TW201000108A - Novel use - Google Patents

Description

201000108 六、發明說明： 【發明所屬之技術領域】 、本U係關於寡醣’特別為不可消化的寡醣組成物用於發 人特别為腸道發炎之預防或治療之用途。該組成物包含半 乳寡糖混合物。半乳寡料於不可消化的碳水化合物，可對 抗翁礼動物月腸道的消化酶，但可被特定大腸細菌所發酵。 【先前技術】 ❹人類之腸菌叢包合致病性、良性及有益性微生物種屬。大 部分的致病性微生物皆可能導致腸道病症，包括急性病症 (例如腸胃炎）及慢性病症（例如發炎性腸病及若干腸道癌 症）。曾經試圖藉添加一種或多種此等微生物菌株之適當食 物載媒劑來㈣腸g蟲的平衡而有利於有益的微生物，諸如 雙叉才干菌(bifidobacteria)。此種活的微生物食物補充物稱作 為1生菌但難以保證活ϋ於食物中以及於消化後存活。 〇 3 -種藉勝食操控腸道微菌叢的辦法係使用益生物質 (prebiotic) ’其係定義為不可消化的食物成分，其經由選擇 性刺激大腸中-種細菌或有限數目細菌的生長及/或活性， 藉此導致宿主健康的改善，因而對宿主造成有益的影響。 於多種發炎病症諸如發炎性腸病（IBD)，益生物質顯示有 間接保護效果。發現於若干IBD病人適應性免疫系統對共 棲共生的腸卤叢有南度反應性(參考Guarner F，Malagelada JR，Best Pract. Res. Clin. GatroeTiternl.. (2003) ； Π_ ； 098117646 3 201000108 793-804)。結果，已經使用益生物質來增強有益的腸道微菌 叢，協助預防疾病的復發（參考Sartor RD.，Gastroenterology, (2004), 126, 1620-1633)。 有一類被歸類為益生物質的化合物為半乳寡醣。其為Glc 卢l-4[Gal/31-6]nB式其中n=2-5之含半乳糖之寡醣，係使用 酵素失半乳糖苷酶之轉半乳糖基酶活性而由半乳糖糖漿製 造（Crittenden, (1999)Probiotics : A Critical Review，Tannock, G. (ed)Horizon Scientific Press，Wymondham 141-156 頁）。 EP 1 644 482揭示一種新穎雙叉乳酸桿菌（Bifidobacterium bidifum)菌株，其產生半乳糖苷酶活性而將乳糖轉化成半乳 寡醣。此種半乳寡醣混合物顯示具有益生物質的性質，可增 加益菌雙叉桿菌及乳桿菌（lact〇bacilli)之族群。 今曰出乎意外地發現EP 1 644 482揭示之包含半乳寡醣 混合物之組成物可直接調節哺乳動物腸黏膜之發炎反應。特 別，可於發炎劑存在下減輕發炎前期化學激素反應。 【發明内容】 根據本發明’提供一種用於發炎之預防或治療較佳係用於 腸發炎病症之預防或治療之益生物質組成物。 ϋ生物質組成物為半乳寡醣混合物。此種混合物包含雙餹

Gal_Ga卜三醣 Gal-Gal-Glc、四醣 Gal-Gal-Gal-Glc、及五醋 Gal-Gal-Gla-Gal-Glc，此處Gal表示半乳糖殘基，而表 示葡萄糖殘基。 098117646 4 201000108 較佳半乳寡醣混合物包含雙聽類Gal (；j(5i-3；)-Glc ; Gal (尽l-3)-Gal ; Gal (/51-6)-Gal ; Gal (al-6)-Gal ;三醣類 Gal (尽l-6)-Gal (01-4)-Glc ; Gal (/31-3)-Gal (|S1-4)_gic ;四醣 Gal 〇31-6)-Gal 〇51-6)-Gal 〇31-4)-Glc ;及五醣 Gal (如_6)_〇&1 _ 〇31-6)-Gal 〇31-6)-Gal (/31-4)-Glc。此種半乳寡醣混合物於市 面上係以商品名Bimuno (註冊商標）由卡拉薩多公司 (Clasado Ltd)(英國 Milton Keynes)上市出售。 ❹ 腸細胞形成單一偏極化的上皮層將腸腔環境與宿主隔 開。腸細胞可積極貢獻於宿主防衛功能。腸細胞對任何發炎 刺激的先天性免疫反應主要負責快速再生上皮的障壁功 能。上皮可被誘導而表現發炎前期細胞激素及化學激素，若 有所需，開始動員先天性免疫細胞諸如嗜中性細胞至受損黏 膜的過程。舉例言之，發炎前期細胞激素諸如IL_8可於免 疫反應期間由上皮細胞或由巨噬細胞刺激而動員嗜中性細 ❹胞及PMN(多形核白血球)至發炎的黏膜。巨噬細胞發炎蛋白 質-3α (ΜΙΡ -3α)或CCL20乃另一種化學激素，該化學激素 經由透過化學激素受體CCR6之活化而活化淋巴細胞及樹 狀細胞來k引出適應性免疫反應。江_8及MIP-3a(CCL20) 誘導指示對抗發炎之回應程度。 稱作為Bimuno之半乳募醣混合物對多種不同成人大腸細 胞培養研究模型的發炎反應的功效已經經過研究。出乎意外 地發現Bimuno於生理濃度時可減輕腸上皮細胞亦即人腸細 098117646 ς 201000108 胞被TNF-α發炎刺激所誘導的發炎前期化學激素反應。 也發現Bimuno可減少NF_KB p65蛋白質的轉位，如此可 用於下列疾病的治療，諸如氣喘、神經退化、缺血/再灌流 傷害、肝炎、腎小球腎炎、類風濕性關節炎、過敏症、第 II型糖尿病、肥胖、敗血病、自體免疫病、多發性硬化及動 脈粥狀硬化。 稱作為Bimuno的半乳寡醣組成物為半乳寡醣混合物之凍 乾粉末。Bimuno包含49%w/w半乳寡醣。組成物之差額包 含無活性組分諸如葡萄糖、乳糖、阿拉伯膠及檸檬酸。組成 物可以由1.35克至9.6克半乳寡醣於2.75克至20克散劑， 較佳由1.96克至4.9克半乳寡醣於4克至10克散劑，最佳 為2.7克半乳寡醣於5.5克散劑之有效劑量每日投予患有發 炎病症例如腸發炎病症病人。可以單劑服用或間隔數小時分 開兩劑服用。Bimuno產品可添加至熱飲或撒在食物上。 用於預防發炎，Bimuno散劑可以2克至15克，較佳2.5 克至1〇克及最佳5.5克之有效每曰劑量投予個體。 根據本發明之另一態樣’提供一種用於發炎諸如腸道發炎 之治療及/或預防之方法，包含對一嘴乳動物經口投予有效 量之寡醣組成物。 【實施方式】 將藉下列實例及圖式進一步舉例說明本發明。 (實施例1) 098117646 6 201000108 半乳寡醣對細胞激素分泌之功效 腸上皮細胞於24孔孔板中由5xl〇5細胞/毫升之初濃度生 長至高緻密度(confluence)。當細胞達到70%高緻密度時， 分成四等分處理如下：⑴陰性對照，（ii) TNF-α (10奈克/毫 升）陽性對照，（iii) B-GOS (5克/升)及(iv) TNF-a (10奈克/ 毫升)含B-GOS (5克/升）。使用5克/升募醋濃度，原因在於 此乃人乳中之生理寡醣濃度。經16小時後，收集上清液， 〇 儲存於-20°C，用於後來藉ELISA測定IL-8及ΜΙΡ-3α之分 泌。於後文實驗中，TNF-α係由IL 1/3或鞭毛蛋白替代。 IL-8之定量。如前文說明藉EliSA測定IL-8濃度(Claud EC，Savidge T, Walker WA 2003藉人乳因子調控人類腸上皮 細胞 IL-8 之分泌。Pediatr Res 53:419-425)。簡言之，96 孔 兩連結板(Nunc Immulon，費雪科學公司（Fisher Scientific)， 美國維吉尼亞州米多鎮)之各孔以100微升3微克/毫升小鼠 ©抗人類IL-8單株抗體塗覆隔夜，以2〇〇微升1%BSA於PBS 洗三次’且與1〇〇微升樣本於37〇c培養1小時。然後各孔 洗三次’且與1〇〇微升〇1微克/毫升經生物素標示的小鼠 抗人類IL-8抗體培養1小時。經另一次洗滌後，各孔與1〇〇 微升辣根過氧化酶一起培養，再度洗滌，隨後與100微升鄰 伸苯基二胺二鹽酸及過氧化氫一起培養。使用1〇〇微升2n 硫酸中止反應’讀取於490奈米之吸光率。由IL-8標準曲 線計算樣本中之IL-8濃度。 098117646 7 201000108

MlP-3oc之疋里。類似於IL-8 ’藉ELISA測定miP-3oc之分 必1，但孔板以100微升2.0微克/耄升小鼠抗人類ΜΙρ_3α 單株抗體塗覆隔夜。檢測抗體亦即經以生物素標記的小鼠抗 人類MIP-3 cc抗體用作為檢測抗體，使用濃度為奈克/毫 升，用ϊ為100微升。樣本中之MIP-3cc濃度係由ΜΙΡ-3α 標準曲線計算。 細胞存活率檢疋分析。使用錐蟲藍排除試驗研究B_g〇S 之細胞毒性。由2xl05細胞/毫升初濃度，NCM_46〇細胞生 長於蓋玻片上。細胞使用B-GOS (5克/升）或對照培養基重 複處理三次。經16小時後，藉錐蟲藍排除試驗檢定分析 NCM-460 細胞之細胞存活率（Raimondi F, Crivaro V, Capasso L, Maiuri L, Santoro P, Tucci M, Barone MV, Pappacoda S Paludetto R 2006於人衍生的試管試驗研究模型中未經輛合 的膽紅素調控腸上皮障壁功能。Pediatr Res 60:30-33)。於此 濃度，B-GOS對細胞存活率並無顯著影響。 B-GOS用於誘導細胞激素轉錄之功效。NCM-460細胞於 6孔孔板由5xl05細胞/毫升之初濃度生長至高緻密度。當細 胞達到70%高緻密度，分成四等分處理如下：⑴陰性對照， (ii) TNF-α或IL 1/3或鞭毛蛋白（10奈克/毫升）陽性對照，及 (iii) TNF-a或IL 1/3或鞭毛蛋白（10奈克/毫升）含B_G〇s (5 克/升）。經18小時後，藉Trizol-氯仿萃取分離總細胞rNa。 使用 Superscript III Platinum SYBR Green One-Step 098117646 201000108

qRT-PCR 套件組，於 Mj 0ptic〇n 2 測量 IL 8、Μιρ_3α及 MCP-1之mRNA表現，且經標準化成為GApDH之mRNA 表現。 B-GOS對NF-λΒ轉位之功效。NCM-460細胞於蓋玻片上 生長至70%高緻密度且重複兩次處理分鐘或分鐘如 下.⑴陰性對照，（ii) TNF-a (10奈克/毫升）陽性對照，及 (iii)TNF-oc (1〇奈克/毫升)含B_G0S (5克/升）。取出培養基， 〇 細胞於4%三聚甲醛固定。於使用甲醇滲透且於0.25% BSA 於TBS中使用10%山羊血清封阻之後，細胞使用兔抗人類 NF-κΒ p65多株抗體探測。洗條後，細胞與經CyTM 3輛合 之山羊抗兔抗體共同培養。然後盖玻片經洗務，安裝於玻璃 片上準備於顯微鏡（尼康公司（Nikon)伊克普斯（Eclipse) TE2000-S)下觀察。 材料 〇 ™F-a細胞激素、1L 1/5、鞭毛蛋白、鏈絲菌-HRP及人類 CCL20-MIP-3 a ELISA 展開套件組(康提金(Quantikine))係得 自R&D系統公司（美國明尼蘇達州米納波里市）。抗人類 IL-8抗體及小鼠抗人類IL-8抗體係得自pierce Endogen (美 國麻省渥本市）。鄰-伸苯基二胺錠劑係得自Pierce (美國伊 利諾州洛克福）。Trizol、Superscript III Platinum SYBR Green

One-Step qRT-PCR套件組及其它qRT_pCR所需試劑係得自

Invitrogen (美國加州卡爾斯白）。DMEM/F12培養基、CMRL 098117646 9 201000108 培養基、青黴素(Penicillin)、鏈黴素（streptomycin)及 Hepes 緩衝液係得自Gibco-Invitrogen(美國加州卡爾斯白）。胎牛血 清係得自Atlanta Biologicals (美國喬治亞州羅倫斯斐）。M3D 係得自Incell Corp.(美國德州聖安東尼市）。兔抗人類 NF-/dB(p65)多株抗體係得自Calbiochem (美國紐澤西州吉伯 鎮）。經CyTM 3-軛合之F(ab’)2片段山羊抗兔IgG係得自 Jackson ImmunoResearch (美國賓州西葛福）。全部其它用於 免疫螢光之試劑係得自Vector Lab (美國加州柏林甘）。全部 其它試劑皆屬分析級或分子生物級，皆係得自 Sigma-Aldrich (美國蒙大拿州聖路易）。 B-半乳寡膽B-GOS。Bimuno®需由英國Milton Keynes之 Clasado Ltd·供應。 腸上皮細胞系。本研究使用兩個成人腸上皮培養研究模 型：T84細胞及NCM-460細胞分別為已經轉形及未經轉形 之大腸上皮細胞。細胞於Falcon細胞培養皿中於37°C於飽 和水蒸氣的95%氧氣及5%二氧化碳氣體下培養。T84培養 基之組成為DMEM/F12添加FBS (5%)、Hepes緩衝液、糙 胺、非必需胺基酸、青黴素及鏈黴素（12)。NCM_460培養基 之組成為M3D培養基添加FBS (10%)、青黴素及鏈黴素， 如前文說明（13)。 統計分析。細胞激素之誘導係以良性對照標準化，以誤#差 柱表示標準差（SE)。各組間之比較係使用雙尾Student的t 098117646 10 201000108 試驗進行。由qRT-PCR所得基因表現資料係以平均值帶有 標準差表示。各組間之比較係於對數換算之後使用Student 的雙尾t試驗進行邛值小於〇 〇5被視為統計上有意義且以 星號(*)標示，p值小於0.01以兩個星號(**)表示，而p值小 於0.001以三個星號（***)標示。 結果 於T84細胞半乳寡 B-GOS對細胞激素分泌之效果（圖1)。 ϋ 於T84細胞之TNF-α誘導的IL-8分泌係經正規化至1〇〇〇/。 來允許4個獨立實驗間之比較。未經處理的Τ84細胞具有 於20.5%之基本11^8分泌。當丁\?-〇^彳激時，11^8分泌顯 著增加 4.9 倍(ρ<〇.〇〇1)。 為了測定B-GOS之效果，於半乳寡醣B-GOS (5克/升)存 在之下，使用及未使用TNF-α刺激Τ84細胞。經B-GOS處 理的T84細胞分泌16.4% IL-8。此係與未經處理的T84細 ❺胞之基本含量無顯著差異。使用TNF-a刺激時，B_GOS可 顯著減少IL-8之分泌達38.5% (p<0.001)。 於NCM-460細胞半乳寡醣B-GOS對細胞激素分泌的效果 (圖2、圖5、圖6)。 於NCM-460細胞經TNF-ot誘導之IL-8及MIP-3a分泌經 正規化之100%來允許4項獨立實驗間做比較。未經處理的 NCM-460細胞分別具有於1.7%及4.0%之基本IL-8分泌及 MIP-3a分泌。當TNF-a刺激時，IL-8分泌及MIP-3a分泌分 098117646 11 201000108 別顯著增高 58.8 倍(ρ<〇.〇〇1)(圖 2A)及 25.0 倍(p<0.〇〇l)(圖 2B)。 為了判定B-GOS的效果，NCM-460細胞於半乳寡醣 B-GOS (5克/升）存在下使用或未使用TNF-a刺激。經B_G〇S 處理之]^0\1-460細胞分泌11^8及]^11?-3〇1分別為1.1%及 3.9% ;此係與未經處理的NCM-460細胞的基本濃度並無顯 著差異。當使用TNF-ct刺激時，B-GOS可顯著減低IL-8及 MIP-3oc之分泌達 43.5% (ρ<0·001)(圖 2A)及 52.1% (p<0.05) (圖2B)。以相同方式，於TNF-α刺激前，當NCM-460細胞 使用B-GOS預洗時，即使於無B-GOS存在下（圖6)，IL-8 之分泌顯著降低達32%(p<0.001)。如此提示B-GOS混合物 之成分與上皮受體諸如類鐸受體(t〇ll-like receptor,TLR)交 互作用來預防細胞的發炎性刺激。 同理，當使用鞭毛蛋白刺激時，B-GOS顯著減少IL-8分 泌達21.5% (p<〇.〇5)(圖5)。使用IL 1|8刺激未觀察得效果。 為了判定B-GOS是否具有胞毒性，NCM-460細胞使用或 未使用B-GOS共同培養16小時。如方法章節所述，藉錐蟲 藍排除檢定分析測得B-GOS並不影響細胞的存活。 半乳寡醣B-GOS對細胞激素表現之效果（圖3)。 經TNF-a處理之NCM-460細胞之總RNA經分離，藉 qRT-PCR 檢定分析 il-8、MIP-3a及 MCP-1 mRNA 之表現。 當使用TNF-a刺激時，IL_8及MIP-3ot mRNA之表現分別顯 098117646 12 201000108 著增高達 12.2 倍(ρ<〇·〇〇1)(圖 3A)及 99.4 倍(ρ<〇.〇〇1)(圖 3B)。任何處理組間皆未觀察得MCP-1 mRNA表現之改變 (ρ=0·19)(資料未顯示）。為了測定B-GOS的效果，於 B-GOS(5克/升)存在下使用TNF-ct刺激NCM-460細胞。半 乳寡醣B-GOS顯著減低TNF-α誘導的IL-8及ΜΙΡ-3α mRNA 之表現達 5.7 倍(p<0.05)(圖 3A)及 58.9 倍(p<〇.〇5)(圖 3B)。MCP-1 mRNA表現係由B-GOS減少但未達顯著程度 ❹ （p=〇.〇6)(資料未顯示）。 半乳寡醣B-GOS對NF-/CB轉位的影響（圖4) 成人大腸NCM-460細胞使用TNF-a (10奈克/毫升）處理 及檢定分析NF-zcB p65蛋白質之核轉位狀況。於接受載媒劑 處理之對照細胞（圖4A)，NF-κΒ p65之染色主要出現於胞 質，細胞核中不含p65蛋白質。使用TNF-a刺激後30分鐘， NF-κΒ p65明顯轉位入細胞核（圖4B)。 ❹ 但於B-GOS存在下，TNF-a誘導之NF-icB轉位於30分鐘 時部分受抑制（圖4C)。 (實施例2) 於藉葡聚糖硫酸鈉誘導大腸炎小鼠研究模型中B-GOS之功 效之活體内研究 材料及方法 兩組（各組 n=24) C57BL/6 成小鼠（JackS0n Laboratories， 美國緬因州巴爾港）分別為以習知方式養育的（CR)小鼠及細 098117646 13 201000108 菌剔除(BD)小鼠用來誘發大腸炎。全部動物皆係以12小時 明暗週期圈養，可自由食用鼠食及飲水。 於6週齡時，以習知方式養育之小鼠係於習知條件下使用 未經處理的飲水圈養(CR組）；而BD組小鼠則於飲用水中 給予抗生素混合液歷2週時間。康納黴素(Kanamycin) (8毫 克/毫升）、建它黴素(Gentamicin) (0.7毫克/毫升）、可利斯$丁 (Colistin) (34,〇〇〇 單位/毫升）、美仇尼達佐(Metr〇nidaz〇le) (4.3笔克/宅升)及萬古黴素(vanacomyCin) (〇 9毫克/毫升）組 成抗生素混合液。基於該年齡群所耗用的平均飲水量，求出 水中抗生素濃度。 8週齡時’兩組(CR及BD)全部小鼠於飲用水中給予3.5% DSS (葡聚糖硫酸鈉）（mp Biomedicals，美國俄亥俄州奥羅 拉)歷5日誘發大腸炎。1〇週齡時，每組半量小鼠開始接受 Bimuno(5克/升)歷經7曰時間。第1〇週結束時將小鼠安樂 死’回收其大腸進行分析。 細胞激素測定 根據製造商指示藉ELISA (康提金，R&D系統公司，美國 明尼蘇達州）對大腸組織均化物分析鼠科IL_6及MIP-2細胞 激素。簡言之’收集各組的近端大腸且與補充蛋白酶抑制劑 混合液的含1% Triton-100之PBS均化緩衝液共同均化。均 化後之溶液於12,000 rpm離心10分鐘，上清液分離成多份 且儲存於-7(TC。 098117646 14 201000108 結果 測定於兩組小鼠（CR及BD)，Bimuno減少DSS大腸炎之 傷害及發炎能力且與對照小鼠（未投予Bimuno)做比較。 於習知經DSS處理小鼠，IL-6及MIP-2分泌分別顯著減 少 2.2 倍(ρ<〇·〇〇〇ΐ)及 8.3 倍(p<0.0001)。Bimuno 顯著減少 IL-6分泌及MIP-2分泌達6.6倍（ρ<〇.〇〇〇1)及55件 (p<0.0001)° ❹ 於BD經DSS處理組小鼠，IL-6及IP-2分泌分別顯著誘 導 6.2 倍(ρ<〇.〇〇〇1)及 27.2 倍(p=0_0005)。Bimuno 顯著減少 IL-6之分泌達3.6倍(p<0.0001)。MIP-2之分泌減少1 3倍， 但發現不具意義^=0^26)。 要言之，習知經DSS處理小鼠比未經處理組更容易發生 大腸炎。經DSS處理之習知小鼠補充Bimuno可顯著減低發 炎標記（IL-6及MIP-2)且缓和大腸炎症狀。於已剔除細菌之 ❹經DSS處理組小鼠也觀察得相同效果。暗示觀察得因 Bimuno造成發炎的減低並非逸過微菌叢媒介。於DSS大腸 炎中，Bimuno係對腸上皮具有直接免疫調控功效。 【圖式簡單說明】 圖1顯示B-GOS對T84細胞中TNF_a誘導的IL-8之分泌 之功效； 圖2(A)及2(B)顯示B-GOS對NCM_460細胞中TNF-α誘 導的IL-8及MIP-3oc之分泌之功效； 098117646 15 201000108 τ 避 TNF-ot處理的 NCM-460 之表現之功效； 圖3(A)及3(B)顯示b_GOS對經 細胞中IL-8及MIP-3a mRNA之矣 圖4(A)、（B)及(C)顯示b_g〇s對nf_kB p65蛋白質轉位 進入經TNF-α處理之NCM-46〇細胞之細胞核之功效； 圖5及6顯示B-GOS對NCM-460細胞中TNF-oc誘導的 IL_8分泌之功效；及 圖7(A)及7(B)顯示B-GOS對經DSS處理之小鼠之IL-6 及MIP-2分泌之功效。 098117646 16

Claims (1)

1. 201000108 七、申请專利範園： 1· 一種寡酶組成物’其係用於發炎之預防或治療。 2·如申請專利範圍第1項之寡醣組成物其包含益生物質 寡醣混合物。 3. 如申請專利範圍第2項之寡醣組成物，其包含半乳寡醣 混合物。 4. 如申請專利範圍第3項之寡醣組成物，其中，該半乳寡 〇釀混合物包含雙醣Gal-Gal、三醣Gal-Gal-Glc、四醣 Gal-Gal-Gal-Glc、及五醣 Gal-Gal-Gal-Gal_Glc。 5. 如申專利圍第4項之寡酿組成物，其中，該半乳寡 醣混合物包含雙醣類 Gal (/3l_3)_Gk ; Gal wl 3)_Gal ; Gai (/31-6)-Gal ; Gal (al-6)-Gal ;三醣類 Gal (j81_6)_Gal (/31-4)-Glc ； Gal (/31-3)-Gal (^l-4)-Glc ； ng ^ Gal (^l-6)-Gal (01-6)-Gal (/?1_4)-Glc ;及五醣 Gal ⑹哥Gal ⑹_6) Gal Q (W-6)-Gal 〇Sl-4)-Glc。 6. 如申請專利範圍第丨至5項中任_項之寡敝成物其 係用於腸發炎病症之預防或治療。 7. 如申明專利範圍第6項之寡醣組成物，其係用於腸上皮 發炎之預防或治療。 8. 如申請專利範圍第6項之寡醣組成物，其係用於預防或 減輕於腸上皮細胞中由TNF_a(組織壞死因子)誘導的發炎。 9. 如申請專利範圍第6項之寡醣組成物，其係用於預防或 098117646 17 201000108 減輕於人類腸細胞中由TNF-α誘導的發炎反應。 10. —種治療及/或預防發炎之方法，包含對一哺乳動物經 口投予有效量之寡醣組成物。 11. 如申請專利範圍第1〇項之方法，其中，該組成物為寡 醣混合物。 12·如申請專利範圍第1〇項之方法，其中，該組成物為包 含雙醣 Gal-Ga卜三醣 Gal-Gal-Glc、四醣 Gal-Gal-Gal-Glc、 及五醣Gal-Gal-Gal-Gal-Glc之寡醣混合物。 13. 如申請專利範圍第1〇項之方法，其中，該組成物為包 含雙醣類 Gal (卢l-3)-Glc ; Gal 〇Sl-3)-Gal ; Gal 〇31-6)-Gal ; Gal (al-6)-Gal ;三醣類 Gal 〇Sl-6)-Gal 〇81-4)-Glc ; Gal 〇31-3)-Gal (01-4)-Glc ;四醣 Gal 〇31-6)-Gal (/31-6)-Gal (/51-4)-Glc ;及五醣 Gal 〇Sl-6)-Gal 〇01-6)-Gal (/31-6)-Gal 〇51-4)-Glc之半乳寡醣混合物。 14. 如申請專利範圍第13項之方法，其中，該發炎為腸上 皮發炎。 15. 如申請專利範圍第1〇項之方法，其係用於預防或減輕 於腸上皮細胞中由TNF-α(組織壞死因子)誘導的發炎。 16. 如申請專利範圍第1〇項之方法，其係用於預防或減輕 於人類腸細胞中由TNF-α誘導的發炎反應。 17. 如申請專利範圍第1〇項之方法，其中，該哺乳動物為 人類。 098117646 18 201000108 18.如申請專利範圍第10項之方法，其中，該組成物包含 由1.35克至9.6克，較佳由1.96克至4.9克及最佳2.7克之 寡醋。

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