NO: 26具有至少80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%相同性的胺基酸序列，
(3) 輕鏈CDR1包含如SEQ ID NO: 48所示的胺基酸序列或與SEQ ID NO: 48具有至少80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%相同性的胺基酸序列，輕鏈CDR2包含如SEQ ID NO: 49所示的胺基酸序列或與SEQ ID NO: 49具有至少80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%相同性的胺基酸序列，和輕鏈CDR3包含如SEQ ID NO: 50所示的胺基酸序列或與SEQ ID NO: 50具有至少80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%相同性的胺基酸序列，
(4) 輕鏈CDR1包含如SEQ ID NO: 56所示的胺基酸序列或與SEQ ID NO: 56具有至少80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%相同性的胺基酸序列，輕鏈CDR2包含如SEQ ID NO: 57所示的胺基酸序列或與SEQ ID NO: 57具有至少80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%相同性的胺基酸序列，和輕鏈CDR3包含如SEQ ID NO: 58所示的胺基酸序列或與SEQ ID NO: 58具有至少80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%相同性的胺基酸序列，或
(5) 輕鏈CDR1包含如SEQ ID NO: 64所示的胺基酸序列或與SEQ ID NO: 64具有至少80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%相同性的胺基酸序列，輕鏈CDR2包含如SEQ ID NO: 65所示的胺基酸序列或與SEQ ID NO: 65具有至少80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%相同性的胺基酸序列，和輕鏈CDR3包含如SEQ ID NO: 66所示的胺基酸序列或與SEQ ID NO: 66具有至少80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%相同性的胺基酸序列。
在一些實施方案中，所述抗IL-36R抗體或其抗原結合片段，其包含重鏈CDR1、重鏈CDR2、重鏈CDR3、輕鏈CDR1、輕鏈CDR2和輕鏈CDR3，其中，
(1) 重鏈CDR1包含如SEQ ID NO: 1或85所示的胺基酸序列或與SEQ ID NO: 1或85具有至少80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%相同性的胺基酸序列，重鏈CDR2包含如SEQ ID NO: 2所示的胺基酸序列或與SEQ ID NO: 2具有至少80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%相同性的胺基酸序列，重鏈CDR3包含如SEQ ID NO: 3所示的胺基酸序列或與SEQ ID NO: 3具有至少80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%相同性的胺基酸序列，輕鏈CDR1包含如SEQ ID NO: 4所示的胺基酸序列或與SEQ ID NO: 4具有至少80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%相同性的胺基酸序列，輕鏈CDR2包含如SEQ ID NO: 5所示的胺基酸序列或與SEQ ID NO: 5具有至少80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%相同性的胺基酸序列，和輕鏈CDR3包含如SEQ ID NO: 6所示的胺基酸序列或與SEQ ID NO: 6具有至少80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%相同性的胺基酸序列，
(2) 重鏈CDR1包含如SEQ ID NO: 21或86所示的胺基酸序列或與SEQ ID NO: 21或86具有至少80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%相同性的胺基酸序列，重鏈CDR2包含如SEQ ID NO: 22所示的胺基酸序列或與SEQ ID NO: 22具有至少80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%相同性的胺基酸序列，重鏈CDR3包含如SEQ ID NO: 23所示的胺基酸序列或與SEQ ID NO: 23具有至少80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%相同性的胺基酸序列，輕鏈CDR1包含如SEQ ID NO: 24或87所示的胺基酸序列或與SEQ ID NO: 24或87具有至少80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%相同性的胺基酸序列，輕鏈CDR2包含如SEQ ID NO: 25所示的胺基酸序列或與SEQ ID NO: 25具有至少80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%相同性的胺基酸序列，和輕鏈CDR3包含如SEQ ID NO: 26所示的胺基酸序列或與SEQ ID NO: 26具有至少80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%相同性的胺基酸序列，
(3) 重鏈CDR1包含如SEQ ID NO: 45或88所示的胺基酸序列或與SEQ ID NO: 45或88具有至少80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%相同性的胺基酸序列，重鏈CDR2包含如SEQ ID NO: 46所示的胺基酸序列或與SEQ ID NO: 46具有至少80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%相同性的胺基酸序列，重鏈CDR3包含如SEQ ID NO: 47所示的胺基酸序列或與SEQ ID NO: 47具有至少80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%相同性的胺基酸序列，輕鏈CDR1包含如SEQ ID NO: 48所示的胺基酸序列或與SEQ ID NO: 48具有至少80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%相同性的胺基酸序列，輕鏈CDR2包含如SEQ ID NO: 49所示的胺基酸序列或與SEQ ID NO: 49具有至少80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%相同性的胺基酸序列，和輕鏈CDR3包含如SEQ ID NO: 50所示的胺基酸序列或與SEQ ID NO: 50具有至少80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%相同性的胺基酸序列，
(4) 重鏈CDR1包含如SEQ ID NO: 53或89所示的胺基酸序列或與SEQ ID NO: 53或89具有至少80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%相同性的胺基酸序列，重鏈CDR2包含如SEQ ID NO: 54所示的胺基酸序列或與SEQ ID NO: 54具有至少80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%相同性的胺基酸序列，重鏈CDR3包含如SEQ ID NO: 55所示的胺基酸序列或與SEQ ID NO: 55具有至少80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%相同性的胺基酸序列，輕鏈CDR1包含如SEQ ID NO: 56所示的胺基酸序列或與SEQ ID NO: 56具有至少80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%相同性的胺基酸序列，輕鏈CDR2包含如SEQ ID NO: 57所示的胺基酸序列或與SEQ ID NO: 57具有至少80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%相同性的胺基酸序列，和輕鏈CDR3包含如SEQ ID NO: 58所示的胺基酸序列或與SEQ ID NO: 58具有至少80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%相同性的胺基酸序列，或
(5) 重鏈CDR1包含如SEQ ID NO: 61或90所示的胺基酸序列或與SEQ ID NO: 61或90具有至少80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%相同性的胺基酸序列，重鏈CDR2包含如SEQ ID NO: 62所示的胺基酸序列或與SEQ ID NO: 62具有至少80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%相同性的胺基酸序列，重鏈CDR3包含如SEQ ID NO: 63所示的胺基酸序列或與SEQ ID NO: 63具有至少80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%相同性的胺基酸序列，輕鏈CDR1包含如SEQ ID NO: 64所示的胺基酸序列或與SEQ ID NO: 64具有至少80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%相同性的胺基酸序列，輕鏈CDR2包含如SEQ ID NO: 65所示的胺基酸序列或與SEQ ID NO: 65具有至少80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%相同性的胺基酸序列，和輕鏈CDR3包含如SEQ ID NO: 66所示的胺基酸序列或與SEQ ID NO: 66具有至少80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%相同性的胺基酸序列。
在一些具體的實施方案中，前述SEQ ID NO: 2的胺基酸序列為YIX
1YSGYTYYNPSLKS，前述SEQ ID NO: 6的胺基酸序列為QQX
2TTSPYT，其中，
X
1=S或Y，X
2=F或Y；
並且，前述SEQ ID NO: 21的胺基酸序列為GYX
3FTSYWMN，前述SEQ ID NO: 22的胺基酸序列為X
4IX
5PYDSETRX
6X
7QKFX
8G，其中
X
3=F或Y，X
4=M或Y，X
5=H或Y，X
6=L或Y，X
7=N或A，X
8=K或Q。
在一些具體的實施方案中，前述SEQ ID NO: 2的胺基酸序列為YIX
1YSGYTYYNPSLKS，前述SEQ ID NO: 6的胺基酸序列為QQX
2TTSPYT，其中，
i) X1=S或Y，X2=F，或
ii) X1=S或Y，X2=Y；
並且，前述SEQ ID NO: 21的胺基酸序列為GYX
3FTSYWMN，前述SEQ ID NO: 22的胺基酸序列為X
4IX
5PYDSETRX
6X
7QKFX
8G，其中，
i) X3=F或Y，X4=M或Y，X5=H或Y，X6=L，X7=N或A，X8=K，或
ii) X3= F或Y，X4=M或Y，X5=H或Y，X6=Y，X7=N或A，X8=Q。
在一些具體的實施方案中，前述SEQ ID NO: 2的胺基酸序列為YIX
1YSGYTYYNPSLKS，前述SEQ ID NO: 6的胺基酸序列為QQX
2TTSPYT，其中，
i) X1=S或Y，X2=F，或
ii) X1=S或Y，X2=Y；
並且，前述SEQ ID NO: 21的胺基酸序列為GYX
3FTSYWMN，前述SEQ ID NO: 22的胺基酸序列為X
4IX
5PYDSETRX
6X
7QKFX
8G，其中，
i) X
3=F或Y，X4=M，X5=H，X6=L，X7=N，X8=K，
ii) X
3=F或Y，X4=M，X5=H，X6=Y，X7=A，X8=Q，
iii) X
3=F或Y，X4=Y，X5=H，X6=Y，X7=A，X8=Q，
iv) X
3=F或Y，X4=M，X5=Y，X6=Y，X7=A，X8=Q，或
v) X
3=F或Y，X
4=M，X
5=H，X
6=L，X
7=A，X
8=K。
一方面，本發明提供了分離的抗IL-36R抗體或其抗原結合片段，其包含：SEQ ID NOs: 7、9、11、13、27、29、31、33、35、37、51、59或67所示重鏈可變區中的重鏈CDR1、重鏈CDR2和重鏈CDR3，和/或SEQ ID NOs: 15、17、19、39、41、43、52、60或68所示輕鏈可變區中的輕鏈CDR1、輕鏈CDR2和輕鏈CDR3。
在一些實施方案中，所述抗IL-36R抗體或其抗原結合片段，其包含：
(1) SEQ ID NO: 7所示重鏈可變區中的重鏈CDR1、重鏈CDR2和重鏈CDR3，和SEQ ID NO: 15所示輕鏈可變區中的輕鏈CDR1、輕鏈CDR2和輕鏈CDR3；
(2) SEQ ID NO: 9所示重鏈可變區中的重鏈CDR1、重鏈CDR2和重鏈CDR3，和SEQ ID NO: 17所示輕鏈可變區中的輕鏈CDR1、輕鏈CDR2和輕鏈CDR3；
(3) SEQ ID NO: 11所示重鏈可變區中的重鏈CDR1、重鏈CDR2和重鏈CDR3，和SEQ ID NO: 17所示輕鏈可變區中的輕鏈CDR1、輕鏈CDR2和輕鏈CDR3；
(4) SEQ ID NO: 13所示重鏈可變區中的重鏈CDR1、重鏈CDR2和重鏈CDR3，和SEQ ID NO: 17所示輕鏈可變區中的輕鏈CDR1、輕鏈CDR2和輕鏈CDR3；
(5) SEQ ID NO: 9所示重鏈可變區中的重鏈CDR1、重鏈CDR2和重鏈CDR3，和SEQ ID NO: 19所示輕鏈可變區中的輕鏈CDR1、輕鏈CDR2和輕鏈CDR3；
(6) SEQ ID NO: 11所示重鏈可變區中的重鏈CDR1、重鏈CDR2和重鏈CDR3，和SEQ ID NO: 19所示輕鏈可變區中的輕鏈CDR1、輕鏈CDR2和輕鏈CDR3；
(7) SEQ ID NO: 13所示重鏈可變區中的重鏈CDR1、重鏈CDR2和重鏈CDR3，和SEQ ID NO: 19所示輕鏈可變區中的輕鏈CDR1、輕鏈CDR2和輕鏈CDR3；
(8) SEQ ID NO: 27所示重鏈可變區中的重鏈CDR1、重鏈CDR2和重鏈CDR3，和SEQ ID NO: 39所示輕鏈可變區中的輕鏈CDR1、輕鏈CDR2和輕鏈CDR3；
(9) SEQ ID NO: 29所示重鏈可變區中的重鏈CDR1、重鏈CDR2和重鏈CDR3，和SEQ ID NO: 41所示輕鏈可變區中的輕鏈CDR1、輕鏈CDR2和輕鏈CDR3；
(10) SEQ ID NO: 31所示重鏈可變區中的重鏈CDR1、重鏈CDR2和重鏈CDR3，和SEQ ID NO: 41所示輕鏈可變區中的輕鏈CDR1、輕鏈CDR2和輕鏈CDR3；
(11) SEQ ID NO: 33所示重鏈可變區中的重鏈CDR1、重鏈CDR2和重鏈CDR3，和SEQ ID NO: 41所示輕鏈可變區中的輕鏈CDR1、輕鏈CDR2和輕鏈CDR3；
(12) SEQ ID NO: 35所示重鏈可變區中的重鏈CDR1、重鏈CDR2和重鏈CDR3，和SEQ ID NO: 41所示輕鏈可變區中的輕鏈CDR1、輕鏈CDR2和輕鏈CDR3；
(13) SEQ ID NO: 37所示重鏈可變區中的重鏈CDR1、重鏈CDR2和重鏈CDR3，和SEQ ID NO: 41所示輕鏈可變區中的輕鏈CDR1、輕鏈CDR2和輕鏈CDR3；
(14) SEQ ID NO: 29所示重鏈可變區中的重鏈CDR1、重鏈CDR2和重鏈CDR3，和SEQ ID NO: 43所示輕鏈可變區中的輕鏈CDR1、輕鏈CDR2和輕鏈CDR3；
(15) SEQ ID NO: 31所示重鏈可變區中的重鏈CDR1、重鏈CDR2和重鏈CDR3，和SEQ ID NO: 43所示輕鏈可變區中的輕鏈CDR1、輕鏈CDR2和輕鏈CDR3；
(16) SEQ ID NO: 33所示重鏈可變區中的重鏈CDR1、重鏈CDR2和重鏈CDR3，和SEQ ID NO: 43所示輕鏈可變區中的輕鏈CDR1、輕鏈CDR2和輕鏈CDR3；
(17) SEQ ID NO: 35所示重鏈可變區中的重鏈CDR1、重鏈CDR2和重鏈CDR3，和SEQ ID NO: 43所示輕鏈可變區中的輕鏈CDR1、輕鏈CDR2和輕鏈CDR3；
(18) SEQ ID NO: 37所示重鏈可變區中的重鏈CDR1、重鏈CDR2和重鏈CDR3，和SEQ ID NO: 43所示輕鏈可變區中的輕鏈CDR1、輕鏈CDR2和輕鏈CDR3；
(19) SEQ ID NO: 51所示重鏈可變區中的重鏈CDR1、重鏈CDR2和重鏈CDR3，和SEQ ID NO: 52所示輕鏈可變區中的輕鏈CDR1、輕鏈CDR2和輕鏈CDR3；
(20) SEQ ID NO: 59所示重鏈可變區中的重鏈CDR1、重鏈CDR2和重鏈CDR3，和SEQ ID NO: 60所示輕鏈可變區中的輕鏈CDR1、輕鏈CDR2和輕鏈CDR3；或
(21) SEQ ID NO: 67所示重鏈可變區中的重鏈CDR1、重鏈CDR2和重鏈CDR3，和SEQ ID NO: 68所示輕鏈可變區中的輕鏈CDR1、輕鏈CDR2和輕鏈CDR3。
在一些實施方案中，所述抗IL-36R抗體或其抗原結合片段，其包含重鏈可變區，所述重鏈可變區包含如SEQ ID NOs: 7、9、11、13、27、29、31、33、35、37、51、59或67所示的胺基酸序列，或與SEQ ID NOs: 7、9、11、13、27、29、31、33、35、37、51、59或67所示的胺基酸序列具有至少80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%相同性的胺基酸序列。
在一些實施方案中，所述抗IL-36R抗體或其抗原結合片段，其包含輕鏈可變區，所述輕鏈可變區包含如SEQ ID NOs: 15、17、19、39、41、43、52、60或68所示的胺基酸序列，或與SEQ ID NOs: 15、17、19、39、41、43、52、60或68所示的胺基酸序列具有至少80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%相同性的胺基酸序列。
在一些實施方案中，所述抗IL-36R抗體或其抗原結合片段，其包含重鏈可變區和輕鏈可變區，其中，
(1) 重鏈可變區包含如SEQ ID NO: 7所示的胺基酸序列或與SEQ ID NO: 7具有至少80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%相同性的胺基酸序列，和輕鏈可變區包含如SEQ ID NO: 15所示的胺基酸序列或與SEQ ID NO: 15具有至少80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%相同性的胺基酸序列，
(2) 重鏈可變區包含如SEQ ID NO: 9所示的胺基酸序列或與SEQ ID NO: 9具有至少80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%相同性的胺基酸序列，和輕鏈可變區包含如SEQ ID NO: 17所示的胺基酸序列或與SEQ ID NO: 17具有至少80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%相同性的胺基酸序列，
(3) 重鏈可變區包含如SEQ ID NO: 11所示的胺基酸序列或與SEQ ID NO: 11具有至少80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%相同性的胺基酸序列，和輕鏈可變區包含如SEQ ID NO: 17所示的胺基酸序列或與SEQ ID NO: 17具有至少80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%相同性的胺基酸序列，
(4) 重鏈可變區包含如SEQ ID NO: 13所示的胺基酸序列或與SEQ ID NO: 13具有至少80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%相同性的胺基酸序列，和輕鏈可變區包含如SEQ ID NO: 17所示的胺基酸序列或與SEQ ID NO: 17具有至少80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%相同性的胺基酸序列，
(5) 重鏈可變區包含如SEQ ID NO: 9所示的胺基酸序列或與SEQ ID NO: 9具有至少80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%相同性的胺基酸序列，和輕鏈可變區包含如SEQ ID NO: 19所示的胺基酸序列或與SEQ ID NO: 19具有至少80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%相同性的胺基酸序列，
(6) 重鏈可變區包含如SEQ ID NO: 11所示的胺基酸序列或與SEQ ID NO: 11具有至少80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%相同性的胺基酸序列，和輕鏈可變區包含如SEQ ID NO: 19所示的胺基酸序列或與SEQ ID NO: 19具有至少80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%相同性的胺基酸序列，
(7) 重鏈可變區包含如SEQ ID NO: 13所示的胺基酸序列或與SEQ ID NO: 13具有至少80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%相同性的胺基酸序列，和輕鏈可變區包含如SEQ ID NO: 19所示的胺基酸序列或與SEQ ID NO: 19具有至少80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%相同性的胺基酸序列，
(8) 重鏈可變區包含如SEQ ID NO: 27所示的胺基酸序列或與SEQ ID NO: 27具有至少80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%相同性的胺基酸序列，和輕鏈可變區包含如SEQ ID NO: 39所示的胺基酸序列或與SEQ ID NO: 39具有至少80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%相同性的胺基酸序列，
(9) 重鏈可變區包含如SEQ ID NO: 29所示的胺基酸序列或與SEQ ID NO: 29具有至少80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%相同性的胺基酸序列，和輕鏈可變區包含如SEQ ID NO: 41所示的胺基酸序列或與SEQ ID NO: 41具有至少80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%相同性的胺基酸序列，
(10) 重鏈可變區包含如SEQ ID NO: 31所示的胺基酸序列或與SEQ ID NO: 31具有至少80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%相同性的胺基酸序列，和輕鏈可變區包含如SEQ ID NO: 41所示的胺基酸序列或與SEQ ID NO: 41具有至少80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%相同性的胺基酸序列，
(11) 重鏈可變區包含如SEQ ID NO: 33所示的胺基酸序列或與SEQ ID NO: 33具有至少80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%相同性的胺基酸序列，和輕鏈可變區包含如SEQ ID NO: 41所示的胺基酸序列或與SEQ ID NO: 41具有至少80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%相同性的胺基酸序列，
(12) 重鏈可變區包含如SEQ ID NO: 35所示的胺基酸序列或與SEQ ID NO: 35具有至少80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%相同性的胺基酸序列，和輕鏈可變區包含如SEQ ID NO: 41所示的胺基酸序列或與SEQ ID NO: 41具有至少80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%相同性的胺基酸序列，
(13) 重鏈可變區包含如SEQ ID NO: 37所示的胺基酸序列或與SEQ ID NO: 37具有至少80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%相同性的胺基酸序列，和輕鏈可變區包含如SEQ ID NO: 41所示的胺基酸序列或與SEQ ID NO: 41具有至少80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%相同性的胺基酸序列，
(14) 重鏈可變區包含如SEQ ID NO: 29所示的胺基酸序列或與SEQ ID NO: 29具有至少80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%相同性的胺基酸序列，和輕鏈可變區包含如SEQ ID NO: 43所示的胺基酸序列或與SEQ ID NO: 43具有至少80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%相同性的胺基酸序列，
(15) 重鏈可變區包含如SEQ ID NO: 31所示的胺基酸序列或與SEQ ID NO: 31具有至少80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%相同性的胺基酸序列，和輕鏈可變區包含如SEQ ID NO: 43所示的胺基酸序列或與SEQ ID NO: 43具有至少80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%相同性的胺基酸序列，
(16) 重鏈可變區包含如SEQ ID NO: 33所示的胺基酸序列或與SEQ ID NO: 33具有至少80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%相同性的胺基酸序列，和輕鏈可變區包含如SEQ ID NO: 43所示的胺基酸序列或與SEQ ID NO: 43具有至少80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%相同性的胺基酸序列，
(17) 重鏈可變區包含如SEQ ID NO: 35所示的胺基酸序列或與SEQ ID NO: 35具有至少80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%相同性的胺基酸序列，和輕鏈可變區包含如SEQ ID NO: 43所示的胺基酸序列或與SEQ ID NO: 43具有至少80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%相同性的胺基酸序列，
(18) 重鏈可變區包含如SEQ ID NO: 37所示的胺基酸序列或與SEQ ID NO: 37具有至少80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%相同性的胺基酸序列，和輕鏈可變區包含如SEQ ID NO: 43所示的胺基酸序列或與SEQ ID NO: 43具有至少80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%相同性的胺基酸序列，
(19) 重鏈可變區包含如SEQ ID NO: 51所示的胺基酸序列或與SEQ ID NO: 51具有至少80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%相同性的胺基酸序列，和輕鏈可變區包含如SEQ ID NO: 52所示的胺基酸序列或與SEQ ID NO: 52具有至少80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%相同性的胺基酸序列，
(20) 重鏈可變區包含如SEQ ID NO: 59所示的胺基酸序列或與SEQ ID NO: 59具有至少80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%相同性的胺基酸序列，和輕鏈可變區包含如SEQ ID NO: 60所示的胺基酸序列或與SEQ ID NO: 60具有至少80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%相同性的胺基酸序列，或
(21) 重鏈可變區包含如SEQ ID NO: 67所示的胺基酸序列或與SEQ ID NO: 67具有至少80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%相同性的胺基酸序列，和輕鏈可變區包含如SEQ ID NO: 68所示的胺基酸序列或與SEQ ID NO: 68具有至少80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%相同性的胺基酸序列。
在一些具體的實施方案中，SEQ ID NOs: 7、9、11、13、27、29、31、33、35和37所示的胺基酸序列可以分別由SEQ ID NOs: 8、10、12、14、28、30、32、34、36和38所示的核酸編碼，SEQ ID NOs: 15、17、19、39、41和43所示的胺基酸序列可以分別由SEQ ID NOs: 16、18、20、40、42和44所示的核酸編碼。
在一些實施方案中，所述抗IL-36R抗體或其抗原結合片段，其包含重鏈和輕鏈，所述重鏈包含重鏈可變區和重鏈恆定區，所述輕鏈包含輕鏈可變區和輕鏈恆定區，其中重鏈可變區的C末端與重鏈恆定區的N末端相連接，輕鏈可變區的C末端與輕鏈恆定區的N末端相連接。所述重鏈恆定區可以是人IgG1或人IgG4重鏈恆定區或其片段或其變異體，例如包含SEQ ID NO: 69所示胺基酸序列的人IgG1重鏈恆定區或其片段，或包含SEQ ID NO: 71所示胺基酸序列的人IgG4重鏈恆定區或其片段，或者是與SEQ ID NOs: 69或71所示胺基酸序列相比具有1、2、3、4或5個胺基酸取代、刪除和添加的變異體。所述輕鏈恆定區可以是人κ輕鏈恆定區或其片段，例如包含SEQ ID NO: 73所示胺基酸序列的人κ輕鏈恆定區或其片段，或者是與SEQ ID NO: 73所示胺基酸序列相比具有1、2、3、4或5個胺基酸取代、刪除和添加的變異體。在一些實施方案中，所述重鏈恆定區也可以包含小鼠IgG1或小鼠IgG4重鏈恆定區或其片段，所述輕鏈恆定區也可以包含小鼠κ輕鏈恆定區或其片段。
在一些實施方案中，所述抗IL-36R抗體或其抗原結合片段，其包含重鏈，所述重鏈包含重鏈可變區和重鏈恆定區，所述重鏈可變區包含如SEQ ID NOs: 7、9、11、13、27、29、31、33、35、37、51、59或67所示的胺基酸序列，或與SEQ ID NOs: 7、9、11、13、27、29、31、33、35、37、51、59或67所示的胺基酸序列具有至少80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%相同性的胺基酸序列；所述重鏈恆定區的胺基酸序列如SEQ ID NO: 69或71所示，或與SEQ ID NOs: 69或71所示胺基酸序列相比具有1、2、3、4或5個胺基酸的取代、刪除和添加。
在一些實施方案中，所述抗IL-36R抗體或其抗原結合片段，其包含輕鏈，所述輕鏈包含輕鏈可變區和輕鏈恆定區，所述輕鏈可變區包含如SEQ ID NOs: 15、17、19、39、41、43、52、60或68所示的胺基酸序列，或與SEQ ID NOs: 15、17、19、39、41、43、52、60或68所示的胺基酸序列具有至少80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%相同性的胺基酸序列；所述輕鏈恆定區的胺基酸序列如SEQ ID NO: 73所示，或與SEQ ID NO: 73所示胺基酸序列相比具有1、2、3、4或5個胺基酸的取代、刪除和添加。
在一些實施方案中，所述抗IL-36R抗體或其抗原結合片段，其包含重鏈和輕鏈，其中，
(1) 所述重鏈包含重鏈可變區和重鏈恆定區，其中，重鏈可變區包含如SEQ ID NO: 7所示的胺基酸序列或與SEQ ID NO: 7具有至少80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%相同性的胺基酸序列，重鏈恆定區的胺基酸序列如SEQ ID NO: 71所示或與SEQ ID NOs: 71所示胺基酸序列相比具有1、2、3、4或5個胺基酸的取代、刪除和添加；
所述輕鏈包含輕鏈可變區和輕鏈恆定區，其中，輕鏈可變區包含如SEQ ID NO: 15所示的胺基酸序列或與SEQ ID NO: 15具有至少80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%相同性的胺基酸序列，輕鏈恆定區的胺基酸序列如SEQ ID NO: 73所示或與SEQ ID NO: 73所示胺基酸序列相比具有1、2、3、4或5個胺基酸的取代、刪除和添加；
(2) 所述重鏈包含重鏈可變區和重鏈恆定區，其中，重鏈可變區包含如SEQ ID NO: 9所示的胺基酸序列或與SEQ ID NO: 9具有至少80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%相同性的胺基酸序列，重鏈恆定區的胺基酸序列如SEQ ID NO: 71所示或與SEQ ID NOs: 71所示胺基酸序列相比具有1、2、3、4或5個胺基酸的取代、刪除和添加；
所述輕鏈包含輕鏈可變區和輕鏈恆定區，其中，輕鏈可變區包含如SEQ ID NO: 17所示的胺基酸序列或與SEQ ID NO: 17具有至少80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%相同性的胺基酸序列，輕鏈恆定區的胺基酸序列如SEQ ID NO: 73所示或與SEQ ID NO: 73所示胺基酸序列相比具有1、2、3、4或5個胺基酸的取代、刪除和添加；
(3) 所述重鏈包含重鏈可變區和重鏈恆定區，其中，重鏈可變區包含如SEQ ID NO: 11所示的胺基酸序列或與SEQ ID NO: 11具有至少80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%相同性的胺基酸序列，重鏈恆定區的胺基酸序列如SEQ ID NO: 71所示或與SEQ ID NOs: 71所示胺基酸序列相比具有1、2、3、4或5個胺基酸的取代、刪除和添加；
所述輕鏈包含輕鏈可變區和輕鏈恆定區，其中，輕鏈可變區包含如SEQ ID NO: 17所示的胺基酸序列或與SEQ ID NO: 17具有至少80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%相同性的胺基酸序列，輕鏈恆定區的胺基酸序列如SEQ ID NO: 73所示或與SEQ ID NO: 73所示胺基酸序列相比具有1、2、3、4或5個胺基酸的取代、刪除和添加；
(4) 所述重鏈包含重鏈可變區和重鏈恆定區，其中，重鏈可變區包含如SEQ ID NO: 13所示的胺基酸序列或與SEQ ID NO: 13具有至少80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%相同性的胺基酸序列，重鏈恆定區的胺基酸序列如SEQ ID NO: 71所示或與SEQ ID NOs: 71所示胺基酸序列相比具有1、2、3、4或5個胺基酸的取代、刪除和添加；
所述輕鏈包含輕鏈可變區和輕鏈恆定區，其中，輕鏈可變區包含如SEQ ID NO: 17所示的胺基酸序列或與SEQ ID NO: 17具有至少80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%相同性的胺基酸序列，輕鏈恆定區的胺基酸序列如SEQ ID NO: 73所示或與SEQ ID NO: 73所示胺基酸序列相比具有1、2、3、4或5個胺基酸的取代、刪除和添加；
(5) 所述重鏈包含重鏈可變區和重鏈恆定區，其中，重鏈可變區包含如SEQ ID NO: 9所示的胺基酸序列或與SEQ ID NO: 9具有至少80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%相同性的胺基酸序列，重鏈恆定區的胺基酸序列如SEQ ID NO: 71所示或與SEQ ID NOs: 71所示胺基酸序列相比具有1、2、3、4或5個胺基酸的取代、刪除和添加；
所述輕鏈包含輕鏈可變區和輕鏈恆定區，其中，輕鏈可變區包含如SEQ ID NO: 19所示的胺基酸序列或與SEQ ID NO: 19具有至少80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%相同性的胺基酸序列，輕鏈恆定區的胺基酸序列如SEQ ID NO: 73所示或與SEQ ID NO: 73所示胺基酸序列相比具有1、2、3、4或5個胺基酸的取代、刪除和添加；
(6) 所述重鏈包含重鏈可變區和重鏈恆定區，其中，重鏈可變區包含如SEQ ID NO: 11所示的胺基酸序列或與SEQ ID NO: 11具有至少80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%相同性的胺基酸序列，重鏈恆定區的胺基酸序列如SEQ ID NO: 71所示或與SEQ ID NOs: 71所示胺基酸序列相比具有1、2、3、4或5個胺基酸的取代、刪除和添加；
所述輕鏈包含輕鏈可變區和輕鏈恆定區，其中，輕鏈可變區包含如SEQ ID NO: 19所示的胺基酸序列或與SEQ ID NO: 19具有至少80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%相同性的胺基酸序列，輕鏈恆定區的胺基酸序列如SEQ ID NO: 73所示或與SEQ ID NO: 73所示胺基酸序列相比具有1、2、3、4或5個胺基酸的取代、刪除和添加；
(7) 所述重鏈包含重鏈可變區和重鏈恆定區，其中，重鏈可變區包含如SEQ ID NO: 13所示的胺基酸序列或與SEQ ID NO: 13具有至少80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%相同性的胺基酸序列，重鏈恆定區的胺基酸序列如SEQ ID NO: 71所示或與SEQ ID NOs: 71所示胺基酸序列相比具有1、2、3、4或5個胺基酸的取代、刪除和添加；
所述輕鏈包含輕鏈可變區和輕鏈恆定區，其中，輕鏈可變區包含如SEQ ID NO: 19所示的胺基酸序列或與SEQ ID NO: 19具有至少80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%相同性的胺基酸序列，輕鏈恆定區的胺基酸序列如SEQ ID NO: 73所示或與SEQ ID NO: 73所示胺基酸序列相比具有1、2、3、4或5個胺基酸的取代、刪除和添加；
(8) 所述重鏈包含重鏈可變區和重鏈恆定區，其中，重鏈可變區包含如SEQ ID NO: 27所示的胺基酸序列或與SEQ ID NO: 27具有至少80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%相同性的胺基酸序列，重鏈恆定區的胺基酸序列如SEQ ID NO: 71所示或與SEQ ID NOs: 71所示胺基酸序列相比具有1、2、3、4或5個胺基酸的取代、刪除和添加；
所述輕鏈包含輕鏈可變區和輕鏈恆定區，其中，輕鏈可變區包含如SEQ ID NO: 39所示的胺基酸序列或與SEQ ID NO: 39具有至少80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%相同性的胺基酸序列，輕鏈恆定區的胺基酸序列如SEQ ID NO: 73所示或與SEQ ID NO: 73所示胺基酸序列相比具有1、2、3、4或5個胺基酸的取代、刪除和添加；
(9) 所述重鏈包含重鏈可變區和重鏈恆定區，其中，重鏈可變區包含如SEQ ID NO: 29所示的胺基酸序列或與SEQ ID NO: 29具有至少80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%相同性的胺基酸序列，重鏈恆定區的胺基酸序列如SEQ ID NO: 71所示或與SEQ ID NOs: 71所示胺基酸序列相比具有1、2、3、4或5個胺基酸的取代、刪除和添加；
所述輕鏈包含輕鏈可變區和輕鏈恆定區，其中，輕鏈可變區包含如SEQ ID NO: 41所示的胺基酸序列或與SEQ ID NO: 41具有至少80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%相同性的胺基酸序列，輕鏈恆定區的胺基酸序列如SEQ ID NO: 73所示或與SEQ ID NO: 73所示胺基酸序列相比具有1、2、3、4或5個胺基酸的取代、刪除和添加；
(10) 所述重鏈包含重鏈可變區和重鏈恆定區，其中，重鏈可變區包含如SEQ ID NO: 31所示的胺基酸序列或與SEQ ID NO: 31具有至少80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%相同性的胺基酸序列，重鏈恆定區的胺基酸序列如SEQ ID NO: 71所示或與SEQ ID NOs: 71所示胺基酸序列相比具有1、2、3、4或5個胺基酸的取代、刪除和添加；
所述輕鏈包含輕鏈可變區和輕鏈恆定區，其中，輕鏈可變區包含如SEQ ID NO: 41所示的胺基酸序列或與SEQ ID NO: 41具有至少80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%相同性的胺基酸序列，輕鏈恆定區的胺基酸序列如SEQ ID NO: 73所示或與SEQ ID NO: 73所示胺基酸序列相比具有1、2、3、4或5個胺基酸的取代、刪除和添加；
(11) 所述重鏈包含重鏈可變區和重鏈恆定區，其中，重鏈可變區包含如SEQ ID NO: 33所示的胺基酸序列或與SEQ ID NO: 33具有至少80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%相同性的胺基酸序列，重鏈恆定區的胺基酸序列如SEQ ID NO: 71所示或與SEQ ID NOs: 71所示胺基酸序列相比具有1、2、3、4或5個胺基酸的取代、刪除和添加；
所述輕鏈包含輕鏈可變區和輕鏈恆定區，其中，輕鏈可變區包含如SEQ ID NO: 41所示的胺基酸序列或與SEQ ID NO: 41具有至少80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%相同性的胺基酸序列，輕鏈恆定區的胺基酸序列如SEQ ID NO: 73所示或與SEQ ID NO: 73所示胺基酸序列相比具有1、2、3、4或5個胺基酸的取代、刪除和添加；
(12) 所述重鏈包含重鏈可變區和重鏈恆定區，其中，重鏈可變區包含如SEQ ID NO: 35所示的胺基酸序列或與SEQ ID NO: 35具有至少80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%相同性的胺基酸序列，重鏈恆定區的胺基酸序列如SEQ ID NO: 71所示或與SEQ ID NOs: 71所示胺基酸序列相比具有1、2、3、4或5個胺基酸的取代、刪除和添加；
所述輕鏈包含輕鏈可變區和輕鏈恆定區，其中，輕鏈可變區包含如SEQ ID NO: 41所示的胺基酸序列或與SEQ ID NO: 41具有至少80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%相同性的胺基酸序列，輕鏈恆定區的胺基酸序列如SEQ ID NO: 73所示或與SEQ ID NO: 73所示胺基酸序列相比具有1、2、3、4或5個胺基酸的取代、刪除和添加；
(13) 所述重鏈包含重鏈可變區和重鏈恆定區，其中，重鏈可變區包含如SEQ ID NO: 37所示的胺基酸序列或與SEQ ID NO: 37具有至少80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%相同性的胺基酸序列，重鏈恆定區的胺基酸序列如SEQ ID NO: 71所示或與SEQ ID NOs: 71所示胺基酸序列相比具有1、2、3、4或5個胺基酸的取代、刪除和添加；
所述輕鏈包含輕鏈可變區和輕鏈恆定區，其中，輕鏈可變區包含如SEQ ID NO: 41所示的胺基酸序列或與SEQ ID NO: 41具有至少80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%相同性的胺基酸序列，輕鏈恆定區的胺基酸序列如SEQ ID NO: 73所示或與SEQ ID NO: 73所示胺基酸序列相比具有1、2、3、4或5個胺基酸的取代、刪除和添加；
(14) 所述重鏈包含重鏈可變區和重鏈恆定區，其中，重鏈可變區包含如SEQ ID NO: 29所示的胺基酸序列或與SEQ ID NO: 29具有至少80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%相同性的胺基酸序列，重鏈恆定區的胺基酸序列如SEQ ID NO: 71所示或與SEQ ID NOs: 71所示胺基酸序列相比具有1、2、3、4或5個胺基酸的取代、刪除和添加；
所述輕鏈包含輕鏈可變區和輕鏈恆定區，其中，輕鏈可變區包含如SEQ ID NO: 43所示的胺基酸序列或與SEQ ID NO: 43具有至少80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%相同性的胺基酸序列，輕鏈恆定區的胺基酸序列如SEQ ID NO: 73所示或與SEQ ID NO: 73所示胺基酸序列相比具有1、2、3、4或5個胺基酸的取代、刪除和添加；
(15) 所述重鏈包含重鏈可變區和重鏈恆定區，其中，重鏈可變區包含如SEQ ID NO: 31所示的胺基酸序列或與SEQ ID NO: 31具有至少80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%相同性的胺基酸序列，重鏈恆定區的胺基酸序列如SEQ ID NO: 71所示或與SEQ ID NOs: 71所示胺基酸序列相比具有1、2、3、4或5個胺基酸的取代、刪除和添加；
所述輕鏈包含輕鏈可變區和輕鏈恆定區，其中，輕鏈可變區包含如SEQ ID NO: 43所示的胺基酸序列或與SEQ ID NO: 43具有至少80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%相同性的胺基酸序列，輕鏈恆定區的胺基酸序列如SEQ ID NO: 73所示或與SEQ ID NO: 73所示胺基酸序列相比具有1、2、3、4或5個胺基酸的取代、刪除和添加；
(16) 所述重鏈包含重鏈可變區和重鏈恆定區，其中，重鏈可變區包含如SEQ ID NO: 33所示的胺基酸序列或與SEQ ID NO: 33具有至少80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%相同性的胺基酸序列，重鏈恆定區的胺基酸序列如SEQ ID NO: 71所示或與SEQ ID NOs: 71所示胺基酸序列相比具有1、2、3、4或5個胺基酸的取代、刪除和添加；
所述輕鏈包含輕鏈可變區和輕鏈恆定區，其中，輕鏈可變區包含如SEQ ID NO: 43所示的胺基酸序列或與SEQ ID NO: 43具有至少80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%相同性的胺基酸序列，輕鏈恆定區的胺基酸序列如SEQ ID NO: 73所示或與SEQ ID NO: 73所示胺基酸序列相比具有1、2、3、4或5個胺基酸的取代、刪除和添加；
(17) 所述重鏈包含重鏈可變區和重鏈恆定區，其中，重鏈可變區包含如SEQ ID NO: 35所示的胺基酸序列或與SEQ ID NO: 35具有至少80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%相同性的胺基酸序列，重鏈恆定區的胺基酸序列如SEQ ID NO: 71所示或與SEQ ID NOs: 71所示胺基酸序列相比具有1、2、3、4或5個胺基酸的取代、刪除和添加；
所述輕鏈包含輕鏈可變區和輕鏈恆定區，其中，輕鏈可變區包含如SEQ ID NO: 43所示的胺基酸序列或與SEQ ID NO: 43具有至少80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%相同性的胺基酸序列，輕鏈恆定區的胺基酸序列如SEQ ID NO: 73所示或與SEQ ID NO: 73所示胺基酸序列相比具有1、2、3、4或5個胺基酸的取代、刪除和添加；
(18) 所述重鏈包含重鏈可變區和重鏈恆定區，其中，重鏈可變區包含如SEQ ID NO: 37所示的胺基酸序列或與SEQ ID NO: 37具有至少80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%相同性的胺基酸序列，重鏈恆定區的胺基酸序列如SEQ ID NO: 71所示或與SEQ ID NOs: 71所示胺基酸序列相比具有1、2、3、4或5個胺基酸的取代、刪除和添加；
所述輕鏈包含輕鏈可變區和輕鏈恆定區，其中，輕鏈可變區包含如SEQ ID NO: 43所示的胺基酸序列或與SEQ ID NO: 43具有至少80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%相同性的胺基酸序列，輕鏈恆定區的胺基酸序列如SEQ ID NO: 73所示或與SEQ ID NO: 73所示胺基酸序列相比具有1、2、3、4或5個胺基酸的取代、刪除和添加；
(19) 所述重鏈包含重鏈可變區和重鏈恆定區，其中，重鏈可變區包含如SEQ ID NO: 51所示的胺基酸序列或與SEQ ID NO: 51具有至少80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%相同性的胺基酸序列，重鏈恆定區的胺基酸序列如SEQ ID NO: 71所示或與SEQ ID NOs: 71所示胺基酸序列相比具有1、2、3、4或5個胺基酸的取代、刪除和添加；
所述輕鏈包含輕鏈可變區和輕鏈恆定區，其中，輕鏈可變區包含如SEQ ID NO: 52所示的胺基酸序列或與SEQ ID NO: 52具有至少80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%相同性的胺基酸序列，輕鏈恆定區的胺基酸序列如SEQ ID NO: 73所示或與SEQ ID NO: 73所示胺基酸序列相比具有1、2、3、4或5個胺基酸的取代、刪除和添加；
(20) 所述重鏈包含重鏈可變區和重鏈恆定區，其中，重鏈可變區包含如SEQ ID NO: 59所示的胺基酸序列或與SEQ ID NO: 59具有至少80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%相同性的胺基酸序列，重鏈恆定區的胺基酸序列如SEQ ID NO: 71所示或與SEQ ID NOs: 71所示胺基酸序列相比具有1、2、3、4或5個胺基酸的取代、刪除和添加；
所述輕鏈包含輕鏈可變區和輕鏈恆定區，其中，輕鏈可變區包含如SEQ ID NO: 60所示的胺基酸序列或與SEQ ID NO: 60具有至少80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%相同性的胺基酸序列，輕鏈恆定區的胺基酸序列如SEQ ID NO: 73所示或與SEQ ID NO: 73所示胺基酸序列相比具有1、2、3、4或5個胺基酸的取代、刪除和添加；或
(21) 所述重鏈包含重鏈可變區和重鏈恆定區，其中，重鏈可變區包含如SEQ ID NO: 67所示的胺基酸序列或與SEQ ID NO: 67具有至少80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%相同性的胺基酸序列，重鏈恆定區的胺基酸序列如SEQ ID NO: 71所示或與SEQ ID NOs: 71所示胺基酸序列相比具有1、2、3、4或5個胺基酸的取代、刪除和添加；
所述輕鏈包含輕鏈可變區和輕鏈恆定區，其中，輕鏈可變區包含如SEQ ID NO: 68所示的胺基酸序列或與SEQ ID NO: 68具有至少80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%相同性的胺基酸序列，輕鏈恆定區的胺基酸序列如SEQ ID NO: 73所示或與SEQ ID NO: 73所示胺基酸序列相比具有1、2、3、4或5個胺基酸的取代、刪除和添加。
在一些具體的實施方案中，SEQ ID NOs: 69、71和73所示的胺基酸序列可以分別由SEQ ID NO: 70、72和74所示的核酸編碼。
在一些實施方案中，本發明的抗IL-36R抗體包含兩條重鏈和兩條輕鏈，或由兩條重鏈和兩條輕鏈組成，重鏈和輕鏈透過二硫鍵相互連接，其中每條重鏈包含上述的重鏈恆定區、重鏈可變區或CDR，並且每條輕鏈包含上述的輕鏈恆定區、輕鏈可變區或CDR，其中重鏈可變區的C末端與重鏈恆定區的N末端相連接，輕鏈可變區的C末端與輕鏈恆定區的N末端相連接。本發明的抗IL-36R抗體可以是全長抗體，例如IgG1、IgG2或IgG4同種型的全長抗體，優選IgG1或IgG4。
在一些實施方案中，本發明的抗IL-36R抗體或其抗原結合片段可是IgG4同種型抗體。在其他實施方案中，本發明的抗IL-36R抗體或其抗原結合片段可以是單鏈可變區(scFv)抗體，或抗體片段，例如Fab、F(ab’)
2片段、Fd片段、Fv片段、dAb 或分離的CDR區。
一方面，本發明提供了多特異性分子，其包含本發明的抗IL-36R抗體或其抗原結合片段，其中本發明的抗IL-36R抗體或其抗原結合片段與至少一個與其具有不同特異性的其他功能部分相連接，所述其他功能部分包括另一種胜肽或蛋白質(例如，另一種抗體或其抗原結合片段、細胞因子和/或受體配體)，以產生與至少兩個不同結合位址或標的結合的多特異性分子。本發明所述的“多特異性分子”涵蓋具有兩種(即雙特異性分子)、三種(即三特異性分子)、四種(即四特異性分子)或更多種的特異性的分子。在一些具體的實施方案中，本發明所述的“多特異性分子”涵蓋多特異性抗體，例如雙特異性抗體、三特異性抗體或四特異性抗體。這些雙特異性分子可以透過基因改造、化學法等進行製備。
本發明還提供了免疫綴合物，其包含本發明的抗IL-36R抗體或其抗原結合片段，其中本發明的抗IL-36R抗體或其抗原結合片段與治療劑(例如細胞毒素，細胞毒性藥物等)相連接，例如抗體-藥物偶聯物(ADC)。在一些實施方案中，所述連接是共價連接。在一些實施方案中，所述連接是非共價連接。在一些實施方案中，所述連接是直接連接。在一些實施方案中，所述連接是透過連接子連接。合適的連接子包括但不限於胺基酸或多肽連接子。
本發明的抗IL-36R抗體或其抗原結合片段也可以是嵌合抗原受體(CAR)的一部分。本發明還提供了包含所述嵌合抗原受體的免疫細胞，例如T細胞(即，CAR-T細胞)。
此外，本發明還提供了基因載體，所述基因載體包含編碼本發明的抗IL-36R抗體或其抗原結合片段的基因，並且能使所述基因進入哺乳動物細胞(優選人細胞)，並在其中表現。這些基因載體包括但不限於，裸質體載體、酵母質體載體、腺病毒載體、腺相關病毒載體、反轉錄病毒載體、痘病毒載體、棒狀病毒載體或桿狀病毒載體。用於將DNA插入這些基因載體中的技術是本領域普通技術人員所熟知的。
一方面，本發明還提供了編碼本發明的抗IL-36R抗體或其抗原結合片段的核酸分子，包含所述核酸分子的表現載體，以及包含所述核酸分子或表現載體的宿主細胞。
一方面，本發明還提供了藥物組成物，其包含本發明的抗IL-36R抗體或其抗原結合片段、多特異性分子、免疫綴合物、CAR-T細胞、基因載體或核酸分子，以及藥學上可接受的賦形劑、稀釋劑或載劑。
一方面，本發明還提供了製備抗IL-36R抗體或其抗原結合片段的方法，其包括以下步驟：(i) 在宿主細胞中表現所述抗IL-36R抗體或其抗原結合片段，和 (ii) 從宿主細胞或其細胞培養物中分離所述抗IL-36R抗體或其抗原結合片段。
另一方面，本發明提供了在受試者中抑制IL-36/IL-36R信號轉導的方法，其包括向所述受試者施用治療有效量的本發明的抗IL-36R抗體或其抗原結合片段、藥物組成物、多特異性分子、免疫綴合物、CAR-T細胞、基因載體或核酸分子。在一些實施方案中，所述受試者是人。在一些實施方案中，所述受試者患有自身免疫性疾病、發炎疾病、呼吸系統疾病、代謝失調或癌症。
另一方面，本發明提供了治療或預防受試者IL-36/IL-36R媒介的相關疾病和病症的方法，其包括向所述受試者施用治療有效量的本發明的抗IL-36R抗體或其抗原結合片段、藥物組成物、多特異性分子、免疫綴合物、CAR-T細胞、基因載體或核酸分子。本發明還提供了本發明的抗IL-36R抗體或其抗原結合片段、藥物組成物、多特異性分子、免疫綴合物、CAR-T細胞、基因載體或核酸分子在製備用於治療或預防IL-36/IL-36R媒介的相關疾病和病症的藥物中的用途。在一些實施方案中，在所述方法和用途中，所述受試者是人。
在一些實施方案中，在所述方法和用途中，所述IL-36/IL-36R媒介的相關疾病和病症包括自身免疫性疾病、發炎疾病、呼吸系統疾病、代謝失調或癌症。在一些實施方案中，在所述方法和用途中，所述IL-36/IL-36R媒介的相關疾病和病症包括多發性硬化症、硬皮病、哮喘、慢性阻塞性肺病、化膿性汗腺炎、關節炎、僵直性脊椎炎、銀屑病、掌蹠膿皰病、系統性紅斑狼瘡、異位性皮膚炎、尋常性痤瘡、皮疹、過敏性鼻炎、腎炎、發炎腸病和/或食物過敏。在一些具體的實施方案中，所述關節炎包括類風濕性關節炎、和銀屑病關節炎。在一些具體的實施方案中，所述銀屑病包括尋常型銀屑病、膿皰病型銀屑病、侷限性膿皰型銀屑病、泛發性膿皰型銀屑病。在一些具體的實施方案中，所述發炎腸病包括克羅氏病和潰瘍性結腸炎。在一些實施方案中，至少一種其他抗體可以與本發明的抗IL-36R抗體或其抗原結合片段一起施用，例如抗IgE抗體、抗IL4抗體、抗IL13抗體和/或抗IL5抗體。在一些實施方案中，至少一種其他藥物可以與本發明的抗IL-36R抗體或其抗原結合片段一起施用，例如抗過敏劑。在一些實施方案中，在所述方法和用途中，所述IL-36/IL-36R媒介的相關疾病和病症是固態腫瘤或非固態腫瘤。在一些實施方案中，至少一種其他的抗體可以與本發明的抗IL-36R抗體或其抗原結合片段一起施用，例如抗PD-1抗體、抗PD-L1抗體和/或抗CTLA-4抗體。在一些實施方案中，至少一種其他藥物可以與本發明的抗IL-36R抗體或其抗原結合片段一起施用，例如小分子抗癌劑。
基於以下具體描述和實施例，本發明的其他特徵和優點將會更加清晰，具體描述和實施例不應解讀為限制性的。在本申請中引用的所有文獻、Genbank記錄、專利和已公開專利申請的內容透過引用的方式明確地地併入本申請中。
發明詳述
應當理解，本申請所用的術語只是為了描述具體實施例，並非旨在進行限制。除非另有定義，否則本文使用的所有技術和科學術語的含義與本發明所屬領域的普通技術人員通常所理解的含義相同。
“IL-36R”是指IL-36受體，也稱為介白素1受體樣2(IL1RL2)或IL-1受體相關蛋白2(IL-1Rrp2)，包括IL-36R的變異體、亞型、同源物、直系同源物和旁系同源物。例如，在一些實施例中，對人IL-36R蛋白特異的抗體可以在某些情況下與另一物種(例如猴)的IL-36R蛋白發生交叉反應。在另一些實施方案中，對人IL-36R蛋白特異的抗體可以完全地對人IL-36R蛋白特異而不與其他物種或其他類型的蛋白發生交叉反應，或者僅與某些其他物種但並非所有其他物種的IL-36R蛋白發生交叉反應。
術語“人IL-36R”或“hIL-36R”等在本文中可以互換，是指具有人IL-36R胺基酸序列的蛋白，例如SEQ ID NO: 75所示的人IL-36R胺基酸序列。術語“猴IL-36R”、“食蟹猴IL-36R”或“CynoIL-36R”等在本文中可以互換，是指具有猴IL-36R胺基酸序列的蛋白，例如SEQ ID NO: 78所示的猴IL-36R胺基酸序列。
“抗體”是指具有至少一個抗原(例如，IL-36R)結合結構域的結合蛋白，因此，本發明的抗體涵蓋多株抗體、單株抗體或其片段和單株抗體變異體或其片段、多特異性抗體、單特異性抗體、單價抗體或單鏈抗體。本發明的抗體可以衍生自任何物種，包括但不限於小鼠、大鼠、兔、靈長類動物、美洲駝和人。本發明的抗體包括但不限於小鼠抗體、嵌合抗體、人源化抗體和人抗體。除非另有說明，否則本發明的“抗體”包括全長抗體及其任何抗原結合部分(即“抗原結合片段”)或單鏈。常規的全長抗體是包含兩條重(H)鏈和兩條輕(L)鏈的糖蛋白，其中重鏈和輕鏈透過二硫鍵連接。每條重鏈由重鏈可變區(VH)和重鏈恆定區組成。重鏈恆定區由三個結構域組成，即CH1，CH2和CH3。每條輕鏈由輕鏈可變區(VL)和輕鏈恆定區組成。輕鏈恆定區由一個結構域CL組成。VH和VL區還可以劃分為高度變異區(即，互補決定區(CDR))和序列較為守恆的骨架區(FR)。每個VH和VL由三個CDR和四個FR組成，從胺基端到羧基端以FR1、CDR1、FR2、CDR2、FR3、CDR3、FR4的順序排布。抗體的可變區包含與抗原相互作用的結合結構域。抗體的恆定區可以媒介免疫球蛋白與宿主組織或因子的結合，所述宿主組織或因子包括多種免疫系統細胞(例如，效應細胞)和經典補體系統的第一成分(C1q)。與此同時，如本領域技術人員所瞭解的，特殊的“全長抗體”，例如奈米抗體，其僅只有重(H)鏈而沒有輕(L)鏈。
抗體的“抗原結合片段”或“抗原結合部分”是指抗體中保留特異性結合抗原(例如，IL-36R)功能的一個或多個片段。已證實，抗體的抗原結合功能可以透過全長抗體的片段來實施。涵蓋在術語抗體的“抗原結合部分/片段”中的實例包括：(i)Fab片段：由VL、VH、CL和CH1結構域組成的單價片段；(ii)F(ab')2片段，包含在樞紐區透過二硫鍵連接的兩個Fab片段的二價片段；(iii)由VH和CH1結構域組成的Fd片段；(iv)由抗體單臂的VL和VH結構域組成的Fv片段；(v)由VH結構域組成的dAb片段(參見Ward et al., Nature. 341:544-546(1989))；(vi)分離的互補決定區(CDR)；以及(vii)奈米抗體，一種包含單個可變結構域和兩個恆定結構域的重鏈可變區。此外，儘管Fv片段的兩個結構域VL和VH由不同基因編碼，但可以採用重組的方法透過合成連接子將VH和VL連接成單蛋白鏈，其中VL和VH配對形成單價分子(稱單鏈Fv (scFv)；參見例如Bird et al.,Science.242:423-426(1988)；Huston et al., Proc.Natl.Acad.Sci.85:5879-5883(1988))。這些單鏈抗體也涵蓋在術語抗體的“抗原結合部分/片段”中。此外，包含上述抗原結合部分/片段的重組多肽和融合蛋白也涵蓋在術語抗原結合部分/片段中。這些抗體片段可以由本領域技術人員已知的常規技術獲得，且可以透過與全長抗體相同的方法進行功能篩選。
“分離的抗體”是指基本上不含具有不同抗原特異性的其他抗體的抗體(例如，與IL-36R蛋白特異性結合的分離的抗體基本上不含特異性結合IL-36R蛋白以外抗原的抗體)。但是，特異性結合人IL-36R蛋白的分離抗體可能與其他抗原(例如，來自其他物種的IL-36R蛋白)具有交叉反應性。此外，分離的抗體基本上不含其他細胞成分和/或化學物質。
“小鼠抗體”或“鼠源抗體”是指可變區中骨架區和CDR區均來自小鼠種系免疫球蛋白序列的抗體。此外，如果抗體包含恆定區，則恆定區也來自小鼠種系免疫球蛋白序列。本發明的小鼠抗體可包括不由小鼠種系免疫球蛋白序列編碼的胺基酸殘基(例如，透過體外隨機突變或點突變或透過體內體細胞突變引入的突變)，但“小鼠抗體”不包括在小鼠骨架序列中插入源自其他哺乳動物種系CDR序列的抗體。
“嵌合抗體”是指透過將來自非人來源的遺傳物質和來自人的遺傳物質組合而成的抗體。或更籠統地說，嵌合抗體是指具有來自一種物種的遺傳物質和來自另一物種的遺傳物質的抗體。在本發明中，嵌合抗體也被表示為“xi”。
“人源化抗體”是下述抗體：所述抗體含有衍生自非人抗體的互補決定區(CDR)和衍生自人抗體的骨架區以及恆定區。例如，本文提供的結合IL-36R的人源化抗體可以包含衍生自一種或多種鼠類抗體的CDR以及人骨架區和恆定區。因此，在一些實施方案中，本文提供的人源化抗體與所述抗體的CDR所衍生自的鼠類抗體結合IL-36R上的相同表位。本文提供了示例性人源化抗體。包含本文提供的重鏈CDR和輕鏈CDR的另外的結合IL-36R的人源化抗體或其變異體可以使用任何人骨架序列產生，並且也包括在本發明中。在一些實施方案中，適用於在本發明中使用的骨架序列包括在結構上與本文提供的骨架序列類似的那些骨架序列。可以在骨架區中進行另外修飾以改變本文提供的抗體的特性。此類另外的骨架修飾可以包括化學修飾，點突變以降低免疫原性或去除T細胞表位，或回復突變為原始種系序列中的殘基。在一些實施方案中，此類修飾包括對應於本文示例的突變的那些修飾，包括對種系序列的回復突變。例如，在一些實施方案中，本文提供的人源化抗體的VH和/或VL的人骨架區中的一個或多個胺基酸被回復突變為親代鼠類抗體中對應的胺基酸。在本發明中，人源化抗體也被表示為“hz”。
“同種型”是指由重鏈恆定區基因編碼的抗體類別(例如，IgM或IgG1)。
“辨識……的抗體”和“對……特異的抗體”在本文中與術語“與……特異性結合的抗體”和“特異性結合……的抗體”可互換使用。
“特異性結合人IL-36R”的抗體是指與人IL-36R蛋白(還可能是其他非人物種的IL-36R蛋白)結合但基本上不結合非IL-36R蛋白的抗體。優選地，抗體以“高親和力”結合人IL-36R，即以5.0×10
-8M或更小，優選為1.0×10
-8M或更小，更優選為5.0×10
-9M或更小的KD結合人IL-36R。
術語“基本上不結合”蛋白質或細胞是指不與蛋白質或細胞結合，或不以高親和力與其結合，即以1.0×10
-5M或更大，優選為1.0×10
-4M或更大，更優選為1.0×10
-3M或更大，更優選為1.0×10
-2M或更大的KD結合蛋白質或細胞。
術語“高親和力”對IgG而言，是指以1.0×10
-6M或更小，1.0×10
-7M或更小，優選為1.0×10
-8M或更小，更優選為5.0×10
-9M或更小的KD結合抗原。但對於其他抗體同種型，“高親和力”結合可能有所不同。例如，IgM同種型的“高親和力”結合是指以1.0×10
-6M或更小，優選為1.0×10
-7M或更小，更優選為1.0×10
-8M或更小的KD結合抗原。
“相同性”是指兩個核酸序列之間或兩個多肽之間的相似性。胺基酸序列的“相同性百分數(%)”是指將待比對序列與本文中所示的具體胺基酸序列進行比對並且如有必要的話為達到最大序列相同性百分數而引入空位後，並且不考慮任何守恆置換作為序列相同性的一部分時，待比對序列中與本文中所示的具體胺基酸序列的胺基酸殘基相同的胺基酸殘基百分數。本發明的序列相同性至少為80%，85%，90%或95%，優選為至少95%，非限制性實施例包括：80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、100%。相同性的胺基酸序列比對可以採用本領域範圍內的多種方式進行，例如BLAST、BLAST-2、ALIGN或Megalign(DNASTAR)軟體。本領域技術人員可決定用於比對序列的適宜參數，包括在比較序列的全長裡獲得最大比對需要的任何算法。
術語“EC50”，又稱半數有效濃度，是指在特定暴露時間後，能達到50%最大效應的抗體濃度。
術語“IC50”，又稱半數抑制濃度，是指相對於不存在抗體的情況，將特異性生物學或生化功能抑制50%的抗體濃度。
術語“抑制”或“阻斷”包括部分和完全抑制/阻斷。
術語“受試者”包括任何人或非人動物。術語“非人動物”包括所有脊椎動物，例如哺乳動物及非哺乳動物，優選哺乳動物，例如非人靈長類、羊、狗、貓、牛和馬。
術語“治療有效量”是指足以防止或改善疾病或病症相關症狀的量，優選引起疾病症狀的嚴重程度降低、無症狀期頻率和持續時間增加、或防止由疾病引起的損傷或無能的量。治療有效量與被治療的疾病相關，其中本領域技術人員可以方便地判別出實際的有效量。
如本文所用，“約”表示在本領域普通技術人員判定的對特定值可以接受的誤差範圍內，其部分取決於如何測量或測定該值，即測量系統的限制。例如，“約”按照本領域實踐可表示1倍或超過1倍標準偏差以內。或者，“約”可以表示多至±5%的範圍，例如在所給定的具體數值範圍±2%範圍內、±1%範圍內或±0.5%範圍內波動。當本申請或請求項中給出特定值時，除非另有說明，“約”的含義應認為是在該特定值的可接受的誤差範圍內。在本文中，除非另有說明，步驟參數或條件的值默認均由“約”修飾。
術語“X
n”和“Xaa”等同，是指未指定的胺基酸(Unspecified Amino Acid)，透過相關表述中的後續定義來指定其涵蓋的範圍。
術語“包括”、“含有”或“包含”及其變換形式應理解為“包括但不限於”，意味著除所列出的要素、組分和步驟外，還可涵蓋其它未指明的要素、組分和步驟。
除非另外特別說明，否則單數的使用包括複數。除非另外特別說明，否則詞語“一個”或“一種”意指“至少一個”或“至少一種”。除非另外說明，短語“至少一個”的含義等同於“一個或多個”的含義，“和/或”的使用意指“和”或者“或”。
本發明的多個方面在以下更加具體地加以描述。
本發明的抗IL-36R抗體或其抗原結合片段以高親和力結合IL-36R(例如，人IL-36R和猴IL-36R)。本發明的抗IL-36R抗體或其抗原結合片段：(a) 結合人IL-36R；(b) 結合猴IL-36R；(c) 阻斷IL-36與IL-36R的結合；和/或 (d) 抑制IL-36/IL-36R信號轉導(例如抑制IL-8、IL-6和/或GM-CSF的產生)，更具體地，在OVCAR8細胞和/或NHK細胞中抑制IL-36(hIL36α、hIL36β、hIL36γ)/IL-36R信號轉導，抑制IL-8的產生。
優選地，本發明的抗IL-36R抗體是人源化單株抗體。此外，本發明的抗IL-36R抗體可以是小鼠、人或嵌合單株抗體。
本發明的示例性抗體或其抗原結合片段按下文和實施例中所述內容進行結構和化學上的表徵。抗體或其抗原結合片段包含重鏈可變區(VH)和輕鏈可變區(VL)，所述重鏈可變區包含VH CDR1、VH CDR2和VH CDR3(即，重鏈CDR1、重鏈CDR2和重鏈CDR3)，所述輕鏈可變區包含VL CDR1、VL CDR2和VL CDR3(即，輕鏈CDR1、輕鏈CDR2和輕鏈CDR3)，其中示例性重鏈可變區、輕鏈可變區和CDR的胺基酸序列ID(SEQ ID NO.)提供於下表1.1和表1.2中。一些抗體具有相同的CDR，一些抗體具有相同的VH或VL。抗體的重鏈恆定區可以是包含SEQ ID NO: 69所示胺基酸序列的人IgG1重鏈恆定區、或包含SEQ ID NO: 71所示胺基酸序列的人IgG4重鏈恆定區，或者是與SEQ ID NOs: 69或71所示胺基酸序列相比具有1、2、3、4或5個胺基酸取代、刪除和添加的變異體。抗體的輕鏈恆定區可以是包含SEQ ID NO: 73所示胺基酸序列的人κ輕鏈恆定區，或者是與SEQ ID NO: 73所示胺基酸序列相比具有1、2、3、4或5個胺基酸取代、刪除和添加的變異體。這些抗體也可以包含小鼠IgG1或小鼠IgG4重鏈恆定區，和/或小鼠κ輕鏈恆定區。
本發明的示例性抗體或其抗原結合片段的可變區和CDR的胺基酸序列如表1.1所示。然而，如本領域所公知的，CDR區或“互補決定區”也可以基於重/輕鏈可變區序列由其他編號系統例如Kabat(參見，Kabat 等人，免疫學的蛋白質序列，第五版，美國國立衛生研究院，貝塞斯達，馬裡蘭州(1991)、Chothia(參見JMol Biol 273:927-48, 1997)、IMGT(Lefranc M.P.，Immunologist，7，132-136(1999)；Lefranc，M.P.等，Dev. Comp. Immunol.，27，55-77(2003)、AbM(Oxford Molecular 的AbM 抗體建模35 軟體定義)或Contact(基於對可用複雜晶體結構的分析)編號系統/方法確定，CDR區也可以基於Kabat、Chothia、IMGT、AbM 和Contact 定義規則中的兩種或多種組合確定。例如，表1.2中所示的CDR區由Kabat編號系統定義。本領域技術人員應當理解的是，除非另有規定，否則術語給定抗體或其區(例如可變區)的“CDR”應瞭解為涵蓋透過任何一種已知方案界定的CDR。在涉及用本申請某些劃分定義的具體CDR序列限定抗體時，所述抗體的範圍還涵蓋了轉換為其他任意編號系統定義(例如本領域所公知的Kabat、Chothia、IMGT或Contact等定義中的一種或幾種的結合)的CDR序列限定的抗體。
表1.1 可變區和CDR的胺基酸序列ID(SEQ ID NO.)
表1.2 由Kabat編號系統定義的CDR的胺基酸序列ID(SEQ ID NO.)
| 抗體 | VH CDR1 | VH CDR2 | VH CDR3 | VH | VL CDR1 | VL CDR2 | VL CDR3 | VL |
| 小鼠/嵌合72C1 | 1 | 2, X 1=S | 3 | 7 | 4 | 5 | 6, X 2=F | 15 |
| hz72C1-1.1 | 2, X 1=S | 9 | 6, X 2=F | 17 | ||||
| hz72C1-1.2 | 2, X 1=S | 11 | 6, X 2=F | |||||
| hz72C1-1.3 | 2, X 1=Y | 13 | 6, X 2=F | |||||
| hz72C1-2.1 | 2, X 1=S | 9 | 6, X 2=Y | 19 | ||||
| hz72C1-2.2 | 2, X 1=S | 11 | 6, X 2=Y | |||||
| hz72C1-2.3 | 2, X 1=Y | 13 | 6, X 2=Y | |||||
| 小鼠/嵌合84C4 | 21, X 3=F | 22, X 4=M,X 5=H, X 6=L,X 7=N,X 8=K | 23 | 27 | 24 | 25 | 26 | 39 |
| hz84C4-1.1 | 21, X 3=F | 22, X 4=M,X 5=H, X 6=Y,X 7=A,X 8=Q | 29 | 41 | ||||
| hz84C4-1.2 | 21, X 3=F | 22, X 4=Y,X 5=H, X 6=Y,X 7=A,X 8=Q | 31 | |||||
| hz84C4-1.3 | 21, X 3=F | 22, X 4=M,X 5=Y, X 6=Y,X 7=A,X 8=Q | 33 | |||||
| hz84C4-1.4 | 21, X 3=Y | 22, X 4=M,X 5=H, X 6=L,X 7=A,X 8=K | 35 | |||||
| hz84C4-1.5 | 21, X 3=F | 22, X 4=M,X 5=H, X 6=L,X 7=A,X 8=K | 37 | |||||
| hz84C4-2.1 | 21, X 3=F | 22, X 4=M,X 5=H, X 6=Y,X 7=A,X 8=Q | 29 | 43 | ||||
| hz84C4-2.2 | 21, X 3=F | 22, X 4=Y,X 5=H, X 6=Y,X 7=A,X 8=Q | 31 | |||||
| hz84C4-2.3 | 21, X 3=F | 22, X 4=M,X 5=Y, X 6=Y,X 7=A,X 8=Q | 33 | |||||
| hz84C4-2.4 | 21, X 3=Y | 22, X 4=M,X 5=H, X 6=L,X 7=A,X 8=K | 35 | |||||
| hz84C4-2.5 | 21, X 3=F | 22, X 4=M,X 5=H, X 6=L,X 7=A,X 8=K | 37 | |||||
| 小鼠/嵌合74B4D6 | 45 | 46 | 47 | 51 | 48 | 49 | 50 | 52 |
| 小鼠/嵌合58A8D1 | 53 | 54 | 55 | 59 | 56 | 57 | 58 | 60 |
| 小鼠/嵌合6G10 | 61 | 62 | 63 | 67 | 64 | 65 | 66 | 68 |
| 抗體 | VH CDR1 | VH CDR2 | VH CDR3 | VL CDR1 | VL CDR2 | VL CDR3 |
| 小鼠/嵌合72C1 | 85 | 2, X 1=S | 3 | 4 | 5 | 6, X 2=F |
| hz72C1-1.1 | 2, X 1=S | 6, X 2=F | ||||
| hz72C1-1.2 | 2, X 1=S | 6, X 2=F | ||||
| hz72C1-1.3 | 2, X 1=Y | 6, X 2=F | ||||
| hz72C1-2.1 | 2, X 1=S | 6, X 2=Y | ||||
| hz72C1-2.2 | 2, X 1=S | 6, X 2=Y | ||||
| hz72C1-2.3 | 2, X 1=Y | 6, X 2=Y | ||||
| 小鼠/嵌合84C4 | 86 | 22, X 4=M,X 5=H, X 6=L,X 7=N,X 8=K | 23 | 87 | 25 | 26 |
| hz84C4-1.1 | 22, X 4=M,X 5=H, X 6=Y,X 7=A,X 8=Q | |||||
| hz84C4-1.2 | 22, X 4=Y,X 5=H, X 6=Y,X 7=A,X 8=Q | |||||
| hz84C4-1.3 | 22, X 4=M,X 5=Y, X 6=Y,X 7=A,X 8=Q | |||||
| hz84C4-1.4 | 22, X 4=M,X 5=H, X 6=L,X 7=A,X 8=K | |||||
| hz84C4-1.5 | 22, X 4=M,X 5=H, X 6=L,X 7=A,X 8=K | |||||
| hz84C4-2.1 | 22, X 4=M,X 5=H, X 6=Y,X 7=A,X 8=Q | |||||
| hz84C4-2.2 | 22, X 4=Y,X 5=H, X 6=Y,X 7=A,X 8=Q | |||||
| hz84C4-2.3 | 22, X 4=M,X 5=Y, X 6=Y,X 7=A,X 8=Q | |||||
| hz84C4-2.4 | 22, X 4=M,X 5=H, X 6=L,X 7=A,X 8=K | |||||
| hz84C4-2.5 | 22, X 4=M,X 5=H, X 6=L,X 7=A,X 8=K | |||||
| 小鼠/嵌合74B4D6 | 88 | 46 | 47 | 48 | 49 | 50 |
| 小鼠/嵌合58A8D1 | 89 | 54 | 55 | 56 | 57 | 58 |
| 小鼠/嵌合6G10 | 90 | 62 | 63 | 64 | 65 | 66 |
與人IL36R結合的其他抗IL-36R抗體的VH和/或VL序列(或CDR序列)可以與本發明的抗IL-36R抗體的VH和/或VL序列(或CDR序列)“混合並配對”。優選地，當VH和VL鏈(或其CDR)混合並配對時，特定VH/VL對中的VH序列可以被結構相似的VH序列取代。同樣，優選地將特定VH/VL對中的VL序列可以被結構相似的VL序列取代。
因此，在一個實施方案中，本發明的抗體或其抗原結合片段包括：
(a)重鏈可變區，其包含列於表1.1中的胺基酸序列，和
(b)輕鏈可變區，其包含列於表1.1中的胺基酸序列，或另一種抗IL-36R抗體的VL；其中該抗體或其抗原結合片段特異性結合人IL36R。
在另一個實施方案中，本發明的抗體或其抗原結合片段包括：
(a)列於表1.1或表1.2的VH CDR1、VH CDR2和VH CDR3，和
(b)列於表1.1或表1.2的VL CDR1、VL CDR2和VL CDR3，或另一種抗IL-36R抗體的輕鏈可變區的CDR；其中該抗體或其抗原結合片段特異性結合人IL36R。在另一個實施方案中，本發明的抗體或其抗原結合片段包括本發明的抗IL-36R抗體的重鏈可變區的CDR2以及其他結合人IL-36R抗體的CDR，例如，另一抗IL-36R抗體的重鏈可變區的CDR1和/或CDR3，和/或輕鏈可變區的CDR1，CDR2和/或CDR3；其中該抗體或其抗原結合片段特異性結合人IL36R。
此外，本領域內公知，不依賴於CDR1和/或CDR2結構域，CDR3結構域可以單獨確定抗體對同種抗原的結合特異性，並且基於共同的CDR3序列可以預測性地產生具有相同結合特異性的多種抗體。在一個實施方案中，本發明的抗體或其抗原結合片段包括本發明的抗IL-36R抗體的重和/或輕鏈可變區的CDR3以及其他結合人IL-36R抗體的CDR，例如，另一抗IL-36R抗體的重鏈可變區的CDR1和/或CDR2，和/或輕鏈可變區的CDR1和/或CDR2；其中該抗體或其抗原結合片段特異性結合人IL36R。在另一個實施方案中，本發明的抗體或其抗原結合片段包含本發明的抗IL-36R抗體的重鏈可變區的CDR2，以及本發明的抗IL-36R抗體的重和/或輕鏈可變區的CDR3或另一種抗IL-36R抗體的重和/或輕鏈可變區的CDR3，其中該抗體或其抗原結合片段特異性結合人IL-36R。優選地，這些抗體與本發明的抗IL-36R抗體(a)競爭結合IL36R；(b)保留功能特徵；(c)結合相同的表位；和/或(d)具有相似的結合親和力。在另一個實施方案中，本發明的抗體或其抗原結合片段進一步包含本發明的抗IL-36R抗體的輕鏈可變區的CDR2或另一種抗IL-36R抗體的輕鏈可變區的CDR2，其中該抗體或其抗原結合片段特異性結合人IL36R。在另一個實施方案中，本發明的抗體或其抗原結合片段進一步包括本發明的抗IL-36R抗體的重和/或輕鏈可變區的CDR1或另一種抗IL-36R抗體的重和/或輕鏈可變區的CDR1，其中該抗體或其抗原結合片段特異性結合人IL36R。
在另一個實施方案中，本發明的抗體或其抗原結合片段包含不同於本發明的抗IL-36R抗體的重和/或輕鏈可變區的CDR1，CDR2和CDR3序列，所述不同源自一個或多個守恆修飾。本領域應理解，一些守恆的序列修飾不會使抗原結合性消失。
因此，在一個實施方式中，本發明的抗體或其抗原結合片段包含重鏈可變區和/或輕鏈可變區，重鏈可變區和輕鏈可變區分別包含CDR1、CDR2和CDR3，其中：
(a)重鏈可變區的CDR1序列包含表1.1或表1.2列出的序列，和/或其守恆修飾；和/或
(b)重鏈可變區的CDR2序列包含表1.1或表1.2列出的序列，和/或其守恆修飾；和/或
(c)重鏈可變區的CDR3序列包含表1.1或表1.2列出的序列，和/或及其守恆修飾；和/或
(d)輕鏈可變區的CDR1和/或CDR2和/或CDR3序列包含表1.1或表1.2列出的序列；和/或其守恆修改；且
(e)抗體特異性結合人IL36R。
術語“守恆序列修飾”是指不顯著影響或改變抗體結合特性的胺基酸修飾。這樣的守恆修飾包括胺基酸取代、添加和刪除。可以透過本領域已知的標準技術將修飾引入本發明的抗體中，例如點突變和PCR媒介的突變。守恆胺基酸取代是指胺基酸殘基被具有相似側鏈的胺基酸殘基取代。具有相似側鏈的胺基酸殘基組在本領域中已知。這些胺基酸殘基組包括具有鹼性側鏈(例如，離胺酸，精胺酸，組胺酸)，酸性側鏈(例如，天冬胺酸，麩胺酸)，不帶電極性側鏈(例如，甘胺酸，天冬醯胺，麩醯胺酸，絲胺酸，蘇胺酸，酪胺酸，半胱胺酸，色胺酸)，非極性側鏈(例如，丙胺酸，纈胺酸，白胺酸，異白胺酸，脯胺酸，苯丙胺酸，甲硫胺酸)，β支鏈側鏈(例如，蘇胺酸，纈胺酸，異白胺酸)和芳香族側鏈(例如，酪胺酸，苯丙胺酸，色胺酸，組胺酸)的胺基酸。因此，本發明的抗體的CDR中一個或多個胺基酸殘基可以被同一側鏈組的其他胺基酸殘基取代，且得到的抗體可以使用本文所述的功能檢測方法對其進行保留功能的檢測。
本發明的抗體可以用具備本發明的抗IL-36R抗體的一個或多個VH/VL序列的抗體作為起始材料來工程化產生修飾抗體。可以對抗體的一個或兩個可變區(即，VH和/或VL)內(例如，在一個或多個CDR區和/或一個或多個骨架區)的一個或多個殘基進行工程化修飾。此外或可替代地，可以對恆定區中的殘基進行修飾，以例如改變抗體的效應功能。
某些實施方案中，CDR移植可以用來修飾抗體的可變區。抗體主要透過位於重鏈和輕鏈的六個互補決定區(CDR)中的胺基酸殘基與標的抗原進行相互作用。因此，CDR內的胺基酸序列比CDR外的胺基酸序列在各種抗體之間更加地多樣。因為CDR序列負責主要的抗體-抗原相互作用，可以透過建構這樣的表現載體，其中特定天然抗體的CDR序列移植到具有不同特性的另一抗體的骨架區序列，來表現模擬特定天然抗體特性的重組抗體(參見，例如，Riechmann et al., (1998) Nature 332:323-327; Jones et al., (1986) Nature 321:522-525; Queen et al., (1989) Proc. Natl. Acad. 另外參見U.S.A. 86:10029-10033; 美國專利5,225,539; 5,530,101; 5,585,089; 5,693,762 和 6,180,370)
因此，本發明的另一些實施方案涉及分離的單株抗體或其抗原結合片段，其包含重鏈可變區和/或輕鏈可變區，所述重鏈可變區包含本發明上述的重鏈CDR1、重鏈CDR2和重鏈CDR3，輕鏈可變區包含本發明上述的輕鏈CDR1、輕鏈CDR2和輕鏈CDR3。儘管這些抗體包含本發明的單株抗體VH和VL的CDR序列，它們可以含有不同的骨架序列。
這樣的骨架序列可以從包括抗體基因序列的公開DNA資料庫或參考文獻中獲得。例如，用於人重鏈可變區基因和人輕鏈可變區基因的DNA序列可以在Vbase人種系序列資料庫(www.mrc-cpe.cam.ac.uk/vbase)以及Kabat et al., (1991)，同上；Tomlinson et al., (1992) J. Mol. Biol. 227:776-798; and Cox et al., (1994) Eur. J. Immunol. 24:827-836文獻中獲得，其內容各以引用的方式明確地併入本文。另一個實施方案中，用於人重鏈可變區和人輕鏈可變區基因的DNA序列可以在Genbank資料庫中獲得。使用本領域技術人員所熟知的Gapped BLAST序列相似性搜索方法(Altschul et al., (1997)，同上)，將抗體蛋白序列與編譯蛋白序列的資料庫進行比較。
本發明所用的抗體骨架序列，優選在結構上與本發明的抗體骨架序列相似的那些。可以將VH CDR1、VH CDR2和VH CDR3序列移植到與得到該骨架序列的種系免疫球蛋白基因中具有相同序列的骨架區中，或者CDR序列可以移植到包含與種系序列相比具有一個或多個突變的骨架區中。例如，在一些情況下，將骨架區中的殘基進行突變是有益的，可以保持或增強抗體的抗原結合能力(參見例如美國專利5,530,101；5,585,089；5,693,762和6,180,370)。
另一類可變區修飾是將VH和/或VL的CDR1、CDR2和/或CDR3內的胺基酸殘基進行突變，從而改善目標抗體的一種或多種結合特性(例如，親和力)。可以透過點突變或PCR媒介的突變引入突變，並且可以透過本領域已知的體外或體內檢測評估突變對抗體結合或其他功能特性的影響。優選地，引入本領域已知的守恆修飾。突變可以是胺基酸取代、添加或刪除，但優選為取代。此外，通常改變每個CDR內不多於一個、兩個、三個、四個或五個殘基。
此外，在另一個實施方案中，本發明提供分離的抗IL-36R單株抗體或其抗原結合片段，包含重鏈可變區和輕鏈可變區，所述重鏈可變區和輕鏈可變區包含：
(a) VH CDR1，其包含本發明的VH CDR1序列，或具有一個、兩個、三個、四個或五個胺基酸取代、刪除或添加的胺基酸序列；
(b) VH CDR2，其包含本發明的VH CDR2序列，或具有一個、兩個、三個、四個或五個胺基酸取代、刪除或添加的胺基酸序列；
(c) VH CDR3，其包含本發明的VH CDR3序列，或具有一個、兩個、三個、四個或五個胺基酸取代、刪除或添加的胺基酸序列；
(d) VL CDR1，其包含本發明的VL CDR1序列，或具有一個、兩個、三個、四個或五個胺基酸取代、刪除或添加的胺基酸序列；
(e) VL CDR2，其包含本發明的VL CDR2序列，或具有一個、兩個、三個、四個或五個胺基酸取代、刪除或添加的胺基酸序列；和
(f) VL CDR3，其包含本發明的VL CDR3序列，或具有一個、兩個、三個、四個或五個胺基酸取代、刪除或添加的胺基酸序列。
本發明的工程化抗體包括在VH和/或VL的骨架區殘基中進行修飾以例如改變抗體特性的那些抗體。通常而言，此類骨架區修飾可用來降低抗體的免疫原性。例如，將一個或多個骨架區殘基“回復突變”成相應的種系序列。更具體地，經歷體細胞突變的抗體可能包含不同於得到該抗體的種系序列的骨架殘基。這些殘基可以透過將抗體骨架序列與得到該抗體的種系序列相比較而辨識出來。
另一類的骨架區修飾包括對骨架區、或者甚至一個或多個CDR的一個或多個殘基進行突變，以去除T細胞表位，從而減少抗體可能導致的免疫原性。該方法也稱為“去免疫化”，在美國專利公開20030153043中有更加詳細的描述。
此外，作為骨架區或CDR修飾之外的另一種選擇，可以對本發明的抗體的Fc進行修飾，通常用來改變抗體的一個或多個功能特性，例如血清半衰期、補體結合、Fc受體結合、和/或抗體依賴的細胞毒性。此外，還可以對本發明的抗體進行化學修飾(例如，可以將一個或多個化學功能基團連接至抗體)，或者修飾以改變其糖基化，來改變抗體的一個或多個功能特性。
在一個實施方案中，對樞紐區進行修飾，從而改變(例如增加或減少)樞紐區的半胱胺酸殘基的數量。該方法在美國專利5,677,425中有具體描述。改變樞紐區的半胱胺酸殘基的數量，例如可以促進重鏈和輕鏈的組裝、或增加或降低抗體的穩定性。
在另一個實施方案中，對抗體的Fc-樞紐區進行突變，以增加或降低抗體的生物半衰期。更具體地，將一個或多個胺基酸突變引入Fc-樞紐片段的CH2-CH3連接區，使得抗體相對於天然Fc-樞紐結構域，具有減弱的葡萄球菌A蛋白(SpA)結合力。該方法在美國專利6,165,745中有更詳細的描述。
在另一個實施方案中，改變抗體的糖基化。例如，製備去糖基化的抗體(即，抗體缺少糖基化)。這樣的糖化修飾可以透過例如改變抗體序列中的一個或多個糖基化位址來實現。例如，可以進行一個或多個胺基酸替換，以消除一個或多個可變區的骨架區的糖基化位址，從而消除該位址的糖基化。這樣的去糖基化可以增加抗體對抗原的親和性。參見，例如美國專利5,714,350和6,350,861。
此外，可以製備糖基化類型改變的抗體，例如岩藻糖殘基量減少的低岩藻糖基化抗體，或者具有增加的平分型GlcNac結構的抗體。已經證明這種糖基化類型的改變能增加抗體的ADCC活性。這樣的糖修飾可以透過例如在糖基化機制改變的宿主細胞中表現抗體來實現。糖基化機制改變的細胞在本領域中已知，且可以用作表現本發明的重組抗體的宿主細胞，以製備糖基化類型改變的抗體。
抗體的另一種修飾是聚乙二醇化(PEG化)。將抗體PEG化，可以增加抗體的生物(例如，血清)半衰期。為使抗體PEG化，將抗體或其片段與聚乙二醇(PEG)，例如PEG的反應性酯或醛類衍生物，在使一個或多個PEG基團附著於抗體或抗體片段的條件下反應。優選地，透過與反應性PEG分子(或類似的有反應性的水溶性聚合物)的醯化反應或烷化反應進行PEG化。術語“聚乙二醇”包括用於衍生其他蛋白的任何形式的PEG，例如單(C1-C10)烷氧基聚乙二醇或芳氧基聚乙二醇或聚乙二醇-馬來醯亞胺。PEG化蛋白的方法在本領域是已知的，且可以用於本發明的抗體。參見，例如EP0154316和EP0401384。
各抗體具有獨特的等電點(pI)，通常落在6-9.5的pH範圍內。IgG1抗體的pI通常落在7-9.5的pH範圍內，而IgG4抗體的pI基本落在6-8的pH範圍內。推測pI在正常範圍外的抗體在體內可能會發生一些解折疊且不穩定。因此，優選pI值落在正常範圍內的抗IL-36R抗體。這可以透過選擇pI在正常範圍內的抗體或透過突變帶電的表面殘基來實現。
在另一方面，本發明提供了編碼本發明的抗體的重鏈可變區和/或輕鏈可變區或CDR的核酸分子。核酸分子可以存在於完整細胞中、細胞裂解液中、或以部分純化或基本上純的形式存在。當透過標準技術將核酸分子從其他細胞組分或其他污染物例如其他細胞核酸或蛋白中純化出來後，核酸分子是“分離的”或“基本上純的”。本發明的核酸分子可以是DNA或RNA，且可包含或不包含內含子序列。在優選的實施方案中，核酸分子是cDNA分子。
本發明的核酸可以透過標準的分子生物學技術獲得。對於由融合瘤表現的抗體，可以透過標準PCR擴增或cDNA選殖技術獲得編碼融合瘤製備的抗體的輕鏈和重鏈的cDNA。對於從免疫球蛋白基因序列庫(例如使用噬菌體展示技術)中獲得的抗體，可以從基因序列庫中回收編碼這類抗體的核酸。
優選地，本發明的核酸分子包括編碼本發明的抗IL-36R單株抗體的VH和VL序列或CDR的那些核酸分子。一旦獲得了編碼VH和VL的DNA片段，可以透過標準重組DNA技術對這些DNA片段進行進一步操作，例如將可變區基因轉變為全長抗體鏈基因、Fab片段基因或scFv基因。在這些操作中，將編碼VH或VL的DNA片段與編碼另一蛋白(例如抗體恆定區或柔性連接子)的DNA片段可操作地連接。這種情況下所使用的術語“可操作地連接”是指兩個DNA片段連接在一起，從而使兩個DNA片段編碼的胺基酸序列都在閱讀框內。
將編碼VH的DNA與編碼重鏈恆定區(CH1、CH2和CH3)的另一DNA分子可操作地連接，可以將編碼VH的分離的DNA轉變成全長重鏈基因。人重鏈恆定區基因的序列是本領域已知的，且可以透過標準PCR擴增獲得包括人重鏈恆定區基因的DNA片段。重鏈恆定區可以是IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgA、IgE、IgM或IgD恆定區，但優選為IgG1或IgG4恆定區。對於Fab片段重鏈基因，可將編碼VH的DNA可操作地連接至僅編碼重鏈CH1恆定區的另一DNA分子。
將編碼VL的DNA與編碼輕鏈恆定區CL的另一DNA分子可操作地連接，可以將編碼VL的分離的DNA轉變成全長輕鏈基因。人輕鏈恆定區基因的序列是本領域已知的，且可以透過標準PCR擴增獲得包括人輕鏈恆定區基因的DNA片段。在優選的實施方案中，輕鏈恆定區可以是κ或λ恆定區。
為了製備scFv基因，將編碼VH和VL的DNA片段可操作地連接至編碼柔性連接子例如編碼胺基酸序列(Gly4-Ser)3的另一片段，使得VH和VL序列可以表現為連續的單鏈蛋白，其中VL和VH區域透過該柔性連接子連接(參見，例如Bird et al., (1988) Science 242:423-426; Huston et al., (1988) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 85:5879-5883; McCafferty et al., (1990) Nature 348:552-554)。
本發明的單株抗體(mAbs)可以使用本領域熟知的Kohler and Milstein (1975) Nature 256: 495的體細胞雜交(融合瘤)技術進行製備。製備單株抗體的其他實施方案包括B淋巴細胞的病毒或致癌性轉化以及噬菌體展示技術。嵌合或人源化抗體也是本領域熟知的。參見，例如美國專利4,816,567；5,225,539；5,530,101；5,585,089；5,693,762和6,180,370，其全部內容透過引用的方式明確地併入本文。
本發明的抗體還可以使用例如重組DNA技術結合基因轉染的方法，在宿主細胞轉染瘤中製備(例如Morrison, S. (1985) Science 229:1202)。在一個實施方案中，將透過標準分子生物技術得到的編碼部分或全長輕鏈和重鏈的DNA插入一個或多個表現載體中，使得基因可操作地連接至轉錄和轉譯調控序列。在這種情況下術語“可操作地連接”是指抗體基因連接到載體中，使得載體內的轉錄和轉譯調控序列行使它們既定的調控抗體基因轉錄和轉譯的功能。
術語“調控序列”包括控制抗體基因轉錄或轉譯的啟動子、增強子和其他表現控制元件(例如，多腺苷酸化信號)。這樣的調控序列在例如Goeddel(Gene Expression Technology. Methods in Enzymology 185, Academic Press, San Diego, Calif. (1990))中有過描述。優選的，用於哺乳動物宿主細胞表現的調控序列包括在哺乳動物細胞中的引導高位準蛋白表現的病毒元件，例如源自巨細胞病毒(CMV)、猿猴病毒40(SV40)、腺病毒(如腺病毒主要晚期啟動子(AdMLP))和多瘤病毒的啟動子和/或增強子。或者，可以使用非病毒調控序列，例如泛素啟動子或β-珠蛋白啟動子。另外，調控元件由不同來源的序列構成，例如SRα啟動子系統，其包含來自SV40早期啟動子的序列和人T細胞白血病病毒1型的長末端重複序列(Takebe et al., (1988) Mol. Cell. Biol. 8:466-472)。選擇與所使用的表現宿主細胞相容的表現載體和表現調控序列。
抗體輕鏈基因和抗體重鏈基因可以插入到同一或不同的表現載體中。在優選的實施方案中，將可變區插入到已經編碼所需同種型的重鏈恆定區和輕鏈恆定區的表現載體中建構全長抗體基因，使VH與載體中的CH可操作地連接，VL與載體中的CL可操作地連接。此外，重組表現載體可以編碼促進抗體鏈從宿主細胞分泌的信號胜肽。抗體鏈基因可以選殖到載體中，使得信號胜肽在閱讀框內連接到抗體鏈基因的胺基端。信號胜肽可以是免疫球蛋白信號胜肽或異源信號胜肽(即，來自非免疫球蛋白的信號胜肽)。
除抗體鏈基因和調控序列外，本發明的重組表現載體還可以攜帶其他序列，例如調控載體在宿主細胞中複製的序列(例如，複製起始點)和可選擇標記物基因。
為了表現輕鏈和重鏈，透過標準技術將編碼重鏈和輕鏈的表現載體轉染到宿主細胞中。不同形式的“轉染”包括多種常用於將外源DNA導入原核或真核宿主細胞的技術，例如，電穿孔、磷酸鈣沉澱、DEAE-葡聚糖轉染等。儘管在原核或真核宿主細胞中表現本發明的抗體在理論上是可行的，但抗體優選在真核細胞中表現，最優選在哺乳動物宿主細胞中表現，因為真核細胞，特別是哺乳動物細胞，比原核細胞更可能組裝抗體並分泌適當折疊且有免疫活性的抗體。優選的用於表現本發明的重組抗體的哺乳動物宿主細胞包括中國倉鼠卵巢(CHO細胞)(包括與DHFR可選擇標記物一起使用的dhfr-CHO細胞，在Urlaub and Chasin, (1980) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 77:4216-4220中有過描述，DHFR可選擇標記物在例如R. J. Kaufman and P. A. Sharp (1982) J. Mol. Biol. 159:601-621中描述)、NSO骨髓瘤細胞、COS細胞和SP2細胞。特別是在使用NSO骨髓瘤細胞時，另一優選的表現系統是GS基因表現系統，記載於WO 87/04462、WO 89/01036和EP 338,841。當編碼抗體基因的重組表現載體導入哺乳動物宿主細胞後，透過將宿主細胞培養足以使得宿主細胞中抗體表現、或優選足以使得使抗體分泌到宿主細胞生長的培養基中的一段時間來製備抗體。抗體可以使用標準蛋白純化方法從培養基中回收得到。
另一方面，本發明提供了藥物組成物，其包含一個或多個本發明的抗IL-36R抗體或其抗原結合片段、多特異性分子、免疫綴合物、CAR-T細胞、基因載體或核酸分子，以及藥學上可接受的賦形劑、稀釋劑或載劑。在一些實施方案中，所述藥物組成物可以任選地包含一種或多種其他藥學上的有效成分，例如另一種抗體(例如抗IgE抗體)或藥物。
本發明的藥物組成物適合於靜脈內、肌肉內、皮下、腸道外、脊柱或表皮施用(例如透過注射或輸液)。基於給藥途徑，可以將活性成分包覆在材料中，以保護其不受酸和可能使其失活的其他自然條件的影響。本文所用的短語“腸道外施用”是指除腸內和局部施用以外的施用方式，通常採用注射，並且包括但不限於靜脈內、肌肉內、動脈內、鞘內、囊內、眶內、心內、皮內、腹膜內、經氣管、皮下、表皮下、關節內、囊下、蛛網膜下、脊柱內、硬膜外和胸骨內注射和輸液。或者，本發明的藥物組成物可以透過非腸道外途徑施用，例如局部、表皮或粘膜途徑施用，如鼻內、口服、陰道、直腸、舌下或局部施用。
本發明的藥物組成物可以為無菌水溶液或分散液的形式。它們也可以配製在微乳劑、脂質體或其他適於高濃度藥物的有序結構中。
給藥方案經調整提供最佳的所需反應(例如，治療反應)。例如，可以施用單次大劑量，可以隨時間推移施用多個分劑量，或者可以隨治療情況的危急程度成比例降低或提高劑量。特別有利的是，以易於施用和劑量均勻的劑量單位形式配製腸道外施用的組成物。此處所用的劑量單位形式是指適於待治療受試者的單一劑量的物理上離散的單位，每個單位包含經計算可與所需的藥物載體一起產生所需的治療效果的預定量的活性成分。或者，抗體可以作為緩釋劑施用，這種情況下所需的施用頻率降低。
對於抗體的施用，劑量可以為0.0001至100 mg/kg宿主體重的範圍內。
本發明的抗IL-36R抗體或其抗原結合片段具有多種體外和體內應用，涉及IL-36/IL-36R媒介的相關疾病和病症的診斷、治療和/或預防。本發明的抗IL-36R抗體或其抗原結合片段、藥物組成物、多特異性分子、免疫綴合物、CAR-T細胞、基因載體或核酸分子可以施用至人受試者，以預防、減輕、緩解或治療所述IL-36/IL-36R媒介的相關疾病和病症。
另一方面，本發明提供了一種在受試者中抑制IL-36/IL-36R信號轉導的方法，其包括向所述受試者施用治療有效量的本發明的抗IL-36R抗體或其抗原結合片段、藥物組成物、多特異性分子、免疫綴合物、CAR-T細胞、基因載體或核酸分子。在一些實施方案中，所述受試者是人。在一些實施方案中，所述受試者患有自身免疫性疾病、發炎疾病、呼吸系統疾病、代謝失調或癌症。
另一方面，本發明提供了一種在受試者中治療或預防IL-36/IL-36R媒介的相關疾病和病症的方法，其包括向所述受試者施用治療有效量的本發明的抗IL-36R抗體或其抗原結合片段、藥物組成物、多特異性分子、免疫綴合物、CAR-T細胞、基因載體或核酸分子。在一些實施方案中，所述受試者是人。
在一些具體的實施方案中，在所述應用和方法中，所述IL-36/IL-36R媒介的相關疾病和病症包括自身免疫性疾病、發炎疾病、呼吸系統疾病、代謝失調或癌症等。在一些具體的實施方案中，在所述應用和方法中，所述IL-36/IL-36R媒介的相關疾病和病症包括銀屑病、掌蹠膿皰病、異位性皮膚炎、發炎腸病、腎炎、化膿性汗腺炎和/或類風濕性關節炎等。在一些具體的實施方案中，在所述應用和方法中，所述IL-36/IL-36R媒介的相關疾病和病症包括癌症，例如固態腫瘤或非固態腫瘤。
另一方面，本發明提供了組合療法，其中本發明的抗IL-36R抗體或其抗原結合片段與一種或多種其他抗體或其他藥物共同施用，所述其他抗體或其他藥物能夠預防、減輕、緩解或治療IL-36/IL-36R媒介的相關疾病和病症。在一些實施方案中，所述IL-36/IL-36R媒介的相關疾病和病症包括自身免疫性疾病、發炎疾病、呼吸系統疾病、代謝失調或癌症等。
在一些具體的實施方案中，所述IL-36/IL-36R媒介的相關疾病和病症包括銀屑病、掌蹠膿皰病、異位性皮膚炎、發炎腸病、腎炎、化膿性汗腺炎和/或類風濕性關節炎等。在一些具體的實施方案中，本發明提供了一種在受試者中治療或預防銀屑病、掌蹠膿皰病、異位性皮膚炎、發炎腸病、腎炎、化膿性汗腺炎和/或類風濕性關節炎的方法，其包括向受試者施用本發明的抗IL-36R抗體或其抗原結合片段和一種或多種另外的抗體，例如IgE抗體、抗IL4抗體、抗IL13抗體和/或抗IL5抗體。在一些具體的實施方案中，本發明提供了一種在受試者中治療或預防銀屑病、掌蹠膿皰病、異位性皮膚炎、發炎腸病、腎炎、化膿性汗腺炎和/或類風濕性關節炎的方法，其包括向受試者施用本發明的抗IL-36R抗體或其抗原結合片段和一種或多種另外的藥物，例如抗過敏藥。其他可以與本發明的抗IL-36R抗體或其抗原結合片段組合的療法還包括：減少或避免變應原接觸、激素治療、手術等。在一些實施方案中，所述受試者是人。
在一些具體的實施方案中，所述IL-36/IL-36R媒介的相關疾病和病症包括癌症，例如固態腫瘤或非固態腫瘤。在一些具體的實施方案中，本發明提供了一種在受試者中治療或預防癌症的方法，其包括向受試者施用本發明的抗IL-36R抗體或其抗原結合片段和一種或多種另外的抗體，例如抗PD-1抗體、抗PD-L1抗體和/或抗CTLA-4抗體。在一些具體的實施方案中，本發明提供了一種在受試者中治療或預防癌症的方法，其包括向受試者施用本發明的抗IL-36R抗體或其抗原結合片段和一種或多種另外的藥物，例如小分子抗癌劑，例如化療劑。其他可以與本發明的抗IL-36R抗體或其抗原結合片段組合的療法還包括：手術和放射治療等。在一些實施方案中，所述受試者是人。
自身免疫性疾病是指由免疫系統過度活化引起的機體攻擊和損害自身組織的任何疾病、失調或症狀，例如，多發性硬化症、硬皮病、哮喘、化膿性汗腺炎、關節炎(包括類風濕性關節炎和銀屑病關節炎)、僵直性脊椎炎、銀屑病(包括尋常型銀屑病、膿皰病型銀屑病，例如侷限性膿皰型銀屑病、泛發性膿皰型銀屑病(GPP)、掌蹠膿皰病(PPP)、系統性紅斑狼瘡(SLE)、克羅氏病和潰瘍性結腸炎。
發炎疾病是指由於過度或失控的發炎反應所導致的過度的發炎症狀、宿主組織損害或功能喪失的任何疾病、失調或症狀，包括皮膚、腎、肺、胃腸道和呼吸道的過敏性發炎，例如異位性皮膚炎、尋常性痤瘡、皮疹、過敏性鼻炎、腎炎、發炎腸病(包括克羅氏病和潰瘍性結腸炎)、食物過敏和其他過敏。
可以透過本發明的方法治療的呼吸系統疾病的實例包括但不限於：哮喘和慢性阻塞性肺病(COPD)。
癌症指一群廣泛的各種疾病，其特徵在於身體中異常細胞不受控制的生長。“癌症”或“癌症組織”可包括腫瘤。可以透過本發明的方法治療的癌症包括但不限於：癌(carcinomas)、肉瘤、淋巴瘤、母細胞瘤及白血病。
本文討論的治療劑的組合可以作為在藥學可接受載體中的單一組成物同時施用，或者作為分開的組成物同時施用，其中各藥劑處於藥學可接受載體中。在另一個實施方案中，治療劑的組合可以按序施用。
此外，如果進行多次聯合療法施用，且藥劑按序施用，則在各時間點的按序施用的次序可以反轉或保持相同，按序施用可以與同時施用或其任何組合相結合。
儘管為了清楚理解的目的，已經透過舉例說明和實施例詳細地描述了前述發明，但是根據本發明的教義，本領域的普通技術人員將顯而易見的是，可另外對本發明進行某些改變和修改而不背離所附申請專利範圍的精神和範圍。本發明透過以下實施例進一步說明，並非旨在進行限制。本領域的技術人員將容易地辨識多種非關鍵性參數，所述參數可發生改變或修改以產生基本上類似的結果。
除非另外指出，否則本發明的實踐將採用本領域技術範圍內的蛋白質化學、生物化學、重組DNA技術和藥理學的常規方法。
實施例 實施例 1 檢測蛋白的製備
hIL36R-ECD mFc重組蛋白(SEQ ID NO: 76)由hIL-36R胞外區和小鼠抗體重鏈Fc組成，hIL36R-ECD hFc重組蛋白(SEQ ID NO: 77)由hIL-36R胞外區和人抗體重鏈Fc組成，CynoIL36R-ECD mFc重組蛋白(SEQ ID NO: 79)由食蟹猴IL-36R胞外區和小鼠抗體重鏈Fc組成，CynoIL36R-ECD hFc重組蛋白(SEQ ID NO: 80)由食蟹猴IL-36R胞外區和人抗體重鏈Fc組成。編碼上述重組蛋白的cDNA透過基因合成獲得，並且分別被次選殖到表現載體pcDNA3.1(Invitrogen V-790)中，然後將表現載體轉染到ExpiCHO細胞中進行暫態表現。ExpiCHO細胞培養7天後，分別用Protein A柱(GE healthcare)純化細胞培養上清液中的hIL36R-ECD mFc、CynoIL36R-ECD mFc、hIL36R-ECD hFc和CynoIL36R-ECD hFc重組蛋白，用於後期篩選檢測。
實施例 2 融合瘤抗 IL-36R 單株抗體的製備
以Human IL-1Rrp2/IL-1R6 Protein, His Tag(ACROBiosystems，IL2-H52H6)蛋白(100 μg/鼠)作為免疫原，將其與等體積的完全弗氏佐劑(首次免疫)或不完全弗氏佐劑(加強免疫)充分混合並乳化，每2周皮下免疫BALB/c小鼠，持續6周。細胞融合前3天，腹腔注射不含佐劑的免疫原(50 μg/鼠)。選擇血清抗體效價高且增長趨於平緩的小鼠，在無菌環境中分離出小鼠脾淋巴細胞。採用電融合的方法將免疫小鼠的脾淋巴細胞(1×10
8個)與骨髓瘤細胞Sp2/0(5×10
7個)細胞進行融合，得到融合瘤細胞。融合後，用HAT完全培養基重新懸浮融合瘤細胞，然後將融合瘤細胞以1×10
7個/孔加到96孔盤中，並在37℃、含5% CO
2的培養箱中培養。融合後的第6天~7天，去除培養基，每孔加入200 μL HAT完全培養基，在37℃、含5% CO
2的培養箱中培養1天，然後收集96孔盤中的培養上清液，透過ELISA檢測其中的抗體與hIL-36R的結合活性(方法參見實施例5)，透過FACS檢測其中的抗體與過表現hIL-36R或CynoIL-36R細胞的結合活性(方法參見實施例6)，採用FACS檢測其中的抗體阻斷IL36蛋白與過表現hIL-36R或CynoIL-36R細胞結合的功能(方法參見實施例7)。篩選具有結合活性和阻斷功能的抗體，將其對應的選殖株，例如選殖株72C1、84C4、74B4D6、58A8D1和6G10，再透過有限稀釋法進行次選殖。
實施例 3 嵌合抗 hIL-36R 抗體的建構和表現
使用總RNA提取套組(Takara, Cat: 9767)從實施例2篩選的融合瘤細胞中分離出總RNA作為模板，使用superscript III反轉錄酶(Thermo，18080051)合成第一鏈cDNA。以第一鏈cDNA作為模板，然後使用簡併小鼠IgG引子透過PCR反應擴增抗體的可變區序列。將PCR混合物在含有0.5 μg/mL溴化乙錠的1%瓊脂糖/Tris-硼酸鹽凝膠中進行電泳分離。確定擴增產物片段的位置，採用PCR產物回收套組(康寧，AP-PCR-250)對PCR產物進行回收純化。將純化的PCR產物選殖到pMD-19T載體(Takara，6013)中，然後轉形到DH5α感受態大腸桿菌細胞(Takara，9057)中。透過菌落PCR篩選陽性選殖株，並對陽性選殖株進行DNA定序，得到抗體的重鏈可變區序列和輕鏈可變區的序列，如72C1(SEQ ID NOs: 7和15)、84C4(SEQ ID NOs: 27和39)、74B4D6(SEQ ID NOs: 51和52)、58A8D1(SEQ ID NOs: 59和60)和6G10(SEQ ID NOs: 67和68)。
將小鼠抗體的VL區基因合成片段連接到人κ輕鏈恆定區來建構嵌合輕鏈，將小鼠抗體的VH區基因合成片段連接到人IgG4重鏈恆定區來建構嵌合重鏈。將包含嵌合輕鏈DNA的載體和包含嵌合重鏈DNA的載體轉染至Expi CHO細胞進行暫態表現，Expi CHO細胞培養7天後，用Protein A柱(GE healthcare)純化細胞培養上清液中的嵌合抗體。其中，所述人κ輕鏈恆定區具有SEQ ID NO: 73所示的胺基酸序列，所述人IgG4重鏈恆定區具有SEQ ID NO: 71所示的胺基酸序列。本發明的“xi”表示嵌合抗體，例如xi72C1表示嵌合72C1抗體。
實施例 4 抗 IL-36R 抗體的親和力測定
透過ForteBio分子相互作用儀檢測抗IL-36R抗體與CynoIL36R-ECD mFc和Human IL-1Rrp2/IL-1R6 Protein, His Tag(ACROBiosystems，IL2-H52H6)的親和力。首先，將ProA生物感測器(SARTORIUS，18-5010)活化，然後將生物感測器浸入含有5 μg/mL本發明的抗IL-36R抗體或參照抗體(Boehringer Ingelheim公司的BI655130，內部製備，其重鏈和輕鏈的胺基酸序列見SEQ ID NOs: 81和83)的溶液中，用以捕獲抗IL36R抗體。再用生物感測器去結合梯度稀釋(初始濃度為200 nM，2倍梯度稀釋)的CynoIL36R-ECD mFc或Human IL-1Rrp2/IL-1R6 Protein, His Tag，利用Fortebio分子相互作用儀(SARTORIUS，octet red 96e)實時檢測反應信號從而獲得結合和解離曲線。每個循環解離完成後，將生物感測器再生，繼而進行下一次捕獲，循環往復完成不同抗IL-36R抗體對IL-36R親和力的測定。透過Fortebio Data Analysis 11.0軟體以1:1 (Langmuir)結合模型分析所得數據，來測定k
a(k
on)和k
d(k
off)值，並透過K
D＝k
d/k
a計算解離常數K
D。檢測方法基本上遵循製造商的建議，更多資訊參見www.fortebio.com。嵌合抗IL-36R抗體對人IL36R抗原的親和力見表2.1和表2.2。
表2.1 嵌合抗IL-36R抗體與hIL-36R的親和力
表2.2 嵌合抗IL-36R抗體與hIL-36R的親和力
實施例 5 抗 IL-36R 抗體基於 ELISA 的結合分析
| hIL-36R | |||
| 抗體 | K on(1/Ms) | K off(1/s) | K D(M) |
| BI655130 | 6.41E+04 | 1.57E-05 | 2.45E-10 |
| xi72C1 | 5.96E+04 | 4.38E-05 | 7.36E-10 |
| xi74B4D6 | 7.04E+04 | 3.32E-04 | 4.72E-09 |
| hIL-36R | |||
| 抗體 | K on(1/Ms) | K off(1/s) | K D(M) |
| BI655130 | 5.86E+04 | 1.29E-05 | 2.20E-10 |
| xi84C4 | 1.06E+05 | 7.00E-05 | 6.60E-10 |
| xi58A8D1 | 3.60E+04 | 9.15E-06 | 2.54E-10 |
| xi6G10 | 5.69E+04 | 5.01E-05 | 8.81E-10 |
以human IL-1Rrp2/IL-1R6 Protein, His Tag(ACROBiosystems，IL2-H52H6)和CynoIL36R-ECD mFc(用於嵌合抗體和人源化抗體的檢測)，以及hIL36R-ECD hFc和CynoIL36R-ECD hFc蛋白(用於融合瘤抗體的檢測)作為抗原，透過ELISA分析抗IL-36R抗體與IL-36R的結合活性。將2 μg/mL的抗原以100 μL/孔塗覆於96孔盤(Costar，9018)中，4℃培育過夜。洗滌緩衝液(含0.05% v/v吐溫20的PBS)洗滌96孔盤後，加入封阻緩衝液(含2%牛血清白蛋白的PBS)，於37℃封阻2小時。洗滌緩衝液洗滌96孔盤後，每孔加入100 μL梯度稀釋的本發明的抗IL-36R抗體或參照抗體BI655130(抗體的初始濃度為66 nM，4倍梯度稀釋)，於室溫培育1小時。洗滌緩衝液洗滌96孔盤後，每孔加入100 μL偶聯辣根過氧化物酶的重組蛋白A/G(TheroScientific，32490)，於室溫培育1小時。洗滌緩衝液洗滌96孔盤後，每孔加入100 μL TMB溶液(Thermo，00-4201-56)，於室溫培育2分鐘。最後每孔加入100 μL終止溶液(2N H
2SO
4)以終止反應。使用酶標儀(PE，Envision)在450nm處讀取吸光度，使用GraphPad Prism分析所得數據，並計算EC50。嵌合抗IL-36R抗體在ELISA實驗中與hIL-36R的結合EC50見圖1，嵌合抗IL-36R抗體在ELISA實驗中與CynoIL-36R的結合EC50見圖2，BI655130的結合作為對照示出，IgG4的結合作為陰性對照示出。
實施例 6 抗 IL-36R 抗體基於細胞的結合分析
基於FACS的方法，分析抗IL-36R抗體與過表現人IL-36R(SEQ ID NO: 75)的細胞株(293T-hIL36R-NFκB)和過表現食蟹猴IL-36R(SEQ ID NO: 78)的細胞株(293T-CynoIL36R-NFκB)的結合活性。按照lipofectamine 3000轉染試劑(Thermo，L3000015)的說明書，將質體pGL4.32 [luc2P/NF-ĸB-RE/Hygro] Vector(Promega，E8491)轉染到HEK293T細胞中，得到293T-NFκB穩定細胞株。然後，在pcDNA3.1/Zeo (+) 載體的BamHI以及XhoI位址分別插入hIL-36R和CynoIL-36R的編碼序列，得到重組質體pcDNA3.1/Zeo (+)-hIL36R和pcDNA3.1/Zeo (+)-CynoIL36R。按照lipofectamine 3000轉染試劑(Thermo，L3000015)的說明書，分別將兩個重組質體轉染到293T-NFκB穩定細胞株中，得到293T-hIL36R-NFκB細胞株和293T-CynoIL36R-NFκB細胞株。
取指數生長期狀態良好的293T-hIL36R-NFκB細胞和293T-CynoIL36R-NFκB細胞，分別以2x10
5個/孔加到96孔培養盤中，棄上清液，然後將梯度稀釋的本發明的抗IL-36R抗體或參照抗體BI655130(在293T-hIL36R-NFκB結合試驗中：抗體的初始濃度為20 μg/mL，3倍梯度稀釋；在293T-CynoIL36R-NFκB結合試驗中：抗體的初始濃度為40 μg/mL，2倍梯度稀釋)添加到96孔培養盤中，於室溫培育60分鐘。PBS洗滌細胞後，每孔加入100 μL按照1:200稀釋的goat-anti-human IgG二抗(Jackson，109-116-170)，於室溫培育30分鐘。PBS洗滌細胞後，用100μL PBS重新懸浮細胞，然後使用流式細胞儀(BD，Accuri C6)檢測螢光信號。透過染色的平均螢光強度(MFI)來測量抗IL-36R抗體與293T細胞表面的hIL36R和CynoIL36R的結合能力，倍數(Ratio)為實驗組平均螢光強度(MFI)/背景MFI的比值，並使用GraphPad Prism分析所得數據。嵌合抗IL-36R抗體與293T-hIL36R-NFκB細胞上hIL-36R的結合EC50見圖3A-3B，嵌合抗IL-36R抗體與293T-CynoIL36R-NFκB細胞上CynoIL-36R的結合EC50見圖4，BI655130的結合作為對照示出，IgG4的結合作為陰性對照示出。
實施例 7 抗 IL-36R 抗體阻斷 IL36α 、 IL36β 和 IL36γ 與過表現人 IL-36R 的細胞株和過表現食蟹猴 IL-36R 的細胞株相互作用的分析
基於化學發光的檢測方法，分析抗IL-36R抗體阻斷hIL36α(R&D，6995-IL-010)、hIL36β(R&D，6834-ILB-025)和hIL36γ(R&D，6835-IL-010)與過表現人IL36R的細胞株(293T-hIL36R-NFκB)和過表現食蟹猴IL36R的細胞株(293T-CynoIL36R-NFκB)相互作用的功能。293T-hIL36R-NFκB和293T-CynoIL36R-NFκB細胞株的製備方法參見實施例6。當hIL36α、hIL36β或hIL36γ蛋白與細胞表面的IL-36R結合後，招募293T細胞表面天然的IL-1RAcP蛋白，共同作用活化下游NFκB信號途徑，誘導Luciferase表現，並與檢測受質反應產生螢光信號。因此，當檢測體系中存在抗IL-36R抗體，其能夠阻斷hIL36α、hIL36β和hIL36γ與IL-36R結合，導致檢測信號減弱。
取指數生長期狀態良好的293T-hIL36R-NFκB細胞和293T-CynoIL36R-NFκB細胞，分別用培養基稀釋至濃度為2.5×10
5個/mL，以5 μL/孔接種於384孔盤中。然後每孔加入15 μL梯度稀釋的本發明的抗IL-36R抗體或參照抗體BI655130(在293T-hIL36R-NFκB試驗中：抗體的初始濃度為20 μg/mL，3倍梯度稀釋；在293T-CynoIL36R-NFκB試驗中：抗體的初始濃度為40 μg/mL，2倍梯度稀釋)，於37℃、含CO
2的培養箱中培育60分鐘。培育結束後，每孔加入5 μL的hIL36α、hIL36β、hIL36γ或hIL36αβγ(在293T-hIL36R-NFκB試驗中：hIL36α的終濃度為100 ng/mL，hIL36β的終濃度為20 ng/mL，hIL36γ的終濃度為10 ng/mL，hIL36αβγ是由hIL36α、hIL36β和hIL36γ溶液混合而成，其中三者的終濃度分別是100 ng/mL、20 ng/mL和10 ng/mL；在293T-CynoIL36R-NFκB試驗中：hIL36α的終濃度為3.33 ng/mL，hIL36β的終濃度為1 ng/mL，hIL36γ的終濃度為0.006 ng/mL，hIL36αβγ是由hIL36α、hIL36β和hIL36γ溶液混合而成，其中三者的終濃度分別是3.33 ng/mL、1 ng/mL和0.006 ng/mL)，低速離心混勻，於37℃、含CO
2的培養箱中培育過夜。然後，每孔加入25 μL ONE-Glo™ Luciferase Assay(Promega，E6120)，避光反應2-5分鐘，透過酶標儀(PE，Envision)讀取化學發光信號。使用GraphPad Prism分析所得數據，並計算IC50值和抑制率(抑制率=(不加抗體組發光值-抗體組發光值)/(不加抗體組發光值-空白對照組發光值)×100%)。嵌合抗IL-36R抗體阻斷hIL36α、hIL36β和hIL36γ蛋白與293T-hIL36R-NFκB細胞上hIL-36R相互作用的結果依次見圖5A-5B、5C-5D和5E-5F，嵌合抗IL-36R抗體阻斷hIL36α、hIL36β和hIL36γ蛋白與293T-CynoIL36R-NFκB細胞上CynoIL-36R相互作用的結果依次見圖6A、6B和6C。
實施例 8 抗 IL-36R 抗體阻斷 IL36α 、 IL36β 和 IL36γ 蛋白與天然表現 IL36R 蛋白的 OVCAR8 或 NHK 細胞相互作用的分析
基於ELISA的檢測方法，分析抗IL-36R抗體阻斷hIL36α(R&D，6995-IL-010)、hIL36β(R&D，6834-ILB-025)和hIL36γ(R&D，6835-IL-010)與天然表現IL-36R的人卵巢癌細胞OVCAR8(購買自南京科佰)和正常人表皮角質形成細胞keratinocytes(也稱為NHK細胞，購買自ATCC)相互作用的功能。當hIL36α、hIL36β或hIL36γ蛋白與細胞表面的IL-36R結合後，招募IL-1RAcP蛋白，誘導下游信號途徑產生細胞因子IL-8。因此，當檢測體系中存在抗IL-36R抗體，其能夠阻斷hIL36α、hIL36β和hIL36γ與IL-36R結合，抑制IL-8的產生。
取指數生長期狀態良好OVCAR8細胞和NHK細胞，分別用培養基稀釋至濃度為1×10
5個/mL，以100 μL/孔接種於96孔盤(即每孔10000個細胞)，於37℃、含CO
2的培養箱中培養過夜。棄上清液，每孔加入100 μL培養基。然後每孔加入50 μL梯度稀釋的本發明的抗IL-36R抗體或參照抗體BI655130(抗體的初始濃度為1000 ng/mL，3倍梯度稀釋)，於37℃、含CO
2的培養箱中培育60分鐘。培育結束後，每孔加入50 μL的hIL36α、hIL36β、hIL36γ或hIL36αβγ(hIL36α的終濃度為15 ng/mL，hIL36β的終濃度為4 ng/mL，hIL36γ的終濃度為2 ng/mL，hIL36αβγ是由hIL36α、hIL36β和hIL36γ溶液混合而成，其中三者的終濃度分別是15 ng/mL、4 ng/mL和2 ng/mL)，低速離心混勻，於37℃、含CO
2的培養箱中培育48小時。收集上清液，按照IL-8檢測套組(R&D，DY208)的說明書檢測檢測96孔盤上清液中IL-8的含量，透過酶標儀(PE，Envision)讀取OD450值。使用GraphPad Prism分析所得數據，並計算IC50值和抑制率(抑制率=(不加抗體組發光值-抗體組發光值)/(不加抗體組發光值-空白對照組發光值)×100%)。嵌合抗IL-36R抗體阻斷hIL36α、hIL36β和hIL36γ與OVCAR8細胞相互作用的結果依次見圖7A-7B、7C-7D和7E-7F，嵌合抗IL-36R抗體阻斷hIL36α、hIL36β和hIL36γ與NHK細胞相互作用的結果依次見圖8A-8B、8C和8D。
實施例 9 小鼠抗 IL-36R 單株抗體的人源化
選取小鼠抗體72C1和84C4進行人源化設計。採用CDR graft方法，篩選可用於小鼠抗體人源化的人類種系抗體骨架區。透過篩選與小鼠抗體可變區胺基酸序列具有最高序列相同性的人類種系抗體或其亞型，將小鼠抗體的CDR插入到篩選的骨架區中。並進一步突變骨架區和/或CDR區的殘基，以獲得更多候選抗體。小鼠抗體72C1一共獲得6個人源化抗體，小鼠抗體84C4一共獲得10個人源化抗體，人源化抗體的重鏈可變區和輕鏈可變區的胺基酸序列如下所示：
hz72C1-1.1(SEQ ID NOs: 9，17)、hz72C1-1.2(SEQ ID NOs: 11，17)、hz72C1-1.3(SEQ ID NOs: 13，17)、hz72C1-2.1(SEQ ID NOs: 9，19)、hz72C1-2.2(SEQ ID NOs: 11，19)、hz72C1-2.3(SEQ ID NOs: 13，19)；hz84C4-1.1(SEQ ID NOs: 29，41)、hz84C4-1.2(SEQ ID NOs: 31，41)、hz84C4-1.3(SEQ ID NOs: 33，41)、hz84C4-1.4(SEQ ID NOs: 35，41)、hz84C4-1.5(SEQ ID NOs: 37，41)、hz84C4-2.1(SEQ ID NOs: 29，43)、hz84C4-2.2(SEQ ID NOs: 31，43)、hz84C4-2.3(SEQ ID NOs: 33，43)、hz84C4-2.4(SEQ ID NOs: 35，43)、hz84C4-2.5(SEQ ID NOs: 37，43)。
將人源化抗體的VL區基因合成片段連接到人κ輕鏈恆定區來建構人源化輕鏈，將人源化抗體的VH區基因合成片段連接到人IgG4重鏈恆定區來建構人源化重鏈。將包含人源化輕鏈DNA的載體和包含人源化重鏈DNA的載體轉染至ExpiCHO細胞進行蛋白表現，ExpiCHO細胞培養7天後，用Protein A柱(GE healthcare)對細胞培養上清液中的人源化抗體進行純化。其中，所述人κ輕鏈恆定區具有SEQ ID NO: 73所示的胺基酸序列，所述人IgG4重鏈恆定區具有SEQ ID NO: 71所示的胺基酸序列。本發明中的“hz”表示人源化抗體，例如hz72C1表示人源化72C1抗體。
實例 10 人源化抗 IL-36R 抗體的生物學功能分析
按照實施例4、實施例5、實施例6、實施例7和實施例8的方法對人源化抗體hz72C1-1.1、hz72C1-1.2、hz72C1-1.3、hz72C1-2.1、hz72C1-2.2和hz72C1-2.3以及hz84C4-1.1、hz84C4-1.2、hz84C4-1.3、hz84C4-1.4、hz84C4-1.5、hz84C4-2.1、hz84C4-2.2、hz84C4-2.3、hz84C4-2.4和hz84C4-2.5進行親和力、結合和阻斷分析。人源化抗IL-36R抗體對hIL-36R和CynoIL-36R的親和力見表3.1和表3.2。
表3.1 人源化抗IL-36R抗體與hIL-36R和CynoIL-36R的親和力
註：“/”表示未檢測
表3.2 人源化抗IL-36R抗體與hIL-36R的親和力
| 抗體 | hIL-36R | CynoIL-36R | ||||
| k on(1/Ms) | k off(1/s) | K D(M) | k on(1/Ms) | k off(1/s) | K D(M) | |
| BI655130 | 6.41E+04 | 1.57E-05 | 2.45E-10 | 2.95E+04 | 7.26E-05 | 2.46E-09 |
| xi72C1 | 5.96E+04 | 4.38E-05 | 7.36E-10 | 2.57E+04 | 9.04E-06 | 3.52E-10 |
| hz72C1-1.1 | 1.13E+05 | 1.81E-05 | 1.60E-10 | 2.28E+04 | 1.51E-05 | 6.60E-10 |
| hz72C1-1.2 | 1.11E+05 | 3.91E-06 | 3.51E-11 | / | / | / |
| hz72C1-1.3 | 1.19E+05 | 8.80E-06 | 7.43E-11 | 2.12E+04 | 9.42E-06 | 4.45E-10 |
| hz72C1-2.1 | 7.04E+04 | 7.81E-07 | 1.11E-11 | / | / | / |
| hz72C1-2.2 | 6.24E+04 | ＜1.0E-07 | ＜1.0E-12 | / | / | / |
| hz72C1-2.3 | 6.33E+04 | 1.12E-05 | 1.77E-10 | / | / | / |
| 抗體 | hIL-36R | ||
| k on(1/Ms) | k off(1/s) | K D(M) | |
| BI655130 | 8.19E+04 | 5.84E-05 | 7.13E-10 |
| hz84C4-1.1 | 1.07E+05 | 1.02E-04 | 9.58E-10 |
| hz84C4-1.2 | 1.00E+05 | 1.61E-04 | 1.61E-09 |
| hz84C4-1.3 | 6.19E+04 | 3.26E-05 | 5.27E-10 |
| hz84C4-1.4 | 1.19E+05 | 2.36E-04 | 1.98E-09 |
| hz84C4-1.5 | 1.00E+05 | 1.34E-04 | 1.34E-09 |
| hz84C4-2.1 | 9.45E+04 | 1.16E-04 | 1.22E-09 |
| hz84C4-2.2 | 9.15E+04 | 1.42E-04 | 1.55E-09 |
| hz84C4-2.3 | 6.16E+04 | 5.12E-05 | 8.31E-10 |
| hz84C4-2.4 | 1.05E+05 | 1.96E-04 | 1.88E-09 |
| hz84C4-2.5 | 9.64E+04 | 1.38E-04 | 1.44E-09 |
人源化抗IL-36R抗體在ELISA實驗中與hIL-36R的結合EC50見圖9A-9B，人源化抗IL-36R抗體在ELISA實驗中與CynoIL-36R的結合EC50見圖10。
人源化抗IL-36R抗體與293T-hIL36R-NFκB細胞上hIL-36R的結合EC50見圖11A-11B，人源化抗IL-36R抗體293T-CynoIL36R-NFκB細胞上CynoIL-36R的結合EC50見圖12A-12B。
人源化抗IL-36R抗體阻斷hIL36α、hIL36β、hIL36γ和hIL36αβγ蛋白與293T-hIL36R-NFκB細胞上hIL-36R相互作用的結果依次見圖13A-13B、13C-13D、13E-13F和13G-13H，以及表4.1和表4.2。
表4.1 人源化抗IL-36R抗體阻斷hIL36α、hIL36β、hIL36γ和hIL36αβγ與293T-hIL36R-NFκB細胞上hIL-36R相互作用的能力
表4.2 人源化抗IL-36R抗體阻斷hIL36α、hIL36β、hIL36γ和hIL36αβγ與293T-hIL36R-NFκB細胞上hIL-36R相互作用的能力
| 抗體 | 293T-hIL36R-NFκB細胞 | |||||||
| hIL36α | hIL36β | hIL36γ | hIL36αβγ | |||||
| IC50(M) | 最大抑制率% | IC50(M) | 最大抑制率% | IC50(M) | 最大抑制率% | IC50(M) | 最大抑制率% | |
| BI655130 | 6.09E-09 | 84.48 | 2.45E-09 | 86.67 | ~1.32E-08 | 79.24 | 2.36E-08 | 81.21 |
| hz72C1-1.1 | 9.56E-09 | 99.57 | 3.07E-09 | 94.59 | 2.82E-08 | 98.14 | 5.27E-08 | 108.8 |
| hz72C1-1.2 | 1.04E-08 | 100.79 | 5.07E-09 | 96.94 | 2.18E-08 | 98.36 | ~4.15E-08 | 86.67 |
| hz72C1-1.3 | 6.82E-09 | 98.73 | 3.88E-09 | 96.66 | 1.88E-08 | 101.43 | 4.03E-08 | 90.13 |
| hz72C1-2.1 | 9.83E-09 | 87.89 | 5.08E-09 | 92.29 | 3.72E-08 | 85.36 | 6.62E-08 | 70.52 |
| hz72C1-2.2 | 1.61E-08 | 92.04 | 4.66E-09 | 94.67 | 3.68E-08 | 87.89 | ~4.44E-08 | 77.86 |
| hz72C1-2.3 | 1.61E-08 | 90.8 | 2.93E-09 | 83.67 | 2.94E-08 | 89.00 | ~1.39E-08 | 66.28 |
| 抗體 | 293T-hIL36R-NFκB細胞 | |||||||
| hIL36α | hIL36β | hIL36γ | hIL36αβγ | |||||
| IC50(M) | 最大抑制率% | IC50(M) | 最大抑制率% | IC50(M) | 最大抑制率% | IC50(M) | 最大抑制率% | |
| BI655130 | 1.75E-09 | 83.63 | 2.21E-09 | 85.24 | 1.10E-09 | 81.02 | 3.27E-09 | 63.28 |
| hz84C4-1.1 | 8.82E-10 | 84.14 | 9.28E-10 | 85.35 | 5.76E-10 | 83.51 | 1.82E-09 | 61.20 |
| hz84C4-2.5 | 9.38E-10 | 85.70 | 7.66E-10 | 83.10 | 3.50E-10 | 84.68 | ~1.55E-09 | 54.39 |
人源化抗IL-36R抗體阻斷hIL36α、hIL36β和hIL36γ蛋白與293T-CynoIL36R-NFκB細胞相互作用的結果依次見圖14A、14B和14C，以及表5。
表5 人源化抗IL-36R抗體阻斷hIL36α、hIL36β和hIL36γ與293T-CynoIL36R-NFκB細胞上CynoIL-36R相互作用的能力
| 抗體 | 293T-CynoIL36R-NFκB細胞 | |||||
| hIL36α | hIL36β | hIL36γ | ||||
| IC50(M) | 最大抑制率% | IC50(M) | 最大抑制率% | IC50(M) | 最大抑制率% | |
| BI655130 | 2.77E-08 | 49.07% | 5.63E-08 | 60.76% | 1.19E-08 | 83.08% |
| hz72C1-1.1 | 3.15E-09 | 100.97% | 3.09E-09 | 100.37% | 1.66E-09 | 103.74% |
| hz72C1-1.3 | 3.13E-09 | 101.22% | 2.70E-09 | 100.62% | 1.65E-09 | 102.87% |
人源化抗IL-36R抗體阻斷hIL36α、hIL36β、hIL36γ和hIL36αβγ蛋白與OVCAR8細胞相互作用的結果依次見圖15A-15B、15C-15D、15E-15F和15G-15H，以及表6.1和表6.2。
表6.1 人源化抗IL-36R抗體阻斷hIL36α、hIL36β、hIL36γ和hIL36αβγ與OVCAR8細胞上IL-36R相互作用的能力
表6.2 人源化抗IL-36R抗體阻斷hIL36α、hIL36β、hIL36γ和hIL36αβγ與OVCAR8細胞上IL-36R相互作用的能力
註：“-”表示未擬合到數據
| 抗體 | OVCAR8細胞 | |||||||
| hIL36α | hIL36β | hIL36γ | hIL36αβγ | |||||
| IC50(M) | 最大抑制率% | IC50(M) | 最大抑制率% | IC50(M) | 最大抑制率% | IC50(M) | 最大抑制率% | |
| BI655130 | 4.34E-11 | 99.79 | 1.57E-11 | 99.7 | 1.42E-11 | 99.67 | 4.88E-11 | 99.87 |
| hz72C1-1.1 | 3.02E-11 | 98.95 | 4.11E-11 | 98.36 | 2.59E-11 | 98.16 | 9.17E-11 | 97.5 |
| hz72C1-1.2 | 6.21E-11 | 98.93 | 2.61E-11 | 98.16 | 1.38E-11 | 98.23 | 8.82E-11 | 97.92 |
| hz72C1-1.3 | 4.08E-11 | 99.01 | 1.60E-11 | 98.37 | 2.42E-11 | 98.3 | 8.40E-11 | 97.65 |
| hz72C1-2.1 | 1.43E-10 | 98.57 | 9.90E-11 | 98.35 | 8.27E-11 | 97.81 | 3.97E-10 | 96.38 |
| hz72C1-2.2 | 1.94E-10 | 98.55 | 1.45E-10 | 98.05 | 7.60E-11 | 97.74 | 2.30E-10 | 97.12 |
| hz72C1-2.3 | 2.17E-10 | 98.1 | 1.67E-10 | 97.93 | 5.31E-11 | 97.67 | 3.58E-10 | 94.96 |
| 抗體 | OVCAR8細胞 | |||||||
| hIL36α | hIL36β | hIL36γ | hIL36αβγ | |||||
| IC50(M) | 最大抑制率% | IC50(M) | 最大抑制率% | IC50(M) | 最大抑制率% | IC50(M) | 最大抑制率% | |
| BI655130 | 1.60E-11 | 99.63 | 2.45E-11 | 99.09 | 8.12E-12 | 100.09 | 1.42E-11 | 99.87 |
| hz84C4-1.1 | 6.38E-12 | 99.67 | 7.61E-12 | 99.30 | 4.77E-12 | 99.57 | 6.51E-12 | 99.89 |
| hz84C4-1.2 | 8.50E-12 | 99.13 | 1.60E-12 | 98.94 | 8.99E-12 | 99.49 | 7.75E-12 | 99.23 |
| hz84C4-1.3 | - | 20.62 | - | 21.81 | ~6.46E-12 | 59.49 | 5.33E-12 | 44.24 |
| hz84C4-1.4 | 1.42E-11 | 99.50 | 1.46E-11 | 98.51 | 7.75E-12 | 99.40 | 1.12E-11 | 98.89 |
| hz84C4-1.5 | 8.48E-12 | 99.52 | 1.06E-11 | 99.23 | 5.29E-12 | 99.57 | 7.24E-12 | 99.26 |
| hz84C4-2.1 | 1.09E-11 | 99.91 | 5.70E-12 | 99.27 | 6.45E-12 | 99.60 | 3.66E-12 | 99.90 |
| hz84C4-2.2 | 1.19E-11 | 99.18 | 8.59E-12 | 98.52 | 8.61E-12 | 98.73 | 1.31E-11 | 99.21 |
| hz84C4-2.3 | ~6.47E-12 | 28.44 | 3.42E-12 | 18.58 | ~0.0062 | 41.51 | ~4.34E-12 | 40.59 |
| hz84C4-2.4 | 7.52E-12 | 99.51 | 7.24E-12 | 99.10 | 5.15E-12 | 99.33 | 2.58E-12 | 98.80 |
| hz84C4-2.5 | 6.45E-12 | 100.03 | 7.06E-12 | 99.38 | 6.62E-12 | 99.74 | 4.01E-12 | 99.15 |
人源化抗IL-36R抗體阻斷hIL36α、hIL36β、hIL36γ和hIL36αβγ蛋白與NHK細胞相互作用的結果依次見圖16A-16B、16C-16D、16E-16F和16G-16H，以及表7.1和表7.2。
表7.1 人源化抗IL-36R抗體阻斷hIL36α、hIL36β、hIL36γ和hIL36αβγ與NHK細胞上IL-36R相互作用的能力
表7.2 人源化抗IL-36R抗體阻斷hIL36α、hIL36β、hIL36γ和hIL36αβγ與NHK細胞上IL-36R相互作用的能力
實施例 11 人源化抗 IL-36R 抗體表現量
| 抗體 | NHK細胞 | |||||||
| hIL36 α | hIL36β | hIL36γ | hIL36αβγ | |||||
| IC50(M) | 最大抑制率% | IC50(M) | 最大抑制率% | IC50(M) | 最大抑制率% | IC50(M) | 最大抑制率% | |
| BI655130 | 1.26E-10 | 106 | 3.03E-10 | 100.74 | 4.42E-11 | 104.65 | 1.98E-10 | 98.88 |
| hz72C1-1.1 | 2.19E-10 | 99.05 | 3.85E-10 | 86.73 | 1.21E-10 | 102.45 | 3.72E-10 | 93.7 |
| hz72C1-1.2 | 1.19E-10 | 96.12 | 4.33E-10 | 84.74 | 1.14E-10 | 85.72 | 3.29E-10 | 89.58 |
| hz72C1-1.3 | 7.09E-11 | 97.26 | 2.40E-10 | 90.3 | 1.03E-10 | 93.51 | 3.82E-10 | 90.34 |
| hz72C1-2.1 | 1.13E-09 | 93.52 | 1.41E-09 | 82.06 | 2.41E-10 | 94.1 | 1.78E-9 | 84.56 |
| hz72C1-2.2 | 2.45E-10 | 97.26 | 1.10E-09 | 82.53 | 1.18E-9 | 89.05 | 1.49E-9 | 85.27 |
| hz72C1-2.3 | 1.80E-10 | 82.02 | 2.67E-09 | 78.29 | 5.60E-10 | 90.85 | 4.50E-9 | 79.95 |
| 抗體 | NHK細胞 | |||||||
| hIL36α | hIL36β | hIL36γ | hIL36αβγ | |||||
| IC50(M) | 最大抑制率% | IC50(M) | 最大抑制率% | IC50(M) | 最大抑制率% | IC50(M) | 最大抑制率% | |
| BI655130 | 6.33E-11 | 101.02 | 3.29E-11 | 97.11 | 2.63E-11 | 106.57 | 7.27E-11 | 90.71 |
| hz84C4-1.1 | 2.62E-11 | 103.39 | 2.27E-11 | 103.48 | 1.44E-11 | 102.52 | 5.25E-11 | 93.68 |
| hz84C4-1.2 | 1.02E-10 | 92.54 | 9.53E-12 | 91.22 | 3.42E-12 | 98.34 | 6.67E-11 | 82.85 |
| hz84C4-1.3 | ~2.41E-09 | 16.87 | ~1.43E-09 | 19.38 | 2.13E-09 | 57.55 | ~6.51E-12 | 40.74 |
| hz84C4-1.4 | 3.71E-11 | 94.42 | 3.48E-11 | 93.51 | 5.01E-12 | 109.19 | 5.76E-11 | 92.46 |
| hz84C4-1.5 | 2.87E-11 | 100.89 | 1.55E-11 | 100.52 | 1.27E-11 | 109.40 | 2.77E-11 | 96.95 |
| hz84C4-2.1 | 5.23E-11 | 99.49 | 3.18E-11 | 96.77 | 1.81E-11 | 97.53 | 4.82E-11 | 107.48 |
| hz84C4-2.2 | 8.45E-11 | 95.14 | 4.64E-11 | 95.83 | 6.21E-11 | 14.96 | 6.63E-11 | 100.35 |
| hz84C4-2.3 | ~9.24E-13 | 44.50 | ~2.73E-11 | 23.39 | 8.76E-10 | 56.96 | 8.23E-11 | 33.13 |
| hz84C4-2.4 | 4.68E-11 | 94.95 | 6.52E-11 | 92.68 | 1.12E-11 | 101.24 | 1.57E-10 | 95.58 |
| hz84C4-2.5 | 4.81E-11 | 99.66 | 1.24E-11 | 101.80 | 8.40E-12 | 102.94 | 6.61E-11 | 98.52 |
編碼hz72C1-1.1、hz72C1-1.3、hz84C4-1.1、hz84 C4-2.5和參照抗體BI655130的cDNA透過基因合成獲得，並且分別被次選殖到表現載體pcDNA
TM3.1(Invitrogen V-790)中，然後將表現載體轉染至ExpiCHO細胞中進行暫態表現。然後用MabSelect SuRe LX柱(GE healthcare)分別純化hz72C1-1.1、hz72C1-1.3、hz84C4-1.1、hz84C4-2.5和BI655130。採用超微量分光光度計(Thermo Scientific，Nanodrop2000)檢測純化的抗體的濃度；並採用Superdex 200 increase 10/300 GL(GE healthcare)分析純化的抗體的純度，其中流動相是磷酸鹽緩衝液(1X，pH 7.4)，檢測波長是A280。結果如表8.1和8.2所示，hz72C1-1.1、hz72C1-1.3、hz84C4-1.1和hz84C4-2.5的暫態表現量均明顯優於BI655130。
表8.1 人源化抗IL-36R抗體的表現量及純度
表8.2 人源化抗IL-36R抗體的表現量及純度
實施例 12 人源化抗 IL36R 抗體在體內的藥代動力學分析
| 抗體 | 暫態轉染表現量（7天） | SEC純度 |
| BI655130 | 27mg/L | 99.9 |
| hz72C1-1.1 | 103.5mg/L | 98.59 |
| hz72C1-1.3 | 87mg/L | 99.21 |
| 抗體 | 暫態轉染表現量（8天） | SEC純度 |
| BI655130 | 25mg/L | 100 |
| hz84C4-1.1 | 240mg/L | 100 |
| hz84C4-2.5 | 285mg/L | 99.37 |
採用ICR小鼠(購買自上海西普爾-必凱實驗動物有限公司)作為動物模型，將其隨機分為3組，每組6隻。實驗當天，分別對ICR小鼠尾靜脈注射hz72C1-1.1、hz72C1-1.3和參照抗體BI655130，給藥劑量為10 mg/kg，給藥次數為1次。並在給藥前0分鐘，給藥後30分鐘、2小時(±1分鐘)、8小時(±1分鐘)、24小時(±2分鐘)、2天(±2分鐘)、4天(±2分鐘)、7天(±2分鐘)、14天(±5分鐘)、21天(±5分鐘)和28天(±5分鐘)時間點進行採血。收集血樣，透過離心分離上清液，並採用ELISA方法(參見實施例5的方法)檢測上清液中的血藥濃度等指標。hz84C4-1.1和hz84C4-2.5的實驗方法與上述方法(即，hz72C1-1.1和hz72C1-1.3的實驗方法)一致。
結果如表9.1和表9.2所示，其中，hz72C1-1.1和hz84C4-2.5的PK參數優於BI655130，hz72C1-1.3和hz84C4-1.1的PK參數與BI655130相當。
表9.1 人源化抗IL-36R抗體在小鼠體內的PK參數
表9.2 人源化抗IL-36R抗體在小鼠體內的PK參數
註：Tmax：達峰時間(peak time)；Cmax：藥峰濃度(peak concentration)；AUC：藥時曲線下面積(Area under concentration-time curve)；t1/2：半衰期(half-life)；MRT：平均駐留時間(Mean retention time)；CL：清除率(clearance)；Mean±SD：平均值±標準誤差；d：天；PK：藥代動力學或藥動學(Pharmacokinetics)
| PK參數 | Mean±SD | ||
| BI655130 | hz72C1-1.1 | hz72C1-1.3 | |
| Tmax (d) | 0.0208±0 | 0.0208±0 | 0.0208±0 |
| Cmax (µg/mL) | 177±17.3 | 176±4.04 | 135±11.9 |
| AUC(0-28d) (d*µg/mL) | 1063±96.5 | 1137±89.8 | 846±71.0 |
| t1/2 (d) | 12.2±1.17 | 13.4±1.21 | 13.1±0.660 |
| MRT(0-28d) (d) | 9.87±0.385 | 10.4±0.323 | 10.2±0.181 |
| CL (mL/d/kg) | 7.73±0.697 | 6.94±0.718 | 9.29±0.858 |
| PK參數 | Mean±SD | ||
| BI655130 | hz84C4-1.1 | hz84C4-2.5 | |
| Tmax (d) | 0.0208±0 | 0.0208±0 | 0.0208±0 |
| Cmax (µg/mL) | 154±12.8 | 143±18.0 | 158±21.6 |
| AUC(0-28d) (d*µg/mL) | 754.2±138 | 781±92.8 | 855±200 |
| t1/2 (d) | 11.4±0.759 | 11.4±2.19 | 11.9±1.40 |
| MRT(0-28d) (d) | 8.83±0.547 | 9.31±0.587 | 9.06±1.48 |
| CL (mL/d/kg) | 11.51±2.23 | 10.7±1.83 | 10.3±3.61 |
本申請的序列資訊總結於下表10中。
表10 序列資訊匯總
| 抗體描述 序列/SEQ ID NO. | |
| 小鼠、嵌合和人源化72C1抗體的VH-CDR1 GASITSGYWN (SEQ ID NO: 1) | |
| 小鼠72C1、嵌合72C1、hz72C1-1.1、hz72C1-1.2、hz72C1-2.1和hz72C1-2.2抗體的VH-CDR2 YIX 1YSGYTYYNPSLKS (SEQ ID NO: 2, X 1=S) YISYSGYTYYNPSLKS | |
| hz72C1-1.3和hz72C1-2.3抗體的VH-CDR2 YIX 1YSGYTYYNPSLKS (SEQ ID NO: 2, X 1=Y) YIYYSGYTYYNPSLKS | |
| 小鼠、嵌合和人源化72C1抗體的VH-CDR3 GGYDYVEDALYY (SEQ ID NO: 3) | |
| 小鼠、嵌合和人源化72C1抗體的VL-CDR1 RASSNVRYMY (SEQ ID NO: 4) | |
| 小鼠、嵌合和人源化72C1抗體的VL-CDR2 LTSNLAS (SEQ ID NO: 5) | |
| 小鼠72C1、嵌合72C1、hz72C1-1.1、hz72C1-1.2和hz72C1-1.3抗體的VL-CDR3 QQX 2TTSPYT (SEQ ID NO: 6, X 2=F) QQFTTSPYT | |
| hz72C1-2.1、hz72C1-2.2和hz72C1-2.3抗體的VL-CDR3 QQX 2TTSPYT (SEQ ID NO: 6, X 2=Y) QQYTTSPYT | |
| 小鼠和嵌合72C1抗體的VH EVQLQQSGPSLVKPSQTLSLTCSVTGASITSGYWNWIRNFPGNKLEYMGYISYSGYTYYNPSLKSRISITRDTSKNQYYLQLISVTTEDTATYYCATGGYDYVEDALYYWGQGTSVTVSS (SEQ ID NO: 7) 嵌合72C1抗體的VH GAGGTGCAGCTGCAGCAGTCCGGCCCCTCTCTGGTGAAGCCTTCTCAGACCCTGAGCCTGACATGCTCCGTGACCGGCGCCAGCATCACATCCGGCTACTGGAACTGGATCCGGAATTTCCCAGGCAACAAGCTGGAGTACATGGGCTATATCTCTTACAGCGGCTATACCTACTATAATCCCTCTCTGAAGAGCCGGATCTCCATCACCAGAGACACATCTAAGAACCAGTACTATCTGCAGCTGATCTCCGTGACCACAGAGGATACCGCCACATACTATTGTGCCACAGGCGGCTACGACTATGTGGAGGATGCCCTGTACTATTGGGGCCAGGGCACCAGCGTGACAGTGAGCTCC (SEQ ID NO: 8) | |
| hz72C1-1.1和hz72C1-2.1抗體的VH QVQLQESGPGLVKPSQTLSLTCTVSGASITSGYWNWIRNHPGKGLEYIGYISYSGYTYYNPSLKSRVTISRDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCATGGYDYVEDALYYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO: 9) CAGGTGCAGCTGCAGGAGTCCGGACCAGGACTGGTGAAGCCTTCTCAGACCCTGTCCCTGACCTGCACAGTGTCCGGCGCCAGCATCACATCTGGCTACTGGAACTGGATCAGGAATCACCCAGGCAAGGGCCTGGAGTACATCGGCTATATCAGCTACTCTGGCTATACCTACTATAACCCCTCCCTGAAGAGCAGGGTGACCATCAGCCGGGACACATCTAAGAATCAGTTCTCCCTGAAGCTGTCCAGCGTGACCGCCGCTGATACAGCCGTGTACTATTGTGCTACAGGCGGCTACGACTATGTGGAGGATGCTCTGTACTATTGGGGCCAGGGCACCCTGGTGACAGTGTCTTCC (SEQ ID NO: 10) | |
| hz72C1-1.2和hz72C1-2.2抗體的VH QVQLQESGPGLVKPSQTLSLTCTVSGASITSGYWNWIRNHPGKGLEYIGYISYSGYTYYNPSLKSRVTISRDTSKNQYYLKLSSVTAADTAVYYCATGGYDYVEDALYYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO: 11) CAGGTGCAGCTGCAGGAGTCCGGACCAGGACTGGTGAAGCCTTCTCAGACCCTGTCCCTGACCTGCACAGTGTCCGGCGCCAGCATCACATCTGGCTACTGGAACTGGATCAGGAATCACCCAGGCAAGGGCCTGGAGTACATCGGCTATATCAGCTACTCTGGCTATACCTACTATAACCCCTCCCTGAAGAGCAGGGTGACCATCAGCCGGGACACATCTAAGAATCAGTACTATCTGAAGCTGTCCAGCGTGACCGCCGCTGATACAGCCGTGTACTATTGTGCTACAGGCGGCTACGACTATGTGGAGGATGCTCTGTACTATTGGGGCCAGGGCACCCTGGTGACAGTGTCTTCC (SEQ ID NO: 12) | |
| hz72C1-1.3和hz72C1-2.3抗體的VH QVQLQESGPGLVKPSQTLSLTCTVSGASITSGYWNWIRNHPGKGLEYIGYIYYSGYTYYNPSLKSRVTISRDTSKNQYYLKLSSVTAADTAVYYCATGGYDYVEDALYYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO: 13) CAGGTGCAGCTGCAGGAGAGCGGACCAGGACTGGTGAAGCCTTCCCAGACCCTGAGCCTGACCTGCACAGTGAGCGGCGCCTCTATCACATCCGGCTACTGGAACTGGATCAGGAATCACCCAGGCAAGGGCCTGGAGTACATCGGCTATATCTACTATTCTGGCTATACCTACTATAACCCCAGCCTGAAGTCTAGGGTGACCATCTCTCGGGACACATCCAAGAATCAGTACTATCTGAAGCTGTCCAGCGTGACCGCCGCTGATACAGCCGTGTACTATTGTGCTACAGGCGGCTACGACTATGTGGAGGATGCTCTGTACTATTGGGGCCAGGGCACCCTGGTGACAGTGTCTTCC (SEQ ID NO: 14) | |
| 小鼠和嵌合72C1抗體的VL EILLTQSPAIMSATLGEKVTMSCRASSNVRYMYWYQLKSGASPKLWIYLTSNLASGVPARFSGSGSGTSYSLTISSVEAEDAATYFCQQFTTSPYTFGGGTKLEIK (SEQ ID NO: 15) 嵌合72C1抗體的VL GAGATCCTGCTGACCCAGTCCCCAGCCATCATGTCTGCCACCCTGGGCGAGAAGGTGACAATGTCCTGCCGGGCCAGCTCCAACGTGAGATACATGTATTGGTACCAGCTGAAGAGCGGCGCCTCCCCCAAGCTGTGGATCTATCTGACCTCTAATCTGGCAAGCGGAGTGCCTGCACGGTTCTCCGGCTCTGGCAGCGGCACCTCCTACTCTCTGACAATCTCTAGCGTGGAGGCAGAGGACGCAGCAACATATTTCTGTCAGCAGTTTACCACAAGCCCCTACACCTTTGGCGGCGGCACAAAGCTGGAGATCAAG (SEQ ID NO: 16) | |
| hz72C1-1.1、hz72C1-1.2和hz72C1-1.3抗體的VL DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASSNVRYMYWYQQKPGKAPKLWIYLTSNLASGVPSRFSGSGSGTSYTLTISSLQPEDFATYYCQQFTTSPYTFGQGTKLEIK (SEQ ID NO: 17) GACATCCAGATGACCCAGTCCCCTTCCAGCCTGTCCGCCAGCGTGGGCGATAGGGTGACCATCACATGCCGGGCTTCTTCCAACGTGAGATACATGTATTGGTACCAGCAGAAGCCCGGCAAGGCCCCTAAGCTGTGGATCTATCTGACATCTAATCTGGCTTCCGGAGTGCCAAGCCGCTTCTCTGGATCCGGAAGCGGCACCTCTTACACCCTGACAATCAGCTCTCTGCAGCCAGAGGACTTTGCCACATACTATTGTCAGCAGTTCACCACATCCCCCTATACCTTTGGCCAGGGCACAAAGCTGGAGATCAAG (SEQ ID NO: 18) | |
| hz72C1-2.1、hz72C1-2.2和hz72C1-2.3抗體的VL DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASSNVRYMYWYQQKPGKAPKLWIYLTSNLASGVPSRFSGSGSGTSYTLTISSLQPEDFATYYCQQYTTSPYTFGQGTKLEIK (SEQ ID NO: 19) GACATCCAGATGACCCAGTCCCCTTCCAGCCTGTCCGCCAGCGTGGGCGATAGGGTGACCATCACATGCCGGGCTTCTTCCAACGTGAGATACATGTATTGGTACCAGCAGAAGCCCGGCAAGGCCCCTAAGCTGTGGATCTATCTGACATCTAATCTGGCTTCCGGAGTGCCAAGCCGCTTCTCTGGATCCGGAAGCGGCACCTCTTACACCCTGACAATCAGCTCTCTGCAGCCAGAGGACTTCGCCACATACTATTGTCAGCAGTATACCACATCCCCCTACACCTTTGGCCAGGGCACAAAGCTGGAGATCAAG (SEQ ID NO: 20) | |
| 小鼠84C4、嵌合84C4、hz84C4-1.1、hz84C4-1.2、hz84C4-1.3、hz84C4-1.5、hz84C4-2.1、hz84C4-2.2、hz84C4-2.3和hz84C4-2.5抗體的VH-CDR1 GYX 3FTSYWMN (SEQ ID NO: 21, X 3=F) GYFFTSYWMN | |
| hz84C4-1.4和hz84C4-2.4抗體的VH-CDR1 GYX 3FTSYWMN (SEQ ID NO: 21, X 3=Y) GYYFTSYWMN | |
| 小鼠和嵌合84C4抗體的VH-CDR2 X 4IX 5PYDSETRX 6X 7QKFX 8G (SEQ ID NO: 22, X 4=M, X 5=H, X 6=L, X 7=N, X 8=K) MIHPYDSETRLNQKFKG | |
| hz84C4-1.1和hz84C4-2.1抗體的VH-CDR2 X 4IX 5PYDSETRX 6X 7QKFX 8G (SEQ ID NO: 22, X 4=M, X 5=H, X 6=Y, X 7=A, X 8=Q) MIHPYDSETRYAQKFQG | |
| hz84C4-1.2和hz84C4-2.2抗體的VH-CDR2 X 4IX 5PYDSETRX 6X 7QKFX 8G (SEQ ID NO: 22, X 4=Y, X 5=H, X 6=Y, X 7=A, X 8=Q) YIHPYDSETRYAQKFQG | |
| hz84C4-1.3和hz84C4-2.3抗體的VH-CDR2 X 4IX 5PYDSETRX 6X 7QKFX 8G (SEQ ID NO: 22, X 4=M, X 5=Y, X 6=Y, X 7=A, X 8=Q) MIYPYDSETRYAQKFQG | |
| hz84C4-1.4、hz84C4-1.5、hz84C4-2.4和hz84C4-2.5抗體的VH-CDR2 X 4IX 5PYDSETRX 6X 7QKFX 8G (SEQ ID NO: 22, X 4=M, X 5=H, X 6=L, X 7=A, X 8=K) MIHPYDSETRLAQKFKG | |
| 小鼠、嵌合和人源化84C4抗體的VH-CDR3 STTAFAY (SEQ ID NO: 23) | |
| 小鼠、嵌合和人源化84C4抗體的VL-CDR1 ASQDIGNALN (SEQ ID NO: 24) | |
| 小鼠、嵌合和人源化84C4抗體的VL-CDR2 ATSSLDP (SEQ ID NO: 25) | |
| 小鼠、嵌合和人源化84C4抗體的VL-CDR3 LQYASSPYT (SEQ ID NO: 26) | |
| 小鼠和嵌合84C4抗體的VH EVQLQQLGAELVRPGASVMLSCKVSGYFFTSYWMNWVNQRPGQGLEWIGMIHPYDSETRLNQKFKGKATLTVDKSASTAYLQLSSPTSEEYAVYYCASSTTAFAYWGQGTLVTVSA (SEQ ID NO: 27) 嵌合84C4抗體的VH GAGGTGCAGCTGCAGCAGCTGGGAGCAGAGCTGGTGCGGCCAGGAGCAAGCGTGATGCTGTCCTGCAAGGTGTCTGGCTACTTCTTTACCAGCTATTGGATGAACTGGGTGAATCAGAGGCCAGGACAGGGACTGGAGTGGATCGGCATGATCCACCCTTACGACTCCGAGACAAGACTGAACCAGAAGTTCAAGGGCAAGGCCACCCTGACAGTGGATAAGTCCGCCTCTACCGCCTACCTGCAGCTGAGCTCCCCCACATCTGAGGAGTATGCCGTGTACTATTGTGCCTCTAGCACCACAGCCTTTGCCTATTGGGGCCAGGGCACCCTGGTGACAGTGAGCGCC (SEQ ID NO: 28) | |
| hz84C4-1.1和hz84C4-2.1抗體的VH QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYFFTSYWMNWVRQAPGQGLEWMGMIHPYDSETRYAQKFQGRVTMTVDKSTSTVYMELSSLRSEDTAVYYCASSTTAFAYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO: 29) CAAGTGCAGCTGGTGCAGAGCGGAGCCGAGGTGAAAAAGCCCGGCGCTTCTGTGAAGGTGTCCTGCAAGGCCAGCGGCTACTTCTTCACCTCCTACTGGATGAACTGGGTGCGGCAGGCCCCTGGCCAGGGCCTGGAATGGATGGGCATGATCCACCCTTACGACAGCGAGACAAGATACGCCCAGAAGTTCCAGGGCAGAGTGACCATGACCGTGGATAAGAGCACCAGCACAGTGTATATGGAACTGAGCAGCCTGAGAAGCGAGGACACCGCCGTGTACTACTGTGCCTCTTCTACAACCGCTTTTGCCTACTGGGGCCAGGGAACCCTGGTTACAGTCAGCAGC (SEQ ID NO: 30) | |
| hz84C4-1.2和hz84C4-2.2抗體的VH QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYFFTSYWMNWVRQAPGQGLEWMGYIHPYDSETRYAQKFQGRVTMTVDKSTSTVYMELSSLRSEDTAVYYCASSTTAFAYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO: 31) CAAGTGCAGCTGGTTCAGAGCGGCGCCGAGGTGAAGAAGCCTGGCGCTAGCGTGAAGGTGTCTTGTAAAGCCTCTGGCTACTTCTTCACCAGCTACTGGATGAACTGGGTCAGACAGGCCCCTGGCCAGGGCCTGGAATGGATGGGATATATCCACCCCTACGACAGCGAGACAAGATACGCCCAGAAGTTCCAGGGCAGAGTGACAATGACCGTGGACAAGTCCACCTCTACAGTGTACATGGAACTGAGCAGCCTGCGGAGCGAGGATACCGCCGTGTACTACTGCGCCAGCAGCACCACCGCTTTTGCCTACTGGGGCCAGGGAACACTGGTGACCGTGTCCAGC (SEQ ID NO: 32) | |
| hz84C4-1.3和hz84C4-2.3抗體的VH QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYFFTSYWMNWVRQAPGQGLEWMGMIYPYDSETRYAQKFQGRVTMTVDKSTSTVYMELSSLRSEDTAVYYCASSTTAFAYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO: 33) CAAGTGCAGCTGGTTCAGAGCGGCGCCGAGGTGAAAAAGCCTGGCGCTTCTGTGAAGGTGTCCTGCAAGGCCTCTGGCTACTTCTTCACCTCCTACTGGATGAACTGGGTGCGGCAGGCCCCTGGACAGGGCCTGGAATGGATGGGCATGATCTACCCCTACGACAGCGAGACAAGATACGCCCAGAAGTTCCAGGGAAGAGTGACAATGACCGTGGATAAGAGCACCAGCACAGTGTATATGGAACTGAGCAGCCTGAGAAGCGAGGACACCGCCGTGTACTACTGTGCCAGCAGCACCACAGCTTTTGCCTACTGGGGCCAGGGCACCCTGGTGACCGTCAGCTCT (SEQ ID NO: 34 ) | |
| hz84C4-1.4和hz84C4-2.4抗體的VH QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYYFTSYWMNWVRQAPGQGLEWMGMIHPYDSETRLAQKFKGRVTMTVDKSTSTVYMELSSLRSEDTAVYYCASSTTAFAYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO: 35) CAAGTGCAGCTGGTCCAGAGCGGCGCCGAGGTGAAAAAGCCTGGAGCTTCTGTGAAGGTGTCCTGCAAGGCCTCCGGCTACTACTTCACCAGCTACTGGATGAACTGGGTGCGGCAGGCCCCTGGCCAGGGCCTGGAATGGATGGGCATGATCCACCCCTACGACAGCGAGACAAGACTGGCCCAGAAATTCAAGGGCAGAGTGACCATGACCGTGGATAAGAGCACAAGCACCGTGTACATGGAACTGAGCAGCCTGAGAAGCGAGGACACCGCCGTGTACTATTGTGCCTCTAGCACCACCGCTTTTGCCTACTGGGGCCAGGGAACACTGGTGACAGTTTCTAGC (SEQ ID NO: 36) | |
| hz84C4-1.5和hz84C4-2.5抗體的VH QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKVSGYFFTSYWMNWVNQAPGQGLEWMGMIHPYDSETRLAQKFKGRVTMTVDKSTSTVYMELSSLRSEDTAVYYCASSTTAFAYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO: 37) CAAGTGCAGCTGGTTCAGAGCGGCGCCGAGGTGAAAAAGCCTGGCGCTTCTGTGAAGGTGTCTTGTAAAGTGTCCGGATATTTCTTCACCAGCTACTGGATGAACTGGGTCAACCAGGCCCCTGGACAGGGCCTGGAATGGATGGGCATGATCCACCCCTACGACAGCGAGACAAGACTGGCCCAGAAGTTCAAGGGCAGAGTGACCATGACCGTGGATAAGAGCACCTCTACCGTGTACATGGAACTGAGCAGCCTGCGGAGCGAGGACACCGCCGTGTACTACTGCGCCAGCAGCACAACAGCTTTTGCCTACTGGGGCCAGGGCACCCTGGTGACAGTGTCCAGC (SEQ ID NO: 38) | |
| 小鼠和嵌合84C4抗體的VL DILMTQSPSSLSASLGERVSLTCRASQDIGNALNWLQQAPDGTIKRLIYATSSLDPGVPKRFSGSRSGSDYSLTISSLASEDFVYYYCLQYASSPYTFGGGTKLEIK (SEQ ID NO: 39) 嵌合84C4抗體的VL GACATCCTGATGACCCAGAGCCCAAGCTCCCTGTCTGCCAGCCTGGGAGAGAGGGTGTCTCTGACATGCAGGGCAAGCCAGGACATCGGAAACGCCCTGAATTGGCTGCAGCAGGCCCCCGATGGCACCATCAAGCGGCTGATCTATGCCACATCTAGCCTGGATCCCGGCGTGCCTAAGCGGTTCTCCGGCTCTAGAAGCGGCTCCGACTACTCCCTGACCATCTCCTCTCTGGCCTCTGAGGATTTCGTGTACTATTACTGTCTGCAGTATGCAAGCTCCCCATACACCTTTGGCGGAGGAACAAAGCTGGAGATCAAG (SEQ ID NO: 40) | |
| hz84C4-1.1、hz84C4-1.2、hz84C4-1.3、hz84C4-1.4和hz84C4-1.5抗體的VL DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQDIGNALNWYQQKPGKAPKRLIYATSSLDPGVPSRFSGSRSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCLQYASSPYTFGQGTKVEIK (SEQ ID NO: 41) GATATTCAGATGACCCAGAGCCCTTCCTCCCTGAGCGCTAGCGTGGGCGACAGAGTGACCATCACCTGTAGAGCCTCTCAGGACATCGGCAACGCCCTGAACTGGTACCAGCAGAAACCTGGCAAGGCCCCTAAGCGGCTGATCTACGCCACCAGCAGCCTGGACCCCGGAGTCCCCAGCAGATTCAGCGGCAGCCGGAGCGGAACAGATTTTACCCTGACCATCAGCTCCCTGCAACCTGAGGACTTCGCCACATACTACTGCCTGCAGTACGCTTCTTCTCCATATACATTCGGCCAGGGCACCAAGGTGGAAATCAAG (SEQ ID NO: 42) | |
| hz84C4-2.1、hz84C4-2.2、hz84C4-2.3、hz84C4-2.4和hz84C4-2.5抗體的VL DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQDIGNALNWLQQKPGKAPKRLIYATSSLDPGVPSRFSGSRSGTDYTLTISSLQPEDFATYYCLQYASSPYTFGQGTKVEIK (SEQ ID NO: 43) GATATTCAGATGACCCAGAGCCCATCTTCCCTGAGCGCCAGCGTGGGCGATAGAGTGACCATCACCTGTAGAGCCTCCCAGGACATCGGCAACGCCCTGAACTGGCTGCAGCAGAAACCTGGCAAGGCCCCTAAGCGGCTGATCTACGCTACAAGCTCCCTCGACCCCGGCGTCCCCAGCAGATTCAGCGGATCTCGGAGCGGAACAGACTACACCCTGACCATCAGCAGCCTGCAACCTGAGGACTTCGCCACCTACTACTGCCTGCAGTACGCTTCTAGCCCTTATACCTTTGGCCAGGGCACAAAGGTGGAAATCAAG (SEQ ID NO: 44) | |
| 小鼠和嵌合74B4D6抗體的VH-CDR1 GYTFTNYWIH (SEQ ID NO: 45) | |
| 小鼠和嵌合74B4D6抗體的VH-CDR2 TIDPSENYTNYNQKFKG (SEQ ID NO: 46) | |
| 小鼠和嵌合74B4D6抗體的VH-CDR3 SSFSY (SEQ ID NO: 47) | |
| 小鼠和嵌合74B4D6抗體的VL-CDR1 SASSSVSFIH (SEQ ID NO: 48) | |
| 小鼠和嵌合74B4D6抗體的VL-CDR2 TTSNLAS (SEQ ID NO: 49) | |
| 小鼠和嵌合74B4D6抗體的VL-CDR3 QQRSSYPLT (SEQ ID NO: 50) | |
| 小鼠和嵌合74B4D6抗體的VH EVQLQQPGAELGKPGASVKMACKASGYTFTNYWIHWVKQRPGQGLEWIGTIDPSENYTNYNQKFKGKATLTVDTSSSTAYMQLSSLTSEDKAVYFCTGSSFSYWGQGTLVTVSA (SEQ ID NO: 51) | |
| 小鼠和嵌合74B4D6抗體的VL QNVLTQSPAIMSVSPGEKVTMTCSASSSVSFIHWFQQKPGTSPKLWIYTTSNLASGVPARFSGSGSGTSYSLTISRMEAEDAATYYCQQRSSYPLTFGAGTKLELK (SEQ ID NO: 52) | |
| 小鼠和嵌合58A8D1抗體的VH-CDR1 GYSFTSSWMH (SEQ ID NO: 53) | |
| 小鼠和嵌合58A8D1抗體的VH-CDR2 EIHPNSGNTNYNEKFKG (SEQ ID NO: 54) | |
| 小鼠和嵌合58A8D1抗體的VH-CDR3 SPYGYGGSMDY (SEQ ID NO: 55) | |
| 小鼠和嵌合58A8D1抗體的VL-CDR1 RASQDIHNYLN (SEQ ID NO: 56) | |
| 小鼠和嵌合58A8D1抗體的VL-CDR2 YTSRLYS (SEQ ID NO: 57) | |
| 小鼠和嵌合58A8D1抗體的VL-CDR3 QQGNTLPVM (SEQ ID NO: 58) | |
| 小鼠和嵌合58A8D1抗體的VH EVQLQQLGSVLVRPGISVKLSCKASGYSFTSSWMHWTKQRPGQGLEWIGEIHPNSGNTNYNEKFKGKATLTVDTSSRTAYVDLSSLTSEDSAVYYCARSPYGYGGSMDYWGQGTSVTVSS (SEQ ID NO: 59) | |
| 小鼠和嵌合58A8D1抗體的VL DIQMTQTTSSLSASLGDRVTISCRASQDIHNYLNWYQQKPDGTVKLLIYYTSRLYSGVPSRFSGSGSGTDYSLTISNLEQEDFATYFCQQGNTLPVMFGSGTKLELK (SEQ ID NO: 60) | |
| 小鼠和嵌合6G10抗體的VH-CDR1 GITFSRFAMS (SEQ ID NO: 61) | |
| 小鼠和嵌合6G10抗體的VH-CDR2 TISSGDMYTYYPDSVKG (SEQ ID NO: 62) | |
| 小鼠和嵌合6G10抗體的VH-CDR3 MITTGEHAY (SEQ ID NO: 63) | |
| 小鼠和嵌合6G10抗體的VL-CDR1 RASQDISVWLT (SEQ ID NO: 64) | |
| 小鼠和嵌合6G10抗體的VL-CDR2 KASNLHT (SEQ ID NO: 65) | |
| 小鼠和嵌合6G10抗體的VL-CDR3 LQSQSYPWT (SEQ ID NO: 66) | |
| 小鼠和嵌合6G10抗體的VH EVMLVESGGGLVKPGGSLKLSCAASGITFSRFAMSWIRQTPEKRLEWVATISSGDMYTYYPDSVKGRFTISRDNANNTLYLQMRSLRSEDTAMYYCAIMITTGEHAYWGQGTLVTVSA (SEQ ID NO: 67) | |
| 小鼠和嵌合6G10抗體的VL EIKMTQSPSSLSASLGDTITITCRASQDISVWLTWYQQKPGNIPKLLIYKASNLHTGVPPRFSGSGSGTDFTFTISSLQPEDITTYYCLQSQSYPWTFGGGTKLEIK (SEQ ID NO: 68) | |
| 人IgG1重鏈恆定區 ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK (SEQ ID NO: 69) GCCTCTACCAAGGGCCCCTCCGTGTTCCCTCTGGCTCCAAGCTCTAAGTCCACCAGCGGAGGAACAGCCGCTCTGGGCTGTCTGGTGAAGGATTATTTCCCAGAGCCCGTGACCGTGTCCTGGAATAGCGGCGCCCTGACCTCCGGAGTGCATACATTTCCCGCTGTGCTGCAGTCCAGCGGCCTGTACAGCCTGTCTTCCGTGGTGACCGTGCCTAGCTCTTCCCTGGGCACCCAGACATATATCTGCAATGTGAACCACAAGCCTTCCAACACAAAGGTGGACAAGAGGGTGGAGCCAAAGAGCTGTGATAAGACCCATACATGCCCCCCTTGTCCTGCTCCAGAGGCTGCTGGAGGACCATCCGTGTTCCTGTTTCCACCCAAGCCCAAGGACACCCTGATGATCTCTAGGACCCCTGAGGTGACATGCGTGGTGGTGGACGTGTCCCACGAGGATCCAGAGGTGAAGTTTAATTGGTACGTGGATGGCGTGGAGGTGCATAACGCTAAGACCAAGCCTAGGGAGGAGCAGTACAACAGCACCTATCGGGTGGTGTCTGTGCTGACAGTGCTGCACCAGGACTGGCTGAATGGCAAGGAGTATAAGTGCAAGGTGAGCAACAAGGCCCTGCCCGCTCCTATCGAGAAGACCATCTCTAAGGCCAAGGGCCAGCCCAGAGAGCCTCAGGTGTACACACTGCCTCCAAGCCGCGAGGAGATGACCAAGAATCAGGTGTCTCTGACATGTCTGGTGAAGGGCTTCTATCCATCTGACATCGCTGTGGAGTGGGAGTCCAACGGCCAGCCCGAGAACAATTACAAGACCACACCCCCTGTGCTGGACTCTGATGGCTCCTTCTTTCTGTATTCCAAGCTGACCGTGGATAAGAGCCGGTGGCAGCAGGGCAACGTGTTCTCCTGTTCCGTGATGCATGAGGCCCTGCACAACCATTACACACAGAAGAGCCTGTCTCTGTCCCCAGGCAAG (SEQ ID NO: 70) | |
| 人IgG4重鏈恆定區 ASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGK (SEQ ID NO: 71) GCCAGCACAAAGGGACCATCCGTGTTCCCACTGGCTCCATGCTCCCGGAGCACCTCTGAGTCCACAGCCGCTCTGGGCTGTCTGGTGAAGGACTACTTCCCTGAGCCAGTGACCGTGTCCTGGAATAGCGGCGCCCTGACCAGCGGAGTGCACACATTTCCTGCTGTGCTGCAGAGCTCTGGCCTGTACTCTCTGTCCAGCGTGGTGACCGTGCCATCTTCCAGCCTGGGCACAAAGACCTATACATGCAACGTGGACCATAAGCCCTCCAATACAAAGGTGGATAAGAGAGTGGAGAGCAAGTACGGACCACCTTGCCCACCATGTCCAGCTCCTGAGTTTCTGGGAGGACCATCCGTGTTCCTGTTTCCTCCAAAGCCTAAGGACACCCTGATGATCTCCAGGACCCCAGAGGTGACATGCGTGGTGGTGGACGTGAGCCAGGAGGATCCTGAGGTGCAGTTCAACTGGTACGTGGATGGCGTGGAGGTGCACAATGCTAAGACCAAGCCTAGAGAGGAGCAGTTTAACTCCACCTACCGCGTGGTGAGCGTGCTGACAGTGCTGCATCAGGATTGGCTGAACGGCAAGGAGTATAAGTGCAAGGTGTCTAATAAGGGCCTGCCATCTTCCATCGAGAAGACCATCTCCAAGGCCAAGGGCCAGCCTAGGGAGCCACAGGTGTACACACTGCCCCCTTCTCAGGAGGAGATGACCAAGAACCAGGTGTCCCTGACATGTCTGGTGAAGGGCTTCTATCCTAGCGACATCGCTGTGGAGTGGGAGTCTAATGGCCAGCCAGAGAACAATTACAAGACCACACCACCCGTGCTGGACTCTGATGGCTCCTTCTTTCTGTATTCTAGGCTGACCGTGGATAAGTCCCGGTGGCAGGAGGGCAACGTGTTTAGCTGCTCTGTGATGCATGAGGCTCTGCACAATCATTACACACAGAAGTCCCTGAGCCTGTCTCTGGGCAAG (SEQ ID NO: 72) | |
| 人κ輕鏈恆定區 RTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC (SEQ ID NO: 73) CGCACAGTGGCCGCTCCAAGCGTGTTCATCTTTCCCCCTTCTGACGAGCAGCTGAAGTCTGGCACCGCTTCCGTGGTGTGCCTGCTGAACAATTTCTACCCCCGCGAGGCCAAGGTGCAGTGGAAGGTGGATAACGCTCTGCAGTCCGGCAATAGCCAGGAGTCTGTGACAGAGCAGGACTCCAAGGATAGCACCTATTCTCTGTCCAGCACACTGACCCTGTCTAAGGCCGATTACGAGAAGCACAAGGTGTATGCTTGCGAGGTGACACATCAGGGCCTGTCTTCCCCAGTGACCAAGTCCTTTAACAGGGGCGAGTGT (SEQ ID NO: 74) | |
| 人IL-36R (hIL-36R) MWSLLLCGLSIALPLSVTADGCKDIFMKNEILSASQPFAFNCTFPPITSGEVSVTWYKNSSKIPVSKIIQSRIHQDETWILFLPMEWGDSGVYQCVIKGRDSCHRIHVNLTVFEKHWCDTSIGGLPNLSDEYKQILHLGKDDSLTCHLHFPKSCVLGPIKWYKDCNEIKGERFTVLETRLLVSNVSAEDRGNYACQAILTHSGKQYEVLNGITVSITERAGYGGSVPKIIYPKNHSIEVQLGTTLIVDCNVTDTKDNTNLRCWRVNNTLVDDYYDESKRIREGVETHVSFREHNLYTVNITFLEVKMEDYGLPFMCHAGVSTAYIILQLPAPDFRAYLIGGLIALVAVAVSVVYIYNIFKIDIVLWYRSAFHSTETIVDGKLYDAYVLYPKPHKESQRHAVDALVLNILPEVLERQCGYKLFIFGRDEFPGQAVANVIDENVKLCRRLIVIVVPESLGFGLLKNLSEEQIAVYSALIQDGMKVILIELEKIEDYTVMPESIQYIKQKHGAIRWHGDFTEQSQCMKTKFWKTVRYHMPPRRCRPFPPVQLLQHTPCYRTAGPELGSRRKKCTLTTG (SEQ ID NO: 75) | |
| 包含小鼠抗體重鏈Fc的人IL36R蛋白胞外區 (hIL36R-ECD mFc) DGCKDIFMKNEILSASQPFAFNCTFPPITSGEVSVTWYKNSSKIPVSKIIQSRIHQDETWILFLPMEWGDSGVYQCVIKGRDSCHRIHVNLTVFEKHWCDTSIGGLPNLSDEYKQILHLGKDDSLTCHLHFPKSCVLGPIKWYKDCNEIKGERFTVLETRLLVSNVSAEDRGNYACQAILTHSGKQYEVLNGITVSITERAGYGGSVPKIIYPKNHSIEVQLGTTLIVDCNVTDTKDNTNLRCWRVNNTLVDDYYDESKRIREGVETHVSFREHNLYTVNITFLEVKMEDYGLPFMCHAGVSTAYIILQLPAPDFRIEGRMDEPRGPTIKPCPPCKCPAPNLLGGPSVFIFPPKIKDVLMISLSPIVTCVVVDVSEDDPDVQISWFVNNVEVHTAQTQTHREDYNSTLRVVSALPIQHQDWMSGKEFKCKVNNKDLPAPIERTISKPKGSVRAPQVYVLPPPEEEMTKKQVTLTCMVTDFMPEDIYVEWTNNGKTELNYKNTEPVLDSDGSYFMYSKLRVEKKNWVERNSYSCSVVHEGLHNHHTTKSFSRTPGK (SEQ ID NO: 76) | |
| 包含人抗體重鏈Fc的人IL36R蛋白胞外區 (hIL36R-ECD hFc) DGCKDIFMKNEILSASQPFAFNCTFPPITSGEVSVTWYKNSSKIPVSKIIQSRIHQDETWILFLPMEWGDSGVYQCVIKGRDSCHRIHVNLTVFEKHWCDTSIGGLPNLSDEYKQILHLGKDDSLTCHLHFPKSCVLGPIKWYKDCNEIKGERFTVLETRLLVSNVSAEDRGNYACQAILTHSGKQYEVLNGITVSITERAGYGGSVPKIIYPKNHSIEVQLGTTLIVDCNVTDTKDNTNLRCWRVNNTLVDDYYDESKRIREGVETHVSFREHNLYTVNITFLEVKMEDYGLPFMCHAGVSTAYIILQLPAPDFRIEGRMDPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK (SEQ ID NO: 77) | |
| 食蟹猴IL-36R (CynoIL-36R) MWSLLLCGLSIALPLSVTADGCNDIFMKNEMLSASQPFAFNCTFPPITSGEVSVTWYKNSSKIPVSKIIQSRIHQDETWILFLPMEWGDSGVYQCVIKGRDSCHRIHVNLTVFEKQWCDTSVKGLPNLSDEYKQILHLGKDDSLTCHLHFPKSCILGPIKWYKDCNEITGERFTVLETRLLVSNVSAEDRGNYACQVILTHSGKQYEVLNGITVSITERAGYGGSVPKIIYPKNNSIEVQLGTTLIVDCNITDTKDNTNLRCWRVNNTLVDDYYNESKRIREGVETHASFREYNLYTVNITFLEVKMEDYGLPFMCHAGVSAAYIMLQLPAPDFRAYLIGGLIAFLAVAVSVVYIYNIFKIDIVLWYRSTFQSTETLEDGKLYDAYVLYPKPRRESQRHAVDTLVLKILPEVLERQCGYKLFIFGRDEFPGQAVANVIDENVKLCRRLIVIVVPESLGFGLLKNLSEEQIAVYNALIQDGMKVILIELEKIEDYTAMPESIQYIRQKHGVIRWHGDFTEQSQCVKTKFWKTVRYHMPPRRCRPSPPVQLPQHTPCYRTTGERVGGHKVRHALMEGLSLRGGSQLEEDTFHRGRPL (SEQ ID NO: 78) | |
| 包含小鼠抗體重鏈Fc的食蟹猴IL36R蛋白胞外區 (CynoIL36R-ECD mFc) DGCNDIFMKNEMLSASQPFAFNCTFPPITSGEVSVTWYKNSSKIPVSKIIQSRIHQDETWILFLPMEWGDSGVYQCVIKGRDSCHRIHVNLTVFEKQWCDTSVKGLPNLSDEYKQILHLGKDDSLTCHLHFPKSCILGPIKWYKDCNEITGERFTVLETRLLVSNVSAEDRGNYACQVILTHSGKQYEVLNGITVSITERAGYGGSVPKIIYPKNNSIEVQLGTTLIVDCNITDTKDNTNLRCWRVNNTLVDDYYNESKRIREGVETHASFREYNLYTVNITFLEVKMEDYGLPFMCHAGVSAAYIMLQLPAPDFRIEGRMDEPRGPTIKPCPPCKCPAPNLLGGPSVFIFPPKIKDVLMISLSPIVTCVVVDVSEDDPDVQISWFVNNVEVHTAQTQTHREDYNSTLRVVSALPIQHQDWMSGKEFKCKVNNKDLPAPIERTISKPKGSVRAPQVYVLPPPEEEMTKKQVTLTCMVTDFMPEDIYVEWTNNGKTELNYKNTEPVLDSDGSYFMYSKLRVEKKNWVERNSYSCSVVHEGLHNHHTTKSFSRTPGK (SEQ ID NO: 79) | |
| 包含人抗體重鏈Fc的食蟹猴IL36R蛋白胞外區 (CynoIL36R-ECD hFc) DGCNDIFMKNEMLSASQPFAFNCTFPPITSGEVSVTWYKNSSKIPVSKIIQSRIHQDETWILFLPMEWGDSGVYQCVIKGRDSCHRIHVNLTVFEKQWCDTSVKGLPNLSDEYKQILHLGKDDSLTCHLHFPKSCILGPIKWYKDCNEITGERFTVLETRLLVSNVSAEDRGNYACQVILTHSGKQYEVLNGITVSITERAGYGGSVPKIIYPKNNSIEVQLGTTLIVDCNITDTKDNTNLRCWRVNNTLVDDYYNESKRIREGVETHASFREYNLYTVNITFLEVKMEDYGLPFMCHAGVSAAYIMLQLPAPDFRIEGRMDPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK (SEQ ID NO: 80) | |
| BI655130的重鏈 QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYSFTSSWIHWVKQAPGQGLEWMGEINPGNVRTNYNENFRNKVTMTVDTSISTAYMELSRLRSDDTAVYYCTVVFYGEPYFPYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK (SEQ ID NO: 81) CAGGTGCAGCTGGTGCAGTCTGGCGCCGAGGTGAAGAAGCCAGGCGCTAGCGTGAAGGTGTCTTGCAAGGCCAGCGGCTACTCTTTCACCTCCAGCTGGATCCACTGGGTGAAGCAGGCTCCAGGACAGGGACTGGAGTGGATGGGCGAGATCAATCCTGGCAACGTGAGAACAAACTACAATGAGAACTTTCGCAATAAGGTGACCATGACAGTGGACACCAGCATCTCTACAGCCTATATGGAGCTGTCCAGGCTGCGGAGCGACGATACCGCCGTGTACTATTGCACAGTGGTGTTCTACGGCGAGCCATACTTTCCCTATTGGGGCCAGGGCACCCTGGTGACAGTGTCTTCCGCCTCTACCAAGGGCCCCTCCGTGTTCCCTCTGGCTCCAAGCTCTAAGTCCACCAGCGGAGGAACAGCCGCTCTGGGCTGTCTGGTGAAGGATTATTTCCCAGAGCCCGTGACCGTGTCCTGGAATAGCGGCGCCCTGACCTCCGGAGTGCATACATTTCCCGCTGTGCTGCAGTCCAGCGGCCTGTACAGCCTGTCTTCCGTGGTGACCGTGCCTAGCTCTTCCCTGGGCACCCAGACATATATCTGCAATGTGAACCACAAGCCTTCCAACACAAAGGTGGACAAGAGGGTGGAGCCAAAGAGCTGTGATAAGACCCATACATGCCCCCCTTGTCCTGCTCCAGAGGCTGCTGGAGGACCATCCGTGTTCCTGTTTCCACCCAAGCCCAAGGACACCCTGATGATCTCTAGGACCCCTGAGGTGACATGCGTGGTGGTGGACGTGTCCCACGAGGATCCAGAGGTGAAGTTTAATTGGTACGTGGATGGCGTGGAGGTGCATAACGCTAAGACCAAGCCTAGGGAGGAGCAGTACAACAGCACCTATCGGGTGGTGTCTGTGCTGACAGTGCTGCACCAGGACTGGCTGAATGGCAAGGAGTATAAGTGCAAGGTGAGCAACAAGGCCCTGCCCGCTCCTATCGAGAAGACCATCTCTAAGGCCAAGGGCCAGCCCAGAGAGCCTCAGGTGTACACACTGCCTCCAAGCCGCGAGGAGATGACCAAGAATCAGGTGTCTCTGACATGTCTGGTGAAGGGCTTCTATCCATCTGACATCGCTGTGGAGTGGGAGTCCAACGGCCAGCCCGAGAACAATTACAAGACCACACCCCCTGTGCTGGACTCTGATGGCTCCTTCTTTCTGTATTCCAAGCTGACCGTGGATAAGAGCCGGTGGCAGCAGGGCAACGTGTTCTCCTGTTCCGTGATGCATGAGGCCCTGCACAACCATTACACACAGAAGAGCCTGTCTCTGTCCCCAGGCAAG (SEQ ID NO: 82) | |
| BI655130的輕鏈 QIVLTQSPGTLSLSPGERATMTCTASSSVSSSYFHWYQQKPGQAPRLWIYRTSRLASGVPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDAATYYCHQFHRSPLTFGAGTKLEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC (SEQ ID NO: 83) CAGATCGTGCTGACACAGAGCCCTGGCACCCTGAGCCTGTCTCCAGGAGAGAGGGCCACCATGACATGCACCGCTTCCAGCTCCGTGTCCAGCTCTTACTTCCACTGGTATCAGCAGAAGCCAGGACAGGCTCCAAGGCTGTGGATCTACAGGACCTCCAGGCTGGCTAGCGGAGTGCCTGACCGGTTCTCCGGAAGCGGATCTGGCACAGACTTCACCCTGACCATCTCCAGACTGGAGCCCGAGGACGCCGCTACCTACTATTGCCACCAGTTCCATAGAAGCCCTCTGACATTTGGCGCCGGCACCAAGCTGGAGATCAAGCGCACAGTGGCCGCTCCAAGCGTGTTCATCTTTCCCCCTTCTGACGAGCAGCTGAAGTCTGGCACCGCTTCCGTGGTGTGCCTGCTGAACAATTTCTACCCCCGCGAGGCCAAGGTGCAGTGGAAGGTGGATAACGCTCTGCAGTCCGGCAATAGCCAGGAGTCTGTGACAGAGCAGGACTCCAAGGATAGCACCTATTCTCTGTCCAGCACACTGACCCTGTCTAAGGCCGATTACGAGAAGCACAAGGTGTATGCTTGCGAGGTGACACATCAGGGCCTGTCTTCCCCAGTGACCAAGTCCTTTAACAGGGGCGAGTGT (SEQ ID NO: 84) | |
| Kabat定義的小鼠、嵌合和人源化72C1抗體的VH-CDR1 SGYWN (SEQ ID NO: 85) | |
| Kabat定義的小鼠、嵌合和人源化84C4抗體的VH-CDR1 SYWMN (SEQ ID NO: 86) | |
| Kabat定義的小鼠、嵌合和人源化84C4抗體的VL-CDR1 RASQDIGNALN (SEQ ID NO: 87) | |
| Kabat定義的小鼠和嵌合74B4D6抗體的VH-CDR1 NYWIH (SEQ ID NO: 88) | |
| Kabat定義的小鼠和嵌合58A8D1抗體的VH-CDR1 SSWMH (SEQ ID NO: 89) | |
| Kabat定義的小鼠和嵌合6G10抗體的VH-CDR1 RFAMS (SEQ ID NO: 90) |
雖然，上文中已經用一般性說明及具體實施方案對本發明作了詳盡的描述，但在本發明基礎上，可以對之作一些修改或改進，這對本領域技術人員而言是顯而易見的。因此，在不偏離本發明精神的基礎上所做的這些修改或改進，均屬本發明要求保護的範圍。
圖1：透過ELISA檢測嵌合抗IL-36R抗體與hIL-36R的結合。圖1示出嵌合抗體xi72C1和xi84C4與hIL-36R的結合，BI655130的結合作為對照示出，IgG4的結合作為陰性對照示出。
圖2：透過ELISA檢測嵌合抗IL-36R抗體與CynoIL-36R的結合。圖2示出嵌合抗體xi72C1和xi84C4與CynoIL-36R的結合，BI655130的結合作為對照示出，IgG4的結合作為陰性對照示出。
圖3A-3B：透過FACS檢測嵌合抗IL-36R抗體與過表現hIL-36R的細胞的結合。圖3A示出嵌合抗體xi72C1和xi84C4與293T-hIL36R-NFκB細胞的結合，圖3B示出嵌合抗體xi72C1和xi74B4D6與293T-hIL36R-NFκB細胞的結合，BI655130的結合作為對照示出，IgG4的結合作為陰性對照示出。
圖4：透過FACS檢測嵌合抗IL-36R抗體與過表現CynoIL-36R的細胞的結合。圖4示出嵌合抗體xi72C1、xi84C4、xi58A8D1和xi6G10與293T-CynoIL36R-NFκB細胞的結合，BI655130的結合作為對照示出，IgG4的結合作為陰性對照示出。
圖5A-5F：嵌合抗IL-36R抗體阻斷hIL36α、hIL36β和hIL36γ蛋白與過表現hIL-36R的細胞相互作用的功能。圖5A-5B示出嵌合抗體xi72C1、xi74B4D6、xi84C4、xi58A8D1和xi6G10阻斷hIL36α與293T-hIL36R-NFκB細胞相互作用的結果，圖5C-5D示出嵌合抗體xi72C1、xi74B4D6、xi84C4、xi58A8D1和xi6G10阻斷hIL36β與293T-hIL36R-NFκB細胞相互作用的結果，圖5E-5F示出嵌合抗體xi72C1、xi74B4D6、xi84C4、xi58A8D1和xi6G10阻斷hIL36γ與293T-hIL36R-NFκB細胞相互作用的結果，BI655130的阻斷作為對照示出，IgG4的阻斷作為陰性對照示出。
圖6A-6C：嵌合抗IL-36R抗體阻斷hIL36α、hIL36β和hIL36γ蛋白與過表現CynoIL-36R的細胞相互作用的功能。圖6A示出嵌合抗體xi72C1和xi84C4阻斷hIL36α與293T-CynoIL36R-NFκB細胞相互作用的結果，圖6B示出嵌合抗體xi72C1和xi84C4阻斷hIL36β與293T-CynoIL36R-NFκB細胞相互作用的結果，圖6C示出嵌合抗體xi72C1和xi84C4阻斷hIL36γ與293T-CynoIL36R-NFκB細胞相互作用的結果，BI655130的阻斷作為對照示出，IgG4的阻斷作為陰性對照示出。
圖7A-7F：嵌合抗IL-36R抗體阻斷hIL36α、hIL36β和hIL36γ蛋白與OVCAR8細胞相互作用的功能。圖7A-7B示出嵌合抗體xi72C1、xi74B4D6、xi84C4、xi58A8D1和xi6G10阻斷hIL36α與OVCAR8細胞相互作用的結果，圖7C-7D示出嵌合抗體xi72C1、xi74B4D6、xi84C4、xi58A8D1和xi6G10阻斷hIL36β與OVCAR8細胞相互作用的結果，圖7E-7F示出嵌合抗體xi72C1、xi74B4D6、xi84C4、xi58A8D1和xi6G10阻斷hIL36γ與OVCAR8細胞相互作用的結果，BI655130的阻斷作為對照示出，IgG4的阻斷作為陰性對照示出。
圖8A-8D：嵌合抗IL-36R抗體阻斷hIL36α、hIL36β和hIL36γ蛋白與keratinocytes(NHK)細胞相互作用的功能。圖8A-8B示出嵌合抗體xi84C4、xi58A8D1、xi6G10和xi72C1阻斷hIL36α與NHK細胞相互作用的結果，圖8C示出嵌合抗體xi72C1、xi84C4、xi58A8D1和xi6G10阻斷hIL36β與NHK細胞相互作用的結果，圖8D示出嵌合抗體xi72C1、xi84C4、xi58A8D1和xi6G10阻斷hIL36γ與NHK細胞相互作用的結果，BI655130的阻斷作為對照示出，IgG4的阻斷作為陰性對照示出。
圖9A-9B：透過ELISA檢測人源化抗IL-36R抗體與hIL-36R的結合。圖9A示出人源化抗體hz72C1-1.1、hz72C1-1.2、hz72C1-1.3、hz72C1-2.1、hz72C1-2.2和hz72C1-2.3與hIL-36R的結合，圖9B示出人源化抗體hz84C4-1.1、hz84C4-1.2、hz84C4-1.3、hz84C4-1.4、hz84C4-1.5、hz84C4-2.1、hz84C4-2.2、hz84C4-2.3、hz84C4-2.4和hz84C4-2.5與hIL-36R的結合，BI655130的結合作為對照示出，IgG4的結合作為陰性對照示出。
圖10：透過ELISA檢測人源化抗IL-36R抗體與CynoIL-36R的結合。圖10示出人源化抗體hz72C1-1.1、hz72C1-1.2、hz72C1-1.3、hz72C1-2.1、hz72C1-2.2和hz72C1-2.3與CynoIL-36R的結合，BI655130的結合作為對照示出，IgG4的結合作為陰性對照示出。
圖11A-11B：透過FACS檢測人源化抗IL-36R抗體與過表現hIL-36R的細胞的結合。圖11A示出人源化抗體hz72C1-1.1、hz72C1-1.2、hz72C1-1.3、hz72C1-2.1、hz72C1-2.2和hz72C1-2.3與293T-hIL36R-NFκB細胞的結合，圖11B示出人源化抗體hz84C4-1.1、hz84C4-1.2、hz84C4-1.3、hz84C4-1.4、hz84C4-1.5、hz84C4-2.1、hz84C4-2.2、hz84C4-2.3、hz84C4-2.4和hz84C4-2.5與293T-hIL36R-NFκB細胞的結合，BI655130的結合作為對照示出，IgG4的結合作為陰性對照示出。
圖12A-12B：透過FACS檢測人源化抗IL-36R抗體與過表現CynoIL-36R的細胞的結合。圖12A示人源化抗體hz72C1-1.1、hz72C1-1.2、hz72C1-1.3、hz72C1-2.1、hz72C1-2.2和hz72C1-2.3與293T-CynoIL36R-NFκB細胞的結合，圖12B示人源化抗體hz84C4-1.1、hz84C4-1.2、hz84C4-1.3、hz84C4-1.4、hz84C4-1.5、hz84C4-2.1、hz84C4-2.2、hz84C4-2.3、hz84C4-2.4和hz84C4-2.5與293T-CynoIL36R-NFκB細胞的結合，BI655130的結合作為對照示出，IgG4的結合作為陰性對照示出。
圖13A-13H：人源化抗IL-36R抗體阻斷hIL36α、hIL36β、hIL36γ和hIL36αβγ蛋白與過表現hIL-36R的細胞相互作用的功能。圖13A-13B示出人源化抗體hz72C1-1.1、hz72C1-1.2、hz72C1-1.3、hz72C1-2.1、hz72C1-2.2、hz72C1-2.3、hz84C4-1.1和hz84C4-2.5阻斷hIL36α與293T-hIL36R-NFκB細胞相互作用的結果，圖13C-13D示出人源化抗體hz72C1-1.1、hz72C1-1.2、hz72C1-1.3、hz72C1-2.1、hz72C1-2.2、hz72C1-2.3、hz84C4-1.1和hz84C4-2.5阻斷hIL36β與293T-hIL36R-NFκB細胞相互作用的結果，圖13E-13F示出人源化抗體hz72C1-1.1、hz72C1-1.2、hz72C1-1.3、hz72C1-2.1、hz72C1-2.2、hz72C1-2.3、hz84C4-1.1和hz84C4-2.5阻斷hIL36γ與293T-hIL36R-NFκB細胞相互作用的結果，圖13G-13H示出人源化抗體hz72C1-1.1、hz72C1-1.2、hz72C1-1.3、hz72C1-2.1、hz72C1-2.2、hz72C1-2.3、hz84C4-1.1和hz84C4-2.5阻斷hIL36αβγ與293T-hIL36R-NFκB細胞相互作用的結果，BI655130的阻斷作為對照示出，IgG4的阻斷作為陰性對照示出。
圖14A-14C：人源化抗IL-36R抗體阻斷hIL36α、hIL36β和hIL36γ蛋白與過表現CynoIL-36R的細胞相互作用的功能。圖14A示出人源化抗體hz72C1-1.1和hz72C1-1.3阻斷hIL36α與293T-CynoIL36R-NFκB細胞相互作用的結果，圖14B示出人源化抗體hz72C1-1.1和hz72C1-1.3阻斷hIL36β與293T-CynoIL36R-NFκB細胞相互作用的結果，圖14C示出人源化抗體hz72C1-1.1和hz72C1-1.3阻斷hIL36γ與293T-CynoIL36R-NFκB細胞相互作用的結果，BI655130的阻斷作為對照示出，IgG4的阻斷作為陰性對照示出。
圖15A-15H：人源化抗IL-36R抗體阻斷hIL36α、hIL36β、hIL36γ和hIL36αβγ蛋白與OVCAR8細胞相互作用的功能。圖15A-15B示出人源化抗體hz72C1-1.1、hz72C1-1.2、hz72C1-1.3、hz72C1-2.1、hz72C1-2.2、hz72C1-2.3、hz84C4-1.1、hz84C4-1.2、hz84C4-1.3、hz84C4-1.4、hz84C4-1.5、hz84C4-2.1、hz84C4-2.2、hz84C4-2.3、hz84C4-2.4和hz84C4-2.5阻斷hIL36α與OVCAR8細胞相互作用的結果，圖15C-15D示出示出人源化抗體hz72C1-1.1、hz72C1-1.2、hz72C1-1.3、hz72C1-2.1、hz72C1-2.2、hz72C1-2.3、hz84C4-1.1、hz84C4-1.2、hz84C4-1.3、hz84C4-1.4、hz84C4-1.5、hz84C4-2.1、hz84C4-2.2、hz84C4-2.3、hz84C4-2.4和hz84C4-2.5阻斷hIL36β與OVCAR8細胞相互作用的結果，圖15E-15F示出人源化抗體hz72C1-1.1、hz72C1-1.2、hz72C1-1.3、hz72C1-2.1、hz72C1-2.2、hz72C1-2.3、hz84C4-1.1、hz84C4-1.2、hz84C4-1.3、hz84C4-1.4、hz84C4-1.5、hz84C4-2.1、hz84C4-2.2、hz84C4-2.3、hz84C4-2.4和hz84C4-2.5阻斷hIL36γ與OVCAR8細胞相互作用的結果，圖15G-15H示出人源化抗體hz72C1-1.1、hz72C1-1.2、hz72C1-1.3、hz72C1-2.1、hz72C1-2.2、hz72C1-2.3、hz84C4-1.1、hz84C4-1.2、hz84C4-1.3、hz84C4-1.4、hz84C4-1.5、hz84C4-2.1、hz84C4-2.2、hz84C4-2.3、hz84C4-2.4和hz84C4-2.5阻斷hIL36αβγ與OVCAR8細胞相互作用的結果，BI655130的阻斷作為對照示出，IgG4的阻斷作為陰性對照示出。
圖16A-16H：人源化抗IL-36R抗體阻斷hIL36α、hIL36β、hIL36γ和hIL36αβγ蛋白與keratinocytes(NHK)細胞相互作用的功能。圖16A-16B示出人源化抗體hz72C1-1.1、hz72C1-1.2、hz72C1-1.3、hz72C1-2.1、hz72C1-2.2、hz72C1-2.3、hz84C4-1.1、hz84C4-1.2、hz84C4-1.3、hz84C4-1.4、hz84C4-1.5、hz84C4-2.1、hz84C4-2.2、hz84C4-2.3、hz84C4-2.4和hz84C4-2.5阻斷hIL36α與NHK細胞相互作用的結果，圖16C-16D示出示出人源化抗體hz72C1-1.1、hz72C1-1.2、hz72C1-1.3、hz72C1-2.1、hz72C1-2.2、hz72C1-2.3、hz84C4-1.1、hz84C4-1.2、hz84C4-1.3、hz84C4-1.4、hz84C4-1.5、hz84C4-2.1、hz84C4-2.2、hz84C4-2.3、hz84C4-2.4和hz84C4-2.5阻斷hIL36β與NHK細胞相互作用的結果，圖16E-16F示出人源化抗體hz72C1-1.1、hz72C1-1.2、hz72C1-1.3、hz72C1-2.1、hz72C1-2.2、hz72C1-2.3、hz84C4-1.1、hz84C4-1.2、hz84C4-1.3、hz84C4-1.4、hz84C4-1.5、hz84C4-2.1、hz84C4-2.2、hz84C4-2.3、hz84C4-2.4和hz84C4-2.5阻斷hIL36γ與NHK細胞相互作用的結果，圖16G-16H示出人源化抗體hz72C1-1.1、hz72C1-1.2、hz72C1-1.3、hz72C1-2.1、hz72C1-2.2、hz72C1-2.3、hz84C4-1.1、hz84C4-1.2、hz84C4-1.3、hz84C4-1.4、hz84C4-1.5、hz84C4-2.1、hz84C4-2.2、hz84C4-2.3、hz84C4-2.4和hz84C4-2.5阻斷hIL36αβγ與NHK細胞相互作用的結果，BI655130的阻斷作為對照示出，IgG4的阻斷作為陰性對照示出。
Claims (15)
- 一種分離的抗IL-36R抗體或其抗原結合片段，所述抗體或其抗原結合片段包含： (i) 重鏈CDR1、重鏈CDR2和重鏈CDR3，其中， (1) 重鏈CDR1包含如SEQ ID NO: 1或85所示的胺基酸序列或與SEQ ID NO: 1或85具有至少80%相同性的胺基酸序列，重鏈CDR2包含如SEQ ID NO: 2所示的胺基酸序列或與SEQ ID NO: 2具有至少80%相同性的胺基酸序列，和重鏈CDR3包含如SEQ ID NO: 3所示的胺基酸序列或與SEQ ID NO: 3具有至少80%相同性的胺基酸序列； (2) 重鏈CDR1包含如SEQ ID NO: 21或86所示的胺基酸序列或與SEQ ID NO: 21或86具有至少80%相同性的胺基酸序列，重鏈CDR2包含如SEQ ID NO: 22所示的胺基酸序列或與SEQ ID NO: 22具有至少80%相同性的胺基酸序列，和重鏈CDR3包含如SEQ ID NO: 23所示的胺基酸序列或與SEQ ID NO: 23具有至少80%相同性的胺基酸序列； (3) 重鏈CDR1包含如SEQ ID NO: 45或88所示的胺基酸序列或與SEQ ID NO: 45或88具有至少80%相同性的胺基酸序列，重鏈CDR2包含如SEQ ID NO: 46所示的胺基酸序列或與SEQ ID NO: 46具有至少80%相同性的胺基酸序列，和重鏈CDR3包含如SEQ ID NO: 47所示的胺基酸序列或與SEQ ID NO: 47具有至少80%相同性的胺基酸序列； (4) 重鏈CDR1包含如SEQ ID NO: 53或89所示的胺基酸序列或與SEQ ID NO: 53或89具有至少80%相同性的胺基酸序列，重鏈CDR2包含如SEQ ID NO: 54所示的胺基酸序列或與SEQ ID NO: 54具有至少80%相同性的胺基酸序列，和重鏈CDR3包含如SEQ ID NO: 55所示的胺基酸序列或與SEQ ID NO: 55具有至少80%相同性的胺基酸序列；或 (5) 重鏈CDR1包含如SEQ ID NO: 61或90所示的胺基酸序列或與SEQ ID NO: 61或90具有至少80%相同性的胺基酸序列，重鏈CDR2包含如SEQ ID NO: 62所示的胺基酸序列或與SEQ ID NO: 62具有至少80%相同性的胺基酸序列，和重鏈CDR3包含如SEQ ID NO: 63所示的胺基酸序列或與SEQ ID NO: 63具有至少80%相同性的胺基酸序列； (ii) 輕鏈CDR1、輕鏈CDR2和輕鏈CDR3，其中， (1) 輕鏈CDR1包含如SEQ ID NO: 4所示的胺基酸序列或與SEQ ID NO: 4具有至少80%相同性的胺基酸序列，輕鏈CDR2包含如SEQ ID NO: 5所示的胺基酸序列或與SEQ ID NO: 5具有至少80%相同性的胺基酸序列，和輕鏈CDR3包含如SEQ ID NO: 6所示的胺基酸序列或與SEQ ID NO: 6具有至少80%相同性的胺基酸序列； (2) 輕鏈CDR1包含如SEQ ID NO: 24或87所示的胺基酸序列或與SEQ ID NO: 24或87具有至少80%相同性的胺基酸序列，輕鏈CDR2包含如SEQ ID NO: 25所示的胺基酸序列或與SEQ ID NO: 25具有至少80%相同性的胺基酸序列，和輕鏈CDR3包含如SEQ ID NO: 26所示的胺基酸序列或與SEQ ID NO: 26具有至少80%相同性的胺基酸序列； (3) 輕鏈CDR1包含如SEQ ID NO: 48所示的胺基酸序列或與SEQ ID NO: 48具有至少80%相同性的胺基酸序列，輕鏈CDR2包含如SEQ ID NO: 49所示的胺基酸序列或與SEQ ID NO: 49具有至少80%相同性的胺基酸序列，和輕鏈CDR3包含如SEQ ID NO: 50所示的胺基酸序列或與SEQ ID NO: 50具有至少80%相同性的胺基酸序列； (4) 輕鏈CDR1包含如SEQ ID NO: 56所示的胺基酸序列或與SEQ ID NO: 56具有至少80%相同性的胺基酸序列，輕鏈CDR2包含如SEQ ID NO: 57所示的胺基酸序列或與SEQ ID NO: 57具有至少80%相同性的胺基酸序列，和輕鏈CDR3包含如SEQ ID NO: 58所示的胺基酸序列或與SEQ ID NO: 58具有至少80%相同性的胺基酸序列；或 (5) 輕鏈CDR1包含如SEQ ID NO: 64所示的胺基酸序列或與SEQ ID NO: 64具有至少80%相同性的胺基酸序列，輕鏈CDR2包含如SEQ ID NO: 65所示的胺基酸序列或與SEQ ID NO: 65具有至少80%相同性的胺基酸序列，和輕鏈CDR3包含如SEQ ID NO: 66所示的胺基酸序列或與SEQ ID NO: 66具有至少80%相同性的胺基酸序列；或 (iii) 如(i)所示的重鏈CDR1、重鏈CDR2和重鏈CDR3，以及如(ii)所示的輕鏈CDR1、輕鏈CDR2和輕鏈CDR3； 其中， SEQ ID NO: 2的胺基酸序列為YIX1YSGYTYYNPSLKS，SEQ ID NO: 6的胺基酸序列為QQX2TTSPYT，其中，X1=S或Y，X2=F或Y； 並且，SEQ ID NO: 21的胺基酸序列為GYX3FTSYWMN，SEQ ID NO: 22的胺基酸序列為X4IX5PYDSETRX6X7QKFX8G，其中，X3=F或Y，X4=M或Y，X5=H或Y，X6=L或Y，X7=N或A，X8=K或Q； 優選地，SEQ ID NO: 2的胺基酸序列為YIX1YSGYTYYNPSLKS，SEQ ID NO: 6的胺基酸序列為QQX2TTSPYT，其中，i) X1=S或Y，X2=F，或ii) X1=S或Y，X2=Y； 並且，SEQ ID NO: 21的胺基酸序列為GYX3FTSYWMN，SEQ ID NO: 22的胺基酸序列為X4IX5PYDSETRX6X7QKFX8G，其中，i) X3=F或Y，X4=M或Y，X5=H或Y，X6=L，X7=N或A，X8=K，或ii) X3=F或Y，X4=M或Y，X5=H或Y，X6=Y，X7=N或A，X8=Q。
- 根據請求項1所述的抗體或其抗原結合片段，所述抗體或其抗原結合片段包含重鏈CDR1、重鏈CDR2、重鏈CDR3、輕鏈CDR1、輕鏈CDR2和輕鏈CDR3，其中， (1) 重鏈CDR1包含如SEQ ID NO: 1或85所示的胺基酸序列或與SEQ ID NO: 1或85具有至少80%相同性的胺基酸序列，重鏈CDR2包含如SEQ ID NO: 2所示的胺基酸序列或與SEQ ID NO: 2具有至少80%相同性的胺基酸序列，重鏈CDR3包含如SEQ ID NO: 3所示的胺基酸序列或與SEQ ID NO: 3具有至少80%相同性的胺基酸序列，輕鏈CDR1包含如SEQ ID NO: 4所示的胺基酸序列或與SEQ ID NO: 4具有至少80%相同性的胺基酸序列，輕鏈CDR2包含如SEQ ID NO: 5所示的胺基酸序列或與SEQ ID NO: 5具有至少80%相同性的胺基酸序列，和輕鏈CDR3包含如SEQ ID NO: 6所示的胺基酸序列或與SEQ ID NO: 6具有至少80%相同性的胺基酸序列； (2) 重鏈CDR1包含如SEQ ID NO: 21或86所示的胺基酸序列或與SEQ ID NO: 21或86具有至少80%相同性的胺基酸序列，重鏈CDR2包含如SEQ ID NO: 22所示的胺基酸序列或與SEQ ID NO: 22具有至少80%相同性的胺基酸序列，重鏈CDR3包含如SEQ ID NO: 23所示的胺基酸序列或與SEQ ID NO: 23具有至少80%相同性的胺基酸序列，輕鏈CDR1包含如SEQ ID NO: 24或87所示的胺基酸序列或與SEQ ID NO: 24或87具有至少80%相同性的胺基酸序列，輕鏈CDR2包含如SEQ ID NO: 25所示的胺基酸序列或與SEQ ID NO: 25具有至少80%相同性的胺基酸序列，和輕鏈CDR3包含如SEQ ID NO: 26所示的胺基酸序列或與SEQ ID NO: 26具有至少80%相同性的胺基酸序列； (3) 重鏈CDR1包含如SEQ ID NO: 45或88所示的胺基酸序列或與SEQ ID NO: 45或88具有至少80%相同性的胺基酸序列，重鏈CDR2包含如SEQ ID NO: 46所示的胺基酸序列或與SEQ ID NO: 46具有至少80%相同性的胺基酸序列，重鏈CDR3包含如SEQ ID NO: 47所示的胺基酸序列或與SEQ ID NO: 47具有至少80%相同性的胺基酸序列，輕鏈CDR1包含如SEQ ID NO: 48所示的胺基酸序列或與SEQ ID NO: 48具有至少80%相同性的胺基酸序列，輕鏈CDR2包含如SEQ ID NO: 49所示的胺基酸序列或與SEQ ID NO: 49具有至少80%相同性的胺基酸序列，和輕鏈CDR3包含如SEQ ID NO: 50所示的胺基酸序列或與SEQ ID NO: 50具有至少80%相同性的胺基酸序列； (4) 重鏈CDR1包含如SEQ ID NO: 53或89所示的胺基酸序列或與SEQ ID NO: 53或89具有至少80%相同性的胺基酸序列，重鏈CDR2包含如SEQ ID NO: 54所示的胺基酸序列或與SEQ ID NO: 54具有至少80%相同性的胺基酸序列，重鏈CDR3包含如SEQ ID NO: 55所示的胺基酸序列或與SEQ ID NO: 55具有至少80%相同性的胺基酸序列，輕鏈CDR1包含如SEQ ID NO: 56所示的胺基酸序列或與SEQ ID NO: 56具有至少80%相同性的胺基酸序列，輕鏈CDR2包含如SEQ ID NO: 57所示的胺基酸序列或與SEQ ID NO: 57具有至少80%相同性的胺基酸序列，和輕鏈CDR3包含如SEQ ID NO: 58所示的胺基酸序列或與SEQ ID NO: 58具有至少80%相同性的胺基酸序列；或 (5) 重鏈CDR1包含如SEQ ID NO: 61或90所示的胺基酸序列或與SEQ ID NO: 61或90具有至少80%相同性的胺基酸序列，重鏈CDR2包含如SEQ ID NO: 62所示的胺基酸序列或與SEQ ID NO: 62具有至少80%相同性的胺基酸序列，重鏈CDR3包含如SEQ ID NO: 63所示的胺基酸序列或與SEQ ID NO: 63具有至少80%相同性的胺基酸序列，輕鏈CDR1包含如SEQ ID NO: 64所示的胺基酸序列或與SEQ ID NO: 64具有至少80%相同性的胺基酸序列，輕鏈CDR2包含如SEQ ID NO: 65所示的胺基酸序列或與SEQ ID NO: 65具有至少80%相同性的胺基酸序列，和輕鏈CDR3包含如SEQ ID NO: 66所示的胺基酸序列或與SEQ ID NO: 66具有至少80%相同性的胺基酸序列； 其中， SEQ ID NO: 2的胺基酸序列為YIX1YSGYTYYNPSLKS，SEQ ID NO: 6的胺基酸序列為QQX2TTSPYT，其中， i) X1=S或Y，X2=F，或 ii) X1=S或Y，X2=Y； 並且，SEQ ID NO: 21的胺基酸序列為GYX3FTSYWMN，SEQ ID NO: 22的胺基酸序列為X4IX5PYDSETRX6X7QKFX8G，其中， i) X3=F或Y，X4=M或Y，X5=H或Y，X6=L，X7=N或A，X8=K，或 ii) X3=F或Y，X4=M或Y，X5=H或Y，X6=Y，X7=N或A，X8=Q。
- 一種分離的抗IL-36R抗體或其抗原結合片段，所述抗體或其抗原結合片段包含： (1) SEQ ID NO: 7所示重鏈可變區中的重鏈CDR1、重鏈CDR2和重鏈CDR3，和SEQ ID NO: 15所示輕鏈可變區中的輕鏈CDR1、輕鏈CDR2和輕鏈CDR3； (2) SEQ ID NO: 9所示重鏈可變區中的重鏈CDR1、重鏈CDR2和重鏈CDR3，和SEQ ID NO: 17所示輕鏈可變區中的輕鏈CDR1、輕鏈CDR2和輕鏈CDR3； (3) SEQ ID NO: 11所示重鏈可變區中的重鏈CDR1、重鏈CDR2和重鏈CDR3，和SEQ ID NO: 17所示輕鏈可變區中的輕鏈CDR1、輕鏈CDR2和輕鏈CDR3； (4) SEQ ID NO: 13所示重鏈可變區中的重鏈CDR1、重鏈CDR2和重鏈CDR3，和SEQ ID NO: 17所示輕鏈可變區中的輕鏈CDR1、輕鏈CDR2和輕鏈CDR3； (5) SEQ ID NO: 9所示重鏈可變區中的重鏈CDR1、重鏈CDR2和重鏈CDR3，和SEQ ID NO: 19所示輕鏈可變區中的輕鏈CDR1、輕鏈CDR2和輕鏈CDR3； (6) SEQ ID NO: 11所示重鏈可變區中的重鏈CDR1、重鏈CDR2和重鏈CDR3，和SEQ ID NO: 19所示輕鏈可變區中的輕鏈CDR1、輕鏈CDR2和輕鏈CDR3； (7) SEQ ID NO: 13所示重鏈可變區中的重鏈CDR1、重鏈CDR2和重鏈CDR3，和SEQ ID NO: 19所示輕鏈可變區中的輕鏈CDR1、輕鏈CDR2和輕鏈CDR3； (8) SEQ ID NO: 27所示重鏈可變區中的重鏈CDR1、重鏈CDR2和重鏈CDR3，和SEQ ID NO: 39所示輕鏈可變區中的輕鏈CDR1、輕鏈CDR2和輕鏈CDR3； (9) SEQ ID NO: 29所示重鏈可變區中的重鏈CDR1、重鏈CDR2和重鏈CDR3，和SEQ ID NO: 41所示輕鏈可變區中的輕鏈CDR1、輕鏈CDR2和輕鏈CDR3； (10) SEQ ID NO: 31所示重鏈可變區中的重鏈CDR1、重鏈CDR2和重鏈CDR3，和SEQ ID NO: 41所示輕鏈可變區中的輕鏈CDR1、輕鏈CDR2和輕鏈CDR3； (11) SEQ ID NO: 33所示重鏈可變區中的重鏈CDR1、重鏈CDR2和重鏈CDR3，和SEQ ID NO: 41所示輕鏈可變區中的輕鏈CDR1、輕鏈CDR2和輕鏈CDR3； (12) SEQ ID NO: 35所示重鏈可變區中的重鏈CDR1、重鏈CDR2和重鏈CDR3，和SEQ ID NO: 41所示輕鏈可變區中的輕鏈CDR1、輕鏈CDR2和輕鏈CDR3； (13) SEQ ID NO: 37所示重鏈可變區中的重鏈CDR1、重鏈CDR2和重鏈CDR3，和SEQ ID NO: 41所示輕鏈可變區中的輕鏈CDR1、輕鏈CDR2和輕鏈CDR3； (14) SEQ ID NO: 29所示重鏈可變區中的重鏈CDR1、重鏈CDR2和重鏈CDR3，和SEQ ID NO: 43所示輕鏈可變區中的輕鏈CDR1、輕鏈CDR2和輕鏈CDR3； (15) SEQ ID NO: 31所示重鏈可變區中的重鏈CDR1、重鏈CDR2和重鏈CDR3，和SEQ ID NO: 43所示輕鏈可變區中的輕鏈CDR1、輕鏈CDR2和輕鏈CDR3； (16) SEQ ID NO: 33所示重鏈可變區中的重鏈CDR1、重鏈CDR2和重鏈CDR3，和SEQ ID NO: 43所示輕鏈可變區中的輕鏈CDR1、輕鏈CDR2和輕鏈CDR3； (17) SEQ ID NO: 35所示重鏈可變區中的重鏈CDR1、重鏈CDR2和重鏈CDR3，和SEQ ID NO: 43所示輕鏈可變區中的輕鏈CDR1、輕鏈CDR2和輕鏈CDR3； (18) SEQ ID NO: 37所示重鏈可變區中的重鏈CDR1、重鏈CDR2和重鏈CDR3，和SEQ ID NO: 43所示輕鏈可變區中的輕鏈CDR1、輕鏈CDR2和輕鏈CDR3； (19) SEQ ID NO: 51所示重鏈可變區中的重鏈CDR1、重鏈CDR2和重鏈CDR3，和SEQ ID NO: 52所示輕鏈可變區中的輕鏈CDR1、輕鏈CDR2和輕鏈CDR3； (20) SEQ ID NO: 59所示重鏈可變區中的重鏈CDR1、重鏈CDR2和重鏈CDR3，和SEQ ID NO: 60所示輕鏈可變區中的輕鏈CDR1、輕鏈CDR2和輕鏈CDR3；或 (21) SEQ ID NO: 67所示重鏈可變區中的重鏈CDR1、重鏈CDR2和重鏈CDR3，和SEQ ID NO: 68所示輕鏈可變區中的輕鏈CDR1、輕鏈CDR2和輕鏈CDR3。
- 根據請求項1-3中任一項所述的抗體或其抗原結合片段，所述抗體或其抗原結合片段包含： (1) 重鏈可變區，所述重鏈可變區包含如SEQ ID NOs: 7、9、11、13、27、29、31、33、35、37、51、59或67所示的胺基酸序列，或與SEQ ID NOs: 7、9、11、13、27、29、31、33、35、37、51、59或67所示的胺基酸序列具有至少80%相同性的胺基酸序列； (2) 輕鏈可變區，所述輕鏈可變區包含如SEQ ID NOs: 15、17、19、39、41、43、52、60或68所示的胺基酸序列，或與SEQ ID NOs: 15、17、19、39、41、43、52、60或68所示的胺基酸序列具有至少80%相同性的胺基酸序列；或 (3) 如(1)所示的重鏈可變區以及如(2)所示的輕鏈可變區。
- 根據請求項1-4中任一項所述的抗體或其抗原結合片段，所述抗體或其抗原結合片段包含重鏈可變區和輕鏈可變區，其中， (1) 重鏈可變區包含如SEQ ID NO: 7所示的胺基酸序列或與SEQ ID NO: 7具有至少80%相同性的胺基酸序列，和輕鏈可變區包含如SEQ ID NO: 15所示的胺基酸序列或與SEQ ID NO: 15具有至少80%相同性的胺基酸序列； (2) 重鏈可變區包含如SEQ ID NO: 9所示的胺基酸序列或與SEQ ID NO: 9具有至少80%相同性的胺基酸序列，和輕鏈可變區包含如SEQ ID NO: 17所示的胺基酸序列或與SEQ ID NO: 17具有至少80%相同性的胺基酸序列； (3) 重鏈可變區包含如SEQ ID NO: 11所示的胺基酸序列或與SEQ ID NO: 11具有至少80%相同性的胺基酸序列，和輕鏈可變區包含如SEQ ID NO: 17所示的胺基酸序列或與SEQ ID NO: 17具有至少80%相同性的胺基酸序列； (4) 重鏈可變區包含如SEQ ID NO: 13所示的胺基酸序列或與SEQ ID NO: 13具有至少80%相同性的胺基酸序列，和輕鏈可變區包含如SEQ ID NO: 17所示的胺基酸序列或與SEQ ID NO: 17具有至少80%相同性的胺基酸序列； (5) 重鏈可變區包含如SEQ ID NO: 9所示的胺基酸序列或與SEQ ID NO: 9具有至少80%相同性的胺基酸序列，和輕鏈可變區包含如SEQ ID NO: 19所示的胺基酸序列或與SEQ ID NO: 19具有至少80%相同性的胺基酸序列； (6) 重鏈可變區包含如SEQ ID NO: 11所示的胺基酸序列或與SEQ ID NO: 11具有至少80%相同性的胺基酸序列，和輕鏈可變區包含如SEQ ID NO: 19所示的胺基酸序列或與SEQ ID NO: 19具有至少80%相同性的胺基酸序列； (7) 重鏈可變區包含如SEQ ID NO: 13所示的胺基酸序列或與SEQ ID NO: 13具有至少80%相同性的胺基酸序列，和輕鏈可變區包含如SEQ ID NO: 19所示的胺基酸序列或與SEQ ID NO: 19具有至少80%相同性的胺基酸序列； (8) 重鏈可變區包含如SEQ ID NO: 27所示的胺基酸序列或與SEQ ID NO: 27具有至少80%相同性的胺基酸序列，和輕鏈可變區包含如SEQ ID NO: 39所示的胺基酸序列或與SEQ ID NO: 39具有至少80%相同性的胺基酸序列； (9) 重鏈可變區包含如SEQ ID NO: 29所示的胺基酸序列或與SEQ ID NO: 29具有至少80%相同性的胺基酸序列，和輕鏈可變區包含如SEQ ID NO: 41所示的胺基酸序列或與SEQ ID NO: 41具有至少80%相同性的胺基酸序列； (10) 重鏈可變區包含如SEQ ID NO: 31所示的胺基酸序列或與SEQ ID NO: 31具有至少80%相同性的胺基酸序列，和輕鏈可變區包含如SEQ ID NO: 41所示的胺基酸序列或與SEQ ID NO: 41具有至少80%相同性的胺基酸序列； (11) 重鏈可變區包含如SEQ ID NO: 33所示的胺基酸序列或與SEQ ID NO: 33具有至少80%相同性的胺基酸序列，和輕鏈可變區包含如SEQ ID NO: 41所示的胺基酸序列或與SEQ ID NO: 41具有至少80%相同性的胺基酸序列； (12) 重鏈可變區包含如SEQ ID NO: 35所示的胺基酸序列或與SEQ ID NO: 35具有至少80%相同性的胺基酸序列，和輕鏈可變區包含如SEQ ID NO: 41所示的胺基酸序列或與SEQ ID NO: 41具有至少80%相同性的胺基酸序列； (13) 重鏈可變區包含如SEQ ID NO: 37所示的胺基酸序列或與SEQ ID NO: 37具有至少80%相同性的胺基酸序列，和輕鏈可變區包含如SEQ ID NO: 41所示的胺基酸序列或與SEQ ID NO: 41具有至少80%相同性的胺基酸序列； (14) 重鏈可變區包含如SEQ ID NO: 29所示的胺基酸序列或與SEQ ID NO: 29具有至少80%相同性的胺基酸序列，和輕鏈可變區包含如SEQ ID NO: 43所示的胺基酸序列或與SEQ ID NO: 43具有至少80%相同性的胺基酸序列； (15) 重鏈可變區包含如SEQ ID NO: 31所示的胺基酸序列或與SEQ ID NO: 31具有至少80%相同性的胺基酸序列，和輕鏈可變區包含如SEQ ID NO: 43所示的胺基酸序列或與SEQ ID NO: 43具有至少80%相同性的胺基酸序列； (16) 重鏈可變區包含如SEQ ID NO: 33所示的胺基酸序列或與SEQ ID NO: 33具有至少80%相同性的胺基酸序列，和輕鏈可變區包含如SEQ ID NO: 43所示的胺基酸序列或與SEQ ID NO: 43具有至少80%相同性的胺基酸序列； (17) 重鏈可變區包含如SEQ ID NO: 35所示的胺基酸序列或與SEQ ID NO: 35具有至少80%相同性的胺基酸序列，和輕鏈可變區包含如SEQ ID NO: 43所示的胺基酸序列或與SEQ ID NO: 43具有至少80%相同性的胺基酸序列； (18) 重鏈可變區包含如SEQ ID NO: 37所示的胺基酸序列或與SEQ ID NO: 37具有至少80%相同性的胺基酸序列，和輕鏈可變區包含如SEQ ID NO: 43所示的胺基酸序列或與SEQ ID NO: 43具有至少80%相同性的胺基酸序列； (19) 重鏈可變區包含如SEQ ID NO: 51所示的胺基酸序列或與SEQ ID NO: 51具有至少80%相同性的胺基酸序列，和輕鏈可變區包含如SEQ ID NO: 52所示的胺基酸序列或與SEQ ID NO: 52具有至少80%相同性的胺基酸序列； (20) 重鏈可變區包含如SEQ ID NO: 59所示的胺基酸序列或與SEQ ID NO: 59具有至少80%相同性的胺基酸序列，和輕鏈可變區包含如SEQ ID NO: 60所示的胺基酸序列或與SEQ ID NO: 60具有至少80%相同性的胺基酸序列；或 (21) 重鏈可變區包含如SEQ ID NO: 67所示的胺基酸序列或與SEQ ID NO: 67具有至少80%相同性的胺基酸序列，和輕鏈可變區包含如SEQ ID NO: 68所示的胺基酸序列或與SEQ ID NO: 68具有至少80%相同性的胺基酸序列。
- 根據請求項1-5中任一項所述的抗體或其抗原結合片段，其中所述抗體或其抗原結合片段是嵌合或人源化的； 可選地，所述抗體或其抗原結合片段是IgG1、IgG2或IgG4同種型。
- 根據請求項1-6中任一項所述的抗體或其抗原結合片段，其中所述抗體或其抗原結合片段還包含重鏈恆定區和輕鏈恆定區，所述重鏈恆定區包含SEQ ID NOs: 69或71所示的胺基酸序列或與SEQ ID NOs: 69或71所示的胺基酸序列相比具有1、2、3、4或5個胺基酸的取代、刪除和添加，所述輕鏈恆定區包含SEQ ID NO: 73所示的胺基酸序列或與SEQ ID NO: 73所示的胺基酸序列相比具有1、2、3、4或5個胺基酸的取代、刪除和添加。
- 根據請求項1-7中任一項所述的抗體或其抗原結合片段，其中所述抗體或其抗原結合片段選自單株抗體、融合蛋白、重組多肽、多特異性抗體、Fab片段、F(ab')2片段、Fd片段、Fv片段、dAb片段、分離的CDR區、單鏈Fv分子或其組合。
- 一種分離的抗體或其抗原結合片段，其中所述抗體或其抗原結合片段與請求項1-8中任一項所述的抗體或其抗原結合片段結合相同表位，或競爭結合IL-36R。
- 一種分離的核酸分子，其編碼請求項1-8中任一項所述的抗體或其抗原結合片段。
- 一種免疫綴合物或多特異性分子，其包含請求項1-8中任一項所述的抗體或其抗原結合片段。
- 一種藥物組成物，其包含請求項1-8中任一項所述的抗體或其抗原結合片段，以及一種或多種藥學上可接受的賦形劑、稀釋劑或載劑。
- 一種在有需要的受試者中抑制IL-36/IL-36R信號轉導的方法，所述方法包括向所述受試者施用治療有效量的請求項1-8中任一項所述的抗體或其抗原結合片段，請求項11所述的免疫綴合物或多特異性分子，或者請求項12所述的藥物組成物。
- 一種在有需要的受試者中治療IL-36/IL-36R媒介的相關疾病和病症的方法，所述方法包括向所述受試者施用治療有效量的請求項1-8中任一項所述的抗體或其抗原結合片段，請求項11所述的免疫綴合物或多特異性分子，或者請求項12所述的藥物組成物。
- 根據請求項14所述的方法，其中所述IL-36/IL-36R媒介的相關疾病和病症包括自身免疫性疾病、發炎疾病、呼吸系統疾病、代謝失調或癌症。
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