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TW201350504A - 結晶性抗人類ｉｌ-１２抗體 - Google Patents

結晶性抗人類ｉｌ-１２抗體 Download PDF

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TW201350504A
TW201350504A TW102131931A TW102131931A TW201350504A TW 201350504 A TW201350504 A TW 201350504A TW 102131931 A TW102131931 A TW 102131931A TW 102131931 A TW102131931 A TW 102131931A TW 201350504 A TW201350504 A TW 201350504A
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TW
Taiwan
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antibody
disease
crystal
crystallization
buffer
Prior art date
Application number
TW102131931A
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English (en)
Inventor
David W Borhani
Wolfgang Fraunhofer
Hans-Juergen Krause
Anette Koenigsdorfer
Gerhard Winter
Stefan Gottschalk
Original Assignee
Abbott Lab
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Abbott Lab filed Critical Abbott Lab
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Abstract

本發明係關於使抗hIL-12抗體結晶之分批結晶方法，其允許以工業規模產生該抗體；根據該等方法獲得之抗體晶體；含有該等晶體之組合物；及使用該等晶體及該等組合物之方法。

Description

結晶性抗人類IL-12抗體
本發明係關於一種使抗體結晶之分批結晶方法，其允許以工業規模產生該抗體；抗體之晶體，尤其根據所揭示之方法獲得的抗體之晶體；及含有該等晶體之組合物以及使用該等晶體及組合物之方法。
本申請案主張2007年3月29日申請之美國臨時申請案第60/920,608號的優先權。
a)抗體晶體
就目前正處於臨床研究階段2或3中進行評估之100種以上單株抗體(mAb)而言，mAb銷售被視為最有前途之生物醫藥銷售之一。因為此等藥物係以經常超過100mg之單一劑量傳遞，所以急需找到滿足穩定性、安全性及患者順應性之合適調配策略。然而，高度濃縮之液體mAb調配物顯示黏度增加，從而阻礙經由患者友好性細針之可注射性。此外，mAb分子於該等高濃度下聚集之趨勢與適度濃縮之溶液相比按指數規律增加。此為安全性及穩定性要求所不可接受的。
因此，高mAb劑量之傳遞係專供大體積之用，其通常必須通過輸注傳遞。此給藥方式成本密集且顯著降低患者之順應性。
因此，醫藥學上適用之皮下注射用低體積mAb晶體懸浮液將非常合乎需要。理論上，影響mAb完整性之降解路徑應由於晶格之剛度而顯著減速，其中蛋白質結構之移動受阻。此外，當將高度濃縮之晶體 懸浮液與液體調配物比較時，黏度之增加將顯著減少。對於持續釋放而言，可能產生或改變蛋白質晶體以使其進入患者體內時緩慢溶解。此將為傳遞持續釋放調配物之極好方式，此係因為將避免廣泛使用會損害mAb結構之賦形劑及方法。
儘管使用蛋白質晶體作為藥物物質有極大潛在性，但對系統性評估此策略之嘗試尚且很少。
熟知之例外(exemption)為胰島素，其已在幾十年前得以成功地結晶。現今，已充分描述對胰島素之晶體懸浮液之使用，從而提供正在市場上明確銷售之穩定及長效調配物。開發胰島素晶體與所有其他蛋白質之結晶體之間的差別可能與有序胰島素聚集物天然地形成於胰腺中之事實有關。為此，當使胰島素與過量鋅離子接觸時，容易獲得胰島素晶體。大多數其他蛋白質傾向於形成無序沈澱物而非晶體，且因此，找到蛋白質之結晶條件係一個耗時、不平凡之任務。
儘管對收穫蛋白質晶體以作X射線繞射分析很感興趣，但找到合適之結晶條件仍為經驗科學，此係因為原則上任何蛋白質表現有所不同。迄今為止，尚未發現能可靠地預測所選蛋白質之成功結晶條件的通用規律。因此，獲得特定蛋白質之晶體始終被稱為關於後來計劃任何所要應用之"瓶頸"。
抗體由於分子之可撓性而特別難以結晶。不過，免疫球蛋白晶體之實例已經知道很長時間。免疫球蛋白晶體之第一實例已在150年前由英國醫師Henry Bence Jones作了描述；其自骨髓瘤患者之尿液分離出異常Ig輕鏈二聚物之晶體(Jones H.B.(1848)Philosophical Transactions of the Royal Society,London 138：55-62)。該等異常Ig自此之後被稱為本斯瓊司蛋白(Bence Jones protein)。在1938年，描述自骨髓瘤患者之血清自發結晶出獨特的異常Ig(von Bonsdorf,B.等人(1938)Folia Haematologia 59：184-208)，顯然其為Ig重鏈寡聚物(MW 200kDa)。
在隨後之三十年裏已描述正常結構之結晶人類免疫球蛋白(兩個重鏈連接於兩個輕鏈)，其亦主要自骨髓瘤患者分離得之(Putnam,F.W.(1955)Science 122：275-7)。Davies及同事最先使用X-射線晶體術來表徵名為"Dob"之完整人類骨髓瘤抗體之結構(Terry,W.D.等人(1968)Nature 220(164)：239-41)，且其在1971年測定其三維結構(Sarma,V.R.等人(1971)J.Biol.Chem.246(11)：3753-9)。繼其開拓性研究之後，緊隨其他人之研究，從而獲得IgG "Kol"(Huber,R.等人(1976)Nature 264(5585)：415-20)、IgG "Mcg"(Rajan,S.S.等人(1983)Mol.Immunol.20(7)：787-99)及犬淋巴瘤IgG2a(Harris,L.J.等人(1992)Nature 360(6402)：369-72)之晶體結構。
免疫球蛋白之晶體在再溶解後保留其特殊免疫活性。Nisonoff等人於1968年報導兔抗對偶氮苯甲酸酯抗體，"X4"，其易於結晶(Nisonoff,A.等人(1968)Cold Spring Harbor Symposia on Quantitative Biology 32：89-93)。抗體X4在結晶之前以及在晶體再溶解之後已被廣泛表徵。發現[125I]-對碘苯甲酸酯特異性且有效地與再溶解X4結合；再溶解晶體亦展現未經純化之兔血清特有之多特異性Ouchterlony免疫擴散反應(Nisonoff等人，1968)。Connell及同事描述人類骨髓瘤γ-免疫球蛋白-1 κ(IgG-κ)，稱為"Tem"，其於低溫下自血清自發結晶(Connell,G.E.等人(1973)Canad.J.Biochem.51(8)：1137-41)。發現Tem晶體結構良好且具有菱面體對稱性。含有Tem之血清係廣泛地藉由瓊脂糖免疫擴散技術表徵。Tem晶體之再溶解溶液的電泳及免疫擴散顯示其與藉由冷沈澱法自血清獲得之物質一致，且與經分離之骨髓瘤蛋白一致(Connell等人，1973)。
Mills及同事於1983年報導由白蛋白之人類單株抗體引起的罕見結晶冷球蛋白血症(crystallocryoglobulinemia)(Mills,L.E.等人 (1983)Annals of Internal Med 99(5)：601-4)。在此，自兩位患者分離出極其類似之立方形晶體。使晶體再溶解，接著電泳及免疫電泳，結果指示，晶體由兩個蛋白質組份組成，亦即1：2比率之單株IgG-λ與人類血清白蛋白(Jentoft,J.E.等人(1982)Biochem.21(2)：289-294)。藉由溶解原始晶體，接著管柱層析以製備規模分離該等組份。儘管任一分離之組份自身皆不結晶，但一旦再組合後原始兩組份複合物重新形成且接著結晶。對再溶解、分離之IgG及其具有人類血清白蛋白之Fab片段之特殊沈降特徵及免疫反應性的進一步研究指示，兩個再溶解、分離之組份之重新締合在性質上具免疫性，亦即結晶性抗體一旦再溶解後仍然具有其天然、高度特異性(針對人類血清白蛋白)結合特徵(Mills等人1983)。
最近，Margolin及同事報導結晶性抗體之潛在性治療用途(Yang,M.X.等人(2003)Proc.Natl.Acad.Sci.100(12)：6934-6939)。其發現治療性單株抗體曲妥珠單抗(trastuzumab)(Herceptin®)可得以結晶(Shenoy,B.等人(2002)PCT國際申請案WO/2002/072636,(Altus Biologies Inc.,USA).第173頁)。結晶性曲妥珠單抗懸浮液於小鼠腫瘤模型中在治療上係有效的，由此證明結晶性曲妥珠單抗保留生物活性(Yang等人，2003)。
b)結晶技術
各種蛋白質之結晶無法使用明確的方法或規則程序(algorithm)成功地進行。當然，在最近20-30年內有巨大技術進步，此如蛋白質結晶方面之世界聞名的專家A.McPherson所提及。McPherson提供關於大分子結晶之方式、策略、試劑及裝置的廣泛細節。(McPherson,A.(1999)Crystallization of Biological Macromolecules.Cold Spring Harbor,New York,Cold Spring Harbor Laboratory Press，第159頁)。然而，其未提供確保實際上可由熟習技術者以合理之成功期望結晶出 任何特定大分子的方法。舉例而言，McPherson陳述："無論何種程序，在改進及最優化系統之參數、溶劑及溶質方面必須不遺餘力，以促進及增進分子之間的特異性結合相互作用且在其形成後使其穩定。此後面之問題態樣通常視正結晶之特殊蛋白質或核酸的特定化學及物理特性而定"。
熟習蛋白質結晶技術者已普遍認可，尚無任何規則程序可用於獲取所關注之新蛋白質、實施明確的方法步驟且藉此獲得所要晶體。
若干篩選系統為市售的(例如Hampton 1及2、Wizzard I及II)，其允許以微升規模篩選特定蛋白質之潛在合適之結晶條件。然而，在此類篩選系統中獲得之陽性結果未必允許工業上適用之較大分批規模的成功結晶。據描述，微升型結晶試驗至工業尺寸之轉化係一個具挑戰性的任務(參見Jen,A.,Merkle,H.P.(2001)Pharm.Res.18,11,1483)。
Baldock等人報導對於結晶條件之初始篩選而言微批與氣相擴散之比較(Baldock,P.等人(1996)J.Crystal Growth 168(1-4)：170-174)。使用一組結晶溶液篩選六種市售蛋白質。該等篩選係使用最常見的氣相擴散方法及微批結晶方法之三種變體(包括新穎蒸發技術)來執行。在所鑑別之58種結晶條件中，43種(74%)係以微批鑑別，而41種(71%)係以氣相擴散鑑別。藉由兩種方法找到二十六種條件，且若根本未使用微批，則將錯過17種(29%)。由此可見，在初始結晶篩選中最常用之氣相擴散技術並不保證陽性結果。
c)抗人類IL-12抗體晶體
人類IL-12在與若干涉及免疫反應及發炎反應之疾病相關的病變中起關鍵作用，該等疾病例如多發性硬化症、克羅恩氏病(Crohn's disease)及牛皮癬。因此，對治療該等人類IL-12相關病症之合適方法存在很大需求。一種有前景之治療方法包含投與醫藥學上有效之劑量 的抗人類IL-12抗體。
由於人類IL-12在多種人類病症中之作用，已針對抑制或抵抗IL-12活性設計治療策略。詳言之，已尋找與IL-12結合且中和IL-12之抗體作為抑制IL-12活性之工具。一些最早抗體為鼠類單株抗體(mAb)，其由自經IL-12免疫之小鼠之淋巴細胞製備的融合瘤分泌(參見例如WO 97/15327)。然而，此等鼠類IL-12抗體在活體內之使用由於與向人類投與小鼠抗體相關之問題而受到限制，該等問題諸如血清半衰期短暫、不能觸發某些人類效應功能及在人類體內引起不希望有之抵抗小鼠抗體的免疫反應("人類抗小鼠抗體"(HAMA)反應)。
一般而言，對克服與在人類中使用完全鼠類抗體相關之問題的嘗試涉及將該等抗體遺傳工程化成更"像人類"。舉例而言，已製備嵌合抗體，其中抗體鏈之可變區源自鼠類且抗體鏈之恆定區源自人類。然而，因為此等嵌合且人類化之抗體仍然保留一些鼠類序列，所以其仍然可能會引起不希望有之免疫反應，亦即人類抗嵌合抗體(HACA)反應，此在長期投藥時尤然。
美國專利第6,914,128號揭示與人類介白素-12(hIL-12)特異性結合之人類抗體，較佳重組人類抗體。其中所揭示之較佳抗體對於hIL-12具有高親和力且在活體外及活體內中和hIL-12活性。抗體或抗體部分適用於偵測hIL-12及抑制hIL-12活性，例如在罹患hIL-12活性為有害源之病症的人類個體中。亦涵蓋用於表現本發明之重組人類抗體之核酸、載體及宿主細胞以及合成該等重組人類抗體之方法。抗hIL-12抗體之結晶形式或製備該等結晶形式之方法在該'128專利中並未有具體描述。
因此，根據本發明待解決之問題在於開發適合於抗-IL-12抗體之結晶條件(尤其分批結晶條件)及建立適用於工業抗體晶體產生相關之體積的結晶過程條件。同時，建立不使用毒性劑之結晶過程，其中該 等毒性劑可能會負面地影響該等抗體之醫藥適用性。
令人驚訝地為，藉由有可能經由應用生理學上可接受之聚伸烷基多元醇作為結晶誘發劑以超過微升規模之分批結晶體積獲得完整抗人類IL-12抗體之晶體的發現，上文所提及之問題得以解決。
在第一態樣中，本發明提供一種使抗人類IL-12抗體結晶之分批結晶方法，其包含下列步驟：(a)提供IL-12抗體與至少一種聚伸烷基多元醇型結晶試劑(如下文更詳細地定義，例如聚伸烷二醇)之混合物的水性溶液；例如藉由將抗體(其中抗體較佳係以溶解形式存在)之水性溶液與包含至少一種聚伸烷二醇作為溶解形式之結晶試劑的水性結晶溶液混合，或者藉由添加固體形式之結晶試劑來進行；(b)及培養該水性結晶混合物直至形成抗體之晶體。
根據另一實施例，亦可執行本發明之方法以便可用合適量之預先存在之抗人類IL-12抗體晶體作為晶種補充步驟a)中獲得之結晶混合物以引發或促進結晶。
本發明之結晶方法通常係於在約pH 4至約6.5、尤其約4.5至約6.0、約5.0至約5.8、或約5.3至約5.7(諸如5.4、5.5或5.6)之範圍內之水性結晶混合物的pH值下執行。
此外，水性結晶混合物可含有至少一種緩衝劑。該緩衝劑可包含作為主要組份之乙酸鹽組份，尤其其鹼金屬鹽，例如鈉鹽或鉀鹽，諸如乙酸鈉。該鹽係藉由添加酸、尤其乙酸來調整至所需pH值。在結晶方法之一較佳實施例中，水性結晶混合物中之緩衝劑濃度(總乙酸鹽)為約0M至約0.5M，或約0.02M至約0.5M，例如約0.05M至約0.3M，或約0.07M至約0.2M，或約0.09M至約0.12M。
在下文中對"聚伸烷基多元醇型結晶試劑"作更詳細的定義： 熟習讀者將認識到，該術語必須被廣義理解且包含聚伸烷基多元醇以及其衍生物。
如根據本發明所使用，"聚伸烷基多元醇"係直鏈或支鏈(尤其直鏈)聚-C2-C6伸烷基多元醇。聚醚係由至少一種類型之多官能脂族醇形成，該脂族醇帶有2至6個、2至4個且尤其2或3個、較佳鄰近之羥基且具有2至6個、尤其2、3或4個碳原子，較佳形成直鏈碳主鏈。非限制性實例為伸乙基-1,2-二醇(乙二醇)、伸丙基-1,2-二醇、伸丙基-1,3-二醇以及正伸丁基-1,3-二醇及正伸丁基-1,4-二醇。尤其較佳之二醇為乙二醇。
本發明之聚伸烷基多元醇可由一種單一類型之多元醇或至少兩種不同多元醇之混合物構成，其可為無規聚合的或可以嵌段共聚物形式存在。
此外，該術語"聚伸烷基多元醇"亦包含其衍生物。非限制性實例為烷基酯及醚，尤其單烷基醚及二烷基醚。"烷基"詳言之被定義為直鏈或支鏈C1-C6烷基殘基，尤其為甲基、乙基、正丙基或異丙基、正丁基、異丁基、第二丁基及第三丁基、正戊基或異戊基及正己基。
如根據本發明所使用，聚伸烷基多元醇、尤其聚伸烷二醇進一步係藉由各種分子量來表徵。陳述為數目或重量平均分子量之分子量範圍通常在400至10,000之範圍內，例如1,000至8,000，或2,000至6,000，3,000至6,000，或3,200至6,000，例如3,350至6,000，3,350至5000，或3,800至4,200，尤其約4,000。
特殊聚伸烷基多元醇為聚乙二醇(PEG)及聚丙二醇(PPG)以及相應無規或嵌段共聚物。合適多元醇之特定實例為PEG 2,000、PEG 3,000、PEG 3,350、PEG 4,000、PEG 5,000及PEG 6,000。
詳言之，結晶混合物中之聚伸烷基多元醇濃度、尤其聚乙二醇濃度在約5%至約30%(w/v)之範圍內，例如約7%至約15%(w/v)或約9% 至約16%(w/v)或約10%至約14%(w/v)或約11%至約13%(w/v)。較佳地，平均分子量為約4,000之聚乙二醇係以在結晶混合物中約11%至約13%(w/v)之濃度使用。
在本發明之一較佳實施例中，抗體蛋白溶液及結晶溶液係以約1：1之比率組合。因此，原始結晶溶液中緩衝劑/結晶試劑之莫耳濃度高達結晶混合物中之約兩倍。
通常，結晶方法係以在下列範圍內之分批體積執行：約1ml至約20,000 l，或1ml至約15,000 l，或1ml至約12,000 l，或約1ml至約10,000 l，或1ml至約6,000 l，或1ml至約3,000 l，或1ml至約1,000 l，或1ml至約100 l，例如約50ml至約8,000ml，或約100ml至約5,000ml，或約1,000ml至約3,000ml；或約1 l至約1,000 l；或約10 l至約500 l。
另外，可執行本發明之結晶方法以便達成下列其他結晶條件中之至少一者：a)執行培養歷時約1小時至約250天，或1天至250天或13天至250天，例如約1天至約30天或約2天至10天；b)於約0℃與約50℃、例如約4℃與約37℃或約15℃與約25℃之間的溫度下執行培養；c)結晶混合物中之抗體濃度(亦即蛋白質濃度)在約0.5mg/ml至280mg/ml、或約1mg/ml至200mg/ml、或1mg/ml至100mg/ml(例如1.5mg/ml至20mg/ml)之範圍內，尤其在約2mg/ml至15mg/ml或5mg/ml至10mg/ml之範圍內。該蛋白質濃度可根據蛋白質測定之標準程序來測定。
在一較佳實施例中，例如以聚乙二醇作為結晶試劑，執行結晶方法，以便於約20℃之溫度下且於約5mg/ml至10mg/ml之抗體濃度下執行培養歷時約13至60天。
根據特別較佳之方法，於結晶混合物之下列條件下執行結晶：
如上文概述之結晶混合物通常係藉由將結晶試劑溶液或固體添加至蛋白質溶液中來獲得。兩種溶液可經緩衝，但並非必須經緩衝。原始結晶溶液中之結晶試劑濃度及緩衝劑莫耳濃度通常高於結晶混合物中的濃度，此係因為該結晶混合物經蛋白質溶液"稀釋"。
在另一實施例中，本發明之結晶方法可進一步包含乾燥所獲得之晶體之步驟。合適之乾燥方法包含蒸發乾燥、噴霧乾燥、冷凍乾燥、真空乾燥、流化床乾燥、噴霧冷凍乾燥、近臨界乾燥、超臨界乾燥及氮氣乾燥。
在另一實施例中，本發明之結晶方法可進一步包含例如藉由離心、透濾、超濾或其他常用緩衝劑交換技術將結晶母液與不同液體或緩衝緩衝劑交換之步驟，該不同液體或緩衝緩衝劑例如含有不同於用於結晶之聚伸烷基多元醇且莫耳質量在約300道爾頓至8,000道爾頓範圍內之聚伸烷基多元醇或該等多元醇之混合物的液體或緩衝劑。該不同液體或緩衝劑亦可稱為"人造母液"，其不同於晶體之"天然"結晶母液且防止所形成之晶體溶解。
本發明亦係關於一種可藉由如上文所定義之結晶方法獲得的抗hIL-12抗體之晶體，且大致係關於抗hIL-12抗體之晶體。
本發明之晶體可具有不同形狀。該形狀通常被指為"劍狀"。詳言之，該術語亦包含"片狀"、"針狀"或"針簇狀"(海膽狀)。舉例而言，本發明之晶體的特徵可為最大長度(l)為約2-500μm或約100-300μm且長度/直徑(l/d)比率為約1至100之針狀形態。該等針狀晶體之高度大致在直徑之尺寸內。
本發明之片狀物可具有下列尺寸：最大長度(l)為約2-500μm或約100-300μm且長度/直徑(l/d)比率為約1至100。該等片狀物之高度顯著小於直徑。
本發明之針簇可具有下列尺寸。最大長度l為約2-200μm或約10-100μm且長度/直徑(l/d)比率為約1至3。
晶體可自多株抗體或較佳自單株抗體獲得。
詳言之，抗體係選自由非嵌合或嵌合抗體、人類化抗體、非糖基化抗體、人類抗體及小鼠抗體組成之群。尤其，待結晶之抗體為視情況進一步經處理以改良抗原結合及/或功效之非嵌合、人類抗體。
較佳地，晶體係自IgG抗體(諸如IgG1、IgG2、IgG3或IgG4抗體)獲得。尤其，抗體為IgG1群之完整抗人類IL-12抗體。
在一較佳實施例中，晶體係由自hIL-12解離之經分離人類抗體製備，其中皆藉由表面電漿共振所測定，Kd為1×10-10M或更小且koff速率常數為1×10-3 s-1或更小。
尤其，晶體可自具有包含SEQ ID NO：2之胺基酸序列之輕鏈可變區(LCVR)及包含SEQ ID NO：1之胺基酸序列之重鏈可變區(HCVR)的經分離之人類抗體製備。
較佳人類抗體例如描述於美國專利第6,914,128號中。
最佳為自抗體ABT-874製備之晶體。
在另一實施例中，本發明係關於一種固體、液體或半固體醫藥組合物，其包含：(a)如上文所定義之抗hIL-12抗體之晶體及(b)至少 一種穩定維持該等抗體晶體之醫藥學上可接受之賦形劑。
本發明之另一態樣係關於一種固體、液體或半固體醫藥組合物，其包含：(a)如本文所定義之抗hIL-12抗體之晶體及(b)至少一種囊封或包埋該等抗體晶體之醫藥學上可接受之賦形劑。該組合物可進一步包含(c)至少一種穩定維持該等抗體晶體之醫藥學上可接受之賦形劑。此外，囊封及包埋可一起實施。
詳言之，本發明之組合物可具有高於約1mg/ml、尤其約200mg/ml或更大(例如約200mg/ml至約600mg/ml或約300mg/ml至約500mg/ml)之抗體晶體濃度。
該等賦形劑可包含至少一種聚合、(視情況)生物可降解之載劑或至少一種油類或脂質載劑。
該聚合載劑可為一或多種選自由下列各物組成之群的聚合物：聚(丙烯酸)、聚(氰基丙烯酸酯)、聚(胺基酸)、聚(酸酐)、聚(縮肽)、聚(酯)、聚(乳酸)、聚(乳酸-共-乙醇酸)或PLGA、聚(β-羥基丁酸酯)、聚(己內酯)、聚(二氧雜環己酮)；聚(乙二醇)、聚(羥基丙基)甲基丙烯醯胺、聚(有機)磷氮烯、聚(原酸酯)、聚(乙烯醇)、聚(乙烯吡咯啶酮)、順丁烯二酸酐烷基乙烯基醚共聚物、泊洛尼克多元醇(pluronic polyol)、白蛋白、海藻酸鹽、纖維素及纖維素衍生物、膠原蛋白、纖維蛋白、明膠、玻糖醛酸、寡醣、甘胺基聚糖、硫酸化多醣、其摻合物及共聚物。
該油類(或油性液體)可為一或多種選自由下列各物組成之群的油類(或油性液體)：油質杏仁油、玉米油、棉籽油、油酸乙酯、豆蔻酸異丙酯、棕櫚酸異丙酯、礦物油、輕質礦物油、辛基十二烷醇、橄欖油、花生油、桃仁油、芝麻油、豆油、角鯊烷、液體三甘油酯、液體蠟及高級醇。
該脂質載劑可為一或多種選自由下列各物組成之群的脂質：脂 肪酸及脂肪酸鹽、脂肪醇、脂肪胺、脂肪酸之單甘油酯、二甘油酯及三甘油酯、磷脂、糖脂、固醇及蠟以及相關類似物質。蠟進一步係以天然及合成產物分類。天然物質包括自植物、動物或礦物來源獲得之蠟，諸如蜂蠟、巴西棕櫚蠟或褐煤蠟。氯化萘及烯系聚合物為合成蠟產物之實例。
在一較佳實施例中，組合物為包含如上文所定義之抗hIL-12抗體晶體且具有在約10mg/ml至約400mg/ml或約50mg/ml至約300mg/ml之範圍內之抗體晶體濃度的可注射組合物。
在另一態樣中，本發明係關於一種晶體漿料，其包含如上文所定義之具有高於約100mg/ml(例如約150mg/ml至約600mg/ml或約200至約400mg/ml)之抗體晶體濃度的抗hIL-12抗體晶體。
本發明亦係關於一種用於治療哺乳動物之方法，其包含向該哺乳動物投與有效量之如上文所定義之完整抗hIL-12抗體晶體或有效量之如上文所定義之組合物的步驟。較佳地，該組合物係藉由非經腸途徑、口服途徑或藉由注射來投與。
此外，本發明係關於一種治療個體之hIL-12相關病症之方法，其包含投與治療有效量之如上文所定義的抗體晶體。
詳言之，hIL-12相關病症係選自：類風濕性關節炎、骨關節炎、青少年慢性關節炎、萊姆關節炎(Lyme arthritis)、牛皮癬性關節炎、反應性關節炎、脊柱關節病、全身性紅斑狼瘡、克羅恩氏病(Crohn's diseas)、潰瘍性結腸炎、炎性腸病、胰島素依賴性糖尿病、甲狀腺炎、哮喘、過敏性疾病、牛皮癬、皮炎硬皮病、異位性皮炎、移植物抗宿主疾病、器官移植排斥反應、與器官移植相關之急性或慢性免疫疾病、類肉瘤病、動脈粥樣硬化、彌漫性血管內凝血、川崎氏病(Kawasaki's disease)、格雷氏病(Grave's disease)、腎病症候群、慢性疲勞症候群、韋格納肉牙腫病(Wegener's granulomatosis)、亨偌-絲奇恩賴紫癜(Henoch-Schoenlein purpurea)、顯微腎血管炎、慢性活動性肝炎、葡萄膜炎、敗血性休克、中毒性休克症候群、敗血症候群、惡病質、傳染性疾病、寄生蟲疾病、後天免疫缺乏症候群、急性橫貫性脊髓炎、亨廷頓氏舞蹈病(Huntington's chorea)、帕金森氏病(Parkinson's disease)、阿茲海默氏病(Alzheimer's disease)、中風、原發性膽汁性肝硬化症、溶血性貧血、惡性腫瘤、心臟衰竭、心肌梗塞、艾迪森氏病(Addison's disease)、散發病(sporadic)、I型多腺缺乏症及II型多腺缺乏症、施密特氏症候群(Schmidt's syndrome)、成人(急性)呼吸窘迫症候群、禿髮症、斑禿、血清陰性關節病、關節病、萊特爾氏病(Reiter's disease)、牛皮癬性關節病、潰瘍性結腸炎性關節病、腸病性滑膜炎、衣原體疾病、耶氏菌(yersinia)及沙門氏菌(salmonella)相關關節病、脊柱關節病、動脈粥樣化病/動脈硬化症、異位性過敏、自體免疫性大疱病、尋常天疱瘡、落葉狀天疱瘡、類天疱瘡、線性IgA疾病、自體免疫性溶血性貧血、庫姆陽性溶血性貧血(Coombs positive haemolytic anaemia)、後天性惡性貧血、青少年惡性貧血、肌痛性腦炎/貴族自由疾病(Royal Free Disease)、慢性皮膚黏膜念珠菌病、巨細胞性動脈炎、原發性硬化性肝炎、隱原性自體免疫性肝炎、後天性免疫缺陷疾病症候群(Acquired Immunodeficiency Disease Syndrome)、後天性免疫缺陷相關疾病(Acquired Immunodeficiency Related Diseases)、C型肝炎、普通可變性免疫缺陷(普通可變性低γ-球蛋白血症)、擴張型心肌病、女性不孕症、卵巢衰竭、卵巢早衰、纖維化肺病、隱原性纖維化肺泡炎、炎症後間質性肺病、間質性肺炎、結締組織疾病相關間質性肺病、混合型結締組織疾病相關肺病、全身性硬化症相關間質性肺病、類風濕性關節炎相關間質性肺病、全身性紅斑狼瘡相關肺病、皮肌炎/多肌炎相關肺病、休格連氏病(Sjodgren's disease)相關肺病、強直性脊椎炎相 關肺病、血管炎彌漫性肺病、血鐵質沈著症相關肺病、藥物誘發間質性肺病、放射性纖維化、阻塞性細支氣管炎、慢性嗜酸性肺炎、淋巴球性浸潤性肺病、感染後間質性肺病、痛風性關節炎、自體免疫性肝炎、1型自體免疫性肝炎(典型自體免疫性或狼瘡樣肝炎)、2型自體免疫性肝炎(抗LKM抗體肝炎)、自體免疫介導性低血糖症、B型抗胰島素症伴有黑棘皮病、甲狀旁腺機能減退、與器官移植相關之急性免疫疾病、與器官移植相關之慢性免疫疾病、骨關節病、原發性硬化性膽管炎、特發性白血球減少症、自體免疫性嗜中性球減少症、腎病NOS、腎小球腎炎、顯微腎血管炎、萊姆病(lyme disease)、盤狀紅斑狼瘡、男性不育症特發性或NOS、精子自體免疫疾病、多發性硬化症(所有亞型)、胰島素依賴性糖尿病、交感性眼炎、結締組織疾病繼發性肺動脈高血壓、古德帕斯徹氏症候群(Goodpasture's syndrome)、結節性多動脈炎之肺部表現、急性風濕熱、類風濕性脊椎炎、史提爾氏病(Still's disease)、全身性硬化症、高安氏病(Takayasu's disease)/動脈炎、自體免疫性血小板減少症、特發性血小板減少症、自體免疫性甲狀腺病、甲狀腺機能亢進、甲狀腺腫性自體免疫性甲狀腺功能低下(橋本氏病(Hashimoto's disease))、萎縮性自體免疫性甲狀腺功能低下、原發性黏液水腫、晶體原性葡萄膜炎、原發性血管炎及白癜風。本發明之人類抗體及抗體部分可用於治療自體免疫性疾病，尤其與炎症相關之彼等者，包括類風濕性脊椎炎、過敏、自體免疫性糖尿病、自體免疫性葡萄膜炎。
此外，本發明係關於如上文所定義之完整抗hIL-12抗體晶體用於製備用以治療如上文所定義之hIL-12相關疾病之醫藥組合物的用途。
最後，本發明提供用於醫學之如上文所定義之抗hIL-12抗體晶體。
圖1展示ABT-874晶體結晶時之光學顯微照片。
圖2至圖5展示ABT-874晶體在不同放大倍率下之SEM；圖2：1,250×；圖3：10,000×；圖4：3,227×；圖5：15,000×。
圖6展示關於ABT-874毛細管等電聚焦(cIEF)實驗之結果；A)ABT-874晶體緩衝劑及pI 8.4、8.5、10.1及10.4之pI標記；B)ABT-874晶體；相同pI標記及pI=9.29處之特徵ABT-874信號；C)參考標準；相同pI標記及pI=9.29處之特徵ABT-874信號。
圖7展示根據實例28(伴以攪拌之結晶)獲得之晶體(針簇狀)之光學顯微圖。
圖8展示根據實例32(無攪拌之結晶)獲得之晶體(針狀)之光學顯微圖。
圖9展示根據實例33(無攪拌之結晶)獲得之晶體(針狀)之光學顯微圖。
圖10展示根據實例34b(無攪拌之結晶)獲得之晶體(針狀)之光學顯微圖。
圖11展示ABT-874樣品之二階導數IR光譜。圖11A展示用BioATR單元記錄之晶體懸浮液之光譜。圖11B展示用AquaSpec單元記錄之再溶解晶體之光譜。實線表示結晶性ABT-874之樣品，虛線表示液體標準物。為了更好的說明，插入樣品與標準物之間的偏移。
圖12展示於25℃下儲存3個月之ABT-874樣品(50mg/mL於22% PEG 4,000緩衝劑、0.1M乙酸鈉緩衝劑(pH 5.5)中之結晶性蛋白質)的二階導數IR光譜。圖11A展示以BioATR單元記錄之晶體懸浮液之光譜。圖11B展示用AquaSpec單元記錄之再溶解晶體之光譜。為了更好的說明，插入樣品與標準物之間的偏移。
圖13：ABT-874在有及無接種(例如，相對於來自批料之ABT-874質量而言使用3.25%結晶蛋白質作為接種物質)之情況下的40mL分批 結晶。R2分別對於未接種而言為0.9711，且對於接種批料而言為0.9763。
在連同隨附圖式閱讀時，根據以下對較佳實施例之描述，將對本發明之前述及其他目標、特徵及優點以及本發明本身有更充分的理解。
A. 定義
"分批結晶方法"包含將包含結晶試劑(較佳為溶解形式)之結晶溶液添加至待結晶之抗體溶液中的步驟。
"微量結晶方法"可例如為基於氣相擴散且包含下列步驟：將微升範圍內之少量抗體溶液與含有結晶試劑之儲集緩衝劑(reservoir buffer)混合；將混合物液滴置於一鄰近於儲集緩衝劑之等分試樣的密封容器中；允許藉由氣相擴散使該液滴與該儲集層之間交換溶劑，在此期間液滴之溶劑含量發生變化且若達到合適之結晶條件，則可觀察到結晶。
"結晶試劑"(例如聚乙二醇)有利於待結晶之抗體之晶體形成。
"結晶溶液"含有溶解形式之結晶試劑。較佳地，該溶液為水性系統，亦即其液體組分主要由水組成。舉例而言，80wt.-%至100wt.-%或95wt.-%至100wt.-%或98wt.-%至100wt.-%可為水。
抗體"晶體"為蛋白質物質之固態之一種形式，其不同於第二固體形式，亦即非晶形狀態，該非晶形狀態基本上以無組織之異質固體形式存在。晶體具有規則三維結構，通常稱為晶格。抗體晶體包含抗體分子之規則三維陣列(參見Giege,R.及Ducruix,A.Barrett,Crystallization of Nucleic Acids and Proteins,a Practical Approach，第2版，第1-16頁，Oxford University Press,New York(1999))。
如根據本發明結晶之"完整"抗hIL-12抗體係能夠在活體外及/或活 體內識別其抗原人類IL-12且與後者結合之功能抗體。該抗體可引發與抗體與其抗原結合相關的患者之後續免疫系統反應，尤其直接細胞毒性、補體依賴性細胞毒性(CDC)及抗體依賴性細胞毒性(ADCC)。抗體分子具有由兩條互相共價結合之一致重鏈(MW各約50kDa)及兩條各與重鏈中之一者共價結合之一致輕鏈(MW各約25kDa)構成的結構。四條鏈排列成典型"Y"基元。各重鏈由重鏈可變區(本文中縮寫為HCVR或VH)及重鏈恆定區構成。該重鏈恆定區由三個域(CH1、CH2及CH3)構成。各輕鏈由輕鏈可變區(本文中縮寫為LCVR或VL)及輕鏈恆定區構成。該輕鏈恆定區由一個域CL構成。VH及VL區可進一步再分成稱為互補判定區(CDR)之高變區，其間散布有較為保守、稱為構架區(FR)之區域。各VH及VL由按以下順序自胺基末端至羧基末端排列之三個CDR及四個FR構成：FR1、CDR1、FR2、CDR2、FR3、CDR3、FR4。完整抗體分子具有兩個抗原結合位點，亦即為"二價"。該兩個抗原結合位點對於一個hIL-12抗原具特異性，亦即抗體具"單特異性"。
"單株抗體"為源自B淋巴細胞(B細胞)之單一純系且識別相同抗原決定子的抗體。完整單株抗體為具有上文所提及之包括兩條完整重鏈及兩條完整輕鏈之典型分子結構的彼等者。單株抗體常規係藉由將產生抗體之B細胞與永生骨髓瘤細胞融合以產生B細胞融合瘤而產生，其中該等B細胞融合瘤在細胞培養物中不斷地產生單株抗體。可利用其他產生方法，例如使用噬菌體呈現技術使單株抗體表現於細菌、酵母、昆蟲或哺乳動物細胞培養物中；在諸如牛、山羊、豬、兔、小雞之遺傳改良動物中或在已經改良而含有且表現整個人類B細胞基因組之轉殖基因小鼠中活體內產生；或在諸如煙草及玉米之遺傳改良植物中產生。所有該等來源之抗hIL-12抗體可根據本發明結晶。
根據本發明待結晶之單株抗體包括"嵌合"抗hIL-12抗體，其中重 鏈及/或輕鏈之一部分與源自特定物種或屬於特定抗體種類或亞類之抗體中的相應序列一致或同源，而該(等)鏈之其餘部分與源自另一物質或屬於另一抗體種類或亞類之抗體中的相應序列一致或同源。舉例而言，小鼠/人類嵌合體含有鼠類抗體之可變抗原結合部分及源自人類抗體之恆定部分。
非人類(例如鼠類)抗hIL-12抗體之"人類化形式"亦由本發明涵蓋。人類化抗體為含有源自非人類免疫球蛋白之最小序列的嵌合抗體。多半而言，人類化抗體為來自人類免疫球蛋白之一或多個互補判定區(CDR)或高變環(HVL)之殘基由來自非人類物種(諸如小鼠、大鼠、兔或非人類靈長類)之CDR或HVL且具有所需功能性之殘基置換的人類免疫球蛋白。人類免疫球蛋白之構架區(FR)殘基可由相應非人類殘基置換以改良抗原結合親和力。此外，人類化抗體可包含不存在於相應人類或非人類抗體部分中之殘基。此等改良可為進一步改良抗體功效所必需的。
"人類抗體"或"完全人類抗體"係具有對應於由人類產生或重組產生之抗體之胺基酸序列的胺基酸序列之抗體。如本文所使用，術語"人類抗體"意欲包括具有源自人類生殖系免疫球蛋白序列之可變區及恆定區的抗體。本發明之人類抗體可包括不由人類生殖系免疫球蛋白序列編碼之胺基酸殘基(例如，藉由活體外隨機或位點特異性突變誘發或藉由活體內體細胞突變引入之突變體)，例如在CDR且尤其CDR3中。然而，如本文所使用，術語"人類抗體"不欲包括源自另一哺乳動物物種(諸如小鼠)之生殖系之CDR序列已嫁接於人類構架序列上的抗體。
如本文所使用，術語"重組人類抗體"意欲包括藉由重組方式製備、表現、形成或分離之所有人類抗體，諸如使用轉染至宿主細胞中之重組表現載體表現的抗體、自重組性組合人類抗體庫分離之抗體、 自人類免疫球蛋白基因轉殖動物(例如小鼠)分離之抗體(參見例如，Taylor,L.D.等人(1992)Nucl.Acids Res.20：6287-6295)或藉由包含將人類免疫球蛋白基因序列與其他DNA序列拼接之任何其他方式製備、表現、形成或分離之抗體。該等重組人類抗體具有源自人類生殖系免疫球蛋白序列之可變區及恆定區。然而，在特定實施例中，使該等重組人類抗體經受活體外突變誘發(或，當使用人類Ig序列轉殖動物時，經受活體內體細胞突變誘發)且因此，重組抗體之VH及VL區之胺基酸序列為雖然源自人類生殖系VH及VL序列且與其有關但可能在活體內不天然存在於人類抗體生殖系譜中之序列。
如本文所使用，"中和抗體"(或"中和hIL-12活性之抗體")意欲指與hIL-12結合導致抑制hIL-12之生物活性之抗體。對hIL-12之生物活性之此抑制作用可在活體外或活體內藉由量測hIL-12生物活性之一或多個指標來評估，諸如hIL-12誘發之細胞增殖及hIL-12與hIL-12受體之結合或hIL-12誘發之活體內白血球減少。
hIL-12生物活性之此等指標可藉由此項技術中已知之若干標準活體外或活體內檢定中之一或多者來評估。較佳地，抗體中和hIL-12活性之能力係藉由植物性血球凝集素胚細胞及鼠類2D6細胞中hIL-12誘發之細胞增殖之抑制來評估。
"親和力成熟"抗hIL-12抗體為在一或多個高變區中具有一或多個變化之抗體，此導致該抗體與親本抗體相比對於抗原之親和力得到改良。親和力成熟抗體對於靶抗原將具有奈莫耳或甚至皮莫耳之親和力值。親和力成熟抗體係藉由此項技術中已知之程序產生。Marks等人(1992)Bio/Technology 10：779-783描述藉由VH及VL域改組達成之親和力成熟。CDR及/或構架殘基之隨機突變誘發係由下列文獻描述：Barbas等人(1994)Proc.Nat.Acad.Sci.USA 91：3809-3813(1994)；Scier等人(1995)Gene 169：147-155；Yelton等人(1995)J.Immunol. 155：1994-2004；Jackson等人(1995)J.Immunol.154(7)：3310-9；及Hawkins等人(1992)J.Mol Biol.226：889-896。
如本文所使用，"經分離之抗體"意欲指大體上不含具有不同抗原特異性之其他抗體的抗體(例如，特異性結合hIL-12之經分離之抗體大體上不含特異性結合除hIL-12外之抗原的抗體)。然而，特異性結合hIL-12之經分離之抗體可具有與其他抗原之交叉反應性，諸如來自其他物種之hIL-12分子。此外，經分離之抗體可大體上不含其他細胞物質及/或化學品。
如本文所使用，短語"人類介白素12"(本文中縮寫為hIL-12或IL-12)包括主要由巨噬細胞及樹突狀細胞分泌之人類細胞因子。該術語包括異質二聚蛋白質，其包含兩者以雙硫橋連接在一起之35kD亞單位(p35)及40kD亞單位(p40)。該異質二聚蛋白質被稱為"p70亞單位"。人類IL-12之結構進一步被描述於(例如)下列文獻中：Kobayashi，等人(1989)J.Exp Med.170：827-845；Seder，等人(1993)Proc.Natl.Acad.Sci.90：10188-10192；Ling，等人(1995)J.Exp Med.154：116-127；Podlaski，等人(1992)Arch.Biochem.Biophys.294：230-237。術語人類IL-12意欲包括重組人類IL-12(rh IL-12)，其可藉由標準重組表現方法製備。
如本文所使用，術語"koff"意欲指抗體自抗體/抗原複合物解離之解離速率常數。
如本文所使用，術語"Kd"意欲指特定抗體-抗原相互作用之解離常數。
如根據本發明結晶之特定"親本"抗hIL-12抗體之"功能等效物"為顯示相同抗原特異性但然而就"親本"抗體之分子組成而言在胺基酸含量或糖基化程度方面不同的物質。該等差異可能僅使得結晶條件不偏離本文所揭示之參數範圍。
抗體晶體之"囊封"係指所合併之晶體個別地塗有至少一層塗覆物質之調配。在一較佳實施例中，該等經塗覆之晶體可具有持續溶解速率。
抗體晶體之"包埋"係指可能經囊封或未經囊封之晶體以分散方式併入固體、液體或半固體載劑中的調配。該等經包埋之結晶抗體分子可以受控、持續方式自該載劑釋放或溶解。
B. 結晶方法
本發明之結晶方法原則上適用於任何抗hIL-12抗體。該抗體可為多株抗體或較佳為單株抗體。抗體可為嵌合抗體、人類化抗體、人類抗體或非人類(例如小鼠)抗體，各呈糖基化或非糖基化形式。尤其，該方法適用於ABT-874及其功能等效物。
較佳地，抗hIL-12抗體為IgG抗體，尤其IgG1群之抗人類IL-12抗體。
除非另有說明，否則本發明之結晶方法使用此項技術中熟知之技術設備、化學品及方法。然而，如上文所闡明，本發明係基於以下令人驚訝的發現：特定結晶條件之選擇、尤其特定結晶試劑之選擇視情況進一步與特定pH值條件及/或相應試劑(緩衝劑、抗體、結晶試劑)之濃度範圍組合，首次允許可再現地且大規模地製備針對hIL-12之抗體(尤其非嵌合人類抗體)之穩定晶體，其可進一步經處理以形成優良、高度有利之醫藥組合物之活性成份。
用於執行結晶方法之起始物質通常包含待結晶之抗體之濃縮溶液。蛋白質濃度可(例如)在約5mg/ml至約300mg/ml、較佳約5mg/ml至約200mg/ml、較佳約5mg/ml至約75mg/ml之範圍內。該溶液可含有使溶解抗體穩定之添加劑，且預先將添加劑移除可為可取的。此可藉由執行緩衝劑交換步驟來達成。
較佳地，用於執行結晶之起始物質含有於水性溶液中具有經調 整在約3.2至約8.2、或約4.0至約8.0、尤其約4.5至約6.5、較佳約5.0至約5.5之範圍內之pH值的抗體。pH值可經由以約1mM至約500mM、尤其約1mM至約100mM或1mM至約10mM之最終濃度應用之合適緩衝劑來調整。溶液可含有添加劑，例如比例為以溶液之總重量計約0.01至約15、或約0.1至約5、或約0.1至約2wt.-%，諸如鹽、糖、糖醇及界面活性劑，以便進一步使溶液穩定。賦形劑較佳係選自常規應用於醫藥製劑中之生理學上可接受之化合物。作為非限制性實例，賦形劑包括鹽，諸如NaCl；界面活性劑，諸如聚山梨醇酯80(Tween 80)、聚山梨醇酯20(Tween 20)；糖，諸如蔗糖、海藻糖；糖醇，諸如甘露糖醇、山梨糖醇；及緩衝劑，諸如基於磷酸鹽之緩衝系統、磷酸氫鈉及磷酸氫鉀緩衝劑(如上文所定義)、乙酸鹽緩衝劑、磷酸鹽緩衝劑、檸檬酸鹽緩衝劑、TRIS緩衝劑、順丁烯二酸鹽緩衝劑或琥珀酸鹽緩衝劑、組胺酸緩衝劑；胺基酸，諸如組胺酸、精胺酸及甘胺酸。
緩衝劑交換可經由常規方法執行，例如透析、透濾或超濾。
用作起始物質之水性溶液之初始蛋白質濃度應在約0.5mg/ml至約200mg/ml或約1mg/ml至約50mg/ml之範圍內。
視所欲之最終批量大小(其可在1ml至20,000公升之範圍內)而定，將初始體積之水性抗體溶液置於由惰性材料(例如玻璃、聚合物或金屬)製成之適當容器(例如器皿、瓶子或貯槽)中。該水性溶液之初始體積可對應於最終批量大小之約30至80%、通常約50%。
必要時，在溶液已填充至容器中之後，使溶液達到標準化條件。特別言之，將溫度調節在約4℃與約37℃之範圍內。
接著含有適當濃度結晶劑之結晶溶液，視情況以抗體溶液相同之方式預調節，添加至抗體溶液中。
結晶溶液之添加連續或間斷地執行，視情況於緩和攪拌下以有助於混合兩種液體。較佳地，該添加係於攪拌下提供蛋白質溶液及以 控制方式添加結晶溶液(或固體形式之試劑)之條件下執行。
抗體晶體之形成係藉由應用如上文所定義之聚伸烷基多元醇，尤其聚伸烷二醇，且較佳聚乙二醇(PEG)，或至少兩種如上文所定義之不同聚伸烷二醇之混合物作為結晶劑來引發。結晶溶液含有該劑之濃度足以提供聚伸烷基多元醇在結晶混合物中之最終濃度在約5%至30%(w/v)之範圍內。
較佳地，結晶溶液另外含有酸性緩衝劑，例如不同於抗體溶液之緩衝劑，於適合允許調節結晶混合物之pH在約4至6之範圍內的濃度。
在完成結晶溶液之添加後，所獲得之混合物可進一步培育約1小時至約250天以獲得最高產率之抗體晶體。適當時，可以例如攪拌、輕微攪拌、滾動或者移動混合物。
最後，所獲得之晶體可藉由已知方法分離，例如過濾或離心，例如於約200-20,000rpm、較佳500-2,000rpm於室溫或4℃離心。剩餘母液可丟棄或進一步處理。
必要時，所分離之晶體可以洗滌且隨後乾燥，或母液可用適合懸浮抗體之儲存及/或最終使用的不同溶劑系統交換。
如上文已闡明，根據本發明形成之抗體晶體的形狀可不同。對於治療性投藥而言，晶體之尺寸將視投藥途徑而不同，例如對於皮下投藥而言晶體之尺寸可大於靜脈內投藥。
如先前對於蛋白質晶體及低分子量有機及無機分子之晶體所描述，晶體形狀可藉由將特定額外添加劑添加至結晶混合物中來改變。
必要時，可驗證晶體事實上為抗體之晶體。可用顯微鏡分析抗體之晶體的雙折射。一般而言，晶體除非具有立方內部對稱性，否則將使偏振光之偏振平面旋轉。在另一方法中，可將晶體分離、洗滌、再溶解且藉由SDS-PAGE分析，並視情況用抗Fc受體抗體染色。視情 況，亦可利用標準檢定測試再溶解抗體與其hIL-12之結合。
根據本發明獲得之晶體亦可互相交聯。該交聯可增強晶體之穩定性。使晶體交聯之方法例如描述於美國專利第5,849,296號中。可使用諸如戊二醛之雙官能試劑使晶體交聯。交聯後，可將晶體冷凍乾燥且儲存以例如用於診斷性或治療性應用。
在一些情況下，可能需要使晶體乾燥。晶體可經由如氮氣之惰性氣體、真空烘箱乾燥、冷凍乾燥、蒸發、盤式乾燥、流化床乾燥、噴霧乾燥、真空乾燥或滾筒乾燥來乾燥。合適之方法為眾所周知。
根據本發明形成之晶體可維持於原始結晶溶液中，或其可用如惰性載劑或成份之其他物質洗滌並組合以形成包含本發明之晶體之組合物或調配物。該等組合物或調配物可例如用於治療性及診斷性應用。
一較佳實施例為將合適之載劑或成份與本發明之晶體以調配物之晶體為賦形劑所包埋或囊封之方式組合。合適之載劑可取自下列各物之非限制性群：聚(丙烯酸)、聚(氰基丙烯酸酯)、聚(胺基酸)、聚(酸酐)、聚(縮肽)、聚(酯)、聚(乳酸)、聚(乳酸-共-乙醇酸)或PLGA、聚(β-羥基丁酸酯)、聚(己內酯)、聚(二氧雜環己酮)；聚(乙二醇)、聚(羥基丙基)甲基丙烯醯胺、聚(有機)磷氮烯、聚(原酸酯)、聚(乙烯醇)、聚(乙烯吡咯啶酮)、順丁烯二酸酐烷基乙烯基醚共聚物、泊洛尼克多元醇、白蛋白、海藻酸鹽、纖維素及纖維素衍生物、膠原蛋白、纖維蛋白、明膠、玻糖醛酸、寡醣、甘胺基聚糖、硫酸化多醣、其摻合物及共聚物、SAIB、脂肪酸及脂肪酸鹽、脂肪醇、脂肪胺、脂肪酸之單甘油酯、二甘油酯及三甘油酯、磷脂、糖脂、固醇及蠟以及相關類似物質。蠟進一步係以天然及合成產物分類。天然物質包括自植物、動物或礦物來源獲得之蠟，諸如蜂蠟、巴西棕櫚蠟或褐煤蠟。氯化萘及烯系聚合物為合成蠟產物之實例。
C. 組合物
本發明之另一態樣係關於包含抗hIL-12抗體晶體與至少一種載劑/賦形劑之組合之組合物/調配物。
該調配物可為固體、半固體或液體。
本發明之調配物係藉由將具有必需純度之抗體與生理學上可接受之添加劑(如載劑、賦形劑及/或穩定劑)以懸浮液之形式混合(參見例如Remington's Pharmaceutical Sciences，第16版，Osol,A.編(1980))且將之冷凍乾燥或以另一方式乾燥而以適合於儲存及/或使用之形式來製備。視情況亦可合併其他活性成份，例如不同抗體、生物分子、化學或酶促合成低分子量分子。
可接受之添加劑在所用之劑量及濃度下對接受者無毒。其非限制性實例包括：-酸化劑，如乙酸、檸檬酸、反丁烯二酸、鹽酸、蘋果酸、硝酸、磷酸、稀磷酸、硫酸、酒石酸；-氣溶膠推進劑，如丁烷、二氯二氟甲烷、二氯四氟乙烷、異丁烷、丙烷、三氯單氟甲烷；-排氣，如二氧化碳、氮氣；-醇變性劑，如甲基異丁基酮、八乙酸蔗糖酯；-鹼化劑，如氨溶液、碳酸銨、二乙醇胺、二異丙醇胺、氫氧化鉀、碳酸氫鈉、硼酸鈉、碳酸鈉、氫氧化鈉、三乙醇胺；-消泡劑，如二甲聚矽氧烷、聚二甲矽氧烷；-抗菌防腐劑，如氯化苯甲烴銨、氯化苯甲烴銨溶液、氯苄硫銨、苯甲酸、苄醇、對羥基苯甲酸丁酯、氯化十六烷基吡錠、氯丁醇、氯甲酚、甲酚、脫氫乙酸、對羥基苯甲酸乙酯、對羥基苯甲酸甲酯、對羥基苯甲酸甲酯鈉、苯酚、苯乙醇、乙酸苯汞、硝酸苯汞、苯甲酸鉀、山梨酸鉀、對羥基苯甲酸丙酯、對羥基苯甲酸丙酯鈉、苯甲 酸鈉、脫氫乙酸鈉、丙酸鈉、山梨酸、硫柳汞、瑞香草酚；-抗氧化劑，如抗壞血酸、棕櫚酸抗壞血酯、丁基化羥基大茴香醚、丁基化羥基甲苯、次磷酸、硫代甘油(monothioglycerol)、沒食子酸丙酯、甲醛合次硫酸氫鈉、偏亞硫酸氫鈉、硫代硫酸鈉、二氧化硫、生育酚、生育酚賦形劑；-緩衝劑，如乙酸、碳酸銨、磷酸銨、硼酸、檸檬酸、乳酸、磷酸、檸檬酸鉀、偏磷酸鉀、磷酸二氫鉀、乙酸鈉、檸檬酸鈉、乳酸鈉溶液、磷酸氫二鈉、磷酸二氫鈉、組胺酸；-螯合劑，如依地酸二鈉、乙二胺四乙酸及鹽、依地酸；-塗覆劑，如羧甲基纖維素鈉、乙酸纖維素、酞酸乙酸纖維素、乙基纖維素、明膠、藥物糖衣、羥丙基纖維素、羥丙基甲基纖維素、酞酸羥丙基甲基纖維素、甲基丙烯酸共聚物、甲基纖維素、聚乙二醇、聚乙酸乙烯酯鄰苯二甲酸酯、蟲膠、蔗糖、二氧化鈦、巴西棕櫚蠟、微晶蠟、玉米蛋白、聚胺基酸、如PLGA等之其他聚合物及SAIB；-著色劑，如氧化鐵；-錯合劑，如乙二胺四乙酸及鹽(EDTA)、依地酸、龍膽酸、乙醇醯胺、硫酸氧基喹啉；-乾燥劑，如氯化鈣、硫酸鈣、二氧化矽；-乳化劑及/或增溶劑，如阿拉伯膠、膽固醇、二乙醇胺(佐劑)、單硬脂酸甘油酯、羊毛脂醇、卵磷脂、單甘油酯及二甘油酯、單乙醇胺(佐劑)、油酸(佐劑)、油醇(穩定劑)、泊洛沙姆、聚氧乙烯50硬脂酸酯、聚烴氧35蓖麻油、聚烴氧40氫化蓖麻油、聚烴氧10油醚、聚烴氧20十六基十八基醚、聚烴氧40硬脂酸酯、聚山梨醇酯20、聚山梨酸酯40、聚山梨酸酯60、聚山梨醇酯80、丙二醇二乙酸酯、丙二醇單硬脂酸酯、月桂基硫酸鈉、硬脂酸鈉、脫水山梨糖醇單月桂酸酯、脫水 山梨糖醇單油酸酯、脫水山梨糖醇單棕櫚酸酯、脫水山梨糖醇單硬脂酸酯、硬脂酸、三乙醇胺、乳化蠟；-助濾劑，如粉末狀纖維素、純化矽質土；-香料及芳香劑，如大茴香腦、苯甲醛、乙基香蘭素、薄荷腦、水楊酸甲酯、麩胺酸單鈉、橙花油、胡椒薄荷、薄荷油、薄荷醑、玫瑰油、濃玫瑰水、瑞香草酚、吐魯香脂酊、香草、香草蘭酊、香蘭素；-助流劑及/或防結塊劑，如矽酸鈣、矽酸鎂、膠體二氧化矽、滑石粉；-保濕劑，如甘油、己二醇、丙二醇、山梨糖醇；-軟膏基質，如羊毛脂、無水羊毛脂、親水性軟膏、白色軟膏、黃色軟膏、聚乙二醇軟膏、石蠟油、親水性石蠟油、白色石蠟油、玫瑰水軟膏、角鯊烷；-增塑劑，如蓖麻油、羊毛脂、礦物油、石蠟油、甲酸苄酯、氯丁醇、鄰苯二甲酸二乙酯、山梨糖醇、二乙醯化單甘油酯、鄰苯二甲酸二乙酯、甘油、丙三醇、單乙醯化單甘油酯及二乙醯化單甘油酯、聚乙二醇、丙二醇、三乙酸甘油酯、檸檬酸三乙酯、乙醇；-多肽，如低分子量(小於約10個殘基)之多肽；-蛋白質，諸如血清白蛋白、明膠或免疫球蛋白；-聚合物膜，如乙酸纖維膜；-溶劑，如丙酮、醇、稀醇、水合戊烯、苯甲酸苄酯、丁醇、四氯化碳、氯仿、玉米油、棉籽油、乙酸乙酯、甘油、己二醇、異丙醇、甲醇、二氯甲烷、甲基異丁基酮、礦物油、花生油、聚乙二醇、碳酸丙二酯、丙二醇、芝麻油、注射用水、注射用無菌水、灌洗用無菌水、純水、液體三甘油酯、液體蠟、高級醇；-吸附劑，如粉末狀纖維素、炭、純化矽質土、二氧化碳吸附 劑、氫氧化鋇石灰、鹼石灰；-硬化劑，如氫化蓖麻油、十六醇十八醇混合物、十六烷醇、十六烷基酯蠟、硬脂、石蠟、聚乙烯賦形劑、硬脂醇、乳化蠟、白蠟、黃蠟；-栓劑基質，如可可脂、硬脂、聚乙二醇；-懸浮劑及/或黏度增加劑，如阿拉伯膠、瓊脂、海藻酸、單硬脂酸鋁、膨土、純化膨土、岩漿膨土、卡波姆(carbomer)934p、羧甲基纖維素鈣、羧甲基纖維素鈉、羧甲基纖維素鈉12、角叉菜膠、微晶及羧甲基纖維素鈉纖維素、糊精、明膠、瓜爾膠、羥乙基纖維素、羥丙基纖維素、羥丙基甲基纖維素、矽酸鎂鋁、甲基纖維素、果膠、聚氧化乙烯、聚乙烯醇、聚乙烯吡咯銅、丙二醇海藻酸酯、二氧化矽、膠體二氧化矽、海藻酸鈉、黃耆膠、三仙膠；-甜味劑，如阿斯巴甜糖、葡萄糖結合劑、右旋糖、賦形劑右旋糖、果糖、甘露糖醇、糖精、糖精鈣、糖精鈉、山梨糖醇、溶液狀山梨糖醇、蔗糖、可壓縮糖、糖粉、糖漿；-錠劑黏合劑，如阿拉伯膠、海藻酸、羧甲基纖維素鈉、微晶纖維素、糊精、乙基纖維素、明膠、液狀葡萄糖、瓜爾膠、羥丙基甲基纖維素、甲基纖維素、聚氧化乙烯、聚乙烯吡咯銅、預膠凝化澱粉、糖漿；-錠劑及/或膠囊稀釋劑，如碳酸鈣、磷酸氫二鈣、磷酸三鈣、硫酸鈣、微晶纖維素、粉末狀纖維素、葡萄糖結合劑、糊精、右旋糖賦形劑、果糖、高嶺土、乳糖、甘露糖醇、山梨糖醇、澱粉、預膠凝化澱粉、蔗糖、可壓縮糖、糖粉；-錠劑崩解劑，如海藻酸、微晶纖維素、交聯羧甲基纖維素鈉、交聯聚乙烯吡咯酮、泊拉可林鉀(polacrilin potassium)、羥基乙酸澱粉鈉、澱粉、預膠凝化澱粉； -錠劑及/或膠囊潤滑劑，如硬脂酸鈣、蘿酸甘油酯、硬脂酸鎂、輕質礦物油、聚乙二醇、硬脂醯反丁烯二酸鈉、硬脂酸、純化硬脂酸、滑石粉、氫化植物油、硬脂酸鋅；-滲透劑，如右旋糖、甘油、甘露糖醇、氯化鉀、氯化鈉；-媒劑：調味及/或甜味芳香酏劑、複方苯甲醛酏劑、等醇酏劑、薄荷水、山梨糖醇溶液、糖漿、吐魯香脂糖漿；-媒劑，如油質杏仁油、玉米油、棉籽油、油酸乙酯、十四烷酸異丙酯、棕櫚酸異丙酯、礦物油、輕質礦物油、十四烷醇、辛基十二烷醇、橄欖油、花生油、桃仁油、芝麻油、豆油、角鯊烷；固體載劑糖球；注射用無菌抑菌水、抑菌氯化鈉注射劑、液體三甘油酯、液體蠟、高級醇；-拒水劑，如環甲聚矽氧烷、二甲聚矽氧烷、聚二甲矽氧烷；-濕潤劑及/或增溶劑，如氯化苯甲烴銨、苄索氯銨、氯化十六烷基吡錠、多庫酯鈉(docusate sodium)、壬苯醇醚9、壬苯醇醚10、辛苯昔醇9、泊洛沙姆、聚烴氧35蓖麻油、聚烴氧40、氫化蓖麻油、聚烴氧50硬脂酸酯、聚烴氧10油醚、聚烴氧20、十六基十八基醚、聚烴氧40硬脂酸酯、聚山梨醇酯20、聚山梨酸酯40、聚山梨酸酯60、聚山梨醇酯80、月桂基硫酸鈉、脫水山梨糖醇單月桂酸酯、脫水山梨糖醇單油酸酯、脫水山梨糖醇單棕櫚酸酯、脫水山梨糖醇單硬脂酸酯及泰洛沙泊(tyloxapol)。
可將晶體與聚合載劑組合以提供穩定性及/或持續釋放。該等聚合物包括生物相容性及生物可降解聚合物。聚合載劑可為單一聚合物類型或其可由聚合物類型之混合物構成。聚合載劑之非限制性實例已在上文陳述。
較佳之成份或賦形劑之實例包括：-胺基酸之鹽，該等胺基酸諸如甘胺酸、精胺酸、天冬胺酸、麩 胺酸、離胺酸、天冬醯胺、麩醯胺、脯胺酸、組胺酸；-單醣，諸如葡萄糖、果糖、半乳糖、甘露糖、阿拉伯糖、木糖、核糖；-雙醣，諸如乳糖、海藻糖、麥芽糖、蔗糖；-多醣，諸如麥芽糊精、葡聚糖、澱粉、肝醣；-醛醣醇，諸如甘露糖醇、木糖醇、乳糖醇、山梨糖醇；-葡糖醛酸、半乳糖醛酸；-環糊精，諸如甲基環糊精、羥基丙基-(3-環糊精)；-無機鹽，諸如氯化鈉、氯化鉀、氯化鎂、鈉及鉀之磷酸鹽、硼酸、碳酸銨及磷酸銨；-有機鹽，諸如乙酸鹽、檸檬酸鹽、抗壞血酸鹽、乳酸鹽；-乳化劑或增溶劑，如阿拉伯膠、二乙醇胺、單硬脂酸甘油酯、卵磷脂、單乙醇胺、油酸、油醇、泊洛沙姆、聚山梨醇酯、月桂基硫酸鈉、硬脂酸、脫水山梨糖醇單月桂酸酯、脫水山梨糖醇單硬脂酸酯及其他脫水山梨糖醇衍生物、聚烴氧衍生物、蠟、聚氧乙烯衍生物、脫水山梨糖醇衍生物；及-黏度增加劑，如瓊脂、海藻酸及其鹽、瓜爾膠、果膠、聚乙烯醇、聚氧化乙烯、纖維素及其衍生物、碳酸丙二酯、聚乙二醇、己二醇及泰洛沙泊。
本文所述之調配物亦包含有效量之結晶性抗體。詳言之，本發明之調配物可包括"治療有效量"或"預防有效量"之本發明之抗體晶體。"治療有效量"係指在必需劑量下且在必需時間內有效達成所需治療效果之量。抗體晶體之"治療有效量"可隨諸如個體之疾病狀況、年齡、性別及體重以及抗體引起個體體內所需反應之能力的因素而變化。治療有效量亦為抗體之治療性有益效應勝過任何毒性或不利效應之量。"預防有效量"係指在必需劑量下且在必需時間內有效達成所需 預防效果之量。通常，因為在疾病早期階段之前或在疾病早期階段時對個體使用預防劑量，所以預防有效量將小於治療有效量。
合適之劑量可容易地使用標準方法來確定。適當地向患者投與抗體一次或歷經一系列治療。視上述因素而定，約1μg/kg至約50mg/kg(例如0.1-20mg/kg)抗體為向患者投與之初始候選劑量，無論(例如)藉由一或多次分開投藥或藉由連續輸注皆然。典型每日或每週劑量可在約1μg/kg至約20mg/kg或以上之範圍內，此視病症而定，重複治療直至出現疾病症狀之所需抑制。然而，其他給藥方案可為適用的。在一些情況下，調配物包含再溶解時為至少約1g/L或以上之濃度的抗體。在其他實施例中，再溶解時抗體濃度為至少約1g/L至約100g/L。
抗體之晶體或包含該等晶體之調配物可單獨投與或作為醫藥製劑之部分投與。其可藉由非經腸、口服或局部途徑投與。舉例而言，其可藉由經口、肺、鼻、耳、肛門、皮膚、眼睛、靜脈內、肌肉內、動脈內、腹膜內、黏膜、舌下、皮下、經皮、局部或顱內途徑投與或投與至口腔中。投藥技術之特定實例包含肺吸入、病灶內施用、用針注射、乾粉吸入、皮膚電穿孔、氣溶膠傳遞及無針注射技術，包括無針皮下投藥。
現將藉由下列非限制性說明性實例來更詳細地解釋本發明。根據說明書之一般部分且基於一般知識，將使得熟習讀者能夠提供本發明之其他實施例而無需不當實驗。
範例 A.材料
a)蛋白質
冷凍單株抗體(mAb)ABT-874係得自Abbott實驗室。所有實驗係根據產物批組執行，其中原始mAb濃度為64mg/mL。
b)精細化學品
乙酸鈉係得自Grüssing GmbH,Filsum。不同聚合度之聚乙二醇係得自Clariant GmbH,Sulzbach。此外，將商業結晶篩選系統及試劑(Hampton Research,Nextal Biotechnologies)用於某些微量實驗。所有其他化學物係來自Sigma-Aldrich、Steinheim或Merck,Darmstadt。
B.通用方法
a)ABT-874藥物之解凍
於25℃下將ABT-874於攪拌水浴中解凍。
b)緩衝劑交換-方法A
將ABT-874溶液之等分試樣用移液管移入30KDa MWCO Vivaspin 20濃縮器(Vivascience)中。將蛋白質樣品用新緩衝劑以1：10之比率稀釋，且藉由於4℃下以5,000×g離心(Sigma 4 K 15實驗室離心機)使樣品體積回到原始樣品體積。將稀釋/離心步驟重複一次，產生原始樣品緩衝劑之1：100稀釋物。調整蛋白質濃度後，經由0.2μm針頭式過濾器單元無菌過濾溶液。
b)緩衝劑交換-方法B
將ABT-874溶液之等分試樣置於SLIDE-A-LYZER透析盒(Pierce Biotechnology Inc.)中。將該透析盒置於含有所選緩衝劑之燒杯中，且於4℃下伴以攪拌執行緩衝劑交換隔夜。調整蛋白質濃度後，經由0.2μm針頭式過濾器單元無菌過濾溶液。
c)OD280蛋白質濃度量測
使用ThermoSpectronics UV1裝置來評估於280nm波長下之蛋白質濃度，其中應用1.42cm2 mg-1之消光係數。出於此目的，將結晶漿料之等分試樣於14,000rpm下離心，且測定上清液中之殘餘蛋白質濃度。
d)pH值量測
pH值量測係藉由使用Mettler Toledo MP220 pH計進行。利用Inlab 413電極及Inlab 423微電極。
e)結晶方法
e1)微量結晶-沈滴氣相擴散(Sitting Drop Vapor Diffusion)Hydra II
初始結晶篩選係使用Hydra II結晶自動機及Greiner 96孔板(三個滴孔，Hampton Research)執行。安置該等板後，用Clearseal薄膜(Hampton Research)密封該等孔。
e2)微量結晶-懸滴氣相擴散(Hanging Drop Vapor Diffusion)
懸滴氣相擴散實驗係分別使用VDX板(具有密封劑，Hampton Research)及OptiClear塑膠蓋玻片(正方形，Hampton Research)或矽化玻璃蓋玻片(圓形，Hampton Research)進行。製備儲集溶液後，將一滴儲集溶液與一滴蛋白質溶液於蓋玻片上混合，且用倒置蓋玻片以液滴懸於儲集層上方之方式密封孔。
e3)分批結晶-方法A(24孔板)
分批結晶係藉由將蛋白質溶液與等量結晶緩衝劑(500μl)於孔中混合來執行。隨後用膠帶密封該孔以防止水蒸發。
e4)分批結晶-方法B(Eppendorff反應管)
分批結晶係藉由將蛋白質溶液與等量結晶緩衝劑於1.5mL或2mLEppendorff反應管中混合來執行。
e5)分批結晶-方法C(Falcon管，無攪拌)
分批結晶係藉由將蛋白質溶液與等量結晶緩衝劑於15mL或50mL Falcon管中混合來執行。
e6)分批結晶-方法D(Falcon管，攪拌)
分批結晶係藉由將蛋白質溶液與等量結晶緩衝劑於15mL或50mL Falcon管中混合來執行。封閉後立即將該管置於實驗室震盪器(GFL 3013或GFL 3015)上或者藉由翻轉攪拌。藉由應用此等方法，避 免將攪拌器引入樣品中。
f)SDS-PAGE
樣品係藉由將蛋白質濃度調整至8μg/20μL來製備。將該等樣品用含有溴酚藍之SDS/Tris/甘油緩衝劑稀釋。
定性SDS PAGE分析係使用Invitrogen NuPage 10% Bis-Tris凝膠、NuPage MES SDS運行緩衝液及Mark12寬範圍蛋白質標準物來執行。將20μL樣品用移液管移入凝膠袋中。在跑膠且用乙酸/甲醇試劑固定後，使用Novex膠體藍染色套組執行染色。使用Invitrogen凝膠乾燥乾燥溶液將凝膠乾燥。
g)光學顯微法
使用Zeiss Axiovert 25或Nikon Labophot顯微鏡觀察到晶體。後者裝備有偏振濾光鏡設置及JVC TK C1380彩色視訊攝影機。
h)SE-HPLC
ABT-874樣品之聚集程度係藉由SE-HPLC評估。使用Dionex P680泵、ASI-100自動取樣器及UVD170U偵測裝置。藉由Amersham Bioscience Superdex 200 10/300 GL凝膠過濾管柱，應用有效之Abbott標準方案(A-796874.0-ABT 874,J 695)將聚集物質自單體分離。
C.氣相擴散結晶實驗
下列實例中給出之濃度值為關於抗體溶液及儲集溶液在混合兩種溶液之前的初始值。
若未另外描述，則所有pH值係指乙酸鹽緩衝劑儲備物在其與其他物質(如結晶試劑)組合之前的pH值。
若未另外描述，則所有緩衝劑莫耳濃度係指在通常使用冰乙酸執行之pH值調整之前儲備溶液中的乙酸鈉濃度。
實例1-懸滴氣相擴散模式之PEG 4,000/乙酸鈉晶格篩選
對ABT-874執行懸滴氣相擴散結晶方法。將ABT-874緩衝加入於 pH值約5.2之含有約0.1M乙酸鈉之緩衝劑中。將蛋白質濃度調整至10mg/mL。
使用塗脂VDX板及正方形OptiClear塑膠蓋玻片。500μL特定儲集溶液係藉由將乙酸鹽緩衝劑、50% w/v PEG 4,000溶液及Milli Q水(經完全脫鹽且視情況經預蒸餾)於各孔中混合來製備。在本實例中，將乙酸鹽緩衝劑莫耳濃度保持恆定於約0.1M，且使PEG 4,000以2%步進自約6% w/v變化至約28% w/v。期間pH值為約5.2。對各條件作兩次評估。將約1μL蛋白質溶液與約1μL特定儲集溶液於正方形OptiClear塑膠蓋玻片上混合，且用倒置玻片將孔密封，從而形成懸滴實驗。將該等板儲存於周圍溫度下。在隨後三十天期間對液滴執行多次顯微鏡檢術。將條件分為澄清液滴、含有無規沈澱物之液滴、含有晶體之液滴及含有沈澱物質及晶體之混合物之液滴。
結果：自所評估之24個孔未觀察到晶體。
實例2-懸滴氣相擴散模式、不同蛋白質濃度下之PEG 4,000/乙酸鈉晶格篩選
於不同蛋白質濃度下對ABT-874執行懸滴氣相擴散結晶方法。將ABT-874緩衝加入於pH值約5.2之含有約0.1M乙酸鈉之緩衝劑中。將蛋白質濃度調整至50mg/mL。
使用塗脂VDX板及正方形OptiClear塑膠蓋玻片。500μL特定儲集溶液係藉由將乙酸鹽緩衝劑、50% w/v PEG 4,000溶液及Milli Q水於各孔中混合來製備。在本實例中，將乙酸鹽緩衝劑莫耳濃度保持恆定於約0.1M，且使PEG 4,000以2%步進自約6% w/v變化至約28% w/v。期間pH值為約5.2。對各條件作兩次評估。將約1μL蛋白質溶液與約1μL特定儲集溶液於正方形OptiClear塑膠蓋玻片上混合，且用倒置玻片將孔密封，從而形成懸滴實驗。將該等板儲存於周圍溫度下。在隨後三十天期間對液滴執行多次顯微鏡檢術。將條件分為澄清液 滴、含有無規沈澱物之液滴、含有晶體之液滴及含有沈澱物質及晶體之混合物之液滴。
結果：自所評估之24個孔，於約16%之PEG 4,000濃度下觀察到晶體。該等晶體顯示針狀或針簇狀形態。
實例3-懸滴氣相擴散模式之PEG 400/乙酸鈉晶格篩選
使用PEG 400對ABT-874執行懸滴氣相擴散結晶方法。將ABT-874緩衝加入於pH值約5.2之含有約0.1M乙酸鈉之緩衝劑中。將蛋白質濃度調整至10mg/mL。
使用塗脂VDX板及正方形OptiClear塑膠蓋玻片。500μL特定儲集溶液係藉由將乙酸鹽緩衝劑、50% w/v PEG 400溶液及Milli Q水於各孔中混合來製備。在本實例中，將乙酸鹽緩衝劑莫耳濃度保持恆定於約0.1M，且使PEG 400以2%步進自約30% w/v變化至約40% w/v。期間pH值為約5.2。對各條件作兩次評估。將約1μL蛋白質溶液與約1μL特定儲集溶液於正方形OptiClear塑膠蓋玻片上混合，且用倒置玻片將孔密封，從而形成懸滴實驗。將該等板儲存於周圍溫度下。在隨後三十天期間對液滴執行多次顯微鏡檢術。將條件分為澄清液滴、含有無規沈澱物之液滴、含有晶體之液滴及含有沈澱物質及晶體之混合物之液滴。
結果：自所評估之12個孔未觀察到晶體。
實例4-懸滴氣相擴散模式、不同蛋白質濃度下之PEG 400/乙酸鈉晶格篩選
於不同蛋白質濃度下對ABT-874執行懸滴氣相擴散結晶方法。將ABT-874緩衝加入於pH值約5.2之含有約0.1M乙酸鈉之緩衝劑中。將蛋白質濃度調整至50mg/mL。
使用塗脂VDX板及正方形OptiClear塑膠蓋玻片。500μL特定儲集溶液係藉由將乙酸鹽緩衝劑、50% w/v PEG 400溶液及Milli Q水於 各孔中混合來製備。在本實例中，將乙酸鹽緩衝劑莫耳濃度保持恆定於約0.1M，且使PEG 400以2%步進自約30% w/v變化至約40% w/v。期間pH值為約5.2。對各條件作兩次評估。將約1μL蛋白質溶液與約1μL特定儲集溶液於正方形OptiClear塑膠蓋玻片上混合，且用倒置玻片將孔密封，從而形成懸滴實驗。將該等板儲存於周圍溫度下。在隨後三十天期間對液滴執行多次顯微鏡檢術。將條件分為澄清液滴、含有無規沈澱物之液滴、含有晶體之液滴及含有沈澱物質及晶體之混合物之液滴。
結果：自所評估之12個孔未觀察到晶體。
實例5-懸滴氣相擴散模式、不同蛋白質濃度及設置下之PEG 400/乙酸鈉晶格篩選
使用不同蛋白質濃度及不同設置對ABT-874執行懸滴氣相擴散結晶方法。將ABT-874緩衝加入於pH值約5.2之含有約0.1M乙酸鈉之緩衝劑中。將蛋白質濃度調整至50mg/mL。
使用塗脂VDX板及正方形OptiClear塑膠蓋玻片。500μL特定儲集溶液係藉由將乙酸鹽緩衝劑、50% w/v PEG 400溶液及Milli Q水於各孔中混合來製備。在本實例中，將乙酸鹽緩衝劑莫耳濃度保持恆定於約0.1M，且使PEG 400以2%步進自約30% w/v變化至約40% w/v。pH值分別為約5.7或6.7。對各條件作兩次評估。將約1μL蛋白質溶液與約1μL特定儲集溶液於正方形OptiClear塑膠蓋玻片上混合，且用倒置玻片將孔密封，從而形成懸滴實驗。將該等板儲存於周圍溫度下。在隨後二十一天期間對液滴執行多次顯微鏡檢術。將條件分為澄清液滴、含有無規沈澱物之液滴、含有晶體之液滴及含有沈澱物質及晶體之混合物之液滴。
結果：自所評估之24個孔未觀察到晶體。
實例6-懸滴氣相擴散模式之PEG 10,000/乙酸鈉晶格篩選
使用PEG 10,000對ABT-874執行懸滴氣相擴散結晶方法。將ABT-874緩衝加入於pH值約5.2之含有約0.1M乙酸鈉之緩衝劑中。將蛋白質濃度調整至10mg/mL。
使用塗脂VDX板及正方形OptiClear塑膠蓋玻片。500μL特定儲集溶液係藉由將乙酸鹽緩衝劑、50% w/v PEG 10,000溶液及Milli Q水於各孔中混合來製備。在本實例中，將乙酸鹽緩衝劑莫耳濃度保持恆定於約0.1M，且使PEG 10,000以2%步進自約4% w/v變化至約14% w/v。期間pH值為約5.2。對各條件作兩次評估。將約1μL蛋白質溶液與約1μL特定儲集溶液於正方形OptiClear塑膠蓋玻片上混合，且用倒置玻片將孔密封，從而形成懸滴實驗。將該等板儲存於周圍溫度下。在隨後三十天期間對液滴執行多次顯微鏡檢術。將條件分為澄清液滴、含有無規沈澱物之液滴、含有晶體之液滴及含有沈澱物質及晶體之混合物之液滴。
結果：自所評估之12個孔未觀察到晶體。
實例7-懸滴氣相擴散模式、不同蛋白質濃度下之PEG 10,000/乙酸鈉晶格篩選
使用PEG 10,000且於不同蛋白質濃度下對ABT-874執行懸滴氣相擴散結晶方法。將ABT-874緩衝加入於pH值約5.2之含有約0.1M乙酸鈉之緩衝劑中。將蛋白質濃度調整至50mg/mL。
使用塗脂VDX板及正方形OptiClear塑膠蓋玻片。500μL特定儲集溶液係藉由將乙酸鹽緩衝劑、50% w/v PEG 10,000溶液及Milli Q水於各孔中混合來製備。在本實例中，將乙酸鹽緩衝劑莫耳濃度保持恆定於約0.1M，且使PEG 10,000以2%步進自約4% w/v變化至約14% w/v。期間pH值為約5.2。對各條件作兩次評估。將約1μL蛋白質溶液與約1μL特定儲集溶液於正方形OptiClear塑膠蓋玻片上混合，且用倒置玻片將孔密封，從而形成懸滴實驗。將該等板儲存於周圍溫度下。 在隨後三十天期間對液滴執行多次顯微鏡檢術。將條件分為澄清液滴、含有無規沈澱物之液滴、含有晶體之液滴及含有沈澱物質及晶體之混合物之液滴。
結果：自所評估之12個孔未觀察到晶體。
實例8-懸滴氣相擴散模式、不同設置下之PEG 4,000/乙酸鈉晶格篩選
使用PEG 4,000及不同設置對ABT-874執行懸滴氣相擴散結晶方法。將ABT-874緩衝加入於pH值約5.2之含有約0.1M乙酸鈉之緩衝劑中。將蛋白質濃度調整至10mg/mL。
使用塗脂VDX板及正方形OptiClear塑膠蓋玻片。500μL特定儲集溶液係藉由將乙酸鹽緩衝劑、50% w/v PEG 4,000溶液及Milli Q水於各孔中混合來製備。在本實例中，將乙酸鹽緩衝劑莫耳濃度保持恆定於約0.1M，且使PEG 4,000以2%步進自約22% w/v變化至約28% w/v。pH值分別為約4.2、4.7、5.2、5.7、6.2及6.7。對各條件作兩次評估。將約1μL蛋白質溶液與約1μL特定儲集溶液於正方形OptiClear塑膠蓋玻片上混合，且用倒置玻片將孔密封，從而形成懸滴實驗。將該等板儲存於周圍溫度下。在隨後三十天期間對液滴執行多次顯微鏡檢術。將條件分為澄清液滴、含有無規沈澱物之液滴、含有晶體之液滴及含有沈澱物質及晶體之混合物之液滴。
結果：自所評估之48個孔未觀察到晶體。
實例9-懸滴氣相擴散模式、不同設置下之PEG 4,000/乙酸鈉晶格篩選
使用PEG 4,000及另一設置對ABT-874執行懸滴氣相擴散結晶方法。將ABT-874緩衝加入於pH值約5.2之含有約0.1M乙酸鈉之緩衝劑中。將蛋白質濃度調整至10mg/mL。
使用塗脂VDX板及正方形OptiClear塑膠蓋玻片。500μL特定儲集溶液係藉由將乙酸鹽緩衝劑、50% w/v PEG 4,000溶液及Milli Q水於各孔中混合來製備。在本實例中，將乙酸鹽緩衝劑莫耳濃度保持恆 定於約0.1M，且使PEG 4,000以2%步進自約8% w/v變化至約14% w/v。pH值分別為約5.7、6.2及6.7。對各條件作兩次評估。將約1μL蛋白質溶液與約1μL特定儲集溶液於正方形OptiClear塑膠蓋玻片上混合，且用倒置玻片將孔密封，從而形成懸滴實驗。將該等板儲存於周圍溫度下。在隨後三十天期間對液滴執行多次顯微鏡檢術。將條件分為澄清液滴、含有無規沈澱物之液滴、含有晶體之液滴及含有沈澱物質及晶體之混合物之液滴。
結果：在本實例中自所評估之24個孔，在所包括之所有pH值下於約10%至14%的PEG 4,000濃度下觀察到晶體。該等晶體顯示針狀或針簇狀形態。
實例10-懸滴氣相擴散模式之PEG 400結合4,000/乙酸鈉晶格篩選
使用PEG 400及4,000/乙酸鈉對ABT-874執行懸滴氣相擴散結晶方法。將ABT-874緩衝加入於pH值約5.2之含有約0.1M乙酸鈉之緩衝劑中。將蛋白質濃度調整至10mg/mL。
使用塗脂VDX板及正方形OptiClear塑膠蓋玻片。500μL特定儲集溶液係藉由將乙酸鹽緩衝劑、50% w/v PEG 4,000溶液及Milli Q水於各孔中混合來製備。在本實例中，將乙酸鹽緩衝劑莫耳濃度保持恆定於約0.1M，且使PEG 4,000以2%步進自約8% w/v變化至約12% w/v。同時，將PEG 400分別以約26% w/v、28% w/v、30% w/v及32% w/v之濃度加入PEG 4,000/乙酸鹽溶液中。期間pH值為約5.2。對各條件作兩次評估。將約1μL蛋白質溶液與約1μL特定儲集溶液於正方形OptiClear塑膠蓋玻片上混合，且用倒置玻片將孔密封，從而形成懸滴實驗。將該等板儲存於周圍溫度下。在隨後三十天期間對液滴執行多次顯微鏡檢術。將條件分為澄清液滴、含有無規沈澱物之液滴、含有晶體之液滴及含有沈澱物質及晶體之混合物之液滴。
結果：自所評估之24個孔未觀察到晶體。
實例11-懸滴氣相擴散模式、不同蛋白質濃度下之PEG 400結合4,000/乙酸鈉晶格篩選
使用PEG 400及4,000/乙酸鈉以不同蛋白質濃度對ABT-874執行懸滴氣相擴散結晶方法。將ABT-874緩衝加入於pH值約5.2之含有約0.1M乙酸鈉之緩衝劑中。將蛋白質濃度調整至50mg/mL。
使用塗脂VDX板及正方形OptiClear塑膠蓋玻片。500μL特定儲集溶液係藉由將乙酸鹽緩衝劑、50% w/v PEG 4,000溶液及Milli Q水於各孔中混合來製備。在本實例中，將乙酸鹽緩衝劑莫耳濃度保持恆定於約0.1M，且使PEG 4,000以2%步進自約4% w/v變化至約8% w/v。同時，將PEG 400分別以約30% w/v、32% w/v、34% w/v及36% w/v之濃度加入PEG 4,000/乙酸鹽溶液中。期間pH值為約5.2。對各條件作兩次評估。將約1μL蛋白質溶液與約1μL特定儲集溶液於正方形OptiClear塑膠蓋玻片上混合，且用倒置玻片將孔密封，從而形成懸滴實驗。將該等板儲存於周圍溫度下。在隨後三十天期間對液滴執行多次顯微鏡檢術。將條件分為澄清液滴、含有無規沈澱物之液滴、含有晶體之液滴及含有沈澱物質及晶體之混合物之液滴。
結果：自所評估之24個孔未觀察到晶體。
實例12-以懸滴氣相擴散模式、不同蛋白質緩衝劑進行之PEG 4,000/乙酸鈉晶格篩選
使用PEG 4,000及不同蛋白質緩衝劑對ABT-874執行懸滴氣相擴散結晶方法。將ABT-874緩衝加入於pH值約5.5之含有約0.1M乙酸鈉之緩衝劑中。將蛋白質濃度調整至10mg/mL。
使用塗脂VDX板及正方形OptiClear塑膠蓋玻片。500μL特定儲集溶液係藉由將乙酸鹽緩衝劑、50% w/v PEG 4,000溶液及Milli Q水於各孔中混合來製備。在本實例中，將乙酸鹽緩衝劑莫耳濃度保持恆定於約0.1M，且使PEG 4,000以2%步進自約4% w/v變化至約26% w/v。期間pH值為5.5。對各條件作兩次評估。將約1μL蛋白質溶液與約1μL特定儲集溶液於正方形OptiClear塑膠蓋玻片上混合，且用倒置玻片將孔密封，從而形成懸滴實驗。將該等板儲存於周圍溫度下。在隨後五天期間對液滴執行多次顯微鏡檢術。將條件分為澄清液滴、含有無規沈澱物之液滴、含有晶體之液滴及含有沈澱物質及晶體之混合物之液滴。
結果：自所評估之24個孔，分別於約12% w/v、18% w/v、20% w/v、22% w/v及24% w/v之PEG 4,000濃度下觀察到晶體。該等晶體顯示針狀或針簇狀形態。
實例13-懸滴氣相擴散模式、不同蛋白質濃度下之PEG 4,000/乙酸鈉晶格篩選
使用PEG 4,000及不同蛋白質濃度對ABT-874執行懸滴氣相擴散結晶方法。將ABT-874緩衝加入於pH值約5.5之含有約0.1M乙酸鈉之緩衝劑中。將蛋白質濃度調整至5mg/mL。
使用塗脂VDX板及正方形OptiClear塑膠蓋玻片。500μL特定儲集溶液係藉由將乙酸鹽緩衝劑、50% w/v PEG 4,000溶液及Milli Q水於各孔中混合來製備。在本實例中，將乙酸鹽緩衝劑莫耳濃度保持恆定於約0.1M，且使PEG 4,000以2%步進自約4% w/v變化至約26% w/v。期間pH值為5.5。對各條件作兩次評估。將約1μL蛋白質溶液與約1μL特定儲集溶液於正方形OptiClear塑膠蓋玻片上混合，且用倒置玻片將孔密封，從而形成懸滴實驗。將該等板儲存於周圍溫度下。在隨後五天期間對液滴執行多次顯微鏡檢術。將條件分為澄清液滴、含有無規沈澱物之液滴、含有晶體之液滴及含有沈澱物質及晶體之混合物之液滴。
結果：自所評估之24個孔，分別於約10% w/v及14% w/v之PEG 4,000濃度下觀察到晶體。該等晶體顯示針狀或針簇狀形態。
實例14-以懸滴氣相擴散模式、不同蛋白質緩衝劑進行之PEG 4,000/乙酸鈉晶格篩選
使用PEG 4,000/乙酸鈉及不同蛋白質緩衝劑對ABT-874執行懸滴氣相擴散結晶方法。將ABT-874緩衝加入於pH值約5.5之含有約0.1M乙酸鈉之緩衝劑中。將蛋白質濃度調整至20mg/mL。
使用塗脂VDX板及正方形OptiClear塑膠蓋玻片。500μL特定儲集溶液係藉由將乙酸鹽緩衝劑、50% w/v PEG 4,000溶液及Milli Q水於各孔中混合來製備。在本實例中，將乙酸鹽緩衝劑莫耳濃度保持恆定於約0.1M，且使PEG 4,000以2%步進自約4% w/v變化至約26% w/v。期間pH值為5.5。對各條件作兩次評估。將約1μL蛋白質溶液與約1μL特定儲集溶液於正方形OptiClear塑膠蓋玻片上混合，且用倒置玻片將孔密封，從而形成懸滴實驗。將該等板儲存於周圍溫度下。在隨後五天期間對液滴執行多次顯微鏡檢術。將條件分為澄清液滴、含有無規沈澱物之液滴、含有晶體之液滴及含有沈澱物質及晶體之混合物之液滴。
結果：自所評估之24個孔，分別於約10% w/v、14% w/v、16% w/v、20% w/v及22% w/v之PEG 4,000濃度下觀察到晶體。該等晶體顯示針狀或針簇狀形態。
實例15-以氣相擴散模式對條件之廣泛篩選
對ABT-874執行廣泛篩選懸滴氣相擴散結晶方法。將ABT-874緩衝加入於pH 7.4之20mM HEPES/150mM氯化鈉緩衝劑中。將蛋白質濃度調整至10mg/mL。在另一情況下，將蛋白質濃度調整至5mg/mL。在另一情況下，將蛋白質濃度調整至20mg/mL。
使用Hydra II結晶自動機且利用若干市售結晶篩選系統，將96孔Greiner板設置於周圍溫度下。將蛋白質溶液及結晶試劑以約1：1、較佳1：1之比率混合。
使用下列篩選系統。Hampton Crystal Screen 1及2、Hampton Index Screen、Hampton SaltRX Screen(均來自Hampton Research)、Nextal The Classics、The Classics Lite、The PEGs、The Anions、The pH clear及The Ammonium sulphate(均來自Nextal Biotechnologies)。
在將蛋白質添加至結晶試劑中(每一條件三滴，含有如上文所述之三種不同蛋白質濃度)後，用Clearseal薄膜密封板。將任何板設置四份且分別儲存於周圍溫度、4℃、27℃及37℃下。六天後對液滴執行顯微鏡檢術。將條件分為澄清液滴、含有無規沈澱物之液滴、含有晶體之液滴及含有沈澱物質及晶體之混合物之液滴。
結果：自所測試之10,368種條件中，4種呈現晶體。該等條件包含由製造商所公開之下列蛋白質濃度及結晶試劑：
- 周圍溫度，約20mg/mL之ABT-874
0.2M硫酸銨，30% w/v PEG 8,000
(Hampton Crystal Screen，C6)
- 4℃，約5mg/mL之ABT-874
0.1M HEPES pH 7.5，5% w/v PEG 8,000
(Nextal The Classics Lite，F4)
- 4℃，約10mg/mL之ABT-874
0.1M HEPES pH 7.5，5% w/v PEG 6,000，2.5% v/v MPD
(Nextal The Classics Lite，H9)
- 4℃，約20mg/mL之ABT-874
0.1M HEPES，5% w/v PEG 6,000，pH 7.00
(Nextal pH clear，C4)
該等晶體顯示針狀或針簇狀形態。
實例16-懸滴氣相擴散模式、不同設置下之PEG 4,000/乙酸鈉晶格篩選
使用PEG 400及4,000/乙酸鈉以不同設置對ABT-874執行懸滴氣相擴散結晶方法。使ABT-874緩衝加入於pH 7.4之20mM HEPES/150mM氯化鈉緩衝劑中。將蛋白質濃度調整至10mg/mL。在另一情況下，將蛋白質濃度調整至5mg/mL。
使用塗脂VDX板及圓形矽化玻璃蓋玻片。500μL特定儲集溶液係藉由將乙酸鹽緩衝劑、50% w/v PEG 4,000溶液及Milli Q水於各孔中混合來製備。在本實例中，將乙酸鹽緩衝劑莫耳濃度保持恆定於約0.1M，且分別使用約12% w/v、18% w/v、24% w/v及30% w/v之PEG 4,000濃度。使pH值以0.2步進自約3.6變化至約5.6，從而形成48種不同條件。如上文所述，對任何條件設置兩種蛋白質濃度。將約1μL蛋白質溶液與約1μL特定儲集溶液於圓形矽化玻璃蓋玻片上混合，且用倒置玻片將孔密封，從而形成懸滴實驗。將該等板儲存於周圍溫度下。六天後對液滴執行顯微鏡檢術。將條件分為澄清液滴、含有無規沈澱物之液滴、含有晶體之液滴及含有沈澱物質及晶體之混合物之液滴。
結果：自所測試之96種條件中，於pH值約5.6下對5mg/mL ABT-874及約24% PEG 4,000觀察到呈針簇形狀之晶體。
實例17-懸滴氣相擴散模式、不同設置下之PEG 4,000/檸檬酸鈉晶格篩選
使用PEG 4,000/檸檬酸鈉及不同設置對ABT-874執行懸滴氣相擴散結晶方法。使ABT-874緩衝加入於pH 7.4之20mM HEPES/150mM氯化鈉緩衝劑中。將蛋白質濃度調整至10mg/mL。在另一情況下，將蛋白質濃度調整至5mg/mL。
使用塗脂VDX板及圓形矽化玻璃蓋玻片。500μL特定儲集溶液係藉由將檸檬酸鹽緩衝劑、50% w/v PEG 4,000溶液及Milli Q水於各孔中混合來製備。在本實例中，將檸檬酸鹽緩衝劑莫耳濃度保持恆定於 約0.1M，且使用約12% w/v、18% w/v、24% w/v或30% w/v之PEG 4,000濃度。使pH值以0.2步進自約4.2變化至約6.4，從而形成48種不同條件。如上文所述，對任何條件設置兩種蛋白質濃度。將約1μL蛋白質溶液與約1μL特定儲集溶液於圓形矽化玻璃蓋玻片上混合，且用倒置玻片將孔密封，從而形成懸滴實驗。將該等板儲存於周圍溫度下。六天後對液滴執行顯微鏡檢術。將條件分為澄清液滴、含有無規沈澱物之液滴、含有晶體之液滴及含有沈澱物質及晶體之混合物之液滴。
結果：自所測試之96種條件，未觀察到晶體。
D.分批結晶實驗
對ABT-874執行分批結晶方法。下列實例中所示之濃度值為抗體溶液及結晶溶液兩種溶液混合之前的初始值。
若未另外描述，則所有pH值係指乙酸鹽緩衝劑儲備物在與其他物質(如結晶劑)組合之前的pH值。
若未另外描述，則所有緩衝劑莫耳濃度係指在通常使用冰乙酸執行pH值調整之前儲備溶液中的乙酸鈉濃度。
實例18- 1Ml批量體積之PEG 4,000/乙酸鈉條件
使用PEG 4,000/乙酸鈉以1Ml批量體積對ABT-874執行結晶方法。ABT-874於pH約5.2之含有約0.1M乙酸鈉之緩衝劑中緩衝。將蛋白質濃度調整至10mg/mL。
分批結晶係藉由約500μL蛋白質溶液與等體積結晶緩衝劑於1.5mL Eppendorff反應管中混合來執行。500μL特定儲集溶液係藉由乙酸鹽緩衝劑、50% w/v PEG 4,000溶液及Milli Q水混合來製備。在本實例中，乙酸鹽緩衝劑莫耳濃度為0.1M，乙酸鹽緩衝劑pH為約6.7。使用濃度為約14% w/v之PEG 4,000。將該反應管儲存於周圍溫度下。16天後對1μL等分試樣執行顯微鏡檢。
結果：16天後未觀察到晶體。
實例19- 300μL體積分批模式之PEG 4,000/乙酸鈉晶格篩選
使用PEG 4,000/乙酸鈉以300μL體積分批模式對ABT-874執行結晶方法。ABT-874於pH約5.5之含有約0.1M乙酸鈉之緩衝劑中緩衝。將蛋白質濃度調整至10mg/mL。
分批結晶係藉由約150μL蛋白質溶液與等體積結晶緩衝劑於孔中混合來執行。隨後用膠帶密封該孔板以防止水蒸發。150μL特定儲集溶液係藉由乙酸鹽緩衝劑、50% w/v PEG 4,000溶液及Milli Q水於各孔中混合來製備。在本實例中，將乙酸鹽緩衝劑莫耳濃度保持恆定於約0.1M，且期間乙酸鹽緩衝劑pH為約5.5。使PEG 4,000以2%步進自約12% w/v變化至約34% w/v。對任何條件作三次評估。將該等板儲存於周圍溫度下。在隨後兩天期間對液滴執行顯微鏡檢術。
結果：自所檢查之36個孔中，於設置在22% w/v與26% w/v PEG 4,000之間的實驗中觀察到晶體。
實例20- 1Ml批量體積、不同PEG 4,000濃度下之PEG 4,000/乙酸鈉條件
使用PEG 4,000/乙酸鈉以1Ml批量體積使用不同PEG 4,000濃度對ABT-874執行結晶方法。將ABT-874緩衝加入於pH值約5.5之含有約0.1M乙酸鈉之緩衝劑中。將蛋白質濃度調整至10mg/mL。
分批結晶係藉由將約500μL蛋白質溶液與等體積結晶緩衝劑於1.5mL Eppendorff反應管中混合來執行。500μL特定儲集溶液係藉由將乙酸鹽緩衝劑、50% w/v PEG 4,000溶液及Milli Q水混合來製備。在本實例中，乙酸鹽緩衝劑莫耳濃度為0.1M，且乙酸鹽緩衝劑pH值為約5.5。使用濃度為約22% w/v之PEG 4,000。將實驗設置四份。將該等反應管儲存於周圍溫度下。在隨後78天期間對1μL等分試樣執行多次顯微鏡檢術。此外，藉由OD 280測定晶體產率。於14,000rpm下 離心懸浮液之等分試樣，且評估上清液中之蛋白質濃度。
結果：七天後出現劍狀晶體。在隨後儲存數月期間未觀察到沈澱物質。六十天後藉由OD280根據上清液中之殘餘蛋白質濃度測定的晶體產率介於50%與70%之間。
實例21- 1Ml批量體積、不同PEG 4,000濃度下之PEG 4,000/乙酸鈉條件
使用PEG 4,000/乙酸鈉以1Ml批量體積使用不同PEG 4,000濃度對ABT-874執行結晶方法。將ABT-874緩衝加入於pH值約5.5之含有約0.1M乙酸鈉之緩衝劑中。將蛋白質濃度調整至10mg/mL。
分批結晶係藉由將約500μL蛋白質溶液與等體積結晶緩衝劑於1.5mL Eppendorff反應管中混合來執行。500μL特定儲集溶液係藉由將乙酸鹽緩衝劑、50% w/v PEG 4,000溶液及Milli Q水混合來製備。在本實例中，乙酸鹽緩衝劑莫耳濃度為0.1M，且乙酸鹽緩衝劑pH值為約5.5。使用濃度為約26% w/v之PEG 4,000。將該反應管儲存於周圍溫度下。在隨後數月期間對1μL等分試樣執行多次顯微鏡檢術。
結果：在一天後，觀察到沈澱物質。五天後除了沈澱物外還觀察到劍狀晶體。
實例22- 1Ml批量體積、不同PEG 4,000濃度下之PEG 4,000/乙酸鈉條件
使用PEG 4,000/乙酸鈉以1Ml批量體積使用不同PEG 4,000濃度對ABT-874執行結晶方法。將ABT-874緩衝加入於pH值約5.5之含有約0.1M乙酸鈉之緩衝劑中。將蛋白質濃度調整至10mg/mL。
分批結晶係藉由將約500μL蛋白質溶液與等體積結晶緩衝劑於1.5mL Eppendorff反應管中混合來執行。500μL特定儲集溶液係藉由將乙酸鹽緩衝劑、50% w/v PEG 4,000溶液及Milli Q水混合來製備。在本實例中，乙酸鹽緩衝劑莫耳濃度為0.1M，且乙酸鹽緩衝劑pH值 為約5.5。使用濃度為約24% w/v之PEG 4,000。將該反應管儲存於周圍溫度下。在隨後數月期間對1μL等分試樣執行多次顯微鏡檢術。此外，藉由OD 280測定晶體產率。於14,000rpm下離心懸浮液之等分試樣，且評估上清液中之蛋白質濃度。
結果：一天後出現針簇狀晶體。五天後，除了針簇狀晶體外還觀察到針狀晶體及片狀物。十三天後藉由OD280根據上清液中之殘餘蛋白質濃度測定的晶體產率介於60%與70%之間。
實例23- 1Ml體積分批模式、不同蛋白質濃度下之PEG 4,000/乙酸鈉晶格篩選
使用PEG 4,000/乙酸鈉以1Ml批量體積使用不同蛋白質濃度對ABT-874執行結晶方法。將ABT-874緩衝加入於pH值約5.5之含有約0.1M乙酸鈉之緩衝劑中。將蛋白質濃度調整至5mg/mL。
分批結晶係藉由將約500μL蛋白質溶液與等體積結晶緩衝劑於孔中混合來執行。隨後用膠帶密封該孔板以防止水蒸發。
500μL特定儲集溶液係藉由將乙酸鹽緩衝劑、50% w/v PEG 4,000溶液及Milli Q水於各孔中混合來製備。在本實例中，將乙酸鹽緩衝劑莫耳濃度保持恆定於約0.1M，且期間乙酸鹽緩衝劑pH值為約5.5。使PEG 4,000以2%步進自約12% w/v變化至約34% w/v。對任何條件作兩次評估。將該等板儲存於周圍溫度下。在下一月期間對液滴執行顯微鏡檢術。
結果：自所檢查之24個孔中，於設置在24% w/v與26% w/v PEG 4,000之間的實驗中觀察到劍狀晶體。
實例24- 1Ml體積分批模式、不同設置下之PEG 4,000/乙酸鈉晶格篩選
使用PEG 4,000/乙酸鈉以1Ml批量體積使用不同設置對ABT-874執行結晶方法。將ABT-874緩衝加入於pH值約5.5之含有約0.1M乙酸 鈉之緩衝劑中。將蛋白質濃度調整至10mg/mL。
分批結晶係藉由將約500μL蛋白質溶液與等體積結晶緩衝劑於孔中混合來執行。隨後用膠帶密封該孔板以防止水蒸發。500μL特定儲集溶液係藉由將乙酸鹽緩衝劑、50% w/v PEG 4,000溶液及Milli Q水於各孔中混合來製備。在本實例中，將乙酸鹽緩衝劑莫耳濃度保持恆定於約0.1M，且乙酸鹽緩衝劑pH值分別為約4.1、4.6及5.1。使PEG 4,000以2%步進自約20% w/v變化至約28% w/v。將板儲存於周圍溫度下。在隨後四天期間對液滴執行顯微鏡檢術。
結果：自所檢查之18個孔中，於設置有pH 5.1之28% w/v PEG 4,000及乙酸鈉緩衝劑之實驗中觀察到劍狀晶體。
實例25- 2Ml批量體積、不同溫度下之PEG 4,000/乙酸鈉條件
使用PEG 4,000/乙酸鈉以2Ml批量體積使用不同溫度對ABT-874執行結晶方法。將ABT-874緩衝加入於pH值約5.5之含有約0.1M乙酸鈉之緩衝劑中。將蛋白質濃度調整至10mg/mL。
分批結晶係藉由將約1mL蛋白質溶液與等體積結晶緩衝劑於2mL Eppendorff反應管中混合來執行。1mL特定儲集溶液係藉由將乙酸鹽緩衝劑、50% w/v PEG 4,000溶液及Milli Q水混合來製備。在本實例中，乙酸鹽緩衝劑莫耳濃度為0.1M，且乙酸鹽緩衝劑pH值為約5.5。使用濃度為約22% w/v之PEG 4,000。將該反應管儲存於4-8℃下。在下一月期間對1μL等分試樣執行多次顯微鏡檢術。
結果：在儲存隔夜後觀察到沈澱物質。
實例26- 10Ml批量體積、攪拌下之PEG 4,000/乙酸鈉結晶條件
使用PEG 4,000/乙酸鈉以10Ml批量體積使用攪拌對ABT-874執行結晶方法。將ABT-874緩衝加入於pH值約5.5之含有約0.1M乙酸鈉之緩衝劑中。將蛋白質濃度調整至10mg/mL。
分批結晶係藉由將約5mL蛋白質溶液與等體積結晶緩衝劑於50 mL Falcon管中混合來執行。5mL結晶緩衝劑係藉由將乙酸鹽緩衝劑、50% w/v PEG 4,000溶液及Milli Q水於管中混合來製備。在本實例中，乙酸鹽緩衝劑莫耳濃度為約0.1M，且乙酸鹽緩衝劑pH值為約5.5。使用濃度為約24% w/v之PEG 4,000。將管儲存於周圍溫度下，用實驗室震盪器攪拌批料。在隨後數週期間對溶液之1μL等分試樣執行多次顯微鏡檢術。
結果：六天後出現劍狀晶體，但幾乎完全吸附於容器表面。無法自顯微鏡檢術推斷批料不含沈澱物質。結晶溶液幾乎為澄清的。
實例27- 10Ml批量體積、無攪拌之PEG 4,000/乙酸鈉結晶條件
用PEG 4,000/乙酸鈉以10Ml批量體積在無攪拌之情況下對ABT-874執行結晶方法。將ABT-874緩衝加入於pH值約5.5之含有約0.1M乙酸鈉之緩衝劑中。將蛋白質濃度調整至10mg/mL。
分批結晶係藉由將約5mL蛋白質溶液與等體積結晶緩衝劑於50mL Falcon管中混合來執行。5mL結晶緩衝劑係藉由將乙酸鹽緩衝劑、50% w/v PEG 4,000溶液及Milli Q水於管中混合來製備。在本實例中，乙酸鹽緩衝劑莫耳濃度為約0.1M，且乙酸鹽緩衝劑pH值為約5.5。使用濃度為約24% w/v之PEG 4,000。將該管儲存於周圍溫度下。在隨後數週期間對溶液之1μL等分試樣執行多次顯微鏡檢術。此外，藉由OD 280測定晶體產率。於14,000rpm下離心懸浮液之等分試樣，且評估上清液中之蛋白質濃度。
結果：一天後出現針簇狀晶體。四天後，除了針簇狀晶體外還觀察到針狀晶體。七天後藉由OD280根據上清液中之殘餘蛋白質濃度測定的晶體產率介於30%與40%之間。
實例28- 10Ml批量體積、攪拌、不同容器材料下之PEG 4,000/乙酸鈉結晶條件
使用PEG 4,000/乙酸鈉以10Ml批量體積使用攪拌及不同容器材 料對ABT-874執行結晶方法。將ABT-874緩衝加入於pH值約5.5之含有約0.1M乙酸鈉之緩衝劑中。將蛋白質濃度調整至10mg/mL。
分批結晶係藉由將約5mL蛋白質溶液與等體積結晶緩衝劑於50mL I型玻璃小瓶中混合來執行。5mL結晶緩衝劑係藉由將乙酸鹽緩衝劑、50% w/v PEG 4,000溶液及Milli Q水於小瓶中混合來製備。在本實例中，乙酸鹽緩衝劑莫耳濃度為約0.1M，且乙酸鹽緩衝劑pH值為約5.5。使用濃度為約24% w/v之PEG 4,000。將小瓶儲存於周圍溫度下，用實驗室震盪器攪拌批料。在隨後數週期間對溶液之1μL等分試樣執行多次顯微鏡檢術。此外，藉由OD 280測定晶體產率。於14,000rpm下離心懸浮液之等分試樣，且評估上清液中之蛋白質濃度。
結果：十八天後觀察到劍狀晶體。十八天後藉由OD 280根據上清液中之殘餘蛋白質濃度測定的晶體產率介於40%與50%之間。針簇之光學顯微圖(圖之寬度對應於450μm之長度)展示於圖7中。
實例29- 10Ml批量體積、攪拌、不同容器材料及聚山梨醇酯80之影響下的PEG 4,000/乙酸鈉結晶條件
使用PEG 4,000/乙酸鈉以10Ml批量體積使用攪拌、不同容器材料及聚山梨醇酯80之影響對ABT-874執行結晶方法。將ABT-874緩衝加入於pH值約5.5之含有約0.1M乙酸鈉之緩衝劑中。將蛋白質濃度調整至10mg/mL。
分批結晶係藉由將約5mL蛋白質溶液與等體積結晶緩衝劑於50mL I型玻璃小瓶中混合來執行。5mL結晶緩衝劑係藉由將乙酸鹽緩衝劑、50% w/v PEG 4,000溶液及Milli Q水於小瓶中混合來製備。在本實例中，乙酸鹽緩衝劑莫耳濃度為約0.1M，且乙酸鹽緩衝劑pH值為約5.5。使用濃度為約24% w/v之PEG 4,000。此外，將濃度為0.1%之聚山梨醇酯80添加至緩衝劑中。將小瓶儲存於周圍溫度下，用實驗室震盪器攪拌批料。在隨後數週期間對溶液之1μL等分試樣執行多次顯 微鏡檢術。此外，藉由OD 280測定晶體產率。於14,000rpm下離心懸浮液之等分試樣，且評估上清液中之蛋白質濃度。
結果：十八天後觀察到劍狀晶體。在本實例及實例28(未添加聚山梨醇酯80)之晶體形狀之間未觀察到差異。十八天後藉由OD 280根據上清液中之殘餘蛋白質濃度測定的晶體產率介於25%與35%之間。
實例30- 10Ml批量體積下之不同PEG 4,000/乙酸鈉結晶條件及攪拌與未攪拌批料之比較
使用PEG 4,000/乙酸鈉以10Ml批量體積使用攪拌與未攪拌批料之比較對ABT-874執行結晶方法。將ABT-874緩衝加入於pH值約5.5之含有約0.1M乙酸鈉之緩衝劑中。將蛋白質濃度調整至10mg/mL。
分批結晶係藉由將約5mL蛋白質溶液與等體積結晶緩衝劑於50mL I型玻璃小瓶中混合來執行。5mL結晶緩衝劑係藉由將乙酸鹽緩衝劑、50% w/v PEG 4,000溶液及Milli Q水於小瓶中混合來製備。在本實例中，乙酸鹽緩衝劑莫耳濃度為約0.1M，且乙酸鹽緩衝劑pH值為約5.5。使用濃度為約22% w/v及24% w/v之PEG 4,000。將該等小瓶儲存於周圍溫度下，不伴以攪拌或藉由翻轉攪拌。在隨後數週期間對溶液之1μL等分試樣執行多次顯微鏡檢術。此外，藉由OD 280測定一個批料之晶體產率。於14,000rpm下離心懸浮液之等分試樣，且評估上清液中之蛋白質濃度。
結果：在兩個攪拌批料中，26天後觀察到沈澱物質。具有約22% w/v PEG 4,000之緩衝劑的未攪拌批料在26天後含有劍狀晶體，但由於據目測懸浮液幾乎澄清，所以認為晶體產率較低。具有約24% w/v PEG 4,000之緩衝劑的未攪拌批料在26天後含有劍狀晶體。70天後根據上清液測定之產率介於65%與75%之間。
實例31-接種之影響
檢驗接種對ABT-874晶體產率之影響。來自實例30之具有含有約 22% w/v PEG 4,000之結晶緩衝劑的未攪拌批料在26天後顯示極低晶體產率。因此，將批料與約100μL來自同一實例之具有含有約24% w/v PEG 4,000之結晶緩衝劑的未攪拌批料一起培養。
結果：與晶種一起培養未引起明顯的產率增加。
實例32- 10Ml批量體積、不同蛋白質濃度、攪拌與未攪拌批料之比較下的PEG 4,000/乙酸鈉結晶條件
使用PEG 4,000/乙酸鈉以10Ml批量體積使用不同蛋白質濃度及攪拌與未攪拌批料之比較對ABT-874執行結晶方法。將ABT-874緩衝加入於pH值約5.5之含有約0.1M乙酸鈉之緩衝劑中。將蛋白質濃度調整至5mg/mL。
分批結晶係藉由將約5mL蛋白質溶液與等體積結晶緩衝劑於15mL I型玻璃小瓶中混合來執行。5mL結晶緩衝劑藉由將乙酸鹽緩衝劑、50% w/v PEG 4,000溶液及Milli Q水於小瓶中混合來製備。在本實例中，乙酸鹽緩衝劑莫耳濃度為約0.1M，且乙酸鹽緩衝劑pH值為約5.5。使用濃度為約22% w/v、24% w/v及26% w/v之PEG 4,000。將該等小瓶儲存於周圍溫度下，不伴以攪拌或用實驗室震盪器攪拌批料。在隨後數週期間對溶液之1μL等分試樣執行多次顯微鏡檢術。此外，藉由OD 280測定一批之晶體產率。於14,000rpm下離心懸浮液之等分試樣，且評估上清液中之蛋白質濃度。
結果：含有具有約22% w/v及約24% w/v PEG 4,000之緩衝劑的批料在65天後為澄清的。當含有具有約26% w/v PEG 4,000之結晶緩衝劑的攪拌批料在4天後含有沈澱物質時，相同結晶緩衝劑之未攪拌批料在4天後含有劍狀晶體。26天後根據上清液測定之此特定批料之晶體產率介於40%與50%之間。未經攪拌獲得之晶體之光學顯微圖(圖之寬度對應於225μm之長度)展示於圖8中。
實例33- 10Ml批量體積、不同設置下之PEG 4,000/乙酸鈉結晶條件
使用PEG 4,000/乙酸鈉以10Ml批量體積使用不同設置對ABT-874執行結晶方法。將ABT-874緩衝加入於pH值約5.5之含有約0.1M乙酸鈉之緩衝劑中。將蛋白質濃度調整至10mg/mL。
分批結晶係藉由將約5mL蛋白質溶液與等體積結晶緩衝劑於15mL Falcon管中混合來執行。5mL結晶緩衝劑係藉由將乙酸鹽緩衝劑、50% w/v PEG 4,000溶液及Milli Q水於管中混合來製備。在本實例中，乙酸鹽緩衝劑莫耳濃度為約0.1M，且乙酸鹽緩衝劑pH值為約5.5。使用濃度為約22% w/v之PEG 4,000。將該管儲存於周圍溫度下。在隨後數週期間對溶液之1μL等分試樣執行多次顯微鏡檢術。此外，藉由OD 280測定批料之晶體產率。於14,000rpm下離心懸浮液之等分試樣，且評估上清液中之蛋白質濃度。
結果：11天後觀察到劍狀晶體。26天後根據上清液測定之此批料之晶體產率介於40%與50%之間。26天後未經攪拌獲得之晶體之光學顯微圖(圖之寬度對應於450μm之長度)展示於圖9中。
實例34a- 50mL批量體積下之PEG 4,000/乙酸鈉結晶條件
使用PEG 4,000/乙酸鈉以50mL批量體積對ABT-874執行結晶方法。將ABT-874緩衝加入於pH值約5.5之含有約0.1M乙酸鈉之緩衝劑中。將蛋白質濃度調整至10mg/mL。
分批結晶係藉由將約25mL蛋白質溶液與等體積結晶緩衝劑於50mL Falcon管中混合來執行。25mL結晶緩衝劑係藉由將乙酸鹽緩衝劑、50% w/v PEG 4,000溶液及Milli Q水於管中混合來製備。在本實例中，乙酸鹽緩衝劑莫耳濃度為約0.1M，且乙酸鹽緩衝劑pH值為約5.5。使用濃度為約22% w/v之PEG 4,000。將該管儲存於周圍溫度下。在隨後數週期間對溶液之1μL等分試樣執行多次顯微鏡檢術。此外，藉由OD 280測定批料之晶體產率。於14,000rpm下離心懸浮液之等分試樣，且評估上清液中之蛋白質濃度。
結果：3天後觀察到劍狀晶體。16天後根據上清液測定之此批料之晶體產率介於50%與60%之間。
實例34b- 700Ml批量體積下之PEG 4,000/乙酸鈉結晶條件
使用PEG 4,000/乙酸鈉以700mL批量體積對ABT-874執行結晶方法。將ABT-874緩衝加入於pH值約5.5之含有約0.1M乙酸鈉之緩衝劑中。將蛋白質濃度調整至10mg/mL。
分批結晶係藉由將約350mL蛋白質溶液與等體積結晶緩衝劑於1L聚丙烯瓶子中混合來執行。350mL結晶緩衝劑係藉由將乙酸鹽緩衝劑、PEG 4,000及Milli Q水混合來製備。在本實例中，乙酸鹽緩衝劑莫耳濃度為約0.1M，且乙酸鹽緩衝劑pH值為約5.5。使用濃度為約22% w/v之PEG 4,000。將該瓶子儲存於周圍溫度下。40天後對溶液之1μL等分試樣執行顯微鏡檢術。此外，藉由OD 280測定批料之晶體產率。於14,000rpm下離心懸浮液之等分試樣，且評估上清液中之蛋白質濃度。
結果：40天後觀察到劍狀晶體。40天後根據上清液測定之此批料之晶體產率介於50%與60%之間。40天後未經攪拌獲得之晶體之光學顯微圖(圖之寬度對應於450μm之長度)展示於圖10中。
上述分批實驗之實驗條件總結於以下表1中： 1 %(w/v)
E.用於晶體加工及分析之方法 實例35-晶體之洗滌
形成晶體後，無需再溶解晶體之洗滌步驟可為有利的。在完成結晶過程後，將晶體漿料轉移至離心管中且以500至1000×g離心二十分鐘。於4℃或周圍溫度下執行該離心。在離心後，倒出上清液，且使晶體離心塊容易地再懸浮於含有於約0.1M乙酸鈉中之約24% w/v PEG 4,000的緩衝劑(pH值約5.5)中。如藉由OD280所分析，該種洗滌緩衝劑中不存在可量測之ABT-874晶體溶解度。隨後將離心/再懸浮步驟重複一至三次，且在此洗滌程序後，將離心塊再懸浮且儲存於該種緩衝劑中。
實例36-藉由SDS PAGE分析晶體
為證實晶體之蛋白質特徵，如實例32中所述用洗滌緩衝劑洗滌晶體。在藉由OD280確信蛋白質不再溶解於溶液中後，將晶體離心，倒出上清液，且隨後將晶體溶解於蒸餾水中。此溶液之OD280量測顯示現在存在蛋白質，此係因為現在樣品之吸收率顯著高於殘餘洗滌緩衝劑中的吸收率。此再溶解晶體溶液之SDS PAGE分析與原始ABT-874樣品相比時顯示相同圖案。
實例37-藉由SE-HPLC分析晶體
為評估ABT-874晶體之聚集物質之含量，將經洗滌晶體之等分試樣離心且再溶解於SE-HPLC運行緩衝液(92mM磷酸氫二鈉/211mM硫酸二鈉pH 7.0)中。恰在結晶過程結束後，在本實例中於周圍溫度下16天，聚集含量通常略微自約0.9%增加至約1.6-1.7%。目前尚不清楚是否該等聚集物含於晶體中或其表面處且未藉由洗滌過程完全移除。
F.其他實例
下列實例中給出之濃度值為關於抗體溶液及結晶溶液在混合兩 種溶液之前的初始值。
若未另外描述，則所有pH值係指乙酸鹽緩衝劑儲備物在其與其他物質(如結晶試劑)組合之前的pH值。
若未另外描述，則所有緩衝劑莫耳濃度係指在通常使用冰乙酸執行之pH值調整之前儲備溶液中的乙酸鈉濃度。
實例38-固體結晶試劑
將ABT-874緩衝加入於pH值約5.5之含有約0.1M乙酸鈉之緩衝劑中。將蛋白質濃度調整至10mg/mL。
分批結晶係藉由將約500μL蛋白質溶液與約380μL乙酸鹽緩衝劑(0.1M，pH 5.5)於2mL Eppendorf反應管中混合來執行。隨後，添加固體聚乙二醇至12% m/v(120mg/mL)之最終濃度。隨後將該管封閉且攪拌直至結晶試劑完全溶解。在無攪拌之情況下將管儲存於周圍溫度下。在隨後數週期間對結晶混合物之等分試樣執行多次顯微鏡檢術。
結果：七天後觀察到劍狀晶體。
實例39-不同緩衝劑製備方案及晶體之製備
在本實例中，乙酸鹽緩衝劑係如以下所述製備：用約840mL純水稀釋60g冰乙酸。用氫氧化鈉溶液調整pH值且將體積調整至1,000mL。在該種狀況下，將總乙酸鹽量固定為1M(100mM於蛋白質溶液、結晶緩衝劑及結晶混合物中)。
根據實例34a執行結晶；三天後觀察到劍狀晶體。
實例40-囊封晶體之製備
如經由ζ電位量測使用Malvern Instruments Zetasizer nano所測定，實例34中所獲得之晶體帶正電。將晶體洗滌且懸浮於含有保持結晶性之賦形劑且具有保持晶體帶電之pH值的緩衝劑中。隨後，將適當囊封劑添加至晶體懸浮液中。就此而言，適當囊封劑為具有低毒性、生物可降解性及抗衡離子特徵之(聚合)物質。由於此抗衡離子特 徵，該物質吸附於晶體上且允許塗覆。藉由此技術，較佳維持晶體溶解於不含有任何其他維持結晶性之賦形劑之介質中。
實例41-囊封/包埋晶體之製備
如實例34中所述獲得晶體。將晶體洗滌且懸浮於含有保持結晶性之賦形劑之緩衝劑中。
接著可藉由乾燥晶體且將此等經乾燥晶體與載劑組合(例如藉由壓縮、熔融分散等)來包埋晶體。
-藉由將晶體懸浮液與不可與水混溶之載劑溶液組合來囊封/包埋。該載劑在移除載劑之溶劑後沈澱。隨後，將物質乾燥。
-藉由將晶體懸浮液與水可混溶性載劑溶液組合來囊封/包埋。當超過載劑在混合物中之溶解度極限時該載劑沈澱。
-藉由將經乾燥晶體或晶體懸浮液與水可混溶性載劑溶液組合來包埋。
-藉由將經乾燥晶體與水不可混溶性載劑溶液組合來包埋。
實例42-沈澱ABT-874之研究
a)沈澱
乙酸鹽緩衝劑係藉由將1莫耳乙酸鈉溶解於水中且用乙酸(100%)將pH值調整至5.5來製備。將儲備溶液用水以1：10稀釋以供緩衝劑交換。PEG 4000溶液係藉由將20g PEG 4000溶解於5mL 1M乙酸鈉緩衝劑pH 5.5及水中來製備。在溶解後，用水將體積調整至50mL。將5mL 10mg/mL ABT874(於0.1M乙酸鈉緩衝劑pH 5.5中)(藉由透濾交換之原始緩衝劑)與5mL於0.1M乙酸鈉緩衝劑pH 5.5中之40% PEG 4000混合。
在無攪拌之情況下將沈澱物批料保持於室溫下隔夜。形成大小為約1-10μm之非雙折射粒子。
b)沈澱物之洗滌
將2mL沈澱物漿料置放入離心機中且以500×g離心20min。丟棄上清液，且將離心塊再懸浮於2mL於0.1M乙酸鈉緩衝劑pH 5.5中之40% PEG 4000(根據上述程序製備)中。最終懸浮液之蛋白質濃度藉由OD280測定為3.9mg/mL。
G.晶體表徵
在以下章節中，概述為測定是否結晶性單株抗體ABT-874在使該結晶性物質再溶解後保留未曾結晶之ABT-874之生物活性特徵而執行的實驗。
G1.藉由測定NK-92細胞之IFN-γ產生的生物活性測試
a)通用方法
再溶解ABT-874晶體之生物活性係藉由監測NK-92細胞響應於IL-12刺激之IFN-γ產生的基於細胞之檢定來量測。在分析之前，首先將樣品於細胞培養介質(具有20% FCS及200mM L-麩胺醯胺之α-MEM介質)中稀釋至30μg/mL。隨後，以11個步驟將樣品進一步自3μg/mL稀釋至0.1ng/mL。將IL-12溶液於細胞培養介質中稀釋至10ng/mL且添加至ABT-874樣品中。接著將混合物於37℃及5% CO2下培養1小時。
將NK-92細胞之懸浮液(2.0×106個細胞/毫升)用移液管移至96孔微量培養板中，將ABT-874/IL-12混合物添加至細胞中且接著將微量培養板於37℃及5% CO2下培養約20小時。培養後，將微量培養板於1,000rpm及5℃下離心10min且使用各孔之50μl上清液藉由ELISA(ELISA套組人類干擾素-γ，Pierce，目錄號EHIFNG)量測由細胞產生之IFN-γ之量。
將生物素標記抗IFN-γ抗體溶液用移液管移至96孔預塗微量培養板中且添加細胞培養物上清液(兩種樣品各4列)。於室溫下將微量培養板培養2小時後，將其洗滌。此後，添加抗生蛋白鏈菌素-HRP溶液且將微量培養板再培養30min，且接著加以洗滌。在添加TMB受質 後，將微量培養板於室溫下在黑暗中培養約20min且接著藉由添加停止溶液停止反應。
最後，在隨後5min內用微量培養板讀取器於450nm下(校正波長為550nm)量測吸收且將結果相對於ABT-874濃度作圖。接著使用4參數非線性曲線擬合估算IC50值且藉由以樣品之IC50值除參考標準之IC50值且乘以100%來計算樣品之相對生物活性。
b)ABT-874晶體之相對活性
將樣品之生物活性與參考標準之生物活性比較來執行測試。由細胞產生之IFN-γ之量係藉由市售ELISA套組量測且以於450nm之波長下之吸收單位報導。將此等值相對於ABT-874之濃度作圖且藉由4參數非線性回歸評估，結果揭示ABT-874抑制IL-12效應之IC50值。因為將兩種樣品於一個微量培養板上重複四次，因此此導致ABT-874參考標準及樣品分別有四個IC50值。隨後，計算參考標準之IC50值之平均值且藉由以樣品之相關IC50值除參考標準之平均IC50值且乘以100%來評估每次重複之樣品的相對活性。
對樣品(晶體懸浮液2.9mg/mL)之測試揭示98%之相對生物活性。因此，樣品可視作具有完全生物學活性。
G2.顯微鏡表徵
以下將呈現關於ABT-874晶體之顯微鏡表徵的資料。
a)對mAb晶體分批樣品之光學分析
在均質化後，將1至10μL樣品體積之等分試樣用移液管移至物體固持器板上且用玻璃蓋玻片覆蓋。使用分別裝備有E-PI 10×目鏡及10×、20×及40×物鏡之Zeiss Axiovert 25倒置光學顯微鏡評估晶體製劑。使用數位攝影機(Sony Cybershot DSC S75)獲取圖像。
b)對ABT-874晶體之掃描電子顯微鏡(SEM)表徵
為用電子顯微鏡使蛋白質晶體成像，該等晶體必須足夠的乾 燥、具足夠之導電性及穩定性以耐受高真空及電子束之能量。此方案藉由過濾使晶體與其緩衝液分離，藉由用基於戊二醛之固定劑將晶體化學固定而使晶體穩定，經由坡度系列乙醇使晶體脫水，藉由臨界點方法將晶體乾燥且用金電漿塗覆晶體以使其導電。
b1)材料
-0.2M索倫森氏磷酸鹽緩衝劑(Sorensen's Phosphate Buffer，SPB)-0.15M磷酸氫二鈉、0.05M磷酸二氫鉀，pH 7.3
-卡洛夫斯基氏固定劑(Karnovsky's fixative)-2.5%戊二醛、1.5%三聚甲醛、0.1M SPB
-50%、75%、95%及100%乙醇
-於結晶緩衝劑中之ABT-874晶體樣品(來自實例34，儲存於來自實例35之洗滌緩衝劑中)
-ABT-874結晶緩衝劑(來自實例35之洗滌緩衝劑)
-用於將13mm過濾膜附接於注射器之微孔不鏽鋼過濾器總成
-0.4μm聚碳酸酯過濾膜(Nucleopore，Cat# 110407)
b2)設備
-臨界點乾燥器(CPD)-Baltec型號CPD030，Asset LC978501
-掃描電子顯微鏡(SEM)-Philips XL30場致發射掃描電子顯微鏡
-濺射塗覆機-Denton Desk II濺射塗覆機，Asset LC827847
b3)程序
藉由使溶液沖過過濾器總成且將該注射器固持於過濾器總成上歷時指定固持時間來執行步驟3-12。
1.將聚碳酸酯過濾器裝至注射器過濾器固持器上；2.將0.1ml晶體樣品與0.4ml晶體緩衝劑混合於1.0ml注射器中；3.經由過濾器總成分配經稀釋晶體溶液；4.分配1ml晶體緩衝劑且保持2min； 5.分配1ml 50%固定劑、50%晶體緩衝劑且保持2min；6.分配1ml 100%固定劑且保持2min；7.分配1ml SPB且保持2min；8.再次分配1ml SPB且保持2min；9.分配1ml 50%乙醇且保持2min；10.分配1ml 75%乙醇且保持2min；11.分配1ml 95%乙醇且保持2min；12.分配1ml 100%乙醇且保持2min，重複步驟3次；13.將具有附著晶體之過濾膜轉移至填充有100%乙醇之CPD；14.如下處理過濾器至CPD：a. 於10℃下五次交換液體CO2，每次交換混合5分鐘；b. 加熱至40℃、80巴壓力；且c. 經20分鐘緩慢回滲至大氣壓；15.將過濾膜安裝於SEM支撐物上16.濺射塗覆以金歷時60秒；17.用SEM檢查。
c)結果
在附圖1至5中，呈現ABT-874晶體之代表性圖。
圖1展示根據實例34獲得之於結晶緩衝劑中之ABT-874晶體(來自實例34，儲存於來自實例35之洗滌緩衝劑中)的光學顯微圖。晶體慣態類似於圖2至5中展示之經固定乾燥之晶體的慣態。該等晶體展現雙折射。
圖2至圖5展示根據實例34獲得之ABT-874晶體在不同放大倍率下的SEM。
G3.雙折射
自所有分批實驗產生之晶體展現雙折射。
G4.可注射性
150mg/mL蛋白質併入晶體中且調配於來自實例35之洗滌緩衝劑中之ABT-874晶體懸浮液可經由27G針注射。
H.對ABT-874之毛細管等電聚焦(cIEF)實驗
a)設備
使用iCE280分析器(Convergent Bioscience)進行分析。系統ID 1054(IS #2785)。
b)材料
所使用之毛細管為經塗覆之50mm長度、100μm ID管柱(Convergent，目錄號101700)。所使用之電解液為陽極電解液(80mM H3PO4)及陰極電解液(100mM NaOH)。(Convergent，目錄號101800)。載體兩性電解質為4% Pharmalyte(8-10.5)(GE Healthcare，目錄號17-0455-01)。添加劑為甲基纖維素(0.35%)(Convergent，目錄號101876)。內部pI標記係來自BioRad(8.4、8.5、10.1及10.4-BioRad，目錄號148-2100，貨號482-511)pI標記混合物。
c)方法
聚焦時間於1500V下為2分鐘且於3000V下為20分鐘。樣品製備程序-將Mab晶體、Mab沈澱物及參考標準均於Milli-Q水中稀釋至約1mg/ml。樣品製備程序(用尿素)。
如上表中所示，將樣品混合於1.5mL微量離心管中。接著添加尿素(20mg)以產生約1.6M之最終濃度。接著將離心管渦旋，離心10分鐘且接著小心地轉移至小瓶中以供分析。
d)結果
分析下列樣品：
ABT-874晶體緩衝劑(來自實例35之洗滌緩衝劑)
ABT-874晶體(根據實例33獲得，於來自實例35之洗滌緩衝劑中)
參考標準(ABT-874液體樣品)。
結果展示於附圖6A至C中。
實例43：晶體結晶/再溶解後之天然二級結構的保持
根據製造商說明書用Confocheck系統於Bruker Optics Tensor 27上記錄IR光譜。使用MicroBiolytics AquaSpec單元分析液體樣品。用Harrick BioATRII單元TM執行蛋白質懸浮液之量測。各樣品係藉由於25℃下執行120至500次掃描之至少兩次量測來評估。分別自蛋白質光譜減去空白緩衝劑光譜。藉由傅裏葉變換(Fourier transformation)產生蛋白質二階導數光譜且將向量自1580-1720cm-1正規化以供相對比較。
如下執行晶體之再溶解。將晶體懸浮液離心，丟棄上清液，且將晶體離心塊溶解於0.1M乙酸鈉緩衝劑pH 5.5中達10mg/mL蛋白質 濃度。
圖11圖示按照實例34b中所述之處理結晶、按照實例35中所介紹之程序洗滌且經再溶解的結晶性ABT-874懸浮液之FT-IR二階導數光譜。該光譜展示在結晶性固體狀態下或再溶解後，觀察到二級結構無顯著變化。
實例44：穩定性資料(SE HPLC、FT-IR、形態)
使用實例34b中所述之結晶程序使ABT-874結晶。如實例35中所述，用含有22% PEG 4,000及0.1M乙酸鈉之分散緩衝劑洗滌晶體，且用冰乙酸將pH值調整至5.5。隨後，藉由離心分別將晶體濃縮至5mg/mL及50mg/mL蛋白質，且儲存於2-8℃下。
經3個月儲存於2-8℃下，5mg/mL及50mg/mL結晶性ABT-874之穩定性資料指示超過90%單體的保持率。
(a)SE-HPLC
使用Dionex HPLC系統(P680泵、ASI 100自動取樣器、UVD170U)量測ABT-874抗體之穩定性。將ABT-874樣品於GE Superdex® 200管柱上，應用0.75mL/min之流速分離。於214nm之波 長下進行偵測。運行緩衝液由於0.09M磷酸鈉緩衝劑(pH 7.0)中之0.2M硫酸二鈉組成。
(b)FT-IR
用Confocheck系統於Bruker Optics Tensor 27上記錄IR光譜。使用MicroBiolytics AquaSpec單元分析液體樣品。用Harrick BioATRII單元TM執行蛋白質懸浮液之量測。各樣品係藉由於25℃下執行120至500次掃描之至少兩次量測來評估。分別自蛋白質光譜減去空白緩衝劑光譜。藉由傅裏葉變換產生蛋白質二階導數光譜且將向量自1580-1720cm-1正規化以供相對比較。
如下執行晶體之再溶解。將晶體懸浮液離心，丟棄上清液，且將晶體離心塊溶解於0.1M乙酸鈉緩衝劑pH 5.5中達10mg/mL蛋白質濃度。
圖2圖示結晶性ABT-874懸浮液(50mg/mL存放穩定性樣品，如上文所述製備且儲存於25℃下歷時3個月)及該等經預處理晶體在再溶解後之FT-IR二階導數光譜。該光譜展示在結晶性固體狀態下或再溶解後，於25℃下儲存三個月後觀察到二級結構無顯著變化。
(c)形態
於2-8℃下儲存3個月後，在晶體之光學顯微法分析中觀察到無顯著形態變化。將1μL至10μL樣品體積之等分試樣用移液管移至物體固持器板上，用調配緩衝劑(22% PEG)稀釋且用玻璃蓋玻片覆蓋。使用分別裝備有E-PI 10×目鏡及10×、20×及40×物鏡之Zeiss Axiovert 25倒置光學顯微鏡評估製劑。
實例45-結晶過程之產率增加
結晶過程之終點可定義為在結晶漿料之上清液之等分試樣的OD280量測不變(例如在隨後三天裏)時的時間點。產率增加藉由將一定量額外PEG 4,000(於約0.1M乙酸鈉緩衝劑中之50% w/v溶液，pH值 為約5.5)添加至結晶漿料之上清液中而成為可能。類似於第一次收穫結果之晶體在隨後數天期間形成。應用此程序，容易使總產率超過90%，而不引入沈澱。
舉例而言，在實例34b之上清液之等分試樣中，將PEG 4,000濃度自約11% w/v升至約22% w/v、約20% w/v、約18% w/v、約16% w/v或約14% w/v。於周圍溫度(例如介於約20℃與約25℃之間)下儲存若干天後，於某些PEG 4,000濃度(例如約22% w/v、約20% w/v或約18% w/v PEG 4,000)下觀察到沈澱物質。於較低PEG 4,000濃度(例如於約16% w/v及約14% w/v PEG 4,000)下發現晶體但不伴有沈澱。藉由將PEG 4,000添加至結晶漿料之殘餘上清液中達例如約14% w/v之總體濃度，使總體晶體產率在數天內自約60%提昇至約70%直至超過90%。
實例46：應用連續方法增加產率
在本實例中，將其他沈澱物及/或蛋白質以預定速率"滴定"至結晶批料(視情況含有一定量之結晶試劑)中。隨時間促使連續結晶，最後產生超過90%的晶體產率。
實例47-ABT-874結晶批料之接種
自發成核在性質上具統計性。可能由相同蛋白質(均質接種)或除結晶者外之另一物質(異質接種)組成的晶種提供可組裝其他分子之模板。因此，接種可藉此加速結晶。
如實例34b中所述製備ABT-874結晶批料。在將蛋白質溶液與結晶緩衝劑混合後，藉由用ABT-874晶體均質接種來接種混合物。舉例而言，將如實例34b中所述製備之展現約50%至60%晶體產率之晶體懸浮液的等分試樣例如以1/20比率(v/v)添加至結晶批料中。應用此策略，進一步將總晶體產率及處理持續時間向較短處理時間內的較高產率最優化。
簡言之，製備ABT-874結晶混合物(於0.1M乙酸鹽緩衝劑pH 5.5 中之5mg/mL蛋白質及11% PEG 4,000)且分成兩個40mL等分試樣。將第一批料儲存於RT下而無其他程序且藉由添加已展現65%晶體產率之2mL相同組成之結晶混合物(6.5mg晶種，基於結晶蛋白質計算，與批料中之200mg ABT-874相比)來接種第二批料。圖13中所繪之圖說明藉由應用此接種方法，在80天內總產率增加約15%，而平行曲線行進表明達到最大產率之處理時間並不顯著減少。圖13表明儘管未接種批料在約80天後達到產率之平台，但理論上可能之產率可能高達接種批料之產率，此意謂接種減少結晶過程之持續時間而不增加產率。
以引用之方式併入
本申請案可能通篇引用之所有引用參考資料(包括文獻參考、專利、專利申請案及網站)的內容明確地以全文引用之方式併入本文中，其中所引用之參考案亦然。除非另有指示，否則本發明之實踐將利用此項技術中熟知之結晶及調配之習知技術。
等效性
在不脫離本發明之精神或基本特徵的情況下可以其他特定形式體現本發明。因此，就各方面而言上述實施例視為說明性的而非限制本文所述之本發明。因此，本發明之範疇係由隨附申請專利範圍而非由上述描述所指示，且因此在申請專利範圍之等效性之意義及範圍內的所有變化意欲包含在本發明中。
<110> 美商亞培公司
<120> 結晶性抗人類IL-12抗體
<130> M/47164
<140> 097111598
<141> 2008/03/28
<150> 2007/03/29
<151> 60/920,608
<160> 2
<170> PatentIn version 3.3
<210> 1
<211> 444
<212> PRT
<213> 智人
<400> 1
<210> 2
<211> 217
<212> PRT
<213> 智人
<400> 2

Claims (43)

  1. 一種使抗人類IL-12抗體結晶之分批結晶方法，該方法包含下列步驟：(a)提供該抗體與作為結晶試劑之至少一種聚伸烷二醇(polyalkylene glycol)之混合物的水溶液；及(b)培育該水性結晶混合物直至形成該抗體之晶體。
  2. 如請求項1之結晶方法，其中該水性結晶混合物之pH在約pH 4至約6.5之範圍內。
  3. 如請求項1或2之結晶方法，其中該水性結晶混合物包含緩衝劑。
  4. 如請求項3之結晶方法，其中該緩衝劑包含乙酸鹽緩衝劑。
  5. 如請求項4之結晶方法，其中該緩衝劑包含乙酸鈉。
  6. 如請求項3之結晶方法，其中該水性結晶混合物中緩衝劑濃度達約0.5M。
  7. 如請求項1或2之結晶方法，其中該聚伸烷二醇具有在約400至約10,000之範圍內的平均分子量。
  8. 如請求項7之結晶方法，其中該聚伸烷二醇為聚乙二醇。
  9. 如請求項1或2之結晶方法，其中該結晶混合物中該聚伸烷二醇濃度在約5%至30%(w/v)之範圍內。
  10. 如請求項9之結晶方法，其中該聚伸烷二醇為聚乙二醇。
  11. 如請求項1或2之結晶方法，其中符合下列其他結晶條件之至少一者：a)執行培育約1小時至約250天；b)於約4℃與約37℃之間的溫度執行培育；c)該抗體濃度在約0.5mg/mL至約280mg/mL之範圍內。
  12. 如請求項1或2之結晶方法，其進一步包含乾燥該等晶體之步驟。
  13. 如請求項1或2之結晶方法，其進一步包含用人造母液交換結晶母液之步驟。
  14. 如請求項1或2之結晶方法，其中分批體積在約1ml至約20,000升之範圍內。
  15. 一種抗人類IL-12抗體之晶體。
  16. 一種抗人類IL-12抗體之晶體，其可藉由如請求項1至14中任一項之結晶方法獲得。
  17. 如請求項15或16之晶體，其中該等晶體具有劍狀形態。
  18. 如請求項15或16之晶體，其中該抗體為多株抗體或單株抗體。
  19. 如請求項18之晶體，其中該抗體係選自由嵌合抗體、人類化抗體、非糖基化抗體、人類抗體及小鼠抗體組成之群。
  20. 如請求項15或16之晶體，其中該抗體為IgG抗體。
  21. 如請求項20之晶體，其中該抗體係選自由IgG1、IgG2、IgG3及IgG4抗體組成之群。
  22. 如請求項21之晶體，其中該抗體為IgG1群之抗人類IL-12抗體。
  23. 如請求項22之晶體，其中該晶體係由自人類IL-12解離之分離人類抗體製備，藉由表面電漿共振測定，Kd為1×10-10M或更小，koff速率常數為1×10-3 s-1或更小。
  24. 如請求項22之晶體，其中該晶體係自具有包含SEQ ID NO：2之胺基酸序列之輕鏈可變區(LCVR)及包含SEQ ID NO：1之胺基酸序列之重鏈可變區(HCVR)的分離之人類抗體製備。
  25. 如請求項23之晶體，其中該晶體係自抗體ABT-874製備。
  26. 一種醫藥組合物，其包含：(a)如請求項15至25中任一項之抗人類IL-12抗體之晶體及(b)至少一種醫藥賦形劑；其中該組合物係以固體、半固體或液體調配物提供，各調配物含有呈結晶形式之該抗體。
  27. 一種醫藥組合物，其包含：(a)如請求項15至25中任一項之抗人類IL-12抗體之晶體及(b)至少一種包埋或囊封該等晶體之醫藥賦形劑。
  28. 如請求項26或27之組合物，其中該組合物具有大於約1mg/ml之抗體濃度。
  29. 如請求項28之組合物，其中該組合物具有大於約200mg/ml之抗體濃度。
  30. 如請求項26及27之組合物，其中該組合物包含至少一種選自由聚合之生物可降解載劑、聚合之非生物可降解載劑、油類載劑及脂質載劑組成之群的載劑。
  31. 如請求項30之組合物，其中該聚合載劑為選自一或多種由下列組成之群之聚合物：聚(丙烯酸)、聚(氰基丙烯酸酯)、聚(胺基酸)、聚(酸酐)、聚(縮肽(depsipeptide))、聚(酯)、聚(乳酸)、聚(乳酸-共-乙醇酸)或PLGA、聚(β-羥基丁酸酯)、聚(己內酯)、聚(二氧雜環己酮(dioxanone))；聚(乙二醇)、聚(羥基丙基)甲基丙烯醯胺、聚(有機)磷氮烯、聚(原酸酯)、聚(乙烯醇)、聚(乙烯吡咯啶酮)、順丁烯二酸酐烷基乙烯基醚共聚物、泊洛尼克多元醇(pluronic polyols)、白蛋白、海藻酸鹽、纖維素及纖維素衍生物、膠原蛋白、纖維蛋白、明膠、玻糖醛酸、寡醣、甘胺基聚糖、硫酸化多醣、其摻合物及共聚物。
  32. 一種可注射液體組合物，其包含如請求項15至25中任一項之抗人類IL-12抗體晶體且具有在約10mg/ml至約400mg/ml之範圍內的抗體濃度。
  33. 一種晶體漿料組合物，其包含如請求項15至25中任一項之抗人類IL-12抗體晶體，具有大於約100mg/ml之抗體濃度。
  34. 一種如請求項15至25中任一項之抗人類IL-12抗體晶體之用途，其 用於製備治療哺乳動物之藥劑。
  35. 一種如請求項26至33中任一項之組合物之用途，其用於製備治療哺乳動物之藥劑。
  36. 如請求項34或35之用途，其中該藥劑係藉由非經腸途徑、口服途徑或藉由注射投與。
  37. 一種如請求項15至25中任一項之抗人類IL-12抗體晶體的用途，其用於製備治療IL-12相關病症之醫藥組合物。
  38. 如請求項37之用途，其中該IL-12相關病症係選自由下列組成之群：類風濕性關節炎、骨關節炎、青少年慢性關節炎、萊姆關節炎(Lyme arthritis)、牛皮癬性關節炎、反應性關節炎、脊柱關節病、全身性紅斑狼瘡、克羅恩氏病(Crohn's disease)、潰瘍性結腸炎、炎性腸病、胰島素依賴性糖尿病、甲狀腺炎、哮喘、過敏性疾病、牛皮癬、皮炎硬皮病、異位性皮炎、移植物抗宿主疾病、器官移植排斥反應、與器官移植相關之急性或慢性免疫疾病、類肉瘤病、動脈粥樣硬化、彌漫性血管內凝血、川崎氏病(Kawasaki's disease)、格雷氏病(Grave's disease)、腎病症候群、慢性疲勞症候群、韋格納肉牙腫病(Wegener's granulomatosis)、亨偌-絲奇恩賴紫癜(Henoch-Schoenlein purpurea)、顯微腎血管炎、慢性活動性肝炎、葡萄膜炎、敗血性休克、中毒性休克症候群、敗血症候群、惡病質、傳染性疾病、寄生蟲疾病、後天免疫缺乏症候群、急性橫貫性脊髓炎、亨廷頓氏舞蹈病(Huntington's chorea)、帕金森氏病(Parkinson's disease)、阿茲海默氏病(Alzheimer's disease)、中風、原發性膽汁性肝硬化症、溶血性貧血、惡性腫瘤、心臟衰竭、心肌梗塞、艾迪森氏病(Addison's disease)、散發病(sporadic)、I型多腺缺乏症及II型多腺缺乏症、施密特氏症候群(Schmidt's syndrome)、成人(急性)呼吸窘迫症候 群、禿髮症、斑禿、血清陰性關節病、關節病、萊特爾氏病(Reiter's disease)、牛皮癬性關節病、潰瘍性結腸炎性關節病、腸病性滑膜炎、衣原體疾病、耶氏菌(yersinia)及沙門氏菌(salmonella)相關關節病、脊柱關節病、動脈粥樣化病/動脈硬化症、異位性過敏、自體免疫性大疱病、尋常天疱瘡、落葉狀天疱瘡、類天疱瘡、線性IgA疾病、自體免疫性溶血性貧血、庫姆陽性溶血性貧血(Coombs positive haemolytic anaemia)、後天惡性貧血、青少年惡性貧血、肌痛性腦炎/貴族自由疾病(Royal Free Disease)、慢性皮膚黏膜念珠菌病、巨細胞性動脈炎、原發性硬化性肝炎、隱原性(cryptogenic)自體免疫性肝炎、後天性免疫缺陷疾病症候群(Acquired Immunodeficiency Disease Syndrome)、後天性免疫缺陷相關疾病(Acquired Immunodeficiency Related Disea-ses)、C型肝炎、普通可變性免疫缺陷(普通可變性低γ-球蛋白血症)、擴張型心肌病、女性不孕症、卵巢衰竭、卵巢早衰、纖維化肺病、隱原性纖維化肺泡炎、發炎後間質性肺病、間質性肺炎、結締組織疾病相關間質性肺病、混合型結締組織疾病相關肺病、全身性硬化症相關間質性肺病、類風濕性關節炎相關間質性肺病、全身性紅斑狼瘡相關肺病、皮肌炎/多肌炎相關肺病、休格連氏病(Sjodgren's disease)相關肺病、強直性脊椎炎相關肺病、血管炎彌漫性肺病、血鐵質沈著症相關肺病、藥物誘發之間質性肺病、放射性纖維化、阻塞性細支氣管炎、慢性嗜酸性肺炎、淋巴球性浸潤性肺病、感染後間質性肺病、痛風性關節炎、自體免疫性肝炎、1型自體免疫性肝炎(典型自體免疫性或狼瘡樣肝炎)、2型自體免疫性肝炎(抗LKM抗體肝炎)、自體免疫介導性低血糖症、B型抗胰島素症伴有黑棘皮病、甲狀旁腺機能減退、與器官移植相關之急性免疫疾病、與器官移植相關之慢性免疫疾病、骨 關節病、原發性硬化性膽管炎、特發性白血球減少症、自體免疫性嗜中性球減少症、腎病NOS、腎小球腎炎、顯微腎血管炎、萊姆病(lyme disease)、盤狀紅斑狼瘡、男性不育症特發性或NOS、精子自體免疫疾病、多發性硬化症(所有亞型)、胰島素依賴性糖尿病、交感性眼炎、結締組織疾病繼發性肺動脈高血壓、古德帕斯徹氏症候群(Goodpasture's syndrome)、結節性多動脈炎之肺部表現、急性風濕熱、類風濕性脊椎炎、史提爾氏病(Still's disease)、全身性硬化症、高安氏病(Takayasu's disease)/動脈炎、自體免疫性血小板減少症、特發性血小板減少症、自體免疫性甲狀腺病、甲狀腺機能亢進、甲狀腺腫性自體免疫性甲狀腺功能低下(橋本氏病(Hashimoto's disease))、萎縮性自體免疫性甲狀腺功能低下、原發性黏液水腫、晶狀體原性葡萄膜炎、原發性血管炎及白癜風。本發明之人類抗體及抗體部分可用於治療自體免疫性疾病，尤其與炎症相關者，包括類風濕性脊椎炎、過敏、自體免疫性糖尿病、自體免疫性葡萄膜炎。
  39. 如請求項15或16之抗人類IL-12抗體晶體，其係用於醫藥。
  40. 如請求項1或2之結晶方法，其進一步包含藉由添加額外聚伸烷二醇增加該等晶體產率的步驟。
  41. 如請求項40之方法，其中該聚伸烷二醇為聚乙二醇。
  42. 如請求項40之方法，其中連續添加該聚伸烷二醇。
  43. 如請求項1或2之結晶方法，其進一步包含用ABT-874接種反應之步驟。
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* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US6258562B1 (en) 1996-02-09 2001-07-10 Basf Aktiengesellschaft Human antibodies that bind human TNFα
AU2002256971B2 (en) * 2000-12-28 2008-04-03 Altus Pharmaceuticals Inc. Crystals of whole antibodies and fragments thereof and methods for making and using them
MX2007014440A (es) 2005-05-16 2008-02-11 Abbott Biotech Ltd Uso de inhibidor de tnf para tratamiento de poliartritis erosiva.
US9605064B2 (en) * 2006-04-10 2017-03-28 Abbvie Biotechnology Ltd Methods and compositions for treatment of skin disorders
JP2010507670A (ja) 2006-10-27 2010-03-11 アボツト・バイオテクノロジー・リミテツド 結晶性抗ｈＴＮＦα抗体
SG177982A1 (en) * 2007-01-16 2012-02-28 Abbott Lab Methods for treating psoriasis
AU2008233173B2 (en) 2007-03-29 2013-09-19 Abbvie Inc. Crystalline anti-human IL-12 antibodies
MX2010001488A (es) * 2007-08-08 2010-03-01 Abbott Lab Composiciones y metodos para cristalizar anticuerpos.
CA2713342A1 (en) * 2008-01-30 2009-08-13 Abbott Laboratories Compositions and methods for crystallizing antibody fragments
BRPI0908715A2 (pt) * 2008-03-18 2016-05-03 Abbott Lab métodos para tratamento da psoríase
BRPI0921320A2 (pt) * 2008-11-28 2018-05-22 Abbott Laboratories composições de anticorpo estáveis e métodos para estabilizar os mesmos
TW201127400A (en) * 2009-09-14 2011-08-16 Abbott Lab Methods for treating psoriasis
EP2596123B1 (en) * 2010-07-22 2015-11-25 Shire Human Genetic Therapies, Inc. Crystal structure of human alpha-n-acetylglucosaminidase
WO2012135035A1 (en) * 2011-03-25 2012-10-04 Amgen Inc. Anti - sclerostin antibody crystals and formulations thereof
WO2012149197A2 (en) 2011-04-27 2012-11-01 Abbott Laboratories Methods for controlling the galactosylation profile of recombinantly-expressed proteins
US9150645B2 (en) 2012-04-20 2015-10-06 Abbvie, Inc. Cell culture methods to reduce acidic species
WO2013158273A1 (en) 2012-04-20 2013-10-24 Abbvie Inc. Methods to modulate c-terminal lysine variant distribution
US9067990B2 (en) 2013-03-14 2015-06-30 Abbvie, Inc. Protein purification using displacement chromatography
US9249182B2 (en) 2012-05-24 2016-02-02 Abbvie, Inc. Purification of antibodies using hydrophobic interaction chromatography
WO2014004436A2 (en) 2012-06-27 2014-01-03 Merck Sharp & Dohme Corp. Crystalline anti-human il-23 antibodies
EP2890782A1 (en) 2012-09-02 2015-07-08 AbbVie Inc. Methods to control protein heterogeneity
US9512214B2 (en) 2012-09-02 2016-12-06 Abbvie, Inc. Methods to control protein heterogeneity
US8962888B2 (en) * 2012-12-03 2015-02-24 Physical Sciences, Inc. Forming spherical crystal habit
UA117466C2 (uk) 2012-12-13 2018-08-10 Мерк Шарп Енд Доме Корп. СТАБІЛЬНИЙ СКЛАД У ВИГЛЯДІ РОЗЧИНУ АНТИТІЛА ДО IL-23p19
EP2830651A4 (en) 2013-03-12 2015-09-02 Abbvie Inc HUMAN ANTIBODIES THAT BIND TNF-ALPHA AND PREPARATION METHODS
WO2014151878A2 (en) 2013-03-14 2014-09-25 Abbvie Inc. Methods for modulating protein glycosylation profiles of recombinant protein therapeutics using monosaccharides and oligosacharides
US9017687B1 (en) 2013-10-18 2015-04-28 Abbvie, Inc. Low acidic species compositions and methods for producing and using the same using displacement chromatography
US8921526B2 (en) 2013-03-14 2014-12-30 Abbvie, Inc. Mutated anti-TNFα antibodies and methods of their use
WO2015051293A2 (en) 2013-10-04 2015-04-09 Abbvie, Inc. Use of metal ions for modulation of protein glycosylation profiles of recombinant proteins
US9085618B2 (en) 2013-10-18 2015-07-21 Abbvie, Inc. Low acidic species compositions and methods for producing and using the same
US9181337B2 (en) 2013-10-18 2015-11-10 Abbvie, Inc. Modulated lysine variant species compositions and methods for producing and using the same
US8946395B1 (en) 2013-10-18 2015-02-03 Abbvie Inc. Purification of proteins using hydrophobic interaction chromatography
WO2015073884A2 (en) 2013-11-15 2015-05-21 Abbvie, Inc. Glycoengineered binding protein compositions
AR103726A1 (es) * 2015-02-27 2017-05-31 Merck Sharp & Dohme Cristales de anticuerpos monoclonales anti-pd-1 humanos
WO2018204374A1 (en) 2017-05-02 2018-11-08 Merck Sharp & Dohme Corp. Formulations of anti-lag3 antibodies and co-formulations of anti-lag3 antibodies and anti-pd-1 antibodies
JOP20190260A1 (ar) 2017-05-02 2019-10-31 Merck Sharp & Dohme صيغ ثابتة لأجسام مضادة لمستقبل الموت المبرمج 1 (pd-1) وطرق استخدامها
BR112021008873A8 (pt) 2018-11-07 2023-04-11 Merck Sharp & Dohme Formulação
WO2021152175A1 (en) * 2020-01-31 2021-08-05 Sanofi Pulmonary delivery of antibodies
JPWO2024195801A1 (zh) * 2023-03-20 2024-09-26

Family Cites Families (135)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
GB8308235D0 (en) * 1983-03-25 1983-05-05 Celltech Ltd Polypeptides
US4597966A (en) * 1985-01-09 1986-07-01 Ortho Diagnostic Systems, Inc. Histidine stabilized immunoglobulin and method of preparation
DE3631229A1 (de) * 1986-09-13 1988-03-24 Basf Ag Monoklonale antikoerper gegen humanen tumornekrosefaktor (tnf) und deren verwendung
US4877608A (en) * 1987-11-09 1989-10-31 Rorer Pharmaceutical Corporation Pharmaceutical plasma protein formulations in low ionic strength media
US4897465A (en) * 1988-10-12 1990-01-30 Abbott Laboratories Enrichment and concentration of proteins by ultrafiltration
US5811523A (en) * 1988-11-10 1998-09-22 Trinchieri; Giorgio Antibodies to natural killer stimulatory factor
US5530101A (en) * 1988-12-28 1996-06-25 Protein Design Labs, Inc. Humanized immunoglobulins
JPH0791318B2 (ja) 1989-09-21 1995-10-04 三井東圧化学株式会社 蛋白質水溶液、蛋白質水溶液の濃度増大方法および蛋白質製剤
ATE168416T1 (de) * 1989-10-05 1998-08-15 Optein Inc Zellfreie synthese und isolierung von genen und polypeptiden
US5780597A (en) * 1989-12-22 1998-07-14 Hoffmann-La Roche Inc. Monoclonal antibodies to cytotoxic lymphocyte maturation factor
US6713610B1 (en) * 1990-01-12 2004-03-30 Raju Kucherlapati Human antibodies derived from immunized xenomice
US5945098A (en) * 1990-02-01 1999-08-31 Baxter International Inc. Stable intravenously-administrable immune globulin preparation
GB9015198D0 (en) 1990-07-10 1990-08-29 Brien Caroline J O Binding substance
ATE185601T1 (de) 1990-07-10 1999-10-15 Cambridge Antibody Tech Verfahren zur herstellung von spezifischen bindungspaargliedern
US5618710A (en) 1990-08-03 1997-04-08 Vertex Pharmaceuticals, Inc. Crosslinked enzyme crystals
DE69129154T2 (de) 1990-12-03 1998-08-20 Genentech, Inc., South San Francisco, Calif. Verfahren zur anreicherung von proteinvarianten mit geänderten bindungseigenschaften
WO1994004679A1 (en) 1991-06-14 1994-03-03 Genentech, Inc. Method for making humanized antibodies
GB9122820D0 (en) * 1991-10-28 1991-12-11 Wellcome Found Stabilised antibodies
US5652138A (en) * 1992-09-30 1997-07-29 The Scripps Research Institute Human neutralizing monoclonal antibodies to human immunodeficiency virus
CA2125763C (en) * 1993-07-02 2007-08-28 Maurice Kent Gately P40 homodimer of interleukin-12
EP0638644A1 (en) 1993-07-19 1995-02-15 F. Hoffmann-La Roche Ag Receptors of interleukin-12 and antibodies
FR2708467B1 (fr) 1993-07-30 1995-10-20 Pasteur Merieux Serums Vacc Préparations d'immunoglobulines stabilisées et procédé pour leur préparation.
EP0659766A1 (en) 1993-11-23 1995-06-28 Schering-Plough Human monoclonal antibodies against human cytokines and methods of making and using such antibodies
DE4344824C1 (de) * 1993-12-28 1995-08-31 Immuno Ag Hochkonzentriertes Immunglobulin-Präparat und Verfahren zu seiner Herstellung
ZA95960B (en) 1994-03-14 1995-10-10 Genetics Inst Use of interleukin-12 antagonists in the treatment of autoimmune diseases
US5910486A (en) * 1994-09-06 1999-06-08 Uab Research Foundation Methods for modulating protein function in cells using, intracellular antibody homologues
DE69637481T2 (de) 1995-04-27 2009-04-09 Amgen Fremont Inc. Aus immunisierten Xenomäusen stammende menschliche Antikörper gegen IL-8
US6685940B2 (en) 1995-07-27 2004-02-03 Genentech, Inc. Protein formulation
CA2226575C (en) 1995-07-27 2011-10-18 Genentech, Inc. Stabile isotonic lyophilized protein formulation
US6267958B1 (en) * 1995-07-27 2001-07-31 Genentech, Inc. Protein formulation
US5853697A (en) * 1995-10-25 1998-12-29 The United States Of America, As Represented By The Department Of Health & Human Services Methods of treating established colitis using antibodies against IL-12
US6297395B1 (en) * 1995-11-10 2001-10-02 The Secretary Of State For Defence In Her Brittanic Majesty's Government Of The United Kingdom Of Great Britain And Northern Ireland Calixarenes and their use for sequestration of metals
US6090382A (en) * 1996-02-09 2000-07-18 Basf Aktiengesellschaft Human antibodies that bind human TNFα
GB9610992D0 (en) 1996-05-24 1996-07-31 Glaxo Group Ltd Concentrated antibody preparation
WO1998016248A1 (en) 1996-10-11 1998-04-23 The Government Of The United States Of America, Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services Methods for enhancing oral tolerance and treating autoimmune disease using inhibitors of interleukin-12
PT936923E (pt) 1996-11-15 2004-04-30 Kennedy Inst Of Rheumatology Supressao de tnfalfa e il-12 em terapia
CA2273194C (en) * 1996-12-03 2011-02-01 Abgenix, Inc. Transgenic mammals having human ig loci including plural vh and vk regions and antibodies produced therefrom
EP0998300A1 (en) 1997-03-18 2000-05-10 Basf Aktiengesellschaft Methods and compositions for modulating responsiveness to corticosteroids
GB9705810D0 (en) 1997-03-20 1997-05-07 Common Services Agency Intravenous immune globulin
US6183744B1 (en) 1997-03-24 2001-02-06 Immunomedics, Inc. Immunotherapy of B-cell malignancies using anti-CD22 antibodies
WO1998044948A2 (en) 1997-04-07 1998-10-15 Cangene Corporation Intravenous immune globulin formulation containing a non-ionic surface active agent with improved pharmacokinetic properties
US6162629A (en) * 1997-04-28 2000-12-19 Eli Lilly And Company Methods for processing activated protein C
WO1998056418A1 (en) 1997-06-13 1998-12-17 Genentech, Inc. Stabilized antibody formulation
US6171586B1 (en) * 1997-06-13 2001-01-09 Genentech, Inc. Antibody formulation
WO1999009055A2 (en) 1997-08-18 1999-02-25 Innogenetics N.V. Interferon-gamma-binding molecules for treating septic shock, cachexia, immune diseases and skin disorders
DK0911037T3 (da) * 1997-10-23 2002-12-02 Mitsubishi Pharma Corp Ved stuetemperatur lagringsholdbart immunoglobulinpræparat til intravenøs injektion
ATE274920T1 (de) 1997-10-31 2004-09-15 Wyeth Corp Verwendung von anti-il-12 antikörpern bei transplantationsabstossungen
JP4481489B2 (ja) 1998-01-23 2010-06-16 エフ．ホフマン−ラ ロシュ アーゲー ヒトｉｌ−１２に対する抗体
US20020161199A1 (en) * 1998-04-08 2002-10-31 Genentech, Inc. Compositions and methods for the diagnosis and treatment of tumor
US6284282B1 (en) * 1998-04-29 2001-09-04 Genentech, Inc. Method of spray freeze drying proteins for pharmaceutical administration
EP0953639A1 (en) 1998-04-30 1999-11-03 Boehringer Ingelheim International GmbH FAPalpha-specific antibody with improved producibility
DE69927520T2 (de) * 1998-12-09 2006-06-22 Protein Design Labs, Inc., Fremont Verwendung von il-12 antikörpern zur behandlung von psoriasis
US7883704B2 (en) * 1999-03-25 2011-02-08 Abbott Gmbh & Co. Kg Methods for inhibiting the activity of the P40 subunit of human IL-12
DK2168984T3 (da) * 1999-03-25 2012-12-10 Abbott Gmbh & Co Kg Humane antistoffer, som binder humant IL-12, og fremgangsmåder til pro-duktion heraf
US6914128B1 (en) * 1999-03-25 2005-07-05 Abbott Gmbh & Co. Kg Human antibodies that bind human IL-12 and methods for producing
US20030148955A1 (en) * 1999-04-19 2003-08-07 Pluenneke John D. Soluble tumor necrosis factor receptor treatment of medical disorders
AUPQ026799A0 (en) 1999-05-10 1999-06-03 Csl Limited Method of increasing protein stability by removing immunoglobulin aggregates
US7279146B2 (en) * 2003-04-17 2007-10-09 Fluidigm Corporation Crystal growth devices and systems, and methods for using same
DE10022092A1 (de) * 2000-05-08 2001-11-15 Aventis Behring Gmbh Stabilisiertes Protein-Präparat und Verfahren zu seiner Herstellung
EP1336410A4 (en) * 2000-08-04 2005-10-12 Chugai Pharmaceutical Co Ltd PROTEIN INJECTION PREPARATIONS
US6902734B2 (en) * 2000-08-07 2005-06-07 Centocor, Inc. Anti-IL-12 antibodies and compositions thereof
KR20030038690A (ko) 2000-08-07 2003-05-16 인헤일 테라퓨틱 시스템즈 인크. 응집이 최소화된, 흡입성 분무 건조 4-나선 다발 단백질분말
EP1314437B1 (en) 2000-08-11 2014-06-25 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Stabilized antibody-containing preparations
DE60139944D1 (de) 2000-10-12 2009-10-29 Genentech Inc Niederviskose konzentrierte proteinformulierungen
WO2002043750A2 (en) 2000-12-01 2002-06-06 Battelle Memorial Institute Method for the stabilizing of biomolecules (e.g. insulin) in liquid formulations
US6693173B2 (en) * 2000-12-26 2004-02-17 Alpha Therapeutic Corporation Method to remove citrate and aluminum from proteins
AU2002256971B2 (en) * 2000-12-28 2008-04-03 Altus Pharmaceuticals Inc. Crystals of whole antibodies and fragments thereof and methods for making and using them
WO2002098445A1 (fr) * 2001-05-30 2002-12-12 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Preparation de proteines
GB0113179D0 (en) 2001-05-31 2001-07-25 Novartis Ag Organic compounds
US6818613B2 (en) 2001-11-07 2004-11-16 Ortho-Mcneil Pharmaceutical, Inc. Aqueous sustained-release formulations of proteins
AU2002359495A1 (en) * 2001-11-30 2003-06-17 Centocor, Inc. Anti-tnf antibodies, compositions, methods and uses
PL213311B1 (pl) * 2002-02-14 2013-02-28 Chugai Pharmaceutical Co Ltd Preparat roztworu zawierajacego przeciwcialo
US20040105889A1 (en) * 2002-12-03 2004-06-03 Elan Pharma International Limited Low viscosity liquid dosage forms
US7101576B2 (en) 2002-04-12 2006-09-05 Elan Pharma International Limited Nanoparticulate megestrol formulations
EP1551875A4 (en) 2002-06-21 2006-06-28 Biogen Idec Inc TAMPON PREPARATIONS FOR CONCENTRATING ANTIBODIES AND METHODS FOR USE THEREOF
JP2006502116A (ja) * 2002-07-12 2006-01-19 メダレックス， インク． タンパク質の酸化分解を防ぐ方法及び組成物
BR0312785A (pt) 2002-07-19 2005-08-30 Abbott Biotech Ltd Tratamento de desordens relacionadas a tnf(alfa)
US20040033228A1 (en) 2002-08-16 2004-02-19 Hans-Juergen Krause Formulation of human antibodies for treating TNF-alpha associated disorders
EP2261230B1 (en) 2002-09-11 2017-05-10 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Protein purification method
CA2504134C (en) * 2002-11-01 2012-03-06 Bayer Healthcare Llc Process for concentration of macromolecules
US20040086532A1 (en) * 2002-11-05 2004-05-06 Allergan, Inc., Botulinum toxin formulations for oral administration
AU2003293543A1 (en) 2002-12-13 2004-07-09 Abgenix, Inc. System and method for stabilizing antibodies with histidine
US7378110B2 (en) 2002-12-17 2008-05-27 Med Immune Vaccines, Inc. High pressure spray-dry of bioactive materials
WO2004060343A1 (en) 2002-12-31 2004-07-22 Nektar Therapeutics Antibody-containing particles and compositions
US7608260B2 (en) * 2003-01-06 2009-10-27 Medimmune, Llc Stabilized immunoglobulins
EP1589996A4 (en) 2003-01-30 2009-01-21 Medimmune Inc ANTI-INTEGRIN ALPHA BETA 3 ANTIBODY FORMULATIONS AND ITS USES
PL1610820T5 (pl) * 2003-04-04 2014-01-31 Genentech Inc Preparaty zawierające wysokoskoncentrowane przeciwciała i białka
WO2004102184A1 (en) 2003-05-09 2004-11-25 Arizeke Pharmaceuticals, Inc. Compositions and methods for concentrating polypeptides and proteins
AU2004220325B2 (en) * 2003-06-30 2011-05-12 Domantis Limited Polypeptides
HUE026793T2 (en) * 2003-10-01 2016-07-28 Kyowa Hakko Kirin Co Ltd A method for stabilizing an antibody and a stabilized solution-type antibody preparation
EP1688432B1 (en) * 2003-10-09 2011-08-03 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Igm high concentration stabilized solution
US7968684B2 (en) * 2003-11-12 2011-06-28 Abbott Laboratories IL-18 binding proteins
EP1532983A1 (en) * 2003-11-18 2005-05-25 ZLB Bioplasma AG Immunoglobulin preparations having increased stability
EP1694317A4 (en) * 2003-12-19 2010-05-12 Protemix Corp Ltd COPPER ANTAGONIST COMPOUNDS
EP1713502A1 (de) * 2004-02-12 2006-10-25 MERCK PATENT GmbH Hochkonzentrierte, flüssige formulierungen von anti-egfr-antikörpern
KR100486028B1 (ko) 2004-04-20 2005-05-03 주식회사 펩트론 단백질 함유 서방성 리피드 임플란트 및 이의 제조방법
US7727962B2 (en) * 2004-05-10 2010-06-01 Boehringer Ingelheim Pharma Gmbh & Co. Kg Powder comprising new compositions of oligosaccharides and methods for their preparation
AR049390A1 (es) * 2004-06-09 2006-07-26 Wyeth Corp Anticuerpos contra la interleuquina-13 humana y usos de los mismos
US8008447B2 (en) 2004-07-23 2011-08-30 Genentech, Inc. Crystallization of antibody or fragment thereof
TW200621282A (en) * 2004-08-13 2006-07-01 Wyeth Corp Stabilizing formulations
US20060051347A1 (en) * 2004-09-09 2006-03-09 Winter Charles M Process for concentration of antibodies and therapeutic products thereof
US20060194301A1 (en) * 2004-10-09 2006-08-31 Doctor Bhupendra P Large-scale production of human serum butyrylcholinesterase as a bioscavenger
JO3000B1 (ar) * 2004-10-20 2016-09-05 Genentech Inc مركبات أجسام مضادة .
CN101120087A (zh) 2004-12-21 2008-02-06 森托科尔公司 抗-il-12抗体、表位、组合物、方法和用途
CN101111264A (zh) * 2005-01-28 2008-01-23 惠氏公司 稳定化的液体多肽制剂
US8349991B2 (en) * 2005-04-19 2013-01-08 Massachusetts Institute Of Technology Amphiphilic polymers and methods of use thereof
ES2776657T3 (es) * 2005-06-14 2020-07-31 Amgen Inc Formulaciones de proteínas autotamponantes
EP1896073B1 (en) * 2005-06-30 2013-03-06 Janssen Biotech, Inc. Anti-il-23 antibodies, compositions, methods and uses
CN103146708A (zh) * 2005-06-30 2013-06-12 Abbvie公司 Il-12/p40结合蛋白
WO2007003936A1 (en) 2005-07-02 2007-01-11 Arecor Limited Stable aqueous systems comprising proteins
JP2009508470A (ja) * 2005-07-21 2009-03-05 アボット・ラボラトリーズ Ｓｏｒｆ構築物並びにポリタンパク質、プロタンパク質及びタンパク質分解による方法を含む複数の遺伝子発現
CA2634131C (en) * 2005-12-21 2014-02-11 Wyeth Protein formulations with reduced viscosity and uses thereof
JP5231810B2 (ja) 2005-12-28 2013-07-10 中外製薬株式会社 抗体含有安定化製剤
AU2007212147A1 (en) * 2006-02-03 2007-08-16 Medimmune, Llc Protein formulations
US20070202051A1 (en) * 2006-02-10 2007-08-30 Pari Gmbh Aerosols for sinunasal drug delivery
CN101495136A (zh) 2006-02-15 2009-07-29 英克隆系统公司 抗体配制品
DE102006030164A1 (de) * 2006-06-29 2008-01-03 Boehringer Ingelheim Pharma Gmbh & Co. Kg Inhalative Pulver
CN107243099A (zh) * 2006-06-30 2017-10-13 艾伯维生物技术有限公司 自动注射装置
GB0615312D0 (en) 2006-08-02 2006-09-13 Univ Dundee Protein Solubilisation
SG175622A1 (en) 2006-10-13 2011-11-28 Centocor Ortho Biotech Inc Enhancement of hybridoma fusion efficiencies through cell synchronization
JP2010507670A (ja) * 2006-10-27 2010-03-11 アボツト・バイオテクノロジー・リミテツド 結晶性抗ｈＴＮＦα抗体
AU2007329333A1 (en) * 2006-12-06 2008-06-12 Wyeth High protein concentration formulations containing mannitol
SG177982A1 (en) * 2007-01-16 2012-02-28 Abbott Lab Methods for treating psoriasis
MX2009008769A (es) * 2007-02-16 2009-08-25 Wyeth Corp Formulaciones de proteina que contienen sorbitol.
AU2008233173B2 (en) 2007-03-29 2013-09-19 Abbvie Inc. Crystalline anti-human IL-12 antibodies
MX2009011408A (es) * 2007-05-02 2009-11-05 Hoffmann La Roche Metodo para estabilizar una proteina.
MX2010001488A (es) 2007-08-08 2010-03-01 Abbott Lab Composiciones y metodos para cristalizar anticuerpos.
KR20210049186A (ko) * 2007-11-30 2021-05-04 애브비 바이오테크놀로지 리미티드 단백질 제형 및 이의 제조방법
NZ621174A (en) * 2008-01-15 2015-09-25 Abbvie Deutschland Powdered protein compositions and methods of making same
CA2713342A1 (en) * 2008-01-30 2009-08-13 Abbott Laboratories Compositions and methods for crystallizing antibody fragments
BRPI0908715A2 (pt) * 2008-03-18 2016-05-03 Abbott Lab métodos para tratamento da psoríase
BRPI0921320A2 (pt) * 2008-11-28 2018-05-22 Abbott Laboratories composições de anticorpo estáveis e métodos para estabilizar os mesmos
US8470308B2 (en) 2009-01-03 2013-06-25 Ray C. Wasielewski Enhanced medical implant comprising disrupted tooth pulp and tooth particles
NZ595885A (en) * 2009-04-29 2014-05-30 Abbvie Biotechnology Ltd Automatic injection device
CN102458469B (zh) * 2009-05-04 2014-12-24 艾伯维生物技术有限公司 人抗TNF-α抗体的稳定高蛋白质浓度制剂

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