TW201130814A

TW201130814A - Pyrazine derivatives

Info

Publication number: TW201130814A
Application number: TW100102003A
Authority: TW
Inventors: Tao Feng; Hitesh Jayantilal Sanganee; Hiroki Wada
Original assignee: Astrazeneca Ab
Priority date: 2010-01-19
Filing date: 2011-01-19
Publication date: 2011-09-16
Also published as: WO2011089416A1; US20120022082A1; AU2011208530A1; EP2526097A1; BR112012017884A2; CA2786520A1; JP2013517321A; UY33191A; MX2012008328A; US8198285B2; US20130123275A1; AR079945A1; KR20120120307A; CN102812017A; RU2012135093A

Description

201130814 六、發明說明：【發明所屬之技術領域】本發明係關於某些新穎。比啩衍生物或其醫藥上可接受之鹽，其具有骨形成活性且因此可用於治療人類或動物體之方法中。本發明亦係關於製造該等吡畊衍生物之方法、含有該等《«比畊衍生物之醫藥組合物及該等吡畊衍生物在治療方法（例如在製造用於預防或治療溫血動物（例如人）之骨相關性病症或病況的藥劑）中之用途。本發明尤其係關於》比畊衍生物’其係糖原合酶激酶3 (GSK3)抑制劑。【先前技術】 GSK3係由兩種同型異構體（α及β)構成，該等同型異構體係由不同基因編碼’但在催化域内高度同源。GSK3在中柩及周圍神經系統中高度表現。GSK3係多功能激酶，其調節在重要細胞功能、結構、基因表現、遷移及存活中所涉及的多種不同信號傳導途徑（Jope等人Neurochem Res. 2007，32，577-595)。GSK3可磷酸化若干受質，包括tau、 β-連環蛋白、糖原合酶、丙嗣酸脫氫酶及伸長起始因子2b (eIF2b)。胰島素及生長因子可活化蛋白激酶B，該蛋白激酶B可在第9位絲胺酸殘基上磷酸化GSK3並使其滅活 (Kannoji等人，Expert Opin. Ther. Targets 2008，12, 1443-1455)。 GSK3係組成性活性激酶，現已認識到其可調節包括 Wnt/β-連環蛋白、Notch及PI3K及hedgehog信號傳導途徑 153530.doc ⑤ 201130814 在内的途徑且在調節包括骨生成、軟骨發生及脂肪生成在内的過程中起作用（Kulkarni等人，j cell Biochem，2007, 102，15 04-1518)。已在活體外與活體内二者證明QSK3p (GSK3之一種同型異構體）調節骨形成。抑制GSK3可防止 β-連環蛋白磷酸化’從而使β·連環蛋白穩定、積累及自細胞質易位至核。人們認為此過程可使轉錄因子活化並使骨形成中所涉及特定基因轉錄，例如誘導鹼性磷酸酶mRNA 及蛋白質（早期成骨細胞分化標記物）表現（Bain等人，

Biochem. Biophys. Res. Commun·，2003，301:84-91)。鼠類間充質幹細胞中之GSK3抑制可在活體外誘導成骨細胞分化及骨形成之標記物（Kulkarni等人，JBMR, 2006，6，910-920)。GSK3 β之抑制可在活體外保護成骨細胞培養物之存活及分化免受糖皮質激素誘導性抑制（MC3T3_E1 cells，

Wang 等人 Life Sciences, 2009，85，685-692)。雜合 GSK30- 缺陷型小鼠表現增加之骨形成（Kugimiya F等人，PL〇s

One，2007，2(9)，e837，1-9)。另外，已證明 GSK3 之特定抑制劑可在骨丟失之卵巢切除動物模型中增加骨質量並改善骨強度（Kulkarni 等人，JBMR，2〇〇6, 21，91〇92〇)並且減少動物之糖皮質激素誘導性骨丟失（Wang等人Life Sciences， 2009, 85’ 685-692)。另外，GSK3之抑制可在骨髓瘤之 5T2MM模型中阻止骨形成之骨髓瘤誘導性抑制及溶骨性疾病之進展（Abdul等人，B〇ne，2〇〇9，44(增刊丨），S53摘要 103)。遺傳研究已確定人類之骨質量與Wnt信號傳導之間有關 I53530.doc 201130814 聯（Gong·# 人，Am. J. Hum. Genet 1996, 59，146-51 ; Little 等人，N. Engl. J. Med.，2002, 347, 943-4)。然後，小鼠中

Wnt信號傳導之遺傳及藥理學操作已證實此途徑在調節骨形成中之主要作用。由Wnt活化之途徑係經由典型（即

Wnt//p-連環蛋白）途徑來進行信號傳導，該途徑經由多種機制來增加骨質量’包括幹細胞之更新、前成骨細胞之刺激、成骨細胞發生之誘導及成骨細胞之抑制及骨細胞洞亡。因此，利用GSK3抑制劑來增強Wnt途徑信號傳導可用於治療骨相關性病症、或涉及需要新的且增多骨形成之其他病況’例如骨質疏鬆（遺傳性、醫源性或因衰老/激素失衡而產生）、由於損傷或手術之骨折修復、導致骨丟失之慢性炎症性疾病（例如類風濕性關節炎）、導致骨損害之癌症（例如乳癌、前列腺癌及肺癌、多發性骨髓瘤、骨肉瘤、尤因氏肉瘤（Ewing's sarcoma)、軟骨肉瘤、脊索瘤、骨惡性纖維組織細胞瘤、骨纖維肉瘤）、癌症誘導之骨疾病、醫源性骨疾病、良性骨疾病及佩吉特氏病$ disease) 〇該等發現表明GSK3酶之醫理學抑制劑具有治療各種形式之骨相關性病症或病況之治療價值，該等病症或病況係 (例如）骨質疏鬆（遺傳性、醫源性或因衰老/激素失衡而產生）、由於損傷或手術之骨折修復、導致骨丟失之慢性炎症性疾病（例如類風濕性關節炎）、導致骨損害之癌症（例如礼癌、前列腺癌及肺癌、多發性骨髓瘤、骨肉瘤、尤因氏肉瘤軟骨肉瘤、脊索瘤、骨惡性纖維組織細胞瘤、骨纖 153530.doc 201130814 維肉瘤）、癌症誘導之骨疾病、醫源性骨疾病、良性骨疾病及佩吉特氏病。除骨相關性病症或病況以外，有證據表明GSK3酶亦在其他疾病中起作用。GSK3抑制可在阿茲海默氏病 (Alzheimer's disease)、癡呆症及tau病變、急性神經退化性疾病、雙相型障礙、精神分裂症、糖尿病、脫髮、炎症性疾病、癌症、青光眼及再生性醫學中具有有益效應。因此，預計GSK3酶抑制劑在預防及治療眾多種除骨相關性病症或病況外之疾病上具有價值。現已令人驚奇地發現，本發明化合物（即吼畊衍生物）具有強效骨形成活性，可用於預防或治療骨相關性病症或病況。不希望暗示本發明中所提示化合物僅藉助對單一生物過程之效應而具有藥理學活性，吾人相信該等化合物藉助對GSK3酶之抑制來產生骨形成效應。眾所周知，若一種藥物之血漿濃度會因共投與另一藥物而改變，則可出現諸如毒性或減低之功效等嚴重問題。若存在藉由共投與具有肝酶抑制或誘導性質之另一物質所造成一種藥物之代謝的變化，則可出現通常稱為藥物-藥物相互作用之此現象。細胞色素P45〇係主要的肝異生物質代謝酶且通常將CYP(細胞色素P450)3A4同型異構體視為人類肝中種最重要的轉，此乃因大多數氧化藥物已藉由此酶進行生物轉化。因此，不期望採用具有此肝酶抑制或誘導眭質之顯著程度的藥物。此在諸如彼等可使用本發明化合物治療者等疾病上尤為重要。舉例而言，導致骨損宝之 I53530.doc 201130814 癌症所用的抗癌藥物通常將需要與用於預防或治療骨相關性病症或病況的化合物共投與β許多抗癌藥物具有窄治療窗（即介於有效劑量與毒性劑量間之小裕度）且因此小心控制此等藥物之血漿濃度對於避免毒性或減低之功效至關重要。用作初步治療多發性骨趙瘤之此一抗癌藥物的一個實例係蛋白酶體抑制劑硼替佐米（b〇nez〇mib)(稱作萬珂 (—6))，其具有極窄治療裕度。CYP3A4可充分代謝此藥物，因此接收可誘導或抑制此酶之任一化合物之共投與的患者需要進行密切監測（參見出咖_ 〇f⑽㈣峋 Information f〇r Velcade: http：//www.accessdata fda g〇y/ 因此需要對肝酶（例如CYP3A4)表現低活性的用於預防或治療骨相關性病症或病況之新顆化合物。現已驚奇地發現本發明之特定化合物（即3 -脖其口胺基_6_(4-(3-[(3_f氧基丙基）胺基]丙 }苯基）N-比啶基吡„井_2_甲醯胺三鹽酸鹽）對πρ3Α4 具有此低活性。3 -脸A z ，r, . 胺基·6-(4]3_[(3-甲氧基丙基）胺基]丙土 }笨基)-Ν-吡啶基吡畊冬甲醯胺三鹽酸鹽之又一有利性質在於其對心臟Na+通道施⑴不表現強效抑制活性。此外，當與其他特定激酶比較時，本發明某些化合物亦對GSK3表現有用選擇性。【發明内容】根據本發明之—個態樣，提供式I之t井衍生物 153530.doc 201130814

其中： η係2或3 ; m係2或3 ; R係甲基或乙基；或其醫藥上可接受之鹽。根據本發明之又一態樣，提供式I之吡畊衍生物，其係 3-胺基-6-(4-{3-[(3-曱氧基丙基）胺基]丙基}苯基）_Ν·吼啶-3-基吡畊-2-曱醯胺：

或其醫藥上可接受之鹽。【實施方式】應瞭解，上文所定義式I化合物可展示互變異構現象。應瞭解’本發明在其定義令包括任一此互變異構體形式或具有GSK3酶抑制活性之不同互變異構體形式之混合物，且並不僅限於式之圖式中所用或實例中所命名之任一種互變異構體形式。一般而言，僅任一此等互變異構體形式中 153530.doc 201130814 之一者在下文實例中命名或在下文任一相關式之圖式中提供。式I化合物之適宜醫藥上可接受之鹽係（例如）式z化合物之酸加成鹽，例如與無機酸或有機酸（例如，鹽酸、氫溴酸、硫酸、二氟乙酸或檸檬酸）之酸加成鹽。式合物之又一適宜醫藥上可接受之鹽係（例如）人類或動物體内在投與式I化合物後所形成之鹽。式I化合物之特定醫藥上可接受之鹽係式〗化合物與選自以下之g文之酸加成鹽：鹽酸、氫溴酸、硫酸、三氟乙酸、擰檬酸、苯魏、對曱苯姐、乙料、DLj桃酸或苯甲酸。根據本發明之一個態樣，式x化合物之特定醫藥上可接文之鹽係式I化合物與鹽酸之酸加成鹽。根據本發明之又一態樣，式〗化合物之特定醫藥上可接受之鹽係式I化合物與苯磺酸或對曱苯磺酸之酸加成鹽。根據本發明之又一態樣，式I化合物之特定醫藥上可接受之鹽係式I化合物與苯磺酸之酸加成鹽。兵根據本發明之又一態# ’式!化合物之特定醫藥上可接受之鹽係式I化合物與對曱苯磺酸之酸加成鹽。兵根據本發明之又一態樣，式〗化合物之特定醫藥上可接受之鹽係式I化合物與選自乙磺酸、Du扁桃酸或苯曱酸之酸之酸加成鹽。進—步應瞭解’式〗化合物之適宜醫藥上可接受之溶劑合物亦構成本發明之一態樣。適宜醫藥上可接受之溶劑合 153530.doc 201130814 物係（例如）水合物，你丨1 * I a J如+水合物、單水合物、二水合物或三水合物或其替代量。 —式I化口物可展不多晶性。應瞭解，本發明涵蓋任夕明形式或其混合物，該形式具有用於抑制糖原合酶激酶3活f生之性質，業内已熟知如何藉由下文所述標準測試來測疋用於抑制糖原合酶激酶·3活性之多晶形式之效能。眾所周知，結晶材料可使用諸如以下等習用技術來分析.X射線粉末繞射（在下文中XRPD)分析、差式掃描量熱法（在下文中DSC)、熱重分析（在下文中TGA)、漫反射紅外傅襄葉變換（Diffuse Reflectance Infrared F〇urier

Transform)(DRIFT)光譜法、近紅外（NIR)光譜法、液態及/ 或固態核磁共振光譜法。可藉由卡爾費希爾（Karl Fischer) 分析來測定此等結晶材料之水含量。舉例而言’已鑑別實例2之化合物之特定結晶形式。因此’本發明之又一態樣係3-胺基-6-(4·{3·[(3-甲氧基丙基）胺基]丙基}苯基）比咬_3-基。比畊-2-甲酿胺之形式 Β。所有以下XRPD數據均如實例部分之介紹中之段落（vii〇中所述來量測。根據本發明之又一態樣，提供3-胺基·6-(4-{3-[(3-甲氧基丙基）胺基]丙基}苯基）-N-nt咬-3·基。比畊-2-曱醯胺之結曰曰形式（形式B)，其具有在2Θ=3.5。加或減〇.1。2Θ處具有至少一個特性峰的X射線粉末繞射圖案。根據本發明之又一態樣，提供3-胺基·6-(4-{3-[(3-甲氧 153530.doc • 11- 201130814 基丙基）胺基]丙基}苯基）·Ν -吡啶·3_基吡啡_2_甲醯胺之結晶形式（形式Β)，其具有在2Θ=17·6。加或減〇丨。“處具有至少一個特性峰的X射線粉末繞射圖案。根據本發明之又一態樣，提供3_胺基_6·(4_{3_[(3_曱氧基丙基）胺基]丙基}苯基）_Ν_吡啶_3_基吡ρ井·2_曱醯胺之結晶形式（形式Β)，其具有在20=3.5。及176。處具有至少兩個特性峰的X射線粉末繞射圖案，其中該等值可加或減〇1。 2Θ。根據本發明之又一態樣，提供3_胺基·6·(4_{3_[(3•甲氧基丙基）胺基]丙基}苯基）_Ν_吡啶_3_基吡，井_2_甲醯胺之結晶形式（形式Β) ’其具有在20=3.5。、7.0。、9.5。、ΗΜ。、 12Τ、13·8。' 14」。、15 9。、17 6。、21〇。處具有特性峰的X射線粉末繞射圖案，其中該等值可加或減〇1。20。根據本發明之又一態樣，提供3_胺基_6(4_{3七3_甲氧基丙基）胺基]丙基}苯基）-Ν- η比咬-3 -基。比畊-2-甲醯胺之妗晶形式（形式Β)，其具有與圖4中所展示χ射線粉末繞射圖案實質上相同的X射線粉末繞射圖案。根據本發明之又一態樣，提供3_胺基_6_(4_{3_[(3•甲氧基丙基）胺基]丙基}苯基）_Ν_β比咬_3_基。比》»井_2_甲酿胺之名士晶形式（形式Β)，其具有在2Θ=3.5。處具有至少一個特性峰的X射線粉末繞射圖案。根據本發明之又一態樣，提供3-胺基-6-(4-{3-[(3_甲氧基丙基）胺基]丙基}苯基）_Ν-η比啶-3-基吡啡-2-甲醯胺之矣士晶形式（形式Β) ’其具有在2Θ=17.6。處具有至少一個特性峰 I53530.doc •12· 201130814 的χ射線粉末繞射圖案。根據本發明之又一態樣，提供3_胺基_6_(4_{3-曱氧基丙基）胺基]丙基}笨基）-N-吡啶·3-基η比畊-2-甲醯胺之結晶形式（形式Β) ’其具有在20=3.5。及17 6。處具有至少兩個特性峰的X射線粉末繞射圖案。根據本發明之又一態樣，提供3_胺基·6_(4_{3_[(3_曱氧基丙基）胺基]丙基}苯基）_Ν·„比啶_3_基。比_ _2_曱醯胺之結晶形式（形式 Β) ’ 其具有在2Θ=3.5。、7.0。、9.5。、1〇.4。、 12·4°、13 ·8°、14.1°、15.9°、17.6°、21.0°處具有特性峰的X射線粉末繞射圖案。根據本發明之又一態樣，提供3_胺基_6_(4_{3_[(3_曱氧基丙基）胺基]丙基}苯基）_Ν_"比啶_3_基tr比畊-2-甲醯胺之結晶形式（形式B)，其具有如圖4中所展示之X射線粉末繞射圖案。作為又一實例，實例3之化合物展示多晶性且已鑑別兩種結晶形式。因此’本發明之又一態樣係3_胺基_6_(4_{3_[(3_甲氧基丙基）胺基]丙基}苯基）_N-°比咬-3-基。比畊-2-甲醢胺單苯確酸鹽之形式Α。根據本發明之又一態樣’提供3·胺基_6_(4_{3_[(3_甲氧基丙基）胺基]丙基}笨基）_N-»比啶_3_基η比畊_2_甲醯胺單苯續酸鹽之結晶形式（形式Α) ’其具有在約20=8.4。處具有至少一個特性峰的χ射線粉末繞射圖案。根據本發明之又一態樣，提供3_胺基_6_(4_丨3_[(3_甲氧 I53530.doc -13- 201130814 基丙基）胺基]丙基}苯基）-N-。比咬-3-基°比》»并-2-曱酿胺單苯績酸鹽之結晶形式（形式A)，其具有在約20 = 14.5。處具有至少一個特性峰的X射線粉末繞射圖案。根據本發明之又一態樣’提供3_胺基_6_(4·{3-[(3 -甲氧基丙基）胺基]丙基}苯基）·Ν-β比咬_3·基β比ρ井_2_曱酿胺單苯續酸鹽之結晶形式（形式Α)，其具有在約2Θ=8 4。及14 5。處具有至少兩個特性峰的X射線粉末繞射圖案。根據本發明之又一態樣，提供3·胺基·6_(4_{3·^3•甲氧基丙基）胺基]丙基}苯基）_Ν-。比咬-3-基〇比11 井-2-甲醯胺單笨磺酸鹽之結晶形式（形式Α)，其具有在約2Θ==7 5。、8 4。、 11.0。、 14.5。、 15.7。、 18.5。、 20.2。、 22.0。、 22.2。、 23.〇〇處具有特性峰的X射線粉末繞射圖案。根據本發明之又一態樣，提供3_胺基_6_(4_{3_[(3_甲氧基丙基）胺基]丙基}苯基）_Ν_。比啶_3_基。比畊_2甲醯胺單苯績酸鹽之結晶形式（形式Α)，其具有與圖以中所展示χ射線粉末繞射圖案實質上相同的χ射線粉末繞射圖案。根據本發明之又一態樣，提供3_胺基_6_(4·{3_[(3_甲氧基丙基）胺基]丙基}苯基）_ Ν “比咬· 3 _基〇比ρ井_ 2 _甲醯胺單苯磺酸鹽之結晶形式(形式Α)，其具有在2" 4。加或減〇」。 2Θ處具有至少一個特性峰的χ射線粉末繞射圖案。根據本發明之又一態樣，提供3·胺基-6·(4·{3_[(3_甲氧基丙基）胺基]丙基}苯基）·Ν“比咬_3_基。比__2•甲酿胺單苯績酸鹽之結晶形式（形式Α)，其具有在⑼〜5。加或減〇」。 2Θ處具有至少-個特性峰的χ射線粉末繞射圖案。 153530.doc •14· 201130814 根據本發明之又一態樣，提供3-胺基-6-(4-{3_[(3_曱 ^丙基）胺基]丙基}苯基）_Nn3m2_甲酿胺續酸鹽之結晶形式（形式A)，其具有在20=8 4。及W 處具有至少兩個特性峰的χ射線粉末繞射圖案，其中 :、加或減0.1°2Θ。可根據本發明之又一態樣，提供3-胺基-6-(4·{3_[(3_甲氧基丙基）胺基]丙基}苯基）|比咬_3_基„比„井_2•甲酿胺單笨磺酸鹽之結晶形式（形式Α)，其具有在2Θ=7.5。、8.4。、 U·0。、1(5。、15.7。、18 5。、2〇 2。、22 〇。、22 2。n

處具有特性峰的χ射線粉末繞射圖案，其中該等值可減 0.1ο2θ。 A 根據本發明之又一態樣，提供3_胺基·6_(4_{3_[(3_甲氧基丙基）胺基]丙基}苯基）_N_D比啶_3_基d比畊_2_甲醯胺單苯石黃酸鹽之結晶形式（形式A)，其具有在2Θ=8.4。處具有至少一個特性峰的χ射線粉末繞射圖案。夕根據本發明之又一態樣，提供3•胺基_6_(4_{3_[(3•甲氧基丙基）胺基]丙基}笨基）_Ν_α比啶_3_基吼畊_2_曱醯胺單苯績酉文鹽之結晶形式（形式Α)，其具有在20=14 5。處具有至少一個特性峰的X射線粉末繞射圖案。夕根據本發明之又—態樣，提供3-胺基·6-(4_{3-[(3_甲氧土丙基）胺基]丙基}笨基）比啶_3_基〇比畊_2_甲醯胺單笨 κ馱现之結日日形式（形式Α)，其具有在4。及μ 5。處具有至少兩個特性峰的X射線粉末繞射圖案》根據本發明之又—態樣，提供3•胺基·ό_(4·{3_[(3·甲氧 153530.doc -15· 201130814 基丙基）胺基]丙基}苯基）-N-。比啶-3-基〇比畊-2-甲醯胺單苯石黃酸鹽之結晶形式（形式Α)，其具有在2Θ = 7.5。、8.4。、 11·0〇、 14·50 、 15·70 、 18.50 、 20.2〇、 22·0〇、 22·20 、 23.0。處具有特性峰的χ射線粉末繞射圖案。根據本發明之又一態樣，提供3-胺基-6-(4-{3-[(3-曱氧基丙基）胺基]丙基}苯基）_Ν-〇比啶-3-基》比畊-2-曱醯胺單苯績酸鹽之結晶形式（形式Α)，其具有如圖6a中所展示之X射線粉末繞射圖案。因此’本發明之又一態樣係3·胺基_6 (4_{3_[(3_甲氧基丙基）胺基]丙基}苯基）_Ν_β比啶比畊_2_甲醯胺單苯磺酸鹽之形式C。根據本發明之又一態樣，提供3胺基_6·(4·{3·[(3_甲氧基丙基）胺基]丙基}苯基）_Ν·吡啶·3_基吼畊_2_曱醯胺單苯績酸鹽之結晶形式（形式c) ’其具有在約20=1丨2。、14 7。及15.8。處具有至少兩個特性峰的χ射線粉末繞射圖案。根據本發明之又一態樣，提供3_胺基·6_(4·{3[(3-甲氧基丙基）胺基]丙基}苯基比啶_3_基D比畊_2_曱醯胺單苯磺酸鹽之結晶形式（形式c)，其具有在約2θ = η 2。、 12.6、14.7。、15.5。、15.8。、16 8。、2〇 4。、211。、 22.5。、26.5°處具有特性峰的\射線粉末繞射圖案。根據本發明之又一態樣，提供3·胺基_6_(4_{3_[(3-甲氧基丙基）胺基]丙基}苯基）_Ν•。比咬_3舍比__2•甲酿胺單苯續酸鹽之結晶形式（形式其具有與圖㈣所展示X射線粉末繞射圖案實質上相同的χ射線粉末繞射圖案。 153530.doc ' 16 · ⑧ 201130814 根據本發明之又一態樣，提供3_胺基_6_(4_{3七3_甲氧基丙基）胺基]丙基}苯基）_N•吡啶_3_基d比畊_2_甲醯胺單笨石黃酸鹽之結晶形式（形式〇,其具有在2β=旧。加或減〇1。 2Θ處具有至少-個特性峰的乂射線粉末繞射圖案。根據本發明之又一態樣，提供％胺基甲氧基丙基）胺基]丙基}苯基）·Ν_π比啶_3_基吼畊-2_甲醯胺單笨 %酸鹽之結日日形式（形式c)，其具有在2㈣4 ”加或減處具有至少-個特性峰的X射線粉末繞射圖案。根據本發明之又—態樣，提供胺基冬甲氧基丙基）胺基]丙基}苯基）_n_d比啶_3_基α比畊-2-曱醯胺單笨續酸鹽之結晶形式（形式〇,其具有在胸5 8。加或減〇1。 2Θ處具有至少—個特性峰的X射線粉末繞射圖案。根據本發明之又-態樣，提供3•胺基_6_(4_{3_[(3_甲氧土）胺基]丙基}苯基）_Ν_吡啶_3_基吡畊_2·甲醯胺單苯績酸鹽之結晶形式（形式C)，其具有在20=11.2。、14.7。及 15.8處具有至少兩個特性峰的X射線粉末繞射圖案，其中該等值可加或減0.1。2Θ。根據本發明之又-態樣，提供3-胺基-6·(4-{3-[(3-甲氧 :)胺基]丙基）苯基）·Ν-吡啶-3-基吡畊-2-曱醯胺單苯 "^酸鹽之結晶形式（形式C)’其具有在20=U.2。、12.6。、 14.7。、丨5.5。、 15.8。、 168。、2〇4。、211。、225。、265。處具有特科的χ射線粉末繞射圖案，其減0.Γ 2Θ。守m」刀根據本發明之又—態樣，提供3-胺基-6·(4_{3-[(3·甲氧 153530.doc • 17· 201130814 基丙基）胺基]丙基}苯基咬-3-基》比井_2-甲醯胺單苯磺酸鹽之結晶形式（形式C)，其具有如圖6b中所展示之X射線粉末繞射圖案。作為再一實例，已鑑別實例4.1之化合物之式。特定結曰曰形因此，本發明之又一態樣係3-胺基-6-(4-{3-[(3甲_ 丙基）胺基]丙基}苯基）-Ν-β比咬-3-基。比啡-2-曱酿路dd ^ 磺酸鹽之形式A。 + 根據本發明之又一態樣，提供3_胺基_6_(4_丨3 L ( 3 -甲氧基丙基）胺基]丙基}苯基）_N-«比啶-3-基吡畊·2·甲μ Τ醯胺單甲苯續酸鹽之結晶形式（形式Α)，其具有在約2Θ ·υ處1有至少一個特性峰的X射線粉末繞射圖案。 ' 甲氧醯胺單曱處具有根據本發明之又一態樣，提供3_胺基_6·(4_{3 基丙基）胺基]丙基}苯基）_Ν-«比啶-3-基β比畊_2_曱苯磺酸鹽之結晶形式（形式Α)，其具有在約2Θ=23 至少一個特性峰的X射線粉末繞射圖案。根據本發明之又一態樣，提供3_胺基·6·(4·{3"〇基丙基）胺基]丙基}苯基）·Ν_吡啶·3_基吡畊_2•甲 :氧苯％酸鹽之結晶形式（形式A)，其具有在約2Θ= ·υ 及 23 〇0 處具有至少兩個特性峰的X射線粉末繞射圖案。 . 根據本發明之又一態樣，提供3-胺基-6-(4-{3、[(3 _ 基丙基）胺基]丙基}苯基）善。比咬_3·基DtbP井·2·曱離胺^ 苯磺酸鹽之結晶形式（形式Α)，其具有在約2θ=8 ^ 11·7 、 14.8。、 20.0〇、 20.9。、 21.5〇、 22.2〇、 23.〇。、 153530.doc • 18_ 201130814 27.5 、28.0處具有特性峰的又射線粉末繞射圖案。根據本發明之又一態樣’提供3•胺基曱氧基丙基）胺基]丙基}笨基）_Ν_Π比啶_3_基〇比畊·2·曱醯胺單甲苯續酸鹽之結晶形式（形式Α)，其具有與圖8中所展示乂射線粉末繞射圖案實質上相同的\射線粉末繞射圖案。根據本發明之又一態樣，提供3·胺基_6_(4_{3[(3_曱氧基丙基）胺基]丙基}笨基）_Ν_吡啶_3_基η比畊_2·曱醯胺單苯續酸鹽之結晶形式（形式Α)，其具有在2β=8 〇。加或減〇 1〇 2Θ處具有至少-個特性峰的χ射線粉末繞射圖案。根據本發明之又一態樣’提供3_胺基_6_(4_{3·[(3_甲氧基丙基）胺基]丙基}笨基）·Ν_Π比咬_3_基。比ρ井_2·甲醯胺單笨續酸鹽之結晶形式（形式Α)，其具有在胸3()。加或減〇」。 2Θ處具有至少-個特性峰的χ射線粉末繞射圖案。根據本發明之又—態樣，提供3-胺基-6·(4·{3_[(3·曱氧基丙基）胺基]丙基}笨基）m3m2·曱醯胺單甲苯石黃酸鹽之結晶形式（形式A)，其具有在2Θ=8錢23 〇。處具有至少兩個特性峰的X射線粉末繞射圖案，《中該等值可加或減0.1° 2Θ。根據本發明之又—態樣，提供3·胺基·6_(4_{3_[(3_甲氧基丙基）胺基]丙基}笨基基。比__2_甲㈣單甲苯續酸鹽之結晶形式（形式A)，其具有在2e=8Q。、Μ。 Μ。、以。、⑽。、16.0。、17.〇。、18ι。、2〇〇。、 2〇·9。、21.5。、22.2。、23·。。、27. 的x射線粉末繞射圖案’其中該等值可加或減01。“。 153530.doc

S 19· 201130814 根據本發明之又一態樣，提供3-胺基-6-(4·{3-[(3-甲氧基丙基）胺基]丙基}苯基）_N_D比啶_3_基0比畊_2_曱醯胺單甲苯磺酸鹽之結晶形式（形式A)，其具有在20=8〇。處具有至少一個特性峰的X射線粉末繞射圖案。根據本發明之又一態樣，提供3-胺基-6-(4·{3-[(3-曱氧基丙基）胺基]丙基}苯基）_Ν_ 0比0定_3 _基〇比畊_2•曱醯胺單甲本磺酸鹽之結晶形式（形式Α)，其具有在2Θ=23.0。處具有至少一個特性峰的X射線粉末繞射圖案。根據本發明之又一態樣，提供3-胺基-6-(4-{3-[(3-甲氧基丙基）胺基]丙基}笨基）_Ν_吡啶_3_基吡畊-2_甲醯胺單甲苯續酸鹽之結晶形式（形式Α)，其具有在2θ=8.〇。及23.0。處具有至少兩個特性峰的χ射線粉末繞射圖案。根據本發明之又一態樣，提供3胺基甲氧基丙基）胺基]丙基）笨基）_Ν_吡啶基吡畊甲醯胺單甲本磺酸鹽之結晶形式(形式Α)，其具有在2θ=8.〇。、1〇 5。、 U.7。、12.4。、14.8。、16.0。、17.0。、18.1。、20 0。、 20.9〇、 21 50 、 22 9° 〇 22·2 、23·〇。、27·5。、28 〇。處具有特性峰的X射線粉末繞射圖案。根據本發明之又—態樣，提供3_胺基-6·(4·{3·[(3-甲氧土）胺基]丙基}笨基）_Ν_吡啶_3_基吡_ _2_甲醯胺單甲苯續酸鹽之結晶形式（形式Α)，其具有如圖8中所展示之χ 射線粉末繞射圖案。已鑑別特定結晶形式之化合物之其他實例係實例4 · 2至 153530.doc 201130814 因此，本發明之又一態樣係3 -胺基-6-(4- {3-[(3 -甲氧基丙基）胺基]丙基}苯基）-N-°比啶-3-基°比畊-2-曱醯胺二乙績酸鹽之形式A。因此，本發明之又一態樣係3-胺基-6-(4-{3-[(3-甲氧基丙基）胺基]丙基}苯基）-N-吡啶-3-基吡畊-2-甲醯胺單_DL_ 扁桃酸鹽之形式A。因此，本發明之又一態樣係3-胺基_6-(4-{3-[(3-甲氧基丙基）胺基]丙基}苯基）-N-。比啶-3-基0比畊-2-甲醯胺單苯甲酸鹽之形式A。根據本發明之又一態樣，提供3-胺基·6-(4-{3-[(3-曱氧基丙基）胺基]丙基}苯基）-N-d比咬-3-基°比〃井-2-甲酿胺二乙續酸鹽之結晶形式（形式八），其具有在20=5_2°及12.7。處具有至少兩個特性峰的X射線粉末繞射圖案，其中該等值可加或減Ο.Γ 2Θ。根據本發明之又一態樣，提供3·胺基_6_(4{3_[(3_甲氧基丙基）胺基]丙基}苯基）-N-吡啶-3-基吡畊-2-甲醯胺二乙 %酸鹽之結晶形式（形式A)，其具有在2Θ=5 2。、1〇 4〇、 12.7 、 15.0。、 16.9。、 17.3〇、 19.1。 ' 19.6。、 20.0。、 23.5。處具有特性峰的X射線粉末繞射圖案，其中該等值可加或減 0.1。2Θ。根據本發明之又一態樣，提供3-胺基_6_(4_{3_[(3_甲氧基丙基）胺基]丙基}笨基）吡啶_3_基吡畊_2·曱醯胺二乙石黃酸鹽之結晶形式（形式Α)，其具有如圖1〇中所展示之乂射線粉末繞射圖案。 153530.doc •21 - 201130814 根據本發明之又一態樣，提供3·胺基曱氧基丙基）胺基]丙基}苯基），Ν_。比啶基η比畊_2_甲醯胺單了 L-扁桃酸鹽之結晶形式(形式Α)，纟具有在2θ=2 7。及 :.8處具有至少兩個特性峰的χ射線粉末繞射圖案，其中 §玄等值可加或減〇. 1。2Θ。根據本發明之又一態樣，提供3_胺基_6_(4_(3_[(3_甲氧土丙基）胺基]丙基}苯基）。比啶_3_基〇比〇井甲醯堪單-DL-扁桃酸鹽之結晶形式(形式α)，其具有在Μ?。、 5.2〇、 7.8。、 9.6。、 1〇.5〇、 12.3。、有特性峰的X射線粉末繞射圖案 0.Γ 2Θ » 13.1°、15’7°、18.4°處具 ’其中該專值可加或減根據本發明之又一態樣，提供3-胺基-6-(4-{3-[(3_甲氧基丙基）胺基]丙基}苯基）·Ν_η比咬_3_基吼喷_2_甲酿胺單-DL•扁桃酸鹽之結晶形式(形式Α)，其具有如圖12中所展示之X射線粉末繞射圖案。根據本發明之又一態樣，提供3_胺基_6_(4_{3·[(3_甲氧基丙基）胺基]丙基}笨基）如比咬1基。比__2_甲酿胺單苯甲酸鹽之結晶形式(形式A) ’其具有在2Θ = 5 3。與9 2。處具有至少兩個特性峰的χ射線粉末繞射圖案，其中該等值可加或減0.1。2Θ。基甲根據本發明之又一態樣，提供3_胺基_6_(4_丨3-[^_甲氧丙基）胺基]丙基}苯基比啶_3_基。比畊_2_甲醯胺單苯酸鹽之結晶形式（形式A)，其具有在2β=5 3。、6 2。、 9·20、9·8〇、11.9°、 16.6。、17.8。、18.1。、19.5。 24·60處 I53530.doc ⑧ -22- 201130814 具有特性峰的X射線粉末繞射圖案，其令該等值可加或減 0.Γ2Θ。 ’ 根據本發明之又一態樣，提供3_胺基_6_(4_{3_[(孓甲氧基丙基）胺基]丙基}苯基）_Ν_β比啶_3_基。比畊_2_甲醯胺單笨甲酸鹽之結晶形式（形式Α)，其具有如圖14中所展示之又射線粉末繞射圖案。 ^ 應瞭解，X射線粉末繞射圖案之2Θ值可在機器之間或試樣之間稍有變化，且因此所引述值不應理解為絕對值。亦已知可獲得端視量測條件（例如所用設備或機器）具有一或多種量測誤差之X射線粉末繞射圖案。特定而言，眾所周知，X射線粉末繞射圖案中之強度可根據量測條件而波動。因此，應瞭解，除非另有說明，否則上文所述本發明結晶形式並不限於提供與圖4、圖“、圖补、圖8、圖 1〇、圖12及圖14中所展示乂射線粉末繞射圖案相同之乂射線粉末繞射圖案的晶體’且任何提供與彼等於該等圖中所展示者實質上相同之X射線粉末繞射圖案的晶體均屬於本發月範圍内。熟習X射線粉末繞射技術者能夠判定實質上相同之X射線粉末繞射圖案。熟習X射線粉末繞射技術者亦應瞭解，峰之相對強度可受(例如)尺寸在30微米以上且不均-縱橫比之晶粒的影響，該等晶粒可影響試樣分析。熟習此項技術者亦應瞭解，反射位置可受試樣在繞射儀中所虚Μ1 I. π m f所處的精確高度及繞射儀之零校正的影響。試樣衣面十整度亦可具有小的效應。因此，所提供繞射圖案數據不應理解為絕對值（參見 r:-.153530.doc -23· 201130814

Jenkins, R及 Snyder, R.L. 'Introduction to X-Ray Powder Diffractometry' John Wiley & Sons 1996 ； Bunn, C.W. (1948), Chemical Crystallography, Clarendon Press, London ； Klug, Η. P. & Alexander, L. E. (1974), X-Ray Diffraction Procedures) 0 通常，X射線粉末繞射圖中繞射角之量測誤差係大約加或減0. Γ 2Θ，且當考慮X射線粉末繞射數據時，應考慮此量測誤差度。此外，應瞭解’強度可根據實驗條件及試樣製備（較佳定向）而波動。進一步應瞭解，式I化合物之適宜醫藥上可接受之前藥亦構成本發明之一態樣。因此，本發明化合物可以前藥形式投與’該前藥係在人類或動物體内分解釋放本發明化合物之化合物。可使用前藥改變本發明化合物之物理性質及/ 或藥物動力學性質。當本發明化合物含有可附接性質改良基團的適宜基團或取代基時，可形成前藥β前藥之實例包括可在式I化合物中之胺基處形成之活體内可解離醯胺衍生物》因此，本發明包括如上文所定義化合物，其藉由有機合成變得可用且在人類或動物體内藉助其前藥解離變得可用。因此，本發明包括藉由有機合成方式產生之彼等式 I化合物亦及在人類或動物體内藉助前體化合物之代謝產生之此等化合物’即式I化合物可為合成產生之化合物或代謝產生之化合物。式I化合物之適宜醫藥上可接受之前藥係基於合理的醫 153530.doc -24- 201130814 學判斷適於投與人類或動物體而無不合意的藥理活性且無過度毒性者。應瞭解，儘管上文所定義式I化合物之醫藥上可接受之前藥可由於一或多個不對稱碳原子以光學活性或外消旋形式存在，但在其定義中本發明亦包括任一該光學活性或外消旋形式。可藉由業内熟知之有機化學的標準技術實施光學活性形式之合成’例如藉由自光學活性起始材料合成或藉由外消旋形式之拆分。以下文獻中闡述前藥之不同形式，例如：- a) Methods in Enzymology » 第42卷，第309-396頁，由Κ. Widder 專人編輯（Academic Press, 1985); b) Design of Pro-drugs，由 H. Bundgaard 編輯（Elsevier， 1985)； c) A Textbook of Drug Design and Development，由 Krogsgaard-Larsen 及 H. Bundgaard編輯，第 5章「Design and Application of Pro-drugs」，H. Bundgaard，第 113-191 頁（1991); d) H. Bundgaard, Advanced Drug Delivery Reviews, 8, 1 - 38 (1992)； e) H. Bundgaard 等人，Journal of Pharmaceutical Sciences，77，285 (1988); f) N. Kakeya等人，Chem. Pharm. Bull·，32, 692 (1984); g) T. Higuchi及 V. Stella, 「Pro-Drugs as Novel Delivery Systems」，A.C.S. Symposium Series，第 14卷；及 153530.doc -25- 201130814 h) E. Roche(編者），「Bioreversible Carriers in Drug

Design」，Pergamon Press，1987。具有胺基之式I化合物的適宜醫藥上可接受之前藥係（例如）其活體内可解離之醯胺衍生物。來自胺基之適宜醫藥上可接受之醯胺包括（例如）與（1-10C)烷醯基（例如乙醯基、苯曱醯基、苯基乙醯基及經取代苯曱醯基及苯基乙醯基）形成之醯胺。苯基乙醯基及苯甲醯基上之環取代基的實例包括胺基甲基、N-烷基胺基甲基、N，N_二烷基胺基曱基、嗎啉基甲基、六氫吡畊-1-基甲基及4-(l-4C)烷基六氫吡畊-1-基甲基。在投與式I化合物之後’式I化合物之活體内效應可部分由在人類或動物體内形成之一或多種代謝產物來施加。如上文所述，式I化合物之活體内效應亦可藉助前體化合物 (前藥）之代謝來施加。本發明之特定化合物係實例中之每一者及其醫藥上可接受之鹽’其每一者提供本發明之又一獨立態樣。根據本發明之又一態樣，提供式〗之^比畊衍生物或其醫藥上可接受之鹽，其可藉由依照如本文所揭示任一實例來獲得。本發明之又一特徵係本文所定義之任一範圍，前提為個別地放棄特定實例（例如實例1、2、3a、3b、4丨等）。本發明之再-特徵係本文所定義之任—範圍，前提為個別地放棄一個特定實例（例如實例丨、2、h、3卜4」等）。本發明之特定新顆化合物句枯^ 切巴栝（例如）式I之吡畊衍生物或 153530.doc • 26 - 201130814 其醫藥上可接受之鹽，其中n、m&R中之每_者均具有上文或在下文段落（a)至（h)中所定義之任一含義· _ (a) η係 2 ; (b) η係 3 ; (c) m係 2 ; (d) m係 3 ; (e) n係3且m係3 ; (f) η係3且m係2 ; (g) η係2且m係3 ;或 (h) R係甲基。本發明化合物之特定基團係上文式I之。比畊衍生物，其中：- η係2或3 ; m係3 ; R係甲基或乙基，方便地為甲基；或其醫藥上可接受之轉〇本發明化合物之特定基團係上文式I之°比畊衍生物，其中：- η係3 ; m係2或3 ; R係曱基或乙基，方便地為曱基；或其醫藥上可接受之 S择〇本發明特定之化合物係選自以下中任一者之式I之吡畊衍生物：- 153530.doc • 27· 201130814 3-胺基-6-(4-{3-[(3-曱氧基丙基）胺基]丙基}苯基）·Ν-。比啶_ 3-基吡畊-2-甲醯胺； 3-胺基·6-(4-{2-[(2-曱氧基乙基）胺基]乙基}苯基）-Ν-。比啶_ 3-基吡畊-2-甲醯胺； 3-胺基-6-(4-{2-[(3-甲氧基丙基）胺基]乙基}苯基）-Ν-。比啶· 3-基吡畊-2-甲醯胺；及 3-胺基-6-(4-{3-[(2-甲氧基乙基）胺基]丙基}苯基）-Ν-»比啶_ 3-基吡》井-2-甲醯胺；或其醫藥上可接受之鹽。根據本發明再一態樣，本發明之特定化合物係選自以下中任一者之式I之吡叫·衍生物：- 3-胺基-6-(4-{3-[(3-曱氧基丙基）胺基]丙基}苯基）_Ν-β比啶-3-基吡嗜-2-甲醯胺； 3-胺基-6-(4-{2-[(3-曱氧基丙基）胺基]乙基}苯基比啶-3-基吡畊-2·甲醯胺；及 3-胺基-6-(4-{3-[(2-曱氧基乙基）胺基]丙基}苯基）·Ν_ 0比啶_ 3-基。比畊-2-曱醯胺；或其醫藥上可接受之鹽。本發明之另一態樣提供用於製備式I化合物或其醫藥上了接文之鹽的方法。適宜方法係藉由以下代表性方法變化形式來闡釋，其中除非另有說明，否則η、m及R均具有上文所定義之任一含義。必要起始材料可藉由標準有機化學程序獲得。此等起始材料之製備係結合以下代表性方法變化形式來闞述且在隨附實例内。另一選擇為，必要起始材料可藉由與彼等所闡釋者類似之程序來獲得，該等程序係在有機化學師之一般技術内。 153530.doc ⑧ • 28 - 201130814 適宜方法變化形式包括（例如）以下：-(a)式II化合物：

或其反應性衍生物，其中m係2或3且X代表適宜離去基團 (例如鹵素（例如漠、氟、氯或換））或續酸醋基團（例如曱炫磺酸根或三氟甲烷磺酸根），其中若需要可保護所存在之任一官能團，與式III之胺化合物之胺置換反應： ο^^νη2 I 2

R III 其中η係2或3且R係曱基或乙基，以形成式I化合物，此後去除所存在之任一保護基團。在有機溶劑（例如二氯曱院、Ν,Ν-二曱基曱醯胺、二曱基亞硬或乙腈）存在下在適宜驗（例如驗金屬碳酸鹽（例如碳酸鈉或碳酸鉀）或鹼土金屬碳酸鹽（例如碳酸鈣）、金屬氫氧化物（例如氫氧化鈉或氫氧化钾））存在下在（例如）〇。〇至 150°C之範圍内之溫度下，方便地在介於㈣^與9〇c»c之間之溫度祀圍下方便地實施反應。包括反應性衍生物在内之式II化合物可藉由（例如）使式 IV化合物： 153530.doc •29· 201130814

(其中m係2或3 )與適宜活化試劑（例如甲院績醯氣、甲苯石黃醯氣、亞硫酿氯或草醯氯）反應來製備。可在有機溶劑（例如四氫呋喃或二氣甲烷）中使用無機鹼（例如碳酸鈉或碳酸鉀）或有機鹼（例如三乙胺或二異丙基乙基胺）在〇β(：至15〇t>c 之fe圍内之溫度下，方便地在環境溫度下方便地實施該反應。式IV化合物可藉由（例如）使式v化合物：

(其中m係2或3且PG代表保護基團（例如第三丁基二甲基甲石夕院基或四氫》比喃））與適宜酸（例如硫酸）反應來製備。可在有機溶劑（例如甲醇、四氫呋喃或二噁烧）中使用無機I (例如鹽酸或氫溴酸）或有機酸（例如三氟乙酸）在（例如）〇C至150°C之範圍内之溫度下，方便地在介於20°C與 80 C之間之溫度範圍下方便地實施該反應。式V化合物可藉由（例如）使式VI化合物： 153530.doc 201130814

(其中γ代表適宜離去基團（例如函素（例如氯、氟、溴或峨）或三氟甲烷磺酸根））與式VII化合物發生金屬催化偶合反應來製備：

其中m係2或3，z代表適宜離去基團，例如鹵素（例如氯、氟、溴或碘）或三氟曱烷磺酸根且PG代表保護基團，例如第二丁基一曱基曱石夕烧基或四氫0比喃。可在有機溶劑（例如四氫呋喃、N，N-二曱基曱醯胺戋二噁烷）中在具有適宜配體之Pd觸媒（例如pd(dppf)Cl2或 Pd(PPh3)3)存在下且在具有適宜配體之二硼烷（例如雙（頻哪醇基）二硼或雙（鄰笨二酚基）二硼）存在下且在鹽（例如乙酸鉀或乙酸鈉）存在下在〇。(：至15〇。(：之範圍内之溫度下，方便地在介於80°C與90。(：之間之溫度範圍下方便地實施該反應。或者，式IV化合物可藉由（例如）使式VI化合物與式vm 化合物反應來製備： 153530.doc -31 -

VIII VIII201130814

其中m係2或3且W代表硼酸或硼酸酯，例如頻哪醇硼酸酯或鄰苯二紛棚酸醋。可在有機溶劑（例如四氫呋喃、n，n-二甲基甲醯胺或二噁烷）中在具有適宜配體之Pd觸媒（例如Pd(dppf)Ci2或 Pd(PPh3)3)存在下且在鹽（例如乙酸鉀或乙酸鈉）存在下在 0C至150C之範圍内之溫度下，方便地在介於7〇。匚與9〇。〇之間之溫度範圍下方便地實施該反應。式IV化合物亦可使用與上文所述者相反之偶合方法來製備’其中式VI化合物將以W基團（其係硼酸或硼酸酯，例如頻哪醇蝴酸醋或鄰苯二紛爛酸醋，如上文所定義）代替γ 基團且式VIII化合物將以所存在Y基團（為適宜離去基團，例如自素（例如氣、氟、溴或碘）或三氟甲烷磺酸根，如上文所定義）代替W基團。用於該反應之適宜條件將係彼等上文所述者。式VIII化合物可藉由（例如）用適宜二硼烷複合物（例如雙 (頻哪醇基）二硼或雙（鄰苯二酚基）二硼）處理式以化合物來製備：

IX 其中m係2或3且Z代表適宜離去基團，例如函素或三氟甲 153530.doc •32- 201130814 烷磺酸根。可在有機溶劑(例如四氫。夫d南、n，n二甲基甲醯胺乙腈或一心院）中在具有配體（例如或pph3)iPd 觸媒（例如Pd-Cl2或Pd(OAc)2)存在下且在鹽（例如乙酸狎或乙酸納）存在下在代至15代之範圍内之溫度下，方便地在介於赃與m：之間之溫度範圍下方便地實施該反應。式VII化合物可藉由（例用適宜保護劑（例如第三丁基二甲基曱矽烷基氯）處理式Ix化合物來製備：

HO 其中m係2或3且Z代表適宜離去基團，例如_素或三氟烧績酸根。在有機溶劑（例如四氫七南或二氯甲幻存在下使用無機鹼（例如碳酸鈉或碳酸鉀）或有機鹼（例如三乙胺或二異丙基乙基胺）且在適宜觸媒（例如4_二曱基胺基η比咬）存在下在0°dl5(TC之範圍内之溫度下’方便地在環境溫度下方便地實施該反應。或者，可利用二氫吼味在有機溶劑（例如THF)中或者若不存在溶劑，則利用觸媒（例如硫酸或HC1)在0£>c至之範圍内之溫度下，方便地在回流條件下實施上述反應。式m、似Ιχ之化合物可藉由習用程序獲得或自市面麟得，如文獻中已知，或者其可藉由使用或調適#内已知之標準方法來製備； (b)式X化合物： 153530.doc •33· 201130814

(其中，η係2或3，m係2或3，R係曱基或乙基且PG2代表適宜保護基團（例如烷氧基羰基（例如第三丁氧基羰基或異丙氧基羰基））與適宜酸（例如HC1或三氟乙酸）之反應。可在有機溶劑（例如EtOAc、曱醇、2-甲基四氫吱喃或四氫呋喃）中或在無機溶劑（例如水）中使用無機酸（例如鹽酸或氫溴酸）或有機酸（例如三氟乙酸）在〇°C至150°C之範圍内之溫度下’方便地在介於2〇°c與80。(：之間之溫度範圍下方便地實施該反應。式X化合物可藉由（例如）使式X〗化合物：

XI (其中，η係2或3，m係2或3，R係甲基或乙基，PG2代表適宜保護基團’例如烷氧基羰基（例如第三丁氧基羰基或異丙氧基数基）’且W代表硼酸或硼酸酯（例如頻哪醇硼酸酯或鄰苯二紛棚酸酯））與式¥1化合物發生金屬催化偶合反應來製備。可在有機溶劑（例如四氫呋喃、Ν，Ν·二甲基甲醯胺、二 °惡烧或1- 丁醇）中在具有適宜配體之pd觸媒（例如 153530.doc ⑤ -34- 201130814

Pd(dppf)Cl2或Pd(PPh3)3)或另一選擇為具有四氣鈀酸鈉及 3-(二第三丁基鱗）丙烷硫酸鹽之混合物存在下且在鹽（例如乙酸鉀、乙酸鈉或磷酸三鉀N-水合物）存在下在〇。〇至 1 50°C之範圍内之溫度下，方便地在介於7〇。(：與90。(：之間之溫度範圍下方便地實施該反應。式XI化合物可藉由（例如）使式XII化合物：

XII (其中’ η係2或3，m係2或3，R係曱基或乙基，PG2代表適宜保護基團（例如烷氧基羰基（例如第三丁氧基羰基或異丙氧基獄基））且Z代表適宜離去基團（例如卣素或三氟曱燒續酸根））與適宜二硼烷複合物（例如雙（頻哪醇基）二硼或雙（鄰苯二酚基）二硼）反應來製備。可在有機溶劑（例如四氫呋喃、N，N-二曱基甲醯胺、乙腈或二噁烷）中在具有配體（例如PCy3或PPh3)之Pd觸媒（例如Pd-Cld Pd(〇Ac)2)存在下且在鹽（例如乙酸鉀或乙酸鈉）存在下在至l5〇t之範圍内之溫度下，方便地在介於7(rc與9〇 t之間之溫度範圍下方便地實施該反應β 式ΧΠ化合物可藉由（例如）使式XIII化合物：

Η

R 153530.doc ·35·

XIII 201130814 (其中，η係2或3，m係2或3，R係甲基或乙基，且z代表適宜離去基團（例如齒素或三氟甲烷磺酸根）與適宜保護劑（例如二碳酸二第三丁基酯）反應來製備。可在有機溶劑（例如甲醇、四氫呋喃或二噁炫·）中使用無機酸（例如鹽酸或氫漠酸）或有機酸（例如三氟乙酸）在（例如）〇°C至150eC之範圍内之溫度下，方便地在介於20°C與80°C之間之溫度範圍下方便地實施該反應。式XIII化合物可藉由（例如）使式XIV化合物：

X

XIV 或其反應性衍生物（其中m係2或3，X代表適宜離去基團，例如鹵素（例如溴、氟、氣或碘）或磺酸根基團（例如曱烷續酸根或三氟曱烷磺酸根）且Z代表適宜離去基團（例如南素或二II甲烧續酸根））與適宜保護劑（例如二碳酸二第三丁基酯）並與式III之胺化合物反應來製備。可在有機溶劑（例如二氣曱烧、N，N-二曱基曱醯胺、二甲基亞硬或乙腈）存在下在適宜驗（例如驗金屬碳酸鹽（例如碳酸鈉或碳酸鉀）或鹼土金屬碳酸鹽（例如碳酸鈣）、金屬氫氧化物（例如氫氧化鈉或氩氧化鉀））存在下在（例如）〇。匚至 150°C之範圍内之溫度下，方便地在介於8〇〇c與9(rc之間之溫度範圍下方便地實施反應。式XIV化合物可藉由使式IX化合物與適宜活化試劑（例如曱烷磺醯氣、甲苯磺醯氣、亞硫醯氣或草醯氣）反應來製 153530.doc 36 ⑤ 201130814 備。可在有機溶劑（例如四氫呋喃或二氣甲烷）中使用無機鹼（例如碳酸鈉或碳酸鉀）或有機鹼（例如三乙胺或二異丙基乙基胺）在〇它至150。(：之範圍内之溫度下，方便地在環境溫度下方便地實施該反應。當需要式I之吡畊衍生物之醫藥上可接受之鹽（例如酸加 - 成鹽）時，其可藉由使該吡畊衍生物與適宜酸反應獲得。當需要式I之吡畊衍生物之醫藥上可接受之前藥時，其可使用習用程序獲得。舉例而言，式J之η比畊衍生物之活體内可解離酿胺可藉由使含有胺基之式I化合物與醫藥上可接受之羧酸反應獲得。熟習有機合成技術者亦應瞭解，本發明化合物中之某些取代基可藉由標準芳香族取代反應引入或藉由習用官能團修飾在上文所提及之方法之前或之後立即生成，且照此納入本發明方法態樣中。此等反應及修飾包括（例如）藉助芳香族取代反應、取代基還原、取代基烷基化、取代基醯化、取代基醯胺化及取代基氧化來引入取代基。此等程序之試劑及反應條件為化學領域所熟知。芳香族取代反應之特定實例包括使用（例如）醯鹵及路易士酸（Lewis扣“乂例如三氯化铭）在弗瑞德克來福特（Friedel Crafts)條件下引入醞基，使用烧基函及易士酸（例如三氣化铭）在弗瑞德克來福條件下引入烷基；及引入鹵基。亦應瞭解’在一些上文所提及之反應中，可能必需或期望保護化合物中之任何敏感基團。需要或期望保護之情況及適且保§蔓方法為彼等热習此項技術者已知。可根據標準 -37- -；·：, 153530.doc 201130814 作業使用習用保遵基團（關於說明，參見T.w. Green， Protective Groups in Organic Synthesis, John Wiley and Sons，199ip因此，若反應物包括諸如胺基、羧基或羥基等基團，則在一些本文所提及之反應中可能期望對基團實施保護。胺基或烷基胺基之適宜保護基團係（例如）醯基（例如烷醯基，例如乙醯基）、烷氧基羰基（例如甲氧基羰基、乙氧基羰基或第三丁氧基羰基）、芳基曱氧基羰基（例如苄基氧基羰基）、或芳醯基（例如苯甲醯基）。以上保護基團之去保護條件必然隨所選保護基團而變化。因此，舉例而言，可藉由（例如）用適宜鹼（例如鹼金屬氫氧化物，例如氫氧化鋰或氫氧化鈉）水解來去除醯基（例如烷醯基）或烷氧基羰基或芳醯基。另一選擇為，可藉由（例如）用適宜酸（例如鹽酸、硫酸、磷酸或三氟乙酸）處理來去除醯基（例如第三丁氧基羰基）且可藉由（例如）在觸媒（例如碳載鈀）上進行氫化或藉由用路易斯酸（例如，叁（三氟乙酸）硼）處理來去除芳基甲氧基羰基(例如苯甲氧基羰基)。一級胺基之適宜替代保護基團係(例如)鄰苯二甲醯基，其可藉由用烷基胺(例如二曱基胺基丙基胺）或用肼處理來去除。可使用化學領域内熟知之習用技術在合成之任一方便階段去除保護基團。某些本文所定義中間體係新穎的且其係作為纟發明又一特徵提供。舉例而言，式„及乂之化合物（如上文所定義）可用作製備本發明化合物之中間體。 153530.doc ⑤ •38- 201130814 此外，以下化合物可用作製備本發明化合物之中間體： 3-胺基-6-(4-(3-(第三丁基二曱基曱矽烷基氧基）丙基）苯基）-N-(0比咬-3-基）-α比p井-2-曱酿胺；及甲烷磺酸3-(4-(5-胺基-6-(吡啶-3-基胺基甲醯基）吡畊-2-基）苯基)丙基酯。生物分析可使用以下分析來量測本發明化合物之效應：活體外GSKp激酶分析此生物化學分析使用基於螢光共振能力轉移（FRET)之偶合酶模式來測定測試化合物抑制重組GSK3P絲胺酸/蘇胺酸激酶將受質構酸化之能力（Kleman-Leyer，K.等人，Drug Disc. Devel. 2003, 6:8卜2)。此分析中所用受質係Z’-LYTEtm ser/Thr 9 肽且 FRET 分析套組係賭自 Invitrogen(Paisley, UK，目錄編號PV3324)。具有H350L突變之N-末端His 6-標籤重組人體GSK3P係在Sf21昆蟲細胞之杆狀病毒中表現，該病毒經純化且係自 Millipore(Billerica, Massachusetts, USA，目錄編號14-306 Human)獲得。將測試化合物製備為存於二曱基亞颯（DMSO)中之10 mM儲液並視需要稀釋於DMSO中。將化合物稀釋液之等份試樣（2.5 μΐ)添加至 Optiplate-F PerkinElmer 384 孔板 (Massachusetts, USA,目錄編號6007270)之各孔中。藉由使用購自 Invitrogen(Paisley，UK，目錄編號 PV3326)之 100%磷酸化肽生成產生對應於最大酶活性之最大信號的對照孔。將100%磷酸化肽之5 μΐ等份試樣（100 μΜ，存於 153530.doc -39- 201130814 1.33χ激酶緩衝液）添加至所有最大對照孔中。將2.5 μΐ存於 1.33χ激酶緩衝液中之4% DMSO溶液（ν/ν)添加至最大對照孔中。藉由添加2.5 μΐ存於含有4% DMSO(v/v)之1 ·33χ激酶緩衝液中之40 μΜ星狀孢子素來生成產生對應於100%抑制酶之最低信號的對照孔。將GSK3P (100 ng/μΐ)酶與未磷酸化受質（Z-LYTEtm ser/Thr 9肽，100 μΜ)存於 1.33χ 激酶緩衝液溶液中之5 μΐ混合物添加至除最大對照孔以外之各孔中並將分析板以270 g離心1分鐘。所用1 ·3 3χ激酶緩衝液係購自 Invitrogen(Paisley，UK，目錄編號 PV3 1 89)且含有 67 mM HEPES (pH 7.5)、13 mM MgCL、1.3 mM EGTA， 0.01 % BRIJ-35。然後向每孔中添加存於激酶緩衝液中之 2.5 μΐ三磷酸腺苷（28 μΜ)，以270 g離心1分鐘且隨後在室溫下將分析板振盪1小時。專有顯色溶液係藉由將58 μΐ顯色試劑 A(Invitrogen，Paisley，UK，目錄編號 PV3297)添加至 2142 μΐ 顯色試劑 B(Invitrogen，Paisley，UK，目錄編號 P3127)中來製備。然後向每孔中添加5 μΐ Invitrogen專有顯色溶液，以270 g離心1分鐘且隨後在室溫下振盪1小時。藉由每孔添加5 μΐ終止試劑（Invitrogen, Paisley, UK目錄編號P3094)終止反應，以270 g離心1分鐘且隨後在室溫下振盡5分鐘。使用 Perkin Elmer Envision 分光光度計（Perkin Elmer，

Massachusetts，USA)讀取源自400 nM下之雷射光激發之所得信號。Z’-LYTEtm生物化學分析採用基於FRET之偶合酶模式且基於磷酸化肽與未磷酸化肽進行蛋白水解解離之差 153530.doc .40- 201130814 異敏感性。參t 4* 万法計算在400 nm下激發供體螢光團後供體發射對受體私如 ^射之比率（發射比），量化反應進展，如以下等式中所顯示。發射比$丑素發射（445 nm) +螢光素發射（520 nm) 使用每測试化合物濃度、i〇〇% dmSO對照孔及100%抑制對照孔之平均數據值來生成濃度反應曲線，自其計算化〇物處理對激酶活性之抑制百分比並計算效能值。 ICsg值係抑制人類GSK3 β激酶活性之5〇%的測試化合物之濃度。此分析中之最終Ατρ濃度係7 μΜ。 (b)細胞p-連環蛋白穩定化分析此分析使用基於成像之方法來量測測試化合物促進 C3H10T1/2細胞核中β_連環蛋白穩定化之能力β 連環蛋白穩定化係GSK3 β抑制作用之指標。〇311101'1/2小鼠純系8成纖維細胞細胞系（美國菌種培養物寄存中心（American Type Culture Collection))(ATCC， USA ;目錄編號CRL 226))照例在37°C及5% C〇2下維持於尹氏基礎培養基（Basal Medium Eagle)(BME，Invitrogen; Paisley，UK ;目錄編號41010)中，該培養基含有ι〇〇/0 (v/v) 胎牛血清（FBS，Invitrogen，Paisley; UK;目錄編號 10270) 及 2 mM L-麩醯胺酸（Invitrogen，Paisley，UK;目錄編號 25030024)。分析時，使用標準組織培養方法，利用 ’Accutase'(Innovative Cell Technologies公司，San Diego, USA ;目錄編號ATI04) ’使細胞自培養燒瓶剝離，並再懸浮於包含含有5%(v/v) FBS及2 mM L-糙醯胺酸之BME的分 153530.doc -41 - 201130814 析培養基中，以獲得55,555個細胞/ml。然後，使用 Multidrop Combi 分配器（Thermo Fisher Scientific, Loughborough, UK)，將90 μΐ此溶液接種至底部透明96孔組織培養板（Perkin Elmer Viewplate ;目錄編號6005182)之各孔中，以獲得5,000個細胞/孔。將各板在37°C及5% C02 下培育過夜，使細胞黏附至各孔。將測試化合物於二曱基亞石風（DMSO)(Sigma-Aldrich ; Poole，UK，目錄編號49442-9)中製備為10 mM儲液，並於DMSO中連續稀釋。使用 Multidrop Combi將245 μΐ預熱分析培養基分配至96孔板 (Thermo Fisher Scientific，Loughborough，UK ;目錄編號 50823925)中，然後將5 μΐ連續稀釋化合物添加至此中間分析板中。在混合後，將10 μΐ各化合物濃縮物添加至細胞板中。DMSO儲液之總稀釋倍數係500倍。對照細胞接收 DMSO(0.2% ν/ν最終濃度）或10 μΜ陽性對照化合物。在 37°C及5% C02下將細胞培育24小時。在化合物處理後，直接添加100 μΐ 8% w/v低聚甲酸 (Sigma-Aldrich，Poole, UK ;目錄編號P6148)至分析板孔中來固定細胞。將細胞在環境溫度下與固定劑一起培育3 0分鐘，隨後用100 μΐ磷酸鹽緩衝生理食鹽水（PBS，Sigma-Aldrich ;目錄編號D8537)洗滌3次。然後，將細胞洗滌1次並在室溫下，在封阻溶液（PBS，其含有1.1% w/v牛血清白蛋白（BSA，Sigma-Aldrich，Poole，UK ;目錄編號A7906)及 0.2% v/v Triton X-100(Sigma-Aldrich, Poole，UK ;目錄編號X100))中培育1小時。在去除封阻溶液後，將30 μΐ抗β- 153530.doc -42- 201130814 連環蛋白抗體（BD Biosciences;目錄編號610154)(已於封阻溶液中稀釋成丨.25 Mg/ml之濃度）添加至細胞中並在4°c 下培育16小時。然後將細胞在100 μΐ封阻溶液中洗滌兩次並在％：境溫度下培育1小時。隨後將細胞置於包含AF647驢抗小鼠抗體（Invitr〇gen，paisley，UK;目錄編號Α31571)及

Hoechst 33342(Invitrogen，Paisley，UK;目錄編號H1399) 核複染劑（其已分別於封阻溶液中稀釋成4 之濃度）之40 μΐ二級抗體溶液中。在室溫下，與二級染色溶液一起培育2小時。然後將細胞在1 〇〇 μι pbs中洗滌3次，隨後將板密封，用於影像捕捉》捕捉螢光影像並使用

Incell分析儀 3〇〇〇 (GE Healthcare，USA)定量。使用 365 nm 之激發波長以及設定為1之中性密度濾波器及45〇·65發射濾波器來觀察Hoechst核染色。使用633 nm雷射波長、1之中性密度濾波器及695-55 nm之發射濾波器來捕捉β-連環蛋白定位。為能進行足夠的細胞計數，每孔獲取4個影像。使用核轉運分析模組（Nuclear .Trafficking Analysis Module)(TRF2)來分析影像數據❶將分析板上各孔之數據標準化為相同分析板之陰性對照與陽性對照之中值且以陽性對照之比例表示效應百分比。分析不包括總細胞數低於實驗批次中值之50%之孔的數據。將濃度反應曲線擬合至希爾方程（Hill equation)之以下形式（Neubig等人，2003, Pharmacol Rev. 2003 ； 55:597-606) y = A + {{B-A)^{\ + {{C^r χγ D))) 153530.doc •43- 201130814 其中χ=化合物濃度（Μ)且y=效應0/〇。此外，其中A=基本濃度效應曲線’ B=漸近線曲線，c=曲線中點，D=斜率以產生最大效應之一半（EC5Q)之化合物濃度及以最大效應百分比報告每一測試化合物之數據。式I化合物之藥理學性質可在上述測試（a)及（b)中之一或多者以下列濃度或劑量來證明：測試（a):-相對於人類GSK3p酶之1C5。在（例如）ι〇 nM至1 μΜ之範圍内測試（b):-相對於鼠類C3H/10T1/2細胞中之細胞連環蛋白累積之EC5〇在（例如）50 nM至5 μΜ之範圍内。舉例而言，實例1所揭示之吡畊化合物在測試（a)中具有活性，其中相對於人類GSK3P酶之ICw為大約35 nM ;且在測試（b)中具有活性’其中相對於鼠類C3H/1 〇T1/2細胞核中之細胞β-連環蛋白累積之EC50為大約242 ηΜ。實例5所揭示之吡畊化合物在測試（a)中具有活性，其中相對於人類GSK3 β _之IC5〇為大約21 nM ;且在測試（b)中具有活性，其中相對於鼠類C3H/1〇Tl/2細胞核中之細胞卜連環蛋白累積之EC5〇為大約902 nM。實例6所揭示之吡畊化合物在測試（a)中具有活性，其中相對於人類GSK3P酶之K：5。為大約48 nM;且在測試（…中具有活性，其中減於鼠類c丽GT1/2細胞核巾之細胞卜連環蛋白累積之EC5〇為大約902 nM。實例7所揭示之吡畊化合物在測試（a)中具有活性，其中 153530.doc • 44· ⑤ 201130814 相對於人類GSK3p酶之iCw為大約80 nM ;且在測試（b)中具有活性，其中相對於鼠類C3H/1〇T1/2細胞核中之細胞卜連環蛋白累積之EC50為大約3890 nM。方便地’本發明之特定化合物在上述測試（a)及（b)中在以下濃度或劑量下具有活性：_ 測試（a):-相對於人類GSK3p酶之平均1(：5()在（例如）5 nM 至40 nM之範圍内測試（b):-相對於鼠類C3H/10T1/2細胞中之細胞β_連環蛋白累積之平均EC50在（例如）50 nM至300 ηΜ 之範圍内。舉例而言，實例1所揭示之吡畊化合物在測試（a)中具有活性’其中相對於人類GSK3p酶之IC5G為大約35 nM ;且在測試（b)中具有活性，其中相對於鼠類C3H/10T1/2細胞核中之細胞β-連環蛋白累積之EC50為大約242 nM。 c) 成骨性分化及活體外礦化之評估材料及方法對於活體外骨生成，以5000個細胞/cm2之密度將自人類脂肪獲得之幹細胞（hADSC)(Invitrogen，UK ;目錄編號 R7788-115)接種至12孔板中且在補充有5°/。胎牛血清（FBS， Gibco，UK;目錄編號 10270)及 2 mM GlutaMax®(Gibco; 目錄編號35050)之無酚紅杜貝克氏改良鷹氏培養基 (Dulbecco's Modified Eagle's Medium)(DMEM ； Sigma-Aldrich，UK;目錄編號Dll45)的基礎培養基中培養。在過夜培育後，替換基礎培養基並添加3-胺基-6-(4·{3·[(3-曱 153530.doc •45- 201130814 氧基丙基）胺基]丙基}苯基）-N-»比啶-3-基。比畊-2-甲醯胺三鹽酸鹽（溶於100% DMSO中且在細胞培養基中稀釋至0.2% DMSO之最終濃度）。在成骨性陽對照孔中，用分化培養基替換基礎培養基；該分化培養基係補充有5% FBS、2 mM GlutaMax®、50 pg/ml L-抗壞血酸（Sigma-Aldrich ;目錄編號A8960)、5 mM β-甘油構酸醋（Calbiochem，UK;目錄編號 35675)及 10 nM 地塞米松（dexamethasone)(Sigma-Aldrich ;目錄編號D4902)之無酚紅DMEM。在37°C下於 5% C02中利用培養基培育培養物且經24天之時程每隔3至4 天替換化合物。使用茜素紅S (Alizarin Red S)染色評估在該時程期間礦化骨小結之形成。在整個時程中，多次將細胞用4%低聚曱醛（Sigma-Aldrich ;目錄編號P6148)固定20 min，隨後用無氣化鈣及氣化鎂之磷酸鹽緩衝鹽水（PBS)(Sigma-Aldrich ;目錄編號D8537)洗滌3次，然後在室溫下用40 !11]^茜素紅8(81£11^-八1£11^11;目錄編號八5533)(?1^4.2)染色 20 min。在染色期間將各板置於振動臺（50 rpm)上。在染色後，用PBS將細胞洗滌3次，並用水洗滌3次。使用Leica M165FC立體顯微鏡及相關Leica應用套件成像軟體（Leica Microsystems，UK)使細胞成像。經由使用先前所述氣化十六烷基吡啶鏽提取法自骨小結提取茜素紅S染色劑來量化礦化量（Gregory等人， Analytical Biochemistry, 2004，329: 77-84 ; Hwang等人， Stem Cells and Development 17: 963-970，2008)。簡言之， 153530.doc ·46· ⑧ 201130814 經由向各孔中添加1 ml氯化十六烷基吡啶鑌緩衝液（由存於 10 mM Na3P〇4 (Sigma-Aldrich ;目錄編號342483)(pH 7.0) 中之1 0¾氯化十六烧基。比0定鑌（§igma_Aldrich ;目錄編號 C0732)組成）並在37。(：下培育1 h而自骨小結提取茜素紅S染色劑。在培育後，將200 μΐ等份試樣轉移至96孔模式中並使用微量板分光光度計（SpectraMax Plus, Molecular Devices，USA)測定550 nm下之吸光率。以550 nm下之平均吸光率士平均值之標準誤差（SEM)表示數據。依次使用單因素方差分析（ANOVA)及Tukey氏多重比較事後檢驗來檢測組間差異的統計顧著性。Ρ<〇·〇5視為顯著。圖1Α :展示在24天細胞培養後相對於媒劑因應30〇 ηΜ 3-胺基-6-(4-{3-[(3-曱氧基丙基）胺基]丙基}苯基）·ν-<»比啶_ 3-基。比畊-2-曱醯胺三鹽酸鹽之礦化骨小結之茜素紅s染色的照片。以三重複（triplicate)方式進行實驗。圖1B : 300 ηΜ 3-胺基-6-(4-{3-[(3-曱氧基丙基）胺基]丙基}苯基）-N-吡啶-3-基吡畊-2·甲醯胺三鹽酸鹽對骨礦化之效應’使用氣化十六烷基吡啶鑌提取量化茜素紅S染色。以550 nm下之平均吸光率顯示數據並依次使用單因素 ANOVA及Tukey氏多重比較事後檢驗來分析：n=9 ; *"， P<0.001。圖1A及1B展示在24天細胞培養後，3-胺基-6-(4-{3-[(3-甲氧基丙基）胺基]丙基}苯基）-N·。比啶-3-基。比畊-2-甲醯胺二鹽酸鹽顯者誘導祖細胞定型及成骨細胞分化，如經由相對於媒劑對照增加之茜素紅S染色所指示。 153530.doc •47· 201130814 d) 大鼠中增加之骨形成化合物給予、無液取樣及屍檢在含有0.5% HPMC((羥基丙基）甲基纖維素；目錄編號 H7509, Sigma，Poole，UK)及 0.1% Tween 80 (v/v)(目錄編號 P8074, Sigma，Poole UK)之水中調配3-胺基-6-(4-{3-[(3-曱氧基丙基）胺基]丙基}苯基）-N-。比啶-3-基。比畊-2-曱醯胺三鹽酸鹽。在每天7 am與10 am之間使用直鋼（75 mm，16號）經口管飼餵食針（Vet-Tech Solutions有限公司，Congleton, UK)向年齡在12週與6週之間之雌性斯普拉-道來氏大鼠 (Female Sprague Dawley rats)(Charles River CRL:CD 大鼠，Deal，Margate, UK)(230-340 g)給予化合物或媒劑，其中藉由經口管飼所投與體積為5 mL/kg。每天1次以不同劑量（包括等效於 3 mg/kg、6 mg/kg、18 mg/kg 及 59 mg/kg 三鹽酸鹽之2.5 mg/kg/天、5 mg/kg/天、15 mg/kg/天或 50 mg/kg/天游離鹼劑量）給予化合物或媒劑並保持7至14天。在一些研究中，在過夜禁食後，在處理前獲取血清試樣以量測基線血清骨生物標記物。自尾靜脈對血液取樣並藉由將血液添加至血清凝膠血液收集管（Micro vette 500 Z-gel，目錄編號 20.1344, Sarstedt，Leicester，UK)中且在 4°C 下將該等管以13000 rpm離心5 min來製備血清。將血清試樣儲存在-80°C下，隨後進行生物標記物分析。在最後一次處理劑量後24小時時，在藉由腹腔内注射過劑量戊巴比妥 (pentobarbitone)麻醉劑（3 mL/kg 200 mg/mL 戊巴比妥鈉 (Euthatal)，Merial Animal Health有限公司，Harlow, UK)將 153530.doc ·48· ⑤ 201130814 已禁食過夜動物處死後，對其實施屍檢。在化合物或媒劑處理後，在屍檢期間自降主動脈獲取血液以獲得供血清骨生物標記物分析用終末血清試樣。經由25號x5/8 TW針將血液吸入無菌2.5 mL注射器中並傾析至2x〇.5 mL血清凝膠血液收集管（Monovette 500 Z-gel，目錄編號20.1344, Sarstedt，Leicester，UK)中，離心並儲存於-80°C下，隨後進行分析。移出股骨及腰椎以供組織病理學處理及骨形成評估。對左股骨及第4或第5腰椎進行處理以供組織病理學分析。為將骨快速脫鈣（用於製備蘇木精及曙紅染色切片），將股骨在10%中性緩衝甲醛（目錄編號PRC/r/4, Pioneer Chemicals，Colchester，UK)中固定 1〇天，之後在 ίο%甲酸水溶液（目錄編號f/1850/pb17，Fisher Scientific， Loughborough, UK)中脫鈣5天，每天更換脫鈣溶液。倘若需要進行免疫組織化學分析，則將骨在10%中性緩衝甲搭中固定10天’之後在50°C下用12% EDTA(乙二胺四乙酸）及4%中性緩衝甲醛（目錄編號pRC/R/132，Hanw

Chemicals，Colchester，UK)脫鈣7週，且每週更換流體。在脫鈣後，將股骨在自來水中洗滌2小時並藉由標準過夜自動化處理計劃使用連續的醇、乙醇及二曱笨溶液進行卢理，之後進行最終蠟包埋。用顯微鏡用薄片切片機切割* μηι厚切片’用蘇木精及曙紅染色並實施組織病理學評骨形成之評價及骨合成代可使用以下技術來評價化合物對GSK3抑制 153530.doc 201130814 謝之效應。 a)組織病理學藉由光學顯微術評價大鼠股骨切片中之組織病理學變化並藉由骨小樑及骨皮質之變化評估骨形成。在7或14天後，當以5 mg/kg給予經口投與之3-胺基-6-(4-{3-[(3-甲氧基丙基）胺基]丙基}苯基）_N_。比咬-^-基^比11井-2-曱醯胺三鹽酸鹽時，與相關媒劑對照組相比，其顯示股骨形態無任何差異。在經口投與3-胺基-6-(4-{3-[(3-曱氧基丙基）胺基]丙基} 苯基）-N-吡啶-3-基吡畊-2-甲醯胺三鹽酸鹽7天後，使15 mg/kg及50 mg/kg之口服劑量與軟骨下區域及骨幹中之骨皮質二者中之增加的類骨質及骨之劑量有關變化相關聯。另外’此兩種劑量均與成骨細胞肥大（暗示成骨細胞活化）之跡象相關。另外，在50 mg/kg劑量下，顯示在松質骨區室内骨增加。亦有證據表明此劑量與骨髓細胞動員及分化具有組織學相關性，尤其藉由松骨區室内未成熟（胚細胞）成骨細胞數量之增加及髓細胞構成之增加所顯示。在經口投與3-胺基-6-(4-{3-[(3-曱氧基丙基）胺基]丙基} 苯基）-N-吡啶-3-基吡畊-2-甲醯胺三鹽酸鹽14天後，3-胺基-6-(4-{3-[(3-曱氧基丙基）胺基]丙基}苯基）-]^-"比咬-3-基吡畊-2-曱醯胺三鹽酸鹽之組織學效應在性質上與彼等在給予7天後所發現者相似，但通常更為明顯且顯示骨趙對化合物具有更大反應。特定而言’ 15 mg/kg劑量之3-胺基_6_ (4-{3-[(3-甲氧基丙基）胺基]丙基}苯基）-]^-°比咬-3-基。比_- 153530.doc -50· ⑧ 201130814 2-甲醯胺三鹽酸鹽顯示軟骨下區域及皮質區域二者中有骨形成之跡象《此兩個發現均與成骨細胞肥大相關。藉由在 10只動物中之2只中觀察軟骨下區域中之局部骨質量來進步加強對骨形成之確定。在5〇 mg/kg組中，除彼等上文所述者外，暗示骨形成之骨變化有更多種：軟骨下區域中類骨質之增加及尚潮分區（tide mark zonation);松骨區室中類骨質之增加及骨髓細胞構成之顯著變化，特定而言，胚細胞群擴增，其與成骨細胞擴增在形態學上一致。總之’該等數據在形態學上支持3_胺基_6_(4_{3_[(3甲氧基丙基）胺基]丙基}苯基）-N-°比咬-3-基"比〃井-2-曱醯胺三鹽酸鹽在活體内誘發骨形成之概念。 b)骨密度測定使用具有 Stratec 軟體 6.0 版之 Norland Stratec XCT Research SA+ 設備（Norland Stratec Medizintechnik, Birkenfeld，Germany)並使用周圍定量式電腦斷層攝影術量測骨礦物質密度（pQCT)(jamsa等人.Bone，1998，23, 155-61，Tuukkanen 等人 J Bone Mineral. Res. 2000，15, 1905-11)。對體素大小為0.07x0.07x0.5 mm3之每一右股骨實施體外pQCT量測。就幹骺端量測而言，CT掃描位點在股骨遠端距遠端關節表面為總骨長度的25%處。總骨之體積礦物質密度（幹骺端總骨礦物質密度-BMD)測定為mg/cm3 ^ 與媒劑處理大鼠相比，以15 mg/kg連續14天每天1次經口給予雌性CRL:CD大鼠經口投與之3-胺基·6-(4-{3-[(3-曱氧基丙基）胺基]丙基}苯基）-Ν-°比咬-3-基。比ρ井-2-曱醯胺三 153530.doc 51 201130814 鹽酸鹽使右股骨幹骺端總BMD增加6.6% »用3-胺基-6-(4-{3-[(3-甲氧基丙基）胺基]丙基}苯基）_Ν_β比啶_3_基。比畊_2_ 甲酿胺鹽酸鹽處理之大鼠之股骨中的總BMD係8 14.41 ±15 mg/cm3或媒劑係764.23±16 mg/cm3(平均值士SEM)。該等結果顯示經口投與3-胺基-6-(4-{3-[(3-甲氧基丙基）胺基]丙基}苯基）-N-吡啶-3-基吡畊-2-甲醯胺三鹽酸鹽可刺激骨形成。骨生物標記物評價藉由用於I型前膠原之N-末端前肽（P1NP)之酶免疫分析 (EIA)分析套組及用於源自破骨細胞之耐酒石酸鹽酸性碟酸酶形式5b (TRAcP-5b)之免疫固定酶活性分析套組測定骨生物標記物’該等分析套組特定用於大鼠血清生物標記物量化。分析套組係購自Immun〇diagnostic Systems有限公司（IDS有限公司，Boldon，UK)且依照廠商說明書使用，以測定血清中I型前膠原之N-末端前肽（P1NP-產品編號 AC-33F1)及自破骨細胞獲得之耐酒石酸鹽酸性磷酸酶形式 5b(TRAcP-5b-產品編號 SB-TR102)之含量。 P·分析所用P1NP分析係競爭性免疫分析，其中大鼠血清中之 P1NP與經生物素標記之PINP蛋白質競爭板固定抗體結合。在室溫下在板振盪器上將用多株兔抗P1NP預塗佈之所供應96孔分析板以700 rpm振盪培育1小時，該等分析板具有50 μί廠商供應之標準物或5 pL血清及45 pL所供應分析试樣稀釋液及50 μι所供應P1NP生物素溶液，該溶液含 153530.doc -52· 201130814 有經生物素標記之P1NP蛋白質。用300 μί所供應洗滌緩衝液將分析板之各孔手工洗滌3次，完全去除洗滌緩衝液，且在室溫下將1 50 pL所供應酶接合物（含有連接至辣根過氧化物酶之抗生物素蛋白）培育30 min。.用洗滌緩衝液將分析板洗滌3次並在室溫下將含有四曱基聯苯胺及過氧化氫之水性調配物的150 pL所供應TMB溶液培育30 min，隨後添加50 μί所供應0.5 M HC1，以終止反應。使用Molecular Devices Spectromax-Plus分光光度計在450 nm下測定所有孔之吸光率，其中參照吸光率為650 nm。藉由針對標準曲線使用標準回歸分析以ng/mL測定血清試樣中P1NP之濃度。 TRAcP-5b 分析在用多株抗小鼠IgG預塗佈之所供應96孔分析板中實施 TRAcP-5b分析。在室溫下在板振盪器上將各孔與100 μί抗大鼠TRAcP-5b抗體一起以950 rpm振盪培育60 min。利用自動化1200 μι多通道移液管用300 μί所供應洗滌緩衝液將分析板之各孔手工洗滌4次。叩出洗滌緩衝液並在室溫下將具有75 pL 0.9% NaCl溶液（Fresenius Kabi有限公司， Runcorn, UK，產品編號-2295 121E)之100 μί所供應標準物或25 pL血清試樣與50 pL所供應釋放試劑一起振盪培育1 小時。用300 μι所供應洗滌緩衝液將分析板之各孔手工洗滌5次。完全去除洗滌緩衝液並在37°C下將1〇〇 μί所供應且新製備之ρΝΡΡ(對硝基苯基磷酸鹽）受質溶液培育1小時，隨後添加25 pL 0.32 M NaOH以終止反應。使用 153530.doc •53· 201130814

Molecular Devices Spectromax-Plus分光光度計在405 ⑽下測定所有孔之吸光率。藉由使用針對標準曲線之標準回歸分析以U/L測定血清試樣中TRAcP-5b之濃度。圖2.展示在經口給予大鼠3 -胺基-6-(4-{3-[(3 -曱氧基丙基）胺基]丙基}苯基）-N-°比咬-3-基。比》井-2-甲酿胺三鹽酸鹽7 天後之血清Ρ1ΝΡ含量圖3.展示在經口給予大鼠3-胺基-6-(4-{3-[(3_曱氧基丙基）胺基]丙基}苯基）-N-吡啶-3-基《比畊-2-甲醯胺三鹽酸鹽7 天後之血清TRAcP-5b含量圖2及圖3中所展示數據表明，連續7天每天1次經口給予雌性CRL:CD大鼠3-胺基-6-(4-{3-[(3_甲氧基丙基）胺基]丙基}苯基）·Ν-吡啶-3 -基吡畊-2-曱醯胺三鹽酸鹽產生血清 Ρ1ΝΡ含量（骨形成之標記物）之增加及血清TRAcp_5b含量 (骨再吸收之標記物）之降低。該等結果顯示經口投與3_胺基-6-(4-{3-[(3-甲氧基丙基）胺基]丙基}苯基）_Ν_β比啶_3•基吡畊-2-甲醯胺三鹽酸鹽可刺激骨形成。使用以下分析來量測3-胺基-6-(4-{3-[(3-甲氧基丙基）胺基]丙基}苯基）-Ν_吡啶-3-基吡畊-2-甲醯胺三鹽酸鹽抑制重組人類酶中CYP3A4之能力。分析根據咪達"坐余（midazolam)至Γ-經基咪達坐舍之氧化之抑制測定某些化合物抑制膜中CYP3A4之能力。CYP3A^ 用米達。坐侖來催化1經基咪達吐侖形成’該形成係藉由 LC MS/MS來量測。相對於對照，抑制CYP3A4可減少丨，-羥 153530.doc ⑤ •54· 201130814 基咪達唑侖產生速率。採用自動化分析（完全ic50)使用自動化平臺，每板運行至多13種化合物以及作為CYP3A4之標準抑制劑之酮康β坐（ketoconazole)。培育在0.1 Μ磷酸鹽緩衝液（pH 7.4在37°C)中實施培育，該緩衝液含有DMSO (1%)、咪達唑侖（2.5 μΜ)、非那西丁 (phenacetin)(25.7 μΜ)、雙氯芬酸（diclofenac)(1.8 μΜ)、S-美芬妥英（S-mephenytoin)(30.5 μΜ)、丁0夫洛爾（bufuralol) (8.8 μΜ)、NADPH (1 mM)、大腸桿菌（E. coli)表現之 3A4 膜（5 pmol/ml)、1A2膜（25 pmol/ml)、2C9膜（5 pmol/ml)、 2C19膜（2.5 pmol/ml)、2D6膜（5 pmol/ml)及測試抑制劑酮康。坐、α-萘黃酮（α-napthoflavone)、續胺苯°比。坐、反苯環丙胺及奎尼丁（quinidine)。非那西丁及雙氯芬酸購自 Sigma-Aldrich (Poole, dorset，UK)。S-美芬妥英、丁°夫洛爾（鹽酸鹽）及°米達。坐侖（鹽酸鹽）購自Ultrafine Chemicals (Manchester, UK)。重組表現之CYP酶購自 Cypex (Dundee, UK)。在自動化試樣處理器上運行分析。在微量滴定板中實施培育。藉由添加NADPH(經還原煙醯胺腺嘌呤二核苷酸填酸鹽）開始分析，將試劑混合並對板進行預培育。然後在 hotel培育器中將板培育10 min。添加MeOH (1:1 vol/vol)終止反應。將試樣離心，轉移至清潔板中並藉由LC MS/MS 來分析，該分析係使用帶有Agilent HP 1100二元溶劑遞送幫浦及 CTC HTS-PAL 自動進樣器之 Applied Biosystems- 153530.doc -55- 201130814

SciexAPHOOO質譜儀來進行。流動相由曱醇及之水組成，其中以曱酸（0.1%)作為改性劑。所用管柱係phen〇menex Max RP 5〇x2 mm(4 μιη粒徑）。使用梯度系統，以3%有機流動相開始並保持〇_25 min，以1.75 min升至100°/。有機。總運行時間係2.5111丨11，其中流動速率為〇_6111丨/111111。將1〇 μί注射至管柱上。監測產物羥基咪達唑侖）之形成。抑制劑濃度測试化合物之推薦濃度係5 〇 μΜ、1 5 μΜ、5 μΜ、1.5 μΜ、0，5 μΜ、0.1 5 μΜ。需要測試抑制劑存於DMSO中之5 mM儲液以獲得該等濃度。使用酮康唾作為標準抑制劑且在0.09-0.0003 μΜ下進行培育。數據分析藉由量測MS/MS面積單位計算每一反應之反應速率。藉由使用假希爾曲線（pseudo Hill plot)並利用自動化試算表將數據線性化來實施數據分析。計算CYP3A4之抑制程度並以ICso值表示^ ic5G值係抑制 CYP 3 A4活性之50%的測試化合物之濃度。在上述分析中，3-胺基-6-(4-{3-[(3-甲氧基丙基）胺基]丙基}苯基）_Ν· 吡啶-3-基吡畊-2-甲醯胺三鹽酸鹽之所估計IC5D值係>50 μΜ，顯示該化合物對CYP3 A4具有可忽略活性。使用以下分析來量測3-胺基-6-(4-{3-[(3 -甲氧基丙基）胺基]丙基}苯基）-Μ-吡啶-3-基°比畊-2-曱醯胺三鹽酸鹽對心臟 Na+通道hNavl.5之活性。細胞培養及製備 153530.doc -56- ⑤ 201130814 所用表現hNavl.5之中國倉鼠卵巢K1 (CHO)細胞已由前人闡述（Persson，F.等人，（2005)，Journal of Cardiovascular Electrophysiology， 16，329-341)。在 37°C 下在含有 Glutamax™ ' 10%胎牛血清及1 mg/ml G418(均來自 Invitrogen)之F-12 Ham培養基中使該等細胞在加濕環境 (5% C02)中生長至半彙集狀態。在使用前，使用預熱 (37°C)的維爾烯（Versene) 1:5000 (Invitrogen)之3 ml等份試樣洗滌單層。在對此溶液進行抽吸後，在37°C下將燒瓶與又一 3 ml維爾烯1:5000 —起培養6 min時段。然後藉由輕輕叩擊將細胞與燒瓶底部分離並隨後將10 ml含有鈣（0.9 mM) 及鎂（0.5 mM)之杜貝克氏磷酸鹽緩衝液鹽水（PBS ; Invitrogen)添加至該燒瓶中並且抽吸至15 ml離心管中，之後進行離心（50 g，達4 min)。丢棄所得上清液並將顆粒輕輕地再懸浮於3 ml PBS中。移出細胞懸浮液之0.5 ml等份試樣並在自動化細胞計數器（Cedex ; Innovatis)中測定活細胞數（基於錐蟲藍排除），以便可用PBS調節細胞再懸浮體積以獲得期望之最終細胞濃度。就Ion Works Quattro實驗而言，所用最終細胞濃度係1,〇〇〇,〇〇〇個細胞/ml。 lonWorks之電生理學

IonWorks HT器件之原理及作業已由Schroeder等人 (Schroeder等人（2003)，Ionworks HT: a new high-throughput electrophysiology measurement platform. Journal of Biomolecular Screening，8，50-64.2003)闡述。簡言之，該技術係基於384孔板（PatchPlate)，其中在各孔中藉由利用 153530.doc -57- 201130814 吸力將細胞放置並保持於分隔兩個隔離流體室之小孔上來嘗試記錄。封接後，將PatchPlate下側上之溶液換成含有兩性黴素B者。此使得覆蓋各孔中之孔洞的細胞膜片具有滲透性且實際上允許自單一細胞進行穿孔全細胞片箝記錄。Ion Works Quattro器件使用相同技術，只是自至多64 個細胞/孔進行記錄。使用PBS (Invitr〇gen)作為具有以下組成（mM)之細胞外溶液：138 NaCl、2.7 KC1、0.9 CaCl2、0.5 MgCl2、1·5 KH2P〇4及 8.1 Na2HP04。「内部」溶液（在封接形成過程期間使用）組成係（mM) : Kgluconate 100、KC1 40、MgCl2 3.2、EGTA 3 及 HEPES 5(均來自 Sigma-Aldrich ; pH 7.25-7.30，使用 1〇 Μ KOH)。含有抗生素之溶液組成係（mM) : KC1 140、EGTA 1、MgCl2 1及 HEPES 20(pH 7.25-7‘30，使用 1〇 Μ KOH)及 100 pg/ml 兩性黴素B (Sigma-Aldrich)。將各化合物佈置於板上12行中以便能夠構建10個8點濃度-效應曲線；板上剩餘兩行加入媒劑（最終濃度為0.33% DMSO)以界定分析基線，及超大封阻濃度之氟卡尼（flecainide)(最終濃度為316 μΜ)以界定 100%抑制濃度。在用各測試化合物培育大約3 5 min之前及之後量測hNavl.5電流。以此方式，可產生非累積濃度_ 效應曲線，其中前提為在足夠百分比之孔中達成接受準則 (參見下文）。所有記錄均在室溫下進行。前及後混合hNav 1.5電流係藉由由下組成之單電壓組來引發：在-90 mV下保持15 s時段、160 ms步長至_1〇〇 mV(以獲得茂漏電流之估計值），1〇〇 ms步長返回至_9〇 153530.doc -58- ⑧ 201130814 mV ’之後連續8個脈衝經5〇 ms自以3 Hz所施加_90 mV保持電位至0 mV。（選擇3 Hz之刺激頻率，此乃因其刺激在人類中所發現心率之正常上限範圍·即18〇次跳動/分鐘）。在前及後混合電壓脈衝之間不存在對膜電位之箝位。根據在電壓脈衝方案開始之-100 mV步長期間所引發電流之估計值對電流進行漏減（leak-subtracted)。於2.5 kHz下對電流信號取樣。 1〇11\¥(^1<；31^軟體藉由以下作業而自經漏減之跡線量測前及後掃描hNavl.5電流幅值：獲得在去極化脈衝至〇瓜乂之末期之平均電流（基線電流）並自峰内電流減去此值。各孔中所引發電流之接受準則為：前掃描封接電阻>3〇 ΜΩ (Quattro)’前掃描Na+電流幅值>_15〇 pA;後掃描封接電阻>30 ΜΩ (Quattro)。藉由各孔及8個測試脈衝中每一者之前掃描hNavl .5電流除以相應的後掃描hNavl 5電流來估計 hNav 1 _ 5電流之抑制程度。 ICm值係抑制hNav 1.5活性之50%的測試化合物之濃度。 3-胺基-6-(4-{3-[(3·甲氧基丙基）胺基]丙基}苯基）_Ν_Π比啶_ 3-基吡畊-2-甲醯胺三鹽酸鹽之1(：5()係212 μΜ，顯示其對心臟Na+通道hNavl.5不表現強效抑制活性。亦在活體内大鼠基因毒性微核研究中測試3_胺基_6·(4_ {3-[(3-曱氧基丙基）胺基]丙基丨苯基）_]^_11比啶_3_基11比(1井_2_ 甲醯胺單苯磺酸鹽。此研究之目的係研究兩次經口給予3_ 胺基-6-(4-{3-[(3-甲氧基丙基）胺基]丙基}苯基）_Ν_β比啶_3_ 基吡畊-2-甲醯胺單苯磺酸鹽是否增加大鼠骨髓中微核化未 153530.doc •59· 201130814 成熟紅細胞（MIE)之頻率。將3-胺基-6-(4-{3-[(3-甲氧基丙基）胺基]丙基}苯基）-N-吡啶-3-基吡畊-2-甲醯胺單苯磺酸鹽投與7只在給予時大約 10週齡之雄性Wistar Han大鼠之群組。間隔24小時向各組給予兩劑量之 0 mg/kg、25 mg/kg、125 mg/kg及 250 mg/kg 游離驗等效物（0 μηιοΐ/kg、59.5 μιηοΐ/kg、297 μηιοΐ/kg及 595 μιηοΐ/kg)且在每二次給予後24小時取樣進行骨髓分析。向對照大鼠給予存於磷酸鹽緩衝液鹽水中之媒劑、 0.5°/。w/v羥基丙基曱基纖維素及0.1% w/v聚山梨酯80 (polysorbate 80) »最高劑量係所耐受最大值。在第二次給予後24小時處死動物並製備骨髓穿刺塗片，固定並用吖啶橙（acridine orange)染色。對於每一動物而言’對2000個未成熟紅細胞（IE)之微核化細胞（MIE)之出現率進行評分並測定在1 〇〇〇個細胞中IE對成熟紅細胞（e)之比率。為用作品質控制程序，來自在先前研究中用環磷醯胺以20 mg/kg (72 μπιοΐ/kg)處理大鼠之骨髓的6個載玻片包括來自在染色及編號前處理動物之載玻片。在兩次經口給予3-胺基-6-(4-{3-[(3-甲氧基丙基）胺基]丙基}苯基）-N-吡啶-3-基吡畊-2-甲醯胺單苯磺酸鹽後，MIE 之出現率沒有超過媒劑對照之生物上或統計上顯著增加。處理組與媒劑對照組之1£$比率相似。如所預計，與媒劑對照值相比’預先給予環磷醯胺之大鼠之載玻片中MIE之出現率顯著增加。總之’當以兩次至多250 mg/kg游離鹼等效物（595 153530.d〇c 6〇_ ⑧ 201130814 pmol/kg)之經口劑量投與時，3-胺基-6-(4-{3-[(3-甲氧基丙基）胺基]丙基}苯基）-Ν-η比啶-3-基。比畊-2-甲醯胺單苯磺酸鹽不會增加雄性Wistar Han大鼠之骨髓中微核化未成熟紅細胞之出現率。

亦發現3-胺基-6-(4-{3-[(3-甲氧基丙基）胺基]丙基}苯基）· N-。比啶-3-基吡畊-2-曱醯胺三鹽酸鹽展示其他期望性質，例如藥物動力學特性及高水溶解性（在磷酸鈉緩衝液（pH 7.4, n=4)中之平均量測溶解度為大約1128 mg/ml)。根據本發明之又一態樣’提供醫藥組合物，其包含如上文所疋義式I之。比ρ井衍生物、或其醫藥上可接受之鹽以及醫藥上可接受之稀釋劑或載劑。態氣溶膠）、呈適於藉由吹入投與之形式（例如作為細微粉

於直腸給予）。本發明組合物可呈適於經口使用之形式（例如作為錠劑、菱形劑、硬或軟膠囊、水性或油性懸浮液、乳液、可刀散粕劑或顆粒、糖漿或酏劑）、呈適於局部使用之形式 (例如作為乳霜、軟膏、凝膠、或水性或油性溶液或懸浮液）、呈適於藉由吸入投與之形式（例如作為細微粉末或液

得，此已為業内所熟知。 153530.doc 每用程序使用習用醫藥賦形劑來獲。因此，意欲經服使用之乡且合物可 -61 · 201130814 含有（例如）一或多種著色劑、甜味劑、矯味劑及/或防腐劑。可與一或多種賦形劑組合以產生單—劑型之活性成份的量將必然隨所治療主體及特定投與途徑而變化。舉例而吕，意欲經口投與人類之調配物通常將含有（例如）丨mg至 1 g活性劑（更適宜1 mg至250 mg，例如！ mg至1〇〇 mg)，其與以總組合物之重量計可介於約5%至約98%間之適當且方便量的賦形劑混合。出於治療性或預防性目的，式I化合物之劑量大小自然應根據病狀之性質及嚴重程度、動物或患者之年齡及性別及投與途徑根據習知的醫藥原則而改變。在出於治療性或預防性目的使用式合物時，通常所投與方式應使得可接收在（例如）丨„1§/]^至1〇〇 mg/kg體重範圍内之曰劑量’若需要以分開劑量給予。一般而言，在採用非經腸途徑時應投與較低劑量。因此，舉例而言，就靜脈内投與而言，通常應使用在（例如）丨mg/kg至25 mg/kg 體重範圍内之劑量。同樣，就藉由吸入投與而言，應使用在（例如）1 mg/kg至25 mg/kg體重範圍内之劑量。然而，尤其呈錠劑形式經口投與較佳。通常，單位劑型應含有約1〇 mg至〇.5 g本發明化合物。如上文所述，已發現本發明中定義之式j化合物非常適於抑制糖原合酶激酶-3 (GSK3)。因此，預計本發明之該化合物可用於預防及/或治療與糖原合酶激酶_ 3活性相關之病況，即在需要此預防及/或治療之哺乳動物（包括人類 153530.doc •62· 201130814 中，該等化合物可用於產生GSK3之抑制效應。如上文所述，GSK3酶之醫藥抑制劑具有預防及/或治療各種形式之骨相關性病症或病況之治療價值，該等病症或病況係（例如）骨質疏鬆（遺傳性、醫源性或因衰老/激素失衡而產生）、由於損傷或手術之骨折修復、導致骨丟失之慢性炎症性疾病（例如類風濕性關節炎）、導致骨損害之癌症（例如乳癌、前列腺癌及肺癌、多發性骨髓瘤、骨肉瘤尤因氏肉瘤、軟骨肉瘤、脊索瘤、骨惡性纖維組織細胞瘤、骨纖維肉瘤）、癌症誘導之骨疾病、醫源性骨疾病、良性骨疾病及佩吉特氏病。根據本發明之一態樣，提供如上文所定義式I之吡畊衍生物或其醫藥上可接受之鹽，其用作溫血動物（例如人）之藥劑。根據本發明之又一態樣，提供如上文所定義式I之吡啫何生物或其醫藥上可接受之鹽，其用於預防及/或治療溫血動物（例如人）之與GSK3相關之病況。根據本發明之又一態樣’提供如上文所定義式T之吡畊衍生物或其醫藥上可接受之鹽之用途，其用於預防及/或治療溫血動物（例如人）之與GSK3相關之病況。根據本發明此態樣之又一特徵，提供如上文所定義式工之°比呼衍生物或其醫藥上可接受之鹽之用途，其用以製造用於預防及/或治療溫血動物（例如人）之與GSK3相關之病況之藥劑。根據本發明此態樣之又一特徵，提供預防及/或治療需 153530.doc •63- 201130814 要此治療之溫血動物（例如人）之與GSK3相關之病況的方法，其包含向該動物投與有效量之如上文所定義式〗之吡 11 井衍生物或其醫藥上可接受之鹽。根據本發明之又一態樣，提供如上文所定義式〗之吡畊衍生物或其醫藥上可接受之鹽，其用於預防溫血動物（例如人）之骨丟失。，根據本發明之又一態樣，提供如上文所定義式1之吡畊行生物或其醫藥上可接受之鹽之用途，其用於預防溫血動物（例如人）之骨丢失。根據本發明此態樣之又一特徵，提供如上文所定義之比井衍生物或其醫藥上可接受之鹽之用途，其用於製造用以預防溫血動物（例如人）之骨丟失效應的藥劑。根據本發明此態樣之又一特徵’提供預防需要此治療之溫血動物（例如人）之骨丟失的方法，其包含向該動物投與有效量之如上文所定義式1之吡畊衍生物或其醫藥上可接受之鹽。根據本發明之又一態樣，提供如上文所定義式〗之吡畊衍生物或其醫藥上可接受之鹽，其用於預防及/或治療溫血動物（例如人）之彼等對（^尺_3酶之抑制敏感的骨相關性病症或病況。根據本發明此態樣之又一特徵，提供如上文所定義式工之比畊何生物或其醫藥上可接受之鹽之用豸，其用於製造用以預防及/或治療溫血動物（例如人）之彼等對（53艮_3酶之抑制敏感之骨相關性病症或病況的藥劑。 153530.doc 201130814 根據本發明此態樣之又一特徵，提供預防及/或治療彼等對G S K · 3酶之抑制敏感之骨相關性病症或病況的方法，其包含向溫血動物（例如人）投與有效量之如上文所定義式工之。比畊衍生物或其醫藥上可接受之鹽。根據本發明之又一特徵，提供如上文所定義式〗之吡畊衍生物或其醫藥上可接受之鹽，其用於預防及/或治療溫血動物（例如人）之骨質疏鬆（遺傳性、醫源性或因衰老/激素失衡而產生）、由於損傷或手術之骨折修復、導致骨丟失之慢性炎症性疾病（例如類風濕性關節炎）、導致骨損害之癌症（例如乳癌、前列腺癌及肺癌、多發性骨髓瘤、骨肉瘤、尤因氏肉瘤、軟骨肉瘤、脊索瘤、骨惡性纖維組織細胞瘤、骨纖維肉瘤）中之此等骨損害、癌症誘導之骨疾病、醫源性骨疾病、良性骨疾病及佩吉特氏病。根據本發明此態樣之又一特徵，提供如上文所定義式工之吡哺衍生物或其醫藥上可接受之鹽之用途，其用於製造用以預防及/或治療溫血動物（例如人）之以下病況之藥劑：骨質疏鬆（遺傳性、醫源性或因衰老/激素失衡而產生）、由於損傷或手術之骨折修復、導致骨丟失之慢性炎症性疾病 (例如類風濕性關節炎）、導致骨損害之癌症（例如乳癌、前列腺癌及肺癌、多發性骨髓瘤、骨肉瘤、尤因氏肉瘤、軟骨肉瘤、脊索瘤、骨惡性纖維組織細胞瘤、骨纖維肉瘤）中之此等骨損害、癌症誘導之骨疾病、醫源性骨疾病、良性骨疾病及佩吉特氏病。根據本發明此態樣之又一特徵，提供如上文所定義式【

l5353〇.dOC -65- 201130814 之"比。井衍生物或其醫藥上可接受之鹽之用途，其用於製造用以預防及/或治療溫血動物（例如人）之以下病況之藥劑. 骨質疏鬆（遺傳性、醫源性或因衰老/激素失衡而產生）、由於損傷或手術之骨折修復、導致骨丟失之慢性炎症性疾病 (例如類風濕性關節炎）、導致骨損害之癌症（例如乳癌、前列腺癌及肺癌、多發性骨髓瘤、骨肉瘤、尤因氏肉瘤、軟骨肉瘤、脊索瘤、骨惡性纖維組織細胞瘤、骨纖維肉瘤）中之此等骨損害、癌症誘導之骨疾病、醫源性骨疾病、良性骨疾病及佩吉特氏病。根據本發明此態樣之又一特徵，提供預防及/或治療需要此治療之溫血動物（例如人）之以下病況之方法：骨質疏鬆（遺傳性、醫源性或因衰老/激素失衡而產生）、由於損傷或手術之骨折修復、導致骨丟失之慢性炎症性疾病（例如類風濕性關節炎）、導致骨損害之癌症（例如乳癌、前列腺癌及肺癌、多發性骨髓瘤、骨肉瘤、尤因氏肉瘤、軟骨肉瘤、脊索瘤、骨惡性纖維組織細胞瘤、骨纖維肉瘤）中之此等骨損害、癌症誘導之骨疾病、醫源性骨疾病、良性骨疾病及佩吉特氏病，該方法包含投與有效量之如上文所定義式I之"比畊衍生物或其醫藥上可接受之鹽。如上文所定義式I之吡畊化合物可用於原發性及繼發性骨質疏鬆，其中原發性骨質疏鬆包括絕經後骨質疏鬆及男性及女性二者中之老年性骨質疏鬆，且繼發性骨質疏鬆包括可的松（cortisone)誘導性骨質疏鬆，此外，術語骨質疏鬆亦包括任一其他類型之誘導性繼發性骨質疏鬆。式工之 153530.doc -66 - 201130814 °比畊化合物可以不同調治療該等病況。配方案進行局部或全身性投與，以，提供如上文所定義式I 之鹽’其用於治療溫血_動醫源性或因衰老/激素失因此’在本發明之又一特徵中之0比畊柯生物或其醫藥上可接受物（例如人）之骨質疏鬆（遺傳性、衡而產生）。根據本發明此態樣之又一特徵，提供如上文所定義式】之喻生物或其醫藥上可接受之鹽之用③，其用於製造用：治療溫血動物(例如人)之骨質疏鬆(遺傳性、醫源性或因农老/激素失衡而產生）之藥劑。根據本發明此態樣之又一特徵，提供如上文所定義式【之。比喷衍生物或其醫藥上可接受之鹽之料，其用於製造用以治療溫血動物（例如人）之骨f疏鬆（遺傳性、醫源性或因哀老/激素失衡而產生）之藥劑。根據本發明此態樣之又一特徵’提供用於治療需要此治療之溫血動物（例如人）之骨質疏鬆（遺傳性、醫源性或因衰老/激素失衡而產生）之方法，其包含投與有效量之如上文所定義式I之苯并吡喃酮（chromenone)衍生物或其醫藥上可接受之鹽。促進及增加骨形成及/或骨礦物質密度使如上文所定義之式I化合物適於在哺乳動物中降低骨折發生率，降低骨折速率及/或增加骨折癒合速率，增加松質骨形成及/或新骨形成。促進及增加新骨形成之用途可與手術結合。可在手術期間使用本發明，其中治療外科醫生將以適當 153530.doc -67- 201130814 調配物形式局部地放置本發明靠近有缺陷的骨及/或於體腔中。骨可能（例如）已斷裂’且在開放性骨折修復期間，利用本文所述及主張之本發明並隨後應將其放置於骨折中或靠近該骨折處。在一些情況下，可能缺失骨片（例如在腫瘤切除或嚴重事故後）’且利用本文所述及主張之本發明’並隨後應將其放置於靠近建設性骨手術部位處。因此’在本發明之又一特徵中，提供如上文所定義式工之吡'•井衍生物或其醫藥上可接受之鹽，其用於促進溫血動物（例如人）之骨形成。根據本發明此態樣之又一特徵’提供如上文所定義式I 之°比畊衍生物或其醫藥上可接受之鹽之用途，其用於製造用以促進溫血動物（例如人）之骨形成之藥劑。根據本發明此態樣之又一特徵，提供如上文所定義式工之°比°井衍生物或其醫藥上可接受之鹽之用途，其用於製造用以促進溫血動物（例如人）之骨形成之藥劑。根據本發明此態樣之又一特徵，提供促進需要此治療之溫血動物（例如人）之骨形成之方法，其包含投與有效量之如上文所定義式I之吡呼衍生物或其醫藥上可接受之鹽。根據本發明之又一特徵中，提供如上文所定義式I之吡 σ井衍生物或其醫藥上可接受之鹽，其用於增加溫血動物 (例如人）之骨礦物質密度。根據本發明此態樣之又一特徵，提供如上文所定義式1 之°比畊衍生物或其醫藥上可接受之鹽之用途，其用於製造用以增加溫血動物（例如人）之骨礦物質密度之藥劑。 153530.doc -68 - ⑧ 201130814 根據本發明此態樣之又一特徵，提供如上文所定義式i 之°比"井衍生物或其醫藥上可接受之鹽之用途，其用於製造用以增加溫血動物（例如人）之骨礦物質密度之藥劑。根據本發明此態樣之又一特徵，提供增加需要此治療之溫灰動物（例如人）之骨礦物質密度之方法，其包含投與有效量之如上文所定義式I之吡畊衍生物或其醫藥上可接受之鹽。根據本發明之又一特徵，提供如上文所定義式J之吡_ 衍生物或其醫藥上可接受之鹽’其用於在溫血動物（例如人）中降低骨折發生率及/或增加骨折癒合速率及/或增加癒合骨折強度。根據本發明此態樣之又一特徵，提供如上文所定義式【之η比啡衍生物或其醫藥上可接受之鹽之用途，其用於製造用以在溫也動物（例如人）中降低骨折發生率及/或增加骨折癒合速率及/或增加癒合骨折強度的藥劑。根據本發明此態樣之又一特徵，提供如上文所定義式工之°比畊衍生物或其醫藥上可接受之鹽之用途，其用於製造用以在溫jk動物（例如人）中降低骨折發生率及/或增加骨折癒:合速率及/或增加癒合骨折強度的藥劑。根據本發明此態樣之又一特徵，提供在需要此治療之溫血動物（例如人）中降低骨折發生率及/或增加骨折癒合速率及/或增加癒合骨折強度之方法，其包含投與有效量之如上文所定義式I之吡畊衍生物或其醫藥上可接受之鹽。根據本發明之又一特徵，提供如上文所定義式丨之^比畊 153530.doc 69· 201130814 衍生物或其醫藥上可接受之鹽，其用於預防及/或治療溫血動物（例如人）之癌症（例如乳癌 '前列腺癌及辟癌、多發性骨髓瘤、骨肉瘤、尤因氏肉瘤、軟骨肉瘤、脊索瘤、骨惡性纖維組織細胞瘤、骨纖維肉瘤）中之骨損害、癌症誘導之骨疾病、醫源性骨疾病、良性骨疾病及佩吉特氏病。根據本發明此態樣之又一特徵，提供如上文所定義式j 之吡°井衍生物或其醫藥上可接受之鹽之用途，其用於製造用以預防及/或治療溫血動物（例如人）之以下病況之藥劑：癌症（例如乳癌、前列腺癌及肺癌、多發性骨髓瘤、骨肉瘤、尤因氏肉瘤、軟骨肉瘤、脊索瘤、骨惡性纖維組織細胞瘤、骨纖維肉瘤）中之骨損害、癌症誘導之骨疾病、醫源性骨疾病、良性骨疾病及佩吉特氏病。根據本發明此態樣之又一特徵，提供如上文所定義式I 之吡啩衍生物或其醫藥上可接受之鹽之用途，其用於製造用以預防及/或治療溫血動物（例如人）之以下病況之藥劑：癌症（例如乳癌、前列腺癌及肺癌、多發性骨髓瘤、骨肉瘤、尤因氏肉瘤 '軟骨肉瘤、脊索瘤、骨惡性纖維組織細胞瘤、骨纖維肉瘤）中之骨損害、癌症誘導之骨疾病、醫源性骨疾病、良性骨疾病及佩吉特氏病。根據本發明此態樣之又一特徵，提供預防及/或治療需要此治療之溫血動物（例如人）之以下病況之方法：癌症（例如乳癌、前列腺癌及肺癌、多發性骨髓瘤、骨肉瘤、尤因氏肉瘤、軟骨肉瘤、脊索瘤、骨惡性纖維組織細胞瘤、骨纖維肉瘤）中之骨損害、癌症誘導之骨疾病、醫源性骨疾 153530.doc 201130814 病、良性骨疾病及佩吉特氏病，該方法包含投與有效量之如上文所定義式！之吡畊衍生物或其醫藥上可接受之鹽。根據本發明之又一特徵，提供如上文所定義式I之《比p井衍生物或其醫藥上可接受之鹽，其用於預防及/或治療溫血動物（例如人）之多發性骨髓瘤中之骨損害。根據本發明此態樣之又一特徵，提供如上文所定義式j 之吡畊衍生物或其醫藥上可接受之鹽之用途，其用於製造用以預防及/或治療溫金動物（例如人）之多發性骨髓瘤中之骨損害的藥劑。根據本發明此態樣之又一特徵，提供預防及/或治療需要此治療之溫血動物（例如人）之多發性骨髓瘤中之骨損害法其包3投與有效量之如上文所定義式I之e比Ρ井衍生物或其醫藥上可接受之鹽。根據本發明之又一特徵，提供如上文所定義式〗之吡畊订生物或其醫藥上可接受之鹽，其用於預防患有以下病況 :溫血動物(例如人)之骨骼相關事件：因癌症(例如乳癌、前歹二腺癌及肺癌、多發性骨髓瘤、骨肉瘤、尤因氏肉瘤、軟月肉瘤、脊索瘤、骨惡性纖維組織細胞瘤、骨纖維肉瘤）所致之骨損害、癌症誘導之骨疾病、醫源性骨疾病、良性骨疾病及佩吉特氏病。根據本發明此態樣之又一特徵，提供如上文所定義^ 之”衍生物或其醫藥上可接受之鹽之用it，其用於製造預防患有以下病況之溫血動物（例如人）之骨路相關事的藥劑：因癌症（例如乳癌、前列腺癌及肺癌、多發性 153530.doc 201130814 骨髓瘤、骨肉瘤、尤因氏肉瘤、軟骨肉瘤、脊索瘤、骨惡性纖維組織細胞瘤、骨纖維肉瘤）所致之骨損害、癌症誘導之骨疾病、醫源性骨疾病、良性骨疾病及佩吉特氏病。根據本發明此態樣之又一特徵，提供預防需要此治療之患有以下病況之溫血動物（例如人）之骨骼相關事件的方法：因癌症（例如乳癌、前列腺癌及肺癌、多發性骨髓瘤月肉瘤、尤因氏肉瘤、軟骨肉瘤、脊索瘤、骨惡性纖維組織細胞瘤、骨纖維肉瘤）所致之骨損害、癌症誘導之月疾病醬源性骨疾病、良性骨疾病及佩吉特氏病，該方法包含投與有效量之如上文所定義之吡畊衍生物或其醫藥上可接受之鹽。除骨相關性病症或病況以外，有證據表明GSK3酶亦在其他疾病中起作用。因此，預計GSK3酶抑制劑在預防及治療眾多種除骨相關性病症或病況外之疾病上具有價值。舉例而§，預計GSK3酶抑制劑在癌症治療中具有價值。實際上，亦已發現式〗之特定吡畊衍生物（即3•胺基_6_(4_ {3-[(3-甲氧基丙基）胺基]丙基}苯基）_N·。比啶-^基。比畊-2-曱醯胺二鹽酸鹽對其他激酶（例如piM3、CHK2(檢查點激酶2)及DYRKla(經雙特異性酪胺酸磷酸化且調節之激酶 la))展示抑制活性，亦相信該等激酶在癌症中起作用。因此’式I之吼畊衍生物或其醫藥上可接受之鹽應具有治療各種形式之癌症疾病之治療價值，該癌症包含實體瘤 (例如癌瘤及肉瘤）及白血病及惡性淋巴瘤。特定而言，式工之0比畊何生物或其醫藥上可接受之鹽應具有治療（例如）以 153530.doc ⑤ •72· 201130814 下癌症之治療價值：乳癌、結腸直腸癌、肺癌（包括小細胞肺癌、非小細胞肺癌及細支氣管肺泡癌）及前列腺癌、及膽管癌、骨癌、膀胱、頭頸癌、腎癌、肝癌、胃腸組織癌、食道癌、卵巢癌、胰腺癌、皮膚癌、睾丸癌、甲狀腺癌、子呂癌、宮頸癌及外陰癌、及白血病（包括all及 CML)、多發性骨髓瘤及淋巴瘤。根據本發明之又一態樣，提供如上文所定義式〗之吡畊衍生物或其醫藥上可接受之鹽，其用於治療溫血動物（例如人）之癌症。根據本發明之又一態樣，提供如上文所定義式〗之吡砩衍生物或其醫藥上可接受之鹽之用途，其用於製造用以治療溫血動物（例如人）之癌症之藥劑。根據本發明此態樣之又一特徵，提供治療需要此治療之溫血動物（例如人）之癌症的方法，其包含向該動物投與有效量之如上文所定義式I之吡畊衍生物或其醫藥上可接受之鹽。根據本發明之又一態樣，提供如上文所定義式！之。比崎衍生物或其醫藥上可接受之鹽，其用於治療選自以下之癌症：乳癌、結腸直腸癌、肺癌（包括小細胞肺癌、非小細胞肺癌細支氣管肺泡癌）及前列腺癌。根據本發明之又一態樣，提供如上文所定義式1之„比4 街生物或其醫藥上可接受之鹽之用途，其用於製造用以治療溫血動物（例如人）之選自以下之癌症的藥劑：乳癌、結腸直腸癌、肺癌（包括小細胞肺癌、非小細胞肺癌細支氣 153530.doc • 73· 201130814 管肺泡癌）及前列腺癌。根據本發明此態樣之又一特徵，提供治療需要此治療之溫血動物（例如人）之選自以下之癌症的方法：乳癌、結腸直腸癌、肺癌（包括小細胞肺癌、非小細胞肺癌細支氣管肺泡癌）及前列腺癌，該方法包含向該動物投與有效量之如上文所定義式丨之吡畊衍生物或其醫藥上可接受之鹽。除非有相反的明確規定，否則在本說明書之上下文中，術語「療法」或「治療」）亦包括「預防」。術語Γ治療」 (「therapeutic」及「therapeutically」）應作相應理解。除非有相反的明確規定，否則在本說明書上下文中，術 §吾「病症」亦包括「病況如上文所述’在投與式I化合物之後，式⑴化合物之活體内效應可部分由在人類或動物體内形成之一或多種代謝產物施加。上文所定義抗骨丟失治療可作為唯一療法應用或除本發明化合物外亦可涉及習用手術或放射療法或化學療法。此化學療法可包括一或多種下以下類別之抗腫瘤劑：-⑴其他抗增生/抗贅瘤藥物及其組合，如醫學腫瘤學中所用者，例如，烧基化劑（例如，順始、奥沙利銘 (oxaliplatin)、卡銘（carboplatin)、環峨酿胺、氛芥 (nitrogen mustard)、美法命（melphalan)、笨丁酸氮芥 (chlorambucil)、白消安（busulfan)、替莫唾胺 (temozolamide)及亞硝基脲類）；抗代謝物類（例如，吉西他濱（gemcitabine)及抗葉酸製劑，例如，氟嘧啶類，如5-氟 153530.doc • 74- 201130814 尿嘧啶及替加氟（tegafur)、雷替曲塞（raltitrexed)、胺甲蝶呤（methotrexate)、阿糖胞苷（Cytosine arabinoside)及羥基脲）；抗腫瘤抗生素（例如，蒽環類抗生素，如阿黴素 (adriamycin)、博來黴素、多柔比星（doxorubicin) '道諾黴素（daunomycin)、表柔比星（epirubicin)、伊達比星 (idarubicin)、絲裂黴素（mitomycin)-C、放線菌素 (dactinomycin)及光輝黴素（mithramycin));抗有絲分裂劑 (例如’長春花生物驗類，如長春新驗（vincristine)、長春化驗（vinblastine)、長春地辛（vindesine)及長春瑞濱 (vinorelbine)及紫杉烷，如紫杉酚（tax〇i)及紫杉德 (taxotere)及polo激酶抑制劑）；及拓撲異構酶抑制劑類（例如，差向鬼抬毒素類（epipodophyllotoxins)，如表鬼桕毒素 (etoposide)及替尼泊苷（teniposide)、安吖啶（amsacrine)、托泊替康（topotecan)及喜樹鹼（camptothecin)); (ii)細胞生長抑制劑，例如，抗雌激素類（例如，他莫西芬（tamoxifen)、氟維司群（fulvestrant)、托瑞米芬 (toremifene)、雷洛昔芬（raloxifene)、屈洛昔芬 (droloxifene)及碘氧芬（碘xyfene))、抗雄激素類（例如，比卡魯胺（bicalutamide)、氟利坦（flutamide)、尼魯米特

(nilutamide)及乙酸 ί哀丙孕嗣（cyproterone acetate))、LHRH 拮抗劑類或LHRH激動劑類（例如’戈舍瑞林（g〇sereiin)、亮丙瑞林（leuprorelin)及布舍瑞林（buserelin))、孕激素類 (例如，乙酸甲地孕酮（megestrol acetate))、芳香酶抑制劑 (例如，阿那曲唑（anastrozole)、來曲唑（letrozole)、伏氣 153530.doc -75- 201130814 唑（vorazole)及依西美坦（exemestane))及5α-還原酶之抑制劑（例如非那雄胺（finasteride)); (iii)抗侵襲劑[例如，c-Src激酶家族抑制劑，如4_(6氣-2,3-亞曱基一氧基苯胺基）-7-[2-(4-甲基六氫。比p井基）乙氧基]-5-四氫吡喃-4-基氧基喹唑啉（AZD0530 ;國際專利申請案 WO 01/94341)、Ν-(2-氣-6·曱基苯基）-2-{6-[4-(2-羥基乙基）六氫吡畊-1-基]_2-甲基嘧啶-4-基胺基}噻唑_5·曱醯胺 (達沙替尼（dasatinib) ’ BMS-354825 ; J. Med. Chem·，2004, 47，6658-6661)及伯舒替尼（b〇sutinib)(SKI-606)，及金屬蛋白酶抑制劑’如馬馬司他（marimastat)，尿激酶血纖溶酶原活化劑受體功能之抑制劑或抗類肝素酶之抗體]; (iv)生長因子功能抑制劑：例如，此等抑制劑包括生長因子抗體及生長因子受體抗體（例如，抗erbB2抗體曲司佐單抗（trastuzumab) [Herceptin™]、抗 EGFR 抗體帕尼單抗 (panitumumab)、抗erbB1抗體西土西單抗（⑽⑽化叫 [Erbitux，C225]及由 Stern 等人’ Crhieal 比 oncology/haematol〇gy，2005，第 54卷，第 11-29頁揭示之任一生長因子或生長因子受體抗體）；此等抑制劑亦包括酪胺酸激酶抑㈣，例如表皮生長因子家族之抑制劑（例如’ EGFR家族酪胺酸激酶抑制劑，例如叫3_氣_4•氣苯基）-7-曱氧基-6-(3-嗎琳基丙氧基）噎㈣_4_胺（吉非替尼 (gefhinib) ’ ZD1 839)、Ν·(3·乙块基苯基）_6 7 雙（2 甲氧基乙氧基）喹嗤琳·4_胺（埃羅替尼（erlotinib) ’ OSI-774)及6·丙稀酿胺基N-(3-氣-4-氟笨基）-7_(3_嗎淋基丙氧基）喧唾琳_ 153530.doc ⑧ -76 - 201130814 4-胺（CI 1033)、erbB2酪胺酸激酶抑制劑（例如拉帕替尼 (lapatinib));肝細胞生長因子家族之抑制劑；胰島素生長因子家族之抑制劑；血小板衍生生長因子家族之抑制劑，例如伊馬替尼（imatinib)及/或尼羅替尼 (nilotinib)(AMN107);絲胺酸/蘇胺酸激酶之抑制劑（例如 Ras/Raf信號傳導抑制劑，例如法尼基（farnesyl)轉移酶抑制劑，例如.索拉非尼（sorafenib)(BAY 43-9006)、替°比法尼 (tipifarnib)(R115777)及洛那法尼（lonafarnib)(SCH66336))、經由MEK及/或AKT激酶之細胞信號傳導抑制劑、c-kit抑制劑、abl激酶抑制劑、PI3激酶抑制劑、PU3激酶抑制劑、CSF-1R激酶抑制劑、IGF受體（胰島素樣生長因子）激酶抑制劑；極光激酶抑制劑（aurora kinase inhibitor)(例如 AZD1152、PH739358、VX-680、MLN8054、R763、 MP235、MP529、VX-528及AX39459)及細胞週期調節蛋白依賴性激酶抑制劑，例如CDK2及/或CDK4抑制劑； (v)抗血管生成劑，例如，彼等可抑制血管内皮生長因子之效應者[例如，抗-血管内皮細胞生長因子抗體貝伐單抗 (bevacizumab)(AvastinTM)及（例如）VEGF受體路胺酸激酶抑制劑，例如凡德他尼（vandetanib)(ZD6474)、瓦他拉尼 (vatalanib)(PTK787)、舒尼替尼（sunitinib)(SU11248)、阿西替尼（axitinib)(AG-013736)、帕0坐帕尼（pazopanib)(GW 786034)及4-(4 -氣-2-甲基0弓丨0朵-5-基氧基）-6-曱氧基-7_(3-17比咯啶-1-基丙氧基）喹唑啉（AZD2171 ; W0 00/47212中之實例240)、諸如彼等揭示於國際專利申請案WO 97/22596、 153530.doc -77- 201130814 WO 97/30035、WO 97/32856 及 WO 98/13354中者等化合物及藉由其他機制起作用之化合物（例如，利諾胺 (linomide)、整合素ανβ3功能抑制劑及血管他丁 (angiostatin))]; (vi) 血管損傷劑，例如考布他汀（Combretastatin) A4及揭示於國際專利申請案WO 99/02166、WO 00/40529、WO 00/41669、WO 01/92224、WO 02/04434及 WO 02/08213 中之化合物； (vii) 内皮素受體拮抗劑，例如齊泊騰坦（zibotentan) (ZD4054)或阿曲生坦（atrasentan); (viii) 反義治療劑，例如，彼等引導至上文所列舉靶位者，例如，ISIS 2503、抗-ras反義劑； (ix) 蛋白體抑制劑，例如萬珂（硼替佐米） (X)用於基因療法之藥劑，該等基因療法包括（例如）替代諸如異常p53或異常BRCA1或BRCA2等異常基因之方法、諸如彼等使用胞嘧啶脫胺酶、胸苷激酶或細菌硝基還原酶者等GDEPT(基因定向性酶前藥療法）方法以及可提高患者對化學療法或放射療法之耐受性的方法（例如多耐藥性抗基因療法）；及 (xi)用於免疫療法之藥劑，該等免疫療法包括（例如）提高患者腫瘤細胞之免疫原性之活體外或活體内方法，例如用諸如白介素2、白介素4或粒細胞-巨嗔細胞集落刺激因子等細胞因子轉染；降低T-細胞無反應性之方法；使用經轉染之免疫細胞（例如經細胞因子轉染之樹突細胞）之方法； 153530.doc -78- 201130814 使用經細胞因子轉染之腫瘤細胞系之方法；及使用抗個體基因型抗體之方法。根據本發明之此態樣，提供適用於治療骨相關性病症或病況之組合，其包含如上文所定義式j化合物或其醫藥上可接受之鹽及上文（i)-(xi)下所列舉之抗腫瘤劑中的任一者。因此’在本發明之又一態樣中’提供式J化合物或其醫藥上可接受之鹽與選自上文（i)-(xi)下所列舉者之抗腫瘤劑的組合。在本文中，當使用術語「组合」時，應理解為此係指同時、單獨或依序投與。在本發明之一個態樣中，「組合」係才曰同時技與。在本發明之另一態樣中，「組合」係指單獨投與。在本發明之又一態樣中，「組合」係指依序投與。在依序或單獨投與時，不應延遲投與第二組份以免喪失該組合之有益效應。根據本發明之又一態樣中，提供一種醫藥組合物，其包含式I化合物或其醫藥上可接受之鹽與選自上文（iHxi)下所列舉者之抗腫瘤劑的組合、以及醫藥上可接受之稀釋劑或載劑。根據本發明之又-態樣中，提供—種醫藥組合物，其包含式I化合物或其醫藥上可接受之鹽與選自上文（i)_(xi)下所列舉者之抗踵瘤劑的組合、以及醫藥上可接受之稀釋劑或載劑’該組合物用於治療f相關性病症或病況。根據本發明之另-特徵，提供式⑴化合物或其醫藥上可 153530.doc •79- 201130814 接受之鹽與選自上文（iHix)下所列舉者之抗腫瘤劑的組合之用途，其用以製造用於溫血動物（例如人）之骨相關性病症或病況之藥劑。因此，在本發明之額外特徵中，提供治療需要此治療之溫血動物（例如人）之骨相關性病症或病況的方法，其包含向該動物投與有效量之式丨化合物或其醫藥上可接受之鹽與選自上文（i)-(xi)下所列舉者之抗腫瘤劑的組合。根據本發明之又一態樣，提供一種套組，其包含式以匕合物或其醫藥上可接受之鹽與選自上文（i)_(xi)下所列舉者之抗腫瘤劑的組合。根據本發明之又一態樣，提供一種套組，其包含： a) 式I化合物或其醫藥上可接受之鹽，其呈第一單位劑型； b) 選自上文（i)-(xi)下所列舉者之抗腫瘤劑，其呈第二單位劑型；及 c) 容器構件’其用於含有該第一及第二劑型。上文所述疋義抗骨丢失治療可作為唯一療法應用或除本發明化合物方法外亦可涉及與其他藥理活性劑（例如雙磷酸鹽、雌激素、SERMS(選擇性雌激素受體調節劑）、 RANKL(核因子kB配體之受體活化劑）拮抗劑、降鈣素及雌激素促進劑（例如曱狀旁腺激素或重組或合成曱狀旁腺激素））之組合。雙磷酸鹽之實例包括阿屈膦酸鹽 (alendronate)、氣鱗酸鹽（ci〇dr〇nate)、伊班膦酸睡 (ibandronate)、帕米膦酸鹽（pamidronate)、依替膦酸越 153530.doc _80. ⑧ 201130814 (etidronate)、利塞膦酸鹽（risedronate)、替魯膦酸鹽 (tiludronate)及 σ坐來膦酸（zoledronic acid)。SERMS之實例包括雷洛昔芬（raloxifene)及二氫雷洛昔芬。RANKL拮抗劑之一實例係地諾單抗（denosumab)。降弼素包括人類降釣素及鮭降鈣素。根據本發明之此態樣，提供適用於治療骨相關性病症或病況之組合，其包含如上文所定義式I化合物或其醫藥上可接受之鹽及選自以下之藥理活性劑：雙磷酸鹽 '雌激素、SERM、RANKL拮抗劑、降鈣素及雌激素促進劑。根據本發明之又一態樣，提供醫藥組合物，其包含式I 化合物或其醫藥上可接受之鹽與選自以下之藥理活性劑之組合以及醫藥上可接受之稀釋液或載劑：雙磷酸鹽、雌激素、SERM、RANKL拮抗劑、降鈣素及雌激素促進劑。根據本發明之又一態樣，提供醫藥組合物，其包含式I 化合物或其醫藥上可接受之鹽與選自以下之藥理活性劑之組合以及醫藥上可接受之稀釋液或載劑：雙磷酸鹽、雌激素、SERM、RANKL拮抗劑、降鈣素及雌激素促進劑。根據本發明之另一特徵，提供式I化合物或其醫藥上可接受之鹽與選自以下之藥理活性劑之組合的用途：雙磷酸鹽、雌激素、SERM、RANKL拮抗劑、降鈣素及雌激素促進劑，其用於在溫企動物（人）中治療骨相關性病症或病況。因此，在本發明之額外特徵中，提供治療需要此治療之溫血動物（例如人）之骨相關性病症或病況的方法，其包含 153530.doc -81- 201130814 向該動物投與有效量之式！化合物或其醫藥上可接受之鹽與選自以下之藥理活性劑的組合：雙磷酸鹽、雌激素、 SERM、RANKL拮抗劑、降鈣素及雌激素促進劑。儘管式I化合物主要具有作為用於溫血動物（包括人）中之治療劑之價值，但其亦可用於在需要抑制獄_3之效應時。因此’其可作為藥理學標準物用於研發新賴生物測試及研究新穎藥理劑。現在將在以下實例中闡釋本發明，其中，通常： (i) 除非另有說明，否則在環境溫度（即在^^至乃它之範圍内）下且在惰性氣體（例如氮）之氣氛下實施作業； (ii) 藉由旋轉蒸發實施蒸發且在藉由過濾去除殘餘固體後實施處理程序； (ill)使用購自Agela technologies之經預先填充Ageia正相 Si60 .一氧化碎遽 ιί 在自動化 combiflash companion (TELEDYNE，ISCO，USA)上實施急驟層析純化； (W)使用水（含有0.1。/。TFA)與乙腈之極性漸減混合物作為洗脫液在配備有ZMD或ZQ ESCi質譜儀及Luna反相管柱 (C-1 8，5微米二氧化石夕，50 mm直徑，250 mm長度，流速為80 ml /分鐘）之SHIMADZU儀器（LC-8A)上實施製備型層析’或者若需要，使用Waters Symmetry C8, Xterra或 Phenomenex Gemini管柱使用乙腈及水性乙酸敍、氨、曱酸或三氟乙酸作為緩衝液實施RPHPLC(反相製備型高效液相層析）； (v)產率（若存在）未必為可獲得之最大值； 153530.doc •82· ⑤ 201130814 (vi) —般而言，藉由核磁共振（NMR)光譜法來證實式I終產物之結構；以δ標度量測NMR化學位移值[使用Varian或 Bruker Avance 400 (400 MHz)儀器測定質子磁共振譜];除非另有說明，否則在環境溫度下進行量測；已使用以下縮寫：s，單峰；d，雙峰；t，三重峰；q，四重峰；m，多重峰；dd，雙重雙峰；ddd，雙重雙裂雙峰；dt，三重雙峰；bs，寬信號； (vii) —般而言，式I終產物亦可在液相層析（LCMS)後藉由質譜法來分析特徵；使用配備有SHIMADZU 2010EV質譜儀及 Xtimate 3 μηι C-18 管柱（2.1 X 30 mm)或 Shim-pack XR-ODS C-18 管柱（3_0 X 30 mm)之 SHIMADZU 20 AB ’ 在以下一種條件下進行LCMS : (a)流速為1 ·2 ml/min，使用 10% A+90% B至80% A+20% B之溶劑系統，經3分鐘，其中A=存於乙腈中之0.01875 °/〇 TFA，B=存於H20中之 0.03 75% TFA)或（b)流速為 1.0 ml/min，使用 90% A+10% B 至10% A+80% B之溶劑系統，經2分鐘，其中A=存於水中之0.05%曱酸，B=存於ACN中之0.05%甲酸； (viii) X射線粉末繞射譜係（使用P'Analytical Cubix分析儀器）將結晶材料之試樣安裝於單矽晶體（SSC)晶圓試樣支架上且將試樣展開成薄層來測定。使試樣以30轉/分鐘（以改良計數統計）旋轉’並用由在45 kV及40 mA下運行之長細聚焦銅管所產生的波長為1.5 418埃之X射線輻照。使準直X射線源穿過設定在V20下之自動可變發散狹縫，且反射之輕射直接穿過5.89 mm防散射狹縫及9 · 5 5 mm偵測狹 153530.doc 83 · 201130814 縫。依θ-θ模式，在2度至40度2Θ範圍内，將試樣暴露loo 秒/0.02。2Θ增量（連續掃描模式ρ該儀器配備有位置感測器（Lynxeye)。藉助利用x，pert工業軟體運行之 Optiplex 686 Windows XP Workstation進行控制及數據捕捉。熟習X射線粉末繞射技術者亦應瞭解，峰之相對強度可受（例如）尺寸在30微米以上且不均一縱橫比之晶粒的影響’峰之相對強度可影響試樣分析。熟習此項技術者亦應瞭解’反射位置可受試樣在繞射儀中所處的精確高度及繞射儀之零校正的影響。試樣之表面平整度亦可具有小的效應。因此’所呈現的繞射圖案數據不應視為絕對值。 (ix)使用TA Instruments Q2000 DSC儀器實施差式掃描量熱法。通常將含有小於5 mg材料配備有蓋子之TZero鋁盤以1 0°C /分鐘之恆定加熱速率加熱至〇。〇至300。(：之範圍。使用吹掃氣體（氮），流速為50 ml/分鐘。通常，由於粒子及試樣尺寸引入熱滞，故可發現轉變溫度值之量測誤差為大約加或減1°C ;且 (X)已使用以下縮寫：-

Boc2〇二碳酸二第三丁基酯

Br2 溴 CDC13 氘代氯仿 DCM 二氯甲烷 DMAP 4-二甲基胺基吡啶 DMF N，N-二甲基甲醯胺 DMSO 二甲基亞砜

EtOAc 乙酸乙酯 HATU 六氟磷酸〇-(7_氮雜苯并三唑-1-基）- 153530.doc ⑤ 201130814 HC1 HF N，N，N\N’-四曱基脲鏽氣化氫氟化氫 IPA KOAc k2co3 LiAlH4 MeCN MeOD 異丙醇乙酸鉀碳酸鉀氫化鋰鋁乙腈氘代曱醇 MgS04 硫酸鎂 MsCl MTBE Ν^2^〇3 NaOH N&2 S 〇4 甲烷磺醯氣曱基第三丁基醚碳酸鈉氫氧化納硫酸鈉 NMP n2 PCy3 Pd(dppf)Cl2 Pd-Cl2 PE 1-曱基-2-吡咯啶酮氮氣三環己基膦二氣[1，1'_雙（二苯基膦基）二茂鐵]鈀（Π) 二氣鈀（II) 石油醚 TBSC1 THF 第三丁基二甲基甲矽烷基氣四氫°夫0南 TEA TLC 實例1 三乙胺薄層層析 3-胺基-6-(4-{3-[(3-甲氧基丙基）胺基]丙基}苯基）-N-吼啶 3-基吡畊-2-甲酿胺三鹽酸鹽 153530.doc -85- 201130814

3HCI 根據以下方案製備標題化合物：

(i) 3-(4-溴苯基）丙-1-醇：在0°C下向3-(4-溴苯基）-丙酸（9.16 g，40 mmol)存於Thf (150 mL)中之溶液中逐份添加LiAlH4 (1.4 g ’ 36 mmol)。當完成添加時，將反應混合物加熱並在回流下再攪拌5小時。將反應混合物冷卻至〇°C並逐滴添加2 N-HC1 (50 mL)。用EtOAc萃取反應混合物並用水（x3)洗條。將合併的有機萃取物經無水MgS〇4乾燥，過濾並在真空中濃縮，獲得油狀副標題化合物（i)(8 g)。 1H-NMR(400 MHz, CDC13) δ 7.40 (d, 2H), 7.08 (d, 2H) 3.66 (t，2H), 2.66 (t，2H)，1.89-1,82 (m，2H)。 (ii) (3-(4-溴苯基）丙氧基）（第三丁基）二甲基矽烷： 153530.doc • 86 · 201130814 向步驟⑴之產物（32.25 g，0.15 mol)存於無水二氣甲烷 (400 mL)中之溶液中依序添加三乙胺（45 g，0.45 mol)、 DMAP (915 mg，7.5 mmol)及 TBSC1 (33 g，0.215 mol)。將所得溶液攪拌過夜。用二氯甲烷萃取反應混合物並用水 (x3)洗滌。將合併的有機層經無水MgS〇4乾燥，過濾並在真空中濃縮。藉由管柱層析利用PE對粗製產物實施純化，獲得淺褐色油狀副標題化合物（Π)(4〇 g)。 1H-NMR(400 MHz, CDC13) δ 7.34 (d, 2H), 7.02 (d, 2H), 3.56 (t, 2H), 2.58 (t, 2H), 1.77-1.73 (m, 2H), 0.86 (s, 9H), 〇.〇〇 (s, 6H)； HPLC保留時間=i.017 min。 (iii) 3-胺基-6-演》比味_2-甲酸甲醋：將 3-胺基。比畊_2_甲酸甲酯（200 g，1.3 mol，3B Scientific 公司）溶於AcOH (1 L)中。將該溶液升溫至50。(：並逐滴添加Br2 (312 g ’ 1.9 m〇l)。當完成添加時，在5〇。〇下將混合物再攪拌3小時。將反應混合物緩慢傾倒至冰水（4 L)中。將沉澱過濾，用水洗滌並在減壓下乾燥，獲得紅褐色固體狀副標題化合物（出）（3〇〇 g)。 H-NMR (400 MHz, CDC13) δ 8.28 (s, 1H), 3.97 (s, 3H)； HPLC保留時間.〇16 min 〇 (iv) 3-胺基溴啦畊-2_甲酸：向步驟（ui)之產物（200 g，0.86 mol)存於 MeOH (500 mL) 中之溶液中緩慢添加5 N-NaOH (500 mL)。在50°C下將所得混合物攪拌3小時。在減壓下去除Me〇H並將水（3〇〇 mL) 153530.doc •87- 201130814 至反應混合物中。利用6N-HC1將該溶液酸化至pH 3。用 EtOAc萃取溶液並用水洗務。將合併的有機萃取物經

NaJO4乾燥，過濾並蒸發至乾燥，獲得褐黃色固體狀副標題化合物（iv)(l 80 g)。 'H-NMR (400 MHz, CDC13) δ 8.30 (s, 1H)； HPLC保留時間=〇,85〇 min。 (v) 3-胺基-6-溴-N-(吡咬-3-基）吡畊-2-甲醯胺向步驟（iv)之產物（1〇〇 g，0.45 m〇l)存於 DMF (350 mL) 中之溶液中添加TEA (129 mL，0.91 mol)及3-胺基吡啶（42.3 g ’ 〇·45 m〇l)。將HATU (174 g，〇 45 m〇1)逐份添加至溶液中。將懸浮液過濾’用水洗滌並在減壓下乾燥，獲得黃色固體狀副標題化合物（v)( 1 〇5 g)。 'H-NMR (400 MHz, CDC13) δ 9.50 (s, 1Η), 8.81 (d, 1H), 8.40 (dd，1H)，8.32 (s，1H)，8.23-8.20 (m，1H)，7.33 (dd， 1H)。LCMS (ESI) m/z [M+H]+=294&296(計算值=294& 296)(MultiMode+)，HPLC保留時間=0.478 min。 (vi) 3-胺基-6-(4-(3-(第三丁基二甲基甲矽烷基氧基）丙基）苯基）-Ν·("比咬-3-基比啡-2-甲醯胺：攪拌步驟（11)之產物（9.84 g ’ 30 mmol)、雙（頻哪醇基）二硼（11.4 g，45 mmol)、KOAc (9 g，90 mmol)及 Pd(dppf)Cl2 (1 g，1.5 mmol)存於二噁烷（200 mL)中之混合物並將其用

Nz(x3)脫氣。在80°C下將該混合物在n2氣氛下攪拌3小時。將反應混合物冷卻至室溫。將水（25 mL)及Na2C03 (10 g，90 mmol)添加至混合物中。將混合物攪拌1〇分鐘，隨 153530.doc -88 - 201130814 後添加步驟（V)之產物（7.9 g，27 mmol)及Pd(dppf)Cl2 (0.5 g，0.7 mmol)。將所得溶液再用& (χ3)脫氣。在9〇〇c下將反應混合物在&氣氛下再攪拌丨〇小時。添加Na2S〇4，過濾並在真空中濃縮濾液。藉由管柱層析利用]?£:以〇入£； = 5:1至 3:1作為洗脫液對粗製產物實施純化，獲得黃色固體狀副標題化合物（vi)(7.8 g)。 !Η-ΝΜΚ(400 MHz, CDC13) δ 9.90 (s, 1H), 8.73 (d, 1H), 8.62 (s，1 H)，8.34 (d，1H), 8.21 (d，1H)，7.74 (d，2H), 7.28 (d, 2H), 7.28 (m, 1H), 3.6 (t, 2H), 2.68 (t, 2H), 1.83-1.79 (m, 2H), 0.86 (s, 9H), 〇.〇〇 (s, 6H) ； LCMS (ESI) m/z [M+H]+-464(s十算值=464)(MultiMode+), HPLC保留時間 =1.233 min。 (vii) 3-胺基-6-(4-(3-羥基丙基）苯基）·Ν_(β比啶_3•基）咬畊_2· 甲醯胺：將步驟（vi)之產物（14.5 g ’ 31.3 mmol)添加至塑料小瓶中並添加THF (150 mL)。將HF (3 0 mL)小心添加至溶液中並在室溫下將溶液攪拌3小時。將混合物傾倒至6〇〇中並添加5 N-NaOH以將溶液鹼化至pH=l〇-ll。用EtOAc萃取該溶液並用水（χ3)洗滌。將合併的EtOAc萃取物經

MgSCU乾燥’過濾並在真空中濃縮，獲得黃色固體狀副標題化合物（vii)(l〇 g)。 !Η-ΝΜΚ(4〇〇 MHz, DMSO-d6) δ 8.94 (d, 1 H), 8.87(s, 1H), 8-31 (dd, 1H), 8.18-8.16 (m, 1H), 8.10 (d, 2H), 7.60 (brs, 2H)，7.38 (dd，1H)，7.28 (d，2H)，3.39 (q，2H )，2.61 (t, 153530.doc -89- 201130814 2H)，1.75-1.65 (m，2H) ; LCMS (ESI) m/z [m+h]+=350(計算值=350)(MultiMode+)，HPLC保留時間=〇 858 min。 (viH)甲燒磺酸3-(4-(5-胺基-6-(啦啶_3_基胺基甲醯基）吼畊-2-基）苯基）丙酯：將一氣曱烧（200 mL)及二異丙基乙基胺（2 g，17 16 mmol)添加至步驟（vii)之產物（4 g，u 46 mm〇1)中。將所得溶液冷卻至0°C並逐滴添加MsCl (2 g，17·16 mmol)。當元成添加時’在〇C下將所得溶液授拌ι〇分鐘且在室溫下授拌2小時。用一氣曱烧萃取反應混合物並用水（x3)洗祿。將合併的有機萃取物經MgSCU乾燥，過濾並在真空中濃縮，獲得黃褐色固體狀副標題化合物（viiiM4 5g^。 ^•NMRHOO MHz，CDC13) δ 9.94 (s，1 H)，8.81 (d，1H)， 8.70 (s，1Η)，8.41 (d，1Η)，8.30 (d，1Η)，7.84 (d，2Η)，7.34 (d, 2H), 7.34 (m, 1H), 4.27 (t, 2H), 3.03 (s, 3H), 2.84 (t, 2H), 2.17-2.10 (m, 2H)； LCMS (ESI) m/z [M+H]+=428(計算值=428)(MultiMode+)， HPLC保留時間=0.933 min。 (ix) 3-胺基-6-(4-(3-(3-甲氧基丙基胺基）丙基）苯基啶-3-基）-吡畊-2-甲醯胺三鹽酸鹽：在 90°C 下將步驟（viii)之產物（4.25 g，10 mmol)、K2C03 (2.76 g ’ 20 mmol)及 3-曱氧基丙基胺（1·78 g，20 mmol)存於MeCN (100 mL)中之混合物在乂氣氛下攪拌過夜。將反應混合物冷卻至室溫並過濾。在真空中濃縮濾液並藉由製備型HPLC實施純化。蒸發含有期望化合物之流分以將溶 153530.doc 201130814 劑（乙猜及水）體積自1 L減至50 ml並添加0.5 M HC1水溶液 (20 mL) °然後將所得黃色溶液凍乾’獲得三鹽酸鹽狀標題化合物（黃色固體，2.7 g)。 ]Η-ΝΜΚ(400 MHz, MeOD) δ 9.63 (d, 1H), 8.95 (d, 1H), 8.81 (s, 1H), 8.64 (d,lH), 8.12-8.09 (m, 1H), 8.10 (d, 2H), 7.42 (d, 2H), 3.51 (t, 2H), 3.34 (s, 3H), 3.13 (t, 2H), 3.05 (t, 2H), 2.78 (t, 2H), 2.10-2.00 (m, 2H), 1.98-1.90 (m, 2H)； LCMS (ESI) m/z [M+H]+=421(計算值=421)(MultiMode+), HPLC保留時間=0.815 min。實例2 3-胺基-6-(4-{3-【(3-甲氧基丙基）胺基]丙基}苯基）-N-»比啶-3 -基《Λ11 井甲醯胺

153530.doc -91 - 201130814 (i) 甲烷磺酸3-(4-溴苯基）丙酯：在〇〜5°C下向3-(4-溴苯基）丙小醇（500 g，2 3〇 m〇i)及二異丙基乙基胺（312 g，2.40 mol)存於無水二氣甲烷（4 “中之攪拌溶液中逐滴緩慢添加曱烷磺醯氣（28〇 ^，2 4〇 mol)。添加後，在〇〜5t下將反應混合物攪拌i小時。用鹽水（1 L)將反應混合物洗滌兩次。在真空中濃縮有機相，獲得副標題化合物⑴(667 g)。HPLC保留時間=1.353 min。 (ii) 3-(4-溴苯基）-N-(3-甲氧基丙基）丙-I胺：在80-90 C下將步驟⑴之產物（272 g，〇·93 mol)、K2C03 (256 g，1.86 mol)、甲氧基丙基胺（199 g，2 22 m〇1)存於 MeCN(1.5 L)中之混合物在&氣氛下攪拌16小時，將反應混合物冷卻至室溫並過濾。濃縮濾液以去除MeCN。將 MTBE (1 L)及H2〇 (1 L)加入所得混合物中並用1N_HC1水 /谷液（1 L)洗滌。收集水相並藉由2.5N-NaOH水溶液將其驗化至pH=9-10，獲得存於溶液中之副標題化合物（Η),其直接用於下一步驟。 LCMS (ESI) m/z [Μ+Η]+=286&288(計算值=286&288) (MultiMode+)，HPLC保留時間=〇.935 min。 (m)N-[3-(4-溴苯基）丙基]-N-(3-甲氧基丙基）胺基甲酸第三丁基酯：向步驟（ii)之產物（0.93 mol)存於來自最後步驟之NaOH 水溶液中之攪拌反應混合物中加入THF (1 L)並在1 (TC下將 Boc20 (222 g ’ 1.01 mol)逐滴添加至該混合物中。添加後，在10°C下將混合物攪拌1小時並用mTBE (1 Lx2)萃 153530.doc -92- 201130814 取。濃縮有機相並藉由管柱層析（？£:£〖0入〇=10:1〜5:1)實施純化，獲得300 g副標題化合物（iii)。】H NMR (400 MHz, CDC13) δ 7.38 (d, J=8.4 Hz, 2H), 7.05 (d, J=8.4 Hz, 2H) 3.35 (t, J=6.0 Hz, 2H), 3.30 (s, 3H), 3.22 (s, 4H), 2.54 (t, J=7.6 Hz, 2H)，1.76-1.84 (m，4H)，1.43 (s, 9H) 〇 LCMS (ESI) m/z [M+H]+=386&388(計算值=386&388)(MultiMode+)。 (iv) N-(3_ 甲氧基丙基）-N-{3-[4-(4,4,5,5-四甲基-1，3,2-二氧硼咪-2-基）苯基】丙基}胺基甲酸第三丁基酯：攪拌步驟（iii)之產物（230 g，0.60 mol)、雙（頻哪醇基）二硼（227 g，0.89 mol)、KOAc (175 g，1.79 mol)、PdCl2 (3.20 g，18 mmol)、PCy3(10 g，38 mmol)存於MeCN (4 L) 中之混合物並用N2脫氣3次《在80°C下將反應混合物在N2 下授拌16小時。將混合物過濾並在真空中濃縮濾液以去除 MeCN°加入MTBE (3 L)且用h2〇 (8〇〇 mLx3)洗滌有機相並濃縮’獲得油狀副標題化合物（iv)(25〇 g)，其直接用於下一步驟。1H-NMR (400 MHz, CDC13) δ 7.71 (d, J=8.0 Hz， 2H)> 7.18 (d, J=8.0 Hz, 2H), 3.35 (t, J=6.0 Hz, 2H), 3.29 (s, 3H), 3.22 (s, 4H), 2.60 (t, J=7.6 Hz, 2H), 1.75-1.88 (m, 4H)，I43 (s, 9H)，1.32。 HPLC保留時間=1 793油。 N-[3_{4-[5-胺基-6-(3-»Λ啶基胺基甲醯基畊-2-基】苯基·}丙基卜Ν-(3-曱氧基丙基）胺基甲酸第三丁基酯·· 授摔步驟（iv)之產物（25〇 g ’ 0·58 mol)、3 -胺基-6-漠-N- (比咬.3-基）n比畊_2•甲醯胺（22〇 g，〇 75爪叫、Na2C〇3 (183 153530.doc •93- 201130814

g ’ 1.73 mol)及 Pd(dppf)Cl2 (25.30 g，35 mmol)存於 DMF (3 L)中混合物並用N2脫氣3次》在70〜80°C下將混合物在n2 下攪拌24小時。將混合物過濾並在真空中濃縮濾液以去除 DMF。加入EtOAc (1.5 L)及H20 (800 mL)並在 10-25。(：下將其授拌1小時。將懸浮液過濾，在真空中濃縮有機相並藉由管柱層析（PE: EtOAc=3:l-l :3)實施純化。將粗製產物自 EtOAc-MeOH重結晶並過濾，藉由EtOA洗滌黃色固體並在減壓下乾燥。獲得副標題化合物（v)(淺黃色固體，160 g)。 LCMS (ESI) m/z [M+H]+=521(計算值=521)(MultiMode+)， HPLC保留時間=1.366 min。 (vi) 3-胺基-6-(4-(3-(3-甲氧基丙基胺基）丙基）苯基）-N-(吼咬-3-基甲酿胺：將步驟（v)之產物（300 g，0.58 mol)(存於4N-HC1中）存於 EtOAc (3L·)中之混合物攪拌3小時。將懸浮液過濾並獲得黃色固體。將固體溶於H20 (1.2 L)中。將2N-NaOH逐滴添加至該溶液中以驗化至pH=l 1。用THF與EtOAc (5 L><2, 1:1)之混合物萃取該混合物並用10%_NaChK溶液洗滌有機相並且在真空中濃縮。獲得副標題化合物（vi)(淺黃色固體，210 g)。 ]H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 10.57 (s, 1Η), 8.99 (d, J=2.4 Hz, 1H), 8.89 (s,lH), 8.35 (dd, J=1.2 Hz, J=4.8 Hz, 1H), 8.23-8.20 (m, 1H), 8.12 (d, J=8.4 Hz, 2H), 7.67 (s, 2H), 7.40 (dd, J=4.8 Hz, J=4.8 Hz, 1H), 7.28 (d, J=8.4 Hz, 153530.doc •94· ⑤ 201130814 2H)，3.33 (t，J=6.8 Hz，2H)，3.18 (s，3H)，2.62 (t，J=7.2 Hz， 2H)，2.47 (dd，J=7.2 Hz，J=14 Hz，4H)，1.73-1.65 (m，2H)， 1.62-1.56 (m，2H) 〇藉由XRPD(參見圖4)確定如上文所述製備的3_胺基_6_(4_ {3-[(3-甲氧基丙基）胺基]丙基}苯基）-；^-〇比》定_3_基。比，井_2· 甲醢胺形式B為晶體且具有以下X射線粉末繞射峰：角度 2-θ(2θ) 強度％ 3.5 100 7.0 4 9.5 2 10.4 15 12.4 3 13.8 2 14.1 8 15.9 7 17.6 9 21.0 5 亦利用10°C /min之加熱速率實施3_胺基·6_(4_{3_[(3:甲氧基丙基）胺基]丙基}苯基）如比。定_3.基吼哺_2_甲酿胺形式b 之DSC分析（圖5)，且其顯示起始點為听且峰值為6〇。匸之初始吸熱事件，隨後為起始點為urc且峰值糾代之後續相變。因此，霞分析顯示，3·胺基_6·(Μ3_[(3·甲氧基丙細基]丙基}苯基）·νκ3·基m曱㈣形式⑽ 熔融起始點為約⑴。c且峰值為約U6t之高㈣固體。實例3a 153530.doc 95- 201130814

3-胺基-6-(4·{3·[(3-甲氧基丙基）胺基]丙基}笨基）&哎啶· 3-基吡畊-2-甲醯胺單苯磺酸鹽之形式A 將500.6 mg 3-胺基_6_(4_{3_[(3_甲氧基丙基）胺基]丙基} 苯基）-N-吡啶-3-基吡啩_2_甲醯胺（如實例2中所製備）及 189.09 mg苯磺酸準確稱重至玻璃小瓶中並添加15 ιρΑ 以形成懸浮液《在室溫下將懸浮液保持振盪2天，且隨後過濾並在室溫下乾燥，獲得黃色粉末。藉由XRPD(參見圖6a)確定如上文所述所製備3_胺基-6_ (4-{3-[(3-甲氧基丙基）胺基]丙基}苯基）_Ν_π比啶_3_基^比呼_ 2-甲醯胺單苯磺酸鹽之形式a為晶體且其具有以下χ射線粉末繞射峰：角度 2-θ(2θ) 強度％ 7.5 16 8.4 100 11.0 13 14.5 9 15.7 12 18.5 8 20.2 「ό 22.0 11 22.2 10 23.0 3 亦利用10°C/min之加熱速率實施3_胺基_6·(4_{3·[(3甲氧基丙基）胺基]丙基}苯基）-Ν-。比啶-3-基《比畊-2-甲醯胺軍笨磺酸鹽形式Α之DSC分析，且其顯示起始點為89〇c且犖值 I53530.doc -96- ⑧ 201130814 為m:之初始吸熱事件，隨後為起始點為⑽且峰值為 167.0C之熔融物（圖7a)e因此，DSC分析顯示，胺基·6_ (4-{3-[(3-甲氧基丙基）胺基]丙基}苯基）_Ν_吡啶-3基吡畊_ 2- 甲醯胺單苯磺酸鹽形式Α係熔融起始點為約164。〇且峰值為約167°C之高熔融固體。實例3b

3- 胺基-6-(4-{3-[(3-甲氧基丙基）胺基】丙基}苯基）-N-咕咬_ 3-基吡畊-2-甲醢胺單苯磺酸鹽之形式C

(X? 0

3-胺基-6-溴-N-(吡啶-3-基）吡畊-2-甲醢胺之合成階段1 : 3-胺基-6-溴吡畊-2-甲酸甲醋 153530.doc •97· 201130814

NH2 NBS/MeCN .0— " O

Br <NH,

.0- O 將3·胺基。"_2_甲酸甲醋(1 kg)、N_…酿亞堪 (H kg及乙腈（8 L)加人反應器中。在室溫下將混合物指拌丨Omin，加熱至75_80t：並在略微回流條件下保持2至3 時。將混合物冷卻至25充並在旋轉蒸發器上蒸發至乾燥。將所得黑色固體再溶於二氣甲烷(20 L)·中並加入活性碳⑽ g)。在25°C下將所得懸浮液攪拌3〇至6〇分鐘，隨後過濾以去除不溶物《隨後用飽和NkSO3 (3x5L)水溶液及水（5 l) 洗滌濾液。在相分離後收集有機層。在旋轉蒸發器上去除二氣曱烷並獲得褐色固體狀3_胺基_6_溴吡畊_2•甲酸曱酯，其不進一步純化即用於下一步驟（1〇9〇g濕產物階段2 : 3-胺基-6-溴吡畊-2-甲酸

將3-胺基-6-溴吡畊-2-甲酸曱酯（1.4 Kg)、5N NaOH溶液 (5.6 L)及曱醇（8·4 L)加入反應器令。在劇烈攪拌的同時使所得懸浮液在50°C下升溫3小時》分析混合物之反應是否完成。將混合物冷卻至25°C並藉由過濾收集固體。用水（1 L)洗 153530.doc •98· ⑧ 201130814 滌濾餅。將所得固體懸浮於水（5 L)中並藉由添加6 N HC1 溶液將此懸浮液之pH值調節至3。在25<t下將酸性溶液劇烈攪拌48 h。在此期間，檢查pH值，若1?11值>3，則加入額外酸。將懸浮液過濾，收集黃褐色固體，在N2流下在爐中將其在40°C下乾燥。將粗製副標題材料用於下一步驟。階段3 : 3-胺基-6-溴-N_(吡啶_3·基）吡畊_2·甲醯胺

將3-胺基-6-溴吡畊-2-甲酸（1.07 kg)、3-胺基吡啶（46〇 g)、三乙胺（680 ml)及DMF (6.4 L)加入反應器中。將混合物冷卻至-5至0C並攪拌15 min。在氮流下，分多份緩慢添加HATU (1·8 kg)，同時將溫度維持在1〇t：以下。添加後，形成稍黃色沉澱。添加後，在2〇-25°C下將混合物授拌1 h。分析反應是否完成（3-胺基_6_漠。比_ _2-甲酸^在劇烈攪拌下添加水（13 L)。在25°C下將黃色懸浮液攪拌30 min。將懸浮液過濾並將濾餅再加入反應器中。加入水（n L)。將黃色懸浮液升溫至50°C並在此溫度下攪拌2 h。將懸浮液過濾並用水洗滌濾餅。在氮流下將濕產物（3_胺基_ 6-溴-N-(吡啶-3-基）吡啼-2-甲醯胺）在爐中於55ac下乾燥。 (1-14 Kg). !H-NMR (400 MHz, DMSO-d6) 7.39 (dd, 1H) ； 7.74 (br.s., 153530.doc •99- 201130814 2H) ; 8.18 (ddd，1H) ; 8.33 (dd，1H) ; 8.43 (s, 1H) ; 8.96 (d, 1H) ; 10.51 (s，1H)。 (3-甲氧基丙基）{3-[4-(4,4,5,5-四甲基-1，3,2-二氧硼咪-2-基）苯基】丙基}胺基甲酸第三丁基酯之合成階段1 . 3-(4-漠苯基）丙-i_醇

將硼氫化鈉（119.12 g)及THF (5 L)加入反應器1中並將溫度調節至-20°C。將3-(溴苯基）丙酸（1 kg)與THF(3 L)加入反應器2中並在25°C下攪拌直至所有固體溶解。將反應器2 中之此溶液轉移至反應器1中，使反應器1内含物維持在 <〇°C。將BFrEt20 (991.4 g)緩慢添加至反應器1中，使反應器1内含物維持在-20至-10°C。添加後，在-20至-10X：下將混合物攪拌1 h。分析反應是否完成（3-(溴苯基）丙酸 <2.5%)。將水（2 L)緩慢添加至反應器1中以淬滅反應。（氣體逸出）。將MTBE (5L)加入反應器1中並實施相分離。收集上層並用MTBE (5 L)洗滌下層。收集上層並將其與前一步驟之層合併《藉由添加IN NaOH溶液將有機層之pH值調節為8至9。用飽和NaCl溶液（2 L)洗滌有機層並收集上層。將有機層蒸發至無色油狀物。階段2:曱烷磺酸3-(4-溴苯基）丙酯 153530.doc -100- ⑤ 201130814

DCM 將3-(4-溴苯基）丙醇（335 g)及二氣曱烷（25 l)加入反應器1中。將反應器1調節為_10至0°c。將三乙胺（2〇5 加入反應器1中。將甲烷磺醯氣（272.7 g)逐滴添加至反應器1 中，使内含物維持在<〇。〇。在_5至5t下將反應器1攪拌1 h，隨後分析反應是否完成。用水（丨L)及飽和NaCi溶液（i L)洗務有機層。將有機層蒸發至乾燥’獲得曱烷磺酸3_(4_ 溴苯基）丙酯（418 g)。階段3 : 3-(4-溴苯基）·ν_(3-曱氧基丙基）丙胺

〇 K2C03, CH3CN 將曱烧磺酸3-(4-溴苯基）丙酯（418 g)及乙腈（2 L)加入反應器1中。將3-曱氧基丙基胺（305 g)及碳酸鉀（394 g)添加至反應器1中並將混合物升溫至8〇-90°C並且保持4-16 h。分析混合物是否完成（甲烷磺酸3-(4-溴苯基）丙酯<〇.5%)。將反應物冷卻至251並將懸浮液過濾以去除白色固體。在旋轉蒸發器上將濾液濃縮至乾燥。將來自旋轉蒸發器之粗製產物、MTBE (2 L)及水（1_5 L)加入反應器2中。在相分離後’收集有機層並用IN HC1 (2 L)洗滌直至pH=4-5。在相分離後’藉由2.5N NaOH溶液將水相鹼化至pH=9-l〇且 153530.doc -101 - 201130814 將所得水溶液不進一步處理即用於下一步驟。階段4 : [3-(4-溴苯基）丙基](3-甲氧基丙基）胺基甲酸第三丁基醋

將存於水（1.5 L)及THF (500 ml)中之3-(4-溴苯基）-N-(3- 甲氧基丙基）丙-1-胺（500 g)加入反應器中。在1〇。〇下將三乙胺（176.8 g)加入反應器中。在1〇。〇下將b〇c2〇 (475.5 g) 逐滴添加至反應器1中之混合物中並在〗〇〇c下將混合物攪拌1 h »分析混合物是否完成反應。用mtBE(3 X 1 L)萃取混合物。將合併的有機層徹底蒸發，獲得油狀粗製產物。藉由矽膠管柱層析進一步純化粗製產物。（石油醚：乙酸乙醋=1:0—20:1一10:1)。獲得微黃色油狀[3-(4-溴苯基）丙基](3-甲氧基丙基）胺基甲酸第三丁基酯（327.0 g)。階段 5 : (3-甲氧基丙基）{3-[4-(4,4,5,5-四曱基-1，3,2-二氧硼咮-2-基）苯基]丙基}胺基曱酸第三丁基酯

雙(頻哪酵基)二硼 gr PdCI2 or PdOAc .Cy3P

MeCN.KOAc 將[3_(4·溴苯基）丙基](3-曱氧基丙基）胺基甲酸第三丁基酯（500 g)及乙腈（4.3 L)連同雙（頻哪醇基）二硼（394.4 g)、乙酸鉀（190.5 g)、pcy3 (23.2 g)及 Pd(OAc)2 (8.7 g)—起加 153530.doc 201130814 入反應器1中。用氮將容器變壓吹掃3次。將混合物升溫至 85-90°C並保持16 h，隨後分析反應是否完成（[3-(4-溴苯基）丙基](3-甲氧基丙基）胺基甲酸第三丁基酯<0.5%)。將混合物冷卻至25 °C，過濾並將濾液濃縮以去除MeCN。加入MTBE (3 L)並用水（3x1.5 L)洗滌MTBE層。濃縮MTBE 層，獲得粗製產物。藉由矽膠管柱層析進一步純化粗製產物。（石油喊：乙酸乙酯=1:0—40:1 — 1 〇:丨）。獲知微黃色油狀（3·甲氧基丙基）{3-[4-(4,4,5,5-四甲基-1，3,2·二氧硼咮-2- 基）苯基]丙基}胺基曱酸第三丁基酯（490·0 g)。ΐΗ·ΝΜΚ (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 1.27 (s, 12H) ; !·35 (m, 9H)； 1.65 (m，2H) ; 1.74 (m，2H) ; 2.54 (t，2H) ; 3·1〇 (m, 1H); 3.15 (m，1H) ; 3.18 (s，3H) ; 3.26 (t，2H) ; 7.19 (d，2H); 7.58 (d，2H)。 3-胺基-6-(4-{3-[(3-甲氧基丙基）胺基】芮基）苯基）-N-i比啶_ 3-基吹畊-2-甲醯胺單苯磺酸鹽之合成階段1 : (3·{4-[5-胺基-6-(吡啶-3-基胺基甲醯基）吡畊_2·基] 苯基}丙基）(3-甲氧基丙基）胺基甲酸第三丁基酯

向反應器中加入3 -胺基-6-溴-N-(0比f定-3 -基）0比井-2-曱酿胺（1580 g)、（3-甲氧基丙基）{3_[4-(4,4,5,5-四曱基-1，3,2-二 153530.doc •103· 201130814 氧棚味-2-基）苯基]丙基}胺基甲酸第三丁基醋（2778@)、1- 丁醇（23.7 L)、構酸二_ N-水合物（2740 g)及水（ι·58 L)。在氮下在環境溫度（21C)下搜摔内含物。向第二反應器中補充3·(二第三丁基鱗）丙烧續酸鹽（DTBPPS)(83.04 g)、四氣飽酸鈉（45.52 g)及水（1.58 L)之溶液。將觸媒/配體溶液傾倒至反應物中；將反應物鈍化並加熱至8〇°c。在8(rc下將反應物授掉2小時。將該批料冷卻至6〇°c並添加水（22· 1 L)。在60°C下用水洗蘇内含物。藉助補充有ι_丁醇（3 L) 之珍珠岩（500 g)過濾有機層及介面❶將有機液體再加入容器中並在60eC下用水（11.1 L)洗滌。在6(TC下用1〇% w/v氣化鈉水溶液（11.2 L)洗滌有機液體。將有機液體加熱至 6〇°C並在真空下蒸餾至約1〇相對體積。將批料冷卻至⑼力並在氮下攪拌16小時。將内含物過濾並用1_丁醇（4 l><2)洗滌。排出黃色自由流動固體並在40°C下在真空爐中乾燥過仪（（3-{4-[5-胺基-6-(°比咬-3-基胺基曱醯基）η^__2·基]苯基}丙基）(3-甲氧基丙基）胺基甲酸第三丁基酯（2428 。 ]H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 1.37 (s, 9 Η) 1.62- 1.72 (m，2 Η) 1.73-1.87 (m, 2 Η) 2.59 (t，J=7.65 Hz，2 Η) 3.12-3.21 (m, 4 H) 3.19 (s, 3 H) 3.28 (t, J=6.25 Hz, 2 H) 7.31 (d，J=8.1〇 Hz，2 H) 7.42 (dd，J=8.41，4.74 Hz, 1 H) 7-62 (br. s., 2 H) 8.13 (d, J = 8.10 Hz, 2 H) 8.21 (ddd, J=8.40, 2.60, 1.40 Hz，1 H) 8.35 (dd，J=4.70, 1.40 Hz，i H) 8.90 (s，1 H) 8.98 (d，J=2.59 Hz，1 H) 10.54 (s，1 H) 階段2 : 3-胺基-6-(4-{3-[(3-曱氧基丙基）胺基]丙基}苯基）_ J53530.doc • 104· 201130814 N-吡啶-3-基吡畊_2_甲醯胺

HCl/NaOH 2·甲基THF MTBE

將（3-{4-[5-胺基_6_(吡啶_3_基胺基甲醯基）吼畊_2_基]苯基}丙基）（3_甲氧基丙基）胺基曱酸第三丁基酯（1 kg)及水（8 L)添加至反應器中，攪拌並加熱至70°C。緩慢添加36%鹽酸（606 ml)以控制氣體逸出速率。在7〇。〇下將内含物攪拌 45分鐘。藉由添加氫氧化鈉（325 調節至3_4。將内含物冷卻至50°C並添加2-甲基四氫呋喃（5 L)。隨後藉由添加48。/〇氫氧化鈉液體（170 將pH調節至pH 11-12。然後將内含物冷卻至·4〇Χ：。使批料沉澱並使兩個層分離。用2_. 曱基四氩呋喃（2.5 L)洗滌水層。用10% w/v氯化鈉水溶液洗滌合併的有機層。蒸餾有機層以去除3.75 L餾出物。將剩餘液體加熱至50°C並添加曱基-第三丁基醚（4 L)。經4小時將液體冷卻至l〇°C，隨後藉由過濾分離。用曱基_第三丁基醚（2 Lx2)洗滌固體並在真空爐中在50°C下乾燥。3-胺基-6·(4-{3-[(3 -曱氧基丙基）胺基]丙基}苯基）-N-π比咬_ 3 _其_ 吡畊-2-甲醯胺（721 g)。 NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 1.77-1.87 (m，2 H) 1.88-2.01 (m，2 Η) 2.72 (t，J=7.65 Hz，2 Η) 2.89-3.03 (m, 4 H) 3.23 (s, 3 H) 3.39 (t, J=5.98 Hz, 2 H) 7.35 (d, J=8.30 Hz, 2 H) 7.68 (br. s., 2 H) 7.68 (dd, J=8.62, 5.17 Hz, 1 H) 8.18 (d，J=8.30 Hz, 2 H) 8.41-8.52 (m, 2 H) 8.57 (br. s· 2 153530.doc -105· 201130814 Η) 8.94 (s，1 Η) 9.16 (d，J=2.15 Hz，1 Η) 10.77 (s，1 Η) 階段3 : 3-胺基-6-(4-{3-[(3-甲氧基丙基）胺基]丙基}苯基）-N-。比咬-3-基"比畊·2-曱酿胺單苯項酸鹽

向反應器中加入3-胺基-6-(4-{3-[(3-甲氧基丙基）胺基]丙基}苯基）-N-»比啶-3-基吼畊_2_曱醯胺（700 g)及乙醇（4.9 L)。將内含物加熱至60°C以獲得溶液。將苯磺酸（258 g)加入反應器中，隨後加入乙醇（2_1 L)及水（70 ml)。將内含物加熱至60°C。隨後將完成溶液冷卻至51。(：並接種3-胺基-6-(4-{3-[(3-曱氧基丙基）胺基]丙基}苯基）-]^-»比啶-3-基。比畊-2-曱醯胺單苯磺酸鹽之形式A(0.35 g，如根據實例3a所製備）。在形成結晶後，使内含物在51°C下保持2小時，然後經4小時斜坡（ramp)冷卻至40°C，在40°C下保持4小時，隨後經4小時進一步冷卻至l〇t。使内含物在10°C下保持12 小時然後過滤並用乙醇（700 mlx2)洗務。在真空爐中將固體3-胺基-6-(4-{3-[(3-甲氧基丙基）胺基]丙基}苯基）_N_ 吡啶-3-基吡畊-2-曱醯胺單苯磺酸鹽形式C在40°C下乾燥 (810 g)。 'H-NMR (700 MHz, DMSO-d6) δ ppm 1.78-1.86 (m, 2 H) 1.92 (五重岭，J=7.70 Hz，2 H) 2.70 (t，J=7.70 Hz，2 H) 2.89-2.99 (m, 4 H) 3.22 (s, 3 H) 3.37 (t, J=6.05 Hz, 2 H) 7.28-7.35 (m, 5 H) 7.47 (dd, J=8.25, 4.73 Hz, 1 H) 7.62 (br. 153530.doc -106- ⑧ 201130814 s.，2 Η) 7.62 (dd，J=7_92, 1.54 Hz，2 Η) 8·16 (d，J=8 36 Hz 2 H) 8.27 (ddd，J=8.30, 2.40, ι·30 Hz，} H) 8 34 加 $ 2 H) 8.38 (dd, J=4.70, 1.32 Hz, 1 H) 8.91 (s, 1 H) 9.0^ (d J=2.42 Hz, 1 H) 10.57 (s, 1 H) ，藉由XRPD(參見圖6b)確定直接如上文所述所製備3•胺基-6-(4-{3-[(3-甲氧基丙基）胺基]丙基}苯基）·Ν“比啶基 H2-曱酿胺單苯績酸鹽之形式c為晶體且其具有以下= 射線粉末繞射峰：角度 2-θ(2θ) 強度％ 11.2 0.9 12.6 0.3 14.7 0.6 15.5 0.7 15.8 0.7 16.8 0.8 20.4 0.7 21.1 4.3 22.5 1.8 26.5 0.3 亦利用10°C/min之加熱速率實施3_胺基·6_(4·{3_[(3•曱氧基丙基）胺基]丙基}苯基）-Ν-"比啶-3-基吨畊-2-甲醯胺單苯磺酸鹽形式C之DSC分析，且其顯示起始點為98充且峰值為99°C之固-固轉變，隨後為起始點為i6yc且峰值為 170°C之後續相變（圖7b)。因此，DSC分析顯示，3_胺基-卜 (4-{3-[(3-曱氧基丙基）胺基]丙基}苯基）·Ν_β比啶^―基。比畊· 153530.doc •107- 201130814 2- 甲醯胺單苯磺酸鹽形式C係熔融起始點為約165°C且峰值為約170°C之高熔融固體》實例4.1至4.4 3- 胺基-6-(4-{3-[(3-甲氧基丙基）胺基】丙基}苯基比咬-3-基"比畊-2-甲酿胺之特定鹽實例4.1 3-胺基-6-(4·{3-[(3-曱氧基丙基）胺基]丙基}苯基比咬· 3-基《•比畊-2-甲醢胺單甲苯磺酸鹽實例4.2 3-胺基-6·(4-{3-[(3-曱氧基丙基）胺基]丙基}苯基）_n-。比啶_ 3-基吡畊-2-曱醯胺二乙磺酸鹽實例4.3 3-胺基-6-(4-{3-[(3-曱氧基丙基）胺基]丙基}苯基比啶_ 3-基η比畊-2-甲酿胺單-DL-扁桃酸鹽實例4.4 3-胺基-6-(4-{3-[(3-曱氧基丙基）胺基]丙基}苯基）·Ν_„比啶_ 3-基。比畊甲醢胺單苯甲酸鹽單苯甲酸鹽形式A、單-DL·扁桃酸鹽形式Α及單甲苯磺酸鹽形式A鹽係藉由使大約500 mg 3-胺基-6-(4-{3-[(3-甲氧基丙基）胺基]丙基}苯基比咬-3-基11比畊-2-曱醢胺形式B與存於1〇 mL IPA中之1莫耳當量適當抗衡離子反應來製備。在室溫下實施該反應並將混合物攪拌5天，隨後藉由過遽分離。一乙磺酸鹽形式A係藉由使大約500 mg 3_胺基 153530.doc .108· 201130814 [(3-甲氧基丙基）胺基]丙基}苯基）·Ν_η比啶_3基d比畊_2_曱醯胺形式B與存於10 mL IPA中之2莫耳當量抗衡離子反應來製備。在室溫下實施該反應並將混合物攪拌5天，隨後藉由過遽分離。藉由XRPD(參見圖8)確定3_胺基_6·(4 {3 [(3_曱氧基丙基）胺基]丙基}苯基）-Ν-吡啶-3-基吡畊_2_曱醯胺單甲苯磺酸鹽形式Α為晶體且具有以下又射線粉末繞射峰：角度 2-θ(2β) 強度％ 8.0 100 11.7 19 14.8 24 20.0 10 20.9 10 21.5 12 22.2 27 23.0 53 27.5 13 28.0 11 亦利用10°C /min之加熱速率實施3_胺基_6_(4-{3·[(3_甲基丙基）胺基]丙基}苯基）·ΝΚ3·基。比啡_2_甲酿胺單甲苯％酸鹽形式Α之DSC分析（圖9)，且其顯示起始點 168 C且峰值為171。(：之熔融物。因此，DSC分析顯示夂‘、、' 基-6-(4-{3-[(3-甲氧基丙基）胺基]丙基}苯基）_Ν_η比啶· 吡畊-2-甲醯胺單曱苯磺酸鹽形式a係熔融起始點為約 153530.doc -109* 201130814 168°C且峰值為約17TC之高熔融固體。藉由XRPD(參見圖1〇)確定3-胺基-6-(4-{3-[(3-甲氧基丙基）胺基]丙基}苯基）-N-°比啶-3-基"比畊-2-甲醯胺二乙磺酸鹽形式A為晶體且具有以下X射線粉末繞射峰：角度 2-θ(2θ) 強度％ 5.2 100 10.4 9 12.7 32 15.0 7 16.9 15 17.3 13 19.1 21 19.6 11 20.0 5 23.5 15 亦利用10°C/min之加熱速率實施3-胺基-6-(4-{3-[(3-曱氧基丙基）胺基]丙基}苯基）-Ν-πϋ咬-3-基"比井-2-甲酿胺二乙確酸鹽形式A之DSC分析（圖11)，且其顯示起始點為179°C 且峰值為181C之溶融物。因此’ DSC分析顯示3-胺基-6-(4-{3-[(3-曱氧基丙基）胺基]丙基}苯基比咬_3·基〇比(》井_ 2-甲酿胺二乙續酸鹽形式Α係熔融起始點為約179。匸且峰值為約181°C之高熔融固體。藉由XRPD(參見圖12)確定3-胺基-6-(4-{3·[(3-甲氧基丙基）胺基]丙基}苯基）-Ν-吼咬-3-基》比呼_2_甲酿胺單扁 -110- 153530.doc ⑤ 201130814 桃酸鹽形式A為晶體且具有以下χ射線粉末繞射峰. 角度2_θ (2Θ) 強度％ 2.7 84 5.2 39 7.8 74 9.6 50 10.5 100 12.3 13 13.1 41 15.7 20 18.4 51 2.7 84 亦利用10°C/min之加熱速率實施3-胺基·6·(4·{3_[(3_曱氧基丙基）胺基]丙基}苯基）-Ν-«比啶-3-基吧畊·2_曱醯胺單-DL·扁桃酸鹽形式Α之DSC分析（圖13)，且其顯示認為與起始點為約140。(：且峰值為約144°C之熔融物對應的初始吸熱事件。此後為起始點為約146°C且峰值為約149«»c之放熱（重結晶）事件’隨後為起始點為約153。〇且峰值約156。〇之最終熔融事件。因此，DSC分析顯示，3_胺基_6·(4_{3· [(3 -曱氧基丙基）胺基]丙基}苯基比咬_3_基〇比_ ·2_曱醯單-DL-扁桃酸鹽形式a經歷溶融-重結晶-溶融轉變順序，其中初始熔融起始點為約140。〇且峰值為約144〇c ^藉由XRPD(參見圖14)確定3-胺基-6·(4-{3-[(3 -甲氧基丙基）胺基]丙基}苯基）-Ν-吡啶-3-基吡井-2-曱醯胺單苯曱酸鹽形式 153530.doc 201130814 A為晶體且具有以下χ射線粉末繞射峰角度2-β (2β) -- 1 On 5.3 6.2 9.2 9.8 11.9 —__J4_ 16.6 17.8 18.1 _______56 19.5 20 24.6 39 亦利用10°C/min之加熱速率實施3_胺基·6_(4_{3七％曱氧基丙基）胺基]丙基}苯基）-N-^b啶_3_基„比畊·2_甲醯胺單笨甲酸鹽形式A之DSC分析（圖15)，且其顯示起始點為14Γ(：且峰值為143t：之熔融物》因此，DSC分析顯示％胺基_6_ (4-{3-[(3 -甲氧基丙基）胺基]丙基}苯基 2- 甲醯胺單苯曱酸鹽形式a係熔融起始點為約i4rc且峰值為約143°C之高熔融固體。實例5 3- 胺基-6-(4-{3-[(2-甲氧基乙基）胺基】丙基}苯基卜&咕咬-3-基吡哜-2-甲醯胺三鹽酸鹽

HNP 3HCI 153530.doc •112 201130814 使用與彼等在實例丨中所述者類似之方法製備標題化人物，只是使用2-甲氧基乙基胺替代步驟（ix)中之3_甲氧基丙基胺。 !H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 9.65 (s, 1Η), 8.96 (d, J=8.0 Hz, 1H), 8.83 (s, 1H), 8.64 (d5 J=5.6 Hz, 1H), 8.12 (m, 3H) 7.42 (d，J=7.6 Hz’ 2H)，3.66(m，2H)，3.48 (s，3H)，3.23 (m 2H), 3.10 (m, 2H), 2.82 (m, 2H), 2.11 (m, 2H) 〇 ’ LCMS ·保留時間=〇 761 min。實例6 3-胺基-6-(4-{2-[(3-甲氧基丙基）胺基】乙基}笨基）N 比啶· 3-基吡畊_2-甲醯胺

根據以下程序製備標題化合物： (i)(4-溴苯基乙氧基）（第三丁基）二甲基矽烷向2-(4-/臭苯基）乙醇（5 g，25 mm〇1)存於無水二氣曱烷 (150 mL)中之溶液中依序添加三乙胺（75 g，75 DMAP (300 mg，2.5 mm〇1)及第三丁基二甲基曱矽烷基氣 (7·5 g 5〇 mmol) »將所得淺褐色溶液在室溫下攪拌過夜。用二氯曱烷及水將反應混合物萃取3次。將合併的有機層經無水硫酸鈉乾燥，過濾並在真空中濃縮。利用爾為洗脫液對粗製產物實施f柱層析，獲得褐色油狀副標題 153530.doc •113· 201130814 化合物（7.1 g)。 'H NMR (400 MHz, CDC13) δ 7.41 (dd, J=6.4, 2.0 Hz, 2H), 7.10 (dd, J=6.4, 2.0 Hz, 2H), 3.80 (t, J=6.8 Hz, 2H), 2.79 (t, J=6.8 Hz，2H), 0.88 (s，9H)，0.00 (s, 6H)。 (ii) 3-胺基-6-(4-(2-(第三丁基二甲基甲矽烷基氧基）乙基）苯基啶-3-基）《*畊-2-甲醯胺將步驟⑴之產物（6.9 g，27.1 mmol)、KOAc (6.6 g， 67·8 mmol)、Pd(dppf)Cl2 (0.82 g，1·13 mmol)存於二噁烷 (150 mL)中之混合物用N2脫氣並回填3次。在90°C下將混合物在A下攪拌過夜。將反應混合物冷卻至室溫並將實例 1 中步驟（v)之產物（6.6 g，22.6 mmol)、Pd(dppf)Cl2 (0.5 g，0.7 mmol)、水（50 mL)及 Na2C03 (7.2 g，67·8 mmol)添加至該混合物中。將所得溶液用N2脫氣3次且在90°C下在 A下再攪拌7小時。用二氣甲烷將反應混合物萃取3次且將合併的有機層經無硫酸鈉乾燥，過濾並在真空中濃縮。藉由管柱利用PE:EtOAc=5:l—3:1作為洗脫液純化殘餘物，獲付黃色固體狀副標題化合物（4.1 g)。 ]H NMR (400 MHz, CDC13) δ 9.95 (s, 1H), 8.79 (d, J=2.4 Hz，1H)，8.68 (s，1 H)，8.41 (d，J=2.4 Hz，1H)，8.25 (d， J=8.2 Hz，1H)，7.80 (d，J=8.0 Hz，2H)，7.39-7.30 (m，3H)， 3.84 (t，J=6.8 Hz，2H)，2.88 (t，J=6.8 Hz，2H)，0.87 (s，9H)， 0.00 (s，6H)。 (iii) 3-胺基-6-(4-(2-羥基乙基）苯基）-N-(吡啶-3_基）吡畊_ 2-甲醯胺 153530.doc •114· 201130814 在室溫下將步驟（ii)之產物（4.1 g，9.13 mmol)及四丁基氟化銨（4.8 g，18.3 mmol)存於THF (150 mL)中之溶液授掉過夜。在真空中濃縮混合物且用二氣甲烷萃取殘餘物並用水洗滌。將合併的有機層經無水硫酸鈉乾燥，過濾並在真空中濃縮，獲得副標題化合物（2.5 gj。 LCMS保留時間=0.801 min (iv) 甲烷磺酸4-(5-胺基-6·(吡啶-3-基胺基甲醯基）吡畊_2_ 基）苯乙基酯向步驟（iii)之產物（2.5 g，7.5 mmol，1.0 當量）及 TEA (2.3 g，22.5 mmol)存於無水二氯甲烷中之溶液中添加MsC1 (1.7 g，15 mmol)。在室溫下將反應混合物攪拌4小時。在減壓下去除溶劑並藉由官柱純化殘餘物，獲得副標題化合物（1.9 g)。 !H NMR (400 MHz, CDC13) δ 9.87 (s, 1 Η), 8.76 (s, 1Η), 8.64 (s, 1H), 8.36 (d, J=4.0 Hz, 1H), 8.24 (d, J=8.4 Hz, 1H), 7.80 (d, J=8.0 Hz, 2H), 7.38-7.24 (m, 3H), 4.42 (t, J=6.8 Hz，2H ), 3.08 (t, J=6.8 Hz, 2H), 2.87 (s，3H) » (v) 3-胺基-6-(4-{2-[(3-甲氧基丙基）胺基]乙基}苯基）_N_ *比咬·3·基0tb啡-2-甲酿胺在 90°C 下將步驟（iv)之產物（250 mg，0.61 mmol)、K2C03 (250 mg，1.8 mmol)、3-曱氧基丙基胺（82 mg，0.92 mm〇1) 存於MeCN(20 mL，Aldrich，HPLC級）中之混合物在N2氣氛下攪拌過夜。將反應混合物冷卻至室溫並過濾。在真空中濃縮濾液並對殘餘物實施製備型_HPLC以進行純化，濃縮 153530.doc -115· 201130814 洗脫液並將IN NaOH溶液添加至殘餘物中以控制pH=8~9。用DCM將混合物萃取3次。將合併的萃取物經無水硫酸鈉乾燥，過濾，在真空中濃縮，獲得標題化合物（黃色固體，158 mg) !H NMR (400 MHz, CDC13) δ 9.89 (s, 1H), 8.74 (d, J=2.4 Hz，1H)，8.63 (s，1H)，8.35 (d，J=4.4 Hz，1H)，8.23 (d， J=8.4 Hz, 1H), 7.76 (d, J=8.4 Hz, 2H), 7.40-7.27 (m, 3H), 3.37 (t, J=6.2 Hz, 2H), 3.23 (s, 3H), 2.90-2.77 (m, 4H), 2.69 (t，J=7.0 Hz，2H)，1.76-1.62 (m，2H)。 LCMS :保留時間=0.741 min。實例7 3-胺基-6-(4-{2-【(2-甲氧基乙基）胺基】乙基}苯基）_N-他啶-3-基吡畊-2-甲醯胺三鹽酸鹽

HNP ^n^nh2 Η

3HCI 3-胺基-6_(4-{2-[(2-甲氧基乙基）胺基]乙基}苯基）·Ν-啦。定-3-基吼啡-2-甲醯胺係使用與彼等在實例6所述者類似之程序來製備，只是使用2-曱氧基乙基胺替代步驟（ν)中之3_ 曱氧基丙基胺。將MeCN添加至3-胺基- 6-(4-{2-[(2 -甲氧基乙基）胺基]乙基}苯基）-Ν-»比啶-3-基吡畊-2-甲醯胺中且亦添加0.5 M HC1水溶液（20 mL)。隨後將所得黃色溶液凍乾’獲得三鹽酸鹽狀標題化合物。 153530.doc 201130814 !H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 9.66 (s, 1H), 8.98 (d, J=8.8 Hz, 1H), 8.85 (s, 1H), 8.65 (d, J=5.6 Hz, 1H), 8.17-8.12 (m, 3H), 7.48 (d, J=8.4 Hz, 2H), 3.70 (t, J=4.8 Hz, 2H), 3.44 (s, 3H)，3.35-3.28 (m，4H), 3.13-3.08 (m，2H)。 LCMS :保留時間=〇·72〇 min。【圖式簡單說明】圖1A係展示自人類脂肪獲得之幹細胞在24天培養後相對於媒劑因應300 nM 3-胺基-6-(4-{3-[(3-甲氧基丙基）胺基] 丙基}苯基）-N-吡啶-3-基吡畊-2-曱醯胺三鹽酸鹽之礦化骨小結之茜素紅S染色的照片。以三重複方式進行實驗。圖1B係300 nM 3·胺基-6-(4-{3-[(3-曱氧基丙基）胺基]丙基}苯基比啶-3-基吡哨· -2-曱醯胺三鹽酸鹽對骨礦化之效應’使用氣化十六烷基吡啶鏽提取法定量茜素紅S染色度。以550 nm下之平均吸光率顯示數據並依次使用單因素 ANOVA及Tukey氏多重比較事後檢驗來分析：n=9 ; ***， P<0.00 卜圖2係在經口給予大鼠3-胺基·6-(4-{3-[(3_曱氧基丙基）胺基]丙基}苯基）-Ν-吡啶-3-基吡畊-2-甲醯胺三鹽酸鹽7天後之血凊Ρ1ΝΡ含夏（結果以平均值±sein表示且當在化合物處理與媒劑對照組之間觀察到統計顯著差異時， *P<0_05 )。圖3係在經口給予大鼠3_胺基_6_(4_{3_[(3·甲氧基丙基）胺基]丙基}苯基）-N-吼啶-3-基吡畊_2-甲醯胺三鹽酸鹽7天後之血清TRAcP-5b含量（結果以平均值土sem表示且當在化 153530.doc •117- 201130814 合物處理與媒劑對照組之間觀察到統計顯著差異時， *Ρ<0·05或 **P<0.01 ) ° 圖4係3-胺基-6-(4-{3-[(3-曱氧基丙基）胺基]丙基}苯基）·Ν-吡啶-3-基吡畊-2-甲醯胺之形式B之X射線粉末繞射圖案。圖5係3·胺基-6-(4-{3-[(3-甲氧基丙基）胺基]丙基}苯基）-Ν-吡啶-3-基吡畊-2-甲醯胺之形式Β之DSC熱譜圖圖6a係3-胺基_6-(4-{3-[(3·甲氧基丙基）胺基]丙基}苯基）-N-吡啶-3-基吡畊-2-甲醯胺單苯磺酸鹽之形式A之X射線粉末繞射圖案。圖6b係3-胺基·6-(4-{3-[(3·曱氧基丙基）胺基]丙基}笨基）-Ν-吡啶-3-基吡畊-2-甲醯胺單苯磺酸鹽之形式c之X射線粉末繞射圖案。圖7a係3-胺基·6_(4_{3_[(3-曱氧基丙基）胺基]丙基}苯基）-Ν-»比啶-3_基吡畊-2-甲醯胺之形式Α之DSC熱譜圖。圖7b係3-胺基_6_(4_{3_[(3_甲氧基丙基）胺基]丙基}苯基）-Ν-»比啶-3-基吡畊_2_甲醯胺之形式C之DSC熱譜圖。圖8係3-胺基_6·(4_{3_[(3_甲氧基丙基）胺基]丙基}苯基）-Ν-«比咬-3-基吡畊_2·曱醢胺單曱苯磺酸鹽之形式a之χ 射線粉末繞射圖案。圖9係3~胺基-6·(4-{3·[(3-曱氧基丙基）胺基]丙基}苯基）-Ν-"比嘴-3-基。比畊_2_甲醯胺單曱苯磺酸鹽之形式a之 DSC熱譜圖。圖10係3-胺基_6_(4_{3_[(3_甲氧基丙基）胺基]丙基}苯 153530.doc ⑧ -118- 201130814 基）-N-吡啶-3-基吡畊_2-甲醯胺線粉末繞射圖案》二乙磺酸鹽之形式A之X射圖 11 係 3-胺基-6-(4-{3-fn 田 & ^ ^ _甲虱基丙基）胺基]丙基}苯基）-N-吡啶-3-基咣畊_2_曱醯

收一乙4、酸鹽之形式A之DSC 熱譜圖。圖12係3-胺基-6-(4-{3_『a田* K ·曱乳基丙基）胺基]丙基}苯基）-N-口比0定-3-基0比p井_2_甲酼吐^ 胺早-DL-扁桃酸鹽之形式a之 X射線粉末繞射圖案。 •甲氧基丙基）胺基]丙基}苯胺單-DL-扁桃酸鹽之形式a之圖 13 係 3 -胺基基）-N-0比咬-3-基0比》井-2-甲酿 DSC熱譜圖。圖14係3·胺基_6-(4-{3-[(3-甲氧基丙基）胺基]丙基}苯基）N比啶-3-基吡畊-2-甲醯胺單苯甲酸鹽之形式a之X射線粉末繞射圖案。

圖15係3-胺基-6-(4·{3-[(3-甲氧基丙基）胺基]丙基}苯基）-Ν-吡啶-3-基吡畊-2-甲醯胺單_苯甲酸鹽之形式Α之DSC 熱譜圖。 153530.doc 119-

Claims

201130814 七、申請專利範圍： 1. 一種式I化合物， FT .0

其中： η係2或3 ; m係2或3 ; R係曱基或乙基；或其醫藥上可接受之鹽。 2. 如請求項1之化合物，其係3-胺基-6-(4-{3-[(3-曱氧基丙基）胺基]丙基}苯基）-N-。比啶-3-基吼畊-2-甲醯胺；或其醫藥上可接受之鹽。 3. 如請求項1之式I化合物，其係3-胺基-6-(4-{3-[(3-曱氧基丙基）胺基]丙基}苯基）-N-"比啶-3-基吼畊-2-甲醯胺三鹽酸鹽。 4. 如請求項1之式I化合物，其係3-胺基-6-(4-{3-[(3-曱氧基丙基）胺基]丙基}苯基）-Ν-η比啶-3-基吼畊-2-甲醯胺單苯確酸鹽。 5. 如請求項1之式I化合物，其係3-胺基-6-(4-{3-[(3-曱氧基丙基）胺基]丙基}苯基）-Ν-η比啶-3-基吼畊-2-曱醯胺單甲苯績酸鹽。 6. 一種醫藥組合物，其包含如請求項1至5中任一項之式I化 153530.doc 201130814 合物或其醫藥上可接受之鹽以及醫藥上可接受之稀釋劑或載劑。 7.如請求項1至5中任一項之式I化合物或其醫藥上可接受之鹽’其用於療法。 8· 一種如請求項1至5中任一項之式I化合物或其醫藥上可接艾之鹽的用途，其用於製造用以治療或預防諸如人等溫血動物之對GSK-3酶之抑制敏感之骨相關性病症或病況的藥劑。 9.如請求項1至5中任一項之式〗之吡畊衍生物或其醫藥上可接受之鹽’其用於預防或治療諸如人等溫血動物之對 GSK-3酶之抑制敏感的骨相關性病症或病況。 1〇· 一種用於治療或預防患有骨相關性病症或病況之諸如人等溫血動物的方法，該骨相關性病症或病況對GSK-3酶之抑制敏感，該方法包含向該動物投與有效量的如請求項1至5中任一項之式I化合物或其醫藥上可接受之鹽。 11. 7種如請求項1至5中任一項之式〗化合物或其醫藥上可接受之鹽的用途，其用於製造用以促進諸如人等溫血動物之骨形成的藥劑。 12. 如叫求項1至5中任一項之式j之吡畊衍生物或其醫藥上可接又之鹽，其用於促進諸如人等溫血動物之骨形成。種用於促進諸如人等溫血動物之骨形成的方法，其包含向該動物投與有效量的如請求項丨至5中任一項之式以匕合物或其醫藥上可接受之鹽。 14·種如明求項】至5中任一項之式丁化合物或其醫藥上可接 153530.doc 201130814 又凰的用途，其用於製造用以治療諸如人等溫血動物之乂下病况的藥劑：諸如乳癌、前列腺癌及肺癌、多發性骨趙瘤、骨肉瘤、尤因氏肉瘤（Ewing，s sarc〇ma)、軟月肉瘤脊索瘤、骨惡性纖維組織細胞瘤、骨纖維肉瘤等癌症中之骨損害、癌症誘導之骨疾病、醫源性骨疾病、良性骨疾病及佩吉特氏病（Paget、disease)。 15.如請求項丨至5中任一項之式〗化合物或其醫藥上可接受之孤八用於療諸如人等溫血動物之以下病況：諸如乳癌、前列腺癌及肺癌、多發性骨髓瘤、骨肉瘤、尤因氏肉瘤、軟骨肉瘤、脊索瘤、骨惡性纖維組織細胞瘤、骨纖.准肉瘤等癌症中之骨損害、癌症誘導之骨疾病、醫源性骨疾病、良性骨疾病及佩吉特氏病。 16_種用於治療諸如人等溫血動物之以下病況的方法：諸如乳癌、前列腺癌及肺癌、多發性骨髓瘤、骨肉瘤、尤因氏肉瘤、軟骨肉瘤、脊索瘤、骨惡性纖維組織細胞瘤、骨纖維肉瘤等癌症中之骨損害、癌症誘導之骨疾病、醫源性骨疾病、良性骨疾病及佩吉特氏病，該方法包含向該動物投與有效量的如請求項丨至5中任一項之式工化合物或其醫藥上可接受之鹽。 17. 如請求項14或15之用途，其中該癌症係多發性骨髓瘤。 18. 如凊求項16之方法，其中該癌症係多發性骨髓瘤。 153530.doc