MX2012012604A - Uso de una composicion que contiene fosfolipidos y acido glicirricinico para eliminar acumulacones adiposas por lipolisis subcutanea. - Google Patents

Abstract

La invención que se describe se relaciona con el uso de una composición acuosa que contiene al menos un fosfolipido, al menos un ácido glicirricínico o sales del ácido glicirricínico, para preparar un medicamento para eliminar acumulaciones adiposas subcutáneas.

Description

USO DE UNA COMPOSICIÓN QUE CONTIENE FOSFOLIPIDOS Y ÁCIDO GLICIRRICINICO PARA ELIMINAR ACUMULACIONES ADIPOSAS POR LIPÓLISIS SUBCUTÁNEA Campo de la Invención La invención se relaciona con el uso de una composición a base de fosfolípidos y al menos un ácido glicirricinico o una sal del ácido glicirricinico y sus formas útiles en medicina, para el tratamiento de inclusiones adiposas de las formas más diferentes debajo de la piel, como por ejemplo, problemas de la distribución adiposa y para la regresión de panículos adiposos resistentes a las dietas.

Antecedentes de la Invención En el arte anterior se usan métodos quirúrgicos para tratar acumulaciones adiposas subcutáneas o proliferaciones de las células adiposas tales como lipomas o lipoedemas. Tales tratamientos pueden implicar las complicaciones o riesgos conocidas, ya sea por anestesia, reacciones locales o posibles infecciones. En estos casos, frecuentemente no se puede evitar internaciones. Para evitar tales intervenciones, se buscan alternativas no-quirúrgicas para eliminar acumulaciones adiposas subcutáneas.

Ya se han desarrollado diferentes preparaciones que contienen fosfolípidos y que se administran al paciente por vía de inyección. Se conocen preparaciones acuosas que contienen al menos un fosfolípido para diferentes aplicaciones. Estos sistemas se usan, por ejemplo en cosmética o para la obtención de productos farmacéuticos. ? menudo, estos sistemas forman micelas o liposomas que poseen una fase acuosa en su interior.

El documento US 2005/143347 ?1 y el correspondiente documento de prioridad DE 103 61 067 Al revelan una preparación que contiene al menos un fosfolipido y/o al menos un ácido biliar y un componente que favorece la degradación de las grasas como riboflavina y agua, que es apropiada para la preparación de medicamentos para eliminar acumulaciones adiposas subcutáneas y para la regresión de los panículos adiposos. Se mencionan preparaciones disponibles en el comercio tales como Essentiale N.i.V. (Lista roja, marzo de 2003) y Lipostabil N.i.V.

Essentiale N.i.V. se describe en la EP 0 615 746 Al como preparación acuosa que contiene fosfolípidos de porotos de soja, ácido biliar, riboflavina, alfa-tocoferol , etanol y agua. El compuesto activo se transforma en un sistema de micelas, cuyas micelas tienen un diámetro de 30 nm a 100 nm. En la EP 0 615 746 Al se describe el uso de un ácido glicirricínico . Esta preparación se administra por vía intravenosa, para tratar, entre otros, una degeneración adiposa del hígado, es decir un contenido excesivo en grasa del parénquima del hígado (depósito adiposo en forma de pequeñas gotas) .

En la DE 103 61 067 Al se revela la preparación acuosa de la forma galénica de Essentiale N.i.V. que contiene al menos un fosfolipido y/o al menos un ácido biliar y un componente que favorece la degradación de las grasas y agua, para obtener un medicamento para eliminar acumulaciones adiposas subcutáneas.

Tampoco en este caso se agrega ácido glicirricínico a la preparación .

Lipostabil N.i.V. contiene fosfolipidos de porotos de soja, DL-alfa-tocoferol , ácido 7-desoxicólico, alcoholes, otras excipientes y agua. Sin embargo, esta preparación de compuestos activos no contiene ácido glicirricínico. Por inyección subcutánea de Lipostabil N.i.V. se eliminan depósitos adiposos tales como los que se presentan bajo los ojos, en el vientre o en las caderas de personas con sobrepeso.

Existen otras preparaciones que se basan en un fosfolípido que se describen en los documentos WO 2008/113421, DE 10 2007 015 701, US 2005/143347 Al y US 2005/0089555 Al, las que se usan para provocar la lipólisis de las acumulaciones adiposas por inyección subcutánea Los inconvenientes que presentan estas preparaciones del estado de la técnica para la lipólisis subcutánea son, entre otros, hinchazones, hematomas, dolores en la zona tratada y malestares tales como ardor y picazón en el lugar de la inyección después del tratamiento, aunque particularmente la muerte de las células por daños en la estructura celular y en la integridad de la membrana (necrosis celular) .

En el intento de encontrar composiciones efectivas para la eliminación no-quirúrgica de acumulaciones adiposas subcutáneas que no adolezcan de las desventajas mencionadas se descubrió sorpresivamente que la composición que se revela en la RU 2 133 122 Cl, destinada al tratamiento intravenoso y oral de afecciones hepáticas agudas y crónicas y trastornos del metabolismo de los lipidos en ateroesclerosis y enfermedades concomitantes es apropiada para la lipólisis subcutánea, también llamada adipocitólisis .

Cuando se usa esta composición según la invención, la que contiene al menos un fosfolipido, preferentemente una fosfatidilcolina y un ácido glicirricinico o sus sales, para la lipósis subcutánea, se reducen y/o se eliminan totalmente los inconvenientes de las preparaciones del estado de la técnica .

La particular ventaja de la composición de la invención que se reivindica para la lipólisis subcutánea de acumulaciones adiposas consiste en la clara reducción y hasta completa eliminación de los daños en la estructura celular y de la integridad de la membrana de las células del tejido adiposo (adipocitos) . En el tratamiento de trastornos del tejido adiposo subcutáneo la invención que tiene la composición que se reivindica, se reduce notablemente o se impide completamente la aparición de necrosis.

Gracias al uso según la invención se produce la degradación de depósitos adiposos en el cuerpo del tejido adiposo tratado por lipólisis, sin que se produzca la destrucción de la membrana celular.

Se observaron efectos secundarios notablemente menores y hasta la ausencia de molestias tales como hinchazón, enrojecimiento, ardor, picazón y dolores generales e hipersensibilidad .

Los componentes principales de la composición que se usa de acuerdo con la invención es un fosfolipido, ácido glicirricínico o sus sales y, en caso necesario, al menos una excipiente .

El ácido glicirricínico, que se obtiene de un extracto de plantas del género glicirriza o palo dulce (por ejemplo, Glycyrrhiza glabra) o sus sales, particularmente glicirricinato de sodio o de amonio, se describen en el arte anterior, en la EP 03 27 756 A, como intensificadores de la absorción para el transporte de por ejemplo hormonas peptídicas a través de la membrana de la mucosa. En la US 5 238 917 ? también se describe la intensificación de la absorción de polipéptidos por medio del ácido glicirricínico en preparaciones transvaginales .

En el estado de la técnica también se conoce el ácido glicirricínico como aditivo bactericida e inhibidor de la inflamación y emulsionante a partir de los documentos US 2004-076652 ?, US 2009-169588 A, US 2007-053852 A, O 08/046791 A, WO 08/046795 A, WO 05/037239 A, EP 1 676 561 A y JP 2006/137 670.

La particular función del ácido glicirricínico en el transporte de moléculas a través de la membrana celular refuerza la especial ventaja del rápido efecto de la administración de la composición reivindicada. Gracias al ácido glicirricínico, el fosfolípido puede llegar fácil y velozmente al interior de las células del tejido adiposo del subcutis, con lo cual se reducen o no se presentan las desventajas descriptas más arriba, tales como la necrosis. Las hinchazones, hematomas, dolores y malestares posteriores a un tratamiento con un compuesto del estado de la técnica, particularmente si contiene ácidos biliares o sales de los mismos, se debilitan o no aparecen gracias a la combinación con ácido glicirricinico . Esta tolerancia mejorada es apoyada por el efecto antiinflamatorio y bactericida del ácido glicirricinico. o Sumario de la Invención Por lo tanto, la presente invención se caracteriza porque la combinación reivindicada de al menos un fosfolipido, preferentemente una fosfatidilcolina y un ácido glicirricinico o su sal tiene sustancialmente menos o ningún efecto perjudicial para la célula y una mejor tolerancia que las composiciones de los preparados EssentialeO y LipostabilÓ del arte anterior.

De allí que la invención se relaciona con el uso de una composición que contiene: a) al menos un fosfolipido; b) al menos ácido glicirricinico o c) una sal del ácido glicirricinico y d) si fuera necesario, excipientes donde - el contenido total de fosfolipidos y de ácido glicirricinico o sus sales es de 2-80 % en peso, y la relación de peso entre fosfolipidos y el ácido glicirricinico o sus sales es de 30 : 1 a 0,5 : 1, para la preparación de un medicamento para eliminar depósitos adiposos subcutáneos.

La invención se refiere también al uso de una preparación que contiene la composición mencionada, la que contiene fosfatidilcolina en carácter de fosfolipido.

La invención también se refiere al uso de una preparación que contiene la composición mencionada, la que contiene fosfatidilcolina de origen animal o vegetal.

La invención se refiere asimismo al uso de una preparación que contiene la composición mencionada, la cual contiene sales de potasio, de sodio, de amonio, de magnesio u otras sales apropiadas del ácido glicirricinico .

La invención también se refiere al uso de una preparación que contiene la composición mencionada, la que puede contener excipientes tales como azúcar, particularmente maltosa y/o sus derivados, sorbita o lactosa La invención también se refiere al uso de una preparación que contiene la composición mencionada, la que tiene un contenido total de fosfatidilcolina de 15 a 98 % en peso, preferentemente 30 a 98 % en peso, con mayor preferencia 50 a 98 % en peso, con particular preferencia 75 a 90 % en peso y muy preferentemente 75 a 98% en peso.

La invención también se refiere al uso de una preparación que contiene la composición mencionada, cuya forma seca se disuelve en un disolvente apropiado.

La invención también se refiere al uso de una preparación que contiene la composición mencionada, cuya forma seca se usa preferentemente en forma de liofilizado que se obtiene por secado por congelación.

La invención también se refiere al uso de una preparación que contiene la composición mencionada, en forma de solución.

La invención también se refiere al uso de una preparación que contiene la composición mencionada, la que contiene disolventes apropiados para uso fisiológico que comprenden agua, solución fisiológica, solución de glucosa, monohidroxi-alcoholes como etanol, 2-propanol, n-propanol, polihidroxialcoholes como glicerol y/o propandiol, poliglicol como polietilenglicol y/o migliol, glicerol, formal, dimetilisosorbitol, aceites naturales y sintéticos y/o éteres .

La invención también se refiere al uso de una preparación que contiene la composición mencionada, que se usa para preparar un medicamento para el tratamiento de acumulaciones adiposas subcutáneas, enfermedades subcutáneas del tejido adiposo, particularmente con trastornos locales de la distribución de lipidos .

La invención también se refiere al uso de una preparación que contiene la composición mencionada, la que se usa para la preparación de un medicamento para la descomposición y regresión de lipomas.

La aplicación de la preparación de la invención se realiza en forma de cremas, ungüentos, geles, hidrogeles, lociones, pastas, liofilizados y soluciones. Se prefiere una preparación acuosa formada por varias lociones.

La invención también se refiere al uso de una preparación que contiene la composición mencionada que se caracteriza porque los trastornos de distribución adiposa de tipo no deseado, de naturaleza estética o provocados por una enfermedad son lipoedemas, lipomas, lipomatosis de la pared abdominal, dermatopaniculosis deformante, pseudo ginecomastias , Buffalo Hump en pacientes de SIDA, celulitis o depósitos adiposos subcutáneos no específicos.

La invención también se refiere al uso de una preparación que contiene la composición mencionada, caracterizada porque la aplicación de la preparación se realiza por inyección subcutánea, intraperitoneal , intramuscular o intravenosa.

La invención también se refiere al uso de una preparación que contiene la composición mencionada que se caracteriza porque para la aplicación se usa un procedimiento seleccionado del grupo formado por iontoforesis , electroporación, microporación o fonoforesis.

Otro objeto de la invención es el uso de la composición para preparar un medicamento para el tratamiento de enfermedades del tejido adiposo del subcutis, particularmente con trastornos locales de la distribución adiposa.

Otro objeto de la invención es el uso de la composición para preparar un medicamento para la regresión o involución de lipomas .

Otro objeto de la invención es el uso de la composición para preparar un medicamento para el tratamiento de trastornos de la distribución adiposa en el subcutis, ya sean de naturaleza estética o provocados por una enfermedad, por ejemplo lipoedemas, lipomas, lipomatosis de la pared abdominal, dermatopaniculosis deformante, pseudo ginecomastia, Buffalo Hump en pacientes de SIDA, celulitis o depósitos adiposos subcutáneos no específicos.

Descripción Detallada de la Invención Gracias al uso de las composiciones según la invención se pueden evitar los riesgos y los efectos secundarios mencionados más arriba, de un tratamiento quirúrgico o subcutáneo con un preparado del estado de la técnica, que contenga particularmente ácido desoxicólico y sus sales. Además, el tratamiento ambulatorio es más agradable para el paciente y más económico que un tratamiento quirúrgico.

La gran eficiencia terapéutica de la composición que se ha descripto más arriba, la que se evidencia por la rápida degradación del tejido adiposo se debe al efecto sinérgico de la interacción de la combinación de la invención, formada por un fosfolípido y/o un ácido glicirricínico o una de sus sales. El uso según la invención de la composición que se reivindica se caracteriza por efectos secundarios notablemente menores y en algunos casos la ausencia de algunos de los efectos secundarios descriptos .

Los trastornos de la distribución adiposa son variaciones del tejido adiposo en el cuerpo humano y de los animales mamíferos que se presentan en forma de de depósitos de grasa localizados de origen genético o que dependen de la alimentación y que se pueden considerar zonas críticas desde el punto de vista estético, particularmente en el vientre, las nalgas, la cadera, las rodillas, las piernas, los muslos, los brazos, la barbilla, las mejillas. Tales depósitos también pueden ser proliferaciones benignas de las células adiposas, tales como los lipomas (proliferación distópica) .

Según la invención, se entiende por enfermedades del tejido adiposo, por ejemplo las siguientes enfermedades: lipomas (tumefacción de tejido adiposo), que son tumores mesenquimales benignos de crecimiento lento, generalmente esféricos, eventualmente pediculados (lipoma pendular) o hasta hirsutos (lipoma arborescente, ejemplo de lipomas de tipo gelatinoso) de células adiposas agrandadas, preferentemente en el tejido celular del subcutis, eventualmente con osificación central (L. ossificans), muscinosos (L. myxomatodes) o calcáreos (L. petrificans ) , también con proliferación de tejido conjuntivo y formación de cápsula (L. fibrosum) , con angiogénesis (L. teleangiectodes ) , que rara vez se convierte en maligno (L. sarcomatodes , liposarcoma) . Estos lipomas deben considerarse patológicos, ya que crecen y su envoltura de tejido conjuntivo puede ser dolorosa, lo mismo que la compresión que aplican a vasos sanguíneos, lo que puede provocar dolores en los nervios. Aquí también se incluye la lipomatosis múltiple que provoca una acumulación de lipomas en el paciente.

El morbus dercum o lipomatosis es un forma dolorosa de proliferación hipertrófica del tejido adiposo que se encuentra entre la fascia adiposa (fascia adiposa de Kampasche) y el lado inferior de la dermis. Por efectos de la acción hormonal estas células adiposas aumentan su capacidad de fijación de agua, lo que a su vez produce congestión de los vasos linfáticos por fenómenos de presión en la zona de los vasos linfáticos primarios en forma de heléchos. Esto aumenta los efectos compresivos e irritantes en los nervios periféricos sensibles, de manera que estos pacientes presentan una extrema sensibilidad dolorosa al contacto. En el transcurso de varios años y hasta décadas se forman pequeños nodulos de grasa irregulares, localizados, diseminados debajo de la dermis (la que se adelgaza durante el proceso de envejecimiento) que parcialmente son dolorosos y son muy antiestéticos.

El cuello adiposo de Madelung (síndrome de Lanois-Bensaude) es una proliferación de tejido adiposo inflamado, en la cual se produce, además de una formación tumoral distrófica de tejido adiposo, también una densificación parecida a una cicatriz del tejido conjuntivo en la zona subcutánea. En estos casos, los recursos quirúrgicos sólo logran éxito parcial, ya que en este proceso intervienen estructuras anatómicas esenciales y la enfermedad se manifiesta sustancialmente en la zona de la cabeza, el cuello y los hombros .

El lipoedema es una tumefacción dolorosa del tejido adiposo que se presenta principalmente en las piernas de las mujeres y avanza con la edad.

Por lo tanto, se entiende por regresión de la lipólisis el desdoblamiento hidrolítico del tejido adiposo y la regresión por movilización de la zona adiposa proliferada.

Un xantelasma es una acumulación amarillenta de grasa debajo de los ojos.

Los pacientes de SIDA padecen frecuentemente trastornos por acumulaciones de tejido adiposo que se producen a raíz de la medicación del estado de la técnica, por ejemplo la nuca de toro o Buffalo Hump . En pacientes con su sistema inmune debilitado no es aconsejable en general, una eliminación quirúrgica, porque las acumulaciones adiposas persisten y estigmatizan exteriormente a los pacientes.

Las enfermedades del tejido adiposo que hemos mencionado indican estados de los tejidos o entidades que deben distinguirse claramente desde el punto de vista patológico de la lipohipertrofia dependiente de la alimentación y que también provoca un trastorno en la distribución adiposa en forma de depósitos adiposos. El grupo patológico se caracteriza por cicatrización histológica y parámetros de inflamación, aunque también por encapsulación de tejido conjuntivo y modificación de la morfología histológica del tejido adiposo.

Otro objeto de la invención es el uso de la composición para obtener un medicamento para el tratamiento de la celulitis. La celulitis es una forma particular de la proliferación hipertrófica de tejido adiposo que se encuentra entre la fascia dérmica (fascia adiposa de Kampasche) y el lado inferior de la dermis. Por efectos hormonales estas células adiposas aumentan su capacidad de fijación de agua, lo que a su vez produce congestión de los vasos linfáticos por fenómenos de presión en la zona de los vasos linfáticos primarios en forma de heléchos. En el transcurso de varios años y hasta décadas se forman pequeños nodulos de grasa irregulares, localizados, diseminados debajo de la dermis (la que se adelgaza durante el proceso de envejecimiento) , que parcialmente son dolorosos y parcialmente antiestéticos.

Otro objeto de la invención es el uso de la composición para obtener un medicamento para el tratamiento de pseudoginecomastias y la lipomastia. En los hombres, las pseudoginecomastias son acumulaciones adiposas alrededor de la tetilla, lo que provoca un aumento del volumen de la misma y sobre todo, se considera antiestético. La lipomastia es una forma de pseudoginecomastia sin aumento del tamaño del cuerpo de la glándula mamaria.

Los fosfolipidos contenidos en la composición galénica que se describe en la presente se obtienen de cualquier material animal o vegetal, particularmente de huevos de gallina, semillas y frutos oleaginosos como nueces de coco secos, semillas de palmera, maníes, semillas de colza, semillas de girasol, semillas de lino, aceite de palma y/o oliva. Sin embargo, el más apropiado es el fosfolípido de porotos de soja que se obtiene con el método que se describe en las patentes europeas EP 0 054 770 Bl y EP 0 054 769 Bl.

Este fosfolípido se purifica escrupulosamente y contiene 15 a 98 % en peso, preferentemente 30 a 98 % en peso, con mayor preferencia 50 a 98 % en peso, con particular preferencia 75 a 98 % en peso y muy preferentemente 75 a 90 % en peso de fosfatidilcolina . Tales fosfolipidos muy purificados pueden contener otros componente de los fosfolipidos, particularmente hasta 15% en peso, más preferentemente hasta 12% en peso de fosfatidiletanolamina, hasta 8% en peso de ácido fosfatídico, hasta 10% en peso de fosfatidilinositol , basta 6% en peso de lisofosfatidilcolina o lisofosfatidiletanolamina, rastros de fosfatidilserina, así como pequeñas cantidades de lípidos.

La invención también se refiere al uso de un ácido glicirricinico o diferentes ácidos glicirricinicos, donde el ácido glicirricinico se encuentra presente en forma de sal tolerable desde el punto de vista fisiológico. Como sales del ácido glicirricinico se usan sales fisiológicamente tolerables, particularmente sales mono, di o trisódicas o sales de potasio, magnesio o amonio. Se prefieren las sales mono, di o trisódicas o sales de potasio y amonio y particularmente las sales mono, di o trisódicas o sales de potasio.

La relación de masa entre fosfolipido y ácido glicirricinico es de 30 : 1 a 0,5 : 1, preferentemente de 15 : 1 a 0,5 : 1, con mayor preferencia de 4 : 1 a 1:1 y con particular preferencia de 3 : 1 a 2 : 1.

La concentración de fosfolipido en la composición es de 0,5% en peso a 30% en peso, preferentemente de 5% en peso a 25% en peso .

En contenido total recomendado de fosfolipidos y de ácido glicirricinico o sus sales es de 2-80% en peso. Con este contenido se prefiere una relación de peso entre fosfolipidos y el ácido glicirricinico o sus sales de 3 : 1 o 4 : 1. Con la relación de peso entre los fosfolipidos y el ácido glicirricinico o sus sales de 2 : 1 a 3 : 1 corresponde preferentemente un contenido de 2-45% en peso de fosfolipidos y de ácido glicirricinico o sus sales.

El valor pH del medicamento es del rango de pH 6,0 a pH 9,0, preferentemente de pH 7,5 a pH 8,5, con particular preferencia de pH 6,5 a pH 7,5 y especialmente de pH 6,5 a pH 7,0.

En caso necesario de agregan excipientes apropiadas. Las excipientes admisibles desde el punto de vista farmacológico pueden ser azúcar, particularmente maltosa, glucosa, lactosa, sorbita y manita y sus derivados, ácido silícico coloidal y sus derivados, gel de silicio, talco, lactosa, almidón, gelatina, agua, alcoholes con uno o varios grupos hidroxi, particularmente etanol, glicerol y propilenglicol , aceites naturales o sintéticos, particularmente petróleo, aceite mineral, aceite de maní, aceite de soja, aceite de sésamo y éter. Otros excipientes apropiados son celulosa, sucrosa, malta, arroz, flúor, calcio, estearato de magnesio, estearato de sodio, monoestearato de glicerol, NaCl y leche descremada desecada. Los excipientes preferidos, sobre todo para la lipólisis subcutánea comprenden agua, alcohol, particularmente etanol, solución fisiológica, maltosa y dextrosa acuosa.

La preparación galénica que se describe en la presente se puede usar en forma seca o líquida.

Las formas líquidas comprenden gotas, soluciones, suspensiones, emulsiones, suspensiones y emulsiones inyectables y sistemas de micelas-liposomas , así como sistemas de micelas-liposomas-agua .

Se prefieren las preparaciones líquidas tales como soluciones, suspensiones, emulsiones, suspensiones y emulsiones inyectables. Particularmente se prefieren las suspensiones y emulsiones inyectables.

Se pueden usar para inyectar, particularmente las preparaciones líquidas tales como soluciones, suspensiones, emulsiones, suspensiones y emulsiones inyectables que contienen las sustancias mencionadas y excipientes o las sustancias secas que después de agregarles agua, otro disolvente o un amortiguador apropiado tal como Trisbuffer, se licúan inmediatamente. Se prefiere un usar un liofilizado como base para obtener una preparación líquida.

Cuando se emplean las preparaciones galénicas que aquí se describen como inyección se recomienda usar un disolvente apropiado que no presente efectos secundarios no deseados, por ejemplo agua, suero fisiológico, glucosa, monohidroxialcoholes como etanol, 2-propanol, n-propanol, polihidroxialcoholes como glicerol y/o propandiol, poliglicol como polietilenglicol y/o migliol, glicerol, formal, dimetilisosorbita, aceites naturales o sintéticos y/o éter, ya sean solos o mezclados, aunque en caso de inyecciones se recomienda el uso de sistemas de liposomas-micelas .

El volumen residual de alcohol después de concentrar deberá ser de 0 %/volumen a 20 l/Vol, preferentemente de 0 %/Vol a 10 %/Vol.

La forma de aplicación más apropiada de la preparación que aquí se describe es una mezcla de sustancias activas que contiene un fosfolípido y un ácido glicirricínico o su sal en forma de sistema liposomas-micelas-agua . Un tal sistema de liposomas-micelas-agua que está destinado a ser inyectado tiene un valor pH de preferentemente 6,0 a 7,5.

La forma seca de la preparación galénica que aquí se describe incluye un liofilizado, comprimidos, particularmente comprimidos con cubierta de película y pildoras, polvo, cápsulas, granulados y tabletas recubiertas con azúcar. Se prefiere un liofilizado.

Si la composición se prepara en forma de liofilizado, al agregar agua o Trisbuffer se forma un sistema de agua-liposomas que puede ser usado para inyectar.

El sistema de liposomas-agua también puede ser sometido a filtración estéril y contiene una elevada concentración de liposomas y micelas con un tamaño de partículas relativamente pequeño de 30 nm a 180 nm, preferentemente de 30 a 130 nm, con particular preferencia de de 30 a 90 nm. Estos liposomas pueden filtrarse en forma estéril usando un filtro con un diámetro de poros de 0,2 mm.

La preparación que se describe, que se obtiene en forma de solución acuosa, toma la forma de preferentemente un sistema de liposomas-micelas que es muy transparente, se conserva durante mucho tiempo y puede ser sometido a filtración estéril. El sistema se puede secar, por ejemplo por liofilización, con lo cual se forma una mezcla liofilizada estable .

Si la preparación galénica que se describe se usa como solución inyectable, se recomienda especialmente el uso de una combinación de agentes activos que contiene fosfolípidos y la sal trisódica del ácido glicirricínico, donde la relación de peso entre la fosfatidilcolina y la sal trisódica del ácido glicirricinico es de 1 : 1 a 4 : 1 y preferentemente de 2 : 1 a 3 : 1.

Para obtener las preparaciones de la invención se disuelven juntos o se dispersan en un disolvente apropiado al menos un fosfolipido y al menos un ácido glicirricinico en la relación mencionada más arriba. A continuación se concentra esta solución o dispersión y luego se agrega agua.

En las solicitudes de patente europea EP 0 470 437 A o EP 0 615 746 A se describen métodos para obtener las preparaciones.

En caso necesario se pueden agregar a las preparaciones usadas según la invención también agentes antioxidantes tales como ácido ascórbico, sulfito hidrógeno de sodio o pirosulfito de sodio, alfa-tocoferol , agentes conservantes como bencilalcohol o p-hidroxibenzoatos , o ayudas de suspensión como carboximetilcelulosa sódica.

Las preparaciones también pueden contener estructuras coloidales tales como micelas o micelas mixtas. Estas estructuras tienen un diámetro de partícula de 10 a 500 Angstróm. Consisten en ácido glicirricinico y fosfolipido. La relación de masa entre ácido glicirricinico y fosfolipido es de 0,1: 2 a 2 : 1 % en peso, preferentemente 1 : 2. En las estructuras coloidales del medicamento, la concentración de fosfolipido es de 5 a 15 % en peso, preferentemente de 10 % en peso. Para obtener las estructuras coloidales, por ejemplo se disuelve el ácido glicirricinico en agua, con lo cual se alcaliniza algo la solución. En esta solución se dispersa luego el fosfolipido. Finalmente se filtra.

Las preparaciones usadas según la invención y los medicamentos comparables se aplican por vía de inyección subcutánea, intraperitoneal , intramuscular o intravenosa. Se prefiere la inyección subcutánea.

También se reivindica la aplicación percutánea en diferentes vehículos y usando diferentes medios auxiliares, por ejemplo iontoforesis .

En determinadas aplicaciones, la incorporación uniforme de las preparaciones y las formas medicamentosas usadas según la invención también se puede llevar a cabo por medio de un método en que se inyecta gran cantidad de solución estéril para acondicionar el tejido adiposo (Tumeszenzverfahren) que se sirve de presión hidrostática a fin de asegurar una distribución uniforme.

Además es posible la aplicación percutánea que se puede efectuar con diferentes vehículos como cremas, ungüentos, geles, hidrogeles, lociones o pastas y usando diferentes medios auxiliares, particularmente la iontoforesis , microporación, electroporacion o fonoforesis.

Las preparaciones y formas galénicas apropiadas son, por ejemplo suspensiones, emulsiones o soluciones inyectables, así como preparaciones de liberación retardada de la sustancia activa, en cuya obtención se usan excipientes corrientes. Las preparaciones también pueden ser en forma de concentrados, sustancias desecadas o liofili zados , por ejemplo para aumentar su estabilidad.

Las preparaciones galénicas se obtienen y se administran en unidades de dosis, donde cada unidad contiene una dosis determinada del componente activo de la preparación. En el caso de soluciones inyectables en ampollas, cada mi de esta dosis de 10 a aproximadamente 2000 mg puede contener aproximadamente 50 a aproximadamente 2000 mg, preferentemente aproximadamente 250 mg a 500 mg, del fosfolipido.

En el tratamiento de un paciente adulto, se requieren, según el tamaño del tejido adiposo a tratar y cuando se aplican soluciones inyectables, dosis diarias de 5 mg a 2500 mg, preferentemente de 250 a 2500 mg del fosfolipido por sesión de inyección y un total de un máximo de 200 inyecciones, . Las soluciones inyectables también se pueden diluir antes de su aplicación, preferentemente con solución fisiológica. En ciertos casos también se pueden aplicar dosis diarios superiores o inferiores. La dosis también depende del tamaño de la acumulación adiposa: para lipomas pequeños alcanzan cantidades de 125 mg a 500 mg, preferentemente de 250 mg a 500 mg de fosfolipido por lipoma. La administración de las dosis diarias se puede realizar tanto en una vez en forma de una sola dosis o en varias unidades de dosis más pequeñas, como por administración múltiple de dosis fraccionadas a intervalos determinados.

A continuación se explica más detalladamente la invención con referencia a ejemplos.

EJEMPLOS Ejemplo 1: Preparación de una solución inyectable para aplicación subcutánea Se mezcló prolijamente una solución de: 0,2 g (8%) de trisódica del ácido glicirricinico 1,8 g (72%) maltosa y 4 , 5 mi agua con una dispersión de: 0,5 g (20%) fosfolipido de soja y 0,5 mi (20%) etanol al 96% bajo atmósfera de gas inerte.

El contenido total de fosfolipido y sal de ácido glicirricinico era de 28%. La relación entre el fosfolipido y la sal del ácido glicirricinico era de 2,5 : 1.

La emulsión se dispersó con ultrasonido (desintegrador MSE Souiprep 150, Inglaterra) a menos de 4o C durante 30 segundos con una interrupción de un minuto. Después de aproximadamente 10 minutos se formó una suspensión de liposomas.

La suspensión de liposomas se filtró con un filtro de 0,2 Om y a continuación se liofilizó.

La suspensión de liposomas (5,0 mi) se secó por congelación ( liofilización ) en el curso de 5 horas. Con ello se formaron aproximadamente 2,5 g de un polvo suelto, ligeramente amarillento.

Para una solución inyectable subcutánea se disolvieron 2,5 g de la preparación envasada en ampollas en 9,0 mi de disolvente (agua o Tribuffer) .

Ejemplo 2: Preparación de un sistema de liposomas-agua para aplicación subcutánea Se preparó una solución de 50 g fosfolipidos de soja purificados (82,5 % en peso fosfolipido + 3,5 % en peso fosfatidilcolina , hasta 10 % en peso fosfatidiletanolamina, 0,6 % en peso lisofosfatidilcolina y un máximo de 20 % en peso de otros lipidos) y 0,25 g sal sódica del fosfatidilglicerol en 250 mi etanol . La solución preparada se redujo al vacio.

La mezcla de fosfolipidos obtenida (aproximadamente 20%) se dispersó en una corriente de gas inerte por mezcla con 500 mi agua que ya contenia 20,0 g (7,99 %) sal trisódica del ácido glicirricinico y 180,0 g (71,92 %) isomaltosa, .

El contenido total del fosfolipido y de la sal del ácido glicirricinico era de 28,07 %. La relación entre el fosfolipido y la sal del ácido glicirricinico era de 2,5 : 1.

Esta dispersión fue sometida cinco veces a una homogeneización por alta presión a 600 bares. El sistema de liposomas asi obtenido se filtró en un filtro de 0,2 Dm y se envasó bajo atmósfera de gas inerte en ampollas de 10,0 mi. La preparación presentó las siguientes propiedades: Aspecto: liquido transparente, ligeramente opalescente pH 6 , 5 Transparencia a la luz (660 nm) : 85% Tamaño promedio de las partículas (dispersión láser) ; 75 nm Esterilidad: según requerimientos Propiedades microscópicas ( criofij ación ) : 30-90 nm, mayormente liposomas laminares, algunos liposomas bilaminares La transparencia de la preparación envasada en ampollas se examinó al cabo de 2, 6, 9 y 12 meses de almacenamiento. No se comprobaron diferencia de transparencia con la original de la preparación 1.

Ejemplo 3: Análisis de un efectos nocivo de la fosfatidilcolina en la membrana de células 3T3-L1 Para comprobar in vitro los efectos de la fosfatidilcolina sobre la integridad y estabilidad de la membrana se incubaron células 3T3-L1 diferenciadas con diferentes concentraciones de fosfatidilcolina durante 4 y 24 horas y a continuación se analizaron con microscopio óptico.

Para el análisis se utilizó la linea murina de células 3T3-L1 de preadipositos como sistema modelo. Las células 3T3-L1 se estimularon para la adipogénesis con un cocktail de hormonas conocido ( cort icosterona , isobut ilmetilxantina , indometacina , insulina) y fueron diferenciadas 8 días para obtener adipositos maduros.

Los adipocitos maduros de las células 3T3-L1 se trataron con diferentes concentraciones de fosfatidilcolina .

Primeramente se preparó una solución-madre de fosfatidilcolina : 500 mg/ml fosfatidilcolina diluida en etanol 70%.

Las concentraciones de fosfatidilcolina utilizadas fueron de 1 mg/ml, 5 mg/ml, 10 mg/ml, 15 mg/ml, 20 mg/ml.

En la figura la se muestran fotografías de microscopio óptico de las células 3R3-L1 después de 24 horas de tratamiento con 1 mg/ml, 5mg/ml, 10mg/ml, 15mg/ml y 20 mg/ml de fosfatidilcolina y en la figura Ib se observan las fotografías detalladas del microscopio de fluorescencia (confocal láser scanning microscope) (CLSM) con un aumento de 63 veces de las células 3T3.L1 tratadas con fosfatidilcolina . La figura le muestra células 3T3-L1 después de ser tratadas con fosfatidilcolina , teñidas con yoduro de propidio (PI) .

Figura la: Fotografía con contraste de fases de células 3T3-Ll diferenciadas en cultivo de células 2D. El tratamiento se realizó como sigue: (a) Control = células sin tratamiento en medio de diferenciación (b) 1 mg/ml fosfatidilcolina después de 24 horas (c) 5 mg/ml fosfatidilcolina después de 24 horas (d) 10 mg/ml fosfatidilcolina después de 24 horas (e) 15 mg/ml fosfatidilcolina después de 24 horas (f) 20 mg/ml fosfatidilcolina después de 24 horas (Escala = 10 µ?p) Figura Ib: Fotografía con contraste de fases con un CLSM de 63 aumentos de células 3T3-L1 diferenciadas en cultivo de células 2D. El tratamiento se realizó como sigue: (a) Control = células sin tratamiento en medio de diferenciación después de 4 h (b) 1 mg/ml fosfatidilcolina después de 4 horas (c) 5 mg/ml fosfatidilcolina después de 4 horas (d) 10 mg/ml fosf tidilcolina después de 4 horas Escala = 20 µp? Figura le: Fotografía con contraste de fases (PK) con un CLSM de 63 aumentos de células 3T3-L1 diferenciadas en cultivo de células 2D después de teñido con PI . El tratamiento se realizó como sigue: (a) Control = células sin tratamiento en etanol (b) Control positivo = células sin tratamiento en medio de diferenciación + 1% tritonio (c) 5 mg/ml fosfatidilcolina después de 4 horas (d) 10 mg/ml fosfatidilcolina después de 4 horas (e) 15 mg/ml fosfatidilcolina después de 4 horas Al cabo del tiempo de incubación (4 horas), los adipositos fueron teñidos con 5 µt??/ml PI y analizados en el CLSM. En la serie con PI de más arriba (a-e) se muestran las fotografías fluorescentes de las células teñidas con PI . En la serie PK de más abajo (a-e) se superponen las correspondientes fotografías de contraste de fase con las fotografías fluorescentes (Escala = 20 µ?t?) .

Las células tratadas con fosfatidilcolina (figuras la y Ib) no presentan diferencias morfológicas con el control sin tratamiento. Por lo tanto, la fosfatidilcolina no tiene efectos nocivos para las células. En cambio, concentraciones comparables (20 mg/ml) de Na-desoxicolato provocaron una clara destrucción de la membrana celular, lo que no ocurrió con las concentraciones de fosfat idilcolina que se usaron.

El hecho que la fosfat idilcolina no tiene efecto nocivo para las células fue confirmado por el teñido con PI de las células .

Para esto se trataron células 3T3-L1 diferenciadas con 5 mg/ml, 10 mg/ml y 15 mg/ml de fosfatidilcolina durante 4 horas. A continuación, se agregaron 5 iq/ml PI en el curso de 5 minutos y se analizaron las células con CLSM (figura le) .

Al control (figura 1c, (a)) se agregó etanol, de modo que se alcanzó la misma concentración que la concentración de la solución destinada al tratamiento de las células. La figura 1c (a) muestra que las células no se han teñido con PI. De esto surge que el etanol no tiene efectos nocivos para las células en la concentración usada.

En la figura le (b) , el control positivo con 1% de tritonio muestra numerosas células teñidas de rojo con PI. Esto indica un daño de la membrana celular. En este caso la estabilidad de la membrana y la integridad de la célula han sido dañadas.

En cambio, entre las células tratadas (figura le (c) - (e) ) no se comprueba la presencia de células teñidas de rojo, lo que indica que estas células no presentan daños en su membrana o su integridad. Por lo tanto la fosfatidilcolina no tiene efectos nocivos sobre células 3T3-L1 diferenciadas.

Estos resultados se corresponden con el análisis con microscopio óptico (véase figura la y Ib) en el que tampoco se observaron efectos nocivos para las células provocados por fosfatidiIcolina .

Ejemplo 4: Obtención de células madres de tejido adiposo (Adipose-Derived Stem Cells) (ADSC) de tejido adiposo humano.

Para acercarse al uso clínico, en otros ensayos se usó otro sistema modelo con células madres mesenquimales . o El tejido adiposo subcutáneo puede servir de fuente potencial de células madre adultas. Estas Adipose-Derived Stem Cells (ADSC) son multipotentes y con estímulos correspondientes pueden diferenciarse en diferentes tipos de células, por ejemplo, osteoblastos , condrocitos , adipocitos . En la figura 2 se muestra esquemáticamente la aislación de ADSCs de tejido adiposo subcutáneo humano, que se elimina en intervenciones reductivas plásticas, Primeramente se lavó la grasa con amortiguador para eliminar células hematopoyéticas y a continuación se desmenuzó. Los trozos de tejido adiposo que se forman se digirieron con colagenasa. Por centrifugación del tejido digerido se separó la fracción estomal vascular y se descartaron los adipositos maduros flotantes. La fracción estomal vascular en pellet comprende de una población de células heterogénea de células sanguíneas, fibroblastos, pericitos, células endoteliales y preadipocitos .

Esta población de células se pasó a un frasco de cultivo con medio, con lo cual una parte de las células se adhieren. Por agregado de un cocktail apropiado, formado por insulina, dexametasona , indometacina e isobutilmetilxant ina o por insulina, cortisol, troglitazona , triyodot ironina e isobutilmetilxantina se estimularon las células para la adipogénesis y se provocó una mejor diferenciación adipogenética .

Ejemplo 5: Análisis de un efecto nocivo sobre la membrana provocado por la fosfatidilcolina y el Na-desoxicolato en ADSCs Na-desoxicolato (Na-DC) Las ADSCs del ejemplo 4 fueron estimuladas con un cocktail de hormonas (insulina, cortisol, troglitazona, triyodot ironina e isobutilmetilxantina) para provocar la adipogénesis y luego otros 21 dias para diferenciarlas como adipocitos maduros.

A continuación se llevó a cabo el tratamiento con Na-desoxicolato . Para ello se usaron las siguientes concentraciones : 0,01 mg/ml, 0,05 mg/ml, 0,075 mg/ml, 0,1 mg/ml y 0,5 mg/ml.

Los controles usados eran ADSCs sin tratamiento.

El tiempo de incubación fue de 4 horas.

Este grupo de concentraciones resultó efectivo para las 3T3-Ll. Después del tiempo de incubación de 4 horas, las células diferenciadas tratadas fueron observadas con microscopio óptico (figura 3a) .

Adicionalmente las ADSCs tratadas con Na-desoxicolato fueron analizadas en CLSM.

Los adipocitos diferenciados maduros fueron tratados con: 0,01 mg/ml, 0,05 mg/ml y 0,1 mg/ml Na-desoxicolato durante 4 horas .

Como control se usaron ADSCs sin tratamiento.

A continuación se realizó el análisis microscópico en CLSM con 63 aumentos (figura 3b) .

Se realizó otro análisis en ADSCs para determinar si el Na-desoxicolato tenia un efecto nocivo para las células por teñido con PI de las células tratadas y siguiente análisis en el CLSM. Los adipocitos diferenciados maduros fueron tratados con: 0,05 mg/ml, 0,1 mg/ml y 0,5 mg/ml Na-desoxicolato durante 4 horas. Como control se usaron ADSCs sin tratamiento .

A continuación se incubaron las células en un medio con 5 µp?/p?? yoduro de propidio durante 5 minutos. Luego se efectuó el análisis microscópico en el CLSM con 63 aumentos (figura 3c) Figura 3a: Fotografía con microscopio óptico de ADSCs diferenciadas después de ser tratadas con diferentes concentraciones de Na-desoxicolato (Na-DC) en cultivo de células 2D. El tratamiento se realizó como sigue: (a) Control = células sin tratamiento en medio de diferenciación durante 4 horas 0,01 mg/ml Na-DC después de 4 horas (c) 0,05 mg/ml Na-DC después de 4 horas (d) 0,075 mg/ml Na-DC después de 4 horas (e) 0,1 mg/ml Na-DC después de 4 horas (f) 0,5 mg/ml Na-DC después de 4 horas Las flechas negras indican las células con membrana dañada o fragmentos de células. Las flechas blancas indican gotas de lipido libres (Escala = 100 µp?) .

Figura 3b: Fotografías con CLSM de ADSCs diferenciadas después del tratamiento con diferentes concentraciones de Na-desoxicolato (Na-DC) en cultivo de células 2D. El tratamiento se realizó como sigue: (a) Control: Células sin tratamiento en medio de diferenciación 4 horas (b) 0-, 01 mg/ml Na-DC después de 4 horas (c) 0,05 mg/ml Na-DC después de 4 horas (d) 0,1 mg/ml Na-DC después de 4 horas Las flechas negras indican las células con membrana dañada o fragmentos de células. Las flechas blancas indican gotas de lipido libres (Escala = 20 µ??) .

Figura 3c: Fotografía fluorescente de ADCs diferenciadas con diferentes concentraciones de Na-desoxicolato (Na-DC) en cultivo de células 2D. El tratamiento se realizó como sigue: (a) Control: Células sin tratamiento en medio de diferenciación 4 horas (b) Control positivo = Células sin tratamiento en medio de diferenciación + 1% tritonio (c) 0,05 mg/ml Na-DC después de 4 horas (d) 0,1 mg/ml Na-DC después de 4 horas (e) 0,5 mg/ml Na-DC después de 4 horas Después del tiempo de incubación (4 horas) los adipocitos se tiñeron con 5 µp?/ml PI y se analizaron bajo CLSM. En la serie con PI de más arriba (a-e) , se muestran las fotografías fluorescentes de las células teñidas con PI. En la serie con PK de más abajo (a-e) se superponen las fotografías con contraste de fase correspondientes con las fotografías fluorescentes. (Escala = 20 µ?t?) Una concentración muy pequeña de Na-desoxicolato de 0,01 mg/ml no produjo efecto en las células (figura 3a (b) ) . No se apreciaron diferencias con respecto al grupo de control (figura 3a (a)). Los adipositos estaban vitales y tenían la membrana intacta. Una concentración mayor, a partir de 0,05 mg/ml produjo daños ligeros en la membrana celular (figura 3a (c)). Esto se incrementó con las siguientes concentraciones mayores (figura 3a (d,e)). La dosis más elevada de 0,5 mg/ml produjo un efecto claramente tóxico en la's células (figura 3a (f) ). Los adipocitos estaban muertos, la membrana celular completamente destruida, de modo que sustancialmente sólo quedaban gotas de lípido libres y fragmentos de células. El efecto del Na-desoxicolato sobre las ADSCs no se diferencia del que produce sobre las 3T3-L1. Se establecieron relaciones dosis-efecto idénticas. En ambos sistemas modelo se presentaron efectos nocivos en la membrana celular a partir de una dosis de 0,05 mg/ml y una concentración de 0,5 mg/ml resultó altamente tóxica.

La observación minuciosa de las células en el microscopio fluorescente confirmó las mencionadas conclusiones. Mientras que una concentración pequeña de 0,01 mg/ml de Na-desoxicolato (figura 3b (b) ) no provoca efectos nocivos en las células, una concentración de 0,1 mg/ml (figura 3b (d) provoca importantes lesiones en la membrana celular. Esto indica que el Na-desoxicolato tiene un claro efecto nocivo para la membrana celular.

Este efecto fue confirmado nuevamente con el teñido de las células ADSC con yoduro de propidio después de ser tratadas con Na-desoxicolato.

El control positivo con 1% tritonio mostró claramente células teñidas de rojo con PI, lo cual indica células con la membrana dañada (figura 3c (b) ) Después de un tratamiento con 0,05 mg/ml Na-desoxicolato no se comprobó la presencia de células teñidas de rojo y por lo tanto, la falta de células con lesiones en la integridad de la membrana y falta de estabilidad (figura 3c (c) ) . Después del tratamiento con 0,1 mg/ml Na-desoxicolato se observaron células teñidas de rojo aisladas y por lo tanto pocas células con lesiones en la integridad de su membrana y falta de estabilidad (figura 3c (d) ) . Después de un tratamiento con 0,5 mg/ml Na-desoxicolato se observaron muchas células claramente teñidas de rojo y con ello, muchas células con lesiones en su membrana y falta de estabilidad (figura 3c (e) ) Esto demuestra claramente un efecto nocivo para la membrana celular de las ADSCs del Na-desoxicolato en una concentración de 0 , 5 mg/ml .

Fosfatidilcolina (PC) En forma análoga a los ensayos realizados con Na-desoxicolato también se analizó un posible efecto nocivo para la membrana de la fosfatidilcolina.

Para ello se usaron en forma análoga a los ensayos con Na-desoxicolato, ADSCs del ejemplo 4 y se diferenciaron con un cocktail de hormonas (insulina, cortisol, troglitazona, triyodotironina e isobutilmetilxantina) para obtener adipocitos maduros.

A continuación se procedió al tratamiento con fosfatidilcolina. Para ello se usaron las siguientes concentraciones: 1 mg/ml, 5 mg/ml, 10 mg/mil, 15 mg/ml y 20 mg/ml .

Como control se usaron ADSCs sin tratamiento.

El tiempo de incubación fue de 4 horas.

Este rango de concentraciones resultó ser efectivo para las 3T3-L1. Después del tiempo de incubación de 4 horas, las células diferenciadas y tratadas se observaron en microscopio óptico (figura 4a) .

Además se analizaron ADSCs trat'adas con fosfatidilcolina en el CLSM. Los adipocitos diferenciados, maduros fueron tratados con: 1 mg/ml, 5 mg/ml, 15 mg/mil de fosfatidilcolina durante 4 horas.

Como control se usaron ADSCs no tratados.

A continuación se efectuó el análisis microscópico en el CLS de 63 aumentos (figura 4b) .

Se realizó otro análisis del posible efecto nocivo de la fosfatidilcolina en células ADSC por medio de teñido con PI de las células tratadas y subsiguiente análisis en el CLSM. Los adipositos maduros diferenciado fueron tratados con 5 mg/ml, 10 mg/mil, 15 mg/ml de fosfatidilcolina durante 4 horas .

Como control se usaron células ADSC sin tratamiento.

Las células se incubaron a continuación en un medio con 5 µ??/ml yoduro de propidio durante 5 minutos. Luego se efectuó el análisis microscópico en el CLSM con 63 aumentos (figura 4c/26) .

Figura 4a: Fotografía con microscopio óptico de las ADSCs diferenciadas después de ser tratadas con diferentes concentraciones de fosfatidilcolina (PC) en cultivo de células 2D. El tratamiento se realizó como sigue: (a) Control = células sin tratamiento en medio de diferenciación durante 4 horas (b) 1 mg/ml PC después de 4 horas (c) 5 mg/ml PC después de 4 horas (d) 10 mg/ml PC después de 4 horas (e) 15 mg/ml PC después de 4 horas (f) 20 mg/ml PC después de 4 horas (Escala = 100 µp?) Figura 4b: Fotografía en CLSM de ADSCs diferenciadas después de ser tratadas con diferentes concentraciones de fosfatidilcolina (PC) en cultivo de células 2D. El tratamiento se realizó como sigue: (a) Control = células sin tratamiento en medio de diferenciación durante 4 horas (b) Control positivo = células sin tratamiento en medio de diferenciación + 1% tritonio'" © 5 mg/ml PC después de 4 horas (d) 10 mg/ml PC después de 4 horas (e) 15 mg/ml PC después de 4 horas Después del tiempo de incubación (4 horas) los adipocitos se tiñeron con 5 µp?/ml PI y se analizaron bajo CLSM. En la serie con PI de más arriba (a-e), se muestran las fotografías fluorescentes de las células teñidas con PI . En la serie con PK de más abajo (a-e) se superponen las fotografías con contraste de fase correspondientes con las fotografías fluorescentes. (Escala = 20 µ?t) De manera similar a las observaciones realizadas en 3T3-L1 (ejemplo 3), en el modelo de células ADSC no se comprobaron efectos nocivos para las células al ser tratada con fosfatidilcolina (figura 4a). Independientemente de la concentración de PC usada, las células estaban vitales y no presentaban modificaciones morfológicas.

En cambio, con una concentración de apenas 0,05 mg/ml Na-DC se comprobaron daños y con una concentración de 0,5 mg/ml las ADSCs estaban muertas (figura 3c) .

La observación de las ADSCs en el CLSN después del tratamiento con fosfatidilcolina confirmó que no se habían producido daños en las células (4b) . Tanto el control sin tratamiento como también las ADSCs tratadas con 15 mg/ml PC presentaron una morfología intacta. Por lo tanto, la fosfatidilcolina no tiene efectos nocivos para las células.

El teñido con PI de las ADSCs tratadas con fosfatidilcolina confirmó que in vitro, la fosfatidilcolina no tiene efectos nocivos para las células.

El control positivo con 1% tritonio puso en evidencia claramente las células teñidas de rojo con PI, lo cual indicó la presencia de células dañadas en su membrana (figura 4c (b) .

Después de un tratamiento con 5, 10 y 15 mg/ml Na-desoxicolato y después de teñido con PI, no se observaron células teñidas y por lo tanto células con daños en la integridad de su membrana y su estabilidad (figura 4c © a (e) ) .

Esto demuestra que el tratamiento con fosfatidilcolina no provocó efectos nocivos en la membrana de las ADSCs.

En cambio, la integridad de la membrana y la estabilidad de las ADSCs sufrieron claros daños por tratamiento con Na-desoxicolato (figura 3c (d-e) .

Los ensayos con Na-desoxicolato y fosfatidilcolina demuestran que solamente el Na-desoxicolato tiene efectos nocivos en las células y no asi la fosfatidilcolina . La fosfatidilcolina no provoca daños en la membrana de las células o las células. Esta observación fue corroborada usando varios métodos tales como análisis con microscopio óptico, teñido con yoduro de propidio y subsiguiente microscopía fluorescente.

El efecto de las sustancias no se modificó durante el tiempo que duró el ensayo. Una incubación de 2 horas mostró los mismos efectos que una incubación de 24 horas. Los ensayos con Na-desoxicolato demostraron que esta sal biliar tiene efectos desestabilizadores y necróticos en la membrana. Después de comprobar las dosis necesarias in vitro es probable que in vivo las cantidades usadas de Na-desoxicolato también tengan efecto nocivo para las células.

Para fosfatidilcolina no se pudieron comprobar in vitro efectos nocivos para las células, lo cual probablemente también sea el caso en vivo. Este fosfolípido no tiene efecto dañino para las células.

Ejemplo 6: Análisis de la combinación de fosfatidilcolina-glicirricinato-maltosa Se analizó el efecto de una nueva combinación de sustancias. Esta combinación estaba formada por: 50 mg/ml fosfatidilcolina (PC) 20 mg/ml glicirricinato trisódico y 180 mg/ml maltosa Primeramente se determinó la relación dosis-efecto en cuanto a daños en la membrana o efectos citotóxicos y se investigó la actividad lipolitica.

Como sistema modelo para este análisis se usó la linea murina de células 3T3-L1 de preadipocitos . Las células 3T3-L1 fueron estimuladas con un cocktail de hormonas (corticosterona, isobutilmetilxant ina , indometacina, insulina) para la adipogénesis se diferenciaron 8 días más para obtener adipocitos maduros.

Los adipocitos maduros de las células 3T3-L1 fueron tratados con concentraciones de entre 0,1 mg/ml y 50 mg/ml de fosfatidilcolina . La fosfatidilcolina se combinó con 2-20 mg/ml de glicirricinato y 18 -180 mg/ml de maltosa.

La incubación de las células 3T3-L1 maduras se realizó durante 4 horas con la combinación de sustancias.

A continuación, las células tratadas fueron analizadas con microscopía óptico de 63 aumentos para comprobar la existencia de un efecto citotóxico o desestabilizador de la membrana .

Los resultados se han representado gráficamente en las figuras 5 y 6: Figura 5: Fotografía de contraste de fases con un CLS de células 3T3-L1 diferenciadas y tratadas en cultivo de células 2D. El tratamiento se realizó como sigue: (a) Control = células sin tratamiento en medio de diferenciación (b) 5 mg/ml PC + 2 mg/ml glicirricinato + 18 mg/ml maltosa (c) 10 mg/ml PC + 4 mg/ml glicirricinato -i- 36 mg/ml maltosa (d) 20 mg/ml PC + 8 mg/ml glicirricinato + 72 mg/ml maltosa (e) 30 mg/ml PC + 12 mg/ml glicirricinato + 108 mg/ml maltosa (f) 50 mg/ml PC + 20 mg/ml glicirricinato + 180 mg/ml maltosa (Escala = 20 µ??) Figura 6: Fotografía con un CLSM de células 3T3-L1 diferenciadas y tratadas en cultivo de células 2D. El tratamiento se realizó como sigue: o (a) Control negativo = células sin tratamiento en medio de diferenciación (b) Control positivo = células sin tratamiento en medio de diferenciación + 1% tritonio X (c) 20 mg/ml PC + 8 mg/ml glicirricinato + 72 mg/ml maltosa (d) 30 mg/ml PC + 12 mg/ml glicirricinato + 108 mg/ml maltosa (e) 50 mg/ml PC + 20 mg/ml glicirricinato + 180 mg/ml maltosa cabo del tiempo de incubación (4 horas), los adipositos fueron teñidos con 5 µt?/p?? PI y analizados en el CLSM. En la columna con PI izquierda (a-e) se muestran las fotografías fluorescentes de las células teñidas con PI. En la columna PK de la derecha (a-e) se superponen las correspondientes fotografías de contraste de fases con las fotografías fluorescentes. (Escala = 20 µ??) .

Los adipocitos tratados con la combinación de sustancias no se diferencian de las células de control (control figura 5a) . La observación en microscopio óptico mostró la misma morfología de las células de control, estaban vitales y la membrana celular estaba intacta. Independientemente de la concentración (figura 5) la combinación de sustancias no produjo efectos dañinos visibles para la membrana de la célula.

Para confirmar la integridad de la membrana se tiñeron las células 3T3-L1 y el control con PI . Para ello se usaron combinaciones de sustancias con las siguientes concentraciones : 20 mg/ml, 30 mg/ml y 50 mg/ml fosfatidilcolina; 8 mg/ml, 12 mg/ml y 20 mg/ml glicirricinato; y 72 mg/ml, 108 mg/ml y 180 mg/ml maltosa.

El tiempo de incubación fue de 4 horas. A continuación se incubaron las células tratadas y dos controles con 5 µ??/ml PI durante 5 minutos.

La evaluación se realizó en el CLSM (figura 6) .

El tratamiento de las células con tritonio X provocó daños en la integridad de la membrana. Esto permitió la penetración del yoduro de propidio en las células y tiñó las células de membrana desestabilizada. El control positivo (figura 6b) presentó la coloración esperada de las células permeabilizadas por el tritonio X. Las células sin tratamiento del control negativo (figura 6a) no fueron coloreadas por el PI. Esto indica que la membrana de estas células estaba intacta.

Las células tratadas con 20 mg/ml PC (figura 6c) y 30 mg/ml PC (figura 6d) no se tiñeron con PI. Por lo tanto, estas células no presentaban daños en su membrana y la combinación de sustancias utilizada no tuvo efectos nocivos para la célula (figura 6c, d) .

Las células tratadas con 50 mg/ml PC (figura 6e) presentaron una débil coloración roja (figura 6e) . Estas células fueron tratadas con una dosis elevada de la combinación de sustancias. Esto hizo que se privara completamente de medio a las células y resultara una falta de nutrientes, lo cual provocó años en las células en incubaciones algo prolongadas. Por lo tanto, la coloración débil de las células tratadas con 50 mg/ml PC puede adjudicarse a una falta de nutrientes y no a daños sufridos por las células por efecto de la fosfatidilcolina .

En los experimentos in-vit.ro, la combinación de sustancias formada por fosfatidilcolina, glicirricinato y maltosa no presentó ningún efecto nocivo para la membrana. Hay que tener en cuenta que para demostrar un daño potencial de la membrana provocado por las combinaciones de sustancias de la invención se usaron concentraciones rauy elevadas, que son claramente superiores a las concentraciones terapéuticas que se usan in ivo .

La relación entre el efecto in-vitro y el efecto in-vivo se denomina correlación in-vivo/in-vitro . Sin embargo, la determinación de esta correlación no es trivial y es diferente en condiciones diferentes. En muchos casos se puede tomar como base aproximada una correlación in vivo/in vitro de un factor 100. Esto significa que las concentraciones que se usan in-vitro son más o menos dos décimas potencias inferiores a las dosis usadas in vivo para lograr efectos comparativos. Sobre esta base serian previsibles para la lipólisis por inyección de por ejemplo Lipostabil®N, las concentraciones in-vitro que se indican en la Tabla 1.

TabSa H .

En el caso del Na-desoxicolato, tanto como sustancia aislada o sustancia componente de Lipostabil®, el cálculo de la concentración esperada in-vitro coincide con las concentraciones determinadas en los ensayos (Tabla 1) . De esto se puede concluir que en la lipólisis por inyección esta sustancia muy probablemente tenga efectos nocivos para la célula en las concentraciones usadas.

Por lo tanto, es muy improbable que las concentraciones utilizadas para una terapia in-vivo con la combinación de sustancia de la invención provoquen un daño igualmente grave en la membrana de las células (y subsiguiente necrosis) que las del estado de la técnica. De allí que se pueden suponer los mismos factores de conversión para la combinación de fosfatidilcolina y ácido glicirricínico .

Ejemplo 7: Análisis in-vivo de la reacción inflamatoria de las células tratadas en el ratón Dado que una inflamación es un disparador para la migración de células madres (ADSC) lipoderivadas, se inyectó o bien una mezcla (figuras 8 d-f) de fosfatidilcolina (PC), ácido glicirricínico (GH) y maltosa (MAL) (25 mg/ml PC, 10 mg/ml GR, 90 mg/ml MAL), amortiguador PBS (figuras 8 g-i) o de células coli (figuras 8 a-c) en el tejido subcutáneo derecho de ratones Balb/c. La incubación se realizó durante 5 días.

A continuación se tiñó CD4, CD8, CD19 y CD20 para analizar la reacción de inflamación de las células. Además, se marcaron células madres (ADSC) lipoderivadas por medio de un vector de expresión lentiviral de eGFP/luciferasa y se inyectó 48 horas después de la inyección inicial en el tejido adiposo del lado opuesto de los ratones Balb/c.

La migración de las células ADSC se observó por medio de bioluminiscencia . Los resultados del ejemplo 7 se han volcado gráficamente en la figura 8.

Figura 8: Fotografías bioluminiscentes de células ADSC marcadas con luciferasa después de inyección subcutánea en el tejido adiposo derecho de ratones Balb/c de: (a-c) Células E.. coli (d-f) Fosfatidilcolina + maltosa + glicirricinato (PMC) (g-i) Amortiguador PBS Al cabo de 48 horas se inyectaron en cada caso por vía intraperitoneal células ADSC marcadas con luciferasa y se observó la migración de las células ASC por medio de bioluminiscencia . En los ratones (d-i) , las células ASC migraron al hígado y el bazo. En los ratones (a-c) , las células ASC migraron a la región inflamada con E. coli y se acumularon allí.

En los ratones con PBS (figuras 8 g-1) y en los ratones con la mezcla que contenía PC (figuras 8 d-f) no se observó diferencia de la migración de células ADSC. En cambio, en los ratones a los que se había inyectado E.coli se observó una migración y acumulación de células ADSC en la región inflamada por la inyección de E.coli.

Por lo tanto, aquí se mostró, por medio de células madres lipoderivadas (células ADSC) que una inyección in-vivo de una mezcla de fosfatidilcolina (PMC), glicirricinato trisódico y maltosa no desencadena una reacción inflamatoria. Esto se demostró por el hecho que las células ADSC marcadas con luciferasa no migraron al tejido adiposo subcutáneo en el que se había inyectado la mezcla ni se acumularon allí.

Esto confirmó que la fosfatidilcolina se puede usar como sustancia lipolítica activa sin que provoque graves reacciones inflamatorias cuando se la combina con ácido glicirricínico .

Ejemplo 8: Análisis in-vitro del efecto lipolitico de la combinación de sustancias Células 3T3-L1 fueron estimuladas con un cocktail de hormonas y diferenciadas otros 8 días para obtener adipositos maduros.

A continuación se procedió a una incubación de las células durante 4 horas con: 10 mg/ml, 25 mg/ml y 50 mg/ml fosfatidilcolina y 4 mg/ml, 10 mg/ml y 20 mg/ml glicirricinato y 36 mg/ml, 90 mg/ml y 180 mg/ml maltosa.

La actividad lipolitica se determinó mediante un ensayo de lipólisis como se describe a continuación: Método del ensayo de lipólisis: El clivado de triglicéridos para dar glicerol y los tres ácidos grasos se denomina lipólisis. Este proceso es catalizado principalmente por la lipasa, sensible a las hormonas, y por la lipasa adiposa de triglicéridos. Por medio de un ensayo de lipólisis se puede demostrar la actividad lipolitica de las células. Este ensayo se basa en la medición del glicerol que se genera en la lipólisis, el que es secretado al medio. Por reacción enzimática, el glicerol se convierte en fosfato 1-glicerol y luego se metaboliza para dar fosfato de dihidroxiacetona . En este proceso se forma peróxido de hidrógeno, el que se identifica fotométricamente por medio de una reacción de color con peroxidasa. Para poder juzgar el efecto lipolitico de sustancias, se la compara con la actividad lipolitica basal de las células y con una lipólisis estimulada por medio del receptor beta-andrenérgico . Dicha estimulación puede provocarse con isoproterenol .

Los resultados del ejemplo 8 se han representado gráficamente en la figura 7.

Figura 7: Representación gráfica de la evaluación del ensayo de lipólisis µp? glicerol/µ?? DNA) con células 3T3-L1 diferenciadas tratadas. Las 3T3-L1 fueron estimuladas para la adipogénesis con un cocktail de hormonas y a continuación diferenciadas durante 8 días. El tratamiento de los adipocitos maduros se efectuó, en cada caso, durante 4 horas en BSA/PBS 3% con: 10 DM isoproterenol (control positivo para una lipólisis estimulada ) 10 mg/ml fosfatidilcolina + 4 mg/ml glicirricinato + 36 mg/ml maltosa 25 mg/ml fosfatidilcolina + 10 mg/ml glicirricinato + 90 mg/ml maltosa 50 mg/ml fosfatidilcolina + 20 mg/ml glicirricinato + 180 mg/ml maltosa Como control de la actividad de lipólisis básica se usaron células sin tratamiento en BSA/PBS 3%. Las barras indican las variaciones estándar de n=3. El ensayo se realizó dos veces. (PC=fosfatidilcolina) .

La primera barra de la figura 7 muestra que la actividad de lipólisis básica de células sin tratamiento en BSA/PBS 3% es de 8 glicerol/^ig DNA. Sobre la base de este nivel básico se determinó la actividad lipolitica de las otras muestras. En el control positivo (figura 7) se indujo una estimulación de la lipólisis con 10 µ? del agonista beta-adrenoreceptor isoproterenol . El control positivo presentó una actividad lipolitica que aumentó a ocho veces el nivel básico. Todas las células tratadas con la combinación de sustancias (10 mg/ml, 25 mg/ml y 50 mg/ml PC) mostraron un aumento de la actividad lipolitica con respecto al nivel básico (figura 7) . Un tratamiento de las células con la combinación de sustancias que contiene 10 o 25 mg/ml PC provoca un aumento de la actividad lipolitica quintuplicada con respecto al nivel básico. El tratamiento de las células con la combinación de sustancias que contiene 50 mg/ml PC provoca un aumento triple de la actividad lipolitica, con respecto al nivel básico (figura 7) . Como ya se ha dicho más arriba, la calda de la actividad lipolitica con la concentración más elevada de debe probablemente a que las células carecen de nutrientes por falta del medio que necesitan para sobrevivir o para mantener las funciones normales como por ejemplo la actividad lipolitica.

La combinación de sustancia de la invención presenta, in-vitro, un marcado efecto lipolítico.

Ejemplo comparativo 1: (Lipostabil® que contiene fosfatidilcolina y Na-desoxicolato) Se usaron concentraciones de Na-desoxicolato de 0,005-0,5 mg/ml (efecto como sustancia aislada, a partir de 0,05 mg/ml) y concentraciones de fosfatidilcolina de 0,01-1 mg/ml (sin efecto como sustancia aislada) .

El ensayo se efectuó en forma análoga al ejemplo 8.

Los resultados del ejemplo comparativo 1 se han representado gráficamente en la figura 9.

Figura 9: Fotografía de contraste de fases de células 3T3-L1 tratadas. . Las 3T3-L1 fueron estimuladas para la adipogénesis con un cocktail inductor de hormonas y a continuación se diferenciaron durante 8 días. Los adipocitos maduros se trataron durante 24 horas con fosfatidilcolina y Na-desoxicolato de LipostabilD, con las siguientes concentraciones : (a) células sin tratamiento en medio de diferenciación (b) 0,01 mg/ml fosfatidilcolina + 0,005 mg/ml Na-desoxicolato (c) 0,1 mg/ml fosfatidilcolina + 0,05 mg/ml Na-desoxicolato (d) 0,25 mg/ml fosfatidilcolina + 0,125 mg/ml Na-desoxicolato (e) 0,5 mg/ml fosfatidilcolina + 0,25 mg/ml Na-desoxicolato (f) 1 mg/ml fosfatidilcolina + 05 mg/ml Na-desoxicolato El análisis se efectuó" con microscopio óptico. Los ejemplos de células con membrana dañada o fragmentos de células se identifican por medio de flechas negras, mientras que las gotas de lípido libres se marcan con flechas blancas.

Si bien la concentración más baja de fosfatidilcolina y Na-desoxicolato aún no muestra ningún efecto (figura 9b), en la subsiguiente ya se aprecia una ligera lesión en las células (figura 5c) , la que aumenta a medida que aumenta la concentración. En la figura 5e · las membranas celulares aparecen muy atacadas, lo que demuestra que Lipostabil® con una concentración de 0,5 mg/ml fosfatidilcolina junto con 0,25 mg/ml Na-desoxicolato tiene un efecto muy nocivo en las células y provoca la muerte de las células. El efecto del Lipostabil® se parece más al efecto detergente del Na-desoxicolato (daño típico de la membrana celular) , cuyo efecto evidentemente es más efectivo. No pudo comprobarse efecto nocivo característico de la fosfatidilcolina para la membrana como sustancia aislada, lo que permite suponer que el efecto nocivo para las células de Lipostabil® proviene, en primera línea, del Na-desoxicolato. La comparación del rango de concentraciones efectivas de Lipostabil® con las de las sustancias aisladas corrobora la conclusión en cuanto al efecto preeminente del Na-desoxicolato. Mientras que la fosfatidilcolina , como sustancia aislada no produjo efecto alguno, Lipostabil® ya provocó ligeros efectos con una concentración de fosfatidilcolina de 0, 1 mg/ml (con esta concentración no se observan efectos de la PC como sustancia aislada) . En cambio, la administración aislada de Na-desoxicolato con una concentración a partir de 0,05 mg/ml provocó primeros daños en la membrana, lo que también ocurrió con Lipostabil® de esta concentración.

Ejemplo 9: Aplicación de Phosphogliv® y Lipostabil® en sujetos de ensayo femeninos y comprobación de la efectividad por lipólisis subcutánea La preparación Phosphogliv® i.v. que se usa hasta ahora en casos de enfermedades hepáticas contiene ácido glicirricinico en lugar de DC (como en Lipostabil® N i.v) . Los primeros resultados experimentales en dos sujetos de ensayo indicaron igual efectividad de la preparación y de Lipostabil® N i.v. con una tolerancia claramente superior.

Los ensayos que se describen en la presente indican un efecto comparable de Phosphogliv® y Lipostabil®, con mejor tolerancia de Phosphogliv®.

En un estudio exploratorio controlado se trataron seis sujetos de ensayo femeninos en forma subcutánea en el brazo izquierdo con Phosphogliv® y en el brazo derecho con Lipostabil®.

Las ampollas usadas contenían 0,5 g PPC, 0,2 g glicirricinato y 1,8 g maltosa en forma de liofilizado, disuelto en 10 mi agua por inyección. Según la extensión de la zona a inyectar se efectuaron hasta 60 inyecciones subcutáneas en cada brazo, siempre 0,5 mi a una distancia de 1,5 cm.

Momento del análisis de los efectos de las preparaciones: El tratamiento duró un total de 16 semanas. Los análisis se realizaron un día antes de empezar el tratamiento (t = -1), el mismo día del primer tratamiento (t=0), 8 días después de empezar el tratamiento (t=8) y 16 semanas después de iniciar el tratamiento (t=16) .

Comprobación del efecto: Para comprobar el efecto se midió el contorno del brazo del sujeto de ensayo. El contorno del brazo (cm) se midió con un cáliper y una cinta métrica (Myo-tape) antes de iniciar el tratamiento, al cabo de ocho días y de 16 semanas.

Al final se determinó el colesterol total, el colesterol LDL y el colesterol HDL en mg/dl y el índice aterógeno de colesterol LDL a HDL.

Representación de los resultados: A partir de los valores de medición, las modificaciones de los mismos como diferencia con respecto al valor inicial y los cambios en % del valor inicial se determinaron valores promedio y las variaciones Cal izq.= cáliper izquierdo; Cal der . = caliper derecho; Myo izq. = Myo-type izquierdo; Myo der.= Myo derecho; P = Phosphogliv®; L = Lipostabil®; Del = Clara mejora de la eficiencia y tolerancia, física; DelP = Clara mejora de la eficiencia y tolerancia, paciente; Drl = Mejora espectacular de la eficiencia y tolerancia, física; DrlP = Mejora espectacular de la eficiencia y tolerancia, paciente.

El contorno del brazo de los sujetos de ensayo fue diferente según el método de medición elegido: cáliper o Myo-tape . Sin embargo, independientemente del método de medición se pudo comprobar una disminución del perímetro del brazo. Entre el efecto de Phospogliv® y Lipostabil® no se apreció ninguna diferencia. Ambas preparaciones provocaron una reducción del Tabla 3-1 Perímetro del brazo medido con cáttpor (cm) Tiempo en semanas después de!, inicio (tel tratamiento con.

! Sujeto de Phospogliv® (¡zqu'erda) LipostaM® {derecha) Tabla 3-2: Cambios del perímetro del brazo con cáliper en cm como diferencia absoluta y relativa para la semana 0 De la Tabla 3-2 surge que al cabo de 8 semanas P osphogliv® y Lipostabil® provocan una reducción del perímetro del brazo medido con cáliper, de 19,21 % o 18,29 %. Al cabo de 16 semanas se comprobó una reducción del perímetro del brazo, medido con cáliper, de 21,22 o 21,04%. Por lo tanto, ambas preparaciones, Phosphogliv® y Lipostabil® tienen el mismo efecto .

Tabla 4-1: Cambio del perímetro del brazo con Myo-tape en cm como diferencia absoluta y relativa de la semana 0 Tabla 4-1 : Cambio del perime!ro del brazo con Wiyo-tape en cm como diferencia absoluta relativa de la seman 0 De la Tabla 4-2 surge que al cabo de 8 semanas Phosphogliv© y Lipostabil® provocan una reducción del perímetro del brazo medido con Myo-tape, de 7,62 o 6,97 %. Al cabo de 16 semanas se comprobó una reducción del perímetro del brazo, medido con Myo-tape, de 9,81 o 9,89%. Por lo tanto, ambas preparaciones, Phosphogliv® y Lipostabil® tienen el mismo efecto.

Si bien ambos métodos, cáliper y Myo-tape, indican reducciones diferentes provocadas por las preparaciones, el efecto de ambas preparaciones Phosphogliv® y Lipostabil® es igual .

Ejemplo 10: Comprobación de efectos secundarios en el tratamiento con Phosphogliv® y Lipostabil® Las mujeres que participaron del ensayo fueron tratadas y los efectos fueron analizados como se describe en el ejemplo 9. Para documentar los efectos secundarios se tomaron fotografías del brazo de los sujetos de ensayo antes y después del tratamiento con Phosphogliv® y Lipostabil® ( figuras 10 y 11 ) .

En la sujeto de ensayo Nro. 1 se comprobó un claro enro ecimiento e hinchazón en el brazo derecho tratado con Lipostabil®, a los 3 minutos. En cambio, en el brazo izquierdo tratado con Phosphogliv® sólo se comprobó un ligero enrojecimiento e hinchazón. Este fenotipo confirma los resultados de los ensayos in-vitro con fosfatidilcolina, que no tiene efectos nocivos para las células (Ejemplo 5, figura 4a -c) ) . En la figura 11, la foto de la sujeto de ensayo Nro. 2 muestra la misma diferencia entre el brazo izquierdo (Phosphogliv©) y el brazo derecho (Lipostabil®) .

Figura 10: Documentación fotográfica después del tratamiento del brazo izquierdo ((Phosphogliv©)) y el brazo derecho (Lipostabil® ). de la sujeto de ensayo Nro. 1. La fotografía se tomó 3 minutos después de la aplicación de las preparaciones Phosphogliv® y Lipostabil®) .

Figura 11: Documentación fotográfica después del tratamiento del brazo izquierdo ((Phosphogliv®)) y el brazo derecho (Lipostabil®). de la sujeto de ensayo Nro. 2. La fotografía se tomó 3 minutos después de la aplicación de las preparaciones Phosphogliv® y Lipostabil®) .

En la Tabla 5 que sigue se han resumido los efectos secundarios .

Tabla 5: Efectos secundarios del tratamiento con Phosphogliv® y Lipostabil® P = Phosphogliv®; L = Lipostabil® Después del primero y el segundo tratamiento, tanto el médico como los sujetos de ensayo coincidieron en una mejoría notable o muy notable (reducción) de las acumulaciones adiposas por el tratamiento con ambas preparaciones y además de una tolerancia claramente mejor de Phosphogliv®. En todos los casos, la firmeza de la piel después del tratamiento fue buena .

Los datos de la Tabla 5 muestran que las molestias posteriores al tratamiento de los sujetos de ensayo con Lipostabil® fueron acompañadas de hinchazones, enrojecimiento y dolores en los lugares de inyección. Tales efectos secundarios casi no se presentaron o no se presentaron en un tratamiento con Phosphogliv® . Para los sujetos de ensayo interrogadas aseguraron que Phosphogliv® tenia una tolerancias sustancialmente mejor que Lipostabil®. Como ya se ha mencionado más arriba, la mejor tolerancia se debe a la reducida presencia o total ausencia de daños en las células. Como se aprecia en el ejemplo 5, la fosfat idilcolina no daña la membrana celular, mientras que el Na-desoxicolato contenido en Lipostabil® la perjudica.

Ejemplo 11: Determinación de los valores de colesterol antes y después de lipólisis subcutánea Para esto se observaron los lipidos de la sangre de los sujetos de ensayo durante el tiempo que tardó la terapia. Se determinó el colesterol total, el colesterol LDL (low density lipoprotein) y el colesterol HDL (high density lipoprotein) . La Tabla 6 incluye los valores en el tiempo t = -1, t = 8 semanas y t = 16 semanas.

Los lipidos sanguíneos se modificaron en forma lineal en el medio durante el tiempo que duró la terapia. Únicamente en dos sujeto de ensayo (I.B. y Ch.K.) que tenían un nivel de colesterol total y colesterol LDL claramente aumentado, los valores cayeron, mientras que el colesterol HDL aumentó (Tabla 6) . En la Tabla 7 se ofrece un resumen de este estudio .

Las demás variables bioquímicas de control AST, ALT, y-GT, bilirrubina, glucosa y creatinina permanecieron en el rango normal, salvo un pequeño aumento del valor y-GT en la sujeto de ensayo S.A. antes del inicio de la terapia.

TABLA 6: Valores do oolestorol (mg/ml) Tiempo en semands des ués dal inicio del tratamiento Cociente LDL/HDL (Valor objetivo < 3) -1 semana 1,64 8 semanas 1, 1 16 semanas 1 , 65 Colesterol LDL = colesterol de lipoprotein de baja densidad Colesterol HDL = colesterol de lipoprotein de alta densidad TABLft. 7 : Rasuman de loo resultados del eotudio con los su etos do ostudio Del = Clara mejora de la eficiencia y tolerancia, física; DelP = Clara mejora de la eficiencia y tolerancia, paciente; Drl = Mejora espectacular de la eficiencia y tolerancia, física; DrlP = Mejora espectacular de la eficiencia y tolerancia, paciente.

Claims (16)

REIVINDICACIONES

1. Uso de una composición CARACTERIZADA PORQUE contiene: a) al menos un fosfolipido; b) al menos ácido glicirricinico o c) una sal del ácido glicirricinico y d) si fuera necesario, excipientes donde el contenido total de fosfolipidos y de ácido glicirricinico o sus sales es de 2-80 % en peso, y - la relación de peso entre fosfolipidos y el ácido glicirricinico o sus sales es de 30:1 a 0,5:1, para la preparación de un medicamento para eliminar depósitos adiposos subcutáneos.

2. Uso de una composición de la reivindicación 1, CARACTERIZADO PORQUE el fosfolipido que contiene es fosfatidi Icolina .

3. Uso de una composición de la reivindicación 1 o 2, CARACTERIZADO PORQUE contiene fosfatidilcolina de origen animal o vegetal.

4. Uso de una composición de las reivindicaciones 1 a 3, CARACTERIZADO PORQUE contiene ácido glicirricinico o sales de potasio, sodio, amonio o magnesio del ácido glicirricinico.

5. Uso de una composición de las reivindicaciones l a 4, CARACTERIZADO PORQUE contiene un azúcar, particularmente glucosa y maltosa y/o sus derivados, manita, sorbita o lactosa como excipiente.

6. Uso de una composición de las reivindicaciones 1 a 5, CARACTERIZADO PORQUE tiene un contenido total de fosfatidilcolina de 15 a 98 % en peso, preferentemente 30 a 98 % en peso, con mayor preferencia 50 a 98 % en peso, con particular preferencia 75 a 90 % en peso y muy preferentemente 75 a 98% en peso.

7. Uso de una composición de las reivindicaciones 1 a 6, CARACTERIZADO PORQUE su forma seca se disuelve en un disolvente apropiado.

8. Uso de una composición de una o varias de las reivindicaciones 1 a 7, CARACTERIZADO PORQUE se usa preferentemente en forma seca, particularmente como liofilizado obtenido por secado por congelación ( liofilización ) .

9. Uso de una composición de una o varias de las reivindicaciones 1 a 8, CARACTERIZADO PORQUE se usa en forma de una solución.

10. Uso de una composición de una o varias de las reivindicaciones 1 a 9, CARACTERIZADO PORQUE contiene disolventes apropiados para uso fisiológico que comprenden agua, solución fisiológica, glucosa, un monohidroxi-alcohol como etanol, 2-propanol, n-propanol, polihidroxialcoholes como glicerol y/o propandiol, poliglicol como polietilenglicol y/o migliol, glicerol, formal, dimetilisosorbitol, aceites naturales y sintéticos y/o éteres .

11. Uso de una composición de una o varias de las reivindicaciones 1 a 10, CARACTERIZADO PORQUE es para obtener un medicamento para el tratamiento de acumulaciones adiposas subcutáneas, enfermedades subcutáneas del tejido adiposo, particularmente con trastornos locales de la distribución adiposa .

12. Uso de una composición de una o varias de las reivindicaciones 1 a 11, CARACTERIZADO PORQUE es para la preparación de un medicamento para la descomposición y regresión de dilataciones patológicas del tejido adiposo.

13. Uso de una composición de una o varias de las reivindicaciones 1 a 12, para la preparación de un medicamento CARACTERIZADO PORQUE se presenta en forma de cremas, ungüentos, geles, hidrogeles, lociones, pastas, liofilizado y soluciones.

14. Uso de una composición de una o varias de las reivindicaciones 1 a 13, CARACTERIZADO PORQUE los trastornos de distribución adiposa no deseados de naturaleza estética o por enfermedad son lipoedemas, lipomas, lipomatosis de la pared abdominal, dermatopaniculosis deformante, pseudoginecomastia, Buffalo Hump en pacientes de SIDA, celulitis o depósitos adiposos subcutáneos no específicos.

15. Uso de una composición de una o varias de las reivindicaciones 1 a 14, CARACTERIZADO PORQUE la aplicación de la preparación se efectúa por inyección subcutánea, intraperitoneal, intramuscular o intravenosa.

16. Uso de una composición de una o varias de las reivindicaciones 1 a 14, CARACTERIZADO PORQUE para la aplicación se selecciona un procedimiento del grupo que comprende iontoforesis, electroporación, microporación o fonoforesis .