TW201817446A - Ｃｍｅｔ單株結合劑、其藥物複合體及其用途 - Google Patents

Abstract

本發明在一些實施例中，提供一種包含與cMET之細胞外功能域專一性結合之單株結合劑之組成物，及該組成物之用途。

Description

CMET單株結合劑、其藥物複合體及其用途

本發明實施例係有關一種包含專一性結合cMET之結合劑之組成物，及其用途。

蛋白質cMET(有時稱為MET或肝細胞生長因子受體(HGFR，hepatocyte growth factor receptor))為在人體中由MET基因編碼之蛋白質(MET原致癌基因(proto-oncogene)，受體酪胺酸激酶)。cMET為具有酪胺酸激酶活性之單通道細胞表面受體(single-pass cell surface receptor)。MET轉譯產物之一級單鏈前體蛋白質在轉譯後裂解成α與β次單元(subunit)，此等藉由二硫鍵鍵結形成成熟細胞表面cMET受體。cMET在如幹細胞之上皮起源的細胞、前驅細胞與其他細胞類型上表現。已判別出肝細胞生長因子/分散因子(Scatter Factor)(HGF/SF)及其剪接異構物(NK1、NK2)為cMET之配體。

cMET被認為是正常胚胎發育、器官形成及傷口癒合所必需。異常之cMET表現及/或活化與某些腫瘤 病變及癌症(例如：腎臟、肝臟、胃、乳房、與腦之癌症)有關，其中，cMET涉及腫瘤生長、血管新生、與轉移。cMET之過度表現及通過其配體之共同表現的自體分泌活化亦涉及腫瘤形成。

本發明提供一種與cMET專一性結合之新穎的結合劑、單株抗體及其結合部分、其醫藥組成物、及其使用方法。

有些態樣中，本發明提供與cMET、cMET之細胞外功能域、或其一部份專一性結合之結合劑。有些實施例中，本發明說明之結合劑係專一性結合至包含cMET、cMET之細胞外功能域、或其一部份之蛋白質或多肽。某些實施例中，該結合劑係專一性結合至選自：人類cMET、非人類靈長類cMET(例如：猴子cMET)、大鼠cMET、與小鼠cMET中一或多種哺乳動物cMET。某些實施例中，該結合劑專一性結合至人類cMET之變異體及/或包含一或多種天然變異體之人類cMET之細胞外功能域。某些實施例中，該結合劑專一性結合至包含E168D及/或N375S變異體之人類cMET變異體。

有些態樣中，與cMET專一性結合之結合劑包含CDR-L1、CDR-L2及/或CDR-L3，此等係輕鏈互補決定區(CDR-L)之三個多肽序列，其中該CDR-L1係選自表1，CDR-L2係選自表2，及CDR-L3係選自表3。有些態樣中，與cMET專一性結合之結合劑包含CDR-H1、CDR-H2 及/或CDR-H3，此等係重鏈互補決定區(CDR-H)之三個多肽序列，其中該CDR-H1係選自表6，CDR-H2係選自表7，及CDR-H3係選自表8。有些態樣中，與cMET專一性結合之結合劑包含選自表1之CDR-L1、選自表2之CDR-L2、選自表3之CDR-L3、選自表6之CDR-H1、選自表7之CDR-H2、及選自表8之CDR-H3。有些實施例中，CDR-L1係選自：SEQ ID NO：2、4、6、8、10、12與14。有些實施例中，CDR-L2係選自：SEQ ID NO：17、19、21、23與25。有些實施例中，CDR-L3係選自：SEQ ID NO：27、29、31、33與35。有些實施例中，CDR-H1係選自：SEQ ID NO：51、53、55、57與59。有些實施例中，CDR-H2係選自SEQ ID NO：63、65、67、69、73與75。有些實施例中，CDR-H3係選自：表8，係選自：SEQ ID NO：80、82、84、86、88、91與93。有些實施例中，該結合劑為抗體、或其cMET結合片段。

某些實施例中，該結合劑包含具有選自表4或5之胺基酸序列之可變輕鏈區、及/或具有選自表9或10之胺基酸序列之可變重鏈區。表4或5之可變輕鏈或表9或10之可變重鏈可包含1至20個，或在有些實施例中，1至10個選自胺基酸加成、胺基酸缺失與胺基酸取代之胺基酸修飾，其中該結合劑保留與cMET之專一結合性。

某些實施例中，該結合劑為單株抗體、或其cMET結合片段。有些實施例中，該結合劑包含IgG1、IgG2、IgG3、或IgG4之恆定區。有些實施例中，該結合 劑包含IgD、IgE、IgA或IgM之恆定區。某些實施例中，該結合劑為人源化者及/或包含至少一至四個人源化或人類框架區。某些實施例中，該結合劑包含至少一至四個小鼠框架區。有些實施例中，該結合劑為抗體之Fab、Fab’、F(ab’)2、Fv或scFV片段。

本發明所述之結合劑在有些態樣具有一或多種功能性質。某些實施例中，該結合劑誘發或促進人類癌細胞上之cMET內化。有些實施例中，該結合劑在人類癌細胞誘發或促進cMET降解。有些實施例中，該結合劑不具有可檢測之cMET促效劑活性。有些實施例中，該結合劑誘發或促進與其結合之細胞死亡。某些實施例中，該結合劑係與抗腫瘤劑複合。

有些態樣中，本發明說明之結合劑係與cMET或其一部份專一性結合。有些態樣中，本發明所述之結合劑以10nM以下、或1nM以下之KD與cMET或其一部份專一性結合。有些態樣中，結合劑對cMET或其一部份之親和力包含10nM以下、或1nM以下之KD。

有些實施例中，與cMET專一性結合之結合劑進一步包含專一性結合至另一種抗原(例如：不為cMET或其一部份之抗原)之第二抗原結合部分。例如：有些實施例中，結合劑包含專一性結合至cMET之第一抗原結合功能域與專一性結合至另一種多肽之第二抗原結合功能域。

某些態樣中，本發明提供一種治療患有或疑似患有腫瘤病變或癌症之個體之方法。一實施例中，一 種方法包括對該個體投予醫療有效量之本發明所述之結合劑。有些實施例中，方法包括使該個體之細胞(例如：腫瘤或癌細胞)與結合劑接觸。某些實施例中，該結合劑被配置成專一性結合至在該個體之一或多種細胞上表現之cMET之細胞外功能域。某些實施例中，該結合劑降低、抑制或減少該表現cMET之一或多種細胞之有絲分裂及/或促進或誘發其死亡。某些實施例中，該腫瘤病變或癌症包含：肺癌、乳癌、卵巢癌、腎臟癌、結腸直腸癌、胃癌、甲狀腺癌、胰臟癌、神經母細胞瘤、頭與頸之鱗狀細胞癌、子宮頸癌、肝細胞癌、肉瘤、間皮瘤、神經膠質母細胞瘤、多發性骨髓瘤、黑色素瘤、攝護腺與食道癌。

有些實施例中，提供一種包含該結合劑之醫藥組成物。有些實施例中，該醫藥組成物中除了結合劑外，更包含醫藥上可接受之賦形劑、稀釋劑、添加劑及/或載體。有些實施例中，醫藥組成物係調配成無菌凍乾粉末，當復水時，適用於對哺乳動物靜脈內投予。

在下述說明、實例、申請專利範圍及圖式進一步說明某些技術態樣。

圖式係說明技術之實施例且未被限制。為了清楚及方便說明，圖式並未按比例呈現，且有些例子中，不同態樣可能擴大或放大，以方便了解該特定實施例。

第1圖表示用以產生與cMET專一性結合之單株抗體 (結合劑實例)之操作流程。該先導單株Ab P3D12係由小鼠產生，該小鼠接受與人類Fc融合之cMET之重組的完整細胞外功能域免疫接種。

第2圖表示用以產生與cMET專一性結合之單株抗體(結合劑實例)之免疫接種流程圖。如圖示，小鼠藉由腹膜內注射(i.p.)含在弗氏完全佐劑(Freund’s Complete Adjuvant)(CFA)中之100μg人類cMET-Fc融合蛋白質(cMET-Fc)、或50至100μg與KLH複合之cMET肽進行初次免疫接種。cMET-Fc包含與抗體之Fc部份融合之人類cMET之細胞外功能域。cMET肽係策略性地選自cMET細胞外功能域的一部份。如圖示，經免疫接種之小鼠接種一或多次加強免疫，該加強免疫包含在不完全弗氏佐劑(Incomplete Freund’s Adjuvant)(IFA)中之25或50μg cMET-Fc或肽。有些小鼠在多重部位接受重覆免疫接種(RIMMS，received repetitive immunizations at multiple sites)。免疫接種包括Met-Fc融合物、肽、傳統與RIMMS。取得經過免疫的小鼠的脾臟，並且與合適融合對象融合。得到超過20,000個融合瘤選殖株(hybridoma clone)並篩選。

第3圖表示與促效劑Met-mAb抗體之Fab(5D5 Fab)及HGFβ次單元(HGFb)結合之MET SEMA功能域之3D結構。底部箭頭表示用於設計肽3之cMET一部份之位置。

第4圖表示來自示例性融合物(融合物6B1，第3盤)之特徵化結果。選取一部份抗-cMet融合瘤，採用ELISA來分析與cMET之專一結合性(參見標示「MET結合性 ELISA OD450nm」一欄)及採用流式細胞計測定其在人類癌細胞株誘發cMET內化之能力(參見標示「FACS幾何平均值」一欄)。FACS幾何平均值低於陰性對照組時，表示cMet已內化。箭頭表示先導融合瘤F6B1P3D12。

第5圖表示MET降解分析法之結果。對指定之孔中取得單離之抗-cMet抗體(x-軸)進行測試並選擇其在人類癌細胞株誘發cMET降解之能力，該能力係採用中尺度(Mesoscale)(MSD)cMet蛋白質定量法測定。Met降解之相對值以%對照組(對照組之百分比)表示於y-軸。數值低於100%對照組(陰性對照組值)時，表示cMet的內化及降解。降解不僅表示內化，亦表示溶小體運輸，其係抗體藥物複合體之重要性質。箭頭表示先導融合瘤F6B1P3D12之結果。

第6圖表示磷酸化ERK分析法(P-ERK分析法)之結果，該分析法係藉由間接測定抗-cMET抗體與cMET在細胞表面之結合所誘發之ERK之磷酸化來測定抗-cMET抗體之促效劑活性。第6圖顯示了使用抗-cMET抗體處理活細胞後，在細胞溶解物中檢測到之經磷酸化ERK之量(以對照組之%表示於y-軸)。由各種抗-cMET融合瘤產生之抗-cMet抗體(x-軸)係在6ug/ml或30ug/ml下測試(如x-軸所示)，並依據其可誘發ERK顯著的磷酸化之能力(亦即其不會誘發增生之能力，亦即沒有促效劑活性)來選擇。先導單株抗體(mAb)P3D12係以箭頭表示。

第7圖表示藉由ELISA分析某些cMet mAb與人類、猴子(獼猴(Cynomolgus Macaque)，亦簡寫為「Cyno」)、 犬、大鼠、及小鼠之cMet結合的結果。所有單株抗體均與人類及猴子cMet結合。P3D12證實與大鼠cMet之顯著交叉反應性。各抗體之不同濃度示於x-軸。相對量示於y-軸(OD450nm)。

第8A圖表示九種小鼠抗-cMET之單株抗體之輕鏈可變區之胺基酸序列比對，其名稱分別表示於各序列左邊。SEQ ID NO表示在各序列右邊。LC F6B1P1E2與F6BP3E2之輕鏈可變區之胺基酸序列係100%相同。此外，LC F6B1P3D12與F6B1P3E9之輕鏈可變區之胺基酸序列係100%相同。

第8B圖表示九種小鼠抗-cMET之單株抗體之重鏈可變區之胺基酸序列比對，其名稱分別表示於各序列左邊。SEQ ID NO表示在各序列右邊。F6B1P3D12H7913與F6B1P3E9之重鏈可變區之胺基酸序列係100%相同。此外，F6B1P1E2H7819與F6BP3E2之重鏈可變區之胺基酸序列係100%相同。

第9A與9B圖表示於活體內(in vivo)異種移植小鼠模式中之結果，其係於裸小鼠(nude mice)採用MKN45腫瘤模式(cMet+胃癌模式)評估所示之抗-cMET抗體藥物複合體(ADC)之效力。動物以2.5mg/kg(9A)或5.0mg/kg(9B)之ADC處理一次。各個藥物複合之抗-cMET結合劑之效力係與PBS或無關之非靶向性單株抗體(IgG-ADC)比較。在接種後不同時間點(x-軸，(接種後)天數)測定腫瘤體積(y-軸)。腫瘤生長的抑制表示陽性效力。抗-cMET結合劑 與非靶向性單株抗體(IgG)複合形成單甲基奥里斯他汀(monomethyl auristatin)F(MMAF)。

第10圖表示磷酸化ERK分析法(P-ERK分析法)之結果，該分析法係藉由間接測定抗-cMET抗體與cMET在細胞表面之結合所誘發之ERK磷酸化，來測定抗-cMET抗體之促效劑活性。第10圖表示了採用抗-cMET抗體處理活細胞後，在細胞溶解物中所檢測到之磷酸化ERK的量(以對照組之%表示於y-軸)。如x-軸所示，將標記為P3D12之單離小鼠單株抗體之重鏈與輕鏈之恆定區以人類IgG1(P3D12(hIgG1))或人類IgG2(P3D12(hIgG2))之抗體恆定區置換。如x-軸所示，各抗體以0.00064ug/ml、0.0032ug/ml、0.016ug/ml、0.08ug/ml、0.4ug/ml、2ug/ml、10ug/ml及50ug/ml進行測試。「對照組」表示未經處理之陰性對照組。HGF(EC90)為陽性對照組，表示接受肝細胞生長因子(HGF，Hepatocyte Growth Factor)處理之細胞，HGF係cMet受體之天然配體。此數據顯示人類IgG2同型(isotype)沒有展示可檢測之促效劑活性。

第11圖表示MET降解分析之結果。降解係cMET受體與抗體結合後內化之測度。嵌合性抗-cMet抗體藉由中尺度(MSD)cMet蛋白質定量法測定該抗體誘發cMET在人類癌細胞株降解之結果。Met降解之相對值以%對照組(對照組之百分比)表示於y-軸。數值低於100%對照組表示cMet已內化及降解。如x-軸所示，嵌合性抗體係由名稱為P3D12之單離小鼠單株抗體(P3D12(小鼠))之重鏈與輕鏈 之恆定區被人類IgG1(P3D12(hIgG1))或人類IgG2(P3D12(hIgG2))之抗體恆定區置換而產生。如x-軸所示，各抗體以0.00064ug/ml、0.0032ug/ml、0.016ug/ml、0.08ug/ml、0.4ug/ml、2ug/ml、10ug/ml與50ug/ml進行測試。P3D12之嵌合性cMet抗體顯示相似於親代小鼠P3D12抗體之內化/降解活性。

第12圖表示用以測試及選擇先導抗-cMET單株結合劑之發展過程流程圖。

第13圖表示五個鼠類抗-cMET選殖株P3D12之人源化版本的人源化輕鏈可變區之比對，其名稱與SEQ ID NO示於各序列左邊。採用五種獨立方法將鼠類抗-cMET mAb進行人源化。其中兩種方法產生相同結果，因此表示有4種不同的輕鏈。

第14圖表示五個鼠類選殖株P3D12之人源化版本的人源化重鏈可變區之比對，其名稱與SEQ ID NO示於各序列左邊。採用五種獨立方法將鼠類抗-cMET mAb進行人源化。其中兩種方法產生相同結果，因此表示有4種不同的輕鏈(參見第13圖)與4種不同的重鏈，此等可產生16種不同結合劑之組合。

第15圖表示活體內異種移植小鼠模式之結果，其係採用MKN45腫瘤模式(cMet+胃癌模式)測試所示之人源化抗-cMET抗體藥物複合體(ADC)，證實該複合體在2.5mg/kg(2.5mpk)或5mg/kg(5mpk)下之效力。動物以指定之ADC於2.5或5.0mg/kg下處理一次。各抗-cMET結合 劑之效力與PBS或非靶向性單株抗體利妥昔(Rituxima)單抗(Retux)相比，該Retux為靶向CD20之抗癌單株抗體，CD20主要存在於免疫系統B細胞表面上。在接種後不同時間點(x-軸)測定腫瘤體積(y-軸)。腫瘤生長的抑制表示陽性效力。抗-cMET結合劑係與單甲基奥里斯他汀F(MMAF)複合。

第16圖表示抗-cMET單株結合劑hD12及MET IgG2與cMET-Fc及突變cMET(E168D)Fc重組融合蛋白質之結合。E168D突變為出現在小細胞肺癌(SCLC)中之體突變。該突變位在Sema功能域，造成cMet受體持續性活化。cMet之體突變的豐富度極低。E168D在0.8%至3% SCLC患者中發生。採用與人類IgG1 Fc融合之人類cMET或E168D cMET細胞外功能域進行結合性ELISA。將cMET蛋白質塗佈在盤上一夜，滴定樣本，使用山羊抗-人類IgG(H+L)-HRP檢測。使用S形劑量效應擬合(sigmoidal dose response fit)測定EC50。

有些實施例中，本發明提供與cMET或其一部份結合之單株結合劑及該單株結合劑之組成物及用途。原致癌基因MET轉譯產物包含間質上皮轉化因子(MET)。MET在本發明中係術語「cMET」之同義字。cMET亦稱為肝細胞生長因子受體(HGFR，hepatocyte growth factor receptor)。人類cMET(例如：SEQ ID NO：109)包含1390個胺基酸之不成熟多肽序列，包含：胺基酸第1-24位之N-末端單一序列、胺基酸約第24-932位之人類cMET之細胞外功能域、 胺基酸約第933至955位之跨膜功能域、及胺基酸第956至1390位之細胞質功能域，係從N-末端編號至C-末端。判別cMET受體之先導序列、細胞外功能域、跨膜功能域、與細胞質功能域之方法係已知，且可採用任何合適方法來判別來自合適哺乳動物物種之cMET多肽序列內之此等功能域或區域。人類cMET多肽可包含復數種已知變異體(例如：參見URL：http：//www.uniprot.org/uniprot/P08581，已於2016年5月5日啟用，其中揭示之cMET變異體與替代序列已以引用而併入至本發明中)。人類cMET之天然變異體之非限制實例包括在人類cMET(SEQ ID NO：109)之第143、150、156、168、238、316、320、375、385、773、970、991、及/或992位之胺基酸取代。有些實施例中，cMET或cMET細胞外功能域包含在人類cMET位置168之E取代為D，本發明中稱為E168D。有些實施例中，cMET或cMET細胞外功能域包含在人類cMET位置375之N取代為S，本發明中稱為N375S。

有些實施例中，cMET為哺乳動物cMET。有些實施例中，cMET為靈長類cMET。有些實施例中，cMET為人類cMET。有些實施例中，cMET為猴子cMET。有些實施例中，cMET為囓齒類cMET(例如：大鼠及/或小鼠)。有些實施例中，cMET為犬cMET(例如：狗cMET)。哺乳動物cMET之非限制實例提供於實例5及/或本申請案之序列表中。某些實施例中，cMET之細胞外功能域包含通常表現在完整哺乳動物細胞表面上之cMET多肽之N- 末端部份。cMET之細胞外功能域可包含源自MET轉譯產物之兩個或更多個多肽鏈。某些實施例中，cMET之細胞外功能域可以缺少細胞質及/或跨膜功能域之可溶解及/或非膜結合性形式表現。某些實施例中，cMET之細胞外功能域係被表現、單離及/或純化為融合蛋白質。例如：可將哺乳動物cMET之細胞外功能域工程化並表現成包含免疫球蛋白之Fc部份的融合蛋白質(例如：cMET-Fc)。某些實施例中，cMET及/或cMET之細胞外功能域包含一或多種胺基酸加成、缺失或取代。cMET多肽可與本發明所揭示之cMET多肽至少80%、至少85%、至少90%或至少95%相同。某些實施例中，cMET多肽包含cMET蛋白質之一部份(例如：子序列)。有些實施例中，cMET之一部份包含cMET之細胞外功能域、或其一部份。

有些實施例中，本發明提供一種組成物(例如：醫藥組成物)，該組成物包含一或多種與cMET或其一部份專一性結合之結合劑。有些實施例中，本發明提供之結合劑係用於為個體治療、預防及/或診斷腫瘤病變及/或癌症。

術語「個體」意指哺乳動物。任何合適之哺乳動物均可接受本發明所述之方法或組成物處理。哺乳動物之非限制實例包括人類、非人類靈長類(例如：猿、長臂猿、黑猩猩、紅猩猩、猴子、獼猴等)、家畜動物(例如：狗與貓)、農場動物(例如：馬、乳牛、山羊、綿羊、豬)及實驗動物(例如：小鼠、大鼠、兔、天竺鼠)。有些實施例 中，哺乳動物為人類。哺乳動物可為任何年齡或處於任何發育階段(例如：成人、青少年、兒童、嬰兒、或母體內之哺乳動物)。哺乳動物可為雄性或雌性。哺乳動物可為懷孕雌性。

有些實施例中，個體需要本發明所述之治療或組成物。某些實施例中，個體患有或疑似患有腫瘤病變或癌症。有些實施例中，需要本發明所述之治療或組成物之個體患有或疑似患有腫瘤病變或癌症。某些實施例中，本發明所述之結合劑或組成物係用以治療患有或疑似患有腫瘤病變或癌症之個體。

某些實施例中，該結合劑包含與至少一種抗原(例如：cMET或其一部份)專一性結合之一或多種多肽或一或多種蛋白質、或由該多肽或蛋白質組成。該結合劑通常包含至少一個抗原結合部份(亦即結合部份)。結合劑之抗原結合部份係與抗原專一性結合之部份。某些實施例中，結合劑之結合部份包含單一多肽(例如：單鏈抗體)、或由單一多肽組成。有些實施例中，結合劑之結合部份包含兩個多肽、或由兩個多肽組成。有些實施例中，結合劑之結合部份包含2、3、4或更多個多肽、或由該多肽組成。有些實施例中，結合劑包含一或多個結構部份(例如：骨架、結構多肽、恆定區及/或框架區)。有些實施例中，結合劑或其結合部份連接至底材(例如：聚合物、非有機材料、矽、小珠等)。

結合劑可包含一個抗原結合部份或多個抗 原結合部份。例如：包含一個結合部份之結合劑有時候稱為單價。包含兩個結合部份之結合劑有時候稱為二價。有些實施例中，結合劑包含1、2、3、4、5、6、7、8、9、或10個或更多個結合部份。某些實施例中，多價結合劑之所有結合部份係結合相同抗原。某些實施例中，多價結合劑之所有結合部份包含一或多種至少90%、至少95%、至少99%或100%相同之多肽序列。

某些實施例中，結合劑之兩個或更多個結合部份結合不同抗原。此等結合劑有時候稱為雙專一性或多專一性結合劑(例如：抗體)。因此，某些實施例中，結合劑包含與cMET或其一部份專一性結合之第一抗原結合部份、及與另一種抗原(例如：不為cMET之多肽或其一部份)專一性結合之第二抗原結合部份。有些實施例中，與cMET專一性結合之結合劑係共價或非共價連接至另一種不會與cMET或其一部份專一性結合之結合劑。某些實施例中，與cMET專一性結合之結合劑包含可與另一種抗原專一性結合之第二結合劑。

有些實施例中，結合劑包含抗體、或其一部份(例如：其結合部份)。某些實施例中，結合劑包含合適之抗體、抗體片段及/或抗體之抗原結合部份(例如：結合片段，亦即其結合部份)，或由此等組成。有些實施例中，結合劑為抗體(例如：單株抗體及/或重組抗體)。可採用合適方法形成、製作或製造結合劑或抗體。有些實施例中，結合劑為單株。有些實施例中，結合劑為衍生自合適物種 之單株抗體。結合劑之某些非限制實例包括單株抗體、嵌合抗體、抗體結合片段(例如：抗體之抗原結合部份)、CDR-接枝抗體、人源化抗體、人類抗體、或其一部份。人類抗體可採用任何合適方法製得。例如：人類抗體可從經工程化而產生完全人類抗體之轉染色體(trans-chromosomal)動物獲得。某些實施例中，該結合劑不為多株，不為多株抗體，且術語「結合劑」不是指多株抗體。

有些實施例中，結合劑係從合適之物種衍生、製造、取得、單離及/或純化。有些實施例中，結合劑係從例如：兔、山羊、馬、乳牛、大鼠、小鼠、魚、鳥、或羊駝衍生、製造、取得、單離及/或純化。有些實施例中，結合劑係從鳥(例如：雞或鳥蛋)衍生、製造、取得、單離及/或純化。有些實施例中，結合劑係從植物衍生、製造、取得、單離及/或純化(例如：由基因工程植物產生之重組結合劑)。有些實施例中，結合劑由合適之哺乳動物衍生、製造、取得、單離及/或純化。某些實施例中，合適之哺乳動物為基因改造之哺乳動物(例如：轉染色體或轉殖基因哺乳動物)，該哺乳動物經過工程化而產生包含人類重鏈及/或人類輕鏈或其一部份之抗體。有些實施例中，結合劑係由原核生物或真核生物細胞製造、取得、單離、或純化(例如：由基因工程化之細胞產生之重組結合劑)。有些實施例中，結合劑係由病毒製造、取得、單離或純化(例如：由基因工程化之病毒產生之重組結合劑)。結合劑可由合適之表現系統(其非限制實例包括合適之細菌、噬菌體、昆蟲、病 毒、植物或哺乳動物表現系統)表現，從該等表現系統單離及/或純化。例如：可將編碼有結合劑之核酸導入合適之哺乳動物細胞株中，該核酸會表現及分泌該結合劑至細胞培養基中。

某些實施例中，結合劑在自然界不存在且不是天然存在的。例如：某些實施例中，藉由投予包括外來重組抗原、強力之佐劑、與常用之礦物油及/或清潔劑之乳化混合液，從而誘發對外來重組抗原(例如：cMET、cMET-Fc)之人工免疫反應，而在動物體中人工產生結合劑。

某些實施例中，單株抗體或單株結合劑為實質上結合劑、或其結合片段之均質群體，其中，該群體中各單獨結合劑實質上相同及/或結合至相同抗原表位，但不包括在製造單株結合劑期間可能產生之變異體。有些實施例中，此等變異體通常不存在或可能存在少量。相對於多株抗體製劑通常包括一群針對不同決定基(抗原表位)之不同抗體，單株結合劑族群中各結合劑經常結合抗原之單一決定基。單株結合劑通常不夾雜其他免疫球蛋白。可依目的需要添加一或多種不同單株結合劑至組成物中，形成混合物。

修飾詞「單株」不代表需要採用任何特定方法來製造結合劑。單株結合劑可採用任何合適方法製造。例如：某些實施例中，單株抗體係採用融合瘤方法(例如：Kohler等人，揭示於Nature,256：495(1975))、或其變 化法製造。有些實施例中，單株結合劑係由重組DNA方法製造。例如：單株結合劑可藉由使用合適表現系統(例如：噬菌體呈現表現系統)篩選重組基因庫(recombinant library)來製造。有些實施例中，單株結合劑係從結合劑之噬菌體基因庫中單離，例如：採用Clackson等人揭示於Nature,352：624-628(1991)及/或Marks等人揭示於J.Mol Biol,222：581-597(1991)之技術或其變化法。

某些實施例中，該結合劑包含一或多種結構或骨架部份，有時候稱為框架。結合劑可包含框架，其非限制實例包括衍生自抗體、蛋白質A之Z功能域、γ-B結晶、泛素、胱抑素(cystatin)、Sac7d、三螺旋卷曲螺旋、脂質運載蛋白(lipocalin)、錨蛋白(ankyrin)重覆序列基元、Fyn之SH3功能域、合適蛋白酶抑制劑之Kunitz功能域、纖維網蛋白功能域、核酸聚合物等之框架，此等之一部份或組合。有些實施例中，結合劑不包含框架。某些實施例中，該結合劑包含哺乳動物抗體之一或多個結構部份。

某些實施例中，該結合劑包含一或多個恆定區(例如：衍生自抗體，哺乳動物抗體之恆定區)。某些實施例中，該結合劑包含抗體輕鏈之恆定區及/或抗體重鏈之恆定區。哺乳動物抗體中存在至少兩種稱為λ與κ之免疫球蛋白輕鏈。結合劑可包含任何合適之抗體恆定區、或其一或多個部份。有些實施例中，結合劑包含λ輕鏈恆定區或其一部份。有些實施例中，結合劑包含κ輕鏈恆定區或其一部份。有些實施例中，結合劑包含與哺乳動物抗體 輕鏈之恆定區或其一部份之多肽序列至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少99%相同之多肽。有些實施例中，結合劑包含與人類抗體之抗體輕鏈恆定區之多肽序列至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少99%相同之多肽。有些實施例中，結合劑不包括輕鏈恆定區。

某些實施例中，該結合劑包含抗體重鏈之恆定區。哺乳動物中，抗體可具有至少五種/類稱為IgA、IgD、IgE、IgG、與IgM之Ig重鏈，此等係由所存在之不同重鏈恆定區、或其一部份(例如：CH1、CL、CH2、CH3功能域)所決定。結合劑可包括任何合適之重鏈恆定區、或其一部份。有些實施例中，結合劑包含IgG1、IgG2、IgG3或IgG4之重鏈恆定區、或其一或多個部份。有些實施例中，結合劑包含一或多個IgM、IgD、IgA、或IgE同型之重鏈恆定區、或其一部份。有些實施例中，結合劑包含與哺乳動物抗體重鏈之恆定區多肽序列或其一部份至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少99%相同、或100%相同之多肽。有些實施例中，結合劑包含與人類抗體之抗體重鏈恆定區之多肽序列至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少99%相同或100%相同之多肽。有些實施例中，結合劑包含對恆定區之一或多種加成、缺失及/或修飾。結合劑有時候經過修飾，而改變抗體類型或結合劑之同型。有些實施例中，結合劑包含一或多種加成、缺失及/或修飾(一或多種胺基酸 取代、缺失或加成)，來修飾一或多種結合劑功能，例如：廢除、加強或降低血清半衰期、Fc受體結合性、補體結合性(例如：C1q結合性)、糖基化、唾液酸化(sialylation)、細胞毒性、抗體依賴性細胞介導之細胞吞噬作用(ADCP)、抗體依賴性細胞毒性(ADCC)等。有些實施例中，結合劑不包括重鏈恆定區或輕鏈恆定區之一或多個部份。有些實施例中，結合劑不包括重鏈恆定區。

有些實施例中，結合劑包含抗體之一或多個可變區或其一部份，或由該可變區或其一部份組成。有些實施例中，結合劑包含一或多個輕鏈可變區、或其一部份。有些實施例中，結合劑包含一或多個重鏈可變區、或其一部份。某些實施例中，該結合劑包含至少一個輕鏈可變區與至少一個重鏈可變區。輕鏈可變區與重鏈可變區可在相同或不同多肽上。某些實施例中，結合劑之抗原結合部份係由一或多個重鏈可變區組成。某些實施例中，結合劑之抗原結合部份係由一或多個輕鏈可變區組成。某些實施例中，結合劑之抗原結合部份係由一或多個輕鏈可變區與一或多個重鏈可變區組成。

有些實施例中，結合劑包含Fab、Fab’、F(ab’)2、Fv片段、單鏈Fv(scFv)、雙價抗體(Dab)、合成抗體(synbody)、類似物及/或其組合或其一部份，或由此等組成。有些實施例中，結合劑為Fab、Fab’、F(ab’)2、Fv片段、單鏈Fv(scFv)、雙價抗體(Dab)、合成抗體、類似物及/或其組合或其一部份(參見例如：美國專利案案號 6,099,842與5,990,296)。有些實施例中，結合劑包含含有一或多個抗原結合部份之單鏈多肽。例如：單鏈結合劑之構築可採用重組分子生物學製程，由重鏈可變區或其抗原結合部份與輕鏈可變區或其抗原結合部份連接鏈結子(linker)(例如：胺基酸、多肽鏈結子)。如此之單鏈結合劑經常對類似親代雙鏈單株結合劑之抗原表現專一性與親和力。結合劑通常包含工程化區，如：CDR-接枝或人源化部份。某些實施例中，該結合劑為完整雙鏈免疫球蛋白，其他實施例中，結合劑為Fab單體或Fab二聚體。

編碼有結合劑多肽之核酸或其部份可藉由合適之選殖程序選殖、次選殖、重排或修飾用以重組表現，隨後使用合適之表現系統，並採用所屬技術領域具有通常知識者已知之方法表現(參見例如：Maniatis等人之Molecular Cloning：A Laboratory Manual,Cold Spring Harbor Laboratory,1982；Antibody Engineering：Methods and Protocols,Vol.248 of Methods in molecular biology，Benny K.C.Lo編輯，Springer Science & Business Media,2004；Antibody Engineering,Vol.1,Roland E.Kontermann,Stefan Dübel，第2版，Publisher Springer Science & Business Media,2010；Antibody Phage Display：Methods and Protocols,Biomed Protocols,Vol.178 of Methods in molecular biology，Philippa M.O’Brien,Robert Aitken編輯，Springer Science & Business Media,2004)。

哺乳動物中，抗體之重鏈可變區與輕鏈可 變區分別貢獻通稱為CDR1、CDR2與CDR3之三個CDR(互補決定區，complementarity determining region)，該等CDR藉由框架區(例如：FR1、FR2、FR3與FR4)分隔及/或側接。本發明所採用之術語「CDR」意指經判別為互補決定區之多肽之胺基酸序列。某些實施例中，藉由解析結合劑之結構及/或解析結合劑-抗原複合物之結構來確認CDR多肽序列之輪廓及判别包含結合劑結合位點之殘基。某些實施例中，其可藉由任何合適方法完成，如：X-射線結晶學及/或電腦模型。某些實施例中，可採用各種不同分析方法來判別或估測結合劑或抗體之CDR序列。例如：結合劑、抗體、其結合部份或可變區之多肽序列中CDR之胺基酸序列及/或位置均可採用合適方法判別，其非限制實例包括Kabat系統(例如：參見Kabat,E.A.，等人之1991；Sequences of Proteins of Immunological Interest，第5版，NIH Publication No.91-3242，及Johnson,G.and Wu,T.T.2000,Nucleic Acids Research)，及/或Chothia編號法(Chothia Numbering Scheme)(例如：Chothia & Lesk,(1987)J.Mol.Biol,196：901-917；Chothia等人，Nature,(1989)342：878-883；及Al-Lazikani等人(1997)JMB 273,927-948)。有些實施例中，可採用AbM方法及/或接觸法判別抗體之CDR之胺基序列及/或位置。「AbM」係採用建立抗體結構模型之Oxford Molecular Group製作的全套電腦軟體定義(參見例如：Martin等人之Proc.Natl.Acad.Sci.(USA),86：9268-9272(1989)；「AbM^TM,A Computer Program for Modeling Variable Regions of Antibodies」,Oxford,UK；Oxford Molecular,Ltd.)。AbM定義係利用已知數據庫與及從頭開始之方法之組合，由一級序列建立抗體之三級結構模型，如：此等由Samudrala等人揭示於PROTEINS,Structure,Funtion and Genetics Suppl,3：194-198(1999)之「Ab Initio Protein Structure Prediction Using a Combined Hierarchical Approach」。某些實施例中，接觸定義係依據可取得之複合結晶結構分析(參見例如：MacCallum等人之J.Mol.Biol,5：732-45(1996))。

有些實施例中，結合劑及/或結合劑之抗原結合部份包含至少2個、至少3個、至少4個、至少5個或至少6個CDR。有些實施例中，結合劑包含3至60個CDR(例如：用於具有多重抗原結合部份之結合劑)。有些實施例中，結合劑包含3至12個CDR。有些實施例中，結合劑之抗原結合部份包含1至6個CDR多肽序列。

某些實施例中，結合劑及/或結合劑之抗原結合部份包含輕鏈可變區之一、二、或三個CDR。有些實施例中，結合劑之輕鏈可變區包含一或多個CDR(例如：一、二、三、或更多個CDR)。代表抗體或結合劑之輕鏈可變區中CDR之胺基酸序列稱為CDR-L1、CDR-L2、與CDR-L3，此等係依據輕鏈可變區之胺基末端(N-末端)至羧基末端(C-末端)之方向依序編號(亦即L1、L2與L3)。例如：再結合劑之輕鏈可變區之多肽中，當CDR-L1存在時為N-最末端的輕鏈CDR；當CDR-L3存在時為C-最末端 輕鏈CDR的；及當CDR-L2存在時為位於結合劑輕鏈可變區或結合部份之(i)CDR-L1與CDR-L3之間、(ii)CDR-L3之N-末端側、或(iii)CDR-L1之C-末端側。術語「CDR-L1」、「CDR-L2」與「CDR-L3」係指經判別或本發明揭示為結合劑之互補決定區之多肽之胺基酸序列之一部份(例如：輕鏈可變區之CDR)。CDR-L1、CDR-L2與CDR-L3之胺基酸序列之非限制實例分別提供於表1至3。本發明所述之結合劑之輕鏈可變區或抗原結合部份可包含本發明所揭示之CDR-L1、CDR-L2、與CDR-L3之任何組合，其中該結合劑保留與cMET或其一部份之專一性結合。某些實施例中，本發明所述之結合劑之輕鏈可變區或抗原結合部份所包含之單一輕鏈CDR，其包含與選自表3之CDR-L3至少70%相同之胺基酸序列。某些實施例中，本發明所述之結合劑之輕鏈可變區或抗原結合部份包含與選自表3之CDR-L3至少70%相同之胺基酸序列，及任何其他合適之CDR-L2及/或CDR-L1多肽序列，其中該結合劑保留與cMET或其一部份之結合專一性。某些實施例中，結合劑之輕鏈可變區或抗原結合部份之輕鏈CDR係由CDR-L3與CDR-L2組成，其中該CDR-L3包含與選自表3之CDR-L3至少70%相同之胺基酸序列，及CDR-L2包含與選自表2之CDR-L2至少70%相同之胺基酸序列。某些實施例中，本發明所述之結合劑之輕鏈可變區或抗原結合部份包含與選自表3之CDR-L3至少70%相同之胺基酸序列及與選自表2之CDR-L2至少70%相同之胺基酸序列，及任何其他 合適之CDR-L1多肽序列，其中該結合劑保留與cMET或其一部份之結合專一性。某些實施例中，本發明所述之結合劑之輕鏈可變區或抗原結合部份包含三條輕鏈CDR，其係由與選自表3之CDR-L3至少70%相同之胺基酸序列、與選自表2之CDR-L2至少70%相同之胺基酸序列、及與選自表1之CDR-L1至少70%相同之胺基酸序列所組成。某些實施例中，本發明所述之結合劑之輕鏈可變區或抗原結合部份包含與選自表3之CDR-L3至少70%相同之胺基酸序列、與選自表2之CDR-L2至少70%相同之胺基酸序列、及與選自表1之CDR-L1至少70%相同之胺基酸序列，其中該結合劑保留與cMET或其一部份之結合專一性。

有些實施例中，結合劑包含與表1、2或3所列之任一CDR序列具有至少70%、75%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、或至少99%相同性之一或多個輕鏈CDR。有些實施例中，結合劑或結合劑之抗原結合部份包含與表1所示之任一序列具有至少70%、75%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、或至少99%相同性之CDR-L1。有些實施例中，結合劑或結合劑之抗原結合部份包含表1所示之任一序列之CDR-L1。

CDR-L1序列

表1至10所示之選殖株名稱係指衍生出該等選殖株之96孔盤之融合物編號(「F」)、盤編號(「P」)與孔編號(A1至H12)。因此，例如：選殖株F6AP12F12係來自融合物6A，盤12，孔F12。各選殖株之融合物編號對應於第2圖所示之融合物。

有些實施例中，結合劑或結合劑之抗原結合部份包含與表2所示之任一序列具有至少70%、75%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、或至少99%相同性之CDR-L2。有些實施例中，結合劑或結合劑之抗原結合部份包含表2所示之任一序列之CDR-L2。

CDR-L2序列

有些實施例中，結合劑或結合劑之抗原結合部份包含與表3所示之任一序列具有至少70%、75%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、或至少99%相同性之CDR-L3。有些實施例中，結合劑或結合劑之抗原結合部份包含表3所示之任一序列之CDR-L3。

CDR-L3序列

有些實施例中，結合劑或結合劑之抗原結合部份包含與表4之胺基酸序列具有至少70%、75%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、或至少99%相同性之輕鏈可變區。有些實施例中，結合劑或結合劑之抗原結合部份包含表4之輕鏈可變區序列。

可變輕鏈序列

有些實施例中，結合劑或結合劑之抗原結合部份包含與表5之序列具有至少70%、75%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、或至少99%相同性之人源化輕鏈可變區。有些實施例中，結合劑或結合劑之抗原結合部份包含如表5之人源化輕鏈可變區序列。

人源化P3D12輕鏈

某些實施例中，結合劑及/或結合劑之抗原結合部份包含重鏈可變區之一、二、或三個CDR。有些實施例中，重鏈可變區包含一或多個CDR(例如：一、二、或三個或更多個CDR)。表示抗體或結合劑之重鏈可變區中的CDR之胺基酸序列稱為CDR-H1、CDR-H2、與CDR-H3，此等係依重鏈可變區之胺基末端(N-末端)至羧基末端(C-末端)之方向依序編號(亦即H1、H2與H3)。例如：在表示結合劑之重鏈可變區之多肽中，當CDR-H1存在時為N-最末端CDR；當CDR-H3存在時為C-最末端CDR；及當CDR-H2存在時為位於重鏈可變區之(i)CDR-H1與CDR-H3之間，(ii)CDR-H3之N-末端側或(iii)CDR-H1之C-末端側。術語「CDR-H1」、「CDR-H2」與「CDR-H3」係指經判別或本發明揭示為結合劑之互補決定區之多肽的胺基酸序列之一部份(例如：結合劑之重鏈可變區之CDR)。 CDR-H1、CDR-H2與CDR-H3之胺基酸序列之非限制實例分別提供於表6至8。本發明所述之結合劑之重鏈可變區或抗原結合部份可包含本發明所揭示之CDR-H1、CDR-H2、與CDR-H3之任何組合，其中該結合劑保留與cMET或其一部份之結合專一性。某些實施例中，本發明所說明結合劑之重鏈可變區或抗原結合部份包含由與選自表8之CDR-H3至少70%相同之胺基酸序列組成之單一重鏈CDR。某些實施例中，本發明所述之結合劑之重鏈可變區或抗原結合部份包含與選自表8之CDR-H3至少70%相同之胺基酸序列，及任何其他合適之CDR-H2及/或CDR-H1多肽序列，其中該結合劑保留與cMET或其一部份之結合專一性。某些實施例中，結合劑之重鏈可變區或抗原結合部份之重鏈CDR係由CDR-H3與CDR-H2組成，其中該CDR-H3包含與選自表8之CDR-H3至少70%相同之胺基酸序列，及CDR-H2包含與選自表7之CDR-H2至少70%相同之胺基酸序列。某些實施例中，本發明所述之結合劑之重鏈可變區或抗原結合部份包含與選自表8之CDR-H3至少70%相同之胺基酸序列及與選自表7之CDR-H2至少70%相同之胺基酸序列，及任何其他合適之CDR-H1多肽序列，其中該結合劑保留與cMET或其一部份之結合專一性。某些實施例中，本發明所述之結合劑之重鏈可變區或抗原結合部份包含三個重鏈CDR，其係由與選自表8之CDR-H3至少70%相同之胺基酸序列、與選自表7之CDR-H2至少70%相同之胺基酸序列、及與選自表6之CDR-H1至少70%相 同性之胺基酸序列所組成。某些實施例中，本發明所述之結合劑之重鏈可變區或抗原結合部份包含與選自表8之CDR-H3至少70%相同之胺基酸序列、與選自表7之CDR-H2至少70%相同之胺基酸序列、及與選自表6之CDR-H1至少70%相同之胺基酸序列，其中該結合劑保留與cMET或其一部份之結合專一性。

有些實施例中，結合劑包含與表6、7或8之任一CDR具有至少70%、75%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、或至少99%相同性之一或多個重鏈CDR。有些實施例中，結合劑或結合劑之抗原結合部份包含與表6所示之任一序列具有至少70%、75%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、或至少99%相同性之CDR-H1。有些實施例中，結合劑或結合劑之抗原結合部份包含表6所示之任一序列之CDR-H1。

CDR-H1序列

有些實施例中，結合劑或結合劑之抗原結合部份包含與表7所示之任一序列具有至少70%、75%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、或至少99%相同性之CDR-H2。有些實施例中，結合劑或結合劑之抗原結合部份包含如表7所示之任一序列之CDR-H2。

CDR-H2序列

有些實施例中，結合劑或結合劑之抗原結合部份包含與表8所示之任一序列具有至少70%、75%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、或至少99%相同性之CDR-H3。有些實施例中，結合劑或結合劑之抗原結合部份包含如表8所示之任一序列之CDR-H3。

CDR-H3序列

有些實施例中，結合劑或結合劑之抗原結合部份包含與表9之序列具有至少70%、75%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、或至少99%相同性之重鏈可變區。有些實施例中，結合劑或結合劑之抗原結合部份包含表9之重鏈可變區序列。

可變重鏈序列

有些實施例中，結合劑或結合劑之抗原結合部份包含與表10之序列具有至少70%、75%、85%、86%、 87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、或至少99%相同性之人源化重鏈可變區。有些實施例中，結合劑或結合劑之抗原結合部份包含如表10序列之人源化重鏈可變區。

人源化P3D12重鏈

有些實施例中，結合劑或結合劑之抗原結合部份包含CDR-L3及CDR-H3，其中，該CDR-L3包含與SEQ ID NO：26至36之任一胺基酸序列具有至少70%、至少75%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%相同性之胺基酸序列(例如：選自表3之 CDR-L3序列)；該CDR-H3包含與SEQ ID NO：79至93之任一胺基酸序列具有至少70%、至少75%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%相同性之胺基酸序列(例如：選自表8之CDR-H3序列)。有些實施例中，結合劑或結合劑之抗原結合部份包含CDR-L3及CDR-H3，其中，該CDR-L3包含與SEQ ID NO：34或35之胺基酸序列具有至少70%、至少90%、至少95%、至少98%、至少99%或100%相同性之胺基酸序；該CDR-H3包含與SEQ ID NO：87、88、92或93之胺基酸序列具有至少70%、至少90%、至少95%、至少98%、至少99%或100%相同性之胺基酸序列。

有些實施例中，結合劑或結合劑之抗原結合部份包含CDR-L3、CDR-L2、CDR-H3及CDR-H2，其中，該CDR-L3包含與SEQ ID NO：26至36之任一胺基酸序列具有至少70%、至少90%、或100%相同性之胺基酸序列(例如：選自表3之CDR-L3序列)；該CDR-L2包含與SEQ ID NO：16至25之任一胺基酸序列具有至少70%、至少90%、或100%相同性之胺基酸序列(例如：選自表2之CDR-L2序列)；該CDR-H3包含與SEQ ID NO：79至93之任一胺基酸序列具有至少70%、至少90%、或100%相同性之胺基酸序列(例如：選自表8之CDR-H3序列)；該CDR-H2包含與SEQ ID NO：62至78之任一胺基酸序 列具有至少70%、至少90%、或100%相同性之胺基酸序列(例如：選自表7之CDR-H2序列)。有些實施例中，結合劑或結合劑之抗原結合部份包含CDR-L3、CDR-L2、CDR-H3及CDR-H2，其中，該CDR-L3包含與SEQ ID NO：34或35之胺基酸序列具有至少70%、至少90%、或100%相同性之胺基酸序列；該CDR-L2包含與SEQ ID NO：24或25之胺基酸序列具有至少70%、至少90%、或100%相同性之胺基酸序列；該CDR-H3包含與SEQ ID NO：87、88、92或93之胺基酸序列具有至少70%、至少90%、或100%相同性之胺基酸序列；及CDR-H2包含與SEQ ID NO：70、71或78之任一胺基酸序列具有至少70%、至少90%、或100%相同性之胺基酸序列。

有些實施例中，結合劑或結合劑之抗原結合部份包含CDR-L3、CDR-L2、CDR-L1、CDR-H3、CDR-H2及CDR-H1，其中，該CDR-L3包含與SEQ ID NO：26至36之任一胺基酸序列具有至少70%、至少90%、或100%相同性之胺基酸序列(例如：選自表3之CDR-L3序列)；該CDR-L2包含與SEQ ID NO：16至25之任一胺基酸序列具有至少70%、至少90%、或100%相同性之胺基酸序列(例如：選自表2之CDR-L2序列)；該CDR-L1包含與SEQ ID NO：1至15之任一胺基酸序列具有至少70%、至少90%、或100%相同性之胺基酸序列(例如：選自表1之CDR-L1序列)；該CDR-H3包含與SEQ ID NO：79至93之任一胺基酸序列具有至少70%、至少90%、或100%相 同性之胺基酸序列(例如：選自表8之CDR-H3序列)；該CDR-H2包含與SEQ ID NO：62至78之任一胺基酸序列具有至少70%、至少90%、或100%相同性(例如：選自表7之CDR-H2序列)之胺基酸序列；該CDR-H1包含與SEQ ID NO：50至61之任一胺基酸序列具有至少70%、至少90%、或100%相同性之胺基酸序列(例如：選自表6之CDR-H1序列)。有些實施例中，結合劑或結合劑之抗原結合部份包含CDR-L3、CDR-L2、CDR-L1、CDR-H3、CDR-H2及CDR-H1，其中，該CDR-L3包含與SEQ ID NO：34或35之胺基酸序列具有至少70%、至少90%、或100%相同性之胺基酸序列；該CDR-L2包含與SEQ ID NO：24或25之胺基酸序列具有至少70%、至少90%、或100%相同性之胺基酸序列；該CDR-L1包含與SEQ ID NO：9、10或15之胺基酸序列具有至少70%、至少90%、或100%相同性之胺基酸序列；該CDR-H3包含與SEQ ID NO：87或88之胺基酸序列具有至少70%、至少90%、或100%相同性之胺基酸序列；該CDR-H2包含與SEQ ID NO：70、71或78之胺基酸序列具有至少70%、至少90%、或100%相同性之胺基酸序列；及該CDR-H1包含與SEQ ID NO：58或59之胺基酸序列具有至少70%、至少90%、或100%之胺基酸序列。

有些實施例中，結合劑或結合劑之抗原結合部份包含重鏈可變區及輕鏈可變區，其中，該重鏈可變區包含與SEQ ID NO：94至108之任一胺基酸序列具有至 少70%、至少75%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%相同性之胺基酸序列(例如：選自表9與10之重鏈可變區)；及該輕鏈可變區包含與SEQ ID NO：37至49之任一胺基酸序列具有至少70%、至少75%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%相同性之胺基酸序列(例如：選自表4與5之輕鏈可變區)。有些實施例中，結合劑或合劑之抗原結合部份包含重鏈可變區及輕鏈可變區，其中，該重鏈可變區包含與SEQ ID NO：104至108之任一胺基酸序列具有至少90%相同性之胺基酸序列(例如：選自表10之重鏈可變區)；及該輕鏈可變區包含與SEQ ID NO：45至49之任一胺基酸序列具有至少90%相同性之胺基酸序列(例如：選自表5之輕鏈可變區)。

於下述說明本發明所採用之縮寫「abb」、「sdr」、「fra」、「ven.」與「cdr」。縮寫「cdr」或「CDR」係指互補決定區。縮寫「abb」係指依據Padlan等人(1995)於「Identification of specificity-determining residues in antibodies」FASEB J 9：133-139所縮寫之CDR。有些實施例中，縮寫CDR之定義為輕鏈中的殘基27D-34、50-55、與89-96，及重鏈中的殘基31-35B、50-58、與95-101，該 等係接枝在適當人類框架上。關鍵之框架殘基通常被保留。縮寫「sdr」係依據Padlan等人(1995)的「專一性決定基」，該等係被認為涉及抗原結合性之殘基。縮寫「fra」係依據Wu與Kabat(1992)「Possible use of similar framework region amino acid sequences between human and mouse immunoglobulins for humanizing mouse antibodies」Mol Immunol 29：1141-1146所建議之「科學怪人方法(Frankenstein approach)」。縮寫「ven」係指依據Padlan(1991),「A possible procedure for reducing the immunogenicity of antibody variable domains while preserving their ligand-binding properties」Mol Immunol 28：489-498的「剪接」。

術語「相同性百分比」或「相同百分比」係指兩個胺基酸序列之間的序列相同性。以比較為目的來比對各序列，由比對位置來決定相同性。當比對之序列中同一個位置被相同胺基酸佔據時，則該等分子在該位置上具有相同性。當同一個位置被相同或類似胺基酸殘基(例如：類似立體性及/或電子性)佔據時，則該等分子可稱為在該位置上具有同源(相似)性。同源性、相似性、或相同性之百分比係以比對之序列在相同位置上有相同或類似胺基酸之數量為函數表示。可採用各種比對算法及/或程式，包括FASTA、BLAST、或ENTREZ。FASTA與BLAST可作為GCG序列分析套裝軟體(University of Wisconsin,Madison,Wis.)之一部份獲得，且可與例如默認設置併 用。ENTREZ可透過國家衛生研究院國家醫學圖書館之國家生物技術資訊中心(the National Center for Biotechnology Information,National Library of Medicine,National Institutes of Health,Bethesda,Md.)取得。一實施例中，兩個序列之間之相同性百分比可採用GCG程式決定，空位權重為1，例如：每個胺基酸空位係視同兩個序列之間之單一胺基酸或核苷酸錯配。

其他比對技術說明於Methods in Enzymology,vol.266：Computer Methods for Macromolecular Sequence Analysis(1996)，Doolittle編輯，Academic Press,Inc.(Harcourt Brace & Co.,San Diego,Calif.,USA之分部)。有些實施例中，採用容許在序列中出現空位之比對程式來進行序列比對。Smith-Waterman為其中一種算法，其容許在序列比對中出現空位。參見Meth.Mol.Biol.70：173-187(1997)。此外，可採用使用Needleman與Wunsch比對方法之GAP程式來比對序列。另一種搜尋法係採用在MASPAR電腦上運作之MPSRCH軟體。MPSRCH採用Smith-Waterman算法，在大量平行電腦上取得序列得分。此方法改良挑出遠親匹配之能力，特別能忍受小空位及核苷酸序列錯誤。可採用由核酸編碼之胺基酸序列來搜尋蛋白質與DNA資料庫。

有些實施例中，結合劑或結合劑之抗原結合部份包含一或多個選自表4與5輕鏈可變區之CDR。有些實施例中，結合劑或結合劑之抗原結合部份包含一或多 個選自表9與10重鏈可變區之CDR。有些實施例中，結合劑或結合劑之抗原結合部份包含一或多個選自表4與5輕鏈可變區之CDR及一或多個選自表9與10重鏈可變區之CDR。某些實施例中，該結合劑或結合劑之抗原結合部份包含CDR-L1、CDR-L2、與CDR-L3，其分別選自表4與5之任一輕鏈可變區、及CDR-H1、CDR-H2、與CDR-H3，其分別選自表9與10之任一重鏈可變區。可採用本發明說明或該技術領域具有通常知識者已知之任何合適方法，在本發明所述之重鏈或輕鏈可變區中判別CDR之胺基酸序列(例如：CDR-L1、CDR-L2、CDR-L3、CDR-H1、CDR-H2、與CDR-H3)。

有些實施例中，結合劑包含選自表1至10之一或多種合適序列，其中選擇之多肽序列包含0至5、1至5、0至10、1至10、0至15、或1至15個胺基酸修飾，其中胺基酸修飾可為胺基酸加成、胺基酸缺失及/或胺基酸取代。有些實施例中，本發明說明之結合劑包含一或多種胺基酸類似物、非天然胺基酸或胺基酸衍生物。

某些實施例中，結合劑或結合劑之抗原結合部份包含一或多個框架區(FR)。框架區經常位於抗體或結合劑之重鏈或輕鏈可變區之CDR及/或側接CDR序列之間。哺乳動物中，重鏈可變區經常包含四個框架區，及輕鏈可變區經常包含四個框架區。任何合適方法均可用於判別抗體、抗體之可變區、或結合劑中之一或多個框架區。結合劑可包含合成或天然框架區，其係未經修飾或如下文 所述經過修飾(例如：優化)。

有些實施例中，結合劑或其抗原結合部份係嵌合、接枝及/或人源化。嵌合、接枝及/或人源化結合劑經常包含經修飾或取代之恆定區及/或框架區，同時保留對cMET或其一部份之結合專一性。有些實施例中，結合劑或其抗原結合部份包含衍生自人類抗體之恆定區、框架區、或其一部份。有些實施例中，結合劑或其抗原結合部份包含不會出現在天然抗體中之完全合成部份、一或多種胺基酸、或胺基酸之序列。

天然框架區或其一部份可從任何合適的物種獲得。某些實施例中，結合劑或其抗原結合部份之輕鏈與重鏈可變區之互補決定區(CDR)係接枝在來自相同或另一物種之框架區。例如：結合劑之一或多個框架區可衍生自囓齒類物種(例如：小鼠或大鼠)或靈長類物種(例如：人類)。

某些實施例中，結合劑或其抗原結合部份之輕鏈及/或重鏈可變區之CDR可接枝在共有人類框架區。某些實施例中，為了製造共有的人類框架區，可對來自人類重鏈或輕鏈胺基酸序列之數種框架區進行比對，以判別共有序列。某些實施例中，抗體或結合劑之重鏈或輕鏈框架區被來自不同重鏈或輕鏈可變區之一或多個框架區或其一部份置換。有些實施例中，結合劑或其抗原結合部份包含一或多個人類框架區。某些實施例中，該結合劑或其抗原結合部份包含至少1、2、3、4、5、6、7、8、9或 10個人類框架區。有些實施例中，結合劑或其抗原結合部份包含一或多個小鼠框架區。某些實施例中，結合劑或其抗原結合部份包含至少1、2、3、4、5、6、7、8、9或10個小鼠框架區。某些實施例中，結合劑或其抗原結合部份包含一或多個人類框架區與一或多個小鼠框架區。

產生嵌合、人源化及/或優化抗體或結合劑之方法已知有例如：藉由修飾、取代或刪除框架區、或其一部份。CDR接枝法之非限制實例說明於例如：美國專利案案號6,180,370、6,054,297、5,693,762、5,859,205、5,693,761、5,565,332、5,585,089、與5,530,101，及Jones等人之Nature,321：522-525(1986)；Verhoeyen等人之Science,239：1534-1536(1988)，及Winter,FEBS Letts.,430：92-94(1998)。產生嵌合、接枝及/或人源化結合劑之其他非限制實例包括：美國專利案案號5,530,101；美國專利案案號5,707,622；美國專利案案號5,994,524；美國專利案案號6,245,894；Queen等人之(1988)PNAS 86：10029-10033；Riechmann等人之Nature(1988)332：323-327；Methods in molecular biology之Vol.248，Antibody Engineering：Methods and Protocols，Benny K.C.Lo編輯，Springer Science & Business Media,(2004)；及Antibody Engineering,Vol.1,Roland E.Kontermann,Stefan Dübel,第2版，Publisher Springer Science & Business Media,(2010)。有些實施例中，可藉由來自人類抗體之一或多個框架區或其一部份交換抗體之一或多個框架區或其一部份 (例如：一或多個胺基酸)來使結合劑之人源化法。某些實施例中，抗體或結合劑之人源化法或接枝法為由來自供體結合劑(例如：小鼠單株抗體)之一或多個CDR(例如：1、2、3、4、5或全部6個CDR)轉移接受體結合劑(例如：人類抗體)，同時保留該供體結合劑之結合專一性。某些實施例中，製作該嵌合、接枝或人源化結合劑之方法包括在結合劑之恆定區或框架區進行一個或多個胺基酸取代、加成或缺失。某些實施例中，可採用如：「重構」、「高嵌合」或「剪接/表面重修」等技術來製造人源化結合劑(例如：參見Vaswami等人之Annals of Allergy,Asthma,& Immunol.81：105(1998)；Roguska等人之Prot.Engin.,9：895-904(1996)；與美國專利案案號6,072,035)。有些態樣中，結合劑採用上述之方法或另一種合適方法修飾，以降低免疫原性(例如：參見Gilliland等人之J.Immunol,62(6)：3663-71(1999))。

某些實施例中，結合劑之胺基酸序列經過修飾，而優化針對標靶(例如：cMET)之結合親和力、物種交叉反應性、溶解性及/或功能(例如：促效劑活性、或缺少促效劑活性)。有些實施例中，本發明所揭示之CDR之定組合可針對與cMET之結合性進行優化，及/或優化本發明所揭示之結合劑之功能或特性。例如：本發明所揭示之已知特性之輕鏈可變區(例如：SEQ ID NO：48之輕鏈可變區)可使用合適之表現系統，與包含已知特性之重鏈可變區之CDR-H1與CDR-H2之重鏈可變區基因庫(例如：SEQ ID NO：107之重鏈可變區)共同表現，其中該CDR-H3經例如可包括一或多個表8之CDR-H3區之CDR-H3序列基因庫置換。可篩選所得輕鏈/重鏈結合劑與cMET之結合及/或特定功能。可採用合適方法判別優化之結合劑及CDR-H3之胺基酸序列。上述篩選方法可用於判別包含CDR之特定組合或特定優化CDR序列(例如：包含胺基酸取代、加成或缺失之CDR序列)之結合劑，其所提供之結合劑具有改良之結合專一性、結合親和力與/或功能。此等篩選及優化結合劑之方法係已知者(例如：參見Portolano等人之(1993)Journal of Immunology 150：880-887；及Clarkson等人之(1991)Nature 352：624-628)。此等參考文獻教示利用已知可變輕鏈、已知可變重鏈、或其一部份(例如：其CDR)，藉由篩選互補可變區基因庫，來製造可與專一性抗原結合之抗體之方法。

某些實施例中，為了優化結合劑之親和力及/或功能，結合劑經過修飾而消除或添加糖基化位點，(例如：參見Co等人之Mol.Immunol,30：1361-1367(1993))。有些實施例中，結合劑中糖基化位點之數量及/或型態經修飾或改變。N-連接之糖基化位點之特徵經常在於序列Asn-X-Ser或Asn-X-Thr，其中該稱為X之胺基酸殘基可為除了脯胺酸以外之任何胺基酸殘基。創造之此序列之胺基酸殘基的取代提供一個潛在的添加N-連接碳水化合物鏈之新位點。或者，消除此序列之取代將去除現有之N-連接碳水化合物鏈。某些實施例中亦提供N-連接碳水化合物鏈 之重排，其中一或多個N-連接糖基化位點(彼等通常為天然)被消除並且創造一或多個新的N-連接位點。有些實施例中，相對於未經修飾之結合劑，結合劑之修飾係刪除一或多個半胱胺酸殘基或以一或多個半胱胺酸殘基取代另一個胺基酸(例如：絲胺酸)。某些實施例中，半胱胺酸變異體適用於優化表現、分泌及/或溶解性。

某些實施例中，修飾結合劑以包括設計或計畫之某些胺基酸添加、取代、或缺失，例如降低結合劑對蛋白質分解之感受性、降低結合劑對氧化之感受性、增加結合劑之血清半衰期及/或賦與或修飾其他生理化學、藥物動力學或功能性質。

有些實施例中，結合劑專一性結合至哺乳動物cMET或其一部份。有些實施例中，結合劑專一性結合至哺乳動物cMET或其一部份之細胞外功能域或細胞外區。某些態樣中，結合劑專一性結合至存在於自然界之未改變(未經基因修飾)的哺乳動物所產生之野生型cMET。某些態樣中，結合劑專一性結合至天然cMET變異體。某些態樣中，結合劑專一性結合至包含一或多種胺基酸取代、加成、或缺失之cMET。某些實施例中，結合劑專一性結合至產生及/或表現在人類、非人類靈長類、狗、貓或囓齒類(例如：小鼠或大鼠)之細胞的cMET。某些實施例中，結合劑專一性結合至具有如SEQ ID NO：109至113所示之任一個胺基酸序列之一或多種cMET多肽、或其一部份。某些實施例中，結合劑專一性結合至人類cMET。某些實 施例中，結合劑專一性結合至人類cMET之細胞外功能域。某些實施例中，結合劑專一性結合至人類cMET及/或其細胞外功能域，其中該人類cMET包含將E168取代為D168(亦即cMET之E168D變異體)。某些實施例中，結合劑專一性結合至人類cMET及/或其細胞外功能域，其中該人類cMET包含將N375取代為S375(亦即人類cMET之N375S變異體)。

術語「專一性結合」係指結合劑與目標肽之結合優先於與其他分子或其他肽之結合，其係由例如：合適之活體外(in vitro)分析法測定(例如：Elisa、免疫墨點法、流式細胞計等)。專一性結合交互作用與非專一性結合交互作用之區分可為約2倍或以上，經常約10倍或以上，及有時候約100倍或以上、1000倍或以上、10,000倍或以上、100,000倍或以上、或1,000,000倍或以上。

有些實施例中，與cMET或其一部份專一性結合之結合劑為以等於或小於100nM、等於或小於50nM、等於或小於25nM、等於或小於10nM、等於或小於5nM、等於或小於1nM、等於或小於900pM、等於或小於800pM、等於或小於750pM、等於或小於700pM、等於或小於600pM、等於或小於500pM、等於或小於400pM、等於或小於300pM、等於或小於200pM、或等於或小於100pM之結合親和力常數(KD)與cMET或其一部份(例如：cMET之細胞外功能域)結合之結合劑。有些實施例中，與cMET或其一部份專一性結合之結合劑為以等於或 小於100nM、等於或小於50nM、等於或小於25nM、等於或小於10nM、等於或小於5nM、等於或小於1nM、等於或小於900pM、等於或小於800pM、等於或小於750pM、等於或小於700pM、等於或小於600pM、等於或小於500pM、等於或小於400pM、等於或小於300pM、等於或小於200pM、或等於或小於100pM結合親和力常數(KD)與人類cMET或其一部份(例如：人類cMET之細胞外功能域)結合之結合劑。有些實施例中，與cMET或其一部份專一性結合之結合劑為以等於或小於100nM、等於或小於50nM、等於或小於25nM、等於或小於10nM、等於或小於5nM、等於或小於1nM、等於或小於900pM、等於或小於800pM、等於或小於750pM、等於或小於700pM、等於或小於600pM、等於或小於500pM、等於或小於400pM、等於或小於300pM、等於或小於200pM、或等於或小於100pM之結合親和力常數(KD)與衍生自非人類物種(例如：非人類靈長類、或囓齒類；例如：小鼠或大鼠)之cMET或其一部份專一性結合之結合劑。某些實施例中，本發明揭示之結合劑係專一性結合至人類cMET或其一部份，及專一性結合至衍生自非人類靈長類之cMET或其一部份。某些實施例中，本發明揭示之結合劑專一性結合至人類cMET或其一部份，及專一性結合至衍生自囓齒類(例如：小鼠或大鼠)之cMET或其一部份。某些實施例中，結合劑係：(i)以10nM以下、或1nM以下之KD專一性結合至人類cMET或其一部份(例如：人類cMET之細 胞外功能域)，及(ii)以100nM以下、90nM以下、80nM以下、70nM以下、60nM以下、50nM以下、40nM以下、30nM以下、20nM以下或10nM以下之KD專一性結合至大鼠或小鼠cMET或其一部份(例如：大鼠或小鼠cMET之細胞外功能域)。

有些實施例中，結合劑包含標記(label)。本發明所採用術語「標記」或「標記的」係指摻入可檢測之標誌(marker)，例如：藉由將摻入有標記之胺基酸或附著物結合到生物素部份之多肽而可利用經標記之抗生物素蛋白來檢測(例如：可利用光學或染色法檢測之包含螢光標誌或酵素活性之鏈黴抗生物素蛋白)。某些實施例中，標記或標誌可以連接結合劑，產生治療劑或診斷劑。結合劑可以共價或非共價連接任何合適之標記或標誌。各種標記多肽與醣蛋白之方法是所屬技術領域具有通常知識者已知且可使用。多肽之標記之非限制實例包括(但不限於)下列：放射性同位素或放射性核種(例如：³H、¹⁴C、¹⁵N、³⁵S、⁹⁰Y、⁹⁹Tc、¹²⁵I、¹³¹I)、螢光標記、酵素性標記(例如：辣根(horseradish)過氧化酶、β-半乳糖苷酶、螢光素酶、鹼性磷酸酶)、化學發光標記、金屬標記、發色團、電化學發光標記、磷光標記、淬滅劑(例如：螢光團淬滅劑)、螢光共振能量轉移(FRET)對(例如：供體與接受體)、染劑、酵素受質、小分子、質量標籤、量子點、奈米粒子、生物素基團、由第二報導子辨識之預定多肽抗原表位(epitope)(例如：白胺酸拉鍊對序列、二級抗體之結合位點、金屬結合功能域、 抗原表位標籤)等或其組合。

有些實施例中，結合劑包含合適之載體。結合劑可以共價或非共價連接合適載體。載體之非限制實例包括：改變或延長結合劑之活體內半衰期之製劑或分子、聚乙二醇、糖原(例如：藉由結合劑之糖基化)、聚葡萄醣、美國專利案案號6,660,843說明之載體或賦形劑(vehicle)等或其組合。

有些實施例中，結合劑包含合適之治療劑。結合劑可以共價或非共價連接任何合適之治療劑。治療劑之非限制實例包括：醫藥、毒素、放射性同位素、配體、受體、細胞素、抗體、抗腫瘤劑、抑制劑(例如：受體拮抗劑、酵素抑制劑)、細胞素或美國專利案案號6,660,843(其已以引用之方式併入本發明中)所揭示之製劑等或其組合。抗腫瘤劑之非限制實例包括奥里斯他汀(auristatin)(例如：單甲基奥里斯他汀E(MMAE)、單甲基奥里斯他汀F(MMAF)等)、多拉司他汀(dolastatin)、美登素(maytansine)、微管菌素(tubulysin)、伊立替康(irinotecan)或其衍生物或代謝物(例如：SN38)、卡奇黴素(calicheamicin)、吡咯并苯并吖庚三烯(pyrrolobenzodiazepine)(PBD)、倍癌黴素(duocarmycin)、阿黴素(doxorubicin)、假單胞菌外毒素A(例如：PE38)、其衍生物等或組合。因此，某些實施例中，本發明揭示之結合劑包含抗腫瘤劑。

有些實施例中，標記、治療劑或載體利用合適之鏈結子與結合劑結合。合適鏈結子之非限制實例包 括：矽烷類、硫醇類、膦酸、聚乙二醇(PEG)、胺基酸與肽類、其聚合物、其衍生物等與其組合。使用鏈結子連接兩個或更多個分子之方法係所屬技術領域具有通常知識者已知，且有時候稱為「交聯」。

有些實施例中，標記、治療劑、載體或鏈結子係連接在結合劑之合適硫醇基上(例如：半胱胺酸殘基之硫醇基)。結合劑之恆定區或框架區之任何合適的胺基酸殘基均可被含硫醇基之胺基酸殘基(例如：半胱胺酸)取代，其目的在於連接標記、治療劑、載體或鏈結子。可被含硫醇之胺基酸殘基取代之胺基酸之非限制實例包括：IgG2之A118、S119、S239、V282、T289、N361、與V422；IgG1之S115、S252、V289、T306、與N384；或IgG1、IgG2、IgG3或IgG4中的對應位置。由標記、治療劑、載體及/或鏈結子與結合劑連接之其他非限制實例包括：使胺與N-羥基琥珀醯亞胺(NHS)酯、亞胺基酯、五氟苯基(PFP)酯、羥甲基膦、環氧乙烷或任何其他羰基化合物反應；使羧基與碳化二亞胺反應；使氫硫基與馬來醯亞胺、鹵乙醯基、吡啶基二硫醚、及/或乙烯基碸反應；使醛與肼反應；使任何非選擇性基團與二氮雜環丙烯及/或芳基疊氮化物反應；由羥基與異氰酸酯反應；使羥基胺與羰基化合物反應等及組合。

某些實施例中，結合劑包含一或多種功能特性。因此，結合劑可依結構性及功能性說明(例如：其作用或其可執行之功用)。本發明揭示之結合劑可以專一性結 合至cMET之細胞外部份，例如：存在於細胞表面之cMET之細胞外部份。有些實施例中，細胞為表現cMET之人類癌細胞或人類腫瘤細胞。某些實施例中，當cMET與細胞表面結合時，某些本發明揭示之結合劑可誘發cMET內化。有些實施例中，結合劑係與細胞(例如：癌細胞上)之cMET、或其一部份專一性結合，及誘發cMET的降解。藉由結合配體或結合劑而誘發細胞表面結合之受體之內化及/或降解係已知之生物過程。利用合適之實驗分析法容易觀察到結合劑誘發cMET內化及/或降解之能力，而無需繁複的實驗。因此有些實施例中，結合劑在細胞表面與cMET或其一部份專一性結合，並誘發cMET內化及/或降解。

有些實施例中，結合劑cMET或其一部份與專一性結合，並誘發或促進訊號傳導(例如：酪胺酸激酶活性)。某些實施例中，結合劑在細胞表面上與cMET專一性結合，並且不能檢測到誘發或促進訊號傳導(例如：酪胺酸激酶活性)。因此某些實施例中，本發明所揭示之抗-cMET結合劑沒有可檢測之cMET促效劑活性。某些實施例中，當抗-cMET結合劑在細胞表面與cMET結合時，缺少促效活性，及/或當在細胞表面與cMET結合時，不能誘發或促進可檢測之酪胺酸激酶活性。有些實施例中，抗-cMET結合劑為cMET拮抗劑。某些實施例中，抗-cMET結合劑降低、抑制、減少、阻斷或防止通過cMET受體的訊號傳導及/或降低、抑制、減少、阻斷或防止cMET受體誘發或促進可檢測之酪胺酸激酶活性。有些實施例中，本發明揭示 之抗-cMET結合劑降低、抑制、減少、防止或阻斷cMET與其天然同源配體結合(例如：肝細胞生長因子、或其同型)。

某些實施例中，以本發明揭示之結合劑接觸個體之細胞，而誘發或促進細胞死亡。某些實施例中，以本發明揭示之結合劑接觸個體之細胞，而藉由表現cMET之細胞的凋亡或壞死來誘發或促進細胞死亡。某些實施例中，以本發明揭示之結合劑接觸個體之細胞，而藉由ADCC、ADCP或補體依賴性細胞毒性(CDCC)過程，來誘發或促進細胞死亡。

某些實施例中，以本發明揭示之結合劑接觸個體之細胞，而降低、抑制、或減少細胞之有絲分裂。某些實施例中，以本發明揭示之結合劑接觸由個體之細胞，而降低、抑制、或減少細胞轉移。

有些實施例中，本發明提供組成物或醫藥組成物，其包含一或多種與cMET或其一部份(例如：cMET之細胞外功能域、或其一部份)專一性結合之結合劑。

醫藥組成物可配製成用於合適的投藥途徑調配。有些實施例中，醫藥組成物係調配成供用於皮下(s.c.)、皮內、肌內、腹膜內及/或靜脈內(i.v.)投藥。某些實施例中，醫藥組成物可包含用於修飾、維持或保存例如：組成物的pH值、滲透性、黏度、澄清度、顏色、等滲性、氣味、無菌性、安定性、溶解或釋放速率、吸附或穿透性的製劑材料。某些實施例中，合適之製劑材料包括(但不限 於)：胺基酸(如：甘胺酸、麩醯胺酸、天冬醯胺、精胺酸、或離胺酸)；抗微生物劑；抗氧化劑(如：抗壞血酸、亞硫酸鈉或亞硫酸氫鈉)；緩衝劑(如：硼酸鹽、碳酸氫鹽、Tris-HCl、檸檬酸鹽、磷酸鹽(例如：磷酸鹽緩衝生理食鹽水)或合適之有機酸)；增積劑(如：山露糖醇或甘胺酸)；螯合劑(如：乙二胺四乙酸(EDTA))；錯合劑(如：咖啡因、聚乙烯吡咯烷酮、β-環糊精或羥丙基-β-環糊精)；蛋白質(如：血清白蛋白、明膠或免疫球蛋白)；著色劑、調味劑與稀釋劑；乳化劑；親水性聚合物(如：聚乙烯吡咯烷酮)；低分子量多肽；形成鹽之抗衡離子(如：鈉)；溶劑(如：甘油、丙二醇、或聚乙二醇)；稀釋劑；賦形劑及/或醫藥佐劑(Remington’s Pharmaceutical Sciences，第18版，A.R.Gennaro編輯，Mack Publishing Company(1995))。

某些實施例中，醫藥組成物包含合適之賦形劑，其非限制實例包括：抗附著劑(例如：硬脂酸鎂)、接合劑、填料、單糖、雙醣、其他碳水化合物(例如：葡萄糖、甘露糖或糊精)、糖醇類(例如：甘露糖醇或山梨糖醇)、包衣(例如：纖維素、羥丙基甲基纖維素(HPMC)、微晶纖維素、合成性聚合物、蟲膠、明膠、玉米蛋白質(玉米蛋白)、腸衣或其他多醣)、澱粉(例如：馬鈴薯、玉米或小麥澱粉)、矽石、著色劑、崩解劑、調味劑、潤滑劑、防腐劑、吸附劑、填味劑、媒劑、懸浮劑、界面活性劑及/或濕化劑(如：普朗尼克(pluronics)、PEG、山梨糖醇酐酯、聚山梨酸酯如：聚山梨酸酯20、聚山梨酸酯80、曲拉通(triton)、三羥基 胺基甲烷、卵磷脂、膽固醇、泰洛沙泊(tyloxapal))、安定性加強劑(如：蔗糖或山梨糖醇)、與渗性加強劑(如：鹼金屬鹵化物、氯化鈉或鉀、甘露糖醇、山梨糖醇)、及/或Remington’s Pharmaceutical Sciences，第18版，A.R.Gennaro編輯，Mack Publishing Company(1995)中揭示之任何賦形劑。本發明所採用術語「接合劑」係指有助於保持醫藥混合物組合在一起之化合物或成份。適合製造醫藥製劑且經常用於製備醫藥錠劑、膠囊、與粒劑之接合劑係所屬技術領域具有通常知識者已知。為了澄清，本發明所採用之術語「結合劑」不是指用於某些醫藥製劑中之「接合劑」。儘管如此，在某些實施例中，醫藥組成物可能包含會與cMET專一性結合之結合劑及接合劑。

有些實施例中，醫藥組成物包含合適之醫藥上可接受之添加劑及/或載體。合適添加劑之非限制實例包括：合適之pH調整劑、緩和劑、緩衝劑、含硫還原劑、抗氧化劑等。含硫還原劑之非限制實例包括：彼等具有氫硫基者，如：N-乙醯基半胱胺酸、N-乙醯基高碳半胱胺酸、硫辛酸、硫二甘醇、硫乙醇胺、硫甘油、硫山梨糖醇、硫乙醇酸與其鹽、硫代硫酸鈉、穀胱甘肽、與C1-C7硫烷酸。抗氧化劑之非限制實例包括：異抗壞血酸、二丁基羥基甲苯、丁基羥基苯甲醚、α-生育酚、乙酸生育酚、L-抗壞血酸與其鹽、L-抗壞血酸基棕櫚酸酯、L-抗壞血酸基硬脂酸酯、亞硫酸氫鈉、亞硫酸鈉、沒食子酸三戊酯與沒食子酸丙酯、及螯合劑，如：乙二胺四乙酸二鈉(EDTA)、焦磷酸 鈉與偏磷酸鈉。此外，稀釋劑、添加劑與賦形劑可包含其他常用成份，例如：無機鹽類，如：氯化鈉、氯化鉀、氯化鈣、磷酸鈉、磷酸鉀、與碳酸氫鈉，及有機鹽類，如：檸檬酸鈉、檸檬酸鉀與乙酸鈉。

本發明所採用之醫藥組成物可以長期時間保持安定，例如：保持數月或數年。有些實施例中，醫藥組成物包含一或多種合適之防腐劑。防腐劑之非限制實例包括：氯化苯二甲烴銨、苯甲酸、水楊酸、硫柳汞、苯乙醇、對羥基苯甲酸甲酯、對羥基苯甲酸丙酯、氯己定(chlorhexidine)、山梨酸、過氧化氫等及/或其組合。防腐劑可包含：四級銨化合物，如：氯化苯二甲烴銨、苯佐氯銨(Benzoxonium chloride)、氯化芐乙氧銨(benzethonium chloride)、溴化十六烷基三甲銨(cetrimide)、氯司帕唑(sepazonium chloride)、十六烷基氯化吡啶、或度米芬溴(domiphen bromide)(BRADOSOL®)。防腐劑可包含：硫水楊酸之烷基-汞鹽，如：硫柳汞、硝酸苯基汞、乙酸苯基汞、或硼酸苯基汞。防腐劑可包含：對羥基苯甲酸酯，如：對羥基苯甲酸甲酯或對羥基苯甲酸丙酯。防腐劑可包含：醇類，如：氯丁醇、苯甲醇或苯基乙基醇。防腐劑可包含：雙胍衍生物，如：氯己定或聚六亞甲基雙胍。防腐劑可包含：過硼酸鈉、咪唑啶基脲、及/或山梨酸。防腐劑可包含安定化之氧氯複合物，如：以商品名PURITE®已知且可商購獲得者。防腐劑可包含聚二醇-聚胺縮合樹脂，如：已知且可自Henkel KGaA商購商品名為POLYQUART®。防腐 劑可包含安定化之過氧化氫。防腐劑可為氯化苯二甲烴銨。有些實施例中，醫藥組成物不含防腐劑。

有些實施例中，組成物、醫藥組成物或結合劑實質上不含血液或血液產物雜質(例如：血球、血小板、多肽、礦物質、血源性化合物或化學物質等)。有些實施例中，組成物、醫藥組成物或結合劑實質上不含血清與血清雜質(例如：血清蛋白質、血清脂質、血清碳水化合物、血清抗原與類似物)。有些實施例中，組成物、醫藥組成物或結合劑實質上不含病原菌(例如：病毒、寄生蟲或細菌)。有些實施例中，組成物、醫藥組成物或結合劑實質上不含內毒素。有些實施例中，組成物、醫藥組成物或結合劑係無菌。某些實施例中，組成物或醫藥組成物包含與cMET之細胞外功能域專一性結合之結合劑與稀釋劑(例如：磷酸鹽緩衝生理食鹽水)。某些實施例中，組成物或醫藥組成物包含與cMET之細胞外功能域專一性結合之結合劑與賦形劑(例如：檸檬酸鈉無水物(sodium citrate dehydrate)或聚氧乙烯-山梨糖醇酐-20單油酸酯(聚山梨酸酯80))。

本發明所述之醫藥組成物可被配製為根據所採用之療法以任何合適的形式及/或用量施用於個體。例如：配置成用於非經口投藥(例如：藉由注射或輸注)之醫藥組成物組態可採取在油性或水性媒劑呈懸浮液、溶液或乳液之形式，並且其可包含調配劑、賦形劑、添加劑及/或稀釋劑，如：水性或非水性溶劑、共溶劑、懸浮溶液、防腐劑、安定劑及/或分散劑。有些實施例中，適合非經口 投藥之醫藥組成物可包含一或多種賦形劑。有些實施例中，醫藥組成物經過凍乾形成乾粉形式。有些實施例中，醫藥組成物經過凍乾形成乾粉形式，其適合使用合適之醫藥溶劑(例如：水、生理食鹽水、等滲性緩衝液(例如：PBS)等)還原。某些實施例中，凍乾醫藥組成物之還原形式適合非經口投藥(例如：經靜脈內投藥)給哺乳動物。

有些實施例中，本發明說明之醫藥組成物可被配置為用於局部外用投藥，並且可包括一或多種結合劑及/或潤滑劑、聚合性二醇類、明膠、可可脂或其他合適蠟類或脂肪。有些實施例中，本發明說明之醫藥組成物係摻入包含局部外用載體之局部外用製劑，其通常適合局部投予外用藥物，且包含所屬技術領域具有通常知識者已知之任何合適材料。某些實施例中，醫藥組成物之局部外用製劑係調配用於從局部外用貼布投予該結合劑。

某些實施例中，最佳醫藥組成物將由所屬技術領域具有通常知識者依據例如：計畫採用之投藥途徑、傳遞方式與所需劑量決定(參見例如：如上述之Remington’s Pharmaceutical Sciences)。某些實施例中，此等組成物會影響本發明抗體之物理狀態、安定性、活體內釋放速率及與活體內清除速率。

有些實施例中，本發明說明之組成物、醫藥組成物或結合劑係用於治療患有或疑似患有腫瘤病變或癌症之個體。某些實施例中，本發明說明之結合劑或醫藥組成物係用於治療個體之腫瘤病變或癌症，其中該結合劑 與人類cMET之細胞外功能域專一性結合。有些實施例中，本發明提供治療患有或疑似患有腫瘤病變或癌症之個體之方法。某些實施例中，治療患有或疑似患有腫瘤病變或癌症之個體之方法包括對該個體投予醫療有效量之本發明所述之組成物、醫藥組成物或結合劑。某些實施例中，治療方法包括以醫療有效量之本發明說明之組成物、醫藥組成物或結合劑與個體之細胞(例如：一或多個細胞)接觸。某些實施例中，治療方法包括以醫療有效量之與人類cMET或其變異體之細胞外部份專一性結合之結合劑與個體之細胞(例如：一或多個細胞)接觸。該個體之細胞經常為表現cMET之細胞外部份之細胞。個體之細胞可能出現在個體體內(例如：活體內)或體外(例如：活體外或離體(ex vivo))。

本發明所述之組成物、醫藥組成物或結合劑可用於治療合適之腫瘤病變或涉及表現cMET之細胞型態之癌症。可採用本發明之方法治療之腫瘤病變或癌症之非限制實例包括：肺癌、乳癌、卵巢癌、腎臟癌、結腸直腸癌、胃癌、甲狀腺癌、胰臟癌、神經母細胞瘤、或頭與頸之鱗狀細胞癌、子宮頸癌、肝細胞癌、肉瘤、間皮瘤、神經膠質母細胞瘤、多發性骨髓瘤、黑色素瘤、攝護腺與食道癌。某些實施例中，癌症或腫瘤病變之腫瘤細胞可以採用合適方法(例如：全細胞ELISA、FAC、任何合適之免疫分析法、與類似方法)，使用合適之抗-cMET結合劑或本發明之新穎結合劑快速分析cMET之表現。

任何適合對個體投予組成物、醫藥組成物或結合劑之方法均可採用。根據本發明所述之本發明方法所採用的確切投藥製劑與途徑可由個別醫師依據患者條件選擇。參見例如：Fingl等人，1975，「The Pharmacological Basis of Therapeutics,」Ch.1,p.1；其內容已以引用之方式完整併入本發明中。可使用任何合適之投藥途徑投予本發明所述之醫藥組成物或結合劑。投藥途徑之非限制實例包括：局部外用或局部(例如：穿皮式或經皮膚(例如：皮膚上或表皮)、眼睛內或眼睛上、經鼻內、穿透黏膜、耳內、耳內部(例如：耳鼓後面))、腸內(例如：透過胃腸道傳遞)、經口(例如：為錠劑、膠囊、粒劑、液體、乳化、口含錠、或其組合)、舌下、利用胃飼管、經直腸等)、非經口投藥(例如：非經口，例如：經靜脈內、經動脈內、肌內、腹膜內、皮內、皮下、腔內、顱內、關節內、投至關節腔內、心內(進心臟內)、海綿體內注射、病灶內(進皮膚病灶內)、骨內輸液(進骨髓內)、鞘內(進脊髓管內)、子宮內、陰道內、膀胱內輸液、玻璃體內)等或其組合。

有些實施例中，對個體提供本發明之組成物。提供給個體之組成物有時候提供給個體用於自行投藥或由另一個對象(例如：非醫事專業人員)投藥給個體。例如：由授權給患者接受提供本發明說明之組成物或治療的醫事人員所寫的指令(例如：處方籤)來提供本發明所述之組成物。另一項實例中，可提供組成物給個體，其中該個體例如：經口、經靜脈內、或利用吸藥器自行投予組成物。

或者，使用根據本發明方法時，可採用局部而非全身方式投予組成物，例如：直接施用至皮膚、黏膜、或所需治療區域，包括使用長效或持續釋放製劑。

有些實施例中，包含結合劑之醫藥組成物可單獨投予(例如：作為單一活性成份(AI)或例如：作為單一活性醫藥成份(API))。其他實施例中，包含結合劑之醫藥組成物可與一或多種其他AI/API組合投予，例如：作為兩個分開組成物或作為單一組成物，其中該一或多種其他AI/API與該結合劑一起在醫藥組成物中混合或共同調配。

醫藥組成物可採用任何合適方式製造，包括：利用傳統混合、溶解、造粒、製作糖衣、磨細、乳化、囊封、包埋、或壓錠程序。

有些實施例中，包含結合劑之醫藥組成物係因應所需，以合適的頻率或間隔投藥來得到有效之醫療結果。有效之醫療結果可由追蹤罹患腫瘤病變或癌症之個體中腫瘤或癌細胞之數量、活力、生長、有絲分裂、或轉移來決定。因此，某些實施例中，降低個體中腫瘤或癌細胞之數量、活力、生長、有絲分裂、或轉移即視為有效之醫療結果。有些實施例中，包含結合劑之醫藥組成物可以每小時投藥、一天一次、一天兩次、一天三次、一天四次、一天五次、及/或依規律間隔，例如：每天、每隔一天、一週三次、每週、每隔一週、一個月一次及/或單純因應所需或專業醫師所建議之頻率或間隔投藥。

有些實施例中，組成物中結合劑之量係為 了得到有效的醫療結果所需之用量。某些實施例中，組成物(例如：醫藥組成物)中結合劑之量係足以預防、治療、降低嚴重性、延緩發作及/或減輕本發明所涵括之腫瘤病變或癌症的症狀之用量。

「醫療有效量」意指足以得到有效醫療結果之用量及/或足以預防、治療、降低嚴重性、延緩發作及/或減輕腫瘤病變或癌症的症狀之需要量。某些實施例中，「醫療有效量」意指足以終止腫瘤或癌症生長及/或減緩生長之需要量。某些實施例中，「醫療有效量」意指足以抑制一或多種腫瘤細胞複製及/或誘發其死亡之量。醫療有效量之決定係所屬技術領域具有通常知識者之能力範圍內，尤其可依據本發明提供之詳細揭示內容。

有些實施例中，組成物中結合劑之量為至少醫療有效量之量且足夠低以使不要之副反應最小化之量。結合劑或所需活性劑之組合之準確量將會隨個體而不同，取決於個體之年齡、體重與一般狀況、待治療病症之嚴重性、及所投予藥物之特定組合。因此，不一定總是能在不同個體族群中指明精確醫療有效量來治療腫瘤病變。眾所周知，給患者在特定條件和特定疾病的具體劑量會常規變化，但在每種情況下可藉由簡單例行程序容易地完成各病例之最適量。因此，用於治療腫瘤病變之結合劑之醫療有效量可由所屬技術領域具有通常知識者採用例行實驗決定。

某些實施例中，組成物中結合劑之量以合 適之醫療有效量或劑量(例如：依合適之體積與濃度，其有時候部分依特定投藥途徑而定)投予。某些實施例中，結合劑(例如：組成物中之結合劑)之投藥劑量可為約0.01mg/kg(例如：每公斤個體體重)至500mg/kg、0.1mg/kg至500mg/kg、0.1mg/kg至400mg/kg、0.1mg/kg至300mg/kg、0.1mg/kg至200mg/kg、0.1mg/kg至150mg/kg、0.1mg/kg至100mg/kg、0.1mg/kg至75mg/kg、0.1mg/kg至50mg/kg、0.1mg/kg至25mg/kg、0.1mg/kg至10mg/kg、0.1mg/kg至5mg/kg或0.1mg/kg至1mg/kg。有些態樣中，結合劑之量可為約10mg/kg、9mg/kg、8mg/kg、7mg/kg、6mg/kg、5mg/kg、4mg/kg、3mg/kg、2mg/kg、1mg/kg、0.9mg/kg、0.8mg/kg、0.7mg/kg、0.6mg/kg、0.5mg/kg、0.4mg/kg、0.3mg/kg、0.2mg/kg、或0.1mg/kg。有些實施例中，結合劑之醫療有效量為約0.1mg/kg至500mg/kg之間，或約1mg/kg與約300mg/kg之間。適合靜脈內投藥之體積係眾所皆知的。

有些實施例中，於活體外或活體內使用結合劑來檢測cMET。有些實施例中，使用結合劑檢測細胞表面上之cMET及/或測定是否存在腫瘤細胞(例如：惡性細胞)，其中該細胞表現cMET。有些實施例中，使用結合劑來測定個體是否患有腫瘤病變或癌症。有些實施例中，一種檢測cMET之方法包括測定樣本(例如：直接或間接得自個體之樣本)中之細胞是否存在有cMET。

可採用任何合適之方法來檢測及/或定量與 cMET或其一部份專一性結合之結合劑之存在與否及/或含量，此方法之非限制實例可參見Immunology,Werner Luttmann； Academic Press,2006及/或Medical Detection and Quantification of Antibodies to Biopharmaceuticals：Practical and Applied Considerations,Michael G.Tovey；John Wiley & Sons,July 12,2011。可用於檢測及/或定量與cMET或其一部份專一性結合之結合劑之存在與否及/或含量之其他方法之非限制實例包括使用競爭性免疫分析法、非競爭性免疫分析法、西方墨點法、放射性免疫分析法、ELISA(酵素偶聯之免疫吸附分析法)、競爭性或夾心式ELISA、夾心式免疫分析法、免疫沉澱分析法、放射免疫分析法、螢光免疫分析法、蛋白質A免疫分析法、沉澱法、凝膠擴散沉澱反應、免疫擴散分析法、凝集分析法、補體固定分析法、免疫組織化學分析法、西方墨點分析法、免疫組織分析法、免疫細胞化學分析法、點墨分析法、螢光極化分析法、閃爍近似分析法、均相時差性螢光分析法、IAsys分析法、BIAcore分析法等或其組合。

包含結合劑用量或劑量之醫藥組成物若需要時可以作為套組、包裝、或分配裝置提供，其可包含一或多個劑量之結合劑。該包裝可以例如：包含金屬或塑膠箔，如：發泡包。該包裝或分配裝置可附有投藥說明書。該包裝或分配裝置亦可在容器中附有與由管理醫藥之製造、用法或出售之政府機關規定之形式有關之聲明書，該聲明書反映該藥物形式已由管理當局核准用於人類或獸醫 投藥。此等聲明書可以例如：針對處方藥物標示美國食品藥物檢驗局之核准、或核准之產品插頁。

有些實施例中，套組或包裝中之結合劑含量足以治療患者歷時1天至1年、1天至180天、1天至120天、1天至90天、1天至60天、1天至30天或其間之任一天或任何天數、1至4小時、1至12小時、或1至24小時。

套組可視需要包括產品標示或包裝插頁，其包括組份說明或其中組份於活體外、活體內、或離體之使用說明書。說明書實例包括診斷方法、治療方法或醫療療程之說明書。有些實施例中，套組包含包裝材料，其係指該容納套組組份之物理結構。該包裝材料可以維持組份無菌狀態，且可以由此等目的常用之材料製成(例如：紙、瓦楞紙、玻璃、塑膠、箔、安瓿、小瓶、管子等)。產品標示或插頁包括「印刷品」，例如：紙或卡紙板，或分離或固定在組份、套組或包裝材料(例如：箱子)上，或貼在含有套組組份之安瓿、管子或小瓶上。標示或插頁亦可另外包括電腦可讀式媒體，如：CD-或DVD-ROM/RAM、DVD、MP3、磁帶、或電子儲存媒體，如：RAM與ROM或此等之混合物，如：磁/光儲存媒體、FLASH媒體、或記憶型卡片。產品標示或插頁可包括說明其中一或多種組份、劑量、活性成份(群)之臨床藥理學，包括作用機轉、藥物動力學(PK)與藥效學(PD)之資訊。產品標示或插頁可包括說明製造商資訊、批號、製造商位置、日期、適應症之資訊、 可利用該套組組份之病變、疾病或症狀之資訊。產品標示或插頁包括指示醫師或個體使用其中一或多種套組組份之方法、治療法或療程之說明書。該說明書可包括劑量、頻率或持續時間，及說明本發明所示之任何操作方法、治療法或療程之說明書。因此本發明套組可另外包括指示操作本發明所述之任何本發明方法與用途之標示或說明書。產品標示或插頁可包括有關可能副作用及/或警告之資訊。

某些實施例中，套組包含一或多個具有已知cMET量之對照組。有些實施例中，套組包含表現cMET之細胞。該套組中之細胞可維持在適當儲存條件下，直到準備使用該等細胞時為止。

有些實施例中，套組為包含結合劑之診斷套組。包含在該診斷套組中之結合劑可呈任何合適形式。有些實施例中，診斷劑包含結合劑與可檢測之標記。某些實施例中，例如：診斷套組包含或其組成為檢測棒，包括執行本發明方法所必要之試劑，及產生例如：比色結果，其可與色卡或標準曲線比較。診斷套組亦可包含檢測該與cMET專一性結合之結合劑時必要之組份，例如：二級抗體。

[實例1]

抗體製作

為了誘發針對cMET之抗體反應，依第1圖與第2圖之說明，以cMET-Fc或cMET肽免疫接種小鼠。有些實施 例中，選擇衍生自策略區之肽進行免疫接種。第3圖顯示激發肽3設計靈感之MET結構環之實例。從免疫之小鼠取得脾臟，取脾臟細胞與合適之融合對象，採用標準製程融合產生融合瘤。單離出融合瘤選殖株，測試融合瘤培養基中與MET之結合性及/或在人類癌細胞株誘發cMET之內化之能力，其係由流式細胞計所測定(第4圖)。所選擇之融合瘤抗體係依據其誘發MET降解之能力(第5圖)或無法誘發ERK磷酸化之能力來選擇(第6圖)。

進行其他分析法來選擇理想的抗-cMET抗體候選物。例如：測試抗-cMET抗體之物種交叉反應性，採用ELISA測定抗體與人類cMET、猴子cMET(例如：食蟹獼猴(Macaca fascicularis，亦即獼猴(Cynomolgus Macaque)))、大鼠cMET及小鼠cMET結合之能力(第7圖及表1)。亦分析活體內半衰期與其他藥物動力學特徵(未出示數據)。亦使用與MMAF複合之抗-cMET抗體測定抗體藥物複合體(ADC)對高度、中度與陰性cMET表現細胞株之效力與專一特性)(第9圖及第15圖，表11與表12)。採用MKN45異種移植模式測定ADC之活體內效力。

[實例2]

所選擇之人源化單株結合劑之特徵綜合說明

所產生的人源化與同型轉換單株結合劑包含小鼠單株抗體P3D12之重鏈CDR與輕鏈CDR。測試16種不同重鏈(HC)與輕鏈(LC)組合於PBS中之溶解度、與人類cMET之結合性、與大鼠cMET之結合性、與人類及大鼠cMET之結合親和力，其係藉由表面電槳共振(SPR)測定，促效活性與cMET降解性之存在與否係以中度規模探索平台(Meso Scale Discovery platform)(MSD)彙報。其結果綜合示於下表12。

[實例3]

人類個體在肝與肺中出現2cm或更大之多重轉移性癌。進行活體生檢來決定癌之細胞是否在其細胞表面表現cMET。由活體生檢結果證實細胞表面之cMET表現。

對人類個體投予與人類cMET之細胞外功能域專一性結合之結合劑。該結合劑可視需要包含人類κ與IgG1重鏈恆定區、SEQ ID NO：41之輕鏈可變區及SEQ ID NO：98之重鏈可變區。該結合劑之投藥劑量為30mg/kg，以2小時時間經靜脈內投予體積300ml，一天一次，歷時6週。藉由活體生檢及超音波追蹤測定腫瘤之存在、大小與活力。治療6週後，測得個體處於緩解狀態。

[實例4]

人類個體在肝與肺中出現2cm或更大之多重轉移性癌。進行活體生檢來決定癌之細胞是否在其細胞表面表現cMET。由活體生檢結果證實細胞表面之cMET表現。

對人類個體投予與人類cMET之細胞外功能域專一性結合之結合劑。該結合劑可視需要包含人類κ與IgG2重鏈恆定區、SEQ ID NO：48之人源化輕鏈可變區及SEQ ID NO：107之人源化重鏈可變區。該結合劑可視需要與MMAF複合。該結合劑之投藥劑量為1mg/kg，以2小時時間經靜脈內投予體積300ml，一天一次，歷時6週。藉由活體生檢及超音波追蹤測定腫瘤之存在、大小與活力。治療6週後，測得個體處於緩解狀態。

[實例5]

cMET序列

SEQ ID NO：109(人類cMET-UniProtKB-P08581(MET_HUMAN))*殘基E168與N375係以粗體及底線表示。

SEQ ID NO：110(大鼠cMET-UniProtKB-P97523(MET_RAT))

SEQ ID NO：111(小鼠cMET-UniProtKB-P16056(MET_MOUSE))

SEQ ID NO：112(狗cMET)

SEQ ID NO：113(普通獼猴(Macaca mulatta,Rhesus)cMET-NCBI參考序列：NP_001162100.1)

[實例6]

實施例

A1.一種與cMET或其一部份專一性結合之結合劑，其中該結合劑包含CDR-L1、CDR-L2與CDR-L3，其分別獨立選自從表4或表5選出之輕鏈可變功能域。

A2.一種與cMET或其一部份專一性結合之結合劑，其中該結合劑包含CDR-H1、CDR-H2與CDR-H3，其分別獨立選自從表9或表10選出之重鏈可變功能域。

A3.一種與cMET或其一部份專一性結合之結合劑，其中該結合劑包含(i)CDR-L1、CDR-L2與CDR-L3，其分別獨立選自從表4或表5選出之輕鏈可變功能域及(ii)CDR-H1、CDR-H2與CDR-H3，其分別獨立選自從表9或表10選出之重鏈可變功能域。

A4.一種與cMET或其一部份專一性結合之結合劑，其中該結合劑包含輕鏈可變功能域之三個CDR，其係選自表1、2及3之CDR；及重鏈可變功能域之三個CDR，其係選自表4、5與6之CDR。

A5.一種與cMET或其一部份專一性結合之結合劑，其中該結合劑包含選自表1之CDR-L1、選自表2之CDR-L2、選自表3之CDR-L3、選自表4之CDR-H1、選自表5之CDR-H2、與選自表6之CDR-H3。

A6.一種與cMET或其一部份專一性結合之結合劑，其中該結合劑包含與選自表1之CDR至少80%相同之CDR-L1、與選自表2之CDR至少80%相同之CDR-L2、與選自表3之CDR至少80%相同之CDR-L3、與選自表4之CDR至少80%相同之CDR-H1、與選自表5之CDR至少80%相同之CDR-H2、及與選自表6之CDR至少80%相同之CDR-H3。

A7.如實施例A1至A6中任一項所述之結合劑，其中該結合劑為重組單株抗體。

A8.一種醫藥組成物，其包含：實施例A1至A7中任一項所述之結合劑；及醫藥上可接受之賦形劑、稀釋劑、添加劑或載體。

A9.如實施例A8之醫藥組成物，其中該結合劑包含IgG₁、IgG₂、IgG₃或IgG₄之恆定區。

A10.如實施例A8或A9之醫藥組成物，其中該結合劑包含IgD、IgE、IgA或IgM之恆定區。

A11.如實施例A8至A10中任一項所述之醫藥組成物，其中該結合劑係人源化。

B1.一種重組單株抗體，其包含：與選自表1之CDR至少80%相同之CDR-L1、與選自 表2之CDR至少80%相同之CDR-L2、與選自表3之CDR至少80%相同之CDR-L3、與選自表4之CDR至少80%相同之CDR-H1、與選自表5之CDR至少80%相同之CDR-H2、及與選自表6之CDR至少80%相同之CDR-H3，其中該抗體與人類cMET之細胞外功能域專一性結合。

B2.如實施例B1之抗體，其中該抗體係人源化、嵌合性或CDR接枝。

C1.如實施例A1至A11、B1、與B2中任一項所述之抗體結合劑、醫藥組成物或抗體，其係用於治療個體之腫瘤病變或癌症。

所摘錄之各專利案、專利申請案、公開案或任何其他參考文獻或文件之完整內容已以引用之方式併入本發明中。若有抵觸，將以說明書(包括定義)主導。

所摘錄之任何專利案、專利申請案、公開案或任何其他文件並不表示認可上述任一者為相關之先前技術，亦不表示其構成任何認可此等公開案或文件之內容或日期。

除非另有說明，否則本發明所採用之所有技術與科學術語均具有熟悉本發明所屬技術領域具有通常知識者咸了解之相同定義。雖然本發明說明合適之方法與材料，但仍可採用與彼等本發明說明之類似或相同方法及材料來操作或試驗本發明。

本發明揭示之所有特色均可依任何方式組合。說明書中揭示之各特色可改用可提供相同、同等、或 類似目的之替代特色置換。因此除非另有說明，否則所揭示之特色(例如：抗體)係一類同等或類似特色之實例之一。

本發明所採用所有數值或數字範圍包括此等範圍內之整數及範圍內之數值之分數或整數，除非本發明中另有明確說明。此外，當本發明說明中列出數值(例如：約50%、60%、70%、80%、85%或86%)時，該表列包括所有中間值與其分數(例如：54%、85.4%)。因此，為了說明，提及80%或以上，包括81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%等，及81.1%、81.2%、81.3%、81.4%、81.5%等，82.1%、82.2%、82.3%、82.4%、82.5%等，及依此類推。

所提及超過(大於)或小於某整數時，分別包括大於或小於所提及之數字之任何數字。因此例如：提及小於100時，包括99、98、97等，一直到數字一(1)；及小於10，包括9、8、7等，一直到數字一(1)。

本發明所採用所有數值或數字範圍包括此等範圍內之整數及此等範圍內之數值之分數或整數，除非本發明中另有明確說明。因此為了說明，所提及之數字範圍如：1至10，包括1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、及1.1、1.2、1.3、1.4、1.5等，依此類推。因此提及範圍1至50包括1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20等，最多且包括50，及1.1、1.2、1.3、1.4、1.5等、2.1、2.2、2.3、2.4、2.5等，依此類推。

提及之一系列範圍包括該等系列內不同範圍之界限值之組合。因此為了說明所提及之系列範圍，例如：1至10、10至20、20至30、30至40、40至50、50至60、60至75、75至100、100至150、150至200、200至250、250至300、300至400、400至500、500至750、750至1,000、1,000至1,500、1,500至2,000、2,000至2,500、2,500至3,000、3,000至3,500、3,500至4,000、4,000至4,500、4,500至5,000、5,500至6,000、6,000至7,000、7,000至8,000、或8,000至9,000，包括10至50、50至100、100至1,000、1,000至3,000、2,000至4,000等之範圍。

上述內容可在不偏離技術之基本態樣下進行修飾。雖然已參照一或多項明確實施例詳細說明技術，但彼等習此相關技藝之人士咸了解，可在本申請書明確揭示之實施例中進行改變，同時此等修飾與改進均在該等技術之範圍與精神內。

本發明通常採用肯定式語言來說明數項實施例與態樣。本發明亦明確包括其中已完全或部分排除特定個別物資(如：物質或材料)、方法步驟與條件、程序或製程之實施例。例如：本發明某些實施例或態樣中，已排除材料及/或方法步驟。因此雖然本發明通常不會以本發明未包括之術語來表示，但本發明仍將揭示未表示排除在本發明以外之態樣。

本發明說明之技術可在沒有本發明所揭示 任何元素(群)下操作。因此例如：本發明各例中，任何術語「包括」、「基本上其組成為」與「其組成為」其中之一可與任何其他兩種術語交換使用。本發明所採用術語與表示法係供說明之術語，並沒有限制，且此等術語與表示法不排除所表示或說明之特色之任何同等物或其一部分，且此等變化與修飾均在所主張技術範圍內。術語「一個」或「一種」可指其所形容元素之一或複數(例如：「一種試劑」可指一或多種試劑)，除非本發明中另有明確說明其係一種元素或超過一種元素。本發明所採用術語「約」係指在所指示參數之10%範圍內之數值(亦即加或減10%)，及用在一連串數值開始前之術語「約」係形容各數值(亦即「約1、2與3」係指約1、約2與約3)。例如：重量「約100克」可包括在90克與110克之間之重量。本發明所採用術語「實質上」係指該形容之數值意義為「至少95%」、「至少96%」、「至少97%」、「至少98%」、「至少99%」，且可包括100%。例如：一種實質上不含X之組成物可能包括小於5%、小於4%、小於3%、小於2%、或小於1%之X，且/或該組成物中之X可能不存在或無法檢測。

因此，咸了解雖然本技術已採用代表性實施例及選用之特色明確揭示，但所屬技術領域具有通常知識者仍可在本發明揭示之觀念下進行修飾與變化，且此等修飾與變化均被視為此技術範圍內。

<110> 田邊三菱製藥股份有限公司

<120> CMET單株結合劑、其藥物複合體及其用途

<130> 673513

<150> US 62/401,428

<151> 2016-09-29

<160> 113

<170> PatentIn version 3.5

<210> 1

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<212> PRT

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<223> Xaa可為Tyr或Phe

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<221> misc_feature

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<223> Xaa可為Asp或Ser

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<221> misc_feature

<222> (8)..(8)

<223> Xaa可為Asn,Trp或Tyr

<220>

<221> misc_feature

<222> (10)..(10)

<223> Xaa可為His或Ser

<400> 61

<210> 62

<211> 16

<212> PRT

<213> 小鼠

<400> 62

<210> 63

<211> 7

<212> PRT

<213> 小鼠

<400> 63

<210> 64

<211> 17

<212> PRT

<213> 小鼠

<400> 64

<210> 65

<211> 8

<212> PRT

<213> 小鼠

<400> 65

<210> 66

<211> 19

<212> PRT

<213> 小鼠

<400> 66

<210> 67

<211> 10

<212> PRT

<213> 小鼠

<400> 67

<210> 68

<211> 17

<212> PRT

<213> 小鼠

<400> 68

<210> 69

<211> 8

<212> PRT

<213> 小鼠

<400> 69

<210> 70

<211> 17

<212> PRT

<213> 小鼠

<400> 70

<210> 71

<211> 8

<212> PRT

<213> 小鼠

<400> 71

<210> 72

<211> 17

<212> PRT

<213> 小鼠

<400> 72

<210> 73

<211> 8

<212> PRT

<213> 小鼠

<400> 73

<210> 74

<211> 17

<212> PRT

<213> 小鼠

<400> 74

<210> 75

<211> 8

<212> PRT

<213> 小鼠

<400> 75

<210> 76

<211> 8

<212> PRT

<213> 小鼠

<220>

<221> misc_feature

<222> (8)..(8)

<223> Xaa可為Ile或Thr

<400> 76

<210> 77

<211> 17

<212> PRT

<213> 小鼠

<220>

<221> misc_feature

<222> (1)..(1)

<223> Xaa可為Tyr或Asp

<220>

<221> misc_feature

<222> (3)..(3)

<223> Xaa可為Lys或Asn

<220>

<221> misc_feature

<222> (8)..(8)

<223> Xaa可為Asn或Tyr

<220>

<221> misc_feature

<222> (9)..(9)

<223> Xaa可為Thr或Ile

<220>

<221> misc_feature

<222> (12)..(12)

<223> Xaa可為Ala或Asn

<220>

<221> misc_feature

<222> (16)..(16)

<223> Xaa可為Gln或Lys

<220>

<221> misc_feature

<222> (17)..(17)

<223> Xaa可為Gly或Asp

<400> 77

<210> 78

<211> 17

<212> PRT

<213> 小鼠

<400> 78

<210> 79

<211> 10

<212> PRT

<213> 小鼠

<400> 79

<210> 80

<211> 7

<212> PRT

<213> 小鼠

<400> 80

<210> 81

<211> 18

<212> PRT

<213> 小鼠

<400> 81

<210> 82

<211> 16

<212> PRT

<213> 小鼠

<400> 82

<210> 83

<211> 10

<212> PRT

<213> 小鼠

<400> 83

<210> 84

<211> 7

<212> PRT

<213> 小鼠

<400> 84

<210> 85

<211> 18

<212> PRT

<213> 小鼠

<400> 85

<210> 86

<211> 16

<212> PRT

<213> 小鼠

<400> 86

<210> 87

<211> 13

<212> PRT

<213> 小鼠

<400> 87

<210> 88

<211> 10

<212> PRT

<213> 小鼠

<400> 88

<210> 89

<211> 13

<212> PRT

<213> 小鼠

<400> 89

<210> 90

<211> 13

<212> PRT

<213> 小鼠

<400> 90

<210> 91

<211> 11

<212> PRT

<213> 小鼠

<400> 91

<210> 92

<211> 13

<212> PRT

<213> 小鼠

<220>

<221> misc_feature

<222> (2)..(2)

<223> Xaa可為Ala或Val

<220>

<221> misc_feature

<222> (8)..(8)

<223> Xaa可為Phe或Tyr

<400> 92

<210> 93

<211> 11

<212> PRT

<213> 小鼠

<220>

<221> misc_feature

<222> (6)..(6)

<223> Xaa可為Phe或Tyr

<400> 93

<210> 94

<211> 117

<212> PRT

<213> 小鼠

<400> 94

<210> 95

<211> 118

<212> PRT

<213> 小鼠

<400> 95

<210> 96

<211> 127

<212> PRT

<213> 小鼠

<400> 96

<210> 97

<211> 127

<212> PRT

<213> 小鼠

<400> 97

<210> 98

<211> 119

<212> PRT

<213> 小鼠

<400> 98

<210> 99

<211> 119

<212> PRT

<213> 小鼠

<400> 99

<210> 100

<211> 119

<212> PRT

<213> 小鼠

<400> 100

<210> 101

<211> 119

<212> PRT

<213> 小鼠

<400> 101

<210> 102

<211> 119

<212> PRT

<213> 小鼠

<400> 102

<210> 103

<211> 119

<212> PRT

<213> 小鼠

<220>

<221> misc_feature

<222> (23)..(23)

<223> Xaa可為Lys或Arg

<220>

<221> misc_feature

<222> (46)..(46)

<223> Xaa可為Glu或Asp

<220>

<221> misc_feature

<222> (52)..(52)

<223> Xaa可為Lys或Asn

<220>

<221> misc_feature

<222> (57)..(57)

<223> Xaa可為Tyr或Asn

<220>

<221> misc_feature

<222> (58)..(58)

<223> Xaa可為Thr或Ile

<220>

<221> misc_feature

<222> (77)..(77)

<223> Xaa可為Ser或Thr

<220>

<221> misc_feature

<222> (97)..(97)

<223> Xaa可為Ala或Val

<220>

<221> misc_feature

<222> (103)..(103)

<223> Xaa可為Tyr或Phe

<400> 103

<210> 104

<211> 119

<212> PRT

<213> 人工

<220>

<223> 人源化重鏈

<400> 104

<210> 105

<211> 119

<212> PRT

<213> 人工

<220>

<223> 人源化重鏈

<400> 105

<210> 106

<211> 119

<212> PRT

<213> 人工

<220>

<223> 人源化重鏈

<400> 106

<210> 107

<211> 119

<212> PRT

<213> 人工

<220>

<223> 人源化重鏈

<400> 107

<210> 108

<211> 119

<212> PRT

<213> 人工

<220>

<223> 人源化重鏈

<400> 108

<210> 109

<211> 1390

<212> PRT

<213> 智人

<400> 109

<210> 110

<211> 1382

<212> PRT

<213> 大鼠

<400> 110

<210> 111

<211> 1379

<212> PRT

<213> 小鼠

<400> 111

<210> 112

<211> 1382

<212> PRT

<213> 家犬

<400> 112

<210> 113

<211> 1381

<212> PRT

<213> 恆河獼猴

<400> 113

Claims (51)

1. 一種結合劑，其包含：CDR-L1、CDR-L2與CDR-L3，此等係輕鏈互補決定區(CDR-L，light chain complementarity determining region)之三個多肽序列，其中，該CDR-L1選自SEQ ID NO：1-15，CDR-L2選自SEQ ID NO：16-25，及CDR-L3選自SEQ ID NO：26-36，及其中，該結合劑專一性結合至間質上皮轉化因子(cMET，mesenchymal epithelial transition factor)之細胞外功能域。
2. 一種結合劑，其包含：CDR-H1、CDR-H2、與CDR-H3，此等係重鏈互補決定區(CDR-H，heavy chain complementarity determining region)之三個多肽序列，其中，該CDR-H1選自SEQ ID NO：50-61，CDR-H2選自SEQ ID NO：62-78，及CDR-H3選自SEQ ID NO：79-93，及其中，該結合劑專一性結合至間質上皮轉化因子(cMET)之細胞外功能域。
3. 一種結合劑，其包含：選自SEQ ID NO：1-15之CDR-L1、選自SEQ ID NO：16-25之CDR-L2、選自SEQ ID NO：26-36之CDR-L3、選自SEQ ID NO：50-61之CDR-H1、選自 SEQ ID NO：62-78之CDR-H2、及選自SEQ ID NO：79-93之CDR-H3，其中，該結合劑專一性結合至間質上皮轉化因子(cMET)之細胞外功能域。
4. 如申請專利範圍第1或3項所述之結合劑，其中，該CDR-L1係選自SEQ ID NO：2、4、6、8、10、12與14。
5. 如申請專利範圍第1、3或4項所述之結合劑，其中，該CDR-L2係選自SEQ ID NO：17、19、21、23與25。
6. 如申請專利範圍第1、3、4或5項所述之結合劑，其中，該CDR-L3係選自SEQ ID NO：27、29、31、33與35。
7. 如申請專利範圍第2或3項所述之結合劑，其中，該CDR-H1係選自SEQ ID NO：51、53、55、57與59。
8. 如申請專利範圍第2、3或7項所述之結合劑，其中，該選自SEQ ID NO：62-78之CDR-H2係選自SEQ ID NO：63、65、67、69、73與75。
9. 如申請專利範圍第2、3或8項所述之結合劑，其中，該CDR-H3係選自SEQ ID NO：80、82、84、86、88、91與93。
10. 如申請專利範圍第1至9項中任一項所述之結合劑，其中，該結合劑為抗體、或其結合片段。
11. 如申請專利範圍第10項所述之結合劑，其中，該結合劑為單株抗體、或其結合片段。
12. 如申請專利範圍第1至11項中任一項所述之結合劑，其中，該結合劑包含IgG ₁、IgG ₂、IgG ₃、或IgG ₄之恆 定區。
13. 如申請專利範圍第1至11項中任一項所述之結合劑，其中，該結合劑包含IgD、IgE、IgA或IgM之恆定區。
14. 如申請專利範圍第1至13項中任一項所述之結合劑，其中，該結合劑為人源化(humanized)者。
15. 如申請專利範圍第1至13項中任一項所述之結合劑，其中，該結合劑包含至少一種人源化或人類框架區。
16. 如申請專利範圍第15項所述之結合劑，其中，該結合劑包含至少三個人源化或人類框架區。
17. 如申請專利範圍第1至13項中任一項所述之結合劑，其中，該結合劑包含至少一個小鼠框架區。
18. 如申請專利範圍第17項所述之結合劑，其中該結合劑包含至少三個小鼠框架區。
19. 如申請專利範圍第1至18項中任一項所述之結合劑，其中，該結合劑為抗體之Fab、Fab’、F(ab’)2、Fv或scFV片段。
20. 如申請專利範圍第1至19項中任一項所述之結合劑，其中，該結合劑係由單鏈多肽組成。
21. 如申請專利範圍第1至13項中任一項所述之結合劑，其中，該結合劑包含具有選自SEQ ID NO：37-44之胺基酸序列之可變輕鏈區。
22. 如申請專利範圍第1至13項中任一項所述之結合劑，其中，該結合劑包含具有選自SEQ ID NO：94-103之胺基酸序列之可變重鏈區。
23. 如申請專利範圍第1至13項中任一項所述之結合劑，其中，該結合劑包含選自SEQ ID NO：45-49之輕鏈序列。
24. 如申請專利範圍第1至13項中任一項所述之結合劑，其中，該結合劑包含選自SEQ ID NO：104-108之重鏈序列。
25. 如申請專利範圍第23或24項所述之結合劑，其中，該選自SEQ IDNO：45-49之輕鏈序列及/或選自SEQ ID NO：104-108之重鏈序列包含1至5個選自胺基酸加成、胺基酸缺失與胺基酸取代之胺基酸修飾。
26. 如申請專利範圍第1至25項中任一項所述之結合劑，其中，該結合劑在人類癌細胞誘發cMET之內化。
27. 如申請專利範圍第1至25項中任一項所述之結合劑，其中，該結合劑在人類癌細胞誘發cMET之降解。
28. 如申請專利範圍第1至25項中任一項所述之結合劑，其中，該結合劑不為cMET促效劑。
29. 如申請專利範圍第1至28項中任一項所述之結合劑，其中，該結合劑係專一性結合至哺乳動物cMET。
30. 如申請專利範圍第29項所述之結合劑，其中，該哺乳動物cMET為人類cMET、猴子cMET或大鼠cMET。
31. 如申請專利範圍第30項所述之結合劑，其中，該結合劑係專一性結合至人類cMET、猴子cMET與大鼠cMET。
32. 如申請專利範圍第30項所述之結合劑，其中，該結合 劑專一性結合至人類cMET。
33. 如申請專利範圍第1至32項中任一項所述之結合劑，其中，該結合劑專一性結合至野生型cMET之細胞外功能域。
34. 如申請專利範圍第1至32項中任一項所述之結合劑，其中，該結合劑專一性結合至cMET變異體之細胞外功能域。
35. 如申請專利範圍第34項所述之結合劑，其中，該cMET變異體包含cMET之E168D或N375S變異體。
36. 如申請專利範圍第1至34項中任一項所述之結合劑，其中，該結合劑以10nM以下之KD(親和力常數)與人類cMET之細胞外功能域專一性結合。
37. 如申請專利範圍第36項所述之結合劑，其中，該結合劑以1nM以下之KD與人類cMET之細胞外功能域專一性結合。
38. 如申請專利範圍第1至37項中任一項所述之結合劑，其中，該結合劑包含抗腫瘤劑。
39. 一種組成物，係包含：第一結合劑，其係申請專利範圍第1至38項中任一項所述之結合劑；及不與cMET專一性結合之第二結合劑。
40. 如申請專利範圍第39項所述之組成物，其中，該第一結合劑為專一性結合至cMET之細胞外功能域之結合劑，而該第二結合劑係與該第一結合劑複合。
41. 一種治療患有腫瘤病變或癌症之個體之方法，包括： a)提供患有或疑似患有腫瘤病變之個體；及b)對該個體投予醫療有效量之申請專利範圍第1至38項中任一項所述之結合劑、或申請專利範圍第39至40項中任一項所述之組成物。
42. 如申請專利範圍第41項所述之方法，其中，該結合劑專一性結合至在該個體的一或多種細胞表現之cMET之細胞外功能域。
43. 如申請專利範圍第41或42項所述之方法，其中，該結合劑抑制一或多種表現cMET之細胞之有絲分裂及/或誘發一或多種表現cMET之細胞之死亡。
44. 如申請專利範圍第41至43項中任一項所述之方法，其中，該腫瘤病變或癌症包含：肺癌、乳癌、卵巢癌、腎臟癌、結腸直腸癌、胃癌、甲狀腺癌、胰臟癌、神經母細胞瘤、頭與頸之鱗狀細胞(squamous cell)癌、子宮頸癌、肝細胞癌、肉瘤、間皮瘤、神經膠質母細胞瘤、多發性骨髓瘤、黑色素瘤、攝護腺與食道癌。
45. 一種醫藥組成物，其包含申請專利範圍第1至38項中任一項所述之結合劑、及醫藥上可接受之賦形劑、稀釋劑、添加劑或載體。
46. 如申請專利範圍第45項所述之醫藥組成物，其中，該添加劑包含防腐劑。
47. 如申請專利範圍第45或46項所述之醫藥組成物，其中，該稀釋劑包含磷酸鹽緩衝生理食鹽水。
48. 如申請專利範圍第45至47項中任一項所述之醫藥組成 物，其中，該賦形劑包含檸檬酸鈉無水物(sodium citrate dehydrate)或聚氧乙烯-山梨糖醇酐-20單油酸酯(聚山梨酸酯80)。
49. 如申請專利範圍第45至48項中任一項所述之醫藥組成物，其中，該載體包含重組蛋白質。
50. 如申請專利範圍第45至49項中任一項所述之醫藥組成物，其中，該組成物係無菌者。
51. 如申請專利範圍第45至50項中任一項所述之醫藥組成物，其中，該組成物係調配成適用於對哺乳動物靜脈內投予之無菌凍乾粉末。