TW201336504A - 具抗癌活性之狼尾草活性物質、製備方法及其應用 - Google Patents
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Abstract
本發明係關於一種具抗癌活性之狼尾草活性物質，其將狼尾草分別藉由酸、鹼、溶劑進行處理，再依序分別以破細胞處理、過濾、管柱層析等步驟，以分別製備出ZE5萃取液、ZE50萃取液、ZE501萃取液，該等萃取液經抗癌活性評估後，即為具抗癌活性之狼尾草活性物質；該具抗癌活性之狼尾草活性物質對於癌細胞具選擇性毒殺效果，特別係對於肺癌細胞及乳癌細胞有效，且對正常細胞無明顯之細胞毒性。
Description
本發明係關於一種具抗癌活性之活性物質及其製備方法的技術領域，特別係指從一天然草本植物中所製備萃取者。
狼尾草(Pennisetum purpureum，學名：Pennisetum alopecuroides(L.)Spreng，又叫Chinese Pennisetum)為多年生禾本科(Gramineae)植物，其產量高，可為草食動物主要之青芻料之一，稈叢生，直立，無毛，兩邊扁壓，有蠟質，株高100~210公分，葉片革質，長30~60公分，寬5~8公釐，條形，常內捲。葉鞘扁壓具脊，毛刷狀。穗狀之圓錐花序，圓筒形，長10~15公分，小穗具2朵小花，約5公厘長，主軸與分枝密生柔毛，剛毛狀小枝長1~1.5公厘，常呈紫色；可用以清肺止咳，涼血明目。
癌症(cancer)，為控制細胞生長增殖機制失常而引起的疾病。癌細胞除了生長失控外，還會局部侵入週遭正常組織(浸潤，invasion)甚至經由體內循環系統或淋巴系統轉移到身體其他部分(遠端轉移，metastasis)。癌症有許多類型，而病症的嚴重程度取決於癌細胞所在部位以及惡性生長的程度，以及是否發生遠端轉移。多數癌症需根據其類型、所處的部位和發展的階段進行不同之治療，通常以外科手術、化療或放射療法或其結合的方式進行治療。如果癌症未經治療，通常最終結果將導致死亡。然而，無論是外科手術、化療或放射療法均有其使用限制及副作用。
近年來，許多源自植物萃取成分與其衍生物，例如長春花鹼(vincristinem與vinblastine)、喜樹鹼(camptothecin)太平洋紫杉醇(taxol)及其衍生物paclitaxel、docetaxel，已經廣泛應用在惡性腫瘤之臨床化學治療。此一顯示，以植物成分為藥物發展之研究導向，仍為兼具理論與成效之研
究。
有鑑於此，本案發明人係從一天然草本植物中萃取活性物質，並分析評估其是否具有抗癌之活性，希冀提供一天然抗癌活性物質，藉此供一般使用者或罹癌患者使用，以改善、控制、治療或預防癌症之發生或惡化。因此提出本件「具抗癌活性之狼尾草活性物質、製備方法及其應用」
本說明書中所述之所有技術性及科學術語，除非另外有所定義，皆為該所屬領域具有通常技藝者可共同瞭解的意義。
本發明之目的即在於提供一種具抗癌活性之狼尾草活性物質，該活性物質具有抑制癌細胞增殖進而達到抗肝癌的效果。
本發明之次一目的即在於提供一種具抗癌活性之狼尾草活性物質的製備方法，係以狼尾草做為材料萃取而得該具抗癌活性之狼尾草活性物質。
本發明之另一目的即在於提供一種具抗癌活性之狼尾草活性物質的用途，係將該活性物質用於製備抗癌之組成物、藥物等形式，該形式包含食品、飲品、健康食品、添加物、醫療組合物等日常生活易於使用之形式，以供一般服用者、或病患，可易於長期服用，以達日常保健、癌症預防、或病情控制之效。
可達成上述發明目的之狼尾草活性物質，係將狼尾草經過下列步驟所產生者：步驟一：將狼尾草分別進行酸、鹼、溶劑處理；步驟二：將步驟一處理後之產物分別依序進行破細胞處理、過濾、管柱層析後，即可分別製得ZE5萃取液、ZE50萃取液、ZE501萃取液，該等萃取液即為具抗癌活性之狼尾草活性物質。
將前述製備所得之狼尾草活性物質進行各類癌細胞之細胞
毒性分析，以評估該狼尾草活性物質之抗癌活性。經下述實施例證明，本發明所提供之狼尾草活性物質除了對於癌細胞具選擇性毒殺效果，尤其對肺癌細胞及乳癌細胞具明顯之抑制效果(或毒殺效果)，且對於正常細胞並無明顯之細胞毒性。
圖一為本發明狼尾草活性物質之製備流程圖。
圖二A為不同濃度狼尾草萃取物ZE5對於人類肺癌細胞A549、人類乳癌細胞MDA-MB-231及人類正常皮膚纖維母細胞CCD 966之細胞存活率分析；圖二B為不同濃度狼尾草萃取物ZE5對於人類肝癌細胞Hep G2、人類大腸結腸癌細胞DLD-1及人類正常皮膚纖維母細胞CCD 966之細胞存活率分析。
圖三為不同濃度狼尾草萃取物ZE50對於人類肺癌細胞A549、人類乳癌細胞MDA-MB-231、人類肝癌細胞Hep G2、人類大腸結腸癌細胞DLD-1、人類正常皮膚纖維母細胞CCD 966之細胞存活率分析。
圖四A為人類肺癌細胞A549未經狼尾草萃取物ZE501處理之細胞分佈圖；圖四B為人類肺癌細胞A549經狼尾草萃取物ZE501處理後之細胞分佈圖。
圖五A為人類乳癌細胞MDA-MB-231未經狼尾草萃取物ZE501處理之細胞分佈圖；圖五B為人類乳癌細胞MDA-MB-231經狼尾草萃取物ZE501處理後之細胞分佈圖。
圖六A為人類正常皮膚纖維母細胞CCD 966未經狼尾草萃取物ZE501處理之細胞分佈圖；圖六B為人類正常皮膚纖維母細胞CCD 966經狼尾草萃取
物ZE501處理後之細胞分佈圖。
圖七為不同濃度狼尾草萃取物ZE501對於人類肺癌細胞A549、人類正常皮膚纖維母細胞CCD 966之細胞存活率分析。
本發明係以下面的實施例予以示範闡明，但本發明不受下述實施例所限制。本發明所用之藥物、生物材料皆市售易於取得，下列僅為示例可取得之管道。
請參閱圖一所示，本實施例係以市面易於取得之狼尾草為原料(如：可購於初鹿牧場)，將該2公斤之狼尾草原料以70%乙醇浸泡處理後分成三組，其中兩組進行酸處理、鹼處理後。再將該三組(酸處理後、鹼處理後及乙醇處理後)分別進行破細胞步驟、固液分離、管柱層析及低溫濃縮，最後即可分別製得三種萃取物，分別命名為ZE5萃取物、ZE50萃取物、ZE501萃取物。
其中該狼尾草原料可視需要，進一步將其進行粗研磨以製備成粉末、粗磨物等各種適用後續處理之原料大小，再進行酸、鹼、或溶劑處理。此原料粗研磨步驟僅會影響後續處理上之效率。
其中該「酸處理」係以30%~50%之濃鹽酸(HCl)進行酸解。
其中該「鹼處理」係指將狼尾草原料置於一鹼性溶液中進行浸泡處理，約24小時；其中該鹼性溶液可藉由氨水(NH4OH)將該環境調整至酸鹼值(pH)為8.5，使其呈鹼性。
其中該「破細胞處理」係以超音波(Sonicaton)振盪、或以微波輔助萃取法(Microwave assistant extraction)於80℃下萃取2~3小時以進行破細胞處理。
其中該「固液分離」包含但不限於：離心、自然沈降法、濾膜等適用本發明之固液分離方式。
其中該「管柱層析」係以HP-20管柱、或氧化鋁(Al2O3)管
柱進行管柱層析，並以酒精作為流洗液，收集30%至50%酒精之流洗片段(fraction)，即可分別製得ZE5萃取物、ZE50萃取物、ZE501萃取物。
前述製備出之ZE501萃取物即為可產品化之產品，係命名為「初露菁(Zeurogen)」。
本實施例係藉由SRB分析(Sulforhodamine B assay)評估狼尾草活性物質對於下列癌細胞之毒殺能力。其中該癌細胞包含：人類肺癌細胞A549(human lung carcinoma cell line)、人類乳癌細胞MDA-MB-231(human breast adenocarcinoma cell line)、人類肝癌細胞Hep G2(human hepatocellular carcinoma cell line)、人類大腸結腸癌細胞DLD-1(human colorectal adenocarcinoma cell line)。另以人類正常皮膚纖維母細胞CCD 966(human skin fibroblast)作為正常細胞為對照組。
將前述細胞株分別以培養基(含有DMEM(Dulbecco's Modified Eagle Medium,Hyclone SH30022.02)、10% FBS(Fetal bovine serum)、1×Penicillin/Streptomycin)進行培養，於37℃、5% CO2環境下培養之，待細胞培養到1×106數目以上時，隨機分配至96孔培養皿中(5000細胞/孔)。再經培養一天後，分別加入不同濃度(4、2、1、0.5、0.25 μg/μL)及種類之狼尾草萃取物(實施例一所製備者)培養兩天，以進行SRB分析。
先以50%TCA固定細胞，每孔放入定量的Sulforhodamine B進行呈色，最後以分光光度計中565 nm光譜吸收值來分析存活細胞中的蛋白質
量，藉此測量細胞存活數。
請參閱圖二A、圖二B及表一所示，圖二A為狼尾草萃取物ZE5對於人類肺癌細胞A549、人類乳癌細胞MDA-MB-231及人類正常皮膚纖維母細胞CCD 966之細胞存活率分析；圖二B為狼尾草萃取物ZE5對於人類肝癌細胞Hep G2、人類大腸結腸癌細胞DLD-1及人類正常皮膚纖維母細胞CCD 966之細胞存活率分析；其中狼尾草萃取物ZE5對於人類肺癌細胞A549、人類乳癌細胞MDA-MB-231具毒殺能力，其IC50(抑制50%細胞生長之藥物濃度)分別為0.42 μg/μL、0.36 μg/μL；然而，該等濃度對於人類正常皮膚纖維母細胞CCD 966、人類肝癌細胞Hep G2或人類大腸結腸癌細胞DLD-1而言，並無明顯之細胞毒性。此即表示本發明所提供之狼尾草萃取物ZE5對於癌細胞具選擇性毒殺效果(特別是肺癌細胞及乳癌細胞)且比較不會傷害正常之細胞。圖五A為人類乳癌細胞MDA-MB-231未經狼尾草萃取物ZE5處理之細胞分佈圖、圖五B為人類乳癌細胞MDA-MB-231經狼尾草萃取物ZE5處理後之細胞分佈圖，其中可明顯觀察到經狼尾草萃取物ZE5(0.5 μg/μL)處理後，人類乳癌細胞MDA-MB-231(圖五B)之細胞存活率明顯下降。
請參閱圖三為及表一所示，圖三為狼尾草萃取物ZE50對於人類肺癌細胞A549、人類乳癌細胞MDA-MB-231、人類肝癌細胞Hep G2、人類大腸結腸癌細胞DLD-1、人類正常皮膚纖維母細胞CCD 966之細胞存活率分
析；其中狼尾草萃取物ZE50對於人類肺癌細胞A549、人類乳癌細胞MDA-MB-231，IC50分別為3.6 μg/μL、3.5 μg/μL；然而，該等濃度(≒4.0 μg/μL)對於人類正常皮膚纖維母細胞CCD 966、人類肝癌細胞Hep G2或人類大腸結腸癌細胞DLD-1而言，仍然有相同程度的細胞毒性。此即表示對於同種類癌細胞與正常細胞在選擇性毒殺效果上，本發明所提供之不同萃取方式或萃取物會有不同的毒殺效果及能力。
請參閱圖四A為人類肺癌細胞A549未經狼尾草萃取物ZE501處理之細胞分佈圖，而圖四B則是萃取物ZE501(0.5 μg/μL)處理後之細胞分佈圖；圖六A為人類正常皮膚纖維母細胞CCD 966未經狼尾草萃取物ZE501處理之細胞分佈圖，而圖六B則是萃取物ZE501(0.5 μg/μL)處理後之細胞分佈圖。圖七為不同濃度的狼尾草萃取物ZE501對於人類肺癌細胞A549、人類正常皮膚纖維母細胞CCD 966之細胞存活率分析；其中可明顯觀察到經(0.5 μg/μL)狼尾草萃取物ZE501處理後，人類肺癌細胞A549(圖四B)及人類乳癌細胞MDA-MB-231(圖五B)之細胞存活率明顯下降；然而，對於人類正常皮膚纖維母細胞CCD 966之細胞存活率則無明顯之影響(圖六A及圖六B之比較)。
請參閱表二，係以習知方法分析ZE501萃取物之成分。如：以Biuret試驗測定蛋白質含量；以Vanillin-Perchloric acid試驗測定皂苷(Saponin)含量；以溴甲酚綠(Bromocresol Green)試驗測定生物鹼(Alkaloids)含量；以Folin-Ciocalteu比色法測定酚類(Phenolic)含量；以Christ-Müllers試驗測定類黃酮素(Flavonoids)含量。結果顯示，ZE501萃取物成分中以皂苷(Saponin)及類黃酮素(Flavonoids)為主。
本發明所提供之具抗癌活性之狼尾草活性物質、製備方法及其應用，與其他傳統抗癌藥物、療法、製程相互比較時，更具有下列之優點：
1.本發明之具抗癌活性之狼尾草活性物質，經試驗分析其可有效抑制肺癌細
胞、乳癌細胞之生長且對正常細胞無明顯之毒性。
2.本發明之具抗癌活性之狼尾草活性物質，其係由天然草本植物「狼尾草」進行萃取，其原料來源廣、取得容易、搭配本發明之簡易製程，即可製備出具抗癌之活性物質。
上列詳細說明係針對本發明之一可行實施例之具體說明，惟該實施例並非用以限制本發明之專利範圍，凡未脫離本發明技藝精神所為之等效實施或變更，均應包含於本案之專利範圍中。
綜上所述，本案所揭露之技術特徵已充分符合新穎性及進步性之法定發明專利要件，爰依法提出申請，懇請 貴局核准本件發明專利申請案，以勵發明，至感德便。
Claims (4)
- 一種具毒殺乳癌細胞之狼尾草活性物質，係將狼尾草經過下列步驟所製備者：步驟一：將狼尾草以70%乙醇處理，以取得一乙醇萃取物；步驟二：將步驟一之乙醇萃取物依序進行破細胞處理、固液分離、管柱層析、及低溫濃縮步驟後，即可製得ZE5萃取物，該萃取物即為具抗乳癌細胞活性之狼尾草活性物質。
- 如申請專利範圍第1項所述之具毒殺乳癌細胞之狼尾草活性物質，其中於步驟二之破細胞處理係以超音波振盪處理之、或以微波輔助萃取法(Microwave assistant extraction)於80℃下萃取2~3小時。
- 如申請專利範圍第1項所述之具毒殺乳癌細胞之狼尾草活性物質，其中該管柱層析係以HP-20管柱、或氧化鋁(Al2O3)管柱進行管柱層析，以酒精作為流洗液，收集30%至50%酒精之流洗片段。
- 一種包含如申請專利範圍第1項所述之具毒殺乳癌細胞之狼尾草活性物質之醫藥組合物。
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Cited By (6)
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