TW201000129A

TW201000129A - Interleukin-21 receptor binding proteins

Info

Publication number: TW201000129A
Application number: TW098117296A
Authority: TW
Inventors: Laird Bloom; Davinder Gill; Yulia Vugmeyster; Deborah A Young; David Lowe; Viia Valge-Archer
Original assignee: Wyeth Corp; Medimmune Ltd
Priority date: 2008-05-23
Filing date: 2009-05-25
Publication date: 2010-01-01
Also published as: PE20100141A1; MY149448A; IL209328A0; EP2297199A1; CL2009001284A1; CA2724915A1; SA109300315B1; KR20110040773A; AU2009248809A1; JP2011523849A; US20120264919A1; MX2010012811A; RU2010152690A; ZA201008335B; CN102105491A; US20090298167A1; US8163884B2; AR071885A1; NZ589330A; WO2009143523A1

Description

201000129 六、發明說明：【發明所屬之技術領域】相關申請案本申請案請求2008年5月23曰提申之美國臨時專利申請案案號61/055,500的優先權，其之全部内容被併入本文中以作為參考資料。發明領域本發明係有關結合介白素-21受體(U1R)，特別地，人類IL-21R，的結合蛋白質和其等之抗原結合片段，以及其等於調節IL-21R-相關的活性之用途。本文中揭示的結合蛋白質係可用於治療及/或診斷IL-21R-相關的障礙，例如：發炎障礙、自體免疫障礙、過敏、移植排斥、血液過度增生性障礙，以及其他的免疫系統障礙。 C 先前 3 發明背景

φ 抗原可引發免疫反應並活化兩個最大淋巴細胞群體：T 細胞及B細胞。接觸抗原後，T細胞增殖並分化成效應細胞，而B細胞增殖且分化成抗體分泌漿細胞。此等效應細胞可分泌細胞素及/或對細胞素有反應，該等細胞素為由淋巴細胞及其它細胞類型所分泌之小蛋白質（小於約3 〇kDa)。人類IL-21是一種細胞素（Cyt〇kine)，其與il-2、IL-4與 IL-5 有序列同源性（Parrish-Novak 等人，（2000) 408:57-63)。儘管在介白素細胞素之間僅具有低序列同源性’這些細胞素都擁有“四-螺旋-束”之共同折疊結構，此為 3 201000129 此家族之特徵。大部份的細胞素會與第I類或第II類細胞素受體結合。第II類細胞素受體包含IL-10之受體與干擾素，而第I類細胞素受體則包含IL-2至IL-7、IL-9、IL- U、IL-12、 IL-13與IL-15之受體，以及造血生長因子、瘦體素（leptin) 與生長激素（Cosman (1993) 5:95-106)。人類IL-21受體（IL-21R)為第I類細胞素受體。編碼人類 IL-21與其受體(IL-21R)之核苷酸與胺基酸序列係描述於國際申請案公開號WO 00/53761與WO 01/85792 ; Parrish-Novak 等人，（2000)，如前所述；與Ozaki 等人， (2000) U.S.A. 97: 11439-44。IL-21R與 IL-2受體β鏈以及IL-4受體α鏈具有最高之序列同源性 (Ozaki等人，（2000)，如前所述）。基於配體結合，IL-21R 會與IL-2、IL-3、IL-4、IL-7、IL-9、IL-13與IL-15之受體複合物所共有的共同細胞素受體γ鏈(γε)結合(Ozaki等人， (2000)，如前所述 Asao 等人，（2001)/. TVwmMwo/. 167:1-5)。 IL-21R表現於淋巴組織，尤其是T細胞、B細胞、自然殺手（NK)細胞、樹狀細胞(；DC)以及巨嗟細胞（Parrish-Novak 等人，（2000)如前所述），其允許此等細胞對IL-21反應 (Leonard與Spolski (2005) iVai· /wwwwo/· 5:688-98)。 IL-21R之廣泛性淋巴分布表示IL-21在免疫調節中扮演重要角色。活體外試驗已顯示出IL-21可明顯調節B細胞、CD4+ 與CD8+T細胞’以及NK細胞的功能（Parrish-Novak等人， (2000)，如前所述；Kasaian 等人，（2002) /wwwm’ij. 16: 559-69)。最近的證據暗示IL-21媒介的訊息傳導能具有抗腫 201000129 瘤活性（Sivakumar 等人，(2004) Immunology 112:177-82)，以及IL-21能預防小鼠體内之抗原誘發性氣喘 (Shang 等人，（2006) Ce//· /mmwwo/· 241:66-74)。於自體免疫性中，IL-21基因的破裂以及重組型IL-21的投入已經分別地顯示出調控實驗性自體免疫重症肌無力症 (EAMG)與實驗性自體免疫腦脊髓炎(EAE)之進展(King等人，（2004) Cell 117:265-77 ; Ozaki 等人，（2004) «/· 173:5361-71 ; Vollmer 等人，（2QQ5) J. Immunol. 174:2696-2701 ; Liu 等人，（2006) J. Immunol. 176:5247-54)。於此等實驗性的系統中，已經暗示操作IL-21 媒介的訊息傳導會直接地改變CD8+細胞、B細胞、T輔助細胞，以及NK細胞的功能。【發明内容3 發明概要本發明係說明結合蛋白質，舉例而言，人類抗體及其等之片段’的單離與特徵化，其係專一地結合至人類與鼠類 IL-21R。本文中揭示的結合蛋白質係衍生自抗體18A5，其係揭示於美國專利號碼7,495,085之中，其之全部内容被併入本文中以作為參考資料。本發明的結合蛋白質具有比親代18A5抗體大得多的對於人類及/或鼠科IL-21R之親和力。本發明至少部份提供可結合至IL-21R，特別為人類 IL-21R，之具有高親和力及專一性之IL-21R結合劑（例如，結合蛋白質以及其等之抗原結合片段）。本發明的該等結合 5 201000129 蛋白質及其抗原結合片段在文中亦分別稱為“抗JL_21R結合蛋白質’及其之片段，，。在一具體例中，該結合蛋白質或其片段可減少、抑制或拮抗IL_21R活性。此等抗體可藉拮抗IL-21R活性而用以調節免疫反應或IL_21R相關的障礙。在其它具體例中，可診斷性地使用該抗IL_21R結合蛋白質或該抗IL - 21R抗體可作為標靶結合蛋白質以將治療或細胞毒殺劑遞送至IL-21R表現細胞。因而，本發明的抗IL_21R 結合蛋白質適用於診斷與治療IL_21R_相關的障礙，例如：發k·障礙、自體免疫障礙、過敏、移植排斥、過度增生性障礙，以及其他的免疫系統障礙。於是，於本發明的一個態樣中，結合蛋白質係以一種結合IL-21R(特別地，人類IL_21R)之經單離的結合蛋白質 (例如，一種經單離的抗體）或其抗原結合片段為特徵。於某些具體例中，抗IL-21R結合蛋白質（例如，抗體）可具有以下特徵的一或多個：（1)其係一單株或單—專一性結合蛋白質；（2)其係一人類結合蛋白質；（3)其係一活體外產生的結合蛋白質；（4)其係一活體内產生的（舉例而言，一基因轉残的小鼠系統）結合蛋白質；（5)其抑制IL-21結合至 IL-21R; (6)其係一 igGl ; (7)其以至少大約 ιο5]^·、-1的

結合常數與人類IL-21R結合；（8)其以至少大約5χΐ〇4 的結合常數與鼠類IL-21R結合；（9)其以大約ι〇、-ι或更小的解離常數與人類IL-21R結合；（10)其以大約1 〇_2s-i或更小的解離常數與鼠類IL-21R結合；（11)其係在大約1.75 nM或較低之IC5G下抑制人類il-2 1R-媒介的表現人類il-21R 201000129

BaF3細胞之增殖；（12)其係在大約0·5ηΜ或較低之1(：50下抑制鼠類IL-21R-媒介的表現鼠類IL_21R BaF3細胞之增殖；（13)其係在大約14.〇nM或較低之IC5G下抑制人類 IL_21R-媒介的表現人類IL-21RTF1細胞之增殖；（14)其係在大約1 ·9 nM或較低之1(：5()下抑制IL_2丨_媒介的人類原代b 細胞之增殖；（15)其係在大約ι·5ηΜ或較低之IC5G下抑制 IL-21-媒介的人類原代cd4+ T細胞之增殖；以及（16)其係在大約5.0 nM或較低之IC5〇下抑制IL_2丨_媒介的鼠類原代 CD4+T細胞之增殖。本發明的結合蛋白質(術語“結合蛋白質，，當適當時也包括且稱為其之抗原結合片段）之非限制性例示性具體例在文中稱為AbA-AbZ，以及此等術語與美國臨時專利申請案案號61/055,500中使用的術語之相關性係於表2A中提出。本發明的結合蛋白質之其他的例示性具體例，亦即， scFv ’係如於表2B中詳述的在文中稱為H3H6、U_L6、 L8-L21，以及L23-L25。本發明的一個具體例是一種結合IL_2 ir之經單離的結合蛋白質或其抗原結合片段’其中該結合蛋白質或其抗原結合片段包含至少一個胺基酸序列，該胺基酸序列係與一選自於以下所構成的群組之胺基酸序列有至少大約95%同一性：序列辨識編號：14、16、18、20、22、24、26、28、 30、32、34、36、38、40、42、44、46、48、50、52、54、 56、58、60、62、64、66、68、70、72、74、76 ' 78、80、 82、84、86、88、90 ' 92、94、96、98、1〇〇、1〇2、104、 7 201000129 106、108、110、112、114、116、118、120、122、124、 126 、 128 、 130 、 132 、 134 、 136 、 138 、 140 、 142 、 144 、 146、148、150、152、154、156、158、160、162、165-168、 171-193、213-229、240、242、244、246，以及248。該經單離的結合蛋白質或抗原結合片段，舉例而言，可以是一抗體、一scFv、一VH、一Vl，或是一CDR。本發明的另一個具體例是一種結合IL-21R之經單離的結合蛋白質或其抗原結合片段，其中該結合蛋白質或其抗原結合片段包含至少一個胺基酸序列，該胺基酸序列係由與選自於以下所構成的群組之核苷酸序列有至少大約95% 同一性的核苷酸序列所編碼：序列辨識編號：13、15、17、 19、21、23、25、27、29、31、33、35、37、39、41、43、 45、47、49、51、53、55、57、59、61、63、65、67、69、 71、73、75、77、79、81、83、85、87、89、91、93、95、 97、99、101、103、105、107、109、111、113、115、117、 119 、 121 、 123 、 125 、 127 、 129 、 131 、 133 、 135 、 137 、 139 、 141 、 143 、 145 、 147 、 149 、 151 、 153 、 155 、 157 、 159、161、239、241、243、245，以及247。本發明的一個另外的具體例是一種經單離的結合蛋白質或其抗原結合片段，其係包含選自於以下所構成的群組之至少一個胺基酸序列：序列辨識編號：14、16、18、20、 22、24、26、28、30、32、34、36、38、40、42、44、46、 48、50、52、54、56、58、60、62、64、66、68、70、72、 74、76、78、80、82、84、86、88、90、92、94、96、98、 8 201000129 100、102、104、106、108、110、112、114、116、118、 120 、 122 、 124 、 126 、 128 、 130 、 132 、 134 、 136 、 138 、 140、142、144、146、148、150、152、154、156、158、 160、162、165-168、171-193、213-229、240、242、244、 246，以及248。

本發明的又另一個具體例是一種結合IL-21R之經單離的結合蛋白質或其抗原結合片段，其中該結合蛋白質或其抗原結合片段包含至少一個胺基酸序列，該胺基酸序列係與一選自於以下所構成的群組之胺基酸序列有至少大約 95%同一性：序列辨識編號：6、8、10、12、14、16、18、 20、22、24、26 ' 28、30 ' 32、34 ' 36、38、40、42'44、 46、48 ' 50 ' 52 ' 54 ' 56 ' 58、60 ' 62 ' 64 ' 66 ' 68 ' 70、 72、74、76、78、80、82、84、86、88、90、92 ' 94、96、 98、100、102、104、106、108、110、112、114、116、118、 120 、 122 、 124 、 126 、 128 、 130 、 132 、 134 、 136 、 138 、 140 、 142 、 144 、 146 、 148 、 150 、 152 、 154 、 156 、 158 、 160、162-195、213-229、240、242、244、246，以及248，以及其中，設若該結合蛋白質或抗原結合片段包含至少一個胺基酸序列，該胺基酸序列係與一選自於以下所構成的群組之序列有至少大約95%同一性的：序列辨識編號：6、 8、10、12、163、164、169、170、194，和 195，那麼該結合蛋白質或抗原結合片段也必須包含至少一個胺基酸序列，該胺基酸序列係與一選自於以下所構成的群組之胺基酸序列有至少大約95%同一性的：序列辨識編號：14、16、 9 201000129 18 ' 20、22、24、26、28、30、32 ' 34、36、38、40、42、 44、46、48 ' 50 ' 52、54 ' 56 ' 58 ' 60、62、64 ' 66、68、 70 ' 72、74、76、78、80、82、84、86、88、90、92、94、 96、98、100、102、104、106、108、110、112、114、116、 118 、 120 、 122 、 124 、 126 、 128 、 130 、 132 、 134 、 136 、 138、140、142、144、146、148、150 ' 152、154、156、 158、160、162、165-168、171-193、213-229、240、242、 244、246，以及248。本發明的又另一個具體例是一種結合IL - 21R之經單離的結合蛋白質或其抗原結合片段，其中該結合蛋白質或其抗原結合片段包含至少一個胺基酸序列，該胺基酸序列係由與選自於以下所構成的群組之核苷酸序列有至少大約 95%同一性的核苷酸序列所編碼：序列辨識編號：5、7、9、 11、13、15、17、19、2卜 23、25、27、29、3卜 33、35 ' 37 ' 39'41、43、45、47、49、51、53、55、57、59、61、 63、65、67、69、71、73、75、77、79、81、83、85、87、 89、9卜 93、95、97、99、ΗΠ、103、105、107、109、111、 113、115、117、119、121、123、125、127、129、131、 133 、 135 、 137 、 139 、 141 、 143 、 145 、 147 、 149 、 151 、 153、155、157、159、16卜 239、24卜 243、245，以及247，以及其中，設若該結合蛋白質或抗原結合片段包含至少一個胺基酸序列，該胺基酸序列係由選自於與序列辨識編號：5、7 ' 9，以及11所構成的群組之序列有至少大約95% 同一性的核苷酸序列所編碼，那麼該結合蛋白質或抗原結 201000129 合片段也必須包含至少一個胺基酸序列，該胺基酸序列係由與選自於以下所構成的群組之核苷酸序列有至少大約 95%同一性的核苷酸序列所編碼：序列辨識編號：13、15、 17、19、21、23、25、27、29、31、33、35、37、39、41、 43、45、47、49、51、53、55、57、59、61、63、65、67、 69、71、73、75、77、79、81、83 ' 85 ' 87、89、91、93 ' 95、97、99、101、103、105、107、109、111、113、115、 117 、 119 、 121 、 123 、 125 、 127 、 129 、 131 、 133 、 135 、 137 、 139 、 141 、 143 、 145 、 147 、 149 、 151 、 153 、 155 、 157、159、161、239、241、243、245，以及247。本發明的又一個另外的具體例是一種經單離的結合蛋白質或其抗原結合片段，其係包含選自於以下所構成的群組之至少一個胺基酸序列：序列辨識編號：6、8、10、12、 14、16、18、20、22、24、26、28、30、32、34、36、38、 40、42'44、46、48、50、52 ' 54 ' 56、58 ' 60 ' 62 ' 64、 66、68、70、72、74 ' 76、78、80 ' 82、84、86、88、90 ' 92、94、96、98、100、102、104、106、108、110、112、 114、116、118、120、122、124、126、128、130、132、 134、136、138、140、142、144、146、148、150 ' 152、 154、156、158、160、162-195、213-229、240、242、244、 246，以及248，其中，設若該結合蛋白質或抗原結合片段包含至少一個胺基酸序列，該胺基酸序列係與一選自於以下所構成的群組之序列有至少大約95%同一性的：序列辨識編號：6、8、10、12、163、164、169、170、194，和 195， 11 201000129 那麼該結合蛋白質或抗原結合片段也必須包含至少一個胺基酸序列，該胺基酸序列係與一選自於以下所構成的群組之胺基酸序列有至少大約95%同一性的：序列辨識編號： 14、16、18、20 ' 22、24、26、28、30、32、34、36、38、 40、42、44、46、48、50、52、54、56、58、60、62、64、 66、68、70、72、74、76、78、80、82、84、86、88、90、 92 、 94 、 96 、 98 、 100 、 102 、 104 、 106 、 108 、 110 、 112 、 114 、 116 、 118 、 120 ' 122 、 124 、 126 、 128 、 130 、 132 、 134 、 136 、 138 、 140 、 142 、 144 ' 146 、 148 、 150 ' 152 ' 154、156、158、160、162、165-168、171-193、213-229、 240、242、244、246，以及248。本發明的另一個具體例是一種結合IL-21R之經單離的結合蛋白質或其抗原結合片段，其中該結合蛋白質或其抗原結合片段包含一輕鏈與一重鏈，以及其中該重鏈包含選自於以下所構成的群組之至少一個胺基酸序列：序列辨識、編號：14 ' 16、18、20、68、70 ' 72、88、90、92 ' 94、 213、218、219、240，以及242，或是與其實質同一的序列 (例如，與其實質同一的序列包括與其至少大約85%、90%、 95%、96%、97%、98%、99%，或是更多同一性的一個序列），或是與其實質同源的序列(例如，一與其實質同源的序列包括與其至少大約50%、55%、60%、65%、70%、75%、 80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%、99%，或是更多同一性的一個序列）。於一個另外的具體例中，該經單離的結合蛋白質或抗原結合片段包含一領域與一 VH領 201000129 域，以及該等vH領域係包含選自於以下所構成的鮮組之至少一個胺基酸序列：序列辨識編號：14、16、18，以及2〇，或是與其實質同一或同源的序列。本發明的另一個肩_體例是一種結合IL-21R之經單離的結合蛋白質或其抗原結合片段，其中該結合蛋白質或其抗原結合片段包含一輕鍵與― 重鏈’以及其中該輕鏈包含選自於以下所構成的群組之至少一個胺基酸序列：序列辨識編號：22、24、26、28、30、 32、34、36、38、40、42、44、46、48、50、52、54、56、 58、60、62、64、66、74、76、78、80、82、84、86、96、 98、100、102、104、106、108、214-217、220-229、244、 246，以及248 ’或是與其實質同一或同源的序列。於一個另外的具體例中，該經單離的結合蛋白質或抗原結合片段包含一VL領域與一VH領域，以及該等VL領域係包含選自於以下所構成的群組之至少一個胺基酸序列··序列辨識編號：22、24、26、28、30、32、34、36、38、40、42、44、 46、48、50、52、54、56、58、60、62、64、66、215、217、 221、223、225、227，以及229，或是與其實質同一或同源的序列。於又另一個具體例中，該重鏈包含一選自於以下所構成的群組之胺基酸序列：序列辨識編號：88、90、92、 94、213、218、219、240，以及242，以及該輕鏈包含一選自於以下所構成的群組之胺基酸序列：序列辨識編號：96、 98、100、1〇2、1〇4、1〇6、108、214、216、220、222、224、 226、228、244、246，以及248，或是與其實質同一或同源的序列。 13 201000129 本發明的結合蛋白質’例如’抗體，可以是生殖系列化的或是非生殖系列化的。其等可專一地結合至 AbA-AbZ、H3-H6、L1-L6、L8-L21，或是L23-L25所結合之相同的IL-21R抗原決定位或相似的抗原決定位(例如，一重疊的抗原決定位）。於其他的具體例中’該等結合蛋白質係專一地結合至IL-21R的一片段，例如與序列辨識編號：2 或4所提出之胺基酸序列相鄰之具有至少10、20、50、75、 100、150或200個胺基酸的片段或與其相似有至少85%、 90%、95%、96%、97%、98%、99%或更多同一性之序列。本發明的另一個具體例是一種經單離的結合蛋白質或其抗原結合片段，其係結合可由一選自於以下所構成的群組之結合蛋白質所辨識之IL-21R抗原決定位：AbA-AbZ、 H3-H6、L1-L6、L8-L21，以及L23-L25，其中該結合蛋白質或抗原結合片段競爭地抑制一選自於以下所構成的群組之結合蛋白質之結合至人類IL-21R : AbA-AbZ、H3-H6、 L1-L6、L8-L21，以及L23-L25。於另一個具體例中，該經單離的結合蛋白質或抗原結合片段包含一重鏈、一輕鏈，或是一Fv片段，其包含一選自於以下所構成的群組之胺基酸序列：序列辨識編號：14、16、18 ' 20、22、24、26、 28、30、32、34、36、38、40、42、44、46、48、50、52、 54、56、58、60、62、64、66、68、70、72、74、76、78、 80、82、84、86、88、90、92、94、96、98、100、1〇2、 104、106、108、110、112、114、116、118、120、122、 124、126、128、130、132、134、136、138、140、142、 201000129 144 、 146 、 148 、 150 、 152 、 154 、 156 、 158 、 160 、 162 、 165-168、171-193、213-229、240、242、244、246，以及 248，或是與其實質同一或同源的序列。於又另一個具體例中，該經單離的結合蛋白質或抗原結合片段包含一重鏈、一輕鍵，或是一 Fv片段，其係包含由一選自於以下所構成的群組之核苷酸序列所編碼的一胺基酸序列：序列辨識編號：：13、15、17、19、2卜 23、25、27、29、31、33、35、 37、39、41、43、45、47、49、51、53、55、57、59、61、 63、65、67、69、71、73、75、77 ' 79、81、83、85、87、 89、9卜 93、95、97、99、1(Π、103、105、107、109、111、 113、115、117、119、121、123、125、127、129、131、 133 、 135 、 137 、 139 、 141 、 143 、 145 、 147 、 149 、 151 、 153、155、157、159、16卜 239、24卜 243、245，以及247 ’ 或是與其實質同一或同源的序列。於再其他的具體例中，該結合蛋白質包含此等VH和VL 領域之至少一個互補決定區（CDR)(例如：相鄰的CDR之一或多個、二或多個、三或多個、四或多個，或是五或多個（例如，由架構區域(FR)或一連接子所隔開的二或多個CDRs) 或非相鄰之CDRs (例如，由至少一個其他的CDR及，例如， FR(s)所隔開的二或多個CDRs)。舉例而言，該結合蛋白質可包括VH領域及/或VL領域之一、二、三或多個CDRs。本揭示係提供來自 AbA-AbZ、H3-H6、L1-L6、L8-L21 ’ 以及L23-L25的VH和VL領域之核酸序列。亦預期到包含來自 AbA_AbZ、H3-H6、L1-L6、L8-L21，以及L23-L25 的至 15 201000129 少一個CDR之核酸序列。本揭示亦提供包含此等核酸的載體與宿主細胞。本發明的結合蛋白質可以是全長的（例如，包括至少一個完整的重鏈與至少一個完整的輕鏈），或是可以只包括一才几原結合片段(例如：一 Fab、一 Fab’、一F(ab’)2、一Fv、一單鏈Fv片段、一Fd片段、一dAb片段、一CDR，或是保留專一地結合一抗原的能力之全長的結合蛋白質的其他的片段）。該結合蛋白質可包括一選自以下任一種之守恆區或其之一部份：卡巴（κ)、拉目達（lambda)、阿伐(alpha)、加馬 (gamma)、得耳他（delta) 5、依普西隆(epsilon) ε 及"（mu) 守值區基因。舉例而言，可使用各種同型物之重鏈恆定區，包括：IgG卜 IgG2、IgG3、IgG4、IgM、IgAl、IgA2、IgD，以及IgE。該輕鏈守恆區可選自卡巴或拉目達。該結合蛋白質可以是IgG，或其亦可以是。本文中說明的抗IL-21R結合蛋白質可以被衍生或是被連接至另一個官能性分子（例如，另一個胜肽或蛋白質，例如，Fab片段）。舉例而言，本發明的結合蛋白質可以被官旎性的連結（例如：藉化學耦合、基因融合、非共價結合或其匕方法）到至少一個其他的分子實體，例如：尤其是另一個、° σ蛋白質（例如，一個雙專一性或是一個多重專一性結合蛋白質）、毒素、放射性同位素、細胞毒殺或細胞生長抑制劑。人於本發明的一個具體例中，該等結合蛋白質或抗原結合片段針對人類iL_21r的結合常數是至少大約1〇5 Μ·νι。 16 201000129 於另一個具體例中，該結合蛋白質或抗原結合片段係在大約1.75 nM或較低之iCm下抑制il-21-媒介的BaF3細胞増殖，且該等BaF3細胞包含一人類IL-21R。於另一個具體例中，该結合蛋白質或抗原結合片段係在大約14 〇 nM或較低之ICm下抑制IL_2i_媒介的TFUs胞增殖，且該等丁^細胞包含一人類IL-21R。於另一個具體例中，該結合蛋白質或抗原結合片段係在大約1.9 nM或較低之iCw下抑制il-2 1 -媒介 ❹ 的原代人類B細胞增殖，以及該等B細胞包含—人類 IL-21R。於又另一個具體例中，該結合蛋白質或抗原結合片段係在大約1.5 nM或較低之ic%下抑制IL_2丨·媒介的原代 • 人類CD4+細胞增殖，以及該等CD4+細胞包含一人類、 IL-21R。於-個具體例中，本發明係提供一專一地結合至一胺基酸序列之結合蛋白質或抗原結合片段，該胺基酸序列是與序列辨識編號：2之至少刚個相鄰的絲酸的任何序列〇纟約95%同一的。另一個具體例係提供-抑制IL-21社人至 IL-21R之結合蛋白質或抗原結合片段。於至少—個呈體例中，該結合蛋白質或抗原結合片段是_。於至少一個且體例中，該結合蛋白質或抗原結合片段是人類的。~ 於另一個態樣中，本發明係以-種含有至少—個抗 f結合蛋㈣以及—藥學上可接受的_之藥學组成物為特徵。該樂學組成物可進—步包括至少—種仏篇結合蛋白質及至少-個其他的治義(例如，如^更詳述之細胞素及生長因子抑制劑、免疫抑制劑、消炎劑、代謝 17 201000129 抑制劑、酶抑制劑、細胞素殺劑、細胞生長抑制劑或其等之組合）之組合。該抗IL-21R結合蛋白質及治療劑之組合亦屬於本發明之範疇。本發明該等組成物及組合可用以調節與IL-21R有關之免疫障礙，其係，例如藉由調控IL-21R之信號傳送。於一個具體例中，本發明的結合蛋白質係抗體。於進一步的具體例中，該等抗體係多株抗體、單株抗體、單專一性抗體、多專一性抗體、非專一性抗體、人化抗體、人類抗體、單鏈抗體、嵌合型抗體、合成抗體、重組型抗體、混種抗體、突變型抗體、移植型抗體、活體外產生之抗體及/或多重專一性(例如，由至少2個完整的抗體形成的雙專一性抗體）。本發明的其他具體例包括一種編碼一個抗IL-21R結合蛋白質之經單離的核酸、一包含該核酸之表現載體，以及一經該載體轉形的宿主細胞。該宿主細胞的可以是細菌、哺乳動物的細胞、酵母細胞、植物細胞，或是昆蟲細胞。該結合蛋白質可以直接地或間接地經可檢測物質標記以加速該結合或未結合的結合蛋白質之檢測。合適的可檢測物質包括，但不限於，各種酶、輔基、螢光物質、發光物質及放射性物質。於另一個態樣中，本發明提供一種活體内將藥劑，例如治療劑或細胞毒殺劑遞送或指引至IL-21R表現細胞之方法。該方法包括於可以使該結合蛋白質結合至IL-21R之條件下對患者投予抗IL-21R結合蛋白質。該結合蛋白質可以 18 201000129 與第二治療部份，諸如毒素，偶合。於另一個具體例中，本發明係提供一診斷套組，其包 3本U的—種結合蛋白質或抗原結合片段。本揭示的額外態樣係部份揭示在本說明文中，且部份自^說明文可知’或可藉實踐本發明而瞭解。本發明係於申月專利範圍中提出•特別指明，且本揭示内容不應被視為對該等申請專利範圍的範鳴之限制。以下詳細說明包括〇本發明各具體例之例證代表 ’如所主張，其並非本發明之限制。以下附圖構成本說明書之一部份，且與本說明一起僅用以闌明例示具體例而非限制本發明。 • 圖式簡單說明 • 第Ma-c)圖係描繪人類IL-2 lR-BaF3細胞增殖藉由scFv 之中和作用。細胞係用指出的scFv予以混合，以及接而用 100 pg/ml的人類il-21予以孵育。在48小時之後藉由 CELLTITER-GLO® (Promega Corporation，Madison，WI) φ 測量增殖。第2(a-c)圖係描繪人類IL-21R-TF1細胞增殖藉由 scFv 之中和作用。細胞係用指出的scFv予以混合，以及接而用 100 pg/ml的人類IL-21予以孵育。在48小時之後藉由 CELLTITER-GLO® 測量增殖。第3(a-c)圖係描繪鼠類IL-21 R-BaF3細胞增殖藉由scFv 之中和作用。細胞係用指出的scFv予以混合’以及接而用 400 pg/ml的鼠類IL-21予以孵育。在48小時之後藉由 CELLTITER-GLO®測量增殖。 19 201000129 第4(a-c)圖係描矣會scFv與親代抗體i8A5明結合至鼠類IL-21R之競爭作用。咖係用經生物素化的鼠科 IL-21R-H/F予以混合’以及將該等混合物添加至固定於 ELISA平盤之上的抗體18八5。mIL2iR的捕獲係用hRP鏈黴抗生物素蛋白予以檢測，以及A45〇信號的降低係指出針對mIL-21R結合之競爭作用。第5圖係描繪IL-21_依賴性增殖藉由21重鏈/輕鏈對之中和作用。如圖示中指出的抗體係被添加至細胞。隨後添加IL-21，以及在48小時之後藉由CELLTITER_GL〇®測量增殖：°用100pg/ml的人類IL-21進行iL-21R-BaF3細胞的分析 (第 5a-c圖），用 1〇〇 pg/mi 的人類 IL21 進行人^L_21RTF1 細胞的分析（第5d-f圖），或是用4〇〇pg/ml的鼠類IL-21進行鼠類IL-21R-BaF3細胞的分析（第5g_i圖）。第6圖係描繪2丨抗IL_21R IgGs對暫時表現人類

IL-21R(第 6a-c圖）、大鼠IL-21R (第 6d-f圖）、石蟹獼猴IL-21R (第6g-i圖），以及人類加馬共同鏈（第6j_丨圖）之CH〇細胞的結合。CHO細胞係暫時地用IL-21R或是對照的加馬共同鏈予以轉染，以及用HRP-結合的抗人類igG於一細胞為主的 ELI S A檢測結合作用。第7(a-c)圖係描繪藉由表面電槳子共振予以測量之特定的抗IL-21R抗體（第7a圖，AbS ;第7b圖，AbQ、AbT、 AbO;第7c圖，AbR、AbP，和AbU)之專一性的結合。抗IL-21R 抗體係被捕捉於抗人類IgG之上，以及於BIACORE™ (GE Healthcare，Piscataway，NJ)儀器内測量鼠科IL-21R-H/F、 20 201000129 人類IL-13-H/F、人類IL-2R0，或是人類可溶解的化_4尺任一者之隨後的結合。第7d圖顯示出人類IL_2Rp與人類可溶解的IL_4R係分別地被專一的抗iL-2Rp與抗IL_4R抗體捕捉 (對照）。第8(a-d)圖係描續'抗IL-21R抗體對人類與鼠類il_2 1R 之結合。指出的人類抗IL-21R抗體係被捕捉於固定在 BIACORE™晶片上的抗人類igG之上。允許變化濃度的人類 L-21R-His/FLAG (第 8a-b 圖）與鼠科IL-21R-His/FLAG(第 8c-d圖）於晶片上流動’以及監測結合作用與解離作用。第9圖係描繪抗IL-21R抗體對人類與石蟹獼猴IL-21R 之結合作用。人類抗IL-21R抗體AbS與AbT係被捕捉於固定在BIACORE™晶片上的抗人類IgG之上。允許變化濃度的人類與石蟹獼猴IL-21R-His/FLAG於晶片上流動，以及監測結合作用與解離作用。第9a圖顯示出的石蟹獼猴 IL-21R-His/FLAG的結合至AbS。第9b圖顯示出人類 IL-21R-His/FLAG結合至AbS。第9c圖顯示出石蟹獼猴 IL-21R-His/FLAG的結合至AbT。第9d圖顯示出人類 IL-21R-His/FLAG的結合至AbT。第10圖係描繪IL-21R抗體之抗原決定位的評定。於第 l〇a圖所說明的實驗中（亦參見Y-轴左方的闡釋）’鼠科 IL-21R-H/F (His-Flag融合蛋白質）係被捕捉於固定在 BIACORE™晶片上的抗IL-21R抗體AbS之上。額外的抗 IL-21R抗體(AbS、AbT、D5 (D5-20，中和性抗鼠類IL-21R 抗體），與7C2(非中和性抗鼠類IL-21R對照抗體))係於晶片 21 201000129 上流動以及監測其等結合至該捕獲的IL-21R-H/F。於第10b 圖所說明的實驗中，人類IL-21R-H/F係被捕捉於固定在 BIACORE™晶片上的抗IL-21R抗體AbS之上。額外的抗 -IL-21R抗體(AbS、AbT，和9D2(非中和性抗人類IL-21R對照抗體）)係於晶片上流動以及監測其等結合至該捕獲的 IL-21R-H/F。第11圖係描繪人類IL-21R-BaF3細胞增殖與鼠類 IL-21R-BaF3細胞增殖藉由該指出的抗體之中和作用。將抗體添加至細胞。隨後添加IL-21以及在48小時之後用 CELLTITER-GLO®測量增殖。用1〇〇 Pg/ml的人類il-21進行人類IL_2lR-BaF3細胞的分析（第lla圖），用200 pg/ml的鼠類 IL-21進行鼠類IL-21R-BaF3細胞的分析（第lib圖），以及用 100 pg/ml的人類IL-21進行人類IL-21R-TF1細胞的分析（第 11c圖）。第12圖係描繪人類原代B細胞之IL-鼠類21-依賴性的增殖之中和作用。將該等指出的抗體與抗CD40抗體和人類 IL-21—起添加至原代人類B細胞。在3天之後測量3H-胸腺核苷的併入。第12a圖係描繪介於AbQ、AbR、AbS、AbT、 AbU、IL-13三突變’以及18A5親代抗體之間的比較；第 12b圖係描繪介於AbT、AbV、AbW、AbU，和人類IgGl對照(hlgl)之間的比較。第13圖係描繪人類原代CD4+ T細胞的IL-21 -依賴性增殖之中和作用。將指示的抗體與人類IL-21 —起加入至活化的原代人類CD4+ T細胞’以及在3天之後測量3H-胸腺核苷 201000129 的併入。第14圖係描繪鼠類原代CD8+ T細胞的IL-21 -依賴性增殖之中和作用。將指不的抗體與人類IL_21 —起加入至活化的原代鼠科CD8+ T細胞，以及在3天之後測量3H-胸腺核普的併入。第15圖係描繪由抗-IL-21R抗體誘導的抗體依賴性細胞毒殺(ADCC)之測量。覆蓋有該指出的抗-IL-21R抗體之 ❹ CFSE_標記的BJAB細胞的PBMC-依賴性毒殺係藉由碘化丙咬的併入予以測量。該等抗CD2〇抗體rituximab (RITUXAN®，Genentech，Inc.，South San Francisco，CA) ' 係被包括作為一正對照組，以及抗-IL-13抗體係被包括作為 - 一負對照組。第16圖係描繪藉由抗_1]^2111抗體之補體Clq的結合。該指出的抗-IL-21R抗體被固定於ELISA平盤之上以及，接著用人類血清孵育，Clq的結合係用雞抗人類Clq以及 Q HRP-結合的抗雞IgY抗體予以測量。該等抗CD20抗體 rituximab (RITUXAN®)係被包括作為一正對照組，以及一抗-IL-13抗體係被包括作為一負對照組。第17(a-c)圖描繪AbQ的胺基酸序列，其包括VH和VL領域、CDRs (m、H2、H3、LI、L2，與L3)，以及守恆區域。第18(a-c)圖描繪AbR的胺基酸序列，其包括vH和VL領域、CDRs (m、H2、H3、U、L2，與L3)，以及守恆區域。第19(a-c)圖描繪AbW的胺基酸序列，其包括VH和VL領域、CDRs (m、H2、H3、LI、L2，與L3)，以及守恆區域。 23 201000129 第20(a-c)圖描繪AbS的胺基酸序列，其包括VH和VL領域、CDRs (HI、H2、H3、LI、L2，與L3)，以及守十互區域。第21(a-c)圖描繪AbT的胺基酸序列，其包括VH和VL領域、CDRs (HI、H2、H3、LI、L2，與L3)，以及守怪區域。第22(a-c)圖描繪AbO的胺基酸序列，其包括VH和VL領域、CDRs (HI、H2、H3、LI、L2，與L3)，以及守恒區域。第23(a-c)圖描繪AbP的胺基酸序列，其包括VH和VL領域、CDRs (HI、H2、H3、LI、L2，與L3)，以及守十亙區域。第24(a-c)圖描繪AbU的胺基酸序列，其包括VH和VL領域、CDRs (ΙΠ、H2、H3、U、L2，與 L3)，以及守恆區域。第25(a-c)圖描繪AbV的胺基酸序列，其包括VH和VL領域、CDRs (HI、H2、H3、LI、L2，與L3)，以及守恒區域。第26(a-g)圖係描繪額外的研究產生的結果，該等研究係以相似於產生第5、11、12、13，和14圖（以上說明的）中顯示出的結果的方式執行。第27a圖係描繪IL-21細胞素與抗體AbT對鼠類IL-21R 的結合之競爭作用。載體或是增加量的IL-21係用經生物素化的鼠類IL-21R-His/FLAG混合，以及將該等混合物添加至被固定於ELISA平盤之上的AbT。mIL-21R的捕獲係用 HRP-鏈黴抗生物素蛋白予以檢測，以及A450信號的降低係指出針對mIL-21R結合之競爭作用。第27b圖係描繪用抗體 AbS之IL-21細胞素競爭的實驗。【實施方式3 較佳實施例之詳細說明 24 201000129

本發明的結合蛋白質最初係衍生自親代抗體18A5，但是在重鏈及/或輕鏈互補決定區3(CDR3)的部分之胺基酸序列上與18A5不同。此外，本文件的結合蛋白質於結合以及中和人類與鼠類IL-21R二者上均顯示出改良的潛力，當相較於均等形式的18A5 (例如，scFv或是IgG)時。先前尚未有關於來自2個物種（人類與小鼠）之IL-21R被一單一結合蛋白質高潛力中和的報告。本文件之具有比其等的親代抗體更大的中和潛力之結合蛋白質可轉變成較高的效能，當相較於先前說明的製劑時。此外，VH和VL架構區域的胺基酸序列已經改變成配合人類基因體序列所編碼的序列，藉此降低病人體内之用本文件的結合蛋白質予以治療的人類抗人類抗體的反應之可能性。定義為了使本發明可更容易被瞭解，首先定義特定術語。另外之定義係在詳細說明和說明書的其他地方中從頭至尾揭示。術語“結合蛋白質”當使用於本文中，包括任何天然存在的、重組型、合成型，或是經基因工程化的蛋白質，或是其等之一組合，其係結合一抗原、標的蛋白質，或是胜肽，或是其之片段。本發明的結合蛋白質可包括抗體，或是自至少一個抗體片段衍生出的。該等結合蛋白質可包括天然存在的蛋白質及/或合成上經工程化的蛋白質。本發明的結合蛋白質可結合一抗原或其之一片段以形成一複合物以及引發一生物反應（例如，激動或拮抗一特定的生物活 25 201000129 性）。結合蛋白質可包括經單離的抗體片段、由一抗體的重鏈和輕鏈之可變異區域所構成的“Fv”片段、輕鏈和重鏈可變異區域係藉由胜肽連接子連接的重組型單鏈多胜肽分子 (“scFv蛋白質”），以及由模擬高度可變異區域的胺基酸殘基所構成之最小辨識單元。結合蛋白質片段也可包括一抗體的官能性片段，例如，舉例而言，Fab、Fab’、F(ab’)2、Fc、 Fd、Fd’、Fv ’以及一抗體之一單一可變異領域(dAb)。該等結合蛋白質可以是雙鏈或單鏈，以及能包含一單一結合領域或多重結合領域。結合蛋白質也可包括結合領域-免疫球蛋白融合蛋白質’包括：一經融合或用其他方法與一免疫球蛋白樞紐或樞紐作用區多胜肽連接之結合領域多胜肽，該結合領域多胜肽接著經融合或用其他方法與非CH1之含一或多個得自免疫球蛋白重鏈之天然或經工程化的守恆區的區域連接，舉例而言：IgG及IgA之CH2及CH3區域或IgE之CH3及CH4 區域（參見’例如，Ledbetter等人，美國專利公開案 2005/0136049，以得到完整的說明該結合領域_免疫球蛋白融合蛋白質可進一步包括一包含經融合或用其他方法與該樞紐區多胜肽連接之天然或經工程化的免疫球蛋白重鏈 CH2守恆區多胜肽（或就全部或局部衍生自lgE之建構物而言係為CH3) ’及經融合或用其他方法與該cm守怪區多胜肽(或就全部或局部衍生自IgE之建構物而言係為CH3)連接之天然或經工程化之免疫球蛋白重鏈CH3守恆區多胜肽（或就全錢局部衍生自IgE之建構物而言係為cH4)的區域。典 26 201000129 型地，此等結合領域-免疫球蛋白融合蛋白質可具有至少一種選自以下所組成之群組的免疫活性：經抗體依賴性細胞媒介之細胞毒殺、補體結合，及/或結合至—目標，例如一標的抗原。本發明的結合蛋白質可以衍生自任何物種。包括，但不限於：小鼠、人類、駱駝、美洲駝、魚、黨魚、山羊、兔、雞，以及牛。術S吾抗體”在文中使用時稱為一免疫球蛋白，其係對 ❹ 一指定蛋白質或胜肽或其之片段有反應的。合適的抗體包括，但不限於：人類抗體、靈長源的抗體、嵌合型抗體、單株抗體、單專一性抗體、多株抗體、多專一性抗體、非 • 專一性抗體、雙專一性抗體、多重專一性抗體、人化抗體、 - 合成抗體、重組型抗體、雜交抗體、突變型抗體、移植型結合抗體（亦即’結合或是融合至其他的蛋白質、放射性標記、細胞毒素之抗體），以及活體外產生的抗體。該抗體可來自任何種類的抗體，包括，但不限於：IgG、IgA、IgM、 Φ kD，和1gE ’以及可來自亞型（例如：IgGl、IgG2、IgG3，和IgG4)的抗體。該抗體的能具有一選自於，例如：IgGi、 IgG2、IgG3 ’或是IgG4之重鏈守恆區。該抗體也能具有一選自於’例如：卡巴(κ)或拉目達(lambda) (λ)的輕鏈。本發明的抗體可以衍生自任何物種，包括，但不限於：小鼠、人類、駱駝、美洲駝、魚、鯊魚、山羊、兔、雞，和牛。抗體守恆區可以被改變，例如，突變型，以改質該抗體的性質（例如’增加或減低以下的一或多者：Fc受體結合、抗體醣化作用、半胱胺酸殘基的數目、效應細胞的功能，或 27 201000129 是補體的功能）。典型地，該抗體的係專一地結合至一預定的抗原，例如’與-障礙相關的抗原，例如：發炎、免疫、自體免疫、神經退化、新陣代謝，及/或惡性障礙。術語“單一領域的結合蛋白質，，當使用於本文中係包括結合一抗原、蛋白質，或i多胜肽之任何的單一領域結合骨架。單一領域的結合蛋白質可包括任何天然型、重組型、合成型’或經基因工程化的蛋白質骨架，或是其等之一組合，其係結合一抗原或其之片段以形成一複合物以及引發一生物反應（例如，激動或拮抗一特定的生物活性）。單〇一領域的結合蛋白質可以衍生自天然存在的蛋白質或抗體，或是其等玎以是合成工程化的或藉由重組技術予以生 _ 產的。單一領域的結合蛋白質可以是本技藝中的任一者或任何未來的單一領域結合蛋白質，以及可以衍生自任何物種，包括，但不限於.小鼠、人類、絡，較；、美洲騎、魚' 鯊魚、山羊、兔、雞，以及牛。於本發明的一些具體例中，一單一領域的結合蛋白質骨架能衍生自於魚中發現的免疫球蛋白之一可變異區域’例如’舉例而言，其係衍生自鯊魚血清中發現的已知為新穎抗原受體(NAR)之免疫球蛋白同型物。生產衍生自NAR的一可變異區域(“IgNARs”）的單一領域結合支架的方法係說明於國際申請案公開號 WO 03/014161 和 Streltsov (2005) Protein Sci. 14(11):2901-09之中。於其他的具體例中，一單一領域的結合蛋白質係一天然存在的一單一領域的結合蛋白質，其已經於本技藝中被 28 201000129 描述為一缺乏輕鏈的重鏈抗體。此等單一領域的結合蛋白質係揭示於，例如’國際申請案公開號w〇 94/004678之中。為了清楚之故，一衍生自天然缺乏輕鏈的重鏈抗體之可變異領域的結合蛋白質於本文中係已知為一種VHH或是‘‘奈米抗體’’以將其與慣例的4鏈免疫球蛋白之vh區分。此一 VHH分子可衍生自在路騎科物種，例如路轮、美洲轮、單峰駝、羊駝及南美野生馬駝，中所取得之抗體。除了駱駝 0 科之外，其他的科亦可以用來生產天然缺乏輕鏈的重鏈結合蛋白質。VHH分子比傳統的igG分子小大概於1〇倍。其等係為單一多胜肽且很穩定’可以抗極端pH及溫度條件。而 - 且，其可抗蛋白酶之作用，習知抗體並無此作用。而且， • VHH之活體外表現可產生高產率、經適當折疊之官能性 VHH。此外，在駱駝動物中所產生之結合蛋白質可經由使用抗體存庫或藉非駱騎動物之哺乳動物的免疫化作用而辨識不同於藉活體外產生之抗體所辨識之抗原決定位（參 ❹ 見’例如，國際申請案公開號WO 97/049805和 WO 94/004678，二者之全部内容被併入本文中以作為參考資料）。術語“抗原結合領域”和“抗原結合片段，，係意指含負責結合蛋白質與抗原間之專一性結合作用之胺基酸的結合蛋白質之一部份。可專一性地由該結合蛋白質辨識並結合之遠抗原部份稱為抗原決定位’’。抗原結合領域可包^__抗體的輕鏈可變異區域（Vl)及一抗體的重鏈可變異區域 (Vh) ’然而其未必包含這兩種。舉例而言，Fd片段且有兩 29 201000129 個vH區域且通常仍保有該完整抗原結合領域之抗原結合之功能。一結合蛋白質之抗原結合片段的實例包括，但不限於：（l)Fab片段，其係為具有VL、Vh、Cl&Ch1領域之單價片段；（2)F(ab')2片段，其係為具有兩個藉雙琉鍵橋於樞紐區域連結之Fab片段的雙價片段；（3)具有兩個VH及一個CH1 領域之Fd片段；（4)具有單臂抗體之Vl&vh領域的Fv片段； (5)具有一個VH領域之dAb片段（參見，例如，Ward等人， (1989) iVaiwre 341: 544-546) ; (6)單離的CDR ;及(7)單鏈片段區域(scFv)。雖然Fv片段之兩領域，vL及VH，係藉各別基因而編碼’但是使用重組方法，其等可藉能夠使其以單一蛋白質鏈之合成連接子而被製成，其中vL及vH區域可配對以形成單價分子（已知為scFv)(參見，例如，Bird等人， (1988) 242:423-26 ; Huston 等人，（1988) Proc.胸/. &/· ί/似85:5879-83)。此等結合領域片段係使用本技藝中具有技藝的該等所知道的慣例技術而獲得，以及以如同元整的結合蛋白質的方式評估該等片段之功用，例如，舉例而言，抗體。術語“中和”係意指-降低或封阻一信號傳送途徑或一 j原的活性之結合蛋白質或其之抗原結合片段(舉例而

言’ 一抗體），例如’ IL-21/IL·取信號傳送途徑或IL_21R 抗原。術語“有效量”係意指足以調節IL_21R活性以減輕臨床症狀的嚴重性或獲得所欲生物結果，例如降低的T细胞及/ 或Β細胞活性、自體免疫之抑制、移植排斥之_，之㈣ 30 201000129 或量。術語“人類結合蛋白質”包括具有實質上相當於本技藝所知道的人類生殖系列免疫球蛋白序列的可變異及守恆區之結合蛋白質’其包括，舉例而言，由Kabat等人所述之讓專 ’ i第 3版 ’ Sequences of Proteins of Immunological Interest > U.S. Department of Health and Human Services » NIH Publication No. 91-3242。本發明之人類抗體可包括未由人類生殖系列免疫球蛋白序列編碼之胺基酸殘基（例如藉活體外之隨機或位置專一性突變或藉活體内的體突變而導入之突變），舉例而言，在CDRs中，以及特別地，CDR3 中。該人類抗體可具有至少1、2、3、4、5或更多個由不是被該人類生殖系列免疫球蛋白序列編碼之胺基酸殘基所取代的位置。用語“抑制，，、“拮抗，，、“封阻，，或“中和，，IL-21R活性及其同源詞係指由於結合抗IL-21R抗體而減少、抑制或是用其他方法降低IL-21R之至少一種活性，其中該減少係相對於在無相同抗體存在下之該IL-21R之活性而言。可使用本項技藝中所熟知之任何技術測定IL-21R活性。抑制或拮抗作用未必顯示該IL-21R生物活性之總消除量。活性之減少量可以是約 10%、20%、30%、40%、50%、60%、70%、80%、 90%或更高。術語“介白素-21受體，，或“IL-21R”或類似物係指第工族細胞素家族受體，亦已知為MU-1 (參見，例如：美國專利申請案案號09/569,384及美國申請案公開號 31 201000129 2004/0265960 ; 2006/0159655 ; 2006/0024268 ;及 2〇08/〇24l〇98)，NILR或zalphall (參見，例如：國際申請案公開號WO 01/085792 ; Parrish-N〇vak 等人 ’（2000)如前所述；Ozaki等人，（2000)如前所述），其係結合至1L_21配體。 IL-21R係與IL-2及IL-15受體共有之P鏈’以及1L-4a是同源的（Ozaki等人，（2000)如前所述）。當配體一結合，IL-21R 可與共通加馬細胞素受體鏈(γ(〇交互作用’並誘發STAT1與 STAT3 (Asao 等人，（2001)如前所述），或STAT5 (0zaki 等 · 人，（2000)如前所述）之磷酸化。IL-21R顯示廣範圍之淋巴組織分佈。術語“介白素-21受體”或“IL_21R”或類似物亦指一多胜肽(較佳哺乳動物來源的，例如，鼠類或人類IL-21R) 或，如上下文需要，一個編碼此一多胜肽之聚核苷酸，其 *

係能與IL-21(較佳地，哺乳動物來源的IL-21，例如，鼠類或人類IL-21)交互作用且具有下列特徵的至少一者：（1)一天然存在的哺乳動物IL-21R多胜肽或其片段的胺基酸序列，例如，序列辨識編號：2(人類-對應至GENBANK® (U.S. Q

Dept· of Health and Human Services，Bethesda，MD)存取編號NP_068570)或是序列辨識編號：4(鼠科-對應至 GENBANK® Acc· No. NP—068687)中提出的一胺基酸序列，或是其之一片段；（2)實質上與序列辨識編號：2或序列辨識編號：4中提出的一胺基酸序列或是其之一片段有至少85%、90%、95。/。、98%或99。/。同源之胺基酸序列；（3)一胺基酸序列，其係由一天然存在的哺乳動物IL_21R核苷酸序列或其之片段所編碼（例如：序列辨識編號：丨（人類_對 32 201000129 應至GENBANK®存取編號NM_021798)或是序列辨識編號：3 (鼠科-對應至GENBANK® Acc· No· NM_021887)，或是其之一片段）；（4) 一胺基酸序列，其係由實質上與序列辨識編號：1或序列辨識編號：3提出之核苷酸序列或其之一片段具有，例如，至少85%、90%、95%、980/〇，或是990/〇同源的一核苷酸序列所編碼；（5) —胺基酸序列，其係由一簡併一天然存在的IL-21R核苷酸序列或其之一片段，例如：序列辨識編號·· 1或序列辨識編號：3之核苷酸序列’ 或是其之一片段所編碼的；或是(6)—核苷酸序列，其係在嚴苛條件下，例如，高度嚴苛條件，與前述的核苷酸序列雜交。此外，其他非人類與非哺乳動物的IL-21R係被預期到於該等揭不的方法中是有用的。術語“介白素-21”或“IL-21”係意指其序列與IL-2、IL-4 與IL-15有序列同源性且結合至IL-21R之細胞素 (Parrish-Novak等人，（2000)如前所述）。此等細胞素都擁有“四-螺旋-束”之特定折疊結構，此為此家族之特徵。IL-21 主要表現於經活化之CD4+T細胞，亦有報導指出對NK細胞、B細胞與T細胞亦有影響（parrish-N〇vak等人，（2000) 如前所述；Kasaian等人，（2002)如前所述）。當IL-21結合至乩-21尺，IL-21R的活化係導致，例如，STAT5或STAT3信號傳送(〇zaki等人，（2000)如前所述）。術語“介白素-21” 或“IL-21”亦意指一多胜肽(較佳哺乳動物來源的，例如，鼠類或人類1L-21)，或是，如上下文需要’一個編碼此一多胜肽之聚核苷酸，其能與IL_21R(較佳哺乳動物來源的，例 33 201000129 如，鼠類或人類IL-21R)交互作用且具有下列特徵的至少一者：（1) 一天然存在的哺乳動物IL-21或其片段的胺基酸序列，例如’序列辨識編號：212(人類），或是其之一片段； (2)實質上與序列辨識編號：212中提出的一胺基酸序列或是其之一片段有至少85%、90%、95%、98%，或是99%同源之胺基酸序列；（3) —胺基酸序列，其係由一天然存在的哺乳動物IL-21核苷酸序列或其之一片段所編碼(例如：序列辨識編號：211(人類），或是其之一片段）；（4) 一胺基酸序列，其係由實質上與序列辨識編號：212或其之一片段提出的核苷酸序列具有，例如，至少85%、90%、95%、98%，或是 99%同源的一核苷酸序列所編碼；（5) —胺基酸序列，其係由一簡併一天然存在的IL-21核苷酸序列之核苷酸序列或是其之一片段所編碼；或是(6)—核苷酸序列，其係在嚴苛條件下，例如，高度嚴苛條件，與前述的核苷酸序列雜交。術語“IL-21R活性”及類似物，（例如，“IL-21R的活性”、 “IL-21/IL-21R活性”)係意指由於IL-21R結合所起始或中斷之至少一個細胞進程。IL-21R的活性包括，但不限於：（1)與一配體（如IL-21多胜肽）交互作用，如結合；（2)結合或活化訊息傳導（亦稱為“信號傳送”，其意指因應一特定刺激所發生的細胞内級聯）及訊息傳導分子（例如，加馬鏈(γ〇與 JAK1)，及/或刺激STAT蛋白質，例如，STAT5及/或STAT3，之碟酸化及/或活化，及(3)調控免疫細胞之增殖、分化、效應細胞(effector cell)功能、細胞溶解活性、細胞素分泌，及 /或存活，例如：T細胞、NK細胞、B細胞、巨噬細胞、調 201000129 控性T細胞(Tregs)與巨核細胞。當使用於本文中，“活體外產生的抗體”意指其中所有或部份的該可變異區域（例如至少一個CDR)係在非免疫細胞選擇(例如：活體外噬菌體呈現、蛋白質晶片或可測試候選序列之與抗原結合之能力的任何其它方法）中產生的抗體。術語“經單離的，，意指實質上無其之天然環境之分子。譬如，一經單離的蛋白質為實質上無細胞性物質或得自該細胞之其它蛋白質或衍生該蛋白質之組織源。該術語亦指就藥學組成物而言，該經單離的蛋白質具充份純度或是至少 70-80% (w/w)純度、至少 80-90% (w/w)純度、至少 90-95% (w/w)純度，或是至少95%、96%、97%、98%、99%，或是 100% (w/w)純度的製劑。用語“同一％”或“相同％”係指至少兩不同序列間之相似度。相同％可藉以下標準配向演算法而測定：例如由 Altshul等人所述之the Basic Local Alignment Search Tool (BLAST) ((1990) J. Mol. Biol. 215:403-10) ； Needleman # 人之演算法，（（1970)·/. Mo/.所〇/. 48:444-53);或是Meyers 等人之演算法，（（1988) Compwi. 々?/?/· 4:11-17)。一組參數可以是具有空隙罰分為12、空隙擴大罰分為4,及移碼空隙罰分為5之Blosum 62計分矩陣。亦可使用已併入 ALIGN程式（第2.0版）内之Meyers及Miller之演算法((1989) C45/OS1 4: 11-17)，利用PAM 120殘基重量表、空隙長度罰分為12及空隙罰分為4以測定兩個胺基酸或核苷酸序列 35 201000129 間之相同％。該相同％通常係藉比較類似長度之序列而計算。。術語“名錄(repertoire)，，意指係指全部或局部衍生自編碼至少-個免疫球蛋白編碼之至少—個序列的至少一個核苦酸序列。序列(群)可藉重鏈之V、D和峨段，及輕鏈之v 與J傲段的活體内重組而產生。任擇地，序列（群)可藉一細胞因應例如，活體外的刺激而發生重組時產生。任擇地，部份或所有該序列（群)可藉DNA接合法、核苦酸合成法、突變誘發，或是其它方法（參見，例如，美國專利號瑪 5,565,332)而獲得一名錄可僅包括—相或可包括數個序列，其包括在基因上不同的收集中之該等。術語“專一性結合”、“專一地結合，，及類似物，係指可形成於生理條件下具相當穩定性之複合物的兩分子。專一性”專-性結合作用(其通常具有低親和力及中至高容量）不同之處在於具有高親和力及低至中容量的特徵。典型地，當結合常數Ka高於大約l〇6M-V4_，結合作用被視為具專—性。若必要，在不會實質上影響專-性結合作用的情況下，藉改變結合條件，可減少非專一性結合作用。可藉熟練的技術人員，使用例行技術而使合適結合條件’諸如：結合蛋白質㈣度、溶液之離子強度、進行結合作用之溫度及時間、封阻劑(例如血清白蛋白、牛奶 )之/辰度等，予以改良。說明性條件係如本文中所提出的’但是本技藝中具有通常技藝的人已知之其它條件皆屬於本發明範圍。 36 201000129

當使用於本文中，術語“嚴苛（stringem)”、“嚴苛 (stringency)，，，及類似物係說明雜交與清洗條件。本發明的經單離之雜賊能被使用作為雜交探針與引子，以辨認及單離出具有與揭示之聚核倾具有相同或相似序列之: 酸。因此’以此方式單離的聚核料可以用來生航德的結合蛋自質或是觸表現此等結合蛋白f之細胞。用以辨認或單離之雜交方法包括聚合酶連鎖反應(pcR)、南方雜交、原位雜交與北方雜交，以及”此領财㈣㈣i 雜交反應可於不同嚴苛條件下進行。雜交反應之嚴苛性包括任二核酸分子互相雜合之困難性，以及1等在該等條件下仍轉雜交。較佳為，每—雜交之聚核㈣係:其相對應之雜《於較低嚴苛性條件，更㈣嚴苛性條件，以及最㈣高度嚴苛性環境下雜交。嚴苛條件係該等熟悉此藝者所知道的且可在以下資料中找到，例如， P—u▲▲飾，John Wiley & s〇ns，Ν γ (歷）6.3.1·6.3·6。水性及非纽枝係贿在該參考資料中且任-種皆可使用。嚴苛_交條件之—實例為於祕 C下、在6x氣化納/擰檬酸納(ssc)中進行雜交，接著於％ °C下在〇.2戲、0™中進行至少-次清洗。嚴苛的雜交條件亦，例如，於55°C、6代，或是咖下在〇.2X SSC / ㈣SDS中進行清洗予以完成。高度嚴苛條件包括，例如，於65。〇：下在〇.5_酸氫二納/ 7%伽中雜交，接著於例下在0WDS中進行至少—次清洗。其他嚴苛條件之實例係顯示於下表1中：高度嚴苛條件為至少如舉例而 37 201000129 言，條件A-F —般嚴苛之嚴苛條件；嚴苛條件為至少如舉例而言，條件G-L —般嚴苛之嚴苛條件；以及較低嚴苛條件為至少如舉例而言，條件M-R —般嚴苛之嚴苛條件。表1:雜交條件

條件雜交雜交長度 (bp)1 雜交溫度與緩衝液2 清洗溫度與緩衝液2 A DNA:DN A >50 65〇C ; IX SSC -或 42°C ; IX SSC，50%甲醛 65°C ； 0.3X SSC B DNA:DN A <50 TB* ; IX ssc TB* ; IX SSC C DNA:RN A >50 670C ; IX SSC -或 45°C ; IX SSC，50%甲醛 67°C ； 0.3X SSC D DNA:RN A <50 TD* ; IX SSC TD* ； ix ssc E RNA:RN A >50 70oC ; IX SSC -或 -50oC ; IX SSC，50%甲醛 70°C ； 0.3X SSC F RNA:RN A <50 TF* ; IX SSC TF* ； IX ssc G DNA:DN A >50 65°C ; 4X SSC -或 -42°C ; 4X SSC，50% 甲醛 65°C；IX SSC Η DNA:DN A <50 TH* ； 4X SSC TH* ； 4X SSC I DNA:RN A >50 67°C ; 4X SSC -或 -45°C ; 4X SSC，50% 甲醛 67°C；IX SSC J DNA:RN A <50 Tj* ； 4X SSC Tj* ； 4X SSC K RNA:RN A >50 70°C ; 4X SSC -或 -50oC ; 4X SSC，50% 甲醛 67°C；IX SSC L RNA:RN A <50 Tl* ； 2X SSC TL* ； 2X SSC Μ DNA:DN A >50 50°C ; 4X SSC -或 -40°C ; 6X SSC，50% 甲醛 50°C；2X SSC N DNA:DN <50 TN* ； 6X SSC TN* ； 6X SSC 38 201000129

條件雜交雜交長度 (bp)1 雜交溫度舆緩衝液2 清洗溫度與緩衝液2 A 0 DNA:RN A >50 55°C ; 4X SSC -或 -42°C ; 6X SSC，50% 曱醛 55°C；2X SSC P DNA:RN A <50 ΤΡ* ； 6X SSC TP* ； 6X SSC Q RNA:RN A >50 ^0°C ; 4X SSC -或 -45°C ; 6X SSC，50% 甲醛 60°C；2X SSC R RNA:RN A <50 TR* ； 4X SSC TR* ； 4X SSC 1雜交長度為參與雜交聚核苷酸之雜交區域。當要雜交一聚核苷酸至未知序列的標的聚核苷酸時，雜交長度便假定為該雜交的聚核苷酸之雜交長度。當已知序列的聚核苷酸雜交時，雜交長度便以對齊該聚核苷酸之序列，並辨識出該最佳序列互補性之區域來決定。 • 2 SSPE (1XSSPE為0.15 M NaCl，1〇 mM NaH2P04，以及 1.25 mM EDTA， pH 7.4)可取代雜交與清洗緩衝液中的SSC (1XSSC為0.15 M NaCl與15 mM " 檸檬酸納）；清洗係於雜交完全後15分鐘後進行。

Tb'iV :小於50鹼基對長度之雜交溫度應低於雜交熔點(Tm)5-1(TC，其中!^ 依據下列方程式決定。就長度小於18鹼基對之雜交而言，Tm〇：)= 2(A+T鹼基數目）+4(G+C鹼基數目）。就鹼基對長度介於18至49間之雜交而言， Tm(°C)=81.5+16.6(logH)Na+)+0.41(°/()G +C) -(600/N)，其中N為雜交鹼基數目，以及Na+為雜交緩衝液中鈉離子之濃度（1χSSc中Na+=0165M)。 © 其他聚核苷酸雜交之嚴苛條件實例係提供於以下中 :Sambrook 等人，

Molecular Cloning： A Laboratory Manual > Chs. 9 & 11 > Cold Spring Harbor

Labamtory Press ’ Cold Spring Harbor ’ NY(1989)，以及Ausubel等人，eds.，

Current Protocols in Molecular Biology . Sects. 2.10 & 6.3-6.4 > John Wiley & Sons’Inc. (1995)，其等被併入本文中以作為參考資料。本發明的經單離之聚核苷酸可以使用作為雜交探針與引子’以辨識並單離出具編碼所揭示聚核苷酸之對偶基因的變異體的序列之DNA。對偶基因的變異體為所揭示聚核 _酸之天然、存在之任擇的形式’其係編碼與該等揭示的聚核普酸所編碼之多胜肽同—的或具有實f相似性之多胜 39 201000129 肽。較佳地，對偶基因的變異體具有與所揭示聚核魏至 >90%序列同-性（更佳地，至少95%同—性；最佳地，至 Γ交9=^)子本發㈣料觀料料料使用作為 =探針或引子㈣識並單離出具有編簡該等揭示的聚核錢同源的多胜肽之序列之臟。此等同源

^與多胜肽，其㈣㈣揭Μ«料與多胜肽不㈣種或相同之物種分離出之聚核普酸與多胜肽，但是具與該等揭示的聚㈣酸與多胜肽之顯著的序列相:了較佳地，聚核《同源物具有與該等揭示的聚核*酸之至少大約50%的序列同—性（更佳地，至少大約冰同―性；最佳地’至少大約9G%同-性），而多胜肽同源物具有與該= 揭示的結合蛋白質/多胜肽之至少大約3〇%的序列同一性 (更佳地，至少大約45%同一性；最佳地，至少大約6〇。/同一性）。較佳地，該等揭示的聚㈣酸與多㈣之同:物: 從哺乳動物物種單離的該等。本發明之經單離聚核皆酸可以額外地被使用作為雜交探針與引子以辨識表現本發明的結合蛋白質之細胞或組織以及其等被表現之條件。用語“實質上如所說明的”、“實質上同一的，，，及“實質上同源的，，意指該有關的胺基酸或核苷酸序列（例如： CDR(群）、νΗ或Vl領域）當與欲陳述之序列比較時係相同的或無實質差異（例如，經由守恆性胺基酸取代）。無實質差異包括較少的胺基酸變化，諸如在具有特定區域之5個胺基酸序列中之1或2個取代。就抗體而言，第二抗體具有相同專一性且其親和力為第一抗體親和力之至少大约50%。 40 201000129 與本文揭示的該等序列實質上同一的或是同源的序列亦為本申請案之一部份。於一些具體例中，序列同一性可以是約 85%、90%、95%、96%、97%、98%、99% 或更高。任擇地，當於選擇性雜交條件（例如高度嚴苛的雜交條件）下，該等核酸嵌段可雜交至該股之互補物時，存在實質上的同一性或同源性。該等核酸可存在於全細胞内、細胞溶解產物内或以部份純化或實質上純的形式存在。〇術語“治療劑”或類似物係一可治療或協助治療一醫療障礙或其之症狀的物質。治療劑可包括，但不限於：可以以能補足抗IL-21R結合蛋白質之用途的方式，調控免疫細胞或免疫反應之物質。於本發明的一個具體例中，一治療 • 劑係一治療性抗體，例如，一抗-IL-21R抗體。於本發明的另個具體例中’-治療劑是係一治療性結合蛋白質，例如，-抗-IL-21R奈米抗體。治療劑之非限制性實例及用途係描述於文中。 ❿當使用於本文中，抗IL_21R結合蛋白質(例如，一抗體) 的“治療有效量”係指該等結合蛋白質的量，#單一或多次劑量投藥至-個體(如人類病患），之劑量，係有效用於治療預防、治癒、延遲一障礙或一復發障礙之至少一個症狀、降低-障礙或-復發障礙之至少_個症狀的嚴重度，及/或改善-障礙或_復發障礙之至少—個症狀，或延長個體存活期間超過未經此治療之預期期間。抗-IL-21R結合蛋白質本申π案之揭不内容提供包含新賴的抗原結合片段之 41 201000129 新穎抗IL-21R結合蛋白質。熟悉本項技藝者所知道的許多方法皆可用於獲得結合蛋白質或其等之抗原結合片段。舉例而言，可使用重組DNA方法以生產包含抗體之抗IL_2iR 結合蛋白質（參見，例如，美國專利號碼4,816,56乃。亦可根據已知方法藉融合瘤之產生而製成單株抗體（見，例如

Kohler and Milstein(1975) TVaiwre ’ 256: 495-499)。然後使用標準方法，諸如：酵素連結免疫吸附分析(ELISA)及表面電漿子共振(BIACORETM)分析，篩檢以此方式所形成之融合瘤以鑑定可產生能夠與特定抗原專一性結合之抗體的一或多種融合瘤。任何形式之特定抗原皆可作為免疫原，例如：重組型抗原、天然存在的形式、任何變異體或其之片段，以及其之抗原性胜肽。製造包含抗體之結合蛋白質之一個例示性方法包括篩選蛋白質表現存庫’例如嗔菌體或核糖體呈現存庫。噬菌體呈現技術係描述在，例如以下資料中：美國專利號碼 5,223,409 ; Smith (1985) 228:1315-17 ; Clackson 等人，（1991) 352:624-28 ; Marks 等人，（1991) «/ Mo/, β/ο/. 222:581-97;以及國際申請案公開號WO 92/018619; WO 91/017271 ； WO 92/020791 ； WO 92/015679 ; WO 93/001288 ； WO 92/001047 ； WO 92/009690 ； ^ WO 90/002809。除使用該等呈現存庫之外，可使用特定抗原來免疫一種非人類動物，例如，石蟹摘猴、雞，或是唾齒目動物（諸如小鼠、倉鼠或大鼠）。於一個具體例中，該非人類動物包 42 201000129 括人類免疫球蛋白基因之至少一部份。舉例而言，可使用人類Ig基因座（loci)之大片段予以工程化小鼠抗體製造不足之小鼠品系。使用該融合瘤技術，可生產並選擇衍生自該等具有所欲專一性之基因的抗原專一性單株結合蛋白質 (參見，例如，XENOMOUSETM (Amgen Inc.，Thousand Oaks，CA) ; Green 等人，（1994) K 7:13-21 :美國專利號碼7,064,244 ;以及國際申請案公開號 WO 96/034096和 WO 96/033735)。於本發明的一個具體例中，該等結合蛋白質是一單株抗體，其係得自於一種非人類動物，以及接而使用本項技藝中所熟知的重組DNA技術使其經修飾（例如：人化的、去免疫化，或是嵌合型）。製造嵌合型抗體之多種方法業經描述（參見，例如：Morrison 等人，（1985) /Voc· USA 81(21):6851-55 ； Takeda 等人，（1985) iVaiwre 314(6010):452-54:美國專利號碼4,816,567與4,816,397 ;歐洲申請案公開號EP 0 171 496與EP 0 173 494 ;以及英國專利號碼GB 2 177 096)。亦可使用，例如可表現人類重鏈及輕鏈基因但是不能表現内源性小鼠免疫球蛋白重鏈及輕鏈基因之基因轉殖的小鼠以產生人化結合蛋白質。Winter (美國專利號碼5,225,539)描述可用以製造本文中說明的人化結合蛋白質之例示性CDR移植方法。一特定人類結合蛋白質之所有CDR可用一個非人類CDR之至少一部份予以取代，或僅部份該等CDR可以用非人類CDR予以取代。僅必需取代使該人化結合蛋白質與預定抗原結合所需之CDR數 43 201000129 目。可藉由用來自人類Fv可變異領域之均等的序列取代未直接涉及抗原結合之Fv可變異領域的序列而產生人化結合蛋白質或其片段。產生人化結合蛋白質或其片段之例示性方法係藉以下而提供：例如：Morrison (1985) Sckwce 229:1202-07 ; Oi 等人 ’（1986)所〇rec/mz·分wes 4:214 ;以及；美國專利號碼5,585,089 ; 5,693,761 ; 5,693,762 ; 5,859,205 ; 和6,407,213。該等方法包括單離、操作，及表現編碼得自重鏈或輕鏈中之至少一者的所有或部份免疫球蛋白Fv可變異領域之核酸序列。如同以上說明的，此等核酸可得自能產生抗預定標的之抗體的融合瘤，以及其他來源。編碼該人化的抗體分子之重組型DNA接而能被選殖至合適表現載體内。於某些具體例中’可藉守恆性取代、一致性序列取代、生殖系列取代及/或回復突變之導入而改良人化結合蛋白質。可藉本項技藝已知之幾種技術中之任一種而製成此等經改變之免疫球蛋白分子（參見，例如：Teng等人，（1983) Proc*. iVa". Jed. f/似 80:7308-73 ; Kozbor 等人，（1983) Immunol. Today 4..7219，，Q\ssQn 專（\9名2、Meth. Enzymol. 92:3-16);國際申請案公開號w〇 92/006193 ;以及歐洲專利案號碼EP 〇 239 400)。亦可藉人類T細胞抗原決定位之特定刪失或藉國際申請案公開號WO 98/52976及WO 00/34317中所揭示之“去免疫化”方法而修飾一結合蛋白質或其之片段。簡言之，可分 44 201000129 析結合蛋白質（例如，舉例而言，一衍生自一抗體的結合蛋白質）之重鏈及輕鏈可變異領域之可結合至MHC第Π類的胜肽；這些胜肽代表潛在的T細胞抗原決定位（如，例如，國際申請案公開號WO 98/052976與WO 00/034317中所定義）。就潛在的T細胞抗原決定位之檢測而言，可施用稱為 “胜肽結構預測線索法（peptide threading)”之電腦模擬方法，以及此外，如國際申請案公開號WO 95/52976及WO 00/34317中所說明的，存在於VH及VL序列中的要素可搜尋人類MHC第Π類結合胜肽之資料庫。此等要素可結合至18 種主要MHC第Π類DR異型中之任一種，以及因而，可構成潛在的T細胞抗原決定位。檢測到的潛在T細胞抗原決定位能藉取代該等可變異領域中之少數胺基酸殘基或藉單一胺基酸取代予以消除。典型地，進行守恆性取代。通常，但並非絕對，可使用與人類生殖系列抗體序列中之一位置共有的一胺基酸。人類生殖系列序列係揭示於以下之中，例如：Tomlinson 等人，（1992)«/· Mo/.所〇/· 227:776-98 ; Cook 等人，（1995)/mmimo/· 16(5):237-42 ; Chothia 等人， (1992) «/.Μολ 227:799-817 ;以及Tomlinson 等人， (1995)五M50/ 14:4628-38。V BASE目錄提供人類免疫球蛋白可變異區域序列之综合目錄（由Tomlinson等人彙編 ’ MRC Centre for Protein Engineering，Cambridge，UK)。此等序列可作為人類序列，例如架構區域及CDR，之來源。亦可使用一致性人類架構區域，如，例如，美國專利號碼 6,300,064中所說明的。 45 201000129 於某些具體例中，—結合蛋白質可含有一經改變免疫球蛋白守恆或Fc區域。舉例而言，根據本文中的教示所生產之結合蛋白質可以更強或更具專一性地結合至效應分子，例如，補體及/或Fc党體，該等效應分子可控制該結合蛋白質之幾種免疫功用，諸如：效應細胞活性、溶胞作用、補體媒介之活性、結合蛋白質清除率，及結合蛋白質半生期。可結合至一結合蛋白質（例如IgG抗體）之匕區域的典型 Fc受體包括，但不限於以下之受體：FcyRl、FcTRn，及FcRn亞型，其包括此等受體之對偶基因變異體或任擇的剪接形式。Fc受體係在，例如：Ravetch and Kinet (1991) /所所《加/. 9:457-92 ; Capel 等人，（1994) /www/iome认o办 4:25-34 ;與de Haas 等人，（1995) ·/· ZM.

Mei 126:330-41中有評論。就額外之結合蛋白質/抗體生產技術’參見，例如’ Antibodies: A Laboratory Manual (1988) Harlow 等人 ’ eds· ’ Cold Spring Harbor Laboratory。本發明未必受限於一結合蛋白質或一抗體之任何特定來源、生產法或其他特別特徵。包含抗體（免疫球蛋白）之結合蛋白質典型地為由各具大概25 kDa之兩輕(L)鏈及各具大概5〇 kDa之兩重（H)鏈所組成的四聚合醣化蛋白質。在抗體内可找到兩種輕鏈，亦即拉目達(λ)及卡巴。根據重鏈之守恆領域的胺基酸序列，可將免疫球蛋白分成5種主要的種類：A、D、Ε、G，及Μ’且其中一些可進一步分成亞型（同型物），例如：IgGi、 IgG2、IgG3、IgG4、IgAl，及IgA2。各輕鏈包括一個N-端可 46 201000129 變異(v)領域(vL)及一個守恆(c)領域(Cl)。各重鏈包括一個 N-端V領域(Vh)、3或4個(：領域(ChS)，及一個樞紐區域。最接近VH之該CH結構域稱為CH1。該等γΗ及vL領域係由4個相當守恆的序列之區域，稱為架構區域(FR1、FR2、FR3，及FR4)，所組成，該等架構區域可形成3個高度可變異序列之區域(稱為CDRs)所需的架構。該等CDR含有大部份可進行忒抗體與抗原之專一性交互作用的殘基。CDR在文中稱為CDRl、CDR2，及CDR3。在該重鏈上之CDR成份在文中稱為Hi、H2，及H3(在文中亦分別稱為CDR HI、CDR H2，和CDRH3)，而在該輕鏈上之CDR成份在文中稱為U、L2，及L3(在文中亦分別稱為CDRL1、CDRL2，和CDR L3)。 CDR3典型地為該抗原結合位址内之最大分子多樣性的來源。例如CDR H3可以短如兩個胺基酸殘基或大於26個胺基酸。不同的免疫球蛋白種類之次單元結構及三維構形係本技藝所熟知的。就抗體結構之評論而言，參見，例如， Harlow等人，（1988)如前所述。熟悉本項技藝者瞭解各次單元結構，例如CH、VH、CL、VL、CDR，及/或FR結構，包含活性片段，例如可以與該抗原結合之VH、VL或CDR次單元之部份，亦即該抗原結合性片段或，例如可結合至’ 例如Fc受體及/或補體及/或將活化Fc受體及/或補體之該CH次單元之部份。該等CDRs典型地稱為Kabat CDRs (如於Kabat等人，（1991)中所說明的，如前所述）。描述該抗原結合位址之特徵的另一標準係指如，例如：Chothia等人，（1992)如前所述，與Tomlinson等人，（1995)如前所述， 47 201000129 所說明的高度可變異環。又另一標準為由Oxford Molecular’s AbM抗體模擬軟體所使用之“AbM”定義（一般而言 ’ t ’ 例如 ’ Protein Sequence and Structure Analysis of Antibody Variable Domains in: Antibody Engineering (2001) Duebel and Kontermann eds.，Springer-Verlag，Heidelberg) o 關於Kabat CDRs所說明的具體例可任擇地使用相似的關於 Chothia高度可變異環或經AbM定義之環所說明的關係予以執行。由Fab片段係由VH-CH1及VL-CL領域所構成，該等領域係藉由介於守恆區之間的雙硫鍵共價地予以連結。Fv片段較小且係由非共價連結之VH及VL領域所構成。為了克服非共價連結領域解離之趨勢，可建構scFv。該SCFV含有可以使 ⑴VH之C-端與VL之N-端連接或使(2)VL之C-端與VH之N-端連接的可撓性多胜肽。一個15員（Glyjerh胜肽可作為一連接子，但是其它連接子在本項技藝中係已知的。抗體基因的序列在總成及體細胞突變後是高度變異的，且這些變異基因經估計可編碼1〇1〇個不同抗體分子 (第 2版）Jonio 等人，eds，Academic

Press，San Diego，CA,)。於本發明的某些具體例中，該結合蛋白質是一單一領域的結合蛋白質。單一領域的結合蛋白質包括結合蛋白質，其中該等CDRs是一單一領域多胜肽的部分。實例包括，但不限於，重鏈結合蛋白質、天然缺乏輕鏈的結合蛋白質、衍生自慣例的4鏈抗體之單一領域的結合蛋白質、經 48 201000129 工程化的結合蛋白質’以及單一領域蛋白質骨架，除了街生自抗體的該等之外。單一領域的結合蛋白質包括本技藝所知道的任一者，以及任何未來決定的或未來獲知的單— 領域的結合蛋白質。單一領域的結合蛋白質可以衍生自任何物種，包括，但不限於：小鼠、人類、駱駝、美洲駝、魚、鯊魚、山羊、兔、雞，以及牛。於本發明的一個態樣中，該單一領域的結合蛋白質能衍生自於魚中發現的免疫球蛋白之一可變異區域，例如，舉例而言，其係衍生自鯊魚血清中發現的已知為新穎抗原受體(NAR)之免疫球蛋白同型物。生產衍生自 NAR的一可變異區域(“IgNARs”)的單一領域結合蛋白質的方法係說明於例如’國際申請案公開號WO 03/014161和 Streltsov (2005)/^〇如14(11):2901-09之中。單一領域的結合蛋白質也包括天然存在的單一領域的結合蛋白質，其係本技藝所知道為缺乏輕鏈的重鏈抗體。此衍生自一天然缺乏一輕鏈的重鏈抗體之可變異領域於本文中已知為一種VHH，或是一種奈米抗體，以令其與4鏈的免疫球蛋白之慣例的VH作區分。此一VHH分子可衍生自在駱駝科物種，例如駱駝、美洲駝、單峰駝、羊駝及南美野生羊駝，中所取得之抗體，以及有時稱為駱駝動物或駱駝動物化可變異領域（參見，例如，Muyldermans (2001) ·/· 74(4):277-302，其被併入本文中以作為參考資料）。除了路駝科家族的該等之外的其他物種亦可以生產天然缺乏輕鏈的重鏈結合蛋白質。VHH分子比IgG分子小大約10倍。其等 49 201000129 係單一多胜肽且非常安定，耐極端的pH與溫度條件。而且，其等對蛋白酶之作用有抗性’此並非慣例的抗體的情況。而且，VHH之活體外的表現能生產高產率、正確折疊的官能性VHH。此外’於路秘動物產生的結合蛋白質會辨識除了經由抗體存庫活體外產生的抗體或是經由除了絡聪動物之外的其他哺乳動物之免疫作用產生的抗體所辨識的該等之外的抗原決定位（參見’例如，國際申請案公開號 WO 97/049805與WO 94/004678，其等被併入本文中以作為參考資料）。 “雙專一性”或“雙官能性’’結合蛋白質為具有兩不同重 /輕鏈對及兩不同結合部份之人造雜交結合蛋白質。雙專一性結合蛋白質可藉各種方法製成，其包括融合瘤之融合或是成Fab’片段的連接（參見，例如，s〇ngsiviiai and Lachmann (1990) Clin. Exp. Immunol. 79:315-21 ； Kostelny 等人，（1992) ·/./awwwwo/· 148:1547-53)。於一個具體例中，該雙專一性結合蛋白質係包含一第一結合領域多胜肽，例如：Fab’片段，其係經由一免疫球蛋白守恆區而連結至一第二結合領域多胜肽。如本發明的另一個的結合蛋白質能包含，舉例而言，一結合領域-免疫球蛋白融合蛋白質’其包括融合或用其他方法連接至一免疫球蛋白柩紐或樞紐作用區多胜肽的一結合領域多胜肽，該結合領域多胜肽接著經融合或用其他方法與非CH1之含一或多個得自免疫球蛋白重鏈之天然或經工程化的守怪區的區域連接’舉例而言：IgG及igA之ch2 50 201000129 及CH3區域或lgE之Ch3及Ch4區域（參見，例如，美國專利公開案2005/0136049，其被併入本文中以作為參考資料以得到完整的說明）。該結合領域-免疫球蛋白融合蛋白質可進一步包括一包含經融合或用其他方法與該樞紐區多胜肽連接之天然或經工程化的免疫球蛋白重鏈Ch2守恆區多胜肽 (或就全部或局部衍生自IgE之建構物而言係為Ch3)，及經融合或用其他方法與該CH2守恆區多胜肽（或就全部或局部衍生自IgE之建構物而言係為CH3)連接之天然或經工程化之免疫球蛋白重鏈CH3守恆區多胜狀（或就全部或局部衍生自IgE之建構物而言係為Ch4)的區域。典型地，此等結合領域-免疫球蛋白融合蛋白質可具有至少一種選自以下所組成之群組的免疫活性：經抗體依賴性細胞媒介之細胞毒殺 (ADCC)、補體結合，及/或結合至一目標，例如一標的抗原，例如：人類IL-21R。本發明的結合蛋白質也可包含胜肽模擬物 (mimetics)。類似物為可模擬蛋白質二級結構之元素的含胜狀分子（參見，舉例而言，Johnson等人，PepizWe M/we’/c·? in cmd P/iarmaqy (1993) Pezzuto 等人 ’ eds.，Chapman and Hall，New York，其之全部内容被併入本文中以作為參考資料）。該胜肽模擬物之使用的背後優先原因在蛋白質之胜肽主鏈存在之主要功用為將胺基酸側鏈定向，以此方式來促進分子交互作用，諸如抗體與抗原間之分子交互作用。已預期胜肽模擬物可以進行與天然分子類似之分子交互作用。可使用這些原理以工程化不僅 51 201000129 具有文中揭示之該等目標胜肽的許多自然性質且具有經改變且潛在性改良之特徵的二代分子。

其他的週用於實施本發明i菇令、资白質的具體例包括融合畏白質。此等分子通常具有於N-或C-端與所有或一部份的第二多胜肽或蛋白質連接之所有或大部份指引胜肽，例如IL-21R或抗IL-21R抗體。舉例而言，融合蛋白質可使用得自其他物種的前導（或訊息）序列以使一蛋白質在異源型宿主内呈現重組表現。舉例而言，本發明的該等結合蛋白質以及其等之抗原結合片段的胺基酸序列，或是編碼胺基酸序列的核酸序列，其係包含一前導(或訊息)序列，可以選自於序列辨識編號：87-109與239-248。另一有用的融人作用包括加入一免疫活性領域，諸如一結合蛋白質抗原決定位’以促進該融合蛋白f之純化。包含—分裂位址或接近該融合接合處之可促進純化後外源多胜肽之移除。其他有用之融合作聽括官能性領域，諸如酶之活性位址了醣化領域、細胞指引信號或穿膜區域，之連接

::質内之蛋白質或胜—括，但不限於Si 管生：蛋Π、殺細胞性蛋白質、前_周亡劑、抗血 s生成劑、激素、細胞I . p ^ ^ 浐牌生長因子、胜肽藥物、抗體、抗體之Fab片段、抗κ

文體蛋白質、酶、凝集素、MHC 资白質、細胞黏連蛋白皙 L … 質及結合性蛋白質。產生融合蛋白貝之方法為熟悉本項技軚龙曰法，使用雙官能性交聯;:熟知。可，例如藉化學附著合成法或藉使可將編私^該完整的融合蛋白f之從新灸和弓丨胜肽之DNA序列與可將該第 52 201000129 二胜肽或蛋白質之DNA序列連接，繼而表現該完整的融合蛋白質，而製成此等蛋白質。於一個具體例中’指引胜肽，舉例而言，IL-21R，係與含兩守恆區領域及一樞紐區域，但無可變異區域之免疫球蛋白重鏈守恆區（諸如Fc片段）融合（見，例如美國專利第 6,018,026號及第5,750,375號，其皆在此併入本案以為參考資料）。該Fc區域可以是天然存在的!^區域或可以經改變以改良特定性質，諸如治療特性、循環時間、減少的凝集性等。與Fc區域融合之胜肽及蛋白質典型地展現出比未經融合之對應物更大的活體内半生期。此外，與Fc區域融合之作用可以使該融合多胜肽進行二聚合作用/多聚合作用。本發明的一個態樣係包含結合扎-2111的結合蛋白質以及其等之抗原結合片段。本揭示係提供衍生自人類免疫球蛋白吳基因存庫之新顆CDR。用於攜帶CDR之蛋白質結構通常為抗體重鏈或輕鏈或其一部份，其中該CDR係座落於與天然存在之CDR相關的區域内。可變異領域之結構及位置可以是如Kabat等人，（(1991)如前所述)所說明的方式決定。本發明的結合蛋白質（以及其等之抗原結合片段）之例示性具體例係被辨識為AbA-AbZ、H3-H6、L1-L6、L8-L21，以及L23-L25。本發明的抗IL_21R結合蛋白質之DNA與胺基酸序列的一些非限制性例示性具體例係於序列辨識編號： 5-195、213-229,以及239_248中提出。本發明的抗IL_21R 結合蛋白質之DNA與胺基酸序列的一些例示性具體例，包 53 201000129 括其等之scFv片段、VH與VL領域，以及CDRs，以及其等目前的密碼與先前的名稱係於第17-25圖，以及表2A與2B内提出。表2A:目前的抗體密碼與先前的名稱之相關性目前的密碼先前的名稱 AbA VHP/VL2 AbB VHP/VL3 AbC VHP/VL11 AbD VHP/VL13 AbE VHP/VL14 AbF VHP/VL17 AbG VHP/VL18 AbH VHP/VL19 Abl VHP/VL24 AbJ VH3/VLP AbK VH3/VL3 AbL VH3/VL13 AbM VH6/VL13 AbN VH6/VL24 AbO VHP/VL16 ； VHPTM/VL16 AbP VHP/VL20 ； VHPTM/VL20 AbQ VH3/VL2 ； VH3DM/VL2 AbR VH3/VL18 ； VH3DM/VL18 AbS VHP/VL6 ； VHPTM/VL6 ； VL6 AbT VHP/VL9 ； VHPTM/VL9 ； VL9 AbU VHP/VL25 ； VHPTM/VL25 AbV VH3TM/VL2 AbW VH3TM/VL18 AbX VHPDM/VL9 AbY VHPg4/VL9 AbZ VHPWT/VL9 54 201000129 表2B:本發明的例示性結合蛋白質之VH與VL領域、scFv，以及CDRs的胺基酸與核苷酸序列區域類型 H3序列辨識 H4序列辨識 H5序列辨識 H6序列辨識 L1序列辨識 VH AA 編號：14 編號：16 編號· 18 編號：20 編號：6 Vl AA 編號：10 編號：10 編號：10 編號：10 編號：2 2 scFv AA 編號： 110 編號： 112 編號： 114 編號： 116 編號： 118 CDR HI AA 編號： 163 編號： 163 編號： 163 編號： 163 編號： 163 CDR H2 AA 編號： 164 編號： 164 編號： 164 編號： 164 編號： 164 CDR H3 AA 編號： 165 編號： 166 編號： 167 編號： 168 編號： 169 CDR LI AA 編號： 194 編號： 194 編號： 194 編號： 194 編號： 194 CDR L2 AA 編號： 195 編號： 195 編號： 195 編號： 195 編號： 195 CDR L3 AA 編號： 170 編號： 170 編號： 170 編號： 170 編號： 171 Vh DNA 編號：13 編號.15 編號：17 編號：19 編號：5 Vl DNA 編號：9 編號·· 9 編號.9 編號_· 9 編號：21 scFv DNA 編號： 109 編號： 111 編號： 113 編號： 115 編號： 117 ❹ 55 201000129 表2B (待續的) 區域類型 L2序列辨識 L3序列辨識 L4序列辨識 L5序列辨識 L6序列辨識 VH AA 編號：6 編號：6 編號：6 編號：6 編號· 6 Vl AA 編號：24 編號.2 6 編號· 2 8 編號：30 編號：3 2 scFv AA 編號： 120 編號： 122 編號： 124 編號： 126 編號： 128 CDR HI AA 編號： 163 編號： 163 編號： 163 編號： 163 編號： 163 CDR H2 AA 編號： 164 編號： 164 編號： 164 編號： 164 編號： 164 CDR H3 AA 編號： 169 編號： 169 編號： 169 編號： 169 編號： 169 CDR LI AA 編號： 194 編號： 194 編號： 194 編號： 194 編號： 194 CDR L2 AA 編號： 195 編號： 195 編號： 195 編號· 195 編號： 195 CDR L3 AA 編號： 172 編號： 173 編號： 174 編號： 175 編號： 176 VH DNA 編號.5 編號：5 編號’· 5 編號：5 編號：5 Vl DNA 編號：23 編號：2 5 編號：27 編號：29 編號：31 scFv DNA 編號： 119 編號： 121 編號： 123 編號： 125 編號： 127 56 201000129 表2B (待續的) 區域類型 L8序列辨識 L9序列辨識 L10序列辨識 L11 序列辨識 L12序列辨識 VH AA 編號：6 編號：6 編號· 6 編號：6 編號· 6 Vl AA 編號： 34 編號： 36 編號： 38 編號： 40 編號：42 scFv AA 編號： 130 編號： 132 編號： 134 編號： 136 編號： 138 CDR HI AA 編號： 163 編號： 163 編號： 163 編號： 163 編號： 163 CDR H2 AA 編號： 164 編號： 164 編號： 164 編號： 164 編號： 164 CDR H3 AA 編號： 169 編號： 169 編號： 169 編號： 169 編號： 169 CDR LI AA 編號： 194 編號： 194 編號： 194 編號： 194 編號： 194 CDR L2 AA 編號： 195 編號： 195 編號： 195 編號： 195 編號： 195 CDR L3 AA 編號： 177 編號： 178 編號： 179 編號： 180 編號： 181 Vh DNA 編號.5 編號：5 編號：5 編號：5 編號：5 Vl DNA 編號： 33 編號： 35 編號： 37 編號： 39 編號：41 scFv DNA 編號： 129 編號： 131 編號： 133 編號： 135 編號： 137 57 201000129 表2B (待續的)

區域類型 L13序列辨識 L14序列辨識 L15序列辨識 L16序列辨識 L17序列辨識 VH AA 編號：6 編號_ 6 編號_· 6 編號：6 編號_ 6 Vl AA 編號： 44 編號： 46 編號： 48 編號：5 0 編號：5 2 scFv AA 編號： 140 編號： 142 編號： 144 編號： 146 編號： 148 CDR HI AA 編號： 163 編號： 163 編號： 163 編號： 163 編號： 163 CDR H2 AA 編號： 164 編號： 164 編號： 164 編號： 164 編號： 164 CDR H3 AA 編號： 169 編號： 169 編號： 169 編號： 169 編號： 169 CDR LI AA 編號： 194 編號： 194 編號： 194 編號： 194 編號： 194 CDR L2 AA 編號： 195 編號： 195 編號： 195 編號： 195 編號： 195 CDR L3 AA 編號. 182 編號： 183 編號： 184 編號： 185 編號： 186 VH DNA 編號：5 編號_ 5 編號：5 編號：5 編號：5 Vl DNA 編號： 43 編號： 45 編號： 47 編號：49 編號：51 scFv DNA 編號： 139 編號： 141 編號： 143 編號： 145 編號： 147 58 201000129 表2B (待續的) 區域類型 L18序列辨識 L19序列辨識 L20序列辨識 L21 序列辨識 L23 序列辨識 VH AA 編號：6 編號：6 編號：6 編號· 6 編號：6 Vl AA 編號： 54 編號.5 6 編號· 5 8 編號： 60 編號：62 scFv AA 編號： 150 編號·_ 152 編號： 154 編號： 156 編號： 158 CDR HI AA 編號： 163 編號：163 編號： 163 編號： 163 編號： 163 CDR H2 AA 編號： 164 編號：164 編號： 164 編號： 164 編號： 164 CDR H3 AA 編號： 169 編號：169 編號： 169 編號： 169 編號： 169 CDR LI AA 編號： 194 編號：194 編號： 194 編號： 194 編號： 194 CDR L2 AA 編號： 195 編號.19 5 編號： 195 編號： 195 編號： 195 CDR L3 AA 編號： 187 編號：188 編號： 189 編號： 190 編號： 191 VH DNA 編號· 5 編號：5 編號：5 編號：5 編號：5 Vl DNA 編號： 53 編號：5 5 編號.5 7 編號： 59 編號：61 scFv DNA 編號： 149 編號：151 編號： 153 編號： 155 編號： 157 表2B (待續的) 區域類型 L24序列辨識 L25序列辨識 VH AA 編號： 6 編號 6 Vl AA 編號： 64 編號 66 ScFv AA 編號： 160 編號 162 CDR HI AA 編號： 163 編號 163 CDR H2 AA 編號 164 編號 164 CDR H3 AA 編號 169 編號 169 CDR LI AA 編號 194 編號 194 CDR L2 AA 編號 195 編號 195 CDR L3 AA 編號 192 編號 193 Vh DNA 編號· 5 編號 5 Vl DNA 編號 63 編號 65 scFv DNA 編號 159 編號 161 59 201000129 本發明的抗IL-21R結合蛋白質可以包含抗體守恆區或其等之部分。舉例而言’ VL領域可以於其c_端處與輕鍵守恆領域(如Ck或(：λ)連接。類似地，VH領域或其部份可以與一重鏈（例如IgA、IgD、IgE，及IgM)的所有或部份，及任何同型物亞型連接。守恆區係本技藝所知道的（參見，例如，Kabat等人，（1991)如前所述）。因此，屬於本發明範圍之結合蛋白質包括與本項技藝所熟知的守恆區結合之Vh 及VL領域或其部份。某些具體例係包含AbA-AbZ、H3-H6 ' L1-L6、L8-L21，及/或L23-L25iFv片段的vH領域' VL領域或其等之組合。進一步的具體例包含來自VH和VL領域的1、2、3、4、5或6 個CDR。其之CDR序列係相同於，或是相似於（亦即，無實質地與之不同的）序列辨識編號：5_195、213-229，以及 239-248中提出的該等序列内存在的一或多個CDR序列之結合蛋白質係包含於本發明的範嘴内。於某些具體例中，VH及/或VL領域可以是生殖系列化的，亦即，此等領域的FR係使用慣例的分子生物學技術予以突變以配合藉該等生殖系列細胞所產生之架構區域。於其他的具體例中，該等FR序列保持與一致性生殖系列序列相異。於一個具體例中，使用突變誘發作用以製造更類似— 或多種生殪系列序列之結合蛋白質。此可以經由體突變誘發作用或經由易出錯PCR (err〇r pr〇ne pCR)將突變導入— 201000129 結合蛋白質（例如一抗體）之FR内。可藉根據VBASE資料庫 (MRC Center for Protein Engineering，UK)以進行之胺基酸及核酸序列對齊而辨識該等VH及VL領域之生殖系列序列。VBASE為彙編自超過一千種已公開序列（其包括 GENBANK®與EMBL·資料庫之最近發佈的序列）之所有人類生殖系列可變異區域序列的綜合目錄。在一些具體例中，使scFvs之FR突變以與VBASE資料庫中最接近之配對物一致，且使該等CDR部份保持完整。於某些具體例中，本發明的結合蛋白質專一地與

AbA-AbZ、H3-H6、L1-L6、L8-L21，或是L23-L25所辨識的抗原決定位相同的抗原決定位，藉此其等競爭性抑制

AbA-AbZ、H3-H6、L1-L6、L8-L21 ’ 或是L23-L25結合至人類IL-21R。可以在競爭性結合分析中測定此等結合蛋白質。於一個具體例中，此等結合蛋白質針對人類IL_21R的該結合常數(KA)是至少1〇5 Μ、·1。可使用本項技藝中已知之技術，諸如ELISA、生物感測器技術(諸如生物專一性交互作用分析）或其它技術(其包括本申請案中所述之技術），測定結合親和力。預期到本發明的結合蛋白質可結合其他的蛋白質，例如，舉例而言，包含IL-21R的所有或部份之重組型蛋白質。熟悉此藝者會瞭解可使用該等所揭示結合蛋白質以檢測、測定，及/或抑制稍不同於IL-21R之蛋白質。舉例而言，此等蛋白質可以是IL-21R之同源物。已預期抗il-21R 抗體可結合之蛋白質所包含之序列與序列辨識編號：2或4 61 201000129 中所提出之序列内之具至少100、80、60、40或20個相鄰胺基酸的任何序列具至少約60%、70%、80%、90%、95%或更高同一性。除了序列同源性分析外，可進行抗原決定位製圖（見，例如 & (1996) Morris ed.，Humana

Press)’及二級與三級結構分析以鑑定藉目前揭示之結合蛋白質及其與抗原之複合物所假設之特定3D結構。此等方法包括’但不限於：X射線結晶學（Engstem(1974)所ocr/zew. Exp. 价〇/.’ 11:7-13)及本文的結合蛋白質之實際代表的電腦模擬 (Fletterick 等人，（1986) Cowpwier GVa/Wcs

Modeling ’ in Current Communications in Molecular Biology 5 Cold Spring Harbor Laboratory » Cold Spring Harbor，NY)。本揭示係提供提供一種獲得抗IL-21R結合蛋白質之方法。該方法包含產生具有經改變本文中所揭示的該等序列之VH及/或VL序列（群）的結合蛋白質。可藉熟練的技術人員使用本項技藝已知之技術而衍生此等結合蛋白質。舉例而言，可將胺基酸取代作用、刪失作用或加入作用導入FR 及/或CDR區域中。FR變化通常用以改良該等結合蛋白質之安定性及免疫原性，而CDR變化典型上用以增加一結合蛋白質對其抗原之親和力。可藉改變一或多個CDR序列並測定該結合蛋白質對其目標之親和力而測試可增加親和力之變化（參見，例如，XniAody 五(2nd ed. 1995) Borrebaeck ed.，Oxford University Press) ° 201000129 其CDR序列與下列提出的序列無實質地不同或是包括下列序列的結合蛋白質係屬於本發明範疇：序列辨識編號：5-195 ' 213-229,以及239-248。典型地，此無實質差異係涉及用一具有相似的電荷、疏水或立體化學特性之胺基酸進行胺基酸取代。與CDR區域不同，亦可進行FR區域内之更大程度的取代，只要該等取代作用不會不利地影響 (例如與未經取代之結合蛋白質比較，減少超過5〇%之親和力）該結合蛋白質之結合性質。也可進行取代作用以將該結合蛋白質生殖系列化或將該抗原結合位址安定化。守恆性修飾可生產具有類似於得自此等修飾作用之分子的官能性及化學性之分子。反之，可藉選擇該胺基酸序列中之取代基而實質修飾該等分子之官能性及/或化學特性，該等取代基在對於維持以下之作用有顯著差異：（1)在該取代區域中之分子主鏈的結構，例如呈薄片或螺旋構形’（2)於目標部位之分子的電荷或疏水性或分子之大小〇舉例而言，“守恆性胺基酸取代”可涉及以非天然殘基取代天然胺基酸殘基，藉此對於於該位置之胺基酸殘基的極性或電荷幾乎沒有影響（參見，例如，MacLennan等人， (1998) Jcia /Vzjas/o/. (Scimc/· 643:55-67 ; Sasaki 等人，（1998) Ji/v. 35:1-24)。在取代作用為所欲的情況下，可由熟悉本項技藝者測定所欲胺基酸取代基(不論守恆性或非守恆性）。舉例而言，可使用胺基酸取代基以鑑定該分子序列之重要殘基，或增 63 201000129 加或降低文中所述該等分子之親和力。代表性胺基酸取代基包括，但不限於：表3中所提出之取代基。表3:例示性胺基酸取代原有殘例示性的取代更多的守怪性取基代 Ala (A) Val，Leu，lie Val Arg (R) Lys，Gin，Asn Lys Asn (N) Gin Gin Asp (D) Glu Glu Cys(C) Ser，Ala Ser Gin (Q) Asn Asn Gly (G) Pro，Ala Ala His (H) Asn，Gin，Lys，Arg Arg He (I) Leu，Val，Met，Ala， Phe，正白胺酸 Leu Leu (L) 正白胺酸，lie，Val， Met，Ala，Phe lie Lys (K) Arg，1,4-二胺基-丁酸， Gin，Asn Arg Met (M) Leu，Phe，lie Leu Phe (F) Leu，Val，lie，Ala，Tyr Leu Pro (P) Ala，Gly Gly Ser(S) Thr，Ala，Cys Thr Thr(T) Ser Ser Trp (W) Tyr ， Phe Tyr Tyr (Y) Trp ， Phe ， Thr ， Ser Phe Val (V) lie，Met，Leu，Phe， Ala，正白胺酸 Leu 於某些具體例中，守恆性胺基酸取代亦包括典型藉化學胜肽合成法（而非在生物系統中進行之合成法）而併入之非天然存在的胺基酸殘基。於一個具體例中，該製造變異型VH領域之方法包括加入、刪失或取代所揭示VH領域中之至少一個胺基酸，或合 64 201000129 併所揭示vH領域與至少—個乂1領域，並測試用於IL_21R結合或IL-21R/IL-21活性之調控作用的變異型Vh領域。一種製造變異型VL領域之類似方法包括加入、刪失或取代所揭示vL領域中之至少一個胺基酸，或使所揭示之¥匕領域與至少一個VH領域組合，並測試用於IL 21R結合或 IL-21R活性之調控作用的變異型領域。於一些例不性具體例中，該等抗IL 21R結合蛋白質可藉化學交聯法或重組法而予以連接至一蛋白質（例如白蛋白）。亦可以使用美國專利號碼4,64〇,835 ; 4,496,689 ; 4,301，144 ; 4,670,417 ; 4,791，192 ;與 4,179,337 中提出之方式使所揭示之結合蛋白質與各種非蛋白質狀聚合物（例如聚乙二醇、聚丙二醇或聚氧化烯烴)連接。該等結合蛋白質可藉與，例如聚合物共價結合而經化學性修飾以增加其在血液循環中之半生期。例示性聚合物及連接方法係示於美國專利號碼4,766,106 ; 4，179,337 ; 4,495,285 ;與4,609,546 之中。該等揭示的結合蛋白質可經修飾以改變其醣化作用；亦即，至少一種碳水化合物部分可經刪除或加入至該結合蛋白質内。可藉改變胺基酸序列以刪除或產生本項技藝中已為吾人熟知之醣化作用一致性位址而進行該等餹化作用位址的刪失作用或加入作用。添加碳水化合物部分之另一種方法為醣苷與該等結合蛋白質（例如抗體）之胺基酸殘基的化學或酵素性偶合（參見，例如，國際申請案公開號 WO 87/05330及Aplin 等人，（1981) 65 201000129 22:259-306)。亦可化學或酵素性方法以進行碳水化合物部分之移除（參見’例如，Hakimuddin等人，（1987) B/ockAw·价259:52; Edge 等人，（1981)4如/. 118:131 ;以及Thotakura 等人，（1987) Md·五所〇/. 138:350)。修飾碳水化合物結構可以是較佳的，因Fc領域内之胺基酸的改變可以高一種藥學組成物之免疫原性（參見，例如，國際申請案公開號WO 2008/052030)。針對免疫球蛋白分子’已經顯示出連接N-連接的碳水化合物至CH2 領域的Asn-297對於ADCC活性是關鍵性的。其之酵素性或經由N-連接的一致性位址之突變的移除導致幾乎沒有或完全沒有ADCC活性。於醣蛋白内，碳水化合物可連接至三胜肽要素Asn-X-Thr/Ser的天冬醯胺酸的側鏈之醯胺氮原子。此類型的醣化，稱為N-連接的聽化，於内質網(er)中開始添加多個單醣至磷酸長醇以形成丨4 _殘基分支的碳水化合物複合物。此碳水化合物複合物接而藉由寡醣轉移酶 (ost)複合物予以轉移至蛋白質。在醣蛋白離開£11内腔之前，自該14-殘基寡醣移除3個葡萄糖分子。酵素ER配醣酶】、 ER配醣酶II與ER甘露糖酶係涉&ER加工。其後，將多胜肽運送至咼基複合體，N-連接的糖鏈係以許多不同的方式予以修飾。於咼基複合體的顺式及内侧區間中，原始的14_醣 N-連接的複合物可以經由移除甘露糖(Man)殘基予以修整以及經由添加N-乙醯葡萄胺糖（GlcNac)及/或海藻糖(Fuc) 殘基予以延長。各種形式的N_連接的碳水化合物大體而言具有共通的由3個甘露糖與2個N_乙醯葡萄胺糖殘基所構成 66 201000129 的五碳糖核心。最後，於反式高基複合體内，可加入其他的GlcNac殘基，接著半乳糖(Gal)與一末端的唾液酸⑼叫。咼基複合體内的碳水化合物加工稱為“末端醣化，，以與“核心醣化”區分，核心醣化係於£11内發生。最後的複合物碳水化合物單元能呈現許多的形式與結構，其等的一些具有2、 3或4個支鏈(稱為雙觸角的、三觸角的或四觸角的）。許多酵素涉及高基加工，包括高基甘露糖酶IA、见與1(：、GlcNAc_ 0 轉移酶I、高基甘露糖酶Π、GlcNAc-轉移酶II、半乳糖基轉移扭與唾液基轉移酶。改變一結合蛋白質的守值區（例如，舉例而言，一抗體 - 的守恆區）之方法係本技藝所知道的。可藉以不同殘基取代；至少一種胺基酸殘基而製生具有不同功用（例如適於效應配體，諸如細胞上之FCR或補體之ci組份，的不同親和力）之結合蛋白質（參見，例如，歐洲申請案公開號Ep 〇 388 151 與美國專利號碼5,624,821及5,648,260)。若適用於鼠或其它〇物種的結合蛋白質，可描述能減少或去除類似功用之類似改變類型。舉例而言，可改變一結合蛋白質（例如IgG，諸如人類 IgG)之Fc區域對FCR(例如Fc<rR1)或Clq之親和力。可藉以至少一種具有合適官能性於其側鏈上之殘基取代至少一種特定殘基，或藉導入帶電荷官能性基團，諸如麩胺酸或天冬胺酸，或也許是芳香族非極性殘基，諸如苯丙胺酸、酪胺酸、色胺酸或丙胺酸，而改變親和力（參見，例如，美國專利號瑪5,624,821)。 67 201000129 舉例而言’在IgG守恆區内以丙胺酸取代殘基297(天冬酿胺酸)可顯著抑制效應細胞之募集，且僅稍微減少（約弱3 倍)對Clq之親和力（見，例如美國專利號碼5,624 821)。該等殘基在重鏈中之編號為EU索引之編號（見，Kabat等人， (1991)如前所述）。此改變作用可破壞該醣化作用部位，以及咸信碳水化合物之存在為Fc受體結合作用所需。咸信於該部位之可破壞該醣化作用的任何其它取代作用會導致溶解活化之類似降低。亦已知，例如可將殘*318(G1U)、 320(Lys)及322(LyS)之任一種轉變成Ala的其它胺基酸取代作用可完全破壞Clq與IgG抗體之Fc區域的結合作用（參見，例如，美國專利號碼5,624,821)。可製備與Fc受體之相互作用性較低之經修飾的結合蛋白質。舉例而言，業經証明可結合至人類Fcr R1受體以將Leu 235轉變成Glu之人類IgG3可破壞其與該受體之相互作用。亦可使用一結合蛋白質的樞紐連結區域内之鄰接或接近部位上的突變作用（例如，以Ala取代殘基 234、235與237)以影響結合蛋白質對該Fcr R1受體之親和力。該等殘基在重鏈内之編號係根據該EU索引（見上述 Kabat等人，1991)。該等殘基在重鏈中之編號為EU索引之編號（見，Kabat等人，（1991)如前所述）。因而，於本發明的一些具體例中，本發明的結合蛋白質之Fc區域含有至少一個守恆區突變，例如，舉例而言’在位置234改變 Leu 成 Ala(L234A)、在位置 235 改變 Leu 成 Ala (L235A)，及/或在位置237改變Gly成Ala (G237A)。於一個具體例 68 201000129 中，該等結合蛋白質的Fc區域含有2個守恆區突變， L234A與G237A (亦即，“雙突變’，或“DM”）。於另一個具體例中，該等結合蛋白質的Fc區域含有3個守恆區突變， L234A、L235A，以及 G237A (亦即，“三突變’，或“TM”）。舉例而言，於序列辨識編號：196中提出一個人類IgG之守怪區三突變。改變一結合蛋白質之溶解活性的額外的方法，舉例而 A 言’藉改變該CH2領域之N端區域内的至少一個胺基酸，係於國際申請案公開號WO 94/029351與美國專利號碼 5,624,821之中說明。 - 本發明的結合蛋白質可經可檢測或功能性標籤標記。 - 這些標籤包括放射性標記(例如1311或99Tc)、酵素標記(例如辣根過氧化酶與鹼性磷酸酶），及其它化學部分（例如生物素）。本發明亦以一種結合IL-21R(特別地，人類IL-21R)之經 ❹ 單離的結合蛋白質或其等之抗原結合片段為特徵。於某些具體例中’該等抗IL-21R結合蛋白質可具有以下特徵的至少一者：（1)其係一單株或是單一專一性結合蛋白質；（2) 其係一人類結合蛋白質；（3)其係一活體外產生的結合蛋白質；（4)其係一活體内產生的結合蛋白質（例如，基因轉殖的小鼠系統）；（5)其抑制IL-21結合至IL-21R ; (6)其係一 IgGl，（7)其以至少大約的結合常數與人類il_2ir 結合；（8)其以至少大約5χ1〇4 的結合常數與鼠類 IL-21R結合；（9)其以大約1〇-3 (1/s)或更小的解離常數與人 69 201000129

類IL-21R結合；（10)其以大約10-2 (1/s)或更小的解離常數與鼠類IL-21R結合，（11)其係在大約1乃nM或較低之心下抑制人類IL-21R-媒介的表現人類江_2丨R BaF3細胞之增殖，（12)其係在大約〇·5 nM或較低之IC5G下抑制鼠類 IL-21R-媒介的表現鼠類IL_21R BaF3細胞之增殖；（13)其係在大約14.0 nM或較低之^川下抑制人類il_2ir_媒介的表現人類IL-21R TF1細胞之增殖；（14)其係在大約i 9 nM 或較低之IC50下抑制IL-21-媒介的人類原飢細胞的增殖； (15)其係在大約h5 nM或較低之1(：5〇下抑制媒㈣ © 人類原代CD4+T細胞的增殖；以及（16)其係在大約5〇_ 或較低之IC50下抑狐_21_媒介的鼠類原代cm+ τ 增殖。 ’ 上s兒明的修飾並非全面，許多其它修飾為熟練本技藝中具有技藝的人可知以徹底性，且根據本揭示内容之教示的技藝者所知。選殖及表現系統

本揭示内容提供編碼該等揭示的結合蛋白質之經身的核酸。該等核酸可包含DNA或RNA，且穴』从疋合片元王，。[5分地）或重組型（完全或部分地）。如本文中所言的核苷酸序列包括具有特定序列之DNA分 # ^ 且包括j 具中係以u取代τ之特定序列的RNA分子。亦預期到以下核酸，其係包含如文中揭示之1、2或 =DR、—VH領域、-Vl領域或其等之組合的編碼序列^ 質上與其相同之序列（例如與其它相同性為至少5⑽ 70 201000129 60% ' 70% ' 80% ' 85% > 90% ' 95% ' 96% ' 97% ' 98% ' 99%或更高的序列，或於嚴苛條件下可與該等序列雜交之序列）。於一個具體例中，該等經單離的核酸具有編碼抗 -IL-21R結合蛋白質的重鏈與輕鏈可變異區域之核苷酸序列，其係包含選自於序列辨識編號：163-195的胺基酸序列之至少一個CDR，或是編碼一個與本文說明的該等序列相差1或2或3或4個胺基酸之CDR之序列。該核酸僅能編碼可變異區域的輕鏈或重鏈，或是能編碼一結合蛋白質輕鏈或重鏈的守恆區，其係可操作地連 . 接至對應的可變異區域。於一個具體例中，該輕鏈可變異 - 區域係與選自卡巴或拉目達守恆區之守恒區連接。該輕鏈守恆區也可以是人類卡巴或拉目達類型。在另一具體例中，該重鏈可變異區域係與選自IgG(例如IgGi、IgG2、IgG3 和 IgG〇、IgM、IgA,、ig、、IgD，及 IgE 之結合蛋白質〇的同型物的重鏈守恆區連接。該重鏈的守恆區可以是一

IgG(例如，IgGl)同型物。本發明的賊成物，雖齡了轉飾的限制酶位址及諸如此類外，其通常以（cDNA或基因組dna或其混合物之）天然序列根據標準技術予以突變以提供基因序列。就密碼序列而言，如所欲，這些突變作用可影響胺基酸序列。特別地’係涵蓋實質上與天然v、D、j、怪定的轉換部位相同或自其衍生之核㈣序列及文中所述之其 71 201000129 它此等序列（其中“衍生，，表示與另一序列相同或自其修飾之序列）。於一個具體例中，該核酸與所提供之序列的核酸不同（例如由於取代、插入或刪失）而產生差異（例如相差至少一個但小於10、20、30或40個核苷酸；至少一個但小於該實驗對象核酸中該等核苷酸之1%、5%、10%或20%)。就此分析而言，若必要，該等序列應該經對齊以獲得最大同源性。自刪失或插入或錯配所“圈出（loop out)，，之序列被認為有差異。該差異可以是發生於可將編碼非必需殘基 (群)之核苷酸(群），或該差異可以是一守恆性取代。本揭示亦提供以質體、載體，以及轉錄或表現卡匣形式之核酸建構物’其包含至少一種如文中所述之核酸。本揭示進一步提供一宿主細胞，其係包含至少一個本文揭示的核酸建構物。亦提供一種自一包含本文中說明的序列之核酸(群) 製造一經編碼蛋白質（群）的方法。該方法包括於合適條件下培養宿主細胞以使其自核酸表現該蛋白質。若合適’在表現及製造後，可使用任何合適技術以單離及/或純化 Vh或VL領域或特定結合部份，然後使用。該方法亦可包括以下步驟：融合一編瑪SCFV之核酸與編瑪/個結合蛋白質之Fc部份之核酸，並在細胞内表現該經融合核酸。該方法亦可包括生殖系列化之步驟。抗原結合片段、Vh及/或vL領域，及編滿核酸分子與載體可自其等之天然環境以實質上純或均質形式，或就 72 201000129 核酸而言’無或實質上無不同於編碼具有所欲功用之多胜狀之序列的來源之核酸或基因，予以單離及/或純化。用於在各種宿主細胞内選殖或表現多胜肽之系統係本技藝所知道的。適於產生結合蛋白質之細胞係描述在，例如 Fernandez 等人（1999) 五JcpreWow 办价咖，

Academic Press中。簡言之，合適的宿主細胞包括哺乳動物細胞、昆蟲細胞、植物細胞、酵母細胞或原核細胞，例 ❹如大腸桿菌（E.。本技藝中可得之用於異源性多胜肽表現之哺乳動物細胞包括：淋巴細胞株(例如NSO)、HEK 293細胞、中國倉鼠卵巢(CHO)細胞、COS細胞、HeLa細胞、幼倉氣腎細胞、卵母細胞，及得自轉殖基因動物之細胞’例如乳房上皮細胞。在其它具體例中，編碼本發明的結合蛋白質之核酸係在組織專一性啟動子（例如乳房專一性啟動基因）之控制下且該等結合蛋白質係在基因轉殖的動物體内產生。舉例而言，該等結合蛋白質係分泌入該基 Q 因轉殖動物（諸如：基因轉殖的牛、豬、馬、綿羊、山羊或嚙齒目動物）之奶汁内。可選用或建構成含有合適調節序列之合適載體，該等調節序列包括啟動子序列、終止子序列、聚腺苷酸化作用序列、增強子序列、標誌序列，及其它序列。該等载體亦可含有質體或病毒主鏈。關於細節，參見，例如，

Sambrook 等人，C7om>7g··· J Z<aZ)〇raior_y Mimwa/ (2nd ed. 1989) Cold Spring Harbor Laboratory Press。使用載體之許多已確認技術，包括DNA之操作法、製法、突 73 201000129 變誘發、定序，及轉染，係描述在，例如，Current Protocols in Molecular Biology (2nd ed. 1992) Ausubel 等人，eds.，

John Wiley & Sons 中。本揭示的一個另外的態樣係提供一種將該核酸導入宿主細胞内之方法。就真核細胞而言，合適的轉染技術可包括磷酸鈣、DEAD-聚葡萄糖、電子穿孔法、經脂質體媒介之轉染，及使用反錄病毒或其它病毒(例如牛痘或桿狀病毒）之轉導。就細菌細胞而言，合適的技術可包括氣化鈣轉形法、電子穿孔法，及使用噬菌體之轉染。DNA導入後可進藝行篩選法(例如抗藥性）以選擇含有該核酸之細胞。抗-IL-21R結合蛋白質之用途作為IL-21R之拮抗劑之抗IL_21R結合蛋白質可用來調 - 節至少-種經IL-21R媒介之免疫反應，例如：一或多種細 -

胞增殖、T細胞、B細胞、NK細胞、巨仙胞、或滑膜細胞之細胞素表現或分泌、化學激動劑分泌，以及細胞溶解活性。於是’本發明的結合蛋白質能使用來抑制免疫或造血細胞（例如脊髓、淋巴或成紅細胞系之細胞或其前驅細胞） Q 之活性(例如增殖、分化，及/或存活），且因此，可用以治療各種免疫障礙及錢過度增生性障礙。可治療的免疫障礙之實例包括’但不限於：移植排斥、移植物對抗宿主疾病(GVHD)、過敏(舉例而言，異位性過敏），以及自體免疫障礙。自體免疫障礙包括：糖尿病、關節炎障礙（包括：風濕性關節炎、青少年風濕性關節炎、骨關節炎、牛皮癖關節炎，以及僵直性脊椎炎)、脊椎關節病、多發性硬化症、 74 201000129 腦脊體炎、重症肌無力症、全身性紅斑狼瘡、皮膚型紅斑狼瘡、自體免疫甲狀腺炎、皮膚炎（包括異位性皮膚炎與濕療）、牛皮癬、修格蘭氏症候群(Sj5gren’s syndrome)、IBD (包括克隆氏症與潰瘍性結腸炎）、氣喘（包括内因性氣喘與過敏性氣喘）、硬皮病以及jk管炎。組合療法於一個具體例中，一種含有至少一個抗IL-21R結合 φ 蛋白質與至少一個治療劑之藥學組成物係於組合療法中予以投藥。該療法可用於治療病理病況或障礙，例如：免疫及發炎障礙。本文之術語“組合，，意指實質上同時期，同時或相繼地’給予該結合蛋白質組成物及治療劑。若相繼 ; 地給予，則於第二種化合物開始投藥時，於治療之部位仍可檢測到有效濃度之這兩種化合物中之第一種化合物。舉例而言，組合療法可包括與至少一種額外治療劑共配方，及/或共投藥之至少一種抗il_2ir結合蛋白質， φ 例如，舉例而言，一種抗-IL-21R抗體。額外的藥劑可包括至少一種細胞素抑制劑、生長因子抑制劑、免疫抑制劑、消炎劑、代謝抑制劑、酶抑制劑、細胞毒殺劑’及/ 或細胞生長抑制劑。此等組合療法可有利地使用較低劑量之所投藥治療劑’因此可避免與各種單一療法有關之毒性或併發症。而且，文中所揭示之該等治療劑可在與 IL-21/IL-21R路徑不同之路徑上作用，以及因此已預期可增強該等抗IL-21R結合蛋白質之作用及/或與其產生協同作用。 75 201000129 本發明的另一個態樣係有關進行抗-IL-21R結合蛋白質與其他的治療劑之組合投藥的套組。於一個具體例中，該套組包含經配方於一種藥學載劑之内的至少一個抗 IL-21R結合蛋白質，以及至少一個若合適在一或多種不同藥學製劑中經配方之治療劑。診斷用途本發明的結合蛋白質亦可用以檢測IL-21R在生物樣本中之存在。藉著將這些蛋白質之位準與醫學病況建立相互關聯性，熟悉本項技藝者可診斷該有關的醫學病況。舉例而言，舉例而言，經刺激的T細胞增高IL-21R其等之表現，以及於關節處之不尋常高濃度的IL-21R表現T細胞可能表示關節發炎及可能的關節炎。可以藉由本發明的結合蛋白質診斷之例示性醫學病況包括，但不限於：多發性硬化症、風濕性關節炎，以及移植排斥。結合蛋白質為主之檢測方法，例如：通常針對抗體使用的該等，在本項技藝中已為吾人所熟知，且包括 ELIS A、放射免疫分析、免疫墨點法、西方墨點法(Western blot)、流動細胞測量法、免疫螢光、免疫沉澱，及其它相關技術。一併入此等程序的至少一者之診斷套組可以提供該等結合蛋白質以檢測IL-21R。該套組可含有其它組份、包裝材料、用藥指示或有助於檢測該蛋白質及該套組之使用的其它材料。結合蛋白質可經可檢測標記，其包括配體基團（例如生物素）、榮光團、發色團、放射性同位素、電子稍密劑 76 201000129 或是酵素，而予以修飾。酵素係藉其活性而檢測。舉例而言’辣根轉化酶鋪歸四？基聯苯胺(麗)轉化成藍色色素之能力而檢測，其可經分光光度計而定量。其它合適的結合伙伴包括生物素及抗參物素蛋白、IgG及蛋白質 A，與本項技藝中已知之其它受體-配體對。 ❹ ❹ 結合蛋白質抗體亦可以官能性地連結到至少—種其他的为子實體’其包括’例如：另-個結合蛋白質（例如，雙專-性或是多重專—性結合蛋白質）、毒素放射性同位素、細胞毒殺劑或細胞生長抑制劑，官能性鍵聯（例如藉化學偶合、基因融合、非共價結合或其它方法）。其它置換法及可能使用的方法對本技藝中具有通常技藝者是明顯的，以及這些方法被視為屬於本發明料内的均等藥學組成物及投藥方法 *本發明的某些具體例包括包含該等揭示的結合蛋白質之組成物。該等組成物可適於藥學用途及對患者投藥。該等組成純含本料之結合蛋自f及轉卿劑。當使用於本文巾藥予紙形劑，，包括溶劑、分散介質、塗料、抗細菌劑、抗真菌劑、等渗壓劑及吸收延緩劑等，這此賦形劑皆可以與藥學投藥相容。這些適於作為藥學上活㈣質之藥_本㈣所熟知的。該等組成物亦可含有能提供補充性、另外或增_治療舰之其它雜化合物。該等樂學組成物亦可包含具有投藥說明之容器、小包或配藥器中。 77 201000129 本發明之藥學組成物係經配方而適合其計劃之投藥途徑。進行該投藥之方法為本技藝中具有通常技藝者所知。可局部或以口服方式或能夠通過黏膜而輪送之方式而技予藥學組成物。-種藥學組成物之投藥實例包括口服或吸入。亦可進行靜脈内、腹膜内、肌肉内、腔内、皮下、皮膚或經皮投藥。用於皮内或皮下塗敷之溶液或懸浮液典型上包括以下組份之至少一種：無菌稀釋劑，例如：水、食鹽水、固定油、聚乙二醇、甘油、丙二醇或其它合成溶劑；抗細帛 © 劑，諸如苄醇或對羥基苯甲酸甲酯；抗氧化劑，諸如抗壞金酸或亞硫酸虱鈉；螯合劑，諸如乙二胺四乙酸(Edta); 緩衝劑，諸如乙酸鹽、檸檬酸鹽或磷酸鹽；及滲性劑諸 . 如氣化鈉或右旋糖。pH可經酸或驗調整。此等製劑可包 - 封在安瓶、拋棄式注射器或多劑量小玻瓶。用於靜脈内投藥之溶液或懸浮液包括載劑，諸如生理食鹽水、制菌劑、CREMOPHOR EL® (BASF Corp.，

Ludwigshafen，Germany)、乙醇或多元醇。就一切情況而 ® 言，該組成物必需無菌且容易注射之流體。通常可使用卵構脂或表面活化劑以獲得合適流動性。該組成物於製造及貯存之條件下亦必需具安定性。可使用抗細菌劑及抗真菌劑，例如對羥基苯甲酸酯、氣丁醇、酚、抗壞血酸、硫柳汞(thimerosai)等，以防止微生物。在許多情況下，該組成物可包含等滲壓劑（糖）、多元醇（甘露醇及山梨糖醇）或 78 201000129 氣化鈉。可II添加能延緩吸收之藥齊卜例如單硬脂酸銘及明膠’而延長該組成物之吸收。口服組成物包括惰性稀釋劑及食用栽劑。就口服投藥的目的而言，該等結合蛋白質可併入賦形劑以及放入錠劑、口含錠或膠囊内。該組成物可包含藥學上相容之結合劑或佐劑物質。藥學上相容的結合劑或佐劑材料可被包括於該組成物之内。該等組成物可含有（1)結合劑，諸如微晶 Q 狀纖維素、黃蓍膠或明膠；（2)賦形劑，諸如澱粉或乳糖； (3)分解劑，諸如藻酸、pdm〇gei或玉米澱粉；潤滑劑，諸如硬脂酸鎂；（5)助滑劑，諸如膠態二氧化矽；及/或(6) ' 甜味劑或調味劑。 ; 亦可藉經黏膜或經皮途径而投予該組成物。舉例而言，含Fc部份之結合蛋白質（例如’一抗體)可穿越腸、口或肺内之黏膜(經由Fc受體）。可藉使用含片、鼻喷劑、吸入器或塞劑而進行經黏膜投藥。亦可藉使用含本項技藝已 0 知之油膏、軟膏、凝膠或乳膏之組成物而進行經皮投藥。就經黏膜或經皮投藥而言，係使用適於欲滲透之屏障的滲透劑。就吸入投藥而言，係自含有推進劑（例如液體或氣體）或霧化器之加壓容器或分配器以氣溶膠噴劑遞送該等結合蛋白質。於某些具體例中，係使用可保護該等結合蛋白質免於自身體快速消除之載劑以製備本發明的結合蛋白質。通常使用生物可分解的聚合物（例如：乙稀乙酸乙烯酯、聚酸酐、聚乙醇酸、膠原、聚原酸酯，以及聚乳酸）。此等 79 201000129 配方之製法為熟悉本項技藝者所知。脂質體懸浮液亦可使用作為藥學上可接受載劑。可根據本項技藝中已確定之方法製成該等脂質體（參見，例如，美國專利號蝎4,522,81 υ。本發明的結合蛋白質或是結合蛋白質組成物係以如所述之治療有效量予以投藥。治療有效量可根據個體的年齡、病況、性別，及醫學病況之嚴重性而變化。可藉醫生根據臨床指徵而決定合適劑量。可以以團狀劑量提供該等結合蛋白質或組成物而使最長時間下之結合蛋白質的循環位準最大化。亦可使用連續注入。 ® 當使用於本文中，術語“個體”係意欲包括人類及非人類動物。個體可包括罹患以可表現IL-21R之細胞，例如 . 癌細胞或免疫細胞，為特徵的病症之人類病人。本發明術語“非人類動物”包括所有脊椎動物，諸如非人類之靈長類、綿羊、狗、牛、雞、兩棲動物、爬蟲類等。可對個體投藥之劑量範圍的實例可選自：1 pg/kg至 20 mg/kg、1 pg/kg 至 10 mg/kg、1 pg/kg 至 1 mg/kg、10 ❹ pg/kg 至 1 mg/kg、10 pg/kg 至 100 gg/kg、100 pg/kg 至 1 mg/kg、250 pg/kg 至 2 mg/kg、250 pg/kg 至 1 mg/kg、500 pg/kg 至 2 mg/kg、500 pg/kg 至 1 mg/kg、1 mg/kg 至 2 mg/kg、1 mg/kg 至 5 mg/kg、5 mg/kg 至 10 mg/kg、10 mg/kg 至 20 mg/kg、15 mg/kg 至 20 mg/kg、10 mg/kg 至 25 mg/kg、15 mg/kg 至 25 mg/kg、20 mg/kg 至 25 mg/kg，以及20 mg/kg至30 mg/kg (或更高）。根據劑量、投藥方法、欲治療之障礙或症狀，及個別個體之特徵，此等劑量 80 201000129 可每日、每週、雙週、每月或較低頻率，例如—年兩4 予以投藥。在特定情況下，最好可以以劑量單位形式來配方組成物以谷易投藥及獲得該劑量之一致性。如文中使用量單位形式係指適於該患者之實際上各別的單位。各劑Θ 單位含有預定量之結合蛋白質，其經估計可產生與該載= 有關之治療作用。劑量單位係取決於該等結合蛋白暂貿之特徵及欲獲得之特定治療作用。可在細胞培養或實驗動物中藉標準藥學程序而測定該組成物之毒性及治療效力，例如測定LD5Q(對50%群體有害之劑量）及EDsJ對50%該群體有治療效果之劑量）。毒性作用與治療作用間之劑量比為治療指數且其可以以 LD5〇/ED5〇之比率表示。具有大治療指數之結合蛋白質可以具低毒性及/或更具治療上有效性。 Ο 可使用得自該等細胞培養分析及動物研究之資料以配方適用於人類之劑量範圍。這些化合物之劑量在於血液内循環結合蛋白質濃度之範H内’其包括幾乎不具毒性之 ED%。根據所使用的劑量組成物形式及投藥途徑，劑量可在該範圍内變化。就用於本發明之任何結合蛋白質而言，可百先使用細胞培養分析法以估計治療上有效劑量。可以以動物模式配方劑量以獲得包括％。(亦即獲得症狀之半最大抑制作用的結合蛋白質濃度）之循環血漿濃度。可藉 5適的生物刀析法而監測任何特定劑量之效用。合適的生物分析法之實例包括職複製分析、以轉錄為主之分 81 201000129 以及其它免析、基因表現分析、IL-21/IL-21R結合分析疫學分析法。本申請案從頭到尾所記述之全部的參考資料申請案，以及專利的整體内容係於此被併入本文中專矛J 參考資料。以作為實施例

本發明將進一步於下列非限制性實施例中予以闌提出此等實施例以協助瞭解本發明，但不希望限釋。之範嘴，以及不應以任何方式解釋成限制本發明明該等實施例不包括詳細說明中本技藝中具有通常技=可等所熟知的慣例方法。 a的該實施例I :藉由噬菌體呈現產生結合蛋白質

美國專利號碼7,495,085(併入本文中以作為參考資料) 之中說明的scFv親代殖系l8A5係藉由標準的噬菌體呈現方法自CS人類scFv存庫得到，其係於第i與第3回合使用 BaF3細胞表現人類IL-21R作為一標的且於第2回合使用經生物素化的IL-21R_Fc融合蛋白質作為一標的。實施例2 :存庫建構噬菌體呈現存庫係根據使用pCANTAB6載體的親代 18A5 scFv’其中該scFv係於其之3’端被融合至完整的基因 III。各種的CDR3序列係使用本技藝所熟知的技術予以衍生。任意排列6個連續密碼之2個重疊的封阻於VH與VL的 CDR3内，生產總計4個存庫：H3B1、H3B2、L3B1，以及 82 201000129 L3B2。下列分別地辨識核苷酸與胺基酸序列。il_21r: 18八5

VhCDR3 [序列辨識編號：I99與200] ; H3B1 (存庫大小 1.40xl09)[序列辨識編號：2〇1與2〇2] ; H3B2 (存庫大小 l.OOxlO9)[序列辨識編號：2〇3與2〇4]; IL_21R : 18A5

VlCDR3 [序列辨識編號：205與206] ; L3B1 (存庫大小 9·00χ109)[序列辨識編號：2〇7與2〇8] ; L3B2 (存庫大小 6·40χ1〇9)[序列辨識編號：2〇9與210]。實施例3 :噬菌體篩選 18Α5之所有的衍生物係從以上之scFv存庫單離，其係藉由篩選能夠於溶液相結合至經生物素化的人類IL_21R細胞外領域His-Flag融合蛋白質生物素_hIL_21R-H/F”)及經生物素化的鼠類IL-21R細胞外領域His-Flag融合蛋白質 (“生物素-mIL-21R-H/F”）的噬菌體；有關篩選之全部的程序與技術係熟習此藝者所熟知的。總計27個抗-IL-21RscFv係藉由噬菌體篩選的程序予以單離。實施例4 :存庫篩選所形成之scFv形式的結合蛋白質係根據以下方式來選擇：其等與人類IgGl形式之親代的18A5競爭結合至生物素 -hIL-21R-H/F與生物素-mIL-21R-H/F的能力，以預防經基因工程化的細胞株表現人類IL-21R之hIL-21 -依賴性增殖以及經基因工程化的細胞株表現鼠類IL-21R之mIL-21-依賴性增殖。實施例4，1 :供用於篩選分析的粗周質材料(“peri_preps”）製備 83 201000129 取決於使用的生長條件’ scFv能被表現於細菌周質空間内的溶液中。為了誘導scFv釋放至周質内，96-深井平盤的將含有〇.1°/。葡萄糖/1〇(^§/1111胺苄青黴素之99〇01 2xTY培養基係係使用QPix2群落挑取儀（Genetix，New Milton，England)自解凍的甘油存液接種(每井H固殖系），以

及於37。(：（999 rpm)下生長歷時大約4 hr。培養物係用最終濃度0.02mM的IPTG予以誘導以及於3〇°c (999 rpm)生長隔夜。細菌周質(peri-preps)的内含物係藉由滲壓衝擊予以釋放。簡言之’將平盤離心以及將成粒再懸浮於15〇 μι TES 周質緩衝液（50 mM Tris / HC1 (pH 8.0) / 1 mM EDTA (pH 8.0) / 20% Sucrose)之中的，接著添加 15〇 μι 1 : 5 TES : 水’以及於冰上醉育歷時30 min。將平盤離心，以及收穫含有scFv之上清液。實施例4.2 ··針對存庫篩選之抗原決定位競爭分析能與親代18A5抗體競爭結合至人類或鼠類il-21R的該等scFv之係藉由均相時間分辨螢光(HTRF®)分析自經選擇的噬菌體辨識。經純化的親代的18A5抗體係依據HTRF® Cryptate Labeling套組（Cisbio，Bedford，MA)之用法說明、用穴狀化合物，銪的衍生物，予以共價地修飾。scFv之 Peri-preps係如同以上說明的方式予以製備，以及被稀釋成配於PBS/0·4M氟化鉀/0.1%BSA(HTRF®緩衝液）的 0.25% ;接而將10 μ1的混合物轉移至黑色384-淺-井平盤 (Nunc，Rochester，ΝΥ)的井内。接而將5 μΐ的穴狀化合物-結合的18Α5抗體添加至各個井，接著1:800稀釋的鏈黴抗 84 201000129 生物素蛋白-XL665共軛物（Cisbio)之5μ1的混合物，以及 either 4.8ηΜ 生物素-hIL-21R-H/F 或 40ηΜ 生物素 -mIL-21R-H/F。該混合物係在RT予以孵育歷時2 hr，以及進行時間分辨螢光的測量(340 nm激發、615 nm與665 nm 發射）。藉由665 nm的發射對615 nm的發射之背景校正的比率之降低指出與18A5抗體之競爭作用。使用人類IL-21R-H/F於HTRF®分析中篩選總計8280個獨立單離的scFv，以及選出能與親代18A5抗體競爭對生物素-hIL-21R-H/F的結合之376個殖系用於進一步分析。實施例5 :存庫-衍生的scFv之DNA序列分析-定序分析之 scFv區域的PCR擴增具有超越親代18A5 scFv分子之改善的IL-21R的結合之287個18A5-衍生的scFv變異體的序列係被決定，以及在各個位置上發現的各個胺基酸之頻率係被決定。在 VH殖系之中，只有2個（1.7%)是衍生自突變最後6個胺基酸的存庫，例如，序列辨識編號：169 (在VH CDR3的C 端），而其餘的係衍生自突變最前面的6個胺基酸的存庫，例如，序列辨識編號：169。在VL殖系之中，只有1個殖系（0.6%)是衍生自一存庫，該存庫中的最後6個胺基酸，例如，序列辨識編號：170 (在VL CDR3的C端）係經突變的，而多數係衍生自最前面的6個胺基酸的改變，例如，序列辨識編號·· 170 (在CDR3的N端）。 scFvs之PCR的擴增係依據製造商的用法說明於HN 緩衝液（Epicentre Biotechnologies，Madison ’ WI)中使用 85 201000129 VENT DNA 聚合 S# (New England Biolabs，Ispwich， MA)予以進行。5μ1的1:10的稀釋之靜止相的細菌培養物係用作為20 μΐ之最後反應體積的模板。使用的循環條件是在94°C熱啟動2-min，30週期的在94°C (1 min)變性、在55°C (2 min)引子黏合以及在720C (1 min)延展，接著在 72°C (5 min)最終的延展。PCR產物係經瓊脂糖凝膠電泳予以證實且在用M13rev引子定序之前以ΕχοΙ/SAP (蝦鹼性磷酸酶）予以清理。 27個scFv的CDR3序列之序列辨識編號係列於表4中。選擇此等scFv用於根據實施例6中說明的分析法予以進一步分析。

表4:改良的18 A5-衍生的scFv之CDR3序列辨識編號 scFv 重鏈cdrS 輕鏈CDR3 H3 165 ~~~ 170 H4 166 ―― 170 H5 167 170 H6 168 ~ 170 L1 169 171 L2 169 ~~~ 172 L3 169 173 L4 169 174 L5 169 175 L6 169 176 L8 169 177 L9 T69 178 L10 T69 179 L11 T69 180 L12 169 181 L13 169 182 L14 169 183 L15 169 184 L16 "T69 185 L17 169 186 86 201000129 L18 169 187 L19 169 188 ~~~ L20 169 189 L21 169 190 L23 169 191 L24 169 192 s L25 169 193 實施例6 ··存庫衍生的scFv之特徵化實施例6.1 :用於定量分析之純化的仏巧的製備個別的scFv殖系係藉由PHYTIP®管桎（phyNexus， Inc. ’ San Jose，CA)上之Ni_NTA以小規模予以純化。單一的群落係在37°C伴隨250 rpm的震蘯、在5〇-mi圓錐形管中於含有0.1%葡萄糖/ 100pg/ml胺苄青黴素之2〇mi 2χΤΥ 培養基内生長至中-對數期。用最終濃度〇〇2 mIy[2iPTG 誘導scFv的表現，以及培養物在30〇C生長隔夜。細胞係藉由離心予以收穫且再懸浮於1 ml TES周質緩衝液之中，接著添加1 ml 1:5 TES :水且於冰上孵育歷時30 min。在4。〇以3200 rpm離心溶解產物歷時1 〇 min，以及將上清液帶至 2 mM MgCl2。藉由於 Perkin Elmer (Waltham，MA) MINITRAK™ IX液體處理儀上的PHYTIPs®上方重複通過上清液而捕捉scFv於Ni-NTA PHYTIPs® (PhyNexus)之上，接著於IMAC清洗緩衝液内清洗並以200mM咪唑、50mM Tris、300 mM NaCl (pH 8.0)沖洗。藉由3個週期之1:10的稀釋至PBS之内而將緩衝液交換成PBS，接著於10,000分子量分割過濾器平盤（Millipore MULTISCREEN® ULTRACEL™ 96 井的超過濾平盤，Millipore，Billerica，ΜΑ) 上濃縮。利用使用製造商的牛血清白蛋白標準之Micro 87 201000129 BCA™套組（Thermo Fisher Scientific Inc.，Rockford，IL) 來定量樣本。實施例6.2:過度表現人類或鼠類1L_21Rt細胞的1L_2u依賴性增殖之分析用18A5-衍生的結合蛋白質㈣卜與匕⑺執行抑制作用的分析以測量其等對轉染人類或鼠類IL_21R的細胞株之 IL-21-依賴性增殖的封阻作用。BaF3細胞、鼠科前-B細胞株’以及TF1細胞（人類紅血球系細胞株)係以IL_21R與綠螢光蛋白（GFP)予以反轉錄轉導。細胞例行地於含1〇%fBS、 2mML-麩醯胺酸、i〇〇u/ml青黴素、i〇〇pg/ml鏈黴素，和0.00036% β-酼乙醇之RPMI 164〇之内生長。人類 IL-2lR-BaF3細胞培養物係用50 ng/ml的人類il-21予以補充；鼠科IL-21 R-BaF3細胞培養物係用1 〇 u/ml的IL-3予以補充；TFl細胞培養物係用50ng/ml的GM-CSF予以補充。在分析之前’細胞係用缺乏補充性生長因子之分析培養基予以清洗3X，再懸浮於分析培養基中，以及在37〇c/5%c〇2 醇育歷時6 hr。為了製備分析平盤，將5〇〇〇個細胞以55 μΐ/ 井的體積添加至96-井的平底白色組織培養平盤（Thermo Scientific，Waltham , ΜΑ)之中央60個井内。測試的scFv或 igG樣本係藉由於分析培養基中稀釋存液樣本以及連續地稀釋3倍予以製備。將25 μΐ的結合蛋白質樣本添加至該等細胞以及在37。(： / 5% C02予以孵育歷時3〇 min。將含有 100-400 Pg/mi的人類或鼠類的分析培養基添加至各個井，以及令該等細胞孵育歷時歷時額外的48 hr。藉 88 201000129 由以下步驟測量增殖：將平盤處於RT，添加15 μΐ/井的 CELLTITER-GLO®，於RT予以孵育歷時10 min，以及用-** Perkin Elmer ENVISION™平盤讀取器測量榮光。在用 PhyNexus IMAC吸管尖純化之後，108scFv係測試全部的3 個細胞株之IL-21-依賴性增殖的中和作用。全部顯示出人類 IL-21R-BaF3細胞之中和作用，具有低於或等於親代18A5 scFv的IC5〇之IC50s。A子集顯示出鼠類IL-21R-BaF3細胞和人類IL-21R-TF1細胞增殖之強的中和作用。來自27個最有效力的殖系之資料顯示於第1-3圖之中，以及總結於表5之内。第1-3圖顯示出人類IL-2lR-BaF3細胞（第la-c圖）；人類 IL-21R-TF1細胞（第2a-c圖）；與鼠科IL-2lR-BaF3細胞（第 3a-c圖）的增殖藉由scFv之中和作用。細胞係用指出的ScFv 予以混合以及以100 pg/ml (第I-2圖）或是4〇〇 pg/ml (第3圖）的人類IL-21予以孵育。實施例6.3 :定量抗原決定位競爭分析純化的scFv係於酵素連結免疫吸附分析（ELIS A)中被定量分析其等與親代18A5抗體競爭結合至鼠科IL-21R的能力。親代的18A5抗體係以配於PBS之0.75pg/ml的濃度在 4°C下塗覆於96-井的Nunc MAXISORP®平盤上隔夜。平盤係使用PBS予以清洗3X，以及接而於PBS / 1% BSA / 0.05% Tween-20中在RT下封阻歷時3 hr。scFv係與36 nM經生物素化的mIL-21R-H/F混合以及在RT孵育歷時1 〇 min。經封阻的平盤係用PBS清洗3X，以及將50 μΐ/井的scFv / 89 201000129 IL-21R混合物轉移至合適的平盤以及在RT下孵育歷時 1 hr。在添加1:6000稀釋的辣根過氧化酶-結合的鏈黴抗生物素蛋白（Southern Biotech，Birmingham，AL)二級抗體來檢測結合的經生物素化的mIL-21R-H/F之前，用PBS清洗平盤5X。平盤接而在RT下孵育歷時1 hr以及用PBS清洗7X。使用3,3’,5,5’-四曱基聯苯胺(TMB)令信號顯露出，用H2S04 停止反應，以及於ENVISION™平盤讀取器（Perkin Elmer) 上在450 nm讀取吸光度。於此分析中測試藉由PhyNexus IMAC吸管尖純化的108個scFv，以及多數會與親代18A5抗體競爭結合至經生物素化的鼠科IL-21R-H/F，且IC5()s低於親代18A5 scFv的IC5〇。以細胞為基礎的中和分析中有最高效力的27個殖系的抗原決定位競爭資料係顯示於第4a_e圖之中以及總結於表5之内。表5:以細胞為基礎的分析之人類與鼠類IL-21R的中和作用以及以18A5抗體競爭鼠科IL-21R的結合人類 IL-21R-BaF3 中和分析中之 ICs〇 (nM) 人類 IL-21R-TF1 中和分析中之 IC50 (nM) 鼠科 IL-21R-BaF3 中和分析中之 IC50 (nM) 鼠科IL-21R 抗原決定位競爭ELISA 中之IC5« (nM^ H3 7.7 98.1 25.68 14 H4 3.8 9.3 nd nd H5 7.9 178.5 53.66 H6 13.8 150 (估計的） nd 13 L1 3.7 55 (估計的） 28.77 7 L2 3.1 37.5 2.41 ~5~~ L3 27.6 7(估計的） 13.78 100 L4 2.1 60 (估計的） nd 8 L5 2.1 20 (估計的） 38.52 7 L6 5.9 150 (估計的） 0.29 4 201000129 L8 4.1 51.3 715.27 7 L9 2.8 27.7 3.61 7 L10 15.1 7 nd 40 L11 4.2 38.3 10.03 6 L12 2.6 54.9 87.77 δ L13 11.0 257.4 1.25 7 L14 3.2 33.5 6.49 6 L15 3.3 30.3 53.49 14 L16 3.7 67.4 4.71 6 L17 1.6 60.3 2.66 12 L18 3.7 54.4 8.34 8 L19 4.5 35.3 13.59 15 L20 3.1 57.5 15.39 5 L21 9.4 100 (估計 όϊΤ1 162.27 28 L23 1.5 15.3 nd 12 L24 2.4 18.7 3.73 6 L25 3.7 33.1 15.55 9 實施例7 :親代的18A5 IgG的轉化成生殖系列序列

❹ 下列具有經修飾的VL區域之15個scFv，與生殖系列化的親代18A5 VL (參見以下）一起被選擇用於轉化成全長的人類IgG拉目達：L2、L3、L6、L9、LU、L13、L14、L16、 L17、L18、L19、L20、L23、L24，以及L25。具有經修飾的VH區域之4個scFv，H3、H4、H5，和H6 ’與該生殖系列化的親代18A5 VH (參見以下）一起係被選擇用於轉化成全長的人類IgGl。親代18A5抗體之VH和VL胺基酸序列係經修飾以使得 CDR區域外部的序列符合最接近的人類生殖系列序列：就 VH 來說係 DP67/VH4B+ (VBASE_AA:WAP00CEAZ_1)和 JH1/JH4/JH5 ，以及就 VL 來說係 DPL16/VL3.1(VBASE_AA:WAP00CEMI_1)。修飾係藉由 GENE ART (Regensburg，Germany)之基因的合成以及藉由 91 201000129 PCR導入的位置專一變化之組合來進行。此外，該等序列係藉由使用其等專有的方法之GENE ART來最佳化密碼子以供於哺乳動物細胞内之表現。親代18A5序列與該等生殖系列校正的18A5序列之對準係顯示如下：

18A5重鏈比較親代的18A5 VH

CAGGTGCAGCTGCAGGAGTCGGGCCCAGGACTGGTGAAGACT TCGGAGACCCTGTCCCTCACCTGCGCTGTCTCTGGTTACTCC ATCAGCAGTGGTTACTACTGGGGCTGGATCCGGCAGCCCCCA GGGAAGGGGTTGGAGTGGATTGGGAGTATCTCTCATACTGGG AACACCTACTACAACCCGCCCCTCAAGAGTCGCGTCACCATA TCAGTAGACACGTCCAAGAACCAGTTCTCCCTGAAACTGAGC TCTGTGACCGCCGCAGACACGGCCGTGTATTACTGTGCGCGA GGTGGGGGAATTAGCAGGCCGGAGTACTGGGGCAAAGGCACC CTGGTCACCGTCTCGAGT (序列辨識編號：5)

生殖系列化的18A5 VH

CAGGTGCAGCTGCAGGAGTCTGGCCCTGGCCTGGTGAAGCCT TCCGAGACCCTGTCTCTGACCTGTGCCGTGTCCGGCTACTCC ATCTCCTCCGGCTACTACTGGGGCTGGATCAGACAGCCTCCT GGCAAGGGCCTGGAGTGGATCGGCTCCATCTCTCACACCGGC AACACCTACTACAACCCCCCTCTGAAGTCCAGAGTGACCATC TCCGTGGACACCTCCAAGAACCAGTTCTCCCTGAAGCTGTCC TCTGTGACCGCTGCCGATACCGCCGTGTACTACTGTGCCAGA GGCGGCGGAATCTCCAGACCTGAGTACTGGGGCCAGGGCACC CTGGTGACCGTGTCCTCT (序歹，J辨識編號：7) 生殖系列化的18A5Vhx親代的18A5Vh 1 CAGGTGCAGCTGCAGGAGTCTGGCCCTGGCCTGGTGAAGCCTTCCGAGAC 50

I I I II I I I I I I I I II I I I II I II II II I I I I I II I I II II I I II I 1 CAGGTGCAGCTGCAGGAGTCGGGCCCAGGACTGGTGAAGACTTCGGAGAC 50 51CCTGTCTCTGACCTGTGCCGTGTCCGGCTACTCCATCTCCTCCGGCTACT 100

II I I I I II I I! II II II II II II I II I I I I I II I II I 51CCTGTCCCTCACcTGCGCTGTCTCTGGTTACTCCATCAGCAGTGGTTACT 100 92 201000129 101 ACTGGGGCTGGATCAGACAGCCTCCTGGCAAGGGCCTGGAGTGGATCGGC 150 I I I I I I II I I II I I I I I II I II II I I I I I I I I I I I II II II 101 ACTGGGGCTGGATCCGGCAGCCCCCAGGGAAGGGGTTGGAGTGGATTGGG 150 151 TCCATCTCTCACACCGGCAACACCTACTACAACCCCCCTCTGAAGTCCAG 200 I I I I I I I I II Μ II I I II I II I I I I I I I I II II III I 151 AGTATCTCTCATACTGGGAACACCTACTACAACCCGCCCCTCAAGAGTCG 200 201 AGTGACCATCTCCGTGGACACCTCCAAGAACCAGTTCTCCCTGAAGCTGT 250 II I II I I II II I II I I I I I I I I II I I I II I I I I I I I I II III 201 CGTCACCATATCAGTAGACACGTCCAAGAACCAGTTCTCCCTGAAACTGA 250 〇 251 CCTCTGTGACCGCTGCCGATACCGCCGTGTACTACTGTGCCAGAGGCGGC 300 I I II II II I I II II II II I I I II I II II I I I I I I I I I I I! 251 GCTCTGTGACCGCCGCAGACACGGCCGTGTATTACTGTGCGCGAGGTGGG 300 ' 301 GGAATCTCCAGACCTGAGTACTGGGGCCAGGGCACCCTGGTGACCGTGTC 350

' II I II III II I II II II I I I I I I I II I I I I I I I I I II I I II 301 GG7\ATTAGCAGGCCGGAGTACTGGGGCAAAGGCACCCTGGTCACCGTCTC 350 351 CTCT 354 (序列辨識編號：7)

I 351 GAGT 354 (序列辨識編號：5) 18A5輕鍵之比較 ❿ 親代的18A5Vl

TCTTCTGAGCTGACTCAGGACCCTCCTGTGTCTGTGGCCTTG

GGACAGACAGTCACGCTCACATGCCAAGGAGACAGCCTCAGA

ACCTATTATGCAAGCTGGTACCAGCAGAAGTCAGGACAGGCC

CCTATACTTCTCCTCTATGGTAAACACAAACGGCCCTCAGGG

ATCCCAGACCGCTTCTCTGGCTCCACCTCAGGAGACACAGCT

TCCTTGACCATCACTGGGGCTCAGGCGGAAGACGAGGCTGAC

TATTACTGTAACTCCCGGGACTCCAGTGGCAACCCCCATGTT CTGTTCGGCGGAGGGACCCAGCTCACCGTTTTA (序列辨識編號：9) 生殖系列化的18A5 Vl tcctctgagctgacccaggatcctgctgtgtctgtggccctg ggccagACCGTCAGGATCacctgccagggcgatagcctgaga 93 201000129 acctactacgcctcctggtatcagcagaagcctggacaggcc cctgtgctggtgatctacggcaagcacaagaggccatccggc atccctgacagattctccggctcctcctctggcaataccgcc tccctgaccatcaccggcgctcaggccgaggacgaggccgac tactactgtaactcccgggactcttccggcaaccctcacgtg ctgtttggcggcggaacccagctgaccgtgcta (序歹辨識編號：11) 生殖系列化的18A5VlX親代的18A5Vl 1 TCCTCTGAGCTGACCCAGGATCCTGCTGTGTCTGTGGCCCTGGGCCAGAC 50 II I II I I I I II I I I I I I I III I IIII I I I I I I I II I I II I I I I I 1 TCTTCTGAGCTGACTCAGGACCCTCCTGTGTCTGTGGCCTTGGGACAGAC 50 51 CGTCAGGATCACCTGCCAGGGCGATAGCCTGAGAACCTACTACGCCTCCT 100

I I II I IIII II I I I II II I I I I I I I I I I I I I II II I I 51 AGTCACGCTCACATGCCAAGGAGACAGCCTCAGAACCTATTATGCAAGCT 100 101 GGTATCAGCAGAAGCCTGGACAGGCCCCTGTGCTGGTGATCTACGGCAAG 150 I I I I I I I I I I II I I I I I I I I IIII I I I II I I II I II II 101 GGTACCAGCAGAAGTCAGGACAGGCCCCTATACTTCTCCTCTATGGTAAA 150 151 CACAAGAGGCCATCCGGCATCCCTGACAGATTCTCCGGCTCCTCCTCTGG 200 IMII I II I II II II I II III I I I I II I I II II I I II II 151 CACAAACGGCCCTCAGGGATCCCAGACCGCTTCTCTGGCTCCACCTCAGG 200 201 CAATACCGCCTCCCTGACCATCACCGGCGCTCAGGCCGAGGACGAGGCCG 250 I II II III II I I II I I I I II I II I II I I II II I II I I I I 201 AGACACAGCTTCCTTGACCATCACTGGGGCTCAGGCGGAAGACGAGGCTG 250 251 ACTACTACTGTAACTCCCGGGACTCTTCCGGCAACCCTCACGTGCTGTTT 300 I I II I I I I I I II I I I II I II I II I I I II I I II II II I II II 251 ACTATTACTGTAACTCCCGGGACTCCAGTGGCAACCCCCATGTTCTGTTC 300 301 GGCGGCGGAACCCAGCTGACCGTGCTA 327 (序歹，J辨識編號：11)

I I I I I II I I I I I I I I I I I II I I 301 GGCGGAGGGACCCAGCTCACCGTTTTA 327 (序歹ij辨識編號：9) 生殖系列校正的VH序列（由親代的序列之變化係粗體且劃底線的）： 94 201000129 親代的（序列辨識編號：6)

QVQLQESGPGLVKTSETLSLTCAVSGYSISSGYYWGWIRQPPGKG 生殖系列化的（序列辨識編號：8)

QVQLQESGPGLVKPSETLSLTCAVSGYSISSGYYWGWIRQPPGKG 親代的

LEWIGSISHTGNTYYNPPLKSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCARGGGISRP 生殖系列化的

LEWIGSISHTGNTYYNPPLKSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCARGGGISRP 親代的 EYWGKGTLVTVSS

生殖系列化的 EYWGQGTLVTVSS 生殖系列校正的VL序列（由親代的序列之變化係粗體且劃底線的）：親代的（序列辨識編號：10)

SSELTQDPPVSVALGQTVTLTCQGDSLRTYYASWYQQKSGQAPIL 生殖系列化的（序列辨識編號：12)

SSELTQDPAVSVALGQTVRITCQGDSLRTYYASWYQQKPGQAPVL 親代的

LLYGKHKRPSGIPDRFSGSTSGDTASLTITGAQAEDEADYYCNSRDSSGNPHVLFGGGTQ 生殖系列化的

^YGKHKRPSGIPDRFSGSSSGNTASLTITGAQAEDEADYYCNSRDSSGNPHVLFGGGTQ 親代的 LTVL 生瘦系列 LTVL

實施例8 :存庫衍生的scFv的轉化成IgG 經改良的18A5 scFv衍生物之VL與VH領域的CDR3區域 95 201000129

係藉由PCR予以擴增以及藉由下列的方法予以次選瘦成親代18 A5之生瘦系列校正的Vl和Vh架構。一個包含生殖系列化的18 A5 Vh基因之5’部分的PCR片段係藉由使用引子 BssHII_II_Vh_F (5，-GCTTGGCGCGCACTCTCAGGTGCAGCTGCAGGAG-3 ’）[序列辨識編號：230]和 GVh__R for BssHII (5，-TCAGGGAGAACTGGTTCTTGG-3，）[序列辨識編號： 231] 之質體pSMED2—OP18A5G_huIgGl的擴增來產生。一個包含來自經改良的scFv殖系VH3之VH基因的3’部分之 PCR片段係使用下列引子：G VH F for Sail (5，-TCCAAGAACCAGTTCTCCCTG-3，）[序列辨識編號：

232] 和 scFv_SalI_VH_R

(5，-GCGACGTCGACAGGACTCACCACTCGAGACGGTGA CCAGGGTGCC-3，）[序列辨識編號：233]予以擴增。片段係經凝膠純化，以及接而將二者混合且使用外部引子組 BssHII_G_Vh_F* SalI_VH_R予以擴增以產生一完整的VH 基因片段。用BssHII和Sail消化此片段以及接合至一載體内，該載體含括具有三突變樞紐區域的人類IgGl之守恆區。該插入子係用BssHII_II_Vh_F和一個新的引子 (Sal_VH_R_RJ (5，-GCGACGTCGACAGGACTCACCACTCGAGACGG-3，)） [序列辨識編號：234]予以再擴增俾以改變VHJ節段的編碼序列以符合JH1生殖系列序列，以及接合至一個人類IgGl- 三突變守恆區載體之内。 201000129

來自經改良的scFv之VL基因係藉由一相似的方法予以次選殖。一個包含18A5 VL基因的5,部分之PCR片段係使用引子 BssHIIJLVi^F

(5 ’-GCTTGGCGCGCACTCTTCCTCTGAGCTGACCCAG-3，） [序列辨識編號：235]和 scFv_VL_R_for_BssHII (5’-GCCTGAGCCCCAGTGATGGTCA-3，）[序列辨識編號：236]，藉由質體pSMEN2_OP18A5G_hu拉目達的擴增予以產生。包含來自經改良的scFv殖系之VL基因的3,部分之PCR片段係使用弓丨子GVL_F—for_XbaI (5’-ACCGCCTCCCTGACCATCAC-3，）[序列辨識編號：237] 和 scFv_XbaI_VL_R (5，-GCGCCGTCTAGAGTTATTCTACTCACCTAAAACGGT GAGCTGGGTCCCTC-3’）[序列辨識編號：238]予以擴增。片段係經凝膠純化，以及接而令對應至各基因的5’和3’部分之片段混合以及使用外部引子組BssHII_II_VL_F和 scFv_XbaI_VL_R?以擴增以產生完整的VL基因片段。用 BssHII和Xbal消化此等片段，以及接合至一含括人類拉目達基因的守恆區之載體内。實施例9 :活體外之經改良的IgG的特徵化實施例9.1 :結合蛋白質之暫時的小規模的表現殖系係在cos-7細胞的暫時性表現之後測試完全的IgG 形式之功能。16個測試序列組（生殖系列化的親代18A5 以及L2、L3、L6、L9、L1 卜 L13、L14、L16、L17、L18、 L19、L20、L23、L24和L25)中的各輕鏈與5個測試序列組 97 201000129 (H3、H4、H5，和H6，與生殖系列化的親代18A5 VH領域 Vh_P—起）中的各重鏈配對。成對中的各質體（1.4 gg)係依據製造商的用法說明與77MMSIT®的轉染的試劑(Minis， Madison，WI)組合，以及將DNA:77^A^IT®的試劑複合物添加至生長於6-井的組織培養平盤内之杜貝可氏改良的依格氏培養基(Dulbecco modified Eagle’s medium) (DMEM)/ 10%熱-去活化的胎牛血清/青黴素/鏈黴素/2 mML-麩醯胺酸中的單層cos-7細胞。在24 hr之後，將培養基改成無血清的培養基（R1CD1)，以及接而在48hr後收集。現在包含全長的抗體之結合蛋白質係經由抗人類IgG ELISA予以定量。實施例9.2 :抗-IL-21RIgG於細胞增殖的中和作用之活性於無血清的條件培養基中之8〇個暫時地表現的IgGs係於如上說明的3個細胞株中測試IL - 21 -依賴性增殖分析的活性：（1)人類IL-21R-BaF3細胞、（2)鼠科IL-21R-BaF3細胞，以及（3)人類IL-21R-TF1細胞。全部的80對顯示出表現人類 IL-21R- BaF3細胞增殖之中和作用，以及除了該等涉及VH4 之外的全部的配對顯示出表現人類IL-21R TF1細胞的中和作用（資料未顯示）。全部的80對亦顯示出表現人類IL-21R BaF3細胞增殖之中和作用，且最強的中和作用大體而言與和親代重鏈配對的輕鏈相關以及最弱的中和作用大體而言與VH4重鏈相關（資料未顯示）。來自最有效力的21 IgG組合 (AbA-AbU)之中和作用資料係顯示於第5圖中，以及IC50資料係總結於表6内。 98 201000129 用100 pg/ml的人類IL-21於人類IL-21 R-BaF3細胞（第 5a-c圖）、用l〇〇pg/ml的人類il-21於人類IL-21R-TF1細胞 (第5d-f圖）’或是用00 pg/ml的鼠類IL_21於鼠類 IL-21R-BaF3細胞（第5g-i圖）進行分析。il-21係在指出的抗體之後被添加至細胞；在48hr之後用CELLTITER-GLO®測量增殖。第26a-c圖顯示出額外的研究，其等展現於相同的 3個細胞株中之相似的抑制作用。 ❹ 實施例9.3 :抗-IL-21RIgG的結合至暫時表現的大鼠和石蟹

mm IL-21R 結合蛋白質的子集係被測試對暫時地表現在 • CH〇-pA-Dukx細胞的表面之大鼠、石蟹獼猴、人類 - IL_21R，或是人類IL-211-γ共同次單元之結合作用。細胞係在分析之前48 hr予以轉染。於分析當天，細胞係於一自動的平盤清洗儀（Titertek，Huntsville，AL)上以含有 0.9 mM CaCl2 和 0.45 mM MgCl2 (PBS / CaMg)之 PBS 溫和 ❺ 地清洗5X，以及於PBS / CaMg/ 5%脫脂乾燥牛奶内在 RT下予以封阻歷時ihr。來自暫時表現抗-IL-21RIgGs 之條件培養基係於封阻緩衝液内連續地稀釋以及在RT下被添加至經封阻的平盤中的細胞歷時1 hr。細胞係用PBS / CaMg予以清洗5X，以及接而在RT下以辣根過氧化酶-結合的抗人類IgG予以孵育歷時1 hr。細胞接而於PBS / CaMg中清洗10X以及將全部的清洗緩衝液移除。以1〇〇 μ1 ΤΜΒ孵育細胞直到顏色反應到達飽和為止，用1〇〇 μ丨的 99 201000129 0.18 M H2S04 令其停止，以及於一 Perkin Elmer ENVISION™平盤讀取器在A450讀取。全部的21個IgGs均結合至暫時表現人類（第6a-c 圖）、大鼠（第6d-f圖），或是石蟹獼猴（第6g-i圖）IL-21R 之CHO細胞。多數對一暫時表現於ch〇細胞上的對照蛋白質（人類加馬（γ)共同鏈)在高於背景值顯示出不結合’ 但是一子集的 IgGs(AbD、AbE、AbF、AbH、AbL，以及 AbM)在13 nM或更大時結合高於背景值（第6j_丨圖）。資料係總結於表6之内。表6:細胞增殖分析中的人類與鼠類IL-21R活性的中和作用以及表現於CHO細胞上的人類、大鼠，和石蟹獼猴 IL-21R之結合作用的總結結合蛋白質人類 IL-21R -BaF3 增殖 (nM) 人類 IL-21R TF1 增殖 IC5〇 (nM) 鼠科 IL-21R -BaF3 增殖 IC5〇 (nM) 人類 IL-21R 的結合 (於細胞 ELISA 中 13 nM Ab ； A450) 大鼠 IL-21R 的結合 (於細胞 ELISA 中 13 nM Ab ； A450) 石蟹獼猴 IL-21R 的結合 (於細胞 ELISA 中 13 nM Ab ; A450) 人類加馬共同的結合 (於細胞 ELISA 中 13 nM Ab ； A450) AbA 0.97 3.80 0.08 1.196 1.124 1.352 0.111 AbB 1.14 3.34 0.421 1.147 1.09 1.333 0.107 AbC 0.82 3.36 0.03 1.218 0.999 1.277 0.137 AbD 0.91 2.67 0.01 1.247 0.874 1.375 0.197 AbE 0.56 2.28 0.04 1.257 1.111 1.423 0.223 AbF 0.54 2.41 0.304 1.347 1.001 1.458 0.433 AbG 0.ΪΤ 3.84 0.07 1.35 1.112 1.304 0.108 AbH 0.94 3.64 0.327 1.35 1.097 1.324 0.152 Abl 1.00 3.80 0.224 1.237 1.088 1.209 0.107 AbJ 0.65 4.60 0.4 1.217 1.261 1.273 0.126 AbK 0.98 ------- 4.00 0.079 1.364 1.175 1.338 0.108 AbL 0.68 4.25 0.227 1.454 1.257 1.514 0.219 201000129

AbM 1.08 4.22 0.125 1.197 0.78 1.45 0.224 AbN 〇.5〇 1.59 0.435 1.214 0.702 1.497 0.136 AbO 0.52 2.91 0.065 1.107 1.101 1.358 0.108 AbP 0.75 3.48 0.03 1.308 1.03 1.313 0.112 AbQ 0.68 4.62 0.153 1.255 1.161 1.31 0.125 AbR 0.87 3.94 0.302 1.334 1.108 1.35 0.109 AbS 1.53 5.00 0.04 1.017 1.166 1.224 0.118 AbT 0.67 3.26 0.093 1.078 0.994 1.219 0.102 AbU 0.73 3.13 0.184 1.289 0.927 1.314 0.104 實施例9.4 :抗-1L-21R IgG的結合至人類 1L-21R之選擇性的 BIAC〇Retm 分析一子集的暫時表現的抗-IL-21R結合蛋白質（此稱抗〇體）的結合專一性係於BIACORE™ 2000表面電漿子共振儀器上測試。抗人類-IgG、抗鼠類免疫球蛋白抗體，以及鼠科IL-21R-H/F係使用標準的胺偶合固定於研究級的羧，曱基聚葡萄糖晶片（CM5)之上。感測器晶片的表面係以 : 20 μΐ/min的流速用EDC/NHS予以活化歷時7 min。使用第一個流量槽作為參考表面以校正整體折射指數(bulk refractive index)，間質效應，以及非專一性結合。捕獲的抗體(於流量槽2上的7,150共振單位(RU)的抗人類-Fc ® 抗體（Invitrogen Corporation，Carlsbad，CA)以及於流量槽 3上的7,500 RU的抗鼠類-Fc抗體）係於醋酸鈉緩衝液 (pH 5.0)内稀釋至10 pg/ml以及被注入至活化的表面上。剩下的活化基團係用1.0 Μ乙醇胺(pH 8.0)予以封阻。該等抗人類IgG和抗鼠類IgG的分子量均是150 kD，以及 IL-21R單體的分子量是27kD。含有抗-IL-21R抗體和抗體對照（鼠類抗人類IL-2RJ3 和鼠類抗人類 IL-4R (R&D Systems，Minneapolis， MN);人類抗人類 IL-13 (Wyeth，Cambridge，ΜΑ))之條 101 201000129 件培養基係於用0.2%牛血清予以補充的HBS/ EP緩衝液之内稀釋以及注入至BIACORE™晶片之全部的4個流量槽上，於物種-合適的捕獲抗體上捕獲500-700 (RU)的抗體。接著5sec清洗期間，一正對照蛋白質（鼠科 IL-21R-H/F)、2種有關IL-21R之人類蛋白質（人類IL-2R0 和人類sIL-4R(R&D Systems))，或是一不相關的 His/FLAG-標示蛋白質（人類IL-13-H/F)之50 nM溶液係被注入於該晶片上之捕獲的抗體之上。分別地監測結合和解離相120和180sec，接著2個5 μΐ注射的甘胺酸(pH 1.5) 以再生完全主動捕捉表面。全部的結合實驗係於HBS /EP 緩衝液内在25。(：下進行。各感測圖係使用雙重參考 (double referencing)減去空白和緩衝作用。全部被測試的抗IL-21R抗體（18A5抗體與AbA-AbU) 顯示出完全的結合至鼠科IL-21R，但是不結合至IL-21R-相關的蛋白質人類IL_2Rp和人類可溶解的IL-4R，或是無關的His/FLAG-標示蛋白質人類lL-13-His/FLAG(第7a-c 圖）。對照組係指出IL-2RP和人類可溶解的IL-4R可被專一的抗IL_2RP和抗IL-4R抗體所捕捉（第7d圖）。實施例9.5 :暫時表現的抗體之純化令7種抗體（人類IgGl三突變形式：AbS、AbT、AbO、 AbP，和AbU ;以及雙突變形式：AbQ和AbR)暫時表現於 c〇s-7細胞中以及予以純化用於進一步分析。此外，預期會不同位準的Fc受體結合之具有人類IgG尾部之AbT的3種形式（野生型IgGl、igG4，和坨⑴雙突變）亦被製備。除了 102 201000129 使用25 pg的各質體予以轉染8個T_丨75燒瓶的各個燒瓶中的細胞之外，遵守以上說明的7Τ?Α/ν5ΤΤ®規則。在條件培養基之第一次的收穫以後，添加新鮮的R1CD1，以及接而在額外的72 hr之後予以收集。將條件培養基集中以及於一 0_22 μηι過濾器上過濾。將抗體裝入蛋白質a樹脂上，用 20 mM檸檬酸/ 150 mM氣化鈉（pH 2.5)沖洗，用Tris (pH 8.5)予以中和，以及透析至pbs。實施例9.6 :人類與鼠類 1L-21R之抗體結合的B1AC0RETM分析人類與鼠類IL-21R-H/F之抗IL-21R抗體的結合動力學 ·. 係於BIACORETM表面電漿子共振儀器上測試。使用標準的 • 胺偶合將抗人類IgG抗體（Invitrogen Corporation)固定於一研究級的羧甲基聚葡萄糖晶片（CM5)之上。表面係以 2(^1/111丨11的流量用£0(：/：^1«予以活化歷時7 111丨11。使用第一個流量槽作為參考表面以校正整體折射指數，間質效應， ❽ 以及非專一性結合。抗人類_Fc抗體係於1〇 mM醋酸納緩衝液(pH 5.0)内稀釋至20 pg/ml，以及4個流量槽的各個上捕捉 2950-3405共振單位(RU)。剩下的活化基團係用1() μ乙醇胺-HC1 (pH 8_5)予以封阻。抗-IL-21R抗體係於用0.2%牛血清白蛋白予以補充的 HBS / EP緩衝液予以稀釋至010.2 Mg/mi以及裝入至 biacoretn^b片之上。在短暫的清洗期間以後，〇_1〇〇nM 的人類IL-21R-H/F或10-500 nM鼠科IL-21R-H/F的溶液係以 50 μΐ/min的流速被注入於晶片之上。針對人類與鼠類 103 201000129 IL-21R的動力學進行結合相歷時3 min，以及針對hIL_21R 監測解離相歷時15 min及針對miL-21R監測解離相歷時 5 111丨11，接著2個1(^1注射及1個3〇4注射的甘胺酸(1^1.5) 以再生完全主動捕捉表面。全部的結合實驗係於HBS/ Ep 緩衝液内在25°C下進行，以及將樣本架保持在15〇c。各感測圖係使用雙重參考以減去空白和緩衝作用。感測圖係顯示於第8a-b圖（人類IL-21R-His/FLAG)和8c_d(鼠科 IL-21R-His/FLAG)之中。結合動力學參數係顯示於表7八之中，以及來自一重複的實驗之額外的動力學資料係顯示於表7B之中。此外，AbS和AbT係藉由以上說明的程序測試對於石蟹獼狼IL-21R-His/FLAG的結合動力學。AbS和AbT二者對人類與石蟹獼猴IL-21R-H/F之結合圖形是相似的（第9圖）。第9圖顯示出石蟹獼猴IL-21R-His/FLAG結合至AbS(9a); 以及結合至AbT(9c);以及人類IL-21 R-His/FLAG結合至 AbS(9b);以及結合至AbT(9d)。表7A :抗IL-21R抗體結合人類與鼠類IL_21R-His/FLAG的動力學參數人類IL-21R 鼠科IL-21R 抗艘 ka (1/Ms) kd a/s) KD (M) ka (1/Ms) kd (1/s) KD (M) 18A5 2.43E+05 1.08E-03 4.43E-09 2.12E+05 1.53E-02 7.20E-08 AbO 2.41E+05 1.14E-04 4.75E-10 1.12E+05 5.49E-03 4.92E-08 AbP 1.94E+05 1.19E-04 6.15E-10 9.99E+04 5.08E-03 5.08E-08 AbQ 4.39E+05 9.34E-05 2.13E-10 3.01E+05 2.07E-02 6.88E-08 AbR 1.70E+05 9.61E-05 5.67E-10 7.65E+04 4.93E-03 6.45E-08 AbS 1.44E+05 2.91E-04 2.02E-09 1.99E+05 3.32E-03 1.67E-08 AbT 1.79E+05 6.78E-05 3.79E-10 2.11E+05 3.31E-03 1.57E-08 AbU 1.86E+05 8.18E-05 4.40E-10 9.81E+04 4.34E-03 4.42E-08 104 201000129 表7B :抗IL-21R抗體結合人類IL-21R-His/FLAG的動力學參數人類IL-21R 抗體 ka kd KD (l/Ms) (1/s) (M) 18A5 3.04E+05 1.34E-03 4.40E-09 AbP 2.33E+05 1.02E-04 4.36E-10 AbQ 4.39E+05 9.34E-05 2.13E-10 AbR 2.48E+05 9.76E-05 3.94E-10 AbS 2.02E+05 3.05E-04 1.51E-09 AbT 2.73E+05 7.42E-05 2.72E-10 AbU 2.38E+05 7.83E-05 3.29E-10 實施例9.7 : B1ACOREtm抗原決定位競爭分析

將抗體AbS和AbT以及親代抗體18A5直接地固定於 CM5 BIACORE™晶片之上。允許鼠科IL-21R-H/F (100 nM) 流動越過晶片歷時3 00 sec，接著清洗（100 sec)，以及接而允許5 pg/ml的AbS、AbT、D5，或是一非中和性抗mIL-21R 抗體(7C2)之溶液流動越過表面。AbS、AbT，和D5未觀察到額外的結合，其係指出於mIL-21R-H/F上之其等的結合位址係被同時的結合AbS、AbT，或18A5抗體所阻止（第10a 圖）。反之，非中和性對照抗IL-21R抗體7C2能夠結合至被捕捉於AbS、AbT，或是18A5抗體之上的mIL-21R-H/F，其係指出此對照抗體係結合在和捕獲的抗體所結合的抗原決定位不同之一個抗原決定位。相似地，AbS和AbT不與固定於CM5 BIACORETM晶片之上的AbS或AbT所捕捉之人類IL-21R-H/F結合，而對照抗 105 201000129 人類IL-21R抗體（9D2)能夠結合由AbS或AbT所捕捉之人類 IL_21R-H/F(第10b圖）。此觀察暗示著AbS的結合位址係藉由同時的結合AbT所封阻，以及反之亦然。實施例9.8 :以細胞為基礎的增殖分析純化的IgG係如同以上說明的於3個細胞株中測試 IL-21-依賴性增殖分析的活性：人類IL-21R-BaF3細胞、鼠科IL-21R-BaF3細胞，以及人類IL-21R-TF-1細胞。全部均顯示出人類與鼠類IL-21R-依賴性增殖二者之強的抑制作用’具有比親代18A5 IgG的潛力更大的潛力（第11圖，表8)。用1 〇〇 pg/ml的人類IL-21於人類IL-21 R-BaF3細胞進行分析 (第11a圖），用200 pg/ml的氣類il-21於鼠科IL-21R-BaF3細胞進行分析（第lib圖），以及用1〇〇 pg/mi的人類IL_2i於人類 IL-2ir_tf-i細胞進行分析（第lle圖）。第26d圖係描繪此等抗體對於人類IL-21R-BaF3細胞的作用之額外的研究的結果。表8 .人類IL-21R-BaF3細胞 '鼠科lL-21R-BaF3細胞，以及人類IL_21R-TF-1細胞的增殖之中和作用抗體人類 IL-21R-BaF3 中和 IC5〇 (nM) Γϊ IL-21R-BaF3 中和 IC5〇 (nM) 人類 IL-21R-TF1 中和 ICso (nM) AUr^^-- 1.71 177.23 13.99 0.56 0.34 1.63 ^bS 0.68 0.04 6.67 ^bT -- 0.30 0.05 2.32 0.54 nd nd AL21R_Fc 0.20 (人類 IL-21R-Fc) 〇·〇4 (小鼠 IL-21 R-Fc) 7.22 (人類 IL-21R-Fc) 實施例9.9 :原代人類B細胞增殖分析 106 201000129 抗IL - 21R抗體係被測試其等抑制IL - 21 -依賴性原代人類B細胞增殖的能力。來自健康的人類供體之棕黃層（bUffy coat)細胞係得自於 Massachusetts General Hospital (Boston，ΜΑ)。細胞係用ROSETTESEP™ B細胞的增濃雞尾酒（StemCell Technologies，Vancouver，Canada)予以畔育，以及B細胞係依據製造商的用法說明予以單離。以 lxlO5/井的量將所形成的族群(60-80% CD19+ B細胞）培養於96-井的平底的平盤之中含有i〇〇/0 FBS、50 U/ml青黴〇素、50 pg/ml鏈黴素，和2 mM L-麵醯胺酸之RPMI内。B 細胞係於調整至5% C〇2的37。(：孵育器中用連續稀釋的抗 -人類IL-21R抗體予以預處理歷時3〇 min。經處理的B細胞接 - 而於調整至5% C02的370C孵育器中用0.5 pg/ml抗CD40 mAb (BD Biosciences ’ San Jose，CA)和 10 ng/ml IL-21 細胞素予以刺激歷時3天。於第3天，培養物係以0.5 MCi/井的 3H-胸腺核苷（perkin Elmer (NEN))產生脈動以及在5 hr之後 Q 於玻璃纖維過濾墊片上予以收穫。藉由液體閃爍計數器決定H-胸腺核苷的併入。全部經改良的抗體會以比親代18a5 抗體更大的潛力中和IL-21-依賴性增殖（第。^匕圖，表9 ; 亦可參見第26e圖）。表9 :人類原代B細胞的增殖之中和作用抗體 AbQ ~~ B細胞增殖之中和 IC5〇 (nM) 0.16 AbR ~0.22 AbS 0.44 AbT 0.14 AbU 」 0.13 107 201000129 18A5 抗體 |l.86__ 實施例9.10 :原代人類τ細胞增痩分析抗IL-21R抗體係被測試其等抑制il-2 1 -依賴性原代人類CD4+ Τ細胞增殖的能力。來自健康的人類供體之棕黃層細胞係付自於 Massachusetts General Hospital (Boston， MA)。CD4 T細胞係依據製造商的用法說明使用 ROSETTESEPtm CD4+ τ 細胞的增濃雞尾酒（StemCell Technologies)之負篩選予以單離。所形成的族群係〜8〇 9〇0/〇 CD4+/CD3+ T細胞。經增濃的人類CD4+ T細胞在調整至5% 〇 C02的37°C孵育器中、於含有1〇% FBS、100 U/ml青黴素、

100 pg/ml鏈黴素、2mM L-楚醯胺酸，和HEPES之RPMI 内、以抗CD3/抗CD28-塗覆的微球體予以活化歷時3天。在 - 活化之後’將微球體移除以及清洗該等細胞且以大概1 χ 1 〇6 , 細胞/ml的量靜止於培養基之中隔夜。靜止的細胞接而在加至分析平盤之前再次予以清洗。於平底的96-井平盤内之培養基中製造連續稀釋的抗人類比-21受體抗體，接著相繼的添加人類IL-21(20 ng/ml的最終濃度），以及活化的與靜止的 ❹ CD4+T細胞（1〇5細胞/井）。該等平盤接而被孵育歷時額外的 3天以及在分析的最終6 hr的期間以1 μΟί/井3H-胸腺核苦 (Perkin Elmer (NEN))產生脈動。細胞係於玻璃纖維過渡塾片上予以收穫，以及藉由液體閃燦計數器決定3H-胸腺核芽的併入。全部經改良的抗體會以比親代18A5抗體更大的潛力中和IL-21_依賴性增殖（第13圖，表10A ;亦可參見第26f 圖）。 108 201000129 表10A:人類原代τ細胞增殖之中和作用抗體 T細胞增殖之中和 ICsn fnM) AbO 0.06 ' -----------------…- AbP 0.02 〜--- AbQ 0.08 '〜 AbR ~〇T〇4 —-- AbS Γ〇.〇6 '~~~—^ AbT 0.03 ~~~~~---- AbU ~0^03 ――—-—---. 18A5抗體 ---— 實施例9Λ1 :原代鼠科Τ細胞增殖分析

❹ 抗IL-21R抗體係被測試其等抑制il_2k依賴性原代鼠科CD8+ T細胞增殖的能力。收集來自12_週大雖性說We 小鼠之胭的、腋窩的、肱的，和腹股溝的淋巴結以及脾臟。使用配於Ο.ΟΠ M THs (pH 7.4)之〇·16 Μ ΝΗ4α將脾臟細胞之單一-細胞的懸浮液之紅血球細胞去掉。集中脾臟和淋巴結細胞以及使用鼠科T細胞CD8子集管柱套組（R&D Systems)來增濃CD8+細胞。將鼠科CD8+細胞（3xl04 ;懸浮於含有10〇/〇胎牛血清且補充〇_〇5 mM β-巯乙醇、2 mM L-麩醯胺酸、0.1 mM非必需胺基酸、1 mM丙酮酸納、100 U/ml 青黴素、100 pg/ml鏈黴素以及50 pg/ml建它黴素的 DMEM之中）平板培養於96-井，抗mCD3活化平盤中 (BD Biosciences);將 mIL_2i (50 ng/ml)添加至全部的井中。從20 pg/ml開始以三重複滴定測試抗體的力價。細胞係於37°C/ 10% C〇2孵育器中生長歷時3天。在培養的最後5 hr 109 201000129 的期間，用0.5 pCi甲基-3H-胸腺核苷/井(GE Healthcare)標記細胞。使用Mach III細胞收穫機(T〇niTec，Hamden，CT) 收獲細胞以及使用Trilux microbeta計數器（Perkin Elmer)計數細胞。除AbP之外’全部的經改良的抗體會以比親代18a5 抗體更大的潛力中和IL-21-依賴性增殖（第圖，表ιοΒ ;亦可參見第26g圖）。表10B:鼠類原代T細胞增殖之中和作用抗體 T細胞增殖之中和 ICs〇 (nM) AbO 4.92 AbP 無抑制作用 AbQ 0.85 AbR 0.13 AbS 0.02 AbT 0.61 AbU 1.79 18A5抗體 >85 實施例9.12 ·· ADCC分析抗IL-21R抗體係被測試當結合至標的細胞時其等誘導抗體依賴性細胞毒殺(ADCC)的能力。在實驗的前一天， PBMC係藉由於PBS中稀釋棕黃層i:i，令其於FICOLL® (GE Healthcare)上成層，以及al200 g離心2〇 min而從棕黃層單離。PBMCs係自FICOLL®層的頂部移除，予以清洗，以及用 10 ng/ml IL-2和 1〇 ng/ml IL-12 (R&D Systems)予以刺激隔夜。實驗當天，經刺激的PBMCs係藉由離心予以收集以及以lxlO8細胞/ml被再懸浮於培養基内。BJAB細胞係在 37°C 下用 0.5 μΜ CFSE (MOLECULAR PROBES®，

Invitrogen Corporation)予以標記10 min，以及接而以胎牛血 110 201000129 清清洗一次和PBS二次。接而以100 μΐ的培養基2xl05細胞/ 井的量將細胞平板培養於96-井平底的平盤内。添加50μι的 4χ抗體至BJAB細胞，接著50 μΐ的5xl〇6PBMC，提供最終 1 : 25標的：效應細胞比率。細胞係在37°c下孵育歷時6hr 以及用峨化丙啶(PI)染色以標記死的和垂死的細胞。標的細胞之毒殺（CFSE+)係於FACSCALIBUR™流式細胞儀 (BD Biosciences)中藉由測量PI染色予以評定。只有一種抗 IL-21R抗體，AbZ，其具有野生型人類igGl守恆區，顯示出高於背景位準（由不結合至標的細胞的對照抗IL-13抗體所呈現）之ADCC。具有如同AbZ之相同的可變異領域之全部的抗體，包括帶有人類IgG4的形式(AbY)，以及該等帶有雙突變(AbX)和三突變(AbT)形式的人類IgGl，均僅顯示出背景位準的ADCC(第15圖）。測試之全部的其他的抗IL-21R 抗體均含有三突變形式的人類IgGl以及顯示出背景 ADCC。一正對照抗體，rituximab (RITUXAN®)，於全部的實驗中會誘導ADCC。

實施例9Λ3 : ClqELlSA 為了決定是否細胞表面被抗IL-21R抗體結合可能會導致補體依賴性細胞毒殺(CDC)，該等抗體係於ELISA中測試其等結合至補體組份Clq的能力。IL-21R抗體和rituximb (RITUXAN®)係於PBS之内稀釋至5 pg/ml。稀釋的抗體 (100 μΐ)係在4°C下被塗覆於一 COSTAR®高度結合的 ELISA平盤(Corning Life Sciences，Lowell，MA)上隔夜。平盤係用PBS / Tween-20予以清洗3X以及在RT下用200 μΐ 111 201000129 的封阻緩衝液(〇·1 MNaPO4,0.1 MNaCl，〇.l% 明膠，〇_〇ι〇/〇 Tween)予以封阻歷時1 hr。先前經測定含有ciq的人類也清(Quide卜San Diego ’ CA)係於PBS中予以稀釋1:5〇。在 lhr的封阻之後，清洗平盤係以及將1〇〇 μΐ的稀釋血清添加至各個井中且在RT下於一震盪器上孵育歷時2hr。在3次清洗以後’將100 μΐ的0.1 pg/ml雞多株抗人類Clq抗體 (AbCam，Cambridge，MA)添加至各個井中且在rt下畔育歷時1 hr。再次清洗平盤以及用稀釋1:4000的1〇〇 μΐ的兔多株抗體對雞Ig-Y-HRP(AbCam)在RT下孵育歷時1 hr。清洗 ❹ 平盤以及用TMB予以顯示歷時5 min，接著用50 μΐ的1M HbSO4以停止反應，以及接而在450 nm讀取。只有一種抗 _ IL-21R抗體，AbZ，其具有野生型人類IgGl守恆區，顯示 · 出高於背景位準（由先前已經顯示出缺乏Clq的結合之帶有 ’ 三突變的人類IgGl守恆區的對照抗體所呈現)之的Clq的結合。具有如同AbZ之相同的可變異領域之全部的抗體，包括帶有人類IgG4的形式(AbY)，以及該等帶有雙突變(AbX) 和三突變（AbT)形式的人類IgGl，均僅顯示出背景位準的 Clq的結合（第16圖）。測試之全部的其他的抗IL-21R抗體均含有三突變形式的人類IgGl以及顯示出背景Clq的結合。實施例9.14 :細胞素競爭分析執行細胞素競爭分析以展現抗體AbT係以競爭IL-21細胞素的方式結合至鼠科IL-21R。抗體AbT係以1 pg/ml予以塗覆於ELISA平盤上，其等接而用配於PBS/.05% Tween之 1% BSA予以封阻。1.5 ng/ml經生物素化的鼠科 112 201000129 IL-21 R-His/FL AG係單獨地或是於增加濃度的鼠類IL-21存在之下被添加至井中，以及受體的結合至固定的抗體係用 HRP-結合的鏈黴抗生物素蛋白和隨後用TMB檢測試劑予以孵育來檢測。在4 ng/ml之上的小鼠IL-21幾乎完全地能夠封阻mIL-21R的結合至AbT，其係指出該抗體與該細胞素競爭結合至鼠科IL-21R (第27a圖）。執行第二種分析以展現抗體AbS係以競爭IL-21細胞素的方式結合至鼠科IL-21R。鼠科IL-21R-FC係被捕捉於覆蓋有一抗小鼠IgG2a抗體之ELISA平盤之上。平盤係用配於 PBS之1% BSA予以封阻以及清洗，並且變化濃度的AbS係於10 pg/ml mIL-21存在之下被添加至該平盤。miL-21的結合該受體係藉由HRP-結合的抗His6抗體予以檢測，以及AbS 的結合該受體係藉由一抗人類Ig抗體予以檢測^在大概2 Kg/ml之上的AbS的濃度完全地防止mlL-21結合至 mIL-21R-Fc ’其係指出該抗體與該細胞素競爭結合至鼠科 IL-21R(第 27b圖）。均等物該等熟悉此藝者只使用例行的實驗會識別出，或是能夠確定本文中說明的本發明的特定具體例之許多的均等物。下列的申請專利範圍意欲包含此等均等物。【圖式簡單說*明】第l(a-c)圖係描繪人類IL_2 i R_BaF3細胞增殖藉由 scFv 之中和作用。細胞係用指出的scFv予以混合，以及接而用 100 pg/ml的人類IL_2i予以孵育。在48小時之後藉由 113 201000129 CELLTITER-GLO® (Promega Corporation，Madison，WI) 測量增殖。第2(a-c)圖係描繪人類IL-21R-TF1細胞增殖藉由scFv 之中和作用。細胞係用指出的scFv予以混合，以及接而用 100 pg/ml的人類IL-21予以孵育。在48小時之後藉由 CELLTITER-GLO®測量增殖。第3(a-c)圖係描繪鼠類IL-21 R-BaF3細胞增殖藉由scFv 之中和作用。細胞係用指出的scFv予以混合，以及接而用 400 pg/ml的鼠類IL-21予以畔育。在48小時之後藉由 CELLTITER-GLO®測量增殖。第4(a-c)圖係描繪scFv與親代抗體18A5 IgG結合至鼠類IL-21R之競爭作用。scFv係用經生物素化的·鼠科 IL-21R-H/F予以混合，以及將該等混合物添加至固定於 ELISA平盤之上的抗體18A5。mIL-21R的捕獲係用hrp_鍵黴抗生物素蛋白予以檢測，以及A450信號的降低係指出針對mIL-21R結合之競爭作用。第5圖係描繪IL-21-依賴性增殖藉由21重鏈/輕鏈對之中和作用。如圖示中指出的抗體係被添加至細胞。隨後添加IL-21，以及在48小時之後藉由CELLTITER-GLO®測量增殖。用100 pg/ml的人類IL-21進行IL-21R-BaF3細胞的分析 (第5a-c圖），用 1〇〇 pg/mi的人類IL_21it行人類IL 21r tfi 細胞的分析（第5d-f圖），或是用400 pg/ml的鼠類il_21進行鼠類IL-21R-BaF3細胞的分析（第5g-i圖）。第6圖係描繪21抗IL-21R IgGs對暫時表現人類 114 201000129 IL-21R(第 6a-c圖）、大鼠IL_21R (第 6d-f圖）、石蟹獼猴IL-21R (第6g-i圖），以及人類加馬共同鏈（第6j_丨圖）之ch〇細胞的結合。CHO細胞係暫時地用扎-2111或是對照的加馬共同鏈予以轉染，以及用HRP-結合的抗人類IgG於一細胞為主的 ELIS A檢測結合作用。第7(a-c)圖係描繪藉由表面電漿子共振予以測量之特定的抗IL-21R抗體（第7a圖，AbS ;第7b圖，AbQ、AbT、 AbO;第7c圖’AbR'AbP，和AbU)之專一性的結合。抗IL-21R 抗體係被捕捉於抗人類IgG之上，以及於BIACORE™ (GE Healthcare，Piscataway，NJ)儀器内測量鼠科IL-21R-H/F、人類IL-13-H/F、人類IL-2Rp，或是人類可溶解的IL-4R任一者之隨後的結合。第7d圖顯示出人類IL-2RP與人類可溶解的IL-4R係分別地被專一的抗IL-2RP與抗IL-4R抗體捕捉 (對照）。第8(a-d)圖係描繪抗IL-21R抗體對人類與鼠類IL-21R 之結合。指出的人類抗IL-21R抗體係被捕捉於固定在 BIACORE™晶片上的抗人類IgG之上。允許變化濃度的人類L-21R-His/FLAG (第8a-b圖）與鼠科IL-21R-His/FLAG(第 8c-d圖）於晶片上流動，以及監測結合作用與解離作用。第9圖係描繪抗IL-21R抗體對人類與石蟹獼猴IL-21R 之結合作用。人類抗IL-21R抗體AbS與AbT係被捕捉於固定在BIACOREtn^b片上的抗人類IgG之上。允許變化濃度的人類與石蟹獼猴IL-21R-His/FLAG於晶片上流動，以及監測結合作用與解離作用。第9a圖顯示出的石蟹獼猴 115 201000129 IL-21R-His/FLAG的結合至AbS。第9b圖顯示出人類 IL-21R-His/FLAG結合至AbS。第9c圖顯示出石蟹獼猴 IL-21R-His/FLAG的結合至AbT。第9d圖顯示出人類 IL-21R-His/FLAG的結合至 AbT。第10圖係描繪IL-21R抗體之抗原決定位的評定。於第 10a圖所說明的實驗中（亦參見Y-轴左方的闡釋），鼠科 IL-21R-H/F (His-Flag融合蛋白質）係被捕捉於固定在 BIACORE™晶片上的抗IL-21R抗體AbS之上。額外的抗 IL-21R抗體(AbS、AbT、D5 (D5-20，中和性抗鼠類IL-21R 抗體），與7C2(非中和性抗鼠類IL-21R對照抗體))係於晶片上流動以及監測其等結合至該捕獲的IL-21R-H/F。於第10b 圖所說明的實驗中，人類IL-21R-H/F係被捕捉於固定在 BIACORE™晶片上的抗IL-21R抗體AbS之上。額外的抗 -IL-21R抗體(AbS、AbT，和9D2(非中和性抗人類IL-21R對照抗體）)係於晶片上流動以及監測其等結合至該捕獲的 IL-21R-H/F。第11圖係描繪人類IL-21R-BaF3細胞增殖與鼠類 IL-21R-BaF3細胞增殖藉由該指出的抗體之中和作用。將抗體添加至細胞。隨後添加IL-21以及在48小時之後用 CELLTITER-GLO®測量增殖。用100 pg/ml的人類IL-21進行人類IL-21R-BaF3細胞的分析（第11a圖），用200 pg/ml的鼠類 IL-21進行鼠類IL-21R-BaF3細胞的分析（第lib圖），以及用 100 pg/ml的人類IL-21進行人類IL-21R-TF1細胞的分析（第 11c圖）。 201000129 第12圖係描繪人類原代b細胞之i L -鼠類21 -依賴性的增殖之中和作用。將該等指出的抗體與抗CD40抗體和人類 IL-21—起添加至原代人類B細胞。在3天之後測量3H-胸腺核苷的併入。第12a圖係描繪介於AbQ、AbR、AbS、AbT、 AbU、IL-13三突變，以及18A5親代抗體之間的比較；第 12b圖係描繪介於AbT、AbV、AbW、AbU，和人類IgGl對照(hlgl)之間的比較。第13圖係描繪人類原代CD4+T細胞的IL-21 -依賴性增殖之中和作用。將指不的抗體與人類IL-21 —起加入至活化的原代人類CD4+T細胞，以及在3天之後測量3H-胸腺核苷的併入。第14圖係描繪鼠類原代CD8+ T細胞的IL-21 -依賴性增殖之中和作用。將指示的抗體與人類IL-21 —起加入至活化的原代鼠科CD8+T細胞，以及在3天之後測量3H-胸腺核苷的併入。第15圖係描繪由抗-1L - 21R抗體誘導的抗體依賴性細胞毒殺(ADCC)之測量。覆蓋有該指出的抗-IL-21R抗體之 CFSE-標記的BJAB細胞的PBMC-依賴性毒殺係藉由碘化丙啶的併入予以測量。該等抗CD20抗體rituximab (RITUXAN®，Genentech，Inc.，South San Francisco，CA) 係被包括作為一正對照組，以及抗_；[ L -13抗體係被包括作為一負對照組。第16圖係描繪藉由抗-IL-21R抗體之補體Clq的結合。該指出的抗-IL-21R抗體被固定於ELISA平盤之上以及，接 117 201000129 著用人類血清孵育，Clq的結合係用雞抗人類Clq以及 HRP-結合的抗-雞IgY抗體予以測量。該等抗CD20抗體 rituximab (RITUXAN®)係被包括作為一正對照組，以及一抗-IL-13抗體係被包括作為一負對照組。第17(a-c)圖描繪AbQ的胺基酸序列，其包括VH和VL領域、CDRs (HI、H2、H3、LI、L2，與L3)，以及守十互區域。第18(a-c)圖描繪AbR的胺基酸序列，其包括VH和VL領域、CDRs (HI、H2、H3、LI、L2，與L3)，以及守十亙區域。第19(a-c)圖描繪AbW的胺基酸序列，其包括VH和VL領域、CDRs (HI、H2、H3、LI、L2，與L3)，以及守十亙區域。第20(a-c)圖描繪AbS的胺基酸序列，其包括VH和VL領域、CDRs (HI、H2、H3、LI、L2，與L3)，以及守十亙區域。第21(a-c)圖描繪AbT的胺基酸序列，其包括VH和VL領域、CDRs (HI、H2、H3、LI、L2，與L3)，以及守十亙區域。第22(a-c)圖描繪AbO的胺基酸序列，其包括VH和VL領域、CDRs (HI、H2、H3、LI、L2，與L3)，以及守怪區域。第23(a-c)圖描繪AbP的胺基酸序列，其包括VH和VL領域、CDRs (HI、H2、H3、LI、L2，與L3)，以及守恆區域。第24(a-c)圖描繪AbU的胺基酸序列，其包括VH和VL領域、CDRs (HI、H2、H3、LI、L2，與L3)，以及守十互區域。第25(a-c)圖描繪AbV的胺基酸序列，其包括VH和VL領域、CDRs (HI、H2、H3、LI、L2，與L3)，以及守十亙區域。第26(a-g)圖係描繪額外的研究產生的結果，該等研究係以相似於產生第5、11、12、13，和14圖（以上說明的） 118 201000129 中顯示出的結果的方式執行。第27a圖係描繪IL-21細胞素與抗體AbT對鼠類IL-21R 的結合之競爭作用。載體或是增加量的IL-21係用經生物素化的鼠類IL-21R-His/FLAG混合，以及將該等混合物添加至被固定於ELISA平盤之上的AbT。mIL-21R的捕獲係用 HRP-鏈黴抗生物素蛋白予以檢測，以及A450信號的降低係指出針對mIL-21R結合之競爭作用。第27b圖係描繪用抗體 AbS之IL-21細胞素競爭的實驗。【主要元件符號說明】 (無） 119 201000129 序列表 <110> 惠氏梅迪谬思有限公司

<12〇>介白素-21受體結合蛋白質 <130> 01997,069000 <150> US 61/055,500 <151> 2008^05—23 <160> 248 <170> Patentln 版本 3.5 <210> 1 <211> 2665 <212> DNA <213> 4 人 <220

<221> CDS <222> (236)..(1849) <400> 1 gtcgactgga ggcccagctg cccgtcatca gagtgacagg tcttatgaca gcctgattgg tgactcgggc tgggtgtgga ttctcacccc aggcctctgc ctgctttctc agaccctcat ctgtcacccc cacgctgaac ccagctgcca cccccagaag cccatcagac tgcccccagc acacggaatg gatttctgag aaagaagccg aaacagaagg cccgtgggag tcagc atg

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Ser Leu His Arg Ser Ala His Asn Ala Thr His Ala Thr Tyr Thr Cys 70 75 80 cac atg gat gta ttc cac ttc atg gcc gac gac att ttc agt gtc aac

His Met Asp Val Phe His Phe Met Ala Asp Asp lie Phe Ser Val Asn 85 90 95 ate aca gac cag tet ggc aac tac tee cag gag tgt ggc age ttt etc lie Thr Asp Gin Ser Gly Asn Tyr Ser Gin Glu Cys Gly Ser Phe Leu 100 105 110 ctg get gag age ate aag ccg get ccc cct ttc aac gtg act gtg acc

Leu Ala Glu Ser He Lys Pro Ala Pro Pro Phe Asn Val Thr Val Thr 115 120 125 60 120 180 238 286 334 382 430 478 526 574 622 201000129 ttc tea gga cag tat aat ate tee tgg ege tea gat tac gaa gac cct 670

Phe Ser Gly Gin Tyr Asn lie Ser Trp Arg Ser Asp Tyr Glu Asp Pro 130 135 140 145 gee ttc tac atg ctg aag ggc aag ett cag tat gag ctg cag tac agg 718

Ala Phe Tyr Met Leu Lys Gly Lys Leu Gin Tyr Glu Leu Gin Tyr Arg 150 155 160 aac egg gga gac ccc tgg get gtg agt ccg agg aga aag ctg ate tea 766

Asn Arg Gly Asp Pro Trp Ala Val Ser Pro Arg Arg Lys Leu lie Ser 165 170 175 gtg gac tea aga agt gtc tee etc etc ccc ctg gag ttc ege aaa gac 814

Val Asp Ser Arg Ser Val Ser Leu Leu Pro Leu Glu Phe Arg Lys Asp 180 185 190 teg age tat gag ctg cag gtg egg gca ggg ccc atg cct ggc tee tee 862

Ser Ser Tyr Glu Leu Gin Val Arg Ala Gly Pro Met Pro Gly Ser Ser 195 200 205 tac cag ggg acc tgg agt gaa tgg agt gac ccg gtc ate ttt cag acc 910

Tyr Gin Gly Thr Trp Ser Glu Trp Ser Asp Pro Val lie Phe Gin Thr 210 215 220 225 cag tea gag gag tta aag gaa ggc tgg aac cct cac ctg ctg ett etc 958

Gin Ser Glu Glu Leu Lys Glu Gly Trp Asn Pro His Leu Leu Leu Leu' 230 235 240 etc ctg ett gtc ata gtc ttc att cct gee ttc tgg age ctg aag acc 1006

Leu Leu Leu Val lie Val Phe lie Pro Ala Phe Trp Ser Leu Lys Thr 245 250 255 cat cca ttg tgg agg eta tgg aag aag ata tgg gee gtc ccc age cct 1054

His Pro Leu Trp Arg Leu Trp Lys Lys lie Trp Ala Val Pro Ser Pro 260 265 270 gag egg ttc ttc atg ccc ctg tac aag ggc tgc age gga gac ttc aag 1102

Glu Arg Phe Phe Met Pro Leu Tyr Lys Gly Cys Ser Gly Asp Phe Lys 275 280 285 aaa tgg gtg ggt gca ccc ttc act ggc tee age ctg gag ctg gga ccc 1150

Lys Trp Val Gly Ala Pro Phe Thr Gly Ser Ser Leu Glu Leu Gly Pro 290 295 300 305 tgg age cca gag gtg ccc tee acc ctg gag gtg tac age tgc cac cca 1198

Trp Ser Pro Glu Val Pro Ser Thr Leu Glu Val Tyr Ser Cys His Pro 310 315 320 cca egg age ccg gee aag agg ctg cag etc aeg gag eta caa gaa cca 1246

Pro Arg Ser Pro Ala Lys Arg Leu Gin Leu Thr Glu Leu Gin Glu Pro 325 330 335 gca gag ctg gtg gag tet gac ggt gtg ccc aag ccc age ttc tgg ccg 1294

Ala Glu Leu Val Glu Ser Asp Gly Val Pro Lys Pro Ser Phe Trp Pro 340 345 350 aca gee cag aac teg ggg ggc tea get tac agt gag gag agg gat egg 1342

Thr Ala Gin Asn Ser Gly Gly Ser Ala Tyr Ser Glu Glu Arg Asp Arg 355 360 365 cca tac ggc ctg gtg tee att gac aca gtg act gtg eta gat gca gag 1390

Pro Tyr Gly Leu Val Ser lie Asp Thr Val Thr Val Leu Asp Ala Glu 370 375 380 385 ggg cca tgc acc tgg ccc tgc age tgt gag gat gac ggc tac cca gee 1438

Gly Pro Cys Thr Trp Pro Cys Ser Cys Glu Asp Asp Gly Tyr Pro Ala 390 395 400 ctg gac ctg gat get ggc ctg gag ccc age cca ggc eta gag gac cca 1486 2 201000129

Leu Asp Leu Asp Ala Gly Leu Glu Pro Ser Pro Gly Leu Glu Asp Pro 405 410 415 etc ttg gat gca ggg acc aca gtc ctg tcc tgt ggc tgt gtc tea get 1534

Leu Leu Asp Ala Gly Thr Thr Val Leu Ser Cys Gly Cys Val Ser Ala 420 425 430 ggc age cct ggg eta gga ggg ccc ctg gga age etc ctg gac aga eta 1582

Gly Ser Pro Gly Leu Gly Gly Pro Leu Gly Ser Leu Leu Asp Arg Leu 435 440 445 aag cca ccc ett gca gat ggg gag gac tgg get ggg gga ctg ccc tgg 1630

Lys Pro Pro Leu Ala Asp Gly Glu Asp Trp Ala Gly Gly Leu Pro Trp 450 455 460 465 ggt ggc egg tea cct gga ggg gtc tea gag agt gag geg ggc tea ccc 1678

Gly Gly Arg Ser Pro Gly Gly Val Ser Glu Ser Glu Ala Gly Ser Pro 470 475 480 ctg gee ggc ctg gat atg gac aeg ttt gac agt ggc ttt gtg ggc tet 1726

Leu Ala Gly Leu Asp Met Asp Thr Phe Asp Ser Gly Phe Val Gly Ser 485 490 495

Φ gac tgc age age cct gtg gag tgt gac ttc acc age ccc ggg gac gaa 1774

Asp Cys Ser Ser Pro Val Glu Cys Asp Phe Thr Ser Pro Gly Asp Glu 500 505 510 gga ccc ccc egg age tac etc ege cag tgg gtg gtc att cct ccg cca 1822

Gly Pro Pro Arg Ser Tyr Leu Arg Gin Trp Val Val lie Pro Pro Pro 515 . 520 . 525 ett teg age cct gga ccc cag gee age taatgagget gactggatgt 1S69

Leu Ser Ser Pro Gly Pro Gin Ala Ser 530 535 « ccagagctgg ccaggccact gggccctgag ccagagacaa ggtcacctgg gctgtgatgt 1929 gaagacacct gcagcctttg gtctcctgga tgggcctttg agcctgatgt ttacagtgtc 1989 tgtgtgtgtg tgtgcatatg tgtgtgtgtg catatgcatg tgtgtgtgtg tgtgtgtctt 2049 aggtgcgcag tggcatgtcc acgtgtgtgt gtgattgeae gtgcctgtgg gcctgggata 2109 atgcccatgg tactccatgc attcacctgc cctgtgcatg tctggactca cggagctcac 2169 ccatgtgcac aagtgtgcac agtaaacgtg tttgtggtca acagatgaca acagccgtcc 2229 tccctcctag ggtcttgtgt tgcaaglrtgg tccacagcat ctccggggct ttgtgggatc 2289 agggcattgc ctgtgactga ggcggagccc agccctccag cgtctgcctc caggagctgc 2349 aagaagtcca tattgttcct tatcacctgc caacaggaag cgaaagggga tggagtgagc 2409 ccatggtgac ctcgggaatg gcaatttttt gggcggcccc tggaegaagg tctgaatccc 2469 gactctgata ccttctggct gtgctacctg agccaagtcg cctcccctct ctgggctaga 2529 gtttccttat ccagacagtg gggaaggeat gacacacctg ggggaaattg gegatgteae 2589 ccgtgtacgg tacgcagccc agagcagacc ctcaataaac gtcagcttcc ttcaaaaaaa 2649 aaaaaaaaaa tetaga 2665 <210> 2 <211> 538 <212> PRT <213>智人 201000129 <400> 2

Met Pro Arg Gly Trp Ala Ala Pro Leu Leu Leu Leu Leu Leu Gin Gly 15 10 15

Gly Trp Gly Cys Pro Asp Leu Val Cys Tyr Thr Asp Tyr Leu Gin Thr 20 25 30

Val lie Cys lie Leu Glu Met Trp Asn Leu His Pro Ser Thr Leu Thr 35 40 45

Leu Thr Trp Gin Asp Gin Tyr Glu Glu Leu Lys Asp Glu Ala Thr Ser 50 55 60

Cys Ser Leu His Arg Ser Ala His Asn Ala Thr His Ala Thr Tyr Thr 65 70 75 80

O

Cys His Met Asp Val Phe His Phe Met Ala Asp Asp lie Phe Ser Val 85 90 95

Asn lie Thr Asp Gin Ser Gly Asn Tyr Ser Gin Glu Cys Gly Ser Phe 100 105 110

Leu Leu Ala Glu Ser lie Lys Pro Ala Pro Pro Phe Asn Val Thr Val 115 120 125

Thr Phe Ser Gly Gin Tyr Asn lie Ser Trp Arg Ser Asp Tyr Glu Asp 130 135 140

Pro Ala Phe Tyr Met Leu Lys Gly Lys Leu Gin Tyr Glu Leu Gin Tyr 145 150 155 160

Arg Asn Arg Gly Asp Pro Trp Ala Val Ser Pro Arg Arg Lys Leu lie 165 170 175

Ser Val Asp Ser Arg Ser Val Ser Leu Leu Pro Leu Glu Phe Arg Lys 180 185 190

Asp Ser Ser Tyr Glu Leu Gin Val Arg Ala Gly Pro Met Pro Gly Ser 195 200 205

Ser Tyr Gin Gly Thr Trp Ser Glu Trp Ser Asp Pro Val lie Phe Gin 210 215 220

Thr Gin Ser Glu Glu Leu Lys Glu Gly Trp Asn Pro His Leu Leu Leu 225 230 235 240

Leu Leu Leu Leu Val lie Val Phe lie Pro Ala Phe Trp Ser Leu Lys 245 250 255

Thr His Pro Leu Trp Arg Leu Trp Lys Lys lie Trp Ala Val Pro Ser 260 265 270 4 201000129

Pro Glu Arg Phe Phe Met Pro Leu Tyr Lys Gly Cys Ser Gly Asp Phe 275 280 285

Lys Lys Trp Val Gly Ala Pro Phe Thr Gly Ser Ser Leu Glu Leu Gly 290 295 300

Pro Trp Ser Pro Glu Val Pro Ser Thr Leu Glu Val Tyr Ser Cys His 305 310 315 320

Pro Pro Arg Ser Pro Ala Lys Arg Leu Gin Leu Thr Glu Leu Gin Glu 325 330 335

Pro Ala Glu Leu Val Glu Ser Asp Gly Val Pro Lys Pro Ser Phe Trp 340 345 350

Pro Thr Ala Gin Asn Ser Gly Gly Ser Ala Tyr Ser Glu Glu Arg Asp 355 360 365

Arg Pro Tyr Gly Leu Val Ser lie Asp Thr Val Thr Val Leu Asp Ala 370 375 380

Glu Gly Pro Cys Thr Trp Fro Cys Ser Cys Glu Asp Asp Gly Tyr Pro 385 390 395 400

Ala Leu Asp Leu Asp Ala Gly Leu Glu Pro Ser Pro Gly Leu Glu Asp 405 410 415

Pro Leu Leu Asp Ala Gly Thr Thr Val Leu Ser Cys Gly Cys Val Ser 420 425 430

Ala Gly Ser Pro Gly Leu Gly Gly Pro Leu Gly Ser Leu Leu Asp Arg 435 440 445

Leu Lys Pro Pro Leu Ala Asp Gly Glu Asp Trp Ala Gly Gly Leu Pro 450 455 460

Trp Gly Gly Arg Sor Pro Gly Gly Val Ser Glu Ser Glu Ala Gly Ser 465 470 475 480

Pro Leu Ala Gly Leu Asp Met Asp Thr Phe Asp Ser Gly Phe Val Gly 485 490 495

Ser Asp Cys Ser Ser Pro Val Glu Cys Asp Phe Thr Ser Pro Gly Asp 500 505 510

Glu Gly Pro Pro Arg Ser Tyr Leu Arg Gin Trp Val Val lie Pro Pro 515 520 525

Pro Leu Ser Ser Pro Gly Pro Gin Ala Ser 530 535 5 201000129 <210> 3 <211> 2628 <212> DNA <213>家鼷鼠 <220

<221> CDS <222> (407).·(1993) <400> 3 gtcgacgcgg cggtaccagc tgtctgccca cttctcctgt ggtgtgcctc acggtcactt 60 gcttgtctga ccgcaagtct gcccatccct ggggcagcca actggcctca gcccgtgccc 120 caggcgtgcc ctgtctctgt ctggctgccc cagccctact gtcttcctct gtgtaggctc 180 tgcccagatg cccggctggt cctcagcctc aggactatct cagcagtgac tcccctgatt 240 ctggacttgc acctgactga actcctgccc acctcaaaco ttcacctccc accaccacca 300 ctccgagtcc cgctgtgact cccacgccca ggagaccacc caagtgcccc agcctaaaga 360

atggctttct gagaaagacc ctgaaggagt aggtctggga cacagc atg ccc egg 415

Met Pro Arg 1 ggc cca gtg get gee tta etc ctg ctg att etc cat gga get tgg age 463

Gly Pro Val Ala Ala Leu Leu Leu Leu lie Leu His Gly Ala Trp Ser 5 10 15 tgc ctg gac etc act tgc tac act gac tac etc tgg acc ate acc tgt 511

Cys Leu Asp Leu Thr Cys Tyr Thr Asp Tyr Leu Trp Thr lie Thr Cys 20 25 30 35 gtc ctg gag aca egg age ccc aac ccc age ata etc agt etc acc tgg 559

Val Leu Glu Thr Arg Ser Pro Asn Pro Ser lie Leu Ser Leu Thr Trp 40 45 50 caa gat gaa tat gag gaa ett cag gac caa gag acc ttc tgc age eta 607

Gin Asp Glu Tyr Glu Glu Leu Gin Asp Gin Glu Thr Phe Cys Ser Leu 55 60 65 cac agg tet ggc cac aac acc aca cat ata tgg tac aeg tgc cat atg 655

His Arg Ser Gly His Asn Thr Thr His He Trp Tyr Thr Cys His Met 70 75 80

ege ttg tet caa ttc ctg tee gat gaa gtt ttc att gtc aat gtg aeg 703

Arg Leu Ser Gin Fhe Leu Ser Asp Glu Val Phe lie Val Asn Val Thr 85 90 95 gac cag tet ggc aac aac tee caa gag tgt ggc age ttt gtc ctg get 751

Asp Gin Ser Gly Asn Asn Ser Gin Glu Cys Gly Ser Phe Val Leu Ala 100 105 110 115 gag age ate aaa cca get ccc ccc ttg aac gtg act gtg gee ttc tea 799

Glu Ser lie Lys Pro Ala Pro Pro Leu Asn Val Thr Val Ala Phe Ser 120 125 130 gga ege tat gat ate tee tgg gac tea get tat gac gaa ccc tee aac 847

Gly Arg Tyr Asp lie Ser Trp Asp Ser Ala Tyr Asp Glu Pro Ser Asn 135 140 145 tac gtg ctg agg ggc aag eta caa tat gag ctg cag tat egg aac etc 895

Tyr Val Leu Arg Gly Lys Leu Gin Tyr Glu Leu Gin Tyr Arg Asn Leu 150 155 160 aga gac ccc tat get gtg agg ccg gtg acc aag ctg ate tea gtg gac Arg Asp Pro Tyr Ala Val Arg Pro Val Thr Lys Leu lie Ser Val Asp 943 6 165 170 175 tea aga aac gtc tet ett etc cct gaa gag ttc cac aaa gat tet age 991

Ser Arg Asn Val Ser Leu Leu Pro Glu Glu Phe His Lys Asp Ser Ser 180 185 190 195 tac cag ctg cag gtg egg gca geg cct cag cca ggc act tea ttc agg 1039

Tyr Gin Leu Gin Val Arg Ala Ala Pro Gin Pro Gly Thr Ser Phe Arg 200 205 210 ggg acc tgg agt gag tgg agt gac ccc gtc ate ttt cag acc cag get 1087

Gly Thr Trp Ser Glu Trp Ser Asp Pro Val lie Phe Gin Thr Gin Ala 215 220 225 ggg gag ccc gag gca ggc tgg gac cct cac atg ctg ctg etc ctg get 1135

Gly Glu Pro Glu Ala Gly Trp Asp Pro His Met Leu Leu Leu Leu Ala 230 235 240 gtc ttg ate att gtc ctg gtt ttc atg ggt ctg aag ate cac ctg cct 1183

Val Leu lie lie Val Leu Val Phe Met Gly Leu Lys lie His Leu Pro 245 250 255 tgg agg eta tgg aaa aag ata tgg gca cca gtg ccc acc cct gag agt 1231

Trp Arg Leu Trp Lys Lys lie Trp Ala Pro Val Pro Thr Pro Glu Ser 260 265 270 275 ttc ttc cag ccc ctg tac agg gag cac age ggg aac ttc aag aaa tgg 1279

Phe Phe Gin Pro Leu Tyr Arg Glu His Ser Gly Asn Phe Lys Lys Trp 280 285 290 gtt aat acc cct ttc aeg gcc tcc age ata gag ttg gtg cca cag agt 1327

Val Asn Thr Pro Phe Thr Ala Ser Ser lie Glu Leu Val Pro Gin Ser 295 300 305 tcc aca aca aca tea gcc tta cat ctg tea ttg tat cca gcc aag gag 1375

Ser Thr Thr Thr Ser Ala Leu His Leu Ser Leu Tyr Pro Ala Lys Glu 310 315 320 aag aag ttc ccg ggg ctg ccg ggt ctg gaa gag caa ctg gag tgt gat 1423

Lys Lys Phe Pro Gly Leu Pro Gly Leu Glu Glu Gin Leu Glu Cys Asp 325 330 335 gga atg tet gag cct ggt cac tgg tgc ata ate ccc ttg gca get ggc 1471

Gly Met Ser Glu Pro Gly His Trp Cys lie He Pro Leu Ala Ala Gly 340 345 350 355 caa geg gtc tea gcc tac agt gag gag aga gac egg cca tat ggt ctg 1519

Gin Ala Val Ser Ala Tyr Ser Glu Glu Arg Asp Arg Pro Tyr Gly Leu 360 365 370 gtg tcc att gac aca gtg act gtg gga gat gca gag ggc ctg tgt gtc 1567

Val Ser lie Asp Thr Val Thr Val Gly Asp Ala Glu Gly Leu Cys Val 375 380 385 tgg ccc tgt age tgt gag gat gat ggc tat cca gcc atg aac ctg gat 1615

Trp Pro Cys Ser Cys Glu Asp Asp Gly Tyr Pro Ala Met Asn Leu Asp 390 395 400 get ggc ega gag tet ggc cct aat tea gag gat ctg etc ttg gtc aca 1663

Ala Gly Arg Glu Ser Gly Pro Asn Ser Glu Asp Leu Leu Leu Val Thr 405 410 415 gac cct get ttt ctg tet tgc ggc tgt gtc tea ggt agt ggt etc agg 1711

Asp Pro Ala Phe Leu Ser Cys Gly Cys Val Ser Gly Ser Gly Leu Arg 420 425 430 435 ett gga ggc tcc cca ggc age eta ctg gac agg ttg agg ctg tea ttt 1759

Leu Gly Gly Ser Pro Gly Ser Leu Leu Asp Arg Leu Arg Leu Ser Phe 440 445 450 201000129 gca aag gaa ggg gac tgg aca gca gac cca acc tgg aga act ggg tcc 1807

Ala Lys Glu Gly Asp Trp Thr Ala Asp Pro Thr Trp Arg Thr Gly Ser 455 460 465 cca gga ggg ggc tct gag agt gaa gca ggt tcc ccc cct ggt ctg gac 1855

Pro Gly Gly Gly Ser Glu Ser Glu Ala Gly Ser Pro Pro Gly Leu Asp 470 475 480 atg gac aca ttt gac agt ggc ttt gca ggt tea gac tgt ggc age ccc 1903

Met Asp Thr Phe Asp Ser Gly Phe Ala Gly Ser Asp Cys Gly Ser Pro 485 490 495 gtg gag act gat gaa gga ccc cct ega age tat etc ege cag tgg gtg 1951

Val Glu Thr Asp Glu Gly Pro Pro Arg Ser Tyr Leu Arg Gin Trp Val 500 505 510 515 gtc agg acc cct cca cct gtg gac agt gga gee cag age age 1993

Val Arg Thr Pro Pro Pro Val Asp Ser Gly Ala Gin Ser Ser 520 525 tageatataa taaccagcta tagtgagaag aggcctctga gcctggcatt tacagtgtga 2053

acatgtaggg gtgtgtgtgt gtgtgtgtgt gtgtgtgtgt gtgtgtgtgt gtgtgtgtgt 2113 gtgtgtgtgt cttgggttgt gtgttagcac atccatgttg ggatttggtc tgttgctatg 2173 tattgtaatg ctaaattctc tacccaaagt tctaggccta egagtgaatt ctcatgttta 2233 caaacttgct gtgtaaacct tgttccttaa tttaatacca ttggttaaat aaaattggct 2293 gcaaccaatt actggaggga ttagaggtag ggggcttttg agttacctgt ttggagatgg 2353 agaaggagag aggagagacc aagaggagaa ggaggaagga gaggagagga gaggagagga 2413 gaggagagga gaggagagga gaggagagga gaggagagge tgccgtgagg ggagagggac 2473 catgagcctg tggccaggag aaacagcaag tatctggggt acactggtga ggaggtggcc 2533 aggccagcag ttagaagagt agattagggg tgacctccag tatttgtcaa agccaattaa 2593 aataacaaaa aaaaaeaaaa agcggccgct ctaga 2628

<210> 4 <211> 529 <212> PRT <213>家鼷鼠 <400> 4

Met Pro Arg Gly Pro Val Ala Ala Leu Leu Leu Leu lie Leu His Gly 15 10 15

Ala Trp Ser Cys Leu Asp Leu Thr Cys Tyr Thr Asp Tyr Leu Trp Thr 20 25 30 lie Thr Cys Val Leu Glu Thr Arg Ser Pro Asn Pro Ser lie Leu Ser 35 40 45

Leu Thr Trp Gin Asp Glu Tyr Glu Glu Leu Gin Asp Gin Glu Thr Phe 50 55 60

Cys Ser Leu His Arg Ser Gly His Asn Thr Thr His lie Trp Tyr Thr 65 70 75 80 8 201000129

Cys His Met Arg Leu Ser Gin Phe Leu Ser Asp Glu Val Phe lie Val 85 90 95

Asn Val Thr Asp Gin Ser Gly Asn Asn Ser Gin Glu Cys Gly Ser Phs 100 105 110

Val Leu Ala Glu Ser lie Lys Pro Ala Pro Pro Leu Asn Val Thr Val 115 120 125

Ala Phe Ser Gly Arg Tyr Asp lie Ser Trp Asp Ser Ala Tyr Asp Glu 130 135 140

Pro Ser Asn Tyr Val Leu Arg Gly Lys Leu Gin Tyr Glu Leu Gin Tyr 145 150 155 160

Arg Asn Leu Arg Asp Pro Tyr Ala Val Arg Pro Val Thr Lys Leu lie 165 170 175

Ser Val Asp Ser Arg Asn Val Ser Leu Leu Pro Glu Glu Phe His Lys 180 185 190

Asp Ser Ser Tyr Gin Leu Gin Val Arg Ala Ala Pro Gin Pro Gly Thr 195 200 205

Ser Phe Arg Gly Thr Trp Ser Glu Trp Ser Asp Pro Val lie Phe Gin 210 215 220

Thr Gin Ala Gly Glu Pro Glu Ala Gly Trp Asp Pro His Met Leu Leu 225 230 235 240

Leu Leu Ala Val Leu lie lie Val Leu Val Phe Met Gly Leu Lys lie 245 250 255

His Leu Pro Trp Arg Leu Trp Lys Lys lie Trp Ala Pro Val Pro Thr 260 265 270

Pro Glu Ser Phe Phe Gin Pro Leu Tyr Arg Glu His Ser Gly Asn Phe 275 280 285

Lys Lys Trp Val Asn Thr Pro Phe Thr Ala Ser Ser He Glu Leu Val 290 295 300

Pro Gin Ser Ser Thr Thr Thr Ser Ala Leu His Leu Ser Leu Tyr Pro 305 310 315 320

Ala Lys Glu Lys Lys Phe Pro Gly Leu Pro Gly Leu Glu Glu Gin Leu 325 330 335

Glu Cys Asp Gly Met Ser Glu Pro Gly His Trp Cys lie lie Pro Leu 340 345 350 9 201000129

Ala Ala Gly Gin Ala Val Ser Ala Tyr Ser Glu Glu Arg Asp Arg Pro 355 360 365

Tyr Gly Leu Val Ser lie Asp Thr Val Thr Val Gly Asp Ala Glu Gly 370 375 380

Leu Cys Val Trp Pro Cys Ser Cys Glu Asp Asp Gly Tyr Pro Ala Met 385 390 395 400

Asn Leu Asp Ala Gly Arg Glu Ser Gly Pro Asn Ser Glu Asp Leu Leu 405 410 415

Leu Val Thr Asp Pro Ala Fhe Leu Ser Cys Gly Cys Val Ser Gly Ser 420 425 430

Gly Leu Arg Leu Gly Gly Ser Pro Gly Ser Leu Leu Asp Arg Leu Arg 435 440 445 ❹

Leu Ser Phe Ala Lys Glu Gly Asp Trp Thr Ala Asp Pro Thr Trp Arg 450 455 460

Thr Gly Ser Pro Gly Gly Gly Ser Glu Ser Glu Ala Gly Ser Pro Pro 465 470 475 480

Gly Leu Asp Met Asp Thr Phe Asp Ser Gly Phe Ala Gly Ser Asp Cys 485 490 495

Gly Ser Pro Val Glu Thr Asp Glu Gly Pro Pro Arg Ser Tyr Leu Arg 500 505 510

Gin Trp Val Val Arg Thr Pro Pro Pro Val Asp Ser Gly Ala Gin Ser 515 520 525

Ser <210> 5 <211> 354 <212> DNA <213>智人 <400> 5 caggtgcagc tgcaggagtc gggcccagga acctgcgctg tctctggtta ctccatcagc cccccaggga aggggttgga gtggattggg aacccgcccc tcaagagtcg cgtcaccata ctgaaactga gctctgtgac cgccgcagac ggaattagca ggccggagta ctggggcaaa & ctggtgaaga cttcggagac cctgtccctc 60 agtggttact actggggctg gatccggcag 120 agtatctctc atactgggaa cacctactac 180 tcagtagaca cgtccaagaa ccagttctcc 240 acggccgtgt attactgtgc gcgaggtggg 300 ggcaccctgg tcaccgtcic gagt 354 <210 6 10 201000129 <211> 118 <212> PRT <213>智人 <400 6 Gin Val Gin Leu Gin Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Thr Ser Glu 15 10 15

Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ala Val Ser Gly Tyr Ser lie Ser Ser Gly 20 25 30

Tyr Tyr Trp Gly Trp lie Arg Gin Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp 35 40 45 lie Gly Ser He Ser His Thr Gly Asn Thr Tyr Tyr Asn Pro Pro Leu 50 55 60 Φ

Lys Ser Arg Val Thr lie Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gin Phe Ser 65 70 75 80

Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95

Ala Arg Gly Gly Gly lie Ser Arg Pro Glu Tyr Trp Gly Lys Gly Thr 100 105 110

Leu Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 7 <211> 354 <212> DNA <213>智人 <400 7 ❹ caggtgcagc tgcaggagtc tggccctggc ctggtgaagc cttccgagac cctgtctctg 60 acctgtg.ccg tgtccggcta ctccatctcc tccggctact actggggctg gatcagacag 120 cctcctggca agggcctgga gtggatcggc tccatctctc acaccggcaa cacctactac 180 aacccccctc tgaagtccag agtgaccatc tccgtggaca cctccaagaa ccagttctcc 240 ctgaagctgt cctctgtgac cgctgccgat accgccgtgt actactgtgc cagaggcggc 300 ggaatctcca gacctgagta ctggggccag ggcaccctgg tgaccgtgtc ctct 354 <210> 8 <211> 118 <212> PRT <213> 智人 <400> 8 Gin Val Gin Leu Gin Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu 15 10 15

Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ala Val Ser Gly Tyr Ser lie Ser Ser Gly 11 201000129 20 25 30

Tyr Tyr Trp Gly Trp lie Arg Gin Pro Fro Gly Lys Gly Leu Glu Trp 35 40 45

He Gly Ser He Ser His Thr Gly Asn Thr Tyr Tyr Asn Pro Pro Leu 50 55 60

Lys Ser Arg Val Thr He Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gin Phe Ser 65 70 75 80

Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95

Ala Arg Gly Gly Gly He Ser Arg Pro Glu Tyr Trp Gly Gin Gly Thr 100 105 110

Leu Val Thr Val Ser Ser 115 <210 9 <211> 327 <212> DNA <213>智人 <400 9 tcttctgagc tgactcagga ccctcctgtg tctgtggcct tgggacagac agtcacgctc 60 acatgccaag gagacagcct cagaacctat tatgcaagct ggtaccagca gaagtcagga 120 caggccccta tacttctcct ctatggtaaa cacaaacggc cctcagggat cccagaccgc 180 ttctctggct ccacctcagg agacacagct tccttgacca tcactggggc tcaggcggaa 240 gacgaggctg actattactg taactcccgg gactccagtg gcaaccccca tgttctgttc 300 ggcggaggga cccagctcac cgtttta 327

<210> 10 <211> 109 <212> PRT <213> 智人 <400> 10

Ser Ser Glu Leu Thr Gin Asp Pro Pro Val Ser Val Ala Leu Gly Gin 15 10 15

Thr Val Thr Leu Thr Cys Gin Gly Asp Ser Leu Arg Thr Tyr Tyr Ala 20 25 30

Ser Irp Tyr Gin Gin Lys Ser Gly Gin Ala Pro lie Leu Leu Leu Tyr 35 40 45

Gly Lys His Lys Arg Pro Ser Gly lie Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser 50 55 60 12

Thr Ser Gly Asp Thr Ala Ser Leu Thr lie Thr Gly Ala Gin Ala Glu 65 70 75 80

Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Asn Ser Arg Asp Ser Ser Gly Asn Pro 85 90 95

His Val Leu Phe Gly Gly Gly Thr Gin Leu Thr Val Leu 100 105 <210> 11 <211> 327 <212> DNA <213>智人 <400> 11 tcctctgagc tgacccagga tcctgctgtg tctgtggccc tgggccagac cgtcaggatc 60 acctgccagg gcgatagcct gagaacctac tacgcctcct ggtatcagca gaagcctgga 120 caggcccctg tgctggtgat ctacggcaag cacaagaggc catccggcat ccctgacaga 180 ttctccggct cctcctctgg caataccgcc tccctgacca tcaccggcgc tcaggccgag 240 gacgaggccg actactactg taactcccgg gactcttccg gcaaccctca cgtgctgttt 300 ggcggcggaa cccagctgac cgtgcta 327 <210> 12 <211> 109 <212> PRT <213> 智人 <400> 12

Ser Ser Glu Leu Thr Gin Asp Pro Ala Val Ser Val Ala Leu Gly Gin 15 10 15

Thr Val Arg lie Thr Cys Gin Gly Asp Ser Leu Arg Thr Tyr Tyr Ala 20 25 30

Ser Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Gly Gin Ala Pro Val Leu Val He Tyr 35 40 45

Gly Lys His Lys Arg Pro Ser Gly lie Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser 50 55 60

Ser Ser Gly Asn Thr Ala Ser Leu Thr lie Thr Gly Ala Gin Ala Glu 65 70 75 80

Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Asn Ser Arg Asp Ser Ser Gly Asn Pro 85 90 95

His Val Leu Phe Gly Gly Gly Thr Gin Leu Thr Val Leu 100 105 <210 13

<211> 354 <212> DNA 13 201000129 <213>人造的 <220 <223> H3 VH <400> 13 caggtgcagc tgcaggagtc gggcccagga ctggtgaaga cttcggagac cctgtccctc 60 acctgcgctg tctctggtta ctccatcagc agtggttact actggggctg gatccggcag 120 cccccaggga aggggttgga gtggattggg agtatctctc atactgggaa cacctactac 180 aacccgcccc tcaagagtcg cgtcaccata tcagtagaca cgtccaagaa ccagttctcc 240 ctgaaactga gctctgtgac cgccgcagac acggccgtgt attactgtgc gcgattcatg 300 gggttcggcc gcccggagta ctggggcaaa ggcaccctgg tcaccgtctc gagt 354 <210 14

<211> 118 <212> PRT <213>人造的 <220 <223> H3 VH <400> 14

Gin Val Gin Leu Gin Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Thr Ser Glu 15 10 15

Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ala Val Ser Gly Tyr Ser lie Ser Ser Gly 20 25 30

Tyr Tyr Trp Gly Trp lie Arg Gin Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp 35 40 45 lie Gly Ser lie Ser His Thr Gly Asn Thr Tyr Tyr Asn Pro Pro Leu 50 55 60

Lys Ser Arg Val Thr lie Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gin Phe Ser 65 70 75 80

Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95

Ala Arg Phe Met Gly Phe Gly Arg Pro Glu Tyr Trp Gly Lys Gly Thr 100 105 110

Leu Val Thr Val Ser Ser 115 <210 15 <211> 354 <212> DNA <213>人造的 <220>

<223> H4 VH 14 60 201000129 <400> 15 caggtgcagc tgcaggagtc gggcccagga ctggtgaaga cttcggagac cctgtccctc acctgcgctg tctctggtta ctccatcagc agtggttact actggggctg gatccggcag cccccaggga aggggttgga gtggattggg agtatctctc atactgggaa cacctactac aacccgcccc tcaagagtcg cgtcaccata tcagtagaca cgtccaagaa ccagttctcc ctgaaactga gctctgtgac cgccgcagac acggccgtgt attactgtgc gcgatggctc gggttcggcc gcccggagta ctggggcaaa ggcaccctgg tcaccgtctc gagt <210> 16 <211> 118 <212> PRT <213> 人造的 <220

120 180 240 300 354 <223> H4 VH <400> 16

Gin Val Gin Leu Gin Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Thr Ser Glu 15 10 15

Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ala Val Ser Gly Tyr Ser lie Ser Ser Gly 20 25 30

Tyr Tyr Trp Gly Trp He Arg Gin Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp 35 40 45

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Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 ❿

Ala Arg Trp Leu Gly Phe Gly Arg Pro Glu Tyr Trp Gly Lys Gly Thr 100 105 110

Leu Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 17 <211> 354 <212> DNA <213> 人造的 <220> 60 120 <223> H5 VH <400> 17 caggtgcagc tgcaggagtc gggcccagga c*tggtgaaga ct/tcggagac cctgtccctc acctgcgctg tctctggtta ctccatcagc agtggttact actggggctg gatccggcag 15 201000129 cccccaggga aggggttgga gtggattggg agtatctctc atactgggaa cacctactac 180 aacccgcccc tcaagagtcg cgtcaccata tcagtagaca cgtccaagaa ccagttctcc 240 ctgaaactga gctctgtgac cgccgcagac acggccgtgt attactgtgc gcgattcttg 300 ggcttcggcc ggccggagta ctggggcaaa ggcaccctgg tcaccgtctc gagt 354 <210 18 <211> 118 <212> PRT <213> 人造的 <220> <223> H5 VH <400> 18

Gin Val Gin Leu Gin Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Thr Ser Glu 1 5 10 15 ❹

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He Gly Ser lie Ser His Thr Gly Asn Thr Tyr Tyr Asn Pro Pro Leu 50 55 60

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Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95

Ala Arg Phe Leu Gly Phe Gly Arg Pro Glu Tyr Trp Gly Lys Gly Thr 100 105 HO ❹

Leu Val Thr Val Ser Ser 115 <210 19 <211> 354 <212> DNA <213>人造的 <220> <223> H6 VH <400> 19 caggtgcagc tgcaggagtc gggcccagga ctggtgaaga cttcggagac cctgtccctc 120 180 240 300 acctgcgctg tctctggtta ctccatcagc agtggttact actggggctg gatccggcag cccccaggga aggggttgga gtggattggg agtatctctc atactgggaa cacctactac aacccgcccc tcaagagtcg cgtcaccata tcagtagaca cgtccaagaa ccagttctcc ctgaaactga gctctgtgac cgccgcagac acggccgtgt attactgtgc gcgattcttc 16 201000129 ggcttcggcc gcccggagta ctggggcaaa ggcaccctgg tcaccgtctc gagt 354 <210> 20 <211> 118 <212> PRT <213>人造的 <220> <223> H6 VH <400 20 Gin Val Gin Leu Gin Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Thr Ser Glu 15 10 15

Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ala Val Ser Gly Tyr Ser He Ser Ser Gly 20 25 30 e

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Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95

Ala Arg Phe Phe Gly Phe Gly Arg Pro Glu Tyr Trp Gly Lys Gly Thr 100 105 110

Leu Val Thr Val Ser Ser 115 ❹ <210> 21 <211> 327 <212> m <213>人造的 <220> <223> LI VL <400> 21 tcttctgagc tgactcagga ccctcctgtg tctgtggcct tgggacagac agtcacgctc 60 acatgccaag gagacagcct cagaacctat tatgcaagct ggtaccagca gaagtcagga 120 caggccccta tacttctcct ctatggtaaa cacaaacggc cctcagggat cccagaccgc 180 ttctctggct ccacctcagg agacacagct tccttgacca tcactggggc tcaggcggaa 240 gacgaggctg actattactg tgcgtcccgg tcggtgagcg gcaaccccca tgttctgttc 300 ggcggaggga cccagctcac cgtttta 327 <210> 22 17 201000129 <211> 109 <212> PRT <213> 人造的 <220 <223> LI VL <400> 22

Ser Ser Glu Leu Thr Gin Asp Pro Pro Val Ser Val Ala Leu Gly Gin 15 10 15

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Ser Trp Tyr Gin Gin Lys Ser Gly Gin Ala Pro lie Leu Leu Leu Tyr 35 40 45

Gly Lys His Lys Arg Pro Ser Gly lie Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser 50 55 60

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His Val Leu Phe Gly Gly Gly Thr Gin Leu Thr Val Leu 100 105 <210 23 <211> 327 <212> DNA <213>人造的 <220 <223> L2 VL <400> 23 tcttctgagc tgactcagga ccctcctgtg tctgtggcct tgggacagac agtcacgctc 60 acatgccaag gagacagcct cagaacctat tatgcaagct ggtaccagca gaagtcagga 120 caggccccta tacttctcct ctatggtaaa cacaaacggc cctcagggat cccagaccgc 180 ttctctggct ccacctcagg agacacagct tccttgacca tcactggggc tcaggcggaa 240 gacgaggctg actattactg tgtcgcccgg tcggtggtgg gcaaccccca tgttctgttc 300 ggcggaggga cccagctcac cgtttta 327 <210 24 <211> 109 <212> PRT <213>人造的 <220> <223> L2 VL <400> 24 18 201000129

Ser Ser Glu Leu Thr Gin Asp Pro Pro Val Ser Val Ala Leu Gly Gin 15 10 15

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Ser Trp Tyr Gin Gin Lys Ser Gly Gin Ala Fro lie Leu Leu Leu Tyr • 35 40 45

Gly Lys His Lys Arg Pro Ser Gly lie Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser 50 55 60

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Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Val Ala Arg Ser Val Val Gly Asn Pro 85 90 95

Φ

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Ser Ser Glu Leu Thr Gin Asp Pro Pro Val Ser Val Ala Leu Gly Gin 15 10 15

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Ser Trp Tyr Gin Gin Lys Ser Gly Gin Ala Pro lie Leu Leu Leu Tyr 19 201000129 35 40 45

Gly Lys His Lys Arg Pro Ser Gly He Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser 50 55 60

Thr Ser Gly Asp Thr Ala Ser Leu Thr lie Thr Gly Ala Gin Ala Glu 65 70 75 80

Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Val Ser Arg Ala Val Val Gly Asn Pro 85 90 95

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tcttctgagc tgactcagga ccctcctgtg tctgtggcct tgggacagac agtcacgctc 60 acatgccaag gagacagcct cagaacctat tatgcaagct ggtaccagca gaagtcagga 120 caggccccta tacttctcct ctatggtaaa cacaaacggc cctcagggat cccagaccgc 180 ttctctggct ccacctcagg agacacagct tccttgacca tcactggggc tcaggcggaa 240 gacgaggctg actattactg tagcacccgc agcagcaagg gcaaccccca tgttctgttc 300 ggcggaggga cccagctcac cgtttta 327 <210> 28 <211> 109 <212> PRT <213>人造的

<220> <223> U VL <400> 28

Ser Ser Glu Leu Thr Gin Asp Pro Pro Val Ser Val Ala Leu Gly Gin 15 10 15

Thr Val Thr Leu Thr Cys Gin Gly Asp Ser Leu Arg Thr Tyr Tyr Ala 20 25 30

Ser Trp Tyr Gin Gin Lys Ser Gly Gin Ala Pro lie Leu Leu Leu Tyr 35 40 45

Gly Lys His Lys Arg Pro Ser Gly lie Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser 50 55 60

Thr Ser Gly Asp Thr Ala Ser Leu Thr He Thr Gly Ala Gin Ala Glu 65 70 75 80 20 201000129

Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ser Thr Arg Ser Ser Lys Gly Asn Pro 85 90 95

His Val Leu Phe Gly Gly Gly Thr Gin Leu Thr Val Leu 100 105 <210> 29 <211> 327 <212> DNA <213>人造的 <220> <223> L5 VL <400> 29

tcttctgagc tgactcagga ccctcctgtg tctgtggcct tgggacagac agtcacgctc 60 acatgccaag gagacagcct cagaacctat tatgcaagct ggtaccagca gaagtcagga 120 caggccccta tacttctcct ctatggtaaa cacaaacggc cctcagggat cccagaccgc 180 ttctctggct ccacctcagg agacacagct tccttgacca tcactggggc tcaggcggaa 240 gacgaggctg actattactg tgccagcagg tcctccaagg gcaaccccca tgttctgttc 300 ggcggaggga cccagctcac cgtttta 327 <210 30 <211> 109 <212> PRT <213>人造的 <220> <223> L5 VL <400> 30

Ser Ser Glu Leu Thr Gin Asp Pro Pro Val Ser Val Ala Leu Gly Gin 1 5 10 15

Thr Val Thr Leu Thr Cys Gin Gly Asp Ser Leu Arg Thr Tyr Tyr Ala 20 25 30

Ser Trp Tyr Gin Gin Lys Ser Gly Gin Ala Pro lie Leu Leu Leu Tyr 35 40 45

Gly Lvs His Lys ArS Pro Sf Gly He Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser

Thr Ser Gly Asp Thr Ala Ser Leu Thr He Thr Gly Ala Gin Ala Glu 65 70 75 80

Asp Glu Ala Aso Tyr Tyr Cys Ala Ser Arg Ser Ser Lys Gly Asn Pro 85 90 95

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Ser Ser Glu Leu Thr Gin Asp Pro Pro Val Ser Val Ala Leu Gly Gin 15 10 15

Thr Val Thr Leu Thr Cys Gin Gly Asp Ser Leu Arg Thr Tyr Tyr Ala 20 25 30

Ser Trp Tyr Gin Gin Lys Ser Gly Gin Ala Pro lie Leu Leu Leu Tyr 35 40 45

Gly Lys His Lys Arg Pro Ser Gly lie Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser 50 55 60

Thr Ser Gly Asp Thr Ala Ser Leu Thr lie Thr Gly Ala Gin Ala Glu 65 70 75 80

Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Met Ser Arg Ser lie Trp Gly Asn Pro 85 90 95

His Val Leu Phe Gly Gly Gly Thr Gin Leu Thr Val Leu 100 205 <210> 33 <211> 327 <212> DNA <213>人造的 <220>

<223> L8 VL 22 60 <400> 33 120 180 240 300 327 tcttctgagc tgactcagga ccctcctgtg tctgtggcct tgggacagac agtcacgctc acatgccaag gagacagcct cagaacctat tatgcaagct ggtaccagca gaagtcagga caggccccta tacttctcct ctatggtaaa cacaaacggc cctcagggat cccagaccgc ttctctggct ccacctcagg agacacagct tccttgacca tcactggggc tcaggcggaa gacgaggctg actattactg taccacgcgc tccacccagg gcaaccccca tgttctgttc ggcggaggga cccagctcac cgtttta <210> 34 <211> 109 <212> PRT <213>人造的 <220> <223> L8 VL <400 34

Ser Ser Glu Leu Thr Gin Asp Pro Pro Val Ser Val Ala Leu Gly Gin 15 10 15

Thr Val Thr Leu Thr Cys Gin Gly Asp Ser Leu Arg Thr Tyr Tyr Ala 20 25 30

Ser Trp Tyr Gin Gin Lys Ser Gly Gin Ala Pro lie Leu Leu Leu Tyr 35 40 45

Gly Lys His Lys Arg Pro Ser Gly II© Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser 50 55 60

Thr Ser Gly Asp Thr Ala Ser Leu Thr lie Thr Gly Ala Gin Ala Glu 65 70 75 80

Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Thr Thr Arg Ser Thr Gin Gly Asn Pro 85 90 95

His Val Leu Phe Gly Gly Gly Thr Gin Leu Thr Val Leu 100 105 <210> 35 <211> 327 <212> DNA <213>人造的 <220> 60 120 180 <223> L9 VL <400> 35 tcttctgagc tgactcagga ccctcctgtg tctgtggcct tgggacagac agtcacgctc acatgccaag gagacagcct cagaacctat tatgcaagct ggtaccagca gaagtcagga caggccccta tacttctcct ctatggtaaa cacaaacggc cctcagggat cccagaccgc ttctctggct ccacctcagg agacacagct tccttgacca tcactggggc tcaggcggaa 23 240 201000129 gacgaggctg actattactg tgtcgccagg tccaacaagg gcaaccccca tgttctgttc 300 ggcggaggga cccagctcac cgtttta 327 <210> 36 <211> 109 <212> PRT <213>人造的 <220> <223> L9 VL <400> 36

Ser Ser Glu Leu Thr Gin Asp Pro Pro Val Ser Val Ala Leu Gly Gin 15 10 15

Thr Val Thr Leu Thr Cys Gin Gly Asp Ser Leu Arg Thr Tyr Tyr Ala 20 25 30

Ser Trp Tyr Gin Gin Lys Ser Gly Gin Ala Pro lie Leu Leu Leu Tyr 35 40 45

Gly Lys His Lys Arg Pro Ser Gly lie Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser 50 55 60

Thr Ser Gly Asp Thr Ala Ser Leu Thr lie Thr Gly Ala Gin Ala Glu 65 70 75 80

Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Val Ala Arg Ser Asn Lys Gly Asn Pro 85 90 95

His Val Leu Phe Gly Gly Gly Thr Gin Leu Thr Val Leu 100 105 <210> 37 <211> 327 <212> DNA <213>人造的 <220> <223> L10 VL <400> 37

tcttctgagc tgactcagga ccctcctgtg tctgtggcct tgggacagac agtcacgctc 60 acatgccaag gagacagcct cagaacctat tatgcaagct ggtaccagca gaagtcagga 120 caggccccta tacttctcct ctatggtaaa cacaaacggc cctcagggat cccagaccgc 180 ttctctggct ccacctcagg agacacagct tccttgacca tcactggggc tcaggcggaa 240 gacgaggctg actattactg tatcagccgg tcgatctacg gcaaccccca tgttctgttc 300 ggcggaggga cccagctcac cgtttta 327 <210> 38 <211> 109 <212> PRT <213> 人造的 24 201000129 <220 <223> L10 VL <400> 38

Ser Ser Glu Leu Thr Gin Asp Pro Pro Val Ser Val Ala Leu Gly Gin 15 10 15

Thr Val Thr Leu Thr Cys Gin Gly Asp Ser Leu Arg Thr Tyr Tyr Ala 20 25 30

Ser Trp Tyr Gin Gin Lys Ser Gly Gin Ala Pro He Leu Leu Leu Tyr 35 40 45

Gly Lys His Lys Arg Pro Ser Gly lie Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser 50 55 60

Thr Ser Gly Asp Thr Ala Ser Leu Thr lie Thr Gly Ala Gin Ala Glu 65 70 75 80

Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys lie Ser Arg Ser lie Tyr Gly Asn Pro 85 90 95

His Val Leu Phe Gly Gly Gly Thr Gin Leu Thr Val Leu 100 105 <210> 39 <211> 327 <212> DNA <213>人造的 <220> <223> Lll VL <400 39 tcttctgagc tgactcagga ccctcctgtg tctgtggcct tgggacagac agtcacgctc 60 acatgccaag gagacagcct cagaacctat tatgcaagct ggtaccagca gaagtcagga 120 caggccccta tacttctcct ctatggtaaa cacaaacggc cctcagggat cccagaccgc 180 ttctctggct ccacctcagg agacacagct tccttgacca tcactggggc tcaggcggaa 240 gacgaggctg actattactg ttcctcccgc tcccgccacg gcaaccccca tgttctgttc 300 ggcggaggga cccagctcac cgtttta 327 <210> 40 <211> 109 - <212> PRT <213>人造的 <220> <223> Lll VL <400> 40

Ser Ser Glu Leu Thr Gin Asp Pro Pro Val Ser Val Ala Leu Gly Gin 15 10 15 25 201000129

Thr Val Thr Leu Thr Cys Gin Gly Asp Ser Leu Arg Thr Tyr Tyr Ala 20 25 30

Ser Trp Tyr Gin Gin Lys Ser Gly Gin Ala Pro He Leu Leu Leu Tyr 35 40 45

Gly Lys His Lys Arg Pro Ser Gly lie Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser 50 55 60

Thr Ser Gly Asp Thr Ala Ser Leu Thr lie Thr Gly Ala Gin Ala Glu 65 70 75 80

Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ser Ser Arg Ser Arg His Gly Asn Pro 85 90 95

His Val Leu Phe Gly Gly Gly Thr Gin Leu Thr Val Leu 100 105 <210> 41 <211> 327 <212> DNA <213>人造的 <220> <223> L12 VL <400> 41 tcttctgagc tgactcagga ccctcctgtg tctgtggcct tgggacagac agtcacgctc 60 acatgccaag gagacagcct cagaacctat tatgcaagct ggtaccagca gaagtcagga 120 caggccccta tacttctcct ctatggtaaa cacaaacggc cctcagggat cccagaccgc 180 ttctctggct ccacctcagg agacacagct tccttgacca tcactggggc tcaggcggaa 240 gacgaggctg actattactg tgtcgcgagg gggacgaggg gcaaccccca tgttctgttc 300 ggcggaggga cccagctcac cgtttta 327

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Ser Ser Glu Leu Thr Gin Asp Pro Pro Val Ser Val Ala Leu Gly Gin 15 10 15

Thr Val Thr Leu Thr Cys Gin Gly Asp Ser Leu Arg Thr Tyr Tyr Ala 20 25 30

Ser Trp Tyr Gin Gin Lys Ser Gly Gin Ala Pro lie Leu Leu Leu Tyr 35 40 45 26 201000129

Gly Lys His Lys Arg Pro Ser Gly He Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser 50 55 60

Thr Ser Gly Asp Thr Ala Ser Leu Thr lie Thr Gly Ala Gin Ala Glu 65 70 75 80

Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Val Ala Arg Gly Thr Arg Gly Asn Pro 85 90 95

His Val Leu Phe Gly Gly Gly Thr Gin Leu Thr Val Leu 100 105 <210> 43 <211> 327 <212> DNA <213> 人造的 <220> <223> L13 VL <400> 43 ❹

tcttctgagc tgactcagga ccctcctgtg tctgtggcct tgggacagac agtcacgctc 60 acatgccaag gagacagcct cagaacctat tatgcaagct ggtaccagca gaagtcagga 120 caggccccta tacttctcct ctatggtaaa cacaaacggc cctcagggat cccagaccgc 180 ttctctggct ccacctcagg agacacagct tccttgacca tcactggggc tcaggcggaa 240 gacgaggctg actattactg tgtcacccgc aaccgctacg gcaaccccca tgttctgttc 300 ggcggaggga cccagctcac cgtttta 327 <210> 44 <21L> 109 <212> PRT <213> 人造的 <220> <223> LI3 VL <400> 44

Ser Ser Glu Leu Thr Gin Asp Pro Pro Val Ser Val Ala Leu Gly Gin 15 10 15

Thr Val Thr Leu Thr Cys Gin Gly Asp Ser Leu Arg Thr Tyr Tyr Ala 20 25 30

Ser Trp Tyr Gin Gin Lys Ser Gly Gin Ala Pro lie Leu Leu Leu Tyr 35 40 45

Gly Lys His Lys Arg Pro Ser Gly lie Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser 50 55 60

Thr Ser Gly Asp Thr Ala Ser Leu Thr lie Thr Gly Ala Gin Ala Glu 65 70 75 80

Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Val Thr Arg Asn Arg Tyr Gly Asn Pro 27 201000129 85 90 95

His Val Leu Phe Gly Gly Gly Thr Gin Leu Thr Val Leu 100 105 <210 45 <211> 327 <212> DNA <213> 人造的 <220> <223> L14 VL <400> 45 tcttctgagc tgactcagga ccctcctgtg tctgtggcct tgggacagac agtcacgctc 60 acatgccaag gagacagcct cagaacctat tatgcaagct ggtaccagca gaagtcagga 120 caggccccta tacttctcct ctatggtaaa cacaaacggc cctcagggat cccagaccgc 180 ❹ ttctctggct ccacctcagg agacacagct tccttgacca tcactggggc tcaggcggaa 240 gacgaggctg actattactg tatggcgagg tcgaggaagg gcaaccccca tgttctgttc 300 ggcggaggga cccagctcac cgtttta 327 <210> 46 <211> 109 <212> PRT <213> 人造的 <220 <223> L14 VL <400> 46

Ser Ser Glu Leu Thr Gin Asp Pro Pro Val Ser Val Ala Leu Gly Gin 15 10 15

Thr Val Thr Leu Thr Cys Gin Gly Asp Ser Leu Arg Thr Tyr Tyr Ala 20 25 30

Ser Trp Tyr Gin Gin Lys Ser Gly Gin Ala Pro lie Leu Leu Leu Tyr 35 40 45

Gly Lys His Lys Arg Pro Ser Gly lie Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser 50 55 60

Thr Ser Gly Asp Thr Ala Ser Leu Thr lie Thr Gly Ala Gin Ala Glu 65 70 75 80

Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Met Ala Arg Ser Arg Lys Gly Asn Pro 85 90 95

His Val Leu Phe Gly Gly Gly Thr Gin Leu Thr Val Leu 100 105 <210 47 <211> 327 28 201000129 <212> DNA <213> 人造的 <220> <223> L15 VL <400> 47 tcttctgagc tgactcagga ccctcctgtg tctgtggcct tgggacagac agtcacgctc 60 acatgccaag gagacagcct cagaacctat tatgcaagct ggtaccagca gaagtcagga 120 caggccccta tacttctcct ctatggtaaa cacaaacggc cctcagggat cccagaccgc 180 ttctctggct ccacctcagg agacacagct tccttgacca tcactggggc tcaggcggaa 240 gacgaggctg actattactg ttccacccgc gccatccacg gcaaccccca tgttctgttc 300 ggcggaggga cccagctcac cgtttta 327 ❹ <210> 48 <211> 109 <212> PRT <213>人造的 <220> <223> L15 VL <400> 48

Ser Ser Glu Leu Thr Gin Asp Pro Pro Val Ser Val Ala Leu Gly Gin 15 10 15

Thr Val Thr Leu Thr Cys Gin Gly Asp Ser Leu Arg Thr Tyr Tyr Ala 20 25 30

Ser Trp Tyr Gin Gin Lys Ser Gly Gin Ala Pro lie Leu Leu Leu Tyr 35 40 45

Gly Lys His Lys Arg Pro Ser Gly lie Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser 50 55 60

Thr Ser Gly Asp Thr Ala Ser Leu Thr lie Thr Gly Ala Gin Ala Glu 65 70 75 80

Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ser Thr Arg Ala lie His Gly Asn Pro 85 90 95

His Val Leu Phe Gly Gly Gly Thr Gin Leu Thr Val Leu 100 105 <210> 49 <211> 327 <212> DNA <213>人造的 <220> <223> L16 VL <400 49 tcttctgagc tgactcagga ccctcctgtg tctgtggcct tgggacagac agtcacgctc 60 29 201000129 acatgccaag gagacagcct cagaacctat tatgcaagct ggtaccagca gaagtcagga 120 caggccccta tacttctcct ctatggtaaa cacaaacggc cctcagggat cccagaccgc 180 ttctctggct ccacctcagg agacacagct tccttgacca tcactggggc tcaggcggaa 240 gacgaggctg actattactg tgtgacgagg agcgcgaagg gcaaccccca tgttctgttc 300 ggcggaggga cccagctcac cgtttta 327 <210> 50 <211> 109 <212> PRT <213>人造的 <220 <223> L16 VL <400> 50

Ser Ser Glu Leu Thr Gin Asp Pro Pro Val Ser Val Ala Leu Gly Gin 15 10 15

Thr Val Thr Leu Thr Cys Gin Gly Asp Ser Leu Arg Thr Tyr Tyr Ala 20 25 30

Ser Trp Tyr Gin Gin Lys Ser Gly Gin Ala Pro lie Leu Leu Leu Tyr 35 40 45

Gly Lys His Lys Arg Pro Ser Gly lie Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser 50 55 60

Thr Ser Gly Asp Thr Ala Ser Leu Thr lie Thr Gly Ala Gin Ala Glu 65 70 75 80

Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Val Thr Arg Ser Ala Lys Gly Asn Pro 85 . 90 95

His Val Leu Phe Gly Gly Gly Thr Gin Leu Thr Val Leu

100 105 Q <210> 51 <211> 327 <212> DNA <213>人造的 <220> <223> L17 VL <400> 51 tcttctgagc tgactcagga ccctcctgtg tctgtggcct tgggacagac agtcacgctc 60 acatgccaag gagacagcct cagaacctat tatgcaagct ggtaccagca gaagtcagga 120 caggccccta tacttctcct ctatggtaaa cacaaacggc cctcagggat cccagaccgc 180 ttctctggct ccacctcagg agacacagct tccttgacca tcactggggc tcaggcggaa 240 gacgaggctg actattactg tagcacgagg tcgaggaagg gcaaccccca tgttctgttc 300 ggcggaggga cccagctcac cgtttta 327 30 201000129 <210> 52 <2Π> 109 <212> PRT <213>人造的 <220> <223> L17 VL <400 52

Ser Ser Glu Leu Thr Gin Asp Pro Pro Val Ser Val Ala Leu Gly Gin 15 10 15

Thr Val Thr Leu Thr Cys Gin Gly Asp Ser Leu Arg Thr Tyr Tyr Ala 20 25 30

Ser Trp Tyr Gin Gin Lys Ser Gly Gin Ala Pro He Leu Leu Leu Tyr 35 40 45

Gly Lys His Lys Arg Pro Ser Gly He Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser 50 55 60

Thr Ser Gly Asp Thr Ala Ser Leu Thr lie Thr Gly Ala Gin Ala Glu 65 70 75 80

Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ser Thr Arg Ser Arg Lys Gly Asn Pro 85 90 95

His Val Leu Phe Gly Gly Gly Thr Gin Leu Thr Val Leu 100 105 <210> 53 <211> 327 <212> DNA <213>人造的 <220> <223> L18 VL <400> 53

tcttctgagc tgactcagga ccctcctgtg tctgtggcct tgggacagac agtcacgctc 60 acatgccaag gagacagcct cagaacctat tatgcaagct ggtaccagca gaagtcagga 120 caggccccta tacttctcct ctatggtaaa cacaaacggc cctcagggat cccagaccgc 180 ttctctggct ccacctcagg agacacagct tccttgacca tcactggggc tcaggcggaa 240 gacgaggctg actattactg tgtcacgagg agcgtgaagg gcaaccccca tgttctgttc 300 ggcggaggga cccagctcac cgtttta 327 <210> 54 <211> 109 <212> PRT <213>人造的 <220>

<223> L18 VL 31 201000129 <400> 54

Ser Ser Glu Leu Thr Gin Asp Pro Pro Val Ser Val Ala Leu Gly Gin 15 10 15

Thr Val Thr Leu Thr Cys Gin Gly Asp Ser Leu Arg Thr Tyr Tyr Ala 20 25 30

Ser Trp Tyr Gin Gin Lys Ser Gly Gin Ala Pro lie Leu Leu Leu Tyr 35 40 45

Gly Lys His Lys Arg Pro Ser Gly lie Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser 50 55 60

Thr Ser Gly Asp Thr Ala Ser Leu Thr lie Thr Gly Ala Gin Ala Glu 65 70 75 80

Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Val Thr Arg Ser Val Lys Gly Asn Pro 85 90 95

His Val Leu Phe Gly Gly Gly Thr Gin Leu Thr Val Leu 100 105 <210> 55 <211> 327 <212> DNA <213>人造的 <220> <223> L19 VL <400> 55 tcttctgagc tgactcagga ccctcctgtg tctgtggcct tgggacagac agtcacgctc 60 acatgccaag gagacagcct cagaacctat tatgcaagct ggtaccagca gaagtcagga 120 caggccccta tacttctcct ctatggtaaa cacaaacggc cctcagggat cccagaccgc 180 ttctctggct ccacctcagg agacacagct tccttgacca tcactggggc tcaggcggaa 240 gacgaggctg actattactg tgtcgcgcgg gcggtgaggg gcaaccccca tgttctgttc 300 ggcggaggga cccagctcac cgtttta 327 <210> 56 <211> 109 <212> PRT <213>人造的 <220> <223> L19 VL <400> 56

Ser Ser Glu Leu Thr Gin Asp Pro Pro Val Ser Val Ala Leu Gly Gin 15 10 15

Thr Val Thr Leu Thr Cys Gin Gly Asp Ser Leu Arg Thr Tyr Tyr Ala 32 201000129

Ser Trp Tyr Gin Gin Lys Ser Gly Gin Ala Pro lie Leu Leu Leu Tyr 35 40 45

Gly Lys His Lys Arg Pro Ser Gly He Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser 50 55 60

Thr Ser Gly Asp Thr Ala Ser Leu Thr He Thr Gly Ala Gin Ala Glu 65 70 75 80

Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Val Ala Arg Ala Val Arg Gly Asn Pro 85 90 95

His Val Leu Phe Gly Gly Gly Thr Gin Leu Thr Val Leu 100 105 <210> 57 <211> 327 <212> DNA <213> 人造的 <220> <223> L20 VL <400> 57 ❹

tcttctgagc tgactcagga ccctcctgtg tctgtggcct tgggacagac agtcacgctc 60 acatgccaag gagacagcct cagaacctat tatgcaagct ggtaccagca gaagtcagga 120 caggccccta tacttctcct ctatggtaaa cacaaacggc cctcagggat cccagaccgc 180 ttctctggct ccacctcagg agacacagct tccttgacca tcactggggc tcaggcggaa 240 gacgaggctg actattactg tgtctcccgc agcgcgaagg gcaaccccca tgttctgttc 300 ggcggaggga cccagctcac cgtttta 327 <210> 58 <211> 109 <212> PRT <213> 人造的 <220> <223> L20 VL <400> 58

Ser Ser Glu Leu Thr Gin Asp Pro Pro Val Ser Val Ala Leu Gly Gin 15 10 15

Thr Val Thr Leu Thr Cys Gin Gly Asp Ser Leu Arg Thr Tyr Tyr Ala 20 25 30

Ser Trp Tyr Gin Gin Lys Ser Gly Gin Ala Pro lie Leu Leu Leu Tyr 35 40 45

Gly Lys His Lys Arg Pro Ser Gly lie Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser 50 55 60 33 201000129

Thr Ser Gly Asp Thr Ala Ser Leu Thr lie Thr Gly Ala Gin Ala Glu 65 70 75 80

Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Val Ser Arg Ser Ala Lys Gly Asn Pro 85 90 95

His Val Leu Phe Gly Gly Gly Thr Gin Leu Thr Val Leu 100 105 <210> 59 <211> 327 <212> DNA <213> 人造的 <220> <223> L21 VL <400> 59

tcttctgagc tgactcagga ccctcctgtg tctgtggcct tgggacagac agtcacgctc 60 acatgccaag gagacagcct cagaacctat tatgcaagct ggtaccagca gaagtcagga 120 caggccccta tacttctcct ctatggtaaa cacaaacggc cctcagggat cccagaccgc 180 ttctctggct ccacctcagg agacacagct tccttgacca tcactggggc tcaggcggaa 240 gacgaggctg actattactg tgccacccgg gcggtccggg gcaaccccca tgttctgttc 300 ggcggaggga cccagctcac cgtttta 327 <210> 60 -<211> 109 <212> PRT <213> 人造的 <220> <223> L21 VL <400> 60

Ser Ser Glu Leu Thr Gin Asp Pro Pro Val Ser Val Ala Leu Gly Gin 1 5 10 15 ❹

Thr Val Thr Leu Thr Cys Gin Gly Asp Ser Leu Arg Thr Tyr Tyr Ala 20 25 30

Ser Trp Tyr Gin Gin Lys Ser Gly Gin Ala Pro He Leu Leu Leu Tyr 35 40 45

Gly Lys His Lys Arg Pro Ser Gly lie Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser 50 55 60

Thr Ser Gly Asp Thr Ala Ser Leu Thr lie Thr Gly Ala Gin Ala Glu 65 70 75 80

Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ala Thr Arg Ala Val Arg Gly Asn Pro 85 90 95 34 1000129

His Val Leu Phe Gly Gly Gly Thr Gin Leu Thr Val Leu 100 105 的 7 A造 6132DN人 <210> <211> <212> <213> <220> <223> L23 VL <400 61 60 120 ISO 240 300 327 tcttctgagc tgactcagga ccctcctgtg tctgtggcct tgggacagac agtcacgctc acatgccaag gagacagcct cagaacctat tatgcaagct ggtaccagca gaagtcagga caggccccta tacttctcct ctatggtaaa cacaaacggc cctcagggat cccagaccgc ttctctggct ccacctcagg agacacagct tccttgacca tcactggggc tcaggcggaa gacgaggctg actattactg ttcggcgcgg tcggtgaggg gcaaccccca tgttctgttc ggcggaggga cccagctcac cgtttta <210> 62 <211> 109 <212> FRT <213>人造的 <220 <223> L23 VL <400> 62

Ser Ser Glu Leu Thr Gin Asp Pro Pro Val Ser Val Ala Leu Gly Gin 15 10 15

Thr Val Thr Leu Thr Cys Gin Gly Asp Ser Leu Arg Thr Tyr Tyr Ala 20 25 30

Ser Trp Tyr Gin Gin Lys Ser Gly Gin Ala Pro He Leu Leu Leu Tyr 35 40 45

Gly Lys His Lys Arg Pro Ser Gly lie Pro Asp Arg Fhe Ser Gly Ser 50 55 60

Thr Ser Gly Asp Thr Ala Ser Leu Thr lie Thr Gly Ala Gin Ala Glu 65 70 75 80

Asp Glu Ala Asp Tvr Tyr Cys Ser Ala Arg Ser Val Arg Gly Asn Pro

His Val Leu Phe Gly Gly Gly Thr Gin Leu Thr Val Leu 100 105 <210> 63 <211> 327 <212> DNA <213> 人造的 35 201000129 <220> <223> L24 VL <400> 63 tcttctgagc tgactcagga ccctcctgtg tctgtggcct tgggacagac agtcacgctc 60 acatgccaag gagacagcct cagaacctat tatgcaagct ggtaccagca gaagtcagga 120 caggccccta tacttctcct ctatggtaaa cacaaacggc cctcagggat cccagaccgc 180 ttctctggct ccacctcagg agacacagct tccttgacca tcactggggc tcaggcggaa 240 gacgaggctg actattactg tatcgccagg agcaacaagg gcaaccccca tgttctgttc 300 ggcggaggga cccagctcac cgtttta 327 <210> 64 <211> 109 <212> PRT <213>人造的

<220> <223> L24 VL <400> 64

Ser Ser Glu Leu Thr Gin Asp Pro Pro Val Ser Val Ala Leu Gly Gin 15 10 15

Thr Val Thr Leu Thr Cys Gin Gly Asp Ser Leu Arg Thr Tyr Tyr Ala 20 25 30

Ser Trp Tyr Gin Gin Lys Ser Gly Gin Ala Pro lie Leu Leu Leu Tyr 35 40 45

Gly Lys His Lys Arg Pro Ser Gly lie Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser 50 55 60

Thr Ser Gly Asp Thr Ala Ser Leu Thr lie Thr Gly Ala Gin Ala Glu 65 70 75 80

Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys lie Ala Arg Ser Asn Lys Gly Asn Pro 85 90 95

His Val Leu Phe Gly Gly Gly Thr Gin Leu Thr Val Leu 100 105 <210> 65 <211> 327 <212> DNA <213>人造的 <220 <223> L25 VL <400> 65 tcttctgagc tgactcagga ccctcctgtg tctgtggcct tgggacagac agtcacgctc 60 acatgccaag gagacagcct cagaacctat tatgcaagct ggtaccagca gaagtcagga 120 caggccccta tacttctcct ctatggtaaa cacaaacggc cctcagggat cccagaccgc 180 36 ttctctggct ccacctcagg agacacagct tccttgacca tcactggggc tcaggcggaa gacgaggctg actattactg tacgacgcgg agcaacaagg gcaaccccca tgttctgttc ggcggaggga cccagctcac cgtttta <210 66 <211> 109 <212> PRT <213>人造的 <220> <223> L25 VL <400> 66

Ser Ser Glu Leu Thr Gin Asp Pro Pro Val Ser Val Ala Leu Gly Gin 15 10 15

Thr Val Thr Leu Thr Cys Gin Gly Asp Ser Leu Arg Thr Tyr Tyr Ala 20 25 30

Ser Trp Tyr Gin Gin Lys Ser Gly Gin Ala Pro lie Leu Leu Leu Tyr 35 40 45

Gly Lys His Lys Arg Pro Ser Gly Ilo Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser 50 55 60

Thr Ser Gly Asp Thr Ala Ser Leu Thr lie Thr Gly Ala Gin Ala Glu 65 70 75 80

Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Thr Thr Arg Ser Asn Lys Gly Asn Pro 85 90 95

His Val Leu Phe Gly Gly Gly Thr Gin Leu Thr Val Leu 100 105 <210 67 <211> 1401 <212> DNA <213> 人造的 <220> <223> VH4 重鍵 <400> 67 atgggatgga gctgtatcat cctcttcttg gtagcaacag ctacaggcgc gcactctcag gtgcagctgc aggagtctgg ccctggcctg gtgaagcctt ccgagaccct gtctctgacc tgtgccgtgt ccggctactc catctcctcc ggctactact ggggctggat cagacagcct cctggcaagg gcctggagtg gatcggctcc atctctcaca ccggcaacac ctactacaac ccccctctga agtccagagt gaccatctcc gtggacacct ccaagaacca gttctccctg aagctgtcct ctgtgaccgc tgccgatacc gccgtgtact actgtgccag atggctcggg ttcggccgcc cggagtactg gggcaaaggc accctggtga ccgtgtcctc tgcctccacc 240 300 327 60 120 180 240 300 360 37 420 201000129 aagggcccat cggtcttccc cctggcaccc tcctccaaga gcacctctgg gggcacagcg 480 gccctgggct gcctggtcaa ggactacttc cccgaaccgg tgacggtgtc gtggaactca 540 ggcgccctga ccagcggcgt gcacaccttc ccggctgtcc tacagtcctc aggactctac 600 tccctcagca gcgtggtgac cgtgccctcc agcagcttgg gcacccagac ctacatctgc 660 aacgtgaatc acaagcccag caacaccaag gtggacaaga aagttgagcc caaatcttgt 720 gacaaaactc acacatgccc accgtgccca gcacctgaag ccgcgggggc accgtcagtc 780 ttcctcttcc ccccaaaacc caaggacacc ctcatgatct cccggacccc tgaggtcaca 840 tgcgtggtgg tggacgtgag ccacgaagac cctgaggtca agttcaactg gtacgtggac 900 ggcgtggagg tgcataatgc caagacaaag ccgcgggagg agcagtacaa cagcacgtac 960 cgtgtggtca gcgtcctcac cgtcctgcac caggactggc tgaatggcaa ggagtacaag 1020 tgcaaggtct ccaacaaagc cctcccagcc cccatcgaga aaaccatctc caaagccaaa 1080 ggtcagcccc gagaaccaca ggtgtacacc ctgcccccat cccgggagga gatgaccaag 1140 aaccaggtca gcctgacctg cctggtcaaa ggcttctatc ccagcgacat cgccgtggag 1200 tgggagagca atgggcagcc ggagaacaac tacaagacca cgcctcccgt gctggactcc 1260 gacggctcct tcttcctcta tagcaagctc accgtggaca agagcaggtg gcagcagggg 1320 aacgtcttct catgctccgt gatgcatgag gctctgcaca accactacac gcagaagagc 1380 ctctccctgt ccccgggtaa a 1401 <210 68 <211> 467 <212> PRT <213>人造的 <220> <223> VH4 重鏈 <400> 68

Met Gly Trp Ser Cys lie lie Leu Phe Leu Val Ala Thr Ala Thr Gly 15 10 15

Ala His Ser Gin Val Gin Leu Gin Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys 20 25 30

Pro Ser Glu Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ala Val Ser Gly Tyr Ser He 35 40 45

Ser Ser Gly Tyr Tvr Trp Gly Trp lie Arg Gin Pro Pro Gly Lys Gly

Leu Glu Trp He Gly Ser He Ser His Thr Gly Asn Thr Tyr Tyr Asn 6S 70 75 80

Pro Pro Leu Lys Ser Arg Val Thr lie Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn 85 90 95 38 201000129

Gin Phe Ser Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val 100 105 110

Tyr Tyr Cys Ala Arg Trp Leu Gly Phe Gly Arg Pro Glu Tyr Trp Gly 1L5 120 125

Lys Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser 130 135 140

Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala 145 150 155 160

Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val 165 170 175

Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala 180 185 190 φ

Val Leu Gin Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val 195 200 205

Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gin Thr Tyr lie Cys Asn Val Asn His 210 215 220

Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys 225 230 235 240

Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Fro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly 245 250 255

Ala Pro Ser Val Phe Leu Fhe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met 260 265 270

He Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His 275 280 285

Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val 290 295 300

His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gin Tyr Asn Ser Thr Tyr 305 310 315 320

Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gin Asp Trp Leu Asn Gly 325 330 335

Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro He 340 345 350

Glu Lys Thr He Ser Lys Ala Lys Gly Gin Pro Arg Glu Pro Gin Val 355 360 365

Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gin Val Ser 39 201000129 370 375 380

Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp lie Ala Val Glu 385 390 395 400

Trp Glu Ser Asn Gly Gin Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro 405 410 415

Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val 420 425 430

Asp Lys Ser Arg Trp Gin Gin Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met 435 440 445

His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gin Lys Ser Leu Ser Leu Ser 450 455 460

Pro Gly Lys 465 <210 69 <211> 1401 <212> DNA <213>人造的 <220> <223> VH5 重鏈 <400> 69 atgggatgga gctgtatcat cctcttcttg gtagcaacag ctacaggcgc gcactctcag 60 gtgcagctgc aggagtctgg ccctggcctg gtgaagcctt ccgagaccct gtctctgacc 120 tgtgccgtgt ccggctactc catctcctcc ggctactact ggggctggat cagacagcct 180 cctggcaagg gcctggagtg gatcggctcc atctctcaca ccggcaacac ctactacaac 240 ccccctctga agtccagagt gaccatctcc gtggacacct ccaagaacca gttctccctg 300

aagctgtcct ctgtgaccgc tgccgatacc gccgtgtact actgtgccag attcttgggc 360 ttcggccggc cggagtactg gggcaaaggc accctggtga ccgtgtcctc tgcctccacc 420 aagggcccat cggtcttccc cctggcaccc tcctccaaga gcacctctgg gggcacagcg 480 gccctgggct gcctggtcaa ggactacttc cccgaaccgg tgacggtgtc gtggaactca 540 ggcgccctga ccagcggcgt gcacaccttc ccggctgtcc tacagtcctc aggactctac 600 tccctcagca gcgtggtgac cgtgccctcc agcagcttgg gcacccagac ctacatctgc 660 aacgtgaatc acaagcccag caacaccaag gtggacaaga aagttgagcc caaatcttgt 720 gacaaaactc acacatgccc accgtgccca gcacctgaag ccgcgggggc accgtcagtc 780 ttcctcttcc ccccaaaacc caaggacacc ctcatgatct cccggacccc tgaggtcaca 840 tgcgtggtgg tggacgtgag ccacgaagac cctgaggtca agttcaactg gtacgtggac 900 ggcgtggagg tgcataatgc caagacaaag ccgcgggagg agcagtacaa cagcacgtac 960 cgtgtggtca gcgtcctcac cgtcctgcac caggactggc tgaatggcaa ggagtacaag 1020 40 1080 1080 1140 1200 1260 1320 1380 1401 tgcaaggtct ccaacaaagc cctcccagcc cccatcgaga aaaccatctc caaagccaaa ggtcagcccc gagaaccaca ggtgtacacc ctgcccccat cccgggagga gatgaccaag aaccaggtca gcctgacctg cctggtcaaa ggcttctatc ccagcgacat cgccgtggag tgggagagca atgggcagcc ggagaacaac tacaagacca cgcctcccgt gctggactcc gacggctcct tcttcctcta tagcaagctc accgtggaca agagcaggtg gcagcagggg aacgtcttct catgctccgt gatgcatgag gctctgcaca accactacac gcagaagagc ctctccctgt ccccgggtaa a <210> 70 <211> 467 <212> PRT <213>人造的 <220> <223> VH5 重鏈 <400> 70

Met Gly Trp Ser Cys lie lie Leu Phe Leu Val Ala Thr Ala Thr Gly 15 10 15

Ala His Ser Gin Val Gin Leu Gin Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys 20 25 30

Pro Ser Glu Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ala Val Ser Gly Tyr Ser lie 35 40 45

Ser Ser Gly Tyr Tyr Trp Gly Trp lie Arg Gin Pro Pro Gly Lys Gly 50 55 60

Leu Glu Trp He Gly Ser He Ser His Thr Gly Asn Thr Tyr Tyr Asn 65 70 75 80

Pro Pro Leu Lys Ser Arg Val Thr lie Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn 85 90 95

Gin Phe Ser Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val 100 105 HO

Tyr Tyr Cys Ala Arg Phe Leu Gly Phe Gly Arg Pro Glu Tyr Trp Gly 115 120 125

Lys Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser 130 135 140

Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala 145 150 155 160

Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val 41 201000129

Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala 180 185 190

Val Leu Gin Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val 195 200 205

Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gin Thr Tyr lie Cys Asn Val Asn His 210 215 220

Lys Fro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys 225 230 235 240

Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly 245 250 255

Ala Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met 260 265 270 lie Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His 275 280 285

Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val 290 295 300

His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gin Tyr Asn Ser Thr Tyr 305 310 315 320

Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gin Asp Trp Leu Asn Gly 325 330 335

Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro lie 340 345 350

Glu Lys Thr He Ser Lys Ala Lys Gly Gin Pro Arg Glu Pro Gin Val 355 360 365

Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gin Val Ser 370 375 380

Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp lie Ala Val Glu 385 390 395 400

Trp Glu Ser Asn Gly Gin Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro 405 410 415

Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val 420 425 430

Asp Lys Ser Arg Trp Gin Gin Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met 435 440 445 42

I 201000129

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atgggatgga gctgtatcat cctcttcttg gtagcaacag ctacaggcgc gcactctcag 60 gtgcagctgc aggagtctgg ccctggcctg gtgaagcctt ccgagaccct gtctctgacc 120 tgtgccgtgt ccggctactc catctcctcc ggctactact ggggctggat cagacagcct 180 cctggcaagg gcctggagtg gatcggctcc atctctcaca ccggcaacac ctactacaac 240 ccccctctga agtccagagt gaccatctcc gtggacacct ccaagaacca gttctccctg 300 aagctgtcct ctgtgaccgc tgccgatacc gccgtgtact actgtgccag attcttcggc 360 ttcggccgcc cggagtactg gggcaaaggc accctggtga ccgtgtcctc tgcctccacc 420 aagggcccat cggtcttccc cctggcaccc tcctccaaga gcacctctgg gggcacagcg 480 gccctgggct gcctggtcaa ggactacttc cccgaaccgg tgacggtgtc gtggaactca 540 ggcgccctga ccagcggcgt gcacaccttc ccggctgtcc tacagtcctc aggactctac 600 tccctcagca gcgtggtgac cgtgccctcc agcagcttgg gcacccagac ctacatctgc 660 aacgtgaatc acaagcccag caacaccaag gtggacaaga aagttgagcc caaatcttgt 720 gacaaaactc acacatgccc accgtgccca gcacctgaag ccgcgggggc accgtcagtc 780 ttcctcttcc ccccaaaacc caaggacacc ctcatgatct cccggacccc tgaggtcaca 840 tgcgtggtgg tggacgtgag ccacgaagac cctgaggtca agttcaactg gtacgtggac 900 ggcgtggagg tgcataatgc caagacaaag ccgcgggagg agcagtacaa cagcacgtac 960 cgtgtggtca gcgtcctcac cgtcctgcac caggactggc tgaatggcaa ggagtacaag 1020 tgcaaggtct ccaacaaagc cctcccagcc cccatcgaga aaaccatctc caaagccaaa 1080 ggtcagcccc gagaaccaca ggtgtacacc ctgcccccat cccgggagga gatgaccaag 1140 aaccaggtca gcctgacctg cctggtcaaa ggcttctatc ccagcgacat cgccgtggag 1200 tgggagagca atgggcagcc ggagaacaac tacaagacca cgcctcccgt gctggactcc 1260 gacggctcct tcttcctcta tagcaagctc accgtggaca agagcaggtg gcagcagggg 1320 aacgtcttct catgctccgt gatgcatgag gctctgcaca accactacac gcagaagagc 1380 ctctccctgt ccccgggtaa a 1401

<210> 72 <211> 467 <212> PRT 43 201000129 <213>人造的 <220> <223> VH6 重鏈 <400> 72

Met Gly Trp Ser Cys He He Leu Phe Leu Val Ala Thr Ala Thr Gly 15 10 15

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Pro Ser Glu Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ala Val Ser Gly Tyr Ser He 35 40 45

Ser Ser Gly Tyr Tyr Trp Gly Trp lie Arg Gin Pro Pro Gly Lys Gly 50 55 60

Leu Glu Trp He Gly Ser He Ser His Thr Gly Asn Thr Tyr Tyr Asn 65 70 75 80

Pro Pro Leu Lys Ser Arg Val Thr lie Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn 85 90 95

Gin Phe Ser Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val 100 105 110

Tyr Tyr Cys Ala Arg Phe Phe Gly Phe Gly Arg Pro Glu Tyr Trp Gly 115 120 125

Lys Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser 130 135 140

Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala 145 150 155 160

Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val 165 170 175

Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala 180 185 190

Val Leu Gin Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val 195 200 205

Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gin Thr Tyr lie Cys Asn Val Asn His 210 215 220

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Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly 245 250 255 44

Ala Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met 260 265 270 lie Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His 275 2S0 285

Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val 290 295 300

His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gin Tyr Asn Ser Thr Tyr 305 310 315 320

Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gin Asp Trp Leu Asn Gly 325 330 335

Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro lie 340 345 350

Glu Lys Thr He Ser Lys Ala Lys Gly Gin Pro Arg Glu Pro Gin Val 355 360 365

Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gin Val Ser 370 375 380

Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp lie Ala Val Glu 385 390 395 400

Trp Glu Ser Asn Gly Gin Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro 405 410 415

Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val 420 425 430

Asp Lys Ser Arg Trp Gin Gin Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met 435 440 445

His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gin Lys Ser Leu Ser Leu Ser 450 455 460

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Ala His Ser Ser Ser Glu Leu Thr Gin Asp Pro Ala Val Ser Val Ala 20 25 30

Leu Gly Gin Thr Val Arg lie Thr Cys Gin Gly Asp Ser Leu Arg Thr 35 40 45

Tyr Tyr Ala Ser Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Gly Gin Ala Pro Val Leu 50 55 60

Val lie Tyr Gly Lys His Lys Arg Pro Ser Gly lie Pro Asp Arg Phe 65 70 75 80

Ser Gly Ser Ser Ser Gly Asn Thr Ala Ser Leu Thr lie Thr Gly Ala 85 90 95

Gin Ala Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Val Ser Arg Ala Val Val 100 105 110

Gly Asn Pro His Val Leu Phe Gly Gly Gly Thr Gin Leu Thr Val Leu 115 120 125

Gly Gin Pro Lys Ala Ala Pro Ser Val Thr Leu Phe Pro Pro Ser Ser 130 135 140 46 201000129

Glu Glu Leu Gin Ala Asn Lys Ala Thr Leu Val Cys Leu lie Ser Asp 145 150 155 160

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Val Lys Ala Gly Val Glu Thr Thr Thr Pro Ser Lys Gin Ser Asn Asn 180 185 190

Lys Tyr Ala Ala Ser Ser Tyr Leu Ser Leu Thr Pro Glu Gin Trp Lys 195 200 205

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Glu Lys Thr Val Ala Pro Thr Glu Cys Ser 225 230 <210> 75 <211> 702 <212> DNA <213>人造的 ❹ <220> <223> VL11 輕鏈 <400> 75 atgggatgga gctgtatcat cctcttcttg gtagcaacag ctacaggcgc gcactcttcc 60 tctgagctga cccaggatcc tgctgtgtct gtggccctgg gccagaccgt caggatcacc 120 tgccagggcg atagcctgag aacctactac gcctcctggt atcagcagaa gcctggacag 180 gcccctgtgc tggtgatcta cggcaagcac aagaggccat ccggcatccc tgacagattc 240 tccggctcct cctctggcaa taccgcctcc ctgaccatca ctggggctca ggcggaagac 300 gaggctgact attactgttc ctcccgctcc cgccacggca acccccatgt tctgttcggc 360 ggagggaccc agctcaccgt tttaggtcag cccaaggctg ccccctcggt cactctgttc 420

ccgccctcct ctgaggagct tcaagccaac aaggccacac tggtgtgtct cataagtgac 480 ttctacccgg gagccgtgac agtggcctgg aaggcagata gcagccccgt caaggcggga 540 gtggagacca ccacaccctc caaacaaagc aacaacaagt acgcggccag cagctatctg 600 agcctgacgc ctgagcagtg gaagtcccac agaagctaca gctgccaggt cacgcatgaa 660 gggagcaccg tggagaagac agtggcccct acagaatgtt ca 702 <210> 76 <211> 234 <212> PRT <213>人造的 <220> <223> VL11 輕鍵 <400> 76

Met Gly Trp Ser Cys lie lie Leu Phe Leu Val Ala Thr Ala Thr Gly 47 201000129 15 10 15

Ala His Ser Ser Ser Glu Leu Thr Gin Asp Pro Ala Val Ser Val Ala 20 25 30

Leu Gly Gin Thr Val Arg lie Thr Cys Gin Gly Asp Ser Leu Arg Thr 35 40 45

Tyr Tyr Ala Ser Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Gly Gin Ala Pro Val Leu 50 55 60

Val lie Tyr Gly Lys His Lys Arg Pro Ser Gly lie Pro Asp Arg Phe 65 70 75 80

Ser Gly Ser Ser Ser Gly Asn Thr Ala Ser Leu Thr lie Thr Gly Ala 85 90 95 ❹

Gin Ala Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ser Ser Arg Ser Arg His 100 105 110

Gly Asn Pro His Val Leu Phe Gly Gly Gly Thr Gin Leu Thr Val Leu 115 120 125

Gly Gin Pro Lys Ala Ala Pro Ser Val Thr Leu Phe Pro Pro Ser Ser 130 135 140

Glu Glu Leu Gin Ala Asn Lys Ala Thr Leu Val Cys Leu lie Ser Asp 145 150 155 160

Phe Tyr Pro Gly Ala Val Thr Val Ala Trp Lys Ala Asp Ser Ser Pro 165 170 175

Val Lys Ala Gly Val Glu Thr Thr Thr Pro Ser Lys Gin Ser Asn Asn 180 185 190

Lys Tyr Ala Ala Ser Ser Tyr Leu Ser Leu Thr Pro Glu Gin Trp Lys 195 200 205

Ser His Arg Ser Tyr Ser Cys Gin Val Thr His Glu Gly Ser Thr Val 210 215 220

Glu Lys Thr Val Ala Pro Thr Glu Cys Ser 225 230 <210> 77 <211> 702 <212> DNA <213>人造的 <220> <223〉VL13 輕鏈 <400> 77 atgggatgga gctgtatcat cctcttcttg gtagcaacag ctacaggcgc gcactcttcc 60 48 tctgagctga cccaggatcc tgctgtgtct gtggccctgg gccagaccgt caggatcacc 120 tgccagggcg atagcctgag aacctactac gcctcctggt atcagcagaa gcctggacag 180 gcccctgtgc tggtgatcta cggcaagcac aagaggccat ccggcatccc tgacagattc 240 tccggctcct cctctggcaa taccgcctcc ctgaccatca ctggggctca ggcggaagac 300 gaggctgact attactgtgt cacccgcaac cgctacggca acccccatgt tctgttcggc 360 ggagggaccc agctcaccgt tttaggtcag cccaaggctg ccccctcggt cactctgttc 420 ccgccctcct ctgaggagct tcaagccaac aaggccacac tggtgtgtct cataagtgac 480 ttctacccgg gagccgtgac agtggcctgg aaggcagata gcagccccgt caaggcggga 540 gtggagacca ccacaccctc caaacaaagc aacaacaagt acgcggccag cagctatctg 600 agcctgacgc ctgagcagtg gaagtcccac agaagctaca gctgccaggt cacgcatgaa 660 gggagcaccg tggagaagac agtggcccct acagaatgtt ca 702 <210> 78 <211> 234 <212> PRT <213> 人造的 <220> <223> VL13 輕鍵 <400> 78

Met Gly Trp Ser Cys lie lie Leu Phe Leu Val Ala Thr Ala Thr Gly 15 10 15

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Leu Gly Gin Thr Val Arg lie Thr Cys Gin Gly Asp Ser Leu Arg Thr 35 40 45

Tyr Tyr Ala Ser Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Gly Gin Ala Pro Val Leu 50 55 60

Val lie Tyr Gly Lys His Lys Arg Pro Ser Gly lie Pro Asp Arg Phe 65 70 75 80

Ser Gly Ser Ser Ser Gly Asn Thr Ala Ser Leu Thr lie Thr Gly Ala 85 90 95

Gin Ala Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Val Thr Arg Asn Arg Tyr 100 105 110

Gly Asn Pro His Val Leu Phe Gly Gly Gly Thr Gin Leu Thr Val Leu 115 120 125

Gly Gin Pro Lys Ala Ala Pro Ser Val Thr Leu Phe Pro Pro Ser Ser 130 135 140 49 201000129

Glu Glu Leu Gin Ala Asn Lys Ala Thr Leu Val Cys Leu lie Ser Asp 145 150 155 160

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Val Lys Ala Gly Val Glu Thr Thr Thr Pro Ser Lys Gin Ser Asn Asn 180 185 190

Lys Tyr Ala Ala Ser Ser Tyr Leu Ser Leu Thr Pro Glu Gin Trp Lys 195 200 205

Ser His Arg Ser Tyr Ser Cys Gin Val Thr His Glu Gly Ser Thr Val 210 215 220

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atgggatgga gctgtatcat cctcttcttg gtagcaacag ctacaggcgc gcactcttcc 60 tctgagctga cccaggatcc tgctgtgtct gtggccctgg gccagaccgt caggatcacc 120 tgccagggcg atagcctgag aacctactac gcctcctggt atcagcagaa gcctggacag 180 gcccctgtgc tggtgatcta cggcaagcac aagaggccat ccggcatccc tgacagattc 240 tccggctcct cctctggcaa taccgcctcc ctgaccatca ctggggctca ggcggaagac 300 gaggctgact attactgtat ggcgaggtcg aggaagggca acccccatgt tctgttcggc 360 ggagggaccc agctcaccgt tttaggtcag cccaaggctg ccccctcggt cactctgttc 420 ccgccctcct ctgaggagct tcaagccaac aaggccacac tggtgtgtct cataagtgac 480 ttctacccgg gagccgtgac agtggcctgg aaggcagata gcagccccgt caaggcggga 540 gtggagacca ccacaccctc caaacaaagc aacaacaagt acgcggccag cagctatctg 600 agcctgacgc ctgagcagtg gaagtcccac agaagctaca gctgccaggt cacgcatgaa 660 gggagcaccg tggagaagac agtggcccct acagaatgtt ca 702 <210> 80 <211> 234 <212> PRT <213> 人造的 <220> <223> VL14 輕鏈 <400> 80 50 201000129

Met Gly Trp Ser Cys lie lie Leu Phe Leu Val Ala Thr Ala Thr Gly 15 10 15

Ala His Ser Ser Ser Glu Leu Thr Gin Asp Pro Ala Val Ser Val Ala 20 25 30

Leu Gly Gin Thr Val Arg lie Thr Cys Gin Gly Asp Ser Leu Arg Thr 35 40 45

Tyr Tyr Ala Ser Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Gly Gin Ala Pro Val Leu 50 55 60

Val lie Tyr Gly Lys His Lys Arg Pro Ser Gly lie Pro Asp Arg Phe 65 70 75 80

Ser Gly Ser Ser Ser Gly Asn Thr Ala Ser Leu Thr lie Thr Gly Ala 85 90 95

O

Gin Ala Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Met Ala Arg Ser Arg Lys 100 105 110

Gly Asn Pro His Val Leu Phe Gly Gly Gly Thr Gin Leu Thr Val Leu 115 120 125

Gly Gin Pro Lys Ala Ala Pro Ser Val Thr Leu Phe Pro Pro Ser Ser 130 135 140

Glu Glu Leu Gin Ala Asn Lys Ala Thr Leu Val Cys Leu lie Ser Asp 145 150 155 160

Phe Tyr Pro Gly Ala Val Thr Val Ala Trp Lys Ala Asp Ser Ser Pro 165 170 175

Val Lys Ala Gly Val Glu Thr Thr Thr Pro Ser Lys Gin Ser Asn Asn 180 185 190

Lys Tyr Ala Ala Ser Ser Tyr Leu Ser Leu Thr Pro Glu Gin Trp Lys 195 200 205

Ser His Arg Ser Tyr Ser Cys Gin Val Thr His Glu Gly Ser Thr Val 210 215 220

Glu Lys Thr Val Ala Pro Thr Glu Cys Ser 225 230 <210 81 <211> 702 <212> DNA <213> 人造的 <220 <223> VL17 輕鏈 <400> 81 51 201000129

atgggatgga gctgtatcat cctcttcttg gtagcaacag ctacaggcgc gcactcttcc 60 tctgagctga cccaggatcc tgctgtgtct gtggccctgg gccagaccag aatcctgacc 120 tgccagggcg atagcctgag aacctactac gcctcctggt atcagcagaa gcctggacag 180 gcccctgtgc tggtgatcta cggcaagcac aagaggccat ccggcatccc tgacagattc 240 tccggctcct cctctggcaa taccgcctcc ctgaccatca ctggggctca ggcggaagac 300 gaggctgact attactgtag cacgaggtcg aggaagggca acccccatgt tctgttcggc 360 ggagggaccc agctcaccgt tttaggtcag cccaaggctg ccccctcggt cactctgttc 420 ccgccctcct ctgaggagct tcaagccaac aaggccacac tggtgtgtct cataagtgac 480 ttctacccgg gagccgtgac agtggcctgg aaggcagata gcagccccgt caaggcggga 540 gtggagacca ccacaccctc caaacaaagc aacaacaagt acgcggccag cagctatctg 600 agcctgacgc ctgagcagtg gaagtcccac agaagctaca gctgccaggt cacgcatgaa 660 gggagcaccg tggagaagac agtggcccct acagaatgtt ca 702 <210> 82 <211> 234 <212> PRT <213> 人造的 <220 <223> VL17 輕鍵 <400 82

Met Gly Trp Ser Cys lie lie Leu Phe Leu Val Ala Thr Ala Thr Gly 15 10 15

Ala His Ser Ser Ser Glu Leu Thr Gin Asp Pro Ala Val Ser Val Ala 20 25 30

Leu Gly Gin Thr Arg lie Leu Thr Cys Gin Gly Asp Ser Leu Arg Thr 35 40 45

Tyr Tyr Ala Ser Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Gly Gin Ala Pro Val Leu 50 55 60

Val lie Tyr Gly Lys His Lys Arg Pro Ser Gly lie Pro Asp Arg Phe 65 70 75 80

Ser Gly Ser Ser Ser Gly Asn Thr Ala Ser Leu Thr lie Thr Gly Ala 85 90 95

Gin Ala Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ser Thr Arg Ser Arg Lys 100 105 Π0

Gly Asn Pro His Val Leu Phe Gly Gly Gly Thr Gin Leu Thr Val Leu 115 120 125

Gly Gin Pro Lys Ala Ala Pro Ser Val Thr Leu Phe Pro Pro Ser Ser 130 135 140 52

Glu Glu Leu Gin Ala Asn Lys Ala Thr Leu Val Cys Leu lie Ser Asp 145 150 155 160

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Glu Lys Thr Val Ala Fro Thr Glu Cys Ser 225 230 <210> 83 <211> 702 <212> DNA <213>人造的 <220> <223> VL23 輕鏈 <400> 83 atgggatgga gctgtatcat cctcttcttg gtagcaacag ctacaggcgc gcactcttcc 60 tctgagctga cccaggatcc tgctgtgtct gtggccctgg gccagaccgt caggatcacc 120 tgccagggcg atagcctgag aacctactac gcctcctggt atcagcagaa gcctggacag 180 gcccctgtgc tggtgatcta cggcaagcac aagaggccat ccggcatccc tgacagattc 240 tccggctcct cctctggcaa taccgcctcc ctgaccatca ctggggctca ggcggaagac 300 gaggctgact attactgttc ggcgcggtcg gtgaggggca acccccatgt tctgttcggc 360 ggagggaccc agctcaccgt tttaggtcag cccaaggctg ccccctcggt cactctgttc 420 ccgccctcct ctgaggagct tcaagccaac aaggccacac tggtgtgtct cataagtgac 480 ttctacccgg gagccgtgac agtggcctgg aaggcagata gcagccccgt caaggcggga 540 gtggagacca ccacaccctc caaacaaagc aacaacaagt acgcggccag cagctatctg 600 agcctgacgc ctgagcagtg gaagtcccac agaagctaca gctgccaggt cacgcatgaa 660 gggagcaccg tggagaagac agtggcccct acagaatgtt ca 702 <210> 84 <211> 234 <212> PRT <213>人造的 <220> <223> VL23 輕鏈 <400> 84 53 201000129

Met Gly Trp Ser Cys lie He Leu Phe Leu Val Ala Thr Ala Thr Gly 15 10 15

Ala His Ser Ser Ser Glu Leu Thr Gin Asp Pro Ala Val Ser Val Ala 20 25 30

Leu Gly Gin Thr Val Arg lie Thr Cys Gin Gly Asp Ser Leu Arg Thr 35 40 45

Tyr Tyr Ala Ser Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Gly Gin Ala Pro Val Leu 50 55 60

Val lie Tyr Gly Lys His Lys Arg Pro Ser Gly lie Pro Asp Arg Phe 65 70 75 80

Ser Gly Ser Ser Ser Gly Asn Thr Ala Ser Leu Thr lie Thr Gly Ala 85 90 95

Gin Ala Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ser Ala Arg Ser Val Arg 100 105 110

Gly Asn Pro His Val Leu Phe Gly Gly Gly Thr Gin Leu Thr Val Leu 115 120 125

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Leu Gly Gin Thr Val Arg He Thr Cys Gin Gly Asp Ser Leu Arg Thr 35 40 45

Tyr Tyr Ala Ser Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Gly Gin Ala Pro Val Leu 50 55 60

Val lie Tyr Gly Lys His Lys Arg Pro Ser Gly lie Pro Asp Arg Phe 65 70 75 80

Ser Gly Ser Ser Ser Gly Asn Thr Ala Ser Leu Thr lie Thr Gly Ala 85 90 95

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Lys Tyr Ala Ala Ser Ser Tyr Leu Ser Leu Thr Pro Glu Gin Trp Lys 195 200 205

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O aagctgtcct ctgtgaccgc tgccgatacc gccgtgtact actgtgccag aggcggcgga 360 atctccagac ctgagtactg gggccagggc accctggtga ccgtgtcctc tgcctccacc 420 aagggcccat cggtcttccc cctggcaccc tcctccaaga gcacctctgg gggcacagcg 480 gccctgggct gcctggtcaa ggactacttc cccgaaccgg tgacggtgtc gtggaactca 540 ggcgccctga ccagcggcgt gcacaccttc ccggctgtcc tacagtcctc aggactctac 600 tccctcagca gcgtggtgac cgtgccctcc agcagcttgg gcacccagac ctacatctgc 660 aacgtgaatc acaagcccag caacaccaag gtggacaaga aagttgagcc caaatcttgt 720 gacaaaactc acacatgccc accgtgccca gcacctgaag ccgcgggggc accgtcagtc 780 ttcctcttcc ccccaaaacc caaggacacc ctcatgatct cccggacccc tgaggtcaca 840 tgcgtggtgg tggacgtgag ccacgaagac cctgaggtca agttcaactg gtacgtggac 900 ggcgtggagg tgcataatgc caagacaaag ccgcgggagg agcagtacaa cagcacgtac 960 cgtgtggtca gcgtcctcac cgtcctgcac caggactggc tgaatggcaa ggagtacaag 1020 56 1080 1080 1140 1200 1260 1320 1380 1401 tgcaaggtct ccaacaaagc cctcccagcc cccatcgaga aaaccatctc caaagccaaa ggtcagcccc gagaaccaca ggtgtacacc ctgcccccat cccgggagga gatgaccaag aaccaggtca gcctgacctg cctggtcaaa ggcttctatc ccagcgacat cgccgtggag tgggagagca atgggcagcc ggagaacaac tacaagacca cgcctcccgt gctggactcc gacggctcct tcttcctcta tagcaagctc accgtggaca agagcaggtg gcagcagggg aacgtcttct catgctccgt gatgcatgag gctctgcaca accactacac gcagaagagc ctctccctgt ccccgggtaa a <210> 88 <211> 467 <212> PRT <213>人造的 <220> <22办具訊息序列之VHPTM重鏈 <400 88

Met Gly Trp Ser Cys lie lie Leu Phe Leu Val Ala Thr Ala Thr Gly 15 10 15

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Pro Ser Glu Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ala Val Ser Gly Tyr Ser lie 35 40 45

Ser Ser Gly Tyr Tyr Trp Gly Trp lie Arg Gin Pro Pro Gly Lys Gly 50 55 60

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Pro Pro Leu Lys Ser Arg Val Thr He Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn 85 90 95

Gin Phe Ser Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val 100 105 no

Tyr Tyr Cys Ala Arg Gly Gly Gly lie Ser Arg Pro Glu Tyr Trp Gly 115 120 125

Gin Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser 130 135 140

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Asp Lys Ser Arg Trp Gin Gin Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met 435 440 445 58 201000129

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Val Leu Gin Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val 195 200 205

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He Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His 275 280 285

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Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro lie 340 345 350

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Glu Lys Thr He Ser Lys Ala Lys Gly Gin Pro Arg Glu Pro Gin Val 355 360 365

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Trp Glu Ser Asn Gly Gin Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro 405 410 415 ❹

Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val 420 425 430

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Pro Pro Leu Lys Ser Arg Val Thr lie Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn 85 90 95

Gin Phe Ser Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val 100 105 110

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Gin Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser 130 135 140

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Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Fro Glu Pro Val Thr Val 165 170 175

Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala 180 185 190

Val Leu Gin Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val 195 200 205 0

Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gin Thr Tyr lie Cys Asn Val Asn His 210 215 220

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Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly 245 250 255

Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val 290 295 300

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Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gin Asp Trp Leu Asn Gly 325 330 335

Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro lie 340 345 350

Glu Lys Thr lie Ser Lys Ala Lys Gly Gin Pro Arg Glu Pro Gin Val 355 360 365

Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gin Val Ser 370 375 380

Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp lie Ala Val Glu 385 390 395 400 66 201000129

Trp Glu Ser Asn Gly Gin Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro 405 410 415

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atgggatgga gctgtatcat cctcttcttg gtagcaacag ctacaggcgc gcactcttcc 60 tctgagctga cccaggatcc tgctgtgtct gtggccctgg gccagaccgt caggatcacc 120 tgccagggcg atagcctgag aacctactac gcctcctggt atcagcagaa gcctggacag 180 gcccctgtgc tggtgatcta cggcaagcac aagaggccat ccggcatccc tgacagattc 240 tccggctcct cctctggcaa taccgcctcc ctgaccatca ctggggctca ggcggaagac 300 gaggctgact attactgtgt cgcccggtcg gtggtgggca acccccatgt tctgttcggc 360 ggagggaccc agctcaccgt tttaggtcag cccaaggctg ccccctcggt cactctgttc 420 ccgccctcct ctgaggagct tcaagccaac aaggccacac tggtgtgtct cataagtgac 480 ttctacccgg gagccgtgac agtggcctgg aaggcagata gcagccccgt caaggcggga 540 gtggagacca ccacaccctc caaacaaagc aacaacaagt acgcggccag cagctatctg 600 agcctgacgc ctgagcagtg saagtcccac agaagctaca gctgccaggt cacgcatgaa 660 gggagcaccg tggagaagac agtggcccct acagaatgtt ca 702 <210> 96 <211> 234 <212> PRT <213>人造的 <220> <223>具訊息序列之VL2輕键 <400 96

Met Gly Trp Ser Cys He lie Leu Phe Leu Val Ala Thr Ala Thr Gly 15 10 15

Ala His Ser Ser Ser Glu Leu Thr Gin Asp Pro Ala Val Ser Val Ala 67 201000129 20 25 30

Leu Gly Gin Thr Val Arg lie Thr Cys Gin Gly Asp Ser Leu Arg Thr 35 40 45

Tyr Tyr Ala Ser Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Gly Gin Ala Pro Val Leu 50 55 60

Val He Tyr Gly Lys His Lys Arg Pro Ser Gly lie Pro Asp Arg Phe 65 70 75 80

Ser Gly Ser Ser Ser Gly Asn Thr Ala Ser Leu Thr lie Thr Gly Ala 85 90 95

Gin Ala Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Val Ala Arg Ser Val Val 100 105 110 ❹

Gly Asn Pro His Val Leu Phe Gly Gly Gly Thr Gin Leu Thr Val Leu 115 120 125

Gly Gin Pro Lys Ala Ala Pro Ser Val Thr Leu Phe Pro Pro Ser Ser 130 135 140

Glu Glu Leu Gin Ala Asn Lys Ala Thr Leu Val Cys Leu lie Ser Asp 145 150 155 160

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Val Lys Ala Gly Val Glu Thr Thr Thr Pro Ser Lys Gin Ser Asn Asn 180 185 190

Lys Tyr Ala Ala Ser Ser Tyr Leu Ser Leu Thr Pro Glu Gin Trp Lys 195 200 205

Ser His Arg Ser Tyr Ser Cys Gin Val Thr His Glu Gly Ser Thr Val 210 215 220

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Met Gly Trp Ser Cys lie lie Leu Phe Leu Val Ala Thr Ala Thr Gly 15 10 15

Ala His Ser Ser Ser Glu Leu Thr Gin Asp Pro Ala Val Ser Val Ala 20 25 30

Leu Gly Gin Thr Val Arg He Thr Cys Gin Gly Asp Ser Leu Arg Thr 35 40 45

Tyr Tyr Ala Ser Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Gly Gin Ala Fro Val Leu 50 55 60

Val He Tyr Gly Lys His Lys Arg Pro Ser Gly He Pro Asp Arg Phe 65 70 75 80

Ser Gly Ser Ser Ser Gly Asn Thr Ala Ser Leu Thr He Thr Gly Ala 85 90 95

Gin Ala Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Met Ser Arg Ser lie Trp 100 105 110

Gly Asn Pro His Val Leu Phe Gly Gly Gly Thr Gin Leu Thr Val Leu 115 120 125

Gly Gin Pro Lys Ala Ala Pro Ser Val Thr Leu Phe Pro Pro Ser Ser 130 135 140

Glu Glu Leu Gin Ala Asn Lys Ala Thr Leu Val Cys Leu He Ser Asp 145 150 155 160 69 201000129

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Val Lys Ala Gly Val Glu Thr Thr Thr Pro Ser Lys Gin Ser Asn Asn 180 185 190

Lys Tyr Ala Ala Ser Ser Tyr Leu Ser Leu Thr Pro Glu Gin Trp Lys 195 200 205

Ser His Arg Ser Tyr Ser Cys Gin Val Thr His Glu Gly Ser Thr Val 210 215 220

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O atgggatgga gctgtatcat cctcttcttg gtagcaacag ctacaggcgc gcactcttcc 60 tctgagctga cccaggatcc tgctgtgtct gtggccctgg gccagaccgt caggatcacc 120 tgccagggcg atagcctgag aacctactac gcctcctggt atcagcagaa gcctggacag 180 gcccctgtgc tggtgatcta cggcaagcac aagaggccat ccggcatccc tgacagattc 240 tccggctcct cctctggcaa taccgcctcc ctgaccatca ctggggctca ggcggaagac 300 gaggctgact attactgtgt cgccaggtcc aacaagggca acccccatgt tctgttcggc 360 ggagggaccc agctcaccgt tttaggtcag cccaaggctg ccccctcggt cactctgttc 420 ccgccctcct ctgaggagct tcaagccaac aaggccacac tggtgtgtct cataagtgac 480 ttctacccgg gagccgtgac agtggcctgg aaggcagata gcagccccgt caaggcggga 540 gtggagacca ccacaccctc caaacaaagc aacaacaagt acgcggccag cagctatctg 600 agcctgacgc ctgagcagtg gaagtcccac agaagctaca gctgccaggt cacgcatgaa 660 gggagcaccg tggagaagac agtggcccct acagaatgtt ca 702 <210> 100 <211> 234 <212> PRT <213>人造的 <220> <223>具訊息序列之VL9輕鏈 <400> 100

Met Gly Trp Ser Cys lie lie Leu Phe Leu Val Ala Thr Ala Thr Gly 1 5 10 15 70 201000129

Ala His Ser Ser Ser Glu Leu Thr Gin Asp Pro Ala Val Ser Val Ala 20 25 30

Leu Gly Gin Thr Val Arg He Thr Cys Gin Gly Asp Ser Leu Arg Thr 35 40 45

Tyr Tyr Ala Ser Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Gly Gin Ala Pro Val Leu 50 55 60

Val He Tyr Gly Lys His Lys Arg Pro Ser Gly He Pro Asp Arg Phe 65 70 75 80

Ser Gly Ser Ser Ser Gly Asn Thr Ala Ser Leu Thr II© Thr Gly Ala 85 90 95

Gin Ala Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Val Ala Arg Ser Asn Lys 100 105 110

❷

Gly Asn Pro His Val Leu Phe Gly Gly Gly Thr Gin Leu Thr Val Leu 115 120 125

Gly Gin Pro Lys Ala Ala Pro Ser Val Thr Leu Phe Pro Pro Ser Ser 130 135 140

Glu Glu Leu Gin Ala Asn Lys Ala Thr Leu Val Cys Leu He Ser Asp 145 150 155 160

Phe Tyr Pro Gly Ala Val Thr Val Ala Trp Lys Ala Asp Ser Ser Pro 165 170 175

Val Lys Ala Gly Val Glu Thr Thr Thr Pro Ser Lys Gin Ser Asn Asn 180 185 190

Lys Tyr Ala Ala Ser Ser Tyr Leu Ser Leu Thr Pro Glu Gin Trp Lys 195 200 205

Ser His Arg Ser Tyr Ser Cys Gin Val Thr His Glu Gly Ser Thr Val 210 215 220

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Gin Ala Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Val Thr Arg Ser Ala Lys 100 105 110

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Gly Gin Pro Lys Ala Ala Pro Ser Val Thr Leu Phe Pro Pro Ser Ser .130 135 140

Glu Glu Leu Gin Ala Asn Lys Ala Thr Leu Val Cys Leu lie Ser Asp 145 150 155 160 72

Phe Tyr Pro Gly Ala Val Thr Val Ala Trp Lys Ala Asp Ser Ser Pro 165 170 175

Val Lys Ala Gly Val Glu Thr Thr Thr Pro Ser Lys Gin Ser Asn Asn 180 185 190

Lys Tyr Ala Ala Ser Ser Tyr Leu Ser Leu Thr Pro Glu Gin Trp Lys 195 200 205

Ser His Arg Ser Tyr Ser Cys Gin Val Thr His Glu Gly Ser Thr Val 210 215 220

Glu Lys Thr Val Ala Pro Thr Glu Cys Ser 225 230 <210> 103 <211> 702 <212> DNA <213> 人造的 <220> <223>具訊急序列之VL18輕鏈 <400 103 atgggatgga gctgtatcat cctcttcttg gtagcaacag ctacaggcgc gcactcttcc 60 tctgagctga cccaggatcc tgctgtgtct gtggccctgg gccagaccgt caggatcacc 120 tgccagggcg atagcctgag aacctactac gcctcctggt atcagcagaa gcctggacag 180 gcccctgtgc tggtgatcta cggcaagcac aagaggccat ccggcatccc tgacagattc 240 tccggctcct cctctggcaa taccgcctcc ctgaccatca ctggggctca ggcggaagac 300 gaggctgact attactgtgt cacgaggagc gtgaagggca acccccatgt tctgttcggc 360 ggagggaccc agctcaccgt tttaggtcag cccaaggctg ccccctcggt cactctgttc 420 ccgccctcct ctgaggagct tcaagccaac aaggccacac tggtgtgtct cataagtgac 480 ttctacccgg gagccgtgac agtggcctgg aaggcagata gcagccccgt caaggcggga 540 gtggagacca ccacaccctc caaacaaagc aacaacaagt acgcggccag cagctatctg 600 agcctgacgc ctgagcagtg gaagtcccac agaagctaca gctgccaggt cacgcatgaa 660 gggagcaccg tggagaagac agtggcccct acagaatgtt ca 702 <210> 104 <211> 234 <212> PRT <213>人造的 <220> <223>具訊息序列之VL18輕鏈 <400 104

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Ala His Ser Ser Ser Glu Leu Thr Gin Asp Pro Ala Val Ser Val Ala 20 25 30

Leu Gly Gin Thr Val Arg lie Thr Cys Gin Gly Asp Ser Leu Arg Thr 35 40 45

Tyr Tyr Ala Ser Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Gly Gin Ala Pro Val Leu 50 55 60

Val He Tyr Gly Lys His Lys Arg Pro Ser Gly lie Pro Asp Arg Phe 65 70 75 80

Ser Gly Ser Ser Ser Gly Asn Thr Ala Ser Leu Thr He Thr Gly Ala 85 90 95

Gin Ala Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Val Thr Arg Ser Val Lys 100 105 110

Gly Asn Pro His Val Leu Phe Gly Gly Gly Thr Gin Leu Thr Val Leu 115 120 125

Gly Gin Pro Lys Ala Ala Pro Ser Val Thr Leu Phe Pro Pro Ser Ser 130 135 140

Glu Glu Leu Gin Ala Asn Lys Ala Thr Leu Val Cys Leu lie Ser Asp 145 150 155 160

Phe Tyr Pro Gly Ala Val Thr Val Ala Trp Lys Ala Asp Ser Ser Pro 165 170 175

Val Lys Ala Gly Val Glu Thr Thr Thr Pro Ser Lys Gin Ser Asn Asn 180 185 190 o

Lys Tyr Ala Ala Ser Ser Tyr Leu Ser Leu Thr Pro Glu Gin Trp Lys 195 200 205

Ser His Arg Ser Tyr Ser Cys Gin Val Thr His Glu Gly Ser Thr Val 210 215 220

Glu Lys Thr Val Ala Pro Thr Glu Cys Ser 225 230 <210> 105 <211> 702 <212> DNA <213> 人造的 <220> <223>具訊息序列之VL2〇輕鏈 <400 105 atgggatgga gctgtatcat cctcttcttg gtagcaacag ctacaggcgc gcactcttcc 60 tctgagctga cccaggatcc tgctgtgtct gtggccctgg gccagaccgt caggatcacc 120 74 tgccagggcg atagcctgag aacctactac gcctcctggt atcagcagaa gcctggacag 180 gcccctgtgc tggtgatcta cggcaagcac aagaggccat ccggcatccc tgacagattc 240 tccggctcct cctctggcaa taccgcctcc ctgaccatca ctggggctca ggcggaagac 300 gaggctgact attactgtgt ctcccgcagc gcgaagggca acccccatgt tctgttcggc 360 ggagggaccc agctcaccgt tttaggtcag cccaaggctg ccccctcggt cactctgttc 420 ccgccctcct ctgaggagct tcaagccaac aaggccacac tggtgtgtct cataagtgac 480 ttctacccgg gagccgtgac agtggcctgg aaggcagata gcagccccgt caaggcggga 540 gtggagacca ccacaccctc caaacaaagc aacaacaagt acgcggccag cagctatctg 600 agcctgacgc ctgagcagtg gaagtcccac agaagctaca gctgccaggt cacgcatgaa 660 gggagcaccg tggagaagac agtggcccct acagaatgtt ca <210> 106 <211> 234 <212> PRT <213>人造的 <220> <223>具訊息序列之VL2〇輕鏈 <400> 106

Met Gly Trp Ser Cys lie lie Leu Phe Leu Val Ala Thr Ala Thr Gly 15 10 15

Ala His Ser Ser Ser Glu Leu Thr Gin Asp Pro Ala Val Ser Val Ala 20 25 30

Leu Gly Gin Thr Val Arg lie Thr Cys Gin Gly Asp Ser Leu Arg Thr 35 40 45

Tyr Tyr Ala Ser Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Gly Gin Ala Pro Val Leu 50 55 60

Val He Tyr Gly Lys His Lys Arg Pro Ser Gly lie Pro Asp Arg Phe 65 70 75 8〇

Ser Gly Ser Ser Ser Gly Asn Thr Ala Ser Leu Thr lie Thr Gly Ala 85 90 95

Gin Ala Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Val Ser Arg Ser Ala Lys 100 105 HO

Gly Asn Pro His Val Leu Phe Gly Gly Gly Thr Gin Leu Thr Val Leu 115 120 125

Gly Gin Pro Lys Ala Ala Pro Ser Val Thr Leu Phe Pro Pro Ser Ser 130 135 140

Glu Glu Leu Gin Ala Asn Lys Ala Thr Leu Val Cys Leu He Ser Asp 75 201000129 145 150 155 160

Phe Tyr Pro Gly Ala Val Thr Val Ala Trp Lys Ala Asp Ser Ser Pro 165 170 175

Val Lys Ala Gly Val Glu Thr Thr Thr Pro Ser Lys Gin Ser Asn Asn 180 185 190

Lys Tyr Ala Ala Ser Ser Tyr Leu Ser Leu Thr Pro Glu Gin Trp Lys 195 200 205

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Glu Lys Thr Val Ala Pro Thr Glu Cys Ser 225 230 <210 107 <211> 702 <212> DNA <213>人造的 <220> <223>具訊息序列之VL25輕鏈 <400 107

O atgggatgga gctgtatcat cctcttcttg gtagcaacag ctacaggcgc gcactcttcc 60 tctgagctga cccaggatcc tgctgtgtct gtggccctgg gccagaccgt caggatcacc 120 tgccagggcg atagcctgag aacctactac gcctcctggt atcagcagaa gcctggacag 180 gcccctgtgc tggtgatcta cggcaagcac aagaggccat ccggcatccc tgacagattc 240 tccggctcct cctctggcaa taccgcctcc ctgaccatca ctggggctca ggcggaagac 300 gaggctgact attactgtac gacgcggagc aacaagggca acccccatgt tctgttcggc 360 ggagggaccc agctcaccgt tttaggtcag cccaaggctg ccccctcggt cactctgttc 420 ccgccctcct ctgaggagct tcaagccaac aaggccacac tggtgtgtct cataagtgac 480 ttctacccgg gagccgtgac agtggcctgg aaggcagata gcagccccgt caaggcggga 540 gtggagacca ccacaccctc caaacaaagc aacaacaagt acgcggccag cagctatctg 600 agcctgacgc ctgagcagtg gaagtcccac agaagctaca gctgccaggt cacgcatgaa 660 gggagcaccg tggagaagac agtggcccct acagaatgtt ca 702 <210> 108 <211> 234 <212> PRT <213>人造的 <220> <223>具訊息序列之VL25輕鏈 <400 108

Met Gly Trp Ser Cys lie lie Leu Phe Leu Val Ala Thr Ala Thr Gly 1 5 10 15 76

Ala His Ser Ser Ser Glu Leu Thr Gin Asp Pro Ala Val Ser Val Ala 20 25 30

Leu Gly Gin Thr Val Arg lie Thr Cys Gin Gly Asp Ser Leu Arg Thr 35 40 45

Tyr Tyr Ala Ser Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Gly Gin Ala Pro Val Leu 50 55 60

Val lie Tyr Gly Lys His Lys Arg Pro Ser Gly lie Pro Asp Arg Phe 65 70 75 80

Ser Gly Ser Ser Ser Gly Asn Thr Ala Ser Leu Thr lie Thr Gly Ala 85 90 95

Gin Ala Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Thr Thr Arg Ser Asn Lys 100 105 110

Gly Asn Pro His Val Leu Phe Gly Gly Gly Thr Gin Leu Thr Val Leu 115 120 125

Gly Gin Pro Lys Ala Ala Pro Ser Val Thr Leu Phe Pro Pro Ser Ser 130 135 140

Glu Glu Leu Gin Ala Asn Lys Ala Thr Leu Val Cys Leu lie Ser Asp 145 150 155 160

Phe Tyr Pro Gly Ala Val Thr Val Ala Trp Lys Ala Asp Ser Ser Pro 165 170 175

Val Lys Ala Gly Val Glu Thr Thr Thr Pro Ser Lys Gin Ser Asn Asn 180 185 190

Lys Tyr Ala Ala Ser Ser Tyr Leu Ser Leu Thr Pro Glu Gin Trp Lys 195 200 205

Ser His Arg Ser Tyr Ser Cys Gin Val Thr His Glu Gly Ser Thr Val 210 215 220

Glu Lys Thr Val Ala Pro Thr Glu Cys Ser 225 230 <210 109 <211> 732 <212> DNA <213>人造的 <220> <223> H3 scFV <400> 109 caggtgcagc tgcaggagtc gggcccagga ctggtgaaga cttcggagac cctgtccctc 77 60 201000129 acctgcgctg tctctggtta ctccatcagc agtggttact actggggctg gatccggcag 120 cccccaggga aggggttgga gtggattggg agtatctctc atactgggaa cacctactac 180 aacccgcccc tcaagagtcg cgtcaccata tcagtagaca cgtccaagaa ccagttctcc 240 ctgaaactga gctctgtgac cgccgcagac acggccgtgt attactgtgc gcgattcatg 300 gggttcggcc gcccggagta ctggggcaaa ggcaccctgg tcaccgtctc gagtggaggc 360 ggcggttcag gcggaggtgg ctctggcggt ggcggaagtg cactttcttc tgagctgact 420 caggaccctc ctgtgtctgt ggccttggga cagacagtca cgctcacatg ccaaggagac 480 agcctcagaa cctattatgc aagctggtac cagcagaagt caggacaggc ccctatactt 540 ctcctctatg gtaaacacaa acggccctca gggatcccag accgcttctc tggctccacc 600 tcaggagaca cagcttcctt gaccatcact ggggctcagg cggaagacga ggctgactat 660 tactgtaact cccgggactc cagtggcaac ccccatgttc tgttcggcgg agggacccag 720

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Tyr Tyr Trp Gly Trp lie Arg Gin Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp 35 40 45

lie Gly Ser lie Ser His Thr Gly Asn Thr Tyr Tyr Asn Pro Pro Leu 50 55 60

Lys Ser Arg Val Thr lie Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gin Phe Ser 65 70 75 80

Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95

Ala Arg Phe Met Gly Phe Gly Arg Pro Glu Tyr Trp Gly Lys Gly Thr 100 105 110

Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser 115 120 125

Gly Gly Gly Gly Ser Ala Leu Ser Ser Glu Leu Thr Gin Asp Pro Pro 130 135 140 78 201000129

Val Ser Val Ala Leu Gly Gin Thr Val Thr Leu Thr Cys Gin Gly Asp 145 150 155 160

Ser Leu Arg Thr Tyr Tyr Ala Ser Trp Tyr Gin Gin Lys Ser Gly Gin 165 170 175

Ala Pro He Leu Leu Leu Tyr Gly Lys His Lys Arg Pro Ser Gly lie 180 185 190

Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Thr Ser Gly Asp Thr Ala Ser Leu Thr 195 200 205 lie Thr Gly Ala Gin Ala Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Asn Ser 210 215 220

Arg Asp Ser Ser Gly Asn Pro His Val Leu Phe Gly Gly Gly Thr Gin 225 230 235 240

Leu Thr Val Leu <210 111 <211> 732 <212> DNA <213> 人造的 <220 <223> H4 scFV <400> 111 caggtgcagc tgcaggagtc gggcccagga ctggtgaaga cttcggagac cctgtccctc 6〇 acctgcgctg tctctggtta ctccatcagc agtggttact actggggctg gatccggcag 120 cccccaggga aggggttgga gtggattggg agtatctctc atactgggaa cacctactac i8〇 aacccgcccc tcaagagtcg cgtcaccata tcagtagaca cgtccaagaa ccagttctcc 240 ctgaaactga gctctgtgac cgccgcagac acggccgtgt attactgtgc gcgatggctc 300 gggttcggcc gcccggagta ctggggcaaa ggcaccctgg tcaccgtctc gagtggaggc 360 ggcggttcag gcggaggtgg ctctggcggt ggcggaagtg cactttcttc tgagctgact 420 caggaccctc ctgtgtctgt ggccttggga cagacagtca cgctcacatg ccaaggagac 480 agcctcagaa cctattatgc aagctggtac cagcagaagt caggacaggc ccctatactt 540 ctcctctatg gtaaacacaa acggccctca gggatcccag accgcttctc tggctccacc 600 tcaggagaca cagcttcctt gaccatcact ggggctcagg cggaagacga ggctgactat 660 tactgtaact cccgggactc cagtggcaac ccccatgttc tgttcggcgg agggacccag 720 ctcaccgttt ta 732

<210> 112 <211> 244 <212> PRT 79 201000129 <213>人造的 <220> <223> H4 scFV <400> 112

Gin Val Gin Leu Gin Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Thr Ser Glu 15 10 15

Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ala Val Ser Gly Tyr Ser lie Ser Ser Gly 20 25 30

Tyr Tyr Trp Gly Trp He Arg Gin Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp 35 40 45

He Gly Ser He Ser His Thr Gly Asn Thr Tyr Tyr Asn Pro Pro Leu 50 55 60

Lys Ser Arg Val Thr He Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gin Phe Ser 65 70 75 80

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Val Ser Val Ala Leu Gly Gin Thr Val Thr Leu Thr Cys Gin Gly Asp 145 150 155 160

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Leu Thr Val Leu <210> 129 <211> 732 <212> DNA <213> 人造的 <220> <223> L8 scFv <400 129 60 120 caggtgcagc tgcaggagtc gggcccagga ctggtgaaga cttcggagac cctgtccctc acctgcgctg tctctggtta ctccatcagc agtggttact actggggctg gatccggcag cccccaggga aggggttgga gtggattggg agtatctctc atactgggaa cacctactac 93 180 201000129 aacccgcccc tcaagagtcg cgtcaccata tcagtagaca cgtccaagaa ccagttctcc 240 ctgaaactga gctctgtgac cgccgcagac acggccgtgt attactgtgc gcgaggtggg 300 ggaattagca ggccggagta ctggggcaaa ggcaccctgg tcaccgtctc gagtggaggc 360 ggcggttcag gcggaggtgg ctctggcggt ggcggaagtg cactticttc tgagctgact 420 caggaccctc ctgtgtctgt ggccttggga cagacagtca cgctcacatg ccaaggagac 480 agcctcagaa cctattatgc aagctggtac cagcagaagt caggacaggc ccctatactt 540 ctcctctatg gtaaacacaa acggccctca gggatcccag accgcttctc tggctccacc 600 tcaggagaca cagcttcctt gaccatcact ggggctcagg cggaagacga ggctgactat 660 tactgtacca cgcgctccac ccagggcaac ccccatgttc tgttcggcgg agggacccag 720 ctcaccgttt ta 732 <210> 130

<211> 244 <212> PRT <213>人造的 <220> <223> L8 scFv <400> 130

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Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ala Val Ser Gly Tyr Ser lie Ser Ser Gly 20 25 30

Tyr Tyr Trp Gly Trp lie Arg Gin Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp 35 40 45 lie Gly Ser lie Ser His Thr Gly Asn Thr Tyr Tyr Asn Pro Fro Leu 50 55 60 ❹

Lys Ser Arg Val Thr He Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gin Phe Ser 65 70 75 80

Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95

Ala Arg Gly Gly Gly lie Ser Arg Pro Glu Tyr Trp Gly Lys Gly Thr 100 105 110

Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser 115 120 125

Gly Gly Gly Gly Ser Ala Leu Ser Ser Glu Leu Thr Gin Asp Pro Pro 130 135 140

Val Ser Val Ala Leu Gly Gin Thr Val Thr Leu Thr Cys Gin Gly Asp 145 150 155 160 94

Ser Leu Arg Thr Tyr Tyr Ala Ser Trp Tyr Gin Gin Lys Ser Gly Gin 165 170 175

Ala Pro lie Leu Leu Leu Tyr Gly Lys His Lys Arg Pro Ser Gly lie 180 185 190

Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Thr Ser Gly Asp Thr Ala Ser Leu Thr 195 200 205

He Thr Gly Ala Gin Ala Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Thr Thr 210 215 220

Arg Ser Thr Gin Gly Asn Fro His Val Leu Phe Gly Gly Gly Thr Gin 225 230 235 240

Leu Thr Val Leu <210 131 <211> 732 <212> DNA <213>人造的 <220 <223> L9 scFv <400> 131 caggtgcagc tgcaggagtc gggcccagga ctggtgaaga cttcggagac cctgtccctc 60 acctgcgctg tctctggtta ctccatcagc agtggttact actggggctg gatccggcag 120 cccccaggga aggggttgga gtggattggg agtatctctc atactgggaa cacctactac 180 aacccgcccc tcaagagtcg cgtcaccata tcagtagaca cgtccaagaa ccagttctcc 240 ctgaaactga gctctgtgac cgccgcagac acggccgtgt attactgtgc gcgaggtggg 300 ggaattagca ggccggagta ctggggcaaa ggcaccctgg tcaccgtctc gagtggaggc 360 ggcggttcag gcggaggtgg ctctggcggt ggcggaagtg cactttcttc tgagctgact 420 caggaccctc ctgtgtctgt ggccttggga cagacagtca cgctcacatg ccaaggagac 480 agcctcagaa cctattatgc aagctggtac cagcagaagt caggacaggc ccctatactt 540 ctcctctatg gtaaacacaa acggccctca gggatcccag accgcttctc tggctccacc 600 tcaggagaca cagcttcctt gaccatcact ggggctcagg cggaagacga ggctgactat 660 tactgtgtcg ccaggtccaa caagggcaac ccccatgttc tgttcggcgg agggacccag 720 ctcaccgttt ta 732 <210> 132 <21L> 244 <212> PRT <213> 人造的 <220> <223> L9 scFv 95 201000129 <400> 132

Gin Val Gin Leu Gin Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Thr Ser Glu 15 10 15

Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ala Val Ser Gly Tyr Ser He Ser Ser Gly 20 25 30

Tyr Tyr Trp Gly Trp lie Arg Gin Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp 35 40 45

He Gly Ser He Ser His Thr Gly Asn Thr Tyr Tyr Asn Pro Pro Leu 50 55 60

Lys Ser Arg Val Thr lie Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gin Phe Ser 65 70 75 80

Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95

Ala Arg Gly Gly Gly lie Ser Arg Pro Glu Tyr Trp Gly Lys Gly Thr 100 105 110

Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser 115 120 125

Gly Gly Gly Gly Ser Ala Leu Ser Ser Glu Leu Thr Gin Asp Pro Pro 130 135 140

Val Ser Val Ala Leu Gly Gin Thr Val Thr Leu Thr Cys Gin Gly Asp 145 150 155 160

Ser Leu Arg Thr Tyr Tyr Ala Ser Trp Tyr Gin Gin Lys Ser Gly Gin 165 170 175

Ala Pro lie Leu Leu Leu Tyr Gly Lys His Lys Arg Pro Ser Gly lie 180 185 190

Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Thr Ser Gly Asp Thr Ala Ser Leu Thr 195 200 205 lie Thr Gly Ala Gin Ala Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Val Ala 210 215 220

Arg Ser Asn Lys Gly Asn Pro His Val Leu Phe Gly Gly Gly Thr Gin 225 230 235 240

Leu Thr Val Leu <210> 133 <211> 732 96 <212> DNA <213>人造的 <220 <223> L10 scFv <400> 133 caggtgcagc tgcaggagtc gggcccagga ctggtgaaga cttcggagac cctgtccctc 60 acctgcgctg tctctggtta ctccatcagc agtggttact actggggctg gatccggcag 120 cccccaggga aggggttgga gtggattggg agtatctctc atactgggaa cacctactac 180 aacccgcccc tcaagagtcg cgtcaccata tcagtagaca cgtccaagaa ccagttctcc 240 ctgaaactga gctctgtgac cgccgcagac acggccgtgt attactgtgc gcgaggtggg 300 ggaattagca ggccggagta ctggggcaaa ggcaccctgg tcaccgtctc gagtggaggc 360 ggcggttcag gcggaggtgg ctctggcggt ggcggaagtg cactttcttc tgagctgact 420 caggaccctc ctgtgtctgt ggccttggga cagacagtca cgctcacatg ccaaggagac 480 agcctcagaa cctattatgc aagctggtac cagcagaagt caggacaggc ccctatactt 540 ctcctctatg gtaaacacaa acggccctca gggatcccag accgcttctc tggctccacc 600 tcaggagaca cagcttcctt gaccatcact ggggctcagg cggaagacga ggctgactat 660 tactgtatca gccggtcgat ctacggcaac ccccatgttc tgttcggcgg agggacccag 720 ctcaccgttt ta 732 <210> 134 <211> 244 <212> PRT <213> 人造的 <220> <223> L10 scFv <400> 134

Gin Val Gin Leu Gin Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Thr Ser Glu 15 10 15

Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ala Val Ser Gly Tyr Ser lie Ser Ser Gly 20 25 30

Tyr Tyr Trp Gly Trp He Arg Gin Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp 35 40 45

He Gly Ser He Ser His Thr Gly Asn Thr Tyr Tyr Asn Pro Pro Leu 50 55 60

Lys Ser Arg Val Thr He Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gin Phe Ser 65 70 75 80

Leu Lvs Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95

Ala Arg Gly Gly Gly lie Ser Arg Pro Glu Tyr Trp Gly Lys Gly Thr 97 201000129 100 105 110

Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser 115 120 125

Gly Gly Gly Gly Ser Ala Leu Ser Ser Glu Leu Thr Gin Asp Pro Pro 130 135 140

Val Ser Val Ala Leu Gly Gin Thr Val Thr Leu Thr Cys Gin Gly Asp 145 150 155 160

Ser Leu Arg Thr Tyr Tyr Ala Ser Trp Tyr Gin Gin Lys Ser Gly Gin 165 170 175

Ala Pro lie Leu Leu Leu Tyr Gly Lys His Lys Arg Pro Ser Gly lie 180 185 190

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Leu Thr Val Leu <210> 135 <211> 732 <212> DNA <213>人造的 <220>

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Gin Val Gin Leu Gin Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Thr Ser Glu 15 10 15

Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ala Val Ser Gly Tyr Ser He Ser Ser Gly 20 25 30

Tyr Tyr Trp Gly Trp He Arg Gin Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp 35 40 45

He Gly Ser He Ser His Thr Gly Asn Thr Tyr Tyr Asn Pro Pro Leu 50 55 60

Lys Ser Arg Val Thr lie Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gin Phe Ser 65 70 75 · 80

Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95

Ala Arg Gly Gly Gly He Ser ArB Pro Glu Tyr Trp Gly Lys Gly Thr

Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser 115 120 125

Gly Gly Gly Gly Ser Ala Leu Ser Ser Glu Leu Thr Gin Asp Pro Pro 130 135 140

Val Ser Val Ala Leu Gly Gin Thr Val Thr Leu Thr Cys Gin Gly Asp 145 150 155 160

Ser Leu Arg Thr Tyr Tyr Ala Ser Trp Tyr Gin Gin Lys Ser Gly Gin 165 170 175

Ala Pro lie Leu Leu Leu Tyr Gly Lys His Lys Arg Pro Ser Gly lie 180 185 190

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He Thr Gly Ala Gin Ala Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ser Ser 720 732 99 201000129 210 215 220

Arg Ser Arg His Gly Asn Pro His Val Leu Phe Gly Gly Gly Thr Gin 225 230 235 240

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caggtgcagc tgcaggagtc gggcccagga ctggtgaaga cttcggagac cctgtccctc 60 acctgcgctg tctctggtta ctccatcagc agtggttact actggggctg gatccggcag 120 cccccaggga aggggttgga gtggattggg agtatctctc atactgggaa cacctactac 180 aacccgcccc tcaagagtcg cgtcaccata tcagtagaca cgtccaagaa ccagttctcc 240 ctgaaactga gctctgtgac cgccgcagac acggccgtgt attactgtgc gcgaggtggg 300 ggaattagca ggccggagta ctggggcaaa ggcaccctgg tcaccgtctc gagtggaggc 360 ggcggttcag gcggaggtgg ctctggcggt ggcggaagtg cactttcttc tgagctgact 420 caggaccctc ctgtgtctgt ggccttggga cagacagtca cgctcacatg ccaaggagac 480 agcctcagaa cctattatgc aagctggtac cagcagaagt caggacaggc ccctatactt 540 ctcctctatg gtaaacacaa acggccctca gggatcccag accgcttctc tggctccacc 600 tcaggagaca cagcttcctt gaccatcact ggggctcagg cggaagacga ggctgactat 660 tactgtgtcg cgagggggac gaggggcaac ccccatgttc tgttcggcgg agggacccag 720 ctcaccgttt ta 732 ❹ <210 138 <211> 244 <212> PRT <213>人造的 <220> <223> L12 scFv <400> 138

Gin Val Gin Leu Gin Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Thr Ser Glu 1 5 10 15

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Tyr Tyr Trp Gly Trp lie Arg Gin Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp 35 40 45 100 lie Gly Ser lie Ser His Thr Gly Asn Thr Tyr Tyr Asn Pro Pro Leu 50 55 60

Lys Ser Arg Val Thr lie Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gin Phe Ser 65 70 75 80

Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95

Ala Arg Gly Gly Gly lie Ser Arg Pro Glu Tyr Trp Gly Lys Gly Thr 100 105 110

Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser 115 120 125

Gly Gly Gly Gly Ser Ala Leu Ser Ser Glu Leu Thr Gin Asp Pro Pro 130 135 140

Val Ser Val Ala Leu Gly Gin Thr Val Thr Leu Thr Cys Gin Gly Asp 145 150 155 160

Ser Leu Arg Thr Tyr Tyr Ala Ser Trp Tyr Gin Gin Lys Ser Gly Gin 165 170 175

Ala Pro lie Leu Leu Leu Tyr Gly Lys His Lys Arg Pro Ser Gly lie 180 185 190

Arg Gly Thr Arg Gly Asn Pro His Val Leu Phe Gly Gly Gly Thr Gin 225 230 235 240

Leu Thr Val Leu <210> 139 <211> 732 <212> DNA <213> 人造的 <220> <223> L13 scFv <400 139 60 120 180 caggtgcagc tgcaggagtc gggcccagga ctggtgaaga cttcggagac cctgtccctc acctgcgctg tctctggtta ctccatcagc agtggttact actggggctg gatccggcag cccccaggga aggggttgga gtggattggg agtatctctc atactgggaa cacctactac aacccgcccc tcaagagtcg cgtcaccata tcagtagaca cgtccaagaa ccagttctcc

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Gin Val Gin Leu Gin Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Thr Ser Glu 15 10 15

Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ala Val Ser Gly Tyr Ser lie Ser Ser Gly 20 25 30

Tyr Tyr Trp Gly Trp lie Arg Gin Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp 35 40 45

He Gly Ser lie Ser His Thr Gly Asn Thr Tyr Tyr Asn Pro Pro Leu 50 55 60

Lys Ser Arg Val Thr lie Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gin Phe Ser 65 70 75 80

Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95

Ala Arg Gly Gly Gly lie Ser Arg Pro Glu Tyr Trp Gly Lys Gly Thr 100 105 110

Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser 115 120 125

Gly Gly Gly Gly Ser Ala Leu Ser Ser Glu Leu Thr Gin Asp Pro Pro 130 135 140

Val Ser Val Ala Leu Gly Gin Thr Val Thr Leu Thr Cys Gin Gly Asp 145 150 155 160 102

Ser Leu Arg Thr Tyr Tyr Ala Ser Trp Tyr Gin Gin Lys Ser Gly Gin 165 170 175

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Gin Val Gin Leu Gin Glu Ser Gly Pro Gly L©u Val Lys Thr Ser Glu 15 10 15

Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ala Val Ser Gly Tyr Ser He Ser Ser Gly 20 25 30

Tyr Tyr Trp Gly Trp He Arg Gin Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp 35 40 45

He Gly Ser He Ser His Thr Gly Asn Thr Tyr Tyr Asn Pro Pro Leu 50 55 60

Lys Ser Arg Val Thr He Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gin Phe Ser 65 70 75 80

Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95

Ala Arg Gly Gly Gly He Ser Arg Pro Glu Tyr Trp Gly Lys Gly Thr 100 105 110

Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser 115 120 125

Gly Gly Gly Gly Ser Ala Leu Ser Ser Glu Leu Thr Gin Asp Pro Pro 130 135 140

Val Ser Val Ala Leu Gly Gin Thr Val Thr Leu Thr Cys Gin Gly Asp 145 150 155 160

Ser Leu Arg Thr Tyr Tyr Ala Ser Trp Tyr Gin Gin Lys Ser Gly Gin 165 170 175

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Arg Ser Arg Lys Gly Asn Pro His Val Leu Phe Gly Gly Gly Thr Gin 225 230 235 240

Leu Thr Val Leu <210> 143 <211> 732 <212> DNA <213> 人造的 104 <220 <223> L15 scFv <400> 143 caggtgcagc tgcaggagtc gggcccagga ctggtgaaga cttcggagac cctgtccctc 60 acctgcgctg tctctggtta ctccatcagc agtggttact actggggctg gatccggcag 120 cccccaggga aggggttgga gtggattggg agtatctctc atactgggaa cacctactac 180 aacccgcccc tcaagagtcg cgtcaccata tcagtagaca cgtccaagaa ccagttctcc 240 ctgaaactga gctctgtgac cgccgcagac acggccgtgt attactgtgc gcgaggtggg 300 ggaattagca ggccggagta ctggggcaaa ggcaccctgg tcaccgtctc gagtggaggc 360 ggcggttcag gcggaggtgg ctctggcggt ggcggaagtg cactttcttc tgagctgact 420 caggaccctc ctgtgtctgt ggccttggga cagacagtca cgctcacatg ccaaggagac 480 agcctcagaa cctattatgc aagctggtac cagcagaagt caggacaggc ccctatactt 540 ctcctctatg gtaaacacaa acggccctca gggatcccag accgcttctc tggctccacc 600 tcaggagaca cagcttcctt gaccatcact ggggctcagg cggaagacga ggctgactat 660 tactgttcca cccgcgccat ccacggcaac ccccatgttc tgttcggcgg agggacccag 720 ctcaccgttt ta 732 <210> 144 <211> 244 <212> PRT <213>人造的 <220> <223> L15 scFv <400> 144

Gin Val Gin Leu Gin Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Thr Ser Glu 15 10 15

Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ala Val Ser Gly Tyr Ser lie Ser Ser Gly 20 25 30

Tyr lyr Trp Gly Trp He Arg Gin Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp 35 40 45

He Gly Ser He Ser His Thr Gly Asn Thr Tyr Tyr Asn Pro Pro Leu 50 55 60

Lys Ser Arg Val Thr He Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gin Phe Ser 65 70 75 80

Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95

Ala Arg Glv Gly Gly He Ser Arg Pro Gl，Tyr Trp Glv Lys Gly Thr 105 201000129

Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser 115 120 125

Gly Gly Gly Gly Ser Ala Leu Ser Ser Glu Leu Thr Gin Asp Pro Pro 130 135 140

Val Ser Val Ala Leu Gly Gin Thr Val Thr Leu Thr Cys Gin Gly Asp 145 150 155 160

Ser Leu Arg Thr Tyr Tyr Ala Ser Trp Tyr Gin Gin Lys Ser Gly Gin 165 170 175

Ala Pro lie Leu Leu Leu Tyr Gly Lys His Lys Arg Pro Ser Gly lie 180 185 190

Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Thr Ser Gly Asp Thr Ala Ser Leu Thr 195 200 205

He Thr Gly Ala Gin Ala Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ser Thr 210 215 220

Arg Ala lie His Gly Asn Pro His Val Leu Phe Gly Gly Gly Thr Gin 225 230 235 240

Leu Thr Val Leu <210> 145 <211> 732 <212> DNA <213> 人造的 <220 <223> L16 scFv <400> 145

caggtgcagc tgcaggagtc gggcccagga ctggtgaaga cttcggagac cctgtccctc 60 acctgcgctg tctctggtta ctccatcagc agtggttact actggggctg gatccggcag 120 cccccaggga aggggttgga gtggattggg agtatctctc atactgggaa cacctactac 180 aacccgcccc tcaagagtcg cgtcaccata tcagtagaca cgtccaagaa ccagttctcc 240 ctgaaactga gctctgtgac cgccgcagac acggccgtgt attactgtgc gcgaggtggg 300 ggaattagca ggccggagta ctggggcaaa ggcaccctgg tcaccgtctc gagtggaggc 360 ggcggttcag gcggaggtgg ctctggcggt ggcggaagtg cactttcttc tgagctgact 420 caggaccctc ctgtgtctgt ggccttggga cagacagtca cgctcacatg ccaaggagac 480 agcctcagaa cctattatgc aagctggtac cegcagaagt c白ggecaggc ccctatactt 540 ctcctctatg gtaaacacaa acggccctca gggatcccag accgcttctc tggctccacc 600 tcaggagaca cagcttcctt gaccatcact ggggctcagg cggaagacga ggctgactat 660 tactgtgtga cgaggagcgc gaagggcaac ccccatgttc tgttcggcgg agggacccag 720 106 732 ctcaccgttt ta <210> 146 <211> 244 <212> PRT <213> 人造的 <220> <223> L16 scFv <400 146

Gin Val Gin Leu Gin Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Thr Ser Glu 15 10 15

Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ala Val Ser Gly Tyr Ser lie Ser Ser Gly 20 25 30

Lys Ser Arg Val Thr He Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gin Phe Ser 65 70 75 80

Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95

Ala Arg Gly Gly Gly He Ser Arg Pro Glu Tyr Trp Gly Lys Gly Thr 100 105 110

Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser 115 120 125

Gly Gly Gly Gly Ser Ala Leu Ser Ser Glu Leu Thr Gin Asp Pro Pro 130 135 140

Val Ser Val Ala Leu Gly Gin Thr Val Thr Leu Thr Cys Gin Gly Asp 145 150 155 160

Ser Leu Arg Thr Tyr Tyr Ala Ser Trp Tyr Gin Gin Lys Ser Gly Gin 165 170 175

Ala Pro He Leu Leu Leu Tyr Gly Lys His Lys Arg Pro Ser Gly He 180 185 190

Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Thr Ser Gly Asp Thr Ala Ser Leu Thr 195 200 205 lie Thr Gly Ala Gin Ala Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Val Thr 210 215 220 107 201000129

Arg Ser Ala Lys Gly Asn Pro His Val Leu Phe Gly Gly Gly Thr Gin 225 230 235 240

Leu Thr Val Leu <210 147 <211> 732 <212> DNA <213>人造的 <220> <223> LI7 scFv <400 147

caggtgcagc tgcaggagtc gggcccagga ctggtgaaga cttcggagac cctgtccctc 60 acctgcgctg tctctggtta ctccatcagc agtggttact actggggctg gatccggcag 120 cccccaggga aggggttgga gtggattggg agtatctctc atactgggaa cacctactac 180 aacccgcccc tcaagagtcg cgtcaccata tcagtagaca cgtccaagaa ccagttctcc 240 ctgaaactga gctctgtgac cgccgcagac acggccgtgt attactgtgc gcgaggtggg 300 ggaattagca ggccggagta ctggggcaaa ggcaccctgg tcaccgtctc gagtggaggc 360 ggcggttcag gcggaggtgg ctctggcggt ggcggaagtg cactttcttc tgagctgact 420 caggaccctc ctgtgtctgt ggccttggga cagacagtca cgctcacatg ccaaggagac 480 agcctcagaa cctattatgc aagctggtac cagcagaagt caggacaggc ccctatactt 540 ctcctctatg gtaaacacaa acggccctca gggatcccag accgcttctc tggctccacc 600 tcaggagaca cagcttcctt gaccatcact ggggctcagg cggaagacga ggctgactat 660 tactgtagca cgaggtcgag gaagggcaac ccccatgttc tgttcggcgg agggacccag 720 ctcaccgttt ta 732 o <210> 148 <211> 244 <212> PRT <213>人造的 <220> <223> L17 scFv <400> 148

Gin Val Gin Leu Gin Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Thr Ser Glu 15 10 15

Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ala Val Ser Gly Tyr Ser lie Ser Ser Gly 20 25 30

Tyr Tyr Trp Gly Trp He Arg Gin Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp 35 40 45

He Gly Ser lie Ser His Thr Gly Asn Thr Tyr Tyr Asn Pro Pro Leu 50 55 60 108

Lys Ser Arg Val Thr lie Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gin Phe Ser 65 70 75 80

Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95

Ala Arg Gly Gly Gly lie Ser Arg Pro Glu Tyr Trp Gly Lys Gly Thr 100 105 110

Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser 115 120 125

Gly Gly Gly Gly Ser Ala Leu Ser Ser Glu Leu Thr Gin Asp Pro Pro 130 135 140

Val Ser Val Ala Leu Gly Gin Thr Val Thr Leu Thr Cys Gin Gly Asp 145 150 155 160

Ser Leu Arg Thr Tyr Tyr Ala Ser Trp Tyr Gin Gin Lys Ser Gly Gin 165 170 175

Ala Pro lie Leu Leu Leu Tyr Gly Lys His Lys Arg Pro Ser Gly He 180 185 190

Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Thr Ser Gly Asp Thr Ala Ser Leu Thr 195 200 205

He Thr Gly Ala Gin Ala Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ser Thr 210 215 220

Arg Ser Arg Lys Gly Asn Pro His Val Leu Phe Gly Gly Gly Thr Gin 225 230 235 240

Leu Thr Val Leu <210> 149 <211> 732 <212> DNA <213> 人造的 <220 <223> L18 scFv <400> 149 60 120 180 240 caggtgcagc tgcaggagtc gggcccagga ctggtgaaga cttcggagac cctgtccctc acctgcgctg tctctggtta ctccatcagc agtggttact actggggctg gatccggcag cccccaggga aggggttgga gtggattggg agtatctctc atactgggaa cacctactac aacccgcccc tcaagagtcg cgtcaccata tcagtagaca cgtccaagaa ccagttctcc ctgaaactga gctctgtgac cgccgcagac acggccgtgt attactgtgc gcgaggtggg 109 300 201000129 ggaattagca ggccggagta ctggggcaaa ggcaccctgg tcaccgtctc gagtggaggc 360 ggcggttcag gcggaggtgg ctctggcggt ggcggaagtg cactttcttc tgagctgact 420 caggaccctc ctgtgtctgt ggccttggga cagacagtca cgctcacatg ccaaggagac 480 agcctcagaa cctattatgc aagctggtac cagcagaagt caggacaggc ccctatactt 540 ctcctctatg gtaaacacaa acggccctca gggatcccag accgcttctc tggctccacc 600 tcaggagaca cagcttcctt gaccatcact ggggctcagg cggaagacga ggctgactat 660 tactgtgtca cgaggagcgt gaagggcaac ccccatgttc tgttcggcgg agggacccag 720 ctcaccgttt ta 732

<210 150 <211> 244 <212> PRT 人造的 ❹ <220> <223> L18 scFv <400 150

Gin Val Gin Leu Gin Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Thr Ser Glu 15 10 15

Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ala Val Ser Gly Tyr Ser lie Ser Ser Gly 20 25 30

Tyr Tyr Trp Gly Trp He Arg Gin Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp 35 40 45

He Gly Ser He Ser His Thr Gly Asn Thr Tyr Tyr Asn Pro Pro Leu 50 55 60

Lys Ser Arg Val Thr He Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gin Phe Ser 65 70 75 8〇

Leu LyS La, Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

Ala Arg Gly Gly Gly He Ser Arg Pro Glu Tyr Trp Gly Lys Gly Thr 100 105 HO

Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser 115 120 125

Gly Gly Gly Gly Ser Ala Leu Ser Ser Glu Leu Thr Gin Asp Pro Pro 130 135 140

Val Ser Val Ala Leu Gly Gin Thr Val Thr Leu Thr Cys Gin Gly Asp 145 150 15S 16〇

Ser Leu Arg Thr Tyr Tyr Ala Ser Trp Tyr Gin Gin Lys Ser Gly Gin 165 170 175 110

Ala Pro lie Leu Leu Leu Tyr Gly Lys His Lys Arg Pro Ser Gly lie 180 185 190

Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Thr Ser Gly Asp Thr Ala Ser Leu Thr 195 200 205 lie Thr Gly Ala Gin Ala Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Val Thr 210 215 220 Arg Ser Val Lys Gly Asn Pro His Val Leu Phe Gly Gly Gly Thr Gin 225 230 235 240 Leu Thr Val Leu <210> 151 <211> 732 <212> DNA <213>人造的 <220> <223> L19 scFv <400> 151 caggtgcagc tgcaggagtc gggcccagga ctggtgaaga cttcggagac cctgtccctc 60 acctgcgctg tctctggtta ctccatcagc agtggttact actggggctg gatccggcag 120 cccccaggga aggggttgga gtggattggg agtatctctc atactgggaa cacctactac 180 aacccgcccc tcaagagtcg cgtcaccata tcagtagaca cgtccaagaa ccagttctcc 240 ctgaaactga gctctgtgac cgccgcagac acggccgtgt attactgtgc gcgaggtggg 300 ggaattagca ggccggagta ctggggcaaa ggcaccctgg tcaccgtctc gagtggaggc 360 ggcggttcag gcggaggtgg ctctggcggt ggcggaagtg cactttcttc tgagctgact 420 caggaccctc ctgtgtctgt ggccttggga cagacagtca cgctcacatg ccaaggagac 480 agcctcagaa cctattatgc aagctggtac cagcagaagt caggacaggc ccctatactt 540 ctcctctatg gtaaacacaa acggccctca gggatcccag accgcttctc tggctccacc 600 tcaggagaca cagcttcctt gaccatcact ggggctcagg cggaagacga ggctgactat 660 tactgtgtcg cgcgggcggt gaggggcaac ccccatgttc tgttcggcgg agggacccag 720 ctcaccgttt ta 732 <210> 152 <211> 244 <212> PRT <213> 人造的 <220> <223> L19 scFv <400> 152

Gin Val Gin Leu Gin Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Thr Ser Glu 111 201000129

5 10 IS

Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ala Val Ser Gly Tyr Ser lie Ser Ser Gly 20 25 30

Tyr Tyr Trp Gly Trp He Arg Gin Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp 35 40 45

He Gly Ser He Ser His Thr Gly Asn Thr Tyr Tyr Asn Pro Pro Leu 50 55 6〇

Lys Ser Arg Val Thr He Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gin Phe Ser 65 70 75 80

Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 ❹

Ala Arg Gly Gly Gly lie Ser Arg Fro Glu Tyr Trp Gly Lys Gly Thr 100 105 no

Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser 115 120 125

Gly Gly Gly Gly Ser Ala Leu Ser Ser Glu Leu Thr Gin Asp Pro Pro 130 135 140

Val Ser Val Ala Leu Gly Gin Thr Val Thr Leu Thr Cys Gin Gly Asp 145 150 155 160

Ser Leu Arg Thr Tyr Tyr Ala Ser Trp Tyr Gin Gin Lys Ser Gly Gin 16S 170 175

Ala Pro lie Leu Leu Leu Tyr Gly Lys His Lys Arg Pro Ser Gly lie 180 185 190

Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Thr Ser Gly Asp Thr Ala Ser Leu Thr 195 200 205

He Thr Gly Ala Gin Ala Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Val Ala 210 215 220

Arg Ala Val Arg Gly Asn Pro His Val Leu Phe Gly Gly Gly Thr Gin 225 230 235 240

Leu Thr Val Leu <210> 153 <211> 732 <212> DNA <213> 人造的 112 <220> <223> L20 scFv <400> 153 caggtgcagc tgcaggagtc gggcccagga ctggtgaaga cttcggagac cctgtccctc 60 acctgcgctg tctctggtta ctccatcagc agtggttact actggggctg gatccggcag 120

cccccaggga aggggttgga gtggattggg agtatctctc atactgggaa cacctactac ISO aacccgcccc tcaagagtcg cgtcaccata tcagtagaca cgtccaagaa ccagttctcc 240 ctgaaactga gctctgtgac cgccgcagac acggccgtgt attactgtgc gcgaggtggg 300 ggaattagca ggccggagta ctggggcaaa ggcaccctgg tcaccgtctc gagtggaggc 360 ggcggttcag gcggaggtgg ctctggcggt ggcggaagtg cactttcttc tgagctgact 420 caggaccctc ctgtgtctgt ggccttggga cagacagtca cgctcacatg ccaaggagac 480 agcctcagaa cctattatgc aagctggtac cagcagaagt caggacaggc ccctatactt 540 ctcctctatg gtaaacacaa acggccctca gggatcccag accgcttctc tggctccacc 600 tcaggagaca cagcttcctt gaccatcact ggggctcagg cggaagacga ggctgactat 660 tactgtgtct cccgcagcgc gaagggcaac ccccatgttc tgttcggcgg agggacccag 720 ctcaccgttt ta 732 <210 154 <211> 244 <212> PRT <213> 人造的 <220> <223> L20 scFv <400> 154

Gin Val Gin Leu Gin Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Thr Ser Glu 15 10 15

Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ala Val Ser Gly Tyr Ser He Ser Ser Gly ; 20 25 30

Tyr Tyr Trp Gly Trp He Arg Gin Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp 35 40 45

He Gly Ser He Ser His Thr Gly Asn Thr Tyr Tyr Asn Pro Pro Leu 50 55 60

Lys Ser Arg Val Thr lie Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gin Phe Ser

65 70 75 SO

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Ala Arg Gly Gly Gly He Ser Arg Pro Glu Tyr Trp Gly Lys Gly Thr 100 l〇5 no

Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser 113 201000129 115 120 125

Gly Gly Gly Gly Ser Ala Leu Ser Ser Glu Leu Thr Gin Asp Pro Pro 130 135 140

Val Ser Val Ala Leu Gly Gin Thr Val Thr Leu Thr Cys Gin Gly Asp 145 150 155 160

Ser Leu Arg Thr Tyr Tyr Ala Ser Trp Tyr Gin Gin Lys Ser Gly Gin 165 170 175

Ala Pro lie Leu Leu Leu Tyr Gly Lys His Lys Arg Pro Ser Gly lie 180 185 190

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Leu Thr Val Leu <210 155 <211> 732 <212> DNA <213>人造的 <220 <223> L21 scFv <400> 155

caggtgcagc tgcaggagtc gggcccagga ctggtgaaga cttcggagac cctgtccctc 60 acctgcgctg tctctggtta ctccatcagc agtggttact actggggctg gatccggcag 120 cccccaggga aggggttgga gtggattggg agtatctctc atactgggaa cacctactac 180 aacccgcccc tcaagagtcg cgtcaccata tcagtagaca cgtccaagaa ccagttctcc 240 ctgaaactga gctctgtgac cgccgcagac acggccgtgt attactgtgc gcgaggtggg 300 ggaattagca ggccggagta ctggggcaaa ggcaccctgg tcaccgtctc gagtggaggc 360 ggcggttcag gcggaggtgg ctctggcggt ggcggaagtg cactttcttc tgagctgact 420 caggaccctc ctgtgtctgt ggccttggga cagacagtca cgctcacatg ccaaggagac 480 agcctcagaa cctattatgc aagctggtac cagcagaagt caggacaggc ccctatactt 540 ctcctctatg gtaaacacaa acggccctca gggatcccag accgcttctc tggctccacc 600 tcaggagaca cagcttcctt gaccatcact ggggctcagg cggaagacga ggctgactat 660 tactgtgcca cccgggcggt ccggggcaac ccccatgttc tgttcggcgg agggacccag 720 ctcaccgttt ta 732 114 201000129 <210> 156 <211> 244 <212> PRT <213> 人造的 <220> <223> L21 scFv <400> 156

Gin Val Gin Leu Gin Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Thr Ser Glu 1 5 10 15

Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ala Val Ser Gly Tyr Ser He Ser Ser Gly 20 25 30

Tyr Tyr Trp Gly Trp lie Arg Gin Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp 35 40 45

lie Gly Ser lie Ser His Thr Gly Asn Thr Tyr Tyr Asn Pro Pro Leu 50 55 60

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Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

Ala Arg Gly Gly Gly lie Ser Arg Pro Glu Tyr Trp Gly Lys Gly Thr 100 105 110

Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser 115 120 125

Gly Gly Gly Gly Ser Ala Leu Ser Ser Glu Leu Thr Gin Asp Pro Pro 130 135 140

Val Ser Val Ala Leu Gly Gin Thr Val Thr Leu Thr Cys Gin Gly Asp 145 150 155 160

Ser Leu Arg Thr Tyr Tyr Ala Ser Trp Tyr Gin Gin Lys Ser ?故 Gin 165 170 175

Ala Pro He Leu Leu Leu Tyr Gly Lys His Lys Arg Pro Ser Gly He 180 185 ㈣

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Leu Thr Val Leu <210 157 <211> 732 <212> DNA <213>人造的 <220> <223> L23 scFv <400 157 caggtgcagc tgcaggagtc acctgcgctg tctctggtta cccccaggga aggggttgga aacccgcccc tcaagagtcg ctgaaactga gctctgtgac ggaattagca ggccggagta ggcggttcag gcggaggtgg caggaccctc ctgtgtctgt agcctcagaa cctattatgc ctcctctatg gtaaacacaa tcaggagaca cagcttcctt tactgttcgg cgcggtcggt ctcaccgttt ta gggcccagga ctggtgaaga ctccatcagc agtggttact gtggattggg agtatctctc cgtcaccata tcagtagaca cgccgcagac acggccgtgt ctggggcaaa ggcaccctgg ctctggcggt ggcggaagtg ggccttggga cagacagtca aagctggtac cagcagaagt acggccctca gggatcccag gaccatcact ggggctcagg gaggggcaac ccccatgttc cttcggagac cctgtccctc actggggctg gatccggcag atactgggaa cacctactac cgtccaagaa ccagttctcc attactgtgc gcgaggtggg tcaccgtctc gagtggaggc cactttcttc tgagctgact cgctcacatg ccaaggagac caggacaggc ccctatactt accgcttctc tggctccacc cggaagacga ggctgactat tgttcggcgg agggacccag 120 180 300 360 420 480 540 600 660 720 732

<210> 158 <211> 244

<212> PRT <213>人造的 <220> <223> L23 scFv <400> 158

Gin Val Gin Leu Gin Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Thr Ser Glu 15 10 15

Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ala Val Ser Gly Tyr Ser lie Ser Ser Gly 20 25 30

Tyr Tyr Trp Gly Trp lie Arg Gin Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp 35 40 45 lie Gly Ser lie Ser His Thr Gly Asn Thr Tyr Tyr Asn Pro Pro Leu 50 55 60 116

Lys Ser Arg Val Thr lie Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gin Phe Ser 65 70 75 80

Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95

Ala Arg Gly Gly Gly lie Ser Arg Pro Glu Tyr Trp Gly Lys Gly Thr 100 105 110

Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser 115 120 125

Gly Gly Gly Gly Ser Ala Leu Ser Ser Glu Leu Thr Gin Asp Pro Pro 130 135 140

Val Ser Val Ala Leu Gly Gin Thr Val Thr Leu Thr Cys Gin Gly Asp 145 150 155 160

Ser Leu Arg Thr Tyr Tyr Ala Ser Trp Tyr Gin Gin Lys Ser Gly Gin 165 170 175

Ala Pro He Leu Leu Leu Tyr Gly Lys His Lys Arg Pro Ser Gly lie 180 185 190

Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Thr Ser Gly Asp Thr Ala Ser Leu Thr 195 200 205 lie Thr Gly Ala Gin Ala Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ser Ala 210 215 220

Arg Ser Val Arg Gly Asn Pro His Val Leu Phe Gly Gly Gly Thr Gin 225 230 235 240

Leu Thr Val Leu <210> 159 <211> 732 <212> DNA <213>人造的 <220> <223> L24 scFv <400> 159 60 120 180 240 300 caggtgcagc tgcaggagtc gggcccagga ctggtgaaga cttcggagac cctgtccctc acctgcgctg tctctggtta ctccatcagc agtggttact actggggctg gatccggcag cccccaggga aggggttgga gtggattggg agtatctctc atactgggaa cacctactac aacccgcccc tcaagagtcg cgtcaccata tcagtagaca cgtccaagaa ccagttctcc ctgaaactga gctctgtgac cgccgcagac acggccgtgt attactgtgc gcgaggtggg ggaattagca ggccggagta ctggggcaaa ggcaccctgg tcaccgtctc gagtggaggc 117 360 201000129 ggcggttcag gcggaggtgg ctctggcggt ggcggaagtg cactttcttc tgagctgact 420 caggaccctc ctgtgtctgt ggccttggga cagacagtca cgctcacatg ccaaggagac 480 agcctcagaa cctattatgc aagctggtac cagcagaagt caggacaggc ccctatactt 540 ctcctctatg gtaaacacaa acggccctca gggatcccag accgcttctc tggctccacc 600 tcaggagaca cagcttcctt gaccatcact ggggctcagg cggaagacga ggctgactat 660 tactgtatcg ccaggagcaa caagggcaac ccccatgttc tgttcggcgg agggacccag 720 ctcaccgttt ta 732 <210 160 <211> 244 <212> PRT <213> 人造的 <220>

<223> L24 scFv <400 160

Gin Val Gin Leu Gin Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Thr Ser Glu 1 5 10 15

Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ala Val Ser Gly Tyr Ser lie Ser Ser Gly 20 25 30

Tyr Tyr Trp Gly Trp lie Arg Gin Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp 35 40 45

He Gly Ser lie Ser His Thr Gly Asn Thr Tyr Tyr Asn Pro Pro Leu 50 55 60

Lys Ser Arg Val Thr He Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gin Phe Ser 65 70 75 80

O

Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95

Ala Arg Gly Gly Gly He Ser Arg Pro Glu Tyr Trp Gly Lys Gly Thr 100 105 110

Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser 115 120 125

Gly Gly Gly Gly Ser Ala Leu Ser Ser Glu Leu Thr Gin Asp Pro Pro 130 135 140

Val Ser Val Ala Leu Gly Gin Thr Val Thr Leu Thr Cys Gin Gly Asp 145 150 155 160

Ser Leu Arg Thr Tyr Tyr Ala Ser Trp Tyr Gin Gin Lys Ser Gly Gin 165 170 175 118 0

201000129

Ala Pro He Leu Leu Leu Tyr Gly Lys His Lys Arg Pro Ser Gly lie 180 185 190

Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Thr Ser Gly Asp Thr Ala Ser Leu Thr 195 200 205 lie Thr Gly Ala Gin Ala Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys He Ala 210 215 220

Arg Ser Asn Lys Gly Asn Pro His Val Leu Phe Gly Gly Gly Thr Gin 225 230 235 240

Leu Thr Val Leu <210> 161 <211> 732 <212> DNA <213> 人造的 <220> <223> L25 scFv <400> 161 caggtgcagc tgcaggagtc gggcccagga ctggtgaaga cttcggagac cctgtccctc acctgcgctg tctctggtta ctccatcagc agtggttact actggggctg gatccggcag cccccaggga aggggttgga gtggattggg agtatctctc atactgggaa cacctactac aacccgcccc tcaagagtcg cgtcaccata tcagtagaca cgtccaagaa ccagttctcc ctgaaactga gctctgtgac cgccgcagac acggccgtgt attactgtgc gcgaggtggg ggaattagca ggccggagta ctggggcaaa ggcaccctgg tcaccgtctc gagtggaggc ggcggttcag gcggaggtgg ctctggcggt ggcggaagtg cactttcttc tgagctgact caggaccctc ctgtgtctgt ggccttggga cagacagtca cgctcacatg ccaaggagac agcctcagaa cctattatgc aagctggtac cagcagaagt caggacaggc ccctatactt ctcctctatg gtaaacacaa acggccctca gggatcccag accgcttctc tggctccacc tcaggagaca cagcttcctt gaccatcact ggggctcagg cggaagacga ggctgactat tactgtacga cgcggagcaa caagggcaac ccccatgttc tgttcggcgg agggacccag ctcaccgttt ta <210> 162 <211> 244 <212> PRT <213> 人造的 <220> <223> L25 scFv <400> 162

Gin Val Gin Leu Gin Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Thr Ser Glu 15 10 15 60 120 180 240 300 360 420 480 540 600 660 720 732 119 201000129

Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ala Val Ser Gly Tyr Ser lie Ser Ser Gly 20 25 30

Tyr Tyr Trp Gly Trp He Arg Gin Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp 35 40 45

He Gly Ser He Ser His Thr Gly Asn Thr Tyr Tyr Asn Pro Pro Leu 50 55 60

Lys Ser Arg Val Thr lie Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gin Phe Ser 65 70 75 80

Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95

Ala Arg Gly Gly Gly He Ser Arg Pro Glu Tyr Trp Gly Lys Gly Thr 100 105 110

Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser 115 120 125

Gly Gly Gly Gly Ser Ala Leu Ser Ser Glu Leu Thr Gin Asp Pro Pro 130 135 140

Val Ser Val Ala Leu Gly Gin Thr Val Thr Leu Thr Cys Gin Gly Asp 145 150 155 160

Ser Leu Arg Thr Tyr Tyr Ala Ser Trp Tyr Gin Gin Lys Ser Gly Gin 165 170 175

Ala Pro lie Leu Leu Leu Tyr Gly Lys His Lys Arg Pro Ser Gly lie 180 185 190

Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Thr Ser Gly Asp Thr Ala Ser Leu Thr 195 200 205

He Thr Gly Ala Gin Ala Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Thr Thr 210 215 220

Arg Ser Asn Lys Gly Asn Pro His Val Leu Phe Gly Gly Gly Thr Gin 225 230 235 240

Leu Thr Val Leu <210> 163 <211> 6 <212> PRT <213>智人 <400> 163

Ser Gly Tyr Tyr Trp Gly 120 201000129 1 5 <210> 164 <211> 16 <212> PRT <213>智人 <400> 164

Ser He Ser His Thr Gly Asn Thr Tyr Tyr Asn Pro Pro Leu Lys Ser 15 10 15 <210> 165 <211> 9 <212> PRT <213>人造的 <220

<223> H3 重鏈 CDR3 <400> 165

Phe Met Gly Phe Gly Arg Pro Glu Tyr 1 5 <210> 166 <211> 9 <212> PRT <213>人造的 <220 <223> H4 重鏈 CDR3 <400> 166

Trp Leu Gly Phe Gly Arg Pro Glu Tyr 1 5 <210> 167 <211> 9 <212> PRT <213> 人造的 <220> <223> H5重鏈CDR3 <400> 167

Phe Leu Gly Phe Gly Arg Pro Glu Tyr 1 5 <210> 168 <211> 9 <212> PRT <213> 人造的 <220 <223> H6 重鏈 CDR3 <400> 168

Phe Phe Gly Phe Gly Arg Pro Glu Tyr 1 5 121 201000129 <210> 169 <211> 9 <212> PRT <213> 智人 <400> 169 Gly Gly Gly lie Ser Arg Pro Glu Tyr 1 5 <210 170 <211> 12 <212> PRT <213> 智人 <400> 170

Asn Ser Arg Asp Ser Ser Gly Asn Pro His Val Leu 1 5 10 <210 171 <211> 12 <212> PRT <213> 人造的 <220> <223> LI 輕鏈 CDR3 <400> 171

Ala Ser Arg Ser Val Ser Gly Asn Pro His Val Leu 1 5 10 <210> 172 <211> 12 <212> PRT <213> 人造的 <220> <223> L2 輕鏈 CDR3 <400> 172

Val Ala Arg Ser Val Val Gly Asn Pro His Val Leu 1 5 <210> 173 <211> 12 <212> PRT <213> 人造的 <220> <223> L3輕鍵CDR3 <400> 173

Val Ser Arg Ala Val 1 5

Val Gly Asn Pro His Val Leu 10 <210 174 <211> 12 <212> PRT CL3> 人造的 122 201000129 <220> <223〉L4 輕鏈 CDR3 <400 174

Ser Thr Arg Ser Ser Lys Gly Asn Pro His Val Leu 1 5 10 <210> 175 <211> 12 <212> PRT <213>人造的 <220> <223> LS 輕鏈 CDR3 <400 175

Ala Ser Arg Ser Ser Lys Gly Asn Pro His Val Leu 1 5 10

<210> 176 <211> 12 <212> PRT <213> 人造的 <220> <223> L6 輕鍵 CDR3 <400> 176

Met Ser Arg Ser lie Trp Gly Asn Pro His Val Leu 1 5 10 <210 177 <211> 12 <212> PRT <213>人造的 <220> <223> L8 輕鏈 CDR3 <400 177

Thr Thr Arg Ser Thr Gin Gly Asn Pro His Val Leu 1 5 10 <210> 178 <211> 12 <212> PRT <213>人造的 <220> <223> L9 輕鏈 CDR3 <400> 178

Val Ala Arg Ser Asn Lys Gly Asn Pro His Val Leu 1 5 10 <210> 179

<211> 12 <212> PRT 123 201000129 <213> 人造的 <220> <223=> L10 輕鏈 CDR3 <400> 179 lie Ser Arg Ser lie Tyr Gly Asn Pro His Val Leu 1 5 10 <210> 180 <211> 12 <212> PRT <213> 人造的 <220> <223> Lll 輕鍵 CDR3 <400> 180

Ser Ser Arg Ser Arg His Gly Asn Pro His Val Leu 1 5 10 <210> 181 <211> 12 <212〉 PRT <213> 人造的 <220> <223> L12 輕鏈 CDR3 <400> 181

Val Ala Arg Gly Thr Arg Gly Asn Pro His Val Leu 1 5 10 <210> 182 <211> 12 <212> PRT <213>人造的 <220> <223> L13 輕鍵 CDR3 <400 182

Val Thr Arg Asn Arg Tyr Gly Asn Pro His Val Leu 1 5 10 <210> 183 <211> 12 <212> PRT <213> 人造的 <220> <223> L14 輕鍵 CDR3 <400> 183

Met Ala Arg Ser Arg Lys Gly Asn Pro His Val Leu 1 5 10 <210> 184 <211> 12 124 201000129 <212> PRT <213>人造的 <220 <223> L15 輕鏈 CDR3 <400 184

Ser Thr Arg Ala lie His Gly Asn Pro His Val Leu 1 5 10 <210 185 <211> 12 <212> PRT <213>人造的- <220> <223> L16 輕鍵 CDR3 <400> 185

Val Thr Arg Ser Ala Lys Gly Asn Pro His Val Leu ⑩ 1 S 10 <210 186 <211> 12 <212> PRT <213>人造的 <220> <223> L17 輕鏈 CDR3 <400> 186

Ser Thr Arg Ser Arg Lys Gly Asn Pro His Val Leu 1 5 10 <210> 187 <2Π> 12 <212> PRT <213>人造的 <220>

<223> L18 輕鏈 CDR3 <400> 187

Val Thr Arg Ser Val Lys Gly Asn Pro His Val Leu 1 5 10 <210> 188 <211> 12 <212> PRT <213>人造的 <220> <223> L19 輕鏈 CDR3 <400> 188

Val Ala Arg Ala Val Arg Gly Asn Pro His Val Leu 1 5 10 <210> 189 125 201000129 <211> 12 <212> PRT <213> 人造的 <220> <223〉L20 輕鏈 CDR3 <400 189

Val Ser Arg Ser Ala Lys Gly Asn Pro His Val Leu 1 5 10 <210> 190 <211> 12 <212> PRT <213>人造的 <220> <223> L21 輕鍵 CDR3 <400> 190

Ala Thr Arg Ala Val Arg Gly Asn Pro His Val Leu 1 5 10 <210 191 <211> 12 <212> PRT <213：>人造的 <220 <223> L23 輕鍵 CDR3 <400 191

Ser Ala Arg Ser Val Arg Gly Asn Pro His Val Leu 1 5 10 <210> 192 <211> 12 <212> PRT <213>人造的 <220> <223> L24 輕鍵 CDR3 <400> 192 lie Ala Arg Ser Asn Lys Gly Asn Pro His Val Leu 1 5 10 <210 193 <211> 12 •<212> PRT <213>人造的 <220> <223> L25 輕鍵 CDR3 <400> 193

Thr Thr Arg Ser Asn Lys Gly Asn Pro His Val Leu 1 5 10 126 201000129 <210> 194 <211> 11 <212> PRT <213>智人 <400> 194

Gin Gly Asp Ser Leu Arg Thr Tyr Tyr Ala Ser <210> 195 <211> 7 <212> PRT <213>智人

<400>19S

Gly Lys His Lys Arg Pro Ser 1 5 ❹

<210 196 <211> 330 <212> PRT <213> 人造的 <220> <223>人類IgG守恆區TM <400> 196

Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Lou Ala Pro Ser Ser Lys 1 5 10 15

Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr 20 25 30

Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser 35 40 45

Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gin Ser Ser Gly Leu Tyr Ser 50 55 60

Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gin Thr 65 70 75 80

Tyr* lie Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys 85 90 95

Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys 100 105 110

Pro Ala Pro Glu Ala Ala Glv Ala Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro 115 120 125

Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met lie Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys 130 135 140

Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp 127 201000129 145 150 155 160

Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu 165 170 175

Glu Gin Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu 180 185 190

His Gin Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn 195 200 205

Lys Ala Leu Pro Ala Pro lie Glu Lys Thr lie Ser Lys Ala Lys Gly 210 215 220

Gin Pro Arg Glu Pro Gin Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu 225 230 235 240

Met Thr Lys Asn Gin Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr 245 250 255

Pro Ser Asp lie Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gin Pro Glu Asn 260 265 270

Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe 275 280 285

Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gin Gin Gly Asn 290 . 295 300

Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr 305 310 315 320

Gin Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys 325 330 o <210> 197 <211> 330 <212> PRT <213>人造的 <220> <223>人類IgG守恆區DM <400> 197

Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys 15 10 15

Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr 20 25 30

Phe Fro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser 35 40 45 128

Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gin Ser Ser Gly Leu Tyr Ser 50 55 60

Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gin Thr 65 70 75 80

Tyr He Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys 85 90 95

Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys 100 105 110

Pro Ala Pro Glu Ala Leu Gly Ala Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro 115 120 125

Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met lie Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys 130 135 140

Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp 145 150 155 160

Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu 165 170 175

Glu Gin Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu 180 185 190

His Gin Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn 195 200 205

Lys Ala Leu Pro Ala Pro lie Glu Lys Thr lie Ser Lys Ala Lys Gly 210 215 220

Gin Pro Arg Glu Pro Gin Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu 225 230 235 240

Met Thr Lys Asn Gin Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr 245 250 255

Pro Ser Asp He Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gin Pro Glu Asn 260 265 270

Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe 275 280 285

Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gin Gin Gly Asn 290 295 300

Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr 305 310 315 320

Gin Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys 129 201000129 325 330

<210 198 <211> 106 <212> PRT <213>智人 - <400 198

Gly Gin Pro Lys Ala Ala Pro Ser Val Thr Leu Phe Pro Pro Ser Ser 15 l〇 15

Glu Glu Leu Gin Ala Asn Lys Ala Thr Leu Val Cys Leu He Ser Asp 20 25 30

Phe Tyr Pro Gly Ala Val Thr Val Ala Trp Lys Ala Asp Ser Ser Pro 35 40 45

Val Lys Ala Gly Val Glu Thr Thr Thr Pro Ser Lys Gin Ser Asn Asn 50 55 60

Lys Tyr Ala Ala Ser Ser Tyr Leu Ser Leu Thr Pro Glu Gin Trp Lys 65 70 75 80

Ser His Arg Ser Tyr Ser Cys Gin Val Thr His Glu Gly Ser Thr Val 85 90 95 G1U Lvs Thr Val Ma Pro Thr Glu Cys Ser <210> 199 100 <212> DNA <213> 智人 60 100 <400> 199 gctctgtgac cgccgcagac acggccgtgt attactgtgc gcgaggtggg ggaattagca ggccggagta ctggggcaaa ggcaccctgg tcaccgtctc <210> 200 <211> 34 <212> PRT <213>智人 <400> 200

Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg Gly 15 10 15

Gly Gly He Ser Arg Pro Glu Tyr Trp Gly Lys Gly Thr Leu Val Thr 20 25 30

Val Ser <210> 201 130 201000129

<211> 60 <212> DNA <213> 人造的 <220> <223> Hffil VH存庫 <220> <221> <222> (11)7¾ <223> n 是 a、c、g，或 t <220> <221> <222> mis?_特徵 (22) .. (23) <223> n 是 a、c、g，或 t <220> <221> <222> (25) . . (26) <223> n 是 a、c、g，或 t <220> <221> <222> S)ct1S) <223> n 是 a、c ' g，或 t <220> <221> <222> #5?_特,徵、 (31)..(32) <223> n 是 a、c、g，或 1: <220> <221> <222> <223> n 是 a、c、g，或 t <400> 201 cacataatga cacgcgctnn snnsnnsnns <210 202 <211> 20 <212> PRT <213> 人造的 <220> <223> H3B1 VH存庫 <400> 202 60

Val Tyr Tyr Cys Ala Arg Gly Gly Gly lie Ser Arg Pro Glu Tyr Trp 15 10 15

Gly Lys Gly Thr 20 <210> 203 <211> 56 <212> DNA <213> 人造的 <220> <223> H3B2 VH存庫 131 201000129 <220> <221> <222> <223> <220> <221> <222> <223> <220> <221> <222> <223> <220 <221> misc 特樹 <222> (29)7^¾ <223> π 是 a、c、g，或 t <220 <221> misc <222> (32).7(33) <223> r»la、c、g，或t (¾)¾ π 是a、c、g，或t n 是a、c、g，或t 呢汊一特徵(26).7(¾ n 是a、c、g，或t <220> <221> <222> <223> (35) .. (36) n 是 a、c、g <400> 203 gacacgcgct ccaccccctn nsnnsnnsnn snnsnnsacc ccgtttccgi: gggacc 56 <210 204 <211> 18 <212> PRT <213> 人造的 <220 <223> H3B2 VH存庫 <400 204

Cys Ala Arg Gly Gly Gly He Ser Arg Pro Glu Tyr Trp Gly Lys Gly 15 10 15

Thr Leu <210> 205 <211> 85 <212> DNA <213> 夤人 <400 205 ggctgactat tactgtaact cccgggactc cagtggcaac ccccatgttc tgttcggcgg agggacccag ctcaccgttt taagt 60 <210> 206 <211> 28 <212> PRT <213> 智人 <400> 206 132 85 201000129

Ala Asp Tyr 1 Leu Phe Gly

Tyr Cys Asn Ser Arg Asp 5

Ser 10

Gly Gly Thr Gin Leu Thr 20 25

Val

Ser Gly Asn Pro His Val 15 Leu Ser <210> 207 <211> 55 <212> DNA <213>人造的 <220> <223> L3B1 VL 存庫 <220> <221> misc一特徵 <222> (17)T. (18) <223> n 是 a、c、g，或 t

<220 <22i> misc一特徵 <222> (20)7.(21) <223> n 是 a'c'g，或 t <220> <221> misc <222> (23)··(24) <223> n 是 a、c、g，或 t <220> <221> ijisf—特/ 徵、 <222> (26)·· (27) <223> n 是 a、c、g，或 t <220 <221> misi 特徵 <222> (29)7. (30) <223> n 是 a、c、g，或 t <220> <221> misc <222> (32)..(33) <223> n 是a、c、g，或 t 55 <400> 207 ccgactgata atgacannsn nsnnsnnsnn snnsccgttg ggggxscaag acaag <210 208 <211> 18 <212> PRT <213>人造的 <220> <223> L3B1 VL 存庫 <400> 208

Ala Asp Tyr Tyr Cys Asn Ser Arg Asp Ser Ser Gly Asn Pro His Val 15 10 15

Leu Phe 133 201000129 <210 209 <2Π> 59 <212> DNA <213> 人造的 <220> <223> L3B2 VL 存庫 <220 <221>喂气-特/徵、 <222> (23)..(24) <223> 11是3、（：、运，或t <220 <221> misc_^ 特徵 <222> (26) . · (27) <223> 11是3、〇、吕，或t <220 <221> i^isf 一轉徵 <222> (29)·, (30) <223> η 是 a、c、g，或 t <220> <221> 轉徵 <222=> (32).. (33) <223> n*a、c、g，或 t <220 <221> misc_ 特徵 <222> (35)7.(36) <223> η 是 a、c、g，或 ΐ <220 <221> miscj寺徵 <222> (38)7. (39) <223> η 是 a、c、g，或 t <400 209 59 gacattgagg gccctgaggt cannsnnsnn snnsnnsnns aagccgcctc cctgggtcg <210> 210 <211> 19 <212> PRT <213> 人造的 <220> <223> Lffi2 VL存庫 <400> 210

Cys Asn Ser Arg Asp Ser Ser Gly Asn Pro His Val Leu Phe Gly Gly 15 10 15

Gly Thr Gin <210 211 <211> 617 <212> DNA <213> 智人 <220 134 55 <221> CDS <222> (47)··(532) <400> 211 gctgaagtga aaacgagacc aaggtctagc tctactgttg gtactt atg aga tcc

Met Arg Ser agt cct ggc aac atg gag agg att gtc ate tgt ctg atg gtc ate ttc

Ser Pro Gly Asn Met Glu Arg He Val lie Cys Leu Ket Val lie Phe 5 10 15 ttS ggg aca ctg gtc cac aaa tea age tcc caa ggt caa gat ege cac

Leu Gly Thr Leu Val His Lys Ser Ser Ser Gin Gly Gin Asp Arg His 20 25 30 35 atg att aga atg cgt caa ett ata gat att gtt gat cag ctg aaa aat

Met lie Arg Met Arg Gin Leu lie Asp lie Val Asp Gin Leu Lys Asn 40 45 50 tat gtg aat gac ttg gtc cct gaa ttt ctg cca get cca gaa gat gta

Tyr Val Asn Asp Leu Val Pro Glu Phe Leu Pro Ala Pro Glu Asp Val 55 60 65 gag aca aac tgt gag tgg tea get ttt tcc tgc ttt cag aag gcc caa

Glu Thr Asn Cys Glu Trp Ser Ala Phe Ser Cys Phe Gin Lys Ala Gin 70 75 80 eta aag tea gca aat aca gga aac aat gaa agg ata ate aat gta tea

Leu Lys Ser Ala Asn Thr Gly Asn Asn Glu Arg lie lie Asn Val Ser 85 90 95 att aaa aag ctg aag agg aaa cca cct tcc aca aat gca ggg aga aga lie Lys Lys Leu Lys Arg Lys Pro Pro Ser Thr Asn Ala Gly Arg Arg 100 105 110 115 cag aaa cac aga eta aca tgc cct tea tgt gat tet tat gag aaa aaa

Gin Lys His Arg Leu Thr Cys Pro Ser Cys Asp Ser Tyr Glu Lys Lys 120 125 130 cca ccc aaa gaa ttc eta gaa aga ttc aaa tea ett etc caa aag atg

Pro Pro Lys Glu Phe Leu Glu Arg Phe Lys Ser Leu Leu Gin Lys Met 135 140 145 att cat cag cat ctg tcc tet aga aca cac gga agt gaa gat tcc lie His Gin His Leu Ser Ser Arg Thr His Gly Ser Glu Asp Ser 150 155 160 tgaggateta aettgeegtt ggacactatg ttacatactc taatartagta gtgaaagtca tttctttgta ttccaagtgg aggag <210 212 <211> 162 <212> PRT <213>智人 <400 212

Met Arg Ser Ser Pro Gly Asn Met Glu Arg lie Val lie Cys Leu Met 15 10 15

Val lie Phe Leu Gly Thr Leu Val His Lys Ser Ser Ser Gin Gly Gin 20 25 30

Asp Arg His Met lie Arg Met Arg Gin Leu lie Asp lie Val Asp Gin 103 151 199 247 295 343 391 439 487 532 592 617 135 201000129 35 40 45

Leu Lys Asn Tyr Val Asn Asp Leu Val Pro Glu Phe Leu Pro Ala Pro 50 55 60

Glu Asp Val Glu Thr Asn Cys Glu Trp Ser Ala Phe Ser Cys Phe Gin 65 70 75 80

Lys Ala Gin Leu Lys Ser Ala Asn Thr Gly Asn Asn Glu Arg He lie 85 90 95

Asn Val Ser lie Lys Lys Leu Lys Arg Lys Pro Pro Ser Thr Asn Ala 100 105 110

Gly Arg Arg Gin Lys His Arg Leu Thr Cys Pro Ser Cys Asp Ser Tyr 115 120 125

Glu Lys Lys Pro Pro Lys Glu Phe Leu Glu Arg Phe Lys Ser Leu Leu 130 135 140

Gin Lys Met lie His Gin His Leu Ser Ser Arg Thr His Gly Ser Glu 145 150 155 160

Asp Ser <210> 213 <211> 448 <212> PRT <213> 人造的 <220 <223> VH3DM 重鍵 <400 213

Gin Val Gin Leu Gin Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu 15 10 15

Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ala Val Ser Gly Tyr Ser lie Ser Ser Gly 20 25 30

Tyr Tyr Trp Gly Trp lie Arg Gin Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp 35 40 45

He Gly Ser lie Ser His Thr Gly Asn Thr Tyr Tyr Asn Pro Pro Leu 50 55 60

Lys Ser Arg Val Thr lie Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gin Phe Ser 65 70 75 80

Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 136

Ala Arg Phe Met Gly Phe Gly Arg Pro Glu Tyr Trp Gly Gin Gly Thr 100 105 110

Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro 115 120 125

Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly 130 135 140

Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn 145 150 155 160

Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gin 165 170 175

Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser 180 185 190

Ser Leu Gly Thr Gin Thr Tyr lie Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser 195 200 205

Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr 210 215 220

His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Leu Gly Ala Pro Ser 225 230 235 240

Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met lie Ser Arg 245 250 255

Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro 260 265 270

Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala 275 280 285

Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gin Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val 290 295 300

Ser Val Leu Thr Val Leu His Gin Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr 305 310 315 320

Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro lie Glu Lys Thr 325 330 335 lie Ser Lys Ala Lys Gly Gin Pro Arg Glu Pro Gin Val Tyr Thr Leu 340 345 350

Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gin Val Ser Leu Thr Cys 355 360 365

Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp lie Ala Val Glu Trp Glu Ser 137 201000129 370 375 380 Λβη Gly Gin Pro G1U Asn Asn Xvr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp

Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser 405 410 415

Arg Trp Gin Gin Gly Asn Va! Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala

Leu His Asn His Tyr Thr Gin Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys 435 440 445

<210> 214 <211> 215 <212> PRT <213>人造的 <220 <223> VL2 輕鍵 <400> 214

Ser Ser Glu Leu Thr Gin Asp Pro Ala Val Ser Val Ala Leu Gly Gin 15 10 15

Thr Val Arg He Thr Cys Gin Gly Asp Ser Leu Arg Thr Tyr Tyr Ala 20 25 30

Ser Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Gly Gin Ala Pro Val Leu Val He Tyr 35 40 45

Gly Lys His Lys Arg Pro Ser Gly lie Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser 50 55 60

Ser Ser Gly Asn Thr Ala Ser Leu Thr lie Thr Gly Ala Gin Ala Glu 65 70 75 80

Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Val Ala Arg Ser Val Val Gly Asn Pro 85 90 95

His Val Leu Phe Gly Gly Gly Thr Gin Leu Thr Val Leu Gly Gin Pro 100 105 no

Lys Ala Ala Pro Ser Val Thr Leu Phe Pro Pro Ser Ser Glu Glu Leu 115 120 125

Gin Ala Asn Lys Ala Thr Leu Val Cys Leu lie Ser Asp Phe Tyr Pro 130 135 140

Gly Ala Val Thr Val Ala Trp Lys Ala Asp Ser Ser Pro Val Lys Ala 145 150 155 160 138 201000129

Gly Val Glu Thr Thr Thr Pro Ser Lys Gin Ser Asn Asn Lys Tyr Ala 165 170 175

Ala Ser Ser Tyr Leu Ser Leu Thr Pro Glu Gin Trp Lys Ser His Arg 180 185 190

Ser Tyr Ser Cys Gin Val Thr His Glu Gly Ser Thr Val Glu Lys Thr 195 200 205

Val Ala Pro Thr Glu Cys Ser 210 215 <210> 215 <211> 109 <212> PRT <213> 人造的 <220>

<223> VL2輕鏈的可變異區 <400> 215

Ser Ser Glu Leu Thr Gin Asp Pro Ala Val Ser Val Ala Leu Gly Gin 1 5 10 15

Thr Val Arg Tie Thr Cys Gin Gly Asp Ser Leu Arg Thr Tyr Tyr Ala 20 25 30

Ser Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Gly Gin Ala Pro Val Leu Val lie Tyr 35 40 45

Gly Lys His Lys Arg Pro Ser Gly lie Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser 50 55 60

Ser Ser Gly Asn Thr Ala Ser Leu Thr lie Thr Gly Ala Gin Ala Glu 65 70 75 80

Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Val Ala Arg Ser Val Val Gly Asn Pro 85 90 95

His Val Leu Phe Gly Gly Gly Thr Gin Leu Thr Val Leu 100 105 <210> 216 <211> 215 <212> PRT <213> 人造的 <220 <223> VL18 輕鏈 <400> 216

Ser Ser Glu Leu Thr Gin Asp Pro Ala Val Ser Val Ala Leu Gly Gin 15 l〇 15

Thr Val Arg lie Thr Cys Gin Gly Asp Ser Leu Arg Thr Tyr Tyr Ala 139 201000129 20 25 30

Ser Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Gly Gin Ala Pro Val Leu Val lie Tyr 35 40 45

Gly Lys His Lys Arg Pro Ser Gly lie Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser 50 55 60

Ser Ser Gly Asn Thr Ala Ser Leu Thr lie Thr Gly Ala Gin Ala Glu 65 70 75 80

Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Val Thr Arg Ser Val Lys Gly Asn Pro 85 90 95

His Val Leu Phe Gly Gly Gly Thr Gin Leu Thr Val Leu Gly Gin Pro 100 105 110

Lys Ala Ala Pro Ser Val Thr Leu Phe Pro Pro Ser Ser Glu Glu Leu 115 120 125

Gin Ala Asn Lys Ala Thr Leu Val Cys Leu lie Ser Asp Phe Tyr Pro 130 135 140

Gly Ala Val Thr Val Ala Trp Lys Ala Asp Ser Ser Pro Val Lys Ala 145 150 155 160

Gly Val Glu Thr Thr Thr Pro Ser Lys Gin Ser Asn Asn Lys Tyr Ala 165 170 175

Ala Ser Ser Tyr Leu Ser Leu Thr Pro Glu Gin Trp Lys Ser His Arg 180 185 190

Ser Tyr Ser Cys Gin Val Thr His Glu Gly Ser Thr Val Glu Lys Thr 195 200 205

Val Ala Pro Thr Glu Cys Ser 210 215 <210> 217 <211> 109 <212> PRT <213>人造的 <220> <223> VL18輕鍵的可變異區 <400> 217

Ser Ser Glu Leu Thr Gin Asp Pro Ala Val Ser Val Ala Leu Gly Gin 15 10 15

Thr Val Arg He Thr Cys Gin Gly Asp Ser Leu Arg Thr Tyr Tyr Ala 20 25 30 140

Ser Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Gly Gin Ala Pro Val Leu Val lie Tyr 35 40 45

Gly Lys His Lys Arg Pro Ser Gly He Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser 50 55 60

Ser Ser Gly Asn Thr Ala Ser Leu Thr lie Thr Gly Ala Gin Ala Glu 65 70 75 80

Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Val Thr Arg Ser Val Lys Gly Asn Pro 85 90 95

His Val Leu Phe Gly Gly Gly Thr Gin Leu Thr Val Leu 100 105 <210 218 <211> 448 <212> PRT <213>人造的 <220> <223> VH3TM 重鏈 <400 218

Gin Val Gin Leu Gin Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu 15 10 15

Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ala Val Ser Gly Tyr Ser lie Ser Ser Gly 20 25 30

Lys Ser Arg Val Thr lie Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gin Phe Ser 65 70 75 80

Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95

Ala Arg Phe Met Gly Phe Gly Arg Pro Glu Tyr Trp Gly Gin Gly Thr 100 105 110

Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro 115 120 125

Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly 130 135 140

Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn 145 150 1S5 160 141 201000129

Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gin 165 170 175

Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser 180 185 190

Ser Leu Gly Thr Gin Thr Tyr lie Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser 195 200 205

Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr 210 215 220

His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Ala Pro Ser 225 230 235 240

Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met lie Ser Arg 245 250 255

Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro 260 265 270

Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala 275 280 285

Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gin Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val 290 295 300

Ser Val Leu Thr Val Leu His Gin Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr 305 310 315 320

Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gin Val Ser Leu Thr Cys 355 360 365

Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp lie Ala Val Glu Trp Glu Ser 370 375 380

Asn Gly Gin Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp 385 390 395 400

Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser 405 410 415

Arg Trp Gin Gin Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala 420 425 430 142

Leu His Asn His Tyr Thr Gin Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys 435 440 445 <210> 219 <211> 448 <212> PRT <213>人造的 <220> <223> VHPTM 重鏈 <400 219

Gin Val Gin Leu Gin Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu 15 10 15

Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ala Val Ser Gly Tyr Ser lie Ser Ser Gly 20 25 30

Tyr Tyr Trp Gly Trp He Arg Gin Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp 35 40 45 lie Gly Ser He Ser His Thr Gly Asn Thr Tyr Tyr Asn Pro Pro Leu 50 55 60

Lys Ser Arg Val Thr lie Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gin Phe Ser 65 70 75 80

Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95

Ala Arg Gly Gly Gly lie Ser Arg Pro Glu Tyr Trp Gly Gin Gly Thr 100 105 210

Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro 115 120 125

Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly 130 135 140

Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn 145 150 155 160

Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gin 165 170 175

Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser 180 185 190

Ser Leu Gly Thr Gin Thr Tyr lie Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser 195 200 205

Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr 210 215 220 143 201000129

His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Ala Pro Ser 225 230 235 240

Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met He Ser Arg 245 250 255

Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro 260 265 270

Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala 275 280 285

Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gin Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val 290 295 300

Ser Val Leu Thr Val Leu His Gin Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr 305 310 315 320

Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro He Glu Lys Thr 325 330 335 lie Ser Lys Ala Lys Gly Gin Pro Arg Glu Pro Gin Val Tyr Thr Leu 340 345 350

Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gin Val Ser Leu Thr Cys 355 360 365

Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp lie Ala Val Glu Trp Glu Ser 370 375 380

Asn Gly Gin Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp 385 390 395 400

Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser 405 410 415

Arg Trp Gin Gin Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala 420 425 430

Leu His Asn His Tyr Thr Gin Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys 435 440 445 <210> 220 <211> 215 <212> PRT <213>人造的 <220> <223> VL6 輕鏈 <400. 220

Ser Ser Glu Leu Thr Gin Asp Pro Ala Val.Ser Val Ala Leu Gly Gin 1 5 10 15 144

Thr Val Arg lie Thr Cys Gin Gly Asp Ser Leu Arg Thr Tyr Tyr Ala 20 25 30

Ser Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Gly Gin Ala Pro Val Leu Val lie Tyr 35 40 45

Gly Lys His Lys Arg Pro Ser Gly lie Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser 50 55 60

Ser Ser Gly Asn Thr Ala Ser Leu Thr lie Thr Gly Ala Gin Ala Glu 65 70 75 80

Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Met Ser Arg Ser lie Trp Gly Asn Pro 85 90 95

His Val Leu Phe Gly Gly Gly Thr Gin Leu Thr Val Leu Gly Gin Pro 100 105 110

Lys Ala Ala Pro Ser Val Thr Leu Phe Pro Pro Ser Ser Glu Glu Leu 115 120 125

Gin Ala Asn Lys Ala Thr Leu Val Cys Leu lie Ser Asp Phe Tyr Pro 130 135 140

Gly Ala Val Thr Val Ala Trp Lys Ala Asp Ser Ser Pro Val Lys Ala 145 150 155 160

Gly Val Glu Thr Thr Thr Pro Ser Lys Gin Ser Asn Asn Lys Tyr Ala 165 170 175

Ala Ser Ser Tyr Leu Ser Leu Thr Pro Glu Gin Trp Lys Ser His Arg 180 185 190

Ser Tyr Ser Cys Gin Val Thr His Glu Gly Ser Thr Val Glu Lys Thr 195 200 205

Val Ala Pro Thr Glu Cys Ser 210 215 <210 221 <211> 109 <212> PRT <213>人造的 <220> <223> VL6輕鏈的可變異區 <400> 221

Ser Ser Glu Leu Thr Gin Asp Pro Ala Val Ser Val Ala Leu Gly Gin 15 10 15

Thr Val Arg lie Thr Cys Gin Gly Asp Ser Leu Arg Thr Tyr Tyr Ala 145 201000129 20 25 30

Ser Tro Tyr Gin Gin Lys Pro Gly Gin Ala Pro Val Leu Val He Tyr 35 40 45

Gly Lys His Lys Arg Pro Ser Gly lie Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser 50 55 60

Ser Ser Gly Asn Thr Ala Ser Leu Thr He Thr Gly Ala Gin Ala Glu 6S 70 75 80

Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Met Ser Arg Ser He Trp Gly Asn Pro 85 90 95

His Val Leu Phe Gly Gly Gly Thr Gin Leu Thr Val Leu 100 105

<210 222 <211> 215 <212> PRT <213>人造的 <220> <223> VL9 輕鏈 <400> 222

Ser Ser Glu Leu Thr Gin Asp Pro Ala Val Ser Val Ala Leu Gly Gin 15 10 15

Thr Val Arg lie Thr Cys Gin Gly Asp Ser Leu Arg Thr Tyr Tyr Ala 20 25 30

Ser Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Gly Gin Ala Pro Val Leu Val He Tyr 35 40 45

Gly Lys His Lys Arg Pro Ser Gly lie Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser 50 55 60

Ser Ser Gly Asn Thr Ala Ser Leu Thr lie Thr Gly Ala Gin Ala Glu 65 70 75 80

Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Val Ala Arg Ser Asn Lys Gly Asn Pro 85 90 95

His Val Leu Phe Gly Gly Gly Thr Gin Leu Thr Val Leu Gly Gin Pro 100 105 110

Lys Ala Ala Pro Ser Val Thr Leu Phe Pro Pro Ser Ser Glu Glu Leu 115 120 125

Gin Ala Asn Lys Ala Thr Leu Val Cys Leu lie Ser Asp Phe Tyr Pro 130 135 140 146 201000129

Gly Ala Val Thr Val Ala Trp Lys Ala Asp Ser Ser Pro Val Lys Ala 145 150 155 160

Gly Val Glu Thr Thr Thr Pro Ser Lys Gin Ser Asn Asn Lys Tyr Ala 165 170 175

Ala Ser Ser Tyr Leu Ser Leu Thr Pro Glu Gin Trp Lys Ser His Arg 180 185 190

Ser Tyr Ser Cys Gin Val Thr His Glu Gly Ser Thr Val Glu Lys Thr 195 200 205

Val Ala Pro Thr Glu Cys Ser 210 215

❹ <210> 223 <211> 109 <212> PRT <213> 人造的 <220> <223> VL9輕鏈的可變異區 <400> 223

Ser Ser Glu Leu Thr Gin Asp Pro Ala Val Ser Val Ala Leu Gly Gin 1 S 10 15

Thr Val Arg lie Thr Cys Gin Gly Asp Ser Leu Arg Thr Tyr Tyr Ala 20 25 30

Ser Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Gly Gin Ala Pro Val Leu Val lie Tyr 35 40 45

Gly Lys His Lys Arg Pro Ser Gly lie Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser 50 55 60

Ser Ser Gly Asn Thr Ala Ser Leu Thr He Thr Gly Ala Gin Ala Glu 65 70 75 80

Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Val Ala Arg Ser Asn Lys Gly Asn Pro 85 90 95

His Val Leu Phe Gly Gly Gly Thr Gin Leu Thr Val Leu 100 105 <210> 224 <211> 215 <212> PRT <213> 人造的 <220> <223> VL16 輕鏈 <400> 224

Ser Ser Glu Leu Thr Gin Asp Pro Ala Val Ser Val Ala Leu Gly Gin 147 201000129 15 10 15

Thr Val Arg lie Thr Cys Gin Gly Asp Ser Leu Arg Thr Tyr Tyr Ala 20 25 30

Ser Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Gly Gin Ala Pro Val Leu Val lie Tyr 35 40 45

Gly Lys His Lys Arg Pro Ser Gly lie Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser 50 55 60

Ser Ser Gly Asn Thr Ala Ser Leu Thr lie Thr Gly Ala Gin Ala Glu 65 70 75 80

Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Val Thr Arg Ser Ala Lys Gly Asn Pro 85 90 95

His Val Leu Phe Gly Gly Gly Thr Gin Leu Thr Val Leu Gly Gin Pro 100 105 110

Lys Ala Ala Pro Ser Val Thr Leu Phe Pro Pro Ser Ser Glu Glu Leu 115 120 125

Gin Ala Asn Lys Ala Thr Leu Val Cys Leu lie Ser Asp Phe Tyr Pro 130 135 140 '

Gly Ala Val Thr Val Ala Trp Lys Ala Asp Ser Ser Pro Val Lys Ala 145 150 155 160

Gly Val Glu Thr Thr Thr Pro Ser Lys Gin Ser Asn Asn Lys Tyr Ala 165 170 175

Ala Ser Ser Tyr Leu Ser Leu Thr Pro Glu Gin Trp Lys Ser His Arg 180 185 190

Ser Tyr Ser Cys Gin Val Thr His Glu Gly Ser Thr Val Glu Lys Thr 195 200 205

Val Ala Pro Thr Glu Cys Ser 210 215 <210> 225 <211> 109 <212> PRT <213> 人造的 <220> <223> VL16輕鏈的可變異區 <400 225

Ser Ser Glu Leu Thr Gin Asp Pro Ala Val Ser Val Ala Leu Gly Gin 15 10 15 148

Thr Val Arg He Thr Cys Gin Gly Asp Ser Leu Arg Thr Tyr Tyr Ala 20 25 30

Ser Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Gly Gin Ala Pro Val Leu Val He Tyr 35 40 45

Gly Lys His Lys Arg Pro Ser Gly lie Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser 50 55 60

Ser Ser Gly Asn Thr Ala Ser Leu Thr lie Thr Gly Ala Gin Ala Glu 65 70 75 80

Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Val Thr Arg Ser Ala Lys Gly Asn Pro 85 90 95

His Val Leu Phe Gly Gly Gly Thr Gin Leu Thr Val Leu 100 105 <210> 226 <211> 215 <212> PRT <213> 人造的 <220 <223> VL20 輕鍵 <400> 226

Ser Ser Glu Leu Thr Gin Asp Pro Ala Val Ser Val Ala Leu Gly Gin 15 10 15

Thr Val Arg He Thr Cys Gin Gly Asp Ser Leu Arg Thr Tyr Tyr Ala 20 25 30

Ser Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Gly Gin Ala Pro Val Leu Val He Tyr 35 40 45

Gly Lys His Lys Arg Fro Ser Gly lie Fro Asp Arg Phe Ser Gly Ser 50 55 60

Ser Ser Gly Asn Thr Ala Ser Leu Thr lie Thr Gly Ala Gin Ala Glu 65 70 75 80

Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Val Ser Arg Ser Ala Lys Gly Asn Pro 85 90 95

His Val Leu Phe Gly Gly Gly Thr Gin Leu Thr Val Leu Gly Gin Pro 100 105 110

Lys Ala Ala Pro Ser Val Thr Leu Phe Pro Pro Ser Ser Glu Glu Leu 115 120 125

Gin Ala Asn Lys Ala Thr Leu Val Cys Leu He Ser Asp Phe Tyr Pro 130 135 140 149 201000129

Gly Ala Val Thr Val Ala Trp Lys Ala Asp Ser Ser Pro Val Lys Ala 145 150 155 160

Gly Val Glu Thr Thr Thr Pro Ser Lys Gin Ser Asn Asn Lys Tyr Ala 165 170 175

Ala Ser Ser Tyr Leu Ser Leu Thr Pro Glu Gin Trp Lys Ser His Arg 180 185 190

Ser Tyr Ser Cys Gin Val Thr His Glu Gly Ser Thr Val Glu Lys Thr 195 200 205

Val Ala Pro Thr Glu Cys Ser 210 215 <210> 227 <211> 109 <212> PRT <213> 人造的 <220 <223> VL20輕鏈的可變異區 <400> 227

Ser Ser Glu Leu Thr Gin Asp Pro Ala Val Ser Val Ala Leu Gly Gin 15 10 15

Thr Val Arg He Thr Cys Gin Gly Asp Ser Leu Arg Thr Tyr Tyr Ala 20 25 30

Ser Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Gly Gin Ala Pro Val Leu Val lie Tyr 35 40 45

Gly Lys His Lys Arg Pro Ser Gly lie Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser 50 55 60

Ser Ser Gly Asn Thr Ala Ser Leu Thr lie Thr Gly Ala Gin Ala Glu 65 70 75 80

Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Val Ser Arg Ser Ala Lys Gly Asn Pro 85 90 95

His Val Leu Phe Gly Gly Gly Thr Gin Leu Thr Val Leu 100 105 <210> 228 <211> 215 <212> PRT <213> 人造的 <220 <223> VL25 輕鍵 <400> 228 150 201000129

Ser Ser Glu Leu Thr Gin Asp Pro Ala Val Ser Val Ala Leu Gly Gin 15 10 15

Thr Val Arg lie Thr Cys Gin Gly Asp Ser Leu Arg Thr Tyr Tyr Ala 20 25 30

Ser Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Gly Gin Ala Pro Val Leu Val lie Tyr 35 40 45

Gly Lys His Lys Arg Pro Ser Gly lie Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser 50 55 60

Ser Ser Gly Asn Thr Ala Ser Leu Thr lie Thr Gly Ala Gin Ala Glu 65 70 75 80

Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Thr Thr Arg Ser Asn Lys Gly Asn Pro 85 90 95 ❻

His Val Leu Phe Gly Gly Gly Thr Gin Leu Thr Val Leu Gly Gin Pro 100 105 110

Lys Ala Ala Pro Ser Val Thr Leu Phe Pro Pro Ser Ser Glu Glu Leu 115 120 125

Gin Ala Asn Lys Ala Thr Leu Val Cys Leu lie Ser Asp Phe Tyr Pro 130 135 140

Gly Ala Val Thr Val Ala Trp Lys Ala Asp Ser Ser Pro Val Lys Ala 145 150 155 160

Gly Val Glu Thr Thr Thr Pro Ser Lys Gin Ser Asn Asn Lys Tyr Ala 165 170 175

Ala Ser Ser Tyr Leu Ser Leu Thr Pro Glu Gin Trp Lys Ser His Arg 180 185 190

Ser Tyr Ser Cys Gin Val Thr His Glu Gly Ser Thr Val Glu Lys Thr 195 200 205

Val Ala Fro Thr Glu Cys Ser 210 215 <210 229 <211> 109 <212> PRT <213> 人造的 <220> <223> VL25輕键的可變異區 <400 229

Ser Ser Glu Leu Thr Gin Asp Pro Ala Val Ser Val Ala Leu Gly Gin 15 10 15 151 201000129

Thr Val Arg lie Thr Cys <51n Gly Asp Ser Leu Arg Thr Tyr Tyr Ala 20 25 30

Ser Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Gly Gin Ala Pro Val Leu Val He Tyr 35 40 45

Gly Lys His Lys Arg Pro Ser Gly lie Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser 50 55 60

Ser Ser Gly Asn Thr Ala Ser Leu Thr lie Thr Gly Ala Gin Ala Glu 65 70 75 80

Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Thr Thr Arg Ser Asn Lys Gly Asn Pro S5 90 95

His Val Leu Phe Gly Gly Gly Thr Gin Leu Thr Val Leu 100 105 <210> 230 <2U> 34 <212> DNA <213> 人造的序列 <220> <223> 引子 BssHI <400> 230 gcttggcgcg cactctcagg tgcagctgca ggag 34 <210> 231 <211> 21 <212> DNA <213>人造的序列 <220> <223> BssHII 之引子 GVH_R <400> 231 21 tcagggagaa ctggttcttg g <210> 232 <211> 21 <212> DNA <213>人造的序列 <220> <223> Sal I 之引子 G_VH_F <400> 232 tccaagaacc agttctccct g <210> 233 <211> 45 <212> DNA <213>人造的序列 <220>

<223> 引子 scFv_SalI_VHJR 152 21 201000129 <400 233 gcgacgtcga caggactcac cactcgagac ggtgaccagg gtgcc 45 <210 234 <211> 32 <212> DNA <213>人造的序列 <220> <223> 引子 Sal_VH_R_RJ <400 234 32 34 gcgacgtcga caggactcac cactcgagac gg <210 235 <211> 34 <212> DNA <213> 人造的序列 <220>

<223> 引子 BssHII_II_VL_F <400> 235 gcttggcgcg cactcttcct ctgagctgac ccag

<210> 236 <211> 22 <212> DNA <213> 人造的序列 <220> <223> BssHII 之引子 scFv_VL_R <400> 236 gcctgagccc cagtgatggt ca <210> 237 <211> 20 <212> DNA <213> 人造的序列 <220> <223> Xbal之引子GVL_F <400 237 accgcctccc tgaccatcac <210> 238 <211> 50 <212> DNA <213> 人造的序列 <220> <223> 引子 scFv_XbaI_VL_R <400> 238 gcgccgtcta gagttattct actcacctaa aacggtgagc tgggtccctc 22 20 <210> 239 <211> 1401 <212> DNA <213>人造的 153 50 60 201000129 <220> <2羽> 具訊息序列之VHPTM重鏈 <400> 239 atgggatgga gctgtatcat cctcttcttg gtggcaacag ctacaggcgt gcactctcag gtgcagctgc aggagtctgg ccctggcctg gtgaagcctt ccgagaccct gtctctgacc tgtgccgtgt ccggctactc catctcctcc ggctactact ggggctggat cagacagcct cctggcaagg gcctggagtg gatcggctcc atctctcaca ccggcaacac ctactacaac ccccctctga agtccagagt gaccatctcc gtggacacct ccaagaacca gttctccctg aagctgtcct ctgtgaccgc tgccgatacc gccgtgtact actgtgccag aggcggcgga atctccagac ctgagtactg gggccagggc accctggtga ccgtgtcctc tgcctccacc aagggcccat cggtcttccc cctggcaccc tcctccaaga gcacctctgg gggcacagcg gccctgggct gcctggtcaa ggactacttc cccgaaccgg tgacggtgtc gtggaactca ggcgccctga ccagcggcgt gcacaccttc ccggctgtcc tacagtcctc aggactctac tccctcagca gcgtggtgac cgtgccctcc agcagcttgg gcacccagac ctacatctgc aacgtgaatc acaagcccag caacaccaag gtggacaaga aagttgagcc caaatcttgt gacaaaactc acacatgccc accgtgccca gcacctgaag ccgcgggggc accgtcagtc ttcctcttcc ccccaaaacc caaggacacc ctcatgatct cccggacccc tgaggtcaca tgcgtggtgg tggacgtgag ccacgaagac cctgaggtca agttcaactg gtacgtggac ggcgtggagg tgcataatgc caagacaaag ccgcgggagg agcagtacaa cagcacgtac cgtgtggtca gcgtcctcac cgtcctgcac caggactggc tgaatggcaa ggagtacaag tgcaaggtct ccaacaaagc cctcccagcc cccatcgaga aaaccatctc caaagccaaa ggtcagcccc gagaaccaca ggtgtacacc ctgcccccat cccgggagga gatgaccaag aaccaggtca gcctgacctg cctggtcaaa ggcttctatc ccagcgacat cgccgtggag tgggagagca atgggcagcc ggagaacaac tacaagacca cgcctcccgt gctggactcc gacggctcct tcttcctcta tagcaagctc accgtggaca agagcaggtg gcagcagggg aacgtcttct catgctccgt gatgcatgag gctctgcaca accactacac gcagaagagc ctctccctgt ccccgggtaa a <210> 240 <211> 467 <212> PRT <213> 人造的 <220 <223>具訊息序列之VHPTM重鏈-<400 240

Met Gly Trp Ser Cys lie lie Leu Phe Leu Val Ala Thr Ala Thr Gly 15 10 15

Val His Ser Gin Val Gin Leu Gin Glu 20 25

Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys 30 120 180 240 300 360 420 480 540 600 660 720 780 840 900 960 1020 1080 1140 1200 1260 1320 1380 1401

154 201000129

Pro Ser Glu Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ala Val Ser Gly Tyr Ser lie 35 40 4S

Ser Ser Gly Tyr Tyr Trp Gly Trp lie Arg Gin Pro Pro Gly Lys Gly 50 55 60

Leu Glu Trp lie Gly Ser lie Ser His Thr Gly Asn Thr Tyr Tyr Asn 65 70 75 80

Pro Pro Leu Lys Ser Arg Val Thr lie Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn 85 90 95

Gin Phe Ser Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val 100 105 110 o ❹

Tyr Tyr Cys Ala Arg Gly Gly Gly He Ser Arg Pro Glu Tyr Trp Gly 115 120 125

Gin Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser 130 135 140

Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala 145 150 155 160

Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val 165 170 175

Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala 180 185 190

Val Leu Gin Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val 195 200 205

Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gin Thr Tyr lie Cys Asn Val Asn His 210 215 . 220

Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys 225 230 235 240

Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly 245 250 255

Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val 290 295 300 155 201000129

His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gin Tyr Asn Ser Thr Tyr 305 310 315 320

Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gin Asp Trp Leu Asn Gly 325 330 335

Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro lie 340 345 350

Glu Lys Thr lie Ser Lys Ala Lys Gly Gin Pro Arg Glu Pro Gin Val 355 360 365

Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gin Val Ser 370 375 380

Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp lie Ala Val Glu 385 390 395 400

Trp Glu Ser Asn Gly Gin Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro 405 410 415

Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val 420 425 430

Asp Lys Ser Arg Trp Gin Gin Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met 435 440 445

His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gin Lys Ser Leu Ser Leu Ser 450 455 460

Pro Gly Lys 465

O <210> 241 <211> 1401 <212> DNA <213> 人造的 <220 <223>具訊息序列之VHSTM重鏈 <400> 241 atgggatgga gctgtatcat cctcttcttg gtggcaacag ctacaggcgt gcactctcag 60 gtgcagctgc aggagtctgg ccctggcctg gtgaagcctt ccgagaccct gtctctgacc 120 tgtgccgtgt ccggctactc catctcctcc ggctactact ggggctggat cagacagcct 180 cctggcaagg gcctggagtg gatcggctcc atctctcaca ccggcaacac ctactacaac 240 ccccctctga agtccagagt gaccatctcc gtggacacct ccaagaacca gttctccctg 300 aagctgtcct ctgtgaccgc tgccgatacc gccgtgtact actgtgccag attcatgggg 360 ttcggccgcc cggagtactg gggccagggc accctggtga ccgtgtcctc tgcctccacc 420 aagggcccat cggtcttccc cctggcaccc tcctccaaga gcacctctgg gggcacagcg 480 156 540 540

201000129 gccctgggct gcctggtcaa ggactacttc cccgaaccgg tgacggtgtc gtggaactca ggcgccctga ccagcggcgt gcacaccttc ccggctgtcc tacagtcctc aggactctac tccctcagca gcgtggtgac cgtgccctcc agcagcttgg gcacccagac ctacatctgc aacgtgaatc acaagcccag caacaccaag gtggacaaga aagttgagcc caaatcttgt gacaaaactc acacatgccc accgtgccca gcacctgaag ccgcgggggc accgtcagtc ttcctcttcc ccccaaaacc caaggacacc ctcatgatct cccggacccc tgaggtcaca tgcgtggtgg tggacgtgag ccacgaagac cctgaggtca agttcaactg gtacgtggac ggcgtggagg tgcataatgc caagacaaag ccgcgggagg agcagtacaa cagcacgtac cgtgtggtca gcgtcctcac cgtcctgcac caggactggc tgaatggcaa ggagtacaag tgcaaggtct ccaacaaagc cctcccagcc cccatcgaga aaaccatctc caaagccaaa ggtcagcccc gagaaccaca ggtgtacacc ctgcccccat cccgggagga gatgaccaag aaccaggtca gcctgacctg cctggtcaaa ggcttctatc ccagcgacat cgccgtggag tgggagagca atgggcagcc ggagaacaac tacaagacca cgcctcccgt gctggactcc gacggctcct tcttcctcta tagcaagctc accgtggaca agagcaggtg gcagcagggg aacgtcttct catgctccgt gatgcatgag gctctgcaca accactacac gcagaagagc ctctccctgt ccccgggtaa a <210 242 <211> 467 <212> PRT <213> 人造的 <220> <223>具訊息序列之VTOTM重鏈 <400> 242

Met Gly Trp Ser Cys lie lie Leu Phe Leu Val Ala Thr Ala Thr Gly 15 10 15

Val His Ser Gin Val Gin Leu Gin Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys 20 25 30

Pro Ser Glu Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ala Val Ser Gly Tyr Ser lie 35 40 45

Ser Ser Gly Tyr Tyr Trp Gly Trp He Arg Gin Pro Pro Gly Lys Gly 50 55 60

Leu Glu Trp lie Gly Ser lie Ser His Thr Gly Asn Thr Tyr Tyr Asn 65 70 75 80

Fro Pro Leu Lys Ser Arg Val Thr lie Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn 85 90 95

Gin Phe Ser Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val 600 660 720 780 840 900 960 1020 1080 1140 1200 1260 1320 1380 1401 157 201000129 100 105 110

Tyr Tyr Cys Ala Arg Phe Met Gly Phe Gly Arg Pro Glu Tyr Trp Gly 115 120 125

Gin Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser 130 135 140

Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala 145 150 155 160

Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val 165 170 175

Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala 180 185 190

Val Leu Gin Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val 195 200 205

Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gin Thr Tyr lie Cys Asn Val Asn His 210 215 220

Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys 225 230 235 240

Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly 245 250 255

Ala Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met 260 265 270 lie Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His 275 280 285 ❹

Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val 290 295 300

His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gin Tyr Asn Ser Thr Tyr 305 310 315 320

Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gin Asp Trp Leu Asn Gly 325 330 335

Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro lie 340 345 350

Glu Lys Thr lie Ser Lys Ala Lys Gly Gin Pro Arg Glu Pro Gin Val 355 360 365

Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gin Val Ser 370 375 380 158 201000129

Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp lie Ala Val Glu 385 390 395 400

Trp Glu Ser Asn Gly Gin Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro 405 410 415

Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val 420 425 430

Asp Lys Ser Arg Trp Gin Gin Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met 435 440 445

His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gin Lys Ser Leu Ser Leu Ser 450 455 460

❹

Pro Gly Lys 465 <210> 243 <211> 703 <212> DNA <213>人造的 <220> <223>具訊息序列之VL2輕鏈 <400 243 atgggatgga gctgtatcat cctcttcttg gtggcaacag ctacaggcgt gcactcttcc 60 tctgagctga cccaggatcc tgctgtgtct gtggccctgg gccagaccgt caggatcacc 120 tgccagggcg atagcctgag aacctactac gcctcctggt atcagcagaa gcctggacag 180 gcccctgtgc tggtgatcta cggcaagcac aagaggccat ccggcatccc tgacagattc 240 tccggctcct cctctggcaa taccgcctcc ctgaccatca ctggggctca ggcggaagac 300 gaggctgact attactgtgt cgcccggtcg gtggtgggca acccccatgt tctgttcggc 360 ggagggaccc agctcaccgt tttaggtcag cccaaggctg ccccctcggt cactctgttc 420 ccgccctcct ctgaggagct tcaagccaac aaggccacac tggtgtgtct cataagtgac 480 ttctacccgg gagccgtgac agtggcctgg aaggcagata gcagccccgt caaggcggga 540 gtggagacca ccacaccctc caaacaaagc aacaacaagt acgcggccag cagctatctg 600 agcctgacgc ctgagcagtg gaagtcccac agaagctaca gctgccaggt cacgcatgaa 660 gggagcaccg tggagaagac agtggcccct acagaatgtt cat 703 <210> 244 <211> 234 <212> PRT <213>人造的 <220 <223>具訊息序列之VL2輕鏈 <400> 244 159 201000129

Met Gly Trp Ser Cys lie lie Leu Phe Leu Val Ala Thr Ala Thr Gly 15 10 15

Val His Ser Ser Ser Glu Leu Thr Gin Asp Pro Ala Val Ser Val Ala 20 25 30

Leu Gly Gin Thr Val Arg lie Thr Cys Gin Gly Asp Ser Leu Arg Thr 35 40 45

Tyr Tyr Ala Ser Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Gly Gin Ala Pro Val Leu 50 55 60

Val He Tyr Gly Lys His Lys Arg Pro Ser Gly He Pro Asp Arg Phe 65 70 75 80

Ser Gly Ser Ser Ser Gly Asn Thr Ala Ser Leu Thr lie Thr Gly Ala 85 90 95

Gin Ala Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Val Ala Arg Ser Val Val 100 105 110

Gly Asn Pro His Val Leu Phe Gly Gly Gly Thr Gin Leu Thr Val Leu 115 120 125

Gly Gin Pro Lys Ala Ala Pro Ser Val Thr Leu Phe Pro Pro Ser Ser 130 135 140

Glu Glu Leu Gin Ala Asn Lys Ala Thr Leu Val Cys Leu lie Ser Asp 145 150 155 160

Phe Tyr Pro Gly Ala Val Thr Val Ala Trp Lys Ala Asp Ser Ser Pro 165 170 175

Val Lys Ala Gly Val Glu Thr Thr Thr Pro Ser Lys Gin Ser Asn Asn 180 185 190

Lys Tyr Ala Ala Ser Ser Tyr Leu Ser Leu Thr Pro Glu Gin Trp Lys 195 200 205

Ser His Arg Ser Tyr Ser Cys Gin Val Thr His Glu Gly Ser Thr Val 210 215 220

Glu Lys Thr Val Ala Pro Thr Glu Cys Ser 225 230 <210 245 <211> 703 <212> DNA <213>人造的 <220> <223>具訊息序列之VL18輕鏈 160 201000129 <400> 245 atgggatgga gctgtatcat cctcttcttg gtggcaacag ctacaggcgt gcactcttcc 60 tctgagctga cccaggatcc tgctgtgtct gtggccctgg gccagaccgt caggatcacc 120 tgccagggcg atagcctgag aacctactac gcctcctggt atcagcagaa gcctggacag 180 gcccctgtgc tggtgatcta cggcaagcac aagaggccat ccggcatccc tgacagattc 240 tccggctcct cctctggcaa taccgcctcc ctgaccatca ctggggctca ggcggaagac 300 gaggctgact attactgtgt cacgaggagc gtgaagggca acccccatgt tctgttcggc 360 ggagggaccc agctcaccgt tttaggtcag cccaaggctg ccccctcggt cactctgttc 420 ccgccctcct ctgaggagct tcaagccaac aaggccacac tggtgtgtct cataagtgac 480 ttctacccgg gagccgtgac agtggcctgg aaggcagata gcagccccgt caaggcggga 540 gtggagacca ccacaccctc caaacaaagc aacaacaagt acgcggccag cagctatctg 600 agcctgacgc ctgagcagtg gaagtcccac agaagctaca gctgccaggt cacgcatgaa 660 Ο ❹ gggagcaccg tggagaagac agtggcccct acagaatgtt cat 703 <210> 246 <211> 234 <212> PRT <213> 人造的 <220> <223>具訊息序列之VL1S輕鏈 <400> 246

Met Gly Trp Ser Cys lie lie Leu Phe Leu Val Ala Thr Ala Thr Gly 15 10 15

Val His Ser Ser Ser Glu Leu Thr Gin Asp Pro Ala Val Ser Val Ala 20 25 30

Leu Gly Gin Thr Val Arg lie Thr Cys Gin Gly Asp Ser Leu Arg Thr 35 40 45

Tyr Tyr Ala Ser Trp Xyr Gin Gin Lys Pro. Gly Gin Ala Pro Val Leu 50 55 60

Val lie Tyr Gly Lys His Lys Arg Pro Ser Gly He Pro Asp Arg Phe 65 70 75 80

Ser Gly Ser Ser Ser Gly Asn Thr Ala Ser Leu Thr lie Thr Gly Ala 85 90 95

Gin Ala Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Val Thr Arg Ser Val Lys 100 105 HO

Gly Asn Pro His Val Leu Phe Gly Gly Gly Thr Gin Leu Thr Val Leu 115 120 125

Gly Gin Pro Lys Ala Ala Pro Ser Val Thr Leu Phe Pro Pro Ser Ser 161 201000129 130 135 140

Glu Glu Leu Gin Ala Asn Lys Ala Thr Leu Val Cys Leu lie Ser Asp 145 150 155 160

Phe Tyr Pro Gly Ala Val Thr Val Ala Trp Lys Ala Asp Ser Ser Pro 165 170 175

Val Lys Ala Gly Val Glu Thr Thr Thr Pro Ser Lys Gin Ser Asn Asn 180 185 190

Lys Tyr Ala Ala Ser Ser Tyr Leu Ser Leu Thr Pro Glu Gin Trp Lys 195 200 205

Ser His Arg Ser Tyr Ser Cys Gin Val Thr His Glu Gly Ser Thr Val 210 215 220

Glu Lys Thr Val Ala Pro Thr Glu Cys Ser 225 230 <210 247 <211> 703 <212> DNA <213> 人造的 <220 <223>具訊息序列之VL25輕鏈 <400> 247

O atgggatgga gctgtatcat cctcttcttg gtggcaacag ctacaggcgt gcactcttcc 60 tctgagctga cccaggatcc tgctgtgtct gtggccctgg gccagaccgt caggatcacc 120 tgccagggcg atagcctgag aacctactac gcctcctggt atcagcagaa gcctggacag 180 gcccctgtgc tggtgatcta cggcaagcac aagaggccat ccggcatccc tgacagattc 240 tccggctcct cctctggcaa taccgcctcc ctgaccatca ctggggctca ggcggaagac 300 gaggctgact attactgtac gacgcggagc aacaagggca acccccatgt tctgttcggc 360 ggagggaccc agctcaccgt tttaggtcag cccaaggctg ccccctcggt cactctgttc 420 ccgccctcct ctgaggagct tcaagccaac aaggccacac tggtgtgtct cataagtgac 480 ttctacccgg gagccgtgac agtggcctgg aaggcagata gcagccccgt caaggcggga 540 gtggagacca ccacaccctc caaacaaagc aacaacaagt acgcggccag cagctatctg 600 agcctgacgc ctgagcagtg gaagtcccac agaagctaca gctgccaggt cacgcatgaa 660 gggagcaccg tggagaagac agtggcccct acagaatgtt cat 703 <210> 248 <211> 234 <212> PRT <213>人造的 <220> <223>具訊息序列之VL25輕鍵 162 201000129 <400> 248

Met Gly Trp Ser Cys lie lie Leu Phe Leu Val Ala Thr Ala Thr Gly 15 10 15

Val His Ser Ser Ser Glu Leu Thr Gin Asp Pro Ala Val Ser Val Ala 20 25 30

Leu Gly Gin Thr Val Arg He Thr Cys Gin Gly Asp Ser Leu Arg Thr 35 40 45

Tyr Tyr Ala Ser Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Gly Gin Ala Pro Val Leu 50 55 60

Val lie Tyr Gly Lys His Lys Arg Pro Ser Gly lie Pro Asp Arg Phe 65 70 75 80 Ο

Ser Gly Ser Ser Ser Gly Asn Thr Ala Ser Leu Thr lie Thr Gly Ala 85 90 95

Gin Ala Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Thr Thr Arg Ser Asn Lys 100 105 110

Gly Asn Pro His Val Leu Phe Gly Gly Gly Thr Gin Leu Thr Val Leu 115 120 125

Gly Gin Pro Lys Ala Ala Pro Ser Val Thr Leu Phe Pro Pro Ser Ser 130 135 140

Glu Glu Leu Gin Ala Asn Lys Ala Thr Leu Val Cys Leu lie Ser Asp 145 150 155 160

Phe Tyr Pro Gly Ala Val Thr Val Ala Trp Lys Ala Asp Ser Ser Pro 165 170 175

Val Lys Ala Gly Val Glu Thr Thr Thr Pro Ser Lys Gin Ser Asn Asn 180 185 190

Lys Tyr Ala Ala Ser Ser Tyr Leu Ser Leu Thr Pro Glu Gin Trp Lys 195 200 205

Ser His Arg Ser Tyr Ser Cys Gin Val Thr His Glu Gly Ser Thr Val 210 215 220

Glu Lys Thr Val Ala Pro Thr Glu Cys Ser 225 230 163

Claims

201000129 七、申請專利範圍： 1. 一種結合IL-21R之經單離的結合蛋白質或其抗原結合片段，其中該結合蛋白質或其抗原結合片段包含至少一個胺基酸序列，該胺基酸序列係與一選自於以下所構成的群組之胺基酸序列有至少大約95%同一性的：序列辨識編號：14、16、18、20、22、24、26、28、30、32、 34 ' 36、38、40、42、44、46、48、50 ' 52、54、56、 58、60、62、64、66、68、70、72、74、76、78、80、 ❿ 82、84、86、88、90、92、94、96、98、100、102、104、 106、108、110、112、114、116、118、120、122、124、 126、128、130、132、134、136、138、140、142、144、 146、148、150、152、154、156、158、160、162、165-168、 171-193、213-229、240、242、244、246，以及 248。 2. 如申請專利範圍第1項之經單離的結合蛋白質或抗原結合片段，其中該結合蛋白質或抗原結合片段係一抗體。 3. 如申請專利範圍第1項之經單離的結合蛋白質或抗原結合片段，其中該結合蛋白質或抗原結合片段係一 scFv。 4. 如申請專利範圍第1項之經單離的結合蛋白質或抗原結合片段，其中該結合蛋白質或抗原結合片段係一 VH。 5. 如申請專利範圍第1項之經單離的結合蛋白質或抗原結合片段，其中該結合蛋白質或抗原結合片段係一 VL。 6. 如申請專利範圍第1項之經單離的結合蛋白質或抗原結合片段，其中該結合蛋白質或抗原結合片段係一 CDR。 1 201000129 7. —種結合IL-21R之經單離的結合蛋白質或其抗原結合片段，其中該結合蛋白質或其等之抗原結合片段包含至少一個胺基酸序列，該胺基酸序列係由與選自於以下所構成的群組之核苷酸序列有至少大約9 5 %同一性的核苷酸序列所編碼：序列辨識編號：13、15、17、19、21、 23、25、27、29、31、33、35、37、39、41 ' 43、45、 47 、 49 、 51 、 53 、 55 、 57 、 59 、 61 、 63 、 65 、 67 、 69 、 71、73 ' 75、77、79、81 ' 83、85、87、89、91、93、 95、97、99、101、103、105、107、109、111、113、115、 117、119、m、123、125、127、129、13卜 133、135、 137、139、141、143、145、147、149、15 卜 153、155、 157、159、161、239、241、243、245，以及 247。 8. 如申請專利範圍第7項之經單離的結合蛋白質或抗原結合片段，其中該結合蛋白質或抗原結合片段係一抗體。 9. 如申請專利範圍第7項之經單離的結合蛋白質或抗原結合片段’其中該結合蛋白質或抗原結合片段係一 scFv。 10_如申請專利範圍第7項之經單離的結合蛋白質或抗原結合片段’其中該結合蛋白質或抗原結合片段係一 VH。 11.如申請專利範圍第7項之經單離的結合蛋白質或抗原結合片段’其中該結合蛋白質或抗原結合片段係一 VL。 12·如申請專利範圍第7項之經單離的結合蛋白質或抗原結合片段’其中該結合蛋白質或抗原結合片段係一 CDR。 13.如申請專利範圍第1項之結合蛋白質或抗原結合片段，其包含選自於以下所構成的群組之至少一個胺基酸序 201000129 列：序列辨識編號：14、16、18、20、22、24、26、28、 30、32、34、36、38、40、42、44、46、48、50、52、 54、56、58、60 ' 62 ' 64、66、68、70 ' 72、74 ' 76、 78、80、82、84、86、88、90、92、94、96、98、100、 102、104、106、108、110、112、114、116、118、120、 122、124、126、128、130、132、134、136、138、140、 142、144、146、148、150、152、154、156、158、160、 162、165-168、171-193、213-229、240、242、244、246，以及248。 14. 如申請專利範圍第13項之經單離的結合蛋白質或抗原結合片段，其中該結合蛋白質或抗原結合片段係一抗體。 15. 如申請專利範圍第13項之經單離的結合蛋白質或抗原結合片段，其中該結合蛋白質或抗原結合片段係一 scFv。 16. 如申請專利範圍第13項之經單離的結合蛋白質或抗原結合片段，其中該結合蛋白質或抗原結合片段係一 VH。 17. 如申請專利範圍第13項之經單離的結合蛋白質或抗原結合片段，其中該結合蛋白質或抗原結合片段係一。 18. 如申請專利範圍第13項之經單離的結合蛋白質或抗原結合片段，其中該結合蛋白質或抗原結合片段係一 CDR。 19. 一種結合IL-21R之經單離的結合蛋白質或其抗原結合片段，其中該結合蛋白質或其抗原結合片段包含至少一個胺基酸序列，該胺基酸序列係與一選自於以下所構成的群組之胺基酸序列有至少大約95%同一性的：序列辨 3 識編號：6、8、10、12、14、16、18、20、22、24、26、 28 、 30 、 32 、 34 、 36 、 38 、 40 、 42 、 44 、 46 、 48 、 50 、 52 、 54 、 56 ' 58 、 60 、 62 、 64 ' 66 、 68 、 70 ' 72 、 74 、 76、78、80、82、84、86、88、90、92、94、96、98、 100、102、104、106、108、110、112、114、116、118、 120、122、124、126、128、130、132、134、136、138、 140、142、144、146、148、150、152、154、156、158、 160、162-195、213-229、240、242、244、246，和 248，以及其中，設若該結合蛋白質或抗原結合片段包含至少一個胺基酸序列，該胺基酸序列係與一選自於以下所構成的群組之序列有至少大約95%同一性的：序列辨識編號：6、8、10、12、163、164、169、170、194，和 195，那麼該結合蛋白質或抗原結合片段也必須包含至少一個胺基酸序列，該胺基酸序列係與一選自於以下所構成的群組之胺基酸序列有至少大約95%同一性的：序列辨識編號：14、16、18、20、22、24、26、28、30、32、34、 36、38、40、42、44、46、48、50、52、54、56、58、 60、62、64、66、68、70、72、74、76、78、80、82 ' 84、86、88、90、92、94、96、98、100、102、104、106、 108、110、112、114、116、118、120、122、124、126、 128、130、132、134、136、138、140、142、144、146、 148、150、152、154、156、158、160、162、165-168、 171-193、213-229、240、242、244、246，以及 248。 201000129 20· ~種結合IL-21R之經單離的結合蛋白質或其抗原結合片段，其中該結合蛋白質或其抗原結合片段包含至少一個胺基酸序列，該胺基酸序列係由與選自於以下所構成的鮮組之核苷酸序列有至少大約95%同一性的核苷酸序列所編碼：序列辨識編號：5、7、9、11、13、15、17、 19、21、23、25、27、29、31、33、35、37、39、41、 43、45、47、49、51、53、55、57、59、61、63、65、 67、69、71、73 ' 75、77 ' 79、81、83、85、87、89、 91、93、95、97、99、101、103、105、107、109、111、 113、115、117、119、m、123、125、127、129、131、 133、135、137、139、141、143、145、147、149、151、 153、155、157、159、161、239、241、243、245，和 247，以及其中，設若該結合蛋白質或抗原結合片段包含至少一個胺基酸序列，該胺基酸序列係由與選自於以下所構成的群組之序列有至少大約95%同一性的核苷酸序列所編碼：序列辨識編號：5、7、9，和11，那麼該結合蛋白質或抗原結合片段也必須包含至少一個胺基酸序列，該胺基酸序列係由與選自於以下所構成的群組之核苷酸序列有至少大約95%同一性的核苷酸序列所編碼：序列辨識編號：13、15、17、19、2卜 23、25、27、29、31、 33、35、37、39、41、43、45、47、49、51、53、55、 57、59、61、63、65 ' 67、69 ' 71 ' 73 ' 75、77、79 ' 8卜 83、85、87、89、9卜 93、95、97、99、1(Π、103、 201000129 105、107、109、111、113、115、117、119、121、123、 125、127、129、131、133、135、137、139、141、143、 145、147、149、151、153、155、157、159、161、239、 241、243、245，和 247。 21.如申請專利範圍第19項之結合蛋白質或抗原結合片段’其包含選自於以下所構成的群組之至少一個胺基酸序列：序列辨識編號：6、8、10 ' 12、14、16、18、20、 22、24、26、28、30、32、34、36、38、40、42、44、 46、48、50、52、54、56 ' 58、60、62、64、66、68、 ® 70、72、74、76、78、80、82、84、86、88、90、92、 94、96、98、100、102、104、106、108、110、112、114、 116、118、120、122、124、126、128 ' 130、132、134、 ^ 136、138、140、142、144、146、148、150、152、154、 * 156、158、160、162-195、213-229、240、242、244、 246，以及 248，其中，設若該結合蛋白質或抗原結合片段包含至少一個胺基酸序列，該胺基酸序列係與一選自於以下所構成的群組之序列有至少大約95%同一性的：序列辨識編號：6、8、1〇、12、163、164、169、170、194，和 195，那麼該結合蛋白質或抗原結合片段也必須包含至少一個胺基酸序列，該胺基酸序列係與一選自於以下所構成的群組之胺基酸序列有至少大約95%同一性的：序列辨識編號：14、16、18、20、22、24、26、28、30、32、34、 36、38、40、42、44、46、48、50、52 ' 54、56、58、 6 201000129 60、62、64、66、68 ' 70 ' 72、74 ' 76、78、80 ' 82 ' 84、86、88、90、92、94、96、98、100、102、104、106、 108、110、112、114、116、118、120、122、124、126、 128、130、132、134、136、138、140、142、144、146、 148、150、152、154、156、158、160、162、165-168、 171-193、213-229、240、242、244、246，以及 248。 22. —種結合IL-21R之經單離的結合蛋白質或其抗原結合片段，其中該結合蛋白質或其抗原結合片段包含一輕鏈與一重鏈，以及其中該重鏈包含選自於以下所構成的群組之至少一個胺基酸序列：序列辨識編號：14、16、18、 20、68、70、72、88、90、92、94、213、218、219、240 , 以及242。 23. —種結合IL-21R之經單離的結合蛋白質或其抗原結合片段’其中該結合蛋白質或其抗原結合片段包含一輕鏈與一重鏈，以及其中該輕鏈包含選自於以下所構成的群組之至少一個胺基酸序列：序列辨識編號：22、24、26、 28、30、32、34、36、38 ' 40 ' 42、44、46、48、50、 52、54、56、58、60 ' 62 ' 64 ' 66、74 ' 76、78、80、 82、84、86、96、98、100、102、104、106、108、214-217、 220-229、244、246，以及 248。 24. 如申請專利範圍第22項之結合蛋白質或抗原結合片段，其中該結合蛋白質或抗原結合片段包含一域與一 VH領域，以及其中該VH領域係包含選自於以下所構 7 201000129 成的群組之至少一個胺基酸序列：序列辨識編號：14、 16、18，以及 20。 25. 如申請專利範圍第23項之結合蛋白質或抗原結合片段，其中該結合蛋白質或抗原結合片段包含一 VL領域與一 VH領域，以及其中該VL領域係包含選自於以下所構成的群組之至少一個胺基酸序列：序列辨識編號：22、 24、26、28、30、32 ' 34、36、38、40、42 ' 44、46、 48、50、52、54、56、58、60、62、64、66、215、217、 221、223、225、227，以及 229。 26. 如申請專利範圍第22或23項之結合蛋白質或抗原結合片段，其中該重鏈包含一選自於以下所構成的群組之胺基酸序列：序列辨識編號：88、90、92、94、213、218、 219、240，和242，以及該輕鏈包含一選自於以下所構成的群組之胺基酸序列：序列辨識編號：96、98、100、 102、104、106、108、214、216、220、222 ' 224、226、 228、244、246，以及 248。 27. —種經單離的結合蛋白質或其抗原結合片段，其係結合可由一選自於以下所構成的群組之結合蛋白質所辨識之 IL-21R 抗原決定位：AbA-AbW、H3-H6、L1-L6、L8-L21，和L23-L25，其中該結合蛋白質或抗原結合片段競爭地抑制一選自於以下所構成的群組之結合蛋白質之結合至人類 IL-21R : AbA-AbW、H3-H6、L1-L6、L8-L2卜和 L23-L25 。 201000129 28_如申請專利範圍第27項之結合蛋白質或抗原結合片段，其包含含有一選自於以下所構成的群組之胺基酸序列的一重鏈、一輕鏈，或是一 Fv片段：序列辨識編號： 14、16、18、20、22、24、26、28、30、32、34、36、 38、40、42、44、46、48、50、52、54、56、58、60、 62、64、66、68、70、72、74、76、78、80、82、84、 86、88、90、92、94、96、98、1〇〇、1〇2、1〇4、106、 108、110、112、114、116、118、120、122、124、126、 ® 128、130、132、134、136、138、140、142、144、146、 148、150 ' 152、154、156、158、160、162、165-168、 171-193、213-229、240、242、244、246，以及 248。 29.如申請專利範圍第27項之結合蛋白質或抗原結合片段，其包含含有一胺基酸序列之一重鍵、一輕鍵，或是一 Fv片段，該胺基酸序列係由一選自於以下所構成的群組之核苷酸序列所編碼：序列辨識編號：13、15、17、 19、21、23、25、27、29、31、33、35 ' 37、39、41、 — 43、45、47、49、51、53、55、57、59、61、63、65、 67、69、71、73、75 ' 77、79、81、83、85、87、89、 9卜 93、95、97、99、ΗΠ、103、105、107、109、111、 113、115、117、119、m、123、125、127、129、131、 133、135、137、139、14卜 143、145、147、149、151、 153、155、157、159、161、239、241、243、245，以及 247 ° 9 201000129 30. 如申請專利範圍第1、2、19，或20項中任一項之結合蛋白質或抗原結合片段，其中該結合蛋白質或抗原結合片段針對人類IL-21R的結合常數是至少大約。 31. 如申請專利範圍第1、2、19，或20項中任一項之結合蛋白質或抗原結合片段，其中該結合蛋白質或抗原結合片段係在大約1.75 ηΜ或較低之IC5Q下抑制IL-21-媒介的BaF3細胞之增殖_，以及其中該等BaF3細胞包含一人類 IL-21R。 32. 如申請專利範圍第1、2、19，或20項中任一項之結合蛋白質或抗原結合片段，其中該結合蛋白質或抗原結合片段係在大約14.0 nM或較低之IC5〇下抑制IL-21-媒介的TF1細胞之增殖，以及其中該等TF1細胞包含一人類 IL-21R。 33. 如申請專利範圍第1、2、19，或20項中任一項之結合蛋白質或抗原結合片段，其中該結合蛋白質或抗原結合片段係在大約1.9nM或較低之IC5〇下抑制IL-21-媒介的原代人類B細胞之增殖，以及其中該等B細胞包含一人類 IL-21R。 34. 如申請專利範圍第1、2、19，或20項中任一項之結合蛋白質或抗原結合片段，其中該結合蛋白質或抗原結合片段係在大約1.5 nM或較低之IC50下抑制IL-21 -媒介的原代人類CD4+細胞之增殖，以及其中該等CD4+細胞包含一人類IL-21R。. 201000129 35. 如申請專利範圍第1、2、19，或20項中任一項之結合蛋白質或抗原結合片段，其中該結合蛋白質或抗原結合片段係專一地結合至一胺基酸序列，該胺基酸序列係與序列辨識編號：2的至少100個相鄰的胺基酸之任何序列有至少大約95°/。同一性的。 36. 如申請專利範圍第1、2、19，或20項中任一項之結合蛋白質或抗原結合片段，其中該結合蛋白質或抗原結合片段係抑制IL-21的結合至IL-21R。 ® 37.如申請專利範圍第1、2、19，或20項中任一項之結合蛋白質或抗原結合片段，其中該結合蛋白質或抗原結合 - 片段係IgGl。 38. 如申請專利範圍第1、2、19，或20項中任一項之結合 ^ 蛋白質或抗原結合片段，其中該結合蛋白質或抗原結合片段係人類的。 39. —種藥學組成物，其包含如申請專利範圍第1、2、19，或20項中任一項之結合蛋白質或抗原結合片段。 40. —種經單離的核酸，其編碼如申請專利範圍第卜2、19，或20項中任一項之結合蛋白質或抗原結合片段。 41. 一種表現載體，其包含如申請專利範圍第40項之核酸。 42. —種宿主細胞，其係經如申請專利範圍第41項之載體予以轉形的。 43. 如申請專利範圍第42項之宿主細胞，其中該宿主細胞係一細菌、哺乳動物的細胞、酵母細胞、植物細胞，或是昆蟲細胞。 11 201000129 44. 一種診斷套組，其包含如申請專利範圍第1、2、19，或 20項中任一項之結合蛋白質或抗原結合片段。 45. 如申請專利範圍第19-38項中任一項之經單離的結合蛋白質或抗原結合片段，其中該結合蛋白質或抗原結合片段係一抗體。 46. 如申請專利範圍第19-38項中任一項之經單離的結合蛋白質或抗原結合片段，其中該結合蛋白質或抗原結合片段係一 scFv。 47. 如申請專利範圍第19-38項中任一項之經單離的結合蛋白質或抗原結合片段，其中該結合蛋白質或抗原結合片段係一 Vh。 48. 如申請專利範圍第19-38項中任一項之經單離的結合蛋白質或抗原結合片段，其中該結合蛋白質或抗原結合片段係一 VL。 49. 如申請專利範圍第19-38項中任一項之經單離的結合蛋白質或抗原結合片段，其中該結合蛋白質或抗原結合片段係一 CDR。 12