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TW201702225A - 具有β２受體激動及Ｍ受體拮抗活性的含氮雜螺環衍生物及其在醫藥上的用途 - Google Patents

具有β２受體激動及Ｍ受體拮抗活性的含氮雜螺環衍生物及其在醫藥上的用途 Download PDF

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TW201702225A
TW201702225A TW105114685A TW105114685A TW201702225A TW 201702225 A TW201702225 A TW 201702225A TW 105114685 A TW105114685 A TW 105114685A TW 105114685 A TW105114685 A TW 105114685A TW 201702225 A TW201702225 A TW 201702225A
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alkyl
hydroxy
methyl
oxo
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TW105114685A
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yong-gang Wei
Guan-Peng Qiu
Bo-Lin Lei
hong-zhu Chu
Su-Xin Zheng
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Sichuan Haisco Pharmaceutical Co Ltd
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Abstract

一種通式(I)所示的化合物或其立體異構物、水合物、代謝產物、溶劑化物、藥學上可接受的鹽、共晶體或前藥，以及其製備方法和其在製備用於治療氣道阻塞性疾病藥物中的應用，其中通式(I)化合物為 □其中，各取代基的定義與說明書中一致。

Description

具有 β 2受體激動及M受體拮抗活性的含氮雜螺環衍生物及其在醫藥上的用途
本發明關於一種含氮雜螺環衍生物及其製備方法和在醫藥上的應用，具體關於一種具有蕈毒鹼受體拮抗和β2-腎上腺素受體激動雙重活性的新穎含氮雜螺環衍生物或其立體異構物、水合物、溶劑化物、代謝產物、藥學上可接受的鹽、共晶體或前藥、其藥物組合物以及其在醫藥上的用途。
支氣管擴張劑對於呼吸疾病例如慢性阻塞性肺疾病(COPD)及哮喘等的治療起重要作用。臨床中廣泛使用的支氣管擴張劑包括蕈毒鹼受體拮抗劑和β2-腎上腺素激動劑。蕈毒鹼受體拮抗劑通過降低氣道平滑肌的迷走神經膽鹼能水平來發揮支氣管擴張的效力。目前所使用的吸入蕈毒鹼受體拮抗劑包括異丙托溴銨、氧托溴銨、格隆溴銨、噻托溴銨、阿地溴胺和蕪地溴胺。β2-腎上腺素激動劑通過刺激氣道平滑肌的腎上腺素受體而使支氣管擴張，逆轉支氣管收縮劑對各種介質如乙醯膽鹼的反應。目前所使用的β2-腎上腺素激動劑包括沙丁胺醇、沙美特羅、阿福特羅、福美特羅、維蘭特羅和茚達特羅。這些藥物除了改善肺的功能，也可改善患者生活質量並減少病情惡化。
隨著更多的臨床研究發現，證明聯合使用蕈毒鹼受體拮抗劑和β2-腎上 腺素激動劑比單獨使用其中一種治療劑更有效，目前臨床上將蕈毒鹼受體拮抗劑和β2-腎上腺素激動劑製備成複方製劑，用於哮喘和中重度COPD的治療，這類複方製劑主要包括AnoroEllipta(蕪地溴胺/維蘭特羅)、UltibroBreezhaler(格隆溴銨/茚達特羅)和異丙托溴胺/沙丁胺醇等。雖然複方製劑比其中單一製劑具有更好的治療效果，但是在製劑製備上有更高的要求。
因此，人們希望開發同時具有蕈毒鹼受體拮抗和β2-腎上腺素激動雙重作用的藥物，這種雙功能藥物具有兩種成分組合的藥學優點，同時具備單一的分子藥代動力學。這些化合物以單一治療劑的形式給藥，可以由兩種不同且可能協同起效的作用模式提供支氣管擴張作用。另外，具有蕈毒鹼受體拮抗和β2-腎上腺素激動雙重作用(MABA)的化合物還可以與皮質類固醇(ICS)消炎劑藥物組合，形成兩種治療劑(MABA/ICS)而提供三重作用的治療效果(ExpertOpin.Investig.Drugs(2014)23(4)：453-456)。因此，有必要開發新穎的同時具有蕈毒鹼受體拮抗和β2-腎上腺素激動的雙重活性藥物，以提供更有效的單一治療劑量或者複方製劑，為患者提供更多的臨床用藥選擇。
本發明提供一種通式(I)所示的化合物或其立體異構物、水合物、代謝產物、溶劑化物、藥學上可接受的鹽、共晶體或前藥，
其中： R1選自、或； R1a選自H、C2-6烯基、C2-6炔基、C3-10碳環基、3至8員雜環基、C3-10碳環基-C1-4亞烷基或3至8員雜環基-C1-4亞烷基，所述烯基、炔基、亞烷基、碳環基或雜環基任選進一步被0、1、2、3或4個選自F、Cl、Br、I、CH2F、CHF2、CF3、OH、OCH2F、OCHF2、OCF3、NH2、羧基、氰基、硝基、C1-4烷基、C1-4烷氧基、-O(=O)C1-4烷基、-(=O)C1-4烷基、-OC3-6環烷基或C1-4烷硫基的取代基所取代，所述雜環基含有1、2或3個選自N、O或S的雜原子；R1b選自C2-6烯基、C2-6炔基、C3-10碳環基、3至8員雜環基、C3-10碳環基-C1-4亞烷基或3至8員雜環基-C1-4亞烷基，所述烯基、炔基、亞烷基、碳環基或雜環基任選進一步被0、1、2、3或4個選自F、Cl、Br、I、CH2F、CHF2、CF3、OH、OCH2F、OCHF2、OCF3、NH2、羧基、氰基、硝基、C1-4烷基、C1-4烷氧基、-O(=O)C1-4烷基、-(=O)C1-4烷基、-OC3-6環烷基或C1-4烷硫基的取代基所取代，所述雜環基含有1、2或3個選自N、O或S的雜原子；R1c選自H、羥基、氰基、NH2、C1-6烷基、C1-6烷氧基、C1-6烷硫基或-C(=O)NH2，所述NH2、-C(=O)NH2或烷基任選進一步被0、1或2個選自F、Cl、Br、I、羥基、氰基或C1-4烷基的取代基所取代；M選自鍵結、-CH2-、-CH2CH2-、-O-、-S-、-OCH2-、-SCH2-或-CH=CH-；R1d選自H、羥基、-CH2OH或C1-4烷基；R1e和R1f各自獨立選自F、Cl、Br、I、CF3、NH2、OH、羧基、氰基、C1-4烷基、C1-4烷氧基、C1-4烷硫基、-NHC1-4烷基、-N(C1-4烷基)2、-S(=O)-C1-4 烷基、-S(=O)2-C1-4烷基或-C(=O)O-C1-4烷基；環A和環C各自獨立選自C6-10碳環或5至10員雜環，所述碳環或雜環任選進一步被0、1、2、3或4個選自F、Cl、Br、I、C1-4烷基或C1-4烷氧基的取代基所取代，且所述雜環含有1、2或3個選自N、O或S的雜原子；R2選自鍵、C1-6亞烷基、C2-6亞烯基或C2-6亞炔基，所述亞烷基、亞烯基或亞炔基任選進一步被0、1、2、3、4或5個選自F、Cl、Br、I、OH、氰基、C1-4烷基、C1-4烷氧基、苯基或苯基-C1-4亞烷基的取代基所取代； L選自鍵結或，且Y直接與R2相連接； R3選自鍵結或C1-6亞烷基，所述亞烷基任選進一步被0、1、2、3、4或5個選自R3a的取代基所取代；並且R2、L和R3三者不能同時為鍵結；R4、R5各自獨立的選自H或C1-4烷基； 表示β-腎上腺素受體結合基團； R3a選自F、Cl、Br、I、氰基、OH、C1-4烷基、C1-4烷氧基、苯基或苯基-C1-4亞烷基；選擇性的，兩個R3a可以與它們相連的原子一起形成一個3至6員碳環，所述碳環任選進一步被0、1、2、3、4或5個選自F、Cl、Br、I、氰基、OH、C1-4烷基或C1-4烷氧基的取代基所取代；A1和A4各自獨立選自C3-7亞環烷基、C6-10亞芳基、5至8員亞雜芳基、-O-C6-10亞芳基、-O-5至8員亞雜芳基、5至8員亞雜芳基-O-或C6-10亞芳基-O-，其中所述的亞環烷基、亞芳基或亞雜芳基任選進一步被0、1、2、3、4或5個選自R6的取代基所取代； A2和A3各自獨立選自C1-6亞烷基、C2-6亞烯基或C2-6亞炔基，所述亞烷基、亞烯基或亞炔基任選進一步被0、1、2、3、4或5個選自F、Cl、Br、I、OH、氰基、C1-4烷基、C1-4烷氧基、苯基或苯基-C1-4亞烷基的取代基所取代；X和Y各自獨立選自鍵結、-O-、-C(=O)O-、-OC(=O)-、-S-、-S(=O)-、-S(=O)2-、-C(=O)NR7-、-NR7C(=O)-、-OC(=O)NR7-、-NR7C(=O)O-、-NR7C(=O)NR7、-NR7S(=O)2-、-S(=O)2NR7-、-NR7S(=O)2NR7或-NR7-；R6選自F、Cl、Br、I、OH、NH2、羧基、氰基、硝基、C1-4烷基、C2-4烯基、C2-4炔基、C1-4烷氧基、-OC3-6環烷基、C1-4烷硫基、-S(=O)-C1-4烷基、-S(=O)2-C1-4烷基、-C(=O)-C1-4烷基、-C(=O)O-C1-4烷基、-OC(=O)-C1-4烷基、5至6員雜芳基或-C(=O)NH2，所述烷基、烷氧基、環烷基、烯基、炔基、雜芳基、NH2或-C(=O)NH2任選進一步被0、1、2、3或4個選自F、Cl、Br、I、CF3、C1-4烷基、C1-4烷氧基或-C(=O)-C1-4烷基的取代基所取代；R7各自獨立選自H或C1-4烷基；a為0、1、2、3或4；b為0、1、2、3、4或5；m、n、p或q各自獨立選自0或1。
在本發明的具體實施例中，在上述的通式(I)所示的化合物或其立體異構物、水合物、代謝產物、溶劑化物、藥學上可接受的鹽、共晶體或前藥中， 表示β-腎上腺素受體結合基團； B較佳選自、或，R10、R11、R12、R13、R14、 R15、R16、R17或R18各自獨立的選自H、F、Cl、Br、I、CF3、OH、-CH2OH、氰基、羧基、C1-4烷基、C1-4烷氧基、-C(=O)C1-4烷基、-C(=O)OC1-4烷基、-NHC(=O)H、-NHS(=O)2-C1-4烷基、-NHS(=O)2-NH2或-NHS(=O)2-NHC1-4烷基，Q選自-CRq1=CRq2-、-CRq1Rq2CRq3Rq4-、-O-、-S-、-OCRq1Rq2-、-CRq1Rq2O-、-SCRq1Rq2-、-CRq1Rq2S-，所述Rq1、Rq2、Rq3或Rq4各自獨立的選自選自H、F、Cl、Br、I或C1-4烷基； B更佳選自、、、、 、或，其中Q選自-CH=CH-、-CH2CH2-、 -O-、-S-、-CH2O-、-OCH2-、-C(CH3)2O-或-OC(CH3)2-； B進一步較佳選自、、、、
在本發明的較佳實施例中，在上述的通式(I)所示的化合物或其立體異 構物、水合物、代謝產物、溶劑化物、藥學上可接受的鹽、共晶體或前藥中， R1選自、或； R1a選自H、C2-4烯基、C2-4炔基、C3-7碳環基、3至6員雜環基、C3-7碳環基-C1-4亞烷基或3至6員雜環基-C1-4亞烷基，所述烯基、炔基、亞烷基、碳環基或雜環基任選進一步被0、1、2、3或4個選自F、Cl、Br、I、CF3、OH、NH2、羧基、氰基、硝基、C1-4烷基、C1-4烷氧基、-O(=O)C1-4烷基、-(=O)C1-4烷基、-OC3-6環烷基或C1-4烷硫基的取代基所取代，所述雜環基含有1、2或3個選自N、O或S的雜原子；R1b選自C2-4烯基、C2-4炔基、C3-7碳環基、3至6員雜環基、C3-7碳環基-C1-4亞烷基或3至6員雜環基-C1-4亞烷基，所述烯基、炔基、亞烷基、碳環基或雜環基任選進一步被0、1、2、3或4個選自F、Cl、Br、I、CF3、OH、NH2、羧基、氰基、硝基、C1-4烷基、C1-4烷氧基、-O(=O)C1-4烷基、-(=O)C1-4烷基、-OC3-6環烷基或C1-4烷硫基的取代基所取代，所述雜環基含有1、2或3個選自N、O或S的雜原子；R1c選自H、羥基、氰基、NH2、C1-4烷基、C1-4烷氧基、C1-4烷硫基或-C(=O)NH2，所述NH2、-C(=O)NH2或烷基任選進一步被0、1或2個選自F、Cl、Br、I、羥基、氰基或C1-4烷基的取代基所取代；環A和環C各自獨立選自噻吩環、呋喃環、吡啶環或苯環，較佳為苯環，所述噻吩環、呋喃環、吡啶環或苯環任選進一步被0、1、2、3或4個選自F、Cl、Br、I、C1-4烷基或C1-4烷氧基的取代基所取代，較佳進一步被0、1、2、3或4個選自F、Cl、Br、I、甲基、乙基、甲氧基或乙氧基的取 代基所取代；M選自鍵結、-CH2-、-CH2CH2-、-O-、-S-、-OCH2-、-SCH2-或-CH=CH-，較佳選自鍵結、-O-或-S-；R1d選自H、羥基、-CH2OH或C1-4烷基，較佳選自H、羥基、-CH2OH、甲基、乙基或丙基；R1e和R1f各自獨立選自F、Cl、Br、I、CF3、NH2、OH、氰基、C1-4烷基、C1-4烷氧基、C1-4烷硫基、-NHC1-4烷基或-N(C1-4烷基)2；R2選自鍵結、C1-6亞烷基、C2-6亞烯基或C2-6亞炔基，所述亞烷基、亞烯基或亞炔基任選進一步被0、1、2、3、4或5個選自F、Cl、Br、I、OH、氰基、C1-4烷基、C1-4烷氧基、苯基或苯基-C1-4亞烷基的取代基所取代；R2較佳選自鍵結或C1-6亞烷基，所述亞烷基任選進一步被0、1、2、3、4或5個選自F、Cl、Br、I、OH、氰基、C1-4烷基或C1-4烷氧基的取代基所取代；R3選自鍵結或C1-6亞烷基，所述亞烷基任選進一步被0、1、2、3、4或5個選自R3a的取代基所取代；R3較佳選自鍵結或C1-6亞烷基，所述亞烷基任選進一步被0、1、2、3、4或5個選自R3a的取代基所取代； L選自鍵結或，且Y直接與R2相連接； 並且R2、L和R3三者不能同時為鍵結；R4、R5各自獨立的選自H或C1-4烷基； B選自、、、、、 其中Q選自-CH=CH-、-CH2CH2-、-O-、-S-、-CH2O-、-OCH2-、-C(CH3)2O- 或-OC(CH3)2-；R3a選自F、Cl、Br、I、氰基、OH、C1-4烷基、C1-4烷氧基、苯基或苯基-C1-4亞烷基；R3a較佳選自F、Cl、Br、I、氰基、OH、C1-4烷基、C1-4烷氧基或苯基；選擇性的，兩個R3a可以與它們相連的原子一起形成一個3至6員碳環，所述碳環任選進一步被0、1、2、3、4或5個選自F、Cl、Br、I、氰基、OH、C1-4烷基或C1-4烷氧基的取代基所取代；A1和A4各自獨立選自C3-7亞環烷基、C6-10亞芳基、5至8員亞雜芳基、-O-C6-10亞芳基、-O-5至8員亞雜芳基、5至8員亞雜芳基-O-或C6-10亞芳基-O-，較佳選自亞環戊烷基、亞環己烷基、亞苯基、亞噻吩基、亞呋喃基、亞噻唑基、亞噁唑基、亞咪唑基或亞吡啶基，其中所述的亞環烷基、亞芳基、亞雜芳基、亞環戊烷基、亞環己烷基、亞苯基、亞噻吩基、亞呋喃基、亞噻唑基、亞噁唑基、亞咪唑基或亞吡啶基任選進一步被0、1、2、3、4或5個選自R6的取代基所取代；A2和A3各自獨立選自C1-6亞烷基、C2-6亞烯基或C2-6亞炔基，較佳選自C1-6亞烷，更佳選自亞甲基、亞乙基、亞丙基、亞丁基或亞戊基，所述亞烷基、亞烯基、亞炔基或亞甲基、亞乙基、亞丙基、亞丁基或亞戊基任選進一步被0、1、2、3、4或5個選自F、Cl、Br、I、OH、氰基、C1-4烷基、C1-4烷氧基、苯基或苯基-C1-4亞烷基的取代基所取代；X和Y各自獨立選自鍵結、-O-、-C(=O)O-、-OC(=O)-、-S-、-S(=O)-、-S(=O)2-、-C(=O)NR7-、-NR7C(=O)-、-OC(=O)NR7-、-NR7C(=O)O-、-NR7C(=O)NR7、-NR7S(=O)2-、-S(=O)2NR7-、-NR7S(=O)2NR7或-NR7-；R6各自獨立選自F、Cl、Br、I、OH、NH2、羧基、氰基、硝基、C1-4烷基、C2-4炔基、C1-4烷氧基、-OC3-6環烷基、C1-4烷硫基、-S(=O)-C1-4烷基、 -S(=O)2-C1-4烷基、-C(=O)-C1-4烷基、5至6員雜芳基或-C(=O)O-C1-4烷基，所述烷基、炔基、烷氧基、環烷基、雜芳基或NH2任選進一步被0、1、2、3或4個選自F、Cl、Br、I、CF3、C1-4烷基、C1-4烷氧基或-C(=O)-C1-4烷基的取代基所取代，R6較佳選自F、Cl、Br、氰基、甲基、乙基、丙基、異丙基、CHF2、CF3、甲氧基、乙氧基、-OCHF2、-OCF3、環丙基氧基、乙炔基、丙炔基、吡咯基、咪唑基、吡唑基、噻吩基、呋喃基、噻唑基或噁唑基；R7選自H或C1-4烷基，較佳選自H、甲基或乙基；a為0、1、2、3或4；b為0、1、2、3、4或5；m、n、p或q各自獨立選自0或1。
在本發明的較佳實施例中，在上述的通式(I)所示的化合物或其立體異構物、水合物、代謝產物、溶劑化物、藥學上可接受的鹽、共晶體或前藥中， R1選自、或； R1a選自H、乙烯基、乙炔基、丙炔基、苯基、環丙烷基、環丁基、環戊基、環己基、環庚基、苯甲基、噻吩基、呋喃基或吡啶基，較佳選自乙烯基、乙炔基、苯基、環丁基、環戊基、環己基、環庚基、苯甲基或噻吩基，所述的乙烯基、乙炔基、丙炔基、苯基、環丙烷基、環丁基、環戊基、環己基、環庚基、苯甲基、噻吩基、呋喃基或吡啶基任選進一步被0、1、2、3或4個選自F、Cl、Br、I、CF3、OH、NH2、羧基、氰基、硝基、C1-4烷基、C1-4烷氧基或-O(=O)C1-4烷基的取代基所取代； R1b選自乙烯基、乙炔基、丙炔基、苯基、環丙烷基、環丁基、環戊基、環己基、環庚基、苯甲基、噻吩基、呋喃基或吡啶基，較佳選自乙烯基、乙炔基、苯基、環丁基、環戊基、環己基、環庚基、苯甲基或噻吩基，所述的乙烯基、乙炔基、丙炔基、苯基、環丙烷基、環丁基、環戊基、環己基、環庚基、苯甲基、噻吩基、呋喃基或吡啶基任選進一步被0、1、2、3或4個選自F、Cl、Br、I、CF3、OH、NH2、羧基、氰基、硝基、C1-4烷基、C1-4烷氧基或-O(=O)C1-4烷基的取代基所取代；R1c選自H、羥基、NH2、甲基、乙基、氰基、甲胺基、二甲基胺基、甲氧基、乙氧基、-CH2OH或-C(=O)NH2，較佳選自H、羥基、NH2、甲基、乙基或甲氧基；M選自鍵結、-CH2-、-CH2CH2-、-O-、-S-、-OCH2-、-SCH2-或-CH=CH-，較佳選自鍵結、-O-或-S-；R1d選自H、NH2、羥基、-CH2OH、甲基或乙基；R1e和R1f各自獨立選自F、Cl、Br、I、CF3、NH2、OH、氰基、甲基、乙基、甲氧基、乙氧基、-NHCH3或-N(CH3)2；R2選自鍵結或C1-6亞烷基，較佳選自鍵結、亞甲基、亞乙基、亞丙基、亞丁基或亞戊基，所述的C1-6亞烷基、亞甲基、亞乙基、亞丙基、亞丁基或亞戊基任選進一步被0、1、2、3、4或5個選自F、Cl、Br、I、氰基、OH、甲基、乙基、甲氧基或乙氧基的取代基所取代；R3選自鍵結或C1-6亞烷基，較佳選自鍵結、亞甲基、亞乙基、亞丙基、 亞丁基、亞戊基或，所述的C1-6亞烷基、亞甲基、亞乙基、亞丙基、 亞丁基、亞戊基或任選進一步被0、1、2、3、4或5個選自F、Cl、 Br、I、氰基、OH、甲基、乙基、甲氧基或乙氧基的取代基所取代； L選自鍵結或，且Y直接與R2相連接； 並且R2、L和R3三者不能同時為鍵結；R4、R5各自獨立的選自H、甲基或乙基； B選自、、、、、 X和Y各自獨立選自鍵結、-O-、-C(=O)NR7-、-NR7C(=O)-、-OC(=O)NR7-或-NR7C(=O)O-；A1和A4各自獨立選自亞苯基、亞環戊烷基、亞環己烷基、亞苯基、亞噻吩基、亞呋喃基、亞噻唑基、亞噁唑基、亞咪唑基或亞吡啶基，較佳選自亞苯基、亞噻吩基、亞呋喃基或亞吡啶基，所述的亞苯基、亞環戊烷基、亞環己烷基、亞苯基、亞噻吩基、亞呋喃基、亞噻唑基、亞噁唑基、亞咪唑基或亞吡啶基任選進一步被0、1、2、3或4個選自F、Cl、Br、氰基、甲基、乙基、丙基、異丙基、CHF2、CF3、甲氧基、乙氧基、-OCHF2、-OCF3、乙炔基、丙炔基、吡咯基、咪唑基、吡唑基、噻吩基、呋喃基、噻唑基或噁唑基的取代基所取代；A2和A3各自獨立選自亞甲基、亞乙基、亞丙基、亞丁基或亞戊基；R7選自H或C1-4烷基，較佳選自H、甲基、乙基或丙基；a為0、1、2、3或4，較佳0或1； b為0、1、2、3或4，較佳0、1或2；m、n、p或q各自獨立選自0或1。
在本發明的較佳實施例中，在上述的通式(I)所示的化合物或其立體異構物、水合物、代謝產物、溶劑化物、藥學上可接受的鹽、共晶體或前藥中， R1選自、、、、、、 R2選自鍵結、亞甲基、亞乙基、亞丙基、亞丁基或亞戊基，所述的亞甲基、亞乙基、亞丙基、亞丁基或亞戊基任選進一步被0、1、2、3、4或5個選自F、Cl、Br、I、氰基、OH、甲基、乙基、甲氧基或乙氧基的取代基所取代；R2較佳選自鍵結、亞甲基、亞乙基、亞丙基、-CH2CH(CH3)-、-CH2C(CH3)2-、-C(CH3)2CH2-、-CH(CH3)CH2-、亞丁基、-CH(CH3)CH2CH2-、-CH2CH(CH3)CH2-、-CH2CH(CH3)CH2-或亞戊基； R3選自鍵結、亞甲基、亞乙基、亞丙基、亞丁基、亞戊基或，所 述的亞甲基、亞乙基、亞丙基、亞丁基、亞戊基或任選進一步被0、1、 2、3、4或5個選自F、Cl、Br、I、氰基、OH、甲基、乙基、甲氧基或乙氧基的取代基所取代；R3較佳選自鍵結、亞甲基、亞乙基、亞丙基、-CH2CH(CH3)-、 -CH2C(CH3)2-、-C(CH3)2CH2-、-CH(CH3)CH2-、亞丁基、-CH(CH3)CH2CH2-、 -CH2CH(CH3)CH2-、-CH2CH(CH3)CH2-、亞戊基或； L選自，且Y直接與R2相連接； 並且R2、L和R3三者不能同時為鍵結； B選自、、、、、 R4、R5各自獨立的選自H、甲基或乙基；X和Y各自獨立選自鍵結、-O-、-C(=O)NR7-、-NR7C(=O)-、-OC(=O)NR7-或-NR7C(=O)O-；A1和A4各自獨立選自亞苯基、亞噻吩基、亞呋喃基或亞吡啶基，較佳選自亞苯基，所述的亞苯基、亞噻吩基、亞呋喃基或亞吡啶基任選進一步被0、1、2、3或4個任選自F、Cl、Br、CHF2、CF3、氰基、甲基、乙基、甲氧基、乙氧基、-OCHF2、-OCF3、乙炔基、丙炔基、吡咯基、咪唑基或吡唑基的取代基所取代；A2和A3各自獨立選自亞甲基、亞乙基、亞丙基、亞丁基或亞戊基；R7選自H或C1-4烷基，較佳選自H、甲基、乙基或丙基；m、n、p或q各自獨立選自0或1。
在本發明的較佳實施例中，在上述的通式(I)所示的化合物或其立體異 構物、水合物、代謝產物、溶劑化物、藥學上可接受的鹽、共晶體或前藥中，所述化合物包括但不限於：
本發明還提供了一種藥物組合物，所述的藥物組合物含有治療有效劑量的上述通式(I)所述的化合物或其立體異構物、水合物、代謝產物、溶劑化物、藥學上可接受的鹽、共晶體或前藥，以及藥學上可接受的載體、稀釋劑、佐劑、媒介物或賦形劑；所述的組合物還可進一步包括一種或多種其他治療劑；較佳地，其中所述其他治療劑選自PDE4抑製劑、蕈毒鹼受體拮抗劑、皮質類固醇和β-腎上腺素受體激動劑中的一種或多種。
本發明還提供了上述通式(I)所述的化合物或其立體異構物、水合物、代謝產物、溶劑化物、藥學上可接受的鹽、共晶體或前藥，在製備用於治療氣道阻塞性疾病的藥物的用途，較佳地，在製備用於治療哮喘、慢性阻塞性肺疾病或支氣管炎的藥物的用途。
本發明還提供了一種治療氣道阻塞性疾病的方法，所述方法包括給藥上述通式(I)所述的化合物或其立體異構物、水合物、代謝產物、溶劑化物、藥學上可接受的鹽、共晶體或前藥，或上述的藥物組合物。
本發明還提供了一種治療哮喘、慢性阻塞性肺疾病或支氣管炎的方法，所述方法包括給藥上述通式(I)所述的化合物或其立體異構物、水合物、代謝產物、溶劑化物、藥學上可接受的鹽、共晶體或前藥，或上述的藥物組合物。
本發明還提供了一種製備通式(I)所示化合物或其立體異構物的中間體，該中間體選自通式(II)所示的化合物或其立體異構物：
其中： R1選自或； R1a選自H、C2-6烯基、C2-6炔基、C3-10碳環基、3至8員雜環基、C3-10碳環基-C1-4亞烷基或3至8員雜環基-C1-4亞烷基，所述烯基、炔基、亞烷基、碳環基或雜環基任選進一步被0、1、2、3或4個選自F、Cl、Br、I、CH2F、CHF2、CF3、OH、OCH2F、OCHF2、OCF3、NH2、羧基、氰基、硝基、C1-4烷基、C1-4烷氧基、-O(=O)C1-4烷基、-(=O)C1-4烷基、-OC3-6環烷基或C1-4烷硫基的取代基所取代，所述雜環基含有1至3個選自N、O或S的雜原子；R1b選自C2-6烯基、C2-6炔基、C3-10碳環基、3至8員雜環基、C3-10碳環基-C1-4亞烷基或3至8員雜環基-C1-4亞烷基，所述烯基、炔基、亞烷基、碳環基或雜環基任選進一步被0、1、2、3或4個選自F、Cl、Br、I、CH2F、CHF2、CF3、OH、OCH2F、OCHF2、OCF3、NH2、羧基、氰基、硝基、C1-4烷基、C1-4烷氧基、-O(=O)C1-4烷基、-(=O)C1-4烷基、-OC3-6環烷基或C1-4烷硫基的取代基所取代，所述雜環基含有1至3個選自N、O或S的雜原 子；R1c選自H、羥基、氰基、NH2、C1-6烷基、C1-6烷氧基、C1-6烷硫基或-C(=O)NH2，所述NH2、-C(=O)NH2或烷基任選進一步被0至2個選自F、Cl、Br、I、羥基、氰基或C1-4烷基的取代基所取代；R1e和R1f各自獨立選自F、Cl、Br、I、CF3、NH2、OH、羧基、氰基、C1-4烷基、C1-4烷氧基、C1-4烷硫基、-NHC1-4烷基、-N(C1-4烷基)2、-S(=O)-C1-4烷基、-S(=O)2-C1-4烷基或-C(=O)O-C1-4烷基；R9選自H或者氨基保護基；a為0、1、2、3或4；b為0、1、2、3、4或5。
在本發明的較佳實施例中，在上述的通式(II)所示的化合物或其立體異構物中， R1選自、、、、、、 R1較佳選自、、、、或； R9選自H或者氨基保護基，其中所述的氨基保護基較佳為苄基、對甲氧基苄基、第三丁氧基羰基、苄氧基羰基、乙醯基或苯甲醯基。
在本發明的較佳實施例中，上述的通式(II)所示的製備通式(I)所示化合 物或其立體異構物的中間體選自以下化合物之一：
本發明關於一種製備通式(I)所示化合物或其立體異構物的中間體，該中間體選自通式(III)所示的化合物或者其立體異構物：
R1選自或； R1a選自H、C2-6烯基、C2-6炔基、C3-10碳環基、3至8員雜環基、C3-10碳環基-C1-4亞烷基或3至8員雜環基-C1-4亞烷基，所述烯基、炔基、亞烷基、碳環基或雜環基任選進一步被0至4個選自F、Cl、Br、I、CH2F、CHF2、CF3、OH、OCH2F、OCHF2、OCF3、NH2、羧基、氰基、硝基、C1-4烷基、C1-4烷氧基、-O(=O)C1-4烷基、-(=O)C1-4烷基、-OC3-6環烷基或C1-4烷硫基的取代基所取代，所述雜環基含有1至3個選自N、O或S的雜原子；R1b選自C2-6烯基、C2-6炔基、C3-10碳環基、3至8員雜環基、C3-10碳環基-C1-4亞烷基或3至8員雜環基-C1-4亞烷基，所述烯基、炔基、亞烷基、碳環基或雜環基任選進一步被0至4個選自F、Cl、Br、I、CH2F、CHF2、CF3、OH、OCH2F、OCHF2、OCF3、NH2、羧基、氰基、硝基、C1-4烷基、C1-4烷氧基、-O(=O)C1-4烷基、-(=O)C1-4烷基、-OC3-6環烷基或C1-4烷硫基的取代基所取代，所述雜環基含有1至3個選自N、O或S的雜原子； R1c選自H、羥基、氰基、NH2、C1-6烷基、C1-6烷氧基、C1-6烷硫基或-C(=O)NH2，所述NH2、-C(=O)NH2或烷基任選進一步被0至2個選自F、Cl、Br、I、羥基、氰基或C1-4烷基的取代基所取代；R1e和R1f各自獨立選自F、Cl、Br、I、CF3、NH2、OH、羧基、氰基、C1-4烷基、C1-4烷氧基、C1-4烷硫基、-NHC1-4烷基、-N(C1-4烷基)2、-S(=O)-C1-4烷基、-S(=O)2-C1-4烷基或-C(=O)O-C1-4烷基；R2選自鍵結、C1-6亞烷基、C2-6亞烯基或C2-6亞炔基，所述亞烷基、亞烯基或亞炔基任選進一步被0至5個選自F、Cl、Br、I、OH、氰基、C1-4烷基、C1-4烷氧基、苯基或苯基-C1-4亞烷基的取代基所取代；W選自OH、羧基、-C(=O)OC1-4烷基、苯基、-C(=O)NRx-苯基、-ONRxC(=O)-苯基、-C(=O)NRx-C1-4亞烷基-C(=O)OH、-C(=O)NRx-C1-4亞烷基-C(=O)OC1-4烷基、-C(=O)NRx-C1-4亞烷基-C(=O)NRx-苯基、-C(=O)NRx- 亞苯基-C(=O)NRx-苯基、、或 ，所述的苯基任選進一步被0至4個自F、Cl、Br、I、 甲氧基、乙氧基、、甲醯基、羧基、-C(=O)OC1-4烷基、 或的取代基所取代； Rx選自H或C1-4烷基；R3選自鍵結或C1-6亞烷基，所述亞烷基任選進一步被0至5個選自R3a的取代基所取代，R3a選自F、Cl、Br、I、氰基、OH、C1-4烷基、C1-4烷氧基、苯基或苯基-C1-4亞烷基；選擇性的，兩個R3a可以與它們相連的原子一起形成一個3至6員碳環，所述碳環任選進一步被0至5個選自F、Cl、 Br、I、氰基、OH、C1-4烷基或C1-4烷氧基的取代基所取代； B選自、、、、、 其中Q選自-CH=CH-、-CH2CH2-、-O-、-S-、-CH2O-、-OCH2-、-C(CH3)2O-或-OC(CH3)2-； B較佳選自、、、、 a為0、1、2、3或4；b為0、1、2、3、4或5。
在本發明的較佳實施例中，上述的通式(III)所示的製備通式(I)所示化合物或其立體異構物的中間體選自以下化合物之一：
本發明具體實施例化合物中的二三氟乙酸鹽，可將其溶解在極性有機溶劑(如甲醇與二氯甲烷的混合溶劑(v/v=1/90)中，通過加入鹼性試劑(如飽和碳酸氫鈉溶液或飽和碳酸鈉溶液等)調節pH至鹼性，攪拌後用有機溶劑(如二氯甲烷、乙酸乙酯等)萃取，將有機相減壓濃縮後可得到對應化合物的游離鹼形式。
除非有相反的陳述，在說明書和申請專利範圍中使用的術語具有下述含義。
本發明所述基團和化合物中所提及的碳、氫、氧、硫、氮或鹵素均包括它們的同位素，及本發明所述基團和化合物中所提及的碳、氫、氧、硫、氮或鹵素任選進一步被一個或多個它們對應的同位素所替代，其中碳的同 位素包括12C、13C和14C，氫的同位素包括氕(H)、氘(D，又稱為重氫)、氚(T，又稱為超重氫)，氧的同位素包括16O、17O和18O，硫的同位素包括32S、33S、34S和36S，氮的同位素包括14N和15N，氟的同位素19F，氯的同位素包括35Cl和37Cl，溴的同位素包括79Br和81Br。
「烷基」是指直鏈和支鏈的一價飽和烴基，主鏈包括1至10個碳原子，較佳為1至8個碳原子，進一步較佳為1至6個碳原子，更佳為1至4個碳原子的直鏈與支鏈基團，最佳為1至2個碳原子，烷基的實例包括但不限於甲基、乙基、正丙基、異丙基、正丁基、異丁基、第二丁基、第三丁基、正戊基、2-戊基、3-戊基、2-甲基-2-丁基、3-甲基-2-丁基、正己基、正庚基、正辛基、正壬基和正癸基等；所述的烷基可以任選進一步被0、1、2、3、4或5個選自F、Cl、Br、I、=O、-CH2F、-CHF2、-CF3、-OCH2F、-OCHF2、-OCF3、羥基、-SR19、硝基、氰基、異氰基、烷基、羥基烷基、烷氧基、碳環基、雜環基、C2-8烯基、C2-8炔基、-(CH2)a-C(=O)-R19、-(CH2)k-C(=O)-O-R19、-(CH2)k-C(=O)-NR19R19a、-(CH2)k-S(=O)j-R19、-O-C(=O)-O-R19或-NR19R19a的取代基所取代，其中R19和R19a各自獨立選自H、羥基、氨基、羧基、C1-8烷基、C1-8烷氧基、C2-8烯基、C2-8炔基、3至10員碳環基、4至10員雜環基、3至10員碳環基氧基或4至10員雜環基氧基，k選自0、1、2、3、4或5，j選自0、1或2。本文中出現的烷基、k、j、R19和R19a，其定義如上所述。
「亞烷基」是指直鏈和支鏈的二價飽和烴基，包括-(CH2)v-(v為1至10的整數)，亞烷基實施例包括但不限於亞甲基、亞乙基、亞丙基和亞丁基等；所述的亞烷基可以任選進一步被0、1、2、3、4或5個選自F、Cl、Br、I、=O、-CH2F、-CHF2、-CF3、-OCH2F、-OCHF2、-OCF3、羥基、-SR19、硝基、氰基、異氰基、烷基、羥基烷基、烷氧基、碳環基、雜環基、C2-8烯基、C2-8 炔基、-(CH2)a-C(=O)-R19、-(CH2)k-C(=O)-O-R19、-(CH2)k-C(=O)-NR19R19a、-(CH2)k-S(=O)j-R19、-O-C(=O)-O-R19或-NR19R19a的取代基所取代，當亞烷基中的取代基數量大於等於2個時，取代基可以稠合在一起形成環狀結構。本文中出現的亞烷基，其定義如上所述
「烷氧基」是指O-烷基的一價基團，其中，烷基如本文所定義，烷氧基實施例包括但不限於甲氧基、乙氧基、1-丙氧基、2-丙氧基、1-丁氧基、2-甲基-1-丙氧基、2-丁氧基、2-甲基-2-丙氧基、1-戊氧基、2-戊氧基、3-戊氧基、2-甲基-2-丁氧基、3-甲基-2-丁氧基、3-甲基-1-丁氧基和2-甲基-1-丁氧基等。
「烯基」是指直鏈和支鏈的一價不飽和烴基，其具有至少1個，通常有1、2或3個碳碳雙鍵，主鏈包括2至10個碳原子，進一步較佳2至6個碳原子，更佳在主鏈上有2至4個碳原子，烯基實施例包括但不限於乙烯基、烯丙基、1-丙烯基、2-丙烯基、1-丁烯基、2-丁烯基、3-丁烯基、1-戊烯基、2-戊烯基、3-戊烯基、4-戊烯基、1-甲基-1-丁烯基、2-甲基-1-丁烯基、2-甲基-3-丁烯基、1-己烯基、2-己烯基、3-己烯基、4-己烯基、5-己烯基、1-甲基-1-戊烯基、2-甲基-1-戊烯基、1-庚烯基、2-庚烯基、3-庚烯基、4-庚烯基、1-辛烯基、3-辛烯基、1-壬烯基、3-壬烯基、1-癸烯基、4-癸烯基、1,3-丁二烯、1,3-戊二烯、1,4-戊二烯和1,4-己二烯等；所述的烯基可以任選進一步被0、1、2、3、4或5個選自F、Cl、Br、I、=O、-CH2F、-CHF2、-CF3、-OCH2F、-OCHF2、-OCF3、羥基、-SR19、硝基、氰基、異氰基、烷基、羥基烷基、烷氧基、碳環基、雜環基、C2-8烯基、C2-8炔基、-(CH2)a-C(=O)-R19、-(CH2)k-C(=O)-O-R19、-(CH2)k-C(=O)-NR19R19a、-(CH2)k-S(=O)j-R19、-O-C(=O)-O-R19或-NR19R19a的取代基所取代。本文中出現的烯基，其定義如上所述。
「亞烯基」是指二價烯基基團，其中烯基的定義如上所述。
「炔基」是指直鏈和支鏈的一價不飽和烴基，其具有至少1個，通常有1、2或3個碳碳三鍵，主鏈包括2至10個碳原子，進一步較佳2至6個碳原子，更佳在主鏈上有2至4個碳原子，炔基實施例包括但不限於乙炔基、1-丙炔基、2-丙炔基、丁炔基、2-丁炔基、3-丁炔基、1-甲基-2-丙炔基、4-戊炔基、3-戊炔基、1-甲基-2-丁炔基、2-己炔基、3-己炔基、2-庚炔基、3-庚炔基、4-庚炔基、3-辛炔基、3-壬炔基和4-癸炔基等；所述的炔基可以任選進一步被0、1、2、3、4或5個選自F、Cl、Br、I、=O、-CH2F、-CHF2、-CF3、-OCH2F、-OCHF2、-OCF3、羥基、-SR19、硝基、氰基、異氰基、烷基、羥基烷基、烷氧基、碳環基、雜環基、C2-8烯基、C2-8炔基、-(CH2)a-C(=O)-R19、-(CH2)k-C(=O)-O-R19、-(CH2)k-C(=O)-NR19R19a、-(CH2)k-S(=O)j-R19、-O-C(=O)-O-R19或-NR19R19a的取代基所取代。本文中出現的炔基，其定義如上所述。
「亞炔基」是指二價炔基基團，其中炔基的定義如上所述。
「環烷基」是指一價飽和的碳環烴基，通常有3至10個碳原子，非限制性實施例包括環丙基、環丁基、環戊基、環己基或環庚基等。所述的環烷基可以任選進一步被0、1、2、3、4或5個選自F、Cl、Br、I、=O、-CH2F、-CHF2、-CF3、-OCH2F、-OCHF2、-OCF3、羥基、-SR19、硝基、氰基、異氰基、烷基、羥基烷基、烷氧基、碳環基、雜環基、C2-8烯基、C2-8炔基、-(CH2)a-C(=O)-R19、-(CH2)k-C(=O)-O-R19、-(CH2)k-C(=O)-NR19R19a、-(CH2)k-S(=O)j-R19、-O-C(=O)-O-R19或-NR19R19a的取代基所取代。本文中出現的環烷基，其定義如上所述。
「亞環烷基」是指二價環烷基，其中環烷基的定義如上所述。
「芳基」是指具有單環或稠合環的一價芳香族烴基，通常有6至10個 碳原子，非限制性實施例包括苯基、萘-1-基或萘-2-基。所述的芳基可以任選進一步被0、1、2、3、4或5個選自F、Cl、Br、I、=O、-CH2F、-CHF2、-CF3、-OCH2F、-OCHF2、-OCF3、羥基、-SR19、硝基、氰基、異氰基、烷基、羥基烷基、烷氧基、碳環基、雜環基、C2-8烯基、C2-8炔基、-(CH2)a-C(=O)-R19、-(CH2)k-C(=O)-O-R19、-(CH2)k-C(=O)-NR19R19a、-(CH2)k-S(=O)j-R19、-O-C(=O)-O-R19或-NR19R19a的取代基所取代。本文中出現的芳基，其定義如上所述。
「亞芳基」是指二價芳基，其中芳基的定義如上所述。
「雜芳基」是指具有單環或兩個稠合環並且在環中包含至少1個選自N、O或S的雜原子的一價芳基，通常有5至8員的原子組成，非限制性實施例包括吡咯基、咪唑基、噻唑基、噻吩基、呋喃基、吡唑基、異噁唑基、噁唑基、吡啶基或吡嗪基。所述的雜芳基可以任選進一步被0、1、2、3、4或5個選自F、Cl、Br、I、=O、-CH2F、-CHF2、-CF3、-OCH2F、-OCHF2、-OCF3、羥基、-SR19、硝基、氰基、異氰基、烷基、羥基烷基、烷氧基、碳環基、雜環基、C2-8烯基、C2-8炔基、-(CH2)a-C(=O)-R19、-(CH2)k-C(=O)-O-R19、-(CH2)k-C(=O)-NR19R19a、-(CH2)k-S(=O)j-R19、-O-C(=O)-O-R19或-NR19R19a的取代基所取代。本文中出現的雜芳基，其定義如上所述。
「亞雜芳基」是指二價雜芳基，其中雜芳基的定義如上所述。
「碳環基」是指飽和或者不飽和的芳香環或者非芳香環，芳香環或者非芳香環可以是3至10員的單環、4至12員雙環或10至15元三環體系，碳環基可以連接有橋環或者螺環，非限制性實施例包括環丙基、環丁基、環戊基、1-環戊基-1-烯基、1-環戊基-2-烯基、1-環戊基-3-烯基、環己基、1-環己基-2-烯基、1-環己基-3-烯基、環己烯基、環己二烯基、環庚基、環辛基、環壬基、環癸基、環十一烷基、環十二烷基、苯基、萘基、 、、和。所述的碳環基可以任選進一步被0、1、2、3、4或5 個選自F、Cl、Br、I、=O、-CH2F、-CHF2、-CF3、-OCH2F、-OCHF2、-OCF3、羥基、-SR19、硝基、氰基、異氰基、烷基、羥基烷基、烷氧基、碳環基、雜環基、C2-8烯基、C2-8炔基、-(CH2)a-C(=O)-R19、-(CH2)k-C(=O)-O-R19、-(CH2)k-C(=O)-NR19R19a、-(CH2)k-S(=O)j-R19、-O-C(=O)-O-R19或-NR19R19a的取代基所取代。本文中出現的碳環基，其定義如上所述。
「雜環基」是指飽和或不飽和的芳香環或者非芳香環，芳香環或者非芳香環可以是3至10員的單環、4至12員雙環或10至15元三環體系，且包含1至4個選自N、O或S的雜原子，較佳3至8員雜環基，雜環基的環中選擇性取代的N、S可被氧化成各種氧化態。雜環基可以連接在雜原子或者碳原子上，雜環基可以連接有橋環或者螺環，非限制性實施例包括環氧乙基、環氧丙基、氮雜環丙基、氧雜環丁基、氮雜環丁基、硫雜環丁基、1,3-二氧戊環基、1,4-二氧戊環基、1,3-二氧六環基、氮雜環庚基、氧雜環庚基、硫雜環庚基、氧氮雜卓基、二氮雜卓基、硫氮雜卓基、吡啶基、呱啶基、高呱啶基、呋喃基、噻吩基、吡喃基、N-烷基吡咯基、嘧啶基、吡嗪基、噠嗪基、呱嗪基、高呱嗪基、咪唑基、呱啶基、呱叮基、嗎啉基、硫代嗎啉基、噻噁烷基、1,3-二噻基、二氫呋喃基、二氫吡喃基、二噻戊環基、四氫呋喃基、四氫噻吩基、四氫吡喃基、四氫噻喃基、四氫吡咯基、四氫咪唑基、四氫噻唑基、四氫吡喃基、苯並咪唑基、苯並吡啶基、吡咯並吡啶基、苯並二氫呋喃基、2-吡咯啉基、3-吡咯啉基、二氫吲哚基、2H-吡喃基、4H-吡喃基、二氧雜環己基、1,3-二氧戊基、吡唑啉基、二噻烷基、二噻茂烷基、二氫噻吩基、吡唑烷基、咪唑啉基、咪唑烷基、1,2,3,4-四氫異喹啉基、3-氮雜雙環[3.1.0]己基、3-氮雜雙環[4.1.0]庚基、氮雜雙環[2.2.2] 己基、3H-吲哚基喹嗪基、N-吡啶基尿素、1,1-二氧硫代嗎啉基、氮雜二環[3.2.1]辛烷基、氮雜二環[5.2.0]壬烷基、氧雜三環[5.3.1.1]十二烷基、氮雜金剛烷基和氧雜螺[3.3]庚烷基。所述的雜環基可以任選進一步被0、1、2、3、4或5個選自F、Cl、Br、I、=O、-CH2F、-CHF2、-CF3、-OCH2F、-OCHF2、-OCF3、羥基、-SR19、硝基、氰基、異氰基、烷基、羥基烷基、烷氧基、碳環基、雜環基、C2-8烯基、C2-8炔基、-(CH2)a-C(=O)-R19、-(CH2)k-C(=O)-O-R19、-(CH2)k-C(=O)-NR19R19a、-(CH2)k-S(=O)j-R19、-O-C(=O)-O-R19或-NR19R19a的取代基所取代。本文中出現的雜環基，其定義如上所述。
「β-腎上腺素受體結合基團」是指能夠與β-腎上腺素受體結合的基團；諸如參見綜述文章「β-adrenergicreceptorsinComprehensiveMedicinalChemistry，1990，B.E.Main，p187(PergamonPress)」。上述基團也參見例如WO/2005092841、US/20050215542、WO/2005070872、WO/2006023460、WO/2006051373、 WO/2006087315和WO/2006032627。非限制性實施例包括，R4、 R5各自獨立的選自H或C1-4烷基，B選自、、 、、、或；其中Q 選自-CH=CH-、-CH2CH2-、-O-、-S-、-CH2O-、-OCH2-、-C(CH3)2O-或-OC(CH3)2-。
「氨基保護基」是指用於氨基保護的基團，該基團適用於保護氨基，使氨基不進行化學反應，但是在分子的其它部分完成所需化學反應之後該 基團容易除去。在《有機合成中的保護基》(華東理工大學有機化學教研室譯，榮國斌校，華東理工大學出版社，2004；原書為Protective Groups In Organic Synthesis(thirdedition),Theodora W.Green and Peter G.M.Wuts著)中氨基的保護一章對氨基保護基做了詳細介紹。本發明將《有機合成中的保護基》中第494-653頁引用於此作為本發明的一部分。
「氨基保護基」包括但不限於以下基團：苄基、對甲氧基苄基、三苯甲基、第三丁氧基羰基、苄氧基羰基、9-芴基甲氧羰基、2,2,2-三氯乙氧羰基、乙氧羰基、苄氧基羰基、三氟乙醯基、乙醯基或苯甲醯基。
「任選」或「任選地」是指隨後所描述的事件或環境可以但不必須發生，該說明包括該事件或環境發生或不發生的場合。如：「任選被F取代的烷基」指烷基可以但不必須被F取代，說明包括烷基被F取代的情形和烷基不被F取代的情形。
「藥物組合物」表示一種或多種內文所述化合物或其生理學/藥學上可接受的鹽與其他組成成分的混合物，其中其它組分包含生理學/藥學上可接受的載體和賦形劑。
「載體」指的是不會對生物體產生明顯刺激且不會消除所給予化合物的生物活性和特性的載體或稀釋劑。
「賦形劑」指的是加入到藥物組合物中以進一步依賴於化合物給藥的惰性物質。賦形劑的實例包括但不限於碳酸鈣、磷酸鈣、各種糖和不同類型的澱粉、纖維素衍生物(包括微晶纖維素)、明膠、植物油、聚乙二醇類、稀釋劑、成粒劑、潤滑劑、黏合劑、崩解劑等。
「前藥」是指可以在生理條件下或通過溶劑解(hydrolysis)轉化為具有生物活性的本發明化合物的化合物。本發明的前藥通過修飾本發明化合物中的功能基團來製備，該修飾可以通過例行的操作或者在體內被除去，而得 到母體化合物。
「立體異構物」是指由分子中原子在空間上排列方式不同所產生的異構物，包括順反異構物、對映異構物和構象異構物。
「有效劑量」指引起組織、系統或受試者生理或醫學反應的化合物的量，此量是所尋求的，包括在受治療者身上施用時足以預防受治療的疾患或病症的一種或多種症狀發生或使其減輕至某種程度的化合物的量。
「溶劑化物」指本發明化合物或其鹽，它們還包括以分子間非共價力結合的化學計量或非化學計量的溶劑。當溶劑為水時，則為水合物。「IC50」指半數抑制濃度，指達到最大抑制效果一半時的濃度。
以下通過具體實施例詳細說明本發明的實施過程和產生的有益效果，旨在幫助閱讀者更好地理解本發明的實質和特點，不作為對本案可實施範圍的限定。
化合物的結構是通過核磁共振(NMR)或(和)質譜(MS)來確定的。NMR位移(δ)以10-6(ppm)的單位給出。NMR的測定是用(BrukerAvanceIII400和BrukerAvance300)核磁共振儀，測定溶劑為氘代二甲基亞碸(DMSO-d6)，氘代氯仿(CDCl3)，氘代甲醇(CD3OD)，內標為四甲基矽烷(TMS)。
MS的測定使用(Agilent6120B(ESI)和Agilent6120B(APCI))。
HPLC的測定使用安捷倫1260DAD高壓液相層析儀(ZorbaxSB-C18100×4.6mm)。
薄層層析矽膠板使用煙臺黃海HSGF254或青島GF254矽膠板，薄層層析法(TLC)使用的矽膠板採用的規格是0.15mm~0.20mm，薄層層析分離純化產品採用的規格是0.4mm~0.5mm。
管柱層析一般使用煙臺黃海矽膠200~300目矽膠為載體。
本發明的己知的起始原料可以採用或按照本領域已知的方法來合成，或可購買於泰坦科技、安耐吉化學、上海德默、成都科龍化工、韶遠化學科技、百靈威科技等公司。
氮氣氛是指反應瓶連接一個約1L容積的氮氣氣球。
氫氣氛是指反應瓶連接一個約1L容積的氫氣氣球。
氫化反應通常抽真空，充入氫氣，反復操作3次。
若實施例中無特殊說明，反應在氮氣氛下進行。
若實施例中無特殊說明，溶液是指水溶液。
若實施例中無特殊說明，反應的溫度為室溫。
室溫為最適宜的反應溫度，為20℃~30℃。
TBS為第三丁基二甲基矽基。
Boc為第三丁基氧基羰基。
TFA為三氟乙酸。
HATU為2-(7-偶氮苯並三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯(CAS：148893-10-1)。
實施例1：[7-[3-[2-氯-4-[[[(2R)-2-羥基-2-(8-羥基-2-氧代-1H-喹啉-5-基)乙基]氨基]甲基]-5-甲氧基苯胺基]-3-氧代-丙基]-7-氮雜螺[3.5]壬-2-基]-2-羥基-2,2-雙(2-噻吩基)乙酸酯(化合物1)
[7-[3-[2-chloro-4-[[[(2R)-2-hydroxy-2-(8-hydroxy-2-oxo-1H-quinolin-5-yl)ethyl]amino]methyl]-5-methoxy-anilino]-3-oxo-propyl]-7-azaspiro[3.5]nonan-2-yl]2-hydroxy-2,2-bis(2-thienyl)acetate
第一步：2-羥基-7-氮雜螺[3.5]壬烷-7-羧酸第三丁酯(1B)
tert-butyl 2-hydroxy-7-azaspiro[3.5]nonane-7-carboxylate
冰浴下，在2-羰基-7-氮雜螺[3.5]壬烷-7-羧酸第三丁酯(1A)(7g，29.3mmol)的甲醇(100mL)溶液中加入硼氫化鈉(1.1g，29.3mmol)，加完後室溫反應2小時。加水(100mL)，用二氯甲烷(100mL×3)萃取，合併有機相，無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮後得到題述化合物2-羥基-7-氮雜螺[3.5]壬烷-7-羧酸第三丁酯(1B)，白色固體(7g，產率99.2%)。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ 4.39-4.23(m,1H),3.38-3.22(m,4H),2.32-2.22(m,2H),2.04(d,1H),1.74-1.62(m,2H),1.50(m,4H),1.45-1.41(m,9H).
LCMS m/z=264.1[M+23].
第二步：2-[2-羥基-2,2-雙(2-噻吩基)乙醯基]氧基-7-氮雜螺[3.5]壬烷-7- 羧酸第三丁酯(1C)
tert-butyl 2-[2-hydroxy-2,2-bis(2-thienyl)acetyl]oxy-7-azaspiro[3.5]nonane-7-carboxylate
將2-羥基-7-氮雜螺[3.5]壬烷-7-羧酸第三丁酯(1B)(0.482g，2mmol)溶於甲苯(10mL)中，加入氫化鈉(0.024g，1mmol)，攪拌5分鐘，加入2-羥基-2,2-雙(2-噻吩基)乙酸甲酯(0.508g，2mmol)，升溫至155℃反應1小時。加水淬滅反應，依次用乙酸乙酯(20mL×2)萃取，飽和氯化鈉水溶液(20mL×1)洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾，濾液減壓濃縮，殘留物用矽膠管柱層析(沖提劑為乙酸乙酯/石油醚(v：v)=1/100~1/20)純化，得到題述化合物2-[2-羥基-2,2-雙(2-噻吩基)乙醯基]氧基-7-氮雜螺[3.5]壬烷-7-羧酸第三丁酯(1C)，淡黃色固體(0.23g，產率25%)。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ 7.29(dd,2H),7.17(dd,2H),6.98(dd,2H),5.25-5.05(m,1H),4.66(s,1H),3.32(dd,2H),3.29-3.23(m,2H),2.41-2.30(m,2H),1.88(dd,2H),1.54-1.50(m,2H),1.47(d,2H),1.44(s,9H).
LCMS m/z=486.3[M+23].
第三步：7-氮雜螺[3.5]壬烷-2-基2-羥基-2,2-雙(2-噻吩基)乙酸酯(1D)
7-azaspiro[3.5]nonan-2-yl2-hydroxy-2,2-bis(2-thienyl)acetate
將2-[2-羥基-2,2-雙(2-噻吩基)乙醯基]氧基-7-氮雜螺[3.5]壬烷-7-羧酸第 三丁酯(1C)(0.5g，1.08mmol)溶於1,4-二氧六環(10mL)中，通入過量的鹽酸氣體，室溫反應2小時。加入水(20mL)，在0℃用固體碳酸鉀調pH為8至9，用乙酸乙酯(20mL×2)萃取，飽和氯化鈉水溶液(20mL×1)洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾，濾液減壓濃縮，得到題述化合物7-氮雜螺[3.5]壬烷-2-基2-羥基-2,2-雙(2-噻吩基)乙酸酯(1D)，白色固體(0.24g，產率61%)。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ 7.30(dd,2H),7.16(dd,2H),6.98(dd,2H),5.15(t,1H),4.61(s,1H),3.08(s,2H),3.01(s,2H),2.45-2.33(m,2H),1.99-1.87(m,4H),1.87-1.79(m,2H).
LCMS m/z=364.0[M+1].
第四步：[7-[3-(2-氯-4-甲醯基-5-甲氧基苯胺基)-3-氧代-丙基]-7-氮雜螺[3.5]壬-2-基]-2-羥基-2,2-二(2-噻吩基)乙酸酯(1F)
[7-[3-(2-chloro-4-formyl-5-methoxy-anilino)-3-oxo-propyl]-7-azaspiro[3.5]nonan-2-yl]-2-hydroxy-2,2-bis(2-thienyl)acetate
將7-氮雜螺[3.5]壬烷-2-基2-羥基-2,2-雙(2-噻吩基)乙酸酯(1D)(2.6g，7.153mmol)和N-(2-氯-4-甲醯基-5-甲氧基苯基)丙-2-烯醯胺(1E)(參考WO2010119064A1中合成實施例製備得到)(1.886g，7.868mmol)懸浮於2-甲基四氫呋喃(15mL)中，加入三乙胺(1.448g，14.31mmol)，微波100℃反應30分鐘，停止反應。反應液冷卻至室溫後直接減壓濃縮，殘留物用矽膠管柱層析(沖提劑為二氯甲烷/甲醇(v：v)=100/1~20/1)純化，得到題述化合物[7-[3-(2-氯-4-甲醯基-5-甲氧基苯胺基)-3-氧代-丙基]-7-氮雜螺[3.5]壬-2- 基]-2-羥基-2,2-二(2-噻吩基)乙酸酯(1F)，淡黃色固體(2g，產率46%)。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ 10.94(s,1H),10.30(s,1H),8.34(s,1H),7.81(s,1H),7.29(dd,2H),7.18(dd,2H),6.98(dd,2H),5.16(s,1H),4.67(s,1H),3.93(s,3H),3.78(s,1H),2.63(s,4H),2.46-2.31(m,4H),1.90(dd,2H),1.68(d,4H).
LCMS m/z=603.0[M+1].
第五步：[7-[3-[4-[[[(2R)-2-[第三丁基(二甲基)矽基]氧基-2-(8-羥基-2-氧代-1H-喹啉-5-基)乙基]氨基]甲基]-2-氯-5-甲氧基-苯胺基]-3-氧代-丙基]-7-氮雜螺[3.5]壬-2-基]2-羥基-2,2-二(2-噻吩基)乙酸酯(1H)
[7-[3-[4-[[[(2R)-2-[tert-butyl(dimethyl)silyl]oxy-2-(8-hydroxy-2-oxo-1H-quinolin-5-yl)ethyl]amino]methyl]-2-chloro-5-methoxy-anilino]-3-oxo-propyl]-7-azaspiro[3.5]nonan-2-yl]2-hydroxy-2,2-bis(2-thienyl)acetate
將[7-[3-(2-氯-4-甲醯基-5-甲氧基苯胺基)-3-氧代-丙基]-7-氮雜螺[3.5]壬-2-基]-2-羥基-2,2-二(2-噻吩基)乙酸酯(1F)(0.603g，1mmol)和5-[(1R)-2-氨基-1-[第三丁基(二甲基)矽基]氧基甲基]-8-羥基-1H-喹啉-2-酮(1G)(0.401g，1.2mmol)溶於二氯甲烷(5mL)和甲醇(5mL)的混合溶劑中，室溫攪拌30分鐘，加入三乙醯氧基硼氫化鈉(0.636g，3.0mmol)，室溫反應2小時。反應液加入二氯甲烷(20mL)，依次用飽和碳酸氫鈉溶液(20mL×2)和飽和氯化鈉水溶液(20mL×1)洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾，濾液減壓濃縮，殘留物用矽膠管柱層析(沖提劑為二氯甲烷/甲醇(v：v)=100/1~20/1)純化，得到題述化合 物[7-[3-[4-[[[(2R)-2-[第三丁基(二甲基)矽基]氧基-2-(8-羥基-2-氧代-1H-喹啉-5-基)乙基]氨基]甲基]-2-氯-5-甲氧基-苯胺基]-3-氧代-丙基]-7-氮雜螺[3.5]壬-2-基]2-羥基-2,2-二(2-噻吩基)乙酸酯(1H)，淡黃色固體(0.6g，產率70%)。
第六步：[7-[3-[2-氯-4-[[[(2R)-2-羥基-2-(8-羥基-2-氧代-1H-喹啉-5-基)乙基]氨基]甲基]-5-甲氧基苯胺基]-3-氧代-丙基]-7-氮雜螺[3.5]壬-2-基]2-羥基-2,2-雙(2-噻吩基)乙酸酯(化合物1)
[7-[3-[2-chloro-4-[[[(2R)-2-hydroxy-2-(8-hydroxy-2-oxo-1H-quinolin-5-yl)ethyl]amino]methyl]-5-methoxy-anilino]-3-oxo-propyl]-7-azaspiro[3.5]nonan-2-yl]2-hydroxy-2,2-bis(2-thienyl)acetate
將[7-[3-[4-[[[(2R)-2-[第三丁基(二甲基)矽基]氧基-2-(8-羥基-2-氧代-1H-喹啉-5-基)乙基]氨基]甲基]-2-氯-5-甲氧基-苯胺基]-3-氧代-丙基]-7-氮雜螺[3.5]壬-2-基]2-羥基-2,2-二(2-噻吩基)乙酸酯(1H)(0.5g，0.543mmol)溶於二氯甲烷(10mL)中，加入三乙胺三氫氟酸鹽(5mL)，35℃反應6小時。向反應液中加入二氯甲烷(50mL)，用飽和碳酸氫鈉溶液調pH約為9，然後二氯甲烷(30mL×2)萃取，合併有機相，用飽和氯化鈉水溶液(30mL×1)洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾，濾液減壓濃縮，殘留物用矽膠管柱層析(沖提劑為二氯甲烷/甲醇(v：v)=100/1~20/1)純化，得到題述化合物[7-[3-[2-氯-4-[[[(2R)-2-羥基-2-(8-羥基-2-氧代-1H-喹啉-5-基)乙基]氨基]甲基]-5-甲氧基苯胺基]-3-氧代-丙基]-7-氮雜螺[3.5]壬-2-基]2-羥基-2,2-雙(2-噻吩基)乙酸酯(化合物1)(0.13g，產率29.7%)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ 10.30(s,1H),8.12(d,1H),7.75(s,1H),7.47(dd,2H),7.30(s,2H),7.09(dd,2H),7.05(d,1H),6.99(dd,2H),6.91(d,1H),6.46(d,1H),5.11-5.00(m,2H),3.71(s,3H),3.64(s,2H),2.67(dd,2H),2.57(d,2H),2.53(d,2H),2.43-2.14(m,6H),1.76(dd,2H),1.60(s,2H),1.55(s,2H).
LCMS m/z=807.1[M+1].
實施例2：[7-[3-[2-氯-4-[[[(2R)-2-羥基-2-(8-羥基-2-氧代-1H-喹啉-5-基)乙基]氨基]甲基]-5-甲氧基-苯胺基]-3-氧代-丙基]-7-氮雜螺[3.5]壬-2-基]N-(2-苯基苯基)氨基甲酸酯(化合物2)
[7-[3-[2-chloro-4-[[[(2R)-2-hydroxy-2-(8-hydroxy-2-oxo-1H-quinolin-5-yl)ethyl]amino]methyl]-5-methoxy-anilino]-3-oxo-propyl]-7-azaspiro[3.5]nonan-2-yl]N-(2-phenylphenyl)carbamate
第一步：1-異氰酸酯-2-苯基-苯(2B)
1-isocyanato-2-phenyl-benzene
將2-氨基聯苯(2A)(2.4g,14mmol)溶於甲苯(50mL)中，加入三光氣(1.7g,5.7mmol)，120℃反應1小時。反應液冷卻至室溫後，減壓濃縮，得到題述化合物1-異氰酸酯-2-苯基-苯(2B)，褐色油狀(2.7g，產率98%)。
第二步：2-[(2-苯基苯基)氨基甲醯基氧基]-7-氮雜螺[3.5]壬烷-7-氨基羧酸第三丁酯(2C)
tert-butyl 2-[(2-phenylphenyl)carbamoyloxy]-7-azaspiro[3.5]nonane-7-carboxylate
將1-異氰酸酯-2-苯基-苯(2B)(2.7g,13.4mmol)溶於四氫呋喃(50mL)中， 加入2-羥基-7-氮雜螺[3.5]壬烷-7-羧酸第三丁酯(1B)(1.9g,7.87mmol)，加入三乙胺(2.39g,23.6mmol)，70℃反應4小時。反應液冷卻至室溫後，減壓濃縮後，殘留物用矽膠管柱層析分離純化(沖提劑為乙酸乙酯：石油醚(v/v)=0：1~1：9)，得到題述化合物2-[(2-苯基苯基)氨基甲醯基氧基]-7-氮雜螺[3.5]壬烷-7-氨基羧酸第三丁基酯(2C)，黃色油狀(3.4g，產率99%)。
LCMS m/z=459.2[M+23].
第三步：7-氮雜螺[3.5]壬烷-2-基N-(2-苯基苯基)氨基甲酸酯(2D)
7-azaspiro[3.5]nonan-2-ylN-(2-phenylphenyl)carbamate
將2-[(2-苯基苯基)氨基甲醯基氧基]-7-氮雜螺[3.5]壬烷-7-氨基羧酸第三丁基酯(2C)(3.4g,7.8mmol)溶於二氯甲烷(15mL)中，加入三氟乙酸(4.4g,39mmol)，室溫反應3小時。反應液減壓濃縮，之後加入水(20mL)和二氯甲烷(20mL)，加入氨水調節pH至9，萃取。水相用二氯甲烷(20mL×2)萃取，合併有機相。有機相用無水硫酸鈉乾燥，過濾，濾液減壓濃縮後，殘留物用矽膠管柱層析分離純化(乙酸乙酯：石油醚(v/v)=1：4~1：0；甲醇：二氯甲烷(v/v)=1：9)，得到題述化合物7-氮雜螺[3.5]壬烷-2-基N-(2-苯基苯基)氨基甲酸酯(2D)，黃色固體(2.1g，產率80%)。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ 8.11(d,1H),7.5(dd,2H),7.44-7.38(m,1H),7.38-7.31(m,3H),7.20(dd,1H),7.15-7.07(m,1H),6.66(s,1H),5.08-4.90(m,1H),2.81-2.75(m,2H),2.72(t,3H),2.37-2.24(m,2H),1.85-1.74(m,2H),1.60-1.50(m,4H).
LCMS m/z=337.1[M+1].
第四步：[7-[3-(2-氯-4-甲醯基-5-甲氧基-苯胺基)-3-氧代-丙基]-7-氮雜螺[3.5]壬烷-2-基N-(2-苯基苯基)氨基甲酸酯(2E)
[7-[3-(2-chloro-4-formyl-5-methoxy-anilino)-3-oxo-propyl]-7-azaspiro[3.5]nonan-2-yl]N-(2-phenylphenyl)carbamate
將N-(2-氯-4-甲醯基-5-甲氧基苯基)丙烯醯胺(1E)(0.648g,2.71mmol)溶於2-甲基四氫呋喃(10mL)中，加入7-氮雜螺[3.5]壬烷-2-基N-(2-苯基苯基)氨基甲酸酯(2D)(0.700g,2.08mmol)，加入乙酸(0.250g,4.16mmol)，100℃微波反應1小時。反應液減壓濃縮，殘留物中加入二氯甲烷(20mL)，加入飽和碳酸氫鈉水溶液(20mL)，萃取。水相用(20mL×2)萃取，無水硫酸鈉乾燥，過濾，濾液減壓濃縮。殘留物用矽膠管柱層析分離純化(沖提劑為乙酸乙酯：石油醚(v/v)=1：1~1：0)，得到題述化合物[7-[3-(2-氯-4-甲醯基-5-甲氧基-苯胺基)-3-氧代-丙基]-7-氮雜螺[3.5]壬烷-2-基N-(2-苯基苯基)氨基甲酸酯(2E)，白色固體(1.0g，產率83%)。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ 10.30(s,1H),8.33(s,1H),8.11(d,1H),7.81(s,1H),7.50(dd,2H),7.45-7.39(m,1H),7.39-7.33(m,3H),7.21(dd,1H),7.15-7.10(m,1H),6.62(s,1H),5.06-4.95(m,1H),3.93(s,3H),2.83-2.20(m,10H),1.90-1.77(m,2H),1.71(s,4H).
LCMS m/z=576.1[M+1].
第五步：[7-[3-[4-[[[(2R)-2-[第三丁基(二甲基)矽基]氧-2-(8-羥基-2-氧代-1H-喹啉-5-基)乙基]氨基]甲基]-2-氯-5-甲氧基-苯胺基]-3-氧代-丙基]-7-氮雜螺[3.5]壬烷-2-基]N-(2-苯基苯基)氨基甲酸酯(2F)
[7-[3-[4-[[[(2R)-2-[tert-butyl(dimethyl)silyl]oxy-2-(8-hydroxy-2-oxo-1H-quinolin-5-yl)ethyl]amino]methyl]-2-chloro-5-methoxy-anilino]-3-oxo-propyl]-7-azaspiro[3.5]nonan-2-yl]N-(2-phenylphenyl)carbamate
將[7-[3-(2-氯-4-甲醯基-5-甲氧基-苯胺基)-3-氧代-丙基]-7-氮雜螺[3.5]壬烷-2-基N-(2-苯基苯基)氨基甲酸酯(2E)(1.00g,1.74mmol)溶於二氯甲烷(10mL)和甲醇(10mL)中，加入5-[(1R)-2-氨基-1-[第三丁基(二甲基)矽基]氧基甲基]-8-羥基-1H-喹啉-2-酮(1G)(0.581g,1.74mmol)，室溫反應1小時。加入三乙醯氧基硼氫化鈉(1.11g,5.21mmol)，室溫反應2小時。反應液加入二氯甲烷(20mL)，加入飽和碳酸氫鈉溶液(20mL)，萃取。水相用(20mL×1)萃取，無水硫酸鈉乾燥，過濾，濾液濃縮後，殘留物用矽膠管柱層析分離純化(沖提劑為乙酸乙酯：石油醚(v/v)=1：1~1：0，甲醇：二氯甲烷(v/v)=1：99~1：19)，得到題述化合物[7-[3-[4-[[[(2R)-2-[第三丁基(二甲基)矽基]氧-2-(8-羥基-2-氧代-1H-喹啉-5-基)乙基]氨基]甲基]-2-氯-5-甲氧基-苯胺基]-3-氧代-丙基]-7-氮雜螺[3.5]壬烷-2-基]N-(2-苯基苯基)氨基甲酸酯(2F)，黃色固體(0.900g，產率58%)。
LCMS m/z=447.6[(M+2)/2].
第六步：[7-[3-[2-氯-4-[[[(2R)-2-羥基-2-(8-羥基-2-氧代-1H-喹啉-5-基)乙基]氨基]甲基]-5-甲氧基-苯胺基]-3-氧代-丙基]-7-氮雜螺[3.5]壬烷-2-基]N-(2-苯基苯基)氨基甲酸酯(化合物2)
[7-[3-[2-chloro-4-[[[(2R)-2-hydroxy-2-(8-hydroxy-2-oxo-1H-quinolin-5-yl) ethyl]amino]methyl]-5-methoxy-anilino]-3-oxo-propyl]-7-azaspiro[3.5]nonan-2-yl]N-(2-phenylphenyl)carbamate
將[7-[3-[4-[[[(2R)-2-[第三丁基(二甲基)矽基]氧-2-(8-羥基-2-氧代-1H-喹啉-5-基)乙基]氨基]甲基]-2-氯-5-甲氧基-苯胺基]-3氧代-丙基]-7-氮雜螺[3.5]壬烷-2-基]N-(2-苯基苯基)氨基甲酸酯(2F)(0.900g,1.01mmol)溶於二氯甲烷(8mL)中，加入三乙胺三氫氟酸鹽(1.62g,10.1mmol)，室溫反應24小時。反應液加入水(20mL)和二氯甲烷(20mL)，加入3%氫氧化鈉溶液調節pH至12左右，萃取。水相用(20mL×2)萃取，合併有機相。有機相用飽和氯化鈉水溶液(20mL×1)洗滌，用無水硫酸鈉乾燥，過濾，濾液減壓濃縮。殘留物用矽膠管柱層析分離純化(沖提劑為乙酸乙酯：石油醚(v/v)=1：1~1：0，甲醇：二氯甲烷(v/v)=3：97~1：9)，得到題述化合物[7-[3-[2-氯-4-[[[(2R)-2-羥基-2-(8-羥基-2-氧代-1H-喹啉-5-基)乙基]氨基]甲基]-5-甲氧基-苯胺基]-3-氧代-丙基]-7-氮雜螺[3.5]壬烷-2-基]N-(2-苯基苯基)氨基甲酸酯(化合物2)，黃色固體(0.32g，產率40.8%)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ 10.34(s,1H),8.60(s,1H),8.13(d,1H),7.78(s,1H),7.55-7.17(m,11H),7.07(d,1H),6.94(d,1H),6.48(d,1H),5.10(s,1H),4.74(s,1H),3.73(d,5H),2.80-2.66(m,2H),2.64-2.52(m,4H),2.38(s,4H),2.14(s,2H),1.56(s,6H).
LCMS m/z=390.6[(M+2)/2].
實施例3：[7-[2-[[2-氯-4-[[[(2R)-2-羥基-2-(8-羥基-2-氧代-1H-喹啉-5-基)乙基]氨基]甲基]-5-甲氧基-苯基]氨基甲醯基氧基]乙基]-7-氮雜螺環[3.5]壬烷-2-基]2-羥基-2,2-雙(2-噻吩基)乙酸酯(化合物3)
[7-[2-[[2-chloro-4-[[[(2R)-2-hydroxy-2-(8-hydroxy-2-oxo-1H-quinolin-5-yl)ethyl]amino]methyl]-5-methoxy-phenyl]carbamoyloxy]ethyl]-7-azaspiro[3.5]nonan-2-yl]2-hydroxy-2,2-bis(2-thienyl)acetate
第一步：[7-(2-羥基乙基)-7-氮雜螺環[3.5]壬烷-2-基]2-羥基-2,2-雙(2-噻吩基)乙酸酯(3A)
[7-(2-hydroxyethyl)-7-azaspiro[3.5]nonan-2-yl]2-hydroxy-2,2-bis(2-thienyl)acetate
將7-氮雜螺環[3.5]壬烷-2-基2-羥基-2,2-雙(2-噻吩基)乙酸酯(1D)(0.500g,1.38mmol)溶於乙腈(15mL)中，加入溴乙醇(0.516g,4.13mmol)和 二異丙基乙胺(0.533g,4.13mmol)，90℃反應3小時。反應液冷卻至室溫，減壓濃縮後，殘留物用矽膠管柱層析分離純化(沖提劑為乙酸乙酯：石油醚(v/v)=1：1~1：0；甲醇：二氯甲烷(v/v)=3：97)，得到題述化合物[7-(2-羥基乙基)-7-氮雜螺環[3.5]壬烷-2-基]2-羥基-2,2-雙(2-噻吩基)乙酸酯(3A)，黃色固體(0.54g，產率96.3%)。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ 7.30(dd,2H),7.16(dd,2H),6.99(dd,2H),5.19--5.10(m,1H),4.04(s,2H),3.50--2.79(m,6H),2.43(dd,2H),2.01(m,5H),1.61-1.42(m,2H).
LCMS m/z=408.1[M+1]。
第二步：[7-[2-[(2-氯-4-甲醯基-5-甲氧基-苯基)氨基甲醯基氧基]乙基]-7-氮雜螺環[3.5]壬烷-2-基]2-羥基-2,2-雙(2-噻吩基)乙酸酯(3C)
[7-[2-[(2-chloro-4-formyl-5-methoxy-phenyl)carbamoyloxy]ethyl]-7-azaspiro[3.5]nonan-2-yl]2-hydroxy-2,2-bis(2-thienyl)acetate
將4-氨基-5-氯-2-甲氧基-苯甲醛(3B)(1.48g,7.95mmol)溶於甲苯(30mL)中，加入三光氣(1.18g,3.97mmol)，120℃反應2小時。減壓除去溶劑得到反應液1。將[7-(2-羥基乙基)-7-氮雜螺環[3.5]壬烷-2-基]2-羥基-2,2-雙(2-噻吩基)乙酸酯(3A)(0.540g，1.32mmol)溶於四氫呋喃(20mL)中，加入反應液1，加入三乙胺(0.670g，6.62mmol)，70℃反應2小時。反應液冷卻至室溫，減壓濃縮後，殘留物用矽膠管柱層析分離純化(沖提劑為甲醇：二氯甲烷(v/v)=1：99~5：95)，得到題述化合物[7-[2-[(2-氯-4-甲醯基-5-甲氧基-苯基)氨基甲醯基氧基]乙基]-7-氮雜螺環[3.5]壬烷-2-基]2-羥基-2,2-雙(2-噻吩基)乙 酸酯(3C)，黃色固體(0.600g，產率73.1%)。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ 10.29(s,1H),8.01(s,1H),7.82(s,1H),7.29(dd,2H),7.17(dd,2H),6.98(dd,2H),5.19-5.08(m,1H),4.49(s,2H),3.94(s,3H),3.09-2.49(m,6H),2.45-2.32(m,2H),2.01-1.66(m,6H).
LCMS m/z=619.2[M+1]。
第三步：[7-[2-[[4-[[[(2R)-2-[第三丁基(二甲基)矽基]氧基-2-(8-羥基-2-氧代-1H-喹啉-5-基)乙基]氨基]甲基]-2-氯-5-甲氧基-苯基]氨基甲醯基氧基]乙基]-7-氮雜螺環[3.5]壬烷-2-基]2-羥基-2,2-雙(2-噻吩基)乙酸酯(3D)
[7-[2-[[4-[[[(2R)-2-[tert-butyl(dimethyl)silyl]oxy-2-(8-hydroxy-2-oxo-1H-quinolin-5-yl)ethyl]amino]methyl]-2-chloro-5-methoxy-phenyl]carbamoyloxy]ethyl]-7-azaspiro[3.5]nonan-2-yl]2-hydroxy-2,2-bis(2-thienyl)acetate
將[7-[2-[(2-氯-4-甲醯基-5-甲氧基-苯基)氨基甲醯基氧基]乙基]-7-氮雜螺環[3.5]壬烷-2-基]2-羥基-2,2-雙(2-噻吩基)乙酸酯(3C)(0.600g,0.969mmol)溶於二氯甲烷(10mL)和甲醇(10mL)中，加入5-[(1R)-2-氨基-1-[第三丁基(二甲基)矽基]氧基甲基]-8-羥基-1H-喹啉-2-酮(1G)(0.324g,0.969mmol)，室溫反應1小時。加入三乙醯氧基硼氫化鈉(0.619g,2.91mmol)，室溫反應3小時。反應液加入二氯甲烷(20mL)，加入飽和碳酸氫鈉水溶液(20mL)，萃取。水相用二氯甲烷(20mL×1)萃取，無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮後，殘留物用矽膠管柱層析分離純化(沖提劑為乙酸乙酯：石油醚(v/v)=1：1~1：0，甲醇：二氯甲烷(v/v)=1：99~1：19)，得到題述化合物[7-[2-[[4-[[[(2R)-2-[第三丁基(二甲基) 矽基]氧基-2-(8-羥基-2-氧代-1H-喹啉-5-基)乙基]氨基]甲基]-2-氯-5-甲氧基-苯基]氨基甲醯基氧基]乙基]-7-氮雜螺環[3.5]壬烷-2-基]2-羥基-2,2-雙(2-噻吩基)乙酸酯(3D)，黃色固體(0.42g，產率46.2%)。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ 8.19(d,1H),7.78(s,1H),7.28(dd,2H),7.17(dd,3H),7.06(s,1H),7.03-6.92(m,3H),6.84(d,1H),6.59(d,1H),5.22-5.04(m,2H),4.38-4.22(m,2H),3.83-3.71(m,5H),3.00-2.78(m,2H),2.71(t,2H),2.46(d,4H),2.37-2.28(m,2H),1.86(dd,2H),1.63(dd,4H),0.85(s,9H),0.02(s,3H),-0.22(s,3H).
LCMS m/z=469.3[(M+2)/2]。
第四步：[7-[2-[[2-氯-4-[[[(2R)-2-羥基-2-(8-羥基-2-氧代-1H-喹啉-5-基)乙基]氨基]甲基]-5-甲氧基-苯基]氨基甲醯基氧基]乙基]-7-氮雜螺環[3.5]壬烷-2-基]2-羥基-2,2-雙(2-噻吩基)乙酸酯(化合物3)
[7-[2-[[2-chloro-4-[[[(2R)-2-hydroxy-2-(8-hydroxy-2-oxo-1H-quinolin-5-yl)ethyl]amino]methyl]-5-methoxy-phenyl]carbamoyloxy]ethyl]-7-azaspiro[3.5]nonan-2-yl]2-hydroxy-2,2-bis(2-thienyl)acetate
將[7-[2-[[4-[[[(2R)-2-[第三丁基(二甲基)矽基]氧基-2-(8-羥基-2-氧代-1H-喹啉-5-基)乙基]氨基]甲基]-2-氯-5-甲氧基-苯基]氨基甲醯基氧基]乙基]-7-氮雜螺環[3.5]壬烷-2-基]2-羥基-2,2-雙(2-噻吩基)乙酸酯(3D)(0.420g,0.448mmol)溶於四氫呋喃(8mL)中，加入三乙胺三氫氟酸鹽(0.722g,4.48mmol)，室溫反應24小時。反應液加入二氯甲烷(50mL)，加入飽 和碳酸氫鈉溶液調節pH至8左右，萃取。水相用二氯甲烷(50mL×1)萃取，合併有機相。有機相用飽和氯化鈉水溶液(20mL×1)洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾，濾液減壓濃縮。殘留物用矽膠管柱層析分離純化(沖提劑為乙酸乙酯/石油醚(v/v)=1：1~1：0，甲醇/二氯甲烷(v/v)=3：97~5：95)，得到題述化合物[7-[2-[[2-氯-4-[[[(2R)-2-羥基-2-(8-羥基-2-氧代-1H-喹啉-5-基)乙基]氨基]甲基]-5-甲氧基-苯基]氨基甲醯基氧基]乙基]-7-氮雜螺環[3.5]壬烷-2-基]2-羥基-2,2-雙(2-噻吩基)乙酸酯(化合物3)，黃色固體(0.13g，產率35.2%)。
1H NMR(400MHz,CD3OD)δ 8.25(d,1H),7.75(s,1H),7.39(m,3H),7.25(d,1H),7.16(dd,2H),7.05-6.95(m,3H),6.64(d,1H),5.34(t,1H),5.18-5.06(m,1H),4.37(t,2H),4.09(s,2H),3.85(d,3H),3.10(d,2H),2.84(t,2H),2.62(d,4H),2.42-2.29(m,2H),1.88(dd,2H),1.73(t,2H),1.66(t,2H).
LCMS m/z=412.3[(M+2)/2]。
實施例4：[7-[3-[2-氯-4-[[[(2R)-2-羥基-2-(4-羥基-2-氧代-3H-1,3-苯並噻唑-7-基)乙基]氨基]甲基]-5-甲氧基-苯胺基]-3-氧代-丙基]-7-氮雜螺環[3.5]壬烷-2-基]2-羥基-2,2-雙(2-噻吩基)乙酸酯(化合物4)
[7-[3-[2-chloro-4-[[[(2R)-2-hydroxy-2-(4-hydroxy-2-oxo-3H-1,3-benzothiazol-7-yl)ethyl]amino]methyl]-5-methoxy-anilino]-3-oxo-propyl]-7-azaspiro[3.5]nonan-2-yl]2-hydroxy-2,2-bis(2-thienyl)acetate
將[7-[3-(2-氯-4-甲醯基-5-甲氧基-苯胺基)-3-氧代丙基]-7-氮雜螺環[3.5]壬烷-2-基]2-羥基-2,2-雙(2-噻吩基)乙酸酯(1F)(0.420g,0.696mmol)溶於二氯甲烷(10mL)和甲醇(10mL)中，加入7-[(1R)-2-氨基-1-羥基-乙基]-4-羥基-3H-1,3-苯並噻唑-2-酮(4A，參考Bioorganic&MedicinalChemistryLetters,21(15),4612-4616；2011製備得到)(0.173g,0.766mmol)，室溫反應1小時。加入三乙醯氧基硼氫化鈉(0.445g,2.09mmol)，室溫反應3小時。反應液加入二氯甲烷(20mL)和飽和碳酸氫鈉水溶液(20mL)，萃取。水相用二氯甲烷(20mL×1)萃取，合併有機相，有機相用無水硫酸鈉乾燥，過濾，濾液減壓濃縮。殘留物用矽膠管柱層析分離純化(沖提劑為乙酸乙酯：石油醚(v/v)=1：1~1：0，甲醇：二氯甲烷(v/v)=1：99~1：19)，得到題述化合物[7-[3-[2-氯-4-[[[(2R)-2-羥基-2-(4-羥基-2-氧代-3H-1,3-苯並噻唑-7-基)乙基]氨基]甲基]-5-甲氧基-苯胺基]-3-氧代-丙基]-7-氮雜螺環[3.5]壬烷-2-基]2-羥基-2,2-雙(2-噻吩基)乙酸酯(化合物4)，黃色固體(0.10g，產率17.7%)。
1H NMR(400MHz,CD3OD)δ 7.79(s,1H),7.31(dd,2H),7.27(s,1H),7.09(dd,2H),6.93(dd,2H),6.87(d,1H),6.68(d,1H),5.11-4.99(m,1H),4.75(s,1H),3.84(s,2H),3.74(s,3H),2.92-2.77(m,2H),2.68(t,2H),2.59(t,2H),2.45(d,4H),2.33-2.22(m,2H),1.81(dd,2H),1.66(t,2H),1.59(s,2H).
LCMS m/z=407.3[(M+2)/2]。
實施例5：[7-[3-[[5-[4-[[[(2R)-2-羥基-2-(8-羥基-2-氧代-1H-喹啉-5-基) 乙基]氨基]甲基]苯胺基]-5-氧代戊基]-甲基-氨基]-3-氧代-丙基]-7-氮雜螺[3.5]壬烷-2-基]2-羥基-2,2-雙(2-噻吩基)乙酸酯；二三氟乙酸鹽(化合物5)
[7-[3-[[5-[4-[[[(2R)-2-hydroxy-2-(8-hydroxy-2-oxo-1H-quinolin-5-yl)ethyl]amino]methyl]anilino]-5-oxo-pentyl]-methyl-amino]-3-oxo-propyl]-7-azaspiro[3.5]nonan-2-yl]2-hydroxy-2,2-bis(2-thienyl)acetate；ditrifluoroacetic acid
第一步：5-(甲基氨基)戊酸(5B)
5-(methylamino)pentanoicacid
將1-甲基-2-呱啶酮(5A)(7.0g,61.9mmol)加入到氫氧化鈉(2.7g,68.0mmol)的水溶液(17mL)中，升溫至110℃反應2天。冷卻到0℃，用濃鹽酸調節pH約 為2，然後直接減壓濃縮，得到題述化合物5-(甲基氨基)戊酸(5B)，白色固體(8.1g，產率100%)。
LCMS m/z=132.1[M+1]。
第二步：5-(甲基氨基)戊酸甲酯(5C)
Methyl 5-(methylamino)pentanoate
將5-(甲基氨基)戊酸(5B)(8.0g,61.0mmol)溶於無水甲醇(100mL)中，冷卻至0℃，加入氯化亞碸(7.3g,61.0mmol)，升溫到50℃，攪拌2小時。直接減壓濃縮，然後用二氯甲烷(150mL×3)連續濃縮，除去產品中所含的甲醇，得到題述產物5-(甲基氨基)戊酸甲酯(5C)，灰白固體(8.8g，產率100%)。
LCMS m/z=146.2[M+1]。
第三步：5-[甲基(丙-2-烯醯基)氨基]戊酸甲酯(5D)
Methyl 5-[methyl(prop-2-enoyl)amino]pentanoate
將5-(甲基氨基)戊酸甲酯(5C)(5.9g,40.0mmol)和丙烯酸(1.44g,20.0mmol)溶於二氯甲烷(25mL)中，加入2-(7-偶氮苯並三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯(HATU,CAS：148893-10-1)(11.4g,30mmol)，冷卻到0℃，滴加N,N-二異丙基乙胺(20.7g,160mmol)，升至室溫下反應3小時，向反應液加入二氯甲烷(120mL)和水(100mL)，萃取分層，再用飽和氯化鈉水溶液(100mL×1)洗滌，用無水硫酸鈉乾燥，過濾，濾液減壓濃縮後，殘留物矽膠管柱層析純化(沖提劑為乙酸乙酯：石油醚(v/v)=0：1~1：3)，得到題述化合物5-[甲基(丙-2-烯醯基)氨基]戊酸甲酯(5D)，褐色液體(1.8g，產率45%)。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ 6.56(m,1H),6.31(d,1H),5.67(dd,1H), 3.67(s,3H),3.49-3.32(m,2H),3.09-2.96(m,3H),2.35(t,2H),1.62(d,4H).
LCMS m/z=200.1[M+1]。
第四步：5-[甲基(丙-2-烯醯基)氨基]戊酸(5E)
5-[methyl(prop-2-enoyl)amino]pentanoicacid
將5-[甲基(丙-2-烯醯基)氨基]戊酸甲酯(5D)(1.8g,9.0mmol)溶於四氫呋喃(20mL)中，加入氫氧化鋰(0.32g,14mmol)的水溶液(40mL)，室溫下反應3小時，冷卻至0℃，調節pH約為3，加入二氯甲烷(50mL×3)萃取，合併有機層，用無水硫酸鈉，乾燥，過濾，濾液減壓濃縮，得到題述化合物5-[甲基(丙-2-烯醯基)氨基]戊酸(5E)，褐色油狀(1.48g，產率88%)。
LCMS m/z=186.1[M+1]。
第五步：5-[3-[2-[2-羥基-2,2-雙(2-噻吩基)乙醯基]氧基-7-氮雜螺[3.5]壬-7-基]丙醯基-甲基-氨基]戊酸(5F)
5-[3-[2-[2-hydroxy-2,2-bis(2-thienyl)acetyl]oxy-7-azaspiro[3.5]nonan-7-yl]propanoyl-methyl-amino]pentanoicacid
將5-[甲基(丙-2-烯醯基)氨基]戊酸(5E)(0.76g,4.13mmol)和7-氮雜螺[3.5]壬烷-2-基2-羥基-2,2-雙(2-噻吩基)乙酸酯(1D)(1.00g,2.75mmol)溶於2-甲基四氫呋喃(20mL)中，加入N,N-二異丙基乙胺(0.57g,5.5mmol)，置於微波反應器中，升溫至100℃反應1小時，冷卻至室溫後，減壓濃縮，殘留物用矽膠管柱層析純化(沖提劑為二氯甲烷/甲醇(v：v)=1/0~9/1)，得到題述化合物 5-[3-[2-[2-羥基-2,2-雙(2-噻吩基)乙醯基]氧基-7-氮雜螺[3.5]壬-7-基]丙醯基-甲基-氨基]戊酸(5F)，淺黃固體(1.1g，產率73%)。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ 7.29(dd,2H),7.16(dd,2H),7.02-6.92(m,2H),5.13(dd,1H),3.34(m,2H),3.06(m,2H),3.00-2.89(m,3H),2.80(m,6H),2.47-2.23(m,4H),1.97-1.71(m,6H),1.62(m,4H).
LCMS m/z=601.2[M+1]。
第六步：[7-[3-[[5-[4-(1,3-二氧雜環戊-2-基)苯胺]-5-氧代-戊基]-甲基-氨基]-3-氧代-丙基]-7-氮雜螺[3.5]壬烷-2-基]2-羥基-2,2-二(2-噻吩基)乙酸酯(5H)
[7-[3-[[5-[4-(1,3-dioxolan-2-yl)anilino]-5-oxo-pentyl]-methyl-amino]-3-oxo-propyl]-7-azaspiro[3.5]nonan-2-yl]2-hydroxy-2,2-bis(2-thienyl)acetate
將5-[3-[2-[2-羥基-2,2-雙(2-噻吩基)乙醯基]氧基-7-氮雜螺[3.5]壬-7-基]丙醯基-甲基-氨基]戊酸(5F)(1.0g,1.82mmol)和4-(1,3-二氧戊環-2-基)苯胺(5G)(0.60g,3.64mmol)溶於二氯甲烷(25mL)中，冷卻到0℃，加入2-(7-偶氮苯並三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯(HATU,CAS：148893-10-1)(1.04g,2.73mmol)，滴加N,N-二異丙基乙胺(0.47g,3.65mmol)，室溫下反應3小時。向反應液加入二氯甲烷(120mL)和水(100mL)，萃取分層，有機相再用飽和氯化鈉水溶液(100mL×1)洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾，濾液減壓濃縮，殘留物用矽膠管柱層析純化(沖提劑為二氯甲烷/甲醇(v：v)=1/0~9/1)，得到題述化合物[7-[3-[[5-[4-(1,3-二氧雜環戊 -2-基)苯胺]-5-氧代-戊基]-甲基-氨基]-3-氧代-丙基]-7-氮雜螺[3.5]壬烷-2-基]2-羥基-2,2-二(2-噻吩基)乙酸酯(5H)，黃色固體(1.3g，產率100%)。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ 7.62(d,2H),7.41(t,2H),7.29(m,2H),7.17(m,2H),6.98(dd,2H),5.76(s,1H),5.12(m,1H),4.10(m,2H),4.02(m,2H),3.39(m,2H),2.97(s,3H),2.68(m,2H),2.54(m,2H),2.36(m,8H),1.85(m,2H),1.71(m,4H),1.57(m,4H).
LCMS m/z=696.3[M+1]。
第七步：[7-[3-[[5-(4-甲醯苯胺)-5-氧代-戊基]-甲基-氨基]-3-氧代-丙基]-7-氮雜螺[3.5]壬烷-2-基]2-羥基-2,2-雙(2-噻吩基)乙酸酯(5I)
[7-[3-[[5-(4-formylanilino)-5-oxo-pentyl]-methyl-amino]-3-oxo-propyl]-7-azaspiro[3.5]nonan-2-yl]2-hydroxy-2,2-bis(2-thienyl)acetate
將[7-[3-[[5-[4-(1,3-二氧雜環戊-2-基)苯胺]-5-氧代-戊基]-甲基-氨基]-3-氧代-丙基]-7-氮雜螺[3.5]壬烷-2-基]2-羥基-2,2-二(2-噻吩基)乙酸酯(5H)(1.1g,1.6mmol)溶於乙腈(40mL)中，滴加3M鹽酸水溶液(20mL)，室溫反應1小時。向反應液加入二氯甲烷(100mL)和水(100mL)，萃取分層，有機相再用飽和氯化鈉水溶液(100mL×1)洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾，濾液減壓濃縮，得到題述化合物[7-[3-[[5-(4-甲醯苯胺)-5-氧代-戊基]-甲基-氨基]-3-氧代-丙基]-7-氮雜螺[3.5]壬烷-2-基]2-羥基-2,2-雙(2-噻吩基)乙酸酯(5I)，黃色固體(0.95g，產率92%)。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ 9.89(s,1H),7.94(dd,2H),7.81(dd,2H),7.30(m,2H),7.15(m,2H),6.98(m,2H),5.13(m,1H),3.29(m,4H),3.09(t,2H),2.98(m,3H),2.59(m,4H),2.32(m,4H),1.98(m,2H),1.75(m,8H).
LCMS m/z=652.2[M+1]。
第八步：[7-[3-[[5-[4-[[[(2R)-2-[第三丁基(二甲基)矽基]氧基-2-(8-羥基-2-氧代-1H-喹啉-5-基)乙基]氨基]甲基]苯胺基]-5-氧代-戊基]-甲基-氨基]-3氧代-丙基]-7-氮雜螺[3.5]壬烷-2-基]2-羥基-2,2-雙(2-噻吩基)乙酸酯(5K)
[7-[3-[[5-[4-[[[(2R)-2-[tert-butyl(dimethyl)silyl]oxy-2-(8-hydroxy-2-oxo-1H-quinolin-5-yl)ethyl]amino]methyl]anilino]-5-oxo-pentyl]-methyl-amino]-3-oxo-propyl]-7-azaspiro[3.5]nonan-2-yl]2-hydroxy-2,2-bis(2-thienyl)acetate
將[7-[3-[[5-(4-甲醯苯胺)-5-氧代-戊基]-甲基-氨基]-3-氧代-丙基]-7-氮雜螺[3.5]壬烷-2-基]2-羥基-2,2-雙(2-噻吩基)乙酸酯(5I)(0.25g,0.38mmol)和5-[(1R)-2-氨基-1-[第三丁基(二甲基)矽基]氧基甲基]-8-羥基-1H-喹啉-2-酮(1G)(0.19g,0.58mmol)溶於異丙醇/二氯甲烷(v/v=1：1,10mL)混合溶劑中，室溫攪拌1小時，然後加入三乙醯氧基硼氫化鈉(0.24g,1.14mmol)，再攪拌2小時。向反應液加入二氯甲烷(150mL)和水(50mL)，萃取分層，有機相再用飽和氯化鈉水溶液(50mL×1)洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾，濾液減壓濃縮，殘留物用矽膠管柱層析純化(沖提劑為二氯甲烷/甲醇(v：v)=1/0~9/1)，得到題述化合物[7-[3-[[5-[4-[[[(2R)-2-[第三丁基(二甲基)矽基]氧基-2-(8-羥基-2-氧代-1H-喹啉-5-基)乙基]氨基]甲基]苯胺基]-5-氧代-戊基]-甲基-氨基]-3氧代-丙基]-7-氮雜螺[3.5]壬烷-2-基]2-羥基-2,2-雙(2-噻吩基)乙酸酯酯(5K)，淺黃 固體(0.17g，產率46%)。
第九步：[7-[3-[[5-[4-[[[(2R)-2-羥基-2-(8-羥基-2-氧代-1H-喹啉-5-基)乙基]氨基]甲基]苯胺基]-5-氧代戊基]-甲基-氨基]-3-氧代-丙基]-7-氮雜螺[3.5]壬烷-2-基]2-羥基-2,2-雙(2-噻吩基)乙酸酯；二三氟乙酸鹽(化合物5)
[7-[3-[[5-[4-[[[(2R)-2-hydroxy-2-(8-hydroxy-2-oxo-1H-quinolin-5-yl)ethyl]amino]methyl]anilino]-5-oxo-pentyl]-methyl-amino]-3-oxo-propyl]-7-azaspiro[3.5]nonan-2-yl]2-hydroxy-2,2-bis(2-thienyl)acetate；ditrifluoroacetic acid salt
將[7-[3-[[5-[4-[[[(2R)-2-[第三丁基(二甲基)矽基]氧基-2-(8-羥基-2-氧代-1H-喹啉-5-基)乙基]氨基]甲基]苯胺基]-5-氧代-戊基]-甲基-氨基]-3氧代-丙基]-7-氮雜螺[3.5]壬烷-2-基]2-羥基-2,2-雙(2-噻吩基)乙酸酯(5K)(0.17g,0.18mmol)溶於二氯甲烷(10mL)中，加入三乙胺三氫氟酸鹽(0.14g,0.88mmol)，室溫反應過夜，反應液用飽和碳酸氫鈉調鹼，用8%甲醇/二氯甲烷(v/v=8：92,100mL)萃取，有機相用飽和氯化鈉水溶液(50mL×1)洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾，濾液減壓濃縮，殘留物用液相製備管柱分離純化(液相製備條件：C18逆向層析管柱，流動相為含0.05%TFA的去離子水(A)，含0.05%TFA的乙腈(B)，梯度沖提A：B=10%~55%，沖提時間39min，流速1.0mL/min，柱溫：40℃)，得到題述化合物[7-[3-[[5-[4-[[[(2R)-2-羥基-2-(8-羥基-2-氧代-1H-喹啉-5-基)乙基]氨基]甲基]苯胺基]-5-氧代戊基]-甲基-氨基]-3-氧代-丙基]-7-氮雜螺[3.5]壬烷-2-基]2-羥基-2,2-雙(2-噻吩基)乙酸酯；二三氟乙酸鹽(化合物5)，淺黃固體(0.045g，產率24%)。
1H NMR(400MHz,CD3OD)δ 8.06(dd,1H),7.54(dd,2H),7.32(dd,2H), 7.25(dd,2H),7.13(d,1H),7.01(m,2H),6.87(m,3H),6.49(dd,1H),5.25(m,1H),4.99(dt,1H),4.13(d,2H),3.30(m,6H),3.07(d,2H),2.82(m,7H),2.32(m,3H),2.21(s,1H),1.82(dd,3H),1.70(m,3H),1.55(m,4H).
LCMS m/z=428.9[(M+2)/2]。
實施例6：[7-[3-[[5-[4-[[[(2R)-2-羥基-2-(5-羥基-3-氧代-4H-1,4-苯並噁嗪-8-基)乙基]氨基]甲基]苯胺基]-5-氧代戊基]-甲基-氨基]-3-氧代-丙基]-7-氮雜螺[3.5]壬烷-2-基]2-羥基-2,2-雙(2-噻吩基)乙酸酯；二三氟乙酸鹽(化合物6)
[7-[3-[[5-[4-[[[(2R)-2-hydroxy-2-(5-hydroxy-3-oxo-4H-1,4-benzoxazin-8-yl)ethyl]amino]methyl]anilino]-5-oxo-pentyl]-methyl-amino]-3-oxo-propyl]-7-azaspiro[3.5]nonan-2-yl]2-hydroxy-2,2-bis(2-thienyl)acetate；ditrifluoroacetic acid salt
第一步：[7-[3-[[5-[4-[[[(2R)-2-[第三丁基(二甲基)矽基]氧基-2-(5-羥基-3-氧代-4H-1,4-苯並噁嗪-8-基)乙基]氨基]甲基]苯胺基]-5-氧代戊基]-甲基-氨 基]-3-氧代-丙基]-7-氮雜螺[3.5]壬烷-2-基]2-羥基-2,2-雙(2-噻吩基)乙酸酯(6B)
[7-[3-[[5-[4-[[[(2R)-2-[tert-butyl(dimethyl)silyl]oxy-2-(5-hydroxy-3-oxo-4H-1,4-benzoxazin-8-yl)ethyl]amino]methyl]anilino]-5-oxo-pentyl]-methyl-amino]-3-oxo-propyl]-7-azaspiro[3.5]nonan-2-yl]2-hydroxy-2,2-bis(2-thienyl)acetate
將[7-[3-[[5-(4-甲醯苯胺)-5-氧代-戊基]-甲基-氨基]-3-氧代-丙基]-7-氮雜螺[3.5]壬烷-2-基]2-羥基-2,2-雙(2-噻吩基)乙酸酯(5I)(0.2g,0.3mmol)和8-[(1R)-2-氨基-1-[第三丁基(二甲基)矽基]氧基乙基]-5-羥基-4H-1,4-苯並噁嗪-3-酮(6A)(參考WO2008149110A1中間體65的合成方法製備)(0.2g,0.5mmol)溶於溶於異丙醇/二氯甲烷(v/v=1：1,10mL)混合溶劑中，室溫攪拌1小時，然後加入三乙醯氧基硼氫化鈉(0.19g,0.9mmol)，再攪拌2小時。向反應液加入二氯甲烷(150mL)和水(50mL)，萃取分層，有機相再用飽和氯化鈉水溶液(50mL×1)洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾，濾液減壓濃縮，得到題述化合物[7-[3-[[5-[4-[[[(2R)-2-[第三丁基(二甲基)矽基]氧基-2-(5-羥基-3-氧代-4H-1,4-苯並噁嗪-8-基)乙基]氨基]甲基]苯胺基]-5-氧代戊基]-甲基-氨基]-3-氧代-丙基]-7-氮雜螺[3.5]壬烷-2-基]2-羥基-2,2-雙(2-噻吩基)乙酸酯(6B)，淺黃固體(0.2g，產率70%)。
LCMS m/z=487.9[(M+2)/2]。
第二步：[7-[3-[[5-[4-[[[(2R)-2-羥基-2-(5-羥基-3-氧代-4H-1,4-苯並噁嗪-8-基)乙基]氨基]甲基]苯胺基]-5-氧代戊基]-甲基-氨基]-3-氧代-丙基]-7-氮雜螺[3.5]壬烷-2-基]2-羥基-2,2-雙(2-噻吩基)乙酸酯；二三氟乙酸鹽(化合物6)
[7-[3-[[5-[4-[[[(2R)-2-hydroxy-2-(5-hydroxy-3-oxo-4H-1,4-benzoxazin-8-yl)ethyl]amino]methyl]anilino]-5-oxo-pentyl]-methyl-amino]-3-oxo-propyl]-7-azaspiro[3.5]nonan-2-yl]2-hydroxy-2,2-bis(2-thienyl)acetate；ditrifluoroacetic acid salt
將[7-[3-[[5-[4-[[[(2R)-2-[第三丁基(二甲基)矽基]氧基-2-(5-羥基-3-氧代-4H-1,4-苯並噁嗪-8-基)乙基]氨基]甲基]苯胺基]-5-氧代戊基]-甲基-氨基]-3-氧代-丙基]-7-氮雜螺[3.5]壬烷-2-基]2-羥基-2,2-雙(2-噻吩基)乙酸酯(6B)(0.2g,0.2mmol)溶於四氫呋喃(5mL)中，加入三乙胺三氫氟酸鹽(0.2g,1.0mmol)，室溫反應過夜，反應液用飽和碳酸氫鈉調鹼，過濾，所得固體用8%甲醇/二氯甲烷(v/v=8：92,50mL)溶解，飽和氯化鈉水溶液(50mL×1)洗滌，用無水硫酸鈉乾燥，過濾，濾液減壓濃縮，殘留物用液相製備管柱分離純化(液相製備條件：C18逆向層析管柱，流動相為含0.05%TFA的去離子水(A)，含0.05%TFA的乙腈(B)，梯度沖提A：B=10%~55%，沖提時間39min，流速1.0mL/min，柱溫：40℃)，得到題述化合物[7-[3-[[5-[4-[[[(2R)-2-羥基-2-(5-羥基-3-氧代-4H-1,4-苯並噁嗪-8-基)乙基]氨基]甲基]苯胺基]-5-氧代戊基]-甲基-氨基]-3-氧代-丙基]-7-氮雜螺[3.5]壬烷-2-基]2-羥基-2,2-雙(2-噻吩基)乙酸酯；二三氟乙酸鹽(化合物6)，白色固體(0.104g，產率50%)。
1H NMR(400MHz,CD3OD)δ 7.68(dd,2H),7.45(dd,2H),7.40(dd,2H),7.16(t,2H),7.01(m,3H),6.58(d,1H),5.16(m,2H),4.49(m,2H),4.23(m,2H),3.44(m,6H),3.17(dd,1H),2.98(m,8H),2.47(m,3H),2.37(m,1H),1.98(m,3H),1.84(d,3H),1.70(m,4H).
LCMS m/z=430.8[(M+2)/2]。
化合物6的游離鹼：[7-[3-[[5-[4-[[[(2R)-2-羥基-2-(5-羥基-3-氧代-4H-1,4-苯並噁嗪-8-基)乙基]氨基]甲基]苯胺基]-5-氧代戊基]-甲基-氨基]-3-氧代-丙基]-7-氮雜螺[3.5]壬烷-2-基]2-羥基-2,2-雙(2-噻吩基)乙酸酯
[7-[3-[[5-[4-[[[(2R)-2-hydroxy-2-(5-hydroxy-3-oxo-4H-1,4-benzoxazin-8-yl)ethyl]amino]methyl]anilino]-5-oxo-pentyl]-methyl-amino]-3-oxo-propyl]-7-azaspiro[3.5]nonan-2-yl]2-hydroxy-2,2-bis(2-thienyl)acetate
將[7-[3-[[5-[4-[[[(2R)-2-[第三丁基(二甲基)矽基]氧基-2-(5-羥基-3-氧代-4H-1,4-苯並噁嗪-8-基)乙基]氨基]甲基]苯胺基]-5-氧代戊基]-甲基-氨基]-3-氧代-丙基]-7-氮雜螺[3.5]壬烷-2-基]2-羥基-2,2-雙(2-噻吩基)乙酸酯(6B)(40.0g,41.1mmol)溶於四氫呋喃(500mL)中，加入三乙胺三氫氟酸鹽(33.1g,205mmol)，室溫反應過夜，反應液用飽和碳酸氫鈉調鹼，過濾，所得固體用8%甲醇/二氯甲烷(v/v=8：92,50mL)溶解，飽和氯化鈉水溶液(250mL×1)洗滌，用無水硫酸鈉乾燥，過濾，濾液減壓濃縮，殘留物用液相製備管柱分離純化(液相製備條件：C18逆向層析管柱，流動相為含0.05%TFA的去離子水(A)，含0.05%TFA的乙腈(B)，梯度沖提A：B=10%~55%，沖提時間39min，流速1.0mL/min，柱溫：40℃)。將製備所得溶液減壓濃縮除去溶劑，所得固體用8%甲醇/二氯甲烷(v/v=8：92，500mL)溶解，加入飽和碳酸氫鈉水溶液(250mL)，分液，水相用8%(v/v)甲醇/二氯甲烷(250mL×2)萃取，合併有機相，用無水硫酸鈉乾燥，過濾，濾液減壓濃縮後得到題述化合物[7-[3-[[5-[4-[[[(2R)-2-羥基-2-(5-羥基-3-氧代-4H-1,4-苯並噁嗪-8-基) 乙基]氨基]甲基]苯胺基]-5-氧代戊基]-甲基-氨基]-3-氧代-丙基]-7-氮雜螺[3.5]壬烷-2-基]2-羥基-2,2-雙(2-噻吩基)乙酸酯(化合物6的游離鹼)，白色固體(18.0g，產率51.0%)。
1H NMR(400MHz,CD3OD)δ 7.44(d,1H),7.42(d,1H),7.26(m,2H),7.18(s,1H),7.16(s,1H),7.03(m,2H),6.89-6.85(m,2H),6.82(d,1H),6.41(d,1H),5.01-4.91(m,2H),4.39-4.35(m,2H),3.74-3.63(m,2H),3.31(m,2H),3.25(s,1H),2.94(s,2H),2.73-2.59(m,2H),2.58-2.49(m,2H),2.49-2.43(m,2H),2.37-2.11(m,8H),1.70(m,2H),1.51(m,8H).
LCMS m/z=430.9[(M+2)/2]。
實施例7：[7-[3-[[5-[4-[[[(2R)-2-羥基-2-(4-羥基-2-氧代-3H-1,3-苯並噻唑-7-基)乙基]氨基]甲基]苯胺基]-5-氧代戊基]-甲基-氨基]-3-氧代-丙基]-7-氮雜螺[3.5]壬烷-2-基]-2-羥基-2,2-二(2-噻吩基)乙酸酯；二三氟乙酸鹽(化合物7)
[7-[3-[[5-[4-[[[(2R)-2-hydroxy-2-(4-hydroxy-2-oxo-3H-1,3-benzothiazol-7-yl)ethyl]amino]methyl]anilino]-5-oxo-pentyl]-methyl-amino]-3-oxo-propyl]-7-azaspiro[3.5]nonan-2-yl]2-hydroxy-2,2-bis(2-thienyl)acetate；ditrifluoroacetic acid salt
第一步：7-[(1R)-2-疊氮基-1-[第三丁基(二甲基)矽基]氧基乙基]-4-[第三丁基(二甲基)矽基]氧基-3H-1,3-苯並噻唑-2-酮(7B)
7-[(1R)-2-azido-1-[tert-butyl(dimethyl)silyl]oxy-ethyl]-4-[tert-butyl(dimethyl)silyl]oxy-3H-1,3-benzothiazol-2-one
7-[(1R)-2-疊氮基-1-羥基-乙基]-4-羥基-3H-1,3-苯並噻唑-2-酮(7A)(參考WO2009098448A1製備得到)(0.56g.2.2mmol)溶於N,N-二甲基甲醯胺(20mL)中，然後加入咪唑(0.6g，8.9mmol)，分批加入第三丁基二甲基氯矽烷(1.3g，8.9mmol)，再加入催化量的4-二甲氨基吡啶，溫度升至40℃攪拌7小時。把反應液倒入水(100mL)中，用乙酸乙酯(100mL×1)萃取，有機相用飽和氯化鈉水溶液(100mL×2)洗滌，用無水硫酸鈉乾燥，過濾，濾液減壓濃縮，殘留物用矽膠管柱層析(沖提劑為乙酸乙酯/石油醚(v/v)=0/1~5/95)，得題述化合物7-[(1R)-2-疊氮基-1-[第三丁基(二甲基)矽基]氧基乙基]-4-[第三丁基(二甲基)矽基]氧基-3H-1,3-苯並噻唑-2-酮(7B)，白色固體(0.85g，產率80%)。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ 8.25(s,1H),6.92(d,1H),6.71(d,1H),4.78(dd,1H),3.41(dd,1H),3.25(dd,1H),1.05-0.98(m,9H),0.92-0.88(m,9H),0.28(t,6H),0.12(d,3H),-0.04(d,3H).
第二步：7-[(1R)-2-氨基-1-[第三丁基(二甲基)矽基]氧基乙基]-4-[第三丁基(二甲基)矽基]氧基-3H-1,3-苯並噻唑-2-酮(7C)
7-[(1R)-2-amino-1-[tert-butyl(dimethyl)silyl]oxy-ethyl]-4-[tert-butyl(dimethyl)silyl]oxy-3H-1,3-benzothiazol-2-one
將7-[(1R)-2-疊氮基-1-[第三丁基(二甲基)矽基]氧基乙基]-4-[第三丁基(二甲基)矽基]氧基-3H-1,3-苯並噻唑-2-酮(7B)(0.85g，1.8mmol)溶於乙酸乙酯(20mL)中，加入10%(w/w)的鈀碳(0.085g)，常壓氫氣球下攪拌過夜。墊矽藻土過濾，濃縮得題述化合物7-[(1R)-2-氨基-1-[第三丁基(二甲基)矽基]氧基乙基]-4-[第三丁基(二甲基)矽基]氧基-3H-1,3-苯並噻唑-2-酮(7C)，淺黑色固體(0.7g，產率90%)。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ 6.89(d,1H),6.68(t,1H),4.64(dd,1H),2.88(ddd,2H),1.04-0.96(m,9H),0.95-0.87(m,9H),0.33-0.23(m,6H),0.12-0.06(m,3H),-0.04--0.11(m,3H).
第三步：[7-[3-[[5-[4-[[[(2R)-2-[第三丁基(二甲基)矽基]氧基-2-[4-[第三丁基(二甲基)矽基]氧基-2-氧代-3H-1,3-苯並噻唑-7-基]乙基]氨基]甲基]苯胺基]-5-氧代戊基]-甲基-氨基]-3-氧代-丙基]-7-氮雜螺[3.5]壬烷-2-基]2-羥基-2,2-二(2-噻吩基)乙酸酯(7D)
[7-[3-[[5-[4-[[[(2R)-2-[tert-butyl(dimethyl)silyl]oxy-2-[4-[tert-butyl(dimethyl)silyl]oxy-2-oxo-3H-1,3-benzothiazol-7-yl]ethyl]amino]methyl]anilino]-5-oxo-pentyl]-methyl-amino]-3-oxo-propyl]-7-azaspiro[3.5]nonan-2-yl]2-hydroxy-2,2-bis(2-thienyl)acetate
將[7-[3-[[5-(4-甲醯苯胺)-5-氧代-戊基]-甲基-氨基]-3-氧代-丙基]-7-氮雜螺[3.5]壬烷-2-基]2-羥基-2,2-雙(2-噻吩基)乙酸酯(5I)(0.25g,0.38mmol)和7-[(1R)-2-氨基-1-[第三丁基(二甲基)矽基]氧基乙基]-4-[第三丁基(二甲基)矽基]氧基-3H-1,3-苯並噻唑-2-酮(7C)(0.26g,0.58mmol)溶於異丙醇/二氯甲烷(v/v=1：110mL)的混合溶劑中，室溫攪拌1小時，然後加入三乙醯氧基硼氫化鈉(0.24g,1.14mmol)，室溫下反應2小時。向反應液加入二氯甲烷(150mL)和水(50mL)，萃取分層，有機相用飽和氯化鈉水溶液(50mL×1)洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾，濾液減壓濃縮，得到題述化合物[7-[3-[[5-[4-[[[(2R)-2-[第三丁基(二甲基)矽基]氧基-2-[4-[第三丁基(二甲基)矽基]氧基-2-氧代-3H-1,3-苯並噻唑-7-基]乙基]氨基]甲基]苯胺基]-5-氧代戊基]-甲基-氨基]-3-氧代-丙基]-7-氮雜螺[3.5]壬烷-2-基]2-羥基-2,2-二(2-噻吩基)乙酸酯(7D)，淺黃固體(0.35g，產率84%)。
LCMS m/z=488.8[(M+2)/2]。
第四步：[7-[3-[[5-[4-[[[(2R)-2-羥基-2-(4-羥基-2-氧代-3H-1,3-苯並噻唑-7-基)乙基]氨基]甲基]苯胺基]-5-氧代戊基]-甲基-氨基]-3-氧代-丙基]-7-氮雜螺[3.5]壬烷-2-基]2-羥基-2,2-二(2-噻吩基)乙酸酯；二三氟乙酸鹽(化合物7)
[7-[3-[[5-[4-[[[(2R)-2-hydroxy-2-(4-hydroxy-2-oxo-3H-1,3-benzothiazol-7-yl)ethyl]amino]methyl]anilino]-5-oxo-pentyl]-methyl-amino]-3-oxo-propyl]-7-azaspiro[3.5]nonan-2-yl]2-hydroxy-2,2-bis(2-thienyl)acetate；ditrifluoroacetic acid salt
將[7-[3-[[5-[4-[[[(2R)-2-[第三丁基(二甲基)矽基]氧基-2-[4-[第三丁基(二甲基)矽基]氧基-2-氧代-3H-1,3-苯並噻唑-7-基]乙基]氨基]甲基]苯胺基]-5-氧代戊基]-甲基-氨基]-3-氧代-丙基]-7-氮雜螺[3.5]壬烷-2-基]2-羥基-2,2-二(2-噻吩基)乙酸酯(7D)(0.35g,0.32mmol)溶於四氫呋喃(5mL)中，加入三乙胺三氫氟酸鹽(0.26g,1.6mmol)，室溫反應過夜，反應液用飽和碳酸氫鈉溶液調鹼，用8%甲醇/二氯甲烷(v/v=8：92,100mL)萃取，有機相用飽和氯化鈉水溶液(50mL×1)洗滌，用無水硫酸鈉乾燥，過濾，濾液減壓濃縮，殘留物用液相製備管柱分離純化(液相製備條件：C18逆向層析管柱，流動相為含0.05%TFA的去離子水(A)，含0.05%TFA的乙腈(B)，梯度沖提A：B=10%~55%，沖提時間39min，流速1.0mL/min，柱溫：40℃)，得到題述化合物[7-[3-[[5-[4-[[[(2R)-2-羥基-2-(4-羥基-2-氧代-3H-1,3-苯並噻唑-7-基)乙基]氨基]甲基]苯胺基]-5-氧代戊基]-甲基-氨基]-3-氧代-丙基]-7-氮雜螺[3.5]壬烷-2-基]2-羥基-2,2-二(2-噻吩基)乙酸酯；二三氟乙酸鹽(化合物7)，白色固體(0.117g，產率42%)。
1H NMR(400MHz,CD3OD)δ 7.69(dd,2H),7.46(dd,2H),7.40(dd,2H),7.16(t,2H),6.99(dd,3H),6.77(d,1H),5.14(m,1H),4.99(dd,1H),4.25(d,2H),3.44(m,6H),3.13(m,2H),3.03(m,3H),2.93(m,4H),2.48(m,3H),2.36(m,1H),1.98(m,3H),1.84(m,3H),1.70(m,4H).
LCMS m/z=431.8[(M+2)/2]。
實施例8：[7-[3-[[5-[4-[[[(2R)-2-羥基-2-(8-羥基-2-氧代-1H-喹啉-5-基)乙基]氨基]甲基]苯胺]-5-氧代戊基]-甲基-氨基]-3-氧代-丙基]-7-氮雜螺[3.5]壬烷-2-基]N-(2-苯基苯基)氨基甲酸酯；二三氟乙酸鹽(化合物8)
[7-[3-[[5-[4-[[[(2R)-2-hydroxy-2-(8-hydroxy-2-oxo-1H-quinolin-5-yl)ethyl]amino]methyl]anilino]-5-oxo-pentyl]-methyl-amino]-3-oxo-propyl]-7-azaspiro[3.5]nonan-2-yl]N-(2-phenylphenyl)carbamate；ditrifluoroacetic acid salt
第一步：3-[2-[(2-苯基苯基)氨基甲醯氧基]-7-氮雜螺[3.5]壬-7-基]丙酸(8A)
3-[2-[(2-phenylphenyl)carbamoyloxy]-7-azaspiro[3.5]nonan-7-yl]propanoi cacid
將7-氮雜螺[3.5]壬烷-2-基N-(2-苯基苯基)氨基甲酸酯(2D)(0.8g,2mmol)和丙烯酸(2.0g,20mmol)溶於2-甲基四氫呋喃(10mL)中，置於微波反應器中，升溫至100℃反應1小時，冷卻至室溫，減壓濃縮，殘留物用矽膠管柱層析分離純化(甲醇：二氯甲烷(v/v)=0：1~1：9)得到題述化合物3-[2-[(2-苯基苯基)氨基甲醯氧基]-7-氮雜螺[3.5]壬-7-基]丙酸(8A)，淺黃固體(0.8g，產率80%)。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ 8.08(d,1H),7.50(m,2H),7.42(m,1H),7.35(m,3H),7.21(dd,1H),7.13(m,1H),6.63(s,1H),4.99(m,1H),2.96(m,8H),2.37(m,2H),1.88(m,6H).
LCMS m/z=409.1[M+1]。
第二步：5-[甲基-[3-[2-[(2-苯基苯基)氨基甲醯氧基]-7-氮雜螺[3.5]壬-7-基]丙醯基]氨基]戊酸甲酯(8B)
Methyl 5-[methyl-[3-[2-[(2-phenylphenyl)carbamoyloxy]-7-azaspiro[3.5]nonan-7-yl]propanoyl]amino]pentanoate
將3-[2-[(2-苯基苯基)氨基甲醯氧基]-7-氮雜螺[3.5]壬-7-基]丙酸 (8A)(0.8g,2mmol)和5-(甲基氨基)戊酸甲酯(0.6g,4mmol)溶於二氯甲烷(25mL)中，加入2-(7-偶氮苯並三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯(1g,3mmol)，冷卻到0℃，滴加二異丙基乙胺(2.0g,20mmol)，升至室溫下反應3小時，向反應液加入二氯甲烷(120mL)和水(100mL)，萃取分層，有機相用飽和氯化鈉水溶液(100mL×1)洗滌，用無水硫酸鈉乾燥，過濾，濾液減壓濃縮後得到題述化合物5-[甲基-[3-[2-[(2-苯基苯基)氨基甲醯氧基]-7-氮雜螺[3.5]壬-7-基]丙醯基]氨基]戊酸甲酯(8B)，褐色固體(1.0g，產率100%)。
LCMS m/z=536.2[M+1]。
第三步：5-[甲基-[3-[2-[(2-苯基苯基)氨基甲醯氧基]-7-氮雜螺[3.5]壬-7-基]丙醯基]氨基]戊酸(8C)
5-[methyl-[3-[2-[(2-phenylphenyl)carbamoyloxy]-7-azaspiro[3.5]nonan-7-yl]propanoyl]amino]pentanoicacid
將5-[甲基-[3-[2-[(2-苯基苯基)氨基甲醯氧基]-7-氮雜螺[3.5]壬-7-基]丙醯基]氨基]戊酸甲酯(8B)(1.0g,1.86mmol)溶於四氫呋喃(10mL)中，加入氫氧化鈉(0.37g,9.3mmol)的水溶液(10mL)，室溫下反應2小時，冷卻至0℃，調節pH約為3，加入二氯甲烷(50mL×3)萃取，合併有機層，用無水硫酸鈉乾燥，過濾，濾液減壓濃縮，殘留物用矽膠管柱層析純化(沖提劑為二氯甲烷/甲醇(v：v)=1/0~9/1)，得到題述化合物5-[甲基-[3-[2-[(2-苯基苯基)氨基甲醯氧基]-7-氮雜螺[3.5]壬-7-基]丙醯基]氨基]戊酸(8C)，淺黃固體(0.85g，產率87%)。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ 8.03(s,1H),7.50(dd,2H),7.42(t,1H),7.35(m,3H),7.21(dd,1H),7.13(t,1H),6.65(d,1H),4.99(m,1H),3.47(m,2H),3.37(s,2H),3.30(m,2H),3.00(m,4H),2.89(d,3H),2.83(m,2H),2.39(m,4H),2.00(m,2H),1.87(m,2H),1.81(m,2H),1.66(s,2H).
LCMS m/z=522.2[M+1]。
第四步：[7-[3-[[5-[4-(1,3-二氧戊環-2-基)苯胺基]-5-氧代戊基]-甲基-氨基]-3-氧代-丙基]-7-氮雜螺[3.5]壬烷-2-基]N-(2-苯基苯基)氨基甲酸酯(8D)
[7-[3-[[5-[4-(1,3-dioxolan-2-yl)anilino]-5-oxo-pentyl]-methyl-amino]-3-oxo-propyl]-7-azaspiro[3.5]nonan-2-yl]N-(2-phenylphenyl)carbamate
將5-[甲基-[3-[2-[(2-苯基苯基)氨基甲醯氧基]-7-氮雜螺[3.5]壬-7-基]丙醯基]氨基]戊酸(8C)(0.4g,0.8mmol)和4-(1,3-二氧戊環-2-基)苯胺(0.3g,1.6mmol)溶於二氯甲烷(10mL)中，冷卻到0℃，加入2-(7-偶氮苯並三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯(0.44g,1.0mmol)，滴加N,N-二異丙基乙胺(0.2g,2mmol)，室溫下反應3小時。向反應液加入二氯甲烷(50mL)和水(50mL)，萃取分層，有機層用飽和氯化鈉水溶液(50mL×1)洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾，濾液減壓濃縮，殘留物用矽膠管柱層析純化(沖提劑為二氯甲烷/甲醇(v/v)=1/0~9/1)，得到題述化合物[7-[3-[[5-[4-(1,3-二氧戊環-2-基)苯胺基]-5-氧代戊基]-甲基-氨基]-3-氧代-丙基]-7-氮雜螺[3.5]壬烷-2-基]N-(2-苯基苯基)氨基甲酸酯(8D)，黃色固體(0.4g，產率80%)。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ 8.10(d,1H),7.63(dd,2H),7.50(dd,2H),7.38(m,6H),7.21(dd,1H),7.13(m,1H),6.61(d,1H),5.75(d,1H),4.97(m,1H),4.10(m,2H),4.00(m,2H),3.46(m,1H),3.31(m,1H),3.00(s,3H),2.77(m,2H),2.72(m,2H),2.58(m,2H),2.48(m,2H),2.29(m,4H),1.78(m,4H),1.63(m,6H).
LCMS m/z=669.4[M+1]。
第五步：[7-[3-[[5-(4-甲醯基苯胺基)-5-氧代-戊基]-甲基-氨基]-3-氧代-丙基]-7-氮雜螺[3.5]壬烷-2-基]N-(2-苯基苯基)氨基甲酸酯(8E)
[7-[3-[[5-(4-formylanilino)-5-oxo-pentyl]-methyl-amino]-3-oxo-propyl]-7-azaspiro[3.5]nonan-2-yl]N-(2-phenylphenyl)carbamate
將[7-[3-[[5-[4-(1,3-二氧戊環-2-基)苯胺基]-5-氧代戊基]-甲基-氨基]-3-氧代-丙基]-7-氮雜螺[3.5]壬烷-2-基]N-(2-苯基苯基)氨基甲酸酯(8D)(1.2g,1.8mmol)溶於乙腈(20mL)中，滴加3M鹽酸水溶液(6mL)，室溫反應1小時。向反應液加入二氯甲烷(100mL)和水(100mL)，萃取分層，有機相用飽和氯化鈉水溶液(100mL×1)洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾，濾液減壓濃縮，得到題述化合物[7-[3-[[5-(4-甲醯基苯胺基)-5-氧代-戊基]-甲基-氨基]-3-氧代-丙基]-7-氮雜螺[3.5]壬烷-2-基]N-(2-苯基苯基)氨基甲酸酯(8E)，黃色固體(1.0g，產率89%)。
LCMS m/z=625.3[M+1]。
第六步：[7-[3-[[5-[4-[[[(2R)-2-[第三丁基(二甲基)矽基]氧基-2-(8-羥基-2-氧代-1H-喹啉-5-基基)乙基]氨基]甲基]苯胺基]-5-氧代戊基]-甲基-氨基]-3-氧代-丙基]-7-氮雜螺[3.5]壬烷-2-基]N-(2-苯基苯基)氨基甲酸酯(8F)
[7-[3-[[5-[4-[[[(2R)-2-[tert-butyl(dimethyl)silyl]oxy-2-(8-hydroxy-2-oxo-1H-quinolin-5-yl)ethyl]amino]methyl]anilino]-5-oxo-pentyl]-methyl-amino]-3-oxo-propyl]-7-azaspiro[3.5]nonan-2-yl]N-(2-phenylphenyl)carbamate
將[7-[3-[[5-(4-甲醯基苯胺基)-5-氧代-戊基]-甲基-氨基]-3-氧代-丙基]-7-氮雜螺[3.5]壬烷-2-基]N-(2-苯基苯基)氨基甲酸酯(8E)(0.25g,0.40mmol)和5-[(1R)-2-氨基-1-[第三丁基(二甲基)矽基]氧基甲基]-8-羥基-1H-喹啉-2-酮(1G)(0.20g,0.60mmol)溶於異丙醇/二氯甲烷(v/v=1：1,10mL)混合溶劑中，室溫攪拌1小時，然後加入三乙醯氧基硼氫化鈉(0.25g,1.2mmol)，再攪拌2小時。向反應液加入二氯甲烷(150mL)和水(50mL)，萃取分層，有機相用飽和氯化鈉水溶液(50mL×1)洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾，濾液減壓濃縮，殘留物用矽膠管柱層析純化(沖提劑為二氯甲烷/甲醇(v：v)=1/0~9/1)，得到題述化合物[7-[3-[[5-[4-[[[(2R)-2-[第三丁基(二甲基)矽基]氧基-2-(8-羥基-2-氧代-1H-喹啉-5-基基)乙基]氨基]甲基]苯胺基]-5-氧代戊基]-甲基-氨基]-3-氧代-丙基]-7-氮雜螺[3.5]壬烷-2-基]N-(2-苯基苯基)氨基甲酸酯(8F)，淺黃固體(0.15g，產率40%)。
LCMS m/z=472.4[(M+2)/2]。
第七步：[7-[3-[[5-[4-[[[(2R)-2-羥基-2-(8-羥基-2-氧代-1H-喹啉-5-基)乙基]氨基]甲基]苯胺]-5-氧代戊基]-甲基-氨基]-3-氧代-丙基]-7-氮雜螺[3.5]壬烷 -2-基]N-(2-苯基苯基)氨基甲酸酯；二三氟乙酸鹽(化合物8)
[7-[3-[[5-[4-[[[(2R)-2-hydroxy-2-(8-hydroxy-2-oxo-1H-quinolin-5-yl)ethyl]amino]methyl]anilino]-5-oxo-pentyl]-methyl-amino]-3-oxo-propyl]-7-azaspiro[3.5]nonan-2-yl]N-(2-phenylphenyl)carbamate；ditrifluoroacetic acid salt
將[7-[3-[[5-[4-[[[(2R)-2-[第三丁基(二甲基)矽基]氧基-2-(8-羥基-2-氧代-1H-喹啉-5-基基)乙基]氨基]甲基]苯胺基]-5-氧代戊基]-甲基-氨基]-3-氧代-丙基]-7-氮雜螺[3.5]壬烷-2-基]N-(2-苯基苯基)氨基甲酸酯(8F)(0.11g,0.12mmol)溶於二氯甲烷(10mL)中，加入三乙胺三氫氟酸鹽(0.10g,0.58mmol)，室溫反應過夜，反應液用飽和碳酸氫鈉溶液調鹼，用8%甲醇/二氯甲烷(v/v=8：92,100mL)萃取，有機相用飽和氯化鈉水溶液(50mL×1)洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾，濾液減壓濃縮，殘留物用液相製備管柱分離純化(液相製備條件：C18逆向層析管柱，流動相為含0.05%TFA的去離子水(A)，含0.05%TFA的乙腈(B)，梯度沖提A：B=10%~55%，沖提時間39min，流速1.0mL/min，柱溫：40℃)，得到題述化合物[7-[3-[[5-[4-[[[(2R)-2-羥基-2-(8-羥基-2-氧代-1H-喹啉-5-基)乙基]氨基]甲基]苯胺]-5-氧代戊基]-甲基-氨基]-3-氧代-丙基]-7-氮雜螺[3.5]壬烷-2-基]N-(2-苯基苯基)氨基甲酸酯；二三氟乙酸鹽(化合物8)，淺黃固體(0.04g，產率24%)。
1H NMR(400MHz,CD3OD)δ 8.20(t,1H),7.69(dd,2H),7.57(s,1H),7.38(m,11H),7.04(d,1H),6.63(dd,1H),5.38(m,1H),4.86(s,1H),4.26(d, 2H),3.43(m,6H),3.20(d,2H),3.07(s,2H),3.01(d,1H),2.97(m,2H),2.92(m,2H),2.46(dd,3H),2.23(s,1H),1.91(m,6H),1.70(d,4H).
LCMS m/z=415.3[(M+2)/2]。
實施例9：[7-[3-[[5-[4-[[[(2R)-2-羥基-2-(5-羥基-3-氧代-4H-1,4-苯並噁嗪-8-基)乙基]氨基]甲基]苯胺基]-5-氧代戊基]-甲基-氨基]-3-氧代-丙基]-7-氮雜螺[3.5]壬烷-2-基]N-(2-苯基苯基)氨基甲酸酯；二三氟乙酸鹽(化合物9)
[7-[3-[[5-[4-[[[(2R)-2-hydroxy-2-(5-hydroxy-3-oxo-4H-1,4-benzoxazin-8-yl)ethyl]amino]methyl]anilino]-5-oxo-pentyl]-methyl-amino]-3-oxo-propyl]-7-azaspiro[3.5]nonan-2-yl]N-(2-phenylphenyl)carbamate；ditrifluoroacetic acid salt
第一步：[7-[3-[[5-[4-[[[(2R)-2-[第三丁基(二甲基)矽基]氧基-2-(5-羥基-3-氧代-4H-1,4-苯並噁嗪-8-基)乙基]氨基]甲基]苯胺基]-5-氧代戊基]-甲基-氨基]-3-氧代-丙基]-7-氮雜螺[3.5]壬烷-2-基]N-(2-苯基苯基)氨基甲酸酯(9A)
[7-[3-[[5-4-[[[(2R)-2-[tert-butyl(dimethyl)silyl]oxy-2-(5-hydroxy-3-oxo-4H-1,4-benzoxazin-8-yl)ethyl]amino]methyl]anilino]-5-oxo-pentyl]-methyl-amino]-3-oxo-propyl]-7-azaspiro[3.5]nonan-2-yl]N-(2-phenylphenyl)carbamate
將[7-[3-[[5-(4-甲醯基苯胺基)-5-氧代-戊基]-甲基-氨基]-3-氧代-丙基]-7-氮雜螺[3.5]壬烷-2-基]N-(2-苯基苯基)氨基甲酸酯(8E)(0.25g,0.3mmol)和8-[(1R)-2-氨基-1-[第三丁基(二甲基)矽基]氧基乙基]-5-羥基-4H-1,4-苯並噁嗪-3-酮(6A)(0.2g,0.6mmol)溶於甲醇/二氯甲烷(v/v=1/1,10mL)混合溶劑中，室溫攪拌1小時，然後加入三乙醯氧基硼氫化鈉(0.25g,1.2mmol)，再攪拌3小時。向反應液加入二氯甲烷(150mL)和水(50mL)，萃取分層，有機相用飽和氯化鈉水溶液(50mL×1)洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾，濾液減壓濃縮，殘留物用矽膠管柱層析純化(沖提劑為二氯甲烷/甲醇(v/v)=1/0~9/1)，得到題述化合物[7-[3-[[5-[4-[[[(2R)-2-[第三丁基(二甲基)矽基]氧基-2-(5-羥基-3-氧代-4H-1,4-苯並噁嗪-8-基)乙基]氨基]甲基]苯胺基]-5-氧代戊基]-甲基-氨基]-3-氧代-丙基]-7-氮雜螺[3.5]壬烷-2-基]N-(2-苯基苯基)氨基甲酸酯(9A)，淺黃固體(0.12g，產率32%)。
LCMS m/z=474.3[(M+2)/2]。
第二步：[7-[3-[[5-[4-[[[(2R)-2-羥基-2-(5-羥基-3-氧代-4H-1,4-苯並噁嗪-8-基)乙基]氨基]甲基]苯胺基]-5-氧代戊基]-甲基-氨基]-3-氧代-丙基]-7-氮雜螺[3.5]壬烷-2-基]N-(2-苯基苯基)氨基甲酸酯；二三氟乙酸鹽(化合物9)
[7-[3-[[5-[4-[[[(2R)-2-hydroxy-2-(5-hydroxy-3-oxo-4H-1,4-benzoxazin-8-yl)ethyl]amino]methyl]anilino]-5-oxo-pentyl]-methyl-amino]-3-oxo-propyl]-7-az aspiro[3.5]nonan-2-yl]N-(2-phenylphenyl)carbamate；ditrifluoroacetic acid salt
將[7-[3-[[5-[4-[[[(2R)-2-[第三丁基(二甲基)矽基]氧基-2-(5-羥基-3-氧代-4H-1,4-苯並噁嗪-8-基)乙基]氨基]甲基]苯胺基]-5-氧代戊基]-甲基-氨基]-3-氧代-丙基]-7-氮雜螺[3.5]壬烷-2-基]N-(2-苯基苯基)氨基甲酸酯(9A)(0.11g,0.12mmol)溶於四氫呋喃(5mL)中，加入三乙胺三氫氟酸鹽(0.1g,0.58mmol)，室溫反應過夜，反應液用飽和碳酸氫鈉溶液調鹼，過濾，所得固體用8%甲醇/二氯甲烷(v/v=8：92,50mL)溶解後，飽和氯化鈉水溶液(50mL×1)洗滌，有機相用無水硫酸鈉乾燥，過濾，濾液減壓濃縮，殘留物用液相製備管柱分離純化(液相製備條件：C18逆向層析管柱，流動相為含0.05%TFA的去離子水(A)，含0.05%TFA的乙腈(B)，梯度沖提A：B=10%~55%，沖提時間39min，流速1.0mL/min，柱溫：40℃)，得到題述化合物[7-[3-[[5-[4-[[[(2R)-2-羥基-2-(5-羥基-3-氧代-4H-1,4-苯並噁嗪-8-基)乙基]氨基]甲基]苯胺基]-5-氧代戊基]-甲基-氨基]-3-氧代-丙基]-7-氮雜螺[3.5]壬烷-2-基]N-(2-苯基苯基)氨基甲酸酯；二三氟乙酸鹽(化合物9)，白色固體(0.056g，產率45%)。
1H NMR(400MHz,CD3OD)δ 7.69(dd,2H),7.58(s,1H),7.37(m,10H),7.02(d,1H),6.58(d,1H),5.17(d,1H),4.86(s,1H),4.49(m,2H),4.23(m,2H),3.43(m,6H),3.16(dd,1H),2.98(m,8H),2.46(m,3H),2.23(s,1H),1.91(m,6H),1.70(d,4H).
LCMS m/z=417.3[(M+2)/2]。
實施例10：[7-[3-[[5-[4-[[[(2R)-2-羥基-2-(4-羥基-2-氧代-3H-1,3-苯並噻唑-7-基)乙基]氨基]甲基]苯胺基]-5-氧代戊基]-甲基-氨基]-3-氧代-丙基]-7-氮雜螺[3.5]壬烷-2-基]N-(2-苯基苯基)氨基甲酸酯；二三氟乙酸鹽(化合物10)
[7-[3-[[5-[4-[[[(2R)-2-hydroxy-2-(4-hydroxy-2-oxo-3H-1,3-benzothiazol-7-yl)ethyl]amino]methyl]anilino]-5-oxo-pentyl]-methyl-amino]-3-oxo-propyl]-7-azaspiro[3.5]nonan-2-yl]N-(2-phenylphenyl)carbamate；ditrifluoroacetic acid salt
第一步：[7-[3-[[5-[4-[[[(2R)-2-[第三丁基(二甲基)矽基]氧基-2[4-[第三丁基(二甲基)矽基]氧基-2-氧代-3H-1,3-苯並噻唑-7-基]乙基]氨基]甲基]苯胺基]-5-氧代戊基]-甲基-氨基]-3-氧代-丙基]-7-氮雜螺[3.5]壬烷-2-基]N-(2-苯基苯基)氨基甲酸酯(10A)
[7-[3-[[5-[4-[[[(2R)-2-[tert-butyl(dimethyl)silyl]oxy-2-[4-[tert-butyl(dimethyl)silyl]oxy-2-oxo-3H-1,3-benzothiazol-7-yl]ethyl]amino]methyl]anilino]-5-oxo-pentyl]-methyl-amino]-3-oxo-propyl]-7-azaspiro[3.5]nonan-2-yl]N-(2-phenylp henyl)carbamate
將[7-[3-[[5-(4-甲醯基苯胺基)-5-氧代-戊基]-甲基-氨基]-3-氧代-丙基]-7-氮雜螺[3.5]壬烷-2-基]N-(2-苯基苯基)氨基甲酸酯(8E)(0.25g,0.38mmol)和7-[(1R)-2-氨基-1-[第三丁基(二甲基)矽基]氧基乙基]-4-[第三丁基(二甲基)矽基]氧基-3H-1,3-苯並噻唑-2-酮(7C)(0.27g,0.6mmol)溶於甲醇/二氯甲烷(v/v=1/1,10mL)混合溶劑中，室溫攪拌1小時，然後加入三乙醯氧基硼氫化鈉(0.25g,1.2mmol)，室溫下反應2小時。向反應液加入二氯甲烷(150mL)和水(50mL)，萃取分層，有機相用飽和氯化鈉水溶液(50mL×1)洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾，濾液減壓濃縮，得到題述化合物[7-[3-[[5-[4-[[[(2R)-2-[第三丁基(二甲基)矽基]氧基-2[4-[第三丁基(二甲基)矽基]氧基-2-氧代-3H-1,3-苯並噻唑-7-基]乙基]氨基]甲基]苯胺基]-5-氧代戊基]-甲基-氨基]-3-氧代-丙基]-7-氮雜螺[3.5]壬烷-2-基]N-(2-苯基苯基)氨基甲酸酯(10A)，淺黃固體(0.4g，產率90%)。
第二步：[7-[3-[[5-[4-[[[(2R)-2-羥基-2-(4-羥基-2-氧代-3H-1,3-苯並噻唑-7-基)乙基]氨基]甲基]苯胺基]-5-氧代戊基]-甲基-氨基]-3-氧代-丙基]-7-氮雜螺[3.5]壬烷-2-基]N-(2-苯基苯基)氨基甲酸酯；二三氟乙酸鹽(化合物10)
[7-[3-[[5-[4-[[[(2R)-2-hydroxy-2-(4-hydroxy-2-oxo-3H-1,3-benzothiazol-7-yl)ethyl]amino]methyl]anilino]-5-oxo-pentyl]-methyl-amino]-3-oxo-propyl]-7-azaspiro[3.5]nonan-2-yl]N-(2-phenylphenyl)carbamate；ditrifluoroacetic acid salt
將[7-[3-[[5-[4-[[[(2R)-2-[第三丁基(二甲基)矽基]氧基-2[4-[第三丁基(二甲基)矽基]氧基-2-氧代-3H-1,3-苯並噻唑-7-基]乙基]氨基]甲基]苯胺基]-5-氧代戊基]-甲基-氨基]-3-氧代-丙基]-7-氮雜螺[3.5]壬烷-2-基]N-(2-苯基苯基)氨基甲酸酯(10A)(0.4g,0.4mmol)溶於二氯甲烷(10mL)中，加入三乙胺三氫氟酸鹽(0.3g,2mmol)，室溫反應過夜，反應液用飽和碳酸氫鈉溶液調鹼，用8%甲醇/二氯甲烷(v/v=8：92,100mL)萃取，有機相用飽和氯化鈉水溶液(50mL×1)洗滌，用無水硫酸鈉乾燥，過濾，濾液減壓濃縮，殘留物用液相製備管柱分離純化(液相製備條件：C18逆向層析管柱，流動相為含0.05%TFA的去離子水(A)，含0.05%TFA的乙腈(B)，梯度沖提A：B=10%~55%，沖提時間39min，流速1.0mL/min，柱溫：40℃)，得到題述化合物[7-[3-[[5-[4-[[[(2R)-2-羥基-2-(4-羥基-2-氧代-3H-1,3-苯並噻唑-7-基)乙基]氨基]甲基]苯胺基]-5-氧代戊基]-甲基-氨基]-3-氧代-丙基]-7-氮雜螺[3.5]壬烷-2-基]N-(2-苯基苯基)氨基甲酸酯；二三氟乙酸鹽(化合物10)，白色固體(0.086g，產率20%)。
1H NMR(400MHz,CD3OD)δ 7.55(dd,2H),7.43(s,1H),7.24(m,9H),6.83(d,1H),6.63(d,1H),4.84(d,1H),4.72(s,1H),4.10(s,2H),3.29(m,6H),2.93(s,4H),2.82(m,5H),2.32(m,3H),2.09(s,1H),1.76(m,6H),1.56(m,4H).
LCMS m/z=418.3[(M+2)/2]。
實施例11：[7-[3-[2-氯-4-[[[(2R)-2-羥基-2-(5-羥基-3-氧代-4H-1,4-苯並噁 嗪-8-基)乙基]氨基]甲基]-5-甲氧基苯胺基]-3-氧代-丙基]-7-氮雜螺[3.5]壬烷-2-基]-2-羥基-2,2-二(2-噻吩基)乙酸酯(化合物11)
[7-[3-[2-chloro-4-[[[(2R)-2-hydroxy-2-(5-hydroxy-3-oxo-4H-1,4-benzoxazin-8-yl)ethyl]amino]methyl]-5-methoxy-anilino]-3-oxo-propyl]-7-azaspiro[3.5]nonan-2-yl]2-hydroxy-2,2-bis(2-thienyl)acetate
將[7-[3-(2-氯-4-甲醯基-5-甲氧基苯胺基)-3-氧代-丙基]-7-氮雜螺[3.5]壬烷-2-基]-2-羥基-2,2-二(2-噻吩基)乙酸酯(1F)(0.300g，0.497mmol)溶解在二氯甲烷(5mL)和異丙醇(5mL)的混合溶劑中，加入8-[(1R)-2-氨基-1-羥基-乙基]-5-羥基-4H-1,4-苯並噁嗪-3-酮(11A，參考WO2009098448A1製備得到)(0.134g，0.597mmol)，30℃攪拌反應1.5小時再加入三乙醯氧基硼氫化鈉(0.316g，1.49mmol)，繼續30℃反應2小時。滴加飽和氯化銨水溶液(15mL)，用二氯甲烷(30mL×3)萃取，合併有機層，用飽和氯化鈉水溶液(10mL×2)洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾，濾液減壓濃縮後殘留物用矽膠管柱層析分離純化(沖提劑為二氯甲烷：甲醇(v/v)=97：3~92：8)得題述化合物[7-[3-[2-氯-4-[[[(2R)-2-羥基-2-(5-羥基-3-氧代-4H-1,4-苯並噁嗪-8-基)乙基]氨基]甲基]-5-甲氧基苯胺基]-3-氧代-丙基]-7-氮雜螺[3.5]壬烷-2-基]-2-羥基-2,2-二(2-噻吩基)乙酸酯(化合物11)，淺黃色固體(0.080g，產率20%)。
1H NMR(400MHz,CD3OD)δ 7.69(s,1H),7.28-7.25(m,2H),7.18(s, 1H),7.04-7.01(m,2H),6.88-6.86(m,2H),6.79(d,1H),6.41(d,1H),5.38(s,1H),5.05--4.96(m,1H),4.92-4.86(m,1H),4.37(s,2H),3.68(s,3H),3.66--3.58(m,2H),3.22-3.18(m,6H),2.72-2.62(m,2H),2.62--2.55(m,2H),2.54-2.48(m,2H),2.42-2.30(m,3H),2.28-2.18(m,2H),1.77-1.73(m,2H),1.62-1.56(m,2H),1.54-1.50(m,2H).
LCMS m/z=406.1[(M+2)/2]。
實施例12：[7-[3-[2-氯-4-[[[(2R)-2-羥基-2-(8-羥基-2-氧代-1H-喹啉-5-基)乙基]氨基]甲基]-5-甲氧基苯胺基]-3-氧代-丙基]-7-氮雜螺[3.5]壬烷-2-基]-2-環戊基-2-羥基-2-(2-噻吩基)乙酸酯；二三氟乙酸鹽(化合物12)
[7-[3-[2-chloro-4-[[[(2R)-2-hydroxy-2-(8-hydroxy-2-oxo-1H-quinolin-5-yl)ethyl]amino]methyl]-5-methoxy-anilino]-3-oxo-propyl]-7-azaspiro[3.5]nonan-2-yl]2-cyclopentyl-2-hydroxy-2-(2-thienyl)acetateditrifluoroacetate；ditrifluoroacetic acid salt
第一步：2-氧代-2-(2-噻吩基)乙酸(12B)
2-oxo-2-(2-thienyl)aceticacid
將2-氧代-2-(2-噻吩基)乙酸乙酯(6.0g,32.6mmol)溶於水(20mL)中，室溫滴加氫氧化鈉(2.61g,65.1mmol)的水溶液，反應2小時。反應完畢後，加入水(50mL)，用二氯甲烷(50mL×2)萃取分層，水相用稀鹽酸調pH=3，用二氯甲烷(100mL×2)萃取，合併第二次的有機相，無水硫酸鈉乾燥，過濾，濾液減壓濃縮後得到題述化合物2-氧代-2-(2-噻吩基)乙酸(12B)，白色固體(4.00g，產率78.6%)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ 14.51(s,1H),8.22(m,1H),8.07(m,1H),7.32(m,1H).
LCMS m/z=157.1[M+1].
第二步：2-[2-氧代-2-(2-噻吩基)乙醯氧基]-7-氮雜螺[3.5]壬烷-7-羧酸第三丁酯(12C)
tert-butyl 2-[2-oxo-2-(2-thienyl)acetyl]oxy-7-azaspiro[3.5]nonane-7-carboxylate
將2-氧代-2-(2-噻吩基)乙酸(12B)(0.500g,3.20mmol)溶於二氯甲烷(10mL)中，滴加草醯氯(0.813g,6.40mmol)，然後加入一滴N,N-二甲基甲醯胺，室溫反應1小時。減壓除去溶劑和過量的草醯氯，製成反應液2。將2-羥基-7-氮雜螺[3.5]壬烷-7-羧酸第三丁酯(0.773g,3.20mmol)溶於二氯甲烷(10mL)中，冰浴下加入反應液2。加完後升至室溫反應1小時。反應完畢後加入水(50mL)，用二氯甲烷(100mL×2)萃取，合併有機相，無水硫酸鈉乾燥，過濾，減壓濃縮後殘留物用矽膠管柱層析分離純化(沖提劑為乙酸乙酯：石油醚(v/v)=49：1~10：1)，得到題述化合物2-[2-氧代-2-(2-噻吩基)乙醯氧基]-7-氮雜螺[3.5]壬烷-7-羧酸第三丁酯(12C)，淡黃色液體(1.0g，產率82.3%)。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ 8.12(d,1H),7.82(d,1H),7.23-7.17(m,1H),5.26(m,1H),3.43-3.35(m,2H),3.35-3.26(m,2H),2.52-2.40(m,2H),2.09-2.01(m,2H),1.59(m,4H),1.45(s,9H).
LCMS m/z=402.1[M+23].
第三步：2-[2-環戊基-2-羥基-2-(2-噻吩基)乙醯氧基]-7-氮雜螺[3.5]壬烷-7-羧酸第三丁酯(12D)
tert-butyl 2-[2-cyclopentyl-2-hydroxy-2-(2-thienyl)acetyl]oxy-7-azaspiro[3.5]nonane-7-carboxylate
將2-[2-氧代-2-(2-噻吩基)乙醯氧基]-7-氮雜螺[3.5]壬烷-7-羧酸第三丁酯(12C)(1.0g,2.64mmol)溶於四氫呋喃(20mL)中，氮氣保護下冷卻到-40℃，滴加1.0M環戊基溴化鎂的四氫呋喃溶液(3.95mL,3.95mmol)，加完後升溫到室溫反應30分鐘。反應完畢後，加入飽和氯化銨水溶液(50mL)，用乙酸乙酯(100mL×2)萃取，合併有機相，無水硫酸鈉乾燥，過濾，濾液減壓濃縮後，殘留物用矽膠管柱層析分離純化(沖提劑為乙酸乙酯：石油醚(v/v)=49：1~19：1)，得到題述化合物2-[2-環戊基-2-羥基-2-(2-噻吩基)乙醯氧基]-7-氮雜螺[3.5]壬烷-7-羧酸第三丁酯(12D)，淡黃色液體(0.500g，產率42.2%)。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ 7.21(m,1H),7.11(m,1H),6.97(m,1H),5.08(m,1H),3.96(s,1H),3.35-3.26(m,4H),2.85-2.73(m,1H),2.39(m,1H),2.31(m,1H),1.90(m,1H),1.82(m,1H),1.61-1.48(m,12H),1.45(s,9H).
第四步：7-氮雜螺[3.5]壬烷-2-基2-環戊基-2-羥基-2-(2-噻吩基)乙酸酯(12E)
7-azaspiro[3.5]nonan-2-yl-2-cyclopentyl-2-hydroxy-2-(2-thienyl)acetate
將2-[2-環戊基-2-羥基-2-(2-噻吩基)乙醯氧基]-7-氮雜螺[3.5]壬烷-7-羧酸第三丁酯(12D)(0.55g,1.22mmol)溶於1,4-二氧六環(20mL)中，通入過量的鹽酸氣體室溫反應1小時。反應完畢後，加入飽和碳酸氫鈉水溶液(50mL)， 用二氯甲烷(100mL×2)萃取，合併有機相，無水硫酸鈉乾燥，過濾，濾液減壓濃縮得到題述化合物7-氮雜螺[3.5]壬烷-2-基2-環戊基-2-羥基-2-(2-噻吩基)乙酸酯(12E)，無色液體(0.40g，產率93.6%)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ 7.38(m,1H),7.08(m,1H),6.96(m,1H),5.93(s,1H),4.94(m,1H),2.78-2.68(m,1H),2.63-2.52(m,4H),2.24(m,2H),1.70(m,2H),1.58-1.39(m,12H).
LCMS m/z=350.2[M+1].
第五步：[7-[3-(2-氯-4-甲醯基-5-甲氧基-苯胺基)-3-氧代-丙基]-7-氮雜螺[3.5]壬烷-2-基]2-環戊基-2-羥基-2-(2-噻吩基)乙酸酯(12F)
[7-[3-(2-chloro-4-formyl-5-methoxy-anilino)-3-oxo-propyl]-7-azaspiro[3.5]nonan-2-yl]2-cyclopentyl-2-hydroxy-2-(2-thienyl)acetate
將N-(2-氯-4-甲醯基-5-甲氧基-苯基)丙-2-烯醯胺(1E)(0.247g,2.03mmol)溶於2-甲基四氫呋喃(30mL)中，加入7-氮雜螺[3.5]壬烷-2-基2-環戊基-2-羥基-2-(2-噻吩基)乙酸酯(12E)(0.300g,0.858mmol)，加入三乙胺(0.174g,1.72mmol)，100℃微波反應1小時。反應液冷卻至室溫，減壓濃縮後，殘留物用矽膠管柱層析分離純化(沖提劑為甲醇：二氯甲烷(v/v)=1：99~1：49)，得到題述化合物[7-[3-(2-氯-4-甲醯基-5-甲氧基-苯胺基)-3-氧代-丙基]-7-氮雜螺[3.5]壬烷-2-基]2-環戊基-2-羥基-2-(2-噻吩基)乙酸酯(12F)，黃色固體(0.350g，產率69.2%)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ 10.79(s,1H),10.18(s,1H),8.24(s,1H),7.70(s,1H),7.39(m,1H),7.09(m,1H),6.97(m,1H),5.94(s,1H),5.03-4.93 (m,1H),3.89(s,3H),2.80-2.70(m,1H),2.62(s,4H),2.41(d,3H),2.34-2.20(m,3H),1.82-1.69(m,2H),1.61(m,4H),1.55-1.28(m,8H).
LCMS m/z=589.1[M+1].
第六步：[7-[3-[4-[[[(2R)-2-[第三丁基(二甲基)矽基]氧基-2-(8-羥基-2-氧代-1H-喹啉-5-基)乙基]氨基]甲基]-2-氯-5-甲氧基-苯胺基]-3-氧代-丙基]-7-氮雜螺[3.5]壬烷-2-基]2-環戊基-2-羥基-2-(2-噻吩基)乙酸酯(12G)
[7-[3-[4-[[[(2R)-2-[tert-butyl(dimethyl)silyl]oxy-2-(8-hydroxy-2-oxo-1H-quinolin-5-yl)ethyl]amino]methyl]-2-chloro-5-methoxy-anilino]-3-oxo-propyl]-7-azaspiro[3.5]nonan-2-yl]2-cyclopentyl-2-hydroxy-2-(2-thienyl)acetate
將[7-[3-(2-氯-4-甲醯基-5-甲氧基-苯胺基)-3-氧代-丙基]-7-氮雜螺[3.5]壬烷-2-基]2-環戊基-2-羥基-2-(2-噻吩基)乙酸酯(12F)(0.400g,0.679mmol)溶於二氯甲烷(10mL)和甲醇(10mL)的混合溶液中，加入5-[(1R)-2-氨基-1-[第三丁基(二甲基)矽基]氧基甲基]-8-羥基-1H-喹啉-2-酮(1G)(0.318g,0.951mmol)，室溫反應30分鐘。加入三乙醯氧基硼氫化鈉(0.432g,2.04mmol)，室溫反應3小時。反應液加入二氯甲烷(20mL)和飽和碳酸氫鈉溶液(20mL)，萃取分層，水相用二氯甲烷(20mL×1)萃取，合併有機相，無水硫酸鈉乾燥，過濾，濾液減壓濃縮後殘留物用矽膠管柱層析分離純化(沖提劑為乙酸乙酯：石油醚(v/v)=1：1~1：0，甲醇：二氯甲烷(v/v)=1：99~1：19)，得到題述化合物[7-[3-[4-[[[(2R)-2-[第三丁基(二甲基)矽基]氧基-2-(8-羥基-2-氧代-1H-喹啉-5-基)乙基]氨基]甲基]-2-氯-5-甲氧基-苯胺基]-3-氧代-丙基]-7-氮雜螺[3.5]壬烷-2-基]-2-環戊基-2-羥基-2-(2-噻吩基)乙 酸酯(12G)，淡黃色固體(0.400g，產率64.9%)。
LCMS m/z=454.1[(M+2)/2].
第七步：[7-[3-[2-氯-4-[[[(2R)-2-羥基-2-(8-羥基-2-氧代-1H-喹啉-5-基)乙基]氨基]甲基]-5-甲氧基苯胺基]-3-氧代-丙基]-7-氮雜螺[3.5]壬烷-2-基]2-環戊基-2-羥基-2-(2-噻吩基)乙酸酯；二三氟乙酸鹽(化合物12)
[7-[3-[2-chloro-4-[[[(2R)-2-hydroxy-2-(8-hydroxy-2-oxo-1H-quinolin-5-yl)ethyl]amino]methyl]-5-methoxy-anilino]-3-oxo-propyl]-7-azaspiro[3.5]nonan-2-yl]2-cyclopentyl-2-hydroxy-2-(2-thienyl)acetate；ditrifluoroacetate acid salt
將[7-[3-[4-[[[(2R)-2-[第三丁基(二甲基)矽基]氧基-2-(8-羥基-2-氧代-1H-喹啉-5-基)乙基]氨基]甲基]-2-氯-5-甲氧基-苯胺基]-3-氧代-丙基]-7-氮雜螺[3.5]壬烷-2-基]-2-環戊基-2-羥基-2-(2-噻吩基)乙酸酯(12G)(0.275g,0.303mmol)溶於二氯甲烷(15mL)中，加入三乙胺三氫氟酸鹽(0.488g,3.03mmol)，室溫反應24小時。反應液加入水(20mL)和二氯甲烷(20mL)，加入3%氫氧化鈉溶液調節pH至12左右，萃取分層，水相用二氯甲烷(20mL×2)萃取，合併有機相，飽和氯化鈉水溶液(20mL×1)洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾，濾液減壓濃縮後殘留物用矽膠管柱層析分離純化(沖提劑為乙酸乙酯：石油醚(v/v)=1：1~1：0，甲醇：二氯甲烷(v/v)=3：97~1：9)，濃縮除去溶劑後得到的粗產物，粗產物進一步通過用液相製備管柱分離純化(液相製備條件：C18逆向層析管柱，流動相為含0.05%TFA的去離子水(A)，含0.05%TFA的乙腈(B)，梯度沖提A：B=5%~100%，沖提10分鐘，然後用100%B沖 提5分鐘，流速1.0mL/min，柱溫：40℃)得到題述化合物[7-[3-[2-氯-4-[[[(2R)-2-羥基-2-(8-羥基-2-氧代-1H-喹啉-5-基)乙基]氨基]甲基]-5-甲氧基苯胺基]-3-氧代-丙基]-7-氮雜螺[3.5]壬烷-2-基]2-環戊基-2-羥基-2-(2-噻吩基)乙酸酯；二三氟乙酸鹽(化合物12)，淡黃色固體(0.025g，產率10.4%)。
1H NMR(400MHz,CD3OD)δ 7.22(d,1H),6.88(s,1H),6.56(s,1H),6.44-6.33(m,2H),6.23(s,1H),6.13(d,1H),6.08-6.04(m,1H),5.70(d,1H),4.50(m,1H),4.23-4.13(m,1H),3.36(m,2H),2.95(s,3H),2.70-2.57(m,4H),2.38-2.32(m,1H),2.27(m,1H),2.16(m,4H),1.96(m,1H),1.62(m,1H),1.47(m,1H),1.08(m,6H),0.82-0.53(m,8H).
LCMS m/z=397.3[(M+2)/2].
實施例13：[7-[3-[2-氯-4-[[[(2R)-2-羥基-2-(8-羥基-2-氧代-1H-喹啉-5-基)乙基]氨基]甲基]-5-甲氧基-苯胺基]-3-氧代-丙基]-7-氮雜螺[3.5]壬烷-2-基]2-環戊基-2-羥基-2-苯基-乙酸酯；二三氟乙酸鹽(化合物13)
[7-[3-[2-chloro-4-[[[(2R)-2-hydroxy-2-(8-hydroxy-2-oxo-1H-quinolin-5-yl)ethyl]amino]methyl]-5-methoxy-anilino]-3-oxo-propyl]-7-azaspiro[3.5]nonan-2-yl]2-cyclopentyl-2-hydroxy-2-phenyl-acetate；ditrifluoroacetic acid salt
第一步：2-氧代-2-苯基-乙酸(13B)2-oxo-2-phenyl-aceticacid
將2-氧代-2-苯基-乙酸甲酯(13A)(10g,60.92mmol)溶於水(50mL)中，加入氫氧化鈉(4.9g,121.8mmol)，室溫反應2小時。反應液用二氯甲烷(50mL×2)萃取，水相用4M鹽酸水溶液調節pH至3，用二氯甲烷(100mL×3)萃取，合併有機相，有機相減壓濃縮，得到題述化合物2-氧代-2-苯基-乙酸(13B)，白色固體(9g，產率98.41%)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ 7.95-7.88(m,2H),7.78-7.71(m,1H),7.64-7.55(m,2H).
LCMS m/z=149.1[M-1]。
第二步：2-(2-氧代-2-苯基-乙醯基)氧基-7-氮雜螺[3.5]壬烷-7-羧酸第三 丁酯(13C)
tert-butyl 2-(2-oxo-2-phenyl-acetyl)oxy-7-azaspiro[3.5]nonane-7-carboxylate
將2-氧代-2-苯基-乙酸(13B)(4.0g,27mmol)溶於二氯甲烷(100mL)中，加入草醯氯(6.8g,53mmol)，滴加一滴N,N-二甲基甲醯胺，室溫反應1小時。反應液減壓濃縮為反應液3。將2-羥基-7-氮雜螺[3.5]壬烷-7-羧酸第三丁酯(1B)(4.8g,20mmol)溶於二氯甲烷(100mL)中，加入三乙胺(11g,110mmol)，冰浴下加入反應液3，室溫反應1小時。反應液加入二氯甲烷(50mL)和水(50mL)，萃取。水相用二氯甲烷(50mL×1)萃取，合併有機相。有機相用無水硫酸鈉乾燥，過濾，濾液減壓濃縮。殘留物用矽膠管柱層析分離純化(乙酸乙酯：石油醚(v/v)=0：1~1：9)，得到題述化合物2-(2-氧代-2-苯基-乙醯基)氧基-7-氮雜螺[3.5]壬烷-7-羧酸第三丁酯(13C)，黃色油狀(6.0g，產率60%)。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ 8.00(d,2H),7.70-7.62(m,1H),7.52(t,2H),5.35-5.28(m,1H),3.42-3.34(m,2H),3.34-3.26(m,2H),2.54-2.41(m,2H),2.07-1.98(m,2H),1.64-1.53(m,4H),1.50-1.37(m,9H).
LCMS m/z=396.2[M+23]。
第三步：2-(2-環戊基-2-羥基-2-苯基-乙醯基)氧基-7-氮雜螺[3.5]壬烷-7-羧酸第三丁酯(13D)
tert-butyl 2-(2-cyclopentyl-2-hydroxy-2-phenyl-acetyl)oxy-7-azaspiro[3.5]nonane-7-carboxylate
將2-(2-氧代-2-苯基-乙醯基)氧基-7-氮雜螺[3.5]壬烷-7-羧酸第三丁酯(13C)(1.0g,11mmol)溶於四氫呋喃(100mL)中，-40℃加入2.0M的環戊基溴化鎂的四氫呋喃溶液(8mL，16mmol)，逐漸升至室溫反應2小時。反應液加入飽和氯化銨溶液(60mL)，加入乙酸乙酯(50mL)，萃取。水相用乙酸乙酯(50mL×1)萃取，合併有機相。有機相用無水硫酸鈉乾燥，過濾，濾液減壓濃縮。殘留物用矽膠管柱層析分離純化(乙酸乙酯：石油醚(v/v)=0：1~1：19)，得到題述化合物2-(2-環戊基-2-羥基-2-苯基-乙醯基)氧基-7-氮雜螺[3.5]壬烷-7-羧酸第三丁酯(13D)，無色油狀(2.4g，產率51%)。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ 7.68-7.42(m,2H),7.38-7.29(m,2H),7.29-7.23(m,1H),5.08-4.95(m,1H),3.39-3.17(m,4H),2.97-2.82(m,1H),2.44-2.20(m,2H),1.90-1.80(m,1H),1.79-1.54(m,7H),1.53-1.47(m,4H),1.45-1.43(m,9H),1.38-1.30(m,2H).
LCMS m/z=466.3[M+23]。
第四步：7-氮雜螺[3.5]壬烷-2-基2-環戊基-2-羥基-2-苯基-乙酸酯(13E)
7-azaspiro[3.5]nonan-2-yl2-cyclopentyl-2-hydroxy-2-phenyl-acetate
將2-(2-環戊基-2-羥基-2-苯基-乙醯基)氧基-7-氮雜螺[3.5]壬烷-7-羧酸第三丁酯(13D)(2.4g,5.4mmol)溶於二氯甲烷(20mL)中，加入三氟乙酸(6.2g,54mmol)，室溫反應3小時。反應液加入氨水調節pH至10，加入二 氯甲烷(50mL)和水(50mL)，萃取。水相用二氯甲烷(20mL×1)萃取，合併有機相。有機相用無水硫酸鈉乾燥，過濾，濾液減壓濃縮，得到題述化合物7-氮雜螺[3.5]壬烷-2-基2-環戊基-2-羥基-2-苯基-乙酸酯(13E)，黃色油狀(1.7g，產率91%)。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ 7.66-7.40(m,2H),7.38-7.29(m,2H),7.29-7.24(m,1H),5.07-4.95(m,1H),3.03-2.84(m,4H),2.51-2.18(m,2H),2.00-1.27(m,15H).
LCMS m/z=344.2[M+1]。
第五步：[7-[3-(2-氯-4-甲醯基-5-甲氧基-苯胺基)-3-氧代-丙基]-7-氮雜螺[3.5]壬烷-2-基]2-環戊基-2-羥基-2-苯基-乙酸酯(13F)
[7-[3-(2-chloro-4-formyl-5-methoxy-anilino)-3-oxo-propyl]-7-azaspiro[3.5]nonan-2-yl]2-cyclopentyl-2-hydroxy-2-phenyl-acetate
將7-氮雜螺[3.5]壬烷-2-基2-環戊基-2-羥基-2-苯基-乙酸酯(13E)(0.400g,1.16mmol)溶於2-甲基四氫呋喃(10mL)中，加入N-(2-氯-4-甲醯基-5-甲氧基-苯基)丙基-2-烯醯胺(1E)(0.307g,1.28mmol)，加入三乙胺(0.236g,2.33mmol)，100℃微波反應1小時。反應液冷卻至室溫，減壓濃縮，殘留物用矽膠管柱層析分離純化(乙酸乙酯：石油醚(v/v)=1：1~1：0)，得到題述化合物[7-[3-(2-氯-4-甲醯基-5-甲氧基-苯胺基)-3-氧代-丙基]-7-氮雜螺[3.5]壬烷-2-基]2-環戊基-2-羥基-2-苯基-乙酸酯(13F)，黃色固體(0.500g，產率73.6%)。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ10.93(s,1H),10.32(s,1H),8.34(d,1H),7.81(d,1H),7.67-7.41(m,2H),7.38-7.30(m,2H),7.29-7.23(m,1H),5.08-4.98(m,1H),3.93(s,3H),2.98-2.85(m,1H),2.74-2.55(m,4H),2.47-2.23(m,4H),1.91-1.41(m,14H),1.39-1.29(m,2H).
LCMS m/z=583.3[M+1]。
第六步：[7-[3-[4-[[[(2R)-2-[第三丁基(二甲基)矽基]氧基-2-(8-羥基-2-氧代-1H-喹啉-5-基)乙基]氨基]甲基]-2-氯-5-甲氧基-苯胺基]-3-氧代-丙基]-7-氮雜螺[3.5]壬烷-2-基]2-環戊基-2-羥基-2-苯基-乙酸酯(13G)
[7-[3-[4-[[[(2R)-2-[tert-butyl(dimethyl)silyl]oxy-2-(8-hydroxy-2-oxo-1H-quinolin-5-yl)ethyl]amino]methyl]-2-chloro-5-methoxy-anilino]-3-oxo-propyl]-7-azaspiro[3.5]nonan-2-yl]2-cyclopentyl-2-hydroxy-2-phenyl-acetate
將[7-[3-(2-氯-4-甲醯基-5-甲氧基-苯胺基)-3-氧代-丙基]-7-氮雜螺[3.5]壬烷-2-基]2-環戊基-2-羥基-2-苯基-乙酸酯(13F)(0.430g,0.737mmol)溶於甲醇(10mL)中，加入5-[(1R)-2-氨基-1-[第三丁基(二甲基)矽基]氧基甲基]-8-羥基-1H-喹啉-2-酮(1G)(0.296g,0.885mmol)，加入無水氯化鋅(0.402g,2.95mmol)，55℃反應1小時。加入氰基硼氫化鈉(0.139g,2.21mmol)，55℃反應2小時。反應液加入二氯甲烷(50mL)和飽和碳酸氫鈉溶液(20mL)，萃取。水相用二氯甲烷(30mL×1)萃取，合併有機相，有機相用無水硫酸鈉乾燥，過濾，濾液減壓濃縮，得到題述化合物[7-[3-[4-[[[(2R)-2-[第三丁基(二甲基)矽基]氧基-2-(8-羥基-2-氧代-1H-喹啉-5-基)乙基]氨基]甲基]-2-氯-5-甲 氧基-苯胺基]-3-氧代-丙基]-7-氮雜螺[3.5]壬烷-2-基]2-環戊基-2-羥基-2-苯基-乙酸酯(13G)，黃色固體(0.47g，產率70%)。
LCMS m/z=451.3[(M+2)/2]。
第七步：[7-[3-[2-氯-4-[[[(2R)-2-羥基-2-(8-羥基-2-氧代-1H-喹啉-5-基)乙基]氨基]甲基]-5-甲氧基-苯胺基]-3-氧代-丙基]-7-氮雜螺[3.5]壬烷-2-基]2-環戊基-2-羥基-2-苯基-乙酸酯；二三氟乙酸鹽(化合物13)
[7-[3-[2-chloro-4-[[[(2R)-2-hydroxy-2-(8-hydroxy-2-oxo-1H-quinolin-5-yl)ethyl]amino]methyl]-5-methoxy-anilino]-3-oxo-propyl]-7-azaspiro[3.5]nonan-2-yl]2-cyclopentyl-2-hydroxy-2-phenyl-acetate；ditrifluoroacetic acid salt
將[7-[3-[4-[[[(2R)-2-[第三丁基(二甲基)矽基]氧基-2-(8-羥基-2-氧代-1H-喹啉-5-基)乙基]氨基]甲基]-2-氯-5-甲氧基-苯胺基]-3-氧代-丙基]-7-氮雜螺[3.5]壬烷-2-基]2-環戊基-2-羥基-2-苯基-乙酸酯(13G)(0.450g,0.499mmol)溶於四氫呋喃(5mL)中，加入三乙胺三氫氟酸鹽(0.805g,4.99mmol)，室溫反應24小時。反應液加入10%(v/v)甲醇/二氯甲烷溶液(50mL)，加入飽和碳酸氫鈉水溶液調節pH至8左右，萃取。水相用10%(v/v)甲醇/二氯甲烷溶液(50mL×2)萃取，合併有機相。有機相用飽和食鹽水(20mL×1)洗滌，用無水硫酸鈉乾燥，過濾，濾液減壓濃縮。殘留物用液相製備管柱分離純化(製備條件：C18逆向層析管柱，流動相為含0.05%TFA的去離子水(A)，含0.05%TFA的乙腈(B)，梯度沖提A：B=5%~100%，沖提10分鐘，然後用100%B沖提5分鐘，流速1.0mL/min，柱溫：40℃)，得到題述化合物[7-[3-[2-氯-4-[[[(2R)-2- 羥基-2-(8-羥基-2-氧代-1H-喹啉-5-基)乙基]氨基]甲基]-5-甲氧基-苯胺基]-3-氧代-丙基]-7-氮雜螺[3.5]壬烷-2-基]2-環戊基-2-羥基-2-苯基-乙酸酯；二三氟乙酸鹽(化合物13)，白色固體(0.200g，產率39.5%)。
1H NMR(400MHz,CD3OD)δ8.16(d,1H),7.79(s,1H),7.64(d,2H),7.49-7.42(m,1H),7.40-7.22(m,4H),7.05(d,1H),6.62(d,1H),5.45-5.35(m,1H),5.10-4.96(m,1H),4.28(q,2H),33.82(s,3H),3.62-3.40(m,4H),3.30-3.15(m,2H),3.13-2.86(m,5H),2.60-2.24(m,2H),2.03-1.78(m,6H),1.76-1.30(m,8H).
19F NMR(376MHz,CD3OD)δ -75.35.
LCMS m/z=394.3[(M+2)/2]。
實施例14：[7-[3-[2-氯-4-[[[(2R)-2-羥基-2-(8-羥基-2-氧代-1H-喹啉-5-基)乙基]氨基]甲基]-5-甲氧基-苯胺基]-3-氧代-丙基]-7-氮雜螺[3.5]壬烷-2-基]2-環戊基-2-羥基-2-苯基-乙酸酯；二三氟乙酸鹽(化合物13)的異構物1
Isomer1 of[7-[3-[2-chloro-4-[[[(2R)-2-hydroxy-2-(8-hydroxy-2-oxo-1H-quinolin-5-yl)ethyl]amino]methyl]-5-methoxy-anilino]-3-oxo-propyl]-7-azaspiro[3.5]nonan-2-yl]2-cyclopentyl-2-hydroxy-2-phenyl-acetate；ditrifluoroacetic acid salt
第一步：7-氮雜螺[3.5]壬烷-2-基2-環戊基-2-羥基-2-苯基-乙酸酯(13E)的異構物1
Isomer1 of 7-azaspiro[3.5]nonan-2-yl-2-cyclopentyl-2-hydroxy-2-phenyl-acetate
將2-(2-環戊基-2-羥基-2-苯基-乙醯基)氧基-7-氮雜螺[3.5]壬烷-7-羧酸第三丁酯(13D)(13g,29.31mmol)溶於二氯甲烷(50mL)中，加入三氟乙酸(33.41g,293.1mmol)，室溫反應3小時。反應液加入氨水調節pH至10，加入二氯甲烷(50mL)和水(50mL)，萃取。水相用二氯甲烷(50mL×1)萃取，合併有機相。有機相用無水硫酸鈉乾燥，過濾，濾液減壓濃縮，殘留物採用層析管柱分離純化，層析條件為：Instrument：Shimadzu LC-20 APPrep HPLC(PrepL-GB)；Column：Chiral Pak AY,300×50mm,10u；Mobile phase：A for Heptane(0.1%NH3H2O)and B for Ethanol；Gradient：B 25%；Flowrate：80mL/min；Column temperature：R.T.得到題述化合物7-氮雜螺[3.5]壬烷-2-基2-環戊基-2-羥基-2-苯基-乙酸酯(13E)的異構物1，黃色油狀(2.7g，產率27%)，13E異構物1的滯留時間(retention time)小於13E異構物2的滯留時 間。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ 7.65-7.40(m,2H),7.37-7.29(m,2H),7.29-7.23(m,1H),5.05-4.95(m,1H),2.96-2.88(m,1H),2.88-2.72(m,4H),2.46-2.20(m,2H),1.91-1.79(m,1H),1.79-1.40(m,12H),1.37-1.30(m,1H).
LCMS m/z=344.3[M+1]。
第二步：[7-[3-(2-氯-4-甲醯基-5-甲氧基-苯胺基)-3-氧代-丙基]-7-氮雜螺[3.5]壬烷-2-基]2-環戊基-2-羥基-2-苯基-乙酸酯(13F)的異構物1
Isomer1 of[7-[3-(2-chloro-4-formyl-5-methoxy-anilino)-3-oxo-propyl]-7-azaspiro[3.5]nonan-2-yl]2-cyclopentyl-2-hydroxy-2-phenyl-acetate
將7-氮雜螺[3.5]壬烷-2-基2-環戊基-2-羥基-2-苯基-乙酸酯(13E)的異構物1(0.600g,1.75mmol)溶於2-甲基四氫呋喃(10mL)中，加入N-(2-氯-4-甲醯基-5-甲氧基-苯基)丙基-2-烯醯胺(1E)(0.460g,1.92mmol)，加入三乙胺(0.354g,3.49mmol)，100℃微波反應1小時。反應液冷卻至室溫，減壓濃縮，殘留物用矽膠管柱層析分離純化(乙酸乙酯：石油醚(v/v)=1：1~1：0)，得到題述化合物[7-[3-(2-氯-4-甲醯基-5-甲氧基-苯胺基)-3-氧代-丙基]-7-氮雜螺[3.5]壬烷-2-基]2-環戊基-2-羥基-2-苯基-乙酸酯(13F)的異構物1，黃色固體(0.740g，產率72.7%)。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ10.29(d,1H),8.33(d,1H),7.81(d,1H), 7.65-7.40(m,2H),7.37-7.29(m,2H),7.29-7.24(m,2H),5.07-4.95(m,1H),3.93(s,3H),2.97-2.83(m,1H),2.68(br,4H),2.48(br,2H),2.42-2.34(m,1H),2.32-2.23(m,1H),1.92-1.80(m,1H),1.80-1.65(m,7H),1.65-1.30(m,8H).
LCMS m/z=583.3[M+1]。
第三步：[7-[3-[4-[[[(2R)-2-[第三丁基(二甲基)矽基]氧基-2-(8-羥基-2-氧代-1H-喹啉-5-基)乙基]氨基]甲基]-2-氯-5-甲氧基-苯胺基]-3-氧代-丙基]-7-氮雜螺[3.5]壬烷-2-基]2-環戊基-2-羥基-2-苯基-乙酸酯(13G)的異構物1
Isomer1 of[7-[3-[4-[[[(2R)-2-[tert-butyl(dimethyl)silyl]oxy-2-(8-hydroxy-2-oxo-1H-quinolin-5-yl)ethyl]amino]methyl]-2-chloro-5-methoxy-anilino]-3-oxo-propyl]-7-azaspiro[3.5]nonan-2-yl]2-cyclopentyl-2-hydroxy-2-phenyl-acetate
將[7-[3-(2-氯-4-甲醯基-5-甲氧基-苯胺基)-3-氧代-丙基]-7-氮雜螺[3.5]壬烷-2-基]2-環戊基-2-羥基-2-苯基-乙酸酯(13F)的異構物1(0.740g,1.27mmol)溶於甲醇(10mL)中，加入5-[(1R)-2-氨基-1-[第三丁基(二甲基)矽基]氧基甲基]-8-羥基-1H-喹啉-2-酮(1G)(0.425g,1.27mmol)，加入無水氯化鋅(0.692g,5.08mmol)，55℃反應1小時。加入氰基硼氫化鈉(0.239g,3.81mmol)，55℃反應2小時。反應液加入二氯甲烷(50mL)，加入飽和碳酸氫鈉溶液(20mL)，萃取。水相用二氯甲烷(30mL×2)萃取，合併有機相，有機相用無水硫酸鈉乾燥，過濾，濾液減壓濃縮，得到題述化合物[7-[3-[4-[[[(2R)-2-[第 三丁基(二甲基)矽基]氧基-2-(8-羥基-2-氧代-1H-喹啉-5-基)乙基]氨基]甲基]-2-氯-5-甲氧基-苯胺基]-3-氧代-丙基]-7-氮雜螺[3.5]壬烷-2-基]2-環戊基-2-羥基-2-苯基-乙酸酯(13G)的異構物1，黃色固體(1.0g，產率87%)。
LCMS m/z=451.3[(M+2)/2]。
第四步：[7-[3-[2-氯-4-[[[(2R)-2-羥基-2-(8-羥基-2-氧代-1H-喹啉-5-基)乙基]氨基]甲基]-5-甲氧基-苯胺基]-3-氧代-丙基]-7-氮雜螺[3.5]壬烷-2-基]2-環戊基-2-羥基-2-苯基-乙酸酯；二三氟乙酸鹽(化合物13)的異構物1
Isomer1 of[7-[3-[2-chloro-4-[[[(2R)-2-hydroxy-2-(8-hydroxy-2-oxo-1H-quinolin-5-yl)ethyl]amino]methyl]-5-methoxy-anilino]-3-oxo-propyl]-7-azaspiro[3.5]nonan-2-yl]2-cyclopentyl-2-hydroxy-2-phenyl-acetate；ditrifluoroacetic acid salt
將[7-[3-[4-[[[(2R)-2-[第三丁基(二甲基)矽基]氧基-2-(8-羥基-2-氧代-1H-喹啉-5-基)乙基]氨基]甲基]-2-氯-5-甲氧基-苯胺基]-3-氧代-丙基]-7-氮雜螺[3.5]壬烷-2-基]2-環戊基-2-羥基-2-苯基-乙酸酯(13G)的異構物1(1.0g,1.1mmol)溶於四氫呋喃(5mL)中，加入三乙胺三氫氟酸鹽(1.8g,11mmol)，室溫反應24小時。反應液加入10%(v/v)甲醇/二氯甲烷溶液(50mL)，加入飽和碳酸氫鈉水溶液調節pH至8左右，萃取。水相用10%(v/v)甲醇/二氯甲烷溶液(50mL×2)萃取，合併有機相。有機相用飽和食鹽水(20mL×1)洗滌，用無水硫酸鈉乾燥，過濾，濾液減壓濃縮。殘留物用液相製備管 柱分離純化(製備條件：C18逆向層析管柱，流動相為為含0.05%TFA的去離子水(A)，含0.05%TFA的乙腈(B)，梯度沖提A：B=5%~100%，沖提10分鐘，然後用100%B沖提5分鐘，流速1.0mL/min，柱溫：40℃)，得到題述化合物[7-[3-[2-氯-4-[[[(2R)-2-羥基-2-(8-羥基-2-氧代-1H-喹啉-5-基)乙基]氨基]甲基]-5-甲氧基-苯胺基]-3-氧代-丙基]-7-氮雜螺[3.5]壬烷-2-基]2-環戊基-2-羥基-2-苯基-乙酸酯；二三氟乙酸鹽(化合物13)的異構物1，白色固體(0.200g，產率18%)。
1H NMR(400MHz,CD3OD)δ 8.13(d,1H),7.77(s,1H),7.62(d,2H),7.46(s,1H),7.37-7.21(m,4H),7.03(d,1H),6.60(d,1H),5.40(dd,1H),5.09-4.94(m,1H),4.26(q,2H),3.89-3.77(m,3H),3.62-3.40(m,4H),3.29-3.22(m,1H),3.21-3.12(m,1H),3.11-2.86(m,5H),2.60-2.40(m,1H),2.40-2.22(m,1H),2.00-1.80(m,6H),1.71-1.53(m,5H),1.52-1.40(m,1H),1.39-1.26(m,2H).
19F NMR(376MHz,CD3OD)δ -75.43.
LCMS m/z=394.4[(M+2)/2]。
實施例15：[7-[3-[2-氯-4-[[[(2R)-2-羥基-2-(8-羥基-2-氧代-1H-喹啉-5-基)乙基]氨基]甲基]-5-甲氧基-苯胺基]-3-氧代-丙基]-7-氮雜螺[3.5]壬烷-2-基]2-環戊基-2-羥基-2-苯基-乙酸酯；二三氟乙酸鹽(化合物13)的異構物2
Isomer2 of[7-[3-[2-chloro-4-[[[(2R)-2-hydroxy-2-(8-hydroxy-2-oxo-1H-quinolin-5-yl)ethyl]amino]methyl]-5-methoxy-anilino]-3-oxo-propyl]-7-azaspiro[3.5]nonan-2-yl]2-cyclopentyl-2-hydroxy-2-phenyl-acetate；ditrifluoroacetic acid salt
第一步：7-氮雜螺[3.5]壬烷-2-基2-環戊基-2-羥基-2-苯基-乙酸酯(13E)的異構物2
Isomer2 of 7-azaspiro[3.5]nonan-2-yl-2-cyclopentyl-2-hydroxy-2-phenyl-acetate
將2-(2-環戊基-2-羥基-2-苯基-乙醯基)氧基-7-氮雜螺[3.5]壬烷-7-羧酸第三丁酯(13D)(13g,29.31mmol)溶於二氯甲烷(50mL)中，加入三氟乙酸(33.41g,293.1mmol)，室溫反應3小時。反應液加入氨水調節pH至10，加入二氯甲烷(50mL)和水(50mL)，萃取。水相用二氯甲烷(50mL×1)萃取，合併有機相。有機相用無水硫酸鈉乾燥，過濾，濾液減壓濃縮，殘留物拆分，製備條件如下：Instrument：Shimadzu LC-20AP PrepHPLC(PrepL-GB)； Column：Chiral Pak AY,300×50mm,10u；Mobile phase：A for Heptane(0.1%NH3H2O)and B for Ethanol；Gradient：B25%；Flowrate：80mL/min；Column temperature：R.T.得到題述化合物7-氮雜螺[3.5]壬烷-2-基2-環戊基-2-羥基-2-苯基-乙酸酯(13E)的異構物2，黃色油狀(2.50g，產率25%)。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ 9.21(s,1H),7.62(dd,2H),7.36-7.30(m,2H),7.29-7.24(m,1H),5.08-4.96(m,1H),3.12-2.94(m,4H),2.94-2.85(m 1H),2.48-2.37(m,1H),2.37-2.27(m,1H),1.93(dd,1H),1.86-1.74(m,5H),1.73-1.40(m,6H),1.40-1.30(m,2H).
LCMS m/z=344.3[M+1]。
第二步：[7-[3-(2-氯-4-甲醯基-5-甲氧基-苯胺基)-3-氧代-丙基]-7-氮雜螺[3.5]壬烷-2-基]2-環戊基-2-羥基-2-苯基-乙酸酯(13F)的異構物2
Isomer2 of[7-[3-(2-chloro-4-formyl-5-methoxy-anilino)-3-oxo-propyl]-7-azaspiro[3.5]nonan-2-yl]2-cyclopentyl-2-hydroxy-2-phenyl-acetate
將7-氮雜螺[3.5]壬烷-2-基2-環戊基-2-羥基-2-苯基-乙酸酯(13E)的異構物2(0.600g,1.75mmol)溶於2-甲基四氫呋喃(10mL)中，加入N-(2-氯-4-甲醯基-5-甲氧基-苯基)丙基-2-烯醯胺(1E)(0.460g,1.92mmol)，加入三乙胺(0.354g,3.49mmol)，100℃微波反應1小時。反應液濃縮，殘留物用矽膠管柱層析分離純化(乙酸乙酯：石油醚(v/v)=1：1~1：0)，得到題述化合物[7-[3-(2- 氯-4-甲醯基-5-甲氧基-苯胺基)-3-氧代-丙基]-7-氮雜螺[3.5]壬烷-2-基]2-環戊基-2-羥基-2-苯基-乙酸酯(13F)的異構物2，黃色固體(0.750g，產率73.6%)。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ 10.30(s,1H),8.34(s,1H),7.81(s,1H),7.68-7.62(m,2H),7.37-7.29(m,2H),7.29-7.24(m,2H),5.09-4.94(m,1H),3.93(s,3H),2.98-2.84(m,1H),2.67(s,4H),2.48(s,2H),2.42-2.35(m,1H),2.32-2.22(m,1H),1.91-1.83(m,1H),1.80-1.39(m,13H),1.39-1.29(m,2H).
LCMS m/z=583.3[M+1]。
第三步：[7-[3-[4-[[[(2R)-2-[第三丁基(二甲基)矽基]氧基-2-(8-羥基-2-氧代-1H-喹啉-5-基)乙基]氨基]甲基]-2-氯-5-甲氧基-苯胺基]-3-氧代-丙基]-7-氮雜螺[3.5]壬烷-2-基]2-環戊基-2-羥基-2-苯基-乙酸酯(13G)的異構物2
Isomer2 of[7-[3-[4-[[[(2R)-2-[tert-butyl(dimethyl)silyl]oxy-2-(8-hydroxy-2-oxo-1H-quinolin-5-yl)ethyl]amino]methyl]-2-chloro-5-methoxy-anilino]-3-oxo-propyl]-7-azaspiro[3.5]nonan-2-yl]2-cyclopentyl-2-hydroxy-2-phenyl-acetate
將[7-[3-(2-氯-4-甲醯基-5-甲氧基-苯胺基)-3-氧代-丙基]-7-氮雜螺[3.5]壬烷-2-基]2-環戊基-2-羥基-2-苯基-乙酸酯(13F)的異構物2(0.752g,1.29mmol)溶於甲醇(10mL)中，加入5-[(1R)-2-氨基-1-[第三丁基(二甲基)矽基]氧基甲基]-8-羥基-1H-喹啉-2-酮(1G)(0.432g,1.29mmol)，加入無水氯化鋅(0.701g,5.14mmol)，55℃反應1小時。加入氰基硼氫化鈉(0.243g,3.86mmol)， 55℃反應2小時。反應液加入二氯甲烷(50mL)，加入飽和碳酸氫鈉溶液(20mL)，萃取。水相用二氯甲烷(30mL×2)萃取，合併有機相，有機相用無水硫酸鈉乾燥，過濾，濾液減壓濃縮，得到題述化合物[7-[3-[4-[[[(2R)-2-[第三丁基(二甲基)矽基]氧基-2-(8-羥基-2-氧代-1H-喹啉-5-基)乙基]氨基]甲基]-2-氯-5-甲氧基-苯胺基]-3-氧代-丙基]-7-氮雜螺[3.5]壬烷-2-基]2-環戊基-2-羥基-2-苯基-乙酸酯(13G)的異構物2，黃色固體(1.00g，產率86.0%)。
LCMS m/z=451.4[(M+2)/2]。
第四步：[7-[3-[2-氯-4-[[[(2R)-2-羥基-2-(8-羥基-2-氧代-1H-喹啉-5-基)乙基]氨基]甲基]-5-甲氧基-苯胺基]-3-氧代-丙基]-7-氮雜螺[3.5]壬烷-2-基]2-環戊基-2-羥基-2-苯基-乙酸酯；二三氟乙酸鹽(化合物13)的異構物2
Isomer2 of[7-[3-[2-chloro-4-[[[(2R)-2-hydroxy-2-(8-hydroxy-2-oxo-1H-quinolin-5-yl)ethyl]amino]methyl]-5-methoxy-anilino]-3-oxo-propyl]-7-azaspiro[3.5]nonan-2-yl]2-cyclopentyl-2-hydroxy-2-phenyl-acetate；ditrifluoroacetic acid salt
將[7-[3-[4-[[[(2R)-2-[第三丁基(二甲基)矽基]氧基-2-(8-羥基-2-氧代-1H-喹啉-5-基)乙基]氨基]甲基]-2-氯-5-甲氧基-苯胺基]-3-氧代-丙基]-7-氮雜螺[3.5]壬烷-2-基]2-環戊基-2-羥基-2-苯基-乙酸酯(13G)的異構物2(1.0g,1.1mmol)溶於四氫呋喃(5mL)中，加入三乙胺三氫氟酸鹽(1.8g,11mmol)，室溫反應24小時。反應液加入10%(v/v)甲醇/二氯甲烷溶液 (50mL)，加入飽和碳酸氫鈉水溶液調節pH至8左右，萃取。水相用10%(v/v)甲醇/二氯甲烷溶液(50mL×2)萃取，合併有機相。有機相用飽和食鹽水(20mL×1)洗滌，用無水硫酸鈉乾燥，過濾，濾液減壓濃縮。殘留物用液相製備管柱分離純化(製備條件：C18逆向層析管柱，流動相為為含0.05%TFA的去離子水(A)，含0.05%TFA的乙腈(B)，梯度沖提A：B=5%~100%，沖提10分鐘，然後用100%B沖提5分鐘，流速1.0mL/min，柱溫：40℃)，得到題述化合物[7-[3-[2-氯-4-[[[(2R)-2-羥基-2-(8-羥基-2-氧代-1H-喹啉-5-基)乙基]氨基]甲基]-5-甲氧基-苯胺基]-3-氧代-丙基]-7-氮雜螺[3.5]壬烷-2-基]2-環戊基-2-羥基-2-苯基-乙酸酯；二三氟乙酸鹽(化合物13)的異構物2，白色固體(0.250g，產率22.2%)。
1H NMR(400MHz,CD3OD)δ 8.04(d,1H),7.70(s,1H),7.54(d,2H),7.38(s,1H),7.29-7.13(m,4H),6.95(d,1H),6.52(d,1H),5.32(dd,1H),4.98-4.87(m,1H),4.17(q,2H),3.77(s,3H),3.50-3.30(m,4H),3.20-3.13(m,1H),3.13-3.04(m,1H),3.02-2.77(m,5H),2.50-2.30(m,1H),2.31-2.17(m,1H),1.93-1.69(m,6H),1.65-1.45(m,5H),1.45-1.32(m,1H),1.32-1.20(m,2H).
19F NMR(376MHz,CD3OD)δ -75.43.
LCMS m/z=394.3[(M+2)/2]。
實施例16：[7-[3-[3-[[4-[[[(2R)-2-羥基-2-(8-羥基-2-氧代-1H-喹啉-5-基)乙基]氨基]甲基]苯基]氨基甲醯基]-N-甲基-苯胺基]-3-氧代-丙基]-7-氮雜螺[3.5]壬烷-2-基]2-羥基-2,2-二(2-噻吩基)乙酸酯；二三氟乙酸鹽(化合物16)
[7-[3-[3-[[4-[[[(2R)-2-hydroxy-2-(8-hydroxy-2-oxo-1H-quinolin-5-yl)ethyl]amino]methyl]phenyl]carbamoyl]-N-methyl-anilino]-3-oxo-propyl]-7-azaspiro[ 3.5]nonan-2-yl]2-hydroxy-2,2-bis(2-thienyl)acetate；ditrifluoroacetic acid salt
第一步：3-(甲基氨基)苯甲酸甲酯(16B)
Methyl 3-(methylamino)benzoate
將3-氨基苯甲酸甲酯(16A)(10.0g，66.2mmol)溶解在N,N-二甲基甲醯胺(150mL)中，加入碳酸鉀(13.7g，99.2mmol)，再慢慢滴入碘甲烷(9.39g，66.2mmol)，加完後室溫反應3小時。過濾，濾渣用乙酸乙酯(50mL)洗滌，收集濾液，加入水(100mL)，用乙酸乙酯(200mL×2)萃取，合併有機相，用飽和氯化鈉溶液(100mL×2)洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾，濾液減壓濃縮後殘留物用矽膠管柱層析分離純化(沖提劑為石油醚：乙酸乙酯 (v/v)=100：0~97：3)得到題述化合物3-(甲基氨基)苯甲酸甲酯(16B)，淺黃色油狀物(3.85g，產率35.2%)。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ 7.29(d,1H),7.20-7.17(m,1H),7.15(t,1H),6.70(m,1H),3.81(s,3H),2.78(s,3H).
LCMS m/z=166.2[M+1]。
第二步：3-[甲基(丙-2-烯醯基)氨基苯甲酸甲酯(16C)
Methyl 3-[methyl(prop-2-enoyl)amino]benzoate
將3-(甲基氨基)苯甲酸甲酯(16B)(0.500g，3.03mmol)溶解在二氯甲烷(5mL)中，加入碳酸氫鈉(0.509g，6.05mmol)，氮氣保護下冰浴冷卻至0℃，滴加丙烯醯氯(0.411g，4.54mmol)，加完後升溫至室溫反應30分鐘。加入二氯甲烷(20mL×1)萃取，用飽和碳酸氫鈉溶液(10mL×2)洗滌，合併有機相，有機相用飽和氯化鈉溶液(10mL×1)洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾，濾液減壓濃縮後殘留物用矽膠管柱層析分離純化(沖提劑為石油醚：乙酸乙酯(v/v)=100：0~4：1)得到題述化合物3-[甲基(丙-2-烯醯基)氨基苯甲酸甲酯(16C)，無色油狀物(0.569g，產率85.7%)。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ 8.01(d,1H),7.87(t,1H),7.50(t,1H),7.40-7.36(m,1H),6.39(m,1H),6.04(m,1H),5.55(m,1H),3.94(s,3H),3.38(s,3H).
LCMS m/z=220.2[M+1]。
第三步：3-[甲基(丙-2-烯醯基)氨基]苯甲酸(16D)
3-[methyl(prop-2-enoyl)amino]benzoicacid
將3-[甲基(丙-2-烯醯基)氨基苯甲酸甲酯(16C)(0.550g，2.51mmol)溶解在四氫呋喃(17mL)中，冰浴冷卻下滴加1.0M氫氧化鋰(0.409g，17.1mmol)水溶液，加完後冰浴下反應1小時。冰浴下用10%鹽酸溶液調節pH至1，用乙酸乙酯(20mL×2)萃取，合併有機相，有機相用飽和氯化鈉溶液(10mL×2)洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾，濾液減壓濃縮得到題述化合物3-[甲基(丙-2-烯醯基)氨基]苯甲酸(16D)，白色固體(0.500g，產率97.1%)。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ 8.02(d,1H),7.88(t,1H),7.48(t,1H),7.37(d,1H),6.35(m,1H),5.99(m,1H),5.51(m,1H),3.34(s,3H).
LCMS m/z=206.2[M+1]。
第四步：3-[3-[2-[2-羥基-2,2-雙(2-噻吩基)乙醯基]氧基-7-氮雜螺[3.5]壬烷-7-基]丙醯基-甲基-氨基]苯甲酸(16E)
3-[3-[2-[2-hydroxy-2,2-bis(2-thienyl)acetyl]oxy-7-azaspiro[3.5]nonan-7-yl]propanoyl-methyl-amino]benzoicacid
將3-[甲基(丙-2-烯醯基)氨基]苯甲酸(16D)(0.400g，1.95mmol)溶解在2-甲基四氫呋喃(10mL)中，加入7-氮雜螺[3.5]壬烷-2-基2-羥基-2,2-雙(2-噻吩基)乙酸酯(1D)(0.709g，1.95mmol)和三乙胺(0.394g，3.90mmol)，加完後微波100℃反應1小時。反應液減壓濃縮後殘留物用矽膠管柱層析分離純化(沖提劑為二氯甲烷：甲醇(v/v)=100：0~9：1)得到題述化合物3-[3-[2-[2-羥基-2,2-雙(2-噻吩基)乙醯基]氧基-7-氮雜螺[3.5]壬烷-7-基]丙醯基-甲基-氨基]苯甲 酸(16E)，黃色固體(0.500g，產率45.1%)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ 7.87(d,1H),7.76(d,1H),7.50(d,2H),7.47(d,1H),7.45(d,1H),7.26(s,1H),7.08(d,1H),7.07(d,1H),6.98(d,1H),6.97(d,1H),5.04-4.96(m,1H),3.17(s,3H),2.73(m,2H),2.24-2.14(m,5H),2.14-2.07(m,2H),1.71-1.67[m,2H),1.46(s,2H),1.41(s,2H),1.24(s,1H).
LCMS m/z=569.3[M+1]。
第五步：[7-[3-[3-[[4-(1,3-二氧戊環-2-基)苯基]氨基甲醯基]-N-甲基苯胺]-3-氧代-丙基]-7-氮雜螺[3.5]壬烷-2-基]2-羥基-2,2-二(2-噻吩基)乙酸酯(16F)
[7-[3-[3-[[4-(1,3-dioxolan-2-yl)phenyl]carbamoyl]-N-methyl-anilino]-3-oxo-propyl]-7-azaspiro[3.5]nonan-2-yl]2-hydroxy-2,2-bis(2-thienyl)acetate
將3-[3-[2-[2-羥基-2,2-雙(2-噻吩基)乙醯基]氧基-7-氮雜螺[3.5]壬烷-7-基]丙醯基-甲基-氨基]苯甲酸(16E)(1.50g，2.64mmol)溶解在二氯甲烷(20mL) 中，加入4-(1,3-二氧戊環-2-基)苯胺()(0.871g，5.28mmol)、 HATU(1.30g，3.43mmol)，冰浴冷卻至0℃，再滴加二異丙基乙基胺(1.70g，13.2mmol)，加完後自然升溫至室溫反應3小時。加入水(10mL)，二氯甲烷(20mL)，分液，有機相用飽和氯化鈉溶液(10mL×1)洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾，濾液減壓濃縮所得粗產物用矽膠管柱純化(沖提劑：70%(v/v)乙酸乙酯/石油醚~2%(v/v)甲醇/二氯甲烷~4%(v/v)甲醇/二氯甲烷)得題述化合物 [7-[3-[3-[[4-(1,3-二氧戊環-2-基)苯基]氨基甲醯基]-N-甲基苯胺]-3-氧代-丙基]-7-氮雜螺[3.5]壬烷-2-基]2-羥基-2,2-二(2-噻吩基)乙酸酯(16F)，淺黃色固體(0.820g，產率43.4%)。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ 7.87(d,1H),7.80-7.73(m,3H),7.53(t,1H),7.48(d,2H),7.34(d,1H),7.28(m,2H),7.15(m,2H),6.97(m,2H),5.80(s,1H),5.14-5.05(m,1H),4.76-4.60(m,1H),4.15-4.10(m,2H),4.05-4.00(m,2H),3.28(s,3H),2.80(t,2H),2.50-2.34(m,5H),2.34-2.26(m,2H),1.84-1.81(m,2H),1.67-1.57(m,4H).
LCMS m/z=716.3[M+1]。
第六步：[7-[3-[3-[(4-甲醯基苯基)氨基甲醯基]-N-甲基苯胺]-3-氧代-丙基]-7-氮雜螺[3.5]壬烷-2-基]2-羥基-2,2-二(2-噻吩基)乙酸酯(16G)
[7-[3-[3-[(4-formylphenyl)carbamoyl]-N-methyl-anilino]-3-oxo-propyl]-7-azaspiro[3.5]nonan-2-yl]2-hydroxy-2,2-bis(2-thienyl)acetate
將[7-[3-[3-[[4-(1,3-二氧戊環-2-基)苯基]氨基甲醯基]-N-甲基苯胺]-3-氧代-丙基]-7-氮雜螺[3.5]壬烷-2-基]2-羥基-2,2-二(2-噻吩基)乙酸酯(16F)(0.820g，1.15mmol)溶解在乙腈(8mL)中，冰浴冷卻下加入3M鹽酸水溶液(10mL)，加完後冰浴下反應3小時。用二氯甲烷(20mL×2)萃取，合併有機相，有機相用飽和氯化鈉溶液(10mL×2)洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾，濾液減壓濃縮得題述化合物[7-[3-[3-[(4-甲醯基苯基)氨基甲醯基]-N-甲基苯胺]-3-氧代-丙基]-7-氮雜螺[3.5]壬烷-2-基]2-羥基-2,2-二(2-噻吩基)乙酸酯 (16G)粗產物，淺黃色固體(0.635g，產率82.5%)，不純化直接用於下一步。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ 9.94(s,1H),8.05(s,2H),7.93(d,1H),7.89(d,2H),7.84(s,1H),7.57(t,1H),7.35(d,1H),7.29(m,2H),7.15(m,2H),6.97(m,2H),5.18-5.09(m,1H),4.62(s,1H),3.29(s,3H),3.06-2.98(m,2H),2.75-2.61(m,3H),2.40-2.31(m,2H),1.91-1.85(m,3H),1.80-1.70(m,5H).
LCMS m/z=672.2[M+1]。
第七步：[7-[3-[3-[[4-[[[(2R)-2-[第三丁基(二甲基)甲矽烷基]氧基-2-(8-羥基-2-氧代-1H-喹啉-5-基)乙基]氨基]甲基]苯基]氨基甲醯基]-N-甲基-苯胺基]-3-氧代-丙基]-7-氮雜螺[3.5]壬烷-2-基]2-羥基-2,2-二(2-噻吩基)乙酸酯(16H)
[7-[3-[3-[[4-[[[(2R)-2-[tert-butyl(dimethyl)silyl]oxy-2-(8-hydroxy-2-oxo-1H-quinolin-5-yl)ethyl]amino]methyl]phenyl]carbamoyl]-N-methyl-anilino]-3-oxo-propyl]-7-azaspiro[3.5]nonan-2-yl]2-hydroxy-2,2-bis(2-thienyl)acetate
將[7-[3-[3-[(4-甲醯基苯基)氨基甲醯基]-N-甲基苯胺]-3-氧代-丙基]-7-氮雜螺[3.5]壬烷-2-基]2-羥基-2,2-二(2-噻吩基)乙酸酯(16G)(0.600g，0.893mmol)溶解在無水甲醇(20mL)中，加入5-[(1R)-2-氨基-1-[第三丁基(二甲基)矽基]氧基甲基]-8-羥基-1H-喹啉-2-酮(1G)(0.299g，0.893mmol)和無水氯化鋅(0.487g，3.57mmol)，50℃反應1小時後加入氰基硼氫化鈉(0.281g，4.47mmol)，繼續50℃反應1小時。加入水(50mL)，二氯甲烷(100mL×3)萃取，合併有機相，有機相用飽和氯化鈉溶液50mL×1)洗滌，無水硫酸鈉乾 燥，過濾，濾液減壓濃縮得題述化合物[7-[3-[3-[[4-[[[(2R)-2-[第三丁基(二甲基)甲矽烷基]氧基-2-(8-羥基-2-氧代-1H-喹啉-5-基)乙基]氨基]甲基]苯基]氨基甲醯基]-N-甲基-苯胺基]-3-氧代-丙基]-7-氮雜螺[3.5]壬烷-2-基]2-羥基-2,2-二(2-噻吩基)乙酸酯(16H)粗產物，黃色固體(0.600g，產率67.8%)，不純化直接用於下一步。
LCMS m/z=495.8[M/2+1]。
第八步：[7-[3-[3-[[4-[[[(2R)-2-羥基-2-(8-羥基-2-氧代-1H-喹啉-5-基)乙基]氨基]甲基]苯基]氨基甲醯基]-N-甲基-苯胺基]-3-氧代-丙基]-7-氮雜螺[3.5]壬烷-2-基]2-羥基-2,2-二(2-噻吩基)乙酸酯；二三氟乙酸鹽(化合物16)
[7-[3-[3-[[4-[[[(2R)-2-hydroxy-2-(8-hydroxy-2-oxo-1H-quinolin-5-yl)ethyl]amino]methyl]phenyl]carbamoyl]-N-methyl-anilino]-3-oxo-propyl]-7-azaspiro[3.5]nonan-2-yl]2-hydroxy-2,2-bis(2-thienyl)acetate；ditrifluoroacetic acid salt
將[7-[3-[3-[[4-[[[(2R)-2-[第三丁基(二甲基)甲矽烷基]氧基-2-(8-羥基-2-氧代-1H-喹啉-5-基)乙基]氨基]甲基]苯基]氨基甲醯基]-N-甲基-苯胺基]-3-氧代-丙基]-7-氮雜螺[3.5]壬烷-2-基]2-羥基-2,2-二(2-噻吩基)乙酸酯(16H)(0.600g，0.606mmol)溶解在四氫呋喃(10mL)中，加入三乙胺三氫氟酸鹽(0.391g，2.42mmol)室溫反應過夜。將反應清液倒掉，剩餘黏稠物用四氫呋喃(20mL)洗滌，再將清液倒掉，黏稠物用甲醇/二氯甲烷(v/v=1/9)的混合溶液溶解，滴加飽和碳酸氫鈉水溶液調節pH至鹼性，分液，水層再用甲醇/二氯甲烷(v/v=1/9)的混合溶液(100mL×3)萃取，合併有機相，有機相用無水 硫酸鈉乾燥，過濾，濾液減壓濃縮所得粗產物，該粗產物用液相製備管柱分離純化(製備條件：C18逆向層析管柱，流動相為為含0.05%TFA的去離子水(A)，含0.05%TFA的乙腈(B)，梯度沖提A：B=5%~100%，沖提10分鐘，然後用100%B沖提5分鐘，流速1.0mL/min，柱溫：40℃)得題述化合物[7-[3-[3-[[4-[[[(2R)-2-羥基-2-(8-羥基-2-氧代-1H-喹啉-5-基)乙基]氨基]甲基]苯基]氨基甲醯基]-N-甲基-苯胺基]-3-氧代-丙基]-7-氮雜螺[3.5]壬烷-2-基]2-羥基-2,2-二(2-噻吩基)乙酸酯；二三氟乙酸鹽(化合物16)，淺黃色固體(0.075g，產率14.1%)。
1H NMR(400MHz,CD3OD)δ 8.19(d,1H),8.01(d,1H),7.92(s,1H),7.83(d,2H),7.67(t,1H),7.58(d,1H),7.51(d,2H),7.39-7.34(m,2H),7.27(d,1H),7.12(s,2H),7.02(d,1H),6.99-6.94(m,2H),6.63(d,1H),5.39(t,1H),5.16-5.08(m,1H),4.30(s,2H),3.51-3.35(m,4H),3.33(s,3H),3.22(d,2H),2.94-2.80(m,2H),2.61(t,2H),2.51-2.45(m,1H),2.36-2.30(m,1H),1.98-1.88(m,3H),1.82-1.70(m,3H).
19F NMR(376MHz,CD3OD)δ -75.44.
LCMS m/z=876.4[M+1]。
實施例17：[7-[3-[4-[[4-[[[(2R)-2-羥基-2-(8-羥基-2-氧代-1H-喹啉-5-基)乙基]氨基甲基]苯基]氨基甲醯基]-N-甲基苯胺]-3-氧代丙基]-7-氮雜螺[3.5]壬烷-2-基]2-羥基-2,2-二(2-噻吩基)乙酸酯；二三氟乙酸鹽(化合物17)
[7-[3-[4-[[4-[[[(2R)-2-hydroxy-2-(8-hydroxy-2-oxo-1H-quinolin-5-yl)ethyl]amino]methyl]phenyl]carbamoyl]-N-methyl-anilino]-3-oxo-propyl]-7-azaspiro[3.5]nonan-2-yl]2-hydroxy-2,2-bis(2-thienyl)acetate；ditrifluoroacetic acid salt
第一步：4-(甲基氨基)苯甲酸甲酯(17B)
Methyl 4-(methylamino)benzoate
將4-氨基苯甲酸甲酯(17A)(10.0g，66.2mmol)溶解在N,N-二甲基甲醯胺(150mL)中，加入碳酸鉀(13.7g，99.2mmol)，再慢慢滴入碘甲烷(9.39g，66.2mmol)，加完後室溫反應3小時。過濾，濾渣用乙酸乙酯(50mL)洗滌，收集濾液，加入水100mL，用乙酸乙酯(200mL×2)萃取，合併有機相，有機 相用飽和氯化鈉溶液(100mL×2)洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾，濾液減壓濃縮後殘留物用矽膠管柱層析分離純化(沖提劑為石油醚：乙酸乙酯(v/v)=100：0~97：3)得到題述化合物4-(甲基氨基)苯甲酸甲酯(17B)，白色固體(4.80g，產率43.9%)。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ 7.81-7.79(m,1H),7.79-7.77(m,1H),6.50-6.48(m,1H),6.48-6.45(m,1H),3.77(s,3H),2.80(s,3H).
LCMS m/z=166.2[M+1]。
第二步：4-[甲基(丙-2-烯醯基)氨基苯甲酸甲酯(17C)
Methyl 4-[methyl(prop-2-enoyl)amino]benzoate
將化合物4-(甲基氨基)苯甲酸甲酯(17B)(1.80g，10.90mmol)溶解在二氯甲烷(5mL)中，加入碳酸氫鈉(1.831g，21.8mmol)，氮氣保護下冰浴冷卻至0℃，滴加丙烯醯氯(1.48g，16.3mmol)，加完後升溫至室溫反應30分鐘。加入二氯甲烷(20mL×1)萃取，有機相用飽和碳酸氫鈉溶液(10mL×2)洗滌，飽和氯化鈉溶液10mL×1)洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾，濾液減壓濃縮後殘留物用矽膠管柱層析分離純化(沖提劑為石油醚：乙酸乙酯(v/v)=100：0~4：1)得到題述化合物4-[甲基(丙-2-烯醯基)氨基苯甲酸甲酯(17C)，無色油狀物(1.80g，產率75.3%)。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ 8.10-8.06(m,2H),7.27(d,2H),7.24(d,1H),6.40(m,1H),6.09(m,1H),5.57(m,1H),3.94(s,3H),3.39(s,3H).
LCMS m/z=220.2[M+1]。
第三步：4-[甲基(丙-2-烯醯基)氨基]苯甲酸(17D)
4-[methyl(prop-2-enoyl)amino]benzoicacid
將4-[甲基(丙-2-烯醯基)氨基苯甲酸甲酯(17C)(3.100g，14.14mmol)溶解在四氫呋喃(50mL)中，冰浴冷卻下滴加1.0M的氫氧化鋰(2.303g，96.15mmol)水溶液，加完後冰浴下反應1小時。冰浴下用10%鹽酸溶液調節pH至1，用乙酸乙酯(20mL×2)萃取，合併有機相，有機相用飽和氯化鈉溶液(10mL×2)洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾，濾液減壓濃縮得到題述化合物4-[甲基(丙-2-烯醯基)氨基]苯甲酸(17D)，白色固體(2.60g，產率89.8%)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ 13.05(s,1H),8.02-8.00(m,1H),8.00-7.97(m,1H),7.43-7.40(m,1H),7.40-7.38(m,1H),6.19(m,1H),6.12(m,1H),5.62(m,1H),3.29(s,3H).
LCMS m/z=206.2[M+1]。
第四步：N-[4-(1,3-二氧戊環-2-基)苯基]-4-[甲基(丙-2-烯醯基)氨基]苯甲醯胺(17E)
N-[4-(1,3-dioxolan-2-yl)phenyl]-4-[methyl(prop-2-enoyl)amino]benzamide
將4-[甲基(丙-2-烯醯基)氨基]苯甲酸(17D)(0.500g，2.44mmol)溶解在二氯甲烷(10mL)中，加入4-(1,3-二氧戊環-2-基)苯胺(0.604g，3.65mmol)、HATU(1.20g，3.17mmol)，冰浴冷卻至0℃，再滴加二異丙基乙基胺(1.57g，12.2mmol)，加完後自然升溫至室溫反應3小時。加入水(10mL)和二氯甲烷(20mL)，分液，有機相用飽和氯化鈉溶液(10mL×1)洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾，濾液減壓濃縮所得粗產物用矽膠管柱純化(沖提劑：20%(v/v)乙酸乙 酯/石油醚~70%(v/v)乙酸乙酯/石油醚)得題述化合物N-[4-(1,3-二氧戊環-2-基)苯基]-4-[甲基(丙-2-烯醯基)氨基]苯甲醯胺(17E)，黃色固體(0.800g，產率93.2%)。
LCMS m/z=353.2[M+1]。
第五步：N-(4-甲醯基苯基)-4-[甲基(丙-2-烯醯基)氨基]苯甲醯胺(17F)
N-(4-formylphenyl)-4-[methyl(prop-2-enoyl)amino]benzamide
將N-[4-(1,3-二氧戊環-2-基)苯基]-4-[甲基(丙-2-烯醯基)氨基]苯甲醯胺(17E)(0.800g，2.27mmol)溶解在乙腈(8mL)中，冰浴冷卻下加入3M稀鹽酸(10mL)，加完後冰浴下反應3小時。用二氯甲烷(20mL×2)萃取，合併有機相，有機相用飽和氯化鈉溶液(10mL×2)洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾，濾液減壓濃縮得題述化合物N-(4-甲醯基苯基)-4-[甲基(丙-2-烯醯基)氨基]苯甲醯胺(17F)粗產物，淺黃色固體(0.560g，產率80.0%)，不純化直接用於下一步。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ 9.96(s,1H),7.96(d,2H),7.94-7.85(m,4H),7.32(d,2H),6.40(m,1H),6.11(m,1H),5.59(m,1H),3.40(s,3H).
LCMS m/z=309.2[M+1]。
第六步：[7-[3-[4-[(4-甲醯基苯基)氨基甲醯基]-N-甲基苯胺]-3-氧代丙基]-7-氮雜螺[3.5]壬烷-2-基]2-羥基-2,2-二(2-噻吩基)乙酸酯(17G)
[7-[3-[4-[(4-formylphenyl)carbamoyl]-N-methyl-anilino]-3-oxo-propyl]-7-azaspiro[3.5]nonan-2-yl]2-hydroxy-2,2-bis(2-thienyl)acetate
將N-(4-甲醯基苯基)-4-[甲基(丙-2-烯醯基)氨基]苯甲醯胺(17F)(0.560g，1.82mmol)溶解在2-甲基四氫呋喃(10mL)中，加入7-氮雜螺[3.5]壬烷-2-基2-羥基-2,2-雙(2-噻吩基)乙酸酯(1D)(0.660g，1.82mmol)和三乙胺(0.368g，3.63mmol)，加完後微波100℃反應1小時。反應液冷卻至室溫，減壓濃縮後殘留物用矽膠管柱層析分離純化(沖提劑為石油醚：乙酸乙酯(v/v)=4：1~1：4)得到題述化合物[7-[3-[4-[(4-甲醯基苯基)氨基甲醯基]-N-甲基苯胺]-3-氧代丙基]-7-氮雜螺[3.5]壬烷-2-基]2-羥基-2,2-二(2-噻吩基)乙酸酯(17G)，淺黃色固體(0.650g，產率53.3%)。
LCMS m/z=672.3[M+1]。
第七步：[7-[3-[4-[[4-[[[(2R)-2-[第三丁基(二甲基)甲矽烷基]氧基-2-(8-羥基-2-氧代-1H-喹啉-5-基)乙基]氨基甲基]苯基]氨基甲醯基]-N-甲基苯胺]-3-氧代丙基]-7-氮雜螺[3.5]壬烷-2-基]2-羥基-2,2-二(2-噻吩基)乙酸酯(17H)
[7-[3-[4-[[4-[[[(2R)-2-[tert-butyl(dimethyl)silyl]oxy-2-(8-hydroxy-2-oxo-1H-quinolin-5-yl)ethyl]amino]methyl]phenyl]carbamoyl]-N-methyl-anilino]-3-oxo-propyl]-7-azaspiro[3.5]nonan-2-yl]2-hydroxy-2,2-bis(2-thienyl)acetate
將[7-[3-[4-[(4-甲醯基苯基)氨基甲醯基〕-N-甲基苯胺]-3-氧代丙基]-7-氮雜螺[3.5]壬烷-2-基]2-羥基-2,2-二(2-噻吩基)乙酸酯(17G)(0.635g，0.945mmol)溶解在無水甲醇(20mL)中，加入5-[(1R)-2-氨基-1-[第三丁基(二甲基)矽基]氧基甲基]-8-羥基-1H-喹啉-2-酮(1G)(0.316g，0.945mmol)和無水氯化鋅(0.515g，3.78mmol)，50℃反應1小時後加入氰基硼氫化鈉(0.297g，4.73mmol)，繼續50℃反應1小時。加入水(50mL)，二氯甲烷(100mL×3)萃取，合併有機相，有機相用飽和氯化鈉溶液(50mL×1)洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾，濾液減壓濃縮得題述化合物[7-[3-[4-[[4-[[[(2R)-2-[第三丁基(二甲基)甲矽烷基]氧基-2-(8-羥基-2-氧代-1H-喹啉-5-基)乙基]氨基甲基]苯基]氨基甲醯基]-N-甲基苯胺]-3-氧代丙基]-7-氮雜螺[3.5]壬烷-2-基]2-羥基-2,2-二(2-噻吩基)乙酸酯(17H)粗產物，黃色固體(0.600g，產率64.1%)，不純化直接用於下一步。
LCMS m/z=495.8[M/2+1]。
第八步：[7-[3-[4-[[4-[[[(2R)-2-羥基-2-(8-羥基-2-氧代-1H-喹啉-5-基)乙基]氨基甲基]苯基]氨基甲醯基]-N-甲基苯胺]-3-氧代丙基]-7-氮雜螺[3.5]壬烷-2-基]2-羥基-2,2-二(2-噻吩基)乙酸酯；二三氟乙酸鹽(化合物17)
[7-[3-[4-[[4-[[[(2R)-2-hydroxy-2-(8-hydroxy-2-oxo-1H-quinolin-5-yl)ethyl]amino]methyl]phenyl]carbamoyl]-N-methyl-anilino]-3-oxo-propyl]-7-azaspiro[3.5]nonan-2-yl]2-hydroxy-2,2-bis(2-thienyl)acetate；ditrifluoroacetic acid salt
將[7-[3-[4-[[4-[[[(2R)-2-[第三丁基(二甲基)甲矽烷基]氧基-2-(8-羥基-2-氧代-1H-喹啉-5-基)乙基]氨基甲基]苯基]氨基甲醯基]-N-甲基苯胺]-3-氧代丙基]-7-氮雜螺[3.5]壬烷-2-基]2-羥基-2,2-二(2-噻吩基)乙酸酯(17H)(0.600g，0.606mmol)溶解在四氫呋喃(10mL)中，加入三乙胺三氫氟酸鹽(0.391g，2.42mmol)室溫反應過夜。將反應清液倒掉，剩餘黏稠物用四氫呋喃(20mL)洗滌，再將清液倒掉，黏稠物用甲醇/二氯甲烷(v/v=1/9)的混合溶液溶解，滴加碳酸氫鈉調節pH至鹼性，分液，水層再用甲醇/二氯甲烷(v/v=1/9)的混合溶液(100mL×3)萃取，合併有機層，無水硫酸鈉乾燥，過濾，濾液減壓濃縮所得粗產物，該粗產物用液相製備管柱分離純化(製備條件：C18逆向層析管柱，流動相為為含0.05%TFA的去離子水(A)，含0.05%TFA的乙腈(B)，梯度沖提A：B=5%~100%，沖提10分鐘，然後用100%B沖提5分鐘，流速1.0mL/min，柱溫：40℃)得題述化合物[7-[3-[4-[[4-[[[(2R)-2-羥基-2-(8-羥基-2-氧代-1H-喹啉-5-基)乙基]氨基甲基]苯基]氨基甲醯基]-N-甲基苯胺]-3-氧代丙基]-7-氮雜螺[3.5]壬烷-2-基]2-羥基-2,2-二(2-噻吩基)乙酸酯；二三氟乙酸鹽(化合物17)，白色固體(0.140g，產率20.9%)。
1H NMR(400MHz,CD3OD)δ 8.15(d,1H),7.97(d,2H),7.73(d,2H),7.44-7.39(m,4H),7.27(m,2H),7.17(d,1H),7.03(t,2H),6.93(d,1H),6.89-6.86(m,2H),6.54(d,1H),5.35-5.25(m,1H),5.07-4.98(m,1H),4.21(s,2H),3.35-3.22(m,7H),3.14(d,2H),2.90-2.72(m,2H),2.57-2.47(m,2H),2.45-2.35(m,1H),2.28-2.20(m,1H),1.90-1.78(m,3H),1.75-1.65(m,3H).
19F NMR(376MHz,CD3OD)δ -75.48.
LCMS m/z=876.3[M+1]。
實施例18：[7-[[4-[2-[[(2R)-2-羥基-2-(8-羥基-2-氧代-1H-喹啉-5-基)乙基]氨基]乙基甲基氨基甲醯基]苯基]甲基]-7-氮雜螺[3.5]壬烷-2-基]N-(2-苯氧基苯基)氨基甲酸酯；二三氟乙酸鹽(化合物18)
[7-[[4-[2-[[(2R)-2-hydroxy-2-(8-hydroxy-2-oxo-1H-quinolin-5-yl)ethyl]amino]ethyl-methyl-carbamoyl]phenyl]methyl]-7-azaspiro[3.5]nonan-2-yl]N-(2-phenylphenyl)carbamate；ditrifluoroacetic acid salt
第一步：4-[[2-[(2-苯基苯基)氨基甲醯基氧基]-7-氮雜螺[3.5]壬-7-基]甲基]苯甲酸甲酯(18A)
Methyl 4-[[2-[(2-phenylphenyl)carbamoyloxy]-7-azaspiro[3.5]nonan-7-yl]methyl]benzoate
將7-氮雜螺[3.5]壬-2-基-N-(2-苯基苯基)氨基甲酸酯(2D)(1.50g,4.46mmol)溶於乙腈(30mL)中，加入N,N-二甲基甲醯胺(10mL)、碳酸鉀(1.85g,13.4mmol)和4-(溴甲基)苯甲酸甲酯(1.02g,4.46mmol)，升溫至70℃反應2小時。冷卻到室溫，加入水(50mL)，用二氯甲烷(100mL×3)萃取，合併有機相，用無水硫酸乾燥，過濾，濾液減壓濃縮，殘留物用矽膠管柱層析分離純化(沖提劑為二氯甲烷：甲醇(v/v)=99：1~97：3)，得到題述化合物4-[[2-[(2-苯基苯基)氨基甲醯基氧基]-7-氮雜螺[3.5]壬-7-基]甲基]苯甲酸甲酯(18A)，白色固體(2.0g，產率92.6%)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ 8.60(s,1H),7.96(m,2H),7.71(s,1H),7.37(m,10H),4.72(s,1H),4.34(s,1H),3.85(s,3H),3.47(s,1H),3.16(m,1H),2.89(m,1H),2.17(m,4H),1.63(m,6H).
LCMS m/z=485.3[M+1]。
第二步：4-[[2-[(2-苯基苯基)氨基甲醯基氧基]-7-氮雜螺[3.5]壬-7-基]甲基]苯甲酸(18B)
4-[[2-[(2-phenylphenyl)carbamoyloxy]-7-azaspiro[3.5]nonan-7-yl]methyl]benzoicacid
將4-[[2-[(2-苯基苯基)氨基甲醯基氧基]-7-氮雜螺[3.5]壬-7-基]甲基]苯甲酸甲酯(18A)(2.20g,4.54mmol)溶於四氫呋喃(30mL)中，加入氫氧化鈉(7.3g,61.0mmol)水溶液(5mL)，室溫攪拌2小時。加入水(50mL)，用10%鹽酸水溶液調pH約為2，用二氯甲烷(100mL×3)萃取，合併有機相，用無水硫酸乾燥，過濾，濾液減壓濃縮，得到題述化合物4-[[2-[(2-苯基苯基)氨基甲醯基氧基]-7-氮雜螺[3.5]壬-7-基]甲基]苯甲酸(18B)，白色固體(2.0g，產率93.6%)。
LCMS m/z=471.3[M+1]。
第三步：[7-[[4-[2,2-二甲基乙基(甲基)氨基甲醯基]苯基]甲基]-7-氮雜螺[3.5]壬烷-2-基]N-(2-苯氧基苯基)氨基甲酸酯(18C)
[7-[[4-[2,2-dimethoxyethyl(methyl)carbamoyl]phenyl]methyl]-7-azaspiro[3.5]nonan-2-yl]N-(2-phenylphenyl)carbamate
將4-[[2-[(2-苯基苯基)氨基甲醯基氧基]-7-氮雜螺[3.5]壬-7-基]甲基]苯甲酸(18B)(2.00g,4.01mmol)溶於二氯甲烷(20mL)中，加入N,N-二甲基甲醯胺(4mL)、2,2-甲氧基-N-甲基乙胺(0.531g,4.45mmol)、HATU(2.29g,6.02mmol)和三乙胺(1.22g,12.0mmol)，加完後保持室溫反應3小時，向反應液加入二氯甲烷(50mL)和水(20mL)，萃取分層，有機相再用飽和氯化鈉水溶液(20mL×1)洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾，濾液減壓濃縮，得到題述化合物[7-[[4-[2,2-二甲基乙基(甲基)氨基甲醯基]苯基]甲基]-7-氮雜螺[3.5]壬烷-2-基]N-(2-苯氧基苯基)氨基甲酸酯(18C)(1.82g，產率79.4%)。
第四步：[7-[[4-[甲基(2-氧代乙基)氨基甲醯基]苯基]甲基]-7-氮雜螺[3.5] 壬烷-2-基]N-(2-苯氧基苯基)氨基甲酸酯(18D)
[7-[[4-[methyl(2-oxoethyl)carbamoyl]phenyl]methyl]-7-azaspiro[3.5]nonan-2-yl]N-(2-phenylphenyl)carbamate
將[7-[[4-[2,2-二甲基乙基(甲基)氨基甲醯基]苯基]甲基]-7-氮雜螺[3.5]壬烷-2-基]N-(2-苯氧基苯基)氨基甲酸酯(18C)(1.50g,2.62mmol)溶於二氯甲烷(20mL)中，加入對甲苯磺酸(2.26g,13.1mmol)，室溫下反應3小時。加入水(20mL)，二氯甲烷(50mL×2)萃取，合併有機層，用飽和碳酸氫鈉水溶液(30mL×3)洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾，濾液減壓濃縮，得到題述化合物[7-[[4-[甲基(2-氧代乙基)氨基甲醯基]苯基]甲基]-7-氮雜螺[3.5]壬烷-2-基]N-(2-苯氧基苯基)氨基甲酸酯(18D)，淡黃色固體(1.22g，產率88.5%)。
LCMS m/z=526.3[M+1]。
第五步：[7-[[4-[2-[[(2R)-2-[第三丁基(二甲基)甲矽烷基]氧基-2-(8-羥基-2-氧代-1H-喹啉-5-基)乙基]氨基]乙基甲基氨基甲醯基]苯基]甲基]-7-氮雜螺[3.5]壬烷-2-基]N-(2-苯氧基苯基)氨基甲酸酯(18E)
[7-[[4-[2-[[(2R)-2-[tert-butyl(dimethyl)silyl]oxy-2-(8-hydroxy-2-oxo-1H-quinolin-5-yl)ethyl]amino]ethyl-methyl-carbamoyl]phenyl]methyl]-7-azaspiro[3.5]nonan-2-yl]N-(2-phenylphenyl)carbamate
將[7-[[4-[甲基(2-氧代乙基)氨基甲醯基]苯基]甲基]-7-氮雜螺[3.5]壬烷 -2-基]N-(2-苯氧基苯基)氨基甲酸酯(18D)(0.200g,0.381mmol)和5-[(1R)-2-氨基-1-[第三丁基(二甲基)矽基]氧基甲基]-8-羥基-1H-喹啉-2-酮(1G)(0.127g,0.381mmol)溶於異丙醇/二氯甲烷(v/v=1/1，20mL)混合溶劑中，加入冰醋酸(1mL)，室溫攪拌1小時，然後加入三乙醯氧基硼氫化鈉(0.162g,0.761mmol)，再攪拌2小時。向反應液加入二氯甲烷(50mL)和水(50mL)，萃取分層，有機相再用飽和氯化鈉水溶液(20mL×1)洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾，濾液減壓濃縮，殘留物用矽膠管柱層析純化(二氯甲烷/甲醇(v：v)=1/0~9/1)，得到題述化合物[7-[[4-[2-[[(2R)-2-[第三丁基(二甲基)甲矽烷基]氧基-2-(8-羥基-2-氧代-1H-喹啉-5-基)乙基]氨基]乙基甲基氨基甲醯基]苯基]甲基]-7-氮雜螺[3.5]壬烷-2-基]N-(2-苯氧基苯基)氨基甲酸酯(18E)，淺黃固體(0.220g，產率68.5%)。
第六步：[7-[[4-[2-[[(2R)-2-羥基-2-(8-羥基-2-氧代-1H-喹啉-5-基)乙基]氨基]乙基甲基氨基甲醯基]苯基]甲基]-7-氮雜螺[3.5]壬烷-2-基]N-(2-苯氧基苯基)氨基甲酸酯；二三氟乙酸鹽(化合物18)
[7-[[4-[2-[[(2R)-2-hydroxy-2-(8-hydroxy-2-oxo-1H-quinolin-5-yl)ethyl]amino]ethyl-methyl-carbamoyl]phenyl]methyl]-7-azaspiro[3.5]nonan-2-yl]N-(2-phenylphenyl)carbamate；ditrifluoroacetic acid salt
將[7-[[4-[2-[[(2R)-2-[第三丁基(二甲基)甲矽烷基]氧基-2-(8-羥基-2-氧代 -1H-喹啉-5-基)乙基]氨基]乙基甲基氨基甲醯基]苯基]甲基]-7-氮雜螺[3.5]壬烷-2-基]N-(2-苯氧基苯基)氨基甲酸酯(18E)(0.800g,0.948mmol)溶於二氯甲烷(10mL)中，加入三乙胺三氫氟酸鹽(0.764g,4.74mmol)，室溫反應過夜，反應液用飽和碳酸氫鈉調鹼，用8%甲醇/二氯甲烷(v/v=8：92,100mL×1)萃取，有機相用飽和氯化鈉水溶液(50mL×1)洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾，濾液減壓濃縮，殘留物用液相製備管柱分離純化(液相製備條件：C18逆向層析管柱，流動相為含0.05%TFA的去離子水(A)，含0.05%TFA的乙腈(B)，梯度沖提A：B=10%~55%，沖提時間39min，流速1.0mL/min，柱溫：40℃)，得到題述化合物[7-[[4-[2-[[(2R)-2-羥基-2-(8-羥基-2-氧代-1H-喹啉-5-基)乙基]氨基]乙基甲基氨基甲醯基]苯基]甲基]-7-氮雜螺[3.5]壬烷-2-基]N-(2-苯氧基苯基)氨基甲酸酯；二三氟乙酸鹽(化合物18)，淺黃固體(0.0650g，產率7.16%)。
1H NMR(400MHz,CD3OD)δ 8.43(d,1H),7.64-7.57(m,5H),7.48-7.27(m,9H),7.06(d,1H),6.66(d,1H),5.47(s,1H),4.36(s,2H),3.94(s,2H),3.53-3.35(m,6H),3.04(m,5H),2.46(s,1H),2.25(s,1H),1.97-1.87(m,7H).
LCMS m/z=365.8[(M+2)/2]。
生物測試例
測試例1：對人毒蕈鹼M3受體的抑制活性
穩定表達人毒蕈鹼受體3(Muscarinic acetylcholine receptor M3,hM3)和apo-Aequorin的CHO細胞(PerkinElmer，ES-212-AF)培養於含10%胎牛血清(FBS)(Gibico10099-141)，400μg/mLG418(sigmaG5013)和250μg/mLZeocin(invivogenant-zn-5p)的Ham’SF12培養基(Invitrogen12500-062)中，在37℃，5%CO2條件下培養，達到90-100 %融合。以PBS/5mMEDTA沖洗分離細胞，離心收集，以含0.1%BSA(BOVOGENBSAS100)無酚紅Ham’sF12培養基(Invitrogen11039-021)重新懸浮細胞並計數，調整細胞濃度至1x106cells/mL。將15ml細胞懸浮液加入50mL離心管，加入Coelenterazine-h(promegaS2011)至終濃度為5μM。用錫紙包裹避光，於旋轉搖床20℃下孵育4小時。再以0.1%BSA/無酚紅Ham’sF12培養基稀釋細胞至終濃度為5.0×105cells/mL，將細胞置於旋轉搖床上低速轉動，室溫下孵育至少1小時。實施例化合物用DMSO配製為10mM母液，0.1%BSA/無酚紅Ham’sF12培養基梯度稀釋(log(M)：-7,-8,-9,-10,-11)，加入96孔板，每孔50L。每孔再加入50L細胞懸浮液(25000細胞/孔)，室溫孵育15分鐘。將96孔板放入酶標儀(PerkinElmer，Envision)，以酶標儀加樣器每孔加入50L氯化乙醯膽鹼(Sigma A6625)溶液，其濃度為112.92nM(hM3)，記錄發光20秒，使用origin7.5計算和分析IC50。本發明化合物人毒蕈鹼受體的抑制活性通過以上的實驗進行測定，測得的IC50值見下表1。
結論：本發明化合物對人毒蕈鹼M3受體有顯著抑制活性。
測試例2：對人腎上腺素β2受體的激動活性
實施例化合物對人腎上腺素受體的激動活性通過LANCE Ultra cAMP Assay測定。
穩定表達人腎上腺素受體(hβ2)的CHO細胞(PerkinElmer，ES-034-CF)培養於含10%胎牛血清(FBS)(Gibico10099-141)和250μg/mLZeocin(InvivoGenant-zn-5p)的MEM-alpha培養基(Invitrogen12561-056)，在37℃，5%CO2條件下培養，達到90-100%融合後用LANCE Ultra cAMP Assay試劑盒(PerkinElmerTRF0263)檢測實施例對cAMP的激動作用。以PBS/5mMEDTA分離細胞，離心收集，用Stimulation Buffer(1xHBSS,5mM HEPES,0.5mM IBMX,0.1% BSA,PH7.4)重新懸浮細胞，調整細胞濃度至6×105cells/ml。實施例化合物用DMSO配製為10mM母液，以Stimulation Buffer梯度稀釋後以每孔5μl加入384孔板。每孔再加入5μL細胞懸浮液(3000細胞/孔)，室溫孵育30分鐘後，每孔加入5μl 4x Eu-cAMP tracer工作溶液，然後每孔加入5μl 4xUlight-anti-cAMP工作溶液，並在室溫下孵育1小時。384孔板用酶標儀(PerkinElmer，Envision)檢測TR-FRET，使用origin7.5計算和分析EC50。本發明化合物對人腎上腺素受體的激動活性通過以上的實驗進行測定，測得的EC50值見表2。
結論：本發明化合物對β2腎上腺素受體有顯著激動活性。
測試例3：乙醯甲膽鹼誘導的豚鼠支氣管收縮抑制作用
8周齡全雄豚鼠購置於維通利華，適應3天後開始實驗。待測化合物用83%無水乙醇+17%吐溫80配製成0.6mM儲備液。於給藥前用水稀釋500倍使用。給藥前，使用小動物麻醉機(Matrx；VME2)給予5%異氟烷麻醉動 物，麻醉時間為1.5~2分鐘。待豚鼠麻醉後，將豚鼠固定於氣管插管操作平臺上，使用大鼠液體氣溶膠給藥套裝(penn-century；MSA-250-R)氣管內給藥，每隻豚鼠給藥體積250μl。給藥後，於4小時，24小時，使用全體積描計儀(DSI；GS220A12-R7B)測量豚鼠增強呼氣間歇(enhanced pause；PenH)值。霧化給予3mg/ml乙醯甲膽鹼(Mch)，霧化時間36秒，記錄時間7分鐘。計算PenH平均值。(參考文獻J Pharmacol Exp Ther 345：260-270.)。實驗結果見表3。
PenH計算公式：PenH=PEP/PIP*Pause；Pause=(Te-Tr)/Tr
Te：呼氣相時間(s)
Tr：鬆弛相時間(s)
PEP：呼氣峰流速(ml/s)
PIP：吸氣峰流速(ml/s)
結論：本發明化合物對乙醯甲膽鹼誘導的豚鼠支氣管收縮抑制作用優於陽性對照，且在給藥24小時後，仍具有良好的支氣管收縮抑制效果。
雖然本發明以實施例說明如上，惟此些實施例並非用以限制本發明。 本領域之通常知識者在不脫離本發明技藝精神的範疇內，當可對此些實施例進行等效實施或變更，故本發明的保護範圍應以其後所附之申請專利範圍為準。

Claims (17)

  1. 一種通式(I)所示的化合物或其立體異構物、水合物、代謝產物、溶劑化物、藥學上可接受的鹽、共晶體或前藥， 其中： R1選自或； R1a選自H、C2-6烯基、C2-6炔基、C3-10碳環基、3至8員雜環基、C3-10碳環基-C1-4亞烷基或3至8員雜環基-C1-4亞烷基，所述烯基、炔基、亞烷基、碳環基或雜環基任選進一步被0至4個選自F、Cl、Br、I、CH2F、CHF2、CF3、OH、OCH2F、OCHF2、OCF3、NH2、羧基、氰基、硝基、C1-4烷基、C1-4烷氧基、-O(=O)C1-4烷基、-(=O)C1-4烷基、-OC3-6環烷基或C1-4烷硫基的取代基所取代，所述雜環基含有1至3個選自N、O或S的雜原子；R1b選自C2-6烯基、C2-6炔基、C3-10碳環基、3至8員雜環基、C3-10碳環基-C1-4亞烷基或3至8員雜環基-C1-4亞烷基，所述烯基、炔基、亞烷基、碳環基或雜環基任選進一步被0至4個選自F、Cl、Br、I、CH2F、CHF2、CF3、OH、OCH2F、OCHF2、OCF3、NH2、羧基、氰基、硝基、C1-4烷基、C1-4烷氧基、-O(=O)C1-4烷基、-(=O)C1-4烷基、-OC3-6環烷基或C1-4烷硫基的取代基所取代，所述雜環基含有1至3個選自N、O或S的雜原子；R1c選自H、羥基、氰基、NH2、C1-6烷基、C1-6烷氧基、C1-6烷硫基或-C(=O)NH2，所述NH2、-C(=O)NH2或烷基任選進一步被0至2個選自F、Cl、Br、I、羥基、氰基或C1-4烷基的取代基所取代；R1e和R1f各自獨立選自F、Cl、Br、I、CF3、NH2、OH、羧基、氰基、 C1-4烷基、C1-4烷氧基、C1-4烷硫基、-NHC1-4烷基、-N(C1-4烷基)2、-S(=O)-C1-4烷基、-S(=O)2-C1-4烷基或-C(=O)O-C1-4烷基；R2選自鍵結、C1-6亞烷基、C2-6亞烯基或C2-6亞炔基，所述亞烷基、亞烯基或亞炔基任選進一步被0至5個選自F、Cl、Br、I、OH、氰基、C1-4烷基、C1-4烷氧基、苯基或苯基-C1-4亞烷基的取代基所取代； L選自鍵結或，且Y直接與R2相連接； R3選自鍵結或C1-6亞烷基，所述亞烷基任選進一步被0至5個選自R3a的取代基所取代；並且R2、L和R3三者不能同時為鍵結；R4、R5各自獨立選自H或C1-4烷基； 表示β-腎上腺素受體結合基團； R3a選自F、Cl、Br、I、氰基、OH、C1-4烷基、C1-4烷氧基、苯基或苯基-C1-4亞烷基；選擇性的，兩個R3a可以與它們相連的原子一起形成一個3至6員碳環，所述碳環任選進一步被0至5個選自F、Cl、Br、I、氰基、OH、C1-4烷基或C1-4烷氧基的取代基所取代；A1和A4各自獨立選自C3-7亞環烷基、C6-10亞芳基、5至8員亞雜芳基、-O-C6-10亞芳基、-O-5至8員亞雜芳基、5至8員亞雜芳基-O-或C6-10亞芳基-O-，其中所述的亞環烷基、亞芳基或亞雜芳基任選進一步被0至5個選自R6的取代基所取代；A2和A3各自獨立選自C1-6亞烷基、C2-6亞烯基或C2-6亞炔基，所述亞烷基、亞烯基或亞炔基任選進一步被0至5個選自F、Cl、Br、I、OH、氰基、C1-4烷基、C1-4烷氧基、苯基或苯基-C1-4亞烷基的取代基所取代； Y和X各自獨立選自鍵結、-O-、-C(=O)O-、-OC(=O)-、-S-、-S(=O)-、-S(=O)2-、-C(=O)NR7-、-NR7C(=O)-、-OC(=O)NR7-、-NR7C(=O)O-、-NR7C(=O)NR7、-NR7S(=O)2-、-S(=O)2NR7-、-NR7S(=O)2NR7或-NR7-；R6選自F、Cl、Br、I、OH、NH2、羧基、氰基、硝基、C1-4烷基、C2-4烯基、C2-4炔基、C1-4烷氧基、-OC3-6環烷基、C1-4烷硫基、-S(=O)-C1-4烷基、-S(=O)2-C1-4烷基、-C(=O)-C1-4烷基、-C(=O)O-C1-4烷基、-OC(=O)-C1-4烷基、5至6員雜芳基或-C(=O)NH2，所述烷基、烷氧基、環烷基、烯基、炔基、雜芳基、NH2或-C(=O)NH2任選進一步被0至4個選自F、Cl、Br、I、CF3、C1-4烷基、C1-4烷氧基或-C(=O)-C1-4烷基的取代基所取代；R7各自獨立選自H或C1-4烷基；a為0、1、2、3或4；b為0、1、2、3、4或5；m、n、p或q各自獨立選自0或1。
  2. 如申請專利範圍第1項所述的化合物或其立體異構物、水合物、代謝產物、溶劑化物、藥學上可接受的鹽、共晶體或前藥，其中， B選自、、、、、 其中Q選自-CH=CH-、-CH2CH2-、-O-、-S-、-CH2O-、-OCH2-、-C(CH3)2O-或-OC(CH3)2-。
  3. 如申請專利範圍第2項所述的化合物或其立體異構物、水合物、代謝產物、溶劑化物、藥學上可接受的鹽、共晶體或前藥，其中， R1a選自H、C2-4烯基、C2-4炔基、C3-7碳環基、3至6員雜環基、C3-7碳環基-C1-4亞烷基或3至6員雜環基-C1-4亞烷基，所述烯基、炔基、亞烷基、碳環基或雜環基任選進一步被0至4個選自F、Cl、Br、I、CF3、OH、NH2、羧基、氰基、硝基、C1-4烷基、C1-4烷氧基、-O(=O)C1-4烷基、-(=O)C1-4烷基、-OC3-6環烷基或C1-4烷硫基的取代基所取代，所述雜環基含有1至3個選自N、O或S的雜原子；R1b選自C2-4烯基、C2-4炔基、C3-7碳環基、3至6員雜環基、C3-7碳環基-C1-4亞烷基或3至6員雜環基-C1-4亞烷基，所述烯基、炔基、亞烷基、碳環基或雜環基任選進一步被0至4個選自F、Cl、Br、I、CF3、OH、NH2、羧基、氰基、硝基、C1-4烷基、C1-4烷氧基、-O(=O)C1-4烷基、-(=O)C1-4烷基、-OC3-6環烷基或C1-4烷硫基的取代基所取代，所述雜環基含有1至3個選自N、O或S的雜原子；R1c選自H、羥基、氰基、NH2、C1-4烷基、C1-4烷氧基、C1-4烷硫基或-C(=O)NH2，所述NH2、-C(=O)NH2或烷基任選進一步被0至2個選自F、Cl、Br、I、羥基、氰基或C1-4烷基的取代基所取代；R1e和R1f各自獨立選自F、Cl、Br、I、CF3、NH2、OH、氰基、C1-4烷基、C1-4烷氧基、C1-4烷硫基、-NHC1-4烷基或-N(C1-4烷基)2；R6各自獨立選自F、Cl、Br、I、OH、NH2、羧基、氰基、硝基、C1-4烷基、C2-4炔基、C1-4烷氧基、-OC3-6環烷基、C1-4烷硫基、-S(=O)-C1-4烷基、-S(=O)2-C1-4烷基、-C(=O)-C1-4烷基、5至6員雜芳基或-C(=O)O-C1-4烷基，所述烷基、炔基、烷氧基、環烷基、雜芳基或NH2任選進一步被0至4個選自F、Cl、Br、I、CF3、C1-4烷基、C1-4烷氧基或-C(=O)-C1-4烷基的取代基所取代。
  4. 如申請專利範圍第3項所述的化合物或其立體異構物、水合物、代謝產物、溶劑化物、藥學上可接受的鹽、共晶體或前藥，其中， R1a選自H、乙烯基、乙炔基、丙炔基、苯基、環丙烷基、環丁基、環戊基、環己基、環庚基、苯甲基、噻吩基、呋喃基或吡啶基，所述的乙烯基、乙炔基、丙炔基、苯基、環丙烷基、環丁基、環戊基、環己基、環庚基、苯甲基、噻吩基、呋喃基或吡啶基任選進一步被0至4個選自F、Cl、Br、I、CF3、OH、NH2、羧基、氰基、硝基、C1-4烷基、C1-4烷氧基或-O(=O)C1-4烷基的取代基所取代；R1b選自乙烯基、乙炔基、丙炔基、苯基、環丙烷基、環丁基、環戊基、環己基、環庚基、苯甲基、噻吩基、呋喃基或吡啶基，所述的乙烯基、乙炔基、丙炔基、苯基、環丙烷基、環丁基、環戊基、環己基、環庚基、苯甲基、噻吩基、呋喃基或吡啶基任選進一步被0至4個選自F、Cl、Br、I、CF3、OH、NH2、羧基、氰基、硝基、C1-4烷基、C1-4烷氧基或-O(=O)C1-4烷基的取代基所取代；R1c選自H、羥基、NH2、甲基、乙基、氰基、甲胺基、二甲基胺基、甲氧基、乙氧基、-CH2OH或-C(=O)NH2；R1e和R1f各自獨立選自F、Cl、Br、I、CF3、NH2、OH、氰基、甲基、乙基、甲氧基、乙氧基、-NHCH3或-N(CH3)2；R2選自鍵結、亞甲基、亞乙基、亞丙基、亞丁基或亞戊基，所述的亞甲基、亞乙基、亞丙基、亞丁基或亞戊基任選進一步被0至5個選自F、Cl、Br、I、氰基、OH、甲基、乙基、甲氧基或乙氧基的取代基所取代； R3選自鍵結、亞甲基、亞乙基、亞丙基、亞丁基、亞戊基或，所 述亞甲基、亞乙基、亞丙基、亞丁基、亞戊基或任選進一步被0至5 個選自F、Cl、Br、I、氰基、OH、甲基、乙基、甲氧基或乙氧基的取代基所取代；R4、R5各自獨立選自H、甲基或乙基； B選自、、、、、 A1和A4各自獨立選自亞苯基、亞噻吩基、亞呋喃基或亞吡啶基，所述的亞苯基、亞噻吩基、亞呋喃基或亞吡啶基任選進一步被0至4個選自F、Cl、Br、氰基、甲基、乙基、丙基、異丙基、CHF2、CF3、甲氧基、乙氧基、-OCHF2、-OCF3、乙炔基、丙炔基、吡咯基、咪唑基、吡唑基、噻吩基、呋喃基、噻唑基或噁唑基的取代基所取代；A2和A3各自獨立選自亞甲基、亞乙基、亞丙基、亞丁基或亞戊基；Y和X各自獨立選自鍵結、-O-、-C(=O)NR7-、-NR7C(=O)-、-OC(=O)NR7-或-NR7C(=O)O-；R7選自H、甲基、乙基或丙基；a為0或1；b為0、1或2。
  5. 如申請專利範圍第4項所述的化合物或其立體異構物、水合物、代謝產物、溶劑化物、藥學上可接受的鹽、共晶體或前藥，其中， R1選自、、、、、、 R2選自鍵結、亞甲基、亞乙基、亞丙基、-CH2CH(CH3)-、-CH2C(CH3)2-、-C(CH3)2CH2-、-CH(CH3)CH2-、亞丁基、-CH(CH3)CH2CH2-、-CH2CH(CH3)CH2-、-CH2CH(CH3)CH2-或亞戊基；R3選自鍵結、亞甲基、亞乙基、亞丙基、-CH2CH(CH3)-、-CH2C(CH3)2-、-C(CH3)2CH2-、-CH(CH3)CH2-、亞丁基、-CH(CH3)CH2CH2-、 -CH2CH(CH3)CH2-、-CH2CH(CH3)CH2-、或亞戊基； A1和A4各自獨立選自亞苯基，所述的亞苯基任選進一步被0至4個任選自F、Cl、Br、CHF2、CF3、氰基、甲基、乙基、乙炔基、甲氧基、乙氧基、-OCHF2、-OCF3、乙炔基、丙炔基、吡咯基、咪唑基或吡唑基的取代基所取代。
  6. 如申請專利範圍第5項所述的化合物或其立體異構物、水合物、代謝產物、溶劑化物、藥學上可接受的鹽、共晶體或前藥，其中，所述的化合物包括：
  7. 一種藥物組合物，所述的藥物組合物含有治療有效劑量的申請專利範圍第1至6項中任一項所述的化合物或其立體異構物、水合物、代謝產物、溶劑化物、藥學上可接受的鹽、共晶體或前藥，以及藥學上可接受的載體、稀釋劑、佐劑、媒介物或賦形劑。
  8. 如申請專利範圍第7項所述的藥物組合物，其中更包括一種或多種其他治療劑，所述其他治療劑選自PDE4抑制劑、M受體拮抗劑、皮質類固醇和β-腎上腺素受體激動劑中的一種或多種。
  9. 一種如申請專利範圍第1至6項中任一項所述的化合物或其立體異構物、水合物、代謝產物、溶劑化物、藥學上可接受的鹽、共晶體或前藥，其在製備用於治療氣道阻塞性疾病之藥物的用途。
  10. 一種如申請專利範圍第1至6項中任一項所述的化合物或其立體異構物、水合物、代謝產物、溶劑化物、藥學上可接受的鹽、共晶體或前藥，其在製備用於治療哮喘、慢性阻塞性肺疾病或支氣管炎之藥物的用途。
  11. 一種治療氣道阻塞性疾病的方法，所述方法包括給藥如申請專利範圍1 至6項中任一項所述的化合物或其立體異構物、水合物、代謝產物、溶劑化物、藥學上可接受的鹽、共晶體或前藥，或如申請專利範圍第7或8項所述的藥物組合物。
  12. 一種治療哮喘、慢性阻塞性肺疾病或支氣管炎的方法，所述方法包括給藥如申請專利範圍第1至6項中任一項所述的化合物或其立體異構物、水合物、代謝產物、溶劑化物、藥學上可接受的鹽、共晶體或前藥，或如申請專利範圍第7或8項所述的藥物組合物。
  13. 一種製備通式(I)所示化合物或其立體異構物的中間體，該中間體選自通式(II)所示的化合物或者其立體異構物： 其中： R1選自或； R1a選自H、C2-6烯基、C2-6炔基、C3-10碳環基、3至8員雜環基、C3-10碳環基-C1-4亞烷基或3至8員雜環基-C1-4亞烷基，所述烯基、炔基、亞烷基、碳環基或雜環基任選進一步被0至4個選自F、Cl、Br、I、CH2F、CHF2、CF3、OH、OCH2F、OCHF2、OCF3、NH2、羧基、氰基、硝基、C1-4烷基、C1-4烷氧基、-O(=O)C1-4烷基、-(=O)C1-4烷基、-OC3-6環烷基或C1-4烷硫基的取代基所取代，所述雜環基含有1至3個選自N、O或S的雜原子；R1b選自C2-6烯基、C2-6炔基、C3-10碳環基、3至8員雜環基、C3-10碳環基-C1-4亞烷基或3至8員雜環基-C1-4亞烷基，所述烯基、炔基、亞烷基、碳環基或雜環基任選進一步被0至4個選自F、Cl、Br、I、CH2F、CHF2、CF3、OH、OCH2F、OCHF2、OCF3、NH2、羧基、氰基、硝基、C1-4烷基、 C1-4烷氧基、-O(=O)C1-4烷基、-(=O)C1-4烷基、-OC3-6環烷基或C1-4烷硫基的取代基所取代，所述雜環基含有1至3個選自N、O或S的雜原子；R1c選自H、羥基、氰基、NH2、C1-6烷基、C1-6烷氧基、C1-6烷硫基或-C(=O)NH2，所述NH2、-C(=O)NH2或烷基任選進一步被0至2個選自F、Cl、Br、I、羥基、氰基或C1-4烷基的取代基所取代；R1e和R1f各自獨立選自F、Cl、Br、I、CF3、NH2、OH、羧基、氰基、C1-4烷基、C1-4烷氧基、C1-4烷硫基、-NHC1-4烷基、-N(C1-4烷基)2、-S(=O)-C1-4烷基、-S(=O)2-C1-4烷基或-C(=O)O-C1-4烷基；R9選自H或者氨基保護基；a為0、1、2、3或4；b為0、1、2、3、4或5。
  14. 如申請專利範圍第13項所述的中間體，其中： R1選自、、、、或； R9選自H、苄基、對甲氧基苄基、第三丁氧基羰基、苄氧基羰基、乙醯基或苯甲醯基。
  15. 如申請專利範圍第14項所述的中間體，所述中間體選自以下化合物之一：
  16. 一種製備通式(I)所示化合物或其立體異構物的中間體，該中間體選自通式(III)所示的化合物或者其立體異構物： R1選自或； R1a選自H、C2-6烯基、C2-6炔基、C3-10碳環基、3至8員雜環基、C3-10碳環基-C1-4亞烷基或3至8員雜環基-C1-4亞烷基，所述烯基、炔基、亞烷基、碳環基或雜環基任選進一步被0至4個選自F、Cl、Br、I、CH2F、CHF2、CF3、OH、OCH2F、OCHF2、OCF3、NH2、羧基、氰基、硝基、C1-4烷基、C1-4烷氧基、-O(=O)C1-4烷基、-(=O)C1-4烷基、-OC3-6環烷基或C1-4烷硫基的取代基所取代，所述雜環基含有1至3個選自N、O或S的雜原子；R1b選自C2-6烯基、C2-6炔基、C3-10碳環基、3至8員雜環基、C3-10碳環基-C1-4亞烷基或3至8員雜環基-C1-4亞烷基，所述烯基、炔基、亞烷基、碳環基或雜環基任選進一步被0至4個選自F、Cl、Br、I、CH2F、CHF2、CF3、OH、OCH2F、OCHF2、OCF3、NH2、羧基、氰基、硝基、C1-4烷基、C1-4烷氧基、-O(=O)C1-4烷基、-(=O)C1-4烷基、-OC3-6環烷基或C1-4烷硫基的取代基所取代，所述雜環基含有1至3個選自N、O或S的雜原子；R1c選自H、羥基、氰基、NH2、C1-6烷基、C1-6烷氧基、C1-6烷硫基或-C(=O)NH2，所述NH2、-C(=O)NH2或烷基任選進一步被0至2個選自F、Cl、Br、I、羥基、氰基或C1-4烷基的取代基所取代；R1e和R1f各自獨立選自F、Cl、Br、I、CF3、NH2、OH、羧基、氰基、C1-4烷基、C1-4烷氧基、C1-4烷硫基、-NHC1-4烷基、-N(C1-4烷基)2、-S(=O)-C1-4烷基、-S(=O)2-C1-4烷基或-C(=O)O-C1-4烷基； R2選自鍵結、C1-6亞烷基、C2-6亞烯基或C2-6亞炔基，所述亞烷基、亞烯基或亞炔基任選進一步被0至5個選自F、Cl、Br、I、OH、氰基、C1-4烷基、C1-4烷氧基、苯基或苯基-C1-4亞烷基的取代基所取代；W選自OH、羧基、-C(=O)OC1-4烷基、苯基、-C(=O)NRx-苯基、-ONRxC(=O)-苯基、-C(=O)NRx-C1-4亞烷基-C(=O)OH、-C(=O)NRx-C1-4亞烷基-C(=O)OC1-4烷基、-C(=O)NRx-C1-4亞烷基-C(=O)NRx-苯基、-C(=O)NRx- 亞苯基-C(=O)NRx-苯基、、或 ，所述的苯基任選進一步被0至4個選自F、Cl、Br、 I、甲氧基、乙氧基、、甲醯基、羧基、-C(=O)OC1-4烷基、 或的取代基所取代； Rx選自H或C1-4烷基；R3選自鍵結或C1-6亞烷基，所述亞烷基任選進一步被0至5個選自R3a的取代基所取代，R3a選自F、Cl、Br、I、氰基、OH、C1-4烷基、C1-4烷氧基、苯基或苯基-C1-4亞烷基；選擇性的，兩個R3a可以與它們相連的原子一起形成一個3至6員碳環，所述碳環任選進一步被0至5個選自F、Cl、Br、I、氰基、OH、C1-4烷基或C1-4烷氧基的取代基所取代； B選自、、、、、 其中Q選自-CH=CH-、-CH2CH2-、-O-、-S-、-CH2O-、-OCH2-、-C(CH3)2O-或-OC(CH3)2-；a為0、1、2、3或4；b為0、1、2、3、4或5。
  17. 如申請專利範圍第16所述的中間體，所述中間體選自以下化合物之一：
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