TW201143778A - Use of a phospholipid-containing composition for the removal of subcutaneous fat accumulatons by subcutaneous lipolysis - Google Patents

Description

201143778 六、發明說明： 【發明戶斤屬之技術領域；1 本發明是有關於一種以磷脂和至少一甘草酸或一甘草 酸的鹽類為基礎的組成物以及它呈醫藥可應用的形式用於 治療在各種不同的表型（phenotypes)的皮膚下的脂肪沉積 (adipose deposits)[諸如脂肪的皮下分布擾亂（subcutaneous distribution disturbances of fat)]以及用於消退（regression)抗 飲食脂肪墊(diet-resistant fat pads)的用途。 t先前标]1 發明背景 至今在本技藝的狀態下，外科方法（surgical methods) 被使用以治療皮下脂肪堆積或脂肪細胞的異常生長[如脂 瘤（lipomas)或脂性水腫(lipedemas)]。此等治療引起由麻醉 (anesthesia)、局部反應（local reactions)以及可能的感染 (infections)所引起的已知併發症(complications)或風險。通 常在此等情況下住院病患住院是無可避免的。尋找關於移 除皮下脂肪堆積的非外科替代方案以避免此等操作。 各種不同的磷脂化合物已經被發展，它們藉由注射至 病患而被投藥。包含有至少一磷脂的水性配方被知曉用於 各種不同的應用。這些系統被使用例如在化妝品或者用於 製造藥學產品。頻繁地，這些系統形成含有一水性相 (aqueous phase)在它們内部的微胞（micelles)或脂質體 (liposomes)。 US 2005/143347 A1以及相關的優先權文件DE 103 61 201143778 067 A1揭示一種含有炱少一磷脂和/或至少一膽酸(bile acid) 和一支持脂肪分解的組份[如核黃素（riboflavin)]以及水的 水性組成物適合於製造用來移除皮下脂肪堆積以及用來消 退脂肪墊的醫藥品。其中Essentiale® N i.V. (Red List，March 2003)以及Lipostabil® N i.V.被提及為商業上可獲得的化合物。

Essentiale® N i.V.被描述在EP 0 615 746 A1 中作為一含 有來自大豆的填脂、膽酸、核黃素、α-生育盼 (alpha-tocopherol)、乙醇以及水的水性製備物（aqueous preparation)。該活性物質組成物在一微胞系統中被加工， 而該等微胞具有一為3〇 nm至100 nm的直徑。在EP 0 615 746 A1中，甘草酸的使用未被描述。這個化合物被靜脈内 地投藥以治療尤其〆肝的脂肪變性（fatty degeneration)[ — 過多脂肪含量的肝薄膜組織(liverParenchyma)][脂肪以小滴 (droplets)的形式沉積]。 在DE 103 61 067 A1中，含有至少一磷脂和/或至少一 膽與一支持脂肪分解的組份以及水的化合物Essentiale® N i.V.的水性配方用於製備一用來移除皮下脂肪堆積的醫藥 品被揭示。在此甘草酸亦沒有被添加至該製備物。

Lipostabil® N i.V.包含有來自大豆的磷脂、DL-α-生育 紛、7-去氧膽酸(7-^^〇^)^11〇1。&6(1)、醇、水以及其他助劑 (auxiliaries)。然而，這個化合物的活性物質組成物不含有甘 草酸。藉由皮下注射Lipostabil® N i.V.，出現在過重人們的眼 睛下方、在腹部(abdomen)或臀部(hips)的脂肪堆積被移除。 以一磷脂為基礎並且為了脂肪堆積的脂肪分解 4 201143778 (lipolysis)的目的被使用於皮下注射的進一步製備物被描述 在 W0 2008/11342卜 DE 1〇 2007 015 701、US 2005/143347 A1 以及US 2005/0089555 A1。 用於一皮下脂肪分解的先前技藝的上述化合物的缺點 尤其包括在治療之後在治療區域的腫脹（swelling)、血腫 (hematomas)[挫傷(bruises)]、疼痛和有如發熱(burning)感覺 的不適以及在注射位址的瘩(itching) ’但是特別地藉由損害 細胞結構以及膜完整性[壞死（necrosis)]的細胞死亡。

致力發現用於非外科移除皮下脂肪堆積而沒有上面所 提及的缺點的活性化合物，現在已驚舒地發現：在RU 2133122 C1所揭示的用於靜脈内（intravenous)與口服(oral) 治療急性與慢性肝疾病以及在動脈硬化(arteriosclerosis)與 相關疾病中的脂質代謝(lipid metabolism)的疾患(disorders) 的組成物適合於一皮下的脂肪分解[亦被稱為脂肪細胞分 解(adipozytolyse)]。 藉由使用依據本發明的這個組成物{包含有至少一磷 脂[較佳地填脂酿膽驗(phosphatidyl choline)]以及一甘草西变 或它的鹽類}，被使用於皮下的脂肪分解的先前技藝化合物 的先前所描述的缺點被降低和/或完全地消除。 依據本發明的用於皮下脂肪堆積的脂肪分解的所請組 成物的使用的特別優點是顯著降低至完全預防脂肪組織細 胞[脂肪細胞(adipocytes)]的細胞結構與膜完整性的損害。在 以所請組成物發明的治療脂肪組織的皮下疾患，壞死的發 生被顯著地降低或完全地預防。 201143778 由於發明的使用，在身體的被治療的脂肪組織中的儲 存脂肪（depot fat)藉由脂肪分解被降解而沒有引起任何細 胞膜的破壞。 被觀察到的是：顯著較少的副作用至一完全缺乏症狀 (complaints)[如腫脹、紅色(redness)、發熱、癢與一般疼痛 以及過敏(hypersensitivity)]。 依據本發明所使用的組成物包括一磷脂、甘草酸或它 的一鹽類作為主要組份，以及若必要的至少一助劑。 可從一來自甘草屬（Glycyrrhiza)、歐亞甘草（licorice)[例 如甘草（Glycyrrhiza glabra)]的植物的萃取物中被獲得的甘 草酸或者它們的鹽類[特別是甘草酸納或銨（sodium or ammonium glycyrrhizinate)]被描述在先前技藝作為用於運 送例如胜肽激素（peptide hormones)穿過黏膜（mucous membrane)的吸收增強劑（在EP 03 27 756 A中）。又，在經陰 道製備物(transvaginal preparations)中藉由甘草酸增加多肽 (polypeptides)的吸收被描述在US 5,238,917 A。 因此，甘草酸在先前技藝（來自US 2004-076652 A、US 2009-169588 A、US 2007-053852 A、WO 08/046791 A、WO 08/046795 A、WO 05/037239 A、EP 1676561 A以及 JP 2006/137 670)中被知曉作為一抗細菌（antibacterial)與抗發 炎成份（anti-inflammatory ingredient)以及乳化劑 (emulsifier)。 甘草酸在運送分子穿過細胞膜的特殊功能支持所請組 成物的發明用途的作用的快速方式的特別優點。由於該甘 201143778 草酸，該磷脂可特別好且快地穿透至皮下組織（subcutis)的 脂肪組織細胞，藉此上述的缺點（如壞死）可被降低或不發 生。組合以該甘草酸，在一以先前技藝的化合物（特別是包 括膽酸或它們的鹽類的那些）治療之後所描述的腫脹、血 腫、疼痛以及不適被減輕或不發生。這個增強的耐受性由 甘草酸的抗發炎以及抗細菌性質所支持。 因此，本發明的特徵在於：至少一磷脂（較佳地一磷脂 醯膽鹼）以及一甘草酸或它的鹽類的所請組合與來自先前 技藝的化合物Essentiale®和Lipostabil®的組成物相比較顯 示較少至無細胞毒性效用（cytotoxic effect)並且具有經改善 的财受性。

ί：發明内容:J 本發明是有關於一包含有下列的組成物用於製備一用 來移除皮下脂肪堆積之醫藥品的用途： a) 至少一磷脂； b) 至少一甘草酸或 c) 一甘草酸的鹽類以及 d) 若需要的話，助劑 其中 -該等磷脂以及該甘草酸或它的鹽類的總含量是2-80 wt-%，以及 -在磷脂以及甘草酸或它的鹽類之間的重量比是自 30 : 1 至0,5 : 1。 本發明進一步有關於一包含有上面組成物的製備物的 7 201143778 用途，該組成物含有磷脂醯膽鹼作為一磷脂。 本發明進一步有關於一包含有上面組成物的製備物的 用途，該組成物含有動物或植物來源的磷脂醯膽鹼。 本發明進一步有關於一包含有上面組成物的製備物的 用途，s亥組成物含有甘草酸的钾(potassium)、納(sodium)、 銨(ammonium)、鎂（magnesium)鹽或其它適合的鹽類。 本發明進一步有關於一包含有上面組成物的製備物的 用途’該組成物含有一糖[特別是麥芽糖(maltose)和/或它的 衍生物]、山梨糖醇(sorbitol)或乳糖(lactose)作為一可能的賦 形劑(excipient)。 本發明進一步有關於一包含有上面組成物的製備物的 用途’該組成物含有具有一為15至98 wt-%、較佳地30至98 wt-%、更佳地50至98 wt-%、特別較佳地75至90 wt-%、最 佳地75至98 wt-%的總數量的磷脂醯膽鹼。 本發明進一步有關於一包含有上面組成物的製備物的 用途’該組成物呈乾燥形式被溶解在一適合的溶劑中。 本發明進一步有關於一包含有上面組成物的製備物的 用途，該組成物呈乾燥形式[較佳地有如一由冷凍乾燥 (freeze-drying)所獲得的凍乾物（ly〇philisate)]而被應用。 本發明進一步有關於一包含有上面組成物的製備物的 用途，該組成物呈一溶液的形式而被使用。 本發明進一步有關於一包含有上面組成物的製備物的 用途，6玄組成物含有生理學上適合的溶劑（phySi〇l〇gicaUy suitable solvents)^含有水 '生理鹽水溶 201143778 saline solution)、葡萄糖溶液（giucose s〇iuti〇n)、一元醇 (monohydroxy alcohols)[如乙醇（ethan〇i) 、2-丙醇 (2-propanol)、n-丙醇]、多元醇(p〇iyhydroxy alcohols)[如甘 油（glycerol)和 / 或丙二醇（propandi〇i)]、聚二醇 (polyglycol)[如聚乙二醇（p〇iyethylene glyC〇l)]和 / 或 Miglyol]、甘油、甲縮酸（formal)、二曱基異山梨糖醇 (dimethyl isosorbitol)、天然與合成的油和/或醚(ether)}。 本發明進一步有關於一包含有上面組成物的製備物的 用途，該組成物被使用於製備一用來治療皮下脂肪堆積、 皮下脂肪組織疾患（subcutaneous adipose tissue disorders)(特別是與脂肪分布的局部擾亂有關）的醫藥品。 本發明進一步有關於一包含有上面組成物的製備物的 用途’ §亥紐成物被使用於製備一用來分解(decomposition) 或變性（degeneration)[消退(regression)]脂肪組織腫瘤的醫 藥品。 該發明的製備物的投藥呈乳霜（creams)、軟膏 (ointments)、凝膠（gels)、水凝膠（hydrogels)、乳液(lotions)、 糊（pastes)、’東乾物（lyophilisat)以及溶液（solutions)的形式的 形式發生。呈各種不同的溶液形式的水性配方是較佳的。 本發明進一步有關於一包含有上面組成物的製備物的 用途’其特徵在於：美學（aesthetic)或病理學性質 (pathological nature)的非所欲的脂肪分布擾亂是脂性水腫 (lipedemas)、脂瘤（lip0mas)、腹部的脂肪過多症 (lipomatosis) ' 畸形性皮膚脂層炎（dermatopanniculosis 9 201143778 deformans)、假性男子女乳症（pseudogynecomastia)、HIV病 患的水牛峰(Buffalo hump)、蜂窩組織炎(cellulitis)或非專一 性皮下脂肪庫（nonspecific subcutaneous fat depots)。 本發明進一步有關於一包含有上面組成物的製備物的 用途，其特徵在於：該製備物的投藥藉由皮下的 (subcutaneous)、腹膜内的（intraperitoneal)、肌肉内的 (intramuscular)或靜脈内的（intravenous)注射而發生。 本發明進一步有關於一包含有上面組成物的製備物的 用途，其特徵在於：一選自於由離子電滲(i〇nt〇ph〇resis)、 電穿孔(electroporation)、微穿孔(microporation)或超聲導入 (phonophoresis)所構成的群組的方法被使用於投藥。 本發明的另一個目的是該組成物用於製備一用來治療 皮下組織[下部的真皮(l〇wer dermis)]的脂肪組織(特別是具 有脂肪分布的局部擾亂）的醫藥品的用途。 本發明的另一個目的是該組成物用於製備一用來消退 以及衰退(involution)脂肪組織腫瘤的醫藥品的用途。 本發明的另一個目的是該組成物用於製備一用來治療 在美學或病理學性質的皮下組織中非所欲的脂肪分布擾亂 (例如脂性水腫、脂瘤、腹部的脂肪過多症、畸形性皮膚脂 層炎、假㈣子女乳症、HIV病患的水牛峰、蜂窩組織炎或 非專一性皮下脂肪庫）的醫藥品的用途。 θ藉由該組成物的發明❹，以—先前技藝的化合物(特 別疋含有去氧膽酸以及它的鹽類的那些）的—外科治療或 -皮下治療的上面所提及的風險以及副作用可被避免’。、此 10 201143778 外，門診>台療(outpatient treatment)相較於外科治療對於广 患是更舒適並且較不昂貴的。 上面所描述的高治療效率（therapeutic efficiency)(由令 組成物的脂肪組織的快速降解而被證明）與一磷脂和/或— 甘草酸或它的一鹽類的發明組合的交互作用的協同效用 (synergistic effect)有關聯。目前所請組成物的發明使用的特 徵在於：顯著地降低副作用或部分地缺乏一些先前所描述 的副作用。 皮下脂肪分布擾亂在人類以及哺乳動物的身體的脂肪 組織中變化，它發生有如一遺傳(genetic)或飲食(dietary)決 定的儲存脂肪呈局部脂肪沉積的形式並且被認為審美地惱 人的關鍵區域[特別是腹部、JL股(buttocks)、臀部（hipS)、 膝(knees)、小腿（calves)、大腿(thighs)、上臂（upper arms)、 下巴（chin)、臉頰（cheeks)]。因此，它亦可處理脂肪細胞的 良性生長(benign growths)(諸如脂瘤）[異位增生（dySt〇pic proliferation)]。 依據本發明的脂肪組織疾患包括例如下列疾患：脂瘤 (脂肪組織腫瘤），它們是良性、缓慢生長、通常球形、可能 有莖的（stalked)[=擺錘狀脂瘤（L. pendulum)]或甚至毛狀的 (shaggy)[=分枝脂瘤（L. arborescens) ’ 諸如滑液的（synovial)] 間質腫瘤（mesenchymal tumors)[來自-擴大的（enlarged)-脂 肪組織細胞、較佳地在皮下組織]，可能具有中心骨化 (central ossifying)[=骨化脂瘤（L. ossificans)]、變成以黏液阻 斷（phlegm)[=黏液脂瘤（L. myxomatodes)]或妈化 11 201143778 (calcification)(=弼化脂瘤（L. petrificans)、亦具有增加的結 締組織（connective tissue)以及包膜形成（capsule formation)[=纖維脂瘤（L. fibrosum)]血管形成（blood vessel formation)[=血管脂瘤（L. teleangiectodes)]、很少惡性變性 (malignant degenerating)[=肉瘤狀脂瘤（L. sarcomatodes)、脂 肉瘤（liposarcoma)]。這些可被分類為病理學的，因為它們 生長以及它們的結締纟且織勒（connective tissue sheath)本身 可以是疼痛的，並且藉由它們所引起的血管壓迫造成神經 痛（nerves pain)。這些亦包括導致一滿滿堆積的脂瘤在病患 中的多重脂肪過多症(multiple lipomatosis)。 疾病（morbus)德爾肯氏病（Dercum's disease)[被稱為痛 性脂肪過多症（lipomatosis dolorosa)]是一種位於真皮脂肪 筋膜(dermal fat fascia)[坎帕氏脂肪筋膜(Kampa，s fat fascia)] 與真皮的下側之間的脂肪組織的肥大性增殖(hypertrophic proliferation)的特別形式。激素效用導致那些脂肪細胞的一 增強的水結合能力，它們依次藉由壓力現象淋巴道(lymph tract)阻塞在最初的蕨類型（如以叩分淋巴管（lymph vessels) 的區域而引起’因此額外的壓迫以及刺激影響（irritation influences)被施加在周圍的敏感神經，藉此這些病患具有一 對碰觸極端地疼痛感受性。在數年至數十年的過程中，在 老化過程的期間變成較薄的上皮不規則散播的局部化的脂 肪結（fat nodules)[具有一部分疼痛以及強的觸物痛感 (dysesthetic)特徵]形成。 馬德隆氏脂肪頸（Madelung’sche fat neck) 12 201143778 [Lanois-Bensaude症候群（Lanois-Bensaude Syndrome)]是一 種脂肪組織增生脂肪組織發炎，其中除了一營養不良性脂 肪組織腫瘤（dystrophic adipose tissue tumor)形成，它亦導致 類似瘢痕(scar-like)的結缔組織(connective tissue)壓縮在皮 下空間。在這個理由上’外科操作程序通常僅部分地成功， 因為必要的解剖學的結構涉及這個過程以及疾患實質上被 證明在頭、頸以及肩膀區域。 脂肪水腫(lipoedema)是一種脂肪組織的疼痛腫脹，它 特別發生在女人的小腿(lower legs)並且顯示一隨著增加的 年齡進行性的過程與特徵。 作為脂肪分解的消退，脂肪組織的水解切割以及藉由 鬆動增生的脂肪區域的變性被瞭解。 一黃斑瘤（xanthelasma)是一在眼睛下的脂肪的淡黃色 堆積。 HIV病患通常具有起因於依據先前技藝的藥物治療 (medication)所發生的脂肪組織堆積的擾亂，諸如在這個病 患組的稱為水牛峰的牡牛頸（Buffalo Hump-called bull neck)。外科移除一般而言不可預期免疫不全病患 (immune-compromised patients)，因此脂肪沉積維持以及該 病患外在地污辱。 上面所提及的脂肪組識疾患與飲食相關的脂肥大 (diet-related lipohypertrophy)(就脂肪分布擾亂而言亦導致 一脂肪沉積）相比顯示特徵在於組織學的結瘢(histological scarring)與發炎參數(inflammation parameters)和結締組織 13 201143778 包圍以及在組織學的脂肪組織型態本身的變化之病理與上 清楚地分化的組織改變或者實體。 本發明的另一個目的是該組成物用於製備一用來户療 蜂窩組織/蜂窩組織炎(celluliteWs)的醫藥品的用途。蜂寓組 織是一種位於真皮脂肪筋膜（坎帕氏脂肪筋膜）與真皮的下 側之間的脂肪組織的肥大性增生的特別形式。激素效用導 致那些脂肪細胞的一增強的水結合能力，它們依次起因於 壓力現象引起淋巴道阻塞在最初的蕨類型淋巴管的區域。 在數年至數十年的過程中’在老化過程的期間變成較薄的 上皮不規則散播的局部化的脂肪結（具有一部分疼痛以及 強的觸物痛感特徵)被形成。 本發明的另一個目的是該組成物用於製備一用來治療 假性男子女乳症以及纟曰肪性乳房發育症（lip〇rnastia)的醫藥 品的用途。假性男子女乳症是脂肪堆積在男人乳 (mammary)[乳房（breast)]周圍，其導致一乳房的增大 (enlargement)並且首先被審美地指出。脂肪性乳房發育症是 一種假性男子女乳症沒有乳腺體(mammary gland corpus)的 增大的形式。 在此所描述的藥學組成物所含有的磷脂可被生產自任 何動物或采物貝，特別疋來自雞蛋(chicken eggs)、含油 種子(oily seeds)以及水果[如乾燥的挪子（drie(j c〇c〇nut)、棕 糊籽(palm seeds)、花生（peanut)、油菜籽（rapeseed)、向曰 葵種子（sunflower seeds)、亞麻子（linseed)、棕橺（palm)和/ 或撖欖油(olive oil)]。最適合的是依據在歐洲專利EP 〇 〇54 14 201143778 770 m以及EP 0 054 769 B1中所描述的操作程序而從大豆 所獲得的磷脂。 這個填脂被高度地純化並且含有15至98 wt %、較佳地 30至98wt-%、更佳地50至98 wt_%、特別較佳地乃至％ wt-%、最佳地75至90 wt-%碌脂酸膽鹼。此等被高度地純化 的磷脂含有磷脂的其他組份’特別是達15wt_%、更佳地達 12 wt-%磷脂醯乙醇胺（phosphatidyl ethanolamine)、達8 wt-%磷脂酸（phosphatidic acid)、達 10 wt_%磷脂醯肌醇 (phosphatidyl inositol)、達 6 wt-% 溶血鱗脂醯膽驗 (lysophosphatidyl choline)或溶血磷脂醯乙醇胺 (lysophosphatidyl ethanolamine)、微量的磷脂醯絲胺酸 (phosphatidyl serine)以及呈小數量的其他脂質。 本發明亦有關於一甘草酸或數種甘草酸的使用，其中 該甘草酸有如一生理學上可接受的鹽類存在。作為甘草酸 生理學上可接受的鹽類的鹽類，特別是單_(m〇n〇 )、二_(di_) 或三鈉鹽(trisodium salts)或者鉀鹽、鎂或錢鹽被使用。單、 二-或三鈉鹽或卸鹽以及敍鹽是較佳的，並且更佳的是單、 二-或三鈉鹽或卸鹽。 該鱗脂比該甘草酸的質量比(mass ratio)是30 : 1至〇,5 : 1、較佳地15 : 1至〇,5 : 1 '更佳地4 : 1至1 : 1、最佳地3 : 1 至2 : 1。 在該組成物中的填脂濃度是自〇,5 wt-%至30 wt-%、較 佳地自5 wt-%至25 wt-%。 該等磷脂以及該甘草酸或它的鹽類的建議總含量被認 15 201143778 為是自2_8Gwt—%。在這财，-為3: UX及4: 1的在該等 磷月曰與该甘草酸或它的鹽類之間的重量比是較佳的《在2 : 1至3 . 1的在该等鱗脂與該甘草酸或它的鹽類之間的重量比 中，較佳的含量是具有2_45 wt_%的該等磷脂以及該甘草酸 或它的鹽類。 δ亥醫藥品的PH值是在自pH 0，0至pH 9,0、較佳地自ρϋ 7’5至PH8,5、更佳地自阳6,5至阳7,5以及阳6，以及特別 的6,5至PH7,〇的範圍内。 在適當的情況下，適合的助劑被添加。糖被提供作為 藥學上可接受的助劑，特別是麥芽糖、葡萄糖、乳糖、山 梨糖醇與甘露醇以及它們的衍生物、膠狀矽酸(colloidal silicic acid)以及它的衍生物、矽膠(siUcagel)、滑石（talc)、 乳糖、澱粉(starch)、明膠(gelatin)、水、具有一或多個經基 基團（hydroxyl groups)的醇（alcohols)[特別是乙醇 (ethanol)、甘油以及丙二醇(pr〇p0yiengiyC〇i)]、天然或合成 的油[特別地石油(petroleum)、礦物油（mineral oil)、花生油 (peanut oil)、大豆油（soybean oil)、芝麻油（sesame oil)]以及 醚（ether)。進一步適合的添加物（additives)是纖維素 (cellulose)、嚴糖（sucrose)、麥芽（malt)、米（rice)、敦 (fluorine)、#5 (calcium)、硬脂酸鎮（magnesium stearate)、硬 脂酸鈉（sodium stearate)、單硬脂酸甘油醋（glycerol monostearate)、氣化鈉（sodium chloride)、乾燥的脫脂乳 (dried skim milk)。特別用於皮下脂肪分解的較佳助劑包含 有水、醇（特別地乙醇）、鹽水(saline)、麥芽糖以及水性右 16 201143778 旋糖（aqueous dextrose) ° 在此所描述的組成物可呈乾燥或液體形式而被使用。 液體形式包含有滴劑(drops)、溶液(solutions)、懸浮液 (suspensions)、乳劑（emulsions)、注射懸浮液（injection suspensions)或可注射的乳劑（injectable emulsions)和脂質 體-微胞系統（liposome-micelle systems)以及脂質體-微胞-水系統（liposome-micelle-water systems)。 液體製備物有如溶液、懸浮液、乳劑、注射懸浮液或 可注射的乳劑是較佳的。特別地注射懸浮液或可注射的乳 劑是較佳的。 特別的’在添加水、另一種溶劑或一適合的緩衝液(如 Tris緩衝液）以後立即地變成液體的上面所提及的成份、助 劑或固體物質的液體製備物（有如溶液、懸浮液、乳劑、注 射懸浮液或可注射的乳劑）可容易地被使用於注射。一凍乾 物較佳地被使用作為一基礎以獲得一液體製備物。 藉由使用在此所描述的藥學製備物作為一注射，建議 使用一不具有非所欲的副作用的適合溶劑[例如，水、生理 鹽水、葡萄糖、一元醇(monohydroxy alcohols)(如乙醇、2-丙醇、η-丙醇）、多元醇(polyhydroxy alcohols)[如甘油和/或 丙二醇(propandiole)]、聚二醇[如聚乙二醇和/或Miglyol]、 甘油、曱縮醛、二甲基異山梨糖醇、天然與合成的油和/或 鍵’各個單獨或組合]，而關於注射，脂質體-微胞系統的使 用被建議。 在濃縮之後醇的剩餘體積應該是自0百分比以體積計 17 201143778 (vol.%)上達20 vol·%，較佳地自 0 vol.%至 10 vol.%。 在此所描述的化合物的最適當的應用形式是一種含有 一磷脂以及該甘草酸或它的鹽類的活性物質的混合物呈一 脂質體-微胞-水系統的形式。此一被設計用於注射的脂質體 -微胞-水系統較佳地具有一為6,0至7,5的pH值。 在此所描述的藥學製備物的乾燥形式包含有一康乾 物、錠劑（tablets)[特別地薄膜包覆的錠劑（film-coated tablets)以及丸劑（pills)、粉末(powders)、膠囊（capsules)、 顆粒(granules)以及糖衣錠(dragees)。一床乾物是較佳的。 當該組成物呈一凍乾物的形式而被生產並且水或Tris 緩衝液被添加，一可被用於注射的水-脂質體系統產生。 該水-脂質體系統亦可被過濾無菌的並且含有呈高濃 度的在一為30 nm至180 nm '較佳地30至130 nm、特別較佳 地30至90 nm的相對小的顆粒尺寸之脂質體以及微胞。這些 月曰為體可藉由使用一具有一為0,2 μιη的孔直徑的渡膜而被 過濾無菌的。 呈一水性溶液的形式而被生產的在此所描述的化合物 較佳地呈一高度透明的脂質體_微胞系統的形式、具有一非 常長的儲存期限(shelflife)並且可被過濾無菌的。該系統可 例如藉由凍乾而被乾燥，藉此導致一穩定的凍乾混合物。 若在此所描述的藥學化合物被使用作為一注射溶液， —活性物質的組合(含有碟脂以及甘草酸的三鈉鹽，而在磷 月曰隨膽鹼與甘草酸的三鈉鹽之間的重量比是1 : 1至4 : 1並 且較佳地2 : 1至3 : 1)的應用被特別地建議。 18 201143778 發明的製備物的製備例如藉由溶解或分散至少一磷脂 以及至少一甘草酸（以上面所提及的彼此的比例）在一適合 的溶劑中而被執行。之後該溶液或分散液被濃縮並且接著 水被添加。 用於製備該等製備物的方法亦被描述在歐洲專利申請 案 EP 0 470 437 A或 EP 0 615 746 A 中。 在適當的情況下，抗氧化劑（antioxidants)[如抗壞血酸 (ascorbic acid)、亞琉酸氫鈉（sodium hydrogen sulfite)或焦亞 硫酸鈉（sodium pyrosulfite)、α生殖盼（alpha-tocopherol)]、 防腐劑(preservatives)[諸如苯甲醇(benzyl alcohol)或p-經基 苯甲酸 S旨（p-hydroxybenzoates)]或懸浮劑（suspending agent)[如羧甲基纖維素納（sodium carboxy methyl cellulose)] 可被添加至依據本發明所使用的製備物中。 該等製備物亦可選擇性地含有膠體結構（colloidal structures)(諸如微胞或混合的微胞）。這些結構具有一為10 至500埃(angstroms)的顆粒直徑。它們由甘草酸以及填脂構 成。·甘草酸比磷脂的質量比是呈自0，1 : 2至2 : 1、較佳地 自1 : 2的wt-%。在該醫藥品中該等膠體結構中的磷脂濃度 是自5 wt-%至15 wt-%、較佳地10 wt-%。該等膠體結構的 製備例如藉由在水中溶解甘草酸而被執;，而該溶液變成 輕微地驗性(alkaline)。接著該填脂被分散在其中。最後它 將被過濾。 依據本發明所使用的製備物的投藥以及可比較的劑量 形式藉由皮下的、腹膜内的、肌肉内的或靜脈内的注射而 19 201143778 被執行。皮下注射是較佳的。 再者在各種不同的載劑介質（carrier medium)中並且 藉由使用各種不同的工具（諸如離子電滲）的經皮的投藥 (percutaneous administration)被請求。為了確保——致的分 布’依據本發明所使用的製備物以及劑量形式的一致插入 亦"T藉由使用靜水壓（hydrostatic pressure)的腫脹方法 (tumescence meth〇d)而發生在某些應用中。 再者’經皮的投藥變成可能的，它可在各種不同的載 劑介質（諸如乳霜、軟膏、凝膠、水凝膠、乳液或糊）中並且 藉由使用不同的工具(特別是離子電滲、微穿孔、電穿孔或 超聲導入）而被執行。 適合的製備物以及劑量形式是例如懸浮液、乳劑或可 注射的溶液，還有具有活性物質的延長釋放（protracted release)的化合物（其中製造共同的工具被使用）。該等製備 物亦可有如一濃縮物(concentrate)、乾燥物質或束乾物而存 在以例如增加穩定性。 較佳地，該等藥學化合物以劑量單位(dosage units)而 被生產以及投藥，藉此各個單位含有一特定劑量的該製備 物作為活性成分(active constituent)。對於呈安瓶(ampule) 形式的注射溶液，這個劑量可以是以磷脂為基礎每ml自大 約10 mg上達大約2000 mg、較佳地自大約50 mg上達大約 2000 mg、更佳地自大約250 mg至500 mg。 關於治療成人病患，視要被治療的脂肪組織的大小而 定，關於可注射的溶液的投藥，以磷脂為基礎每注射期（具 20 201143778 有最大200次注射）5 mg至2500 mg、較佳地250 mg至2500 mg的每日劑量是必需的。該等可注射的溶液亦可在投藥之 前被進一步稀釋(較佳地以一鹽水溶液）。然而，在某些情況 下’較高或較低的每曰劑量可為適當的《該劑量亦視脂肪 堆積的大小而定，對於小脂瘤以磷脂為基礎每脂瘤自125 mg至500 mg、較佳地25〇11^至50〇11^的數量是完全足夠 的。每日劑量的投藥可以一單一投藥的形式或有如數個較 小的劑量單位以及藉由在特定的間隔中複數次投藥細分的 劑量（subdivided doses)而發生。 I：實施方式3 本發明以實施例而被更詳細的闡明。 實施例 實施例1 : 一供皮下使用的注射溶液的製備 在惰性氣體(inert gas)下，一具有0,2 g (8%)甘草酸的三 鈉鹽、1,8 g (72%)麥芽糖以及4,5 ml的水的溶液被徹底地混 合以一具有〇,5 g (20%)來自大豆的磷脂以及0,5 ml (20%) 96-百分比乙醇的分散液(dispersion)。 該磷脂與該甘草酸的鹽類的總含量是28 %。在該磷脂 與該甘草酸的鹽類之間的比例是2,5 : 1。 乳劑在4°C下藉由音波處理（s〇nication)(MSE Souiprep 150 disintegrator, England)歷時30秒與一為1分鐘的中斷而 被分散。在大約10分鐘之後，一脂質體懸浮液(UPosome suspension)被形成。 該脂質體懸浮液經由一為〇,2 μπι濾膜而被過濾並且之 £ 21 201143778 後被凍乾。 5亥脂質體懸浮液（5,0 ml)在5小時内被冷;東乾燥東 乾）。因此，大約2,5 g鬆的、微淡黃色粉末被產生。 關於一皮下注射溶液’ 2,5 g的呈安瓶填充的化合物被 溶解在9,〇ml溶劑（水或Tris缓衝液）中。 實施例2 : —供皮下使用的脂質體-水系統的製備 一具有50 g的來自大豆的經純化的鱗脂（82,5 wt·-%填 脂+3,5 wt.-%填脂醯膽驗、達10 wt.-%鱗脂醯乙醇胺、〇,6 wt-%溶血磷脂醯膽驗以及一最大1〇 wt.-%的其他脂質）以及 0,25 g填脂醯甘油（phosphatidyl glycerol)的鈉鹽的溶液被製 備在250 ml乙醇中。該製備的溶液在真空下被還原 (reduced) 〇 所形成的磷脂（大概2 0 %)混合物在一惰性氣體流中藉 由混合以500 ml的水[已含有20,0 g (7,99 %)甘草酸的三鈉 鹽以及180,0 g (71,92 %)異麥芽糖(isomaltose)]而被分散。 該磷脂與該甘草酸的鹽類的總含量是28,07 %。在該磷 脂與該甘草酸的鹽類之間的比例是2,5 : 1。 這個分散液受到高壓均質（high pressure homogenization)(在600 bar) 5次。所形成的脂質體系統以一 為0,2 μιη的濾膜而被過濾並且在惰性氣體大氣(atmosphere) 下被裝填至10,0 ml的安瓶内。該產物具有下列特徵： 外觀：透明的、微乳白色液體 pH-值：6,5 透明度（Transparency)(660 nm) : 85 %。 22 201143778 顆粒的平均大小[雷射散射（1&似8(:抓以1^)]:7511111 無菌（sterility):根據需要 顯微性質（microscopic properties)[冰；東固定（cryo fixation)] . 30-90 nm 主要地單層脂質體（monolamellar liposomes)、單一雙層脂質體(singie bilamellare liposomes)。 呈安瓶填裝的化合物的透明度在儲存的2、6、9以及12 個月後被試驗。與產物1的原始清晰度(clarity)沒有差異。 實施例3 :磷脂醯膽鹼在3T3-L1細胞的一膜損害效用 (membrane damaging effect)的研究 為了活體外試驗磷脂醯膽鹼在膜完整性以及穩定性上 的效用’分化的3T3-L1細胞與不同濃度的磷脂醯膽鹼被培 育歷時4以及24小時，並且接著藉由光學顯微術（light microscopy)而被分析。 作為一模型系統，鼠類前脂肪細胞(preadipocyte)細胞 株3T3-L1被使用供研究。3T3-L1細胞藉由一傳統的激素雞 尾酒（hormone cocktail)[皮質固醇(corticosterone)、異 丁基甲 基黃 °票 D令（isobutylmethylxanthine) 、° 弓丨咕美辛 (indomethacin)、胰島素（insulin)]而被刺激以脂肪生成 (adipogenesis)，並且分化歷時另外8天至成熟的脂肪細胞 (adipocytes) 〇 3 T 3 - L1細胞的成熟脂肪細胞被處理以各種不同濃度的 鱗脂酿膽驗。 首先，一磷脂If膽驗母液(stock solution)被製備：500 mg/ml磷:脂醢膽驗溶解在70 %乙醇 23 201143778 所使用的磷脂醯膽鹼的濃度是：1 mg/ml、5 mg/ml' 10 mg/ml '15 mg/ml ' 20 mg/ml 在第la圖中，3T3-L1細胞在處理以1 mg/ml、5 mg/ml、 10 mg/nU、15 mg/ml以及20 mg/ml麟脂臨膽驗的24小時之後 的一光學顯微術影像被顯示’以及在第lb圖中，在一63-倍 放大率的被處理以磷脂醯膽鹼的3T3-L1細胞的詳細共軛焦 雷射掃描顯微鏡（confocal laser scanning microscope, CLSM) 影像可被看到。第lc圖顯示在處理以磷脂醯膽鹼之後的碘 化丙咬(propidium iodide，PI)染色的 3T3-L1 細胞。 第la圖：在2D細胞培養中被處理的經分化的3T3-L1細 胞的相對比影像(phase contrast images)。該處理如下： (a) 對照=未被處理的細胞在分化培養基 (differentiation medium)中 (b) 1 mg/ml的鱗脂蕴膽驗在24小時以後 (c) 5 mg/ml的填脂醯膽驗在24小時以後 (d) 10 mg/ml的鱗脂酿膽驗在24.小時以後 (e) 15 mg/ml的續脂酿膽驗在24小時以後 (f) 20 mg/ml的碌脂酿膽驗在24小時以後 [尺寸棒(Size bar)=100 μιη]。 第lb圖：使用一CLSM在一為63-倍放大率的在2D細胞 培養中被處理的經分化的3T3-L1細胞的像對比影像。該處 理如下： (a) 對照=未被處理的細胞在分化培養基中在4小時以後 (b) 1 mg/ml的填脂酿膽驗在4小時以後 24 201143778 (c) 5mg/ml的磷脂醯膽鹼在4小時以後 ⑷l〇mg/ml的構脂酼膽驗在4小時以後 (尺寸棒=20 μιη)。 第lc圖：使用一CLSM在一為63-倍放大率的在ΡΙ染色 之後在2D細胞培養中被處理的經分化的3T3 U細胞的相對 比（PC)-影像。該處理如下： (a) 對照=未被處理的細胞在乙醇中 (b) 正對照=未被處理的細胞在分化培養基+ 1% Triton (c) 5 mg/ml的鱗脂醯膽驗在4小時以後 (d) 10mg/ml的填脂醯膽驗在4小時以後 (e) 15mg/ml的填脂醯膽驗在4小時以後 在培育期間（4小時）以後’脂肪細胞被以5 pg/ml PI染色 並且以CLSM予以分析。在上面的PI-列（a_e) pi-染色的細胞 的螢光影像(fluorescence images)被顯示。在下面的PK-列 (a - e)對應的相對比影像一個在另一個上面被重疊以螢光影 像(尺寸棒=20 μιη)。 被處理以磷脂醯膽鹼的細胞（第la與lb圖）顯示與未被 處理的對照無形態的差異（morphological differences)。因 此，磷脂醯膽鹼具有無細胞毒性效用。可比較濃度(20 mg/ml) 的Na-去氧膽酸引起細胞膜的一清楚破壞，這已沒有發生在 所使用的濃度的磷脂酿膽鹼。 磷脂醯膽鹼具有無細胞毒性效用藉由PI染色該等被處 理的細胞而被確定。 因此，經分化的3T3-L1已被處理以5 mg/ml、10 mg/ml 25 201143778 以及15 mg/ml磷脂醯膽鹼歷時4小時。接著，5 g/ml PI被添 加至培養基歷時5分鐘，以及該等細胞以CLSM而被分析（第 lc圖）。 乙醇被添加至對照（第lc圖，（a))，藉此如在用於治療 該等細胞的溶液的相同濃度被達到。第lc (a)圖顯示沒有細 胞被染色以PI。結果被使用的乙醇在所使用的濃度下具有 無細胞毒性效用。 在第lc(b)圖中，以1% Triton的正對照顯示許多細胞藉 由PI而染紅。這個指示一細胞膜的傷害。在此該細胞的膜 穩定性以及完整性被損害。 藉由比較，在被處理的細胞中沒有紅色-染色的細胞可 偵測的（第lc(c)至(e)圖）。因此，這些細胞具有無膜穩定性 與完整性的傷害。因為這個原因，磷脂醯膽鹼在經分化的 3T3-L1細胞上沒有損害效用。 這個結果充分地與光學顯微分析相關聯（比較第la與 lb圖），其中亦沒有磷脂醢膽鹼的細胞損害效用被觀察到。 實施例4 :來自人類皮下脂肪組織的“脂肪衍生的幹細胞 (Adipose-Derived Stem Cells)”(ADSC)的萃取 人類皮下脂肪組織可作為成人幹細胞的一可能來源。 這些所謂的“脂肪衍生的幹細胞”(ADSC)是多潛能 (multipotent)並且可藉由適當的刺激而被分化成各種不同 的細胞類型[例如成骨細胞（osteoblasts)、軟骨細胞 (chondrocytes)、脂肪細胞]。從在整型還原手術的期間被移除 的人類皮下脂肪組織中分離ADSC被圖表地顯示在第2圖中。 26 201143778 首先，脂肪以缓衝液予以清洗以移除造血細胞 (hematopoietic cells)，並且接著予以壓碎。所形成的脂肪組 織部分以膠原酶(collagenase)予以消化。藉由離心被消化的 組織，基質-血管分離部分(stromal-vascular fraction)被分開 並且漂浮的成熟脂肪細胞被丟棄。在沉澱物(pellet)中的基 質-血管分離部分包含有一具有血液細胞、纖維母細胞 (fibroblasts)、外被細胞（pericytes)、内皮細胞（endothelial cells)以及前脂肪細胞的異質細胞族群(heterogeneous cell population) ° 這些細胞族群被轉移至一具有培養基的培養瓶中，其 中一部分的細胞黏附。藉由添加一由胰島素、地塞米松 (dexamethasone)、吲哚美辛以及異丁基甲基黃嘌呤所構成 或由膜島素、皮質固醇、曲格列酮(tr〇glitazone)、三峨曱狀 腺素（triiodothyronine)以及異丁基曱基黃嘌呤所構成的適 合雞尾酒，該等細胞被刺激用於脂肪生成並且一經改善的 脂肪生成分化被達到。 實施例5 : ADSC的鱗脂酿膽驗以及去氧膽酸納（sodium deoxycholate)的一膜損害效用的研究 Na-去氧膽酸(Na_D〇 實施例4的ADSC藉由一激素雞尾酒（胰島素、皮質固 醇 '曲格列酮、三碘甲狀腺素以及異丁基甲基黃嘌呤）而被 刺激以脂肪生成，並且接著被分化歷時另一個21天成為成 熟脂肪細胞。 這個繼而一以去氧膽酸鈉的處理。關於這個，下列濃 27 201143778 度被使用：〇,〇l mg/ml、0,05 mg/m卜 0,075 mg/m卜 0，1 mg/ml 以及0,5 mg/ml。未被處理的ADSC被使用作為一對照。培育 期間是4小時。 這個濃度範圍已經被證實在3T3-L1有效的。在4小時的 培育期間之後，該等經分化的被處理的細胞隨後藉由光學 顯微術而被觀看（第3a圖）。 此外以去氧膽酸鈉處理的ADSC以CLSM而被檢查。該 等經分化的成熟脂肪細胞被處理以〇,〇1 mg/ml、0,05 mg/ml 以及0,1 mg/ml去氧膽酸鈉歷時4小時。未被處理的ADSC被 使用作為一對照。這個繼而以CLSM (在一為63-倍放大率） 的顯微分析（第3b圖）。 去氧膽酸鈉在ADSC上的一細胞損害效用的進一步分 析藉由PI染色該等被處理的細胞以及隨後以CLSM分析而 被執行。該等經分化的成熟脂肪細胞被處理以：〇,〇5 mg/m卜0，1 mg/ml以及0,5 mg/ml去氧膽酸鈉歷時4小時。未 被處理的ADSC被使用作為一對照。 接著該等細胞被培育在一含有5 g/ml碘化丙啶的培養 基中歷時5分鐘。這個繼而以CLSM (在一為63-倍放大率） 的顯微分析（第3c圖）。 第3a圖：經分化的ADSC在處理以各種不同濃度的去氧 膽酸鈉(Na-DC)之後在2D細胞培養的光學顯微影像。該處理 如下： (a) 對照=未被處理的細胞在分化培養基中4小時 (b) 0,01 mg/ml Na-DC在4小時以後 28 201143778 (c) 〇,〇5 mg/ml Na-DC在4小時以後 (d) 0,075 mg/ml Na-DC在4小時以後 (e) 0,1 mg/ml Na-DC在4小時以後 (f) 0,5 mg/ml Na-DC在 4小時以後 黑色箭頭指在具有被損害的膜的細胞或細胞片段。自 色箭頭指示無脂質小滴（free lipid droplets)。 (尺寸棒=1〇〇 μηι)。 第3b圖：經分化的ADSC在處理以各種不同濃度的去氧膽 酸鈉(Na-DC)之後在2D細胞培養的CLSM影像。該處理如^ : (a) 對照=未被處理的細胞在分化培養基中4小時 (b) 0,01 mg/ml Na-DC在4小時以後 (c) 〇,〇5 mg/ml Na-DC在4小時以後 (d) 〇，1 mg/ml Na-DC在4小時以後 黑色箭頭指在具有被損害的膜的細胞或細胞片段。自 色箭頭指示無脂質小滴。 (尺寸棒=20 μιη)。 第3c圖：經分化的ADSC在處理以各種不同濃度的去氧 膽酸鈉（Na-DC)之後在2D細胞培養的共軛焦雷射掃描顯微 影像。該處理如下： (a) 對照=未被處理的細胞在分化培養基中4小時 (b) 正對照=未被處理的細胞在分化培養基+ 1% TritQn (c) 0,05 mg/ml Na-DC在4小時以後 (d) 0，1 mg/ml Na-DC在4小時以後 (e) 0,5 mg/ml Na-DC在 4小時以後 29 201143778 在培育期間(4小時)以後’該等脂肪細胞被染色以5 —m1PI並且以CLSM予以分才斤。在上面的朽列㈣叩染 色的細胞的螢光影像被顯示。在下面的ρκ列㈣對應的相 對比影像-個在另-個上面被重疊以螢光影像(尺寸棒=2〇 μιη)。 一為0,01 mg/ml的非常低的去氧膽酸鈉濃度在該等細 胞上無效用（第3a(b)圖）。與對照組沒有差異（第3a(a)圖）被看 到。該等脂肪細胞是活的（vital)並且具有一完整的細胞膜。 一自0,05 mg/ml的濃度的增加已經導致細胞膜的光損傷（第 3a(c)圖）。這個在下一個更高的濃度中被加強（第3a(d，e) 圖）。0,5 mg/ml的最高劑量對該等細胞運用一顯著地毒性效 用（第3a(f)圖）。該等脂肪細胞死亡，細胞膜被完全地破壞， 因此根本上僅無脂質小滴以及細胞片段存在。去氧膽酸鈉 在ADSC上的效用沒有不同於在3T3-L1上所具者。可建立相 同的劑量-效用關係。在這兩個模型系統中，在〇,〇5 mg/ml 去氧膽酸鈉下膜損害效用發生，並且一為〇,5 mg/ml的濃度 被發現是高度毒性的。 藉由以先前觀察所用的共軛焦顯微鏡詳細檢查該等被 處理的細胞可被確認。當一為〇,〇1 mg/ml的低濃度去氧膽酸 鈉（第3b(b))顯示對細胞無細胞毒性效用時，一為〇, 1 mg/ml 的濃度（第3b(d)圖）引起強的細胞損害。這個證明Na-去氧膽 酸的一區別的膜損害。 這個效用藉由在以去氧膽酸鈉再以蛾化丙咬處理之後 染色ADSC細胞而被確認。 30 201143778 以1% Triton的正對照清楚地顯示由朽所染色的紅色細 胞(指示膜損害的細胞）。（第3c(b)圖）。 在一以0,05 mg/ml去氣膽酸鈉的處理以後，無紅色染色 的細胞並且因此無具有被損害的膜完整性以及穩定性的細 胞被4貞測到（第3c(c)圖）。在—以〇,i mg/mi去氧膽酸鈉的處 理以後，個別的紅色染色的細胞並且因此一些具有被損害 的膜完整性以及穩定性的細胞是可偵測的（第3c(d)圖）。在 一以0,5 mg/ml去氧膽酸鈉的處理以後，許多且清楚地紅色 染色的細胞並且因此許多具有被損害的膜完整性以及穩定 性的細胞是可偵測的（第3c(e)圖）。 這個清楚地顯示0,5 mg/ml的去氧膽酸鈉濃度對ADSC 的一膜損害效用。 磷脂醯膽鹼(PC) 類似於以Na-去氧膽酸的實驗，磷脂醯膽鹼亦被研究一 膜損害效用。 為了相似於以Na-去氧膽酸的實驗的這個目的，來自實 施例4的ADSC被使用並且藉由一激素難尾酒（膜島素、皮質 固醇、曲格列酮、三碘曱狀腺素以及異丁基曱基黃嘌呤）而 被分化成成熟脂肪細胞。 接著該處理以磷脂醯膽鹼而被執行。為了這個，下列 濃度被使用：1 mg/ml、5 mg/ml、、Μ mg/ml以及 20 mg/ml。未被處理的ADSC被使用作為一對照。培育期間 是4小時。 這個濃度範園已經被證實在3T3_L1有效的。在4小時的 31 201143778 培育期間之後’該等經分化的被處理的細胞隨後藉由光學 顯微術而被觀看（第4&圖）。 此外以填脂醯膽鹼處理的ADSC以CLSM而被檢查。該 等經分化的成熟脂肪細胞被處理以：1 mg/ml、5 mg/ml以及 15 mg/ml填脂酿膽驗歷時4小時。未被處理的ADSC被使用 作為一對照。這個繼而以CLSM (在一為63-倍放大率）的顯 微分析（第4b圖）。磷脂醯膽鹼在ADSC上的細胞損害效用的 一進一步分析藉由PI染色該等被處理的細胞以及隨後以 CLSM分析而被執行。該等經分化的成熟脂肪細胞被處理 以：5 mg/ml、10 mg/ml以及15 mg/ml填脂醯膽驗歷時4小 時。未被處理的ADSC被使用作為一對照。 接著該等細胞被培育在含有5 g/ml碘化丙啶的培養基 中歷時5分鐘。這個繼而以CLSM (在一為63-倍放大率）的顯 微分析（第4c圖）。 第4a圖：經分化的ADSC在處理以各種不同濃度的磷脂醯 膽鹼(PC)之後在2D細胞培養的光學顯微影像。該處理如下： (a) 對照=未被處理的細胞在分化培養基中4小時 (b) 1 mg/ml PC在4小時以後 (c) 5 mg/ml PC在4小時以後 (d) 10 mg/ml PC在4小時以後 (e) 15 mg/ml PC在4小時以後 (f) 20 mg/ml PC在4小時以後 (尺寸棒=1〇〇 μιη)。 第4b圖：經分化的ADSC在處理以各種不同濃度的磷脂 32 201143778 醯膽鹼(PC)之後在2D細胞培養的cLSM影像。該處理如下： (a) 對照=未被處理的細胞在分化培養基中4小時 (b) 1 mg/ml PC在4小時以後 (c) 5 mg/ml PC在4小時以後 (d) 10 mg/ml PC在4小時以後 (尺寸棒=20 μιη)。 第4c圖：經分化的ADSC在處理以各種不同濃度的磷脂 醯膽驗(PC)之後在2D細胞培養的CLSM影像。該處理如下： (a) 對照=未被處理的細胞在分化培養基中4小時 (b) 正對照=未被處理的細胞在分化培養基+丨％ Trit〇n (c) 5 mg/ml PC在4小時以後 (d) 10 mg/ml PC在4小時以後 (e) 15 mg/ml PC在4小時以後 在培育期間（4小時）以後，該等脂肪細胞被染色以5 μιη/ml PI並且以CLSM予以分析。在上面的PI_列（a_e) pi-染 色的細胞的螢光影像被顯示。在下面的ΡΚ—列（a_e)對應的相 對比影像一個在另一個上面被重疊以螢光影像。（尺寸棒= 20 μηι)。 對應於在3T3-L1中的觀察（實施例3)，在用於構脂酿膽 驗的ADSC-細胞Α模型中無細胞毒性效用（第4a圖）被建 立。不管PC濃度’該等細胞是活的並且顯示無型態改變。 相較於Na-DC，已經在一為〇,〇5 mg/ml Na-DC的濃度下 一傷害被證明並且在一為〇,5 mg/ml的濃度下ADSC死亡（第 3c 圖）〇 33 201143778 ADSC在處理以磷脂醯膽驗之後以CLSM的一觀察證 實：對該等細胞(4b)無傷害存在。未被處理的對照以及以15 mg/ml PC處理的ADSC這兩者顯示一完整的型態學。因此磷 脂酿膽驗不具有細胞毒性效用。 被處理以磷脂醯膽鹼的ADSC的PI染色證實：磷脂醯膽 驗在活體外不具有細胞毒性效用。 以1% Triton的正對照清楚地顯示由pi所染色的紅色細 胞(指示膜損害的細胞）。（第4c (b)圖）。 在以5、10以及15 mg/ml去氧膽酸鈉的處理之後以及在 各個PI染色之後，無紅色染色的細胞並且因此無具有被損 害的膜完整性以及穩定性的細胞是可偵測的（第4c (c)至（e) 圖）。 這個清楚地顯示以破脂醯膽驗治療在ADSC上不具有 膜損害效用。 相反地，ADSC的膜完整性和穩定性藉由Na-去氧膽酸 而被顯著地損害（第3c(de)圖）。 以Na-去氧膽酸和磷脂醯膽鹼的實驗顯示：僅Na-去氧 膽酸具有一細胞毒性效用，但不是磷脂醯膽鹼。磷脂醯膽 鹼不會引起對細胞膜或細胞的損害。這些觀察藉由使用數 種方法（諸如光學顯微術、碘化丙啶染色繼而螢光顯微術) 而被證實。 該等物質的效用在研究期間隨著時間沒有變化；一為2 小時的培育已經顯示如一為24-小時培育的相同效用。以 Na-去氧膽酸的實驗顯示：膽鹽（bile salt)是膜去穩定的 34 201143778 (membrane destabilizating)以及壞死的。在評估活體外所需 的劑量以後，可能的是：活體内所使用的Na-去氧膽酸數量 是細胞毒性的。 關於磷脂醯膽鹼，活體外無細胞毒性效用可被證明， 它亦可能是活體内的例子。這個磷脂不是細胞毒性的。 實施例6 :在填脂酿膽驗、甘草酸鹽（glycyrrhizinate)以及麥 芽糖的組合上的研究 一新物質組合的效用被研究。這個組合由50 mg/ml磷 脂醢膽驗（PC)、20 mg/ml甘草酸三納（trisodium glycyrrhizinate)以及 180 mg/ml麥芽糖構成。 關於膜損害以及細胞毒性效用的第一劑量-反應關係 被測定，並且被試驗脂肪分解活性(lipolytic activity)。 鼠類前脂肪細胞細胞株3T3-L1被使用作為一模型系統 用於研究。3T3-L1細胞藉由一激素雞尾酒（皮質固醇、異丁 基甲基黃嘌呤、吲哚美辛、胰島素）而被刺激以脂肪生成並 且被分化歷時另一個8天至成熟的脂肪細胞。 3T3-L1細胞的成熟脂肪細胞被培育以各種不同濃度的 磷脂醯膽驗(在〇,1 mg/ml與50 mg/ml之間）。填脂醯膽驗被組 合以2 - 2〇 mg/ml甘草酸鹽以及18-180 mg/ml麥芽糖。 成熟的3T3-L1細胞與該物質組合的培育被執行歷時一 為4小時的持續時間（durati〇n)。 接著該等被處理的細胞藉由光學顯微術在一為63-倍 放大率下被檢查一膜去穩定以及細胞毒性效用。 結果被顯示在第5與6圖中： 35 201143778 第5圖：使用一CLSM的被處理的經分化的3T3_L1細胞 在2D細胞培養的像對比影像。該處理如下： (a) 對照=未被處理的細胞在分化培養基中 (b) 5 mg/ml PC + 2 mg/ml甘草酸鹽 + i 8 mg/ml麥芽糖 (c) 10 mg/ml PC + 4 mg/ml甘草酸鹽 + 36 mg/ml麥芽糖 (d) 20 mg/ml PC + 8 mg/ml甘草酸鹽 + 72 mg/mi麥芽糖 (e) 30 mg/ml PC + 12 mg/ml甘草酸鹽 + 1〇8 mg/ml麥芽糖 (f) 50 mg/ml PC + 20 mg/ml甘草酸鹽 + 180 mg/ml麥芽糖 (尺寸棒=20 μιη)。 第6圖：使用一 CLSM的被處理的經分化的3T3_L1細胞 在2D細胞培養的影像。該處理如下：

(a)負對照=未被處理的細胞在分化培養基中 ⑻正對照=未被處理的細胞在分化培養基+1% Trit〇n X (c) 20 mg/ml PC + 8 mg/ml甘草酸鹽 + 72 mg/ml麥芽糖 (d) 30 mg/ml PC + 12 mg/ml甘草酸鹽 + i〇8 mg/mi麥芽糖 (e) 50 mg/ml PC + 20 mg/ml甘草酸鹽 + i8〇 mg/ml麥芽糖 在培育期間（4小時）之後，該等脂肪細胞被染色以5 pg/ml PI並且以CLSM予以分析。在左邊的pI_欄（a_e) PI_染 色的細胞的螢光影像被顯示。在右邊的ρκ_欄(a_e)對應的相 對比影像一個在另一個上面被重疊以螢光影像。（尺寸棒= 20 μιη)。 以該物質組合治療的脂肪細胞與對照細胞（對照第5a 圖）沒有不同。光學顯微它們顯示如對照的細胞的相同蜇 態，它們是活的並且具有一完整的細胞膜。該物質組合不 36 201143778 管濃度在細胞上不具有可見的膜損害效用（第5圖）。 為了證實完整的膜完整性，PI染色該等被處理的 3T3-L1細胞以及對照被進行。關於這個物質組合以下列濃 度而被使用： 20 mg/πύ、30 mg/ml以及5〇 mg/mi磷脂醯膽鹼； 8 mg/πύ、12 mg/ml以及20 mg/ml甘草酸鹽；以及 72 mg/πύ、108 mg/ml 以及 18〇 mg/mi麥芽糖。 培育期間是4小時。接著該等被處理妁細胞以及2個對 照被培育以5 pg/ml PI歷時5分鐘。分析使用CLSM而被執行 (第6圖）。 以Triton X處理該等細胞導致一膜完整性的損害。那是 為什麼碘化丙啶能夠進入該等細胞並且染色膜去穩定的細 胞。如預期的’正對照（第6b圖）顯示一由Triton X所滲透的 細胞的染色。負對照的未被處理的細胞（第6a圖）不由Pi所染 色。這個指示這些細胞的膜是完整的。 以 2〇 mg/ml PC (第 6c圖）以及3〇 mg/mi pc (第 &圖）處 理的細胞沒有顯示藉由PI染色。因此，這些細胞顯示沒有 膜的損害以及該等被使用的物質組合沒有細胞毒性效用 (第6c、d圖）。 以50 mg/ml PC (第6e圖）處理的細胞顯示該等細胞的 一弱紅色染色（第6 e圖）。這些細胞被處理以高劑量的該物質 組合。因此該培養基完全地從該等細胞被移除並且—營養 物(nutrients)的缺乏產生，導致細胞損害在延長的培養中。 50 mg/ml PC處理的細胞的弱染色可因此歸因於缺之營養 37 201143778 物並且沒有一起因於磷脂醯膽鹼的該等細胞的傷害。 磷脂醯膽鹼、甘草酸鹽以及麥芽糖的物質組合顯示在 被執行的活體外實驗中沒有膜損害效用。應該被注意的 是：為了偵測該等發明物質組合的一可能的膜損害，非常 高的濃度（顯著地高於在活體内治療所使用的濃度)被使用。 在一活體内與活體外效用之間的關係被知曉有如一活 體内/活體外相關性（丨《 viW/rt correlation)。活體内/活 體外相關性的決定不是不重要的並且在各種不同的條件下 不同地表現。在許多例子中，大概一活體内/活體外按照係 數100相關性可被假設。這個意指活體外所使用的濃度是大 約10的2次方少於活體内所使用的劑量以達到相似效用。在 這個基礎上，吾人可預期例如用於注射脂肪分解的 Lipostabil® N被例示在表1的活體外濃度。 表1

在化合物中活體内 所使用的濃度 預期的活體外澧度 (係數 lOC^tnig/mli 引起活體外細胞損 害的濃度 Na去氧膽酸 12,65 mg/ml 0,1265 自 0,05 mg/ml 磷脂醯膽鹼 25 mg/ml 0,25 無 來自 Lipostabil 的 Na-DC ' PC 12,65 mg/ml Na-DC 25 mg/ml PC 0,1265 0,25 自 0,05 mg/ml Na-DC 自 0,1 mg/ml PC 在Na-去氧膽酸的例子中，在Lip〇stabii®中有如一單一 試劑以及物質這兩者，就大小而論在計算以後所預期的活 體外濃度與在實驗中所測定的濃度相符（表丨）。因此，可被 推斷出：這個物質在注射脂肪分解所使用的濃度下非常可 能地具有一細胞損害效用。 因此，極端不可能的是：依據本發明的物質組合的活 38 201143778 體内所使用的濃度將引起如來自本技藝的狀態的一者的相 同的細胞的膜損傷（以及隨後的壞死）。相同的轉化因子可因 此被假設用於磷脂醯膽鹼與甘草酸的組合。 實施例7 :被處理的細胞在小鼠中的發炎反應的活體内研究 由於發炎是一關於脂肪衍生的幹細胞（ADSC)的移動 (migration)的觸發(trigger)，一含有磷脂醯膽鹼(PC)、甘草 酸(GR)以及麥芽糖(MAL)(25 mg/ml PC、1〇 mg/ml GR、90 mg/ml的MAL)的混合物（第8d-f圖）、PBS緩衝液（第8g-i圖） 或大腸桿菌（五· 細胞（第8a-c圖）被注射至BALB/c小鼠的 右皮下脂肪組織中。培育是5天。 隨後’它針對CD4、CD8、CD19以及CD20而被染色以 研究該等細胞的發炎反應。 此外，脂肪衍生的幹細胞(ADSC)藉由一慢病毒表現載 體（lentiviral expressing vector) eGFP/螢光素酶(luciferase) 而被標記並且在初始注射至相對的BALB/c小鼠的脂肪組 織之後48小時被注射。 細胞的移動藉由生物發光（bi〇iurninescence)而被觀 察。實施例7的結果被顯示在第8圖中。 第8圖：在皮下注射ADSC至具有下列的Balb/c小鼠的右 脂肪組織以後螢光素酶-標定的細胞的生物發光影像： (a-c)大腸桿菌細胞 (d-f)磷脂醯膽驗+麥芽糖+甘草酸鹽(PMC) (g-i) PBS-緩衝液 在48小時以後，各個螢光素酶_標定的adSC細胞被腹

S 39 201143778 膜内地注射，並且ASC細胞的移動使用生物發光而被觀 察。在小鼠(d-i)中，該等ASC細胞移動至肝以及脾内。在小 鼠(a-c)中，該等ASC細胞移動至由大腸桿菌注射感染的區 域並且累積在那裏。 在具有PBS的小鼠（第8g-l圖）以及在具有含有PC的混 合物的小鼠（第8d-f圖）中，在ADSC細胞的移動上沒有差異 被觀察到。相反地，在已被注射以大腸桿菌的小鼠中，一 A D S C細胞的移動以及累積在起因於大腸桿菌的注射所引 起的被感染的區域被觀察到。 因此，在此藉由螢光素酶-標定的脂肪衍生的幹細胞 (ADSC)細胞顯示：一活體内注射一含有填月旨醯膽驗 (PMC)、甘草酸三鈉以及麥芽糖的混合物沒有引起發炎反 應。這個事實上證明：螢光素酶-標定的ADSC細胞不會移 動至或累積在該混合物被注射的皮下脂肪組織。 實施例8在該物質組合的脂肪分解作用上的活體外研究 3 T 3 - L1細胞藉由一激素雞尾酒而被刺激以脂肪生成並 且予以分化歷時另一個8天至成熟的脂肪細胞。這個繼而一 為4-小時培養細胞以： 10 mg/ml、25 mg/ml以及50 mg/mli粦脂醯膽驗以及 4 mg/ml、10 mg/ml以及20 mg/ml甘草酸鹽以及 36 mg/ml ' 90 mg/ml 以及 180 mg/ml 麥芽糖 脂肪分解活性使用一如下面所描述的脂肪分解試驗而 被測量： 脂肪分解試驗的方法： 40 201143778 切割三酸甘油脂（triglycerides)至甘油以及3種脂肪酸 被知曉為脂肪分解。這個過程主要藉由激素敏感的脂酶 (lipase)以及脂肪三酸甘油脂脂酶（adipose triglyceride lipase) 而被催化。使用一脂肪分解分析，細胞的脂肪分解活性可 被偵測。這個分析是根據在脂肪分解的期間出現的甘油（藉 由細胞被分泌至培養基中）的測量。甘油藉由酵素反應被代 謝成甘油-1-碌酸醋（glycerol-1-phosphate)以及接著碌酸二 經丙顔I (dihydroxy acetone phosphate)。藉此過氧化氫 (hydrogen peroxide)被產生，它以一過氧化酶染色反應 (peroxidase stain reaction)而被光度地定量。為了能夠做出 關於物質的脂肪分解作用的說明，它們與該等細胞的基礎 脂肪分解活性以及由β-腎上腺素受體（beta-adrenergic receptor)所刺激的脂肪分解比較。此一刺激可由異丙基腎上 腺素(isoproterenol)所引起。 實施例8的結果被顯示在第7圖中。 第7圖：以被處理的經分化的3T3-L1細胞的脂肪分解試 驗(μβ甘油DNA)的分析。3T3-L1藉由一激素注射雞尾 酒而被刺激以脂肪生成’並且接著予以分化歷時8天。成熟 脂肪細胞的處理分別在具有下列的3% BSA/PBS中被進行 歷時4小時. 10 μΜ異丙基腎上腺素（用於刺激脂肪分解的正對照） 10 mg/ml磷脂醯膽驗+4 mg/mi甘草酸鹽+36 mg/mi麥芽糖 25 mg/ml填脂醯膽鹼+1〇 mg/m丨甘草酸鹽+9〇 mg/ml麥 芽糖

S 41 201143778 50 mg/ml磷脂醯膽鹼+20 mg/ml甘草酸鹽+ 180 mg/ml麥 芽糖 未被處理的細胞在3% BSA/PBS中被使用作為一供基 礎脂肪分解活性的對照。條狀物(bars)指示n=3的標準偏差 (standard deviation)。實驗被進行2次。（PC=磷脂醯膽鹼） 在第7圖的第一條狀物顯示：在3 %bSA/PBS中的未被 處理的細胞的基礎脂肪分解活性是在8 pg甘油/μβ的 DNA°根據這個基礎位準，其它樣品的脂肪分解活性被測 定。在正對照（第7圖）中，一脂肪分解的刺激由10 μΜ的β-腎上腺素受體促效劑(β-adrenoceptor agonist)異丙基腎上腺 素所誘發。正對照顯示一增加至8倍的基礎位準的脂肪分解 活性。被處理以該物質組合（1〇 mg/ml、25 mg/ml以及5〇 mg/ml的PC)的所有細胞相較於基礎位準顯示一增加的脂肪 分解活性（第7圖）。一以該含有1〇或25 mg/ml pc的物質組合 的細胞的治療相較於基礎位準導致一為5倍增加的脂肪分 解活性。一以該含有5〇mg/ml PC的物質組合的細胞的治療 相較於基礎位準導致一為3倍增加的脂肪分解活性（第7 圖）。如已被解釋的，起因於該等細胞具有一缺乏營養物[因 為收回對於它們存活或維持正常功能（諸如脂肪分解活性） 所需的培養基]的事實，於最高濃度下在脂肪分解活性的降 低是可能的。 本發明的物質組合活體外顯示一顯著的脂肪分解效用。 比較實施例1 :(含有磷脂醯膽鹼以及去氧膽酸鈉的 Lipostabil®) 42 201143778 0,005-0,5 mg/ml的Na_去氧膽酸濃度（效用有如—自 〇,05 mg/ml的單一物質）以及mg/如的磷脂醯膽鹼濃 度（無效用有如一單一物質）被使用。操作程序是類似於實施 例8。比較實施例j的結果被顯示在第9圖中。 第9圖：被處理的經分化的3T3_U細胞的相對比影像。 3T3-L1藉由一激素雞尾酒而被刺激以脂肪生成並且接著被 分化歷時8天。該等成熟的脂肪細胞被處理以來自 Lipostabil®的具有下列濃度的磷脂醯膽鹼以及去氧膽酸鈉： (a) 未被處理的細胞在分化培養基中 (b) 0,01 mg/mi磷脂醯膽鹼+〇,〇〇5 mg/ml他去氧膽酸 (c) 〇，1 mg/ml鱗脂醯膽驗+〇,〇5 mg/ml Na去氧膽酸 ⑷0,25 mg/ml磷脂醯膽鹼+〇，125 mg/ml Na去氧膽酸 ⑹0,5 mg/ml磷脂醯膽鹼以及〇,25 mg/ml Na去氧膽酸 (f) 1 mg/ml磷脂醯膽鹼+〇,5 mg/ml Na去氧膽酸 "亥刀析使用光學顯微鏡而被做出。具有損害的膜的細 胞或細胞片段被示範的標記以黑色箭頭，而無脂質小滴藉 由白色箭頭而被指示。 雖然最低濃度的磷脂醯膽鹼以及去氧膽酸鈉依然顯示 無效用（第9a圖）’在次高的濃度下該等細胞的一輕微傷害 (與增加的濃度一起被增強）是可見的（第允圖）。在第％圖 中’細胞膜被強大的影響，指*Up〇stabil®(在一為〇 5 mg/ml 磷脂醯膽鹼連同〇,25 mg/m去氧膽酸鈉的濃度下）強大地損 害該等細胞並且藉由壞死引起細胞死亡。Lip〇stabil®的效用 的性質與Na-去氧膽酸的清潔劑（detergent)作用（對細胞膜 43 201143778 典型的損害）(它的效用明顯地更能承受）更可比較的。磷脂 醯膽鹼作為一單一試劑的此一典型的膜損害效用不可被偵 測’暗示在Lipostabil®中的細胞毒性效用主要地產生自Na_ 去氧膽酸。Lipostabil®的有效濃度範圍與個別物質所具者的 比較支持關於在Na-去氧膽酸的優越效用（prep〇nderance effect)上的結論。鑒於該磷脂醯膽鹼作為一單一試劑不是有 效的，該Lipostabil®(在一為〇，1 mg/mi的磷脂醯膽鹼的濃度 下）已經達到輕微效用（在這個濃度下該p C作為一單一試劑 無效用）。然而，在一為〇,〇5 mg/ml的濃度作為一單一劑量 的去氧膽酸鈉已經引起初始的膜損害（在Lipostabil®在這個 濃度的期間亦發生）。 貫把例9:投藥Phosphogliv®與Lipostabil®給女性測試者以及 測定皮下脂肪分解的效力（efficacy) 到目前為止供肝疾病所使用的化合物Phosphogliv® i.v. 含有甘草酸取代DC(在Lipostabil® N i.v.)。在2個測試者上的 第一次實驗結果以及研究指示該化合物如Lipostabil® N i.v. 在顯著較佳的耐受性上的一相等效力。 在此所描述的實驗以Phosphogliv®的 > 較佳耐受性證 明 Phosphogliv®對Lipostabil®的一可比較效用。 在一預期、經控制的研究中，6位女性測試者被處理以 Phosphogliv®在左上臂以及以Lipostabil®在右上臂。 所使用的安瓶含有0,5 g PPC、0,2 g甘草酸鹽以及1，8 g 麥芽糖有如一凍乾物(每注射要被溶解在10 ml的水中）。視 要被注射的區域的範圍而定，上達60個皮下穿刺 44 201143778 (subcutancms punctures)在各個上臂上做出，〇 5⑹分別地在 一為1,5 cm的距離。 該等化合物的效用的時間研究： 該治療持續16週。分析在起始治療前一天(t = _丨）、在 第一次治療當天(t = 0)、在起始治療之後8週〇 = 8)以及在起 始治療之後16週(t= 16)被執行。 測定一效用 為了偵測一效用’測試者的上臂的圓周被測量。上臂 的圓周[cm]在治療以前以及在8與16週後使用一卡尺 (caliper)(卡尺）以及測量捲尺（measuring tape)[身體捲尺 (myo-tape)]而被測量。 此外’血脂肪總膽固醇(total cholesterol)、LDL-膽固醇 以及HDL膽固醇（呈mg/dl)以及LDL比HDL膽固醇的動脈硬 化指數(atherogenic index)被測定。 結果的呈現 自被測量的數值，如自基線(baseline)的差異的被測量 的數值變化以及自基線平均數值的變化（呈百分比）以及標 準偏差被測定。 45 201143778 鳍碱4:fs< 註記 可能服用怡妥 (Ezetrol-takin 只 probable) 臨床改善 Del / DelP Del / DelP | DrI/DrIP | DrI/DrIP DrI/DrIP DrI/DrIP Del / DelP Del/DelP Del / DelP Del / DelP DrI/DrIP HDL-膽固醇 fmg/dl] 〇〇— CO vn 58,9 C^l oo" 75,4 78,0 | o σΓ oo" 00 d\ oo o, ίο o oo" 〇 62,8 60,8 oo" \〇 cn ON VO LDL-膽固醇 rmg/dll o On v〇 T-H 112,0 127,0 136,0 129,0 | 128,0 104,0 103,0 cn in 49,0 120,2 110,0 110,9 oT 〇\ οί ON 總膽固醇 [md/dl] 269,0 o ON »n <N 237,0 I 222,0 I 218,0 212,0 214,0 143,0 141,0 〇\ 182,0 182,0 187,0 177,0 Myo re [cm] 〇, cn I 35,0 I 33,0 p, ci m 1 30,5 | I 29,0 I *T) OO <N p, ri (D ri >n oo" <N 〇 p, cn m cn CO 00 w-) 贫 o \〇 cn 〇 Ό" m in ri o, ci CO o 〇\ (N o On (N o Oh Myo li [cm] p, i〇 35,0 I WO <N o rf »〇 (N oo" (N o 00 <N o o 〇 o (N p, ΓΛ m p, CO m oq CO in m 〇l vn CO CO cn o, ci CO m «Γ (N m 00* (N o (N hJ 3l 1-H CO (N a\ oT 〇ι of (N CN (N cn CO rn cn 〇\ CN OO (N o〇w rn oq cn (N cn oq (N 泛 (N ΓΊ of CO ci Oh Calli [cm] CO cn v〇 of in (N ON ci ON ri ra CN p, <N cn <N cn oq cs oq CO cn m OO οί ON 〇i ci ri ri 〇i CN of 寸· Sa ^ ca i—* 1 〇 oo 1 〇 oo Ό 1 〇 oo VO i-H 1 〇 00 1 o oo H H 1 〇 00 化合物 測試者 CQ 1-^ PQ PQ HH PQ 1 Ch.K. I 1 Ch.K. I | Ch.K. I I Ch.K. I I S.A. I < tn < 00 < CO PQ ϋ ω ϋ ω C5 ω 〇 M.St. | M.St. I M.St. M.St. E.K. E.K. E.K. E.K. No. Ό (N CO 寸 珣煤 * 吔钇A3H_f«^sl^耍铽笮TTdpa :糾麵-f-inHf^sii^Inl-K-铼笮該=ρα·;.ϋ < #钇锼浮忘±1#耍铼 :蚓 1 <^^$3^Η^±ί^^^-^^=Ι3α:®3^&π = Ί:®>π&ο0Μ&0Η&,=ί1Η:ι^^#ιι^=3.Ι0^ν:^?^^ιι%=!0>.^:你切^4- =3J PQ :嘲叫^个=Η ΡΌ 46 201143778 測試者的上臂的圓周差異視所選的方法測量卡尺或身 體捲尺卡尺而定。不管被使用的方法，在各個例子中上臂 圓周的一降低是可偵測的。在的 效用之間，沒有不同的證據。這兩者化合物誘發一在相同 程度的上臂圓周的降低(參見表3-1與3_2)。 表3-1以卡尺所測量的上臂的圓周[cm] 在起始治療之後以週計的時間 - 測言 之者 I Jhosphoj 出v® (左） Lipostabil® (^) -1 0 8 16 -1 0 8 16 6 I.B. 3,1 3,1 2,6 2,5 3,1 3,1 2,7 2,5 2 Ch.K. 2,9 2,9 2,2 2,0 2,9 2,9 2,2 2,0 7 S.A. 3,2 3,2 2,8 2,7 3,3 3,3 2,9 2,8 1 G.E. 3,8 3,8 3,2 2,8 3,8 3,8 3,2 2,8 3 M.St. 2,9 2,9 2,6 2,5 3,0 3,0 2,7 2,6 4 E.K. 2,2 2,2 1,4 2,3 2,3 1,5 平均 3,02 3,02 2,47 2,50 3,07 3,07 2,53 2,54 標準偏差 0,52 0,52 0,62 0,31 0,49 0,49 0,60 0,33 N 6 6 6 5 6 6 6 5 表3-2相較於第〇週在以卡尺（呈cm)所測量的上臂的圓周的改 變[如絕對（absolute)以及相對差（relative difference)] 在起始治療之後以週計的時間 測試者 Phosphogliv® (左） Lipostabil® (右） 8 16 8 16 cm % cm % cm % cm % 6 I.B. -0,5 -16,1 -0,6 -19,4 -0,4 -12,9 -0,6 -19,4 2 Ch.K. -0,7 -24,1 -0,9 -31,0 -0,7 -24,1 -0,9 -31,0 7 S.A. -0,4 -12,5 -0,5 -15,6 -0,4 -12,1 -0,5 -15,2 1 G.E. -0,6 -15,8 -1,0 -26,3 -0,6 -15,8 -1,0 -26,3 3 M.St. -0,3 -10,3 -0,4 -13,8 -0,3 -10,0 -0,4 -13,3 4 E.K. -0,8 -36,4 -0,8 -34,8 平均 -0,55 -19,21 -0,68 -21,22 -0,53 -18,29 -0,68 -21,04 標準偏差 0,19 9,63 0,26 7,28 0,20 9,47 0,26 7,49 N 6 6 5 5 6 6 5 5 47 201143778 從表3-2清楚的是：在8週以後起因於Lip0Stabil®以及 卩11〇8?11〇§1^^’藉由使用卡尺一為19,21%以及18,29%的上 臂圓周的降低發生。在16週以後，一為21,22 %以及21,04 % 的上臂圓周的降低使用卡尺而被測定。因此，化合物 Phosphogliv®以及Lipostabil®這兩者具有相同的效力。 表4-1以身體捲尺所測量的上臂的圓周[cm] 在起始治療之後以週計的時間 測試者 Phosphogliv® (左） Lipostabil® (右） -1 0 8 16 -1 0 8 16 6 I.B. 35,0 35,0 32,5 32,0 35,0 35,0 33,0 32,0 2 Ch.K. 30,5 30,5 28,2 28,0 30,5 30,5 29,0 28,5 7 S.A. 31,0 31,0 27,0 26,0 32,0 32,0 28,5 27,0 1 G.E. 33,0 33,0 31,8 30,5 33,0 33,0 31,8 30,5 3 M.St. 35,0 35,0 33,0 32,0 36,0 36,0 32,5 32,0 4 E.K. 28,5 28,5 26,0 29,0 29,0 27,0 平均 32,17 32,17 29,75 29,70 32,58 32,58 30,30 30,00 標準偏差 2,62 2,62 3,04 2,64 2,65 2,65 2,46 2,21 N 6 6 6 5 6 6 6 5 表4-2相較於第0週在以身體捲尺（呈cm)所測量的上臂的 圓周的改變(如絕對與相對差） 在起始治療之後以週計的時間 測試者 Phosphogliv® (左） Lipostabil® (右） 8 16 8 16 cm % cm % cm % cm % 6 I.B. -2,5 -7,1 -3,0 -8,6 -2,0 -5,7 -3,0 -8,6 2 Ch.K. -2,3 -7,5 -2,5 -8,2 -1,5 -4,9 -2,0 -6,6 7 S.A. -4,0 -12,9 -5,0 -16,1 -3,5 -10,9 -5,0 -15,6 1 G.E. -1,2 -3,6 -2,5 -7,6 -1,2 -3,6 -2,5 -7,6 3 M.St. -2,0 -5,7 -3,0 -8,6 -3,5 -9,7 -4,0 -1U 4 E.K. -2,5 -8,8 -2,0 -6,9 平均 -2,42 -7,62 -3,20 -9,81 -2,28 -6,97 -3,30 -9,89 標準偏差 0,92 3,13 1,04 3,56 0,99 2,84 1,20 3,63 N 6 6 5 5 6 6 5 5 48 201143778 從表4-2清楚的是：在8週以後起因於Lipostabil®以及 Phosphogliv®，依據身體捲尺方法一為7,62 %以及6,97 %的 上臂圓周的降低發生。在16週以後，藉由身體捲尺一為9,81 %以及9,89 %的上臂圓周的降低被測定。因此，化合物 Phosphogliv®以及Lipostabil®這兩者具有相同的效力。 雖然卡尺以及身體捲尺這兩者方法顯示藉由該等化合 物的不同降低，在化合物Lipostabil®以及Phosphogliv®這兩 者的有效性(effectiveness)的程度是相等的。 實施例10 :評估來自以Lipostabil®以及Phosphogliv®治療的 副作用 因此，女性測試者如在實施例9所描述的被處理，並且 有效性被檢驗。為了提供副作用的文件，在處理以 Phosphogliv®以及Lipostabil®之前與之後的女性測試者的上 臂的影像被做出（第10與11圖）。 在3分鐘以後，在測試者1號的右上臂（被處理以 Lipostabil®)上一顯著的紅色以及腫脹被測定。此外比較左 上臂（被處理以Phosphogliv®) ’僅一輕微紅色以及腫脹被測 定。這個表型證實對磷脂醯膽鹼的活體外實驗的結果[在細 胞上不具有膜損害效用（實施例5，第4a-c圖））。在第11圖中 測試者2號的影像顯示在左（Phosphogliv®)以及右 (Lipostabil®)上臂之間的相同差異。 第10圖：在化合物Lipostabil®以及Phosphogliv®的左 (Phosphogliv®)以及右(Lipostabil®)投藥以後的攝影文件。 第11圖：在測試者號的左（Phosphogliv®)以及右 49 201143778 (Lipostabil®)上臂的處理以後的攝影文件。該等影像在化合 物Lipostabil®以及Phosphogliv®的投藥之後3分鐘被做出。 再者’副作用已被概述在下面的表5中。 表5起因於以Phosphogliv®與Lipostabil®治療的副作用 t = 0 t = 8 t = 16 ----1 測試者 P L P L P — L 編號1 僅短痛，幾乎無 腫脹 實質腫脹與疼 痛，上達3天 幾乎無痛 腫脹、變紅直到 4°'天 ____ 編號2 非常小的腫服 以及變紅 非常大的變紅 以及腫脹 左邊幾乎無痛 疼痛歷時1週 --— 編號3 沒事 發熱以及癢歷 時5分鐘。—微 疼痛在2週的& 間 “小事一樁”= —點也不痛 輕微疼痛在最 初2週的期間 無非預期的反 應。非含少的症 狀 無非預期的反 應。非舍乡的症 狀 編號4 僅歷時大約3分 鐘的疼痛在注 射區域 > 逢服以 及變紅歷時3 天。之後無疼 痛。無腫脹在全 部的期間 更多的疼痛、腫 脹在最初3天的 期間大約與以 Phosphogliv 相 同的。腫脹以及 變紅的持續時 間歷時12天。具 有 Lipostabil 敏 感性持續幾乎 所有8週 編號6 幾乎無痛 無症狀 腫脹與變紅上 達3天 編號7 幾乎無痛 竦痛以及腫脹< 易忍受 t這兩個臂上容 P = Phosphogliv® ； L = Lipostabil® 醫生以及測試者提及依據這兩者化合物在第一次與第 二次處理以後在所有例子中一致地上臂脂肪墊的一清楚或 戲劇性的改善（降低）以及一對Phosphogliv顯著較佳的财受 性。在治療以後皮膚抗性在所有例子中是好的。 在表5的數據顯示在處理以Lipostabil®以後測試者的症 狀涉及腫脹、紅色以及疼痛在注射位址。此等副作用在處 理以Phosphogliv®的期間很少或一點也沒有發生。因此， 50 201143778

Phosphogliv®要比化合物Lipostabil®是被詢問的測試者所顯 著較佳耐受的。如先前所提及的，較佳的耐受性是歸因於 降低的或無發生的細胞損害。如在實施例5所顯示的，填脂 醯膽鹼不會損害細胞膜而來自LiP〇stabil®的去氧膽酸鈉損 害細胞。 實施例11 :在皮下脂肪分解之前以及之後的膽固醇位準的 測定 為了這個，測試者的血脂肪在治療的期間被觀察。總 膽固醇(total cholesterol)、LDL [低密度脂蛋白（1〇w_density lipoproteine)]膽固醇以及HDL [高密度脂蛋白（high_density lipoprotein)]膽固醇被測定。表6概述在t =小t = 8週以及t = 16週的時間的數值。 平均血脂肪單向的改變在治療的期間。僅在2位具有顯 著增加的總膽固醇以及LDL膽固醇的測試者(IB以及Ch κ ) 的例子中數值下降而HDL-膽固醇(表6)上升。一研究的概述 被顯示在表7中。其他生物化學控制變數（bi〇chemical control variables) AST、ALT、y-GT、膽紅素（bilimbin)、肌 酸酐(creatinine)以及葡萄糖維持在正常範圍内（除了在起始 >α療以如在測武者S·Α.中的y-GT數值的輕微增加）。 51 201143778 表6膽固醇數值[mg/dl] 在起始治療之後以週計的時間 測試者 總膽固醇 LDL-膽固醇 HDL-膽固醇 -1 8 16 -1 8 16 -1 8 16 6 I.B. 269,0 159,0 172,0 169,0 112,0 127,0 53,8 58,9 58,3 2 Ch.K. 237,0 222,0 218,0 136,0 129,0 128,0 75,4 78,0 79,0 7 S.A. 212,0 214,0 104,0 103,0 88,4 89,1 1 GE. 143,0 141,0 142,0 53,0 51,0 49,0 67,0 68,0 54,0 3 M.St. 198,0 182,0 182,0 120,2 110,0 110,9 62,8 60,3 60,8 4 E.K. 187,0 177,0 99,0 92,0 68,7 69,3 平均 207,67 182,50 178,50 113,53 99,50 103,73 69,35 70,60 63,03 標準偏差 43,23 31,17 31,34 38,97 26,67 37,32 11,75 11,39 11,01 N 6 6 4 6 6 4 6 6 4 LDL/HDL-商（Quotient) _1週 1,64 [目標值(target value)< 3] 8週 1,41 16週 1,65 LDL-膽固醇=低密度脂蛋白膽固醇 HDL-膽固醇=低密度脂蛋白膽固醇 52 201143778 锖寒容蝌垅饫t^%¥f_fRL< 註記 *可能服用怡妥 =3 ε <N〇n i-H r- So^ 〇 v〇 cn so^niOH «»j j 蹵3§ =3 叫 —"ϊϊ) 5 Ε 兰ο 白孤 °^〇〇 旆 ㈣5« Si 1! i Ιη^ 鮏SS魏 0¾% 焯 ^h-1 碳峡 ι?3§ ^ 5 >~ ^S-Sh ε 議 SI 卜《'一卜 (Π·® OH 跌画画 «ακ "S 街 — 4« εΐ S —〇 ε — ^〇〇·〇 € 哟 Β^〇ό f C A ί 變3κ叫 —=5 ε§ε 0¾ 3¾ 非1 —O r °^S 跌画画 驾3§ 總膽固醇自 182,0 mg/dl auf 182,0 mg/dl 臨床改善 Del /DelP Del /DelP DrI /DrIP DrI /DrIP Del /DelP Del /DelP 身體捲尺 Lipostabil CO m cn CO CN ΓΛ a 00 <N CO m (N CN Phosphogliv ITi in ri m m »n *〇 28,2 00 IT) CO l〇 cn cn rs m 卡尺[cm] Lipostabil ΓΛ 1—H r·； ri in ci ON (N 〇l ci (N (N m <tT l> οί Γ^ί Phosphogliv CO ΓΟ vq ci in <N as ci ON CN <N <N o^ (N 〇l ci Ch cs VD oi »n ci S5 CO 篩選 o 〇〇 VO 篩選 〇 oo 篩選| o OO \〇 測試者 cd I-； |Ch.K. | s ΓΛ s 53 201143778 =3 1 < wro s^b ^ ε θ'00 Π〇 S Ρί 2"S 孤 孤孤 ^ § 回回從 jj 物 3§切 =3专专 0¾ ES5 糾=5¾ ^ "bj) W)忘 "Sb ε ε 本 辦i 22孤邨 m •®敏验制 *回回掷 E j輕 璨3§ ^ =5 —btf〇 i30· ε 〇S^ 寸-ηδ 5 s'! 旨5寸 明i H 孤 <ΠΙ 激•回画 0¾¾0 絮3§ y-GT正常化(normalized) 皮膚緊密度备開始好的 III 。忠 w+i ^1¾¾ Ό "bJ) 5f "5b£ E ε〇°. oco^r CO 寸孤观 SQQ ^hJ w =3专专 |es 00^ 3¾ ^ 'tub'Bi) "ϊδΕ £ !±7 ε〇〇 5 •ππ歡敏制 歡回回俾 ^ £ 紫』4 4®® 驾3§句 DrI /DrIP Drl/DrlP Drl/DrlP Del/DelP Del/DelP 卜 (N (N (^) (N cn 0〇" CN <n CO CO OO |28,5 28,5 v〇 CN CN Γ〇 CO cn cn 00 30,5 CO ri cn ri »n c〇 CO CO CO 〇1 οί CW (N 00^ C^T 00^ r〇 CN 〇〇· ri CN CS (N CN 乂 (N CO CN cn oq ri ri 00^ CO 〇〇· cn (N co" 〇〇^ ci Ο 00 篩選 o 00 i2 漶 O 00 E.K. I IS.A. I IG.E. 1 寸 卜 ,?堞*姊尨qH_^f«±i^要铼父該=dl』a :划豳-_钇^琢竭《封^要硃9該=15 : 9-墚-蛛妨埤盔宕趄鉍要铽9該=dFQ <吔钇赞驭宕±1^要硃Α^=ρα 54 201143778 【圖式簡單說明】 第la圖：在2D細胞培養中被處理的經分化的3T3-L1細 胞的相對比影像。該處理如下： (a) 對照=未被處理的細胞在分化培養基中 (b) lmg/ml的填脂醯膽驗在24小時以後 (c) 5mg/ml的填脂酸膽驗在24小時以後 (d) 10 mg/ml的麟脂醯膽驗在24小時以後 (e) 15 mg/ml的麟脂酸膽驗在24小時以後 (f) 20 mg/ml的鱗脂醯膽驗在24小時以後 (尺寸棒= 100 μιη)。 第lb圖：使用一CLSM在一為63-倍放大率的在2D細胞 培養中被處理的經分化的3T3-L1細胞的像對比影像。該處 理如下： (a) 對照=未被處理的細胞在分化培養基中在4小時以後 (b) lmg/ml的麟脂酷膽驗在4小時以後 (c) 5mg/ml的填脂酿膽驗在4小時以後 (d) 10mg/ml的鱗脂隨膽驗在4小時以後 (尺寸棒=20 μιη)。 第lc圖：使用一CLSM在一為63-倍放大率的在ΡΙ染色 之後在2 D細胞培養中被處理的經分化的3 T 3 - L1細胞的相對 比（PC)-影像。該處理如下： (a) 對照=未被處理的細胞在乙醇中 (b) 正對照=未被處理的細胞在分化培養基+ 1% Triton (c) 5mg/ml的填脂醯膽驗在4小時以後 55 201143778 (d) l〇mg/ml的鱗脂醯膽驗在4小時以後 (e) 15mg/ml的4脂醯膽驗在4小時以後 PI-列（a-e)顯示PI-染色的細胞的螢光影像，而PK-列（a_e)顯 示對應的相對比影像一個在另一個上面被重疊以營光影像 (尺寸棒=20 μπι)。 第2圖被圖表地顯tf從在整型還原手術的期間被移除 的人類皮下脂肪組織_分離ADSC。 第3a圖：經分化的ADSC在處理以各種不同濃度的去氧 膽酸鈉（Na-DC)之後在2D細胞培養的光學顯微影像。該處理 如下： (a) 對照=未被處理的細胞在分化培養基中4小時 (b) 0,01 mg/ml Na-DC在4小時以後 (c) 0,05 mg/ml Na-DC在4小時以後 (d) 0,075 mg/ml Na-DC在4小時以後 (e) 0，1 mg/ml Na-DC在4小時以後 (f) 0, 5 mg/ml Na-DC在 4小時以後 黑色箭頭指在具有被損害的膜的細胞或細胞片段。白色箭 頭指示無脂質小滴。 (尺寸棒=100 μπι)。 第3b圖：經分化的ADSC在處理以各種不同濃度的去氧膽 酸鈉(Na-DC)之後在2D細胞培養的CLSM影像。該處理如丁 ： (a) 對照=未被處理的細胞在分化培養基中4小時 (b) 0,01 mg/ml Na-DC在4小時以後 (c) 0,05 mg/ml Na-DC在4小時以後 56 201143778 (d) 0，1 mg/mlNa-DC在4小時以後 黑色箭頭指在具有被損害的膜的細胞或細胞片段。白色箭 頭指示無脂質小滴。 (尺寸棒=20 μιη)。 第3c圖：經分化的ADSC在處理以各種不同濃度的去氧 膽酸鈉（Na-DC)之後在2D細胞培養的共軛焦雷射掃描顯微 影像。該處理如下： (a) 對照=未被處理的細胞在分化培養基中4小時 (b) 正對照=未被處理的細胞在分化培養基+ 1% Trit〇n (c) 0,05 mg/ml Na-DC在4小時以後 (d) 0，1 mg/mlNa-DC在 4小時以後 (e) 0,5 mg/ml Na-DC在4小時以後 PI-列（a-e)顯示PI-染色的細胞的螢光影像，而PK-列（a-e)顯 示對應的相對比影像一個在另一個上面被重疊以螢光影像 (尺寸棒=20 μπι)。 第4a圖.經分化的ADSC在處理以各種不同濃度的鱗脂 醯膽鹼(PC)之後在2D細胞培養的光學顯微影像。該處理如 下： ⑻對照=未被處理的細胞在分化培養基中4小時 (b) 1 mg/ml PC在4小時以後 (c) 5 mg/ml PC在4小時以後 (d) 10 mg/ml PC在4小時以後 (e) 15 mg/ml PC在4小時以後 (f) 20 mg/ml PC在4小時以後 S. 57 201143778 (尺寸棒=100 μιη)。 第4b圖：經分化的ADSC在處理以各種不同濃度的磷脂 醯膽鹼(PC)之後在2D細胞培養的CLSM影像。該處理如下： (a) 對照=未被處理的細胞在分化培養基中4小時 (b) 1 mg/ml PC在4小時以後 (c) 5 mg/ml PC在4小時以後 (d) 10 mg/ml PC在4小時以後 (尺寸棒=20 μιη)。 第4c圖：經分化的ADSC在處理以各種不同濃度的磷脂 醯膽鹼(PC)之後在2D細胞培養的CLSM影像。該處理如下： (a) 對照=未被處理的細胞在分化培養基中4小時 (b) 正對照=未被處理的細胞在分化培養基+ 1% Trit〇n (c) 5 mg/ml PC在4小時以後 (d) 10 mg/ml PC在4小時以後 (e) 15 mg/ml PC在4小時以後 PI-列（a-e)顯示PI-染色的細胞的螢光影像，而ρκ_列（a_e)顯 示對應的相對比影像一個在另一個上面被重疊以螢光影像 (尺寸棒=20 μιη)。 第5圖：使用一 CLSM的被處理的經分化的3T3-L1細胞 在2D細胞培養的像對比影像。該處理如下： (a) 對照=未被處理的細胞在分化培養基中 (b) 5 mg/ml PC + 2 mg/ml 甘草酸鹽 + 18 mg/ml麥芽糖 (c) 10 mg/ml PC + 4 mg/ml甘草酸鹽 + 36 mg/ml麥芽糖 ⑷20 mg/ml PC + 8 mg/ml甘草酸鹽+ 72 mg/mi麥芽糖 58 201143778 ⑹ 30 mg/ml PC + 12 mg/ml甘草酸鹽 + 108 mg/ml麥芽糖 ⑴ 50 mg/ml PC + 20 mg/ml甘草酸鹽 + i80 mg/ml麥芽糖 (尺寸棒=20 μπι)。 第6圖：使用一CLSM的被處理的經分化的3T3-L1細胞 在2D細胞培養的影像。該處理如下： (a) 負對照=未被處理的細胞在分化培養基中

(b) 正對照=未被處理的細胞在分化培養基+1% Trit〇n X (c) 20 mg/ml PC + 8 mg/ml甘草酸鹽+ 72 mg/ml麥芽糖 ⑷ 30 mg/ml PC + 12 mg/ml甘草酸鹽+ i〇8 mg/ml麥芽糖 (e) 50 mg/ml PC + 20 mg/ml甘草酸鹽+ 180 mg/ml麥芽糖 PI-列（a-e)顯示PI-染色的細胞的螢光影像，而pKjj(a_e)顯 示對應的相對比影像一個在另一個上面被重疊以螢光影像 (尺寸棒=20 μπι)。 第7圖：以被處理的經分化的3T3-L1細胞的脂肪分解試 驗(pg甘油/pgDNA)的分析。 第8圖：在皮下注射ADSC至具有下列的Balb/c小鼠的右 脂肪組織以後螢光素酶-標定的細胞的生物發光影像： (a-c)大腸桿菌細胞 (d-f)磷脂醯膽鹼+麥芽糖+甘草酸鹽(pMC) (g_i) PBS-緩衝液。 第9圖：被處理的經分化的3T3_L1細胞的相對比影像。 該處理如下： (a) 未被處理的細胞在分化培養基中 (b) 0,01 mg/ml碟脂醯膽驗+〇,〇〇5 mg/ml Na-去氧膽酸 59 201143778 (c) 0,1 mg/ml填脂醯膽驗+0,05 mg/ml Na-去氧膽酸 (d) 0,25 mg/ml碌脂酿膽驗+0,125 mg/ml Na-去氧膽酸 (e) 0,5 mg/ml碟脂醯膽驗以及0,25 mg/ml Na-去氧膽酸 (f) 1 mg/ml填脂酿膽驗+0,5 mg/ml Na-去氧膽酸 黑色箭頭指示具有損害的膜的細胞或細胞片段，而白色箭 頭指示無脂質小滴。 第10圖：在化合物Lipostabil®以及Phosphogliv®的左 (Phosphogliv®)以及右(Lipostabil®)投藥以後的攝影文件。 第11圖：在測試者02號的左（Phosphogliv®)以及右 (Lipostabil®)上臂的處理以後的攝影文件。 【主要元件符號說明】 (無） 60

Claims (1)

1. 201143778 七、申請專利範圍： 1. 一種包含有下列的組成物用於製備一用來移除皮下脂 肪堆積之醫藥品的用途 a) 至少一磷脂； b) 至少一甘草酸(glycyrrhizic acid)或 c) 一甘草酸的鹽類以及 d) 選擇性地助劑 其中 -該等磷脂以及該甘草酸或它的鹽類的總含量是 2-80重量百分比，以及 -在磷脂以及甘草酸或它的鹽類之間的重量比是自 30 : 1 至0,5 : ；1。 2. 如申請專利範圍第1項的組成物的用途，該組成物含有 磷脂醯膽鹼作為磷脂。 3. 如申請專利範圍第1與2項的組成物的用途，該組成物含 有動物或植物來源的磷脂醯膽鹼。 4. 如申請專利範圍第1至3項的組成物的用途，該組成物含 有甘草酸或者甘草酸的鉀、納、銨或鎂鹽。 5. 如申請專利範圍第1至4項的組成物的用途，該組成物含 有一糖（特別是葡萄糖以及麥芽糖和/或它們的衍生 物）、甘露醇 '山梨糖醇或乳糖作為一助劑。 6. 如申請專利範圍第1至5項的組成物的用途，該組成物含 有一為15至98 wt-%、較佳地30至98 wt-%、更佳地50至 98 wt-%、特別較佳地75至98 wt-%、最佳地75至90 wt-% S 61 201143778 的總磷脂醯膽鹼含量。 7. 如申請專利範圍第1至6項的組成物的用途，該組成物呈 乾燥形式被溶解在一適合的溶劑中。 8. 如申請專利範圍第1至7項的一或多項的組成物的用 途，該組成物呈乾燥形式（較佳地有如一由冷凍乾燥所 獲得的凍乾物）而被使用。 9. 如申請專利範圍第1至8項的一或多項的組成物的用 途，該組成物呈一溶液的形式而被使用。 10. 如申請專利範圍第1至9項的一或多項的組成物的用 途，該組成物含有包含有水、生理鹽水、葡萄糖、一一 元醇（如乙醇、2-丙醇、η-丙醇）、多元醇（如甘油和/或丙 二醇）、聚二醇（諸如聚乙二醇和/或Miglyol)、甘油、曱 縮酸(formal)、二曱基異山梨糖醇、天然與合成的油和/ 或醚的生理學上適合的溶劑。 11. 如申請專利範圍第1至10項的一或多項的組成物用於製 備一用來治療皮下脂肪堆積、皮下脂肪組織疾患（特別 是具有脂肪分布的局部擾亂）之醫藥品的用途。 12. 如申請專利範圍第1至11項的一或多項的組成物用於製 備一用來降解及變性脂肪組織腫瘤之醫藥品的用途。 13. 如申請專利範圍第1至12項的一或多項的組成物用於製 備一醫藥品的用途，其特徵在於：它呈乳霜、軟膏、凝 膠、水凝膠、乳液、糊、粉末以及溶液的形式。 14. 如申請專利範圍第1至13項的一或多項的組成物的用 途，其特徵在於：美學或病理學性質的非所欲類型的脂 62 201143778 肪分布擾亂是脂性水腫、脂瘤、腹部的脂肪過多症、畸 形性皮膚脂層炎、假性男子女乳症、HIV病患的水牛峰、 蜂窩組織炎或非專一性皮下脂肪庫。 15. 如申請專利範圍第1至14項的一或多項的用途，其特徵 在於：該製備物的投藥是藉由皮下的、腹膜内的 '肌肉 内的或靜脈内的注射而被應用。 16. 如申請專利範圍第1至14項的一或多項的用途，其中一 選自於包含有離子電滲、電穿孔、微穿孔(Microporation) 或超聲導入（phonophoresis)的群組的方法被使用於投 藥。 63