TW201201835A - Anti-nerve growth factor (NGF) antibody compositions - Google Patents

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201201835 六、發明說明： 【先前技術】 神經生長因子（NGF)為一種50多年前發現之分泌蛋白 質，其為一種促進感覺神經元及交感神經元存活及分化之 分子。NGF之β鏈僅負責NGF之神經生長刺激活性。β鏈均 二聚化且併入較大蛋白質複合物中。NGF為被稱為神經營 會 養素（neurotrophin)之神經營養因子家族之成員。NGF以高 親和力結合至被稱為TrkA之原肌凝蛋白（tropomyosin)受體 激酶。NGF亦能夠結合被稱為p75NTR之受體，該受體為腫 瘤壞死因子受體超家族之成員，其亦與其他神經營養素相 互作用。NGF之結構及功能綜述於例如Sofroniew，M.V.等 人（2001) iVewroicz·. 24:1217-1281 ; Weismann， C.及 de Vos, Α·Μ. (2001) Ce//· Μσ/. I於 5W· 58:748-759 ; Fahnestock, M. (1991) Curr. Top. Microbiol. Immunol. 165:1-26 中。 儘管NGF最初因其能夠促進神經元之存活及分化而被鑑 別，但是越來越多的證據表明此等發展效應 (developmental effect)僅為NGF生物學之一個態樣。特定 ’ 言之，NGF已牽涉於持續性疼痛或慢性疼痛之傳輸及維持 ' 中。舉例而言，局部與全身投與NGF已顯示可引起痛覺過 敏及異常疼痛（Lewin，G.R.等人（1994)五 wr. /. WeMrwci. 6:1903-1912)。在人體内靜脈輸注NGF會產生全身肌痛， 而局部投藥除引發全身效應外亦引發注射部位痛覺過敏及 異常疼痛（Apfel，S.C.等人（1998) 51.695-702)。 154450.doc 201201835 此外，在某些形式之癌症中，過量NGF促進神經纖維之生 長及浸潤，及誘導癌症疼痛（Zhu，Z.等人（1999) ·/. C/z>. 17:241-228) 〇 慢性疼痛中牽涉NGF使得基於抑制NGF效應之治療方法 備受關注（參見例如 Saragovi，H.U· and Gehring，K. (2000) 心尸/mrwaco/· 5W. 21:93-98)。舉例而言，使用一種可 溶形式之TrkA受體阻斷NGF之活性，此顯示在不損傷病變 神經元之細胞體的情況下顯著減少負責神經痛之神經瘤的 形成（Kryger，G.S.等人（2001) /·开(Am.) 26:635-644)。 中和NGF活性之另一方法為使用抗NGF抗體，該等抗體 之實例已經描述（參見例如PCT公開案第WO 2001/78698 號、第 WO 2001/64247號、第 WO 2002/096458號、第 WO 2004/032870號、第 WO 2005/061540號、第 WO 2006/131951 號、第〜0 2006/1 10883號；美國專利第7,449,616號；美 國公開案第 US 20050074821號、第 US 20080033157號、第 US 20080182978 號及第 US 20090041717號）。在神經痛（例 如神經幹或脊神經結紮）之動物模型中，全身注射NGF之 中和抗體預防異常疼痛與痛覺過敏（Ramer，M.S. and Bisby, M.A. (1999) Eur. J. Neurosci. 11:837-846 ； Ro, L.S. 等人（1999)尸αζ·« 79:265-274)。此外’用中和抗NGF抗體之 治療在鼠類癌症疼痛模型中產生顯著的疼痛減輕（Sevcik， M.A.等人（2005)尸ak 115:128-141)。 含有抗NGF抗體（例如PG110)之早期調配物已受調配物 154450.doc 201201835 中抗體之物理不穩定性困擾，該物理不穩定性係如由嚴重 可見粒子形成及沈澱現象所反映。因此，此項技術中需要 維持物理穩定性且降低粒子形成易發性（susceptibility)之 含有抗NGF抗體的調配物。 【發明内容】 本發明至少部分基於含有抗NGF抗體（例如人類化PG110 抗體）之新穎調配物的發現，該等調配物具有物理穩定性 且不受粒子形成易發性困擾。 因此，本發明提供醫藥組合物，其包含：（a)抗神經生長 因子（NGF)抗體或其抗原結合片段；（b)濃度為約5至約60 mM之組胺酸緩衝劑；及（c)濃度為約0 01%至約〇 1%之聚 山梨醇酯80 ;其中組合物之pH值為約5.0至約6.0。在某些 實施例中，組合物另外包含糖及/或多元醇，諸如本文所 述者。在其他實施例中，組合物不包含多元醇或糖。在其 他實施例中，組合物不包含曱硫胺酸。 在某些實施例中’本發明提供由或基本上由以下組成之 醫藥組合物：（a)抗神經生長因子（NGF)抗體或其抗原結合 片段；（b)濃度為約5至約60 mM之組胺酸緩衝劑；及（〇濃 度為約0.01%至約0.1 %之聚山梨醇酯80 ;其中組合物之pH 值為約5.0至約6.0。 在某些實施例中’本發明提供由或基本上由以下組成之 醫藥組合物：（a)抗神經生長因子（NGF)抗體或其抗原結合 片段；（b)濃度為約5至約60 mM之組胺酸緩衝劑；及（c)濃 度為約0.01 %至約0.1 %之聚山梨醇酯80 ;及（d)多元醇及/或 154450.doc 201201835 糖；其中組合物之pH值為約5.0至約6.0。 在某些實施例中’本發明提供由或基本上由以下組成之 醫藥組合物：（a)抗神經生長因子（NGF)抗體或其抗原結合 片段；（b)濃度為約5至約60 mM之組胺酸緩衝劑；及（c)濃 度為約0.01 %至約〇.1 %之聚山梨醇酯8〇 ;及（d)多元醇；其 中組合物之pH值為約5.0至約6.0。 在某些實施例中’本發明提供由或基本上由以下組成之 醫藥組合物：（a)抗神經生長因子（NGF)抗體或其抗原結合 片段’（b)濃度為約5至約60 mM之組胺酸緩衝劑；及（e)濃 度為約0.01 %至約〇·1 %之聚山梨醇酯8〇 ;及（d)糖；其中組 合物之pH值為約5.0至約6.0。 在某些實施例中？本發明醫藥組合物為液體醫藥組合 物。在其他實施例中，醫藥組合物適於凍乾。因此，本發 月另外it供凉乾醫樂組合物’其包含（a)約1至約240爪轻抗 NGF抗體或其抗原結合片段，（b)約1至約1 〇 組胺酸；及 (c)約0.1至約〇·4 mg聚山梨醇酯。在某些實施例中，凍乾 組合物另外包含糖及/或多元醇。在其他實施例中，凍乾 組合物不包含多元醇或糖。 在某些實施例中’本發明提供由或基本上由以下組成之 醫藥組合物：（a)約1至約240 mg抗NGF抗體或其抗原結合 片段；（b)約1至約1〇 mg組胺酸；及（〇約〇」至約〇 4 聚 山梨醇酯80。 在其他實施例中，本發明提供由或基本上由以下組成之 醫藥組合物：（a)約1至約240 mg抗NGF抗體或其抗原結合 154450.doc 201201835 片'^又，（b)約1至約10 mg組胺酸；及（c)約o.i至約〇 4 mg聚 山梨醇酯80 ;及（d)約1至約100 mg多元醇及/或約i至約1〇〇 mg糖。 在/、他貫施例中’本發明提供由或基本上由以下組成之 醫藥組合物：（a)約1至約240 mg抗NGF抗體或其抗原結合 片段，（b)約1至約1〇 mg組胺酸；及卜）約〇」至約〇 4爪经聚 山梨醇醋80 ;及（d)約1至約1〇〇 mg多元醇。 在其他實施例中，本發明提供由或基本上由以下組成之 醫藥組合物：（a)約1至約240 mg抗NGF抗體或其抗原結合 片段，（b)約1至約1〇 mg組胺酸；（c)約〇」至約〇 4 mg聚山 梨醇酯80 ;及（d)約1至約1〇〇 „^糖◦在某些實施例中，抗 NGF抗體或其抗原結合部分與人類ngf結合。在其他實施 例中’抗體或其抗原結合部分包含人類IgG4怪定區，其中 該人類IgG4恆定區包含鉸鏈區突變。較佳地，IgG4怪定區 中之鉸鏈區突變包含在SEQ ID NO: 9(其展示人類IgG4恆 定區之野生型胺基酸序列）之胺基酸位置108處之絲胺酸突 變。更佳地，在SEQ ID NO: 9之胺基酸位置1〇8處之絲胺 酸突變成脯胺酸。在一較佳實施例中，抗NGF抗體之人類 IgG4怪定區包含SEQ ID NO: 10之胺基酸序列。 本發明組合物中含有之較佳抗NGF抗體為抗體Pgii〇， 其重鏈胺基酸序列展示於SEQ ID NO: 13中且其輕鏈胺基 酸序列展示於SEQ ID NO: 16中。在另一實施例中，本發 明提供含有抗NGF抗體之組合物，該抗NGF抗體包含由 SEQ ID NO: 11之核苷酸序列編碼之重鏈及由SEQ ID NO: 154450.doc 201201835 14之核苷酸序列編碼之輕鏈。在另一實施例中，抗NGF抗 體包含含有SEQ ID NO: 1之胺基酸序列（其展示PG110之重 鍵可變區）之重鏈可變區。在另一實施例中，抗NGF抗體 包含含有SEQ ID NO: 2之胺基酸序列（其展示PG110之輕鏈 可變區）之輕鍵可變區。在另一實施例中，抗NGF抗體包 含含有SEQ ID NO: 1之胺基酸序列之重鏈可變區及含有 SEQ ID NO: 2之胺基酸序列之輕鏈可變區。在另一實施例 中，抗NGF抗體與包含含有SEQ ID NO: 1之胺基酸序列之 重鏈可變區及含有SEQ ID NO: 2之胺基酸序列之輕鏈可變 區的抗體競爭結合NGF。 在另一實施例中，抗NGF抗體包含重鏈可變區，該重鏈 可變區包含分別具有SEQ ID NO: 3、4及5之胺基酸序列之 CDR1、CDR2及 CDR3(其中 SEQ ID NO: 3、4及 5分別展示 PG110之重鏈可變區CDR1、CDR2及CDR3)。在另一實施 例中，抗NGF抗體包含輕鏈可變區，該輕鏈可變區包含分 別具有SEQ ID NO: 6、7及8之胺基酸序列之CDR1、CDR2 及CDR3(其中SEQ ID NO: 6、7及8分別展示PG110之輕鏈 可變區CDR1、CDR2及CDR3)。在另一實施例中，抗NGF 抗體包含重鏈可變區，該重鏈可變區包含分別具有SEQ ID NO: 3、4及5之胺基酸序列之CDR1、CDR2及CDR3，且包 含輕鏈可變區，該輕鏈可變區包含分別具有SEQ ID NO: 6、7及8之胺基酸序列之CDR1、CDR2及CDR3 » 在其他實施例中，抗體或其抗原結合部分具有一或多種 以下功能性質：a)與人類NGF結合，但不與源於人腦之神 I54450.doc 201201835 經營養因子（human brain-derived neurotrophic factor)(BDNF)、 人類神經營養素3(NT-3)或人類神經營養素4(NT-4)結合； b)以100 pM或100 pM以下之KD與人類或大鼠NGF結合；c) 抑制NGF與TrkA或p75NTR結合；d)抑制TF-1細胞之NGF依 賴性增殖；e)抑制雞背根神經節之NGF依賴性存活；f)抑 制PC12細胞神經突之NGF依賴性生長。 在其他實施例中，抗體或其抗原結合部分係選自由以下 組成之群：單株抗體、人類抗體、人類化抗體、嵌合抗 體、CDR移植抗體、Fab、Fab'、F(ab')2、Fv、二硫化物連 接之Fv、scFv、單域抗體、微型雙功能抗體（diabody)、多 特異性抗體、雙重特異性抗體、雙特異性抗體或已消除潛 在T細胞抗原決定基之抗體。在另一實施例中，抗體或其 抗原結合部分經人類化。 在一尤其較佳實施例中，本發明提供含有抗NGF抗體之 組合物，該抗NGF抗體具有終末消除半衰期延長及疼痛減 輕之持續時間延長的組合有利特徵。因此，本發明亦提供 包含人類IgG4怪定區之抗NGF抗體，其中該人類IgG4恆定 區包含突變（較佳鉸鏈區突變），其中該抗體在食蟹獼猴 (cynomolgus monkey)中具有至少15天、更佳至少21天之終 末消除半衰期，且其中在向個體投與單次劑量之該抗體之 後，該抗體減輕疼痛持續至少約1週至約12週之持續時 間。 本發明亦關於藉由向罹患NGF相關疾病或病狀之人類個 體投與本發明醫藥組合物來抑制該人類個體中之NGF活性 154450.doc 201201835 的方法。在其他實施例中’向個體投與如本文所述之第二 醫藥劑。在某些實施例中，NGF相關疾病或病狀為疼痛。 NGF相關疾病及病狀之非限制性實例包括發炎性疼痛、術 後疼痛、神經痛、骨折疼痛（斤扣化代pain)、痛風關節疼 痛、帶狀范疹後遺神經痛（p〇st_herpetic neuraigia)、癌症 疼痛、骨關節炎或類風濕性關節炎疼痛、坐骨神經痛、與 鐮狀細胞危象相關之疼痛、頭痛、痛經 '子宮内膜異位 (endometriosis)、肌肉骨骼痛、慢性下背痛、肌肉纖維疼 痛、扭傷、内臟疼痛（visceral pain)、卵巢囊腫 cyst)、前列腺炎、膀胱炎、間質性膀胱炎（…⑽比⑷ cystitis)、切口疼痛（incisi〇nal pain)、偏頭痛、三又神經 痛、灼傷及/或創傷疼痛、與外傷相關之疼痛、與肌肉骨 骼疾病相關之疼痛、僵直性脊椎炎（奶1^1〇5比8 sp〇ndimis)、 關節囊病變（periarticular path〇l〇gy)、骨轉移疼痛、mv疼 痛、由胰臟炎（pancreatitis)或腎結石引起之肢端紅痛症 (erythromelalgia)或疼痛。NGF相關疾病及病狀之其他實例 包括惡性黑素瘤（malignant melanoma)、休格連氏症候群 (Sjogren's syndrome)及哮喘，諸如不受控制之哮喘伴隨嚴 重氣管過度反應、及頑固性咳漱。對根據本發明方法之户 療而§ ’尤其較佳疾病及病狀包括發炎性疼痛（尤其為骨 關節炎或類風濕性關節炎疼痛）、肌肉骨骼疼痛（尤其為慢 性下背痛）、神經痛（尤其為糖尿病性神經病變）、癌症疼痛 及骨轉移疼痛、間質性膀胱炎/疼痛性膀胱症候群、與^ 性非細菌性前列腺炎（chronic abacterial prostatitis)相關之 154450.doc •10· 201201835 疼痛與子宮内膜異位及/或子宮纖維瘤（uterine fibroid)相 關之疼痛及術後疼痛。較佳地，疼痛係選自由以下組成之 群.骨關節炎疼痛、慢性下背痛、糖尿病性神經痛、癌症 疼痛、骨轉移疼痛、間質性膀胱炎、疼痛性膀胱症候群、 與慢性非細菌性前列腺炎相關之疼痛、與子宮内膜異位相 關之疼痛、與子宮纖維瘤相關之疼痛及術後疼痛。 本發明醫藥組合物可例如靜脈内、皮下（例如經由注射 筆或皮下植入物）、肌肉内或關節内投與，但本文中描述 其他適合投藥途徑。 本文亦提供包含本發明醫藥組合物之套組或製品。 【實施方式】 本發明係關於抗NGF抗體或其抗原結合部分之具有改良 穩定性之改良組合物（例如醫藥組合物）。本發明組合物通 常包含抗NGF抗體或其抗原結合片段、適合緩衝劑（例如 組胺酸緩衝劑）、適合賦形劑（例如聚山梨醇酯8〇)，且具有 約5.0至約ό·0之pH值。本發明組合物可為適於凍乾之液體 組合物、及/或凍乾組合物。 為了使本發明可更容易理解，首先定義某些術語。其他 定義在整篇[實施方式]中加以描述。 I.定義 在本文中使用冠詞「一」以指1個或1個以上（亦即至少1 個）该冠阑之語法對象。舉例而言，「一元件」意謂1個元 件或1個以上元件。 術語「醫藥調配物」係指呈諸如允許活性成分之生物活 154450.doc 201201835 性明確有效之形式，且不含有對調配物將投與之個體具有 顯著毒性之其他組分的製劑。 片語「醫藥學上可接受之載劑」經技術公認為包括適於 向諸如人類之哺乳動物投與之醫藥學上可接受的物質、組 合物或媒劑。此等載劑包括自身體之某一器官或部分傳送 或輸送標的藥劑至身體之另一器官或部分中涉及的液體或 固體填充劑、稀釋劑、賦形劑、溶劑或囊封物質。各載劑 必須在與組合物之其他成分相容之意義為「可接受」且不 對人類個體之安全有害或影響人類個體之安全。 「緩衝液」係指藉由酸-鹼結合組分之作用對抗pH值變 化之緩衝溶液。本發明之緩衝液之pH值在約4至約8之範圍 内。將控制pH值在此範圍内之緩衝劑之實例包括磷酸鹽、 乙酸鹽（例如乙酸鈉）、丁二酸鹽（例如丁二酸鈉）、葡糖酸 鹽、麩胺酸鹽、組胺酸、檸檬酸鹽及其他有機酸緩衝劑。 術語「賦形劑」係指可添加至組合物中以例如藉由改變 整體性質而提供所要稠度以改良穩定性及/或調整滲透壓 度（osmolality)的試劑。通常使用之賦形劑之實例包括（但 不限於）糖、多元醇、胺基酸、界面活性劑及聚合物。 「醫藥學上可接受之賦形劑」（例如媒劑、添加劑）為可適 度向例如人類之哺乳動物個體投與以提供有效劑量之所用 活性成分的賦形劑。 如本文所用，「多元醇」為具有多個羥基之物質，且包 括糖醇及糖酸。特定多元醇具有小於約6〇〇 D(例如在約 120至約400 D之範圍内）之分子量。多元醇之非限制性實 154450.doc 12 201201835 例包括果糖、甘露糖、麥芽糖、乳糖、阿拉伯糖 (arabinose)、木糖、核糖、鼠李糖、半乳糖、葡萄糖、山 梨糖、松三糖（melezitose)、棉子糖（raffin〇se)、甘露糖 醇、木糖醇、赤藻糖醇（erythrit〇1)、蘇糖醇（threit〇1)、山 梨糖醇、甘油、L-葡糖酸鹽及其金屬鹽。 「糖」為具有特徵性甜味之碳水化合物。糖可分類為單 醣、雙醣及多醣。「單醣」為單糖（simple sugar)，例如果 糖（fructose)、左旋果糖（ievulose)、葡萄糖（gluc〇se)及右旋 糖（dextrose)或葡萄糖（grape sugar)。「雙聽」包括乳糖 (lactose/milk sugar)、麥芽糖（malt〇se/malt sugar)、結晶雙 醣、蔗糖及海藻糖（亦稱為繭蜜糖（myc〇se)或簟糖 (tremalose))。在水解時，雙醣分子產生2個單醣分子。 「多聽」包括諸如纖維素、糊精、肝醣及澱粉之物質。多 醣為由單糖構成之聚合化合物且可水解產生單糖。雙醣有 時與較簡單之多聽（通常由3或4個單糖單元構成之多酿）聚 集在一起以形成稱為「养醋」之碳水化合物種類。 「糖」亦可分類為「還原糖」或「非還原糖」。還原糖 由以下事實區分：歸因於其游離或潛在游離之醛或酮基， 其具有易於還原許多金屬鹽之鹼性溶液，諸如銅、銀、 鉍、汞及鐵之鹼性溶液的性質。還原糖包括例如麥芽糖、 乳糖、纖維一糖、龍膽二糖（gentiobi ose)、蜜二糖 (mehbiose)及松二糖（turanose)。非還原糖之非限制性實例 包括蔗糖、海藻糖、棉子糖、松三糖、水蘇糖（stachy〇se) 及毛蕊花糖（verbascose)。 154450.doc 13 201201835 術語「界面活性劑」通常包括保護組合物中之蛋白質免 遭空氣/溶液界面料應激及溶液/表面料應激之彼等試 劑。舉例而言’界面活性劑可保護蛋白質免遭凝集。適合 界面活性劑可包括例如聚山梨醇s旨；聚環氧乙㈣基/ 諸如Bnj 35.RTM.;或泊洛沙姆（p〇1〇xamer)，諸如吐溫 2〇、吐溫80或泊洛沙姆188。較佳清潔劑為聚環氧乙烷烷 基

Cremophor A25 ^ Sympatens 例如 Brij 35.RTM. ALM/230 ;聚山梨醇醋/吐溫，例如聚山梨醇㈣、聚山梨 醇S曰80、Mirj ’及泊洛沙姆’例如泊洛沙姆188、泊洛沙 姆407及吐溫，例如吐溫2〇及吐溫8〇。 穩定」組合物為例如抗體之活性成分在製造過程期間 及/或在儲存時在其中基本上保留該活性成分之物理穩定 性及/或化學穩定性及/或生物活性的組合物。量測蛋白質 穩定性之各種分析技術在此項技術中可用且综述MPeyide and Protein Drug Delivery, 247-301, Vincent Lee^, Marcel Dekker，Inc” New York，Ν.γ，pubs (1991)及；〇11“（Η%)

Adv. Drug Delivery Rev. 10:29-90 中。 若在目視檢查顏色及/或澄清度時或如藉由紫外光散射 或藉由尺寸排阻層析法所量測，抗體顯示實質上無例如凝 集、沈澱及/或變性之徵象，則其在醫藥組合物中「保留 其物理穩定性」。凝集為個別蛋白質分子或複合物藉此共 價或非共價締合以形成凝集體之過程。凝集可在形成可見 沈澱之程度上進行。含有抗NGF抗體之醫藥組合物之物理 穩定性可例如根據溶液中之單體蛋白質的百分比加以確 154450.doc •14· 201201835 定’其中經降解（例如斷裂）及/或經凝集之蛋白質之百分比 較低（例如小於3%)指示組合物穩定。 若在既定時間時之化學穩定性使得抗體被視為仍然保留 其如下定義之生物活性’則抗體在本發明醫藥組合物中 「保留其化學穩定性」《化學穩定性可藉由例如偵測及定 量抗體之化學改變形式加以評估。化學改變可涉及尺寸變 更（例如修剪（clipping》，其可使用尺寸排阻層析法、 SDS-PAGE及/或基質輔助雷射脫附離子化法/飛行時間式 質谱法（MALDI/TOF MS)加以評估。其他類型之化學改變 包括電荷改變（例如由於脫醯胺或氧化而發生），其可藉由 例如離子交換層析法加以評估。 若醫藥組合物中之抗體對於其預定目的而言具有生物活 性，則該抗體在本發明醫藥組合物中「保留其生物活 I·生」。舉例而言，若醫藥組合物中之抗體之生物活性係在 製備醫藥組合物時展現之生物活性(例如如在抗原結合檢 測中所；則定）的約30%、約20%或約在檢測誤差内） 内則生物活性得到保留。本發明調配物内含有之抗NGF 抗體之生物活性包括（但不限於）與人類NGF結合，抑制 抑制TF-1細胞之NGF依賴性增 NGF 與 TrkA 或 P75NTR結合， 殖抑制神經το之NGF依賴性存活及分化，及抑制ngf依 賴性疼痛轉導。術扭「、-壬祕 ^ 術°° /舌性」進一步包括諸如以下之活 抗體對抗原’例如抗NGF抗體與NGF抗原結合之結合 特異性/親和力。 如本文所用之術語「抑制」係指生物活性之任何統計顯 154450.doc -15. 201201835 著降低，包括完全阻斷活性。舉例而言，「抑制」可係指 生物活性降低約 10%、20%、30%、40%、50%、60%、 70%、80%、90%或 100%。 術語「神經生長因子」或「NGF」在本文中可互換使 用，且包括變異體、同功異型物、同源物、直系同源物及 旁系同源物。舉例而言，在某些情況下，對人類NGF具有 特異性之抗體可與來自除人類之外之物種的NGF交叉反 應。在其他實施例中，對人類NGF具有特異性之抗體可對 人類NGF具有完全特異性，且可不展現物種交叉反應性或 其他類型之交又反應性。術語「人類NGF」係指人類序列 NGF，諸如包含人類NGF-β鏈之胺基酸序列，人類NGF-β 鏈之前驅體形式具有Genbank寄存編號NP_002497，由 Genbank寄存編號NM_002506之核苷酸序列編碼。人類 NGF-β鏈序列與Genbank寄存編號NP_002497之人類NGF-β 之不同之處可在於具有例如保守取代或非保守區中之取 代，其中人類NGF-β具有與Genbank寄存編號NP_002497之 人類NGF-β實質上相同之生物功能。術語「大鼠NGF」係 指大鼠序列NGF，諸如包含大鼠NGF-β鏈之胺基酸序列， 大鼠NGF-β鍵之前驅體形式具有Genbank寄存編號 XP_227525，由Genbank寄存編號XP_227525之核苷酸序列 編碼。「小鼠NGF」係指小鼠序列NGF，諸如包含小鼠 NGF-β鏈之胺基酸序列，小鼠NGF-β鏈之前驅體形式具有 Genbank寄存編號NP_038637，由Genbank寄存編號 NM_013609之核苷酸序列編碼。 154450.doc -16- 201201835 如本文所用之術語「TrkA受體」係指NGF受體，此項技 術中亦稱為原肌凝蛋白激酶受體A及1型神經營養性酪胺酸 激酶受體（NTRK1)。人類TrkA受體之例示性非限制性序列 包括Genbank寄存編號NP_001012331(同功異型物1)、 NP_002520(同功異型物2)及NP_001007793(同功異型物3) 之胺基酸序列。 如本文所用之術語「p75NTR受體」係指分子量為約75 kDa且結合NGF及其他神經營養素的神經營養素受體，該 受體描述於例如 Bothwell，M. (1996) 272:506-507 中。人類p75NTR受體之例示性非限制性序列為Genbank寄 存編號NP_002498之胺基酸序列，由Genbank寄存編號 NM_002507之核苷酸序列編碼。 如本文關於抗NGF抗體所用之術語「終末消除半衰期」 係指一旦抗體之吸收與再分佈完成，如在已投與抗體之個 體企清中量測之抗體濃度降低一半所需之時間量。當使用 一組個體時，可使用個體中之幾何平均終末消除半衰期作 為抗體終末消除半衰期的量度。 如本文關於抗NGF抗體所用之術語「藥理學半衰期」係 指維持活體内藥效之平均時間量（藥效之MRT)。其可使用 以下公式，計算為第一瞬時基線修正之效應-時間曲線下 面積（AUMEC)對隨時間累積之基線修正之藥效（效應-時間 曲線下面積，AUEC)的比率： 藥理學半衰期= 154450.doc -17- 201201835 當使用一組個體時，可使用個體中之幾何平均藥理學半衰 期作為抗體藥理學半衰期的量度。 如本文所用之術語「抑制」係指生物活性之任何統計顯 著降低，包括完全阻斷活性。舉例而言，「抑制」可係指 生物活性降低約 10%、20%、30%、40%、50%、60%、 70%、80%、90%或 100% 〇 如本文中可互換使用之術語「抗體」或「免疫球蛋白」 包括完整抗體及其保留特異性結合抗原（例如NGF)之能力 的任何抗原結合片段（亦即「抗原結合部分」）或單鏈。在 全長抗體中，各重鏈包含重鏈可變區（本文中縮寫為HCVR 或VH)及重鏈恆定區。重鏈恆定區包含三個域，即CH1、 CH2及CH3。各輕鏈包含輕鏈可變區（本文中縮寫為LCVR 或VL)及輕鏈恆定區。輕鏈悝定區包含一個域CL。VH區及 VL區可進一步再分為高變區（稱為互補決定區（CDR))，其 間穿插有較保守區（稱為構架區（FR))。各VH及VL由按以 下順序自胺基端排列至羧基端之三個CDR及四個FR組成： FR1、CDR1、FR2、CDR2、FR3、CDR3 及 FR4。重鏈及輕 鏈之可變區含有與抗原相互作用之結合域。抗體恆定區可 介導免疫球蛋白結合宿主組織或因子，包括免疫系統之各 種細胞（例如效應細胞）及經典補體系統之第一組分（C1 q)。 免疫球蛋白分子可為任何類型（例如IgG、IgE、IgM、 IgD、IgA及 IgY)、種類（例如 IgGl、IgG2、IgG3、IgG4、 IgAl及IgA2)或子類。 術語抗體之「抗原結合部分」或「抗原結合片段」（或 154450.doc -18 - 201201835 簡稱為「抗體部分」）係指保留特異性結合抗原（例如NGF) 之能力的一或多個抗體片段。此等抗體實施例亦可為特異 性結合兩種或兩種以上不同抗原之雙特昇性、雙重特異性 或多特異性形式。術語抗體之「抗原結合部分」内涵蓋之 結合片段之實例包括（i) Fab片段，由VL、VH、CL及CH1 域組成之單價片段；（ii) F(ab，)2片段，包含經由位於鉸鏈 區之二硫橋鍵連接之兩個Fab片段之二價片段；（iii) Fd片 段’由VH及CH1域組成；（iv) fv片段，由抗體之單一臂之 VL 及 VH 域組成；（v) dAb 片段（Ward等人，（1989) Nature 341:544-546 ; Winter等人，PCT公開案 WO 90/05144 A1)， 其包含單一可變域；及（vi)經分離之互補決定區（CDR)。此 外’儘管Fv片段之兩個域VL和VH由單獨基因編碼，但其 可使用重組方法由能將其製備成單一蛋白質鏈之合成連接 子聯接’在該單一蛋白質鏈中，VL與VH區配對以形成單 價分子（稱為單鏈Fv(scFv);參見例如Bird等人（1988)

Science 242:423-426及 Huston#A(1988)Proc.Natl.Acad.

Sci. USA 85:5879-5883)。亦涵蓋其他形式之單鏈抗體，諸 如微型雙功能抗體。雙功能抗體為二價雙特異性抗體，其 中VH及VL域表現於單一多肽鏈上，但使用過短連接子以 致在同一鏈上該兩個域之間不能配對，藉此迫使該等域與 另一鏈之互補域配對且產生兩個抗原結合位點（參見例如

Holliger 等人（1993)Proc.Natl·Acad.Sci.USA 90:6444-6448 ; Poljak 等人（1994) Structure 2:1121-1123)。此等單 鍵抗體亦意欲涵蓋在如此項技術中熟知之術語抗體之「抗 154450.doc •19· 201201835 原結合部分」内（Kontermann及Dubel編，Antibody Engineering (2001) Springer-Verlag. New York，790 (ISBN 3-540- 41354-5))。 如本文所用之術語「鉸鏈區突變」係指免疫球蛋白恆定 域之鉸鍵區中之突變’諸如點突變、取代、添加或缺失。 如本文所用之術語「單株抗體」係指自實質上均質之抗 體群體獲得的抗體，亦即除可極少量存在之可能的天然存 在之突變以外，構成該群體之個別抗體為相同的。單株抗 體針對單一抗原位點具有高度特異性。此外，與通常包括 針對不同決定子（抗原決定基）之不同抗體的習知（多株）抗 體製劑不同，各單株抗體針對抗原上之單一決定子。單株 抗體可使用任何技術公認之技術製備，例如如Kohler等人 (1975) iVa/wre，256:495描述之融合瘤法、如例如參見例如

Lonberg，等人（1994) Nature 368(6474): 856-859描述之轉殖 基因動物、重組DNA法（參見例如美國專利第4,816,567 號）、或使用利用例如Clarkson等人，352:624-628 (1991)及 Marks等人，J. Mo/. 5沁/·，222:581-597 (1991)中描 述之技術的噬菌體抗體文庫。單株抗體包括嵌合抗體、人 類抗體及人類化抗體’且可天然存在或重組產生。 術語「重組抗體」係指利用重組方法製備、表現、產生 或分離之抗體，諸如（a)自免疫球蛋白基因（例如人類免疫 球蛋白基因）為轉殖基因的或轉染色體的動物（例如小鼠）分 離的抗體或由其製備之融合瘤，（b)自經轉化以表現抗體的 宿主細胞（例如轉染瘤）分離的抗體，（c)使用噬菌體呈現自 154450.doc •20· 201201835 重組組合性抗體文庫（例如含有人類抗體序列）分離的抗 體’及（d)利用包括拼接免疫球蛋白基因序列（例如人類免 疫球蛋白基因）至其他DNA序列之任何其他方法製備、表 現、產生或分離的抗體。此等重組抗體可具有源於人類生 殖系免疫球蛋白序列的可變區及恆定區。然而，在某些實 施例中，此等重組人類抗體可進行活體外突變誘發，且因 此重組抗體之VH區及VL區之胺基酸序列為儘管源於人類生 殖系VH及VL序列及與人類生殖系vH及VL序列相關，但可 能不天然存在於活體内人類抗體生殖系譜系内的序列。 術語「嵌合免疫球蛋白」或嵌合抗體係指可變區源於第 一物種且恆定區源於第二物種之免疫球蛋白或抗體。嵌合 免疫球蛋白或抗體可例如藉由遺傳工程改造自屬於不同物 種之免疫球蛋白基因區段構築。 術語「人類化抗體」或「人類化免疫球蛋白」係指包括 至少一條人類化抗體鍵或免疫球蛋白鍵（亦即至少一條人 類化輕鏈或重鏈）的抗體或免疫球蛋白。術語「人類化免 疫球蛋白鏈」或「人類化抗體鏈」（亦即「人類化免疫球 蛋白輕鏈」或「人類化免疫球蛋白重鏈」）係指具有包括 實質上來自人類免疫球蛋白或抗體之可變構架區及實質上 來自非人類免疫球蛋白或抗體之互補決定區（CDr)(例如至 少一個CDR ’較佳兩個CDR，更佳三個CDR)之可變區的免 疫球蛋白鏈或抗體鏈（亦即分別為輕鍵或重鏈），且其另外 包括怪定區（例如在輕鏈情況下，為至少一個恆定區或其 一部分’且在重鏈情況下，較佳為三個恆定區）。術語 154450.doc 21 · 201201835 人類化可變區j (例如「人類化輕鏈可變區」或「人類 化重鏈可變區」）係指包括實質上來自人類免疫球蛋白咬 抗體之可變構架區及實質上來自非人類免疫球蛋白或抗體 之互補決定區（CDR)的可變區。 在一實施例中’術語「人類化抗體」為免疫特異性結合 相關抗原且包含實質上具有人類抗體之胺基酸序列之構架 (FR)區及實質上具有非人類抗體之胺基酸序列之互補決定 區（CDR)的抗體或其變異體、衍生物、類似物或片段。如 本文所用，術語「實質上」在CDR之情形下係指Cdr具有 與非人類抗體CDR之胺基酸序列至少80%、至少85%、至 少90°/。、至少95%、至少98%或至少99% —致之胺基酸序 列。人類化抗體包含實質上所有至少一個且通常兩個可變 域（Fab、Fab’、F(ab’)2、FabC、Fv)，其中所有或實質上所 有CDR區對應於非人類免疫球蛋白（亦即供者抗體）之彼等 CDR區且所有或實質上所有FR區為人類免疫球蛋白共同序 列之彼等FR區。在一實施例中，人類化抗體亦包含免疫球 蛋白恆定區（Fc)，通常人免疫球蛋白之恆定區的至少一部 分。在一些實施例中，人類化抗體含有輕鏈以及重鍵之至 少可變域。抗體亦可包括重鏈之CH1、鉸鏈、CH2、CH3 及CH4區。在一實施例中，人類化抗體僅含有人類化輕 鏈。在另一實施例中，人類化抗體僅含有人類化重鏈。在 一特定實施例中，人類化抗體僅含有輕鏈及/或人類化重 鏈之人類化可變域。人類化抗體可選自任何種類之免疫球 蛋白’包括IgM、IgG、IgD、IgA及IgE及任何同型，不加 154450.doc -22- 201201835 限制地包括IgGl、IgG2、IgG3及IgG4。人類化抗體可包含 來自一種以上之種類或同型的序列’且特定悝定域可經選 擇以使用此項技術中熟知之技術使所要效應功能最佳化。 術語「抗原決定基」包括能夠與免疫球蛋白特異性結合 之任何X決定子（例如多肽）。在某些實施例中，抗原決定基 決定子包括分子之化學活性表面基團（諸如胺基酸、糖側 鏈、碗醯基或項醯基），且在某些實施例中，可具有特定 二維結構特徵及/或特定電荷特徵。抗原決定基為抗原之 由抗體所結合的區。在某些實施例中，當抗體優先識別蛋 白質及/或大分子之複雜混合物中之其目標抗原時，認為 該抗體特異性結合抗原。 如本文所用之術語「人類抗體」意欲包括具有可變區的 抗體’在該等可變區中構架區與CDR區均源於如例如

Kabat 荨人（參見 Kabat 等人，（1991) iSegwewcei 農五焱，美國健康與公眾服務 部（U.S. Department of Health and Human Services), NIH公 開案第91-3242號）所述之人類生殖系免疫球蛋白序列。此 外，若抗體含有恆定區，則該恆定區亦源於人類生殖系免 疫球蛋白序列。人類抗體可包括不由人類生殖系免疫球蛋 白序列編瑪之胺基酸殘基（例如由活體外隨機或位點特異 性突變誘發或由活體内體細胞突變引入之突變）。然而， 如本文所用之術語「人類抗體」不意欲包括源於另一哺乳 動物物種（諸如小鼠）之生殖系之CDR序列已移植於人類構 架序列上的抗體。 154450.doc •23- 201201835 如本文所用之「分離之抗體」意欲指實質上不含具有不 同抗原特異性之其他抗體的抗體（例如特異性結合之 分離之抗體實質上不含特異性結合NGF以外之抗原的抗 體）。此外，分離之抗體通常實質上不含其他細胞物質及/ 或化學物。 如本文所用，術語「特異性結合」及「選擇性結合」意 谓抗體或其抗原結合部分對特定抗原或抗原決定基展現明 顯親和力，且一般不會與其他抗原及抗原決定基展現顯著 交叉反應性。「明顯」結合或較佳結合包括以至少丨〇6、 10、1〇8 ' 109 1VT1或l〇1() M·1之親和力進行結合。較佳親 和力超過107 M-1，以超過108 M-1更佳。本文所述數值之中 間值亦意欲在本發明之範疇内，且較佳結合親和力可採用 親和力範圍表示，例如1〇6至1〇1〇 M-1，較佳1〇7至1〇1〇 ， 更佳 108 至 101G Μ-1。 不展現顯著交又反應性」之抗體為 不會與非所需實體（例如非所需蛋白質實體）明顯結合之抗 體。特異性或選擇性結合可根據任何測定此結合性之相關 技術所公認方式決定，包括例如根據史卡查分析 (Scatchard analysis)及/或競爭性結合檢測加以測定。 如本文所用之術語「KD」意指特定抗體_抗原相互作用 之「解離平衡常數」或抗體對抗原之親和力，例如於在平 衡狀態下滴定得到kd，或由缔合速率常數（Kon)除以解離 速率常數（Koff)，得到KD。締合速率常數（κ〇η)、解離速率 常數（Koff)及平衡解離常數（Κ)用於表示抗體與抗原之結合 親和力^測定締合及解離速率常數之方法係此項技術中熟 154450.doc •24· 201201835 知者。基於螢光之技術在檢測生理緩衝液中平衡狀態下之 樣品時’提供咼靈敏度及高能力。可使用諸如BiAcore®檢 測法（生物分子交互作用分析法）之其他實驗方法及儀器（例 如可自 BIAcore International AB，GE Healthcare company，

Uppsala,瑞典購得之儀器）。另外，亦可使用可自Sapidyne

Instruments(Boise，Idaho)購得之 KinExA® 檢測法（動力學排 斥檢測（Kinetic Exclusion Assay))。 在一實施例中，如使用表面電漿共振檢測法或細胞結合 檢測法所量測，本發明抗體與抗原（例如NGF)結合之親和 力（KD)為約100 ρΜ或100 pM以下（亦即或較佳1〇〇 pM以 下）（例如約90 pM或約80 pM或約70 PM或約60 pM或約50 pM或約40 pM或約3 0 pM)。在較佳實施例中，抗體與NGF 結合之親和力（KD)為約25-35 pM之範圍内。 如本文所用之術語「Kass」、「Ka」及「Kon」意欲指抗 體締合成抗體/抗原複合物之締合速率常數。此值指示抗 體與其目標抗原之結合速率或抗體與抗原之間形成複合物 之速率’如以下公式所示： 抗體（「Ab」）+抗原（「Ag」）-^Ab-Ag 如本文所用之術語「Kdiss」、「Kd」及「Koff」意欲指 抗體自抗體/抗原複合物解離之解離速率常數.此值指示 如由如下公式所示，抗體與其目標抗原解離之速率或Ab_ Ag複合物隨時間分離成游離抗體及抗原之解離速率：

Ab+Ag«-Ab-Ag 如本文所用之術語「1(：5〇」係指在活體外或活體内檢測 154450.doc -25· 201201835 中抑制反應至最大抑制反應之50%之程度（亦即介於最大抑 制反應與未治療反應的中間值）的抗體濃度。 如本文所用之術語「治療」係指本文所述之治療性或預 防性措施。「治療」方法採用向個體（例如患有NGF相關 疾病或病狀之個體）投與本發明抗體以預防、治瘡、延 遲、減輕該疾病或病狀之嚴重性或改善該疾病或病狀之一 或多種症狀。 如本文所用之術語「NGF相關疾病或病狀」係指ngf活 性涉及或關聯或介導或促進疾病或病狀之一或多種症狀的 疾病及病狀。 如本文所用，術語「個體」包括任何人類或非人類鸯 物。在一特定實施例中，個體為人類.術語「非人類鸯 物」包括所有脊椎動物’例如哺乳動物及非哺乳動物，讀 如非人類靈長類動物、綿羊、犬、母牛、雞、兩樓動物、 爬行動物等。 如本文所用’術語「反彈效應」係指在單:欠或重複投藥 之後的初期效用之後，個體中發生NGF螯合劑，諸如抗 NGF抗體功效消減。舉例而言，用抗卿抗體之冶療最初 可減輕例如由發炎或神經損傷或其他病因引起之疼痛，此 後為疼痛的劇烈程度最終變得與治療前大致相同或比治療 前更劇烈的止痛療效消減時期。在另一實例中，在單：或 重複投藥之後，抗NGF抗體可在個體中展示初始效用持續 -段時間，諸如投藥後一週的時間(例如投藥後第卜7天广 此後為功效消減時期，諸如投藥後U週的時_如投藥 154450.doc -26 - 201201835 後第7-14天）。此「反彈」時期之後可為抗nGF抗體功效恢 復時期。舉例而言，在單次或重複投與抗NGF抗體之後可 存在痛覺缺失之兩相概況，伴隨功效降低或甚至痛覺放大 之中間時期。此反彈效應可在例如臨床疼痛研究、疼痛實 驗模型及/或抗NGF功效之其他模型中評估》此反彈效應可 在反彈時期期間導致例如個體疼痛增加及/或不利事件（諸 如自異常疼痛至感覺不良、感覺倒錯及感覺過敏或感覺遲 純之感覺異常）增加。儘管不意欲受機制限制，但反彈效 應可由NGF表現改變、TrkA4p75受體表現改變或信號傳 導或在單次或重複投與抗NGF之後的初期功效之後導致功 效暫時消減之任何其他機制引起。 以下子章節中進一步詳述本發明之各種態樣。 II·本發明醫藥組合物 本發明提供包含抗NGF抗體或其抗原結合片段之液體及 凍乾醫藥組合物，其相較於技術公認之組合物具有改良之 性質。本發明組合物能夠例如在製造、儲存及/或重複凍/ 融處理步驟或延長暴露於增加之空氣_液體界面期間維持 抗NGF抗體或其抗原結合片段之溶解性及穩定性（例如不 顯示顯著乳光、凝集或沈澱）。舉例而言，本發明組合物 儘音含有高量（例如約1〇至約24〇 mg/mL)抗體或其抗原結 合片段，但維持低程度之蛋白質凝集（亦即小於3%)。本發 明組合物儘管含有高量（例如約1〇至約240 mg/mL)抗體， 但亦維持在適於皮下注射之範圍内之低黏度。此外，本發 明組合物維持溶解性，維持適於皮下或靜脈内注射之低黏

S 154450.doc •27· 201201835 度，且維持歷經例如約pH 5.0至約pH 6.0之pH值範圍的穩 定性。因此’本發明抗體組合物克服抗體組合物之許多已 知挑戰’包括穩定性、黏度、混濁度及物理降解挑戰。 因此’在一態樣中，醫藥組合物包含抗NGF抗體或其抗 原結合片段、足以維持液體及/或凍乾形式之抗NGF抗體或 其抗原結合片段之穩定性的緩衝劑及賦形劑。 本文中詳述可用於本發明組合物及製備抗NGF抗體及其 抗原結合片段之方法中之抗NGF抗體及其抗原結合片段。 存在於組合物中之抗體之量係例如藉由考慮所要劑量、投 藥體積及模式來確定。在本發明之某些實施例中，例如液 體及/或凉乾組合物（在復原時）之本發明組合物包含約丨〇至 約 240 mg/mL、約 20 至約 120 mg/mL、約 40 至約 240 mg/mL、約50-150 mg/mL、約15至約75 mg/ml之蛋白質濃 度’或約10至約20 mg/ml抗人類NGF抗體或其抗原結合片 段。儘管本發明之較佳實施例為包含高蛋白質濃度之組合 物，但亦預期本發明組合物可包含介於約i mg/mL與約24〇 mg/mL之間、介於約1 mg/mi與約15〇 mg/mi之間或介於約 50 mg/mL與約150 mg/mL之間或介於約3〇 mg/mL與約5〇 mg/mL之間的抗體濃度。在本發明之一實施例中’抗體濃 度為約100 mg/mL »在本發明之一實施例中，抗體濃度為 約60 mg/mL。在本發明之一實施例中，抗體濃度為約3〇 mg/mL。在另一實施例中，抗體濃度為約2〇 mg/m]L。在另 貫知例中，抗體濃度為約1 0 mg/mL。在本發明之另一實 施例中，組合物包含約55 mg/mL之抗體濃度。 154450.doc •28· 201201835 例如處於上述範圍中間之範圍，例如75_9〇 mg/ml亦意 欲為本發明之一部分。舉例而言’意欲包括使用任何上述 值之組合作為上限及/或下限之值範圍，此外，在上述量 及濃度中間之抗NGF抗體濃度亦意欲為本發明< # (例如約 1、2、3、4、5、6、7、8、9、1〇、ii、12、I] 14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24 25、 26 、 27 、 28 、 29 、 30 、 31 、 32 、 33 、 34 、 35 、 36 、 37 、 38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、 50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、01、 62、63、64、65、66 ' 67、68、69、70、71、72、73 ' 74、75、76、77、78、79、80 ' 81、82、83、84、85、 86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96、97、 98、99、100、101、102、103、104、105、106、1〇7、 108、 109、 110、 111、 112、 113、 114、 115、 116、 117、 118 、 119 、 120 、 121 、 122 、 123 、 124 、 125 、 126 、 127 、 128、129、130、131、132、133、134、135、Π6、137、 138、139、140、141、142、143、144、145、M6、147、 148 、 149 、 150 、 151 、 152 、 153 、 154 、 155 、 156 、 157 、 158 、 159 、 160 、 161 、 162 、 163 、 164 、 165 、 166 、 167 ' 168 、 169 、 170 、 171 、 172 、 173 、 174 、 175 、 176 、 177 、 178 、 179 、 180 、 181 、 182 、 183 、 184 、 185 、 186 、 187 、 188 、 189 、 190 、 191 、 192 、 193 、 194 、 195 、 196 、 197 、 198 、 199 、 200 、 201 、 202 、 203 、 204 、 205 、 206 ' 207 、 208 、 209 、 210 、 211 、 212 、 213 、 214 、 215 、 216 、 217 、

S 154450.doc -29- 201201835 218 、 219 、 220 、 221 、 222 、 223 、 224 ' 225 、 226 、 227 、 228 、 229 、 230 、 231 、 232 、 233 、 234 、 235 、 236 、 237 、 238 ' 239或約 240 mg/mL)。 在本發明之一些實施例中，例如凍乾組合物之組合物包 含約 1-100 mg、1-75 mg、1·55 mg、uo mg、uo mg、 1-10 mg、10-20 mg、15_75 mg、100-150 mg、110-150 mg、100-140 mg、110-140 mg、120-140 mg、130-140 mg 抗NGF抗體。在其他實施例中，例如凍乾組合物之組合物 包含約 40-240、40-200、40-180、40-160、40-140、40-120 mg ' 45-100 mg、50-80 mg或 55-70 mg抗體。在一實施例 中，例如凍乾組合物之組合物包含约】〇 mg抗體。在另一 實施例中’例如凍乾組合物之組合物包含約2〇 mg抗體。 處於上述範圍中間之範圍，例如132-138或55-65亦意欲 為本發明之一部分。舉例而言，意欲包括使用任何上述值 之組合作為上限及/或下限之值範圍《此外，在上述量及 濃度中間之抗NGF抗體之量及濃度亦意欲為本發明之—部 分（例如約 1、2、3、4、5 ' 6、7、8、9、10、11、12、 13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、 25 、 26 、 27 、 28 、 29 、 30 、 31 、 32 、 33 、 34 、 35 、 36 、 37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、 49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、 61、62、63、64、65、66 ' 67、68、69、70、71、72、 73、74、75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、 85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96、 •30· 154450.doc 201201835 97、98、99、100、101、l〇2、i〇3、104、105、l〇6、 107、108 ' 109、110、111、112、113、114、1 15、116、 117 、 118 、 119 、 120 、 121 、 122 、 123 、 124 、 125 、 126 、 127、128、129、130、131、132、133、134、134.1、 134.2、134.3、134.4、134.5、134.6、134.7、134.8、 134.9、135、136、137、138、139、140、141、142、 143、144、145、146、147、148、149或約 150 mg抗體）。 用於本發明醫藥組合物中之緩衝劑為適於維持組合物之 pH值在約4.0至約8.0、約5.0至約7.〇、約5.0至約6.5、約 5.5至約7.0之範圍的缓衝劑。較佳地，緩衝劑維持本發明 醫藥組合物之pH值在約5.0至約6,0、約6 〇至約7 〇、約5 5 至約6.0、約6.0至約6_5、約5.75至約6.25及約5.25至約5.75 之範圍内。在一實施例中，本發明組合物之pH值為約 6.0在貫施例中，本發明組合物之pH值為約5.5。在一 實施例中，本發明組合物之pH值為約5 〇。在上述pH值中 間之範圍及值亦意欲為本發明之一部分（例如pH 5 〇、 5.1、 5.2、5.3、5.4、5.5、5.6、5 7、5 8、5 9、6 〇、 6.1、 6.2、6_3或6.4)。意欲包括使用任何上述值之組合作 為上限及/或下限之值範圍。 將控制p Η值在約5 · 5至約7. 〇之範圍内之緩衝劑的實例包 括磷酸鹽、乙酸鹽(例如乙酸鈉）、丁二酸鹽(例如丁二酸 鈉）、精胺酸、葡糖酸鹽、麩胺酸鹽、組胺酸、檸檬酸鹽 及其他有機酸緩衝劑。 在實施例中，緩衝劑為組胺酸。在本發明之某些實施 154450.doc -31 - 201201835 例中，組合物中之組胺酸之濃度為約mM、約13〇 mM、約 5-30 mM、約 10-30 mM、約 30-60 mM、約 3〇_4〇 mM、約 10-50 mM、約 15-60 mM、約 15_45 mM、約 15 3〇 mM、約15-25或約15-20 mM。在一實施例中，組合物中之 組胺酸之濃度為約20 mM。在另一實施例中，組合物中之 組胺之》農度為約15 mM。在另一實施例中，組合物中之 組胺酸之濃度為約30 mM。在上述濃度中間之組胺酸之漠 度及範圍亦意欲為本發明之一部分（例如約1、2、3、4、 5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、 18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、 30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、4〇、41、 42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、 54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、64、65、 66、67、68、69、70、71、72、73、74、75、76、77、 78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、 90、91、92、93、94、95、96、97、98、99、1〇〇或約 ι〇〇 mM組胺酸p意欲包括使用任何上述值之組合作為上限及/ 或下限之濃度範圍。 在本發明之其他實施例中，例如凍乾組合物之組合物包 含約1-10 mg組胺酸或約2-5 mg組胺酸。在一實施例中， 組合物包含約6 mg，例如約5.7 mg組胺酸。在一實施例 中，組合物包含約5 mg，例如約4 7 mg組胺酸。在一實施 例t，組合物包含約2_3 mg組胺酸。在上述量中間之組胺 酸之量及範圍亦意欲為本發明之一部分（例如約〗、丨.5、 154450.doc •32- 201201835 2 、 2.2 、 2.3 、 2.5 3·5 、 4 、 4.5 、5.1 、 5.2 、 5.3 、 5_4 、 5.5 、 5.6 、 5.7 、 5.8 、 5.9 ' 6 、 6·5 、 7 、 7 5 8 8 $ 9、9·5或約1〇 mg組胺酸）。意欲包括使用任何上 合作為上限及/或下限之量範圍。 述值之.且 清潔劑或界面活性劑亦可作為賦形劑添加至本發明 體組合物中。例示性清潔劑包括非離子清潔劑，諸如聚山凡 梨醇醋（例如聚山梨醇醋20、聚山梨醇醋叫）或泊洛沙姆 ^例如治洛沙姆清潔劑之添加量為使得其降低經調配 或使組合物中顆粒形成最少及/或降低吸附 的量。適&界面活性劑可包括例如聚山梨醇i旨；聚環氧乙 烧烧基趟，諸如叫35.RTM;或泊洛沙姆，諸如吐田 20、吐溫80或泊洛沙姆i88。較佳清潔劑為聚環氧乙烧： 基謎，例如Brij 35.RTM.、Cremophor A25sympatens ALM/230;聚山梨醇醋/吐溫，例如聚山梨醇醋2。、聚山梨 醇醋80、Mirj;及泊洛沙姆，例如泊洛㈣⑻、^沙 姆407及吐溫，例如吐溫2〇及吐溫8〇。 在本發明之-較佳實施例中，組合物包括為聚山梨醇醋 之界面活性劑。在本發明之另一較佳實施例中，組合物含 有/月潔劑聚山梨醇醋8〇。在—實施例中，組合物含有介於 約 〇.〇i 與約 2.0 mg/mL、約 0.01 至約 1 mg/mL、約 0.05 至約 g/mL 約 0_〇5 至約 1 _〇 mg/mL、約 〇 〇5 至約 〇 5 g L ’力0.05至約〇.lmg/mL之間的聚山梨醇醋。在一 貫J尹組合物包含約I mg/mL聚山梨醇酯80。在另一 實施例令’組合物包含约〇】mg/mL聚山梨醇醋80。在另

S I54450.doc •33· 201201835 -實施例中’組合物包含約0·05 mg/mL聚山梨醇醋8〇。在 -實施例中’組合物包含介於約請1%與約01%之間介 於約〇·〇〇5%與約〇.〇8%之間、介於約請7%與約0.06%之 間、介於約0.01%與約0.04%之間、介於約〇〇1%與約 〇观之間或介於約0.01%與〇.〇2%之間的聚山梨醇醋8〇。 在-實施例中，組合物包含約〇 〇1%聚山梨醇醋8〇。在一 實施例中’組合物包含約〇.〇2%聚山梨醇酯8〇。然而在 本發明之其他實施例中，組合物基本上無或不含有界面活 性劑，諸如吐溫或聚山梨醇酯。 .在本發明之某些實施例中，例如凍乾組合物之組合物可 包含介於約0.01與〇_5 mg之間，例如約〇 05、〇丨、〇 15、 、0·25、0·3、0·35、〇.4、〇·45或約〇 5 mg的界面活性 劑在實施例中，例如凉·乾組合物之組合物包含約〇.2〇 mg界面活性劑，例如聚山梨醇酯8〇。在一實施例中，例如 凍乾組合物之組合物包含約〇 1〇 mg界面活性劑，例如聚 山梨醇酯80。在界面活性劑之上述濃度及量中間的範圍及 量亦意欲為本發明之一部分，例如〇 〇1、〇 〇2、〇 〇3、 〇·〇4、〇.〇5、〇.〇6、〇·〇7、〇.〇8、〇.〇9、〇·1、0.2、0.3、 〇·4 、 0.5 、 0.6 、 0.7 、 0.8 、 0.9 、 1 、 1.1 、 1.2 、 1.3 、 1.4 、 L5、1.6、1.7、1.8、1.9及 2.0 mg/mL·界面活性劑。此外， 意欲包括使用任何上述值之組合作為上限及/或下限之值 範圍’例如〇.〇4至1.8 mg/mL界面活性劑。 本發明組合物亦可包含多元醇。適用於本發明組合物中 之多元醇包括（但不限於）以下一或多者：海藻糖、果糖、 154450.doc •34· 201201835 甘露糖、麥芽糖、乳糖、阿拉伯糖、木糖、核糖、鼠李 糖、半礼糖、葡萄糖、山梨糖、松三糖、棉子糖、甘露糖 醇、木糖醇、赤藻糖醇、蘇糖醇、山梨糖醇、甘油、L-葡 糖酸鹽及其金屬鹽。 在一實施例中，多元醇係選自由以下組成之群：山梨糖 醇、甘油、海藻糖及甘露糖醇或其組合。在一實施例令， 夕兀醇不為甘露糖醇。在某些實施例中，本發明組合物中 之夕元醇之/農度為約！至約mg/mL、約丨〇至約9〇 mg/mL、約20至約8〇 mg/mL、約3()至約7〇叫就、約扣至 約60 mg/mL、或約50至約60 mg/mi^在其他實施例中， 例如凍乾組合物之本發明組合物包含濃度為約ι〇 ι〇〇 mg、約10至約90 mg/mL、約2〇至約8〇叫/社、約3〇至約 或約50至約60 mg/mL之 70 mg/mL、約 40至約 60 mg/mL、 多兀醇。纟其他實施财，例如適於凍乾（组合物的本發 明組合物包含約1-50 mg/mL、約1〇_3〇叫就或約2〇25 mg/mL多元醇。 在其他實施例中，例如;東乾組合物之本發明組合物包含 約 10-120、約 2(M2〇、約 30_120、約 4〇12〇、約 5〇12〇、 約60-120、約10-110、約10_1〇〇'約1〇-9〇、約1〇8〇、約 1〇, mg多元醇或其組合。在上述濃度中間之多元醇之濃 度及範圍亦意欲為本發明之一部分（例如約^234、 、 15 、 16 、 17 、 26 ' 27 ' 28 、 29 ' 38 、 39 、 40 、 41 、 5、6、7、8、9、10、11、12、13、 18、19、20、21、22、23、24、25 30 、 31 、 32 、 33 、 34 、 35 、 36 、 37 154450.doc -35- 201201835 42、43、44、45、46、47 54、55、56、57、58、59 66、67、68、69 ' 70 ' 71 78、79、80、81、82、83 48、49、50、51、52、53、 6〇、61 ' 62、63、64、65、 72、73 ' 74、75、76、77、 84、85、86、87、88、89、 90 91 92、93、94、95、96、97、98、99、100 或約 100 mg/mL多元醇意欲包括使用任何上述值之組合作為上限 及/或下限之多元醇的5農声玆閲 .,, 畔幻/晨度靶圍’例如35-70 mg/ml多元 醇0 在貫施例中，適用於本發明組合物中之多元醇為糖 醇，例如山梨糖醇。本發明組合物可包含約2〇 6〇 mg/mL、約 30·60 mg/mL、約 2〇 5〇 mg/mL 或約 35 45 mg/mL山梨糖醇。在一實施例中，組合物包含約4〇爪以以匕 山梨糖醇。 在另實施例中，適用於本發明組合物中之多元醇為甘 露糖醇。本發明組合物可包含約15〇 mg/mL、約1〇 4〇 mg/mL、約 20_30 mg/mL、約 2〇_25 mg/mL甘露糖醇。在一 實％例中，組合物包含約2〇 mg/mL甘露糖醇。在一實施例 中，例如適於;東乾之組合物的本發明組合物包含約 mg/mL、約10-30 mg/mL·或約20-25 mg/mL·甘露糖醇，且較 佳包含20 mg/mL甘露糖醇。在其他實施例中，例如凍乾組 合物之本發明組合物包含約4〇 6〇 mg、約45_55 或約48_ 52 mg甘露糖醇《在一實施例中，組合物包含約5〇 mg ,例 如約49.5 mg甘露糖醇。 在另一貫施例中，適用於本發明組合物中之多元醇為甘 154450.doc •36· 201201835 油。本發明組合物可包含約卜5〇 mg/mL、約ι〇 4〇 mg/mL^ ^ 20-30 mg/mL^ ^ 20-25 mg/mL^ 20 mg/mL# 油0 亦可添加或多種糖至本發明組合物中。適用於本發明 組合物中之糖之非限制性實例包括麥芽糖、乳糖、纖維二 糖、龍膽二糖、蜜二糖、及松二糖、果糖、左旋果糖、葡 萄糖、及右旋糖、乳糖、聽、及海蒸糖（亦稱為繭蜜糖 或葦糖）、棉子糖、松三糖' 水蘇糖及毛蕊花糖。在某些 實施例中，糖漠度為約i至約12〇 mg/mL、約i至約ι〇〇 mg/mL、約1()至約9〇 mg/mL、約2〇至約8〇呵/紅、約跑 約70 mg/mL、約40至約6〇叫/社、或約5〇至約6〇 mg/mL。在其他實施例中，例如;東乾組合物之本發明組合 物包含約 HM20、約 20_120、約 3〇_12〇、約 4〇_12〇、約 5〇_ 120、約 60_120、約10_110、約 1〇_1〇〇、約 1〇 9〇、約⑺· 80、約 10-70 mg糖。 在某些實施例中，糖為蔗糖且以約1〇_1〇〇 mg/mL、約 10-90 mg/rnL、約 10-80 mg/mL、約 1〇_7〇 mg/mL、約 2〇·9〇 mg/mL、約 20_80 mg/mL、約 2〇_7〇 叫/机、約 3〇 7〇 mg/mL或約25-65 rng/mL之蔗糖存在於本發明組合物中。 在一實_中’組合物包含約70 mg/mL嚴糖。在一實施例 中，例如適於凍乾之組合物的組合物包含約5 mg/mL簾 糖。在-實施射，例如適於綠之組合物的組合物包含 約45 mg/mL嚴糖。在另一實施例中，例如適於床乾之組合 物的組合物包含約46 mg/mL蔗糖。 154450.doc •37· I：i 201201835

糖。在一實施例中，例如 組合物包含 MO、約 10-120 mg、約 1〇_1〇〇 mg、 mg、或約12 mg，例如約12 25 mg蔗 例如凍乾組合物之組合物包含約5〇_ 120 mg、約 75-120 mg或約 10〇_12〇蔗糖，例如約 ιι〇、 11、112、113、114、115、116、117、118、119或12〇叫 蔗糖。在一實施例中，例如凍乾組合物之組合物包含約 113 mg蔗糖。在另一實施例中，例如凍乾組合物之組合物 包含約70 mg蔗糖。在另一實施例中，例如凍乾組合物之 組合物包含約20 mg蔗糖。在另一實施例中，例如凍乾組 合物之組合物包含約10 mg蔗糖。在另一實施例中，例如 凍乾組合物之組合物包含約5 mg蔗糖。 在另一實施例中，糖為海藻糖。海藻糖可以約1〇_1〇〇 mg/mL、約 10-90 mg/mL、約 10-80 mg/mL、約 1〇_7〇 mg/mL、約 20-90 mg/mL、約 20-80 mg/mL、約 20-70 mg/mL、約 30_70 mg/mL、約 25-65 mg/mL或約 35-55 mg/ml 存在於組合物中。在一實施例中，例如適於束乾之組合物 的組合物包含約40-50 mg/ml ’例如約45 mg/mL海藻糖。 在上述濃度中間之糖之濃度及範圍亦意欲為本發明之— 部分（例如約 1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、 13、14、15、16、17、18、19、20、21 ' 22、23、24、 25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、 37 ' 38、39、40、41 ' 42、43、44、45、46、47 ' 48 ' 49 ' 50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、 154450.doc • 38 - 201201835 61、62、63、64、65、66、67、68、69、70、71、72、 73、74、75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、 85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96、 97、98、99、100、101、l〇2、l〇3、l〇4、105、l〇6、 107 、 108 、 109 、 110 、 111 、 112 、 113 、 114 、 115 、 116 、 117、118、119或約120 mg/mL·糖）。意欲包括使用任何上 述值之組合作為上限及/或下限之糖濃度範圍，例如35_7〇 mg/ml 糖。 在其他實施例中，一或多種前述糖與一或多種前述多元 醇之任何組合可一起包括在本發明組合物中。舉例而言， 例如適於凍乾之組合物的本發明組合物可包含例如甘露糖 醇之多元醇及例如餘之糖4某些實施例巾，抗NQF抗 體或其抗原結合片段與多元醇（例如甘露糖醇）、糖（例如蔗 糖）或其組合（例如甘露糖醇及蔗糖）之莫耳比大於約 ，較佳大於約1:1400,更佳介於約1:1400與115()() 之間，或大於約1:1500。 在本發明之某些實施例中，組合物另外包含胺基酸 Ή 如甲硫胺酸。在-實施例中’組合物包含約卜⑺祕、約 Μ福、約2_9碰、約2_8嗔、約μ碰、約μ 爾、約2_5mM、約3_8mM、約3_7mM、約3_6福或約％ 5 mM之甲硫胺酸。在一實施例中， 、’且〇物包含約4 mM曱 硫胺酸。在另—實施例中，組合 物包含約5 mM曱硫胺 I。在一實施例中，包含曱硫胺 ^ % <組合物亦包含多元 醇，例如甘露糖醇，及/或糖’例 邓庶糖。在一實施例 154450.doc • 39· 201201835 中，組合物包含甲坊肚缺 ,_ " 酸、甘露糖醇及蔗糖。在一實施例 中，組合物不包含胺基s痒 卷自文例如甲硫胺酸。 在本發明之某歧實祐仏丨由 一耳施例中’例如凍乾組合物之組合物可 包含介於約 叫、卜4 mg、K3 mgstl_2叫之間例如約μ、Μ、 1.7、1.75、1.8、1 81、1 μ ,。 • 1,82、L83、1.84、1.85、1.9 或 2.0 mg的甲硫胺酸。在_竇w 貫施例中’例如凍乾組合物之組合物 包含約1 · 8 mg，例如1 μ ^ m # •83 mg甲硫胺酸。在甲硫胺酸之上述 濃度及量中間之範圍及吾·1 量亦忍欲為本發明之一部分，例如 1 1.5 2 2.5 、 3 、 3·5 、 4 、 4.5 、 5 、 5.5 、 6 、 6.5 、 7 、 7.5 8 8.5 9、9.5及1〇 mM。此外，意欲包括使用任何 上述值之組合作為上限及/或下限之值範圍，例如3.5_9 mM。 在一實施例中，組合物基本上不含防腐劑，諸如苯曱 醇、苯酚、間甲酚、氯丁醇及苄索氣銨伽似― Cl)。在另-實施例中，防腐劑可包括在組合物中…或 多種其他醫藥學上可接受之載劑、賦形劑或穩定劑，諸如 Remington’s Pharmaceutical 以&⑽第 ^版，〇s〇i，a 編 (1980)中所述者’彳包括在組合物中，其限制條件為其不 會顯著地對組合物之所要特徵造成不利影響。可接受之載 劑、賦形劑或穩定劑在採用之劑量及濃度下對接受者無毒 且包括其他緩衝劑；共溶劑；抗氧化劑，包括抗壞血酸及 甲硫胺酸；螯合劑，諸如EDTA;金屬錯合物（例如Ζη_蛋 白質錯合物）；生物可降解聚合物，諸如聚酯；及/或成鹽 154450.doc •40· 201201835 相對離子，諸如鈉。 在特定實施例中，本發明醫藥組合物調配成液體，其包 含、基本上由或由以下組成：（a)約1-1〇、5-15、10-20、 10-30、20-50或20-75 mg/mL抗NGF抗體或其抗原結合片 段；（b)約 5-50、5-30、5-20 或 10-20 mM 組胺酸；及（c)約 〇.〇1-0.02%聚山梨醇酯80 ;其中組合物之pH值為約5.0-6.0 或約5.5。在某些較佳實施例中’抗NGF抗體為PG1 00或 PG11 〇之抗原結合片段。在某些較佳實施例中，組胺酸濃 度為約10或15 mM。 在特定實施例中’本發明醫藥組合物調配成液體，其包 含、基本上由或由以下組成：（a)約丨_1〇、5_15、1〇_2〇、 10-30、20-50或20-75 mg/mL抗NGF抗體或其抗原結合片 ’又，（b)約5-5 0、5-30、5-20或10-20 mM組胺酸；及⑷約 0.01-0.2%聚山梨醇酯 80 ;及（d)約2〇_8〇、3〇8〇 或 4〇·8〇 mg 多7°醇；其中組合物之PH值為約5.0-6.0或約5.5。在某些 較佳實施例中，抗NGF抗體為PG1〇〇或pGU〇之抗原結合 片奴。在某些較佳實施例中，組胺酸濃度為約丨〇或15 mM。在某些較佳實施例中，多元醇為甘露糖醇或山梨糖 醇。在其他較佳實施例中，多元醇濃度為2〇、3〇或4〇 呵/机。在其他較佳實施例中，組合物另外包含約10-20、 2〇·50或30-80 mg/mL之糖，較佳蔗糖或海藻糖。 在特疋貫施例巾’本發明醫藥組合物調配成液體，其包 含、基本上由或由以下組成：（a)約11〇、5 i5、〖O N、 10-30 ' 20·50或20_75 mg/mL抗NGF抗體或其抗原結合片 154450.doc -41- 201201835 段；（b)約 5-50、5-30、5-20 或 10-20 mM 組胺酸；及（c)約 0.01-0.2°/。聚山梨醇酯 8〇 ;及（句約 20-80、30-80 或 40-80 mg/mL糖；其中組合物之pH值為約5.0-6.0或約5.5。在某 些較佳實施例中，抗NGF抗體為PG100或PG110之抗原結 合片段。在某些較佳實施例中’組胺酸濃度為約丨〇或】5 mM。在某些較佳實施例中，糖為蔗糖或海藻糖。在其他 較佳實施例中，糖濃度為70或8〇 mg/mL。在特定實施例 中，本發明醫藥組合物係以適於復原成液體形式之凍乾形 式提供。對於每毫升復原液體而言，凍乾組合物包含、基 本上由或由以下組成：⑷約1-10、5-15、10-20、10-30、 20-50或20-75 mg抗NGF抗體或其抗原結合片段；（b)約卜 20、1-1〇、1-5或2_4爪§組胺酸；及（^約❹^至〇 2爪吕聚山 梨醇酯80。在某些較佳實施例中，組合物含有約1〇、⑽或 50 mg PG100或pg 11 〇之抗原結合片段。在某些較佳實施 例中，組合物含有約2_3 mg組胺酸。在某些較佳實施例 中，組合物含有〇.! mg聚山梨醇酯80。 在特定實施例中，本發明醫藥組合物係以適於復原成液 體形式之凍乾形式提供。對於每毫升復原液體而言，凍乾 組合物包含、基本上由或由以下組成：（甸約11〇、515、 10-20、10-30、2〇_5〇或2〇_75 m^NGF抗體或其抗原結合 片奴，（b)約ΐ·2〇、ι_10、或2_4叫組胺酸；（c)約〇」至 〇·2 mg聚山梨醇酯8〇 ;及（(})約2〇8〇、3〇8〇或4〇_的多 疋醇。在某些較佳實施例中，組合物含有約1〇、加或 mg PCH00或PG110之抗原、结合片段。在某些較佳實施例 154450.doc •42- 201201835 中，組合物含有約2-3 mg組胺酸。在某些較佳實施例中， 組合物含有0.1 mg聚山梨醇酯80。在某些較佳實施例中， 組合物含有10、20、30或40 mg甘露糖醇或山梨糖醇。在 某些較佳實施例中，組合物另外含有約10_4〇 〇1§糖，較佳 蔗糖或海藻糖。 在特定實施例中，本發明醫藥組合物係以適於復原成液 體形式之凍乾形式提供。對於每毫升復原液體而言，凍乾 組合物包含、基本上由或由以下組成：（a)約11〇、515、 10-20、10-30、20-50或20·75 m^NGF抗體或其抗原結合 片段；（b)約1-20、1-1〇、i_5或2_4 mg組胺酸；（c)約〇」至 0.2 mg聚山梨醇醋80 ;及⑷約2〇_8〇、3〇 8〇或4〇 8〇 mg/mL糖。在某些較佳實施例中，組合物含有約⑺、2〇或 50 mg PGiOO或PG110之抗原結合片段。在某些較佳實施 例中，組合物含有約2_3 mg組胺酸。在某些較佳實施例 中’組合物含有(M mg聚山梨醇⑽。在某些較佳實施例 中’組合物含有約20、40、70或8〇叫糖，較佳蔬糖或海 藻糖。 本發明組合物亦可與-或多種如為所治療之料適應症 所必需之其他治療劑組合，該等治療劑較佳為具有不會對 組合物之抗體造成不利影響之互補活性的治療劑。此等治 療劑適合以有效用於預定目的之量以組合形式存在 欲用於活體内投與之組合物必須無菌。此易於藉由在製 備組合物之前或之後經無菌過濾膜過濾達成。 如上所述，例如適於;東乾之液體及;東乾組合物的本發明 154450.doc •43- 201201835 組合物具有有利之穩定性及儲存性質。液體組合物之穩定 性不依賴於儲存形式，且包括（但不限於）經冷凍、凍乾、 喷霧乾燥之組合物，或活性成分經懸浮之組合物。可在選 定溫度下持續選定時期量測穩定性。在本發明之—態樣 中’液體組合物中之蛋白f以液體形式穩定存在至少約3 個月，至少約4個月；至少約5個月；至少約6個月；至少 約12個月；至少約18個月或18個月以上。在上述時期中間 之範圍亦意欲為本發明之一部分，例如約9個月等。此 外，意奴包括使用任何上述值之組合作為上限及/或下限 之值範圍。 較佳地，組合物在室溫下，或在約3〇。〇下或在4〇(>c下穩 定至少約1個月及/或在約孓8它下穩定至少約丨年，或更: 在約2-8°C下穩定至少約2年。此外，組合物較佳在組合物 之冷凍（達到例如-80。〇及融化（以下稱為「凍/融循環」）之 後為穩定的。在一實施例中，組合物在丨次、2次、3次或3 次以上凍融循環之後為穩定的。 液體組合物中之蛋白質之穩定性亦可定義為組合物中之 蛋白質之單體、凝集體或片段或其組合的百分比，例如如 藉由紫外光散射或藉由尺寸排阻層析法所量測。在本發明 之一態樣中，穩定液體組合物為以凝集體形式存在於組合 物中之蛋白質小於約10%、且較佳小於約5%且更佳小於約 2 %的組合物。 在-實施例巾’液體組合物之物理穩定性係藉由在授摔 應激檢測，例如24小時或48小時攪拌應激檢測之後測定組 154450.doc -44 201201835 合物之混濁度加以確定。舉例而言，攪拌應激檢測可藉由 以下進行：置放適合體積之液體組合物於具有磁性授拌器 (例如多點HP，550 rpm)之燒杯中，在任何適合時間’例 如在T0-T48(小時）移除等分試樣，且對等分試樣進行所要 適合檢測。在相同條件下但不攪拌之組合物之樣品充當對 照。混濁度量測可使用來自Hach(德國）之實驗室混濁度量 測系統來進行且以濁度單位（NTU)來報導。 本發明組合物亦具有有利之耐受性性質。耐受性係使用 疼痛目視類比量表（Pain Visual Analog Scale ’ VAS)基於§平 估個體感知之注射部位疼痛加以評估。（VAS)為按照其跨 越連續值之範圍，例如自無疼痛至最大量之疼痛來量測疼 痛的量測工具。在操作上，VAS為水平線，長度約100 mm，由數值及/或言詞描述（例如0或10，或『無疼痛』或 『極度疼痛』）錨定，視情況在極限之間具有額外言詞或 數值描述，例如輕度、中度及重度；或1至9(參見例如Lee 等人（2000) Acad. Emerg. Med. 7:550)。 耐受性之可量測之其他指標包括例如德雷策量表（Draize Scale)(出血、皮下血斑症（petechiae)、紅斑、水腫、播癯) 及擦傷（bruising)。 III.抗NGF抗體 可用於本發明醫藥組合物中之抗NGF抗體描述於例如以 下：PCT公開案第WO/2010/128398號、PCT公開案第WO 2001/78698號、PCT公開案第 WO 2001/64247號、PCT公開 案第 WO 2002/096458號、PCT公開案第 WO 2004/032870 154450.doc -45· 201201835 號、PCT公開案第wo 2004/058184號、PCT公開案第WO 2005/061540號、PCT公開案第 WO 2005/019266號、PCT公 開案第 WO 2006/077441 號、PCT公開案第 WO 2006/131951 號、PCT公開案第2006/1 10883號、PCT公開案第WO 2009/023540號、美國專利第7,449,616號、美國公開案第 US 20050074821號、美國公開案第 US 20080033157號、美 國公開案第US 20080182978號或美國公開案第US 20090041717 號，各專利之全部内容，尤其與抗NGF抗體相關之内容因 此以引用的方式併入本文中。 在一實施例中，欲用於醫藥組合物中之抗NGF抗體之特 徵在於具有增強之活體内穩定性，如由活體内所觀測到之 長終末消除半衰期所證實。儘管不意欲受機制限制，但吾 人認為抗體之長終末消除半衰期由抗體之清除率降低引 起，而非由抗體之分佈體積增加引起。較佳地，欲用於本 發明醫藥組合物中之抗體包含含有突變之人類IgG4恆定 區。較佳突變為鉸鏈區突變。較佳地，鉸鏈區突變包含 SEQ ID NO: 9(其中SEQ ID NO: 9展示野生型人類IgG4恆 定區之胺基酸序列）之胺基酸位置108處之絲胺酸突變。更 佳地，鉸鏈區突變包含SEQ ID NO: 9之胺基酸位置108處 之絲胺酸突變成脯胺酸。在一較佳實施例中，人類IgG4恆 定區包含SEQ ID NO: 10之胺基酸序列。 在一實施例中，欲用於本發明醫藥組合物中之抗NGF抗 體展現出乎意料長之終末消除半衰期，諸如在食蟹獼猴中 之終末消除半衰期為至少15天，且通常在約15天至約22天 154450.doc -46 - 201201835 之範圍内（或在15-22天之範圍内）、或在約15天至約28天之 範圍内（或在15-28天之範圍内）、或在約21天至約28天之範 圍内（或在21-28天之範圍内）。此穩定抗NGF抗體亦展現在 大鼠中之終末消除半衰期為至少8天，通常在約8至約9天 之範圍内（或在8-9天之範圍内）。 在一實施例中’用於本發明醫藥組合物中之較佳抗ngf 抗體PG110展現在食蟹獼猴中之平均終末消除半衰期為至 父15天且通常更長。舉例而言，在一項食蟹獼猴研究中， 觀測到平均終末消除半衰期在約15天至約22天之範圍内。 在另一食蟹獼猴研究中，觀測到平均終末消除半衰期在約 21天至約28天之範圍内。此外，PG110展現在大鼠中之平 均終末消除半衰期為約8天至約9天。更進一步，如此項技 術中已知，人類中之IgG之終末消除半衰期為猴中之約兩 倍’吾人預測，本發明之抗NGF抗體（諸如PG110)在人類 中之終末消除半衰期為至少10-30天、或至少1 〇天、或至 乂、15天、或至少20天、或至少25天、或更佳至少3〇天 '或 至少40天、或在約10天至約4〇天之範圍内（或在ι〇 4〇天之 範圍内）、或在約15天至約30天之範圍内（或在15_30天之範 圍内）。或者或另外’抗體可展現在人類中之平均藥理學 半哀期為至少30天、或至少35天、或至少40天、或在至少 4週至ό週之範圍内（或在4週至6週之範圍内）、或在至少4週 至7週之範圍内（或在4週至7週之範圍内）或在至少4週至8週 之範圍内（或在4週至8週之範圍内）。如於實例8中進一步所 述’本發明之抗NGF抗體已顯示在人類中之平均藥理學半 154450.doc • 47- 201201835 衰期在以上提及之範圍内。 PG110在食蟹獼猴中之終末消除半衰期顯著長於此項技 術中業已報導之其他IgG4抗體在食蟹獼猴中之半衰期。舉 例而言，業已報導CDP571(—種IgG4抗TNF抗體）在食蟹獼 猴中之半衰期為約40-90小時（約1.6-3.8天）（參見Stephens， S.等人（1995) 85··668-674)。類似地，業已報導那 他珠單抗（natalizumab)(—種IgG4抗整合素（integrin)抗體） 在食蟹獼猴中之半衰期為約3天（參見Refusal CHMP Assessment Report for Natalizumab, European Medicines Agency，London, 2007年 11月 15 日，參考文獻 EMEA/CHMP/ 8203/2008)。 在一實施例中，本發明醫藥組合物包含抗NGF抗體，其 中較佳较鍵區突變為在SEQ ID NO: 9中之位置1 〇8處絲胺 酸突變成脯胺酸。此項技術中先前已描述此突變（參見

Angal，S.等人（1993) Mo/, /wmw ⑽/. 30:105-108)且業已報 導此突變可消除IgG4分子之異質性，特定言之形成含有單 一重鍵及單一輕键之半抗體。因此，本發明亦涵蓋SEQ ID NO: 9之位置108處之除脯胺酸以外的胺基酸取代，其中該 取代在消除IgG4分子之異質性（例如形成半抗體）方面達成 與Ser突變成Pro之突變相同的作用。可如Angal等人， (1993) ’同上中所述，評估位置108處之突變消除IgG4分 子之異質性的能力。 除SEQ ID NO: 9之位置108處之修飾外或替代SEQ ID NO: 9之位置108處之修飾，亦已描述改良FcRn-IgG相互作 154450.doc -48 - 201201835 用之親和力從而導致修飾之IgG半衰期延長的其他IgG鉸鏈 區突變。此等額外或替代修飾之實例包括位於一或多個對 應於以下之IgG恆定區殘基處的突變：Thr250、Met252、 Ser254、Thr256、Thr307、Glu308、Met428、His433 及/或 Asn434(如 Shields，R.L.等人（2001) /. Chem. 276:6591- 6604 ; Petkova，S.B·等人(2006) /«ί· /wzwmwo/. 18:1759-1769 ； Hinton, P.R.等人（2004) J. Biol. Chem. 279:6213-6216 ; Kamei，D.T.等人（2005) 92:748- 760 ; Vaccaro, C.等人（2005)#如《/-日5/〇化〇/1«〇/.23:1283-1288 ; Hinton，P.R.等人（2006) 乂 Immunol. 176:346-356 中 進一步所述）。 此外，替代鉸鏈區突變，已描述IgG4恆定區之其他穩定 修飾。舉例而言，在其他實施例中，如美國專利公開案 20080063 635中另外所述，人類IgG4恆定區之突變包含用 IgGl CH3區取代IgG4 CH3區、用IgGl CH2及CH3區取代 IgG4 CH2及CH3區、或用離胺酸取代IgG4‘I·亙定區之位置 409(根據Kabat編號）處的精胺酸。在其他實施例中，如 卩(：丁公開案\^0 2008/145142中另外所述，人類1§04恆定區 之突變包含取代Arg409、Phe405或Lys370(根據Kabat編 號），諸如用Lys、Ala、Thr、Met或Leu取代Arg409，或用 Ala、Va卜 Gly或Leu取代Phe405。 可使用標準重組DNA技術，諸如編碼人類IgG4，|·亙定區之 核酸的定點突變誘發或PCR介導之突變誘發，將所要突變 引入人類IgG4恆定區結構域中。此外，可將編碼抗體重鍵 154450.doc -49- 201201835 可變區之DNA引入編碼突變人類IgG4恆定區之表現載體 中，以致可變區與恆定區可操作地連接，藉此產生編碼恆 定區為突變的人類IgG4恆定區之全長免疫球蛋白重鏈的載 體。接著可使用表現載體利用標準重組蛋白質表現方法來 表現全長免疫球蛋白重鏈。舉例而言，本發明之抗NGF抗 體可如實例1中進一步詳述來構築。 可使用此項技術中已知之標準方法測定抗體之終末消除 半衰期。舉例而言，在向個體（例如食蟹獼猴、史泊格多 利大鼠（Sprague-Dawley rat))投與抗體之後，可在投藥之 後各時間點獲得血液樣品’且可使用此項技術中已知之抗 體濃度測定技術（諸如ELISA檢測）測定血液樣品之血清抗 體濃度。可使用已知的藥物動力學方法計算抗體之末端半 衰期，例如使用經設計用於計算藥物動力學參數之電腦系 統及軟體（一個非限制性實例為具有WinNonlin軟體之 SNBL美國藥物動力學分析系統（Snbl USA Pharmacokinetics Analysis System)) ° 在一實施例中’本發明醫藥組合物含有包含PG11 〇抗體 之重鏈及輕鏈可變區之抗NGF抗體或其抗原結合部分。 PG110之重鏈可變區展示於SEQ ID NO: 1中，且PG110之 輕鏈可變區展示於SEQ ID NO: 2中。因此，在一實施例 中’本發明之抗NGF抗體包含含有SEQ ID NO: 1之胺基酸 序列之重鍵可變區。在另一實施例中’本發明之抗NGF抗 體包含含有SEQ ID NO: 2之胺基酸序列之輕鏈可變區。在 另一實施例中，本發明之抗NGF抗體包含含有SEQ ID NO: 154450.doc .50- 201201835 1之胺基酸序列之重鏈可變區及含有SEQ ID NO: 2之胺基 酸序列之輕鏈可變區。 PG110重鏈（可變區及怪定區）之全長胺基酸序列展示於 SEQ ID NO: 13中。此重鏈可由前驅體重鏈製備，該前驅 體重鏈包括前導序列或信號序列，諸如SEQ ID NO: 12中 所示之胺基酸序列。SEQ ID NO: 12之前驅體重鏈由SEQ ID NO: 11中所示之核苷酸序列編碼。 PG110輕鏈（可變區及恆定區）之全長胺基酸序列展示於 SEQ ID NO: 16中。此輕鏈可由前驅體輕鏈製備，該前驅 體輕鏈包括前導序列或信號序列，諸如SEQ ID NO: 15中 所示之胺基酸序列。SEQ ID NO: 15之前驅體輕鏈由SEQ ID NO: 14中所示之核苷酸序列編碼。 因此’在另一實施例中’用於本發明醫藥組合物中之抗 NGF抗體包含含有SEQ ID NO: 13之胺基酸序列之重鍵， 其中抗體在食蟹獼猴中之血清半衰期為至少15天。在另一 實施例中’在食蟹獼猴中之血清半衰期可在約丨5天至約22 天之範圍内（或在15-22天之範圍内）。在其他實施例中，在 大鼠中之血清半衰期可為至少8天或在約8天至約9天之範 圍内（或在8-9天之範圍内）。在其他實施例中，人類中之血 》月半哀期可為至少10-30天、或至少1〇天、或至少15天、 或至少20天、或至少25天、或至少30天、或至少4〇天、或 在約10天至約40天之範圍内（或在1〇_4〇天之範圍内）、或在 約15天至約30天之範圍内（或在15·30天之範圍内）。或者或 另外，抗體可展現在人類中之平均藥理學半衰期為至少3〇

S 154450.doc •51 · 201201835 天、或至少35天、或至少40天、或在至少4週至6週之範圍 内（或在4週至6週之範圍内）、或在至少4週至7週之範圍内 (或在4週至7週之範圍内）或在至少4週至8週之範圍内（或在 4週至8週之範圍内）。較佳地，重鏈由SEQ ID NO: 11之核 苷酸序列編碼。較佳地，抗體之輕鏈包含SEQ ID NO: 16 之胺基酸序列。較佳地，輕鏈由SEQ ID NO: 14之核苷酸 序列編碼。 在另一實施例中，用於本發明醫藥組合物中之抗NGF抗 體包含含有SEQ ID NO: 13之胺基酸序列之重鏈及含有SEQ ID NO: 16之胺基酸序列之輕鏈。 在另一實施例中，用於本發明醫藥組合物中之抗NGF抗 體包含由SEQ ID NO: 11之核苷酸序列編碼之重鏈及由SEQ ID NO: 14之核苷酸序列編碼之輕鏈。 假定PG110之結合特異性由可變域之互補決定區（CDR) 提供，則在另一實施例中，用於本發明醫藥組合物中之抗 NGF抗體包含PG110之重鏈之CDR、PG110之輕鏈之CDR或 兩者皆有。PG110之重鏈CDR1、CDR2及CDR3分別展示於 SEQ ID NO: 3、4及5 中。PG110 之輕鏈 CDR1、CDR2 及 0〇113分別展示於8£(5 1〇]^〇:6、7及8中。因此，在一實 施例中，本發明之抗NGF抗體包含含有分別具有SEQ ID NO: 3、4及5之胺基酸序列之CDR1、CDR2及CDR3的重鏈 可變區。在另一實施例中，用於本發明醫藥組合物中之抗 NGF抗體包含含有分別具有SEQ ID NO: 6、7及8之胺基酸 序列之CDR1、CDR2及CDR3的輕鏈可變區。在另一實施 154450.doc -52- 201201835 例中，用於本發明醫藥組合物中之抗NGF抗體包含含有分 別具有SEQ ID NO: 3、4及5之胺基酸序列之CDR1、CDR2 及CDR3的重鏈可變區，且包含含有分別具有SEQ ID NO: 6、7及8之胺基酸序列之CDR1、CDR2及CDR3的輕鏈可變 區° 在另一實施例中，用於本發明醫藥組合物中之抗NGF抗 體可包含含有與PG110之重键及/或輕鏈可變區同源之胺基 酸序列的重鏈及輕鏈可變區’且其中抗體保留PG11 〇所展 現之增強之活體内穩定性。舉例而言，抗NGF抗體之重鏈 可變區可包含與SEQ ID NO: 1之胺基酸序列至少9〇%同 源、更佳至少95%同源、更佳至少97%同源且甚至更佳至 少99%同源的胺基酸序列。抗NGF抗體之輕鏈可變區可包 含與SEQ ID NO: 2之胺基酸序列至少90%同源、更佳至少 95%同源、更佳至少97%同源且甚至更佳至少99%同源的 胺基酸序列。 如本文所用’兩個胺基酸序列之間的同源性百分比等同 於兩個序列之間的一致性百分比。兩個序列之間的一致性 百分比為該等序列共有之相同位置數的函數（亦即同源性％ =相同位置數/位置總數X 100)，此情形考慮為達成兩個序 列之最佳比對所需引入之空隙數及各空隙之長度。可使用 數學算法達成序列比較及確定兩個序列之間的一致性百分 比。舉例而言，可使用已併入ALIGN程式（2.0版）中之E.

Meyers及 W. Miller之算法（Comjpwi·却尸/· 5z_〇icz··，4:11-17 (1988))確定兩個胺基酸序列之間的一致性百分比，該 154450.doc •53· 201201835 ALIGN程式使用PAM120權重殘差表（weight residue table)、空隙長度罰分（gap length penalty)12及空隙罰分 (gap penalty)4。此外，可使用已併入GCG套裝軟體（可在 http://www.gcg.com 上獲得）之 GAP 程式中的 Needleman 及 Wunsch(«/· Mo/·价£>/. 48:444-453 (1970))算法確定兩個胺基 酸序列之間的一致性百分比，該GAP程式使用Blossum 62 矩陣或PAM250矩陣，及空隙權重（gap weight)16、14、 12、10、8、6或 4及長度權重（length weight) 1、2、3、4、 5或6 〇 在另一實施例中，用於本發明醫藥組合物中之抗NGF抗 體可包含含有PG110之重鏈及/或輕鏈可變區之胺基酸序列 的重鏈及輕鏈可變區，但其中一或多個保守取代已引入該 (該等）序列中，而抗體仍保留PG110所展現之增強之活體 内穩定性。舉例而言，抗NGF抗體之重鏈可變區可包含相 較於SEQ ID NO: 1，除1、2、3、4或5個保守胺基酸取代 以外，與SEQ ID NO: 1之胺基酸序列一致的胺基酸序列。 抗NGF抗體之輕鍵可變區可包含相較於SEQ ID NO: 2，除 1、2、3、4或5個保守胺基酸取代以外，與SEQ ID NO: 2 之胺基酸序列一致的胺基酸序列。 如本文所用，術語「保守胺基酸取代」意欲指胺基酸修 飾不顯著影響或改變含有該胺基酸序列之抗體的結合或穩 定性特徵。此等保守修飾包括胺基酸取代、添加及缺失。 可利用此項技術中已知之標準技術，諸如定點突變誘發及 PCR介導之突變誘發，將修飾引入本案之抗體中。保守胺 154450.doc .54· 201201835 基酸取代為胺基酸殘基經具有類似側鏈之胺基酸殘基置換 之取代。此項技術中已定義具有類似側鏈之胺基酸殘基之 家族。此等家族包括具有鹼性側鏈之胺基酸（例如離胺 酸、精胺酸、組胺酸）、具有酸性侧鏈之胺基酸（例如天冬 胺酸、麩胺酸）、具有不帶電極性側鏈之胺基酸（例如甘胺 酸、天冬醯胺酸、糙醯胺酸、絲胺酸、蘇胺酸、酪胺酸、 半胱胺酸、色胺酸）、具有非極性側鏈之胺基酸（例如丙胺 酸、顯胺酸、白胺酸、異白胺酸、脯胺酸、苯丙胺酸、甲 硫胺酸）、具有β分支側鏈之胺基酸（例如蘇胺酸、纈胺酸、 異白胺酸）及具有芳族側鏈之胺基酸（例如赂胺酸、苯丙胺 酸、色胺酸、組胺酸）。因此，PG110之可變區内之一或多 個胺基酸殘基可經同一侧鍵家族之其他胺基酸殘基置換， 且可使用本文所述之功能檢測來測試改變之抗體之保留功 能。 在另一實施例中’用於本發明醫藥組合物中之抗NGF抗 體包含抗原結合區（亦即可變區），該等抗原結合區在NGF 上與PG110抗體結合相同之抗原決定基，或與pgii〇交叉 競爭結合NGF。因此，在一實施例中，本發明之抗NGF抗 體與包含含有SEQ ID NO: 1之胺基酸序列之重鍵可變區及 含有SEQ ID NO: 2之胺基酸序列之輕鍵可變區的抗體競爭 結合NGF。 此等交又競爭抗體可基於其在標準NGF結合檢測中與 P G110交叉競爭之能力鑑別。舉例而言，可使用標準 ELISA檢測’其中重組NGF蛋白（例如人類NGF-β)固定於板 154450.doc -55·

S 201201835 上，螢光標記一個該等抗體，且評估未標記抗體競爭以解 離經標記抗體之結合的能力。或者或另外，可使用 BIAcore分析來評估抗體交叉競爭之能力。先前（例如 WO/2010/128398)已描述可用於測試抗體與包含含有SEQ ID NO: 1之胺基酸序列之重鏈可變區及含有SEQ ID NO: 2 之胺基酸序列之輕鏈可變區的抗體競爭結合NGF之能力的 適合結合檢測。 在其他實施例中，適用於本發明組合物中之抗NGF抗體 展現PG110抗體之一或多種功能性質。舉例而言，本發明 之抗NGF抗體可展現一或多種以下功能性質： •與人類NGF結合，但不與源於人腦之神經營養因子 (BDNF)、人類神經營養素3(NT-3)或人類神經營養素 4(NT-4)結合； •以ΙΟΟρΜ或ΙΟΟρΜ以下之KD與人類或大鼠NGF結合； •抑制NGF與TrkA或p75NTR結合； •抑制TF-1細胞之NGF依賴性增殖； •抑制雞背根神經節之NGF依賴性存活； •抑制PC12細胞神經突之NGF依賴性生長。 此等功能性質可使用此項技術中已知及描述於例如 WO/2010/128398中之活體外檢測加以評估。就抗體與人類 NGF之特異性結合而言，如本文所用之術語「不與腦源性 神經營養因子（BDNF)、人類神經營養素3(NT-3)或人類神 經營養素4(NT-4)結合」意欲意謂在標準結合檢測（例如 ELISA或如實例中所述之其他適合活體外檢測）中所觀測到 154450.doc -56- 201201835 之抗體與BDNF、NT-3或NT-4結合的量與結合之背景水準 (例如對照抗體）相當’例如不高於背景水準之2倍，或相較 於與人類NGF之結合（其中與人類NGF之結合水準設為 100°/。結合），與BDNF、NT-3或NT-4之結合小於5%。

在另一實施例中’用於本發明醫藥組合物中之抗神經生 長因子（NGF)抗體包含人類IgG4恆定區，其中該人類igG4 怪定區包含SEQ ID NO: 1〇之胺基酸序列（或其中該人類 IgG4恆定區包含SEQ ID NO: 9之胺基酸位置108處之絲胺 酸突變，較佳為位置108處之絲胺酸突變成脯胺酸），且其 中該抗體與人類或大鼠NGF結合之KD為100 pM或1〇〇 pM 以下（或者，KD為300 pM或300 PM以下、200 pM或200 pM 以下、150 pM或150 pM以下、75 pM或75 pM以下、或50 pM或50 pM以下）’抑制NGF與TrkA或p75NTR結合之ic50為 250 PM或 250 PM以下（或者，IC5〇為 500 pM 或 5〇〇 pM以 下、400 pM或 400 pM以下、300 pM或 300 pM以下、或 200 pM或200 pM以下）’且抑制TF-1細胞之NGF依賴性增殖之 IC50為 50 ng/ml或 50 ng/ml以下（或者，1(：5()為15〇 ng/ml4 150 ng/ml以下、1〇〇 ng/mi或 1〇〇 ng/ml以下、75 ng/爪丨或 75 ng/ml以下、或4〇 ng/ml或40 ng/ml以下）。較佳地，抗體在 人類中之平均終末消除半衰期為至少1 〇_3〇天、或至少1 〇 天、或至少15天、或至少20天、或至少25天、或至少3〇 天、或在約10天至約40天之範圍内（或在1〇_4〇天之範圍 内）、或在約15天至約30天之範圍内（或在15_3〇天之範圍 内）。或者或另外，抗體可展現在人類中之平均藥理學半 154450.doc •57· 201201835 衰期為至少30天、或至少35天、或至少4〇天、或在至少4 週至6週之範圍内（或在4週至6週之範圍内）、或在至少斗週 至7週之範圍内（或在4週至7週之範圍内）或在至少4週至8週 之範圍内（或在4週至8週之範圍内）。或者或另外，抗體可 展現在食蟹獼猴中之平均終末消除半衰期為至少丨5天，且 通常在約15天至約22天之範圍内（或在15_22天之範圍内）、 或在約15天至約28天之範圍内（或在15-28天之範圍内）、或 在約21天至約28天之範圍内（或在21-28天之範圍内）。或者 或另外’抗體可展現在大鼠中之終末消除半衰期為至少8 天’通常在約8天至約9天之範圍内（或在8-9天之範圍内）。 抗體可進一步展現一或多種額外功能性質，諸如與人類 NGF結合，但不與源於人腦之神經營養因子(BDNF)、人類 神經營養素3(NT-3)或人類神經營養素4(NT-4)結合；抑制 雞背根神經節之NGF依賴性存活；及/或抑制pc 12細胞神 經突之NGF依賴性生長。較佳地，抗體減輕疼痛之持續時 間為向個體投與單次劑量之抗NGF抗體之後至少約1週至 約12週。較佳地，抗體包含重鏈可變區，該重鏈可變區包 含分別具有SEQ ID NO: 3、4及5之胺基酸序列之CDR1、 CDR2及CDR3，或抗體包含輕键可變區，該輕鏈可變區包 含分別具有SEQ ID NO: 6、7及8之胺基酸序列之CDR1、 CDR2及CDR3，或抗體包含重鏈可變區，該重鏈可變區包 含分別具有SEQ ID NO: 3、4及5之胺基酸序列之CDR1、 CDR2及CDR3 ;及輕鏈可變區，該輕鏈可變區包含分別具 有SEQ ID NO: 6、7及8之胺基酸序列之CDR1、CDR2及 154450.doc -58- 201201835 CDR3。較佳地，抗體包含含有SEQ ID NO: 1之胺基酸序 列之重鏈可變區，或抗體包含含有SEQ ID NO: 2之胺基酸 序列之輕鏈可變區，或抗體包含含有SEQ ID NO: 1之胺基 酸序列之重鏈可變區及含有SEQ ID NO: 2之胺基酸序列之 輕鏈可變區，或抗體與包含含有SEQ ID NO: 1之胺基酸序 列之重鏈可變區及含有SEQ ID NO: 2之胺基酸序列之輕鏈 可變區的抗體競爭結合NGF。 在另一實施例中，用於本發明醫藥組合物中之抗NGF抗 體在向個體投與時不展現反彈效應（例如該抗體以一定劑 量及頻率投與以使個體避免反彈效應）。其他抗NGF抗體 之動物模型與臨床研究中業已報導反彈效應，在該反彈效 應中，在單次或重複投藥之後的效用初期之後，抗NGF抗 體在個體中展現功效消減。舉例而言，業已在大鼠慢性縮 窄損傷（CCI)模型中報導抗大鼠NGF抗體之該種效應，稱 為「反彈現象」（R〇, L-S.等人（1999) 79:265-274)。另 外，業已報導使用抗NGF抗體他尼珠單抗（tanezumab)(亦 稱為RN624、E3、CAS登記編號880266-57-9)之臨床疼痛 研究，其中在初始止痛時期之後觀測到一段時期之不利事 件，諸如對觸摸敏感及『麻痒』感（『pins & needles』 sensation)增力口（參見 Hefti, Franz F., Rinat Neuroscience, LSUHSC，Shreveport，Louisiana, 2006年 9 月 26 日之陳述）。 儘管不意欲受機制限制，但吾人認為本文所述之抗NGF抗 體之延長終末消除半衰期使其避免展現反彈效應。因此， 用於本發明組合物中之抗NGF抗體之其他優點包括相較於 154450.doc -59- 201201835 其他先前技術抗NGF抗體更穩定且更延長之活體内活性。 雲於此等抗NGF抗體之延長之終末消除半衰期，可使用較 低劑量（相較於其他抗NGF抗體）’且含有抗體之組合物必 要時可在更頻繁間隔下使用，從而可選擇劑量及定時治療 方案（timing treatment regimen)以使個體避免反彈效應。 在另一實施例中，用於本發明醫藥組合物中之抗NGF抗 體能夠長時間減輕個體疼痛，例如抗體能夠減輕疼痛之持 續時間為向個體投與單次劑量之抗NGF抗體之後至少約j 週至約12週（或1週至12週）。在一實施例中，抗體減輕疼痛 之持續時間為向個體投與單次劑量之抗NGF抗體之後至少 約1週（或至少1週）。在另一實施例中，抗體減輕疼痛之持 續時間為向個體投與單次劑量之抗NGF抗體之後至少約2 週（或至少2週）。在另一實施例中’抗體減輕疼痛之持續時 間為向個體投與單次劑量之抗NGF抗體之後至少約4週（或 至少4週）。在另一實施例中’抗體減輕疼痛之持續時間為 向個體投與單次劑量之抗NGF抗體之後至少約8週（或至少 8週）。在另一實施例中’抗體減輕疼痛之持續時間為向個 體投與單次劑量之抗NGF抗體之後至少約12週（或至少12 週）。在另一實施例中’抗體減輕疼痛之持續時間為向個 體投與單次劑量之抗NGF抗體之後至少約4週至約12週（或 4週至12週）。在另一實施例中，抗體減輕疼痛之持續時間 為向個體投與單次劑量之抗NGF抗體之後至少約8週至約 12週（或8週至12週）。 可使用此項技術中建立之檢測評估抗體減輕個體疼痛的 154450.doc •60- 201201835 能力。適用於評估抗NGF抗體減輕疼痛之持續時間的動物 模型描述於例如PCT公開案第WO 2006/131951號及美國專 利公開案20080182978中。此等動物模型之非限制性實例 包括由坐骨神經慢性縮窄引發之神經痛模型、涉及後爪切 口之術後疼痛模型、涉及佛氏完全佐劑（complete Freund’s adjuvant，CFA)誘導之關節炎的類風濕性關節炎疼痛模型 及諸如Halvorson，K.G·等人（2005) Cancer Λα. 65:9426-9435 及 Sevcik，Μ·Α·等人（2005)尸 αζ·« 115:128-141 中所述之 癌症疼痛模型。此外，可臨床評估人類疼痛減輕，且可基 於用抗NGF抗體治療之人類個體所報導之疼痛程度來確定 疼痛減輕的持續時間。 在其他實施例中，用於本發明醫藥組合物中之抗NGF抗 體可包含藉由此項技術中已知用於產生單株抗體之標準方 法製備之抗NGF抗體的重鏈可變區及/或輕鏈可變區，該標 準方法諸如由 Kohler及 Milstein (1975) iVaiMre 256: 495所 述用於產生非人類單株抗體（該等抗體可接著經人類化）的 標準體細胞雜交技術以及噬菌體呈現文庫技術或使用表現 人類免疫球蛋白基因之轉殖基因動物的方法。用於選擇抗 體之噬菌體呈現文庫技術描述於例如以下中：McCafferty 等人，348:552-554 (1990); Clarkson等人，Nature, 352:624-628 (1991) ; Marks 等人，J. Mol. Biol·, 222:581-597 (1991)及 Hoet 等人（2005) iVaiwre 23， 344-348 ; Ladner等人之美國專利第5,223,409號；第 5,403,484號；及第5,571，698號；Dower等人之美國專利第 154450.doc -61 - 201201835 5,427,908號及第5,580,717號；McCafferty等人之美國專利 第5,969，108號及第6，172，197號；及Griffiths等人之美國專 利第 5,885,793 號；第 6,521，404 號；第 6,544,731 號；第 6,555,3 13號；第6,582,915號及第6,593,081號。使用表現 人類免疫球蛋白基因之轉殖基因動物產生抗體之方法描述 於例如以下中：Lonberg，等人（1994) Nature 368(6474): 856-859 ； Lonberg, N. and Huszar, D. (1995) Intern. Rev. Immunol. 13: 65-93 i Harding, F./5L Lonberg, N. (1995) Ann. 见 K dead. 764:53 6-546 ;美國專利第 5,545,806號、第 5,569,825號、第 5,625,126號、第 5,633,425號、第 5,789,650 號、第 5,877,397號、第 5,661，016號、第 5,814,318號、第 5,874,299 號、及第 5,770,429 號（皆屬於 Lonberg及 Kay); Surani等人之美國專利第5,545,807號；PCT公開案第WO 92/03918號、第 WO 93/12227號、第 WO 94/25585號、第 WO 97/13852號、第 WO 98/24884號及第 WO 99/45962號 (皆屬於Lonberg及Kay) ; Ishida等人之PCT公開案WO 02/43478 ; Kucherlapati等人之美國專利第 5,939,598號、第 6,075，181號、第 6，1 14,598號、第 6，150,584號及第 6，162,963 號。 在各種實施例中，用於本發明組合物中之抗NGF抗體可 為嵌合抗體、人類化抗體或人類抗體。此外，抗體可為潛 在T細胞抗原決定基已消除之抗體。此項技術中已描述消 除潛在T細胞抗原決定基以藉此降低抗體之潛在免疫原性 的方法（參見例如Carr等人之美國專利公開案第20030153043 154450.doc •62· 201201835 號）。 可使本發明抗體或抗體部分衍决$ 刀何生或連接於另一功能分子 (例如另一肽或蛋白質）。因此，田 貝^ 口此，用於本發明醫藥組合物中 之抗體及抗體部分意欲包括本文所 乂所迷之何生形式及其他修 ^ 飾形式的则〇抗體。舉例而言，本發明抗體或抗體部分 . K藉由化學偶合、基因融合、非共價締合或其他方式）功 能性地連接於-或多種其他分子實體，諸如另一抗體（例 如雙特異性抗體或微型雙功能枋栌\ _p .. A| 叉刀月&杌體）、可偵測劑、細胞毒 性劑、醫藥劑及/或可介導抗體或抗體部分與另一分子（諸 如抗生蛋白鏈菌素（streptavidin)fe心、區或％組胺酸標籤）締 合的蛋白質或肽。 種類型之衍生抗體係藉由交聯兩個或兩個以上抗體 (相同類型，或不同類型，例如產生雙特異性抗體）而產 生。適合交聯劑包括具有兩個由適當間隔基隔開之反應性 顯著不同之基團的雜雙官能交聯劑（例如間順丁烯二醯亞 胺苯甲醯基·Ν-羥基琥珀醯亞胺酯）或同雙官能交聯劑（例如 辛二酸二琥站醯亞胺酯）。此等鍵聯劑可購自pierce

Chemical Company，Rockford，IL 〇 可用於衍生本發明抗體或抗體部分之可偵測劑包括螢光 • 化合物。例示性螢光可偵測劑包括螢光素（fluorescein)、 異疏氰酸螢光素、若丹明（rhodamine)、5-二曱胺-1-萘續酿 氣、藻紅素（phycoerythrin)及其類似物。亦可用諸如鹼性 鱗酸醋酶、辣根過氧化物酶（horseradish peroxidase)、葡 萄糖氧化酶及其類似酶之可偵測酶來衍生抗體。當用可偵 154450.doc -63- 201201835 測酶衍生抗體時，藉由添加被酶用於產生可偵測反應產物 之額外試劑來偵測。舉例而言，當存在可偵測劑辣根過氧 化物酶時，添加過氧化氫及二胺基聯苯胺會產生可偵測之 有色反應產物。亦可用生物素衍生抗體，且藉由間接量測 抗生蛋白或抗生蛋白鏈菌素結合來偵測抗體。 IV·抗體產生 ’ 用於本發明醫藥組合物中之抗NGF抗體可使用編碼抗 NGF抗體之核酸分子產生。核酸可存在於完整細胞中、細 胞/谷解產物中或呈部分純化或實質上純之形式。當核酸藉 由標準技術’包括鹼/SDS處理、CsCl顯帶（CsCl banding)、 管柱層析、瓊脂糖凝膠電泳及此項技術中熟知之其他技術 自其他細胞組分或其他污染物，例如其他細胞核酸或蛋白 質純化時，其「經分離」或「致使變得實質上純淨」。參 見F. Ausubel，等人編（1987) Current Protocols in Molecular

Biology, Greene Publishing and Wiley Interscience, New York。本發明核酸可為例如DNA或RNA，且可或可不含有 内含子序列。在一較佳實施例中，核酸為cDNA分子。本 發明核酸可使用標準分子生物學技術獲得。 在一實施例中’用於本發明醫藥組合物中之抗ngf抗體 由包含SEQ ID NO: 11之核苷酸序列之核酸分子編碼。在 另一實施例中，用於本發明醫藥組合物中之抗NGf抗體由 包含SEQ ID NO: 14之核苷酸序列之核酸分子編碼。 一旦獲得編碼VH及VL區段之DNA片段，即可藉由標準 重組DNA技術進一步操縱此等DNA片段，例如將可變區基 154450.doc -64 - 201201835 因轉換成全長抗體鏈基因以便可變區可操作地連接於恆定 區（參見例如實例1)。如在此情形下所用之術語「可操作地 連接」意欲意S胃使兩個DNA片段聯接以便由兩個DNA片段 編碼之胺基酸序列保持同框（in_frarne)。 用於本發明醫藥組合物中之抗體可使用此項技術中已知 之方法於俏主細胞中產生（例如Morrison, S. (1985) •Science 229:1202)。舉例而言，為了表現抗體，可將編碼重鏈及輕 鏈之DNA插入表現載體中，從而使基因可操作地連接於轉 錄及轉譯控制序列。在此情形下，術語「可操作地連接」 意欲意謂抗體基因連接於載體中，從而使該載活體内之轉 錄及轉譯控制序列發揮其調控抗體基因之轉錄及轉譯的預 定功能。表現載體及表現控制序列經選擇以與所用表現宿 主細胞相容。可將抗體輕鏈基因及抗體重鏈基因插入各別 載體中’或更通常地，將兩種基因插入同一表現載體中。 藉由標準方法（例如抗體基因片段及載體上互補限制位點 之連接’或若不存在限制位點’則為鈍端連接（blunt end ligation))將抗體基因插入表現載體中。另外，重組表現載 體可編碼促進抗體鏈自宿主細胞分泌之信號肽。可將抗體 鏈基因選殖入載體中，從而使信號肽與抗體鏈基因之胺基 端同框連接。信號肽可為免疫球蛋白信號肽或異源信號肽 (亦即非免疫球蛋白之信號肽）。 除抗體鏈基因以外，重組表現載體通常攜帶控制抗體鏈 基因在宿主細胞中表現的調控序列。術語「調控序列」意 欲包括啟動子、增強子及控制抗體鏈基因轉錄或轉譯之其 154450.doc •65· 201201835 他表現控制元件（例如聚腺苷酸化信號）^此等調控序列描 述於例如 Goeddel，Gene Expression Technology, Methods in Enzymology 185, Academic Press, San Diego, CA (1990) 中。熟習此項技術者應瞭解，表現載體之設計，包括調控 序列之選擇可視諸如欲轉型之宿主細胞之選擇、所要蛋白 質之表現量等因素而定。用於哺乳動物宿主細胞表現之較 佳調控序列包括引導蛋白質在哺乳動物細胞内高量表現的 病毒元件’諸如源於細胞巨大病毒（cyt〇megal〇virus， CMV)、猿狼病毒 40(Simian Virus 40，SV40)、腺病毒（例 如腺病毒主要晚期啟動子（AdMLP))及多瘤的啟動子及/或 增強子。或者’可使用非病毒性調控序列，諸如泛素啟動 子或β-血球蛋白啟動子。更進一步，調控元件由不同來源 之序列組成，諸如SRa啟動子系統，其含有來自SV40早期 啟動子之序列及1型人類T細胞白血病病毒之長末端重複序 列（Takebe，Y.等人（1988) Mo/. Ce//_ 出〇/. 8:466-472)。 除抗體鏈基因及調控序列以外’重組表現載體亦可攜帶 其扼序列’諸如調控該載體在宿主細胞中複製的序列（例 如複製起點）及可選擇標記基因。可選擇標記基因有助於 内部已引入載體之宿主細胞的選擇（參見例如美國專利第 4,399,216 號、第 4,634,665 號及第 5，179,017 號，皆屬於

Axel等人）。舉例而言，通常可選擇標記基因賦予内部已 引入載體之宿主細胞對藥物，諸如G418、潮黴素 (hygromycin)或甲胺喋呤（methotrexate)之抗性。較佳可選 擇標記基因包括二氫葉酸還原酶（DHFR)基因（用於以曱胺 154450.doc •66· 201201835 °禁吟選擇/擴增之dhfr-宿主細胞中）及neo基因（用於G41 8選 擇）。 對於輕鏈及重鏈之表現，藉由標準技術將編碼重鏈及輕 鏈之表現載體轉染入宿主細胞中。術語「轉染」之各種形 式意欲涵蓋通常用於將外源DNA引入原核或真核宿主細胞 中的廣泛多種技術’例如電穿孔、雄酸約沈澱、DEAE-葡 聚糖轉染及其類似技術。儘管理論上有可能在原核或真核 宿主細胞中表現抗體，但最佳在真核細胞，且最佳哺乳動 物宿主細胞中表現抗體’因為此等真核細胞且特定言之哺 乳動物細胞比原核細胞更有可能裝配且分泌適當摺疊且具 免疫學活性的抗體。業已報導抗體基因之原核表現不能以 高產率產生活性抗體（Boss，Μ· Α.及Wood，C. R. (1985) Immunology Today 6:12-13) ° 用於表現本發明重組抗體之較佳哺乳動物宿主細胞包括 中國倉鼠卵巢（CHO細胞）（包括描述於Urlaub及Chasin， (1980) Proc. iWzi/· Sci. C/U 77:4216-4220 中之dhfr· CHO細胞’其與例如如R. j. Kaufman及P. A. Sharp (1982) J. Mo/.价〇/. 159:601-621中所描述之DHFR可選擇標記一 起使用）、NSO骨髓瘤細胞、COS細胞及SP2細胞。另一較 佳表現系統為揭示於WO 87/04462(屬於Wilson)、WO 89/01036(屬於 Bebbington)及 EP 338,841(屬於 Bebbington) 中之GS基因表現系統》當將編碼抗體基因之重組表現載體 引入哺乳動物宿主細胞中時，藉由培養宿主細胞一段足以 使抗體在宿主細胞中表現或更佳使抗體分泌至宿主細胞生 154450.doc •67· 201201835 長之培養基中的時間來產生抗體。可使用標準蛋白質純化 方法自培養基中回收抗體。 在一實施例中，用於本發明醫藥組合物中之抗NGF抗體 係使用表現載體產生，其中該載體包含編碼抗體重鏈之 SEQ ID NO: 11之核苷酸序列及編碼抗體輕键之SEQ ID NO: 14之核苷酸序列。較佳表現載體包含GS(麩醯胺酸合 成酶）基因。在另一較佳實施例中，本發明之較佳宿主細 胞為CHO(中國倉鼠卵巢）細胞。 在另一較佳實施例中，用於本發明醫藥組合物中之抗 NGF抗體係藉由培養包含表現載體之宿主細胞而產生，該 表現載體包含SEQ ID NO: 11之核苷酸序列（編碼抗體重鏈） 及SEQ ID NO: 14之核苷酸序列（編碼抗體輕鏈）以便表現包 含由SEQ ID NO: 11編碼之重鏈及由SEQ ID NO: 14編碼之 輕鏈的抗NGF抗體。 V·投藥方法 本發明醫藥組合物可藉由此項技術中已知之多種方法投 與。如熟習此項技術者將瞭解，投藥途徑及/或模式將視 所要結果而定。一般而言，本發明醫藥組合物適於靜脈 内、關節内、皮下、肌肉内、非經腸、瘤内、鼻内、囊泡 内、滑膜内、經口、經黏膜、舌下、經脊椎或經表皮投 與，或藉由滴注入體腔（例如腹腔、胸膜腔、鼻竇）中來投 與。在某些較佳實施例中，本發明醫藥組合物適於靜脈 内、皮下（例如經由注射筆）或關節内投與。 本發明醫藥組合物可單獨或以組合療法（亦即與其他藥 154450.doc • 68 - 201201835 劑組合）投與。舉例而言，組合療法 可包括本發明組合物 及至少-或多種其他醫藥劑。舉例而言 他醫藥劑可獨立投與或亦可併人組合物夕種其 例中，包含抗NGF抗體較佳實施 合物與第二醫藥劑組合投 月醫樂組 以下組mT 興其中該第二醫藥劑係選自由 以下組成之群.NSAID、止痛劑（ 曲刺I· Λ如、 （匕括類鵪片止痛劑及非 典型止痛劑）、局部麻醉劑 押Α阻斷劑、盼阻斷劑、>Α 療性抗體、類固醇、&聲g α 抗驚厥劑、抗抑鬱劑、局部辣椒鹼 ㈣saicin)或抗病毒劑…類尤其較佳之用於減輕疼痛之 第二醫藥劑為類鸦片止痛劑。或者或另外，第二治療方案 可與本發明之抗體組合使用，例如在減輕疼痛方面。此等 第二治療方案之實例包括放射線療法（例如針對癌症疼 痛）、手術程序（例如針對三又神經痛之半月神經結及半月 神經結後根燒蝕（針刺）程序）、催眠及針灸。 NSAID之貫例包括乙醯化水揚酸類，包括阿司匹靈 (aspirin)，未乙醯化水楊酸類，包括雙水揚酸（salsalate)、 一 II尼柳（diflunisal);乙酸類’包括依託度酸（et〇d〇lac)、 雙氯务酸（diclofenac)、。引u朵美辛（ind〇methacin)、酮洛酸 (ketorolac)、萘丁美酮（nabunietone);丙酸類，包括非諾洛 分（fenoprofen)、氟比洛芬（flurbiprofen)、布洛芬（ibuprofen)、 酮洛芬（ketoprofen)、萘普生（naproxen)、萘普生鈉、噁丙 嗪（oxaprozin);甲芬那酸類，包括甲氧芬那酸鹽 (meclofenamate)、甲芬那酸（mefenamic acid);苯基丁氮酮 (phenylbutazone)、吡羅昔康（piroxicam) ; COX-2抑制劑

S 154450.doc •69- 201201835 類，包括塞内昔布（celecoxib)、依託昔布（etoricoxib)、伐 地昔布（valdecoxib)、羅非昔布（rofecoxib)、魯米昔布 (lumiracoxib)。止痛劑之實例包括撲熱息痛（paracetamol)、 (乙醯胺苯紛（acetaminophen))、曲馬多（tramadol)、他喷他 多（tapentadol)、辣椒鹼（局部）、類鴉片止痛劑及非典型止 痛劑。類鸦片止痛劑之實例包括嗎。非、可待因（codeine)、 蒂巴因（thebaine)、氫嗎啡酮（hydromorphone)、氛可酮 (hydrocodone)、氧可嗣（oxycodone)、氧化嗎。非酮 (oxymorphone)、二氫脫氧嗎啡（desomorphine)、二乙酿嗎 啡（diacetylmorphine)、於驗醢嗎啡（nicomorphine)、二丙 醯基嗎啡（dipropanoylmorphine)、苄嗎0非（benzylmorphine)、 乙基嗎啡、芬太尼（fentanyl)、"底替咬（pethidine)、美沙酮 (methadone)、曲馬多及丙氧芬（propoxyphene)。非典型止 痛劑之實例包括三環抗抑繁劑、卡馬西平（carbazepine)、 加巴喷丁（gabapentin)、普瑞巴林（pregabalin)、度洛西汀 (duloxetine)及咖啡驗（caffeine)。類固醇之實例包括關節内 皮質類固醇（IAC)及潑尼松（prednisone)。治療性抗體之實 例包括抗TNF抗體，諸如Remicade®及Humira® ;以及抗 CD20抗體，諸如Rituxan®及Arzerra™。抗病毒劑之實例 包括阿昔洛韋（acyclovir)及構酸奥斯他偉（oseltamivir phosphate)(Tamiflu®) 〇 在一較佳實施例中，組合療法可包括本發明之抗NGF抗 體醫藥組合物及至少一或多種TrkA抑制劑（例如拮抗TrkA 活性之化合物）。TrkA抑制劑可例如藉由與TrkA受體細胞 154450.doc -70- 201201835 外相互作用或藉由與TrkA信號轉導機構（signaling transduction machinery)細胞内相互作用（例如抑制TrkA激 酶活性）而起作用。細胞外TrkA抑制劑之非限制性實例包 括抗TrkA抗體（諸如美國專利公開案第20090208490號及美 國專利公開案第20090300780號中所述之人類化抗TrkA抗 體）及拮抗TrkA之NGF肽模擬物（諸如Debeir，T·等人（1999) Proc. #ai/· 96:4067-4072 中所述）。細胞内

TrkA抑制劑之非限制性實例包括拮抗TrkA功能之細胞穿 透肽（cell-penetrating peptide)(例如如 Hirose，M.等人（2008) «/. P/zarmaco/. 106:107-113 ; Ueda，K.等人（2010) «/. P/iarwaci?/. 5W·，2010年3月30日期中所述）及小分子抑制 劑，諸如TrkA激酶抑制劑（例如如Wood，E.R.等人（2004) 从^· C/iew. Ze/ί. 14:953-957 ; Tripathy，R.等人 (2008)价oorg·· Mei/· C/zew. 18:3551-3555 中所述）。

TrkA抑制劑之其他非限制性實例包括ARRY-470及ARRY-872(Array Biopharma) 〇 在另一較佳實施例中，組合療法可包括本發明之抗NGF 抗體組合物及至少一或多種蛋白激酶C(PKC)抑制劑（例如 拮抗PKC活性之化合物）。 本發明醫藥組合物之無菌可注射調配物可藉由合併活性 化合物與一種以上列舉之成分（例如緩衝劑、赋形劑等）或 該等成分之組合，必要時，隨後進行滅菌微過滤加以製 備。一般而言，藉由將活性化合物併入無菌媒劑中來製備 分散液，該無菌媒劑含有基礎分散介質及以上列舉之所需 154450.doc 71· 201201835 其他成分。在用於製備無菌可注射溶液之無菌粉末的情況 下，較佳製備方法為真空乾燥及冷凍乾燥（凍乾），其自無 菌粉末之前述無菌過遽溶液中得到活性成分加任何其他二 要成分的粉末。 調配物宜呈單位劑型，且可利用藥劑學技術中已知之任 何方法來製備《如本文所用之單位劑型係指適合作為單一 劑量用於欲治療之個體的物理個別單元；各單元含有經叶 算會產生所要治功效應之預定量的活性化合物。 本發明醫藥組合物中活性成分之實際劑量可改變以獲得 有效達成對特定患者、組合物及投藥模式而言所要的治療 反應且對患者不具有毒性的活性成分之量。戶斤選劑量將視 ^藥物動力學因素而定’該等因素包括所用之本發明特 定組合物或其酯、鹽或醯胺的活性；㈣ 間；所用特定化合物之分泌速率；治療持續時間;= 特定組合物組合使用的其他藥物、化合物及/或物質；所 :療患者之年齡、性別、體重、病狀、一般健康狀況及先 前病史（medical history);及醫學技術中熟知的類似因素。 一般熟習此項技術之醫師或獸醫可易於確定並開具所需醫 藥組合物之有效量。舉例而言’醫師或獸醫可以低於所需 含量之含量開始醫藥組合物中所用之本發明化合物的劑量 以達成所要治療效應，且逐漸增加劑量直至達成所要效 果。一般而言，本發明組合物之適合每日劑量將為有效產 生治療效應之最低劑量的化合物量。該種有效劑量一般將 視上述因素而定。 154450.doc -72· 201201835 在一實施例中，本發明組合物之有效量為抑制罹患ngf 活性為有害之病症之個體中NGF活性的量。在一實施例 中，組合物提供每次注射100 mg抗體之有效劑量。在另一 實施例中’組合物提供在約〇_丨至約10〇 mg抗體之範圍内 之有效劑3：。必要時’醫藥組合物之有效每日劑量可以全 天2個、3個、4個、5個、ό個或6個以上在適當間隔下獨立 投與之子劑量’視情況以單位劑型投與。 在本發明之一實施例中，組合物中之抗體之劑量介於約 5與約15 0 mg之間。在另一實施例中，組合物中之抗體之 劑量介於約25與約100 mg之間。在另一實施例中，組合物 中之抗體之劑量介於約40與約80 mg之間。在另一實施例 中，組合物中之抗體之劑量介於約50與約1〇〇 mg之間。在 另一實施例中，組合物中之抗體之劑量介於約〇· 1與約1 〇〇 mg之間、介於約0.5與75 mg之間、介於約1.〇與60 mg之 間、介於約5與40 mg之間、介於約1〇與30 mg之間、或介 於約10與20 mg之間。組合物尤其適於1 〇 mg以上之大抗體 劑量。在本發明之一特定實施例中，組合物提供劑量為約 10 mg或約20 mg之抗體。在另一實施例中，組合物提供劑 量為約80 mg或約100 mg之抗體。 在本發明之一實施例中，組合物中之抗體之劑量介於約 0.1至約150 mg、1至約150 mg、約5至約145 mg、約1〇至 約140 mg、約15至135 mg、約20至約130 mg、約25至約 125 mg、約30至約120 mg、約35至約115 mg、約40至約 110 mg、約45至約105 mg、約50至約1〇〇 mg、約55至約95 154450.doc -73· 201201835 mg、約60至約90 mg、約65至約85 mg、約7〇至約8〇邮之 間或為約75 mg。在一實施例中，抗體劑量為1 〇 ^在一 實施例中，抗體劑量為20 mg。在上述劑量中間之範圍， 例如約2至約149 mg亦意欲為本發明之—部分。舉例而 吕，意欲包括使用任何上述值之組合作為上限及/或下限 之值範圍。 對於特定投藥途徑，可選擇適合傳遞裝置以供使用。舉 例而言，對於皮下或肌肉内投藥，可使用注射筆（例如可 自投與（self-administered)之注射筆）。此等注射筆（亦稱為 注射器）在此項技術中為已知的，包括含有液體劑量之抗 體之注射筆（諸如PCT公開案WO 2008/005315中描述之注 射葦）。此外，對於皮下投藥，可使用皮下植入物 (subcutaneous implant)。另外，可藉由使用外部皮膚貼片 (例如黏著貼片）達成經皮傳遞。亦可藉由注射乾粉（諸如可 購自Glide Pharma之市售注射器）達成經皮傳遞。更進一 步’對於傳遞入肺中（例如在治療哮喘或頑固性咳漱中）， 可採用肺投藥，例如藉由使用吸入器或喷霧器及具有霧化 劑之組合物。參見例如美國專利第6 019 968號；第5,985 32〇 號；第 5,985,309號；第 5,934,272號；第 5,874,064號；第 5,855,913號；第 5,290,540號；及第 4,880,078號；及 PCT 公 開案第 WO 92/19244 號、第 WO 97/32572 號、第 WO 97/44013號、第 W0 98/3 1346號及第 WO 99/66903號。 在一較佳實施例中’本發明之治療組合物可用無針皮下 注射裝置投與’諸如美國專利第5,399，163號、第5,383,851 154450.doc .74· 201201835 號、第 5,3 12,335 號、第 5,064,413號、第 4,941，880號、第 4’790,824號或第4,596,556號中所揭示之裝置。適用於本發 明中之熟知植入物及模組的實例包括：美國專利第 4,487,603號，其揭示一種用於以受控速率分配藥物的可植 入式微輸注泵·’美國專利第4,486,194號，其揭示一種用於 經由皮膚投與藥物之治療裝置；美國專利第4,447,233號， 其揭示一種用於以精確輸注速率傳遞藥物之藥物輸注泵； 美國專利第4,447,224號，其揭示一種用於連續藥物傳遞之 可變"il速可植入式輸注设備；美國專利第4,439,196號，其 揭示一種具有多腔隔室之滲透式藥物傳遞系統；及美國專 利第4,475，196號，其揭示一種滲透式藥物傳遞系統。熟習 此項技術者已知許多其他此等植入物、傳遞系統及模組。 在某些實施例中，本發明醫藥組合物可經進一步調配以 確保在活體内適當分佈。舉例而言，血腦障壁（BBB)會排 除許多高親水性化合物。為確保本發明之治療化合物穿過 BBB(若需要）’其可調配於例如脂質體中。關於製造脂質 體之方法，參見例如美國專利4,522,8u ; 及 5,399,331。脂質體可包含一或多個選擇性傳輸至特定細胞 或器官中的部分，從而增強靶向藥物傳遞（參見例如v v Ranade (1989) 乂 C/z>2. P/mrwac〇/. 29:685)。例示性靶向部 分包括葉酸酯或生物素（參見例如L〇w等人之美國專利 5,06,0(6):甘露糖苦（Umezawa等人，（1988)扪％心队 扪叩/加· Co_ 现 153:1〇38);抗體（pG 臟n 等 人（1995) 357:14〇 ; Μ 〇細等人⑽5) 154450.doc •75- 201201835 yigewh C/zemoi/zer. 39:180);界面活性劑蛋白 A 受體（Briscoe 等人（1995) dm. «/· Ρ/ζ>Ήο/· 1233:134)，其不 同種類可構成該等發明之調配物以及所發明分子之組分； pl20(Schreier 等人（1994) ·/·別 〇/. C；zem_ 269:9090);亦參 見 K. Keinanen; M.L. Laukkanen (1994) FEBS Lett. 346:123 ； J.J. Killion; I.J. Fidler (1994) Immunomethods 4:273 ° 給藥方案經調整以提供最佳所要反應（例如治療反應）。 舉例而言，可投與單一大丸劑，可隨時間投與若干分次劑 量，或可如由治療情況之緊急需要所指示，按比例降低或 增加劑量。典型單次劑量（其可根據如下文進一步所述之 給藥時程來投與）視本文所述之因素而定，可在約0.1 pg/kg 至 1 pg/kg 至 3 pg/kg 至 30 pg/kg 至 300 pg/kg 至 3000 pg/kg(3 mg/kg)至 30 mg/kg至 100 mg/kg或 100 mg/kg以上之 任一範圍内。舉例而言，抗NGF抗體之投與劑量可為約1 pg/kg、約 10 pg/kg、約 20 pg/kg、約 50 pg/kg、約 100 pg/kg、系勺 200 jxg/kg、約 3 00 pg/kg、系勺 400 |ig/kg、 I勺 5 00 pg/kg、約 1 mg/kg、約 2 mg/kg 或約 3 mg/kg。在一較佳實 施例中，抗NGF抗體之投與劑量在約3 pg/kg至約3000 pg/kg之範圍内。在另一較佳實施例中，抗NGF抗體之投 與劑量為1〇〇 pg/kg。在另一較佳實施例中，抗NGF抗體之 投與劑量為200 pg/kg。在另一較佳實施例中，抗NGF抗體 之投與劑量為300 pg/kg。在另一較佳實施例中，抗NGF抗 體之投與劑量為400 gg/kg。 154450.doc -76- 201201835 料數天、數週或數月或更長時間内之重複投藥，視病 狀而定’持續治療直至出現症狀之所要抑制，或直至達成 足夠的治療程度（例如減輕疼痛例示性給藥方案包含投 與約3 pg/kg至500 pg/kg之範圍内的初始劑量，隨後投與 約3 pg/kg至500 ng/kg之抗NGF抗體的每月維持劑量。在另 一實施例中，每月投與一次約2〇〇 pg/kg之劑量。在另一實 施例中，每兩月投與一次約4〇〇吨/kg之劑量。然而，視醫 師所希望達成之藥物動力學衰減樣式而定，其他給藥方案 亦可能適用。舉例而言，在一些實施例中，涵蓋一週給藥 1至4次。然而，倘若抗NGF抗體減輕疼痛之持續時間較 長，則使用之給藥頻率可較低。在一些實施例中，每週一 次、每2週一次、每3週一次、每4週一次、每5週一次、每 6週一次、每7週一次、每8週一次、每9週一次、每10週一 次、每I5週一次、每2〇週一次、每25週一次、每26週一次 或更長時間一次投與抗NGF抗體。在一些實施例中，每月 一次、每2月一次、每3月一次、每4月一次、每5月一次、 每6月一次或更長時間一次投與抗ngf抗體。 在一較佳實施例中，抗NGF抗體為PG110抗體或其抗原 結合片段’且靜脈内投與（例如向人類投與）之劑量在〇1 mg/kg至〇.2 mg/kg之範圍内，較佳為0.15 mg/kg，每12週 一次。在另一較佳實施例中，抗Ngf抗體經皮下投與（例 如向人類投與）之劑量在〇.2 mg/kg至0_4 mg/kg之範圍内， 較佳為0.3 mg/kg，每12週一次。在其他實施例中，PG110 或其片段之投與劑量在0」mg/kg至3 mg/kg之範圍内、在 154450.doc •77· 201201835 0.1 mg/kg 至 30 mg/kg 之範圍内、或在 0.1 mg/kg 至 20 mg/kg 之範圍内、或在0.1 mg/kg至10 mg/kg之範圍内、或在1 mg/kg至30 mg/kg之範圍内、或在1 mg/kg至20 mg/kg之範 圍内、或在1 mg/kg至10 mg/kg之範圍内。 出於投藥簡便性及劑量均一性考慮，尤其宜調配非經腸 組合物呈單位劑型。如本文所用之單位劑型係指適合作為 單一劑量用於欲治療之個體的物理個別單元；各單元含有 經計算會產生所要治療效應之預定量的活性化合物以及所 需醫藥載劑。本發明之單位劑型之規格係藉由下列情況指 定且直接取決於下列情況：（a)活性化合物之獨特特徵及欲 達成之特定治療效應’及（b)複配該種用於治療個體敏感性 之活性化合物之技術中的固有限制。舉例而言，單位劑型 之非限制性實例包括0.2 mg(針對約7〇 kg之人對應於3 gg/kg之劑量）、2 mg(針對約70 kg之人對應於30 pg/kg之劑 量）及7 mg(針對約70 kg之人對應於1〇〇 pg/kg之劑量）。 V·使用方法 本發明提供存放期延長之穩定高濃度組合物，在一實施 例中，其用於抑制罹患NGF活性為有害之病症之個體中的 NGF活性。方法通常包含向個體投與本發明組合物以使該 個體中之NGF活性降低或受抑制◎較佳地，NGF為人類 NGF且個體為人類個體。或者，個體可為表現本發明抗體 與之交又反應之NGF的哺乳動物。更進一步，個體可為内 4已引入hNGF(例如藉由投與hNGF或藉由表現hNGF轉殖 基因）之哺乳動物。此外，出於獸醫學目的或作為人類疾 154450.doc -78- 201201835 病之動物模型，可向表現抗體與之交叉反應之ngf的非人 類哺乳動物（例如靈長類動物、豬或小鼠）投與本發明組合 物。關於後者’此等動物模型可用於評估本發明抗體之治 療功效（例如測試投藥之劑量及時程）。 出於治療或預防目的，可向人類個體投與本發 物。因此’在另一態樣中，本發明提供治療（例如減弱或 抑制）個體中之NGF相關疾病或病狀之方法，該方法包含 向該個體投與本發明醫藥組合物。較佳地，抗NGF抗體用 於減弱或減輕疼痛’例如與疾病或病狀相關之疼痛，其中 該疼痛之發展或維持至少部分由NGF介導^ NGp^a關疾病 或病狀之非限制性實例包括發炎性疼痛、術後疼痛、術後 疼痛（包括牙痛）、神經痛、周邊神經病、糖尿病性神經病 變、月折疼痛、痛風關節疼痛、帶狀疱疹後遺神經痛、癌 症疼痛、骨關節炎或類風濕性關節炎疼痛、纟骨神經痛、 與鐮狀細胞危象相關之疼痛、頭痛(例如偏頭痛、緊張性 頭痛（tension headache)、叢集性頭痛）、痛經、子宮内膜異 位、子宮纖維瘤、肌肉骨胳痛 '慢性下背痛、肌肉纖維疼 痛、扭傷、内臟疼痛、印巢囊腫、前列腺炎、慢性骨盆疼 ;1、群膀耽九、間質性膀胱炎、疼痛性膀脱症候群及/ 或膀胱疼痛症候群、與慢性非細菌性前列腺炎相關之疼 痛、切口疼痛、偏頭痛、三叉神經痛、灼傷及/或創傷疼 痛、與外傷相關之疼痛、與肌肉骨路疾僵 ^脊戈椎炎、關節囊病變、骨轉移疼痛、勝疼痛、由姨 贓炎或腎結石引扣+认… > 起之肢知紅痛症（erythr〇melalgia)或疼 154450.doc •79· 201201835 痛、惡性黑素瘤、休格連氏症候群、哮喘（諸如不受控制 之哮喘伴隨嚴重氣管過度反應）、頑固性咳漱、脫髓顆疾 病（demyelinating disease)、慢性酒精中毒、中風、丘腦性 疼痛症候群、毒素所致之疼痛、化學療法所致之疼痛、肌 肉纖維疼痛、發炎性腸病症、大腸急碡症、發炎性眼病 症、發炎性或不穩足膀耽病症、牛皮癖、皮膚病患伴隨發 炎性組分、曬傷、心肌炎、皮炎、肌炎、神經炎、膠原蛋 白血管疾病、慢性發炎病狀、發炎性疼痛且伴隨痛覺過敏 及異常疼痛、神經痛且伴隨痛覺過敏或異常疼痛、糖尿病 性神經病變疼痛、灼性神經痛（causalgia)、交感神經維持 疼痛（sympathetically maintained pain)、傳入神經阻滯症候 群、上皮組織損傷或功能障礙、呼吸區、泌尿生殖區、腸 胃區或血管區之内臟運動（visceral motility)失調、過敏性 皮膚反應、搔癢症（pruritis)、白斑症（vitiligo)、一般性腸 胃障礙（general gastrointestinal disorder)、結腸炎、胃潰 瘍、十二指腸潰瘍、血管舒縮性鼻炎或過敏性鼻炎、支氣 管病症、消化不良、胃食道逆流（gastr〇esophageal reflux)、 胰臟炎及内臟痛（visceralgia)。 此外’ NGF已牽涉於諸如前列腺癌、曱狀腺癌、肺癌、 泌乳素瘤及黑素瘤之癌症的增殖中。因此，在另一實施例 中’可使用本發明醫藥組合物治療之NGF相關疾病或病狀 為癌症，較佳為前列腺癌、甲狀腺癌、肺癌、泌乳素瘤或 黑素瘤。因此，在另一實施例中，本發明亦提供治療個體 中之癌症之方法’該癌症較佳為前列腺癌、曱狀腺癌、肺 154450.doc •80· 201201835 癌、泌乳素瘤或黑素瘤，該方法包含向該個體投與本發明 醫藥組合物。 更進一步’在另一實施例中，NGF相關疾病或病狀可為 HIV/AIDS。使用本發明之抗NGF抗體阻斷NGF可阻斷經 HIV感染之巨噬細胞，藉此治療mv/AIDS。因此，在另一 實施例中，本發明亦提供治療個體中之HIV/AIDS之方 法，其包含向該個體投與本發明醫藥組合物。 根據本發明方法治療之尤其較佳疾病及病狀包括發炎性 疼痛（尤其為骨關節炎或類風濕性關節炎疼痛）、肌肉骨骼 疼痛（尤其為慢性下背痛）、癌症疼痛、神經痛（尤其為糖尿 病性神經痛）、骨轉移疼痛、間質性膀胱炎/疼痛性膀胱症 候群、與慢性非細菌性前列腺炎相關之疼痛、由子宮内膜 異位及/或子宮纖維瘤所致之疼痛及術後疼痛 與子宮内膜異位及/或子宮纖維瘤相關之疼痛及/或其他 症狀包含痛經；慢性非月經性骨盆疼痛；性交困難 (dySpareunia);排便困難（dyschexia);月經過多（men〇rrhagia) ’下腹部痛或下背'痛·’不孕症及低生育力㈣咖出㈣； 排尿困難（dySUria);排尿腫脹及疼痛；噪心、d區吐及/或腹 填。症狀亦可包含與子宮㈣異㈣變或㈣腹腔外部之 纖維瘤相關的症狀，包括例如表現為β各血、氣胸或血胸的 胸子呂内膜異位症候群及表現為呼吸困難及肺部腫塊 (PUlm〇nary maSS)的肺平滑肌症（Pulm0nary leiomy()sis)。 在一尤其較佳實施例中’本發明醫藥組合物用於治療疼 痛。較佳地，戶斤治療之疼痛類型係選自由骨關節炎疼痛、 154450.doc 201201835 慢生下二痛、糖尿病性神經痛、癌症疼痛及子宮内膜異位 維瘤疼餘叙群。因此，在—較佳實施例 本發月提供治療個體中之疼痛之方法，其包含投與本 m组合物以治療該個體中之疼痛。較佳地，疼痛係 =由骨關節炎疼痛、慢性下背痛、糖尿病性神經痛、癌 症疼痛及子宮内膜異位及/或子宮纖維瘤疼痛組成之群。 因此’在厂實施例中，本發明提供治療個體中之骨關節炎 :痛之方包含投與本發明醫藥組合物以治療該個體 中之骨關節炎疼痛。在另一實施例中，本發明提供治療個 體中之陵f生下背痛之方法’其包含投與本發明醫藥組合物 ^台療該個體中之慢性下背痛。在另一實施例中，本發明 提供治療個體中之糖尿病性神經痛之方法，其包含投與本 發明醫藥組合物以治療該個體中之糖尿病性神經痛。在另 一實施例中’本發明提供治療個體中之癌症疼痛之方法， 其包含投與本發明醫藥組合物以治療該個體中之癌症疼 痛。在另一實施例中，本發明提供治療個體中之子宮内膜 異位及/或子宮纖維瘤疼痛之方法，其包含投與本發明醫 藥組合物以治療該個體中之子宮内膜異位及/或子宮纖維 瘤疼痛。 在一較佳實施例中，本發明醫藥組合物包含含有人類 IgG4〖亙疋區（包含SEQ ID NO: 1〇之胺基酸序列）之抗ngf抗 體且長時間減輕抗體所投與之個體中之疼痛。舉例而言， 在一實施例中，抗體減輕疼痛之持續時間為向個體投與單 次劑量之抗NGF抗體之後至少約1週至約12週（或至少1週 154450.doc • 82 · 201201835 至12週）。在另一實施例中，抗體減輕疼痛之持續時間為 向個體投與單次劑量之抗NGF抗體之後至少約丨週（或至小 1週）。在另一實施例中，抗體減輕疼痛之持續時間為向個 體投與單次劑量之抗NGF抗體之後至少約2週（或至少2 週）。在另一實施例中，抗體減輕疼痛之持續時間為向個 體投與單次劑量之抗NGF抗體之後至少約4週（或至少4 週）。在另一實施例中，抗體減輕疼痛之持續時間為向個 體投與單次劑量之抗NGF抗體之後至少約8週（或至少8 週）。在另一實施例中，抗體減輕疼痛之持續時間為向個 體投與單次劑量之抗NGF抗體之後至少約12週（或至少Η 週）。在一實施例中，抗體減輕疼痛之持續時間為向個體 投與單次劑量之抗NGF抗體之後至少約4週至約12週（或4 週至12週）。在一實施例中，抗體減輕疼痛之持續時間為 向個體投與單次劑量之抗NGF抗體之後至少約8週至約12 週（或8週至12週）。

在另一實施例中，本發明醫藥組合物連同第二醫藥劑或 第一，台療方案一起投與。抗體及第二藥劑、或抗體及第二 治療方案可同時投與或同時進行，或者，可首先投與抗 體=後投與第二醫藥劑或進行第二方案，或可首先投與 第一邊藥劑或進行方案，隨後投與抗體。適合第二醫藥劑 及第一治療方案之非限制性實例闡述於以上醫藥組合物章 節中與本發明抗體組合使用之尤其較佳之第二醫藥劑為 類鸦片止痛齊j。與本發明抗冑組合使用t其他&佳第二醫 藥齊！為TrkA抑制劑（例如細胞外TrkA抑制劑或細胞内TrkA 154450.doc -83- 201201835 抑制劑，如醫藥組合物章節中所詳述）及蛋白激酶c(PKC) 抑制劑。 在另一態樣中，本發明提供減弱或抑制個體中之神經生 長因子（NGF)相關疾病或病狀以使個體避免反彈效應的方 法’该方法包含向該個體投與包含含有人類IgG4恆定區之 杬NGF抗體的本發明醫藥組合物，其中該人類IgG4恆定區 包含大變（較佳為鉸鍵區突變），且其中該抗體在食蟹獼狼 中之終末消除半衣期為至少15天。在另一實施例中，抗體 在食蟹獼猴中之終末消除半衰期在約15天至約22天之範圍 内（或在15-22天之範圍内）、或在約15天至約28天之範圍内 (或在15-28天之範圍内）、或在約21天至約28天之範圍内 (或在21-28天之範圍内）。在另一實施例中，抗體在大鼠中 之終末消除半衰期為至少8天。在另一實施例中，抗體在 人類中之平均終末消除半衰期為至少10_30天（或至少1〇 天、至少15天、至少20天、至少25天、至少30天、至少40 天、或在約10天至約40天之範圍内、或在1〇_4〇天之範圍 内、或在約15天至約30天之範圍内、或在15-30天之範圍 内）。較佳突變包括上文詳述之突變。較佳抗體包括具有 上文詳述之序列及/或功能性質的抗NGF抗體。 VI.製品 包含本發明之液體醫藥組合物之自動注射筆、預填充注 射器或無針投藥裝置亦在本發明範疇内。在一實施例中， 本發明提供包含一定劑量之包含100 mg/mL抗人類NGF抗 體或其抗原結合部分之組合物的傳遞裝置，例如自動注射 154450.doc •84- 201201835 筆或預填充注射器包含以下劑量之組合物：約1 mg 、2 mg、 3 mg、4 mg、5 mg 、6 mg、 7 mg、8 mg、9 mg、 10 mg、 11 mg、 12 mg、 13 mg、 14 mg、15 mg ' 16 mg、 17 mg、 18 mg、 19 mg ' 20、 mg、 21 mg > 22 mg ' 23 mg、 24 mg、 25 mg、 26 mg、 27 mg、 28 mg、29 mg ' 30 mg、 31 mg、 32 mg、 33 mg、 34 mg、 35 mg、36 mg > 37 mg、 38 mg、 39 mg、 40 mg、 41 mg、 42 mg、43 mg > 44 mg、 45 mg、 46 mg、 47 mg、 48 mg、 49 mg、50 mg、51 mg、 52 mg、 53 mg、 54 mg ' 55 mg、 56 mg、57 mg ' 58 mg、 59 mg、 60 mg、 61 mg ' 62 mg、 63 mg、64 mg ' 65 mg、 66 mg、 67 mg、 68 mg、 69 mg、 70 mg、71 mg ' 72 mg、 73 mg、 74 mg、 75 mg、 76 mg、 77 mg ' 78 mg、79 mg、 80 mg、 81 mg、 82 mg、 83 mg、 84 mg、85 mg > 86 mg、 87 mg' 88 mg' 89 mg、 90 mg、 91 mg、92 mg、93 mg、 94 mg、 95 mg、 96 mg、 97 mg、 98 mg、99 mg、100 mg、 101 mg 包含 、102 mg、103 mg、104 mg或 105 mg。 你紙巴枯扠併於#組上或與套組一起提供 外方式隨附於套組的任何t面行銷材料或記錄材料。 舉例而言:本發明亦提供包裝在套組或製品内的慈 藥組合物。本發明之态細$制σ A — 一 σ呈液體或凍乾形式之本發明醫藥組合物且視情分 括治療NGF相關疾病或病狀之使用說明書的套組亦在^ 明範疇内。套組可包括指示套組之内含物之預定用途含 籤。術語標籤包括提供於套組上或與套組一起提供或工〉 套組的任何書面行銷材料或記錄材料。 苹例而吕，本發明亦提供包裝在套組或製品内的！ 之本發明醫藥組合物。本發明之套組或製品含有適月 療’包括預防、治療及/或診斷個體中之NGF相關疾产 154450.doc •85· 201201835 狀的材料。在較佳實施例中’ NGF相關疾病或病狀為發炎 性疼痛（尤其為骨關節炎或類風濕性關節炎疼痛）、肌肉骨 胳疼痛（尤其為慢性下背痛）、神經痛（尤其為糖尿病性神經 痛）、癌症疼痛（尤其為骨轉移疼痛）、與子宮内膜異位及/ 或子宮纖維瘤相關之疼痛及術後疼痛。套組或製品包含容 器及附於谷||_L或與谷器—起之標籤或藥品說明書或印刷 材料，該材料提供關於使用抗NGF抗體（例如pGi ι〇)治療 本文所述之NGF相關疾病或病狀的資訊。 套組或製品係指包含用以供投與治療NGF相關疾病或病 狀之本發％醫藥組合物之組分的包裝產品。套組較佳包含 今納套’卫、’且刀之盒子或容器，且亦可包括投與醫藥組合物 之方案及/或「藥品說明書」。該盒子或容器容納本發明 ^組分，其較佳含於塑膠、聚乙稀、聚丙烯、乙稀或丙烯 貝了器中。舉例而言’適合用於本發明醫藥組合物之容器包 括例如瓶、小瓶、注射器、筆等。 術語「藥品說明書」用於指通常包括在治療性產品之商 :、匕裝中的說明書’其含有關於此等治療性產品使用之適 心症法、劑量、投藥、帛忌症及/或警告的資訊。在 實施例中’本發明之藥品說明書告知將投與用於治療之 本,明醫藥組合物的讀者(包括個體，例如購買者)，本發 馐藥組合物指不用於治療如本文所述之ngf相 病狀。/ J ^ 。一實施例中，藥品說明書描述本發明醫藥組合物 之某些’α療益處，包括減輕疼痛。在另一實施例中，藥品 §明書可包括本發明醫藥組合物中之抗NGF之劑量之描 154450.doc -86 · 201201835 w —貫施例中，藥品說明書可包括本發明醫藥組合 物之=樂途輕及投藥頻率之描述。在另—實施例中，本發 :之藥。。說明書亦可為即將接受本發明醫藥組合物之個體 提=有關其用法之安全性及功效的資訊。舉例而言’在某 些貫施例中’套組進一步包含含有另一治療劑的第二醫藥 ^合物’其與關於投與該兩種治療NGF相關疾病或病狀之 藥劑：說明書一起包裝或共同宣傳。尤其適合使用本發明 套，、且療之疾病及病狀包括發炎性疼痛（特定言之骨關節 炎或類風濕性關節炎疼痛）、肌肉骨路疼痛（特定言之慢性 下责痛）、神經痛（特定言之糖尿病性神經病變）、癌症疼痛 及骨轉移疼痛、與子宮内膜異位及/或子宮纖維瘤相關之 疼痛及術後疼痛。 以下實例中描述本發明之其他實施例，該等實例不應理 解為進—步限制本發明。本中請案整篇引用之序列表 '圖 及所有參考文獻、專利及公開#利申請案之内容皆以引用 的方式明確併入本文中。 實例 以下提供之貫例詳述為了檢查溶液pH值、凍融、PG丨1 〇 蛋白質濃度及各種緩衝劑及賦形劑對PG丨i 〇之物理及化學 穩疋性之影響以開發適合PG11 〇調配物而進行的實驗。 以下分析方法用於所進行之實驗中以評估及監測PG11〇 於溶液中之穩定性。 一般方法 測試PG110調配物之一般品質參數（例如pH值）、物理穩 154450.doc •87- 201201835 定性參數（例如澄清度、顏色、粒子污染及純度）、及化學 穩定性、脫醢胺、氧化、一般化學穩定性及尺寸排阻層析 (SEC)之參數。例示性測試包括可見顆粒污染之測試、顯 微鏡可見粒子之光遮蔽粒子計數測試及純度測試，諸如尺 寸排阻HPLC及影像毛細管等電聚焦。 藉由目視檢查來確定顆粒污染（例如可見粒子）。根據美 國藥典（USP)藉由光遮蔽法來監測顯微鏡可見之粒子。此 外，藉由允許偵測片段及凝集體之SEC來評估調配物之物 理化學穩定性。 為了監測化學穩定性，進行尺寸排阻高壓液相層析（SE-HPLC)(用於偵測調配物試樣中之片段及水解）及icIEF(影像 毛細管等電聚焦）。 iclEF方法 使用具有PrinCE自動進樣器之iCE280成像cIEF系統 (Covergent Biosciences)進行ic/五/7分析。下表1列出用於 icIEF分析之試劑及材料。 表1 試劑 製造商 產品ID 1%甲基纖維素溶液 Convergent Bioscience 101876 0.5%甲基纖維素溶液 Convergent Bioscience 102505 載體兩性電解質3-1 〇(Pharmalyte 3-10) GE healthcare 17-0456-01 含0.08 Μ H3P04之0.1%曱基纖維素溶液 (陽極電解液） Convergent Bioscience 102506 含0.1 M NaOH之0.1 %曱基纖維素溶液(陰 極電解液） Convergent Bioscience 102506 pi 5.12標記 Convergent Bioscience 102224 pi 9.22標記 Convergent Bioscience 102231 根據製造商說明書操作iCE280儀器。各別小瓶用新鮮陽 154450.doc -88 - 201201835 極電解液及陰極電解液溶液填充，廢物小瓶用MilliQ HPLC水填充，且打開紫外燈。 藉由用MilliQ HPLC水10倍稀釋pi 5.12與pi 9.22標記兩 者且充分混合來製備pi標記。 藉由用MilliQ HPLC水稀釋PG110測試樣品至1 mg/mL， 合併經稀釋之抗體溶液與下表中之組分，且簡短渦旋來製 備供分析之PG110樣品。樣品隨後轉移至位於自動進樣器 管中的玻璃插入物（glass insert)中，且在置放入PrinCE自 動進樣器中之前經脫氣5分鐘。 表2 .組分 :體積㈣ 1%甲基纖維素 70 載體兩性電解質3-10 8 稀釋之pi 5.12標記 8 稀釋之pi 9.22標記 8 1 mg/mL樣品 50 水 56 尺寸排阻HPLC法 尺寸排阻HPLC用於測定PG110溶液之純度。如以下概述 進行檢測。 TSK凝膠前導管柱（目錄號08543，6.0 mm X 4.0 cm，7 #111)與丁810疑膠（}30008^/(目錄號08 541，7.8 111111父30(^11， 5 μιη)組合且在管柱壓力上限70巴之情況下操作。移動相 由 100 mM Na2HP04/200 mM Na2S04(pH 7.0)組成。此緩衝 液藉由以下產生：將49.68 g無水填酸氫二鈉及99.44 g無水 硫酸鈉溶解於約3300 mL Milli-Q水中，使用1 Μ磷酸調整 154450.doc -89- 201201835 pH值至7·0 ’用Milli-Q水增加緩衝液體積至3500 mL且經膜 過濾器過濾溶液。 實驗參數如下： • 0.3 mL/min流速 • 20 pL注射體積（相當於20 pg樣品） •室溫管柱 • 2至8°C自動進樣器溫度 • 50分鐘操作時間 •等濃度梯度 利用二極體陣列偵測器，使用214 nm波長（> 0.1分鐘峰 寬及8 nm帶寬）及360 nm參考波長（100 nm帶寬）進行偵測。 一式兩份注射測試樣品。藉由在排除緩衝液相關之峰之 情況下比較PG110抗體峰面積與樣品中所有214 nm吸收組 分之總面積來測定純度。使用此方法自完整PG11〇解析高 分子量凝集體及抗體片段。 光遮蔽 進行光遮蔽檢測以量測抗體溶液之不溶性顆粒含量。光 遮蔽量測設備（粒子計數器，注射器型，Klotz(Bad Liebenzell， 德國，S20037系列））配備有分層空氣通風櫥（Thermo Electron Corp·，Asheville，NC，型號ULT2586-9-A40)以使量測期間外 來粒子污染最小。如下進行光遮蔽分析》在分層空氣流動 條件下將3.5 mL樣品置放於5 mL圓底管中。根據製造商說 明書’在初始0.8 mL沖洗之後，以n=3之模式（每單次量測 0.8 mL)進行量測。 154450.doc •90- 201201835 差示掃描熱量測定（Dsc> 在DSC分析之前，使用Slide-A-Lyzer透析卡將蛋白質透 析於適合緩衝液系統中。亦使用此緩衝液系統（10 mM磷酸 鹽、10 mM檸檬酸鹽）作為dsc量測之參考/空白。抗體以1-2 mg/mL進行分析。使用具有毛細管池（Capillary Cell) (Microcal)DSC儀器之自動yp_DSc。在25°C -95°C之溫度範 圍内使用每分鐘pc之掃描速率來研究分子之展開 (unfolding)。其他量測參數為··裝配時期：μ秒；掃描前 等待：10分鐘；反饋模式：無。 目測檢查 藉由用肉眼仔細檢查樣品容器中之蛋白質溶液來進行蛋 白質樣品之目視檢查。通常，樣品係相對於白色及深色/ 黑色背景進行檢查以更容易鑑別可見顆粒物質、混濁、乳 光或蛋白質沈澱及可見粒子及聚結物。能夠經受目視檢查 之樣品谷器可不同且可包括諸如半透明及透明Falc〇n管、 玻璃小瓶、小體積小瓶/管及slide-a-lyzer透.析卡之容器。 實例1 .溶液pH值對重複凍/融研究（_8〇它/3〇°c )期間 PG110調配物之穩定性的影響 藉由在pH 4、pH 5、pH 6、pH 7及pH 8下使蛋白質溶液 在冷凍狀態與液體狀態之間循環多達4次來評估以丨 之蛋白質濃度含於10 mM擰檬酸鹽/1 〇 〇1]^磷酸鹽緩衝液中 之ΑΒΤ110抗體的凍融特性。藉助於溫度控制_8〇<5(：冷凍器 進行冷凍，且藉助於30t溫度控制水浴進行融化。在每次 凍/融（F/T)循環之後抽取（pu„ed)樣品且藉由sec進行分 154450.doc •91 - 201201835 析。對於此實驗，約20 mL各PG110溶液置放於30 mL PETG貯藏容器中。表3提供關於SEC之測試間隔及進行之 凍/融循環數之概述。表4顯示凍/融處理對剩餘PG110單體 之量及在此等pH值水準下調配之樣品中所形成片段及凝集 體之量的影響。 表3 :測試間隔：測試之冷凍（-80°C )及融化（30°C水浴）循 環之數目 測試間隔：；東/融循環之數目及測試之樣品要求 用於應激測試之儲存溫度 To 4 -80°C/30°C循環研究 1 1 表4 :如經由SEC測定之重複凍/融循環期間PG110之物理 穩定性 單鱧 康/融循環 pH 4 pH 5 pH 6 pH 7 pH 8 T0 98.53 98.46 98.39 98.11 98.00 T4 96.74 凝集體 96.46 97.81 97.91 97.55 康/融循環 pH 4 pH 5 pH 6 pH 7 pH 8 T0 1.31 1.41 1.47 1.74 1.85 T4 3.00 片段 3.34 2.00 1.94 2.24 凍/融循環 pH 4 pH 5 pH 6 pH 7 pH 8 T0 0.15 0.11 0.13 0.14 0.14 T4 0.24 0.18 0.18 0.13 0.19 結果顯示在重複凍/融（F/T)處理期間，PG110單體之量 略微減少，然而，該減少僅發生在較小程度上且95%以上 之完整單體在溶液中保持穩定。 進行光遮蔽實驗以測定在各凍/融步驟期間形成之顯微 鏡可見粒子之數目。表5提供關於光遮蔽之測試間隔及進 154450.doc •92- 201201835 行之珠/融循環數之概述。表6及表7分別顯示凍/融處理對 尺寸大於等於1微米/毫升及大於等於10微米之粒子之數目 的影響。 表5 :測試間隔：測試之冷凍（_80〇c )及融化（30〇c水浴）循 環之數目 測試間隔：殊/融循環之數目及測試之樣品要求 用於應激測試之儲存溫度 To 3 -80〇C/30〇C 循~ 2 2 表6 :如經由利用光遮蔽技術之顯微鏡可見粒子量測法測 定之重複凍/融循環期間PG110之物理穩定性。尺寸大於等 於1微米/毫升之粒子（資料表示兩次量測之平均值） '.' . • S.y λ :, 0 t/T ，綱賴？ ;偯之航: ,1 E/T < 值練差 2F/T 偏離平均 .也之偏差 3F/T 偏離平均 值之偏差 水/對照 15 3.75 30.41 7.5 19.37 4.79 29.37 9.79 pH 4 3605 140 8576 7716 10524 1432 45162 2117 pH 5 2150 1595 14793 1976 26302 8870 74402 9673 pH 6 207 4.58 53577 6670 30601 4386 75999 10809 pH 7 140 19 41932 4279 32737 50 54267 2828 pH 8 137 1.25 18862 2643 21725 1407 48981 623 表7 :如經由利用光遮蔽技術之顯微鏡可見粒子量測法測 定之重複凍/融循環期間PG110之物理穩定性。尺寸大於等 於10微米/毫升之粒子（資料表示兩次量測之平均值） i'. . f.· . • -,1., \〇ΜΆ :弟料:均， 應驗 V .. ' v . · -* ' ^ -2'F/T- 儀離平均 :值之偏暴 ;3Ψ/τ 傳雜平均 值之偏差 水/對照 0 0 2.08 2.08 1.25 0 0.79 0.79 pH 4 55.62 16 121 105 1375 147 3142 2789 pH 5 41 31 744 390 9293 5575 20507 14028 pH 6 5.62 0.62 993 253 3823 3.54 8039 1785 pH 7 4.58 0.41 494 49 3932 21 6517 1167 pH 8 4.79 1.45 301 244 4019 216 4063 735 154450.doc -93- 201201835 實例2 :溶液pH值對加速儲存期間PG110調配物之物理化 學穩定性之影響· 影響蛋白質液體及凍乾調配物之加速/長期儲存期間之 蛋白質穩定性的重要因素為調配物之pH值及儲存溫度。為 了評估此等因素之影響’蛋白質在高溫下在調配前及調配 計劃階段期間進行短期儲存以快速獲得對在較低溫度（例 如2-8°C )下長期儲存調配物之可行性的見地。 在溫度控制條件下在各種溫度下持續延長時期評估 PG110抗體於溶液中（2 mg/mL，1〇 mM檸檬酸鹽/1〇 mM磷 酸鹽緩衝液）之儲存穩定性。在確定之儲存時期之後，抽 取樣品且評估儲存時間及儲存溫度對pGU〇穩定性之影 響。 對於此pH值篩檢研究，以ρίί 3、pH 4、pH 5、pH 6、 pH 7及pH 8，以2 mg/mLSiO mM磷酸鹽，1〇 mM檸檬酸 鹽中調配PG110。 樣品填充入無菌小瓶（各約5〇〇 μί)中且在4〇t>c及5〇t>c下 在受控條件下（妹溫室中且不存在光）儲存。在預定時間 點根據表8中提供之樣品抽取流程來抽取所製備溶液之 樣品用於分析。數字指儲存/抽取之小瓶之數目。所得資 料提供於表9及表1〇中。 表8 ·樣品抽取流程 1'' - — 5°C TO —丨丨丨 丨丨丨 .. 7天 ------ 6個月 1 1 25〇C 1 - _ 40°C 1 — 50°C —1 154450.doc •94· 201201835 表9 :當在5〇°C下儲存時在各種pH值下調配之PG110樣品 在長期儲存之後的單體、凝集體及片段含量（SEC資料） 在50°C下儲存之PG110 A:;:;:./' /1 V·· ··0>...··.· '·. 举艟: • · - Λ ·—·.·(·" ' '.、. 時間 pH 3 pH 4 pH 5 pH 6 pH 7 pH 8 0 0 96.85 97 97.15 96.93 96.68 7天 0 9.65 85.54 94.84 93.96 92.2 - ... 剩德H 、 菜集癃 ··' •.‘ .... ',、 · 0 100.00 1.75 1.75 1.62 1.95 2.12 7天 100.00 86.22 12.41 3.06 4.00 5.19 ；.；· .V ·' ·-'·« · '-' ...·> - '.·； ' > Λ u’ ,·.、 片段 ί . ·· - ,. ' · . .·. .. .· ι 0 0.00 1.39 1.23 1.21 1.10 1.18 7天 0.00 4.12 2.03 2.08 2.03 2.60 表10:當在各種溫度下儲存時在各種pH值下調配之PG110 樣品在長期儲存之後的單體、凝集體及片段含量（SEC資料） i各種溫度下儲存之PG110 單薄 ： 時間 pH 3 pH 4 pH 5 pH 6 pH 7 pH 8 0 0 96.85 97 97.15 96.93 96.68 7 天，40〇C 0 81.64 96.64 96.84 96.1 95.49 6個月’ 25 C 0 92.89 94.81 94.32 95.14 89.12 6個月，5C 0 97.87 97.86 97.78 97.33 97.10 12個月，5°C 0 97.50 97.37 97.53 97.11 96.42 凝集; t:.〆… 0 100 1.75 1.75 1.62 1.95 2.12 7天，40°C 100 15.32 1.78 1.65 2.56 3.08 6個月’ 25 C 100 2.55 2.38 3.02 2.71 2.81 6個月’ 5 C 100 1.38 1.56 1.64 1.95 2 22 12個月，5°C 100 1.40 1.62 1.57 2.04 2 67 .’ Λ,._ ; .V . . '· ·.... .<· ：ry：}：m ·· . . ： . ·· / -* . · · - * . . L，+ ，. .， '--r \ 0 0 1.39 1.23 1.21 1.1 1 18 7天，40Ό 0 3.03 1.57 1.49 1.33 1.42 6個月’ 25 C 0 4.55 2.79 2.64 2.14 8 05 6個月’ 5 C 0 0.73 0.57 0.56 0.71 〇 66 12個月，5°C 0 1.08 1.00 0.88 0.83 0.90 亦評估以上提及之樣品之加速穩定性的成像毛細管等電 154450.doc •95- 201201835 聚焦資料。icIEF提供關於分子之化學穩定性之資訊。表 11及表12分別展示樣品抽取流程及資料。 表11 :樣品抽取流程 TO 21天 4個月 12個月 40°C 1 1 1 25〇C 1 5°C 1 1 表12:當在各種溫度下儲存時在各種pH值下調配之PG110 樣品在長期儲存之後的主要、酸性及鹼性物質含量 (iCIEF) 〇結果亦展示分子之相應pi TO 樣品 酸性 主要 鹼性 pi pH 4.0 33.27 55.38 11.35 7.01 pH 5.0 33.98 56.63 9.39 6.95 pH 6.0 32.57 57.13 10.3 7.01 pH 7.0 31.71 58.72 9.57 7.1 pH 8.0 31.98 59.03 8.99 7.12 40°C，21 天 酸性 主要 鹼性 pi pH 4.0 24.87 23.81 51.33 6.94 pH 5.0 46.38 44.1 9.53 6.94 pH 6.0 48.31 43.42 8.27 6.94 pH 7.0 56.99 37.06 5.95 6.94 pH 8.0 74.27 19.43 6.3 6.93 5t，4個月 酸性 主要 鹼性 pi pH 4.0 35.50 52.96 11.54 7.02 pH 5.0 33.43 56.73 9.84 7.01 pH 6.0 33.62 57.09 9.30 7.01 pH 7.0 34.56 56.49 8.95 7.01 pH 8.0 37.02 54.31 8.68 7.01 25°C，4個月 酸性 主要 鹼性 pi pH 4.0 52.31 29.10 18.59 7.01 pH 5.0 44.39 45.58 10.03 7.02 pH 6.0 43.76 47.81 8.43 7.01 pH 7.0 53.44 40.08 6.48 7.01 pH 8.0 70.80 26.00 3.20 6.99 154450.doc •96· 201201835 '>> ：': · ->.ϊ- ;·> ·' ' ''' ·>·'^ · -?···' y，^ .40¾洲月ΐ , .... : ί, ^ ·- Γ Λ·. I 鹼性 pH 4.0 19.02 9.62 7L36 6 QQ pH 5.0 74.96 7.37 17.68 7 〇1 pH 6.0 85.28 8.94 5.78 7〇1 pH 7.0 95.74 4.26 0.00 6 QR pH 8.0 99.07 0.36 0.57 L.. 'J.^O a go '、..f. '.含； ·> / ·,·%·/- · -.r ..-+Λ -、'4·... w紙，_月二: Λ·〇Χ· ' -<> . .. . ,-, ：s 5.. V. ·.· H 蟓性；::1. mi 主要 驗性 ---" . .. 1 — ητ pH 4.0 37.21 52.58 ίοΐΐ ~ 7 17 pH 5.0 35.45 55.20 9.35 7 16 pH 6.0 34.95 55.48 9.57 7 ΊΑ pH 7.0 36.76 54.55 8.69 L » · i^t 7 14 pH 8.0 42.54 49.29 8.17 ' 7 10 此等資料說明約pH 5-7之溶液pH值範圍最佳維持溫度增 加時PG110之穩定性。在40°C及50°C下儲存1週之後，在 pH 6下調配之樣品中之單體含量最高。 超出pH 5-7範圍之2 mg/mL PG110明顯誘導穩定性喪 失’由凝集體及片段含量增加反映。片段含量揭示在約6 之pH值下調配之樣品中的降解最少。icIEp«資料亦顯示約6 之pH值最佳維持PG110穩定性。此等資料表明在此實驗中 使用之特定應激條件下’約5.5-6.5之pH值最佳維持pg 11 〇 蛋白質穩定性。 實例3 :在30 mg/mL條件下調配物對重複凍/融研究（_8〇<»c/ 3〇°C)期間PG110調配物之穩定性之影響 藉由在pH 5.5下使原料藥在冷凍狀態與液體狀態之間循 環多達3次來評估以30 mg/mL之蛋白質濃度含於不同調配 物中之ABT110抗體的凍/融（F/T)特性。評估之調配物為： (1) 10 mM乙酸鹽+125 mM氣化鈉，pH 5.5 (2) 15 mM組胺酸，pH 5.5 (3) 15 mM組胺酸及 0.01%吐溫 8〇，pH 5.5

It助於溫度控制- 80C冷;東器進行冷;東，且藉助於30 °C 154450.doc ·9Ί· 201201835 溫度控制水浴進行融化。在每次凍/融循環之後抽取樣品 且藉由SEC及目視檢查進行分析。對於此實驗，約1 mL PG110溶液置放於貯藏容器中。表13提供關於SEC之測試 間隔及進行之凍/融循環數之概述。表14顯示凍/融處理對 剩餘PG110單體之量及在此等pH值水準下調配之樣品中所 形成片段及凝集體之量的影響。 表13 :測試間隔：測試之冷凍（-80°C)及融化（30°C水浴）循 環之數目 測試間隔：床/融循考 1之數目及測試之樣品要求 用於應激測試之儲存溫度 T〇 3 -80°C/30°C循環研究 1 1 表14 :如經由SEC測定之重複凍/融循環期間PG110之物理 穩定性 乙酸鹽+NaCl，pH5.5 單體 T0 1 F/T 2 F/T 3 F/T 98.76 98.76 98.76 98.83 凝集體 TO 1 F/T 2 F/T 3 F/T 1.23 1.23 1.23 1.16 片段 TO 1 F/T 2 F/T 3 F/T 0 0 0 0 5 mM組胺酸，pH 5.5 單體 το 1 F/T 2 F/T 3 F/T 98.82 98.82 98.83 98.85 凝集體 TO 1 F/T 2 F/T 3 F/T 1.17 1.17 1.16 1.14 片段 TO 1 F/T 2 F/T 3 F/T 0 0 0 0 15 mM組胺酸，0.01%吐溫80，pH 5.5 單體 TO 1 F/T 2 F/T 3 F/T 98.85 98.85 98.89 98.86 凝集體 TO 1 F/T 2 F/T 3 F/T 1.14 1.14 1.1 1.13 片段 TO 1 F/T 2 F/T 3 F/T 0 0 0 0 154450.doc •98· 201201835 各種調配物之目視檢查顯示含有組胺酸及吐溫80(聚山 梨醇酯80)之調配物甚至在3次F/T循環之後形成之粒子亦 最少，表明組胺酸與吐溫80兩者為極適合用於維持PG110 穩定性之賦形劑。其他兩種調配物顯示可見粒子之數目高 得多（每個容器20_3〇個可見粒子）。 實例4 :在1 mg/mL條件下調配參數對微量熱法研究期間 PG110調配物之穩定性（固有穩定性）的影響。 藉由使用微量熱法評估以1 mg/mL之蛋白質濃度含於不 同調配物中之ABT11 0抗體的熱力學穩定性（固有穩定性）。 以每分鐘1°C之掃描速率進行加熱。結果概述於表15中。 表15 :在不同調配條件下之溶融轉變溫度（melting transition temperature) ..： ： y，:.' Τπίΐ ； Tm2 Tm3 15 mM組胺酸，pH 6 58.59 67.25 75.02 15 mM填酸鹽，pH ό 68.3 74.68 77.22 15 mM丁二酸鹽，pH 6 * 68.4 74.62 77.09 10mM乙酸鹽 + 125mMNaCl，pH5.5 65.5 72.99 76.21 水，pH 6 69.82 75.58 77.81 10 Mm摔檬酸鹽+ 10 mM磷酸鹽+ 0.01%吐溫80，pH 6 67.8 73.96 76.69 10 Mm棒檬酸鹽+ 10 mM罐酸鹽+ 40 mg/mL甘露糖醇，pH 6 68.5 74.52 77.2 10 Mm#檬酸鹽+ 10 mM礙酸鹽+ 40 mg/mL山梨糖醇，pH 6 68.9 74.9 77.34 10 Mm檸檬酸鹽+ 10 mM麟酸鹽+ 40 mg/mL嚴糖，pH 6 68.75 74.73 77.41 10 Mm擰檬酸鹽+ 10 mM罐酸鹽+ 80 mg/mL海藻糖，pH 6 68.9 74.91 77.55 10 Mm擰檬酸鹽+ 10 mM磷酸鹽，pH 4 53.68 62.02 69.68 10 Mm檸檬酸鹽+ 10 mM磷酸鹽，pH 6 67.92 74.41 76.78 10 Mm檸檬酸鹽+ 10 mM磷酸鹽，pH 8 70.56 75.58 77.42 此等資料顯示PGU0之固有穩定性受調配參數，例如調 配pH值及賦形劑影響。 實例5:在100 mg/mL條件下濃度對重複凍/融研究(-80°C/30°C) 期間PG110調配物之穩定性的影響 154450.doc -99- 201201835 藉由在pH 6下使蛋白質溶液在冷凍狀態與液體狀態之間 循環多達4次來評估1〇〇 mg/mLi蛋白質濃度之ΑΒτιι〇抗 體的凍/融（F/T)特性。先前資料指示組胺酸為適用於穩定 PG110之緩衝劑/賦形劑，且因此在1〇〇 mg/mL蛋白質濃度 下測試組胺酸對PG110蛋白質穩定性之穩定影響。 藉助於溫度控制-80°C冷凍器進行冷凍，且藉助於3〇。〇 溫度控制水浴進行融化。在每次凍融循環之後抽取樣品且 藉由SEC及目視檢查進行分析。表16提供關於SEC之測試 間隔及進行之凍/融循環數之概述。表17顯示凍/融處理對 剩餘PG110單體之量及在此等pH值水準下調配之樣品中所 形成片段及凝集體之量的影響。 表16 :測試間隔：測試之冷凍（_8〇。〇及融化（30°C水浴）循 環之數目 測試間隔：；東/融循環之數目及測試之樣品要求 用於應激測試之儲存溫度 To 1 -80°C/30°C循環研究 T2 2 •8〇°C/3〇t燊環研究 T4 2 表17 :如經由SEC測定之以高蛋白質濃度（100 mg/mL)調 配於15 mM組胺酸（pH 6)中之PG110在重複凍/融循環期間 的物理穩定性 SEC資料 樣品 T0 2F/T 4F/T 單體 樣品1 98.0 97.9 97.9 樣品2 - 97.9 97.9 凝集體 樣品1 1.9 1.9 1.9 樣品2 - 1.9 1.9 片段 樣品1 0.1 0.2 0.2 樣品2 0.2 0.2 154450.doc -100- 201201835 資料顯示在100 mg/mL下，PG110調配物在重複凍/融處 理期間不經歷物理不穩定，因為單體、凝集體及片段含量 實際上在整個凍/融實驗期間保持不變，表明組胺酸為極 適合用於維持凍/融處理期間PG11〇穩定性之賦形劑。 實例6:如藉由目視檢查確定之緩衝劑及賦形劑對透析之 後PG110調配物内粒子之混濁度及形態的影響 關於PG110之較早經驗已顯示蛋白質傾向於具有物理不 穩定性，如由當儲存於1〇 乙酸鹽> 125 mM NaCl之溶 液（pH 5.5)中時嚴重可見粒子形成及沈澱現象所反映。此 實驗經設計以驗謹可見粒子形成是否為蛋白質本身所固有 或是否可鑑別維持物理穩定性且降低粒子形成易發性之調 配物。 因為以上提及之粒子可用肉眼觀測，所以仔細目視檢查 與不同賦形劑一起調配之PG11〇溶液為一種確定哪些調配 條件可加速或防止粒子形成之極具資訊性方式。 為了進行此實驗，藉由透析製備含有列於表18中之賦形 劑且濃度為1 mg/ml之PG110溶液。 表18 :經評估對溶液中PGU〇可見粒子形成之影響之緩衝 劑及賦形劑（通用緩衝劑或UB6為1〇 mM磷酸鹽，10 mM檸 檬酸鹽，pH 6) • 15 mM構酸鈉 • 15 mM擰檬酸鈉 • 15 mM丁 二酸鈉 • 15 mM精胺酸 154450.doc -101 · 201201835 • 15 mM組胺酸 • 自緩衝調配物 • 10 mM通用緩衝劑及40 mg/mL甘露糖醇 • 10 mM通用緩衝劑及40 mg/mL山梨糖醇 • 10 mM通用緩衝劑及80 mg/mL蔗糖 • 1 0 mM通用缓衝劑及80 mg/mL海藻糖 • 10 mM通用緩衝劑及0.01%(m/m)聚山梨醇酯80 • 10 mM 乙酸鹽，125 mM NaCl 大於1 mg/ml之PG110溶液插入具有i〇,〇〇〇 MWCO之 slide-a-lyzer透析卡中且相對於1 L目標緩衝液/賦形劑介質 透析1小時。此後’透析介質經新鮮介質置換且透析繼續 隔夜。在透析之後，藉由UV280量測溶液濃度《若濃度過 高’則溶液用相應緩衝液稀釋至目標濃度。若濃度過低， 則溶液用Amicon Ultra離心管濃縮至目標濃度。接著，檢 查溶液pH值。若pH值不在6之±0.1内，則用〇.1 μ NaOH或 0.1 M HC1調整pH值至彼目標。基於確定pH 6接近達成化 學及物理穩定性之最佳pH值的先前實驗選擇PH 6之條件。 此後’溶液穿過0.20 μηι過濾器進入清潔Petg容器中。蒸 餾水亦穿過相同過濾器進入PETG容器中以充當對照。 在此程序之後，目視檢查於PETG小瓶中之PGu〇溶液中 的粒子。相對於柔和螢光以及相對於黑色背景固定各瓶。 亦溫和振盪各瓶以促使粒子流動，從而致使目視檢查較容 易。各瓶接著在4°C下儲存隔夜。次日，各瓶自儲存庫移 除且如上進行檢查。 154450.doc •102· 201201835 在過濾之後即刻進行之檢查揭示在所有樣品中皆無可見 粒子。然而，在4°C下儲存隔夜之後，目視檢查揭示在許 多緩衝劑/賦形劑中形成粒子。研究結果概述於表19中。 表19 : PG110於所列緩衝劑/賦形劑中之溶液的目視檢查研 究結果。在過濾之後及在4°C下儲存隔夜之後檢查溶液。 UB6為10 mM檸檬酸鹽，10 mM磷酸鹽，pH 6 |银氍蜊結果 -：.:1-/. 水 無粒子 15 mM填酸鹽 粉塵樣纖維 15 mM擰檬酸鹽 粉塵樣纖維 15 mM丁二酸鹽 大量粉塵樣纖維 15mM組胺酸 痕量粉塵樣纖維 15mM精胺酸 痕量粉塵樣纖維 自緩衝/僅有水 極少痕量粉塵樣纖維 UB6 + 40 mg/ml山梨糖醇 粉塵樣纖維 UB6 + 40 mg/ml甘露糖醇 痕量粉塵樣纖維 UB6 + 80 mg/ml 嚴糖 粉塵樣纖維 UB6 + 80 mg/ml海藻糖 粉塵樣纖維 UB6 + 0.01% 吐溫 80 澄清，無粒子 10mM 乙酸鹽，125mMNaCl 大量粉塵樣纖維 資料指示吐溫80防止可見粒子形成，從而證明其用途。 在具有pH 6之缓衝能力之既定賦形劑（檸檬酸鹽、磷酸 鹽、丁二酸鹽、組胺酸）中，資料指示組胺酸最佳防止可 見粒子形成。 實例7 :緩衝劑及調配賦形劑對重複凍/融循環（-80°C/30°C) 期間PG110調配物之穩定性的影響 此實例描述經進行以評估在重複冷凍（-80°C溫度控制冷 凍器）及融化（30°C溫度控制循環水浴）時，PG110調配物溶 液（2 mg/mL且pH 6)中各種缓衝劑及賦形劑之穩定化潛力

S 154450.doc •103· 201201835 之實驗的資料。（基於確定pH 6接近達成化學及物理穩定 性之最佳pH值的先前實驗選擇pH 6之條件）。測試之緩衝 劑及賦形劑列於表20中。 表20 :經評估對PG110進行凍融時之DS降解之影響的緩衝 劑及賦形劑（通用緩衝劑或UB6為10 mM磷酸鹽，1〇 mM檸 檬酸鹽，pH 6) • 1 5 mM峨酸納 • 1 5 mM梅檬酸鈉 • 1 5 mM丁 二酸鈉 • 1 5 mM精胺酸 • 15 mM組胺酸 •低離子調配物（亦即調配於水中） • 1 〇 mM通用緩衝劑及40 mg/mL甘露糖醇 • 10 mM通用緩衝劑及40 mg/mL山梨糠醇 • 1 〇 mM通用緩衝劑及80 mg/mL簾糖 • 10mM通用緩衝劑及80mg/mL海藻糖 • 10 mM通用緩衝劑及0.01%(m/m)聚山梨醇酯80 • 10 mM 乙酸鹽，125 mM NaCl 在TO、T1(在1個凍/融步驟之後）、T2及T3時抽取樣品。 凍融處理步驟涵蓋在-80°C下儲存樣品至少4小時及隨後於 30°C循環水浴中融化樣品。為了分析凍融樣品，5 mL圓底 管用3.5 mL抗體調配物填充（使用已用0.2 μιη經過濾之WFI 沖洗之5 mL吸液管尖端）且經受光遮蔽量測。此外，抽取 0.1 mL各樣品用於SEC分析，且抽取0.2 mL樣品且儲存 154450.doc • 104- 201201835 在-80°C下（保留樣品以用於視情況選用之額外分析表徵）。 表21 :凍融實驗之樣品抽取流程 TO ' Τ4 -80〇C/30eC 小瓶1 小瓶2 小瓶1 小瓶2 小瓶1 小瓶2 小瓶1 小瓶2 小瓶1 小瓶2 *小瓶表示填充有樣品溶液之30 mL PETG貯藏容器 緩衝劑及賦形劑對PG110之凍融處理期間尺寸μιη及 210 μιη之顯微鏡可見粒子形成之影響分別展示於表22及表 23中。SEC資料於表24、25及26中給出。 在一些調配物’諸如含有磷酸鹽、擰檬酸鹽、山梨糠 醇、甘露糖醇及蔗糖之調配物中，μ^/mL之粒子之數目 在第一凍融循環之後增加’僅在第二循環之後減少。在其 他調配物’諸如含有組胺酸、精胺酸或僅有水之調配物 中，之1 μιη/rnL之粒子之數目在每次凍融循環之後皆增加。 對於含有磷酸鹽、檸檬酸鹽、丁二酸鹽、組胺酸、精胺酸 及僅有水之調配物而言，21〇 pm/mL之粒子在每次凍融循 環之後皆增加。對於含有山梨糖醇、甘露糖醇或蔗糖之調 配物而言，210 pm/mL之粒子在第一凍融循環之後增加， 但隨隨後循環減少。在一個凍融循環之後，含有山梨糖醇 或甘露糖醇之調配物之之1 pm/mL之粒子數目（至少 > 約 200,000)以及>10 μιη/ιηί之粒子數目（平均約25〇〇〇)最大。 然而，在第三凍融循環之後，所有調配物皆揭示y μιηΛηί 之粒子每毫升小於100,000。 發現聚山梨醇酯80具有關於維持PG110穩定性之正性影 響，因為其防止PG110之凍融處理期間形成顯微鏡可見粒 154450.doc •105· 201201835 子。此歸因於聚山梨醇酯80能夠防止冰-水界面處抗體之 變性。發現包括甘露糖醇、山梨糖醇及蔗糖之糖/糖醇誘 導早期凍融循環後形成顯微鏡可見粒子。此等觀測結果由 SEC資料支持，該等資料顯示對於含有甘露糖醇及山梨糖 醇之調配物而言，單體％顯著損失及凝集體％相應增加。 (對於所有其他賦形劑，SEC資料在穩定性方面未產生差 別）。 表22 :在所列凍融循環之後量測之21 μιη/mL之粒子數 目。F/T0在冰點以下。UB6為10 mM磷酸鹽，10 mM檸檬 酸鹽，pH 6。水為無蛋白質之純水 F/T0 F/T1 F/T2 F/T3 >=1 μηι之數目 >=1 μπι 之 3 文目 >=1 μηι之數目 >=1 μη®之數目 緩衝劑 平均值 標準 偏差 平均值 標準 偏差 平均值 標準 偏差 平均值 標準 偏差 磷酸鹽 536.67 94.58 17274.58 6372.51 9415.42 2353.78 9014.58 512.36 檸檬酸鹽 723.75 174.13 40620.83 795.79 27191.25 10421.87 10470.21 7553.08 丁二酸鹽 1147.29 571.58 20720.21 2263.33 19527.29 8585.45 9504.17 1297.25 組胺酸 250.21 42.43 1647.08 617.25 8963.33 4741.45 21077.50 12656.92 精胺酸 690.63 557.44 2407.29 122.57 5858.54 2044.13 8314.17 6856.28 自身/水 410.21 23.57 1622.50 811.11 8722.50 4459.19 21048.75 9602.80 UB6+山梨 糖醇 1049.58 421.61 260052.29 31476.86 74827.29 21027.59 15613.54 10.02 UB6+甘露 糖醇 1113.33 260.75 209047.71 40784.74 78368.54 9137.59 26725.21 4711.10 UB6+蔗糖 1330.00 169.41 43803.33 970.80 11592.08 408.65 7183.33 1182.34 UB6+海藻 糖 1320.63 306.41 9674.17 1445.15 15516.25 1373.26 9259.17 7457.91 UB6+吐溫 80 11.04 7.66 671.67 707.40 185.83 219.50 231.46 139.65 10 mM乙酸 鹽/125 mM NaCl 954.58 231.28 17396.67 617.83 14698.13 1752.45 10400.00 4.42 水 18.96 14.79 39.38 49.38 -106· 154450.doc 201201835 表23 :在所列凍融循環之後量測之>10 μηι/mL之粒子數 目。F/T0在冰點以下。UB6為10 mM磷酸鹽，10 mM檸檬 酸鹽，pH 6。水為無蛋白質之純水，低離子意謂蛋白質調 配於水中而不添加其他賦形劑 '、‘ '卜、 • ' C ,、、 《、V、'、/,:,· 'c 、 '、〆， F/T0 F/ΤΓ . Ι7Γ2 F/T3 >=^ί〇μπι之數目 >^=10 μπι<；^ 0 - >=10μιη之數目 >?=10 μήι 之數目 標举. ：mJ&" • .·' V '·'".. ^ ^ .*5. * y 標率： 標準 缓衝劑 平均值 傅差:, 平均值1 偏差 卒珣银 偏差 平均值 偏差 磷酸鹽 18.54 6.19 248.33 55.68 574.79 435.17 1224.38 408.94 檸檬酸鹽 26.67 12.37 533.96 383.61 968.75 192.10 899.17 217.14 丁二酸鹽 138.33 128.46 359.38 149.67 908.75 207.42 1920.21 121.98 組胺酸 36.25 22.98 73.33 58.04 4456.88 3766.82 6125.21 3906.76 精胺酸 167.29 213.61 59.79 43.02 1113.33 500.28 2978.54 3415.92 低離子 22.71 5.01 18.54 12.37 1871.88 2062.10 3028.33 2162.86 UB6+ 山梨糖醇 47.50 16.50 33930.83 12385.27 8329.79 2310.77 3302.50 1157.00 UB6+ 甘露糖醇 41.25 4.12 16219.17 18940.15 7868.13 1498.18 1774.17 969.03 UB6+ 蔗糖 43.33 1.77 3577.29 2615.12 2069.58 991.72 1427.92 1182.34 UB6+ 海藻糖 27.71 4.42 173.75 82.79 1866.04 27.99 379.17 310.24 UB6+ 吐溫80 5.42 3.54 370.63 497.92 11.04 5.01 17.50 18.56 10 mM 乙 酸鹽/125 mMNaCl 124.79 78.08 241.67 16.20 584.38 93.40 930.21 390.68 水 2.08 1.04 0.00 1.04 表24 :在凍/融實驗期間在儲存之後調配於各種緩衝劑及 賦形劑中之PG110樣品的單體百分比（SEC資料）(UB6為10 mM檸檬酸鹽，10 mM磷酸鹽，pH: 6 ; 「低離子」為蛋白 質僅於水中） •107. 154450.doc 201201835 F/TO F/T1 F/T2 F/T3 標準 標準 標準 標準 緩衝劑 平均值 偏差 平均值 偏差 平均值 偏差 平均值 偏差 磷酸鹽 98.34 0.04 98.27 0.02 98.43 0.05 98.35 0 06 檸檬酸鹽 98.42 0.03 98.04 0.36 98.43 0.05 98.33 V/ < W 〇 1 1 丁二酸鹽 98.37 0.00 98.29 0.02 98.36 0.06 98 32 〇 ns 組胺酸 98.38 0.04 98.30 0.00 98.48 0.00 98 40 η 精胺酸 98.40 0.02 98.28 0.01 98.52 0.05 98.44 〇 〇4 低離子 98.47 0.02 98.37 r 0.01 98.47 0.02 98.35 〇 〇2 UB6+山梨糖醇 98.40 0.04 97.87 0.05 98.04 0.04 98 05 〇 m UB6+甘露糖醇 98.41 0.00 97.34 0.07 97.47 0.02 97.43 0 09 UB6+蔗糖 98.40 0.02 98.35 0.01 98.60 0.01 98.57 η 〇ι UB6+海藻糖 98.37 0.06 98.36 0.01 98.58 0.01 98.58 0 04 UB6+吐溫80 98.23 0.04 98.26 0.04 98.55 0.02 98.57 〇 〇2 10mM乙酸鹽/ 125 mMNaCl 98.37 0.02 98.21 0.04 98.31 0.04 98.24 表25 :在凍/融實驗期間在儲存之後調配於各種緩衝劑及 賦形劑中之PG110樣品的凝集體百分比（sec資料）(UB6為 10 Π1Μ檸檬酸鹽’ 10 mM磷酸鹽，pH 6 ;低離子意謂蛋白 質調配於水中而不添加其他賦形劑） F/TO F/T1 F/T2 F/T3 緩衝劑 平均值 平均 偏差 平均值 平均 偏差 平均值 平均 偏差 平均值 平均 偏差 磷酸鹽 1.49 0.02 1.56 0.02 1.36 0.03 1.41 〇 〇5 檸樣酸鹽 1.44 0.03 1.81 0.34 1.41 0.05 1.48 〇 0Q 丁二酸鹽 1.48 0.01 1.55 0.02 1.42 0.06 1.43 0 07 組胺酸 1.46 0.03 1.52 0.00 1.30 0.01 1.32 0.04 精胺酸 1.44 0.02 1.54 0.00 1.27 0.04 1.29 0.03 低離子 1.37 0.00 1.45 0.01 1.29 0.02 136 〇 οι UB6+山梨糖醇 1.47 0.04 1.98 0.04 1.77 0.04 1.74 0.03 〇 〇0 UB6+甘露糖醇 1.45 0.00 2.50 0.05 2.33 0.03 2.37 UB6+蔗糖 1.46 0.01 1.48 0.01 1.23 0.01 1.23 Π Π0 UB6+海藻糖 1.48 0.06 1.48 0.01 1.22 0.01 1.22 Λ 〇7 UB6+吐溫80 1.61 0.04 1.56 0.04 1.24 0.00 1.21 〇 〇1 10mM乙酸鹽/ 125 mMNaCl 1.46 0.02 1.60 0.04 1.44 0.04 1.49 表26 :在凍/融實驗期間在儲存之後調配於各種緩衝劑及 賦形劑中之PG110樣品的片段百分比（sec資料）(UB6為10 -108- 154450.doc 201201835 mM擰檬酸鹽，10 mM磷酸鹽，pH 6;低離子意謂蛋白質 調配於水中而不添加其他賦形劑） · | λ ： .....'乂Ά ν· λ» “,ί.-：· ' .y j>- <-,< '! . λ ' *r . F/Tl Ε/ΐ'2-: * ：·. F/T3 緩餐相、卜、：W i'>y -U \<\ _构值净 ，偏差^ 、-V ; 分蟎值. 準： .偏差： -.V ' .. ^ 平均值 :標率' 偏it · V . - · 年均值 標準 偏差 磷酸鹽 0.17 0.02 0.18 0.00 0.20 0 03 0 24 0 01 檸檬酸鹽 0.14 0.00 0.15 0.02 0.17 0 00 〇 20 0.01 丁二酸鹽 0.15 0.00 0.16 0.00 0.22 〇 〇〇 0 25 0 01 組胺酸 0.15 0.02 0.18 0.00 0.21 0 00 〇 28 0.01 精胺酸 0.15 0.00 0.18 0.00 0.20 0 01 0 27 0.01 低離子 0.16 0.02 0.18 0.00 0.24 0 01 0.28 0.01 UB6+山梨糖醇 0.14 0.00 0.15 0.00 0.19 0 00 0 21 〇.〇〇 UB6+甘露糖醇 0.13 0.01 0.16 0.01 0.20 0 01 0 20 〇.〇〇 UB6+蔗糖 0.15 0.01 0.16 0.00 0.18 0 00 0 20 0.01 UB6+海藻糖 0.14 0.00 0.16 0.01 0.19 0 00 0.20 0.01 UB6+吐溫80 0.16 0.00 0.18 0.00 0.21 0 01 0 23 0.01 10mM乙酸鹽/ 125mMNaCl 0.17 0.00 0.19 0.00 0.25 0.00 0.27 實例8 .緩衝劑及賦形劑對加速穩定性測試期間pG11〇調 配物之物理化學穩定性的影響 較早貫例已論述影響長期儲存期間pG丨丨〇調配物之穩定 性之因素，包括pH值及儲存溫度。除此等外在因素外，亦 必須評估調配物成分自身對儲存期間蛋白質原料藥穩定性 之影響。為了進行此實驗，將蛋白質原料藥在高溫下在調 配刚及調配計劃階段期間進行短期健存，以便快速瞭解在 較低溫度（在大多數情況下2_8°C)下長期儲存調配物之可行 性。 PG110抗體在溶液中之儲存穩定性係於不同緩衝劑及賦 形劑中在pH 6下在溫度控制條件下在各種溫度下持續延長 時期加以評估。基於確定pH 6接近達成化學及物理穩定性 之最佳pH值的先前實驗選擇pH 6之條件。在確定之儲存時 154450.doc -109- 201201835 期之後’抽取樣品且藉由SEC及iCIEF評估儲存時間及儲存 溫度對PG110穩定性之影響。 在此研究中，PG110以2 mg/ml調配於表27中所列之各種 緩衝劑及賦形劑中〇 表27 :經測試對在高溫下進行儲存之pgi 1〇之物理及化學 穩定性的影響之緩衝劑及賦形劑（通用緩衝劑為1〇 mM檸 檬酸鹽，10 mM麟酸鹽，pH 6) • 15 mM磷酸鈉 • 15 mM檸檬酸鈉 • 15 mM丁 二酸鈉 φ 15 mM乙酸納 • 15 mM精胺酸 • 15 mM組胺酸 *低離子調配物 • mM通用緩衝劑及40 mg/mL甘露糖醇 • 1 0 mM通用緩衝劑及40 mg/mL山梨糖醇 • 10 mM通用緩衝劑及80 mg/mL蔗糖 • l〇mM通用緩衝劑及80mg/mL海藻糖 • 10 mM通用緩衝劑及2.5%(m/m)甘油 • 10 mM通用緩衝劑及15 mM硫酸銨 • 10 mM通用緩衝劑及20 mM氯化鈉 • 10 mM通用緩衝劑及200 mM氣化鈉 • 10 mM通用緩衝劑及〇.〇l%(m/m)聚山梨醇酯80 • 10 mM通用緩衝劑及〇.〇l%(m/m)聚山梨醇酯20 154450.doc •110· 201201835 • 1 0 mM通用緩衝劑及0 · 1 %(m/m)泊洛沙姆1 8 8 接著在各種溫度下在受控條件下（在恆溫室中且不存在 光）儲存樣品。在預定時間點，根據分別用於SEC及iCIEF 之表28及29中提供之樣品抽取流程抽取所製備溶液之樣品 用於分析。數字指針對各緩衝劑或賦形劑條件之經儲存/ 抽取之小瓶的數目。資料提供於表30、3 1及32中。 表28 :樣品抽取流程 i-i'. Η 1二 .：·. ,> ", Λ,'' V. ' ·· 'ΤπΐΛ' ·： ί · ν-'>· 6個月 12個月 5°C 1 25〇C 1 40°C 1 1 50°C 1 表29 :樣品抽取流程 TO 4個月 > 12個月 5°C 1 1 25〇C 1 40°C 1 1 表30 :在規定溫度及時間下儲存之後調配於各種緩衝劑及 賦形劑中之PG110樣品的單體百分比（SEC資料）（UB6為10 mM檸檬酸鹽，10 mM磷酸鹽，pH 6 ;低離子意謂蛋白質 調配於水中而不添加其他賦形劑）

S _ :.:¾賴;親謂纖 :緩衝劑 '厂 "το;;:：'ϊ"Ι. Τ7天… 50°C ... ί Ν' ' 6娜， 25°C 12個 月 ’5°C 15 mM填酸鹽 98.38 93.84 97.92 94.73 93.84 15 mM乙酸鹽 98.45 94.19 97.92 95.41 97.46 15 mM檸檬酸鹽 98.35 93.92 98.03 95.35 97.49 15 mM丁二酸鹽 98.44 94.08 98.08 95.08 97.4 15 mM組胺酸 98.58 94.25 98.2 95.29 97.59 15mM精胺酸 98.5 93.17 98.16 96.37 97.79 低離子 98.85 95.88 98.69 96.37 98.02 154450.doc -111- 201201835 UB6 + 4%山梨糖醇 98.16 94.86 98.11 95.5 97.4 UB6 + 4%甘露糖醇 98.05 94.91 98.05 95.34 97.45 UB6 + 8%蔗糖 98.52 95.08 98.09 95.77 97.5 UB6 + 8%海藻糖 98.45 94.96 98.06 95.33 97.3 UB6 + 0.01% 吐溫 80 98.43 93.98 97.88 92.78 96.76 UB6 + 2.5% 甘油 98.53 97.74 95.2 97.24 UB6 + 15 mM (NH4)2S04 98.35 94.79 98.07 95.17 97.26 UB6 + 20mMNaCl 98.39 94.42 98 95.26 97.26 UB6 + 200 mM NaCl 98.4 94.58 98.12 95.04 97.04 UB6 + 0.01% 吐溫 20 98.42 94.08 97.84 94.66 97.23 UB6 + 0.1%泊洛沙姆 98.47 94.54 97.98 95.07 97.16 表31 :在規定溫度及時間下儲存之後調配於各種緩衝劑及 賦形劑中之PG110樣品的凝集體百分比（SEC資料）(UB6為 10 mM檸檬酸鹽，10 mM磷酸鹽，pH 6 ;低離子意謂蛋白 質調配於水中而不添加其他賦形劑） 緩衝劑 TO T7天， 50°C T7天， 40dC 6個月， 25〇C 12個 月， 15mM磷酸鹽 1.42 3.45 1.87 2.77 5.22 15mM乙酸鹽 1.34 3.47 1.88 2.32 1.65 15 mM檸檬酸鹽 1.48 3.47 1.78 2.34 1.6 15 mM丁二酸鹽 1.35 3.31 1.73 2.61 1.66 15mM組胺酸 1.22 3.51 1.6 2.29 1.5 15mM精胺酸 1.3 4.54 1.63 1.73 1.39 低離子 0.95 1.53 1.07 1.61 1.01 UB6 + 4%山梨糖醇 1.67 3.13 1.71 2.16 1.63 UB6 + 4%甘露糖醇 1.77 2.91 1.76 2.28 1.63 UB6 + 8%蔗糖 1.31 2.76 1.73 1.98 1.59 UB6 + 8%海藻糖 1.37 3 1.75 2.4 1.65 UB6 + 0.01% 吐溫 80 1.38 3.55 1.93 4.75 1.88 UB6 + 2.5% 甘油 1.29 2.04 2.42 1.69 UB6 + 15 mM (NH4)2S04 1.49 3.22 1.74 2.44 1.68 UB6 + 20 mM NaCl 1.43 3.33 1.81 2.26 1.63 UB6 + 200 mM NaCl 1.42 3.28 1.69 2.47 1.93 UB6 + 0.01% 吐溫 20 1.39 3.81 1.95 2.78 1.82 UB6 + 0.1%泊洛沙姆 1.34 3.32 1.83 2.49 1.76 154450.doc -112- 201201835 表32:在規定溫度及時間下儲存之後調配於各種緩衝劑及 賦形劑中之PG110樣品的片段百分比（SEC資料）（UB6為10 mM擰檬酸鹽，10 mM磷酸鹽，pH 6 ;低離子意謂蛋白質 調配於水中而不添加其他賦形劑） ;'，厶 rs::.上 緩衝劑 & ; : '< ·； ： ·； > ' . .·.. T7 天， .了 ： 50°C T7夭， 40ΐ 旮個月..， 25〇C ί2個 月，5°C 15 mM填酸鹽 0.20 2.71 0.2 2.49 0.93 15 mM乙酸鹽 0.21 2.34 0.20 2.25 0.88 15 mM檸檬酸鹽 0.17 2.61 0.19 2.29 0.9 15 mM丁二酸鹽 0.21 2.61 0.19 2.29 0.93 15 mM組胺酸 0.19 2.25 0.19 2.41 0.90 15 mM精胺酸 0.20 2.28 0.21 1.89 0.81 低離子 0.20 2.59 0.24 2.52 0.95 UB6 + 4%山梨糖醇 0.17 2.01 0.18 2.33 0.96 UB6 + 4%甘露糖醇 0.18 2.18 0.19 2.36 0.91 UB6 + 8%蔗糖 0.17 2.16 0.19 2.23 0.89 UB6 + 8%海藻糖 0.18 2.04 0.19 2.25 1.04 UB6 + 0.01% 吐溫 80 0.19 2.46 0.20 2.45 1.34 UB6 + 2.5% 甘油 0.18 0.21 2.36 1.06 UB6 + 15 mM (NH4)2S04 0.17 2 0.19 2.37 1.05 UB6 + 20mMNaCl 0.17 2.25 0.19 2.46 1.09 UB6 + 200mMNaCl 0.18 2.15 0.19 2.47 1.02 UB6 + 0.01% 吐溫 20 0.19 2.11 0.20 2.54 0.94 UB6 + 0.1 %泊洛沙姆 0.18 2.14 0.19 2.42 1.07 154450.doc -113- 201201835 表33:在規定溫度及時間儲存之後調配於各種緩衝劑及賦 形劑中之PG110樣品之各種物質的百分比（iCIEF資 料）(UB6為10 mM檸檬酸鹽，10 mM磷酸鹽，pH 6 ;低離 子意謂蛋白質調配於水中而不添加其他賦形劑） 4個月，各種溫度 面積％ 緩衝劑 酸性 主要 鹼性 Pi 5°C 33.74 57.22 9.05 6.94 15mM磷酸鹽 25〇C 43.27 48.69 8.04 6.93 40°C 86.30 8.26 5.44 6.91 33.59 57.03 9.39 6.93 15mM乙酸鹽 25〇C 43.25 48.71 8.04 6.93 40°C 86.02 10.89 3.09 6.91 5°C 33.05 57.54 9.41 6.96 15mM檸檬酸鹽 25 °C 41.94 50.06 8.00 6.94 40°C 85.38 11.27 3.35 6.93 5°C 32.62 58.43 8.95 6.96 15 mM丁二酸鹽 25〇C 41.29 50.55 8.16 6.96 40°C 83.17 13.98 2.85 6.94 5°C 32.79 57.99 9.22 6.99 15 mM組胺酸 25〇C 37.97 52.85 9.18 6.99 40°C 70.99 21.43 7.59 6.98 5°C 31.47 55.43 13.11 6.82 15mM精胺酸 25〇C 39.09 49.00 11.91 6.80 40°C 92.62 5.66 1.72 6.85 5°C 33.48 57.45 9.07 7.00 低離子 25 °C 39.22 51.41 9.37 7.00 40°C 74.02 19.15 6.83 6.99 5°C 32.63 58.32 9.05 6.92 UB6 + 4%山梨糖醇 25〇C 42.57 49.25 8.18 6.92 40°C 93.73 2.96 3.31 6.92 5°C 33.92 56.96 9.13 6.93 UB6 + 4%甘露糖醇 25〇C 46.64 45.87 7.49 6.92 40°C 88.15 9.80 2.05 6.89 5°C 33.19 57.64 9.17 6.90 UB6 + 8%蔗糖 25〇C 43.62 48.52 7.86 6.88 40°C 87.02 11.04 1.94 6.85 5°C 34.44 56.30 9.26 6.94 UB6 + 8%海藻糖 25 °C 48.41 44.27 7.33 6.93 40°C 89.82 6.74 3.44 6.89 154450.doc -114- 201201835 1^6 + 0.01%吐溫80 5°C 36.81 54.24 8.95 6.94 25〇C 90.56 7.36 2.08 6.93 40°C 100.00 0.00 0.00 ΝΑ UB6 + 2.5% 甘油 5°C 33.21 57.40 9.39 6.95 25〇C 41.22 50.31 8.47 6.94 40°C 81.69 13.58 4.73 6.92 UB6 + 15 mM (NH4)2S04 5°C 33.10 57.65 9.25 6.93 25〇C 42.47 49.07 8.46 6.92 40°C 84.46 12.13 3.41 6.89 UB6 + 20 mM NaCl 5°C 41.19 48.50 10.31 6.81 25〇C 47.99 42.16 9.85 6.79 40°C 84.56 12.51 2.93 6.77 UB6 + 200mMNaCl 5°C 33.13 58.03 8.84 6.92 25 °C 43.32 48.12 8.56 6.92 40°C 84.26 10.55 5.19 6.91 UB6 + 0.01% 吐溫 20 5°C 33.71 57.18 9.11 6.93 25 °C 43.57 48.18 8.25 6.93 40°C 84.79 12.37 2.84 6.90 UB6 + 0.1%泊洛沙姆 34.02 56.77 9.21 6.93 25 °C 42.82 49.11 8.07 6.93 4〇’。 84.80 12.90 2.30 6.90 12個月，5ΐ , * - , · N 緩衝劑 .-... 酸性 主要. 鹼性 pi值 15mM磷酸鹽 5°C 38.194 53.23 8.576 7.12 15 mM乙酸鹽 5°C 38.226 53.21 8.564 7.09 15 mM檸檬酸鹽 5°C 37.955 53.81 8.235 7.14 15 mM丁二酸鹽 5°C 37.633 53.88 8.487 7.16 15 mM組胺酸 5°C 36.612 54.71 8.678 7.13 15mM精胺酸 5°C 36.923 52.25 10.827 6.99 低離子 5°C 36.949 54.71 8.341 7.23 UB6 + 4%山梨糖醇 5°C 38.342 53.06 8.598 7.11 UB6 + 4%甘露糖醇 5t 39.883 51.58 8.537 7.11 UB6 + 8%蔗糖 5°C 38.023 53.11 8.867 7.09 UB6 + 8%海藻糖 5°C 38.92 52.75 8.33 7.11 UB6 + 0.01% 吐溫 80 5°C 48.371 44.8 6.829 7.12 UB6 + 2.5% 甘油 5°C 37.078 54.34 8.582 7.12 UB6 + 15 mM (NH4)2S04 5°C 38.121 53.54 8.339 7.08 UB6 + 20mMNaCl 5°C 42.232 49.73 8.038 6.9 UB6 +200 mM NaCl 5T： 38.253 53.45 8.297 7.14 UB6 + 0.01% 吐溫 20 5°C 37.619 53.97 8.411 7.14 UB6 + 0.1%泊洛沙姆 5°C 38.145 53.13 8.725 7.15 PGl 10穩定性隨儲存溫度增加而減小，此為所有蛋白質 154450.doc •115· 201201835 之預期特性。然而，迄今收集之資料指示使用磷酸鹽、精 胺酸或甘油調配P G110將導致潛在變性。在與甘油一起 5〇°C儲存7天之後，經由SEC偵測不到蛋白質，表明所有 PG110皆已經歷物理不穩定及不溶性凝集體形成，從而躲 避SEC/UV偵測。 實例9 :缓衝劑及調配賦形劑對在_80。(：下儲存之pGu❶調 配物之穩定性的影響 先前實例之研究結果致使斷定15 mM組胺酸及〇.01%吐 溫80之調配物最佳用於防止原料藥之液體調配物中形成可 見粒子（實例6)。如實例7中詳述，吐溫80亦防止由康融應 激誘導之顯微鏡可見粒子形成《加速穩定性測試（實例8)亦 禮定兩種賦形劑不導致不可接受的凝集或斷裂程度。

馨於此’接著關心的是賦形劑是否導致原料藥在儲存 在-80 C時去穩定。為了進行此測試，製備pG11〇以1 mg/ml及1〇 mg/mi含於原始調配物（1〇 乙酸鹽，125 mM

NaCl)、15 mM組胺酸（pH 6)及 15 mM組胺酸（pH 6)+ 0.01% 吐溫80中之150 μΐ溶液且在-sot下儲存於冷凍小瓶中。在 第5天’各樣品之小瓶自儲存庫移除且藉由SEC對物理化 學降解進行定量。在第1〇天’移除剩餘各樣品之小瓶且以 同樣方式進行分析。表34、35及3 6含有此等實驗之結果。 資料顯示對於含有組胺酸或組胺酸+吐溫8〇之調配物， 單體°/。在第〇天至第5天增加且保持在彼含量至少直至第1〇 天。相反’以10 mg/ml含於1〇 mM乙酸鹽及125 mM NaCl 中之PG110顯示單體％在第〇天至第5天至第1〇天穩定減 154450.doc •116· 201201835 小，此對應於凝集體％增加。總之，資料指示組胺酸+吐 溫80調配物不使原料藥在儲存在-80°c下時去穩定。 表34 :在-80°C下儲存之後調配於各種緩衝劑及賦形劑中 之PG110樣品的單體百分比（SEC資料） ' 緩衝劑 ； ,..ν'.V. . . .- . · ；' V -. ' S,\ .-s\.· ,ί ' i· ^^ .. --Λ . \ Vv . ·, TO T5天，-如r Τ1〇 天，-80°c 平马值 平刼值 標準偏差 平均值 標準偏差 1 mg/ml，10 mM乙酸鹽，125 mMNaCl 98.24 98.31 0.01 98.38 0.02 10mg/ml，lOmM乙酸鹽，125mMNaCl 98.24 97.99 0.01 97.77 0.02 1 mg/ml，組胺酸，pH 6 98.22 98.38 0.07 98.42 0.03 10 mg/ml，組胺酸，pH 6 98.22 98.47 0.01 98.44 0.02 1 mg/ml，組胺酸(pH 6)+0.01%吐溫80 98.16 98.43 0.01 98.38 0.02 10 mg/m卜組胺酸(pH 6)+0.010%吐溫80 98.16 98.45 0.01 98.43 0.01 表35 :在-80°C下儲存之後調配於各種緩衝劑及賦形劑中 之PG110樣品的凝集體百分比（SEC資料） . .. <·. , :〜.· · .... ... ' - .... Λ.. . ' ' · 〆-> 緩衝劑 ： ·.：：, TO T5天、-80t： ; T10天，-80°c 平均偯 平均值 標準偏差 平均值 標準偏差 1 mg/ml，10 mM乙酸鹽，125 mMNaCl 1.58 1.50 0.01 1.33 0.00 lOmg/ml，lOmM乙酸鹽，125mMNaCl 1.58 1.81 0.01 1.92 0.02 1 mg/ml，組胺酸，pH 6 1.59 1.42 0.06 1.29 0.01 10 mg/ml，組胺酸，pH 6 1.59 1.33 0.00 1.28 0.01 1 mg/ml，組胺酸(pH 6)+0.01%吐溫80 1.65 1.35 0.01 1.31 0.00 10 mg/ml，組胺酸(pH 6)+0.010%吐溫80 1.65 1.33 0.00 1.24 0.00 表36 :在-80°C下儲存之後調配於各種緩衝劑及賦形劑中 之PG110樣品的片段百分比（SEC資料） .......... ... ::破衝劑 - V ί'· ·> '"：'··· ί ·Τ ' ·’： ？ . 、‘ b ’-ϋ. : . ·, TT i:.: T5^ -80¾ T10天，-80°c 平均植 平均值: 輕準偏差 平均值 標準偏差： 1 mg/ml，10 mM乙酸鹽，125 mMNaCl 0.18 0.19 0.00 0.29 0.02 10 mg/m卜 10 mM乙酸鹽，125 mMNaCl 0.18 0.20 0.00 0.31 0.00 1 mg/ml，組胺酸，pH 6 0.19 0.19 0.01 0.30 0.02 lOmg/ml，組胺酸，pH6 0.19 0.19 0.01 0.29 0.01 111^〇11，組胺酸(卩116)+0.01%吐溫80 0.19 0.22 0.00 0.32 0.02 10 mg/ml，組胺酸(pH 6)+0.010%口土溫80 0.19 0.21 0.01 0.34 0.01 目視檢查資料亦顯示含有組胺酸之調配物甚至在100 -117· 154450.doc 201201835 mg/ml下即使在4次凍/融循環之後亦不含有可見粒子形成 物’進一步表明組胺酸為極適合用於維持pG丨丨〇穩定性之 賦形劑。 實例10 :凍融、攪拌及加速穩定性測試對以各種濃度含於 各種調配物中之PG110之穩定性的影響 在各種應激實驗中評估賦形劑對PG11 〇之影響： 1) 重複凍融處理（-80°C/30°C水浴）； 2) 授拌以有效施加擾拌應激且增加空氣-液體界面以誘 導物理不穩定性及PG110降解（6R玻璃小瓶，環境溫 度’約9 mm經Teflon塗佈之攪拌棒，550 rpm，搜拌 多達48小時）； 3) 加速穩定性測試：各種樣品在2_5。(3、25°C/60%相對 濕度及40°C /60%相對濕度下進行即時及加速穩定性 測試’且藉由SEC/UV監測蛋白質濃度及穩定性賦形 劑對原始PG110單體之含量的影響。 測試以下PG 110調配物及調配組合物： 調配物 1 : 52 mg/mL PG110，pH 6.0 ; 2.33 mg/mL組胺酸； 5.0 mg/mL蔗糖； 20.0mg/mL甘露糖醇；及 0_10 mg/mL聚山梨醇酯8〇。 調配物 2 : 52 mg/mL PG110，pH 6.0 ; 2.33 mg/mL組胺酸； 46 mg/mL蔗糖；及 154450.doc -118- 201201835 0.1 0 mg/mL聚山梨醇自旨80。 調配物 3 : 52 mg/mL PG110，pH6.0 ; 2.3 3 mg/mL組胺酸； 46 mg/mL海藻糖；及 0.1 0 mg/mL聚山梨醇醋80。 調配物 4 : 20 mg/mL PG110，pH 6.0 ; 2.3 3 mg/mL組胺酸； 5.0 mg/mL蔗糖； 20.0 mg/mL甘露糖醇；及 0.10 mg/mL聚山梨醇醋80。 調配物 5 : 20 mg/mL PG110，pH 6.0 ; 2.3 3 mg/mL組胺酸； 46 mg/mL蔬糖；及 0.1 0 mg/mL聚山梨醇S旨80。 調配物 6 : 20 mg/mL PG110，pH 6.0 ; 2.33 mg/mL組胺酸； 46 mg/mL海藻糖；及 0.10 mg/mL聚山梨醇自旨80。 在分別2次及4次凍/融循環之後蛋白質濃度為52 mg/mL 及20 mg/mL之ABT110抗體的凍融穩定性如下所示。 表37 :如藉由SEC/UV測定之單體含量 :二..V ?.聲ά 今: a纖難4; ί糊麵 纖調编购 罐調·: 5蜣調S&物 6號調缸物 〇次;東/融 98.20 98.19 98.19 97.94 98.07 98.33 2次;東/融 98.22 98.21 98.20 98.07 98.19 98.31 4次;東/融 98.19 98.18 98.17 98.10 98.22 98.30 154450.doc -119- 201201835 前述資料說明蔗糖、海藻糖及甘露糖醇良好適合於維持 重複凍/融應激期間PG110之物理穩定性。在整個應激實驗 期間，實際上無關於原始PG110單體含量之降解被偵測 到。 在分別為24小時及48小時之攪拌之後蛋白質濃度為52 mg/mL及20 mg/mL之ABT110抗體的攪拌應激穩定性如下 所示。 表38 :如藉由SEC/UV測定之單體含量 1號調配物 2號調配物 3號調配物 4號調配物 5號調配物 6號調配物 0小時 98.20 98.19 98.18 97.94 98.07 98.33 24小時 98.24 98.22 98.24 98.00 98.15 98.38 48小時 98.20 98.21 98.20 97.96 98.08 98.36 前述資料說明蔗糖、海藻糖及甘露糖醇良好適合於維持 積極搜拌應激力（extensive stir stress)期間PG110之物理穩 定性。在整個應激實驗期間，實際上無關於原始PG1 10單 體含量之降解被偵測到。 在5°C下14天之後及在50°C下14天之後，蛋白質濃度為 52 mg/mL及20 mg/mL之ABT110抗體之加速降解動力學如 下戶斤示。 表39 :如藉由SEC/UV測定之單體含量 1號調配物 2號調配物 3號調配物 4號調配物 5號調配物 6號調配物 0小時 98.20 98.19 98.19 97.94 98.07 98.33 14天，5°C 98.19 98.11 98.21 97.92 97.97 98.30 14天，50°C 85.16 85.09 85.29 84.82 85.04 84.82

前述資料說明蔗糖、海藻糖及甘露糖醇良好適合於維持 較長期儲存期間PG110之物理穩定性。甚至當暴露於50°C 154450.doc -120- 201201835 中14天時，亦有超過80%之原始單體存在於所有測試樣品 〇 實例11 :在各種條件下儲存之PG110凍乾粉末之長期穩定性 進一步研究蔗糖及甘露糖醇作為PG110凍乾及儲存期間 之穩定劑之適合性。將用於注射溶液之PG110凍乾粉末之 兩種調配物置放在較長期儲存條件（2-8°C)、25°C/60%相對 濕度之加速儲存條件、及40°C /75%相對濕度及50°C之應激 條件下。此等實驗室規模藥品批次經產生且自130 L規模 之根據標準方法製造之原料藥進行凍乾，例如如表40中所 示。 表40:用於調配物1及調配物2之凍乾條件 :程式我 夂存放金戾【士權f ϋ瘴力[牽巴]Γ : ::時間t小時:分鐘】 裝料 +20°C 大氣壓 --- 冷凍 +20°C 至 0°C 大氣壓 0:20 o°c 大氣壓 2:10 0°C 至-45°C 大氣壓 2:30 -45〇C 大氣壓. 3:00 一次乾燥 -45〇C 0.66 ±0.01 1:00 -45°C 至-25°C 0.66 ±0.01 1:00 -25。。 0.66 ±0.01 90:00 二次乾燥 -25〇C 0.36 土 0.01 01:00 -25°C 至+25°C 0.36 ±0.01 04:30 +25 °C 0.36 ±0.01 08:00 保持步驟 +25°C 至+5°C 0.36 ±0.01 0:30 +5°C 0.36 ±0.01 --- 預通氣及封閉 +5°C 約500 通氣 +5°C 大氣壓 -一 對於測試，在室溫下將調配物樣品再懸浮於無菌蒸餾水 中〇 154450.doc -121 · 201201835 調配物1 : 20 mg/mL PG110 > pH 5.5 2.33 mg/mL組胺酸 70 mg/mL蔗糖 0.1 mg/mL聚山梨醇酯80 調配物2 : 20 mg/mL PG110，pH 5.5 2.33 mg/mL組胺酸 10 mg/mL 蔗糖 30 mg/mL甘露糖醇 0.1 mg/mL聚山梨醇酯80 在各種時間點執行與原料藥之品質、生物活性及純度相 關之測試方法以評估各批次中PG110之穩定性概況。所用 分析方法包括： •外觀（目視） •粒子（目視） •顯微鏡可見粒子（光遮蔽）

• pH •成像毛細管等電聚焦（icIEF)

• SDS PAGE(還原性及非還原性） •尺寸排阻HPLC •產品特異性抗原結合檢測 •產品特異性功能生物測定 使用染料滲透法進行容器密封完整性測試，其中藥品小 瓶於亞甲基藍溶液中暴露於真空中，且接著目視檢查藍色 染色。根據標準方法，按照USP測定水含量。所得第^比 次及第2批次樣品之穩定性資料提供於表41_48中。 154450.doc -122· 201201835 表41 :在2-8°C下儲存之PG110凍乾調配物1之穩定性 測試 f '· · ·，.、， ν'. '··+>. •兹:走k k: 森.鲁 特徵.、.：' 初始 命月 3個月 6個月 尺寸排阻 HPLC(SE- HPLC) HPLC 凝集體[%] 1.6 1.7 1.6 1.6 片段[%] <0.1 <0.1 <0.1 <0.1 單體[%] 98.3 98.3 98.3 98.4 毛細管等電聚 焦(icIEF) 等電聚焦 酸性區域總和[%] 33.7 33.3 32.8 32.5 主峰[%] 56.2 57.1 57.3 58.9 鹼性區域總和[%] 10.1 9.7 9.9 8.6 SDS凝膠電泳 (還原性SDS-PAGE) SDS-Page(R) 純度[%] 99.6 99.5 99.6 99.7 SDS凝膠電泳 (非還原性 SDS-PAGE) SDS- Page(NR) 純度[%] 92.3 92.2 91.8 1 90.6 存在於97 kDa處之亮帶[%] 0.3 0.3 0.3 0.4 顆粒污染-顯微 鏡可見粒子 顯微鏡可見 粒子(LO) 210 μιη之粒子[/容器] 30 7 19 14 225 μηι之粒子[/容器] 1 0 1 2 表42 :在25°C/60%相對濕度下儲存之PG110凍乾調配物夏 之穩定性 踯試 尺寸排阻

HPLC HPLC(SE-HPLC) 毛細管等電聚焦 (icIEF) SDS凝膠電泳(還 原性 SDS-PAGE；) SDS凝膠電泳 (非還原性SDS-PAGE) 顆粒污染-顯微鏡 可見粒子 等電聚焦 SDS-Page(R) SDS-Page(NR)

顯微鏡可見粒 子(LO) 210 μηι之粒子[/容器] >25 μπι之粒子[/容器]

154450.doc -123- 201201835 表43 :在40°C /75%相對濕度下儲存之PG110凍乾調配物1 之穩定性 初始 1個月 3個月 6個月 測試 程序 特徵 尺寸排阻 HPLC(SE-HPLC) HPLC 凝集體『％1 1.6 1.7 1.7 1.7 片段 <0.1 <0.1 <0.1 <0.1 單體[%] 98.3 98.3 98.2 98.3 毛細管等電聚焦 (icIEF) 等電聚焦 酸性區域總和[%] … 33.7 33.6 33.1 32.5 主峰[%] 56.2 56.4 55.9 55.1 鹼性區域總和丨0/0] 10.1 10.0 11.0 12.3 SDS凝膠電泳(還 原性 SDS-PAGE) SDS-Page(R) 純度『％] 99.6 99.6 99.5 99.7 SDS凝膠電泳(非 還原性SDS-PAGE) SDS- Page(NR) 純度Γ%1 92.3 92.6 91.4 90.9 存在於97kDa處之亮 帶Γ%1 0.3 0.3 0.2 0.5 顆粒污染-顯微鏡 可見粒子 顯微鏡可見 粒子(LO) >10 μιη之粒子[/容器] 30 6 35 12 >25 μηι之敕子丨/容器] 1 0 1 1 表44:在SOt：下儲存之PG110凉·乾調配物1之穩定性 1個月 測試 程序 特徵 初始 尺寸排阻 HPLC(SE-HPLC) HPLC 凝集體丨％1 1.6 1.7 片段[%] <0.1 <0.1 單體『％1 98.3 98.2 毛細管等電聚焦 (icIEF) 等電聚焦 酸性區域總和[%] 33.7 33.8 主峰[%] 56.2 53.5 鹼性區域總和[%] 10.1 12.7 SDS凝膠電泳(還 原性 SDS-PAGE) SDS-Page(R) 純度[%] 99.6 99.6 SDS凝膠電泳(非 還原性SDS-PAGE) SDS-Page(NR) 純度[叫 92.3 92.6 存在於97 kDa處之亮帶[°/〇] - • 顆粒污染-顯微鏡 可見粒子 顯微鏡可見粒 210μιη之粒子[/容器] 30 1 子(LO) 225 μιη之粒子[/容器] 1 0 154450.doc -124- 201201835 表45 :在2-8°C下儲存之PG110凍乾調配物2之穩定性 . . ·.· 、、..'v . ..··、 ,· · . .、 《· ·. II/·· . · ' ；. r ' .； 初如:: 1個月 3钿月 6個月 特·斤: ' 尺寸排阻 HPLC(SE- HPLC) HPLC 凝集體[%] 1.9 1.9 2 1.8 片段[%] <0.1 <0.1 <0.1 <0.1 單體[%] 98.1 98 98 98.2 毛細管等電聚 焦(icIEF) 等電聚焦 酸性區域總和[%] 34.2 34 34 31.8 主峰[%] 56.4 56.5 56.5 58.5 鹼性區域總和[%] 9.5 9.5 9.5 9.6 SDS凝膠電泳 (還原性SDS-PAGE) SDS- Page(R) 純度[%] 99.6 99.4 99.5 99.5 SDS凝膠電泳 (非還原性 SDS-PAGE) SDS- Page(NR) 純度[%] 91.9 9.7 90.7 90.2 存在於97 kDa處之亮帶[°/〇] 0.3 0.2 0.3 0.1 顆粒污染-顯微 鏡可見粒子 顯微鏡可見 粒子(LO) 之10 μιη之粒子[/容器] 43 6 19 25 225 μιη之粒子[/容器] 1 0 0 0 表46 :在25°C/60°/。相對濕度下儲存之PG110凍乾調配物2 之穩定性 ' ..一' ,ί ν- A r'·'：·' .· ~ ' : 乂'.厂 '初始 3個月 6個月 ':：·^-：Γ·] 程序” 特徵1 尺寸排阻 HPLC(SE-HPLC) HPLC 凝集體[%] 1.9 2.2 2.4 片段[%] <0.1 <0.1 <0.1 單體[%] 98.1 97.8 97.6 毛細管等電聚焦 (icIEF) 等電聚焦 酸性區域總和[%] 34.2 34.1 32.6 主峰[%] 56.4 55.7 56.5 鹼性區域總和[%] 9.5 10.2 10.9 SDS凝膠電泳(還 原性 SDS-PAGE) SDS- Page(R) 純度[%] 99.6 99.5 99.4 SDS凝膠電泳(非 還原性SDS-PAGE) SDS- Page(NR) 純度[%] 91.9 91.9] 90.1 存在於97 kDa處之亮帶[%] 0.3 0.3 0.3 顆粒污染·顯微鏡 可見粒子 顯微鏡可見 粒子(LO) >10 μηι之粒子[/容器] 43 28 26 之25 μηι之粒子[/容器] 1 0 1 154450.doc • 125- 201201835 表47 :在40°C/75%相對濕度下儲存之PG110凍乾調配物2 之穩定性 初始 1個月 3個月 6個月 測試 程序 特徵 尺寸排阻 HPLC(SE- HPLC) HPLC 凝集體[%] 1.9 3.1 5.2 8.4 片段[%] <0.1 <0.1 0.1 0.1 單體[%] 98.1 96.9 94.8 91.6 毛細管等電聚 焦(icIEF) 等電聚焦 酸性區域總和[%] 34.2 34.6 33.6 39 主峰[%] 56.4 47.8 33.8 21.4 鹼性區域總和[%] 9.5 17.6 32.6 39.6 SDS凝膠電泳 (還原性SDS-PAGE) SDS- Page(R) 純度[%] 99.6 99.4 99.1 98.5 SDS凝膠電泳 (非還原性 SDS-PAGE) SDS- Page(NR) 純度[%] 91.9 92.4 89.3 84.5 存在於97kDa處之亮帶[%] 0.3 0.2 0.2 0.2 顆粒污染-顯微 鏡可見粒子 顯微鏡可見 粒子(LO) >10 μηι之粒子[/容器] 43 4 42 18 ^25 μπι之粒子[/容器] 1 0 0 0 表48 :在50。(：下儲存之PG110凍乾調配物2之穩定性 初始 1個月 測試 程序 特徵 尺寸排阻 HPLC(SE-HPLC) HPLC 凝集體[%] 1.9 6.2 片段[%] <0.1 <0.1 單體[%] 98.1 93.8 毛細管等電聚焦 (icIEF) 等電聚焦 酸性區域總和『％] 34.2 33.7 主峰[%] 56.4 33.5 鹼性區域總和『％1 9.5 32.8 SDS凝膠電泳(還原 性 SDS-PAGE) SDS- Page(R) 純度[%] SDS凝膠電泳(非還 原性 SDS-PAGE) SDS- Page(NR) 純度[%] 91.9 93 存在於97 kDa處之亮帶[%] 0.3 0.2 顆粒污染-顯微鏡 可見粒子 顯微鏡可見 粒子(LO) >10 μιη之粒子[/容器] [43 2 >25 μηι之粒子[/容器] 1 0 154450.doc •126- 201201835 關於在2至8°c之預定儲耗件健存之調配物i及調配物2 的樣品、以及在m：及㈣下儲存6個月之樣品的所有資 料皆滿足接受準則，且未觀測到在此等溫度下測試之任何 穩定性參數賴著變化。在更極端應激條件⑼。⑺下儲存！ • 個月導致純度下降，此僅對於icIEF而言為明顯的。 ' 調配物1與調配物2在40它下歷經6個月之比較指示僅與 庶糖一起調配之PG1 10抗體證明比與蔗糖與甘露糖醇之組 合一起調配之抗體具有更高程度的穩定性（圖丨）。此外，驚 人地觀測到含有莫耳比大於14〇〇(例如調配物丨_蛋白質：糖= 1:1515，調配物2-蛋白質：糖+多元醇比=1436)之糖及/或 多元醇：蛋白質之此等調配物中的顯微鏡可見粒子及可見 粒子之形成不隨時間變化，甚至在4〇〇c下進行之加速穩定 性研究中亦如此。 以引用方式之併入 本發明以全文引用的方式併入蛋白質調配領域中熟知之 技術。此等技術包括（但不限於）描述於以下出版物中之技 術.Ausubel 專人（編），Current Protocols in Molecular Biology，John Wiley & Sons，NY (1993) ; Ausubel，F. M.等 人編，Short Protocols In Molecular Biology (第 4版 1999) * John Wiley & Sons, NY. (ISBN 0-471-32938-X) ； Controlled Drug Bioavailability Drug Product Design and Performance, Smolen及 Ball (編），Wiley，New York (1984) ; Giege，R.及 Ducruix, A. Barrett, Crystallization of Nucleic Acids and Proteins, a Practical Approach,第 2 版，第 20 1 -16 頁， 154450.doc -127- 201201835

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Goodson, Medical Applications of Controlled Release,第 2 卷，第 115-138 頁（1984) ; Hammerling，等人，Monoclonal

Antibodies and T-Cell Hybridomas 563-681 (Elsevier, N.Y., 1981; Harlow等人，Antibodies: A Laboratory Manual, (Cold Spring Harbor Laboratory Press,第 2版 1988) ; Kabat等人，

Sequences of Proteins of Immunological Interest (National Institutes of Health，Bethesda，Md. (1987)及（1991) ; Kabat， E. A.，等人（1991) Sequences of Proteins of Immunological Interest,第 5版，U.S. Department of Health and Human Services，NIH公開案第 91-3242號；Kontermann及 Dubel編， Antibody Engineering (2001) Springer-Verlag. New York. 第 790 頁（ISBN 3-540-41354-5); Kriegler，Gene Transfer and Expression, A Laboratory Manual, Stockton Press, NY (1990) ; Lu及 Weiner 編，Cloning and Expression Vectors for Gene Function Analysis (2001) BioTechniques Press. Westborough, Mass.第 298 頁（ISBN 1-88 1299-21-X)； Medical Applications of Controlled Release, Langer及 Wise (編），CRC Pres·，Boca Raton，Fla. (1974) ; Old，R. W·及 S. B. Primrose, Principles of Gene Manipulation: An Introduction To Genetic Engineering (第 3版 1985) Blackwell Scientific Publications, Boston. Studies in Microbiology;第 2卷：第 409頁（ISBN 0-632-01318-4); Sambrook，J.等人編，Molecular Cloning: A Laboratory Manual (第 2版 1989) Cold Spring 154450.doc -128- 201201835

Harbor Laboratory Press, NY.第 1-3 卷（ISBN 0-87969-309-6) ; Sustained and Controlled Release Drug Delivery Systems, J_ R. Robinson編，Marcel Dekker，Inc” New York, 1978 ； Winnacker, E. L. From Genes To Clones: Introduction To Gene Technology (1987) VCH Publishers, N.Y.(由 Horst Ibelgaufts翻譯），第 634 頁（ISBN 0-89573-614-4)。 等效物 在不脫離本發明之精神或本質特徵下，本發明可以其他 特定形式實施。因此，前述實施例在所有態樣中均應視為 說明而非限制本文所述之本發明。因此，本發明範疇係由 隨附申請專利範圍而非以上描述及所有變化所指示。 序列表之概述 SEQ ID NO: 1(PG110 VH)

EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFSLTNNNVNWVRQAPGKGLEWVGGVWAGGATDYNSALKSRFTISR

DNSKNTAYLQMNSLRAEDXAVYYCARDGGYSSSTLYAMDAWGQGTLVTVSS SEQ ID NO: 2(PG110 VL)

DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASEDIYNALAWYOQKPGKAPKLLIYNTDTLHTGVPSRFSGSGSGTDY

TLTISSLQPEDFATYFCQHYFHYPRTFGQGTKVEIK SEQ ID NO: 3(PG110 VH CDR 1)

GFSLTNNNVN SEQ ID NO: 4(PG110 VH CDR 2)

GVWAGGATDYNSALKS SEQ ID NO: 5(PG110 VH CDR 3)

DGGYSSSTLYAMDA SEQ ID NO: 6(PG110 VL CDR 1)

RASEDIYNALA s 154450.doc -129- 201201835 SEQ ID NO: 7(PG110 VL CDR 2)

NTDTLHT SEQ ID NO: 8(PG110 VL CDR 3)

QHYFHYPRT SEQ ID NO: 9(野生型人類IgG4恆定區）

ASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSWTV

PSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPSCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCV

WDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRWSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIE

KTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSF

FLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGK SEQ ID NO: 10(絲胺酸突變成脯胺酸之人類IgG4恒定 區）

ASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSWTV

PSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCV

WDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVflNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVi,HQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIE

KTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSF

FLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGK SEQ ID NO: 11(PG110完全重鏈核苷酸序列，包括信號 序列）

ATGGAATGGAGCTGGGTGTTCCTGTTCTTCCTGAGCGTGACCACCGGCGTGCACAGCGAGGTGC

AGCTGGTCGAGAGCGGCGGAGGGCTGGTGCAGCCAGGCGGCAGCCTGAGGCTGTCCTGCGCCGC

CAGCGGCTTCAGCCTGACCAACAACAACGTGAACTGGGTGCGGCAGGCCCCAGGCAAGGGCCTG

GAATGGGTGGGCGGCGTGTGGGCCGGGGGAGCCACCGACTACAACAGCGCCCTGAAGAGCAGGT

TCACCATCAGCAGGGACAACAGCAAGAACACCGCCTACCTGCAGATGAACAGCCTGAGGGCCGA

GGACACCGCCGTGTACTACTGCGCCAGGGACGGCGGCTACAGCAGCAGCACCCTGTACGCCATG

GACGCCTGGGGCCAGGGCACCCTGGTGACCGXGAGCAGCGCCAGCACCAAGGGCCCCAGCGTGT

TCCCCCTGGCCCCCTGCAGCAGAAGCACCAGCGAGAGCACAGCCGCCCTGGGCTGCCTGGTGAA

GGACTACTTCCCCGAGCCCGTGACCGTGTCCTGGAACAGCGGAGCCCTGACCAGCGGGGTGCAC

ACCTTCCCCGCCGTGCTGCAGAGCAGCGGCCTGTACAGCCTGAGCAGCGTGGTGACAGTGCCCA

GCAGCAGCCTGGGCACCAAGACCTACACCTGCAACGTGGACCACAAGCCCAGCAACACCAAGGT

GGACAAGAGGGTGGAGAGCAAGTACGGCCCACCCTGCCCCCCATGCCCAGCCCCCGAGTTCCTG

GGCGGACCCTCCGTGTTTCTGTTCCCCCCCAAGCCCAAGGACACCCTGATGATCAGCAGGACCC

CCGAGGTGACCTGCGTGGTGGTGGACGTGAGCCAGGAAGATCCAGAGGTCCAGTTCAACTGGTA

CGTGGACGGCGTGGAGGTGCACAACGCCAAGACCAAGCCCAGAGAGGAACAGTTTAACAGCACC

TACAGGGTGGTGTCCGTGCTGACCGTGCTGCACCAGGACTGGCTGAACGGCAAGGAGTACAAGT

GCAAGGTCTCCAACAAGGGCCTGCCCAGCTCCATCGAGAAAACCATCAGCAAGGCCAAGGGCCA

GCCACGGGAGCCCCAGGTGTACACCCTGCCACCCTCCCAGGAAGAGATGACCAAGAACCAGGTG

TCCCTGACCTGTCTGGTGAAGGGCTTCTACCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAACG

GCCAGCCCGAGAACAACTACAAGACCACCCCCCCAGTGCTGGACAGCGACGGCAGCTTCTTCCT

GTACAGCAGGCTGACCGTGGACAAGTCCAGGTGGCAGGAAGGCAACGTCTTTAGCTGCAGCGTG

ATGCACGAGGCCCTGCACAACCACTACACCCAGAAGAGCCTGTCCCTGAGCCTGGGCAAGTGA SEQ ID NO: 12(PG110完全重鏈胺基酸序列，包括信號 序列） -130- 154450.doc 201201835

MEWSWVFLFFLSVTXGVHSEVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFSLTNNNVNWVRQAPGKGLEWVGGVW

AGGATDYNSALKSRFTISRDNSKNTAYLQMNSLRAEDTAVYYCARDGGYSSSTLYAMDAWGQGTLVTVSSA

STKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSWTVP

SSSLGTKTYXCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCW

VDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRWSVLXVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEK

TISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFF

LYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGK SEQ ID NO: 13(PG110成熟重鏈胺基酸序列，排除信號 序列）

EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFSLTNNNVNWVRQAPGKGLEWVGGVWAGGATDYNSALKSRFTISR

DNSKNTAYLQMNSLRAEDTAVYYCARDGGYSSSTLYAMDAWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSE

STAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSWTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSN

TKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVWDVSQEDPEVQFNWYVDGV

EVHNAKTKPREEQFNSTYRWSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPP

SQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDXAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFS

CSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGK SEQ ID NO: 14(PG110完全輕鏈核苷酸序列，包括信號 序列）

ATGAGCGTGCCCACCCAGGTGCTGGGCCTGCTGCTGCTGTGGCTGACCGACGCCAGATGCGACA

TCCAGATGACCCAGAGCCCCAGCAGCCTGAGCGCCAGCGTGGGCGACAGGGTGACCATCACCTG

CAGGGCCAGCGAGGACATCTACAACGCCCTGGCCTGGTATCAGCAGAAGCCCGGCAAGGCCCCC

AAGCTGCTGATCTACAACACCGACACCCTGCACACCGGCGTGCCCAGCAGGTTCAGCGGCAGCG

GCTCCGGCACCGACTACACCCTGACCATCAGCAGCCTGCAGCCCGAGGACTTCGCCACCTACTT

TTGCCAGCACTACTTCCACTACCCCAGGACCTTCGGCCAGGGCACCAAGGTGGAGATCAAGAGG

ACCGTGGCTGCCCCCAGCGTGTTCATCTTCCCCCCCAGCGACGAGCAGCTGAAGAGCGGCACCG

CCTCCGTGGTGTGCCTGCTGAACAACTTCTACCCCCGGGAGGCCAAGGTGCAGTGGAAGGTGGA

CAACGCCCTGCAGAGCGGCAACAGCCAGGAAAGCGTCACCGAGCAGGACAGCAAGGACTCCACC

TACAGCCTGAGCAGCACCCTGACCCTGAGCAAGGCCGACTACGAGAAGCACAAGGTGTACGCCT

GCGAGGTGACCCACCAGGGCCTGTCCAGCCCCGTGACCAAGAGCTTCAACAGGGGCGAGTGCTG

A SEQ ID NO: 15(PG110完全輕鏈胺基酸序列，包括信號 序列）

MSVPTQVLGLLLLWLTDARCDIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASEDIYNALAWYQQKPGKAPKLLIYNT DTLHTGVPSRFSGSGSGTDYTLTISSLQPEDFATYFCQHYFHYPRTFGQGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSD EQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYA C.E VT HQGLS S PVTKS FNRGEC SEQ ID NO: 16(PG110成熟輕鏈胺基酸序列，排除信號 序列）

DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASEDIYNALAWYQQKPGKA.PKLLIYNTDTLHTGVPSRFSGSGSGTDY

TLTISSLQPEDFATYFCQHYFHYPRTFGQGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASWCLLNNFYPR

EAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTXiTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGE

C 【圖式簡單說明】 圖1為調配物1與調配物2隨時間之穩定性的圖示比較。 154450.doc • 131·

S 201201835 序列表 <110> <120〉抗-神經生長因子抗體組合物

<130〉PNJ-026PC <140〉 100109071 <141〉 2011-03-16 <150> 61/314,984 <151〉 2010-03-17 <160> 16 <170> Patentln version 3.5 <210〉 1 <211> 122 <212〉 PRT <213〉人工序列 <220〉 <221〉 source <223〉/註解=「人工序列之描述：合成多肽」 <400> 1

Glu Val Gin Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gin Pro Gly Gly 15 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Ser Leu Thr Asn Asn 20 25 30

Asn Val Asn Trp Val Arg Gin Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45

Gly Gly Val Trp Ala Gly Gly Ala Thr Asp Tyr Asn Ser Ala Leu Lys 50 55 60 154450-序列表.doc 201201835

Ser Arg Phe Thr lie Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Ala Tyr Leu 65 70 75 80

Gin Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala 85 90 95

Arg Asp Gly Gly Tyr Ser Ser Ser Thr Leu Tyr Ala Met Asp Ala Trp 100 105 110

Gly Gin Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210〉 2 <211> 107 <212〉 PRT 〈213>人工序列 <220〉 <221〉 source <223〉/註解=「人工序列之描述：合成多肽」 <400〉 2

Asp lie Gin Met Thr Gin Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 15 10 15

Asp Arg Val Thr lie Thr Cys Arg Ala Ser Glu Asp He Tyr Asn Ala 20 25 30

Leu Ala Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu He 35 40 45

Tyr Asn Thr Asp Thr Leu His Thr Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 2- 154450-序列表.doc 201201835

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Thr Leu Thr lie Ser Ser Leu Gin Pro 65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Phe Cys Gin His Tyr Phe His Tyr Pro Arg 85 90 95

Thr Phe Gly Gin Gly Thr Lys Val Glu lie Lys 100 105 <210〉 3 <211> 10 <212〉 PRT <213〉人工序列 <220〉 <221〉 source <223〉/註解=「人工序列之描述：合成肽」 <400〉 3

Gly Phe Ser Leu Thr Asn Asn Asn Val Asn 1 5 10 <210〉 4 〈211〉 16 <212> PRT 〈213>人工序列 <220〉 <221> source 〈223〉/註解=「人工序列之描述：合成肽」 <400〉 4

Gly Val Trp Ala Gly Gly Ala Thr Asp Tyr Asn Ser Ala. Leu Lys Ser 15 10 15 <210〉 5 <211〉 14 154450-序列表.doc 201201835 <212> PRT <213〉人工序列 <220〉 <221〉 source <223〉/註解=「人工序列之描述：合成肽」 <400〉 5

Asp Gly Gly Tyr Ser Ser Ser Thr Leu Tyr Ala Met Asp Ala 1 5 10 <210〉 6 <211> 11 <212> PRT <213〉人工序列 <220〉 <221> source <223〉/註解=「人工序列之描述：合成肽」 <400> 6

Arg Ala Ser Glu Asp lie Tyr Asn Ala Leu Ala 1 5 10 <210> 7 <211〉 7 <212〉 PRT <213〉人工序列 <220〉 <221〉 source <223〉/註解=「人工序列之描述：合成肽」 <400> 7

Asn Thr Asp Thr Leu His Thr 1 5 <210〉 8 4· 154450-序列表.doc 201201835 <211〉 9 <212〉 PRT <213〉人工序列 <220〉 <221〉 source <223〉/註解=「人工序列之描述：合成肽」 <400> 8

Gin His Tyr Phe His Tyr Pro Arg Thr 1 5 <210> 9 <211〉 327 <212〉 PRT <213〉智人 <400〉 9

Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg 15 10 15

Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr 20 25 30

Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser 35 40 45

Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gin Ser Ser Gly Leu Tyr Ser 50 55 60

Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Lys Thr 65 70 75 80

Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys 85 90 95 154450-序列表.doc 201201835

Arg Val Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Ser Cys Pro Ala Pro 100 105 110

Glu Phe Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys 115 120 125

Asp Thr Leu Met lie Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val 130 135 140

Asp Val Ser Gin Glu Asp Pro Glu Val Gin Phe Asn Trp Tyr Val Asp 145 150 155 160

Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gin Phe 165 170 175

Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gin Asp 180 185 190

Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu 195 200 205

Pro Ser Ser lie Glu Lys Thr lie Ser Lys Ala Lys Gly Gin Pro Arg 210 215 220

Glu Pro Gin Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gin Glu Glu Met Thr Lys 225 230 235 240

Asn Gin Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp 245 250 255

He Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gin Pro Glu Asn Asn Tyr Lys 260 265 270 154450·序列表.doc 201201835

Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser 275 280 285

Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gin Glu Gly Asn Val Phe Ser 290 295 300

Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gla Lys Ser 305 310 315 320

Leu Ser Leu Ser Leu Gly Lys 325 <210〉 10 <211〉 327 <212> PRT <213〉人工序列 <220> <221〉 source 〈223〉/註解==「人工序列之描述：合成多肽」 <400〉 10

Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg 15 10 15

Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr 20 25 30

Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser 35 40 ' 45

Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gin Ser Ser Gly Leu Tyr Ser 50 55 60

Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Lys Thr 154450·序列表.doc 201201835 65 70 75 80

Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys 85 90 95

Arg Val Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro 100 105 110

Glu Phe Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys 115 120 125

Asp Thr Leu Met lie Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val 130 135 140

Asp Val Ser Gin Glu Asp Pro Glu Val Gin Phe Asn Trp Tyr Val Asp 145 150 155 160

Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gin Phe 165 170 175

Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gin Asp 180 185 190

Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu 195 200 205

Pro Ser Ser He Glu Lys Thr lie Ser Lys Ala Lys Gly Gin Pro Arg 210 215 220

Glu Pro Gin Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gin Glu Glu Met Thr Lys 225 230 235 240

Asn Gin Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp 154450-序列表.doc 201201835 245 250 255

He Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gin Pro Glu Asn Asn Tyr Lys 260 265 270

Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser 275 280 285

Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gin Glu Gly Asn Val Phe Ser 290 295 300

Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gin Lys Ser 305 310 315 320

Leu Ser Leu Ser Leu Gly Lys 325 〈210〉 11 〈211〉 1407 <212〉 DNA 〈213〉人工序列 <220〉 <221> source <223〉/註解=「人工序列之描述：合成聚核苷酸」 <400〉 11 60 120 180 240 atggaatgga gctgggtgtt cctgttcttc ctgagcgtga ccaccggcgt gcacagcgag gtgcagctgg tcgagagcgg cggagggctg gtgcagccag gcggcagcct gaggctgtcc tgcgccgcca gcggcttcag cctgaccaac aacaacgtga actgggtgcg gcaggcccca ggcaagggcc tggaatgggt gggcggcgtg tgggccgggg gagccaccga ctacaacagc gccctgaaga gcaggttcac catcagcagg gacaacagca agaacaccgc ctacctgcag 154450-序列表.doc 300 201201835 atgaacagcc tgagggccga ggacaccgcc agcagcagca ccctgtacgc catggacgcc agcgccagca ccaagggccc cagcgtgttc gagagcacag ccgccctggg ctgcctggtg tcctggaaca gcggagccct gaccagcggg agcggcctgt acagcctgag cagcgtggtg acctacacct gcaacgtgga ccacaagccc agcaagtacg gcccaccctg ccccccatgc gtgtttctgt tcccccccaa gcccaaggac acctgcgtgg tggtggacgt gagccaggaa gacggcgtgg aggtgcacaa cgccaagacc tacagggtgg tgtccgtgct gaccgtgctg aagtgcaagg tctccaacaa gggcctgccc aagggccagc cacgggagcc ccaggtgtac aagaaccagg tgtccctgac ctgtctggtg gagtgggaga gcaacggcca gcccgagaac agcgacggca gcttcttcct gtacagcagg ggcaacgtct ttagctgcag cgtgatgcac agcctgtccc tgagcctggg caagtga <210〉 12 <211> 468 <212〉 PRT 〈213>人工序列 gtgtactact gcgccaggga cggcggctac 360 tggggccagg gcaccctggt gaccgtgagc 420 cccctggccc cctgcagcag aagcaccagc 480 aaggactact tccccgagcc cgtgaccgtg 540 gtgcacacct tccccgccgt gctgcagagc 600 acagtgccca gcagcagcct gggcaccaag 660 agcaacacca aggtggacaa gagggtggag 720 ccagcccccg agttcctggg cggaccctcc 780 accctgatga tcagcaggac ccccgaggtg 840 gatccagagg tccagttcaa ctggtacgtg 900 aagcccagag aggaacagtt taacagcacc 960 caccaggact ggctgaacgg caaggagtac 1020 agctccatcg agaaaaccat cagcaaggcc 1080 accctgccac cctcccagga agagatgacc 1140 aagggcttct accccagcga catcgccgtg 1200 aactacaaga ccaccccccc agtgctggac 1260 ctgaccgtgg acaagtccag gtggcaggaa 1320 gaggccctgc acaaccacta cacccagaag 1380 1407 -10- 154450-序列表.doc 201201835 <220〉 <221〉 source <223〉/註解=「人工序列之描述：合成多肽」 <400〉 12

Met Glu Trp Ser Trp Val Phe Leu Phe Phe Leu Ser Val Thr Thr Gly 15 10 15

Val His Ser Glu Val Gin Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gin 20 25 30

Pro Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Ser Leu 35 40 45

Thr Asn Asn Asn Val Asn Trp Val Arg Gin Ala Pro Gly Lys Gly Leu 50 55 60

Glu Trp Val Gly Gly Val Trp Ala Gly Gly Ala Thr Asp Tyr Asn Ser 65 70 75 80

Ala Leu Lys Ser Arg Phe Thr lie Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr 85 90 95

Ala Tyr Leu Gin Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr 100 105 110

Tyr Cys Ala Arg Asp Gly Gly Tyr Ser Ser Ser Thr Leu Tyr Ala Met 115 120 125

Asp Ala Trp Gly Gin Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr 130 135 140

Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser 145 150 155 160 •11 · 154450-序列表.doc 201201835

Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu 165 170 175

Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His 180 185 190

Thr Phe Pro Ala Val Leu Gin Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser 195 200 205

Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Lys Thr Tyr Thr Cys 210 215 220

Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu 225 230 235 240

Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Phe Leu 245 250 255

Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu 260 265 270

Met lie Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser 275 280 285

Gin Glu Asp Pro Glu Val Gin Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu 290 295 300

Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gin Phe Asn Ser Thr 305 310 315 320

Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gin Asp Trp Leu Asn 325 330 335 12- 154450·序列表.doc 201201835

Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser Ser 340 345 350 lie Glu Lys Thr lie Ser Lys Ala Lys Gly Gin Pro Arg Glu Pro Gin 355 360 365

Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gin Glu Glu Met Thr Lys Asn Gin Val 370 375 380

Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp He Ala Val 385 390 395 400

Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gin Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro 405 410 415

Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Arg Leu Thr 420 425 430

Val Asp Lys Ser Arg Trp Gin Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val 435 440 445

Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gin Lys Ser Leu Ser Leu 450 455 460

Ser Leu Gly Lys 465 <210〉 13 <211> 449 〈212〉 PRT 〈213〉人工序列 <220〉 154450·序列表.d〇c -13·

S 201201835 <221〉 source 〈223> /往解=「人工序列之描述：合成多肽」 <400〉 13

Glu Val Gin Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gin Pro Gly Gly 15 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Ser Leu Thr Asn Asn 20 25 30

Asn Val Asn Trp Val Arg Gin Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45

Gly Gly Val Trp Ala Gly Gly Ala Thr Asp Tyr Asn Ser Ala Leu Lys 50 55 60

Ser Arg Phe Thr lie Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Ala Tyr Leu 65 70 75 80

Gin Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala 85 90 95

Arg Asp Gly Gly Tyr Ser Ser Ser Thr Leu Tyr Ala Met Asp Ala Trp 100 105 110

Gly Gin Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro 115 120 125

Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu Ser Thr 130 135 140

Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr 145 150 155 160 14· 154450-序列表.doc 201201835

Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro 165 170 175

Ala Val Leu Gin Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr 180 185 190

Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Lys Thr Tyr Thr Cys Asn Val Asp 195 200 205

His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Ser Lys Tyr 210 215 220

Gly Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Phe Leu Gly Gly Pro 225 230 235 240

Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met lie Ser 245 250 255

Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser Gin Glu Asp 260 265 270

Pro Glu Val Gin Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn 275 280 285

Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gin Phe Asn Ser Thr Tyr Arg Val 290 295 300

Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gin Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu 305 310 315 320

Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser Ser lie Glu Lys 325 330 335 15- 154450·序列表.doc 201201835

Thr He Ser Lys Ala Lys Gly Gin Pro Arg Glu Pro Gin Val Tyr Thr 340 345 350

Leu Pro Pro Ser Gin Glu Glu Met Thr Lys Asn Gin Val Ser Leu Thr 355 360 365

Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp lie Ala Val Glu Trp Glu 370 375 380

Ser Asn Gly Gin Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu 385 390 395 400

Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Arg Leu Thr Val Asp Lys 405 410 415

Ser Arg Trp Gin Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu 420 425 430

Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gin Lys Ser Leu Ser Leu Ser Leu Gly 435 440 445

Lys <210〉 14 <211〉 705 <212〉 DNA <213〉人工序列 <220> <221> source <223〉/註解=「人工序列之描述：合成聚核苷酸」 <400> 14 16- 154450·序列表.doc 201201835 atgagcgtgc ccacccaggt gctgggcctg ctgctgctgt ggctgaccga cgccagatgc 60 gacatccaga tgacccagag ccccagcagc ctgagcgcca gcgtgggcga cagggtgacc 120 atcacctgca gggccagcga ggacatctac aacgccctgg cctggtatca gcagaagccc 180 ggcaaggccc ccaagctgct gatctacaac accgacaccc tgcacaccgg cgtgcccagc 240 aggttcagcg gcagcggctc cggcaccgac tacaccctga ccatcagcag cctgcagccc 300 gaggacttcg ccacctactt ttgccagcac tacttccact accccaggac cttcggccag 360 ggcaccaagg tggagatcaa gaggaccgtg gctgccccca gcgtgttcat cttccccccc 420 agcgacgagc agctgaagag cggcaccgcc tccgtggtgt gcctgctgaa caacttctac 480 ccccgggagg ccaaggtgca gtggaaggtg gacaacgccc tgcagagcgg caacagccag 540 gaaagcgtca ccgagcagga cagcaaggac tccacctaca gcctgagcag caccctgacc 600 ctgagcaagg ccgactacga gaagcacaag gtgtacgcct gcgaggtgac ccaccagggc 660 ctgtccagcc ccgtgaccaa gagcttcaac aggggcgagt gctga 705 <210〉 15 <211> 234 <212〉 PRT <213〉人工序列 <220〉 <221> source <223〉/註解=「人工序列之描述：合成多肽」 <400〉 15

Met Ser Val Pro Thr Gin Val Leu Gly Leu Leu Leu Leu Trp Leu Thr 1 5 10 15

Asp Ala Arg Cys Asp lie Gin Met Thr Gin Ser Pro Ser Ser Leu Ser 20 25 30 -17· 154450-序列表.d〇c 201201835

Ala Ser Val Gly Asp Arg Val Thr He Thr Cys Arg Ala Ser Glu Asp 35 40 45 lie Tyr Asn Ala Leu Ala Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Gly Lys Ala Pro 50 55 60

Lys Leu Leu lie Tyr Asn Thr Asp Thr Leu His Thr Gly Val Pro Ser 65 70 75 80

Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Thr Leu Thr He Ser 85 90 95

Ser Leu Gin Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Phe Cys Gin His Tyr Phe 100 105 110

His Tyr Pro Arg Thr Phe Gly Gin Gly Thr Lys Val Glu He Lys Arg 115 120 125

Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe lie Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gin 130 135 140

Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr 145 150 155 160

Pro Arg Glu Ala Lys Val Gin Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gin Ser 165 170 175

Gly Asn Ser Gin Glu Ser Val Thr Glu Gin Asp Ser Lys Asp Ser Thr 180 185 190

Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys 195 200 205 -18- 154450·序列表.doc 201201835

His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gin Gly Leu Ser Ser Pro 210 215 220

Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys 225 230 〈210〉 16 <211〉 214 <212〉 PRT <213〉人工序列 <220> <221> source <223〉/註解=「人工序列之描述：合成多肽」 <400> 16

Asp lie Gin Met Thr Gin Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 15 10 15

Asp Arg Val Thr lie Thr Cys Arg Ala Ser Glu Asp lie Tyr Asn Ala 20 25 30

Leu Ala Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu lie 35 40 45

Tyr Asn Thr Asp Thr Leu His Thr Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Thr Leu Thr He Ser Ser Leu Gin Pro 65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Phe Cys Gin His Tyr Phe His Tyr Pro Arg 85 90 95

Thr Phe Gly Gin Gly Thr Lys Val Glu lie Lys Arg Thr Val Ala Ala 154450-序列表.doc -19·

!E 201201835 100 105 110

Pro Ser Val Phe He Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gin Leu Lys Ser Gly 115 120 125

Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala 130 135 140

Lys Val Gin Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gin Ser Gly Asn Ser Gin 145 150 155 160

Glu Ser Val Thr Glu Gin Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser 165 170 175

Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr 180 185 190

Ala Cys Glu Val Thr His Gin Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser 195 200 205

Phe Asn Arg Gly Glu Cys 210 20· 154450-序列表.doc

Claims (1)

1. 201201835 七、申請專利範圍： 1- 一種醫藥組合物，其包含： (a) 抗神經生長因子（NGF)抗體或其抗原結合片段； (b) 濃度為約5至約60 mM之組胺酸緩衝劑；及 (c) 濃度為約〇·〇1 %至約〇·ι%之聚山梨醇酯8〇 ; 其中該組合物之pH值為約5·0至約6.0。 2. 如έ青求項1之醫藥組合物 3 0 mM組胺酸。 3. 如請求項1之醫藥組合物 4. 如請求項1之醫藥組合物 約0_02%聚山梨醇酯8〇。 5. 如請求項丨之醫藥組合物 醇。 6. 如請求項5之醫藥組合物 糖醇及甘露糖醇組成之群 7. 如請求項6之醫藥組合物， 8. 如請求項7之醫藥組合物， mg/mL甘露糖醇。 9·如請求項1之醫藥組合物， 10.如請求項9之醫藥組合物， 11·如請求項10之醫藥組合物 mg/mL蔗糖。 12.如請求項1之醫藥組合物， 或糖。 ’其中έ亥組合物包含約1 〇至約 ’其中該pH值為約5.5。 ’其中該組合物包含約〇 〇丨％至 ’其中該組合物另外包含多元 ’其中該多元醇係選自由山梨 〇 其中該多元醇為甘露糖醇。 其中該組合物包含約1至約5 〇 其中該組合物另外包含糖。 其中該糖為蔗糖。 ’其中該組合物包含約1 0至約 其中該組合物不包含多元醇 154450.doc 201201835 13. 如請求項1之醫藥組合物，其中該組合物不包含曱硫胺 酸。 14. 如請求項1之醫藥組合物’其中該抗體或其抗原結合部 分之濃度為約1至約240 mg/mL。 1 5 ·如請求項1之醫藥組合物’其中該抗體或其抗原結合部 分之濃度為約20至約120 mg/mL。 16. 如請求項1之醫藥組合物，其中該組合物包含： (a) 約20 mg/mL之該抗體或其抗原結合部分； (b) 約15 mM組胺酸；及 (c) 約0.01 %聚山梨醇酯80 ; 其中調配物之pH值為約5.5。 17. 如請求項1之醫藥組合物，其中該組合物包含： (a) 約60 mg/mL之該抗體或其抗原結合部分； (b) 約30 mM組胺酸；及 (c) 約0.02°/。聚山梨醇酯80 ; 其中調配物之pH值為約5.5。 1 8.如請求項1之醫藥組合物，其適於;東乾。 19. 一種凍乾醫藥組合物，其包含： (a) 約1至約120 mg抗NGF抗體或其抗原結合片段. (b) 約1至約10 mg組胺酸；及 (c) 約0· 1至約0.4 mg聚山梨醇酯8〇。 2 0 ·如清求項19之束乾醫藥組合物’其中該組合物包含. (a) 約60 mg抗NGF抗體或其抗原結合片段； (b) 約4.7 mg組胺酸；及 154450.doc 201201835 (c)約0.2 mg聚山梨醇酯80。 2 1 ·如請求項丨9之凍乾醫藥組合物，其中該組合物包含： (a) 約20 mg抗NGF抗體或其抗原結合片段； (b) 約2.3 mg組胺酸；及 (c) 約0.1 mg聚山梨醇酯80。 22. 如請求項19之凍乾醫藥組合物，其另外包含約1至約1〇〇 mg多元醇。 23. 如請求項22之凍乾醫藥組合物，其中該多元醇為約10至 約50 mg甘露糖醇。 24. 如請求項19之凍乾醫藥組合物，其另外包含約1至約1〇〇 mg糖。 25·如請求項24之凍乾醫藥組合物，其中該糖為約1至1〇〇 mg蔗糖。 26. 如請求項1至25中任一項之醫藥組合物，其中該抗NGF抗 體或其抗原結合部分與人類NGF結合。 27. 如請求項1至25中任一項之醫藥組合物，其中該抗NGF抗 體或其抗原結合部分包含人類IgG4恆定區。 28. 如請求項27之醫藥組合物’其中該抗NGF抗體或抗原結 合部分包含鉸鏈區突變。 29. 如請求項28之醫藥組合物，其中該鉸鏈區突變包含seQ ID NO: 9之胺基酸位置1〇8處之絲胺酸的突變。 30. 如請求項28之醫藥組合物，其中SEq id NO: 9之胺基酸 位置108處之該絲胺酸突變成脯胺酸。 3 1 ·如請求項28之醫藥組合物，其中該人類IgG4恆定區包含 S 154450.doc 201201835 SEQ ID NO: 10之胺基酸序列。 32. 如請求項28之醫藥組合物，其中該抗體或其抗原結合部 分具有一或多種以下功能性質： a) 與人類NGF結合，但不與源於人腦之神經營養因子 (BDNF)、人類神經營養素3(NT-3)或人類神經營養素 4(NT-4)結合； b) 其與人類或大鼠NGF結合之KD為100 pM或100 pM以 下； c) 抑制NGF與TrkA或p75NTR結合； d) 抑制TF-1細胞之NGF依賴性增殖； e) 抑制雞背根神經節之NGF依賴性存活；及 f) 抑制PC12細胞神經突之NGF依賴性生長。 33. 如請求項28之醫藥組合物，其中該抗體或其抗原結合部 分在向個體投與時不展現反彈效應。 34. 如請求項27之醫藥組合物，其中該抗體或其抗原結合部 分包含重鏈可變區，其包含分別具有SEQ ID NO: 3、4及 5之胺基酸序列之CDR 1、CDR 2及CDR 3。 3 5.如請求項27之醫藥組合物，其中該抗體或其抗原結合部 分包含輕鏈可變區，其包含分別具有SEQ ID NO: 6、7及 8之胺基酸序列之CDR 1、CDR 2及CDR 3。 36. 如請求項27之醫藥組合物，其中該抗體或其抗原結合部 分包含含有SEQ ID NO: 1之胺基酸序列之重鏈可變區。 37. 如請求項27之醫藥組合物，其中該抗體或其抗原結合部 分包含含有SEQ ID NO: 2之胺基酸序列之輕鏈可變區。 154450.doc 201201835 38·如請求項27之醫藥組合物，其中該抗體或其抗原結合部 分與包含含有SEQ ID NO: 1之胺基酸序列之重鍵可變區 及含有SEQ ID NO: 2之胺基酸序列之輕鍵可變區的抗體 競爭結合NGF。 39. 如請求項1至25中任一項之醫藥組合物，其中該抗體或 其抗原結合部分包含含有SEQ ID NO: 13之胺基酸序列之 重鍵® 40. 如請求項39之醫藥組合物，其中該抗體或其抗原結合部 分另外包含含有SEQ ID NO: 16之胺基酸序列之輕鏈。 41. 如請求項1至25中任一項之醫藥組合物，其中該抗體或 其抗原結合部分係選自由以下組成之群：單株抗體、人 類抗體、人類化抗體、嵌合抗體、CDR移植抗體、 Fab、Fab'、F(ab’）2、Fv、二硫化物連接之 fv、scfv、單 域抗體、微型雙功能抗體、多特異性抗體、雙重特異性 抗體及雙特異性抗體β 42. 如請求項！至25中任一項之醫藥組合物，其中該抗體或 其抗原結合部分為抗體PG11〇。 43. 如請求項！至18中任一項之醫藥組合物，其中該調配物 以液體形式穩定存在至少約3個月。 44. 如凊求項丨至丨8中任一項之醫藥組合物，其中該調配物 以液體形式穩定存在至少約丨2個月。 45. 如請求項！至25中任一項之醫藥組合物，其中該調配物 以冷束或凍乾形式穩定存在至少3個月。 46. 如請求項丨至25中任一項之醫藥組合物，其中該調配物 154450.doc 201201835 適用於經靜脈内、皮下及/或肌肉内投與。 47. 種裝置，其包含如請求項ι25中任一項之醫藥組合 物。 48. 如請求項47之裝置，其中該裝置係選自由以下組成之 群.注射器、筆、植入物、無針注射裝置、吸入裝置及 貼片。 49. 一種製品，其包含如請求項1至25及47至48中任一項之 醫藥組合物或裝置。 5〇· —種如請求項1至25中任一項之醫藥組合物之用途，其 係用於製造用於治療NGF介導之疾病或病狀之藥劑。 51. 如請求項50之用途，其中該NGF介導之疾病或病狀為疼 痛。 52. 如請求項5丨之用途，其中該疼痛係選自由以下組成之 群：骨關節炎疼痛、慢性下背痛、糖尿病性神經痛、癌 症疼痛、骨轉移疼痛、間質性膀胱炎、疼痛性膀胱症候 群、與慢性非細菌性前列腺炎相關之疼痛、與子宮内膜 異位相關之疼痛、與子宮纖維瘤相關之疼痛及術後疼 痛。 53. 如晴求項5〇之用途，其中該醫藥組合物適於以在〇 ^ mg/kg至1 〇 mg/kg之範圍内之劑量投與該抗NGF抗體或其 抗原結合片段。 54. 如請求項50至53中任一項之用途，其中該醫藥組合物適 於經靜脈内、皮下或關節内投與。 55. 如請求項50之用途，其中該醫藥組合物適於與第二醫藥 154450.doc -6 - 201201835 劑一起投與。 56.如請求項55之用途，其中該第二醫藥劑係選自由以下組 成之群：NSAID、止痛劑（包括類鴉片止痛劑及非典型止 痛劑）、局部麻醉劑、神經阻斷劑、酚阻斷劑、治療性抗 體、類固醇、抗驚厥劑、抗抑鬱劑、局部辣椒鹼、抗病 毒劑、TrkA抑制劑及PKC抑制劑。 57.如請求項5至11或22至46中任一項之醫藥組合物，其中 (a)抗NGF抗體或其抗原結合片段與（b)多元醇、糖或其組 合之莫耳比大於1:1400。 154450.doc