TW201000106A - C-ring-substituted pregn-4-ene-21,17-carbolactones, and pharmaceutical products comprising the same - Google Patents

Description

201000106 六、發明說明： 【發明所屬之技術領域】 本發明係關於一種通式I之c-環經取代之孕_4_烯_2i,i7 碳内酯：

R6’7係α-或β-亞曱基且 R9係氫原子，且係溴、氣或氟原子；或 R與R共同形成·一個鍵。 氫原子R9較佳係位於α位置。 鹵素原子R11較佳係位於β位置。 *素原子R11較佳為氟或氣原子；特別佳係氟原子❶ 下述化合物根據本發明係特別佳的： 11β-氣-6β，7β;15β，16β-二亞甲基 _3_側氧基 _17 孕 _4·烯 21，17β-碳内酯 6β，7β;15β，16β-二亞甲基·3_側氧基·17_孕 _4 9(11广二烯 21，17β-碳内酯 6β，7β;15β，16β_二亞甲基-1ιρ·氟_3_側氧基_17孕一烯 21，17β-碳内醋 6α，7α;15β，16β-二亞甲基 _11β_ 氟 _3_側氧基·η 孕 _4·烯 21，17β-碳内酯 140602.doc 201000106 曲螺嗣（6β，7β·15Ρ，16Ρ-:亞曱基·3-側氧基·17·孕-4-埽· 21，17β-碳内酯）係新型孕激素，其存在於，例如，口服避 孕藥YASMIN®及用於治療絕經後症狀之製品angeliq⑧ 中。由於其對於孕激素作用受體的親和力比較低及其較高 之排卵抑制劑量，曲螺酮以較高3 mg2日劑量存在於 YASMIN® 中。

曲螺酮 除孕激素作用性質之外，曲螺酮具有顯著的醛留酮拮抗 作用（抗礦物皮質激素物質）及抗雄激素作用。此等兩種性 質使曲螺酮在藥理學作用上非常類似於天然孕激素之黃體 素，但於曲螺酮不同，後者不具有足夠的口服生物利用 率。 〇 因此，本發明之目的係提供比活體内曲螺酮具有更高孕 激素作用效力的化合物。此最終目的在於使用較低日劑量 . 且降低活性化合物物質之需求量。 由本發明提供之化合物應在活體内另外具有抗礦物皮質 激素物質效應，其至多與曲螺_之抗礦物皮質激素效應一 樣高，但較佳係小於後者。 進一步意圖為，本發明化合物具有比曲螺酮更弱的抗雄 激素活性。 140602.doc 201000106 最終，本發明之化合物應具有高代謝安定性。 【先前技術】 WO 2006072467揭示之化合物在老鼠的維持懷孕試驗中 顯示比曲螺酮更高的活性，且對來自老鼠腎勻聚物之碌物 皮質激素受體顯示與曲螺酮相當的活性。該等化合物係 18 -甲基-19-去甲基-17 -孕-4 -稀-21,17 -碳内g旨。 在WO 2008000521中描述的化合物在活體外與黃體素及 礦物皮質激素受體結合之解離型態上低於曲螺綱。該等化 合物係18-甲基-19-去曱基-雄-4-浠-17,17-螺謎。 在EP 1 746 101 A1中描述一種藉由17-(3-經丙基）_3,17- 一經基雄烧之無金屬氧化作用來製備3 -側氧基孕_4_稀_ 21,17-碳内酯的方法。一般無法自EP 1 746 101 A1證實此 等碳内酯之藥理學活性。僅提及的具體化合物係6p，？p_ 15β，16β-二亞曱基-3-側氧基-17-孕-4-烯-21，17β-碳内酯（曲 螺酮）。未明確說明11 -鹵素及9,丨丨_脫氫化合物。 本發明之目的係藉由提供文中描述之通式I之c_環經取 代之孕-4-烯-21,17-碳内酯而實現。通式〗之化合物（及尤其 係彼等實例1及2)之特徵在於改良的效應。 【發明内容】 本發明化合物因其令人驚訝之強孕激素作用活性而值得 注意’且在老鼠維持懷孕試驗中於皮下給藥後具有高活 性。 通式I之本發明化合物具有極強之孕激素作用活性，同 時，其與雄激素受體的結合性比曲螺酮更弱。 140602.doc 201000106 另外已發現本發明之化合物在切除腎上腺的 _ 取*中顯>|\ 保^卸的促尿鈉排泄（抗礦物皮質激素）效應。 由於其孕激素作用活性，通式1之新穎化合物可單獨使 用或在醫藥製品中與雌激素組合以用於避孕。

Ο 因此，該通式之本發明化合物可單獨（即不含雌激素）用 於生產所謂的POP(僅含黃體素之藥丸）。該等基於其他具 有孕激素作用活性的化合物之P0P已經揭示，例如基於孕 激素左旋諾孕酮，呈Microlut⑧製品之形式（28個日2量單 位，每個含有30 左旋諾孕酮）。 因其有利的效果，本發明化合物係尤其適於治療經期前 症狀，諸如頭痛、壓抑的情緒、水腫及乳房痛。 由於其孕激素作用的活性，本發明化合物適合進一步用 於已熟知的孕激素用途，例如治療嚴重的出血性疾病（例 ^治療經血過多及子宮出血），治療黃體不足（即治療先兆 流產）’治療青春期延遲及治療需要使用孕激素替代療法 之病症。 本發明因此亦關於—種醫藥製品，其包括至少一種通式 1之化合物及醫藥上可接受之載體。 根據本發明之醫藥製品較佳係彼等包含6β，7β;1 5β，16β-二亞甲基-3-側氧基·17孕_4,9叫二稀A，降碳内鏟或 6β卿5β，16β_ 二亞甲基 _11β 氟 _3 2 1，1 7β-碳内酯作為活性成分。 本發明亦關於-種醫藥組合製品，其除通式！之化合物 及醫藥上可接受之載體之外’還包括雌激素。 140602.doc 201000106 本發明化合物在避孕產品中的劑量規定為每曰〇〇1至5 mg，較佳係每曰0.01至2 mg。 用於治療經期前症狀之日劑量係約〇丨至別mg。 孕激素和雌激素活性成分組分較佳係在避孕產品中一起 口服。該日劑量較佳為一次全部服用。 在本發明組合製品中適用於避孕的雌激素係雌留二醇與 &成准激素，較佳係炔雌醇，但亦可係美雌醇〇 另外可能使用雌甾二醇的酯，且其中尤其係雌甾二醇戊酸 酯或雌甾二醇苯甲酸酯。 雌激素係以對應其雌激素效果之0 01至0 04瓜§炔雌醇的 曰用量服用。在此等避孕產品中炔雌醇本身係以〇 〇丨至 0.04 mg之日用量使用。 通式I之新穎化合物亦可用於治療絕經前（pre_men〇pausal) 、圍絕經期（peri-menopausal)及絕經後（p〇st_men〇pausaim 狀之醫藥製品中，及用於激素代替治療（Hrt)的製品中。 此類用於激素代替治療之產品中所使用的雌激素主要係 天然雌激素，尤其係雌留二醇或其酯，例如雌留二醇戊酸 酯或例如存在於製品PREMARIN®中的經共軛雌激素（CEE = 經共軛馬雌激素）。 最近亦已揭示將葉酸（WO 99/53910)或5-曱基、6_(s)_四氯 葉酸鹽’及其中尤其係5-曱基-6-(S)-四氫葉酸之詞鹽 (Metafolin® ; WO 2006/120035)併入用於避孕或激素替代 療法之產品中。 在WO 2008/003432中描述只含有孕激素及特別含有孕激 140602.doc 201000106 素及雌激素之四氫葉酸之對應的穩定調配物。在用於避孕 之產品中，葉酸或四氫葉酸鹽成分係用於防止成長令胎兒 的畸形。就此而言，其優先重點係防止新生嬰兒的 NTD(神經管缺陷），一種嚴重的身體畸形。 本發明範圍内使用本發明新型孕激素係類似於上述公開 案對先前已知之孕激素的描述。 ❹

基於新穎化合物之醫藥製品係使用本身已知之方法，藉 由加工活性成分而配製，其令適當時，由雌激素與載體物 質、稀釋劑組合中適當時，使用遮蓋味道之調味料等 (常見於製藥技術中）且轉變為所需之投藥形式。 知若單獨或與雌激素一同使用該等新穎化合物，並結合葉 酸或5-甲基_6_(S)_四氫葉酸料，則可如在上述公開案中 描述先刖已知孕激素一樣，生產對應的調配物。 適=較佳之經口投藥法料言之為錠劑 '包衣鍵劑、膠 囊、藥丸、懸浮液或溶液。 、適於非經腸式投藥法料言之係油性溶液，例如，芝麻 :、萬麻油與棉籽油中之溶液。可添加增溶劑，如，例如 本曱酸节醋或节醇，以增加可溶性。 藥亦可能將本發明之物質併入穿皮系统隨其穿透皮膚投 ，可能將該等卿化合物，單獨或與雌激素一起，併 统續期間内釋放活性成分或活性成分群的投藥系 、入系系統（IUS)、陰道内環（ivr)或併人皮下植 、、、在插人子宮或陰道或植人皮下後自該處逐漸 140602.doc 201000106 釋放。 【實施方式】 藥理學 在切除卵巢的鼠中之孕激素作用效果： 孕激素作用效果係由如Muhn等人(Muhn, P·，Krattenmacher, R.，Beier，S·，Eiger, W.，及 Schillinger，Ε· (1995)。曲螺 酮：具有抗礦物皮質激素及抗雄激素活性之新型孕激素。 在動物模型中之藥理學特徵(Drospirenone: a novel progestogen with antimineralocorticoid and antiandrogenic activity. Pharmacological characterization in animal models)， Contraception 5 1，99-1 10)中之描述測定。 其中研究該等化合物在不能合成自身黃體酮之切除卵巢 的動物中補償黃體酮缺乏及維持懷孕（”懷孕維持度"）之能 力。 使重量為200-230 g之雌性動物交配。在交配後（p.c.)第8 天切除該等動物的卵巢且用5 pg/kg/d雌酮處理。待測試之 化合物係以多種濃度投與（3、10、30 mg/kg/d)。於交配後 第8天開始處理且持續6天。 評估： 在最後一次處理的一天後，將該等動物解剖。懷孕維持 度係藉由將活胎兒之數目除以可檢測到的著床位置之數目 而計算。以出現心臟跳動為評定胎兒為活體的決定性因 素。不可識別之著床位置（切除卵巢的對照）係限定為〇%懷 孕維持度。 140602.doc -10- 201000106 決定ED50(達最大效應之一半值時之濃度）作為孕激素作 用效力之測定值。 吾人發現本發明之化合物具有比曲螺酮之孕激素作用效 果高四倍的孕激素作用效力。 '~ ed50 曲螺酮 10 mg/ka/d 實例1之化合物 2.9 ma/k^/d 實例2之化合物 3.4 mg/ke/d ^ 表1:化合物在維持懷孕試驗中的孕激素作用效果。 在切除印巢的鼠中之孕激素作用效果，與藥物動力值及藥 效學效應之相關性 ’ 為了更準綠描述其等孕激素作用效力之差異，在經過修 改之維持懷孕實驗中，另外在多個時間點採取血樣，以測 定藥物動力學參數。在此情況下之老氣按照先前試驗中的 描述先進行預處理。使用程式PK_SIM，版本401(Bayer ❹ T—gw㈣iees，Leverkusen，德國）、Gastn)pius版本 5.2(Simulations Plus，Inc ’ ，ca，美國）及

WinNong專業版（版本5·2，細咖—，^峨^

View’ CA’ USA)展開基於生理學之藥物動力學模式。 發現在實驗期間達到之Auc(時間_濃度圖之曲線下面積） 與測量的藥理學效果(即達成維持懷孕之目的)之間具有相 關性。因此可由該模式估算AUC5〇值。 已發現曲螺嗣與本發明之化合物在活體内的孕激素作用 效力上存在統計上的顯著差異，對於本發明之化合物， 140602.doc 201000106 AUC5〇值下降超過6倍》基於全身性處理與效力之間的相關 性’計算該鼠模式中達到80°/。懷孕維持度時血中所需之 AUC(表 2)。 老鼠達成80%懷孕維持度時所需的AUC (血液，計算值） 曲螺酮 1346bg*h/L) 實例1之化合物 210 (pg*h/L) 表2 :為維持懷孕所需之處理（計算值） 化合物在切除腎上線的鼠中之抗礦物皮質激素效果（利尿 ⑩ 實驗）： 化合物之抗礦物皮質激素效果係依Losert等人（Losert， W.，Casals-Stenzel ’ J.及 Buse，Μ·(1985)。具有抗镇物皮 質激素藥活性之孕激素（Pr〇gest〇gens with antimineralocorticoid activity)。Arzneimittelforschung 35，459-471)之描述測 定。 重量為180-200 g的雄性動物在實驗前5天切除腎上腺及 改接受糖皮質激素替代療法。在切除腎上腺後第5天執行 © 利尿實驗。將含5%葡萄糖之等滲NaCl溶液經靜脈内連續 輸注給動物。同時投與lpg/kg/h d-醛甾酮，以達成恆定的 · 礦物皮質激素效果，其可由鈉保留及尿鉀排泄識別。以多 種劑量（3、10及30 mg/kg)經皮下投與該等測試化合物，且 醛甾酮誘導的鈉保留之停止顯示抗礦物皮質激素效果。 評估： 將動物關在代謝籠中且每小時收集尿液。藉由火焰光度 140602.doc -12· 201000106 計方法測定尿中的鈉及鉀離子濃度’且由此計算Na/K比。 繪製出Na/K比對時間的曲線’及測定曲線下面積[AUC]。 決定ED5G(達成最大效果之一半值時之濃度）作為孕激素 作用效力之測定值。 吾人發現本發明之化合物具有抗礦物皮質激素物質活 性，其強度約達曲螺銅活性之一半強度至與曲螺酮相同之 強度。 ed50 曲螺酮 6.7 mg/kg 實例1之化合物 5.9 mg/kg/d 實例2之化合物 12.36 mg/kg/d 表3:化合物在利尿實驗中之抗礦物皮質激素物質效果 化合物在活體外之抗雄激素轉激活試驗中之抗雄激素物質 效果： 抗雄激素物質效果係按照在Schneider等人（Schneider K., Graf E., Irran E., Nicholson G., Stainsby F.M., Coodfellow M., Borden S.A., Keller S., Siissmuth R.D.及

Fiedler H.P. (2008) Bendigoles A~C, New Steroids from Gordonia australis Acta 2299，J. Antibiotics (東京）61(6)， 356-364)中之描述實施》 用於培養試驗用細胞的培養基係含有10%FCS、200 mM L-麩胺醯胺、100U/100 pg/ml盤尼西林/鏈黴素之 RPMI(PAA，#E15-49)。受體細胞系（使用人雄激素受體 (hAR)穩定轉染之PC3細胞，其中包括在雄激素效應發動子 140602.doc 13 201000106 (MMTV)控制下之螢光素酶的報導子構築體）係在每孔 4 X 104細胞之密度下，在各具有96孔之白色不透明組織培 養盤（Perkin Elmer，#P 12-106-017)中生長，且維持在含3% DCC-FCS之培養基中（血清經活性碳處理，以去除存在於 血清中的干擾組分）。將要研究之化合物在八小時後添 加，且使用該等化合物培育該等細胞16小時。執行三次實 驗。在培育結束時，排除包含效應物之培養基，並改換成 溶胞緩衝液。 在添加營光素酶試驗基質（Promega，#E1501)之後，將 具有96孔之分析盤插入微分析光度計中（Pherastar，BMG labtech)，且測量發光度。使用軟體分析IC5G以計算劑量-活性關係。與參考物抗雄激素物質（羥基氟他胺 (hydroxyflutamide))之最大效力比較，其效力以相對於最 大效力之百分比表示。 吾人發現本發明之化合物在活體外具有比曲螺酮更弱的 抗雄激素活性。 IC5〇 ΓμΜΙ 功效 曲螺酮 0.12 40.3 實例1之化合物 0.24 19.3 實例2之化合物 0.16 31.9 表4 :化合物在轉激活試驗中之抗雄激素效果。 化合物在切除睪丸之大鼠中之抗雄激素效果（Hershberger 法）： 化合物之抗雄激素效果係根據在Muhn等人（Muhn，P.， 140602.doc -14· 201000106

Krattenmacher, R., Beier, S., Eiger, W·，及 Schillinger, E. (1995)。曲螺酮：具有抗礦物皮質激素及抗雄激素活性之 新型孕激素。動物模型中之藥理學特徵（Drospirenone: a novel progestogen with antimineralocorticoid and antiandrogenic activity. Pharmacological characterization in animal models)， Contraception 51，99-110)中之描述測定。 其中必需測試該等化合物在年輕的雄性已閹割但接受雄 激素替代療法之老鼠中抑制前列腺、精囊及肛門提肌之雄 〇 激素依賴型生長的適合性。 為此目的，在開始時閹割年輕大鼠《在摘除睪丸八天 後，動物經皮下單獨接受或者與試驗物質（10 mg/kg/天）組 合接受1 mg/kg/天丙酸睪酮（TP)七天。 在摘除睪丸後15天，殺死該等動物，且切下前列腺、精 囊及肛門提肌’測定相對濕重。以雄激素所誘導生長之受 抑制程度測定實驗物質之抗雄激素效果。該抗雄激素致果 轉化為抑制％，當前列腺重量相當於媒介對照組時，烏+ 全效果（1 〇0°/。抑制），當前列腺重量相當於Tp處理組時，為 0%抑制。 .一 - —_ _$^激素效果(抑制 曲螺酮 22.5% 實例1之化合物 <0% 實例2之化合物 3.8% 醋酸賽普羅特博(Cyproterone acetate) 73.1% -------- 表5:化合物在去睪丸大鼠中之抗雄激素效果 140602.doc -15- 201000106 按照其臨床型態，吾人發現醋酸賽普羅特博 (cyproterone acetate)顯示強力抗雄激素效果，及曲螺酮顯 示較小但明顯的抗雄激素效果。與此相反，吾人發現本發 明之化合物不顯示抗雄激素效果。 該等化合物在去睪丸大鼠中之抗雄激素效果，基因表現的 研究 修记上述Hershberger試驗，另外在第一次處理（1 mg/kg TP，10 mg/kg測試物質）後24小時殺死動物，且在屍體解 剖後立即取出前列腺組織瞬間冷凍，然後用於單離 mRNA。使用定量PCR方法（TaqMan)探討雄激素所刺激基 因之誘導作用（X-倍誘導因數），尤其係類固醇生物合成（例 如IDI1，NM 0045 08.2)，其用於測量TP之雄激素效果及其 受本發明化合物之抑制性。將該抑制性換算成抑制％，當 誘導因數為1時，係完全抑制（100%)，且當誘導因數等於 TP之誘導因數時，為0%抑制。 投與TP後之IDI1 mRNA之 X-倍誘導因數 抗雄激素效果 (抑制％) 對照組(TP) 7.07 0% TP+DRSP 5.39 27% TP+實例1 7.89 <0% TP+CPA 1.53 91% TP=丙酸睪酮；DRSP=曲螺酮；CPA =醋酸賽普羅特博 表6 :化合物之抗雄激素效果：基因表現中之變化 按照其臨床作用，吾人發現醋酸賽普羅特博顯示強力抗 140602.doc -16- 201000106 致 抗 雄激素物質效果，及曲螺_顯示較小但明顯的抗雄 果。與此相反，吾人發現本發明實⑴之化合 ;;

雄激素效果。 顯7F 通式I之新穎化合物係根據本發明如下所述而製備。反 應圖1中顯示的新穎C-環經取代之孕_4_烯_21，17_碳内醋之 合成途徑始於例如：已知化合物1[CAS: 95218-0H Nickisch等人Med· Chem. 1985 546-550]。

藉由例如甲續醯化及消去法引入Δ9·11雙鍵[Chamberlin 等人，J. Org. Chem· 1960,295]，產生化合物2(實例1)。 ❹

反應圖1 140602.doc -17- 201000106

反應圖2 條件：a)赭麯徽（Aspergillus ochraceus) ; b) CH3S〇2Cl，0比 啶，DMAP ; c) NaOAc，AcOH，Ac20 ; d)二溴二甲基乙 内醯脲，HF-吡啶（70%)，二氯甲烷；e) Bu3SnH/AIBN/ 苯；f) 2,2-二甲氧基丙烷、吡啶鑌-pTsOH ; g)CH2 = CHCH2OPO(NMe2)2，n-BuLi，THF ; h) l.N-曱基吡 口各烷 酮，NaOAc/H2〇，二溴二曱基乙内醯脲，2. LiBr/Li2C03 ; i) (CH3)3SO-I，DMSO，NaH。 另一種用於製備本發明化合物之方法如反應圖2所示。 (5)在發酵槽中使用微生物，由已知之15β，16β-亞曱基雄 甾-4-烯-3,17-二酮[\\^6(：1161*1;等人(3116111.361·. 106，1973， 140602.doc -18- 201000106 888](4)進行微生物羥基化作用而獲得，該等微生物使類固 醇在11位置，尤其係11α位置發生羥基化作用，例如举頭 徽屬、支頂抱屬W·)、棉花莖枯 病屬（Ascochyta sp.)、純被屬（Aspergillus sp.)、样嵐屬 (Bacillus sp.)、白僵蛰 M (Beauveria sp_)、香赛、黑瘸病議屬 (Botryodipoldia sp.)、甘簽、炼病镆慝〈Caldariomyces sp.)、 赤致屬（Caionectria sp.)、Μ 盤抱屣（Colletotrichum sp.)、 苦烏屬（Cwrvw/aWa 、鎌刀菌屬印」、赤黴菌 © 爆（Gibberella sp.)、織掌紙良数病爆（Gloeosporium sp.)、 核桃炭疽病屬、日規殼屬⑽mom'a印·）、 大單抵慝（Haplosporella sp.)、卷故数餍（Helicostylum sp.)、長罐抱屬（Helminthosporium sp.)、綠僵菌屬 (Metarhizium sp.)、毛徽屬（Mucor sp.)、黑抱子菌屬 (Nigrospora sp.)、酒麵菌屬（Rhizopus sp.)、側抱數屣 (Sporotrichum sp.)、头頭数餍（Syncephalastrum sp.)反板腐 病菌屬（Wojnowicia sp.)。

Q 尤其使用犁頭黴菌orc/πϋ)、藍色犁頭黴 (Absidia coerulea)、枝頂抱’数菌（Acremonium strictum)、 棉花莖枯病菌c/emai/山、蒜趟菌（^sperg/Z/w·? “//iacewO、泡盛麯黴awaworG、費希爾麯黴 (Aspergillus fischeri)、I 觀数（Aspergillus flavus)、良'夜觀 遠（Aspergillus malignus)、蜂蜜麵'数(Aspergillus melleus)、 構巢麵徽（04、黑麯徽（Aspergillus niger)、棕麵黴（Aspergillus ochraceus)、而t 鹽麯黴 140602.doc -19- 201000106 (Aspergillus variecolor)、色大芽抱释儀（Bacillus megaterium) 、球抱白僵囷、纖細白僵菌 tenella)、香焦黑腐病菌（B〇try〇diplodia ma丨orum)、甘簽、煤 病南（Caldariomyces fumago)、德可拉赤铁屬（Calonectria decora)、番蘇良痕病菌（Colletotrichum phomoides)、辑鸾 抱遙（Curvularia lunata)、尖抱鐫：71 菌（Fusarium oxysporium) 、售宿根腐病菌（Fusarium solani)、麥類_赤數病儀（Gibberella zeae)、核桃炭症病菌（G7omere//a cz’/igM/βία)、葡萄炭疽病 菌(Gloeosporium fructigenum)、鶴掌楸炭痕病菌 ^ (Gloeosporium higgensianum)、柿炭症病菌（G/oeospoz-iMwi 众ahj、乳色鶴掌揪炭疽病菌/aci/co/or)、油 撤欖炭疽病菌 fG/oeospor/ww o/ivarww)、小叢殼屬（G/owere//fl /««saro/i/e·?)、子囊日規殼疽病菌「Gwomom’a ez·«发 、小 單胞屬（Haplosporella hesperedica)、長境抱屬（Helminthosporium sp.)、梨形卷枝徽(Helicostylum piriforme)、黑後菌（Metarhizium 、密叢毛徽（Mwcor、刺囊毛徽（Mwcor 、球黑孢菌（W/grospora ίρ/ζαβηΥα)、少根根徽 〇 (^/π·ζο/?μ·5 arr/z/zwsj、科恩根徽、德氏根 徽 fTi/n’zo/jM·? ί/e/ewar)、日本根徽(7?/π·ζο/?μ·5 /apow/cMi)、酒 徵菌 M (Rhizopus kazaensis)、']、抱根’数（Rhizopus microsporus) 、米根黴種（^/π·ζο/?μ·5 or^yzae)、上海根黴（Rhizopus shanghaiensis)、葡枝根徽 0/π·ζο/?μ·5 ·5ίο/ο«(/1β〇、小麥曲根 徽(Τ?/2Ζ·ΖΟ/7Μ·5 iriiz’ci)、測抱徽屬（iS/JOrOiWc/zWm 、總狀星珠徽rflcewosww)、小麥根腐病 140602.doc •20· 201000106 菌（fFo/woiWcb gramzWs及 Wojnowicia /π·"α)。 具體言之，係使用彼等：犁頭黴菌（ATCC 6647)、枝頂 孢黴菌（NRRL 5759)、棉花莖枯病菌（CBS)、蒜麴菌（ATCC 10060)、泡盛麯黴（CBS)、費希爾麯黴（ATCC 1020)、炭疽 麴菌（IMI 16061)、蜂蜜麯黴（CBS)、構巢麯黴（ATCC 11267)、黑麯黴（ATCC 9142、ATCC 1 1394)、棕麯黴 (NRRL 405、NRRL 410、CBS 13252，ATCC 46504)、耐鹽 麯黴（ATCC 10067)、巨大芽孢桿菌（ATCC 13368)、球孢白 © 僵菌（IFO 5838、ATCC 13144、IFO 4848、CBS 1 1025、 CBS 12736、ATCC 7159)、香蕉黑腐病菌（CBS 13450)、甘 蔗煤病菌（ATCC 16373)、德可拉赤殼屬（ATCC 14767)、稗 彎孢菌（IX 3、NRRL 2380)、苜蓿根腐病菌（ATCC 12823)、 尖芽孢鐮刀菌（ATCC 7808)、麥類赤黴病菌（CBS 4474)、 核桃炭疽病菌（ATCC 12097、ATCC 10534、CBS 23849、 CBS 23749、ATCC 16646、IFO 6459、IFO 6425、IFO 6470、ATCC 15093、ATCC 10529、IFO 5257、ATCC w 56596、ATCC 64682)、小叢殼屬（ATCC 9552)、子囊曰規 殼疽病菌（CBS 15226)、小單胞屬 (CBS 20837)、梨形卷枝黴（ATCC 8992)、長蠕孢屬（NRRL 4671)、黑礓菌（IFO 5940)、球黑孢菌（CBS 29563)、黑孢 子菌（ATCC 12772)、少根根黴（ATCC 11145)、米根黴菌 (ATCC 4858、ATCC 34102、CBS 32947)、葡枝根黴 (ATCC 15441)、總狀星珠黴（IFO 4827)、小麥根腐病菌 140602.doc -21 - 201000106 隨後，11-羥基類固醇5藉由例如甲磺醯化作用及甲基磺 酸之鹼性消去法轉換成Δ9(ιυ衍生物7 ^後者可利用已知方 法（例如使用Olah試劑/Ν-溴代琥珀醯亞胺[〇1仏等人 Synthesis 19π，780])，藉由例如Δ9⑴}雙鍵之溴氟化作用 轉化為二酮8，並藉由還原法脫溴作用（例如使用氫化三丁 基錫）轉化為氟二酮9。將4-烯-3-酮系統（9)形成二烯醇醚1〇 之保護型後，由例如Sturtz [Synthesis 1980，289]之方法 或採用已知方法[3出匕入喂评.卜.21 1982，696;

Laurent. J. Steroid Blochem. 19 1983, 771]形成螺留内酯。 化合物U可藉由類似例如；[j.A· Zderic，Humbed〇 Carpio，a. BowerdCarl Djerassi 8加〇心，i i963， 之方法進行二烯醇醚溴化作用，及在5〇_12(rc之溫度下， 將6-溴化合物與含在非質子溶劑（例如二甲基曱醯胺或丨甲 基-2-吡咯烷酮）中的鹼性試劑（例如LiBi^Li2C〇3)加熱，或 在溶劑中（例如可力丁或二甲基吡啶）加熱6_溴化合物，以 除去溴化氫，轉換成4,6-二烯-3-酮12。化合物12然後根據 已知方法’藉由Δ6雙鍵之亞曱基化作用，例如使用二曱基 亞甲基氧锍鏘[參見，例如DE-A 1 1 83 500、DE-A 29 22 500 、EP-A 0 019 090、US-A 4,291，〇29 ; E. J. Corey 及 M. Chaykovsky ’ J.Am.Chem.Soc. 84 1962，867]，轉化為化 合物13，其會產生α及β異構體之混合物（比率取決於使用 之基質’通常以β異構體佔明顯優勢），其可藉由例如層析 法分離為單獨的異構體。如反應圖3所示，η_氟基團之引 入亦可發生，例如，自11 -羥基-4-烯二酮5開始，在有機溶 140602.doc 22· 201000106 劑（例如四氫呋喃）中，與全氟丁磺醯氟及DBU反應[參見， 例如 ’ Bennua-Skalmowski，Tet. Lett. 1995，2611]，形成 上述Η-氟類固醇9及同樣的上述Δ9(11)衍生物7之混合物， 其可由層析法分離成單個化合物，及隨後如上述進一步反 應。

反應圖3 條件· c’/e，）NfF，dBU，THF; d-i)見反應圖 2。

140602.doc 23- 201000106

反應圖4 所有反應條件見反應圖2(R=甲基、甲苯基） 從11-羥基類固醇5開始，有可能在5個步驟内藉由上述 方法製備4,6-二烯-3-酮18 ’由此本發明之化合物2隨後可 藉由6,7雙鍵（見上文）之亞甲基化反應而獲得。4,6_二稀_3_ 酮18亦可自4_烯-3-酮7開始，藉由上述方法在三個步驟内 獲得。 式5、6、7、8、9、10、II、12、14、15、16、17、 1 8、1 9及20之中間化合物全部係新穎化合物。本發明因此 係關於全部該等化合物。本發明另外係關於其作為起始化 合物及中間體用於製備通式I之本發明化合物的用途。 下列實例係用於更詳細解釋本發明： 140602.doc -24· 201000106 實例1 6β，7β;15β，16β·二亞甲基-3-側氧基·ΐ7-孕-4,9(11)-二烯· 21，17β·碳内酯 a) 6β,7β; 15β,16β-.一亞甲基-11α-甲續酿氧基-3 -側氧基-17-孕-4-稀- 21，17β -碳内醋

於〇°(：下將21.7 1111甲磺醯氯逐滴加入25§60,70;150，1叩_ 二亞甲基-11α-經基-3 -側氧基-17-孕_4_烯-21，17β -碳内酉旨 [CAS: 95218-07-8，Nickisch等人。j. Med· Chem. 1985, 546-55 0]在250 ml°比咬中的溶液，且在25°C下授拌該混合 物2小時。然後用乙酸乙酯稀釋，用碳酸氫鈉溶液、水及 鹽水沖洗至中性’在硫酸鈉上乾燥，及於40°C在真空中漢 縮。獲得30 g呈固體之純6β，7β;15β，16β-二亞甲基-ΐΐα-甲 石黃醢氧基-3-側氧基-17 -孕-4 -稀- 21,17β-碳内醋。 ^-NMR (600 MHz, CDC13): δ = 6.01 (s, 1H), 5.46 (d(br), 1H), 2.69-2.61(m, 2H), 2.56-2.46 (m, 3H), 2.39 (m, 1H), 2.27 (d(br), 1H), 2.19-2.13 (m, 2H), 1.89 (m, 1H), 1.81 (dd(br), 1H), 1.72 (m, 1H), 1.67 (m, 1H), 1.52-1.45 (m, 2H), 1.37 (m, 1H), 1.31 (m, 1H), 1.28 (s, 3H), 1.06 (m, 1H), 0.94 (s, 3H)，0.58 (m，1H)。 140602.doc -25· 201000106 b) 6择，7好；15这，16於-二亞甲基-3-側氧基-17-孕-4,9(11)-二燁 21，17β-碳内酯

在 25°C 下將 0.5 ml 乙酸酐加入 18·5 g 6β，7β;15β，16β-二亞 曱基-11α-曱磺醯氧基_3_側氧基_17_孕_4_烯_2ι，17ρ_碳内酯 在50 ml乙酸中的溶液，且在i〇0°c之槽溫下攪拌該混合物 8小時。然後加入水中，使用乙酸乙酯萃取三次，使用水 及鹽水沖洗至中性，在硫酸鈉上乾燥，及於4〇〇c之真空中 乾燥。獲得15.2§粗產物60，70;150，160-二亞甲基-3-側氧 基-17-孕-4,9(ll)_二烯_2ΐ，ΐ7β-碳内酯。使用己烷/乙酸乙 酯進行矽膠層析法，產生7·5 g純產物固體。 MS (El): m/z = 364 (M+)； 】H-NMR (400 MHz，CDC13): δ = 6.07 (s，1H)，4.96 (m，1H)， 2.97 (s, 3H), 2.75-2.51 (m, 3H), 2.47-2.31 (m, 3H), 2.22- 1-84 (m, 5H), 1.77-1.41 (m, 8H), 1.32-1.23 (m, 2H), l·03 (s, 3H), 0.84 (m, 1H). 實例2 6好，7择；15衫，163-二亞甲基_11?_氟-3_側氧基_17-孕_4-烯-21，17β-碳内輯 a) 11α-羥基·1Sp，16p_亞甲基雄甾_4_烯_3，17二網 140602.doc -26- 201000106

在一個包含1升已在高壓鍋中於121°C下殺菌30分鐘之營 - 養液（其包含3%葡萄糖單水合物、1%玉米漿、〇.2%硝酸 • 鈉、〇·1%磷酸二氫鉀、0.2%磷酸氫二鉀、0.05%氣化卸、 〇_〇5%硫酸鎂七水合物及〇 〇〇2%硫酸鐵（π)七水合物（調節 0 至ΡΗ 6.0))之2升錐形燒瓶中注入2 ml褚曲黴 菌株（NRRL 4〇5)之DMS〇冰培養液，且於m 下在每分鐘165轉之旋轉搖動器上振盪715小時。此預培 養液係用於接種20升發酵槽，其中已添加19升與預培養液 相同最終組成分之無菌培養基。另外，在滅菌前，亦加入 用於控制泡沫之1.0 ml矽酮油及丨〇 洛沙姆（Synper〇nic) 。該發酵槽在0_7 bar之超大氣壓下，於28°c溫度培養，其 母分鐘通氣8升及以每分鐘350轉之攪拌速度攪拌475小 ❹ 時。 從該20升發酵槽中取出2·5升預培養液，以接種至5〇升 發酵槽，其充滿47.5升與預培養液相同最終組成分之無菌 培養基。在滅菌前’添加2.5 ml矽酮油及2.5 ml泊洛沙 姆。在0_7 bar超大氣壓力，28°C之溫度，及每分鐘通氣1〇 升及每分鐘350轉之攪拌速度下進行1〇小時初始生長期 後’添加10.0 g 15β，16β-亞甲基雄甾-4-烯-3，17-二酮於200 ml DMF中的溶液。在通氣下繼續攪拌。26小時後收穫該 培養液。 140602.doc •27· 201000106 從該20升發酵槽中取出5.〇升預培養液，接種至ι〇〇升發 酵槽’其充滿95.0升與預培養液相同最終組成分之無菌培 養基。在滅讀刖’添加5.0 m 1梦嗣油及5.0 m 1泊洛沙姆。 在0.7 bar超大氣壓力’ 28°C之溫度，及每分鐘通氣20升及 每分鐘350轉之攪拌速度下進行10小時初始生長期後，添 加 20.0 g 15β，16β-亞甲基雄甾 _4_ 稀 _3，17 -二酮於 400 ml DMF中的溶液。在通氣下繼續攪拌。26.25小時後收穫該 培養液。 將該兩種培養液混合及使用60升甲基異丁基酮萃取 ◎ 1 9.75小時。將合併之有機相濃縮至乾。殘質係由己烷沖 洗以去除石夕酮油。產物自丙酮中結晶，且單離出19 2 g(理 論值的61〇/〇)11〇1-羥基-15 0，160-亞曱基雄留-4-烯-3,17-二 嗣。 取 100 mg經製備性 HPLC純化（250x40 mm ; Luna C18, 10 μ ’ 100 A ’ 水：乙腈 70:30，loo ml/min)。

M.p.: 225/247-249〇C

[a]D= +48.6° (CHC13, c= 1.0700) © W-NMR (400 MHz, CDC13): δ = 1.04 (s, 3H)，1.13-1.37 (m， 8H), 1.62 (dt, 1H), 1.77-1.91 (m, 2H), 1.99 (m, 1H), 2.03-2.21 (m, 4H), 2.31-2.57 (m, 5H), 4.05 (m, 1H). 5.78 (s, 1H). b) 11a-甲磺醯氧基-15β，16ρ-亞曱基雄甾_4_烯_3，17_二酮 140602.doc -28- 201000106

在〇°C下將23 ml甲磺醯氣逐滴加入22 g 1 Ια-羥基-15β，16β-亞甲基雄甾-4-烯-3,17-二酮於220 ml吡啶中的溶 液，且在25°C下攪拌該混合物2小時。然後用乙酸乙酯稀 釋’使用碳酸氫納溶液、水及鹽水沖洗至中性，在硫酸納 ❹ 上乾燥，及於40°C真空中濃縮。獲得24.7 g 11α-甲磺醯氧 基-15β，16β-亞曱基雄留-4-烤-3,17-二酮。 !H-NMR (600 MHz, CDC13): δ = 5.81 (m, 1H), 5.09 (m, 1H)，1.39 (s，3H)，1.21 (m，1H), 1.06 (s, 3H)。 c) 15β，16β-亞甲基雄甾-4,9(11)-二浠-3，17-二酮

在25°C下將0.82 ml乙酸肝添加至25·6 g 11α-曱續隨氧 基-15β，16β-亞曱基雄甾-4-浠-3,17-二_於8〇 mi乙酸中的溶 液’且在100eC之槽溫下攪拌該混合物8小時。之後加至水 中’用乙酸乙酯萃取三次’用水及鹽水沖洗至中性，在硫 酸鈉上乾燥，且於40°C真空中濃縮。自乙酸乙酯中結晶， 形成16.4§150，160-亞曱基雄甾-4,9(11)-二烯_3，17_二酮。 !H-NMR (600 MHz, CDC13): δ = 5.79 (m, ιΗ), 5.55 (m, 1H), 1.85 (m，1H), 1·65 (m，1H)，1.37 (s，3H)，1.12-1.33 140602.doc •29- 201000106 (2m，2H)，1.00 (s, 3H)。 d) 9α-溴-lip-氟-15ρ，16β-亞甲基雄甾-4-烯-3，17-二酮

將24.5 ml 70%濃度HF/吡啶緩慢加入8·76 g二溴乙内醯 脲在250 ml二氣甲烷中之懸浮液中。將16.3 g 15β，16β-亞 甲基雄留-4,9(11)-二烯-3，17-二酮加至所形成的溶液中， 且在室溫下攪拌30 min。之後將其倒入200 ml氨水（25%)與 300 ml冰之混合物中，使用乙酸乙酯萃取三次，使用水及 鹽水沖洗直至中性，在硫酸鈉上乾燥及於40°C真空中濃 縮。殘質自乙酸乙酯中結晶，產生15.2 g 9α-溴-ΙΙβ-氟-15 0，160-亞曱基雄甾-4-烯-3，17-二酮。 !H-NMR (600 MHz, CDC13): δ = 5.81(m, 1H) 5.28 (dt, 1H), 1.695 (d, 3H), 1.175 (d，3H)。 e) 11β-氟-15β，16β-亞甲基雄甾_4_稀_3，17二酮

在80C下，將33.5 g 9α-漠_ΐΐβ_氟·15β，16|3_亞甲基雄崔_ 在80°(：下，將33.5

140602.doc •30· 201000106 H-NMR (600 MHz, CDC13): δ = 5.73 (m, 1H), 5.28 (dq, 1H)，1.395 (d，3H), 1.175 (d，3H)。 f) 11P_氟-3_甲氧基-15P，16P-亞甲基雄留二烯_17.酮

將1.3 g吡啶曱苯磺酸鹽引入含1〇79 g n卜氟_ΐ5β，ι6ρ_ 亞甲基雄留-4务3，17-二酮之22〇 ml 2,2•二甲氧基丙院的 懸浮液中。然後在100〇C槽溫下攪拌3 h。在冷卻至室溫 後，添加2.5 ml三乙基胺，且在真空中將該混合物濃縮至 乾。將殘質與30 ml甲醇攪拌且抽吸濾出。得到96 g up 氟-3-甲氧基-15β，16β-亞曱基雄甾_3,5-二婦-17-酮。 ^-NMR (600 MHz, CDC13): δ = 5.27-5.19 (m, 1.5H), 5.14 (m，1H)，5.08 (q，0.5H)，3.60 (s，3H), 1.17 (m, 6H)。 g) lip-氟-3_曱氧基_15p，16p_亞曱基_17孕3 5二烯 21，17β-碳内酯 o

在-50°C下，將溶解於30 ml四氫呋喃之14 g烯丙基四甲 基磷二醯胺逐滴加入91 ml 1.6 Μ 丁基經溶液（己烧溶液） 中。在-20 C下授拌30 min後，添加22 ml Ν,Ν,Ν,Ν-四曱基 乙烷二胺，且讓該混合物回升至室溫。添加15 g I40602.doc •31 · 201000106 甲氧基-15β，16β-亞曱基雄留-3,5_二烯_17_酮在8〇 ml四氫呋 喃中的溶液，且在室溫下攪拌該混合物4小時。之後添加 飽和氣化銨水溶液’且倒入水中，使用乙酸乙醋萃取三 次，用水及鹽水沖洗直至中性，在硫酸鈉上乾燥，及於 40°C真空中濃縮。自乙酸乙酯中結晶，形成15 8 g up氟_ 3 -甲氧基-15β，16β-亞甲基-17-孕·3,5_二烯_2117β碳内酯。 •H-NMR (300 MHz, CDC13): δ = 5.28-5.22 (m, 1.5H) 5.17 (m, 1H), 5.09 (q, 0.5 H), 3.63 (s, 3H), 1.20 (m, 6H), 0.53 (m, 1H)。 h) lip-氟-15β，16β-亞甲基側氧基 _17 孕 _4,6_ 二烯 _ 21，17β-碳内酯

1，3-二溴-5,5-二甲基乙内醯脲連續分批加入135 g η卜氟· 3-甲氧基-15β,16β-亞甲基_17_孕_3,5_二稀_21，導碳内醋在 150 ml 1-甲基-2-料院酮的懸浮液中。錢在〇t(冰浴) 下授拌該混合物0.5小時’且在添加4.86 g漠化鐘及（27 § 碳酸鐘後，在HHTC之槽溫下攪拌3·5小時。然後將其倒入 冰水/氣化鈉，並過濾沉澱物。經矽膠6〇(使用ι:ι己烷/乙 酸乙醋洗提）層析，得到g丨小氟]5β,ι6卜亞曱基_3_側 氧基-17-孕-4,6-二烯_21，17β_碳内酯。 140602.doc •32- 201000106

Wr (_ MHz, CDC13): δ = 6 41 (m，ih)，6 22 (m， 1H)，5·68 (s，1H), 5.U (dq，1H)，！ 31 ⑷ 3h)，丨 2i ⑷坤, 0.60 (m，1H)。 υ 6p，7p;15M6P-二亞甲基七P-氣側氧基_17_孕_4_締_ 21，17β·碳内酯 ο

在室溫下將2,39 g氫化鈉（在礦物油中，6〇%)分批添加至 13.41 g三甲基氧化銃碘化物在25〇如無水dms〇中的溶 液，且在添加完成後，於室溫下攪拌該混合物3小時。然 後引入8_38 g 11β-氟-Ι5β，16β-亞甲基_3_側氧基_17_孕_46_ 二烯-2 1，17β-碳内酯，及在室溫下攪拌該混合物6小時。之 後倒入水中，使用乙酸乙酯萃取三次，使用水及鹽水沖洗 至中性，在硫酸鈉上乾燥及在4〇°C真空中濃縮。經矽膠60 層析（使用1:4己烷/乙酸乙酯洗提）純化。獲得2.6 g 6β，7β;15β，16β-二亞曱基-11β-氟·3_ 側氧基-17-孕-4-烯-21，17β-碳内醋之溶離份Α。 MS (El): m/z = 384 (M+), 349, 273, 260 ； !H-NMR (600 MHz, CDC13): δ = 5.99 (s, 1H), 5.07 (d(br), 1H), 2.69-2.61 (m, 2H), 2.53 (m, 1H), 2.43 (d(br), 1H), 2.35 (m, 1H), 2.27 (m, 1H), 2.17-2.10 (m, 2H), 2.02-1.95 (m, 2H), 1.83 (m, 1H), 1.68-1.62 (m, 2H), 1.61-1.52 (m, 140602.doc •33· 201000106 2H)，1·49 (m，1H)，1.40 (m. 1H)，K29 (d，3H)，i 25 (m， 1H)，1.21 (m，ih)，1.15 (d, 3H)，ι·〇4 (m，1H)，〇 59 (m， 1H)。 合成實例2之替代性方法： c，）15p，16P-亞曱基雄崔-4,9(11)_二烯-3，17_ 二酮及 〇 lip-氟-l5P，16p-亞甲基雄甾-4-烯·3，17·二酮

(1.5-5)逐滴添加至630 mg 11α_羥基_15β16卜亞甲基雄甾_ 4-烯-3，17-二酮在16 ml四氫呋喃中的溶液，滴加過程使内 部溫度不超過5°C。然後在〇eC下攪拌該混合物30 min，將 〇_55 ml全氟丁烧_1_續醯氟在不使内部溫度超過5艽之方式 下逐滴添加，及在〇。(：下進一步攪拌混合物丨5小時。然後 使用乙酸乙酯稀釋，使用2 Μ硫酸、飽和碳酸氫鈉溶液及 水沖洗，在硫酸鈉上乾燥且於4(rc真空中濃縮。用己烷/ 乙酸乙酯（1:1)洗提後，在矽膠上層析，在溶離份1得到 1 5β，16β-亞甲基雄留 _4,9( 11)_二烯 _3,1 7-二酮。 'H-NMR (600 MHz, CDC13): δ = 5.79 (m, 1H), 5.55 (m 1H)，1.85 (m，1H)，1.65 (m，ih)，ι·37 (s，3H)，1.12-1.33 (2m, 2H)，1.00 (s，3H)。 在溶離份2中單離出11β_氟_15β，16β-亞曱基雄留_4烯-3,17-二酮。 140602.doc 34· 201000106 ^-NMR (600 MHz, CDC13): δ = 5.73 (m, 1H), 5.28 (dq, 1H)，1.395 (d，3H)，1.175 (d, 3H)。 實例3 6〇1，7〇1;15好，16衫-二亞甲基-110-氟-3-側氧基-17-孕-4-烯-21，17β -碳内酯：

自實例2之溶離份Β獲得0.37 g 6α，7α;15β,16β-二亞甲基-110-氟-3-侧氧基-17-孕-4-烯-21，173-碳内酯。 MS (El): m/z =.384 (M+)； ]H-NMR (600 MHz, GDC13): δ = 5.94 (s, 1 H), 5.08 (d(br), 1H), 1.35 (s, 3H). 1.25 (m, 1H), 1.21 (m, 1H), 1.20 (d, 3H), 1.00 (m, 1H)，0.76 (ddd，1H), 0.54 (m，1H) 0.48 (m, 1H)。 _ 合成實例1之替代性方法： ❹ 第一種變化 a. 11α-羥基-3-曱氧基-15β，16ρ-亞甲基雄甾-3,5-二烯-17-酮

將3.2 g吡啶曱苯磺酸鹽引入27 g 11α-羥基-15β,16β-亞曱 基雄甾-4-烯-3，17-二酮在422 ml 2,2-二曱氧基丙烷之懸浮 液中。然後在l〇〇°C槽溫下攪拌該混合物18 h。冷卻至室 140602.doc -35- 201000106 溫後，添加10 ml三乙胺且在真空中濃縮乾燥。使用6〇… 曱醇攪拌殘質’且抽吸過濾。獲得14·3 g 11α_羥基_3_甲氧 基-15β，16β-亞甲基雄甾-3,5-二浠-17-酮。 W-NMR (400 MHz，CDC13); δ = 5.33 (d，寬，片 8Hz，m)， 5·14 (S，寬，1Η)’ 4.07 (m，1Η)，3.58 (s，3Η)，179 (m, 1Η)， 1.13 (s，3Η)，1.02 (s，3Η)。 b) 11α-羥基·3_甲氧基_ι5ρ，16ρ·亞甲基_17孕_3 5二烯_ 21，17p-碳内酯

在-50°C下，將溶於13 ml四氫呋喃之1〇 24 g烯丙基四曱 基磷二醯胺逐滴加至66.6 ml 1.6 M 丁基鋰溶液（己烷溶液） 中。在-20°C下攪拌30 min後，引入16⑹Ν，Ν,Ν,,Ν,_θ f 基乙烧一胺’然後逐滴添加5 g 1 ια_經基_3_曱氧基_ 15戸，160-亞甲基雄甾-3,5-二烯_17_酮在33 5 1111四氫呋喃中 的溶液。讓該混合物回升至室溫且隨後攪拌3〇分鐘。之後 添加25 ml飽和氣化錢水溶液，且倒入水中，使用乙酸乙 酯萃取三次，由水以及鹽水沖洗直至中性，在硫酸鈉上乾 燥，且在真空中濃縮。自二異丙醚中結晶，得到2 85琶 1 Ια-羥基-3-甲氧基_15β，16β-亞甲基_17_孕_3 5_二烯_ 2 1,17β-碳内酯。 i-NMR (400 MHz，CDC13): S = 5·31 (d，寬，J=4 〇Ηζ，1Η)， 140602.doc • 36 · 201000106 5.14 (s，寬，1H), 4_06 (m，1H)，3.58 (s，3H)，1.14 (s，3H)， 1.02 (s，3H)，0.46 (m, 1H)。 〇11〇1-經基-15好，1外-亞甲基_3_側氧基_17_孕_4,6_二缔_ 21，17β-碳内酯

在〇°C下，依序將14.8 mi ι〇%濃度醋酸鈉溶液以及4 g 1，3-二溴-5,5-二甲基乙内醯脲分批添加至13·5 g Ua_羥基_ 3-甲氧基-15β，16β-亞甲基_17_孕_3,5,9(11)_三烯_21，17卜碳 内酯的144 ml 1-甲基-2-吡咯烷酮懸浮液中。然後在〇〇c (冰 浴）下攪拌該混合物0.5小時，且添加4.88 g溴化鋰與4.31 g 碳酸鋰後，在8(TC之浴溫下攪拌3小時。隨後將其注入冰 冷之飽和氯化鈉水溶液中且使用乙酸乙酯萃取，用水及飽 和氣化納水溶液沖洗有機相，在硫酸鈉上乾燥並過濾，將 濾液濃縮至乾。獲得12.8 g ΐΐα_羥基_15β，16β_亞曱基_3_側 氧基-17-孕-4,6-二烯-21，17β-碳内酯粗產物。在矽凝膠上 使用己烷與乙酸乙酯之混合物層析樣品，用於分析。 i-NMR (400 MHz，CDC13): S = 6.34 (d,寬，J=9 6Ηζ，1Η)， 6·2〇 (d，寬，J=9.6Hz，1Η)，5.71 (s，寬，1Η)，4·05 (m，1Η)， 1.95 (m，1Η)，1·85 (m，1Η), 1.29 (m，1Η)，1.25 (s，3Η)，1·〇9 (s，3H), 0.57 (m，1H)。 d) 11α·曱磺醯氧基-15p，16p_亞甲基_3_側氧基_17_孕_4,6_ 二烯-21,17p-碳内酯 140602.doc -37- 201000106 Ο

將 12·8 g 11α-羥基-15β，16β·亞曱基·3 二烯-21，17β-碳内醋溶於113瓜卜比 疋甲然後逐滴添；{ 入 10.91 ml甲烷磺醯氣。在室溫下攪拌該混合物9〇分鐘且 1.5升冰水中。攪拌兩小時後抽吸過濾，乾燥遽餅及 矽膠上’使用己烷與乙酸乙酯之混合物層析。獲 • g

1 Ια-甲磺醯氧基-15β，16β-亞曱基-3-側氧基_17_孕_4,6_二 烯-21,17β-碳内酯。 W-NMR (400 MHz，CDC13): δ = 6·33 (d，寬，j=9.6Hz，1Η)， 6.23 (d，寬，J=9.6Hz，1H)，5.74 (s，寬，1H), 5.10 (m，1H)， 3.01 (s，3H)，1.56 (m，1H)，1.45 (m，1H)，1.30 (s，3H)，1.14 (s, 3H)，0.59 (m，1H) 〇 e) 15M6P-亞甲基_3_側氧基_17-孕-4,6,9(11)·三稀. 21，17P-碳内酯

在90°C下’攪拌14.8 ml乙酸、0.16 ml乙酸酐與2.44 g醋 酸鈉直至醋酸鈉溶解。將53 g 11α_甲磺醯氧基_15β，16β_ 亞曱基-3 -侧氧基_ΐ7 -孕_4,6 -二烯-21,17β-碳内醋加入該溶 液中。在100°C下攪拌5小時後，倒入冰水中且使用乙酸乙 140602.doc • 38- 201000106 酉旨萃取三次。使用水與飽和氣化納水溶液洗務有機相，且 在硫酸鎮上乾燥後，過渡及濃縮慮液。於石夕膠上使用己炫 與乙酸乙醋之混合物層析，產生212 g 15ρ,ΐ6β_亞甲基: 侧氧基-17-孕-4,6,9(11)_三烯_21，17ρ_碳内酯。 土 1H-NMR (则 MHz，CDC13): s = 6 36 (d，寬，j=9 6Hz，⑻， 6.24 (d，寬，J=9.6HZ，1H)，5.72 (s，寬，iH)，5 48 (m，ih), 3.09 (d, %, J=11.7Hz, 1H), 1.84 (m, 1H), I.47 1H)? 1.38 (m, 1H), 1.32 (s, 3H), 1.03 (s, 3H), 0.59 (m, 1¾) 〇 © f) 6P，7P;15P，16P-二亞甲基 _3_ 側氧基 _17 孕 _49⑴）二稀 21,17β-碳内酯

在室溫下，將0.09 g氫化鈉（在礦物油中，6〇%)分批添加 至0.52 g二甲基氧化錡碘化物的4 ml無水〇]^8〇溶液中添 加完成後，在室溫下攪拌該混合物2小時。然後，在〇充 下，引入0.2 g 15β，16β-亞曱基_3_ 側氧基-17-孕 _4,6,9(ΐι)_ 三烯-21，17β-碳内酯，且在室溫下攪拌該混合物25小時。 隨後將該混合物攪拌加入1 〇〇 ml硫酸（8體積％)中且使用乙 酸乙酯萃取。依序使用水及飽和氣化鈉溶液洗滌有機相， 在硫酸鈉上乾燥及過濾。在真空中濃縮且於矽凝膠上使用 由乙酸乙醋與己烷組成之洗提液層析，得到3〇吨 6β，7β;15β，16β-二亞甲基 _3_ 側氧基 _17_ 孕 二烯 _ 140602.doc •39· 201000106 21，17β-碳内酯。 光譜數據參考實例lb。 第二種變化 a· 3-甲氧基-5β，16β-亞甲基雄甾_3,5,9-(11)-三烯-17-酮

將0.8 g吡啶甲苯磺酸鹽引入6.4 g Ββ,ΐόβ-亞曱基雄甾-4,6,9(11)-三烯-3,17-二酮在106 ml 2,2-二甲氧基丙烷的懸 浮液中。然後在100°C槽溫下攪拌該混合物6小時。冷卻至 室溫後’添加5 ml °比咬且5分鐘後，在真空中濃縮至乾。 使用130 ml曱醇攪拌殘質且抽吸過濾。獲得4· 15 g 3-甲氧 基-15β,16β-亞曱基雄甾-3,5,9(11)-三烯-17-酮。 ^-NMR (400 MHz，CDC13): δ = 5.47 (s，寬，1H)，5.33 (s, 寬，1Η)，5·19 (s,寬，1Η)，3.59 (s, 3Η), 2.70 (m，2Η)，2.38 (m, 1H), 1.83 (m, 1H), 1.66 (m, 1H), 1.15 (s, 3H), 0.99 (s, 3H)。 b) 3_ 甲氧基-15P46P-亞甲基-17-孕-3,5,9·(11)-三烯-21，17ρ-碳内酯

於-50。(3下，將溶於11.4 ml四氫呋喃之6.51 g烯丙基四曱 基磷二醯胺逐滴添入42.2 ml 1.6 Μ丁基鋰溶液（己烷溶液） 140602.doc -40· 201000106 中。在-20°C下授拌30 min後，引入1〇 21如n nnin，四 甲基乙烧二胺，然後逐滴添加4.14 g ”氧基]料亞 甲基雄甾-3,5,9(11)-三烯_i7-酿I的29 4 mi 叫幻y·4 ml四氫呋喃溶液 中。將該混合物暖至室溫且授拌3〇分鐘。然後添加a山 ❹ 飽和氯化銨水溶液及倒入水中，使用乙酸乙酯萃取三次， 用水以及鹽水洗滌直至中性，在硫酸鈉上乾燥，且在真空 中濃縮’ 匕時開始結晶。抽吸過濾以去除剩餘溶劑，得到 3.14 g 3-甲氧基-15β，16β·亞曱基 _3,5,9_(11)_ 三烯 _21，導 碳内酯。 ^H-NMR (300 MHz, CDC13)： δ = 5.45 (s, t, 1Η), 5.32 (s, 寬，1Η)，5.18 (s，寬，1Η)，3·59 (s，3Η)，i 15 (s，3η)，〇 % (s，3Η)。 c) 15β，16ρ-亞甲基_3·側氧基·117·孕（Μ⑴）三蝉_ 21，17β-碳内酯

在〇C下，依序將丨.7 ml 1〇%濃度醋酸鈉溶液與〇 6 g 1,3 —溴5,5 - 一曱基乙内醯腺分批加入2_2 g 3 -曱氧基_ 叫，1邱-亞曱基-η-孕-^叩卜王烯心’叩碳㈣在35 ml 1 -甲基-2-»比咯烷酮的懸浮液中。然後在〇。〇（冰浴）下攪 拌該混合物0.5小時，且添加〇·83 g溴化鋰與〇74 g碳酸鋰 後’在IGGt之槽溫下㈣35小時。隨後注人冰水/氯化納 140602.doc -41- 201000106 中，且過濾沉澱物。於矽膠60上層析（使用己烷/乙酸乙酯 1:1洗提），得到1.2 g 15β,16β-亞甲基-3-側氧基-17-孕-4,6,9(11)-三烯-21，170-碳内酯。 光譜數據與第一種變化e比對。 d) 6β，7β;15β，16β-二亞曱基-3-側氧基-17-孕-4,9(11)-二 烯-21，17β-碳内酯

步驟及操作法參考第一種變化f。 140602.doc -42-

Claims (1)

1. 201000106 七、申請專利範圍： 1· 一種通式I之孕-4-烯_21，17_碳内酯：

   R係α-或β-亞甲基，且 係氫原子’且R"係溴、氯或氟原子，或 及R 一起形成一個鍵。 2’如叫求項1之孕烯_21，17-碳内酯，其特徵在於R9係位 於α位置。 月求項1之孕_4-烯-21,17-碳内酯，其特徵在於Rn係位 於β位置。 〇 清求項1之孕-4-烯-21,17-碳内酯，其特徵在於鹵素原 子尺1係氟或氣原子。 青求項4之孕-4-烯-21，17-碳内酯，其特徵在於鹵素原 子RU係氟原子。 6.如。月求項1之叩，70;15|3，16卜二亞甲基-3_側氧基_口_孕_ 4,9(U)-二烯 _21，1%_碳㈣。 求項1之孕_4_稀-21，17-碳内醋’明確言之係 氣6β，7β，15β，16β-一亞曱基-3-側氧基_ΐ7-孕-4-稀_ 21，17卜碳内酯； 140602.doc 201000106 6Ρ’7β;15β，16β-二亞甲基側氧基_17孕·4烯_ 21，17Ρ·碳内酯； ，7α，ΐ5β，16β-一 亞甲基-11β-敦-3-側氧基_17_孕_4_豨_ 21 ’ 17β-碳内醋。 8. 9. 10 11. 12. 13. 14. 15. 16. 17. 18. 一種醫藥產品，其包含至少一種如請求項丨之通式〗化合 物’及醫藥上可接受的載體。 如切求項8之醫藥產品，其包括6β，7β;15β，16β-二亞甲基_ 3-側氧基_17_孕_4 9(11)·二烯_2117ρ碳内酯。 如月求項8之醫藥產品，其包括6β,7β;15β，16ρ二亞甲基_ Πβ-氟-3-側氧基_17-孕_4_烯_21，17J3碳内酯。 如請求項8、9或1G之醫藥產品，其另外包括至少一種雄 激素。 奢求項11之醫藥產品，其包括炔雌醇（ethinylestradi〇l)。 用长項11之醫藥產品，其包括天然雌激素。 =求項13之醫藥產品，其包括雌留二醇（〇estradi〇i)。 月长項13之醫藥產品，其包括雌留二醇戊酸酯 (〇estradi〇1 valerate)。 請求項13之醫_產品，其包括至少—種經共辆雌激 素0 -種4羥基-15β，16ρ-亞甲基雄留_4·烯_3，17二酮 係作為用於製備通式！之化合物的起始化合物。 二 -種製備"α-羥基·15ρ蹲亞甲基雄留_4_烯_3，17、 法其特徵在於1邱,16卜亞甲基雄留l烯_3，i: 嗣在發酵槽中’以下列微生物進行經基化：㈣ 140602.doc 201000106 (Absidia sp.)、支頂抱屬（Acremonium sp，）、梅在隻枯病 屬（Ascochyta sp.)、隨数屬（Aspergillus sp.)、择备屬 (BaciUus sp.)、白僵菌餍（Beauveria spj、香 1黑腐病菌 屬（Botry〇dip〇idia Sp.)、甘疾煤病菌屬（Caldariomyces SP’）、赤敦屬（Calonectria sp.)、刺盤抱屬（Colletotfichum

   SP’）、苦烏屬（Curvularia sp.)、鐵 X)儀屬（Fusarium SP.)、赤敬镆屣（Gibberella sp.)、鵝t楸良疽病Mt (Gloe〇sp〇rium sp.)、极桃良氮病癢（Gl〇mereua sp)、这 規设屬（Gnomonia sp.)、大單抱屣（Haplosporella sp.)、 卷枝飯屬（Helicostylum sp.) ' 長蹲抱餍（He丨minthosporium SP·)、綠僵菌屬（Metarhizium sp.)、毛黴屬（Mucor sp.)、 黑抱子菌屬（]\[igr〇sp〇ra sp )、酒麴菌屬（Rhiz〇pus邛）、 Ή h 徽屬（Sporotrichum sp.)、共頭徽屬（Syncephalastfum SP.)及板腐病嵐慝（j^0jnowicia Sp.) o 19.如請求項18之方法，其特徵在於使用下列微生物進行羥 基化作用.犁頭徽邊山·α 山、藍色單頭徽 C〇erw/ea)、枝頂孢黴菌Mcremo,的·以⑽）、 棉花莖栝病菌加沉一 c/e_zW_、蒜麵菌咐㈣^ 、泡盛麯黴叫、費希爾麯 '数（ASP^gWUS fischeri)、^m^(AspergiUus ^⑽似）、良 疽麴菌喷//w则/咖叫、蜂蜜麯黴…^⑼"似 则//叫、構巢超徽咖印//μ"咖、黑麯黴 (抑邮//心咖）、標麯黴咖叩·‘ 〇c—小财 靈缝徽 〇4spergilluS varieco!〇r)、 巨大痒抱桿菌（BaciHus 140602.doc 201000106 wega/erz’wm)、球抱白僵菌、纖細白 優镜（Beauveria tenella)、香篆票、腐病菌（Botryodiplodia wa/orwm」、甘嚴煤病菌「Ca/iiar/om少ces /wwflgo)、德可拉 赤後 M (Calonectria decora)、螯蘇良癌_ 病議（Colletotfichum phomoides)、辑秀抱菌（Curvularia Iunata)、尖抱鐵刀菌 (Fusarium oxysporium)、售辖根腐病菌（Fusarium solani)

   、麥類赤黴病菌、核桃炭疽病菌 (Glomerella cingulata~)、葡萄良痕病議（Gloeosporium fructigenum) ' ^ ^ Μ % (Gloeosporium higgensianum) 、柿炭疽病菌（G/oeoworz’wm 、乳色鵝掌楸炭疽病 菌（G/oeosjooWMW /ac"co/or) ' 油撤欖1炭症病菌（Ό7οβ〇·ί/>οη·Μ/τ/ o/z'vflrwm)、小叢殼屬（G/omere//a /wsarozWe·?)、子囊曰規 故痕病辕（Gnomonia cingulata)、'\、單％ 慝（Haplosporella hesperedica)、長蹲抱屬（Helminthosporium sp.)、梨形卷 枝黴（He丨icostylum piriforme)、禀、後菌（Metarhizium aTikop/z'aej、密叢毛黴（Mwcor 、刺囊毛黴

   (Mucor spinosus)、珠黑抱儀（Nigrospora sphaerica)、少 根根黴、科恩根徽β/2Ζ·ΖΟ；?⑽ 、 德氏根徽（Rhizopus delemar)、日冬根'数（Rhizopus japonicus) 、酒翅菌（Jihizopus kazaensis)、'\、抱根’飯（Rhizopus mierc^porMW、米根黴種（Τί/π'ζο/ίΜ·? oryzae)、上海根黴 (Rhizopus shanghaiensis)、葡枝根'飯（Rhizopus stolonifer) 、小麥曲根黴、測抱黴菌 sw/ZureMew·?)、總狀星珠黴(^ywcep/za/aWrwm racewosMwj、 140602.doc 201000106 小麥根腐病菌（灰及麥根腐黴菌 (Wojnowicia hirta)。 20.如請求項19之方法，其特徵在於使用下列微生物進行羥 基化作用：犁頭黴菌（ATCC 6647)、枝頂孢黴菌（NRRL 5759)、棉花莖枯病菌（CBS)、蒜麴菌（ATCC 10060)、泡 盛麯黴（CBS)、費希爾麯黴（ATCC 1020)、炭疽麴菌（IMI 16061)、蜂蜜麯黴（CBS)，、構巢麯黴（ATCC 1 1267)、黑 麯黴（ATCC 9142、ATCC 1 1394)、棕麯黴（NRRL 405、 © NRRL 410、CBS 1302、ATCC 46504)、耐鹽麯黴 (ATCC 10067)、巨大芽孢桿菌（ATCC 13368)、球孢白僵 菌（IFO 5838、ATCC 13144、IFO 4848、CBS 1 1025、 CBS 12736、ATCC 7159) ' 香蕉黑腐病菌（CBS 13450)、 甘蔗煤病菌（ATCC 16373)、德可拉赤殼屬（ATCC 14767)、稗彎孢菌（IX 3、NRRL 2380)、苜蓿根腐病菌 (ATCC 12823)、尖芽孢鐮刀菌（ATCC 7808)、麥類赤黴 病菌（CBS 4474)、核桃炭疽病菌（ATCC 12097、ATCC 10534、CBS 23849、CBS 23749、ATCC 16646、IFO 6459、IFO 6425、IFO 6470、ATCC 15093、ATCC 10529、IFO 5257、ATCC 56596、ATCC 64682)、小叢殼 屬（ATCC 9552)、子囊曰規殼痕病菌（CBS 15226)、小單 胞菌（i/aj!7/〇5；7〇re//a /zesperecih'caXCBS 20837)、梨形卷枝 黴（ATCC 8992)、長蠕孢屬（NRRL 4671)、黑殖菌（IFO 5940)、球黑孢菌（CBS 29563)、黑孢子菌（ATCC 12772)、少根根黴（ATCC 11145)、米根黴菌（ATCC 140602.doc 201000106 4858、ATCC 34102、CBS 32947)、葡枝根黴（ATCC 15441)、總狀星珠黴（IFO 4827)、小麥根腐病菌 89168) 〇 140602.doc 201000106 四、指定代表圖： (一) 本案指定代表圖為：（無） (二) 本代表圖之元件符號簡單說明：

   五、本案若有化學式時，請揭示最能顯示發明特徵的化學式：

   140602.doc