TW201008574A - INHBB epitope peptides and vaccines containing the same - Google Patents

Description

201008574 y polypeptides, or the pharmaceutical agents of the present invention. The cancers to be targeted include, but are not limited to, cholangio cellular carcinoma, esophageal cancer, non-small cell lung cancer (NSCLC), renal carcinoma, small cell lung cancer (SCLC) and . soft tissue tumor. « 四、 指定代表圖： ❹ (一） 本案指定代表圖為：第（la)圖。 (二） 本代表圖之元件符號簡單說明：無。 五、 本案若有化學式時，請揭示最能顯示發明特徵的化學式： 無。 六、 發明說明： 〇 【發明所屬之技術領域】 本發明係關於生物科學領域，更特別對於癌症治療領 域。特別是，本發明係關於新穎之胜肽，其當作癌症疫苗 與治療與避免腫瘤之藥物為非常有效。 【先前技術】 已證實CD8 +細胞毒殺性τ淋巴球辨認來自建造於主要 組織相容性抗原複合體（maj〇r histocompatibility complex, MHC)class I分子上之腫瘤相關抗原（tumor- 3 201008574 associated antigens, TAAs)的抗原決定位胜肽，且之後 殺死腫瘤細胞。自從發現黑色素瘤抗原（melanoma ant igen， MAGE)家族為腫瘤相關抗原之第一個例子，主要藉由免疫方 法已發現許多其他腫瘤相關抗原（NPL 1: Boon T，Int J Cancer 1993 May 8, 54(2): 177-80; NPL 2: Boon T & van der Bruggen P, J Exp Med 1996 Mar 1，183(3): 725-9)。 一些腫瘤相關抗原目前接受臨床發展當作免疫治療標的。 能誘導有效且專一之抗腫瘤免疫反應的新腫瘤相關抗 原之辨認成為多種形式癌症之胜肽疫苗接種策略 (vaccination strategies)之更進一步發展與臨床應用的 根據（NPL 3: Harris CC，J Natl Cancer Inst 1996 Oct 16， 88(20): 1442-55; NPL 4 : Butterfield LH et al., Cancer Res 1999 Jul 1, 59(13): 3134-42; NPL 5: Vissers JL et al. , Cancer Res 1999 Nov 1, 59(21): 5554-9; NPL 6 : van der Burg SH et al., J Immunol 1996 May 1, 156(9): 3308-14; NPL 7: Tanaka F et al. , Cancer Res 1997 Oct 15, 57(20): 4465-8; NPL 8: Fujie T et al. , Int J Cancer 1 999 Jan 1 8, 80(2): 1 69-72; NPL 9: Kikuchi M et al., Int J Cancer 1 999 May 5, 81(3)： 459-66; NPL 10: Oiso M et al·， Int J Cancer 1999 May 5， 81(3): 387-94)。 迄今已有使用這些腫瘤相關抗原衍生之胜肽的臨床試驗的 許多報導。不幸地，到目前為止，於這些癌症疫苗試驗中， 僅觀察到一低的客觀反應率（objective response rate)(NPL 11: Belli F et al., J Clin Oncol 2002 Oct 201008574 ' 15, 20(20): 4169-80; NPL 12: Coulie PG et al. , Immunol

Rev 2002 Oct, 188: 33-42; NPL 13: Rosenberg SA et al., Nat Med 2004 Sep, 10(9): 909-15) 〇 近來，已發展對於預測HLA class I -結合胜肽序列的 演算法（NPL 14: Journal of Immunological Methods, . ( 1 995), Vol.185, pp. 181-190, NPL 15: J. Immunol., * (1994), Vol.152, pp.163-175, NPL 16: protein science,

(2000)，Vol.9，pp. 1838-1846)。然而，評估一預測之抗 原決定位是否可於目標細胞中被自然處理且與HLA分子表 現於目標細胞上為困難的。此外，演算法，例如BIMAS (bimas.dcrt.nih.gov/cgi-bin/molbio/ken_parker_comb oform)(NPL 17: Parker KC, et al., (1994) J Immunol.; 152(1):163-75.； NPL18: Kuzushima K, et al., (2001) Blood. ; 98(6) :1872-81.)，會建議少於精確的HLA分子結 合胜肽（NPL 19: Bachinsky MM，et al·，Cancer Immun. 〇 2005 Mar 22;5: 6.)。因此，腫瘤相關抗原篩選仍是具挑戰 性且困難的。 抑制素（inhibin)為由一 alpha-次單元（INHA)與兩個 beta-次單元（beta-A或beta-B)之一所組成之異二聚體酶 蛋白（heterodimeric glycoprotein)。beta -B(INHBB)為 抑制素與活化素（activin)兩者之次單元，兩個緊密相關之 醣蛋白具有相對之生物作用。藉由使用一含有23, 〇4〇個基 因之全基因體範圍（genome_wide)cDNA微陣列之基因表現 輪庵分析，近來顯示INHBB於一些癌症中，例如非小細胞 5 201008574 肺癌（non-small cell lung cancer，NSCLC)、腎細胞癌 (renal cell careinoma)(PTL 1： W02005/019475 ; PTL 2: W02007/013575)與食道癌（參見 PTL 3: W02004/031413, PTL 4: W02005/019475, PTL 5: W02007/013575, and PTL 6: W02007/013671，在此藉由引用文獻將其所揭露引入） 被向上調控（up-rgulated)。因此，對於癌症免疫治療而言 INHBB為有興趣之目標，且藉由本技術領域之那些搜尋來 自其之細胞毒殺性T淋巴球誘導抗原決定位胜肽。 【引用文獻】 [非專利文獻] [NPL 1] Boon T, Int J Cancer 1993 May 8, 54(2): 177-80 [NPL 2] Boon T & van der Bruggen P, J Exp Med 1996 Mar 1, 183(3): 725-9 [NPL 3] Harris CC, J Natl Cancer Inst 1996 Oct 16, 88(20): 1442-55 [NPL 4] Butterfield LH et al. , Cancer Res 1 999 Jul 1, 59(13): 3134-42 [NPL 5] Vissers JL et al., Cancer Res 1 999 Nov 1, 59(21): 5554-9 [NPL 6] van der Burg SH et al. , J Immunol 1 996 May 1, 156(9): 3308-14 [NPL 7] Tanaka F et al., Cancer Res 1997 Oct 15, 57(20): 4465-8 201008574 [NPL 8] Fujie T et al., Int J Cancer 1999 Jan 18, 80(2): 169-72 [NPL 9] Kikuchi M et al., Int J Cancer 1999 May 5, 81(3): 459-66 [NPL 10] Oiso M et al., Int J Cancer 1 999 May 5, 81(3): 387-94 [NPL 11] Belli F et al. , J Clin Oncol 20 02 Oct 15, 20(20): 4169-80 [NPL 12] Coulie PG et al., Immunol Rev 2002 Oct, 188: 33-42 [NPL 13] Rosenberg SA et al., Nat Med 2004 Sep, 10(9): 909-15 [NPL 14] Journal of Immunological Methods, (1995), Vol.185, pp. 181-190 [NPL 15] J. Immunol., ( 1 994), Vo 1.152, pp.163-175 [NPL 16] protein science, (2000), Vol.9, pp.1838- 1846 [NPL 17] Parker KC, et al., (1994) J Immunol.; 152(1):163-75.

[NPL 18] Kuzushima K, et al., (2001) Blood.;98 (6):1872-81.

[NPL 19] Bachinsky MM, et al., Cancer Immun. 2005

Mar 22 ; 5:6. [專利文獻] 7 201008574 [PTL 1] W02005/019475 [PTL 2] W02007/013575 [PTL 3] W02004/031413 [PTL 4] W02005/019475 [PTL 5] W02007/013575 [PTL 6] W02007/013671 【發明内容】 本發明部分基於發現免疫治療之適合標的。由於腫瘤 相關抗原（tumor-associated antigens, TAAs)常誘導免疫 耐受力（immune tol eranee)且因此引起貧乏之免疫抗原性 (immunogenicity)，所以發現適合之標的極度重要。確認 於膽管細胞癌（cholangio cellular carcinoma)、食道癌、 非小細胞肺癌（non-small cell lung cancer, NSCLC)、腎 癌、小細胞肺癌（small cell lung cancer，SCLC)與軟組 織腫瘤的癌症組織中，已確定INHBB為被向上調控，為了 更進一步之分析，本發明以由GenBank Accession No. ΝΜ_0021 93 (序列辨識號：15 )之基因所編碼出之人類抑制 素，beta B(INHBB)蛋白質（序列辨識號：16)為標的。特別 是’選擇包含抗原決定位胜肽之/#及及^基因產物來研究， 上述抗原決疋位胜狀引出專一於對應分子之細胞毒殺性τ 淋巴球。使用與來自INHBB之候選胜肽結合的HLA-A*0210 刺激自健康it供者獲得之周邊血液單核細胞（peripheral blood mononuclear cells，PBMCs)。建立專一辨認經分別 201008574 之候選胜肽脈衝（pulsed)之HLA_A〇2目標細胞的細胞毒殺 性T淋巴球，且確認可誘導抗表現於腫瘤細胞表面之画B 之有效與專-之免疫反應的HU，限制抗原決定位胜 狀。這些結果證實麵B具強效致免疫性，且其抗原決定 位為癌症免疫治療之有效標的。 因此’提供具有細胞毒殺性7淋巴球誘發能力之胜狀 與擇自序賴職：1至14之-職酸相林發明之- ❹目標，且其具有細胞毒殺性τ淋巴球誘發能力。此外，本 發明考慮經修飾之胜肽，其中取代或加入一、二或多個胺 基酸，只要經修飾之胜肽維持最初之細胞毒殺性τ淋巴球 誘發能力。 當投予-個體時，纟發明胜肽被表現於抗原呈現細胞 之表面，且之後誘導細胞毒殺性τ淋巴球將分別之胜肽做 為目標。因此提供表現任一本發明胜肽之抗原呈現細胞與 外吐小體及誘導抗原呈現細胞之方法為本發明之一目標。 Ο 藉由投予本發明之1ΝΗΒβ多胜肽或編碼出該多胜肽之 多核普酸及表現JNHBB多胜肽之外吐小鱧與抗原呈現細胞 誘導一抗遽瘤免疫反應。因此，提供一藥學試劑，其包含 多胜肽或編碼出其之多核苷酸及外吐小體與抗原呈現細胞 為活性成分為本發明之另一目標。本發明之藥學試劑提供 做為疫苗。 此外，提供癌症（腫瘤）之治療及/或預防（即避免）及/ 或其手術後復發之避免的方法’與誘導細胞毒殺性Τ淋巴 球的方法、誘導抗腫瘤相關内皮（end〇thel ia)免疫反應及 9 201008574 抗腔瘤免疫力的方法為本發明之一更進—步目標，其方法 包括投予IN刪多胜肽、編碼丨ΙΝΗΒβ多胜肽之多核苦酸、 表現INHBB多胜肤夕& ‘ ,地_»_、， 狀之外吐小體或抗原呈現細胞或本發明之 樂學試劑的步驟。此外，太恭 此外本發明之細胞毒殺性Τ淋巴球也 提供使用如抗癌疫苗。滤、库& 丈田癌症的例子包括，但不限於膽管細 胞癌、食道癌、非小細胎胁處 j細m肺癌、賢癌、小細胞肺癌與軟組 織腫瘤。 需要瞭解的是，本發明之前述發明内容與下列詳細叙 述兩者為做為例子之實施例’並不限制本發明或本發明之❿ 其他替代實施例。 【實施方式】 雖然於本發明實施例之會始$、日丨4 & j &貫施或測試中可使用相似或等 同於在此敘述之那些的任何大 7方法與材料’但是現在敘述較 佳之方法、元件與材料。铁 …而在敘述本發明材料與方法之 月丨·！ ’需瞭解的是，木發明·}f T im ❹ 本發明並不限於敘述於此之特定大小、 开>狀、尺寸、材料、方法學、 字步驟等’例如按照慣例實驗 法與最佳化可將其變更。也需瞭解的是，於此敘述中使用 之專門用語僅是為了敘料収變化形式或實施例，且不 傾向限制僅會受限於所附 町上之申請專利範圍的本發明 圍0 、專利或專利公開之揭露 内容中。然而，於此並沒 發明之效力不被給予先於 於本說明書中提及之各刊物 特別地於此處引入參考文獻於其 有被解釋為承認本發明由於先前 10 201008574 這些揭露之權力 如果發生抵觸，本發明說 乃晉，包括疋義，將會控制 此外，材料、方法與實施例僅為 .定義 馮說明，並不傾向於限制， 於此使用之單字“一”肖“該”意指 以別的方式明確指出。 於此可替換使用之用語“多胜肽，，、“胜肽，，與‘‘蛋

白質”意指胺基酸殘基之-聚合物。此㈣適用於胺基酸 聚合物’於其中-或多個胺基酸殘基為—經修飾之殘基或 非自然發生之殘基，例如-對應自然發生胺基酸與自然發 生胺基酸聚合物之人工化學模仿物。 於此使用之用語“胺基酸，，意指自然發生與合成之胺 基酸，及胺基酸類似物與胺基酸模仿物，其與自然發生之 胺基酸起相似作用。自然發生胺基酸為基因密碼所編碼的 那些與於細胞中在轉譯後被修飾的那些（例如羥脯胺酸 (hydroxyproline) 、 7 _ 羧基谷胺酸（gamma_ carboxyglutamate)與 0-磷絲胺酸（〇-phosphoserine))。 措辭‘‘胺基酸類似物”意指具有與自然發生胺基酸相同之 基礎化學結構（一 α碳鍵結至一氫、一羧基、一胺基與一 R基）的化合物，但具有一經修飾之R基或經修飾之骨架（例 如’同絲胺酸（homoserine)、降亮胺酸（norleucine)、甲 硫胺酸（methionine)、亞颯（sulfoxide)、曱基硫氨項 (methionine methyl sulfonium))。措辭“胺基酸模仿物” 意指化學化合物其與一般胺基酸具有不同結構，但有相似 11 201008574 的功能。 可藉由由 IUPAC-IUB Biochemical Nomenclature Commi ss i on所建議之其一般所知的三字母符號或一字母符 號來指出於此處之胺基酸。 於此可替換使用用語“基因，，、“多核苷酸”、“核 普酸”與“核酸”，且除非以別的方式指出，以其一般被 接受之單一字母密碼來指出。

除非以別的方式定義，用語“癌症，’意指過度表現 /#洲方基因之癌症，包括，但不限於，例如膽管細胞癌 (cholangio cellular carcinoma)、食道癌、非小細胞肺 癌（non-smal 1 cel 1 lung cancer，NSCLC)、腎癌、小細胞 肺癌（small cell lung cancer, SCLC)與軟組織腫瘤。

除非以別的方式定義，於此可替換使用且以別的方式 特別指出用語“細胞毒殺性T淋巴球”、“細胞毒殺性τ 細胞”與“ CTL”以意指T淋巴球之次族群，且除非以別的 方式指出，意指T淋巴球之次群組（sub-group)可辨認非自 身細胞（例如，腫瘤細胞、被病毒感染之細胞），且誘導這 些細胞死亡。 除非特別定義，於此使用屬與本發明之所有技術或科 學用語為與熟悉此技藝人士所通常瞭解之意義相同。 11.胜肽 為了證明來自INHBB之胜肽作用如一被細胞毒殺性τ 淋巴球（CTLs)所辨認之抗原，分析來自INHBB之胜肽（序列 辨識號：16)以確定是否其為由一般遇到HLA對偶基因 12 201008574 (allele)之HLA-02所限制之抗原決定位（Date Y et al., Tissue Antigens 47： 93-101, 1996; Kondo A et al., J Immunol 155: 4307-12, 1995; Kubo RT et al., J Immunol 152:3913-24，1994)。確認來自 INHBB 之 HLA-A02 結合胜 肽的候選物，基於其對HLA-A02之結合親和力。在藉由載 有這些胜肽之樹突細胞（dendritic cell, DC)//? 刺 激T細胞之後’使用序列辨識號：1至14之各胜肽，特別 是下列胜肽成功建立細胞毒殺性T淋巴球： ® INHBB-A02-9-213C序列辨識號：1)， INHBB-A02-9-174C序列辨識號：2)， INHBB-A02-9-257C序列辨識號：3)， INHBB-A02-9-313(序列辨識號：4)， INHBB-A02-9-1 39C序列辨識號：5)， INHBB-A02-9-8(序列辨識號：6)， INHBB-A02-9-250C序列辨識號：Ό， Φ INHBB-A02-10-179C序列辨識號：8)， INHBB-A02-1 0-237C序列辨識號：9)， INHBB-A02-10-313C序列辨識號：10)， INHBB-A02-1 0-1 73C序列辨識號：11)， INHBB-A02-1 0-256C序列辨識號：12)， INHBB-A02-10-162C序列辨識號：13) 與 INHBB-A02-10-85C序列辨識號：丨4)。 這些被建立的細胞毒殺性τ淋巴球顯示強而專一之抗 13 201008574 經分別之胜肽脈衝之目標細胞的細胞毒殺性τ淋巴球活 性。此處這些結果證明ΙΝΗΒΒ為一由細胞毒殺性τ淋巴球 所辨認之抗原’且這些胜肽可為由HLA-A02限制之ΙΝΗΒΒ 抗原決定位胜肽。 由於/#及方万基因於大部分癌症組織中被過度表現，例 如膽管細胞癌、食道癌、非小細胞肺癌、腎癌、小細胞肺 癌與軟組織腫瘤，所以其為一良好之免疫治療標的。因此， 本發明提供九胜肽（胜肽由九個胺基酸殘基所組成）與十胜 肽（胜肽由十個胺基酸殘基所組成）相當於細胞毒殺性Τ淋 眷 巴球辨認之IΝΗΒΒ抗原決定位。特別地，本發明九胜肽與 十胜肽之較佳實施例包括具有擇自序列辨識號：1_14中之 胺基酸序列的那些胜肽。 通常可使用現今於網路可得之軟體程式，例如於 Parker KC et al., J Immunol 1994 Jan 1, 152(1)： 163-75 中所敘述的那些，來計算i/7 介於各種胜肽與Hla

抗原間之結合親和力。例如，如於參考文獻parker KC et al.，J Immunol 1 994 Jan 1，1 52( 1 ): 1 63-75;與 Kuzushima K a人，Blood 2001，98(6): 1872-81 中所述可測量與 HLA抗原之結合親和力。測量親和力之方法敘述於，例如 於 Journal of Immunological Methods, 1995， 185. 181-190 與 Protein Science， 2000， 9: 1838-1846 中。 因此本發明包括使用這些已知程式確認與HLA結合之 ΙΝΗΒΒ的胜肽。 本發明之九胜肽與十胜肽可於側面具有額外之胺基酸 14 201008574 殘基’只要所產生之胜肽維持其細胞毒殺性τ淋巴球誘發 能力。具有細胞f殺性Τ淋巴球誘發能力之此種胜狀典型 地小於約40個胺基酸’時常小於約20個胺基酸，通常小 於約15個胺基酸。位於本發明九胜肽與十胜肽（即，由擇 自序列辨識號：1-14之胺基酸序列所組成的胜肽）之侧面 的特別胺基酸序列’不被限制，且可由任何種類胺基酸所 組成，只要其不減少原始胜肽之細胞毒殺性T淋巴球誘發 能力。因此，本發明也提供胜肽，其具細胞毒殺性τ淋巴 ® 球誘發能力與擇自序列辨識號：1至14之胺基酸序列。 一般而言’於一蛋白質中一、二或多個胺基酸之修飾， 不會影響蛋白質的功能，且在一些例子中，甚至增強原始 蛋白質所需之功能。事實上，已知經修飾之胜肽（即，由胺 基酸所組成之胜肽，與原始參考序列相較，於其中一、二 或數個胺基酸已被修飾（即，取代、刪除、加入或插入）） 維持原始胜肽的生物活性（Mark et a 1.，Proc Natl Acad ❺ Sci USA 1984, 81: 5662-6; Zoller and Smith, Nucleic Acids Res 1982， 10: 6487-500; Dalbadie-McFarland et al., Proc Natl Acad Sci USA 1982， 79: 6409-13)。因 此，在一實施例中，本發明之胜肽可具有細胞毒殺性T淋 巴球誘發能力與擇自序列辨識號：1至14之胺基酸序列， 其中刪除、插入、加入及/或取代一、二甚至更多個胺基酸。 熟悉此技藝人士認定改變一單一胺基酸或一小百分比 之胺基酸之個別的加入或取代至一胺基酸序列傾向產生保 存原始胺基酸支鏈的特性。因此’它們一般被意指為“保 15 201008574 守取代（conservative substitutions)” 或“保广攸 (conservative modifications)” ，立中一 | 厶租 ’、， 震曰頁之改變 形成一具有特性且與原始蛋白質同功之經修飾的蛋白質。 保守取代表提供功能相似胺基酸已為本技術領域所熟知。 令人滿意以保留之胺基酸支鏈特徵的例子包括，例如疏水 胺基酸（A，I，L，M，F，P，W，Υ，V)、親水胺基酸（r，d N’ C’ E，Q，G，H，K，S, T)與具有下列共同官能基或特 徵之支鏈：一脂肪族支鏈（G，A，V，L，I，P); 一含經基 支鍵（S，T，Y);含硫原子支鏈（C，M);含羧酸與胺基支鍵 _ (D，N，E，Q);含鹼支鏈（R，K，H);以及含芳香族支鏈（H， F，Y’ W)。此外，下列八個族群各包含在本技術領域中被 接受為彼此為保守取代之胺基酸： 1) 丙胺酸（A)、甘胺酸（G); 2) 天門冬胺酸（D)、麩胺酸（E); 3) 天門冬醯胺（N)、麩胺醯胺（Q); 4) 精胺酸（R)、離胺酸（K); 傷 5) 異白胺酸（I)、白胺酸（L)、甲硫丁胺酸（M)、纈胺酸 (V); 6) 苯丙胺酸（F)、酪胺酸（Y)、色胺酸（w); 7) 絲胺酸（S)、蘇胺酸（T);以及 8) 半胱胺酸（C)、曱硫丁胺酸（M)(參見Creighton, Proteins 1984)。 此種經保守修飾胜肽也被視為本發明之胜肽。然而， 本發明之胜肽並不限於此’且可包括非保守修飾，只要經 16 201008574 修飾之胜肽維持原始胜肽之細胞毒殺性τ淋巴球誘發能 力。更進一步而言，經修飾之胜肽不應排除多形變趙 (polymorphic variant)之細胞毒殺性Τ淋巴球誘發的胜 肽、種間同質體（interSpecies homologues)與 INHBB 對偶 基因（alleles)。 為了維持必須之細胞毒殺性T淋巴球誘發能力，可修 飾（插入、刪除、加入及/或取代）一小數目（例如一、二或 數個）或小百分比之胺基酸。此處用語“數個，’指5或更少 個胺基酸’例如3個或更少。被修飾之胺基酸之百分比較 佳為20%或更少，更佳為15%或更少，甚至更佳為10%或更 少或1至5%。 本發明較佳胜肽INHBB-A02-9-213C序列辨識號：1)、 INHBB-A02-9-174(序列辨識號：2)、INHBB-A02-9-257C序 列辨識號：3)、INHBB-A02-9-313C序列辨識號：4)、 INHBB-A02-9-1 39(序列辨識號：5)、INHBB-A02-9-8C序列 ❹ 辨識號：6)、INHBB-A02-9-250C序列辨識號：7)、INHBB-A02-10-179(序列辨識號：8)、INHBB-A02-10-237(序列辨識號： 9)、INHBB-A02-10-313C序列辨識號：10)、INHBB-A02-10-173(序列辨識號：11)、INHBB-A02-10-256C序列辨識號： 12)、INHBB-A02-10-16(序列辨識號：13)與 INHBB-A02-10-85(序列辨識號：14)之同源分析（homology analysis)，確 認了這些胜肽不與來自任何其他已知人類基因產物具有顯 著同源性。因此，當使用這些胜肽於基因治療時，其產生 未知或非期望之免疫反應顯著降低。因此這些胜肽被預期 17 201008574 對於引起在腫瘤病患中之於癌症細胞抗INHBB免疫反應為 高度有效，癌性細胞，例如膽管細胞癌、食道癌、非小細 胞肺癌、腎癌、小細胞肺癌與軟組織腫瘤。 當使用於文中之免疫治療時，本發明之胜肽應被表現 於一細胞或外吐小體之表面上，較佳作為一具有HLA抗原 之複和物。因此，較佳為選擇不只誘導細胞毒殺性τ淋巴 球’且擁有對HLA抗原之高結合親和力之胜肽。為此目的， 可藉由胺基酸殘基之取代、插入、刪除及/或加入來修飾胜 肽以產生一經修飾之胜肽其具有經改善之結合親和力。除 〇 了自然表現之胜肽外’由於藉由結合至HLA抗原表現之胜 肽序列的規則為已知（J Immun〇l 1 994， 1 52: 391 3;

Immunogenetics 1995, 41： 178； J Immunol 1994, 155: 4307) ’可將基於此規則之修飾引入本發明之致免疫性胜 肽。例如，為了增加HLA-A0201之結合親和力，可能需要 以白胺酸或曱硫胺酸取代N端的第二個胺基酸，及/或以纈 胺酸或白胺酸取代在C端胺基酸。因此，本發明包括胜肽 具有序列辨識號：1至14之胺基酸序列，其中上述序列辨 識號之胺基酸序列之N端的第二個胺基酸被白胺酸或甲硫 胺酸取代，及/或其中上述序列辨識號之胺基酸序列之C端 胺基酸被纈胺酸或白胺酸取代◎可將取代引入不止於末端 胺基酸，也可於胜肽之潛在TCR辨認位置。一些研究已證 實於一胜肽中之胺基酸取代可等於或比原來更好，例如 CAPl、p53 (264-272)'Her-2/neu (369-377)或 gpl 00 (2。9-2i7)(Zaremba etal. Cancer Res. 57，4570-4577，1997，T. K. Hoffmann 18 201008574 et al. J Immunol. (2002) Feb 1 ;168(3)：1338-47. , S. 0. Dionne et al. Cancer Immunol imraunother. (2003) 52: 199-206 and S. 0. Dionne et al. Cancer Immunology, Immunotherapy (2004) 53, 307-314)。 本發明也考慮一或兩個胺基酸加至目前胜肽之N及/ 或C端。本發明也包括具有高HL A抗原結合親和力且維持 細胞毒殺性T淋巴球誘發能力之此種經修飾的胜肽。 然而當胜肽序列與一具有不同功能之外生或内生蛋白 © 質之胺基酸序列的一部份相同時，可能誘導副作用，例如 自體免疫疾病及/或抗特定物質之過敏症候群。因此較佳 為，首先使用可得之資料庫執行同源搜尋以避免胜肽之胺 基酸序列符合其他蛋白質之胺基酸序列的情況。當由與目 標胜肽相較不止存在具有一或兩個胺基酸不同之胜肽的同 源搜尋變得清楚時，為了增加其與HU抗原之結合親和 力，及/或增加其細胞毒殺性τ淋巴球誘發能力而不具副作 〇用之任何危險，可修飾目標胺基酸。 雖二如上述之具有對HLA抗原高結合親和力的胜肽被 預期為高效能，但根據作為指示之高親和表現而被選擇之 候選胜肽，更進一步被測試細胞毒殺性τ淋巴球誘發能力 =表現。此處措辭“細胞毒殺性Τ淋巴球誘發能力，，意指 當表現於抗原呈現細胞時，胜肽誘導細胞毒殺性1<淋巴球 的倉b力。此外，細胞毒殺性τ淋巴球誘發能力，，包括胜 肽绣導細胞毒殺性丁淋巴球活化，及/或細胞毒殺性τ淋巴 球増殖、促進細胞毒殺性丁淋巴球分解目標細胞與增加細 19 201008574 胞毒殺性T淋巴球i fn- 7產生的能力。 藉由誘導攜帶人類MHC抗原之抗原呈現細胞（例如B-淋巴球、巨嗔細胞與樹突細胞）或更專一地來自人類周邊血 液單核細胞之樹突細胞，並在以胜肽刺激之後與CD8 +細胞 混合’且之後測量由抗目標細胞之細胞毒殺性T淋巴球產 生並釋放之IFN-τ來達成細胞毒殺性T淋巴球誘發能力的 破定。如此反應系統，可使用已被產生來表現人類HLA之 基因轉殖動物（例如，於BenMohamed L，Krishnan R, Longmate J, Auge C, Low L, Primus J, Diamond DJ, Hum ^ Immunol 2000 Aug, 61(8): 764-79, Related Articles,

Books, Linkout Induction of CTL response by a minimal epitope vaccine in HLA A*0201/DR1 transgenic mice: dependence on HLA class II restricted T(H) response 中的描述）。例如可以51Cr放射標示目標細胞，且可從自目 標細胞釋放出的放射活性計算細胞毒殺活性。或者在攜帶 經固定之胜肽之抗原呈現細胞存在下，藉由測量由細胞毒 修 殺性T淋巴球產生並釋放的IFN- 7，且使用抗IFN- 7單 株抗體來使於培養基上之抑制區可見來評估細胞毒殺性T 淋巴球誘發能力。 由於如上述測試胜肽之細胞毒殺性τ淋巴球誘發能 力’發現具有對HLA抗原之高結合親和力之那些胜肽並不 必然具有高細胞毒殺性T淋巴球誘發能力。然而，發現被 確認且評估擇自具有擇自序列辨識號：1至14之胺基酸序 列之胜肽的九胜肽或十胜肽具有特別高之細胞毒殺性T淋 20 201008574 巴球誘發能力與對HLA抗原之高結合親和力。因此以這些 胜狀做為例子為本發明之較佳實施例。 除了上述修飾之外，本發明之胜肽也可連接其他物 質’只要所產生之經連接的胜肽維持原始胜肽之細胞毒殺 性T淋巴球誘發能力。適合的物質包括，但不限於，胜肽、 脂質'糖與糖鏈、乙醯基，天然與合成之聚合物等。胜肽 可包括修飾，例如醣基化、支鏈氧化或磷酸化等，所提供 ❹之修飾不損壞原始胜肽之生物活性。可執行此修飾以授予 額外之功能（例如目標功能與傳送功能）或穩定多胜肽。 例如’為了 /77 增加多胜肽之穩定度，本技術領 域已知引入D-胺基酸、胺基酸模仿物或非天然胺基酸；此 内容也適合本發明之多胜肽。可以一些方法分析一多胜肽 的穩定度。例如’可使用肽酶與多種生物培養基，例如人 類血漿與血清，來測試穩定度（參見，例如Verhoef以3人，

Eur J Drug Metab Pharmacokin 1986， 11: 291-302)。 ❹ 更進一步而言，經由間隔器（spacer)或連結器 (linker)，本發明胜肽可連結至其他胜肽。其他胜肽的例 子包括，但不限於來自其他腫瘤相關抗原之細胞毒殺性τ 淋巴球誘發胜肽。或者，藉由間隔器或連結器可連結兩個 或多個之本發明胜肽。藉由間隔器或連結器連結之胜肽可 為彼此相同或不同。間隔器或連結器並不特別限於，但較 佳為胜肽，更加為具有一或多個切割位 胜肽切°】位可被酵素，例如胜肽酶、蛋白酶與蛋白酶 體（pr〇teasome)切割。間隔器或連結器的例子包括，但不 201008574 限於：AAY(P. M. Dafliarian et al.，J Trans Med 2007， 5 : 26)、AAA、NKRK(R. P. M. Sutmulleretal·，J Immunol. 2000，165: 7308-7315)或一至幾個離胺酸殘基（S. Ota et al., Can Res. 62, 1471-1476, K. S. Kawamura et al., J Immunol. 2002, 168: 5709-5715)。本發明胜肽包括經 由間隔器或連結器連結至其他胜肽的那些胜肽。 本發明胜肽可被表現於帶有人類MHC抗原之細胞（例 如，抗原呈現細胞）或外吐小體的表面，做為與MHC分子結 合之複合物且誘導細胞毒殺性T淋巴球。藉由本技術領域 熟知的方法可製備此細胞與外吐小體，例如藉由與本發明 胜肽接觸可製備此細胞，與藉由收集來自與本發明胜肽接 觸之細胞的一含外吐小體部分（參見，例如 Japanese Patent Application Kohyo Publications Nos. Hei 1 1-510507與WO99/03499)。本發明胜肽包括存在於細胞 或外吐小體表面為一與MHC結合之複合物的那些胜肽。 此處，本發明之胜肽可被描述為“ INHBB胜肽，，或 ❹ “INHBB多胜肽”。 III. INHBB胜肽之製備 使用熟知之技術可製備本發明之胜肽。例如，使用重 組DNA技術或化學合成可以合成方法地製備胜肽。本發明 胜肽可單獨合成或為由兩或多個胜肽所組成之較長多胜 肽。之後可分離此胜肽，即純化或分離，以使其實質上無 其他自然發生之宿主細胞蛋白質與其片段或任何其他化學 物質。 22 201008574 藉由根據經選擇之胺基酸序列的化學合成可獲得本發 明之胜肽。適合此合成之一般胜肽合成方法的例子包括， 但不限於： (i) 胜肽合成（Peptide Synthesis) Interscience， New York, 1966; (ii) 蛋白質（The Proteins), Vol. 2，Academic Press, New York, 1976; (iii) 胜肽合成（Peptide Synthesis)(in Japanese), o

Maruzen Co., 1975; (iv) 胜肽合成之基礎與實驗（Basics and Experiment of Peptide Synthesi s)(in Japanese), Maruzen Co., 1985; (v) 藥學的發展（Development of Pharmaceuticals) (second volume) (in Japanese), Vol. 14 (peptide synthesis), Hirokawa, 1991; ❹ （vi)W099/67288 ;以及 (vii)Barany G. & Merrifield R.B., Peptides Vol. 2，“Solid Phase Peptide Synthesis”，Academic Press, New York, 1980，100-118。 或者，藉由適應任何已知產生胜肽之基因工程方法可 獲得本發明之胜肽（例如，Morrison J，J Bacteriology 1977, 132: 349-51; Clark-Curtiss & Curtiss, Methods in Enzymology(eds. Wu ei a/.) 1983， 101: 347-62)。 例如，首先製備一適合之載體，其懷有一多核苷酸其編碼 23 201008574 出目標胜肽於一可表達的形式中（例如，調控序列之下游相 當於啟動子序列），並將載體轉殖進入適合之宿主細胞。之 後培養宿主細胞以產生感興趣之胜肽。使用一 轉 譯系統可J·刀W汁〇產生胜肽。 IV.多核苷酸 本發明也&供一多核普酸’其編碼出任何本發明上述 之胜肽。這些包括來自自然發生之仰方基因（GenBank

Accession No. NM_002193(序列辨識號：ι5))的核苷酸序 列與具有其之保守修飾之核苷酸序列的那些。此處措辭 “保守修飾之核苷酸序列”指序列其編碼出相同或實質上 相同之胺基酸序列。由於基因密碼的退化，一大份之功能 相同之核酸編碼出任何已知蛋白質。例如，密碼Gca、GCC、 GCG與GCU皆編碼出胺基酸丙胺酸。因此，於藉由一密瑪 具體指定丙胺酸之每個位置，可改變密碼成為任何上述不 會改變編碼出之胜肽的對應密碼。此核酸變化為“沈默變 化（silent variation)” ，其為保守修飾變化的一種。此 處編碼出一胜肽之每個核酸序列也描述核酸之每種可能的 沈默變化。熟悉此技藝人士明白於一核酸中各密碼（除了 AUG，其原本為甲硫胺酸之唯一密碼、與TGG其原本為色胺 酸之唯一密碼）可被修飾以產生一功能相同分子。因此編碼 出一胜肽之核酸的各沈默變化係為於各所揭露之序列中被 暗示性描述。 本發明之多核苷酸可由DNA、RNA與其衍生物所組成。 DNA由驗基’例如a、T'C、G所適合地組成，而τ於rna 24 201008574 中為u所取代。 本發明之多核苷酸可編碼出本發明之多個胜肽，具有 或不具有介於中間之胺基酸序列於其之間。例如介於中間 之胺基酸序列可提供多核苷酸或經轉譯之胜肽一裂解位 (例如酵素辨認序列）、更進一步而言，多核苷酸可包括任 何額外之序列至編碼出本發明胜肽之編碼序列。例如，多 核苷酸可為一重組多核苷酸，其包括胜肽表現所需之調控 ❹序列，或可為一具有標諸基因與此類之表現載體（質體）。 般而S ’可製備此重組多核普酸’藉由經由使用一般重 組技術，例如聚合酶與内切酶之多核苷酸操作。 可使用重組與化學合成技術以產生本發明之多核苷 酸。例如’藉由插進入一適合之載體可產生一多核苷酸， 當轉染進入一勝任細胞時，其可被表現。或者，使用PCR 技術或表現於適合的宿主可將一多核：g:酸放大（參見，例如 Sambrook et al., Molecular Cloning: A Laboratory ® Manual, Cold Spring Harbor Laboratory, New York, 198)。或者’使用固態技術如於Beaucage SL & Iyer RP， Tetrahedron 1992, 48: 2223-311； Matthes et al., EMBO J 1984，3: 801-5中所敘述，可合成多核苷酸。 含有本發明多核苷酸的載體與懷有此載體之宿主細胞 也包含於本發明中。 V.外吐小體（exosomes) 本發明進一步地提供稱為外吐小體的胞間囊泡 (intracellular vesicles)，其呈現形成於本發明之胜肽 25 201008574 與人類白血球抗原表面之間的複合物。利用例如Japanese

Patent Application Kohyo Publications Nos Hei 1 1-51 0507與W099/03499所詳述的方法以及從接受治療和 /或預防之病人所得的抗原表現細胞可製備外吐小體。本發 明之外吐小體可如疫苗般地接種，在一方式中，類似於本 發明的胜肽。 包含在複合物中的人類白血球抗原形式必須與接受治 療和/或預防之個體的人類白血球抗原形式相符。例如，對 於日本與高加索族群來說，HLA-A02為普遍的。因此使用 ® A-02型有助於獲得有效的結果，而亞型例如a — 0201也有 其效用。一般在臨床上，需接受治療之病患的人類白血球 抗原形式係進行預先的研究’這可適當地選擇對此特別抗 原具有高度結合親合力的胜肽或經由抗原表現具有細胞毒 性T淋巴細胞誘發性的胜肽。此外，為了獲得具有高度結 合親合力與細胞毒性T淋巴細胞誘發性兩者的胜肽，可以 天然產生之INHBB部分胜肽的胺基酸序列為基礎，然後進 _ 行1、2或數個胺基酸的取代、插入及/或添加。 當使用A02型人類白血球抗原於本發明的外吐小體， 具有擇自序列辨識號：1至14之序列的胜肽表現其效用。 VI.抗原呈現細胞 本發明也提供抗經分離之原呈現細胞’其表現形成於 HLA抗原與本發明胜肽之間的複合物於其表面。藉由接觸 本發明胜肽或引入編碼出本發明之胜肽於一合適形式所獲 得之抗原呈現細胞可來自受到治療或避免之病患，與藉由 26 201008574 其或與包括本發明之胜肽、外吐小體或細胞毒殺性τ淋巴 球之其他藥物結合，可被投予如一疫苗。 抗原呈現細胞並不限於特定種類之細胞，且包括樹突 細胞、蘭格罕細胞（Langerhans cel 1)、巨嗜細胞、Β細胞 與活化之T細胞’已知其表現蛋白質（pr〇teinaceousMii^、 於其細胞表面以被淋巴球所辨認。由於樹突細胞為一典型 抗原呈現細胞，其於抗原呈現細胞中具最強之細胞毒殺性 OT淋巴球誘導作用，樹突細胞供給使用如本發明之抗原呈 現細胞。 例如，藉由誘導來自周邊血液單核細胞之樹突細胞與 之後/·Λ 或i/7 H· 以本發明胜肽接觸（刺 激）其可獲得一抗原呈現細胞。當本發明之胜肽投予至一個 鱧’於個體身體内誘導表現本發明胜肽之抗原呈現細胞。 措辭“誘導抗原呈現細胞”包括以本發明之胜肽或編碼出 本發明胜肽之核苷酸接觸（刺激）一細胞，以表現形成於HLA 〇 抗原與本發明胜肽之間的複合物於細胞表面。或者，在引 入本發明胜肽至抗原呈現細胞以允許抗原呈現細胞表現胜 肽後，將抗原呈現細胞投予一個體作為一疫苗。例如，α fjVo投予可包括步驟： a:自一第一個體收集抗原呈現細胞； b:以胜肽接觸步驟a之抗原呈現細胞；以及 c:將載有胜肽之抗原呈現細胞投予一第二個體。 第一個體與第二個體可為相同個體或可為不同個體。 或者，根據本發明，提供本發明胜肽的使用，用以製造一 27 201008574 誘導抗原呈現細胞之藥學組合物。此外，本發明提供用以 製造誘導抗原呈現細胞之藥學組合物的方法或製程，其中 方法包括以藥學上可接受之載體混合或配製本發明胜肽的 步驟。另外，本發明也提供用以誘導抗原呈現細胞之本發 明胜肽。自步驟b獲得之抗原呈現細胞可投予至一個體做 為疫苗。

根據本發明一方面，本發明之抗原呈現細胞具高程度 細胞毒殺性τ淋巴球誘發能力。在用#“高程度細胞毒殺 性τ淋巴球誘發能力”中’高程度相對於藉由抗原呈現細 胞沒有與胜肽接觸或與無法誘導細胞毒殺性τ淋巴球之胜 肽接觸的程度。藉由包括將包含編碼出本發明胜 肽之多核普酸的基因轉移至抗原呈現細胞的步驟的方法， 可製備此種具高程度細胞毒殺性Ti巴球誘發能力之抗原 呈現細胞。此經引入之基因可為DNA或RNA形式。引入方

法的例子包括，並無特別限制，可使用各種於此領域一般 被執行的方法，例如脂質體轉染（lipofection)、電穿孔法 (electroporation)與磷酸鈣方法。更特別地，可執行其如 Cancer Res 1996, 56： 5672-7； J immunol jggg^ 1β1； 5607-13; J Exp Med 1996, 184: 465-72； Publishe

Japanese Translation of International Publication N 2000-509281中所述。藉由轉移基因進入抗原呈現細胞， 基因遇到轉錄、轉譯與此類於細胞中，且之後藉由，

Class ί或Class Π處理獲得之蛋白質，且經由一呈現途 徑來繼續以呈現胜肽。 28 201008574 V11.細胞毒殺性T淋巴球 經誘導抗任何本發明胜肽之細胞毒殺性τ淋巴球增強 /刀h叩以腫瘤相關内皮（endothelia)為標的之免疫反 應，且因此可使用如一疫苗，就其本身而言在一方式中相 似於胜肽。因此本發明也提供經分離之細胞毒殺性Ϊ淋巴 球其藉由任何本發明之胜肽專一地被誘導或活化。 可獲得此種細胞毒殺性7淋巴球，藉由（1)將本發明胜 ❹肽投予至一個體，且之後自該個體收集細胞毒殺性τ淋巴 球或（2)將來自個體之抗原呈現細胞與CD8 +細胞或周邊血 液單核淋巴球與本發明之胜肽h W叩接觸（刺激）且之後 分離細胞毒殺性T淋巴球。 已藉由表現本發明胜肽之抗原呈現細胞刺激誘導的細 胞毒殺性T淋巴球可來自一受到治療及/或避免之病患，且 藉由其或與包括本發明之胜肽或為了調節作用之外吐小體 的其他樂物結合可被投予。所獲得之細胞毒殺性τ淋巴球 ® 起專一抗目標細胞的作用，而目標細胞其表現本發明胜 狀’或’例如用於誘導之相同胜肽。換言之，細胞毒殺性 T細胞可以τ細胞受器辨認（即，結合至）於目標細胞表面 上之形成於HLA抗原與本發明胜肽之間的複合物，且之後 攻擊目標細胞以誘導目標細胞死亡。 目標細胞可為細胞其内生性表現丨NHBB，或被以/#及万方 基因轉殖之細胞；且由於藉由胜肽刺激表現本發明胜肽於 細胞表面之細胞，也可做為經活化之細胞毒殺性T淋巴球 攻擊的目標。 29 201008574 VIII. T細胞受體（TCR) 本發明也提供一組合物其由編碼出可形成T細胞受體 之次單位之多胜肽的核酸序列所組成，與其使用方法。τ 細胞受體之次單位具有能力形成Τ細胞受體，其授與專一 性至抗腫瘤細胞的Τ細胞，腫瘤細胞表現IΝΗΒΒ。藉由使 用本技術領域所知的方法可確認表現於細胞毒殺性Tie 球中之T細胞受體次單位的〇；-與冷—支鏈之核酸序列而 細胞毒殺性Τ淋巴球以一或多個本發明之胜肽所誘導 (W02007/032255 與 Morgan etal.， Jimmunol， 171， 3288 (2003))。引出之T細胞受體可以高親合力結合表現於目標 細胞上之INHBB胜肽，且視需要以>〇與以纱〇居中 有效殺死表現INHBB之目標細胞。 編碼出T細胞受體次單位的核酸序列可合併進入適合 之載體，例如反轉錄病毒載體。這些載體為本技術領域所 熟知。通常包含其之核酸或載體可被轉移至一 τ細胞例 如一來自一病患之Τ細胞。有用地，本發明提供一現成 (of f-the-shel f )的組合物允許快速修飾病人所擁有之丁 細胞（或其他哺乳動物之那些）以快速簡單產生具有優秀之 癌症細胞殺死特性的經修飾T細胞。 本發明也提供細胞毒殺性τ淋巴球，其在HU_〇2存在 下藉由以編碼出與INHBB胜肽結合之τ細胞受體次單位多 胜肽的核酸轉導來製備，丨NHBB胜肽例如序列辨識號： 卜14。經轉導之細胞毒殺性了淋巴球可//7以自引導至 癌症細胞

且可藉由熟知的培養方法/刀擴張（例如 30 201008574

Kawakami et al. , J Immunol., 142, 3452-3461 (1989)) 〇 本發明之T細胞也可用來形成一致免疫組合物，其於一需 要治療或保護之病患中治療或避免癌症為有效 (W02006/031221)。 IX.樂學喊劑或組合物 避免與預防包括任何活性，其減少死亡率之負載或來 自疾病之死亡率。避免與預防可方生於“初期、第二期與 Φ 第三期避免層級”。初期避免與預防避免疾病之發展，而 第二期與第三期層級之避免與預防包括藉由恢復功能與減 少疾病相關併發症，以疾病之發展與症狀之浮現及減少已 建立之疾病之負向發展的避免與預防為目的。或者，治療 或避免包括一廣範圍之預防疾病治療，其以減緩特別疾病 之厫重度為目標，例如減少腫瘤之增殖與轉移。 治療及/或對癌症或腫瘤之預防，或，及/或其手術後 復發的避免包括任何下列步驟，例如癌細胞之手術移除、 Ο 似癌細胞之生長抑制、腫瘤之衰退或退化、癌發生之減緩 與抑制的誘導、腫瘤退化與血管新生抑制的誘導。癌症之 有效治療及/或預防減少致死率與改善具有癌症之個體的 預後、減低癌症標§己於血液中的程度與減緩伴隨著癌症之 可偵測症狀。例如，症狀之減少或改善構成有效治療及/ 或預防包括10%、20%、30%或更減輕或穩定疾病。 由於與正常組織相較，INHBB表現特別於一些癌症中 被向上調控，本發明之胜肽或編碼出此種胜肽之多核苷酸 可用來治療或預防癌症，及/或用來避免其手術後之復發。 31 201008574 =此’本發明提供—藥學試劑或組合物用來治療及/或避免 «’及/或避免其手術後之復發，其包括—或多個本發明 胜肽或編瑪出胜狀之多核苷酸作為活性成分。或者，本發 明之胜肽可表現於任何前述外吐小體或細胞表面，例如抗 原呈現細胞，以用來作 為樂學試劑或組合物。此外，上述 以本發明任何胜肚 一標的之細胞毒殺性τ淋巴球也可用來 作為本發明藥學試劑哎 削及組合物之活性成分。在本發明内容 中’措辭“將一胜肤你电 作為目標”意指以T細胞受器辨認 (即，結合至）於目择“咏± 標細胞表面上之一形成HLA抗原與一胜 狀之間的複合物，且夕你 之後攻擊目標細胞以誘導目標細胞死 亡。 在另實施例中，本發明也在製造用以治療癌症之藥 學組合物或試劑中摇徂_ 甲提供—活性成分的使用，其擇自： (a) 本發明胜肽； ❹ (b) 於可表現之形式’編碼出如此處揭露之此種胜肽 的核酸； (c) 本發明之抗原呈現細胞；以及 (d) 本發明之細胞毒殺性τ淋巴球。 或者’本發明更提供_用以治療癌症的活性成分擇自·· (a )本發明胜肽； (b)於一可表現之形式’編碼出如此處揭露之此種胜肽 的核酸； U)表現本發明一胜肽於其表面上之抗原呈現細胞；以 及 32 201008574 (d)本發明之細胞毒殺性τ淋巴球。 或者，本發明更提供—製造用以治療癌症之藥學組合 物的方法或製程，*中方法或製程包括將-藥學上或生理 上可接又之載體與-活性成分一起配製的步驟，活性成分 擇自·· (a)本發明胜肽； ❹ ❹ ⑻於-可表現之形式，編碼出如此處揭露之此種胜狀 的核酸； (c) 本發明之抗原呈現細胞；以及 (d) 本發明之細胞毒殺性τ淋巴球， 為活性成分。 在另一實施例_，本發明也提供一製造用以治療癌症 之藥學組合物的方法或製程，其中方法或製程包括將一藥 學上或生理上可接受之載體與一活性成分一起混合的步 驟’其中活性成分擇自： (a) 本發明胜肽； (b) 於一可表現之形式，編碼出如此處揭露之此種胜肽 的核酸； (c )本發明之抗原呈現細胞；以及 (d)本發明之細胞毒殺性τ淋巴球。 或者’本發明之藥學組合物或試劑可用於癌症之預防 與其手術後復發的避免。 本發明之藥學組合物或試劑提供使用如一疫苗。在本 發明全文中，措辭‘疫苗”（也指一致免疫組合物）意指一 33 201008574 物質’其藉由接種至動物具有誘導抗腫瘤免疫力。 本發明之藥學組合物或試劑可用於治療及/或避免癌 症及/或其手術後復發的避免於一個體或病患中，個體或 病患包括人類於任何及他哺乳動物，其包括但，不限於小 乳大鼠天竺鼠、兔子、I苗、狗、綿羊、山羊、豬、牛、 馬、猴子、狒狒與黑猩猩，特別是一商業上重要動物或被 剧丨養了的動物。 根據本發明，具有擇自序列辨識號：1至14之胺基酸 序列的多胜肽，或已被發現分別為HLA_A02限制之抗原決 〇 疋位胜肽或候選物之具有擇自序列辨識號：丨至14之胺基 酸序列的多胜肽，其可誘導強而專一之免疫反應。因此包 括任何具有序列辨識號：1至14之胺基酸序列之這些多胜 肽的本發明藥學試劑或組合物特別適合投予HLA抗原為 HLA-A 02之個體。相同的實施至包含編碼出任何這些胜肽 之多核苷酸的藥學試劑或組合物。 由本發明藥學試劑或組合物治療之癌症不限於，且包 _ 括其中關於方之所有種類的癌症，包括，例如膽管細 胞癌、食道癌、非小細胞肺癌、腎癌、小細胞肺癌與軟組 織Μ瘤。 本發明藥學試劑或組合物可包括除了上述活性成分 外’具有誘導細胞毒殺性Τ淋巴球抗似癌細胞之能力的其 他胜肽、編碼出此其他胜肽之其他多核苷酸、其他表現此 其他胜肽之細胞或此類。於此，具有誘導細胞毒殺性τ淋 巴球抗似癌細胞之能力的其他胜肽由癌症專一抗原所例示 34 201008574 (例如，經定義之腔瘤相關抗原），但不限於此。 他治==本發明之藥學試劑或組合物可視需要包括其 抗腫瘤功敎一活性成分，只要此物質不抑制活性成分之 凡工六，活性成分例如任何本發明胜肽。例如，配方

:包括抗發炎試劑或組合物、止痛劑、化學治療與其類似。 :了包括其他治療物質於藥劑其本身中，也可將本發明之 ，劑與A多個其他生理試劑或組合物相繼或同時投予。 藥劑與生理試劑或組合物的量依照，例如使用何種生理試 劑或組合物、要治療之疾病與投藥的計畫與方式。 +應瞭解的是，除了此處特別提及之成分外，本發明之 藥學試劑與組合物可包括本技術領域—般之其他試劑或組 合物，其具有關於討論中之配方形式。 在本發明一實施例中，本發明之藥學試劑或組合物可 被包含於製造之商品與套組，其包含對於要被治療之疾 病，例如癌症的病理情況有用之材料。製造之商品可包含 具有一標籤之任何本發明藥學試劑或組成物的容器。適合 的容器包括瓶、小瓶（vial)與試管。容器可形成自各種材 料’例如玻璃或塑膠。於容器上之標籤需指出試劑或組合 物為用來治療或避免疾病之一或多個情況。標籤也可指出 投藥指示等。 除了上述容器外，套組包括本發明藥學試劑或組合物 可視需要更進一步包括一第二容器，其儲藏一藥學上可接 受之稀釋液。其可更包括商業或使用者觀點需要之其他材 料’包括其他緩衝溶液、稀釋液、濾器、針、注射器與具 35 201008574 有使用說明之包裝插入物。 藥學組合物若需要可被呈現於一包或一分配器，其可 包含含有活性成分之一或多單位劑量形式。包裝可例如包 括金屬或塑膠箔，例如一泡棉箱（biider pack)。包或分 配器可伴隨著投藥指示。 刀 (1)藥學試劑或組合物包含胜肽作為活性成分。 可直接投予本發明胜肽為一藥學試劑或組合物，若需 要的話，其已被一般配方方法所配製。在之後的例子，除 了本發明胜肽外、若適合可包括載體、賦形劑與原始做為瘳 藥物使用之此類而無特別限制。上述載體的例子為滅菌水 生理食鹽水 '磷酸緩衝溶液與培養液體（culture 與此類。更進一步而言，若必須，藥學試劑或組合物可含 女疋劑、懸液劑、防腐劑、界面活性劑與此類。本發明之 藥學試劑或組合物可用來抗癌目的。 可將本發明之胜肽製備為一組合，其由兩或更多個本 發明之胜肽所組成，以誘導細胞毒殺性τ淋巴球。❹ 胜肽組合可以雞尾酒形式或可使用標準技術彼此結合。例 如，胜肽可被化學連接或表現如一單一融合多胜肽序列。 之胜肽可為相同或不同。藉由投予本發明之胜肽，藉 由HLA抗原’咼密度呈現胜肽於抗原呈現細胞上，之後對 形成於呈現胜肽與HLA抗原之間的複合物專一反應之細胞 毒殺性Τ淋巴球被誘導。或者，表現任何本發明之胜肽於 其細胞表面之抗原細胞可被投予一個體，且因此於個體中 誘導細胞毒殺性Τ淋巴球’且可增加朝向癌細胞，例如膽 36 201008574 管細胞癌、食道癌、非小細胞肺癌、腎癌、小細胞肺癌與 軟組織藤瘤之侵犯，表現任何本發明之胜肽於其細胞表面 之抗原細胞可藉由以本發明之胜狀刺激來自一個體之抗原 呈現細胞（例如樹突細胞）來獲得。 治療及/或避免癌症之藥學試劑或組合物，其包括本發 明之一胜狀為活性成分，也可包含一已知有效建立細胞免 疫力之佐劑。或者，它們可與其他活性成分一起被投予或 ❹它們可以配製成細粒被投予。佐劑指一化合物，當與具有 免疫活性之蛋白質一起投予（或依次）時’其增強抗蛋白質 之免疫反應。此處考慮之佐劑，包括於文獻（CHn Microbiol Rev 1994，7: 277_89)中所描述的那些。適合 之佐劑的例子包括，但不限於磷酸鋁、氫氧化鋁、明礬、 霍亂毒素、沙門氏菌毒素與此類但不限於此。 更進一步而S，於微脂體（li p〇s〇me )配方與細粒配方 中，胜肽連結至幾個微米直徑之小珠，且於配方中，可便 〇 利地使用連結至胜肽之脂質。 在一些實施例中，本發明之藥學試劑或組合物可更包 括一成分其啟動細胞毒殺性T淋巴球。已定義脂質為可b n ro啟動抗病毒抗原之細胞毒殺性τ淋巴球的試劑或組合 物。例如，可將棕櫊酸殘基黏附至離胺酸殘基之£_與 胺基，且之後連結至本發明之一胜肽。之後脂質胜肽可被 直接投予於微胞或顆粒中、併入微脂體或乳化於一佐劑 中。如脂質啟動細胞毒殺性Τ淋巴球反應之另一例子，五. 脂蛋白’例如三軟脂酸-S甘油半胱氨酰-絲氨酰基絲 37 201008574 氨酸（i：ripalmit〇yl-S-glyCerylcySternyl_sery卜奸以此） 可使用來啟動細胞毒殺性τ淋巴球，當共價附加至一合適 之胜肽（參見，例如 Deres et al.，Nature 1989，342: 5 61 - 4 ) 〇 投藥之方法可為口服、皮膚内、皮下、靜脈内注射或 此類，以及全身投藥或局部投藥至標的位置的鄰近區域。 *7執行單次投藥或藉由多次投藥追加。本發明之胜狀劑量 可適合地調整根據要治療之疾病、病患年紀、體重、投藥 方法、與此類，且本發明之胜肽劑量一般為〇 〇〇ling至 〇 l〇〇〇mg，例如〇.〇〇lmg至1〇〇〇mg，例如〇丨邶至1〇mg，且 可於數天至數個月投藥一次。熟悉此技藝人士可適合地選 擇一合適的劑量。 (2)藥學試劑或組合物包含多核苷酸為活性成分 本發明之藥學試劑或組合物也可包括編碼出此處揭露 之胜肽的核酸於一可表達之形式中◊此處措辭“於一可表 達之形式中”意指多核苷酸，當引入一細胞，W叩會_ 被表現成一誘導抗腫瘤免疫力之多胜肽。在一代表實施例 中，感興趣之多核苷酸的核酸序列包括對於表現多核苷酸 而言必須之調控要素。可装配多核苷酸以達到穩定插入目 標細胞之基因體（參見，例如Th〇mas KR & Capecchi MR，

Cell 1987, 51: 503-12 for a description of homologous recombination cassette Vect〇rs)。參見，例如 w〇lff et al., Science 1990, 247： 1465-8; U. S. Patent Nos. 5,580,859; 5,589,466; 5,804,566； 5,739，118; 38 201008574 5, 736, 524; 5, 679, 647; and WO 98/04720。DNA 輸送技術 的例子包括“裸1)^”、經促進（1)叩丨¥&031116、聚合物、 胜肽居中之）之輸送、陽離子脂質複合物與顆粒居中之 ( 基因搶”）或壓力居中之傳送（參見，例如U.S. Patent No. 5, 922, 687)。 本發明之胜肽也可藉由病毒或細菌載體來表現。表現 載體的例子包括減弱病毒宿主，例如牛痘或禽痘。此方法 ❹ 包括使用牛痘病毒，例如為一載體以表現編碼胜肽之核苷 酸序列。藉由引入一宿主’此重組之牛痘病毒表現致免疫 胜肽且因此引起一免疫反應。於免疫步驟中為有效之牛痘 載體與方法敘述於，例如U.S. Patent No. 4, 722, 848。 另一載體的例子包括 BCG (Bacille Calmette Guerin)。 BCG 載體敘述於 stover et al.，Nature 1991，351: 456_6〇 中。對於治療投藥或免疫有用之其他多種載艎，例如腺與 腺病毒相關之載體、反轉錄病毒載體、傷寒沙門氏菌 ® (Salm〇nella typhi)載體、經解毒之炭疽毒素載體與其類 似為明顯的。參見，例如 Shata et al.，M〇1 Med 6· 66 71, Shedlock et al., J Leukoc Biol 2000, 68: 793-806; Hipp et ai.，In Viv〇 2〇〇〇，u: 571 85。 輸送多核苷酸進入一個體可為直接，於其例子中，個 體直接暴露於一攜帶多核苷酸之載體’或為間接，於其例 子中’細胞首先一/⑽以感興趣之多核苷酸轉形，之後 將細胞轉殖進入個體。此兩方法分別為已知，$以^叩 與γ/γο基因治療。 39 201008574 基因治療之方法之大體回顧，參見G〇idspieleia7.， Clinical Pharmacy 1993, 12: 488-505; Wu and Wu, Biotherapy 1991, 3: 87-95; Tolstoshev, Ann Rev Pharmacol Toxicol 1993, 33: 573-96; Mulligan, Science 1993, 260: 926-32; Morgan & Anderson, Ann Rev Biochem 1993, 62: 191-217; Trends in Biotechnology 1993, 11(5): 155-215)。也可用於本發明之於重組dna技術中一

般熟知的方法如於eds· Ausubel以a人，Current Protocols in Molecular Biology, John Wi ley & Sons, NY, ® 1993； and Krieger, Gene Transfer and Expression, A

Laboratory Manual，Stockton Press, NY, 1 990 中所述。 才x藥之方法可為口服、皮膚内、皮下、靜脈内注射或 此類’以及全身投藥或局部投藥至標的位置的鄰近區域提 供使用。可執行單次投藥或藉由多次投藥追加。於適合載 體中或於以編碼出本發明之胜肽的多核苷酸轉形之細胞中 的多核苷酸的劑量可適合地調整，根據要治療之疾病、病❹ 患年紀、體重、投樂方法、與此類，且本發明之胜肽劑量 一般為 O.OOlmg 至 lOOOmg’ 例如 〇.〇〇lmg 至 1〇〇〇jng，例如 0.1 mg至i〇mg,且可於每數天一次至每數個月一次投藥。 熟悉此技藝人士可適合地選擇一合適的劑量。 X.使用胜肽、外吐小體、抗原呈現細胞與細胞毒殺性τ淋 巴球的方法 可使用本發明之胜肽與編碼出此胜肽之多核苷酸來誘 導抗原呈現細胞與細胞毒殺性τ淋巴球。也可使用本發明 40 201008574 之外吐小體與抗原呈現細胞來誘導細胞毒殺性τ淋巴球。 胜肽、多核苷酸、外吐小體與抗原呈現細胞可與任何其他 化合物結合使用，只要化合物不抑制其細胞毒殺性τ淋巴 球誘發能力。因此，任何上述之本發明藥學試劑或組合物 可用來誘導細胞毒殺性τ淋巴球，且除此之外，包括胜肽 與多核苷酸的那些也可用來誘導抗原呈現細胞，如下所討 〇

wWJ (1)誘導抗原呈現細胞的方法 本發明提供使用本發明之胜肽或編碼出此胜肽之多核 苷酸來誘導抗原呈現細胞的方法。如前述段落“ V丨.抗原呈 現細胞”中所述執行抗原呈現細胞的誘導。本發明也提供 誘導具有高程度細胞毒殺性τ淋巴球誘發能力之抗原呈現 細胞的方法，其之誘導也已於先前項目“VI.抗原呈現細 胞”下所提及。 較佳為’誘導抗原呈現細胞的方法包括至少一步驟， ❹擇自： a:將抗原呈現細胞與本發明之胜肽接觸，以及 b:將於一表現形式中之本發明多胜肽引入抗原呈現細 胞中。 較佳" fro或ex 執行誘導抗原呈現細胞的此 種方法。當7/2 Π·或ex rj.FO執行此方法時’可自要被 治療之一個體或其HLA抗原相同於此個體之其他個體獲得 要被誘導之抗原呈現細胞。 (2)誘導細胞毒殺性τ淋巴球的方法 41 201008574

更進一步而言，本發明提供使用本發明胜肽、編碼出 此胜肽之多核苷酸、表現此胜肽之外吐小體或抗原呈現細 胞來誘導細胞毒殺性τ淋巴球的方法。本發明也提供使用 編碼出一多胜肽之多核苷酸來誘導細胞毒殺性T淋巴球的 方法，此多胜肽具形成一 T細胞受體次單位的能力，而此 T細胞受體次單位辨認（即，結合至）一本發明胜肽與HLA 抗原之複合物。較佳為，誘導細胞毒殺性τ淋巴球的方法 包括至少一步驟擇自： a :將一 CD8+ T細胞與一抗原呈現細胞及/或一外吐小 〇 體接觸’該抗原呈現細胞及/或該外吐小體表現一 HU抗原 與本發明胜肽之複合物於其表面，以及 b:將一多核苷酸引入一 CD8+ τ細胞，其中該多核苷 酸編碼出一多胜肽，該多胜肽具形成一 7細胞受體次單位 的能力，而該T細胞受體次單位辨認一本發明胜肽與HLA 抗原之複合物。 當本發明胜肽投予一個體時，誘導於個體體内之細胞❹ 毒殺性T淋巴球，且以腫瘤相關内皮（end〇thelia)為標的 之免疫反應強度增強。或者，胜肽或編碼出此胜肽之多核 苷酸可使用為一 h 治療方法，於其中來自個體之抗 原呈現細胞與CD8+T細胞或周邊血液單核淋巴球 以本發明胜肽接觸（刺激），且在誘導細胞毒殺性T淋巴球 後，經活化之細胞毒殺性τ淋巴球回至個體内。例如，方 法可包括步驟： a :自個體收集抗原呈現細胞； 42 201008574 b:將步驟a之抗原呈現細胞與此胜肽接觸； c :將步驟b之抗原呈現細胞與CD8 + T細胞混合，且共 培養以誘導細胞毒殺性T淋巴球；以及 d:自步驟c之共培養收集CD8+T細胞。 或者，根據本發明，提供用以製造誘導細胞毒殺性T 淋巴球之藥學組合物之本發明胜肽的使用。此外，本發明 提供製造誘導細胞毒殺性T淋巴球之藥學試劑或組合物的 0 方法或製程，其中方法包括將本發明胜肽與藥學上可接受 之載體混合或配製的步驟。更進一步而言，本發明也提供 用以誘導細胞毒殺性T淋巴球之本發明胜肽。藉由步驟d 所獲得之具細胞毒殺性之CD8 + T細胞可投予至一個體做為 疫苗。於上述步驟c中要與CD8 + T細胞混合之抗原呈現細 胞也可藉由轉移編碼出本發明胜肽之基因進入抗原呈現細 胞來製備’如先前詳述於段落“ VI.抗原呈現細胞，’中；但 不限於此，且，任何抗原呈現細胞或外吐小體，其有效表 〇 現胜肽至τ細胞可用於本發明方法。 呈現下列實施例以說明本發明與以協助熟悉此技藝人 士製造與使用本發明。實施例並不傾向於在其他方面限制 本發明範圍任何方式中。 【實施例】 材料與方法 細胞株 H2(HLA-A02)、人類b細胞細胞株、與c〇S7為自ATCC 所購得。 43 201008574 來自IMBB之胜肽的候選物選擇 使用結合預測軟體 “BIMAS”（www-bimas. cit. nih· gov/molbio/hla_bind)預測來自 INHBB 之 9-員與 10 員胜 肽，其結合至HLA-A* 0201分子，其演算法已由Parker KC ei a/. (J Immimol 1994，152(1): 163-75)與 Kuzushima K ei (Blood 2001，98(6): 1872-81 )所敘述。根據一標 準固相合成方法且藉由逆相高效能液體層析（reversed phase high performance liquid chromatography, HPLC) 之純化由 Sigma(Sapporo，Japan)或 Biosynthesis Inc. (Lewisville, TX)來合成這些胜肽。分別藉由分析型HLPC 與質譜分析確認這些胜肽之純度（> 90%)與身份 (identity)。將胜肽溶解於DMS0中於20mg/ml且儲存於-80 t：。

In vitro細胞毒殺性T淋巴球誘導 使用來自單核白血球之樹突細胞做為抗原呈現細胞以 誘導抗表現於人類白血球組織抗原（HLA)上之胜肽的細胞 _ 毒殺性T淋巴球反應。//7 Fi· ίΓΟ產生樹突細胞如別處所述 (Nakahara S et al., Cancer Res 2003 Jul 15, 63(14)· 4112-8)。特別地，由 Ficoll-Plaque(Pharmacia)溶液分 離自一正常自願者（HLA-A* 0201 + )之周邊血液單核細胞，藉 由貼附至一塑膠組織培養盤（Beet on Dickinson)來分離以 豐富其如一單核白血球部分。將經豐富單核白血球之族群 培養在1000U/ml之人類顆粒-巨噬細胞群落刺激因子 (granulocyte-macrophage colony-stimulating factor 44 201008574 GM-CSF)(R&D System)與 lOOOU/ml 之白細胞介素 (interleukin, IL)-4(R&D System)存在下於含 2%之熱去 活性自身取得血清（autologous serum, AS)之AIM-V培養 基（Invitrogen)中。培養7天後，於AIM-V培養基中，於 3mcg/ml 之 yS -2 微球蛋白（beta 2-1^(：1'〇£1〇1)111111)存在下 以20/zg/ml之各合成胜肽脈衝（pulsed)細胞激素誘導之 樹突細胞3小時於37°C。所產生之細胞顯示表現樹突細胞 _ 相關分子，例如CD80、CD83、CD86與HLA Class II於其 細胞表面（資料未顯示）。之後以Mitomycin C (MMC) (30mcg/m卜30min)將這些胜肽脈衝之樹突細胞去活性且將 其以1 : 20之比例與自身取得CD8 + T細胞混合，CD8+T細 胞藉由以 CD8 Positive Isolation Kit (Dynal)正選擇獲 得。這些培養物設置於48孔盤（Corning);各孔含1. 5 x 104 胜肽脈衝之樹突細胞、3 X 105 CD8+ Τ細胞與l〇ng/ml之 11^-7(尺仙35^七6111)於0.51111之人1»1-丫/2%自身取得血清培養 ❹基中。三天之後，以IL-2CCHIR0N)添加至培養物至終濃度 為201 U/ml。第7天與第14天更以自身取得胜肽脈衝之樹 突細胞進一步刺激T細胞。以與上述相同之方法每次製備 樹突細胞。於第21天’第三輪之胜肽刺激後，將細胞毒殺 性T淋巴球進行抗胜肽脈衝之T2細胞測試（Tanaka H et al., Br J Cancer 2001 Jan 5, 84(1)： 94-9; Umano Y et al., Br J Cancer 2001 Apr 20, 84(8)： 1052-7; Uchida N et al. , Clin Cancer Res 2004 Dec 15, 10(24): 8577-86; Suda T et al., Cancer Sci 2006 May, 97(5): 411-9; 45 201008574

Watanabe T et al., Cancer Sci 2005 Aug, 96(8)： 498-506)。 細胞毒殺性T淋巴球擴張步驟 使用與由 Riddell et al. (Walter EA et al.，N Engl J Med 1 995 Oct 19, 333(16): 1038-44; Riddel 1 SR et al.,

Nat Med 1 996 Feb, 2(2): 216-23)敘述之相似方法於培養 中擴張細胞毒殺性T淋巴球。全部5 x 104細胞毒殺性τ 淋巴球懸浮於25ml之含有由MMC去活化之兩種人類Β類淋 巴母細胞株之AIM-V/5%自身取得血清培養基，在40ng/ml 之抗-003單株抗體（？11&1'111丨1^611)存在下。在開始培養1天 後，120IU/ml之IL-2加入培養中。於第5、8、11天以新 鮮之含30IU/ml之IL-2的AIM-V/5%自身取得血清培養基 提供給培養物（Tanaka H et al.，Br J Cancer 2001 Jan 5， 84(1 ): 94-9; Umano Y et al., Br J Cancer 2001 Apr 20, 84(8): 1052-7; Uchida N et al., Clin Cancer Res 2004 Dec 15, 10(24): 8577-86; Suda T et al. , Cancer Sci 2006 _

May, 97(5): 411-9; Watanabe T et al., Cancer Sci 2005 Aug, 96(8): 498-506) 〇 專一之細胞毒殺性T淋巴球活性 為了測試專一之細胞毒殺性Τ淋巴球活性，執行 iFN-r酵素結合免疫斑點（ELISP0T)分析與酵素結 合免疫吸附（ELISA)分析。特別地，製備胜肽脈衝之Τ2(1 X 1 04/we 11)為刺激細胞。培養之細胞於48孔中做為應答細 胞。於製造步驟下執行IFN_ 7酵素結合免疫斑點分析與 46 201008574 IFN-γ酵素結合免疫吸附分析。 結果 於癌症中增強之INHBB表現 於下列癌症中有根據地提升INHBB表現：與對應之正 常組織相較，於膽管細胞癌中21個有10個、食道癌中12 個有12個、非小細胞肺癌中13個有1 0個、腎癌中24個 有22個、小細胞肺癌中14個有8個與軟組織腫瘤中49個 有45個。 以HLA - A0201限制之來自INHBB之預測胜肽刺激細T細胞 與經以來自INHBB之胜肽刺激的細胞毒殺性T淋巴球株的 建立 根據先前“材料與方法”段落所敘述之步驟產生對於 那些來自INHBB之胜肽的細胞毒殺性τ淋巴球。產生之細 胞毒殺性T淋巴球，具有可偵測專一細胞毒殺性τ淋巴球 活性，如藉由IFN-r酵素結合免疫斑點分析，顯示於第1 _ 圖。與藉由IFN-7酵素結合免疫斑點分析之控制組相較， INHBB-A02-9-213(序列辨識號：1)、INHBB-A02-9-1 74(序 列辨識號：2)、INHBB-A02-9-257C序列辨識號：3)、 INHBB-A02-9-313(序列辨識號：4)、INHBB-A02-9-139C序 列辨識號：5)、INHBB-A02-9-8(序列辨識號：6)、 INHBB-A02-9-250(序列辨識號：7)、INHBB-A02-10-179C序 列辨識號：8)、INHBB-A02-10-237C序列辨識號：9)、 INHBB-A02-10_313(序列辨識號：1〇)、inHBB-A02-10-173 (序列辨識號：ll)、INHBB-A02-10-256(序列辨識號：12)、 47 201008574 INHBB-A02-10-16C序列辨識號：13)與 INHBB-A02-1 0-85(序 列辨識號：14)。顯示強有力之IFN-7產生。此外，經序 列辨識號：2刺激之於正孔洞編號#7中之細胞被擴展且建 立了細胞毒殺性T淋巴球。具有抗胜肽脈衝標的之高專一 細胞毒殺性T淋巴球活性之細胞毒殺性τ淋巴球細胞株與 抗無胜肽脈衝標的之活性比較，藉由IFN-r酵素結合免疫 吸附分析（第2圖）來確認。此結果於此處顯示，與無胜狀 脈衝之目標細胞相較，細胞毒殺性T淋巴球細胞株顯示強 的抗對應胜肽脈衝之目標細胞的IFN-r產生。於本發明内 ❹ 容中’可建立細胞毒殺性T淋巴球細胞株之胜肽，被選為 強的細胞毒殺性T淋巴球刺激胜肽。 結論’源自INHBB之新的HLA-A02抗原決定位被鑑定 且證明可應用於癌症免疫治療。 產業利用性 本發明敘述新的腫瘤相關抗原，特別是來自丨NHBB的 _ 那些，其誘導強且專一的抗腫瘤免疫反應，且對於癌症形 式之寬的範圍而言具有應用性。此腫瘤相關抗原准許更進 一步發展為抗INHBB相關疾病之胜肽疫苗，例如癌症，特 別是膽管細胞癌、食道癌、非小細胞肺癌、腎癌、小細胞 肺癌與軟組織腫瘤。 當於此詳述本發明與提及其特定實施例時，需瞭解的 是’前述敘述本質為示範與解释且意為說明本發明與其較 佳實施例。於例行實驗之中，熟悉此技藝人士可立即瞭解 48 201008574 在不脫離本發明之精神下其可實行各種改變與修飾，本發 明之邊界與範圍為所附之申請專利範圍所界定。 【圖式簡單說明】 第1圖包括一系列照片（a)-(n)，顯示於細胞毒殺性T 淋巴球上之IFN-T酵素結合免疫斑點分析（ELISP0T)的結 果，其中以來自IΝΗΒΒ之胜肽誘導細胞毒殺性Τ淋巴球。 @ 分別與控制組相較，於孔（well)#4中之以ΙΝΗΒΒ-Α02-9-213(序列辨識號：1)(3)、於孔#5與#7中以1仙63-八02-9- 174(序列辨識號：2)(b)、於孔#8中以INHBB-A02-9-257C序 列辨識號：3)(c)、於孔#1與#8中以INHBB-A02-9-313(序 列辨識號：4)(d)、於孔 #1、#4 與#8 中以 INHBB-A02-9-139 (序列辨識號：5)(e)與於孔#4中以INHBB-A02-9-8C序列辨 識號：6)(ί)、於孔#6中以INHBB-A02-9-250(序列辨識號： 7)(g)、於孔 #5 中以 INHBB-A02-1 0-1 79(序列辨識號：8) ❹ （h)、於孔#3中以INHBB-A02-10-237(序列辨識號：9)(i)、 於孔#5中以INHBB-A02-10-313(序列辨識號：l〇)(j)(序列 辨識號：10)、於孔#3與#7中以INHBB-A02-1 0-1 73C序列 辨識號：11)00、於孔#4中以INHBB-A02-10-256(序列辨 識號：12)(1)、於孔#7中以INHBB-A02-10-162C序列辨識 號：13)(m)與於孔#7中以INHBB-A02-1 0-85C序列辨識號： 14)(η)刺激的細胞毒殺性T淋巴球，顯示強有力之ifn- 7 產生。於圖中，“ 指出孔洞中之目標細胞以適合之胜狀 脈衝，而“指出目標細胞沒有被任何胜肽脈衝。 49 201008574 第2圖顯示一線圖，其以IFN- 7·酵素結合免疫吸附分 析顯示經ΙΝΗΒΒ-Α02-9-174(序列辨識號：2)刺激之細胞毒 殺性T淋巴球細胞株的建立的結果。顯示結果證明，與控 制組相較，藉由以胜肽刺激建立 胞株顯示強有力之IFN-r產生 細胞以適合之胜肽脈衝，而“—，， 胜肽脈衝。 之細胞毒殺性T淋巴球細 。於圖中，“+，’指出目標 指出目標細胞沒有被任何

【主要元件符號說明】 無。

50 201008574 序列表 <110〉 腫瘤療法·科學股份有限公司 <120〉 INHBB抗原決定位胜肽及含此胜肽的疫苗 <130> ONC-A0814-TW <150> <151〉 US 61/089, 973 2008-08-19 <160〉 16 <170〉 PatentIn version 3. 5 ® <210〉 <211〉 <212〉 <213〉 1 9 PRT 人工序列 <220〉 <223〉 人工合成胜肽 <400> 1

Asn Met Val Glu Lys Arg Val Asp Leu 1 5 Q <210> <211〉 <212> <213> 2 9 PRT 人工序列 <220〉 <223〉 人工合成胜肽 <400〉 2

Val Gin Ala Ser Leu Trp Leu Tyr Leu

1 5 <210> <211〉 <212〉 3 9 PRT 1 201008574 <213〉 人工序列 <220〉 <223〉 人工合成胜肽 <400〉 3

Glu Leu Ala Val Val Pro Val Phe Val 1 5 <210> 4 <211〉 9 <212〉 PRT <213〉人工序列 <220〉 <223〉人工合成胜肽 <400> 4

Arg Leu lie Gly Trp Asn Asp Trp lie 1 5 <210〉 5 <211〉 9 <212〉 PRT <213〉人工序列 <220> <223〉人工合成胜肽 <400> 5

Arg Val Ser Glu lie lie Ser Phe Ala 1 5 <210〉 6 <211〉 9 <212〉 PRT <213〉人工序列 <220〉 人工合成胜肽 <223> 201008574 <400> 6

Ala Leu Gly Ala Ala Cys Leu Leu Leu 1 5 <210> 7 <211〉 9 <212〉 PRT <213〉人工序列 <220〉 <223〉人工合成胜肽 φ <400> 7

Val Gin Cys Asp Ser Cys Gin Glu Leu 5 <210> <211〉 <212> <213〉 <220> <223〉 <400> 8 10

PRT 人工序列 人工合成胜肽 8

Trp Leu Tyr Leu Lys Leu Leu Pro Tyr Val 1 5 10 〈210〉 9 <211〉 10 <212〉 PRT <213〉人工序列 <220〉 <223〉人工合成胜肽 <400〉 9

Ala Leu Phe Glu Arg Gly Glu Arg Arg Leu 3 201008574 〈210〉 10 <211〉 10 <212〉 PRT <213〉 人工序列 <220〉 <223〉 人工合成胜肽 <400> 10

Arg Leu lie Gly Trp Asn Asp Trp lie lie 1 5 10 <210〉 11 <211〉 10 <212〉 PRT <213〉人工序列 <220〉 〈223>人工合成胜肽 <400> 11

Val Val Gin Ala Ser Leu Trp Leu Tyr Leu 1 5 10 <210> 12 <211〉 10 <212〉 PRT <213> 人工序列 <220〉 <223〉 人工合成胜肽 <400> 12

Gin Glu Leu Ala Val Val Pro Val Phe Val 1 5 10 <210〉 13 201008574 <211> 10 <212> PRT <213〉人工序列 <220> <223〉人工合成胜肽 <400> 13

Phe lie Ser Asn Glu Gly Asn Gin Asn Leu 1 5 10

<210> 14 <211〉 10 ❻〈212〉 PRT <213〉人工序列 <220〉 〈223>人工合成胜肽 <400> 14

Arg Leu Gin Met Arg Gly Arg Pro Asn lie 1 5 10 <210〉 15 <211〉 3218 <212> DNA ® <213〉人類 <220> <221> CDS <222> (47)..(1270) <400> 15 55 actcggctcg cctcgcggcg ggcgccctcg tcgccagcgg cgcacc atg gac ggg

Met Asp Gly 1 ctg ccc ggt egg geg ctg ggg gcc gcc tgc ett ctg ctg ctg geg gcc Leu Pro Gly Arg Ala Leu Gly Ala Ala Cys Leu Leu Leu Leu Ala Ala 5 10 15 5 103 151201008574 ggc tgg ctg ggg cct gag gcc tgg ggc tea ccc acg ccc ccg ccg acg Gly Trp Leu Gly Pro Glu Ala Trp Gly Ser Pro Thr Pro Pro Pro Thr 20 25 30 35 cct gcc geg ccg ccg cca ccc ccg cca ccc gga tee ccg ggt ggc teg Pro Ala Ala Pro Pro Pro Pro Pro Pro Pro Gly Ser Pro Gly Gly Ser 40 45 50 199 cag gac acc tgt aeg teg tgc ggc ggc ttc egg egg cca gag gag etc Gin Asp Thr Cys Thr Ser Cys Gly Gly Phe Arg Arg Pro Glu Glu Leu 55 60 65 ggc ega gtg gac ggc gac ttc ctg gag geg gtg aag egg cac ate ttg Gly Arg Val Asp Gly Asp Phe Leu Glu Ala Val Lys Arg His lie Leu 70 75 80 age ege ctg cag atg egg ggc egg ccc aac ate aeg cac gcc gtg cct Ser Arg Leu Gin Met Arg Gly Arg Pro Asn lie Thr His Ala Val Pro 85 90 95 aag gcc gcc atg gtc aeg gcc ctg ege aag ctg cac geg ggc aag gtg Lys Ala Ala Met Val Thr Ala Leu Arg Lys Leu His Ala Gly Lys Val 100 105 110 115 ege gag gac ggc ege gtg gag ate ccg cac etc gac ggc cac gcc age Arg Glu Asp Gly Arg Val Glu lie Pro His Leu Asp Gly His Ala Ser 120 125 130 ccg ggc gcc gac ggc cag gag ege gtt tee gaa ate ate age ttc gcc Pro Gly Ala Asp Gly Gin Glu Arg Val Ser Glu lie lie Ser Phe Ala 135 140 145 gag aca gat ggc etc gcc tee tee egg gtc ege eta tac ttc ttc ate Glu Thr Asp Gly Leu Ala Ser Ser Arg Val Arg Leu Tyr Phe Phe lie 150 155 160 tee aac gaa ggc aac cag aac ctg ttt gtg gtc cag gcc age ctg tgg Ser Asn Glu Gly Asn Gin Asn Leu Phe Val Val Gin Ala Ser Leu Trp 165 170 175 ett tac ctg aaa etc ctg ccc tac gtc ctg gag aag ggc age egg egg Leu Tyr Leu Lys Leu Leu Pro Tyr Val Leu Glu Lys Gly Ser Arg Arg 180 185 190 195 aag gtg egg gtc aaa gtg tac ttc cag gag cag ggc cac ggt gac agg Lys Val Arg Val Lys Val Tyr Phe Gin Glu Gin Gly His Gly Asp Arg 247 295 343 391 439

487 參 535 583 631 6 679 201008574 200 205 210 tgg aac atg gtg gag aag agg gtg gac etc aag ege age ggc tgg cat 727

Trp Asn Met Val Glu Lys Arg Val Asp Leu Lys Arg Ser Gly Trp His 215 220 225 acc ttc cca etc aeg gag gee ate cag gee ttg ttt gag egg ggc gag 775

Thr Phe Pro Leu Thr Glu Ala lie Gin Ala Leu Phe Glu Arg Gly Glu 230 235 240 egg ega etc aac eta gac gtg cag tgt gac age tgc cag gag ctg gee 823

Arg Arg Leu Asn Leu Asp Val Gin Cys Asp Ser Cys Gin Glu Leu Ala 245 250 255 gtg gtg ccg gtg ttc gtg gac cca ggc gaa gag teg cac egg ccc ttt 871 翁 Val Val Pro Val Phe Val Asp Pro Gly Glu Glu Ser His Arg Pro Phe 260 265 270 275 gtg gtg gtg cag get egg ctg ggc gac age agg cac ege att ege aag 919

Val Val Val Gin Ala Arg Leu Gly Asp Ser Arg His Arg lie Arg Lys 280 285 290 ega ggc ctg gag tgc gat ggc egg acc aac etc tgt tgc agg caa cag 967

Arg Gly Leu Glu Cys Asp Gly Arg Thr Asn Leu Cys Cys Arg Gin Gin 295 300 305 ttc ttc att gac ttc ege etc ate ggc tgg aac gac tgg ate ata gca 1015

Phe Phe lie Asp Phe Arg Leu lie Gly Trp Asn Asp Trp lie lie Ale 310 315 320 〇 ccc acc ggc tac tac ggg aac tac tgt gag ggc age tgc cca gee tac 1063

Pro Thr Gly Tyr Tyr Gly Asn Tyr Cys Glu Gly Ser Cys Pro Ala Tyr 325 330 335 ctg gca ggg gtc ccc ggc tet gee tee tee ttc cac aeg get gtg gtg 1111

Leu Ala Gly Val Pro Gly Ser Ala Ser Ser Phe His Thr Ala Val Val 340 345 350 355 aac cag tac ege atg egg ggt ctg aac ccc ggc aeg gtg aac tee tgc 1159

Asn Gin Tyr Arg Met Arg Gly Leu Asn Pro Gly Thr Val Asn Ser Cys 360 365 370 tgc att ccc acc aag ctg age acc atg tee atg ctg tac ttc gat gat 1207

Cys lie Pro Thr Lys Leu Ser Thr Met Ser Met Leu Tyr Phe Asp Asp 375 380 385 7 201008574 gag tac aac ate gtc aag egg gac gtg ccc aac atg att gtg gag gag 1255

Glu Tyr Asn lie Val Lys Arg Asp Val Pro Asn Met lie Val Glu Glu 390 395 400 tgc ggc tgc gee tga cagtgcaagg caggggcacg gtggtggggc aeggagggea 1310

Cys Gly Cys Ala 405 gtcccgggtg ggcttcttcc agcccccgcg ggaacggggg tacacggtgg gctgagtaca 1370 gtcattctgt tgggctgtgg agatagtgee agggtgcggc ctgagatatt tttctacagc 1430 ttcatagagc aaccagtcaa aaccagagcg agaaccctca actgacatga aatactttaa 1490 aatgcacacg tagccacgca cagccagacg catcctgcca cccacacagc agcctccagg 1550 ataccagcaa atggatgegg tgacaaatgg cagcttagct acaaatgcct gtcagtcgga 1610 gagaatgggg tgagcagcca ccattcccac cagctggccc ggccactctg aattgcgcct 1670 tccgagcaca cataaaagca caaagacaga gacgcagaga gagagagaga gccacggaga 1730 ggaaaagcag atgcaggggt ggggagcgca geteggegga ggctgcgtgt gccccgtggc 1790 ttttaccagg cctgctctgc ctggctcgat gtctgcttct tccccagcct gggatccttc 1850 gtgcttcaag gcctggggag cctgtccttc catgcccttg tcgagggaaa gagacccaga 1910 aaggacacaa cccgtcagag acctgggagc aggggcaatg accgtttgac tgtttgtggc 1970 ttgggcctct gacatgactt atgtgtgtgt gtgtttttgg ggtggggagg gagggagaga 2030 agagggggct aaatttgatg ctttaactga tctccaacag ttgacaggtc atccttgcca 2090 gttgtataac tgaaaaagga cttttctacc aggtatgacc ttttaagtga aaatctgaat 2150 tgttctaaat ggaaagaaaa aaagttgcaa tctgtgccct tcattgggga cattcctcta 2210 ggactggttt ggggacgggt gggaatgacc cctaggcaag gggatgagac egeaggagga 2270 aatggcgggg aggaggeatt cttgaactgc tgaggatggg gggtgtcccc teageggagg 2330 ccaagggagg ggagcagcct agttggtctt ggagagatgg ggaaggcttt cagctgattt 2390 gcagaagttg cccatgtggg ccccagccat cagggctggc cgtggacgtg gcccctgccc 2450 201008574 ❹ ❹ actcacctgc ccgcctgccc gcccgcccgc atagcacttg cagacctgcc tgaacgcaca 2510 tgacatagca cttgccgatc tgcgtgtgtc cagaagtggc ccttggccga gcgccgaact 2570 cgctcgccct ctagatgtcc aagtgccacg tgaactatgc aatttaaagg gttgacccac 2630 actagacgaa actggactcg tacgactctt tttatatttt ttatacttga aatgaaatcc 2690 tttgcttctt ttttaagcga atgattgctt ttaatgtttg cactgattta gttgcatgat 2750 tagtcagaaa ctgccatttg aaaaaaagtt atttttatag cagcaaaaaa aaaaaaaaaa 2810 gaatacagtt aaatgtatta tacataattt tggaaccaaa gaggccaaca gatcagtttt 2870 aattttatta gacggtgagg ccatctgaga tgaggtggac gttctgagca gtcccttgag 2930 tggcctgcca acgtttcagg gtatgaatgg attttgttta ttcggtttga tgtgtctttt 2990 ccatccttac acacccagaa ggtagagtaa aaatgactat gatagaatgc aggtgtgtat 3050 ccttaaatcc tcatctttat gtttatttaa taaagctccc cttagattct gtttcataat 3110 aatttaaaac caaacaattt tcccatagac ttgctgttaa agtattgtac gtttgtgtac 3170 agtttaagaa aataaaagat tgagtgccac gggaaaaaaa aaaaaaaa 3218 <210> 16 <211〉 407 <212〉 PRT <213〉人類 <400> 16

Met Asp Gly Leu Pro Gly Arg Ala Leu Gly Ala Ala Cys Leu Leu Leu 15 10 15

Leu Ala Ala Gly Trp Leu Gly Pro Glu Ala Trp Gly Ser Pro Thr Pro 20 25 30

Pro Pro Thr Pro Ala Ala Pro Pro Pro Pro Pro Pro Pro Gly Ser Pro 35 40 45 9 201008574

Gly Gly Ser Gin Asp Thr Cys Thr Ser Cys Gly Gly Phe Arg Arg Pro 50 55 60

Glu Glu Leu Gly Arg Val Asp Gly Asp Phe Leu Glu Ala Val Lys Arg 65 70 75 80

His lie Leu Ser Arg Leu Gin Met Arg Gly Arg Pro Asn lie Thr His 85 90 95

Ala Val Pro Lys Ala Ala Met Val Thr Ala Leu Arg Lys Leu His Ala 100 105 110

Gly Lys Val Arg Glu Asp Gly Arg Val Glu lie Pro His Leu Asp Gly 115 120 125

His Ala Ser Pro Gly Ala Asp Gly Gin Glu Arg Val Ser Glu lie He 130 135 140

Ser Phe Ala Glu Thr Asp Gly Leu Ala Ser Ser Arg Val Arg Leu Tyr 145 150 155 160

Phe Phe lie Ser Asn Glu Gly Asn Gin Asn Leu Phe Val Val Gin Ala 165 170 175

Ser Leu Trp Leu Tyr Leu Lys Leu Leu Pro Tyr Val Leu Glu Lys Gly 180 185 190

Ser Arg Arg Lys Val Arg Val Lys Val Tyr Phe Gin Glu Gin Gly His 195 200 205

Gly Asp Arg Trp Asn Met Val Glu Lys Arg Val Asp Leu Lys Arg Ser 210 215 220

Gly Trp His Thr Phe Pro Leu Thr Glu Ala lie Gin Ala Leu Phe Glu 225 230 235 240 10 201008574

Arg Gly Glu Arg Arg Leu Asn Leu Asp Val Gin Cys Asp Ser Cys Gin 245 250 255

Glu Leu Ala Val Val Pro Val Phe Val Asp Pro Gly Glu Glu Ser His 260 265 270

Arg Pro Phe Val Val Val Gin Ala Arg Leu Gly Asp Ser Arg His Arg 275 280 285

lie Arg Lys Arg Gly Leu Glu Cys Asp Gly Arg Thr Asn Leu Cys Cys 290 295 300

Arg Gin Gin Phe Phe lie Asp Phe Arg Leu lie Gly Trp Asn Asp Tip 305 310 315 320 lie lie Ala Pro Thr Gly Tyr Tyr Gly Asn Tyr Cys Glu Gly Ser Cys 325 330 335

Pro Ala Tyr Leu Ala Gly Val Pro Gly Ser Ala Ser Ser Phe His Thr 340 345 350 ❹ Ala Val Val Asn Gin Tyr Arg Met Arg Gly Leu Asn Pro Gly Thr Val 355 360 365

Asn Ser Cys Cys lie Pro Thr Lys Leu Ser Thr Met Ser Met Leu Tyr 370 375 380

Phe Asp Asp Glu Tyr Asn lie Val Lys Arg Asp Val Pro Asn Met lie 385 390 395 400

Val Glu Glu Cys Gly Cys Ala 405 11

Claims (1)

1. 201008574 七、申請專利範圍： 1· 一種經分離的胜肽來自序列辨識號：16，其中該胜 肽包括一胺基酸序列其係擇自由下列所組成之群組： (a) 序列辨識號：1-14 ;以及 (b) 序列辨識號：1-14，其中取代、插入、刪除及/或 加入1、2或數個胺基酸， 且具有細胞毒殺性T淋巴球誘發能力。 2. 如申請專利範圍第1項所述之經分離的胜肽，其中 胜肽由少於15個胺基酸殘基所組成。 3. 如申請專利範圍第2項所述之經分離的胜肽，其中 該胜肽為九胜肽或十胜肽。 4. 如申請專利範圍第1至3項所述之經分離的胜肽， 其中該胜肽包括該胺基酸序列其係擇自由序列辨識號： 1-14所組成之群組’具下列特徵之一或兩者： (a) 來自N端之第二個胺基酸係擇自白胺酸或甲硫胺 酸之群組；以及 (b) C端胺基酸係擇自纈胺酸或白胺酸之群組。 5. —種經分離的多核苷酸，其編碼出如申請專利範圍 第1至4項之任一項所述之一或多個胜肽。 6. —種藥學試劑，包括一活性成分結合一藥學上可接 受之載體，該活性成分係擇自由下列所組成之群組： (a) —或多個如申請專利範圍第1至4項之任一項所述 之胜肽； (b) —或多個多核苷酸’其編碼出該胜肽； 201008574 (C)一或多個抗原呈現細胞及/或一外吐小體，其表現 一複合物於其表面上，該複合物形成於一人類白血球組織 抗原（human leukocyte antigen，HLA)與如申請專利範圍 第1至4項之任一項所述之一胜肽之間； (d)—或多個細胞毒殺性τ淋巴球，其被誘導抗如申請 專利範圍第1至4項之任一項所述之一胜肽；以及 (e )其組合 ❹ ，而該藥學上可接受之載體係為了一目的而配製，該 目的擇自由下列所組成之群組： (i )癌症之治療； (ii)癌症之預防； (lii)癌症之手術後復發的避免；以及 (i v)其組合。 7.如申請專利範圍第6項所述之藥學試劑，其配製所 投予之個體，其之人類白血球組織抗原為人類白也球組織 抗原-A02。 8·如申請專利範圍f 6項所述之藥學試劑，其中該癌 症係擇自由膽管細胞癌（Ch〇langi〇cellulai_ carxmoma)、食道癌、非小細胞肺癌、腎癌、小細胞肺癌 與軟組織脸瘤所組成之群組。 9.如申靖專利範圍第6項所述之藥學試劑，其中該試 劑被配製成一疫苗。 ίο·—種誘導具有高細胞毒殺性τ淋巴球誘發能力之 抗原呈現細胞方，甘>>- _ ,χ > . 去其中該方法包括該步驟擇自由下列所 2 201008574 組成之群組： (a)將一抗原呈現細胞與如申請專利範圍第i至 t 3 之 任一項所述之一胜肽接觸，以及 而該多核苷酸 (b)將一多核苷酸引入一抗原呈現細胞， 編碼出該胜肽於可表達之形式中。 11. 一種誘導細胞毒殺性τ淋巴球的方法，其中該方去 包括該步驟擇自由下列所組成之群組： / (a) 將CD8+ Τ細胞與抗原呈現細胞及/或外吐小體接 觸，該抗原呈現細胞及/或該外吐小體表現一複合物，該複 合物形成於一人類白血球組織抗原與如申請專利範圍第1 至4項之任一項所述之一胜肽之間，以及； (b) 將一多核苷酸引入一 CD8+ τ細胞，其中該多核苷 酸編碼出-多胜肽’該多胜肽具形成一 τ細胞受體次單位 的能力，肖Τ細胞受體次單位辨認一複合物，該複合物形 成於一人類白血球組織抗原與如申請專利範圍第1至4項 之任一項所述之一胜肽之間。 12. —種經分離之細胞毒殺性τ淋巴球，其將如申請專 利範圍第1至4項之任-項所述之胜肽的任—個做為目標。 13. —種經分離之細胞毒殺性τ淋巴球，其藉由如申喑 專利範圍第1至4項之任一項所述之一胜肽來誘導。 14·如申請專利範圍第12或13項所述之細胞毒殺性τ 淋巴球，其具有辨認一複合物的能力，該複合物形成於一 人類白血球組織抗原與如申請專利範圍第丨至4項之任一 項所述之一胜肽之間於—細胞表面上。 201008574 15·如申請專利範圍第12至14項所述之細胞毒殺性Τ 淋巴球’其藉由如申請專利範圍第11項所述之方法來誘 導。 16. —種經分離之抗原呈現細胞，其於其表面表現一複 合物’該複合物形成於一人類白血球組織抗原與如申請專 利範圍第1至4項之任一項所述之一胜肽之間。 17. 如申請專利範圍第16項所述之抗原呈現細胞，其 ❿藉由如申請專利範圍第1 0項所述之方法來誘導。 18. 如申請專利範圍第16或17項所述之抗原呈現細 胞，其中該人類白血球組織抗原為HLA-A02。 19. 一種試劑，用以於一個體中誘導一抗癌之免疫反 應，其中該試劑包括一活性成分，擇自由下列所組成之群 組： (a)—或多個如申請專利範圍第1至4項之任一項所述 之胜肽； ❹ 一或多個多核苷酸，其編碼出該胜肽於一可表現之 形式； (c) 一或多個抗原呈現細胞及/或一外吐小體，其表現 一複合物於其表面上，該複合物形成於一人類白血球組織 抗原（human leukocyte antigen，HLA)與如申請專利範圍 第1至4項之任一項所述之一胜肽之間； (d) —或多個細胞毒殺性τ淋巴球，其被誘導抗如申請 專利範圍第1至4項之任一項所述之一胜肽；以及 (e )其組合。 4 201008574 20. —種誘導抗癌之免疫反應於一個體中的方法，該方 法包括投予該個體一試劑的步驟，該試劑包括一活性成分 擇自由下列所組成之群組： (a) —或多個如申請專利範圍第1至4項之任—項所述 之胜肽； (b) —或多個多核苷酸，其編碼出該胜肽於—可表現之 形式； (c) 一或多個抗原呈現細胞及/或一外吐小體，其表現 一複合物於其表面上，該複合物形成於一人類白血球組織 抗原（human leukocyte antigen，HLA)與如申請專利範圍 第1至4項之任一項所述之一胜肽之間； (d) —或多個細胞毒殺性τ淋巴球，其被誘導抗如申請 專利範圍第1至4項之任一項所述之一胜肽；以及 (e )其組合， 以及； 一藥學上可接受之載體。 21. 如申請專利範圍第2〇項所述之方法，其中該癌症 係擇自由膽管細胞癌、食道癌、非小細胞肺癌、腎癌、小 細胞肺癌與軟組織腫瘤所組成之群組。 22. 如申請專利範圍第20或21項所述之方法，其中該 個體具有人類白血球組織抗原A〇2。 23. —種試劑，用以誘導細胞毒殺性τ淋巴球，其中該 試劑包括一或多個如申請專利範圍第1至4 、 $ <任一項所 述之胜肽、一多核苷酸，其編碼出該胜肽、或如申請專利 201008574 罾 範圍第1 6至18項之任一項或所述之經分離之抗原呈現細