TW200813005A

TW200813005A - Hydrate for pharmaceutical compositions

Info

Publication number: TW200813005A
Application number: TW096109898A
Authority: TW
Inventors: Makoto Ono; Shoko Yoshida
Original assignee: Daiichi Seiyaku Co
Priority date: 2006-03-27
Filing date: 2007-03-22
Publication date: 2008-03-16
Also published as: JP5131926B2; AR060162A1; US20100234410A1; ES2513819T3; TWI386401B; EP2000467B1; EP2000467A4; US8003666B2; EP2000467A2; JPWO2007111023A1; WO2007111023A1; EP2000467A9

Description

200813005 九、發明說明：【發明所屬之技術領域】本發明係關於適合作為用於製造醫藥品製劑、尤其是固體製劑之藥品原料粉末的化合物。【先前技術】具有以式（I) [化1] Η

COOH (0 所表不之結構的新穎喹諾酮化合物，其不僅對於革蘭氏陰性菌，且對於對喹諾酮系抗菌藥為低感受性之革蘭氏陽性球菌亦具有較強之抗菌活性；其可期待作為喹諾酮系合成抗菌藥，該喹諾酮系合成抗菌藥具有優異之安全性、及作 U 為具有體内動態之醫藥優異之特性。（參照專利文獻丨）。為了將某化合物製成醫藥而提供，需要具有可製造各種製劑、尤其是固體製劑之特性之，具有適合作為藥品原料粕末之特性的化合物（或結晶）。作為如此之化合物，期望其具有，例如，優異之化學穩定性、不會產生吸脫濕、或不會產生結晶轉換，又，若為水合物，則不會失去結晶水等％疋性優異之特性。進而，即使為具有如此之穩定性 (、藏穩疋〖生）之化合物，為獲得其而使用的溶劑必須為可安全使用者。 119371.doc 200813005 然而，關於式（i)化合物，並不確知其係補充有上述特性之化合物。 [專利文獻1 ] 曰本專利特願2005-146386號【發明内容】 [發明所欲解決之問題] 本發明之目的在於提供一種化合物，其相關於式⑴化合物，且具有可採用作固體製劑製造用之藥品原料粉末的特性。 ' [解決問題之技術手段] 本發明者們發現以式⑴所表示之化合物之1/2水合物（再者，本說明書中有時僅將下式簡稱為「1/2水合物」。） [化2]

進而關於其製備已明確可由具有且具有作為樂品原料粉末所必須具有充分之保存穩定性，文優異安全性之溶劑製備，』之特性，從而完成本發明。種於以式（I) 即，本發明係關一種於 [化3] H9371.doc 200813005

所表示化合物之1/2水合物者。 ! 即，本發明係關於以下態樣： : 1· 7-[(7S)_7-胺基·7_甲基_5_氮雜螺[2. 4]庚燒_5基]_6_氣_ M(1R，2S)-2-氟代環丙基]_8_甲氧基_Μ_二氫_4_氧代喹啉- 3-羧酸之1/2水合物； 2· 以下述式 [化4]

所表示之化合物。

U 又，本發明係關於一種醫藥，其含有上述1/2水合物。進而’本發明係關於一種醫藥組合物，其係含有上述 1/2水合物及藥學上所容許之載體。進而，本發明係關於一種上述1/2水合物之用途，其係用於醫藥製造。進而，本發明係關於一種感染症之預防治療法，其特徵在於：投與上述1/2水合物之有效量。 [發明之效果] 本發明係提供一種穩定且容易製備之化合物，若根據本 H9371.doc 200813005 發明，則可提供具有作為藥品原料粉末優異之特性的化合物。【實施方式】式（I)之化合物，例如可依據下述參考例1〜11或參考例 12〜22而製造。即，若根據參考例1〜11，則式（I)之化合物可依據下述反應式而製造。 [化5]

119371.doc -9- 200813005 又’若根據參考例12〜22 反應式而製造。 [化6] 則式（I)之化合物可依據下述

本發明之1/2水合物，可將式⑴之化合物自乙猜中進行

U 再結晶而獲得。為製備1/2水合物，可使用各種形態之式 ⑴之化合物。至於如此之化合物，例如可列舉：酸肝或二參考例中所獲得之乙醇化物，以及1/2水合物本身等。自乙腈中進行再結晶時之乙腈之使用量，㈣於起始原料可使用5〜20 (V/W)左右、較好的是5〜15 (v/w)左右。再結晶本身可依據該領域中通常所實施之方法進行。例如，: 好的是，將原料添加於乙腈十，加熱至5(rc而使之溶解，再冷卻至25°C，藉此使1/2水合物結晶析出。使用乙腈以外之溶劑，亦可獲得本申請案之ι/2水人物。作為如此之溶劑’例如可列舉：s旨類、_及簡: 作為酉旨類’可列舉：甲酸乙画旨、乙酸甲醋；作為酮類，可列舉：甲基乙基酮、甲基異丙基酮、2_戊，、3_戊酮；作為崎類’可列舉四氫咬喃。進而，該等溶劑亦可製成與醇或水之混合溶劑而使用。使用該等溶劑之情形，係與使用 H9371.doc -10- 200813005 乙腈之情形相同’可將原料添加於溶劑中，並加熱至5 〇 °c 使之溶解，再冷卻至25°c，藉此使1/2水合物析出。本發明者們驚奇地判明，本發明之1/2水合物具有如下之優異特性。即，已判明： 1.濕度變化所引起之重量變化微小，其係穩定之吸脫濕行為；

2·加熱脫水後之吸脫濕變化中，脫水後可迅速液化，吸羞後之ί丁為亦與加熱處理厨無差異； 3.加熱脫水後之晶形變化，於脫水後亦維持結晶狀態，吸水後亦可恢復成穩定之1/2水合物，而迅速產生液化； 4·於保存時，不會產生晶形之變化； 5.於濕熱條件、乾熱條件下均穩定且含量不產生變化，且已判明’其係穩定性優異之化合物，作為藥品原料粉末較佳之化合物。本發明之1/2水合物具有較強之抗菌作帛，因此，可用作人、動物及魚類用之醫藥品，或用作農藥、食品之保存劑。於將本發明之1/2水合物用作人體用之醫藥品之情形時’投與量為成人每1天〜1 g、更好的是_〜800 叫。又，作為動物用之投與量，係根據投與目的，所處理動物之大小’⑨染病原菌之種類、程度而不同，用量’通常每工公斤動物體重為i〜細叫、該-天Η-幻次進行投與，或分為2〜4次進= ”再者，-天用量亦可根據需要而超過上述量。 119371.doc 200813005 本發明之1/2水合物對成為各種感染症之原目之廣泛範圍的微生物種類具有活性，可治療、預防或減輕由該等病原體所引起之疾病。至於本發明之化合物有效之細菌類或細菌樣微生物種類，可列舉：葡萄球㈣、化膿性鏈球菌、溶血性鏈球菌、腸球菌、肺炎球菌、消化鏈球菌屬、淋病球菌、大腸桿菌、檸檬酸桿菌屬、志賀桿菌屬、肺炎桿菌、腸桿菌屬、沙雷氏菌屬、變形桿菌屬、綠膿桿菌、

U 流行性感冒桿菌、不動菌屬、曲狀桿菌屬、沙眼披衣菌等。至於由該等病原體所引起之疾病，可列舉：毛囊炎、癤、癰、丹毒、蜂窠組織炎、淋巴管（腺）炎、瘭疽、皮下膿瘍、汗腺炎、聚合性痤瘡、感染性粉瘤、肛周膿腫、乳腺炎、外傷·燙傷·手術傷口等淺表性二次感染、咽喉炎、急性支氣管炎、扁桃體炎、慢性支氣管炎、支氣管擴張症、彌、度性細支氣管炎、慢性呼吸疾病之二次感染、肺炎、腎盂腎炎、膀胱炎、前列腺炎、副睾丸炎、淋病球菌性尿道炎、非淋病球菌性尿道炎、膽囊炎、膽管炎、細菌性赤疾、腸炎、子宮附屬器炎、子宮内感染、巴林氏腺炎、眼瞼炎、瞼板腺炎、淚囊炎、瞼板腺炎、角膜潰瘍' 中耳炎、副鼻竇炎、牙周炎、牙冠周圍炎、顎炎、腹膜炎、心内膜炎、敗血症、髄膜炎、皮膚感染症等。進而，至於本發明之1/2水合物有效之抗酸菌類，可列舉：結核菌群（結核分歧桿菌（Mycobacterium tuberculosis)、牛分歧桿菌（μ· bovis)、非洲分歧桿菌 119371.doc 200813005 afdcanum))、非典型結核菌（肯沙士分枝桿菌（μ· kansasii)、Μ· malaynum、Μ· scrofaseum、禽結核分枝桿囷（Μ· avium)、細胞内分枝桿菌（μ· intraceiiuiare)、μ· xenobi、偶然分枝桿菌（μ· f〇rtuitum)、μ· cherone)等。由 ; 忒等病原體所引起之抗酸菌感染症，可根據其起因菌之類別可大致分類為結核病、非典型抗酸菌症、麻風3大類。結核菌感染症，除肺之外，可見於胸腔、氣管·支氣管、、淋巴腺、全身散播性、骨關節、髄膜·腦、消化器官(腸·肝臟）、皮膚、乳腺、眼、中耳·咽喉、尿道、男性生殖器、女性生殖器等。非典型抗酸菌症（非結核性抗酸菌症）之主要患病器官為肺，其它可列舉··局部淋巴腺炎、皮膚軟組織、骨關節、全身散播性型等。又成為動物感染症原因之各種微生物，例如對大腸桿菌屬、沙氏桿菌屬、巴斯德菌屬、嗜血桿菌屬、博德氏桿菌屬、葡萄球菌屬、黴漿菌屬等。作為具體疾病，可列 (J 舉·鳥類之大腸桿菌症、雛白痢、雞副傷寒症、家禽霍亂、傳染性鼻炎、葡萄球菌症、黴漿菌感染症等，豬中大腸桿菌症、沙氏桿菌症、巴斯德菌症、嗜血桿菌感染症、 •彡縮性鼻炎、滲出性表皮炎、黴聚菌感染症等，牛之大腸 • 杯菌症、沙氏桿菌症、出血性敗血症、黴衆菌咸毕症、半接觸傳染性胸膜肺炎、乳房炎等，狗之大腸桿二: ^沙氏桿菌感染症、出血性敗血症、子宮積膿症、膀脱炎等，以及貓之滲出性胸膜炎、膀胱炎、慢性鼻炎、嗜血才干菌感染症、貓仔之腹瀉、黴漿菌感染症等。 H9371.doc •13- 200813005 s有本毛明之1/2水合物之抗菌劑，可根據投與方選擇適當之製劑，可藉由通常所使用之各種製劑 : 法進行調製。至於將本發明之1/2水合物作為主劑』的知!里例如可列舉：錠劑、散劑、顆粒劑、膠囊冷液片!I *漿劑、醜劑、油性或水性之懸濁劑液體等 Γ主=二於製劑中使用穩定劑、防腐劑、溶液輔助：專’亦可將含有該等之溶液裝入容器内之後，藉由燥專作為固體製劑而製成使用時製備之製劑。又 6 次投與i裝八容器内；亦可將多次投與量裝入同α 内。至於外用製劑，例如可列舉：溶裔液、敕客、锌棚 ^ 心屬液、乳濁夜/旋膠、霜劑、洗劑、喷霧劑等。至於固體製劑，可含有活性化合所容許之添加劑，至於該等 ’、11 3製劑學上類、黏合劑類、崩解劑類:::進::可列舉:填域 _等。至於液嫌製劑，；::進'=、㈣類1 ο 乳化劑等劑等，作為添加劑亦包括懸濁化冑…懸濁液、乳液其次，將製劑處方例表示於下。製劑例1· [膠囊劑]：

1 / 2水合物玉米殿粉羧甲基纖維素舞羥甲基纖維素硬脂酸I 合計 119371.doc • 14- 200813005 製劑例2. 製劑例3 .

[溶液製劑]: 1 / 2水合物 1〜1 0 g 乙酸或氫氧化鈉 0.5〜2 g 對羥基苯甲酸乙酯 0.1 g 純化水_87.9〜98.4 g 合計 100 g [飼料混合用散劑]:

1/2水合物 1〜10 g 玉米澱粉 89.5〜98.5 g 輕質無水矽酸_0.5 g 合計 100 g [實施例] 以下，藉由實施例及參考例對本發明加以說明，本發明並不限定於該等。 [參考例1] 1 -乙醯基-1 -環丙烷羧酸第三丁酯 [化7]

將乙醯乙酸第三丁酯（497 mL，3.00 mol)、1，2_二溴乙烷 (310 mL，3.60 mmol)、碳酸舒（1.106 kg，8.00 mmol)、及 119371.doc -15- 200813005 二曱基甲醯胺（2.0 L)之混合物於30t水浴中加熱攪拌15小時，再於6〇°C水浴中上加熱攪拌3.5小時，繼而於3〇t水浴中加熱攪拌4天。以氟鎂石過濾反應液，且以乙醚（3.$ L)清洗濾取物。將濾液及乙醚清洗液一倂加入到水（2 中，萃取有機層。以乙醚（2 L)進而自殘留之水層中萃取有機層，於殘留水層中加入水（1 L)之後，進而以乙醚（2L)萃取有機層。合併全部有機層之後，以1〇%棒樣酸水溶液（2 p L)、水（2 Lx3)、及飽和食鹽水（2 Lx3)進行清洗，再加入、無水硫酸鈉進行乾燥。過濾除去乾燥劑後，減壓蒸餾除去溶劑，將所獲得之殘留物進行減壓蒸餾，獲得371,8 mmHg，72〜78。〇之餾分，2.〇2则卜67%)之無色透明油狀物之目標化合物。 ^-NMR (400 MHz, CDC13) δ ppm: 1.37-1.40 (4Η, m), !.49 (9H，s)，2.44 (3H，s)。 [參考例2] y ΐ-(1-胺基氰乙基）-1 -環丙烷羧酸第三丁酯 [化8]

將1_乙醯基-1·環丙烷羧酸第三丁酯（9.21 g , 5〇〇溶解於7當量之氨水/甲醇溶液（3〇〇 mL)，於冰浴冷卻下，加入濃氨水（90 mL)、氯化銨（53·5 g，1〇〇 m〇1)、及氰化鈉（4.90 g，100.0 mm〇l)，其後於室溫下攪拌18小時。將溶 119371.doc -16- 200813005 劑減壓濃縮’於殘留液中加入水（1〇〇 mL)之後，以二氣甲烧（300 mL + 2xl〇〇 mL)進行萃取。於合併之有機層中加入無水硫酸鈉進行乾燥，再過濾除去乾燥劑之後，減壓蒸餾除去/谷劑’藉此而獲得1 〇· 1 5 g (48.3 mmol，97%)之薄褐色油狀物之目標化合物粗產物。所獲得之粗產物並不進行進一步精製而用於以下反應。 ^-NMR (400 MHz, CDC13) δ ppm: 1.02-1.12 (2Η? m), 1.19- 1·17 (2Η，m)，1.48 (9Η，s)，1.50 (3Η，s)，2.13 (2Η，brs)。 MS (ESI) m/z: 155 ίΜ-tBuf。 [參考例3] 1-(1，2-二胺基-1-甲基乙基>^環丙烷羧酸第三丁酯 [化9]

於1-(1-胺基-1-氰乙基）-1-環丙烷羧酸第三丁酯〇. 12 g， 5·30 mmol)之乙醇溶液（50 mL)中，加入雷氏鎳觸媒 (NIKKO RICA Corporation，R-100，10 mL)之乙醇懸濁液 (3 0 mL)，於氫氣環境下、於室溫下劇烈攪拌6小時。以氟鎂石過濾除去觸媒，且減壓蒸餾除去溶劑，藉此獲得〇.84 g(3.92 mmol，74%)之無色透明油狀物之目標化合物粗產物。所獲得之粗產物並不進行進一步精製而用於以下反應。 h-NMR (三氟乙酸鹽，400 MHz，DMSO-d60 ppm: 108_ 119371.doc -17- 200813005 1.19 (5H，m)，1.21-1.27 (1H，m)，128-1 33 (1H，⑷，ι 39 (9H，s)，3·27(1Η，d，J=12.9 Hz)，3.48 (1H，d，J=13.4 Hz)， 8.34 (6H，brs) ° MS (ESI) m/z: 215 (M+H)+ 〇 [參考例4]

1-(1，2-二胺基小甲基乙基)小環丙烷羧酸二鹽酸鹽 [化 10]

2HCI 將0.82 g (3.83 mmol)^(l2_二胺基卜甲基乙基）小環丙烧叛酸第三丁醋粗產物，於室溫下溶解於濃鹽酸（5 mL)’於相同溫度下授拌30分鐘。於反應液中加入水之後’減壓蒸德除去溶劑’繼而以乙醇進行共沸（2次），獲得 0.82 g (3.55麵〇卜93%)之薄黃色泡狀固體之目標化:物 υ 產物。所獲得之粗產物並不進行進-步純化而用於以下反應。 W-NMR (400 MHz，CD3OD) δ ppm: 1·2(Μ.26 (1H，m)，1 28 (3H, s)5 1.32-1.43 (2H, m)? 1.58-1.62 (1H5 ^3.46(^, J=13.4 Hz)，3.80 (1H，d，J=13.4 Hz)。 ’ 5 MS (ESI) m/z: 159 (M+H)+。 [參考例5] H第三丁氧基獄基胺基）-7-甲基_5·氮雜螺[24]庚烧_4__ [化 11] 119371.doc •18- 200813005

於1-(1，2-二胺基-1-甲基乙基）-1-環丙烧魏酸二鹽酸鹽粗產物（800 mg，3_46 mmol)之乙腈溶液（70 mL)中，加入 1，1，1，3,3,3-六甲基二石夕氮烧（7·38 mL，34.6 mmol)添加，並於氮氣置換下，於100°C油浴中加熱回流4小時。冷卻至室溫，加入甲醇（70 mL)之後，減壓蒸餾除去溶劑，藉此獲得淺褐色膠狀固體之7-胺基-7-甲基-5-氮雜螺[2_4]庚烧_ 4 -酮之粗產物。 MS (ESI) m/z: 141 (M+H)+。於室溫下，於上述所獲得之7-胺基-7-甲基-5-氮雜螺 [2.4]庚烧-4-酮之粗產物中，加入l，4-二氧雜環己烷（2〇 mL)、及二碳酸二第三丁酯（ι·528 g，7·〇〇 mm〇l)，並將混合物於相同溫度下攪拌5小時。於反應液中加入水（50 mL)，且以氯仿（1〇〇 mL + 50 mL)進行萃取之後，於合併之有機層中加入無水硫酸鈉而進行乾燥，使用短矽膠管柱過濾除去乾燥劑之後，減壓蒸餾除去溶劑。於所獲得之殘留物中加入乙醚使其懸濁而進行濾取，藉此獲得502 mg (2·09 mmol，2步驟，60%)之白色粉末之目標化合物。 ^-NMR (400 MHz, CDC13) δ ppm: 0.77-0.82 (1Η5 m), 0.94-1·〇4 (2Η，m)，1.16-1.23 (1Η，m)，1·28 (3Η，s)，1.43 (9Η，s)， 3·29 (1H，d，J=10.3 Hz)，4.12 (1H，m)，4.60 (0.9H，brs)， 119371.doc -19- 200813005 5.82 (1H，brs) 〇 MS (ESI) m/z: 185 (M-tBu)+。 [參考例6 ] 5-苄基-7-(第三丁氧基羰基胺基）-7_甲基氮雜螺[2 4]庚燒-4-酮 [化 12]

於7-(弟二丁氧基援基胺基）-7-甲基-5-氮雜螺[2.4]庚烧_ 4-酮（3.12 g，12.97 mmol)之二甲基甲醯胺溶液（65 mL) 中，於冰浴冷卻下，經5分鐘添加氫氧化鈉（55%，礦物油分散液，53 8 mg，12.33 mmol)。於相同溫度下擾拌4〇分鐘之後，加入溴甲苯（1.851 mL，15.56 mmol)，於室溫下攪拌1_5小時。於反應液中加入乙酸乙酯（3〇〇進行稀釋，以水（100 mLx2)及飽和食鹽水（1〇〇 mL)進行清洗。加入無水硫酸鈉而進行乾燥，過濾除去乾燥劑之後，減壓蒸餾除去溶劑，以矽膠管柱層析法（己烷：乙酸乙騎 =9:1—4:1—2:1)對所獲得之殘留物進行精製，藉此獲得 4·20 g (12.71 mmo卜98%)之無色透明膠狀固體之目標化合物。 aH-NMR (400 MHz? CDC13) δ 1·〇6 (2Η，m)，1.21-1.29 (4Η PPm： 0.76-0.81 (1H5 m), 0.93^ m)，1·37 (9H，m)5 3.14 (1H，d， 119371.doc -20. 200813005 J=10.3 Hz)，3.92-3.98 (1H，m)，4.44 (1H，d，J=15.1 Hz)， 4.56 (1H，d，J=14.6 Hz)，4·56 (1H，brs)，7.22-7.33 (5H， m)。 MS (ESI) m/z: 33 1 (M+H)+。 [參考例7] (_)-5_苄基-7-(第三丁氧基羰基胺基）_7_曱基_5_氮雜螺[2.4] 庚烧酮及（+ )-5-苄基-7-(第三丁氧基羰基胺基）-7-甲基-5-鼠雜螺[2.4]庚烧·4-啊、以光學活性管柱（CHIRALPAK AD，20 mm_250 mm , 己烧：異丙醇=90:10，流速=2〇 mL/min，每1次分離50 mg) ’將於參考例6中所獲得之消旋體5_苄基_7_(第三丁氧基幾基胺基）-7-甲基-5-氮雜螺[2.4]庚烷_4_酮（2 254 g， 6·82 mmol)進行光學分離，獲得（-)_5-苄基_7·(第三丁氧基羰基胺基）-7-甲基_5_氮雜螺[24]庚烷_4_酮（997 mg，3〇2 mmol，保持時間=7 〇分鐘，[α]〇25.ι = -113 9〇(c=〇 l8〇，氣 (J 仿及苄基-7_(第三丁氧基羰基胺基）-7-甲基-5-氮雜螺[2. 4]庚烷-4-酮（957 mg，2.90 mmo卜保持時間=11 3 分鐘，[oli^ ^+lOU。（㈣ 249，氯仿））。 k [參考例8] ()卡基7 (第_ 丁氧基幾基胺基）-7-甲基-5-氮雜螺[2.4] 庚烷 ' [化 13] 119371.doc -21- 200813005

Ph \ph 於溫室下，於（-)-5-苄基-7-(第三丁氧基羰基胺基）-7_甲基-5-氮雜螺[2.4]庚烷-4-酮（950 mg，2.88 mmol)之二氣甲烷溶液（15 mL)中，加入三氟乙酸（7·5 mL)，於相同溫度下攪拌40分鐘。減壓蒸餾除去溶劑，以曱苯進行共沸（2次）之後，加入飽和碳酸氫鈉水溶液（3 0 mL)，以氯仿（1〇〇 mL + 2x50 mL)進行萃取。於合併之有機層中添加無水硫酸鈉進行乾秌，過慮除去乾燥劑之後，減壓蒸餾除去溶劑。將所獲得之殘留物溶解於四氫呋喃（30 mL)中，於冰浴冷卻擾拌下，加入氫化鋰鋁（218 mg，5.74 mmol)，於相同溫度下攪拌1小時。進而加入氫化鋰鋁（109 mg，2·87 mm〇1)，於室溫下攪拌2.5小時之後，再次進行冰浴冷卻，仔細地按順序添加水（0.31 mL)、15。/。氳氧化鈉水溶液（〇31 mL)、及 ϋ 水（〇.93 mL)。於室溫下，將所獲得之混合物攪拌一晚之後，加入硫酸鎂而進行乾燥，且以氟鎂石進行過濾。藉由 , 減壓濃縮濾液，而獲得無色透明油狀物之胺基巧_苄基_ 7-甲基-5-氮雜螺[2·4]庚烷粗產物。所獲得之粗產物並不進行進一步純化而用於以下反應。 H-NMR (400 MHz, CDC13) δ ppm: 0.37-0.45 (2H, m), 0.56-0.66 (2H, m), 0.96 (3H, s), 2.48 (1H, d, J=9.〇 Hz), 2.55 (1H, d, J=8.8 Hz), 2.74 (2H, d, J=9.0 Hz), 3.59 (2H, s), H9371.doc -22- 200813005 7·21_7·37 (5H，m)。 MS (ESI) m/z: 217 (M+H)+ 〇將上述所獲得之7-胺基-5-苄基-7_甲基_5_氮雜螺[2· 4]庚烧粗產物溶解於二氣甲烧（15 mL)中，加入二碳酸二第三丁酯（1.255 g，5.75 mmol)，於室溫下攪拌22小時。減壓蒸餾除去溶劑之後，以矽膠管柱層析法（氯仿：甲醇：三乙基胺=98:2:1 —95:5:1)對殘留物進行精製，藉此獲得586 (1.852 mmo卜3步驟，64。/。）之無色透明膠狀固體之目標化合物。 W-NMR (400 MHz，CDC13) δ ppm: 〇·你〇 45 (1H，⑷，〇 5〇_ 〇·55 (1H，m)，0.63-0.69 (1H，m)，〇.隊〇 85 (m，瓜），12〇 (3H，s)，1.43 (9H，s)，2.44 (1H，d，Ju Hz)，2·59 (1H d J=9.5 Hz)，2.83 (1H，d，J=8.8 Hz)，3·33 (1H，m)，3 57 (ih d，卜13.2 Hz)，3.68 (1H，d，J=13.2 Hz)，4 75 (ih，㈣， 7.20-7.37 (5H，m)。 MS (ESI) m/z: 317 (M+H)、 [a]D25^ = -63.610=0.129，氯仿） [參考例9] (-)-7-(第三丁氧基羰基胺基）-7-甲基_5_氮氣雜螺[2.4]庚烷 [化 14]

• 23 - 119371.doc 200813005 於（-)-5-苄基-7-(第三丁氧基羰基胺基）-7·曱基氮雜螺 [2.4]庚烷（5 81 mg，1.83 6 mmol)之甲醇（40 mL)溶液中，加入10%鈀碳觸媒（M，含水約50%，349 mg)，於氫氣環境下’於室溫下撲:拌2 · 5小時。過渡除去觸媒後，減壓蒸顧除去溶劑’獲得434 mg(定量）之無色透明膠狀固體之目標化合物粗產物。 ^-NMR (400 MHz, CDC13) δ ppm: 0.38-0.43 (1Η5 m)? 0.55-

υ 0·60 (2Η，m)，0.74-0.80 (1Η，m)，1·08 (3Η，s)，1.44 (9Η，s)， 2.75 (III，d，J=12.0 Hz)，2.77 (1H，d，J-11.5 Hz)，3.13 (1H， d，J=11.5 Hz)，3.75 (1H，brd，J=12.0 Hz)，4·44 (1H，brs)。 MS (ESI) m/z: 227 (M+H)+ 〇 [a]D25 1 = -63.5o(c=0.277，氯仿） [參考例10] 7-[7-(第三丁氧基羰基胺基）_7-曱基-5_氮雜螺[24]庚烷-5-基]-6-氟-l-[(lR，2S)-2-氟代環丙基μ8_甲氧基二氫-4-氧代喹啉-3-羧酸 [化 15]

將參考例9中所獲得之㈠_7_(第三丁氧基羰基胺基）_厂甲基-5·氮雜螺[2.4]庚烷粗產物（434 mg，1.836 mmol)、6,7- 119371.doc -24- 200813005 二氟-1-[(1R，2S)-2-氟代環丙基]_8_曱氧基」，4-二氫-4-氧代口奎琳-3-靉酸·二氟棚錯合物（663 mg，1.836 mmol)、及三乙胺（0.768 mL，5.510 mmol)溶解於二甲基亞砜（5 mL)中，於40°C油浴中加熱攪拌14小時。於反應液中加入乙醇：水 =4:1之混合溶液（50 mL)及三乙基胺（5 mL)，於100°C油浴中加熱回流2小時。減壓濃縮反應液，將殘留物溶解於乙酸乙酯（200 mL)中，以1〇%檸檬酸水溶液（5〇 mL)及水（5〇、 mLx2)及飽和食鹽水（5〇 mL)進行清洗。以無水硫酸鈉對有 i 機層進行乾燥之後，減壓蒸餾除去溶劑，藉此獲得87〇 mg(1.676 mmol，91%)之黃色泡狀固體之目標化合物粗產物。 H-NMR (400 MHz，CDC13) δ ppm: 0.55-0.60 (1H，m)，〇 68 0.73 (1H，m)，0.74-0.80 (1H，m)，0.92-0.97 (1H，m)，i 22 (3H，s)，1·40 (9H，s)，1.43-1.59 (2H，m)，3.13 (1H，d，μ 8 Hz), 3.60 (3H? s)? 3.75 (1H? dd3 J=ll.〇? 3.7 Hz)? 3.85 dH, U dt，J=10·2, 4·5 Hz)，4·18 (1H，d，卜10·0 HZ)，4·47 0H，m)， 4·62 (1H，s)，4.79-4.99 (1H，dm)，7.83 (1H，d，J=13.7 Hz)’ 8.68 (1H，d，J=2.7 Hz)，14.88 (0·7Η，brs)。 ’ MS (ESI) m/z: 520 (M+H)+ 〇 [a]D251 = -i28.5o(c=1.240，氣仿） [參考例11] 7-(7-胺基-7_甲基_5-氮雜虫累[2.4]庚燒-5_基）·6氣小_ 2S)-2-氟代環丙基]冬甲氧基]，二氫_4_氧代喹啉|羧酸’ 119371.doc -25- 200813005 [化 16]

於冰浴冷卻下，將於參考例1〇中所獲得之7_[7·(第三丁氧基羰基胺基）-7-甲基_5_氮雜螺[2 4]庚烷_5_基]^氣 [(1R，2S)-2-氟代環丙基]_8_甲氧基·Μ·二氫i氧代喹琳+ 叛酸（870 mg，Μ%匪〇1)溶解於濃鹽酸（ι〇紅）之後，於室溫下攪拌20分鐘，以氣仿（2〇 mLx5)對反應液進行清洗。於冰浴冷卻下，於水層中加入飽和氫氧化鈉水溶液，使pH成為12 ·0，繼而以鹽酸將調整為74之後，以氯仿：甲醇=10:1混合溶液（200 mLx2)、及氣仿：甲醇：水 = 7:3:1底層溶液（200 mL)進行萃取。以無水硫酸鈉對合併之有機層進行乾燥後，減壓蒸館除去溶劑。自乙醇中再結曰曰純化所獲付之殘留物，進行減壓乾燥，藉此獲得644 mg (1·535 mmol，92%)之淡粉紅色粉末之目標化合物。 mp: 195-200〇C。 [a]D25 1=+40.8°(c=0.147, 0.1 N-NaOH)。 W-NMR (400 MHz，0.1 N-Na〇D) δ ppm: 0.49-0.56 (2H，m)， 0·67-0·76 (2H，m)，1.12 (3H，s)，1·43_1·64 (2H，m)，3.56 (3H，s)，3·59-3·71 (4H，m)，3.99-4.04 (1H，m)，4.80-5.03 (1H，m)，7·65 (1H，d，J = 13.9 Hz)，8.45 (1H，s)。 119371.doc -26 - 200813005 元素分析：C21H23F2N3O4_0.75EtOH.0.5H2O; 計算值：C，58.37 ; Η，6.20 ; F，8.21 ; N，9.08。實測值：C，58.23 ; Η，5·99 ; F，8.09 ; N，9.02。 MS (El) m/z: 419 (M+)。 IR (ATR) : 2964，2843，1726，1612，1572，1537，1452, 1439, 1387, 1360, 1346, 1311，1294, 1265, 1207 cm.1。 [參考例12] 5-侧氧基-1-[(1R)-1-苯乙基]咕咯啶-3-羧酸第三丁酯 [化 17]

於攪拌翼攪拌下，於室溫下，於5-氧-1-[(1尺)-1_苯乙基] ϋ比咯啶-3-羧酸（1165 g，4.994 mol)之二氯甲烷（1〇 L)之懸濁液中，加入鄰第三丁基-N，N，·二異丙基脲（3〇2〇 g，ι5.〇〇 mol)之後，於確認内溫上升及回流開始後，於冰水浴中進行冷卻。將反應液冷卻至室溫後，拆除冰水浴1小時後，於40°c下一面加熱一面攪拌3小時。繼而，將反應液於冰水浴中進行冷卻，擾拌丨小時後，過濾除去不溶物，將濾液減壓乾燥固化，以矽膠管柱層析法（矽膠：4 kg;溶離液，己烷：乙酸乙酯=3:1)對所獲得之殘留物進行精製，獲 119371.doc •27- 200813005 得925.2 g (64%)之淡黃色糖漿之目

離獲得而使用。以下表示以其他方法分離獲得之異構體之標化合物（3位異構體各1H-NMR光譜。〇奶口议兵構體混映體可容易地分離之反應，故為能分低極性異構體： H-NMR (400 MHz, CDCI3) δ ppm: 1·45 (9H，s)，1.54 (3H， d，J = 7.08 Ηζ)，2_59-2·74 (2Η，m)，2.95-3.03 (1Η，m)，3·14 (1H? dd5 J-9.77, 8.79 IIz)5 3.49 (1K5 dd5 1=9.77, 6.35 Hz), 7.26-7.36 (5H，m)。高極性異構體： W-NMR (400 MHz，CDCI3) δ ppm: 1.36 (9H，s)，1·53 (3H， d，J=7.32 Hz)，2·59-2·75 (2H，m)，3.02-3.11 (1H，m)，3·16 (1H, dd? J=10.01? 5.62 Hz), 3.51 (1H, dd? J=l〇.〇i5 8.54 Hz)，7·24_7·36 (5H，m)。 [參考例13] (3S)-3 -甲基-5-側氧基-1-[(1R)-1-苯乙基]吼洛咬叛酸第三丁酯 [化 18]

119371.doc -28 - 200813005 於氮氣環境下，於5-側氧基-1-[(1R)-1-苯乙基]吡咯啶_3_ 羧酉夂弟二丁酯（30.05 g，〇·ι〇4 mol)之N，N，-二甲基曱感胺 (210 mL)溶液中，於攪拌下加入26 〇 mL (59.28 g，0.418 mol)硖甲燒，繼而於室溫下，加入氫化鈉（55%油性， 11·35 g，〇·260 mol)。於内溫上升達到約50°c時，於冰水浴中冷卻至30°C，繼而更換至外溫為17°C之水浴中攪拌23 小時。將反應液注入冷檸檬酸水溶液（丨^之1〇%檸檬酸及 (、 5〇〇 g之冰）中擾拌30分鐘後，以乙酸乙酯（800 mL，500 mL)進行萃取w合併有機層，以飽和食鹽水進行清洗之後’以無水硫酸鈉乾燥後，進行過濾，且減壓濃縮濾液。以石夕膠管柱層析法（己烷：乙酸乙酯=5:1—4:1溶出部）對殘留物進行精製，獲得10.63 g (33.7%)之白色固體之目標化合物作為高極性異構物。又，獲得14.91 g(47.3%)之（3R)_ 甲基-5-側氧基- 苯乙基]。比嘻咬_3_鼓酸第三丁酯作為低極性異構物。

U H-NMR (400 MHz5 CDC13) δ ppm: 1.34 (12H, s), 1.52 (3H d，J=7.10 Hz)，2.27 (1H，d，J=17.0 Hz)，2.93 (1H，d，J=l7.〇 Hz)，3.05 (1H，d，J=10.1 Hz)，3·32 (1H，d，J=l〇.i Hz)，5.50 GH，q，J=7.1 Hz)，7.23-7.38 (5H，m)。 •[參考例14] (3S)_4-[2-(第三丁基二甲基矽烷基）羥乙基]_3_甲基_5·侧氧基-1-[(1R)_苯乙基]°比咯啶-3-竣酸第三丁酯 [化 19] 119371.d〇· •29- 200813005

N

U 於·4°(：下，於（3S)-3-曱基-5-側氧基-1-[(1R)-苯乙基]吡咯啶-3-羧酸第三丁酯（30.0 g，98.9 mmol)、及第三丁基（2-蛾代乙氧基）二曱基石夕烧（36.8 g，129 mmol)之無水四氫ϋ夫喃（288 mL)溶液中，滴加雙（三甲基矽烷基）醯胺鋰（1β〇 Μ 之四氫呋喃溶液，129 mL，129 mmol)，於2°C下攪拌3.5 小時。於反應液中加入飽和氯化銨水溶液（3〇〇 mL)，以乙酉夂乙S曰（3 00 mL，200 mL)進行萃取。以飽和食鹽水（2〇〇 mL)清洗有機層，以無水硫酸鈉乾燥後，進行過濾，且將濾液減壓乾综固化’獲得54.1 g之目標化合物。再者，該產物並不進行精緻而用於以下步驟。 MS (ESI) m/z: 363 (M-Boc+H)+ 〇 [參考例15] (3S)-4-(2-m乙基）-3-甲基_5_側氧基小[(1R)_笨乙基p比咯啶_3_羧酸第三丁酯 [化 2〇1 119371.doc -30 - 200813005

Ο 將上述石夕烧基體粗產物（54.1 g’ 98.9 mmol)溶解於四氫呋喃（450 mL)中，於冰浴冷卻下，滴加氟化四丁基銨之1〇 mol/L之四氫呋喃溶液（148 mL，148 mmol)之後，於室溫下擾拌2小時。將反應液濃縮後，以乙駿乙酷（2〇〇 mL， 100 mL)進行萃取。以10%碳酸氫鈉水溶液（200 mL)、檸檬酸水溶液（300 mL)、及飽和食鹽水（1〇〇 mL)清洗有機層，以無水硫酸鈉乾燥之後，進行過濾，且將濾液減壓乾燥固化。以矽膠管柱層析法（己烷：乙酸乙酯=6:1—4:1 —1··1溶出部）對殘留物進行精製，獲得29.1 g(83.9 mmol，85%)之無色透明糖漿狀物質之目標化合物。 W-NNIR (400 MHz，CDC13) δ ppm: 1.28 (3H，s)，1.40 (9H， s)，1.51-1.53 (1Η，m)，1.53 (3Η，d，J=7.1 Ηζ)，1.78-1.94 (2H，m)，2.90-3.08 (2H，m)，3·67-3·75 (1H，m)，3.80-3.91 (1H，m)，4.85-4.89 (1H，m)，5.43-5.53 (1H，m)，7.27-7.37 (5H，m) o MS (ESI) m/z: 348 (M+H)+。 [參考例16] (3S)-4-I；2-(苯磺醯基）氧基乙基]-3-甲基-5-側氧基苯乙基]吡咯啶-3-羧酸第三丁酯 119371.doc -31 - 200813005 [化 21]

於冰浴冷卻下，於（3S)_4-(2-羥乙基）-3-甲基-5-氧-1-[(1R)-苯乙基]吡咯啶-3-羧酸第三丁酯（29.1 g，83.9 mmol) 之一乳甲烧（280 mL)浴液中’加入三乙基胺（15 42 mL，1 〇9 mmol)、苯石黃醯氣（11·8 mL，92.3 mmol)、及4-二甲胺基口比啶（1.02 g，8.39 mmol)，於室溫下將混合物攪拌19小時。於反應液中，加入飽和氣化銨水溶液（280 mL)，分離有機層，於減壓下蒸餾除去溶劑，將殘留物溶解於乙酸乙酉旨 (280 mL，180 mL)之後，再次以先前之飽和氣化銨水溶液進行清洗。以1 mol/L之鹽酸水溶液（250 mL)、飽和碳酸氫鈉水溶液（250 mL)、飽和食鹽水（200 mL)清洗有機層之後，以無水硫酸鈉乾燥，且進行過濾之後，將渡液減壓乾燥固化，獲得目標之苯磺醯基體粗產物（43.7 g)。再者，該產物並不進行精製而用於以下步驟。 MS (ESI) m/z: 510 (M+Na)+ 〇 [參考例17 ] (7S)-7-曱基_4_側氧基-5-[(lR)-苯乙基]_5·氮雜螺[2·4]庚烷_ 7-羧酸第三丁酯 [化 22] 119371.doc -32- 200813005

BsO

"S〇於冰浴冷卻下，於上述苯磺醯體粗產物（43.7 g，83.9 mmol)之無水四氫呋喃（470 mL)溶液中，加入雙（三甲矽烷基）醯胺鈉之1.0 mo 1/L之四氫吱喃溶液（109 mL，109 mm〇l)，於室溫下將化合物擾摔！小時。於反應液中加入飽和氣化銨水溶液（300 mL)，以乙酸乙酯（300 mL，200 mL) 進行萃取，以飽和食鹽水（200 mL)進行清洗。以無水硫酸鋼乾燥有機層之後，進行過濾，且將濾液減壓乾燥固化。以矽膠管柱層析法（己烷：乙酸乙酯=3:1—2:1溶出）對所择得之殘留物進行精製，獲得24.6 g (89%，2步驟）之白色固體之目標化合物。 mp: 55-57〇C。 [a]D25.i = 122 1〇(c=〇 517, chc13)。 W-NMR (400 MHz，CDC13) δ ppm: 0·72-0·77 (iH，m) 〇 85 〇·90 (1H，m)，1.〇4-1·13 (2H，m)，1_18 (3H，s)，l 32 (9H，〇 1·54 (3H，d，J=7.1 Hz)，3.08 (1H，d，J=9.8 HZ)，3·53 (1H d J=9.8 Hz)，5.52 (1H，q，J=7.1 Hz)，7.26-7.34 (5H，m)。 ’ 元素分析：c2〇h27no3 ; 計算值：C，72.92 ; Η，8.26 ; N，4.25。實測值：C，72.64 ; Η，8.27 ; N，4.06。 H9371.doc -33 - 200813005 MS (FAB) m/z: 330 (M+H)+。 HRMS (FAB) m/z: 330.2069 (以 C2〇H28N03 計算，為 330.2069) ° IR (ATR) v: 3066，2976，2933，2879，1720，1676，1481, 1454, 1433, 1365, 1329, 1286, 1238, 1203 cm·1。針對本化合物實施可判定7位之配位的X射線結構解析。收集資料後，以直接法判定初期相位，以全矩陣最小平方法進行相位精密化。於精密化時，非氫原子適用異向性溫度因子，氫原子係藉由計算判定其位置，再固定其座標。本化合物中存在2個不對稱碳原子，且已知其中1個不對稱碳原子之絕對組態。根據該絕對組態，而判定另一個不對稱碳原子之絕對組態。即，可確定與標題化合物之7位有關之配位為（S)。並且，亦可判定經由該化合物製備之一系列化合物之配位。 [參考例18] (7S)-7-甲基-4-側氧基-5-[(lR)-苯乙基]-5-氮雜螺[2.4]庚烷-7-羧酸 [化 23]

於冰浴冷卻下，於（7S)_7-甲基-4-側氧棊-5-[(lR)·苯乙 119371.doc -34- 200813005 基]-5-氮雜螺[2.4]庚烷-7-羧酸第三級丁酯（24.5 g，74.4 mmol)之二氣甲烷（120 mL)溶液中，滴加三氟乙酸（120 mL)，且攪拌2小時。將反應混合物減壓乾燥固化，於殘留物中加入甲苯（20 mL)，進行減壓乾燥固化之後，於冰浴冷卻下’將殘留物溶解於1 m〇l/L之氫氧化鈉水溶液（3 00 mL)中。將該水溶液以乙酸乙酯（3 50 mL)清洗後，於冰浴冷卻下，於水層中加入濃鹽酸（25 mL)，以使pH值成為 2〜3，再以氣仿（3 00 mLx2)進行萃取。以水（200 mL)及飽和食鹽水（100 mL)清洗有機層，以無水硫酸鈉乾燥之後，減壓蒸餾除去溶劑。於所獲得之殘留物中加入甲苯（20 mL)，進行減壓乾燥固化之後，使殘留物懸濁於氣仿（20 mL)中，加入己烧（200 mL)，使之結晶化。以己烷（100 mL)清洗所析出之固體之後，進行減壓乾燥，獲得20.48 g(定量性）之白色固體之目標化合物。該產物並不進行精製而用於以下步驟。 ^-NMR (400 MHz5 CDC13) δ ppm: 0.78-0.83 (1Η? m), 0.90-0.95 (1Η，m)，1·〇8-1·18 (2Η，m)，1.24 (3Η，s)，1·55 (3Η，d， J=7.3 Hz)，3.11 (1H，d，J=10.0 Hz)，3·55 (1H，d，J=10.0 Hz)，5.52 (1H，q，J=7.1 Hz), 7·28·7·32 (5H，m)。 MS (ESI) m/z: 274 (M+H)+。 [參考例19] (7S)-7·胺基-7-甲基-4-側氧基_5_[(1R)-苯乙基]-5-氮雜螺 [2.4]庚烷 [化 24] 119371.doc -35- 200813005

o^'U ""ο 於（7S)-7-甲基-4-侧氧基-5-[(1R)_苯乙基]_5_氮雜螺[2·4] 庚烧-7-羧酸（2〇_4 g，74.4 mmol)及二苯基磷醯疊氮（ΐ76 rnL，81.8 mmol)之曱苯（200 mL)溶液中，加入三乙基胺（20.7 mL，149 mmol)，於125°C油浴中加熱攪拌1小時。減壓濃縮反應液而獲得異氰酸酯體粗產物。將所獲得之異氰酸酯體粗產物溶解於1，4-二氧雜環己炫^ (180 mL)中，加入水（90 mL)及濃鹽酸（90 mL)之後，於 50 C油浴中加熱擾拌1小時。於反應液中加入水（2〇〇 mL)，以乙酸乙酯（200 mL)進行清洗之後，於冰浴冷卻下，於水層中加入10 mol/L之氫氧化鈉水溶液（170 mL)，以使pH成為9〜10，且以曱苯（200 mLx2)進行萃取。以飽和 U 食鹽水（100 mL)清洗有機層，以無水硫酸鈉乾燥之後，進行過濾，將濾液減壓濃縮而獲得15.8 g (64.7 mmol)淡黃色油狀物之目標化合物。再者，該產物並不進行純化而用於以下步驟。 ^-NMR (400 MHz, CDCIb) δ ppm: 0.72-0.78 (2Η? m)5 0.99- 1·1〇 (2Η，m)，ι·〇8 (3Η，s)，1·53 (3Η，d，J=7.4 Ηζ)，2·82 (1Η，d，J=9.6 Ηζ)，3·27 (1Η，d，J=9.6 Ηζ)，5·56 (1Η，q， J=7.1 Hz)，7.14-7.37 (5H，m)。 119371.doc -36- 200813005 [參考例20] (7S)-7-(第三丁氧基毅基胺基）-7-甲基- 5-[(lR)-苯乙基]-5-氮雜螺[2.4]庚烷 [化 25]

將上述（7S)-7-胺基-7-甲基-4-側氧基-5-[(lR)-苯乙基]-5-氮雜螺[2.4]庚烧（15.8 g，64.7 mmol)溶解於甲苯（82 mL)中，一面以内溫不超過70X：之方式進行冰浴冷卻，一面經15分鐘滴加雙（2-甲氧基乙氧基）鋁氫化鈉、65%(重量）甲苯溶液 (77·6 mL，259 mmol)之甲苯（6 mL)溶液後，於80°C油浴中加熱攪拌10分鐘。對反應液進行冰浴冷卻，滴加25% (重量）之氫氧化鈉水溶液（158 mL)使反應停止之後，以甲苯 (135 mL)進行萃取。以飽和食鹽水（1〇〇 mL)清洗有機層之後，於其中加入二碳酸二第三丁酯（15·6 g，71.2 mm〇1)。於室溫下將反應液攪拌3小時之後，減壓蒸餾除去溶劑，以矽膠管柱層析法（以己烷：乙酸乙酯=8:144:141:1溶出）對所獲得之殘留物進行精製，獲得18〇 g (73%)之無色透明糖漿狀物質之目標化合物。 'H-NMR (400 MHz5 CDCIs) δ ppm: 0.37-0.49 (2Η? m), 0.62- 〇·68 (1Η，m)，0.77-0.82 (1Η，m)，1.20 (3Η，s)，1.32 (3Η，d 119371.doc -37- 200813005 J=6.6 Hz)，1·44 (9H，s)，2·46 (2H，dd，J=33.25 9.3 Hz)，2.68 (1H，d，J=8.8 Hz)，3·27 (1H，q，J=6.6 Hz)，3.31_3 34 (1H， m)，4·71 (1H，s)，7.19-7.34 (5H，m)。 MS (ESI) m/z: 331 (M+H)+ 〇 [參考例21] (7S)-7-(第三丁氧基羰基胺基）-7-曱基-5-氮雜螺[2 4]庚烷 [化 26]

於（7S)-7-(第三丁氧基羰基胺基）-7-甲基-5-[(lR)_苯乙基 >5-氮雜螺[2·4]庚烧（18.0 g，54.5 mmol)之甲醇（180 mL) 溶液中，加入10%鈀碳觸媒（含水52.8%，9.00 g)，於氫氣環境下，於室温下攪拌18小時之後，進而於4〇。〇之油浴中攪拌5 · 5小時。過濾除去觸媒後，將溶劑減壓乾燥固化，獲得13.4 g (定量）之白色固體之目標化合物的粗產物。 H-NMR (400 MHz5 CDC13) δ ppm: 0.38-0.43 (1H? m), 0.54- 〇·61 (2H，m)，0.74-0.80 (1H，m)，1.08 (3H，s)，1.44 (9H，s)， 2.75 (1H，d，J=7.6 Hz)，2.78 (1H，d，J-7.1 Hz)，3·13 (1H，d， J=11.5 Hz)，3.73-3.77 (1H，m)，4_45 (1H，s)。 MS (ESI) m/z: 227 (M+H)+ 〇 [參考例22] 119371.doc -38- 200813005 7-[(7S)-7-胺基-7-曱基-5-氮雜螺[2·4]庚烷_5_基]_6_氟-^ [(1R，2S)-2-氟代環丙基]-8_甲氧基4,4-二氫_4_氧代喹啉-3-羧酸 [化 27]

將（7S)-7-(第三丁氧基羰基胺基）_7_曱基_5_氮雜螺[2 4] 庚烷（13.4 g，54.5 mmol)、6,7-二氟 _1_[(ir，2S)_2-氟代環丙基]-8 -甲氧基-1，4-二氫-4-氧代喹琳-3-羧酸·二氟化硼錯合物（17.9 g，49.5 mmol)、及三乙基胺（8.97 mL，64.4 mmo1)溶解於二甲基亞砜（52 mL)中，於40°C油浴中加熱攪拌17小時。將反應液注入冷水（丨〇〇〇 mL)中，過濾取出所析出之固體。對該固體加入乙醇：水=5:1之混合溶液（18〇 Q mL)及三乙基胺（15 mL)，加熱回流1.5小時。將反應混合物減壓乾燥固化，將所獲得之殘留物溶解於乙酸乙酯（丨5 〇 mLx2)中，以1〇%檸檬酸水溶液（2〇〇 mL)、水（200 mL)、飽和食鹽水（100 mL)進行清洗。以無水硫酸鈉乾燥有機層之後’減壓蒸餾除去溶劑。將所獲得之殘留物溶解於氣仿：甲醇=9:1之混合溶液（1〇〇 mL)中，加入矽膠（1〇 g)，攪拌i 小時。過濾除去矽膠，以氯仿：甲醇=9:1之混合溶液（5〇 mLx2)進行清洗，再將濾液合併，進行濃縮乾燥固化。將殘留物於冰浴冷卻下溶解於濃鹽酸（2〇〇 mL)之後，於室溫 H9371.doc -39- 200813005 下攪拌30分鐘，以氯仿（400 mLx5)清洗反應液。於冰浴冷卻下，於水層中添加10 mo 1/L之氫氧化納水溶液，以使pH 成為11.8，繼而以鹽酸將pH調整為7.4之後，以氣仿（1000 mLx3)進行萃取。以無水硫酸鈉乾燥有機層之後，減壓蒸餾除去溶劑。自乙醇中對所獲得之殘留物進行再結晶精製，且進行減壓乾燥，獲得18.5 g (79%)之淺粉紅色粉末之目標化合物。以該產物之1H-NMR為代表之儀器分析資料與實施例11 之化合物之貢料完全一致。即’於具有7-胺基-7-曱基-5_ 氮雜螺[2.4]庚烷-5_基之喹諾酮類衍生物中，高活性化合物之實施例11中所揭示之喹諾酮類衍生物之5-氮雜螺[2.4] 庚烷-5-基之7位得立體構型可判定為（7S)。 [試驗例1] 對以下實施例之所揭示之式（I)之化合物之1/2水合物測定抗菌活性。抗菌活性之測定方法係依據日本化學療法學會指定之標準方法進行，將其結果以MIC(微革蘭氏/mL)為單位表示於表1。表中之菌株中，金黃色葡萄球菌，87037 及S.pneumoniae，J24係而才喧諾酮性菌。將Levofloxacin (LVFX)、Gatifloxacin (GTFX)、及 Ciprofloxacin (CPFX)之 MIC值合併進行表示。 119371.doc -40- 200813005 [表i] 1/2水合物 LVFX GTFX CPFX 大腸桿菌NIHJ 0.025 0.012 0.006 S 0.003 普通變形桿菌，08601 0.025 0.012 0.006 S 0.003 S.marscecens, 10100 0.1 0.1 0.1 0.025 綠膿桿菌，32104 0.39 0.2 0.2 0.05 綠膿桿菌，32121 0.2 0.1 0.1 0.025 金黃色葡萄球菌，209P 0.025 0.2 0.05 0.1 表皮葡萄球菌，56500 0.1 0.39 0.2 0.2 糞腸球菌，ATCC 19433 0.2 0.78 0.39 0.78 金黃色葡萄球菌，87037 0.78 >6.25 1.56 >6.25 肺炎葡萄球菌，J24 0.1 0.78 0.2 0.39 MIC〇/g/ml) η 又，依據曰本化學療法學會之標準方法對式（I)之化合物之1/2水合物之抗結核菌活性進行測定（化學療法學會志 1981年，第29卷，第76〜79頁），將其結果以MIC (pg/ mL) 為單位表示，對感受性菌之活性示於表2，對耐喹諾酮性結核菌之活性示於表3。RFP係Rifampicin。式（I)之化合物之1/2水合物對結核菌顯示出優異之抗菌活性。

U -41 - 119371.doc 200813005 [表2] 菌Vf匕合物本申請案之化合物 RFP TB-s2 0.06 0.03 TB-s3 0.06 0.125 TB-s4 0.06 0.06 TB-s5 0.06 0.06 TB-s6 0.06 0.125 TB-s7 0.06 0.06 TB-s8 0.03 0.015 TB-s9 0.06 0.06 TB-s 10 0.03 0.06 TB-s 11 0.06 0.06 TB-s 12 0.125 0.125 TB-s 13 0.06 0.06 TB-s 14 0.06 0.03 TB-s 15 0.06 0.06 TB-s 16 0.06 0.06 TB-s 17 0.06 0.06 TB-s 18 0.06 0.03 TB-s 19 0.06 0.125 TB-s 20 0.06 0.25 TB-s 21 0.06 0.03 TB-s 22 0.03 0.015 Kurono 0·03 0.06 H37Ry 0.03 0.125 Ravenel 0.03 0.125

42- 119371.doc 200813005 [表3] 菌Vi匕合物本申請案之化合物 RFP si 1 16 MDR1 0.125 16 MDR3 0.125 128 MDR4 0.25 64 MDR5 0.5 32 MDR7 0.125 >128 MDR9 0.125 128 MDR12 0.125 128 1 (QR-3) 0.125 >128 2 (QR-6) 0.5 >128 3 (QR_1) 0.25 128 4 (QR-9) 0.25 >128

[試驗例2]小鼠肺局部感染模型中之治療效果使用耐盤尼西林（Penicillin)性肺炎球菌（PRSP)之小鼠肺局部感染模型，經口投與式（I)之化合物之1/2水合物，對該等之治療效果進行研究。於氣胺酮·甲苯噻嗪混合液麻醉下，對雄性CBA/JNCrlj 系小鼠（3〜4週齡，日本Chrales River實驗室：1群4隻）滴鼻接種使用Todd Hewitt液體培養基進行厭氧培養之PRSP 03 3 806株。於該感染模型中，於感染2小時及8小時後，分別以圖2中之用量（25、50及100 mg/kg/day)經口投與式⑴ 之化合物之1/2水合物（僅1天之治療，1天用量為50、100及 200 mg/kg/day)。對無處理對照組投與注射用蒸餾水。測定藥劑投與前不久之無處理組（感染2小時後，前對照）、藥劑投與第二天之無處理組（感染第二天，後對照）及藥劑投與組之肺内菌數，將其作為治療效果之指標。 119371.doc -43- 200813005 [試驗例3]大鼠單純性膀胱炎模型（大腸桿菌）中之治療效果感染模型：對自前一天起禁水之大鼠（Crl : CD (SD) (IGS) 系’雌性，7週齡，曰本Charles River實驗室，1群4隻）施行氯胺_ •甲笨噻嗪混合麻醉之後，將大腸桿菌E77156株經尿道接種於膀胱内（1·2χ1〇7 CFU/大鼠接種後，以防止菌液排出為目的，將尿道口阻塞2小時，於解除阻塞之同時再開始給水。

Ο 某劑技與·分別以5、2〇及80 mg/kg之投與量，於感染第二天單次經口投與式（I)之化合物的1/2水合物。有效性評價··測定即將藥劑之前、藥劑投與第二天之無處理群（感染兩天後）及藥劑投與組之膀胱内菌數，將其作為治療效果之指標。結果·式（I)之化合物之1/2水合物，與治療開始時相比較可見細菌數有意義之減少（圖2)。由此可表明，式⑴之化 ΰ物之1 /2水合物與先前之試驗例相比，係可發揮優異治療效果之化合物。 [例U 7 [(7S)·7-胺基-7-甲基-5-氮雜螺[2.4]庚烷-5-基]· 6-H-[(lR，2S)-2-氟代環丙基]_8_甲氧基_M_二氫_4-氧代啥啉-3-羧酸.1/2水合物於7 [(7S)_7·胺基_7·甲基·5·氮雜螺[2.4]庚烧·5_基]_6_氣-1_[〇R，2S)·2·氟代環丙基]·8_甲氧基·1，4·:氫_4_氧代棒 3-叛酸Cg)中’加入乙腈（16mL)，加溫至約抓使之 =將該溶液恢復至室溫後，一面授拌π，一面使結日日。過遽取出所析出之結晶，進行風乾，獲得119 g 119371.doc -44- 200813005 (57%)之目標化合物之1/2水合物。對本結晶測定粉末x射線繞射（圖3)、熱分析（TG/DTA)(圖4)及元素分析，可確認，其係1 /2水合物之目標化合物。元素分析：C21H23N3O4FVI/2H2O ; 計算值：C，58·87; Η，5.65; N，9.81 ; F，8.87。實測值·· C ’ 58.73 ; Η，5.65 ; Ν，9·94 ; F，8.87。粉末X射線繞射之測定條件如下：

U 裝置：PHILIPS，X’Pert-MPD PW3050 掃描速度：0.015。2e/s 掃描範圍：5〜40° 熱分析（TG/DTA)之測定條件如下：熱分析裝置：SEIKO電子工業，SSC52〇〇tg/DTA220 升溫速度：10°C/min 壤境·氮氣200 mL/min [評價例1]吸脫濕行為水蒸汽吸附裝置研究其吸脫濕行為判明，該結晶由濕度變化引起之重穩定。對實施例1中所獲得之7·[(叫.7-胺基_7_甲基-5_氮雜螺 [2.4]庚烧_5_基]·6·氟小[(1R，叫2_氟代環丙基]冬曱氧基_ 1，4·二氫-4-氧代啥啉领酸·1/2水合物，以大氣壓型自動。將結果示於圖5。可量變化為1 %以内，且 [評價例2]加熱脫水後之吸脫濕變化對實施例！中所獲得之7_[(7S)_7•胺基_7_甲基·5_氣雜螺 [.4]庚烧-5-基]·6|W(1R，2S)_2遣代環丙基]冬甲氧基_ H9371.doc -45- 200813005 1，4-二氫-4-氧代喹啉_3_羧酸.1/2水合物，研究其加熱脫水 (60°C)後之吸脫濕變化。將其結果示於圖6。脫水後之液化迅速，且吸濕後之行為與加熱處理前無變化。 [評價例3]加熱脫水後之晶形變化對實施例1中所獲得之7-[(7S)_7_胺基_7_甲基_5_氮雜螺 [2.4]庚烷-5·基]-6-氟-1-[(1R，2S)_2_氟代環丙基]_8_甲氧基_ 1，4-二氫-4-氧代喹啉羧酸·1/2水合物，研究其加熱處理 (、之晶形變化。將其結果示於圖7。可認為，其脫水後維持結晶狀態’於繞射圖案上亦僅有微小不同，即使成Γ 恢復至穩定之1/2水合物而迅速液化。 [評價例4]結晶之穩定性於25 C，相對濕度為〇、52、93%之環境下，將實施例i 中所獲得之7-[(7S)-7_胺基-7-甲基-5·氮雜螺[2.4]庚烷- 5-基]-6·氟·1_[(1ΙΙ，2S)-2-氟代環丙基]_8_甲氧基•二氫氧代喹啉-3-羧酸.1/2水合物保存3天，研究其重量變化及 (J a曰形。晶形係利用粉末X射線繞射及熱分析之測定加以判定。其結果為，重量變化微小（表4)，且晶形亦未產生變化。 [表4] 12水合物之結晶穩定性[重量變化(〇/〇)】 ---〇%RH_52%RH__93%RH__ --—_ _〇·43 0.61 [評價例5]化學穩定性將實施例1中所獲得之7-[(7S)-7-胺基-7-甲基-5-氮雜螺 U9371,d0< -46- 200813005 [2·4]庚烷-5-基]-6·氟-1-[(1R，2S)_2-氟代環丙基]甲氧基_ 1，4-二氫氧代喹啉I羧酸·1/2水合物，於濕熱條&件 (4〇°C，相對濕度75%)及乾熱條件（50°C，相對濕度〇%)下保存2週，及將其保存於光照射條件下。將結果示於表$。本發明之化合物於濕熱及乾熱條件下穩定，且不會產生含量降低’然而’於光照射下可見著色變化、殘存率稍有降低。 [表5]

1/2水合物之化學穩定性[殘存重量比例(％)】

【圖式簡單說明】圖1係表示式（I)之化合物之1/2水合物對PRSp小氣肺局部感染模型之治療效果的圖。

U 圖2係表示式⑴之化合物之1/2水合物對由大腸菌引起的大鼠單純性膀胱炎模型之治療效果的圖。圖3係表示本發明化合物[7_[(7S)_7_胺基甲基氮雜螺[2. 4]庚烧_5-基]nwa，2S)_2_氣代環丙基]甲氧基-1，4-二氫·4_氧代啥琳_3·缓酸之1/2水合物]之粉末χ射線繞射光譜的圖。圖4係表示本發明化合物之熱分析（tg/dta)光譜的圖。圖5係表示本發明化合物之吸脫濕行為之圖案的圖。圖6係表示本發明化合物於加熱脫水(6〇。〇後之吸脫濕 119371.doc -47- 200813005 變化之圖案的圖。圖7係表示本發明化合物於加熱處理時之X射線繞射光譜中之變化圖案的圖。

119371.doc 48-

Claims

200813005 十、申請專利範圍： 1· 一種化合物，其係1 2_[(7S)-7-胺基-7-甲基-5-氮雜螺[2.4] 庚烧5基]-6-氟2S)-2-氟環丙基]_8_甲氧基_1，心一氣氧代啥琳_3-魏酸·1/2水合物。 2· 種化合物，其係以下述式 [化1]

表示。 3· 一種醫藥，其含有如請求項1或2之化合物。 4·如明求項3之醫藥，其係感染症預防治療用醫藥。

5·種醫藥組合物，其含有如請求項1或2之化合物及藥風上所容許之載體。 y、予其係感染症預防治療用醫藥 /. 一徑睛求項1或2之化合物之用谇，甘及 8如-4 … 勿之用途’其係用於醫藥製造。 •-求項7之用途’其中醫藥係感藥。此T貝防治療用醫 119371.doc 1 ·如請求項5之醫藥組合物 2 組合物。