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TW201326157A - ８－氟基呔□－１（２ｈ）－酮化合物 - Google Patents

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Bin-Qing Wei
Wendy B Young
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Abstract

本發明提供式II之8-氟基呔□-1(2H)-酮化合物(其中X1、X2與X3之一或二者為N)，包括其立體異構體、互變異構體以及醫藥上可接受之鹽，可用以抑制Btk激酶，以及用以治療免疫病症，諸如Btk激酶所介導之發炎。本發明揭示使用式II化合物於活體外、原位及活體內診斷及治療哺乳動物細胞中此等病症或相關病理病況之方法□

Description

8-氟基呔 -1(2H)-酮化合物
本發明大體上係關於用於治療包括炎症、免疫學及癌症之由布魯頓氏(Bruton's)酪胺酸激酶(Btk)所介導之病症之化合物，且更具體言之係關於抑制Btk活性之化合物。本發明亦係關於利用該等化合物進行活體外、原位及活體內診斷或者治療哺乳動物細胞或相關病理病況之方法。
相關申請案之交互參照
根據37 CFR §1.53(b)之規定所申請之此非臨時申請案根據35 USC §119(e)之規定主張2011年11月3日申請之美國臨時申請案第61/555,398之優先權，該案之全文以引用的方式併入本文中。
蛋白激酶為人類酵素之最大家族且涵蓋超過500種蛋白質。布魯頓氏酪胺酸激酶(Btk)係酪胺酸激酶之Tec家族之成員，且係早期B細胞發展以及成熟B細胞活化、發訊以及存活之調節者。
經由B細胞受體(BCR)之B細胞發訊可導致大範圍之生物輸出，其又取決於B細胞之發展階段。必須精確調節BCR訊號大小及持續時間。異常之BCR介導發訊可導致B細胞活化錯調節(disregulated)及/或病原性自體抗體之形成，從而產生多重自體免疫及/或發炎疾病。人類Btk之突變導致X-連鎖無丙種球蛋白血症(X-linked agammaglobulinaemia；XLA)。該疾病與B細胞成熟受損、免疫球蛋白製造減少、不依賴T細胞的免疫反應不全以及BCR刺激後之持續鈣信 號顯著弱化有關。Btk缺陷小鼠模型中已確定Btk在過敏性病症及/或自體免疫疾病及/或發炎疾病所扮演角色之證據。例如，在全身性紅斑狼瘡(SLE)之標準老鼠臨床前模型中，已顯示Btk缺陷可導致疾病進展之顯著舒緩。此外，Btk缺陷小鼠對發展性膠原誘導性關節炎亦具有抗性，且更不易罹患葡萄球菌誘導性關節炎。大量證據支持B細胞及體液免疫系統在自體免疫及/或發炎疾病致病中之角色。發展至耗盡B細胞之以蛋白質為基礎之療法(諸如美羅華(Rituxan))代表一種治療數種自體免疫及/或發炎疾病之途徑。由於Btk在B細胞活化中之角色，故Btk之抑制劑可用作為B細胞所介導致病活性(諸如，自體抗體製造)之抑制劑。Btk亦在破骨細胞、肥大細胞及單核細胞中被表現，且已顯示對此等細胞之功能具重要性。例如，小鼠中Btk缺陷與受損之IgE-介導肥大細胞活化(TNF-α以及其他炎症性細胞介素釋放顯著減少)有關，而人類中Btk缺陷與因活化單核細胞使TNF-α製造大為減少有關。
因此，抑制Btk活性可用於治療過敏性病症及/或自體免疫及/或發炎疾病，諸如：SLE、類風濕性關節炎、多發性血管炎、特發性血小板減少性紫癜(ITP)、重症肌無力症、過敏性鼻炎以及氣喘(Di Paolo等人(2011)Nature Chem.Biol.7(1)：41-50；Liu等人(2011)Jour.of Pharm.and Exper.Ther.338(1)：154-163)。另外，據報導，Btk在細胞凋亡中亦扮演一角色；因此，Btk活性之抑制作用可用於癌症以及治療B-細胞淋巴瘤、白血病以及其他惡性血液 病。此外，假定Btk在破骨細胞功能中之角色，則Btk活性之抑制作用可用於治療骨骼疾病，諸如，骨質疏鬆症。特異性Btk抑制劑已被報導(Liu(2011)Drug Metab.and Disposition 39(10)：1840-1849；US 7884108、WO 2010/056875；US 7405295；US 7393848；WO 2006/053121；US 7947835；US 2008/0139557；US 7838523；US 2008/0125417；US 2011/0118233；2011年8月31日申請之PCT/US 2011/050034「PYRIDINONES/PYRAZINONES,METHOD OF MAKING,AND METHOD OF USE THEREOF」；2011年8月31日申請之PCT/US 2011/050013「PYRIDAZINONES,METHOD OF MAKING,AND METHOD OF USE THEREOF」；2011年5月6日申請之US流水號第13/102720號「PYRIDONE AND AZA-PYRIDONE COMPOUNDS AND METHODS OF USE」)。
本發明大體上係關於具有布魯頓氏(Bruton's)酪胺酸激酶(Btk)調節活性之式I與II化合物，8-氟基呔-1(2H)-酮化合物，其具有以下結構：
包括其立體異構體、互變異構體或醫藥上可接受之鹽。下文定義各種取代。
本發明之一態樣係由式I或II化合物以及醫藥上可接受之載劑、助流劑、稀釋劑或賦形劑組成之醫藥組合物。該醫藥組合物可進一步包含第二治療劑。
本發明之另一態樣係一種製造醫藥組合物之方法，其包括組合式I或II化合物與醫藥上可接受之載劑。
本發明包括一種治療疾病或病症之方法，該方法包括對患者投與治療有效量之式I或II化合物，該患者患有選自由免疫病症、癌症、心血管疾病、病毒感染、炎症、代謝/內分泌功能病症以及神經疾病組成之群，且由布魯頓氏酪胺酸激酶所介導之疾病或病症。
本發明包括一種用於治療由布魯頓氏酪胺酸激酶所介導之病狀之套組，其包含：a)第一醫藥組合物，其包含式I或II化合物；及b)使用說明書。
本發明包括式I或II化合物，其係用作藥劑，以及用於治療選自由免疫病症、癌症、心血管疾病、病毒感染、炎症、代謝/內分泌功能病症以及神經疾病組成之群且由布魯頓氏酪胺酸激酶所介導之疾病或病症。
本發明包括式I或II化合物於製造藥劑之用途，其係用於 治療免疫病症、癌症、心血管疾病、病毒感染、炎症、代謝/內分泌功能病症以及神經疾病，且其中該藥劑可介導布魯頓氏酪胺酸激酶之疾病。
本發明包括製造式I或II化合物之方法。
現將詳細叁考本發明之某些具體例，於所附結構及化學式說明其實例。雖然本發明將連同列舉具體例而描述。但應瞭解，其並不意欲將本發明限制於彼等具體例。相反，本發明意欲涵蓋所有可能內含於如申請專利範圍所定義之本發明範圍內之替代、修改及等效項。熟習此項技術者將知道許多類似於或等效於本文所述之方法及材料，其可用於實施本發明。本發明絕不限制於所述方法及材料。若所併入文獻、專利、類似材料之一或多者與本申請案相悖時，則以本申請案為準，包括(但不限於)術語、術語用法、所述技術諸如此類。除非另有規定，否則所有技術及科學術語具有等同於本發明所屬技術中一般技術者通常所理解之意義。雖然類似或等效於本文所述之方法及材料可用於實施或測試本發明，但下文描述適宜方法及材料。本文所提及之所有公開案、專利申請案及其他叁考文獻係以全文引用的方式併入本文中。除非另有說明，否則本申請案所使用之命名法係基於IUPAC系統命名法。
定義
當表示取代基數量時，術語「一或多」係指自一個取代基至取代之可能最大數目，也就是說，取代基替換一個氫 至多替換所有氫。術語「取代基」表示替換母體分子上氫原子之原子或原子團。術語「經取代」表示特定基團帶有一或多個取代基。在任何基團可帶有多個取代基，且提供各種可能取代基之情況中，該等取代基係獨立選擇，且不必要係相同。術語「未經取代」意指特定基團無取代基。術語「視情況經取代」意指特定基團係未經取代或者經一或多個獨立選自可能取代基之群之取代基取代。當表示取代基數量時，術語「一或多」係指自一個取代基至取代之可能最大數目，也就是說，取代基替換一個氫至多替換所有氫。
如本文所用之術語「烷基」係指具有一至十二個碳原子(C1-C12)之飽和直鏈或支鏈一價烴基，其中烷基基團可視情況獨立地經一或多個下述取代基取代。在另一具體例中，烷基基團為一至八個碳原子(C1-C8)，或一至六個碳原子(C1-C6)。烷基基團之實例包括(但不限於)甲基(Me、-CH3)、乙基(Et、-CH2CH3)、1-丙基(n-Pr、n-丙基、-CH2CH2CH3)、2-丙基(i-Pr、i-丙基、-CH(CH3)2)、1-丁基(n-Bu、n-丁基、-CH2CH2CH2CH3)、2-甲基-1-丙基(i-Bu、i-丁基、-CH2CH(CH3)2)、2-丁基(s-Bu、s-丁基、-CH(CH3)CH2CH3)、2-甲基-2-丙基(t-Bu、t-丁基、-C(CH3)3)、1-戊基(n-戊基、-CH2CH2CH2CH2CH3)、2-戊基(-CH(CH3)CH2CH2CH3)、3-戊基(-CH(CH2CH3)2)、2-甲基-2-丁基(-C(CH3)2CH2CH3)、3-甲基-2-丁基(-CH(CH3)CH(CH3)2)、3-甲基-1-丁基(-CH2CH2CH(CH3)2)、2-甲基-1- 丁基(-CH2CH(CH3)CH2CH3)、1-己基(-CH2CH2CH2CH2CH2CH3)、2-己基(-CH(CH3)CH2CH2CH2CH3)、3-己基(-CH(CH2CH3)(CH2CH2CH3))、2-甲基-2-戊基(-C(CH3)2CH2CH2CH3)、3-甲基-2-戊基(-CH(CH3)CH(CH3)CH2CH3)、4-甲基-2-戊基(-CH(CH3)CH2CH(CH3)2)、3-甲基-3-戊基(-C(CH3)(CH2CH3)2)、2-甲基-3-戊基(-CH(CH2CH3)CH(CH3)2)、2,3-二甲基-2-丁基(-C(CH3)2CH(CH3)2)、3,3-二甲基-2-丁基(-CH(CH3)C(CH3)3)、1-庚基、1-辛基等等。
如本文所用之術語「伸烷基」係指具有一至十二個碳原子(C1-C12)之飽和直鏈或支鏈二價烴基，其中伸烷基基團可視情況獨立地經一或多個下述取代基取代。在另一具體例中，伸烷基基團為一至八個碳原子(C1-C8)，或一至六個碳原子(C1-C6)。伸烷基基團之實例包括(但不限於)亞甲基(-CH2-)、伸乙基(-CH2CH2-)、伸丙基(-CH2CH2CH2-)等等。
術語「烯基」係指具有二至八個碳原子(C2-C8)之直鏈或支鏈一價烴基，具有至少一個不飽和位點，即，碳-碳，sp2雙鍵，其中烯基基團可視情況獨立地經一或多個本文所述取代基取代，且包括具有「順式」與「反式」定向或者「E」與「Z」定向之基團。實例包括(但不限於)乙烯基(-CH=CH2)、丙烯基(-CH2CH=CH2)等等。
術語「伸烯基」係指具有二至八個碳原子(C2-C8)之直鏈或支鏈二價烴基，具有至少一個不飽和位點，即碳-碳sp2 雙鍵，其中伸烯基基團可視情況獨立地經一或多個本文所述取代基取代，且包括具有「順式」與「反式」定向或者「E」與「Z」定向之基團。實例包括(但不限於)伸乙烯基(-CH=CH-)、伸烯丙基(-CH2CH=CH-)等等。
術語「炔基」係指具有二至八個碳原子(C2-C8)之直鏈或支鏈一價烴基，具有至少一個不飽和位點，即碳-碳，sp三鍵，其中炔基基團可視情況獨立地經一或多個本文所述取代基取代。實例包括(但不限於)乙炔基(-C≡CH)、丙炔基(炔丙基、-CH2C≡CH)等等。
術語「伸炔基」係指具有二至八個碳原子(C2-C8)之直鏈或支鏈二價烴基，具有至少一個不飽和位點，即碳-碳，sp三鍵，其中伸炔基基團可視情況獨立地經一或多個本文所述取代基取代。實例包括(但不限於)伸乙炔基(-C≡C-)、伸丙炔基(伸炔丙基、-CH2C≡C-)等等。
術語「碳環(carbocycle)」、「碳環基」、「碳環狀環(carbocyclic ring)」以及「環烷基」係指一價非芳香、飽和或部分不飽和環，其具有3至12個碳原子(C3-C12)作為單環或者具有7至12個碳原子作為雙環。具有7至12個原子之雙環碳環可配置為(例如)雙環[4,5]、[5,5]、[5,6]或[6,6]系統，而具有9或10個環原子之雙環碳環可配置為雙環[5,6]或[6,6]系統或者橋接系統，諸如雙環[2.2.1]庚烷、雙環[2.2.2]辛烷以及雙環[3.2.2]壬烷。螺環基亦包含於該定義範圍內。單環狀碳環之實例包括(但不限於)環丙基、環丁基、環戊基、1-環戊-1烯基、1-環戊-2烯基、1-環戊-3烯 基、環己基、1-環己-1烯基、1-環己-2烯基、1-環己-3烯基、環己二烯基、環庚基、環辛基、環壬基、環癸基、環十一烷基、環十二烷基等等。碳環基基團係視情況獨立地經本文所述之一或多個取代基取代。
「芳基」意指具有6-20個碳原子(C6-C20)之一價芳香烴基，其係藉由移除母體芳香環系統之單個碳原子之一個氫原子而得到。一些芳基基團係以示範性結構表示為「Ar」。芳基包括包含與飽和、部分不飽和環或芳香碳環稠合之芳香環之雙環狀基團。典型芳基基團包括(但不限於)源自苯(苯基)、經取代的苯、萘、蒽、聯苯基、茚基、二氫茚基、1,2-二氫萘、1,2,3,4-四氫萘基等等之基團。芳基基團係視情況獨立地經本文所述之一或多個取代基取代。
「伸芳基」意指具有6-20個碳原子(C6-C20)之二價芳香烴基，其係藉由移除母體芳香環系統之兩個碳原子之兩個氫原子而得到。一些伸芳基基團係以示範性結構表示為「Ar」。伸芳基包括包含與飽和、部分不飽和環或芳香碳環稠合之芳香環之雙環基團。典型伸芳基基團包括(但不限於)源自苯(伸苯基)、經取代的苯、萘、蒽、伸聯苯基、伸茚基、伸二氫茚基、1,2-二氫萘、1,2,3,4-四氫萘基等等之基團。伸芳基基團係視情況經本文所述之一或多個取代基取代。
術語「雜環(heterocycle)」、「雜環基」以及「雜環狀環(heterocyclic ring)」在本文中可互換使用，且係指由3至 約20個環原子組成之飽和或部分不飽和(即，環內具有一或多個雙鍵及/或三鍵)碳環基團，其中至少一個環原子係選自氮、氧、磷及硫組成之群之雜原子，其餘環原子為C，其中一或多個環原子係視情況獨立地經一或多個下述取代基取代。雜環可為具有3至7個環組員(2至6個碳原子與1至4個選自N、O、P及S之雜原子)之單環，或者具有7至10個環組員(4至9個碳原子與1至6個選自N、O、P及S之雜原子)之雙環，例如：雙環[4,5]、[5,5]、[5,6]或[6,6]系統。雜環述於Paquette,Leo A.；「Principles of Modern Heterocyclic Chemistry」(W.A.Benjamin,New York,1968)，尤其第1、3、4、6、7以及9章；「The Chemistry of Heterocyclic Compounds,A series of Monographs」(John Wiley & Sons,New York,1950 to present)，特定言之，第13、14、16、19及28卷；以及J.Am.Chem.Soc.(1960)82：5566中。「雜環基」亦包括其中雜環基團與飽和、部分不飽和環或芳香碳環或雜環稠合之基團。雜環之實例包括(但不限於)嗎啉-4-基、哌啶-1-基、哌基、哌-4-基-2-酮、哌-4-基-3-酮、吡咯啶-1-基、硫嗎啉-4-基、S-二側氧基硫代嗎啉-4-基、氮雜環辛-1-基、吖丁啶-1-基、八氫吡啶并[1,2-a]吡-2-基、[1,4]二氮雜環庚烷-1-基、吡咯啶基、四氫呋喃基、二氫呋喃基、四氫噻吩基、四氫哌喃基、二氫哌喃基、四氫硫哌喃基、哌啶基、嗎啉基、硫嗎啉基、噻噸基、哌基、高哌基、吖丁啶基、氧雜環丁基、硫雜環丁基、高哌啶基、氧雜環庚烷基、硫雜環庚烷 基、氧氮呯基、二氮呯基、硫氮呯基、2-吡咯啉基、3-吡咯啉基、吲哚啉基、2H-哌喃基、4H-哌喃基、二氧雜環己基、1,3-二氧環戊基、吡唑啉基、二硫雜環己基、二硫雜環戊基、二氫哌喃基、二氫噻吩基、二氫呋喃基、吡唑烷基咪唑啉基、咪唑烷基、3-氮雜雙環[3.1.0]己基、3-氮雜雙環[4.1.0]庚基、氮雜雙環[2.2.2]己基、3H-吲哚基喹基以及N-吡啶基脲。螺環基基團亦可含於該定義範圍內。其中2個環原子經側氧基(=O)基團取代之雜環基團之實例為嘧啶酮基以及1,1-二側氧基-硫嗎啉基。本文之雜環基團視情況獨立地經一或多個本文所述取代基取代。
術語「雜芳基」係指5-、6-或7-員環之一價芳香基團，且包括由5-20個原子組成之稠合環系統(其中至少一者為芳香族)，包含一或多獨立選自氮、氧及硫之雜原子。雜芳基基團之實例為吡啶基(包括，例如，2-羥基吡啶基)、咪唑基、咪唑并吡啶基、嘧啶基(包括，例如，4-羥基嘧啶基)、吡唑基、三唑基、吡基、四唑基、呋喃基、噻吩基、異噁唑基、噻唑基、噁二唑基、噁唑基、異噻唑基、吡咯基、喹啉基、異喹啉基、四氫異喹啉基、吲哚基、苯并咪唑基、苯并呋喃基、噌啉基、吲唑基、吲哚基、呔基、噠基、三基、異吲哚基、蝶啶基、嘌呤基、噁二唑基、三唑基、噻二唑基、呋呫基、苯并呋呫基、苯并噻吩基、苯并噻唑基、苯并噁唑基、喹唑啉基、喹噁啉基、萘啶基以及呋喃并吡啶基。雜芳基基團係視情況獨立地經一或多個本文所述取代基取代。
雜環或雜芳基基團在可能之處可為碳(碳連接)或氮(氮連接)鍵結。舉例言之(但不限於)，碳鍵結雜環或雜芳基係在吡啶之2、3、4、5或6位，噠之3、4、5或6位，嘧啶之2、4、5或6位，吡之2、3、5或6號位，呋喃、四氫呋喃、硫呋喃、噻吩、吡咯或四氫吡咯之2、3、4或5位，噁唑、咪唑或噻唑之2、4或5位，異噁唑、吡唑或異噻唑之3、4或5位，氮雜環丙烷之2或3位，吖丁啶之2、3或4位，喹啉之2、3、4、5、6、7或8位，或者異喹啉之1、3、4、5、6、7或8位鍵結。
舉例言之(但不限於)，氮鍵結雜環或雜芳基係在氮雜環丙烷、吖丁啶、吡咯、吡咯啶、2-吡咯啉、3-吡咯啉、咪唑、咪唑啉、2-咪唑啉、3-咪唑啉、吡唑、吡唑啉、2-吡唑啉、3-吡唑啉、哌啶、哌、吲哚、吲哚啉、1H-吲唑之1位，異吲哚或異吲哚啉之2位，嗎啉之4號位以及咔唑或β-咔啉之9位鍵結。
術語「治療」係指治療性治療，其中目的在於減緩(舒緩)非所欲生理變化或病症，諸如關節炎或癌症之發展或擴散。基於本發明之目的，有利或所需臨床結果包括(但不限於)緩和症狀、減少疾病程度、穩定(也就是不惡化)疾病狀態、延遲或減緩疾病進展、舒緩或緩和疾病狀態，以及減輕(無論是部分還是完全)，無論是可觀察到或不可觀察到的。與未接受治療之預期存活期相比，「治療」亦可表示延長存活期。彼等需要治療者包括彼等患有病狀或病症者。
片語「治療有效量」意指本發明化合物為可(i)治療特定疾病、病狀或病症，(ii)減弱、舒緩或消除特定疾病、病狀或病症之一或多種症狀，或(iii)防止或延遲本文所述之特定疾病、病狀或病症之一或多種症狀之發作之量。在癌症之情況中，藥物之治療有效量可減少癌細胞數量；減小腫瘤尺寸；抑制(也就是說某種程度上減緩以及較佳停止)癌細胞滲入周圍器官；抑制(也就是說某種程度上減緩以及較佳停止)腫瘤轉移；某種程度上抑制腫瘤生長；及/或某種程度上緩解一或多種與癌腫相關之症狀。若藥物為可防止既有癌細胞生長及/或殺死既有癌細胞之程度，則其可為抑細胞性及/或具細胞毒性。就癌症治療而言，功效可藉由(例如)測量至疾病進展之時間(TTP)及/或確定反應率(RR)而測量。
如本文所用之「發炎性病症」可係指任何疾病、病症或症候群，其中過度或未受控制的炎症反應導致過度炎性症狀、宿主組織受損或組織功能喪失。「發炎性病症」亦係指由白血球匯集及/或中性粒細胞趨化性所介導之病理狀態。
如本文所用之「炎症」係指由組織受傷或遭破壞所引起之局部保護性反應，其作用在於摧毀、稀釋或隔離(隔絕)有害藥劑以及受傷組織。炎症尤其與白血球匯集及/或中性粒細胞趨化性相關。炎症可源自致病原有機體及病毒之感染以及源自非感染性方式如外傷或心肌梗塞或中風後之再灌注、對外來抗原之免疫反應以及自體免疫反應。因 此，可利用式I與II化合物治療之發炎性病症涵蓋與特異性防禦系統之反應以及非特異性防禦系統之反應相關之病症。
「特異性防禦系統」係指對出現特異性抗原起反應之免疫系統之組分。由特異性防禦系統之反應所引起之炎症之實例包括對外來抗原之典型反應、自體免疫疾病以及由T細胞所介導之延發型過敏反應。特異性防禦系統之炎症反應之進一步實例為慢性發炎疾病、實體移植組織及器官(例如，腎臟及骨髓炎移植)之排斥反應以及移植物抗宿主疾病(GVHD)。
如本文所用之術語「非特異性防禦系統」係指由不具有免疫記憶之白血球(例如，粒性細胞以及巨噬細胞)所介導之發炎性病症。至少部分係由非特異性防禦系統之反應所引起之炎症之實例包括與以下疾病相關之炎症，諸如成人(急性)呼吸窘迫症候群(ARDS)或多器官損傷症候群；再灌注損傷；急性腎小球腎炎；反應性關節炎；具有急性炎症組分之皮膚病；急性膿性腦膜炎或其他中樞神經系統發炎性病症(諸如中風)；燙傷；發炎性腸病；粒性細胞轉輸相關症候群；以及細胞介素誘導之毒性。
如本文所用之「自體免疫疾病」係指其中組織傷害與針對人體自身組成之體液或細胞介導反應相關之任何類別之疾病。
如本文所用之「過敏疾病」係指由過敏所引起之任何症狀、組織受損或組織功能喪失。如本文所用之「關節炎疾 病」係指特徵在於關節之炎性病變可歸因於各類病因之任何疾病。如本文所用之「皮炎」係指特徵在於皮膚之炎症可歸因於各類病因之皮膚疾病大族群之任一依者。如本文所用之「移植排斥」係指特徵在於移植及周圍組織之功能喪失、疼痛、腫脹、白血球過多以及血小板減少症之針對移植組織(諸如器官或細胞(例如骨髓))之任何免疫反應。本發明治療方法包括治療與炎性細胞活化相關之病症之方法。
「炎性細胞活化」係指在炎性細胞(包括(但不限於)單核細胞、巨噬細胞、T淋巴細胞、B淋巴細胞、粒性細胞(即多形核白血球，諸如中性粒細胞、嗜鹼細胞以及嗜曙紅細胞)、肥大細胞、樹突細胞、蘭格罕(Langerhans)細胞以及內皮細胞)中由刺激物(包括(但不限於)細胞介素、抗原或自體抗體)誘發細胞增殖反應、製造可溶性介體(包括(但不限於)細胞介素、氧自由基、酶、類前列腺素或血管活性胺)或細胞表面表現新的或數量增長之介體(包括(但不限於)主要組織相容性抗原或細胞粘附分子)。熟習此項技術者將瞭解，此等細胞中該等表現型之一者或其組合之活化可造成發炎性病症之起始、持續或惡化。
術語「NSAID」為「非類固醇抗炎症藥」之縮寫詞，且係一種具有鎮痛、退熱(降低身體高溫並緩解疼痛，而不損及意識)之治療劑，且於較高劑量具有抗炎症作用(減少炎症)。術語「非類固醇」係用於區分此等藥物與類固醇類，其(除眾多其他效果以外)具有類似二十碳-抑制、抗炎 症作用。作為鎮痛劑，NSAID之特別處在於其為非麻醉。NSAID包括阿斯匹靈(aspirin)、布洛芬(ibuprofen)以及萘普生(naproxen)。NSAID通常適用於治療出現疼痛與炎症之急性或慢性病狀。NSAID一般適用於症狀地緩解以下病症：類風濕性關節炎、骨關節炎、炎性關節炎(例如僵直性脊椎炎、牛皮癬性關節炎、賴透氏症候群(Reiter's syndrome)、急性痛風、痛經、骨轉移性疼痛、頭痛及偏頭疼、術後疼痛、由炎症及組織損傷所引起之輕度至中度疼痛、發熱、腸阻塞以及腎絞痛。多數NSAID充當酵素環氧酶之非選擇性抑制劑，抑制環氧酶-1(COX-1)與環氧酶-2(COX-2)同工酶二者。環氧酶催化由花生四烯酸(其本身藉由磷脂酶A2源自細胞磷脂雙分子層)形成前列腺素與前列凝素。前列腺素在炎症過程中(尤其)充當信使分子。COX-2抑制劑包括塞利西蔔(celecoxib)、依託西蔔(etoricoxib)、鲁米考昔(lumiracoxib)、帕瑞考昔(parecoxib)、羅非考昔(rofecoxib)以及伐地考昔(valdecoxib)。
術語「癌症」係指或描述通常以未受控制的細胞生長為特徵之哺乳動物之生理情況。「腫瘤」包括一或多種癌細胞。癌症之實例包括(但不限於)癌瘤、淋巴瘤、胚細胞瘤、肉瘤以及白血病或淋巴惡性腫瘤。此等癌症之更特定實例包括鱗狀細胞癌(例如，上皮鱗狀細胞癌)、肺癌(包括小細胞肺癌、非小細胞肺癌(「NSCLC」)、肺腺癌以及肺鱗癌)、腹膜癌、肝細胞癌、胃癌(包括胃腸癌)、胰腺癌、 神經膠質母細胞瘤、子宮頸癌、卵巢癌、肝癌、膀胱癌、肝癌、乳癌、結腸癌、直腸癌、結腸直腸癌、子宮內膜癌或子宮癌、唾液腺癌、腎癌、前列腺癌、外陰癌、甲狀腺癌、肝癌、肛門癌、陰莖癌以及頭頸部癌。
「惡性血液病」(英式拼法「Haematological」malignancies)為影響血液、骨髓及淋巴結之癌症類型。由於該等三者經由免疫系統緊密聯繫相連，故影響該等三者之一之疾病通常亦將影響另外二者。雖然淋巴瘤為一種淋巴結疾病，但其通常擴散至骨髓，進而影響血液。惡性血液病為惡性腫瘤(「癌症」)，且其一般由血液學及/或腫瘤學專家治療。在一些醫療中心，「血液學及/或腫瘤學」為內科醫學之單一附屬專業次專科領域，而在其他醫療中心被視為獨立部門(亦存在外科及放射腫瘤專家)。並非所有血液病症都是惡性的(「癌性的」)；此等其他血液病狀亦可由血液專家治療。惡性血液病可源自兩個主要血細胞系之任一者：骨髓及淋巴細胞系。骨髓細胞系通常製造粒性細胞、紅血球、血小板、巨噬細胞以及肥大細胞；淋巴細胞系製造B、T、NK以及漿細胞。淋巴瘤、淋巴細胞性白血病以及骨髓瘤係來源於淋巴系統，而急性與慢性骨髓性白血病、骨髓發育不良症候群以及骨髓增生性疾病係源自骨髓。白血病包括急性淋巴母細胞白血病(ALL)、急性骨髓性白血病(AML)、慢性淋巴細胞性白血病(CLL)、慢性骨髓性白血病(CML)、急性單核細胞白血病(AMOL)以及小淋巴細胞性淋巴瘤(SLL)。淋巴瘤包括霍奇金氏淋巴瘤(所有四種 亞型)以及非-霍奇金氏淋巴瘤(所有亞型)。
「化學治療劑」為可有效治療癌症之化學化合物，而無關作用機制。化學治療劑之類別包括(但不限於)：烷化劑、抗代謝物、紡錘體毒性植物生物鹼、細胞毒性/抗腫瘤抗生素、拓撲異構酶抑制劑、抗體、光敏劑以及激酶抑制劑。化學治療劑包括「標靶治療」以及習知化療中所用之化合物。化學治療劑之實例包括：厄洛替尼(erlotinib)(TARCEVA®,Genentech/OSI Pharm.)、多西他賽(docetaxel)(TAXOTERE®,Sanofi-Aventis)、5-FU(氟尿嘧啶，5-氟尿嘧啶，CAS No.51-21-8)、吉西他濱(gemcitabine)(GEMZAR®,Lilly)、PD-0325901(CAS No.391210-10-9,Pfizer)、順鉑(順-二胺，二氯鉑(II)，CAS No.15663-27-1)、碳鉑(CAS No.41575-94-4)、太平洋紫杉醇(TAXOL®,Bristol-Myers Squibb Oncology,Princeton,N.J.)、曲妥單抗(trastuzumab)(HERCEPTIN®,Genentech)、替莫唑胺(temozolomide)(4-甲基-5-側氧基-2,3,4,6,8-戊氮雜雙環[4.3.0]壬-2,7,9-三烯-9-甲醯胺，CAS No.85622-93-1，TEMODAR®，TEMODAL®,Schering Plough)、他莫昔芬(tamoxifen)((Z)-2-[4-(1,2-二苯基丁-1-烯基)苯氧基]-N,N-二甲基乙胺，NOLVADEX®,ISTUBAL®,VALODEX®)及阿黴素(ADRIAMYCIN®)、Akti-1/2、HPPD以及雷帕黴素(rapamycin)。
化學治療劑之更多實例包括：奧沙利鉑(oxaliplatin)(ELOXATIN®,Sanofi)、波替單抗(bortezomib) (VELCADE®,Millennium Pharm.)、索坦(sutent)(SUNITINIB®,SU11248,Pfizer)、來曲唑(letrozole)(FEMARA®,Novartis)、甲磺酸伊馬替尼(imatinib mesylate)(GLEEVEC®,Novartis)、XL-518(Mek抑制劑，Exelixis,WO 2007/044515)、ARRY-886(Mek抑制劑，AZD6244,Array BioPharma,Astra Zeneca)、SF-1126(PI3K抑制劑，Semafore Pharmaceuticals)、BEZ-235(PI3K抑制劑，Novartis)、XL-147(PI3K抑制劑，Exelixis)、PTK787/ZK 222584(Novartis)、氟維司群(fulvestrant)(FASLODEX®,AstraZeneca)、爾可福鈣(leucovorin)(亞葉酸)、雷帕黴素(西羅莫司(sirolimus),RAPAMUNE®,Wyeth)、拉帕替尼(lapatinib)(TYKERB®,GSK572016,Glaxo Smith Kline)、洛那法尼(lonafarnib)(SARASARTM,SCH 66336,Schering Plough)、索拉菲尼(sorafenib)(NEXAVAR®,BAY43-9006,Bayer Labs)、吉非替尼(gefitinib)(IRESSA®,AstraZeneca)、伊立替康(irinotecan)(CAMPTOSAR®,CPT-11,Pfizer)、替吡法尼(tipifarnib)(ZARNESTRATM,Johnson & Johnson)、ABRAXANETM(Cremophor-free)、太平洋紫杉醇之白蛋白工程奈米顆粒調配物(American Pharmaceutical Partners,Schaumberg,Il)、凡德他尼(vandetanib)(rINN,ZD6474,ZACTIMA®,AstraZeneca)、苯丁酸氮芥(chloranmbucil)、AG1478、AG1571(SU 5271；Sugen)、替西羅莫司(temsirolimus)(TORISEL®,Wyeth)、帕唑帕尼(pazopanib) (GlaxoSmithKline)、佛司福醯胺(canfosfamide)(TELCYTA®,Telik)、噻替哌(thiotepa)與環磷醯胺(cyclosphosphamide)(CYTOXAN®,NEOSAR®)；烷基磺酸鹽，諸如白消安(busulfan)、英丙舒凡(improsulfan)以及哌泊舒凡(piposulfan)；氮雜環丙烷，諸如苯唑達帕(benzodopa)、卡波醌(carboquone)、美托達帕(meturedopa)以及尤裏達帕(uredopa)；伸乙亞胺與甲基蜜胺，包括六甲蜜胺(altretamine)、三伸乙基密胺、三伸乙基磷醯胺、三伸乙基硫磷醯胺以及三羥甲基蜜胺；乙醯合成物(acetogenins)(尤其布拉他辛(bullatacin)以及布拉他辛酮(bullatacinone))；喜樹鹼(包括合成類似物拓撲替康(topotecan))；苔蘚抑素(bryostatin)；海綿乙醯化物(callystatin)；CC-1065(包括其阿多來新(adozelesin)、卡折來新(carzelesin)以及比折來新(bizelesin)合成類似物)；克利特非辛(cryptophycins)(尤其克利特非辛1以及克利特非辛8)；多拉司他汀(dolastatin)；多卡黴素(duocarmycin)(包括合成類似物，KW-2189與CB1-TM1)；艾榴素(eleutherobin)；石蒜生物鹼(pancratistatin)；肉質網囊素(sarcodictyin)；海綿抑素(spongistatin)；氮芥(nitrogen mustard)，諸如苯丁酸氮芥(chlorambucil)、萘氮芥(chlornaphazine)、氯磷醯胺(chlorophosphamide)、雌氮芥(estramustine)、異環磷醯胺(ifosfamide)、甲氮芥(mechlorethamine)、氧化甲氮芥鹽酸鹽、美法侖(melphalan)、新氮芥(novembichin)、膽甾醇對苯乙酸氮芥 (phenesterine)、潑尼氮芥(prednimustine)、曲磷胺(trofosfamide)、尿嘧啶氮芥(uracil mustard)；亞硝基脲，諸如卡莫司汀(carmustine)、氯脲菌素(chlorozotocin)、福莫司汀(fotemustine)、洛莫司汀(lomustine)、尼莫司汀(nimustine)以及雷莫司汀(ranimnustine)；抗生素，諸如，烯二炔類抗生素(例如，卡奇黴素(calicheamicin)、卡奇黴素γ1I、卡奇黴素ΩI1(Angew Chem.Intl.Ed.Engl.(1994)33：183-186)；達內黴素(dynemicin)、達內黴素A；雙膦酸鹽(諸如氯膦酸鹽)；埃斯培拉黴素(esperamicin)；以及新制癌菌素發色團與相關色蛋白烯二炔抗生素發色團)、阿克那黴素(aclacinomysins)、放線菌素(actinomycin)、安曲黴素(authramycin)、氮絲胺酸(azaserine)、博來黴素(bleomycins)、放線菌素(cactinomycin)、卡雷比素(carabicin)、洋紅黴素(carminomycin)、嗜癌黴素(carzinophilin)、色黴素(chromomycinis)、放線菌素d(dactinomycin)、柔紅黴素(daunorubicin)、地托比星(detorubicin)、6-重氮基-5-側氧基-L-正亮胺酸、嗎啉基阿黴素(morpholino-doxorubicin)、氰嗎啉阿黴素(cyanomorpholino-doxorubicin)、2-吡咯啉-阿黴素以及去氧阿黴素(deoxydoxorubicin))、表柔比星(epirubicin)、依索比星(esorubicin)、伊達比星(idarubicin)、奈莫柔比星(nemorubicin)、馬賽羅黴素(marcellomycin)、絲裂黴素(mitomycin)，諸如絲裂黴素C、黴酚酸(mycophenolic acid)、諾加拉黴素(nogalamycin)、橄欖黴素 (olivomycins)、培洛黴素(peplomycin)、泊非黴素(porfiromycin)、嘌呤黴素(puromycin)、三鐵阿黴素(quelamycin)、羅多比星(rodorubicin)、鏈黑菌素(streptonigrin)、鏈脲黴素(streptozocin)、7-去氮腺苷基(tubercidin)、烏苯美司(ubenimex)、淨司他丁(zinostatin)、佐柔比星(zorubicin)；抗代謝物，諸如甲胺喋呤(methotrexate)以及5-氟尿嘧啶(5-FU)；葉酸類似物，諸如二甲葉酸(denopterin)、甲胺喋呤(methotrexate)、蝶羅呤(pteropterin)、曲美沙特(trimetrexate)；嘌呤類似物，諸如氟達拉濱(fludarabine)、6-巰基嘌呤、硫咪嘌呤(thiamiprine)、硫鳥嘌呤(thioguanine)；嘧啶類似物，諸如環胞苷(ancitabine)、阿札胞苷(azacitidine)、6-氮尿苷、卡莫氟(carmofur)、阿糖胞苷(cytarabine)、二脫氧尿苷(dideoxyuridine)、去氧氟尿苷(doxifluridine)、依諾他濱(enocitabine)、氟尿苷(floxuridine)；雄性激素，諸如卡普睾酮(calusterone)、屈他雄酮丙酸酯(dromostanolone propionate)、環硫雄酮(epitiostanol)、美雄烷(mepitiostane)、睾內酯(testolactone)；抗腎上腺類，諸如安魯米特(aminoglutethimide)、米托坦(mitotane)、曲洛司坦(trilostane)；葉酸補充液，諸如亞葉酸；醋葡醛內酯(aceglatone)；醛磷醯胺糖苷；胺基乙醯丙酸(aminolevulinic acid)；恩尿嘧啶(eniluracil)；安吖啶(amsacrine)；百思布啶(bestrabucil)；比生群(bisantrene)；乙基去氮蝶呤(edatraxate)；迪福胺(defofamine)；秋水醯 胺(demecolcine)；地吖醌(diaziquone)；依氟鳥胺酸(elfornithine)；依利醋銨(elliptinium acetate)；埃坡黴素(epothilone)；依托格魯(etoglucid)；硝酸鎵；羥基脲(hydroxyurea)；蘑菇多糖(lentinan)；氯尼達明(lonidainine)；美登素類(maytansinoids)，諸如美登素(maytansine)與安斯菌素(ansamitocins)；米托胍腙(mitoguazone)；米托蒽醌(mitoxantrone)；莫哌達醇(mopidanmol)；硝林(nitraerine)；噴托他丁(pentostatin)；苯來美特(phenamet)；吡柔比星(pirarubicin)；洛索蒽醌(losoxantrone)；鬼臼酸(podophyllinic acid)；2-乙基醯肼(ethylhydrazide)；丙卡巴肼(procarbazine)；PSK®多糖複合物(JHS Natural Products,Eugene,OR)；雷佐生(razoxane)；根黴素(rhizoxin)；西佐糖(sizofiran)；鍺螺胺(spirogermanium)；細交鍵孢菌酮酸(tenuazonic acid)；三亞胺醌(triaziquone)；2,2',2"-三氯三乙胺(trichlorotriethylamine)；單端孢徾烯族毒素類(trichothecenes)(尤其T-2毒素、黏液黴素A(verracurin A)、漆斑菌素A(roridin A)以及蛇形菌索(anguidine)；烏拉坦(urethan)；長春地辛(vindesine)；達卡巴(dacarbazine)；甘露莫司汀(mannomustine)；二溴甘露醇；二溴衛矛醇(mitolactol)；哌泊溴烷(pipobroman)；葛胞嘧啶(gacytosine)；阿拉伯糖苷(arabinoside)(「Ara-C」)；環磷醯胺；噻替哌；6-硫代烏嘌呤；巰基嘌呤；甲胺喋呤(methotrexate)；鉑類似物，諸如順鉑與碳鉑；長春 花鹼；依託泊苷(etoposide)(VP-16)；異環磷醯胺；米托蒽醌(mitoxantrone)；長春新鹼(vincristine)；長春瑞濱(vinorelbine)(NAVELBINE®)；諾安托(novantrone)；替尼泊苷(teniposide)；依達曲沙(edatrexate)；道諾霉素(daunomycin)；胺基蝶呤(aminopterin)；卡培他濱(capecitabine)(XELODA®,Roche)；伊班膦酸鈉(ibandronate)；CPT-11；拓撲異構酶抑制劑RFS 2000；二氟甲基鳥胺酸(DMFO)；類視色素，諸如視黃酸；以及以上任何物質之醫藥上可接受之鹽、酸及衍生物。
亦包含於「化學治療劑」之定義內者為：(i)作用係調節或抑制荷爾蒙作用於腫瘤之抗荷爾蒙劑，諸如抗雌激素以及選擇性雌激素受體調節劑(SERM)，包括，例如，他莫昔芬(包括NOLVADEX®；檸檬酸他莫昔芬)、雷洛昔芬(raloxifene)、屈洛昔芬(droloxifene)、4-羥基他莫昔芬、曲沃昔芬(trioxifene)、雷洛昔芬(keoxifene)、LY117018、奧那司酮(onapristone)以及FARESTON®(檸檬酸托瑞米芬(toremifine citrate))；(ii)抑制酵素芳香酶之芳香酶抑制劑，其可調節腎上腺中雌激素之製造，諸如，例如，4(5)-咪唑類、安魯米特(aminoglutethimide)、MEGASE®(醋酸甲地孕酮(megestrol acetate))、AROMASIN®(依西美坦(exemestane)；Pfizer)、福美司坦(formestanie)、法屈唑(fadrozole)、RIVISOR®(伏羅唑(vorozole))、FEMARA®(來曲唑；Novartis)以及ARIMIDEX®(阿他美坦(anastrozole)；AstraZeneca)；(iii)抗雄激素，諸如氟利坦 (flutamide)、尼魯米特(nilutamide)、比卡魯胺(bicalutamide)、亮丙瑞林(leuprolide)及戈舍瑞林(goserelin)；以及曲沙他濱(troxacitabine)(一種1,3-二氧環戊烷核苷胞嘧啶類似物)；(iv)蛋白激酶抑制劑，諸如MEK抑制劑(WO 2007/044515)；(v)脂質激酶抑制劑；(vi)反義寡核苷酸，特定言之，彼等抑制涉及異常細胞增殖之發訊路徑中之基因表現者，例如，PKC-α、Raf與H-Ras，諸如奧利默森(oblimersen)(GENASENSE®,Genta Inc.)；(vii)核酶，諸如VEGF表現抑制劑(例如，ANGIOZYME®)與HER2表現抑制劑；(viii)疫苗，諸如基因治療疫苗，例如，ALLOVECTIN®、LEUVECTIN®與VAXID®；PROLEUKIN® rIL-2；拓撲異構酶1抑制劑，諸如LURTOTECAN®；ABARELIX® rmRH；(ix)抗血管生成劑，諸如貝伐單抗(bevacizumab)(AVASTIN®,Genentech)；以及以上任何物質之醫藥上可接受之鹽、酸及衍生物。
亦包括在「化學治療劑」之定義內者為治療性抗體，諸如阿來組單抗(alemtuzumab)(Campath)、貝伐單抗(AVASTIN®,Genentech)；西妥昔單抗(cetuximab)(ERBITUX®,Imclone)；盤尼圖單抗(panitumumab)(VECTIBIX®,Amgen)、利妥昔單抗(rituximab)(RITUXAN®,Genentech/Biogen Idec)、皮妥珠單抗(pertuzumab)(OMNITARGTM,2C4,Genentech)、曲妥單抗(HERCEPTIN®,Genentech)、托西莫單抗(tositumomab)(Bexxar,Corixia)以及抗體藥物共軛物，吉妥單抗 (gemtuzumab ozogamicin)(MYLOTARG®,Wyeth)。
具有作為化學治療劑與本發明Btk抑制劑組合之治療潛力之人源化單株抗體包括：阿來組單抗(alemtuzumab)、阿泊珠單抗(apolizumab)、阿塞珠單抗(aselizumab)、阿麗珠單抗(atlizumab)、巴品珠單抗(bapineuzumab)、貝伐單抗(bevacizumab)、莫坎比伐珠單抗(bivatuzumab mertansine)、莫坎妥珠單抗(cantuzumab mertansine)、西利珠單抗(cedelizumab)、賽妥珠單抗(certolizumab pegol)、希法如單抗(cidfusituzumab)、希如單抗(cidtuzumab)、達利珠單抗(daclizumab)、依庫麗單抗(eculizumab)、依法利單抗(efalizumab)、依帕珠單抗(epratuzumab)、厄利珠單抗(erlizumab)、泛維珠單抗(felvizumab)、芳妥珠單抗(fontolizumab)、吉妥單抗、伊珠單抗奧加米星(inotuzumab ozogamicin)、伊匹單抗(ipilimumab)、拉貝珠單抗(labetuzumab)、林妥珠單抗(lintuzumab)、马妥珠單抗(matuzumab)、美泊利單抗(mepolizumab)、莫維珠單抗(motavizumab)、莫妥珠單抗(motovizumab)、那他珠單抗(natalizumab)、尼妥珠單抗(nimotuzumab)、諾羅珠單抗(nolovizumab)、努麥珠單抗(numavizumab)、奧瑞珠單抗(ocrelizumab)、奧瑪珠單抗(omalizumab)、帕利珠單抗(palivizumab)、帕考珠單抗(pascolizumab)、沛法珠單抗(pecfusituzumab)、沛如單抗(pectuzumab)、皮妥珠單抗(pertuzumab)、培克珠單抗(pexelizumab)、雷利珠單抗(ralivizumab)、來尼珠單抗 (ranibizumab)、雷希維珠單抗(reslivizumab)、瑞利珠單抗(reslizumab)、雷維珠單抗(resyvizumab)、羅維珠單抗(rovelizumab)、盧普來單抗(ruplizumab)、西羅珠單抗(sibrotuzumab)、西利珠單抗(siplizumab)、索土珠單抗(sontuzumab)、他珠單抗(tacatuzumab tetraxetan)、塔多希珠單抗(tadocizumab)、他利珠單抗(talizumab)、特非珠單抗(tefibazumab)、托珠單抗(tocilizumab)、托利珠單抗(toralizumab)、曲妥單抗、西莫白介素單抗(tucotuzumab celmoleukin)、吐舒希珠單抗(tucusituzumab)、烏馬珠單抗(umavizumab)、烏珠單抗(urtoxazumab)以及維西珠單抗(visilizumab)。
「代謝物」係特定化合物或其鹽經由在體內代謝所產生之產物。化合物之代謝物可利用此項技術中所知之例行技術予以確定，且其活性可利用諸如彼等本文所述之測試確定。此等產物可來自所投與化合物之(例如)氧化、還原、水解、醯胺化、去醯胺化、酯化、去酯化、酶解斷裂等等而產生。因此，本發明包括本發明化合物之代謝物，包含藉由包括使本發明之式I或II化合物與哺乳動物接觸一段足以產生其代謝產物之時間之方法所產生之化合物。
術語「包裝說明書」係用以指治療產品之商業包裝通常內附之說明書，其包含關於適應症、用途、劑量、用法、禁忌症及/或關於使用此等治療產品之警語。
術語「對掌性」係指鏡像對象物具有不疊加性之特性之分子，而術語「非對掌性」係指可與其鏡像對象物疊加之 分子。
術語「立體異構體」係指具有相同化學組成，但原子或基團之空間排列不同之化合物。
「非對映異構體」係指具有二或更多對掌性中心之立體異構體，且其分子並不互為鏡像。非對映異構體具有不同的物理特性，例如熔點、沸點、光譜特徵以及反應性。非對映異構體之混合物可在高解析分析步驟下分離，諸如電泳及層析。
「對映異構體」係指一種化合物之兩種立體異構體，其互為不可疊加鏡像。
本文所用之立體化學定義及協議大體上遵循S.P.Parker,Ed.,McGraw-Hill Dictionary of Chemical Terms(1984)McGraw-Hill Book Company,New York；以及Eliel,E.and Wilen,S.,「Stereochemistry of Organic Compounds」，John Wiley & Sons,Inc.,New York,1994。本發明化合物可包含不對稱或對掌性中心，且因此以不同立體異構形式存在。本發明化合物之所有立體異構形式(包括(但不限於)、非對映異構體、對映異構體及被限旋光導異構體(atropisomers)以及其混合物(諸如外消旋混合物))意欲形成本發明之一部分。許多有機化合物以光學活性形式存在，也就是說其具有旋轉平面偏振光之平面之能力。在描述一種光學活性化合物時，詞頭D與L或R與S係用於表示該分子關於其對掌性中心之絕對構型。採用詞頭d與l或(+)與(-)之目的在於表明由化合物所引起平面偏振光之旋轉之符號，其中(-)或l 意指該化合物為左旋。前綴為(+)或d之化合物係右旋。就一給定化學結構而言，此等立體異構體係相同，不同之處在於其互為鏡像。某一特定立體異構體亦可稱為對映異構體，而此等異構體之混合物通常稱為對映異構混合物。50：50之對映異構體混合物被稱為外消旋混合物或消旋體，其可在化學反應或製程中不存在立體選擇性或立體特異性之情況中出現。術語「外消旋混合物」與「消旋體」係指兩種對映異構體之等莫耳混合物而不具有旋光活性。對映異構體可藉由對掌性分離方法自外消旋混合物分離，諸如超臨界流體層析(SFC)。經分離的對映異構體中於對掌中心之構型之指定可係假設性，並基於說明目的而描述於表1中，但是立體化學決定有待諸如x-射線晶體數據確定。
術語「互變異構體」或「互變異構形式」係指具有不同能量之結構異構體，其可經由低能障壁互相轉化。例如，質子互變異構體(亦稱為質子移變互變異構體)包括經由質子遷移之互相轉化，諸如酮-烯醇以及亞胺-烯胺異構化。價鍵互變異構體包括藉由一些鍵結電子之重組之互相轉化。
術語「醫藥上可接受之鹽」表示並非生物上或非需要之鹽。醫藥上可接受之鹽包括酸及鹼加成鹽兩者。片語「醫藥上可接受」意指物質或組合物必須與組成調配物質之其他成分及/或與以其進行治療之哺乳動物在化學及/或毒物學上相容。
術語「醫藥上可接受之酸加成鹽」表示彼等與無機酸所形成之醫藥上可接受之鹽，諸如鹽酸、氫溴酸、硫酸、硝酸、碳酸、磷酸，以及選自脂肪族、脂環族、芳香族、芳脂族、雜環、羧酸及磺酸類有機酸之有機酸，諸如甲酸、乙酸、丙酸、乙醇酸、葡萄糖酸、乳酸、丙酮酸、草酸、蘋果酸、馬來酸、丙二酸、琥珀酸、富馬酸、酒石酸、檸檬酸、天冬胺酸、抗壞血酸、榖胺酸、鄰胺基苯甲酸、苯甲酸、桂皮酸、扁桃酸、雙羥萘酸、苯乙酸、甲烷磺酸「甲磺酸鹽」、乙磺酸、對甲苯磺酸以及水楊酸。
術語「醫藥上可接受之鹼加成鹽」表示彼等與有機或無機鹼所形成之醫藥上可接受之鹽。可接受之無機鹼之實例包括鈉鹽、鉀鹽、鈣鹽、鎂鹽、鐵鹽、鋅鹽、銅鹽、錳鹽及鋁鹽。源自醫藥上可接受之有機無毒鹼之鹽包括以下物質之鹽：一級、二級及三級胺、經取代的胺(包括天然經取代的胺、環胺)以及鹼性離子交換樹脂諸如，異丙胺、三甲胺、二乙胺、三乙胺、三丙胺、乙醇胺、2-二乙胺基乙醇、胺丁三醇(trimethamine)、二環己基胺、賴胺酸、精胺酸、組胺酸、咖啡鹼、普魯卡因(procaine)、海巴明(hydrabamine)、膽鹼、甜菜鹼、乙二胺、葡萄糖胺、葡甲胺、可可鹼、嘌呤、哌、哌啶、N-乙基哌啶以及多元胺樹脂。
「溶劑化物」係指由一或多個溶劑分子與本發明化合物組成之締合或複合物。形成溶劑化物之溶劑之實例包括(但不限於)水、異丙醇、乙醇、甲醇、DMSO、醋酸乙 酯、醋酸及乙醇胺。
術語「EC50」為半數最高有效濃度，且表示某一特定化合物為達到特定活體內最大效果之50%所需之血漿濃度。
術語「Ki」為抑制常數，且表示特定抑制劑對受體之絕對結合親和力。其係利用競爭性結合分析法而測定，且等於在不存在競爭性配位子(例如放射性配位子)下，特定抑制劑佔據50%之受體時之濃度。Ki值可對數地轉化為pKi值(-log Ki)，其中數值越高表示效力呈指數地增加。
術語「IC5」為半數最大抑制濃度，且表示某一特定化合物為達到活體外生物過程之50%抑制所需之濃度。IC50值可對數地轉化為pIC50值(-log IC50)，其中數值越高表示效力呈指數的增加。IC50值並非絕對值，而要取決於實驗條件，例如所採用濃度，且可利用Cheng-Prusoff方程轉化為絕對抑制常數(Ki)(Biochem.Pharmacol.(1973)22：3099)。可計算其他百分比抑制叁數，諸如IC70、IC90等。
術語「本發明化合物」與「式I化合物」包括式I化合物及其立體異構體、幾何異構體、互變異構體、溶劑化物、代謝物以及其醫藥上可接受之鹽及前藥。
本文所給定之任何化學式或結構，包括式I與II化合物，同樣意欲代表此等化合物之水合物、溶劑化物及多晶型，以及其混合物。
本文所給定之任何化學式或結構，包括式I與II化合物，同樣意欲代表該等化合物之未經標記的形式以及經同位素標記的形式。經同位素標記的化合物具有本文所給定化學 式所描述之結構，不同之處在於一或多個原子被具有所選擇原子量或質量數之原子所取代。可併入本發明化合物之同位素之實例包括氫、碳、氮、氧、磷、氟以及氯之同位素，諸如(但不限於)2H(氘，D)、3H(氚)、11C、13C、14C、15N、18F、31P、32P、35S、36Cl以及125I。各種經同位素標記的本發明化合物，例如彼等併入放射性同位素(諸如3H、13C及14C)之化合物。此等經同位素標記的化合物可用於代謝研究、反應動力學研究、檢測或成像技術，諸如正子發射斷層攝影術(PET)或單光子射線電腦斷層攝影術(SPECT)，包括藥物或受質組織分佈分析，或者用於患者之放射性治療。經氘標記或取代之本發明治療性化合物可具有改良的與分佈、代謝以及排泄(ADME)相關的DMPK(藥物代謝與藥物動力學)特性。經較重同位素(諸如氘)取代可提供由較高代謝穩定性所引起之若干治療優勢，例如，提高活體內半衰期或降低劑量需求。經18F標記之化合物可用於PET或SPECT研究。經同位素標記的本發明化合物及其前藥一般可藉由下文所述之反應流程或實例及製備例中所揭示係藉由將易於得到的經同位素標記試藥置換未經同位素標記的試藥之程序而製備。另外，經較重同位素(特定言之，氘(即2H或D))取代可提供由較高代謝穩定性所引起之若干治療優勢，例如，提高活體內半衰期或降低劑量需求或改良治療指數。應瞭解，氘在本說明書內被視為式(I)化合物之取代基。此一較重同位素(尤其是氘)之濃度可藉由同位素濃化因素界定。在本發明化合 物中，未經具體指定為特定同位素之任何原子意在代表該原子之任何穩定之同位素。除非另有說明，否則當某一位置經具體指定為「H」或「氫」時，應理解為該位置具有處於其天然豐度同位素組成之氫。因此，在本發明化合物中，經具體指定為氘(D)之任何原子意在代表氘。
8-氟基呔-1(2H)-酮化合物
本發明提供式I之8-氟基呔-1(2H)-酮化合物或其立體異構體、互變異構體或醫藥上可接受之鹽，包括式Ia-If及其醫藥調配物，其可有效治療由Btk激酶所調控之疾病、病狀及/或病症： 其中：X1為CR1或N；X2為CR2或N；X3為CR3或N；其中X1、X2與X3之一或二者為N；R1、R2與R3係獨立地選自H、F、Cl、CN、-CH3、-CH2CH3、-CH2OH、-CH2F、-CHF2、-CF3、-CH2CH2OH、-NH2、 -NHCH3、-N(CH3)2、-OH、-OCH3、-OCH2CH3以及-OCH2CH2OH；R4係選自H、F、Cl、CN、-CH2OH、-CH(CH3)OH、-C(CH3)2OH、-CH(CF3)OH、-CH2F、-CHF2、-CH2CHF2、-CF3、-C(O)NH2、-C(O)NHCH3、-C(O)N(CH3)2、-NH2、-NHCH3、-N(CH3)2、-NHC(O)CH3、-OH、-OCH3、-OCH2CH3、-OCH2CH2OH、環丙基、環丙基甲基、1-羥基環丙基、咪唑基、吡唑基、3-羥基-氧雜環丁-3-基、氧雜環丁-3-基以及吖丁啶-1-基；R5係選自-CH3、-CH2CH3、-CH2OH、-CH2F、-CHF2、-CF3、-CN以及-CH2CH2OH；或者兩個R5基團形成3-、4-、5-或6-員碳環或雜環；或者R5基團與R7基團形成3-、4-、5-或6-員碳環或雜環；n為0、1、2、3或4；R6係選自H、-CH3、-CH2CH3、-CH2CH2OH、-CH2F、-CHF2、-CF3、-NH2、-NHCH3、-N(CH3)2、-OH、-OCH3、-OCH2CH3以及-OCH2CH2OH；R7係選自H、-CH3、-S(O)2CH3、環丙基、吖丁啶-3-基、氧雜環丁-3-基以及嗎啉-4-基；Z1為CR8或N，其中R8係選自H、F、Cl、-CH3、-CH2CH3、-CH2CH2OH、-NH2、-NHCH3、-N(CH3)2、-OH、-OCH3、-OCH2CH3以及-OCH2CH2OH；Z2為CR9或N，其中R9係選自H、-CH3、-CH2CH3以及 -CH2CH2OH；及Y1與Y2係獨立地選自CH與N，其中Y1與Y2並非各皆為N。
式I化合物之例舉性具體例包括式Ia-If化合物：
式I化合物之例舉性具體例包括，其中X1為N，X2為 CR2，且X3為CR3。
式I化合物之例舉性具體例包括，其中X1為CR1，X2為N，且X3為CR3。
式I化合物之例舉性具體例包括，其中X1為CR1，X2為CR2，且X3為N。
式I化合物之例舉性具體例包括，其中X1與X3為N，X1與X2為N，或者X2與X3為N。
式I化合物之例舉性具體例包括，其中X2為CR2，且R2為F。
式I化合物之例舉性具體例包括，其中X1與X3為CH。
式I化合物之例舉性具體例包括，其中R4為-CH2OH。
式I化合物之例舉性具體例包括，其中R5為-CH3，且n為1或2。
式I化合物之例舉性具體例包括，其中R7為氧雜環丁-3-基。
式I化合物之例舉性具體例包括，其中Y1為CH。
式I化合物之例舉性具體例包括，其中Y2為CH。
式I化合物之例舉性具體例包括，其中Y1為N。
式I化合物之例舉性具體例包括，其中Y2為N。
式I化合物之例舉性具體例包括，其中Z1為CH。
式I化合物之例舉性具體例包括，其中Z2為CH。
式I化合物之例舉性具體例包括，其中Z1為N。
式I化合物之例舉性具體例包括，其中Z2為N。
本發明亦提供式II之8-氟基呔-1(2H)-酮化合物或其立 體異構體、互變異構體或醫藥上可接受之鹽，其可有效治療由Btk激酶所調控之疾病、病狀及/或病症： 其中：X1為CR1或N；X2為CR2或N；X3為CR3或N；其中X1、X2與X3之一或二者為N；Y1與Y2係獨立地選自CH與N，其中Y1與Y2並非各皆為N；R1、R2與R3係獨立地選自H、F、Cl、CN、-CH3、-CH2CH3、-CH2OH、-CH2F、-CHF2、-CF3、-CH2CH2OH、-NH2、-NHCH3、-N(CH3)2、-OH、-OCH3、-OCH2CH3以及-OCH2CH2OH。
R4係選自H、F、Cl、CN、-CH2OH、-CH(CH3)OH、-C(CH3)2OH、-CH(CF3)OH、-CH2F、-CHF2、-CH2CHF2、-CF3、-C(O)NH2、-C(O)NHCH3、-C(O)N(CH3)2、-NH2、-NHCH3、-N(CH3)2、-NHC(O)CH3、-OH、-OCH3、-OCH2CH3、-OCH2CH2OH、-OP(O)(OH)2、環丙基、環丙基甲基、1-羥基環丙基、咪唑基、吡唑基、3-羥基-氧雜環丁-3-基、氧雜環丁-3-基以及吖丁啶-1-基； R6係選自H、-CH3、-CH2CH3、-CH2CH2OH、-CH2F、-CHF2、-CF3、-NH2、-NHCH3、-N(CH3)2、-OH、-OCH3、-OCH2CH3以及-OCH2CH2OH；R8係選自C6-C20芳基、C3-C12碳環基、C2-C20雜環基、C1-C20雜芳基、-(C6-C20芳基)-(C2-C20雜環基)、-(C1-C20雜芳基)-(C2-C20雜環基)、-(C1-C20雜芳基)-(C2-C20雜環基)-(C2-C20雜環基)、-(C1-C20雜芳基)-(C2-C20雜環基)-(C1-C6烷基)、-(C1-C20雜芳基)-(C1-C6烷基)以及-(C1-C20雜芳基)-C(=O)-(C2-C20雜環基)；其中芳基、碳環基、雜環基以及雜芳基視情況地經一或多個選自以下基團之基團取代：F、Cl、Br、I、CN、-CH3、-CH2CH3、CH(CH3)2、-CH2CH(CH3)2、-CH2OH、-CH2OCH3、-C(CH3)2OH、-CH(OH)CH(CH3)2、-C(CH3)2CH2OH、-CH2CH2SO2CH3、-CH2OP(O)(OH)2、-C(CH3)2CONH2、-CH2OCH3、-CH2CH2OH、-CH2CH2OCH3、-CH2F、-CHF2、-CF3、-CH2CF3、-CH2CHF2、-CH(CH3)CN、-C(CH3)2CN、-CH2CN、CO2H、-CO2CH3、-CO2C(CH3)3、-COCH(OH)CH3、-C(O)CH3、-C(O)CH2CH3、-C(O)CH(CH3)2、-C(O)NH2、-C(O)NHCH3、-C(O)N(CH3)2、-NH2、-NHCH3、-N(CH3)2、-NHC(O)CH3、-N(CH3)COCH3、-NHS(O)2CH3、-N(CH3)C(CH3)2CONH2、-N(CH3)CH2CH2S(O)2CH3、-NO2、=O、-OCH2CH2N(CH3)2、-OP(O)(OH)2、-OH、-OCH3、-OCH2CH3、-OCH2CH2OCH3、-OCH2CH2OH、-S(O)2N(CH3)2、-SCH3、-S(O)2CH3、-S(O)3H、環丙基、氧雜環丁基、吖丁啶基、1-甲基吖丁啶-3-基氧基、N-甲 基-N-氧雜環丁-3-基胺基、吖丁啶-1-基甲基以及嗎啉基。
式II化合物之例舉性具體例包括，其中R8為-(C1-C20雜芳基)-(C2-C20雜環基)。
式II化合物之例舉性實施例包括，其中R8為吡啶基。
式II化合物之例舉性具體例包括，其中R8為-(吡啶基)-(哌基)。
式II化合物之例舉性具體例包括，其中R8為C1-C20雜芳基。
式II化合物之例舉性具體例包括，其中R8係選自：嘧啶基、6,7-二氫-4H-噻唑并[5,4-c]吡啶-2-基、5-(嗎啉-4-羰基)-2-吡啶基、吡唑基、噻唑基、6,7-二氫-4H-吡唑并[1,5-a]吡-2-基、噁唑基、異噁唑基、咪唑基、5-(6,7-二氫-4H-吡唑并[5,1-c][1,4]噁-2-基、1,2,3-三唑基、4,5,6,7-四氫吡唑并[1,5-a]吡、吡基，及5,6-二氫-4H-吡咯并[1,2-b]吡唑-2-基。
式II化合物之例舉性具體例包括，其中R8為 其中R9係選自H、-CH3、-CH2OCH3、-CH2CH3、-CH(CH3)2、-CH2CH2OH、-CH2CH2OCH3、-CH2F、-CHF2、-CF3、-CH2CF3、-CH2CHF2、-CH(CH3)CN、-C(CH3)2CN、-CH2CN、-CH2CH2CN、-C(O)CH3、-C(O)CH2CH3、-C(O)CH(CH3)2、-NH2、-NHCH3、-N(CH3)2、-OH、-OCH3、-OCH2CH3、-OCH2CH2OH、環丙基、環丙基甲基、氧雜環丁基以及氧雜環丁基甲基。
式II化合物之例舉性具體例包括，其中X1為N、X2為CR2，且X3為CR3。
式II化合物之例舉性具體例包括，其中X1為CR1，X2為N，且X3為CR3。
式II化合物之例舉性具體例包括，其中X1為CR1，X2為CR2，且X3為N。
式II化合物之例舉性具體例包括，其中X1與X3為N、X1與X2為N或者X2與X3為N。
式II化合物之例舉性具體例包括，其中X2為CR2，且R2為F。
式II化合物之例舉性具體例包括，其中X1與X3為CH。
式II化合物之例舉性實施例包括，其中R4為-CH2OH。
本發明之式I與II化合物可包含不對稱或對掌性中心，且因此存在不同立體異構形式。本發明化合物之所有立體異 構形式(包括(但不限於)、非對映異構體、對映異構體及阻轉異構體，以及其混合物(諸如外消旋混合物))意欲形成本發明之一部分。
此外，本發明包括所有非對映異構體，包括順式-反式(幾何)以及構形異構體。例如，若式I化合物包含雙鍵或稠合環，則該順式及反式形式以及其混合物包含在本發明範圍內。
在本文所示結構中，若並未指定任何特定對掌性原子之立體化學結構，則所有立體異構體皆涵蓋且包含於本發明化合物中。若立體化學結構係由代表特定構型之實心楔形或虛線指定，則該立體異構體因而被指定且界定。
本發明化合物可存在非溶劑化形式以及與醫藥上可接受之溶劑(諸如水、乙醇等等)溶劑化之形式，且本發明欲包含溶劑化以及非溶劑化兩種形式。
本發明化合物亦可存在不同互變異構形式，且所有此等形式皆包含在本發明範圍內。術語「互變異構體」或「互變異構形式」係指具有不同能量之結構異構體，其可經由低能障壁互相轉化。例如，質子互變異構體(亦稱為質子移變互變異構體)包括經由質子遷移之互相轉化，諸如酮-烯醇以及亞胺-烯胺異構化。價鍵互變異構體包括藉由一些鍵結電子之重組之互相轉化。
生物評估
式I化合物作為酶活性(或其他生物活性)之抑制劑之相對功效可藉由測定各化合物抑制該活性達預定程度時之濃 度，然後比較該等結果而建立。通常，較佳之測定係生物化學分析中抑制50%活性之濃度，即50%抑制濃度或「IC50」。利用此項技術中所知之習知技術可測定IC50值。一般而言，藉由測量既定酶在所研究之抑制劑之一系列濃度存在下之活性可測定IC50。然後將實驗所得的酶活性數值相對於所使用抑制劑濃度作圖。顯示50%酶活性之抑制劑濃度(與不存在任何抑制劑下之活性相比較)取為IC50值。類似地，其他抑制濃度可經由適宜地測定活性而界定。例如，在一些情況中，可能需建立90%抑制濃度，即IC90，等等。
藉由標準生化Btk激酶分析測試式I化合物(實例901)。
可用於測試式I化合物之標準細胞Btk激酶分析之一般程序為Ramos細胞Btk分析(實例902)。
以純化自Balb/c小鼠之脾臟之B細胞，使用標準細胞B-細胞增殖分析以測試式I化合物(實例903)。
以純化自Balb/c小鼠之脾臟之T細胞，使用標準T細胞增殖分析以測試式I化合物(實例904)。
以純化自8-16週齡Balb/c小鼠之總小鼠脾細胞，對式I化合物之B細胞活性抑制作用進行CD86抑制分析(實例905)。
可對式I化合物進行B-ALL細胞存活分析，以測量培養基中存活B-ALL細胞之數目(實例906)。
可對式I化合物進行CD69全血分析，以測量該化合物在由以羊F(ab')2抗人類IgM交聯表面IgM所激活之人類全血中抑制由B淋巴細胞產生CD69之能力(實例907)。CD69係 與淋巴細胞遷移以及細胞介素分泌有關之II型C-型凝集素。CD69表現代表白血球活化之最早可提供之指示劑之一，且其快速誘導係經由轉錄活化而發生(Vazquez等人(2009)Jour.of Immunology Published October 19,2009,doi：10.4049/jimmunol.0900839)。由選擇性Btk抑制劑對抗原受體刺激之濃度依賴性抑制作用誘發淋巴細胞活化標誌CD69之細胞表面表現(Honigberg等人(2010)Proc.Natl.Acad.Sci.107(29)：13075-13080)。因此，選擇性Btk抑制劑之CD69抑制作用可能與某種B細胞病症之治療功效相關。表1與2中顯示例舉式I化合物之CD69 Hu血液FACS IC70值。
式I例舉化合物之細胞毒性或抑細胞活性可藉由如下測量：在細胞培養基中建立增殖性哺乳動物腫瘤細胞株，添加式I化合物，培養細胞約6小時至約5天之時間；以及測量細胞存活性(實例908)。使用基於細胞之活體外分析測量存活性。即，增殖性(IC50)、細胞毒性(EC50)以及誘發細胞凋亡(卡斯蛋白(caspase)激活)，且可用於預測治療惡性血液病以及實心腫瘤之臨床功效。
藉由實例908之細胞增殖分析；CellTiter-Glo®發光細胞存活性分析(購自Promega Corp.,Madison,WI)可測量式I化合物與化學治療劑之組合之活體外效力。該均質分析法係基於鞘翅目(Coleoptera)螢光素酶之重組表現(US 5583024；US 5674713；US 5700670)，並基於定量存在之ATP(代謝活性細胞之指標)而測定培養物中存活細胞之數 目(Crouch等人(1993)J.Immunol.Meth.160：81-88；US 6602677)。在96或384孔孔盤進行CellTiter-Glo®分析，使其可進行自動化高通量篩選(HTS)(Cree等人(1995)AntiCancer Drugs 6：398-404)。均質分析程序涉及將單一試藥(CellTiter-Glo®試藥)直接添加至於補充有血清培養基中培養之細胞中。無需進行細胞清洗、移除培養基以及多次移液步驟。在添加試藥並混合後10分鐘內，該系統在384-孔盤中檢測到少至15細胞/孔。
均質「添加-混合-測量」板導致細胞裂解以及產生與ATP存在之量成比例之發光訊號。ATP之量與培養物中細胞之數量成正比例。CellTiter-Glo®分析產生「發光型」發光訊號，其係由螢光素酶反應所產生，該螢光素酶具有一般超過五個小時之半衰期，取決於細胞類型以及所用培養基而定。存活細胞係反映於相對發光單位(RLU)。受質甲蟲(Beetle)蟲螢光素由重組螢火蟲螢光素酶予以氧化性脫羧基，同時使ATP轉化為AMP，並產生光子。延長之半衰期消除了使用試劑注射器之需求，並提供連續或批量處理多塊板之靈活性。該細胞增殖分析可使用各種多孔盤，例如96或384孔盤。藉由照度計或CCD照相機成像裝置可記錄數據。發光輸出係以相對光單位(RLU)表示，且經時測量。
式I實例化合物以及與化學治療劑之組合之抗增殖功效係對於某種血液腫瘤細胞系由CellTiter-Glo®分析(實例908)測量。建立所測試化合物以及組合之EC50值。
表1與2中例舉式I化合物係根據本發明方法製作、鑑定並測試對Btk之抑制作用，且其具有以下結構以及相應名稱(ChemDraw Ultra第9.0.1版以及ChemBioDraw第11.0版，CambridgeSoft Corp.,Cambridge MA)。若式I化合物或中間產物涉及超過一個名稱，則化學結構可確定化合物。
式I化合物之投與
本發明化合物可藉適於待治療病狀之任何途徑投與。適宜途徑包括口服、非經腸(包括皮下、肌肉內、靜脈內、動脈內、皮內、鞘內以及硬膜外)、經皮、直腸、經鼻、局部(包括口腔及舌下)、陰道、腹膜內、肺內以及鼻內。就局部免疫抑制治療而言，該化合物可藉由病竈內投與而投與，包括灌注或者在移植前使移植物與抑制劑接觸。應瞭解，較佳途徑可依(例如)接受者之病狀不同而有所不同。當化合物係口服投與時，其可與醫藥上可接受之載劑或賦形劑調配為丸劑、膠囊、錠劑等。當化合物係非經腸投與時，其可與醫藥上可接受之非經腸媒劑進行調配，並呈單位劑量可注射形式，詳見下文。
治療人類患者之式I或II化合物之劑量可於約10 mg至約1000 mg之範圍。化合物之典型劑量可為約100 mg至約300 mg。劑量可每日一次(QID)、每日兩次(BID)或更頻繁地投與，取決於藥物動力學與藥效動力學特性，其包括特定化合物之吸收、分佈、代謝及排泄。另外，毒性因素可影響劑量給藥及投與療程。當口服投與時，丸劑、膠囊或錠劑可在一特定時間段內每日或更不頻繁地攝入。療程可重複數個治療週期。
以式I與II化合物進行治療之方法
本發明之式I與II化合物可有效治療罹患因與Btk激酶相關之異常細胞生長、功能或行為所引起之疾病或病症之人類或動物患者，諸如免疫病症、心血管疾病、病毒感染、炎症、代謝/內分泌病症或神經疾病，因此可藉由包括向其投與如上定義之本發明化合物之方法而予以治療。罹患癌症之人類或動物患者亦可藉由包括對其投與如上定義之本發明化合物之方法而予以治療。從而可改良或改善患者之病狀。
式I與II化合物可有用於進行活體外、原位及活體內診斷或治療哺乳動物細胞、生體或相關病理狀態，諸如全身及局部炎症、免疫-發炎疾病，諸如類風濕性關節炎、免疫抑制、器官移植排斥、過敏反應、潰瘍性結腸炎、克羅恩氏病(Crohn's disease)、皮炎、氣喘、全身性紅斑狼瘡、修格蘭氏症候群(Sjögren's Syndrome)、多發性硬化、硬皮病/全身性硬化症、特發性血小板減少性紫癜(ITP)、抗嗜中性球細胞質抗體(ANCA)血管炎、慢性阻塞性肺病(COPD)、牛皮癬，以及用於一般關節保護作用。
本發明方法亦包括治療如下列之疾病：關節炎疾病，諸如類風濕性關節炎、單關節類關節炎、骨關節炎、痛風性關節炎、脊椎炎；貝塞特氏疾病(Behcet disease)；敗血症、敗血性休克、內毒素性休克、革蘭氏陰性敗血症、革蘭氏陽性敗血症以及中毒性休克症候群；因敗血病續發之多器官損傷症候群、外傷或出血；眼部病症，諸如過敏性 結膜炎、春季結膜炎、葡萄膜炎以及甲狀腺相關性眼病；嗜酸性球性肉芽腫；肺病或呼吸病症，諸如氣喘、慢性支氣管炎、過敏性鼻炎、ARDS、慢性肺部發炎疾病(例如，慢性阻塞性肺病)、矽肺病、肺結節病、胸膜炎、肺泡炎、血管炎、氣腫、肺炎、支氣管擴張以及肺型氧中毒；心肌、腦或四肢之再灌注損傷；纖維化，諸如囊腫性纖維化；瘢痕形成或疤痕組織形成；動脈粥樣硬化；自體免疫病，諸如全身性紅斑狼瘡(SLE)、自體免疫甲狀腺炎、多發性硬化、一些形式之糖尿病以及雷諾氏症候群(Reynaud's syndrome)；以及移植排斥病症，諸如GVHD以及同種異體移植排斥；慢性腎小球腎炎；發炎性腸病，諸如慢性發炎性腸病(CIBD)、克羅恩氏病、潰瘍性結腸炎以及壞死性小腸結腸炎；發炎性皮膚病，諸如接觸性皮炎、特應性皮膚炎、牛皮癬或蕁麻疹；因感染所引起之發熱及蕁麻疹；中樞及週邊神經系統發炎性病症，諸如腦膜炎、腦炎以及因輕微外傷所引起之腦或脊髓損傷；修格蘭氏症候群(Sjogren's syndrome)；與白細胞血球滲出相關之疾病；酒精性肝炎；細菌性肺炎；抗原-抗體複合物介導之疾病；低血容量性休克；第I型糖尿病；急性及遲發過敏性；因白細胞失調及轉移所引起之疾病狀態；燙傷；粒細胞輸血相關症候群；以及細胞介素誘發之毒性。
本發明方法亦包括治療選自由下列組成之群之癌症：乳癌、卵巢癌、子宮頸癌、前列腺癌、睾丸癌、泌尿生殖道癌、食道癌、喉癌、神經膠質母細胞瘤、神經胚細胞瘤、 胃癌、皮膚癌、角質棘皮瘤、肺癌、表皮樣癌、大細胞癌、非小細胞肺癌(NSCLC)、小細胞癌、肺腺癌、骨癌、結腸癌、腺瘤、胰腺癌、腺癌、甲狀腺癌、濾泡癌、未分化癌、乳頭狀癌、精細胞瘤、黑色素瘤、肉瘤、膀胱癌、肝癌及膽道癌、腎癌、胰腺癌、骨髓病症、淋巴瘤、毛細胞癌、頰腔癌、鼻咽癌、咽癌、唇癌、舌癌、口腔癌、小腸癌、結腸-直腸癌、大腸癌、直腸癌、腦癌及中樞神經系統癌、霍奇金病(霍奇金氏)、白血病、支氣管癌、甲狀腺癌、肝癌及肝內膽管癌、肝細胞癌、胃癌、膠質瘤/神經膠質母細胞瘤、子宮內膜癌、黑色素瘤、腎癌及腎盂癌、膀胱癌、子宮體癌、子宮頸癌、多發性骨髓瘤、急性骨髓性白血病、慢性骨髓性白血病、淋巴細胞性白血病、慢性淋巴細胞白血病(CLL)、骨髓性白血病、口腔癌及咽癌、霍奇金氏淋巴瘤、黑色素瘤以及結腸絨毛腺瘤。
本發明方法可具有治療再灌注損傷(也就是由於組織或器官經歷一段時間局部缺血，接著再灌注所引起之損傷)個體或容易罹患其之個體之效用。術語「局部缺血」係指因動脈血流入受阻所引起之局部組織貧血。短暫性局部缺血接著再灌注特徵性地經由罹患部位中之血管內皮而導致中性粒細胞活化及遊走。活化的中性粒細胞之累積進而導致產生活性氧代謝物，其可損傷相關組織或器官之構成。該「再灌注損傷」現象通常與諸如血管中風(包括全身及病灶性局部缺血)、出血性休克、心肌局部缺血或梗塞、器官移植以及腦血管痙攣之病狀有關。舉例而言，再灌注 損傷發生在心臟旁通手術結束時或在心跳驟停期間，此時，一旦接受血液受阻，則心臟開始再灌注。可預期抑制Btk活性可降低此等情況中再灌注損傷之程度。
醫藥調配物
為將本發明化合物用於治療哺乳動物(包括人類)，通常按照標準製藥實務將其調配為醫藥組合物。根據本發明之此態樣，係提供一種醫藥組合物，其包含與醫藥上可接受之稀釋劑或載劑組合之本發明化合物。
典型調配物係藉由使本發明化合物與載劑、稀釋劑或賦形劑混合而製備。適宜載劑、稀釋劑以及賦形劑係熟習此項技術者所熟知，且包括以下材料，諸如碳水化合物類、蠟、水溶性及/或可膨脹聚合物、親水性或疏水性材料、明膠、油、溶劑、水等。所用特定載劑、稀釋劑或賦形劑將取決於使用本發明化合物之方式及目的。溶劑一般係基於熟習此項技術者所理解投與至哺乳動物係安全(GRAS)之溶劑加以選擇。一般而言，安全溶劑為無毒性水性溶劑，諸如水以及可溶於或可混溶於水中之其他無毒性溶劑。適宜水性溶劑包括水、乙醇、丙二醇、聚乙二醇(例如，PEG 400、PEG 300)等等，及其混合物。該調配物亦可包含一或多種緩衝劑、穩定劑、表面活性劑、潤濕劑、潤滑劑、乳化劑、懸浮劑、保存劑、抗氧化劑、蔽光劑、助滑劑、加工助劑、著色劑、甜味劑、芳香劑、矯味劑以及提供藥物(即本發明化合物或其醫藥組合物)之優良呈現或有助於製造醫藥產品(即，藥劑)之其他已知添加劑。
調配物可利用習知溶解及混合程序而製備。例如，在上述賦形劑之一或多者存在下將大量原料藥物(即，本發明化合物或該化合物之穩定形式(例如，與環糊精衍生物或其他已知複合劑複合)溶於適宜溶劑中。通常將本發明化合物調配為醫藥劑型，以提供該藥物之易於控制劑量，以及可使患者順應處方療程。
供應用之醫藥組合物(或調配物)可以多種方式包裝，取決於投與該藥物所用之方法。一般而言，用於配送之製品包括容器，其內置有呈適宜形式之醫藥調配物。合適容器係熟習此項技術者所熟知，且包括以下材料，諸如瓶子(塑料及玻璃)、藥囊、安瓶、塑料袋、金屬圓筒等等。容器亦可包括防壓裝配，以防止不慎取用包裝之內容物。另外，容器具有置於其上之描述容器內容物之標籤。標籤亦可包括適當警語。
本發明化合物之醫藥調配物可經製備用於各種投與途徑及類型。例如，具有所需純度之式I或II化合物可視情況與醫藥上可接受之稀釋劑、載劑、賦形劑或穩定劑(Remington's Pharmaceutical Sciences(1980)第16版，Osol,A.Ed.)混合，以呈冷凍乾燥調配物、經研磨的粉末或水溶液之形式。調配物可在環境溫度下、在適宜pH下以及在所需純度下與生理上可接受之載劑(即，在所採用劑量及濃度下對接受者無毒性之載劑)混合。調配物之pH主要取決於化合物之特定用途以及濃度，但可介於約3至約8之範圍。於pH為5之醋酸鹽緩衝劑中之調配物係適宜實施例。
化合物一般可以固體組合物、冷凍乾燥調配物或水溶液儲存。
本發明醫藥組合物將以符合良好醫療實務之方式(即，用量、濃度、時間表、過程、媒劑以及投與途徑)調配、給藥以及投與。在本說明書中所考慮因素包括欲治療之特定病症、欲治療之特定哺乳動物、個別患者之臨床狀況、病症之病因、製劑之遞送位置、投與方式、投與時間表以及執業醫師所知之其他因素。欲投與化合物之「治療有效量」將由此等考慮因素控制，且係舒緩或治療過度增生症所必要之最少用量。
依常理，每劑非經腸地投與抑制劑之初始醫藥有效量將於約0.01-100 mg/kg之範圍，也就是每日約0.1至20 mg/kg患者體重，所使用化合物之通常初始範圍為0.3至15 mg/kg/天。
可接受之稀釋劑、載劑、賦形劑及穩定劑在所採用劑量及濃度下對接受者係無毒，且包括緩衝劑，諸如磷酸鹽、檸檬酸鹽以及其他有機酸；抗氧化劑，包括抗壞血酸以及甲硫胺酸；保存劑(諸如十八烷基二甲基苄基氯化銨；氯化己烷雙銨；氯化苄二甲烴銨，氯化苄乙氧銨；苯酚，丁醇或苄醇；對羥基苯甲酸烷基酯，諸如對羥基苯甲酸甲酯或對羥基苯甲酸丙酯；鄰苯二酚；間苯二酚；環己醇；3-戊醇；以及間-甲苯酚)；低分子量(不超過約10個殘基)多肽；蛋白質，諸如血清白蛋白、明膠或免疫球蛋白；親水聚合物，諸如聚乙烯吡咯啶酮；胺基酸，諸如甘胺酸，穀 氨醯胺，天冬醯胺，組胺酸，精胺酸或賴胺酸；單糖、二糖其他糖類，包括葡萄糖，甘露糖或糊精；螯合劑，諸如EDTA；糖，諸如蔗糖、甘露糖醇、海藻糖或山梨糖醇；鹽形成抗衡離子，諸如鈉；金屬錯合物(例如，Zn-蛋白錯合物)；及/或非離子表面活性劑，諸如TWEENTM、PLURONICSTM或聚乙二醇(PEG)。亦可(例如)藉由凝聚技術或藉由界面聚合作用將活性醫藥成分包埋在所製備微膠囊中，例如，分別呈膠狀藥物遞送系統(例如，脂質體、白蛋白微球、微乳液、奈米微粒以及奈米膠囊)或巨乳液之羥甲基纖維素或明膠-微膠囊與聚-(甲基丙烯酸甲酯)微膠囊。此等技術揭示於Remington's Pharmaceutical Sciences第16版，Osol,A.Ed.(1980)中。
可製備式I或II化合物之緩釋調配物。緩釋調配物之合適實例包括含式I或II化合物之固態疏水聚合物之半透基質，其中該等基質係呈成型製品之形式，例如，薄膜或微膠囊。緩釋基質之實例包括聚酯、水凝膠(例如，聚(甲基丙烯酸2-羥基乙酯)或聚(乙烯醇))、聚交酯(US 3773919)、L-榖胺酸與γ-乙基-L-殼胺酸之共聚物、非可降解的乙烯-乙酸乙烯酯、可降解的乳酸-乙醇酸共聚物，諸如LUPRON DEPOTTM(由乳酸-乙醇酸共聚物與乙酸亮丙瑞林(leuprolide acetate)組成之可注射微球體)以及聚-D-(-)-3-羥基丁酸。
調配物包括適於本文所詳述之投與途徑之彼等調配物。調配物可適宜地呈現單位劑型，且可藉由製藥技術中所熟知之任何方法製備。技術及調配物大體上可見於 Remington's Pharmaceutical Sciences(Mack Publishing Co.,Easton,PA)。此等方法包括使活性成分與構成一或多種輔助成分之載劑組合之步驟。一般而言，調配物係均勻地或緊密地使活性成分與液體載劑或微細固體載劑或者二者締合，接著(若需要)使產品成型而製備。
適於口服投與之式I或II化合物之調配物可製成離散型單位，諸如丸劑、膠囊、扁囊劑或錠劑，各包含預定量之式I或II化合物。壓縮錠劑可藉由將呈自由流動形式(諸如，粉末或顆粒)之活性成分視情況與黏合劑、潤滑劑、惰性稀釋劑、保存劑、表面活性劑或分散劑混合並於適宜機器中壓製而製備。藉由使經惰性液體稀釋劑潤濕之粉化活性成分之混合物在適宜機器中模塑可製成成形錠劑。錠劑可視情況經包衣或刻痕，並視情況經調配，以提供活性成分由此之緩慢或控制釋放。可製備錠劑、糖錠劑、含片、水性或油性懸浮液、分散性粉劑或顆粒、乳液、硬或軟膠囊(例如，明膠膠囊)、糖漿或酒劑，用於口服。可根據製造醫藥組合物之此項技術中之任何已知方法製備欲供口服之式I或II化合物之調配物，且此等組合物可包含一或多種藥劑，包括甜味劑、矯味劑、著色劑以及防腐劑，以提供適口製劑。含有活性成分與適於製造錠劑之無毒性醫藥上可接受之賦形劑之混合物之錠劑係可接受。此等賦形劑可為例如惰性稀釋劑，諸如碳酸鈣或碳酸鈉、乳糖、磷酸鈣或磷酸鉀；造粒劑及崩解劑，諸如玉米澱粉或褐藻酸；黏合劑，諸如澱粉、明膠或阿拉伯膠；以及潤滑劑，諸如硬脂 酸鎂、硬脂酸或滑石粉。錠劑可係未經包衣或藉由已知技術(包括微膠囊化技術)包衣，以延遲在胃腸道內之崩解以及吸收，且因此在較長時間內提供持久作用。例如，可單獨採用延時材料諸如甘油單硬脂酸酯或甘油二硬脂酸酯或與蠟一起採用。
就治療眼睛或其他體外組織例如嘴巴以及皮膚而言，該調配物較佳作為包含例如約0.075至20% w/w之活性成分之局部軟膏或乳膏施用。當調配成軟膏時，活性成分可與石蠟或水溶性軟膏基劑一起使用。或者，可將活性成分與水包油乳膏基劑調配於乳膏中。若需要，乳膏基劑之水相可包括多元醇，即具有二或多個羥基基團之醇，諸如丙二醇、1,3-丁二醇、甘露糖醇、山梨糖醇、甘油以及聚乙二醇(包括PEG 400)及其混合物。局部調配物可宜包括可促進活性成分經由皮膚或其他受罹患部位之吸收性或穿透性之化合物。此等皮膚穿透增強劑之實例包括二甲基亞碸及相關類似物。本發明乳液之油相可由已知成分以已知方式構成。雖然該相可僅包括乳化劑，但其較佳包括至少一種乳化劑與脂肪或油或者脂肪以及油二者之混合物。較佳地，一起包括親水性乳化劑與充當穩定劑之親脂性乳化劑。同樣較佳的是包括油與脂肪二者。一起地，含有或不含穩定劑之乳化劑構成所謂乳化蠟，而該蠟與油及以及脂肪一起構成所謂乳化軟膏基劑，其形成乳膏調配物之油性分散相。適用於本發明調配物之乳化劑與乳液穩定劑包括Tween® 60、Span® 80、鯨蠟硬脂醇、苄醇、十四烷醯基 醇、單硬脂酸甘油酯以及月桂基硫酸鈉。
式I與II化合物之水性懸浮液含有與適於製造水性懸浮液之賦形劑之混合物之活性材料。此等賦形劑包括懸浮劑，諸如羧甲基纖維素鈉、交聯羧甲纖維素、帕維酮、甲基纖維素、羥丙基甲基纖維素、褐藻酸鈉、聚乙烯吡咯啶酮、黃蓍膠及阿拉伯樹膠，以及分散劑或潤濕劑，諸如天然磷脂(例如，卵磷脂)、環氧烷與脂肪酸之縮合產物(例如，聚氧乙烯硬脂酸酯)、環氧乙烷與長鏈脂肪醇之縮合產物(例如，十七伸乙基氧基鯨蠟醇)、環氧乙烷與源自脂肪酸與己糖醇酐之部份酯之縮合產物(例如，聚氧乙烯山梨醇酐單硬脂酸酯)。水性懸浮液亦可含有一或多種防腐劑(諸如，對羥基苯甲酸乙酯或對羥基苯甲酸正丙酯)、一或多種著色劑、一或多種矯味劑以及一或多種甜味劑，諸如蔗糖或糖精。
式I與II化合物之醫藥組合物可呈無菌注射製劑，諸如無菌注射水性或油性懸浮液。根據已知技術，利用上述該等適宜分散劑或潤濕劑與懸浮劑可調配此種懸浮液。無菌注射製劑亦可為含於非毒性非經腸可接受之稀釋劑或溶劑之無菌注射溶液或懸浮液(諸如，含於1,3-丁二醇之溶液)或者製成冷凍乾燥粉末。可採用之可接受之媒劑及溶劑為水、林格氏溶液(Ringer's solution)以及等滲氯化鈉溶液。此外，無菌固定油可習知地用作溶劑或懸浮介質。基於此目的，可採用任何無刺激性固定油，包括合成單甘油酯或二甘油酯。此外，同樣可使用脂肪酸(諸如油酸)製備注射 劑。
可與載劑材料組合以製造單一劑型之活性成分之量將取決於所治療宿主以及特定投與模式而有所不同。例如，意欲口服投與至人類之經時釋放調配物可含有約1至1000 mg活性材料與適宜及合宜量之載劑材料組合，該載劑材料可在總組合物之約5至約95%(重量：重量)間變化。該醫藥組合物可製備為提供投與之易測量之量。例如，意欲靜脈注射之水溶液每毫升溶液可含約3至500 μg活性成分，以便以約30 mL/小時之速率注射適宜體積。
適於非經腸投與之調配物包括水性及非水性無菌注射液，其可含有抗氧化劑、緩衝劑、抑菌劑以及賦予調配物與欲接受者之血液等張之溶質；以及水性及非水性無菌懸浮液，其可包含懸浮劑以及增稠劑。
適於局部投與至眼部之調配物亦包括滴眼劑，其中活性成分係溶解於或懸浮於適宜載劑中，尤其用於活性成分之水性溶劑。活性成分較佳以約約0.5至20% w/w之濃度存在於此等調配物中，例如約0.5至10% w/w，例如約1.5% w/w。
適於局部投與至口腔之調配物包括含片，其包含含於矯味基質(通常蔗糖以及阿拉伯樹膠或黃蓍膠)之活性成分；片劑，其包含含於惰性基質(諸如明膠及甘油或者蔗糖及阿拉伯樹膠)之活性成分；以及漱口水，其包含含於適宜液體載劑之活性成分。
適於直腸投與之調配物可呈現為栓劑，其具有適宜基 劑，包括(例如)可可油或水楊酸鹽。
適於肺內或經鼻投與之調配物具有於例如0.1至500微米範圍之粒徑(包括於0.1與500微米間之範圍之粒徑，微米增量為諸如0.5、1、30微米、35微米等)，其係藉由快速經由鼻道吸入或藉由經由口腔吸入而投與，以便到達肺泡囊。適宜調配物包括活性成分之水性或油性溶液。適於氣溶膠或乾粉投與之調配物可根據習知方法製備，且可伴隨其他治療劑一起遞送，諸如用於治療或預防如下所述之病症之前述化合物。
適於陰道投與之調配物可以子宮托、衛生棉塞、乳膏、凝膠、糊膏、發泡體或噴霧調配物呈現，其除活性成分外，還包含諸如此項技術中已知之適宜載劑。
可將調配物包裝成單位劑量或多劑量容器中，例如密封安瓶以及小瓶，且可在儲存在凍乾(冷凍乾燥)條件下，其在注射前僅需添加無菌液體載劑(例如水)即可使用。臨時注射液及懸浮液係由上述種類之無菌粉末、顆粒以及錠劑製備而成。較佳單位劑量調配物為彼等含有如上所述之日劑量或單位日亞劑量或者其適宜分率之活性成分之調配物。
因此，本發明進一步提供獸藥組合物，其包含至少一種如上所定義之活性成分以及獸藥載劑之獸藥組合物。獸藥載劑係可用於投與組合物之目的之材料，且可為固體、液體或氣體材料，或者惰性或獸藥技術中可接受，且可與活性成分相容。此等獸藥組合物可非經腸、口服或藉由任何 其他所需途徑投與。
組合療法
式I及II化合物可單獨採用或與其他治療劑組合，以治療本文所述之疾病或病症，諸如炎症或過度增生症(例如，癌症)。在一些實施例中，式I或II化合物係與額外第二治療性化合物合併在一種醫藥組合調配物中或者給藥療程中作為組合療法，該第二化合物具有消炎或抗過度增生特性或可用於治療炎症、免疫反應病症或過度增生症(例如，癌症)。額外治療性化合物可為消炎劑、免疫調節劑、化學治療劑、細胞凋亡-增強劑、趨神經因子、治療心血管疾病之製劑、治療肝病之製劑、抗病毒劑、治療血液病症之製劑、治療糖尿病之製劑以及治療免疫缺陷病症之製劑。第二治療劑可為NSAID消炎劑。第二治療劑可為化學治療劑。該醫藥組合調配物或給藥療程之第二化合物較佳具有與式I或II化合物互補之活性，使其不至於不利地相互影響。此等化合物係適宜地有效促進預期目的之量存在於組合中。在一具體例中，本發明組合物包含與治療劑(諸如，NSAID)組合之式I或II化合物或其立體異構體、互變異構體、溶劑化物、代謝物或醫藥上可接受之鹽或前藥。
組合療法可作為同時或依次療程投與。當依次投與時，該組合可藉二或更多個投與療程投與。該組合投與包括採用獨立調配物或單一醫藥調配物之共同投與，以及以任何順序連續投與，其中當兩種(或所有)活性劑同時影響其生物活性時，較佳存在時間差投與。
上述任何共同投與劑之適宜劑量為目前使用劑量，且可因新近確定藥劑與其他治療劑或治療之(協同作用)而降低。
組合療法可提供「協同作用」並證明是「協同的」，也就是說，當活性成分一起使用時，所達到效果高於單獨使用該等化合物所產生之效果之總和。當活性成分係：(1)以組合的單位劑量調配物共同調配以及同時投與或遞送；(2)作為獨立調配物交替或平行遞送；或者(3)藉由一些其他療程時，可達到協同作用。當以交替療法遞送時，若該等化合物係例如藉由於獨立注射器、獨立丸劑或膠囊或者獨立注射物中之不同注射劑依次投與或遞送，則可達到協同作用。一般而言，在交替療法期間，每種活性成分之有效劑量係依次即連續投與而在組合療法中，係一起投與二或更多種活性成分之有效劑量。
在一特定療法之具體例中，式I或II化合物或其立體異構體、互變異構體、溶劑化物、代謝物或醫藥上可接受之鹽或前藥可與其他治療劑、荷爾蒙劑或抗體劑組合(諸如彼等本文所述者)，以及與手術治療及放射療法組合。因此，根據本發明之組合療法包括投與至少一種式I或II化合物或其立體異構體、互變異構體、溶劑化物、代謝物或醫藥上可接受之鹽或前藥，以及使用至少一種其他癌症治療方法。式I或II化合物與其他醫藥活性治療劑之量以及相對投與時間可經選擇，以達到所需組合療效。
式I與II化合物之代謝物
本文所述式I與II化合物之活體內代謝產物同樣落入本發明範圍內。此等產物可源自例如所投與化合物之氧化、還原、水解、醯胺化、去醯胺化、酯化、去酯化、酶法分析產物等等。因此，本發明包括式I與II化合物之代謝物，包括藉由包括使本發明之式I或II化合物與哺乳動物接觸一段足以產生其代謝產物之時間所產生之化合物。
代謝物產物通常係藉由製備本發明化合物之經放射性標記的同位素(例如，14C或3H)，以可偵測劑量(例如，超過約0.5 mg/kg)非經腸地將其投與至動物(諸如大鼠、小鼠、天竺鼠、猴子或人類)，經過足以發生代謝作用之時間(通常約30秒至30小時)，以及自尿液、血液或其他生物樣品中分離其轉化產物而鑑定。此等產物易於分離，因其係經標記(其他產物係藉由利用可結合殘留在代謝物中之抗原決定基之抗體而分離)。代謝物結構係以習知方式確定，例如，藉由MS、LC/MS或NMR分析。一般而言，代謝物之分析係以與熟習此項技術者所熟知之習知藥物代謝研究相同的方式完成。只要可在活體內發現，則代謝物產品就可用於本發明化合物之治療投藥之診斷分析。
製造物件
在本發明之另一具體例中，係提供一種含有可用於治療上述疾病或病症之材料之製造物件或「套組」。在一具體例中，該套組包括包含式I或II化合物或其立體異構體、互變異構體、溶劑化物、代謝物或醫藥上可接受之鹽或前藥之容器。該套組可進一步包含置於容器上或隨其附帶之標 籤或包裝說明書。術語「包裝說明書」係用以表示治療產物之商業包裝通常內附之說明書，其包含關於適應症、用途、劑量、用法、禁忌症及/或關於使用此等治療產品之警語。適宜容器包括(例如)瓶子、小瓶、注射器、泡殼包裝等。容器可由各種材料製成，諸如玻璃或塑料。容器可容納有效治療病狀之式I或II化合物或其調配物，且可具有無菌存取口(例如，容器可為靜脈內輸液袋或者具有可藉由皮下注射針刺穿之瓶塞之小瓶)。該組合物中至少一種活性成分為式I或II化合物。標籤或包裝說明書顯示該組合物係用於治療何種病狀，諸如癌症。另外，標籤或包裝說明書可顯示待治療患者為患有以下病症者，諸如過度增生症、神經退行性變、心臟肥大、疼痛、偏頭痛或神經損傷性疾病或事件。在一具體例中，標籤或包裝說明書顯示包含式I或II化合物之組合物可用於治療由異常細胞生長所引起之病症。標籤或包裝說明書亦可顯示該組合物可用以治療其他病症。可選地或附加地，製造物件可進一步包括第二容器，其包含醫藥上可接受之緩衝劑，諸如抑菌性注射用水(BWFI)、磷酸鹽緩衝鹽水、林格氏溶液以及葡萄糖溶液。其可進一步包括其他從商業以及用戶角度係所需之材料，包括其他緩衝劑、稀釋劑、過濾器、針頭及注射器。
該套組可進一步包含用以投與式I或II化合物及若存在之第二醫藥調配物之說明書。例如，若該套組包含式I或II化合物之第一組合物與第二醫藥調配物，則該套組可進一步包含同時、依次或分別投與該第一及第二醫藥組合物至有 需要之患者之說明書。
在另一具體實施例中，該套組適於投遞式I或II化合物之固體口服形式，諸如錠劑或膠囊。此套組較佳包括多種單位劑量。此等套組可包括一卡片，具有該等劑量預期使用之順序。此套組之一個實例為「泡殼包裝(blister pack)」。泡殼包裝在包裝工業中為人所熟知，且廣泛用於包裝醫藥單位劑型。若需要，可提供記憶輔助，例如以數字、字母或其他標記之形式，或者日曆插頁，標明治療規畫表中可投與該等劑量之日期。
根據一個具體實施例，套組可包括(a)內含式I或II化合物之第一容器；及視情況(b)內含第二醫藥調配物之第二容器，其中該第二醫藥調配物包含具有抗過度增生活性之第二化合物。可選地或附加地，該套組可進一步包含第三容器，其包含醫藥上可接受之緩衝劑，諸如抑菌注射用水(BWFI)、磷酸鹽緩衝鹽水、林格氏溶液以及右旋糖溶液。其可進一步包括從商業及使用者立場所需之其他材料，包括其他緩衝劑、稀釋劑、過濾器、針頭及注射器。
在套組包含式I或II之組合物及第二治療劑之某些其他具體實施例中，該套組可包括一個含有各別組合物之容器，諸如分隔瓶或分隔箔包裝，然而，該等各別組合物亦可含於單一未分隔的容器內。通常，該套組包括投與各別組分之說明書。當各別組分較佳以不同劑型(例如口服與非經腸)投與，以不同投藥間隔投與時，或當該組合之各個組分之滴定(titration)為處方醫師所需時，該套組形式尤其有 利。
式I與II化合物之製備
式I與II化合物可藉由包括類似於彼等化學技術所熟知，尤其按照本文所包含之說明以及以下文獻中所述之用於其他雜環物質之方法之合成路徑而合成：Comprehensive Heterocyclic Chemistry II,Editors Katritzky and Rees,Elsevier,1997，例如，第3卷；Liebigs Annalen der Chemie,(9)：1910-16,(1985)；Helvetica Chimica Acta,41：1052-60,(1958)；Arzneimittel-Forschung,40(12)：1328-31,(1990)，其各以引用的方式明確併入。起始物一般可得自商業來源，諸如Aldrich Chemicals(Milwaukee,WI)或者易於利用熟習此項技術者所熟知之方法製備(例如，藉由Louis F.Fieser and Mary Fieser,Reagents for Organic Synthesis,v.1-23,Wiley,N.Y.(1967-2006 ed.)或者Beilsteins Handbuch der organischen Chemie,4,Aufl.ed.Springer-Verlag,Berlin，包括增刊(亦可經由Beilstein線上資料庫獲得)中所通常描述之方法製備)。
可用於合成式I與II化合物及必要試劑以及中間產物之合成化學轉化以及保護基方法(保護及去保護)係此項技術中已知，且包括(例如)述於R.Larock,Comprehensive Organic Transformations,VCH Publishers(1989)；T.W.Greene and P.G.M.Wuts,Protective Groups in Organic Synthesis,3rd Ed.,John Wiley and Sons(1999)；以及L.Paquette,ed.,Encyclopedia of Reagents for Organic Synthesis,John Wiley and Sons(1995)及其後續版本中所述之該等者。
式I與II化合物可單獨製備或製成包含至少2(例如5至1,000或10至100)種化合物之化合物庫。藉由組合「分離與混合」方法或藉由利用溶液相或固相化學之多平行合成，藉由熟習此項技術者所知之程序可製備式I與II化合物之庫。因此，根據本發明之進一步態樣，係提供包含至少2種化合物或其醫藥上可接受之鹽之化合物庫。
圖式及實例提供用於製備式I與II化合物之例舉性方法。熟習此項技術者將瞭解，可使用其他合成路徑來合成式I與II化合物。雖然在圖式及實例中描述並論述特定起始物及試劑，但可易於被其他起始物及試劑取代，以提供各種衍生物及/或反應條件。此外，按照本發明揭示利用熟習此項技術者所熟知之習知化學可進一步修飾由所述方法所製備之許多例舉性化合物。
在製備式I化合物中，可能有必要保護中間產物之遠端官能度(例如，一級或二級胺)。此等保護之需求將隨遠端官能度之性質及製備方法之條件而異。適宜胺基-保護基包括乙醯基、三氟乙醯基、第三丁氧羰基(BOC)、苄氧羰基(CBz)以及9-茀亞甲基氧羰基(Fmoc)。熟習此項技術者將易於決定此保護之需求。至於保護基及其用途之一般說明，請參見T.W.Greene,Protective Groups in Organic Synthesis,John Wiley & Sons,New York,1991。
可用於製備式I與II化合物之實驗步驟、中間產物以及試 劑可見於2011年5月6日申請之US 2012/0010191，「吡啶酮及氮雜-吡啶酮化合物及使用方法(PYRIDONE AND AZA-PYRIDONE COMPOUNDS AND METHODS OF USE)」，其以全文引用的方式而併入。
圖1-8描述合成式I或II之例舉性具體例，在實例101-112中更充分地得到描述，且可用於製備式I與II化合物。
一般製備步驟
一般步驟：鈴木偶合
鈴木型偶合反應可用於形成碳-碳鍵，以將式I與II化合物之環與中間產物A-3連在一起(Suzuki(1991)Pure Appl.Chem.63：419-422；Miyaura and Suzuki(1979)Chem.Reviews 95(7)：2457-2483；Suzuki(1999)J.Organometal.Chem.576：147-168)。鈴木偶合係雜芳基鹵化物(諸如B-2或B-4)與酸(諸如A-1或A-2)之鈀介導的交叉偶合反應。例如，B-2可與約1.5當量之4,4,4',4',5,5,5',5'-八甲基-2,2'-雙(1,3,2-二氧雜硼雜環戊烷(dioxaborolane))合併，並溶解於約3當量之碳酸鈉(1莫耳溶液)含於水與等體積之乙腈中。添加催化劑量或更多之低價數鈀試劑，諸如雙(三苯基膦)二氯化鈀(II)。在一些情況中，使用乙酸鉀替代碳酸鈉，以調節水層之pH。接著在微波反應器(Biotage AB,Uppsala,Sweden)中，在加壓下將反應加熱至約140-150℃歷時10至30分鐘。使用乙酸乙酯或其他有機溶劑萃取內容物。蒸發有機層後，酸酯A-1可在氧化矽上或藉由逆相HPLC純化。取代基係如所定義或其受保護形式或前軀體。同樣地，溴化物中間產物B-4可經硼化，以得到A-2。
B-2與A-2或者A-1與B-4之鈴木偶合產生式I化合物或中間產物A-3。將酸酯(或酸)(1.5 eq)A-1或A-2以及鈀觸媒諸如雙(三苯基膦)氯化鈀(II)(0.05 eq)添加至鹵代中間產物(1 eq)B-2或B-4含於乙腈與1 M碳酸鈉水溶液(與乙腈等體積)之混合物中。在微波爐中將反應混合物加熱至約150℃歷時約15分鐘。LC/MS顯示反應何時完成。將水添加至該混合物中，並過濾沈澱產物，並藉由HPLC純化， 以得到產物A-3。取代基係如所定義或其受保護形式或前軀體。
在鈴木偶合步驟期間可使用各種鈀觸媒。各種鈴木偶合反應中可使用低價數Pd(II)與Pd(0)觸媒，包括PdCl2(PPh3)2、Pd(t-Bu)3、PdCl2 dppf CH2Cl2、Pd(PPh3)4、Pd(OAc)/PPh3、Cl2Pd[(Pet3)]2、Pd(DIPHOS)2、Cl2Pd(Bipy)、[PdCl(Ph2PCH2PPh2)]2、Cl2Pd[P(o-甲苯基)3]2、Pd2(dba)3/P(o-甲苯基)3、Pd2(dba)/P(呋喃基)3、Cl2Pd[P(呋喃基)3]2、Cl2Pd(PMePh2)2、Cl2Pd[P(4-F-Ph)3]2、Cl2Pd[P(C6F6)3]2、Cl2Pd[P(2-COOH-Ph)(Ph)2]2、Cl2Pd[P(4-COOH-Ph)(Ph)2]2及囊封觸媒Pd EnCatTM 30、Pd EnCatTM TPP30以及Pd(II)EnCatTM BINAP30(US 2004/0254066)。
一般步驟：布赫瓦爾德(Buchwald)反應
布赫瓦爾德反應可用於胺化6-溴中間產物B-1(Wolf and Buchwald(2004)Org.Synth Coll.Vol.10：423；Paul等人(1994)Jour.Amer.Chem.Soc.116：5969-5970)。於鹵代中間產物B-1含於DMF之溶液中添加適當哌基-吡啶基或哌基-嘧啶基胺(200 mol%)、Cs2CO3(50 mol%)、Pd2(dba)3 (5 mol%)以及4,5-雙(二苯基膦基)-9,9-二甲基氧雜蒽(Xantphos,CAS Reg.No.161265-03-8,10 mol%)。在微波反應器(Biotage AB,Uppsala,Sweden)中，在加壓下將反應加熱至至約110℃歷時約30分鐘。在真空中濃縮所得溶液，得到B-2。可使用其他鈀觸媒以及膦配位體。
利用環醯胺中間產物(R7)，諸如6-第三丁基-8-氟基呔-1(2H)-酮101h與雜芳基二溴B-3，在布赫瓦爾德條件下亦可製備N-雜芳基醯胺中間產物B-4。
分離方法
在製備式I與II化合物之方法中，可有利地使反應產物彼此分離或自起始物分離。各步驟或一系列步驟之所需產物藉由此項技術中常見技術經分離及/或純化至所需同質程度。通常，此等分離包含多相萃取、自一種溶劑或溶劑混合物再結晶、蒸餾、昇華或層析。層析可包含任何數量之方法，包括(例如)：逆相及正相；尺寸排除；離子交換；高、中及低壓液相層析方法及裝置；小規模分析；模擬移動床(SMB)及製備型薄層或厚層層析，以及小規模薄層及急驟層析技術。
另一類分離方法包含利用一種經選擇以結合所需產物、未反應原材料、反應副產物或類似物或使其變得可分離之 試劑處理混合物。此等試劑包括吸附劑或吸收劑，諸如活性碳、分子篩、離子交換介質等。或者，試劑在鹼性材料之情況中可為酸，在酸性材料、結合劑(諸如抗體、結合蛋白、選擇性螯合劑(諸如冠醚、液體/液體離子萃取試劑(LIX)))等之情況中為鹼。選擇適宜分離方法取決於相關材料之性質，諸如，在蒸餾及昇華中取決於沸點及分子量，在層析中取決於存在或不存在極性官能團，在多相萃取中取決於材料在酸性與鹼性介質中之穩定性等等。
根據物理化學差異，非對映異構混合物可藉由熟習此項技術者所熟知之方法分離成其個別非對映異構體，諸如藉由層析及/或分段結晶。對映異構體可如下分離，藉由與適宜光學活性化合物(例如，對掌性助劑，諸如對掌性醇或莫舍氏醯基氯(Mosher's acid chloride))反應將對映異構混合物轉化為非對映異構混合物，分離非對映異構體，以及將個別非對映立體異構體轉化(例如，水解)為對應純對映異構體。同樣，一些本發明化合物可為被限旋光導異構體(例如，經取代的聯芳基)，且被視為本發明之一部分。對映異構體亦可藉由使用對掌性HPLC管柱而分離。
一種單一立體異構體，例如，實質上不含其立體異構體之對映異構體可藉由利用一種諸如利用光學活性解析劑形成非對映異構體之方法解析外消旋混合物而得到(Eliel,E.and Wilen,S.「Stereochemistry of Organic Compounds」，John Wiley & Sons,Inc.,New York,1994；Lochmuller,C.H.,(1975)J.Chromatogr.,113(3)：283-302)。本發明對掌性 化合物之外消旋混合物可藉由任何適宜方法而分離及隔離，包括：(1)與對掌性化合物形成離子化非對映異構鹽，並藉由分段結晶或其他方法分離，(2)與對掌性衍生化試劑形成非對映異構化合物、分離非對映異構體，並轉化為純立體異構體，以及(3)在對掌性條件下直接分離實質上純的或富含立體異構體。參見「Drug Stereochemistry,Analytical Methods and Pharmacology」，Irving W.Wainer,Ed.,Marcel Dekker,Inc.,New York(1993)。
在方法(1)中，藉由使對映異構體上純正對掌性(諸如馬錢子鹼、奎寧、麻黃鹼、番木鼈鹼(strychnine)、α-甲基-β-苯乙胺(苯異丙胺)等等)與帶有酸性官能度之不對稱化合物(諸如羧酸以及磺酸)反應，可形成非對映異構鹽。藉由分段結晶或離子層析可誘導非對映異構鹽分離。為分離胺化合物之光學異構體，添加對掌性羧酸或磺酸(諸如樟腦磺酸、酒石酸、扁桃酸或乳酸)可形成非對映異構鹽。
或者，藉由方法(2)，使待解析的受質與對掌性化合物之一種對映異構體反應，形成非對映異構體對(E.and Wilen,S.「Stereochemistry of Organic Compounds」，John Wiley & Sons,Inc.,1994,p.322)。使不對稱化合物與對映異構體上純正對掌性衍生化試劑(諸如薄荷基衍生物)反應，接著分離非對映異構體，並水解，產生純的或富含對映異構體，可形成非對映異構化合物。一種確定光學純度之方法包含在鹼存在下製備外消旋混合物之對掌性酯類，諸如薄荷基酯(例如，(-)氯甲酸薄荷酯)或莫含氏(Mosher) 酯(乙酸α-甲氧基-α-(三氟甲基)苯酯(Jacob III.J.Org.Chem.(1982)47：4165))，以及分析1H NMR光譜，以確定兩種被限旋光導異構性對映異構體或非對映異構體之存在。藉由正相或逆相層析，接著分離被限旋光導異構性萘基-異喹啉之方法，可分離及隔離被限旋光導異構化合物之穩定非對映異構體(WO 96/15111)。藉由方法(3)，藉由層析，利用對掌性固定相可分離由兩種對映異構體組成之外消旋混合物(「Chiral Liquid Chromatography」(1989)W.J.Lough,Ed.,Chapman and Hall,New York；Okamoto,J.Chromatogr.,(1990)513：375-378)。藉由用以區分具有不對稱碳原子之其他對掌性分子之方法可區分富含或純化的對映異構體，諸如旋光度及圓二色光譜。
實例
實例101a 4-第三丁基苯甲醯氯101a
使4-第三丁基苯甲酸(1000 g,5.6 mol)含於二氯亞硫酸(1.5 L)之混合物回流3小時。然後在真空中濃縮該混合物，而粗物質101a不經進一步純化用於下一步驟。
實例101b 4-第三丁基-N-(2-羥基-1,1-二甲基-乙基)-苯甲醯胺101b
在0-10℃下，將101a含於DCM(200 mL)之溶液逐滴添加至2-胺基-2-甲基-1-丙醇(1000 g,10.5 mol)含於CH2Cl2(2000 mL)之溶液中。在開始添加5分鐘後形成白色沈澱物。所得漿液在室溫下攪拌隔夜。藉由過濾移除固體，並使用CH2Cl2(1000 mL)清洗。藉由旋轉蒸發繼續濃縮濾 液，以得到呈淡黃色樹脂之101b，其不經進一步純化用於下一步驟。
實例101c 2-(4-第三丁基-苯基)-4,4-二甲基-4,5-二氫-噁唑101c
使含於亞硫醯氯(1.5 L)之101b(1000 g，粗物質)混合物回流1小時。將反應混合物冷卻至室溫，然後傾倒於500 mL經攪拌的Et2O中，在此期間形成白色沈澱物。藉由過濾收集沈澱物，並使用Et2O清洗，溶解於500 mL水中，並使用25% NaOH中和。利用EtOAC(3×500 mL)萃取黃色水溶液，並使用500 mL鹽水清洗經合併的有機相，在Na2SO4上乾燥，過濾，並在真空中濃縮，得到白色固體101c(530 g，經過3步驟為40.8%)。1HNMR(300 MHz,CDCl3)δ 7.87(d,J=8.4 Hz,2 H),7.41(d,J=8.4 Hz,2 H),4.08(s,2 H),1.37(s,6 H),1.33(s,9 H)。
實例101d 5-第三丁基-2-(4,4-二甲基-4,5-二氫-噁唑-2-基)-苯甲醛101d
在-78℃下，在氮氣氛下，將2.4 M n-丁基鋰含於己烷(225 mL)之溶液添加至101c(50 g,0.22 mol)含於無水THF(750 mL)之溶液中。將透明琥珀色溶液溫至-20℃，並攪拌4小時。反應混合物變成紅琥珀且混濁。將該混合物再冷卻至-78℃，並迅速攪拌，然後逐滴添加72 mL DMF，其速率使溫度控制在低於-60℃。添加後，反應混合物在-78℃下攪拌15分鐘，接著在-20℃下攪拌1小時，然後在室溫下攪拌1小時。使用200 mL 0.5 M水性KHSO4使反應混合物驟 冷。添加更多KHSO4溶液，直至將pH調整為4~5。使用EtOAc(3×500 mL)萃取水相，並使用400 mL鹽水清洗合併有機相，然後在Na2SO4上乾燥，過濾，並在真空中濃縮，得到呈黃色固體之101d(35 g,62%)，其未進一步純化而用於下一步驟。LCMS,ESI,m/z 260(M+1)+。
實例101e 2-(4-第三丁基-2-1,3-二氧環己-2-基-苯基)-4,4-二甲基-4,5-二氫噁唑101e
將101d(60 g，0.23 mol)、對甲苯磺酸吡啶鎓鹽(4 g，0.02 mol)與1,3-丙二醇(60 mL)含於甲苯(500 mL)之混合物加熱至回流隔夜，並藉由LCMS確定反應完成後冷卻至室溫。使用200 mL 50% NaHCO3水溶液、200 mL水以及200 mL鹽水清洗反應混合物。在Na2SO4上乾燥有機層，過濾，並在真空中濃縮，得到殘餘物，其藉由矽膠層析利用EtOAc/石油醚=1：5作為溶離液純化，獲得呈亮黃色樹膠之101e(16 g,21.7%)。LCMS(ESI)318(M+H)+。1HNMR(300 MHz,CDCl3)δ 7.79(s,1 H),7.67(d,J=8.0 Hz,1 H),7.36(dd,J=1.6,8.4 Hz,1 H),6.32(s,1 H),4.23(dd,J=5.2,11.2 Hz,2 H),4.06(s,2 H),4.04-3.98(m,2 H),2.27-2.21(m,1 H),1.48-1.38(m,1 H),1.38(s,6 H),1.32(s,9 H)。
實例101f 2-(4-第三丁基-2-1,3-二氧環己-2-基-6-氟-苯基)-4,4-二甲基-4,5-二氫-噁唑101f
在-78℃ N2氣氛下，於101e(20 g,63 mmol)含於無水THF(400 mL)之溶液中添加2.4 M之n-丁基鋰含於己烷(65 mL)之溶液。在-17℃下攪拌該透明黃色溶液3小時，該時其顯示深紅橙色。將反應溶液再次冷卻至-78℃，迅速攪拌，並在10分鐘內逐滴添加N-氟苯磺醯胺(29 g,92 mmol)含於無水THF(100 mL)之溶液。在-78℃下攪拌反應混合物5分鐘，在-20℃攪拌30分鐘，然後在室溫下攪拌1 h。將反應混合物傾倒於150 mL 50% NH4Cl水溶液中，並使用300 mL EtOAc萃取。使用150 mL水以及150 mL鹽水清洗所分離的有機相，在Na2SO4上乾燥，過濾，並在真空中濃縮，得到殘餘物，其藉由矽膠層析利用EtOAc/CH2Cl2=1：5作為溶離液純化，獲得呈黃色固體之101f(7 g,33%)。LCMS(ESI)m/z 336(M+H)+。1HNMR(300 MHz,CDCl3)δ 7.53(d,J=1.6 Hz,1 H),7.08(dd,J=2.0,12.0 Hz,1 H),5.90(s,1 H),4.24(dd,J=5.2,10.8 Hz,2 H),4.06(s,2 H),3.98-3.91(m,2 H),2.26-2.19(m,1 H),1.45-1.42(m,1 H),1.42(s,6 H),1.30(s,9 H)。
實例101g 5-第三丁基-7-氟-3-甲氧基異苯并呋喃-1(3H)-酮101g
101f(68.8 g,205.4 mmol)、甲醇(1340 mL)以及50%含水硫酸(881 mL)之混合物在回流下攪拌隔夜。將反應混合物傾倒於400 mL水中，使用DCM(3×1000 mL)萃取。使用400 mL鹽水清洗合併之有機萃取物，在Na2SO4上乾燥，過濾並濃縮乾燥，獲得呈灰白色固體之101g(43 g)，其未進一步純化而用於下一步驟。LCMS(ESI)m/z 225(M+H)+。
實例101h 6-第三丁基-8-氟基呔-1(2H)-酮101h
在0-10℃下，在N2保護下，於101g(40 g,168 mmol)含於冰乙酸(360 mL)之溶液添加聯胺單水合物(240 mL)。在50℃氮氣下攪拌所得漿液1.5小時。伴隨連續攪拌，將反應混合物傾倒於300 mL水中。使用DCM(2×500 mL)萃取水相，並在Na2SO4上乾燥合併之有機相，過濾並濃縮，得到殘餘物，其係藉由於DMC與Et2O中再結晶純化，獲得呈灰白色固體之101h(17 g，2步驟計為37.6%)。1HNMR(300 MHz,CDCl3)δ 8.11(d,J=2.7 Hz,1 H),7.46(m,2 H),1.39(s,9 H)。LCMS(ESI)m/z 221(M+H)+。
實例101i 2-(6-第三丁基-8-氟-1-側氧基呔-2(1H)-基)-6-氯苯甲醛101i
於10 mL圓底燒瓶添加6-第三丁基-8-氟-2H-呔-1-酮101h(640 mg,2.9 mmol)、2-氯-6-氟苯甲醛(506 mg,3.2 mmol)以及碳酸銫(488 mg,1.5 mmol)。將燒瓶抽真空並使用氮氣回充填，進行三次，接著將乙氧基三甲基矽烷(684 mg,5.8 mmol)以及DMF(5 mL)添加至反應燒瓶中。將所得混合物加熱至60℃。攪拌4小時後，使該溶液冷卻至環境 溫度，並藉由逐滴添加2 mL H2O使反應停止。所需產物開始自DMF與水混合物中沉澱。冷卻至5℃後藉由過濾收集固體，並利用DMF/水(2/1,2 mL，預先冷卻至6℃)以及H2O(2 mL)清洗。使濾餅在65℃真空烘箱中乾燥隔夜，得到519 mg(52%)呈黃色固體之101i。MS：[M+H]+：359
實例101j 6-第三丁基-2-(3-氯-2-(羥甲基)苯基)-8-氟基呔-1(2H)-酮101j
在室溫攪拌下將2-(6-第三丁基-8-氟-1-側氧基-1H-呔-2-基)-6-氯-苯甲醛101i(519 mg,1.4 mmol)溶解於DCM(2 mL)中，接著將1 mL iPA添加至該溶液中。所得溶液冷卻至4℃，並一次添加NaBH4(27 mg,0.7 mmol)。攪拌30分鐘後，藉由添加H2O(2 mL)使反應驟冷。使用CH2Cl2(2x5 mL)萃取水層，使用鹽水清洗，並在MgSO4上乾燥。濃縮濾液，得到殘餘物，其藉由矽膠層析，利用0-20% EtOAc/CH2Cl2溶離而純化，獲得呈白色固體之101j(385 mg,72%)。MS：[M+H]+：361
實例101 6-第三丁基-8-氟-2-(2-(羥甲基)-3-(1-甲基-5-(5-(4-甲基哌-1-基)吡啶-2-基胺基)-6-側氧基-1,6-二氫吡啶-3-基)苯基)呔-1(2H)-酮101
依序於10 mL燒瓶中添加6-第三丁基-2-(3-氯-2-羥甲基- 苯基)-8-氟-2H-呔-1-酮101j(100 mg,0.27 mmol)、1-甲基-3-[5-(4-甲基-哌-1-基)-吡啶-2-基胺基]-5-(4,4,5,5-四甲基-[1,3,2]二氧雜硼雜環戊-2-基)-1H-吡啶-2-酮(141 mg,0.33 mmol)、PCy3(6 mg)、Pd(dba)2(6 mg)以及K2CO3(112 mg,0.8 mmol)。將燒瓶抽真空並使用氮氣回充填。重複此順序三次。接著，將20% 1,4-二噁烷水溶液添加至反應混合物中。將所得混合物加熱至90℃供溫和回流，並在氮氣氛下攪拌1.5小時。將反應混合物冷卻至室溫，經CELITE®墊過濾並濃縮，得到殘餘物，其藉由製備型TLC(10% MeOH含於CH2Cl2)純化，得到呈黃色固體之101(80 mg,46%)。MS：[M+H]+624。1H NMR(400 MHz,DMSO-d 6 )δ 8.53(d,J=2.0 Hz,1 H),8.50(d,J=1.6 Hz,1 H),8.36(s,1 H),7.87(d,J=3.2 Hz,2 H),7.73(d,J=12.8 Hz,1 H),7.51(t,J=7.6 Hz,1 H),7.41(d,J=3.2 Hz,1 H),7.39(d,J=3.6 Hz,1H),7.35(dd,J=2.8,9.2 Hz,1 H),7.28(d,J=2。Hz,1 H),7.20(d,J=9.2 Hz,1 H),4.58(t,J=4.8 Hz,1 H),4.36(s,2 H),3.58(s,3 H),3.04(m,4 H),2.44(m,4H),2.21(s,3 H),1.38(s,9 H)。
實例102a 2,6-二溴-4-氟苯甲醛102a
在30分鐘內於經冷卻至-35℃之1,3-二溴-5-氟-2-碘苯(50 g,132 mmol)含於無水甲苯(300 mL)之溶液添加氯化異丙 基鎂溶液(84 mL,171 mmol,2.0 M含於二醚)，同時使內部溫度維持在低於-25℃下。得到亮棕色溶液。持續攪拌1.5小時。然後在30分鐘時間內添加無水DMF(34 mL,436 mmol)。將反應混合物之溫度上升至-19℃。在1小時期間將反應混合物溫至10℃(室溫)，並在此溫度下攪拌1.5 h。使用飽和水性NH4Cl(100 mL)使反應驟冷，過濾並在減壓下蒸發。藉由矽膠管柱層析純化殘餘物(使用石油醚/乙酸乙酯進行溶離：自50：1至20：1)，得到呈黃色固體之102a(20 g,產率54%)。
實例102b 2-溴-6-(6-第三丁基-8-氟-1-側氧基呔-2(1H)-基)-4-氟苯甲醛102b
於102a(767 mg,2.72 mmol)、6-第三丁基-8-氟基呔-1(2H)-酮101h(300 mg,1.36 mmol)含於二噁烷(50 mL)之溶液添加KOAc(267 mg,2.72 mmol)、CuI(259 mg,1.36 mmol)以及4,7-二甲氧基-1,10-菲繞啉(327 mg,1.36 mmol)。於所得溶液鼓入氮氣30分鐘後，在90度下攪拌該混合物10小時。使其冷卻至室溫，並添加H2O(100 mL)。分離水層，並使用乙酸乙酯萃取(2×200 mL)。合併之有機層使用(100 mL)鹽水清洗，並在硫酸鈉上乾燥。藉由過濾移除乾燥劑，並在減壓下濃縮濾液。在急驟管柱上利用PE/EA(15：1)溶離而純化殘餘物，得到102b(172 mg,30%)。LCMS：[M+H]+ 421。1H NMR(500 MHz,CDCl3)δ 10.20(s,1 H),8.20(s,1 H),7.49-7.51(m,3 H),7.25(m,1 H),1.36(s,9 H)。
實例102c 2-(6-第三丁基-8-氟-1-側氧基呔-2(1H)-基)-4-氟-6-(1-甲基-5-(5-(4-(氧雜環丁-3-基)哌-1-基)吡啶-2-基胺基)-6-側氧基-1,6-二氫吡啶-3-基)苯甲醛102c
將2-溴-6-(6-第三丁基-8-氟-1-氧基呔-2(1H)-基)-4-氟苯甲醛102b(100 mg,0.24 mmol)、1-甲基-3-(5-(4-(氧雜環丁-3-基)哌-1-基)吡啶-2-基胺基)-5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧雜硼雜環戊-2-基)吡啶-2(1H)-酮(131 mg,0.28 mmol)、PdCl2(dppf)(25 mg,0.03 mmol)、K3PO4.3H2O(149 mg,0.56 mmol)、THF(10 mL)以及H2O(5 mL)加入圓底燒瓶中。在抽真空/氬氣沖洗三次循環後，在70℃下加熱混合物6 h。然後將其過濾，並在真空蒸發濾液。藉由急驟管柱層析利用1：3石油醚/乙酸乙酯溶離而純化殘餘物，得到呈黃色固體之102c(98 mg,60%)。LCMS：[M+H]+ 682
實例102 6-第三丁基-8-氟-2-(3-(羥甲基)-4-(1-甲基-5-(5-(4-(氧雜環丁-3-基)哌-1-基)吡啶-2-基胺基)-6-側氧基-1,6-二氫吡啶-3-基)吡啶-2-基)呔-1(2H)-酮102
使2-(6-第三丁基-8-氟-1-側氧基呔-2(1H)-基)-4-氟-6-(1-甲基-5-(5-(4-(氧雜環丁-3-基)哌-1-基)吡啶-2-基胺基)-6-側氧基-1,6-二氫-吡啶-3-基)苯甲醛102c(98 mg,0.14 mmol)、NaBH4(17 mg,0.43 mmol)以及CH3OH(10 mL)之混合物在25℃下攪拌1 h。然後在減壓下使其濃縮，並添加水(10 mL)。利用CH2Cl2(10 mL×2)萃取所得混合物。在減壓下濃縮經合併的CH2Cl2萃取物，並藉由逆相製備型HPLC純化殘餘物，得到102(45 mg,46%)。LCMS：[M+H]+ 684。1H NMR(500 MHz,DMSO-d6)δ 8.52-8.56(m,2 H),8.40(s,1 H),7.88(d,J=6.0 Hz,2 H),7.74-7.77(m,1 H),7.34-7.40(m,3 H),7.29(d,J=3.0 Hz,1 H),7.22(d,J=9.5 Hz,1 H),4.54-4.56(m,2 H),4.44-4.47(m,2 H),4.32(s,2 H),3.58(s,3 H),3.43(s,1 H),3.06-3.08(m,4 H),2.36-2.39(m,5 H),1.38(s,9 H)。
實例103a 2-溴-4-氯菸鹼醛103a
在5分鐘時間內於在-70℃下冷卻之2-溴-4-氯吡啶(1.6 g,8.0 mmol)含於無水四氫呋喃(40 mL)之溶液中添加二異丙基醯胺鋰(5.0 mL,10.0 mmol,2.0 M)溶液，並在-70℃下又攪拌1 h。在3分鐘之時間內導入無水DMF(1.3 g)，且又攪拌該混合物30分鐘。然後使用飽和NH4Cl(30 mL)使其驟冷並使用乙酸乙酯(20 mL×3)萃取。在無水Mg2SO4上乾燥合併之有機層，過濾，並減壓蒸發。藉由矽膠管柱層析利用石油醚/乙酸乙酯(20：1)溶離而純化殘餘物，得到呈黃色固體之103a(900 mg,48%)。1H NMR(500 MHz,DMSO-d6)δ 10.21(s,1H),8.52(d,J=5.5 Hz,1H),7.79(d,J=5.0 Hz,1H)。
實例103b 2-(6-第三丁基-8-氟-1-側氧基呔-2(1H)-基)-4-氯菸鹼醛103b
於2-溴-4-氯菸鹼醛103a(446 mg,2.05 mmol)、6-第三丁 基-8-氯基呔-1(2H)-酮101h(300 mg,1.36 mmol)含於二噁烷(50 mL)之溶液中添加KAcO(267 mg,2.72 mmol)、CuI(259 mg,1.36 mmol)以及4,7-二甲氧基-1,10-菲繞啉(327 mg,1.36 mmol)。於所得溶液中鼓入氮氣30分鐘後，在90℃下攪拌混合物10 h。使其冷卻至室溫，並添加H2O(100 mL)。分離水層，並使用乙酸乙酯萃取(2×200 mL)。使用鹽水(100 mL)清洗合併之有機層，並在硫酸鈉上乾燥。藉由過濾移除乾燥劑，並減壓濃縮濾液。在急驟管柱上利用10：1 PE/EA溶離而純化殘餘物，得到103b(120 mg,25%)。LCMS：[M+H]+ 360。1H NMR(500 MHz,CDCl3)δ 10.36(s,1H),8.69(d,J=5.5,1H),8.28(d,J=2.0,1H),7.28-7.56(m,3H),1.49(s,9H)。
實例103c 2-(6-第三丁基-8-氟-1-側氧基呔-2(1H)-基)-4-(1-甲基-5-(5-(4-(氧雜環丁-3-基)哌-1-基)吡啶-2-基胺基)-6-側氧基-1,6-二氫吡啶-3-基)菸鹼醛103c
將103b(100 mg,0.28 mmol)、1-甲基-3-(5-(4-(氧雜環丁-3-基)哌-1-基)吡啶-2-基胺基)-5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧雜硼雜環戊-2-基)吡啶-2(1H)-酮(131 mg,0.28 mmol)、PdCl2(dppf)(25 mg,0.03 mmol)以及K3PO4.3H2O(149 mg,0.56 mmol)之混合物懸浮於THF(10 mL)/H2O(5 mL)中。在抽真空/氬氣沖洗之三次循環後，混合物在70℃下加熱6 h。然後將其過濾，並在真空蒸發濾液。在急驟管柱層析上利用1：3石油醚/乙酸乙酯溶離而純化殘餘物，得到呈黃色固體之103c(150 mg,60%)。LCMS：[M+H]+ 665
實例103 6-第三丁基-8-氟-2-(3-(羥甲基)-4-(1-甲基-5-(5-(4-(氧雜環丁-3-基)哌-1-基)吡啶-2-基胺基)-6-側氧基-1,6-二氫吡啶-3-基)吡啶-2-基)-呔-1(2H)-酮103
103c(120 mg,0.18 mmol)、NaBH4(21 mg,0.54mmol)以及CH3OH(10 mL)之混合物在25℃下攪拌1 h。然後在減壓下濃縮，並添加水(10 mL)。利用CH2Cl2(10 mL×2)萃取所得混合物。減壓濃縮經合併的CH2Cl2萃取物，並藉由逆相製備型HPLC純化殘餘物，得到103(45 mg,38%)。LCMS：[M+H]+ 667。1H NMR(500 MHz,CDCl3)δ 8.66-8.68(m,2H),8.35(s,1H),7.96(d,J=3.0,1H),7.81(s,1H),7.65(d,J=2.5,1H),7.55-7.59(m,3H),6.83(d,J=8.5,1H),4.71-4.74(m,4H),4.51-4.52(m,2H),4.07-4.08(m,1H),3.73(s,3H),3.56(s,1H),3.20-3.22(m,4H),2.56-2.58(m,4H),1.59(s,9H)
實例104a (S)-2-(6-第三丁基-8-氟-1-側氧基呔-2(1H)-基)-4-氟-6-(1-甲基-5-(5-(2-甲基-4-(氧雜環丁-3-基)哌-1-基)吡啶-2-基胺基)-6-側氧基-1,6-二氫吡啶-3-基)苯甲醛104a
將2-溴-6-(6-第三丁基-8-氟-1-側氧基呔-2(1H)-基)-4-氟苯甲醛102b(100 mg,0.24 mmol)、(S)-1-甲基-3-(5-(2-甲基-4-(氧雜環丁-3-基)哌-1-基)吡啶-2-基胺基)-5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧雜硼雜環戊-2-基)吡啶-2(1H)-酮105f(115 mg,0.24 mmol)、PdCl2(dppf)(22 mg,0.03 mmol)、 K3PO4(102 mg,0.48 mmol)、乙酸鈉(39 mg,0.48 mmol)、THF(15 mL)以及水(5 mL)加入配備有磁攪拌器以及回流冷凝器之50-mL單頸圓底燒瓶中。在抽真空/氬氣沖洗之三次循環後，混合物在100℃下加熱2 h。接著過濾，並在減壓下蒸發濾液。藉由矽膠管柱層析利用40：1二氯甲烷/甲醇溶離而純化殘餘物，得到呈黃色固體之104a(82 mg,49%)。MS：[M+H]+ 696.3
實例104 (S)-6-第三丁基-8-氟-2-(5-氟-2-(羥甲基)-3-(1-甲基-5-(5-(2-甲基-4-(氧雜環丁-3-基)哌-1-基)吡啶-2-基胺基)-6-側氧基-1,6-二氫吡啶-3-基)苯基)呔-1(2H)-酮104
(S)-2-(6-第三丁基-8-氟-1-側氧基呔-2(1H)-基)-4-氟-6-(1-甲基-5-(5-(2-甲基-4-(氧雜環丁-3-基)哌-1-基)吡啶-2-基胺基)-6-側氧基-1,6-二氫吡啶-3-基)苯甲醛104a(80 mg,0.12 mmol)、NaBH4(14 mg,0.36 mmol)以及甲醇(20 mL)之混合物在25℃攪拌1 h。然後使用水(10 mL)使反應混合物驟冷，並在減壓下濃縮。使用二氯甲烷(2×30 mL)萃取提取物，並在減壓下濃縮經合併的二氯甲烷萃取物。藉由逆相製備型HPLC純化殘餘物，得到呈黃色固體之104(46 mg,55%)。MS：[M+H]+ 698.3。1H NMR(500 MHz,DMSO-d6)δ 8.54(d,J=2.0 Hz,1H),8.52(d,J=2.0 Hz,1H),8.42(s,1H),7.88(s,1H),7.86(d,J=3.0 Hz,1H),7.77-7.74(m,1H),7.40-7.34(m,3H),7.30(dd,J=2.5,9.5 Hz,1H),7.23(d,J=9.0 Hz,1H),4.57-4.54(m,2H),4.49-4.45(m,1H), 4.43-4.40(m,1H),4.34-4.29(m,2H),3.70-3.65(m,1H),3.58(s,3H),3.40-3.38(m,2H),3.12-3.06(m,1H),2.97-2.91(m,1H),2.36-2.29(m,3H),2.19-2.15(m,1H),1.38(s,9H),0.93(d,J=6.5 Hz,3H)。
實例105a (3S)-3-甲基-4-(6-硝基吡啶-3-基)哌-1-羧酸第三丁基酯105a
將K2CO3(14 g,104 mmol)與(3S)-3-甲基哌-1-羧酸第三丁基酯(10.0 g,50 mmol)加入5-溴-2-硝基吡啶(30 g,148 mmol)含於DMSO(350 mL)之溶液中。混合物在65℃攪拌隔夜，然後冷卻至室溫，傾倒於水(700 mL)中。收集固體沈澱物，並在真空下乾燥。在急驟管柱上利用20：1石油醚/乙酸乙酯，接著利用CH2Cl2溶離使其進一步純化，得到呈黃色固體之105a(8.05 g,50%)。LCMS：[M+H]+ 323
實例105b (3S)-4-(6-胺基吡啶-3-基)-3-甲基哌-1-羧酸第三丁基酯105b
使用氮氣沖洗500-mL燒瓶，並加入105a(5.8 g,18 mmol)、10%碳載鈀(50%濕品，2.0 g)以及乙醇(200 mL)。將其抽成真空，充入氫氣，並在室溫下攪拌16 h。然後在 真空中移除氫氣，並替換為氮氣。藉由通過CELITE®墊過濾而移除觸媒，並在減壓下濃縮濾液，得到呈棕色固體之105b(4.9 g,96%)。LCMS：[M+H]+ 293
實例105c (3S)-4-(6-(5-溴-1-甲基-2-側氧基-1,2-二氫吡啶-3-基胺基)吡啶-3-基)-3-甲基哌-1-羧酸第三丁基酯105c
將1,4-二噁烷(50 mL)、105b(4.0 g,13.7 mmol)、3,5-二溴-1-甲基吡啶-2(1H)-酮(5.5 g,20.8 mmol)以及碳酸銫(11 g,35 mmol)加入配備有磁攪拌器以及回流冷凝器之100-mL單頸圓底燒瓶中。於所得混合物鼓入氮氣30分鐘後，添加XantPhos(272 mg,0.47 mmol)以及叁(二亞苄基丙酮)二鈀(0)(430 mg,0.47 mmol)，並在回流下加熱反應混合物3 h。此後，將反應冷卻至室溫，分配在乙酸乙酯(300 mL)與水(300 mL)之間，並過濾。分離水層，並使用乙酸乙酯(150 mL×2)萃取。合併有機層，使用鹽水(150 mL)清洗，並在硫酸鈉上乾燥。藉由過濾移除乾燥劑，並在減壓下濃縮濾液。在急驟管柱上利用50：1 CH2Cl2/甲醇溶離而純化殘餘物，得到呈黃色固體之105c(5.4 g,83%)。LCMS：[M+H]+ 478
實例105d (3S)-5-溴-1-甲基-3-(5-(2-甲基哌-1-基)吡 啶-2-基胺基)吡啶-2(1H)-酮105d
在室溫下攪拌105c(3.1 g,6.5 mmol)與4.0 M HCl/二噁烷(10 mL)之混合物5 h。然後在真空中濃縮。利用1.0M NaOH水溶液使殘餘物鹼化，並使用CH2Cl2萃取兩次。使用水清洗合併之有機層，並在減壓下濃縮，得到呈黃色固體之105d(2.3 g,95%)。LCMS：[M+H]+ 380。
實例105e (3S)-5-溴-1-甲基-3-(5-(2-甲基-4-(氧雜環丁-3-基)哌-1-基)吡啶-2-基胺基)吡啶-2(1H)-酮105e
105d(2.35 g,6.2 mmol)與氧雜環丁烷-3-酮(0.49 g,6.8 mmol)、NaBH3CN(4.75 g,22.5 mmol)以及氯化鋅(3 g,22.7 mmol)含於甲醇(125 mL)之混合物在50℃下攪拌5小時。將混合物添加至水中，並使用CH2Cl2萃取三次。在減壓下濃縮有機層。藉由管柱層析利用25：1 CH2Cl2/甲醇溶離而純化殘餘物，得到呈黃色固體之105e(2.6 g,98%)。LCMS：[M+H]+ 434。
實例105f (3S)-1-甲基-3-(5-(2-甲基-4-(氧雜環丁-3-基)哌-1-基)吡啶-2-基胺基)-5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧雜硼雜環戊-2-基)吡啶-2(1H)-酮105f
將105e(1.0 g,1.0 eq.,2.3 mmol)、Pin2B2(1.46 g,2.50 eq.,5.75 mmol)、Pd2(dba)3(105 mg,0.05 eq.,0.125 mmol)、X-Phos(93 mg,0.1 eq.,0.23 mmol)、KOAc(676 mg,3.0 eq.,6.9 mmol)以及二噁烷(50 mL)加入配備有磁攪拌器以及回流冷凝器之100 mL單頸圓底燒瓶中。在抽真空/氬氣沖洗三次循環後，混合物在90℃下加熱4 h。接著將其冷卻至室溫並過濾。在減壓下濃縮濾液並使用3：1石油醚/乙酸乙酯(80 mL)清洗所得殘餘物，得到呈黃色固體之105f(1.0 g,90%)。MS：[M+H]+ 482。
實例105g (S)-2-(6-第三丁基-8-氟-1-側氧基呔-2(1H)-基)-4-(1-甲基-5-(5-(2-甲基-4-(氧雜環丁-3-基)哌-1-基)吡啶-2-基胺基)-6-側氧基-1,6-二氫吡啶-3-基)菸鹼醛105g
將2-(6-第三丁基-8-氟-1-側氧基呔-2(1H)-基)-4-氯菸鹼醛103b(100 mg,0.28 mmol)、105f(135 mg,0.28 mmol)、PdCl2(dppf)(25 mg,0.03 mmol)、K3PO4.3H2O(149 mg,0.56 mmol)、THF(10 mL)以及H2O(5 mL)加入圓底燒瓶中。在抽真空/氬氣沖洗三次循環後，混合物在70℃下加熱6 h。然後將其過濾，並真空蒸發濾液。藉由急驟管柱層析利用1：3石油醚/乙酸乙酯溶離而純化殘餘物，得到呈黃色固體之105g(113 mg,60%)。LCMS：[M+H]+ 679。
實例105 (S)-6-第三丁基-8-氟-2-(3-(羥甲基)-4-(1-甲基-5-(3-甲基-5-(4-(氧雜環丁-3-基)哌-1-基)吡啶-2-基胺基)-6-側氧基-1,6-二氫吡啶-3-基)吡啶-2-基)呔-1(2H)-酮105
105g(100 mg,0.15 mmol)、NaBH4(17 mg,0.45 mmol)與CH3OH(10 mL)之混合物在25℃下攪拌1小時。使用CH2Cl2(10 mL×2)萃取該混合物。在減壓下濃縮經合併的CH2Cl2萃取物。藉由逆相製備型HPLC純化殘餘物，得到105(65 mg,65%)。LCMS：[M+H]+ 681。1H NMR(500 MHz,DMSO-d6)δ 8.62(d,J=2.0,1H),8.53-8.57(m,1H),8.42(s,2H),7.90(d,J=1.5,1H),7.85(d,J=2.0,1H),7.76-7.79(m,1H),7.52(d,J=5.0,1H),7.46(d,J=2.0,1H),7.36-7.38 (m,1H),7.24-7.26(m,1H),4.54-4.57(m,2H),4.46-4.48(m,1H),4.40-4.41(m,3H),3.68-3.70(m,1H),3.57(s,3H),3.37-3.40(m,1H),3.09-3.11(m,1H),2.93-2.95(m,1H),2.52-2.54(m,2H),2.32-2.36(m,2H),2.18(s,1H),1.39(s,9H),0.93(d,J=6.0,3H)。
實例106a (R)-1-甲基-3-(5-(2-甲基-4-(氧雜環丁-3-基)哌-1-基)吡啶-2-基胺基)-5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧雜硼雜環戊-2-基)吡啶-2(1H)-酮106a
於(R)-5-溴-1-甲基-3-(5-(2-甲基-4-(氧雜環丁-3-基)哌-1-基)吡啶-2-基胺基)吡啶-2(1H)-酮(2.0 g,4.60 mmol)、4,4,4',4',5,5,5',5'-八甲基-2,2'-雙(1,3,2-二氧雜硼雜環戊烷)(3.50 g,13.80 mmol)含於二噁烷(50 mL)之溶液中添加PdCl2(dppf)(377.10 mg,0.46 mmol)以及KOAc(2.70 g,27.80 mmol)。參見圖6。混合物在氬氣下，於100℃攪拌12 h。過濾化合物，並真空蒸發濾液。藉由管柱層析利用CH2Cl2/甲醇(15：1)溶離而純化殘餘物，得到呈棕色固體之106a(1.10 g,49%)。MS：[M+H]+ 482.3。
實例106b (R)-2-(6-第三丁基-8-氟-1-側氧基呔-2(1H)-基)-4-(1-甲基-5-(5-(2-甲基-4-(氧雜環丁-3-基)哌- 1-基)吡啶-2-基胺基)-6-側氧基-1,6-二氫吡啶-3-基)菸鹼醛106b
106a(260.0 mg,0.56 mmol)、2-(6-第三丁基-8-氟-1-側氧基呔-2(1H)-基)-4-氯菸鹼醛103b(200.0 mg,0.56 mmol)、PdCl2(dppf)(50.0 mg,0.056 mmol)、NaOAc(90.0 mg,1.1 mmol)、K3PO4(300 mg,1.1 mmol)含於乙腈(30 mL)之混合物在100℃加熱3 h。在真空中蒸發溶劑。藉由急驟管柱層析利用CH2Cl2/甲醇(10：1)溶離而純化殘餘物，得到呈棕色固體之106b(120 mg,34%)。LCMS：[M+H]+ 679.3
實例106 (R)-6-第三丁基-8-氟-2-(3-(羥甲基)-4-(1-甲基-5-(5-(2-甲基-4-(氧雜環丁-3-基)哌-1-基)吡啶-2-基胺基)-6-側氧基-1,6-二氫吡啶-3-基)吡啶-2-基)呔-1(2H)-酮106
將NaBH4(15.0 mg,0.39 mmol)添加至106b(90.0 mg,0.13 mmol)含於MeOH(10 mL)之溶液中。混合物在20℃攪拌2 h。接著蒸發，並藉由逆相製備型HPLC純化殘餘物，得到呈白色固體之106(7.3 mg,8%)。LCMS：(M+H)+ 681.4。1H NMR(500 MHz,DMSO)δ 8.63(d,J=2.5,1H),8.57(d,J=5.0,1H),8.54(d,J=2.0,1H),8.47(s,1H),7.91 (s,1H),7.86(d,J=3.0,1H),7.78(d,J=12.5,1H),7.53(d,J=5.0,1H),7.47(d,J=2.0,1H),7.36-7.39(m,1H),7.25(d,J=9.5,1H),4.90(s,1H),4.54-4.58(m,2H),4.47(t,J=6.0,1H),4.39-4.43(m,3H),3.69(s,1H),3.61(s,3H),3.37-3.42(m,1H),3.09-3.11(m,1H),2.95(t,J=9.0,1H),2.54-2.56(m,1H),2.30-2.37(m,2H),2.19(t,J=8.0,1H),1.39(s,9H),0.94-0.93(d,J=6.5,3H)。
實例107a (R)-2-(6-第三丁基-8-氟-1-側氧基呔-2(1H)-基)-4-氟-6-(1-甲基-5-(5-(2-甲基-4-(氧雜環丁-3-基)哌-1-基)吡啶-2-基胺基)-6-側氧基-1,6-二氫-吡啶-3-基)苯甲醛107a
將(R)-1-甲基-3-(5-(2-甲基-4-(氧雜環丁-3-基)哌-1-基)吡啶-2-基胺基)-5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧雜硼雜環戊-2-基)吡啶-2(1H)-酮(173 mg,1.0 eq.,0.36 mmol)、2-溴-6-(6-第三丁基-8-氟-1-側氧基呔-2(1H)-基)-4-氟苯甲醛101i(152 mg,1.0 eq.,0.36 mmol)、K3PO4(152 mg,2.0 eq.,0.72 mmol)、PdCl2(dppf)(26 mg,0.1 eq.,0.036 mmol)、NaOAc(59 mg,2.0 eq.,0.72 mmol)、CH3CN(20 mL)以及H2O(0.8 mL)加入配備有磁攪拌器與回流冷凝器之50-mL單頸圓底燒瓶中。在抽真空/氬氣沖洗之三次循環後，混合物在80℃下加熱2 h。接著冷卻至室溫並過濾。在減壓下濃縮濾液，並藉由矽膠管柱層析利用40：1 DCM/EtOH溶離而純化所得殘餘物，得到呈黃色固體之107a(77 mg,31%)。MS：[M+H]+ 696.3。
實例107 (R)-6-第三丁基-8-氟-2-(5-氟-2-(羥甲基)-3-(1-甲基-5-(5-(2-甲基-4-(氧雜環丁-3-基)哌-1-基)吡啶-2-基胺基)-6-側氧基-1,6-二氫吡啶-3-基)苯基)呔-1(2H)-酮107
將107a(77 mg,1.0 eq.,0.11 mmol)、NaBH4(21 mg,5.0 eq.,0.55 mmol)以及MeOH(10 mL)加入配備有磁攪拌器之50-mL單頸圓底燒瓶中。混合物在室溫下攪拌1 h。然後將其過濾，並濃縮濾液。藉由逆相製備型HPLC純化殘餘物，得到107(38 mg,49%)。MS：[M+H]+ 698.3。1H NMR(500 MHz,CDCl3)δ 8.59(d,J=2.0 Hz,1H),8.29(d,J=2.5 Hz,1H),7.98(d,J=2.5 Hz,1H),7.81(s,1H),7.56-7.54(m,2H),7.40(s,1H),7.31-7.27(m,2H),7.11-7.10(m,1H),6.81(d,J=9.0 Hz,1H),4.71-4.62(m,4H),4.35(s,2H),3.73-3.70(m,4H),3.53-3.46(m,2H),3.08(t,J=5.0 Hz,2H),2.56-2.46(m,3H),2.22-2.18(m,1H),1.43(s,9H),0.98(d,J=6.5 Hz,3H)。
實例108a 2-(6-第三丁基-8-氟-1-側氧基呔-2(1H)-基)-6-(5-(5-((2S,5R)-2,5-二甲基-4-(氧雜環丁-3-基)哌-1-基)吡啶-2-基胺基)-1-甲基-6-側氧基-1,6-二氫吡啶-3-基)-4-氟苯甲醛108a
將2-溴-6-(6-第三丁基-8-氟-1-側氧基呔-2(1H)-基)-4- 氟苯甲醛102b(84 mg,0.20 mmol)、3-(5-((2S,5R)-2,5-二甲基-4-(氧雜環丁-3-基)哌-1-基)吡啶-2-基胺基)-1-甲基-5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧雜硼雜環戊-2-基)吡啶-2(1H)-酮(99 mg,0.20 mmol)、PdCl2(dppf)(15 mg,0.02 mmol)、K3PO4(127 mg,0.6 mmol)、乙酸鈉(49 mg,0.6 mmol)、乙腈(5 mL)以及水(0.5 mL)加入配備有磁攪拌器與回流冷凝器之25-mL單頸圓底燒瓶中。在抽真空/氬氣沖洗之三次循環後，混合物回流加熱2 h。接著冷卻至室溫並過濾。在減壓下濃縮濾液，藉由矽膠管柱層析利用30：1二氯甲烷/甲醇溶離而純化所得殘餘物，得到呈白色固體之108a(54 mg,38%)。
實例108 6-第三丁基-2-(3-(5-(5-((2S,5R)-2,5-二甲基-4-(氧雜環丁-3-基)哌-1-基)吡啶-2-基胺基)-1-甲基-6-側氧基-1,6-二氫吡啶-3-基)-5-氟-2-(羥基甲基)苯基)-8-呔-1(2H)-酮108
在0℃，於2-(6-第三丁基-8-氟-1-側氧基呔-2(1H)-基)-6-(5-(5-((2S,5R)-2,5-二甲基-4-(氧雜環丁-3-基)哌-1-基)吡啶-2-基胺基)-1-甲基-6-側氧基-1,6-二氫吡啶-3-基)-4-氟苯甲醛108a(54 mg,0.076 mmol)含於甲醇(5 mL)之溶液中添加硼氫化鈉(9.0 mg,0.23 mmol)。混合物攪拌60分鐘。接著以水(1.0 mL)驟冷並減壓濃縮。藉逆相製備型-HPLC純化殘留物，獲得108(12 mg,22%)。MS：[M+H]+ 712.3。1H NMR(500 MHz,CDCl3)δ 8.63(d,J=2.5 Hz,1H),8.31(d,J=2.0 Hz,1H),8.05(d,J=2.5 Hz,1H),7.87(s,1H), 7.58-7.55(m,2H),7.44(d,J=2.0 Hz,1H),7.36(s,1H),7.30(d,J=2.0 Hz,1H),7.12(dd,J=2.5,8.5 Hz,1H),6.82(d,J=8.5 Hz,1H),4.76-4.73(m,2H),4.68-4.61(m,2H),4.38-4.36(m,2H),3.74-3.72(m,2H),3.72(s,3H),3.22-3.20(m,1H),2.94-2.92(m,1H),2.74-2.72(m,2H),2.50-2.48(m,1H),1.98-1.96(m,1H),1.45(s,9H),0.93-0.91(m,6H)。
實例109a 3-溴-5-(6-第三丁基-8-氟-1-側氧基-1,2-二氫呔-2-基)吡啶-4-甲醛109a
將6-第三丁基-8-氟-1,2-二氫呔-1-酮101h(220 mg,1.0 mmol)、3,5-二溴吡啶-4-甲醛(530 mg,2.0 mmol)、CuI(190 mg,1.0 mmol)、4,7-二甲氧基-1,10-菲繞啉(244 mg,1.0 mmol)、Cs2CO3(652 mg,2.0 mmol)以及二噁烷(8 mL)加入配備有磁攪拌器之密封管中。在抽真空/氬氣沖洗之三次循環後，混合物在110℃下加熱5 h。然後將其過濾，並在真空蒸發濾液。藉由矽膠管柱層析利用乙酸乙酯/石油醚(1：3,V/V)溶離而純化殘餘物，得到呈固體之109a(118 mg,29.3%)。LCMS：[M+H]+ 406。
實例109b 3-(6-第三丁基-8-氟-1-側氧基-1,2-二氫呔-2-基)-5-[1-甲基-5-({5-[(2S)-2-甲基-4-(氧雜環丁-3-基)哌-1-基]吡啶-2-基}胺基)-6-側氧基-1,6-二氫-吡啶-3-基]吡啶-4-甲醛109b
將109a(118 mg,0.29 mmol)、1-甲基-3-({5-[(2S)-2-甲基-4-(氧雜環丁-3-基)哌-1-基]吡啶-2-基}胺基)-5-(四甲基-1,3,2-二氧雜硼雜環戊-2-基)-1,2-二氫吡啶-2-酮105f(140 mg,0.29 mmol)、Pd(dppf)Cl2(24.8 mg,0.03 mmol)、KOAc(58.9 mg,0.60 mmol)、K3PO4．3H2O(159.8 mg,0.60 mmol)、乙腈(6 mL)以及水(3 d)加入配備有磁攪拌器以及回流冷凝器之25 mL單頸圓底燒瓶中。在抽真空/氬氣沖洗之三次循環後，混合物在110℃下加熱2 h。然後將反應混合物冷卻至室溫，過濾，並真空蒸發濾液。藉由製備型TLC利用二氯甲烷/甲醇(20：1,V/V)溶離而純化殘餘物，得到呈紅色固體之109b(95 mg,36%)。MS：[M+H]+ 679
實例109 (S)-6-第三丁基-8-氟-2-(4-(羥甲基)-5-(1-甲基-5-(5-(2-甲基-4-(氧雜環丁-3-基)哌-1-基)吡啶-2-基胺基)-6-側氧基-1,6-二氫吡啶-3-基)吡啶-3-基)呔-1(2H)-酮109
在0℃下，於109b(95 mg,0.106 mmol)含於甲醇(5 mL)之懸浮液添加硼氫化鈉(24 mg,0.636 mmol)，並攪拌混合物30分鐘。然後使用水(1.0 mL)使反應混合物驟冷並濃縮。藉由逆相製備型HPLC純化殘餘物，得到109(13.5 mg, 18.7%)。LCMS：[M+H]+ 681。1H NMR(500 MHz,CDCl3)δ 8.76(s,1H),8.65(d,J=2.0,1H),8.61(s,1H),8.32(d,J=2.5,1H),7.96(d,J=3.0,1H),7.82(s,1H),7.56-7.58(m,2H),7.40(d,J=2.0,1H),7.28-7.31(m,1H),6.81(d,J=9.0,1H),4.61-4.70(m,4H),4.43(s,2H),3.95(s,1H),3.72(s,3H),3.45-3.53(m,2H),3.07(t,J=5.25,2H),2.43-2.56(m,3H),2.18-2.22(m,1H),1.43(s,9H),0.99(d,J=6.5,3H)。
實例110a 2-(6-第三丁基-8-氟-1-側氧基呔-2(1H)-基)-4-(5-(5-((2S,5R)-2,5-二甲基-4-(氧雜環丁-3-基)哌-1-基)吡啶-2-基胺基)-1-甲基-6-側氧基-1,6-二氫吡啶-3-基)菸鹼醛110a
將含於CH3CN(80 mL)之2-(6-第三丁基-8-氟-1-側氧基呔-2(1H)-基)-4-氯菸鹼醛103b(216 mg,0.6 mmol)、3-(5-((2S,5R)-2,5-二甲基-4-(氧雜環丁-3-基)哌-1-基)吡啶-2-基胺基)-1-甲基-5-(4,4,5-三甲基-1,3,2-二氧雜硼雜環戊-2-基)吡啶-2(1H)-酮(360 mg,0.72 mmol)、Pd(dppf)Cl2(30 mg,0.03 mmol)、K3PO4(270 mg,1.2 mmol)以及NaOAc．3H2O(180 mg,1.2 mmol)加入100-mL單頸圓底燒瓶中。將系統抽真空並回充填N2。反應混合物在100℃下加熱2 h。接著 將其冷卻至室溫並過濾。在減壓下濃縮濾液，藉由急驟管柱層析利用25：1 CH2Cl2/MeOH溶離而純化所得殘餘物，得到呈黃棕色固體之110a(160 mg,42%)。MS：[M+H]+ 693.3。
實例110 6-第三丁基-2-(4-(5-(5-((2S,5R)-2,5-二甲基-4-(氧雜環丁-3-基)哌-1-基)吡啶-2-基胺基)-1-甲基-6-側氧基-1,6-二氫吡啶-3-基)-3-(羥甲基)吡啶-2-基)-8-氟基呔-1(2H)-酮110
110a(100 mg,0.15 mmol)與NaBH4(20 mg,0.45 mmol)含於MeOH(30 mL)之混合物在30℃下攪拌2 h。使用水使混合物驟冷，並使用EtOAc(10 mL×3)萃取。在減壓下濃縮經合併的EtOAc萃取物，並藉由逆相製備型HPLC純化殘餘物，以得到110(80 mg,80%)。MS：[M+H]+ 695.3。1H NMR(500 MHz,CDCl3)δ 8.72(d,J=2,1H),8.67(d,J=5,1H),8.35(d,J=2.5,1H),8.05(d,J=3,1H),7.88(s,1H),7.68(d,J=2.5,1H),7.58-7.55(m,3H),7.38-7.36(m,1H),6.82(d,J=8.5,1H),4.78-4.71(m,2H),4.67-4.61(m,2H),4.50(s,2H),4.07(t,J=6,1H),3.78-3.74(m,4H),3.22-3.20(m,1H),2.92(d,J=3,1H),2.77-2.71(m,2H),2.51-2.48(m,1H),1.20-1.95(m,1H),1.45(s,9H),0.93-0.90(m,6H)
實例111a (S)-3-乙基-4-(6-硝基吡啶-3-基)哌-1-羧酸第三丁基酯111a
將1,4-二噁烷(50 mL)、5-溴-2-硝基吡啶(2.02 g,10 mmol)、(S)-3-乙基哌-1-羧酸第三丁基酯(2.14 g,10.0 mmol)、Pd2(dba)3(458 mg,0.50mmol)、XantPhos(576 mg,1.0 mmol)以及碳酸銫(6.52 g,20 mmol)加入配備有磁攪拌器以及回流冷凝器之250-mL單頸圓底燒瓶中。在抽真空/氬氣沖洗之三次循環後，混合物在100℃下加熱隔夜。此後，將反應冷卻至室溫。接著經過濾，並在減壓下蒸發濾液。藉由矽膠管柱層析利用3：1石油醚/乙酸乙酯溶離而純化殘餘物，得到呈黃色固體之111a(700 mg,22%)。MS：[M+H]+ 336
實例111b (S)-4-(6-胺基吡啶-3-基)-3-乙基哌-1-羧酸第三丁基酯111b
使用氮氣沖洗100-mL單頸圓底燒瓶，並加入111a(0.7 g,2.08 mmol)、10%碳載鈀(50%濕品，208 mg)以及甲醇(40 mL)。將混合物抽真空，充入氫氣，並在室溫下攪拌6 h。然後抽出氫氣，並將氮氣充入燒瓶中。藉由通過CELITE®墊過濾而移除觸媒，並在減壓下濃縮濾液，得到111b(568 mg,89%)。MS：[M+H]+ 306
實例111c (S)-4-(6-(5-溴-1-甲基-2-側氧基-1,2-二氫吡啶-3-基胺基)吡啶-3-基)-3-乙基哌-1-羧酸第三丁基酯111c
將1,4-二噁烷(50 mL)、111b(568 mg,1.86 mmol)、3,5-二溴-1-甲基吡啶-2(1H)-酮(498 mg,1.86 mmol)、Pd2(dba)3(85 mg,0.093 mmol)、XantPhos(107 mg,0.186 mmol)以及碳酸銫(1.198 g,3.72 mmol)加入配備有磁攪拌器以及回流冷凝器之100-mL單頸圓底燒瓶中。在抽真空/氬氣沖洗之三次循環後，混合物在100℃下加熱6 h。接著經過濾，並在減壓下蒸發濾液。藉由矽膠管柱層析利用100：1二氯甲烷/甲醇溶離而純化殘餘物，得到呈黃色固體之111c(502 mg,55%)。MS：[M+H]+ 492。
實例111d (S)-5-溴-3-(5-(2-乙基哌-1-基)吡啶-2-基胺基)-1-甲基吡啶-2(1H)-酮111d
111c(502 mg,1.02 mmol)、二氯甲烷(2 mL)與4.0 M HCl/二噁烷(4 mL)之混合物在室溫下攪拌5 h。接著在減壓下濃縮，得到呈黃色固體之粗物質111d(263 mg,66%)，其未進一步純化而用於下一步驟。MS：[M+H]+ 392。
實例111e (S)-5-溴-3-(5-(2-乙基-4-(氧雜環丁-3-基)哌-1-基)吡啶-2-基胺基)-1-甲基吡啶-2(1H)-酮111e
111d(263 mg,0.67 mmol)、氧雜環丁烷-3-酮(96 mg,1.34 mmol)、NaBH3CN(104 mg,1.68 mmol)與氯化鋅(227 mg,1.68 mmol)含於甲醇(10 mL)之混合物在50℃下攪拌5小時。然後將水(10 mL)添加至反應中。在減壓下濃縮所得混合物。使用二氯甲烷萃取殘餘物三次。在減壓下濃縮合併之有機層，並藉由矽膠管柱層析利用50：1二氯甲烷/甲醇溶離而純化殘餘物，得到111e(203 mg,68%)。MS：[M+H]+ 448。
實例111f (S)-3-(5-(2-乙基-4-(氧雜環丁-3-基)哌-1-基)吡啶-2-基胺基)-1-甲基-5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧雜硼雜環戊-2-基)吡啶-2(1H)-酮111f
將111e(3219 mg,7.20 mmol)、Pin2B2(9072 mg,36.0 mmol)、Pd2(dba)3(329 mg,0.36 mmol)、X-phos(302 mg,0.72 mmol)、乙酸鉀(2117 mg,21.6 mmol)以及二噁烷(50 mL)加入配備有磁攪拌器以及回流冷凝器之100-mL單頸圓底燒瓶中。在抽真空/氬氣沖洗之三次循環後，混合物在60℃下加熱16 h。接著將其冷卻至室溫並過濾。在減壓下濃縮濾液，並使用8：1石油醚/乙酸乙酯(80 mL)清洗所得殘餘物，得到呈黃色固體之111f(3.0 g,84%)。
實例111g (S)-2-(6-第三丁基-8-氟-1-側氧基呔-2(1H)-基)-6-(5-(5-(2-乙基-4-(氧雜環丁-3-基)哌-1-基)吡啶-2-基胺基)-1-甲基-6-側氧基-1,6-二氫吡啶-3-基)-4-氟苯甲醛111g
將2-溴-6-(6-第三丁基-8-氟-1-側氧基呔-2(1H)-基)-4-氟苯甲醛102h(168 mg,0.40 mmol)、111f(198 mg,0.40 mmol)、Pd(dppf)Cl2(15 mg,0.02 mmol)、K3PO4(170 mg, 0.8 mmol)、乙酸鈉(66 mg,0.8 mmol)、乙腈(5 mL)以及水(0.8 mL)加入配備有磁攪拌器以及回流冷凝器之25-mL單頸圓底燒瓶中。在抽真空/氬氣沖洗之三次循環後，混合物在回流下加熱2 h。接著將其冷卻至室溫並過濾。在減壓下濃縮濾液，藉由矽膠管柱層析利用30：1二氯甲烷/甲醇溶離而純化所得殘餘物，得到呈白色固體之111g(100 mg,35%)。MS：[M+H]+ 710.3
實例111 (S)-6-第三丁基-2-(3-(5-(5-(2-乙基-4-(氧雜環丁-3-基)哌-1-基)吡啶-2-yl-胺基)-1-甲基-6-側氧基-1,6-二氫吡啶-3-基)-5-氟-2-(羥甲基)苯基)-8-氟基呔-1(2H)-酮111
在0℃下於111g(100 mg,0.14 mmol)含於甲醇(5 mL)之溶液添加硼氫化鈉(16.0 mg,0.42 mmol)。攪拌混合物60分鐘。然後使用水(1.0 mL)使其驟冷並濃縮。藉由逆相製備型HPLC純化殘餘物，得到111(32 mg,32%)。MS：[M+H]+ 712.3。1H NMR(500 MHz,CDCl3)δ 8.57(d,J=2.0 Hz,1H),8.30(d,J=2.0 Hz,1H),7.94(s,1H),7.80(s,1H),7.58(s,2H),7.41(d,J=2.0 Hz,1H),7.31-7.28(m,2H),7.12(dd,J=2.5,8.5 Hz,1H),6.82(d,J=9.0 Hz,1H),4.73-4.70(m,4H),4.37(s,2H),3.74-3.72(m,1H),3.71(s,3H),3.56-3.54(m,1H),3.34-3.32(m,1H),3.15-3.13(m,2H),2.58-2.36(m,4H),1.45(s,9H),1.44-1.43(m,2H),0.83(t,J=7.5 Hz,3H)。
實例112a (S)-2-(6-第三丁基-8-氟-1-側氧基呔- 2(1H)-基)-4-(5-(5-(2-乙基-4-(氧雜環丁-3-基)哌-1-基)吡啶-2-基胺基)-1-甲基-6-側氧基-1,6-二氫吡啶-3-基)菸鹼醛112a
將2-(6-第三丁基-8-氟-1-側氧基-呔-2(1H)-基)-4-氯菸鹼醛103b(150 mg,0.43 mmol)、(S)-3-(5-(2-乙基-4-(氧雜環丁-3-基)哌-1-基)吡啶-2-基胺基)-1-甲基-5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧雜硼雜環戊-2-基)吡啶-2(1H)-酮(206 mg,0.43 mmol)、PdCl2(dppf)(33 mg,0.04 mmol)、K3PO4(202 mg,0.86 mmol)、NaOAc(71 mg,0.86 mmol)以及CH3CN(10 mL)、H2O(2 mL)加入50-mL圓底燒瓶中。在抽真空/氬氣沖洗之三次循環後，混合物在100℃下加熱3 h。然後將其過濾，並在真空蒸發濾液。藉由急驟管柱層析利用1：3石油醚/乙酸乙酯溶離而純化殘餘物，得到呈黃色固體之112a(146 mg,49%)。LCMS：[M+H]+ 693
實例112 (S)-6-第三丁基-2-(4-(5-(5-(2-乙基-4-(氧雜環丁-3-基)哌-1-基)吡啶-2-基胺基)-1-甲基-6-側氧基-1,6-二氫吡啶-3-基)-3-(羥甲基)吡啶-2-基)-8-氟基呔-1(2H)-酮112
112a(140 mg,0.20 mmol)、NaBH4(21 mg,0.60)與 CH3OH(8 mL)之混合物在25℃下攪拌1 h。然後使用水(10 mL)使反應混合物驟冷。使用CH2Cl2(15 mL×2)萃取混合物。在減壓下濃縮經合併的CH2Cl2萃取物。藉由逆相製備型HPLC純化殘餘物，得到112(70 mg,50%)。LCMS：[M+H]+ 695。1H NMR(500 MHz,DMSO)δ 8.50-8.60(m,2H),8.44(s,1H),7.90(d,J=1.5,1H),7.82(d,J=3.0,1H),7.75-7.78(m,1H),7.51-7.53(m,1H),7.45(d,J=2.5,1H),7.33-7.35(m,1H),7.22-7.24(m,1H),4.47-4.59(m,2H),4.36-4.45(m,4H),3.60(s,3H),3.46-3.50(m,1H),3.38-3.41(m,3H),3.14-3.17(m,1H),2.96-3.00(m,1H),2.60-2.64(m,1H),2.50-2.55(m,1H),2.14-2.17(m,1H),2.06-2.10(m,1H),1.66-1.69(m,1H),1.39(s,9H),1.21-1.28(m,1H),0.77-0.80(m,3H)。
實例113a 5-溴-1-甲基-3-(嘧啶-4-基胺基)吡啶-2(1H)-酮113a
將3,5-二溴-1-甲基吡啶-2(1H)-酮(2.00 g,21.0 mmol)、2-胺基嘧啶(5.61 g,21.0 mmol)、碳酸銫(13.7 g,42.1 mmol)、DMF(5 mL)以及1,4-二噁烷(70 mL)加入配備有磁攪拌器與氮氣進氣口之100-mL單頸圓底燒瓶中。向所得懸浮液鼓入氮氣30分鐘後，添加Xantphos(1.10 g,1.89 mmol)與叁(二亞苄基丙酮)二鈀(0)(963 mg,1.05 mmol)。 將回流冷凝器連接至燒瓶，且反應混合物在100℃下加熱4 h。此後，將混合物冷卻至室溫，並使用90：10二氯甲烷/甲醇(150 mL)與水(100 mL)稀釋，並分離該等層。使用90：10二氯甲烷/甲醇(50 mL)萃取水層，並使用鹽水清洗合併之有機層，並在硫酸鈉上乾燥。藉由過濾移除乾燥劑。在減壓下濃縮濾液，藉由急驟管柱層析(氧化矽，90：10二氯甲烷/甲醇)純化所得殘餘物，得到呈非晶淡綠色固體之113a(3.42 g)，產率為58%：mp 217-219℃；1H NMR(500 MHz,CDCl3)9.29(s,1H),8.77(s,1H),8.72(d,J=2.5 Hz,1H),8.36(d,J=6.0 Hz,1H),7.69(d,J=2.5 Hz,1H),7.37(dd,J=5.5,1.0 Hz,1H),3.53(s,3H)；MS(ESI+)m/z 281.0(M+H)。
實例113b 1-甲基-3-(嘧啶-4-基胺基)-5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧雜硼雜環戊-2-基)吡啶-2(1H)-酮113b
將113a(4.0 g,14 mmol)、X-phos(400 mg,0.7 mmol)、Pd2(dba)3(635 mg,0.7 mmol)、乙酸鉀(7.3 mg,28 mmol)、4,4,4',4',5,5,5',5'-八甲基-2,2'-雙(1,3,2-二氧雜硼雜環戊烷)(10.6 g,42 mmol)以及1,4-二噁烷(100 mL)加入配備有磁攪拌器與冷凝器之250-mL單頸圓底燒瓶中。在抽真 空/氬氣沖洗之三次循環後，反應混合物在60℃下加熱8 h。接著將其冷卻至室溫並過濾。在減壓下濃縮濾液，且藉由急驟管柱層析利用5：1石油醚/乙酸乙酯溶離而純化所得殘餘物，得到呈淺黃色固體之113b(3.8 mg,82%)。MS：[M+H]+ 329.5。
實例113c 2-(6-第三丁基-8-氟-1-側氧基呔-2(1H)-基)-4-(1-甲基-6-側氧基-5-(嘧啶-4-基胺基)-1,6-二氫吡啶-3-基)菸鹼醛113c
將2-(6-第三丁基-8-氟-1-側氧基呔-2(1H)-基)-4-氯菸鹼醛103b(110 mg,0.31 mmol)、113b(100 mg,0.31 mmol)、PdCl2(dppf)(25 mg,0.030 mmol)、K3PO4(241 mg,0.93 mmol)、NaAcO(76 mg,0.93 mmol)、乙腈(15 mL)以及水(0.5 mL)加入配備有回流冷凝器之100-mL圓底燒瓶中。在抽真空/氬氣沖洗之三次循環後，混合物在100℃下加熱3 h。接著經過濾，並在減壓下蒸發濾液。藉由矽膠管柱層析利用1：20甲醇/二氯甲烷溶離而純化殘餘物，得到呈紅色固體之113c(80 mg,51%)。MS-ESI：[M+H]+ 526.3
實例113 6-第三丁基-8-氟-2-[3-(羥甲基)-4-[1-甲基-6-側氧基-5-(嘧啶-4-基胺基)-3-吡啶基]-2-吡啶基]呔-1-酮113
113c(80 mg,0.14 mmol)、NaBH4(27 mg,0.70 mmol)與甲醇(10 mL)之混合物在室溫下攪拌0.5 h。使用水(2 mL)使混合物驟冷，並在減壓下濃縮。藉由逆相製備型HPLC純化殘餘物，得到113(57 mg,71%)。MS-ESI：[M+H]+ 528.3。1H NMR(500 MHz,DMSO-d 6)δ 9.26(s,1H),8.76(d,J=2.5 Hz,1H),8.67(s,1H),8.59(d,J=5.0 Hz,1H),8.54(d,J=2.5 Hz,1H),8.31(d,J=6.0 Hz,1H),7.90(d,J=1.5 Hz,1H),7.79-7.76(m,1H),7.69(d,J=2.0 Hz 1H),7.54(d,J=5.0,Hz 1H),7.34-7.32(m,1H),4.94(t,J=5.0 Hz,1H),4.42-4.40(m,2H),3.62(s,3H),1.39(s,9H)。
實例114a 5-溴-1-甲基-3-(2-甲基嘧啶-4-基胺基)吡啶-2(1H)-酮114a
按照實例113a之步驟，並以2-甲基嘧啶-4-胺(2.0 g,18.3 mmol)與3,5-二溴-1-甲基吡啶-2(1H)-酮(9.6 g,36 mmol)起始，得到呈黃色固體之114a(2.3 g,43.4%)。MS：[M+H]+ 295。1H NMR(500 MHz,DMSO-d 6)δ 9.20(s,1H),8.78(s,1H),8.26(d,J=4.5 Hz,1H),7.68(s,1H),7.18(d,J=4.5 Hz,1H),3.59(s,3H),2.52(s,3H)。
實例114b 1-甲基-3-(2-甲基嘧啶-4-基胺基)-5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧雜硼雜環戊-2-基)吡啶-2(1H)-酮114b
將雙(戊醯)二硼(689 mg,2.61 mmol)、1,4-二噁烷(30 mL)、114a(307 mg,1.04 mmol)、Pd2(dba)3(47 mg,0.050 mmol)、X-phos(48 mg,0.10 mmol)以及乙酸鉀(305 mg, 3.12 mmol)加入配備有磁攪拌器以及回流冷凝器之100-mL單頸圓底燒瓶中。混合物在65℃下加熱6 h。然後將其過濾，並在真空蒸發濾液，得到呈棕色固體之114b(300 mg,84%)。MS：[M+H]+ 342.2
實例114c 2-(6-第三丁基-8-氟-1-側氧基呔-2(1H)-基)-4-(1-甲基-5-(2-甲基嘧啶-4-基胺基)-6-側氧基-1,6-二氫吡啶-3-基)菸鹼醛114c
將114b(236 mg,0.69 mmol)、2-(6-第三丁基-8-氟-1-側氧基呔-2(1H)-基)-4-氯菸鹼醛103b(250 mg,0.69 mmol)、PdCl2(dppf)(29 mg,0.035 mmol)、K3PO4(296 mg,1.39 mmol)、乙酸鈉(114 mg,1.39 mmol)、乙腈(15 mL)以及水(1 mL)加入配備有磁攪拌器以及回流冷凝器之50-mL單頸圓底燒瓶中。將系統抽真空並回充填N2。反應混合物在100℃下加熱2 h。接著將其冷卻至室溫並過濾。在減壓下濃縮濾液，藉由矽膠管柱層析利用30：1二氯甲烷/甲醇溶離而純化所得殘餘物，得到呈黃色固體之114c(134 mg,36%)。MS-ESI：[M+H]+ 540.2。
實例114 6-第三丁基-8-氟-2-[3-(羥甲基)-4-[1-甲基-5-[(2-甲基嘧啶-4-基)胺基]-6-側氧基-3-吡啶基]-2-吡啶基]呔-1-酮114
在0℃下，於2-(6-第三丁基-8-氟-1-側氧基呔-2(1H)-基)-4-(1-甲基-5-(2-甲基嘧啶-4-基胺基)-6-側氧基-1,6-二氫吡啶-3-基)菸鹼醛114c(130 mg,0.24 mmol)含於甲醇(20 mL)之懸浮液中添加硼氫化鈉(27 mg,0.72 mmol)。反應混 合物攪拌20分鐘，然後使用水(10 mL)驟冷。然後在減壓下將其濃縮，並使用二氯甲烷(3×20 mL)萃取殘餘物。乾燥合併之有機相，並在減壓下濃縮。藉由逆相製備型HPLC純化殘餘物，得到呈白色固體之114(20 mg,15%)。MS-ESI：[M+H]+ 542.3。1H NMR(500 MHz,CDCl3)δ 8.97(d,J=2.5 Hz,1H),8.71(d,J=5.0 Hz,1H,8.36(d,J=2.0 Hz,1H),8.28(d,J=5.5 Hz,1H),8.09-8.06(m,1H),7.86(d,J=2.5 Hz,1H),7.60-7.56(m,3H),6.61(d,J=6.0 Hz,1H),4.54-4.43(m,2H),4.16-4.13(m,1H),3.75(s,3H),2.62(s,3H),1.46(s,9H)。
實例115a 5-甲基-4,5,6,7-四氫噻唑并[5,4-c]吡啶-2-胺115 a
將1-甲基-4-哌啶酮(11.3 g,100 mmol)含於2-丙醇(80 mL)之溶液加熱至50℃。於該溶液中依次添加氰胺(4.2 g,100 mmol)含於2-丙醇(25 mL)之溶液以及硫磺粉末(3.2 g,100 mmol)。添加催化劑量之吡咯啶(1.3 mL)後，所得混合物在50℃下攪拌2小時。使反應混合物冷卻至室溫，並攪拌隔夜。然後在冰水浴中將其冷卻至10℃或低於10℃，並在相同溫度下攪拌1小時。藉由過濾收集所沈澱的晶體，並使用2-丙醇(20 mL)清洗。在真空中乾燥濕晶體，得到115a(10 g,59%)。MS：[M+H]+ 170。1H NMR(500 MHz, DMSO-d 6)δ 6.70(s,2H),3.31(s,2H),2.61(t,J=5.5 Hz,2H),2.45(m,2H),2.33(s,3H)。
實例115b 5-溴-1-甲基-3-(5-甲基-4,5,6,7-四氫噻唑并[5,4-c]吡啶-2-基胺基)吡啶-2(1H)-酮115b
按照化合物113a所述之程序，並以115a(4.0 g,23.5 mmol)與3,5-二溴-1-甲基吡啶-2(1H)-酮(3.0 g,17.8 mmol)起始，得到呈黃色固體之115b(2.8 g,44%)。MS：[M+H]+ 357。
實例115c 1-甲基-3-(5-甲基-4,5,6,7-四氫噻唑并[5,4-c]吡啶-2-基胺基)-5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧雜硼雜環戊-2-基)吡啶-2(1H)-酮115c
將化合物115b(997 mg,2.8 mmol)溶解於二噁烷(50 mL)中，接著添加雙(頻哪醇基)二硼(3.0 g,12.0 mmol)、Pd2(dba)3(128 mg,0.14 mmol)、X-phos(134 mg,0.28 mmol)以及乙酸鉀(823 mg,8.4 mmol)。在抽真空/氬氣沖洗之三次循環後，混合物在65℃下加熱2 h。將混合物冷卻至室溫，並過濾。在減壓下濃縮濾液，並使用石油醚(2×10 mL)清洗殘餘物，得到呈黃色固體之115c(968 mg,86%)，其未進一步純化而用於下一步驟。MS-ESI：[M+H]+ 403.2。
實例115d 2-(6-第三丁基-8-氟-1-側氧基呔-2(1H)-基)-4-(1-甲基-5-(5-甲基-4,5,6,7-四氫噻唑并[5,4-c]吡啶-2-基胺基)-6-側氧基-1,6-二氫吡啶-3-基)菸鹼醛115d
將2-(6-第三丁基-8-氟-1-側氧基呔-2(1H)-基)-4-氯菸鹼醛103b(144 mg,0.40 mmol)、115c(240 mg,0.60 mmol)、PdCl2(dppf)(20 mg,0.020 mmol)、K3PO4(180 mg,0.80 mmol)、三水合乙酸鈉(120 mg,0.80 mmol)以及乙腈/水(15 mL/1 mL)加入配備有回流冷凝器之圓底燒瓶中。在抽真空/氬氣沖洗之三次循環後，混合物在100℃下加熱2 h。接著將其冷卻至室溫並過濾。在減壓下蒸發濾液。藉由矽膠管柱層析利用25：1二氯甲烷/甲醇溶離而純化殘餘物，得到呈黃色固體之115d(100 mg,42%)。MS-ESI：[M+H]+ 600.3。
實例115 6-第三丁基-8-氟-2-[3-(羥甲基)-4-[1-甲基-5-[(5-甲基-6,7-二氫-4H-噻唑并[5,4-c]吡啶-2-基)胺基]-6-側氧基-3-吡啶基]-2-吡啶基]呔-1-酮115
將NaBH4(18 mg,0.45 mmol)添加至115d(100 mg,0.15 mmol)含於甲醇(6 mL)之混合物中。該混合物在30℃下攪拌1小時，然後使用水(10 mL)驟冷。經二氯甲烷(3×30 mL)萃取，並在減壓下濃縮合併之有機層。藉由逆相製備型HPLC純化殘餘物，得到呈白色固體之115(35 mg,36%)。MS-ESI：[M+H]+ 602.2。1H NMR(500 MHz,CDCl3)δ 8.68(d,J=5.0 Hz,1H),8.42(d,J=2.5 Hz,1H),8.35(d,J=2.5 Hz,1H),8.30(s,1H),7.77(d,J=2.0 Hz,1H),7.58-7.53(m,3H),4.49-4.45(m,2H),4.10(bs,1H),3.73(s,3H),3.58(s, 2H),2.83-2.79(m,4H),2.52(s,3H),1.45(s,9H)。
實例116a 6-第三丁基-2-(4-氯-3-(羥甲基)吡啶-2-基)-8-氟基呔-1(2H)-酮116a
在室溫下，於2-(6-第三丁基-8-氟-1-側氧基呔-2(1H)-基)-4-氯菸鹼醛103b(2.0 g,5.5 mmol)含於甲醇(30 mL)之溶液中添加NaBH4(700 mg,16.5 mmol)。反應混合物攪拌1 h，並使用水(30 mL)驟冷。然後在減壓下將其濃縮，並使用二氯甲烷(3×30 mL)萃取殘餘物。在無水Na2SO4上乾燥合併之有機相，過濾，並在減壓下蒸發，得到呈白色固體之116a(1.8 g,90%)。MS：[M+H]+ 362.3。
實例116b 乙酸(2-(6-第三丁基-8-氟-1-側氧基呔-2(1H)-基)-4-氯吡啶-3-基)甲酯116b
將116a(1.6 g,4.4 mmol)、乙酸酐(10 mL)以及三乙胺(1 mL)加入配備有磁攪拌器之50-mL單頸圓底燒瓶中。反應混合物在室溫下攪拌1 h，並在減壓下濃縮。藉由矽膠管柱層析利用30：1二氯甲烷/甲醇溶離而純化殘餘物，得到呈 棕色固體之116b(1.4 g,82%)。MS：[M+H]+ 404.3。
實例116c 3-(乙醯氧基甲基)-2-(6-第三丁基-8-氟-1-側氧基呔-2(1H)-基)吡啶-4-基酸116c
將116b(1.0 g,2.5 mmol)、Pin2B2(3.2 g,12.5 mmol)、Pd(dppf)Cl2(75 mg,0.125 mmol)、X-phos(75 mg,0.25 mmol)、乙酸鉀(750 mg,7.5 mmol)以及二噁烷(60 mL)加入配備有磁攪拌器以及回流冷凝器之100-mL單頸圓底燒瓶中。在抽真空/氬氣沖洗之三次循環後，混合物在65℃下加熱15 h。接著將其冷卻至室溫並過濾。在減壓下濃縮濾液並使用3：1石油醚/乙酸乙酯(10 mL)清洗所得殘餘物，得到呈黃色固體之116c(1.0 g,LCMS純度：75%)。MS：[M+H]+ 414.2。
實例116d 6-氯-2-甲基-4-({5-[(嗎啉-4-基)羰基]吡啶-2-基}胺基)-2,3-二氫噠-3-酮116d
將1,4-二噁烷(40 mL)、(6-胺基吡啶-3-基)(嗎啉基)甲酮(2.07 g,10.0 mmol)、4-溴-6-氯-2-甲基噠-3(2H)-酮(3.35 g,15.0 mmol)、Pd2(dba)3(915 mg,1.0 mmol)、XantPhos(578 mg,1.0 mmol)以及碳酸銫(6.52 g,20 mmol)加入配備有磁攪拌器以及回流冷凝器之100-mL單頸圓底燒瓶中。在抽真空/氬氣沖洗之三次循環後，混合物在100℃下加熱8 h。接著將其冷卻至室溫並過濾。使用二氯甲烷(2×20 mL)清洗固體。在無水Na2SO4上乾燥合併之濾液，並在減壓下濃縮，得到呈黃色固體之116d(2.45 g,51%)。MS：[M+H]+ 350.1。
實例116e 乙酸(2-(6-第三丁基-8-氟-1-側氧基呔-2(1H)-基)-4-(1-甲基-5-(5-(嗎啉-4-羰基)吡啶-2-基胺基)-6-側氧基-1,6-二氫噠-3-基)吡啶-3-基)甲酯116e
將116d(175 mg,0.50 mmol)、3-(乙醯氧基甲基)-2-(6-第三丁基-8-氟-1-側氧基呔-2(1H)-基)吡啶-4-基酸116c(300 mg,0.75 mmol)、Pd(dppf)Cl2(25 mg,0.025 mmol)、K3PO4(220 mg,1.0 mmol)、三水合乙酸鈉(150 mg,1.0 mmol)以及乙腈/水(20/1 mL)加入配備有回流冷凝器之50-mL圓底燒瓶中。在抽真空/氬氣沖洗之三次循環後，混合物在100℃下加熱2 h。接著經過濾，並在減壓下蒸發濾液。藉由矽膠管柱層析利用25：1二氯甲烷/甲醇溶離而純化殘餘物，得到呈黃色固體之116e(150 mg,45%)。MS-ESI：[M+H]+ 683.3。
實例116 6-第三丁基-8-氟-2-[3-(羥甲基)-4-[1-甲基-5-[[5-(嗎啉-4-羰基)-2-吡啶基]胺基]-6-側氧基-噠-3-基]-2-吡啶基]呔-1-酮116
116e(150 mg,0.20 mmol)以及氫氧化鋰(85 mg,2.0 mmol)含於THF/i-丙醇(5/3 mL)與水(2 mL)之混合物在30℃下攪拌1小時。在減壓下蒸發該混合物，並使用乙酸乙酯(3×20 mL)萃取殘餘物。在減壓下濃縮合併的乙酸乙酯萃取物，並藉由逆相製備型HPLC純化殘餘物，得到呈白色固體之116(80 mg,80%)。MS-ESI：[M+H]+ 641.3。1H NMR(500 MHz,CDCl3)δ 8.78(s,1H),8.75(d,J=5.0 Hz,1H),8.47(s,1H),8.45(d,J=2.0 Hz,1H),8.34(d,J=3.0 Hz,1H),7.79(dd,J=2.0,8.0 Hz,1H),7.64(d,J=4.5 Hz,1H),7.57(s,1H),7.52(dd,J=1.5,12.5 Hz,1H),7.02(d,J=8.5 Hz,1H),4.57-4.55(m,2H),3.94(s,3H),3.81-3.75(m,6H),1.64-1.62(m,2H),1.44(s,9H)。
實例117a (S)-4-(6-(6-氯-2-甲基-3-側氧基-2,3-二氫噠-4-基胺基)吡啶-3-基)-3-甲基哌-1-羧酸第三丁基酯117a
將(S)-4-(6-胺基吡啶-3-基)-3-甲基哌-1-羧酸第三丁基酯105b(2.5 g,8.5 mmol)、4-溴-6-氯-2-甲基噠-3(2H)-酮(2.2 g,10.0 mmol)、XantPhos(240 mg,0.40 mmol)、叁(二亞苄基丙酮)二鈀(0)(360 mg,0.40 mmol)、Cs2CO3(5.5 g,17 mmol)以及1,4-二噁烷(100 mL)加入配備有磁攪拌器以及回流冷凝器之250-mL單頸圓底燒瓶中。在抽真空/氬氣沖洗之三次循環後，混合物在100℃下加熱2.5 h。接著將其冷卻至室溫並過濾。在減壓下濃縮濾液，藉由矽膠管柱層析利用二氯甲烷/甲醇(40：1至30：1)溶離而純化所得殘餘物，得到呈淺黃色固體之117a(3.2 g,86%)。MS-ESI：[M+H]+ 435.1。
實例117b (S)-6-氯-2-甲基-4-(5-(2-甲基哌-1-基)吡啶-2-基胺基)噠-3(2H)-酮117b
117a(3.0 g,6.9 mmol)與4.0M HCl/乙醇(20 mL)之混合物在室溫下攪拌2 h。然後在減壓下濃縮混合物，以得到呈黃色固體之粗物質117b(2.5 g,98%)，其未進一步純化而用於下一步驟。MS-ESI：[M+H]+ 335.1。
實例117c (S)-6-氯-2-甲基-4-(5-(2-甲基-4-(氧雜環丁-3-基)哌-1-基)吡啶-2-基胺基)噠-3(2H)-酮117c
117b(2.3 g,6.8 mmol)、氧雜環丁烷-3-酮(1.4 g,20.0 mmol)、NaBH3CN(620 mg,10 mmol)與氯化鋅(1.36 g,10 mmol)含於甲醇(20 mL)之混合物在50℃下攪拌3小時。將混合物添加至水(40 mL)中，並在減壓下濃縮。使用二氯甲烷萃取殘餘物三次。乾燥合併之有機相，並在減壓下濃縮。藉由矽膠管柱層析利用50：1二氯甲烷/甲醇溶離而純化殘餘物，得到117c(2.0 g,75%)。MS-ESI：[M+H]+ 391.2。
實例117d 乙酸(S)-(2-(6-第三丁基-8-氟-1-側氧基呔-2(1H)-基)-4-(1-甲基-5-(5-(2-甲基-4-(氧雜環丁-3-基)哌-1-基)吡啶-2-基胺基)-6-側氧基-1,6-二氫噠-3-基)吡啶-3-基)甲酯117d
將117c(200 mg,0.50 mmol)、3-(乙醯氧基甲基)-2-(6-第三丁基-8-氟-1-側氧基呔-2(1H)-基)吡啶-4-基-酸116c (300 mg,0.75 mmol)、Pd(dppf)Cl2(25 mg,0.025 mmol)、K3PO4(220 mg,1.0 mmol)、三水合乙酸鈉(150 mg,1.0 mmol)以及乙腈/水(20/1 mL)加入配備有回流冷凝器之圓底燒瓶中。在抽真空/氬氣沖洗之三次循環後，混合物在100℃下加熱2 h。接著將其冷卻至室溫並過濾。在減壓下蒸發濾液，並藉由矽膠管柱層析利用25：1二氯甲烷/甲醇溶離而純化殘餘物，得到呈黃色固體之117d(110 mg,42%)。MS-ESI：[M+H]+ 724.4。
實例117 6-第三丁基-8-氟-2-[3-(羥甲基)-4-[1-甲基-5-[[5-[(2S)-2-甲基-4-(氧雜環丁-3-基)哌-1-基]-2-吡啶基]胺基]-6-側氧基-噠-3-基]-2-吡啶基]呔-1-酮117
117d(110 mg,0.15 mmol)與氫氧化鋰(65 mg,1.5 mmol)含於THF/i-丙醇(5/3 mL)與水(2 mL)之混合物在30℃下攪拌1 h。在減壓下蒸發混合物，並使用乙酸乙酯(2×20 mL)萃取殘餘物。在減壓下濃縮合併的乙酸乙酯萃取物，並藉由逆相製備型HPLC純化殘餘物，得到呈黃色固體之117(100 mg,95%)。MS-ESI：[M+H]+ 682.4。1H NMR(500 MHz,CDCl3)δ 8.73(d,J=5.0 Hz,1H),8.60(s,1H),8.33(d,J=2.5 Hz,1H),8.24(s,1H),8.07(s,1H),7.65(d,J=5.0 Hz,1H),7.56-7.51(m,2H),7.34(s,1H),6.96(d,J=9.0 Hz,1H),4.73-4.55(m,5H),3.92(m,4H),3.73-3.74(m,1H),3.55-3.53(m,1H),3.16-3.15(m,2H),2.64-2.39(m,4H),1.44(s,9H),1.09-1.07(m,3H)。
實例118a 5-溴-1-甲基-3-(5-甲基-1H-吡唑-3-基胺基) 吡啶-2(1H)-酮118a
將1,4-二噁烷(15 mL)、5-甲基-1H-吡唑-3-胺(1 g,10 mmol)(1)、3,5-二溴-1-甲基吡啶-2(1H)-酮(4 g,15 mmol)(2)以及碳酸銫(6.4 g,20 mmol)加入配備有磁攪拌器以及回流冷凝器之100-mL單頸圓底燒瓶中。添加XantPhos(400 mg,0.8 mmol)以及Pd2(dba)3(700 mg,0.8 mmol)，且反應混合物在100℃下加熱5 h。此後，將反應冷卻至室溫，並過濾。在減壓下濃縮濾液，並在急驟管柱上利用二氯甲烷：甲醇(20：1)溶離而純化殘餘物，得到118a(1.0 g,35%)。MS：[M+H]+ 283。
實例118b 5-溴-3-(1-乙基-5-甲基-1H-吡唑-3-基胺基)-1-甲基吡啶-2(1H)-酮118b
將118a(800 mg,2.83 mmol)、溴乙烷(216 mg,1.98 mmol)、K2CO3(780 mg,5.66 mmol)以及DMF(20 mL)加入100-mL圓底燒瓶中。混合物在85℃下加熱隔夜。然後將其過濾，並在真空蒸發濾液。藉由矽膠管柱層析利用1：20甲醇/二氯甲烷溶離而純化殘餘物，得到呈紅色固體之118b(298 mg,37%)。MS-ESI：[M+H]+ 311.0。1H NMR(500 MHz,DMSO-d 6 )δ 8.28(s,1H),7.99(d,J=2.5 Hz,1H),7.35(d,J=2.5 Hz,1H),5.85(s,1H),3.98-3.94(m,2H), 3.48(s,3H),2.19(s,3H),1.27(t,J=7.0 Hz,3H)。
實例118c 乙酸(2-(6-第三丁基-8-氟-1-側氧基呔-2(1H)-基)-4-(5-(1-乙基-5-甲基-1H-吡唑-3-基胺基)-1-甲基-6-側氧基-1,6-二氫吡啶-3-基)吡啶-3-基)甲酯118c
將118b(103 mg,0.33 mmol)、3-(乙醯氧基甲基)-2-(6-第三丁基-8-氟-1-側氧基呔-2(1H)-基)吡啶-4-基酸116c(136 mg,0.33 mmol)、PdCl2(dppf)(27 mg,0.033 mmol)、K3PO4(171 mg,0.66 mmol)、乙酸鈉(54 mg,0.66 mmol)、乙腈(10 mL)以及水(0.5 mL)加入配備有回流冷凝器之50-mL圓底燒瓶中。在抽真空/氬氣沖洗之三次循環後，混合物在100℃下加熱3 h。然後將其過濾，並在真空中蒸發濾液。藉由矽膠管柱層析利用1：20甲醇/二氯甲烷溶離而純化殘餘物，得到呈黃色固體之118c(80 mg,41%)。MS-ESI：[M+H]+ 600.2。
實例118 6-第三丁基-2-[4-[5-[(1-乙基-5-甲基-吡唑-3-基)胺基]-1-甲基-6-側氧基-3-吡啶基]-3-(羥甲基)-2-吡啶基]-8-氟基-呔-1-酮118
118c(80 mg,0.13 mmol)、氫氧化鋰(13 mg,0.53 mmol)、THF(6 mL)、i-丙醇(4 mL)與(2 mL)之混合物在室溫下攪拌0.5 h。在減壓下濃縮混合物，並使用水(5 mL)稀釋。然後使用二氯甲烷(2×10 mL)萃取。在減壓下濃縮經合併的二氯甲烷萃取物，並藉由逆相製備型HPLC純化殘餘物，得到呈白色固體之118(20 mg,26%)。MS-ESI：[M+H]+ 558.3。1H NMR(500 MHz,DMSO-d 6 )δ 8.56(d, J=5.0 Hz,1H),8.53(d,J=2.5 Hz,1H),8.10(s,1H),8.05(d,J=2.5 Hz,1H),7.90(d,J=2.0 Hz,1H),7.79-7.76(m,1H),7.50(d,J=5.0 Hz,1H),7.40(d,J=2.5 Hz,1H),5.88(s,1H),4.92(t,J=5.0 Hz 1H),4.46-4.45(m,2H),3.91(q,J=7.5 Hz,2H),3.59(s,3H),2.19(s,3H),1.40(s,9H),1.27(t,J=7.0 Hz,3H)。
實例119a 5-溴-3-(1,5-二甲基-1H-吡唑-3-基胺基)-1-甲基吡啶-2(1H)-酮119a
使用NaH含於礦物油(0.51 g,13 mmol)之60%分散液處理5-溴-1-甲基-3-(5-甲基-1H-吡唑-3-基胺基)吡啶-2(1H)-酮118a(2.8 g,9.9 mmol)含於無水DMF(10 mL)之溶液，同時在氮氣下攪拌。所得起氣消失後，反應額外攪拌30分鐘。此時，使用碘甲烷(0.98 g,7.0 mmol)處理反應，同時在氮氣下持續攪拌2小時。緩慢添加水(50 mL)，並過濾混合物。使用乙酸乙酯(3×30 mL)萃取濾液。在減壓下濃縮合併之萃取物，並藉由急驟管柱層析利用3：1石油醚/乙酸乙酯溶離而純化殘餘物，得到119a(0.70 g,24%)。MS：[M+H]+ 297。
實例119b 乙酸(2-(6-第三丁基-8-氟-1-側氧基呔- 2(1H)-基)-4-(5-(1,5-二甲基-1H-吡唑-3-基胺基)-1-甲基-6-側氧基-1,6-二氫吡啶-3-基)吡啶-3-基)甲酯119b
將119a(180 mg,0.50 mmol)、3-(乙醯氧基甲基)-2-(6-第三丁基-8-氟-1-側氧基呔-2(1H)-基)吡啶-4-基酸116c(207 mg,0.50 mmol)、Pd(dppf)Cl2(41 mg,0.050 mmol)、K3PO4(212 mg,1.0 mmol)、乙酸鈉(82 mg,1.0 mmol)、水(0.5 mL)以及乙腈(10 mL)加入配備有回流冷凝器之50-mL圓底燒瓶中。在抽真空/氬氣沖洗之三次循環後，混合物回流加熱2 h。接著將其冷卻至室溫並過濾。在減壓下濃縮濾液，並藉由矽膠管柱層析利用30：1二氯甲烷/甲醇溶離而純化所得殘餘物，得到呈白色固體之119b(175 mg,60%)。MS-ESI：[M+H]+ 586.4。
實例119 6-第三丁基-2-[4-[5-[(1,5-二甲基吡唑-3-基)胺基]-1-甲基-6-側氧基-3-吡啶基]-3-(羥甲基)-2-吡啶基]-8-氟基-呔-1-酮119
119b(150 mg,0.26 mmol)與氫氧化鋰(61.4 mg,2.6 mmol)含於i-丙醇/THF(1：1,4 mL)與水(1 mL)之混合物在30℃下攪拌1 h。在真空中蒸發混合物，並使用水(5 mL)稀釋殘餘物。然後使用乙酸乙酯(2×10 mL)萃取。在減壓下濃縮合併的乙酸乙酯萃取物，並藉由逆相製備型HPLC純化殘餘物，得到呈白色固體之119(75.0 mg,54%)。MS-ESI：[M+H]+ 544.3。1H NMR(500 MHz,CDCl3)δ 8.66(d,J=5.0 Hz,1H),8.35(d,J=2.0 Hz,1H),7.97(d,J=2.0 Hz,1H),7.59-7.53(m,4H),7.37(s,1H),5.74(s,1H),4.51(s, 2H),4.07(s,1H),3.72(s,3H),3.70(s,3H),2.25(s,3H),1.46(s,9H)。
實例120a 5-溴-1-甲基-3-(5-甲基噻唑-2-基胺基)吡啶-2(1H)-酮120a
將1,4-二噁烷(50 mL)、5-甲基噻唑-2-胺(2.28 g,20.0 mmol)、3,5-二溴-1-甲基吡啶-2(1H)-酮(5.34 g,20.0 mmol)、碳酸銫(13.0 g,40.0 mmol)、xantphos(1.16 g,2.0 mmol)以及叁(二亞苄基丙酮)二鈀(0)(916 mg,1.0 mmol)加入配備有磁攪拌器以及回流冷凝器之100-mL單頸圓底燒瓶中。使系統經歷抽真空/氬氣沖洗之三次循環，並在回流下加熱5 h。接著將其冷卻至室溫並過濾。使用二氯甲烷(3×50 mL)清洗固體。在減壓下濃縮合併之濾液，並使用乙腈(30 mL)清洗殘餘物，得到呈黃色固體之120a(5 g,粗物質，83%)。MS-ESI：[M+H]+ 300.1。
實例120b 1-甲基-3-(5-甲基噻唑-2-基胺基)-5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧雜硼雜環戊-2-基)吡啶-2(1H)-酮120b
將120a。(5.0 g,16.6 mmol)、Pin2B2(21.1 g,83.0 mmol)、叁(二亞苄基丙酮)二鈀(0)(760 mg,0.83 mmol)、x-phos(810 mg,1.7 mmol)、乙酸鉀(4.9 g,50 mmol)以及1,4-二噁烷(80 mL)加入配備有磁攪拌器以及回流冷凝器之250- mL圓底燒瓶中。使反應混合物經歷抽真空/氬氣沖洗之三次循環，並在65℃下加熱3 h。接著將其冷卻至室溫並過濾。在減壓下濃縮濾液，並使用石油醚清洗所得殘餘物，得到呈棕色固體之120b(20.0 g,粗物質)，其未進一步純化而用於下一步驟。MS-ESI：[M+H]+ 348.2。
實例120c 2-(6-第三丁基-8-氟-1-側氧基呔-2(1H)-基)-4-(1-甲基-5-(5-甲基噻唑-2-基胺基)-6-側氧基-1,6-二氫吡啶-3-基)菸鹼醛120c
將120b(174 mg,0.50 mmol)、2-(6-第三丁基-8-氟-1-側氧基呔-2(1H)-基)-4-氯菸鹼醛103b(180 mg,0.50 mmol)、K3PO4(212 mg,1.0 mmol)、乙酸鈉(82 mg,1.0 mmol)、1,1'-雙(二苯基膦基)二茂鐵二氯鈀(II)(18 mg,0.025 mmol)、乙腈(8 mL)以及水(0.5 mL)加入配備有磁攪拌器以及回流冷凝器之25-mL單頸圓底燒瓶中。使反應混合物經歷抽真空/氬氣沖洗之三次循環，並在100℃下加熱1 h。藉由LCMS分析反應混合物顯示完全轉化為所需產物。將反應混合物冷卻至室溫並過濾。在減壓下濃縮濾液。使用二氯甲烷(50 mL)與水(30 mL)稀釋殘餘物。使用二氯甲烷(2×30 mL)萃取水層。在Na2SO4上乾燥合併之有機萃取物，過濾，並在減壓下濃縮。藉由矽膠管柱層析利用二氯甲烷/甲醇(80：1至30：1)溶離而純化深色殘餘物，得到呈黃色固體之120c(150 mg,55%)。MS-ESI：[M+H]+ 545.3。
實例120 6-第三丁基-8-氟-2-[3-(羥甲基)-4-[1-甲基-5-[(5-甲基噻唑-2-基)胺基]-6-側氧基-3-吡啶基]-2-吡啶基]呔 -1-酮120
在室溫下於120c(98 mg,0.18 mmol)含於甲醇/二氯甲烷(3/3 mL)之溶液中添加NaBH4(21 mg,0.55 mmol)。反應攪拌1 h後，LCMS顯示反應完成。使用水(5 mL)使混合物驟冷，並在減壓下濃縮。使用二氯甲烷(3×15 mL)萃取殘餘物。使用鹽水(20 mL)清洗合併之有機層，在Na2SO4上乾燥，過濾，並在減壓下濃縮。藉由逆相製備型HPLC純化殘餘物，得到呈白色固體之120(30 mg,31%)。MS-ESI：[M+H]+ 546.7。1H NMR(500 MHz,DMSO-d 6)δ 9.92(s,1H),8.58(d,J=5.5 Hz,1H),8.56(d,J=2.5 Hz,1H),8.54(d,J=2.0 Hz,1H),7.91(d,J=2.0 Hz,1H),7.78(d,J=13.0 Hz,1H),7.56(d,J=2.0 Hz,1H),7.51(d,J=5.0 Hz,1H),6.96(d,J=1.0 Hz,1H),4.91(bs,1H),4.42-4.41(m,2H),3.60(s,3H),2.28(d,J=1.0 Hz,3H),1.40(s,9H)。
實例121a 乙酸(2-(6-第三丁基-8-氟-1-側氧基呔-2(1H)-基)-4-(1-甲基-5-(5-甲基-1H-吡唑-3-基胺基)-6-側氧基-1,6-二氫吡啶-3-基)吡啶-3-基)甲酯121a
將5-溴-1-甲基-3-(5-甲基-1H-吡唑-3-基胺基)吡啶-2(1H)-酮118a(142 mg,0.50 mmol)、3-(乙醯氧基甲基)-2-(6-第三 丁基-8-氟-1-側氧基呔-2(1H)-基)吡啶-4-基酸116c(310 mg,0.75 mmol)、Pd(dppf)Cl2(18 mg,0.025 mmol)、K3PO4(212 mg,1.0 mmol)、乙酸鈉(82 mg,1.0 mmol)、乙腈(10 mL)以及水(0.2 mL)加入配備有回流冷凝器之50-mL圓底燒瓶中。在抽真空/氬氣沖洗之三次循環後，混合物在100℃下加熱2 h。接著經過濾，並在減壓下蒸發濾液。藉由矽膠管柱層析利用25：1二氯甲烷/甲醇溶離而純化殘餘物，得到呈棕色固體之121a(100 mg,35%)。MS-ESI：[M+H]+ 572.3。
實例121 6-第三丁基-8-氟-2-[3-(羥甲基)-4-[1-甲基-5-[(5-甲基-1H-吡唑-3-基)胺基]-6-側氧基-3-吡啶基]-2-吡啶基]呔-1-酮121
121a(86 mg,0.15 mmol)與氫氧化鋰(36 mg,1.5 mmol)含於THF/i-丙醇(5：3,8 mL)與水(2 mL)之混合物在30℃下攪拌1 h。在減壓下蒸發混合物，並使用水(5 mL)稀釋殘餘物。然後使用乙酸乙酯(2×10 mL)萃取。在減壓下濃縮合併的乙酸乙酯提取物，並藉由逆相製備型HPLC純化殘餘物，得到呈白色固體之121(24 mg,30%)。MS-ESI：[M+H]+ 530.3。1H NMR(500 MHz,CDCl3)δ 8.65(d,J=5.0 Hz,1H),8.35(d,J=2.0 Hz,1H),8.04(d,J=2.5 Hz,1H),7.58-7.53(m,4H),7.44(s,1H),5.78(s,1H),4.51-4.49(m,2H),3.73(s,3H),2.03(s,3H),1.45(s,9H)。
實例122a 5-溴-3-(5-乙基-1H-吡唑-3-基胺基)-1-甲基吡啶-2(1H)-酮122a
將1,4-二噁烷(80 mL)、5-乙基-1H-吡唑-3-胺(3.33 g,30.0 mmol)、3,5-二溴-1-甲基吡啶-2(1H)-酮(9.6 g,36 mmol)以及碳酸銫(19.5 g,60 mmol)加入配備有磁攪拌器以及回流冷凝器之100-mL單頸圓底燒瓶中。於懸浮液鼓入氮氣10分鐘後，添加Xantphos(1.73 mg,3.0 mmol)與叁(二亞苄基丙酮)二鈀(0)(1.36 mg,1.5 mmol)。使系統經歷抽真空/氬氣沖洗之三次循環，並在回流下加熱2 h。然後立即將其過濾。使用二噁烷(3×30 mL)清洗固體，並在減壓下濃縮合併之濾液。藉由矽膠管柱層析利用石油醚/乙酸乙酯(2：1至1：2)溶離而純化殘餘物，得到呈紅色固體之122a(3.8 g,43%)。MS-ESI：[M+H]+ 297.0。
實例122b 5-溴-3-(5-乙基-1-甲基-1H-吡唑-3-基胺基)-1-甲基吡啶-2(1H)-酮122b
在0℃下，於122a(598 mg,2.0 mmol)含於DMF(10 mL)之混合物中添加NaH(64 mg,1.6 mmol)，並攪拌混合物0.5 h。在0℃下，於混合物中逐滴添加含於DMF之碘甲烷(227 mg,1.6 mmol)。攪拌混合物0.5 h，並使用水(20 mL)驟冷。然後使用二氯甲烷(3×30 mL)萃取。在減壓下濃縮合併提取物，並藉由矽膠管柱層析利用石油醚/乙酸乙酯(5：1至2：1)溶離而純化殘餘物，得到呈淡黃色固體之122b(360 mg,58%)。MS-ESI：[M+H]+ 311.1。
實例122c 乙酸(2-(6-第三丁基-8-氟-1-側氧基呔-2(1H)-基)-4-(5-(5-乙基-1-甲基-1H-吡唑-3-基胺基)-1-甲基-6-側氧基-1,6-二氫吡啶-3-基)吡啶-3-基)甲酯122c
將122b(310 mg,1.0 mmol)、3-(乙醯氧基甲基)-2-(6-第三丁基-8-氟-1-側氧基呔-2(1H)-基)吡啶-4-基酸116c(1.24 g,3.0 mmol)、K3PO4(424 mg,2.0 mmol)、乙酸鈉(164 mg,2.0 mmol)、1,1'-雙(二苯基膦基)二茂鐵二氯鈀(II)(73 mg,0.10 mmol)、乙腈(10 mL)以及水(0.5 mL)加入配備有回流冷凝器之50-mL圓底燒瓶中。使系統經受抽真空/氮氣沖洗之三次循環，並在N2保護下，在100℃下加熱2.5 h。將反應混合物冷卻至室溫，並在減壓下濃縮。使用二氯甲烷(50 mL)與水(50 mL)稀釋殘餘物。分離水層，並使用二氯甲烷(3×20 mL)萃取。在Na2SO4上乾燥合併之有機層，過濾，並在減壓下濃縮。藉由矽膠管柱層析利用60：1二氯甲烷/甲醇溶離而純化深色殘餘物，得到呈黃色油體之122c(150 mg,25%)。MS-ESI：[M+H]+ 600.0。
實例122 6-第三丁基-2-[4-[5-[(5-乙基-1-甲基-吡唑-3-基)胺基]-1-甲基-6-側氧基-3-吡啶基]-3-(羥甲基)-2-吡啶基]-8-氟基-呔-1-酮122
在35℃下，於122c(150 mg,0.25 mmol)含於THF/i-丙醇/水(2.5/1/0.5 mL)之溶液中添加氫氧化鋰(70 mg,2.5 mmol)。反應攪拌3 h後，LCMS顯示反應完成。將混合物傾倒於水(15 mL)中，並使用二氯甲烷(3×20 mL)萃取。使 用鹽水(30 mL)清洗合併之有機層，在Na2SO4上乾燥，過濾，並在減壓下濃縮。藉由逆相製備型HPLC純化殘餘固體，得到呈白色固體之122(49 mg,35%)。MS-ESI：[M+H]+ 557.8。1H NMR(500 MHz,CDCl3)δ 8.59(d,J=5.0 Hz,1H),8.51(d,J=2.5 Hz,1H),7.92(d,J=2.0 Hz,1H),7.88(d,J=1.5 Hz,1H),7.73(m,1H),7.64(d,J=5.0 Hz,1H),7.41(d,J=1.5 Hz,1H),5.92(s,1H),4.59(s,2H),3.72(s,3H),3.68(s,3H),2.64(m,2H),1.47(s,9H),1.27(t,J=2.5,3H)。
實例123a 1-乙基-4-硝基-1H-吡唑123a
將NaH(60%於油中)(1.94 g,48.6 mmol)添加至4-硝基-1H-吡唑(5.0 g,44.2 mmol)含於無水DMF(100 mL)之溶液中，同時在-25℃氮氣下攪拌。攪拌該混合物30分鐘，接著添加溴乙烷(5.30 g,48.6 mmol)。繼續在-25℃氮氣下攪拌該混合物6小時。使用乙酸乙酯(100 mL)稀釋該溶液，使用水(2×50 mL)以及鹽溶液(50 mL)清洗，在硫酸鎂上乾燥，並過濾。在減壓下濃縮濾液，得到粗物質123a(5.0 g,80%)，其未進一步純化而用於下一步驟。MS-ESI：[M+H]+ 142.0。
實例123b 1-乙基-1H-吡唑-4-胺123b
使用氫氣沖洗100-mL單頸圓底燒瓶，並加入123a(4.5 g,31.9 mmol)、10%碳載鈀(10%濕品，2.0 g)以及甲醇(50 mL)。在室溫下攪拌混合物6 h。藉由通過CELITE®墊過濾而移除觸媒，並在減壓下濃縮濾液，得到123b(3.3 g,93%)。MS-ESI：[M+H]+ 112.0。
實例123c 5-溴-3-(1-乙基-1H-吡唑-4-基胺基)-1-甲基吡-2(1H)-酮123c
將123b(500 mg,4.5 mmol)、3,5-二溴-1-甲基吡-2(1H)-酮(2.40 g,9.0 mmol),DIP乙酸乙酯(3 mL)以及異丙醇(50 mL)加入配備有磁攪拌器以及回流冷凝器之100-mL單頸圓底燒瓶中。混合物在100℃下加熱2 h。接著將其冷卻至室溫並過濾。在減壓下濃縮濾液，得到呈白色固體之123c(802 mg,60%)。MS-ESI：[M+H]+ 298.0。
實例123d 乙酸(2-(6-第三丁基-8-氟-1-側氧基呔-2(1H)-基)-4-(6-(1-乙基-1H-吡唑-4-基胺基)-4-甲基-5-側氧基-4,5-二氫吡-2-基)吡啶-3-基)甲酯123d
將123c(151 mg,0.51 mmol)、3-(乙醯氧基甲基)-2-(6-第三丁基-8-氟-1-側氧基呔-2(1H)-基)吡啶-4-基酸116c(206 mg,0.50 mmol)、PdCl2(dppf)(22 mg,0.030 mmol)、K3PO4(216 mg,1.02 mmol)、乙酸鈉(84 mg,1.02 mmol)、乙腈(10 mL)以及水(0.5 mL)加入配備有磁攪拌器以及回流冷凝器之50-mL圓底燒瓶中。在抽真空/氬氣沖洗之三次循環後，混合物在100℃下加熱3 h。接著經過濾，並在減壓下蒸發濾液。藉由矽膠管柱層析利用1：3石油醚/乙酸乙酯 溶離而純化殘餘物，得到呈黃色固體之123d(158 mg,53%)。MS-ESI：[M+H]+ 587.2。
實例123 6-第三丁基-2-[4-[6-[(1-乙基吡唑-4-基)胺基]-4-甲基-5-側氧基-吡-2-基]-3-(羥甲基)-2-吡啶基]-8-氟基-呔-1-酮123
123d(152 mg,0.26 mmol)與氫氧化鋰(61 mg,2.56 mmol)含於i-丙醇/THF(1：1,10 mL)與水(3 mL)之混合物在室溫下攪拌1 h。在減壓下蒸發混合物，並使用乙酸乙酯萃取(2×10 mL)殘餘物。在減壓下濃縮合併的乙酸乙酯萃取物，並藉由逆相製備型HPLC純化殘餘物，得到呈黃色固體之123(55 mg,39%)。MS-ESI：[M+H]+ 545.2。1H NMR(500 MHz,DMSO-d 6)δ 9.72(s,1H),8.58(d,J=5.0 Hz,1H),8.54(d,J=2.5 Hz,1H),8.18(s,1H),7.90(d,J=2.0 Hz,1H),7.80-7.75(m,1H),7.74(s,1H),7.71(d,J=5.0 Hz,1H),7.51(s,1H),4.90(t,J=5.0 Hz,1H),4.61-4.53(m,2H),4.09(q,J=7.5 Hz,2H),3.54(s,3H),1.41(s,9H),1.35(t,J=6.0 Hz,3H)。
實例124a (3-硝基-1H-吡唑-5-基)甲醇124a
使用氮氣沖洗配備有機械攪拌器、加料漏斗與氮氣進氣口之3-L三頸圓底燒瓶，並加入3-硝基吡唑-5-羧酸(28.0 g,178 mmol)與THF(420 mL)，並利用冰/丙酮浴冷卻至-5℃。以使內部溫度維持在低於5℃之速率添加硼烷-THF錯合物溶液(1.0 M,535 mL,535 mmol)。完成添加後，移除冷卻浴，並在室溫下攪拌反應18 h。此後，利用冰/丙酮浴將反 應冷卻至-5℃，添加水(70 mL)與4N鹽酸(70 mL)，且反應在回流下攪拌1 h，以破壞硼烷與吡唑之錯合物。將反應冷卻至室溫，並在減壓下濃縮至約30 mL之體積。添加乙酸乙酯(175 mL)，並攪拌混合物15分鐘。分離水層，並使用乙酸乙酯(4×200 mL)萃取。使用飽和碳酸氫鈉水溶液(2×50 mL)、鹽水(50 mL)清洗合併之有機層，並在硫酸鈉上乾燥，藉由過濾移除乾燥劑，並在減壓下濃縮濾液，得到呈淺黃色固體之124a，產率為94%(24.0 g)：1H NMR(300 MHz,DMSO-d 6)δ 13.90(br s,1H),6.87(s,1H),5.58(t,1H,J=5.4 Hz),4.53(d,2H,J=5.1 Hz)；MS(ESI+)m/z 144.0(M+H)。
實例124b (1-(2-溴乙基)-3-硝基-1H-吡唑-5-基)甲醇124b
使用氮氣沖洗配備有機械攪拌器與調溫器之1-L三頸圓底燒瓶，並加入124a(25.0 g,175 mmol)、DMF(250 mL)以及碳酸銫(70.0 g,215 mmol)，並在104℃下加熱5分鐘。然後利用冰/丙酮浴將反應混合物冷卻至0℃，並逐份添加二溴乙烷(329 g,1.75 mol)(無放熱)。混合物在0℃下攪拌1 h，接著在室溫下攪拌4 h。此後，緩慢添加KH2PO4(40 g)含於水(400 mL)之溶液。反應混合物在室溫下攪拌30分鐘。添加乙酸乙酯(450 mL)，並分離水層，並使用乙酸乙酯萃取(2×100 mL)。使用水(200 mL)、鹽水(200 mL)清洗合併之有機層，在硫酸鈉上乾燥，並藉由過濾移除乾燥劑。在減壓下濃縮濾液，得到呈橙色油之粗物質124b，產 率為86%(37.5 g)：1H NMR(300 MHz,CDCl3)δ 6.85(s,1H),4.82(d,2H,J=5.4 Hz),4.66(t,2H,J=6.3 Hz),3.83(t,2H,J=6.3 Hz)；MS(ESI+)m/z 249.9(M+H)。
實例124c 1-(2-溴乙基)-5-(溴甲基)-3-硝基-1H-吡唑124c
使用氮氣沖洗配備有磁攪拌器、氮氣進氣口與回流冷凝器之500-mL三頸圓底燒瓶，並加入124b(37.0 g,148 mmol)以及氯仿(160 mL)。利用冰/丙酮浴將反應冷卻至-5℃，並逐份添加三溴化磷(40.0 g,148 mmol)。移除冷卻浴，且反應在回流下攪拌2 h。此後，將反應冷卻至-5℃，並添加飽和碳酸氫鈉水溶液(250 mL)直至pH達8.5。使用乙酸乙酯(3×150 mL)萃取混合物，並使用飽和碳酸鈉水溶液(2×50 mL)、鹽水(75 mL)清洗合併之有機層，在硫酸鈉上乾燥，並藉由過濾移除乾燥劑。在減壓下濃縮濾液，得到黃色殘餘物，其在溫和加熱下溶解於二氯甲烷(60 mL)中。添加己烷(約20 mL)且溶液變得混濁。加熱混合物，直至形成固體沈澱物，添加二氯甲烷(9 mL)且溶液變透明。使溶液冷卻至室溫，並在4 h後，藉由真空過濾收集所得結晶。使用冰冷的二氯甲烷：己烷之1：2混合物(2×20 mL)清洗濾餅，得到1-(2-溴乙基)-5-(溴甲基)-3-硝基-1H-吡唑(19.7 g)。蒸發合併濾液，並再次進行該步驟，得到額外9.70 g之1-(2-溴乙基)-5-(溴-甲基)-3-硝基-1H-吡唑。合併固體，並在高真空下乾燥18 h，得到呈白色結晶之124c，產率為57%(26.0 g)：mp 95-97℃；1H NMR(300 MHz,CDCl3)δ 6.93(s,1H),4.63(t,2H,J=6.0 Hz),4.54(s,2H),3.86(t,2H,J=6.0 Hz)。
實例124d 2-硝基-4,5,6,7-四氫吡唑并[1,5-a]吡 124d
將含於THF(35 mL)之124c(3.0 g,9.64 mmol)與氨水溶液(135 mL,25-28%)加入配備有磁攪拌器之250-mL單頸圓底燒瓶中。在氮氣下，在室溫下攪拌混合物72 h。然後在減壓下濃縮反應混合物，將所得殘餘物分配在乙酸乙酯(100 mL)與水(100 mL)之間。使用乙酸乙酯(2×50 mL)萃取水層。使用10%碳酸鉀(2×100 mL)、鹽水(200 mL)清洗合併之有機層，並在硫酸鈉上乾燥。藉由過濾移除乾燥劑，並在減壓下濃縮濾液，得到呈黃色固體之124d(1.23 g,76%)。MS：[M+H]+ 169。
實例124e 1-(2-硝基-6,7-二氫吡唑并[1,5-a]吡-5(4H)-基)乙酮124e
於124d(672 mg,4.0 mmol)含於二氯甲烷(20 mL)之溶液中添加乙醯氯(936 mg,12.0 mmol)以及K2CO3(1104 mg,8.0 mmol)。混合物攪拌隔夜。然後將其過濾，並在減壓下濃縮濾液。藉由矽膠管柱層析利用100：1二氯甲烷/甲醇溶離而純化所得殘餘物，得到呈白色固體之124e(500 mg,60%)。MS：[M+H]+ 211.2。
實例124f 1-(2-胺基-6,7-二氫吡唑并[1,5-a]吡-5(4H)-基)乙酮124f
使用氮氣沖洗50-mL單頸圓底燒瓶，並加入124e(492 mg,2.34 mmol)、10%碳載鈀(50%濕品，234 mg)以及甲醇 (20 mL)。將混合物抽真空，充入氫氣，並在室溫下攪拌2 h。然後抽出氫氣，並將氮氣充入燒瓶中。藉由通過CELITE®墊過濾而移除觸媒，並在減壓下濃縮濾液，得到124f(380 mg,80%)。MS：[M+H]+ 181.1。
實例124g 3-(5-乙醯基-4,5,6,7-四氫吡唑并[1,5-a]吡-2-基胺基)-5-溴-1-甲基吡啶-2(1H)-酮124g
將124f(270 mg,1.5 mmol)、1,4-二噁烷(20 mL)、Pd2(dba)3(137 mg,0.15 mmol)、XantPhos(173 mg,0.30 mmol)以及碳酸銫(978 mg,3.0 mmol)加入配備有磁攪拌器以及回流冷凝器之50-mL單頸圓底燒瓶中。在抽真空/氬氣沖洗之三次循環後，混合物在100℃下加熱6 h。此後，將反應冷卻至室溫。然後將其過濾，並在真空蒸發濾液。藉由矽膠管柱層析利用50：1二氯甲烷/甲醇溶離而純化殘餘物，得到呈黃色固體之124g(540 mg,89%)。MS：[M+H]+ 368.0。
實例124h 3-(5-乙醯基-4,5,6,7-四氫吡唑并[1,5-a]吡-2-基胺基)-1-甲基-5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧雜硼雜環戊-2-基)吡啶-2(1H)-酮124h
將124g(365 mg,1.0 mmol)、Pin2B2(1.26 g,5.0 mmol)、Pd2(dba)3(91 mg,0.10 mmol)、X-phos(92 mg,0.20 mmol)、乙酸鉀(294 mg,3.0 mmol)以及二噁烷(10 mL)加入配備有磁攪拌器以及回流冷凝器之50-mL單頸圓底燒瓶中。在抽真空/氬氣沖洗之三次循環後，混合物在60℃下加熱16 h。接著將其冷卻至室溫並過濾。在減壓下 濃縮濾液，並藉由矽膠管柱層析利用50：1二氯甲烷/甲醇溶離而純化殘餘物，得到呈棕色固體之124h(330 mg,80%)。MS：[M+H]+ 414.2。
實例124i 4-(5-(5-乙醯基-4,5,6,7-四氫吡唑并[1,5-a]吡-2-基胺基)-1-甲基-6-側氧基-1,6-二氫吡啶-3-基)-2-(6-第三丁基-8-氟-1-側氧基呔-2(1H)-基)菸鹼醛124i
按照實例123d所述程序，並以2-(6-第三丁基-8-氟-1-側氧基呔-2(1H)-基)-4-氯菸鹼醛103b(200 mg,0.57 mmol)與124h(343 mg,0.83 mmol)起始，得到呈黃色固體之124i(300 mg,86%)。MS-ESI：[M+H]+ 611.3。
實例124 2-[4-[5-[(5-乙醯基-6,7-二氫-4H-吡唑并[1,5-a]吡-2-基)胺基]-1-甲基-6-側氧基-3-吡啶基]-3-(羥甲基)-2-吡啶基]-6-第三丁基-8-氟基-呔-1-酮124
按照實例120之程序，並以124i(200 mg,0.33 mmol)起始，得到呈白色固體之124(54 mg,27%)。MS-ESI：[M+H]+ 613.3。1H NMR(500 MHz,DMSO-d 6,T=80℃)δ 8.53(d,J=8.0 Hz,1H),8.47(d,J=5.0 Hz,1H),7.94-7.92(m,2H),7.84(d,J=2.0 Hz,1H),7.67(dd,J=2.5,22.0 Hz,1H),7.46(d,J=8.5 Hz,1H),7.34(d,J=4.0 Hz,1H),5.98 (s,1H),4.63-4.57(m,3H),4.44(d,J=8.0 Hz,2H),3.98(bs,2H),3.89-3.86(m,2H),3.58(s,3H),2.08(s,3H),1.41(s,9H)。
實例125a 5-溴-1-甲基-3-(5-甲基噁唑-2-基胺基)吡啶-2(1H)-酮125a
將5-甲基噁唑-2-胺(276 mg,2.82 mmol)、3,5-二溴-1-甲基吡啶-2(1H)-酮(753 mg,2.82 mmol)、叁(二亞苄基丙酮)二鈀(0)(256 mg,0.28 mmol)、XantPhos(324 mg,0.56 mmol)、Cs2CO3(1.8 g,5.64 mmol)以及1,4-二噁烷(30 mL)加入配備有磁攪拌器以及回流冷凝器之100-mL單頸圓底燒瓶中。在抽真空/氬氣沖洗之三次循環後，混合物在92℃下加熱3小時。接著將其冷卻至室溫並過濾。在減壓下濃縮濾液，並藉由矽膠管柱層析利用100：1二氯甲烷/甲醇溶離而純化所得殘餘物，得到呈白色固體之125a(702 mg,88%)。MS-ESI：[M+H]+ 284.1。
實例125b 乙酸(2-(6-第三丁基-8-氟-1-側氧基呔-2(1H)-基)-4-(1-甲基-5-(5-甲基噁唑-2-基胺基)-6-側氧基-1,6-二氫吡啶-3-基)吡啶-3-基)甲酯125b
將125a(150 mg,0.53 mmol)、3-(乙醯氧基甲基)-2-(6-第三丁基-8-氟-1-側氧基呔-2(1H)-基)吡啶-4-基酸116c (438 mg,1.06 mmol)、Pd(dppf)Cl2(39 mg,0.053 mmol)、K3PO4(225 mg,1.06 mmol)、乙酸鈉(87 mg,1.06 mmol)、水(0.5 mL)以及乙腈(10 mL)加入配備有磁攪拌器以及回流冷凝器之50-mL單頸圓底燒瓶中。在抽真空/氬氣沖洗之三次循環後，混合物在90℃下加熱1 h。接著將其冷卻至室溫並過濾。在減壓下濃縮濾液，並藉由矽膠管柱層析利用二氯甲烷/甲醇(100：1至50：1)溶離而純化所得殘餘物，得到呈黃色固體之125b(120 mg,40%)。MS-ESI：[M+H]+ 573.3。
實例125 6-第三丁基-8-氟-2-[3-(羥甲基)-4-[1-甲基-5-[(5-甲基噁唑-2-基)胺基]-6-側氧基-3-吡啶基]-2-吡啶基]呔-1-酮125
125b(114 mg,0.20 mmol)與氫氧化鋰(120 mg,5.0 mmol)含於i-丙醇/THF/水(2：2：1,10 mL)之混合物在35℃下攪拌30分鐘。在減壓下濃縮混合物，並使用水(5 mL)稀釋殘餘物。利用二氯甲烷萃取所得混合物三次。然後在減壓下濃縮合併之有機層，並藉由逆相製備型HPLC純化所得殘餘物，得到125(52 mg,49%)。MS-ESI：[M+H]+ 530.9。1H NMR(500 MHz,DMSO-d 6)δ 9.25(s,1H),8.57(d,J=5.0 Hz,1H),8.53(d,J=3.0 Hz,1H),8.25(d,J=2.5 Hz,1H),7.90(d,J=1.0 Hz,1H),7.78(dd,J=1.0,13.0 Hz,1H),7.61(d,J=2.0 Hz,1H),7.50(d,J=5.0 Hz,1H),6.64(d,J=1.5 Hz,1H),4.92(bs,1H),4.40(d,J=7.0 Hz,2H),3.60(s,3H),2.22(s,3H),1.39(s,9H)。
實例126a 3-環丙基-3-側氧基丙腈126a
在-78℃下，在N2保護下，於乙腈(0.34 mL,6.58 mmol)含於THF(3 mL)之溶液逐滴添加二異丙基醯胺鋰(3.3 mL,2 M含於THF,6.58 mmol)。反應混合物在-78℃下攪拌3 h。接著添加含於THF(2 mL)之環丙烷甲酸乙酯(0.50 g,4.38 mmol)，並使混合物溫至室溫歷時1 h。添加水(2 mL)，並在減壓下移除溶劑。添加二氯甲烷(2 mL)，並利用2 N HCl將混合物之pH調節至5。然後使用二氯甲烷(5 mL×2)萃取。在Na2SO4上乾燥合併之有機層，並濃縮，得到呈黃色油體之126a，其未進一步純化而用於下一步驟。
實例126b 3-環丙基-1H-吡唑-5-胺126b
於126a(477 mg,4.38 mmol)含於甲醇(5 mL)之溶液中添加水合聯胺(5 mL,80%)。反應混合物在75℃下加熱15 h。在減壓下移除甲醇，並使用二氯甲烷(2×8 mL)萃取殘餘物。在Na2SO4上乾燥合併之萃取物，並濃縮。藉由急驟管柱層析利用100：1二氯甲烷/甲醇溶離而純化殘餘物，得到呈黃色油之126b(250 mg，以兩步驟計為46%)。MS：[M+H]+ 124。
實例126c 5-胺基-3-環丙基-1H-吡唑-1-羧酸第三丁基酯126c
於126b(0.25 g,2.0 mmol)與K2CO3(0.828 g,6.0 mmol)含於THF(5 mL)之混合物中添加含於THF(5 mL)之(Boc)2O(0.436g,2.0 mmol)。反應混合物在室溫下攪拌15 h。然後將其過濾，並在減壓下濃縮濾液。藉由急驟管柱 層析利用6：1石油醚/乙酸乙酯溶離並純化殘餘物，得到呈白色固體之126c(240 mg,54%)。MS：[M-Boc]+ 124。
實例126d 5-溴-3-(3-環丙基-1H-吡唑-5-基胺基)-1-甲基吡啶-2(1H)-酮126d
將1,4-二噁烷(15 mL)、126c(455 mg,1.95 mmol)、3,5-二溴-1-甲基吡啶-2(1H)-酮(0.40 g,1.5 mmol)以及碳酸銫(1.22 g,3.75 mmol)加入配備有磁攪拌器以及回流冷凝器之100-mL單頸圓底燒瓶中。於所得混合物中鼓入氮氣30分鐘後，添加XantPhos(87 mg,0.15 mmol)以及叁(二亞苄基丙酮)二鈀(0)(70 mg,0.075 mmol)。使反應混合物回流15 h。此後，將反應冷卻至室溫，並過濾。將濾液分配在乙酸乙酯(30 mL)與水(30 mL)之間。分離水層，並使用乙酸乙酯(2×50 mL)萃取。使用鹽水(50 mL)清洗合併之有機層，並在硫酸鈉上乾燥。藉由過濾移除乾燥劑，並在減壓下濃縮濾液。在矽膠管柱上利用50：1二氯甲烷/甲醇溶離而純化殘餘物，得到呈黃色固體之126d(320 mg,70%)。MS：[M+H]+ 309。1H NMR(500 MHz,DMSO-d 6)δ 11.85(s,1H),8.23(s,1H),8.02(d,J=2.5 Hz,1H),7.35(d,J=2.5 Hz,1H),5.77(d,J=2.0 Hz,1H),3.46(s,3H),1.84-1.82(m,1H),0.92-0.90(m,2H),0.65-0.64(m,2H)。
實例126e 5-(3-環丙基-1H-吡唑-5-基胺基)-1-甲基-6-側氧基-1,6-二氫吡啶-3-基酸126e
將126d(205 mg,0.665 mmol)、4,4,4',4',5,5,5',5'-八甲基-2,2'-雙(1,3,2-二氧雜硼雜環戊烷)(1.0 g,4.0 mmol)、二 噁烷(16 mL)、PdCl2(dppf)(54.3 mg,0.066 mmol)以及乙酸鉀(0.39 mg,4.0 mmol)加入配備有磁攪拌器以及回流冷凝器之50-mL單頸圓底燒瓶中。於所得混合物中鼓入氬氣30分鐘後，在氮氣氛下，在105℃下攪拌4 h。接著將其冷卻至室溫並過濾。在減壓下蒸發濾液，得到粗物質126e，其未進一步純化而使用。MS：[M+H]+ 275。
實例126f 5-溴-3-(5-環丙基-1-甲基-1H-吡唑-3-基胺基)-1-甲基吡啶-2(1H)-酮126f
在0℃下，於126e(500 mg,1.6 mmol)含於DMF(6 mL)之溶液中添加NaH(60%於油中)(80 mg,2.0 mmol)。反應混合物在0℃下攪拌1 h。引入碘甲烷(213 mg,1.5 mmol)，且所得混合物在室溫下又攪拌2 h。然後將水(10 mL)添加至混合物中。過濾所得懸浮液，使用水清洗，並在真空中乾燥，得到呈白色固體之126f(350 mg,68%)。MS-ESI：[M+H]+ 323.1。
實例126g 乙酸(2-(6-第三丁基-8-氟-1-側氧基呔-2(1H)-基)-4-(5-(5-環丙基-1-甲基-1H-吡唑-3-基胺基)-1-甲基-6-側氧基-1,6-二氫吡啶-3-基)吡啶-3-基)甲酯126g
將126f(200 mg,0.62 mmol)、乙酸(2-(6-第三丁基-8-氟-1-側氧基呔-2(1H)-基)-4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧雜雜 環戊-2-基)吡啶-3-基)甲酯116c(268 mg,0.65 mmol)、Pd(dppf)Cl2(18 mg,0.025 mmol)、乙酸鈉(74 mg,0.90 mmol)、K3PO4(191 mg,0.90 mmol)以及乙腈/水(5 mL/0.5 mL)加入配備有磁攪拌器之密封管中。在抽真空/氬氣沖洗之三次循環後，混合物在100℃下加熱2.0 h。接著將其冷卻至室溫並過濾。在減壓下蒸發濾液。藉由矽膠管柱層析利用10：1二氯甲烷/甲醇溶離而純化殘餘物，得到呈棕色固體之126g(100 mg,26%)。MS-ESI：[M+H]+ 612.3。
實例126 6-第三丁基-2-[4-[5-[(5-環丙基-1-甲基-吡唑-3-基)胺基]-1-甲基-6-側氧基-3-吡啶基]-3-(羥甲基)-2-吡啶基]-8-氟基-呔-1-酮126
126g(100 mg,0.16 mmol)與氫氧化鋰(72 mg,3.0 mmol)含於i-丙醇/THF(1：1,4 mL)與水(1 mL)之混合物在50℃下攪拌2 h。在減壓下蒸發混合物。藉由逆相組合急驟層析純化殘餘物，得到呈白色固體之126(32 mg,35%)。MS-ESI：[M+H]+ 570.3。1H NMR(500 MHz,DMSO-d 6 )δ 8.63(d,J=5.0 Hz,1H),8.33(d,J=2.0 Hz,1H),7.94(d,J=1.5 Hz,1H),7.56-7.55(m,2H),7.53-7.51(m,2H),7.33(s,1H),5.53(s,1H)4.49-4.48(m,2H),4.04-4.02(m,1H),3.79(s,3H),3.69(s,3H),1.69-1.65(m,1H),1.43(s,9H),0.97-0.94(m,2H),0.68-0.65(m,2H)。
實例127a 6-氯-2-甲基-4-(5-甲基-1H-吡唑-3-基胺基)噠-3(2H)-酮127a
將1,4-二噁烷(20 mL)、5-乙基-1H-吡唑-3-胺(971 mg,10.0 mmol)、4-溴-6-氯-2-甲基噠-3(2H)-酮(2.46 g,11.0 mmol)以及碳酸銫(6.52 g,20.0 mmol)加入配備有磁攪拌器以及回流冷凝器之100-mL單頸圓底燒瓶中。於懸浮液中鼓入氮氣10分鐘後，添加xantphos(1.74 g,3.0 mmol)與叁(二亞苄基丙酮)二鈀(0)(1.37 g,1.5 mmol)。使系統經歷抽真空/氬氣沖洗之三次循環，並在回流下加熱2 h。然後當反應混合物仍然熱時，立即將其過濾。使用二噁烷(3×30 mL)清洗固體，並在減壓下濃縮合併之濾液。藉由矽膠層析利用6：1石油醚/乙酸乙酯溶離而純化殘餘物，得到呈黃色固體之127a(1.8 g,75%)。MS-ESI：[M+H]+ 239.9。
實例127b 6-氯-4-(1,5-二甲基-1H-吡唑-3-基胺基)-2-甲基噠-3(2H)-酮127b
在0℃下，於127a(480 mg,2.0 mmol)含於無水DMF(10 mL)之混合物中添加NaH(純度60%)(64 mg,1.6 mmol)，且所得混合物攪拌0.5 h。在0℃下，於該混合物中逐滴添加含於DMF(5 mL)之碘甲烷(227 mg,1.6 mmol)。反應混合物又攪拌1.5 h，並使用水(20 mL)驟冷。然後使用二氯甲烷(3×20 mL)萃取，並在減壓下蒸發合併之有機層。藉由逆向組合急驟層析純化殘餘物(A：2 NH4HCO3水溶液，B：乙腈)，得到呈淡黃色固體之127b(120 mg,24%)。MS- ESI：[M+H]+ 254.3。
實例127c 乙酸(2-(6-第三丁基-8-氟-1-側氧基呔-2(1H)-基)-4-(5-(1,5-二甲基-1H-吡唑-3-基胺基)-1-甲基-6-側氧基-1,6-二氫噠-3-基)吡啶-3-基)甲酯127c
將127b(120 mg,0.47 mmol)、(2-(6-第三丁基-8-氟-1-側氧基呔-2(1H)-基)-4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧雜硼雜環戊-2-基)吡啶-3-基)甲酯116c(536 mg,1.3 mmol)、Pd(dppf)Cl2(34 mg,0.047 mmol)、K3PO4(199 mg,0.94 mmol)、乙酸鈉(77 mg,0.94 mmol)、乙腈(10 mL)以及水(0.2 mL)加入配備有磁攪拌器以及回流冷凝器之50-mL單頸圓底燒瓶中。在抽真空/氬氣沖洗之三次循環後，混合物在100℃下加熱2 h。接著將其冷卻至室溫並過濾。在減壓下濃縮濾液，並藉由矽膠管柱層析利用二氯甲烷/甲醇(100：1至30：1)溶離而純化所得殘餘物，得到呈黑色油之127c(180 mg,65%)。MS-ESI：[M+H]+ 587.1。
實例127 6-第三丁基-2-[4-[5-[(1,5-二甲基吡唑-3-基)胺基]-1-甲基-6-側氧基-噠-3-基]-3-(羥甲基)-2-吡啶基]-8-氟基-呔-1-酮127
於127c(176 mg,0.30 mmol)含於丙-2-醇(4 mL)、四氫呋喃(4 mL)以及水(1.0 mL)之溶液中添加氫氧化鋰(72 mg,3.0 mmol)。混合物在30℃下攪拌2 h。然後在減壓下將其蒸發，並藉由逆相製備型HPLC純化殘餘物，得到呈白色固體之127(30 mg,18%)。MS-ESI：[M+H]+ 544.8。1H NMR(500 MHz,MeOD)δ 8.66(d,J=5.0 Hz,1H),8.51(d, J=2.5 Hz,1H),7.88(s,1H),7.88(s,1H),7.76-7.72(m,2H),5.97(s,1H),4.68(s,2H),3.89(s,3H),3.75(s,3H),2.29(s,3H),1.47(s,9H)。
實例128a 5-甲基-2-硝基-4,5,6,7-四氫吡唑并[1,5-a]吡 128a
將THF(350 mL)、124c(10.0 g,32.2 mmol)、含於THF之2 M甲胺溶液(113 mL,225 mmol)加入配備有磁攪拌器與氮氣進氣口之1-L單頸圓底燒瓶中，並在室溫下攪拌72 h。此後，在減壓下將反應濃縮至乾燥，並以乙酸乙酯(75 mL)與10%碳酸鉀水溶液(75 mL)之混合物攪拌所得固體。分離水層，並使用乙酸乙酯(2×75 mL)萃取。使用10%碳酸鉀水溶液(75 mL)清洗合併之有機萃取物，接著使用鹽水(50 mL)清洗，並在硫酸鈉上乾燥。藉由過濾移除乾燥劑，並在減壓下濃縮濾液，得到呈黃色固體之128a，產率為97%(5.70 g)。1H NMR(300 MHz,CDCl3)δ 6.62(s,1H),4.28(t,2H,J=5.4 Hz),3.67(s,2H),2.95(t,2H,J=5.4 Hz),2.52(s,3H)；MS(ESI+)m/z 183.0(M+H)。
實例128b 5-甲基-4,5,6,7-四氫吡唑并[1,5-a]吡-2-胺128b
用氮氣沖洗500-mL帕爾反應器瓶(Parr reactor bottle)，並加入10%碳載鈀(50%濕，800 mg乾重)及128a(4.00 g,2.20 mmol)於乙醇(160 mL)中之溶液。將瓶子連接至帕爾氫化器，抽真空，充入氫氣達45 psi之壓力，並搖晃2 h。此後，抽出氫氣，並將氮氣充入瓶中。添加CELITE® 521 (1.0 g)，並使混合物通過CELITE® 521墊過濾。用乙醇(2×75 mL)洗濾餅，合併之濾液在減壓下濃縮至乾燥，得到呈橙色固體之128b，產率為99%(3.31 g)。1H NMR(300 MHz,CDCl3)δ 5.34(s,1H),3.98(t,2H,J=5.4 Hz),3.52(s,3H),2.84(t,2H,J=5.7 Hz),2.45(s,3H)；MS(ESI+)m/z 153.1(M+H)。
實例128c 5-溴-1-甲基-3-(5-甲基-4,5,6,7-四氫吡唑并[1,5-a]吡-2-基胺基)吡啶-2(1H)-酮128c
將128b(1.02 g,6.7 mmol)、3,5-二溴-1-甲基吡啶-2(1H)-酮(2.15 g,8.1 mmol)、Pd2(dba)3(610 mg,0.67 mmol)、2,2-雙(二苯基膦基)-1,1-聯萘(775 mg,1.34 mmol)、碳酸銫(4.37 g,13.6 mmol)及1,4-二噁烷(30 mL)加入配備有磁攪拌器之密封管中。在抽真空/氬氣沖洗之三次循環後，混合物在110℃加熱2 h。然後將其過濾，並在真空蒸發濾液。殘餘物藉由矽膠管柱層析用二氯甲烷/甲醇(15：1,V/V)溶離純化，得到呈白色固體之128c(380 mg,14%)。LCMS：[M+H]+ 338。
實例128d 1-甲基-3-(5-甲基-4,5,6,7-四氫吡唑并[1,5-a]吡-2-基胺基)-5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧雜硼雜環戊-2-基)吡啶-2(1H)-酮128d
將128c(1.0 g,3 mmol)、Pin2B2(3.8 g,15 mmol)、Pd(dppf)Cl2(137 mg,0.15 mmol)、X-phos(143 mg,0.3 mmol)、乙酸鉀(88 mg,9 mmol)及1,4-二噁烷(50 mL)加入配備有磁攪拌器與冷凝器之100-mL單頸圓底燒瓶中。在抽 真空/氬氣沖洗之三次循環後，反應混合物在60℃加熱15 h。接著將其冷卻至室溫並過濾。在減壓下濃縮濾液，並使用石油醚洗所得殘餘物，得到呈黃色固體之128d(0.87 g,75%)。MS：[M+H]+ 386。
實例128e 2-(6-第三丁基-8-氟-1-側氧基呔-2(1H)-基)-4-(1-甲基-5-(5-甲基-4,5,6,7-四氫吡唑并[1,5-a]吡-2-基胺基)-6-側氧基-1,6-二氫吡啶-3-基)菸鹼醛128e
將128d(193 mg,0.50 mmol)、2-(6-第三丁基-8-氟-1-側氧基呔-2(1H)-基)-4-氯菸鹼醛103b(180 mg,0.50 mmol)、1,1'-雙(二苯基膦基)二茂鐵二氯鈀(II)(17 mg,0.025 mmol)、K3PO4(212 mg,1.0 mmol)、乙酸鈉(82 mg,1.0 mmol)、乙腈(6 mL)以及水(0.5 mL)加入配備有回流冷凝器之25-mL圓底燒瓶中。在抽真空/氬氣沖洗之三次循環後，混合物在100℃下加熱1 h。藉由LCMS分析反應混合物顯示完全轉化為所需產物。將反應混合物冷卻至室溫，並在減壓下濃縮。使用二氯甲烷(20 mL)與水(10 mL)稀釋殘餘物。分離水層，並使用二氯甲烷(3×10 mL)萃取。在Na2SO4上乾燥合併之有機層並過濾。在減壓下濃縮濾液。藉由矽膠管柱層析利用二氯甲烷/甲醇(80：1至30：1)溶離而 純化深色殘餘物，得到呈黃色固體之128e(190 mg,65%)。MS-ESI：[M+H]+ 583.3。
實例128 6-第三丁基-8-氟-2-[3-(羥甲基)-4-[1-甲基-5-[(5-甲基-6,7-二氫-4H-吡唑并[1,5-a]吡-2-基)胺基]-6-側氧基-3-吡啶基]-2-吡啶基]呔-1-酮128
在室溫下於128e(158 mg,0.27 mmol)含於甲醇/二氯甲烷(5/5 mL)之溶液中添加NaBH4(31 mg,0.82 mmol)。反應攪拌1 h後，LCMS顯示反應完成。使用(10 mL)使反應驟冷，並在減壓下濃縮。使用二氯甲烷(3×20 mL)萃取殘餘物。使用鹽水(30 mL)清洗合併之有機層，在Na2SO4上乾燥，過濾，並在減壓下濃縮。藉由逆相製備型HPLC純化殘餘物，得到呈白色固體之128(95 mg,60%)。MS-ESI：[M+H]+ 585.3。1H NMR(500 MHz,CDCl3)δ 8.66(d,J=5.0 Hz,1H),8.35(d,J=2.0 Hz,1H),8.00(d,J=2.5 Hz,1H),7.58-7.54(m，重疊，4H),7.44(s,1H),5.70(s,1H),4.52-4.39(m,2H),4.10-4.09(m,3H),3.70(s,3H),3.59(s,2H),2.88-2.86(m,2H),2.47(s,3H),1.43(s,9H)。
實例129a 5-溴-1-甲基-3-(5-甲基異噁唑-3-基胺基)吡啶-2(1H)-酮129a
將5-甲基異噁唑-3-胺(1.0 g,10.2 mmol)、3,5-二溴-1-甲 基吡啶-2(1H)-酮(4.09 g,15.3 mmol)、Pd2(dba)3(467 mg,0.51 mmol)、Xantphos(598 mg,1.02 mmol)、Cs2CO3(6.65 g,20.4 mmol)以及二噁烷(50 mL)加入配備有磁攪拌器以及回流冷凝器之100-mL單頸圓底燒瓶中。在抽真空/氬氣沖洗之三次循環後，反應混合物在100℃下加熱3 h。藉由LCMS分析反應混合物顯示完全轉化為所需產物。當混合物仍熱時，將其過濾。將濾液冷卻至室溫，並藉由過濾收集所得沈澱物，得到呈黃色固體之129a(1.6 g,55%)。MS-ESI：[M+H]+ 284.1。
實例129b 乙酸(2-(6-第三丁基-8-氟-1-側氧基呔-2(1H)-基)-4-(1-甲基-5-(5-甲基異噁唑-3-基胺基)-6-側氧基-1,6-二氫吡啶-3-基)吡啶-3-基)甲酯129b
將3-(乙醯氧基甲基)-2-(6-第三丁基-8-氟-1-側氧基呔-2(1H)-基)吡啶-4-基酸116c(438 mg,1.06 mmol)、129a(150 mg,0.60 mmol)、Pd(dppf)Cl2(19 mg,0.026 mmol)、K3PO4(224 mg,1.06 mmol)、乙酸鈉(87 mg,1.06 mmol)、水(5滴)以及乙腈(10 mL)加入配備有磁攪拌器以及回流冷凝器之50-mL單頸圓底燒瓶中。在抽真空/氬氣沖洗之三次循環後，反應混合物在100℃下加熱1 h。藉由LCMS分析反應混合物顯示完全轉化為所需產物。將混合物冷卻至室溫並過濾。在減壓下濃縮濾液，得到呈深色油之129b(300 mg,87%)，其未進一步純化而用於下一步驟。MS-ESI：[M+H]+ 573.3。
實例129 6-第三丁基-8-氟-2-[3-(羥甲基)-4-[1-甲基-5- [(5-甲基異噁唑-3-基)胺基]-6-側氧基-3-吡啶基]-2-吡啶基]呔-1-酮129
於129b(280 mg,0.49 mmol)含於THF(4 mL)、i-丙醇(4 mL)以及水(2 mL)之溶液中添加氫氧化鋰(24 mg,0.98 mmol)。反應混合物在室溫下攪拌1 h。在減壓下將其濃縮，並藉由逆相製備型HPLC純化殘餘物，得到呈白色固體之129(85 mg,33%)。MS-ESI：[M+H]+ 531.3。1H NMR(500 MHz,DMSO-d 6)δ 9.03(s,1H),8.58(d,J=5.0 Hz,1H),8.54(d,J=3.0 Hz,1H),7.99(d,J=2.0 Hz,1H),7.91(d,J=1.0 Hz,1H),7.78(dd,J=1.0,13.0 Hz,1H),7.56(d,J=2.0 Hz,1H),7.51(d,J=5.0 Hz,1H),6.26(s,1H),4.92(s,1H),4.43(d,J=6.0 Hz,2H),3.61(s,3H),2.32(s,3H),1.40(s,9H)。
實例130a 5-溴-1-甲基-3-(1-甲基-1H-咪唑-4-基胺基)吡啶-2(1H)-酮130a
將1,4-二噁烷(50 mL)、1-甲基-1H-咪唑-4-胺(1.1 g,11.3 mmol)、3,5-二溴-1-甲基吡啶-2(1H)-酮(3.0 g,11.3 mmol)、Pd2(dba)3(1.0 g,1.13 mmol)、XantPhos(1.3 g,2.26 mmol)以及碳酸銫(7.3 g,22.6 mmol)加入配備有磁攪拌器以及回流冷凝器之100-mL單頸圓底燒瓶中。在抽真 空/氬氣沖洗之三次循環後，混合物在92℃下加熱4.5小時。接著將其冷卻至室溫並過濾。在減壓下濃縮濾液，並藉由矽膠管柱層析利用二氯甲烷/甲醇(100：1至50：1)溶離而純化所得殘餘物，得到呈黃色固體之130a(2.4 g,76%)。MS-ESI：[M+H]+ 283.1。
實例130b 乙酸(2-(6-第三丁基-8-氟-1-側氧基呔-2(1H)-基)-4-(1-甲基-5-(1-甲基-1H-咪唑-4-基胺基)-6-側氧基-1,6-二氫吡啶-3-基)吡啶-3-基)甲酯130b
將130a(150 mg,0.53 mmol)、3-(乙醯氧基甲基)-2-(6-第三丁基-8-氟-1-側氧基呔-2(1H)-基)吡啶-4-基酸116c(438 mg,1.06 mmol)、PdCl2(dppf)(43 mg,0.053 mmol)、K3PO4(225 mg,1.06 mmol)、乙酸鈉(87 mg,1.06 mmol)、乙腈(10 mL)以及水(0.2 mL)加入配備有磁攪拌器之50-mL圓底燒瓶中。於混合物中鼓入氮氣10分鐘後，將回流冷凝器連接至燒瓶，且反應混合物在90℃下加熱2.5 h。接著將其冷卻至室溫並過濾。在減壓下蒸發濾液，並藉由矽膠管柱層析利用二氯甲烷/甲醇(50：1至20：1)溶離而純化所得殘餘物，得到呈黃色固體之130b(120 mg,40%)。MS-ESI：[M+H]+ 572.3。
實例130 6-第三丁基-8-氟-2-[3-(羥甲基)-4-[1-甲基-5-[(1-甲基咪唑-4-基)胺基]-6-側氧基-3-吡啶基]-2-吡啶基]呔-1-酮130
130b(100 mg,0.18 mmol)與氫氧化鋰水合物(189 mg,4.5 mmol)含於i-丙醇/THF/水(2：2：1,10 mL)之混合物在 35℃下攪拌30分鐘。在減壓下蒸發混合物，並於殘餘物中添加水(5 mL)。然後使用二氯甲烷(3×10 mL)萃取。在減壓下濃縮合併之萃取物，並藉由逆相製備型HPLC純化殘餘物，得到呈白色固體之130(41.1 mg,44.4%)。MS-ESI：[M+H]+ 530.3。1H NMR(500 MHz,DMSO-d 6)δ 8.56-8.53(m,2H),7.90(d,J=2.0 Hz,1H),7.78(dd,J=2.0,12.5 Hz,1H),7.61(s,1H),7.51(d,J=5.0 Hz,1H),7.41-7.39(m,2H),7.37(d,J=2.0 Hz,1H),6.97(d,J=1.5 Hz,1H),5.04-5.02(m,1H),4.41-4.39(m,2H),3.59(s,3H),3.58(s,3H),1.39(s,9H)。
實例131a 2-硝基-6,7-二氫-4H-吡唑并[5,1-c][1,4]噁 131a
將1-(2-溴乙基)-5-(溴甲基)-3-硝基-1H-吡唑124c(3.00 g,9.59 mmol)以及4 M氫溴酸水溶液(120 mL)加入配備有磁攪拌器以及回流冷凝器之250-mL單頸圓底燒瓶中，且所得混合物在回流下加熱24 h。此後，在減壓下將反應混合物濃縮至約6 mL體積，且殘餘物在2 M氫氧化鈉水溶液(40 mL)中攪拌2 h。此後，添加二氯甲烷(40 mL)，並攪拌混合物15分鐘。分離水層，並使用二氯甲烷(2×50 mL)萃取。使用鹽水(100 mL)清洗合併之有機萃取物，並在硫酸鈉上乾燥。藉由過濾移除乾燥劑，並在減壓下濃縮濾液，得到呈白色固體之131a，產率為62%(1.01 g)：mp 110-112℃；1H NMR(300 MHz,CDCl3)δ 6.68(s,1H),4.87(s,2H),4.28(t,2H,J=5.4 Hz),4.20(t,2H,J=5.1 Hz)；MS(ESI+)m/z 170.0(M+H)。
實例131b 6,7-二氫-4H-吡唑并[5,1-c][1,4]噁-2-胺131b
使用氮氣沖洗500-mL帕爾氫化瓶，並加入131a(1.01 g,5.92 mmol)、10%碳載鈀(50%濕品，125 mg乾重)以及乙醇(50 mL)。將瓶子抽真空，充入氫氣，達到25 psi之壓力，並在帕爾氫化裝置上搖晃2 h。然後抽空氫氣，並將氮氣充入瓶中。藉由通過CELITE®521墊過濾而移除觸媒，並在減壓下濃縮濾液。藉由管柱層析利用400 cc矽膠並利用3%含於二氯甲烷之甲醇溶離而純化所得殘餘物。收集溶離份，在減壓下濃縮後，得到呈黃色固體之131b，產率為73%(601 mg)：mp 74-76℃ 1H NMR(300 MHz,CDCl3)δ 5.37(s,1H),4.72(s,2H),4.07(t,2H,J=5.1 Hz),3.98(t,2H,J=5.1 Hz),3.57(br s,2H)；MS(ESI+)m/z 140.4(M+H)。
實例131c 5-溴-3-(6,7-二氫-4H-吡唑并[5,1-c][1,4]噁-2-基胺基)-1-甲基吡啶-2(1H)-酮131c
將1,4-二噁烷(20 mL)、131b(600 mg,4.31 mmol)、3,5-二溴-1-甲基吡啶-2(1H)-酮(1.44 g,5.40 mmol)以及碳酸銫(3.08 g,9.48 mmol)加入配備有磁攪拌器、回流冷凝器與氮氣進氣口之50-mL三頸圓底燒瓶中。於所得溶液中鼓入氮氣30分鐘後，添加Xantphos(300 mg,0.52 mmol)以及叁(二亞苄基丙酮)二鈀(0)(320 mg,0.35 mmol)，且反應混合物在回流下加熱2 h。此後，將反應冷卻至室溫，分配在 乙酸乙酯(75 mL)與水(75 mL)之間，並過濾。分離水層，並使用乙酸乙酯(2×25 mL)萃取。合併有機層並使用鹽水(50 mL)清洗，並在硫酸鈉上乾燥。藉由過濾移除乾燥劑，並在減壓下濃縮濾液。藉由管柱層析利用500 cc矽膠純化所得殘餘物，並利用3%含於二氯甲烷之甲醇洗脫。收集溶離份，並在減壓下濃縮後，得到呈綠色固體之131c，產率為31%(433 mg)：mp 195-197℃；1H NMR(300 MHz,CDCl3)δ 7.92(d,1H,J=2.4 Hz),7.44(s,1H),6.90(d,1H,J=2.4 Hz),5.65(s,1H),4.80(s,2H),4.13(s,2H),3.61(s,5H)；MS(ESI+)m/z 324.9(M+H)。
實例131d 3-(6,7-二氫-4H-吡唑并[5,1-c][1,4]噁-2-基胺基)-1-甲基-5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧雜硼雜環戊-2-基)吡啶-2(1H)-酮131d
將131c(1.3 g,4.0 mmol)、雙(頻哪醇基)二硼(2.03 g,8.0 mmol)、PdCl2(dppf)(439 mg,0.60 mmol)、乙酸鉀(784 mg,8.0 mmol)以及1,4-二噁烷(60 mL)之混合物加入配備有磁攪拌器以及回流冷凝器之250-mL圓底燒瓶中。於混合物中鼓入氮氣30分鐘後，在回流下將其加熱15 h。反應完全後，將混合物冷卻至室溫，並過濾。使用乙酸乙酯(100 mL)清洗固體。在減壓下蒸發合併之濾液，並藉由矽膠管柱層析利用30：1二氯甲烷/甲醇溶離而純化殘餘物，得到131d(446 mg,30%)。MS：[M+H]+ 373。
實例131e 2-(6-第三丁基-8-氟-1-側氧基呔-2(1H)-基)-4-(5-(6,7-二氫-4H-吡唑并[5,1-c][1,4]噁-2-基胺基)- 1-甲基-6-側氧基-1,6-二氫吡啶-3-基)菸鹼醛131e
將2-(6-第三丁基-8-氟-1-側氧基呔-2(1H)-基)-4-氯菸鹼醛103b(216 mg,1 eq.,0.60 mmol)、131d(446 mg,2 eq.,1.2 mmol)、Pd2(dba)3(55 mg,0.1 eq.,0.060 mmol)、Cy3P(67 mg,0.4 eq.,0.24 mmol)、Cs2CO3(395 mg,2 eq.,1.2 mmol)、水(0.5 mL)以及二噁烷(10 mL)加入配備有回流冷凝器之50-mL圓底燒瓶中。抽真空/N2沖洗之三次循環後，反應混合物在100℃下攪拌2小時。接著將其冷卻至室溫並過濾。在減壓下蒸發濾液，並藉由矽膠管柱層析利用4：1石油醚/乙酸乙酯溶離而純化所得殘餘物，得到呈棕色固體之131e(272 mg,80%)。MS-ESI：[M+H]+ 569.8。
實例131 6-第三丁基-2-[4-[5-(6,7-二氫-4H-吡唑并[5,1-c][1,4]噁-2-基胺基)-1-甲基-6-側氧基-3-吡啶基]-3-(羥甲基)-2-吡啶基]-8-氟基-呔-1-酮131
將131e(220 mg,1.0 eq.,0.39 mmol)、NaBH4(73 mg,5.0 eq.,1.90 mmol)以及甲醇(10 mL)加入配備有磁攪拌器之50-mL單頸圓底燒瓶中。混合物在室溫下攪拌1 h，並使用水(5 mL)萃取。然後在減壓下將其濃縮，並使用二氯甲烷(3×10 mL)萃取所得殘餘物。在減壓下濃縮合併有機 層，並藉由逆相製備型HPLC純化殘餘物，得到131(105 mg,47%)。MS-ESI：[M+H]+ 571.8。1H NMR(500 MHz,CDCl3)δ 8.66(d,J=5.0 Hz,1H),8.35(d,J=2.5 Hz,1H),8.03(d,J=2.5 Hz,1H),7.59-7.53(m,4H),7.48(s,1H),5.73(s,1H),4.81(s,2H),4.51(bs,2H),4.12-4.05(m，重疊，5H),3.73(s,3H),1.46(s,9H)。
實例132a (R)-(6-胺基吡啶-3-基)(3-甲基嗎啉基)甲酮132a
於(R)-3-甲基嗎啉(2.02 g,20 mmol)含於乙醇(25 mL)之溶液中添加1-乙基-3-(3-二甲胺基丙基)碳化二醯亞胺(EDCI)(3.33 g,17.4 mmol)、羥基苯并三唑(HOBt)(2.35 g,17.4 mmol)以及6-胺基菸鹼酸(2.0 g,14.5 mmol)。在室溫下攪拌18 h後，過濾反應懸浮液，並在減壓下濃縮濾液。藉由矽膠管柱層析利用3：1乙酸乙酯/石油醚溶離而純化殘餘物，得到呈白色固體之132a(1.6 g,36%)。MS-ESI：[M+H]+ 222.3。
實例132b (R)-5-溴-1-甲基-3-(5-(3-甲基嗎啉-4-羰基)吡啶-2-基胺基)吡啶-2(1H)-酮132b
將132a(332 mg,1.5 mmol)、3,5-二溴-1-甲基吡啶-2(1H)-酮(H-001)(480 mg,1.8 mmol)以及碳酸銫(978 mg,3.0 mmol)加入配備有磁攪拌器以及回流冷凝器之100-mL單頸圓底燒瓶中。於懸浮液中鼓入氮氣3分鐘後，添加Xantphos(87 mg,0.15 mmol)與叁(二亞苄基丙酮)二鈀(0)(69 mg,0.075 mmol)。使系統經歷抽真空/氬氣沖洗之 三次循環，並在回流下加熱2.5 h。接著將其冷卻至室溫並過濾。使用二氯甲烷(2×50 mL)清洗固體，並在減壓下濃縮合併之濾液。藉由矽膠管柱層析利用石油醚/乙酸乙酯(2：1至1：2)溶離而純化殘餘物，得到呈黃色固體之132b(430 mg,70%)。MS-ESI：[M+H]+ 407.3。
實例132c (R)-1-甲基-5-(5-(3-甲基嗎啉-4-羰基)吡啶-2-基胺基)-6-側氧基-1,6-二氫吡啶-3-基酸132c
將132b(580 mg。1.42 mmol)、雙(頻哪醇基)二硼(1.2 g,4.5 mmol)、Pd2(dba)3(137 mg,0.15 mmol)、X-phos(71 mg,0.15 mmol)、乙酸鉀(294 mg,3.0 mmol)以及1,4-二噁烷(20 mL)加入配備有回流冷凝器之100-mL圓底燒瓶中。在抽真空/氬氣沖洗之三次循環後，混合物在70℃下加熱2 h。接著將其過濾，並在減壓下蒸發濾液。使用石油醚清洗殘餘物，得到呈白色固體之132c(500 mg,94%)，其未進一步純化而用於下一步驟。MS-ESI：[M+H]+ 373.1。
實例132d (R)-2-(6-第三丁基-8-氟-1-側氧基呔-2(1H)-基)-4-(1-甲基-5-(5-(3-甲基嗎啉-4-羰基)吡啶-2-基胺基)-6-側氧基-1,6-二氫吡啶-3-基)菸鹼醛132d
將132c(260 mg,0.70 mmol)、2-(6-第三丁基-8-氟-1-側氧基呔-2(1H)-基)-4-氯煙鹼醛103b(180 mg,0.50 mmol)、K3PO4(297 mg,1.4 mmol)、乙酸鈉(114 mg,1.4 mmol)、1,1'-雙(二苯基膦基)二茂鐵二氯鈀(II)(57 mg,0.070 mmol)以及乙腈/水(10/0.2 mL)加入配備有磁攪拌器以及回流冷凝器之25-mL單頸圓底燒瓶中。抽真空/N2沖洗之三次循環後，混合物在110℃下加熱1.5 h。藉由LCMS分析反應混合物顯示完全轉化為所需產物。將反應混合物冷卻至室溫，並在減壓下濃縮。使用二氯甲烷(20 mL)與水(20 mL)稀釋殘餘物。分離水層，並使用二氯甲烷(3×20 mL)萃取。在Na2SO4上乾燥合併之有機層，過濾，並在減壓下濃縮。藉由矽膠管柱層析利用60：1二氯甲烷/甲醇溶離而純化深色殘餘物，得到呈黃色固體之132d(120 mg,37%)。MS-ESI：[M+H]+ 652.3。
實例132 6-第三丁基-8-氟-2-[3-(羥甲基)-4-[1-甲基-5-[[5-[(3R)-3-甲基嗎啉-4-羰基]-2-吡啶基]胺基]-6-側氧基-3-吡啶基]-2-吡啶基]呔-1-酮132
於132d(120 mg,0.18 mmol)含於甲醇/二氯甲烷(4/4 mL)之溶液中添加NaBH4(15 mg,0.60 mmol)。混合物在室溫下攪拌1 h，並使用水(2 mL)驟冷。然後在減壓下將其蒸發，並藉由逆相製備型HPLC純化殘餘物，得到呈白色固體之132(60 mg,50%)。MS-ESI：[M+H]+ 654.3。1H NMR(500 MHz,MeOD-d 4)δ 8.94(d,J=2.5 Hz,1H),8.61(d,J=5.0 Hz,1H),8.51(d,J=2.5 Hz,1H),8.35(d,J=2.0 Hz,1H)7.88(d,J=1.5 Hz,1H),7.75(d,J=1.5 Hz,1H),7.72-7.69(m,1H),7.65(d,J=5.0 Hz,1H),7.61(d,J=2.5 Hz, 1H),7.13(d,J=7.5 Hz,1H),4.62-4.58(m,2H),4.36-4.31(m,1H),3.61-3.84(m,2H),3.71-3.67(m，重疊，5H),3.56-3.47(m,2H),1.47(s,9H),1.39(d,J=7.0 Hz,3H)。
實例133a 5-(2-甲氧基乙基)-2-硝基-4,5,6,7-四氫吡唑并[1,5-a]吡 133a
於2-硝基-4,5,6,7-四氫吡唑并[1,5-a]吡 124d(190 mg,1.13 mmol)含於乙腈(10 mL)之溶液中添加K2CO3(311.9 mg,2.26 mmol)以及1-溴-2-甲氧基乙烷(188.3 mg,1.36 mmol)。在微波照射下，使反應混合物在80℃下加熱17 h。藉由LCMS分析反應混合物顯示完全轉化為所需產物。將混合物冷卻至室溫，並過濾。在減壓下濃縮濾液，得到呈白色固體之133a(230 mg,90%)，其未進一步純化而用於下一步驟。MS-ESI：[M+H]+ 227.0。
實例133b 5-(2-甲氧基乙基)-4,5,6,7-四氫吡唑并[1,5-a]吡-2-胺133b
於133a(286 mg,1.26 mmol)含於甲醇(10 mL)之溶液中添加Pd/C(28.6 mg)。將系統抽真空，接著使用H2回充填。在室溫下攪拌2 h後，濾除混合物。在減壓下濃縮濾液，得到呈黃色固體之133b(240 mg,97%)，其未進一步純化而用於下一步驟。MS-ESI：[M+H]+ 197.0。
實例133c 5-溴-3-(5-(2-甲氧基乙基)-4,5,6,7-四氫吡唑并[1,5-a]吡-2-基胺基)-1-甲基吡啶-2(1H)-酮133c
將133b(230 mg,1.17 mmol)、3,5-二溴-1-甲基吡啶-2(1H)-酮(468.4 mg,1.76 mmol)、Pd2(dba)3(53.5 mg,0.0585 mmol)、Xantphos(67.6 mg,0.117 mmol)、Cs2CO3(762.8 mg,2.34 mmol)以及二噁烷(20 mL)加入配備有磁攪拌器以及回流冷凝器之100-mL圓底燒瓶中。抽真空/N2沖洗之三次循環後，混合物在100℃下加熱3 h。藉由LCMS分析反應混合物顯示完全轉化為所需產物。將其冷卻至室溫並過濾。在減壓下濃縮濾液。藉由矽膠管柱層析利用40：1二氯甲烷/甲醇溶離而純化殘餘物，得到呈深色固體之133c(380 mg,85%)。MS-ESI：[M+H]+ 382.2。
實例133d 3-(5-(2-甲氧基乙基)-4,5,6,7-四氫吡唑并[1,5-a]吡-2-基胺基)-1-甲基-5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧雜硼雜環戊-2-基)吡啶-2(1H)-酮133d
將133c(330 mg,0.86 mmol)、Pin2B2(329 mg,1.30 mmol)、Pd2(dba)3(40 mg,0.043 mmol)、X-phos(41 mg,0.086 mmol)、乙酸鉀(169 mg,1.726 mmol)以及二噁烷(10 mL)加入配備有磁攪拌器以及回流冷凝器之50-mL單頸圓 底燒瓶中。抽真空/N2沖洗之三次循環後，混合物在70℃下加熱2 h。藉由LCMS分析反應混合物顯示完全轉化為所需產物。將其冷卻至室溫並過濾。在減壓下濃縮濾液。使用石油醚清洗殘餘物，得到呈深色油之133d(240 mg,80%)，其未進一步純化而用於下一步驟。MS-ESI：[M+H]+ 348.3。
實例133e 2-(6-第三丁基-8-氟-1-側氧基呔-2(1H)-基)-4-(5-(5-(2-甲氧基乙基)-4,5,6,7-四氫吡唑并[1,5-a]吡-2-基胺基)-1-甲基-6-側氧基-1,6-二氫吡啶-3-基)菸鹼醛133e
將2-(6-第三丁基-8-氟-1-側氧基呔-2(1H)-基)-4-氯菸鹼醛103b(100 mg,0.28 mmol)、133d(144.4 mg,0.42 mmol)、Pd(dppf)Cl2(11.3 mg,0.0139 mmol)、K3PO4(117.8 mg,0.556 mmol)、乙酸鈉(45.6 mg,0.556 mmol)、乙腈(10 mL)以及水(3滴)加入配備有回流冷凝器之25-mL圓底燒瓶中。抽真空/N2沖洗之三次循環後，在100℃下，在N2保護下加熱混合物1 h。藉由LCMS分析反應混合物顯示完全轉化為所需產物。將其冷卻至室溫並過濾。在減壓下濃縮濾液。藉由矽膠管柱層析利用40：1二氯甲烷/甲醇溶離而純化殘餘物，得到呈黃色固體之133e(140 mg,80%)。MS-ESI：[M+H]+ 627.3。
實例133 6-第三丁基-8-氟-2-[3-(羥甲基)-4-[5-[[5-(2-甲氧基乙基)-6,7-二氫-4H-吡唑并[1,5-a]吡-2-基]胺基]-1-甲基-6-側氧基-3-吡啶基]-2-吡啶基]呔-1-酮133
於133e(180 mg,0.287 mmol)含於二氯甲烷(5 mL)與甲醇(5 mL)之溶液中添加NaBH4(21.7 mg,0.574 mmol)。在室溫下攪拌1 h後，使用NH4Cl水溶液(5 mL)使其驟冷，並在減壓下濃縮。使用二氯甲烷(3×20 mL)萃取殘餘物。使用鹽水清洗合併之有機層，在Na2SO4上乾燥，在減壓下濃縮，並藉由逆相製備型HPLC純化，得到呈白色固體之133(50 mg,27%)。MS-ESI：[M+H]+ 629.3。1H NMR(500 MHz,DMSO-d 6)δ 8.57(d,J=5.5 Hz,1H),8.54(d,J=2.5 Hz,1H),8.22(s,1H),8.04(d,J=2.5 Hz,1H),7.90(d,J=1.5 Hz,1H),7.78(dd,J=1.5,13.5 Hz,1H),7.51(d,J=5.5 Hz,1H),7.39(d,J=2.0 Hz,1H),5.89(s,1H),4.90-4.88(m,1H),4.42(s,2H),3.92(t,J=5.5 Hz,2H),3.61(s,2H),3.59(s,3H),3.50(t,J=5.0 Hz,2H),3.25(s,3H),2.90(t,J=5.5 Hz,2H),2.67(t,J=5.0 Hz,2H),1.40(s,9H)。
實例134a 2-硝基-5-(2,2,2-三氟乙基)-4,5,6,7-四氫吡唑并[1,5-a]吡 134a
將1-(2-溴乙基)-5-(溴甲基)-3-硝基-1H-吡唑124c(632 mg,2.0 mmol)、2,2,2-三氟乙胺(594 mg,6.0 mmol)以及DMSO(5 mL)加入配備有磁攪拌器之密封管中，並在120℃下加熱2 h。將混合物冷卻至室溫，並使用水(20 mL)稀釋。使用乙酸乙酯(3×20 mL)萃取所得混合物。乾燥合併有機層並過濾。在減壓下濃縮濾液，並藉由矽膠管柱層析利用50：1二氯甲烷/甲醇溶離而純化殘餘物，得到呈黃色固體之134a(392 mg,78%)。MS-ESI：[M+H]+ 250.9。
實例134b 5-(2,2,2-三氟乙基)-4,5,6,7-四氫吡唑并[1,5-a]吡-2-胺134b
於134a(390 mg,1.56 mmol)含於乙醇(20 mL)之溶液中添加Pd/C(約200 mg)。將氫氣(經由氣球)加入中反應中，並在室溫下攪拌2 h。反應完成後，將混合物經CELITE®墊而過濾。在減壓下濃縮濾液，得到呈黃色固體之134b(308 mg,90%)，其未進一步純化而用於下一步驟。MS-ESI：[M+H]+ 221.1。
實例134c 5-溴-1-甲基-3-(5-(2,2,2-三氟乙基)-4,5,6,7-四氫吡唑并[1,5-a]吡-2-基胺基)吡啶-2(1H)-酮134c
將134b(300 mg,1.36 mmol)、3,5-二溴-1-甲基吡啶- 2(1H)-酮(364 mg,1.36 mmol)、碳酸銫(887 mg,2.7 mmol)以及1,4-二噁烷(20 mL)加入配備有回流冷凝器之100-mL圓底燒瓶中。於懸浮液中鼓入氮氣10分鐘後，添加xantphos(78 mg,0.136 mmol)與Pd2(dba)3(62 mg,0.068 mmol)。使系統經歷抽真空/氬氣沖洗之三次循環，並在回流下加熱5 h。接著將其冷卻至室溫並過濾。使用二氯甲烷(30 mL)清洗固體。在減壓下濃縮合併之濾液。藉由矽膠管柱層析利用二氯甲烷/甲醇(80/1至30/1)溶離而純化固體殘餘物，得到呈黃色固體之134c(420 mg,76%)。MS-ESI：[M+H]+ 406.0。
實例134d 1-甲基-5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧雜硼雜環戊-2-基)-3-(5-(2,2,2-三氟乙基)-4,5,6,7-四氫吡唑并[1,5-a]吡-2-基胺基)吡啶-2(1H)-酮134d
將134c(400 mg,0.98 mmol)、Pin2B2(750 mg,2.96 mmol)、Pd2(dba)3(45 mg,0.05 mmol)、x-phos(48 mg,0.1 mmol)、乙酸鉀(294 mg,3.0 mmol)以及1,4-二噁烷(15 mL)加入配備有磁攪拌器以及回流冷凝器之50-mL單頸圓底燒瓶中。使反應混合物經歷抽真空/氬氣沖洗之三次循環，並在65℃下加熱3 h。接著將其冷卻至室溫並過濾。在減壓下濃縮濾液。使用石油醚清洗所得殘餘物，得到呈棕色固體之134d(400 mg,90%)，其未進一步純化而用於下一步驟。MS-ESI：[M+H]+ 453.9。
實例134e 2-(6-第三丁基-8-氟-1-側氧基呔-2(1H)-基)-4-(1-甲基-6-側氧基-5-(5-(2,2,2-三氟乙基)-4,5,6,7-四 氫吡唑并[1,5-a]吡-2-基胺基)-1,6-二氫吡啶-3-基)菸鹼醛134e
將134d(200 mg,0.44 mmol)、2-(6-第三丁基-8-氟-1-側氧基呔-2(1H)-基)-4-氯菸鹼醛103b(159 mg,0.44 mmol)、K3PO4(186 mg,0.88 mmol)、乙酸鈉(72 mg,0.88 mmol)、1,1'-雙(二苯基膦基)二茂鐵二氯鈀(II)(16 mg,0.022 mmol)以及乙腈/水(8/0.2 mL)加入配備有回流冷凝器之25-mL圓底燒瓶中。抽真空/N2沖洗之三次循環後，混合物在100℃下在N2保護下加熱1h。藉由LCMS分析反應混合物顯示完全轉化為所需產物。將反應混合物冷卻至室溫，並使用二氯甲烷(30 mL)與水(15 mL)稀釋。分離水層並使用二氯甲烷(2×15 mL)萃取。在Na2SO4上乾燥合併之有機萃取物，過濾，並在減壓下濃縮。藉由矽膠管柱層析利用二氯甲烷/甲醇(80/1至30/1)溶離而純化深色殘餘物，得到呈黃色固體之134e(128 mg,45%)。MS-ESI：[M+H]+ 651.3。
實例134 6-第三丁基-8-氟-2-[3-(羥甲基)-4-[1-甲基-6-側氧基-5-[[5-(2,2,2-三氟乙基)-6,7-二氫-4H-吡唑并[1,5-a]吡-2-基]胺基]-3-吡啶基]-2-吡啶基]呔-1-酮134
在室溫下於134e(110 mg,0.169 mmol)含於甲醇/二氯甲烷(4/4 mL)之溶液中添加NaBH4(19 mg,0.51 mmol)。反應攪拌1 h後，LCMS顯示反應完成。使用水(20 mL)使混合物驟冷，並使用二氯甲烷(3×30 mL)萃取。使用鹽水(20 mL)清洗合併之有機層，在Na2SO4上乾燥，過濾，並在減壓下 濃縮。藉由逆相製備型HPLC純化殘餘物，得到呈白色固體之134(50 mg,45%)。MS-ESI：[M+H]+ 653.3。1H NMR(500 MHz,CDCl3)δ 8.66(d,J=5.0 Hz,1H),8.35(d,J=2.5 Hz s,1H),8.00(d,J=2.5 Hz,1H),7.59-7.58(m,1H),7.56-7.55(m,1H),7.53-7.52(m,2H),7.45(s,1H),5.73(s,1H),4.51-4.49(m,2H),4.11-4.08(m,2H),4.05-4.03(m,1H),3.94(s,2H),3.73(s,3H),3.24-3.18(m,4H),1.45(s,9H)。
實例135a 5-(2,2-二氟乙基)-2-硝基-4,5,6,7-四氫吡唑并[1,5-a]吡 135a
將1-(2-溴乙基)-5-(溴甲基)-3-硝基-1H-吡唑124c(632 mg,2.0 mmol),2,2-二氟乙胺(486 mg,6.0 mmol)以及DMSO(5 mL)加入配備有磁攪拌器之密封管中。在120℃下將其加熱2 h。將混合物冷卻至室溫，並使用水(20 mL)稀釋。使用乙酸乙酯(3×20 mL)萃取所得混合物。乾燥合 併之有機層並過濾。在減壓下濃縮濾液，並藉由矽膠管柱層析利用50：1二氯甲烷/甲醇溶離而純化殘餘物，得到呈黃色固體之135a(371 mg,80%)。MS-ESI：[M+H]+ 233.2。
實例135b 5-(2,2-二氟乙基)-4,5,6,7-四氫吡唑并[1,5-a]吡-2-胺135b
將Pd/C(約200 mg)添加至135a(370 mg,1.59 mmol)含於乙醇(20 mL)之溶液中。將氫氣(經由氣球)加入反應中並在室溫下攪拌2 h。反應完成後，將混合物通過CELITE®墊而過濾。在減壓下濃縮濾液，得到呈黃色固體之135b(293 mg,91%)，其未進一步純化而用於下一步驟。MS-ESI：[M+H]+ 203.2。
實例135c 5-溴-3-(5-(2,2-二氟乙基)-4,5,6,7-四氫吡唑并[1,5-a]吡-2-基胺基)-1-甲基吡啶-2(1H)-酮135c
將135b(290 mg,1.43 mmol)、3,5-二溴-1-甲基吡啶-2(1H)-酮(383 mg,1.43 mmol)、碳酸銫(932 mg,2.86 mmol)以及1,4-二噁烷(20 mL)加入配備有回流冷凝器之50-mL圓底燒瓶中。於懸浮液中鼓入氮氣10分鐘後，添加xantphos(82 mg,0.143 mmol)與Pd2(dba)3(65 mg,0.072 mmol)。使系統經歷抽真空/氬氣沖洗之三次循環，並在回流下加熱5 h。接著將其冷卻至室溫並過濾。使用二氯甲烷(30 mL)清洗固體。在減壓下濃縮經合併的有機濾液。藉由矽膠管柱層析利用二氯甲烷/甲醇(80/1至30/1)溶離而純化殘餘物，得到呈黃色固體之135c(400 mg,72%)。MS-ESI：[M+H]+ 387.8。
實例135d 3-(5-(2,2-二氟乙基)-4,5,6,7-四氫吡唑并[1,5-a]吡-2-基胺基)-1-甲基-5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧雜硼雜環戊-2-基)吡啶-2(1H)-酮135d
將135c(400 mg,1.03 mmol)、Pin2B2(785 mg,3.1 mmol)、Pd2(dba)3(45 mg,0.050 mmol)、X-phos(48 mg,0.10 mmol)、乙酸鉀(294 mg,3.0 mmol)以及1,4-二噁烷(20 mL)加入配備有磁攪拌器以及回流冷凝器之50-mL單頸圓底燒瓶中。使反應混合物經歷抽真空/氬氣沖洗之三次循環，並在65℃下加熱3 h。接著將其冷卻至室溫並過濾。在減壓下濃縮濾液。使用石油醚清洗所得殘餘物，得到呈棕色固體之135d(412 mg,92%)，其未進一步純化而用於下一步驟。MS-ESI：[M+H]+ 436.0。
實例135e 2-(6-第三丁基-8-氟-1-側氧基呔-2(1H)-基)-4-(5-(5-(2,2-二氟乙基)-4,5,6,7-四氫吡唑并[1,5-a]吡-2-基胺基)-1-甲基-6-側氧基-1,6-二氫吡啶-3-基)菸鹼醛135e
將135d(200 mg,0.46 mmol)、2-(6-第三丁基-8-氟-1-側氧基呔-2(1H)-基)-4-氯菸鹼醛103b(166 mg,0.46 mmol)、K3PO4(195 mg,0.92 mmol)、乙酸鈉(75 mg,0.92 mmol)、1,1'-雙(二苯基膦基)二茂鐵二氯鈀(II)(17 mg,0.023 mmol)以及乙腈/水(8/0.2 mL)加入配備有回流冷凝器之25-mL圓底燒瓶中。抽真空/N2沖洗之三次循環後，在100℃下加熱混合物1h。藉由LCMS分析反應混合物顯示完全轉化為所需產物。將反應混合物冷卻至室溫。並使用二 氯甲烷(30 mL)與水(15 mL)稀釋。使用二氯甲烷(2×15 mL)萃取水層。在Na2SO4上乾燥合併之有機萃取物，過濾，並在減壓下濃縮。藉由矽膠管柱層析利用二氯甲烷/甲醇(80/1至30/1)溶離而純化深色殘餘物，得到呈黃色固體之135e(110 mg,38%)。MS-ESI：[M+H]+ 633.3。
實例135 6-第三丁基-2-[4-[5-[[5-(2,2-二氟乙基)-6,7-二氫-4H-吡唑并[1,5-a]吡-2-基]胺基]-1-甲基-6-側氧基-3-吡啶基]-3-(羥甲基)-2-吡啶基]-8-氟基-呔-1-酮135
在室溫下於135e(100 mg,0.158 mmol)含於甲醇/二氯甲烷(4/4 mL)之溶液中添加NaBH4(18 mg,0.475 mmol)。反應攪拌1 h後，LCMS顯示反應完成。使用水(20 mL)使反應混合物驟冷，並使用二氯甲烷(3×20 mL)萃取。使用(20 mL)鹽水清洗合併之有機層，在Na2SO4上乾燥，過濾，並在減壓下濃縮。藉由逆相製備型HPLC純化殘餘物，得到呈白色固體之135(60 mg,60%)。MS-ESI：[M+H]+ 635.3。1H NMR(500 MHz,CDCl3)δ 8.66(d,J=5.0 Hz,1H),8.35(d,J=2.5 Hz,1H),8.00(d,J=2.5 Hz,1H),7.59-7.58(m,1H),7.56-7.55(m,1H),7.53-7.52(m,2H),7.45(s,1H),6.07-5.83(m,1H),5.72(s,1H),4.51-4.49(m,2H),4.11-4.08(m,2H),4.05-4.03(m,1H),3.94(s,2H),3.73(s,3H),3.13-3.10(m,2H),3.00-2.94(m,2H),1.45(s,9H)。
實例136a (S)-(6-胺基吡啶-3-基)(3-甲基嗎啉基)甲酮136a
在室溫下，於(S)-3-甲基嗎啉(1.5 g,15.0 mmol)含於乙 醇(20 mL)之溶液中添加EDCI(3.33 g,17.4 mmol)、HOBt(2.35 g,17.4 mmol)以及6-胺基菸鹼酸(2.07 g,15.0 mmol)。攪拌18 h後，過濾所得懸浮液。藉由矽膠管柱層析利用2：1石油醚/乙酸乙酯至直接用乙酸乙酯溶離而純化固體，得到呈白色固體之136a(1.0 g,30%)。MS-ESI：222.3(M+H)+。
實例136b (S)-5-溴-1-甲基-3-(5-(3-甲基嗎啉-4-羰基)吡啶-2-基胺基)吡啶-2(1H)-酮136b
將136a(222 mg,1.0 mmol)、3,5-二溴-1-甲基吡啶-2(1H)-酮(320 mg,1.2 mmol)、碳酸銫(652 mg,2 mmol)以及1,4-二噁烷(10 mL)加入配備有磁攪拌器以及回流冷凝器之50-mL單頸圓底燒瓶中。於懸浮液中鼓入氮氣10分鐘後，添加Xantphos(58 mg,0.10 mmol)與叁(二亞苄基丙酮)二鈀(0)(46 mg,0.050 mmol)。使系統經歷抽真空/氬氣沖洗之三次循環，並在回流下加熱2.5 h。接著將其冷卻至室溫並過濾。使用二氯甲烷(2×30 mL)清洗固體，並在減壓下濃縮合併之濾液。藉由矽膠管柱層析利用石油醚/乙酸乙酯(2：1至1：2)溶離而純化殘餘物，得到呈黃色固體之136b(280 mg,69%)。MS-ESI：[M+H]+ 407.3。
實例136c (S)-1-甲基-5-(5-(3-甲基嗎啉-4-羰基)吡啶-2- 基胺基)-6-側氧基-1,6-二氫吡啶-3-基酸136c
將136b(600 mg,1.5 mmol)、雙(頻哪醇基)二硼(1.2 g,4.5 mmol)、Pd2(dba)3(137 mg,0.15 mmol)、X-phos(71 mg,0.15 mmol)、乙酸鉀(294 mg,3.0 mmol)以及1,4-二噁烷(20 mL)加入配備有回流冷凝器之100-mL圓底燒瓶中。在抽真空/氬氣沖洗之三次循環後，混合物在70℃下加熱2 h。接著經過濾，並在減壓下蒸發濾液。使用石油醚清洗殘餘物，得到呈白色固體之136c(520 mg,93%)，其可不經進一步純化而直接使用。MS-ESI：[M+H]+ 373.1。
實例136d (S)-2-(6-第三丁基-8-氟-1-側氧基呔-2(1H)-基)-4-(1-甲基-5-(5-(3-甲基嗎啉-4-羰基)吡啶-2-基胺基)-6-側氧基-1,6-二氫吡啶-3-基)菸鹼醛136d
將136c(260 mg,0.70 mmol)、2-(6-第三丁基-8-氟-1-側氧基呔-2(1H)-基)-4-氯菸鹼醛103b(180 mg,0.50 mmol)、K3PO4(297 mg,1.4 mmol)、乙酸鈉(114 mg,1.4 mmol)、1,1'-雙(二苯基膦基)二茂鐵二氯鈀(II)(57 mg,0.07 mmol)以及乙腈/水(10/0.2 mL)加入配備有磁攪拌器以及回流冷凝器之100-mL單頸圓底燒瓶中。抽真空/N2沖洗之三次循環後，混合物在100℃下加熱1.5 h。藉由LCMS分析反應混合物顯示完全轉化為所需產物。將反應混合物冷卻至室溫，並在減壓下濃縮。使用二氯甲烷(20 mL)與水(10 mL)稀釋殘餘物。分離水層，並使用二氯甲烷(3×20 mL)萃取。在Na2SO4上乾燥合併之有機層，過濾，並在減壓下濃縮。藉由矽膠管柱層析利用60：1二氯甲烷/甲醇溶離而純化 深色殘餘物，得到呈黃色固體之136d(140 mg,43%)。MS-ESI：[M+H]+ 652.3。
實例136 6-第三丁基-8-氟-2-[3-(羥甲基)-4-[1-甲基-5-[[5-[(3S)-3-甲基嗎啉-4-羰基]-2-吡啶基]胺基]-6-側氧基-3-吡啶基]-2-吡啶基]呔-1-酮136
於136d(140 mg,0.21 mmol)含於甲醇/二氯甲烷(4/4 mL)之溶液中添加NaBH4(16 mg,0.63 mmol)。在室溫下攪拌混合物1 h，並利用水(2 mL)萃取。然後在減壓下將其蒸發，並藉由逆相製備型HPLC純化殘餘物，得到呈白色固體之136(40 mg,28%)。MS-ESI：[M+H]+ 654.3。1H NMR(500 MHz,DMSO-d 6)δ 9.00(s,1H),8.77(d,J=8.0 Hz,1H),8.57(d,J=5.0 Hz,1H),8.53(d,J=2.5 Hz,1H),8.25(d,J=2.5 Hz,1H),7.90(d,J=1.5 Hz,1H),7.78(d,J=1.0 Hz,1H),7.65-7.63(m,1H),7.59(d,J=2.5 Hz,1H),7.53(d,J=5.0 Hz,1H),7.37(d,J=8.5 Hz,1H),4.91-4.89(m,1H),4.45-4.39(m,2H),4.17-4.13(m,1H),3.79-3.67(m,2H),3.58-3.53(m，重疊，5H),3.41-3.36(m,1H),3.29-3.25(m,1H),1.39(s,9H),1.22(d,J=7.5 Hz,3H)。
實例138a (S)-4-(6-(5-氯-2-甲氧基吡啶-3-基胺基)吡啶-3-基)-3-甲基哌-1-羧酸第三丁基酯138a
將1,4-二噁烷(40 mL)、(S)-4-(6-胺基吡啶-3-基)-3-甲基哌-1-羧酸第三丁基酯105b(2.04 g,7.0 mmol)、3-溴-5-氯-2-甲氧基吡啶(2.8 g,12.6 mmol)、Pd2(dba)3(640 mg,0.70 mmol)、XantPhos(404.6 mg,0.70 mmol)以及碳酸銫(4.56 g,14.0 mmol)加入配備有磁攪拌器以及回流冷凝器之100-mL單頸圓底燒瓶中。在抽真空/氬氣沖洗之三次循環後，混合物在100℃下加熱4 h。此後，將反應冷卻至室溫。接著經過濾，並在減壓下蒸發濾液。藉由矽膠管柱層析利用1：3乙酸乙酯/石油醚溶離而純化殘餘物，得到呈黃色固體之138a(1.7 g,57%)。MS-ESI：[M+H]+ 434.2。
實例138b (S)-5-氯-3-(5-(2-甲基哌-1-基)吡啶-2-基胺基)吡啶-2(1H)-酮138b
138a(1.0 g,2.3 mmol)含於二噁烷/HCl(30 mL)之溶液在100℃下攪拌2 h。然後在減壓下將其蒸發，得到呈黃色固體之138b(1.48 g，粗物質)。MS-ESI：[M+H]+ 320.3。
實例138c (S)-5-氯-3-(5-(2-甲基-4-(氧雜環丁-3-基)哌-1-基)吡啶-2-基胺基)吡啶-2(1H)-酮138c
於138b(1.0 g,3.1 mmol)含於甲醇(35 mL)之溶液中添加氧雜環丁烷-3-酮(669.6 mg,9.3 mmol)、NaBH3CN(585.9 mg,9.3 mmol)以及ZnCl2(1.26 g,9.3 mmol)。反應在30℃下攪拌2 h。在減壓下蒸發混合物，並使用水(20 mL)稀釋殘餘物。然後使用二氯甲烷(3×30 mL)萃取。在減壓下濃縮經合併的二氯甲烷萃取物，並藉由矽膠管柱層析利用40：1乙酸乙酯/甲醇溶離而純化殘餘物，得到呈紅色固體之138c(291 mg,25%)。MS-ESI：[M+H]+ 376.3。
實例138 (S)-6-第三丁基-8-氟-2-(3-(羥甲基)-4-(5-(5-(2-甲基-4-(氧雜環丁-3-基)哌-1-基)吡啶-2-基胺基)-6-側氧基-1,6-二氫吡啶-3-基)吡啶-2-基)呔-1(2H)-酮138
將138c(150 mg,0.40 mmol)、3-(乙醯氧基甲基)-2-(6-第三丁基-8-氟-1-側氧基呔-2(1H)-基)吡啶-4-基酸116c(495.6 mg,1.2 mmol)、Pd2(dba)3(36.6 mg,0.040 mmol)、P(cy)3(44.6 mg,0.16 mmol)、Cs2CO3(391.2 mg,1.2 mmol)、二噁烷(8 mL)以及水(0.2 mL)加入配備有磁攪拌器之密封管中。在抽真空/氬氣沖洗之三次循環後，混合物在120℃下加熱4 h。此後，將反應冷卻至室溫。接著經過濾，並在減壓下蒸發濾液。藉由矽膠管柱層析利用40：1乙酸乙酯/甲醇溶離而純化殘餘物，並進一步藉由逆相製備型HPLC純化，得到呈黃色固體之138(48 mg,18%)。MS-ESI：[M+H]+ 667.3。1H NMR(500 MHz,DMSO-d 6)δ 12.05(s,1H),8.65(d,J=2.0 Hz,1H),8.57(d,J=5.0 Hz,1H),8.55(d,J=3.0 Hz,1H),8.44(s,1H),7.91(d,J=2.0 Hz,1H),7.87(d,J=2.5 Hz,1H),7.79(dd,J=1.0 Hz,13.0 Hz,1H),7.54(d,J=5.0 Hz,1H),7.39(dd,J=2.5 Hz,9.0 Hz, 1H),7.26-7.23(m,2H),4.97-4.95(m,1H),4.58-4.54(m,2H),4.48-4.46(m,1H),4.43-4.41(m,1H),4.38-4.37(m,2H),3.69-3.68(m,1H),3.41-3.39(m,1H),3.11-3.09(m,1H),2.97-2.93(m,1H),2.56-2.54(m,1H),2.35-2.32(m,2H),2.21-2.17(m,1H),1.40(s,9H),0.94(d,J=6.5 Hz,3H),
實例139a (3-硝基-1H-吡唑-5-基)甲醇139a
3-硝基-1H-吡唑-5-羧酸(4.71 g,30 mmol)、BH3/THF(75 mL,1 mol/L,75 mmol)之混合物在60℃下攪拌2 h。將混合物冷卻至室溫，並添加4 M HCl(19 mL,75 mmol)。在70℃下將其攪拌2 h。冷卻至室溫後，在減壓下濃縮混合物。將殘餘物分配在乙酸乙酯與鹽水(100：100 mL)之間。使用乙酸乙酯(4×50 mL)萃取水相。在Na2SO4上乾燥合併之有機層，並在減壓下蒸發。藉由矽膠管柱層析利用石油醚/乙酸乙酯(5：1至1：1)溶離而純化殘餘物，得到呈白色固體之139a(3.5 g,79%)。MS-ESI：[M+H]+ 144.2。
實例139b 1-(5-(羥甲基)-3-硝基-1H-吡唑-1-基)-2-甲基 丙-2-醇139b
將139a(2.145 g,15 mmol)、Cs2CO3(978 mg,3.0 mmol)以及2,2-二甲基環氧乙烷(15 mL)加入密封管中。混合物在70℃下攪拌3 h。冷卻至室溫後，在減壓下濃縮混合物。藉由矽膠管柱層析利用石油醚/乙酸乙酯(5：1至1：1)溶離而純化殘餘物，得到呈白色固體之139b(1.2 g,38%)。MS-ESI：[M+H]+ 216.2。
實例139c 6,6-二甲基-2-硝基-6,7-二氫-4H-吡唑并[5,1-c][1,4]噁 139c
在0℃下於139b(1.1 g,5.1 mmol)含於DMF(10 mL)之溶液中添加NaH(含於礦物油之60%分散液，246 mg,6.14 mmol)。攪拌所得懸浮液30分鐘，接著添加p-甲苯磺醯氯(1169 mg,6.14 mmol)。混合物在60℃下攪拌隔夜。冷卻至室溫後，添加飽和氯化銨溶液，並使用二氯甲烷萃取混合物。使用鹽水清洗合併有機層，在Na2SO4上乾燥，並在減壓下蒸發。藉由矽膠管柱層析利用石油醚/乙酸乙酯梯度(9：1至2：1)溶離而純化殘餘物，得到139c(228 mg,22%)。MS-ESI：[M+H]+ 198.3。
實例139d 6,6-二甲基-6,7-二氫-4H-吡唑并[5,1-c][1,4]噁-2-胺139d
使用氮氣沖洗50-mL單頸圓底燒瓶，並加入139c(0.21 g,1.25 mmol)、10%碳載鈀(50%濕品，125 mg)以及甲醇(10 mL)。將混合物抽真空，充入氫氣，並在室溫下攪拌2 h。然後抽出氫氣，並將氮氣充入燒瓶中。藉由過濾通過 CELITE®墊而移除觸媒，並在減壓下濃縮濾液，得到139d(167 mg,93%)。MS-ESI：[M+H]+ 168.1。
實例139e 5-溴-3-(6,6-二甲基-6,7-二氫-4H-吡唑并[5,1-c][1,4]噁-2-基胺基)-1-甲基吡啶-2(1H)-酮139e
將1,4-二噁烷(10 mL)、139d(167 mg,1.0 mmol)、3,5-二溴-1-甲基吡啶-2(1H)-酮(320 mg,1.2 mmol)、Pd2(dba)3(91 mg,0.10 mmol)、XantPhos(116 mg,0.20 mmol)以及碳酸銫(652 mg,2.0 mmol)加入配備有回流冷凝器之100-mL圓底燒瓶中。在抽真空/氬氣沖洗之三次循環後，混合物在100℃下加熱3 h。接著經過濾並在減壓下蒸發濾液。藉由矽膠管柱層析利用100：1二氯甲烷/甲醇溶離而純化殘餘物，得到呈黃色固體之139e(210 mg,60%)。MS-ESI：[M+H]+ 352.9。
實例139f 乙酸(2-(6-第三丁基-8-氟-1-側氧基呔-2(1H)-基)-4-(5-(6,6-二甲基-6,7-二氫-4H-吡唑并[5,1-c][1,4]噁-2-基胺基)-1-甲基-6-側氧基-1,6-二氫吡啶-3-基)吡啶-3-基)甲酯139f
將139e(177 mg,0.50 mmol)、3-(乙醯氧基甲基)-2-(6-第三丁基-8-氟-1-側氧基呔-2(1H)-基)吡啶-4-基酸116c(207 mg,0.50 mmol)、Pd(dppf)Cl2(41 mg,0.050 mmol)、乙酸鈉(82 mg,1.0 mmol)、K3PO4三水合物(266 mg,1.0 mmol)、水(6滴)以及乙腈(5 mL)加入配備有磁攪拌器及回流冷凝器之25-mL圓底燒瓶中。在抽真空/氬氣沖洗之三次循環後，混合物在100℃下加熱2 h。接著經過濾，並在減 壓下蒸發濾液。藉由矽膠管柱層析利用50：1二氯甲烷/甲醇溶離而純化殘餘物，得到呈棕色固體之139f(161 mg,50%)。MS-ESI：[M+H]+ 642.3。
實例139 6-第三丁基-2-[4-[5-[(6,6-二甲基-4,7-二氫吡唑并[5,1-c][1,4]噁-2-基)胺基]-1-甲基-6-側氧基-3-吡啶基]-3-(羥甲基)-2-吡啶基]-8-氟基-呔-1-酮139
139f(160 mg,0.25 mmol)與氫氧化鋰(60 mg,2.5 mmol)含於i-丙醇/THF(1：1,4 mL)與水(1 mL)之混合物在30℃下攪拌1 h。在減壓下蒸發混合物，並使用水(5 mL)稀釋殘餘物。然後使用乙酸乙酯(3×10 mL)萃取。在減壓下濃縮合併的乙酸乙酯萃取物，並藉由逆相製備型HPLC純化殘餘物，得到呈淺黃色固體之139(60 mg,40%)。MS-ESI：[M+H]+ 599.8。1H NMR(500 MHz,DMSO-d 6)δ 8.57(d,J=5.0 Hz,1H),8.54(d,J=2.5 Hz,1H),8.34(s,1H),8.08(d,J=2.5 Hz,1H),7.90(d,J=1.5 Hz,1H),7.79-7.76(m,1H),7.51(d,J=5.0 Hz,1H),7.39(d,J=2.0 Hz,1H),5.95(s,1H),4.92(bs,1H),4.73(s,2H),4.42(s,2H),3.80(s,2H),3.60(s,3H),1.40(s,9H),1.26(s,6H)。
實例140a 5-溴-1-甲基-3-(1-甲基-1H-吡唑-3-基胺基)吡啶-2(1H)-酮140a
將1,4-二噁烷(100 mL)、1-甲基-1H-吡唑-3-胺(970 mg, 10.0 mmol)、3,5-二溴-1-甲基吡啶-2-(1H)-酮(2.9 g,11 mmol)以及碳酸銫(6.5 g,20.0 mmol)加入配備有磁攪拌器以及回流冷凝器之250-mL單頸圓底燒瓶中。於懸浮液中鼓入氮氣10分鐘後，添加叁(二亞苄基丙酮)二鈀(0)(457 mg,0.50 mmol)與Xantphos(587 mg,1.0 mmol)。使系統經歷抽真空/氬氣沖洗之三次循環，並在回流下加熱2 h。接著將其冷卻至室溫並過濾。使用二氯甲烷(2×50 mL)清洗固體，並濃縮經合併的有機濾液。藉由矽膠管柱層析利用30：1二氯甲烷/甲醇溶離而純化殘餘物，得到呈黃色固體之140a(900 mg,32%)。MS-ESI：[M+H]+ 283.1。
實例140b 1-甲基-3-(1-甲基-1H-吡唑-3-基胺基)-5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧雜硼雜環戊-2-基)吡啶-2(1H)-酮140b
將140a(564 mg,2.0 mmol)、雙(頻哪醇基)二硼(1.5 g,6.0 mmol)、Pd2(dba)3(183 mg,0.20 mmol)、X-phos(95 mg,0.20 mmol)、乙酸鉀(392 mg,4.0 mmol)以及1,4-二噁烷(20 mL)加入配備有回流冷凝器之100-mL圓底燒瓶中。抽真空及氬氣沖洗之三次循環後，混合物在70℃下加熱2h。然後將其冷卻至室溫並過濾。在減壓下蒸發濾液。使用石油醚清洗殘餘物，以得到呈棕色固體之140b(600 mg,91%)，其未進一步純化而使用。MS-ESI：[M+H]+ 331.0。
實例140c 2-(6-第三丁基-8-氟-1-側氧基呔-2(1H)-基)-4-(1-甲基-5-(1-甲基-1H-吡唑-3-基胺基)-6-側氧基-1,6-二氫吡啶-3-基)菸鹼醛140c
將2-(6-第三丁基-8-氟-1-側氧基呔-2(1H)-基)-4-氯菸鹼醛103b(359 mg,1.0 mmol)、140b(660 mg,2.0 mmol)、K3PO4(424 mg,2.0 mmol)、1,1'-雙(二苯基膦基)二茂鐵二氯鈀(II)(82 mg,0.10 mmol)、乙酸鈉(164 mg,2.0 mmol)以及乙腈/水(15/0.2 mL)加入配備有回流冷凝器之50-mL圓底燒瓶中。抽真空/N2沖洗之三次循環後，混合物在100℃下加熱1.5 h。將混合物冷卻至室溫，並在減壓下濃縮。使用二氯甲烷(30 mL)與水(30 mL)稀釋殘餘物。分離有機層，並使用二氯甲烷(3×20 mL)萃取水相。在Na2SO4上乾燥合併之有機層，過濾，並在減壓下濃縮。藉由矽膠管柱層析利用二氯甲烷/甲醇(80/1至50/1)溶離而純化深色殘餘物，得到呈黃色固體之140c(280 mg,53%)。MS-ESI：[M+H]+ 528.1。
實例140 6-第三丁基-8-氟-2-[3-(羥甲基)-4-[1-甲基-5-[(1-甲基吡唑-3-基)胺基]-6-側氧基-3-吡啶基]-2-吡啶基]呔-1-酮140
於140c(270 mg,0.50 mmol)含於THF(5 mL)、丙-2-醇(5 mL)以及水(2 mL)之溶液中添加氫氧化鋰(36 mg,1.5 mmol)。反應混合物在室溫下攪拌1 h，並在減壓下濃縮。使用二氯甲烷(20 mL)與水(10 mL)稀釋殘餘物。分離有機層，並使用二氯甲烷(3×15 mL)萃取水層。使用鹽水清洗合併之有機層，並在減壓下濃縮。藉由逆相製備型HPLC純化殘餘物，得到呈白色固體之140(53 mg,20%)。MS-ESI：[M+H]+ 530.3。1H NMR(500 MHz,DMSO-d 6)δ 8.56 (d,J=5.0 Hz,1H),8.53(d,J=2.0 Hz,1H),8.21(s,1H),8.03(d,J=2.5 Hz,1H),7.89(s,1H),7.78-7.5(m,1H),7.51-7.48(m,2 H),7.39(d,J=2.5 Hz,1H),6.07(d,J=2.0 Hz,1H),4.91(s,1H),4.42(s,2 H),3.71(s,3 H),3.58(s,3 H),1.39(s,9 H)。
實例141a 6-氯-2-甲基-4-(5-甲基異噁唑-3-基胺基)噠-3(2H)-酮141a
將1,4-二噁烷(40 mL)、5-甲基異噁唑-3-胺(559 mg,5.7 mmol)、4-溴-6-氯-2-甲基噠-3(2H)-酮(1.89 g,8.55 mmol)、Pd2(dba)3(521 mg,0.57 mmol)、XantPhos(329 mg,0.57 mmol)以及碳酸銫(3.72 g,11.4 mmol)加入配備有磁攪拌器以及回流冷凝器之100-mL單頸圓底燒瓶中。在抽真空/氬氣沖洗之三次循環後，混合物在100℃下加熱3 h。接著將混合物冷卻至80℃並過濾。將濾液冷卻至室溫。然後將其過濾，得到呈黃色固體之141a(600 mg,44%)。MS-ESI：[M+H]+ 241.0。
實例141b 乙酸(2-(6-第三丁基-8-氟-1-側氧基呔-2(1H)-基)-4-(1-甲基-5-(5-甲基異噁唑-3-基胺基)-6-側氧基-1,6-二氫噠-3-基)吡啶-3-基)甲酯141b
將141a(288 mg,1.2 mmol)、3-(乙醯氧基甲基)-2-(6-第 三丁基-8-氟-1-側氧基-呔-2(1H)-基)吡啶-4-基酸116c(1.49 g,3.6 mmol)、Pd(dppf)Cl2(99 mg,0.12 mmol)、乙酸鉀(235 mg,2.4 mmol)、K3PO4(523 mg,2.4 mmol)、乙腈(20 mL)以及水(10滴)加入配備有磁攪拌器以及回流冷凝器之100-mL單頸圓底燒瓶中。在抽真空/氬氣沖洗之三次循環後，混合物在95℃下加熱2 h。然後將其過濾，並在減壓下濃縮濾液。藉由矽膠管柱層析利用1：1乙酸乙酯/石油醚溶離而純化殘餘物，得到呈黃色固體之141b(220 mg,32%)。MS-ESI：[M+H]+ 574.2。
實例141 6-第三丁基-8-氟-2-[3-(羥甲基)-4-[1-甲基-5-[(5-甲基異噁唑-3-基)胺基]-6-側氧基-噠-3-基]-2-吡啶基]呔-1-酮141
141a(117.3 mg,0.20 mmol)與氫氧化鋰 單水合物(84 mg,2.0 mmol)含於i-丙醇/THF(1：1,8 mL)與水(1 mL)之混合物在35℃下攪拌0.5 h。在減壓下濃縮混合物。將殘餘物分配在水(10 mL)與二氯甲烷(10 mL)之間。使用二氯甲烷(3×10 mL)萃取水相。在減壓下濃縮合併之有機層，並藉由逆相製備型HPLC純化殘餘物，得到呈淺黃色固體之141(70 mg,66%)。MS-ESI：[M+H]+ 532.2。1H NMR(500 MHz,DMSO-d 6)δ 9.92(s,1H),8.65(d,J=5.5 Hz,1H),8.55(d,J=2.5 Hz,1H),7.90(d,J=1.5 Hz,1H),7.85(s,1H),7.80-7.77(m,1H),7.62(d,J=5.0 Hz,1H),6.33(s,1H),4.85(s,1H),4.56-4.53(m,1H),4.45-4.42(m,1H),3.80(s,3H),2.36(s,3H),1.40(s,9H)。
實例142a 3-溴-5-碘吡啶-2-醇142a
將乙腈(50 mL)、TFA(10 mL)、3-溴吡啶-2-醇(4.0 g,11.56 mmol)、N-碘琥珀醯亞胺(5.2 g,11.56 mmol)加入配備有磁攪拌器之100-mL單頸圓底燒瓶中。在室溫下攪拌混合物15 h。使用水(100 mL)稀釋混合物，並藉由過濾收集所得白色固體，得到呈白色固體之142a(6.6 g,96%)。MS-ESI：[M+H]+ 300。
實例142b 3-溴-5-碘-1-甲基吡啶-2(1H)-酮142b
將DMF(50 mL)、142a(6.0 g,20.0 mmol)、CH3I(4.26 g,30.0 mmol)以及K2CO3(5.52 g,40.0 mmol)加入配備有磁攪拌器之100-mL單頸圓底燒瓶中。在室溫下攪拌混合物2 h，並使用水(200 mL)稀釋。藉由過濾收集所得白色固體，得到呈白色固體之142b(5.97 g,95%)。MS-ESI：[M+H]+ 314。
實例142c 乙酸(4-(5-溴-1-甲基-6-側氧基-1,6-二氫吡啶-3-基)-2-(6-第三丁基-8-氟-1-側氧基呔-2(1H)-基)吡啶-3-基)甲酯142c
將142b(1.37 g,4.38 mmol,1.0 eq.)、3-(乙醯氧基甲基)-2-(6-第三丁基-8-氟-1-側氧基呔-2(1H)-基)吡啶-4-基酸 116c(2.07 mg,5.0 mmol)、Pd(dppf)Cl2(179 mg,0.219 mmol,0.050 eq.)、乙酸鈉(718 mg,8.76 mmol,2.0 eq.)、K3PO4(1.86 g,8.76 mmol,2.0 eq.)、乙腈(20 mL)以及水(1 mL)加入配備有磁攪拌器以及回流冷凝器之50-mL單頸圓底燒瓶中。在抽真空/氬氣沖洗之三次循環後，混合物在30℃下加熱2 h。接著將其冷卻至室溫並過濾。在減壓下濃縮濾液，並藉由矽膠管柱層析利用100：1二氯甲烷/乙醇溶離而純化所得殘餘物，得到呈黃色固體之142c(800 mg,32%)。MS-ESI：[M+H]+ 555.2。1H NMR(500 MHz,DMSO-d 6 )δ 8.66(d,J=5.0 Hz,1H),8.56(d,J=2.5 Hz,1H),8.14(d,J=2.5 Hz,1H),8.08(d,J=2.0 Hz,1H),7.91(d,J=1.5 Hz,1H),7.82-7.79(m,1H),7.62(d,J=6.5 Hz,1H),5.02(s,2H),3.59(s,3H),1.78(s,3H),1.40(s,9H)。
實例142d 乙酸(2-(6-第三丁基-8-氟-1-側氧基呔-2(1H)-基)-4-(5-(1-乙基-1H-吡唑-3-基胺基)-1-甲基-6-側氧基-1,6-二氫吡啶-3-基)吡啶-3-基)甲酯142d
向1-打蘭(dram)小瓶中添加含於乾燥1,4-二噁烷(0.2 M)之142c(40 mg,0.074 mmol)、1-乙基-1H-吡唑-3-胺(1.2當量)、碳酸銫(1.5當量)、Xantphos(10 mol%)以及叁(二亞苄基丙酮)二鈀(0)(5 mol%)。接著混合物在80℃下攪拌3小時。冷卻至室溫後，接著使用二氯甲烷(3 mL)稀釋反應， 並使用水(2×3 mL)清洗。在硫酸鎂上乾燥有機層，過濾並在真空中濃縮。無需純化粗產物142d而接著繼續用於後續步驟。
實例142 6-第三丁基-2-[4-[5-[(1-乙基吡唑-3-基)胺基]-1-甲基-6-側氧基-3-吡啶基]-3-(羥甲基)-2-吡啶基]-8-氟基-呔-1-酮142
向1打蘭小瓶中添加含於THF與水之4：1混合物(1 mL)之142d(1當量)。接著將氫氧化鋰(1.5當量)添加至混合物中，且反應在室溫下攪拌16小時。隨後使用二氯甲烷(3 mL)稀釋反應，並用水(2×3 mL)清洗。收集有機層，在硫酸鎂上乾燥，過濾，並在真空中濃縮。藉由逆相層析純化粗物質，得到142(7.6 mg,19%產率)。1H NMR(400 MHz,DMSO-d6)δ 8.55(s,1H),8.52(d,J=2.5 Hz,1H),8,16(s,1H),8.06(d,J=2.5 Hz,1H),7.89(m,1H),7.75(dd,J=13.1,1.9 Hz,1H),7.53(d,J=2.2 Hz,1H),7.51(d,J=12.6 Hz,1H),7.40(d,J=2.1 Hz,1H),6.07(s,1H),4.46(br s 1H),4.00(q,J=7.2 Hz,2H),3.60(s,3H),3.17(s,2H),1.39(s,9H),1.34(t,J=7.2 Hz,3H)。ES-MS m/z 544.3[M+1]。
實例143 6-第三丁基-8-氟-2-[3-(羥甲基)-4-[5-[[5-(甲氧基甲基)-1-甲基-吡唑-3-基]胺基]-1-甲基-6-側氧基-3-吡啶基]-2-吡啶基]呔-1-酮143
按照實例142之程序，並使用5-(甲氧基甲基)-1-甲基-1H-吡唑-3-胺替代1-乙基-1H-吡唑-3-胺，製備143(11.2 mg,54%產率)。1H NMR(400 MHz,DMSO-d6)δ 8.56(d,J=5.0 Hz,1H),8.53(d,J=2.5 Hz,1H),8.19(s,1H),8.03(d,J=2.4 Hz,1H),7.89(d,J=1.8 Hz,1H),7.76(dd,J=13.2,1.7 Hz,1H),7.50(d,J=5.0 Hz,1H),7.39(d,J=2.4 Hz,1H),6.11(s,1H),4.43(d,J=5.4 Hz,2H),4.38(s,2H),3.66(s,3H),3.59(s,3H),3.26(s,3H),1.39(s,9H)。ES-MS m/z 574.3[M+1]。
實例144 6-第三丁基-8-氟-2-[3-(羥甲基)-4-[1-甲基-5-[[1-甲基-5-(吡咯啶-1-羰基)吡唑-3-基]胺基]-6-側氧基-3-吡啶基]-2-吡啶基]呔-1-酮144
按照實例142之程序，並用(3-胺基-1-甲基-1H-吡唑-5-基)(吡咯啶-1-基)甲酮替代1-乙基-1H-吡唑-3-胺，製得144(14.6 mg,65%產率)。1H NMR(400 MHz,DMSO-d 6)δ 8.59-8.50(m,2H),8.28(s,1H),8.04(d,J=2.3 Hz,1H),7.89(d,J=1.8 Hz,1H),7.76(dd,J=13.1,1.7 Hz,1H),7.51(d,J=5.1 Hz,1H),7.42(d,J=2.3 Hz,1H),6.46(s,1H),4.87(t,J=5.1 Hz,1H),4.47-4.40(m,2H),3.79(s,3H),3.60(s,3H),3.48(dd,J=19.0,6.7 Hz,4H),1.91-1.82(m,4H),1.39(s,9H)。ES-MS m/z 627.4[M+1]。
實例145 6-第三丁基-2-[4-[5-[[1-(2,2-二氟乙基)-5-甲基-吡唑-3-基]胺基]-1-甲基-6-側氧基-3-吡啶基]-3-(羥甲基)-2-吡啶基]-8-氟基-呔-1-酮145
按照實例142之程序，並用1-(2,2-二氟乙基)-5-甲基-1H-吡唑-3-胺替代1-乙基-1H-吡唑-3-胺，製得145(11 mg, 26%產率)。1H NMR(400 MHz,DMSO-d6)δ 8.55(d,J=5.0 Hz,1H),8.52(d,J=2.7 Hz,1H),8.20(s,1H),8.11(d,J=2.4 Hz,1H),7.90(d,J=1.6 Hz,1H),7.75(dd,J=13.1,1.8 Hz,1H),7.50(d,J=5.0 Hz,1H),7.42(d,J=2.4 Hz,1H),5.97(s,1H),4.88(t,J=5.0 Hz,1H),4.46-4.33(m,5H),3.59(s,3H),2.21(s,3H),1.39(s,9H)。ES-MS m/z 594.3[M+1]。
實例146a 2-(5-(羥甲基)-3-硝基-1H-吡唑-1-基)乙酸乙酯146a
將乙腈(30 mL)、(3-硝基-1H-吡唑-5-基)甲醇(1.43 g,10.0 mmol)、Cs2CO3(490 mg,1.5 mmol)以及2-溴乙酸乙酯(2.00 g,12 mmol)加入配備有磁攪拌器之100-mL單頸圓底燒瓶中。混合物在40℃下攪拌5 h。接著將其冷卻至室溫並過濾。在減壓下濃縮濾液，並藉由矽膠管柱層析利用30：1二氯甲烷/甲醇溶離而純化殘餘物，得到呈黃色固體之146a(1.65 g,72%)。MS-ESI：[M+H]+ 229.9。
實例146b 2-(5-(氯甲基)-3-硝基-1H-吡唑-1-基)乙酸乙酯146b
於在0℃下冷卻之146a(1.50 g,6.55 mmol)含於CHCl3(60 mL)之混合物中緩慢添加SOCl2(2.34 g,19.6 mmol)，同時使內部溫度維持在低於5℃下。將該反應混合物加熱至50℃，並在此溫度下攪拌3 h。然後將其冷卻至0℃，並使用水驟冷。分離有機層，並在減壓下蒸發。藉由矽膠管柱層析利用30：1二氯甲烷/甲醇溶離而純化殘餘物，得到呈 黃色固體之146b(1.1 g,68%)。MS-ESI：[M+H]+ 247.9。
實例146c 5-甲基-2-硝基-4,5-二氫吡唑并[1,5-a]吡-6(7H)-酮146c
於146b(1.0 g,4.0 mmol)含於二氯甲烷(30 mL)之溶液中添加CH3NH2之溶液(1.07 g,12.0 mmol,35%含於甲醇)。該反應混合物在室溫下攪拌3 h，並用水(30 mL)稀釋。分離有機層，在Na2SO4上乾燥，並在減壓下濃縮。藉由矽膠管柱層析利用30：1二氯甲烷/甲醇溶離而純化殘餘物，得到呈黃色固體之146c(450 mg,57%)。MS-ESI：[M+H]+ 196.9。
實例146d 2-胺基-5-甲基-4,5-二氫吡唑并[1,5-a]吡-6(7H)-酮146d
於146c(450 mg,2.3 mmol)含於乙醇(30 mL)之溶液中添加Pd/C(10%,400 mg)。將氫氣(經由氣球)加入反應中，並在室溫下攪拌2 h。反應完成後，將混合物經CELITE®墊過濾，並在減壓下濃縮濾液，得到呈黃色固體之146d(320 mg,84%)，其未進一步純化而用於下一步驟。MS-ESI：[M+H]+ 167.1。
實例146e 2-(5-溴-1-甲基-2-側氧基-1,2-二氫吡啶-3-基胺基)-5-甲基-4,5-二氫吡唑并[1,5-a]吡-6(7H)-酮146e
將146d(300 mg,1.8 mmol)、3,5-二溴-1-甲基吡啶-2(1H)-酮(482 mg,1.8 mmol)、碳酸銫(1.17 g,3.6 mmol)以及1,4-二噁烷(20 mL)加入配備有磁攪拌器以及回流冷凝器之100-mL圓底燒瓶中。於懸浮液中鼓入氮氣10分鐘後，添加xantphos(104 mg,0.18 mmol)與叁(二亞苄基丙酮)二鈀 (0)(82 mg,0.090 mmol)。使系統經歷抽真空/氬氣沖洗之三次循環，並在回流下加熱5 h。接著將其冷卻至室溫並過濾。使用二氯甲烷(2×30 mL)清洗固體。在減壓下濃縮合併之濾液。藉由矽膠管柱層析利用二氯甲烷/甲醇(80/1至30/1)溶離而純化殘餘物，得到呈黃色固體之146e(390 mg,61%)。
實例146f 乙酸(2-(6-第三丁基-8-氟-1-側氧基呔-2(1H)-基)-4-(1-甲基-5-(5-甲基-6-側氧基-4,5,6,7-四氫吡唑并[1,5-a]吡-2-基胺基)-6-側氧基-1,6-二氫吡啶-3-基)吡啶-3-基)甲酯146f
將3-(乙醯氧基甲基)-2-(6-第三丁基-8-氟-1-側氧基呔-2(1H)-基)吡啶-4-基酸116c(165mg,0.40 mmol)、146e(141 mg,0.40 mmol)、K3PO4(170 mg,0.80 mmol)、乙酸鈉(66 mg,0.80 mmol)、Pd(dppf)Cl2(15 mg,0.020 mmol)以及乙腈/水(8/0.2 mL)加入配備有回流冷凝器之25-mL圓底燒瓶中。使混合物經歷抽真空/氮氣沖洗之三次循環，並在N2保護下，在100℃下加熱1 h。藉由LCMS分析反應混合物顯示完全轉化為所需產物。將反應混合物冷卻至室溫，並在減壓下濃縮。使用二氯甲烷(30 mL)與水(30 mL) 稀釋殘餘物。分離有機層，並使用二氯甲烷(2×30 mL)萃取水層。在Na2SO4上乾燥合併之有機萃取物，過濾，並在減壓下濃縮。藉由矽膠管柱層析利用二氯甲烷/甲醇(80/1至30/1)溶離而純化深色殘餘物，得到呈黃色固體之146f(115 mg,45%)。MS-ESI：[M+H]+ 641.4。
實例146 6-第三丁基-8-氟-2-[3-(羥甲基)-4-[1-甲基-5-[(5-甲基-6-側氧基-4,7-二氫吡唑并[1,5-a]吡-2-基)胺基]-6-側氧基-3-吡啶基]-2-吡啶基]呔-1-酮146
於146f(110 mg,0.172 mmol)含於THF/i-丙醇/水(4/2/2 mL)之溶液中添加氫氧化鋰(21 mg,0.86 mmol)。混合物在30℃下攪拌1 h。反應完全後，在減壓下濃縮混合物。使用水(10 mL)稀釋殘餘物，並使用乙酸乙酯(3×20 mL)萃取。乾燥合併之有機相，並在減壓下濃縮。藉由逆相製備型HPLC純化殘餘物，得到呈白色固體之146(45 mg,44%)。MS-ESI：[M+H]+ 599.2。1H NMR(500 MHz,DMSO-d 6)δ 8.57(d,J=5.0 Hz,1H),8.54(d,J=2.5 Hz,1H),8.41(s,1H),8.08(d,J=2.5 Hz,1H),7.91(d,J=1.5 Hz,1H),7.78(d,J=13.0 Hz,1H),7.51(d,J=5.0 Hz,1H),7.42(d,J=2.5 Hz,1H),6.08(s,1H),4.91-4.89(m,1H),4.62(s,2H),4.57(s,2H),4.45-4.43(m,2H),3.61(s,3H),2.98(s,3H),1.40(s,9H)。
實例147a 1-(6-硝基吡啶-3-基)吖丁啶-3-醇147a
將乙腈(50 mL)、5-氟-2-硝基吡啶(1.2 g,7.9 mmol)、K2CO3(2.1 g,15.8 mmol)以及吖丁啶-3-醇鹽酸鹽(1.3 g, 11.9 mmol)加入配備有磁攪拌器以及回流冷凝器之100-mL單頸圓底燒瓶中。混合物在60℃下加熱1 h。此後，將反應冷卻至室溫。接著經過濾，並在減壓下蒸發濾液。藉由矽膠管柱層析利用二氯甲烷/甲醇(50：1至20：1)溶離而純化殘餘物，得到呈黃色固體之147a(1.1 g,73%)。MS-ESI：[M+H]+196.0。
實例147b 1-(6-胺基吡啶-3-基)吖丁啶-3-醇147b
使用氮氣沖洗100-mL單頸圓底燒瓶，並加入147a(1.0 g,5.1 mmol)、10%碳載鈀(10%濕品，100 mg)以及乙醇(40 mL)。將混合物排空，充入氫氣，並在室溫下攪拌5 h。然後排空氫氣，並將氮氣充入燒瓶中。藉由過濾經過CELITE®墊而移除觸媒，並在減壓下濃縮濾液，得到呈黃色固體之147b(792 mg,85%)。MS-ESI：[M+H]+ 166.1。
實例147c 5-溴-3-(5-(3-羥基吖丁啶-1-基)吡啶-2-基胺基)-1-甲基吡啶-2(1H)-酮147c
將147b(792 mg,4.8 mmol)、3,5-二溴-1-甲基吡啶-2(1H)-酮(1.9 g,7.2 mmol)、叁(二亞苄基丙酮)二鈀(0)(440 mg,0.48 mmol)、XantPhos(555 mg,0.96 mmol),Cs2CO3(3.1 g,9.6 mmol)以及1,4-二噁烷(40 mL)加入配備有磁攪拌器以及回流冷凝器之100-mL單頸圓底燒瓶中。在抽真空/氬氣沖洗之三次循環後，混合物在90℃下加熱3.0小時。接著將其冷卻至室溫並過濾。在減壓下濃縮濾液，並藉由矽膠管柱層析利用二氯甲烷/甲醇(50：1至20：1)溶離而純化所得殘餘物，得到呈黃色固體之147c(1.5 g,89%)。 MS-ESI：[M+H]+ 351.1。
實例147d 乙酸(2-(6-第三丁基-8-氟-1-側氧基呔-2(1H)-基)-4-(5-(5-(3-羥基吖丁啶-1-基)吡啶-2-基胺基)-1-甲基-6-側氧基-1,6-二氫吡啶-3-基)吡啶-3-基)甲酯147d
將147c(285 mg,0.81 mmol)、3-(乙醯氧基甲基)-2-(6-第三丁基-8-氟-1-側氧基呔-2(1H)-基)吡啶-4-基酸116c(669 mg,1.62 mmol)、Pd(dppf)Cl2(66.2 mg,0.081 mmol)、K3PO4(343.4 mg,1.62 mmol)、乙酸鈉(132.8 mg,1.62 mmol)、水(0.5 mL)以及乙腈(15 mL)加入配備有回流冷凝器之100-mL燒瓶中。在抽真空/氬氣沖洗之三次循環後，混合物在100℃下加熱3小時。接著將其冷卻至室溫並過濾。在減壓下濃縮濾液，並藉由矽膠管柱層析利用二氯甲烷/甲醇(50：1至30：1)溶離而純化所得殘餘物，得到呈棕色固體之147d(140.0 mg,27%)。MS-ESI：[M+H]+ 640.3。
實例147 6-第三丁基-8-氟-2-[4-[5-[[5-(3-羥基吖丁啶-1-基)-2-吡啶基]胺基]-1-甲基-6-側氧基-3-吡啶基]-3-(羥甲基)-2-吡啶基]呔-1-酮147
147d(140 mg,0.22 mmol)與氫氧化鋰(132 mg,5.5 mmol)含於i-丙醇/THF/水(2：2：1,10 mL)之混合物在室溫下 攪拌1小時。在減壓下濃縮混合物，並用水(10 mL)稀釋。利用二氯甲烷萃取所得混合物三次。在減壓下濃縮合併之有機層，並藉由逆相製備型HPLC純化所得殘餘物，得到呈黃色固體之147(40 mg,31%)。MS-ESI：[M+H]+ 598.2。1H NMR(500 MHz,DMSO-d 6)δ 8.57-8.53(m,3H),8.32(s,1H),7.90(s,1H),7.77(d,J=13.0 Hz,1H),7.51-7.49(m,2H),7.43(s,1H),7.19(d,J=8.5 Hz,1H),6.88(dd,J=3.0,8.5 Hz,1H),5.57-5.56(m,1H),4.89-4.87(m,1H),4.55-4.52(m,1H),4.43-4.41(m,2H),4.05-4.02(m,2H),3.60(s,3H),3.45-3.42(m,2H),1.39(s,9H)。
實例148a 2-甲基-1-(2-硝基-6,7-二氫吡唑并[1,5-a]吡-5(4H)-基)丙-1-酮148a
於2-硝基-4,5,6,7-四氫吡唑并[1,5-a]吡 124d(160 mg,0.952 mmol)含於二氯甲烷(10 mL)之溶液中添加三乙胺(197 mg,1.90 mmol)。在室溫下攪拌5分鐘後，添加異丁醯 氯(111.0 mg,1.047 mmol)含於二氯甲烷之溶液(2 mL)，並攪拌混合物1 h。藉由LCMS分析反應混合物顯示完全轉化為所需產物。接著在減壓下濃縮，得到呈白色固體之148a(220 mg,97%)，其未進一步純化而用於下一步驟。MS-ESI：[M+H]+ 239.0。
實例148b 1-(2-胺基-6,7-二氫吡唑并[1,5-a]吡-5(4H)-基)-2-甲基丙-1-酮148b
於148a(220 mg,0.924 mmol)含於甲醇(20 mL)之溶液中添加Pd/C(22 mg)。將系統排空並回充填H2。在室溫下攪拌2 h後，過濾混合物。在減壓下濃縮濾液，得到呈黃色固體之148b(190 mg,98%)，其未進一步純化而用於下一步驟。MS-ESI：[M+H]+ 209.1。
實例148c 5-溴-3-(5-異丁醯基-4,5,6,7-四氫吡唑并[1,5-a]吡-2-基胺基-1-甲基吡啶-2(1H)-酮148c
將148b(190 mg,0.913 mmol)、3,5-二溴-1-甲基吡啶-2(1H)-酮(365.6 mg,1.37 mmol)、Pd2(dba)3(41.7 mg,0.0456 mmol)、Xantphos(52.8 mg,0.0913 mmol)、Cs2CO3(595.3 mg,1.826 mmol)以及二噁烷(20 mL)加入配備有回流冷凝器之100-mL圓底燒瓶中。使系統經歷抽真空/氮氣沖洗之三次循環，並在N2保護下，在100℃下加熱3 h。藉由LCMS分析反應混合物顯示完全轉化為所需產物。將其冷卻至室溫並過濾。在減壓下濃縮濾液。使用乙腈(2 mL)清洗殘餘物，得到呈深色固體之148c(240 mg,67%)，其未進一步純化而用於下一步驟。MS-ESI：[M+H]+ 394.2。
實例148d 3-(5-異丁醯基-4,5,6,7-四氫吡唑并[1,5-a]吡-2-基胺基)-1-甲基-5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧雜硼雜環戊-2-基)吡啶-2(1H)-酮148d
將148c(220 mg,0.558 mmol)、Pin2B2(212.6 mg,0.837 mmol)、Pd2(dba)3(25.5 mg,0.0279 mmol)、X-Phos(26.6 mg,0.0558 mmol)、乙酸鉀(109.4 mg,1.12 mmol)以及二噁烷(20 mL)加入配備有回流冷凝器之100-mL圓底燒瓶中。使系統經歷抽真空/氮氣沖洗之三次循環，並在N2保護下，在70℃下加熱2 h。藉由LCMS分析反應混合物顯示完全轉化為所需產物。接著將其冷卻至室溫並過濾。在減壓下濃縮濾液。使用石油醚清洗殘餘物，得到呈深色油之148d(200 mg,81%)，其未進一步純化而用於下一步驟。MS-ESI：[M+H]+ 442.4。
實例148e 2-(6-第三丁基-8-氟-1-側氧基呔-2(1H)-基)-4-(5-(5-異丁醯基-4,5,6,7-四氫吡唑并[1,5-a]吡-2-基胺基)-1-甲基-6-側氧基-1,6-二氫吡啶-3-基)菸鹼醛148e
將2-(6-第三丁基-8-氟-1-側氧基呔-2(1H)-基)-4-氯菸鹼醛103b(150 mg,0.42 mmol)、148d(278 mg,0.63 mmol)、Pd(dppf)Cl2(17.1 mg,0.021 mmol)、K3PO4(178.1 mg,0.84 mmol)、乙酸鈉(68.9 mg,0.84 mmol)、乙腈(15 mL)以及水(5滴)加入配備有回流冷凝器之100-mL圓底燒瓶中。使系統經歷抽真空/氮氣沖洗之三次循環，並在N2保護下，在100℃下加熱1 h。藉由LCMS分析反應混合物顯示完全轉化為所需產物。將其冷卻至室溫並過濾。在減壓下 濃縮濾液。使用乙腈(0.5 mL)清洗殘餘物，得到呈白色固體之148e(100 mg,37%)，其未進一步純化而用於下一步驟。MS-ESI：[M+H]+ 638.8。
實例148 6-第三丁基-8-氟-2-[3-(羥甲基)-4-[1-甲基-5-[[5-(2-甲基丙醯基)-6,7-二氫-4H-吡唑并[1,5-a]吡-2-基]胺基]-6-側氧基-3-吡啶基]-2-吡啶基]呔-1-酮148
於148e(90 mg,0.141 mmol)含於二氯甲烷(5 mL)與甲醇(5 mL)之溶液中添加NaBH4(10.7 mg,0.282 mmol)。在室溫下攪拌1 h後，使用NH4Cl水溶液使反應混合物驟冷，並在減壓下濃縮。使用二氯甲烷(3×15 mL)萃取殘餘物。使用鹽水清洗合併之有機層，在Na2SO4上乾燥，並在減壓下濃縮。藉由逆相製備型HPLC純化殘餘物，得到呈白色固體之148(40 mg,44%)。MS-ESI：[M+H]+ 640.8。1H NMR(500 MHz,DMSO-d 6)δ 8.57(d,J=5.0 Hz,1H),8.54(d,J=2.5 Hz,1H),8.35-8.28(m,1H),8.06(s,1H),7.90(d,J=1.5 Hz,1H),7.78(dd,J=1.0,13.0 Hz,1H),7.51(d,J=5.0 Hz,1H),7.40(d,J=2.5 Hz,1H),6.01(s,1H),4.90-4.88(m,1H),4.78-4.76(m,1H),4.64-4.62(m,1H),4.42-4.41(m,2H),4.03-3.92(m,4H),3.59(s,3H),3.00-2.96(m,1H),1.40(s,9H),1.04-1.01(m,6H)。
實例149a 1-甲基-4-硝基-1H-1,2,3-三唑149a
在0℃下於含4-硝基-2H-1,2,3-三唑(2.0 g,17.5 mmol)與THF(10 mL)之100-mL單頸圓底燒瓶中添加NaH(1.7 g,35.0 mmol,2.0 eq.)。在0℃下攪拌混合物15分鐘。添加CH3I(3.68 g,26.3 mmol,1.5 eq.)含於丙酮(40 mL)之溶液，且所得反應混合物在室溫下攪拌2 h。此後，在0℃下藉由水(20 mL)使反應驟冷，並在減壓下濃縮。使用二氯甲烷(100 mL)稀釋殘餘物。然後使用鹽水將其清洗，在無水Na2SO4上乾燥，並在減壓下濃縮。藉由矽膠管柱層析利用6：1石油醚/乙酸乙酯溶離而純化殘餘物，得到呈白色固體之1-甲基-5-硝基-1H-1,2,3-三唑(1.34 g,60%)以及呈淡黃色固體之149a(800 mg,35%)。1H NMR(500 MHz,CDCl3)δ 8.34(s,1H),4.26(s,3H)。1-甲基-5-硝基-1H-1,2,3-三唑：1H NMR(500 MHz,CDCl3)δ 8.16(s,1H),4.31(s,3H)。
實例149b 1-甲基-1H-1,2,3-三唑-4-胺149b
按照實例148b之程序並以149a(800 mg,6.25 mmol)與10%碳載鈀(50%濕品，160 mg)起始，得到呈黃色固體之149b(600 mg,98%)。1H NMR(500 MHz,CDCl3)δ 6.91(s,1H),3.97(s,3H),3.65(brs,2H)。
實例149c 5-溴-1-甲基-3-(1-甲基-1H-1,2,3-三唑-4-基胺基)吡啶-2(1H)-酮149c
按照實例148c之程序，並以149b(500 mg,5.10 mmol,1.0 eq.)與3,5-二溴-1-甲基吡啶-2(1H)-酮(2.04 g,7.65 mmol,1.5 eq.)起始，得到呈黃色固體之149c(760 mg, 52%)。MS-ESI：[M+H]+ 283.9。
實例149d 乙酸(2-(6-第三丁基-8-氟-1-側氧基呔-2(1H)-基)-4-(1-甲基-5-(1-甲基-1H-1,2,3-三唑-4-基胺基)-6-側氧基-1,6-二氫吡啶-3-基)吡啶-3-基)甲酯149d
按照實例147d之程序並以149c(120 mg,0.42 mmol,1 eq.)與3-(乙醯氧基甲基)-2-(6-第三丁基-8-氟-1-側氧基呔-2(1H)-基)吡啶-4-基酸(116c)(485 mg,1.18 mmol,2.8 eq.)起始，得到呈黃色固體之149d(120 mg,50%)。MS-ESI：[M+H]+ 573.3。
實例149 6-第三丁基-8-氟-2-[3-(羥甲基)-4-[1-甲基-5-[(1-甲基三唑-4-基)胺基]-6-側氧基-3-吡啶基]-2-吡啶基]呔-1-酮149
按照實例147之程序並以149c(90 mg,0.16 mmol)起始，得到呈白色固體之149(32 mg,38%)。MS-ESI：[M+H]+ 530.8。1H NMR(500 MHz,CDCl3)δ 8.65(d,J=5.0 Hz,1H),8.37(d,J=1.5 Hz,1H),7.69-7.67(m,3H),7.60-7.57(m,2H),7.50(d,J=5.0 Hz,1H),7.34(d,J=1.5 Hz,1H),4.53(s,2H),4.27(s,1H),4.10(s,3H),3.74(s,3H),1.46(s,9H)。
實例150a N-甲氧基-N-甲基-3-硝基-1H-吡唑-5-甲醯胺150a
將3-硝基-1H-吡唑-5-羧酸(15.7 g,1.0 eq.,100 mmol)、N,O-二甲基羥胺鹽酸鹽(19.5 g,2.0 eq.,200 mmol)、HATU(76.0 g,2.0 eq.,200 mmol)、三乙胺(40.4 g,4.0 eq.,400 mmol)以及二氯甲烷(300 mL)加入配備有磁攪拌器之500-mL單頸圓底燒瓶中。反應混合物在室溫下攪拌隔夜。在減壓下移除溶劑。藉由矽膠管柱層析利用100：1二氯甲烷/甲醇溶離而純化所得殘餘物，得到呈白色固體之150a(16.0 g,80%)。MS-ESI：[M+H]+ 201.1。
實例150b 3-胺基-N-甲氧基-N-甲基-1H-吡唑-5-甲醯胺150b
使用氮氣沖洗250-mL單頸圓底燒瓶並加入150a(16.0 g,1.0 eq.,80.0 mmol)、10%碳載鈀(50%濕品，800 mg)以及甲醇(100 mL)。將混合物排空，充入氫氣，並在氫氣氛下，在室溫下攪拌隔夜。然後排空氫氣，並將氮氣充入燒瓶中。藉由過濾經過CELITE®墊而移除觸媒。在減壓下濃縮濾液，得到呈白色固體之150b(11.0 g,81%)。MS-ESI：[M+H]+ 171.1。
實例150c 3-(2,5-二甲基-1H-吡咯-1-基)-N-甲氧基-N-甲基-1H-吡唑-5-甲醯胺150c
將150b(11.0 g,1.0 eq.,64.7 mmol)、己烷-2,5-二酮(11.1 g,1.5 eq.,97.2 mmol)、p-甲苯磺酸單水合物(558 mg,0.05 eq.,3.24 mmol)以及甲苯(100 mL)加入配備有磁攪拌器與迪恩-斯達克(Dean-Stark)阱之250-mL圓底燒瓶中。將反應混合物回流隔夜。將所得混合物冷卻至室溫，並在減壓下濃縮。藉由矽膠管柱層析利用1：2石油醚/乙酸乙酯溶離而純化所得殘餘物，得到呈白色固體之150c(10.4 g,65%)。MS-ESI：[M+H]+ 249.0。
實例150d 1-(3-(2,5-二甲基-1H-吡咯-1-基)-1H-吡唑-5-基)乙酮150d
將150c(7.44 g,1.0 eq.,30.0 mmol)以及THF(100 mL)加入配備有磁攪拌器之250-mL圓底燒瓶中。在N2保護下，在0℃下添加MeMgBr之溶液(3.0 M於醚中)(25 mL,2.5 eq.,75.0 mmol)。在室溫下攪拌混合物5 h，並使用飽和NH4Cl溶液(30 mL)驟冷。在減壓下濃縮混合物並使用乙酸乙酯(3×50 mL)萃取殘餘物。在減壓下蒸發合併之有機層，並藉由矽膠管柱層析利用4：1石油醚/乙酸乙酯溶離而純化殘餘物，得到呈白色固體之150d(5.40 g,89%)。MS-ESI：[M+H]+ 204.0。1H NMR(500 MHz,CDCl3)δ 6.74(s,1H),5.92(s,2H),2.61(s,3H),2.15(s,6H)。
實例150e 1-(1-(2-溴乙基)-3-(2,5-二甲基-1H-吡咯-1-基)-1H-吡唑-5-基)乙酮150e
將150d(5.4 g,1.0 eq.,26.6 mmol)、1,2-二溴乙烷(20.0 g,4.0 eq.,106.4 mmol)、K2CO3(7.34 g,2.0 eq.,53.2 mmol)以及乙腈(100 mL)加入配備有磁攪拌器以及回流冷凝器之250-mL圓底燒瓶中。將反應混合物回流5小時。將其冷卻至室溫並過濾。在減壓下濃縮濾液。藉由矽膠管柱層析利用6：1石油醚/乙酸乙酯溶離而純化殘餘物，得到呈無色油之150e(7.5 g,91%)。MS-ESI：[M+H]+ 309.9。
實例150f 1-(1-(2-溴乙基)-3-(2,5-二甲基-1H-吡咯-1-基)-1H-吡唑-5-基)乙醇150f
將150e(2.1 g,1.0 eq.,6.8 mmol)、NaBH4(1.29 g,5.0 eq.,34.0 mmol)以及甲醇(50 mL)加入配備有磁攪拌器之100-mL圓底燒瓶中。混合物在室溫下攪拌2 h，並使用水(30 mL)驟冷。然後在減壓下將其濃縮，並使用二氯甲烷(3×50 mL)萃取殘餘物。在減壓下濃縮合併之有機層，得到粗物質150f，其未進一步純化而用於下一步驟。MS-ESI：[M+H]+ 311.9。
實例150g 2-(2,5-二甲基-1H-吡咯-1-基)-4-甲基-6,7-二氫-4H-吡唑并[5,1-c][1,4]噁 150g
將150f(2.0 g,1.0 eq.,6.4 mmol)、K2CO3(1.77 g,2.0 eq.,12.8 mmol)、乙腈(50 mL)加入配備有回流冷凝器之100-mL圓底燒瓶中。將反應混合物回流隔夜。接著將其冷卻至室溫並過濾。在減壓下濃縮濾液。藉由矽膠管柱層析利用4：1石油醚/乙酸乙酯溶離而純化殘餘物，得到呈無色油之150g(550 mg，兩步驟計為37%)。MS-ESI：[M+H]+ 232.3。
實例150h 4-甲基-6,7-二氫-4H-吡唑并[5,1-c][1,4]噁-2-胺150h
將150g(550 mg,1.0 eq.,2.38 mmol)、羥胺鹽酸鹽(827 mg,5.0 eq.,11.9 mmol)以及乙醇(30 mL)加入配備有磁攪拌器以及回流冷凝器之100-mL圓底燒瓶中。將混合物回流2天。接著將其冷卻至室溫並過濾。在減壓下濃縮濾液。藉由逆相製備型HPLC純化殘餘物，得到呈黃色油體之150h(30 mg,8%)。MS-ESI：[M+H]+ 154.1。1H NMR(500 MHz,CDCl3)δ 5.37(s,1H),4.73(q,J=7.0 Hz,1H),4.26-4.23(m,1H),4.08-4.03(m,1H),3.91-3.90(m,1H),3.90-3.87(m,1H),1.65(d,J=7.0 Hz,3H)。
實例150i 乙酸(2-(6-第三丁基-8-氟-1-側氧基呔-2(1H)-基)-4-(1-甲基-5-(4-甲基-6,7-二氫-4H-吡唑并[5,1-c][1,4]噁-2-基胺基)-6-側氧基-1,6-二氫吡啶-3-基)吡啶-3-基)甲酯150i
將150h(25 mg,1.0 eq.,0.16 mmol)、乙酸(4-(5-溴-1-甲基-6-側氧基-1,6-二氫吡啶-3-基)-2-(6-第三丁基-8-氟-1-側氧基呔-2(1H)-基)吡啶-3-基)甲酯142c(181 mg,2.0 eq.,0.32 mmol)、Pd2(dba)3(15 mg,0.1 eq.,0.016 mmol)、Xantphos(19 mg,0.2 eq.,0.032 mmol)、Cs2CO3(105 mg,2.0 eq.,0.32 mmol)以及二噁烷(10 mL)加入配備有磁攪拌器以及回流冷凝器之25-mL單頸圓底燒瓶中。使混合物經歷抽真空/氬氣沖洗之三次循環，並在100℃下攪拌2小時。 接著將其冷卻至室溫並過濾。在減壓下濃縮濾液。藉由矽膠管柱層析利用20：1二氯甲烷/甲醇溶離而純化所得殘餘物，得到呈棕色固體之150i(48 mg,48%)。
實例150 6-第三丁基-8-氟-2-[3-(羥甲基)-4-[1-甲基-5-[(4-甲基-6,7-二氫-4H-吡唑并[5,1-c][1,4]噁-2-基)胺基]-6-側氧基-3-吡啶基]-2-吡啶基]呔-1-酮150
將150i(48 mg,1.0 eq.,0.077 mmol)、氫氧化鋰(9.2 mg,5.0 eq.,0.38 mmol)、i-丙醇/THF(4/4 mL)以及水(1 mL)加入配備有磁攪拌器之25-mL圓底燒瓶中。混合物在室溫下攪拌1 h，並在減壓下濃縮。藉由逆相製備型HPLC純化殘餘物，得到呈黃色固體之150(6.8 mg,15%)。MS-ESI：[M+H]+ 585.8。1H NMR(500 MHz,CDCl3)δ 8.66(d,J=4.5 Hz,1H),8.35(d,J=2.0 Hz,1H),8.03(d,J=1.5 Hz,1H),7.59-7.53(m,4H),7.47(s,1H),5.72(s,1H),4.82-4.78(m,1H),4.52-4.49(m,2H),4.33-4.30(m,1H),4.30-4.27(m,1H),4.02-3.98(m,3H),3.73(s,3H),1.54(d,J=7.0 Hz,3H),1.48(s,9H)。
實例151a 2-(5-(羥甲基)-3-硝基-1H-吡唑-1-基)乙酸乙酯151a
將乙腈(30 mL)、(3-硝基-1H-吡唑-5-基)甲醇(1.43 g,10.0 mmol)、Cs2CO3(490 mg,1.5 mmol)以及2-溴乙酸乙酯 (2.00 g,12 mmol)加入配備有磁攪拌器之100-mL單頸圓底燒瓶中。混合物在40℃下攪拌5 h。接著將其冷卻至室溫並過濾。在減壓下濃縮濾液，並藉由矽膠管柱層析利用30：1二氯甲烷/甲醇洗脫純化殘餘物，得到呈黃色固體之151a(1.65 g,72%)。MS-ESI：[M+H]+ 229.9。
實例151b 2-(5-(氯甲基)-3-硝基-1H-吡唑-1-基)乙酸乙酯151b
於在0℃下冷卻之151a(1.50 g,6.55 mmol)含於CHCl3(60 mL)之混合物中緩慢添加SOCl2(2.34 g,19.6 mmol)，同時使內部溫度維持在低於5℃。將該反應混合物溫至50℃，並在此溫度下攪拌3 h。然後將其冷卻至0℃，並使用水驟冷。分離有機層，並在減壓下蒸發。藉由矽膠管柱層析利用30：1二氯甲烷/甲醇溶離而純化殘餘物，得到呈黃色固體之151b(1.1 g,68%)。MS-ESI：[M+H]+ 247.9。
實例151c 2-(5-((異丙基胺基)甲基)-3-硝基-1H-吡唑-1-基)乙酸乙酯151c
151b(500 mg,2.04 mmol)、丙-2-胺(180 mg,3.06 mmol) 以及二氯甲烷(20 mL)之混合物在室溫下攪拌2 h。在減壓下濃縮混合物，得到呈黃色固體之151c(400 mg,74%)，其未進一步純化而用於下一步驟。MS-ESI：[M+H]+ 271.1。
實例151d 5-異丙基-2-硝基-4,5-二氫吡唑并[1,5-a]吡-6(7H)-酮151d
151c(400 mg,1.48 mmol)與甲醇(30 mL)之混合物在50℃下攪拌16 h。在減壓下濃縮混合物。使用水(80 mL)稀釋殘餘物，並使用乙酸乙酯(3×50 mL)萃取。在Na2SO4上乾燥合併之有機層，並在減壓下濃縮，得到呈黃色固體之151d(300 mg,90%)。MS-ESI：[M+H]+ 225.3。
實例151e 2-胺基-5-異丙基-4,5-二氫吡唑并[1,5-a]吡-6(7H)-酮151e
將Pd/C(10%,22 mg)添加至151d(220 mg,1.0 mmol)含於乙醇(20 mL)之溶液中。將氫氣(經由氣球)加入反應混合物中，並在室溫下攪拌1 h。將反應混合物經CELITE®墊過濾，並在減壓下濃縮濾液，得到呈黃色固體之151e(180 mg,92%)，其未進一步純化而使用。MS-ESI：[M+H]+ 195.3。
實例151f 2-(5-溴-1-甲基-2-側氧基-1,2-二氫吡啶-3-基胺基)-5-異丙基-4,5-二氫吡唑并[1,5-a]吡-6(7H)-酮151f
將151e(200 mg,1.0 mmol)、3,5-二溴-1-甲基吡啶-2(1H)-酮(268 mg,1.0 mmol)、Pd2(dba)3(50 mg,0.050 mmol)、xantphos(58 mg,0.10 mmol)、Cs2CO3(652 mg,2.0 mmol) 以及1,4-二噁烷(20 mL)加入配備有回流冷凝器之100-mL圓底燒瓶中。使系統經歷抽真空/氬氣沖洗之三次循環，並在100℃下加熱2 h。接著將其冷卻至室溫並過濾。使用二氯甲烷(2×10 mL)清洗固體。在減壓下濃縮合併之濾液。藉由矽膠管柱層析利用二氯甲烷/甲醇(80：1至30：1)溶離而純化殘餘物，得到呈黃色固體之151f(300 mg,79%)。MS-ESI：[M+H]+ 380.2。
實例151g 5-異丙基-2-(1-甲基-2-側氧基-5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧雜硼雜環戊-2-基)-1,2-二氫吡啶-3-基胺基)-4,5-二氫吡唑并[1,5-a]吡-6(7H)-酮151g
將151f(200 mg,0.52 mmol)、Pin2B2(330 mg,1.3 mmol)、Pd2(dba)3(25 mg,0.026 mmol)、X-phos(25 mg,0.052 mmol)、乙酸鉀(150 mg,1.5 mmol)以及1,4-二噁烷(10 mL)加入配備有磁攪拌器以及回流冷凝器之50-mL單頸圓底燒瓶中。使混合物經歷抽真空/氬氣沖洗之三次循環，並在65℃下加熱4 h。接著經過濾，並在減壓下蒸發濾液。藉由石油醚清洗殘餘物，得到呈棕色固體之粗物質151g(300 mg，純度：50%)。MS-ESI：[M+H]+ 428.2。
實例151h 2-(6-第三丁基-8-氟-1-側氧基呔-2(1H)-基)-4-(5-(5-異丙基-6-側氧基-4,5,6,7-四氫吡唑并[1,5-a]吡-2-基胺基)-1-甲基-6-側氧基-1,6-二氫吡啶-3-基)菸鹼醛151h
將2-(6-第三丁基-8-氟-1-側氧異喹啉-2(1H)-基)-4-氯菸鹼醛103b(108 mg,0.30 mmol)、151g(256 mg,0.60 mmol)、K3PO4(127 mg,0.60 mmol)、乙酸鈉水合物(82 mg,0.60 mmol)、Pd(dppf)Cl2(12 mg,0.015 mmol)、水(0.5 mL)以及乙腈(8 mL)加入配備有回流冷凝器之25-mL圓底燒瓶中。使反應混合物經歷抽真空/氮氣沖洗之三次循環，並在N2保護下，在80℃下加熱2 h。然後將其冷卻至室溫，並在減壓下濃縮。使用二氯甲烷(20 mL)與水(10 mL)稀釋殘餘物。分離有機層，並使用二氯甲烷(2×10 mL)萃取水層。在Na2SO4上乾燥合併之有機萃取物，過濾，並在減壓下濃縮。藉由矽膠管柱層析利用二氯甲烷/甲醇(80：1至30：1)溶離而純化深色殘餘物，得到呈黃色固體之151h(90 mg,48%)。MS-ESI：[M+H]+ 625.2。
實例151 6-第三丁基-8-氟-2-(3-(羥甲基)-4-(5-(5-異丙基-6-側氧基-4,5,6,7-四氫吡唑并[1,5-a]吡-2-基胺基)-1-甲基-6-側氧基-1,6-二氫吡啶-3-基)吡啶-2-基)呔-1(2H)-酮151
將151h(90 mg,0.14 mmol)、NaBH4(18 mg,0.42 mmol)以及甲醇(5 mL)加入25-mL單頸圓底燒瓶中。混合物在室溫下攪拌1 h，並在減壓下濃縮。於所得殘餘物中添加水(10 mL)，並使用二氯甲烷(3×15 mL)萃取混合物。在減壓下濃縮合併之有機層。藉由逆相製備型HPLC純化殘餘物，得到151(50 mg,55%)。MS-ESI：[M+H]+ 626.8。1H NMR(500 MHz,CDCl3)δ 8.67(d,J=5.0 Hz,1H),8.36(d,J=2.5 Hz,1H),8.02(d,J=2.0 Hz,1H),7.59-7.58(m,3H),7.55-7.52(m,2H),5.90(s,1H),5.07-5.05(m,1H),4.74(s, 2H),4.50-4.47(m,4H),4.09-4.06(m,1H),3.73(s,3H),1.45(s,9H),1.26(d,J=7.0 Hz,6H)。
實例152a 3-胺基-1H-吡唑-1-羧酸第三丁基酯152a
於3-胺基吡唑(3.0 g,36 mmol)與三乙胺(7.6 g,75 mmol)含於1,4-二噁烷(35 mL)之混合物中添加(Boc)2O(7.8 g,36 mmol)。反應混合物在25℃下攪拌2 h。然後在減壓下將其濃縮。藉由矽膠管柱利用3：1石油醚/乙酸乙酯溶離而純化殘餘物，得到呈白色固體之152a(3.4 g,52%)。MS-ESI：[M+H]+ 184.1。
實例152b 3-(1H-吡唑-3-基胺基)-5-溴-1-甲基吡啶-2(1H)-酮152a
將152a(2.2 g,12 mmol)、XantPhos(0.69 g,1.2 mmol)、Pd2(dba)3(1.1 g,1.2 mmol)、3,5-二溴-1-甲基吡啶-2(1H)-酮(6.4 g,24 mmol)、Cs2CO3(15.6 g,48 mmol)以及1,4-二噁烷(50 mL)加入配備有磁攪拌器以及回流冷凝器之250-mL單頸圓底燒瓶中。於所得混合物中鼓入氮氣10分鐘後，在105℃下將其加熱15 h。將混合物冷卻至室溫並過濾。在減壓下濃縮濾液，並用甲醇(8 mL)洗殘餘物，得到呈淺黃色固體之152b(1.2 g,37%)。MS-ESI：[M+H]+ 269.1。
實例152c 乙酸(4-(5-(1H-吡唑-3-基胺基)-1-甲基-6-側氧基-1,6-二氫吡啶-3-基)-2-(6-第三丁基-8-氟-1-側氧基呔-2(1H)-基)吡啶-3-基)甲酯152c
將152b(200 mg,0.74 mmol)、乙酸(2-(6-第三丁基-8-氟-1-側氧基呔-2(1H)-基)-4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧雜硼雜環戊-2-基)吡啶-3-基)甲酯116c(370 mg,0.74 mmol)、Pd(dppf)Cl2(30 mg,0.035 mmol)、乙酸鈉(74 mg,0.90 mmol)、K3PO4(191 mg,0.90 mmol)以及乙腈/水(5 mL/0.5 mL)加入配備有磁攪拌器之密封管中。在抽真空/氬氣沖洗之三次循環後，混合物在100℃下加熱2 h。接著經過濾，並在減壓下蒸發濾液。藉由矽膠管柱層析利用10：1二氯甲烷/甲醇溶離而純化殘餘物，得到呈棕色固體之152c(100 mg,25%)。MS-ESI：[M+H]+ 558.3。
實例152 6-第三丁基-8-氟-2-[3-(羥甲基)-4-[1-甲基-6-側氧基-5-(1H-吡唑-3-基胺基)-3-吡啶基]-2-吡啶基]呔-1-酮152
152c(100 mg,0.18 mmol)與氫氧化鋰水合物(84 mg,2.0 mmol)含於THF(8 mL)、i-丙醇(8 mL)與水(2 mL)之混合物在40℃下攪拌0.5 h。在減壓下蒸發混合物，並使用水(5 mL)稀釋殘餘物。然後使用乙酸乙酯(2×10 mL)萃取。在減壓下濃縮合併之萃取物，並藉由逆相製備型HPLC純化殘餘物，得到呈淺黃色固體之152(6.5 mg,7%)。MS-ESI：[M+H]+ 515.8。1H NMR(500 MHz,CDCl3)δ 8.62-8.61(m,1H),8.32(s,1H),8.04(m,1H),7.55-7.53(m,4H),7.50- 7.49(m,1H),7.44(s,1H),6.01(s,1H),4.49-4.48(m,2H),3.71(s,3H),1.45(s,9H)。
實例153a 6-氯-2-甲基-4-(5-甲基-4,5,6,7-四氫吡唑并[1,5-a]吡-2-基胺基)噠-3(2H)-酮153a
將1,4-二噁烷(30 mL)、5-甲基-4,5,6,7-四氫吡唑并[1,5-a]吡-2-胺128b(1.70 g,11.2 mmol)、4-溴-6-氯-2-甲基噠-3(2H)-酮(2.68 g,12.0 mmol)以及碳酸銫(7.30 g,22.4 mmol)加入配備有磁攪拌器以及回流冷凝器之100-mL單頸圓底燒瓶中。於懸浮液中鼓入氮氣30分鐘後，添加Xantphos(0.59 g,1.02 mmol)與叁(二亞苄基丙酮)二鈀(0)(467 mg,0.51 mmol)。使系統經歷抽真空/氬氣沖洗之三次循環，並在90℃下加熱2 h。接著將其冷卻至室溫並過濾。在真空中蒸發濾液。藉由矽膠管柱層析利用30：1二氯甲烷/甲醇溶離而純化殘餘物，得到呈棕色固體之153a(1.9 g,60%)。LCMS：[M+H]+ 295.1。
實例153b 1-甲基-5-(5-甲基-4,5,6,7-四氫吡唑并[1,5-a]吡-2-基胺基)-6-側氧基-1,6-二氫噠-3-基酸153b
將153a(200 mg,0.68 mmol)、雙(頻哪醇基)二硼(Pin2B2,863 mg,3.40 mmol)、Pd2(dba)3(55 mg,0.060 mmol)、X-Phos(60 mg,0.12 mmol)、乙酸鉀(60 mg,1.36 mmol)以及 1,4-二噁烷(10 mL)加入配備有磁攪拌器以及回流冷凝器之50-mL圓底燒瓶中。將系統排空，接著使用N2回充填。然後使其在50℃下加熱2 h。反應完全後，過濾混合物，並使用乙酸乙酯(10 mL)清洗固體。在減壓下蒸發合併之濾液，得到呈淺黃色固體之153b，將其用於下一步中。MS-ESI：[M+H]+ 305.1。
實例153c 2-(6-第三丁基-8-氟-1-側氧基呔-2(1H)-基)-4-(1-甲基-5-(5-甲基-4,5,6,7-四氫吡唑并[1,5-a]吡-2-基胺基)-6-側氧基-1,6-二氫噠-3-基)菸鹼醛153c
將153b(200 mg,0.66 mmol)、2-(6-第三丁基-8-氟-1-側氧基呔-2(1H)-基)-4-氯菸鹼醛103b(240 mg,0.66 mmol)、PdCl2(dppf)(54 mg,0.066 mmol)、K3PO4(250 mg,1.2 mmol)、乙酸鈉(100 mg,1.20 mmol)、乙腈(10 mL)以及水(0.5 mL)加入配備有回流冷凝器之25-mL圓底燒瓶中。將系統排空，接著使用N2回充填。然後將其在100℃下加熱1 h。將混合物冷卻至室溫並過濾。在減壓下濃縮濾液，並在矽膠管柱上利用20：1二氯甲烷/甲醇溶離而純化殘餘物，得到呈淡黃色固體之153c(170 mg,42%)。MS-ESI：[M+H]+ 584.3。
實例153 6-第三丁基-8-氟-2-[3-(羥甲基)-4-[1-甲基-5-[(5-甲基-6,7-二氫-4H-吡唑并[1,5-a]吡-2-基)胺基]-6-側氧基-噠-3-基]-2-吡啶基]呔-1-酮153
153c(170 mg,0.29 mmol)與NaBH4(20 mg,0.50 mmol)含於甲醇(5 mL)之混合物在室溫下攪拌0.5 h。接著使用水 (7 mL)使反應混合物驟冷，並在減壓下濃縮。使用二氯甲烷(2×10 mL)萃取殘餘物。在減壓下濃縮經合併的二氯甲烷萃取物，並藉由逆相製備型HPLC純化殘餘物，得到呈淺黃色固體之153(35 mg,21%)。MS-ESI：[M+H]+ 586.3。1H NMR(500 MHz,DMSO-d 6)δ 9.39(s,1H),8.63(d,J=5.0 Hz,1H),8.54(d,J=2.0 Hz 1H),7.93(s,1H),7.90(d,J=2.0 Hz,1H),7.77(dd,J=1.5,12.5 Hz,1H),7.60-7.59(m,1H),6.03(s,1H),4.82-4.81(m,1H),4.51-4.45(m,2H),4.01-3.98(m,2H),3.77(s,3H),3.62-3.60(m,2H),2.90-2.86(m,2H),2.42-2.40(m,3H),1.34(s,9H)。
實例154a 1-甲基-1H-1,2,3-三唑-5-胺154a
使用氮氣沖洗50-mL圓底燒瓶，並加入來自實例149a之1-甲基-5-硝基-1H-1,2,3-三唑(0.78 g,6.09 mmol)、10%碳載鈀(50%濕品，160 mg)以及甲醇(20 mL)。將燒瓶排空，充入氫氣，並在室溫下攪拌4 h。然後排出氫氣，並將氮氣充入燒瓶中。藉由經CELITE®墊過濾而移除觸媒，並在減壓下濃縮濾液，得到呈黃色固體之154a(418 mg,70%)。MS：[M+H]+ 99.3。
實例154b 5-溴-1-甲基-3-(1-甲基-1H-1,2,3-三唑-5-基胺基)吡啶-2(1H)-酮154b
將1,4-二噁烷(20 mL)、154a(500 mg,5.10 mmol)、3,5-二溴-1-甲基吡啶-2(1H)-酮(1362 mg,5.10 mmol)以及碳酸銫(3.325 g,10.2 mmol)加入配備有磁攪拌器以及回流冷凝器之100-mL單頸圓底燒瓶中。於懸浮液中鼓入氮氣20分鐘後，添加Xantphos(0.59 g,1.02 mmol)與叁(二亞苄基丙酮)二鈀(0)(467 mg,0.51 mmol)。使系統經歷抽真空/氮氣沖洗之三次循環，並在回流下加熱5 h。接著將其冷卻至室溫並過濾。在減壓下蒸發濾液。藉由矽膠管柱層析利用50：1二氯甲烷/甲醇溶離而純化殘餘物，得到呈棕色固體之154b(220 mg,15%)。LCMS：[M+H]+ 284.1。
實例154c 乙酸(2-(6-第三丁基-8-氟-1-側氧基呔-2(1H)-基)-4-(1-甲基-5-(1-甲基-1H-1,2,3-三唑-5-基胺基)-6-側氧基-1,6-二氫吡啶-3-基)吡啶-3-基)甲酯154c
將154b(100 mg,0.35 mmol)、3-(乙醯氧基甲基)-2-(6-第三丁基-8-氟-1-側氧基呔-2(1H)-基)吡啶-4-基酸116c(174 mg,0.42 mmol)、Pd(dppf)Cl2(29 mg,0.035 mmol)、乙酸鈉(57 mg,0.70 mmol,)、K3PO4三水合物(186 mg,0.70 mmol)、水(6滴)以及乙腈(6 mL)加入配備有回流冷凝器之25-mL圓底燒瓶中。在抽真空/氬氣沖洗之三次循環後，混合物在100℃下加熱2 h。接著經過濾，並在減壓下蒸發濾液。藉由矽膠管柱層析利用25：1二氯甲烷/甲醇溶離而純化殘餘物，得到呈棕色固體之154c(85 mg,42%)。MS-ESI：[M+H]+ 573.4。
實例154 6-第三丁基-8-氟-2-[3-(羥甲基)-4-[1-甲基-5- [(3-甲基三唑-4-基)胺基]-6-側氧基-3-吡啶基]-2-吡啶基]呔-1-酮154
154c(85 mg,0.15 mmol)與氫氧化鋰(36 mg,1.5 mmol)含於i-丙醇/THF(1：1,4 mL)與水(1 mL)之混合物在30℃下攪拌1 h。在減壓下蒸發混合物，並使用水(5 mL)稀釋殘餘物。接著使用乙酸乙酯(2×10 mL)萃取。在減壓下濃縮經合併的乙酸乙酯萃取物，並藉由逆相製備型HPLC純化殘餘物，得到呈白色固體之標題化合物(11 mg,16%)。MS-ESI：[M+H]+ 531.4。1H NMR(500 MHz,DMSO-d 6)δ 8.54-8.53(m,2H),8.03(s,1H),7.91(d,J=1.5 Hz,1H),7.80-7.76(m,1H),7.75(s,1H),7.55(d,J=2.5 Hz,1H),7.52(d,J=5.0 Hz,1H),6.89(d,J=2.5 Hz,1H),5.04(t,J=5.0 Hz,1H),4.34(d,J=5.0 Hz,2H),3.88(s,3H),3.63(s,3H),1.40(s,9H)。
實例155a 2-硝基-5-(氧雜環丁-3-基)-4,5,6,7-四氫吡唑并[1,5-a]吡 155a
2-硝基-4,5,6,7-四氫吡唑并[1,5-a]吡 124d(238 mg,1.40 mmol)、氧雜環丁烷-3-酮(252 mg,3.5 mmol)、NaBH3CN(260 mg,4.2 mmol)與氯化鋅(567 mg,4.2 mmol)含於甲醇(10 mL)之混合物在50℃下攪拌6小時。將混合物 添加至水中，並使用二氯甲烷萃取三次。在減壓下濃縮合併之有機層，並藉由矽膠管柱層析利用50：1二氯甲烷/甲醇溶離而純化殘餘物，得到155a(200 mg,64%)。MS：[M+H]+ 225.3。
實例155b 5-(氧雜環丁-3-基)-4,5,6,7-四氫吡唑并[1,5-a]吡-2-胺155b
使用氮氣沖洗50-mL單頸圓底燒瓶，並加入155a(0.20 g,0.89 mmol)、10%碳載鈀(50%濕品，89 mg)以及甲醇(10 mL)。將混合物排空，充入氫氣，並在室溫下攪拌2 h。然後排空氫氣，並將氮氣充入瓶中。藉由通過CELITE®墊過濾而移除觸媒，並在減壓下濃縮濾液，得到155b(140 mg,81%)。MS：[M+H]+ 195.1。
實例155c 6-氯-2-甲基-4-(5-(氧雜環丁-3-基)-4,5,6,7-四氫吡唑并[1,5-a]吡-2-基胺基)噠-3(2H)-酮155c
將1,4-二噁烷(25 mL)、155b(640 mg,3.3 mmol)、4-溴-6-氯-2-甲基噠-3(2H)-酮(1.1 g,4.95 mmol)、Pd2(dba)3(302 mg,0.33 mmol)、XantPhos(381 mg,0.66 mmol)以及碳酸銫(2.15 g,6.6 mmol)加入配備有磁攪拌器以及回流冷凝器之100-mL單頸圓底燒瓶中。在抽真空/氬氣沖洗之三次循環後，混合物在100℃下加熱3 h。此後，將反應冷卻至室溫。接著經過濾，並在減壓下蒸發濾液。使用乙酸乙酯清洗殘餘物，得到呈黃色固體之155c(754 mg,68%)。MS-ESI：[M+H]+ 337.3。
實例155d 乙酸(2-(6-第三丁基-8-氟-1-側氧基呔- 2(1H)-基)-4-(1-甲基-5-(5-(氧雜環丁-3-基)-4,5,6,7-四氫吡唑并[1,5-a]吡-2-基胺基)-6-側氧基-1,6-二氫噠-3-基)吡啶-3-基)甲酯155d
將155c(367 mg,1.1 mmol)、3-(乙醯氧基甲基)-2-(6-第三丁基-8-氟-1-側氧基呔-2(1H)-基)吡啶-4-基酸116c(908.6 mg,2.2 mmol)、Pd2(dba)3(100.6 mg,0.11 mmol),P(cy)3(122.8 mg,0.44 mmol)、Cs2CO3(717 mg,2.2 mmol)、二噁烷(20 mL)以及水(0.5 mL)加入配備有磁攪拌器以及回流冷凝器之100-mL單頸圓底燒瓶中。在抽真空/氬氣沖洗之三次循環後，混合物在110℃下加熱2 h。接著經過濾，並在減壓下蒸發濾液。藉由矽膠管柱層析利用35：1二氯甲烷/甲醇溶離而純化殘餘物，得到呈黃色固體之155d(120 mg,16%)。MS-ESI：[M+H]+ 669.8。
實例155 6-第三丁基-8-氟-2-[3-(羥甲基)-4-[1-甲基-5-[[5-(氧雜環丁-3-基)-6,7-二氫-4H-吡唑并[1,5-a]吡-2-基]胺基]-6-側氧基-噠-3-基]-2-吡啶基]呔-1-酮155
155d(117 mg,0.175 mmol)與氫氧化鋰．水合物(73.5 mg,1.75 mmol)含於i-丙醇/THF(1：1,8 mL)與水(1 mL)之混合物在35℃下攪拌0.5 h。在減壓下蒸發混合物，並使用水(6 mL)稀釋殘餘物。然後使用二氯甲烷(3×50 mL)萃取。在減壓下濃縮經合併的二氯甲烷萃取物，並藉由逆相製備型HPLC純化殘餘物，得到呈黃色固體之155(30 mg,27%)。MS-ESI：[M+H]+ 628.3。1H NMR(500 MHz,DMSO-d 6)δ 9.40(s,1H),8.64(d,J=5.5 Hz,1H),8.55(d,J=2.0 Hz, 1H),7.94(s,1H),7.90(d,J=1.5 Hz,1H),7.79-7.77(m,1H),7.61(d,J=4.5 Hz,1H),6.04(s,1H),7.61-7.60(m,1H),4.61-4.59(m,2H),4.50-4.45(m,4H),4.01-3.99(m,2H),3.78(s,3H),3.69-3.65(m,1H),3.54(s,2H),2.79-2.76(m,2H),1.39(s,9H)。
實例156a 5-氟-N,N-雙(4-甲氧基苄基)吡啶-2-胺156
在25℃下，將5-氟吡啶-2-胺(1.12 g,10.0 mmol)、NaH(288 mg,12.0 mmol)以及THF(20 mL)加入100-mL圓底燒瓶中。添加4-甲氧基苄基氯(1.87 g,12.0 mmol)，並在25℃下攪拌2 h。然後在減壓下將其濃縮。將水(30 mL)添加至殘餘物中，並利用二氯甲烷(3×80 mL)萃取所得混合物。在Na2SO4上乾燥合併之萃取物，過濾，並在減壓下蒸發。藉由矽膠管柱層析利用1：9乙酸乙酯/石油醚溶離而純化殘餘物，得到呈黃色液體之156a(620 mg,18%)。MS-ESI：[M+H]+ 353.0
實例156b 2-(6-(雙(4-甲氧基苄基)胺基)吡啶-3-基)-2- 甲基丙腈156b
將156a(528 mg,1.5 mmol)、KHMDS(15 mmol,15 mL,1 mol/L之THF)，以及異丁腈(1.03 g,15 mmol)加入配備有磁攪拌器之25-mL密封管中。在抽真空/氬氣沖洗之三次循環後，混合物在85℃下加熱8 h。然後將其冷卻至室溫，並使用水驟冷。在減壓下濃縮混合物，並使用乙酸乙酯(3×20 mL)萃取殘餘物。在Na2SO4上乾燥合併之萃取物，過濾，並在減壓下蒸發，得到呈黃色液體之156b(514 mg,85%)。MS-ESI：[M+H]+ 402.0。
實例156c 2-(6-胺基吡啶-3-基)-2-甲基丙腈156c
156b(514 mg,1.28 mmol)含於CF3COOH(15 mL)之溶液在60℃下攪拌2 h。此後，將反應冷卻至室溫。然後在減壓下將其蒸發，並使用石油醚與乙酸乙酯清洗殘餘物，得到呈黃色固體之156c(600 mg，粗物質)。MS-ESI：[M+H]+ 162.3。
實例156d 2-(6-(5-溴-1-甲基-2-側氧基-1,2-二氫吡啶-3-基胺基)吡啶-3-基)-2-甲基丙腈156d
將1,4-二噁烷(35 mL)、156c(483 mg,3.0 mmol)、3,5-二溴-1-甲基吡啶-2(1H)-酮(1.6 g,6.0 mmol)、Pd2(dba)3(274.5 mg,0.30 mmol)、XantPhos(346.8 mg,0.60 mmol)以及碳酸銫(4.59 g,15 mmol)加入配備有磁攪拌器以及回流冷凝器之100-mL單頸圓底燒瓶中。在抽真空/氬氣沖洗之三次循環後，混合物在100℃下加熱3 h。此後，將反應冷卻至室溫，並過濾。在減壓下蒸發濾液。藉由矽膠管柱層 析利用1：1乙酸乙酯/石油醚溶離而純化殘餘物，得到呈黃色固體之156d(400 mg,38%)。MS-ESI：[M+H]+ 347.0。
實例156e 乙酸(2-(6-第三丁基-8-氟-1-側氧基呔-2(1H)-基)-4-(5-(5-(2-氰基丙-2-基)吡啶-2-基胺基)-1-甲基-6-側氧基-1,6-二氫吡啶-3-基)吡啶-3-基)甲酯156e
將156d(346 mg,1.0 mmol)、3-(乙醯氧基甲基)-2-(6-第三丁基-8-氟-1-側氧基呔-2(1H)-基)吡啶-4-基酸116c(1.65 g,4.0 mmol)、Pd(dppf)Cl2(82.5 mg,0.10 mmol)、乙酸鉀(196 mg,2.0 mmol)、K3PO4(424 mg,2.0 mmol)、乙腈(15 mL)以及水(0.5 mL)加入配備有磁攪拌器以及回流冷凝器之100-mL單頸圓底燒瓶中。在抽真空/氬氣沖洗之三次循環後，混合物在95℃下加熱2 h。接著經過濾，並在減壓下蒸發濾液。藉由矽膠管柱層析利用10：1乙酸乙酯/石油醚溶離而純化殘餘物，得到呈黃色固體之156e(210 mg,33%)。MS-ESI：[M+H]+ 635.8。
實例156 2-[6-[[5-[2-(6-第三丁基-8-氟-1-側氧基-呔-2-基)-3-(羥甲基)-4-吡啶基]-1-甲基-2-側氧基-3-吡啶基]胺基]-3-吡啶基]-2-甲基-丙腈156
156e(191 mg,0.30 mmol)與氫氧化鋰．1水(126 mg,3.0 mmol)含於i-丙醇/THF(1：1,8 mL)與水(2 mL)之混合物在35℃下攪拌0.5 h。在減壓下蒸發混合物，並使用水(10 mL)稀釋。然後使用二氯甲烷(3×20 mL)萃取。在減壓下濃縮經合併的二氯甲烷萃取物，並藉由逆相製備型HPLC純化殘餘物，得到呈淺黃色固體之156(30 mg,17%)。MS- ESI：[M+H]+ 594.3。1H NMR(500 MHz,DMSO-d 6)δ 8.83(s,1H),8.77(d,J=2.0 Hz,1H),8.59(d,J=5.0 Hz,1H),8.54(d,J=2.5 Hz,1H),8.34(d,J=2.5 Hz,1H),7.91(s,1H),7.79-7.74(m,2H),7.57-7.53(m,2H),7.40(d,J=9.0 Hz,1H),4.92(bs,1H),4.43(s,2H),3.62(s,3H),1.67(s,6H),1.39(s,9H)。
實例157a 乙酸(2-(6-第三丁基-8-氟-1-側氧基呔-2(1H)-基)-4-(1-甲基-5-(5-甲基異噻唑-3-基胺基)-6-側氧基-1,6-二氫吡啶-3-基)吡啶-3-基)甲酯157a
將乙酸(4-(5-溴-1-甲基-6-側氧基-1,6-二氫吡啶-3-基)-2-(6-第三丁基-8-氟-1-側氧基呔-2(1H)-基)吡啶-3-基)甲酯142c(155 mg,0.28 mmol)、4-氟-2-(1-側氧基-5-甲基異噻唑-3-胺鹽酸鹽(55 mg,0.33 mmol)、Cs2CO3(183 mg,0.56 mmol)、Pd2(dba)3(27 mg,0.030 mmol)、XantPhos(35 mg,0.060 mmol)以及DMF(10 mL)加入25-mL密封管中。在抽真空/氬氣沖洗之三次循環後，混合物在110℃微波照射下加熱1小時。然後將其冷卻至室溫並在減壓下蒸發。藉由矽膠管柱利用20：1二氯甲烷/甲醇溶離而純化殘餘物，得到呈黃色固體之157a(64 mg,39%)。MS-ESI：[M+H]+ 589.2。
實例157 6-第三丁基-8-氟-2-[3-(羥甲基)-4-[1-甲基-5-[(5-甲基異噻唑-3-基)胺基]-6-側氧基-3-吡啶基]-2-吡啶基]呔-1-酮157
於157a(60 mg,0.10 mmol)含於THF/i-丙醇/水(4 mL/4 mL/1 mL)之溶液中添加氫氧化鋰(24 mg,1.0 mmol)。反應混合物在室溫下攪拌0.5 h，並在減壓下濃縮。使用水(10 mL)稀釋殘餘物，並使用乙酸乙酯(3×15 mL)萃取。使用Na2SO4乾燥合併之有機層並濃縮，得到黃色固體，其係藉由逆相製備型HPLC純化，得到呈黃色固體之157(27 mg,50%)。MS-ESI：[M+H]+ 546.7。1H NMR(500 MHz,DMSO-d 6) δ 9.28(s,1H),8.60-8.54(m,3H),7.90(s,1H),7.78(d,J=16.0 Hz,1H),7.55-7.50(m,2H),7.04(s,1H),4.89(t,J=6.5 Hz,1H),4.43-4.41(m,2H),3.61(s,3H),2.48(s,3H),1.40(s,9H)。
實例158a 5-溴-3-(5-乙基異噁唑-3-基胺基)-1-甲基吡啶-2(1H)-酮158a
將5-乙基異噁唑-3-胺(250 mg,2.23 mmol)、3,5-二溴-1-甲基吡啶-2(1H)-酮(893 mg,3.35 mmol)、Pd2(dba)3(102 mg,0.112 mmol)、Xantphos(129 mg,0.223 mmol)、 Cs2CO3(1.45 g,4.46 mmol)以及二噁烷(20 mL)加入配備有磁攪拌器與回流冷凝器之50-mL單頸圓底燒瓶中。使系統經歷抽真空/氮氣沖洗之三次循環，並在N2保護下，在100℃下加熱3 h。藉由LCMS分析反應混合物顯示完全轉化為所需產物。接著將其冷卻至室溫並過濾。在減壓下濃縮濾液，並藉由逆相製備型HPLC純化殘餘物，得到呈白色固體之158a(300 mg,45%)。MS-ESI：[M+H]+ 297.8。
實例158b 3-(5-乙基異噁唑-3-基胺基)-1-甲基-5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧雜硼雜環戊-2-基)吡啶-2(1H)-酮158b
將158a(250 mg,0.839 mmol)、Pin2B2(320 mg,1.26 mmol)、Pd2(dba)3(38.4 mg,0.042 mmol)、X-Phos(48.5 mg,0.0839 mmol)、乙酸鉀(164.4 mg,1.678 mmol)以及二噁烷(20 mL)加入配備有磁攪拌器與回流冷凝器之50-mL圓底燒瓶中。使系統經歷抽真空/氮氣沖洗之三次循環，並在N2保護下，在70℃下加熱2 h。藉由LCMS分析反應混合物顯示完全轉化為所需產物。接著將其冷卻至室溫並過濾。在減壓下濃縮濾液。使用石油醚清洗殘餘物，得到呈深色固體之158b(330 mg，粗物質)，其未進一步純化而用於下一步驟。MS-ESI：[M+H]+ 346.0。
實例158c 2-(6-第三丁基-8-氟-1-側氧基呔-2(1H)-基)-4-(5-(5-乙基異噁唑-3-基胺基)-1-甲基-6-側氧基-1,6-二氫吡啶-3-基)菸鹼醛158c
將2-(6-第三丁基-8-氟-1-側氧基呔-2(1H)-基)-4-氯菸鹼 醛103b(160 mg,0.44 mmol)、158b(228 mg,0.66 mmol)、Pd(dppf)Cl2(18 mg,0.022 mol)、K3PO4(187 mg,0.88 mmol)、乙酸鈉(72.2 mg,0.88 mmol)、乙腈(15 mL)以及水(5滴)加入配備有回流冷凝器之50-mL圓底燒瓶中。使系統經歷抽真空/氮氣沖洗之三次循環，並在N2保護下，在100℃下加熱1 h。藉由LCMS分析反應混合物顯示完全轉化為所需產物。接著將其冷卻至室溫並過濾。在減壓下濃縮濾液，並藉由矽膠管柱層析利用40：1二氯甲烷/甲醇溶離而純化殘餘物，得到呈黃色油之158c(210 mg,88%)。MS-ESI：[M+H]+ 543.3。
實例158 6-第三丁基-2-[4-[5-[(5-乙基異噁唑-3-基)胺基]-1-甲基-6-側氧基-3-吡啶基]-3-(羥甲基)-2-吡啶基]-8-氟基-呔-1-酮158
於158c(190 mg,0.35 mmol)含於二氯甲烷(5 mL)與甲醇(5 mL)之溶液中添加NaBH4(26.5 mg,0.70 mmol)。反應混合物在室溫下攪拌1 h，並使用NH4Cl水溶液驟冷。然後在減壓下將其濃縮，並使用二氯甲烷萃取殘餘物。使用鹽水清洗合併之萃取物，在Na2SO4上乾燥，過濾，並在減壓下濃縮。藉由逆相製備型HPLC純化殘餘物，得到呈白色固體之158(70 mg,37%)。MS-ESI：[M+H]+ 545.3。1H NMR(500 MHz,DMSO-d 6)δ 9.01(s,1H),8.58(d,J=5.0 Hz,1H),8.54(d,J=2.0 Hz,1H),8.01(d,J=2.0 Hz,1H),7.90(s,1H),7.79(d,J=13 Hz,1H),7.57(d,J=2.5 Hz,1H),7.51(d,J=5.0 Hz,1H),6.26(s,1H),4.90(s,1H),4.44-4.43(m, 2H),3.61(s,3H),2.69-2.65(m,2H),1.40(s,9H),1.19(t,J=8.0 Hz,3H)。
實例159a 2-(二氟甲基)-4-硝基-2H-1,2,3-三唑159a
含4-硝基-2H-1,2,3-三唑(500 mg,4.38 mmol,1.0 eq.)、2-氯-2,2-二氟乙酸鈉(1310 mg,8.76 mmol,2.0 eq.)、K2CO3(1140 mg,8.76 mmol,2.0 eq.)以及乙腈(20 mL)之100-mL單頸圓底燒瓶在回流下攪拌5 h。冷卻至室溫後，過濾反應混合物，並在減壓下蒸發濾液。藉由矽膠管柱層析利用4：1石油醚/乙酸乙酯溶離而純化殘餘物，得到呈棕色液體之159a(350 mg,48%)。1H NMR(500 MHz,CDCl3)δ 8.38(s,1H),7.39(t,J=57.5 Hz,1H)。
實例159b 2-(二氟甲基)-2H-1,2,3-三唑-4-胺159b
按照實例151e之程序，並以159a(300 mg,1.83 mmol)與10%碳載鈀(50%濕品，60 mg)起始，得到呈黃色液體之159b(200 mg,81%)。1H NMR(500 MHz,CDCl3)δ 7.24(s,1H),7.14(t,J=58.5 Hz,1H),4.08(brs,2H)。
實例159c 5-溴-3-(2-(二氟甲基)-2H-1,2,3-三唑-4-基胺基)-1-甲基吡啶-2(1H)-酮159c
按照實例151f之程序，並以159b(170 mg,1.25 mmol,1.0 eq.)與3,5-二溴-1-甲基吡啶-2(1H)-酮(504 g,1.89 mmol, 1.5 eq.)起始，得到呈淺黃色固體之159c(280 mg,70%)。MS-ESI：[M+H]+ 320.1。
實例159d 乙酸(2-(6-第三丁基-8-氟-1-側氧基呔-2(1H)-基)-4-(5-(2-(二氟甲基)-2H-1,2,3-三唑-4-基胺基)-1-甲基-6-側氧基-1,6-二氫吡啶-3-基)吡啶-3-基)甲酯159d
按照實例152c之程序，並以159c(150 mg,0.46 mmol,1.0 eq.)與3-(乙醯氧基甲基)-2-(6-第三丁基-8-氟-1-側氧基呔-2(1H)-基)吡啶-4-基酸(116c)(285 mg,0.69 mmol,1.5 eq.)起始，得到呈黃色固體之159d(90 mg,32%)。MS-ESI：[M+H]+ 609.3。
實例159 6-第三丁基-2-[4-[5-[[2-(二氟甲基)三唑-4-基]胺基]-1-甲基-6-側氧基-3-吡啶基]-3-(羥甲基)-2-吡啶基]-8-氟基-呔-1-酮159
按照實例152之程序，並以159d(80 mg,0.13 mmol)起始，得到呈白色固體之159(29 mg,40%)。MS-ESI：[M+H]+ 567.3。1H NMR(500 MHz,CDCl3)δ 8.70(d,J=5.0 Hz,1H),8.36(d,J=2.0 Hz,1H),8.15(d,J=2.0 Hz,1H),7.84(s,1H),7.74(d,J=2.0 Hz,1H),7.62-7.53(m,4H),7.25(t,J=59.0 Hz,1H),4.50(s,2H),4.09(t,J=6.5 Hz,1H),3.75(s,3H),1.45(s,9H)。
實例160a 5-溴-1-甲基-3-(吡-2-基胺基)吡啶-2(1H)-酮160a
將吡-2-胺(1.0 g,10 mmol)、3,5-二溴-1-甲基吡啶-2(1H)-酮(2.7 g,10 mmol)、Pd2(dba)3(460 mg,0.50 mmol)、XantPhos(600 mg,1.0 mmol)、碳酸銫(6.52 g,20 mmol)以及1,4-二噁烷(150 mL)加入配備有磁攪拌器以及回流冷凝器之250-mL單頸圓底燒瓶中。在抽真空/氬氣沖洗之三次循環後，混合物在100℃下加熱2 h。然後將其過濾，並在真空蒸發濾液。藉由甲醇再結晶而純化殘餘物，得到呈淡綠色固體之160a(1.3 g,47%)。MS-ESI：[M+H]+ 281.0。
實例160b 乙酸(2-(6-第三丁基-8-氟-1-側氧基呔-2(1H)-基)-4-(1-甲基-6-側氧基-5-(吡-2-基胺基)-1,6-二氫吡啶-3-基)吡啶-3-基)甲酯160b
將160a(140 mg,0.50 mmol)、3-(乙醯氧基甲基)-2-(6-第三丁基-8-氟-1-側氧基呔-2(1H)-基)吡啶-4-基酸116c(410 mg,1.0 mmol)、Pd(dppf)Cl2(25 mg,0.025 mmol)、K3PO4(220 mg,1.0 mmol)、三水合乙酸鈉(136 mg,1.0 mmol)、乙腈(15 mL)以及水(0.5 mL)加入配備有回流冷凝器之50-mL圓底燒瓶中。將系統排空並回充填N2。反應混合物在100℃下加熱1 h。接著將其冷卻至室溫並過濾。在減壓下濃縮濾液，並藉由矽膠管柱層析利用二氯甲烷/甲 醇(100：1至25：1)溶離而純化所得殘餘物，得到呈黃色固體之160b(150 mg,52%)。MS-ESI：[M+H]+ 570.2。
實例160 6-第三丁基-8-氟-2-[3-(羥甲基)-4-[1-甲基-6-側氧基-5-(吡-2-基胺基)-3-吡啶基]-2-吡啶基]呔-1-酮160
160b(120 mg,0.21 mmol)與氫氧化鋰單水合物(88 mg,2.1 mmol)含於THF/i-丙醇(4：2,6 mL)與水(2 mL)之混合物在30℃下攪拌1 h。在減壓下蒸發混合物，並使用水(10 mL)稀釋殘餘物。然後使用乙酸乙酯(2×20 mL)萃取。在減壓下濃縮合併的乙酸乙酯萃取物，並藉由逆相製備型HPLC純化殘餘物，得到呈白色固體之160(50 mg,45%)。MS-ESI：[M+H]+ 527.8。1H NMR(500 MHz,CHCl3)δ 8.78(d,J=2.5 Hz,1H),8.71(d,J=5.0 Hz,1H),8.36(d,J=2.0 Hz,1H),8.31(s,1H),8.19(s,1H),8.14(s,1H),8.05(d,J=2.0 Hz,1H),7.81(d,J=2.5 Hz,1H),7.59(s,1H),7.56-7.55(m,2H)。
實例161a 1-甲基-3-(5-甲基異噁唑-3-基胺基)-5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧雜硼雜環戊-2-基)吡啶-2(1H)-酮161a
將5-溴-1-甲基-3-(5-甲基異噁唑-3-基胺基)吡啶-2(1H)-酮129a(330 mg,1.16 mmol)、Pin2B2(442 mg,1.74 mmol)、Pd2(dba)3(53 mg,0.058 mmol)、X-Phos(55 mg,0.116 mmol)、乙酸鉀(227 mg,2.32 mmol)以及二噁烷(20 mL)加入配備有磁攪拌器以及回流冷凝器之50-mL圓底燒瓶中。抽真空/N2沖洗之三次循環後，混合物在70℃下加熱2 h。藉由LCMS分析反應混合物顯示完全轉化為所需產物。將其冷卻至室溫並過濾。在減壓下濃縮濾液，並使用石油醚清洗殘餘物，得到呈黃色固體之161a(300 mg,78%)。MS-ESI：[M+H]+ 332.3。
實例161b 2-(6-第三丁基-8-氟-1-側氧基呔-2(1H)-基)-4-(1-甲基-5-(5-甲基異噁唑-3-基胺基)-6-側氧基-1,6-二氫吡啶-3-基)菸鹼醛161b
將2-(6-第三丁基-8-氟-1-側氧基呔-2(1H)-基)-4-氯菸鹼醛103b(390 mg,1.08 mmol)、161a(537 mg,1.62 mmol)、碳酸銫(704 mg,2.16 mmol)、1,4-二噁烷(30 mL)以及水(3 mL)加入配備有回流冷凝器之100-mL圓底燒瓶中。於懸浮液中鼓入氮氣10分鐘後，添加Cy3P(121 mg,0.43 mmol)與Pd2(dba)3(99 mg,0.11 mmol)。使系統經歷抽真空/氮氣沖洗之三次循環，並在回流下加熱3 h。接著將其冷卻至室 溫並過濾。使用二氯甲烷(3×20 mL)清洗固體。在減壓下濃縮合併之濾液，並藉由矽膠管柱層析利用20：1乙酸乙酯/石油醚溶離而純化殘餘物，得到161b(300 mg,52%)。MS-ESI：[M+H]+ 528.8。
實例161c 6-第三丁基-8-氟-2-(3-(羥甲基)-4-(1-甲基-5-(5-甲基異噁唑-3-基胺基)-6-側氧基-1,6-二氫吡啶-3-基)吡啶-2-基)呔-1(2H)-酮161c
在室溫下於161b(300 mg,0.57 mmol)含於甲醇(10 mL)之溶液中添加NaBH4(108 mg,2.85 mmol)。反應攪拌6 h後，LCMS顯示反應完成。然後使用水(10 mL)使其驟冷，並在減壓下濃縮。使用二氯甲烷(3×20 mL)萃取所得殘餘物。使用鹽水(20 mL)清洗合併之有機層，在Na2SO4上乾燥，過濾，並在減壓下濃縮。藉由矽膠管柱層析利用石油醚/乙酸乙酯(1：20至100%乙酸乙酯)溶離而純化殘餘固體，得到呈白色固體之161c(164 mg,54%)。MS-ESI：[M+H]+ 530.8。
實例161d 亞磷酸二苄酯(2-(6-第三丁基-8-氟-1-側氧基呔-2(1H)-基)-4-(1-甲基-5-(5-甲基異噁唑-3-基胺基)-6-側氧基-1,6-二氫吡啶-3-基)吡啶-3-基)甲酯161d
161c(100 mg,0.19 mmol)、二苄基二異丙基胺基亞磷酸酯(85 mg,0.25 mmol)、1H-四唑(27 mg,0.38 mmol)含於乙腈之混合物在室溫下攪拌1 h。LCMS顯示無進一步反應。未進一步純化，將含161d之混合物用於下一步驟。MS-ESI：[M+H]+ 775.3。
實例161e 磷酸二苄酯(2-(6-第三丁基-8-氟-1-側氧基呔-2(1H)-基)-4-(1-甲基-5-(5-甲基異噁唑-3-基胺基)-6-側氧基-1,6-二氫吡啶-3-基)吡啶-3-基)甲酯161e
於161d含於乙腈之混合物中添加m-氯過苯甲酸(49 mg,0.28 mmol)。反應混合物在室溫下攪拌5分鐘，並過濾。在減壓下濃縮濾液，並藉由逆相製備型HPLC純化殘餘物，得到呈白色固體之161e(15 mg,10%兩步驟)。MS-ESI：[M+H]+ 791.3。
實例161 磷酸二氫[2-(6-第三丁基-8-氟-1-側氧基-呔-2-基)-4-[1-甲基-5-[(5-甲基異噁唑-3-基)胺基]-6-側氧基-3-吡啶基]-3-吡啶基]甲酯161
161e(10 mg,0.013mmol)含於三氟乙酸(297 mg,2.60 mmol)之混合物在室溫下攪拌1 h。在減壓下濃縮混合物，並藉由逆相製備型HPLC純化殘餘物，得到呈白色固體之161(6.7 mg,84%)。MS-ESI：[M+H]+ 611.3。1H NMR(500 MHz,DMSO-d 6 )δ 9.00(s,1H),8.61(m,1H),8.50(bs,1H),8.02(s,1H),7.87-7.72(m,3H),7.53(m,1H),6.27(s,1H),4.61-4.56(m,2H),3.46(s,3H),2.33(s,3H),1.31(s,9H)。
實例162a 5,6-二氫-4H-吡咯并[1,2-b]吡唑-2-羧酸162a
將5,6-二氫-4H-吡咯并[1,2-b]吡唑-2-羧酸乙酯(540 mg,3.0 mmol)、2 N氫氧化鈉水溶液(3.5 mL)以及1,4-二噁烷(3.0 mL)加入配備有回流冷凝器之25-mL圓底燒瓶中。系統在65℃下加熱2.5 h。然後將其冷卻至室溫，並使用濃HCl將pH調節為2-3。藉由過濾收集固體，得到呈黃色固體之162a(260 mg,57%)。MS-ESI：[M+H]+ 153.3。
實例162b 5,6-二氫-4H-吡咯并[1,2-b]吡唑-2-基胺基甲酸第三丁基酯162b
將162a(197.6 mg,1.3 mmol)、第三丁醇(5.0 mL)、三乙胺(262.6 mg,2.6 mmol)以及DPPA(550 mg,2.0 mmol)加入配備有磁攪拌器以及回流冷凝器之25-mL單頸圓底燒瓶中。使系統經歷抽真空/氮氣沖洗之三次循環，並在85℃下加熱5 h。然後將其冷卻至室溫，並藉由組合急驟層析純化(A：1% NH4HCO3/水，B：乙腈)，得到呈黃色固體之162b(45 mg,15.5%)。MS-ESI：[M+H-56]+ 168.3。
實例162c 5,6-二氫-4H-吡咯并[1,2-b]吡唑-2-胺162c
在室溫下於162b(45 mg,0.20 mmol)含於二氯甲烷(1.5 mL)之溶液中添加三氟乙酸(1 mL)。溶液攪拌5 h。接著在減壓下濃縮，得到162c，其未進一步純化而用於下一步驟。MS-ESI：[M+H]+ 124.3。
實例162d 乙酸(2-(6-第三丁基-8-氟-1-側氧基呔-2(1H)-基)-4-(5-(5,6-二氫-4H-吡咯并[1,2-b]吡唑-2-基胺基)-1-甲基-6-側氧基-1,6-二氫吡啶-3-基)吡啶-3-基)甲酯162d
將(4-(5-溴-1-甲基-6-側氧基-1,6-二氫吡啶-3-基)-2-(6-第三丁基-8-氟-1-側氧基呔-2(1H)-基)吡啶-3-基)甲酯142c(166.2 mg,0.30 mmol)、162c(24.6 mg,0.20 mmol)、碳酸銫(130 mg,0.40 mmol)以及1,4-二噁烷(4.0 mL)加入配備有磁攪拌器以及回流冷凝器之25-mL單頸圓底燒瓶中。於懸浮液中鼓入氮氣10分鐘後，添加Xantphos(23 mg,0.040 mmol)與叁(二亞苄基丙酮)二鈀(0)(14 mg,0.020 mmol)。使系統經歷抽真空/氮氣沖洗之三次循環，並在回流下加熱2.5 h。接著將其冷卻至室溫並過濾。使用二氯甲烷(3×10 mL)清洗固體。在減壓下濃縮合併之有機層。藉由矽膠管柱層析利用二氯甲烷/甲醇(100：1至50：1)溶離而純化殘餘物，得到呈黃色固體之162d(50 mg,42%)。MS-ESI：[M+H]+ 598.3。
實例162 6-第三丁基-2-[4-[5-(5,6-二氫-4H-吡咯并[1,2-b]吡唑-2-基胺基)-1-甲基-6-側氧基-3-吡啶基]-3-(羥甲基)-2-吡啶基]-8-氟基-呔-1-酮162
在室溫下於162d(50 mg,0.080 mmol)含於THF/i-丙醇/水(1/1/0.5 mL)之溶液中添加氫氧化鋰(19 mg,0.80 mmol)。反應攪拌2.5 h後，LCMS顯示反應完成。接著將混合物傾倒於水(15 mL)中，並使用二氯甲烷(3×20 mL)萃取。使用鹽水(30 mL)清洗合併之有機層，在Na2SO4上乾燥，過濾，並在減壓下濃縮。藉由逆相製備型HPLC(A：1% NH4HCO3/水，B：乙腈)純化殘餘固體，得到呈白色固體之162(15 mg,33.3%)。MS-ESI：[M+H]+ 556.3。1H NMR (500 MHz,CDCl3)δ 8.62(d,J=5.0 Hz,1H),8.32(s,1H),7.93(d,J=2.0 Hz,1H),7.55-7.47(m,4H),7.26(s,1H),5.74(s,1H),4.47(d,J=4.0 Hz,2H),4.07(t,J=2.0 Hz,2H),3.70(s,3H),2.87(t,J=6.5 Hz,2H),2.55-2.52(m,2H),1.45(s,9H)。
實例901 生化Btk分析
可用以測試式I與II化合物之標準生化Btk激酶分析之一般程序如下。製備主體(master)混合負型Btk酶，其含有1X細胞發訊激酶緩衝劑(25 mM Tris-HCl，pH 7.5,5 mM β-甘油磷酸酯，2 mM二硫蘇糖醇，0.1 mM Na3VO4，10 mM MgCl2)、0.5 μM Promega PTK生物素化肽受質2以及0.01% BSA。製備主體混合正型Btk酶，其含有1X細胞發訊激酶緩衝劑、0.5 μM PTK生物素化肽受質2、0.01% BSA以及100 ng/孔(0.06 mU/孔)Btk酶。Btk酶係如下製備：將帶有C-末端V5與6x His標記之人類全長野生型Btk(寄存編號NM-000061)次選殖至pFastBac載體中，製得攜帶此抗原決定基-標記Btk之桿狀病毒。桿狀病毒之世代係基於Invitrogen's說明書，詳述於其公開方案「Bac-to-Bac Baculovirus Expression Systems」中(目錄編號10359-016與10608-016)。使用第3繼代病毒感染Sf9細胞，以使重組Btk蛋白過度表現。接著利用Ni-NTA管柱將Btk蛋白純化至同源。基於敏感性Sypro-Ruby染色，最終蛋白製劑之純度高於95%。在水中製備200 μM ATP之溶液，並使用1N NaOH調節至pH 7.4。將數量為1.25 μL之含於5% DMSO之化合 物轉移至96-孔½面積Costar聚苯乙烯盤中。單獨測試化合物並作出11-點劑量-反應曲線(起始濃度為10 μM；1：2稀釋)。將數量為18.75 μL之宿主混合負型酶(作為負對照)與宿主混合正型酶轉移到96-孔½面積Costar聚苯乙烯盤之適宜孔中。將5 μL 200 μM ATP添加至96-孔½面積Costar聚苯乙烯盤中之混合物中，得到40 μM之最終ATP濃度。使反應在室溫下培養1小時。利用含30 mM EDTA、20 nM SA-APC以及1 nM PT66 Ab之Perkin Elmer 1X檢測緩衝劑使反應停止。利用具有採用激發濾光片330 nm、發射光濾光片665 nm以及2nd發射光濾光片615 nm之Perkin Elmer Envision之時間解析式螢光讀取盤。隨後計算IC50值。或者，可使用Lanthascreen分析，經由量化其磷酸化肽產物來評估Btk活性。肽產物上螢光素與檢測抗體上之鋱之間出現之FRET(螢光共振能量轉移)隨著添加可減少肽之磷酸化作用之Btk之抑制劑而減少。在25 uL之最終反應體積中，將Btk(h)(0.1 ng/25 ul反應)與50 mM Hepes pH 7.5、10 mM MgCl2、2 mM MnCl2、2 mM DTT、0.2 mM NaVO4,0.01% BSA以及0.4 uM螢光素聚-GAT一起培養。藉由向25 uM(ATP之Km)添加ATP使反應開始。在室溫下培養60分鐘後，在室溫下藉由添加含於60 mM EDTA之最終濃度2 nM Tb-PY20檢測抗體30分鐘使反應停止。檢測係由具有340 nm激發以及495 nm與520 nm之發射之Perkin Elmer Envision測定。表1、2與3為例舉之Btk抑制IC50值。
實例902 Ramos細胞Btk分析
可用以測試式I與II化合物之標準細胞Btk激酶分析之另一一般程序如下。在測試化合物存在下，在37℃下以0.5x107細胞/mL之密度培養Ramos細胞1小時。然後，在37℃下，藉由與10 μg/mL抗人類IgM F(ab)2培養5分鐘刺激細胞。使細胞粒化，溶胞，並對澄清溶胞產物進行蛋白分析。利用抗-磷醯Btk(Tyr223)抗體(Cell Signaling Technology #3531；Epitomics,cat.#2207-1)或磷醯Btk(Tyr551)抗體(BD Transduction Labs #558034)，對各樣品之等量蛋白進行SDS-PAGE與西方墨點法，以評估Btk自我磷醯化或抗-Btk抗體(BD Transduction Labs #611116)，以控制各溶胞產物中Btk之總量。
實例903 B-細胞增殖分析
可用以測試式I與II化合物之標準細胞B-細胞增殖分析之一般程序如下。利用B細胞單離套組(Miltenyi Biotech,Cat #130-090-862)由8-16週齡Balb/c小鼠脾臟純化B細胞。將測試化合物稀釋於0.25% DMSO中，並與2.5×105經純化之小鼠脾臟B細胞培養30分鐘，接著添加10 μg/mL抗小鼠IgM抗體(Southern Biotechnology Associates Cat #1022-01)至100 μl之最終體積。培養24小時後，添加1 μCi 3H-胸苷，並額外培養該等盤36小時，接著利用SPA[3H]胸苷攝取分析系統(Amersham Biosciences #RPNQ 0130)之製造商方案收取。在microbeta計數器(Wallace Triplex 1450,Perkin Elmer)中計算以SPA-珠粒為主之螢光。
實例904 T細胞增殖分析
可用以測試式I與II化合物之標準T細胞增殖分析之一般程序如下。利用Pan T細胞單離套組(Miltenyi Biotech,Cat #130-090-861)由8-16週齡Balb/c小鼠脾臟純化T細胞。將測試化合物稀釋於0.25% DMSO中，並在於37℃下於經10 μg/mL之各抗-CD3(BD #553057)與抗-CD28(BD #553294)抗體預塗佈90分鐘之透明平底盤中，與100 μl最終體積之2.5×105經純化之小鼠脾臟T細胞培養。培養24小時後，添加1 μCi 3H-胸苷，並額外培養該等盤36小時，接著利用SPA[3H]胸苷攝取分析系統(Amersham Biosciences #RPNQ 0130)之製造商方案收取。在microbeta計數器(Wallace Triplex 1450,Perkin Elmer)中計算以SPA-珠粒為主之螢光。
實例905 CD86抑制分析
可用以測試式I與II化合物之抑制B細胞活性之標準分析之一般程序如下。藉由紅血細胞溶胞劑(BD Pharmingen #555899)由8-16週齡Balb/c小鼠脾臟純化總小鼠脾細胞。將測試化合物稀釋於0.5% DMSO中，並在37℃下於透明平底盤(Falcon 353072)中，與最終體積200 μl之1.25×106脾細胞培養60分鐘。接著藉由添加15 μg/mL IgM(Jackson ImmunoResearch 115-006-020)刺激細胞，並在37℃、5% CO2下培養24小時。培養24小時後，將細胞轉移至錐底透明96-孔盤中，並藉由以1200×g×5分鐘離心粒化。藉由CD16/CD32(BD Pharmingen #553142)預先阻斷細胞，接著利用CD19-FITC(BD Pharmingen #553785)、CD86-PE (BD Pharmingen #553692)以及7AAD(BD Pharmingen #51-68981E)進行三重染色。在BD FACSCalibur上將細胞分類，並門控(gated)CD19+/7AAD-群體。計算相對於測試化合物濃度之經門控群體上之CD86表面表現量。
實例906 B-ALL細胞存活分析
以下係標準B-ALL(急性淋巴母細胞白血病)細胞存活研究之程序，其利用XTT讀數計算活細胞之數量。可使用該分析來測試式I與II化合物抑制培養基中B-ALL細胞之存活之能力。可使用之一種人類B細胞急性淋巴母細胞白血病細胞株為SUP-B15，其係可得自ATCC之人類Pre-B細胞ALL細胞株。
以5×105細胞/mL之濃度將SUP-B15 Pre-B-ALL細胞舖於多重96-孔微量滴定盤之100 μl Iscove's培養基+20% FBS中。接著向測試化合物添加最終濃度為0.4%之DMSO。在37℃下於5%CO2將細胞培養至多3天。3天後，將細胞以1：3分配至新的含測試化合物之96-孔盤中，並使其又成長3天。每隔24小時後，將50 ul XTT溶液添加至該複份之96-孔盤之一者中，並按照製造商說明在2、4以及20小時讀取吸光值讀數。然後讀取該分析之線性範圍內(0.5-1.5)僅經DMSO處理之細胞之OD讀數，並計算經化合物處理之孔中存活細胞相對於僅經DMSO處理之細胞之百分比。
實例907 CD69全血分析
人類血液係來自健康志願者，但有下列限制：1週未用藥，不抽煙。藉由靜脈穿刺將血液(約20 mL以測試8種化 合物)收集於具有肝素鈉之Vacutainer®(Becton,Dickinson and Co.)管中。
以1：10將以10 mM含於DMSO之式I與II化合物溶液稀釋於100% DMSO中，接著藉由三倍連續稀釋而稀釋於100% DMSO中，得到十點劑量-反應曲線。將化合物進一步以1：10稀釋於PBS中，且接著將各化合物之5.5 μl量一式兩份地添加至2 mL 96-孔盤中；添加5.5 μl含於PBS之10% DMSO作為對照及無刺激孔。將人類全血-HWB(100 μl)添加至各孔中。混合後，將盤培養於37℃、5% CO2、100%濕度下30分鐘。將羊F(ab')2抗人類IgM(10 μl 500 μg/mL溶液，50 μg/mL最終)添加至各孔(無刺激孔除外)中同時混合，並將該等盤額外培養20小時。在20小時培養結束時，使樣品在37℃、5% CO2、100%濕度下與經螢光標記地抗體一起培養30分鐘。包括受誘導之對照組、未染色及為補償調整進行單一染色及初始電壓設定。然後根據製造商說明利用PharM LyseTM(BD Biosciences Pharmingen)使樣品溶胞。然後將樣品轉移至96孔盤中，該盤適於在LSRII機器之BD Biosciences HTS 96孔系統上操作。獲取數據，並利用BD Biosciences DIVA軟體得到平均螢光強度值。首先藉由FACS分析軟體分析結果(Flow Jo)。將測試化合物之IC50定義為CD69細胞之陽性百分比降低50%(其亦係由抗-IgM所刺激之CD20陽性)之濃度(8個對照孔之平均值，隨後減去8個孔之之無刺激背景平均值)。利用非線性回歸曲線擬合，藉由Prism第5版計算抑制濃度(IC50、IC70、IC90) 值。
實例908 活體外細胞增殖分析
藉由細胞增殖分析採用以下方案測量式I與II化合物之功效(Mendoza等人(2002)Cancer Res.62：5485-5488)。CellTiter-Glo®發光細胞存活分析，包括試劑及方案均係市售(Promega Corp.,Madison,WI,Technical Bulletin TB288)。該分析評估該等化合物進入細胞及抑制細胞增殖之能力。分析理論係基於藉由定量同源分析中ATP存在而測定存活細胞存在數，其中添加Cell-Titer Glo試劑導致細胞溶胞，並經由螢光素酶反應產生發光訊號。發光訊號與ATP存在量成正比。
將一組B-細胞淋巴瘤細胞株(BJAB、SUDHL-4、TMD8、OCI-Ly10、OCI-Ly3、WSU-DLCL2)舖於正常生長培養基之384-孔盤中，並將經連續稀釋之Btk抑制劑或僅DMSO添加至各孔中。培養96小時後，藉由CellTiter-Glo®(Promega)評估細胞存活性。數據可以經BTK抑制劑處理的細胞相對於經DMSO處理的對照細胞之相對細胞活性表示。數據點係各劑量程度之4次重複之平均值。誤差棒代表與平均值之SD。
程序：第1天-種細胞盤(獲自Falcon #353962之具有蓋之384-孔黑色透明底microclear TC盤)，收取細胞，種細胞係以1000細胞/54 μl/孔接種於384孔細胞盤中，進行為期三天分析。細胞培養基：RPMI或DMEM高葡萄糖，10%胎牛血清，2 mM L-穀氨醯胺，P/S。在37℃、5% CO2下培養 O/N。
第2天-將藥物添加至細胞、化合物稀釋、DMSO盤(連續1：2稀釋，計9點)，將20 μl 10 mM化合物添加至96孔盤之第二欄。使用Precision在全盤上進行連續1：2稀釋(10μl+20μl 100% DMSO)總計9點。培養基盤96-孔錐底聚丙烯盤獲自Nunc(cat.#249946)(1：50稀釋)。將147μl培養基加入所有孔中。利用Rapidplate將DMSO盤中各孔之3μl DMSO+化合物轉移至培養基盤之各相應孔中。
將藥物加入細胞、細胞盤(1：10稀釋)，將6 μl培養基+化合物直接加入細胞(細胞上已有54μl培養基)。在37℃、5% CO2下，於不常開啟之培養箱中培養3天。
第5天-在室溫使盤展開，Thaw Cell Titer Glo緩衝劑。將細胞盤自37℃移開，並平衡至室溫約30分鐘。將Cell Titer Glo緩衝劑添加至Cell Titer Glo受質(瓶對瓶)中。將30 μl Cell Titer Glo試劑(Promega cat.#G7572)加入各孔細胞中。置於盤振盪器上約30分鐘。在分析HT盤讀取器上讀取螢光(半秒/孔)。
細胞存活性分析與組合分析：將細胞以1000-2000細胞/孔接種於384-孔盤中16 h。在第二天，在96孔盤上，於DMSO中製作九次連續1：2化合物稀釋。利用Rapidplate robot(Zymark Corp.,Hopkinton,MA)將化合物進一步稀釋於生長培養基中。然後將經稀釋之化合物添加至384-孔細胞盤之一式四份孔中，並在37℃及5% CO2下培養。4天後，根據製造商說明，藉由發光，利用Cell-Titer Glo (Promega)測量存活細胞之相對數量，並在Wallac Multilabel Reader(PerkinElmer,Foster City)上讀取。利用Prism® 4.0軟體(GraphPad,San Diego)計算EC50值。同時或間隔4小時地(有先後順序)將式I或II化合物以及化學治療劑添加至所有分析中。
額外活體外細胞增殖分析實例包括以下步驟：
1.將培養基中含約104個細胞之細胞培養物之100 mL分數置於384-孔不透明壁盤之每一孔中。
2.製備對照孔，其包含培養基而無細胞。
3.將化合物添加至實驗孔中，並培養3-5天。
4.將該等盤平衡至室溫約30分鐘。
5.添加與各孔中存在之細胞培養基之體積相等體積之CellTiter-Glo試劑。
6.在軌道旋轉式振盪器上混合內容物2分鐘，以誘導細胞溶胞。
7.在室溫下培養盤10分鐘，以穩定發光訊號。
8.記錄發光，並在圖表中記為RLU=相對發光單位。
為清楚瞭解之目的，雖然本發明前文已藉由圖式及實例得到較為詳細地描述，但此等說明及實例不應視為限制本發明之範圍。因此，所有適宜修改及等效項可視為落在下文由申請專利範圍所定義之本發明範圍內。本文所引用之所有專利案及科學文獻之全文係明確地以引用的方式而併入。
圖1顯示由4-第三丁基苯甲醯氯101a開始製備6-第三丁基-8-氟-2-(2-(羥甲基)-3-(1-甲基-5-(5-(4-甲基哌-1-基)吡啶-2-基胺基)-6-側氧基-1,6-二氫吡啶-3-基)苯基)呔-1(2H)-酮101
圖2顯示由2,6-二溴-4-氟苯甲醛102a開始製備6-第三丁基-8-氟-2-(3-(羥甲基)-4-(1-甲基-5-(5-(4-(氧雜環丁-3-基)哌-1-基)吡啶-2-基胺基)-6-側氧基-1,6-二氫吡啶-3-基)吡啶-2-基)呔-1(2H)-酮102
圖3顯示由2-溴-4-氯菸鹼醛103a開始製備6-第三丁基-8-氟-2-(3-(羥甲基)-4-(1-甲基-5-(5-(4-(氧雜環丁-3-基)哌-1-基)吡啶-2-基胺基)-6-側氧基-1,6-二氫吡啶-3-基)吡啶-2-基)-呔-1(2H)-酮103
圖4顯示由(3S)-3-甲基-4-(6-硝基吡啶-3-基)哌-1-羧酸第三丁基酯105a開始製備(S)-6-第三丁基-8-氟-2-(3-(羥甲基)-4-(1-甲基-5-(3-甲基-5-(4-(氧雜環丁-3-基)哌-1-基)吡啶-2-基胺基)-6-側氧基-1,6-二氫吡啶-3-基)吡啶-2-基)呔-1(2H)-酮105
圖5顯示由1-甲基-3-(5-(2-甲基-4-(氧雜環丁-3-基)哌-1-基)吡啶-2-基胺基)-5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧雜硼雜環戊-2-基)吡啶-2(1H)-酮106a開始製備R-6-第三丁基-8-氟-2-(3-(羥甲基)-4-(1-甲基-5-(5-(2-甲基-4-(氧雜環丁-3-基)哌-1-基)吡啶-2-基胺基)-6-側氧基-1,6-二氫吡啶-3-基)吡啶-2-基)呔-1(2H)-酮106
圖6顯示由3-溴-5-(6-第三丁基-8-氟-1-側氧基-1,2-二氫 呔-2-基)吡啶-4-甲醛109a開始製備(S)-6-第三丁基-8-氟-2-(4-(羥甲基)-5-(1-甲基-5-(5-(2-甲基-4-(氧雜環丁-3-基)哌-1-基)吡啶-2-基胺基)-6-側氧基-1,6-二氫吡啶-3-基)吡啶-3-基)呔-1(2H)-酮109
圖7顯示由2-(6-第三丁基-8-氟-1-側氧基呔-2(1H)-基)-4-(5-(5-((2S,5R)-2,5-二甲基-4-(氧雜環丁-3-基)哌-1-基)吡啶-2-基胺基)-1-甲基-6-側氧基-1,6-二氫吡啶-3-基)菸鹼醛110a開始製備6-第三丁基-2-(4-(5-(5-((2S,5R)-2,5-二甲基-4-(氧雜環丁-3-基)哌-1-基)吡啶-2-基胺基)-1-甲基-6-側氧基-1,6-二氫吡啶-3-基)-3-(羥甲基)吡啶-2-基)-8-氟基呔-1(2H)-酮110
圖8顯示由(S)-2-(6-第三丁基-8-氟-1-側氧基呔-2(1H)-基)-4-(5-(5-(2-乙基-4-(氧雜環丁-3-基)哌-1-基)吡啶-2-基胺基)-1-甲基-6-側氧基-1,6-二氫吡啶-3-基)菸鹼醛112a開始製備(S)-6-第三丁基-2-(4-(5-(5-(2-乙基-4-(氧雜環丁-3-基)哌-1-基)吡啶-2-基胺基)-1-甲基-6-側氧基-1,6-二氫吡啶-3-基)-3-(羥甲基)吡啶-2-基)-8-氟基呔-1(2H)-酮112

Claims (34)

  1. 一種選自式II之化合物， 或其立體異構體、互變異構體或醫藥上可接受之鹽，其中：X1為CR1或N；X2為CR2或N；X3為CR3或N；其中X1、X2與X3之一或二者為N；Y1與Y2係獨立地選自CH與N，其中Y1與Y2不皆為N；R1、R2與R3係獨立地選自H、F、Cl、CN、-CH3、-CH2CH3、-CH2OH、-CH2F、-CHF2、-CF3、-CH2CH2OH、-NH2、-NHCH3、-N(CH3)2、-OH、-OCH3、-OCH2CH3及-OCH2CH2OH；R4係選自H、F、Cl、CN、-CH2OH、-CH(CH3)OH、-C(CH3)2OH、-CH(CF3)OH、-CH2F、-CHF2、-CH2CHF2、-CF3、-C(O)NH2、-C(O)NHCH3、-C(O)N(CH3)2、-NH2、-NHCH3、-N(CH3)2、-NHC(O)CH3、-OH、-OCH3、-OCH2CH3、-OCH2CH2OH、-OP(O)(OH)2、環丙基、環丙基甲基、1-羥基環丙基、咪唑基、吡唑基、3-羥基-氧雜環丁-3-基、氧雜環丁-3-基及吖丁啶-1-基； R6係選自H、-CH3、-CH2CH3、-CH2CH2OH、-CH2F、-CHF2、-CF3、-NH2、-NHCH3、-N(CH3)2、-OH、-OCH3、-OCH2CH3及-OCH2CH2OH；R8係選自C6-C20芳基、C3-C12碳環基、C2-C20雜環基、C1-C20雜芳基、-(C6-C20芳基)-(C2-C20雜環基)、-(C1-C20雜芳基)-(C2-C20雜環基)、-(C1-C20雜芳基)-(C2-C20雜環基)-(C2-C20雜環基)、-(C1-C20雜芳基)-(C2-C20雜環基)-(C1-C6烷基)、-(C1-C20雜芳基)-(C1-C6烷基)及-(C1-C20雜芳基)-C(=O)-(C2-C20雜環基)；其中芳基、碳環基、雜環基及雜芳基視情況經一或多個獨立選自以下之基團取代：F、Cl、Br、I、CN、-CH3、-CH2CH3、CH(CH3)2、-CH2CH(CH3)2、-CH2OH、-CH2OCH3、-CH2CH2OH、-C(CH3)2OH、-CH(OH)CH(CH3)2、-C(CH3)2CH2OH、-CH2CH2SO2CH3、-CH2OP(O)(OH)2、-C(CH3)2CONH2、-CH2OCH3、-CH2CH2OH、-CH2CH2OCH3、-CH2F、-CHF2、-CF3、-CH2CF3、-CH2CHF2、-CH(CH3)CN、-C(CH3)2CN、-CH2CN、CO2H、-C(O)CH3、-CO2CH3、-CO2C(CH3)3、-COCH(OH)CH3、-C(O)CH2CH3、-C(O)CH(CH3)2、-C(O)NH2、-C(O)NHCH3、-C(O)N(CH3)2、-NH2、-NHCH3、-N(CH3)2、-NHC(O)CH3、-N(CH3)COCH3、-NHS(O)2CH3、-N(CH3)C(CH3)2CONH2、-N(CH3)CH2CH2S(O)2CH3、-NO2、=O、-OH、-OCH3、-OCH2CH3、-OCH2CH2OCH3、-OCH2CH2OH、-OCH2CH2N(CH3)2、-OP(O)(OH)2、-S(O)2N(CH3)2、-SCH3、-S(O)2CH3、-S(O)3H、環丙基、 氧雜環丁基、吖丁啶基、1-甲基吖丁啶-3-基氧基、N-甲基-N-氧雜環丁-3-基胺基、吖丁啶-1-基甲基及嗎啉基。
  2. 如請求項1之化合物，其中R8為-(C1-C20雜芳基)-(C2-C20雜環基)。
  3. 如請求項1之化合物，其中R8為-(C1-C20雜芳基)-(C2-C20雜環基)，且其中雜芳基係視情況經取代之吡啶基，且雜環基係視情況經取代之哌基。
  4. 如請求項1之化合物，其中R8為C1-C20雜芳基。
  5. 如請求項4之化合物，其中R8係選自嘧啶基、6,7-二氫-4H-噻唑并[5,4-c]吡啶-2-基、5-(嗎啉-4-羰基)-2-吡啶基、吡唑基、噻唑基、6,7-二氫-4H-吡唑并[1,5-a]吡-2-基、噁唑基、異噁唑基、咪唑基、5-(6,7-二氫-4H-吡唑并[5,1-c][1,4]噁-2-基、1,2,3-三唑基、4,5,6,7-四氫吡唑并[1,5-a]吡、吡基，及5,6-二氫-4H-吡咯并[1,2-b]吡唑-2-基。
  6. 如請求項5之化合物，其中R8為 其中R9係選自H、-CH3、-CH2OCH3、-CH2CH3、-CH(CH3)2、-CH2CH2OH、-CH2CH2OCH3、-CH2F、-CHF2、-CF3、-CH2CF3、-CH2CHF2、-CH(CH3)CN、-C(CH3)2CN、-CH2CN、-CH2CH2CN、-C(O)CH3、-C(O)CH2CH3、-C(O)CH(CH3)2、-NH2、-NHCH3、-N(CH3)2、-OH、-OCH3、-OCH2CH3、-OCH2CH2OH、環丙基、環丙基甲基、氧雜環丁基及氧雜環丁基甲基。
  7. 如請求項1之化合物，其中X1為N，X2為CR2，且X3為CR3。
  8. 如請求項1之化合物，其中X1為CR1，X2為N，且X3為CR3。
  9. 如請求項1之化合物，其中X1為CR1，X2為CR2，且X3為N。
  10. 如請求項1之化合物，其係選自：X1與X3為N，X1與X2為N，或者X2與X3為N。
  11. 如請求項1之化合物，其中X2為CR2，且R2為F。
  12. 如請求項11之化合物，其中X1與X3為CH。
  13. 如請求項1之化合物，其中R4為-CH2OH。
  14. 如請求項2之化合物，其係選自式I： R5係選自-CH3、-CH2CH3、-CH2OH、-CH2F、-CHF2、-CF3、-CN及-CH2CH2OH；或者兩個R5基團形成3-、4-、5-或6-員碳環或雜環；或者R5基團與R7基團形成3-、4-、5-或6-員碳環或雜環；n為0、1、2、3或4；R7係選自H、-CH3、-S(O)2CH3、環丙基、吖丁啶-3-基、氧雜環丁-3-基及嗎啉-4-基；Z1為CR8或N，其中R8係選自H、F、Cl、-CH3、-CH2CH3、-CH2CH2OH、-NH2、-NHCH3、-N(CH3)2、-OH、-OCH3、-OCH2CH3及-OCH2CH2OH；Z2為CR9或N，其中R9係選自H、-CH3、-CH2CH3及-CH2CH2OH；及Y1與Y2係獨立地選自CH及N，其中Y1與Y2不皆為N。
  15. 如請求項14之化合物，其係選自具有以下結構之式Ia-If：
  16. 如請求項14之化合物，其中R5為-CH3，且n為1或2。
  17. 如請求項14之化合物，其中R7為氧雜環丁-3-基。
  18. 如請求項14之化合物，其中Y1為CH。
  19. 如請求項14之化合物，其中Y2為CH。
  20. 如請求項14之化合物，其中Z1為CH。
  21. 如請求項14之化合物，其中Z2為CH。
  22. 如請求項1之化合物，其係選自以下化合物：
  23. 如請求項1之化合物，其係選自以下化合物：
  24. 一種醫藥組合物，其包含如請求項1至23中任一項之化合物與醫藥上可接受之載劑、助流劑、稀釋劑或賦形劑。
  25. 如請求項24之醫藥組合物，其進一步包含治療劑。
  26. 如請求項24之醫藥組合物，其係用作治療選自免疫病 症、癌症、心血管疾病、病毒感染、發炎、代謝/內分泌功能病症及神經疾病，以及由布魯頓氏(Bruton's)酪胺酸激酶所介導之疾病或病症之藥劑。
  27. 一種製造醫藥組合物之方法，其包含組合如請求項1至23中任一項之化合物與醫藥上可接受之載劑。
  28. 一種如請求項24之醫藥組合物之用途，其係用於製造供治療免疫病症、癌症、心血管疾病、病毒感染、發炎、代謝/內分泌功能病症及神經疾病之藥劑，其中該藥劑調節布魯頓氏酪胺酸激酶。
  29. 如請求項28之用途，其中該疾病或病症為免疫病症。
  30. 如請求項29之用途，其中該免疫病症為類風濕性關節炎。
  31. 如請求項28之用途，其中該疾病或病症為全身及局部發炎、關節炎、免疫抑制相關發炎、器官移植排斥、過敏、潰瘍性結腸炎、克羅恩氏病(Crohn's disease)、皮炎、氣喘、全身性紅斑狼瘡、修格蘭氏症候群(Sjögren's Syndrome)、多發性硬化、硬皮病/全身性硬化症、特發性血小板減少性紫癜(ITP)、抗嗜中性球細胞質抗體(ANCA)血管炎、慢性阻塞性肺病(COPD)、牛皮癬。
  32. 如請求項28之用途，其中該疾病或病症係選自以下癌症：乳癌、卵巢癌、子宮頸癌、前列腺癌、睾丸癌、泌尿生殖道癌、食道癌、喉癌、神經膠質母細胞瘤、神經胚細胞瘤、胃癌(stomach cancer)、皮膚癌、角質棘皮瘤、肺癌、表皮樣癌、大細胞癌、非小細胞肺癌 (NSCLC)、小細胞癌、肺腺癌、骨癌、結腸癌、腺瘤、胰腺癌、腺癌、甲狀腺癌、濾泡(follicular)癌、未分化癌、乳頭狀癌、精細胞瘤、黑色素瘤、肉瘤、膀胱癌、肝癌及膽道癌、腎癌、胰腺癌、骨髓病症、淋巴瘤、毛細胞癌、頰腔癌(buccal cavity cancer)、鼻咽癌、咽癌、唇癌、舌癌、口腔癌(mouth cancer)、小腸癌、結腸-直腸癌、大腸癌、直腸癌、腦癌及中樞神經系統癌、霍奇金氏(Hodgkin's)癌、白血病、支氣管癌、甲狀腺癌、肝癌及肝內膽管癌、肝細胞癌、胃癌(gastric cancer)、膠質瘤/神經膠質母細胞瘤、子宮內膜癌、黑色素瘤、腎癌及腎盂癌、膀胱癌、子宮體癌、子宮頸癌、多發性骨髓瘤、急性骨髓性白血病、慢性骨髓性白血病、淋巴細胞性白血病、慢性淋巴細胞白血病(CLL)、骨髓性白血病、口腔及咽癌、非霍奇金氏淋巴瘤、黑色素瘤及結腸絨毛腺瘤。
  33. 如請求項28之用途，其中該藥劑係與選自以下之其他治療劑投與：抗發炎劑、免疫調節劑、化學治療劑、細胞凋亡增強劑、趨神經因子(neurotropic factor)、治療心血管疾病之藥劑、治療肝病之製劑、抗病毒劑、治療血液病症之藥劑、治療糖尿病之藥劑及治療免疫缺陷病症之藥劑。
  34. 一種用於治療由布魯頓氏酪胺酸激酶所介導之病狀之套組，其包含：a)如請求項24之醫藥組合物；及b)使用說明書。
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