TW200815475A - Targeted binding agents directed to PDGFR-alpha and uses thereof - Google Patents

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200815475 九、發明說明： L發明所屬之技術領域2 發明領域 本發明根據35 ILS.C. § 119請求2006年8月2日提申之 5 美國臨時申請案序號第60/835,647號之優先權，該案之整體 係併於此作為參考。 本發明係關於對抗該目標抗原PDGFR-α之致標性結 合劑及此劑之用途。在某些實施態樣中，本發明係完全相 關於對於PDGFR-α之人類單株抗體及這些抗體的用途。本 10 發明之其它層面亦關於表現此類致標性結合劑或抗體之融 合瘤或其它細胞株。該所述之及抗體係可用於檢測劑及用 於治療和PDGFR-α之活性及/或過度表現相關聯之疾病。 I：先前技術3 15 發明背景 血小板衍生生長因子(PDGF)係一控制細胞生長及分裂 的蛋白質。PDGF有5種不同的異構物(A、B、C、D以及一 AB異二聚物(heterodimer))，其存在為二聚物且經由二不同 之受體(PDGF-α及PDGF_/3)而活化細胞反應。特定地， 20 PDGF二聚物同時連結至二種受體以引發受體二聚合化、自 磷酸化及細胞内之訊息傳導。 血小板衍生生長因子受體-a(PDGFR-a，也被知道為 CD140a)係一第3型受體酪胺酸激酶，其特徵係在於具有5 個似IgG結構區之一細胞外結構區域，一穿膜結構區域以及 5 200815475 一催化性細胞内結構區域。PDGFR-ck可和PDGFR-/3結構 相似性地形成同二聚物或異二聚物。PDGF-AA只活化α-α受體二聚物，PDGF-AB及PDGF-CC活化α - α及/或a - /S 受體二聚物，而PDGF-BB則活化所有三種之受體二聚物組 5 合。 PDGFR-α已被聯結至腫瘤生成且已被應用至數種癌 症，例如：乳癌、肺癌、卵巢癌、前列腺癌、結腸癌及子 宮内膜癌，以及肝細胞癌、神經膠母細胞瘤、黑色素瘤及 胃腸道基質瘤（GIST)。 10 數家公司已發展出致標於PDGFR- α之治療劑。

Gleevec® (Novartis®)及 SUTENT/SU11248 (sunitinib malate, Pfizer®)係致標於PDGFR- α以及其它受體酪胺酸激酶之小 分子藥物。此外，已報導出致標於PDGFR-α之單株抗體。 國際專利第WO1992/013867號公開案敘述出可製備出針對 15 PDGF受體構造之小鼠或兔子單株抗體及/或多株抗體。國 際專利第W01995/000659號公開案係有關於特別針對 PDGFR-α之單株抗體，其特徵在於其結合至PDGFR且不結 合至PDGFR-/5。該案揭露二種抗體，特徵在於以固態酵素 連結免疫吸附測定法量測時，其具有50pM及75pM之半最 20 大結合親合力。國際專利第WO2006/138729號公開案揭露 一完全人類單株抗體，命名為3G3 (ImClone Systems， Inc·)，其致標於PDGFR-α。此抗體在二價親合力測定法中 量測為對於可溶性PDGFR-α具有40pM的親合力；其中可 溶性PDGFR- α係固定在一感測器晶片上且以各種濃度注 200815475 入抗體。如其中所論者，在二價測定法中，實驗性矯作會 景》響所量測的親合力。 一具有親合力高於4〇pm的抗體可能是所欲的，因為如 此的抗體在以標準劑量投藥到人體時可產生一較大程度及 /或較持久的PDGFR_a的抑制。一具有親合力高於4〇pM的 抗體可比一具有較低親合力之抗體以較低之有效劑量投 藥’或是相較於一具有較低親合力之抗體的標準給藥區 間’可以一較長之給藥區間來投藥。 10 【發明内容】 發明概要 本發明之實施態樣係關於特定結合至PDGFR- α且抑 制表現有PDGFR-α之細胞生長的致標性結合劑。可達成此 功效之機制包含，但不限定於，阻礙配體結合及/或抑制在 15 腫瘤細胞中所涉及之細胞訊息傳導以及抑制基質纖維母細 胞組份導致降低血管生成。該致標性結合劑係可用於降低 腫瘤生長及血管生成。 在本發明之一實施態樣中，該致標性結合劑係為結合 至 PDGFR-o：且抑制 PDGF-AA、PDGF-AB、PDGF-BB及/ 20配體結合至PDGFR-α之完全人類抗體。然而， 本發明之另一實施態樣係為結合至PDGFR-α且抑制受體 自體磷酸化之完全人類單株抗體。本發明之另一實施態樣 係為結合至PDGFR- α且抑制細胞生長中所涉及之下游名 胞訊息傳導之完全人類單株抗體。 7 200815475 在一些實施態樣中，該致標性結合劑結合至PDGFR_ α且不會和PDGFR-yS受體交叉反應，也就的，該劑係單一 特異性的。在一些實施態樣中，該致標性結合劑結合至 PDGFR-α且不會和其它第3型（Class III)受體酪胺酸激酶家 5 族成員交叉反應，舉例如：FLT3、c-kit及/或CSF-1R。 本發明之另一實施態樣係一競爭和於此所敘述之致標 性結合劑或抗體相結合之致標性結合劑。 在一實施態樣中，該致標性結合劑以一少於500pM之 KD結合至PDGFR-α。在另一實施態樣中，該致標性結合 10 劑以一少於約400、300、200或ΙΟΟρΜ之KD結合。在一實施 態樣中，該致標性結合劑以一少於75、60、50、40、30、 20、10或5pM之KD結合。親合力及/或親和性量測可藉由於 此所敘述之FMAT、FACS、KinExA® 及/或 BIACORE®而 測量。 15 在另一實施態樣中，該致標性結合劑在一單價親合力 測定法中以一少於約400、300、200或100、75、60、50、 40、30、20、10或5pM之KD結合PDGFR-α。單價親合力測 定可在一BIACORE®測定法中量測，其中可溶性受體係流 動於經固定的抗體之上。相較於二價親合力測定法，由一 2〇 單價親合力測定法所報知的KD係較少可能被實驗性矯作 所影響且因此可報知更接近於該抗體之真實單價親合力的 KD值。在二價親合力測定法中，經固定化之受體的密度影 響了該單一抗體分子流動過時其二次結合至及/或再結合 至該經固定化之受體的程度。如此一來，在二價親合力測 200815475 定法中，該受體的密度可直接影響所報知的KD值。因此 一單價親合力測定法提供了更具生物性意義的親合力量 測0 在另一實施態樣中，當以接近於飽和配體位準而執4一 5 時，該致標性結合劑以一少於400、300、200或1〇〇、75 60、50、40、30、20、10或5 pM之IC50抑制 了在該受體一 聚物中配體所誘導之轉磷酸化作用。 在另一實施態樣中，當以接近於飽和配體位準而執^一 時，該致標性結合劑以一少於400、300 ' 200、1〇〇、75、 10 60、50、40、30、20、10或5 pM之IC50抑制了配體所场導 之受體自體磷酸化作用。 在本發明之一實施態樣中，該致標性結合劑係—抗 體。在本發明之一實施態樣中，該致標性結合劑係一單株 抗體。在本發明之一實施態樣中，該致標性結合劑係—完 15全人類單株抗體。在本發明之另一實施態樣中，該致標性 結合劑係一為IgGl、IgG2、IgG3或IgG4同類型之完全人類 單株抗體。在本發明之另一實施態樣中，該致標性結合劑 係一為IgG2類型之完全人類單株抗體。該類型相較於其它 類型對於誘發效應物作用具有降低之可能性，此可能導致 20 降低之毒性。

另一實施態樣是一結合至PDGFR· α且包含一具有 一、二或三個在第12表中所示之互補決定區域 (complementarity determining regions ; CDR)序列的重鏈胺 基酸序列以及一具有一、二或三個在第13表中所示之CDR 9 200815475 序列的輕鏈絲酸序列。在特巧施態樣巾，該抗體係一 完全人類單株抗體。在某些實施態樣中，本發明提供一結 合至和此處所述之純抗則目^抗原蚊雜(epitope) 之抗體。 5 在一實施態樣中，該2.175>3 2.449.1.3 抗體、2.998.2 抗體或 2·84 抗體、2.451.1抗體、 3才几體之重鍵係和一異 10 源之輕鏈配在-起。在此技術領域中輕娜交是已良好確 立的技術。因此’2.Π5.3抗體、2 451 1抗體、2 449 1 3抗體、2.998.2抗體或2·84·3抗體之任—者或此處所述之另 一抗體的重鏈可和2.175.3抗體、2 45U抗體、2 449 1 3 抗體、2.998.2抗體、2.84.3抗體之任一者或此處所述之其 它抗體的輕鏈配在一起。 在一實施態樣中，一抗原結合位置可包含2175·3抗 體、2.451.1 抗體、2.449.1.3 抗體、2.998.2 抗體或 2.84.3 15 20 抗體之任一者的一重鏈CDR1、CDR2及CDR3及一輕鏈 CDR1、CDR2及CDR3，以及具有如20、16、10、9或更 少，例如：1、2、3、4或5，的胺基酸添加、取代、刪除 及/或嵌入於該等所揭露之CDRs。如此之改質可能發生在 該等CDRs之内的任何殘基。 在另外的實施態樣中，該致標性結合劑或抗體可包含 一含有如第12表或第13表中所示之CDR1、CDR2或CDR3 序列中的任一、二、三、四、五或六者的序列。在另一實 施態樣中’該致標性結合劑或抗體可包含一含有如第12表 所示之CDR1、CDR2或CDR3序列的序列。在另一實施態 10 200815475 樣中，該致標性結合劑或抗體可包含一含有如第13表所示 之CDR1、CDR2或CDR3序列的序列。在另一實施態樣中， 該致標性結合劑或抗體可包含一含有如第12表所示之 CDR1、CDR2或CDR3序列及如第13表所示之CDR1、 5 CDR2或CDR3序列的序列。了解的是，那些習於此藝者可 容易地完成CDR的決定。例如：Kabat等人，Sequences of Proteins of Immunological Interest，第五版，NIH Publication 91-3242，BethesdaMD (1991)，vols· 1-3。 在另外的實施態樣中，該致標性結合劑或抗體可包含 10 一含有如第12表或第13表中所示之完全人類單株抗體 2.175.3、2.449.1.3 或 2.998.2 之任一者之 CDR1、CDR2 或 CDR3序列中的任一、二、三、四、五或六者的序列。在一 實施態樣中，該致標性結合劑或抗體可包含一含有如第12 表所示之完全人類單株抗體2.175.3、2.449.1.3或2.998.2 15 之CDIU、CDR2或CDR3序列的序列。在另一實施態樣中， 該致標性結合劑或抗體可包含一含有如第13表所示之完全 人類單株抗體 2·175·3、2·449·1·3 或 2.998.2 之 CDIU、CDR2 或CDR3序列的序列。在另一實施態樣中，該致標性結合 劑或抗體可包含一含有如第12表所示之完全人類單株抗體 20 2.175.3、2.449.1.3 或 2.998.2 之 CDIU、CDR2 或 CDR3 序 列及如第13表所示之完全人類單株抗體2.175.3、2.449.1.3 或2.998.2之CDIU、CDR2或CDR3序列的序列。 在另一實施態樣中，該致標性結合劑或抗體可包含一 含有如第12表所示之完全人類單株抗體2.175.3之CDR1、 200815475 CDR2或CDR3序列及如第13表所示之完全人類單株抗體 2.175.3之CDR1、CDR2或CDR3序列的序列。在另一實 施態樣中，該致標性結合劑或抗體可包含一含有如第12表 所示之完全人類單株抗體2·449·1·3之CDR1、CDR2或 5 CDR3序列及如第13表所示之完全人類單株抗體2.449.1.3 之CDR卜CDR2或CDR3序列的序列。在另一實施態樣中， 該致標性結合劑或抗體可包含一含有如第12表所示之完全 人類單株抗體2.998.2之CDR1、CDR2或CDR3序列及如 第13表所示之完全人類單株抗體2.998.2之CDR1、CDR2 10 或CDR3序列的序列。 本發明之另一實施態樣係一和本發明之致標性結合劑 或抗體競爭和PDGFR-α結合之致標性結合劑。在本發明之 另一實施態樣中，係有一和本發明之致標性結合劑或抗體 競爭和PDGFR-α結合之抗體。在另一實施態樣中，該致標 15性結合劑或抗體係和完全人類單株抗體2.175.3、2.449.1.3 或2.998.2之任一者競爭和pdGFR- α的結合。在本發明之 一實施態樣中，提供一和完全人類單株抗體2.175.3、 2.449.1.3或2.998.2之任一者競爭和PDGFR-a結合的抗 體。 本發明之另外的實施態樣係一和本發明之致標性結合 劑或抗體結合至PDGFR-a上相同之抗原決定部位的致標 性結合劑或抗體。在本發明之另一實施態樣中，係 一和本 發明之致標性結合劑或抗體結合至PDGFR- α上相同之抗 原決定部位的抗體。在本發明之一實施態樣中，係提供一 12 200815475 和完全人類單株抗體.2.175.3、2.449.1.3或2.998.2之任一 者結合至PDGFR-α上相同之抗原決定部位的致標性結合 劑。在本發明之一實施態樣中，係提供一和完全人類單株 抗體 2·175·3、2·449·1·3 或 2.998.2 之任一者結合至 PDGFR- 5 α上相同之抗原決定部位的抗體。 本發明之另外的實施態樣係一包含橫跨該結構區域及 /或互補決定區域(CDR’s)，特別是自如第12表或第13表所 示之單株抗體之任一者的FR1至fr4或是CDR1至 CDR3，之連續性重鏈及輕鏈序列的致標性結合劑或抗體。 10 一實施態樣提供一致標性結合劑或是其抗原結合部 份，其中該劑或結合部份包含一具有SEQ ID ΝΟ·:2序列之 重鏈多胜肽。在一實施態樣中，該劑或其結合部份更包含 一具有SEQ Π) NO.:4序列之輕鏈多胜肽。另一實施態樣係 一致標性結合劑或是其抗原結合部份，其中該劑或結合部 15 份係包含一具有SEQ ID Ν〇·: 1〇序列之重鏈多胜肽。在一 實施態樣中，該劑或其結合部份更包含一具有SEQ田 N0.:12序列之輕鏈多胜肽。又一實施態樣係一致標性結合 劑或是其抗原結合部份’其中該劑或結合部份係包含一具 有SEQ ID ΝΟ·:14序列之重鏈多胜肽。在一實施態樣中， 20 該劑或其結合部份更包含一具有SEQ ID Ν〇···16序列之輕 鏈多胜肽。 在一實施態樣中，該致標性結合劑包含一或多個完全 人類單株抗體 2·175·3、2·449·1·3 或 2.998.2。 13 200815475 在一實施態樣中，本發明之致標性結合劑包含一含有 之SEQ ID NO·: 2序列之多胜肽，其中該序列包含在第6 表之各列中所指出之種系及非種系殘基的特定組合中的任 一者。在一實施態樣中，本發明之致標性結合劑包含一含 5 有序列SEQ ID NO.: 10之多胜肽，其中該序列包含在第8 表之各列中所指出之種系及非種系殘基的特定組合中的任 一者。在一實施態樣中，本發明之致標性結合劑包含一含 有序列SEQ ID NO·: 14之多胜肽，其中該序列包含在第10 表之各列中所指出之種系及非種系殘基的特定組合中的任 10 —者。在一實施態樣中，本發明之致標性結合劑包含一含 有序列SEQ ID NO·: 4之多胜肽，其中該序列包含在第7 表之各列中所指出之種系及非種系殘基的特定組合中的任 一者。在一實施態樣中，本發明之致標性結合劑包含一含 有序列SEQ ID NO.: 12之多胜肽，其中該序列包含在第9 15 表之各列中所指出之種系及非種系殘基的特定組合中的任 一者。在一實施態樣中，本發明之致標性結合劑包含一含 有序列SEQ ID NO.: 16之多胜肽，其中該序列包含在第11 表之各列中所指出之種系及非種系殘基的特定組合中的任 一者。

20 在一實施態樣中，本發明之抗體包含一含有序列SEQ ID NO.: 2之重鏈多胜肽，其中該序列包含在第6表之各列中 所指出之種系及非種系殘基的特定組合中的任一者。在一 實施態樣中，本發明之抗體包含一含有序列SEQ ID NO.: 10 之重鏈多胜肽，其中該序列包含在第8表之各列中所指出之 14 200815475 種系及非種系殘基的特定組合中的任一者。在一實施態樣 中’本發明之抗體包含一含有序列SEqIDN〇 : 14之重鏈多 胜肽其中该序列包含在第1〇表之各列中所指出之種系及 非種系殘基的特定組合中的任一者。在一實施態樣中，本 5發明之抗體包含一含有序列SEQ ID NO·: 4之輕鏈多胜肽， 其中該序列包含在第7表之各列中所指出之種系及非種系 殘基的特定組合中的任一者。在一實施態樣中，本發明之 抗體包含一含有序列SEQ ID NO·: 12之輕鏈多胜肽，其中該 序列包含在第9表之各列中所指出之種系及非種系殘基的 10 特定組合中的任一者。在一實施態樣中，本發明之抗體包 含一含有序列SEQ ID NO·: 16之輕鏈多胜肽，其中該序列包 含在第11表之各列中所指出之種系及非種系殘基的特定組 合中的任一者。 在一實施態樣中，本發明之致標性結合劑或抗體包含 15 一依據SEQ ID NO: 2、6或1〇的重鏈序列，其中： 在位置30之殘基係擇自於：S或R; 在位置31之殘基係擇自於：S，N或D; 在位置33之殘基係擇自於：G或Y; 在位置35之殘基係擇自於：S，Η或N; 20 在位置50之殘基係擇自於：Y，V或F; 在位置53之殘基係擇自於：Y, S或R; 在位置54之殘基係擇自於：S或D; 在位置57之殘基係擇自於：T，L，N或I; 在位置58之殘基係擇自於：K或I; 15 200815475 在位置61之殘基係擇自於：V或A; 在位置99之殘基係擇自於：G，D或E或是該殘基係 經刪除的； 在位置100之殘基係擇自於：G或是該殘基係經刪除 5 的； 在位置101之殘基係擇自於：S，H，P或R; 在位置102之殘基係擇自於：Y或I; 在位置103之殘基係擇自於：S,V或A; 在位置104之殘基係擇自於：G或A; 10 在位置105之殘基係擇自於：S或R; 在位置106之殘基係擇自於：P或G; 在位置107之殘基係擇自於：F或M;以及 在位置109之殘基係擇自於：Y或V。 此重鏈序列之群組係命名為「群組A」。 15 在一實施態樣中，本發明之致標性結合劑或抗體包含 一依據SEQ ID NO: 14或18的重鏈序列，其中 在位置27之殘基係擇自於：G或D; 在位置28之殘基係擇自於：S或F; 在位置32之殘基係擇自於：S或F; 20 在位置33之殘基係擇自於：S，N，T或I; 在位置52之殘基係擇自於：S或T; 在位置56之殘基係擇自於：S或T; 在位置58之殘基係擇自於：S或T; 在位置63之殘基係擇自於：S或P; 16 200815475 在位置100之殘基係擇自於：Η或是該殘基係經刪除 的； 在位置101之殘基係擇自於：Η或是該殘基係經刪除 的；以及 5 在位置103之殘基係擇自於：V或是該殘基係經刪除 的。 此重鏈序列之群組係命名為「群組Β」。 在一實施態樣中，本發明之致標性結合劑或抗體包含 一依據SEQIDNO: 4、8或12的輕鏈序列，其中 10 在位置25之殘基係擇自於：Α或Ρ; 在位置27之殘基係擇自於：Q，R或H; 在位置28之殘基係擇自於：G，V，S，I，D或R; 在位置29之殘基係擇自於：I或F; 在位置30之殘基係擇自於：S，N，A，R或T; 15 在位置31之殘基係擇自於：S, H，K，T或R; 在位置32之殘基係擇自於：S，T，Y，D，N或F; 在位置33之殘基係擇自於：L或I; 在位置50之殘基係擇自於：A，G，L，Y，S或V; 在位置51之殘基係擇自於：A，G或S; 20 在位置53之殘基係擇自於：T, Q，N，H, R或S; 在位置54之殘基係擇自於：L, R或S; 在位置55之殘基係擇自於：Q，P，F,A或V; 在位置56之殘基係擇自於：S，N，T或G; 在位置91之殘基係擇自於：S或T; 17 200815475 在位置92之殘基係擇自於：Y或F; 在位置94之殘基係擇自於：N，T，S或是該殘基係經刪 除的； 在位置95之殘基係擇自於：F，W，P，I，A，L或是該殘 5 基係經刪除的； 在位置96之殘基係擇自於：P或是該殘基係經刪除的; 以及 在位置97之殘基係擇自於：W，L，R，I或是該殘基係 經刪除的。 10 此輕鏈序列之群組係命名為「群組C」。 在一實施態樣中，本發明之致標性結合劑或抗體包含 一依據SEQ ID NO: 16或20的輕鏈序列，其中 在位置28之殘基係擇自於：S，I，G，D，R或V; 在位置29之殘基係擇自於：F，I或V; 15 在位置30之殘基係擇自於：S，A，T，G，R或N; 在位置31之殘基係擇自於：S，R，K，N或T; 在位置32之殘基係擇自於：Y，F，W，N，D或S; 在位置33之殘基係擇自於：L或I; 在位置34之殘基係擇自於：N，A或H; 20 在位置50之殘基係擇自於：A，Y，G，L或V; 在位置51之殘基係擇自於：A，G或S; 在位置52之殘基係擇自於：A，Y，G，L或V; 在位置54之殘基係擇自於：L，R或S; 在位置55之殘基係擇自於：Q，F，V，A或P; 18 200815475 在位置56之殘基係擇自於：S，N，T或G; 在位置92之殘基係擇自於：S或T;以及 在位置93之殘基係擇自於·· S，Ν或I。 此輕鏈序列之群組係命名為 「群組D」。 在實施態樣中，本發明之致標性結合劑或抗體包含 群組A重鏈序列之任-者以及群組C或群組D輕鏈序列之 任一者0

在一實施態樣中，本發明之致標性結合劑或抗體包含 群組B重鏈序列之任_者以及群組c或群組d輕鏈序列之任 10 一者。 本發明之其它實施態樣包括結合至PDGFR-a且包含 衍生自VH3-11種系序列之重鏈多胜肽的人類單株抗 體。本發明之其它實施態樣包括結合至PDGFR-a且包含一 衍生自VH4-39種系序列之重鏈多胜肽的人類單株抗體。本 15發明之其它實施態樣包括結合至PDGFR-a且包含一衍生 自Dl_26，D6-6 or D7-27種系序列之重鏈多胜肽的人類單 株抗體。本發明之某些實施態樣包括結合至PDGFR-a且包 含一 Vk輕鏈的人類單株抗體。本發明仍有之其它實施態樣 包括一包含和由VH3-11或VH4-39重鏈基因所譯碼或是所 20 衍生出之重鏈相配對之Vk輕鏈的單株抗體。S在某些實施 態樣中，該Vk輕鏈多胜肽係由JK1輕鏈基因所譯碼或是所 衍生。在其它實施態樣中，該Vk輕鏈多胜肽係由JK5輕鏈 基因所譯碼或是所衍生。 19 200815475 本發明之其它實施態樣包括結合至PDGFR-α且包含 一衍生自VH3-11種系序列之重鏈多胜肽以及一衍生自 〇12輕鏈基因之vk輕鏈多胜肽的人類單株抗體。本發明另 外之實施態樣包括結合至PDGFR_a且包含一衍生自 5 VH3_11種系序列之重鏈多胜肽以及一衍生自〇12種系序 列輕鏈之Vk輕鏈多胜肽的人類單株抗體，其中該輕鏈之 CDR1中的第二胺基酸譯碼出脯胺酸。VH3-11重鏈基因使 用與伴隨有脯胺酸經譯碼為輕鏈之CDR1之第2胺基酸位 置的012輕鏈基因使用的組合係以衍生自來自具有互異 10 之CDR3重鏈及輕鏈序列之獨立族系之二抗體（也就是 2·449·1·3及2.175.3 (參考第12表及第13表))的抗體為例 示0 單株抗體2.175.3及2.449.1.3皆係對於pDGFR-a具高 親合力之抗體，且在試管中具有阻斷PDGF所驅動之細胞 15 反應的高效力。雖然這二個抗體共同使用νΉ (VH3-11)及 Vk(012)使用，其係在D、JH及Jk使用上相異。因此，其 係來自於不同之B-細胞族系。然而，其確實在vk共同具 有獨特的序列形式。在二抗體中殘基25皆是脯胺酸，由族 系之丙氨酸突變而來。脯胺酸並未在任何Vk族系基因中被 2〇 使用，且係只在Kabat資料庫中〇.2。/〇之人類序列的此位置 出現。在位置25之脯胺酸將在該胜肽骨架中後入一不易彎 曲的胜肽鍵以及一急轉的角度，且因而在該二抗體之輕鏈 的Vk區域内產生獨特的結構特性。同樣地，一突變之精胺 酸係被2.175.3及2.449.1.3使用於Vk之CDR1的位置27e 20 200815475 (Kabat編號）。精胺酸並不被使用於任何Vk族系基因之此 標準位置上，且係只在Kabat資料庫中0.4%之人類序列中 出現。在本發明之一實施態樣中，提供一結合至pDGFR_a 且在殘基25包含一脯胺酸之人類單株抗體。在本發明之一 5實施態樣中，提供一結合至PDGFR-cx且在CDR1之位置 27e包含一精胺酸之人類單株抗體。 在本發明之其它實施態樣中，提供一包含一本發明之 致標性結合劑或其結合片段以及—藥學上可接受之載劑的 組成物。在本發明之其它實施態樣中，提供一包含一本發 )明之抗體或其結合片段以及一藥學上可接受之載^ 物。 乂 不贫明還有之其它實 一、水巴符頁效地治療一遭受細 胞增生性疾狀動物的方法，包括選定—需要治療細紗 15 20 生性疾病之動物，且投與—治療有效量κ结^ PDGFR-cx之致標性結合劑至該動物。在某些實施態樣中， 該動物為人類。在某些實施態樣中，該致標性結合劑係_ 完全人類單體。在某㈣域樣巾，紐標性結合劑 係本發明之抗體且係擇自於由2·175 3、2加3或2 所組成之群組。 · 能治療的細胞增生性疾病舉例如包括癌症，例如：里 色素瘤、小細胞肺癌、非小細胞肺癌、膠質瘤、肝癌/甲、 讓瘤、胃癌、前列腺癌、乳癌、印巢癌、膀胱癌、肺 癌、神經膠元母細胞瘤、子宮 腎臟癌、結腸癌、 艮道癌、頭頸部腫瘤、惡性間皮瘤、肉瘤、膽管 21 200815475 癌、小腸腺癌、兒童惡性腫瘤、扁平細胞瘤以及胃腸道其 質瘤（GIST)。 本發明之一實施態樣係適用於和PDGFR-a相拮抗，在 一具有和PDGFR-α單獨相關或部份相關之腫瘤的病人中。 5 本發明額外的實施態樣包括在動物中抑制腫瘤生長的 方法。這些方法包括選定一需要治療腫瘤細胞生長之動 物，且投與一治療有效劑量之致標性結合劑至該動物，其 中該劑係特定結合至！>DGFR-a。在另外的實施態樣中，該 方法包括選定一需要治療腫瘤細胞生長之動物，且投與一 1〇治療有效劑量之完全人類單株抗體至該動物，其中該抗體 係特定結合至PDGFR-a。 本發明之另外的實施態樣包括一致標性結合劑在製備 一用於治療涉及在一動物中PDGFR_cx表現之疾病之藥物 的用途，其中該劑係特定結合至PDGFR-a。在另外的實施 15態樣中，本發明包括一抗體在製備一用於治療涉及在一動 物中PDGFR-ct表現之疾病之藥物的用途，其中該單株抗體 係特定結合至PDGFR-a。 在其它實施態樣中，其中所述之該致標性結合劑或抗 體可被使用於製備一用於治療在一動物中細胞增生性疾病 20之藥物，其中該抗體係特定結合至PDGFR-a。 此處所述之本發明的實施態樣係關於結合至p D G F R _ a 且影響PDGFR-a功能之抗體。其它實施態樣係關於完全人 類抗PDGFR-a抗體以及由治療之層面來看具有所欲性質 之抗PDGFR_a抗體製備物，包括對於pDGFR-a之高結合 22 200815475 親合力、對於PDGFR-α訊息傳導之高選擇性的抑制作用、 低毒性、阻斷PDGF-AA配體結合至PDGFR-α的能力、阻 斷PDGF-AB配體結合至PDGFR-a的能力、阻斷PDGF-BB 配體結合至PDGFR-a的能力、阻斷PDGF-CC配體結合至 、 5 PDGFR-a的能力及/或在試管内及在活體内抑制腫瘤細胞 • 生長的能力。有些實施態樣係關於不會實質上和PDGFR-β 交叉反應的完全人類抗PDGFR-a抗體。其它仍有之實施態 樣係關於不會產生顯著人類抗嵌合化抗體（Human Anti-Chimeric Antibody; HACA)反應之完全人類抗 10 PDGFR-ct抗體及抗PDGFR_a抗體製備物，藉此可用於重 複地投藥。 在一實施態樣中，本發明包括具有非常高之結合至 PDGFR-α之親合力_的抗體。例如，一人類、兔子、小 鼠、嵌合化或人源化抗體係可以一少於10-5、10-6、1〇_7、 15 10_8、i〇-9、10-10或1〇·ιιμ之Kd(但不受限於以上數值） , 或是其中之任何範圍或數值結合至PDGFR-oi。親合力及/ \ -- 或親合性量測可以KinExA⑧及/或BIAC0RE®來測量，如 ' 其中所述。 因此，其中所述之一實施態樣包括經分離之抗體或是 20 這些抗體的片段，其結合至PDGFR_a。如該技術領域中所 知者’該抗體可有利地為，例如：多株的、寡株的、單株 的、嵌合的、人源化的及/或完全人類抗體。其中所述之本 發明之實施態樣也提供用以產生這些抗體之細胞。 23 200815475 被了解的是本發明之實施態樣並不限定於一抗體之任 何特定的形式或是產生或是製造的方法。例如：該抗 PDGFR-CX抗體可為全長的抗體（亦即是，具有一完整的人類 Fc區域）或是一抗體結合片段（亦即是，一 Fab、Fab’或 5 F(ab’)2、FV或dAb)。此外，該抗體可由一分泌該抗體之 融合瘤製備，或是由一已經過轉形或轉染有可譯碼該抗體 之一基因或夕基因的基因重組建構的細胞所製備。此外’ 該抗體可為亭一功能區抗體，如：結合至PDGFR-α之單區 (camdid)或人類單一 VH或VL功能區，如一 dAb片段。 1〇 本發明之其它實施態樣包括譯碼出其中所述之任何致 標性結合劑或抗體之經分離的核酸分子或是具有譯碼出抗 PDGFR-α抗體之經分離的核酸分子的載體或是經轉形有任 何此類核酸分子的宿主細胞。此外，本發明之一實施態樣 係藉由在一核酸分子表現以產生該抗體且接著藉由取回該 15抗體之情形下培養宿主細胞而製造一抗PDGFR-a抗體之 方法。 其中另一實施態樣包括藉由以表現人類 PDGFR-a 之 細胞、含有人類PDGFR-a之經分離的細胞膜、經純化之人 類PDGFR-a或是其等之片段及/或一或多個其直系同源 20 (〇rth〇1〇g〇US)序列或片段來免疫一哺乳類動物而製造對於 PDGFR_a具南親合力之抗體的方法。 其它實施態樣係基於特定結合i PDGFR_a之經分離 的抗體的產生及鑑定。PDGFR_a係表現在數種腫瘤型式 24 200815475 上。中和PDGFR_a之抗體可預防PDGFR-α所引發之腫瘤 生長及其它所欲之效果。 本發明之另一實施悲樣包括' 珍斷疾病或病狀的方 法’其中，一如其中所述般而製備的抗體係利用於偵測在 5 一病患或一病患檢體中之PDGFR_a位準。在另一實施態樣 中，用於鑑定風險因子、診斷疾病以及疾病之階段的方法 係存在的，其涉及使用抗-PDGFR-a抗體來鑑定PDGFR-a 的表現及/或過量表現。在某些實施態樣中，該方法包含投 予一選擇性結合至一細胞上之PDGFR-a蛋白質之完全人 1〇 類抗體綴合物至一病患。該抗體綴合物包含一選擇性結合 至PDGFR-a之抗體及〆標記。該方法進一步包含觀察該標 記在病患中之存在。一相對高量的標記將表示一相對高之 疾病風險以及一相對低量的標記將表示一相對低之疾病風 險。在一實施態樣中，該標記係綠螢光蛋白。 15 本發明進一步提供用於測定在一病患樣品中P D G F R - a 位準之方法，該方法包含使一抗PDGFR-a抗體和一由病患 而來之生物樣品相接觸，且偵測在該樣品中該抗體及 PDGFR-oi之間結合的位準。在更特定之實施態樣中，該生 物樣品係血液或血清。 20 本發明之另一實施態樣包括用於診斷和PDGFR-a在 一細胞中之表現相關之病症的方法，該方法藉由使一血清 或細胞和一抗PDGFR-a抗體相接觸，而之後偵測PDGFR-a 的存在。 25 200815475 在另一實施態樣中，本發明包括一用於偵測在哺乳類 組織、細胞或體液中之PDGFR-α以篩選涉及表現PDGFR-a 之細胞之疾病的測定套組。該套組包括一結合至PDGFR-a 之抗體以及一用於指示該抗體和PDGFR_a反應之物件，如 5 果有該反應的話。較佳的是該抗體為單株抗體。在一實施 態樣中，該結合至PDGFR_a之抗體係經標記的。在另一實 施態樣中，該抗體係一未經標記的第一抗體而該套組更包 括用於偵測該第一抗體之物件。在一實施態樣中，該物件 包括一經標記之第二抗體，該第二抗體為一抗免疫球蛋 10 白。較佳地，該抗體係經一選自於以下群組之標記所標識： 螢光物、酵素、放射性核種及輻射線不能穿透的物質 (radiopaque material) 〇 還有另外的實施態樣包括用於治療在一病患中和 PDGFR-oi表現相關之疾病或病況的方法，該方法藉由投予 15 一有效量之抗PDGFR-α抗體至該病患。該抗PDGFR-α抗 體可被單獨投藥，或是可和其它的抗體或是化療藥物或是 放射性治療合併投予。例如：抑制腫瘤生長之PDGFR-a抗 體之一單株、募株或多株混合物可和一顯示出可直接抑制 腫瘤細胞增殖之藥物合併投藥。該方法可在活體内執行且 20 該病患較佳係人類病患。 在某些實施態樣中，該抗PDGFR-a抗體可被改質以增 強其固定補體及參與補體依賴性細胞毒殺作用 (complement-dependent cytotoxicity，CDC)之能力。在實施 態樣中，該抗PDGFR-a抗體可經改質以增強其活化效應細 26 200815475 胞及參與抗體依賴性細胞毒殺作用（antibody_dependent cytotoxicity，ADCC)之能力。在其它仍有之實施態樣中，該 抗PDGFR-α抗體可經改質以增強其活化效應細胞及參與 抗體依賴性細胞毒殺作用且增強其固定補體及參與補體依 5 賴性細胞毒殺作用之能力。 在另外之實施態樣中，本發明提供—包括—容器之製 造商品。該容器包括-含有抗PDGFR_a抗體之組成物及一 仿單或b識指明该組成物係用於治療特徵為pDGFR_a表 現或過度表現的疾病。 10 纟其它實施態樣中，本發明提供一用於治療涉及 I>DGFR-a表現之疾病的套組，該套組包括抗pDGFR_a單 株抗體及將該單株抗體投予一需要此治療之病患的指示。 在其它方面，係提供-選擇性殺死在一病人之癌細胞 的方法。該方法包含投予全人類抗體綴合物至—病 15人。該完全人類抗體綴合物包含一可結合至PDGFR-a之胞 外功能區域之抗體及-藥劑。該藥劑係一毒素、一放射性 同位素或另-可殺死癌細胞的物質。該抗體綴合物藉此可 選擇性地殺死癌細胞。該_可為阜草毒素蛋白（sap〇rin)。 在一方面’係提供-結合至PDGFR_a之經綴合的完全 20人類抗體。附接至該抗體之係一藥劑，且該抗體結合至— 細胞導致該藥劑傳送至該細胞。在-實施態樣中，上述經 綴合之完全人類抗體結合至一 pDGFR_a之胞外功能區 域。在另-實施態樣中’該抗體及該經綴合之毒素係被— 表現PDGFR-a之細胞胞内化。在另一實施態樣中，該藥劑 27 200815475 係一細胞毒殺性藥劑。在另一實施態樣中，該藥劑係，例 如，皂草毒素蛋白或奥瑞司他汀(auristatin)、假單孢菌屬外 毒素、吉柔寧（gelonin)、蓖麻毒素（ricin)、卡利甲米辛 (calicheamicin)或是以美登素為基礎（maytansine-based)之 5 免疫綴合物等等。在其它另外的實施態樣中，該藥劑係放 射性同位素。 在本發明之某些實施態樣中，其中所提供之抗體醣化 形態係經改質以增加ADCC及CDC效應者功能。參考 Shields RL 等人(2002) JBC. 277:26733; Shinkawa T 等人， 10 (2003) JBC· 278:3466 以及 Okazaki A 等人，（2004) J· Mol·

Biol·，336: 1239 的論文。 圖式簡單說明 第1圖係一顯示5種經選定之單株抗體之劑量反應的 15 圖表，其係就抑制PDGF-AA-所引發之MG-63腫瘤細胞增 生％對於抗體濃度ng/ml而言。使用100 ng/ml (3·45ηΜ)的 PDGF-AA進行細胞刺激。 第2a_2b圖顯示2.175.3及2.449.1.3在Calu-6非小細 胞肺異種移植模式之活體内抗腫瘤評估。第2a圖顯示平 20 均腫瘤大小(mm3)對時間（天數），而第2b圖顯示平均體重（g) 對時間（天數）。該方形點表示該載劑治療組；該圓形點表示 該2.175.3 1〇 mg/kg治療組；該三角形點表示該2.449.1.3 10mg/kg治療組。 第3圖顯示該等抗體在SCID小鼠之U118神經膠質瘤異 28 200815475 種移植模式之活體内評估的結果。圖表中係以抗體治療之 腫瘤大小（mm3)對時間（天數）。該方形點表示該載劑治療 組；該圓形點表示該2.175.3 10 mg/kg治療組；該三角形點 表示該2.449.1.3 l〇mg/kg治療組。 5

【實:方式;J 較佳實施例之詳細說明 於此所述之本發明的實施態樣係關於結合至PDGFR_a 且抑制腫瘤細胞生長的致標性結合劑。在某些實施態樣 10中，该致標性結合劑係結合至PDGFR-a且抑制腫瘤細胞生 長的抗體。本發明之其它實施態樣包括在治療上可用之完 全人類抗PDGFR_a抗體及抗體製備物。此類抗pDGFR_a 抗體製備物較佳係具有所欲之治療性質，包括對於 PDGFR-a之強結合親和力，對於抑制PDGFR-a訊息傳導 15之高選擇性，低毒性’阻止PDGF-AA配體結合至PDGFR-a 之能力，阻止PDGF_AB配體結合至PDGFR_a或是 PDGFR-α/β異二聚物之能力，阻止PDGF-BB配體結合至 PDGFR-a或是PDGFR_a/P異二聚物之能力，阻止PDGF_CC 配體結合至PDGFR-a或是PDGFR-cx/p異二聚物之能力， 2〇 及/或在試管内及在活體内抑制腫瘤細胞生長的能力。某些 實施態樣係關於不會和PDGFR-β交互反應的完全人類抗 PDGFR-a 抗體。 #發明之實施態樣也包括是抗PDGFR-a抗體之經分 離#結合片段的致標性結合劑。較佳地，該結合片段係衍 29 200815475 生自完全人類抗PDGFR-α抗體。典型的片段包括 ^v，Fab， dAb或其它已知之抗體片段，如以下所詳述者。 本發明之 實施態樣也包括表現對抗PDGFR-α之完全人類抗體的細 胞。細胞之例子包括融合瘤或是基因重組所製造出來之細 5 胞，例如：產生對抗PDGFR-a抗體之中國倉鼠卵巢(CHO) 細胞。 此外，本發明之實施態樣包括使用這些抗體治療疾病 之方法。抗PDGFR-a抗體係可用於抑制腫瘤生長。該作用 之機包括，但並不侷限於，阻斷配體結合及/或抑制關於細 10 胞生長之細胞訊息傳導。可藉由此機制治療之疾病包括， 但並不侷限於，腫瘤疾病，例如：癌症，包括肺癌、卵巢 癌、前列腺癌、結腸癌、神經膠質瘤、黑色素瘤及胃腸道 基質瘤（GIST)。 本發明之其它實施態樣包括用明確地決定在一病患或 15 生物性樣品中PDGFR-a的存在及/或其量之診斷試驗。該 試驗套組可包括伴有用於偵測此類抗體之必須的標識的抗 PDGFR-a抗體。這些診斷試驗係可使用於筛選和pDGFR-a 相關之疾病，包括，但並不侷限於，腫瘤疾病，例如：癌 症’包括乳癌、肺癌、卵巢癌、前列腺癌、結腸癌、神级 20膠質瘤、黑色素瘤及胃腸道基質瘤（GIST)。 另一實施態樣係一包含一含有SEQ ID ΝΟ·:2序列之重 鏈多胜肽之抗體。在一實施態樣中，該抗體更包含一含有 SEQIDNO.:4序列之輕鏈多胜肽。另一實施態樣包括一含 有SEQ ID Ν〇·:1〇序列之重鏈多胜肽之抗體。在〆實施態 30 200815475 樣中，該抗體更包含一含有SEQ ID ΝΟ·:12序列之輕鏈多 胜肽。仍有之另一實施態樣係一包含一含有SEQ ID NO.:14 序列之重鏈多胜肽之抗體。在一實施態樣中，該抗體更包 含一含有SEQ ID NO·: 16序列之輕鏈多胜肽。 5 還有之另一實施態樣係一產生如上所述之抗體的輕鏈 及/或重鏈的融合瘤。該融合瘤可產生一完全人類單株抗體 之一輕鏈及/或一重鏈。在一實施態樣中，該融合瘤產生完 全人類單株抗體2.175.3、2.449.1.3及2.998.2之輕鏈及/或 重鏈。可擇地，該融合瘤可產生如同完全人類單株抗體 10 2.175.3、2.449.1 ·3及2.998.2結合至相同之抗原決定部位或 多種抗原決定部位的抗體。可擇地，該融合瘤可產生和完 全人類單株抗體2.175.3、2.449.1.3及2.998.2競爭結合至 PDGFR-oi之抗體。 仍有之另一實施悲樣係一譯碼如上所述之抗體的輕鍵 15或重鏈的核酸分子。在此實施態樣中，該核酸分子可譯碼 一完全人類單株抗體的輕鍵或重鏈。在一實施態樣中，該 核酸分子譯碼2·175.3、么449·1·3或2.998.2完全人類單株 抗體之一者的輕鍵或重鏈。 一額外的實施態樣係一包含核酸分子或如上所述之分 20子的載體，其中該載體譯碼出如上所界定之抗體的輕鏈及/ 或重鏈。 本發明之一實施態樣包括一包含有如上所述之載體的 宿主細胞。可擇地，該宿主細胞可包含多於一種之載體。 31 200815475 此外，本發明之-實施態樣係一藉由在一核酸分子表 現而產生該抗體之情形下培養該宿主細胞且接續回收該抗 體而產生一抗體之方法。 在本發明之一實施態樣中，其包括一藉由以至少一譯 5碼出如上所述之致標性結合劑的核酸分子轉染至少一宿主 細胞’在該宿主細胞中表現該核酸分子且分離出該致標性 結合劑而製造一致標性結合劑的方法。本發明之另一實施 態樣中係一藉由以至少一譯碼出如上所述之抗體的核酸分 子轉染至少一宿主細胞，在該宿主細胞中表現該核酸分子 10 且分離出該抗體而製造一抗體的方法。 本發明之另一方面係一藉由投予如上所述之致標性結 合劑而抑制表現有PDGFR-CC之細胞生長的方法。該方法可 包括選定一需要治療和PDGFR_a表現相關之疾病的動 物，且投予一治療有效量之特定結合至pDGFR-a之致標性 15 結合劑至該動物。 仍有之另一方面係一藉由投予一治療有效量之特定結 合至PDGFR-α之致標性結合劑以治療一哺乳類動物之腫 瘤疾病的方法。該方法可包括選定一需要治療腫瘤疾病的 動物，且投予一治療有效量之特定結合至pDGFR_a之致標 20性結合劑至該動物。該藥劑可被單獨投藥，或是可和一第 二抗腫瘤藥劑合併投藥，該第二抗腫瘤藥劑係選自一抗 體、一化療藥物或是一放射性藥物。 另一方面係—藉由投予-治療有效量之特定結合至 PDGFR-cx之致標性結合劑以、Λ、麻一者 療_礼類動物之癌症的方 32 200815475 法。該方法可包括選定一需要治療癌症的動物，且投予_ 治療有效量之特定結合至PDGFR-CX之致標性結合劑至該 動物。該藥劑可被單獨投藥，或是可和一第二抗腫瘤藥劑 合併投藥，該第二抗腫瘤藥劑係選自一抗體、一化療藥物 5 或是一放射性藥物。 依據本發明之另一方面，一特定結合至PDGFR-α之致 標性結合劑可被使用於製造一用於治療腫瘤疾病的藥物。 本發明之一實施態樣係特定適合於用在抑制一病患之 單獨，或是部份，依賴於PDGFR-α表現的腫瘤生長。 10 本發明之另一實施態樣包括一用於偵測在哺乳類動物 之組織、細胞或體液中之PDGFR-a以筛選腫瘤及/或纖維 性病變及/或免疫系統疾病的測試套組。該套組包括一結合 至PDGFR-a之致標性結合劑及一用於顯示該致標性結合 劑和PDGFR-a反應的物件，若有該反應的話。該致標性結 15合劑可為一單株抗體。在一實施態樣中，該結合PDGFR-a 的抗體係經標記的。在另一實施態樣中，該抗體係未經標 5己的該抗體係一未經標記的第一抗體而該套組更包括用於 偵測該第一抗體之物件。在一實施態樣中，該物件包括一 、、、己之第二抗體，孩苐_抗體為一抗免疫球蛋白。較佳 地，该抗體係經一選自於以下群組之標記所標識：螢光物、 酵素、放射性核種及輻射線不能穿透的物質（radi〇paque material)。 關於抗P D G F R - α抗體之進一步的實施態樣、特徵等係 於以下詳細地敘述。 33 200815475 定義 除非有另外的定義，此處所使用的科學性及技術性的 用語係具有此領域中具有通常知識者所能並遍了解的意 5義。此外，除非内文中另外的需求，單數的用語係包括複 數且複數的用語應包括單數。一般來說，和此處所述之細 胞、組織培養，分子生物以及蛋白質及寡_或聚核苷酸化學 及雜交相關聯之命名及技術係此技術領域中所習知且普遍 的。 10 標準技術係使用重組DNA、寡核苷酸合成以及組織培 養和轉形(例如：電穿透作用，脂質轉染法)之中。酵素反應 及純化技術係依據製造商的說明書或是如同該領域中一般 所熟練的或是此中所述者而執行。前述之技巧及步驟一般 係依據該領域中所熟知的以及在本發明說明書中所引用或 15 疋所討論之各種一般或是更特定之文獻中所述之習知方法 而執行。參考文獻如Sambrook等人的Molecular Cloning: A Laboratory Manual (第三版，Cold Spring Harbor Laboratory

Press，Cold Spring Harbor，N.Y. (2001))，其係併入此作為參 考。此中所述和分析化學、合成有機化學以及藥物及製藥 20 化學相關所應用的命名以及實驗室步驟及技術係該領域中 所熟知者且是普遍使用的。標準技術係使用於化學合成、 化學分析、製藥調配、配方及傳送以及治療病患。 如同依據本揭露内容所採用者，下列之用語，除非另 有指示，應被解讀為具有以下之意思： 34 200815475 一化合物係意指任何具有小於約2000道耳吞(Dalt〇ns) 之分子量的小分子量化合物。 該「PDGFR-α」—詞係意指由PDGFR_a基因所譯碼出 之血小板衍生生長因子酪胺酸激酶受體_a。pDGFR-a亦已 5 知為 CD140a 及 PDGFR_a。 該「中和」一詞在意指一例如一抗體之致標性結合劑 係關於該藥劑消除或明顯減少一標的抗原之活性的能力。 因此，本發明之中和性抗PDGFR_a抗體係可消除或明顯減 少PDGFR-a之活性。舉例來說，一中和性pDGFR_a抗體 10可藉由阻斷配體結合至其受體卩1)(3171〇1而作用。 如此處所使用之該「經分離之聚核苷酸」一詞係意指 一已由其自然存在之環境中被分離出來的聚核苷酸。此聚 核普酸可為染色體、cDNA或是合成的。經分離的聚核普 酸較佳係和其本質上相關聯的所有或部份聚核苷酸沒有關 15聯的。該經分離的聚核苷酸可能操作性地連接於另一本質 上不相連接之聚核苷酸。此外，經分離的聚核苷酸較佳係 本質上不會以一部份之較大序列存在。 該「經分離的蛋白質」一詞在此係意指一已由其自然 存在之環境中被分離出來的蛋白質。此類之蛋白質可衍生 2〇自染色經基因重組之DNA，經基因重組 之RNA或是合成之來源或是其等藉由其來源或是衍生源 之某些i合’該「經分離的蛋白質」⑴係並不和自然中所 卷現之蛋白質相連接，（2)係不具有由相同來源而來之蛋白 35 200815475 質，例如，不具有鼠類蛋白質；（3)係由一來自不同種之細 胞所表現；或是(4)在自然中不存在的。 該「多胜肽」一詞在此處係使用為一通稱用語以意指 天然的蛋白質、片段、或一多胜肽序列的類似物。因此， 5天然的蛋白質、片段或類似物係多胜肽屬的種類。依據本 發明之較佳的多胜肽包含人類的重鏈免疫球蛋白分子以及 人類κ輕鏈免疫球蛋白分子，以及一藉由包含該重鏈免疫 球蛋白分子和一如κ或是χ輕鏈免疫球蛋白分子之該輕鏈 免疫球蛋白分子之組合所形成的抗體分子，反之亦然，以 10及其片段或是類似物。依據本發明之較佳的多胜肽也可能 僅包含人類重鏈免疫球蛋白分子或其片段。 此處所使用之该「自然存在」一詞在應用至一物體時 係意指該物體可在自然中被發現的事實。例如，存在於一 有機體（包括病毒）中之一多胜肽或是一聚核苷酸序列，其可 15 由一自然之來源中被分離出來且其係並未經過實驗室中之 人員有目的地或是其它自然發生地改質。 此處所使用之「可操作性地連接」一詞係意指如此所 述之構件的位置係處於允許其等以其所欲之方式而運作的 關係。例如，一控制序列「可操作性地連接」裏一譯碼序 20列係指以在適合於該控制序列之情形下可達成該譯碼序列 表現的方式連接。 此處所使用之「控制序列」一詞係意指造成或影響其 所連接至之譯碼序列表現或進行之聚核苷酸序列。此類控 制序列之本質係依據其宿主有機體而有所不同；在原核細 36 200815475 胞中’此類控制序列一般係包括啟動子(prom〇ter)、核糖體 結合部位（ribosomal binding site)以及轉錄終止序列 (transcription termination sequence);在真核細胞中，此類 控制序列一般係包括啟動子、增強子、内子、轉錄終止序 5 列、聚腺音酸化訊號序列（polyadenylation signal sequences) 以及5 ’及3 ’非轉譯區域(untranslated regions)。該「控制序 列」一詞係意於包括，至少，所有其存在係為表現或進行 所必須的物件，且亦可包括其存在係為有助益的額外的物 件’例如·領導序列及融合fusion partner sequences. 10 此處所意指之該「聚核苷酸」一詞係意謂一具有一至 少10個鹼基長度之核苷酸的聚合形式，不論是核糖核酸或 是去氧核糖核酸或是任一類型核苷酸之經改質的形式，或 是RNA-DNA之雜交雙股。該用詞包括單股及雙股形式的 DNA。 15 此處所意指之該「寡核皆酸」一詞係包括藉由自然存 在及非自然存在之鏈結而連接在一起之自然存在的及經改 質的核苷酸。寡核苷酸係一般包含有200或更少驗基長度 之聚核苷酸的子集合。較佳地，寡核苷酸係10-60鹼基長 度且更佳地係 12、13、14、15、16、17、18、19 或 20-40 2〇 鹼基長度。寡核苷酸通常係單股的，例如：用於探針；雖 然寡核苷酸可能係雙股的，例如：用於建構一基因突變體。 寡核苷酸可為正義或反義募核苷酸。 此處所意指之「自然存在之核苷酸」一詞係包括去氧 核糖核酸及核糖核酸。此處所意指之「經改質之核苷酸」 37 200815475 一詞係包括具有經改質或是經取代之糖基團等等之核苷 酸。此處所意指之「寡核苷酸鍵結」一詞係包括如硫代磷 酸酯、二硫代磷酸酯、硒代磷酸酯、二硒代磷酸酯、苯 胺硫代磷酸酯、苯胺磷酸酯、磷醯胺酸酯等的寡核苷 5 酸鏈結。參考如 LaPlanche et al. Nucl· Acids Res· 14:9081 (1986); Stec et al. J. Am. Chem. Soc. 106:6077 (1984); Stein et al. Nucl. Acids Res. 16:3209 (1988); Zon et al.

Anti-Cancer Drug Design 6:539 (1991); Zon et al.

Oligonucleotides and Analogues: A Practical Approach, pp. 10 87-108 (F· Eckstein，Ed·，Oxford University Press，Oxford

England (1991)); Stec 等人的美國第 5，151，510 號專利； Uhlmann and Peyman Chemical Reviews 90:543 (1990)，該 等之揭露係併入於此作為參考。一寡核苷酸在所欲之情形 下可包括一用於偵測之標記。 15 此處所意指之「選擇性雜交」係意指可偵測地及特定 地結合。聚核芽酸、寡核普酸及其片段在雜交及降低可察 覺到之和非特定核酸之可偵測結合的清洗條件下選擇性地 雜交至核酸股。如該領域所習知或是其中所討論的，可利 用高嚴苛條件以達到選擇性雜交狀態。一般而言，在聚核 20苦酸、募核苷酸或是抗體片段和一有興趣之核酸序列之間 該核酸序列的相似性將至少係80%，而更代表性地較佳地 增加相似性為至少85%9〇%，95%，99%，及1〇〇%。 該「CDR區域」或是rCDR」一詞係意於指明免疫球 蛋白之重鏈及輕鏈上高度變化的區域，如Kabat等人1991 38 200815475 (Kabat，Ε·Α·等人（1991) Sequences of Proteins of Immunological Interest，第 5 版。US Department of Health and Human Services，Public Service，NIH，Washington)以 及其之後的再版所界定者。一抗體典型地含有3個重鏈 5 CDRs及3個輕鏈CDRs。該用語CDR或是CDRs在此處 係用於指明，依據該實例，這些區域之一或是這些區域之 數者，甚至是全部，含有大多數胺基酸殘基負責於以抗體 之親和力結合於抗原或是其所辨識之抗原決定部位。 該重鏈之第三CDR(HCDR3)具有較大之尺寸變化（較 10多之變異性本質上係來自於產生其之基因的排列機制）。其 可能短如2個胺基酸，雖然已知最長的尺寸為26。CDR長 度也可能依據可被獨特之基本架構所容納之長度而改變。 功能上而論，HCDR3在決定該抗體之特異性方面扮演了部 份的角色（Segal et al·，PNAS，71:4298-4302，1974, Amit et 15 al·，Science，233:747-753, 1986, Chothia et al·，J. Mol. Biol·， 196:901-917，1987，Chothia et al·，Nature，342:877- 883, 1989，Caton et al·，J· Immunol·，144:1965-1968，1990, Sharon et al·，PNAS，87:4814-4817，1990, Sharon et al·，J· Immunol·，144:4863-4869，1990, Kabat et al·，J· Immunol·, 20 147:1709-1719, 1991)。 此處所指之「CDRs組」一詞包含CDR1、CDR2及 CDR3。因此，一組 HCDRs 係意指 HCDR1、HCDR2 及 HCDR3，且一組 LCDRs 係意指 LCDIU、LCDR2 及 LCDR3。 除非另有陳述，一「CDRs組」包括HCDRs及LCDRs。 39 200815475 二胺基酸序列係「相似的(homologous)」，若其序列之 間存有部份或是完全地相同性。例如，85%的相似表示當 該二序列係調整為最高度比對時有85%的胺基酸係相同 的。缺口（在該二經比對之序列之中的其一）在最高度比對時 5 係允許的；缺口長度在5或更少係較佳的，在2或更少係 更佳的。可擇地或是較佳地，二蛋白質序列（或是衍生自其 之具至少30個胺基酸長度的多胜肽序列）係相似的，當該 詞在此處使用時，若使用具有突變資料矩陣及一缺口扣分 為6或更多之ALIGN程式時其具有一多於5之比對積分 10 (以標準偏差早位）。參考 Dayhoff，M.O·，在 Atlas of Protein

Sequence and Structure，ρρ· 101-110 (第 5 冊，National

Biomedical Research Foundation (1972))及此冊之補充刊物 2, ρρ· M0。該二序列或其部份更佳係相似的，若其胺基酸 有50%或更高的相同度，在其係使用ALIGN程式作最佳比 15 對時。該被了解的是，在二直系同源序列中可有具相似性 之不同區域。例如，在鼠類或人類直系同源之功能部位比 非功能部位可具有較高程度的相似性。 此處所用之「相當於」一詞係意指一聚核苷酸序列係 完全或部份相似於（亦即是，相同於，並非完全係演化相關 20的）一參考聚核苷酸，或是一多胜肽序列係相同一參考多胜 肽序列。 相對地，此處所用之「互補於」一詞係意指該互補序 列係完全或部份相似於一參考聚核苦酸序列。用以說明的 40 200815475 是，该核苷酸序列「TATAC」係相當於一參考序列「taTAC」 且係互補於—參考序列「GTATA」。 關於一序列之「序列相同性」或「相同性」一詞係係 代表二聚核苷酸或胺基酸序列在一比較視窗之上係相同的 5 (也就是，在一核苷酸對核苷酸或殘基對殘基的基礎上）。「序 列相同性之比例」一詞係藉由在一比較視窗之上比較二經 最佳比對之序列而計算，判斷在二序列中發生相同核酸鹼 基(例如：八，丁，〇,〇，1；，或1)或是胺基酸殘基的位置數目以 產生相配的位置數目，將相配的位置數目除以在一比較視 10窗中之總數目（也就是，該視窗尺寸大小），且將該結果乘以 100而產生序列相同性之比例。此處所用之r實質上相同」 一詞係表示一聚核苷酸或胺基酸序列之特徵，其中該聚核 苷酸或胺基酸包含一至少85%序列相同性之序列，較佳係 至少90至95%序列相同性，更佳係至少99%之序列相同 15 性，當在一至少有18個核苷酸(6個胺基酸)位置的比較視 窗之上相較於一參考序列時，常常是在一至少有24-48個 核苷酸(8-16個胺基酸)位置的比較視窗之上，其中序列相 同性之比例係藉由在比較視窗之上將參考序列和該包括總 共為參考序列之20%或更少之刪除及附加的序列相比較。 2〇 該參考序列可為一較大序列的次群組。 如此處所使用的，該等20個慣用之胺基酸及其縮寫係 跟隨慣用的用法。參考免疫學·一綜合體（Immunology-A Synthesis)(第 2 版，E.S. Golub 及 D.R. Gren，Eds·，Sinauer Associates，Sunderland，Mass· (1991))，其係併入此以作為參 41 200815475 考文獻。4專20個慣用胺基酸之立體異構物(例如，〇_型 胺基酸）、非天然的胺基酸，如：α_，α_雙重取代胺基酸、 Ν_烷基胺基酸、乳酸及其它非慣用之胺基酸也係適用於本 發明之多胜肽的成份。非慣用之胺基酸的範例包括：4-羥 5基脯胺酸、丫-羧基麵胺酸、ε-Ν，Ν，Ν-三甲基離胺酸、ε-Ν-乙 醯基離胺酸、〇_磷絲胺酸、Ν-乙醯基絲胺酸、Ν-甲醯基甲 硫胺酸、3-甲基組織胺酸、5-羥基離胺酸、σ_Ν•曱基精胺酸 以及其它相似之胺基酸及亞胺酸(例如：4_羥基脯胺酸）。在 此處所使用之多胜肽標示法中，該左手方向係該胺基端方 10向且該右手方向係該羧基端方向，依據標準用法及慣用的 原則。 相同地，除非特別有指明，否則單股聚核苷酸序列之 左手端係該5’-端；雙股聚核苷酸序列之左手方向係意指該 5’-方向。由5’至3’的方向添加新生RNA轉錄體係意指為 15轉錄方向，DNA股上具有相同於rna且係為RNA轉錄 體之5’至5’端之序列區域稱為「上游序列」，DNA股 上具有相同於RNA且係為rna轉錄體之3，至3,端之序 列區域稱為「下游序列」。 當適用於多胜肽，該「實質相同性」一詞係意指二胜 2〇 肽序列，在最佳化對齊時，例如係藉由使用缺陷缺口比重 之GAP或BESTFIT程式，共有至少8〇%的序列相同性， 較佳係至少90%序列相同性，更佳係至少95〇/。序列相同 性，且最佳係至少99%序列相同性。較佳地，不相同的殘 基位置係由保留性胺基酸取代而不同。保留性胺基酸取代 42 200815475 係意指具有相似側鏈之殘基的可交換性。例如，一群具有 脂肪族側鏈之胺基酸係甘胺酸、丙胺酸、纈胺酸、白胺酸 及異白胺酸；一群具有脂肪族-氫氧根側鏈之胺基酸係絲胺 酸及酥胺酸；一群具有含胺基侧鏈之胺基酸係醯胺天門冬 5胺酸鹽及麩醯胺酸；一群具有芳香族側鏈之胺基酸係苯丙 胺酸'酪胺酸及色胺酸；一群具有鹼基側鏈之胺基酸係離 胺酸、精胺酸及組織胺酸；以及一群具有含硫側鏈之胺基 酸係半胱胺酸及甲硫胺酸。較佳之保留性胺基酸取代群組 係：纈胺酸-白胺酸-異白胺酸，苯丙胺酸_酪胺酸，離胺酸_ 10精胺酸，丙胺酸·纈胺酸，麵胺酸-天門冬胺酸以及天門冬醯 胺酸鹽-麩醯胺酸。 如此處所討論的，在抗體或免疫球蛋白分子的胺基酸 序列中些微的變化係被預期為包含在本發明之中，設若該 胺基酸序列的變化對於此處所述之抗體或免疫球蛋白分子 15係維持至少75%，更佳係至少80%、90°/〇或95°/。，且最佳 係99%的序列相同性。特定地，保留性胺基酸置換係可預 期的。保留性置換係那些發生在具有相關側鏈之胺基酸家 族之中。基因上經譯碼的胺基酸一般係分為數個家族··（” 酸性的==天門冬胺酸、麩胺酸；（2)鹼性的=離胺酸、 20精胺酸、組織胺酸；⑺非極性的=丙胺酸、夂白 胺酸、異白胺酸、義酸、苯丙胺酸、甲硫胺酸、色:酸； 以及(4)非帶電極性=甘胺酸、天門冬醯胺酸、麵醯胺酸、 半胱胺酸、絲胺酸、酥胺酸、酪胺酸。更佳之家族係袁 胺酸及穌胺酸係一脂肪族-氫氧基家族；天門冬_^及= 43 200815475 ϋ胺酉夂係含胺基之家族；丙胺酸、線胺酸、白胺酸及異白 胺酉文係一脂肪族家族；且苯丙胺酸、色胺酸及酪胺酸係一 芳族家族。舉例來說，可合理地預期以異白胺酸或纈胺酸 獨立置換掉白胺酸；以麩胺酸獨立置換掉天門冬胺酸；以 5絲胺酸獨立置換掉穌胺酸的或是以一結構上相關的胺基對 一胺基酸進行相似置換將不會對獲得的分子造成結合功 能或性質上的影響，特別是該置換不涉及在骨架位置 内的胺基酸時。可藉由檢測該多胜肽衍生物的特異活 性而輕易地測定一胺基酸改變是否產生一功能性 10肽。在此處將詳述其檢測方法。本領域之習於此技術 者可輕易地製備該抗體或免疫球蛋白分子的片斷或 類似物。片斷或類似物的較佳胺基_和羧基_端出現於 靠近功能功能區的邊界。藉由將核苷酸及/或胺基酸序 列資料與公共或專屬序列資料庫比較可鑑定出其構 15造和功能功能區。較佳地，電腦化比較法係被用於鑑 定出現在其他具已知構造及/或功能之蛋白質的序列 基序（motif)或經預測之蛋白質的構形功能區。已知用 於鑑定被折疊成一已知之3D立體結構之蛋白質序列 的方法。Bowie 等人，（1991) Sc/mm 253 : 164 的文 20 章。因此，前述的說明實例教示的是熟習本技術者依 據此處所揭露之抗體可辨識出可被用於界定構造和 功能功能區的序列基序和構造構形。 較佳的胺基酸取代為那些：（1)降低對蛋白質水 解的敏感性；（2)降低對氧化作用的敏感性；（3)改 44 200815475 變形成蛋白複合物的結合親和力；（4)改變結合親和 力；以及（5)賦予或修改此類類似物的其他物理化學 或功能性質。類似物可包括（除了自然存在之胜肽序 列之外）之一序列的各種突變體（muteins)。例如，可 5 在一自然存在序列内（較佳為在形成分子間接觸之多 胜肽功能區外的部分）進行單一或多重胺基酸取代（較 佳為保留性胺基酸取代）。一保留性胺基酸取代必需 在實質上不改變其親代序列的結構特徵（例如，一置 換胺基酸必需不傾向於打斷出現於親代序列的螺旋 10 結構，或分裂作為親代序列特徵之次級構造的其他類 型）。技術可辨識多胜肽次級和三級結構的實例係描述 於 Proteins，Structures and Molecular Principles —書 (Creighton，Ed·，W. H. Freeman and Company，紐約 (1984)) ; Introduction to Protein Structure —書（C. Branden 15 and J. Tooze，eds·，Garland Publishing，紐約，紐約州 (1991));以及 Thornton 等人，TVa〜π 354 : 105 (1991)， 將其各併入於此以供參考。 可藉由序列變化或突變以及篩選具所欲特性之 抗原致標的方法獲得本發明之VH和VL功能區以及 20 CDRs的變體，其包括那些具有於此處提出之胺基酸 序列以及其可被運用於針對PDGFR-cx之致標性藥劑 和抗體者。所欲之特性的實例包括，但並不侷限於： 相對已知具抗原特異性之抗體增加對抗原的結合親 和力；相對已知具抗原特異性之抗體若已知其活性時 45 200815475 增加其對抗原活性的中和作用；在一特定莫耳比例下 與對抗該抗原之一已知抗體或配體相比具有特異性 的競爭能力；使配體-受體複合物進行免疫沈澱的能 力；結合至一特異性抗原決定部位的能力；線性的抗 5 原決定部位，例如：利用胜肽掃描所鑑定之胜肽序 列，例如：利用在線性及/或受約束之構形下經篩檢 之胜肽；藉由非連續殘基所形成之構形性抗原決定部 位；調節PDGFR-α或下游分子之新生物活性的能力； 結合及/或中和及/或任何其它所欲特性之能力。 10 所需用於在CDRs之胺基酸序列中、抗體VH或 VL功能區中及抗原結合位置中進行取代之技術在此技藝 中係可利用的。此處所揭示的抗體分子變體係可於本 發明中製造及利用。接續著運用多元數據分析技術於 結構/性質-活性關係（Wold等人，Multivariate data 15 analysis in chemistry. Chemometrics -Mathematics and Statistics in Chemistry(B. Kowalski 編輯），D. Reidel 出 版公司，荷蘭Dordrecht市，1984)之計量化學的引導 下，可利用習知數學技術衍生出抗體的定量性活性-性質間的關係，該習知數學技術係如：統計迴歸、圖 20 樣辨認和分類之技術（Norman等人，Applied Regression Analysis，«化rsc/ewce，第三版（1998 年 4 月）； Kandel，Abraham & Backer，Eric. 5 Computer-Assisted Reasoning in Cluster Analysis，Prentice Hall PTR，（1995 年 5 月 11 曰）；Krzanowski，Wojtek，Principles of 46 200815475

Multivariate Analysis: A User’s Perspective(Oxford Statistical Science Series 第 22 號（文件），Oxford University Press(2000 年 12 月）；Witten，Ian Η· & Frank， Eibe 9 Data Mining: Practical Machine Learning Tools and 5 Techniques with Java Implementations ， Morgan Kaufmann(1999 年 10 月 11 曰）；Denison David G.T·(編 輯），Christopher C. Holmes，Bani K. Mallick，Adrian F.M. Smith. Bayesian9 Methods for Nonlinear Classification and Regression(Wiley Series in Probability and Statistics) 5 10 John Wiley & Sons(2002 年 7 月）；Ghose，Arup K. & Viswanadhan，Vellarkad N. ，Combinatorial Library Design and Evaluation Principles，Software，Tools，and Applications in Drug Discovery)。抗體的性質可衍生自抗 體序列、功能性和3D立體結構的經驗性和理論性模 15 式（例如，分析可能的接觸殘基或經計算出之物理化 學性質）且這些性質可被視為單一的和組合性的。 由一 VH功能區和一 VL功能區所構成的抗體抗原 結合位置典型係由六環多胜肽所組成：三個來自輕鏈 可變功能區（VL)及三個來自重鏈可變功能區（VH)。已 20 知原子構造的抗體分析可說明抗體結合位置之序列 和3D立體結構間的關係。這些關係意味著除了 VH 功能區内的該第三區域（環）之外，結合部位環具有一 為小數目的主鏈構形：標準結構。該形成於一特定環 47 200815475 内的標準結構已被顯示為被決定於其大小及在二環 内和在骨架區内之關鍵位置某些殘基的出現。 此序列-結構關係的研究可被用於預測在一已知 序列但卻是未知3D立體結構之抗體内的那些在使其 5 CDR環維持立體結構而因此維持其結合專一性上極 為重要的殘基。可藉由將該等預測與得自於先導最佳 化試驗的輸出資料相比較而支援這些預測。在一結構 性策略中，利用任何可免費取得或市售的軟體如 WAM即可創造該抗體分子的模型。然後可利用蛋白 10質具象化和分析軟體套件，例如Insight II〇\ccekys 公司）或Deep View，以評估在CDR内各位置可能的 取代。然後可利用此資訊以製造對活性具最小影響或 最佳效應或是授予其它所欲之特性的取代。 此處所使用之「多胜肽片斷」一詞係意指具有胺 15基端及/或羧基端刪除但其餘之胺基酸序列係與演譯 自例如一全長cDNA序列之自然存在序列内之相對 應位置上相同的一多胜肽。片斷係通常具有至少約 5、6、8或10個胺基酸長度，較佳為至少約14個胺 基酸長度，更佳為至少約20個胺基酸長度，其通常 2〇為至少約50個胺基酸長度，以及甚至更佳為具有至 少約70個胺基酸長度。此處所使用之「類似物」一 詞係意指包含至少約25個胺基酸之部份的多胜肽， 其與一演譯胺基酸序列的一部分係實質上相同的以 及具有至少一種下列的性質：（1)在適當的結合條件 48 200815475 下，可特異性地結合至PDGFR-α ; (2)抑止PDGF-AA 結合的能力；（3)抑止PDGF-AB結合的能力；；（4)抑 止PDGF-BB結合的能力；及/或（5)抑止PDGF-CC 結合的能力。典型地，多胜肽類似物對於自然存在序 5 列而言包含一保留性胺基酸取代（或添加或刪除）。類 似物一般為至少20個胺基酸長度，較佳為至少50個 胺基酸長度或更長，以及通常可長至如一自然存在之 多胜肽的全長。 胜肽類似物通常在製藥工業中使用為具有類似 10 於該等模板胜肽（template peptide)之性質的非胜肽藥 物。這些類型的非胜肽化合物被稱為「擬胜肽（peptide mimetics)」或「肽模擬分子（peptidomimetics)」。 Fauchere，丄 jdv· Drwg 15 : 29(1986) ; Veber 和

Freidinger，77Λ^ 第 392 頁（1985);以及 Evans 等人，乂 15 Med· C7^m· 30 : 1229(1987)等將併入於此以供參考。 此類化合物通常係藉助於電腦化分子模型而發展出 來。構造上類似於治療用胜肽的擬肽可被用於產生一 等效性治療或預防效應。通常，胜肽模擬分子在構造 上類似於一範例多胜肽（亦即是，具有一生化性質或 20 藥理活性的多胜肽），例如人類抗體，但具有選擇性 地被選自於下列鍵結所構成之群組之鍵結藉由習知 技術中已知之方法所取代的一或多個肽鍵結： -CH2NH-、-CH2S-、-CH2-CH2-、-CH=CH-(順和反式）、 -COCH2-、-CH(0H)CH2-和-CH2SO·。以相同類型的 49 200815475 D-型胺基酸（例如，D-離胺酸代替L_離胺酸）系統性地 取代共有序列中的一或多個胺基酸可被用於產生更 穩定的胜肽。此外，藉由技術上習知的方法可產生一 包含有共有序列或實質上相同之共有序列變異的受 5約束胜肽（Rizo和Gierasch，乂亂61 : 387(1992)，併入於此以供參考）；例如，藉由加入能形 成分子内雙硫鍵（disulfide bridges)之内部半胱胺酸 殘基以環化該多胜肽。 如此處所使用的，「抗體」一詞係意指包含有至 10少一由多胜肽鏈之折疊所組成之結合功能區之一多胜肽 或是一群多胜肽，該結合功能區具有帶有與一抗原之 抗原決定部位特性互補的内部表面形狀及電荷分佈 的3D立體結合空間。一抗體一般具有四聚體之形 式，其包含兩對相同之多胜肽鏈，各對具有一「輕」 15 和一「重」鏈。各輕/重鏈對的可變區形成一抗體結 合位置。 如此處所使用的，「致標性結合劑」係一結合至一 標的位置的藥劑，例如：一抗體或其結合片斷。在一 實施態樣中，該致標性結合劑僅對一標的位置具有專 2〇 一性。在其他實施態樣中，該致標性結合劑係對多於 一個以上的標的位置具有專一性。在一實施態樣中， 該致標性結合劑可為一單株抗體及該標的位置可為一 抗原決定部位。如下所述，一致標性結合劑可包含至 少一抗體的抗原結合功能區（例如：CDR)，其中該功 50 200815475 能區係被融合或包含於一異源蛋白質骨架内，例如： 一非抗體之蛋白質骨架。 藉由重組DNA技術或藉由完整抗體的酵素或化 學切割製造一抗體的「結合片斷」。結合片斷包括 5 Fab、Fab，、F(ab’)2、Fv、dAb 和單鏈抗體。除了「雙 特異性」或「雙功能性」抗體之外的一抗體係被了解 為各具有其相同的結合位置。當一過量之抗體降低結 合至反受體（counter receptor)之受體的數目至少約 20%、40%、60%或80%及通常係大於約85%(由在一 1〇體外競爭性結合試驗中所測定者）時，一抗體係實質 上抑制受體至反受體的黏附。 一抗體可為一寡株抗體、多株抗體、單株抗體、 嵌合抗體、CDR移植抗體、多特異性抗體、雙特異性 抗體、催化性抗體、嵌合抗體、人類化抗體、完全人 I5類抗體、抗-抗原特異性抗體（anti-idiotypic antibody) 和於可溶或結合形式中之經標示的抗體以及其片 斷、其變異株或衍生物，其可單獨或和其他藉由已知 技術所k供之胺基酸序列結合。一抗體可源自任何的 品種。該抗體一詞亦包括本發明抗體的結合片斷；舉 2〇例性的片斷包括Fv、Fab、Fab，、單股抗體（svFC)、 二聚體化可變區（Diabody雙聯體）以及雙硫鍵穩定化 可變區（dsFv)。 已顯示的是，一全抗體的片斷可執行結合抗原的 功能。結合片斷的實例為（i)由VL、VH和CH1功能 51 200815475 區所組成的Fab片斷（Ward, E.S·等人（1989) 341 : 544〜546) ; (ii)由VH和CH1功能區所組成的 Fd 片斷（McCafferty 等人（1990) Nature, 348 ： 552〜554) ; (iii)由單一抗體之VL和VH功能區所組 5 成的 Fv 片斷（Holt 等人（2003) TVewA Μ 21 : 484〜490) ; (iv)由一 VH 或一 VL 功能區所組成的dAb片斷（Ward，E.S.等人， 341 : 544〜546(1989) ; McCafferty 等人（1990) 348 : 552〜554 ; Holt 等人（2003) ζ·« 10 少 21 : 484〜490) ; (ν)經分離的 CDR 區

域；（vi) F(ab’）2片斷，包含兩個經鏈接的Fab片斷的 雙價片斷；（vii)單鏈Fv分子（scFv)，其中一 VH功 能區和一 VL功能區係藉由一胜肽連接子相連接而容 許該兩個功能區聯合而形成一抗原結合位置（Bird等 15 人(1988) iScz.ewce，242 : 423〜426 ; Huston 等人(1988) 尸见^ 85 : 5879〜5883) ; (viii)雙特異性單鏈Fv 二聚物（PCT/US92/ 09965);以及（ix)由基因融合所 構建的「雙聯體」、多價或多特異性片斷 (WO94/13804; Holliger，Ρ·(1993)等人，尸roc· Λ^"· 20 5W.美國90 6444〜6448)。可藉由併入鏈接VH 和VL功能區的雙硫鍵而穩定化Fv、scFv或雙聯體分 子（Reiter， Y.等人，Nature Biotech ·, 14 : 1239〜1245(1996))。 亦可製造微型抗體 (minibodies)，其包含一結合至一 CH3功能區的 52 200815475 scFv(Hu，S.等人（1996) Cancer 56 ·· 3055〜3061)。 結合片斷的其他實例為Fab，，其不同於Fab片斷之處 在於在該重鏈CH1功能區的魏基端加入少數殘基， 包括來自抗體絞鍵區的一或多個半胱胺酸；以及 5 Fab’_SH ’其為一在該恒定功能區的半胱胺酸殘基具 有一游離硫醇基的Fab，片斷。 该「抗原決定部位（epitope)」一詞包括能特異性 地結合至一免疫球蛋白或τ_細胞受體的任何蛋白質 決定簇（determinant)。抗原決定性簇通常由分子的化 1〇學活性表面簇所組成，例如：胺基酸或糖側鏈且可以 但並非經常具有特異性3D立體構造特性以及特異性 電荷特性。當一抗體的解離常數‘ ΙμΜ時則視為可特 異性地結合一抗原，較佳為^ 1〇〇 ηΜ以及最佳為^⑺ nM。 15 此處所使用之「藥劑」一詞係指明一化學化合 物、化學化合物的混合物、生物性巨分子，或是一從 生物材料而製的萃取物。 有關PDGFR-α多胜肽之「活性的」或「活性」 一詞係意指一部分的PDGFR_a多胜肽具有一原始 20 PDGFR_a多胜肽的生物學或免疫活性。當此處使用 寺 生物學上」一詞係意指導因於原始pDGFR_a 夕胜肽之活性的生物學功能。較佳的呢以之生 物學活性包括，例如：自體磷酸化反應。 53 200815475 此處所使用之「哺乳動物」一詞係意指任何可被 視為一哺乳類的動物。較佳的哺乳動物為人類。 以酵素、木瓜酵素消化抗體所產生之兩種相同的 抗原結合片斷，亦稱為「Fab」片斷；以及一「fc」 5片斷為不具有抗原結合活性但具有結晶的能力。以酵 素、胃蛋白酶消化抗體可產生F(ab，）2片斷，其中該 抗體分子的雙臂維持相連接及包含兩個抗原結合位 置。該F(ab’）2片斷具有交聯抗原的能力。 此處所使用之「Fv」一詞係意指保留有抗原辨識 10 和抗原結合位置之抗體的最小片斷。 此處所使用之「Fab」一詞係意指包含有輕鏈之 恒定區及重鏈之CH1功能區的一抗體片斷。 一「dAb」係一單一功能區抗體且包含有一抗體 重鏈之變化功能區（VH功能區）或是一抗體輕鏈之變 15 化功能區（VL功能區）。各dAb包含6個自然存在之 CDRs 中的 3 個（Ward 等人，Binding activities of a repertoire of single immunoglobulin variable domains secreted from Escherichia coli. Nature 341? 544-546 (1989); Holt 等人，domain antibodies: protein for therapy，7>^z办 20 5⑹⑽/· 21，484-49 (2003))。具有在 11-15 kDa 範圍 内之分子量，其係4倍小於一抗原結合片段（Fab)2且 係一單一鏈Fv(scFv)分子的一半尺寸。 「mAb」一詞係意指單株抗體。 54 200815475 此處所使用之「微脂體」一詞係意指可被用於輸 送藥物至哺乳動物的小囊胞，該藥物係包括本發明的 PDGFR-α多胜肽或是針對此一 pDGFR_a多胜肽的抗 體。 此處所使用之「標記」或「經標示」一詞係意指 將一可偵測部份添加至一多胜肽，例如：放射性標 記、螢光標記、酵素性標記、化學發光標示或生物素 標記。放射性同位素或放射性核素係包括3h、i4c、 15

N 35 s 90

Y 99

Tc 111

In 125, 131 ;螢光標記包 10括羅丹明（rhodamine)、鑭系磷光體或FITC ;以及酵 素性標記包括辣根過氧化酶（h〇rseradish peroxidase)、β-半乳糖苷酶、螢光素酶（luciferase)、 鹼性磷酸酶。 供說明之用，但不侷限於，其他標記係包括：酵 15素，例如：葡萄糖_6_磷酸去氫酶（G6PDH)、a_D-半乳 糖苷酶、葡萄糖氧化酶、葡萄糖澱粉酶、碳酸酐 酶、乙醯膽鹼酯酶、溶菌酶、蘋果酸酯脫氫酶和過 氧化酶；染料；其他的螢光標記或螢光劑包括例 如：螢光素（fluorescein)和其衍生物、螢光染料、 20 GFP(GFP指「綠色螢光蛋白質」）、丹磺醯咖⑽州、 傘形花内酯（umbelliferone)、藻紅蛋白 (phycoerythrin)、藻藍素（phyC〇Cyanin)、別藻藍素 (allophycocyanin)、鄰酞醛和螢胺（flu〇rescamine); 螢光體（fluorophores)，例如：鑭系穴合物和螯合物如 55 200815475 銪（Europium)等（Perkin Elmer 和 Cis Biointernational);化學發光標記或化學發光劑例 如：異魯米諾（isoluminol)、魯米諾（luminol)和二氧烷 酮（dioxetanes);敏化劑；輔酶；酶作用物；顆粒，如 5 乳膠或碳粒；金屬溶膠；微晶（crystallite);微脂 體；細胞等；其可進一步被染料、催化劑或其他可偵 測基團所標示；分子，例如：生物素、毛地黃配體 (digoxygenin)或5-溴化去氧尿一；毒素部份，舉例如 一選自以下群組之毒素部份：假單胞菌外毒素（綠膿 10 桿菌外毒素（PE)或細胞毒殺性片斷或其突變株）、白喉 毒素或細胞毒殺性片斷或其突變株、肉毒桿菌毒素 入、8、（1；、0、£或戸、蓖麻毒素（14(^11)或其細胞毒殺 性片斷，例如蓖麻毒素A、相思豆毒素（abrin)或其細 胞毒殺性片斷、皂草毒素（saporin)或其細胞毒殺性片 15 斷、美洲商陸（pokeweed)抗病毒毒素或其細胞毒殺性 片斷以及瀉根毒素l(bryodin 1)或其細胞毒殺性片 斷。 此處所使用之「藥劑或藥物」一詞係意指當適當 投藥至一病患時可誘發一所欲治療效應的一化學化 20 合物或組成物。此處所使用的其他化學名詞係根據該 技術領域中習知的用法，其說明於The McGraw-Hill Dictionary of Chemical Terms (Parker，S·，Ed.，McGraw-Hill， San Francisco (1985))，將其併入於此以供參考。 56 200815475 如此處所使用的，「實質上為純的」一詞係表示 標的物種係存在的主要物種（亦即是，在莫耳基礎上 其係較組成物内任何其他個別物種更為多量的），以 及實質上經純化的部份較佳係為一組成物，其中該標 5 的物種包含所存在之全部巨分子物種之至少約 50%(在莫耳基礎上）。通常，一實質上為純的組成物 將包含多於約80%之該組成物内存在的全部巨分子 物種，更佳為多於約85%、90%和99%。最佳地，該 標的物種為經純化至本質上同質的程度（藉由習知的 10 偵測方法無法偵測出在該組成物内污染的物種），其 中該組成物本質上由單一巨分子物種所組成。 「抗體依賴性細胞媒介之細胞毒殺作用 (antibody-dependent cell-mediated cytotoxicity)」及「ADCC」 係意指一細胞媒介之反應，其中表現IgFc受體(FcRs)之非 15 特異性細胞毒殺性細胞(例如：自然殺手細胞(NK cell)、單 核細胞、噬中性白血球及巨噬細胞)辨識出結合在一標的細 胞上之抗體且接著引起該標的細胞的溶胞作用。用於媒介 ADCC之主要細胞，自然殺手細胞，只表現Fc讪RIII，而 單核細胞則表現Fc讪RI、Fc讪RII及Fc讪RIII。在造血細胞 20 上之FcRs表現係概述於Ravetch and Kinet，如⑽·心V. /mmw⑽/ 9:457-92 (1991)的第464頁第3表中。為評估一有 興趣之分子的ADCC活性，可執行一活體外ADCC測試， 舉例如美國第5,500,362或5,821，337號專利中所述的。用 於此測试之可利用的效應物包括週邊血液單核細胞(PBMC) 57 200815475 及自然殺手細胞(NK cell)。可擇地或是額外地，一有興趣 之分子的ADCC活性可在活體内評估，例如：在一如Clynes 等人(USA) 95:652-656 (1988)中所揭露之動物模式。 「補體依賴性細胞毒殺作用（complementary-dependent 5 cytotoxicity)」及「CDC」係意指一藉由抗體執行其細胞毒 殺功能之機制。其係由Clq結合至Igs、IgG或IgM Fc功 能區而啟始，Clq係補體之第一成份的組成，該等Igs、IgG 或IgM係和抗原形成複合體（Hughs-Jones，N.C.，及B. Gardner. 1979· Mo/·/mmtmo/· 16:697)。Clq 係一為〜410 kDa 10 之大型、結構上複合性醣蛋白以70 pg/ml之濃度存在於人 類血清中（Cooper，N.R· 1985· Ji/v· /mmwwo/· 37:151)。Clq 和二絲胺酸蛋白質水解酶，Clr及Cls，一起形成複合物 C1，補體的第一成份。Clq之至少二N-端球狀前端必須結 合至Igs的Fc以活化該C1，藉此啟始該補體串聯（c〇0per， 15 N.R. 1985. di/v. /mmw⑽/· 37:151)。 「全血測試」係使用未分份之血液作為自然效應 物之來源。血液中包含補體於血漿中，連同FCR-表現 之細胞性效應物，例如：多形核細胞(PMNs)及單核球細胞 (MNCs)。因此，全血測試允許在活體外同時評估ADCC及 20 CDC效應物機制的協同反應。 「病患」一詞係包括人類和獸醫實體。

如此處所使用之「及/或」一詞係用於特定揭示二 特定之特徵或組成中之各者具有或不具有另一者。例 如：「A及/或B」係用作特定揭示為（i) A、（ii) B以及(iii) A 58 200815475 及B ’如同各者係在此處個別被提出一樣。 抗體 基本的抗體結構單元係已知為包含一四聚體。各四聚 5 體係包含二對相同之多胜肽鏈，各對具有一「輕鏈」（約25 kDa)以及—「重鏈」（約50-70 kDa)。各鏈之胺基端部份包 括一約100至11〇或更多胺基酸之可變區，其主要係負責 於才几原的辨識。各鏈之羧基端部份界定一恒定區，其主要 係負責於效應物功能。人類輕鏈係分類為K(kappa)輕鏈及 10 X(lambda)輕鏈。重鏈係分類為 p(mu)、a(delta)、y(gamma)、 a(alpha)或是s(epsil〇n)，且係分別界定該抗體的類型如： IgM、IgD、IgA及IgE。在輕及重鏈内，該可變區及恒定區 係藉由一由約12個或更多胺基酸所構成之「J」區而連接， 加上重鏈也包括一由約10個或更多胺基酸所構成之「〇」 15 區。一般係參考/mmw⑽/〇幻；第七章（paui w 編，第二版，Raven Press，Ν·Υ· (1989))(整體併入以作為 各種用途之參考）。各輕/重鏈對之可變區形成該抗體結合位 置。 因此，一完整的抗體具有二結合位置。除了在雙功能 20或雙特異性抗體中，該二結合位置是相同的。該等鏈全部 呈現由三個高度可變區（hyper variable regions)所結連之相 對保留性骨架區域(FR)之相同的一般結構，也稱為互補決 定區域或CDR。由各對之二鏈而來的CDRs係由該骨架區 域而比對，使能結合至一特定之抗原決定部位。自N_端至 59 200815475 C-端，輕鏈及重鏈兩者皆包含功能區FR1、CDR1、FR2、 CDR2、FR3、CDR3 及 FR4。係依據 Kabat Sequences of Proteins of Immunological Interest (National Institutes of 1^&1111，861:1168(1壮，馬里蘭（1987 及1991))或是〇1〇1;11^& 5 LeskJ· Mo/· 5/W· 196:901-917 (1987) ; Chothi 等人， 342:878-883 (1989)之定義而分配胺基酸至各功能區。 一雙特異性或雙功能抗體係一具有二不同重/輕鏈對 以及二不同結合位置之人造合成抗體。雙特異性抗體可藉 由各種不同之方法製造，包括：融合瘤的融合或是連結Fab， 10 片段。參考如 Songsivilai & Lachmann C7M· /所 79: 315-321 (1990)，Kostelny 等人 J. Immunol. 148:1547-1553 (1992)。雙特異性抗體不以具有一單一結合 位置之片段的形式（例如：Fab、Fab’及Fv)。 典型地，一 VH功能區係和一 VL功能區配對以提供一 抗原結合位置予一抗體，雖然一 VH或VL功能區單獨也可 使用於結合抗原。遠VH功能區（參考苐12表）可和該vl 功能區（參考第13表）配對，俾使一抗體之抗原結合位置形 成為具有VH及VL功能區兩者。 2〇 人邀^艘及抗饉的人類化 人類抗體可避免某些與具有小鼠或大鼠可變及/ 或恒定區之抗體有關的一些問題。此類小鼠或大鼠衍 生蛋白質的存在可導致該抗體迅速被清除或可導致 病患產生對抗該抗體的免疫反應。為了避免使用小氣 60 200815475 或大鼠衍生抗體，可藉由引入功能性人類抗體基因座 至一喻齒動物、其他哺乳類或動物而使該嚙齒動物、 其他哺乳類或動物產生完全人類抗體。 一種產生完全人類抗體的方法係經由利用 5 XenoMouse⑧品系小鼠，該小鼠已經工程處理為含有 高至但小於l〇〇〇kb大小之人類重鏈基因座和κ輕鏈 基因座的胚源經配置片斷。請參考Mendez等人， 15 : 146〜156(1997)及 Green 和 Jakobovits，J.五印· mm· 188 : 483〜495(1998)。該 10 XenoM〇use㊣品系可自Amgen公司（加州Fremont市） 購得。

XenoMouse®品系小白鼠的製造係進一步在以下 文獻中討論和說明：於1990年1月12日提出的美國 專利申請序號07/466,008、1990年11月8日提出的 15 〇7/610,515、1992 年 7月 24 日提出的 07/919,297、1992 年7月30日提出的〇7/922,649、1993年3月15曰提 出的08/031，801、1993年8月27日提出的08/ 1 12,848、1994 年 4 月 28 日提出的 08/234,145、1995 年1月20曰提出的〇8/376,279、1995年4月27曰提 20 出的08/ 430,938、1995年6月5日提出的 08/464,584、1995 年 6 月 5 日提出的 〇8/464,582、1995 年6月5曰提出的08/ 463,191、1995年6月5曰提 出的 08/462,837、1995 年 6 月 5 日提出的 08/486,853、 1995年6月5日提出的08/ 486,857、1995年6月5 61 200815475 日提出的08/486,859、1995年6月5曰提出的 08/462,513、1996 年 1〇 月 2 日提出的 〇8/724,752、1996 年12月3曰提出的〇8/759,620、2001年11月30曰 申請的美國專利公開案2003/0093820和美國專利第 5 6，162,963、6，150,584、6，114,598、6,075，181 和 5,939,598 號以及日本專利第 3 〇68 18〇 B2、3 〇68 5〇6 B2和3 068 507 B2號。亦請參考公告於1996年6月 12日的歐洲專利案EP 〇 463 151 B1、公告於1994年 2月3日的國際專利申請案w〇 94/02602、公告於 10 1996年10月31日的國際專利申請案w〇 96/34096、 公告於1998年6月11日的WO 98/24893、公告於2000 年12月21日的WO 00/76310。上述所引證的各專 利、申請案和參考資料之揭露内容係併入於此以供參 照。 15 在一可替換的方法中，包括GenPharm國際公 司，其它人已運用一「微小基因座」之技術。在微小 基因座技術中，透過包合來自該Ig基因座的片段（個 別基因）而模擬一外源性Ig基因座。因此，一或多個 Vh基因、一或多個dh基因、一或多個jH基因、一 2〇 mU恒定區，以及通常一第二恒定區（較佳為一 γ恒定 區）係形成為一用於插入動物内的構體。此方法係述 於屬於Surani等人的美國專利案5,545,8〇7，以及分 別屬於Lonberg和Kay的美國專利案5,545,806、 5,625,825、5,625，126、5,633,425、5,661，016、 62 200815475 5,770,429'5,789,650'5,814,318'5,877,397' 5,874,299 以及6,255,458、屬於Krimpenfort和Berns的美國專 利案5,591，669和6,023,010、屬於Berns等人的美國 專利案 5,612,205、5,721，367 和 5,789,215，以及屬於 5 Choi和Dunn的美國專利案5,643,763，以及GenPharm 於1990年8月29日提出的國際美國專利申請序號 07/574,748、1990 年 8 月 31 日提出的 07/575,962、1991 年 12月17日提出的07/810,279、1992年3月18日 提出的 07/853,408、1992年6月 23日提出的 10 07/904,068、1992 年 12 月 16 日提出的 07/990,860、 1993年4月26曰提出的08/053,13卜1993年7月22 日提出的08/096,762、1993年11月18曰提出的 08/155,30卜 1993 年 12 月 3 日提出的 08/161,739、1993 年12月10日提出的08/165,699、1994年3月9曰提 15 出的08/209,741，將其等之揭露内容併入於此以供參 照。亦請參考歐洲專利案0 546 073 B1、國際專利申 請案 WO 92/03918、WO 92/22645、WO 92/22647、 WO 92/22670、WO 93/12227、WO 94/00569、WO 94/25585、WO 96/14436、WO 97/13852，及 WO 2〇 98/24884和美國專利案5,981，175，將其等之揭露内 容完整併入於此以供參照。進一步請參考Taylor等人， 1992、Chen 等人，1993、Tuaillon 等人，1993、Choi 等人，1993、Lonberg 等人，1994、Taylor 等人，1994 63 200815475 和 Tu ai lion 等人，1995、Fish wild 等人，1996，將其等 之揭露内容完整併入於此以供參照。

Kirin亦已證明可從小鼠產生人類抗體，其中係 經由微細胞融合法將大片段染色體或全部染色體引 5 入小鼠。請參考歐洲專利申請案第773 288和843 961 號，將其揭露内容併入於此以供參照。此外，已製造 出KMTM—小鼠，其為Kirin’s Tc小鼠與Medarex’s微 小基因座（Humab)小鼠雜交育種的結果。這些小鼠具 有Kirin小鼠的人類IgH轉殖染色體以及Genpharm 10 小鼠的kappa鍵轉殖基因（Ishida等人， (^//以2002)4 : 91 〜102)。 亦可藉由活體外的方法衍生出人類抗體。適當的實例包括但 不侷限於嗤菌體陳現技術（CAT、Morphosys、Dyax、 Biosite/Medarex、Xoma、Symphogen、Alexion(先前稱為 15 Proliferon)、Affimed);核糖體陳現技術(CAT);酵母菌陳現技術 等。 在另一實施態樣中，本發明之抗體與所揭露之抗體相 競爭。抗體之間的競爭可簡單地於活體外測定，例如：使 用ELISA及/或藉由將一特異性之回報分子標識至一可在 20 一或多個其它未標識之抗體存在下被偵測之結合部份，以 可鑑識出結合相同抗原決定部位或或是一部份重疊之抗原 決定部位的抗體。此方法係此技術領域中具有通常知識者 所熟知的’且在此處將更詳細地描述。因此，本發明之另 外的方面係提供一包含有一與抗體分子競爭之人類抗體抗 64 200815475 原結合位置的抗原結合位置，例如：特別是一包含有一 VH 及/或VL功能區、如HCDR3或親代抗體之CDRs組之CDR 或是此處所揭露之任何結合至PDGFR-oi之抗體的抗體分 子。在一實施態樣中，本發明之抗體和2.175.3、2.449.1.3 5 及/或2.998.2競爭。 抗體的製備 通常，藉由融合融合瘤所製造的抗體為具有完全 人類κ或λ輕鏈的人類IgG2或IgG4重鏈。抗體亦可 10 為其他的人類種型，包括IgGl重鏈。該等抗體具有 高度親和力，當在FACS-為基礎之親和力量測技術中對 抗細胞測定時一般係具有從約10_6至約1(Τ12Μ或更低 的Kd。該親和力亦可藉由固相和液相技術測定。在 一實施態樣中，此處所述之抗體以少於約500、400、 15 300、200 或 100 pM 的 Kd 結合至 CD PDGFR-a 20 且抑制 腫瘤生長。在某些實施態樣中，該等抗體以少於約75、 60、50、40、30、25、20、10 或 5 pM 的 Kd 結合至 PDGFR-a。 將如所瞭解到的，抗PDGFR-a抗體可被表現於 除了融合瘤細胞株之外的細胞株。編碼特定抗體的序 20 列可被用於轉形一適合之哺乳類宿主細胞。轉形作用 可藉由任何習知將聚核苷酸導入一宿主細胞的方 法，包括例如將該聚核苷酸包裹於一病毒内（或是一 病毒載體内）及以該病毒（或載體）轉導一宿主細胞或 是藉由此技術領域中已知的轉染方法，其舉例說明於 65 200815475 美國專利案號 4,399,216、4,912,040、4,740,461 和 4,959,455(將這些專利併入於此以供參照）。所使用的 轉形方法視該被轉形的宿主而定。將異源性聚核苷酸 導入哺乳動物細胞的方法已為此技術領域中所習知 5的且包括葡聚醣媒介之轉染法、磷酸鈣沈澱法、聚凝 胺媒介之轉染法、原生質體融合技術、電穿孔法、將 聚核苷酸包裹於脂質體内之方法，以及將DNA直接 微注射入細胞核内。 可用於表現作為宿主的哺乳類細胞株已為此技 10術領域中所習知的且包括許多可得自美國標準菌種 中心（ATCC)的永生化細胞株，其包括但不侷限於： 中國倉鼠卵巢（CHO)細胞、HeLa細胞、幼倉鼠腎（BHK) 細胞、猴腎細胞（COS)、人類肝細胞癌細胞（例如，Hep G2)、人類上皮腎293細胞，以及其他許多的細胞株。 15 經由測定那一細胞株為具有高表現位準且產生具有 固有PDGFR-ct結合性質之抗體而選擇特定偏好的細 胞株。 抗PDGFR-ct抗體可被用於偵測病患樣本内的 PDGFR-α，且因此可被用於診斷如此處所述的疾病狀 20 態。此外，基於其可抑制腫瘤生長的能力，抗PDGFR-a 抗體具有治療導因於PDGFR-a表現之症狀和病症的 治療效應。在特定的實施態樣中，此處所述的抗體和 方法係關於治療導因於PDGFR-a所誘發之腫瘤生 長。進一步之實施態樣涉及利用此處所述之抗體和方 66 200815475 法於治療腫瘤疾病，例如：癌症，包括肺癌、卵巢癌、 前列腺癌、結腸癌、神經膠質瘤、黑色素瘤及胃腸道基質 瘤(GIST)。 抗體序列 本發明的具體實施例包括列於以下第1表之專一 性抗PDGFR-α抗體。此表記錄各抗PDGFR-01抗體的 辨識編號以及相對應之重鏈和輕鏈基因之可變區的 序列辨識編號（SEQ ID NO)。 10 15 \ - 單株抗醴 (mAb)辨識編 號 序列 序列 辨取 編號 2.175.3 為重鏈之可變區的核苷酸序列 1 編碼為重鏈之可變區的胺基酸序列 2 為輕鏈之可變區的核苷酸序列 3 編碼為輕鏈之可變區的胺基酸序列 4 2.451.1.1 為重鏈之可變區的核苷酸序列 5 編碼為重鏈之可變區的胺基酸序列 6 編碼為輕鏈012/JK5之可變區的核苷酸序列 7 編碼為輕鏈012/JK5之可變區的胺基酸序列 8 各抗體已被給予一個包括以一或二個小數點所 分隔開之二或三個數目的辨識編號。在某些實例中， 只列出被一個小數點所隔開的二個辨識編號。然而，在某 些實例中，係製備出一個抗體的數個株落(cl〇ne)。雖然這 些株落具有和親本序列一致的核酸及胺基酸序列，他們也 可分別地被列出’藉由在第二個小數點右方之數字來指明 的株落編號來辨識。因此，例如，抗體2.84的核酸及胺基 酉复序歹1H系相同於抗體2·84·；1、2.84.2及2.84.3的該等序列。 67 200815475 編碼為輕鏈A20/JK5之可變區的核苷酸序列 21 編碼為輕鏈A20/JK5之可變區的胺基酸序列 22 2.449.1.3 編碼為重鏈之可變區的核苷酸序列 9 編碼為重鏈之可變區的胺基酸序列 10 編碼為輕鏈之可變區的核苷酸序列 11 編碼為輕鏈之可變區的胺基酸序列 12 2.998.2 編碼為重鏈之可變區的核苷酸序列 13 編碼為重鏈之可變區的胺基酸序列 14 編碼為輕鏈之可變區的核苷酸序列 15 編碼為輕鏈之可變區的胺基酸序列 16 68 200815475 2.84.3 編碼為重鏈之可變區的核苷酸序列 17 編碼為重鏈之可變區的胺基酸序列 18 編碼為輕鏈之可變區的核苷酸序列 19 編碼為輕鏈之可變區的胺基酸序列 20 2.1576.1.2 編碼為重鏈之可變區的核苷酸序列 23 編碼為重鏈之可變區的胺基酸序列 24 編碼為輕鏈之可變區的核苷酸序列 25 編碼為輕鏈之可變區的胺基酸序列 26 3.625.1 編碼為重鏈之可變區的核苷酸序列 27 編碼為重鏈之可變區的胺基酸序列 28 編碼為輕鏈之可變區的核苷酸序列 29 編碼為輕鏈之可變區的胺基酸序列 30 2.414.2 編碼為重鏈之可變區的核苷酸序列 31 編碼為重鏈之可變區的胺基酸序列 32 編碼為輕鏈之可變區的核苷酸序列 33 編碼為輕鏈之可變區的胺基酸序列 34 2.542.2 編碼為重鏈之可變區的核苷酸序列 35 編碼為重鏈之可變區的胺基酸序列 36 編碼為輕鏈之可變區的核苷酸序列 37 編碼為輕鏈之可變區的胺基酸序列 38 2.737.1.4 編碼為重鏈之可變區的核苷酸序列 39 編碼為重鏈之可變區的胺基酸序列 40 編碼為輕鏈之可變區的核苷酸序列 41 編碼為輕鏈之可變區的胺基酸序列 42 2.1623.2 編碼為重鏈之可變區的核苷酸序列 43 編碼為重鏈之可變區的胺基酸序列 44 編碼為輕鏈之可變區的核苷酸序列 45 編碼為輕鏈之可變區的胺基酸序列 46 2.1853.3 編碼為重鏈之可變區的核苷酸序列 47 編碼為重鏈之可變區的胺基酸序列 48 編碼為輕鏈之可變區的核苷酸序列 49 編碼為輕鏈之可變區的胺基酸序列 50 2.1954.2 編碼為重鏈之可變區的核苷酸序列 51 編碼為重鏈之可變區的胺基酸序列 52 編碼為輕鏈之可變區的核苷酸序列 53 編碼為輕鏈之可變區的胺基酸序列 54 編碼為重鏈之可變區的核苷酸序列 55 69 200815475 3.23.2 編碼為重鏈之可變區的核苷酸序列 55 編碼為缠鏈之可變區的胺基酸序列 50 編碼為輕鏈之可變區的胺基酸序列 58 3.87.1.1 編碼為重鏈之可變區的核苷酸序列 59 編碼為重鏈之可變區的胺基酸序列 60 編碼為輕鏈之可變區的核苷酸序列 61 編碼為輕鏈之可變區的胺基酸序列 62 3.341.1 編碼為重鏈之可變區的核苷酸序列 63 編碼為重鏈之可變區的胺基酸序列 64 編碼為輕鏈之可變區的核苷酸序列 65 編碼為輕鏈之可變區的胺基酸序列 66 3.472.1.1 編碼為重鏈之可變區的核苷酸序列 67 編碼為重鏈之可變區的胺基酸序列 68 編碼為輕鏈之可變區的核苷酸序列 69 編碼為輕鏈之可變區的胺基酸序列 70 3.805.1.3 編碼為重鏈之可變區的核苷酸序列 71 編碼為重鏈之可變區的胺基酸序列 72 編碼為輕鏈之可變區的核苷酸序列 73 編碼為輕鏈之可變區的胺基酸序列 74 3.818.4 編碼為重鏈之可變區的核苷酸序列 75 編碼為重鏈之可變區的胺基酸序列 76 編碼為輕鏈之可變區的核苷酸序列 77 編碼為輕鏈之可變區的胺基酸序列 78 4.16.2 編碼為重鏈之可變區的核苷酸序列 79 編碼為重鏈之可變區的胺基酸序列 80 編碼為輕鏈之可變區的核苷酸序列 81 編碼為輕鏈之可變區的胺基酸序列 82 . 5.1.1.1 編碼為重鏈之可變區的核苷酸序列 83 編碼為重鏈之可變區的胺基酸序列 84 編碼為輕鏈之可變區的核苷酸序列 85 編碼為輕鏈之可變區的胺基酸序列 86 5.9.3 編碼為重鏈之可變區的核苷酸序列 87 編碼為重鏈之可變區的胺基酸序列 88 編碼為輕鏈之可變區的核苷酸序列 89 編碼為輕鏈之可變區的胺基酸序列 90 編碼為重鏈之可變區的核苷酸序列 91 編碼為重鏈之可變區的胺基酸序列 92 70 200815475 編碼為輕鏈之可變區的核苷酸序列 93 編碼為輕鏈之可變區的胺基酸序列 94 3.772.2 編碼為重鏈之可變區的核苷酸序列 95 編碼為重鏈之可變區的胺基酸序列 96 編碼為輕鏈之可變區的核苷酸序列 97 編碼為輕鏈之可變區的胺基酸序列 98 5.16.1 編碼為重鏈之可變區的核苷酸序列 99 編碼為重鏈之可變區的胺基酸序列 100 編碼為輕鏈之可變區的核苷酸序列 101 編碼為輕鏈之可變區的胺基酸序列 102 2.2002.3 編碼為重鏈之可變區的核苷酸序列 103 編碼為重鏈之可變區的胺基酸序列 104 編碼為輕鏈之可變區的核苷酸序列 105 編碼為輕鏈之可變區的胺基酸序列 106 2.2071.1.3 編碼為重鏈之可變區的核苷酸序列 107 編碼為重鏈之可變區的胺基酸序列 108 編碼為輕鏈之可變區的核苷酸序列 109 編碼為輕鏈之可變區的胺基酸序列 110 3.23.3 編碼為重鏈之可變區的核苷酸序列 111 編碼為重鏈之可變區的胺基酸序列 112 編碼為輕鏈之可變區的核苷酸序列 113 編碼為輕鏈之可變區的胺基酸序列 114 3.457.3.1 編碼為重鏈之可變區的核苷酸序列 115 編碼為重鏈之可變區的胺基酸序列 116 編碼為輕鏈之可變區的核苷酸序列 117 編碼為輕鏈之可變區的胺基酸序列 118 2.84.1 編碼為重鏈之可變區的核苷酸序列 119 編碼為重鏈之可變區的胺基酸序列 120 編碼為輕鏈之可變區的核苷酸序列 121 編碼為輕鏈之可變區的胺基酸序列 122 2.351.3 編碼為重鏈之可變區的核苷酸序列 123 編碼為重鏈之可變區的胺基酸序列 124 編碼為輕鏈之可變區的核苷酸序列 125 編碼為輕鏈之可變區的胺基酸序列 126 71 200815475 如此處範例中所述者，透過利用下述之 XenoMouse®技術來製造所述的抗體。然後此類小鼠 能夠產生人類免疫球蛋白分子和抗體且係無法產生 鼠類免疫球蛋白分子和抗體。為了達成此目的所使用 5的技術係揭露於此處發明背景段落中所述的專利、申 請案和參考文獻中。然而，更明確地說，製造轉殖基 因小鼠及由其產生抗體的較佳具體實施例係揭示於 1996年12月3曰提出的美國專利申請序號 08/759,620和公告於1998年6月11曰的國際專利申 10請案WO 98/24893以及公告於2000年12月21日的 WO 00/76310，其揭露内容係併入於此以供參照。亦 凊參考 Mendez 等人，15 : 146〜156(1997)之文獻，將其揭露内容併入於此以供 參照。 15 經由利用此類的技術，可製造出對抗各種抗原的 完全人類單株抗體。基本上，又6110]\4〇1186(1)株小鼠係 以一有興趣之抗原（例如，PDGFR-α)進行免疫，自該 高度免疫之小鼠回收淋巴細胞（例如B-細胞），以及將 該回收的淋巴細胞與骨髓樣細胞株相融合以製造永 20 生化融合瘤細胞株。這些融合瘤細胞株係經篩檢和經 選取以鑑定出可產生對標的抗原具專一性之抗體的 融合瘤細胞株。此處所提供的係用於產生可製造出具 PDGFR-a專一性之抗體的多重融合瘤細胞株的方 法。再者，此處所提供的是由該等細胞株所產生之抗 72 200815475 體的特性描述，其包括此類抗體之重鏈和輕鏈的核苷 酸及胺基酸序列分析。 可擇地，除了融合至骨髓瘤細胞以產生融合瘤，B 細胞可以直接地被檢測。例如，可從高度免疫 5 XenoMouse®小鼠分離出CD 19+B細胞且使其增生和 分化成抗體分泌漿細胞。接著藉由ELISA篩檢來自 細胞上清液之抗體對抗該PDGFR-oi免疫原的活性。 亦可利用該上清液篩檢對抗PDGFR_cx片斷的免疫反 應性以進一步堪測出用以結合至PDGFR_a上的功能 10 標的功能區之不同的抗體。該等抗體亦可篩檢其他相 關人類受體及對抗大鼠、小鼠和非人類靈長類如 Cynomolgus狼、直系同源之PDGFR-α，最後決定品 種的的交叉反應性。來自含標的抗體之孔的B細胞可 藉由各種方法被永生化，包括從個別或是從經混合之 15 孔經融合以製造融合瘤，或是藉由以EBV感染，或 是藉由以已知之永生化基因的轉染，然後植入適當的 培養基内。可擇地，利用PDGFR-α-特異性溶血斑試 驗可接著分離出具有所欲專一性的分泌抗體之單一 漿細胞（請參考例如Babcook等人，尸roc. 7VW/· dead. 20 Sc/. 4琢93 : 7843〜48( 1996))。用於溶血標的之細胞 較佳為包覆有 PDGFR-α抗原的羊紅血球細胞 (SRBCs)。 在含有分泌目標免疫球蛋白和補體之漿細胞的 B-細胞培養的存在下，所形成溶血斑表示在目標漿細 73 200815475 胞周圍之羊紅血球細胞的特異性PDGFR-α-媒介性溶 血。在該溶血斑中央的單一抗原特異性漿細胞可被分 離出來且編碼出該抗體之特異性的遺傳訊息可由該 單一漿細胞分離出來。利用反轉錄作用及之後的 5 PCR(RT-PCR)，可選殖出編碼該抗體之重鏈和輕鏈可 變區的DNA。此類經選殖之DNA可接續被進一步插 入一適當的表現載體，較佳為一載體匣（vector cassette)，例如：pcDNA，更佳為此pcDNA載體含有 免疫球蛋白重鏈和輕鏈之恒定區。然後可將該產生的 10 載體轉染入宿主細胞，例如HEK293細胞、CH0細 胞，然後培養於經修飾為適當於誘發轉錄作用、選擇 轉形株或擴增編碼該所欲序列之基因的習知營養培 養基内。 抗PDGFR-α抗體可具有治療和PDGFR-α表現相關之 15 疾病或病況的效用。例如：該抗體可抑制表現PDGFR-a之 細胞的生長，藉此抑制腫瘤生長；或是該抗體可一藥劑相 連且遞送一致死之毒素至一標的細胞。抗PDGFR-a抗體可 具有治療纖維性病變的治療效應，例如：心臟性、肺、肝、 腎或皮膚纖維性病變。抗PDGFR-a抗體也可具有治療同種 20 異髏移植血管病變或是再狹化的治療效應。此外，抗 PDGFR-a抗體係可用於疾病狀態的檢測，特別是腫瘤、 纖維化及免疫系統疾病。 若所欲的話，一抗-PDGFR-a抗體的類型間可轉變，例 如，可利用不同類型之生物特性。例如，在某些情形下， 74 200815475 關於生成抗體作為對抗PDGFR-α之治療用抗體，想要的是 該抗體可固定補體且參與補體依賴性細胞毒殺作用 (complement-dependent cytotoxicity，CDC)。有數種抗體類 型係可如此的，包括但不侷限於以下所列：鼠類IgM，鼠 5類1gG2a，鼠類IgG2b5鼠類IgG3,人類IgM，人類IgA,人 類IgGl及人類igG3。在其它實施態樣中，關於生成抗體 作為對抗PDGFR-α之治療用抗體，想要的是該抗體可結合 效應細胞上的Fc受體且參與抗體依賴性細胞毒殺作用 (antibody-dependent cytotoxicity，ADCC)。有數種抗體類型 10 係可如此的，包括但不侷限於以下所列：鼠類IgG2a，鼠類 IgG2b，鼠類IgG3,人類IgGl，以及人類IgG3。了解到的 是，生成的抗體並不需要一開始就具有如此的類型，但是， 更確切地說，之後該生成的抗體可具有任何類型且該抗體 可作類型轉變使用此技術領域中已知的習知技術。此類技 15 術包括使用直接基因重組技術（參考例如美國第4,816,397 號專利）、細胞-細胞融合技術（參考例如美國第5,916,771及 6,207,418號專利）及其它。 經由該等範例，此處所討論的抗-PDGFR-α抗體係完全 人類抗體。若一抗體具有所欲結合至PDGFR-a，其可容易 20 地類型轉變為產生一人類IgM，人類IgGl或人類IgG3類 型，然而仍然具有相同之可變區（其為界定該抗體之特異性 及某些其親和力）。此類分子接著可固定補體及參與CDC 及/或可結合在效應細胞上之Fc受體及參與ADCC。 75 200815475 在細胞-細胞融合技術中，一骨趙瘤、CHO細胞或其它 細胞株係經製備以致其具有一帶有任何所欲類型之重鏈， 以及另一骨髓瘤、CH0細胞或其它細胞株係經製備以致其 具有該輕鏈。之後，此細胞可經融合且可分離出一表現完 5 整抗體的細胞株。 因此，當接受遴選之抗體係製備為符合以上所討論之 所欲「結構」屬性，通常其可類型轉變而被供有至少特定 之所欲「功能」屬性。 10 治療性給藥及調配物 本發明之實施態樣包括可用於治療疾病之抗 PDGFR-a抗體的滅菌醫藥調配物。此類調配物可抑制 細胞生長，藉此可有效治療例如PDGFR-a表現異常 上升的病理狀態或是PDGFR-α表現細胞所媒介的疾 15 病狀態。抗PDGFR-oi抗體較佳為具有專一性結合至 PDGFR-α的適當親和力，以及較佳為在人類中具有適 當的作用期間而不需進行經常性的給藥。較長的作用 期間將可減少給藥頻率以及可藉由改變成腸道外途 逕如皮下或肌肉注射途徑而可更方便於給藥。 20 冷凍乾燥及抗體重構之前或之後可藉由例如通 過滅菌濾膜的過濾而製造滅菌調配物。該抗體一般以 冷凍乾燥或溶液的形式被儲存。治療性抗體組成物通 常被置於具有滅菌存取口的一容器内，例如：一具有 76 200815475 可供取得該調配物之銜接頭（如可被皮下注射針頭刺 穿之塞子）的靜脈注射溶液袋或玻璃瓶。 抗體的投與途徑係根據已知的方法，例如藉由靜 脈内、腹腔内、腦池内、肌肉内、眼内、動脈内、椎 5 鞘内注射或輸入，吸入或病灶内的途徑、或是藉由下 述的緩釋系統。該抗體較佳為藉由輸入或藉由點滴注 射持續性地給藥。 治療上所應用之抗體的有效量係視例如治療目 標、給藥途徑和病人的狀況而定。因此，較佳的是， 10治療學家滴定該劑量且調整其給藥途徑為得到最佳 治療效果之所需。通常，臨床醫生將投與抗體直至達 到所欲效應的劑量為止。藉由習知之檢測法或此處所 述的檢測法可輕易地監控此治療的進展。 如此處所述者，可製備與醫藥上可接受之載體混 15合的抗體。此治療組成物可經由靜脈或鼻内或肺被投 與’其較佳為一液體或粉末喷霧劑（冷凍乾燥）。該組 成物需要時亦可經由腸道外或皮下給藥。當用於全身 性給藥時，該治療組成物必需為無菌的、無發熱原的 及置於具有適當pH、等張和穩定性的腸道外可接受 2〇溶液内。這些條件為習於此藝者所已知的。簡言之， 藉由混合具有所欲純度的化合物和生理上可接受之 栽劑、賦形劑或穩定劑而製備此處所述用於儲存或給 藥的化合物劑量調配物。此類材料在使用劑量和濃产 之下對接受者不具有毒性，以及包括緩衝液如tris 77 200815475 鹽酸鹽、磷酸鹽、檸檬酸鹽、醋酸鹽及其他有機酸鹽 類，抗氧化劑如抗壞血酸；低分子量（低於約1〇個殘 基）胜肽如聚精胺酸；蛋白質如血清白蛋白、凝膠或 免疫球蛋白，親水性聚合物如聚乙烯°比略咬顯I ;胺基 5 I如甘胺酸、麵胺酸、天門冬胺酸或精胺酸；單糖、 雙糖和其他碳水化合物包括纖維素或其衍生物、葡萄 糖、甘露糖或糊精；螯合劑如EDTA ;糖醇如甘露糖 醇或山梨糖醇；反離子如鈉及/或非離子性界面活性 劑如TWEEN、PLURONICS或聚乙二醇。 1〇 可根據習知的藥學實務調配用於注射的無菌組 成物如 Remington: The Science and Practice of Pharmacy (第 20 版，Lippincott Williams & Wikens 出版社 (2003))所述。例如，將活性化合物溶解或懸浮於一載 劑内，例如水或天然植物油如芝麻油、花生油或棉籽 15油’或是一合成脂肪載劑如油酸乙酯或其他類似物。 根據可接受的藥學實務可併入緩衝劑、防腐劑、抗氧 化劑等。 緩釋製劑的適當實例包括含該多胜肽之固態疏 水性聚合物的半透性基質，該基質係為經塑形之物 20件、薄膜或微膠囊之形式。緩釋基質的實例包括聚 S旨；水凝膠（例如，聚（2_羥乙基丙烯酸甲酯），如於 Langer 等人，J. &•⑽及以（1981) 15 : 167〜277 和 Langer，CAem. 7^/ι· (1982) 12: 98〜1〇5 中所述’或聚（乙烯醇））；聚丙交酯（美國專利案 78 200815475 3’773’919、EP 58,481) ; L-麵胺酸和γ-L-糙胺酸乙酯 的共聚物（Sidman等人，扪〇/，（1983) 22: 547 556) ’不可朋解性之乙稀-醋酸乙烯等人， 如上述），可崩解性乳酸_乙醇酸共聚物，例如： 5 LUPRON DepotTM(由乳酸_乙醇酸共聚物和乙酸亮丙 5而林（leuprohde acetate)所組成的可注射性微球粒），以 及聚-D-㈠ _3_ 羥基丁酸（EP 133,988)。 雖然如乙烯-醋酸乙烯和乳酸_乙醇酸之聚合物可 釋出分子的時間長達多於1〇〇天，某些水凝膠在較短 1〇日寸間期間釋出蛋白質。當經包覆之蛋白質於體内維持 長日寸間時，其可能因暴露於潮濕的37°C下而會變 質或凝聚，而造成生物活性喪失及可能改變其免疫原 性。可視其所涉及的作用機制而設計出用以穩定蛋白 質的合理策略。例如，若發現該凝集機制係經由雙硫 15鍵互換的分子間S_S鍵形成時，可藉由修飾氫硫鍵殘 基、自酸性溶液冷;東乾燥、控制濕度、利用適當的添 加劑，以及形成特定之聚合物基質組成物而達到穩定 化的目的。 緩釋組成物亦包括懸浮於能維持結晶懸浮液之 2〇適當調配物内之抗體結晶製劑。這些製劑在皮下或腹 月工内庄射後可產生緩釋的效果。其他組成物亦包括脂 質體包覆之抗體。含有此類抗體的脂質體係藉由已知 的方法製備：美國專利案DE 3,218,121，· Epstein等 人，Proc. Natl. Acad‘ Sci.美國⑽职· 79 200815475 3688〜3692 ; Hwang 等人，尸r%· % 姜琢

(1980)77 : 4030〜4034 ; EP 52,322 ; EP 36,676 ; EP 88,046 ; EP 143,949 ; 142,641 ;日本專利申請案 83-1 18008 ;美國專利案 4,485,〇45 和 4,544,545 ;以 5 及 EP 102,324。 用於一預設病人的抗體調配物的劑量將由參與 知料的酉生考慮各種已知會改變該藥物作用之因素 後而決定’包括疾病的嚴重度和類型、體重、性別、 飲食、時間和給藥途徑、其他藥物及其他相關的臨床 10因素。治療有效劑量可藉由體外或體内的方法而決 定。 此處所述治療上應用之抗體的有效量將視例如 治療目標、給藥途徑和病人的狀況而定。因此，對於 /〇療千豕較佳為滴定該劑量和視需要調整其 15途徑以達到最佳的治療效果。依據以上所述的因7 -典型的每日劑量可在約〇·〇〇1毫克/公斤至高達:〇〇 毫克/公斤或以上的範圍。通常，臨床醫生將投與該 治療性抗體直至達到所欲效果的劑量為止。藉由習知 的檢測法或此處所述方法可㈣地監控H療的進 丨〇 展。 應瞭解的是，根據此處之組成物和方法之治 體的投與將和適#的載體、賦形劑及其他可併入調 物内以提供經改善之傳遞、輪送、财受性等的物質一 起投樂。這些調配物包括例如：粉末、藥膏、軟膏、 8〇 200815475 凝膠、蠟、油、脂質、含脂質（陽離子或陰離子）的載 劑（例如LipofectinTM)、DNA共輛物、無水吸附藥膏、 水包油和油包水乳劑、乳化碳堪（各種分子量的聚乙 二醇）、半固體凝膠，以及含碳蠟的半固體混合物。 5 若該調配物内的活性成分不被該調配物失活且該調 配物係生理上相容的和係可忍受該給藥途徑時，任何 上述的混合物均適合用於根據本發明的治療及療 法。亦請參考 Baldrick P. 「Pharmaceutical excipient development: the need for preclinical guidance.」，Regul· 10 Toxicol. Pharmacol. 32(2): 210〜8(2000) ; Wang W. 「Lyophilization and development of solid protein pharmaceuticals.」 ，Int· J· Pharm· 203(1 〜2): 1 〜60(2000) ; Charman WN，「Lipids，lipophilic drugs, and oral drug delivery-some emerging concepts.」，J· 15 尸/^rm· Sc/· 89(8) : 967〜78(2000) ; Powell 等人， 「Compendium of excipients for parenteral formulations」， 尸/^4/.尸/^厂所.5^.77%/^0/.52:238〜3 1 1(1998)及其 中所引述之關於藥物化學家已知之調配物、賦形劑和 載體的引用資料。 20 其他治瘙劊的設計和產生 根據本發明及此處對於PDGFR_a所製造和定性 的抗體活性，對於一習於此藝者而言，設計出其它治 療劑形式是容易的且係顯而易見的。此類形式包括但 81 200815475 不侷限於，進階抗體療法，例如：雙特異性抗體、免 疫毒素和放射線標示治療劑，及單一抗體v功能區， 基於除了 v區域骨架之外的類抗體結合劑，胜肽產生 療法，基因療法，細胞内抗體，反義核酸療法，及小 5 分子。 藉由非抗體蛋白骨架上（如纖連蛋白或細胞色素 B等）之CDRs的配置可產生一抗原結合位置（Haan & Maggos (2004) 少，12(5) : A1 〜A6 ; Koide 等 人，(199S) Jountal of Molecular Biology, 2S4 ·· 10 1141〜1151 ; Nygren 等人（1997) Current Opinion in

Structural Biology 7 : 463〜469)或藉由在一蛋白骨架内 一環的胺基酸殘基進行隨機化或突變而授予一對於 所欲標的的結合專一性。蛋白質内用於製造新穎結 合位置之骨架已詳述於Nygren等人（Nygren等人 15 (1997) Current Opinion in Structural Biology 7 · 463〜469)。用於擬抗體的蛋白質骨架係揭露於 WO/0034784，其完整併入於此以供參照，發明者於 其中描述包括具有至少一隨機化環體之第III型纖黏 蛋白功能區的蛋白質（擬抗體）。可由免疫球蛋白基因 20 超家族之任一功能區成員提供一用於將一或多個 CDRs(如一組HCDRs)移植入之適合的骨架。該骨架 可為人類或非人類蛋白。非抗體蛋白骨架的優點為其 可提供一在一骨架分子内之較小的抗原結合位置’及 /或其比至少一些抗體分子為較易製造的。結合元的 82 200815475 小尺寸可賦予其有用的生理性質，例如：進入細胞的 能力、深層穿透入組織或到達其他構造内的標的物， 或疋在標的抗原的蛋白穴内進行結合。使用於非抗體 蛋白骨架之抗原結合位置已詳述於Wess，2〇〇4(Wess，

BioCenturyf The Bernstein Report on BioBusines 12(42) · Ai〜A7，2004)。典型地是具有穩定主幹以及 一或多個可變環的蛋白質，其中該環或該等環的胺基 酸序列可經特異性地或隨機地突變以製造一可結合 孩私的抗原的抗原結合位置。此類蛋白質包括來自金 10黃色葡萄球菌之蛋白A的IgG-結合功能區、運鐵蛋 白白蛋白、胞漿素原結合蛋白（tetranectin)、纖黏蛋 白（例如：第10纖黏蛋白第ΙΠ型功能區）、脂籠蛋白 (lipocalins)以及γ_結晶和其他AffiUnTM骨架（Scii蛋 白）。其他方法之實例包括合成以環狀多肽為基礎的 I5微小體（nncrobodies)—具有分子内雙硫鍵的小型蛋白 貝微蛋白（microProteins) (Versabodies™，Amunix) 以及錯蛋白重複序列蛋白（DARPins，Molecular Partners) 〇 除了抗體序列及/或一抗原結合位置之外，根據本 20發明的致標性結合劑可包含形成一胜肽或多胜肽的其 他胺基酸，例如一折疊功能區或是賦予該分子除了抗 原結合能力之外的另一功能特性。本發明的致標性結 合劑可攜帶一可偵测標記，或是可被共軛至一毒素或 一靶向基團或酵素（例如，經由一肽鏈或一鍵結物）。 83 200815475 例如，一致標性結合劑可包含一催化性部位（例如，在 酵素功能區内）以及一抗原結合位置，其中該抗原 、、、口 a位置係結合至抗原而因此將該催化性部位導向 该抗原。該催化性部位可抑制該抗原的生物性功能， 5例如：藉由裂解。 關於進階抗體療法，補體結合為其所欲之屬性， 其可經由使用雙特異性抗體、免疫毒素或放射線標示 物而避免依賴補體殺死細胞。 舉例來說，雙特異性抗體可被產生為包含：⑴共 10軛在一起之兩抗體，其一具有對PDGFR-oi的專一性 而另一則具有對一第二分子之專一性；（ii)一單一抗 體，其具有一鏈對PDGFR-α具有專一性及一第二鏈 對一第二分子具有專一性；或（iii)一單鏈抗體，其對 DGFR α及另一分子具有專一性。可利用習知的技術 15產生此類雙特異性抗體；例如：關於⑴和（ii)，請參 考例如 Fanger 等人，/_ww〇/ 4 : 72〜81(1994)和Wright和Harris，如前述；以及關於 (in)，請參考例如Traunecker等人，7从j (補 充文件）7: 51〜52(1992)。在各實例中，該第二專一 2〇性可依所欲地製造。例如：該第二專一性可被製成重 鏈活化受體，包括但不侷限於：CD16或CD64(請參 考例如Deo等人，⑽火Γ〇心少，18 : 127(1997))或 CD89(請參考例如Valeriu等人，胁以9〇 : 4485〜4492(1997))。 84 200815475 亦可利用習知的技術將抗體修飾成作用為免疫 毒素。請參考例如 Vitetta，/mmwwo/·〜心少，14 : 252(1993)。亦請參考美國第5，194,594號專利。關於 製備經放射線標示之抗體，利用該技術領域中習知的 5 技術亦可輕易地製備此類經修倚的抗體。請參考例如 Junghans 等人，Cancer Chemotherapy and Biotherapy, 655〜686(第二版，Chafner 和 Longo 編輯， 7?ανπ(1996))。亦請參考美國專利案4,681，581、 4,73 5,210、5，101，827、5，102,990(RE35,500)、5,648,471 10 和5,697,902。免疫毒素及經放射線標示之抗體之各 者將可能殺死表現有所欲多聚體酵素次單元之寡聚 化功能區的細胞。在某些實施態樣中，提供一包含有 一有效量之抗體和醫藥上可接受之載體的藥學組成 物。 15 在某些實施態樣中，一抗PDGFR-α抗體係鏈結至一藥 劑(例如：放射性同位素、醫藥組成物或是一毒素）。較佳地， 此類抗體可被使用於治療疾病，該等疾病可和表現 PDGFR_a之細胞或是過度表現PDGFR_oi之細胞相關。例 如：預期的是該等藥物具有選自以下之醫藥特性：抗細胞 20 分裂劑、烴化劑、抗代謝藥物、抗血管生成、細胞自戕劑、 生物鹼、COX-2以及抗生素劑及其等之組合。該藥物可擇 自以下群組：氮芬(nitrogen mustards)、次乙亞胺衍生物、 烧基橫酸鹽、亞梢酸基尿素（nitrosoureas)、三氮烯 (triazenes)、葉酸類似物、蔥環黴素(anthracyclines)、紫杉 85 200815475 醇、COX-2抑制劑、.嘧啶類似物、嘌呤顯似物、抗代謝劑、 抗生素酵素、表鬼臼毋素(epipodophyllotoxins)、#配位 複合物、長春花生物鹼、經取代之尿素、甲基聯胺衍生物、 腎上腺皮質抑制劑、拮抗劑、血管内皮抑素、太平洋紫杉 5醇、坎普特賽辛(camPtothecins)、奥沙利鉑(oxaliplatin卜多 柔比辛（doxorubicins)及其類似物，以及其等之組合物。 毒素之實例進一步包括：吉柔凝(gelonin)、假單胞菌 外毒素(PE)、PE40、PE38、白喉毒素、蓖麻毒素、蓖麻毒 素、相思丑毒素、α-毒素、皂草毒素、核糖核酸酶(RNase)、 10 DNasel、葡萄球菌腸毒素_A、美洲商陸抗病毒蛋白、吉 柔凝、假單胞菌内毒素以及其等之衍生物、組合物及修飾 物。 放射性同位素之實例包括可使用於定位化及/或治療 之γ·放射源、正電子放射源(p0sitr〇n_emitters)、以及χ_射 15線放射源，而且可使用於治療之β-放射源及α-放射源。先 前所述使用於診斷、預後及分階之放射性同位素也可使用 於治療。抗癌劑及抗白血病劑之非限制性的實例包括：蔥 %撤素’例如：多柔比辛（d〇xorubicin)(阿黴素， adriamycin)、道諾普比辛（daun〇rubicin)(道諾黴素， 2〇 daimomydn)、艾達黴素（idarubicin)、地托比辛 (detombidn)、洋紅黴素（carmin〇mycin)、表柔比星 (epirubicin)、依索比辛（es〇rubicin)及嗎福琳(moipholino)以 及其等之經取代的衍生物、組合物及修飾物。示範性的藥 學藥劑包括順式鈾、太平洋紫杉醇、卡利甲米辛、長春新 86 200815475 驗(vincristine)、阿糖胞苦（cytarabine) (Ara-C)、環磷醯胺(蓋 克羅邁得;cyclophosphamide)、強體松(prednisone)、道諾 普比辛、艾達黴素、氟達拉賓（fludarabine)、氮芥苯丁酸 (chlorambucil)、干擾素_α、經基脲、替莫唑胺 5 (temozolomide)、沙利竇脈（thalidomide)以及博來霉素 (bleomycin)，以及其等之衍生物、組合物及修飾物。較佳 地，該抗癌劑及抗白血病劑係多柔比辛、嗎福琳多柔比辛 或嗎福琳道諾普比辛。 本發明之抗體也包含在一哺乳類動物（較佳為人類）中 10比一未經修飾之抗體具有更長半生期（例如：血清半生期） 之抗體。在一實施態樣中，該抗體半生期係多於約15天， 多於約20天’多於約25天，多於約3〇天，多於約35天， 多於約40天，多於約45天，多於約2個月，多於約3個 月，多於約4個月，或多於約5個月。本發明之抗體或其 15片段在一哺乳類動物（較佳為一人類）中經增加之半生期在 該哺乳類動物中產生該抗體或抗體片段較高之力價，且因 此降低幻几體或抗體片段投藥的頻率，及/或降低擬被投 藥之該抗體或抗體片段投藥的濃度。可利用該技術領域 tf μ㈣t備具有經増加之活體时生期的抗體或 m例如’可利用修飾（例如取代、刪除或增加） 已被鑑定為涉及Fc功能區和邮受體間之相互作用的 胺基酸殘基*製備具有經增加之活體时生期的抗體或 其片段（參考’如國際專利公開案购97/遍及WO 譲刪9,其整體係併人於此料參考）。可湘將聚合 87 200815475 物分子（如高分子量之聚乙二醇（PEG))連接至該抗體 或抗體片段而製備具有經增加之活體内半生期的抗體或 其片段。PEG可使用或不使用多功能性鏈接物而連接至該 抗體或抗體片段，不論是經由PEG對該抗體或抗體片段之 5 N-或C-端的位置專一性共軛，或是經由出現在離胺酸殘基 上的epsilon-胺基基團。造成最小生物活性損失的線性或分 支性聚合物衍生化作用將被使用。共輛化之程度將藉由 SDS-PAGE及質譜儀密切地監控以確定PEG分子適當地共 軛至該抗體。未反應之PEG可藉由如尺寸排斥性或離子交 10 換性色層分析法自抗體-PEG共軛體中分離出來。 如該技術領域中具有通常知識者所能了解的，在以上 實施態樣中，雖然親和力數值是重要的，依據該抗體之特 定功能’其它因素也一樣重要甚至更重要。例如，對於一 免疫毒素(和抗體相連之毒素），一抗體結合至標的之行為係 15有盈的，然而，在某些實施態樣中，其所欲之最終結果是 4毋素内化至该細胞内。如此一來，在此情形下，所欲的 疋具有向比例内化作用之抗體。因此，在一實施態樣中， 預期的是具有高内化效能的抗體。一高内化效能可被量測 為經内化之抗體的比例，且可為一低數至100%。例如，在 20 不同的實施態樣中，0.1-5、5-10、10-20、20-30、30-40、 40-45、45-50、50-60、60-70、70-80、80-90、90-99 以及 99_100%可為一高效能。如該技術領域中具有通常知識者 所能了解的，在不同實施態樣中該所欲之效能可以是不同 的，依賴例如該經相連的藥劑、可被投與至一區域之該抗 200815475 體的數量、該抗體-藥劑複合物的副作用、擬被處理之問是 題的類型（例如：癌症的類型）及嚴重程度。 在其它實施態樣中，此處所揭露之抗體提供一用於伯 測在一哺乳類組織及細胞中PDGFR-α表現以|帛選和 5 PDGFR-a之表現量改變相關之疾病或病症的測試套組。該 套組包含一結合PDGFR-cx之抗體以及用於指明該抗體和 該抗原反應的物件，若有反應的話。 在某些實施態樣中，一製造之物品係備置包含有一包 含一含有一抗PDGFR-a抗體之組成物的容器，以及一指明 1〇該組成物可被使用於治療由PDGFR-a表現所媒介的疾病 的仿單或是標籤。較佳係一哺乳類動物且更佳係一人類， 接受該抗PDGFR-a抗體。

Ml金療法 15 此處所定義之抗腫瘤療法可被應用為單一治療 法或除了本發明之化合物之外可涉及習知的外科手 術’骨髓及週邊幹細胞移植或放射線療法或化學療 法。此類化學療法可包括一或多種下列種類的抗腫瘤 劑： 20 (0其他用於腫瘤醫學的抗增生/抗腫瘤藥物及其 組合，例如：烧化劑（例如順式鉑、奥沙利鉑、卡鉑、 環嶙醯胺、氮芬、美法侖（melphalan)、氮芥苯丁酸、 白消安（busulphan)、替莫唑胺（temozolamide)和亞硝 基脲）；抗代謝劑（例如吉西他賓（gemcitabine)和抗葉 89 200815475 酸鹽，如氟σ密淀類，如5-氟尿嘴咬和替加氟（tegafur)、 雷替曲塞（raltitrexed)、甲胺蝶吟、阿糖胞嘴咬以及 羥基脲）；抗腫瘤抗生素（例如，蒽環黴素類如阿黴 素、博萊黴素、多柔比辛、道諾黴素、表柔比辛、艾 5 達比辛、絲裂黴素C、放線黴素和光輝黴素）；抗有 絲分裂劑（例如，長春花生物鹼如長春新鹼、長春花 驗、長春地辛（vindesine)和長春瑞賓（vinorelbine)以 及紫杉醇類化合物如紫杉醇和多西紫杉醇和波羅激 酶抑制劑（polokinase inhibitor));以及拓樸異構酶抑 10 制劑（例如表鬼臼毒素類如依託泊苷（etoposide)和替 尼泊苦（teniposide)、胺。丫 σ定（amsacrine)、托普替康 (topotecan)和喜樹驗）； (ii)細胞抑制劑，例如：抗雌激素（例如，他莫昔 芬（tamoxifen)、法洛德（fulvestrant)、托瑞米芬 15 (toremifene)、雷洛昔芬（raloxifene)、屈洛昔芬 (droloxifene)和埃醯昔芬（iodoxyfene));抗雄激素（例 如，比卡魯胺（bicalutamide)、氟卡胺（flutamide)、尼 魯米特（nilutamide)和醋酸環丙孕酮（cyproterone acetate)) ; LHRH拮抗劑或LHRH促動劑（例如，戈舍 20 瑞林（goserelin)、亮丙瑞林（leuprorelin)和布舍瑞林 (buserelin));黃體激素（例如，醋酸甲地孕酮 (megestrol acetate));芳香環轉化酶抑制劑（例如，阿 那曲口坐（anastrozole)、來曲唾（letrozole)、三口坐化合 90 200815475 物（vorazole)和依西美坦（exemestane))以及5α，還原 酶，例如非那雄胺（finasteride); (iii)抗侵入劑，（例如，c-Src激酶家族抑制劑， 如4-(6-氯-2,3-亞曱基二氧苯胺基）-7-[2-(4-曱基哌 5 讳-1 基）乙氧基]-5 -四鼠ϋ比喃-4 -基經啥°坐嚇^ (AZD0530;國際專利申請案WO 01/94341)和，(2-氣-6-曱基苯基）-2-{6-[4-(2-羥乙基）哌玮-1-基]-2-甲 基嘧啶-4-基胺基}噻唑-5-甲醯胺（達沙替尼 (dasatinib), BMS-354825 ； J. Med. Chem., 2004? 47 ' 10 6 6 5 8〜6 6 61))，及金屬蛋白酶抑制劑，如：馬立馬司 他（marimastat);尿激酶型纖溶酶原激活因子受體功 能抑制劑，組織蛋白酶抑制劑，絲胺酸蛋白水解酶（如： 瑪崔普特司（matriptase)、海普辛(hepsin)及尿激酶）抑制 劑，或乙醯肝素酶之抑制劑； 15 (iv)細胞毒殺劑，例如：氟達拉賓、2-氣去氧腺核 苷(2-chlorodeoxyadenosine)、氮芬苯丁酸或是多柔比辛，以 及其等之組合物，如：氟達拉賓+環磷醯胺；CVP :環磷 醯胺+長春新鹼+強體松；ACVBP :多柔比辛+環磷醯 胺+長春地辛+博來霉素+強體松；CHOP:環磷醯胺+ 20 多柔比辛+長春新驗+強體松；CNOP :環磷醯胺+米托 (mitoxantrone)+長春新驗+強體松；m-BACOD :甲氨嗓 呤(methotrexate) +博來霉素+多柔比辛+環磷醯胺+ 長春新鹼+地塞米松(dexamethasone) +甲酰四氫葉酸 (leucovorin); MACOP-B:曱氨喋呤+多柔比辛+環磷 91 200815475 醯胺+長春新鹼+固定劑量之強體松+博來霉素+甲 酰四氫葉酸或ProMACE CytaBOM:強體松+多柔比辛+ 環磷醯胺+依託泊苷+阿糖胞苷+博來霉素+長春 新驗+甲氨喋呤+甲酰四氫葉酸。 5 (v)生長因子功能抑制劑：舉例如此類的抑制 劑包括生長因子抗體和生長因子受體抗體（例如：抗 -erbB2 抗體妥珠單抗（trastuzumab)[HerceptinTM]、抗 -EGFR抗體帕尼單抗（panitumumab)、抗-erbBl抗體 西妥昔單抗（cetuximab)[Erbitux，C225]和任何生長因 10 子或生長因子受體抗體，其揭示於Stern等人，Critical reviews in oncology/haematology，2005,第 54 卷第 11〜29 頁）；此類抑制劑亦包括酪胺酸激酶抑制劑，例如： 上皮生長因子家族抑制劑（例如，EGFR家族酿胺酸 激酶抑制劑，如尽(3-氯-4_氟苯基）-7-甲氧基-6-(3-嗎 15 琳丙氧基）啥唾琳-4-胺（吉非替尼（gefitinib)， ZD1839)、，（3-乙炔基苯基）-6,7-雙（2-甲氧乙氧基） 口奎唾琳-4-胺（埃羅替尼（erlotinib)，OSI-774)和6 -丙浠 醯胺基氣-4_氟苯基）-7-(3-嗎啉丙氧基）喹唑啉 -4-胺（Cl 1033)) ; erbB2酪胺酸激酶抑制劑，例如： 20 拉帕替尼（lapatinib);肝細胞生長因子家族抑制劑； 血小板衍生生長因子家族抑制劑，例如伊馬替尼 (imatinib);絲胺酸/穌胺酸激酶抑制劑（例如， Ras/Raf訊息抑制劑，例如法尼基轉移酶抑製劑 (farnesyl transferase inhibitors)，如索拉菲尼 92 200815475 (sorafenib)(BAY 43-9006));經由 MEK 及/或 AKT 激 酶的細胞訊息抑制劑；肝細胞生長因子家族抑制 劑；c-kit抑制劑；abl激酶抑制劑；IGF受體（類胰島 素生長因子）激酶抑制劑；極光激酶抑制劑（例如， 5 AZD1152、PH739358、VX-680、MLN8054、R763、 MP235、MP529、VX-528 和 AX39459)以及週期素依 賴激酶抑制劑，例如CDK2及/或CDK4抑制劑，以 及如· Bcl-2、Bcl-XL 之存活訊號蛋白（survival signaling proteins)之抑制劑，如 ABT-737 ; 10 (ν0抗血管生長劑，例如，可抑制血管内皮生長 因子之效應者[例如：抗血管内皮細胞生長因子抗體 貝伐單抗（Avastin™)];以及VEGF受體酷胺酸激酶 抑制劑，例如·· 4-(4-溴-2-氟苯胺）_6_甲氧基-7_(1-甲 基哌啶-4-基甲氧基）喹唑啉（ZD6474 ; WO 01/32651 15 内之實例2)、4-(4-氟-2-甲基吲哚-5-基氧基）-6-甲氧 基_7-(3-吡咯烷-1·基丙氧基）喹唑啉（AZD 2171 ; WO 00/47212 内之實例 240)、 維他拉尼 (vatalanib)(PTK787 ; WO 98/35985)和 SU1 1248(舒尼 替尼（sunitinib) ; WO 01/60814)、如揭示於國際專利 20 申請案 WO 97/22596 、WO 97/30035 、WO 97/32856、WO 98/13354、WO 00/47212 及 WO 01/32651中的化合物以及藉由其他機制而作用的化 合物（例如：三羧胺基喧琳（linomide)、整合素αΥβ3 93 200815475 功能抑制劍和血營抑制素）或是群落刺激因子1 (CSF1) 或CSF1受體；

(vii) 血管破壞劑，例如康布司他汀 A4(combretastatin A4)和揭露於國際專利申請案WO

5 99/02166、WO 00/40529、WO 00/41669、WO 01/92224、WO 02/04434 和 WO 02/08213 中的化合 物； (viii)反義療法，例如：可被引導至上述所列標 的者，如G-3139 (Genasense)，一種抗-bcl2反義核酸； 10 (i>0基因療法，包括例如取代如異常p53或異常 BRCA1或BRCA2之異常基因的方法；基因導向酶前 藥療法（GDEPT)例如利用胞嘧唆脫胺酶、胸腺嘧唆激 或細囷性硝基還原酶之方法以及增加病人對化療 或放射線治療耐受性的方法，例如多藥物抗性基因療 15 法；以及 ⑴免疫療法’包括例如以 Alemtuzumab (campath-ΙΗΤΜ，其為一種針對CD52的單株抗體）進行治 療’或是以針對CD22之抗體治療；體外或體内增加病 人對腫瘤細胞之免疫抗原性的方法；轉染細胞素， 20如··白介素2、白介素4或顆粒球巨嗜細胞群落刺激 因子，降低T-細胞無變應性的方法，例如：以抑制 CTLA 4功犯之單株抗體治療·，利用經轉染之免疫細胞 的方法’如：經細胞素轉染之樹突細胞；使用經細胞 94 200815475 以及利用抗特異性的抗 素轉染之腫瘤細胞株的方法； 體的方法； 刀鮮抑制劑，如蛋白酶體抑制 (bortezomid) ㈣生物治療性療法，例如： 如：抗體或可溶性外1 a栌 s蛋白貝（例 疋隔較體配體、_配㈣合β體或是降低受體^ 息傳導(例如：導因於增加的受體分解或是降低的表現位 準）。 1〇…如此結合的治療可藉由同時的、接續的或分開的服用 該治療的個別成份而達成。此類組合產物應用本發明之化 合物或是其藥學上可接受之鹽類（在先前所述之劑量範圍 之内）以及其它藥學上可接受之活性劑（在其經核准之劑量 範圍内）。 15 在本發明之一實施態樣中，本發明之抗腫瘤治療係和 抑制血管内皮生長因子(VEGF)之藥劑合併（例如：抗血管 内皮細胞生長因子抗體貝伐單抗（AvastinTM)，抗血 管内皮生長因子受體抗體，如：抗-KDR抗體及抗-fit 1 抗體；如揭示於國際專利申請案WO 97/22596、WO 20 97/3〇〇35、WO 97/32856、WO 98/13354、WO 00/47212 及WO 01/32651中的化合物；以及藉由其他機制而作 用的化合物（例如：三羧胺基喹啉（linomide)、整合素 ανβ3功能抑制劑和血管抑制素）。在本發明另外的實施 態樣，本發明之抗血管生成治療係和抑制血管内皮生長因 95 200815475 子受體之酪胺酸激酶(KDR)活性的藥劑（例如：AZD2171或 AZD6474)合併。對於AZD2171之額外的細節可在Wedge 等人(2005) Cancer 65(10):4389-400 中發現。對於

AZD6474之額外的細節可在Ryan和Wedge (2005) 沿A 5 乃wma/q/C训cer· 92 Suppl 1:S6-13中發現。二篇出版物皆 整體併入於此作為參考。在本發明另一實施態樣中，該完 全人類抗體1·1·2、1.5.3、2丄2係單獨合併或是和 Avastin™、AZD2171 或 AZD6474 合併。 藉由同時、連續或分開進行個別的處理而可達到 10此類共同治療的目的。此類組合產品可使用在上述劑 量範圍内的本發明化合物或其醫藥上可接受鹽類，以 及在許可劑量範圍内的其他醫藥活性劑。 葱_M. 下列實例（包括進行之試驗和得到之結果）僅供作 為說明的目的而不得解讀為本發明被限制於該範圍 内0 範例1 免疫及滴定 免疫原 重組之可溶性PDGFR-α細胞外功能區係由R&d系統 取得(Minneapolis，MN·目錄號#: 322-PR/CF)且使用為一免 疫原。此外，表現在BHK細胞（幼倉鼠腎細胞）之重組人 96 200815475 類PDGFR-α係使用為一用於免疫的抗原。該BHK細胞係 由 American Type Tissue Collection，目錄號 CCL-10 所取 得。 5 免疫 對抗PDGFR-α之單株抗體係藉由以PDGFR<_a之細胞 外功能區抗續地免疫XenoMouse®小鼠(Xen〇Mouse品系： XMG2 (IgG2 κ)及 XM3C_1 (IgG4K) Amgen 公司，Fremont， CA)而發展（R&D 糸統’目錄號#· 322-PR/CF)。XenoMouse 10動物係藉由習知之工具經由足肉墊作為所有注射途逕而免 疫。每隻小鼠之各注射總體積係50 μΐ且含有1〇 pg PDGFR-α之細胞外功能區，各足肉墊25 μΐ。佐劑中包括 Titermax GoldTM (Sigma，目錄號 Τ2684)，磷酸鋁膠狀佐 劑’ HCL生物區段（目錄號1452-250)以及ImmuneEasy小鼠 15 佐劑（qCpG，Qiagen目錄號303105)。第一次注射係和 Titermax GoldTM投與（第0天）。加強免疫係以5 ul的磷酸 鋁膠狀佐劑（5ul)及qCpG (15 ul)和10 ug之PDGFR-α細胞 外功能區在第3、6、10、13、20、24、27、31及34天投 與。 2〇 範例2 淋巴球的獲得、B細胞分離、融合及產生融合瘤 經免疫的小鼠係以斷頸椎法而犧牲且該汲出的淋巴結 係由各個體採收且收集在一起。該等淋巴細胞係藉由在 DMEM中碾磨以使該等細胞自組織中放出來而分離開，且 97 200815475 該等細胞係懸浮在DMEM中。該等細胞係經計數，且以每 100百萬個淋巴球添加0·9 ml DMEM之數量添加至該細胞 沉澱以使該等細胞溫和地且完全地再懸浮。每1〇〇百萬個 細胞係使用1〇〇 μΐ的CD90+磁性珠，該等細胞係藉由使該 5等細胞和該等磁性珠在4°C下共同培育15分鐘而完成標 記。該等包含多至108個陽性細胞(positive cells)(或多至 2xl09個總細胞）經磁性標記之細胞懸浮液係裝載至一 ls+ 管柱上且該管柱係以DMEM清洗。該總流出液係收集為 CD90-陰性分液。（大部份這些細胞係期望為b細胞）。 10 藉由將以上所得經清洗增富之B細胞和非分泌性骨髓 瘤 P3X63Ag8.653 細胞（購自 ATCC (目錄號 CRL 1580) (Kearney 等人，J. 123, 1979, 1548-1550)以 1:1 的 比例混合而執行融合。該細胞混合物係以800 X g離心和緩 地形成沉澱。在完全移除上清液之後，該等細胞係以2-4 Ml 15 的 Pronase 溶液(CalBiochem，目錄號 53702; 0.5 mg/mL 在 PBS中）處理不超過2分鐘。接著，添加3-5 ml的FBS以 中止該酵素活性且該懸浮液係以細胞電性融合溶液ECFS (0.3 Μ 之 Sue 蔗糖，Sigma，目錄號 S7903 ; 0.1 mM 乙酸 鎂，Sigma，目錄號M2545; 0.1 mM乙酸鈣，Sigma，目錄號 20 C4705)調整至40 mL之總體積。在離心後移除該上清液且 該等細胞係再懸浮在40 mL之ECFS中。重覆此清洗步驟 且該等細胞係再懸浮於ECFS中至2xl06cells/mL的濃度。 使用一融合產生器（模式ECM2001，Genetronic公司， 聖帝牙哥，加州）執行電性細胞融合。所使用之融合腔大小 98 200815475 為2·0 mL，使用下述儀器設定：校準狀態：電壓：50 V， 時間：50秒；細胞膜破壞在電壓：3000 V，時間：30 μ秒； 融合後保持狀態：3秒。 在ECF之後，該細胞上清液係在無菌狀態下小心地自 5該融合腔中移出且轉移至一含有相同體積之融合瘤培養液 (DMEM (JRH Biosciences)，15% FBS (Hyclone)，補充有 L- 麩醯胺酸、青黴菌/鏈黴菌、OPI (草醯乙酸、丙酮酸鹽、牛 胰島素）（皆購自 Sigma)以及 iL_6(Boehringer Mannheim))的 無菌管中。該等細胞係培養在37°C下15-30分鐘，而接著 10 以400 X g (1000 rpm)離心5分鐘。該等細胞係小心地再懸 浮於小3：之融合瘤篩選培養基（Hybridoma Selection Medium，即為補充有〇·5χ HA (Sigma，目錄號A9666)之融 合瘤培養液）’且該體積係以更多之融合瘤筛選培養基適宜 地調整，以下列最終塗佈條件為基準：96孔培養盤中每一 15孔中有5x100個B細胞總量在200 μί體積中。小心地混合 該等細胞且移液至96孔培養盤中且使其得以生長。在第7 或10天，移除一半的培養基，而該等細胞係以融合瘤篩選 培養基再投料。. 20 ELISA 篩選 用於ELISA分析，濃度為4ug/ml之重組人類 PDGFR-a(R&D系統，目錄號322_pR/CF )係使用為一 cap補 捉劑。ELISA盤係以在抗原塗覆緩衝液中之5〇 μΐ/孔的重組 人類PDGFR-α塗覆(〇·1 μ碳酸鹽緩衝液、pH9.6NaHC03 99 200815475 (分子量84) 8·4 g/L)且培育在4°C下一整夜。婚天，該 ELISA盤係以清洗緩衝液(〇仍％ Tween 20 in lx Pbj§)清、先 三次且接著以200 μ1/孔之阻斷缓衝液(在lx PBS中之l% BSA，0.1% Tween 20，0.01%硫柳汞)在室溫下進行阻斷工 5 小時。當完成該阻斷步驟時，50 μΐ/孔的融合瘤上清液係在 室溫下培育2小時。在培育之後，該ELISA盤係以清洗緩 衝液清洗三次。在該清洗步驟之後，50 μΐ/孔的偵測抗體係 加入該等孔中且在室溫下培育1小時。該ELISA盤係接著 以清洗緩衝液清洗三次且加入TMB受質（50 μΐ/孔）。接著加 10 入終止溶液(50 μΐ/孔），該ELISA盤係以一 ELISA盤閱讀機 在650nm下解讀。由ELISA認為是陽性的上清係接著以 FMAT及FACS評估。 範例3 15 由FMAT及FACS選擇抗艟候選者 在14天的培育之後，融合瘤上清液係以螢光微體積測 試技術(FMAT)藉由對抗人類骨瘤MG-63細胞株或HEK293 細胞之篩選而進行PDGFR-ol專一性單株抗體的篩選，其中 該等細胞係經轉染有人類PDGFR-α，且以對抗親代 2〇 HEK293細胞作為對照篩選。 依據第一次篩選而來之陽性融合瘤細胞生長孔的培養 上清液係經移除且該PDGFR-a正性融合瘤細胞係以新鮮 的融合瘤培養基懸浮且係移至一 24·孔盤中。在二天的培育 之後，這些上清液係準備為一第二確認性筛選。在第二次 100 200815475 確認性篩選中，在第一次篩選中為陽性的細胞係以二組或 三組分開使用的偵測抗體藉由FACS進行篩選：1.25ug/ml GAH-YCy5 (JIR# 109-176-098)用於人類 γ 鏈的偵測； 1.25ug/ml GAH-κΡΕ (S.BJ2063-09)用於人類 κ 輕鏈的偵測 5 以及 1.25ug/ml GAH-λΡΕ (S.BJ2073-09)用於人類 λ 輕鏈的 偵測，以確認該抗PDGFR-α抗體係完全人類抗體。 範例4 PDGFR酪胺酸磷酸化作用測試 10 使用PDGFR酪胺酸磷酸化作用（pTyr)測試以決定該 等抗體株是否抑制腫瘤細胞中PDGFR-a的磷酸化作用而 審視該791個抗體株。 簡吕之’人類骨瘤MG-63細胞係以1〇,〇〇〇細胞於1〇〇 μΐ的飢態培養基(Starvation Media)(l%碳黑/葡聚糖處理之 15 FBS)量種在96孔FMAT測試盤之每孔中且培育在37。〇下 約20小時。飢態培養基係經移除且37 5 μ1的培養基係添 加至容納樣本之所有孔中且12·5μ1係添加至容納控制組之 孔中（小鼠單株抗體，抗_PDGFR_a (BD pharMingen目錄號 # 556001)或是小鼠IgG2a (ser〇tech，2倍的最終濃度))且培 20育在37〇C下30分鐘。5〇μ1的在1%測試培養基内2倍最終 濃度的PDGF-AA (R&D)(50ng/ml)係加入所有的盤中且將 培養基加至控制盤之第12攔。盤係培育在37。〇下1〇分 鐘。移除培養基且加人100 μ1之在pbs/3%bsa巾的3 ^ 甲酸且在室溫下培育20分鐘。以PBS清洗該等盤2次且加 101 200815475 入 100 μΐ 的透化緩衝液（permeabiiizati〇n buffer)(在 3%BSA/PBS中之0·1ο/〇 Trit〇n-X)至各孔中，在室溫下培育 10分鐘’且移除之。添加1〇〇 ml之在pBS/3〇/〇 BSA中的 0.6%過氧化氫以中止任何内生性過氧化酶活性且在室溫下 5培育20分鐘。以PBS/〇.l% Tween-20清洗該等盤3次且以 100 μΐ 的在 PBS/0.1% Tween-20 中的 10% FBS 阻隔。該等 盤係在室溫下培育1小時，移除阻隔（緩衝液，且5〇 μ1之 在 10%FBS/PBS_T 中的抗填酸化 PDGF_a抗體(sc_1291〇_r) (1 pg/ml)係添加至各孔中。該等盤係在室溫下培育2小時， 10接著以PBST清洗3次，在每次清洗之間浸泡5分鐘。稀 釋在阻隔緩衝液中之羊對抗兔之IgGFc_HRp二級抗體50 μΐ係添加且在室溫下培育1小時。以PBST清洗該等盤5 为4里3 -人且扣乾。添加50 μΐ之ECL試劑（LumiGLO Reserve， KPL目錄號# 54-71-01)且立即讀取RLUs。以PBST清洗 I5 该專盤2次且扣乾。該等盤係接著在_8〇。匚冷;東30-60分 鐘。將該等盤取出至室溫且添加100 μΐ之CyQUant至各孔。 該等盤係在一螢光讀取機之485 nm激光且在53〇 nm發光 下讀值。 依據在pTyr測試中大於或等於9〇〇/0之中和率而篩選出 2〇 1〇3株，也就是，該等經選取之抗體株抑制pDGF-α受體酪 胺酸磷酸化作用多於或等於90%。（資料未顯示） 102 200815475 範例5 融合瘤上清液之親和力及濃度分析 高抗原(HA)/限制性抗原(LA)分析 利用下述之高抗體(HA)/限制性抗原（LA)分析而審視 5 這103個抗體株。高抗原（HA)係一抗體濃度依賴型反應且 因此用於抗體濃度的測定。LA係大多是一抗體親和力依賴 型反應且因此可為一抗體親和力之測定。 高抗原定量測試 10 簡言之，相較於下述之限定性抗原定量測試(Limited

Antigen Quantitation Assay) ’ ELISA 盤係塗覆有一大量的人 類 PDGFR-α 抗原（R&D Systems 公司，Minneapolis，MN 目 錄號322-PR-050/CF)。含有抗體之融合瘤上清液係在1:51 至1:1656的稀釋範圍内滴定。使用已知小鼠抗人類 15 PDGFR-α-特異性抗體(PharMingen目錄號556001)之控制 組以界定該測試之線性範圍。接著使用在該線性範圍内之 資料以衍生出PDGFR-α特異性抗體在各經滴定之樣品中 的相對濃度。 20 限定性抗原定量測試

相較於上述之高抗原定量測試，該等微滴定盤係塗覆 有一低量之之人類PDGFR-a抗原。在1%脫脂奶/ lx pBS pH 7.4 / 0.5%疊氮化物中之為50 μί之為64、32、16、8、 103 200815475 4及2物之人類PDGFR_«(涵蓋8.5 _至〇.26 nM之範 圍)係添加至各孔中。該盤係培育30分鐘。 以水清洗該等盤4次且加入以Lb稀釋於以脫脂奶/ IX PBS pH 7.4 / 0.5%疊氮化物中含有待測抗體之融合瘤 5上清液50.以塑膠帶或石躐紙將該等盤緊密地包起來且 在室溫下搖晃培育一整夜。 在隔天，所有的盤係清洗5次且添加在1%牛奶、工父 PBS pH 7.4中/辰度為〇·5 Ug/mi之羊抗人類邮& 多 株抗體50此至各孔中。該等盤係在室溫下培育（小時。 10 該等盤係以飲用水清洗至少5次。50 μί之HPR受質 ΤΜΒ係添加至各孔中，且該等盤係培育3〇分鐘。藉由添 加50 μί之1Μ磷酸至各孔中而中止HRp_TMB反應。測量 該盤中各孔在450 nm之光度（吸光值）。 依據相對結合親和力選出34抗體株。選擇係基於π 15 ng/ml及2 ng/ml之抗原濃度下的滴定。選定之切點係la 多於0.3 OD單位及3·3 pg/m卜在抗原濃度2 ng/ml下呈現 低反應性之株係被刪除。 基於在MG-63細胞中抑制PDGFR-α碟酸化作用之结 果，9株額外的抗體株係加入以增加候選者總數，因此， 20 總共有43抗體株呈現有效地抑制絡胺酸磷酸化作用以及高 相對親和力（基於進一步所執行的HA/LA分析）。該先前所描 述之9株額外的抗體株表現完全抑制PDGFR-α填酸化作用 (也就是1〇0%)。沒有一抗體株和PDGFR_P或類似物（FLT3, c-kit，CSF-1R)交叉反應。 104 200815475 第2表 根據在MG-63細胞中有效地抑制PDGFR-α磷酸化 而選定之43個抗體株的摘要 抗體株 平均pTyr抑制率 3.197 >100% 3.476 >100% 2.1623 >100% 3.87 >100% 3.404 >100% 3.72 >100% 2.1795 >100% 2.1853 >100% 2.1954 >100% 2.2002 >100% 2.2071 >100% 3.156 >100% 3.341 >100% 3.456 >100% 3.818 >100% 2.1696 >100% 2.451 >100% 3.457 >100% 2.175 99% 2.259 99% 2.998 99% 2.449 99% 2.414 98% 105 2.84 98% 3.268 98% 2.351 97% 2.850 95% 3.472 95% 2.886 94% 2.415 94% 3.23 94% 2.10 93% 2.737 93% 2.796 93% 2.565 92% 2.12 92% 2.624 92% 2.862 92% 3.805 92% 2.542 91% 3.289 91% 3.772 91% 2.889 90% 200815475 範例6 經選殖之單株抗體之活體外篩選及分析資料 30株抗體株係經選殖且以下列方式審視。 106 200815475

ElYUiiM, PDGFR路胺酸磷酸化作用（pTyr測試）係使用MG-63 細胞如同上述範例4而執行。結果係顯示於第3表中。 5 增殖測試 使 PDGF-AA Proliferation Assay Screen 而評估經純化 之對抗PDGFR-cx單株抗體對於MG-63細胞生長之抑制作 用。 簡言之，MG-63細胞係以每孔5000個細胞的量種在黑 10 色清晰底盤之具有100 μΐ完整生長培養基的内部孔中且在 37°C，5%C02下培育3-4小時。以1XPBS清洗細胞且更換 為生長飢態培養基(MEM, 1% NEAA，（U%碳酸氫鈉，1% L·麩醯胺酸)且飢餓一整夜。將培養基自盤中移除且將50 μΐ 之2Χ mAb或培養基添加至適當的孔中。50 μΐ之PDGF-AA 15 滴定，200 ng/ml PDGF-AA或培養基單獨係添加且該等盤 係培育3天。以Alamar Blue在530激光及580 nm發光下 讀取該等盤（1〇〇 μΐ各孔/100 μΐ)。

Data for the最優良之15株單株抗體之資料（亦即是’ 在以100 ng/ml (3_45 nM) PDGF-AA之細胞刺激中表現最 20 低之IC50值)係總結於以下第3表中。選定以進一步分析 之單株抗體係以粗體字表示。該等經選定之抗體中之5株 的劑量反應曲線係表示在第1圖中。該2·451·1·1之製備物 中可能包括二不同之抗體，其具有相同之重鏈但不同之輕 107 200815475 鏈，因為在針對此單株抗體之DNA解序期間有偵測到二個 不同之輕鏈序列。 第3表 5 增殖測試：MG-63細胞

mAb(單株抗體） IC5〇 (ng/ml) 2.175.3 56.1 (0.37 nM) 2.414.2 349.1 (2.3 nM) 2.451.1.1 283.1 (1.9 nM) 2.542.2 651.6 (4.35 nM) 2.737.1.4 558.5 (3.72 nM) 2.1623.2 981.7 (6.5 nM) 2.1853.3 2679.2 (18 nM) 3.341.2 471.0 (3.1 nM) 2.796.2 756.8 (5nM) 5.16.1 422.7 (2.8 nM) 2.2071.1.3 492.0 (3.3 nM) 2.449.1.3 236.6 (1.57 nM) 2.84.3 480.8 (3.2 nM) 2.998.2 315.5 (2.1 nM) 2.351.3 648.6 (4.3 nM) BD556001 2857.6 (19 nM) 人類IgG2 >10 pg/mL 人類IgG4 >10 pg/mL FACS Kd親和力測定 經純化之單株抗體(mAbs 2.175.3, 2.449.1.3, 2.451.1.1， 2.998.2· 2.84.3)對抗PDGFR-cx之親和力係以FACS分析測 10 定。 簡言之，表現PDGFR-α之MG-63細胞係再懸浮於 FACS緩衝液中（2% FBS，0.05% NaN3)為接近3至5百萬個 細胞/mL的濃度。細胞係保持在冰塊上。經純化之抗體及 108 200815475 CD140a控制組係在96孔盤中之11個孔進行系列稀釋於經 過濾之lx PBS (2x)。每一列的第12個孔只含有緩衝液而 已。lx PBS及細胞係加入各單株抗體孔中使得最終體積為 30 μΙ7孔且各孔包含將近1〇〇,〇〇〇個細胞。該等單株抗體的 5 最終分子濃度範圍係如下列：

MAb 濃度 (單株抗體） 2.451.1.1 =19.1 - 0.019 nM 2.175.3 =10.8 — 0.021 nM 2.449.1.3 =10.7 — 0.021 nM 2.449.1.3 =9.2 - 0.009 nM 2.84.3 =4.4 - 0.009 nM 2.449.1.3 =9.2 - 0.009 nM 2.998.2 =4.6 - 0.009 nM CD140a =20.2 - 0.020 nM 該等盤係放置在一平板震盪器上且於4°C下搖晃5小 時，接著經旋轉且以PBS清洗3次。200 μί之1〇〇或131 Nm 的 Cy5 羊抗人類多株抗體（Jackson Laboratories， 10 #109-175-008)係加入各孔中，且 200 μί 之 100 nM Cy5 羊 抗小鼠多株抗體係加入和CD140a抗體複合之細胞。該等 盤係接著被放置在震盪器上且於4°C下搖晃40分鐘，接著 經旋轉且以PBS清洗3次。 使用一 FACSCalibur儀器測定各單株抗體濃度下 15 15,〇〇〇至20,000個細胞項目中之幾何平均螢光值 (Geometric Mean Fluorescence，GMF)。對於各單株抗體，

該GMF資料係對二重覆滴定值進行相對於各滴定中一相 同單株抗體濃度點進行標準化。相對應之經標準化的滴定 點係取平均值以給予各單株抗體濃度一經標準化之GMF 109 200815475 點。對於單株抗體2.351.3，只有-滴定資料組為用可接受 於分析之品質。為分子單株抗體濃度之一函數的gmf非線 性圖面係符合使用以下方程式之科學軟體： F = P，(KD+Lr+1)-+ 2 5 在上述方程式中，F =幾何平均螢光值，LT =總分子 單株抗體濃度，P’=關於經結合單株抗體之任意螢光單位 的比例性常數，以及KD=平衡解離常數。對於各單株抗 體，對於KD之估計值係在p及KD被允許於在該非線性 分析中自由地流動時而得到。以下第4表列出各單株抗體 10之KDs結果以及該事件的95%信賴區間。單株抗體係以 親和力遞減的順序列出。 第4表 樣品 KD (pM) 95% 〇Γ{ρΜΓ 2.175.3 328 ±202 2.451.1.1 389 ±196~ 2.449.1.3 (control) 52 ±51 ~~ 2.449.1.3 53 士 49 ' 2.998.2 57 +68 (只有最高 之信賴區間） CD140a 146 T.84.3 227 土 121 ' 小鼠交叉反應 110 200815475 為了建立一動物異體移植研究，係使用NIH3T3細胞 以測定小鼠交叉反應。經測試之單株抗體中只有3株呈現 小鼠交叉反應。結果係總結在第5表中。 5 内化之比例 經内化至細胞内之抗體的比例係使用一標準内化實驗 書而測定。在10 pg/ml濃度下之内化結果比例係總結於第 5表中。 10 結果 活體外篩選之結果以及30株經選殖之單株抗體的資 料結果係鎞結於第5表中。單株抗體係以IC50值遞增的順 序列出。以斜體字列出之單株抗體係經選定為10大優良單 株抗體，而以粗體字列出之單株抗體係經選定為3個領先 15 的候選者。“（）”表示在第5表中的等級。 如第5表中可見的，單株抗體2.175.3呈現優異的抑制 MG-63細胞中PDGF-AA增殖，以及優異地抑制MG-63細胞 中PDGFRa的磷酸化作用。單株抗體2.449.1.3及2.998.2 也在MG-63細胞中抑制PDGFRa的石粦酸化作用且抑制 20 MG-63細胞的PDGF-AA增殖。此外，單株抗體2·449·1·3及 2.998.2也具有對於PDGFR-oi的高結合親和力。 第5表 111 200815475 PDGFR-α單株抗艎摘要 抗體 pTyr測試： 抑制％ @ 2pg/ml 增殖測試： IC5〇 ng/ml (1-6-06) 增殖測試： IC5〇 ng/ml (1-23-06) 内化％ @ 10pg/ml 鼠類交 叉反應 性 親和 力：KD 2.175.3 100 67.3 (1) (0·45ηΜ) 56.1 (1) (0·37ηΜ) 19% 是 328pM 2.449.1.3 99 178.6 (2) (1·2ηΜ) 236.6 (2) (1·57ηΜ) 20% - 52pM 2.451.1.1 100 399.0 (6) (2·67ηΜ) 283.1 (3) (1.9ηΜ) 21% - 389pM 2.998.2 99 307.6 (4) (2.05ηΜ) 315.5 (4) (2·1ηΜ) 25% - 57pM 2.84.3 98 192.3 (3) (1·3ηΜ) 480.9 (8) (3.2ηΜ) 26% - 227pNT 2.414.2 99 657.7 (9) (4.4ηΜ) 349.1 (5) (2·3ηΜ) 28% - 5.16.1 99 385.5 (5) (2.57ηΜ) 422.7 (6) (2·81ηΜ) 31% - 3.341.2 100 403.6 (7) (2.7ηΜ) 471.0 (7) (3·1ηΜ) 22% - 2.2071.1.3 99 1,276.4 (10) (8.5ηΜ) 492.0 (9) (3·3ηΜ) 21% - 2.737.1.4 99 550.8 (8) (3·7ηΜ) 558.5 (10) (3.73ηΜ) 22% - 2.796.2 99 497.7 756.8 19% - 2.542.2 99 1037.5 651.6 26% - 2.351.3 97 1,078.9 648.6 21% - 2.1623.2 97 755.1 981.7 46% 是 2.1853.3 98 1,122.0 2679.2 30% 是 3.818.4 92 4,602.6 - 3.457.3.1 85 - - 3.23.3 84 61.9 - 5.1.1.1 77 > 10 pg/mL - 4.16.2 74 > 10 pg/mL - 3.87.1.1 69 6,237.3 - 2.1576.1.2 65 > 10 pg/mL - 3.472.1.1 61 - - 3.805.1.3 58 1,016.2 - 3.772.2 56 167.9 - 5.9.3 31 2.2 - 3.23.2 26 150.3 - 2.1954.2 -3 - - 3.625.1.7 -3 3819.44 - 2.2002.3 -9 - - 112 200815475 範例7 抗-PDGFR-α抗體之結構分析 該等抗體之重鏈及輕鏈可變功能區係經序列分析以確 定其DNA序列◦該等抗PDGFR-α抗體之完整的序列資气 係提供在具有各γ及κ鏈組合之核苷酸及胺基酸序列的序 列表中。該可變重鏈係經分析以確定該VH家族、該〇_區 / 域序列及該J-區域序列。該等序列係接著經轉譯以決定該 一級胺基酸序列且和胚源VH、D及J-區域序列比對以評估 體細胞超突變。「_」表示和胚源序列一致。「#」表示在 10該抗體序列中一額外的胺基酸(其不在胚源序列被發現）。 弟12表係一比較該抗體重鍵區域和其同源之胚源重 鏈區域。第13表係一比較該抗體κ輕鏈區域和其同源之胚 源輕鏈區域。 免疫球蛋白鏈之可變(V)區係由多重胚源DNA節段譯 15碼而成，其係在Β細胞發育過程中相連結為功能性可變區 域(VHDJH 或 VKJK)。

該被了解的是，一特定抗體在胺基酸層次不同於其個 別胚源序列之處，該抗體序列可被突變回去該胚源序列。 如此之校正性突變可發生在一、二、三或更多的位置上， 2〇或疋任何该專突變位置的組合，使用標準的分子生物技 術。作為非限制性的範例，第12表顯示，該單株抗體2175.3 之重鏈序列（SEQ ID NO·: 2)不同於該相對之胚源序列之處 在於在FR1區域中之一 q至η的突變（突變丨），在CDR1區域 中之一 S至Η的突變（突變2)，以及在CDR2區域中之一 S至R 113 200815475 的突變（突變3)。因此，單株抗體2.175.3之重鏈的胺基酸序 列或是譯碼出單株抗體2.175.3之重鏈的核苷酸序列可經過 修改以改變突變1以在突變1的位置產生胚源序列。此外’ 單株抗體2.175.3之重鏈的胺基酸序列或是譯碼出單株抗體 5 2.175.3之重鏈的核苷酸序列可經過修改以改變突變2或突 變3以在突變2或突變3的位置產生胚源序列。事實上該單株 抗體2.175.3之重鏈的胺基酸序列或是譯碼出單株抗體 2.175.3之重鏈的核苷酸序列可包含二或更多突變之組合以 在那些特定之位置產生胚源序列。以下第6-11表說明單株 10 抗體2.175.3、2.449.1.3及2.998.2中由其胚源而來之此類變 化的位置。各列係代表在經指定之位置之胚源或非胚源殘 基的一特定組合。在序列表和第6-11表之間不相符的情形 下’以该荨表格所提供之資訊為優先。 15 第6表單株抗鳢2.175.3重鏈(SEQ ID NO: 2)相對於胚源 在指定之殘基編號上的例示性突變 _ 3 35 53 57 61 80 99 100 101 106 、Q S S T A Y 經刪除的 經刪除的 經删除的 經刪除的 .Q S S T A Y 經刪除的 經刪除的 經刪除的 p - ,Q S S T A Y 經刪除的 經刪除的 p 經刪除的 Q S S T A Y 經刪除的 經刪除的 p p Q S 1 S T A Y 經刪除的 G 經刪除的 經刪除的- .Q S S T A Y 經刪除的 G 經刪除的 、、—匕 π y 1 4 V p .Q S S T A Y 經刪除的 G p 經刪除的 Q S S T A Y 經刪除的 G p p Q S S T A Y G 經刪除的 經刪除的 經刪除的 .Q S S T A Y G 經刪除的 經刪除的 p S S T A Y G 經刪除的 p 經刪除的 ,Q S S T A Y G 經刪除的 p p Q S S T A Y G G 經刪除的 經刪除的 114 200815475

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1 7 28 80 92 93 106 E S s A s s I E S s A s s V E S s A s I I E S s A s I V E S s A T s I E S s A T s V E S s A T I I E S s A T I V E S s V s s I E S s V s s V E S s V s I I E S s V s I V E s s V T s I E s s V T s V E s s V T I I E s s V T I V 312 200815475

1 7 28 80 92 93 106 E S V A s s I E S V A s s V E S V A s I I E S V A s I V E S V A T s I E S V A T s V E S V A T I I E S V A T I V E S V V s s I E S V V s s V E S V V s I I E S V V s I V E S V V T s I E S V V T s V E S V V T I I E S V V T I V E F s A s s I E F s A s s V E F s A s I I E F s A s I V E F s A T s I E F s A T s V E F s A T I I E F s A T I V E F s V s s I E F s V s s V E F s V s I I E F s V s I V E F s V T s I E F s V T s V E F s V T I I E F s V T I V E F V A s s I E F V A s s V E F V A s I I E F V A s I V E F V A T s I E F V A T s V E F V A T I I E F V A T I V E F V V s s I E F V V s s V E F V V s I I E F V V s I V E F V V T s I E F V V T s V 313 200815475

1 7 28 80 92 93 106 E F V V T I I E F V V T I V D S S A s s I D S s A s s V D s s A s I I D s s A s I V D s s A T s I D s s A T s V D s s A T I I D s s A T I V D s s V s s I D s s V s s V D s s V s I I D s s V s I V D s s V T s I D s s V T s V D s s V T I I D s s V T I V D s V A s s I D s V A s s V D s V A s I I D s V A s I V D s V A T s I D s V A T s V D s V A T I I D s V A T I V D s V V s s I D s V V s s V D s V V s I I D s V V s I V D s V V T s I D s V V T s V D s V V T I I D s V V T I V D F s A s s I D F s A s s V D F s A s I I D F s A s I V D F s A T s I D F s A T s V D F s A T I I D F s A T I V D F s V s s I D F s V s s V D F s V s I I D F s V s I V 314 200815475

1 7 28 80 92 93 106 D F S V T s I D F S V T s V D F s V T I I D F s V T I V D F V A s s I D F V A s s V D F V A s I I D F V A s I V D F V A T s I D F V A T s V D F V A T I I D F V A T I V D F V V s s I D F V V s s V D F V V s I I D F V V s I V D F V V T s I D F V V T s V D F V V T I I D F V V T I V 315 200815475 i«s^^¥«^VH,Ioad^<rll 躲 FR2 CO > 田 ϋ Pa < a (¾ Μ ίδ > ：s W ο ο (¾ ·< S Μ IS 〇 H IS M 口 〇 Λ 1¾ a H CDR1 GFTFSDYYMS ΰ GFTFSDYYMS 5 GGSISSSSYYWG P u 1 1 1 1 H 1 1 ) 1 P r FR1 CQ 誇 CO (¾ CO Ο Ο s > Ο ϋ ο CO Η > a Η QVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAAS CO > CJ H OD H CQ S 〇 ft 0 W a a a JH4B I JH6B | JH6B | JH4B ] JH4B Q Germline D1-26 Germline \D P D6-6 Ger inline D7-27 D7-27 > VH3-11 丨 V3-11 | rH H 1 m > | V4-39 | V4-39 赛. :运 丨， 1 2.175.3 I 2·451·1,1 | 2.449·!.3 H 寸 00 CM 2.998.2 1¾ if m 1 127 I oa 128 o H 129 GO rH 寸 rH FR4 ω w > s Η 〇 a 〇 1 I 1 1 1 1 1 1 i 1 1 CO CO I 0 8 is 03 w E-« CD a a !2 c CDR3 ###YSGS#FDY GGP ~ — P — ^ — ##SIAARGMDV r\r^n___ _____ ΰ D P C ti 0 a ##W#FDY HH-VFDY HH-VFDY FR3 6 | g i 0 S w § 1 H £ 5 |5H I w | s CO § 1 CO H £ Pd % Ϊ5Η i O § U) H Eh 益 C y F CDR2 | YISSSGSTIYYADSVKG K Q > 1 i YISSSGSTIYYADSVKG Pi h | SIYYSGSTYYNPSLKS c b b 1 H A 4 9l£ 200815475 < ει軚 | FR2 | | WYQQKPGKAPKLLIY | 1 t 1 b 1 1 1 1 1 J l 1 1 1 1 ΪΗ M Pi > o (h a σ 3： 1 1 1 1 1 1 t 1 1 1 1 1 1 J M J a cu CO σ Q 〇4 a σ 1 1 1 1 r 1 1 1 1 1 1 Ui t r 1 ί 1 1 1 1 1 1 1 1 t 1 1 1 1 M J P4 < o a a iH & ffi 1 1 1 1 Ϊ 1 1 1 1 1 1 1 r 1 1 J ί 1 S 1 1 1 1 1 1 I 1 1 1 I CDR1 j | RASQSISSYLN | r 1 1 oi 1 1 J 1 〇4 1 | RASQGISNYLA | 1 1 1 1 ( > 1 1 1 1 | RASQSIGSSLK | 1 1 i EH 1 1 H 1 1 I 1 1 1 1 1 1 1 > 1 1 1 1 I RASQSISSYLN _1 1 H ί 05 1 b 1 1 1 Λ * ---H--TR-I- I FR1 | U Eh M Eh > Q ϋ > CO < CO w CQ 04 ay a Bh 5 a H Q 1 1 1 1 1 1 \ f 1 1 1 1 1 1 i r 1 1 1 1 1 1 J U M Η > P ϋ > CQ < CQ J CQ CQ Ot CO a Eh S： σ H Q 1 1 1 I f 1 1 1 1 1 1 t 1 1 1 1 1 1 1 i 1 1 > 1 EIVLTQSPDFQSVTPKEKVTITC | 1 f 1 1 M 1 1 1 i 1 1 1 1 1 1 1 J 1 1 1 1 > 1 1 1 1 1 1 t 1 1 1 1 1 1 l i 1 1 1 1 1 t ί Q o H Eh > Pi Q o > M < co J CO W ft CO a H s 〇! H Q 1 1 1 CO 1 1 1 1 1 i c 1 1 1 1 1 1 1 f 1 1 1 1 t 1 1 1 1 1 1 1 * 1 1 1 1 1 1 J J 1 1 1 1 1 1 丨 JK1 | 1 JK5 1 JK1 JK1 JK5 1 JK5 | > | Germline | 1_〇i2_1 | Germline | | A2 0 | | Germline | A2 6 A2 6 | Germline | 012 | 012 ;__键 壤 1 2.175.3 | H H H m -Φ CN rH 守 ΰ〇 <N 1 2.998.2 | 2.449.1.3 「2.451.1.1 | 燊 % % L 130 」^1 1 131 1 1__132 I o (N VO rH 1_133 J 00 1 FR4 1 Η 1 Η ο ο ο H w 岂 ο οι ο b H W g o o i： 1 > M δ | 1 CDR3 1 Η 〇4 〇Α Η CQ 03 Ο Ο Eh Μ =tt： 4fc =»： t < CO 1 〇 c c t c c 1 l 0 t5 u g & ω CQ CQ o ffi 1 1 1 1 g 1 I 1 J l 1 1 H 1 1 1 Eh H 芸 W s o o 1 --T--NPP-- 1 1 --T--NPP-- 1 FR3 υ ΪΗ g &ί Q ω & ο CQ ω Μ Η fe Q Η C5 W ϋ W ϋ W iU 卬 ft > ο e 0 1 K & o 03 w H 口 白 o CO 〇 03 o CO &4 cc; w (¾ > o u I ω < CO H 1¾ P E-i C5 W a CO 0 W w Pu δ P H 1 K > u s b Q W & 〇 W CO H H b Q Η 〇 CQ CD to 〇 CQ M & ϋ 1 CDR2 CO Ο CO 1 P 1 U 〇 H w 3 0 1 1 1 w co 〇 w CO 〇 J to w E D > ζ,ιε 200815475 範例8 藉由BIACORE分析之親和力測定

Biacore貫驗（生物分子交互作用分析，biomolecular interaction analysis，BIACORE)係使用一 Biacore T100 儀 5器在22 °C下執行。利用該生物感測器表面和該抗體之標 準醛偶合。特定地，50 pg之各單株抗體係和〜1 mMNaI04 在0·1 Μ之NaOAc(pH 5·5)中在冰上反應25分鐘且接著該 氧化反應係藉由在一具有10 mM NaOAC，pH 4.0之 Sephadex G-25 核酸純化·5 管柱中（NAP-5, GE biosciences) 10 去鹽化而中止。該單株抗體係接著流過一已和EDC/NHS、 碳醯肼及乙醇胺反應過之CM5生物感測器表面。在到達 所欲之表面容量之後，在該單株抗體及該表面間之腙鍵係 藉由使在 0.1 MNaOAc、pH4.0 中之 0.1 MNaBH3CN 流過 該經固定化之單株抗體達20分鐘而減低。

15 單株抗體 2.998.2 (SEQ ID Nos:14 及 16)、2·175·3 (SEQ ID Nos: 2 及 4)、2·175·3 變化體 Α (具有 3Q，80Υ 之 SEQ ID NO: 2(SEQ ID NO:134);具有 46L，77S 之 SEQ ID NO: 4(SEQ ID NO:135))、2.449.1 (SEQ ID NO: 10 及 12)，以及 2.449.1 變化體 A(SEQ ID NO: 10 ;具有 49Y，10Ή 之 SEQ 20 ID NO: 12(SEQ ID NO:136))係固定於一 CM5生物感測器晶 片上。在濃度範圍51.6 - 0.806 nM(2倍系列稀釋)之重組人 類 sPDGFR-a(R&D 目錄號 # 322-PR/CF;批次號 # QY056081)係注入90秒且接續3分鐘的解離。因該解離相 對於所有研究的相互反應係明顯地為非常地慢，在啟始之 318 200815475 30次注射完成之後，一組額外的6次注射（3次為25.8 nM 而3次為空白緩衝液注射)係和一具有14,4〇〇秒(4小時)解 離相之90秒注射一起執行。該等樣品係製備在添加有1〇〇 pg/ml之BSA之Hepes-緩衝鹽溶液、0.005%聚山梨酸_ 5 20 ’ PH 7·4 (HBS_P)中。所有的樣品係隨機地三重覆注射且 具有散置的超過10次的緩衝液注射用以雙重參考。所有感 應譜資料係以Scrubber 2.0處理且使用CLAMP而總體地符 合一包括用於質量運送之關係的1:1相互作用模式。該所 得之結合常數係列於以下表格中。單株抗體係以最高親和 10 力至最低親和力的順序列出。 第14表經選定之抗艎的親和力

第14表中之結果顯示，自Biac〇re分析所測得者， I5 2·175·3 and 2.449.1的胚源變化體顯示出對可溶性 PDGFR-a增加的親和力，相較於各別之非胚源抗體。相較 於其正常的對應物，所有的胚源抗體顯示出降低的解離常 數，其為導致所觀察到的親和力增加。第14表之該等抗體 中具最高親和力之4株係在一如範例2所述之可溶性 319 200815475 PDGFR-α結合ELISA以及範例4所述之MG-63磷酸化作 用測驗中進行測試。所得之IC50值係列在第15表中。 第15表經選定之抗體在sPDGFR-α結合ELISA及受艘 5 磷酸化作用測驗中之活性 抗體 sPDGFR-aELISA IC50 (ng/ml) PTYR測驗 IC50 (ng/ml) 2.175.3 38 28 2.175.3 變化體A 46 29 2.449.1.3 44 21 2.449.1.3 變化體A 45 31 範例9 在人類腫瘤異體移植模式中之抗腫瘤效用的評估 該上述抗體中之二者的抗腫瘤效用係在一非小細胞肺癌 10 (Calu-6)之異體移植模式中評估。該宿主小鼠係衍生自 Black6/129小鼠（具有藉由同源重組而將鼠類之pDGFR_a 基因置換成人類PDGFR-α)及SCID小鼠間之雜交。該所產 生之小鼠表現人類的PDGFR-cx受體而非鼠類受體。這歧插 入/剔除小鼠19週大時（10/組)係在其右側腹注射入在〇1 15⑹之基質凝膠(matrigd)中之2*106Calu-6細胞。當該腫瘤 達到平均170 mm3的大小時，在一磷酸鹽緩衝鹽溶液載劑 中或二白鹽溶液載劑之抗體係以每公斤10 mg抗體的旦在 該研究期間進行每週2次的腹内投藥。第2a圖顯示每一仏 療組在每一時間的平均腫瘤大小，然而第2b圖顯示在每一 20時間的平均體重。以二抗體之治療明顯地減少腫瘤生長· 320 200815475 以2.175.3治療產生55%之減少生長（ρ=〇·〇6)，然而以 2.449.1.3治療則產生73%之減少生長率(ρ< 〇.〇〇1)。在研究 期間，各組之間的體重改變姐沒有明顯的差異（第2b圖）。 2.449.1.3及2.449.1.3變化體A之抗腫瘤功效係進一 5步在U118膠質瘤異體移植模式中評估。19週大的SCID 小鼠（10/組）係在其右側腹主射入在〇·1 ml之基質凝膠 (matrigel)中之2*106個細胞。當該腫瘤達到平均280 mm3 的大小時，該抗體係如上述Calu-6模式般的投藥。結果係 顯示在第3圖中。該抗體2·449·1·3減少υιΐ8腫瘤的生長 10達94% (Ρ < 0.000001)。2·449·1·3之變化體a減少生長達 101%。因此，2·449· 1·3及2.449.1.3變化體a對於減少此 膠質瘤異體移植生長係皆至高度活性的，且在此模式中， 變化體A之突變並不減少活體内之活性。 15 20 併入作為參考 所有在此引用之參考文獻’包括專利、專利申靖案、 論文、教科書等等係整體併入於此作為參考。 等效物 上述所撰寫之說明書係被認為足以使 施本發明。上魏収勤_ 日*者貝 態樣且敘述本發__ ^本發明較佳實施 是，無論前述在内文中呈現得;二式。然而，將被了解的 式實施且本發明應依據所卩、，本發明可以許多方 附之申凊專利範圍及任何其等同 321 200815475 物來解讀。 【圖式簡單說明3 第1圖係一顯示5種經選定之單株抗體之劑量反應的 5 圖表，其係就抑制PDGF-AA-所引發之MG-63腫瘤細胞增 生％對於抗體濃度ng/ml而言。使用100 ng/ml (3.45nM)的 PDGF_AA進行細胞刺激。 第2a-2b圖顯示2.175.3及2.449.1.3在Calu-6非小細 胞肺異種移植模式之活體内抗腫瘤評估。第2a圖顯示平 10 均腫瘤大小（mm3)對時間（天數），而第2b圖顯示平均體重（g) 對時間（天數）。該方形點表示該載劑治療組；該圓形點表示 該2.175.3 10 mg/kg治療組；該三角形點表示該2.449.1.3 10mg/kg治療組。 第3圖顯示該等抗體在SCID小鼠之U118神經膠質瘤異 15 種移植模式之活體内評估的結果。圖表中係以抗體治療之 腫瘤大小（mm3)對時間（天數）。該方形點表示該載劑治療 組；該圓形點表示該2.175.3 10 mg/kg治療組；該三角形點 表示該2.449.1.3 1〇11^/1<^治療組。 20 【主要元件符號說明】 (無） 322 200815475 序列表 <11〇>亞斯特拉塞奈卡公司 梁娜歐密 康賈斯伯S. 佛特茲艾恩 葛茲特-波史崔葛迪 楊小丹 布拉基大衛C. <120〉 針對血小板衍生生長因子受體_〇1(1>1)(：[1^_〇1)之致標性結合劑及其用 <130> ASTR-013/Paris Convention <15〇> US 60/835,647 <151> 2006-08-03 <160> 136 <170> Patentln version 3.4 <210> 1 <211> 360 <212> DNA <213〉人類 途 <40〇> 1 caggtgcacc tggtggagtc tgggggaggc ttggtcaagc ctggagggtc tcctgtgcag cctctggatt caccttcagt gactactaca tgcactggat ccagggaagg gcctggagtg ggtttcatac attagtagaa gtggcagtct gtagactctg tgaagggccg attcaccatc tccagggaca acgccaagaa ctgcaaatga acagcctgag agccgaggac acggccgtgt actactgtgc ccgtatagtg ggagcccctt tgactactgg ggccagggaa ccctggtcac cctgagactc ccgccaggct catatactac ctcactgaat gagagggggg cgtctcctca 60 120 180 240 300 360

<210> 2 <211〉 120 <212> 蛋白質 <213> 人類 <4〇〇> 2 Gin Val His Leu Val 1 5

Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val 10

Lys

Pro Gly Gly 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala 20

Ser Gly Phe Thr 25

Phe

Ser Asp Tyr 30

Gly Leu Glu Trp Val 45

Tyr Met His Trp 工le Arg Gin Ala Pro Gly Lys 35 4 0 1

52947 vl/DC 200815475

Ser Tyr lie Ser Arg Ser Gly Ser Leu lie Tyr Tyr Val Asp Ser Val 50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr lie Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Asn 65 70 75 80

Leu Gin Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95

Ala Arg Gly Gly Pro Tyr Ser Gly Ser Pro Phe Asp Tyr Trp Gly Gin 100 105 110

Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 3 <211> 324 <212> DNA <213〉人類 <4〇〇> 3 gacatccaga tgacccagtc tccatcctcc ctgtctgcat ctgtaggaga cagagtcacc 60 atcacttgcc ggccaagtca gagaattagc aggtatttaa attggtatca gcagaaacca 120 gggaaagccc ctaagttcct gatctatgct gcatccagtt tgccaagtgg ggtcccatca 180 aggttcagtg gcagtggatc tgggacagat ttcaccctca ccatcagcac tttacaacct 240 gaagattttg caacttacta ctgtcaacag agttacagta cccctccgtg gacgttcggc 300 caagggacca aggtggaaat caaa 324 <210> 4 <211> 108 <212> 蛋白質 <213〉人類 <4〇〇> 4

Asp lie Gin Met Thr Gin Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 15 10 15

Asp Arg Val Thr lie Thr Cys Arg Pro Ser Gin Arg lie Ser Arg Tyr 20 25 30

Leu Asn Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Phe Leu lie 35 40 45

Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Pro Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 2

52947 vl/DC 200815475

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr lie Ser Thr Leu Gin Pro 65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gin Gin Ser Tyr Ser Thr Pro Pro 85 90 95

Trp Thr Phe Gly Gin Gly Thr Lys Val Glu lie Lys 100 105 <21〇> 5 <211〉 360 <212> DNA <213〉人類 <40〇> 5 caggtgcagc tggtggagtc tgggggaggc ttggtcaagc ctggagggtc cctgagactc tcctgtgcag cctctggatt caccttcagt gactactaca tgaactggat ccgccaggct ccagggaagg ggctggagtg ggtttcattc attagtagta gtggtagtac catatactac gcagactctg tgaagggccg attcaccatc tccagggaca acgccaagaa ctcactgtat ctgcaaatga acagcctgag agccgaggac acggccgtgt attactgtgc gagagatggt catatagcag ctcgtggtat ggacgtctgg ggccaaggga ccacggtcac cgtctcctca <210〉 6 <211〉 120 <212> 蛋白質 <213〉人類 <40〇> 6

Gin Val Gin Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly 15 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp Tyr 20 25 30

Tyr Met Asn Trp lie Arg Gin Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45

Ser Phe lie Ser Ser Ser Gly Ser Thr lie Tyr Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr lie Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr 65 7 0 75 80

Leu Gin Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 3 60 120 180 240 300 360

52947 vl/DC 200815475

Ala Arg Asp Gly His lie Ala Ala Arg Gly Met Asp Val Trp Gly Gin 100 105 110

Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 7 <211〉 336 <212> DNA <213〉人類 <400> 7 gtcatccaga tgacccagtc tccatcctcc ctgtctgcat ctgtaggaga cagagtcacc atcacttgcc gggcgagtca ggtcattacc aattatttag cctggtatca gcagaaacca gggaaagttc ctaagctcct gatctttgct tcatccactt tgcaatcagg ggtcccatct cggttcagtg gcagtggatc tgggacagat ttcactctca ccatcagcag cctgcagcct gaagatgttg cgacttatta ctgtcagaag tataacagtg cccctccaag gactcgatcg atcaccttcg gccaagggac acgactggag attaaa <21〇> 8 <211> 112 <212> 蛋白質 <213〉人類 <400〉 8

Val 工le Gin Met Thr Gin Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 15 10 15

Asp Arg Val Thr lie Thr Cys Arg Ala Ser Gin Val lie Thr Asn Tyr 20 25 30

Leu Ala Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Gly Lys Val Pro Lys Leu Leu lie 35 40 45

Phe Ala Ser Ser Thr Leu Gin Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr lie Ser Ser Leu Gin Pro 65 70 75 80

Glu Asp Val Ala Thr Tyr Tyr Cys Gin Lys Tyr Asn Ser Ala Pro Pro 85 90 95

Arg Thr Arg Ser lie Thr Phe Gly Gin Gly Thr Arg Leu Glu lie Lys 4 60 120 180 240 300 336

52947 vl/DC 200815475 100 105 110 <210〉 9 <211> 360 <212> DNA <213> 人類 <400> 9 caggtgcagc <210〉 10 <211> 120 <212> 蛋白質 <213〉人類 <400> 10

Gin Val Gin Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly 15 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp Tyr 20 25 30

Tyr Met Asn Trp 工le Arg Gin Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 \ ， Ser Tyr lie Ser Ser Ser Gly Ser lie lie Tyr Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr lie Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr 65 70 75 80

Leu Gin Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95

Ala Arg Glu Gly Arg 工le Ala Ala Arg Gly Met Asp Val Trp Gly Gin 100 105 110

Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser 115 120 5

52947 vl/DC 60 120 180 240 300 360 tcctgtgcag ccagggaagg gcagactctg ctgcaaatga cgtatagcag tggtggagtc cctctggatt ggctggagtg tgaagggccg acagcctgag ctcgtggtat tgggggaggc caccttcagt ggtttcatac attcaccatc agccgaggac ggacgtctgg ttggtcaagc gactactaca attagtagta tccagggaca acggccgtgt ggccaaggga ctggagggtc tgaactggat gtggtagtat acgccaagaa attactgtgc ccacggtcac cctgaggctc ccgccaggct catatactac ctcactgtat gagagaaggg cgtctcctca 60 200815475 <210> 11 <211> 324 <212> DNA <213〉 人類 <4〇0> 11 gacatccaga tgacccagtc tccatcctcc ctgtctgcat ctgtaggaga cagagtctcc atcacttgcc ggccaagtca gagctttagc aggtatataa attggtatca gcagaaacca gggaaagccc ctaagctcct gatccatgct gcatccagtt tggtaggtgg ggtcccatca aggttcagtg gcagtggatc tgggacagat ttcactctca ccatcagcag tctgcaacct gaagattttg caacttacta ctgtcaacag acttacagta accccccgat caccttcggc caagggacac gactggagat gaaa <21〇> 12 <211> 108 <212> 蛋白質 <213〉人類 <4〇〇> 12

Asp lie Gin Met Thr Gin Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 15 10 15

Asp Arg Val Ser lie Thr Cys Arg Pro Ser Gin Ser Phe Ser Arg Tyr 20 25 30 工le Asn Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu lie 35 40 45

His Ala Ala Ser Ser Leu Val Gly Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr lie Ser Ser Leu Gin Pro 65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gin Gin Thr Tyr Ser Asn Pro Pro 85 90 95 lie Thr Phe Gly Gin Gly Thr Arg Leu Glu Met Lys 100 105 <21〇> 13 <211> 351 <212> DNA <213〉人類 <400> 13 6 120 180 240 300 324

52947 vl/DC 60200815475 cagctgcagc tgcaggagtc gggcccagga ctggtgaagc cttcggagac cctgtccctc acctgcactg tctctggtga ctccatcagc agttttattt actactgggg ctggatccgc cagcccccag ggaaggggct ggagtggatt gggactattt attatagtgg gagcacctac tacaacccgt ccctcaagag tcgagtcacc atatccgtag acacgtccaa gaaccagttc tccctgaagc tgaggtctgt gaccgccgca gacacggctg tgtattactg tgcgagacat cactgggttt ttgactactg gggccaggga acccaggtca ccgtctcctc a <21〇> 14 <211> 117 <212> 蛋白質 <213〉人類 <4〇0> 14 Gin Leu Gin Leu Gin Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu 15 10 15 120 180 240 300 351

Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Asp Ser lie Ser Ser Phe 20 25 30 lie Tyr Tyr Trp Gly Trp 工le Arg Gin Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu 35 40 45

Trp lie Gly Thr lie Tyr Tyr Ser Gly Ser Thr Tyr Tyr Asn Pro Ser 50 55 60

Leu Lys Ser Arg Val Thr lie Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gin Phe 65 70 75 80 ( Ser Leu Lys Leu Arg Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr \ ， 85 90 95

Cys Ala Arg His His Trp Val Phe Asp Tyr Trp Gly Gin Gly Thr Gin 100 105 110

Val Thr Val Ser Ser 115 <210〉 15 <211〉 321 <212> DNA <213〉人類 <400> 15 gacattgtgc tgactcagtt tccagacttt cagtctgtga ctccaaagga gaaagtcacc atcacttgcc gggccagtca ggtcattggt agtagcttac actggtacca gcagaaacca 60

52947 vl/DC 7 120 180200815475 gatcagtctc cgaagctcct catcaagtat gcttcccagt ccttctcagg ggtcccctcg aggttcagtg gcagtggatc tgggacagat ttcaccctca ccatcaatag cctggaagtt gaagatgctg caacgtatta ctgtcatcag agtactattt taccgtggac gttcggccaa gggaccaagg tggaagtcaa a 240 300 321 <210〉 16 <211〉 1〇7 <212> 蛋白質 <213〉人類 <40〇> 16 Asp 工le Val Leu Thr Gin Phe Pro Asp Phe Gin Ser Val Thr Pro Lys 15 10 15

Glu Lys Val Thr lie Thr Cys Arg Ala Ser Gin Val lie Gly Ser Ser 20 25 30

Leu His Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Asp Gin Ser Pro Lys Leu Leu lie 35 40 45

Lys Tyr Ala Ser Gin Ser Phe Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr 工le Asn Ser Leu Glu Val 65 70 75 80

Glu Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys His Gin Ser Thr lie Leu Pro Trp 85 90 95

Thr Phe Gly Gin Gly Thr Lys Val Glu Val Lys 100 105 <210> 17 <211> 351 <212> DNA <213〉人類 <4〇0> 17 cagctgcagc tgcaggagtc gggcccagga ctggtgaagc cttcggagac cctgtccctc acctgcactg tctctggtgg cttcatcagc agtagtagtt actactgggg ctggatccgc cagcccccag ggaagggact ggagtggatt gggaccatct attatagtgg gaccacctac tacaattcgt ccctgaagag tcgagtcacc atatccgtag acacgtccca gaaccagttc tccctgaagc tgagctctgt gaccgccgca gatacggctg tgtattactg tgcgagacat 60 120 180 240

52947 vl/DC 8 300 200815475 cactgggttt ttgactactg gggccaggga accctggtca ccgtctcctc a 351 <210〉 18 <211〉 117 <212> 蛋白質 <213〉人類 <4〇〇> 18 Gin Leu Gin Leu Gin Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu 15 10 15

Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Gly Phe lie Ser Ser Ser 20 25 30

Ser Tyr Tyr Trp Gly Trp lie Arg Gin Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu 35 40 45

Trp lie Gly Thr lie Tyr Tyr Ser Gly Thr Thr Tyr Tyr Asn Ser Ser 50 55 60

Leu Lys Ser Arg Val Thr lie Ser Val Asp Thr Ser Gin Asn Gin Phe 65 70 75 80

Ser Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr 85 90 95

Cys Ala Arg His His Trp Val Phe Asp Tyr Trp Gly Gin Gly Thr Leu 100 105 110

Val Thr Val Ser Ser 115 <21〇> 19 <211〉 321 <212> DNA <213〉人類 <400> 19 gaagttgtgc tgactcagtc tccagacttt cagtctgtga ctccaaagga gaaaatcacc atcacctgcc gggccagtca gatcattggt actagcttac actggtatca gaagaaacca gatcagtctc caaagctcct catcaagtat gcttcccagt ccttctcagg ggtcccctcg aggttcagtg gcagtggatc tgggacagaa ttcaccctca ccatcaatag cctggaagct gaagatactg caacgtatta ctgtcatcag agtactaatt taccgtggac gttcggccaa gggaccaagg tggaaatcaa a 60 120 180 240 300

52947 vl/DC 9 321 200815475 <21〇> 20 <211> 107 〈212> 蛋白質 <213>人類 <400> 20

Glu Val Val Leu Thr Gin Ser Pro Asp Phe Gin Ser Val Thr Pro Lys 15 10 15

Glu Lys lie Thr lie Thr Cys Arg Ala Ser Gin lie lie Gly Thr Ser 20 25 30

Leu His Trp Tyr Gin Lys Lys Pro Asp Gin Ser Pro Lys Leu Leu lie 35 40 45

Lys Tyr Ala Ser Gin Ser Phe Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr lie Asn Ser Leu Glu Ala 65 7 0 75 80

Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr Cys His Gin Ser Thr Asn Leu Pro Trp 85 90 95

Thr Phe Gly Gin Gly Thr Lys Val Glu lie Lys 100 105 <21〇> 21 <211> 324 <212> DNA <213〉人類 <4〇〇> 21 gacatccaga tgacccagtc tccatcctcc ctgtctgcat ctgtaggaga cagagtcacc atcacttgcc gggcaagtca cagcattacc aggtatataa attggtatca gcagaaacca gggaaagccc ctaacctcct gatctatgct gcatccagtt tgcaaagtgg ggtcccttca aggttcagtg gcagtggatc tgggacagat ttcactctca ccatcagcag tccgcaacct gaagattttg caacttacta ctgtcaacag agttacagtt cccctccgat caccttcggc caagggacac gactggagat taaa <210> 22 <211〉 108 <212> 蛋白質 <213〉人類 <400〉 22 10 60 120 180 240 300

52947 vl/DC 324 200815475

Asp lie Gin Met Thr Gin Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 15 10 15

Asp Arg Val Thr lie Thr Cys Arg Ala Ser His Ser lie Thr Arg Tyr 20 25 30 lie Asn Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Gly Lys Ala Pro Asn Leu Leu lie 35 40 45

Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gin Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr lie Ser Ser Pro Gin Pro 65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gin Gin Ser Tyr Ser Ser Pro Pro 85 90 95 lie Thr Phe Gly Gin Gly Thr Arg Leu Glu lie Lys 100 105 <210〉 23 <211〉 372 <212> DNA <213〉人類 <4〇〇> 23 gaggtgcagc tagtggagtc tgggggaggc ttggtccagc ctggggggtc cctgagactc tcctgtgcag cctctggatt cacctttagt agctattgga tgagctgggt ccgccaggct ccagggaagg ggctggagtg ggtggccaac ataaagcaag atggaagtga gaagtactat f . y , gtggactctg tgaagggccg attcaccatc tccagagaca acgccaagaa ctcactgtat ctgcaaatga acagcctgag agccgaggac acggctgtgt attactgtgc gagatggggg gtttttggtt cggggagtta ttatatccct tttgactact ggggccaggg aaccctggtc accgtctcct ca <210> 24 <211〉 124 <212> 蛋白質 <213〉人類 <40〇> 24

Glu Val Gin Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gin Pro Gly Gly 15 10 15 11 60 120 180 240 300 360 372

52947 vl/DC 200815475

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr 20 25 30

Trp Met Ser Trp Val Arg Gin Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45

Ala Asn lie Lys Gin Asp Gly Ser Glu Lys Tyr Tyr Val Asp Ser Val 50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr lie Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr 65 70 75 80

Leu Gin Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95

Ala Arg Trp Gly Val Phe Gly Ser Gly Ser Tyr Tyr lie Pro Phe Asp 100 105 110

Tyr Trp Gly Gin Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210〉 25 <211> 321 <212> DNA <213〉人類 <400〉 25 gacatccaga tgacccagtc tccatcctca ctgtctgcat ctgtgggaga cagagtcacc atcacttgtc gggcgagtca gggcattagg aattatttag cctggtttca gcagaaacca gggaaagccc ctaagtccct gatctatgct gcatccagtt tgcaaagtgg ggtcccatca acgttcagcg gcagtggatc tgggacacat ttcactctca ccatcagtag tttgcagcct gaagattttg caagttattt ctgccaacag tatgagattt atcctctcac tttcggcgga gggaccaagg tggagatcaa a <210> 26 <211〉 107 <212> 蛋白質 <213〉人類 <400〉 26

Asp lie Gin Met Thr Gin Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15

Asp Arg Val Thr lie Thr Cys Arg Ala Ser Gin Gly 工le Arg Asn Tyr 20 25 30 12 60 120 180 240 300 321

52947 vl/DC 200815475

Leu Ala Trp Phe Gin Gin Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Ser Leu lie 35 40 45

Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gin Ser Gly Val Pro Ser Thr Phe Ser Gly 50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr His Phe Thr Leu Thr lie Ser Ser Leu Gin Pro 65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Ser Tyr Phe Cys Gin Gin Tyr Glu lie Tyr Pro Leu 85 90 95

Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu lie Lys 100 105 <21〇> 27 <211〉 354 <212> DNA <213〉人類 <400> 27 caggtgcagc tggtggagtc tgggggaggc gtggtccagc ctgggaggtc cctgagactc tcctgtgcag cgtctggatt caccttcagt agctatggca tgcactgggt ccgccaggct ccaggcaagg ggctggagtg ggtggcagtt atatggtatg atagaagtaa taaatactat gcagactccg tgaagggccg gttcaccatc tccagagaca attccaagaa cacgctgtat ctgcaaatgg acagcctgag agccgaggac acggctgtgt attactgtgc ggggggacga tcccggggag cctttgacta ctggggccag ggaaccctgg tcaccgtctc ctca <21〇> 28 \ ^ <211> 118 <212> 蛋白質 <213〉人類 <4〇〇> 28

Gin Val Gin Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gin Pro Gly Arg ' 15 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr 20 25 30

Gly Met His Trp Val Arg Gin Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45

Ala Val lie Trp Tyr Asp Arg Ser Asn Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60 13 60 120 180 240 300 354

52947 vl/DC 200815475

Lys Gly Arg Phe Thr lie Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80

Leu Gin Met Asp Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95

Ala Gly Gly Arg Ser Arg Gly Ala Phe Asp Tyr Trp Gly Gin Gly Thr 100 105 110

Leu Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 29 <211> 321 <212> DNA <213〉人類 <400> 29 gacatccaga tgacccagtc tccatcttcc gtgtctgcat ctgtaggaga cagagtcacc atcacttgtc gggcgagtca gggtattagc agctggttag cctggtatca gcagaaaccc gggaaagccc ctaagctcct gatttatgct gcatccagtt tgcaaagtgg ggtcccatca agattcagcg gcagtggctc tgggacagat ttcactctca ccatcagcag cctgcagcct gaagattttg caacttacta ttgtcaacgg actaacagtt tccctcggac gttcggccaa gggaccaagg tggaaatcaa a <210> 30 <211> 107 <212> 蛋白質 <213〉人類 <4〇〇> 30

Asp lie Gin Met Thr Gin Ser Pro Ser Ser Val Ser Ala Ser Val Gly 15 10 15

Asp Arg Val Thr lie Thr Cys Arg Ala Ser Gin Gly lie Ser Ser Trp 20 25 30

Leu Ala Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu lie 35 40 45

Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gin Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr lie Ser Ser Leu Gin Pro 14 60 120 180 240 300 321

52947 vl/DC 200815475 65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gin Arg Thr Asn Ser Phe Pro Arg 85 90 95

Thr Phe Gly Gin Gly Thr Lys Val Glu lie Lys 100 105 <210> 31 <211> 351 <212> DNA <213〉人類 <400> 31 cagctgcagt tgcaggagtc gggcccagga ctggtgaagc cttcggagac cctgtccctc acctgcactg tctctggtgg ctccatcagc agtagtaatt actactgggg ctggatccgc cagcccccag ggaaggggct ggagtggatt gggactatat attatactgg gagtacctac tacaacccgt ccctcaagag tcgagtcacc atatccgtag acacgtccaa gaaccagttc tccctgaagt tgagctctgt gaccgccgca gacacggctg tgtattactg tgcgagacat cactgggttt ttgactactg gggccaggga accctggtca ccgtctcctc a <21〇> 32 <211> 117 <212〉 蛋白質 <213〉人類 <400> 32

Gin Leu Gin Leu Gin Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu 15 10 15 、’ Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Gly Ser lie Ser Ser Ser 20 25 30

Asn Tyr Tyr Trp Gly Trp 工le Arg Gin Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu 35 40 45

Trp lie Gly Thr lie Tyr Tyr Thr Gly Ser Thr Tyr Tyr Asn Pro Ser 50 55 60

Leu Lys Ser Arg Val Thr lie Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gin Phe 65 70 75 80

Ser Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr 85 90 95 15 60 120 180 240 300 351

52947 vl/DC 200815475

Cys Ala Arg His His Trp Val Phe Asp Tyr Trp Gly Gin Gly Thr Leu 100 105 110

Val Thr Val Ser Ser 115 <21〇> 33 <211> 321 <212> DNA <213〉人類 <4〇〇> 33 gaaattgtgc tgactcagtc tccagacttt ctgtctgtga ctccaaagga gaaagtcacc atcacctgcc gggccagtca gatcattggt agtagcttac actggtacca acagaaacca gatcagtctc caaaactcct catcaagtat gcttcccagt ccttctcagg ggtcccctcg aggttcagtg gcagtggatc tgggacagat ttcaccctca ccctcaatag cctggaagct gaagatgctg caacgtatta ctgtcatcag agtactattt taccgtggac gttcggccaa gggaccaagg tggaaatcaa a <21〇> 34 <211> 107 <212> 蛋白質 <213〉人類 <4〇〇> 34

Glu 工le Val Leu Thr Gin Ser Pro Asp Phe Leu Ser Val Thr Pro Lys 15 10 15

Glu Lys Val Thr lie Thr Cys Arg Ala Ser Gin lie lie Gly Ser Ser 20 25 30

Leu His Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Asp Gin Ser Pro Lys Leu Leu lie 35 40 45

Lys Tyr Ala Ser Gin Ser Phe Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Leu Asn Ser Leu Glu Ala 65 70 75 80

Glu Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys His Gin Ser Thr lie Leu Pro Trp 85 90 95

Thr Phe Gly Gin Gly Thr Lys Val Glu lie Lys 100 105 16 60 120 180 240 300 321

52947 vl/DC 60 200815475 <210> 35 <211> 351 <212> DNA <213> 人類 <400> 35 cagctgcagt tgcaggagtc gggcccagga ctggtgaagc cttcggagac cctgtccctc acctgcactg tctctggtgg ctccatcagc agtagtactt actactgggg ctggatccgc cagcccccag ggaaggggct ggagtggatt gggactatat attatagtgg gagcacctac tacaacccgt ccctcaagag tcgagtcacc atatccgtag acacgtccaa gaaccagttc tccctgaagc tgaactctgt gaccgccgca gacacggctg tgtattactg tgcgagacat cactgggttt ttgactactg gggccaggga accctggtca ccgtctcctc a <21〇> 36 <211> 117 <212> 蛋白質 <213〉人類 <4〇0> 36

Gin Leu Gin Leu Gin Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu 15 10 15

Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Gly Ser lie Ser Ser Ser 20 25 30

Thr Tyr Tyr Trp Gly Trp lie Arg Gin Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu 35 40 45

Trp lie Gly Thr lie Tyr Tyr Ser Gly Ser Thr Tyr Tyr Asn Pro Ser 50 55 60

Leu Lys Ser Arg Val Thr lie Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gin Phe 65 70 75 80

Ser Leu Lys Leu Asn Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr 85 90 95

Cys Ala Arg His His Trp Val Phe Asp Tyr Trp Gly Gin Gly Thr Leu 100 105 110

Val Thr Val Ser Ser 115 <210〉 37 <211> 321 17 120 180 240 300 351

52947 vl/DC 200815475 <212> DNA <213〉人類 <4〇〇> 37 gaaattgtgc tgactcagtc tccagacttt ctgtctgtga ctccaaagga gaaagtcacc 60 atcacctgcc gggccagtca gatcattggt agtagtttac actggtacca acagaaacca 120 gatcagtctc caaacctcct catcaagtat gcttctcagt ccgtctcagg ggtcccctcg 180 aggttcagtg gcagtgggtc tgggacagat ttcaccctca ccctcaatag cctggaagct 240 gaagatgctg caacgtatta ctgtcatcag agtactattt taccgtggac gttcggccaa 300 gggaccaagg tggaaatcaa a 321 <210> 38 <211> 107 <212> 蛋白質 <213〉人類 <4〇〇> 38

Glu 工le Val Leu Thr Gin Ser Pro Asp Phe Leu Ser Val Thr Pro Lys 15 10 15

Glu Lys Val Thr lie Thr Cys Arg Ala Ser Gin lie lie Gly Ser Ser 20 25 30

Leu His Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Asp Gin Ser Pro Asn Leu Leu lie 35 40 45

Lys Tyr Ala Ser Gin Ser Val Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Leu Asn Ser Leu Glu Ala 65 70 75 80

Glu Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys His Gin Ser Thr lie Leu Pro Trp 85 90 95

Thr Phe Gly Gin Gly Thr Lys Val Glu lie Lys 100 105 <21〇> 39 <211> 360 <212> DNA <213> 人類 <4〇〇> 39 caggtgcagc tggtggagtc tgggggaggc ttggtcaagc ctggagggtc cctgagactc 60 18

52947 vl/DC 200815475 tcctgtgcag ccagggaagg gcagactctg ctgcaaatga catatagcag cctctggatt ggctggagtg tgaagggccg acagcctgag ctcgtggtat caccttcagg ggttgcattc attcaccatc agccgaggac ggacgtctgg gactattaca attagtagta tccagggaca acggccgtgt ggccaaggga tgagctggat gtggtagtat acgccaagaa attactgtgc ccacggtcac ccgccaggct tatatactac ctcactgttt gagagatggg cgtctcctca 120 180 240 300 360 <21〇> 40 <211〉 120 <212> 蛋白質 <213〉人類 * <4〇〇> 40

Gin Val Gin Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly * 15 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Arg Asp Tyr 20 25 30

Tyr Met Ser Trp 工le Arg Gin Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45

Ala Phe lie Ser Ser Ser Gly Ser lie lie Tyr Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr lie Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Phe 65 70 75 80

Leu Gin Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95

Ala Arg Asp Gly His 工le Ala Ala Arg Gly Met Asp Val Trp Gly Gin 100 105 110

Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser 115 120 〈210〉 41 <211> 324 <212> DNA <213〉人類 <400> 41 gacatccaga tgacccagtc tccatcctcc ctgtctgcat ctgtaggaga cagagtcacc atcacttgcc gggcaagtca gagcattaac aagtatataa attggtatca gcagaaacca gggaaagccc ctaagctcct gatttatgct gcatccagtt tgcaaagtgg ggtcccatca 19 60 120 180

52947 vl/DC 240200815475 aggttcaatg gcagtggatc tgggacagat ttcactttca ccatcaacac tctgcaacct gaagattttg caacttacta ctgtcagcag acttacagta cccctccgat caccttcggc caagggacac gactggagat taaa 300 324 <210> 42 <211> 108 <212> 蛋白質 <213〉人類 <4〇〇> 42 Asp lie Gin Met Thr Gin Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 15 10 15

Asp Arg Val Thr lie Thr Cys Arg Ala Ser Gin Ser lie Asn Lys Tyr 20 25 30 lie Asn Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu lie 35 40 45

Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gin Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Asn Gly 50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Phe Thr lie Asn Thr Leu Gin Pro 65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gin Gin Thr Tyr Ser Thr Pro Pro 85 90 95 lie Thr Phe Gly Gin Gly Thr Arg Leu Glu lie Lys 100 105 <210> 43 <211〉 360 <212> DNA <213〉人類 <400〉 43 caggtgcagc tggtggagtc tgggggaggc ttggtcaagc ctggagggtc cctgagactc tcctgtgcag cctctggatt caccttcagt gactactaca tgaactggat ccgccaggct ccagggaagg ggctggagtg ggtttcattc attagtagta gtggtagtac catatactac gcagactctg tgaagggccg attcaccatc tccagggaca acgccaagaa ctcactgtat ctgcaaatga acagcctgag agccgaggac acggccgtgt attactgtgc gagagatggg catatagcag ctcgtggtat ggacgtctgg ggccaaggga ccacggtcac cgtctcctca 60 120 180 240 300

52947 vl/DC 20 360 200815475 <210> 44 <211> 120 <212>蛋白質 <213〉人類 <4〇〇> 44

Gin Val Gin Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly 1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp Tyr 20 25 30

Tyr Met Asn Trp 工le Arg Gin Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45

Ser Phe lie Ser Ser Ser Gly Ser Thr lie Tyr Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr lie Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr 65 70 75 80

Leu Gin Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95

Ala Arg Asp Gly His 工le Ala Ala Arg Gly Met Asp Val Trp Gly Gin 100 105 110

Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser 115 120 $ <210> 45 i J 〈211〉324

<212> DNA <213>人類 <40〇> 45 gacatccaga tgacccagtc tccatcctcc ctgtctgcat ctgtaggaga cagagtcacc " atcacttgcc gggcaagtca gagttttagc aggtatataa attggtatca gcagaaacca gggaaagccc ctaaactcct gatctatgct gcatccagtt tgcaaggtgg ggtcccatca aggttcagtg gcagtggatc tgggacagat ttcactctcg ccatcagcag tctgcaacct gaagattttg caacttacta ctgtcaacag acttacagta cccctccgat caccttcggc caagggacac gactggagat taaa <210> 46 <211〉 108 21 60 120 180 240 300

52947 vl/DC 324 200815475 <212> 蛋白質 <213〉人類 <400> 46

Asp lie Gin Met Thr Gin Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15

Asp Arg Val Thr lie Thr Cys Arg Ala Ser Gin Ser Phe Ser Arg Tyr 20 25 30 工le Asn Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu lie 35 40 45

Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gin Gly Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Ala lie Ser Ser Leu Gin Pro 65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gin Gin Thr Tyr Ser Thr Pro Pro 85 90 95 lie Thr Phe Gly Gin Gly Thr Arg Leu Glu lie Lys 100 105 <210> 47 <211〉 360 <212> DNA <213〉人類 <400> 47 caggtgcagc tggtggagtc tgggggaggc ttggtcaagc ctggagggtc cctgagactc tcctgtgcag cctctggatt caccttcagt gactactaca tgaactggat ccgccaggct ccagggaagg ggctggagtg ggtttcatat attagtagta gtggtagtat tatatactac gcagactctg tgaagggccg attcaccatc tccagggaca acgccaagaa ctcactgtat ctgcaaatga acagcctgag agccgaggac acggccgtgt attactgtgc gagagatggg cgtatagtag ctcgtggtat ggacgtctgg ggccaaggga ccacggtcac cgtctcctca <210〉 48 <211> 120 <212> 蛋白質 <213〉人類 <40〇> 48

Gin Val Gin Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly 22 60 120 180 240 300 360

52947 vl/DC 200815475 1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp Tyr 20 25 30

Tyr Met Asn Trp lie Arg Gin Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45

Ser Tyr lie Ser Ser Ser Gly Ser lie lie Tyr Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr lie Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr 65 70 75 80

Leu Gin Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95

Ala Arg Asp Gly Arg 工le Val Ala Arg Gly Met Asp Val Trp Gly Gin 100 105 110

Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210〉 49 <211> 324 <212> DNA <213〉人類 <4〇0> 49 gacatccaga tgacccagtc tccatcctcc ctgtgtgcat ctgtaggaga cagagtcacc atcacttgcc gggcaagtcg gagcattacc aggtatttaa attggtatca gcagaaacca \ / gggaaagccc ctaagctcct gatctatggt gcatccagtt tgcaaagtgg ggtcccatcc aggttcagtg gcagtggatc tgggacagat ttcactctca ccatcagcag tctgcaacct gaagattttg caacttacta ctgtcaacag agttacagta cccctccgat caccttcggc caagggacac gactggagat taaa <210〉 50 <211〉 108 <212> 蛋白質 <213〉人類 <400> 50

Asp lie Gin Met Thr Gin Ser Pro Ser Ser Leu Cys Ala Ser Val Gly 15 10 15 23 60 120 180 240 300 324

52947 vl/DC 200815475

Asp Arg Val Thr lie Thr Cys Arg Ala Ser Arg Ser lie Thr Arg Tyr 20 25 30

Leu Asn Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu lie 35 40 45

Tyr Gly Ala Ser Ser Leu Gin Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr lie Ser Ser Leu Gin Pro 65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gin Gin Ser Tyr Ser Thr Pro Pro 85 90 95 lie Thr Phe Gly Gin Gly Thr Arg Leu Glu lie Lys 100 105 <210〉 51 <211〉 363 <212> DNA <213〉人類 <400〉 51 caggtgcagc tggtggagtc tgggggaggc gtggtccagc ctgggaggtc cctgagactc tcctgtgcag cgtctggatt ctccttcagt atctatggca tgcactgggt ccgccaggct ccaggcaagg ggctggagtg ggtggcagtt atttggtttg atggtagtaa taaatactat gcagactccg tgaagggccg attcaccatc tccagagaca attccaagaa cacgctgtat ctgcaaatga acagcctgag agccgaggac acggctttgt attactgtgc gagagataag gcgtcttact atggttcggg gatggactac tggggccagg gaaccctggt caccgtctcc tea <21〇> 52 <211> 121 <212> 蛋白質 <213>人類 <4〇0> 52

Gin Val Gin Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gin Pro Gly Arg 15 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Ser Phe Ser lie Tyr 20 25 30

Gly Met His Trp Val Arg Gin Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 24 60 120 180 240 300 360 363

52947 vl/DC 200815475 35 40 45 Ala Val 工le Trp Phe Asp Gly Ser Asn Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr lie Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80

Leu Gin Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Leu Tyr Tyr Cys 85 90 95

Ala Arg Asp Lys Ala Ser Tyr Tyr Gly Ser Gly Met Asp Tyr Trp Gly 100 105 110 /

Gin Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210〉 53 <211> 327 <212> DNA <213〉人類 <4〇〇> 53 gaaattgtgt tgacgcagtc tccaggcacc ctgtctttgt ctccagggga aagagccacc ctctcctgca gggccagtca gagtgttagc agcacctact tagcctggta ccagcacaga cctggccagg ctcccaggct cctcatctct ggtgcatcca ggagggccac tggcatccca gacaggttca gtggcagtgg gtctgggaca gacttcactc tcaccatcag cagactggag cctgaagatt ttgcagtgta ttactgtcag cactatggta gctcattcac gtggacgttc ggccagggga ccaaggtgga aatcaaa 60 120 180 240 300 327

<210> 54 <211> 109 〈212> 蛋白質 <213〉人類 <400> 54 Glu lie Val Leu Thr Gin Ser Pro Gly Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly 15 10 15

Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gin Ser Val Ser Ser Thr 20 25 30

Tyr Leu Ala Trp Tyr Gin His Arg Pro Gly Gin Ala Pro Arg Leu Leu 35 40 45

52947 vl/DC 25 200815475

He Ser Gly Ala Ser Arg Arg Ala Thr Gly lie Pro Asp Arg Phe Ser 50 55 60

Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr lie Ser Arg Leu Glu 65 70 7 5 80

Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gin His Tyr Gly Ser Ser Phe 85 90 95

Thr Trp Thr Phe Gly Gin Gly Thr Lys Val Glu lie Lys 100 105 <210> 55 <211〉 351 <212> DNA <213〉 人類 <400> 55 gaggtgcagt tcctgtgcag ccagggaagg gtggactctg ctgcaaatga atgtactact tggtggagag tgggggaggc ttggtccagc ctggggggtc cctgagactc cctctggatt cacctttagt aacttttgga tgagctgggt ccgccaggct ggctggagtg ggtggccaac ataaagcacg gtggaagtga gaaatactat tgaagggccg attcaccatc tccagagaca acgccaagaa ctcactgtat acagactgag agccgaggac acggctgtgt attactgtgc gagagatcct ttgactactg gggccaggga accctggtca ccgtctcctc a 60 120 180 240 300 351 <210〉 56 <211> 117 <212> 蛋白質 <213〉人類 <40〇> 56 Glu Val Gin Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gin Pro Gly Gly 15 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asn Phe 20 25 30

Trp Met Ser Trp Val Arg Gin Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45

Ala Asn lie Lys His Gly Gly Ser Glu Lys Tyr Tyr Val Asp Ser Val 50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr lie Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr 65 70 75 80

52947 vl/DC 26 200815475

Leu Gin Met Asn Arg Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95

Ala Arg Asp Pro Met Tyr Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly Gin Gly Thr Leu 100 105 110

Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 57 <211> 321 <212> DNA <213〉人類 <400> 57 gacatccaga tgacccagtc tccatcctcc ctgtctgcat ctgtaggaga cagagtcacc atcacttgcc gggcaagtca ggacattaga aatgatttag actggtatca gcagaaacca gggaaagccc ctaagcgcct gatctatgct gcatccagtt tgcaaagtgg ggtcccatca aggttcagcg gcagtggatc tgggacagaa ttcactctca caatcagcag cctgcagcct gaagattttg caacttatta ctgtctacag cataatggtt accctcgcag ttttggccag gggaccaagc tggagatcaa a <21〇> 58 <211〉 107 <212> 蛋白質 <213〉人類 <4〇〇> 58

Asp lie Gin Met Thr Gin Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 15 10 15

Asp Arg Val Thr lie Thr Cys Arg Ala Ser Gin Asp lie Arg Asn Asp 20 25 30

Leu Asp Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Arg Leu lie 35 40 45

Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gin Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr lie Ser Ser Leu Gin Pro 65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Leu Gin His Asn Gly Tyr Pro Arg 85 90 95 27 60 120 180 240 300 321

52947 vl/DC 200815475

Ser Phe Gly Gin Gly Thr Lys Leu Glu lie Lys 100 105 <210> 59 <211> 354 <212> DNA <213> 人類 <40〇> 59 caggtgcagc tggtggagtc tgggggaggc gtggtccagc ctgggaggtc cctgagactc tcctgtgcag cgtctggatt caccttcagt agctatggca tgcactgggt ccgccaggct ccaggcaagg ggctggagtg ggtggcagtt atatggtatg atagaagtaa taaatactat gcagactccg tgaagggccg attcaccatc tccagagaca attccaagaa cacgctgtat ctgcaaatga acagcctgag agccgaggac acggctgtgt attactgtgc ggggggacga tcccggggag cctttgacta ctggggccag ggaaccctgg tcaccgtctc ctca <210〉 60 <211> 118 <212> 蛋白質 <213〉人類 <4〇〇> 60

Gin Val Gin Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gin Pro Gly Arg 1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr 20 25 30

Gly Met His Trp Val Arg Gin Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45

Ala Val lie Trp Tyr Asp Arg Ser Asn Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr lie Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80

Leu Gin Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95

Ala Gly Gly Arg Ser Arg Gly Ala Phe Asp Tyr Trp Gly Gin Gly Thr 100 105 110

Leu Val Thr Val Ser Ser 28 60 120 180 240 300 354

52947 vl/DC 60 115 200815475 <210> 61 <211> 321 <212> DNA <213〉人類 <4〇0> 61 gacatccaga tgacccagtc tccatcttcc gtgtctgcat ctgtaggaga cagagtcacc atcacttgtc gggcgagtca gggtattagc agttggttag cctggtatca gcagaaacca gggaaagccc ctaagctcct gatctttgct gcatccagtt tgcaaagtgg ggtcccatca agattcagcg gcagtggatc tgggacagat ttcactctca ccatcagcag cctgcagcct gaagattttg caacttacta ttgtcaacgg actaacagtt tccctcggac gttcggccaa gggaccaagg tggaaatcaa a <210> 62 <211> 107 <212>蛋白質 <213〉人類 <400> 62

Asp lie Gin Met Thr Gin Ser Pro Ser Ser Val Ser Ala Ser Val Gly 15 10 15

Asp Arg Val Thr lie Thr Cys Arg Ala Ser Gin Gly lie Ser Ser Trp 20 25 30

Leu Ala Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu lie 35 40 45

Phe Ala Ala Ser Ser Leu Gin Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr lie Ser Ser Leu Gin Pro 65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gin Arg Thr Asn Ser Phe Pro Arg 85 90 95

Thr Phe Gly Gin Gly Thr Lys Val Glu lie Lys 100 105

<210〉 63 <211> 363 <212> DNA 29 120 180 240 300 321

52947 vl/DC 60 200815475 <213〉人類 <4〇〇> 63 gaggtgcagc tggtggagtc tgggggaggc ttggtacagc ctggggggtc cctgagactc tcctgtgcag cctctggatt caccttcagt agctatagca tgaactgggt ccgccaggct ccagggaagg ggctggagtg ggtttcattc attagtggta gtagtagtac catgtactac gcagactctg tgaagggccg attcaccatc tccagagaca atgccaagaa ctcactgtat ctgcaaatga acagcctgag agacgaggac acggctgtgt attactgtgc gagattacga tattttgact ggtcatatgc ttttgatatc tggggccaag ggacaatggt caccgtctct tea <210> 64 <211> 121 <212> 蛋白質 <213〉人類 <4〇〇> 64

Glu Val Gin Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gin Pro Gly Gly 15 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr 20 25 30

Ser Met Asn Trp Val Arg Gin Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45

Ser Phe lie Ser Gly Ser Ser Ser Thr Met Tyr Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr lie Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr 65 70 75 80

Leu Gin Met Asn Ser Leu Arg Asp Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95

Ala Arg Leu Arg Tyr Phe Asp Trp Ser Tyr Ala Phe Asp lie Trp Gly 100 105 110

Gin Gly Thr Met Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 65 <211> 321

<212> DNA 30 120 180 240 300 360 363

52947 vl/DC 60200815475 <213〉人類 <4〇〇> 65 gacatccaga tgacccagtc tccatcttcc gtgtctacat ctgtaggaga cagagtcacc atcacttgtc gggcgagtca gggtattcgc agctggttag cctggtatca gcagagacca gggaaagccc ctaagctcct gatctatgct gcatccagtt tacaaaatgg ggtcccatca aggttcagcg gcagtggatc tgggacagat ttcactctca ccatcagcag cctgcagcct gaagattttg caacttactt ttgtcaacag gctaccagtt tcccattcac tttcggccct gggaccaaag tggatatcaa c 120 180 240 300 321 <210> 66 <211> 1〇7 <212> 蛋白質 <213〉人類 <4〇〇> 66 Asp lie Gin Met Thr Gin Ser Pro Ser Ser Val Ser Thr Ser Val Gly 15 10 15

Asp Arg Val Thr lie Thr Cys Arg Ala Ser Gin Gly 工le Arg Ser Trp 20 25 30

Leu Ala Trp Tyr Gin Gin Arg Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu lie 35 40 45

Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gin Asn Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr lie Ser Ser Leu Gin Pro 65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Phe Cys Gin Gin Ala Thr Ser Phe Pro Phe 85 90 95

Thr Phe Gly Pro Gly Thr Lys Val Asp lie Asn 100 105 <210〉 67 <211> 354 <212> DNA <213〉人類 <4〇〇〉67 caggtgcagc tggtggagtc tgggggaggc gtggtccagc ctgggaggtc cctgagactc tcctgtgcag cgtctggatt caccttcagt agctatggca tgcactgggt ccgccaggct 60 120

52947 vl/DC 31 200815475 ccaggcaagg gtagactccg ctgcaaatga tcccggggag ggctggagtg tgaagggccg acagcctgag cctttgacta ggtggcagtt attcaccatc agccgaggac ctggggccag atatggtatg tccagagaca acggctgtgt ggaaccctgg atagaagtaa attccaagaa attactgtgc tcaccgtctc taaatactat cacgttgtat ggggggacga ctca 180 240 300 354 <21〇> 68 <211〉 118 <212> 蛋白質 <213〉人類 <4〇〇> 68

Gin Val Gin Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gin Pro Gly Arg 15 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr 20 25 30

Gly Met His Trp Val Arg Gin Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45

Ala Val lie Trp Tyr Asp Arg Ser Asn Lys Tyr Tyr Val Asp Ser Val 50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr lie Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80

Leu Gin Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95

Ala Gly Gly Arg Ser Arg Gly Ala Phe Asp Tyr Trp Gly Gin Gly Thr 100 105 110

Leu Val Thr Val Ser Ser 115 <210〉 69 <211〉 321 <212> DNA <213〉人類 <400〉 69 gacatccaga tgacccagtc tccatcttcc gtgtctgcat ctgtaggaga cagagtcacc atcacttgtc gggcgagtca ggatattagc agctggttag cctggtatca gcagaaacca gggaaagccc ctaagctcct gatctttgct gcatccagtt tgcaaagtgg ggtcccatca 32 60 120 180

52947 vl/DC 240200815475 agattcagcg gcagtggatc tgggacagat ttcactctca ccatcagcag cctgcagcct gaagattttg caacttacta ttgtcaacgg actagcagtt tccctcggac gttcggccaa gggaccaagg tggaaatcaa a 300 321 <210> 70 <211> 107 <212> 蛋白質 <213〉人類 <4〇〇> 70 Asp lie Gin Met Thr Gin Ser Pro Ser Ser Val Ser Ala Ser Val Gly 15 10 15

Asp Arg Val Thr lie Thr Cys Arg Ala Ser Gin Asp lie Ser Ser Trp 20 25 30

Leu Ala Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu lie 35 40 45

Phe Ala Ala Ser Ser Leu Gin Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr lie Ser Ser Leu Gin Pro 65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gin Arg Thr Ser Ser Phe Pro Arg 85 90 95

Thr Phe Gly Gin Gly Thr Lys Val Glu lie Lys 100 105 <210〉 71 <211> 354 <212> DNA <213〉人類 <4〇〇> 71 caggtgcagc tggtggagtc tgggggaggc gtggtccagc ctgggaggtc cctgagactc tcctgtgcag cgtctggatt caccttcagt agctatggca tgcactgggt ccgccaggct ccaggcaagg ggctggagtg ggtggcagtt atatggtatg atagaagtaa taaatactat gcagactccg tgaagggccg attcaccatc tccagagaca attccaagaa cacgctgtat ctgcaaatga acagcctgag agccgaggac acggctgtat attactgtgc ggggggacga tcccggggag cctttgacta ctggggccag ggaaccctgg tcaccgtctc ctca 60 120 180 240 300

52947 vl/DC 33 354 200815475 <210> 72 <211> 118 <212> 蛋白質 <213〉人類 <400> 72

Gin Val Gin Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gin Pro Gly Arg 15 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr 20 25 30

Gly Met His Trp Val Arg Gin Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45

Ala Val lie Trp Tyr Asp Arg Ser Asn Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr lie Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80

Leu Gin Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95

Ala Gly Gly Arg Ser Arg Gly Ala Phe Asp Tyr Trp Gly Gin Gly Thr 100 105 110

Leu Val Thr Val Ser Ser 115 <21〇> 73 <211> 321 <212> DNA <213〉人類 <40〇> 73 gacatccaga tgacccagtc tccatcttcc gtgtctgcat ctgttggaga cagagtcacc atcacttgtc gggcgagtca gggtattagc agctggttag cctggtatca gcagaaaccc gggaaagccc ctaacctcct gatttatgct gcatccagtt tgcaaagtgg ggtcccatca agattcagcg gcagtggatc tgggacagat ttcactctca ccatcagcag cctgcagcct gaagattttg caacttacta ttgtcaacgg actaacaatt tccctcggac gttcggccaa gggaccaagg tggaaatcaa a <210> 74 <211> 107 34 60 120 180 240 300

52947 vl/DC 321 200815475 <212>蛋白質 <213〉人類 <400> 74

Asp lie Gin Met Thr Gin Ser Pro Ser Ser Val Ser Ala Ser Val Gly 15 10 15

Asp Arg Val Thr lie Thr Cys Arg Ala Ser Gin Gly lie Ser Ser Trp 20 25 30

Leu Ala Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Gly Lys Ala Pro Asn Leu Leu lie 35 40 45

Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gin Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr lie Ser Ser Leu Gin Pro 65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gin Arg Thr Asn Asn Phe Pro Arg 85 90 95

Thr Phe Gly Gin Gly Thr Lys Val Glu lie Lys 100 105 <210〉 75 <211> 363 <212> DNA <213> 人類 <4〇〇> 75 gaggtgcagc tggtggagtc tgggggaggc ttggtacagc ctggggggtc cctgagactc 60 tcctgtgcag cctctggatt caccttcagt agetatagea tgaactgggt ccgccaggct 120 ccagggaagg ggctggagtg ggtttcatac attagtggta gtagtactac catgtactac 180 gcagactctg tgaagggccg attcaccatc tccagagaca atgccaagaa ctcactgtat 240 ctgcaaatga acagcctgag agaegaggae acggctgtgt attactgtgc gagattaega 300 cattttgact ggtcatatgc ttttgatatc tggggccaag ggacaatggt caccgtctct 360 tea 363

<21〇> 76 〈211〉 121 <212> 蛋白質 <213〉人類 <400> 76 35

52947 vl/DC 200815475

Glu Val Gin Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gin Pro Gly Gly 15 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr 20 25 30

Ser Met Asn Trp Val Arg Gin Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45

Ser Tyr lie Ser Gly Ser Ser Thr Thr Met Tyr Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr lie Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr 65 70 75 80

Leu Gin Met Asn Ser Leu Arg Asp Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95

Ala Arg Leu Arg His Phe Asp Trp Ser Tyr Ala Phe Asp lie Trp Gly 100 105 110

Gin Gly Thr Met Val Thr Val Ser Ser 115 120 <21〇> 77 <211〉 321 <212> DNA <213> 人類 <4〇〇> 77 gacatccaga tgacccagtc tccatcttcc gtgtctacat ctgtaggaga cagagtcacc 60 atcacttgtc gggcgagtca gggtattagc agctggttag cctggtatca gcagagacca 120 gggaaagccc ctaagctcct gatctatgct gcatccagtt tgcaaagtgg ggtcccatca 180 aggttcagcg gcagtggatc tgggacagat ttcactctca ccatcagcag cctgcagcct 240 gaagattttg caacttactt ttgtcaacag gctaccagtt tcccattcac tttcggccct 300 gggaccaaag tgggtatcaa a 321 <21〇> 78 <211〉 107 <212> 蛋白質 <213>人類 <4〇〇> 78

Asp lie Gin Met Thr Gin Ser Pro Ser Ser Val Ser Thr Ser Val Gly 15 10 15 36

52947 vl/DC 200815475

Asp Arg Val Thr lie Thr Cys Arg Ala Ser Gin Gly lie Ser Ser Trp 20 25 30

Leu Ala Trp Tyr Gin Gin Arg Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu lie 35 40 45

Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gin Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr lie Ser Ser Leu Gin Pro 65 70 7 5 80

Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Phe Cys Gin Gin Ala Thr Ser Phe Pro Phe 85 90 95

Thr Phe Gly Pro Gly Thr Lys Val Gly lie Lys 100 105 <210> 79 <211> 366 <212> DNA <213〉人類 <40〇> 79 caggtgcagc tggtgcagtc tggggctgag gtgaagaaac ctggggcctc agtgaaggtc tcctgcaagg cttctggata caccttcacc ggctaccata tgcactgggt gcgacaggcc cctggacaag ggcttgagtg gatgggatgg atcaacccta acagtggtgg cacaaactat gcacagaagt ttcagggcag ggtcaccatg accagggaca cgtccatcag cacagcctac atggagctga gcaggctgag atctgacgac acggccgtgt attactgtgc gagagatagg gctttttgga gtggttatca cggtttggac gtctggggcc aagggaccac ggtcaccgtc tcctca <210> 80 <211〉 122 〈212>蛋白質 〈213>人類 <4〇〇> 80

Gin Val Gin Leu Val Gin Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 15 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Gly Tyr 20 25 30 37 60 120 180 240 300 360 366

52947 vl/DC 200815475

His Met His Trp Val Arg Gin Ala Pro Gly Gin Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45

Gly Trp lie Asn Pro Asn Ser Gly Gly Thr Asn Tyr Ala Gin Lys Phe 50 55 60

Gin Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser lie Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Arg Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95

Ala Arg Asp Arg Ala Phe Trp Ser Gly Tyr His Gly Leu Asp Val Trp 100 105 110

Gly Gin Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser 115 120 <21〇> 81 <211> 321 <212> DNA <213〉人類 <4〇〇〉81 gacatccaga tgacccagtc tccatcctcc ctgtctgcat ctgtaggaga cagagtcacc atcacttgcc gggcgagtca ggtcattgcc aattatttag cctggtatca gcagaaacca ggaaaagttc ctaaactcct gatctatgct gcatccactt tgcaatcagg ggtcccatct cggttcagtg gcagtggatc tgggacagat ttcactctca ccatcagcag cctgcagcct gaagatgttg caacttatta ctgtcacacg tataagagtg ccccgtggac gttcggccaa gggaccaagg tggaaatcaa a <21〇> 82 <211> 107 <212> 蛋白質 <213〉人類 <4〇〇> 82

Asp lie Gin Met Thr Gin Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 15 10 15

Asp Arg Val Thr lie Thr Cys Arg Ala Ser Gin Val lie Ala Asn Tyr 20 25 30

Leu Ala Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Gly Lys Val Pro Lys Leu Leu lie 35 40 45 38 60 120 180 240 300 321

52947 vl/DC 200815475

Tyr Ala Ala Ser Thr Leu Gin Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr lie Ser Ser Leu Gin Pro 65 70 75 80

Glu Asp Val Ala Thr Tyr Tyr Cys His Thr Tyr Lys Ser Ala Pro Trp 85 90 95

Thr Phe Gly Gin Gly Thr Lys Val Glu lie Lys 100 105 60 120 180 240 300 357 tcctgcaagg actggacaag gcacagcagt atggagctga tatagcagtt tggtgcagtc cttctggata ggcttgagtg tccagggcag gcagcctgag cgctctttga tggggctgag caccttcacc gatgggatgg agtcaccatg atctgaggac ctcctggggc gtgaagaagc agttatgata atgaacccta accaggaaca acggccgtgt cagggaaccc ctggggcctc tcaactgggt acagtggtaa cctccataac attactgtgc tggtcaccgt agtgaaggtt gcgacaggcc cacaggctat tacagcctac gagagaagag ctcctca <21〇> 83 <211> 357 <212> DNA <213> 人類 <4〇〇> 83 caggtgcagc <210> 84 <211> 119 <212> 蛋白質 <213〉人類 <400> 84

Gin Val Gin Leu Val Gin Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 15 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr 20 25 30

Asp 工le Asn Trp Val Arg Gin Ala Thr Gly Gin Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45

Gly Trp Met Asn Pro Asn Ser Gly Asn Thr Gly Tyr Ala Gin Gin Phe 50 55 60

Gin Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asn Thr Ser lie Thr Thr Ala Tyr 39

52947 vl/DC 200815475 65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95

Ala Arg Glu Glu Tyr Ser Ser Ser Leu Phe Asp Ser Trp Gly Gin Gly 100 105 110

Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 85 <211> 321 <212> DNA <213〉人類 <4〇〇> 85 gacatccaga tgacccagtc tccatcctcc ctgtctgcat ctgtaggaga cagagtcacc atcacttgcc gggcaagtca gggcattaga aataatttag gctggtttca gcagaagcca gggaaagccc ctaagcgcct aatctatgct gcatccagtt tgcaaagtgg ggtcccatca aggttcagcg gcagtggatc tgggacaaaa ttcactctca caatcagcag cctgcagcct gaagattttg caacttattt ctgtctacag cataataggt accctctcac tttcggcgga gggaccaagg tggagatcaa a <21〇> 86 <211〉 107 <212> 蛋白質 <213〉人類 <4〇〇> 86

Asp lie Gin Met Thr Gin Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 15 10 15

Asp Arg Val Thr lie Thr Cys Arg Ala Ser Gin Gly lie Arg Asn Asn 20 25 30

Leu Gly Trp Phe Gin Gin Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Arg Leu lie 35 40 45

Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gin Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Lys Phe Thr Leu Thr lie Ser Ser Leu Gin Pro 65 70 75 80 40 60 120 180 240 300 321

52947 vl/DC 200815475

Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Phe Cys Leu Gin His Asn Arg Tyr Pro Leu 85 90 95

Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu lie Lys 100 105 <210> 87 <211> 372 <212> DNA <213> 人類 <400〉 87 caggtgcagc tggtggagtc tgggggaggc gtggtccagc ctgggaggtc cctgagactc 60 tcctgtgcag cctctggatt caccttcagt agctatggca tgcactgggt ccgccaggct 120 ccaggcaagg ggctggagtg ggtggcagtt atatcatatg atggaagtaa taaatactat 180 gcagactccg tgaagggccg attcaccatc tccagagaca attccaagaa cacgctgtat 240 ctgcaaatga acagcctgag agctgaggac acggctgtgt tttactgtgc gagagataga 300 tattgtagta gtaccagctg ctataggggg ctaggctact ggggccaggg aaccctggtg 360 acggtttcat ca 372 <210> 88 <211> 124 <212> 蛋白質 <213> 人類 <4〇〇> 88

Gin Val Gin Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gin Pro Gly Arg 15 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr 20 25 30

Gly Met His Trp Val Arg Gin Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45

Ala Val lie Ser Tyr Asp Gly Ser Asn Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr lie Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80

Leu Gin Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Phe Tyr Cys 85 90 95

Ala Arg Asp Arg Tyr Cys Ser Ser Thr Ser Cys Tyr Arg Gly Leu Gly 41

52947 vl/DC 200815475 100 105 110

Tyr Trp Gly Gin Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 <21〇> 89 <211> 321 <212> DNA <213> 人類 <400> 89 gacatccaga tgacccagtc tccatcctcc ctgtctgcat ctgtaggaga cagagtcagc 60 atcacttgcc gggcaagtca gggcattaga aatgatttag gctggtatca gcagaaacca 120 gggaaagccc ctacgcgcct gatctatgct gcatccagtt tgcaaagtgg ggtcccatca 180 aggttcagtg gcagtggatc tgggacagaa ttcactctca caatcagcag cctgcagcct 240 gaagattttg caagttatta ctgtctacag cataatagtt tcccgtggac gttcggccaa 300 gggaccaagg tggaaatcaa a 321 <21〇> 90 <211> 107 <212> 蛋白質 <213〉人類 <400〉 90

Asp lie Gin Met Thr Gin Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 15 10 15

Asp Arg Val Ser lie Thr Cys Arg Ala Ser Gin Gly lie Arg Asn Asp 20 25 30

Leu Gly Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Gly Lys Ala Pro Thr Arg Leu lie 35 40 45

Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gin Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr lie Ser Ser Leu Gin Pro 65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Ser Tyr Tyr Cys Leu Gin His Asn Ser Phe Pro Trp 85 90 95

Thr Phe Gly Gin Gly Thr Lys Val Glu lie Lys 100 105 42

52947 vl/DC 60 200815475 <21〇> 91 <211> 360 <212> DNA <213> 人類 <400> 91 caggtgcagc tggtggagtc tgggggaggc ttggtcaagc ctggagggtc cctgagactc tcctgtgcag cctctggatt caccttcagt gactactaca tgaactggat ccgccaggct ccagggaagg ggctggagtg ggtttcatac attagtagta gtggtagtat tatatactac gcagactctg tgaagggccg attcaccatc tccagggaca acgccaagaa ctcactgtat ctgcaaatga acagcctgag agccgaggac acggccgtgt attactgtgc gagagatggg catatagcag ctcgtggtat ggacgtctgg ggccaaggga ccacggtcac cgtctcctca <210> 92 <211> 120 <212> 蛋白質 <213〉人類 <400> 92

Gin Val Gin Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly 15 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp Tyr 20 25 30

Tyr Met Asn Trp 工le Arg Gin Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45

Ser Tyr lie Ser Ser Ser Gly Ser lie lie Tyr Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr lie Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr 65 70 75 80

Leu Gin Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95

Ala Arg Asp Gly His lie Ala Ala Arg Gly Met Asp Val Trp Gly Gin 100 105 110

Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser 115 120

<210> 93 <211> 324 <212> DNA 43 120 180 240 300 360

52947 vl/DC 60200815475 <213〉人類 <4〇〇> 93 gacatccaga tgacccagtc tccatcctcc ctgtctgcat ctgtaggaga cagagtcacc atcacttgcc gggcaagtca gagctttagc aggtatataa attggtatca gcagaaacca gggaaagccc ctaagctcct gatctatgct gcatccagtt tgcaaggtgg ggtcccatca aggttcagtg gcagtggatc tgggacagat ttcactctca ccatcagcag tctgcaacct gaagattttg caacttacta ctgtcaacag acttacagta accctccgat caccttcggc caagggacac gactggagat taaa <210> 94 <211> 108 <212> 蛋白質 <213〉人類 <400〉 94 Asp lie Gin Met Thr Gin Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 15 10 15 120 180 240 300 324

Asp Arg Val Thr lie Thr Cys Arg Ala Ser Gin Ser Phe Ser Arg Tyr 20 25 30 工le Asn Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu lie 35 40 45

Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gin Gly Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr lie Ser Ser Leu Gin Pro 65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gin Gin Thr Tyr Ser Asn Pro Pro 85 90 95 lie Thr Phe Gly Gin Gly Thr Arg Leu Glu lie Lys 100 105 <21〇> 95 <211〉 360 <212> DNA <213> 人類 <40〇> 95 caggtgcagc tggtggagtc tgggggaggc gtggtccagc ctgggaggtc cctgagactc tcctgtgcag cgtctggatt caccttcagt agctatggca tgcactgggt ccgccaggcg 60

52947 vl/DC 44 120 200815475 ccaggcaagg gcagactccg ctgcaaatga tcccggggag ggctggagtg tgaagggccg acagcttgag cctttgactt ggtggcagtt attcaccatc agccgaggac ctggggccag atatggtatg tccagagaca acggctgtgt ggaaccctgg atagaagtaa attccaagaa attactgtgc tcaccgtctc taaatactat cacgctgtat ggggggacga ctcagcctcc 180 240 300 360 <210> 96 <211> 118 <212> 蛋白質 <213〉人類 <4〇0> 96

Gin Val Gin Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gin Pro Gly Arg 15 10 15 /

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr 20 25 30

Gly Met His Trp Val Arg Gin Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45

Ala Val lie Trp Tyr Asp Arg Ser Asn Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr lie Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80

Leu Gin Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95

Ala Gly Gly Arg Ser Arg Gly Ala Phe Asp Phe Trp Gly Gin Gly Thr 100 105 110

Leu Val Thr Val Ser Ser 115 <21〇> 97 <211> 321 <212> DNA <213〉人類 <4〇0> 97 60 120 gacatccaga tgacccagtc tccatcttcc gtgtctgcat ctgtaggaga cagagtcacc atcacttgtc gggcgagtca agatattagc agctggttag cctggtatca gcagaaagca gggaaagccc ctaaactcct gatctatgct gcatccagtt tgcaaagtgg ggtcccatca 45

52947 vl/DC 180 240200815475 agattcagcg gcagtggatc tgggacagat ttcactctca ccatcagcag cctgcagcct gaagattttg caacttacta ttgtcaacgg actaacagtt ttcctcggac gttcggccaa gggaccaagg tggaaatcaa a 300 321 <21〇> 98 <211> 107 <212> 蛋白質 <213〉人類 <400> 98 Asp lie Gin Met Thr Gin Ser Pro Ser Ser Val Ser Ala Ser Val Gly 15 10 15

Asp Arg Val Thr lie Thr Cys Arg Ala Ser Gin Asp lie Ser Ser Trp 20 25 30

Leu Ala Trp Tyr Gin Gin Lys Ala Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu lie 35 40 45

Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gin Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr lie Ser Ser Leu Gin Pro 65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gin Arg Thr Asn Ser Phe Pro Arg 85 90 95

Thr Phe Gly Gin Gly Thr Lys Val Glu lie Lys 100 105 <210> 99 <211> 351 <212> DNA <213〉人類 <4〇0> 99 caggtgcagc tggtgcagtc tggggctgag gtgaagaagc ctggggcctc agtgaaggtt tcctgcaagg catctggata caccttcacc agctactata tgtactgggt gcgacaggcc cctggacaag ggcttgagtg gatgggaata atcaacccta gtggtggtag cacaagctac gcacagaagt tccagggcag agtcaccatg accagggaca cgtccacgag cacagtctac atggagctga gcagcctgag atctgaggac acggccgtgt attactgtgc gagaggcagc tcgccgttct ttgactactg gggccaggga accctggtca ccgtctcctc a 60 120 180 240 300

52947 vl/DC 46 351 200815475 <210> 100 <211> 117 <212> 蛋白質 <213〉人類 <4〇〇> 100

Gin Val Gin Leu Val Gin Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 15 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr 20 25 30

Tyr Met Tyr Trp Val Arg Gin Ala Pro Gly Gin Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45

Gly lie 工le Asn Pro Ser Gly Gly Ser Thr Ser Tyr Ala Gin Lys Phe 50 55 60

Gin Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Thr Ser Thr Val Tyr 65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95

Ala Arg Gly Ser Ser Pro Phe Phe Asp Tyr Trp Gly Gin Gly Thr Leu 100 105 110

Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 101 , <211> 321

; <212> DNA <213〉人類 <4〇〇> 101 gacatccaga tgacccagtc tccatcctcc ctgtctgcat ctgtaggaga cagagtcacc atcacttgcc gggcaagtca gatcattagc cactttttaa attggtatca gcagaaacca gggaaagccc ctaagctcct ggtctatgtt gcatccagtt tgcaaagtgg ggtcccatca ' agattcagtg gcagtggatc tgggactgat ttcactctca ccatcagcag tctgcaacct gaagattttg caacttacta ttgtcaacag agtttcagta taccgctcac tttcggcgga gggaccaagg tggagatcaa a <21〇> 102 <211> 107 47 60 120 180 240 300

52947 vl/DC 321 200815475 <212> 蛋白質 <213〉人類 <400> 102

Asp lie Gin Met Thr Gin Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 15 10 15

Asp Arg Val Thr lie Thr Cys Arg Ala Ser Gin lie lie Ser His Phe 20 25 30

Leu Asn Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Val 35 40 45

Tyr Val Ala Ser Ser Leu Gin Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr lie Ser Ser Leu Gin Pro 65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gin Gin Ser Phe Ser lie Pro Leu 85 90 95

Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu lie Lys 100 105 <21〇> 103 <211> 381 <212> DNA <213〉人類 <4〇〇> 103 caggtgcagc tggtggagtc tgggggaggc gtggtccagc ctgggaggtc cctgagagtc tcctgtgcag cgtctggatt tatgttcaga agctatggca tgcactgggt ccgccaggct ccaggcaagg ggctggagtg ggtggcagtt atatggcatg atggaagtaa taaaaatcat ggagactccg tgaagggccg attcaccatc tccagagaca attccaagaa cacgctgtat ctgcaaatga acagcctgag agccgaggac acggctgtgt attactgtgc gagagggaga ctggcagggg ggggccccta ttactattac tactacggta tggacgtctg gggccaaggg accacggtca ccgtctcctc a <210〉 104 <211> 127 <212> 蛋白質 〈213>人類 <400> 104 48 60 120 180 240 300 360

52947 vl/DC 381 200815475

Gin Val Gin Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gin Pro Gly Arg 15 10 15

Ser Leu Arg Val Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Met Phe Arg Ser Tyr 20 25 30

Gly Met His Trp Val Arg Gin Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45

Ala Val lie Trp His Asp Gly Ser Asn Lys Asn His Gly Asp Ser Val 50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr lie Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 7 5 80

Leu Gin Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95

Ala Arg Gly Arg Leu Ala Gly Gly Gly Pro Tyr Tyr Tyr Tyr Tyr Tyr 100 105 110

Gly Met Asp Val Trp Gly Gin Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser 115 120 125 <21〇> 105 <211〉 333 <212> DNA <213〉人類 <4〇0> 105 gatattgtga tgactcagtc tccactctcc ctgcccgtca cccctggaga gccggcctcc atctcctgca ggtctagtca gagcctcctg catagtaatg gatacaacta tttggattgg tacctgcaga agccagggca gtctccacag ctcctgatct atttgggttc tcatcgggcc tccggggtcc ctgacaggtt cagtggcagt ggatcaggca cagattttac actgaaaatc agcagagtgg aggctgagga tgttgggctt tattactgca tgcaatctct acaaactatc accttcggcc aagggacacg actggagatt aaa <210> 106 <211〉 111 <212> 蛋白質 <213〉人類 <4〇〇> 106

Asp lie Val Met Thr Gin Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro Gly 15 10 15 49 60 120 180 240 300 333

52947 vl/DC 200815475

Glu Pro Ala Ser lie Ser Cys Arg Ser Ser Gin Ser Leu Leu His Ser 20 25 30

Asn Gly Tyr Asn Tyr Leu Asp Trp Tyr Leu Gin Lys Pro Gly Gin Ser 35 40 45

Pro Gin Leu Leu lie Tyr Leu Gly Ser His Arg Ala Ser Gly Val Pro 50 55 60

Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys lie 65 70 75 80

Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Leu Tyr Tyr Cys Met Gin Ser 85 90 95

Leu Gin Thr lie Thr Phe Gly Gin Gly Thr Arg Leu Glu lie Lys 100 105 110 <21〇> 107 <211〉 360 <212> DNA <213〉人類 <400> 107 caggtgcagc tggtggagtc tgggggaggc ttggtcaagc ctggagggtc cctgagactc tcctgtgcag cctctggatt caccttcagt gactactaca tgaactggat ccgccaggct ccagggaagg ggctggagtg ggtttcatac attagtagta gtggtagtat catatactac gcagactctg tgaagggccg attcaccatc tccagggaca acgccaagaa ctcactgtat ctgcaaatga acagcctgag agccgaggac acggccgtgt attactgtgc gagagatggg cgtatagtag ctcgtggtat ggacgtctgg ggccaaggga ccacggtcac cgtctcctca <210〉 108 <211> 120 <212> 蛋白質 <213〉人類 <400〉 108

Gin Val Gin Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly 15 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp Tyr 20 25 30

Tyr Met Asn Trp 工le Arg Gin Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 50 60 120 180 240 300 360

52947 vl/DC 200815475 35 40 45

Ser Tyr lie Ser Ser Ser Gly Ser lie lie Tyr Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr lie Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr 65 70 75 80

Leu Gin Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95

Ala Arg Asp Gly Arg 工le Val Ala Arg Gly Met Asp Val Trp Gly Gin 100 105 110

Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser 115 120 / <210〉 109 <211> 324 <212> DNA <213> 人類 <4〇〇> 109 gacatccaga tgacccagtc tccatcctcc ctgtctgcat ctgtaggaga cagagtcacc ctcacttgcc gggcaagtca cagcattaac aggtatataa attggtatca gcagaaacca gggaaagccc ctaaactcct gatctatgct gcatccagtt tgcaaagtgg ggtcccatct aggttcagtg gcaatggatc tgggacagat ttcactctca ccatcagcag tctgcaacct gaagattttg caacttacta ctgtcaacag agttacagta cccctccgat caccttcggc caagggacac gactggagat tact <21〇> 110 <211> 108 <212> 蛋白質 <213〉人類 <400> 110

Asp lie Gin Met Thr Gin Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 15 10 15

Asp Arg Val Thr Leu Thr Cys Arg Ala Ser His Ser 工le Asn Arg Tyr 20 25 30 工le Asn Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu lie 35 40 45 51 60 120 180 240 300 324

52947 vl/DC 200815475

Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gin Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60

Asn Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr lie Ser Ser Leu Gin Pro 65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gin Gin Ser Tyr Ser Thr Pro Pro 85 90 95 lie Thr Phe Gly Gin Gly Thr Arg Leu Glu lie Thr 100 105 <210> 111 <211〉 360 <212> DNA <213〉人類 <40〇> 111 caggtgcagc tggtggagtc tgggggaggc gtggtccagc ctgggaggtc cctgagactc tcctgtgcag cgtctggatt caccttcagt agatatggca tgcactgggt ccgccaggct ccaggcaagg ggctggagtg ggtggcagtt atatggtatg atggaagaaa taaatactat gtagactccg tgaagggccg attcaccatc tccagagaca attccaagaa cacgctgtat ctgcaaatga acagcctgag agccgaggac acggctgtgt attattgtgt gggagtgggt ataacagtga ctggtgcctt tgactactgg ggccagggaa ccctggtcac cgtctcctca <21〇> 112 <211〉 120 <212> 蛋白質 <213〉人類 <400> 112

Gin Val Gin Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gin Pro Gly Arg 15 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Arg Tyr 20 25 30

Gly Met His Trp Val Arg Gin Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45

Ala Val lie Trp Tyr Asp Gly Arg Asn Lys Tyr Tyr Val Asp Ser Val 50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr lie Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80 52 60 120 180 240 300 360

52947 vl/DC 200815475

Leu Gin Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Val Gly Val Gly lie Thr Val Thr Gly Ala Phe Asp Tyr Trp Gly Gin 100 105 110 Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 113 <211〉 321 <212> DNA <213〉人類 <4〇0> 113 gaaatagtga tgacgcagtc tccagccacc ctgtctgtgt ctccagggga aagagccacc ctctcctgca gggccagtca gagtgttcgc agcaacttag cctggtacca acagaaacct ggccaggctc ccaggctcct catctatggt gcatccacca gggtcactga tatcccaacc aggttcagtg gcagtgggtc tgggacagag ttcactctct ccatcagcag cctgcagtct gaagattttg cagtttatta ttgtcagcag tataataact ggcctcggac gtttggccaa gggaccaagg tggaaatcaa a <210〉 114 <211〉 107 <212> 蛋白質 <213〉人類 <400> 114

Glu lie Val Met Thr Gin Ser Pro Ala Thr Leu Ser Val Ser Pro Gly 15 10 15

Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gin Ser Val Arg Ser Asn 20 25 30

Leu Ala Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Gly Gin Ala Pro Arg Leu Leu lie 35 40 45

Tyr Gly Ala Ser Thr Arg Val Thr Asp lie Pro Thr Arg Phe Ser Gly 50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Ser lie Ser Ser Leu Gin Ser 65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gin Gin Tyr Asn Asn Trp Pro Arg 85 90 95 53 60 120 180 240 300 321

52947 vl/DC 200815475

Thr Phe Gly Gin Gly Thr Lys Val Glu lie Lys 100 105 <210> 115 <211> 354 <212> DNA <213> 人類 <4〇0> 115 caggtgcagc tcctgtgcag ccaggcaagg gcagactccg ctgcaaatga tcccggggag tggtggagtc tgggggaggc gtggtccagc ctgggaggtc cctgagactc cgtctggatt caccttcagt agctatggca tgcactgggt ccgccaggct ggctggagtg ggtggcagtt atatggtatg atagaagtaa taaatactat tgaagggccg attcaccatc tccagagaca attccaagaa cacgctgtat acagcctgag agccgaggac acggctgtgt attactgtgc ggggggacga cctttgactt ctggggccag ggaaccctgg tcaccgtctc ctca 60 120 180 240 300 354 <210> 116 <211> 118 <212> 蛋白質 <213〉人類 <4〇〇> 116 Gin Val Gin Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gin Pro Gly Arg 15 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr 20 25 30

Gly Met His Trp Val Arg Gin Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45

Ala Val 工le Trp Tyr Asp Arg Ser Asn Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr lie Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80

Leu Gin Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95

Ala Gly Gly Arg Ser Arg Gly Ala Phe Asp Phe Trp Gly Gin Gly Thr 100 105 110

Leu Val Thr Val Ser Ser

52947 vl/DC 54 60 115 200815475 <21〇> 117 <211〉 306 <212> DNA <213〉人類 <400〉 117 cagtctccat cttccgtgtc tgcatctgta ggagacagag tcaccatcac ttgtcgggcg agtcagggta ttagcagctg gttagcctgg tatcagcaga aagcagggaa agcccctaaa ctcctgatct attctgcatc cagtttgcaa agtggggtcc catcaagatt cagcggcagt ggatctggga cagatttcac tctcaccatc agcagcctgc agcctgaaga ttttgcaact tactattgtc aacggactaa cagttttcct cggacgttcg gccaagggac caaggtggaa atcaaa <210> 118 <211> 107 <212> 蛋白質 <213〉人類 <400〉 118

Asp lie Gin Met Thr Gin Ser Pro Ser Ser Val Ser Ala Ser Val Gly 15 10 15

Asp Arg Val Thr lie Thr Cys Arg Ala Ser Gin Gly lie Ser Ser Trp 20 25 30

Leu Ala Trp Tyr Gin Gin Lys Ala Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu lie 35 40 45

Tyr Ser Ala Ser Ser Leu Gin Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr lie Ser Ser Leu Gin Pro 65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gin Arg Thr Asn Ser Phe Pro Arg 85 90 95

Thr Phe Gly Gin Gly Thr Lys Val Glu lie Lys 100 105

<210> 119 <211> 351 <212> DNA 55 120 180 240 300 306

52947 vl/DC 60 200815475 <213〉人類 <4〇0> 119 cagctgcagc tgcaggagtc gggcccagga ctggtgaagc cttcggagac cctgtccctc acctgcactg tctctggtgg cttcatcagc agtagtagtt actactgggg ctggatccgc cagcccccag ggaagggact ggagtggatt gggaccatct attatagtgg gaccacctac tacaattcgt ccctgaagag tcgagtcacc atatccgtag acacgtccca gaaccagttc tccctgaagc tgagctctgt gaccgccgca gatacggctg tgtattactg tgcgagacat cactgggttt ttgactactg gggccaggga accctggtca ccgtctcctc a <210〉 120 <211> 117 <212> 蛋白質 <213〉人類 <4〇0> 120

Gin Leu Gin Leu Gin Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu 1 5 10 15

Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Gly Phe lie Ser Ser Ser 20 25 30

Ser Tyr Tyr Trp Gly Trp lie Arg Gin Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu 35 40 45

Trp lie Gly Thr lie Tyr Tyr Ser Gly Thr Thr Tyr Tyr Asn Ser Ser 50 55 60

Leu Lys Ser Arg Val Thr lie Ser Val Asp Thr Ser Gin Asn Gin Phe 65 70 75 80

Ser Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr 85 90 95

Cys Ala Arg His His Trp Val Phe Asp Tyr Trp Gly Gin Gly Thr Leu 100 105 110

Val Thr Val Ser Ser 115 <21〇> 121 <211> 321 <212〉 DNA <213〉人類 56 120 180 240 300 351

52947 vl/DC 60200815475 <400> 121 gaagttgtgc tgactcagtc tccagacttt cagtctgtga ctccaaagga gaaaatcacc atcacctgcc gggccagtca gatcattggt actagcttac actggtatca gaagaaacca gatcagtctc caaagctcct catcaagtat gcttcccagt ccttctcagg ggtcccctcg aggttcagtg gcagtggatc tgggacagaa ttcaccctca ccatcaatag cctggaagct gaagatactg caacgtatta ctgtcatcag agtactaatt taccgtggac gttcggccaa gggaccaagg tggaaatcaa a 120 180 240 300 321 <21〇> 122 <211> 107 <212> 蛋白質 <213〉人類 <400> 122 Glu Val Val Leu Thr Gin Ser Pro Asp Phe Gin Ser Val Thr Pro Lys 1 5 10 15

Glu Lys lie Thr lie Thr Cys Arg Ala Ser Gin lie lie Gly Thr Ser 20 25 30

Leu His Trp Tyr Gin Lys Lys Pro Asp Gin Ser Pro Lys Leu Leu lie 35 40 45

Lys Tyr Ala Ser Gin Ser Phe Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr 工le Asn Ser Leu Glu Ala 65 70 75 80 \ f Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr Cys His Gin Ser Thr Asn Leu Pro Trp 85 90 95

Thr Phe Gly Gin Gly Thr Lys Val Glu lie Lys 100 105 <210〉 123 <211> 384 <212> DNA <213〉人類 <400> 123 caggtgcagc tggtgcagtc tggggctgag gtgaagaagc ctggggcctc agtgaaggtc tcctgcaagg cttctggata caccttcatc ggctactatc ttcactgggt gcgacaggcc cctggacaag ggcttgaatg gatgggatcg atcaacccta acagtggtgg cacaaactat 60 120 180

52947 vl/DC 57 200815475 gcacagaagt atggagctga cgtatcacta gggaccacgg ttcagggcag gcaggctgag tggttcgggg tcaccgtctc ggtcaccatg atctgacgac agtccactat ctca atcagggaca acggccgtgt ctctactacg cgtccatcaa attactgtgc gttgggacgt cacagcctac gagagataaa ctggggccaa 240 300 360 384 <210> 124 <211> 128 <212> 蛋白質 <213〉人類 <400> 124

Gin Val Gin Leu Val Gin Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 15 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe lie Gly Tyr 20 25 30

Tyr Leu His Trp Val Arg Gin Ala Pro Gly Gin Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45

Gly Ser lie Asn Pro Asn Ser Gly Gly Thr Asn Tyr Ala Gin Lys Phe 50 55 60

Gin Gly Arg Val Thr Met lie Arg Asp Thr Ser lie Asn Thr Ala Tyr 65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Arg Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95

Ala Arg Asp Lys Arg 工le Thr Met Val Arg Gly Val His Tyr Leu Tyr 100 105 110

Tyr Gly Trp Asp Val Trp Gly Gin Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser 115 120 125 <210〉 125 <211〉 321 <212> DNA <213> 人類 <40〇> 125 gacatccaga tgacccagtc tccatcctcc ctgtctgcat ctgtaggaga cagagtcacc atcacttgcc gggcgagtca ggtcattagc aattatttag cctggtatca gcagaaacca gggaaagttc ctcagctcct gatctatgct gcatccactt tgcaatcagg ggtcccatct cggttcagtg gcagtggatc tgggacagat ttcactctca ccatcagcag cctgcagcct 58 60 120 180

52947 vl/DC 240 300 200815475 321 gaagatgttg caacttatta ctgtcaaaac tataaaagtg ccccgtggac gttcggccaa gggaccaagg tggaaatcaa a <21〇> 126 <211> 107 <212> 蛋白質 <213〉人類 <4〇〇> 126

Asp lie Gin Met Thr Gin Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 15 10 15

Asp Arg Val Thr lie Thr Cys Arg Ala Ser Gin Val lie Ser Asn Tyr 20 25 30

Leu Ala Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Gly Lys Val Pro Gin Leu Leu lie 35 40 45

Tyr Ala Ala Ser Thr Leu Gin Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr lie Ser Ser Leu Gin Pro 65 70 75 80

Glu Asp Val Ala Thr Tyr Tyr Cys Gin Asn Tyr Lys Ser Ala Pro Trp 85 90 95

Thr Phe Gly Gin Gly Thr Lys Val Glu lie Lys 100 105 、$ <21〇> 127 <211〉 116 <212> 蛋白質 <213〉人類 <4〇〇> 127

Gin Val Gin Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly 15 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp Tyr 20 25 30

Tyr Met Ser Trp 工le Arg Gin Ala 35 40

Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 45 59

52947 vl/DC 200815475

Ser Tyr lie Ser Ser Ser Gly Ser Thr lie Tyr Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr lie Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr 65 70 75 80

Leu Gin Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95

Ala Arg Tyr Ser Gly Ser Phe Asp Tyr Trp Gly Gin Gly Thr Leu Val 100 105 110

Thr Val Ser Ser 115 <210> 128 <211〉 118 <212> 蛋白質 <213〉人類 <400> 128

Gin Val Gin Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly 15 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp Tyr 20 25 30

Tyr Met Ser Trp lie Arg Gin Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45

Ser Tyr lie Ser Ser Ser Gly Ser Thr lie Tyr Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr lie Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr 65 70 75 80

Leu Gin Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95

Ala Arg Ser 工le Ala Ala Arg Gly Met Asp Val Trp Gly Gin Gly Thr 100 105 110

Thr Val Thr Val Ser Ser 115 <21〇> 129 <211> 114 60

52947 vl/DC 200815475 <212> 蛋白質 <213〉人類 <4〇〇> 129

Gin Leu Gin Leu Gin Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu 15 10 15

Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Gly Ser lie Ser Ser Ser 20 25 30

Ser Tyr Tyr Trp Gly Trp 工le Arg Gin Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu 35 40 45

Trp lie Gly Ser lie Tyr Tyr Ser Gly Ser Thr Tyr Tyr Asn Pro Ser 50 55 60

Leu Lys Ser Arg Val Thr lie Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gin Phe 65 70 75 80

Ser Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr 85 90 95

Cys Ala Arg Trp Phe Asp Tyr Trp Gly Gin Gly Thr Leu Val Thr Val 100 105 110

Ser Ser <210〉 130 <211〉 108 <212> 蛋白質 <213〉人類 <4〇〇> 130

Asp lie Gin Met Thr Gin Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 15 10 15

Asp Arg Val Thr lie Thr Cys Arg Ala Ser Gin Ser lie Ser Ser Tyr 20 25 30

Leu Asn Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu lie 35 40 45

Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gin Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 61

52947 vl/DC 200815475

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr lie Ser Ser Leu Gin Pro 65 70 Ί5 80

Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gin Gin Ser Tyr Ser Thr Pro Pro 85 90 95

Trp Thr Phe Gly Gin Gly Thr Lys Val Glu lie Lys 100 105 <21〇> 131 <211> 107 <212> 蛋白質 <213〉人類 <4〇〇> 131

Asp lie Gin Met Thr Gin Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 15 10 15

Asp Arg Val Thr lie Thr Cys Arg Ala Ser Gin Gly lie Ser Asn Tyr 20 25 30

Leu Ala Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Gly Lys Val Pro Lys Leu Leu lie 35 40 45

Tyr Ala Ala Ser Thr Leu Gin Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr lie Ser Ser Leu Gin Pro 65 70 75 80

Glu Asp Val Ala Thr Tyr Tyr Cys Gin Lys Tyr Asn Ser Ala Pro lie 85 90 95 Thr Phe Gly Gin Gly Thr Arg Leu Glu lie Lys 100 105 <210〉 132 <211> 107 <212> 蛋白質 <213〉人類 <400〉 132

Glu lie Val Leu Thr Gin Ser Pro Asp Phe Gin Ser Val Thr Pro Lys 15 10 15

Glu Lys Val Thr lie Thr Cys Arg Ala Ser Gin Ser lie Gly Ser Ser 20 25 30 62

52947 vl/DC 200815475

Leu His Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Asp Gin Ser Pro Lys Leu Leu lie 35 40 45

Lys Tyr Ala Ser Gin Ser Phe Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr 工le Asn Ser Leu Glu Ala 65 70 75 80

Glu Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys His Gin Ser Ser Ser Leu Pro Trp 85 90 95 Thr Phe Gly Gin Gly Thr Lys Val Glu lie Lys . 100 105 <21〇> 133 <211> 105 <212> 蛋白質 <213〉人類 <4〇〇> 133

Asp lie Gin Met Thr Gin Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 15 10 15

Asp Arg Val Thr lie Thr Cys Arg Ala Ser Gin Ser lie Ser Ser Tyr 20 25 30

Leu Asn Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu lie 35 40 45

Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gin Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr lie Ser Ser Leu Gin Pro 65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gin Gin Ser Tyr Ser lie Thr Phe 85 90 95

Gly Gin Gly Thr Arg Leu Glu lie Lys 100 105 <210〉 134 <211> 120 <212> 蛋白質 52947 vl/DC 63 200815475 <213〉人類 <400> 134

Gin Val Gin Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly 15 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp Tyr 20 25 30

Tyr Met His Trp 工le Arg Gin Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45

Ser Tyr lie Ser Arg Ser Gly Ser Leu lie Tyr Tyr Val Asp Ser Val 50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr lie Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr 65 70 75 80

Leu Gin Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95

Ala Arg Gly Gly Pro Tyr Ser Gly Ser Pro Phe Asp Tyr Trp Gly Gin 100 105 110

Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 <21〇> 135 <211> 108 <212> 蛋白質 <213〉人類 <4〇〇> 135

Asp lie Gin Met Thr Gin Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 15 10 15

Asp Arg Val Thr lie Thr Cys Arg Pro Ser Gin Arg lie Ser Arg Tyr 20 25 30

Leu Asn Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu lie 35 40 45

Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Pro Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr lie Ser Ser Leu Gin Pro 65 70 75 80 64

52947 vl/DC 200815475

Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gin Gin Ser Tyr Ser Thr Pro Pro 85 90 95

Trp Thr Phe Gly Gin Gly Thr Lys Val Glu lie Lys 100 105 <210> 136 <211〉 108 <212> 蛋白質 <213〉人類 <4〇〇> 136

Asp lie Gin Met Thr Gin Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 15 10 15

Asp Arg Val Ser lie Thr Cys Arg Pro Ser Gin Ser Phe Ser Arg Tyr 20 25 30 lie Asn Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu lie 35 40 45

Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Val Gly Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr lie Ser Ser Leu Gin Pro 65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gin Gin Thr Tyr Ser Asn Pro Pro 85 90 95 lie Thr Phe Gly Gin Gly Thr Arg Leu Glu lie Lys 100 105 65

52947 vl/DC

Claims (1)

1. 200815475 十、申請專利範圍： 1'種經分離之致標性結合劑，其專一性地結合至 PDGFR-α且抑制表現pDGFR_a之細胞生長，其中該致標 |·生、、、。s知丨以一少於約4〇pM之KD結合pDGFR_a。 5 2·如申請專利範圍帛1項之致標性結合劑，其中該致 枯 14、a a 劑抑制 pDGF_AA、PDgf_ab 及/或 PDGF_CC配體結合至PDGFR-a。 3·如申請專利範圍第1項之致標性結合劑，其中該致 標性結合劑結合至PDGFR_a且抑制受體自體磷酸化。 10 4·如申請專利範圍帛1項之致標性結合劑，其中該致 標性結合騎合至PDGFR_a且抑制細胞生長巾所涉及之 下游細胞訊息傳導。 5·如申請專利範圍第1項之致標性結合劑，其中該致 標性結合劑結合至PDGFR-a且不會和pDGFR-β受體交又 15 反應。 6·如申請專利範圍第1項之致標性結合劑，其中該致 標性結合劑結合至PDGFR-a且不會和其它第3型（Class ΙΠ) 受體酪胺酸激酶家族成員交又反應。 7·如申請專利範圍第丨_6項中任一項之致標性結合 20 劑，其中該致標性結合劑抑制哺乳類動物之腫瘤生長及轉 移。 8.如申請專利範圍第丨_7項中任一項之致標性結合 劑，其中該致標性結合劑係一單株抗體。 200815475 9. 如申請專利範圍第1-8項中任一項之致標性結合 劑，其中該致標性結合劑係如同第1表所示之單株抗體中 的任一種。 10. 如申請專利範圍第9項之致標性結合劑，其中該 5 致標性結合劑係單株抗體2.175.3。 11. 如申請專利範圍第9項之致標性結合劑，其中該 致標性結合劑係單株抗體2.175.3變化體Α。 12. 如申請專利範圍第9項之致標性結合劑，其中該 致標性結合劑係單株抗體2.449.1.3。 10 13.如申請專利範圍第9項之致標性結合劑，其中該 致標性結合劑係單株抗體2.449.1.3變化體A。 14. 如申請專利範圍第9項之致標性結合劑，其中該 致標性結合劑係單株抗體2.998.2。 15. 一種致標性結合劑，其中該致標性結合劑係如申 15 請專利範圍第9_14項中任一項之單株抗體的變化體或衍生 物。 16. —種致標性結合劑，其中該致標性結合劑和如申 請專利範圍第9-14項中任一項之單株抗體具有至少80%的 胺基酸序列相同性。 20 17.如申請專利範圍第1-16項中任一項之致標性結 合劑，其中該致標性結合劑係一完全人類單株抗體。 18.如申請專利範圍第1-17項中任一項之致標性結 合劑，其中該致標性結合劑係一完全人類單株抗體之結合 片段。 2 200815475 19. 如申請專利範圍第18項之致標性結合劑，其中 該結合片段係選自於由Fab、Fab’、F(ab’)2、Fv及dAb所 組成之群組。 20. 如申請專利範圍第1項之致標性結合劑，其中該 5 致標性結合劑包含一含有SEQ ID NO.: 2之序列的多胜肽。 21. 如申請專利範圍第1項之致標性結合劑，其中該 致標性結合劑包含一含有SEQ ID NO·: 10之序列的多胜 肽。 22. 如申請專利範圍第1項之致標性結合劑，其中該 10 致標性結合劑包含一含有SEQ ID NO·: 14之序列的多胜 肽。 23. 如申請專利範圍第1項之致標性結合劑，其中該 致標性結合劑包含一含有SEQ ID NO.: 4之序列的多胜肽。 24. 如申請專利範圍第1項之致標性結合劑，其中該 15 致標性結合劑包含一含有SEQ ID NO·: 12之序列的多胜 肽。 25. 如申請專利範圍第1項之致標性結合劑，其中該 致標性結合劑包含一含有SEQ ID NO·: 16之序列的多胜 肽。 20 26. 一種致標性結合劑，其係和如申請專利範圍第 1-25項中任一項之致標性結合劑競爭和PDGFR-cx結合。 27. 一種致標性結合劑，其係和如申請專利範圍第 1-26項中任一項之致標性結合劑結合至PDGFR-α上相同的 抗原決定部位。 3 200815475 28. 一種致標性結合劑，其包含一胺基酸序列，該胺 基酸序列係包含： 一如第12表或第13表所示之CDR3序列； 一如第12表所示之CDR1、CDR2及CDR3序歹 5 一如第13表所示之CDR1、CDR2及CDR3序 列；或 一如第12表所示之CDR1、CDR2及CDR3序列 以及一如第13表所示之CDIU、CDR2及CDR3 序列。 10 29.如申請專利範圍第20-28項中任一項之致標性結 合劑，其中該致標性結合劑係一抗體。 30. 如申請專利範圍第29項之致標性結合劑，其中 該致標性結合劑係一完全人類單株抗體。 31. 如申請專利範圍第30項之致標性結合劑，其中 15 該致標性結合劑係一完全人類單株抗體之結合片段。 32. 一種譯碼出如申請專利範圍第1_31項中任一項 之致標性結合劑之核酸分子。 33. 一種包含如申請專利範圍第32項之核酸分子的 載體。 20 34. 一種包含如申請專利範圍第33項之載體的宿主 細胞。 35. 一種用於治療一哺乳類動物之腫瘤疾病的方 法，其包含： 選擇一需要治療腫瘤疾病的動物；且 200815475 將一治療有效量之如申請專利範圍第1·31項中 任一項之致標性結合劑投藥至該動物。 36.如申請專利範圍第35項之方法，其中該哺乳類 動物係人類。 5 37.如申請專利範圍第36項之方法，其中該致標性 結合劑係選自於如申請專利範圍第10-14項中任一項之致 標性結合劑。 38.如申請專利範圍第35-37項中任一項之方法，其 中該腫瘤疾病係選自於以下所構成之群組：黑色素瘤、小 10 細胞肺癌、非小細胞肺癌、膠質瘤、肝癌、甲狀腺腫瘤、 胃癌、前列腺癌、乳癌、卵巢癌、膀胱癌、肺癌、神經膠 元母細胞瘤、子宮内膜癌、腎臟癌、結腸癌、胰臟癌、食 道癌、頭頸部腫瘤、惡性間皮瘤、肉瘤、膽管癌、小腸腺 癌、兒童惡性腫瘤、扁平細胞瘤以及胃腸道基質瘤（GIST)。 15 39. 一種用於治療一非腫瘤性疾病的方法，其包含： 選擇一需要治療非腫瘤性疾病的動物；且 將一治療有效量之如申請專利範圍第1-31項中 任一項之致標性結合劑投藥至該動物。 40. 如申請專利範圍第39項之方法，其中該動物係 20 人類。 41. 如申請專利範圍第40項之方法，其中該致標性 結合劑係一完全人類單株抗體。 5 200815475 42. 如申請專利範圍第41項之方法，其中該致標性 結合劑係選自於如申請專利範圍第10-14項中任一項之致 標性結合劑。 43. 如申請專利範圍第39-42項中任一項之方法，其 5 中該非腫瘤性疾病係選自於纖維性病變及/或免疫系統疾 病。 44. 一種包含有如申請專利範圍第1-31項中任一項 之致標性結合劑或是其結合片段，以及一治療劑之綴合物。 45. 如申請專利範圍第44項之綴合物，其中該治療 10 劑係一毒素。 46. 如申請專利範圍第45項之綴合物，其中該治療 劑係一放射性同位素。 47. 如申請專利範圍第46項之綴合物，其中該治療 劑係一醫藥組成物。 15 48. 一種如申請專利範圍第1-31項中任一項之致標 性結合劑用於製造一用於治療腫瘤疾病之藥物的用途。 49. 一種如申請專利範圍第1-31項中任一項之致標 性結合劑用於製造一用於治療癌症之藥物的用途。 50. —種如申請專利範圍第1-31項中任一項之致標 20 性結合劑用於製造一用於治療非腫瘤性疾病之藥物的用 途。 51. 如申請專利範圍第1-31項中任一項之致標性結 合劑，其結合有一醫藥上可接受之載劑。