TW200909005A - Lyophilized immunoglobulin formulations and methods of preparation - Google Patents
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Description
200909005 九、發明說明： 【發明所屬之技術領域】 本發明-般係關於免疫球蛋自之醫藥調配領域。 之，本發明係關於穩定、冷凍乾燥之高濃度免疫球蛋白： 配物。本發明係藉由重組人類化抗一整合素抗體那他珠 早抗（natalizumab)之穩定冷束乾燥之調配物例示。 【先前技術】
意欲投與至人類之藥物㈣可能需要穩定劑來防止在使 用製劑之前藥物之改變。因為蛋白f比傳統有機及無機藥 物更大且更複雜(亦即，除複雜三維結構外，i白質亦具 有多種官能基)’戶斤以蛋白質之調配提出特殊問題。蛋： 質之降解路徑可涉及化學不穩定性（涉及藉由產线化學 實體之鍵形成或裂解對蛋白質進行修飾的任何方法）或物 理不穩定性（蛋白質之高階結構之變化）。化學不穩定性可 由脫醯胺作用、外消旋作用、水解作用、氧化作用、^肖 除或二硫化物交換引起。物理不穩定性可由例如變性、聚 集沈;殿或吸附引起。許多蛋白質製劑於極稀或高濃度溶 ，中尤其不穩定，i當儲存或運輸蛋白f製劑時，此不穩 疋性常常增加。因此，蛋白質藥物之領域中存在之主要挑 戰為開發維持蛋白質穩定性及活性之調配物。 抗體（包括單株抗體）在與其在調配物中之行為及功效有 關之方式方面均互不相同。舉例而言，單株抗體關於等電 點、溶解度及單株抗體之聚集條件互不相同。蛋白質關於 在凋配物中之行為及功效互不相同，使得難以預測調配 132080.doc 200909005 物對於特定抗體是否穩定。蛋白質調配物中之三個常見問 題包括蛋白質降解、聚集、脫醯胺及氧化。此外，影響調 配物穩定性之許多不同反應可同時進行，使得難以判定何 種反應引起何種結果。參見Cleland等人，"The Development of Stable Protein Formulations: A Close Look at Protein Aggregation, Deamidation, and Oxidation", Critical Reviews in Therapeutic Drug Carrier Systems, 10(4):307-377 (1993))= 【發明内容】 具體而言’本發明係關於穩定、冷凍乾燥之高濃度免疫 球蛋白調配物。製備本發明之調配物存在三個步驟，包括 製備預冷凍乾燥之水性調配物、冷凍乾燥步驟及復水步 驟。 本發明係針對一種藉由冷凍乾燥水性調配物所製備之穩 疋冷;東乾燥之調配物’其中該水性調配物包含於緩衝劑、 聚山梨醇酯及蔗糖中之約40 mg/ml至約50 mg/ml之免疫球 蛋白。在本發明之一較佳實施例中，該預冷凍乾燥之水性 調配物包含⑷約30 mg/ml至約60 mg/ml那他珠單抗；（b)具 有約5.5至約6.5之pH值之緩衝劑；（c)約20 mg/ml至約5〇 mg/ml蔗糖；及約0 〇2%至約〇 〇8%聚山梨醇酯。在一更 佳實施例中’該預冷凍乾燥之水性調配物包含⑷約4〇 mg/ml那他珠單抗；（b)約6 mM組胺酸，pH值約6.0 ; (c)約 41 mg/ml蔗糖；及（d)約0.04%聚山梨醇酯8〇。 冷珠乾燥之調配物保持免疫球蛋白之穩定性，且防止意 132080.doc 200909005 欲投與至人類個體之免疫球蛋白於最終產物中形成聚集體 及/或微粒。此冷凍乾燥之調配物於室溫下穩定至少三個 月，較佳6個[且更佳一年。冷凍乾燥之調配物亦於2_ 8°C下穩定1年，較佳2年。此冷束乾燥之調配物具有少於 1〇分鐘之短復水時間’且重組後適於非經腸投藥，諸如肌 肉内、皮下、靜脈内或腹膜内注射。 用液體使冷凍乾燥之調配物重組為含有約8〇_16〇 mg/mi 免疫球蛋白濃度之澄清溶液。在一較佳實施例中，重組調 配物包含（1)約80 mg/ml至約160 mg/ml那他珠單抗；（π) pH 值為約6.0之約18 mM組胺酸；（出）約123 mg/ml蔗糖；及 (!v)約0.12%聚山梨醇酿8〇β在一更佳實施例中，重组調配 物包含約120 mg/ml那他珠單抗。 本發明之預冷凍乾燥之調配物可使用適當乾燥參數經冷 凍乾燥。下列乾燥參數為較佳的：約_25。〇之第一乾燥階 段溫度及介於約80 mTorr至約120 mTorr之間的壓力；及於 約20C及介於約80 mTorr至120 mTorr之間的壓力下之第二 乾燥階段。 本發明進一步提供用於製造及用於使用重組調配物之方 法。 【實施方式】 1.定義 如本文所使用’術語”免疫球蛋白"包括（但不限於）抗體 及抗體片段（諸如SCFV、Fab、Fc、（Fab，）2)，及抗體之其他 遺傳工程化部分。視重鏈恆定域之胺基酸序列而定，免疫 132080.doc 200909005 球蛋白可分為不同種類。存在五種主要免疫球蛋白種類：
IgA、IgD、IgE、IgG及IgM。此等種類中之若干種類可進 一步分為子類（同型），例如IgG1、IgG2、lgG3及IgG4 ; IgAl 及 IgA2。 術語"抗體"以最廣泛之意義使用且特定地遮蓋單株抗體 (包括促效劑及拮抗劑抗體）、具有多抗原決定基特異性之 k體組合物及抗體片段（例如，Fab、（Fab，）2、scFv及Fv)， 只要其展現所需生物活性即可。”抗體”意欲包括多株抗 體、早株抗體、人類化抗體、人類抗體、靈長類化抗體及 經由遺傳工程化製造之其他抗體。 如本文所使用，術語"單株抗體”係指自大體上均質抗體 之群體所獲得之抗體，亦即，除可以微量存在之可能天然 存在之修飾或糖基化變異❸卜包含該群體之個別抗體相 同。修飾語"單株"表明如自大體上均f抗體之群體所獲得 之抗體的特徵，且不應理解為需要藉由任何特定方法來產 生該抗體。術語”單株抗體”亦包括：，，嵌合"抗體（免疫球蛋 白）’其中重鏈及/或輕鏈之一部分與源自特定物種或屬於 特定抗體種類或子類之抗體中的相應㈣—致或同源，而 4亥等）鏈之其餘部分與源自其他物種或屬於其他抗體種 類或子類之抗體中的相應序列—致或同源，以及該等抗體 之片段，只要其呈現所需生物活性即可。非人類（例如’ 科動物兔牛馬、豬及其類似物）抗體之”人類化”形 式為含有源自非人類免疫球蛋白之最小序列的嵌合免疫球 蛋白、免疫球蛋白鏈或其片段（諸如Fv、Fab、Fab,、 132080.doc 200909005 F(aiy)2或抗體之其他抗原結合子序列）。 術語"那他珠單抗"係指亦稱為AN1 00226(抗體編碼序號） 之抗體’且為TYSABRI®(商品名稱；原先為ANTEGREN(g)) 中之活性成份。術語"那他珠單抗"為美國通用名稱（United States Adopted Name，USAN)(給予醫藥物質之官方非專用 或通用名稱）。那他珠單抗為重組、人類化抗整合素抗 體。那他珠單抗為IgG4抗體。以引用的方式併入本文中之 美國專利第5,84G，299號描述如何使用f規合成及分子生物 學方法來製造包括那他珠單抗之重組人類化抗·α_4整合素 抗體。 術語”冷；東乾㈣y〇Phuization，lyophilized，加· 2係才日—種首先將待乾燥之材料冷;東且接著藉由於真 空環境下昇華來移除冰或冷束溶劑之方法。一或多種賦形 劑了包括在預冷;東乾燥之調配物中以增強冷珠乾燥之產物 儲存後之穩定性。 人醫藥調配物”係指呈允許活性成份有效之方式且不 #將投與調配物之個體有毒之其他組份的製劑。 j目樂二上，接受"之賦形劑(媒劑、添加劑)為可適度投 賦^標哺絲物以提供有效劑量之所用活性成份的彼等 ’’重組時間，，為用溶液使冷;東乾 澄清溶液所需之時間。 物董、，且為無顆粒 ”穩定，，調配物為其中之蛋白 及/或化學穩定性及/或儲存後…上保持其物理穩定性 仔後之生物活性之調配物。用於 132080.doc -10. 200909005 量測蛋白質穩定性之各種分析技術均可用於此項技術中且 於Peptide and Protein Drug Delivery，247-301, Vincent Lee 編，Marcel Dekker，Inc” New York，N.Y., Pubs.(199i)及 Jones，A. Adv. Drug Delivery Rev. 10:29-90(1993)中有所評 述。可於所選溫度下量測穩定性歷時所選時期。 "穩定"冷凍乾燥之免疫球蛋白調配物為於冷凍溫度（2_ 8°C)下歷時至少12個月、較佳2年且更佳3年；或於室溫 (23-27 C )下歷時至少3個月 '較佳6個月且更佳i年未觀察 到顯著變化之冷凍乾燥之抗體調配物。穩定性標準如下。 如藉由SEC-HPLC所量測，不超過1〇%之抗體單體降解。 如藉由SEC-HPLC所量測，較佳地不超過5%之抗體單體降 解。藉由目視分析，重組溶液為無色的，或澄清至輕微乳 白色。調配物之濃度、pH值及滲透壓度具有不超過+m〇% 之變化。效能在對照組之7〇_13〇%内且較佳在MM· 内。觀察到不超過㈣之剪短。較佳地，觀察到不超 之努短。形成不超過10%之聚集。較佳地，形成不超過 若免疫球蛋白顯示在目視檢查顏色及/或澄清度或如藉 由UV光散射、尺寸排阻層析（SEc)及動態光散射所量測後 聚集、沈殿及/或變性無顯著增加，則其於醫藥調配物中” :持其物理穩定性白質構形之變化可藉由测定蛋白 質二級結構之螢光光譜法及藉由測定蛋白質 FTIR光譜法來評估。 取…構之 若免疫球蛋白顯示無顯著化學變化，則其於醫藥調配物 132080.doc 200909005 t"保持其化學穩定性"。 并総η 错由伯測及量化蛋白質之化學 改變形式來評估化學穩定性*買之化學 降解汛鉬—4 书吊改變蛋白質化學結構之 降解過耘包括水解或剪短（藉 PAGE^ (籍由諸如尺寸排阻層析及SDS- Λ，Λ (藉由諸如肽圖結合質譜法或 MALDI/TOF/MS 之方法来禪 γ士、 ’ ^ μ 车 。）、脫醯胺（藉由諸如離子交 換層析、毛細管等電聚焦 夾畔砝、Η田* 吳天冬胺酸量測之方法 ° )及異構化（藉由量測異天久胺酸^ . 估）。 、妝馼3里、肽圖等來評 若在特定時間時免疫球蛋 .Β 貧白之生物活性在製備醫藥調配 物時所展現之生物活性之預 Μ ^ ^ 觀圍内，則免疫球蛋白於醫 樂調配物中"保持其生物活 定來測定免疫球蛋白之生物活性例如，可猎由抗原結合檢 術語:等張，，意謂所關注之調配物具有與人類血液基本上 目冋之#透壓。等張調配物—般將具有約27〇_328 ⑽之 滲透壓。輕微低滲壓為25〇_269且輕微高滲壓為mho m〇Sm。例如，可使用蒸氣壓或冰冷束型滲透 透壓。 ☆術語’’緩衝劑"包含在冷來乾燥之前維持溶液員在可接 艾之範圍内的彼等試劑且可能包括組胺酸、丁二酸鹽(鈉 或鉀）、磷酸鹽（納或鉀）、Tris(參（經基甲基）胺基甲幻、二 乙醇胺、檸檬酸鹽(鈉)、葡糖酸鹽及其他有機酸緩衝劑。 "張力調節劑"包括可用於控制滲透壓之鹽，諸如Naci、 gCl2 CaCl2等。另外’低溫保護劑、束乾保護劑 及/或諸如嚴糖、甘露糖醇、甘胺酸等之膨化劑可用作張 132080.doc 12 200909005 力調節劑。 在本發明之内容中，免疫球蛋白之"治療有效量"係指有 效預防或/α療免疫球蛋白可有效治療之病症之量。"病症，， 為將得益於用免疫球蛋白治療之任何病狀。此包括慢性及 急性病症或疾#，包括使哺乳動物易患所述病症之彼等病 理病狀較佳地，該病症為可藉由識別α·4整合素且與其 結合之免疫球蛋白（諸如那他珠單抗）治療及/或預防之病 症。
治療”係指治療性治療及預防性措施。需要治療者 已患有病症者以及欲預防病症者
"防腐劑”為τ包括在調配物中以基本上減少其中之細菌 作用之化合物，因此有助於產生例如多用途調配物。可能 之防腐劑之實例包括氣化十八院基二甲基节基錢、氯化六 烴季銨、氯化苯甲烴銨(氯化烷基节基二甲基銨之混合 物，其中院基為長鏈化合物）及节索氯錢。其他類型之防 腐劑包括芳族醇’諸如盼、丁基醇及节醇；對經基苯甲酸 说酉曰，4如對㈣苯f酸甲醋或_基苯甲 酸；間苯二齡；環己醇；3_戍醇；及間甲紛。 兒木 術語”患者，，或，，個體"意欲包括任何哺乳動物。用於治療 目的之”哺乳動物"係指任何分類為哺乳動物 括 (但不限於)人類、家畜及農畜動物，及 = 動物或寵物動物，諸如狗、 ：運動 佳地，哺乳動Μ 牛及其類似動物。較 動物為人類。較佳地，哺乳動物之 或病狀為當投鱼户疼 廉疾病 ―療有效劑量之那他珠單抗時得到調節之 132080.doc •13· 200909005 疾病或病狀。 2·免疫球蛋白調配物 本發明之組合物將聚集體及微粒之形成減至最少且確保 溶液中之免疫球蛋白隨時間維持其免疫反應性。該等組合 物包含無菌、醫藥學上可接受之冷凍乾燥之調配物，其： 包含具有中性或酸性pH值（約5_5至約6.5)之緩衝劑、蔗糖 及聚山梨醇酯中之免疫球蛋白的$冷凍乾燥之水性調配物 製備。 在一較佳實施例中，免疫球蛋白以約3〇 mg/mi至約6〇 mg/ml、更佳約4〇至約5〇 mg/ml且甚至更佳約mg/ml2 濃度存在於預冷凍乾燥之調配物中。較佳免疫球蛋白為 IgG抗體’更佳為Ig(J4抗體，甚至更佳為人類化重組啡4 抗體，且最佳為那他珠單抗。 預冷凍乾燥之調配物中使用pH值為約5 5至約6 5之緩衝 齊J #又佳地，pH值為約6.0。合適之緩衝劑之實例包括組 胺酸丁—酸鹽（諸如丁二酸鈉）' 葡糖酸鹽、擰檬酸鹽及 、有機&緩衝劑。較佳預冷凍乾燥之調配物含有組胺 鷇較佳約1至約丨2 mM組胺酸。甚至更佳之預冷凍乾燥 之調配物含有約6 mM組胺酸。 預冷凍乾燥之調配物亦包含蔗糖。蔗糖之合適濃度在約 2〇mg/ml至約5〇mg/ml之範圍内，較佳為約ο mg/ml。 匕預冷凍乾燥之調配物亦包含聚山梨醇酯，諸如聚山梨醇 曰〇或聚山梨醇酯80(亦即，分別為吐溫（Tween) 20及吐溫 8〇)及泊洛沙姆（P〇l〇xamer)(例如泊洛沙姆188)。在一較佳 132080.doc -14- 200909005 實施例中’聚山梨醇醋為聚山_80β $山梨醇黯較佳 以母體積漠度約0.02至約0 08%、更佳約〇 〇4 在。 里置存 預冷束乾巾免疫球蛋自與餘之 在約2:1至約0 5·1之r囹向 *从匕較佳 兹… 更佳為約1:1。免疫球蛋白* 成糖之莫耳比率為約3〇〇:1至約5〇〇:1，較至 500:1，更佳為約450:1。 ·丄至 Γ 提供良好冷来乾燥之餅狀物特性之膨 :、甘胺酸及甘露糖醇)可視情況添加至本發明(之二 中。此等試劑亦促進調配物之張力，且 保護並改良長期穩定性。另彳 ，過程提供 物中以拎制a + 力5周卽劑可添加至調配 劑，渗透屋。調配物可進-步包含-或多種防腐 抗較：預冷：乾燥之調配物為包含約4°那他珠單 抗約6 mM組胺酸（ρΗ值約6)、 糖之調配物。上述::.=聚:梨_及 *乾燥以形成乾燥、穩定粉末二=广冷 至人類之無顆粒溶液。 、Τ-易重組為適於投與 冷凍乾燥為常常用於藥品製備中 减乾燥方法。製備液體組合物，接著二卜生物活性之冷 餅狀產物。該方法一般涉及於真 办成乾‘ 以移除冰’留下呈粉狀或 “刚冷束之樣品 冷;東乾燥之產物可於高溫下儲存Γ長::完整非水組份。 知失，且可容易地藉由添加適當 ：2物活性 π坪d而重組為無顆粒溶 132080.doc 15· 200909005 稀釋劑可為生物學上可接受且冷咖之粉末可 凡全洛解於其中之任何液體。水， 木』 為較#接經％, 兀八無菌、無熱原質水 盆仙 因為其不包括鹽或可能影響抗體穩定性之 -化口物。冷/東乾燥之優點在於將水含量減少至 =致產物在長期儲存後不穩定之各種分子事件的程度減 ”東乾燦之產物亦更容易能夠經受住運輸之物理應力。重 組產物無顆粒，因此其可在無需預先過德之情況下投與。 本發明之預冷;東乾燥之靠物可制適t冷;東及乾燥參 數來冷束乾燥。舉例而言，參數可包括預冷束以於約 至約-lot下保持約10_30分鐘。冷凍參數可包括經約45分 鐘至約75分鐘之時期於镇至镇下冷m其他冷 康步驟之參數可包括於·赋至約俄下冷;東。乾燥參數 可^括約-10 c至-30°c之第-乾燥階段溫度及介於約4〇 mT°fl至約120 mT〇n·之間的壓力；及於約10°C至約25°C下 使用介於約40 mTGn^12() mT⑽之間的壓力之第二乾燥階 段。較佳之總循環時間為約6〇至1〇〇小時。較佳之冷;東乾 燥循環可包括預冷;東步驟、冷;東步驟、第—乾燥步驟及第 一乾燥步驟。對於冷凍乾燥循環之考慮因素包括冷凍溫 度壓力帛乾燥、第二乾燥及循環時間。 舉例而s，較佳之冷凍乾燥循環參數可如下： 第一，預冷凍，於下保持15分鐘。 對於冷凍而言，經60分鐘勻變至-6(rc。K_6〇t：下保持60 分鐘。 在另一冷凍步驟中，勻變至-5(TC且保持30分鐘。 132080.doc -16 - 200909005 對於第一乾燥而言’經45分鐘勻變至-15 °C而壓力下降至 50 mTorr。於-15。〇及50 mT壓力下保持54小時。 對於第二乾燥而言，經35分鐘勻變至2〇。〇且保持24小時。 總循環時間為82小時。 此冷凍乾燥之產物保持免疫球蛋白之免疫活性之穩定 性，且防止意欲投與至人類個體之免疫球蛋白於最終產物 中之物理及化學降解。 冷凍乾燥之產物在使用時重組於稀釋劑（例如，無菌水 或生理食鹽水）中以得到無顆粒溶液。重組抗體溶液無顆 粒，即使在冷凍乾燥之餅狀物於周圍溫度下長時間儲存 後。重組溶液可#經冑、較佳經肌肉㈣經皮下投與至個 體。
4乾燥之產物之重要特徵為重組時間或使產物重組所 品夺門為了肊夠極快速且完全重組，使餅狀物具有高 度多孔結構係重要的。餅狀物結構隨許多參數而變，此等 參數包括蛋白質濃度、賦形劑類型及濃度及冷凍乾燥循環 之過程參數。一般’當蛋白質濃度增加時，重組時間亦増 力且因此，短重組時間為開發高濃度冷珠乾燥之抗體調 配物之重要目&。長重組時間可由於使蛋白質較長時間暴 P較濃溶液而劣化產物品質。另外，在用戶端，直至產 f組後才能投與產物。此將確保產物無微粒，投與 正確劑篁，且不影響其無菌狀態。因Λ，諸如重組時間少 於十分鐘之快速重組對患者及醫師提供更多方便。 在冷凍乾煉之產物中，所需劑量可藉由於目標蛋白質濃 132080.doc 200909005 度下冷凍乾燥調配物且用與起始填充體積相同之體積使產 物重組來獲得。所需劑量亦可藉由冷凍乾燥較大體積之經 稀釋調配物且用較少體積使其重組來獲#。舉例而言，若 所需產物劑量為於i mL調配物中之⑽mg蛋白質，則調配 物可用下列液體配置來冷;東乾燥：丄虹之1〇〇 mg/mL蛋白 質調配物、2 mL之50 mg/mi蛋白質調配物或4 mL225 mg/mL蛋白質調配物。在所有情況下最終產物均可用丄 mL稀釋劑來重組以獲得1〇〇叫就之目標蛋白質濃度。然 而，當預冷束乾燥之調配物中之蛋白質濃度降低時，填充 體積成比例地增加。此相應地增加冷;東乾燥循環（尤其第 -乾燥時間)之長度’且因此顯著增加產物之成本。舉例 而言，若i mL填充體積（在小瓶中為i聰高度）之冷束材料 耗費約1小時使其游離水昇華，則1〇扯填充體積（1〇咖高 度）之冷束產物將耗費約1()小時之第—乾燥時間。因此， 最好具有濃縮之預冷凍乾燥之調配物（免疫球蛋白濃度為 約40 mg/ml至約50 mg/mi)以致冷凍乾燥方法將更有效。 本發明提供—種高度濃縮之預冷隸燥之免疫球蛋白調 配物（約40 mg/ml至約5〇 mg/nU)，其經有效及高效地冷凍 乾燥為保持免疫ί求蛋白之生物、物理及化學穩定性之乾燥 調配物。該乾燥調配物於室溫下穩定儲存至少3個月、較 佳6個月。乾燥調配物可在少於十分鐘之短時間内重組為 3有約80 mg/mi至約16〇 mg/ml免疫球蛋白之無顆粒溶 液。該等高度濃縮之抗體溶液準備用於非經腸投藥，諸如 靜脈内、肌肉内、腹膜内或皮下注射。 132080.doc •18· 200909005 較佳之重組產物包含約80 mg/ml至約160 mg/ml那他珠 單抗，更佳約120 mg/ml那他珠單抗；約123 mg/ml蔗糖； 約0.12%聚山梨醇酯80 ;及約pH 6.0之約18 mM組胺酸。 3.分析方法 用於評估產物穩定性之分析方法包括尺寸排阻層析 (SEC)、動態光散射測試（DLS)、差示掃描熱量測定 (DSC)、iso-asp量化、效能、於340 nm下之UV、UV光譜 法及 FTIR。SEC(J. Pharm. Scien., 83:1645-1650, (1994); Pharm. Res., 1 1:485 (1994) ； J. Pharm. Bio. Anal., 15:1928 (1997) ; J. Pharm. Bio. Anal.，14:1133-1140 (1986))量測產 物中之單體百分比且給出可溶性聚集體之量之資訊。抗體 之效能或生物一致性（bioidentity)可藉由其與其抗原結合 之能力來量測。抗體與其抗原之特異性結合可藉由熟習此 項技術者已知之任何方法來定量，例如免疫檢定，諸如 ELISA(酶聯免疫吸附檢定）。此等方法僅為熟習此項技術 者熟知之用於評估產物穩定性之例示性方法。舉例而言， 於340 nm下之UV量測於340 nm下之散射光強度且給出關 於可溶性及不可溶聚集體之量之資訊。UV光譜法量測於 278 nm下之吸光度且給出蛋白質濃度之資訊。FTIR(Eur. J. Pharm. Biopharm., 45:23 1 (1998) ； Pharm. Res., 12:1250 (1995) ； J. Pharm. Scien., 85:1290 (1996) ； J. Pharm. Scien·, 87:1069 (1998))量測在醯胺酮區域中之IR光譜，且 給出蛋白質二級結構之資訊。特定分析方法進一步於實驗 章節（見上）中陳述。 132080.doc -19- 200909005 4.重組調配物之用途 本發明之重組免疫球蛋白調配物可根據已知方法投與至 需要用免疫球蛋白治療之哺乳動物。此等方法可包括（但 不限於）以大丸劑形式或藉由經一段時間連續輸注之靜脈 内投藥、藉由肌肉内、腹膜内、腦脊髓内、皮下、關節 内、滑臈内、鞘内、口服、局部或吸入途徑投藥。在較佳 實施例中’免疫球蛋白調配物係藉由肌肉内或皮下投藥投 與至哺乳動物。典型日劑量可在約i Pg/kg至約2〇() mg/kg 個體重量或更佳約0.01 mg/kg至約15〇 mg/kg個體重量、更 佳約0.1 mg/kg至約1〇〇 mg/kg個體重量、更佳約1 mg/kg至 ’、、勺75 mg/kg個體重量且最佳約3 mg/kg至約6 mg/kg個體重 里之範圍内。通常’醫師將投與免疫球蛋白直至達到實現 所需效應之劑量。此療法之進展可容易藉由習知方法及檢 定來監測。 例如’免疫球蛋白之適當劑量將視待治療之病狀、病狀 之嚴重性及病程、是否投與免疫球蛋白以用於預防性或治 療性目的、先前療法、患者之臨床病史及對免疫球蛋白之 反應、所用免疫球蛋白之類型及主治醫師之判斷而定。通 常’臨床醫師將投與免疫球蛋白直至達到實現所需效應之 劑量。此療法之進展可容易藉由習知檢定來監測。 適當地’一次性或經一系列治療將免疫球蛋白投與至患 者且可在診斷開始後之任何時間投與至患者。免疫球蛋白 可以單獨治療形式或結合適用於治療所述病狀之其他藥物 或療法來投與。如本文所使用，當兩種（或兩種以上）試劑 132080.doc -20- 200909005 同時投與或[定方式獨立投與以致該料#丨將同時起作 用時，稱為將兩種試劑組合投與。舉例而言，本 他珠單抗#配物可與用於治療類風濕性關節炎、多 化症㈣、克羅恩氏病（Crohn’sDis⑽）及其他α相t 疾病之其他治療劑或物理療法組合投與。 15 本發明進一步藉由下列實例來說明’不應將該等實例視 為將本發明限制於其中所述之特定程序之範疇内。 實例
實例1 對石蟹獼猴執行那他珠單抗之高濃度重組冷凍乾燥的調 配物及液體調配物之比較研究。研究結果顯示那他珠單1 之重組冷凍乾燥之調配物產生極其類似於液體調配物之預 期的藥物動力學及藥效學概況。 -平估那他珠單抗之高濃度液體調配物及重組冷凍乾燥之 調配物以比較其各自藥物動力學/藥效學概況、相對生物 可用性及皮下（SC)及肌肉内（IM)給藥後之局部耐受性。在 第1天’藉由各血管外途徑投與液體（丨5〇 mg/mL)及重組冷 束乾燥（120 mg/mL)之高濃度調配物且直至第36天，評估 其藥物動力學/藥效學概況。在第1天，亦投與單一 3〇 mg 劑量之商業液體那他珠單抗以測定高濃度調配物之相對生 物可用性。在第36天，向SC及IM劑量組之動物投與第二 次注射且在第39天執行注射部位活組織檢查以評估局部耐 受性。 測試物品，商業液體那他珠單抗、液體高濃度那他珠單 132080.doc -21 - 200909005 抗及冷凍乾燥之高濃度那他珠單抗係由Biogen Idec供應。 重=冷凌乾燥之那他珠單抗重組流體（注射用無菌水）係以 ，谷液形式供應。在各給藥日使用新鮮小瓶之原料測試物 口口且進行調配以得到適當濃度之給藥溶液。 將三十隻未經實驗處理之石蟹獼猴（15隻雄性及。隻雌 性）分配給如下表1中所示之五個劑量組： 表1 組序號 2 數目 1?3- ι.η ~Έμ~ 1ν— 1試物品調~ 配物 1m* 劑量含量 (毫克/隻 動物） 1〇 3量體積~~ (毫升/隻動 物） H ~ 濃度 (mg/ml) ~ ' 20 3 Λ 3/3 — SC ΤΛ/f Γμ** Π50 ' Π50~~ 1M ~sc~~ 液體**__ '^床乾燥㈣* 150 ~120 1.0 To 150 ~Τ2〇 — i/3 IM 冷凍乾燥*** 120 1.0 120 商業液體那他珠單抗；**液體高濃度那他珠單抗；***重 --1-----L/v/界礼咏 μα__~Ϊ20—- 組冷柬乾燥之高濃度那他珠單抗。 IV=靜脈内；sc =皮下；ΙΜ=肌肉内；_ =雄性/雌性。 在所有組中均注意到與預先研究基線值相比周邊血液淋 巴細胞（及在次要程度上，嗜伊紅血球、嗜驗細胞及未分 類之細胞）之藥理學相關增加且將其視為測試物品之預期 藥效學效應。增加含量之受影響之白血球—般在接受較高 sc及爾旧之那他珠單抗（例如，第8天至第36天）的個別 動物體内與在接受較低以劑量之商業調配物（通常第8天至 第15天）的個別動物體内相比持續時間更長。然而，不存 在與測試物品之液體對比冷凍乾燥之高濃度調配物、性別 或投藥途徑有關的反應之量值或持續時間之一致或明顯差 132080.doc -22· 200909005 異。 商業液體ιν劑量組最快達成平均Tmax，I纟冑濃度調配 物方面IM組比SC組快。當與商業液體IV劑量組相比時， 在途徑方面平均Cmax值小於劑量比例且當血管外投與時， 在高濃度調配物方面一致。與途徑無關，平均u/2值在所 有劑量組方面一致。 在SC及IM劑量組中與調配物無關，平均AUCiast及 AUCinf大於劑量比例，表示完全吸收（亦即i 〇〇%之相對生 物可用性）’且當血管外投與時，在調配物方面亦相當一 致。 與存在於所有劑量組甲之預先研究基線相比’可見循環 淋巴細胞計數及在次要程度上嗜伊紅血球、嗜鹼細胞及未 分類之細胞計數之預期測試物品相關增加。此等結果與仁 整合素飽和度概況一致且歸因於那他珠單抗之藥理學效 應。受影響之白血球計數之增加之持續時間具劑量依賴性 且液體高濃度那他珠單抗及冷凍乾燥之高濃度那他珠單抗 治療組（例如，第8天至第36天）通常高於經靜脈内接受商業 液體調配物之組（通常第8天至第15天）。在那他珠單抗之高 濃度液體及重組冷凍乾燥之調配物之間未觀察到關於此等 白細胞群體的變化之一致差異，或不存在認為與投藥途徑 (皮下或肌肉内注射）或動物性別有關之任何差異。 總之，以120 mg之劑量（重組冷凍乾燥之調配物）皮下及 肌肉内注射至石蟹獼猴體内後重組冷减乾燥之高濃度那他 珠單抗調配物耐受良好且產生周邊血液淋巴細胞計數之預 132080.doc -23* 200909005 期藥理學相關增加，直 、早一3〇 mg靜脈内劑量之商業液 體調配物相备，但比其持久性略高。 實例 目前經1至2小時夕卩主#。 此需要〇Μΐν輸注形式傳遞那他珠單抗。 此而要患者去醫院哇蛊縈 ™ s /專業輸注中心就診。為了使得那他珠 二、方便：需要皮下投藥。最好由接著可以較高濃 I。且之較低》辰度之塊狀藥物物質發展冷凍乾燥之調配 此處所述之本研究係經設計以筛選各種起始及最終蛋 白質濃度對使用薦糖作為賦形劑之穩定性之效應(研究 A)。該研究之第二部分係經設計以關於對蛋白質穩定性之 效應來篩選其他熟知;東乾保護劑及賦形劑（研究…。亦嘗 試根據填充體積及重組體積來檢驗關於可製造性可行之溶 液0 在研究A中，製備四種調配物以檢驗對於預冷凍乾燥之 塊狀物及冷凍乾燥之餅狀物而言起始及最終蛋白質濃度對 實時及加速穩定性之效應。所有四種預冷束乾燥之調配物 均展現足以於下以預冷凍乾燥之塊狀物形式使用歷時 多達ό個月之保持時間的穩定性。兩種冷凍乾燥之調配物 展現足以視為用於進一步調配發展之候選者之調配物特徵 及穩定性。此等調配物之一由40 mg/mL之起始濃度及1〇〇 mg/mL之重組濃度組成且蛋白質與蔗糖之重量比為1:1。第 二候選調配物含有50 mg/mL起始濃度及2〇〇 mg/mL之重組 濃度且蛋白質與蔗糠之重量比為2:1。兩種調配物皆含有 組胺酸緩衝劑及聚山梨醇酯80。 132080.doc -24· 200909005 另卜裝備具有與當前那他珠單抗（TysabriTM)調配物相 同之賦形劑概況之高濃度液體調配物。於$乞下，此調配 物也明足以視為用於進一步發展之候選者之聚集體形成穩 疋性儘^脫醯胺之速率比冷凍乾燥之調配物快。於加速 /胤度下，此調配物顯示形成低分子量降解產物之趨勢，此 在冷凍乾燥之調配物中未觀察到相同程度。 實驗設計 材料 用於此荨研九之那他珠單抗係由Bi〇genide(^#應之於 003年2月製之那他珠單抗製備。此材料已經調配及裝 瓶，因此材料需要混合且在用於此等調配物研究之前移除 聚山梨醇酯80。簡言之，此係藉由透濾至低離子強度、高 pH值（10 _ tris、10 mM NaC卜pH 8.5)緩衝劑中來實 現。在此等條件下將材料結合於DEAE-瓊脂糖管柱上且接 著使用10 mM鱗酸鈉、140 mM NaCl(pH 6)溶離。接著， 將管柱溶離液透濾至6 mM組胺酸（PH 6)中且濃縮至7〇 mg/mL與100 mg/mL之間，隨後進行進一步調配。 化學品及試劑 所有用於此研究之化學品及試劑（除有註釋外）均構自 VWR且為ACS級或更佳等級《當可得到USP級試劑時，將 其用作賦形劑。聚山梨醇酯80係購自sigm<目 P6474)，且源自植物並具有低過氧化值。 用於研究A之調配物 下列調配物係藉由將賦形劑及活性物質之儲備溶液稀釋 132080.doc -25· 200909005 至所需濃度來製備’如表2:研究a調配物參數中所指示。 所有調配物均製備為pH 6。 表2:研究A調配物參數。 調配物ID ^冷凍乾燥濃度 重組濃度 " 3944-18A 20 mg/mL Ab、20 mg/mL嚴糖、 6 mM his > 0.02% PS80 100 mg/mL Ab、100 30mMhis、0.1%PS80 3944-18B 40 mg/mL Ab、40 mg/mL蔗糖、 6 mM his、0.02% PS80 100 mg/mL Ab、100 mg/mL嚴糖、 15 mM his、0.05% PS80 3944-18C 50 mg/mL Ab、25 mg/mL嚴糖、 6 mM his、0.02% PS80 200 mg/mL Ab、100 mg/mL 24 mM his、0.08% PS80 3944-18D 75 mg/mL Ab、40 mg/mL嚴糖、 6 mM his、0.02% PS80 225 mg/mL Ab、120 mg/mL嚴糖、 18 mM his ^ 0.06% PS80 3944-18L 100 mg/mL、10 mM磷酸鈉、 140 mM NaCl(pH 6)' 0.02% PS80 NA " '------ 縮寫：Ab =抗體，his =組胺酸，PS80=聚山梨醇酯80。 用於研究B之調配物 下列調配物係藉由將賦形劑及活性物質之儲備溶液稀釋 至所需濃度來製備，如表3:研究B調配物參數中所示。所 有調配物均為pH 6。 表3 :研究B調配物參數。 調配物ID 預冷凍乾燥濃度 重組濃度 … 3976-4C 50 mg/mL Ab、25 mg/mL蔗糖、6 mM his ' 0.02% PS80 200 mg/mL Ab、100 tnM his ' 0.08% PS80 3976-4G 50 mg/mL Ab、25 mg/mL蔗糖、15 mM NaCl、6 mM his、0.02% PS80 200 mg/mL Ab、100 mg/mL tnM NaCl、24 mM his、0.08% PS80 3976-4H 50 mg/mL Ab、25 mg/mL薦糖、6 mM his ' 0.02% PS20 200 mg/mL Ab、100 mg/mL藉 mM his ' 0.08% PS20 3976-41 5ϋ mg/mL Ab、25 mg/mL海藻糖、6 mM his、0.02% PS80 ' 200 mg/mL Ab、100 mg/mL 海 24 mM his、0.08% PS80 3976-4K 40 mg/mL Ab、25 mg/mL_蔗糖、6 mM his ' 0.02% PS80 160 mg/mL Ab、100 mg/mL嚴 mM his ' 0.08% PS80 縮寫：Ab=抗體’ his =組胺酸，PS80 =聚山梨醇酯80。 132080.doc * 26 - 200909005 方法 調配物之製備 將洛液無菌過據且如所指示填充至無菌玻璃小瓶中。將 所有用於預冷凍乾燥分析之樣品及3944_181^以〇 5 ^^填充 至2 cc小瓶中，用塞子塞住且蓋上蓋子。將待冷凍乾燥之 配方以下列體積填充至5 cc Kimbie小瓶中：調配物W44_ 18A-2.5 mL，調配物 394448^.25 ，調配物 3944_i8c_ 2 mL，調配物3944_18ΕΜ 5 。將所有用於研究b之調配 物以2 mL填充至5 cc Kimble小瓶中。 冷凍乾燥循環 對於研究A而言，將小瓶冷凍k_2〇°c下。週末時冷凍乾 燥器發生故障且溫度下降至_7〇。〇。隨後試圖重新開始冷 凍乾燥循環，導致溫度上升至3-4t，接著重新冷凍。重 新啟動冷凍乾燥器且繼續該循環。於_2(rc下以1〇〇 真空執行第一乾燥歷時20小時。接著，經3小時使溫度勻 變至20 C且於1〇〇 mT〇rr下保持30小時以進行第二乾燥。 對於研究B而言，將小瓶於-5〇。(：下冷凍2小時以確保均 句冷;東。接著，於100 mTorr之真空下使溫度達_4{rc歷時 20 min。接著’經2〇分鐘以1〇〇 mT〇rr真空使溫度勻變至_ 25°C且第一乾燥繼續進行20小時。經1〇小時使存放溫度緩 慢勻變至20°C以於1〇〇 rnTorr下開始第二乾燥且接著於2〇£；c 下保持4小時。 研究設置 將預冷凍乾燥之液體、高濃度液體對照物及冷柬乾燥之 132080.doc -27- 200909005 餅狀物之小瓶置放於5。〇、30°C及40。<3下。 週時檢定於4(TC下儲存之樣品。於3、於2 4、8及12 ° y及12週時檢定 於3(TC下儲存之樣品。於4、8及12週時檢定於代下错存 之樣品。對於一些調配物而言，於6個月及i年時分析⑽ 及5 °C之其他小瓶。在預冷凌兹楹芬、入 視々/末乾溧及冷凍乾燥後之零時間 檢定所有調配物。 檢定 藉由下列方法檢定樣品。並非所有檢定均在所有時間點 執行。除用於預冷凍乾燥之樣品之零時間點外，各檢定對 相同兩個小瓶進行取樣。 根據目視檢查獲得之外觀 對所有樣品進行目視檢查且記錄其外觀。檢查冷凍乾燥 之餅狀物之顏色、均勻性、穩固性及回熔證據。檢查液體 及重組樣品之顏色、澄清度及微粒之存在。 殘餘水分及重組時間 於零時間點，使用Karl Fischer檢定冷凍乾燥之餅狀物之 殘餘水分（BOP 000-01290)。藉由添加適當體積之DI水， 接著平緩旋轉來量測重組時間。記錄餅狀物完全溶解之時 間（EOP 〇〇〇-〇 1292)。 濃度 量測所有樣品之濃度。使用那他珠單抗安慰劑將樣品稀 釋至1 mg/mL。使用Varian 3 00Bio光譜光度計及1 cm光程 比色管，以200奈米/分鐘自400 nm至240 nm掃描UV吸光 度。記錄λ極大值時之吸光度且藉由將該值除以1.498(那他 132080.doc -28 - 200909005 珠單抗之吸光係數）並經適當稀釋進行調節來測定濃度。 混濁度 使用10 mm小容積比色管（Starna Cells Inc.，目錄號 16.160-Q-10\Z20)量測純樣品自300 nm至400 nm之吸收。 報導於360 nm下記錄之值。 尺寸排阻層析 使用Biogen SOP 22d.505之修正來測定單體、高分子量 物質、二聚物及低分子量物質之量。將樣品以純形式負載 至管柱上且調節負載體積以使得管柱上質量為約400 。 亦將參考材料負載之質量調節至可相當。於215 nm及280 nm下記錄债測，然而主峰於2 1 5 nm下超出量表，因此使用 280 nm迹線進行此處報導之計算。 陽離子交換層析 執行陽離子交換層析。由於層析系統之差異，對梯度略 作修正以使得主峰在9與12分鐘之間溶離。因為所用系統 為二元泵，所以僅在各組分析後執行高鹽洗滌。在高鹽洗 滌中不存在於最近滯留時間溶離之任何峰之證據。因為不 在各樣品後執行高鹽洗滌，所以再平衡時間縮短至7分 鐘。 效能 藉由VCAM溶胞物檢定（AAM 00卜00965)及藉由Jurkat細 胞檢定（AAM 00 1-00700)來分析所選樣品之效能。 研究A之結果 此研究係設計為篩選研究以檢驗初始蛋白質濃度及最終 132080.doc -29- 200909005 蛋白質漢度對冷凍乾燥之餅狀物參數、重組時間及穩定性 之效應。初步研究已展示蔗糖對那他珠單抗提供充分短期 凍乾保護劑特性，而甘露糖醇並不提供。為此，使用蔗糖
\ 作為凍乾保護劑來執行初始篩選。早期研究亦已展示用於 那他珠單抗之最佳PH值為PH 6。磷酸鹽、檸檬酸鹽及組胺 S文緩衝劑最常用於此1)11值之緩衝。磷酸鹽緩衝劑由於冷凍 後其pH值位移而對於用於冷凍乾燥蛋白質並非最優。檸檬 酸鹽緩衝劑與一些皮下調配物之注射疼痛有關。因此，選 擇組胺酸作為較佳緩衝劑物質。將初始濃度確定為6爪“ 以便製備調配物且維持重組後最終濃度等於或低於 福。對於研究3A而言，將預冷凍乾燥之溶液中之聚山梨 醇酯8 0濃度維持在〇 · 〇 2 % ’因為此已顯示給予蛋白質足夠 保護且亦維持最終濃度等於或低狀1%。選錢糖濃度以 使蛋白質與糖之重量比維持在1:1與2:1之間，同時仍然維 持接近等張之最終溶液。 預冷凍乾燥之調配物及液體調配物 附錄中之表格含有對所有調配物所記錄之所有結果。目 視檢查時，所有調配物呈現無色及澄清至乳白&，而無任 何可見微粒。+出所料，乳白色隨蛋白質濃度增加而略有 增加。無樣品在分析變化中顯示蛋白質濃度之變化且未觀 察到傾向。如藉由於360 nm下之吸光度所量測，混濁度顯 不於5C下經6個月或於紙下經12週之研究無變化。桃 預冷束乾燥之樣品顯示對於4〇 mg/mL、5() mg/mL之樣品而言混濁度隨時間略有増加。μ mg/mL 及 75 mg/mL預冷 132080.doc -30- 200909005 ;東乾燥之樣品及高濃度液體並未證明在4(rc樣品中存在此 傾向。 對所有調配物監測二聚物、高分子量聚集體及低分子量 物質之形成。表格結果在附錄中之表格中展示。圖1及2展 不於30C及40°C下高分子量物質之形成。於5。〇下儲存6個 月之任何調配物中’高分子量物質之含量均無變化。
ί fc資料在本文中展示。3(rc下之結果（圖丨）顯示對於任 何預冷凍乾燥之調配物而言在儲存12週後均無形成高分子 置物貝之傾向。高濃度液體調配物顯示於30°C下經ό個月 儲存期高分子量物質有明確增加。 於4〇 C下，預冷凍乾燥之調配物中高分子量物質之形成 似乎直至儲存4週後才開始。接著，高分子量物質之量持 續增加。同離子強度《高濃度液體調配物顯示較低起始百 分比之高分子量物質，但於贼下經3個月研究，此量似 乎以恆定速率增加。 =3及4展示在⑽及40。。下於預冷束乾燥之溶液中低分 子量物質之形成。於3(rc下，在儲存3個月期間低分子量 物質之含量僅存在極少變化’但可見明確上升傾向。於6 :月時僅檢定高濃度液體。當時，存在大量低分子量物 質，幾乎為6%。 在於40C下儲存期間，存在形成低分子量物質之 溫Γ之形成速率似乎略有濃度依賴性，因為樣 ::愈'顯示形成愈快。又，於3。。。及4。。(:下低分子量 Μ之形成似乎以比高分子量物質之形成快之速率先行^ 132080.doc •31 - 200909005 _ 此成為液體樣品中之重要降解路徑。 對於5。〇下儲在+拔 八 崤存之樣ασ而言，經ό個月時期低分子量物質 刀比存在極小變化。此資料在附錄中展示，但並不在 此處用圖矣矣- 不。所有預冷凍乾燥之調配物均自約0.6-υ·9/〇之初始含晋 一 達到6個月時之G.15%。高濃度液體甚至於 子6個j '亦不顯示任何低分子物質。 質及7展示於各溫度下由於高分子量及低分子量物 基太κ Μ起之總單體損失。於2_8t：下，單體百分比 A東拿：變&此將表明此等調配物中之任-者均將以預 月東？調配物形式於wc下適當地穩定儲存多達6個 顯液體調配物亦顯示於2_代下無變化。3〇t樣品 成：減少甚微。此變化係歸因於低分子量物質之形 成此亦表明此等調配物中 現充八韁+ k 中之任一者均將於周圍溫度下展 現充为穩定性以允許加工。古、曲 低八不曰榀艇 巧，辰度液體顯示於ό個月時與 低刀子ΐ物質之增加同時發 瓶-认4 Λ。 之早體抽失。所有調配物均 顯不於40 C下經測試之：r個 ,ϋ 一個月時期之單體損失。損失速率 似乎大致與蛋白質濃声右 I λ箱夂皂灿 又 ，、中100 mg/mL·液體及75 mg/mL預冷凍乾燥調配物顯示 分子量物質之形成之降解機進貝…。對歸因於低 徑提供較佳穩定化作用。@進-步研究可對此降解路 藉由陽離子交換層析分析所 果顯示向更具酸性之物f(c在所有情況下，結 、、田声推"財/々 胺）位移，其中基於時間及 種預冷;東乾燥之調配物中不存在差 異。因為脫醯胺一般受pH值、雜 子強度及某些緩衝劑物質 132080.doc -32- 200909005 影響，所以此結果將為吾人所預期。於代下，高濃度液 體調配物之降解並未顯著不同於料祕狀調配物。然 而’其於3G C及4G C下顯示顯著較快降解。此很可能歸因 於高離子強度及磷酸鹽緩衝劑之存在。 冷凍乾燥之調配物
表5 12展不以冷凍乾燥之調配物形式於$它、3及⑽。◦ 下儲存之樣ασ之穩定性的結果。所有調配物均於下儲 存12週，於30。〇及5。〇下儲存6個月。另外，於贼及5。〔下 1年後分析調配物3944-18Β及3944-18C。 於初始時間點分析調配物之殘餘水分。殘餘水分高於所 需殘餘水分’此可能歸因於在冷;東乾燥循環期間所經歷之 問：。對於此等樣品而言，殘餘水分在5_6%範圍内。 里測重組時間且其直接與起始及最終蛋白質濃度有關。 =mg/mL蛋白質溶液冷來乾燥之餅狀物耗費平均μ】 “里來重組。自50 mg/mL冷凍乾燥之樣品耗費平均6_7分 :广〇 mg/mL冷殊乾燥耗費“分鐘且自2〇 一冷珠 =耗費4_5分鐘。該等值可變化，但不顯示關於 間或溫度之任何傾向。 :查重組小瓶之外觀。所有樣品均為澄清至乳白色、無 輕::：顆r:贼下儲存1年之兩種調配物顯示-些 :色！測混濁度，其為36〇nm下之吸光度之函數。 高。2物均顯示當於帆下儲存12週時期時混濁度升 度升^調配物均顯示當於⑽下儲存多達12個月時混濁 门乂不日月顯。所有調配物均顯*當於代下儲存多達 132080.(ΐ〇ς -33 · 200909005 一年時混濁度略微升高，調配物3944_18C除外。（參見附 錄E-Η中之表格）。在材料之人工填充及重組中固有之標準 變化外未觀察到蛋白質濃度之變化。 藉由尺寸排阻層析分析重組樣品之低分子量及高分子量 降解產物之形成。低分子量降解在―些時間點明顯，但似 乎並不存在形成傾向。所有時間點之量在任何樣品中均低 於0·2%，此被視為Bi〇genIdec檢定之偵測極限。主要降解 路徑係經由二聚物及高階聚集體之形成。隨時間產生之單 體損失在圖8、9及1〇中展示。於4〇。〇下儲存，存在一些單 體損失，其中調配物3944-1 8D及3944-1 8C中之損失最快。 調配物39944-1 8B及3944-1 8A顯示更不明顯之下降傾向。 於30C下可見相同傾向次序，其中3944_18D及3944_i8c顯 不較快單體損失。無調配物顯示於5。(：下歷時對於3944-18A及3 944-18D而言多達6個月及對於3944_18B及3944·l8c 而言多達一年之單體損失。 藉由陽灕子交換層析分析所選樣品。似乎在調配物中並 不存在任何差異。於5它下，存在自71%主峰至66%主峰之 位移。酸性峰之百分比隨時間保持相當恆定，但鹼性峰之 百分比隨時間自初始時間點之8_1〇%增加至一年後之 1 5%。30°c及40°c樣品展現相同傾向，其中鹼性峰百分比 於30°C下一年後達到18-19%且於401下3個月後逹到22- 26%。將需要其他工作來表徵此反應路徑且測定降解物質 之來源。 研究B之結果 132080.doc -34- 200909005 調配物之選擇 设置研究B以研究除蔗糖外之賦形劑對那他珠單抗之穩 定性的效應且驗證研究A中所見之結果。基於研究A之結 果，判定40-50 mg/mL之起始濃度對於良好餅狀物形成及 重組特徵為最優。將蛋白質對糖之比率確定為2:1重量 比，其中初始濃度為50 mg/mL且重組濃度目標為2〇〇 mg/mL。另外，以40 mg/mL之起始濃度及16〇 mg/mL之目 標重組濃度來檢驗一種調配物。此調配物亦具有16:1重量 比之蛋白質對糖之比率。 調配物3976-4C含有與研究A中之3944_18C相同之調配 物。在研究A中檢驗預冷凍乾燥之溶液之穩定性且不在b 中重複。來自文獻之報導已表明添加至高濃度蛋白質溶液 中之低含量之氯化鈉可幫助降低此等溶液之黏度。調配物 3976-4G將15 mM NaC1添加至預冷凍乾燥配方中以檢驗 NaCl之效應。聚山梨醇酯2〇(pS2〇)常常用於蛋白質調配物 中以替代聚山梨醇酯80(PS80)。在調配物3976_4h中用 等量之PS20替代0.02% PS8〇。在調配物3976_41中用等 量之海藻糖取代蔗糖。 預冷凍乾燥之調配物 分析預冷凍乾燥之調配物之外觀。無關乎儲存溫度，任 何溶液均未發生顯著外觀變化。其均為無微粒外觀之無色 及輕微乳白色。任何調配物中之蛋白質濃度均無變化。在 所有時間點量測混濁度。對於調配物3976-4G而言，初始 混濁度量測較高，但於後續時間點保持相當恆定。在任何 132080.doc -35- 200909005 調配物中均未觀察到混濁度之變化傾向，儘管對於3976_ 4G所量測之值於所有溫度下仍舊比其他調配物高。 監測由二聚物及較高分子量聚集體之形成引起及由低分 子片又引起之單體損失。如先前所見，任何樣品之單體百 分比於5°C下歷時多達3個月均無變化。亦於rc下歷時6個 月時分析調配物3976-4K且其未顯示任何單體百分比變 化。圖11及12分別展示於30。(：及4(rc下形成各調配物之低 分子量物質。如先前所見，於4(TC下在所有調配物中有低 分子量物質之實質形成，其中具有較低的蛋白質濃度之 3976-4K中之形成速率略微較低。此等結果可與研究a中所 見之彼等結果相比。另外，似乎賦形劑對此反應無影響。 於30°C下，低分子量物質略微增加。此速率亦可與研究3八 中所見相比，12週後達到介於0.2與〇.4«/0之間。 於40。〇下，所有調配物之高分子量物質均略有增加，但 3976-4H除外，其含有PS2〇(圖13)。任何調配物之高分子 量於其他溫度下均無變化。顯示所有調配物均穩定形成聚 集體，且主要降解路徑為於高溫下形成低分子量物質。此 等調配物中之任一者均會足以穩定於進—步發展為預冷凍 乾燥之塊狀藥物。 於初始時間點對所有調配物執行陽離子交換層析，但僅 對3976-4K係於5〇C下儲存6個月後執行。如研究a中所見， 儲存時有向更具酸性物質之位移。此降解係由pH值及溫度 驅動。 冷凍乾燥之調配物 132080.doc -36- 200909005 :初始時間點分析所有樣品之水分、餅狀物外觀及重組 時間。所有餅狀物之餅狀物外觀均為可接受的。水分含量 略微低於研. # —般介於3%與4%之間，除了調配物 3976-41以外，並且士 ，、/、有5.4%水分。於所有時間點及溫度 下’所有樣品之重組時間—般均為可接受的且低於10分 鐘’少數例外耗時10與14分鐘之間。具有最低的起始蛋白 質濃度之調配物3976_4尺亦顯示較快的重組時間。一經重 組時，所有樣品於所有溫度下均為無色及輕微乳白色至乳
白色歷時夕達12週，但3976_41及3976-4G除外。於40°C 下及歷經12週’ 3976-41為完全乳白色。3976_4G;^3〇C)c下 i. 歷經6週且於5七及4(rc下歷經8週開始為完全乳白色。自 重、、且』間較v起泡及氣泡形成之傾向可見，添加⑽以似乎 的確降低調g己物之黏度，然而其亦顯示溶液之乳白光顯著 、曰加刀析於5 C下歷時6個月及1年時之調配物3976_4C。 3976-4C於5t;下歷時一年後顯示輕微黃色。分析於5。〇及 30C下歷時6個月及1年時之調配物3976_4K。調配物3976_ 4k於30C下儲存6個月後顯示輕微黃色，但於5〇c下儲存i 年後並不如此。 於40 C下’藉由尺寸排阻層析分析樣品歷時多達3個 月。於5C及30C下分析樣品多達3個月，且接著於一年時 間點進行分析。另外，亦於6個月時分析調配物3976_4(：及 3976-4K。在所有樣品中，低分子量物質之量均小於 0.2%。主要降解路徑係歸因於二聚物及較高分子量物質之 形成。圖14、15及16展示於各溫度下由聚集體之形成引起 132080.doc -37- 200909005 之單體損失。顯然，於所有溫度下，含有海藻糖之調配物 3976-41中之單體損失均比其他調配物快。含有PS20及 NaCl之調配物顯示與含有蔗糖及PS80之調配物可相當的降 解。調配物3976-4K顯示於所有溫度下最不快之單體損 失。此調配物具有較低起始蛋白質濃度、較低重組濃度及 較高蔗糖與蛋白質之比率。 藉由陽離子交換層析分析所選樣品。此檢定之結果可稍 微變化，但所有調配物似乎於5°C下均保持電荷分布之穩 / 定變化。於40°C下，所有調配物均顯示主峰減少及酸性與 鹼性物質增加。亦在來自調配物3976-4K之樣品中觀察到 此傾向，於3 0°C下儲存1年後對此等樣品進行分析。 於8週時間點，以VC AM溶胞物及Jurkat細胞檢定分析於 5°C及40°C下儲存之調配物3976-4K的效能。結果在下表中 展示。 表4 :效能檢定結果 樣品/檢定 VC AM溶胞物 Jurkat 3976-4K - 5°C 126% 98.2 用於開發那他珠單抗之高濃度冷凍乾燥之調配物的形成 篩選研究。 3976-4K - 40°C 丨 124.3% 丨 104% 結論 預冷凍乾燥之塊狀調配物 於5°C下歷時多達6個月，在高濃度液體調配物中不存在 單體損失，然而存在可能由脫醯胺引起之酸性物質之增 132080.doc -38- 200909005 加。於3〇〇下6個月及於4〇。 ^ /V a 卜3個月，此調配物顯示經由 间/刀子罝及低分子量降解物 ^ . 貝之形成而造成之單體損失。 备别调配物中之高蛋白質濃 盔龠度液體可能不展現足以適合作 為商業調配物而無需進-步最優化之長期穩定性。 預冷東乾燥之調配物均顯示於代下儲存⑻ 任何顯著單體損失。此箄 τ ‘、、、 此等調配物之脫醯胺量之變化與高濃 度液體中之所見可相當。
夕、於3〇C下儲存之調配物顯示歷時 夕目月’二聚物及高分子量聚集體極少增加或未增 加。，然而存在所形成之低分子量斷裂物質之量的增加。於 4〇C下’低分子量物質之增加比高分子量物質之增加更 快。：分：量物質之增加速率似乎與蛋白質濃度有關。 身:而5，含有50 mg/mL或更少之蛋白質濃度及組胺 酸、嚴糖及PS8G之調配物似乎證明預冷隸燥之塊狀物旦 有足夠穩定性。 、 冷凍乾燥之調配物 自50 mg/mL或更少冷来乾燥且重組至1〇〇至2〇〇叫胤 之調配物顯示於所有溫度下及於所有時間點之良好餅狀物 形成及可接受之重組日㈣。含有組胺酸、餘及ps8〇之調 配物於代下歷時多達一年無單體損&。此等調配物中之 -些顯不儲存-年後驗性物質略有增加；然而，此增加難 以在假定檢定變異性之情況τ定量。於高溫下蛋白質之主 要降解路經為：聚物及較高分子量聚集體之形成。添加 NaCl降低黏度，但導致溶液之混濁度增加。用取代 PS80似乎對穩定性無影響，而用海藻糖取代餘增加聚集 132080.doc •39· 200909005 體之形成速率。 含有蔗糖、組胺酸及聚山梨醇酯80及那他珠單抗之冷凍 乾燥之調配物證明足以納入臨床前及早期臨床研究中之穩 定性。將執行其他研究以最優化起始蛋白質濃度、蔗糖與 蛋白質之比率、重組蛋白質濃度及冷凍乾燥循環。另外， 將檢驗重組樣品之穩定性。 r 132080.doc -40- 200909005
¥^κίΊες·ο ooo-sd %(Nod,遨 sf^.w日 9 ,窭雄 Ίε/ω)ε 07 *ϊϊ#?Ηηδ/ί5ΰδ 0(Ν
:踩 Β^^^κ :锄鵷键 酸性峰％ 主峰％ 鹼性峰％ 18.1 69.6 12.4 18.6 70.6 10.9 N/A N/A N/A 24.0 63.9 63.9 σν cN rn rn cn <N ^ 2 S 妹<ΓΓ in RS007-001 3448 RS007-001 33690 RS007-001 33245 RS007-001 33881 REF025 (RS007-001) 33759 LMW% 0.06 0.06 0.09 0.09 Ο·11 1 0.07 1 0.09 | 0.08 | 0.14 0.15 聚集體％ 0.63 0.63 0.49 0.49 0.47 0.45 0.42 0.43 0.36 0.37 二聚物％ 1.01 S 1 ·Η J 0.99 0.98 0.98 0.97 Η 〇 τ—Η Ο 〇 0 1 i 單體％ 98.29 98.43 I 98.44 98.43 98.50 98.48 98.48 98.49 98.47 於360 nm 下之 混濁度 0.041 0.035 0.037 0.021 0.020 「0.025 1 0.027 1 0.035 1 0.033 濃度(mg/mL) 21.0 | ________________1 21.0 N/A N/A 20.7 20.9 20.5 20.5 外觀 N/A N/A 13 Λ 〇 13 (¾ ο <&] ¥碟 澄清，無色 澄清，無色 澄清，無色 澄清，無色 澄清，無色 澄清，無色 小瓶 η CN CN V '< (N 1—Η <Ν r-H CN 時間點/ 溫度 〇 寸 00 12週， 5°C π P 132080.doc -41 - 200909005 〇〇 ο
酸性峰％ 主峰％ 鹼性峰％ ^ vq 〇0 0\ ΓΑ VsQ 18.6 70.6 10.9 1 N/A N/A N/A N/A 2 $ | ϊ Τ « RS007-001 3448 I RS007-001 33707 RS007-001 33758 RS007-001 33757 RS007-001 33897 LMW% 0.06 0.06 0.13 0.12 L〇_n」 0.16 1 〇」9 | 019 1 [0.24 | 0.23 聚集體％ 0.63 0.63 0.48 0.48 0.49 1 0.48 0.43 0.43 0.39 0.40 二聚物％ ι—Η r-H s 0.93 0.93 0.94 0.95 0.93 0.93 0.99 0.99 單體％ 98.29 98.30 98.46 98.48 98.40 98.42 1 98.45 98.45 98.37 98.38 於360 nm下 之混濁度 0.041 0.029 0.044 0.028 0.027 1 0.034 0.031 0.018 0.024 濃度 (mg/mL). 21.0 21.0 N/A N/A N/A 21.0 20.8 外觀 N/A N/A λ Dh o Ί3 Oh Ο > ^：： 澄清，無色 澄清，無色 澄清，無色 澄清，無色 澄清，無色 澄清，無色 小瓶 (N * '< (Ν (N (N Η 時間點/溫度 o 3週，30°C 6週，3(TC 9週，30°C 12週，30°C -42-
132080.doc 200909005
酸性峰％ 主峰％ 鹼性峰％ 18.1 69.6 12.4 18.6 70.6 10.9 N/A Ν/Α Ν/Α 63.6 20.7 15.8 64.7 19.2 16.1 ί ^ Τ « CO RS007-001 3448 RS007-001 33834 RS007-001 33690 33693 RS007-001 33891 LMW% 0.06 98.30 0.22 0.22 0.35 0.44 3.81 1 3.63 5.83 5.22 聚集體％ 0.63 21.0 0.49 0.49 0.45 0.49 0.65 1 1 0.64 j 1.04 1.03 Ί 1.01 0.06 0.96 0.95 1.00 1.04 2.01 1.76 單體％ 98.29 0.63 98.33 98.34 98.20 98.03 1 93.93 1 94.15 1 91.12 92.00 於360 nm 下之混濁 度 0.041 0.060 0.045 0.040 0.043 「0.060 1 0.057 1 0.068 0.055 濃度 (mg/mL) 21.0 98.30 N/A Ν/Α N/A 20.8 20.5 外觀 N/A 21.0 13 Cl, Ο ¥墉 13 〇 Ία *&) > 4= 13 〇, 〇 In <fi] 13 (¾ 〇 Μ 澄清，無色 澄清，無色 澄清，無色 澄清，無色 小瓶 (N (Ν (N (N 時間點/溫度 〇 2週，40°C 4週，40°C 8週，40°C 12週，40°C 132080.doc • 43· 200909005
s tTi o 霖 m ..^ M 酸性峰％ 主峰％ 驗性峰％ 19.0 70.9 10.0 寸 00 ^ 〇 *—Κ Γ-**. ί—Η < I <Ν S 。A寸 25.2 62.8 11.9 25.5 63.0 11.5 ί $ U J </1 RS007-001 3448 RS007-001 33690 RS007-001 33245 RS007-001 33881 REF025 (RS007-001) 33759 LMW% 〇 〇 〇 〇 c5 s o ο Ο Ο g 〇 o 1 1 聚集體％ in Ό 〇 〇 CN d in O 吞 o 妄 ο ο o 卜 O 寸 ΓΛ o 他珠單抗、40 mg/mL蔗糖、6 mM組胺酸、0.02% PS-80 荽 Ί S S 〇\ 〇\ 〇 Os o 1—H 00 Ον Ο y A s ί—H o C) o 單體％ 98.26 I 98.26 j 1 98.38 98.37 98.42 98.44 98.43 98.45 98.47 98.71 於360 nm下 之混濁度 0.053 0.054 0.054 0.050 0.038 0.059 0.043 0.055 0.052 濃度 (mg/mL) 〇 ο < < m cK to m 〇\ cn »—H Os m ITi 〇< m 女 < Ζ 澄清，sl opal， 無色 澄清，sl opal， 無色 ㈤ 碟 13 λ ο 13 Ο ΊΆ V. sl opal，無色 V· sl opal，無色 v. sl opal，無色 v· sl opal，無色 (Ν (N CN T—H (N T-H (N 祐g i s 時間點/溫度 〇 P 寸 Ρ 00 P Wl (N 6個月，5t 132080.doc -44- 200909005
酸性峰％ 主峰％ 鹼性峰％ 19.0 70.9 10.0 in (寸 00^0 1—( 1 麵 < 46.3 8.0 45.7 45.8 46.5 7.7 2 $ T ® U ^ 00 RS007-001 3448 RS007-001 33707 RS007-001 33758 RS007-001 33757 1 1 RS007-001 33897 LMW% 〇 〇 cn 〇 m Τ"·Η ο 〇 〇 CN (Ν 〇 <N <N 〇 (N 〇 (N 〇 聚集體％ ο 〇 〇 妄 ο 〇 〇 寸 〇 〇 寸 o m 〇 m o 荽 Λ s ρ»·Η S ON Ο 〇\ ο σ\ 〇 〇\ 〇 ON as d 00 〇\ o s T—H 單體％ 98.26 98.26 98.45 1 98.45 1 98.41 1_____ 98.42 1_ 98.38 98.40 98.33 98.33 於360 nm 下之混濁 度 0.053 0.042 0.055 1 0.056 0.053 | 0.058 0.060 0.042 0.042 濃度 (mg/mL) Ο Ο < 1 C 卜 o 外觀 1 澄清，v. si opal，無色 澄清，ν· si opal，無色 澄清，無色 澄清，無色 si opal，無色 si opal，無色 v. si opal，無色 v. si opal，無色 1 —— (Ν CN (Ν T _< (N CN 時間點/ 溫度 ο ㈤ ^ p V〇 ^ ^ b 12週， 30°C -45- 132080.doc 200909005
酸性峰％ 主峰％ 鹼性峰％ 19.0 70.9 10.0 ΙΤ) τ—( 00 ^ ο Γ*-» 麵 麵 1 69.2 16.5 14.4 69.2 17.2 13.6 2窣 f ϊ T VS RS007-001 3448 RS007-001 33834 RS007-001 33690 RS007-001 33693 RS007-001 33891 LMW% _ 〇 ο ^Τί (Ν Ο vn CN ο 00 ΙΟ Ο 00 in ο (Ν CN m — 卜^ 〇\ Ό vd 聚集體％ VO ο 3 ο c5 吞 ο ο ο oo v〇 o CN 〇 o (N r—H 龚 Ί s Η S ο ο T—( T-H rn oo 單體％ 98.26 98.26 98.30 98.30 97.92 97.90 93.68 93.56 89.97 90.02 於360 nm 下之混濁 度 0.053 0.071 0.062 0.065 0.065 1 0.084 0.080 0.100 0.103 濃度 (mg/mL) Ο Ο < < 1 00 00 m cK m 外觀 < < 澄清，ν· si opal，無色 澄清，ν· si opal，無色 澄清，sl opal，無色 澄清，sl opal，無色 sl opal，無色 sl opal，無色 ν· sl opal，無色 v. sl opal，無色 I (Ν (Ν <N T—H (N (N 時間點/ 溫度 ο 4 <N寸 Ό 酹〇 寸寸 ^ p 鳑〇 00寸 12週， 40°C -46- 132080.doc 200909005 ®N^fi2 :踩B苯破紱軍
:M 08—sd %(Nod二swi 9 ,t3sbbs 〇 寸 isssns曹？ 酸性峰％ 主峰％ 驗性導％ 18.6 71.0 10.4 18.4 71.2 10.4 N/A N/A ON (N Os t—H 1—I (N ' ^ —(N卜 'O <N —ί fN — 26.1 61.9 12.0 2 $ f ϊ τ « ζΛ RS007-001 3448 RS007-001 33690 RS007-001 33245 RS007-001 33881 REF025 (RS007-001) 33759 LMW% 0.07 0.08 1 0.10 j [o.io 1 0.09 1 o.io 1 0.09 0.09 0.14 0.15 ! 聚集體％ _1 0.71 0.71 0.57 0.56 0.50 0.52 0.45 0.46 1_ 0.38 0.38 荽 Ί 1.03 1.03 1—Η > 1 Η 1 1.01 ] 1.00 1.01 1.04 1.04 s 1.03 單體％ 98.19 98.18 98.31 98.33 98.40 98.37 98.42 98.41 I 98.44 98.44 於360 nm 下之混濁 度 0.074 1 0.070 ] 0.068 0.062 0.056 0.054 0.057 j r 0.064 0.060 濃度 (mg/mL) 52.1 51.5 Ν/Α N/A 50.3 50.6 1 51.9 50.6 外觀 1 ———— ____I N/A N/A 澄清，si opal，無色 1澄清，sl opal，無色 sl opal，無色 sl opal，無色 sl opal，無色 sl opal，無色 1 ______ . 1 sl opal，無色 sl opal，無色 小瓶 (N <N τ—H (N (N 1'"< CN 時間點/ 溫度 〇 寸 00 12週， 5°C π P Ό 132080.doc -47- 200909005
酸性峰％ 主峰％ 鹼性峰％ 18.6 71.0 10.4 18.4 71.2 10.4 Ν/Α Ν/Α Ν/Α 、寸… Ό 1¾ T « of RS007-001 3448 RS007-001 33707 RS007-001 33758 RS007-001 33757 RS007-001 33897 LMW% 0.07 0.08 0.13 [0.08 1 °·17 [0.26 j j 0.25 j 0.36 0.36 聚集體％ 卜 〇 卜 〇 0.49 1 0.49 1 0.44 0.46 r-H 寸 Ο 寸 Ο 0.37 0.37 荽 Λ S S 0.96 1 0.98 1 ON Ο j 0.99 1 0.99 1 0.99 s 1 單體％ 98.19 98.18 98.42 98.40 98.55 98.37 98.34 98.35 1 98.21 98.21 於360 nm 下之混濁 度 0.074 [0.057 1 0.058 j 0.059 0.067 0.064 1 0.063 j 0.052 0.055 濃度 (mg/mL) τ-Η (N 51.5 Ν/Α Ν/Α Ν/Α 52.6 外觀 N/A Ν/Α 澄清，si opal，無色 澄清，si opal，無色 澄清，無色 澄清，無色 si opal，無色 si opal，無色 si opal，無色 si opal，無色 小瓶 (Ν (Ν CN Τ-Η CN F—Η (Ν 時間點/ 溫度 Ο 3週， 30°C 6週， 30°C 9週， 30°C 12週， 30°C -48-
132080.doc 200909005 005
酸性峰％ 主峰％ 鹼性峰％ 18.6 71.0 10.4 18.4 71.2 10.4 ! N/A N/A N/A 73.7 14.8 11.5 2 $ τ « ω ΐ- m RS007-001 3448 RS007-001 33834 RS007-001 33690 RS007-001 33693 RS007-001 33891 LMW% 0.07 0.08 in cn O O 3.34 6.29 m 9.60 聚集體％ <1 < 卜 〇 卜 〇 o o L—0:47…」 o 0.89 1_ 0.89 00 荽 Ί S S o 0.99 | —丨― g cn vr> rn 單體％ 98.19 98.18 | 98.16 I | 98.18 | 95.11 | 95.33 | 91.46 | 91.44 | 86.90 於360 nm 下之混濁 度 0.074 0.081 0.080 j 0.071 0.080 0.095 0.095 0.116 濃度 (mg/mL) <N in N/A N/A I NIA 49.8 外觀 N/A N/A 澄清，si opal，無色 澄清，si opal，無色 澄清，si opal，無色 澄清，si opal，無色 si opal，無色 si opal，無色 si opal，無色 小瓶 ，丨丨< (N (N 1—^ CN CN 時間點/ 溫度 Ο 2週， 40°C 4週， 40°C 8週， 40°C 12週， 40°C -49- 132080.doc 200909005 〇〇 ¥^Hns ςο:SB 絮垵^茛 :喇鉍趔 ooo-sd %sd,键淫 wss 9 , -irfls/ss 0寸 运衅f^^ls/Mssz. 酸性峰％ 主峰％ 鹼性峰％ 18.5 72.3 9.2 17.9 71.9 10.1 N/A N/A N/A 26.2 62.0 11.8 ON寸卜 (N ^ CN ' 雜V0 g，藥 00销~ RS007-001 3448 RS007-001 33690 RS007-001 33245 RS007-001 33881 REF025 (RS007-001) 33759 LMW% 0.09 0.09 0.13 0.12 | 0.13 | | 0.12 I 1 Q·11! T—H o 0.15 0.15 1 聚集體％ 1.15 寸 r-H 0.90 0.89 0.83 1_____ 0.81 0.75 0.75 0.59 0.59 '1 # 1.53 1.53 r丨< t—^ in r-H in t1 ^ 1.56 1.56 | 1.53 <1 m 單體％ 97.23 97.23 97.46 97.47 97.54 | 97.55 | 97.58 97.58 97.72 97.73 於360 nm下之 混濁度 0.097 0.089 0.089 | 0.071 | 0.071 | 0.072 0.070 | 1 ! 0.081 0.078 濃度 (mg/mL) 77.2 77.6 N/A N/A rn !_Τ5ΛI 1 75.9 75.9 外觀 N/A N/A 澄清，sl opal， 無色 澄清，sl opal， 無色 sl opal，無色 sl opal，無色 sl opal，無色 sl opal，無色 sl opal，無色 sl opal，無色 小瓶 Η CN <N τ—H (N (N H CN 時間點/ 溫度 〇 寸 00 12週， 5°C π P 學《η 132080.doc •50- 200909005 ροε 132080.doc oxo#-^i
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酸性峰％ 主峰％ 鹼性峰％ 18.5 72.3 9.2 17.9 71.9 10.1 < < 1 CN '―i 00 I> ^ »~H 68.6 13.7 17.7 SEC參考標 準及平均面 積計數 RS007-001 3448 RS007-001 33834 RS007-001 33690 RS007-001 33498 RS007-001 33891 LMW% g d s d IT) o d 寸 οό On (N 00 11.57 10.41 聚集體％ 寸 rn o (N 〇 o o 卜 ο 卜 m· m rn 00 oi OO Μ赛 m in t-H m in m u-i m oo r-i § i H s (N CN 單體％ 97.23 97.23 97.31 97.33 93.12 93.00 88.74 | 88.57 83.49 86.55 於360 nm下之 混濁度 0.097 0.092 0.111 0.104 0.098 0.136 0.135 0.165 0.174 濃度 (mg/mL) CM vo 1 義 1 寸 ON 外觀 < 澄清，sl opal， 無色 澄清，sl opal， 無色 澄清，sl opal ’ 無色 澄清，sl opal ’ 無色 sl opal，無色 sl opal，無色 sl opal，無色 sl opal，無色 小瓶 r—H (N <N r—< CN 1 (N (N 時間點/ 溫度 o P o <N P o 寸 寸 OO 12週，40°C 132080.doc -52- 200909005 〇\ 08-SDH。/。1.0 ,怒鍩一fwg 0S ,窭槌 Ί 日/οί日 001 00- ®w^*qul ς.ο:萊 B 驾被紱冢 :彻鉍载 酸性峰％ 主峰％ 鹼性峰％ 1-H 〇〇 τ-Η cK ο 〇 f***·· 2卜 Ν/Α Ν/Α Ν/Α 00 T-H ^ vd CN (N β — 21.2 66.6 12.2 蜂V0 00 RS007-001 3448 RS007-001 33720 RS007-001 33245 RS007-001 33881 REF025 (RS007-001) 33759 LMW% 1_ 1 1 1 1 I I 1 1 I 1 0.09 0.08 1 1 1- 聚集體％ 0.78 1_ 0.79 0.70 0.69 I 0.69 1 1_ 0.68 0.77 0.76 0.64 0.66 、1蕃 0.97 0.98 0.90 0.89 〇\ Ο ΟΝ Ο Ο g t-H o s r"H 單體％ 98.24 98.23 98.41 98.41 98.40 98.41 98.04 98.07 98.35 98.33 t B ^ 0.111 0.100 0.146 0.164 0.136 0.138 0.135 0.134 0.150 0.153 濃度 (mg/mL) 95.7 96.7 Ν/Α Ν/Α 94.2 'd 96.3 96.2 水分之 KF% 〇； Ν/Α Ν/Α Ν/Α N/A 重組 時間 (分 鐘） 〇 in ro (N — <Ν o CTn (N 外觀 澄清，si opal Ια ψ*, C3 喇& 澄清，sl opal 澄清，sl opal 碟 二 cd & 碟 二 β gn m 二 β cd &Η #- &H 碟 二 e c3 Oh 碟 二 β cd Ο 小瓶 CN (N τ—Η <Ν CN »—H (N 時間點/ 溫度 〇 寸 ㈤ οο 12週， 5°C 學Ό \d 132080.doc •53 - 200909005 ^ v〇 ^ 嬸· τ-Η 〇〇 ι-^ 0^0 0 i~H »—K ^ <Ί Ό 2卜 Z i < P ^--' Tf (N V〇 r-H ^0^0 Τ"Η 4 — (Ν Ό — 蝶V0 會ίΓ柘 4吟·女 s酶 §黑 in o o p psi §〇〇 1- Pi t—H o卜 έ" ζΑ ^ Ρύ o 00 ^ ¢^1 g|- a^l S 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 〇 o 1 1 1 I 韜 OO o 〇 rn ΙΟ o 〇 〇 ?; 〇 m o v〇 Ό 〇 o CN o o 寸 ο M# σ^ o 00 Os o 00 ON O 00 o S <N r—H 〇 I^H vo cn SS T—< m ν〇 τ—( 韜 1^- 寸 CN od 〇\ <N 00 ON m 00 ro od 等 00 ON oo On <N (N 00 〇\ 艺 00 Os κη oo 00 s； 00 m 00 〇 V ^ o o > Ή o o r*H IT) T-H 〇 吞 o CN 〇 VO in O Ό o CN 寸 o o 寸 o ON o Ο 濃度 (mg/mL) t> V/S 卜 ^o 〇s < 麵 Z 'O ^o 00 〇\ o *〇 G\ Γ〇 ΟΝ Φ^χ- 卜 Z 1 Z I i I|i .Ifh.t CD®. ψ*Ί o m ΓΠ l〇 cn o vd (N rn p ui m 'O 'Tj ro (N ^Ο ΓΛ 女 Ί/2 a 軛gn ’ 13 t—4 ^s3 你** 〇 r碱 Si o ^ «3 &碱 Ίλ Ί3 <fi3 &墉 «) #. c 13 Ο ^sD a 13 & <s3 磲 13 Oh Ο ， CN ^-H (N T-H CN r—H <N CN i—Η CN S㈣ ^，Ά o ?^〇 V〇 ^ "p 痹〇 〇[ ^ ^°〇 (N cn Μ " 〇° ^ nc：^ 132080.doc -54- 200909005 aoTr 酸性蜂％ 主夺°/〇 鹼性峰％ 1—1 00 1—« cK ο 〇 τ-Η Γ^«· Τ-Η S 3 ^ 1 麵 < 辕V0 你+女 RS007-001 3448 RS007-001 33791 RS007-001 33720 RS007-001 33693 RS007-001 33891 LMW% I I I I Ο s d J 1 1 1 1 1 1 d CN d 聚集體％ 00 Ο On Ο Ο On 〇 ^T) O’ O’ »r> o S O’ CN O’ <N 〇 Μ荽 ο οο ο m cn t—H 00 CN r-H o 00 卜 r—4 <N 寸 (N 單體％ 98.24 1 98.23 97.83 97.82 98.07 98.04 97.86 「97.79 97.19 97.16 § γ-^ύ , rp g昶他 0.111 1 0.100 1 1 ... 0.153 1 0.181 1 0.160 0.159 0.168 0.210 0.230 0.238 濃度 (mg/mL) 卜 in ON ο ΟΝ < z Os <N 水分之 KF% 寸· ζ i 重組 時間 (分 鐘） ο 00 rn r-^ r^i rn (N (N On 卜 in 卜 cn 外觀 澄清，si opal Ίλ "13 1澄清ι 澄清 澄清，si opal ^ 13 ^ & opal， 無色 二 e Λ墉 ο opal， 無色 二 e α碟 o 1 I 小瓶 τ-Η (Ν CN <N <N CN 時間點/ 溫度 Ο 2週， 40°C 4週， 40°C 8週， 40°C 12週， 40°C ^Λ乱〇 · T4.lli=ls ·砘璁=.Λ) 132080.doc -55- 200909005 φ| 钵 ο 兹 m •.潘 酸性峰％ 主峰％ 鹼性峰％ 18.9 71.0 10.1 19.5 69.8 10.6 N/A N/A 19.3 68.9 11.8 19.4 68.7 11.8 21.3 66.7 12.0 21.1 66.8 12.0 20.4 65.5 14.1 19.7 66.2 14.2 %'賴 RS007-001 3448 RS007-001 33720 RS007-001 33245 RS007-001 33881 REF025 (RS007- 001)33759 REF025 (RS007- 001)36185 0.08 0.08 1 1 1 1 1 1 1 1 0.08 0.09 1 麵 I 1 I 1 1 1 韜 0.79 0.75 0.63 0.64 0.62 | 0.63 | 0.71 0.67 0.60 0.60 0.67 0.68 >1# 1.04 1.07 0.93 »—H 〇\ o 0.92 | 0.92 | r-H 〇 .丨< Ο 1.00 0.99 t、15 mM組胺酸、0.05% PS-80 製 ιϊ- 98.10 98.10 98.44 98.46 [98.46 | 98.46 | 98.13 98.01 98.39 98.40 98.34 98.33 於360 nm下之 混濁度 0.095 0.109 0.139 0.133 CN 〇 寸 o 0.115 0.138 0.127 1_ 0.132 I 1 0.125 0.126 濃度 (mg/mL) 96.0 95.9 N/A N/A 93.1 93.1 93.5 1 93.4 93.3 92.8 OS N/A N/A N/A N/A Ν/Α m 獬 1 B 麽墩 «w 00 ro 00 <N CN 〇\ 卜^ (N On i〇 卜 oi <N 2 k s玲 t2_ 味 a 崁Ί Jm>| W〇 巍2 澄清，sl opal 澄清，sl opal 7/: -13 靶& ^ 13 _§ m S· o 13 a opal，無色 opal，無色 opal，無色 1 opal，無色 opal，無色 opal，無色i cs (N CN CN H (Ν r·^ (N 時間點/ 溫度 ο 寸 00 12週， 5°C Ό 月1〒,c 132080.doc •56- 200909005
_ 18.9 71.0 10.1 19.5 69.8 10.6 麵 1 1 23.5 66.3 10.2 22.6 68.3 9.1 22.7 62.2 15.1 23.0 62.0 15.0 22.9 58.1 19.0 22.9 58.4 18.7 蜂但 咖 1 1 RS007-001 3448 1 1_ RS007-001 33707 RS007-001 33758 RS007-001 33757 ι_ RS007-001 33897 REF025 (RS007-001) 33774 J REF025 (RS007-001) 36185 LMW% 〇 Ο 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 I 1 Ο ί—Η Ο 〇 o r-H o yn o 寸 Ο 黩 S4 On Ο Ο CN VsD O’ CN v〇 O’ CN IT) o Ο 00 Ο 00 ίη Ο ο 〇 in CN o CN 〇 o rn ο Μ荽 S » Η H o T—H s to ΓΛ rn »—Η ζΙ »—Η rn CTn l—H 寸 (N in (N (N (N CN 鍥 5S(- 1 98.10 1 98.10 98.37 98.33 98.13 98.14 98.08 1 97.99 1 1 96.62 1 97.58 97.45 97.33 96.82 96.90 於360 nm下之 混濁度 0.095 0.109 0.137 0.123 °·121 0.123 1 0.160 1 0.147 1 0.159 0.126 0.188 0.195 0.230 0.226 濃度 (mg/mL) Ο Ό· OS Ο Os z Z < 卜 Os 00 寸 iri OS 〇 〇 rn 〇\ 〇\ m· 〇\ < < i < i οο ΓΟ m rn o in 寸 00 00 m CN — CN 00 in <N (N \〇 00 澄清，si opal "Ί3 澄清，sl opal，無色 澄清，sl opal，無色 碟 13^3 Oh Ίλ m Ί3<β3 Gh α opal，無色」 opal，無色 1 opal，無色 opal，無色 opal，無色 opal，輕微 黃色 opal，輕微 黃色 ' μ <N <N <Ν (Ν (N CN CN 時間點/ 溫度 ο 3週， 30°C 畛0〇 "ρ 鳑ο ^°〇 (N m M ^ P 132080.doc -57- 200909005 P? 酸性峰％ 主峰％ 鹼性峰％ 18.9 71.0 10.1 19.5 69.8 10.6 麵 麵 麵 0 — 0 τ—1 ^ CN <Ν 21.8 55.8 22.4 雜V0 ίΓ 碱 4 +友 ^ ^ ^ RS007-001 3448 RS007-001 33791 RS007-001 33720 RS007-001 33693 RS007-001 33891 LMW% 〇 g Ο o ο (Ν Ο 00 Η ο Ο ο Ο Ο Ο Ο 韜 Os Ο jn ο 宕 o 〇\ ο Ο ο ο T*~H Η Ο ο cn (Ν Ο ο # Ί 卜 r- (N ιη Ο) (Ν 00 (Ν CN SS (Ν 〇\ CN 單體％ 98.10 98.10 96.96 1 97.53 1 97.14 97.33 96.94 97.07 1 96.80 96.96 o W ^ ^ t ^ 0.095 0.109 0.142 0.149 1 0.189 0.195 0.227 1 0.226 1 0.161 0.173 濃度 (mg/mL) Ο 〇\ 〇\ as < < < (Ν Ο) 水分之 KF% ON 2 ί 重組時 間(分 鐘） 00 CO <T) 寸 m 00 ν〇 Ο \〇 〇\ cn 1 4 外觀 澄清，si opal 澄清，sl opal 澄清 澄清 澄清，sl opal 澄清，sl opal 碟 13 α ο 碟 Λ α ο m 13 α ο 碟 13 Dh ο (N τ·^ (Ν (N 1—Η <Ν ι 1 (Ν 時間點/ 溫度 ο ^ ρ 較ο <Ν寸 • P f穿 "ρ 爾ο 00寸 12週， 40。。 (βφ-J卿 IBdo ·藝 I.HIS .衅璁ΙΛ) 132080.doc -58- 200909005
酸性峰％ 主峰％ 鹼性峰％ 19.1 70.9 10.0 N/A N/A 18.6 63.8 17.7 19.9 68.9 11.1 21.2 66.4 12.4 21.0 66.6 12.4 20.0 65.5 14.5 寸 V〇 ON cK in r-H SEC參考 標準及平 4面積計 數 RS007-001 3448 RS007-001 33720 RS007-001 33245 RS007-001 33881 REF025 (RS007- 001) 33759 REF025 (RS007- 001) 36185 經製造： 測試起始日期：0.5 mL填充i LMW% 0.08 0.08 0.13 0.13 1 1 1 1 0.08 0.09 1 1 咖 1 1 1 1 1 聚集體％ 0.86 0.86 0.79 0.80 0.72 I 0.66 | 0.76 0.77 0.66 0.66 0.73 0.74 '1# 〇 τ—Η 1.10 1-16 丨 118 1 110丨 113 1 1.25 00 <N CN 1.40 1.33 § 〇 . 單體％ 97.96 97.96 97.91 97.89 | I 98.18 | 98.21 | j 97.90 97.88 98.07 98.08 97.86 97.93 於360 nm下之 混濁度 0.095 0.106 0.157 I 0.153 | 0.141 I 0.152 | 0.154 0.150 0.167 0.167 0.156 0.152 良抗、1〇〇 mg/mL蔗糖、24 mM組胺酸、0.08% 1 濃度 (mg/mL) 172.0 173.2 N/A N/A 154.5 1 1 170.6 174.9 175.3 178.1 172.2 水分之 KF% οο in N/A N/A N/A N/A N/A 重組時 間(分 鐘） Os 10.5 OO — 00 in in tr^ o m \o 'O 00 rn 外觀 澄清，si opal 澄清，si opal 澄清，si opal 13 g. opal，無色 opal，無色 opal，無色 opal，無色 opal，無色 opal，無色 opal，無色 opal，無色 經重組 200 mg/mL那他珠j 小瓶 t-H 1 _ (N CN <N τ—H CN (N 時間點/ 溫度 o 寸 00 12週， 5°C 12個 月，5°C 132080.doc -59- 200909005
^r^od i—( C^« m 70.9 10.0 1 麵 1 20.0 59.0 21.0 3^00(N —iTiiN oomo CNVOr-. 2Γ8 63.3 15.0 20.9 61.1 17.9 61.2 18.0 ooSi- ，4748〇〇1 RS007-001 33707 RS3〇3°7758001 RS007-001 33757 RS3°3°8797001 REF025 (RS007-001)33774 REF025 (RS007-001) 36185 LMW% g 〇 o 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 g o g o 1 1 1 1 1 1 1 1 聚集體％ oo o 00 o rn o ΓΟ Ο 00 l〇 o ό 〇 卜 d 〇 d g o o cn 〇 〇 o g 寸 »—H '1# o r-H o 00 t—H 00 VO •η <q —Η 50 Γ—H 70 m <N <N (N 卜 寸 rn in ΓΛ rn 單體％ 97.96 97.96 97.79 97.77 97.74 >* 卜 CN in o 1 97.41 | 96.88 96.93 96.16 96.13 95.35 95.26 於3 60 nm下之 混肩度 0.095 0.106 0.165 0.169 0.157 m <0 d Ό 00 o κ> r—Η d 1 0.178 0.183 0.237 0.227 0.221 0.220 f^oii 172.0 173.2 < 1 174.5 177.6 173.2 174.1 171.2 168.8 OO < i 1 < < σ； m 〇 (N m — »—H — >0 rn ON 4 寸 ivS o C) 寸’ o 'O 外觀 澄清，si opal 澄清，sl opal -.•ϊώ Sl ο r碟 ο c： οίδ3 〇 > 潍 g 3 "3 o «3 o opal，無色 碳 13 a o 碳 13 Oh 〇 41 13 a o 13 Oh o Φ(Κ 13 α ο 产 (N Η CN CN r—H ΓΝ1 (N (N 1-H (Ν Is o ?^o CNr〇 t-H 2〇 學rn vo πςΡ 画O 尽m (N 132080.doc •60- 200909005 \
s$|i$ ^ ^ · Ον Ο < ί < ί < ί yri \〇 ίΓί ν〇 Ο 2 s d 〇< Ο Ο κ t- ζ cn »—< (Ν (Ν Ό <Ν SEC參考 標準及平 均面積計 數 RS007-001 3448 RS007-001 33791 RS007-001 33720 RS007-001 33693 I 1 RS007-001 33891 g g 寸 (N j Ο y—^ |~3 Ο Ο Ο Ο Ο Ο 〇 Ο Ο 00 00 % ιη 00 00 00 Gs 00 m Os S 蛛 ο ο Ο ο ο ο 〇 Ο ，< ο ο τ—Η ο 1—^ 宕 (Ν ν〇 (Ν νο A rn οο ▼-Η Ί # (Ν ίΝ CN CN rn r〇 rn id ΟΝ 〇\ m ΟΝ 〇\ 00 Ρ； 芝 00 'O 00 Ον <Ν ΟΝ s®S- νο ΟΝ Os On ιη Ον 茇 •360 下之 濁度 ITi s Ι^Η g α\ r^i 宕 寸 (N 0.208 Os (Ν (Ν ^ 1 ^ ο ο Ο ο ο Ο 〇 Ο 〇 S ο (Ν < f < ζ < c 〇 'Si) CN ΓΛ Ζ r ，、旦 水分之 KF% 00 ΙΟ < 1 麵 1 重組 時間 (分 鐘） ο τ-^ m 00 〇\ cn ΓΟ 寸 oi — (Ν 00 13 Οη 13 Οη &Η Ί3 Ph <e3 Ο o #. 端 41 σ3 α ο 13 α ο 13 Οη ο 13 & 納 Τ—Η <Ν r—Η (Ν <N (Ν Η (Ν 時間點/ 溫度 1 Ο 瘠 (Ν 40°C 寸 | 40°c 1 轵 00 1 40°c 1 12週， 40°C 132080.doc -61 - 200909005
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¥'^fiTHloo:«B 苯妓滅茛 :辨！I趔 溴麵墩 酸性峰％ 主峰％ 驗性峰％ 19.7 70.3 10.0 ^ N/A N/A N/A 20.9 66.6 12.5 20.8 66.7 12.5 藥V0 命ίΓ碱 4 +女 RS007-001 3448 RS007-001 33720 RS007-001 33245 RS007-001 33881 REF025 (RS007-001) 33759 LMW% 0.08 0.09 1 0.14 0.13 0.12 o 0.10 0.08 1 1 1 1 聚集體％ 1.39 1.39 1.32 1.33 1.25 L28 1 (N t1 i L24 1 1.09 1.08 Μ # m 1.64 1.72 1.67 1-69 1 1.69 1.85 1.80 00 1.79 單體％ 96.90 96.88 96.82 96.87 96.94 | 96.91 | 96.82 96.88 | 97.10 97.13 於360 nm下之 混濁度 0.093 0.097 0.136 0.143 0.143 | 0.142 j 1 0.145 | | 0.134 j 0.149 0.152 1 1 濃度 (mg/mL) 194.7 _ 184.1 1 j N/A N/A 「224.7 j 222.3 | 196.9 197.1 水分之 KF% 19.0 20.5 r N/A N/A 1 N/A 1 N/A 重組 時間 (分 鐘） (N \6 rn — 18.0 m 18.8 15·3 27.0 15.5 外觀 澄清，si opal 澄清，sl opal 澄清，sl opal 澄清，sl opal opal，無色 opal，無色 opal，無色 opal，無色 opal，無色 opal，無色 小瓶 1 丨丨< (N (N CN r—H CN (N 時間點/ 溫度 ο 寸 〇〇 12週， 5°C π P 132080.doc • 62- 200909005
酸性峰％ 主峰％ 鹼性峰％ 19.7 70.3 10.0 ^ o N/A N/A N/A N/A 21.6 63.3 15.2 21.6 63.4 15.0 弊V0 ^ ^ a ^ ^ RS007-001 3448 RS007-001 33707 RS007-001 33758 RS007-001 33757 RS007-001 33897 REF025 (RS007-001)33774 LMW% 0.08 0.09 1 1 1 1 0.14 0.14 1 1 1 1 0.09 0.09 1 1 聚集體％ 〇\ 1-H rn 1—H 〇\ CN 1-H 00 CN 1-H T-H »-Η CN 1—t A T—< 1 1.26 I VO (N r—^ m rn r-H 1.27 Μ荽 m S 2.12 (N 2.28 2.67 2.84 | 2.40 ] 2.83 | 2.80 3.57 3.57 單體％ 96.90 96.88 96.48 96.49 96.41 96.04 | 95.91 | | 96.39 | | 95.81 | | 95.86 | 95.10 95.16 〇 W tt?l 0.093 0.097 0.173 0.168 0.143 0.166 0.178 0.170 0.174 「0.173 0.238 0.225 濃度 (mg/mL) 194.7 184.1 N/A N/A N/A [211.6 223.5 | 181.3 183.7 水分 之 KF% (N N/A N/A N/A N/A N/A 重組 時間 (分 鐘） o cK 20.5 m od Os CN O) 27.6 21.6 22.4 | ON 00 24.4 22.9 1 外觀 澄清，si opal 澄清，sl opal 澄清，sl opal，無色 澄清，sl opal，無色 sl opal，無 色 sl opal，無 色 opal，無色 opal，無色 opal，無色 opal，無色 opal，無色 opal，無色 小瓶 (N τ—Η CN (N CN CN 時間點/ 溫度 o 3週， 30°C 6週， 30°C 9週， 30°C 12週， 30°C 6個月， 30°C 132080.doc •63- 200909005
酸性峰％ 主峰％ 驗性峰％ 19.7 70.3 10.0 °® n & N/A 1 i N/A N/A N/A 1 ^ RS007-001 3448 RS007-001 33791 RS007-001 33720 RS007-001 33693 RS007-001 33891 LMW% 0.08 0.09 0.07 0.06 1 0.16 0.15 1 1 0.15 1_ 0.07 0.10 | 韜 cn On rn t—H rn 1 丨崤 m rn t-H On ΓΠ o 卜 rn (N 卜 、1荽 m 3.40 1_ 2.74 | 3.19 3.22 3.77 4.34 | 4.54 單體％ 96.90 96.88 [95.17 I j 95.87 | 95.26 95.23 94.86 j [94.10 93.87 [94.12 於360 nm下之 混濁度 0.093 0.097 0.161 | 0.153 0.180 0.179 0.210 0.211 0.248 0.235 | 濃度 (mg/mL) 194.7 184.1 N/A N/A N/A 194.2 | 215.4 | 水分之 KF% (N N/A I N/A ：N/A i_ N/A 重組 時間 (分 鐘） o Os 20.5 寸 | 15.0 | 寸 〇 On cn 00 r-H I 20.8 I 16.4 | 外觀 澄清，sl opal 澄清，sl opal 澄清 澄清 澄清，sl opal 澄清，sl opal opal，無色 opal，無色 opal，無色 opal，無色 I <N (N ，丨丨H <N (N <N 時間點/ 溫度 o 2週， 40°C 4週， 40°C 8週， 40°C 12週， 40°C -64- 132080.doc 200909005 εκ φ| 钵 m ο 踩 ra ·· ^ 酸性峰％ 主峰％ 驗性峰％ 20.8 68.0 11.3 N/A 1 N/A 1 1_ J | N/A i |ι ^ <ΰ* oo RS007-001 33834 RS007-001 33626 「 | RS007-001 33670 REF025 (RS007-001)33608 LMW% 0.07 〇 0.12 » 1 j 0. 10 t—H o 聚集體％ 0.57 0.54 0.54 r 0.45 0.44 i_ 0.47 0.47 § C/3 Ph % S 〇 ， cd 1 1-H f B f Μ ! a 祐a Ί T—Η I 0.96 0.96 單體％ 98.31 98.31 98.31 98.59 98.60 98.36 98.35 於360 nm下 之混濁度 0.181 1_ 0.105 0.093 1 0.103 0.098 0.098 0.107 濃度 (mg/mL) 50.0 50.7 N/A i- 50.0 50.0 N/A 外觀，pH值 1 澄清，si opal，無色 i sl opal， 無色 sl opal， 無色 13 «3 sl opal， 無色 13 <03 &碱 sl opal， 無色 小瓶 (N (N 時間點/ 溫度 〇 P 寸 P to 00 12週， 5°C -65- 132080.doc 200909005 /. \
酸性峰％ 主峰％ 鹼性峰％ 〇〇 O rn Ο 00 (N N/A N/A N/A N/A ί $ 00 RS007-001 33834 RS007-001 33758 RS007-001 33506 RS007-001 33775 REF025 (RS007-001)33586 LMW% 0.07 0.06 0.14 0.10 0.10 0.16 1_ 0.16 0.47 0.47 韜 sP ψ(\ ©S 0.57 0.15 0.45 0.41 0.42 0.35 0.35 0.37 0.38 >1 # 1.04 0.95 0.99 0.95 0.95 0.99 0.99 1.12 1.10 單體％ 1 98.31 98.54 98.38 98.54 1 98.53 1 98.50 1 98.50 98.04 98.05 於360 nm下 之混濁度 0.181 0.038 0.034 0.109 0.108 0.104 0.102 0.102 0.106 濃度 (mg/mL) 50.0 50.7 N/A N/A N/A N/A 外觀 澄清，si opal，無色 sl opal， 無色 sl opal， 無色 Ί3 <θ3 o'^ sl opal， 無色 sl opal， 無色 sl opal， 無色 丨 sl opal， 無色 13 <&> &墉 小瓶 CN CN r H <N CN 時間點/ 溫度 Ο 3週， 30°C 6週， 30°C 9週， 30°C 12週， 30°C 132080.doc -66- 200909005 $
酸性峰％ 主峰％ 鹼性峰％ 20.8 68.0 11.3 N/A N/A N/A N/A 卞S减 U ^ RS007-001 33834 RS007-001 33732 RS007-001 34124 RS007-001 33852 REF025 (RS007-001) 33590 LMW% 0.07 0.48 0.48 3.25 1 3.30 ! 8.29 1_ 8.59 10.41 10.72 1 uiil^ 'sfD W 0.57 0.46 0.46 0.43 1 0.42 0.62 0.65 1 1.39 rn 1-H >1 # 1.04 〇 〇 00 Ο r—Η i 1.08 1.34 1.22 1.47 1.47 單體％ 98.31 98.05 98.05 95.23 1 95.20 89.74 89.53 86.74 86.46 於360 nm下 之混濁度 0.181 0.105 0.109 0.147 0.106 0.121 0.116 0.128 0.131 濃度 (mg/mL) 50.0 丨 50.7 N/A N/A j 52.0 54.0 N/A 外觀 澄清，si opal，無色 澄清，si opal，無色 澄清，si opal，無色 sl opal 9 無色 13 <sD o墉 sl opal， 無色 13 «3 o' 4= Ίλ sl opal， 無色 sl opal， 無色 小瓶 CN T—H CN (N V «< CN 時間點/ 溫度 〇 2週， 40°C 4週， 40°C 8週， 40°C 12週， 40°C 132080.doc -67- 200909005
V
經製備： 測試起始日期：0.5 mL填充量 酸性峰％ 主峰％ 鹼性峰％ 21.0 67.9 11.1 Ν/Α N/A N/A 妒踅柘 氐销· RS007-001 33834 RS007-001 33626 RS007-001 33670 REF025 (RS007-001) 33608 LMW% 0.07 0.03 0.03 1 1 1 1 0.12 0.12 聚集體％ 0.65 0.59 0.58 0.46 0.45 0.50 0.49 S 〇 f B f $ ! S 4 ssf 被S ‘ s 、1荽 Ο 0.99 0.95 0.96 r—< 單體％ 98.22 1 ! i_ 98.38 98.39 98.59 ；98.59 1_ 98.31 98.31 於360 nm下 之混濁度 0.050 1 1 1_. _ 0.058 0.065 0.060 0.068 i_______ 0.066 0.065 濃度 (mg/mL) 53.7 51.7 Ν/Α o 49.8 i N/A 外觀，pH值 澄清，si opal，無 色，6.11 v. si opal 5 無色 v. si opal > 無色 sl opal 5 無色 sl opal， 無色 sl opal， 無色 sl opal， | 無色 小瓶 1-H CN (N 時間點/ 溫度 Ο Wfa^ 寸 00 12週， 5°C 132080.doc -68- 200909005 ροε 132080.doc %#si迤 i^s O ON ^ C · Τ-Η CN — 寸 ε8Γηεso.^00^
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PS 酸性峰％ 主峰％ 鹼性峰％ 21.0 67.9 11.1 1 < 1 < τ « 含:ST RS007-001 33834 RS007-001 33732 RS007-001 34124 RS007-001 33852 REF025 (RS007-001) 33590 LMW% 〇 7 c5 3 Ο o o oo rn oo ON OO OO (N 聚集體％ Ο ο ο o $ o g o 〇 s 00 ON 〇 M荽 »—Η s s g <τ—H 〇\ (N τ" ·Η (N 00 o § o 單體％ 98.22 98.06 98.08 95.41 95.25 90.07 89.83 89.27 89.09 於360 nm下 之混濁度 0.050 0.102 0.098 0.099 0.081 0.104 0.097 0.101 0.097 濃度 (mg/mL) cn IT) 卜 1 1 1 in OS 義 外觀 〇 • W v. si opal，無色 v. si opal，無色 1 si opal，無色 si opal，無色 si opal，無色 si opal，無色 si opal，無色 si opal，無色 —"Η (N t-H CN (N T·^ (N 時間點/ 溫度 Ο 2週， 30°C 4週， 40°C 8週， 40°C 12週， 40°C -70- 132080.doc 200909005 si 132080.doc
08-sd%so,毽绪^^日9,窭澳碰、1日/§日53,^蚌#荤蔌1661)日01〇 栽楗蛘命IK ¥械姊Is SO : SB苯破笈莨 :擊鉍趔 酸性峰％ 主峰％ 鹼性峰％ rn 〇 Cn i—< ν,Ο τ—1 Ν/Α 1 N/A 1 1 N/A 1 1 會踅鵷 妹+女 g，無 co RS007-001 33834 RS007-001 33626 RS007-001 33670 REF025 (RS007-001) 33608 LMW% 0.07 0.10 1 S 〇 1 1 1 1 0.10 o 聚集體％ 0.68 0.60 ID Ο 〇 0.46 0.48 0.48 Ί S 1-^ 0.99 0.96 0.97 g T-H T-H 單體％ 98.19 [98.26 1 98.44 98.59 | 98.58 | 98.35 | 1 ! 98.34 於360 nm下 之混濁度 0.035 0.056 0.050 0.076 0.093 0.063 0.057 濃度 (mg/mL) 1 51.0 ^Τ) Ν/Α (N iT) N/A 外觀， pH值 澄清，sl opal， 無色， 6.13 ν. sl opal，無色 v. sl opal，無色 I sl opal，無色 sl opal，無色 sl opal，無色 sl opal，無色 小瓶 Η r-Η <N 1-H (N ^—1 CN 時間點/ 溫度 Ο 寸 P 00 P iTi 12週， 5°C •71 - 200909005 ροε 酸性峰％ 主峰％ 鹼性峰％ 19.7 69.3 11.0 Ν/Α N/A N/A N/A 雜* U ^ RS007-001 33834 RS007-001 33758 RS007-001 33506 RS007-001 33775 REF025 (RS007-001) 33586 LMW% 0.07 in Ο Ο 〇 o 0.32 | 0.32 | o 0.42 聚集體％ 〇〇 VO 〇 r—Η in ο r-Ή yn ο 0.47 0.44 0.38 0.40 0.39 00 m 〇 龚 S4 ^ 、1 ο ο o ON c> s g in r-H 單體％ 98.19 98.33 98.33 98.32 98.51 98.21 98.23 98.12 98.06 於360 nm 下之混濁 度 0.035 0.006 0.010 0.061 | 0.060 0.059 0.056 0.069 0.067 濃度 (mg/mL) 51.0 in Ν/Α N/A N/A N/A 外觀 澄清，si opal , 無色， 6.13 si opal，無色 si opal，無色 si opal ’ 無色 si opal，無色 si opal，無色 丨sl opal，無色 sl opal，無色 sl opal，無色 小瓶 τ—Η (N (N (N 時間點/ 溫度 Ο 3週， 30°C 6週， 30°C 9週， 30°C 12週， 30°C -72- 132080.doc 200909005
酸性峰％ 主峰％ 鹼性峰％ 19.7 69.3 11.0 Ν/Α Ν/Α 1 i N/A N/A τ « in RS0007-001 33834 RS0007-001 33732 RS0007-001 34124 RS0007-001 33852 REF025 (RS007-001) 33590 i LMW% 0.07 0.42 0.42 2·94 3.08 7-91 1 8.04 9.78 | 10.72 聚集體％ 1 i_ 0.68 0.48 0.48 0.48 0.46 0.82 0.81 r—H in 1.49 丨1龚 1.06 1.03 1.02 丨 1.09 I 丨 1.09 1 1 1-32 | 1.27 Ό m ψ—i 1.63 單體％ 98.19 98.07 98.08 95.49 「95.37 1 89.95 89.89 | 87.14 86.16 於360 nm 下之混濁 度 0.035 0.065 0.069 0.061 0.060 0.085 0.081 0.099 0.110 濃度 (mg/mL) 51.0 51.5 Ν/Α Ν/Α 52.9 (效能 =78.1%) | 53.4 j N/A 外觀 1_ 3 α 0 ' ^ 7 W 1 澄清，sl opal ’ 無色 澄清，sl opal， 無色 sl opal，無色 ν· sl opal，無色 sl opal，無色 sl opal，無色 1 __ sl opal，無色 sl opal，無色 1 小瓶 ι~Η Η (N CN (N CN 時間點/ 溫度 〇 2週， 40°C 4週， 40°C 8週， 40°C 12週， 40°C •73- 132080.doc 200909005 〆 經製備： 測試起始日期：0.5 mL填充量 酸性峰％ 主峰％ 鹼性峰％ 〇s 〇ν η τ—Η τ-Η Ν/Α Ν/Α N/A 26.4 62.5 11.0 m oo 〇 vd oi “ rsj v〇 — 2 $ T « 妹 00 RS007-001 33834 RS007-001 33626 RS007-001 33670 REF025 (RS007-001) 33608 REF025 (RS007-001) 33633 LMW% I I 0.03 0.03 I I I i o 0.10 1 0.16 0.16 聚集體％ ί j 1 0.60 0.53 0.53 0.44 0.45 1 0.46 0.46 0.39 0.40 ^單抗、25 mg/mL蔗糖、6mM組垵酸、0.02% PS-80 二聚物％ 0.98 0.98 0.99 0.95 1 0.96 j 1.06 | 1.06 1.07 s 單體％ 1 98.41 98.45 98.45 98.61 98.59 1 98.37 | 98.39 98.39 98.39 於360 nm 下之混濁 度 0.035 0.049 0.049 0.051 1 0.057 1 0.054 0.052 0.065 0.076 濃度 (mg/mL) 41.8 41.8 Ν/Α 外觀， pH值 13 S祀3勹 〇Η ^ v. sl opal， 無色 sl opal，無色 sl opal，無色 sl opal，無色 sl opal，無色 1 sl opal，無色 sl opal，無色 ^ g 'Bb 僉日 小瓶 τ—Η (N (N (N CN 時間點/ 溫度 Ο 寸 00 12週， 5°C ^ Oo 舉心 vo 132080.doc -74- 200909005
酸性峰％ 主峰％ 鹼性峰％ ； 1〇 On On ^ N/A N/A i N/A N/A N/A 2 $ U -Τ' RS007-001 33834 RS007-001 33758 RS007-001 33506 RS007-001 33775 REF025 (RS007-001) 33586 LMW% 1 1 0.14 0.14 0.10 0.10 0.29 0.30 0.38 0.37 聚集體％ 0.60 T—Η κη ο 0.49 0.43 0.42 0.40 0.38 0.37 0.38 二聚物％ 0.98 0.99 0.99 0.93 0.93 s r-H 1.07 1.12 1.09 單體％ 98.41 98.39 98.37 98.54 98.55 98.28 98.25 98.13 98.16 於360 nm 下之混濁 度 ! 0.035 0.018 0.013 0.060 0.067 0.047 0.054 0.074 0.063 濃度 (mg/mL) 41.8 41.8 N/A N/A 1 | 1 N/A N/A N/A 外觀， pH值 13 〇 > — 7相3乞 sl opal 5 無色 13 <θ3 *"3 sl opal， 無色 Ί3 &碟 S -«3 &碟 1A sl opal， 無色 sl opal， 無色 sl opal， 無色 小瓶 r—< (N <N (N r—H CN 時間點/ 溫度 〇 3週， 30°C VO 〇\ 12週， 30°C 132080.doc -75- 200909005
酸性峰％ 主峰％ 鹼性峰％ On On N/A N/A N/A N/A 2 s ϊ ί ^/1 RS007-001 33834 RS007-001 33732 RS007-001 34124 RS007-001 33852 REF025 (RS007-001) 33590 LMW% 1 1 0.38 0.24 2.40 2.60 6.41 6.30 7.55 7.35 聚集體％ 0.60 0.48 0.45 0.47 0.72 0.70 1.35 1.38 二聚物％ 0.98 1.00 0.93 1.06 1.23 1.26 1.58 H r-H 單體％ 98.41 98.14 98.39 96.06 95.90 91.64 91.75 89.51 89.66 於360 nm 下之混濁 度 0.035 0.058 0.054 0.054 0.055 ! 1 0.065 0.064 0.081 0.083 濃度 (mg/mL) 41.8 41.8 1 N/A N/A 41.3 (效能 =80.0%) 43.1 N/A 外觀， pH值 13 d, 〇 t — M 澄清，sl opal， 無色 澄清，sl opal， 無色 13 ·«] o #. V. sl opal， 1 無色 sl opal， 無色 sl opal， 無色 sl opal， 無色 sl opal， 無色 小瓶 T—H (N <N r—H CN y—M (N 時間點/ 溫度 o 2週， 40°C 4週， 40°C 8週， 40°C 12週， 40°C 132080.doc -76- 200909005
LK 酸性峰％ 主峰％ 鹼性峰％ 1>' m 〇〇6^ (N^sO — 20.4 69.0 10.7 20.1 64.7 15.2 < z 22.1 63.9 14.0 22.9 62.9 14.2 ί 21.8 66.2 12.0 00 (Ν Ο r^V〇(N (Ν^Ο — 20.5 65.3 14.2 «Kt! $ίΓ RS007-001 33834 RS007-001 33791 J RS007-001 33626 RS007-001 33670 REF025 (RS007-001) 33608 REF025 (RS007-001) 33633 REF025 (RS007-001) 36188 LMW% 〇 c5 o CN r—H d (Ν d I 1 I I Ο Ο ο ο I I 1 1 Ο Ο 祝m ··« 觀 d CTn VsO o Os Ό d 〇\ VO d Ch ό d 00 V) Ο 00 ^Τ) Ο s ο ο in ο m in d 00 ο § zh CL, 京 g Ο f 键 S a f 鏨鹅 槌韜 ε一1 s曰 « ITi 〇〇 2瓦 ，玫 oftL tnJ 〇®Γ·^ 气3 Sg 2¾ Wo Ο # Ί ί» H i H r—H o t < r—< t—H ο ^•Η 产"Η S ▼ _Η 00 (Ν ，丨η 00 CN Τ—Η CN ” i 00 CN »—Η \〇 r—Η 離 5®!- 98.28 98.14 98.14 98.03 98.03 1 98.32 98.33 97.99 1 97.99 98.24 98.19 97.76 於360 nm 下之混濁 度 0.028 0.160 0.134 0.131 j 0.140 0.131 0.135 0.144 1 0.147 0.133 0.157 0.113 濃度 (mg/mL) 〇 r—Η in 183.2 169.8 180.0 185.4 < 176.0 172.6 1 222.8 〇 麵 ί < Ι|ί Ifti.t biH. τ〇π < in cn o IT) 00 C^) οό Ο »嶙 Ο； 寸· 00 〇\ 00 (Ν rn 迴 ffi &H 13 〇〇〇 澄清 澄清 13¾] &碟 13<e3 Ίο opal，無色 opal，無色 ο 碟 13 Oh Ο 礫 13 α ο 碟 Ί3 Ρη ο I- opal，輕微黃色 小瓶 r-H (N r-H (Ν CN (Ν (Ν r—Η 時間點/ 溫度 預贅乾 o P in 寸 Ρ ίη 00 ν〇 <Ν ^ r-H *叹 。戚^冢騐篥^嗒阳^0-毕-§4-^^荽荽^麥*^。^令衾^^婼七厚11了龊^:^》^:画^1食* 132080.doc -77- 200909005 \ 酸性峰％ 主峰％ 鹼性峰％ 20.4 69.0 10.7 20.1 64.7 15.2 N/A j N/A N/A N/A τ « RS007-001 33791 RS007-001 33758 RS007-001 33506 RS007-001 33775 REF025 (RS007-001) 33586 LMW% 0.06 0.07 0.14 0.14 0.13 0.13 o 0.10 o 0.09 聚集體％ 0.69 0.69 0.68 0.69 0.68 0.67 | 0.24 0.25 0.73 0.72 荽 Ί 1.10 1.68 1.64 OO 00 1.89 | 2.71 2.75 2.49 2.47 單體％ 98.14 98.14 97.50 97.53 | 97.31 I 97.31 | 96.94 96.91 96.68 96.71 於360 nm 下之混濁 度 0.160 0.134 0.165 0.169 0.175 0.168 0.181 0.169 0.175 0.184 濃度 (mg/mL) 183.2 169.8 N/A N/A N/A 1 N/A 水分之 KF% Ο N/A N/A N/A I N/A 重組時 間(分鐘) in rn 寸· CN 00 OO 外觀 澄清，sl opal 澄清，sl opal 13 <a3 o'^ a <e3 opal，無色 opa卜無色」 opal，無色j opal，無色 opal，無色 opal，無色 小瓶. (N (N i _H (N (N CN 時間點/ 溫度 o 3週， 30°C 6週， 30°C 9週， 30°C 12週， 30°C -78 - 132080.doc 200909005
酸性峰％ 主峰％ 鹼性峰％ 20.4 69.0 10.7 20.1 64.7 15.2 I < 24.6 55.6 19.8 26.5 58.8 14.7 2 $ U ^ RS007-001 33791 RS007-001 33732 RS007-001 34124 1 1 ! RS007-001 33852 LMW% 1 1 〇 o o IT) 〇 in 〇 o 1 1 1 1 聚集體％ CTn Ό Ο Ό o 卜 o o o 00 o s o in (N 〇 (N 00 o Ί r-H o f—( (N (N (N g <N 落· rn 00 cn 單體％ _1 98.14 98.14 96.83 96.88 96.21 96.17 95.82 95.80 於360 nm 下之混濁 度 0.160 0.134 | 0.179 | 1 0.165 | 0.172 1 1 0.184 0.203 0.214 濃度 (mg/mL) 183.2 _ 169.8 ί 168.0 162.6 179.0 179.4 水分之 KF% Ο 寸’ i < < 重組時 間(分鐘) IT) ro m rn (N rn in 〇\ 寸 in σ； 外觀 澄清，si opal 澄清，si opal 「澄清，sl opal 1 澄清，si opal si opal，無色 :sl opal，無色 &媒 小瓶 (N (N r*H (N r—Η <N 時間點/ 溫度 o 2週， 40°C 4週， 40°C 8週， 40°C -79-
132080.doc 200909005
慽m ••载窣 淹滅 _女W 酸性峰％ 主峰％ 鹼性峰％ 1 卜（Nj οό \ό »—Η ^-Η 20.7 62.4 16.8 麵 ^sO m Η 4寸· (NO — 22.0 64.0 14.0 < ζ 藥 τ « 00 RS007-001 33791 RS007-001 33626 RS0G7-001 33670 REF025 (RS007-001) 33608 REF025 (RS007-001) 36412 LMW% Ο g Ο Ο r-H Ο g ο 1 1 I I Ο Ο ο Ο r·^ Ο CN Ο 聚集體％ ο r-H Ό Ο ί-Η ο (Ν Ό Ο Ο ^Τί ο 00 m ο οο ο s ο 00 ο 糖、24 mM組胺酸、60 mM NaCl、0.08% PS-80 t積 荽 Ί ο ▼ < r-H *—Η m »-Η Η g S ，_·Η ΓΝ| 1—^ Ό <Ν Τ"Η Τ—Η in \q 單體％ 98.21 98.20 98.16 1 98.14 J 98.37 98.35 98.06 98.05 97.86 97.66 於360 nm 下之混濁 度 0.269 0.273 0.291 1 0.510 1 0.287 ! 0.509 0.471 0.485 < 2 濃度 (mg/mL) 184.2 182.0 1 183.7 184.0 < < 水分之 KF% < < S «η § S »—Η ，玫 ami ιτΗ 耠5 4! «is 重組時 間(分鐘) 寸· Ο 00 CN οο (Ν rn 00 卜 00 寸· < * Μ si opal， 無色 Opal，_無色 ν. opal, 無色 1 ν. opal, 無色 ν. opal，無色 ν. opal，無色 < ζ (Ν (Ν <Ν <Ν τ—Η (Ν 時間點/ 溫度 Ο P in 寸 Ρ οο 廢Ρ 12個月， 5°C 132080.doc -80- 200909005
酸性峰％ 主峰％ 鹼性峰％ 18.1 65.7 16.2 20.7 62.4 16.8 N/A N/A i- N/A N/A ! N/A 2$ u ^ RS007-001 33791 RS007-001 33758 RS007-001 33506 RS007-001 33775 REF025 (RS007-001) 33586 REF025 (RS007-001) 36412 LMW% 〇 g 〇 (N 〇 0.12 〇 o 〇 o 0.14 寸 o o t—H o o 0.14 聚集體％ Ό 〇 I H VO o 0.62 cn VO o v〇 o 0.64 0.59 o o — 0.67 0.90 On 〇 袭 Ί 〇 τ—Η r·^ r-H r-H 2.00 | O) 2.20 2.19 2.34 2.47 00 OS cn 單體％ 1 98.21 98.20 97.65 1 97.60 I 97.24 | 97.31 | 97.07 97.07 96.91 96.75 94.99 95.19 於360 nm 下之混濁; 度 0.269 _i 0.273 | 0.376 | [0.444 I 0.436 1 0.373 0.443 0.402 0.401 0.460 N/A 濃度 (mg/mL) 184.2 182.0 N/A N/A N/A NIA N/A 水分之 KF% N/A N/A 1 N/A N/A N/A 重組時 間(分鐘) 〇 oo o (N (N 寸 CN (N N/A 外觀 澄清 澄清 1_ opal，無色 opal，無色 v. opal，無邑 :v. opal，無色 v. opal，無色 v. opal，無色 v. opal，無色 v. opal，無色 N/A 小瓶 CN r-H (N (N r-^ (N T~H (N <N 時間點/ 溫度 o 3週， 30°C 6週， 30°C 9週， 30°C 12週， 30°C 12 mo 30°C 132080.doc -81 · 200909005 k
酸性峰％ 主峰％ 鹼性峰％ '―< ^ (N 〇〇 in \〇 20.7 62.4 16.8 囊 1 m ι—> CN od <Ν ^ — 〇 in in tj1 “ 寸· CN (N < ί $ m RS007-001 33791 RS007-001 33732 RS007-001 34124 RS007-001 33852 REF025 (RS007-001) 33590 LMW% g Ο g Ο m ο m η ο in r-H o ο ι I 1 1 (N r-H o o 聚集體％ Ό Ο r—Η Ό Ο ό ο ο o m 卜 ο Ο Ο 00 o m On 〇 荽 Λ Ο ♦-*Η ι 1 i r-H m CM CN ο (Ν CN (Ν g rn CN cn S ^J· 單體％ 98.21 ι 98.20 I 96.97 97.06 96.32 96.53 96.21 95.55 94.92 94.31 於360 nm 下之混濁 度 0.269 0.273 1 0.322 1 0.328 1 0.428 0.332 1 0.339 0.364 0.359 | 0.397 濃度 (mg/mL) 184.2 182.0 169.0 174.2 164.6 180.0 < 水分之 KF% m rn 1 1 重組時 間(分鐘) 'sO 寸· Ο CN «τΐ ON oo 00 〇\ (N (N in CN r-^ 女 澄清，si opal 澄清，si opal si opal，無色 sl opal，無色 ν. opal，無色 v. opal，無色 1 碟 13 a o <e3 碟 13 Oh 〇 r—< (Ν (Ν (Ν CN (N 時間點/ 溫度 〇 Ό 齊〇 (Ν寸 酹〇 寸寸 Ό 鳑〇 〇〇寸 12 wk 40°C 132080.doc •82- 200909005
狄m ••毁苯 故4滅 巍命Μ 酸性峰％ 主峰％ 鹼性峰％ 19.4 69.5 11.1 卜α寸 o r4 <N VO 一 1 (Nj i 卜 <N| \〇 — 23.5 62.3 14.2 蠢 I 2 $ V VR 00 RS007-001 33791 RS007-001 33626 RS007-001 33670 REF025 (RS007-001) 33608 REF025 (RS007-001) 36412 1 LMW% 〇 C> o m 〇 1 1 1 1 S 〇 O o 〇 r. H o o 1—H o 聚集體％ 00 〇 o 00 o o 〇 〇 ΓΛ 〇 (N o o r^· o 糖、24 mM組胺酸、0.08% PS-20 t積 荽 «4 ^ Ί CN <N T—H 卜 r—H CN T-H 00 CN t—H 卜 r—H r-H 單體％ 98.04 98.05 [ 97.95 97.92 98.25 98.24 [ 97.89 1 97.90 「97.69 97.68 於360 nm 下之混濁 度 0.169 0.161 1 0.143 0.160 0.154 f 0.154 1 0.163 濃度 (mg/mL) 173.3 165.4 180.0 178.5 水分之 KF% 1 1 ^璨 4^ a ^ S ® 一 狀 ，晚 pnit γτγΙ # >W ^ 5 ,|| >w 〇 2 重組時 間(分鐘) 00 in (N ¢50 r—H T^H 'o VO 寸· 澄清 澄清 二 a <e3 C/3 >： l<e3 °媒 > opal，無色 1 1 瑞 13 a 〇 碟 13 a 〇 <〇3 碟 13 a 〇 r—Η (N t-H (N CN T—^ CN »—H <N 時間點/ 溫度 Ο P 寸 P 00 喊P Ά ^ 12個月， 5°C 132080.doc 83 - 200909005 0〇0£
酸性峰％ 主峰％ 鹼性峰％ ^ in 1-H On On r-H 1—Η »—Η 20.7 62.9 16.4 麵 < 麵 1 產 2 $ RS007-001 33791 RS007-001 33758 RS007-001 33506 RS007-001 33775 REF025 (RS007-001) 33586 REF025 (RS007-001) 36412 LMW% Ο Ο 寸 Ο cn ^-Η Ο CS o o 1 1 1 1 S 〇 Ο Ρ" Η Ο Ο o T-H o 聚集體％ oo ο ο 00 ο ο 00 o o 卜 Ο 1-H 卜 〇 (N 00 〇 —_·Η 00 ο VO <N »—H Ό r"H i1 1 H 荽 Ί (N (Ν ^Η r—Η ο ^-Η 〇〇 \〇 $ C\ r—K 寸 (Ν (N CN (N 寸 (Ν 〇s rn 00 q — 單體％ 98.04 98.05 ί 97.65 1 1 97.41 1 97.18 | 97.12 | 97.15 1 97.04 96.55 96.64 94.62 94.67 於360 nm 下之混濁 度 0.169 0.161 0.162 1 0.175 J 0.176 j 0.202 | 0.196 0.195 0.203 0.195 < 濃度 (mg/mL) 173.3 165.4 2； 2： 水分之 KF% ΓΟ -^r < 重組時 間(分鐘) 00 in >10* 1 m in iTi 00 〇\ 寸· 00 rn 〇\ in si opal，無色 si opal，無色 碟 13 & 碟 13 a o 碳 13 Dh 碟 13 a ^s3 磯 13 Oh Ο & (Ν τ-Ή <N (N CN r—Η (Ν T—^ (N 時間點/ 溫度 ο 'Ο 鳑ο ^ p 爾〇 \〇 ^ • P 12週， 30°C 12個月， 30°C 132080.doc -84- 200909005
酸性峰％ 主峰％ 鹼性峰％ 19.4 69.5 11.1 20.7 62.9 16.4 N/A N/A 23.2 57.7 19.2 22.8 58.8 18.5 N/A ί $ Τ vs W Ϊ~ GO RS007-001 33791 RS007-001 33732 RS007-001 34124 1 RS007-001 33852 REF025 (RS007-001) 33590 LMW% I I 0.07 0.06 1 0-14 | 〇_13 1 0.15 0.14 1 1 1 1 0.10 0.10 聚集體％ ! 0.78 0.77 Τ·_ H 00 o 1 0.97 0.97 0.89 ! 1 0.88 1.14 1.12 審 Ί (N r-H CN | 2.25 | 2.24 I 2.76 2.76 3.28 3.28 4.06 4.01 單體％ 98.04 98.05 96.80 96.82 96.12 96.13 95.83 95.84 94.71 94.77 於360 nm 下之混濁 度 0.169 0.161 | 0.185 | | 0.184 | 0.187 0.189 0.228 0.217 0.257 0.255 濃度 (mg/mL) 173.3 165.4 N/A 165.6 151.5 177.3 175.2 i N/A 水分之 KF% ΓΟ N/A N/A 1 N/A N/A 重組時 間(分鐘) 00 in On ，·ι in IT) 外觀 澄清 澄清 澄清，sl opal 澄清，sl opal v. sl opal，無 色 碳 〇 > opal，無色 opal，無色 opal，無色 opal，無色 小瓶 <N CN CN H CN 時間點/ 溫度 ο 2週， 40°C 4週， 40°C 8週， 40°C 12週， 40°C 132080.doc 85· 200909005
• •载苯 酸性峰％ 主峰％ 鹼性峰％ 20.8 63.5 15.6 20.5 64.4 15.2 Ν/Α 22.4 63.3 14.3 23.2 62.2 14.5 J Ν/Α Ν/Α 2 $ τ « oo RS007-001 33791 RS007-001 33626 RS007-001 33670 REF025 (RS007-001) 33608 REF025 (RS007-001) 36412 LMW% 〇 Ο r—Η Ο 〇 1 1 1 1 0.10 Ο Ο Ο r—^ t—K Ο 聚集體％ 〇 ο Ον Ο 0.77 0.64 m Ό Ο 0.70 ο ο r^i Ο ο :藻糖、24 mM組胺酸、0.08% PS-80 t積 荽 Ί 寸 寸 iTi (Ν cn (N (Ν cn r—^ 00 <Τ] 單體％ 98.03 98.05 97.86 97.89 98.17 98.16 f 97.80 97.82 97.39 1 197.38 於360 nm 下之混濁 度 0.152 _ 0.150 0.142 0.140 0.156 0.151 0.160 1 0.171 Ν/Α 濃度 (mg/mL) 167.2 157.4 I Ν/Α 180.0 183.4 Ν/Α 1 I Ν/Α 水分之 KF% 寸 in Ν/Α N/A Ν/Α Ν/Α ^ fI 翻 a ^ §窆 — 糾 ，玫 ii oml rid 开凝 单爷 ^ Q 41 iltml σ · W\ 〇 〇 重組時 間(分鐘) in Ο ο6 ΟΝ 卜 Os 寸 'Ο rn Ν/Α 外觀 澄清 澄清 ν· sl opal，無 色 V. sl opal，無 色 opal，無色 opal，無色 opal，無色 opal，無色 Ν/Α 小瓶 CN t—Η (N r-H (Ν ίΝ η (Ν 時間點/ 溫度 ο Ρ in 寸 Ρ tn 00 12週， 5°C 12個月， 5°C丨 132080.doc -86- 200909005
酸性峰％ 主峰％ 鹼性峰％ 20.8 63.5 15.6 20.5 64.4 15.2 N/A — Ν/Α I Ν/Α N/A N/A ί $ τ « 含£ RS007-001 33791 RS007-001 33758 RS007-001 33506 RS007-001 33775 REF025 (RS007-001) 33586 REF025 (RS007-001) 36412 LMW% 0.07 1 0.06 Lal3.. 0.13 1 ο ΓΟ Η Ο 0.12 m ο 0.10 0.10 o o 聚集體％ 0.77 0.76 0.82 J 00 ο 00 ο 0.80 0.87 0.87 0.95 0.97 vo (N \q 荽 Ί 寸 i 寸 丨 2.19 | 2·!8 1 2.62 2.66 1 1 3.22 1 3.29 j 3.74 3.74 6.74 單體％ 98.03 98.05 96.87 96.88 96.44 96.41 95.79 1 95.71 95.21 95.19 91.45 91.53 於360 nm 下之混濁 度 0.152 1 0.150 0.177 | 0.173 0.219 0.200 0.227 0.240 0.255 0.268 N/A 濃度 (mg/mL) 167.2 1 I _1 157.4 N/A Ν/Α ι_ Γ 丨Ν/Α N/A N/A 水分之 KF% 寸 N/A Ν/Α Ν/Α 1 N/A N/A 重組時 間(分鐘) 〇\ 〇〇 CN 〇 α\ 00 Ι> 00 寸 Ο in cK 卜 N/A 外觀 澄清 澄清 sl opal，無色 slopa卜無色1 opal，無色 opal，無色 opal，無色 1 opal，無色 opal，無色 opal，無色 N/A 小瓶 (N <Ν (Ν (N <N (N 時間點/ 溫度 〇 3週， 30°C 6週， 30°C 9週， 30°C 12週， 30°C 12個月， 30°C 132080.doc •87- 200909005 f
酸性峰％ 主峰％ 鹼性峰％ 20.8 63.5 15.6 20.5 64.4 15.2 < i 28.9 49.9 21.1 00 ΓΟ rn On (Ν ^―' 1 it τ « in RS007-001 33791 RS007-001 33732 RS007-001 34124 RS007-001 33852 REF025 (RS007-001) 33590 LMW% 〇 〇 〇 ο in ο 寸 ο 1 1 I 1 o o 聚集體％ 〇 〇 〇\ 00 〇 (Ν 〇\ Ο 〇\ 寸 (Ν Ο cn <N 00 T—H r—H Ί 寸 F—Η 寸 Η r—H 寸 rn 芩 rn IT) 00 CN — ΙΤί OS vo ON 單體％ 98.03 98.05 95.50 95.41 93.80 93.91 92.75 ! 92,70 90.63 90.67 於360 nm 下之混濁 度 0.152 0.150 0.239 0.245 0.295 0.301 0.424 0.428 0.546 0.580 濃度 (mg/mL) 167.2 157.4 義 164.1 1 [175.0 173.2 (效 能 =122.4%) 1 171.7 水分之 KF% 寸 義 1 1 < 重組時 間(分鐘) in ON 00 〇 (Ν (Ν ίΝ 卜 VO o On 卜 Os 女 澄清，si opal 澄清 ’ si opal si opal，無色 sl opal，無色 碟 〇 <s3 m 13 gn iv. opal，無色 1- V. opal，無色 七 (N τ—Η (Ν H (Ν (N »—H <N 時間點/ 溫度 〇 "ρ 較Ο (Ν寸 ，P 較〇 寸寸 "P 酹〇 00寸 12週， 40°C 132080.doc -88 - 200909005
酸性峰％ 主峰％ 鹼性峰％ CNCN^O 0s! 〇^\ T-H 21.0 63.4 15.6 < 22.1 65.3 12.5 22.6 63.7 13.7 i Cr；<N On V〇 i-H 21.9 66.2 11.9 20.9 65.2 13.9 20.2 65.6 14.2 S-i If RS007-001 33791 RS007-001 33626 RS007-001 33670 REF025 (RS007-001) 33608 REF025 (RS007-001) 33633 REF025 (RS007-001) 36188 S 〇 g d 寸 H o 寸 « < ο I 1 I I g o g o 1 1 1 1 1 1 1 1 ••°» 韜 rn c> o o ο 〇\ ο 00 Ο o 00 VO o ON κη 〇 CTs d 〇 〇 ，糖、24 mM組胺酸、0.08% PS-80 二r勿 g g r"H (N (Ν ί—Η S S (N Ov r—H <N m (N (N 鹳 98.11 98.11 98.00 98.00 98.38 98.39 98.04 | 98.02 98.21 98.20 98.13 98.09 於360 nm 下之混濁 度 0.186 0.153 0.138 0.149 0.146 0.163 I 0.160 | 0.158 0.168 1_ 0.164 0.155 0.154 濃度 (mg/mL) 119.3 124.5 154.7 (效能 =133%) 150.7 麵 147.9 155.2 145.6 142.9 cn i 麵 麵 麵 SS B S.n ，玫 BftL nri 件费 贵咖1 5° 重組時 間(分鐘) oo (N ΓΟ 卜 (N 寸 (Ν ο rn 卜 寸· rn (N ON cn 寸 cn 卜 澄清 碡 1/93 o ^oi > 难 Ι^ι > opal，無色 opal，無色 -¾] o opal，無色 opal，無色 opal，無色 opal，無色 opal，無色 (N CN t Η CN <N (N <N Λβί彐寸· 〇 時間點/ 溫度 o P 寸 Ρ WI οο 舉^ 叹CJ 學Vi CN 132080.doc •89- 200909005 / \
酸性峰％ 主峰％ 鹼性峰％ 19.2 69.2 11.6 21.0 63.4 15.6 N/A N/A N/A N/A 22.1 63.7 14.2 22.2 63.6 14.2 21.0 62.6 16.5 21.0 61.7 17.4 if RS007-001 33791 RS007-001 33758 RS007-001 33506 RS007-001 33775 REF025 (RS007-001) 33586 REF025 (RS007-001) 33633 REF025 (RS007-001) 36188 LMW% 0.08 0.08 1 1 i 0.18 1 1 1 1 0.12 I 1 1 1 1 1 1 1 1 t 1 1 1 1 1 聚集體％ 0.73 1 0.74 0.65 1 0.74 0.64 I 0.64 | | 0.71 I 1 0.65 I 0.27 0.27 0.35 0.39 0.94 0.94 Ί 1.08 1.08 1.38 1 1.56 1 1-59 1-94Ί [1.80 | 2.41 2.41 3.03 3.01 2.99 2.98 單體％ 98.11 98.11 97.97 97.58 97.80 | 97.76 97.23 97.55 | 97.33 97.32 96.63 96.60 96.07 96.08 於360 ran 下之混濁 度 0.186 0.153 | 0.176 1 0.141 1 0.195 1 I 0.175 j 1 0.188 | 0.204 0.188 0.180 1 0.252 0.259 0.218 0.203 濃度 (mg/mL) 119.3 124.5 N/A N/A N/A N/A 144.6 143.9 140.8 145.0 水分之 KF% 卜 rn N/A N/A N/A N/A N/A N/A 重組時 間(分鐘) 00 (N rn rn (N m rn oo rn cn rn (N (N rn o 寸 外觀 澄清 澄清 Islopa卜無色| ·ί〇3 g- 1 opal，無色 | 1 opal，無色 | 1 opal，無色 | 1 opal，無色 I 1 opal，無色 | 1 opal，無色 opal，輕微黃 opal，輕微黃 色 opal，輕微黃 色 opal，輕微黃 小瓶 (N <N r*H CM CN 1-H (N (N (N 時間點/ 溫度 〇 3週， 30°C 6週， 30°C 9週， 30°C 12週， 30°C 6個月， 30°C CN 132080.doc -90- 200909005
酸性峰％ 主峰％ 鹼性峰％ 19.2 69.2 11.6 21.0 63.4 15.6 義 _ 23.6 58.7 17.7 vn (N ro d cK S (Ν a — ί ί υ f RS007-001 33791 RS007-001 33732 Γ RS007-001 34124 1_ RS007-001 33852 REF025 (RS007-001) 33590 LMW% 〇 Ο (Ν Ο (Ν Ο 00 ο Τ—Η Ο 1 1 1 1 Ο τ-Η Ο g Ο 聚集體％ Ο Ο 卜 Ο ο ο (Ν 00 d 00 ο <N 〇 m (N 〇 ο ο 二聚物％ g 00 00 t-Η 1丨丨< CN ο CN rn <N CO 卜 (Ν rn 卜 (Ν ΓΟ 單體％ 98.11 98.11 97.29 1 97.32 96.70 ：96.72 I 1_ 96.63 96.66 95.69 1 95.70 於360 nm下之 混濁度 1- ! 0.186 1_ 0.153 0.198 0.171 0.195 0.185 0.228 0.202 0.225 0.220 濃度 (mg/mL) 119.3 124.5 1 149.7 146.5 145.5 (potency =144%) 148.0 水分之 KF% 1_ 卜 ΓΛ ί i ζ 重組時間 (分鐘） 00 (Ν rn ΓΛ (Ν’ 00 O rn 寸 ^Τ) (Ν 外觀 澄清 澄清 澄清，si opal， 澄清，sl opal 13 <s3 &墉 Ια ：sl opal 5 i無色 13 D, 〇 <e] 13 13 & ·ί〇3 Cu Ο P ο Ϊ τ·^ (Ν ί-Η CN τ—Η (Ν 1-H (Ν <Ν 時間點/ 溫度 ο ^ ρ 較Ο (Ν寸 "ρ "〇 赠〇 00寸 12週， 40°C 132080.doc -91 · 200909005 實例3 如下文所證明，成功地冷凍乾燥具有稍有不同之初始蛋 白質濃度之三種調配物且於5°C下儲存6個月時顯示優良穩 定性。於40°C下儲存8週時，此等調配物之穩定性與先前 所見之穩定性可相當。於5°C下儲存6個月之預冷凍乾燥之 調配物及於5°C或25°C下儲存一週之重組溶液的穩定性亦 為優良的。40 mg/mL之起始濃度顯示比其他調配物略佳之 穩定性及較佳之重組特徵。然而，此調配物之重組允許於 1 5 0 mg/mL下存在1 mL之可傳遞劑量。 材料 下表列出材料及其來源。 表22 物品 製造商 塊狀那他珠單抗 Elan (77.4 mg/mL) 蔗糖(96 mg/mL) Elan 1%PS80 Elan 60 mM組胺酸 Elan 6 mM組胺酸 Elan 0.22微米乙酸纖維素濾紙 Corning 5 cc小瓶 Kimble Grey Butyl，20 mm ;床乾塞子，2槽 Kimble 20 mm拉開铭蓋 Wheaton 表23 _Μ_ _HPLC_ HPLC —
Uv-Vis光譜光度計 ^
Karl Fischer庫侖滴定器（Coulometric Tkrator) _2H|t_ 那他珠單抗 用於此研究之那他珠單抗與用於研究3 A及研究3B之那 132080.doc -92- 200909005 他珠單抗相同（AQS-2 190)。用於此等研究之那他珠單抗自 由Biogenldec供應之那他珠單抗製備。在用於此調配物研 究之前，移除已經調配且裝入小瓶之此材料中所包括之聚 山梨醇酯80。簡言之，使材料經受透濾至低離子強度、高 pH值（10 mM tris、1 0 mM NaCl，pH=8.5)緩衝劑中。在此 等條件下將材料結合於DEAE-瓊脂糖管柱上且接著使用1 0 mM磷酸鈉、140 mM NaCl(pH 6)溶離。接著，將管柱溶離 液透濾至6 mM組胺酸（pH 6)中且濃縮至70 mg/mL與100 mg/mL之間，隨後進行進一步調配。 化學品及試劑 所有用於此研究之化學品及試劑（除有註釋外）均購自 VWR且為ACS級或更佳等級。當可得到USP級試劑時，將 其用作賦形劑。聚山梨醇酯80係購自Sigma(目錄號 P6474);且源自植物並具有低過氧化值。 調配物 下列調配物係藉由將賦形劑及活性物質之儲備溶液稀釋 至所需濃度來製備。所有調配物均為pH 6。 表24 :研究4調配物參數 調配物ID 預冷凍乾燥濃度 目標重組濃度 4089-1L 40 mg/mL Ab、24 mg/mL嚴糖、6 mM his、0.02% PS80 150 mg/mL Ab、90 mg/mL蔗 糖、24 mM his、0.08% PS80 4089-1Μ 45 mg/mL Ab、24 mg/mL蔑糖、6 mM his、0.02% PS80 4089-IN 50 mg/mL Ab、24 mg/mL蔑糖、6 mM his、0.02% PS80 縮寫：Ab =抗體，his =組胺酸，PS80 =聚山梨醇酯80。 132080.doc -93- 200909005 方法 調配物之製備 將樣品調配物無菌過濾且如所指示填充至無菌玻璃小瓶 中。將用於預冷凍乾燥之分析之所有樣品以〇5 mL填充至 3 cc小瓶中，用塞子塞住且蓋上蓋子。將待冷凍乾燥之配 方以4.0 mL填充至5 cc Kimble小瓶中。 冷凍乾燥循環 在冷凍階段期間，首先將含有樣品之小瓶冷卻至5它且 保持30分鐘。接著，經2〇分鐘使溫度勻變至巧它且於巧它 下保持60分鐘。對於冷凍之最後階段而言，經45分鐘使小 瓶勻變至-40。。’於此溫度下保持2小時，其中最後2〇分鐘 施加100 mT〇rr真空。接著，當於1〇〇 mT〇rr之真空下經2〇 min使溫度達到·25它時執行第—乾燥且於彼溫度下保持b 小時。經ίο小時使存放溫度緩慢勻變至2(rc以於i〇〇 下開始第二乾燥且接著於2〇。〇下保持6小時。 研究設置 將預冷凍乾燥之液體及冷凍乾燥之餅狀物的小瓶置於 5 C及40 C下。於2、4及8週時檢定於4〇。(：下儲存之樣品。 於4週及6個月時檢定於5t：下儲存之樣品。於4週時間點， 使來自各儲存溫度之4個小瓶重組，之後將2個小瓶置於 5°C下且將2個小瓶置於25°Ct，歷時丨週之重組穩定性。 在預冷凍乾燥及冷凍乾燥後之零時間檢定所有調配物。 檢定 藉由下列方法檢定樣品且結果呈現於表27_3〇中。並非 132080.doc -94- 200909005 檢疋均在所有時間點執行。除用於預冷束乾燥及冷〉東 乾燥後之樣品之零時間點外，各檢定對相同兩個小瓶進行 取樣。 根據目視檢查獲得之外觀 對所有樣品進行目視檢查且記錄其外觀。檢查冷凍乾燥 之餅狀物之顏色、均勻性、穩固性及回熔證據。檢查液體 及重組樣品之顏色、澄清度及微粒之存在。 殘餘水分及重組時間 於零時間點，使用Karl Fiseher庫余滴定器檢定冷;東乾燥 之餅狀物之殘餘水分。藉由添加適當體積之DI水，接著平 緩旋轉來量測重組時間。記錄餅狀物完全溶解之時間。 濃度 使用那他珠單抗安慰劑將樣品稀釋至i mg/mL，藉此來 里測所有樣品之濃度。使用Varian Cary 3〇〇Bi〇及1〇爪瓜光 程比色管，以200 nm/min自400 nm至250 nm掃描UV吸光 度。記錄極大值時之吸光度且藉由將該值除以1 498(那他 珠單抗之吸光係數）並經適當稀釋進行調節來測定濃度。 混濁度 使用10 mm小容積比色管（starna CeUs Inc•，目錄號 16.160-Q-10\Z20)量測純樣品自 300 nm 至 4〇〇 nmi 吸收。 報導於360 nm下記錄之值。 尺寸排阻層析 藉由尺寸排阻層析測定樣品中單體、高分子量聚集體、 二聚物及低分子量物質之量。簡言之，將樣品以純形式負 132080.doc -95- 200909005 載於管柱上且調節負載體積以允許管柱上質量為約400 叩。亦將參考材料負載之質量調節至可相當。於215 nm& 280 nm下記錄備測，然而主峰於215 nm下超出量表，因此 使用280 nm迹線進行計算。結果至現於表27_3〇中。 結果 預冷凍乾燥之調配物
表27-30含有對於所有調配物戶斤記錄之結目視檢查 後，所有調配物均呈現無色及輕微乳白色，而無任何可見 微粒▲。於5。(：或㈣下，外觀並不隨時間變化。無樣品在 分析變化中顯示蛋白質濃度之變化且未觀察到傾向。如藉 由於⑽叫之吸光度所量測’所有調配物的混濁度均： :於5 CT^月後略有增加。贼預冷;東乾燥之樣品顯示 、於所有—種調配物而言，混濁度均隨時間增加。 監測所有調配物之二聚物、高分子量(聚集體)及低分子 量物質之形成。結果在表格及圖17_19中展示。 調配物分子置物質之形成。預冷象乾燥之 妒 ’咼分子量物質之形成似乎直至儲存4週後才開 始。於8週時，高分子量物質之少量增加較明顯。 人C下在儲存6個月之任何調配物中高分子量物質之 : = 變化。此資料在附錄中展示，但並不在此處用圖 圖18展不於40 C下低分子量物 在助„ . 負之形成。在於401下儲 存期間’存在形成低分子量物 里观貝之明確傾向。又 置物質之形成似乎以比高分子看物 "子 刀予里物質之形成快之速率進 132080.doc -96- 200909005 仃’使此成為液體樣品中之重要降解路徑。 對於5°C下儲存之柹σ 丄 之百分比經6個月時期低分子量物質 二白刀比存在極小變化 此處用圖矣附錄中展示，但並不在 用圖表表示。所有預^ 之初始含量、物均自約〇.11% 刀郊s里達到6個月時 抒定” ”之〇·18/〇。Bl0_ec已顯示用於 此杈疋之ϊ化下限為〇2 入曰^ & 關於傾向貝訊，僅報導低於彼 3重之值。 ( % 9展不於赋下由高分子量物質及低分子量物質之形 成引起之總㈣損失45t：下’單體百分比基本上益變 化。此將表明此等調配物中之任一者均將以預冷來乾燥之 調配物形式於2抑下適當地穩定儲存多達6個月。 藉由陽離子交換層析分析所選樣品。在所有情況下，结 果均顯示向更具酸性物質(脫酿胺)位移，其中基於時間及 溫度進行儲存。各種預冷凍乾燥之調配物不存在差異。因 離子強度及某些緩衝劑物質影響 為脫醯胺一般受pH值、 所以此結果將為吾人所預期。此資料在以下表格中展示。 所有一種預冷/東乾燥之調配物均顯示類似於研究3 a及 3B中預冷凍乾燥之調配物的結果。 冷凍乾燥之調配物 下表25展示經測試以達到150 mg/mL之蛋白質濃度之重 組體積。接著，對於研究之其餘部分使用經測定最接近目 才不/辰度之重組體積。在各樣品完全溶解後，檢查濃度。用 於4089-1L、4089-1M及4089-1N之重組體積分別為〇 85 mL、1·〇 mL及 1.1 mL。 132080.doc -97· 200909005 表25 :重組體積 調配物 小瓶 重組體積(mL) 决度(mg/mL) 4089-1L 1 0.8 2 0.9 —---/ 143 9 3 0.85 151 8 ~ 4089-1Μ 1 0.8 168 2 2 0.9 162.5 3 1.0 158 5 4089-IN 1 Γ 0.9 179.4 2 3 1.1 146.1 159.9 154.4 153.5 1.1 160.9 156.8 下表26展示自重組樣品中移除】社劑量之能力。此僅對 於4〇89-1N有可能，其係们」社重組。此等資料表明為 於15〇 mg/mL下產生i mL之最終可傳遞體積，4 mL之填充 體積以及50 mg/mL之蛋白質濃度將為必需的。 表26 : 1 mL劑量之評估 調配物 重組體積(mL)_ im 小瓶 移除之艘穑(mL) 4089-1L 0.85 21標準規格，比吋 1 0.75 2 0.75 a 〇r 4089-1M 1.0 21標準規格，1½对 1 U.〇5 0.9 2 Γ 0.8 4089-1N 1.1 20標準規格，1 %叫· 1 U.o j 1.0 2 1.0 3 1.0 穩定性 目視檢查後，所有調配物似乎均具有可接受之冷凍乾燥 之餅狀物，從而驗證4 mL體積可成功地冷凍乾燥於5 mL小 瓶中。重組後，所有調配物均呈現無色及輕微乳白色，而 132080.doc -98- 200909005 無任何可見微粒。於5它或4(rc下，外觀並不隨時間變 化。無樣品在分析變化中顯示蛋白質濃度之變化且未觀察 到傾向。如藉由於36〇 nm下之吸光度所量測，所有調配物 之混濁度均顯示於5〇c下6個月後自約〇.〇99_〇 1〇4至〇111_ 0’ 116略有增加^ 4〇它預冷凍乾燥之樣品顯示所有調配物之 混濁度均隨時間増加。 如藉由Karl Fischer庫侖滴定器所量測，冷凍乾燥之餅狀 物之水分百分比在4·3至5.6之範圍内。4089-1L、4089-1M 及4089-1>1之平均水分百分比分別為45、5.2及4.9。此等 樣品中之水分相對較高。 此研究之重組時間均低於丨7分鐘。圖4展示於4(rc下之 重組時間。似乎於40〇c下儲存時有略增加重組時間之傾 向。具有較高起始蛋白質濃度之樣品亦顯示較長重組時間 之傾向。此亦在早期研究（研究A及B)中表明。 監測所有調配物之二聚物、高分子量聚集體及低分子量 物質之形成。表格結果在下列表格中展示a 圖5展示於4(TC下高分子量物質之形成。在於此溫度下 儲存期間’存在形成高分子量物質之明確傾向。聚集體之 形成速率似乎在調配物4〇89-lL中略微較慢。在不希望受 理論束缚之情況下，此可歸因於起始調配物之較低蛋白質 /辰度或略微較高之蔗糖與蛋白質之比率。 於VC下，在儲存6個月之任何調配物中高分子量物質之 3虽均無變化，此顯示各種時間之Hmw〇/0。 圖6展不於40。〇下低分子量物質之形成。與展現低分子 132080.doc -99- 200909005 量物質之形成快速增加之預冷凍乾燥的樣品相反，冷凍乾 燥之樣品經8週未顯示任何變化。對於5t：下儲存之樣品而 吕，經6個月時期沒有任何低分子量物質之百分比變化。 此資料在附錄中展示，但並不在此處用圖表表示。 圖7展示於40t下由高分子量物質及低分子量物質之形 成引起之總單體損失。於5t：下，單體百分比基本上無變 化。此將表明此等調配物中之任一者均會以冷凍乾燥之調 配物形式於2 - 8。(：下適當地穩定儲存多達6個月及更長時 間。 、 樣品亦藉由陽離子交換層析分析。在所有情況下，結果 均顯示於40。(：下8週後向更具鹼性物質位移。在檢定變異 性内有極小的電荷分布變化。所選樣品亦顯示於該時間點 略向更具酸性物質位移。此資料在以下表格中展示，在最 後一欄中以酸性峰％、主峰％及鹼性峰％表示。 重組之穩定性 於5C或40C下儲存4週後，使樣品重組且接著置於5它及 25t下經1週之重組穩定性。於初始時間點及於1週時執行 測試。附錄中之表格包括對所有調配物所記錄之所有結 果。經目視檢查，所有調配物均呈現無色及輕微乳白色。 所有樣品均呈現不含微粒，但有兩種並非如此。含有”蓮 鬆白色微粒之兩個小瓶在重組之前於4〇。〇下儲存且接著 於25它下儲存1週。分析員可能在打開此等小瓶進行初始 時間點測試時污染小瓶。無樣品顯示在分析變異性内的蛋 白質濃度變化且未觀察到有任何傾向。於5<t或25。〇下i週 132080.doc -100- 200909005 後，所有調配物的混濁度均未顯示在分析變異範圍内的變 化，其係藉由於360 nm下之吸光度所量測。 旦監測所有調配物之二聚物、高分子量（聚集體）及低分子 里物質之形成。結果展示於以下表格中。經重組且於5它 5、下放置1週後’任何調配物中的高分子量物質之含 量均無變化。低分子量物質之含量似乎在重組後於饥下 诸存夺略有增加，並於5(：重組儲存後基本上仍舊相同。 此等結果顯示所有調配物若經重組且接著於5t或25。(：下 放置1週時會保持穩定。 = 下儲存之樣品的重組穩定性亦藉由陽離子交換層 析刀析。所有二種調配物之結果顯示1週後更具酸性物質 略有增加，無W乎其在重組前之餘存溫度。在重組之前已 於5 C下儲存之樣品亦顯不儲存}週後略向更具驗性物質位 移。在重組之前於4(rc下儲存之樣品顯示於5t：下儲存1週 後較少向更具驗性物質位移。此等變化極小且檢定變異性 的跡象更勝於蛋白質之實際變化。 結論 上述研究4已顯示4 mL體積可成功地冷凍乾燥於5 Kimble小瓶中且具有可接受之餅狀物結構。 經測定以給出150 mg/mL之目標蛋白質濃度之重組體積 對於4089-1L為0.85 mL(40 mg/mL預冷;東乾燥之濃度）、對 於4089-1M為1.0 mL(45 mg/mL預冷凍乾燥之濃度）且對於 4089-1N為1.1 mL(50 mg/mL預冷凍乾燥之濃度）。 為能夠傳遞1 mL劑量之唯一調配物，顯示M m 132080.doc -101- 200909005 之最小重組體積。此等結果可用於指導關於填充體積、總 固體量及重組體積所發展之最終說明。一般而言，具有較 低初始蛋白質濃度及較高蔗糖與蛋白質之比率之樣品顯示 較短之重組時間及關於單體損失略佳之穩定性。根據填充 體積及重組體積’此表明較低最終蛋白質濃度可產生較理 想產物。 重組穩定性顯示所有調配物於5它及25乞下儲存1週後為 穩定的，而無單體損失。 所有二種預冷凍乾燥之調配物均於5它下經6個月保持穩 定。然而’於40。(：下儲存後，所有調配物均顯示增加低分 子量物質之量之傾向。低分子量物質之形成似乎在假定其 快速形成速率之情況下成為液體樣品中之重要降解路徑。 冷凍乾燥之調配物亦證明於rc下穩定多達6個月。於 4〇°C下儲存後，存在增加高分子量物質之量之明確傾向， 而低分子量物質之量仍舊相同。此顯示高分子量物質之形 I成在冷凍乾燥之樣品中為較重要降解路徑。殘餘水分含量 及叙糖與蛋白質之比率之其他最優化應改良穩定性。 132080.doc 200909005 \ ®w-^fnm ς.ο:琛at苯欤蒎冢:麵m趔 ooo-sd %so^毽建鹿WS 9 ,窭难口S/SXU 寸(Ν,^_·#^^Ίε/ω)ε 0 寸 酸性峰％ 主峰％ 鹼性峰％ 0>__〇N__rj ^ ^ 00 ^ ^ (N ON ^ 寸寸00 1 On vn v〇 ί—; <Ν 00 o t> ^ (N ^ ^ ^ ^ t- Ο ΓΛ (N v〇 — ν〇 ^―< ri (Ν ν«ο — u ^ Γτΐ REF025 (33849) REF025 (33582) <N 〇 g S s $ 0¾ W REF025 (33838) REF025 (33851) C/3蛛 1—Η Ό CN vn <N in 〇 00 r—^ 00 s 〇 o d ，· t> d d h-3 韜 ΓΊ Ό rp (Ν 00 1—Η 〇\ 〇 〇 o o o ο ο o o Ί CN >'"< > H KT) r—H ON H r-H (Ν Η ο rn cn in (N in (N s jn jn S 〇\ m m •"丨叫 零"Η 〇 amt olBp 00 σί 〇\ ΓΛ 〇\ 字 00 00 a\ § ^ 於360: 下之湛 度 s s s § s o o o o ο d 〇 Ο o 3 铡S Oj 寸 o rn Τ—Η On 'Sb o o Η 1—Η r-^ 寸 〇 «] ^3 <s3 ffi VO #. 41 #. 碟 碟 • • • #- 15 a o 13 Oh 〇 13 a 〇 13 ο & 〇 13 a 〇 15 a ο 13 a o 13 Oh 〇 "w ψ7λ "μ "w 节 η 妹 ΊΆ 七 時間點/ 溫度 o wf <N P o 寸 Ρ ο 00 40°C π Ρ -103· 132080.doc 200909005 / 經製備： 測試起始日期：0.5 mL填充量 酸性峰％ 主峰％ 鹼性峰％ v〇 IT) ON oi 寸· Η α — in (Ν rn '―1 寸寸— η勹m 5沄& < 1 26.2 60.8 13.0 26.3 60.6 13.1 命® 2 ^ -CT> ^ 〇 2. 泛t REF025 (33849) REF025 (33582) IT) s CN 〇 £ S 9 ^ REF025 (33838) REF025 (33851) LMW% Ο 〇 ΓΛ 〇 ON 00 — (Ν m 〇 00 t '·Η Ο Ό Ο 聚集體％ m νο ο 〇 〇 00 寸 ο ο τ-Η r—H 吞 ο 卜 寸 ο g cA CL, s c5 a ， 窭 h-3 1 a 蛛 二聚物％ m CN Τ—Η ψ ·Η 00 T—Η (Ν (Ν <Ν (Ν r-H (Ν r-H in CN 單體％ 98.02 _i 97.66 97.67 93.41 93.64 90.14 90.46 98.09 98.11 於360 nm 下之混濁 度 0.041 0.058 0.063 0.081 0.079 0.108 0.161 0.066 0.068 濃度 (mg/mL) cn Ο <Ν Os (N o o τ-Η Ο 外觀/pH值 si opal，無色 /6.07 極其si opal，無 色 極其si opal，無 色 極其sl opal，無 色 極其sl opal，無 色 極其sl opal，無 色 極其sl opal，無 色 極其sl opal，無 色 極其sl opal，無 色 T-H <N <N · < (Ν (N 時間點/ 溫度 Ο 寸 鳑Ο 寸寸 "p 窗〇 oo寸 π P Ό 132080.doc •104- 200909005
經製備： 測試起始日期：0.5 mL填充量 酸性峰％ 主峰％ 鹼性峰％ 21.7 67.6 10.8 ^ 00 寸卜r·^ 寸寸> 9气ΙΟ N/A N/A 26.5 60.6 13.0 。寸 β 二 H csj v〇 — ω ί xn w REF025 (33849) REF025 (33582) REF025 (33610) REF025 (33838) 1 REF025 (33851) LMW% _1 0.12 0.79 0.80 4.60 5·27 1 8.26 | 8.86 0.19 0.19 聚集體％ 0.63 0.43 0.43 0.55 0.48 ^L13^1 寸 0.48 1 ! 0.48 磨、6 mM組胺酸及0.02% PS-80 M荽 1.24 1.17 1.17 1 ί·25 1 | 1.22 I 丨 1-42 1 1.40 1.26 1.25 1 單體％ 98.01 97.61 97.60 93.60 93.04 89.19 88.61 98.08 98.08 於360 nm 下之混濁 度 0.053 0.062 0.062 0.087 0.084 | 0.118 | 0.128 0.072 0.067 濃度 (mg/mL) 52.6 55.9 54.5 55.8 55.9 | 55.3 53.9 51.9 52.3 B k °4· 外觀/pH值 I -1 ! sl opal，無色/6.08 極其sl opal，無色 極其sl opal，無色 極其sl opal，無色 極其sl opal，無色 極其sl opal，無色 極其sl opal，無色 極其sl opal，無色 極其sl opal，無色 小瓶 | τ··Η τ—Η (N CN r—^ (N T—< (N 時間點/ 溫度 Ο 2週， 40°C 4週， 40°C 8週， 40°C π P m ^ VO 132080.doc •105- 200909005 ο 9Hd - 08-sd%80O^^^^sst^ :¢8 嬤 H 黎 Ί£ s-o-'of-f^¾ 崩一^IaJsv8O阳 Is 寸ζ ,鏨褪 ιέ— 〇6 ,辉蚌 #^-ΊεΫ 〇ς! _ 酸性峰％ 主峰％ 鹼性峰％ 21.1 65.1 13.8/ 寸—νη —〆CO (NVO — 寸oc »-H ίη ΓΛ (N Ό 一 19.7 63.5 16.9 20.1 68.3 11.6 20.2 67.4 12.5 20.2 67.2 12.5 On ^ O cnoooo cs…— 21.8 60.0 18.2 OOOCS ' iri rn (NO — O卜04 ^ in rn ω雜贫+’° REF025 (33709) 1 1 1 REF025 (33582) REF025 (33610) REF025 (33838) REF025 (33851) LMW% 0.14 0.13 1 m V·— o 0.21 1- 0.23 0.24 0.20 0.16 0.17 0.15 0.16 髅 崃 S4 0.61 0.61 0.61 0.60 1 ! 0.60 0.63 0.63 0.69 0.67 0.59 0.59 二鈐 1.38 00 cn r— cn 2.19 2.18 2.63 2.60 3.39 3.37 卜 1—^ 1.47 韜 ssi- 1 97.87 97.87 97.89 96.99 1 97.00 96.50 96.56 95.76 95.78 97.83 97.83 於360 nm 下之混濁 度 0.102 0.099 _i 0.103 0.109 0.111 0.136 I 0.135 0.156 0.155 0.113 0.113 Ak (mg/mL) 164.8 164.5 153.7 161.9 157.2 159.2 159.1 166.4 164.1 153.7 152.3 — 寸· ro — N/A N/A N/A N/A (N CN (N fN 寸 rn — rn On rn 卜 uri 00 rn ON oi m 〇< 寸 πβΡ sl opal，無色 _1 sl opal，無色 sl opal，無色 sl opal，無色 sl opal，無色 sl opal，無色 sl opal，無色 sl opal，無色 sl opal，無色 sl opal，無色 sl opal，無色 小瓶 cs m (N (N CN CN 時間點/ 溫度 Ο 2週， 40°C \o 132080.doc •106- 200909005 。05。蟑》1?寸你黎卜0。0寸衾柘》滅侧^:±1^漤域侧 Ιε< .#s\
酸性峰％ 主峰0/〇 鹼性峰％ 20.2 67.4 12.5 20.2 67.2 12.5 23.0 66.4 10.6 22.4 69.0 8.6 < 20.6 69.6 9.8 20.3 70.2 9.5 SEC參考 標準(平均 面積計數） iTi (N 〇 g S 9 ^ W w REF025 (33604) ΙΛ) CN 〇 g S 0¾ W REF025 (33604) LMW% ! 〇 Ο (N 〇 Ο 〇 »—H (N 〇 as <N o 卜 CN 〇 聚集體％ s o cn Ο § o § ο cn ο m 〇 in o in 〇 >1 # m ^s〇 CN (Ν § <N Ό in (Ν νο (N CN (N Η 單體％ 96.50 96.56 96.57 96.61 96.55 96.52 96.72 96.70 於360 nm下之 混濁度 0.136 _________________! 0.135 0.132 0.132 0.137 0.135 0.150 0.125 濃度 (mg/mL) 159.2 159.1 154.6 159.2 1 150.1 153.6 重組 時間 (分鐘） CTn rn 卜 ^r{ 1 C) 寸· 1 外觀 si opal，無 色 sl opal，無 色 sl opal，無 色 sl opal，無 色 sl opal，無 色 sl opal，無 色 sl opal，無 色，"蓬鬆" 白色微粒 sl opal，無 色 τ**Η (N (N m 寸 寸 D3 初始 初始 重組後 之儲存 25〇C 132080.doc -107- 200909005
%Acidic 主峰％ 鹼性峰％ 20.2 69.2 10.7 〇〇 m Γ^* cK ο H i-Η 22.6 60.2 17.2 寸— cn ^}- (N (N Ό — 1 N/A 00 α卜 d o od (NO — —〇 〇 O CN od (NO — SEC Ref Std (平均面積 計數） -1 REF025 (33620) REF025 (33604) N/A REF025 (33604) LMW% i 0.19 <Ν Ο 0.22 0.23 N/A 0.25 0.27 聚集體％ 0.63 0.63 0.60 0.60 N/A 0.55 0.55 Ί # 〇 m· C\ r-H On rn r—H J N/A rn l1"·^ 00 m 單體％ 97.78 _i 97.77 97.80 97.79 N/A 97.83 97.80 於360 nm下之 混濁度 ! 0.106 0.106 0.107 0.109 N/A 0.109 0.112 濃度 (mg/mL) 160.9 161.7 150.6 157.6 N/A 162.8 153.9 重組 時間 (分鐘） Ο 00 cn N/A 1 Os — 寸 N/A 外觀 13 <aD 〇碟 si opal， 無色 Ί3 <fi3 &碟 13 o碟 sl opal ' 無色 sl opal， 無色 sl opal， 無色 sl opal， 無色 小瓶 _1 CN ".H CN ΠΊ 寸 寸 CO 初始 初始 重組後 之儲存 25 °C 132080.doc -108- 200909005 礙 祝m ·« 〇〇〇 l-H»—(〇〇 -—Jiricn CN^O — Γ^ — CN r-i〇0〇 3N〇nCM H —卜（N 〇K(N 50 (NO 3^rni^ 1—H ^-H CN寸寸 OC^(N CN'vO—· 卜CN — rnr^a! 卜os寸 p-iodas γ-ηΌγ〇 CN^ 一 —〇〇 —l/S 寸· ：ΝΌ — CN史 圓δ ss nn <N〇 ITi^—s CN 乂 〇cn Lu〇0 D<w 〇^n Γχ,ΟΟ [3^ So -5 寸 Ο 寸 o 寸 1—H o (N 〇 o On 〇 〇\ o VO o 卜 τ—H o o t—H o 黩 ο \o o f H o o § o \〇 \o o VO o 〇 ro r^ o S o iT) o —經-冷)東乾燥 '150 mg^nlj卩他珠單抗、90 mg/mL幕糠、24 mM組胺酸及0.08% PS-80，pH 6 用1.0 mL DI水重組以得到0.8名9 mL巍體積 、1荽 ON cn τ-Η 〇\ ΓΛ ^1 i o CN 寸 (N s cn 莩 (N CN ON rn »—H ON CO (N 黩 tml jinp in 00 s； 00 s； m 00 VO vd Os vb Os (N \〇 On CN <N ^d as Os ON 00 r—H in On 00 gM«r 1. C\ s o s »—H o s r-H o S o CN o P； r·"^ o (N cn O o ίΓ> in H o T—H r-H o \o r—< T—H o 鲜S f^Sb VO o (N ί〇 〇\ L〇 CN tn 00 s r-H \〇 cK r·1 i 卜 CN s m m y式 00 m iri <〇 < 1 麵 1 <〇 (N rn 卜 00 寸 in oo m rn 00 iri o 卜· 41 IS a o 碟 15 Oh o 4i w * cd a 〇 ^s3 "S a 〇 ^a3 13 a 〇 13 a o -H CO #. 13 & ^¢0 13 a 〇 碟 13 o, o <s] 媸 13 a o 碟 IS a o ?—h (N m CN CN T*~H (N <N ||制 o 學'〇 νοπςν-) •109· 132080.doc 200909005 。05。蟑 wi?寸4Φti 3。0寸食柘>滅_^:^^漤¥|« €£< /%
酸性峰％ 主峰％ 鹼性峰％ 19.8 63.2 17.0 20.2 67.4 12.4 卜 00 Η H寸· (N β — 22.7 68.3 9.0 Z 20.1 70.5 9.4 5 寸· oo 2卜 SEC參考 標準（平 均面積 計數） ^ (N 〇 £ S m γλ 2 0 REF025 (33604) l〇 /-N (N 〇 g S nj rn s ^ REF025 (33604) LMW% 〇\ ψ·^ 〇 ON fH o o o G\ H o o <N 〇 00 <N Ο 聚集體％ νο ο o s o (N v〇 〇 o Ό 〇 00 o ο δ4 、1龚 s rn (N Ov (N 00 00 (N s Ό C\ CN s CN oo CN 單體％ 96.12 96.22 96.16 1- 96.27 96.11 1_ 96.17 96.30 96.37 |隨 〇 ^ t Υ- ^ 1- 1 0.137 1 1_ 0.132 0.131 0.131 0.136 0.138 0.132 0.130 濃 度 (mg/mL) 160.8 159.6 153.7 152.2 < 148.9 1 1 147.5 重組 時間 (分鐘） 寸 00 rn 1 〇 T—H 1 外觀 sl opal 5 無色 sl opal， 無色 sl opal， 無色 sl opal， 無色 sl opal， 無色 λ <fi3 &磲 #絲4 二趔寒 <63 13 <e3 o^4l 小瓶 CN <N m 寸 m 寸 S® 初始 τ—H 初始 P丨丨畸 重組後 之儲存 25〇C 132080.doc -110- 200909005 t£4 f。
酸性峰％ 主峰％ 驗性峰％ 20.3 68.8 10.9 23.8 59.6 16.6 22.6 60.8 16.6 ! N/A ! 〇〇 〇s m O (N CN < 20.2 61.8 18.0 SEC參 考標準 (平均面 積計數） REF025 (33620) REF025 (33604) N/A REF025 (33604) LMW% 0.18 i 0.19 0.21 0.22 N/A 0.25 0.25 聚集體％ 0.62 0.62 0.59 0.59 N/A 1 0.55 ! 0.54 Ί ^ 1.40 ! 1.40 1 1 * 1.40 1 N/A 1.37 1.37 單體％ 97.79 97.78 97.80 97.79 N/A 97.84 97.84 於360 nm 下之混濁 度 0.108 1 i 0.106 0.112 0.111 N/A 0.112 0.111 濃度 (mg/mL) ----- 1 150.1 _1 149.2 145.2 145.8 N/A 141.8 140.0 重組 時間 (分鐘） 00 N/A m rn N/A 外觀 sl opal 5 無色 sl opal， 無色 sl opal， 無色 sl opal， 無色 sl opal， 無色 sl opal， 無色 "3 ¢3 sl opal， 無色 小瓶 CN CN 寸 m 寸 CO 初始 r»H 初始 重組後 之儲存 1 25〇C 132080.doc -Ill - 200909005 f.
經製備： 冷凍#燥完求： 測試始曰蒴： Ι|ί r^lOOCN 、ν〇 — 。卜CJ 寸’ tNO — ΖΓ5 64.8 13.6 Xi—(»—( JSOOCA 2DD 63.7 16.2 20.8 62.2 17.0 d<N(> r^v〇— XJOSCN rn'OON 2377 56.8 19.5 ΚΣ9 65.7 13.3 -^〇N〇 gl ^709) ^582) REF025 (33610) REF025 (33838) REF025 (33851) -1 0.14 0.14 0.14 0.21 0.21 0.19 0.20 0.17 0.18 0.15 0.15 韜 0.62 0.62 0.61 0.62 0.62 0.69 0.69 「 ! 0.78 0.78 0.60 1_ 0.60 1 >1# 1.41 1.41 *—Η 2.62 2.63 3.25 3.21 「 4.26 4.25 1.56 in T — ?.〇m®if、24mM 組胺酸及 0·08%_，ρΗ6 韜 iejL JIBp 97.84 97.84 97.84 96.56 96.54 95.87 95.90 94.79 94.79 97.75 97.76 rp卜贤 0.099 0.100 0.099 0.116 0.115 0.135 0.135 0.157 0.155 0.115 0.114 Η bl) 161.3 168.6 170.3 164.0 159.3 163.3 159.6 162.7 166.5 149.1 149.1 寸· 卜 m iri N/A N/A 1 N/A N/A 酿令 Ό οο wS cn ^S〇 t·^ Os in CN 16.1 o 卜 cK i^Z ^)Τ®Ί I3<a3 '"όο I3<e3 13<S] 13<s3 細: •«<63 〇#. !3<b3 13<s3 細: I3<e3 »*"H (N m »-H CN r—^ CN τ-^ CN CN Ο Vsoccy^ 132080.doc -112- 200909005 。〇5。蟑>南寸哞逛^3。〇寸念柘^0|«^:^^鹚溴«9£< 132080.doc 酸性峰％ 主峰％ 鹼性峰％ 1 1_ 20.8 62.2 17.0 »—· uo c> oi K (NO — 22.8 66.6 10.5 ^ CN 气9心 20.1 70.5 9.4 SEC參考 標準(平 均面積計 數） in ^ (N 〇 £ S S3 w 1 REF025 (33604) 1 1_ in ^ (N 〇 g S Oh w REF025 (33604) 1 LMW% Os Ο o o m (N O (N CS o o r^) Ο CN 〇 聚集體％ On 〇 Ov VO o S o o 〇\ VO o Os o Os Ο o 、1赛 in CS cn T—H (N cn 〇\ T—1 rn rn (N rn (N rn s rn S rn 單體％ 1 95.87 95.90 95.92 i_ 95.97 95.86 95.87 96.06 96.07 於360 nm下之 混濁度 0.135 0.135 | 0.133 0.132 0.136 0.136 0.131 0.128 濃度 (mg/mL) 163.3 159.6 159.1 155.9 1 150.5 149.9 -5¾ Ss S Φ ^T) CM 1 00 卜 1 外觀 sl opal 5 無色 sl opal， 無色 sl opal， 無色 sl opal， 無色 sl opal， 無色 sl opal， 無色 sl opal， 無色 sl opal， 無色 τ—H (N CN 寸 寸 ca 初始 Wl 初始 重組後 之儲存 25〇C -113 - 200909005 。吨蟑w iFiz你袈iοας矣柘W鹿侧蛘：^^漤崁侧ls¥ /.. a\
酸性峰％ 主峰％ 驗性峰％ ΓΟ —… ο 〇 (SJ VO — 20.4 69.0 10.6 | 23.6 59.7 16.7 00 寸 00 CN CN ^ — 21.2 61.9 16.9 寸m (N ο (N (N so — SEC參考 標準(平 均面積計 數） REF025 (33620) REF025 (33604) REF025 (33604) LMW% (Ν CN Ο 〇\ T—4 o <N 〇 CN 〇 (Ν Ο (N o 聚集體％ CN o ro 〇 ON in o § o yn ο l〇 o Ί # m 寸 f—^ i ο 1—Η o 單體％ 97.72 97.74 97.75 97.72 97.80 97.80 於360 nm下之 混濁度 0.107 j 1_ 0.105 1 0.114 1 0.109 N/A 0.111 0.109 濃度 (mg/mL) 162.0 164.7 162.3 161.8 1 155.0 153.4 Sa S >W Φ 1 麵 外觀 ! 1 sl opal， 無色 sl opal， 無色 1 sl opal， 無色 sl opal， 無色 sl opal， , 無色 3 ·ί〇3 &碳 Ία sl opal， 無色 sl opal， 無色 r-H (N 1-H (N ΓΟ 寸 cn 寸 ca 初始 1 初始 重組後 之儲存 25〇C 132080.doc -114- 200909005 那他珠單抗重新調配開發 表37 預冷凍乾燥量 名稱 Antegren(mg/mL) 蔗糖(mg/mL) 組胺酸(mM) PS-80(%) A 40 27.7 6 0.04 B 40 46.2 6 0.04 C 40 9.2 6 0.04 表38 目標冷凍乾燥後之量 名稱 Antegren(mg/mL) 蔗糖(mg/mL) 組胺酸(mM) PS-80(%) A1 160 110.8 24 0.16 A2 100 69.3 15 0.1 B3 160 184.8 24 0.16 B4 40 46.2 6 0.04 AS 100 69.3 15 0.1 A6 40 27.7 6 0.04 Cl 100 23.0 15 0.1 C8 40 9.2 6 0.04 C9 160 36.8 24 0.16 A10 100 69.3 15 0.1 Bll 100 115.5 15 0.1 實例4 此研究之目的在於使用實驗設計來測定最終蛋白質濃度 及最優蛋白質與蔗糖之比率對冷凍乾燥那他珠單抗之效應 以防止聚集體形成且將其減至最少。 實驗設計參數 在1:100至1:500之蛋白質與蔗糖之比率下，檢驗40 132080.doc -115 - 200909005 mg/mL至160 mg/mL之最終蛋白質濃度 量以每10 mg/mL蛋白質0.01 %之量保持 以每40 mg/mL蛋白質1〇 mM保持恆定 。聚山梨醇酯8〇含 定’且組胺酸將 。起始蛋白質濃度 (預冷;東乾餘）將為40 mg/mL。 以2 mL填充量填充小瓶 且 接著重組至所需最終蛋白質濃度。 於0、2、4及6週時，於攝氏40度下檢驗短期穩定性 程序： f. 1.針對下列緩衝劑之一透濾當前調配物。接著超濾至蛋白 質濃度大於40 mg/mL。量測蛋白質濃度且稀釋至 mg/mL。 a.調配物SA : 1〇〇:丨蔗糖：蛋白質之比率_最終調配物7、 b. 調配物SB : 300:1蔗糖：蛋白質之比率·最終調配物ι、 2 、 5 、 6 、 10 ; c. 調配物SC : 500:1蔗糖：蛋白質之比率-最終調配物3、 4、11 β 2. 以2毫升/小瓶填充各調配物之2〇個小瓶。此允許1〇個小 瓶用於40度下之穩定性且其他小瓶用於Tg、水分、卩丁工汉 分析、滲透壓度等。需要如下量： a·調配物 S A : 120 mL ; b_ 調配物 SB : 200 niL ; c.調配物 SC: 120 mL。 3. 使用守恆循環冷凍乾燥小瓶以減少水分且重組至所需蛋 白質濃度。 132080.doc -116- 200909005 a. 調配物4、6、8 -用2 mL重組為40 mg/mL之最終漠度； b. 調配物1、2、5、6、10-用0·8 mL重組以產生100 mg/mL之最終濃度； c. 調配物1、3、9 -用0.5 mL重組以產生160 mg/mL之最 終濃度。 4.在2、4及6週時，於40度下藉由混濁度、濃度、外觀、 S E C檢驗穩定性。其他檢定可於零時間及6週時進行， 諸如IEX、非還原性SDS-PAGE及氧化作用。 表39 調配物編號 最終 初始 最終蛋白質 蛋白質:蔗糖 重組體積 1 A 160 300 1 2 A 100 300 1.6 3 B 160 500 1 4 B 40 500 4 5 A 100 300 1.6 6 A 40 300 4 7 C 100 100 1.6 8 C 40 100 4 9 c 160 100 1 10 A 100 300 1.6 11 B 100 500 1.6 調 配物A :40 mg/mL 蛋白 質、6 mM組胺酸 ' 0.04% PS80 ，27.7 mg/mL 用於5種調配物。 調 配物B :40 mg/mL 蛋白 質、6 mM組胺酸 ' 0.04% PS80 ，46.2 mg/mL 用於3種調配物。 132080.doc -117 - 200909005 調配物C : 40 mg/mL蛋白質、6 mM組胺酸、0.04% PS80 > 9.2 mg/mL 用於3種調配物。 以4 ml填充各小瓶= 160毫克/小瓶如上重組至所需體 積。 總共所用之蛋白質=4 mL * 40 mg/mL * 11種調配物*30 個小瓶350個小瓶。 52800 調配物A 600 mL 80個小瓶 DF vs 3 It 調配物B 360 48個小瓶 DF vs 2 It 調配物C 360 48個小瓶 DF vs 2 It 超濾至約1/2體積。 132080.doc 118- 200909005 ο 腐_1日80阳鈸迓您荦棘杷友*^«lso.lKfo=l^ :萊B^^etflfiK :架鵷邀 。绪，【、回工弒茛ssi岔寧# 08-SCU 0/0910,齧鸽璁 lAt 日寸<N-窭裤一日/ss 8011 , sa)^uv qm/Sm 〇9一
I CN 酸性峰％ 主峰％ 鹼性峰％ 15.8 66.7 17.6 13.6 71.2 15.2 〇\ 寸· ci舟 f**"» 15.2 70.5 14.3 SEC總峰面 積計數 33274 39516 41343 40153 LMW% 1 1 Ο Ο Ο Ο 聚集體％ 咖 1 Ο c> I 1 1 1 Μ荽 〇 〇 in ο οο ο 卜 〇 單體％ 99.50 99.27 99.22 99.21 於360 nm下之 混濁度 0.126 0.101 0.110 0.108 濃度 (mg/mL) 126.9 150.3 159.5 J 141.4 水分之 KF% 寸 rn 重組 時間 (分鐘） 00 rn — 寸 ^6 外觀，pH值 <a3 > HH IV，ΒΥ7 6.37 卜 CQ > ^ ^0 CO Ο 寸 00 CN 132080.doc 119- 200909005 酸性峰％ 主峰％ 鹼性峰％ »0 ΠΊ (N ^O 00 O On »-h <N Os On 产Η Γ**、 ON '«O T-H σν tri v—H ^ oo in t—H r—H V0 ro m <N 卜 絮犮 m ON m OS O^ m 00 On m m U ifc C/1 g T—H g o cJ o o 1 晒 1 1 Ί s cn r—H (N 〇 r-H o oo s (N 00 ON 00 ON 00 OV oo ON i解 1 0.132 1 0.111 ] 0.116 0.119 B "5〇 卜 寸 m OO 旦 in (N cn r—H »—H t—h ^.Se§ 卜 00 CN t> s·^ rn 'pH值 ifi] CQ BY6 27 CQ 外觀， > > ^ v〇 > > za 寸 \〇 OO 12週 -120- 132080.doc
酸性峰％ 主峰％ 驗性峰％ 15.1 66.4 185 ^—* Γ^Ι ^ —ν〇 (Ν 14.8 65.9 19.3 省減 T—Η CN (Ν ν〇 OS ro 等 m 00 ΓΛ 1 c\ Ο ο % ο Ο 韜 崃 1 1 I 1 τ·^ (Ν Ο 荽 Ο Ί (Ν (Ν CN ^Τ) 97.81 00 (Ν 00 ο ΟΝ |叛 0.124 0.113 0.113 3 ^ ε Ο r-H τ—Η r-H 重組 時間 (分鐘） τ-Ή — τ—Η 無色 ΒΥ7 BY7 > > > CS (Ν 寸 VO 200909005 对 。鹿«1m e. 一 阳 swxa^^杷^*溴*口日 9.1 昍哲 〇=一 念 :踩01驾破^茛 :3载蓄介 。¥i f21B画$"0i ooo-sd %ΙΌ ,毽 $3sslol ,#_ qm/3m e.69 , §bo31uvlm/§m 02
酸性峰％ 主峰％ 鹼性峰％ 15.7 67.6 16.8 14.0 71.0 15.0 15.3 70.7 14.0 ΓΛ 寸（N W ci 寸· r~H f*·»». v-H SEC總峰 面積計數 36736 35806 r^sT 35037 LMW% 1 1 Ο g o o 聚集體％ 1 1 Ο d 1 1 1 1 丨1荽 r—Η ο ο o CN 〇 單體％ 99.49 99.28 99.25 99.21 於360 nm 下之混濁 度 0.095 0.111 0.107 0.107 濃度 (mg/mL) 00 vS 00 106.6 1 104.1 水分 KF% 卜 (Ν ζ z < 重組 時間 (分鐘） 卜 <Ν 寸 CN 卜 r4 (N 外觀，pH值 > 41 III，BY7 6.36 卜 H S? Jl〇 CS Ο W! 寸 00 赠 CN 132080.doc 121 - 200909005
酸性峰％ 主峰％ 鹼性峰％ 卜 oo in 4 ci 寸· f-*»· Η 卜 00 in vS —"Η 14.9 69.3 15.8 15.4 68.9 15.6 SEC總峰面 積計數 35825 35581 35055 34771 LMW% Ο Ο g Ο g o 聚集體％ I I I I 1 1 1 1 二聚物％ S (Ν Η m (Ν 00 cn H 單體％ 98.90 98.81 98.67 98.55 於360 nm 下之混濁 度 0.101 0.106 0.101 0.105 濃度 (mg/mL) i_ 106.2 103.8 I ! 102.3 vd 〇\ Ο rn 00 CN Os rn 外觀，pH值 碟 1—1 卜 m > III > BY7 6.34 卜 ffl HH 時間點 寸 Ό 00 較 (N 酸性峰％ 主峰％ 鹼性峰％ 15.5 66.5 18.0 15.3 64.2 20.5 15.1 66.5 18.4 SEC總峰 面積計數 1 _I 35468 35751 35788 LMW% 1 1 0.08 0.09 聚集體％ 1 1 I I 0.21 二聚物％ 1 _1 1.47 2.16 2.38 單體％ 98.53 97.76 97.32 於360 nm 下之混濁 度 0.106 0.110 0.111 濃度 (mg/mL) 105.0 104.7 104.5 重組時間 (分鐘） m ΓΠ 00 (Ν 卜 <Ν 外觀 III，無色 III，ΒΥ7 IV，ΒΥ7 時間點 η 5 1 I32080.doc •122· 200909005 鹿蜊一日80阳歲s£f矣棘埤茫-鹿侧1S0.I阳岔0=1念 :踩01苯破^茛 -"0ί 。绪七學1^茛跋迗赍學# 08-Sd 0/09ΙΌ ,键绪摩ss 17<N,窭維 Is/S曰 8·寸8了 S3JS31UV 1ιχν§ε 〇9一 酸性峰％ 主峰％ 鹼性峰％ ΓΛ <Ν mS 卜ΓΟ Ο rn r—Η Γ*-'· 14.9 70.8 14.3 15.1 70.6 14.3 SEC總峰 面積計數 I 31624 37676 37764 丨細 LMW% 1 1 Ο Ο ο s ο 聚集體％ 1 1 0.10 I I I I ，1龚 Ο ο 0.57 S Ο 單體％ 99.55 99.37 99.34 99.32 於360 nm 下之混濁 度 0.112 0.124 0.105 0.116 濃度 (mg/mL) 121.4 148.1 145.3 138.2 水分之 KF% CN Ν/Α Ν/Α Ν/Α 重組 時間 (分鐘） 寸 rn 寸 ΓΛ 外觀，pH值 IV，無色 III，無色 III，ΒΥ7 6.36 1 III，ΒΥ7 5# Ο I 00 12週 132080.doc -123 - 200909005 r
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酸性峰％ 主峰％ 鹼性峰％ ^q r-； m O oo 寸寸CN in v〇 r^ O —Ό <N iri oo v〇 V0 o 寸 m (N ro m ί g 〇 〇 韜 1 1 1 1 (N 〇 彝 Ί 等 r«^ 〇 (N m CN <N OO m rn 00 Q\ σί σί t ^ o a m s 0.097 o o t y z0"^ t o 寸 cn 旦 g wS OO T—H -¾ Se ^ r- 侧f Φ (N (N CN ，pH值 無色 BY7 無色 外觀 h-H H-j 1—| ft® £e 南 恝 CN 寸 VO -138- 132080.doc 200909005 /% 。韻一:一日e_I阳銶s£咖0牽衅钾茫*鹿¥1日9.1昍哲〇=1衾 :踩 B 絮^$cw 。婼，『、回工紱冢鈸迓當學# 08-SJ。/01·?盔绪戚 wg SI ,t^ls/ss S.SII , SJQO31UV1S/SUI 02
P8 — Z 酸性峰％ 主峰％ 鹼性峰％ iri t> r-H 00 0's 守“ W r-H r-H 'O »-h CN ^ d τι·- 1-H f*·"·» 15.6 70.6 13.8 SEC總峰面積 計數 36877 35319 34784 35667 LMW%; i 1 1 〇 o o 聚集體％ 1 1 o 1 1 1 1 二聚物％ (N m o o 00 VsO o fN 〇 單體％ 99.48 99.28 99.23 99.21 於360 nm 下之混濁 度 0.089 0.100 0.106 1_ 0.104 濃度 (mg/mL) ^sO (N 104.7 102.3 100.5 水分之KF% Z < Z 重組 時間 (分鐘） as CN 寸 rn 00 i〇 外觀，pH值 > -¾) HH III，BY7 6.42 ___________ _ CQ HH 時間點 〇 寸 00 較 132080.doc -139- 200909005 酸性峰％ 主峰％ 鹼性峰％ 15.4 67.6 17.0 14.8 71.5 13.7 15.5 70.9 13.6 15.7 70.7 13.6 SEC總峰面積 計數 35236 34035 33404 34370 LMW% 1 1 0.06 0.09 0.08 聚集體％ 1 1 0.11 1 1 1 1 二聚物％ 0.46 0.46 0.58 0.58 單體％ 99.54 99.37 99.33 99.34 於360 nm 下之混濁 度 0.090 0.085 0.096 0.092 濃度 (mg/mL) 82.0 100.6 97.3 100.5 水分之KF% 〇 CN N/A N/A N/A 重組 時間 (分鐘） 卜 rn 卜 \ό οό 外觀，pH值 IV，無色 III，無色 III，ΒΥ7 6.44 III，ΒΥ7 時間點 〇 f 00 12週 酸性峰％ 主峰％ 鹼性峰％ 15.3 71.2 13.5 15.3 70.6 14.1 00 1-H (N 00 ^ CN 〆ci寸· l-H {*-«· SEC總峰面 積計數 34149 34039 33713 33713 LMW% 〇 Ο o o 聚集體％ 1 1 I I 1 1 1 1 二聚物％ 卜 〇 Ο o cn 00 o 單體％ 99.22 99.18 99.14 99.09 於360 nm下 之混濁度 0.096 0.088 0.097 0.100 濃度(mg/mL) 100.9 100.1 〇 OS in rn 寸 cn O) ^J· 外觀，pH值 1 III，無色 III，無色 III，BY6 6.37 III，BY7 時間點 00 12週 -140- 132080.doc 200909005
酸性峰％ 主峰％ 鹼性峰％ 00^0 m (N m in t> 1 y-^ in <5 00 r—H i/t ί—H Ns〇 in 〇 m ^樂 m | g 1-1 〇 〇 韜 1 1 1 荽 00 ϊ—^ t" < (N o '1 韜 (N (N 00 00 s®l- σ\ od oo 〇\ g㈣ 目粳 〇\ 00 (N On 0.091 §昶 ο 〇 〇 〇 /—N 1 旦 od 〇\ s 重組 時間 (分鐘） 00 寸 ，pH值 無色 BY7 無色 外觀 1—1 |—j HH Se 南 1 寸 Ό 132080.doc -141 200909005 表51 HMW% A B C 0 0.49 0.39 0.43 8 0.5 0.49 0.51 12 0.5 0.49 0.50 LMW% A B C 0 0.09 0 0.00 8 0.08 0.08 0.07 12 0.07 0.07 0.06 單體％ A B C 0 99.42 99.61 99.57 8 99.43 99.43 99.42 12 99.43 99.44 99.43 表52 康燥。C: 冷乾40 0 2 4 6 HMW% A1 A2 B3 0.50 0.51 0.45 1.48 1.47 0.77 2.10 2.16 1.08 2.62 2.59 1.27 B4 A5 A6 C7 0.44 0.51 0.58 0.79 0.78 1.45 1.45 4.23 1.11 2.13 2.14 6.43 1.25 2.61 2.56 7.98 C8 C9 A10 B11 0.76 0.77 0.52 0.46 4.31 4.32 1.46 0.78 6.32 6.47 2.10 1.11 7.74 8.14 2.57 1.25 LMW% A1 A2 0 0.00 0.00 2 0.00 0.00 4 0.09 0.08 6 0.10 0.09 B3 B4 A5 0.00 0.00 0.00 0.00 0.00 0.00 0.08 0.07 0.08 0.08 0.07 0.09 A6 C7 C8 0.09 0.00 0.00 0.11 0.00 0.17 0.08 0.10 0.10 0.09 0.11 0.10 C9 A10 B11 0.00 0.00 0.00 0.00 0.00 0.00 0.11 0.08 0.08 0.11 0.09 0.07 B3 B4 A5 99.55 99.56 99.49 99.23 99.22 98.55 98.84 98.82 97.79 98.65 98.68 97.29 A6 C7 C8 99.32 99.22 99.24 98.16 95.76 95.52 97.77 93.46 93.58 97.35 91.91 92.17 C9 A10 B11 99.23 99.48 99.54 95.67 98.54 99.22 93.42 97.82 98.81 91.75 97.33 98.68 單體％ A1 A2 0 99.50 99.49 2 98.52 98.53 4 97.81 97.76 6 97.28 97.32 132080.doc -142- 200909005表53 冷康 乾燥 ο 4 6 812 5 8 2 4 7 9 β 5 9 1 2 3 ο ο 1 1 1- 5 12 2 4 9 ^5·5·0·1·2·3 π_3 11 11 11 It 4 2 5 ο 3 Μ 4 7 7 8 8 I ο ο ο ο ο 5 5 0 5 0 2 i34 7 7 8 8 γπ ♦ ♦ · · . 1 ο ο ο ο ο 2 12 2 3 8 ^^^-123 ο n 1- 1- 11 % V 1 ο 3 3 5 ο ^α1·5·°λ·2·4 11 Ί1 11 11
C 9 4 10 7 ·7·3·7·2·6 ο·2·2·3·Γ^ J 6 3 9 6 6 :87 3 6 1 6 C0·2·2·3·3· 16 15 6 3 1 4 777 8 B0·0·0·0·0· 0 2 2 4 4 7 1 5* Ό 9^ 3 nou 11 11 7 8 6 2 3 :97 3 7 2 7 C0·2·2·3·3· LMW% Α1 Α2 Β3 Β4 Α5 0 0.00 0.00 0.00 0.00 0.00 4 0.07 0.08 0.07 0.06 0.07 6 0.08 0.07 0.07 0.06 0.07 S 0.11 0.09 0.09 0.08 0.10 12 0.08 0.08 0.08 0.07 0.08 單體％ Α1 Α2 Β3 Β4 Α5 0 99.50 99.49 99.55 99.56 99.49 4 98.89 98.90 99.22 99.22 98.91 6 98.79 98.81 99.18 99.19 98.80 8 98.64 98.67 99.11 99.12 98.67 12 98.52 98.55 99.10 99.10 98.53 Α6 C7 C8 C9 Α10 Β11 0.09 0.00 0.00 0.00 0.00 0.00 0.07 0.09 0.08 0.09 0.07 0.06 0.07 0.09 0.09 0.09 0.07 0.06 0.08 0.09 0.11 0.11 0.09 0.10 0.07 0.10 0.10 0.10 0.08 0.07 Α6 C7 C8 C9 Α10 Β11 99.32 99.22 99.24 99.23 99.48 99.54 98.90 97.57 97.58 97.53 98.91 99.22 98.79 97.20 97.22 97.15 98.80 99.18 98.65 96.71 96.73 96.67 98.67 99.14 98.54 96.22 96.25 96.16 98.55 99.09 表54
冷凍乾 燥 25〇C HMW% Α1 Α2 Β3 Β4 Α5 0 0.50 0.51 0.45 0.44 0.51 4 0.65 0.65 0.56 0.59 0.66 8 0.68 0.67 0.57 0.58 0.67 12 0.71 0.72 0.60 0.58 0.72 LMW% Α1 Α2 Β3 Β4 Α5 0 0.00 0.00 0.00 0.00 0.00 4 0.07 0.06 0.07 0.06 0.07 8 0.10 0.08 0.10 0.07 0.08 12 0.08 0.07 0.09 0.07 0.06 Α6 C7 C8 C9 Α10 Β11 0.58 0.79 0.76 0.77 0.52 0.46 0.65 0.99 1.01 1.02 0.66 0.57 0.67 1.10 1.09 1.14 0.68 0.58 0.69 1.17 1.18 1.21 0.72 0.58 Α6 C7 C8 C9 Α10 Β11 0.09 0.00 0.00 0.00 0.00 0.00 0.06 0.07 0.07 0.08 0.06 0.06 0.07 0.08 0.07 0.08 0.08 0.09 0.07 0.05 0.07 0.07 0.07 0.08 132080.doc -143 - 200909005 單體％ A1 A2 B3 B4 A5 A6 C7 C8 C9 A10 0 99.50 99.49 99.55 99.56 99.49 99.32 99.22 99.24 99.23 99.48 4 99.27 99.28 99.37 99.35 99.27 99.28 98.94 98.92 98.90 99.28 8 99.22 99.25 99.34 99.34 99.24 99.25 98.83 98.84 98.79 99.23 12 99.21 99.21 99.32 99.35 99.22 99.24 98.78 98.75 98.72 99.21 表55 預冷凍乾燥之A A6 5°C 5°C 25〇C 預冷凍乾燥之B 40°C 5°C 預冷凍乾燥之c 5°C C7 5°C 25〇C 40°C A1 5°C 停滯於IV，於8週時變為BY7 C8 25〇C 停滯於IV，於6週時變為BY7 5°C 40°C 停滯於IV，於4週時變為BY7 25 °C 40°C A2 5°C 停滯於III，於8週時變為BY7 C9 25 °C 停滯於III，於6週時變為BY7 5°C 40°C 於6週時變為IV，於4週時變為BY7 25 °C 40°C B3 5°C 停滯於III，於8週時變為BY7 A10 25 °C 於12週時變為IV，於6週時變為BY7 5°C 40°C 停滯於III，於4週時變為BY7 25〇C 40°C B4 5°C 無主要變化，均停滯於II，無色 Bll 25 V 5°C 40°C 25〇C 40°C A5 5°C 25〇C 40°C 132080.doc -144 -
Bll 99.54 99.37 99.33 99.34 200909005 表56 於任何溫度下，混濁度均無主要變化。
40°G A1 A2 B3 B4 A5 A6 C7 C8 C9 A10 B11 0 0.126 0.095 0.112 0.054 0.100 0.047 0.109 0.082 0.162 0.089 0.090 2 0.124 0.106 0.107 0.046 0.112 0.046 0.133 0.052 0.163 0.102 0.089 4 0.113 0.110 0.102 0.052 0.123 0.048 0.132 0.047 0.157 0.097 0.092 6 0.113 0.111 0.114 0.043 0.115 0.046 0.139 0.055 0.152 0.100 0.091 25〇C A1 A2 B3 B4 A5 A6 C7 C8 C9 A10 B11 0 0.126 0.095 0.112 0.054 0.100 0.047 0.109 0.082 0.162 0.089 0.090 4 0.111 0.101 0.093 0.040 0.106 0.040 0.129 0.046 0.144 0.098 0.096 6 0.132 0.106 0.109 0.044 0.104 0.046 0.148 0.053 0.179 0.100 0.088 8 0.116 0.101 0.099 0.053 0.108 0.054 0.124 0.063 0.155 0.108 0.097 12 0.119 0.105 0.118 0.052 0.123 0.046 0.122 0.049 0.136 0.101 0.100 5°C A1 A2 B3 B4 A5 A6 C7 C8 C9 A10 Bll 0 0.126 0.095 0.112 0.054 0.100 0.047 0.109 0.082 0.162 0.089 0.090 4 0.101 0.111 0.124 0.041 0.112 0.042 0.120 0.053 0.140 0.100 0.085 8 0.110 0.107 0.105 0.046 0.107 0.064 0.134 0.052 0.150 0.106 0.096 12 0.108 0.107 0.116 0.051 0.105 0.045 0.201 0.069 0.163 0.104 0.092 預冷凍乾燥 5°C A B C 0 0.044 0.041 0.041 8 0.053 0.040 0.041 12 0.041 0.044 0.043 亦參考實例25A、B、C及D。 132080.doc -145 200909005 表57 重組穩定性 於40°C下4週 於5°C下4週 --- 4089-1L 單體％ 4089-1L 單體 ％ —--- '**" -Μ. 5°C 0 96.5 5°C υ 97.78 0 96.56 0 ~~97J7^ 1 96.57 1 1 — 1 96.61 "1 1 ~97J9 ~~---- 25 °C 0 96.55 25 °C 0 — 0 96.52 0 -----—. 1 96.72 1 -:— 1 96.7 1 ----
96.06 ^6!〇7~ 實例5 本文所述之調配物為含有那他珠單抗、蔗糖、組胺酸及 聚山梨醇酯80之冷凍乾燥之餅狀物。預冷凍乾燥之塊狀藥 物物質含有40 mg/mL抗體、41 mg/mL蔗糖、0.04%聚山梨 醇酯8〇及6 mM組胺酸鹽酸鹽（pH 6.0)。將此物質以每小瓶 4 mL填充’冷凍乾燥’用！·〇 mL水重組至12〇 mg/mL、ι23 mg/mL蔗糖、〇.12%聚山梨醇酯8〇及18 mM組胺酸鹽酸鹽 (pH 6.0)。 預V、東乾燥之那他珠單抗組合物係由B^genIdec提供。 132080.doc * 146 - 200909005 將其調配於磷酸鹽緩衝生理食鹽水中且處理於硫酸銨溶液 中。接著，將此材料透濾至調配物緩衝劑（無聚山梨醇酯） 中且濃縮至40 mg/mL。接著添加適量聚山梨醇酯80，將材 料無菌過濾至聚丙烯瓶子中且於2-8°C下儲存4週，隨後填 充及冷凍乾燥。使用書面批次記錄，在非GMP組中執行填 充及冷凍乾燥。在填充之前，將該組消毒且所有填充操作 均於層流淨化罩下執行。使用Virtis Gensis 25 EL冷;東乾燥 器執行冷康乾燥。 穩定性研究由三個部分組成，一個部分檢驗預冷凍乾燥 之那他珠單抗組合物於推薦儲存溫度（2-8°C)下歷時多達一 年及於25°C之加速溫度下歷時多達6個月之穩定性。將冷 凍乾燥之組合物小瓶於推薦儲存溫度（2-8°C)下儲存12個 月、於25°C下儲存6個月及於40°C下儲存3個月。在各種時 間點，使來自2-8°C部分之小瓶重組且於2-8°C (推薦溫度） 及25°C (加速）下儲存1週。 關於外觀、A280、pH值、非還原性及還原性SDS-PAGE、陽離子交換層析及尺寸排阻層析，執行品質控制 穩定性測試。 材料、方法及測試時間點 將測試下列樣品。 表58.寺| 品配置 批號/貨號 描述 預冷珠乾燥之Biogenldec貨號： LYO121504 2 mL填充至聚丙稀小瓶中 含有160 mg活性物質/小瓶之冷束乾燥之 小瓶貨號K65001 5 mL小瓶含有冷凍乾燥之餅狀物以及丁 基橡膠塞子及易拉蓋。用1 mL WFI或其 他純水使小瓶重組。 132080.doc •147· 200909005 表59.研究方法 方法編號 標題 所需體積 EOP 000-01291 冷凍乾燥之小瓶之外觀的測定 2個小瓶* EOP 000-01291 水分 2個小瓶 EOP 000-01292 重組時間之測定 2個小瓶* AAM 001-00141 Antegren及匹配安慰劑最終容 器之外觀之測定** 2個小瓶* AAM 001-00143 Antegren藥物物質、最終容器 及用於Antegren之安慰劑之pH 值的測定 1 mL* AAM 001-00380 非還原性SDS-Page及還原性 SDS-PAGE** 50 pL EOP 001-01198 藉由弱陽離子交換層析測定 Antegren藥物物質及最終容器 之電荷分布** 50 μί EOP 001-01205 尺寸排阻層析** 50 [iL AAM 001-00025 根據A280之藥物物質、最終容 器及用於Antegren之安慰劑的 濃度** 200 μί *無損壞，使用小瓶進行後續測試。**需要對方法進行修 正，參見下文第3.3節。 表60,研究方法 方法編號 標題 所需體積 160a.213 VCAM溶胞物 1個小瓶β 22d.530 還原性凝膠晶片CE 1個小瓶** 22d.596 非還原性凝膠晶片CE 1個小瓶# 22d.544b 及 22d.552a 曱硫胺酸氧化作用 1個小瓶β 22d.84 少量非經腸藥中之微粒 1個小瓶β * *所有5種檢定均使用一個小瓶。 132080.doc 148- 200909005 表61.預冷凍乾燥之塊狀物之穩定性測試及時間點 測試方法 初始 1個月 2個月 3個月 6個月 12個月 或EOS 2-8 25 2-8 25 2-8 25 2-8 25 2-8 外觀(AAM 001-00141) X X X X X X X X X X 根據A280之蛋白 質濃度 X X X X X X X X X X 尺寸排阻層析 (SEC) X X X X X X X X X X 陽離子交換層析 (CEX) X X X X X X X X X X SDS-PAGE ：還 原性 X X X X X X X X X X SDS-PAGE ：非 還原性 X X X X X X X X X X pH值 X X X X X X X X X X VCAM溶胞物* X X X X 還原性凝膠晶片* X X X X 非還原性凝膠晶 片CE* X X X X 甲硫胺酸氧化作 用* X X X X 於Elan下，每時 間點每條件取出 之樣品數目 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 132080.doc 149- 200909005 踩LBE哲^紱荩趄矽灌W瘅，f' W锻楗啭命.2 < 12個月或 EOS 00 A X X X X X X X X X X X X X X X <N 6個月 1/5 X X X X X X X X X X X X X X X (N op A X X X X X X X X X X X X X X X <N 3個月 ο X X X X X X X X X X X X X X CN in η X X X X X X X X X X X X X X CN op fN X X X X X X X X X CN 2個月 o X X X X X X X X X (N ΙΓΪ fS X X X X X X X X X (N op fS X X X X X X X X X CN 1個月 o X X X X X X X X X (N in <s X X X X X X X X X (N op fS X X X X X X X X X <N 初始 X X X X X X X X X X X X X X X CN 測試方法 1 餅狀物之外觀 重組時間 水分 重組溶液之外觀 根據A280之蛋白質濃度 尺寸排阻層析(SEC) 陽離子交換層析(CEX) SDS-PAGE :還原性 SDS-PAGE :非還原性 pH值 VCAM溶胞物* 還原性凝膠晶片* 非還原性凝膠晶片* 甲硫胺酸氧化作用* SVP微粒* 6¾ ΠΠ #七 -V K Ή §接 ω幸 132080.doc -150- 200909005 重組穩定性 於下列時間點，自2-8°C取出4個小瓶，重組且接著置於 2-8°C及25°C下歷時一週以檢驗重組材料之穩定性。為了便 於使用分析設備及時間，在預定時間點之前一週取出此等 樣品，重組，置於所需溫度下且接著與其他樣品一起檢 定。 表63.重組小瓶之穩定性測試及時間點 測試方法 初始 3雁 月 6伯 月 12個月或EOS 2-8 25 2-8 25 2-8 外觀(AAM 001-00141) X X X X X X 根據A280之蛋白質濃度 X X X X X X 尺寸排阻層析(SEC) X X X X X X 陽離子交換層析(CEX) X X X X X X SDS-PAGE :還原性 X X X X X X SDS-PAGE :非還原性 X X X X X X pH值 X X X X X X VCAM溶胞物* X X X 還原性凝膠晶片* X X X 非還原性凝膠晶片CE* X X X 曱硫胺酸氧化作用* X X X 於Elan下，每時間點每條 件取出之樣品數目 2 2 2 2 2 2 注意：在所列時間點將小瓶自2-8°C取出，重組且接著於2-8 °C或25 °C下儲存一週，且如上檢定。 資料 附錄A :置於各條件下之小瓶之總數。注意：2-8 °數目包 括根據需要之初始時間點測試 132080.doc -151 - 200909005 表64 預冷凍乾燥之塊狀樣品要求 溫度 Elan測試所需之 小瓶數目 過多小瓶 所需總數 5°C 6 5 11個小瓶 25〇C/60%RH 4 4 8個小瓶 總計5°C及25°C/60% RH研究 19個小瓶 表65 冷凍乾燥之樣品要求（包括用於重組） 溫度 Elan測試所需之 小瓶數目 過多小瓶 所需總數 5°C 24 12 3 6個小瓶 25〇C/60%RH 8 5 13個小瓶 40〇C/75%RH 6 4 10個小瓶 總計5°C及25°C/60% RH研究 59個小瓶 材料、方法及測試時間點 表66.研究方法 方法編號 標題 所需體積 EOP 000-01291 冷凍乾燥之小瓶之外觀的測定 2個小瓶* EOP 000-01290+或 EOP 03201299** 水分 2個小瓶 E0P 000-01292 重組時間之測定 2個小瓶* AAM 001-00141 Antegren及匹配安慰劑最終容器之外 觀之測定** 2個小瓶* AAM 001-00143 Antegren藥物物質、最終容器及用於 Antegren之安慰劑之pH值的測定 1 mL* AAM 001-00380 非還原性SDS-PAGE及還原性SDS-PAGE** 50 pL EOP 001-01198 藉由弱陽離子交換層析測定Antegren 藥物物質及最終容器之電荷分布** 50 pL EOP 001-01205 尺寸排阻層析** 50 μί AAM 001-00025 根據A280之藥物物質、最終容器及 用於Antegren之安慰劑的濃度* * _ 200 μί *無損壞，使用小瓶進行後續測試。* *需要對方法進行修 正，參見下文第3,3節。+測定適當SOP，參見正文。 132080.doc -152- 200909005 表67.研究方法 方法編號 標題 所需體積 22d.394+ Karl Fischer 2個小瓶 160a.213 VCAM溶胞物 1個小瓶# 22d.530 還原性凝膠晶片CE 1個小瓶β 22d.596 非還原性凝膠晶片CE 1個小瓶# 22d.544b 及 22d.552a 甲硫胺酸氧化作用 1個小瓶# 22d.84 少量非經腸藥中之微粒 1個小瓶** **所有5種檢定均使用一個小瓶。+測定適當SOP，參見正 文。 檢定之所需修正 對尺寸排阻層析進行修正以包括應於A280 nm波長下進 行資料收集。 說明：管柱上約40 pg至400 pg之增加的質量要求使用較 小敏感性波長。 第3.5節表5 :對該表進行修正以表明於3個月時及於12 個月時或研究結束時，初始時間點測試需要總共4個小 瓶。 說明：此表忽略考慮水分測試於此等時間點所需之其他 2個小瓶。此測試具破壞性且因此，小瓶内含物不能回收 用於其他用途。 132080.doc -153 - 200909005
/V 錄葩啻«^铖茛趄祝灌w^,f' W锻祐务^·89< 12個月或 EOS 00 rs X x X X X X X X X X X X X X X 寸 6個月 \n <N X X X X X X X X X X X X X X X 寸 00 <s X X X X X X X X X X X X X X X 寸 3個月 ο X X X X X X X X X X X X X X (N ITi fS X X X X X X X X X X X X X X <N 00 fS X X X X X X X X X X X X X CN 2個月 o X X X X X X X X X (N ΙΛ fS X X X X X X X X X CN op <s X X X X X X X X X (N 1個月 o X X X X X X X X X (N IT) n X X： X X X X X X X CN op A X X X X X X X! X X (N 初始 X X X X X X X X X X X X X X X 寸 測試方法 餅狀物之外觀 重組時間 水分 重組溶液之外觀 根據A280之蛋白質濃度 尺寸排阻層析(SEC) 陽離子交換層析(CEX) SDS-PAGE :還原性 SDS-PAGE :非還原性 pH值 VCAM溶胞物* 還原性凝膠晶片* 非還原性凝膠晶片* 甲硫胺酸氧化作用* SVP微粒* S® ππ -七 自亏 S接 t Φ 132080.doc 154. 200909005 uorsisDV so^s 寸 0SIOA1 麵驷龚荽老W锄鉍¥§f 一 *龊祐餸令ύΐ·#— - S 69< Τ1:-ρετρς " $$ :琛01锄鉍
®M·^娜一日 S w-a-^H'ltve^^ :«B苯吞趄^耱Twsso寸 锖雄 s :餱 所執行之測試 尺寸排阻層析 報導值 雜質％ LMW2% F-Η y-^ (Ν Ο (N 〇 純度 % 99.7 99.7 SDS-PAGE 報導值 非還原性 韜 〇 Τ-Η On 與參考標 準可相當 之MW 相符 相符 還原性 IgG% in cK Os 99.2 陽離子交換層析(CEX) 報導值 第4峰 % 69.6 69.4 較高同 功異型 物％ 寸 rn 00 — 較低同 功異型 物％ o r—< 00 in 1—^ pH值 報導值 o 濃度 報導值 (mg/mL) 外觀 報導觀察結果 «V · _赛 id趦 ^*r b»iv *s O *^3^3 碳Φ ^ «V · · 'Wf ·- 〇 <ώ3 時間點 (月） o 1-H 132080.doc -155- 200909005
所執行之測試 尺寸排阻層析 Η 〇 o τ—Η (N 〇 (Ν 〇 cn m ο 99.7 99.7 99.7 99.7 SDS-PAGE 00 cn od 卜 Os 相符 相符 相符 相符 99.5 99.4^ 99.4 100.0 陽離子交換層析(CEX) 70.8 69.4 68.9 i 70.2 CN* 12.4 14.2 〇\ <'i »—Η 17.2 18.2 16.9 17.9 pH值 CN 'Ο 2 濃度 r·'< Ο »—H 1—( 外觀 無色，輕微乳 白色。顆粒： 0 «V 1 •s o 哉*ffi 〇 無色，輕微乳 白色。顆粒： 0 :無色，輕微乳 白色。顆粒： 0 時間點 (月） CN VO 132080.doc -156- 200909005 uo(N:si>v :^典#VOJTf/ v/N^^.wfF^/<«09 了璣祐餺女 蜱#乱賒 0卜< :琛B?F鵷 寸 os^—ιΟΛΙ 1-识Μη日sw-B-^,f、裝肊鉍念 揉m苯吞寒^黎 qs/sm 〇寸 :^55" :’ s %S + S %09/ρζ τ 3¾ : 遽 % Μ ML·. 郫 k LMW2% d Τ-Η i 1 荽 (N Ο m ο m ο m o 寸 ο 卜 〇\ 〇\ On On cK ON vo cK Os ON On μ 0 cA a Xfl J1L· 韜 〇 OS od Ό 00 與參考標 準可相當 之MW m m 纥 nn -«r 柒 m -Hr 街 mr 還原性 IgG% 1 IT) σ； On f"»H Os ON cK 〇\ ϊ—H 〇< ON 00 od O m 4 1 弊 # 麻 OS cK VO od <N cK <N ^d v〇 〇 n?荽 寸 寸· 寸 o (N 〇 rn 較低同i 功異型 物％ 〇 ϊ> ir> v〇 (N 卜 姆 Μ α 磔 Ο vd ί—Η ^d ^d v〇 r-H ^d 報導值 (mg/mL) 寸 τ-^ 寸 t^H 寸 寸 Oi 襄®^· 璘φ睽 ^°r 瑞蕤〇趄 •ΙΝπ 餵 /。： 难輕<fi3襄 IIUd 餵 碳輕O為 i®Un 蹯 墩φ踩 ^〇c? 魂寒·輕 〇 <N m v〇 132080.doc -157- 200909005 uoCN^cyv Ι00ς9β 寸 osioahj
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尺寸排阻層析 報導值 雜質％ LMW2% r—( ι~Η 寡聚物 % m ο m ο 式1 α； <η ο SDS-PAGE 報導值 非還原性 卜 ο 鲽S ^s ·φ® 相符 相符 還原性 IgG% 99.52 Ον cK as 陽離子交換層析(CEX) 報導值 第4峰 % 寸 〇< 寸 cK 較高同 功異型 物％ 寸 cn Ι"·Η in — 較低同 功異型 物％ <Ν r*^ 重組時間 重組時間 i 1 llm29s 7m38s IZJ ΙΛ OO T-H —寸 B S 卜 pH值 報導 值 ο 2 水分 1 1 1_ 報導值 _ 0.3% i.._— Pd z 濃度 報導值 (mg/mL) ί____ m rN 外觀 1報導觀察結果1 溶液 -。 β寒<s3卓 * g。 <fi] _ <s3 单 碟邀φ i 白色 1 餅狀 物 <fi3 荽 •ffi ~銮蓉 時間點 (月） 〇 :t«H 132080.doc -158- 200909005 所執行之測試 尺寸排阻層析 1 1 rn i-H 〇' cn rn 寸 o 寸 〇 m α； 〇\ ΓΛ α； as Ch Os 1〇 〇； 〇\ SDS-PAGE ο 00 <η 〇〇 απ 女 纥 m 街 mr ΠΠ -Wr ir> σ< ON 卜 Os 卜 On Os 〇 〇 陽離子交換層析(CEX) Ο in cK 00 00 Ό in ο CN T-H 卜 (N CN »n VO (Ν <N —·_·Η oo 卜： 〇\ in Ον 'Ο r-H 重組時間 6m47s 7m08s 5m22s 4m 16s 卜 m57s 4m40s 4ml5s 6m36s 8ml7s Κ & 2 CN <Ν \ό 〇< Pi !z <N 〇 οο ο ITi ro T-H »—H (N (Ν r-H 無色，_ 輕微乳 白色。 顆粒· -品。 <e3 ^ ^ 〇 碟邀φ i 5 ^ \ltV ° ， e寒^卑H g 碡邈·® i丄ό • g。 Ο寒<e3卑〇 碟邀Φ趁ό 白色 1 餅狀 物 <n ^ ^ 5 白色 1 餅狀 物 白色 1 餅狀 物 時間點 (月） (N m (Ν ο££0-ιη0-ΙΟ#Ή&¥#·£ D^fJKw^^K-?wls£♦Β衾铖柃盤-駟鳍靼ΗβΝ。ροο-ιηο #ΉΙΊ^4Ν#ΞΙ触岭^)甽蹀恻遂-駟硪^茛<贺100絮苍^。^寒筚令%4*-^竦-1教¥衾款二 132080.doc -159- 200909005 uo(n:sdv 100109¾ .0 V/N#^_W?F 鉍 ¥【«砌091 一广^ :琛 B锄鉍 。崩^痒七赵爷犮革棘嘁EM qm 一阳。谰4fe屮蝴鲶錄^h^xl#^率W龊祐餸僉杷命HH'qmln 寸0SICNIOA1 :辗驷钿鉍 :«B笨存犁鉍赛 qm/SUI0(NI ?F 雄^ΐ* S :幸 %ιη-Ηδ 0/009/p(n-hps(n漤砟獾 尺寸排阻層析 報導值 Μ LMW2% 1—Η m ο ο 純度 % v〇 cK m ο SDS-PAGE 報導值 非還原性 ◎ l> o T~H ξ Y 4田 απ 相符2 相符 ! 還原性 IgG% 99.522 00 cK ο\ 陽離子交換層析 (CEX) 報導值 第4峰 % 寸 Os VO CN 較高同 功異型 物％ 寸 cn t—^ 較低同 功異型 物％ CN Τ-Η ^-Η 重組時間 重組時間 llm29s 7m38s ΧΑ ζΠ 00 Τ-Η Η寸 β ε 卜\〇 pH值 報導值 o 水分 報導 值 0.3% Ρί ζ 濃度 報導值 (mg/mL) 1 m T—H Ό CN 外觀 報導觀察結果 溶液 無色， 輕微乳 白色。 顆粒 1' 無色， 輕微乳 i白色。 顆粒· 1 餅狀物 白色 1 餅狀物 1 白色 1 餅狀物 時間點 (月） 〇 132080.doc •160· 200909005 1—Η r-^ 卜 〇 00 Ο Ο CN cK —_Η σν ΟΝ 00 00 Os m ο τ-Η (Ν οό 寸 00 相符 1 1 相符 相符 cK ON 卜 ^sO cK C\ o ι〇 cK m 00 VO CN (Ν y—i o 〇 l> vd W VI (N On mo s s v〇 v〇 6ml7s 5m41s 4m37s 4m45s 6m27s3 (Ν Pi 2； o O 卜 ^―H iT) m ，^。_ · β _ <a3 輕— 碟堪UEI際 無色， 輕微乳 白色。 顆粒 0 無色， 輕微乳 _白色。 顆粒· 0、0、 1 > ο3 白色 1 餅狀物 _ί 白色 1 餅狀物1 白色 1 餅狀物 (Ν m οΓηεο-(τιο-ΙΟ^ΉΙα^^.ε♦Β衾躺柃讅駟鳍^=ΉΝ。(卜00;0 #£Ί^4#ΞΙ舾冷¥ )蜊蹀恻#駟嫦祝茛<熒100驾苍_<Ν 132080.doc -161 - 200909005 uoCN^av5059:¾ 寸 ΟΠΠΟΛΊ /~\ "0 捃，『、/-^«09 了鲅 V/M龚劣赛W喇鉍祐餸僉*运衅#華聆 qul/sm§ $$ KB喇鹖
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luI/SUIOCNf—I :5 蝌垅趄鉍礴婼，f'鹿制-^蚌资荸聆sr-^ ¥s^ 瘥七/^«091
0/OS $$ SB嘲碱 lTf、镩镩劄1 - Is们 d-M - s mi c/009/p(NTPln(N 尺寸排阻層析 報導值 雜質％ LMW2% τ-Η 寸 ο rn 寸 ο 純度 % 99.6 99.2 SDS-PAGE j 報導值 非還原性 黎 Ο) 與參考標 準可相當 之MW 相符 相符 I還原性 IgG % cK On IT) a\ 陽離子交換層析(CEX) 報導值 第4峰 % 69.4 yn cK 較高同功 異型物％ rn Os r~H r~H 較低同功 異型物％ O vd Γ ΟΟ 重組時間 重組時間 Pd Z 1 7m 16s 5m05s pH值 報導值 〇 »—H 濃度 報導值 (mg/mL) 1 CN T-^ 寸 外觀 報導觀察結果 溶液 1 1 1 無色， 輕微乳 白色。 顆粒 r 無色， 輕微乳 1白色。 顆粒. 0 餅狀物 1 Pci 白色 1 餅狀物 9¾ ^ Sa Ο r〇 132080.doc •166- 200909005 w-' ΙΌ 寸 Ό<ν·66 6·α 街要 ς·66 S.69 6·α 寸./,1 s 卜 ςιπς si Γ9 s I , 0 :#碟 οβφ Ί5Ι* 蕃泰 I β-ίπ 紱莨W哋铋K-?fs£啻农贼柃龠ik鳔皞=ΉΝ 。智單絮令%^*-^琿-1軚^备葙·！ 132080.doc -167 200909005 圖式簡單說明】 圖1展示於30°c下高分子量物質之形成。 圖2展示於飢下高分子量物質之形成。 圖3展不於30 C下於預冷凍乾燥之溶液中低分子量物質 之形成。 圖4展示於机下於預冷来乾燥之溶液中低分子量物質 之形成。 及低分子量物質之形成 質及低分子量物質之形 圖5展示於5°C下由高分子量物質 引起之總單體損失。 圖6展示於30°C下由高分子量物 成引起之總單體損失。 圖7展示於40°C下由高分子 成引起之總單體損失。 量物質及低分子量物質之形 圖8展不於5 C下冷;東乾燥之嘴+ n 〇 損 你义碉配物中隨時間之單體損失 圖9展示於30 °C下冷陳乾燥之嘴 从 % <調配物中隨時間之單體 失。 圖10展示於4(TCf冷束乾燥之調配物中隨時間之單體損 失。 圖11展示於30 C下各調配物之低分子量物質之形成。 圖12展不於40 C下各調配物之低分子量物質之形成。 圖13展示於40°C下於預冷凍乾燥之調配物中高分子量物 質之形成。 圖14展示於5C下由聚集體之形成引起之單體損失。 圖15展示於30C下由聚集體之形成引起之單體損失。 132080.doc -168· 200909005 圖16展示於40°C下由聚集體之形成引起之單體損失。 圖17展示於40°C下於預冷凍乾燥之樣品中高分子量物質 之形成。 圖18展示於4(TC下於預冷凍乾燥之樣品中低分子量物質 之形成。 圖19展tf於40 C下由高分子量物質及低分子量物質之形 成引起之總單體損失。 圖2 0展示於4 0 °C下之重組時間。 、 圖21展示於40°C下於冷凍乾燥之樣品中高分子量物質之 形成。 圖22展示於40 C下於冷凍乾燥之樣品中低分子量物質之 形成。 圖23展示於40°C下由高分子量物質及低分子量物質之形 成引起之總單體損失。 / 圖24A展示於5°C下於預冷凍乾燥之樣品中高分子量物質 I 之形成。圖24B展示於5°C下於預冷凍乾燥之樣品中低分子 量物質之形成。圖24C展示於5。〇下於預冷凍乾燥之樣品中 之單體損失。 圖25展示於40°C下於冷凍乾燥之樣品中高分子量物質之 形成。 圖26A展示於40°C下於重組樣品中高分子量物質之形 成。圖26B展示於40°C下於重組樣品中低分子量物質之形 成。圖26C展示於40°C下重組樣品中之單體損失。圖26D展 示重組時間。 132080.doc •169-
Claims (1)
- 200909005 十、申請專利範圍： 1 · 一種藉由冷凍乾燥水性調配物所製備之穩定冷凍乾燥之 調配物’其中該水性調配物包含： (a) 約 20 mg/ml至約 80 mg/ml之那他珠單抗(natalizumab); (b) 具有約5.5至約6.5之pH值的緩衝劑； (c) 約20 mg/ml至約80 mg/ml之蔗糖；及 (d) 約0.02%至約0.08%之聚山梨醇酯。 2·如請求項1之穩定冷凍乾燥之調配物，其中該水性調配 物包含約30 mg/ml至約80 mg/ml之那他珠單抗。 3 ·如清求項2之穩定冷凍乾燥之調配物，其中該水性調配 物包含約40 mg/ml那他珠單抗。 4. 如明求項1之穩定冷束乾燥之調配物，其中該緩衝劑具 有約6.0之pH值。 5. 如明求項1之穩定冷凍乾燥之調配物，其中該缓衝劑為 組胺酸。 6‘如叫求項5之穩定冷凍乾燥之調配物，其中該組胺酸係 以約1 ηιΜ至約12 mM之濃度存在於該水性調配物中。 7.如咐求項6之穩定冷凍乾燥之調配物，其中該組胺酸係 以、6 mM之遭度存在於該水性調配物中。 8 ·如明求項1之穩定冷凍乾燥之調配物，其中該蔗糖係以 、、勺20 mg/mi至約80 mg/ml之濃度存在於該水性調配物 中。 月求項8之穩定冷凍乾燥之調配物，其中該蔗糖係以 勺之濃度存在於該水性調配物中。 132080.doc 200909005 如吻求項1之穩定冷凍乾燥之調配物，其中該聚山梨醇 酯為聚山梨醇酯80。 .如喷求項10之穩定冷凍乾燥之調配物，其中該聚山梨醇 @曰80係以約〇 〇2%至約〇 〇8%之濃度存在於該水性調配物 中。 12·如吻求項11之穩定冷凍乾燥之調配物，其中該聚山梨醇 係以約0. 〇 4 %之、濃度存在於該水性調配物中。 戈項1之穩疋冷柬乾燥之調配物，其中該水性調配 物中之那他珠單抗對蔗糖之重量比為約〇 · 5 :丨至約2:丄。 1.如吻求項13之穩定冷凍乾燥之調配物，其中該水性調配 物中之那他珠單抗對蔗糖之重量比為約1:1。 15. 如請求項丨之穩定冷凍乾燥之調配物，其中該水性調配 物中之蔗糖對那他珠單抗之莫耳比率為約3〇〇:丨至約 500:1 〇 16. 如明求項15之穩定冷凍乾燥之調配物’其中該水性調配 物中之蔗糖對那他珠單抗之莫耳比率為約4〇〇:丨至約 5 0 0:1 〇 17. 如請求項16之穩定冷减乾燥之調配物，其中該水性調配 物中之蔗糖對那他珠單抗之莫耳比率為約4 5 〇: i。 18. 如哨求項i之穩定冷凍乾燥之調配物，其中該水性調配 物進一步包含膨化劑。 19·如明求項丄之穩定冷〉東乾燥之調配物，其中該水性調配 物進一步包含張力調節劑。 2〇·如凊求項！之穩定冷凍乾燥之調配物其中該水性調配 132080.doc 200909005 物包含： (a) 約40 mg/ml那他珠單抗； (b) 約6 mM組胺酸，pH值為約6.0; (c) 約41 mg/ml蔗糖；及 (d) 約0.04%聚山梨醇酯80。 2 1. —種穩定重組調配物，其包含： (i)約80 mg/ml至約160 mg/ml之那他珠單抗； (Π)ρΗ值為約6.0之約18 mM組胺酸； (iii) 約 123 mg/ml蔗糖；及 (iv) 約0.12%聚山梨醇酯80 ;其中： 該重組調配物係從藉由冷凍乾燥水性調配物所製備之 穩疋冷/東乾燥之調配物來製備，該水性調配物包含： (a) 約40 mg/ml那他珠單抗； (b) 約6 mM組胺酸，pH值為約6.0 ; (c) 約41 mg/ml蔗糖；及 (d) 約0.〇4%聚山梨醇酯80。 22.如請求項21之穩定重組調配物，其中該穩定重組調配物 包含約120 mg/ml那他珠單抗。 23 · —種製備穩定重組調配物之方法，其包含使藉由冷凍乾 燥水性調配物所製備之冷凍乾燥之調配物重組，該水性 調配物包含： (a) 約30 mg/ml至約60 mg/ml之那他珠單抗； (b) 具有約5.5至約6_5之pH值的緩衝劑； (c) 約20 mg/ml至約50 mg/ml之蔗糖；及 132080.doc 200909005 (d)約0.02%至約0.08%聚山梨醇醋。 24 ·如請求項24之方法’其中該水性調配物包含約4〇 mg/ml 至約50 mg/ml之那他珠單抗。 25，如請求項25之方法’其中該水性調配物包含約4〇 mg/ml 那他珠單抗。 26_如請求項23之方法’其中該緩衝劑具有約6·〇之pH值。 27.如請求項23之方法’其中該緩衝劑為組胺酸。 《28.如請求項28之方法’其中該組胺酸係以約1 mM至約12 ' mM之濃度存在於該水性調配物中。 29_如請求項29之方法，其中該組胺酸係以約6 mM之濃度存 在於該水性調配物中。 30.如請求項23之方法，其中該蔗糖係以約2〇 mg/ml至約5〇 mg/ml之濃度存在於該水性調配物中。 3 1.如請求項3 1之穩定冷凍乾燥之調配物，其中該蔗糖係以 約40 mg/ml之濃度存在於該水性調配物中。 (32·如請求項23之方法，其中該聚山梨醇酯為聚山梨醇酯 80 = 33. 如請求項32之方法，其中該聚山梨醇醋8〇係以約〇 〇2% 至約0.08°/。之濃度存在於該水性調配物中。 34. 如請求項33之方法，其中該聚山梨醇㈣係以約〇桃 之濃度存在於該水性調配物中。 35. 如睛求項23之方法，其中該水性調配物中之那他珠單抗 對蔗糖之重量比為約〇.5:1至約2:1。 36. 如叫求項35之方法，其中該水性調配物中之那他珠單抗 132080.doc 200909005 對蔗糖之重量比為約丨：j。 之蔗糖對那他 之蔗糖對那他 37_如請求項23之方法，其中該水性調配物中 珠單抗之莫耳比率為約300:丨至約5〇〇: 1。 3 8.如請求項37之方法，其中該水性調配物中 珠單抗之莫耳比率為約4〇〇: 1至約5〇〇: 1。 39.如請求項38之方法，其中該水性調配物中之薦糖對那他 珠單抗之莫耳比率為約450:1。 f 4〇·如請求項23之方法，其中該水性調配物進一步包含膨 劑。 / 41. 如請求項23之方法，其中該水性調配物進一步包含張力 調節劑。 42. 如請求項23之方法’其中該水性調配物包含： (a) 約40mg/ml那他珠單抗； (b) 約6 mM組胺酸，pH值為約6.0 ; (c) 約41 mg/ml蔗糖；及 (d) 約0.04%聚山梨醇酯80。 4 3.—種治療個體之方法，其包含向該個體投與治療有效量 之如清求項2 3之穩定重組調配物，其中該個體具有可藉 由投與那他珠單抗來治療之病症。 132080.doc
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