TW201909904A

TW201909904A - 高濃度調配物

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Publication number: TW201909904A
Application number: TW107127108A
Authority: TW
Inventors: 馬利安那狄米崔瓦; 威廉Ｊ班內特; 琦王
Original assignee: 愛爾蘭商爵士製藥愛爾蘭有限責任公司
Priority date: 2017-08-03
Filing date: 2018-08-03
Publication date: 2019-03-16
Also published as: AR112403A1; US20200261489A1; ZA202000676B; BR112020002289A2; AU2018309068A1; WO2019028340A1; EP3661484A1; WO2019028340A9; US20210338707A1; AU2018309068A8; CA3071544A1; JP2020530004A; CN111132663A; MX2020001337A; SG11202000952PA; KR20200121780A; IL272405A; CO2020001873A2

Abstract

一種可藉由多種非經腸途徑投與之低黏度、高濃度核酸組合物，其給藥頻率可低於當前市售核酸產品。特定言之，用於皮下、肌肉內及腹膜內投藥之低黏度去纖維蛋白多核苷酸(defibrotide)調配物對於患者而言更便利及/或可在醫院環境外投與。本發明之調配物可用於治療多種病狀，包括例如治療周邊動脈病、治療急性腎機能不全、治療急性心肌缺血以及治療及預防竇狀隙堵塞症候群(sinusoidal obstruction syndrome)或VOD。

Description

高濃度調配物

去纖維蛋白多核苷酸，一種核酸鹽，為隨機序列之複雜混合物，其主要為來源於動物黏膜DNA之單股聚去氧核糖核苷酸。其對血管內皮細胞，尤其小型血管之內皮細胞具有保護作用，且具有抗血栓形成、消炎及抗缺血特性。

去纖維蛋白多核苷酸之鈉鹽以Defitelio® (Gentium S.r.L., Villa Guardia, Italy)市售且當前批准用於治療患有肝靜脈閉塞疾病(VOD)(亦稱為竇狀隙堵塞症候群(SOS))、造血幹細胞移植(HSCT)之後的腎或肺功能障礙之成年人及兒童患者。其每隔6小時藉由2小時靜脈內輸注來向患者投與，持續最少21天。輸注療程之頻率及較大體積需要患者具有用於去纖維蛋白多核苷酸投藥之第二條IV管線，以避免混合去纖維蛋白多核苷酸與其他必須靜脈內給藥之藥物。該治療方案將與證實去纖維蛋白多核苷酸可能具有治療性之用於其他疾病適應症之門診給藥不相容。因此，以對患者而言更便利之方式投與去纖維蛋白多核苷酸將為有利的，該方式允許在門診環境中給藥、允許患者經由相容投藥裝置在家自行投藥或降低醫院環境中之給藥持續時間及液體體積。因此，需要新穎去纖維蛋白多核苷酸調配物，其將實現用於在家投與醫藥學上有效劑量之新穎及更有利於患者之給藥方案。

本發明涵蓋大量核酸及其鹽，包括去纖維蛋白多核苷酸，以及製備此等分子之高濃度調配物同時在生理學相關水準下保持黏度及重量莫耳滲透濃度之能力。此等高濃度調配物向患者提供大量益處，包括例如皮下投與及在醫院環境外部由患者投與之能力。患者及其家庭以及醫院可體會到自行投藥及藉由除IV途徑以外的方式來投藥之優點。醫院需要用於治療及監測此等患者之時間量及資源顯著減少，其對醫院及患者提供降低之經濟負擔。本文中提供之調配物特定地關於去纖維蛋白多核苷酸；然而，應理解，本發明適用於大量核苷酸產品，例如單股及雙股DNA或RNA產品，諸如DNA及RNA疫苗。

本文中提供用於治療性投藥之核酸組合物，其可藉由多種非經腸途徑投與且其可藉由與當前市售之類似核酸產品相比頻率較低及/或持續時間較短之給藥來改良患者之生活品質。更特定言之，提供低黏度、高濃度核酸調配物，其亦可藉由除靜脈內以外的途徑投與，包括例如皮下、肌肉內及/或腹膜內途徑。在某些實施例中，高濃度核酸調配物係自行投與及/或在門診環境中投與。在特定實施例中，核酸為去纖維蛋白多核苷酸。本發明之調配物可用於治療及/或預防多種病狀，包括例如造血幹細胞移植(HSCT)相關併發症，諸如竇狀隙堵塞症候群或肝血管阻塞疾病(VOD)、移植體對抗宿主疾病(GvHD)、移植相關血栓性微血管病(TA-TMA)或特發性肺炎症候群。其他病狀，包括例如其他TMA，包括血栓性血小板減少性紫瘢(TTP)及溶血性-尿毒症性症候群(HUS)、急性心肌缺血、缺血性中風、實體器官移植中之局部缺血再灌注損傷、急性呼吸窘迫症候群(ARDS)、鐮狀細胞血管阻塞危症(VOC)、鐮狀細胞相關急性胸腔症候群、瀰漫性血管內凝血(DIC)、敗血症、腎機能不全、其他冠狀動脈或周邊動脈疾病、血液惡性病或實體腫瘤。

因此，在一個實施例中，提供用於向患者治療性投藥之低黏度調配物，其包含核酸；其中核酸以至少80 mg/mL之濃度存在。在一些實施例中，核酸以85與400 mg/mL之間的濃度存在。在一些實施例中，核酸以至少85、90、95或100 mg/mL之濃度存在。核酸可以100與400 mg/mL，或100與300 mg/mL之間的濃度存在。在一些實施例中，核酸具有45至65個鹼基及/或13與20 kDa之間的平均分子量。在某些實施例中，核酸主要為單股的。因此較佳的是，核酸為至少70%、75%、80%、85%、90%或95%單股。在一些實施例中，核酸中多達5%、10%、15%、20%、25%或多達30%的鹼基為成對的。在其他實施例中，核酸為至多5%、10%、15%、20%、25%或至多30%雙股的。

在一些實施例中，核酸以鹼金屬鹽形式存在。在某些實施例中，鹼金屬鹽為鈉鹽。在特定實施例中，核酸主要為單股聚去氧核糖核苷酸。在一些較佳實施例中，核酸主要為單股聚去氧核糖核苷酸性鈉鹽。在特定實施例中，核酸為去纖維蛋白多核苷酸。

對於經改良之患者便利性，重要的是，可注射劑以低黏度、等張及/或搖變減黏性治療性調配物形式投與患者。在去纖維蛋白多核苷酸之情況下，由於濃度增加，濃度之極小變化引起黏度之顯著變化且此變化亦受溫度影響。本發明實現濃度增加，同時仍符合良好耐受之可注射生物製劑之準則。

因此，在一個實施例中，以上調配物具有小於70厘泊(cP)之黏度。在一個實施例中，黏度在5與65 cP，或10與60 cP之間。較佳的是，在室溫條件(諸如15℃至35℃)下量測黏度。更佳的是，在18℃與25℃之間量測黏度。甚至更佳的是，在21℃至23℃之間量測黏度。

在另一實施例中，以上調配物具有240與700 mOsm/kg之間的重量莫耳滲透濃度。在其他實施例中，以上調配物具有300與500 mOsm/kg之間的重量莫耳滲透濃度。在特定實施例中，以上調配物具有6.8與8.5之間或7與8之間的pH值。

某些緩衝液或賦形劑可用於控制穩定性、黏度及/或重量莫耳滲透濃度。在一個實施例中，以上調配物包含一或多種緩衝液或賦形劑。在某些實施例中，賦形劑選自由以下組成之群：檸檬酸鈉、丁二酸鹽、氯化鈉、精胺酸、離胺酸、利多卡因(lidocaine)或聚山梨醇酯-80(「PS-80」)。在一些實施例中，緩衝液選自由以下組成之群：甘胺醯甘胺酸、組胺酸、參(羥基甲基)胺基甲烷(「TRIS」)、檸檬酸鈉或4-(2-羥基乙基)-1-哌嗪乙磺酸(「HEPES」)緩衝液。在一個較佳實施例中，緩衝液為二肽，諸如L-肌肽或甘胺醯甘胺酸。單獨的甘胺醯甘胺酸及與其他賦形劑之組合可藉由最小化核酸之黏度及/或在既定濃度下之重量莫耳滲透濃度來改良調配物之溶液特性。含有甘胺醯甘胺酸之調配物顯示針對已知可改良耐受性及最小化在注射時之不適感的生理學相關條件最佳優化之溶液屬性。因此，在一個實施例中，提供向患者治療性投藥之低黏度調配物，其包含核酸；其中核酸以至少80 mg/mL之濃度存在；及甘胺醯甘胺酸。在一些較佳實施例中，核酸為去纖維蛋白多核苷酸。去纖維蛋白多核苷酸在液體調配物中顯示非牛頓(non-Newtonian)剪切稀化及搖變減黏性特性，且此特性在高濃度液體調配物中極明顯。因此，在某些實施例中，提供用於向患者治療性投藥之低黏度調配物，其包含至少80 mg/mL之去纖維蛋白多核苷酸溶液；及甘胺醯甘胺酸。在一些實施例中，甘胺醯甘胺酸以5與100 mM之間的量存在。更佳的是，甘胺醯甘胺酸以5與60 mM或10與40 mM之間的量存在。

在另一實施例中，提供用於向患者治療性投藥之低黏度調配物，其包含：100與300 mg/mL之間的含有超過70%單股之核酸、具有45至65個鹼基及13與20 kDa之間的平均分子量之多分散性聚去氧核糖核苷酸；及賦形劑，其包含10與60 mM之間的量的甘胺醯甘胺酸。在另一實施例中，提供用於向患者治療性投藥之低黏度調配物，其包含：150與250 mg/mL之間的含有超過70%單股之核酸、具有45與65個鹼基之間的平均長度及13與20 kDa之間的平均分子量之多分散性聚去氧核糖核苷酸；賦形劑，其包含10與100 mM之間的量之甘胺醯甘胺酸；且其中調配物具有5與70 cP之間的黏度，及/或240與550 mOsm/kg之間的重量莫耳滲透濃度且適用於向患者非經腸投與。在一些較佳實施例中，核酸為去纖維蛋白多核苷酸。

在一個實施例中，提供用於向患者治療性投藥之低黏度調配物，其包含：100與300 mg/mL之間的包含超過70%單股之去纖維蛋白多核苷酸、具有45與65個鹼基之間的平均長度及13與20 kDa之間的平均分子量之多分散性聚去氧核糖核苷酸；賦形劑，其包含10與100 mM之間的量之甘胺醯甘胺酸；其中調配物具有5與70 cP之間的黏度、240與500 mOsm/kg之間的重量莫耳滲透濃度且適用於向患者非經腸投與。

在一個實施例中，提供非經腸投與本發明之低黏度調配物之方法。在一些實施例中，調配物適用於皮下投藥。在某些實施例中，調配物包含用於皮下遞送(包括自行投藥)之裝置。在一較佳實施例中，提供經5分鐘至3小時皮下傳遞5與50 mL之間的水性流體之去纖維蛋白多核苷酸劑量之方法。

在其他態樣中，本文中提供用於製備本文中所揭示之調配物之方法。在其他態樣中，提供用於封裝本發明之調配物之方法。在某些態樣中，提供用於在能夠皮下投藥之裝置中封裝本發明之調配物之方法。

在一個實施例中，以上調配物可用於由患者自行投藥。在某些實施例中，以上調配物可用於在醫院環境外投藥。

在一些實施例中，病狀或疾病為造血幹細胞移植之後的伴有腎或肺功能障礙之肝VOD。

去纖維蛋白多核苷酸(CAS編號83712-60-1)為來源於天然來源之材料之物質。其為藉由自動物黏膜提取獲得之相對低分子量聚去氧核糖核苷酸之鈉鹽。去纖維蛋白多核苷酸具有不同尺寸範圍且已知具有13與20 kDa之間的平均分子量(Mw)。去纖維蛋白多核苷酸可根據美國專利案第4,985,552號及美國專利案第5,223,609號獲得及/或呈現相同的美國專利案第4,985,552號及美國專利案第5,223,609號中描述之物理/化學特徵，其各自以引用之方式併入本文中。模擬去纖維蛋白多核苷酸之治療性作用之合成去纖維蛋白多核苷酸，以磷酸二酯寡核苷酸形式存在，描述於US20110092576中，其以全文引用之方式併入本文中。

去纖維蛋白多核苷酸具有多種治療性應用，包括用作抗血栓劑(美國專利案第3,829,567)號、治療周邊動脈病、治療急性腎機能不全(美國專利案第4,694,134號)及治療急性心肌局部缺血(美國專利案第4,693,995號)。最近，去纖維蛋白多核苷酸已用於治療及預防竇狀隙堵塞症候群/靜脈閉塞疾病(EU clinical trial EudraCT:2004-000592-33, US clinical trial 2005-01 (ClinicalTrials.gov identifier: NCT00358501))。用6.25 mg/kg劑量治療患者直至VOD之標誌及症狀緩和，該劑量以每隔六小時進行之兩小時靜脈內輸注形式提供。如上文所提及，去纖維蛋白多核苷酸當前以名稱Defitelio®，以用於注射之單瓶形式出售(可自Gentium S.r.L., Villa Guardia, Italy購得；參見可在dailymed.nlm.nih.gov/dailymed/search.cfm?labeltype=all&query=defibrotide獲得之藥品說明書)。藉由在5%右旋糖注射劑、USP或0.9%氯化鈉注射劑、USP中稀釋，以靜脈內輸注劑形式製備Defitelio®。靜脈內製劑當在室溫下儲存時在4小時內使用，或當在冷凍下儲存時在24小時內使用。其經4次靜脈內輸注，經總共8小時投與。

用於藉由靜脈內(IV)、皮下(SC)、肌肉內(IM)或口服(PO)投藥途徑投藥之新穎去纖維蛋白多核苷酸調配物及/或劑型之研發可向經歷治療之患者提供經改良之生活品質。舉例而言，頻率自每天4次減少至每天一次或兩次以及縮減輸注持續時間可向所治療之患者提供生活品質改良。去纖維蛋白多核苷酸之SC投藥途徑可提供臨床投藥時間之顯著縮減且在需要情況下實現產品之門診給藥。包括大體積SC遞送裝置之組合產品亦可由健康照護專業人士(HCP)、看護者提供額外的便利性及更快的投藥，或甚至由患者自行投藥。經口投藥途徑可與易於劑型製備及投藥、減少疼痛相關聯且通常受患者喜愛。上文所列之調配物、藥物遞送及劑型研發研究之實例集中於改良生活品質及在用去纖維蛋白多核苷酸治療時的患者經歷。

在一些實施例中，投藥途徑影響本發明之調配物之功效及/或壽命。在一些實施例中，皮下、肌肉內及/或腹膜內投藥與全身性半衰期延長(與靜脈內投與之相同調配物相比)相關聯。在一些實施例中，與靜脈內投與之相同調配物相比，調配物之皮下投藥提供血漿濃度之較低峰谷比。在一些實施例中，與靜脈內投與之相同調配物相比，皮下投藥提供改良之功效及/或改良調配物之安全概況。 4.1 定義提供以下定義以用於更好地理解本發明：

如本文所使用，術語「核酸」包括「核酸及其鹽」且係指包含核苷酸之分子，包括由在鏈中連接在一起之核苷酸單元組成聚合物或大型生物分子；此包括聚核苷酸及寡核苷酸，包括包含核糖及/或去氧核苷單體之聚核苷酸及寡核苷酸；其在尺寸及/或序列方面可為均勻的或其可為多分散的；其可具有任何長度，包括不同長度之混合物，但一些實施例通常在10-400個鹼基、20-200個鹼基或45-60個鹼基長度之間；在一些實施例中，平均MW在13與20千道爾頓(「kDa」)之間；其可為單股或雙股，但在本申請案中其他地方陳述之限制內，一些實施例主要為單股聚去氧核糖核苷酸鹽。此亦包括自動物腸黏膜基因組DNA之受控解聚合獲得之DNA序列且作為一個實施例，包括去纖維蛋白多核苷酸。

如本文所使用，術語「去纖維蛋白多核苷酸」係指去纖維蛋白多核苷酸之天然及合成來源，包括如美國專利申請案第20110092576號中所描述只合成磷酸二酯寡核苷酸。術語去纖維蛋白多核苷酸標識藉由自動物及/或植物組織提取而獲得之聚去氧核糖核苷酸，但其亦可以合成方式產生；聚去氧核糖核苷酸通常以鹼金屬-金屬鹽形式使用，通常為鈉鹽，且通常具有13至30 kDa之分子量(CAS註冊號：83712-60-1)。較佳地，去纖維蛋白多核苷酸係根據美國專利案第4,985,552號及美國專利案第5,223,609號獲得及/或呈現相同的美國專利案第4,985,552號及美國專利案第5,223,609號中描述之物理/化學特徵，其以引用的方式併入本文中。更特定言之，去纖維蛋白多核苷酸為具有以下隨機序列式之聚去氧核糖核苷酸之混合物：P1-5，(dAP)₁₂ _- ₂₄ 、(dGP)₁₀ _- ₂₀ 、(dPp)₁₃ _- ₂₆ 、(dCP)₁₀ _- ₂₀ ，其中：P=磷酸根；dAp=去氧腺苷酸單體；dGp=去氧鳥苷酸單體；dTp=去氧胸苷酸單體；dCp=去氧胞苷酸單體；及/或展示以下化學/物理特性：電泳=均勻陽極遷移率及/或消光係數，260±1 nm下之E₁ cm¹ ^% =220±10，及/或E₂₃₀ /E₂₆₀ =0.45±0.04，及/或莫耳消光係數(參考磷)ε(P)=7.750±500，及/或旋轉力[α]_D ^20° =53°±6；及/或可逆增色性，表示為原生DNA中之%及/或h=15±5。

如本文所使用，術語「聚去氧核糖核苷酸」係指一種聚合物，其組成單體為去氧核糖核苷酸。

如本文所使用，術語「寡去氧核苷酸」係指任何由去氧核苷單體構成之寡核苷酸。

如本文所使用，術語「平均MW」係指聚合物之平均或中間分子量。

如本文中所使用，術語「甘胺醯甘胺酸」或「Gly-Gly」或「GlyGly」或「glygly」係指簡單肽，其由兩個甘胺酸分子製成(甘胺酸為簡單、非必需胺基酸)；二肽係用於更複雜的肽之合成。甘胺醯甘胺酸，一種兩性電解質，有時亦稱為二甘醇、二甘胺酸、甘胺酸二肽、N - 甘胺醯甘胺酸。其可藉由諸如CN專利申請案101759767中描述之方法製得，其以全文引用之方式併入本文中。

如本文中所使用，術語「賦形劑」係指任何可與去纖維蛋白多核苷酸一起調配且可出於增強最終劑型中之去纖維蛋白多核苷酸(諸如促進其生物可用性、降低黏度及/或重量莫耳滲透濃度、增強組合物之可溶性或增強長期穩定性)的目的而包括之物質。賦形劑亦可適用於製造過程，以幫助處理活性物質。適合的賦形劑之選擇亦取決於投藥途徑及劑型，以及活性成分及其他因素。因此，去纖維蛋白多核苷酸可與此項技術中已知的任何可實現調適其在製造或投藥期間之效能以及其活體外及活體內效能之賦形劑組合。許多此等賦形劑可用於調適去纖維蛋白多核苷酸調配物之藥物動力學概況。

如本文中所使用，術語「緩衝液」或「緩衝劑」係指一種溶液，其在添加少量酸或鹼時阻止氫離子濃度變化。此包括例如用於在添加另一種酸性或鹼性化合物之後，將溶液之pH值保持在大致所選擇的pH值之弱酸或鹼。此類緩衝液或緩衝劑之功能為在向溶液中添加酸或鹼時防止該溶液之pH值變化。

如本文中所使用之術語「pH值調節劑」係指用於將溶液之pH值變為所選pH值之酸或鹼。此類試劑之功能為在添加酸性或鹼性化合物之後將溶液之pH值變為所需值。

如本文中所使用，術語「調配物」係指用於治療用途之組合物，包括例如本文中所揭示之醫藥組合物之穩定及醫藥學上可接受之製劑。

如本文中所使用，術語「低黏度調配物」係指具有小於約70厘泊(cP)之黏度之調配物。通常，視量測空間之地理區域及/或天氣條件而定，在15℃至35℃之環境/室溫下量測黏度；有時在18℃至25℃之間或典型地在21℃至23℃之間。

如本文中所使用，術語「水性調配物」係指水基調配物，特定言之，水性溶液之調配物。

如本文中所使用，術語「高濃度調配物」或「高濃度液體調配物」或「HCLF」係指其中核酸之濃度為約80 mg/mL或更高；或約85 mg/mL或更高之調配物。

如本文中所使用，術語「高濃度去纖維蛋白多核苷酸調配物」係指其中去纖維蛋白多核苷酸濃度為約80 mg/mL或更高之調配物。

如本文中所使用，術語「藥物動力學」或「PK」係指體內個別藥劑之活體內移動，包括血漿濃度時間概況及動力學參數，例如該藥劑之最大濃度(Cmax)、曲線下面積(AUC)及達到最大濃度之時間(Tmax)。

如與本發明之組合物結合使用之術語「醫藥學上可接受」或「可接受」係指生理學上可耐受且在投與動物及/或人類時通常不產生不良反應的此類組合物之分子實體及其他成分。較佳地，如本文中所使用，術語「醫藥學上可接受」意謂經聯邦或州政府之監管機構批准或在美國藥典(U.S.Pharmacopeia)或其他公認的藥典中列出適用於哺乳動物(且更特定言之，適用於人類)。

如本文中所使用，術語「生理學相關」係指適用於待投與動物受試者，特定言之，人類受試者之醫藥學、治療性或其他劑型之量測值、水準或量。

如本文所使用，術語「非經腸」係指任何非口服投藥手段。其包括靜脈內(i.v.或IV)輸注、IV快速注射、皮下(s.c.或SC)及肌肉內(i.m.或IM)注射。

如本文所使用，術語「投與」或「投藥」意欲涵蓋用於直接及間接遞送化合物至其所欲作用位點之所有手段。

如本文中所使用，術語「動物」意謂任何動物，包括哺乳動物且特定言之，人類。

如本文所使用，術語「患者」係指哺乳動物，特定言之，人類。由所揭示之實施例之方法治療之患者包括人類個體及用於獸醫學目的之動物個體(例如犬、貓、猴、黑猩猩及/或其類似物)。患者可為雄性或雌性且可為任何適合的年齡，例如新生兒、嬰兒、少年(juvenile)、青少年(adolescent)、成年或老年。

如本文中所使用，術語「治療」及其類似術語係指緩解或消除疾病及/或其伴隨症狀之方法。舉例而言，在本發明之含義中，術語「治療」亦表示阻止、延緩發作(亦即疾病之臨床表現之前的週期)及/或降低疾病發生或惡化之風險。

當用於修飾組合物(諸如活性劑、緩衝劑及滲透劑)之成分時，術語「一」不表示數量之限制，而是表示存在所參考之項目中之至少一者。術語「或」或「及/或」係作為功能字組用於指示兩個字組或表述為一起的或單獨的。術語「包含」、「具有」、「包括」及「含有」應理解為開放式術語(亦即意謂「包括(但不限於)」)。所有關於相同組分或性質之範圍之端點為包含性的且可獨立組合的。

遍及本說明書，術語「約」及/或「大致」可與數值及/或範圍結合使用。術語「約」應理解為意謂此等值近似等於所述值。舉例而言，「約1200[單位]」可意謂在1200之±10%內，在±10%、±9%、±8%、±7%、±7%、±5%、±4%、±3%、±2%、±1%、小於±1%或其中任何其他值或值範圍內。此外，片語「小於約[值]」或「大於約[值]」應根據本文中提供之術語「約」之定義來理解。術語「約」及「大致」可互換使用。

遍及本說明書，提供某些量之數值範圍。應理解，此等範圍包含其中所有子範圍。因此，範圍「50至80」包括其中所有可能的範圍(例如51-79、52-78、53-77、54-76、55-75、70-70等)。此外，既定範圍內之所有值可為籍此涵蓋之範圍之端點(例如範圍50-80包括具有諸如55-80、50-75等之端點之範圍)。 4.2 包含核酸之醫藥學調配物

本發明之一個實施例為用於對患者之便利藥物遞送的核酸及其鹽之低黏度、高濃度液體調配物(HCLF)之研發。特定言之，研究核酸組合物，其可皮下投與及/或與當前市售核酸產品相比可需要較低頻率給藥。在某些實施例中，高濃度核酸調配物係根據門診自行投與。本發明之一些調配物具有搖變減黏性及剪切稀化特性，其對於皮下及/或肌肉內投藥為尤其較佳的。與當前可商購的核酸調配物相比，如本文所提供之調配物提供經改良之耐受性、在治療期間之患者便利性及門診給藥之機會。在一些實施例中，本文中提供之高濃度核酸調配物之黏度隨時間推移而降低。在某些實施例中，本文中提供之高濃度核酸調配物之黏度及/或流動性在剪應力增加之情況下降低。應理解，此類特性對於可注射劑及遞送裝置(諸如注射器或預負載皮下裝置)而言為較佳的，其中調配物所暴露之應力或剪應力隨調配物自注射器/裝置之筒管穿過針之縮小孔而增加。在某些實施例中，核酸為去纖維蛋白多核苷酸。本發明之調配物，特定言之，包含去纖維蛋白多核苷酸之調配物，可用於治療多種病狀，包括例如治療周邊動脈病、治療急性腎機能不全、治療急性心肌缺血、治療及預防移植體對抗宿主疾病(GvHD)、治療及預防移植相關血栓性微血管病(TA-TMA)、治療局部缺血性再灌注損傷(諸如在實體器官移植(例如Kidney IRI)中)、治療及預防細胞介素釋放症候群(CRS)或嵌合抗原受體(CAR)-T細胞相關腦病症候群(CRES)以及治療及預防竇狀隙堵塞症候群或VOD。在一些實施例中，本發明之調配物，特定言之包含去纖維蛋白多核苷酸之調配物，可向已經歷、正在經歷或可能經歷化學療法、幹細胞切除及/或造血幹細胞移植(HSCT)之患者投與。去纖維蛋白多核苷酸、其製備及測試方法之其他用途描述於以下專利案、專利申請案及文章中，其各自以全文引用之方式併入本文中：美國專利案第3,770,720號；第3,829,567號；第3,899,481號；第4,693,134號；第4,693,995號；第4,938,873號；第4,985,552號；第5,081,109號；第5,116,617號；第5,223,609號；第5,646,127號；第5,646,268號；第5,977,083號；第6,046,172號；第6,699,985號；第6,767,554號；第7,338,777號；第8,551,967號；第8,771,663號，美國專利公開案第20080194506號；第20090131362號；第20110092576號；第20130231470號；第20140005256號，美國專利申請案第14/019,674號；第14/323,918號；第14/408,272號；第62/656,486號；第62/657,161號；第62/664,657號；及國際申請案第WO 2013/190582號及PCT/EP2015/077355。亦參見Palmer及Boa, Defibrotide. A Review of its pharmacodynamic and pharmacokinetic properties, and therapeutic use in vascular disorders, Drugs, 1993年2月;45(2):259-94；其以引用之方式併入本文中。所有其他所引用之參考文獻亦以全文引用之方式併入本文中。

在某些實施例中，藉由本文所描述之方法評估之去纖維蛋白多核苷酸係由諸如美國專利案第4,985,552號及第5,223,609號中描述之方法製造，其皆以全文引用之方式併入本文中。在本發明之一個較佳實施例中，去纖維蛋白多核苷酸為對應於以下隨機序列式之聚去氧核糖核苷酸： P1-5，(dAp)12-24，(dGp)10-20，(dTp)13-26，(dCp)10-20 其中：P=磷酸根 dAp=去氧腺苷酸單體 dGp=去氧鳥苷酸單體 dTp=去氧胸苷酸單體 dCp=去氧胞苷酸單體

如本文中所使用，去纖維蛋白多核苷酸可具有一或多種或所有以下化學-物理性質：電泳=均勻陽極遷移率；消光係數，在260±1 nm下之E₁ cm¹ ^% =220±10；吸光比，E₂₃₀ /E₂₆₀ =0.45±0.04；莫耳消光係數(參考磷)，ε(P)=7.750±500；旋轉力[α]_D ^20° =53°±6；可逆增色性，表示為原生DNA中之%，h=15±5；及嘌呤:嘧啶比為0.95±0.5。

本發明之一個實施例包含核酸調配物，其具有各種緩衝液或賦形劑，諸如Remington, The Science and Practice of Pharmacy (Remington the Science and Practice of Pharmacy) 第二十二版, 2013 Pharmaceutical Press中發現之緩衝液或賦形劑，其以全文引用之方式併入本文中。尤其參見在第1837頁開始之賦形劑之專論。較佳地，核酸為去纖維蛋白多核苷酸。在一些實施例中，使用除去纖維蛋白多核苷酸以外的核酸。

在一些實施例中，本發明包括二肽緩衝液(例如L-肌肽或甘胺醯甘胺酸)。本發明之一個較佳實施例包括甘胺醯甘胺酸，其為甘胺酸之二肽。其可自供應商購得，諸如Sigma-Aldrich，且適用作生物系統之賦形劑。在本發明之特定實施例中，甘胺醯甘胺酸以約1-50 mM之間的濃度存在。在一些實施例中，甘胺醯甘胺酸以約5至約100 mM、約10至約60 mM或約10至約40 mM之間的濃度存在。本發明之調配物中可存在其他緩衝液或賦形劑，諸如約5至約50 mM之間的濃度之檸檬酸鈉；舉例而言，約5至約60 mM、約10至約60 mM或約10至約40 mM之間的濃度。

可向本發明之調配物中添加其他化合物，諸如防腐劑、鹽或pH值調節劑。

在本發明之一些實施例中，低黏度調配物之黏度隨時間推移而降低。在一些實施例中，黏度在調配物儲存期間降低。在一些實施例中，黏度在增加剪應力、攪拌及/或壓力情況下降低。在一些實施例中，黏度在低黏度調配物之投藥期間(例如當通過針時)降低。在較佳實施例中，在室溫條件(諸如15℃至35℃)下量測黏度。更佳的是，在18℃至25℃之間量測黏度。甚至更佳的是，在21℃至23℃之間量測黏度。本發明之一個實施例為用於遞送本發明之調配物之方法。在某些實施例中，本發明之HCLF係皮下遞送。在一些實施例中，借助於可由患者使用之裝置來皮下投與本發明之調配物。用於皮下投藥之裝置可經預填充，用例如預定義之成年或兒科劑量，或可用於投與對個別患者具有特異性之基於體重之劑量。在一些實施例中，患者決定劑量且投與該劑量。在某些實施例中，借助於市售裝置(諸如FREEDOM60^® 泵或其類似物(RMS™ Medical Products))來皮下投與本發明之調配物。在一些特定實施例中，在小於約兩小時、小於約一小時、或小於約30分鐘內皮下投與本發明之調配物。在一些特定實施例中，經約5分鐘至約1小時、約10分鐘至約1小時或約15分鐘至約45分鐘皮下遞送本發明之調配物。

調配物劑量可由熟習此項技術者容易地顯而易見之多種因素決定。在一些實施例中，劑量係基於患者之基線體重。在一些實施例中，以每天每公斤體重約1至約100 mg之量投與調配物。舉例而言，以每天每公斤體重1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、64、65、66、67、68、69、70、71、72、73、74、75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99或100 mg之量投與調配物。在一些實施例中，以每天每公斤體重約25 mg之量投與調配物。在一些實施例中，對於超過35 kg之患者，基於患者體重之劑量四捨五入至最接近的10 mg。在一些實施例中，對於低於35 kg之患者，基於患者體重之劑量四捨五入至最接近的5 mg。在一些實施例中，調配物為去纖維蛋白多核苷酸調配物。

調配物可以單次日劑量或每天多劑量形式投與。在一些實施例中，每天一次投與調配物。在一些實施例中，以每天多劑量形式投與調配物。舉例而言，可以每天2、3、4、5、6、7、8、9或10次劑量形式投與調配物。在一些實施例中，以每天四次劑量形式投與調配物。在一些實施例中，以每隔6小時，每天四次劑量形式投與調配物。

如熟習此項技術者將瞭解，治療期可基於不同患者而變化。舉例而言，在一些實施例中，藉由監測肝VOD之病徵及症狀來測定治療期。舉例而言，若肝VOD之病徵及症狀在初始治療期之後仍存在，則繼續去纖維蛋白多核苷酸治療直至VOD之解析。在一些實施例中，若肝VOD之病徵及症狀在21天之後仍存在，則繼續去纖維蛋白多核苷酸治療直至VOD之解析，最多達60天。因此，在某些實施例中，治療期可持續21至60天。舉例而言，治療期持續21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59或60天。在一些實施例中，治療期持續21天。

在一些實施例中，與未經治療之患者或在調配物投藥之前的相同患者相比，本發明之調配物之投藥可治療或改善VOD及/或VOD症狀之發展。在一些實施例中，在第1天與第10年之間治療或改善患者中之VOD及/或VOD症狀。在一些實施例中，在約第1天、約第2天、約第3天、約第4天、約第5天、約第6天、約第1週、約第2週、約第3週、約第4週、約第5週、約第6週、約第7週、約第8週、約第9週、約第10週、約第20週、約第30週、約第40週、約第50週、約第60週、約第70週、約第80週、約第90週、約第100週、約第1年、約第2年或約第3年，與未經治療之患者或在去纖維蛋白多核苷酸投藥之前的相同患者相比，調配物之投藥可治療或改善VOD及/或VOD症狀之發展。在一些實施例中，在約1天、約1週、約1個月、約2個月、約3個月、約4個月、約5個月、約6個月、約1年、約2年、約5年或約10年或更長時間內，與未經治療之患者或在調配物投藥之前的相同患者相比，調配物之投藥可治療或改善VOD及/或VOD症狀之發展。

在一些實施例中，與未經治療之患者或在調配物投藥之前的相同患者相比，本發明之調配物之投藥可治療或改善VOD及/或VOD症狀達約1%、約5%、約10%、約20%、約30%、約40%、約50%、約60%、約70%、約80%、約90%或約100%。在一些實施例中，在約第1天、約第2天、約第3天、約第4天、約第5天、約第6天、約第1週、約第2週、約第3週、約第4週、約第5週、約第6週、約第7週、約第8週、約第9週、約第10週、約第20週、約第30週、約第40週、約第50週、約第60週、約第70週、約第80週、約第90週、約第100週、約第1年、約第2年或約第3年，與未經治療之患者或在調配物投藥之前的相同患者相比，調配物之投藥可治療或改善VOD及/或VOD症狀之發展達約1%、約5%、約10%、約20%、約30%、約40%、約50%、約60%、約70%、約80%、約90%或約100%。在一些實施例中，在約1天、約2天、約3天、約4天、約5天、約6天、約1週、約2週、約3週、約4週、約1個月、約2個月、約3個月、約4個月、約5個月、約6個月、約1年、約2年、約5年或約10年或更長時間內，與未經治療之患者或在調配物投藥之前的相同患者相比，調配物之投藥可治療或改善VOD及/或VOD症狀之發展達約1%、約5%、約10%、約20%、約30%、約40%、約50%、約60%、約70%、約80%、約90%或約100%。

包括以下實例以說明本發明之較佳實施例。熟習此項技術者應瞭解，以下實例中所揭示之技術代表本發明人發現在本發明之實踐中運行良好之技術，且因此可視為構成其實踐之較佳模式。然而，根據本發明，熟習此項技術者應瞭解，在不偏離本發明之精神及範疇的情況下可對所揭示之特定實施例作出許多改變且仍獲得相同或類似結果。 5. 實例 5.1 實例1 - 鑑別限制性溶液屬性

為了研發核酸之高濃度液體調配物(HCLF)，重要的是，鑑別可限制調配物之溶液之關鍵物理化學特性。為了研究此問題，使用兩種不同調配物產生在高達約300 mg/mL之去纖維蛋白多核苷酸濃度範圍內之許多溶液，且以去纖維蛋白多核苷酸濃度之函數形式表徵各溶液之溶液特性。可見外觀、可溶性、黏度、重量莫耳滲透濃度、溶液中之聚合物結構(遠及近UV圓偏光二色譜)、熱性質(差示掃描熱量測定)及分子量/聚集(DLS、FTIR及SEC-MALS)為各種去纖維蛋白多核苷酸溶液之所分析之一些特性。

樣品製備 ：藉由離心濃縮或藉由在80、150、200、250及300 mg/mL下溶解去纖維蛋白多核苷酸API，在34 mM檸檬酸鈉，pH 7.3或34 mM甘胺醯甘胺酸(「Gly-Gly」)，pH 7.5中調配去纖維蛋白多核苷酸。通常藉由紫外線可見光譜量測產物濃度。使用35 µL樣品，去纖維蛋白多核苷酸以重量分析形式在其各別調配物緩衝液中一式三份地稀釋至0.1 mg/mL之目標濃度。使用0.2 cm之光析管路徑長度量測A₂₆₀ 及A₃₂₀ 。針對320 nm下之光散射校正A₂₆₀ 值且使用22.2 mL×mg^- ¹ cm^- ¹ 之消光係數測定濃度。當測定稀釋因子時，使用1.08 g/mL之樣品密度及1.0 g/mL之稀釋劑密度校正樣品質量。藉由以下方法，以濃度之函數形式分析各溶液之物理化學特性：

可見外觀及渾濁度：藉由核心模組3 (「CM3」)機器人進行數位顏色匹配。亦使用七種EP顏色標準BY1-BY7，使用歐洲藥典(European Pharmacopeia；EP)顏色匹配分析來評估去纖維蛋白多核苷酸樣品之顏色，其中BY1為最強烈染色標準。在具有白色背景之光盒下進行分析(MIH-DX型Eisai機器觀測燈，06-662-63型Fisher光計)。Gly-Gly及檸檬酸鹽調配物之顏色評估並非顯著不同；所有物質皆為略帶黃色之澄清，或棕色-黃色溶液，其中與標準相比，著色強度更顯著。此外，偵測不可見顆粒(評估粒度≥80 µm)。亦針對七種渾濁度標準量測渾濁度。當與EP顏色標準比較時，在初始時間點時以及在儲存一個月之後，在25±2℃/60±5% RH下，所有調配物之顏色為BY4，證實在25±2℃/60±5% RH下，所有調配物保持穩定達至少三個月。

可溶性 ：使用用於分析之CM3機器人，經由聚乙二醇(PEG)沈澱來評估去纖維蛋白多核苷酸在溶液中之可溶性。遍及研究，即使在大量PEG存在下亦觀測到微量沈澱，因此指示產物之高溶液可溶性。

溶液黏度 ：在約80、150、200、250及300 mg/mL濃度下分析去纖維蛋白多核苷酸樣品之溶液黏度。典型地，使用Brookfield DV-III Ultra可程式化流變儀量測黏度。使用約550 µL，在22℃下分析樣品為純的。Defitelio^® 之黏度為3.9 cP，對剪切率無依賴性。結果表明Defitelio^® 顯示牛頓(Newtonian)流體性質。在檸檬酸鹽及Gly-Gly緩衝液中，以300 mg/mL調配之本發明之去纖維蛋白多核苷酸調配物表明黏度具有剪切率及產物濃度依賴性。所調配之去纖維蛋白多核苷酸之黏度似乎取決於產物濃度而以指數方式增加。與在34 mM檸檬酸鈉中且在pH 7.3下之去纖維蛋白多核苷酸相比，作為產物濃度之函數之在34 mM Gly-Gly中且在pH 7.5下之去纖維蛋白多核苷酸的黏度顯著較低，表明Gly-Gly改良去纖維蛋白多核苷酸在本發明之HCLF中之溶液特性之能力。

重量莫耳滲透濃度 ：藉由至少兩種不同方法量測重量莫耳滲透濃度且結果完全報導於圖式(參見例如圖1D)。典型地，使用Vapro蒸氣壓滲透計進行一種量測。與在34 mM檸檬酸鈉中且在pH值7.3下之去纖維蛋白多核苷酸相比，在34 mM Gly-Gly中且在pH 7.5下之去纖維蛋白多核苷酸的重量莫耳滲透濃度較低，表明Gly-Gly改良去纖維蛋白多核苷酸在本發明之HCLF中之溶液特性之能力。

遠及近紫外光圓偏光二色譜 ：藉由圓偏光二色譜評估作為產物濃度之函數之去纖維蛋白多核苷酸調配物在溶液中之二級及三級結構且用Jasco J-810分光偏振計分析。

游離核鹼基分析 ：用移動相(50 mM CH₃ COONH₄ ，pH 5.0)，在1.6 mg/mL下定量製備樣品且使用254 nm之偵測波長，藉由RP-HPLC進行分析。使用1 mL/min之流動速率，使用Synergi Fusion 4 µm-RP 80 Å管柱分離核鹼基。使用Defitelio®作為參考且在移動相中，在1.6 mg/mL下製備。

傅里葉變換紅外線光譜學 ( Fourier Transform Infrared Spectroscopy ) ：使用標準技術進行FTIR分析以評估去纖維蛋白多核苷酸之HCLF之結構。FTIR分析表明當與Defitelio^® 比較時，在300 mg/mL下，兩種去纖維蛋白多核苷酸調配物(檸檬酸鹽及Gly-Gly)顯示類似概況。

差示掃描熱量測定 ：使用標準技術，藉由差示掃描熱量測定量測去纖維蛋白多核苷酸之溶液中之熱性質。結果表明濃度及/或緩衝液基質，包括Gly-Gly，可影響去纖維蛋白多核苷酸之熱性質。

尺寸分佈 ：以產物濃度之函數形式量測各調配物，以針對分子加權平均值計算促進結構之分子量。使用多分散性指數(Mw/Mn)量測調配物之非均質性且基於該等結果，得出樣品為多分散性之結論。結果表明在檸檬酸鹽及Gly-Gly中以300 mg/mL調配之去纖維蛋白多核苷酸與Defitelio^® 類似。

總體而言，使用以上方法之結果指示溶液重量莫耳滲透濃度及黏度為重要的調配物屬性，其在限制可獲得多高的具有良好耐受性之產物濃度方面起重要作用。含有Gly-Gly之調配物中之此等屬性表明顯著溶液特性改良，其亦與溶液中之熱屬性(ΔH，Tm)相關。

圖1A中之圖展示在檸檬酸鈉、Gly-Gly或兩者之混合物存在下，使用增加之去纖維蛋白多核苷酸濃度製得之調配物之黏度。結果表明去纖維蛋白多核苷酸調配物之黏度主要取決於其濃度，且200 mg/mL溶液的黏度比80 mg/mL溶液高約10倍。

圖為圖1B，其展示包含檸檬酸鈉、Gly-Gly或兩者之混合物之三種不同調配物中呈溫度之函數形式之黏度。

圖1C中之圖展示此等所選擇之調配物中隨著時間推移之黏度降低：20 mM GlyGly(藍色圓形；與橙色正方形重疊)、20 mM GlyGly及34 mM檸檬酸鈉(橙色正方形)、20 mM GlyGly及100 mM丁二酸鈉(藍色三角形)及20 mM GlyGly及20 mM氯化鈉(紅色菱形)。含有GlyGly之調配物展示既定時間點時之最低黏度。

圖1D中之圖展示在Gly-Gly或檸檬酸鈉緩衝液存在下，使用增加之去纖維蛋白多核苷酸濃度製得之調配物之重量莫耳滲透濃度。 5.2 實例2 - 緩衝液對調配物特性之作用 5.2.1 實例2.1 - 緩衝液及賦形劑對黏度及重量莫耳滲透濃度之作用

增加去纖維蛋白多核苷酸濃度展示於實例1中，以提高黏度及重量莫耳滲透濃度。重要的是，用於非經腸投藥之藥品製劑具有低黏度及/或等張性。為了鑑別可降低去纖維蛋白多核苷酸調配物之黏度及/或重量莫耳滲透濃度之緩衝液或賦形劑，使用200 mg/mL去纖維蛋白多核苷酸調配物進行各種緩衝液及賦形劑(包括GRAS賦形劑)之寬板篩檢。

製備測試調配物達到目標200 mg/mL，如以下表1中所示。表1：使用各種緩衝液及賦形劑之去纖維蛋白多核苷酸調配物表2：與檸檬酸鈉相比，呈產物濃度之函數形式之去纖維蛋白多核苷酸在含有Gly-Gly之緩衝液中之溶液黏度及重量莫耳滲透濃度

如表1及2以及圖1B、1C及2A中之曲線所示，與其他調配物相比且當在與檸檬酸鹽緩衝液相比不同之pH值、產物濃度及溫度條件(參見圖2A)下測試時，含有Gly-Gly之HCLF調配物整體上具有顯著較低的黏度。值得注意的是，在200 mg/mL去纖維蛋白多核苷酸下，TRIS及組胺酸緩衝液亦具有較低黏度(小於40 cP)。對於Gly-Gly中之所有調配物，在既定產物濃度及環境溫度條件下，與檸檬酸鹽緩衝液相比，黏度低多達50%。環境溫度可視區域而取決且因此，較佳在約15℃至30℃之間量測黏度；然而，鑒於天氣條件，其可能稍微較高或較低。舉例而言，當在25℃下量測時，一種含有20 mM Gly-Gly及34 mM檸檬酸鈉之較佳調配物具有12 cP之黏度。在所篩檢之賦形劑中，僅利多卡因展示黏度進一步降低之潛力；然而，其增加之重量莫耳滲透濃度＞900 mOsm/kg (參見圖2B)且因此不考慮可實際用於進一步研究。對於200 mg/mL HCLF去纖維蛋白多核苷酸調配物，展示整體上最低黏度之gly-gly緩衝液鑑別為較佳緩衝液。 5.2.2 實例2.2 - 在儲存期間不同鈉離子源對緩衝能力及穩定性之作用

為了比較含有Gly-Gly緩衝液系統之高濃度去纖維蛋白多核苷酸(「DF」)調配物中各種緩衝溶液之緩衝能力，使用十六種不同緩衝液(利用三種不同的鈉離子源)評估DF調配物之穩定性、雜質概況及溶液特性。此等調配物之概述展示於表3中。表3 - 去纖維蛋白多核苷酸調配物之概述

基於外觀、顏色及透明度結果，在Gly-Gly緩衝液中調配之去纖維蛋白多核苷酸在25±2℃/60±5% RH下儲存之後保持穩定達至少三個月。

UV及pH值分析表明當在25±2℃/60±5% RH下儲存時，所有調配物之去纖維蛋白多核苷酸濃度保持恆定達三個月。

所有調配物之黏度以時間之函數形式降低(參見例如圖3B)。在180 mg/mL下，所有調配物在初始時間點時的黏度在23.8 cP-34.4 cP之範圍內且在25±2℃/60±5% RH下儲存三個月之後降低多達約52%。圖3B中列舉之調配物F1-F5描述於以上表3中。

取決於 …儲存時間，觀測到小型重量莫耳滲透濃度增加趨勢，其與鈉鹽濃度相關。隨著鹽濃度增加，重量莫耳滲透濃度增加之變化越大(參見圖3A)。具有小於80 mM總鈉鹽之調配物具有最小的隨時間推移之重量莫耳滲透濃度變化且低於500 mOsm/kg。

穩定性指示FNB分析法表明在儲存一個月之後，總雜質及游離核鹼基稍微增加。總體而言，調配物F2及F3具有最少量之游離核鹼基。

進行尺寸排阻層析(SEC)-多角度光散射(MALS)分析，以產物濃度之函數形式測定去纖維蛋白多核苷酸之尺寸分佈及分子量。在玻璃螺帽試管(10 mL)中，DF調配物及API參考材料在SEC移動相中稀釋至4 mg/mL。在不進行攪拌下，溶液在室溫下保持一小時。接著，將樣品溶液加熱至約100℃(沸水)且在此溫度下保持15分鐘。最終，使用水及冰冷卻樣品溶液五分鐘。在室溫下穩定(約15分鐘)之後，用0.20 µm SFCA針筒過濾器過濾樣品。在製備之一小時後內，藉由SEC-MALS分析樣品溶液。在移動相中，以4 mg/mL由去纖維蛋白多核苷酸API製備參考材料。分析指示所有調配物具有類似尺寸及多分散性。

基於此等組合結果，對於HCLF調配物，含180 mg/mL去纖維蛋白多核苷酸之20 mM Gly-Gly及小於80 mM鈉鹽(及較佳20-34 mM檸檬酸鈉)為較佳緩衝液組合。 5.3 實例3 - 隨時間推移且作為溫度之函數之黏度變化

重要的是，醫藥產品隨時間推移而保持其完整性以實現適合的存放期。由此，以時間及溫度之函數形式量測使用Gly-Gly緩衝液之200 mg/mL去纖維蛋白多核苷酸調配物之黏度。

如上文所描述製備樣品。

圖4中之圖式表明使用20 mM Gly-Gly緩衝液之200 mg/mL去纖維蛋白多核苷酸調配物之黏度隨時間推移而降低且亦隨溫度增加而降低(在25℃、40℃及60℃下量測)。黏度以溫度之函數形式且隨時間推移而降低對於藥物遞送及產品製造而言為有利的，尤其對於高濃度產品，諸如HCLF。隨時間推移之黏度降低、搖變減黏特性為尤其有利的且引起此等調配物之經改良之患者便利性及耐受性。去纖維蛋白多核苷酸為溫度穩定產品，因此在較高溫度下之黏度降低提供實現經改良之患者便利性之額外機會。舉例而言，若患者在投藥之前將調配物溫熱，則黏度將下降以實現持續易於投藥，尤其對於皮下及/或肌肉內投藥。 5.4 實例4 - 使用強制降解之隨時間推移之重量莫耳滲透濃度

對於醫藥產品亦重要的是，隨時間推移且在各種條件下保持低重量莫耳滲透濃度。由此，使用強制降解研究，以時間及溫度之函數形式量測使用Gly-Gly及檸檬酸鹽緩衝液之200 mg/mL去纖維蛋白多核苷酸調配物之重量莫耳滲透濃度。

如上文所描述製備樣品。在25℃、40℃及60℃下量測調配物之重量莫耳滲透濃度。

圖5A中之圖式展示使用檸檬酸鈉緩衝液之200 mg/mL去纖維蛋白多核苷酸調配物之重量莫耳滲透濃度。

圖5B中之圖式展示使用Gly-Gly緩衝液之200 mg/mL去纖維蛋白多核苷酸調配物之重量莫耳滲透濃度。如此等曲線中所見，與具有檸檬酸鹽緩衝液之調配物相比，Gly-Gly調配物之重量莫耳滲透濃度降低。重要的是，在各時間點及每種溫度下，Gly-Gly調配物之重量莫耳滲透濃度始終保持較低(低於約400 mOsm/kg)。 5.5 實例5 - 在強制降解下之物理穩定性及產物概況

使用強制降解研究評估本發明之HCLF之物理穩定性及產物概況。在25±2℃/60±5%相對濕度(「RH」)、40±2℃/75±5% RH及60℃下儲存長達3個月之後，評估在pH 3至pH 10下，在Gly-Gly及/或檸檬酸鈉中調配之180 mg/mL及220 mg/mL之濃度範圍內之去纖維蛋白多核苷酸。所測試之調配物列舉於以下表4中。表 4 ：調配物之概述

基於來自強制降解穩定性研究之外觀、顏色、透明度、pH值及粒子計數結果，在既定25±2℃/60±5% RH及應力條件下儲存長達三個月之後，在20 mM Gly-Gly中以200 mg/mL (FD3)調配之去纖維蛋白多核苷酸(pH值在7與8之間)為最穩定的調配物。 5.6 實例6 - 使用各種投藥途徑之核酸調配物之藥物動力學 5.6.1 實例6.1 - 去纖維蛋白多核苷酸之靜脈內(IV)輸注、IV快速注射、皮下(SC)注射及肌內(IM)注射

比較當經由單次2小時靜脈內(IV)輸注、IV快速注射、皮下(SC)注射、肌內(IM)注射、或口服(PO)管飼劑量投與雄性哥廷根豬(Gottingen pigs)時的各種去纖維蛋白多核苷酸調配物之藥物動力學(PK)。此外，相對於IV輸注測定各種血管外投藥途徑之生物可用性。

雄性哥廷根豬或小型豬為用於研究SC遞送之行業標準、用於研究去纖維蛋白多核苷酸SC調配物及遞送方案之可接受之模型。各動物接受去纖維蛋白多核苷酸之單次投藥，如表5中之處理組中所列舉。哥廷根豬，n=3隻雄性/組，如所示分配至處理組：表 5 ：研究設計 ^a 對於第1至5組，劑量體積分別為6.25、1.0、0.3125、0.3125及1.25 mL/kg

收集血液樣品且處理成血漿。使用Quant-iT OliGreen ssDNA分析法套組(Life Technologies)定量豬血漿樣品中去纖維蛋白多核苷酸之濃度。簡言之，分析方法涉及將樣品(一式兩份地)等分至96孔盤中、添加OliGreen試劑、在攪拌下培育(5分鐘，避光)及直接螢光量測(485激發、515 nm截止及525 nm發射)。分析法範圍為2.5至60 μg/mL (高範圍)及0.05至2.5 μg/mL(低範圍)。分析法之定量下限(LLOQ)為0.05 μg/mL。

將個別動物去纖維蛋白多核苷酸血漿濃度與時間之間的關係資料下載至WinNonlin Phoenix版本6.3軟體(Pharsight, Cary, NC)中以用於PK分析。視需要使用非房室IV輸注、IV推注或血管外注射模型測定各動物之單次劑量PK參數。使用標稱劑量及樣品收集時間(參見表5)評估PK參數。在所有動物中，在給藥前時間點時觀測背景值(範圍=0.115至0.903 μg/mL)。因此，低於1 μg/mL之濃度值視為＜LLOQ且不用於分析。在有可能時評估以下參數： Tmax 達到最大觀測濃度之時間 Cmax 最大觀測濃度 AUC0-t 自時間=0至具有最後可量測濃度之時間點之濃度-時間曲線下面積，藉由線性梯形規則評估 MRT0-t 自時間=0至具有最後可量測濃度之時間點之平均滯留時間 Cmax/D 最大觀測濃度除以劑量水準 AUC0-t/D 自時間=0至最後可量測濃度之濃度-時間曲線下面積，藉由線性梯形規則除以劑量水準來評估 CL 對於IV組，計算為劑量除以AUC0-t

基於AUC0-t/D值，相對於IV輸注劑量組，如下計算各動物之生物可用分數(F)，表示為百分比： (個別動物SC、IM或PO AUC0-t/D)/(組平均IV輸注AUC0-t/D)×100%

去纖維蛋白多核苷酸血漿分析：向雄性哥廷根豬IV、SC、IM或PO給藥之後的概述性去纖維蛋白多核苷酸血漿濃度展示以下：在25 mg/kg之單次IV輸注投藥或2.5 mg/kg去纖維蛋白多核苷酸之單次IV推注投藥之後，在給藥後8小時，平均血漿濃度高於1 µg/mL。在25 mg/kg去纖維蛋白多核苷酸之SC或IM投藥之後，在給藥後24小時(最後量測之時間點)，平均血漿濃度超過1 µg/mL。在100 mg/kg PO劑量之後，在一隻動物中之一個時間點時(動物14M中給藥後4小時)及在一隻動物中之三個時間點時(動物13M中給藥後5、6及12小時)，去纖維蛋白多核苷酸血漿濃度超過1 µg/mL，但在第三隻動物(15M)中之所有時間點時小於1 µg/mL。

藥物動力學分析：亦量測個別動物及概述性PK參數且展示以下：在25 mg/kg去纖維蛋白多核苷酸之2小時IV輸注之後，平均Cmax/D為1.52 (µg/mL)/(mg/kg)且平均AUC0-t/D值為3.56 (hr×µg/mL)/(mg/kg)。在2.5 mg/kg去纖維蛋白多核苷酸之IV推注投藥之後，平均Cmax/D為14.4 (µg/mL)/(mg/kg)且平均AUC0-t/D值為8.30 (hr×µg/mL)/(mg/kg)。

儘管在血漿PK概況中觀測到多個峰，但在25 mg/kg去纖維蛋白多核苷酸之SC投藥之後的Tmax在給藥後0.25至8小時範圍內。平均SC生物可用性(%F)為81.3%。在25 mg/kg去纖維蛋白多核苷酸之IM投藥之後的Tmax在給藥後0.25至0.50小時範圍內。平均IM生物可用性為108%。相比之下，在100 mg/kg去纖維蛋白多核苷酸之口服投藥之後，存在極少的可量測之濃度。在PO投藥之後的平均生物可用性小於7.2%。

此等結果表明與IV投藥相比，在SC及IM投藥之後，對去纖維蛋白多核苷酸之暴露延長。與IV輸注及IV快速給藥組中分別為1.30及2.16小時相比，SC及IM劑量組中之平均MRT持續值分別為9.26及7.36小時。 5.6.2 實例6.2 - HCLF去纖維蛋白多核苷酸調配物之皮下投藥

為了進一步研究皮下投與之去纖維蛋白多核苷酸之高濃度液體調配物之藥物動力學，比較在200 mg/mL下之三種不同HCLF調配物與Defitelio之單次2小時靜脈內(IV)輸注或SC注射。此外，相對於IV輸注測定其經由SC投藥途徑之生物可用性。

如所指示，使用檸檬酸鈉、Gly-Gly或此等緩衝液之組合，如上文所描述以200 mg/mL製備HCLF調配物。使用以下表6中展示之劑量，以4 mg/mL IV或80 mg/mL SC投與Defitelio。雄性哥廷根豬(n=3隻雄性/組)接受表6中列舉之測試物之單次投藥。使用實例6.1中之分析方法分析去纖維蛋白多核苷酸。與實例6.1中類似地測定PK參數。表 6 ：各種調配物之投藥註釋：HCLF1：34 mM檸檬酸鈉，pH 7.3；HCLF2：20 mM GlyGly，pH 7.3；HCLF3：20 mM GlyGly，10 mM檸檬酸鈉，pH 7.3

如上文所報導計算以百分比(%F)表示之生物可用性且結果展示於以下表7中。表 7 ：在SC及IV投藥之後的去纖維蛋白多核苷酸之PK參數

如上文所述測定去纖維蛋白多核苷酸之血漿濃度及血漿濃度-時間資料且展示於圖6中。對於所有四種SC處理(Defitelio及3種HCLF)，圖6中發現之個別小型豬之PK概況展示多個吸收峰。由於去纖維蛋白多核苷酸為寡核苷酸之混合物，多個峰可歸因於去纖維蛋白多核苷酸之個別組分之吸收率之變化。總而言之，結果表明對於所有調配物，在SC給藥下，去纖維蛋白多核苷酸之生物可用性為有利的，包括高濃度液體調配物。

此外，四個SC組之平均滯留時間(MRT)在9.28-10.9小時範圍內；而IV組之MRT僅為2.41小時(表6)；因此，SC投藥提供去纖維蛋白多核苷酸之持續釋放，其為IV輸注之約4.5倍。此與實例6.1中展示之內容一致，其中與IV投藥相比，低黏度HCLF中之去纖維蛋白多核苷酸之SC投藥使得去纖維蛋白多核苷酸之血漿暴露延長。

儘管不希望受任何一種理論約束，由SC途徑引起之延長之循環時間可能歸因於去纖維蛋白多核苷酸HCLF之性質，其引起持續釋放型吸收模式。藉由HCLF之SC投藥實現的去纖維蛋白多核苷酸之延長之循環可提供研究替代性方案之機會，在該等替代性方案中可以較低頻率給藥且改良患者之生活品質。 5.6.3 實例6.3 - IV及SC投藥之藥物動力學概況之比較

為了說明SC HCLF投藥之PK比較，使用隔室模型化技術進行在SC及IV輸注之後的PK概況之模擬。分別使用具有或不具有一階吸收過程之簡單1-隔室模型來模擬IV輸注或SC投藥PK概況。在此模型化實踐中，自Defitelio®之藥品說明書獲得在IV輸注投藥之後的平均PK參數。對於PK研究，藥物之清除率及分佈體積典型地報導為生物可用性之函數；此等函數分別為CL/F及V/F。對於本文中使用之PK模擬，在SC HCLF投藥之後，藉由假設生物可用性為70%，由IV參數計算平均CL/F及V/F。假設吸收率常數為0.22 h^- ¹ ，其與在小型豬中所觀測的類似。用於IV輸注之劑量及方法為6.25毫克/公斤/輸注(25毫克/公斤/天之總日劑量)，藉由2小時IV輸注進行，每天4次。用於SC投藥之日劑量及方案為18毫克/公斤/SC投藥(36毫克/公斤/天之總日劑量)，每天2次。對體重為70 kg之個體進行模擬。在模擬期間，在SC投藥之後的總AUC保持與IV輸注相同。

如圖7中所示，隨時間推移之血漿濃度概況說明與各IV輸注之後的快速清除相反，在SC投藥之後的去纖維蛋白多核苷酸之緩慢、恆定釋放。重要的是，在SC投藥之後的去纖維蛋白多核苷酸之最小血漿濃度顯著高於IV輸注；而SC投藥之Cmax與IV輸注類似。

SC投藥之藥物動力學表示允許去纖維蛋白多核苷酸之持續血漿暴露之概況，其對於去纖維蛋白多核苷酸之藥理學活性而言可能為重要的。與IV輸注之峰值與血漿濃度比(其為約700)相比，在SC投藥之後的峰值與血漿濃度比為約8。

總而言之，此等結果說明去纖維蛋白多核苷酸之皮下投藥可提供新穎的藥物動力學概況，其與IV輸注之PK (諸如當前可獲得的去纖維蛋白多核苷酸調配物所需之PK)顯著不同。去纖維蛋白多核苷酸之緩慢及穩定釋放對於其利益與風險概況而言可能為重要的且獨特的皮下藥物動力學允許研發新穎的劑量及/或給藥方案，其可產生更好的功效及經改良之安全概況。

圖1A為展示作為去纖維蛋白多核苷酸濃度之函數的各種調配物之黏度之圖，其使用3種不同的調配物緩衝液：檸檬酸鈉(菱形)、甘胺醯甘胺酸(正方形)或檸檬酸鈉及甘胺醯甘胺酸之混合物(三角形)。

圖1B為展示作為含有調配物之溫度的函數之黏度之圖，該等調配物含有檸檬酸鈉(藍色菱形)、GlyGly (紅色正方形)或GlyGly及檸檬酸鈉(綠色三角形)。

圖1C為展示調配物中隨時間推移而降低的黏度之圖，該等調配物含有20 mM GlyGly (藍色圓形)、20 mM GlyGly及34 mM檸檬酸鈉(橙色正方形)、20 mM GlyGly及100 mM丁二酸鈉(藍色三角形)以及20 mM GlyGly及20 mM氯化鈉(紅色菱形)。

圖1D為展示作為去纖維蛋白多核苷酸濃度的函數之各種調配物之重量莫耳滲透濃度之圖，其使用檸檬酸鈉(菱形)或甘胺醯甘胺酸(正方形)。

圖2A為展示在各種緩衝液或賦形劑存在下200 mg/mL去纖維蛋白多核苷酸調配物的黏度之圖。

圖2B為展示在各種緩衝液或賦形劑存在下200 mg/mL去纖維蛋白多核苷酸調配物的重量莫耳滲透濃度之圖。

圖3A為展示取決於鈉鹽而增加的重量莫耳滲透濃度之圖。

圖3B為展示在甘胺醯甘胺酸緩衝液及檸檬酸鈉溶液(含有0、20、34、80或100 mM檸檬酸鈉)存在下，隨時間推移的180 mg/mL去纖維蛋白多核苷酸調配物之黏度之圖。

圖4為展示隨時間推移，溫度對含有甘胺醯甘胺酸緩衝液之200 mg/mL去纖維蛋白多核苷酸調配物之黏度的作用之圖。

圖5A為展示隨時間推移，溫度對含有檸檬酸鹽緩衝液之200 mg/mL去纖維蛋白多核苷酸調配物之重量莫耳滲透濃度的作用之圖。

圖5B為展示隨時間推移，溫度對含有甘胺醯甘胺酸緩衝液之200 mg/mL去纖維蛋白多核苷酸調配物之重量莫耳滲透濃度的作用之圖。

圖6為展示與市售Defitelio®之皮下及靜脈內投藥相比，使用動物模型皮下投與之本發明之三種不同的200 mg/mL去纖維蛋白多核苷酸調配物之藥物動力學的圖。

圖7為展示在每天4次6.25 mg/kg之2小時輸注及每天2次18 mg/kg之皮下投藥(呈現70%生物可用性)之後，去纖維蛋白多核苷酸的模擬藥物動力學概況之圖。

Claims

一種用於向患者治療性投藥之低黏度調配物，其包含：核酸；其中該核酸以至少80 mg/mL之濃度存在。
如請求項1之低黏度調配物，其中該核酸以至少85 mg/mL之濃度存在。
如請求項1或2之低黏度調配物，其中該調配物具有70 cP或更低之黏度；視情況在5與65 cP之間，或在10與60 cp之間。
如請求項1至3之低黏度調配物，其進一步包含甘胺醯甘胺酸。
如請求項4之低黏度調配物，其進一步包含介於5與100 mM之間的量之甘胺醯甘胺酸；視情況介於5與60 mM之間或介於10與40 mM之間的量。
如請求項1至5之低黏度調配物，其中該調配物具有在240與700 mOsm/kg之間的重量莫耳滲透濃度；視情況在300與550 mOsm/kg之間。
如請求項1之低黏度調配物，其中該核酸包含去氧核糖核酸之聚核苷酸或寡核苷酸。
如請求項1之低黏度調配物，其中該核酸包含核糖核酸之聚核苷酸或寡核苷酸。
如請求項1至8之低黏度調配物，其中該核酸具有13,000 -50,000道爾頓或16,000-20,000道爾頓範圍內之分子量。
如請求項1至8之低黏度調配物，其中該核酸包含多分散性、隨機序列。
如請求項1至8之低黏度調配物，其中該核酸係藉由其他核酸之解聚合而獲得。
如請求項1至8之低黏度調配物，其中該核酸主要呈單股聚去氧核糖核苷酸形式。
如請求項12之低黏度調配物，其中該等單股聚去氧核糖核苷酸具有隨機序列且對應於下式： P1-5，(dAp)12-24，(dGp)10-20，(dTp)13-26，(dCp)10-20 其中：P=磷酸根；dAp=去氧腺苷酸單體；dGp=去氧鳥苷酸單體；dTp=去氧胸苷酸單體；及dCp=去氧胞苷酸單體。
如請求項1至13之低黏度調配物，其中該核酸以100與400 mg/mL之間的濃度存在。
如請求項1至13之低黏度調配物，其中該核酸具有45至65個鹼基；視情況20至100個鹼基，或30至80個鹼基，或45至60個鹼基。
如請求項1至13之低黏度調配物，其中該黏度係在15℃至35℃之間，視情況在15℃至25℃之間，或在21℃至23℃之間的室溫條件下量測。
如請求項1至13之低黏度調配物，其中該核酸為至少70%、75%、80%、85%、90%或95%單股。
如請求項1至13之低黏度調配物，其中多達5%、10%、15%、20%、25%或30%的該等核酸鹼基為成對的。
如請求項1至18之低黏度調配物，其中該核酸以鹼金屬鹽形式存在。
如請求項19之低黏度調配物，其中該鹼金屬鹽為鈉鹽。
如請求項1至20之低黏度調配物，其中該pH值在6與8之間。
如請求項1至20之低黏度調配物，其進一步包含以下緩衝液或賦形劑中之一或多者：檸檬酸鈉、丁二酸鈉、組胺酸、TRIS緩衝液、HEPES緩衝液、氯化鈉、精胺酸、利多卡因(lidocaine)或聚山梨醇酯-80。
如請求項1至20之低黏度調配物，其進一步包含檸檬酸鈉、丁二酸鈉或氯化鈉，其具有小於80 mM鈉鹽之濃度。
如請求項1至20之低黏度調配物，其進一步包含20-34 mM檸檬酸鈉。
一種用於向患者治療性投藥之低黏度調配物，其包含：介於85與400 mg/mL之間的超過70%單股、多分散性聚去氧核糖核苷酸，其具有45至65個鹼基及介於13與20 kDa之間的平均分子量；及包含5與100 mM之間的量之甘胺醯甘胺酸。
一種用於向患者治療性投藥之低黏度調配物，其包含：介於150與250 mg/mL之間的核酸，其包含超過70%單股、多分散性聚去氧核糖核苷酸，該聚去氧核糖核苷酸具有介於45至65鹼基之間的平均長度及介於13與20 kDa之間的平均分子量；及包含5與60 mM之間的量之甘胺醯甘胺酸；且其中當在15℃與25℃之間的室溫條件下量測黏度時，該調配物具有5與70 cP之間的黏度、240與700 mOsm/kg之間的重量莫耳滲透濃度且適用於向患者非經腸投藥。
一種用於向患者治療性投藥之低黏度調配物，其包含：每毫升100至400 mg去纖維蛋白多核苷酸(defibrotide)；及包含5與60 mM之間的量之甘胺醯甘胺酸；且其中當在15℃與25℃之間的室溫條件下量測黏度時，該調配物具有10與60 cP之間的黏度、300與550 mOsm/kg之間的重量莫耳滲透濃度且適用於向患者非經腸投藥。
如請求項1至27中任一項之低黏度調配物，其中該黏度隨時間推移而降低。
如請求項28之低黏度調配物，其中該黏度在該調配物之儲存期間降低。
如請求項1至29中任一項之低黏度調配物，其中該黏度在增加剪應力/攪拌及/或壓力下降低。
如請求項30之低黏度調配物，其中該增加之剪應力在投藥期間發生，諸如當通過針或其他裝置時。
如請求項1至31中任一項之低黏度調配物，其中該調配物適用於向患者皮下、肌肉內及/或腹膜內投藥且其中該調配物與相比於靜脈內投藥延長之全身性半衰期相關聯。
如請求項1至32之低黏度調配物，其中當藉由皮下途徑投與時，與靜脈內投藥相比，該調配物提供較低的血漿濃度之峰谷比。
如請求項1至33之低黏度調配物，其中當藉由皮下途徑投與時，與靜脈內投與相比，該調配物提供經改良之功效及/或經改良之安全概況。
如前述請求項中任一項之低黏度調配物，其中該調配物為等張性及/或搖變減黏性。
如前述請求項中任一項之低黏度調配物，其中該調配物可由患者自行投與。
如請求項1至36中任一項之低黏度調配物，其能夠治療患有以下病狀或疾病中之一或多者之患者：血栓；造血幹細胞移植(HSCT)相關併發症，包括竇狀隙堵塞症候群或肝血管阻塞疾病(VOD)；移植體對抗宿主疾病(GVHD)；移植相關血栓性微血管病(TA-TMA)或特發性肺炎症候群；其他TMA，包括血栓性血小板減少性紫瘢(TTP)及溶血性-尿毒症性症候群(HUS)；急性心肌缺血；缺血性中風；實體器官移植中之局部缺血再灌注損傷；急性呼吸窘迫症候群(ARDS)；鐮狀細胞血管阻塞危症(VOC)；鐮狀細胞相關急性胸腔症候群；瀰漫性血管內凝血(DIC)；敗血症；腎機能不全；其他冠狀動脈或周邊動脈疾病；血液惡性病或實體腫瘤。
一種裝置，其用於如請求項1至37中任一項之低黏度調配物之皮下投藥。
如前述請求項中任一項之低黏度調配物，其係用於治療有需要之患者。
如請求項39之低黏度調配物，其中該患者患有以下病狀或疾病中之一或多者：血栓；造血幹細胞移植(HSCT)相關併發症，包括竇狀隙堵塞症候群或肝血管阻塞疾病(VOD)；移植體對抗宿主疾病(GvHD)；移植相關血栓性微血管病(TA-TMA)或特發性肺炎症候群；其他TMA，包括血栓性血小板減少性紫瘢(TTP)及溶血性-尿毒症性症候群(HUS)；急性心肌缺血；缺血性中風；實體器官移植中之局部缺血再灌注損傷；急性呼吸窘迫症候群(ARDS)；鐮狀細胞血管阻塞危症(VOC)；鐮狀細胞相關急性胸腔症候群；瀰漫性血管內凝血(DIC)；敗血症；腎機能不全；其他冠狀動脈或周邊動脈疾病；血液惡性病或實體腫瘤。
如請求項1至33中任一項之低黏度調配物，其係用於給藥方案，該給藥方案藉由投與降低之體積之該低黏度調配物或藉由實現該調配物之較不頻繁的投藥來提供經改良之患者生活品質。