TW201306760A - 包括乳鐵蛋白之營養組成物於支持對疾病和病況的抵抗力上之用途 - Google Patents
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Abstract
本揭露關於包括來自非人來源的乳鐵蛋白之營養組成物於支持對疾病和病況的抵抗力之用途。本方法包括投予人營養組成物，該營養組成物包含脂肪或脂質來源、蛋白質來源及藉由非人來源所製造之乳鐵蛋白。
Description
本揭露大體上關於例如嬰兒配方、人乳強化營養品、兒童膳食補充品等等之營養組成物領域，該營養組成物具有乳鐵蛋白、特別是藉由非人來源製造之乳鐵蛋白。更特定言之，本揭露關於一種藉由投予人包括乳鐵蛋白之營養組成物以支持對藉由細菌及病毒病原體所造成之疾病和病況的抵抗力之方法。
目前有各種針對人、特別針對年輕人的膳食組成物，以提供在某些生命階段的補充性或主要營養。一般而言，市售針對嬰兒的膳食組成物尋求盡可能模擬人乳的組成物及相關功能性之程度。透過組合其中某些具有生理活性的蛋白質及經摻合脂肪成分，調製膳食組成物以使彼等模擬人乳，以用作為完整或部分取代物。其他常利用於嬰兒膳食組成物中的成分可包括例如乳糖之碳水化合物來源和咸信存在於人乳中以供嬰兒吸收的維生素、礦物質及元素。
乳鐵蛋白係人乳中的主要蛋白質之一，且被認為是具有平均分子量約80千道耳頓的醣蛋白。其為鐵結合蛋白，具有以可逆形式結合二個鐵分子的能力，且可促進在人的小腸內之鐵攝取。功能上，乳鐵蛋白調控鐵吸收且由此可結合鐵基自由基，並供予鐵以供免疫反應之用。
在獲得商業可行性之膳食組成物中，加入乳鐵蛋白通
常受到侷限，此乃由於在加工處理期間預期失去活性所致。舉例而言，通常在加工處理嬰兒配方及其他例如人乳強化營養品及各種兒童產品中的溫度及pH要求降低乳鐵蛋白的特定功能，造成最終調製物中未含乳鐵蛋白。此外，針對乳鐵蛋白常僅考慮到其鐵結合性；因此，在此種性質被認為藉由加工處理條件而變少時，乳鐵蛋白通常可能排除於調製物外。
又，如本技術領域所知，人乳的鐵含量相對較低(每升人乳含有約0.3毫克鐵)。雖然含量低，但人類嬰兒具有高吸收率，吸收人乳中約一半的鐵。然而，舉例而言，當給予人類嬰兒具有每升約10 mg至約12 mg的高量鐵營養強化之先前技術配方，嬰兒吸收少於總鐵量的約5%。以該先前技術配方中的高鐵量，雖然乳鐵蛋白係已知的鐵運輸蛋白，基本上所有乳鐵蛋白鐵結合位置預期均會被占據。
該先前技術配方的其他困難包括無能力提供抑菌作用。這一部分係由於使用具有經阻斷或已損壞之結合位置之乳鐵蛋白，而抑菌作用至少部分相關於存在於配方中的乳鐵蛋白之鐵結合程度。
因此，有益的是，提供例如嬰兒配方、人乳營養強化品、兒童的膳食補充等等含有乳鐵蛋白、特別是來自非人來源的乳鐵蛋白之營養組成物。鑒於人、特別是嬰兒及兒童的病毒性呼吸道感染盛行，提供支持對病毒性呼吸道感染的抵抗力之營養組成物，將特為有益。較佳的是，即使
於高溫及低pH條件下加工處理後，包括在該組成物中的乳鐵蛋白能夠支持對藉由細菌及病毒病原體所造成之疾病和病況的抵抗力。
簡言之，在一實施態樣中，本揭露係關於一種供人體支持對疾病或病況(例如病毒性呼吸道感染)的抵抗力之方法。在另一實施態樣中，本揭露係關於一種供人體支持對藉由至少一種選自下列之病原體所造成之疾病或病況的抵抗力之方法：腸毒性大腸桿菌(ETEC)、腸內病原性大腸桿菌(EPEC)、流行性感冒嗜血桿菌(Haemophilus influenza)、產志賀毒素性大腸桿菌(STEC)、腸凝集性大腸桿菌(EAEC)、鼠傷寒血清沙氏桿菌血清型(Salmonella ser.Typhimurium)、副痢疾桿菌(Shigella flexneri)、輪狀病毒、諾羅病毒、呼吸道融合性病毒(RSV)、腺病毒及彼等之組合。該方法包括投予人營養組成物，該營養組成物包含(1)脂肪或脂質來源、(2)蛋白質來源、及(3)藉由非人來源所製造之乳鐵蛋白。在某些實施態樣中，該疾病或病況係病毒性下呼吸道感染。
在一實施態樣中，該營養組成包含：a.達至約7 g/100 kcal的脂肪或脂質來源，更佳為約3 g/100 kcal至約7 g/100 kcal的脂肪或脂質來源；b.達至約5 g/100 kcal的蛋白質來源，更佳為約1
g/100 kcal至約5 g/100 kcal的蛋白質來源；及c.至少約10 mg/100 kCal的乳鐵蛋白，更佳為約70 mg至約220 mg/100 kCal的乳鐵蛋白，且最佳為約90 mg至約190 mg/100 kCal的乳鐵蛋白。隨意地，在某些實施態樣中，該營養組成物可另包含約0.1 g/100 kcal至約1 g/100 kcal的益菌生組成物，例如包含聚右旋糖和/或半乳糖寡醣的益菌生組成物。更佳的是，該營養組成物包含約0.3 g/100 kcal至約0.7 g/100 kcal的益菌生組成物，其包含聚右旋糖及半乳糖寡醣之組合。在某些實施態樣中，本揭露係關於一種供人體支持對藉由至少一種選自下列之病原體所造成之疾病或病況的抵抗力之方法：ETEC、EPEC、產志賀毒素性大腸桿菌、EAEC、鼠傷寒血清沙氏桿菌血清型、副痢疾桿菌或彼等之組合。
較佳的是，該乳鐵蛋白係非人乳鐵蛋白和/或藉由經基因修飾之生物體所製造之人乳鐵蛋白。在一特佳實施態樣中，所使用之乳鐵蛋白係使有效量之含乳鐵蛋白營養組成物可投予個體，以支持對藉由病毒或細菌病原體所造成之疾病或病況的抵抗力，即使於加工處理期間，該營養組成物已經暴露於典型的某些類似巴斯德殺菌之加工處理條件的pH及溫度波動亦然。
在一實施態樣中，本揭露提供一種藉由投予人營養組成物供人體支持對藉由細菌或病毒病原體疾病或病況(例
如病毒性呼吸道感染)的抵抗力之方法，該營養組成物包含脂肪或脂質來源、蛋白質來源及來自非人來源之乳鐵蛋白。
如本文中所用，「藉由非人來源所製造之乳鐵蛋白」及「來自非人來源之乳鐵蛋白」各意指藉由人乳以外所製造或取自人乳以外的乳鐵蛋白。舉例而言，用於本揭露之乳鐵蛋白包括藉由經基因修飾之生物體所製造的人類乳鐵蛋白和非人乳鐵蛋白。術語「生物體」如本文中所用，指任何持續之生命系統，例如動物、植物、真菌或微生物。如本文中所用，術語「非人乳鐵蛋白」指具有與人乳鐵蛋白胺基酸序列不同的胺基酸序列之乳鐵蛋白。
乳鐵蛋白為約80 kD的單鏈多肽，取決於物種而含有1-4個聚醣。不同物種的乳鐵蛋白3-D結構均非常相似，但並非完全相同。各乳鐵蛋白包含二個同型葉狀結構，稱之為N-葉及C-葉，係分別指分子N端及C端。各葉狀結構進一步由二個次葉或結構域組成，其形成裂隙，其中該鐵離子(Fe3+)係與(二)碳酸鹽陰離子協同合作而緊密結合。這些結構域係分別稱為N1、N2、C1及C2。乳鐵蛋白的N端具有強陽離子胜肽區域，其負責許多重要結合特性。乳鐵蛋白具有非常高的等電點(~pI 9)且其陽離子本質在其防禦細菌、病毒及真菌病原體的能力中扮演主要角色。於乳鐵蛋白N端區域內有數群陽離子胺基酸殘基調介乳鐵蛋白抗各類微生物的生物活性。舉例而言，人類乳鐵蛋白的N端殘基1-47(牛乳鐵蛋白為1-48)對乳
鐵蛋白的鐵非依賴性生物活性係為關鍵。在人乳鐵蛋白中，殘基2至5(RRRR)(即Arg-Arg-Arg-Arg；SEQ ID NO：1)及28至31(RKVR)(即Arg-Lys-Val-Arg；SEQ ID NO：2)係N端中富含精胺酸陽離子結構域，對乳鐵蛋白的抗微生物活性特別重要。在N端中的類似區域發現於牛乳鐵蛋白(殘基17至42；FKCRRWQWRMKKLGAPSITCVRRAFA；即Phe-Lys-Cys-Arg-Arg-Trp-Gln-Trp-Arg-Met-Lys-Lys-Leu-Gly-Ala-Pro-Ser-Ile-Thr-Cys-Val-Arg-Arg-Ala-Phe-Ala；SEQ ID NO：3)。
如在「Perspectives on Interactions Between Lactoferrin and Bacteria」中所述(該文出現在BIOCHEMISTRY AND CELL BIOLOGY,pp 275-281(2006)刊物中)，來自不同宿主物種的乳鐵蛋白雖然通常具有相對高等電點，在內葉末端區域帶有正電胺基酸，但胺基酸序列不同。適合用於本揭露之乳鐵蛋白包括在HLf(349-364)片段具有與胺基酸序列AVGEQELRKCNQWSGL(即Ala-Val-Gly-Glu-Gln-Glu-Leu-Arg-Lys-Cys-Asn-Gln-Trp-Ser-Gly-Leu；SEQ ID NO：4)至少48%同源性。該乳鐵蛋白在HLf(349-364)片段具有與胺基酸序列AVGEQELRKCNQWSGL(即Ala-Val-Gly-Glu-Gln-Glu-Leu-Arg-Lys-Cys-Asn-Gln-Trp-Ser-Gly-Leu，SEQ ID NO：4)至少65%同源性，且在實施態樣中，為至少75%同源性。舉例而言，可接受用於本揭露之非人乳鐵蛋白包括
而不限於牛乳鐵蛋白、豬乳鐵蛋白、馬乳鐵蛋白、水牛乳鐵蛋白、山羊乳鐵蛋白、鼠類乳鐵蛋白及駱駝乳鐵蛋白。
用於本揭露之乳鐵蛋白可例如自非人動物乳汁分離或經基因修飾之生物體所製造。舉例而言，在美國專利第4,791,193號(其係以引用方式全部併入本案)中，Okonogi等人揭露用於製造高純度牛乳鐵蛋白的方法。通常，該方法如揭露者，包括三個步驟。首先生乳原料與弱酸性陽離子交換劑接觸以吸附乳鐵蛋白，接以第二步驟，在此步驟進行沖洗以移除未吸附物質。接著去吸附步驟，此時乳鐵蛋白被移走，以產生經純化之牛乳鐵蛋白。其他方法可包括如美國專利第7,368,141、5,849,885、5,919,913及5,861,491號中所述步驟，該等揭露均以引用方式全部併入本案。
乳鐵蛋白的效益，如用於本揭露之某些實施態樣中，係其支持對藉由某些細菌及病毒病原體(包括ETEC、EPEC、流行性感冒嗜血桿菌、STEC、EAEC、鼠傷寒血清沙氏桿菌血清型、副痢疾桿菌、輪狀病毒、諾羅病毒、RSV、腺病毒及彼等之組合)所造成之疾病或病況的抵抗力之能力。
在一實施態樣中，乳鐵蛋白存在於該營養組成物中的量為至少約10 mg/100 kCal，特別是當希望該營養組成物係欲供兒童之用。在某些實施態樣中，乳鐵蛋白上限係約240 mg/100 kCal。在另一實施態樣中，其中該營養組成物係嬰兒配方，乳鐵蛋白存在於該營養組成物中的量為約
70 mg至約220 mg/100 kCal；在又另一實施態樣中，乳鐵蛋白存在的量為約90 mg至約190 mg/100 kCal。針對嬰兒的營養組成物可包括乳鐵蛋白量為每升配方約0.5 mg至約1.5 mg。在取代人乳的營養組成物，乳鐵蛋白含量可為每升配方約0.6 mg至約1.3 mg。
如所述，在一實施態樣中，該營養組成物支持對病毒性呼吸道感染之抵抗力。人、特別是嬰兒及兒童，易受到病毒性呼吸道感染的傷害。毒性下呼吸道感染、特別是由呼吸道融合性病毒所造成者，尤其棘手。實際上，呼吸道融合性病毒係主要嬰兒及兒童住院原因，且導致例如細支氣管炎、肺炎及長期併發症，例如哮喘。因此，在一較佳實施態樣中，本揭露係關於一種支持對病毒性下呼吸道感染的抵抗力之方法。在又另一較佳實施態樣中，本揭露係關於一種支持對呼吸道融合性病毒感染的抵抗力之方法。舉例而言，本揭露之營養組成物可用於支持免疫發育至更能使身體預防此種感染或降低彼些之嚴重性以對抗病毒性呼吸道感染。
在某些實施態樣中，該營養組成物係經預防性投予不患有疾病或病況的人，該疾病或病況例如為病毒性呼吸道感染和/或藉由至少一種選自下列之病原體所造成之疾病或病況：ETEC、EPEC、流行性感冒嗜血桿菌、STEC、EAEC、鼠傷寒血清沙氏桿菌血清型、副痢疾桿菌、輪狀病毒、諾羅病毒、RSV、腺病毒及彼等之組合。在其他實施態樣中，該營養組成物所投予之人患有病毒性呼吸道感
染，或該營養組成物於投予時患有藉由至少一種病原體所造成之疾病或病況。
較佳的是，該營養組成物所投予之人係嬰兒或兒童。如本文中所用，術語「嬰兒」通常係定義為出生至12個月大的人。「兒童」係定義為年齡超過12個月至約12歲的人。
較佳的是，在該營養組成物中的乳鐵蛋白與游離形式之乳鐵蛋白具有相同或類似的抗該疾病或病況活性。換言之，較佳的是，該乳鐵蛋白之活性包括於該營養組成物中並不會顯著減少。亦較佳的是，即使於高溫及低pH條件下加工處理後，包括在該組成物中的乳鐵蛋白能夠支持對藉由細菌及病毒病原體所造成之疾病和病況的抵抗力。在本揭露的一實施態樣中，所使用之乳鐵蛋白係非人乳鐵蛋白。
舉例而言，令人驚訝的是，即使暴露於低pH(即低於約7，且甚至低至約4.6或更低)和/或高溫(即超過約65℃，且高至約120℃)，為預期會破壞或嚴重地限制人乳鐵蛋白安定性或活性之條件，牛乳鐵蛋白維持相關活性。用於本文所述之營養組成物種類的某些加工方式過程中，可預期這些低pH和/或高溫條件，例如巴斯德殺菌法。但，在牛乳鐵蛋白的胺基酸組成具有與人乳鐵蛋白約70%序列同源性、且在人或重組人乳鐵蛋白變得不安定或無活性的條件下係安定及仍具活性的同時，牛乳鐵蛋白具有對抗人腸道中所發現之非所欲細菌病原的殺菌活性。
在一些實施態樣中，該營養組成物可為嬰兒配方。術語「嬰兒配方」係指為人乳取代物、呈液體或粉末形式、能滿足嬰兒營養分需求的組成物。在美國，嬰兒配方含量規定於美國聯邦法規第21章第100、106及107部份。這些法規界定巨量營養素、維生素、礦物質及其他成分量以模擬人乳的營養及其他性質。在另一實施態樣中，該營養產品可為人乳強化營養品，意指其為加至人乳中以加強人乳營養價值之組成物。作為人乳強化營養品，該揭露之組成物可為粉末形式或液體形式。在又另一實施態樣中，本揭露之營養產品可為兒童的營養組成物。
本揭露之營養組成物可提供最低、部分或完全營養支持。該營養組成物可為營養補充品或代餐。在一些實施態樣中，該營養組成物可連同食物或另一營養組成物投予。在此實施態樣中，該營養組成物可於個體攝取前與食物或其他營養組成物互混，或可於個體攝取食物或營養組成物之前或之後投予該個體。該營養組成物可投予接受嬰兒配方、母乳、人乳強化營養品或彼等之組合的早產嬰兒。為本揭露之目的，「早產嬰兒」係為妊娠少於約37週後出生的嬰兒，而「足月嬰兒」意指妊娠至少約37週後出生之嬰兒。
該營養組成物可為(但不必要為)營養完整。熟習本技術人士將理解「營養完整」取決於許多因素而有不同，包括但不限於該術語所套用之個體年齡、臨床條件及膳食攝入。一般而言，「營養完整」意指本揭露之營養組成物
提供所有正常生長所需的適量之碳水化合物、脂質、必需脂肪酸、蛋白質、必需胺基酸、條件性必需胺基酸、維生素、礦物質及能量。若在指涉營養素，術語「必需」係指任何身體無法合成足以供正常生長以及維持健康而因此必須藉由膳食供應的營養素。術語「有條件之必需」若在指涉營養素，則意指該營養素在當身體無法取得適量前驅化合物以供進行內生性合成的條件下必須藉由膳食供應。
針對早產嬰兒，該「營養完整」之組成物依定義為提供該早產嬰兒所有生長所需的質量上適量之碳水化合物、脂質、必需脂肪酸、蛋白質、必需胺基酸、條件性必需胺基酸、維生素、礦物質及能量。針對足月嬰兒，該「營養完整」之組成物依定義為提供該足月嬰兒所有生長所需的質量上適量之碳水化合物、脂質、必需脂肪酸、蛋白質、必需胺基酸、條件性必需胺基酸、維生素、礦物質及能量。針對兒童，該「營養完整」之組成物依定義為提供該兒童所有生長所需的質量上適量之碳水化合物、脂質、必需脂肪酸、蛋白質、必需胺基酸、條件性必需胺基酸、維生素、礦物質及能量。
該營養組成物可用任何本技術領域中已知形式提供，包括粉末、凝膠、懸浮液、糊劑、固體、液體、液體濃縮物或現成品。在一較佳實施態樣中，該營養組成物係嬰兒配方，特別適於用作為嬰兒唯一來源營養的嬰兒配方。
在較佳實施態樣中，本文所揭露之營養產品可腸道投予。如本文所用，「腸道」意指透過胃腸道或消化道或於
胃腸道或消化道內，且「腸道投予」包括口服餵食、胃內餵食、鼻腸管投服(transpyloric administration)或任何其他導入消化道。
實施本發明的適合之脂肪或脂質來源可為任何本技術領域中已知或使用者，包括但不限於動物來源，例如：乳脂(milk fat)、乳酪(butter)、乳酪脂(butter fat)、蛋黃脂質；水產來源，例如：魚油、水產油脂、單細胞油；蔬菜及植物油脂，例如：玉米油、菜籽油、葵花子油、大豆油、軟棕櫚油(palmolein)、椰子油、高油酸葵花子油、月見草油、芥花子油、橄欖油、亞麻子油、棉籽油、高油酸紅花子油、硬棕櫚油(palm stearin)、棕櫚仁油、小麥胚芽油；中鏈三酸甘油脂及脂肪酸之乳化劑及酯類；及任何彼等之組合。
在某些實施態樣中，包括於該營養組成物中的蛋白質來源包含牛乳蛋白。可用於實施本揭露的牛乳蛋白來源包括但不限於乳蛋白粉末、乳蛋白濃縮物、乳蛋白分離物、脫脂奶固體、脫脂奶、脫脂奶粉、乳清蛋白、乳清蛋白分離物、乳清蛋白濃縮物、甜乳清、酸乳清、酪蛋白、酸酪蛋白、酪蛋白鹽(例如酪蛋白鈉、酪蛋白鈉鈣、酪蛋白鈣)及任何彼等之組合。
在一實施態樣中，該蛋白質係以完整蛋白質提供。在其他實施態樣中，該蛋白質係以完整蛋白質及部分水解蛋白質兩者來提供，水解程度介於約4%至10%。在又另一實施態樣中，該蛋白質來源可以含麩醯胺酸胜肽補充。
在本揭露之一特別實施態樣中，該蛋白質來源包含乳清及酪蛋白，且乳清與酪蛋白比例與人乳中的乳清與酪蛋白比例類似。舉例而言，在某些實施態樣中，乳清與酪蛋白的重量比為約20%乳清：80%酪蛋白至約80%乳清：20%酪蛋白。
在本揭露之某些實施態樣中，該營養組成物可含有一或多種益生菌。術語「益生菌」意指對宿主健康具有正面作用的低致病性或不具致病性微生物。只要能達到預期結果，在本揭露中，任何本技術領域已知的益生菌均可接受。在一特定實施態樣中，該益生菌可選自乳酸桿菌(Lactobacillus)菌種、鼠李醣乳酸桿菌(Lactobacillus rhamnosus GG)、雙叉桿菌(Bifidobacterium)菌種、龍根雙叉桿菌(Bifidobacterium longum)、短雙叉桿菌(Bifidobacterium brevis)及動物雙叉桿菌(Bifidobacterium animalis subsp.lactis BB-12)。
若包括在該組成物中，則該益生菌量可為每日每kg體重約104至約1010菌落形成單位(cfu)。在另一實施態樣中，該益生菌量可為每日每kg體重約106至約109cfu。在又另一實施態樣中，該益生菌量可為每日每kg體重至少約106 cfu。又，該揭露之組成物亦可包括益生菌態(probiotic-conditioned)介質組分。
在一實施態樣中，一或多種益生菌為活菌。在另一實施態樣中，一或多種益生菌係非活菌。如本文中所用，術語「活菌」係指活的微生物。術語「非活菌」或「非活益
生菌」意指非活的益生菌微生物、它們的細胞組成和其代謝物。此等非活益生菌可為經過熱殺死或其他不活化、但仍留存對宿主健康有利影響能力。在本揭露中，可用的益生菌可為天然存在、合成或透過遺傳操作生物體所開發，而不論此種新來源為現今已知或之後所開發者。
在本揭露之一實施態樣中，該營養組成物可包括含有一或多種益菌生之益菌生組成物。如本文中所用，術語「益菌生」意指藉由選擇性刺激結腸中可改善宿主健康的一種或少數種細菌生長和/或活性來正面影響宿主的非可消化性食物成分。「益菌生組成物」為包含一或多種益菌生之組成物。此種益菌生可為天然存在、合成或透過遺傳操作生物體和/或植物所開發，而不論此種新來源為現今已知或之後所開發者。在某些實施態樣中，包括於本揭露的組成物之益菌生包括美國專利第7,572,474號所教示，該案之揭露係以引用方式併入本案。
用於本揭露中的益生菌可為天然存在、合成或透過遺傳操作生物體和/或植物所開發，而不論此種新來源為現今已知或之後所開發者。可用於本揭露之益菌生可包括寡醣、多醣及其他含有果糖、木糖、大豆、半乳糖、葡萄糖及甘露糖之益菌生。更具體而言，可用於本揭露之益菌生可包括乳果糖、乳果寡醣(lactosucrose)、棉子糖、葡萄糖寡醣、菊糖、聚右旋糖、聚右旋糖粉末、半乳糖寡醣、果糖寡醣、異麥芽糖寡醣、大豆寡醣、乳果寡醣、木糖寡醣、幾丁寡醣(chito-oligosaccharide)、甘露糖寡
醣、阿拉伯糖寡醣、唾液酸寡醣、海藻糖寡醣、及龍膽寡醣(gentio-oligosaccharide)。較佳的是，該營養組成物包含聚右旋糖(PDX)和/或半乳糖寡醣(GOS)。任意地，除了聚右旋糖和/或半乳糖寡醣，該營養組成物包含一或多種額外益菌生。
若包括於本營養組成物中，存於該營養組成物中的益菌生總量可約0.1 g/100 kcal至約1 g/100 kcal。更佳的是，存於該營養組成物中的益菌生總量可約0.3 g/100 kcal至約0.7 g/100 kcal。該益菌生至少20%應包含半乳糖寡醣和/或聚右旋糖。
在一實施態樣中，若在該益菌生組成物中使用聚右旋糖，則該營養組成物中的聚右旋糖量範圍可為約0.1 g/100 kcal至約1 g/100 kcal的範圍內。在另一實施態樣中，該營養組成物中的聚右旋糖量可為約0.2 g/100 kcal至約0.6 g/100 kcal的範圍內。
在一實施態樣中，若在該益菌生組成物中使用半乳糖寡醣，則該營養組成物中的半乳糖寡醣量範圍可為約0.1 g/100 kcal至約1 g/100 kcal的範圍內。在另一實施態樣中，該營養組成物中的半乳糖寡醣量係約0.2 g/100 kcal至約0.5 g/100 kcal的範圍內。在某些實施態樣中，該益菌生組成物中的聚右旋糖與半乳糖寡醣比例係介於約9：1至約1：9。
在一些實施態樣中，本揭露之營養組成物可另含有長鏈多不飽和脂肪酸(LCPUFA)來源。較佳的是，LCPUFA
的來源包含二十二碳六烯酸(DHA)。其他適合的LCPUFA包括但不限於α-亞麻油酸、γ-亞麻油酸、亞麻油酸、次亞麻油酸、二十碳五烯酸(EPA)及花生四烯酸(ARA)。
在一實施態樣中，該營養組成物係以DHA及ARA兩者補充。在此實施態樣中，ARA：DHA重量比例可為約1：3至約9：1。在本揭露的一實施態樣中，ARA：DHA重量比例係約1：2至約4：1。
該營養組成物中的長鏈多不飽和脂肪酸量可為約5 mg/100 kcal至約100 mg/100 kcal，更佳為約10 mg/100 kcal至約50 mg/100 kcal。
該營養組成物可使用本技術領域中已知的標準技術補充含有DHA及ARA的油脂。舉例而言，DHA及ARA可藉由取代等量之通常存在於組成物中的油脂(例如高油酸葵花子油)來加至該組成物。作為另一實例，含有DHA及ARA的油脂可藉由取代等量之通常存在於未有DHA及ARA組成物中的其餘整體脂肪摻合物來加至該組成物。
若有使用，則DHA及ARA來源可為本技術領域中任何已知來源，例如水產油脂、魚油、單細胞油脂、蛋黃脂質及腦部脂質。在一些實施態樣中，該DHA及ARA係分別源自單細胞Martek油脂、DHASCO®及ARASCO®或彼等之變化物。該DHA及ARA可為天然形式，惟該LCPUFA來源之剩餘物不會造成對嬰兒任何實質有害影響。或者，該DHA及ARA可以精製形式使用。
在本揭露的一實施態樣中，DHA及ARA來源係如美國專利第5,374,567、5,550,156及5,397,591號中所教示之單細胞油脂，該等專利所揭露者係以引用方式全部併入本案。然而，本揭露不只限於此種油脂。
在某些實施態樣中，該營養組成物包含約0.5 mg/100 kcal至約5 mg/100 kcal的鐵，包括與乳鐵蛋白結合之鐵。
下列實例係提供以說明本揭露之營養組成物的一些實施態樣，但不應解讀為對其之任何限制。熟悉本技術領域者於考量本文所揭露營養組成物或方法的說明書或實施，將清楚明白本文中之申請專利範圍範疇內的其他實施態樣。本說明書連同本實例僅欲視為例示，本揭露的範圍及精神係由接續於實例之後的申請專利範圍所指定。
本實例示例乳鐵蛋白及嬰兒配方於體外對腹瀉性大腸桿菌菌株生長的效果。
取得十五種來自各DEC群(腸毒性大腸桿菌(ETEC)、腸內病原性大腸桿菌(EPEC)、產志賀毒素性大腸桿菌(STEC)及腸凝集性大腸桿菌(EAEC))之臨床腹瀉性大腸桿菌(DEC)菌株。如先前所述，該等菌
株係自秘魯分群研究(cohort study)中患有腹瀉兒童分離而得，並經針對腹瀉性大腸桿菌群的即時聚合酶連鎖反應(PCR)鑑定。此外，亦取得十五種鼠傷寒血清沙氏桿菌血清型臨床分離株及十五種副痢疾桿菌分離株。
所有臨床菌株及標準實驗室對照菌株係生長於McConkey洋菜培養基上37℃共24小時。針對存活檢測，該等菌株係生長於溶菌肉湯(lysogeny broth，即LB)培養基37℃共18小時。接著，該等菌株以PBS洗兩次，並以4500 x g離心共5分鐘。僅使用在對數中期的細菌。
乳鐵蛋白的0、0.6、1、2、4、6、8及10 mg/ml儲液及含2.1 g/100 kcal的乳蛋白及1.8 mg/100 kcal的鐵之嬰兒配方0、0.6、1、2、4、6、8及10 mg/ml儲液係製備於蒸餾水中。
含有約2×108對數期細胞的臨床菌株培養種菌接種於含1%細菌蛋白腖(bactopeptone)的96孔盤中。各孔盤亦經由微稀釋注以嬰兒配方或乳鐵蛋白儲液，以使各菌株針對0、0.6、1、2、4、6、8及10 mg/ml的乳鐵蛋白或嬰兒配方作測試。該等孔盤於37℃培養，並以連續10倍稀釋培養種菌於每30分鐘監測生長動力學。接著於分光光度計和/或ELISA讀數器監測生長。培養共18-20小時後，針對各菌株記錄造成完全細菌抑制的嬰兒配方或乳鐵蛋白之最低濃度為MIC(最低抑制濃度)。
亦進行協同性檢測，測試乳鐵蛋白及嬰兒配方兩者抗
各菌株的活性，以及乳鐵蛋白/嬰兒配方組合對細菌生長的效果係如上所述測量。針對該些協同性檢測，乳鐵蛋白及嬰兒配方濃度係針對各試劑分別根據MIC研究及生長動力學結果測定。
本實例示例乳鐵蛋白及嬰兒配方於體外對腹瀉性大腸桿菌菌株黏附於人小腸上皮細胞的效果。
以實例1中所述之腸毒性大腸桿菌、腸內病原性大腸桿菌、產志賀毒素性大腸桿菌、腸凝集性大腸桿菌、鼠傷寒血清沙氏桿菌血清型或副痢疾桿菌分離株感染近滿(subconfluent)的Hep2細胞層(於24孔盤中約5×104細胞/孔)。接著加入具有或未有10 mg/ml乳鐵蛋白的嬰兒配方，使細菌對嬰兒配方的濃度為100：1的比率。接著，經感染之Hep2細胞層於37℃、5% CO2下培養共4小時。之後，大力沖洗該Hep2細胞以移除未黏附之細菌。以70%甲醇固定該些細胞、以10% Giemsa溶液染色並於顯微鏡下鏡檢。此外，針對腸內病原性大腸桿菌、產志賀毒素性大腸桿菌、副痢疾桿菌及鼠傷寒血清沙氏桿菌血清型，螢光肌動蛋白染色檢測(FAS assay)係如先前報導進行。
本實例示例乳鐵蛋白及嬰兒配方於體內對支持藉由細
菌病原體所造成之病況或疾病之抵抗力的效果。
取得年齡介於6至8週、體重介於20至24 g的健康雌性Balb/c品系小鼠並分為試驗組及對照組。接著該試驗組於感染前餵飼200 μl含75或165 mg/ml乳鐵蛋白的嬰兒配方，且該對照組於感染前餵飼200 μl嬰兒配方。所投予之嬰兒配方量經調整，以使小鼠接受的量等同每日600 mg/kg及1333 mg/kg之乳鐵蛋白。之後，以300 μL 108菌落形成單位(cfu)的鼠傷寒血清沙氏桿菌血清型、200 μL 108 cfu的齧齒動物檸檬酸桿菌(Citrobacter rodentium)(EPEC的鼠類模式)或200 μL 108 cfu的副痢疾桿菌感染該等小鼠。針對感染及前處理接種，係使用餵食管(gavage needle)。感染後，該等小鼠接受任飼含75或165 mg/ml乳鐵蛋白的嬰兒配方或單獨嬰兒配方各7天。又，所投予之嬰兒配方量經調整，以使小鼠接受的量等同每日600 mg/kg及1333 mg/kg之乳鐵蛋白。感染7日後，每日監測所有小鼠的死亡、體重及臨床徵象(豎毛(piloerection)、背部拱起的姿勢及移動減少)。臨床徵象的發生率係藉由比較個別經感染小鼠的行為共15分鐘來判定。在感染後第10日，犧牲該等小鼠，進行心臟穿刺，以供血液培養。移除器官(結腸、肝臟及脾臟)以用於組織病理分析。與病理學家一同研究器官內的發炎及壞死程度，該病理學家係對組別分配為盲性，以避免偏差。
此實例示例乳鐵蛋白及嬰兒配方於體內支持對病毒病原體所造成之病況或疾病的抵抗力之效果。
實例3的進行係如上所述，但係使小鼠感染輪狀病毒、諾羅病毒、星狀病毒、腺病毒及杯狀病毒而非細菌菌株。小鼠的監測及研究係如上所述。
本實例說明根據本揭露之營養產品的實施態樣。
此實例說明根據本揭露的營養產品之另一實施態樣。
此實例說明可用於製備根據本揭露的營養產品之成分的一實施態樣。
此實例說明可用於製備根據本揭露的營養產品之成分的另一實施態樣。
較佳的是，該營養組成物係投予人，且支持對藉由細菌或病毒病原體(包括病毒性呼吸道感染)所造成的人體疾病或病況之抵抗力。
所有本說明書中所引用之參考文獻、包括但不限於所有論文、刊物、專利、專利申請、發表、文字、報導、文稿、小冊、書籍、網路文章、期刊文章、定期性刊物等等，在此係以引用方式將它們全部併入本說明書。本文中之參考資料的討論僅欲用於總結其作者之主張，並不作為
承認任何參考資料構成先前技術。申請人保留挑戰引用之參考文獻之準確性和針對性的權利。
雖然已使用特定術語、裝置及方法說明本揭露之較佳實施態樣，但此說明僅為描述目的。所使用文字為說明文字而非限制性文字。應了解，本技術領域中具有通常知識者在未悖離於下列申請專利範圍所主張的本揭露之精神及範疇下，可進行更改及變動。此外，應了解，各種實施態樣可全部或部分相互取代。舉例而言，雖然已例示用於製造依據該些方法所製成的市售無菌液體營養補充物的方法，但其他使用亦被涵蓋。因此，後附申請專利範圍之精神及範疇不應受限於本說明中所含的較佳態樣。
<110> Mead Johnson Nutrition Company
<120> 包括乳鐵蛋白之營養組成物於支持對疾病和病況的抵抗力上之用途
<140>
<141>
<150> US 12/980,825
<151> 2010-12-29
<150> US 12/980,833
<151> 2010-12-29
<160> 4
<170> PatentIn
<210> 1
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<213> 人工序列
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<211> 16
<212> PRT
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<220>
<400> 4
Claims (15)
- 一種營養組成物於製備供人體支持對疾病或病況之抵抗力的藥物之用途，該營養組成物包含：a)脂肪或脂質來源；b)蛋白質來源；及c)藉由非人來源所製造之乳鐵蛋白，其中該乳鐵蛋白與HLf(349-364)片段的胺基酸序列AVGEQELRKCNQWSGL具有至少48%同源性。
- 如申請專利範圍第1項之用途，其中該疾病或病況係藉由至少一種選自下列之病原體所造成者：腸毒性大腸桿菌、腸內病原性大腸桿菌、流行性感冒嗜血桿菌(Haemophilus influenza)、產志賀毒素性大腸桿菌、腸凝集性大腸桿菌、鼠傷寒血清沙氏桿菌血清型(Salmonella ser.Typhimurium)、副痢疾桿菌(Shigella flexneri)、輪狀病毒、諾羅病毒、呼吸道融合性病毒、腺病毒及彼等之組合。
- 如申請專利範圍第1項之用途，其中該疾病或病況係病毒性呼吸道感染。
- 如申請專利範圍第1項之用途，其中該人為嬰兒或兒童。
- 如申請專利範圍第1項之用途，其中該脂肪或脂質來源係以約3 g/100 kcal至約7 g/100 kcal的量存在，且該蛋白質來源係以約1 g/100 kcal至約5 g/100 kcal的量存在。
- 如申請專利範圍第1項之用途，其中該乳鐵蛋白係以至少約10 mg/100 kcal的量存在。
- 如申請專利範圍第6項之用途，其中該乳鐵蛋白係以約70 mg/100 kcal至約220 mg/100 kcal的量存在。
- 如申請專利範圍第1項之用途，其中該乳鐵蛋白係選自非人乳鐵蛋白、藉由經基因修飾之生物體所製造之人乳鐵蛋白或其組合。
- 如申請專利範圍第1項之用途，其中該乳鐵蛋白在人乳鐵蛋白變得不安定或不具活性的條件下係呈安定且仍具活性。
- 如申請專利範圍第9項之用途，其中該營養組成物已經過巴斯德殺菌條件處理。
- 如申請專利範圍第1項之用途，其中該營養組成物更包含益菌生(prebiotic)組成物，其包含選自半乳糖寡醣、聚右旋糖或彼等之組合之化合物。
- 如申請專利範圍第1項之用途，其中該營養組成物包含約0.5 mg/100 kcal至約5 mg/100 kcal的鐵，其包括結合乳鐵蛋白的鐵。
- 如申請專利範圍第1項之用途，其中該乳鐵蛋白與HLf(349-364)片段的胺基酸序列AVGEQELRKCNQWSGL具有至少65%同源性。
- 如申請專利範圍第1項之用途，其中當投予該營養組成物時，該人患有該疾病或病況。
- 如申請專利範圍第1項之用途，其中該營養組成 物係經預防性投予，且當投予該營養組成物時，該人不患有該疾病或病況。
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