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TW201502139A - Ｃｄ１９特異性嵌合抗原受體及其用途 - Google Patents

Ｃｄ１９特異性嵌合抗原受體及其用途 Download PDF

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TW201502139A
TW201502139A TW103116744A TW103116744A TW201502139A TW 201502139 A TW201502139 A TW 201502139A TW 103116744 A TW103116744 A TW 103116744A TW 103116744 A TW103116744 A TW 103116744A TW 201502139 A TW201502139 A TW 201502139A
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cells
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antigen receptor
car
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TW103116744A
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Cecile Mannioui
Roman Galetto
Julianne Smith
Andrew Scharenberg
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Cellectis
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Publication date
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Abstract

本發明係關於嵌合抗原受體(CAR)。CARs能夠利用配體結合域性質再導免疫細胞對選定標靶之特異性及反應性。特別地，本發明係關於其中胞外配體結合為衍生自CD19單株抗體(較佳4G7)之scFV的嵌合抗原受體。本發明亦關於編碼該CAR之多核苷酸、載體及在表面表現該CAR之分離細胞。本發明亦關於改造免疫細胞使其表面表現4G7-CAR而賦予轉導細胞延長「活化」狀態之方法。本發明尤其適用於治療B-細胞淋巴瘤及白血病。

Description

CD19特異性嵌合抗原受體及其用途
本發明係關於嵌合抗原受體(CAR)。CAR能夠利用配體結合域性質再導免疫細胞對選定標靶之特異性及反應性。特定言之，本發明係關於其中胞外配體結合為衍生自CD19單株抗體(較佳係4G7)之scFV的嵌合抗原受體。本發明亦關於編碼該CAR之多核苷酸、載體及在其表面表現該CAR之單離細胞。本發明亦關於改造在其表面表現4G7-CAR之免疫細胞而賦予轉導細胞長時間「活化」狀態之方法。本發明尤其適用於治療B-細胞淋巴瘤及白血病。
涉及活體外產生之自體抗原特異性T細胞之轉移的過繼性免疫治療(adoptive immunotherapy)為治療病毒感染及癌症之可靠的方法。用於過繼性免疫治療之T細胞可藉由經由基因改造擴增抗原特異性T細胞或再導T細胞獲得(Park,Rosenberg等人2011)。病毒抗原特異性T細胞之轉移為用於治療移植相關病毒感染及與罕見病毒相關之惡性病之良好確立的程序。類似地，已證實腫瘤特異性T細胞之單離及轉移可成功地治療黑素瘤。
已成功地經由轉殖基因T細胞受體或嵌合抗原受體(CAR)之基因轉移獲得T細胞中之新穎特異性(Jena,Dotti等人2010)。CAR為由與一或多個信號傳導域相關聯之靶向部分於單一融合分子中組成之合成 受體。一般而言，CAR之結合部分係由單鏈抗體(scFv)之抗原結合域組成，該單鏈抗體(scFv)之抗原結合域包含單株抗體之經可撓性連接子接合之輕且可變片段。亦已成功地使用基於受體或配體域之結合部分。就第一代CAR而言之信號傳導域係衍生自CD3 ζ之細胞質區域或Fc受體γ鏈。已證實第一代CAR可成功地再導T細胞細胞毒性，然而，其等無法提供活體內長時間擴增及抗腫瘤活性。衍生自包括CD28、OX-40(CD134)、及4-1BB(CD137)之共刺激分子之信號傳導域經單獨地(第二代)或以組合方式(第三代)添加以提高CAR改造之T細胞之存活率並增加CAR改造之T細胞之增殖。CAR已成功地容許將T細胞再導成可抗在來自包括淋巴瘤及實體瘤之各種惡性病之腫瘤細胞之表面處表現之抗原(Jena,Dotti等人2010)。
CD19為用於免疫治療之吸引人的標靶，此乃因大部分B-急性淋巴母細胞性白血病(B-ALL)均勻地表現CD19，而於非造血細胞、及骨髓、紅血球、及T細胞、及骨髓幹細胞上不存在表現。對B-細胞惡性病之靶向CD19之臨床試驗係以鼓舞人的抗腫瘤反應進行。大多數輸注T細胞係經基因改造以以衍生自CD19-特異性小鼠單株抗體FMC63之scFv區的特異性表現嵌合抗原受體(CAR)(Nicholson,Lenton等人1997；Cooper,Topp等人2003；Cooper,Jena等人2012)(國際申請案：WO2013/126712)。然而，仍需要改良CAR之建構，其顯示與T-細胞增殖較佳相容性，以使表現該等CAR之細胞達成顯著臨床優點。
本發明者已獲得包含衍生自CD19特異性單株抗體(4G7)之scFV之CD19特異性CAR(4G7-CAR)，並驚人地發現引入所得4G7-CAR至原代T細胞中可與抗原結合無關地賦予轉導細胞長時間「活化」狀態。於活體外非特異性活化(例如，利用經抗CD3/CD28塗覆之珠粒及重組IL2)之後，該等細胞相較於經包含FMC63 scFV之類似CAR轉導之細 胞展現增加之細胞尺寸(芽細胞(blast)形成)以及活化標記(CD25)在延長時間期內之表現。該長時間活化容許延長時間之增殖且提供活體外擴增4G7-CAR細胞之抗原無關機制。
本發明因此提供一種嵌合抗原受體，其包含至少一種胞外配體結合域、跨膜域及至少一個信號轉導域，其中該胞外配體結合域包含衍生自特異性單株抗體4G7之scFV。特定言之，本發明之CAR一旦轉導至免疫細胞中立刻造成該細胞之抗原無關地活化及增殖結果。本發明亦關於編碼包含衍生自CD19特異性單株抗體4G7之scFV的CAR之核酸、載體及改造免疫細胞的方法，該方法包括將4G7 CAR引入該細胞中。本發明亦關於在其表面表現4G7之經基因改造之免疫細胞，特別是與抗原機制無關地增殖之免疫細胞。本發明之經基因改造之免疫細胞尤其適用於諸如B-細胞淋巴瘤或白血病治療之治療性應用。
圖1：與未經轉導KO T細胞(NTD)相比，經4G7-CAR慢病毒載體轉導之TCR α非活化T細胞(KO)之增殖。在利用可溶性抗-CD28再活化之步驟(IL2+CD28)或未再活化(IL2)之後的30天期間跟蹤增殖。
圖2：基於4G7-CAR表現(CAR+、CAR-)閘控且與TCR α陽性未經電穿孔(NEP)或經TCR α破壞但未經轉導(NTD)之細胞相比，在經4G7-CAR慢病毒載體轉導之非活化TCR α T細胞之表面上之CD25活化標記表現分析。於利用可溶性抗-CD28再活化之步驟(IL2+CD28)或未再活化(IL2)之後，分析CD25表現。
圖3：在經編碼4G7-CAR或FMC63-CAR中任一者之慢病毒載體轉導之T細胞之表面處的CAR表現分析。該分析係在轉導後第3、第8及第15天藉由流式細胞儀進行。NT係指無經轉導之T細胞。
圖4：在經編碼4G7-CAR或FMC63-CAR中任一者之慢病毒載體轉導之T細胞之表面處的CD25表現分析。該分析係在轉導後第3、第8及 第15天藉由流式細胞儀進行。NT係指無經轉導之T細胞。
圖5：經編碼4G7-CAR或FMC63-CAR中任一者之慢病毒載體轉導之T細胞之尺寸分析。該分析係在轉導後第3、第8及第15天藉由流式細胞儀進行。NT係指無經轉導之T細胞。
圖6：相較於經FMC63慢病毒載體轉導，經4G7-CAR慢病毒載體轉導之T細胞之增殖。在利用可溶性抗-CD28再活化之步驟(CD28)或未再活化(-)之後的20天期間跟蹤增殖。NTD係指無經轉導之T細胞。
除非本文中明確地定義，否則使用的所有技術及科學術語具有與為熟習基因治療、生物化學、遺傳學、及分子生物學領域技術者通常所理解相同的含義。
類似或等同於本文所述其等之所有方法及材料可併與述於本文中之適宜方法及材料用於本發明之實施或測試中。本文中述及的所有公開案、專利申請案、專利案、及其他參考文獻係以其全文引用之方式併入。萬一衝突，將以本說明書(包括定義)為準。此外，除非另作指明，否則材料、方法、及實例僅係例示性而非意圖具限制性。
除非另作指明，否則本發明之實施將利用於本技術中之習知的細胞生物學、細胞培養、分子生物學、轉殖基因生物學、微生物學、重組DNA、及免疫學技術。該等技術完整說明於相關文獻中。參見：例如，Current Protocols in Molecular Biology(Frederick M.AUSUBEL，2000，Wiley and son Inc，Library of Congress，USA)；Molecular Cloning：A Laboratory Manual，第三版(Sambrook等人，2001，紐約冷泉港(Cold Spring Harbor)：冷泉港實驗室出版社)；Oligonucleotide Synthesis(M.J.Gait編輯，1984)；Mullis等人美國專利案第4,683,195號；Nucleic Acid Hybridization(B.D.Harries及S.J.Higgins編輯1984)；Transcription And Translation(B.D.Hames及S.J. Higgins編輯1984)；Culture Of Animal Cells(R.I.Freshney、Alan R.Liss,Inc.，1987)；Immobilized Cells And Enzymes(IRL Press，1986)；B.Perbal，A Practical Guide To Molecular Cloning(1984)；the series,Methods In ENZYMOLOGY(J.Abelson及M.Simon總編輯，Academic Press,Inc.，紐約)，明確言之，第154及155卷(Wu等人編輯)及第185卷，「Gene Expression Technology」(D.Goeddel編輯)；Gene Transfer Vectors For Mammalian Cells(J.H.Miller與M.P.Calos編輯，1987，冷泉港實驗室)；Immunochemical Methods In Cell And Molecular Biology(Mayer及Walker編輯，Academic Press，倫敦，1987)；Handbook Of Experimental Immunology，第I-IV卷(D.M.Weir及C.C.Blackwell編輯，1986)；及Manipulating the Mouse Embryo(冷泉港實驗室出版社，紐約冷泉港，1986)。
CD19特異性嵌合抗原受體
本發明係關於一種嵌合抗原受體(CAR)，其包含胞外配體結合域、跨膜域及信號轉導域。
如本文所用，術語「胞外配體結合域」係定義為可與配體結合之寡肽或多肽。較佳地，該域將能夠與細胞表面分子相互作用。例如，胞外配體結合域可經選擇以識別充作與特定疾病狀態相關聯之標靶細胞上之細胞表面標記的配體。
於一個較佳實施例中，該胞外配體結合域包括包含標靶抗原特異性單株抗體之經可撓性連接子接合之輕(V L )及重(V H )可變片段的單鏈抗體片段(scFv)。於一個較佳實施例中，該scFV係衍生自CD19單株抗體4G7(Peipp,Saul等人2004)，較佳地，本發明之該scFV包含CD19單株抗體4G7免疫球蛋白γ 1重鏈之一部分(GenBank：CAD88275.1；SEQ ID NO：1)及CD19單株抗體4G7免疫球蛋白κ輕鏈之一部分(GenBank：CAD88204.1；SEQ ID NO：2)，其等較佳經可撓性連接子 連接在一起。於一個較佳實施例中，本發明之該scFV包含經可撓性連接子連接在一起之CD19單株抗體4G7免疫球蛋白γ 1重鏈之可變片段(SEQ ID NO：3)及CD19單株抗體4G7免疫球蛋白κ輕鏈之可變片段(SEQ ID NO：4或SEQ ID NO：5)。於特定實施例中，該可撓性連接子具有胺基酸序列(SEQ ID NO：6)。
換言之，該CAR包含包含衍生自CD19特異性單株抗體4G7之單鏈FV片段之胞外配體結合域。於一個特定實施例中，該scFV包含選自由：SEQ ID NO：1至5組成之群之胺基酸序列之一部分。於一個較佳的實施例中，該scFV包含相對選自由SEQ ID NO：7及SEQ ID NO：8組成之群之胺基酸序列之至少70%，較佳至少80%，更佳至少90%、95%、97%或99%序列一致性。
根據本發明之CAR之信號轉導域或胞內信號傳導域造成在使胞外配體結合域與標靶結合從而導致免疫細胞之活化及免疫反應後的胞內信號傳導。換言之，信號轉導域造成表現CAR之免疫細胞之至少一種正常效應子功能之活化。例如，T細胞之效應子功能可係溶細胞活性或輔助活性(包括細胞因子之分泌)。因此，術語「信號轉導域」係指蛋白質之轉導效應子信號功能信號及導向細胞執行特異化功能之一部分。
用於CAR中之信號轉導域之較佳實例可為T細胞受體及可於抗原受體接合後一致起作用以引發信號轉導之共受體之細胞質序列、及具有相同功能能力之該等序列之任何衍生物或變體及任何合成序列。信號轉導域包含兩種不同類別之細胞質信號傳導序列，即其等引發抗原無關一級活化之序列、及其等可以抗原無關方式起作用以提供二級或共刺激信號之序列。一級細胞質信號傳導序列可包含稱為ITAM之免疫受體基於酪胺酸之活化基元之信號傳導基元。ITAM為於充作syk/zap70類別酪胺酸激酶之結合位點的各種受體之細胞質內尾中發現 的經明確定義之信號傳導基元。用於本發明中之ITAM之實例可呈非限制性實例地包括衍生自TCR ζ、FcR γ、FcR β、FcR ε、CD3 γ、CD3 δ、CD3 ε、CD5、CD22、CD79a、CD79b及CD66d之其等。於一個較佳的實施例中，CAR之信號轉導域可包括CD3 ζ信號傳導域，其具有具有相對選自由(SEQ ID NO：10)組成之群之胺基酸序列至少70%，較佳至少80%，更佳至少90%、95%、97%或99%序列一致性之胺基酸序列。
於特定實施例中，本發明之CAR之信號轉導域包括共刺激信號分子。一種共刺激分子為有效免疫反應所需之除抗原受體或其配體以外的細胞表面分子。「共刺激配體」係指於存在抗原之細胞上之與T-細胞上之同源共刺激分子特異性結合之分子，藉此提供除了由例如使TCR/CD3複合物與負載肽之MHC分子結合所提供之一級信號以外之信號，該信號介導包括(但不限於)增殖活化、分化及類似之T細胞反應。共刺激配體可包括(但不限於)CD7、B7-1(CD80)、B7-2(CD86)、PD-L1、PD-L2、4-1BBL、OX40L、可誘導共刺激配體(ICOS-L)、細胞間黏著分子(ICAM、CD30L、CD40、CD70、CD83、HLA-G、MICA、M1CB、HVEM、淋巴毒素β受體、3/TR6、ILT3、ILT4、與Toll配體受體結合之激動劑或抗體及與B7-H3特異性結合之配體。共刺激配體亦尤其包括與存於T細胞上之共刺激分子特異性結合之抗體，諸如(但不限於)CD27、CD28、4-1BB、OX40、CD30、CD40、PD-1、ICOS、與淋巴細胞功能相關聯之抗原-1(LFA-1)、CD2、CD7、LTGHT、NKG2C、B7-H3、與CD83特異性結合之配體。
「共刺激分子」係指於T-細胞上之與共刺激配體特異性結合因而藉由該細胞介導諸如(但不限於)增殖之共刺激反應之同源結合搭配物。共刺激分子包括(但不限於)MHC I類分子、BTLA及Toll配體受體。共刺激分子之實例包括CD27、CD28、CD8、4-1BB(CD137)、 OX40、CD30、CD40、PD-1、ICOS、與淋巴細胞功能相關聯之抗原-1(LFA-1)、CD2、CD7、LIGHT、NKG2C、B7-H3及與CD83特異性結合之配體及類似。
於一個較佳實施例中，本發明之CAR之信號轉導域包含選自由4-1BB(GenBank：AAA53133)及CD28(NP_006130.1)之片段組成之群之共刺激信號分子之一部分。特定言之，本發明之CAR之信號轉導域包含包含相對選自由SEQ ID NO：11及SEQ ID NO：12組成之群之胺基酸序列至少70%，較佳至少80%，更佳至少90%、95%、97%或99%序列一致性之胺基酸序列。
根據本發明之CAR係於細胞之表面膜上表現。因此，CAR可包含跨膜域。適宜跨膜域之識別特徵包括在細胞，於本發明中較佳免疫細胞，特定言之淋巴細胞或自然殺手(NK)細胞之表面處表現，且一起相互作用以導向免疫細胞抗預定標靶細胞之細胞反應之能力。跨膜域可衍生自天然或衍生自合成來源。跨膜域可衍生自任何膜結合或跨膜蛋白質。作為非限制性實例，跨膜多肽可為T細胞受體之子單元(諸如α、β、γ或δ)、構成CD3複合物之多肽、IL2受體p55(α鏈)、p75(β鏈)或γ鏈、Fc受體(特定言之Fcγ受體III)之子單元鏈或CD蛋白質。或者，跨膜域可係合成及可主要包含疏水性殘基，諸如白胺酸及纈胺酸。於一個較佳實施例中，該跨膜域係衍生自人CD8 α鏈(例如NP_001139345.1)(SEQ ID NO：196)。跨膜域可進一步包含介於該胞外配體結合域與該跨膜域之間之莖部區。本文中使用之術語「莖部區」一般意指發揮作用以將跨膜域連接至胞外配體結合域之任何寡肽或多肽。特定言之，莖部區係用於為胞外配體結合域提供更多可撓性及可達性。莖部區可包含多達300個胺基酸，較佳10至100個胺基酸及最佳25至50個胺基酸。莖部區可衍生自自然生成之分子之全部或部分，諸如，衍生自CD8、CD4或CD28之胞外區之全部或部分，或衍生自抗體 恆定區之全部或部分。或者，莖部區可為相當於自然生成之莖部序列之合成序列，或可為全合成莖部序列。於一個較佳實施例中，該莖部區為人CD8 α鏈之一部分(例如NP_001139345.1)(SEQ ID NO：196)。於另一個特定實施例中，該等跨膜及鉸鏈域包含人CD8 α鏈之一部分，較佳地，其等包含相對選自由SEQ ID NO：13組成之群之胺基酸序列之至少70%，較佳至少80%，更佳至少90%、95%、97%或99%序列一致性。
於一個特定實施例中，本發明之該嵌合抗原受體包含衍生自CD19單株抗體4G7之scFV(CD8 α人鉸鏈)及跨膜域、CD3 ζ信號傳導域及4-1BB信號傳導域。較佳地，本發明之4G7 CAR包含相對選自由SEQ ID NO：14及15組成之群之胺基酸序列之至少70%，較佳至少80%，更佳至少90%、95%、97%或99%序列一致性。
通常會在癌細胞中觀察到標靶抗原之下調或突變，從而產生抗原損失逃逸變體。因此，為抵銷腫瘤逃逸且使得免疫細胞對標靶更具特異性，CD19特異性CAR可包含另一種胞外配體結合域，以同時地與標靶中之不同元件結合，藉此強化免疫細胞活化及功能。於一個實施例中，胞外配體結合域可以串接地置於相同跨膜多肽上，及可視需要由連接子間隔。於另一個實施例中，該等不同胞外配體結合域可置於構成CAR之不同跨膜多肽上。於另一個實施例中，本發明係關於一群CAR，其各者均包含不同胞外配體結合域。於一個特定實施例中，本發明係關於一種改造免疫細胞的方法，該方法包括提供免疫細胞及在該細胞之表面處表現一群CAR，其各者均包含不同胞外配體結合域。於另一個特定實施例中，本發明係關於一種改造免疫細胞的方法，該方法包括提供免疫細胞及將編碼構成各者包含不同胞外配體結合域之一群CAR之多肽之多核苷酸引入該細胞中。所謂一群CAR意指至少兩個、三個、四個、五個、六個或更多個CAR，其各者均包含不 同胞外配體結合域。根據本發明之不同胞外配體結合域可較佳同時結合標靶中之不同元件，因而強化免疫細胞活化及功能。本發明亦關於一種單離免疫細胞，其包含各者均包含不同胞外配體結合域之一群CAR。
多核苷酸、載體：
本發明亦關於編碼以上所述之根據本發明之CAR之多核苷酸、載體。於一個較佳實施例中，本發明係關於一種包含核酸序列SEQ ID NO：17之多核苷酸。於一個較佳實施例中，多核苷酸具有相對選自由SEQ ID NO：17組成之群之核酸序列之至少70%，較佳至少80%，更佳至少90%、95%、97%或99%序列一致性。
多核苷酸可存在於表現序列盒或表現載體(例如，用於引入至細菌宿主細胞中之質體、或用於轉染昆蟲宿主細胞之病毒載體諸如桿狀病毒載體、或用於轉染哺乳動物宿主細胞之質體或病毒載體諸如慢病毒)。
於一個特定實施例中，不同核酸序列可包含於一種包含編碼核糖體跳接序列(skip sequence)之核酸序列(諸如編碼2A肽之序列)之多核苷酸或載體中。經鑑定在微小核糖核酸病毒之口蹄疫病毒子群中之2A肽會使核糖體從一個密碼子「跳接」至下一個密碼子而不會在該等密碼子所編碼之兩個胺基酸之間形成肽鍵(參見(Donnelly及Elliott 2001；Atkins,Wills等人2007；Doronina,Wu等人2008))。所謂「密碼子」意指於mRNA上(或於DNA分子之正義股上)藉由核糖體轉譯為一個胺基酸殘基之三個核苷酸。因此，當兩個多肽由在框中之2A寡肽序列間隔時，該兩個多肽可自mRNA中單一相連開放讀碼框合成。該等核糖體跳接機制為相關技藝中所熟知且已知由幾種載體使用於表現幾種由單一信使RNA所編碼之蛋白質。
為引導跨膜多肽至宿主細胞之分泌路徑中，將分泌信號序列(亦 稱為前導序列、前原序列或前序列)提供於多核苷酸序列或載體序列中。分泌信號序列可操作地連接於跨膜核酸序列，即，這兩個序列結合於正確讀碼框中且經定位以引導新合成之多肽至宿主細胞之分泌路徑中。分泌信號序列通常係位於編碼受關注多肽之核酸序列之5'，盡管某些分泌信號序列可位於受關注核酸序列中的其他位置(參見例如Welch等人，美國專利第5,037,743號；Holland等人，美國專利第5,143,830號)。於一個較佳實施例中，信號肽包含胺基酸序列SEQ ID NO：18及19。
熟習此項技藝者應認知，由於基因密碼之簡併性，於該等多核苷酸分子中可能有相當多序列變異。較佳地，本發明之核酸序列為於哺乳動物細胞中表現，較佳於人類細胞中表現，經密碼子最佳化。密碼子最佳化係指在受關注序列中一般在特定物種之高度表現基因中罕見之密碼子由一般在該物種之高度表現基因中常見之密碼子交換，當密碼子交換時，該等密碼子編碼胺基酸。
於一個較佳實施例中，根據本發明之多核苷酸包含選自由：SEQ ID NO：17組成之群之核酸序列。本發明係關於包含具有相對選自由SEQ ID NO：17組成之群之核酸序列至少70%，較佳至少80%，更佳至少90%、95%、97%或99%序列一致性之核酸序列之多核苷酸。
改造免疫細胞之方法：
於所包含之特定實施例中，本發明係關於一種製造用於免疫治療之免疫細胞的方法，該方法包括將根據本發明之CAR引入至該等免疫細胞中及擴增該等細胞。於特定實施例中，本發明係關於一種改造免疫細胞的方法，該方法包括提供細胞及在該細胞之表面處表現至少一個如上所述之CAR。於特定實施例中，該方法包括利用至少一種編碼如上所述之CAR之多核苷酸轉形該細胞，及表現該等多核苷酸至該細胞中。
於一個較佳實施例中，有鑑於穩定地表現於細胞中，將該等多核苷酸包含於慢病毒載體中。
於另一個實施例中，該方法進一步包括藉由去活化至少一個表現TCR之一種組分之基因、針對免疫抑制劑之標靶、HLA基因及/或諸如PDCD1或CTLA-4之免疫檢查點基因(checkpoint gene)，來基因改造該細胞之步驟。於一個較佳實施例中，該基因係選自由TCR α、TCR β、CD52、GR、PD1及CTLA-4組成之群。於一個較佳實施例中，該方法進一步包括將可選擇性地藉由DNA裂解該等基因而去活化之罕見切割(rare-cutting)核酸內切酶引入至該等T細胞中。於一個更佳實施例中，該罕見切割核酸內切酶為TALE-核酸酶或Cas9核酸內切酶。
遞送方法
上述不同方法涉及引入CAR至細胞中。作為非限制性實例，該CAR可呈由一種質體載體編碼之轉殖基因引入。該質體載體亦可包含提供識別及/或選擇接收該載體之細胞之選擇標記。
因引入編碼該等多肽之多核苷酸至細胞中而可於細胞中在原位合成多肽。或者，該等多肽可在細胞外產生且接著引入其中。於本技藝中已知用於引入多核苷酸建構至細胞中之方法及作為非限制性實例地包括其中多核苷酸建構係整合至細胞之基因組中之穩定轉形方法、其中多核苷酸建構不係整合至細胞之基因組中之瞬時轉形方法及病毒介導之方法。該等多核苷酸可藉由(例如)重組病毒載體(例如逆轉錄病毒、腺病毒)、脂質體及類似引入至細胞中。例如，瞬時轉形方法包括(例如)微量注射、電穿孔或顆粒轟擊。有鑑於在細胞中被表現，該等多核苷酸可包含於載體，更特定言之質體或病毒中。
經改造之免疫細胞
本發明亦關於容易藉由該方法獲得以改造細胞之單離細胞或細 胞株。特定言之，該單離細胞包含至少一種上述CAR。於另一個實施例中，該單離細胞包含各者均包含不同胞外配體結合域之一群CAR。特定言之，該單離細胞包含編碼CAR之外源多核苷酸序列。本發明之經基因改造的免疫細胞係與抗原結合機制無關地經活化及增殖。
於本發明之範疇中亦包含單離免疫細胞，較佳係依照任何一種上述方法獲得之T-細胞。該免疫細胞係指功能上參與先天及/或適應性免疫反應之引發及/或執行之造血源細胞。根據本發明之該免疫細胞可衍生自幹細胞。該等幹細胞可為成人幹細胞、非人胚胎性幹細胞，更特定言之非人幹細胞、臍帶血幹細胞、祖細胞、骨髓幹細胞、誘導之多能幹細胞、全能幹細胞或造血幹細胞。代表性人類細胞為CD34+細胞。該單離細胞亦可為樹突細胞、殺手樹突細胞、肥大細胞、NK-細胞、B-細胞或選自由發炎性T-淋巴細胞、細胞毒性T-淋巴細胞、調節型T-淋巴細胞或輔助型T-淋巴細胞組成之群之T-細胞。於另一個實施例中，該細胞可衍生自由CD4+ T-淋巴細胞及CD8+ T-淋巴細胞組成之群。在本發明之細胞之擴增及基因改造之前，細胞之來源可自個體經由多種非限制性方法來獲得。細胞可獲自許多種非限制性來源，包括周邊血液單核細胞、骨髓、淋巴結組織、臍帶血、胸腺組織、來自注射部位之組織、腹水、胸腔積液、脾臟組織及腫瘤。於本發明之某些實施例中，可使用可取得且為熟習此項技藝者已知之任何數目之T細胞株。於另一個實施例中，該細胞可衍生自健康供給者、經診斷罹患癌症之患者或經診斷為感染之患者。於另一個實施例中，該細胞為呈現不同表型特徵之混合細胞群體之一部分。於本發明之範疇中亦包含依照上述方法自轉形T-細胞獲得之細胞株。抗免疫抑制治療且容易藉由上述方法獲得之經改造的細胞包含於本發明之範疇中。
於另一個實施例中，根據本發明之該單離細胞包含編碼CAR之多核苷酸。
T細胞之活化及擴增
無論在T細胞之基因改造之前或之後，即使本發明之經基因改造之免疫細胞係與抗原結合機制無關地經活化及增殖，該等免疫細胞，特定言之本發明之T-細胞亦可進一步大致上利用如例如美國專利案6,352,694；6,534,055；6,905,680；6,692,964；5,858,358；6,887,466；6,905,681；7,144,575；7,067,318；7,172,869；7,232,566；7,175,843；5,883,223；6,905,874；6,797,514；6,867,041；及美國專利申請公開案第20060121005號中所述之方法來活化及擴增。T細胞可在活體外或在活體內擴增。
一般而言，本發明之T細胞係藉由在T細胞之表面上與刺激CD3 TCR複合物之試劑及共刺激分子接觸以產生T-細胞之活化信號來擴增。
例如，諸如鈣離子載體A23187、佛波醇12-肉豆蔻酸13-乙酸酯(PMA)、或例如植物血球凝集素(PHA)之有絲分裂凝集素之化學品可用於產生T-細胞之活化信號。
作為非限制性實例，T細胞群體可在活體外諸如藉由與抗-CD3抗體、或其抗原結合片段、或固定於表面上之抗-CD2抗體接觸，或藉由與與鈣離子載體結合之蛋白質激酶C活化劑(例如，苔蘚蟲素)接觸而刺激。就T細胞之表面上之輔助分子之共刺激而言，使用與輔助分子結合之配體。例如，一群T細胞可在適宜刺激T細胞之增殖之條件下與抗-CD3抗體及抗-CD28抗體接觸。適宜用於T細胞培養之條件包括可包含增殖及存活時所需因子之適宜培養基(例如，最低必須培養基或RPMI培養基1640或X-vivo 5(Lonza))，包括血清(例如，胎牛或人血清)、介白素-2(IL-2)、胰島素、IFN-g、1L-4、1L-7、GM-CSF、-10、-2、1L-15、TGFp、及TNF-或熟習此項技藝者已知之針對細胞生長之任何其他添加劑。針對細胞生長之其他添加劑包括(但不限於)表 面活性劑、人血漿蛋白成分製劑(plasmanate)、及諸如N-乙醯基-半胱胺酸及2-巰基乙醇之還原劑。培養基可包括具有添加之胺基酸、丙酮酸鈉、及維他命之無血清或補充適宜量之血清(或血漿)或預定組之激素、及/或足以生長且擴增T細胞的量之細胞因子的RPMI 1640、A1M-V、DMEM、MEM、a-MEM、F-12、X-Vivo 1、及X-Vivo 20(Optimizer)。例如青黴素及鏈黴素之抗生素僅包含於實驗培養基中，而非包含於意欲注入至個體中之細胞之培養中。標靶細胞維持於支持生長需要的條件，例如適宜溫度(例如，37℃)及氛圍(例如，空氣加上5% CO2)。已暴露於不同刺激多次之T細胞可展現不同特徵。
於另一個特定實施例中，該等細胞可藉由與組織或細胞共培養來擴增。該等細胞亦可於投與該細胞至個體後在活體內，例如在個體血液中擴增。
治療應用
於另一個實施例中，可使用藉由不同方法獲得之單離細胞或衍生自該上述單離細胞之細胞株作為藥物。於另一個實施例中，該藥物可用於治療有需要之患者之癌症，特定言之用於治療有需要之患者之B-細胞淋巴瘤及白血病。於另一個實施例中，根據本發明之該單離細胞或衍生自該單離細胞之細胞株可用於製造用於治療有需要之患者之癌症的藥物。
於另一個態樣中，本發明仰賴於用於治療有需要之患者的方法，該方法包括至少一個以下步驟：(a)提供可藉由任何一種上述方法獲得之免疫細胞；(b)投與該等經轉形免疫細胞給該個體，於一個實施例中，本發明之該等T細胞可經過活體內T細胞擴增穩固化及可持續一段延長的時間。
該治療可係改善、治愈或預防。其可為自體免疫治療之一部分 或異源免疫治療之一部分。所謂自體意指用於治療患者之細胞、細胞株或細胞群體係源自該患者或係源自可與供給者相容之人白細胞抗原(HLA)。所謂異源意指用於治療患者之細胞或細胞群體不是源自該患者而是源自供給者。
於前一節中描述可與所揭示方法併用之細胞。該治療可用於治療經診斷罹患癌症之患者。可治療之癌症可包括非實體腫瘤(諸如血液性腫瘤，包括(但不限於)前-B ALL(小兒適應症)、成人ALL、外套細胞淋巴瘤、瀰漫性大B-細胞淋巴瘤及類似。可藉由本發明之CAR治療之癌症類型包括(但不限於)某些白血病或淋巴惡性病。亦包括成人腫瘤/癌症及小兒腫瘤/癌症。
該治療可為與一或多種選自以下之群之抗癌症療法組合之治療：抗體療法、化學療法、細胞因子療法、樹突細胞療法、基因療法、激素療法、雷射光療法及輻射療法。
根據本發明之一個較佳的實施例，該治療可投與至接受免疫抑制治療之患者。實際上，本發明較佳仰賴於已因去活化編碼針對於該免疫抑制劑之受體之基因而產生抗至少一種免疫抑制劑抗性的細胞或細胞群體。於該態樣中，免疫抑制治療應有助於根據本發明之T-細胞於患者中之選擇及擴增。
根據本發明之細胞或細胞群體之投與可以任何簡便方法，包括藉由氣霧劑吸入、注射、攝取、輸注、植入或移植進行。述於本文中之組合物可經皮下、經皮內、經瘤內、經結節內、經髓內、經肌肉內、經靜脈內或經淋巴內注射、或經腹膜內投與患者。於一個實施例中，本發明之細胞組合物較佳係經靜脈內注射投與。
細胞或細胞群體之投與可由投與104至109個細胞/kg體重，較佳105至106個細胞/kg體重組成，包括於該等範圍中之細胞數目之所有整數值。該等細胞或細胞群體可以一或多次劑量投與。於另一個實施例 中，細胞之該有效量係以單劑量投與。於另一個實施例中，細胞之該有效量係在預定時間期內以多於一次劑量投與。投藥時序係於主治醫師之判斷中且取決於患者之臨床病況。該等細胞或細胞群體可自諸如血庫或供給者之任何來源獲得。雖然個體需求不同，但針對於特定疾病或病況之給定細胞類型之有效量最佳範圍的確定係於本技藝之技術中。有效量意指提供治療或預防效益之量。投與的劑量將取決於接受者之年齡、健康狀態及體重、合併治療(若存在的話)之類型、治療之頻率及所預期效果之性質。
於另一個實施例中，細胞或包含該等細胞之組合物之該有效量係非經腸投與。該投與可為靜脈內投與。該投與可直接地藉由注射於腫瘤中進行。
於本發明之某些實施例中，該等細胞係結合(例如，先於、同時或之後)任何數目之相關治療模態投與給患者，該相關治療模態包括(但不限於)利用藥劑之治療，諸如抗病毒治療、西多福韋(cidofovir)及介白素-2、阿糖胞苷(Cytarabine)(亦稱為ARA-C)或針對於MS患者之那他珠單抗(nataliziimab)治療或針對於銀屑病患者之依法利珠單抗(efaliztimab)治療或針對於PML患者之其他治療。於其他實施例中，本發明之T細胞可與化學療法、放射、免疫抑制劑(諸如環孢菌素、硫唑嘌呤、甲胺喋呤、麥考酚酸鹽、及FK506)、抗體或諸如CAM PATH之其他免疫破壞劑、抗-CD3抗體或其他抗體療法、細胞毒素、氟達拉濱(fludaribine)、環孢菌素、FK506、雷帕黴素(rapamycin)、黴芬酸(mycoplienolic acid)、類固醇、FR901228、細胞因子、及輻射併用。該等藥物抑制鈣離子依賴性磷酸酶鈣調神經磷酸酶(環孢黴素及FK506)或抑制對生長因子誘導之信號傳導具重要性之p70S6激酶(雷帕黴素)(Henderson,Naya等人1991；Liu,Albers等人1992；Bierer,Hollander等人1993)。於另一個實施例中，本發明之細胞組合物係結 合(例如，先於、同時或之後)骨髓移植、使用化學治療劑(諸如氟達拉濱(fludarabine)、體外束放射治療(XRT)、環磷醯胺)、或抗體(諸如OKT3或CAMPATH)中任一者之T細胞去除式療法投與給患者。於另一個實施例中，本發明之細胞組合物係於B-細胞去除式療法(諸如，與CD20反應之藥劑(例如，美羅華(Rituxan)))之後投與。例如，於一個實施例中，個體可經歷以高劑量化學療法之標準治療，接著接受外周血液幹細胞移植。於某些實施例中，於移植後，個體接受注入本發明之經擴增之免疫細胞。於另一個實施例中，經擴增之細胞係在手術之前或之後投與。
其他定義
-除非另作指明，否則「一(a)」、「一種(an)」、「該」、及「至少一種」可互換使用及意指一種或多於一種。-多肽序列中之胺基酸殘基在本文中依照一字母代碼命名，其中，例如，Q意指Gln或麩醯胺酸殘基，R意指Arg或精胺酸殘基及D意指Asp或天冬胺酸殘基。
-胺基酸取代意指一個胺基酸殘基改由另一個胺基酸殘基代換，例如，肽序列中精胺酸殘基改由麩醯胺酸殘基代換即為胺基酸取代。
-核苷酸係如下命名：一字母代碼係用於命名核苷之鹼基：a為腺嘌呤，t為胸腺嘧啶，c為胞嘧啶，及g為鳥嘌呤。就簡併之核苷酸而言，r表示g或a(嘌呤核苷酸)，k表示g或t，s表示g或c，w表示a或t，m表示a或c，y表示t或c(嘧啶核苷酸)，d表示g、a或t，v表示g、a或c，b表示g、t或c，h表示a、t或c，及n表示g、a、t或c。
-如本文所用，「核酸」或「多核苷酸」係指核苷酸及/或多核苷酸，諸如去氧核糖核酸(DNA)或核糖核酸(RNA)、寡核苷酸、經聚合酶鏈反應(PCR)生成之片段、及藉由接合、切斷、核酸內切酶作用、及核酸外切酶作用中任何一種生成之片段。核酸分子可由為自然生成之核苷酸(諸如DNA及RNA)之單體、或自然生成之核苷酸之類似物 (例如，自然生成之核苷酸之對映異構形式)、或兩者之組合組成。經修飾之核苷酸可具有在糖部分及/或在嘧啶或嘌呤鹼基部分中之改變。糖修飾包括(例如)一或多個羥基改由鹵素、烷基、胺、及疊氮基代換，或糖可經官能基化為醚或酯。此外，整個糖部分可經空間及電類似結構(諸如氮雜糖及碳環糖類似物)置換。於鹼基部分中之修飾之實例包括烷基化嘌呤及嘧啶、醯化嘌呤或嘧啶、或其他所熟知的雜環取代基。核酸單體可經磷酸二酯鍵或該等連接之類似者連接。核酸可係單股或雙股。
-所謂嵌合抗原受體(CAR)為將抗存於標靶細胞上之組分(例如，針對於所期抗原(例如，腫瘤抗原)之基於抗體之特異性)之結合域與T細胞受體活化胞內域組合以獲得展現特異性抗標靶細胞免疫活性之嵌合蛋白質之預期分子。一般而言，CAR係由融合至T細胞抗原受體複合物ζ鏈(scFvFc：ζ)之胞內信號傳導域之胞外單鏈抗體(scFvFc)組成且具有在T細胞中表現時能基於單株抗體之特異性再導抗原識別之能力。用於本發明中之CAR之一個實例為導向抗CD19抗原之CAR及可作為非限制性實例地包含胺基酸序列：SEQ ID NO：73。
-術語「核酸內切酶」係指能催化水解(裂解)介於DNA或RNA分子，較佳DNA分子中核酸之間之鍵之任何野生型或變體酵素。核酸內切酶在不考慮其序列下並不裂解DNA或RNA分子，但可識別並裂解在另外被稱為「標靶序列」或「標靶位點」之特異性多核苷酸序列下之DNA或RNA分子。核酸內切酶在通常具有多於12個鹼基對(bp)長度，更佳14至55個bp長度之多核苷酸識別位點情況下可被歸類為罕見切割核酸內切酶。罕見切割核酸內切酶藉由在預定位置誘導DNA雙股斷裂(DSB)而顯著地增加HR(Perrin,Buckle等人1993；Rouet,Smih等人1994；Choulika,Perrin等人1995；Pingoud及Silva 2007)。罕見切割核酸內切酶可例如為歸巢核酸內切酶(Paques及Duchateau 2007)、自 使經改造之鋅指域與限制酶(諸如Fokl)之催化域融合所得之嵌合鋅指核酸酶(ZFN)(Porteusy及Carrot)2005)、衍生自CRISPR系統之Cas9核酸內切酶(Gasiunas,Barrangou等人2012；Jinek,Chylinski等人2012；Cong,Ran等人2013；Mali,Yang等人2013)或化學品核酸內切酶(Eisenschmidt,Lanio等人2005；Arimondo,Thomas等人2006)。於化學品核酸內切酶中，化學品或肽裂解者(cleaver)係偶聯至核酸之聚合物或係偶聯至另一種可識別特異性標靶序列之DNA，藉此靶向特異性序列之裂解活性。化學品核酸內切酶亦包含合成核酸酶，例如，鄰啡啉、DNA裂解分子、及已知可與特異性DNA序列結合之三螺旋形成寡核苷酸(TFO)之偶聯物(Kalish及Glazer 2005)。該等化學品核酸內切酶包含於根據本發明之術語「核酸內切酶」中。
-所謂「TALE-核酸酶」(TALEN)意圖意指由一個通常衍生自轉錄啟動子樣效應因子(TALE)之核酸結合域及一個可裂解核酸標靶序列之核酸酶催化域組成之融合蛋白質。催化域較佳為核酸酶域及更佳為具有核酸內切酶活性之域，諸如(例如)I-Tevl、ColE7、NucA及Fok-I。於一個特定實施例中，TALE域可稠合為大範圍核酸酶諸如(例如)I-Crel及I-Onul或其功能性變體。於一個更佳實施例中，該核酸酶為單體TALE-核酸酶。單體TALE-核酸酶為不需要針對特異性識別及裂解之二聚合的TALE-核酸酶，諸如，述於W02012138927中之經改造之TAL重複與I-Tevl之催化域之融合。轉錄啟動子樣效應子(TALE)為來自細菌物種黃單孢菌(Xanthomonas)之蛋白質，包含複數種重複序列，各重複包含對核酸標靶序列之各個核苷酸鹼基具特異性之在位置12及13中二殘基(RVD)。具有類似的模組化鹼基-鹼基核酸結合性質之結合域(MBBBD)亦可衍生自最近由申請人在不同細菌物種中發現之新穎模組化蛋白質。該等新穎模組化蛋白質具有展現較TAL重複更大程度序列可變性之優點。較佳地，與不同核苷酸之識別相關聯之 RVD為用於識別C之HD、用於識別T之NG、用於識別A之NI、用於識別G或A之NN、用於識別A、C、G或T之NS、用於識別T之HG、用於識別T之IG、用於識別G之NK、用於識別C之HA、用於識別C之ND、用於識別C之HI、用於識別G之HN、用於識別G之NA、用於識別G或A之SN或及用於識別T之YG、用於識別A之TL、用於識別A或G之VT及用於識別A之SW。於另一個實施例中，關鍵胺基酸12及13可突變為其他胺基酸殘基以調節其針對於核苷酸A、T、C及G之特異性及特定言之以增進該特異性。已經描述及使用TALE-核酸酶以刺激基因靶向及基因改造(Both,Scholze等人2009；Moscou及Bogdanove 2009；Christian,Cermak等人2010；Li,Huang等人2011)。經改造之TAL-核酸酶可以商標TALENTM(Cellectis，8 rue de la Croix Jarry，75013法國巴黎)購得。
根據本發明之罕見切割核酸內切酶亦可為Cas9核酸內切酶。最近，已基於來自II型原核CRISPR(成簇有規律間隔短迴文重複序列)適應性免疫系統(評論請參見(Sorek,Lawrence等人2013))之RNA導向Cas9核酸酶(Gasiunas,Barrangou等人2012；Jinek,Chylinski等人2012；Cong,Ran等人2013；Mali,Yang等人2013)開發出新穎基因組改造工具。CRISPR相關(Cas)系統最先在細菌中發現且用作防禦外來DNA(病毒或質體)。CRISPR介導之基因組改造最先藉由選擇通常側接短序列基元(稱為原間隔序列(proto-spacer)相鄰基元(PAM))之標靶序列進行。於標靶序列選擇之後，改造與該標靶序列互補之特異性crRNA。CRISPR II型系統中所需要之轉錄活化(Trans-activating)crRNA(tracrRNA)與crRNA配對並結合至所提供之Cas9蛋白質。Cas9用作促使tracRNA與cRNA鹼基配對之分子錨(Deltcheva,Chylinski等人2011)。於該三元複合物中，雙重tracrRNA：crRNA結構用作引導核酸內切酶Cas9至同源標靶序列之導向RNA。藉由Cas9-tracrRNA：crRNA 複合物識別標靶係藉由針對標靶序列與crRNA間之同源性掃描標靶序列而起始。除了標靶序列-crRNA互補性之外，DNA靶向需要存在與原間隔序列相鄰之短基元(原間隔序列相鄰基元-PAM)。於雙重-RNA及標靶序列之間配對之後，Cas9於隨後引入PAM基元上游平齊(blunt)雙股斷裂3鹼基(Garneau,Dupuis等人2010)。
罕見切割核酸內切酶可為歸巢核酸內切酶(homing endonuclease)，其亦稱為大範圍核酸酶(meganuclease)。此技藝中熟知該等歸巢核酸內切酶(Stoddard 2005)。歸巢核酸內切酶識別DNA標靶序列且產生單或雙股斷裂。歸巢核酸內切酶具高度特異性，可識別範圍自12至45個鹼基對(bp)長度，通常範圍自14至40個bp長度之DNA標靶位點。根據本發明之歸巢核酸內切酶可對應於例如LAGLIDADG核酸內切酶、HNH核酸內切酶、或GIY-YIG核酸內切酶。根據本發明之較佳歸巢核酸內切酶可為I-Crel變體。
-所謂「遞送載體」意圖意指可用於本發明中以使得細胞接觸(換言之，「接觸」)或於細胞或亞細胞隔室內部遞送(換言之，「引入」)本發明中需要之試劑/化學品及分子(蛋白質或核酸)之任何遞送載體。其包括(但不限於)脂質體遞送載體、病毒遞送載體、藥物遞送載體、化學品載體、聚合物載體、脂複合體、聚合複合體、樹枝狀聚合物、微泡體(超音波造影劑)、奈米粒子、乳液或其他適宜轉移載體。該等遞送載體可遞送分子、化學品、大分子(基因、蛋白質)、或其他載體諸如由Diatos開發之質體、肽。於該等情況中，遞送載體為分子載體。所謂「遞送載體」亦意圖意指可進行轉染之遞送方法。
-術語「載體」係指可輸送其所連接的另一種核酸之核酸分子。本發明中之「載體」包括(但不限於)病毒載體、質體、RNA載體或可由染色體、非染色體、半合成或合成核酸組成之線性或圓形DNA或RNA分子。較佳之載體為彼等可自主複製者(附加型載體)及/或可表現 其所連接的核酸者(表現載體)。大數目之適宜載體為熟習此項技藝者已知且可自市面購得。
病毒載體包括逆轉錄病毒、腺病毒、小病毒(例如腺相關病毒)、冠狀病毒、負股RNA病毒，諸如正黏液病毒(例如，流行性感冒病毒)之、桿狀病毒(例如，狂犬病毒及水泡性口炎病毒)、副黏液病毒(例如麻疹及仙台病毒)、正股RNA病毒，諸如小核糖核酸病毒及阿爾法病毒(alphavirus)、及雙股DNA病毒，其包括腺病毒、皰疹病毒(例如，單純皰疹病毒1型及2型、Epstein-Barr病毒、巨大細胞病毒)、及痘病毒(例如，牛痘、禽痘及金絲雀痘)。其他病毒包括(例如)諾瓦克(Norwalk)病毒、披衣病毒(togavirus)、黃病毒、里奧病毒(reoviruses)、巴波瓦病毒(papovavirus)、嗜肝DNA病毒(hepadnavirus)、及肝炎病毒。逆轉錄病毒之實例包括：禽白血病肉瘤病毒、哺乳動物C-型病毒、B型病毒、D型病毒、HTLV-BLV群組、慢病毒、泡沫病毒(spumavirus)(Coffin,J.M.，Retroviridae：The viruses and their replication，Fundamental Virology，第3版，B.N.Fields等人編輯，Lippincott-Raven Publishers，費城，1996)。
-所謂「慢病毒載體」意指因其相對大的包裝能力、經減低之免疫原性及其穩定且高效率地轉導大範圍之不同細胞類型之能力而用於基因遞送極為可靠的HIV-基慢病毒載體。慢病毒載體通常係在瞬時轉染三種(包裝、包埋及轉移)或更多種質體至產生細胞中之後產生。像HIV，慢病毒載體經由病毒表面糖蛋白與細胞表面上之受體相互作用進入標靶細胞。在進入時，病毒RNA經歷由病毒逆轉錄酶複合物介導之逆轉錄。逆轉錄之產物為雙股線性病毒DNA，其為使病毒整合於受感染細胞之DNA中之底物。所謂「整合型慢性病毒載體(或LV)」意指作為非限制性實例，該等載體可與標靶細胞之基因組整合。相反地，所謂「非整合型慢病毒載體(或NILV)」意指並不經由病毒整合酶之作 用與標靶細胞之基因組整合之有效基因遞送載體。
-遞送載體及載體可與諸如聲穿孔或電穿孔或該等技術之衍生法之任何細胞穿透技術聯合或組合。
-所謂細胞意指任何真核活細胞、原代細胞及衍生自該等用於活體外培養之生物體之細胞株。
-所謂「原代細胞」意指直接從活組織(即，活組織檢查材料)取得且確立用於活體外生長之細胞，該等細胞已經歷極少細胞群倍加且因此較持續致癌性或人工永生化細胞株更可代表衍生其等之組織之主要功能性組分及特徵。
作為非限制性實例，細胞株可選自由CHO-K1細胞；HEK293細胞；Caco2細胞；U2-OS細胞；NIH 3T3細胞；NSO細胞；SP2細胞；CHO-S細胞；DG44細胞；K-562細胞；U-937細胞；MRC5細胞；IMR90細胞；Jurkat細胞；HepG2細胞；HeLa細胞；HT-1080細胞；HCT-116細胞；Hu-h7細胞；Huvec細胞；Molt 4細胞組成之群。
所有該等細胞株可由本發明之方法來修飾以提供可產生、表現、量化、檢測、研究受關注基因或蛋白質之細胞株模型；該等模型亦可用於選擇研究及生產及諸如作為非限制性實例之化學、生物燃料、治療學及農藝學之各種領域中受關注生物活性分子。
-所謂「突變」意指多核苷酸(cDNA、基因)或多肽序列中多達一個、兩個、三個、四個、五個、六個、七個、八個、九個、十個、十一個、十二個、十三個、十四個、十五個、二十個、二十五個、三十個、四十個、五十個、或更多個核苷酸/胺基酸之取代、缺失、插入。突變會影響基因之編碼序列或其調節序列。亦可能會影響基因組序列之結構或經編碼之mRNA之結構/穩定性。
-所謂「變體」意指藉由母分子之胺基酸序列中至少一個殘基之突變或代換獲得之重複變體、變體、DNA結合變體、TALE-核酸酶變 體、多肽變體。
-所謂「功能性變體」意指蛋白質或蛋白質域之催化活性突變體；該突變體可具有與其母蛋白質或蛋白質域相同的活性或其他性質、或更高或更低活性。
-「一致性」係指兩種核酸分子或多肽之間之序列一致性。一致性可藉由比較各序列中可基於比較目的而進行比對之位置來確定。當所比較序列中之位置被相同鹼基佔據時，則該等分子在該位置具一致性。核酸或胺基酸序列之間之相似性或一致性之程度成在核酸序列共用位置之一致或匹配核苷酸之數目之函數關係。各種比對演算法及/或程式可用於計算兩種序列之間之一致性，包括可作為GCG序列分析包裝(University of Wisconsin，威斯康辛州麥迪遜)之一部分取得之FASTA或BLAST，及可與例如預設設置併用。例如，包括具有相對本文所述特異性多肽至少70%、85%、90%、95%、98%或99%一致性且較佳展現實質上相同功能之多肽、及編碼該等多肽之多核苷酸。
-「相似性」描述兩種或更多種多肽之胺基酸序列之間之關係。BLASTP亦可用於利用諸如BLOSUM45、BLOSUM62或BLOSUM80之相似矩陣來識別具有相對參照胺基酸序列至少70%、75%、80%、85%、87.5%、90%、92.5%、95%、97.5%、98%、99%序列相似性之胺基酸序列。除非另作指明，否則相似性得分值將基於BLOSUM62之使用。在使用BLASTP之情況下，相似性%係基於BLASTP陽性得分計及序列一致性%係基於BLASTP同一性得分計。BLASTP「同一性」顯示高得分序列對中相同的總鹼基數及分率；及BLASTP「陽性」顯示比對得分具有正值且彼此相似之殘基數及分率。本揭示案涵蓋並包括具有相對揭示於本文中之胺基酸序列之一致性性或相似性之該等程度或一致性性或相似性之任何中間程度之胺基酸序列。相似多肽之多核苷酸序列係利用基因代碼來推導及可藉由習知方法來獲得。例如，pT α之功能性變體可具有相對SEQ ID NO：107之胺基酸序列70%、75%、80%、85%、87.5%、90%、92.5%、95%、97.5%、98%、99%之序列相似性。編碼該種功能性變體之多核苷酸將係藉由利用基因代碼逆轉譯其胺基酸序列來製造。
-「信號轉導域」或「共刺激配體」係指於存在抗原之細胞上與T-細胞上之同源共刺激分子特異性結合之分子，藉此提供除了由例如使TCR/CD3複合物與負載肽之MHC分子結合所提供之一級信號以外之信號，該信號介導包括(但不限於)增殖活化、分化及類似之T細胞反應。共刺激配體可包括(但不限於)CD7、B7-1(CD80)、B7-2(CD86)、PD-L1、PD-L2、4-1BBL、OX40L、可誘導共刺激配體(ICOS-L)、細胞間黏著分子(ICAM、CD30L、CD40、CD70、CD83、HLA-G、MICA、M1CB、HVEM、淋巴毒素β受體、3/TR6、ILT3、ILT4、與Toll配體受體結合之激動劑或抗體及與B7-H3特異性結合之配體。共刺激配體亦尤其包括與存於T細胞上之共刺激分子特異性結合之抗體，諸如(但不限於)CD27、CD28、4-IBB、OX40、CD30、CD40、PD-1、ICOS、淋巴細胞功能相關聯之抗原-1(LFA-1)、CD2、CD7、LTGHT、NKG2C、B7-H3、與CD83特異性結合之配體。
「共刺激分子」係指於T細胞上之與共刺激配體特異性結合之同源結合搭配物，藉此藉由細胞介導諸如(但不限於)增殖之共刺激反應。共刺激分子包括(但不限於)MHC I類分子、BTLA及Toll配體受體。
如本文中所用，「共刺激信號」係指與一級信號(諸如TCR/CD3接合)組合導致T細胞增殖及/或關鍵分子之上調或下調之信號。
-如本文中所用，術語「胞外配體結合域」係定義為可與配體結合之寡肽或多肽。較佳地，該域將能夠與細胞表面分子相互作用。例如，胞外配體結合域可經選擇以可識別充作與特定疾病狀態相關聯之 標靶細胞上之細胞表面標記的配體。因此，可充作配體之細胞表面標記之實例包括與病毒、細菌及寄生性感染、自體免疫疾病及癌細胞相關聯之其等。
如本文中所用，術語「個體」或「患者」包括動物王國之所有成員，包括非人靈長類及人。
本發明之以上書面論述提供一種製造及使用其之方式及方法，使得熟習此項技藝者能製造及使用相同者，，這種使能尤其針對構成最初論述之一部分的隨附申請專利範圍之標的而提供。
在本文規定數值限值或範圍之情況下，端點包含在內。此外，所有值及於數值限值或範圍中之子範圍具體地包含在內，猶如明確地寫出來般。
呈現以上論述以使熟習此項技藝者可製造及使用本發明，且係提供於特定應用及其要求之上下文中。對較佳實施例之各種修改為熟習此項技藝者輕易明瞭，及定義於本文中之基因原理可在不脫離本發明之精神及範疇下應用於其他實施例及應用。因此，本發明並非意圖受到所顯示實施例限制，但應遵循與揭示於本文中之原理及特徵一致之最寬廣範疇。
已大致上描述本發明，可參照除非另作指明否則僅基於例示之目的提供於本文中而非意圖限制之某些具體實例獲得進一步的理解。
實例
實例1：表現4G7-CAR之TCR α非活化細胞之增殖。
設計並製得靶向於T-細胞受體α恆定鏈區(TRAC)基因中之由15-bp間隔物間隔之兩種17-bp長序列(稱為半標靶)之雜二聚TALE-核酸酶。各個半標靶係由列於表1中之半TALE-核酸酶之重複識別。
各TALE-核酸酶建構係利用限制酶消化在哺乳動物表現載體中於在T7啟動子之控制下進行次選殖。編碼TALE-核酸酶裂解TRAC基因組序列之mRNA係自帶有T7啟動子下游之編碼序列之質體合成。
在72小時期間經塗覆抗CD3/CD28之珠粒預活化之純化T細胞係利用編碼兩種半TRAC_T01 TALE-核酸酶之2種mRNA中各者轉染。於轉染後第48小時，利用編碼4G7-CAR(SEQ ID NO：14)之慢病毒載體轉導T細胞。於轉導後第2天，CD3NEG細胞係使用抗-CD3磁性珠粒進行純化，接著於轉導後第5天，利用可溶性抗-CD28(5μg/ml)再活化該等細胞。
於再活化後藉由每週計數細胞2次跟蹤細胞增殖長達30天。圖1顯示在再活化後第2天，就兩種不同供給者而言，細胞個數相對之所存在的細胞量之誘導倍率。表現4G7-CAR之TCR α非活化細胞中，尤其在經抗-CD28再活化時相較於未經轉導之細胞觀察到增加之增殖。
為研究表現4G7-CAR之人類T細胞是否展現活化狀態，在轉導後第7天，藉由FACS分析活化標記CD25之表現。如圖2中所示，經編碼4G7-CAR之慢病毒載體轉導之純化細胞在其表面相較於未經轉導之細胞表現顯著更多的CD25。在CD28再活化或未再活化情況中均觀察到增加之CD25表現。
實例2：表現4G7-CAR及典型FMC63-CAR之原代人類T細胞之基礎活化間的比較。
為確定4G7 scFV是否賦予經轉導之細胞長時間「活化」狀態，比較經載有4G7 scFV(SEQ ID NO：17編碼之SEQ ID NO：15)或典型FMC63 scFV(SEQ ID NO：16)之CAR轉導之T細胞之基礎活化。
依照以下方案轉導純化人類T細胞：簡言之，在3天期間利用經抗CD3/CD28塗覆之珠粒及重組IL2預活化之1×106個CD3+細胞係利用編碼4G7-CAR(SEQ ID NO：15)及FMC63-CAR(SEQ ID NO：16)之慢病毒載體於12孔的經30μg/ml重組人纖維連接蛋白(retronectin)塗覆之非組織培養盤中5個孔之MOI下轉導。於轉導後第24小時，移去培養基及改由新製培養基代換。該等細胞接著在整個培養期間藉由每2至3天細胞計數維持在1×106個細胞/ml之濃度。
在利用編碼4G7-CAR或FMC63-CAR中任一者之慢病毒載體轉導後第3、第8及第15天，藉由流式細胞儀評估表現CAR之細胞之百分比。觀察到利用兩種慢病毒載體，轉導之效率相對等效(圖3)。
接著研究表現4G7-CAR之人類T細胞是否展現較表現FMC63-CAR之人類T細胞更活化之狀態。為達該目的，在不同時間點比較經2種慢病毒載體轉導之T細胞表面處之活化標記CD25之表現。如圖4中所示，在轉導後第3及第8天，經編碼4G7-CAR之慢病毒載體轉導之細胞在其表面相較於經編碼FMC63-CAR之慢病毒載體轉導之細胞表現顯著更多的CD25。
亦可藉由流式細胞儀在不同時間點評估經4G7-CAR或FMC63-CAR轉導之細胞之尺寸。觀察到在轉導後第3、第8及第15天，表現4G7-CAR之細胞比表現FMC63-CAR之細胞更大(圖5)。
於活體外非特異性活化後，經4G7-CAR轉導之細胞展現經增加之細胞尺寸(芽細胞形成)及於延長時間期間之活化標記(CD25)之表 現。該長期活化容許相較經包含FMC63 ScFv之類似CAR轉導之細胞延長時間之增殖。
實例3：表現4G7-CAR及典型FMC63-CAR之原代人類T細胞之增殖間的比較。
為確定4G7 scFV是否賦予較高的增殖活性，藉由每週計數細胞兩次跟蹤經載有4G7 scFV(SEQ ID NO：17編碼之SEQ ID NO：15)或典型FMC63 scFV(SEQ ID NO：16)之CAR轉導之T細胞之增殖長達20天。依照以下方案轉導純化人類T細胞：簡言之，在3天期間利用經抗CD3/CD28塗覆之珠粒及重組IL2預活化之1×106個CD3+細胞係利用編碼4G7-CAR(SEQ ID NO：15)及FMC63-CAR(SEQ ID NO：16)之慢病毒載體轉導。接著將該等細胞維持於典型條件下及在第12天再活化。以相同密度接種該等細胞及在20天期間每週計數兩次。如圖6中所示，表現4G7-CAR之T-細胞之增殖活性比表現典型FMC63-CAR之細胞之增殖活性高出兩倍。
參考文獻
Arimondo, P. B., C. J. Thomas等人(2006)。「Exploring the cellular activity of camptothecin-triple-helix-forming oligonucleotide conjugates.」Mol Cell Biol 26(1): 324-33。
Atkins, J. F., N. M. Wills等人(2007)。「A case for「StopGo」: reprogramming translation to augment codon meaning of GGN by promoting unconventional termination (Stop) after addition of glycine and then allowing continued translation (Go).」Rna 13(6): 803-10。
Bierer, B. E., G. Hollander等人(1993)。「Cyclosporin A and FK506: molecular mechanisms of immunosuppression and probes for transplantation biology.」Curr Opin Immunol 5(5): 763-73。
Boch, J., H. Scholze等人(2009)。「Breaking the code of DNA binding specificity of TAL-type III effectors.」Science 326(5959): 1509-12.
Choulika, A., A. Perrin等人(1995)。「Induction of homologous recombination in mammalian chromosomes by using the I-SceI system of Saccharomyces cerevisiae.」Mol Cell Biol 15(4): 1968-73。
Christian, M., T. Cermak等人(2010).「Targeting DNA double-strand breaks with TAL effector nucleases.」Genetics 186(2): 757-61。
Cong, L., F. A. Ran等人(2013).「Multiplex genome engineering using CRISPR/Cas systems.」Science 339(6121): 819-23。
Deltcheva, E., K. Chylinski等人(2011).「CRISPR RNA maturation by trans-encoded small RNA and host factor RNase III.」Nature 471(7340): 602-7。
Donnelly, M.及G. Elliott(2001)。「Nuclear localization and shuttling of herpes simplex virus tegument protein VP13/14.」J Virol 75(6): 2566-74。
Doronina, V. A., C. Wu等人(2008)。「Site-specific release of nascent chains from ribosomes at a sense codon.」Mol Cell Biol 28(13): 4227-39。
Eisenschmidt, K.、T. Lanio等人(2005)。「Developing a programmed restriction endonuclease for highly specific DNA cleavage.」Nucleic Acids Res 33(22): 7039-47。
Garneau, J. E.、M. E. Dupuis等人(2010)。「The CRISPR/Cas bacterial immune system cleaves bacteriophage and plasmid DNA.」Nature 468(7320): 67-71。
Gasiunas, G.、R. Barrangou等人(2012)。「Cas9-crRNA ribonucleoprotein complex mediates specific DNA cleavage for adaptive immunity in bacteria.」Proc Natl Acad Sci U S A 109(39): E2579-86。
Henderson, D. J.、I. Naya等人(1991)。「Comparison of the effects of FK-506, cyclosporin A and rapamycin on IL-2 production.」Immunology 73(3): 316-21。
Jena, B., G. Dotti等人(2010)。「Redirecting T-cell specificity by introducing a tumor-specific chimeric antigen receptor.」Blood 116(7): 1035-44。
Jinek, M.、K. Chylinski等人(2012)。「A programmable dual-RNA-guided DNA endonuclease in adaptive bacterial immunity.」Science 337(6096): 816-21。
Kalish, J. M.與P. M. Glazer(2005)。「Targeted genome modification via triple helix formation.」Ann N Y Acad Sci 1058: 151-61。
Li, T.、S. Huang等人(2011).「TAL nucleases (TALNs): hybrid proteins composed of TAL effectors and FokI DNA-cleavage domain.」Nucleic Acids Res 39(1): 359-72。
Liu, J.、M. W. Albers等人(1992)。「Inhibition of T cell signaling by immunophilin-ligand complexes correlates with loss of calcineurin phosphatase activity.」Biochemistry 31(16): 3896-901。
Mali, P.、L. Yang等人(2013)。「RNA-guided human genome engineering via Cas9.」Science 339(6121): 823-6。
Moscou, M. J.及A. J. Bogdanove(2009)。「A simple cipher governs DNA recognition by TAL effectors.」Science 326(5959): 1501。
Paques, F.及P. Duchateau(2007)。「Meganucleases and DNA double-strand break-induced recombination: perspectives for gene therapy.」Curr Gene Ther 7(1): 49-66。
Park, T. S.、S. A. Rosenberg等人(2011)。「Treating cancer with genetically engineered T cells.」Trends Biotechnol 29(11): 550-7。
Peipp, M., D. Saul等人(2004)。「Efficient eukaryotic expression of fluorescent scFv fusion proteins directed against CD antigens for FACS applications.」J Immunol Methods 285(2): 265-80。
Perrin, A.、M. Buckle等人(1993)。「Asymmetrical recognition and activity of the I-SceI endonuclease on its site and on intron-exon junctions.」Embo J 12(7): 2939-47。
Pingoud, A.及G. H. Silva(2007)。「Precision genome surgery.」Nat Biotechnol 25(7): 743-4。
Porteus, M. H.及D. Carroll(2005)。「Gene targeting using zinc finger nucleases.」Nat Biotechnol 23(8): 967-73。
Rouet, P.、F. Smih等人(1994)。「Introduction of double-strand breaks into the genome of mouse cells by expression of a rare-cutting endonuclease.」Mol Cell Biol 14(12): 8096-106。
Sorek, R.、C. M. Lawrence等人(2013)。「CRISPR-mediated Adaptive Immune Systems in Bacteria and Archaea.」Annu Rev Biochem。
Stoddard, B. L.(2005)。「Homing endonuclease structure and function.」Q Rev Biophys 38(1): 49-95。
<110> Cellectis
<120> CD19特異性嵌合抗原受體及其用途
<130>
<150> PCT/US2013/040755
<151> 2013-05-13
<150> PCT/US2013/040766
<151> 2013-05-13
<150> US 13/892,805
<151> 2013-05-13
<150> USP 61/888,259
<151> 2013-10-08
<160> 24
<170> PatentIn第3.5版
<210> 1
<211> 464
<212> PRT
<213> 家鼠
<220>
<223> 抗-人CD19單株抗體4G7免疫球蛋白γ 1重鏈
<400> 1
<210> 2
<211> 239
<212> PRT
<213> 家鼠
<220>
<223> 抗-人CD19單株抗體4G7免疫球蛋白κ輕鏈
<400> 2
<210> 3
<211> 121
<212> PRT
<213> 家鼠
<220>
<223> 抗-人CD19單株抗體4G7免疫球蛋白γ1重鏈之片段-(殘基20至140)
<400> 3
<210> 4
<211> 115
<212> PRT
<213> 家鼠
<220>
<223> 抗-人CD19單株抗體4G7免疫球蛋白κ輕鏈之片段-(殘基21至130)
<400> 4
<210> 5
<211> 116
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗-人CD19單株抗體4G7免疫球蛋白κ輕鏈之片段
<400> 5
<210> 6
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之描述：合成寡肽
<220>
<223> 連接子
<400> 6
<210> 7
<211> 252
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之描述：合成多肽
<220>
<223> scFV 4G7變型1
<400> 7
<210> 8
<211> 251
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之描述：合成多肽
<220>
<223> scFV 4G7變型2
<400> 8
<210> 9
<211> 250
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之描述：合成多肽
<220>
<223> scFV FMC63
<400> 9
<210> 10
<211> 112
<212> PRT
<213> 現代人
<220>
<223> T-細胞表面糖蛋白CD3 ζ鏈之片段
<400> 10
<210> 11
<211> 42
<212> PRT
<213> 現代人
<220>
<223> 4-1BB之片段(殘基214至255)
<400> 11
<210> 12
<211> 41
<212> PRT
<213> 現代人
<220>
<223> T-細胞-特異性表面糖蛋白CD28之片段
<400> 12
<210> 13
<211> 69
<212> PRT
<213> 現代人
<220>
<223> T-細胞表面糖蛋白CD8 α鏈同型1前驅物之片段(殘基138至206)
<400> 13
<210> 14
<211> 495
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之描述：合成多肽
<220>
<223> 4G7-CAR變型1
<400> 14
<210> 15
<211> 495
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之描述：合成多肽
<220>
<223> 4G7-CAR變型2
<400> 15
<210> 16
<211> 494
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之描述：合成多肽
<220>
<223> FMC63-CAR
<400> 16
<210> 17
<211> 1488
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之描述：合成多核苷酸
<220>
<223> 4G7-CAR變型2
<400> 17
<210> 18
<211> 20
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之描述：合成寡肽
<220>
<223> 信號肽
<400> 18
<210> 19
<211> 21
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之描述：合成寡肽
<220>
<223> 信號肽
<400> 19
<210> 20
<211> 49
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之描述：合成寡核苷酸
<220>
<223> TRAC_T01
<400> 20
<210> 21
<211> 530
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之描述：合成多肽
<220>
<223> 重複TRAC_T01-L
<400> 21
<210> 22
<211> 530
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之描述：合成多肽
<220>
<223> 重複TRAC_T01-R
<400> 22
<210> 23
<211> 2814
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之描述：合成多核苷酸
<220>
<223> TRAC_T01-R TALEN
<400> 23
<210> 24
<211> 2832
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之描述：合成多核苷酸
<400> 24

Claims (22)

  1. 一種CD19特異性嵌合抗原受體，其包含至少一個胞外配體結合域、跨膜域及至少一個胞內信號傳導域，其中該胞外域包含衍生自對CD19具特異性之單株抗體4G7之γ重鏈(SEQ ID NO：1)及κ輕鏈(SEQ ID NO：2)之單鏈FV片段。
  2. 如請求項1之CD19特異性嵌合抗原受體，其中衍生自單株抗體4G7之該單鏈FV片段包含選自由：SEQ ID NO：3至5及SEQ ID NO：7至8組成之群之胺基酸序列。
  3. 如請求項1或2之CD19特異性嵌合抗原受體，其中該胞內信號傳導域包含CD3 ζ信號傳導域。
  4. 如請求項1至3中任一項之CD19特異性嵌合抗原受體，其中該胞內信號傳導域包含4-1BB域。
  5. 如請求項1至4中任一項之CD19特異性嵌合抗原受體，其包含人類CD8 α鏈跨膜及莖部域(stalk domain)。
  6. 如請求項1至5中任一項之CD19特異性嵌合抗原受體，其包含具有胺基酸序列SEQ ID NO：14及15之至少75%，較佳80%、85%、90%、95%之胺基酸序列。
  7. 如請求項1至6中任一項之CD19特異性嵌合抗原受體，其進一步包含另一非特異針對CD19之胞外配體結合域。
  8. 一種編碼如請求項1至7中任一項之嵌合抗原受體之多核苷酸。
  9. 如請求項8之多核苷酸，其包含具有核酸序列SEQ ID NO：17之至少75%，較佳80%、85%、90%、95%之核酸序列。
  10. 一種包含如請求項8或9之核酸之表現載體。
  11. 一種基因改造免疫細胞，其在細胞表面膜表現CD19特異性嵌合抗原受體，該CD19特異性嵌合抗原受體包含至少一個胞外配體 結合域及至少一個胞內信號傳導域，其中該胞外域包含衍生自對CD19具特異性之單株抗體4G7之單鏈FV片段。
  12. 一種基因改造免疫細胞，其在細胞表面膜表現如請求項1至7中任一項之CD19特異性嵌合抗原受體。
  13. 如請求項11或12之基因改造免疫細胞，其進一步包含另一種非特異針對CD19之嵌合抗原受體。
  14. 如請求項11至13中任一項之基因改造免疫細胞，其係衍生自發炎性T-淋巴細胞、細胞毒性T-淋巴細胞、調節型T-淋巴細胞或輔助型T-淋巴細胞。
  15. 一種基因改造免疫細胞，其係自供給者回收。
  16. 一種基因改造免疫細胞，其係自患者回收。
  17. 一種基因改造細胞，其係用於治療。
  18. 一種基因改造細胞，其係用於B-細胞淋巴瘤或白血病。
  19. 一種改造免疫細胞的方法，其包含：(a)提供免疫細胞，(b)在該細胞之表面表現至少一種如請求項1至7中任一項之CD19特異性嵌合抗原受體。
  20. 如請求項19之改造免疫細胞的方法，其包含：(a)提供免疫細胞，(b)將至少一種編碼該CD19特異性嵌合抗原受體之多核苷酸引入該細胞中，(c)表現該多核苷酸於該細胞中。
  21. 如請求項19之改造免疫細胞的方法，其包含：(a)提供免疫細胞，(b)將至少一種編碼該CD19特異性嵌合抗原受體之多核苷酸引入該細胞中， (c)引入至少一種非特異針對CD19之其他嵌合抗原受體。
  22. 一種治療有需要個體之方法，其包含：(a)提供在表面表現如請求項1至7中任一項之CD19特異性嵌合抗原受體之免疫細胞；(b)將該免疫細胞投與該患者。
TW103116744A 2013-05-13 2014-05-12 Ｃｄ１９特異性嵌合抗原受體及其用途 TWI636992B (zh)

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PCT/US2013/040755 WO2013176915A1 (en) 2012-05-25 2013-05-13 Methods for engineering allogeneic and immunosuppressive resistant t cell for immunotherapy
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US13/892,805 US11603539B2 (en) 2012-05-25 2013-05-13 Methods for engineering allogeneic and immunosuppressive resistant T cell for immunotherapy
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UA (1) UA118106C2 (zh)
WO (1) WO2014184143A1 (zh)

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US12221462B2 (en) 2017-10-31 2025-02-11 Allogene Therapeutics, Inc. Methods and compositions for dosing of allogeneic chimeric antigen receptor T cells

Families Citing this family (114)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP2734621B1 (en) 2011-07-22 2019-09-04 President and Fellows of Harvard College Evaluation and improvement of nuclease cleavage specificity
US10704021B2 (en) 2012-03-15 2020-07-07 Flodesign Sonics, Inc. Acoustic perfusion devices
CN111676196A (zh) 2012-05-25 2020-09-18 塞勒克提斯公司 工程化异体和免疫抑制耐受性t细胞的方法
US11077144B2 (en) 2013-05-13 2021-08-03 Cellectis CD19 specific chimeric antigen receptor and uses thereof
US20150044192A1 (en) 2013-08-09 2015-02-12 President And Fellows Of Harvard College Methods for identifying a target site of a cas9 nuclease
US9359599B2 (en) 2013-08-22 2016-06-07 President And Fellows Of Harvard College Engineered transcription activator-like effector (TALE) domains and uses thereof
US9388430B2 (en) 2013-09-06 2016-07-12 President And Fellows Of Harvard College Cas9-recombinase fusion proteins and uses thereof
US9526784B2 (en) 2013-09-06 2016-12-27 President And Fellows Of Harvard College Delivery system for functional nucleases
US9340800B2 (en) 2013-09-06 2016-05-17 President And Fellows Of Harvard College Extended DNA-sensing GRNAS
DK3066201T3 (en) 2013-11-07 2018-06-06 Editas Medicine Inc CRISPR-RELATED PROCEDURES AND COMPOSITIONS WITH LEADING GRADES
US20150166982A1 (en) 2013-12-12 2015-06-18 President And Fellows Of Harvard College Methods for correcting pi3k point mutations
CA2934436A1 (en) * 2013-12-20 2015-06-25 Cellectis Method of engineering multi-input signal sensitive t cell for immunotherapy
US10189908B2 (en) 2014-02-05 2019-01-29 The University Of Chicago Chimeric antigen receptors recognizing cancer-specific TN glycopeptide variants
GB201405845D0 (en) 2014-04-01 2014-05-14 Ucl Business Plc Signalling system
EP4079847A1 (en) 2014-07-30 2022-10-26 President And Fellows Of Harvard College Cas9 proteins including ligand-dependent inteins
GB201415347D0 (en) 2014-08-29 2014-10-15 Ucl Business Plc Signalling system
US20170354681A1 (en) * 2014-10-24 2017-12-14 Bcrt Holding Bv T cell-based immunotherapeutics
CA2969384A1 (en) * 2014-12-17 2016-06-23 Cellectis Inhibitory chimeric antigen receptor (icar or n-car) expressing non-t cell transduction domain
EP3237442B1 (en) 2014-12-24 2019-07-10 UCL Business PLC Cell
EP3250609A4 (en) 2015-01-26 2018-07-11 The University of Chicago Il13ra alpha 2 binding agents and use thereof in cancer treatment
US20180170992A1 (en) 2015-01-26 2018-06-21 The University Of Chicago CAR T CELLS RECOGNIZING CANCER-SPECIFIC IL 13Ra2
DK3250606T3 (da) 2015-01-26 2021-01-04 Cellectis ANTI-CLL1-specifikke enkeltkædede kimære antigenreceptorer (SCCARS) til cancerimmunterapi
EP4091616A1 (en) 2015-02-27 2022-11-23 iCell Gene Therapeutics LLC Chimeric antigen receptors (car) targeting hematologic malignancies, compositions and methods of use thereof
GB201503742D0 (en) * 2015-03-05 2015-04-22 Ucl Business Plc Chimeric antigen receptor
ES2807591T3 (es) 2015-04-13 2021-02-23 Pfizer Receptores de antígeno quimérico dirigidos a antígeno de maduración de células B
GB201507115D0 (en) * 2015-04-27 2015-06-10 Ucl Business Plc Nucleic Acid Construct
US11708572B2 (en) 2015-04-29 2023-07-25 Flodesign Sonics, Inc. Acoustic cell separation techniques and processes
EA202090931A3 (ru) 2015-05-18 2020-10-30 Тср2 Терапьютикс Инк. Композиции и способы перепрограммирования tcr с помощью гибридных белков
CN104829733B (zh) * 2015-05-25 2018-06-05 广州百暨基因科技有限公司 抗原结合单元稳定的嵌合抗原受体及制备方法与应用
US11173179B2 (en) 2015-06-25 2021-11-16 Icell Gene Therapeutics Llc Chimeric antigen receptor (CAR) targeting multiple antigens, compositions and methods of use thereof
EP3313872A4 (en) 2015-06-25 2019-03-20 iCell Gene Therapeutics LLC CHIMERIC ANTIGEN RECEPTORS (CARS) COMPOSITIONS AND METHOD FOR USE THEREOF
JP7033453B2 (ja) * 2015-06-30 2022-03-10 セレクティス 特異的エンドヌクレアーゼを使用した遺伝子不活化によってｎｋ細胞の機能性を改善する方法
EP3334442B1 (en) 2015-08-11 2024-12-18 Cellectis Cells for immunotherapy engineered for targeting cd38 antigen and for cd38 gene inactivation
WO2017044464A1 (en) * 2015-09-11 2017-03-16 The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University Biologically relevant orthogonal cytokine/receptor pairs
KR20180083313A (ko) 2015-09-24 2018-07-20 에이비비트로, 엘엘씨 Hiv 항체 조성물 및 사용 방법
JP7067793B2 (ja) 2015-10-23 2022-05-16 プレジデント アンド フェローズ オブ ハーバード カレッジ 核酸塩基編集因子およびその使用
AU2016343805A1 (en) 2015-10-30 2018-06-07 Aleta Biotherapeutics Inc. Compositions and methods for tumor transduction
US10508143B1 (en) 2015-10-30 2019-12-17 Aleta Biotherapeutics Inc. Compositions and methods for treatment of cancer
GB201519900D0 (en) * 2015-11-11 2015-12-23 Ucl Business Plc Chimeric antigen receptor
MY192474A (en) 2016-01-21 2022-08-23 Pfizer Chimeric antigen receptors targeting epidermal growth factor receptor variant iii
CN107298715B (zh) 2016-04-15 2021-05-04 阿思科力(苏州)生物科技有限公司 Slit2D2-嵌合抗原受体及其应用
US11214789B2 (en) 2016-05-03 2022-01-04 Flodesign Sonics, Inc. Concentration and washing of particles with acoustics
CN107446051B9 (zh) * 2016-05-31 2019-02-22 上海恒润达生生物科技有限公司 靶向cd19的嵌合抗原受体及其用途
US20200283534A1 (en) 2016-06-24 2020-09-10 iCell Gene Therapeuticics LLC CHIMERIC ANTIGEN RECEPTORS (CARs), COMPOSITIONS AND METHODS THEREOF
PL240585B1 (pl) * 2016-07-18 2022-05-02 Helix Biopharma Corp Chimeryczny receptor antygenowy (CAR), komórki immunologiczne zawierające CAR oraz kompozycja farmaceutyczna je zawierająca do leczenia nowotworów
JP7109789B2 (ja) 2016-08-02 2022-08-01 ティーシーアール２ セラピューティクス インク． 融合タンパク質を使用したｔｃｒの再プログラム化のための組成物及び方法
IL264565B2 (en) 2016-08-03 2024-07-01 Harvard College Adenosine nucleobase editors and uses thereof
EP3497214B1 (en) 2016-08-09 2023-06-28 President and Fellows of Harvard College Programmable cas9-recombinase fusion proteins and uses thereof
US11542509B2 (en) 2016-08-24 2023-01-03 President And Fellows Of Harvard College Incorporation of unnatural amino acids into proteins using base editing
CN109789164B (zh) * 2016-08-30 2023-04-28 亘喜生物科技（上海）有限公司 具有gitr胞内结构域作为共刺激结构域的嵌合抗原受体
CN109715199A (zh) 2016-09-14 2019-05-03 詹森生物科技公司 包含bcma特异性iii型纤连蛋白结构域的嵌合抗原受体及其用途
CN108699163B (zh) * 2016-09-28 2021-11-19 阿思科力(苏州)生物科技有限公司 一种多基因重组嵌合抗原受体分子及其应用
CN112280796A (zh) 2016-10-07 2021-01-29 T细胞受体治疗公司 使用融合蛋白进行t细胞受体重编程的组合物和方法
JP2020500031A (ja) * 2016-10-11 2020-01-09 ミネルバ バイオテクノロジーズ コーポレーション ヒト化抗ｍｕｃ１＊抗体及び開裂酵素の使用
KR102622411B1 (ko) 2016-10-14 2024-01-10 프레지던트 앤드 펠로우즈 오브 하바드 칼리지 핵염기 에디터의 aav 전달
CA3044593A1 (en) 2016-11-22 2018-05-31 TCR2 Therapeutics Inc. Compositions and methods for tcr reprogramming using fusion proteins
JP7778468B2 (ja) 2016-11-22 2025-12-02 ナショナル ユニバーシティ オブ シンガポール Ｔ細胞悪性腫瘍の免疫療法のためのｃｄ７発現およびキメラ抗原受容体の遮断
US10745677B2 (en) 2016-12-23 2020-08-18 President And Fellows Of Harvard College Editing of CCR5 receptor gene to protect against HIV infection
TW201839136A (zh) 2017-02-06 2018-11-01 瑞士商諾華公司 治療血色素異常症之組合物及方法
WO2018165504A1 (en) 2017-03-09 2018-09-13 President And Fellows Of Harvard College Suppression of pain by gene editing
KR20190123328A (ko) 2017-03-09 2019-10-31 프레지던트 앤드 펠로우즈 오브 하바드 칼리지 암 백신
EP3592777A1 (en) 2017-03-10 2020-01-15 President and Fellows of Harvard College Cytosine to guanine base editor
SG11201908658TA (en) 2017-03-23 2019-10-30 Harvard College Nucleobase editors comprising nucleic acid programmable dna binding proteins
AU2018251150B2 (en) 2017-04-13 2024-05-09 Albert-Ludwigs-Universität Freiburg New sequence specific reagents targeting CCR5 in primary hematopoietic cells
WO2018209320A1 (en) 2017-05-12 2018-11-15 President And Fellows Of Harvard College Aptazyme-embedded guide rnas for use with crispr-cas9 in genome editing and transcriptional activation
WO2018222935A1 (en) 2017-06-02 2018-12-06 Pfizer Inc. Chimeric antigen receptors targeting flt3
US12275787B2 (en) 2017-06-21 2025-04-15 Icell Gene Therapeutics Llc Chimeric antigen receptors (CARs), compositions and methods thereof
US12144825B2 (en) 2017-06-30 2024-11-19 Cellectis Cellular immunotherapy for repetitive administration
IL271982B2 (en) 2017-07-17 2025-02-01 Janssen Biotech Inc Antigen binding regions against fibronectin type III sites and methods of using them
JP2020534795A (ja) 2017-07-28 2020-12-03 プレジデント アンド フェローズ オブ ハーバード カレッジ ファージによって支援される連続的進化（ｐａｃｅ）を用いて塩基編集因子を進化させるための方法および組成物
WO2019139645A2 (en) 2017-08-30 2019-07-18 President And Fellows Of Harvard College High efficiency base editors comprising gam
KR20250107288A (ko) 2017-10-16 2025-07-11 더 브로드 인스티튜트, 인코퍼레이티드 아데노신 염기 편집제의 용도
US11326156B2 (en) 2017-11-01 2022-05-10 Allogene Therapeutics, Inc. Modified caspase-9 polypeptides and methods of use thereof
WO2019106163A1 (en) 2017-12-01 2019-06-06 Cellectis Reprogramming of genetically engineered primary immune cells
JP7089806B2 (ja) 2017-12-06 2022-06-23 アブクロン・インコーポレイテッド 悪性ｂ細胞を特異的に認知する抗体またはその抗原結合断片、これを含むキメラ抗原受容体及びその用途
EP3724214A4 (en) 2017-12-15 2021-09-01 The Broad Institute Inc. SYSTEMS AND METHODS FOR PREDICTING REPAIR RESULTS IN GENETIC ENGINEERING
TWI800522B (zh) * 2017-12-23 2023-05-01 宇越生醫科技股份有限公司 醫藥重組受體組成物及方法
WO2019152705A1 (en) 2018-02-01 2019-08-08 Pfizer Inc. Antibodies specific for cd70 and their uses
PE20252242A1 (es) 2018-02-01 2025-09-15 Pfizer Receptores de antigeno quimericos dirigidos a cd70
RU2020128440A (ru) 2018-02-28 2022-03-28 Пфайзер Инк. Варианты il-15 и их применения
US12157760B2 (en) 2018-05-23 2024-12-03 The Broad Institute, Inc. Base editors and uses thereof
EP3820495A4 (en) 2018-07-09 2022-07-20 The Broad Institute Inc. RNA-PROGRAMMABLE EPIGENETIC RNA MODIFIERS AND THEIR USES
WO2020011706A1 (en) * 2018-07-09 2020-01-16 Oslo Universitetssykehus Hf Two chimeric antigen receptors specifically binding cd19 and igkappa
SG11202101773WA (en) 2018-08-29 2021-03-30 Nanjing Legend Biotech Co Ltd Anti-mesothelin chimeric antigen receptor (car) constructs and uses thereof
AU2019336245A1 (en) 2018-09-07 2021-04-01 Beam Therapeutics Inc. Compositions and methods for delivering a nucleobase editing system
US12454694B2 (en) 2018-09-07 2025-10-28 Beam Therapeutics Inc. Compositions and methods for improving base editing
WO2020092453A1 (en) 2018-10-29 2020-05-07 The Broad Institute, Inc. Nucleobase editors comprising geocas9 and uses thereof
EP3873540A4 (en) 2018-10-31 2022-07-27 Mayo Foundation for Medical Education and Research METHODS AND MATERIALS FOR THE TREATMENT OF CANCER
WO2020092839A1 (en) 2018-10-31 2020-05-07 Mayo Foundation For Medical Education And Research Methods and materials for treating cancer
WO2020109953A1 (en) 2018-11-30 2020-06-04 Janssen Biotech, Inc. Gamma delta t cells and uses thereof
WO2020154500A1 (en) 2019-01-23 2020-07-30 The Broad Institute, Inc. Supernegatively charged proteins and uses thereof
RU2742000C2 (ru) * 2019-03-13 2021-02-01 Общество С Ограниченной Ответственностью "Анабион" Выделенный альтернативный внутриклеточный сигнальный домен химерного антигенного рецептора и включающий его химерный антигенный рецептор
WO2020191246A1 (en) 2019-03-19 2020-09-24 The Broad Institute, Inc. Methods and compositions for editing nucleotide sequences
US12473543B2 (en) 2019-04-17 2025-11-18 The Broad Institute, Inc. Adenine base editors with reduced off-target effects
AU2020257252A1 (en) * 2019-04-19 2021-10-14 Allogene Therapeutics, Inc. Antibodies against 4G7-derived chimeric antigen receptors
ES2961314T3 (es) 2019-04-26 2024-03-11 Allogene Therapeutics Inc Receptores quiméricos de antígeno resistentes a rituximab y usos de los mismos
KR20220069926A (ko) 2019-08-27 2022-05-27 얀센 바이오테크 인코포레이티드 키메라 항원 수용체 시스템 및 그의 용도
WO2021072328A1 (en) 2019-10-10 2021-04-15 The Broad Institute, Inc. Methods and compositions for prime editing rna
CN112079934B (zh) 2019-12-17 2021-01-29 合源生物科技(天津)有限公司 一种靶向cd19的嵌合抗原受体及其用途
AU2021232141A1 (en) 2020-03-03 2022-09-22 Janssen Biotech, Inc. ꝩδ T cells and uses thereof
KR20220150353A (ko) 2020-03-05 2022-11-10 네오티엑스 테라퓨틱스 엘티디. 면역 세포를 사용하여 암을 치료하기 위한 방법 및 조성물
GB2614813B (en) 2020-05-08 2025-05-07 Harvard College Methods and compositions for simultaneous editing of both strands of a target double-stranded nucleotide sequence
AU2021312871A1 (en) 2020-07-21 2023-02-09 Allogene Therapeutics, Inc. Chimeric antigen receptors with enhanced signaling and activities and uses thereof
US20220031751A1 (en) 2020-08-03 2022-02-03 Kyverna Therapeutics, Inc. Methods of producing t regulatory cells, methods of transducing t cells, and uses of the same
EP4196231A1 (en) 2020-08-14 2023-06-21 H. Lee Moffitt Cancer Center & Research Institute, Inc. Chimeric antigen receptor t cells for treating autoimmunity
CN111944850B (zh) * 2020-08-28 2023-03-31 澳门大学 表达抗cd22嵌合抗原受体和pd-l1阻断蛋白的细胞的制备方法、表达载体及应用
AU2021401052A1 (en) 2020-12-18 2023-06-22 Century Therapeutics, Inc. Chimeric antigen receptor systems with adaptable receptor specificity
WO2022165419A1 (en) 2021-02-01 2022-08-04 Kyverna Therapeutics, Inc. Methods for increasing t-cell function
CA3208717A1 (en) * 2021-02-19 2022-08-25 Preet M. Chaudhary Single-chain and multi-chain synthetic antigen receptors for diverse immune cells
WO2022234158A1 (es) * 2021-05-06 2022-11-10 Institut D'investigacions Biomèdiques August Pi I Sunyer (Idibaps) Terapia de células t con receptor de antígeno quimérico específico de cd19
WO2022266075A1 (en) 2021-06-14 2022-12-22 Caribou Biosciences, Inc. Methods and materials for treating cancer using car constructs with an intracellular domain comprising a stap domain and a kinase domain or a stap domain and a phosphatase domain
EP4502177A1 (en) 2022-03-24 2025-02-05 Nanjing Legend Biotech Co., Ltd. Method for preparing dna library and detecting retroviral integration site
WO2025051339A1 (en) 2023-09-05 2025-03-13 Tiber Biotech Srl SINGLE-CHAIN VARIABLE FRAGMENT AND MOLECULES DERIVING THEREFROM THAT BIND FRAGMENT TRVB5-1 OF THE β CHAIN OF HUMAN T-CELL RECEPTOR
EP4574838A1 (en) 2023-12-21 2025-06-25 Vilnius University Chimeric antigen receptor (car) with enhanced recruitment of signaling partners

Family Cites Families (30)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4683195A (en) 1986-01-30 1987-07-28 Cetus Corporation Process for amplifying, detecting, and/or-cloning nucleic acid sequences
GB8611832D0 (en) 1986-05-15 1986-06-25 Holland I B Polypeptide
US5037743A (en) 1988-08-05 1991-08-06 Zymogenetics, Inc. BAR1 secretion signal
US6534055B1 (en) 1988-11-23 2003-03-18 Genetics Institute, Inc. Methods for selectively stimulating proliferation of T cells
US5858358A (en) 1992-04-07 1999-01-12 The United States Of America As Represented By The Secretary Of The Navy Methods for selectively stimulating proliferation of T cells
US6352694B1 (en) 1994-06-03 2002-03-05 Genetics Institute, Inc. Methods for inducing a population of T cells to proliferate using agents which recognize TCR/CD3 and ligands which stimulate an accessory molecule on the surface of the T cells
US6905680B2 (en) 1988-11-23 2005-06-14 Genetics Institute, Inc. Methods of treating HIV infected subjects
US7175843B2 (en) 1994-06-03 2007-02-13 Genetics Institute, Llc Methods for selectively stimulating proliferation of T cells
US6692964B1 (en) 1995-05-04 2004-02-17 The United States Of America As Represented By The Secretary Of The Navy Methods for transfecting T cells
US7067318B2 (en) 1995-06-07 2006-06-27 The Regents Of The University Of Michigan Methods for transfecting T cells
US6797514B2 (en) 2000-02-24 2004-09-28 Xcyte Therapies, Inc. Simultaneous stimulation and concentration of cells
US7572631B2 (en) 2000-02-24 2009-08-11 Invitrogen Corporation Activation and expansion of T cells
US6867041B2 (en) 2000-02-24 2005-03-15 Xcyte Therapies, Inc. Simultaneous stimulation and concentration of cells
AU4328801A (en) 2000-02-24 2001-09-03 Xcyte Therapies Inc Simultaneous stimulation and concentration of cells
EP1334188B1 (en) * 2000-11-07 2006-08-30 City of Hope Cd19-specific redirected immune cells
AU2007285976B2 (en) * 2006-08-14 2011-08-18 Xencor, Inc Optimized antibodies that target CD19
US20080131415A1 (en) * 2006-11-30 2008-06-05 Riddell Stanley R Adoptive transfer of cd8 + t cell clones derived from central memory cells
ES2599172T3 (es) * 2007-10-19 2017-01-31 Seattle Genetics, Inc. Agentes de unión a CD19 y usos de éstos
WO2009091826A2 (en) * 2008-01-14 2009-07-23 The Board Of Regents Of The University Of Texas System Compositions and methods related to a human cd19-specific chimeric antigen receptor (h-car)
ES2553421T3 (es) * 2008-08-26 2015-12-09 City Of Hope Método y composiciones para el funcionamiento potenciado del efector antitumoral de células T
WO2012050374A2 (en) * 2010-10-13 2012-04-19 Innocell, Inc. Immunotherapy for solid tumors
PH12013501201A1 (en) * 2010-12-09 2013-07-29 Univ Pennsylvania Use of chimeric antigen receptor-modified t cells to treat cancer
MX2013008376A (es) 2011-01-18 2013-08-12 Univ Pennsylvania Composiciones y metodos para el tratamiento de cancer.
US20120245996A1 (en) 2011-03-22 2012-09-27 Jonathan Mendez System and method for intent-based content matching
SG193591A1 (en) * 2011-03-23 2013-10-30 Hutchinson Fred Cancer Res Method and compositions for cellular immunotherapy
SG194115A1 (en) 2011-04-05 2013-11-29 Cellectis Method for the generation of compact tale-nucleases and uses thereof
US20130071414A1 (en) * 2011-04-27 2013-03-21 Gianpietro Dotti Engineered cd19-specific t lymphocytes that coexpress il-15 and an inducible caspase-9 based suicide gene for the treatment of b-cell malignancies
PH12014500247A1 (en) * 2011-07-29 2014-03-24 Univ Pennsylvania Switch costimulatory receptors
MX2014003176A (es) * 2011-09-16 2015-08-05 Univ Pennsylvania Celulas t diseñadas mediante arn para el tratamiento de cancer.
EA201491572A1 (ru) 2012-02-22 2014-12-30 Дзе Трастиз Оф Дзе Юниверсити Оф Пенсильвания Композиции и способы получения устойчивой популяции t-клеток, используемых для лечения злокачественного новообразования

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US12221462B2 (en) 2017-10-31 2025-02-11 Allogene Therapeutics, Inc. Methods and compositions for dosing of allogeneic chimeric antigen receptor T cells
TWI899047B (zh) * 2017-10-31 2025-10-01 美商異基因治療有限公司 投藥同種異體嵌合抗原受體t細胞之方法及組合物

Also Published As

Publication number Publication date
CA2911292A1 (en) 2014-11-20
EP4364809A3 (en) 2024-07-24
LT3546572T (lt) 2024-05-27
MA38630A1 (fr) 2017-07-31
EA201501109A1 (ru) 2016-06-30
EP3546572B9 (en) 2024-06-26
CN105431532B (zh) 2021-04-06
FI3546572T3 (fi) 2024-05-06
AU2014267436A1 (en) 2015-11-12
BR112015028387A2 (pt) 2017-09-19
HRP20240576T1 (hr) 2024-07-19
EP3546572B1 (en) 2024-03-13
HRP20221393T1 (hr) 2023-01-06
JP6491643B2 (ja) 2019-04-03
PT3546572T (pt) 2024-05-08
KR102248157B1 (ko) 2021-05-03
EP4364809A2 (en) 2024-05-08
CA2911292C (en) 2023-01-03
PL3546572T3 (pl) 2024-07-22
ES2930431T3 (es) 2022-12-12
EA036200B1 (ru) 2020-10-14
RU2015153250A (ru) 2017-06-19
US20210000869A9 (en) 2021-01-07
MX2015015662A (es) 2016-09-16
PH12015502479B1 (en) 2019-11-27
UA118106C2 (uk) 2018-11-26
SI2997141T1 (sl) 2023-04-28
MA38630B2 (fr) 2021-08-31
FI2997141T3 (fi) 2022-12-15
DK3546572T3 (da) 2024-05-06
EP2997141A1 (en) 2016-03-23
SA515370135B1 (ar) 2020-12-14
AU2019201818A1 (en) 2019-04-04
RU2727447C2 (ru) 2020-07-21
ES2978123T3 (es) 2024-09-05
HUE067258T2 (hu) 2024-10-28
JP6854307B2 (ja) 2021-04-07
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