TW201609800A - 做為雙重ｇｌｐ－１／升糖素受體促效劑之艾塞那肽－４胜肽類似物 - Google Patents

Abstract

本發明係關於艾塞那肽-4衍生物及其醫藥用途，例如治療代謝症候群的病症，包括糖尿病和肥胖，以及降低過量的食物攝取。

Description

做為雙重GLP-1/升糖素受體促效劑之艾塞那肽-4胜肽類似物

本發明係關於艾塞那肽-4-胜肽衍生物-其相對於純的GLP-1促效劑艾塞那肽-4-能活化GLP-1和升糖素受體，及其醫藥上的用途，例如治療代謝症候群的病症，包括糖尿病和肥胖，以及減低過量食物攝取。

艾塞那肽-4是一種含39個胺基酸的胜肽，其係由希拉毒蜥(Heloderma suspectum)的唾液腺產生的(Eng,J.等人。《生物化學期刊》，第267期：第7402-05頁，1992年)。艾塞那肽-4是一種似升糖素胜肽-1(GLP-1)受體的活化劑，然而其無法顯著活化升糖素受體。

艾塞那肽-4與GLP-1共同具有許多觀察到的糖調節作用。臨床與非臨床研究已經顯示艾塞那肽-4具有數種有利的抗糖尿病性質，包括依賴葡萄糖的胰島素合成與分泌之增進、依賴葡萄糖的升糖素分泌受抑制、減緩胃排空、降低食物攝取和體重，以及增加β-細胞的質量和β-細胞功能的標記物(Gentilella R等人，《糖尿病肥胖代謝期刊》，第11期：第544-56頁，2009年；Norris SL等人，《糖尿病醫學》，第26期：第837-46頁，2009年；Bunck MC等人，《糖尿病照護期刊》，第34期：第2041-7頁，2011年)。

這些效果不僅對糖尿病患有利，並且也對受肥胖之苦的病患有利。肥胖病患具有較高之患糖尿病、高血壓、高血脂、心血管和肌肉與骨骼疾病的風險。

相較於GLP-1，艾塞那肽-4對於二肽基胜肽酶-4(DPP4)的切割具有抗性，使其在體內有較長的半生期與作用時間(《英格蘭糖尿病雜誌》，第45 期(補充2)：152A(摘要554)，1996年)。

當與GLP-1、升糖素或一種減肥賀爾蒙針劑(oxyntomodulin)相較時，艾塞那肽-4亦被顯示其對於被中性內切胜肽酶(NEP)分解遠比前者穩定。(《內分泌學》，第150期(4)，第1712-1721頁，2009)。然而，艾塞那肽-4在化學上是脆弱的，這是由於在其位置14的甲硫胺酸氧化作用(Hargrove DM等人，《胜肽調節》(Regul.Pept.)，第141期：第113-9頁，2007年)以及位置28之天冬胺酸的去醯胺化和異構化所致(WO 2004/035623)。

艾塞那肽-4的胺基酸序列顯示為SEQ ID NO 1(序列鑑認編號1) HGEGTFTSDLSKQMEEEAVRLFIEWLKNGGPSSGAPPPS-NH₂

GLP-1(7-36)-醯胺的胺基酸序列顯示為SEQ ID NO 2 HAEGTFTSDVSSYLEGQAAKEFIAWLVKGR-NH₂

胰妥善(Liraglutide)是一種市面銷售之化學修飾的GLP-1類似物，居於其他修飾之間，其有一脂肪酸被連接到位置20的離胺酸上導致延長的作用時間(Drucker DJ等人，http：//www.nature.com/nrd/journal/v9/n4/full/nrd3148.html-a3#a3《天然藥物的發現回顧》，第9期，第267-268頁，2010年；Buse,J.B.等人《Lancet》，第374期：第39-47頁，2009年)。

胰妥善的胺基酸序列顯示為SEQ ID NO 4。 HAEGTFTSDVSSYLEGQAAK((S)-4-羧基-4-十六烷醯基胺基-丙炔基-)EFIAWLVRGRG-OH

升糖素是一種具29個胺基酸的胜肽，當循環系統中的葡萄糖量低時，即被釋放到血流之中。升糖素的胺基酸序列顯示為SEQ ID NO 3。 HSQGTFTSDYSKYLDSRRAQDFVQWLMNT-OH

在低血糖症的期間，當血液葡萄糖量降到低於正常值時，升糖素就會示信肝臟打斷肝糖並釋出葡萄糖，使的血液中葡萄糖量增加以達到正常量。低血糖症是胰島素治療時因為糖尿病導致高血糖症(升高的葡萄糖量)病患 常見的副作用。因此，升糖素在葡萄糖調節上最顯著的角色就是抗衡胰島素作用並且維持血液的葡萄糖量。

Holst(Holst,J.J.《生理學回顧》(Physiol.Rev.)，2007年，第87期，第1409頁)和Meier(Meier,J.J.，《美國國家內分泌學回顧》(Nat.Rev.Endocrinol.)，2012年，第8期，第728頁)說明GLP-1受體促效劑，GLP-1、胰妥善和艾塞那肽-4，具有三個主要的藥理學活性，其藉著降低空腹和飯後的葡萄糖(FPG and PPG)以增進T2DM病患的血糖控制：(i)增加依賴葡萄糖的胰島素分泌(改進之第一和第二期間)、(ii)在高血糖條件下之升糖素抑制活性、(iii)延遲胃淨空速率以使膳食衍生之葡萄糖吸收受到阻滯。

Pocai等人(《肥胖》，2012年；第20期：第1566-1571頁；《糖尿病》，2009年，第58期，第2258頁)和Day等人(《自然化學生物學》，2009年；第5期：第749頁)說明雙重活化GLP-1和升糖素受體，例如藉著使GLP-1與升糖素的作用合併在同一分子中，會導致具有抗糖尿病作用的醫療原理和顯著的減重效果。

與升糖素和GLP-1受體結合並使其活化(Hjort等人，《生物化學期刊》，第269期，第30121-30124頁，1994年；Day JW等人，《自然化學生物學》，第5期：第749-757頁，2009年)並且抑制體重增加且降低食物攝取的胜肽說明在專利申請案WO 2008/071972、WO 2008/101017、WO 2009/155258、WO 2010/096052、WO 2010/096142、WO 2011/075393、WO 2008/152403、WO 2010/070251、WO 2010/070252、WO 2010/070253、WO 2010/070255、WO 2011/160630、WO 2011/006497、WO 2011/152181、WO 2011/152182、WO2011/117415、WO2011/117416和WO 2006/134340之中，內容以參考文獻併在本說明書中。

此外，不僅活化GLP-1和升糖素受體且能活化GIP受體的三重輔助促效劑胜肽說明在WO 2012/088116中，並且由VA Gault等人提出(《生化藥理學》，第85期，第16655-16662頁，2013年；《糖尿病學期刊》(Diabetologia)，第56期，第1417-1424頁，2013年)。

Bloom等人(WO 2006/134340)揭示結合並活化升糖素和GLP-1受體的胜肽可從升糖素和艾塞那肽建構成為雜交體分子，其中N-端部分(例如：殘 基1-14或1-24)源自升糖素且C-端部分(例如：殘基15-39或25-39)源自艾塞那肽-4。

DE Otzen等人(《生物化學期刊》，第45期，第14503-14512頁，2006年)揭示N-和C-端的厭水性補片涉及升糖素的原纖維形成，這是因為構成殘基之厭水性和/或高度β-摺疊偏好。

本發明的化合物是包含白胺酸在位置10和麩胺酸在位置13的艾塞那肽-4-胜肽類似物。

Krstenansky等人(《生物化學》，第25期，第3833-3839頁，1986年)顯示升糖素之殘基10-13(YSKY)對其受體交互作用和活化腺苷酸環化酶的重要性。在本發明說明的艾塞那肽-4衍生物中，數種構成殘基與升糖素相異。尤其，已知對升糖素的原纖維形成有貢獻(DE Otzen，《生物化學》，第45期，第14503-14512頁，2006年)的殘基Tyr10和Tyr13被Leu在位置10置換和被非芳香的極性胺基酸Gln在位置13置換。這種置換，尤其是與位置23的異白胺酸和位置24的麩胺酸合併會造成具有改進之生物物理性質(如在溶液中的溶解度或集結表現)的艾塞那肽-4衍生物。在艾塞那肽-4類似物的位置13用極性胺基酸對芳香胺基酸進行非保守性置換，令人驚奇地導致在升糖素受體和視需要在GIP受體上具有高度活性的胜肽。

本發明的化合物當與GLP-1和升糖素比較時，更能抵抗中性內切胜肽酶(NEP)和二肽基胜肽酶(DPP4)的切割，在體內產生較長的半生期與作用時間。

本發明的化合物較好不僅只是在中性pH可溶，且亦在pH 4.5可溶。這種性質基本上容許用胰島素或胰島素衍生物，且較好是用基礎胰島素像是長效胰島素glargine/Lantus®共同調配出一種合併治療物。

本說明書中提供的是能有效活化GLP1和升糖素受體以及視需要GIP受體的艾塞那肽-4衍生物。在這些艾塞那肽-4衍生物中-在其他取代之中，位在位置14的甲硫胺酸被白胺酸所置換。

本發明提供具有式(I)的胜肽化合物：R¹-Z-R² (I)

其中Z是具有式(II)的胜肽分子部分His-X2-X3-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Leu-Ser-Lys-Gln-Leu-Asp-Glu-Gln-X18-Ala-X20-X21-Phe-Ile-Glu-Trp-Leu-Ile-X28-Gly-Gly-Pro-X32-Ser-Gly-Ala-Pro-Pro-Pro-Ser (II)

X2 代表一個選自Ser,D-Ser和Aib的胺基酸殘基，X3 代表一個選自Gln和His的胺基酸殘基，X18 代表一個選自Arg和Lys的胺基酸殘基，X20 代表一個選自Lys、Gln、His和(S)MeLys的胺基酸殘基，X21 代表一個選自Asp和Glu的胺基酸殘基，X28 代表一個選自Ser和Ala的胺基酸殘基，X32 代表一個選自Ser和Val的胺基酸殘基，R¹代表NH₂，R²代表OH或NH₂，或其鹽或溶劑合物。

本發明的化合物是GLP-1和升糖素受體以及視需要GIP受體促效劑，此係藉由觀察其能刺激細胞內cAMP的形成來測定。

根據另一具體實例，本發明的胜肽化合物展現至少0.1%的相對活性(亦即EC50<700pM)，較好至少0.7%(亦即EC50<100pM)，更好至少1.4%(亦即EC50<50pM)和甚至更好至少7%(亦即EC50<10pM)，此係與GLP-1(7-36)對GLP-1受體的活性(EC50=0.7pM)作比較。

根據另一具體實例，本發明的胜肽化合物展現至少0.1%的相對活性(亦即EC50<1000pM)，較好至少0.33%(亦即EC50<300pM)，更好至少1%(亦即EC50<100pM)和甚至更好至少1.43%(亦即EC50<70pM)，此係與天然升糖素對升糖素受體的活性(EC50=1.0pM)作比較。

本說明書中使用的「活性」一詞較好是指一種化合物之活化人類GLP-1受體和人類升糖素受體的能力。本說明書中使用的「活性」一詞更好是指一種化合物之刺激細胞內cAMP形成的能力。本說明書中使用的「相對活性」被瞭解為係指一種化合物當與另一受體促效劑相較或另一受體相較， 以某種比率活化受體的能力。受體被促效劑活化(例如，藉由測量cAMP的量)係如本說明書中說明的方式測定，如在實例中說明者。

本發明的化合物對於hGLP-1受體較好是具有等於或小於100pmol的EC₅₀，更好是等於或小於90pmol，更好是等於或小於80pmol，更好是等於或小於70pmol，更好是等於或小於60pmol，更好是等於或小於50pmol，更好是等於或小於40pmol，更好是等於或小於30pmol，更好是等於或小於25pmol，更好是等於或小於20pmol，更好是等於或小於15pmol，更好是等於或小於10pmol，更好是等於或小於9pmol，更好是等於或小於8pmol，更好是等於或小於7pmol，更好是等於或小於6pmol，更好是等於或小於5pmol，更好是等於或小於4pmol，更好是等於或小於3pmol，更好是等於或小於2pmol和/或對於人類升糖素受體具有等於或小於300pmol的EC₅₀，較好是等於或小於200pmol，更好是等於或小於150pmol，更好是等於或小於100pmol，更好是等於或小於90pmol，更好是等於或小於80pmol，更好是等於或小於70pmol，更好是等於或小於60pmol，更好是等於或小於50pmol，更好是等於或小於40pmol，更好是等於或小於30pmol，更好是等於或小於25pmol，更好是等於或小於20pmol，更好是等於或小於15pmol，更好是等於或小於10pmol。尤佳者為兩種受體的EC₅₀均等於或小於100pmol，更好是等於或小於90pmol，更好是等於或小於80pmol，更好是等於或小於70pmol，更好是等於或小於60pmol，更好是等於或小於50pmol，更好是等於或小於40pmol，更好是等於或小於30pmol，更好是等於或小於25pmol，更好是等於或小於20pmol，更好是等於或小於15pmol，更好是等於或小於10pmol。hGLP-1受體和人類升糖素受體的EC₅₀可經如本說明書中說明並且被用於產生實例4中說明結果之方法測定。

根據另一具體實例，本發明的化合物對於hGIP受體具有等於或小於500pM的EC₅₀，更好是等於或小於200pM，更好是等於或小於150pM，更好是等於或小於100pM，更好是等於或小於90pM，更好是等於或小於80pM，更好是等於或小於70pM，更好是等於或小於60pM，更好是等於或小於50pM，更好是等於或小於40pM，更好是等於或小於30pM，更好是等於或小於20pM，更好是等於或小於10pmol。

在尚有另一具體實例中，所有三種受體(亦即對於hGLP1-受體、人類升糖素受體和對於hGIP受體)的EC₅₀均為500pM，更好是等於或小於200pM，更好是等於或小於150pM，更好是等於或小於100pM，更好是等於或小於90pM，更好是等於或小於80pM，更好是等於或小於70pM，更好是等於或小於60pM，更好是等於或小於50pM，更好是等於或小於40pM，更好是等於或小於30pM，更好是等於或小於20pM，更好是等於或小於10pmol。

本發明的化合物對病患具有減小腸通道、增加胃容量和/或降低食物攝取的能力。本發明的化合物的這些活性可在熟習本技藝者已知的動物模型中探知。本發明之較佳化合物若以單一皮下劑量施用可使老鼠(較好是NMRI雌鼠)的胃容量增加至少25%，更好是至少30%，更好是至少40%，更好是至少50%，更好是至少60%，更好是至少70%，更好是至少80%。較好是此結果是在施用個別化合物一小時之後和施用大丸劑30分鐘之後測量的，和/或若以單一皮下劑量施用可使老鼠(較好是NMRI雌鼠)的腸通道減小至少45%；更好至少50%，更好是至少55%，更好是至少60%，且更好是至少65%；和/或若以單一皮下劑量施用降低老鼠(較好是NMRI雌鼠)的食物攝取至少10%，更好是15%，且更好是20%。

本發明的化合物能降低病患之血糖量和/或HbA1c量。本發明的化合物的這些活性可在熟習本技藝者已知的動物模型中探知，且亦說明在本說明書的方法中。本發明之較佳的化合物若以0.1mg/kg體重的單一皮下劑量施用可降低老鼠(較好是瘦體素受體缺損的糖尿病db/db雌鼠)的血糖量至少4mmol/L；更好是至少8mmol/L，更好是至少12mmol/L。

本發明的化合物能降低病患體重。本發明的化合物的這些活性可以在熟習本技藝者已知的動物模型中探知。

令人驚奇的是吾人發現式(I)的胜肽化合物顯示對GLP-1和升糖素受體非常有效的活化作用。

而且，在艾塞那肽-4核心的甲硫胺酸之氧化(體外或體內)對於式(I)的胜肽化合物不再可能發生。

一具體實例中，本發明的化合物在酸性和/或生理pH值，例如在pH 4.5和/或at pH 7.4於25℃具有高溶解度，在另一具體實例中至少0.5mg/ml，且在一特殊具體實例中至少1.0mg/ml。

而且，本發明的化合物貯存在溶液中時較好式具有高穩定性。較佳之測定穩定度的檢驗條件是在40℃於pH 4.5或pH 7的溶液中貯存七天。剩餘的胜肽量是藉由實例中說明的色層分析測定的。較好是在40℃於pH 4.5或pH 7的溶液中七天後，剩餘的胜肽量至少是80%，更好至少是85%，甚至更好至少是90%且甚至更好至少是95%。

較好是本發明的化合物包括胜肽分子部分Z(II)，其為直鏈之含39個胺基羧酸，尤其是以胜肽(亦即醯胺鍵)連接的α-胺基羧酸之序列。

還有一具體實例係關於一群化合物，其中R²是NH₂。

另一具體實例係關於一群化合物，其中X2 代表一個選自Ser、D-Ser和Aib的胺基酸殘基，X3 代表一個選自Gln和His的胺基酸殘基，X18 代表Arg，X20 代表一個選自Lys、Gln、His和(S)MeLys的胺基酸殘基，X21 代表一個選自Asp和Glu的胺基酸殘基，X28 代表一個選自Ser和Ala的胺基酸殘基，X32 代表一個選自Ser和Val的胺基酸殘基。

另一具體實例係關於一群化合物，其中X2 代表Ser，X3 代表一個選自Gln和His的胺基酸殘基，X18 代表Arg，X20 代表一個胺基酸殘基選自Lys和(S)MeLys的胺基酸殘基，X21 代表一個選自Asp和Glu的胺基酸殘基，X28 代表Ala，X32 代表一個選自Ser和Val的胺基酸殘基。

另一具體實例係關於一群化合物，其中X2 代表D-Ser，X3 代表一個選自Gln和His的胺基酸殘基，X18 代表Arg，X20 代表一個選自Lys和(S)MeLys的胺基酸殘基，X21 代表一個選自Asp和Glu的胺基酸殘基，X28 代表Ala，X32 代表一個選自Ser和Val的胺基酸殘基。

另一具體實例係關於一群化合物，其中X2 代表Aib，X3 代表一個選自Gln和His的胺基酸殘基，X18 代表Arg，X20 代表一個選自Lys、Gln、His和(S)MeLys的胺基酸殘基，X21 代表一個選自Asp和Glu的胺基酸殘基，X28 代表一個選自Ser和Ala的胺基酸殘基，X32 代表一個選自Ser和Val的胺基酸殘基。

另一具體實例係關於一群化合物，其中X2 代表一個選自Ser，D-Ser和Aib的胺基酸殘基，X3 代表Gln，X18 代表一個選自Arg和Lys的胺基酸殘基，X20 代表一個選自Lys、Gln、His和(S)MeLys的胺基酸殘基，X21 代表一個選自Asp和Glu的胺基酸殘基，X28 代表一個選自Ser和Ala的胺基酸殘基，X32 代表一個選自Ser和Val的胺基酸殘基。

另一具體實例係關於一群化合物，其中X2 代表一個選自Ser、D-Ser和Aib的胺基酸殘基， X3 代表His，X18 代表Arg，X20 代表Lys，X21 代表Asp，X28 代表Ala，X32 代表一個選自Ser和Val的胺基酸殘基，。

另一具體實例係關於一群化合物，其中X2 代表一個選自Ser，D-Ser和Aib的胺基酸殘基，，X3 代表一個選自Gln和His的胺基酸殘基，，X18 代表一個選自Arg和Lys的胺基酸殘基，，X20 代表Lys，X21 代表一個選自Asp和Glu的胺基酸殘基，，X28 代表一個選自Ser和Ala的胺基酸殘基，，X32 代表一個選自Ser和Val的胺基酸殘基。

另一具體實例係關於一群化合物，其中X2 代表Aib，X3 代表Gln，X18 代表Arg，X20 代表Gln，X21 代表Asp，X28 代表一個選自Ser和Ala的胺基酸殘基，X32 代表Ser。

另一具體實例係關於一群化合物，其中X2 代表一個選自Ser、D-Ser和Aib的胺基酸殘基，X3 代表Gln，X18 代表Arg，X20 代表(S)MeLys， X21 代表Asp，X28 代表Ala，X32 代表一個選自Ser和Val的胺基酸殘基。

另一具體實例係關於一群化合物，其中X2 代表一個選自Ser、D-Ser和Aib的胺基酸殘基，X3 代表一個選自Gln和His的胺基酸殘基，X18 代表一個選自Arg和Lys的胺基酸，X20 代表一個選自Lys、Gln、His和(S)MeLys的胺基酸殘基，X21 代表Asp，X28 代表一個選自Ser和Ala的胺基酸殘基，，X32 代表一個選自Ser和Val的胺基酸殘基。

另一具體實例係關於一群化合物，其中X2 代表一個選自Ser、D-Ser和Aib的胺基酸殘基，，X3 代表Gln，X18 代表Arg，X20 代表Lys，X21 代表Glu，X28 代表一個選自Ser和Ala的胺基酸殘基，X32 代表一個選自Ser和Val的胺基酸殘基。

另一具體實例係關於一群化合物，其中X2 代表Aib，X3 代表Gln，X18 代表Arg，X20 代表一個選自Lys和Gln的胺基酸殘基，X21 代表一個選自Asp和Glu的胺基酸殘基，X28 代表Ser，X32 代表Ser。

另一具體實例係關於一群化合物，其中X2 代表一個選自Ser、D-Ser和Aib的胺基酸殘基，X3 代表一個選自Gln和His的胺基酸殘基，X18 代表一個選自Arg和Lys的胺基酸，X20 代表一個選自Lys、Gln、His和(S)MeLys的胺基酸殘基，X21 代表一個選自Asp和Glu的胺基酸殘基，X28 代表一個選自Ser和Ala的胺基酸殘基，X32 代表Ser。

另一具體實例係關於一群化合物，其中X2 代表一個選自Ser、D-Ser和Aib的胺基酸殘基，X3 代表一個選自Gln和His的胺基酸殘基，X18 代表Arg X20 代表一個選自Lys和(S)MeLys的胺基酸殘基，X21 代表一個選Asp和Glu的胺基酸殘基，X28 代表Ala，X32 代表Val。

另一具體實例係關於一群化合物，其中X2 代表一個選自Ser和Aib的胺基酸殘基，X3 代表一個選自Gln和His的胺基酸殘基，X18 代表Arg，X20 代表一個選自Lys和Gln的胺基酸殘基，X21 代表一個選自Asp和Glu的胺基酸殘基，X28 代表一個選自Ser和Ala的胺基酸殘基，X32 代表一個選自Ser和Val的胺基酸殘基。

式(I)肽化合物的特定實例為SEQ ID NO：5-27的化合物，及其鹽和溶劑合物。

式(I)肽化合物的特定實例為SEQ ID NO：5-26的化合物，及其鹽和溶劑合物。

式(I)肽化合物的特定實例為SEQ ID NO：5、6、10、11、18的化合物，及其鹽和溶劑合物。

在某些具體實例中，亦即當式(I)化合物包含基因編碼的胺基酸殘基時，本發明尚提供編碼該化合物的核酸(其可為DNA或RNA)、包含此核酸的表現載體，以及包含此種核酸或表現載體的宿主細胞。

還有一方面，本發明提供包含本發明化合物與一種載劑混合的組成物。在一項較佳的具體實例中，該組成物是醫藥上可接受的組成物且該組成物與載劑是醫藥上可接受的載劑。本發明的化合物可呈鹽形式，例如醫藥上可接受的鹽或溶劑合物，例如：水合物。在還有一方面，本發明提供用於醫學治療之方法用途的組成物，尤其是在人類醫學方面。

在某些具體實例中，核酸或表現載體可被用做為治療用劑，例如在基因療法方面。

式(I)化合物適用在不需其他醫療上有效的用劑的治療應用。然而，在另一項具體實例中，所使用的化合物與至少一種另外的醫療活性用劑一併使用，如在「組合物治療」中所說明。

式(I)化合物尤其適用於治療或預防由醣類和/或脂類代謝混亂、相關連和/或伴隨發生的疾病或病症，例如用於治療或預防高血糖症、第二型糖尿病、受損的葡萄糖耐受性、第一型糖尿病、肥胖、代謝症候群。而且，本發明的化合物尤其適用於治療或預防退化性疾病，尤其是神經退化性疾病。

所說明的化合物尤其有用於預防體重增加或促進減重。「預防」意指在與不治療相比下抑制或降低，且其不一定意圖去暗示完全中斷病症。

本發明的化合物可造成食物攝取減少和/或能量消耗增加，造成可觀察到的體重影響。

與其對於體重的影響不相干的(獨立的)，本發明的化合物對循環的膽固醇量可具有利的影響、能改進脂肪量-尤其是LDL，以及HDL的量(例如，增加HDL/LDL比率)。

因此，本發明的化合物可被用於直接或間接治療任何因體重過重所引起或特徵所在的病狀，如治療和/或預防肥胖、病理的肥胖、與發炎關連的肥胖、與膽囊及病關連的肥胖、肥胖誘發的睡眠呼吸暫停。其亦被用在治療和預防代謝症候群、糖尿病、高血壓、致粥性脂血異常、動脈硬化、冠心症、或中風。其在這些病狀之中的影響可為其對於體重之影響的結果或與之相關聯，或者也許與之不相干。

較佳的醫藥用途包括延緩或預防第二型糖尿病之疾病發展、治療代謝症候群、治療肥胖或防止過重、用於減低食物攝取、增加能量消耗、降低體重、延緩從受損的葡萄糖耐受性(IGT)進展到第二型糖尿病；延緩從第二型糖尿病進展到有胰島素需求之糖尿病；調節食慾；誘發飽足；防止成功減重後體重再增加；治療與過重或肥胖相關的疾病或狀態；治療食慾過盛症；治療暴飲暴食；治療動脈硬化、高血壓、第二型糖尿病、IGT、血脂異常、冠心症、脂肪肝，治療β-阻滯劑中毒，用於抑制腸胃道的蠕動、有用於和利用如X-射線，CT-和NMR-掃描技術之腸胃道研究相連結。

更多較佳的醫藥用途包括治療或預防退化性病症如阿茲海默氏症、巴金森氏症、杭亭頓氏症(Huntington's disease)、運動失調症，例如：脊髓小腦萎縮症、甘迺迪症(Kennedy disease)、肌強直型進行性肌肉萎縮症、路易氏體相關失智症、多重全身性萎縮症、肌萎縮性脊髓側索硬化症、原發性脊髓側索硬化症、脊髓性肌肉萎縮症、普利昂蛋白關聯的疾病(prion-associated diseases)，例如：庫賈氏症(Creutzfeldt-Jacob disease)、多發性硬化症、微血管擴張症、貝登氏症(Batten disease)、皮質基底核退化症、皮質基底核退化症、脊髓亞急性聯合退化症、脊髓癆、戴薩克斯症(Tay-Sachs disease)、中毒性腦部疾病、嬰兒型瑞福森氏疾病、瑞福森氏疾病(Refsum disease)、神經棘紅細胞增多症、尼曼匹克症(Niemann-Pick disease)、萊姆症、馬查多-約瑟夫病(Machado-Joseph disease)、山德霍夫症(Sandhoff disease)、Shy-Drager症候群、刺蝟搖擺症、蛋白質構象病、大腦類澱粉血管病變、青光眼的視網膜神經節細胞退化、共核蛋白病、tau蛋白病變、額顳葉退化症(FTLD)、失智症、常染色體顯性遺傳腦動脈症候群、帶有澱粉樣變性的遺傳性腦內部出血中風、亞力山大症(Alexander disease)、內質網壓力關聯症、家族性類澱粉性神經病變、老年系統性澱粉沉積症、蛋白質錯誤摺疊症、 AL(輕鏈)澱粉樣變(原發性系統澱粉樣變)、AH(重鏈)澱粉樣變、AA(次級)澱粉樣變、主動脈中膜澱粉樣變、ApoAI澱粉樣變、ApoAII澱粉樣變、ApoAIV澱粉樣變、芬蘭型家族性澱粉樣變(FAF)、溶菌酶澱粉樣變、纖維蛋白元澱粉樣變、透析澱粉樣變、包涵體肌炎/肌病、白內障、視紫質突變之視網膜色素病變、甲狀腺髓質癌、心房澱粉樣變、垂體催乳素腺瘤、遺傳性格狀角膜變性、皮膚苔癬狀澱粉樣變、馬洛里小體(Mallory bodies)、角膜乳鐵蛋白澱粉樣變、肺泡蛋白質沉積症、齒源性(Pindborg)腫瘤類澱粉症、囊腫性纖維症、鐮狀細胞症或或重症肌肉病變(CIM)。

更多醫藥用途包括治療高血糖症、第二型糖尿病、肥胖症，尤其是第二型糖尿病。

本發明的詳細說明 定義

本發明的胺基酸序列包含對於天然胺基酸之傳統上一個字母與三個字母的密碼，以及對於其他胺基酸用一般被接受的三個字母的密碼，如Aib(α-胺基異丁酸).。

而且，以下編碼被用在顯示於表1a.的胺基酸：

「天然的艾塞那肽-4」一詞係指具有序列HGEGTFTSDLSKQMEEEAVRLFIEWLKNGGPSSGAPPPS-NH₂(SEQ ID NO：1)的天然的艾塞那肽-4。

本發明提供以上定義的胜肽化合物。

本發明的胜肽化合物包括一個以胜肽(亦即醯胺鍵)相連接的直鏈狀胺基羧酸骨架。較佳的是該胺基羧酸是α-胺基羧酸且更好是L-α-胺基羧酸，除非另有指明。該胜肽化合物較好式包括含39個胺基羧酸之骨架序列。

為了免於疑惑，在本說明書中提供的定義中，一般而言吾人有意使胜肽分子部分的序列與天然的艾塞那肽-4至少在那些被聲明容許變異的位置中之一者上互異。在胜肽分子部分(II)中的胺基酸可被認為在傳統的N-端到C-端方向上連續從1到39編號。因此應建立胜肽分子部分(II)中的相關「位置」，如同應建立如同天然的艾塞那肽-4和其他分子中的相關位置。

在另外一方面，本發明提供包括如本說明書中所說明之化合物、或其鹽或溶劑合物與一種載劑混合的組成物。

本發明亦提供用作為醫藥品之本發明化合物，尤其是用於治療以下說明之病狀的醫藥品。

本發明亦提供一種組成物，其中該組成物是一種醫藥上可接受的組成物，並且該載劑是一種醫藥上可接受的載劑。

胜肽合成

熟習本技藝者會知道本發明中說明之許多不同的胜肽製備方法。這些方法包括但不限於化學合成法和重組基因表現法。因此，一種製備這些胜肽的方法是在溶液中或在一種固態撐體上合成，並且緊接著將其分離與純化。一種製備胜肽的相異方式是在宿主細胞中進行基因表現，其中已導入編碼該胜肽的DNA序列。或者，該基因表現可達成而毋須使用到細胞系統。以上說明的方法亦可以任何方式加以合併。

一種製備本發明胜肽的較佳方式是在適當的樹脂上進行固相合成。固相胜肽合成是一種建立完備的方法學(請參考例如：Stewart和Young，《固相胜肽合成)，Pierce化學公司，位於伊利諾州的Rockford市，1984年；E.Atherton和R.C.Sheppard，《固相胜肽合成-實作方法，Oxford-IRL Press公司出版，位於紐約，1989年)。固相合成是藉著將N-端被保護的胺基酸以其羧基端連接到帶有可切連接體的惰性固態撐體開始的。此種固肽單體可為任何容許起頭胺基酸偶合的聚合物，例如：三苯甲基樹脂、氯化三苯甲基樹脂、Wang樹脂或Rink樹脂，其中該羧基(或Rink樹脂的醯胺與該樹脂的連接對於酸很敏感(在使用Fmoc策略時)。該聚合物撐體在胜肽合成期間用於脫除α-胺基酸保護的條件下必須穩定。

在第一個胺基酸已被偶合至固態撐體之後，將此α-胺基酸的保護基移除。然後使用適當的醯胺偶合劑將剩餘之經保護的胺基酸一個接一個依照胜肽序列所表示的順序偶合，例如使用BOP(苯并三唑-1-基-氧基-三-(二甲基胺基)-鏻)、HBTU(2-(1H-苯并三唑-1-基)-1,1,3,3-四甲基-脲鎓)、HATU(O-(7-氮雜苯并三唑-1-基-氧基-三-(二甲基胺基)-鏻)或DIC(N,N'-二異丙基碳二醯亞胺)/HOBt(1-羥基苯并三唑)，其中BOP、HBTU和HATU與三級胺鹼一起使用。或者，釋出的N端可用其他胺基酸以外的基團，例如羧酸等官能化。

通常，將胺基酸具反應活性的側鏈基團用適當的阻斷基團保護起來。這些保護基在所需胜肽已被組合進去之後就被移除。它們的移除是與所想要的產物從樹脂上被切下在相同條件下伴隨發生的。保護基和保護基導入的程序可在《有機化學中的保護基》，第三版，Greene,T.W.和Wuts,P.G.M.，Wiley & Sons公司出版(紐約：1999年)中找到。

在某些情形之中吾人可能希望有當其他側鏈保護基保持完整時可選擇性移除的側鏈保護基。在此情形之中該經釋放的官能基可以選擇性的具有功能。例如，一個離胺酸可用一個ivDde保護基加以保護(S.R.Chhabra等人，《四面體通信》，第39期，(1998年)，第1603頁)，該保護基對於一種非常親核性的鹼(例如4%的肼在DMF[二甲基甲醯胺]中)是脆弱的。因此，若是N端胺基和所有側鏈官能機均被對酸脆弱的保護基保護起來，則可使用4%的肼在DMF選擇性的移除掉ivDde([1-(4,4-二甲基-2,6-二酮基環己-1-叉基)-3-甲基丁基)基團，並且對應的自由胺基可進一步修飾，例如醯化。該離胺酸或可偶合到一個經保護的胺基酸並且此胺基酸的胺基可經脫去保護產生另一自由胺基，其可被醯化或連接到更多胺基酸。

最後胜肽從樹脂上被切下。這可用金氏雞尾酒試劑達成(D.S.King,C.G.Fields,G.B.Fields《國際胜肽蛋白質研究雜誌，第36期，1990年，第255-266頁)。然後粗製的物質若需要可藉由色層分析術，例如以製備用的RP-HPLC加以純化。

效力

如本說明書中所使用的「效力」或「體外效力」一詞對於依據細胞的檢驗中化合物活化GLP-1、升糖素或視需要GIP受體之能力測量。就數字而言其被表示成「EC50」值，是在劑量反應的實驗中化合物誘發一半反應最大增加量(例如形成細胞內cAMP)的有效濃度。

醫療用途

根據一方面，本發明的化合物被用於醫藥，尤其是人類的醫藥。

本發明的化合物是對於GLP-1、升糖素以及視需要GIP受體之促效劑(例如：雙重或三重促效劑)並且可針對代謝症候群目標提供具有吸引力的選擇且容許同時治療肥胖和糖尿病。

代謝症候群是醫學病症的組合，其在同時發生時會增加產生第二型糖尿病，以及動脈硬化之血管疾病(例如心臟病和中風)的風險。定義代謝症候群的醫學參數包括糖尿病、缺損的葡萄糖耐受性、空腹葡萄糖升高、胰島素抗性、尿蛋白分泌、中央型肥胖、高血壓、三酸甘油酯升高、LDL膽固醇升高和HDL膽固醇降低。

肥胖是一種醫學病狀，其中過量的體脂肪堆積到可能對健康和預期壽命具有不良副作用的程度，並且因其在成人和兒童普遍增加，因此變成文明世界中名列榜首的可預防死因之一。它會增加各種其他疾病的可能性，包括：心臟病、第二型糖尿病、阻塞性睡眠呼吸暫停、某些型式的癌症、以及骨關節炎，並且其最常因過量的食物攝取、降低的能量消耗、以及遺傳易感受性的組合而引發。

糖尿病(diabetes mellitus)經常簡稱為糖尿病(diabetes)是一類代謝疾病，其中具有高血糖量的人-或為身體不生產足夠的胰島素，或因細胞對所生產的胰島素不起反應。最常見的糖尿病型式為：(1)第一型糖尿病，其身體無法生產胰島素；(2)第二型糖尿病，其身體無法正確利用胰島素，且與經過一段時間胰島素不足的情形增加，以及(3)妊娠期糖尿病，其中性因為懷孕發生糖尿病。所有形式的糖尿病都增加長期併發症的風險，典型上是在數年後發生。這些常期的併發症大多數是根源於血管受損並且可已被分成兩 類：「大血管」疾病是由較大血管之動脈硬化症引起，和小血管受損引起。大血管疾病的病狀實例為缺血性心臟病、心肌梗塞、中風和周圍血管疾病。微血管疾病的實例為糖尿病引起的視網膜病變、糖尿病引起的腎病、以及糖尿病引起的神經炎。

GLP-1、升糖素和GIP的受體是G-蛋白偶合受體之B族成員。其彼此高度相關並且不僅共同有顯著的序列一致性，而且還有相似的配體辨認機制和細胞內的示信途徑。

相似地，胜肽GLP-1、GIP和升糖素共同有高度序列相同/相似的區域。GLP-1和升糖素是從常見的先驅物產生的，其具差別性地以特定於細胞的方式加工已產生例如：小腸內分泌細胞中的GLP-1和胰島α-細胞中的升糖素。GIP係得自較大的GIP激素前身的先驅物並且從位在小腸的K-細胞合成和釋出。

胜肽腸泌素荷爾蒙GLP-1和GIP是由小腸的內分泌細胞對食物反應所分泌，並且負責高達70%膳食刺激的胰島素分泌。證據建議在有受損的葡萄糖耐受性或第二型糖尿病的對象身上GLP-1分泌會降低，而對於GLP-1的反應能力卻還保留在這些病患身上。因此，用適當的促效劑導向GLP-1受體提供治療代謝病症包括糖尿病的具吸引力的方法。GLP-1的受體分布很廣，主要在胰島、腦、心臟、腎和腸胃道被發現。在胰臟中，GLP-1藉由增加從β細胞分泌的胰島素以嚴格依賴葡萄糖的方式作用。此種葡萄糖依賴性顯示GLP-1受體的活化不可能引起低血糖症。同時GIP的受體廣泛表現在周圍組織包括：胰島、脂肪組織、胃、小腸、心、骨骼、肺、腎、睪丸、腎上腺皮質、腦垂體、內皮細胞、氣管、腎、胸線、甲狀腺和腦。

與其生物功能如腸泌素荷爾蒙，該胰島的β細胞在人類表現最高量的GIP受體。有一些臨床證據顯示GIP-受體調節的示信作用，經調節的示信可能在患T2DM的病患身上是受損的，但是GIP-作用受損經顯示為可逆且可隨糖尿病狀態的改進再恢復。重要的是藉著腸泌素荷爾蒙、GIP和GLP-1刺激胰島素分泌是嚴格依賴葡萄糖的，以確保與低度低血糖症風險關聯之失敗-安全機制。

在β細胞的層次，GLP-1和GIP已經被顯示能促進葡萄糖敏感度、再生、增殖、胰島素前驅體的轉錄和肥大，以及對抗細胞凋亡。對於GLP-1 和GIP受體具有雙重促效劑活性的胜肽可被期望具有加成的或協同的抗糖尿病之益處。GLP-1超過胰臟之其他相關的影響包括延緩胃部清空、增加飽足感、降低食物攝取、降低體重，以及神經保護和心臟保護的作用。在第二型糖尿病患身上，在考慮到高比例的併發症像是肥胖與心血管疾病時此種胰臟以外的作用尤其重要。更多超過胰臟的周圍組織中GIP的作用包括增加骨骼形成和降低骨骼再吸收以及神經保護作用-其可能對於治療骨質疏鬆症和認知缺陷如阿茲海默氏症有益。

升糖素是一種29個胺基酸的胜肽荷爾蒙，由胰臟的α細胞產生並且在循環的葡萄糖量低時被釋放到血流中。升糖素之一項重要的生理角色是刺激肝臟中的葡萄糖輸出，這是一種提供主要抗衡調節機制以使胰島素維持體內葡萄糖恆定的方法。

然而，升糖素受體亦表現在肝以外的組織如腎臟、心臟、脂肪細胞、淋巴芽球、腦、視網膜、腎上腺和消化道，這現象暗示一種超越葡萄糖恆定的寬廣生理角色。因此，最近的研究已經報導升糖素對於能量管控，包括刺激能量支出與伴隨食物攝取降低和體重減少的產熱，具有醫療上正面的效果。總而言之，刺激升糖素受體可能對於治療肥胖和代謝症候群有用。

減肥賀爾蒙針劑(oxyntomodulin)是一種由升糖素與涵蓋八個胺基酸的C端延伸之胜肽荷爾蒙。就像GLP-1和升糖素，其以前升糖素前驅體表現並切割且以特定於組織的方式由小腸之內分泌細胞分泌。已知減肥賀爾蒙針劑(oxyntomodulin)能刺激GLP-1受體和升糖素受體兩者，因而是雙重促效劑的原型。

因為GLP-1和GIP以其對抗糖尿病的效果見知，所以GLP-1和升糖素兩者以其抑制食物攝取的效果見知，並且升糖素也是一種其他能量支出的調節者，由此可知將兩種荷爾蒙活性合併在同一分子中可以產生治療代謝症候群(尤其是其組成病症中之糖尿病和肥胖)的有效藥物。

因而，本發明的化合物可被用於治療葡萄糖不耐症、胰島素阻抗性、前糖尿病、增加的空腹葡萄糖、第二型糖尿病、高血壓、血脂異常、動脈硬化、冠心症、周圍動脈疾病、中風或任何這些個別疾病成份的組合。

此外，它們也被使用在控制胃口、飼養與卡洛里攝取，增加能量支出，預防體重增加，增進體重減少，降低過量的體重並且總和起來治療肥胖， 包括病理的肥胖。

更多可用苯發明化合物治療的疾病狀態和健康狀況是與肥胖關聯的發炎、與膽囊及病關連的肥胖、肥胖誘發的睡眠呼吸暫停。

雖然所有這些狀況可能與肥胖直接或間接相關，本發明的化合物的作用可完整或部分藉由對體重的影響來調節，或者與之無關。

更多待治療的疾病是神經退化性疾病如阿茲海默氏症或巴金森氏症，或其他如以上說明的退化性疾病。

與GLP-1、升糖素和減肥賀爾蒙針劑(oxyntomodulin)相較，艾塞那肽-4具有利的生理化學性質如在溶液中和在生理條件下的溶解度和穩定性(包括對於酵素如DPP-4或NEP分解的酵素穩定性)，其能造成體內較長的作用時間。因此，艾塞那肽-4可作為獲取具有雙重或甚至三重藥理學性質(例如GLP-1/升糖素和視需要另外的GIP促效性)之艾塞那肽-4類似物的優良起始支架。

然而，艾塞那肽-4也顯示因位置14的甲硫胺酸氧化以及位置28的天冬胺酸去醯胺化與異構化所導致的化學脆弱性。因此，可藉由取代位置14的甲硫胺酸和避免已知容易經由天冬醯亞胺形成而分解的序列(尤其是在位置28和29的Asp-Gly或Asn-Gly)來增進穩定性。

醫藥組成物

「醫藥組成物」一詞係指包含混合時可相容之成份且可被施用的混合物。醫藥組成物可包括一種或多於一種醫學藥物。另外，醫藥組成物可包括載劑、緩衝劑、酸化劑、鹼化劑、溶劑、佐劑、滲透性調節劑、軟化劑、增量劑、保存劑、物理和化學的穩定劑，例如：表面活性劑、抗氧化劑和其他成分，無論這些是被視為具有活性或不具活性的成分。提供熟習本技藝者之製備醫藥組成物的指導可被找到，例如在萊明登(Remington)：《藥學之科學與實習》(第20版)；A.R.Gennaro A.R.，2000年，Lippencott Williams & Wilkins公司出版和在R.C.Rowe等人(編著)，《醫藥賦形劑手冊》，PhP公司出版，2013年五月更新。

本發明的艾塞那肽-4-胜肽衍生物或其鹽與作為醫藥組成物之一部分的醫藥上可接受的載劑、稀釋劑、或賦形劑結合使用。一種「醫藥上可接受 的載劑」是一種生理學上可接受(例如生理學上可接受的pH值)的載劑而保持其所施用物質的醫療性質的載劑。標準之可接受的醫藥載劑及其調配物對於熟習本技藝者而言是已知的，並且被說明在例如：萊明登(Remington)：《藥學之科學與實習》(第20版)；A.R.Gennaro A.R.，2000年，Lippencott Williams & Wilkins公司出版和在R.C.Rowe等人(編著)，《醫藥賦形劑手冊》，PhP公司出版，2013年五月更新。一種作為範例的醫藥上可接受的載劑是生理食鹽水溶液。

在一具體實例中，載劑係選自一群緩衝劑(例如：檸檬酸鹽/檸檬酸)、酸化劑(例如：鹽酸)、鹼化劑(例如：氫氧化鈉)、保存劑(例如：苯酚)、共溶劑(例如：聚乙二醇400)、滲透性調節劑(例如：甘露糖醇)、穩定劑(例如：表面活性劑、抗氧化劑、胺基酸)。

所使用的濃度是在生理學上可接受的範圍。

可接受之醫藥載劑或稀釋劑包括用在適用於口服、經直腸的、經鼻的或非經腸的(包括皮下的、肌內的、血管內的、皮內的、和穿透皮的)施用方式之調配物。本發明的化合物典型上是以非經腸的方式施用。

「醫藥上可接受的鹽」一詞意指用於哺乳類為安全且有效之本發明的化合物。醫藥上可接受的鹽包括但不限於：酸添加鹽和鹼添加鹽。酸添加鹽的實例包括：氯化物、硫酸鹽、硫酸氫鹽、(氫)磷酸鹽、乙酸鹽、檸檬酸鹽、甲基苯磺酸鹽或甲基磺酸鹽。鹼性鹽的實例包括：具有無機陽離子的鹽，例如：鹼金屬鹽或鹼土金屬鹽，如鈉、鉀、鎂或鈣鹽，和具有機陽離子的鹽如胺鹽。更多醫藥上可接受之鹽的實例說明在萊明登(Remington)：《藥學之科學與實習》(第20版)；A.R.Gennaro A.R.，2000年，Lippencott Williams & Wilkins公司出版或在《醫藥用鹽手冊：性質、挑選和使用》，P.H.Stahl,C.G.Wermuth編著，2002年，由Verlag Helvetica Chimica Acta(位於瑞典的蘇黎世)和Wiley-VCH公司(位於德國的威黑姆[Weinheim])聯合出版。

「溶劑合物」一詞意指本發明的化合物或其鹽與溶劑分子，例如有機溶劑分子和/或水的複合物。

在醫藥組成物中，艾塞那肽-4衍生物可呈單體的或寡聚物的形式。

一種化合物之「醫療有效量」一詞係指無毒性但是足以提供所需效果的化合物用量。達到所需之生物效果的式I化合物的用量視以下數種因子而定，例如：所挑選的特定化合物、意圖之用量、施用方式和病患的臨床條件。在任何個別情形之中，適當的「有效」用量可由一般熟習本技藝者用例行的實驗法測定，例如式(I)化合物的「醫療有效量」大約是0.01到50mg/每劑，較好是0.1到10mg/每劑。

本發明的醫藥組成物是那些適用於非經腸(例如皮下的、肌內的、皮內的或血管內的)、口服、直腸的、局部的和經口的(例如舌下的)施用，雖然最適當的施用方式視每一個別情形中待治療病狀的本質和嚴重性和/或所使用於每一情形之式I化合物的本質而定。

適當的醫藥組成物可呈分開的單位形式，例如：膠囊、藥片和裝載小瓶或安瓿中的粉末，每一者包含定義量之化合物；呈粉末或呈顆粒；呈溶液或懸浮物在水溶液的或非水溶液的液體中；或呈油在水中或水在油中的乳化物。其亦可以單劑注射形式提供，例如以注射筆的形式。該組成物可如已經提過的方式用任何適當的醫藥方法製備，其包括一種使活性成分和載劑(其可由一種或多於一種另外的成分組成)接觸的步驟。

在某些具體實例中，醫藥組成物可與一種施用裝置，例如與一支注射筒、一支注射筆或一個自動注射器一併提供。此種裝置可與醫藥組成物分開或以預先裝填醫藥組成物的方式提供。

組合療法

本發明的化合物，即作用於GLP-1和升糖素受體的雙重促效劑可以廣泛地與其他具藥理學活性的化合物，如所有在《德國藥典(Rote Liste)》(2013年)上公布的藥物，例如：與所有《德國藥典(Rote Liste)》(2013年)第1章所提到的減重劑或食慾抑制劑；所有《德國藥典(Rote Liste)》(2013年)第58章所提到的降脂劑；所有《德國藥典(Rote Liste)》(2013年)所提到的抗高血壓劑和腎臟保護劑；或所有《德國藥典(Rote Liste)》(2013年)第36章所提到的利尿劑合併。

活性成分組合物尤其可用在協同增進藥物作用。其可藉由對病患分開施用活性成分或以合併產物的形式施用，其中數種活性成分存在於一種醫 藥製備物中。當活性成分是以分開施用活性性成分的方式施用時，其可同時或連續方式達成。

之後提到的大多數活性成分係揭示於美國藥品正名和國際藥名詞典(USP Dictionary of USAN and International Drug Names)，《美國藥典》，位於Rockville市，2011年。

其他適用於此種組合物的活性物質，包括那些尤其例如與所提到藥品指示中之一者有關的一種或多於一種活性物質，具備有醫療效果且/或容許一種或多於一種活性物質的劑量減少的物質。

適用於組合物的醫療用劑包括：例如，抗糖尿病用劑如：胰島素和胰島素衍生物，例如：甘精胰島素(Glargine)/Lantus®，270-330U/mL之甘精胰島素(EP 2387989 A)、300U/mL之甘精胰島素(EP 2387989 A)、賴古胰島素(Glulisin)/Apidra^®、地特胰島素(Detemir)/Levemir^®、賴脯胰島素(Lispro)/Humalog^®/Liprolog^®、德谷胰島素(Degludec)/DegludecPlus^®、門冬胰島素(Aspart)、基礎胰島素和類似物(例如：LY-2605541、LY2963016、NN1436)、PEG化的胰島素Lispro、Humulin^®、Linjeta、SuliXen^®、NN1045、胰島素加昔姆林(Symlin)、PE0139、快速和短效胰島素(例如：Linjeta、PH20、NN1218、HinsBet)、(APC-002)水凝膠，口服、吸入、穿透皮的和舌下的胰島素(例如：Exubera^®、Nasulin^®、Afrezza、Tregopil、TPM 02、Capsulin、Oral-lyn^®、Cobalamin^®口服胰島素、ORMD-0801、NN1953、NN1954、NN1956、VIAtab、Oshadi口服胰島素)。此外還包括藉由雙官能基連接體結合至白蛋白或其他蛋白質的胰島素衍生物。

GLP-1、GLP-1類似物和GLP-1受體促效劑，例如：利西拉來(Lixisenatide)/AVE0010/ZP10/Lyxumia、依西奈肽(Exenatide)/艾塞那肽-4/百泌達(Byetta)/穩爾糖注射劑(Bydureon)/ITCA 650/AC-2993、利拉鲁肽(Liraglutide)/Victoza、賽麻魯肽(Semaglutide)、他司鲁肽(Taspoglutide)、Syncria/阿必鲁肽(Albiglutide)、杜拉魯肽(Dulaglutide)、重組艾塞那肽-4(rExendin-4)、CJC-1134-PC、PB-1023、TTP-054、蘭格拉肽(Langlenatide)/HM-11260C、CM-3、GLP-1 Eligen、ORMD-0901、NN-9924、NN-9926、NN-9927、Nodexen、Viador-GLP-1、CVX-096、ZYOG-1、ZYD-1、 GSK-2374697、DA-3091、MAR-701、MAR709、ZP-2929、ZP-3022、TT-401、BHM-034.MOD-6030、CAM-2036、DA-15864、ARI-2651、ARI-2255、依西奈肽-XTEN和升糖素-Xten。

DPP-4抑制劑，例如：阿格列汀(Alogliptin)/Nesina、糖漸平(Trajenta)/林格列汀(Linagliptin)/BI-1356/Ondero/糖漸平(Trajenta)/Tradjenta/Trayenta/Tradzenta、賽格列汀(Saxagliptin)/昂格莎(Onglyza)、辛格列汀(Sitagliptin)/佳糖維(Januvia)/Xelevia/Tesave/捷糖穩(Janumet)/Velmetia、高糖優(Galvus)/菲格列汀(Vildagliptin)、安格列汀(Anagliptin)、美格列汀(Gemigliptin)、特格列汀(Teneligliptin)、美羅利汀(Melogliptin)、奇格列汀(Trelagliptin)、DA-1229、歐格列汀(Omarigliptin)/MK-3102、KM-223、伊格列汀(evogliptin)、ARI-2243、PBL-1427、諾沙星(Pinoxacin)。

SGLT2抑制劑，例如：Invokana/卡格列淨(Canaglifozin)、Forxiga/達格列淨(Dapagliflozin)、瑞格列淨(Remoglifozin)、舍格列淨(Sergliflozin)、安帕列淨(Empagliflozin)、抑格列淨(Ipragliflozin)、特福列淨(Tofogliflozin)、路塞列淨(Luseogliflozin)、LX-4211、伊特列淨(Ertuglifozin)/PF-04971729、RO-4998452、EGT-0001442、KGA-3235/DSP-3235、LIK066、SBM-TFC-039。

雙胍類(例如：二甲雙胍(Metformin)、丁福明(Buformin)、苯乙雙胍(Phenformin))、噻唑啶二酮(例如，吡格列酮(Pioglitazone)、利格列酮(Rivoglitazone)、羅格列酮(Rosiglitazone)、曲格列酮(Troglitazone))，雙重PPAR促效劑(例如，阿格列扎(Aleglitazar)、莫格他唑(Muraglitazar)、替格列扎(Tesaglitazar))，磺醯脲類(例如，甲苯磺丁脲(Tolbutamide)、格列苯脲(Glibenclamide)、格列美脲(Glimepiride)/Amaryl、格列吡嗪(Glipizide))、美格列奈(Meglitinides)(例如，那格列奈(Nateglinide)、瑞格列奈(Repaglinide)、米格列奈(Mitiglinide))，α-葡糖苷酶抑制劑(例如，阿卡波糖(Acarbose)、米格列醇(Miglitol)、伏格列波糖(Voglibose))、胰澱素(Amylin)和胰澱素類似物(例如，普蘭林肽(Pramlintide)、醋酸普蘭林肽(Symlin)。

GPR119促效劑(例如：GSK-263A、PSN-821、MBX-2982、APD-597、ZYG-19、DS-8500)，GPR40促效劑(例如：呋格列泛(Fasiglifam)/TAK-875、TUG-424、P-1736、JTT-851、GW9508)。

其他適當的組合伴體為：塞克洛瑟(Cycloset)，11-β-HSD抑制劑(例如：LY2523199、BMS770767、RG-4929、BMS816336、AZD-8329、HSD-016、BI-135585)，葡萄糖激酶活化劑(例如：TTP-399、AMG-151、TAK-329、GKM-001)、DGAT抑制劑(例如：LCQ-908)，蛋白質酪胺酸磷酸酶1抑制劑(例如：卓德斯明(Trodusquemine))，葡萄糖-6-磷酸酶抑制劑，果糖-1,6-二磷酸酶抑制劑，肝醣磷酸化酶抑制劑，磷酸烯醇丙酮酸羧激酶抑制劑、肝醣合成酶激酶抑制劑，丙酮酸去氫激酶抑制劑，α2-擷抗劑，CCR-2擷抗劑，SGLT-1抑制劑(例如：LX-2761)。

一種或多於一種降脂劑亦適用於作為組合物中的伴體，例如：HMG-CoA-還原酶抑制劑(例如：辛伐他汀(Simvastatin)、阿托伐他汀(Atorvastatin))，微纖維酸類(例如：倍利脂(Bezafibrate)、弗尼利脂寧(Fenofibrate))，菸鹼酸及其衍生物(例如：菸鹼酸)，

PPAR-(α,γ或α/γ)促效劑或調節劑(例如：阿力格利札(Aleglitazar))，

PPAR-delta促效劑，ACAT抑制劑(例如：阿伐辛比(Avasimibe))、膽固醇吸收抑制劑(例如：依澤麥布(Ezetimibe))，膽酸結合物質(例如：可利舒散(Cholestyramine))，迴腸膽酸運輸抑制劑，MTP抑制劑，或PCSK9調節劑。

HDL-提升化合物如：CETP抑制劑(例如：托斯瑞比(Torcetrapib)、安那賽特拉比(Anacetrapid)、達賽特拉比(Dalcetrapid)、伊伐賽特拉比(Evacetrapid)、JTT-302、DRL-17822、TA-8995)或ABC1調節劑。

其他適當的組合物伴體是一種或多於一種用於治療肥胖的活性物質，例如：諾美婷(Sibutramine)，泰索芬辛(Tesofensine)，羅氏鮮(Orlistat)，大麻素-1受體擷抗劑，MCH-1受體擷抗劑，MC4受體促效劑，NPY5或NPY2擷抗劑(例如：維尼培立(Velneperit))，β-3-促效劑，瘦體素或瘦體素類仿物，5HT2c受體促效劑(例如：洛卡色林(Lorcaserin))，或苯丙酮/那曲酮(naltrexone)的組合物，苯丙酮/佐能安(zonisamide)，苯丙酮/芬他命或普拉姆林太(pramlintide)/美曲普汀(metreleptin)。

其他適當的組合物伴體為：更多腸胃的胜肽如胜肽YY 3-36(PYY3-36)或其類似物、胰臟的多肽(PP)或其類似物。

升糖素受體促效劑或擷抗劑、GIP受體促效劑或擷抗劑、飢餓素(ghrelin)擷抗劑或逆轉促效劑、暫寧(Xenin)及其類似物。

此外，與用於影響高血壓、慢性心臟衰竭或動脈硬化症的藥物，例如：血管收縮素II受體擷抗劑(例如：替米沙坦(telmisartan)、博脈舒(candesartan)、易安穩(valsartan)、洛沙坦(losartan)、伊普沙坦(eprosartan)、厄貝沙坦(irbesartan)、偶米沙坦(olmesartan)、達索沙坦(tasosartan)、阿劑沙坦(azilsartan))、ACE抑制劑、ECE抑制劑、利尿劑、β-阻斷劑、鈣擷抗劑、中央作用的高血壓藥物、α-2-腎上腺素受體擷抗劑、中性內肽酶抑制劑、血小板凝集抑制劑及其他或其組合是適當的。

另一方面，本發明係關於使用根據本發明化合物或其生理上可接受的鹽與至少一種以上說明作為組合物伴體的活性物質組合以製備一種適用於治療或預防疾病或病狀的醫藥品，該疾病或病狀可因藥品結合至GLP-1和升糖素受體以及調節其活性而受影響。這較好視一種以代謝症候群為背景的疾病，尤其是已上所列之疾病或病症之一者，最由其是糖尿病或肥胖或其併發症。

根據本發明的化合物或其生理上可接受的鹽，與一種或多於一種物質的組合之用途可同時、分開或連續發生。

根據本發明之化合物或其生理上可接受的鹽與另一種活性物質合併的使用可以同時或錯開時間-但尤其是在短的時間間隔內進行。若其同時被施用，兩種活性物質一起被施用到病患；若以錯開的時間施用，則兩種活性物質在少於或等於12小時的時段內-但尤其是少於或等於6小時的時段內施給病患。

因此，在另一方面，本發明係關於包括根據本發明的化合物或此種化合物之生理上可接受的鹽和至少一種以上說明的活性物質作為組合物伴體，視需要與一種或多於一種惰性載劑和/或稀釋劑併在一起的醫藥品。

根據本發明的化合物或其生理上可接受的鹽或溶劑合物，以及待與之合併之另外的活性物質可兩者均存在於一種調配物中，例如藥片或膠囊，或是被分在兩個完全相同或相異的調配物中，例如呈所謂的元件套組。

圖1. 以100μg/kg皮下注射SEQ ID NO：10在未禁食的糖尿病dbdb-雌鼠對於葡萄糖降低的效果，以從基底線的變化表示。數據為平均值+S

採用的縮寫如下

胜肽化合物的一般合成法 材料：

不同的Rink-醯胺樹脂(4-(2’,4’-二甲氧基苯基-Fmoc-胺基甲基)-苯氧基乙醯胺基-正白胺醯基甲基樹脂(默克生命科學公司出品)；4-[(2,4-二甲氧基苯基)(Fmoc-胺基)甲基]苯氧基乙醯胺基甲基樹脂，(安捷倫科技公司出品)被用於合成胜肽醯胺，裝載量是在0.3-0.4mmol/g的範圍。

Fmoc保護的天然胺基酸係構自蛋白質科技公司(Protein Technologies Inc.)、Senn Chemicals藥品公司、默克生命科學公司、諾華生化公司(Novabiochem)、Iris Biotech生物科技公司、Nagase公司或Bachem公司。以下標準胺基酸被使用於整個合成過程：Fmoc-L-Ala-OH,Fmoc-L-Arg(Pbf)-OH,Fmoc-L-Asn(Trt)-OH,Fmoc-L-Asp(OtBu)-OH,Fmoc-L-Cys(Trt)-OH,Fmoc-L-Gln(Trt)-OH,Fmoc-L-Glu(OtBu)-OH,Fmoc-Gly-OH,Fmoc-L-His(Trt)-OH,Fmoc-L-Ile-OH,Fmoc-L-Leu-OH,Fmoc-L-Lys(Boc)-OH,Fmoc-L-Met-OH,Fmoc-L-Phe-OH,Fmoc-L-Pro-OH,Fmoc-L-Ser(tBu)-OH,Fmoc-L-Thr(tBu)-OH,Fmoc-L-Trp(Boc)-OH,Fmoc-L-Tyr(tBu)-OH,Fmoc-L-Val-OH。

此外，以下特殊胺基酸係構自與以上相同的供應商：Fmoc-L-Lys(ivDde)-OH、Fmoc-Aib-OH、Fmoc-D-Ser(tBu)-OH、 Fmoc-D-Ala-OH、Boc-L-His(Boc)-OH(可以甲苯的溶劑合物取得)and Boc-L-His(Trt)-OH、Fmoc-L-Nle-OH、Fmoc-L-Met(O)-OH、Fmoc-L-Met(O2)-OH、Fmoc-(S)MeLys(Boc)-OH、Fmoc-(R)MeLys(Boc)-OH、Fmoc-(S)MeOrn(Boc)-OH和Boc-L-Tyr(tBu)-OH。

固相胜肽合成法是在例如Prelude胜肽合成機(蛋白質科技公司出品)或相似的自動化合成機上，利用標準的Fmoc化學和HBTU/DIPEA活化法進行的。DMF被用作為溶劑。脫除保護：20%哌啶/DMF經2 x 2.5分鐘。沖洗：7 x DMF。偶合2：5：10 200mM AA/500mM HBTU/2M DIPEA在DMF2 x經20分鐘。沖洗：5 x DMF。

所有已被合成出來的胜肽均用金氏切割雞尾酒試劑(King’s cleavage cocktail)從樹脂上切下，該試劑包含82.5% TFA、5%苯酚、5%水、5%茴香硫醚、2.5% EDT。然後將粗製的胜肽在二乙基或二異丙基醚中沉澱、離心並且真空乾燥。用分析用的HPLC分析胜肽並且用ESI質譜儀檢查。將粗製的胜肽用傳統的製備用HPLC純化法加以純化。

分析用的HPLC/UPLC

方法A：在波長215nm偵測

管柱：Aeris胜肽，3.6μm,XB-C18(250 x 4.6mm)在60℃

溶劑：H₂O+0.1%TFA：ACN+0.1%TFA(流速1.5毫升/分鐘)

梯度：90：10(0分鐘)到90：10(3分鐘)到10：90(43分鐘)到10：90(48分鐘)到90：10(49分鐘)到90：10(50分鐘)

方法B：在波長220nm偵測

管柱：Zorbax,5μm,C18(250 x 4.6mm)在25℃

溶劑：H₂O+0.1%TFA：90% ACN+10% H₂O+0.1%TFA(流速1.0毫升/分鐘)

梯度：100：0(0分鐘)到98：2(2分鐘)到30：70(15分鐘)到5：95(20分鐘)到0：100(25分鐘)到0：100(30分鐘)到98：2(32分鐘)到98：2(35分鐘)

方法C1：在波長210-225nm偵測，視需要偶合到一台質量分析儀Waters LCT Premier，電噴灑正離子模式

管柱：Waters ACQUITY UPLC^® BEH^TM C18 1.7μm(150 x 2.1mm)在50℃

溶劑：H₂O+1%FA：ACN+1%FA(流速0.5毫升/分鐘)

梯度：95：5(0分鐘)到95：5(1.80分鐘)到80：20(1.85分鐘)到80：20(3分鐘)到60：40(23分鐘)到25：75(23.1分鐘)到25：75(25分鐘)到95：5(25.1分鐘)到95：5(30分鐘)

方法C2：在波長210-225nm偵測，視需要偶合到一台質量分析儀Waters LCT Premier，電噴灑正離子模式

管柱：Waters ACQUITY UPLC^® BEH^TM C18 1.7μm(150 x 2.1mm)在50℃

溶劑：H₂O+1%FA：ACN+1%FA(流速0.6毫升/分鐘)

梯度：95：5(0分鐘)到95：5(1分鐘)到65：35(2分鐘)到65：35(3分鐘)到45：55(23分鐘)到25：75(23.1分鐘)到25：75(25分鐘)到95：5(25.1分鐘)到95：5(30分鐘)

方法C3：在波長210-225nm偵測，視需要偶合到一台質量分析儀Waters LCT Premier，電噴灑正離子模式

管柱：Waters ACQUITY UPLC^® BEH^TM C18 1.7μm(150 x 2.1mm)在50℃

溶劑：H₂O+1%FA：ACN+1%FA(流速1毫升/分鐘)

梯度：95：5(0分鐘)到95：5(1分鐘)到65：35(2分鐘)到65：35(3分鐘)到45：55(20分鐘)到2：98(20.1分鐘)到2：98(25分鐘)到95：5(25.1分鐘)到95：5(30分鐘)

方法C4：在波長210-225nm偵測，視需要偶合到一台質量分析儀Waters LCT Premier，電噴灑正離子模式

管柱：Waters ACQUITY UPLC^® BEH^TM C18 1.7μm(150 x 2.1mm)在50℃

溶劑：H₂O+1%FA：ACN+1%FA(流速1毫升/分鐘)

梯度：95：5(0分鐘)到95：5(1.80分鐘)到80：20(1.85分鐘)到80：20(3分鐘)到60：40(23分鐘)到2：98(23.1分鐘)到2：98(25分鐘)到95：5(25.1分鐘)到95：5(30分鐘)

方法D：在波長214nm偵測

管柱：Waters X-Bridge C18 3.5μm 2.1 x 150mm

溶劑：H₂O+0.5%TFA：ACN(流速0.55毫升/分鐘)

梯度：90：10(0分鐘)到40：60(5分鐘)到1：99(15分鐘)

方法E：在波長210-225nm偵測，視需要與一台質量分析儀Waters LCT Premier結合，以電噴灑正離子模式

管柱：Waters ACQUITY UPLC^® BEH^TM C18 1.7μm(150 x 2.1mm)在50℃

溶劑：H₂O+1%FA：ACN+1%FA(流速0.9毫升/分鐘)

梯度：95：5(0分鐘)到95：5(2分鐘)到35：65(3分鐘)到65：35(23.5分鐘)到5：95(24分鐘)到95：5(26分鐘)到95：5(30分鐘)

一般製備用的HPLC純化法：

將粗製的胜肽在一台Äkta純化系統或一台Jasco半製備用HPLC系統上純化。視待純化的粗製胜肽量而定，使用不同大小與不同流速的製備用RP-C18-HPLC管柱。乙腈+0.05到0.1% TFA(B)和水+0.05到0.1% TFA(A)被採用作為溶離劑。或者，使用由乙腈和水加上少量乙酸的緩衝系統。收集含有產物的部分收集物並且將其冷凍乾燥以得到醇化的產物，典型上是TFA或乙酸鹽。

艾塞那肽-4衍生物的穩定性與溶解度測試：

在測試一批胜肽的穩定性與溶解度之前，先測定其含量。因此，探測兩項變數-期純度(HPLC-UV)與該批的鹽裝載量(離子色層分析法)。

對於溶解度測試而言，標靶濃度為1.0mg/mL純化合物。因此，在不同的緩衝系統中製備固態樣品的溶液，根據先前測定的含量使其濃度為1.0mg/mL化合物。在溫和攪拌2小時後從4000rpm離心20分鐘後得到的上澄液進行HPLC-UV測定。

然後藉著比較用濃度為2mg/mL在純水中或可變化量之乙腈(所有化合物都溶解的光學對照組)溶液中的胜肽貯存液所獲得的UV尖峰面積測定溶解度。這項分析也被當作穩定性分析的起始點(t0)。

對於穩定性測試而言，將一小部分得自溶解度測試的上澄液在25℃或在40℃貯存七天。在該時間過程中，將樣品在4000rpm離心20分鐘並且用HPLC-UV分析上澄液。

為了測定剩下的胜肽量，比較目標化合物在t0和t7的量，依照以下公式得到「%剩下的胜肽」，

%留下的胜肽=[(t7胜肽尖鋒面積)x 100]/t0胜肽尖鋒面積

可溶的分解產物的量是從比較得自所有觀察到雜質的尖鋒面積總和剪掉在t0觀察到的尖鋒面積所計算出來的(亦即測定新形成之與胜肽相關的物種)。此數質是以和t0的最初胜肽量的百分比關係提供，依照以下公式：

%可溶的分解產物={[(t7雜質尖鋒面積總和)-(t0雜質尖鋒面積總和)]x 100}/t0胜肽尖鋒面積

依照以下公式，從「%剩下的胜肽」和「%可溶的分解產物」之總和相對於100%之可能差異反應出在壓力條件下未保持可溶的胜肽的量：

%沉澱物=100-([%剩下的胜肽]+[%可溶的分解產物])

此種沉澱物包括已藉由離心從分析中移除之不可溶的分解產物、聚合物和/或微纖維。

化學穩定性係以「%剩下的胜肽」表示。

陰離子色層分析術

儀器：Dionex ICS-2000，製備用/管柱：Ion Pac AG-18 2 x 50mm(Dionex公司出品)/AS18 2 x 250mm(Dionex公司出品)，溶離劑：氫氧化鈉水溶液，流速：0.38mL/min，梯度：0-6分鐘：22mM KOH，6-12分鐘：22-28mM KOH，12-15分鐘：28-50mM KOH，15-20分鐘：22mM KOH，抑制劑：ASRS 300 2mm，偵測：導電性。

作為HPLC/UPLC方法，方法D或E被使用，。

體外細胞檢驗GLP-1受體、升糖素受體和GIP受體的效能

化合物對於受體的促效性是藉由功能檢驗來測定的，該檢驗係測量穩定表現人類GIP、GLP-1或升糖素受體之HEK-293細胞株的cAMP反應。

細胞的cAMP含量是利用購自Cisbio公司的套組(目錄型號為62AM4PEC)，其係依據HTRF(均相之時間解析螢光術)來測定。為了製備將細胞分到T175培養瓶中並且使其生長至隔夜，直到在培養基(DMEM/10% FBS)中接近長滿。然後移除培養基並用缺少鈣和鎂的PBS沖洗，接著用細胞剝離試劑accutase(Sigma-Aldrich公司出品，目錄型號為A6964)進行蛋白酶處理。將分開的細胞沖洗並且再懸浮於檢驗緩衝液(1 x HBSS；20mM HEPES,0.1% BSA,2mM IBMX)中並測定細胞密度。然後將其稀釋到400000個細胞/毫升並且以25μl為小部分分裝到96-孔檢驗盤的孔洞中。為了進行測量，將25μl溶在檢驗緩衝液中的試驗化合物添加到孔洞中，接著在室溫培育30分鐘。在添加稀釋於細胞溶解緩衝液的HTRF試劑(套組成份)之後，將檢驗盤培育1小時，接著在665/620nm測量螢光比率。體外的促效劑效力是藉由測定能引起50%最大反應之活化作用濃度(EC50)。在糖尿病dbdb雌鼠體內之葡萄糖降低

使用在研究開始實為十週齡的糖尿病dbdb雌鼠體(BKS.Cg-+Leprdb/+Leprdb/OlaHsd)。使老鼠習慣於飼養和居住的條件至少兩週。在研究開始前七天，測定HbA1c以將老鼠編派成組，目標是分散低、中和高HbAlc-值的老鼠且因而使每組的平均數目(n=8)儘量相等。在研究當天，直接在取樣進行基底葡萄糖檢測之前(t=0分鐘)移除掉食物。緊接在後，以皮下注射施用化合物或運輸劑(磷酸鹽緩衝液，PBS)，用量為100μg/kg、 10ml/kg。然後，在15、30、60、90、120、150、180、240、360、480分鐘和24小時用尾端切除法取得血液樣品。取樣之後480分鐘再提供食物。

數據係藉由2-W-ANOVA以重複測量分析，接著用Dunnett氏試驗作為事後比較的評估，顯著性程度p<0.05。

實例

本發明尚藉以下實例作說明。

實例1： SEQ ID NO：6的合成

固相合成是在諾華生化公司(Novabiochem)出品的Rink-醯胺樹脂(4-(2’,4’-二甲氧基苯基-Fmoc-胺基甲基)-苯氧基乙醯胺基-正白胺醯胺基甲基樹脂)上實行的，100-200篩孔大小，裝載量為0.23mmol/g。Fmoc-合成策略是以HBTU/DIPEA-活化反應施行的。該胜肽係以金氏雞尾酒試劑從樹脂上切下來(D.S.King,C.G.Fields,G.B.Fields，《國際胜肽蛋白質研究雜誌》，第36期，1990年，第255-266頁)。將粗製的產物經由製備用的HPLC在一支Waters管柱(XBridge,BEH130，製備用C18 5μM)上利用乙腈/水梯度(兩種溶液均以0.1% TFA予以緩衝)進行純化。

最後，經純化的胜肽之分子量係以LC-MS確認。

實例2： SEQ ID NO：8的合成

固相合成是在Novabiochem Rink-醯胺樹脂(4-(2’,4’-二甲氧基苯基-Fmoc-胺基甲基)-苯氧基乙醯胺基-正白胺醯胺基甲基樹脂)上實行的，100-200篩孔大小，裝載量為0.34mmol/g。Fmoc-合成策略是以HBTU/DIPEA-活化反應施行的。該胜肽係以金氏雞尾酒試劑從樹脂上切下來(D.S.King,C.G.Fields,G.B.Fields，《國際胜肽蛋白質研究雜誌》，第36期，1990年，第255-266頁)。將粗製的產物經由製備用的HPLC在一支 Waters管柱(XBridge,BEH130，製備用C18 5μM)上利用乙腈/水梯度(兩種溶液均以0.1% TFA予以緩衝)進行純化。

最後，經純化的胜肽之分子量係以LC-MS確認。

表2中所列的其他胜肽係以類似的方式合成。

以相似的方式可以合成以下表3的胜肽：

實例3：化學穩定性和溶解度

胜肽化合物的溶解度和化學穩定性係如說明於方法中的方式探知。結果提供在4中。

實例4：GLP-1和升糖素受體的體外數據

胜肽化合物作用於GLP-1和升糖素受體的效力是藉由暴露表現人類升糖素受體(人類升糖素R)或人類GLP-1受體(hGLP-1 R)的細胞至所列之濃度增加的化合物，並且如方法中之說明測量所形成的cAMP來測定的。

結果顯示在表5之中：

實例5：降低糖尿病之dbdb-雌鼠體內的葡萄糖

在時間0分鐘時，dbdb-雌鼠以皮下注射方式接受100μg/kg的SEQ ID NO：10或磷酸鹽緩衝液(運輸劑的對照組)。SEQ ID NO：10立即降低葡萄糖值(基底線平均位在28mmol/l)，達到~12mmol/l葡萄糖減低之最大效果。

與運輸劑對照組相比較，從t=60分鐘值到240分鐘，SEQ ID NO：10達成在統計學上顯著葡萄糖降低(p<0.05，2-途徑-ANOVA重複測量，接著進行Dunnett氏的事後檢定試驗)。

<110> Sanofi

<120> 作為雙重GLP-1/升糖素受體促效劑之艾塞那肽-4-胜肽類似物

<130> DE2013/243

<160> 27

<170> 專利案件版本3.5

<210> 1

<211> 39

<212> PRT

<213> 美國毒蜥(Heloderma suspectum)

<220>

<221> MOD_RES

<222> (39)..(39)

<223> 醯胺化的C端

<400> 1

<210> 2

<211> 30

<212> PRT

<213> 智人(Homo sapiens)

<220>

<221> MOD_RES

<222> (30)..(30)

<223> 醯胺化的C端

<400> 2

<210> 3

<211> 29

<212> PRT

<213> 智人(Homo sapiens)

<400> 3

<210> 4

<211> 31

<212> PRT

<213> 人工合成序列

<220>

<223> 胰妥善(Liraglutide)

<220>

<221> MOD_RES

<222> (20)..(20)

<223> Lys在N6用(S)-4-羧基-4-十六醯基胺基-丁醯 衍生處理

<400> 4

<210> 5

<211> 39

<212> PRT

<213> 人工合成序列

<220>

<223> 艾塞那肽-4類似物

<220>

<221> MOD_RES

<222> (39)..(39)

<223> 醯胺化的C端

<400> 5

<210> 6

<211> 39

<212> PRT

<213> 人工合成序列

<220>

<223> 艾塞那肽-4-類似物

<220>

<221> MOD_RES

<222> (39)..(39)

<223> 醯胺化的C端

<400> 6

<210> 7

<211> 39

<212> PRT

<213> 人工合成序列

<220>

<223> 艾塞那肽-4-類似物

<220>

<221> MOD_RES

<222> (2)..(2)

<223> Xaa是D-Ser

<220>

<221> MOD_RES

<222> (39)..(39)

<223> 醯胺化的C端

<400> 7

<210> 8

<211> 39

<212> PRT

<213> 人工合成序列

<220>

<223> 艾塞那肽-4-類似物

<220>

<221> MOD_RES

<222> (2)..(2)

<223> Xaa是D-Ser

<220>

<221> MOD_RES

<222> (20)..(20)

<223> (S)-阿爾法-甲基離胺酸

<220>

<221> MOD_RES

<222> (39)..(39)

<223> 醯胺化的C端

<400> 8

<210> 9

<211> 39

<212> PRT

<213> 人工合成序列

<220>

<223> 艾塞那肽-4類似物

<220>

<221> MOD_RES

<222> (2)..(2)

<223> Xaa是D-Ser

<220>

<221> MOD_RES

<222> (39)..(39)

<223> 醯胺化的C端

<400> 9

<210> 10

<211> 39

<212> PRT

<213> 人工合成序列

<220>

<223> 艾塞那肽-4類似物

<220>

<221> MOD_RES

<222> (2)..(2)

<223> Aib

<220>

<221> MOD_RES

<222> (39)..(39)

<223> 醯胺化的C端

<400> 10

<210> 11

<211> 39

<212> PRT

<213> 人工合成序列

<220>

<223> 艾塞那肽-4類似物

<220>

<221> MOD_RES

<222> (2)..(2)

<223> Aib

<220>

<221> MOD_RES

<222> (39)..(39)

<223> 醯胺化的C端

<400> 11

<210> 12

<211> 39

<212> PRT

<213> 人工合成序列

<220>

<223> 艾塞那肽-4類似物

<220>

<221> MOD_RES

<222> (2)..(2)

<223> Aib

<220>

<221> MOD_RES

<222> (39)..(39)

<223> 醯胺化的C端

<400> 12

<210> 13

<211> 39

<212> PRT

<213> 人工合成序列

<220>

<223> 艾塞那肽-4類似物

<220>

<221> MOD_RES

<222> (2)..(2)

<223> Aib

<220>

<221> MOD_RES

<222> (39)..(39)

<223> 醯胺化的C端

<400> 13

<210> 14

<211> 39

<212> PRT

<213> 人工合成序列

<220>

<223> 艾塞那肽-4類似物

<220>

<221> MOD_RES

<222> (2)..(2)

<223> Aib

<220>

<221> MOD_RES

<222> (20)..(20)

<223> (S)-阿爾法-甲基離胺酸

<220>

<221> MOD_RES

<222> (39)..(39)

<223> 醯胺化的C端

<400> 14

<210> 15

<211> 39

<212> PRT

<213> 人工合成序列

<220>

<223> 艾塞那肽-4類似物

<220>

<221> MOD_RES

<222> (2)..(2)

<223> Aib

<220>

<221> MOD_RES

<222> (39)..(39)

<223> 醯胺化的C端

<400> 15

<210> 16

<211> 39

<212> PRT

<213> 人工合成序列

<220>

<223> 艾塞那肽-4類似物

<220>

<221> MOD_RES

<222> (2)..(2)

<223> Aib

<220>

<221> MOD_RES

<222> (39)..(39)

<223> 醯胺化的C端

<400> 16

<210> 17

<211> 39

<212> PRT

<213> 人工合成序列

<220>

<223> 艾塞那肽-4類似物

<220>

<221> MOD_RES

<222> (2)..(2)

<223> Aib

<220>

<221> MOD_RES

<222> (39)..(39)

<223> 醯胺化的C端

<400> 17

<210> 18

<211> 39

<212> PRT

<213> 人工合成序列

<220>

<223> 艾塞那肽-4類似物

<220>

<221> MOD_RES

<222> (2)..(2)

<223> Aib

<220>

<221> MOD_RES

<222> (39)..(39)

<223> 醯胺化的C端

<400> 18

<210> 19

<211> 39

<212> PRT

<213> 人工合成序列

<220>

<223> 艾塞那肽-4類似物

<220>

<221> MOD_RES

<222> (39)..(39)

<223> 醯胺化的C端

<400> 19

<210> 20

<211> 39

<212> PRT

<213> 人工合成序列

<220>

<223> 艾塞那肽-4類似物

<220>

<221> MOD_RES

<222> (2)..(2)

<223> Xaa is D-Ser

<220>

<221> MOD_RES

<222> (39)..(39)

<223> 醯胺化的C端

<400> 20

<210> 21

<211> 39

<212> PRT

<213> 人工合成序列

<220>

<223> 艾塞那肽-4類似物

<220>

<221> MOD_RES

<222> (2)..(2)

<223> Xaa是D-Ser

<220>

<221> MOD_RES

<222> (39)..(39)

<223> 醯胺化的C端

<400> 21

<210> 22

<211> 39

<212> PRT

<213> 人工合成序列

<220>

<223> 艾塞那肽-4類似物

<220>

<221> MOD_RES

<222> (39)..(39)

<223> 醯胺化的C端

<400> 22

<210> 23

<211> 39

<212> PRT

<213> 人工合成序列

<220>

<223> 艾塞那肽-4類似物

<220>

<221> MOD_RES

<222> (2)..(2)

<223> Aib

<220>

<221> MOD_RES

<222> (39)..(39)

<223> 醯胺化的C端

<400> 23

<210> 24

<211> 39

<212> PRT

<213> 人工合成序列

<220>

<223> 艾塞那肽-4類似物

<220>

<221> MOD_RES

<222> (20)..(20)

<223> (S)-阿爾法-甲基離胺酸

<220>

<221> MOD_RES

<222> (39)..(39)

<223> 醯胺化的C端

<400> 24

<210> 25

<211> 39

<212> PRT

<213> 人工合成序列

<220>

<223> 艾塞那肽-4類似物

<220>

<221> MOD_RES

<222> (2)..(2)

<223> Xaa是D-Ser

<220>

<221> MOD_RES

<222> (20)..(20)

<223> (S)-阿爾法-甲基離胺酸

<220>

<221> MOD_RES

<222> (39)..(39)

<223> 醯胺化的C端

<400> 25

<210> 26

<211> 39

<212> PRT

<213> 人工合成序列

<220>

<223> 艾塞那肽-4類似物

<220>

<221> MOD_RES

<222> (2)..(2)

<223> Xaa是D-Ser

<220>

<221> MOD_RES

<222> (39)..(39)

<223> 醯胺化的C端

<400> 26

<210> 27

<211> 39

<212> PRT

<213> 人工合成序列

<220>

<223> 艾塞那肽-4類似物

<220>

<221> MOD_RES

<222> (2)..(2)

<223> Xaa是D-Ser

<220>

<221> MOD_RES

<222> (39)..(39)

<223> 醯胺化的C端

<400> 27

Claims (21)

1. 一種式(I)的胜肽化合物，R¹-Z-R² (I)其中Z是一個具有式(II)的胜肽分子部分His-X2-X3-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Leu-Ser-Lys-Gln-Leu-Asp-Glu-Gln-X18-Ala-X20-X21-Phe-Ile-Glu-Trp-Leu-Ile-X28-Gly-Gly-Pro-X32-Ser-Gly-Ala-Pro-Pro-Pro-Ser (II)X2 代表一個選自Ser、D-Ser和Aib的胺基酸殘基，X3 代表一個選自Gln和His的胺基酸殘基，X18 代表一個選自Arg和Lys的胺基酸殘基，X20 代表一個選自Lys、Gln、His和(S)MeLys的胺基酸殘基，X21 代表一個選自Asp和Glu的胺基酸殘基，X28 代表一個選自Ser和Ala的胺基酸殘基，X32 代表一個選自Ser和Val的胺基酸殘基，R¹ 代表NH₂，R² 代表OH或NH₂，或其鹽或溶劑合物。
2. 根據請求項1的化合物，其為一種GLP1和升糖素受體促效劑。
3. 根據請求項1-2中任一項的化合物，其中R²是NH₂。
4. 根據請求項1-3中任一項的化合物，其中該胜肽化合物與天然升糖素相較下對於升糖素受體有至少0.1%的相對活性。
5. 根據請求項1-4中任一項的化合物，其中該胜肽化合物與GLP-1(7-36)相較下對於GLP-1受體展現至少0.1%的相對活性。
6. 根據請求項1-5中任一項的化合物，其中X2 代表一個選自Ser、D-Ser和Aib的胺基酸殘基，X3 代表一個選自Gln和His的胺基酸殘基，X18 代表Arg，X20 代表一個選自Lys、Gln、His和(S)MeLys的胺基酸殘基，X21 代表一個選自Asp和Glu的胺基酸殘基，X28 代表一個選自Ser和Ala的胺基酸殘基，X32 代表一個選自Ser和Val的胺基酸殘基。
7. 根據請求項1-6中任一項的化合物，其中X2 代表一個選自Ser、D-Ser和Aib的胺基酸殘基，X3 代表一個選自Gln和His的胺基酸殘基，X18 代表一個選自Arg和Lys的胺基酸殘基，X20 代表Lys，X21 代表一個選自Asp和Glu的胺基酸殘基，X28 代表一個選自Ser和Ala的胺基酸殘基，X32 代表一個選自Ser和Val的胺基酸殘基。
8. 根據請求項1-7中任一項的化合物，其中X2 代表一個選自Ser、D-Ser和Aib的胺基酸殘基，X3 代表Gln，X18 代表Arg，X20 代表(S)MeLys，X21 代表Asp，X28 代表Ala，X32 代表一個選自Ser和Val的胺基酸殘基。
9. 根據請求項1-8中任一項的化合物，其中X2 代表Aib，X3 代表Gln，X18 代表Arg， X20 代表一個選自Lys和Gln的胺基酸殘基，X21 代表一個選自Asp和Glu的胺基酸殘基，X28 代表Ser，X32 代表Ser。
10. 根據請求項1-9中任一項的化合物，其中X2 代表一個選自Ser、D-Ser和Aib的胺基酸殘基，X3 代表一個選自Gln和His的胺基酸殘基，X18 代表Arg X20 代表一個選自Lys和(S)MeLys的胺基酸殘基，X21 代表一個選自Asp和Glu的胺基酸殘基，X28 代表Ala，X32 代表Val。
11. 根據請求項1-10中任一項的化合物，其中X2 代表一個選自Ser和Aib的胺基酸殘基，X3 代表一個選自Gln和His的胺基酸殘基，X18 代表Arg，X20 代表一個選自Lys和Gln的胺基酸殘基，X21 代表一個選自Asp和Glu的胺基酸殘基，X28 代表一個選自Ser和Ala的胺基酸殘基，X32 代表一個選自Ser和Val的胺基酸殘基。
12. 根據請求項1-11中任一項的化合物，其選自序列鑑認編號(SEQ ID NO)：5-27，及其鹽與溶劑合物。
13. 根據請求項1-12中任一項的化合物，其用於醫藥，尤其是人類醫藥用途。
14. 根據請求項13中的化合物，其使用作為醫藥組成物中的活性劑，並與至少一種醫藥上可接受的載劑一併存在。
15. 根據請求項13或14的化合物，其與至少一種另外的醫療活性劑一併使用，其中該另外的醫療活性劑係選自胰島素和胰島素衍生物、GLP-1、GLP-1類似物和GLP-1受體促效劑、聚合物結合之GLP-1和GLP-1類似物、雙重GLP1/升糖素促效劑、雙重GLP1/GIP促效劑、 PYY3-36或其類似物、胰臟多胜肽或其類似物、升糖素受體促效劑、GIP受體促效劑或擷抗劑、飢餓素(ghrelin)擷抗劑或逆轉促效劑、肽激素暫寧(Xenin)及其類似物、DDP-IV抑制劑、SGLT2抑制劑、雙重SGLT2/SGLT1抑制劑、雙胍類、噻唑啶二酮類、雙重PPAR促效劑、硫醯機尿素類、美格替耐類(Meglitinides)、α-葡萄糖苷酶抑制劑、胰澱素(Amylin)和胰澱素類似物、GPR119促效劑、GPR40促效劑、GPR120促效劑、GPR142促效劑、全身的或低度可吸收的TGR5促效劑、環賽特(Cycloset)、11-β-HSD抑制劑、葡萄糖激酶的活化劑、DGAT的抑制劑、蛋白質酪胺酸磷酸酶1的抑制劑、葡萄糖-6-磷酸酶抑制劑、果糖-1,6-雙磷酸酶抑制劑、肝醣磷酸化酶抑制劑、磷酸烯醇丙酮酸羧激酶抑制劑、肝醣合成酶激酶抑制劑、丙酮酸去氫酶激酶抑制劑、α2-擷抗劑、CCR-2擷抗劑、葡萄糖轉移劑-4的調節劑、體抑素受體3促效劑、HMG-CoA-還原酶抑制劑、微纖維酸類、菸鹼酸及其衍生物、菸鹼酸受體1促效劑、PPAR-α、γ或α/γ)促效劑或調節劑、PPAR-δ促效劑、ACAT抑制劑、膽固醇吸收抑制劑、膽酸結合物質、IBAT抑制劑、MTP抑制劑、PCSK9調節劑、藉由肝選擇性甲狀腺激素LDL受體受體ß促效劑之向上調節劑、提高HDL之化合物、脂類代謝調節劑、PLA2抑制劑、ApoA-I增進劑、甲狀腺激素受體促效劑、膽固醇合成抑制劑、Ω-3脂肪酸及其衍生物、治療肥胖的活性物質(如諾美婷[Sibutramine]、泰索芬辛[Tesofensine]、羅氏鮮[Orlistat])、CB-1受體擷抗劑、MCH-1擷抗劑、MC4受體促效劑和部分促效劑、NPY5或NPY2擷抗劑、NPY4促效劑、β-3-促效劑、瘦體素或瘦體素類仿物、5HT2c受體促效劑、或苯丙酮/那曲酮的組合(CONTRAVE)、苯丙酮/佐能安(EMPATIC)、苯丙酮/芬他命或普蘭林肽/美曲普汀、QNEXA(芬他命+托吡酯)、脂肪酶抑制劑、血管新生抑制劑、H3擷抗劑、AgRP抑制劑、三重單胺攝取抑制劑(正腎上腺素和乙醯膽鹼)、MetAP2抑制劑、鈣通道阻滯劑迪太贊的鼻用調配物、對抗纖維母細胞生長因子4產生的反義股、以抑制素為標靶的胜肽-1、影響高血壓的藥物、慢性心臟衰竭或動脈硬化，如血管收縮素II受體擷抗劑、ACE抑制劑、ECE抑制劑、利尿劑、β-阻斷劑、鈣擷抗劑、 中心作用的高血壓藥、α-2-腎上腺素受體擷抗劑、中性內肽酶抑制劑、血小板凝集抑制劑。
16. 根據請求項13-15中任一項的化合物，其用於治療或預防高血糖症、第二型糖尿病、受損的葡萄糖耐受性、第一型糖尿病、肥胖、代謝症候群及神經退化性病症，尤其是延緩或防止第二型糖尿病之疾病發展、治療代謝症候群、治療肥胖或防止過重、用於減低食物攝取、增加能量消耗、降低體重、延緩從受損的葡萄糖耐受性(IGT)進展到第二型糖尿病；延緩從第二型糖尿病進展到有胰島素需求之糖尿病；調節食慾；誘發飽足；防止成功減重後體重再增加；治療與過重或肥胖相關的疾病或狀態；治療食慾過盛症；治療暴飲暴食；治療動脈硬化、高血壓、IGT、血脂異常、冠心症、脂肪肝，治療β-阻滯劑中毒，用於抑制腸胃道的蠕動、有用於和利用如X-射線，CT-和NMR-掃描技術之腸胃道研究相連結。
17. 根據請求項13-16中任一項化合物，其用於治療或預防高血糖症、第二型糖尿病、肥胖。
18. 一種作為醫藥品用途之醫藥組成物，其包含至少一種根據請求項1-12中任一項之化合物或生理學上可接受鹽或溶劑合物。
19. 一種治療病患之高血糖症、第二型糖尿病或肥胖的方法，該方法包括對病患施用有效量的至少一種根據請求項1-12中任一項之式I化合物以及有效量之至少一種有用於治療高血糖症、第二型糖尿病或肥胖的其他化合物。
20. 根據請求項19的方法，其中將有效量之至少一種根據請求項1-12的式I化合物以及另外的有效成分同時施用到病患身上。
21. 根據請求項19的方法，其中將有效量之至少一種根據請求項1-12的式I化合物以及另外的有效成分依序施用到病患身上。