TW200533348A - Indazole-carboxamide compounds as 5-ht4 receptor agonists - Google Patents

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200533348 九、發明說明： 相關申請案之交叉參考 本申請案主張2004年2月18號申請之美國臨時申請案編 號60/545,702之優點，該揭示全文倂入本文中供參考。 【發明所屬之技術領域】 本發明係針對作為5 _ Η τ *受體激動劑之啕唑_甲醯胺化合 物。本發明亦針對包括該化合物之醫藥組合物，使用該化 參 合物治療以5-ΗΤ4受體活性調節之醫療症狀之方法，及製 備該化合物所用之方法及甲間物。 【先前技術】 血清素（5-羥色胺，5_ΗΤ)為廣泛分布於全身（中樞神經系 統及末梢神經系統二者）之神經傳送素。至少七種亞型之 血清素受體已經被確定，且血清素與此等不同受體之作用 與各種生理功能有關。因此在發展目標特異之弘Ητ受體亞 型治療劑上實質上受到矚目。 _ 尤其，5-ΗΤ4受體之特徵化以及鑑定與彼等作用之藥劑 已為近來重要活動之焦點（例如見Langl〇is& Fischmeista， J. Md· C/zem. 2003, 46，319-344 之回顧）。5_]^4受體激動 劑係用於治療腸胃道減少蠕動之疾病。該疾病包含腸燥徵 候群（IBS)、慢性便秘、機能性消化不良、延遲胃排空、 胃食道逆流疾病（GERD)、胃輕癱、手術後之腸阻塞、腸 胃阻塞及藥物引發之延遲輸送。另外，曾提出某些5_Ητ^ 受體激動劑化合物可用於治療中樞神經系統疾病，包含認 知障礙、行為障礙、心情失調、及自律功能控制障礙。 99256.doc 200533348 儘管調節5-ΗΤ4受體活性藥劑 y ^ ^ ^ d <贗泛用途，但僅少數5- HI受體激動劑化合物被二 、目刖之g品床用途中。廣用於 治療腸胃道蠕動障礙之醫藥 '、月丨（西’乂普來（cisapride))已經退 出市場，據傳係因心臟副作用 職田Η乍用之故。另一藥劑（普卡普來 (prucalopdde))之後期臨床試驗已經暫停。 據此，需要一種可達到所需作用且副作用為最小之新穎 哪受體激動劑。在其他性質，，較佳藥劑可帶有改善 之遥擇性、效力、醫蘿說士 刀西桌動力學及/或作用持久性。 【發明内容】 本毛月提供-種帶有5_HT4受體激動劑活性之新顆化合 物。於其他性質中’本發明化合物已被發現為有效及選擇 =之5-ΗΤ4受體激動劑。另外’已發現本發明化合物展現 有利之醫藥動力學性質， 、了預期其在口服投藥時具有良好 生物可利用性。 〃 據此，本發明提供—種下式（I)之化合物：

R2

Rl為氫、鹵基、羥基、Cw烷基，或Cw烷氧基； R為C3_4烧基或C3·6環燒基；且 w係選自： ⑴下式（II)之基： 99256.doc 200533348

其中x為： • (〇)R ’其中r為烷基或四氫呋喃基，其中。 烧基係視情況以·0Η或燒氧基取代； 、 S(0)2 ;或 ^S(0)2Rb，其中Rb為視情況以观、燒氧基、c 環烷基或^(Oh-Cb3烷基取代之甲基； ⑴）下式（III)之基：

(III) 其中

Ry為-OH或CN3烷氧基； P為0或1 ; η為1或2 ;且 Υ為：一- N(Rc)C(0)Rd，其中Rc為氫或Cw烷基，且Rd為視情 況以-OH或Cw烷氧基取代之Cw烷基，或 N(Re)S(0)2Rf，其中Re為氫且Rf為視情況以屮η、 Cy烷氧基、C5_6環烷基或4(0)2-(^3烷基取代之Cl_3 燒基； 99256.doc 200533348 (出）下式（IV)之基：

(IV) 其中

Rz為氫、C!·3烷基或以-OHSCu烷氧基取代之C2_3烷 基； m為1或2 ; q為1或2，其條件為m與q之總合不等於4 ;且 Z為： NC(0)Rg，其中Rs為視情況以-〇H或Cw烷氧基取代之 CN3烷基， S (〇)2 ;或 則⑼#，其中Rh為視情況以_〇H、C"燒氧基、6 環烧基或-scoh-Ci·3烷基取代之甲基； 或其醫藥可接受性鹽或溶劑化物或立體異構物。 本發明亦提供包括本發明化合物及醫藥可 醫藥組合物。： 本發明亦提供治療與5-HT4受體活性有 例如腸胃道減少蠕動之障礙之方法， 浃焫或症狀 物投予治療有效量之本發明化合物，方法包括對哺乳動 另外’本發明提供治療哺乳動物 之疾病或症狀之方法，該方法包括對哺乳動物關 效量之本發明醫藥組合物。 又予療有 本發明化合物亦可用做研究工|， 99256.doc /、亦即研究生物系統或 200533348 樣品’或用於研究其他化學化合物之活性。據此，本發明 另方法Μ不係提供使用式⑴化合物或其醫藥可接受性 鹽或溶劑化物或立體異構物作為研究生物系統或樣品或用 於發現新穎5·ΗΤ4受體激動劑之研究卫具之方法，該方法 包括使生物系統或樣品與本發明化合物接觸，幻収因化 合物對生物系統或樣品引起之作用。

本發明另一及不同之目標亦提供用於製備本發明化合物 之本文中所述合成方法及中間物。 本發明亦提供用於醫療之本文所述本發明化合物，以及 本發明化合物在製造治療與5_ΗΤ4受體活性有關之疾病或 症狀例如哺乳動物之腸胃道減少蠕動之障礙之調配物或醫 藥之用途。 【實施方式】 本發明提供式（I)之新穎吲唑_甲醯胺5_ΗΤ4受體激動劑或其 醫藥可接受性鹽或溶劑化物或立體異構物。以下之取代基及 值將提供本發明各目的之代表性實例。此等代表性值將進 一步疋義該目的，且將不排除其他值或限制本發明範圍。 依本發明之特定目的，R1為氫、齒基、Ci4烷基或 烷氧基。 依其他目的，R1為氫、鹵基或Cl_4烷基；或]^1為氫或鹵 基；或R1為氟。 依又另一特定目的，R1為氫。 依特定目的，R2為C3_4烷基或C3_6環烷基。 依另一特龙目的，R2為Cm環烷基。代表性R2基包含正 99256.doc -10- 200533348 丙基、異丙基、正丁其楚 J暴、弟二丁基及第三丁基。 依另一特定目的，R2為異丙基。 依又另一特定目的，只2 1 R為裱丁基或環戊基。 依特定目的，W為式（爪夕| 甘 、 ）之基，其中所有變數均如式（II) 中之定義。 依另一特定目的，W垚4WTT、> # 為式（II)之基，其中R^C 基

Rb為甲基。

依另一特定目的’ w為式⑼之基，其中X為NC(〇)Ra， 其中Ra如式（II)中之定義。依其他特定具體例，％為式⑼ 之基，其中UNC(0)Ra，其中R、Ci3烧基，尤其是甲 基、乙基、正丙基或里石盆 飞/、丙基，或四虱呋喃基或四氫呋 喃-3-基；或1^為c^3烷基。 依又另一特定目的’ W為式(π)之基，其中X為 NC(0)CH3 ’其形成具有值4_乙醯基-嗓呼小基之W。 依另-特;t目的’ W為式（11)之基，其中us(〇)2。 依另；'特定目的，W為式（Η)之基’其中X為NS(0)2Rb， ，、中R係如式(Π)中之定義。依另一特定目的，W為式（Μ) 之基，其巾X為NS(0)2Rb，其中Rb為視情況以c56環烧基 或以-s(0)2-Cl.3院基取代之CH3。該目的中之代表性^值 匕3甲基_CH2環戊基、-CH2環己基、_CH2S02CH3及 * C Η 2 S 〇 2 C 2 Η 5。 依另一特定目的，W為式（ΙΙ)之基，其中χ為 NS(0)2CH3，其形成具有值4_甲烷磺醯基-哌畊_丨_基之w。 依另一特-定目的，w為式（111)之基，其中…為_〇H。 99256.doc 200533348 w為式（in)之基，其中…為匕3燒氧 、，〇C2H5 或-〇C3H7。 w為式（III)之基，其中p為0或其中p為 依其他特定目的，w Η

為視情況取代之…Γ1，亦即W ,、兄取代〇 環；或其中n為2’亦即w為視情 况取代之哌啶基環。 1月

依另特定目的，W為式（III)之基，其中γ n(R )c(o)Rd，其中RC^Rd均如式（m)中之定義。依特

… W馮式（ΙΠ)之基，其中Y為N(Rc)C(〇)Rd，其中RC 為氫；且其中^為。^烷基。 依另一特定目的，W為式（ΙΠ)之基，其中γ為 N(R )C(0)Rd，其中Rd為視情況以_〇η或c"烧氧基取代之 Ci-3烷基。該範圍中Rd之代表性值包含甲基、乙基、 -CH2OH及-CH(〇H)CH3。

依另一特定目的 基，例如Ry為七CH3 依其他特定目的， 依另一特定目的，W為式（ΙΠ)之基，其中γ為 NCH3C(0)CH3 ό 依又另一特定目的，w為式（III)之基，其中γ為 NHC(〇）CH3。 依另一特定目的，W為式（m)之基，其中γ為 N(R)S(0)2Rf ’其中Re及Rf均如式（III)中之定義。依另一 特定目的’ W為式之基，其中γ為N(Re)S(〇)2Rf，其中 Rf為視情況以C%6環烷基或以-S(〇）2_Ci_3烷基取代之Cl_3烷 基。該範圍-中Rft代表性值包含甲基、-CH2環戊基、-CH2 99256.doc • 12- 200533348 % 己基、-CH2S02CH3及·〇：Η2302(：2Η5。 、依另一特定目的，式⑴化合物為其中W為其中_0JLn 為1之式（III)基之化合物。依又另一特定目白勺，式⑴化合 物為其中W為其中p為〇、n為丨且¥為n(rC)c⑴)Rd之式（⑴) 基之化合物。 依另-特定目的’W為式（IV)之基，其中RZ為氯。 依另-特定目的，w為式(IV)之基，其中R、c"烷基， 例如甲基、乙基等。依另m的，w為式（以）之基， 其中R為以-OH或以Cb3烧氧基取代之c2 3^基，例如 經乙基、f氧基乙基等。依另—特定目的，w為式（⑺之 基，其中Rz為曱基。 依特定目的，W為式（IV)之基，其中。 依另一特定目的，W為式（IV)之基，其中m為2。 依特定目的，W為式（IV)之基，其中qgi。 依另一特定目的’ W為式（IV)之基，其中9為2。 依特定目的，W為式（IV)之基，其中Z為NC(〇）Rg，其中 為汝式（IV)中之定義。依其他特定目的，W為式（IV)之 基其中Z為NC(〇)Rg，其中Rg為視情況以_〇H取代之 烷基，或Rg為甲基。 依特定目的’ W為式（IV)之基，其中Z為S(〇）2。 匕依将定目的，w為式（Iv)之基，其中2為1^(〇）21^，其中 係士式（iv)中之定義。依其他特定目的，w為式（^)之 基其中Z為NS(〇)2Rh，其中Rh為視情況以烷基或 以’oven烧基取代之曱基。…之代表性值包含曱基、 99256.doc 13 200533348 <112環戊基、己基、-ch2so2ch3、及 _CH2s〇2C2H5。 依又另一其他特定目的，w為式（IV)之基，其中2為 ns(o)2ch3 〇 依另一特定目的，式⑴化合物為其中w為其中111為1且01 為1之式（IV)基之化合物。依又另一特定目的，式⑴化合 物為其中W為其中㈤為i，q為1且112為甲基之式（IV)基之化 合物。 , 本發明之一目的係提供一種式⑴之化合物，其中r1為氫 或鹵基，R2為異丙基或C4_5環烷基，且|係如式⑴中之定 義。 本發明另一目的係提供式⑴之化合物，其中·· R為氯或鹵基； R2為Cm烷基或c4_5環烷基；且 W係選自如下： ⑴式（II)之基，其中X為NC(〇)CH3、s(〇)2或 I NS(0)2CH3 ; (π)式（m)之基，其中？為0，11為1且¥為 nch3c(o)ch3 ;及 (111)式（IV)之基’其中甲基，m為i，q為liZ為 NC(0)CH3、S(0)2 或 NS(0)2CH3。 本發明另-目的係提供一種式⑴化合物，其中R1為氮或 函基，R2為C3·4烷基或Cq環烷基，且w為式（π)之基，其 中 X為 NC(〇）CH3、S(〇)^NS(〇)2CH3。 本發明另-目的係提供一種式⑴之化合物，其為下式 99256.doc -14- 200533348 (v)之化合物：

/矿Ο Λ Ν R2 (V) 其中

R1、R2及X為上述任——般、特定或列舉之值。 本發明又另一目的係提供下式（VI)化合物：

R2

膏W (VI) 其中R1、R2及W均取自下表I中所示之值。

表I 實例編號 R1 R2 W 1 Η ϊ-Pr n j〇 -•-Ν N一\ 1 \^/ \ 2 Η i-?r ~：-NCN^〇 3 Η z-Pr /0 -：-N S〔 'x 〇 4 Η z-Pr ,/—\ ° 一丨一N N—S— * ^ ΰ 99256.doc -15 - 200533348

5 Η z-Pr —V/N 6 Η z-Pr —丨一N N 1 \_/ 0 7 Η i-?r : "rN^ γ 8 Η z-Pr -：-c-y 9 Η ί-Pr -i-^y 10 Η z-Pr -Oy 11 Η z-Pr 〇 12 Η i-Pr rfH 13 Η i-?x 〇 14 Η z-Pr 〇 15 Η z-Pr o^N 人 1 16 Η z-Pr ·:-人 17 Η z-Pr 十 H 〇 99256.doc -16- 200533348

18 Η “Pr 19 Η z-Pr Η 〇 20 Η /-Pr 9 1 21 Η z-Pr -i-N-CNY 1丨 0 22 Η /-Pr -i-N-CNY 1 ο 23 Η /-Pr -;-ν-〇νΥ _ 1 0 24 Η z-Pr | | 〇 25 Η z'-Pr -;-Ν、、，Οψ 1 1 〇 26 Η z-Pr •ί-/¾5 27 · Η z'-Pr -i-N^ 'S OH 28 Η z-Pr 29 Η z-Pr 99256.doc -17- 200533348 30 Η z-Pr ν-〇ν、!/ I I II 1 〇 31 F /-Pr 、Γ^\ P —丨-N N-\ 32 Η «-Pr ,/~~\ P 33 Η «-Bu ,/~λ P —丨-N N一X 1 \^/ \ 34 Η 環丁基 | ^ P 一丨-N N—\ 35 Η 、r~\ P -丨-N N-\ 1 \/ \ 36 Η z-Pr - 37 Η z-Pr 一 -〇.'v 38 Η /-Pr :ΝΠ | | 0 39 . Η z-Pr ” AT 40 Η z-Pr

本文中慣用之化學命名針對實例1之化合物說明： 99256.doc -18- 200533348 〇

依據MDL Information Systems，GmbH (德國法蘭克福）所提 供之AutoNom軟體，其被命名為異丙基羧酸 {(lS，3R，5R)-8-[2-(4-乙醯基-I畊-；[•基）乙基]氮雜雙環 [3.2.1]辛-3-基}醯胺。命名（1s，3r，5r)敘述與雙環系環系統 有關之化學鍵相對位置，其係以實線或虛線敘述。該化合 物另稱之為N-[(3-橋）-8-[2-(4_乙醯基-哌啡基）乙基]_8-氮 亦隹雙環[3.2.1]辛-3 -基]-1-(1-曱基乙基）-ΐΗ- 4丨哇_3-甲醯 胺。上表I中所述之所有化合物中，吲唑曱醯胺係與氮雜 雙環辛基橋接。 特別提及者為以下化合物： 1-異丙基-1H-吲唑-3-羧酸{(lS，3R，5R)-8_[2-(4-乙醯基哌 喷_1-基）乙基]氮雜雙環[3.2.1]辛-3-基}醯胺； 1-異丙基唑 _3_羧酸{(lS，3R，5R)-8-[2-(l，i_二氧代 _ 1λΛ硫嗎琳基）乙基氮雜雙環[3·2.1]辛_3-基}酿胺； 1-異丙基-1Η-吲唑-3-羧酸{(lS，3R，5R)-8-[2-(4-甲烷磺醯 基哌畊基）乙基氮雜雙環[3.2.1]辛_3-基}醯胺； 1-異丙基-1H-，唑-3-羧酸{(18,3尺，5反)-8-[2-(3-(乙醯基_ 甲基-胺基）吡咯啶_1-&)乙基]_8-氮雜雙環[321]辛_弘基》 醯胺； 1-異丙基丨唑-3-羧酸 99256.doc 19 200533348 基甲基胺基）吡咯啶-1-基）乙基]-8-氮雜雙環[3.2.1]辛-3-基} 醯胺； 1-異丙基-1H-啕唑-3-羧酸{(lS，3R，5R)-8-[2-((S)-3-(乙醯 基甲基胺基）吡咯啶-1-基）乙基]-8-氮雜雙環[3·2· 1]辛-3-基} 醯胺； 1-異丙基-1H_ 吲唑-3-羧酸{(lS，3R，5R)-8-[2-[(l -乙醯基-吡咯啶-3-基）-甲基胺基]乙基]-8-氮雜雙環[3.2.1]辛-3-基} 醯胺； 1-異丙基-1H-吲唑-3-羧酸{(lS，3R，5R)-8-[2-[((R)-l-乙醯 基-吡咯啶-3-基）甲基胺基]乙基]-8-氮雜雙環[3.2.1]辛-3-基}醯胺； 1-異丙基-1H-啕唑-3-羧酸{(lS，3R，5R)-8-[2-[((S)-l -乙醯 基-吡咯啶-3-基）甲基胺基]乙基]-8-氮雜雙環[3 ·2·1]辛-3- 基}醯胺； 1-異丙基-1Η-吲唑-3-羧酸（（lS，3R，5R)-8-{2-[(l-甲烷磺醯 基-吡咯啶-3-基）甲基胺基]乙基卜8-氮雜雙環[3.2.1]辛_3_ 基）醯胺； : 1-異丙基-ίΉ-啕唑-3-羧酸（（lS，3R，5R)-8-{2-[((R)_l-曱烷 磺醯基吡咯啶-3-基）曱基胺基]乙基卜8-氮雜雙環[3.2.1 ]辛-3 -基）胺； 1-異丙基-1H-喇唑-3-羧酸（（ls，3R，5R)-8-{2-[((S)-l -甲烷 磺醯基吡咯啶-3-基）甲基胺基]乙基卜8-氮雜雙環[3.2.1]辛-3-基）醯胺； 1-異丙基-1H-啕唑-3_羧酸{(is，3R，5R)-8-[2-((l，l-二氧代 99256.doc -20- 200533348 四氫-1λ6-噻吩-3-基）曱基胺基）乙基]_8_氮雜雙環[32.1]辛- 3 -基}酸胺； 1-異丙基-1Η-吲唑-3-羧酸{(iS，3r，5r) 8 [2 ((r)_(i，i^ 氧代-四氫-ίλ6-噻吩-3-基）甲基胺基）乙基]_8_氮雜雙環 [3·2.1]辛-3-基}醯胺；及 1-異丙基-1Η-4 唑-3_羧酸{(1卜二

氧代四氫-1λ6-噻吩-3-基）甲基胺基）乙基訌氮雜雙環 [3·2·1]辛-3-基}醯胺。 如以上說明，本發明化合物可含對掌性中心。據此，本 發明包含消旋混合物、純立體異構物，及該異構物之富含 立體異構物之混合物，除非另有說明。當顯示特殊之立體 異構物時，熟習本技藝者應了解除非另有說明，否則組合 物中可能存在微量之其他立體異構物，因此全部組合物之 用途並不排除該等其他異構物之存在。 定義 當敘述本發明之化合物、組合物及方法時，以下名詞之 意如下，除非矛有說明。 名詞”烷基”意指可為直鏈或分支或其結合之單價飽和烴 基除非另有疋義，該燒基一般含有1至1 〇個碳原子。代 表丨生烷基包含例如甲基、乙基、正丙基（n_pr)、液丙基（卜 Pr)、正丁基（n_Bu)、第二丁基、異丁基、第三丁基、正戊 基、正己基、正庚基、正辛基、正壬基等。 名同”烷氧基’’意指單價基烷基，其中之烷基為如上 述之定義。代表性烷氧基包含例如甲氧基、乙氧基、丙氧 99256.doc 200533348 基、丁氧基等。 名詞”環烷基”意指可Α σσ ^ μ 為早％或多環之單價飽和π e f 除非另有定義，否則兮p ^ # 1貝钇和妷裱基。 〜成％烷基一般含右1 代表性環烷基包令仏丨個碳原子。 環 基、環戊基、環己 代表性環烧基包含例如環丙基 基、環庚基、環辛基等 基mm埃基。 名詞’’治療有效之量，，音枚 夺 〜才日*投樂於需要治療

以影響治療之量。 欲i病患時足 本文中所用之名詞，， 類）中之疾病、障礙或 (a)預防出現疾病、 治療； 療"意指病患如哺乳動物（尤其是人 醫學症狀之處置，包含·· 障礙或醫學症狀 亦即病患之預防 ㈨減輕疾病、障礙或醫學症狀，亦即使病患、 障礙或醫學症狀消除或造成復原； ' (御疾病、障礙或醫學症狀，亦即減緩或抑制病患 之疾病、障礙或醫學症狀之發展；或 ⑷減te病患之疾病、障礙或醫學症狀之徵候群。 名:司醫藥可接受性鹽’，意指由投藥於病患如哺乳動物為 可接叉之酸或鹼製備之鹽。該言可由醫藥可接受性無機或 有機馱及由w樂可接受性鹼衍生。通常，本發明化合物之 醫藥可接受性鹽係由酸製備。 由醫藥可接受性酸衍生之鹽包含（但不限）乙酸、己二 酉文、苯％酸、笨甲酸、樟腦磺酸、檸檬酸、乙烷磺酸、富 ^ 葡糖4、谷胺酸、氫溴酸、鹽酸、乳酸、馬來酸、 99256.doc -22- 200533348 蘋果酸、扁桃酸、甲烷磺酸、黏酸、硝酸、泛酸、碟酸、 丙酸、水揚酸、丁二酸、硫酸、酒石酸、對-甲笨石黃酸、 辛納芙酸（xinafoic)(l-羥基-2-萘酸）、萘-i，5-二磺酸等。 名詞π溶劑化物’’意指藉由一或多個溶質分子，亦即本發 明化合物或其醫藥可接受性鹽，與一或多個溶劑分子形成 之錯合物或凝聚物。該溶劑化物一般為具有實質上固定莫 耳比之浴質與溶劑之結晶固體。代表性溶劑包含例如水、

甲醇、乙醇、異丙醇、乙酸等。當溶劑為水時，形成之溶 劑化物為水合物。 需了解名詞”或其立體異構物之醫藥可接受性鹽或溶劑 化物”將包含鹽、溶劑化物及立體異構物之所有變換，如 式（I)化合物之立體異構物之醫藥可接受性鹽之溶劑化物。 名詞’’胺基保護基”意指適用於在胺基之氮處避免不必要 反應之保濩基。代表性胺基保護基包含（但不限）甲酿基； 醯基，例如烷醯基如乙醯基；烷氧基羰基如第三丁氧基羰 基（B〇C);芳基甲氧基羰基如苄基氧基羰基（Cbz)及9-芴基 甲氧基Μ基（FmGe);芳基甲基如f基_、三氟甲院續酸 土（）及’1 一（4 _甲氧基苯基）甲基；石夕烧基如三，基矽 烧基（™S)及第三丁基二甲基碎烧基（TBDMS)等。 一般合成程序 本^月化'物可使用以下—般方法及程序，自可輕易取 付之起始物貝製備。雖然本發明之特殊目的已說明於以下 反應圖中，但熟f本技藝者應了解本發明之所有目的均可 使用本文中-所述之方法或使用熟習本技藝者已知之其他方 99256.doc >23- 200533348 法、試劑及起始物質製備。亦應了解雖然已提供—般或較 佳之製程條件（亦即，反應溫度、時間、反應物之莫耳 比、溶劑、壓力等），但亦可使用其他製程條件，除非另 有說明。最佳之反應條件可隨著所用之特殊反應物或溶劑 而定，但該等條件可由熟習技藝者以常用之最佳程序決 定。 另外，如熟習本技藝者所了解，可能需要慣用之保護基 以避免某些官能基經歷不期望之反應。特殊官能基用之適 用保護基之選擇以及供保護及去保護用之適用條件均為技 藝中所習知。例如，許多保護基及其導入及移除敘述於τ. W· Greene 及 G· Μ· Wuts，Orga/n.c 办Third Edition，Wiley，New York，1999及其中所 述之參考文獻中。 依其一合成方法’式⑴化合物係如反應圖A中之說明般 製備。（以下反應圖中所示之取代基及變數之定義如上， 除非另有說明）° 99256.doc 24- 200533348

其中P1代表胺基保護基如第三丁氧基羰基（Boc)或苄基氧基 羰基（Cbz)。 如反應圖A中所示般，經保護之胺基氮雜雙環辛烷，或 一般為胺基托烧（aminotropane)l係先與經取代之lH-p?卜坐_ 羧酸2反應。通常，反應係藉由使2與至少一當量，一般約 1至約2當量之活化劑如硫醯氯或草醯氯在芳族稀釋劑如甲 本、笨、一甲苯等之中接觸，先將2轉化成酸氯化物。該 反應一般係在約80 °C至約12〇。〇間之溫度下進行約15分鐘 至約2小時，或直到反應實質完全為止。 該酸氣化物一般係添加於約1當量胺基托烷1之雙相混合 物中，以形成經保護之中間物，其係以標準程序萃取。1 99256.doc -25- 200533348 之雙相混合物一般係藉由將丨溶於如上所用之芳族稀釋劑 中，且添加含過量鹼如氫氧化鈉或氫氧化鉀，例如約^至^ 當量之鹼之水溶液。 或者，中間物1與羧酸2之醯胺偶合可藉由將2轉化成活 化之酯，如N-羥基丁二醯亞酯或對_硝基苯酯，或 酉欠米唑進行，在使之與胺基托烷丨反應。依又另依方法， 係使羧酸2在偶合劑如丨，弘二環己基羰二醯亞胺（dcc)、^ (3-二甲基胺基丙基）_3_乙基羰二醯亞胺（EDC)或苯并三唑-1-基氧基三吡咯啶-鱗六氟磷酸鹽（PyBop)存在下，且視情 況與1-羥基-7-氮雜苯并三唑（H〇At)結合下，與中間物丨反應。 保護基P1係藉由標準程序移除，以獲得式3之中間物。 例如，保護基B0C —般係藉由以酸如三氟乙酸處理移除。 例如保護基Cbz—般係藉由在適當之金屬觸媒如鈀/碳上氫 解移除。 中間物3在藉由與二甲氧基乙醛反應環原性的N_烷化， 獲知式4之中間物。該反應一般係藉由使3與約丨至約4當量 之二甲氧基乙醛在惰性稀釋劑中，於約1至約2當量之還原 劑存在下接滷進行。該反應通常是在週圍溫度下進行約工 至約2小時，或直到反應實質完全為止。適用之惰性稀釋 劑包含一氣甲烷、三氣曱烷、四氣乙烷等。一般 之還原劑包含三乙醯氧基硼氫化鈉、硼氫化鈉及氰基硼氣 化鈉。產物4係藉由標準程序單離。 接著’使二曱氧基乙基中間物4在強酸之水溶液，例如 3N或0N HC1中水解，獲得二羥基乙基中間物5。需了解雖 99256.doc -26- 200533348 然中間物5以醛水合物之形式示於反應圖A中，但中間物5 同樣的亦可以醛之形式敘述。該反應一般係在約50°C至約 l〇〇°C之溫度下進行15分鐘至約2小時，或直到反應實質上 完成為止。產物5可以鹽形式例如HC1鹽或在鹼萃取後以經 中和之種類單離。或者，粗中間物5可在未經進一步純化 下用於最後步驟中。 最後使中間物5與式H-W之一級或二級胺進行還原性偶 合’獲得式（I)之產物。通常，係製備含約1至約3當量，例 如約2當量之胺及還原劑如三乙醯氧基硼氫化鈉等之惰性 稀釋劑如二氯甲烷溶液。中間物5係添加於胺混合物中。 反應一般係在周圍溫度進行約15分鐘至約2小時，或直到 反應實質完成為止。式⑴之粗產物係以慣用之程序萃取。 產物可藉由自惰性稀釋劑例如乙醇、異丙醇、甲醇、乙 晴、二氯乙烷或其混合物結晶，以鹽形式純化。 式⑴化合物可藉由使式⑴化合物（其中R2為氫）N-

或者，3 烧化製備，

中所用之經保護胺基托烷1係由輕 。例如’當保護基P1為Boc時，經 99256.doc ' 27 - 200533348 保護之橋胺基托烷Γ係藉由反應圖B中說明之程序製備

反應圖B

MeO^O^OMe + H〇2C^X/C02H 6 7

如以下實例1 a中之詳述，為製備經保護之中間物1，，、， 先在酸性水溶液中，於缓衝劑如磷酸氫鈉存在下，使2 $ 二甲氧基四氫吱喃6與約1至約2當量，較好約1 · 5當量之节 基胺及稍過量例如約1 · 1當量之1，3-丙酮二緩酸7接觸。反 應混合物加熱至約60至約100°C，以確保產物，8_节芙8 氮雜雙環[3·2· 1]辛-3-酮8(通稱為N-苄基脫燒_)中之任何 羧基化中間物脫羧基。 中間物8 —般係在過渡金屬觸媒存在下，於氫氣中與猶 過量之二碳酸二-第三丁酯（通稱為（B〇c)2〇)，例如約ι；ι當 量反應，獲得經Boc保護之中間物9，3-氧代氮雜雙環 [3·2·1]辛烷-8-羧酸第三丁酯。該反應一般係在週圍溫度下 進行約12至約72小時。最後，使中間物9在惰性稀釋劑如 甲醇中及過渡金屬觸媒存在下，與大幅過量例如至少約2 $ 當量之甲酸銨接觸，獲得具有高立體比例如橋對掛比>99 橋、、、Ό構之產物1。该反應一般係在週圍溫度下進行約12 、’、勺72小枯，或直到反應貫質完全為止。較好逐次添加甲 酸銨試劑。例如，使中間物9與約15至約25當量之起初部 99256.dc, -28- 200533348 分之甲酸錢接觸。約12至約3 6小時後，添加額外部分約5 至約10當量之甲酸銨。後續添加可於類似期間後重複。產 物Γ可藉由慣用程序如鹼萃取純化。 唾羧酸2可藉由技藝中已知且於例如Harada等人，

Chem· and Pharm Bull· 1995, 43, 1912-30之艾獻中反以 Ύ 實例中敘述之程序輕易的製備。

胺H_W為市售或可藉由標準程序自通用之起始物質輕易 的製備。 製備本發明代表性化合物或其中間物之特定反應條件及 其他程序有關之進一步細節敘述於以下實例中。 、據此，依方法目的，本發明提供製備式⑴化合物或其鹽 或立體異構物或經保護衍生物之製程，該製程包括使式$ 之=合物與式H-W之胺反應，獲得式⑴化合物或其鹽或立 體異構物或經保護之衍生物。 尽發明上提供式 、κ i1體 護之衍生物，其中RlR2均如式⑴中之定義u 依另一合成方法，式⑴ > — °物係如反應圖c中之說明 奴，猎由使經取代之1H_啕唑# 備。 1瑷馱2與式10之中間物偶合製

99256.doc -29- 200533348 反應圖c之反應一般係在上 胺偶合條件下進行。 、料2與中間物1反應之酸 備： 式1 〇之中間物可藉由使下式 田使卜式11之中間物去保護製

P 丨一NH

11 其中P1代表胺基保護基。 式11之中間物可使用與上述烷化、環原性胺化及其他反 應類似之程序，及/或使用熟習本技藝者習知之其他反 應’自輕易取得之起始物質製備。製備中間物此列舉製 程路徑⑴至（V)說明於反應圖D中。

反應圖D 0) + H—w

其中L代表離去基如漠或峨基。 依又另一合成方法，式（I)化合物係籍由使反應圖A中所 99256.doc -30- 200533348 物偶合製備。需了解雖然中間 中，但中間物12同樣的可以醛 述之式3中間物與式12中間 物12以駿形式示於反應圖〇 水合物之形式敘述。 醫藥組合物

j發明之哨唑-甲醯胺化合物一般係以醫藥組合物形式 技藥於病患。該醫藥組合物可藉由任何可接受之投藥路= 投予病患，包含（但不限）口服、直腸、陰道、鼻内、吸 入、局部（包含經皮）及非經腸胃之投藥模式。 據此，依其組合物目的之一，本發明係針對包括醫藥可 接X性載劑或賦形劑及治療有效量之式⑴化合物或其醫藥 可接叉性鹽之醫藥組合物。視情況，該醫藥組合物若需要 可含其他治療劑及/或調配劑。 本發明之醫藥組合物一般含治療有效量之本發明化合物 或其醫藥可接受性鹽。通常，該醫藥組合物會含有約0· i 至約95%(wt)之活化劑，包含約i至約7〇%(wt)，如約5至約 60%(wt)之活化劑。 任何慣用之舉劑或賦形劑均可用於本發明之醫藥組合物 中。特殊載痢或賦形劑或載劑與賦形劑結合之選擇將依欲 使用以治療特殊病患之投藥模式或醫學症狀類型或病症狀 悲而定。依此’特殊投藥模式用之適用醫藥組合物之製備 同樣屬熟習醫藥技藝者之範圍。另外，該組合物之成分係 購自例如 Sigma，Ρ·〇· Box 14508，St· Louis，MO 63 178。進 一步5兒明之t貝用调配技術係敛述於及打以㈣··夢廣身夢 及實務（The-Science and Practice of Pharmacy)，第 20版， 99256.doc -31 - 200533348

Uppincott Williams & White, Baltimore, Maryland (2000) ’及H.C· Ansel等人’醫藥劑型及藥物輸送系統 {Pharmaceutical Dosage Forms and Drug Delivery

Systems) ^ ^ Lippincott Williams & White, Baltimore,

Maryland (1999)中。 可用作醫藥可接受性載劑之物質之代表性實例包含（但 不限）以下：（1)糖如乳糖、葡萄糖及蔗糖；（2)澱粉如玉米 澱粉及馬鈴薯澱粉；（3)纖維素如微結晶纖維素及其衍生 物，如羧基甲基纖維素鈉、乙基纖維素及纖維素乙酸酯； (4)粉末狀黃耆膠；（5)麥牙；（6)明膠；（7)滑石；（8)賦型劑 如可可亞奶油及栓劑用蠟；（9)油如花生油、棉花子油、紅 花油、芝蔴油、撖欖油、玉米油及大豆油；（1〇)二醇如丙 二醇；（11)多元醇如甘油、山梨糖醇及聚乙二醇；（12)酯 =油酸乙醋及月桂酸乙醋；（13)石花菜；（14)緩衝劑如^ 氧化鎂及氫氧化鋁；（15)藻膠酸；（16)無熱源水；（17)等滲 壓食鹽水；（l8)Ringer溶液；（19)乙醇；⑽魏鹽緩衝劑 溶液；及（21)f藥組合物中使用之其他無毒可相容物質。 本發明之醫藥組合物—般係藉由使本發明化合物與醫藥 可接受性載劑及一或多帛需要或期望之選用《分充分且 全的混合或摻合製備，所得均勻摻合之混合物可再使用慣 用程序及設備成型或裝填成錠劑、膠囊、藥丸等。 貝 本發明之醫藥組合物較好包裝成單位劑型。名詞"單位 劑型”係指適用於投藥於病患之物理上不連續之單元，亦 即各單元含.有經計算以便單獨或與—或多種額外單元產^ 99256.doc -32- 200533348 所-療效之預定量之活化劑 囊、錠劑、藥丸等 依較佳具體例’本發明之醫藥組合物適用於口服投藥。 口服投要用之適用醫藥組合物可為膠囊、錠劑、藥丸、率 雕φ樂囊、糖衣錠、粉劑、細顆粒；或為水性或非水性液 ;Λ:溶液或懸浮液；或為水包油或油包水之液態乳液，· 或為甘草劑或糖漿等· 作為活性成分。、’ 有預定量之本發明化合物 率態劑型（亦即膠囊、鍵劑、藥丸等）口服投 活性成八醫藥組合物一般會包括本發明化合物作為 磷酸-& 4多種醫藥可接受性载劑如檸檬酸鈉或 或延視情況或或者，制態劑型亦可包括：0)填料 41長劑，如澱粉 糖、甘露糖醇、及維素、乳糖、蔬糖、葡萄 素、藻膠…㈣V夂’(2)結合劑如氧基甲基纖維 拉伯膠；（3二=聚乙稀基十各㈣、嚴糖及/或阿 馬鈴薯咬太：、〜1如甘油；⑷崩解劑如瓊膠、碳酸鈣、 或木屬瓣粉、藻膠酸、特定之 納；〜/ ®夂鹽及/或碳酸 / ‘劑如十四烷醇及/或乙二醇 收劑如古戾 早應月曰酉夂酯；（8)吸 及/或膨潤土；(9)潤滑劑如滑石 合物；(10)/目體聚乙二醇、月桂基硫酸鈉及/或其混 (10)者色劑；及（11)緩衝劑。

本發明7 A 劑、增甜物中亦可含離型劑、濕潤劑、包衣 加味制及香料劑、保存劑及抗氧化劑。醫藥 99256.doc -33- 200533348

可接受性抗氧化劑之實例包含··（1)水溶性抗氧化劑如抗壞 i酸、cystein鹽酸鹽、硫酸氫鈉、偏硫酸氫鈉、亞硫酸 鈉等；（2)油溶性抗氧化劑如棕櫚酸抗化血酯、丁基化羥 基苯甲醚（BHA)、丁基化羥基甲苯（BHT)、卵磷酯、沒食 子酸丙酯、α-生育酚等；及（3)金屬蜇合劑如檸檬酸、乙二 月女四乙酸（EDTA)、山梨糖醇、酒石酸、鱗酸等。鍵劑、膠 囊、藥丸等用之包衣劑包含腸衣包衣所用者，如纖維素乙 酉欠S曰鱗酸S曰（CAP)、聚乙酸乙酯鱗酸鹽（pVAp)、經基丙 基甲基纖維素磷酸鹽、甲基丙烯酸/甲基丙烯酸酯共聚 物、纖維素乙酸鹽苯六酸酯（CAT)、羧基甲基乙基纖維素 (CMEC)、經基丙基曱基纖維素乙酸酯丁二酸酯（HpMcAs) 等。 若需要，本發明之醫藥組合物亦可使用例如不同比例之 經基丙基甲基纖維f或其他聚合物&質、月旨質及/或微形 球调配，以使活性成分减緩或控制釋出。 另外，本發明之醫藥組合物可視情況含有霧化劑，且可 經调配使其僅#出活性成&，或較好視情況以⑭遲方式在 某些部分之腸胃道中釋出。可使用之殖人組合物實例包含 ?《合物物質及虫鼠。活化成分亦彳為若適合之具有一或多種 上述賦型劑之微膠囊形式。 溶解劑及乳化劑 口服投藥用之適用液體劑型包含說明用之㈣可接受性 乳液、微乳液、溶液、懸浮液、糖漿及甘草劑。該μ劑 型-般包括活性成分及惰性稀釋劑，例如水或其他溶劑: 乙酸乙 如乙醇、異丙醇、碳酸乙酯 99256.doc -34- 200533348 酯、苄基醇、苯甲酸苄酯 ^ 是棉龙早、a斗 —、1，3 - 丁二醇、油（尤其 疋棉化子油、花生油、玉 及芝蒸 、，、胚芽油、橄欖油、蓖麻油 及之麻油）、乙二醇、四 紅a & 穴南辱、聚乙二醇及山梨糖醇 野之知肪酸酯及其混合物。縣一 八 #J 心洋液除活性成分外可含懸浮 月J例如乙虱基化異硬脂基醇、取b 糖醇《、微結晶纖維素、偏Γ㈣乙基山梨糖醇及山梨 黄耆膠及其混合物。 帛⑼化铭、耗土、瑗膠及 或者，本發明之醫藥組合 ^^^ffl „ - 物係針對吸入投藥調配。吸入 仅市用之適用醫樂組合物一、 八舲 ^〆 、又為氣溶膠或粉劑形式。該組 於吸入^ _ 翰迗衣置如計量投藥用吸入器、乾 "刀及入态、贺務器或類似之輸送裝置。 當使用加壓容器吸入投筚砗 ^, 又条^，本發明組合物一般包括活 性成分及適用之推進劑，如二 Λ ^ 虱—齓甲烷、三氯氟甲烷、

一虱四亂乙烷、二氧化碳或A 及/、他適用之氣體。 另外’醫藥組合物可為白 吸入σσ田 〜括本务明化合物及適用於粉劑 及入為用之粉劑之膠囊或筚 用夕Μ十 飞π衣（由例如明膠製成）形式。適 用之粉劑基質包含例如乳糖或殿粉。 本發明化合物亦可使用締成 華 、皮輸k糸統及賦型劑經皮投 条。例如，本發明化合物 一 _ σα 還知升劑如丙二醇、聚乙 一転早月桂酸酯、氮雜環垸R μ Μ +cs. f j寺t貝此合，且加於貼片或 讀似之輸送系統中。若兩 料… 右而要貝“亥經皮組合物中可使用包含 多* Η 、乳化劑及緩衝劑之額外賦型劑。 以下調配物說明本發明之代表性醫藥組合物： 99256.doc -35- 200533348

調配物例A 口服投藥用硬質明膠膠囊係如下列般製備：

使成分充分摻和接著通過第μ網目us篩 網，且裝填入碜質明膠膠囊中（每膠囊2⑽毫克組合物）。·師 成分 量 - 本發明化合物 50毫克 乳糖（噴霧乾燥） 200毫克 硬脂酸鎮 1 〇毫克 ____ 代表性程序：使成分充分摻和， 接著裝塡入映質明膠膠 囊中（每膠囊260毫克組合物）。 調配物例B 口服投藥用硬質明膠膠囊係如下列般製備： 成分 量 本發明化合物 20毫克 澱粉 89毫克 微結晶纖維素 89毫克

調配物例C 口服投藥用膠囊係如下列般製備： 量 成分 本發明化合物 聚氧伸乙基山梨糖醇酐單油酸酷 澱粉粉末 1 〇毫克 50毫克 —毫克— 明膠膠囊中 代表性程序：使成分充分摻和，接著裝填入 99256.doc -36> 200533348 (每膠囊3 10毫克組合物）。調配物例D 口服投藥用錠劑係如下列般製備 成分 量 本發明化合物 ~~-— 澱粉 微結晶纖維素 聚乙烯基吡咯啶酮（水中丨〇重量％) 羧基甲基澱粉鈉 ° 硬脂酸鎂 滑石 ~~；-——~-—______ 代表性程序：使活性成分、澱粉及纖維素通過編號牦網 目U.S·篩網且充分混合。使聚乙烯基毗咯啶酮之溶液與所 知私末此a接著使該混合物通過編號14網目之υ·S·筛 網。因此製成之細微顆粒在5〇·6(Γ(：下供乾且使之通過編 號二網目之U.S.筛網。接著將縣甲基殿粉納、硬脂酸鎮 2石（先通過編號6〇網目之us•篩網）添加於細顆粒中。 /吧合後，使混合物於打錠機上 、广 錠劑。 : 彳又侍重量100毫克之調配物例E 口服投藥用錠劑係如下列般製備： 成分 __ 本發明化合物 微結晶纖維素 發煙二氧化矽 硬脂酸 5毫克 50毫克 35毫克 4毫克 4.5毫克 〇·5毫克 1毫克

25毫克 400毫克 10毫克

99256.doc 37- 200533348 代表性程序：使成分充分摻和，接著經歷著/ (每錠440毫克組合物）。 化成錢劑

調配物例F 口服投ffr用早一刻痕鍵劑係如下列般製備· 量 15毫克 50毫克 25毫克 1 20毫克 5亳 成分 本發明化合物 玉米澱粉 交聯縮甲基纖維素鈉 乳糖 硬脂酸锃 代表性程序：使成分充分摻和，且經壓著形成單一刻带 錠劑（每錠215毫克組合物）。

調配物例G 口服投藥用懸浮液係如下列般製備：

成分 _ 本發明化合物 萄馬酸 氯化鈉 · 對羥基笨甲酸甲酯 對羥基笨曱酸丙酯 細顆粒糖 山梨糖醇（70%溶液）

Veegun k(Vanderbilt Co.) 加味劑 調色劑 99256.doc -38- 200533348 代表性程序··使成分混合形成每ι〇毫升懸浮液含10毫克 活性成分之懸浮液。 調配物例Η 吸入投藥用乾粉劑係如下列般製備： 本發明化合物 乳糖 成分 量 1.0毫克 25亳克 代表性程序：活性成分經微米化再與乳糖摻和。再將經 換和之混合物裝填於明膠吸人匣中。Ε之内容物係、使用粉 劑吸入器投藥。

調配物例I 計量投藥吸入器中之吸入投藥用乾粉劑係如下列般掣 備： < 代表性程序：藉由將10克平均粒徑10微米之經微米化顆 粒之活性化合物分散於由0·2克卵碟醋溶於200毫升軟水中 形成之溶液中製備含5 wt%本發明化合物及01 wt%印填醋 之懸浮液。該懸浮液晶喷霧乾燥，且使所得物質微米化成 平均粒徑小於丄5微米之顆粒。將顆粒充塡於含有加壓 1，1，1，2 -四氟乙烧之g中。 調配物例J 注射調配物係如下列般製備··

本發明化合物 乙酸鈉緩衝溶液（〇·4 M) HC1(0.5 Ν)或 Na〇H(0.5 Ν) 7jC ί蒸I留 · 〇·2克 40毫升 加至pH 4 加至20 99256.doc -39- 200533348

代表性程序：使上述成分推和， 且使用〇·5 N HC1或〇·5 NaOH將pH調整為4±0·5。 調配物例Κ 口服投藥用膠囊係如下列般製備 • 成分 ψ _—- 本發明化合物 4.05毫克 微結晶纖維素（Avicel ΡΗ103) 259.2毫克 硬脂酸鎂 0 75 毫免 _- 代表性程序：使成分充分摻和， 再裝塡於明膠膠囊（Size ，White，Opaque)中（每膠囊264毫克組合物）。 調配物例L 口服投藥用膠囊係如下列般製備 • 1 分 曰 本發明化合物 8.2毫克 微結晶纖維素（Avicel PH103) 139.05毫克 硬脂酸鎂 〇·75臺矿_ 代表性程序；使成分充分摻和，再裝塡於明膠膠囊（Size #1，White，Opaque)中（每膠囊148毫克組合物）。 需了解適用於特殊投藥模式之本發明化合物之任何形式 (亦即，游離鹼、醫藥用鹽或溶劑化物）均可用於上述之醫 藥組合物中。 用途 本發明之喇唑-甲醯胺化合物為5_H丁*受體激動劑，且因 此期望可用·於治療受5-HT4受體調節或與[Η'受體活性有 99256.doc -40- 200533348 關之醫學症狀，亦即藉由以5_HT4受體激動劑處置改善之 醫學症狀。該醫學症狀包含（但不限）腸燥症（IBS)、慢性便 秘、機能性消化不良、延遲胃排空、胃食道逆流疾病 (GERD)、月輕癱 '糖尿病及原發性胃輕癱、手術後之腸 阻塞、腸擬阻塞及藥物引發之延遲輸送。另外，曾提出某 些5-HT4受體激動劑化合物可用於治療中樞神__

病，包含認知障礙、行為障礙、心情失調、及自率功能控 制障礙。 & 尤其，本發明化合物可增加腸胃道（GI)之螺動性，且因 此希望可用於治療哺乳動物（包含人類）中因減少蹲動性造 成之Gm疾病。該㈣動性疾病說明者包含慢性便秘、便 秘為主之腸燥症（C-IBS)、糖尿病及原發性胃輕癱、及機 能性消化不良。 ¥用於治療低GI道蠕動性或因5 _ H τ *受體調節之其他症 狀時，本發明化合物一般係以單一日劑量或以每日多劑量 :服投藥’但亦可使用其他投藥形式。活化藥劑之每劑投 藥量或每天投學總量—般會由醫師決定，端視相關環境而 定，包含欲治療之症狀、選擇之投藥路徑、投藥之實際化 合物及其相對活性、個別病患之年齡、體重及反應、病患 徵候群之嚴重性等。 治療低GI道螺動性或因5_ΗΤ4受體調節之其他症狀之適 用劑量希望在約0·_至約2G毫克/公斤/天之活化劑，包含 約0.0015至約i毫克/公斤/天。對於平均7〇公斤之人類，其 每曰量約為0.1至約70毫克之活化劑。 99256.doc 41 200533348 綱之一目的，本發明化合物可用於治療慢性便 秘。虽用於治療慢性便秘時，本發明化合物一般係以單一 曰劑f或以每日多劑量口服投藥。治療慢性便秘之劑量期 望之範圍為每天約〇 · 1至約70毫克。 依本發明另一目的，本發明化合物係用於治療腸燥症。 當用於治療便秘為主之腸燥症時，本發明化合物—般係以 單-曰劑量或以每曰多劑量口服投藥。治療便秘為主之腸 燥症之劑量期望之範圍為每天約01至約70毫克。 依本發明另一目的，本發明化合物係用於治療糖尿病胃 輕，。當用於治療糖尿病胃輕癱時’本發明化合物一般係 以單-曰劑量或以每曰多劑量口服投藥。治療糖尿病胃_ 癱之劑量期望之範圍為每天約01至約70毫克。 依本發明又另—目的，本發明化合物係』於治療機能性 植不良。當用於治療機能性消化不良時，本發明化合物 -般係以單一日劑量或以每日多劑量口服投藥。治療機能 性消化不良之劑量期望之範圍為每天約01至約70毫克。 本發明亦提供治療具有與5_叫受體活性有關之疾病或 症狀脂哺乳動物’該方法包括對哺乳動物投予治療有效量 之本發明化合物或包括本發明化合物之醫藥組合物。 即使本發明之化合物為5_叫受體激動劑，該化合物亦 :用作調查或研究具有5_町4受體之生物系統或樣品，或 尋找新穎5_HT4受體激動劑之研究工具。再者，因為本發 明化合物相較於與其他5_HT亞型，尤其是5_hT3受體之2 合，呈現針,5-HT4受體之結合選擇性，因此該化合物2 99256.doc -42- 200533348 其可用於5·ΗΤ4受體在生物系統或樣品中之選擇性激動機 制作用之研究。任何具有5-ΗΤ4受體之適用生物系統或樣 品均可以體外或體内進行用於該研究中。適用於該研究之 代表性生物系統或樣品包含（但不限）細胞、細胞萃取液、 血漿膜、組織樣品、哺乳動物（如小鼠、老鼠、天竺鼠、 兔、狗、豬等）等。 依本發明之該目的，包括5-ΗΤ4受體之生物系統或樣品 系/、5 ΗΤ4 X體激動$之本發明化合物接觸。再使用慣用 之程序及設備如放射結合分析或功能分析測定使5 _ΗΤ4受 體激動之作用。該功能分析包含細胞内環狀腺苷單磷酸酯 (c AMP)之受配位子調節之改變、酵素腺苷酸環化酶（其可 a成cAMP)活性之欠配位子調節之改變、經由對類似 物之GTP類似物之受體催化交換，將鳥苷三磷酸酯⑴τρ) 之類似物如[35S]GTP7S(鳥苷5，-〇-(γ·硫基）三磷酸酯）或 GTP-Eu併於單離細胞膜中之受配位子調節之改變、游離 細胞内鈣離子（以例如螢光-鍵聯之顯像板讀取機或 Molecular Devkes，Inc^FupR⑧測量）之受配位子調節之 改艾且測量有絲分裂原活化蛋白質激酶（MAPK)活化作 用。本發明化合物可激動或增加5_HT4受體在上述任一功 月匕刀析或類似性質之分析中之活性。本發明化合物之5_ HT4^：體激動量一般在i奈莫耳濃度至約5〇〇奈莫耳濃度 間。 另外’本發明化合物可作為用以發現新穎5_HT4受體激 動劑之研究工具。依該具體例，係使試驗化合物或試驗化 99256.doc -43 - 200533348 合物群之5-ΗΤ4受體結合或功能數據與本發明化合物之^ ΗΤ4受體結合或功能數據比較，以鑑定可能之任何存在之 具有極佳結合或功能活性之試驗化合物。作為另一具體例 之本發明該目的包含比較數據之產生（使用適用之分析）及 分析試驗數據以確定所關心之試驗化合物。 其他性質中，已發現本發明之化合物為5_11丁4受體之有 效激動劑，且在放射配位分析上對SHI受體亞型呈現優 • 於5_ΗΤ3受體亞型之實質選擇性。另外，本發明化合物已 經在老鼠模型中證明極佳之醫藥動力學性質。本發明化合 物因此預期在口服投藥時具有高度生物使用性。另外，在 使用單離之全細胞表現該hERG心臟卸通道之體外電流爽 具模型中，該等化合物已顯示無法抑制該鉀離子電流。該 >/IL夹具为析為评估改變心臟再偏極化圖形之藥劑用電位 之公認臨床前方法，尤其是造成與心律不整有關之所謂的 奶延長。（Cavao 専尺·，Opinion on Pharmacotherapy， φ 2講，947-73，Fermini 等人·，㈣及〜叹 Dbcovery，200》，2，439-447)。據此，預期包括本發明化合 物之醫藥組合物無該等心臟副作用。 本發明化合物之性質以及用途可使用熟習本技藝者習知 之各種體外及體内分析證明。代表性分析進一步詳述於以 下實例中。 實例 以下合成及生物實例經提供以說明本發明，但並不以任 何方式限制·本發明範圍。以下實例中，下列簡寫之意如 99256.doc -44 - 200533348 下，除非另有說明。以下未定義之簡寫為其一般可接受之 意。

Boc=第三丁氧基幾基 (Boc^O311 二·碳^ 酸·二~ -弟二丁 S旨 DCM=二氯曱烷 DMF=N，N-二甲基甲醯胺 DMS〇 =二甲基亞石風 EtOAc=乙酸乙酯 mCPBA=間-氯過氧苯甲酸 MeCN=乙月青 MTBE=第三丁氧基甲基醚

PyBop=苯并三唑_ 1 -基氧基三吡咯啶基鱗六氟磷酸鹽

Rf=駐留因子 RT=室溫 TFA=三氟乙酸 THF=四氫吱喃 試劑（包含二級胺）及溶劑係購自市場供應商（Aldrich、 Fluka、Sigma等），且未進一步純化使用。反應係在氮氣中 進行，除非另有說明。反應混合物之進行係經薄層層析 (TLC)、分析用高性能液體層析（分析用HPLC)及質譜儀監 控，細節列於以下及不同之特定反應實例中。反應混合物 係如該反應中特別敘述般終止反應；通常係以萃取及其他 純化方法如與溫度-及溶劑-有關之結晶，及沉澱純化。另 外，反應混_合物以製備性HPLC持續不斷的純化：一般程 99256.doc -45 - 200533348 序如下述。反應產物之特徵係以質譜及1H-NMR光譜儀持 續反覆的進行。針對NMR測量，係將樣品溶於氘化溶劑 (CD3OD、CDC13、或DMSO-d6)中，且在標準觀察條件下 以 Varian Gemini 2000儀器（300 MHz)獲得1Η-NMR光譜。 化合物之質譜確認係藉由電喷佈離子化法(ESMS)，以 Perkin Elmer儀器（PE SCIEX API 150 EX)進行。 分析用HPLC之一般方法 將粗化合物以0.5-1.0毫克/毫升濃度溶於50% McCN/H2〇（含0.1% TFA)中，且使用以下條件分析： 管柱：ZorbaxBonus-RP(粒徑 3·5 微米，2·1χ50毫米） 流速：0.5毫升/分鐘 偵測儀波長：214、254及280 nm 製備性HPLC純化之一般方法 將粗化合物以50-100毫克/毫升之濃度溶於50%乙酸/水 中，經過濾且使用以下程序分離： 管柱·· YMC Pack-Pro C18 (50ax20 mm; ID = 5微米） 流速：4〇毫开/分鐘 移動相·· A=90%MeCN/10%H2〇/0.1%TFA B = 98% H2〇/2°/〇 MeCN/0.1% TFA 梯度：10% A/90% B至50% A/50% B，30分鐘内（線性） 偵測儀波長：2 14 nm。 二級胺之製備 自硫嗎啉經由將二級胺保護成N-Boc硫嗎啉（（Boc)2〇， Me〇H)，氧化成颯（mCPBA，CH2C12, 0°C )且使N-Boc基去保 99256.doc -46- 200533348 護獲得游離胺（CF3C〇2H，CH2C12)製備硫嗎啉二氧化 物。（m/z): [M+H]+ C4H9N〇2S之計算值丨36』4 ;實測值 135.9 。 哌畊之N-磺醯基衍生物係由N-Boc哌喷經由與各別之石蔷 酸氯（iPr2NEt，CH2C 12，0 °C )反應，且使N-Boc基去保護 (cf3co2h，ch2ci2)製備。ι_甲基磺醯基-喊唯：ih_nmr (CDC13; neutral): δ (ppm) 3。1 (t，4H)，2.9 (t，4H)，2。7 (s，

3H)。1-(甲基石頁酉监基）甲烧石黃酿基-呢p井：1 η_nμR (CD3OD): δ(ΡΡιη) 2.90 (s，3H)，3.02 (m，4H)，3·38 (m，4H)， 4.61 (s，2H)。 3 -乙醯基胺基p比洛唆之消旋或單一對掌性異構物形式係 措由以乙氣處理N - B 〇 c - 3 -胺基p比洛σ定（消旋體，3 r或3 s) (iPi:2NEt，CH2C12，0°C)，且使N-Boc基去保護（CF3c〇2h，

CH2C 12)。3-(乙醯胺基）p比嘻 σ定：ifj-NMR (DMSO-d6; TFA salt): δ (ppm) 4.2 (quin，1H)，3.3-3.1 (m，3H)，2.9 (m，1H)， 2.0 (m，1H)，1.8 (br s，4H)。 3-((R)-2-經棊丙酸胺基）批嘻π定係在胺基p比洛 啶胺化（L-乳酸，PyBOP，DMF，RT)後，使N-Boc基去保護 (CF3C02H，CH2C12)製備。〔m/z).· [M+H] + C7H14N202之計算 值 159.11 ;實測值 159.0。iH-NMR (CD3OD; TFA 鹽）：δ (ppm) 4.4 (qUin，1Η)，4.1 (q，1Η)，3.5-3.4 (m，2Η)，3.3-3.2 (m，2H)，2.3 (m，1H)，2.0 (m，1H)，1.3 (d5 3H)。 (3R)-胺基吡咯啶之N3-烷基磺醯基衍生物係藉由以丙醯 基磺醯氯或·環己基甲基磺醯氯處理N^Boc-OR)-胺基吡咯 99256.doc -47- 200533348 啶（i-Pr2NEt，CH2C12，0°C)，且使 N_Boc-基去保護 (CF3C02H，CH2C12)製備。 3-(N-乙醯基-N-甲基醯胺基）吡啶係由N^Cbz保護之3-胺 基-哌啶-1 -羧酸第三丁酯經四個合成步驟之後製備（De

Cos% Β·專 k，醫藥化學期刊（j. Med. Chem) 35,

4334-43): i) Mel，n-BuLi，THF，-78°C 至室溫；ii) H2 (1 atm)，10% Pd/C，EtOH ; iii) AcCl，i-Pr2NEt，CH2C12 ; iv) CF3C02H，CH2C12。m/z ·. [M+H]+ C8H16N20 之計算值 157.13 ’ 貝測值 157.2。H-NMR (CD3OD; TFA 鹽）：δ (ppm) 4.6 (m，1Η)，3·3 (m，1Η)，3.2 (m，1Η)，3.0 (m，1Η)，2·9 (s， 3H)，2.8 (m，1H)，2.0 (s，3H)，1.9-1.7 (m，4H)。 3-(N-乙醯基-醯胺基）旅π定係由3_胺基·旅咬_i_羧酸第三 丁酯經N-乙醯化及N-Boc基去保護之後製備：^八…丨，^

Pr2NEt，CH2CI2 ’ ii) CF3C02H，CH2CI2。h-NMR (CD3OD; TFA鹽）：δ (ppm) 3.9 (m，1H)，3.3 (dd，1H)，3·2 (m，1H)，2.9 (dt，1H)，2.75 (dt，1H)，2.0-1.9 (m，2H)，1.9 (s，3H)，L8].4 (m，2H)。 3-胺基哌啶之N -烷磺醯基衍生物係藉由使對掌或诮旋 態之3-胺基叛酸第三丁 g|與個別之烧賴氣反應 (i-Pr2NEt，CH2C12)，且使 N-Boc 去保護（CF3C〇2H，cH2Cl2) 合成。（3S)-3-(乙烷磺醯基胺基）哌啶：1h_Nmr δ (ppm) 1.29(t, 3H, Jt = 7.4 Hz), l.5〇-i.8〇 (m 2H) 1 9〇_ (m，2H)，3.40 (d of d(br)，1H)，3.52 (m，1H)。3s_ 甲基績酿 99256.doc • 48 - 200533348 基甲烷磺醯基醯胺基-哌啶：W-NMR (CD3OD): δ (ppm) 2.13-2.30 (m，2H)，2.40-2.57 (m，2H)，2·98 (m，2H)，3·15 (s，3H)，3·21 (m，2H)，3.30 (br d，1H)，3.74 (m，1H)。 3-(曱基胺基）-1-乙酸基峨。各。定係由3-(甲基胺基）节基 吡咯啶（TCI America)經四步驟後製備：i) (Boc)20，MeOH， rt ; ii) H2 (1 atm)，10% Pd/C，EtOH ; iii) AcCl，i-Pr2NEt， CH2C12 ; iv) CF3C〇2H，CH2C12。（m/z): [M+H]+ C7H14N20: 計算值143.12 ;實測值143.0。 3-(甲基胺基）-1-(甲烧磺醯基）P比略σ定係由3_(甲基胺基）_ 1-苄基吡咯啶經四步驟後製備：i) (Boc)20，MeOH，rt; ii) H2 (1 atm)，10% Pd/C，EtOH ; iii) CH3S02C1，i-Pr2NEt， CH2C12 ; iv) CF3C02H， CH2C12 。 （m/z): [M+H] + C6H14N202S之計算值179.08 ;實測值179·2。3R-甲基胺基-1-(甲烷磺醯基）吡咯啶係依類似方式自（3R)-(甲基胺基）-1-苄基吡咯啶製備。 四氫-3-噻吩胺-1，1-二氧化物之衍生物係依循Loev，B. J. Org· C/zem. 1?·61，26，4394-9 之方法，使 3-流雜環戊烯（3-sulfolene)與需求之一級胺在甲醇中反應（觸媒KOH，rt)製 備。N-甲基-3-四氫噻吩胺-1，1-二氧化物（TFA鹽）：1!!-NMR (DMSO-d6): δ (ppm) 9.4 (br s? 2H)? 4.0-3.8 (qum3 1H)，3.6-3.5 (dd，1H)，3.4-3.3 (m，1H)，3.2-3.1 (m，2H)，2.5 (s，3H)，2.4 (m，1H)，2.1 (m，1H)。N-2-(l-羥基）乙基-3-四 氫噻吩胺-1，1-二氧化物：（m/z): [M+H]+ C6H13N03S之計算 值 180.07 ;實測值 180.2。 99256.doc -49- 200533348 Ν·甲基-四氫-2H-嘧喃-4-胺-1，1-二氧化物係由四氫-4H-口塞喃-4-酮製備：i) MeNH2，NaBH4; ii) (B0c)2〇，MeOH; iii) mCPBA，CH2C12, 0〇C ; iv) CF3C02H，CH2C12。（m/z): [M + H]+ C6H13N02S 之計算值 164.07 ;實測值 164.9。4-NMR (CD3OD; TFA 鹽）:δ (ppm) 3.4-3.1 (m，5H)，2·7 (s， 3H)，2.4 (br d，2H)，2.1 (bi* m，2H)。 1-乙酸基-3-(甲基胺基）α辰唆係由經N3-Cbz保護之3-甲基 胺基-哌啶製備：i) AcCl，i-Pr2NEt，CH2C12 ; ii) H2 (1 atm)，10% Pd/C，EtOH。i-NMR (CD3OD) : δ (ppm) 4.0 (m，1H)，3.6 (m，1H)，3·4-3·2 (m，2H)，3.0 (m，1H)，2.6 (s， 3H)，2.1 (s，3H)，1.8-1.6 (m，4H)。 1-(甲基磺醯基）-3-(甲基胺基）哌啶係由經N3-Cbz保護之 3-曱基胺基-哌啶製備：i) CH3S02C1，i-Pr2NEt，CH2C12 ; ii) H2 (1 atm)，10% Pd/C，EtOH。（m/z): [M+H] + C7H16N202S 計算值 193·ι〇 ;實測值 193 〇。 (DMSO-d6; TFA鹽）：δ (ppm) 3.4 (dd，1H)，3.2 (m5 2H)，3.10 (s，3H)，3.0-2.9 (m，2H)，2.8 (s，3H)，1.85-1.75 (m，2H)， 1·6_1·4 (m，2¾)。 實例 1 : 1-異丙基 _1H_H丨唑-3_ 羧酸{(lS，3R，5R)-8_[2_(4-乙 酿基喊畊_1_ 基） 乙基】_8-氮雜 雙環 丨^^辛^^基}醯胺 之合成 a· 8-苄基-8-氮雜雙環[3.21】辛_3-酮之製備 在授拌下將濃鹽酸（30毫升）添加於含2,5_二甲氧基四氫 吱喃（82.2克，0.622莫耳）之水（170毫升）不均勻溶液中。於 99256.doc -50- 200533348 冷卻至0°C(冰浴）之分離瓶中，將濃鹽酸（92毫升）緩慢添加 於含苄基胺（100克，0.933莫耳）之水（350毫升）溶液中。使 2,5-二甲氧基四氫呋喃溶液攪拌約20分鐘，以水（25〇毫升） 稀釋，再添加节基胺溶液，接著添加含1，3-丙_二竣酸 (100克，0.684莫耳）之水（400毫升）溶液，再添加含鱗酸氯

鉀（44克，0·3 1莫耳）之水（200毫升）。使用40% NaOH將pH 調整為pH 1至pH〜4.5。使所得霧濁及淡黃色溶液擾掉隔 夜。再使用50%鹽酸使溶液由pH 7.5酸化至pH 3，加熱至 85°C且攪拌2小時。使溶液冷卻至室溫，使用4〇% Na〇H驗 化至pH 12，且以二氯甲烷（3x500毫升）萃取。合併之有機 層以食鹽水洗滌，經脫水（MgSCU)，過濾且減壓濃縮至產 生黏稠標色油狀粗標題中間務。 在0°C下於含粗中間物之甲醇（1000毫升）溶液中添加二 石炭酸二第三丁酯（74·6克，0·342莫耳）。使溶液升溫至室溫 且攪拌隔夜。減壓移除曱醇，且將所得之油溶於二氯曱烧 (1000毫升）中。中間物以1 M H3P04( 1000毫升）萃取，且以 二氯甲院（3 X250宅升）洗滌。水層使用NaOH水溶液鹼化至 pH 12，且以二氣曱烷（3x500毫升）萃取。合併之有機層經 脫水（MgSCU)、過濾且減壓濃縮，獲得黏稠淡棕色油狀標 題中間物。1H-NMR (CDC13) δ (ppm) 7·5-7·2 (m，5H， C6H5)，3·7 (s，2Η，CH2Ph)，3·45 (l，S，2H，CH-NBn)，2.7-2.6 (dd，2H，CH2C〇）5 2.2-2.1 (dd，2H，CH2CO)，2.1-2.0 (m， 2H，CH2CH2)，1.6 (m，2H，CH2CH2)。（m/z): [m+H] + C14H17N〇計算值216.14;實測值216.0。 99256.doc 200533348 b· 3-氧代_8_氮雜雙環辛烷羧酸第三丁酯之製備 於含8-苄基I氮雜雙環[3·21；^|酮（75克，〇.348毫莫 耳）之EtOAc(300毫升）溶液中添加含二碳酸二第三丁酯 (83.6克’ 0.383莫耳，u當量）iEt〇Ac(3〇〇毫升）溶液。將 所得溶液及洗滌液（100毫升Et〇Ac)於氮氣中添加於含23克 虱氧化鈀（20 wt% Pd(無水基準）/碳，以水〜5〇%潤濕，例 如Pearlman’s觸媒）之氫化槽中。反應槽經除氣 φ (或者抽真空及N2五次），且加壓至60 psi之H2氣體。反應 溶液攪拌兩天，若需要可再充Hz氣體，使&之壓力維持 在60 psi ’直到反應以矽膠薄層層析監測為完全為止。黑 色溶液再經Celite®墊過濾且減壓濃縮，定量的獲得黏稠黃 色至橘色油狀標題中間物。其可不需進一步純化用於下一 步‘中。H NMR (CDC13) δ (ppm) 4.5 (寬峰，2H，CH_ NBoc)，2·7 (寬峰，2H，CH2CO)，2.4-2.3 (dd，2H，CH2CH2)， 2.1 (寬峰m，2H，CH2CO)，ΐ·7]·6 ⑽，2H，CH2cH2)，】5 (s， • 9H，（CH3)3COCON))。 c· (lS，3R，5R)-3-胺基_8-氮雜雙環[3 21】辛烷-8_羧酸第三 丁酯之製嗇 在A流中配合機械攪拌器攪拌，於含前一步驟產物（754 克，0.335莫耳）之甲醇（1升）溶液中添加甲酸銨（422·5克， 6·7莫耳）、水（11 5毫升）及65克鈀/活性碳（以無水基準為 10%，以水潤濕〜50%，DegUSS0|、ElolNE/w)。24 及 48 小時 ▲ 後，每次均添加額外部分之甲酸錄（丨32克，2·丨莫耳）。乙 分析用HPLC監測反應進行終止時，添加Celite®(>5〇〇克）， 99256.doc -52- 200533348 過濾所得黏稠溶液，再以甲醇（〜500毫升）洗滌收集之固 體。合併濾液且減壓濃縮，直到移除甲醇為止。所得霧 濁、雙相溶液再以1M磷酸稀釋至PH 2之最終體積為〜1.5至 2·0升’且以二氣甲烷（3χ7〇〇毫升）洗滌。水層使用4〇0/〇 NaOH水溶液鹼化至ρΗ 12並以二氣甲烷（3Χ700毫升）萃取。 合併之有機層以MgSCU脫水，經過濾且旋轉蒸發濃縮，再 經高度真空，留下52克（70〇/〇)白色至淡黃色固態標題中間 物’通常為N-Boc-橋-3-胺基托烧（tropane)。以1H-NMR分 析之產物之橋對掛胺之異構物比>99(以分析用HPlc之純 度 >96%)。4 NMR (CDC13) δ (ppm) 4·2-4·0 (寬峰 d，2H， CHNBoc)，3.25 (t，1H，CHNH2)，2.1-2.05 (m，4H)，1.9 (m， 2H)，1·4 (s，9H，（CH3)3OCON)，1.2-1.1 (寬峰，2H)。（m/z): [M+H] C12H22N202 計算值 227· 18 ;實測值 227.2。分析用 HPLC (定組成移動相法；5分鐘内2:98 (A:B)至90:10 (Α··Β)):駐留時間=214分鐘。 d· 1-異丙基-in-吲唑羧酸之製備 於懸浮於甲·醇（700毫升）之吲唑-3-羧酸（40克，247毫莫 耳）中緩忮添加濃ΗΑ〇4(1〇毫升），同時攪拌混合物。混合 物經攪拌且在80°C下回流24小時。使混合物冷卻，經過濾 且減壓？辰縮，獲得淡黃色固體。將固體懸浮於水（700毫升） 中粕碎成細微粉末，以過濾收集且以水（〜400毫升）洗 I。將產物懸浮於甲苯中，且減壓蒸發製乾，獲得淡黃色 固U丨唑羧酸甲酯（C克，純度〉Μ。〆。）。（m/z): [M + h] + C9H8N2〇2 ·叶算值 177·07 ;實測值 177.0。 99256.doc -53- 200533348 (CD3OD，300 MHz): δ (ppm) 8·0 (1H，d)，7.5 (1H，d)，7.4 (1H，t)，7·2 (1H，t)，3·9 (3H，s)。 於於冰浴中冷卻之含啕唑-3-羧酸甲酯（40.7克，231毫莫 耳）之無水四氫呋喃（7〇〇毫升）溶液中緩慢添加固體第三丁 氧化鉀（28_3克，252毫莫耳）。使混合物添加於2-碘丙烷 (34.4毫升，367毫莫耳）之前於相同溫度下攪拌1 h。最終 之混合物在周圍溫度下攪拌12 h，且回流12 h。冷卻至室 溫後，過濾混合物且收集之固體以四氫呋喃（1〇〇毫升）洗 滌。合併濾液且減壓濃縮至乾，獲得淡黃色油狀粗丨_異丙 基-1H-吲唑-3-魏酸甲酯（49·7克）。粗物質以快速矽膠層析 (以己烷/乙酸乙酯（9/1至3/1)溶離）純化，獲得1-異丙基-1Η-吲唾-3-羧酸甲酯（43克，197毫莫耳，純度”多％)。1!!- NMR (CD3OD，300 ΜΗζ): δ (ppm) 8·1-8·0 (1Η，d)，7·6 (1Η， d)，7.4 (1H，t)，7.2 (1H，t)，5·0 (1H，quin)，3.9 (s，3H)，1.5 (6H，d) 〇 於含甲酯之四氫吱喃溶液（400毫升）中添加1 M NaOH (400毫升）。使混合物在周圍溫度下攪拌24 h。反應以乙酸 乙酯（2x400毫升）洗滌終止，留下水層。水層在冰浴中藉由 添加浪HC1(〜40毫升）緩慢酸化，導致分離出淡黃色油狀產 物。產物以乙酸乙酯（丨00〇毫升）萃取，有機層以MgS〇4脫 水且減壓蒸發，獲得淡黃色至白色固態標題化合物（34 克’純度〉98%)，使之自乙酸乙酯結晶進一步純化，獲得 無色針狀標題中間物。（m/z): [M+Na]+ 計算值 226.07 ;實，測值 226.6。b-NMR (CD3〇D，300 MHz): δ 99256.doc -54- 200533348 (ppm) 8.1-8.0 (1H5 d)，7·6 (1H，d)，7.4 (1H，t)，7.2 (1H，t) 5.0 (1H，quin)，1.5 (6H，d)。 e· (18,311，511)_3-[1_異丙基_111-啕唑-3-羰基胺基】_8_淡雜雙 環[3丄1】辛烷-8-羧酸第三丁酯 使含1-異丙基-1Η-啕唑-3-叛酸（56.35克，0.276莫耳）之 曱苯（5 00毫升）懸浮液在添加於硫醯氣（3 〇·2毫升，〇·4ΐ4莫 耳）中之前攪拌且加熱5分鐘。在1〇〇°c下加熱15分鐘後， • 混合物變成均勻溶液，使之在相同溫度下再持續攪拌9〇分 鐘。於另一反應瓶中將依步驟c製備之（1S，3R，5R)_3-胺基_ 8-氮雜雙環[3.2.1]辛烷-8-羧酸第三丁酯（62.43克，〇·276莫 耳）溶於25〇毫升甲苯甲，接著添加含Na〇H(66 3克）之 笔升水。使該雙相混合物於冰浴中冷卻。上述製備之啕唑 酸氯化物溶液冷卻至室溫，且於丨5分鐘内添加於於冰浴中 劇烈攪拌之雙相溶液中。攪拌15 ，將反應混合物移到 分液漏斗。首先，使水層與曱苯層（留下）分離，且以 • Et〇Ac(2X500毫升）萃取。減壓濃縮甲苯層，且將所得殘留 物溶於有機萃:取液（1升；Et〇Ac)中。溶液以i m H3P〇4 (400毛升）、ΐ包和NaHC〇3(4〇〇毫升）洗滌，再以食鹽水溶液 (400¾升）洗滌。以MgS〇4脫水後，減壓使有機溶液蒸發至 乾，獲得119.2克標題中間物。iH-NMR (DMS〇_d^. δ (ppm) 1.41 (S? 9H)5 1.51 (d? 6H)? 1.82 (m5 2H)5 1.97 (bs? 4H)? 2.09 (m5 2H)? 4.10 (m? 3H)? 5.10 (sept5 lH)? 7.23 (t? 1H)^7-42(t5lH)5 7.79 (d?lH)? 7.82 (d5lH)5 8.18 (d lH)〇? _):[驗 HrC23H32N4〇3，計算值413.26;實測值 4i3i。 99256.doc -55 > 200533348 駐 4 Ν' 間（分析用 Ηριχ: 2_95% MeCN/H2〇，6 分鐘内）= 4.8 5分鐘。 f· 1_異丙基-1H_吲唑_3_羧酸{(1S，3R，5R)_8_氮雜雙環 [3·2·1]辛_3_基丨醯胺之製備 於冰浴中將前一步驟之產物溶於二氣甲烷（2〇〇毫升） 中’接著與200毫升三氟乙酸混合。反應混合物在周圍溫 度下授掉1 h °接著滴加於瓶中之攪拌乙醚（2升）中，獲得 單（二氟乙酸）鹽之標題中間物（乾燥後1〇2 7克，二步驟之 產率為87/〇)。H-NMR (DMSO-d6): δ (ppm) 1.54 (d，6H)， 2·〇5 (m，2H)，2.24 (m，6H)，4.03 (s，2H)，4.12 (q，1H)，5·〇9 (sept，1H)，7.28 (t，1H)，7.45 (t，1H)，7.81 (d，1H)，8.00 (d， 1H)，8.11 (d，1H)，8.54 (bd，2H)。（m/z): [M+H] +

ClsH24N4〇，計算值313·20 ;實測值3131。駐留時間（分析 用 HPLC : 2-95% MeCN/H20，6 分鐘内）=2.65 分鐘。 §.1-異丙基_111_吲唑-3_羧酸{(18,311，511)-8-(2,2-二甲氧基 乙基）_8_氮雜雙環[3.2.1】辛-3_基}醯胺之製備 於含1-異丙奉-1Η-<唑-3_羧酸{(lS，3R，5R)-8-氮雜雙環 [3.2.1]辛-3-墓}醯胺（52.7克，0.124莫耳）之500毫升二氯甲 烷溶液中添加含二異丙基乙胺（43.1毫升）及二甲氧基乙醛 之第三丁基甲基醚（濃度45%，44.5毫升，〇.1 73毫莫耳）。 在周圍溫度下攪拌35分鐘後，於該混合物中添加三乙醯氧 基硼氫化鈉（3 6.7克，0.1 73莫耳）。90分鐘後，反應於冰浴 中緩慢添加水（50毫升）及飽和NaHC03溶液（1〇〇毫升）終止 反應。混合·物以500毫升二氣甲烷稀釋，且移到分液漏斗 99256.doc -56- 200533348 中。收集有機層且以飽*NaHC〇3(250毫升）及食鹽水溶液 (3 5 0毫升）洗蘇。以M g S Ο 4脫水且減壓条發’獲得標題中間 物（58.8克）。h-NNIR (CDC13): δ (ppm) 1·60 (d，6H)，ΐ·77 (m，2H)，1.96-2.09 (m，4H)，2.29 (m，2H)，2.55 (m，2H)， 3.33 (m，2H)，3.41 (s，6H)，4.33 (q，1H)，4.47 (m，1H)， 4.87(sept，1H)，7·26 (t，1H)，7.37-7.46 (m，2H)，7.56 (d 1H)，8.36 (d，1H)。（m/z): [M+H]+ C22H32N4〇3，計算值 401.26 ;實測值401.3。駐留時間（分析用HPLC : 2-50% MeCN/H20，6分鐘内）=4.20分鐘。 h· 1-異丙基-1H-吲唑 _3-羧酸{(18,311，511)-8-(2,2_二經基乙 基）-8 -氣雜雙環[3·2·1]辛_3-基}酿胺之製備 將前一步驟之產物（55·2克）懸浮於500毫升6 Μ鹽酸中， 且在70°C下加熱1 h。反應混合物冷卻至〇°c，且以二氯甲 烷（500毫升）稀釋，接著緩慢添加6 M NaOH(800毫升）使水 層驗化。進一步與800毫升二氯甲烷混合，且移到分液漏 斗中。收集有機層，以食鹽水洗滌，以Mgs〇4脫水且蒸發 至車乙，獲知才示4中間物（45.1克）。（m/z): [M+H] + C20H28N4O3 r計算值373.22;實測值373.2。駐留時間（分 析用 HPLC : 2-50% MeCN/H20，6分鐘内）=3·77分鐘。 i· 1_異丙基 _1Η_ 吲唑_3_ 羧酸{(18,3]^，5]^)-8-[2_(‘乙醯基_ 哌畊-1-基）乙基卜8_氮雜雙環[321】辛-3_基}醯胺，或者 為Ν-[(3-橋）-8-[2_(4_乙醯基哌畊_1β基）乙基】氮雜雙環 [爻2·1】辛_3_基卜甲基乙基吲唑-3 —羧醯胺之製備 於含450毫升二氯甲烷之瓶中添加1-乙醯基哌畊（19.3 99256.doc -57- 200533348 克，0.151莫耳）、三乙醯氧基硼氫化鈉（34.4克）。添加前一 步驟之產物（45.1克）前攪拌5分鐘。使最終混合物攪拌1 h， 此時以HPLC及質譜分析顯示反應完全。緩慢加水（200毫 升），且以600毫升二氣甲烷稀釋混合物，且於漏斗中搖 晃，接著收集有機層。以1 M NaOH(400毫升）及食鹽水 (500毫升）洗滌。以MgSCU脫水且蒸發，獲得無色固態標題 化合物（47.6克）。粗產物自以醇結晶純化成HC1鹽（>30克， 純度〉98%)。iH-NMR (DMSO-d6;游離驗）：δ (ppm) 1.52 (d，6H)，1.69 (m，2H)，1.83 (m，2H)，1·97 (s，3H)，1.92-2.10 (m，4H)，2·33 (t，2H)，2.42 (m，6H)，2.50 (m，2H)，3.21 (bs， 2H)，3.38 (m，4H)，4.09 (q，1H)，5.07 (sept，1H)，7.26 (t， 1H)，7.43 (t，1H)，7.79 (d，1H)，8.12 (d，1H)。（m/z): [M+H]+ C26H38N602，計算值 467·31 ;實測值 467·5。駐留 時間（分析用HPLC : 2-50% MeCN/H2〇，6分鐘内）= 3.52分 鐘。 實例2 ·· 1_異丙基_1H•吲唑-3_羧酸{(1S，3R，5R)_8_[2_(心 (四氩呋喃-2_羰基）哌畊基）乙基】_8氮雜雙環口丄工】 辛_3-基}®!胺之合成 於3 N [2四氫嗅喃基]喊畊氫溴化物（4〇毫克，〇· 1 5毫莫 耳）及N，N-一異丙基乙胺（12微升，〇3毫莫耳）之二氯甲烷 (1.5¾升）’合液中添加三乙醯氧基硼氫化鈉（64毫克，ο」毫 莫耳）接著/〜加異丙基_1Η·十坐-3-敌酸{(lS，3R，5R)-8_ (j，2-二羥乙_基）·8-氮雜雙環[3·2·1]辛-3-基}醯胺（HC1鹽）（39 笔克〇·1毛莫耳）。使混合物在周圍溫度下搖晃1 5分鐘。 99256.doc -58- 200533348 減壓？辰細後，將反應混合物溶於5〇%乙酸水溶液中，且以 衣備性HPLC純化，獲得標題化合物之三氟乙酸鹽（純度 97/。）。（m/z)· [m + H] C29H42N6〇3，計算值 523.34 ;實測值 523·2。駐留時間（分析用HPLC : 5-65% MeCN/H20，5分鐘 内）=2.7分鐘。 實例3-20 使用與貝例2類似之方法，但以適用之二級胺置換N_[2_ • 四風咬喃基]嗓呼氫溪化物，製備實例3-20之化合物。 貝例 3 ^ 異丙基-1Η- 口?丨唑 羧酸{(lS，3R，5R)-8-[2- (1，1-一氧代_1\6_硫嗎啉_4-基）乙基]氮雜雙環 [3·2·1]辛-3-基}醯胺；（m/z): [μ+Η] + C24H35N5〇3S，計算值 474.25 ;實測值 474.2。 駐留時間（分析用 HPLC ·· 5-75% MeCN/H20，5 分鐘内）=2.20分鐘。 貝例4卜異丙基-1H-吲唑-3-羧酸{(lS，3R，5R)-8-[2-(4-_ 甲烷磺醯基哌畊-1-基）乙基]-8-氮雜雙環[3.2.1] 辛-3-基}醯胺；（m/z): [Μ+Ηγ c25H38N603S， 計算值503.28 ;實測值503.2。駐留時間（分析 用 HPLC : 5-65% MeCN/H20，4分鐘内）=2.12分 鐘。 貝例5 卜異丙基-1H-吲唑-3-羧酸{(lS，3R，5R)-8-[2-(4- 環己基曱烷磺醯基哌畊-1-基）乙基]-8-氮雜雙環 . [3.2.1]辛 _3-基}醯胺；（m/z): [M + H] + C3iH48N6〇3S，計算值 585 35 ;實測值 585 4。 99256.doc -59- 200533348 駐留時間（分析用HPLC : 5-75% MeCN/H2〇，5 分鐘内）=2.67分鐘。 實例6丨_異丙基-1H-⑼唑-3-羧酸{(lS，3R，5R)-8-[2-(4-甲烧磺醯基甲烷磺醯基哌畊-1-基）乙基]-8-氮雜 雙環[3.2.1]辛-3-基}醯胺；（m/z): [M + H] + C26H4GN6〇5S2，計算值 581.26 ;實測值 581.2。 駐留時間（分析用HPLC : 5-75% MeCN/H20，5 分鐘内）=2.22分鐘。 實例7 卜異丙基-1H-吲唑-3-羧酸{(lS，3R，5R)-8-[2-(3-(乙i盘基甲基胺基）吡咯啶-；μ基）乙基]-8-氮雜雙 環[3·2·1]辛-3-基}醯胺；（m/z): [M+H] + 〔27114()；^6〇2，計算值 481.32;實測值481.3。駐 留時間（分析用HPLC : 5-75% MeCN/H20，5分 鐘内）= 2·〇7分鐘。 實例 8 1-異丙基-1Η-啕唑-3-羧酸{(lS，3R，5R)-8-[2-(3- (乙醯基胺基）吡咯啶-1-基）乙基]-8-氮雜雙環 [3.2:.1]辛-3-基}醯胺；（m/z): [m + H] + C26H38N6〇2，計算值467.3 1 ;實測值467.4。駐 留時間（分析用HPLC : 5-75% MeCN/H20，5分 鐘内）=1.89分鐘。 實例 9 1-異丙基-1H- 4 唑-3 -羧酸{(lS，3R，5R)-8-[2- ((R)-3-(乙酿基胺基）p比p各σ定-1-基）乙基]-8 -氣雜 雙環[3.2·1]辛-3-基}醯胺；（m/z): [M+H] + C26H38N6〇2，計算值 467.3 1 ;實測值 467.4。駐 99256.doc -60- 200533348 留時間（分析用HPLC : 5-75% MeCN/H20，5分 鐘内）= 2.04分鐘。 實例1 ο 1-異丙基-1H- 4丨。坐-3-竣酸{(lS，3R，5R)_8-[2-((S)-3-(乙酸基胺基）峨洛σ定-1-基）乙基]-8 -氮雜 雙環[3·2·1]辛-3-基}醯胺；（m/z): [M+H] +

•實例U C26H38N602，計算值 467·31 ;實測值 467.4。駐 留時間（分析用HPLC : 5-75% MeCN/H20，5分 鐘内）=2·〇7分鐘。 1-異丙基-1Η-啕唑-3_羧酸{(lS，3R，5R)-8-{2-[3-((S)-2-羥丙醯基胺基）吡咯啶-1-基]乙基卜8-氮 雜雙環[3·2·1]辛 _3_基}醯胺；（m/z): [M+H] + C27H4GN603，計算值 497.32 ;實測值497.2。駐 留時間（分析用HPLC : 5-65% MeCN/H20，5分 鐘内）=2.07分鐘。 實例12 1-異丙基-1H-吲唑-3-羧酸{(lS，3R，5R)-8-{2-[(3S，4S)-3-(乙醯基甲基胺基）-4-羥基吡咯啶-1-基]•乙基}-8-氮雜雙環[3.2.1]辛-3-基}醯胺； (m/z): [M+H]+ C27H4〇N603，計算值497.32 ;實 測值497.2。駐留時間（分析用HPLC : 5-65% MeCN/H20，5 分鐘内）= 2.15 分鐘。 實例13 卜異丙基-1H-喇唑-3-羧酸{(is，3R，5R)-8-[2- ((R)-3 -乙烧石黃龜基胺基p比洛咬-1_基）乙基]氮 雜雙環[3.2.1]辛-3-基}醯胺；（m/z): [m+H] + C26H4()N6〇3S，計算值 517.30 ;實測值 517.2。 99256.doc -61 - 200533348 駐留時間（分析用HPLC : 5-75% MeCN/H2〇，5 分鐘内）= 2.12分鐘。 實例14 •實例15 1-異丙基-1H-吲唑-3-羧酸{(lS，3R，5R)-8-[2-((R)-3-環己基甲烷磺醯基胺基吡咯啶-；μ基）乙 基]冬氮雜雙環[3.21]辛-3-基}醯胺；（m/z): [M+H]+ C31H48N603S，計算值 585.36 ;實測值 585.4。駐留時間（分析用HPLC : 5-75% MeCN/H20，5 分鐘内）= 2.52 分鐘。 1-異丙基 _1Η-4 唑-3-羧酸（（lS，3R，5R)-8-{2-[3-(乙醯基甲基胺基）哌啶-1-基]乙基卜8-氮雜雙環 [3·2·1]辛-3-基）醯胺；（m/z): [Μ+Η] + C28H42N602，計算值 495.34 ;實測值 495.4。駐 留時間（分析用HPLC : 5-75% MeCN/H2〇，5分 鐘内）=1.9 4分鐘。 實例16 1-異丙基-1H-㈤唑-3-羧酸{(lS，3R，5R)-8-[2-(3-乙醯基胺基哌啶-1-基）乙基]-8-氮雜雙環[3.2.1] 辛-3-基}醯胺；（m/z): [M + H]+ C27H4〇N6〇2，計 算值481·33 ;實測值481·2。駐留時間（分析用 HPLC : 5-75% MeCN/H2〇，5 分鐘内）=2.01 分 鐘。 實例17 1-異丙基-1H-啕唑-3-羧酸{(lS，3R，5R)-8-[2-(3-甲烷磺醯基胺基哌啶-1-基）乙基]-8-氮雜雙環 [3.2.1]辛 基}醯胺；（m/z): [M+H] + C26H4QN603S，計算值 517.30 ;實測值 517.4。 99256.doc -62- 200533348 駐留時間（分析用HPLC : 5-75% MeCN/H2〇，5 分鐘内）=1.97分鐘。 實例18 卜異丙基-1H-⑼唑-3 -羧酸{(lS,3R，5R)-8-[2_ ((S)-3-甲烷磺醯基胺基哌啶-1-基）乙基]-8-氮雜 雙環[3.2.1]辛-3-基}醯胺；（m/z): [M+H] + C26H4〇N603S，計算值 517.30 ;實測值 517.4。 駐留時間（分析用HPLC : 5-75% MeCN/H20，5 g 分鐘内）=1·99分鐘。 實例19卜異丙基- lH、丨唑-3 -羧酸{(lS，3R，5R)-8-[2-((S)-3 -乙：!：完石黃驢基胺基定-1_基）乙基]氣雜 雙環[3.2.1]辛-3-基}醯胺；（m/z): [Μ+Η] + C27H42N603S，計算值 531.31 ;實測值 531.4。 駐留時間（分析用HPLC : 5-75% MeCN/H20，5 分鐘内）= 2.04分鐘。 實例20卜異丙基]蚓唑-3-羧酸{(lS，3R，5R)-8-[2-φ ((S)-3_甲燒磺醯基甲烷磺醯基胺基哌啶·1·基） 乙基]-8-氮雜雙環[3 21]辛-3-基}醯胺；（m/z): [M+H]+ C27H42N6〇5S2，計算值 595.27 ;實測值 595·2 °駐留時間（分析用HPLC : 5-75% MeCN/H2〇，5 分鐘内）= 2.07 分鐘。 實例21 · 1_異丙基_1H_⑼唑冬羧酸（（1S，3R，5R)_8_{2_ [(1-乙酿基p比洛咬_3_基）甲基胺基】乙基}_8_氮雜雙環 [3·2·1]辛-3-基）醯胺之合成 於3 3-(甲-基基乙醯基吡咯啶⑷毫克，〇 3毫莫耳） 99256.doc -63· 200533348 及N，N-二異丙基乙胺（12微升，0.3毫莫耳）之二氯甲烷（l5 毫升）溶液中添加三乙醯氧基硼氫化鈉（12 8毫克，0.6毫莫 耳），接著添加卜異丙基-1H-吲唑-3-羧酸{(1S，3R，5R)| (2,2-二羥乙基）-8-氮雜雙環[3.2.1]辛-3-基}醯胺（HC1鹽）（78 毫克，0.2毫莫耳）。使混合物在周圍溫度下搖晃丨5分鐘。 減壓濃縮後，將反應混合物溶於5 〇 %乙酸水溶液中，且以 製備性HPLC純化’獲得標題化合物之三氟乙酸鹽（56毫 • 克，純度 99%)。（m/z): [M+H『 C27h4()N6〇2 ,計算值 481.33 ;實測值481.2。駐留時間（分析用HPLC : 5-65% MeCN/H20，5 分鐘内）=2.00 分鐘。 實例22-30 使用與實例2 1類似之方法，但以適用之二級胺置換3 _ (甲基胺基）-i-乙醯基吡咯啶，製備實例22_3〇之化合物。 貝例 22 異丙基-1H-蚓唑-3-羧酸（（lS，3R，5R)-8-{2-[((R)-l -乙醯基吡咯啶-3-基）甲基胺基]乙基卜8_ _ 氮雜雙環[3·2.1]辛-3-基）醯胺：（m/z): [m+H] + C27H4gN6〇2，計算值 48 1.33 ;實測值 481.4。駐 營時間（分析用 HPLC : 10-50% MeCN/H20，5分 鐘内卢2.52分鐘。 貫例23 1-里而装1τ -、円丞-1Η-⑸唑-3-羧酸（（lS，3R，5R)-8-{2-[((s)-l、乙醯基吡咯啶-3_基）甲基胺基]乙基卜8_ 氮 #雙壤[3.2.1]辛-3-基）醯胺：（m/z): [M+H] + ’計算值4§1·33 ;實測值4814。駐 '留時間（分析用 HPLC : 1〇-5〇% MeCN/H2〇，5分 99256.doc -64- 200533348 鐘内）= 2.52分鐘。 實例24 1 異丙基 吲唑-3-羧酸（（lS，3R，5R)-8-{2-[(l-甲烧續酸基吼咯啶基）甲基胺基]乙基卜心氮 布隹又環[3·2·1]辛-3-基）醯胺：（m/z): [m + H] + C26H4qN6〇3S ’ 計算值 517.30 ;實測值 517.2。 駐留時間（分析用HPLC : 5-75% MeCN/H20，5 分鐘内）= 2.04分鐘。 實例25 1-異丙基-1H-吲唑-3-羧酸（（is，3R，5R)-8-{2· [((R)-l -甲燒石黃酿基峨洛啶-3-基）甲基胺基]乙 基}-8-氮雜雙環[321]辛-3-基）醯胺··（m/z): [M+H]+ C26H4〇N6〇3S，計算值 517.30 ;實測值 517。2。駐留時間（分析用HPLC : 5-65%

MeCN/H2〇，5分鐘内）= 2.20分鐘。 實例 26 1_ 異丙基-1H-啕唑-3 -羧酸（（lS，3R，5R)-8-{2- [(1，1_二氧代四氫_1λ6_噻吩-3-基）曱基胺基]乙 基}_8-氮雜雙環[3.2.1]辛-3-基）醯胺：（111/2)·· [M + H]+ C25H37N5〇3S，計算值 488.27 ;實測值 4一88.2。駐留時間（分析用HPLC : 5-75%

MeCN/H20，5 分鐘内）= 2·22 分鐘。 實例 27 1-異丙基-1Η-吲唑-3 -羧酸（（ls，3R，5R)_8-{2- [(1，1 _二氧代四氫- ΐλό-σ塞吩-3-基Μ2-經乙基）月女 基]乙基}-8-氮雜雙環[3·2·1]辛-3-基）酸胺： (111/^):[^+11]+〇261139仏〇43，計算值518.28, 實測值518.2。駐留時間（分析用HPLC : 5-65% 99256.doc -65- 200533348

MeCN/H2〇，5 分鐘内）= 2.25 分鐘。 實例 28 丨-異丙基-1H-吲唑-3-羧酸（（lS，3R，5R)-8-{2-[(l-乙驢基辰啶·3-基）甲基胺基]乙基}-8-氮雜雙環 [3.2.1]辛 基）醯胺：（m/z): [m + H] + C26H38N602，計算值 495·34 ;實測值 495·4。駐 留時間（分析用HPLC : 5-75% MeCN/H2〇，5分 鐘内）=1.95分鐘。 實例 29 1-異丙基-1H-蜊唑-3 -羧酸（（is，3R，5R)-8-{2- [G，1-二氧代六氫-1 λ6-嘧喃-4-基）甲基胺基]乙 基卜8-氮雜雙環基）醯胺：（m/z): [M+H]+ C26H39N503S，計算值 502.29 ;實測值 502·2 °駐留時間（分析用HPLC : 5-65%

MeCN/H20 ’ 5 分鐘内）=2·12 分鐘。 實例 30 1-異丙基_11吲唑-3-羧酸（（18,311，511)-8-{2-[(1- 甲烷磺醯基哌啶-3-基）甲基胺基]乙基卜氮雜 雙環[3.2·1]辛小基）醯胺：（m/z): [Μ + Η] + C27H42N603S，計算值 531.31 ;實測值 531.4。 ‘留時間（分析用 HPLC : 5-75% MeCN/H20，5 分鐘内）= 2.07分鐘。 實例31 : 5-氟-1-異丙基_1H-吲唑_3_羧酸{(is，3R，5R)-8- [2_(4_乙酿基喊0井_1_基）乙基】_8_氮雜雙環[hi】辛冬基} 醯胺之合成 a· 5_氟-1-異丙基-1Η-吲唑-3-羧酸之合成 1 Y，專 k，雜環化學期刊（J Hetere〇cycUc 99256.doc -66 - 200533348 1964，7, 239_41中所述方法製備5·氟]丨哇_3邊 酸甲酯。1H-NMR (DMSO-d6): δ (ppm) 7.8 (dd，2H)，7«35 (dt，1H)，3·8 (s，3H)。該甲酯在第三丁氧化鉀存在下，在 回流之THF中以異丙基碘在N1處烷化。1H-NMR (CDC13): δ(ρριη) 7.8 (dd，1H)，7.6 (dd，1H)，7·1 (dt，1H)，4.8 (hept，

1H)， 1.6 (d， 6H)。接著使異丙基甲酯水解（1M

Na〇H/THF，RT)，獲得標題中間物。 b· 5_氟小異丙基_1Η·Θ丨唑-3_叛酸{(lS，3R，5R)-8j雜雙環 [3·2·1】辛-3-基}醯胺之製備

依據貫例1之e及f部分之程序，使用前一步驟之中間物 置換卜異丙基-1H-啕唑-3,酸製備標題中間物。iH-NMR (DMSO-d6): δ (ppm) 7·9 (br，1H)，7.7 (dd，1H)，7.6 (dd， 1H)，7.2 (dt，1H)，4.9 (m，1H)，4.2 (br，1H)，4.0 (br，2H)， 2.3-2.1 (br m， 8H)， 1.5 (d， 6H) 。 （m/z): [M + H] + C18H23FN40，計算值331.19 ;實測值331.4。駐留時間（分 析用 HPLC: 10-40% MeCN/H20，6分鐘内）= 3.43分鐘。 c· 5-氟 _1_異丙基-1H_吲唑-3-羧酸{(18,311，511)-8_(2,2-二甲 氧基乙基〗-8-氮雜雙環[3·2·1】辛_3-基}醯胺之製備 依據實例1步驟g之方法，使前一步驟之產物與二甲氧基 乙酸反應’獲得標題中間物。（m/z)·· [M+H] + C22H31FN403，計算值 419.25 ;實測值 419.3。 d· 5-氟-1-異丙基 _1H_H丨唑-3_羧酸{(lS，3R，5R)-8-(2,2-:· 乙基）-8-氮雜雙環[^^辛-^基丨醯胺之製備 將前一步-驟之中間物（1〇克）懸浮在1〇毫升6 μ鹽酸中， 99256.doc •67- 200533348 且在70 °C下加熱1 h。反應混合物經冷卻且減壓蒸發至 乾，獲得標題中間物之鹽酸鹽。（m/z): [m+h] + 匸201127卩!^4〇3，計算值391.21;實測值391.4。 e· 5-氟-1_ 異丙基 _ih-吲唑-3-羧酸{(lS，3R，5R)_8-[2-(4-乙 醯基哌畊-1-基）乙基】-8-氮雜雙環[3·2·1】辛-3-基}醯胺之 製備 於δ 40¾升一氣甲火元之瓶中添加1-乙隨基旅呼（gig毫 • 克，4.78毫莫耳）及三乙醯氧基硼氫化鈉（1〇ι克）。授拌5分 鐘接著添加前一步驟之產物（〜1克）。使最終混合物攪拌1 h， 此時以HPLC及質譜分析顯示反應完全。緩慢加水（2〇毫 升），且以300毫升二氣甲烷稀釋混合物，且於漏斗中搖 晃，接著收集有機層。以1 M NaOH(100毫升）及食鹽水 (100毫升）洗滌。以MgSCU脫水且蒸發，獲得標題化合物， 使之以製備性HPLC純化，獲得3 80毫克純產物之TFA鹽。 H-NMR (DMSO-d6 ;游離驗）：δ (ppm) 8.0 (br，1H)，7 8 φ (dd，1H)，7.6 (dd，1H)，7.23 (dt，1H)，5·0 (hept，1H)，4.0一 3.9 (br, 3H), 3.5 (br, 2H)? 3.2-2.8 (br, 10H), 2.2 (br rri? 8H) 1.9 (s，3H)，1.4 (d，6H)。（m/z): [M+H]+ C26H37FN6〇2，計 算值485.30 ;實測值485.5。駐留時間（分析用HPLC : l〇-70% MeCN/H20，6分鐘内）=2.28分鐘。 實例 32 : 1·丙基-1Η^5 丨嗤 叛酸{(lS，3R，5R)_8_[2-(4-乙 醯基旅p井_1_基）乙基】-8 -氮雜雙環[3.2.1]辛-3-基}酿胺之 合成 a· 1Η-啕唑-3_羧酸{(lS，3R，5R)_8_[2-(4-乙醯基哌畊 基） 99256.doc -68 - 200533348 乙基卜8_氮雜雙環丨3.21】辛-3-基丨醯胺之製備 依據實例1之程序，使用1H-吲唑-3-羧酸置換步驟e中之 1·異丙基-1H-吲唑-3邊酸製備標題中間物。（m/z): [M+H] + C23H32N6〇2 ’計算值425·27 ;實測值425.4。駐留時間（分 析用 HPLC : l(M〇% MeCN/H2〇，6分鐘内）=1·47分鐘。 b· 1-異丙基_1Η_吲唑_3_羧酸{(18,3Κ，5Κ)-心[2_(4_乙醯基哌 畊-1-基）乙基卜8-氮雜雙環[^^辛^-基丨醯胺之另一種 合成 於含前一步驟中間物之TFA鹽（80毫克，〇123毫莫耳）之 然水DMF(2笔升）溶液中添加第三丁氧化鉀（48毫克，〇·43 毫莫耳）及異丙基碘（37微升，0.368毫莫耳）。混合物在85。(： 下搖晃12 h ’在分離至乾，獲得淡棕色殘留物，將其溶於 50%乙酸水溶液中，且以製備性HpLC分離，獲得標題化合 物。（m/z). [M+H] C26H38N602，計算值 467.31 ;實測值 467·2 [M+H]+。駐留時間（分析用 hplc ·· 5-65%

MeCN/H2〇 ’ 6分鐘内）=2.09分鐘。 匕1-丙基-1H_吲唑冬羧酸{(ls，3R，5R)_8_[2-(44醯基哌 畊-1·基）乙基】-8-氮雜雙環[3.2.11辛-3-基}醯胺之合成 使用與步驟b類似之方法’但以正丙基碘置換異丙基 碘，製備標題化合物。（m/z): [Μ+ΗΓ C26H38N6〇2，計算值 467.3 1，貫測值467.4 [M+H]+。駐留時間（分析用HpLC : 5-65% MeCN/H20，6 分鐘内）= 2.05 分鐘。 實例33-35 使用與實-例32類似之方法，但以適用之烷基^化物置換 99256.doc -69- 200533348 異丙基碘，製備實例33-35之化合物。 實例 33 ·· 1-丁基-1H-4 唑-3-羧酸（（lS，3R，5R)-8-[2-(4-乙 醯基哌畊-1-基）乙基]-8-氮雜雙環[3·2·1]辛-3-基）醯胺：（m/z): [M+H]+ C27H4()N6〇2，計算值 48 1.33 ;實測值481.4。駐留時間（分析用 1^1^:5-65%?^〇1/1120，6分鐘内）=2.26分 鐘。 實例 34 : 1-環丁基-111-4丨唑-3-羧酸（（13,3尺，511)-8-[2-(心 ® 乙醯基哌畊-1-基）乙基]-8-氮雜雙環[3·2·1]辛- 3-基）醯胺：（m/z): [M+H]+ C27H38N602，計算 值479.3 1 ;實測值479.4。駐留時間（分析用 HPLC : 5-65% MeCN/H20，6 分鐘内）=2.20 分 鐘。 實例 35 : 1-環戊基-1H-H 丨唑-3-羧酸（（lS，3R，5R)-8-[2-(4-乙醯基哌畊-1-基）乙基]-8-氮雜雙環[3.2.1]辛-φ 3-基）醯胺：（m/z): [M+H]+ C27H4〇N602，計算 值493.33 ;實測值493.2。駐留時間（分析用 HPLC ·· 5-65% MeCN/H20，6 分鐘内）=2.34 分 鐘。 實例36-40 使用與上述類似之方法，製備化合物36-40。 實例 36 : 1-異丙基-1H- 4丨唑-3 -羧酸{(lS，3R，5R)-8-[2-((R)-3-(乙酸基甲基胺基）ρ比洛咬-1-基）乙基]-8-^ -氮雜雙環[3.2.1]辛-3-基}醯胺。 99256.doc -70- 200533348 貫例37 :卜異丙基-1H-吲唑-3 -羧酸{(lS，3R，5R)-8-[2- ((S)-3-(乙醯基甲基胺基）吡咯啶パ-基）乙基l·8_ 氮雜雙環[3·2·l]辛-3-基}醯胺。 貫例 38 : 1-異丙基-1H-吲唑-3 -羧酸（（lS，3R，5R)-8-{2-[((S)-l -甲烷磺醯基吡咯啶基）甲基胺基]乙 基氮雜雙環[3·2·ΐ]辛-3-基）醯胺。 貫例 39 : 1-異丙基-1Η)丨唑 羧酸（（ls，3R，5R)-8-{2- [(R)_(l，l-一氧代-四氫-1λ6-σ塞吩-3-基）甲基胺 基]乙基}-8-氮雜雙環基）醯胺。 貫例40:卜異丙基_111^卜坐_3-羧酸{(13,311，511)_8_{2_ [(S)-(l，l·二氧代-四氫_1λ6_噻吩-3_基）甲基胺 基]乙基}-8-氮雜雙環[3·2·1]辛-3-基}醯胺。 實例41 : 1-異丙基_1Η冽唑_3_羧酸{(1S3R，5R)冬[2(4_ 乙醯基哌畊-1-基）乙基卜8-氮雜雙環[3 21】辛_3•基}醯胺 二鹽酸鹽之合成 a· (lS，3R，5R)-3-[l_異丙基_1H，唑_3_羰基]胺基]_8_氮雜 雙環[3·2·1]步燒叛酸第三丁醋之製備 於裝置磁石授拌棒、回流冷凝器、添加漏斗、氮氣輸入 及溫度計之5升三頸圓底瓶中加入^異丙基_1Η_吲唑_3_羧 酸(250克，i.224莫耳，當量)及2·5升甲苯。所得懸浮液 經授拌且在7G.8(TC下加熱。在4Q分鐘内於該料液中添 加硫醯氣(218.4克，莫耳，165當量）。混合物在9〇_ 10(TC下加熱1 h且冷卻至25°C。 於裝置機·械授拌器、添加漏斗、氮氣輸入及溫度計之12 99256.doc -71 - 200533348 升三頸圓底瓶中加人2·5升甲苯及3 N Na〇H(藉由以水稀釋 356 克 50% NaOK^L48升製備），且添加（1S，3R，5R^_ 胺 基-8-氮雜雙環[3·2·1]辛烷-8-羧酸第三丁酯（2519克，} 113 莫耳，1當量）。所得懸浮液在23t下攪拌1〇分鐘，且冷卻 至5°C。在90分鐘内在添加時段之過程中使内溫維持在— °C下，於該懸浮液中添加含酸氣化物之甲苯溶液。混合物 攪拌30分鐘。反應升溫至25t，倒掉水層（ι·58升， φ ΡΗ>13)。有機層以1升2〇 wt%食鹽水洗滌，且倒掉水層 (1.005升，〜pH 8)。收集有機層（5·3升）且濃縮至體積為一 半（〜2.6升），且未經純化用於下一步驟中。 b· 1-異丙基_1Η-吲唑羧酸{(1S，3R，5R)_恥氮雜雙環 [3.2.1】辛-3_基}醯胺之製備 於I置機械攪拌器、添加漏斗、氮氣輸入及溫度計之工2 升三頸圓底瓶中加入前一步驟之產物。在1〇分鐘内該溶液 中添加二氟乙酸（〇.65升）。所得混合物在周圍溫度下攪拌^匕。 Φ 將水（3·3升）加於反應混合物中。使所得懸浮液在23°C下 攪拌10分鐘，且使之沉降獲得三層混合物。倒掉上面二 層收集底雇（820毫升），且於90分鐘内添加於MTBE(6560 毫升）中。所得懸浮液冷卻至5。〇，且攪拌丨h。懸浮液經過 濾，濕潤之餅以MTBE(500毫升）洗滌且減壓（8〇 mmHg)乾 知60 h ’獲得灰白色沙狀固態標題中間物（386克，產率 81°/。，HPLC之純度為 99.2%)。 (^1_異丙基-111-4丨唑-3-羧酸{(18,311，511)_8_(2,2-二曱氧基 乙基）-8-氮雜雙環丨醯胺之製備 99256.doc -72- 200533348 於裝置磁石攪拌器、氮氣輸入及溫度計之3升三頸圓底 升瓦中加入前一步驟之中間物（84克，〇197莫耳）、二氣曱烷 (840宅升）及三乙酿氧基硼氫化鈉（62·6克，〇·295莫耳）。使 所得懸洋液攪拌1〇分鐘，冷卻至⑺它且添加6〇 wt%二曱氧 基乙酸水溶液（51.3克，ο』％莫耳）。使該溶液攪拌3〇分 在里，升腹至25 C且攪拌1 h。混合物經矽藻土過濾，以二 氣曱烷（150¾升）洗滌再以5 wt%食鹽水溶液（4〇〇克）洗滌。 φ 分離水層及有機層，且濃縮有機層成深色油（〜150毫升）， 其可不經純化用於下一步驟中。 11_異丙基-111_吲唑_3_羧酸{(18,311，511)-8-(2,2_二甲氧基 乙基）-8-氮雜雙環^丄^辛—^基}醯胺之製備 於裝置磁石攪拌器、氮氣輸入及溫度計之1升三頸圓底 瓶中加入刚一步驟之產物及水（25〇毫升），且加熱至 °c。該溶液中添加3 N HC1(82亳升，〇·985莫耳）。所得混 合物在75°C下攪拌1 h。反應混合物冷卻至25°c，且以25 • ⑽Na〇H(159克，0·99莫耳）中和至ΡΗ 3·51。約20分鐘 後，收集下層（·〜120毫升）獲得標題中間物，其可不經純化 用於下一步_中。 e. 1-異丙基-ΙΗβ丨嗤_3·羧酸{(1S，3R，5R)_8_[2_(4乙酿基旅 井1基）乙基】-8-氮雜雙環[3.2.1】辛_3_基}醯胺二鹽酸鹽 之製備 於裝置磁石攪拌哭、f裔鹼Α β、w & Μ 規仟扣虱乱輸入及溫度計之3升三頸圓底 瓶中加入二乙醯氧基硼氫化鈉（84克，〇.349莫耳）及二氯甲 烧（800毫升）。所得混合物在75。 ^ r筏件且加入1 -乙醯基哌 99256.doc *73- 200533348 喷（5 1克，〇·394莫耳）。添加之組合以二氯甲烷（3〇毫升）洗 滌。混合物攪拌5分鐘，且在15分鐘内及内溫維持在25它 下倒入前一步驟之產物（〜120毫升）。使混合物攪拌15分 鐘，經矽藻土過濾且以二氯甲烷（2χ1〇〇毫升）洗滌。濾液以 1 N NaOH(500毫升）洗滌。使層分離，收集下層有機層且 濃縮至〜150毫升。 添加無水乙醇（250毫升）且將混合物濃縮至〜2〇〇毫升。 φ 於該混合物中添加無水乙醇（800毫升），且加熱至4(rc。於 3分鐘内於該混合物中添加3 n HCi(33毫升，0.395莫耳）。 使混合物攪拌10分鐘且開始結晶。所得懸浮液在55。〇下攪 拌2 h且冷部至25 C。混合物經Whatman #2漉紙過濾，且 以無水乙醇（2x100毫升）洗滌濾餅。產物在氮氣中烘乾3〇分 鐘，再於40-50 °C下真空乾燥24 h，獲得標題化合物（82 克）。 實例 42 : 1_ 異丙基 _1H_啕唑 _3_羧酸{(lS，3R，5R)_8_p_(4_ # 乙醯基哌畊-1·基）乙基卜8_氮雜雙環[3·2·1]辛-3-基}醯胺 二氫溴化物之合成 於裝置磁石攪拌器、氮氣輸入及溫度計之5〇〇毫升三頸 圓底瓶中加入水（120毫升）及1-異丙基-1Η-吲唑·3_幾酸 {(lS，3R，5R)-8_[2-(4-乙醯基旅畊·1·基）乙基]氮雜雙環 [3_2·1]辛-3-基}醯胺二鹽酸鹽（12克，22.2毫莫耳）。所得混 合物經攪拌，獲得淡黃色透明溶液。在2分鐘内於該溶液 中添加25 wt% Na〇H(7.83克，24.4毫莫耳），獲得白色乳狀 懸浮液。添·加一氣甲烧（12 0宅升），且使混合物授掉3 〇八 99256.doc -74- 200533348 鐘，獲得透明二層溶液。使層分離獲得水層（113毫升）及有 機層（125¾升），且以10% NaBr水溶液（120毫升）洗滌。使 層分離獲得有機層（120毫升），經濃縮至體積約四分之一。 ’小、加然水乙醇（250耄升），且使混合物蒸顧至總體基〜2⑽ I升。谷易在58C下擾拌且於2分鐘内添加48 wt% HBr水 溶液（8_2克，49毫莫耳）。當添加超過一半之HBr時發現沉 殿。使混合物在55°C至62°C下攪拌1 h，接著冷卻至周圍 瞻溫度且過濾。濾液以無水乙醇（4〇毫升）洗滌，在氮氣中乾 燥20分鐘，且在45°C之真空中乾燥48 h，獲得白色固態標 題化合物（13.42克）。 實例 43 : 1-異丙基 _1H-吲唑 _3_羧酸{(lS，3R，5R)-8_[2_(4_ 乙醯基哌畊-1-基）乙基】-8-氮雜雙環[3·2·1]辛-3-基}醯胺 富馬酸鹽之合成 於含1-異丙基-1Η-蚓唑-3-羧酸{(lS，3R，5R)-8-[2-(4乙醯 基哌畊-1-基）乙基]-8-氮雜雙環[^:^辛-3_基}醯胺（〇1 φ 克’ 0·21毫莫耳）之50〇/°乙腈/水（1毫升）溶液中添加1Μ富馬 酸之乙醇溶液（0.44毫升，0.42毫莫耳）。使所得溶液凍乾 隔仪’再與乙酸乙酯（1耄升）混合。配合加熱於該混合物中 添加熱乙醇，直到獲得均勻溶液為止（〇·4毫升）。再使所得 透明溶液於室溫下結晶。所得固體經過濾，以乙醇洗丨條且 真工乾無’獲仔固悲標題化合物（〇 · 1 3克）。 實例 44 : 1-異丙基 _1Η_啕唑-3-羧酸{(lS，3R，5R)_8_[2-(4- 乙醯基喊畊―1·基）乙基】氮雜雙環[3·2·1】辛_3-基}醯胺 磷酸鹽之合成 99256.doc 200533348 於含1-異丙基-1H-钊唑-3-羧酸{(lS，3R，5R)-8-[2_(4-乙醯 基哌畊-1-基）乙基]-8 -氮雜雙環[3.2.1]辛-3-基}醯胺（0.2 克，0·43毫莫耳）之甲醇（3毫升）溶液中添加1 Μ石粦酸之乙醇 溶液（0·43毫升，〇·43毫莫耳）。使所得不均勻溶液再加熱 至溶解，經過濾且使之冷卻隔夜。所得固體經過濾，乙甲 醇洗滌，且真空乾燥，獲得固態標題化合物（〇.〇8克）。 實例 45 : 1_異丙基-1H-W 唑 _3_羧酸{(is，3R，5R)-8_[2_(4_

乙醯基哌畊_1·基）乙基】·8_氮雜雙環[3·2·ΐ】辛-3-基}醯胺 對-甲苯續酸鹽之合成 使含1-異丙基-1H-W唑-3-羧酸{(is，3R，5R)-8-[2-(4-乙酿 基喊味-1 -基）乙基]-8 -氮雜雙環[3.2· 1 ]辛-3-基}醯胺（38.7毫 克’ 0.08毫莫耳）之異丙醇（2毫升）溶液在75。〇水浴中加 熱，且添加固態對-甲苯磺酸單水何物（32·3毫克，〇17毫 莫耳）。加熱所得溶液直到固體溶解為止，再使之冷卻至 室溫。隔夜形成標題化合物之結晶。 實例 46 : 1_異丙基-1Η-啕唑-3-羧酸{(is，3R，5R)-8q2_(4_ 乙醯基哌畊：1_基）乙基】-8-氮雜雙環丨321】辛_3_基}醯胺 酸鹽之合或 便用與實例43-45 量數製備固態之以下異丙基·1Η_β唑_3_綾酸 {(lS，3R，5R)-8_[2_(4_乙酿基哌，井小基）乙基]_8_氮雜雙環 [3.2.1]辛-3_基}醯胺之酸鹽：乙酸鹽（2);苯曱酸鹽pi硝 酸鹽(2);丙酸鹽⑴；酒石酸鹽(2);磷酸鹽(0.5)。 實例47 . J^5-HT4(0人類受體之放射配位基結合分析 99256.doc 76 200533348 a·細胞膜製備5-ΗΤ4⑷ 以人類5-HT4(c)受體cDNA穩定轉染之HEK-293(人類胚胎 腎）細胞（Bmax=約6.0 pmol/毫克蛋白質，使用[3H]-〇111 13 808細胞膜放射配位基結合分析測定）於1[-225燒瓶 内，在含4,500毫克/升之D-葡萄糖及鹽酸吡哆辛（GIBCO-Invitrogen公司，Carlsbad CA : Cat #1 1965)且補充有 10% 胎牛血清（FBS)(GIBCO-Invitrogen公司：Cat #10437)、2 mM L-榖胺醯胺及（100單位）青黴素-(100微克）鏈黴素/毫升 (GIBCO-Invitrogen公司：Cat #15140)之杜貝克氏改質鷹氏 培養基（DMEM)中，於5% C〇2保濕培養機内在37°C生長。 細胞藉添加800微克/毫升慶大黴素（GIBCO-Invitrogen公 司：Cat #10131)至培養基中在連續選擇壓力下生長。 細胞生長至大約60-80%融合（<35次培養物繼代）。收取 前20-22小時，細胞洗滌2次並饋入不含血清之DMEM。所 有細胞膜製備之步驟均在冰上進行。該細胞單層藉溫和機 械攪動挑起並以25毫升移液管分散。在1000 i*pm離心（5分 鐘）而收集細胞：。

就細胞膜製備而言，細胞粒再懸浮於冰冷卻之5 0 mM 4-(2-羥基乙基）-1-哌畊乙烷磺酸（HEPES)，pH 7.4(細胞膜製備 緩衝液）（自30-40瓶T225燒瓶之40毫升/總細胞產量）並使用 多轉子瓦解器（設定19，2x10秒）在冰上均質化。所得均質 物在1200 g在4°C離心5分鐘。粒片丟棄且上清液在40,000 g 離心（20分鐘）。粒片藉以細胞膜製備緩衝液再懸浮洗滌一 次並在40,0O0 g離心（20分鐘）。最終粒片再懸浮於50 mM 99256.doc -77- 200533348 HEPES，pH 7·4(分析缓衝液）（等於1瓶T225燒瓶"毫升）中。 藉Bradford(Bradford，1976)之方法測定細胞膜懸浮液之蛋 白質濃度。細胞膜以整數份冷凍儲存在-80°C。 b·放射配位基結合分析 於1.1毫升96-深孔聚丙烯分析盤（Axygen)中以總分析體 積400微升之含2微克細胞膜蛋白質之50 mM HEPES pH 7.4(含0.025%胎牛血清白蛋白（BS A))中進行放射配位基結 合分析。用以測定該放射配位基之Kd值之飽和結合研究使 用[3H]-GR113808(Amersham 公司，Bucks， UK : Cat #TRK944 ；比活性約 82Ci/毫莫耳），在自 0.001 nM-5.0 nM 範圍内以8-12種不同濃度進行。用以測定化合物之卩1值 之置換分析係以[3H]-GR1 13808在0.15 nM及自10 pM-100 μΜ内之11種不同濃度化合物進行。 試驗化合物接受為於DMSO中之10 mM原料溶液並於含 0.1% BSA 之 50 mM HEPES pH 7·4 中在 25°c 稀釋至 400 μΜ 接著以相同緩衝液連續稀釋（1:5)。於1 μΜ未標記之 GR1 13 808存在下測定非特異結合。分析在室溫培育60分 鐘且接著藉於預先浸潰0.3%聚伸乙亞胺之96-孔GF/B玻璃 纖維濾紙盤（Packard BioScience Co.，Meriden，CT)上快速 過渡而終止結合反應。過濾盤以過濾、緩衝液（冰冷卻之5 0 111%«^?£3，？117.4)洗滌3次以移除未結合之放射活性。使 盤乾燥，於各孔中添加35微升Microscmt-20液體閃爍流體 (Packard BioScience Co.，Meriden, CT)且該等盤在Packard Topcount 液-體閃燦計數器（Packard BioScience Co.， 99256.doc -78- 200533348

Meriden，CT)上計數。 以GraphPad Prism軟體套件（GraphPad軟體公司，聖地牙 哥，CA)使用對單一位置競爭之3-參數模型藉非線性 分析法分析結合數據。該BOTTOM(最小曲線）固定為非斗寺 異結合之值，如在1 /xM GR1 13808存在下所測定者。、 於

Prism中自最佳套入IC50值，對試驗化合物及Kd值伟 Cheng-Prusoff程式（Cheng及Prusoff，生化醫藥學，丨9乃 22，3099-108): Ki=IC50/(l + [L]/Kd)計算心值，其中[1卜濃 度[3H]-GR1 13808。結果表示為Ki值之負的十的對數， pKi。 此分析中具有較高pKi值之試驗化合物對5-HT4受體具^ # 較高結合親和性。此分析中試驗之本發明化合物具有< ρΚι值在約6.3至約9·0之範圍，一般在約7.0至約8.6之範 圍。 實例48 :對5-ΗΤ3ΑΑ類受體之放射配位基結合分析：測 定受體亞型選擇性 a·細胞膜製備5:ΗΤ3Α 人類5-ΗΤ3α受體cDNA穩定轉染之ΗΕΚ-293(人類胚胎腎） 細胞得自 Dr. Michael Bruess(Bonn大學，GDR)(Bmax=約 9.0 pmol/毫克蛋白質，使用[3H]-GR65630細胞膜放射配位 基結合分析測定）。細胞於T-225燒瓶或細胞工廠内，在補 充有10%熱去活化之胎牛血清（FBS)(Hyclone，Logan, UT : Cat #SH30070.03)及（50單位）青黴素-(50微克）鏈黴素/毫升 (016〇0-11^也〇§611公司：〇31#15140)之50%杜貝克氏改質 99256.doc -79- 200533348 鷹氏培養基（DMEM)(GIBCO-Invitrogen 公司；Carlsbad， CA : Cat #1 1965)及 50%漢氏（Hamfs) F12 中，於 5% C02保 濕培養機内在37°C生長。 細胞生長至大約70-80%融合（<35次培養物繼代）。所有 細胞膜製備之步驟均在冰上進行。為了收取該等細胞，吸 取培養基且細胞以不含Ca2+、Mg2+之杜貝克氏磷酸鹽緩衝 食鹽水（dPBS)洗滌。該細胞單層藉溫和機械攪動挑起。在 1000 rpm離心（5分鐘）而收集細胞。細胞膜製備之隨後步驟 依循上述對表現5-HT4(e)受體細胞膜之方法。 b·放射配位基結合分析 於96-孔聚丙烯分析盤中以總分析體積200微升之含1.5-2 微克細胞膜蛋白質之50 mM HEPES pH 7·4(含0.025% BSA 緩衝液）中進行放射配位基結合分析。用以測定該放射配 位基之Kd值之飽和結合研究使用[3H]-GR65630 (PerkinElmer生命科學公司’波士頓，MA : Cat #NET1011 ；比活性約85 Ci/毫莫耳），在自0.005 nM至20 nM範圍内以12·種不同濃度進行。用以測定化合物之？&值 之置換分析德以[3H]-GR65630在0.50 nM及自10 pM至100 μΜ内之11種不同濃度化合物進行。試驗化合物接受為於 DMSO中之10 mM原料溶液（參見段落3.1)，並於含0.1% BSA之5 0 mM HEPES pH 7.4中在25°C稀釋至400 μΜ接著以 相同缓衝液連續稀釋（1:5)。於10 μΜ未標記之MDL72222 存在下測定非特異結合。分析在室溫培育60分鐘且接著藉 於預先浸潰Ό.3%聚伸乙亞胺之96-孔GF/B玻璃纖維濾紙盤 99256.doc -80- 200533348 (Packard BioScience Co。，Meriden，CT)上快速過濾而終止 結合反應。過濾盤以過濾緩衝液（冰冷卻之50 mM HEPES， pH 7·4)洗滌3次以移除未結合之放射活性。使盤乾燥，於 各孔中添加35微升Microscint-20液體閃爍流體（Packard BioScience Co·，Meriden，CT)且該等盤在Packard Topcount 液體閃燦計數器（Packard BioScience Co.，Meriden，CT)上 計數。 使用上述非線性回歸程序分析結合數據以測定&值。該 BOTTOM(最小曲線）固定為非特異結合之值，如在1〇 μΜ MDL72222存在下所測定者。於cheng-Prusoff程式甲之量 [L]定義為濃度[3h]-GR65 630。 對5-HT4受體亞型相對於5-HT3受體亞型之選擇性計算為 比例KiG-HU/KiG-HTw))。此分析中試驗之本發明化合 物具有5-HT4/5-HT3受體亞型選擇性在約25至約4000之範 圍，典型上在約100至約4000之範圍。 實例49 :以表現人類5-HT4(e)受體之HEK_293細胞之全 細胞c AMP累·積快速盤分析 此分析中「藉測量表現人類5-HT4⑷受體之HEK-293細胞 與不同濃度試驗化合物接觸時產生之環狀AMP量而測定試 驗化合物之功能效力。 a·細胞培養物 以選殖之人類5-HT4⑷受體cDNA穩定轉染之HEK-293(人 類胚胎腎）細胞使該受體以不同密度表現而製備··（1)在約 0.5至0·6 pmol/毫克蛋白質之密度，使用[3h]-GR1 13 808細 99256.doc -81 - 200533348 胞膜放射配位基結合分析測定，及（2)在約〇·6 pmol/毫克蛋 白質之密度。該等細胞於T-225燒瓶内，在補充有1〇%胎牛 血清（FBS)(GIBCO-Invitrogen 公司：Cat #10437)及（100 單 位）青撤素-(1 〇〇 4克）鍵彳啟素/宅升（GIB CO-In vitro gen公 司：0&1#15140)之含4,5 00毫克/升之〇-葡萄糖（(31]6(：：〇-Invitrogen公司，Cat #1 1965)之杜貝克氏改質鷹氏培養基 (DMEM)中，於5% C02保濕培養機内在37。〇生長。細胞藉 • 添加慶大黴素（800微克/毫升：GIBCO_Invitrogen公司： Cat #10131)至培養基中在連續選擇壓力下生長。 b·細胞製備 細胞生長至大約60-80%融合。分析前2〇至22小時前，細 胞洗條2次並饋入含4,500毫克/升D-葡萄糖之不含血清之 DMEM(GIBCO-Invitrogen公司：Cat #1 1965)。為了 收取該 等細胞，吸取培養基並於各孓225燒瓶内添加10毫升

Versene(GIBCO-Invitrogen公司：Cat #15040)。細胞在RT • 培育5分鐘接著藉機械攪動自瓶内卸載。細胞懸浮液移至 含等體積預熱（37°C) dPBS之離心管内並在1〇〇〇 rpm離心5 分鐘。丟棄丄澄液且粒片再懸浮於預熱（371 )之刺激緩衝 液（每2-3瓶T-225燒瓶為1〇毫升當量）中。注意此時間並標 兄為時間零（〇)。以c〇ultenf數器計數細胞（高於8微米處計 數’瓶内產量為！_2xi〇7細胞/瓶）。細胞以5χι〇5細胞/毫升 之濃度再懸浮於預熱（37°C )之刺激緩衝液（以快速盤套組提 供）中並在37°C預培育1〇分鐘。

使用快速盤醛環化酶活化分析系統以125I-cAMP 99256.doc •82- 200533348 (SMP004B，PerkinElmer生物科學公司，波士頓，MA)依 據製造商之指示，於放射免疫分析格式中進行cAMp分 析。

細胞如上述生長及製備。此分析中最終細胞濃度為25>< 103細胞/孔且最終分析體積為100微升。試驗化合物接受為 於DMSO中之10❿乂原料溶液，並於含〇1% BSA之5〇 mM HEPES pH 7。4中在25。(：稀釋至400 μΜ接著以相同緩衝液連 續稀釋（1:5)。以自10卩“至丨⑼μΜ範圍之u種不同濃度化 合物（最終分析濃度）進行環狀AMP累積分析。在每一盤上 包含5-HT濃度-反應曲線（10 1)]^1至1〇〇 μΜ)。細胞經培育， 在37t搖晃15分鐘，且藉添加1〇〇微升冰冷卻之偵測緩衝 液（以快速盤套组提供）至各孔中而終止反應。該等盤經密 封亚在4 C培育隔夜。使用Topcount(Parkard則沾以⑶⑶公 司，Meriden，CT)藉閃爍鄰近分光計定量結合之放射活 性。 每毫升反應產生之cAMP量自cAMP標準曲線依據製造商 之使用手冊所提供之指示進行外插。以Graphpad pnsm軟 體套件使用對3-參數彎曲字型劑量_反應模型（限制至單一 性之斜率）藉非線性回歸分析法分析結合數據。效力數據 以$，其為eCm值之負的十的對數，其中ec5〇為 50%最大反應之有效濃度。 此分析中展現較高^(^⑼值之試驗化合物對激動5_h 丁*受 體具有較高效力。此分析例如在具有密度約〇5_〇6 毫克蛋白質之密度之細胞株（1)中試驗之本發明化合物，具 99256.doc -83- 200533348 有在約6.3至約9.0範圍之pECw值，一般約7·5至約8.5之範 圍。 實例50 :於表現hERG心臟鉀通道之全細胞中抑制奸離 子電流之體外電壓夹具分析 自威斯康辛大學之Gail Robertson獲得以hERG cDNA穩 定轉染之CHO-K1細胞。細胞使用前保持冷凍儲存。細胞 於補充有10%胎牛血清及20微克/毫升慶大黴素之杜貝克氏 • 改貝鷹氏培養基/F12中膨脹並繼代。細胞接種於h mm2碟 (含2毫升培養基）内之以聚①·離胺酸（1〇〇微克/毫升）塗佈之 玻璃蓋玻片上，接種密度為使對全細胞電壓-夾具研究中 可選擇出單離之細胞。該等碟維持在保濕之5% 〇〇2及371 之環境中。 至少母7天製備細胞外溶液且未使用時儲存在4。〇。該細 胞外溶液含（mM) : NaCl(137)、KC1(4)、CaCl2(1.8)、

MgChd)、葡萄糖（1〇)、4-(2-羥基乙基^-哌畊乙烷磺酸 • (HEPES)(10)，以他⑽調至PH 7.4。在試驗化合物不存在 或存在下之細·胞外溶液包含於儲器中，自該儲器以約〇·5 毫升/分鐘流〜入記錄室内。製備細胞内容液、分取並儲存 在-20 C直到使用當天。該細胞内溶液含： KC1(13 0)、MgCl2(l)、乙二醇-雙（心胺基乙基醚）n，n，n，，n、 四乙酸鹽（eGTA)(5)、MgATP(5)、4私經基乙基）小旅畊 乙烧績酸（HEPES)⑽，以K0H調至pH7 2。所有實驗在室 溫（20-22 C )進行。 ，、上接種細胞之盍玻片移至記錄室内並連續灌流。在細 99256.doc -84- 200533348 胞與嵌片電極之間形成Gigaohm密封物。_旦達到釋定欲 片，以電壓夾具模式以-80 mV之最初維持電壓開始記錄。 達到穩定全細胞電流後，細胞暴露至試驗化合物_。標準 方案為·自-80 mV至+20 mV之維持電壓階段保持4· § 秒’再偏極化至-50 mV歷時5秒且接著回至最初維持電麼 (-80 mV)。此電壓方案每15秒（0.067 Hz)進行一次。使用 pClamp軟體測定偏極化期之期間高峰電流振幅。試驗化合 物以3 μΜ濃度灌流在細胞上歷時5分鐘，接著在無化合物 存在下進行5-分鐘洗除。最後於灌流液中添加陽性對照組 (西沙普來（cisapride)，20 ηΜ)以試驗細胞功能。自_8〇 mV 至+20 mv之階段活化該hERG通道，導致向外電流。該階 段回到-50 mV導致向外之拖尾電流，因該通道自不活化回 收並予以去活化。 再偏極化期之期間高峰電流振幅使用pCLAMP軟體測 定。该對照組及試驗物件數據輸出至〇rigin(g)(〇riginLat^ 司，Northampton ΜΑ)，在該處個別電流振幅在無化合物 存在下公稱至举初電流振幅。計算公稱之電流平均及各條 件之標準誤羞並對實驗時間作圖。 暴路至试驗物件或載體對照組（一般為〇·3% DMSO)5分 釦後，比較所觀察之電流抑制作用。實驗組間之統計學 比較使用兩個群數獨立地^試驗進行（Micr〇cal 〇ngin ν· 6·0)。認為有意義差為。 此分析中鉀離子電流抑制百分比越小，試驗化合物當使 用作為’口療-劑日寸之心臟再偏極化之圖譜改變潛力越小。在 99256.doc -85- 200533348 使分析中以3 μΜ濃度試驗之本發明化合物展現鉀離子電流 抑制作用小於約20%，典型上小於約丨5%。 實例51 : 口服生物利用性之體外模式·· Cac〇-2滲透分析 進行Caco-2滲透分析以模造試驗化合物口服投藥後通過 腸道並進入血流中之能力。設計於模擬人類小腸單層之緊 密連結之溶液中試驗化合物滲透細胞單層之速率予以測 定。

Caco-2(結腸，腺癌瘤；人類）細胞得自ATCC(美國菌種 收集中心；Rockville，MD)。就滲透研究而言，細胞以 63,0〇〇細胞/cm2密度接種於預濕潤之透明孔聚碳酸酯過濾 器（Costar ;劍橋，MA)上。21天後在培養物中形成細胞單 層。於透明孔盤中細胞培養後]細胞單層之膜自該透明 孔盤上解附並插入擴散室（c〇star ;劍橋，Ma)内。擴散室 插入加熱塊中，其配備有外部循環之恆熱調節之水 中，用以控制溫度。空氣歧管輸送95% 〇2/5% c〇2至擴散 室之各一半中並產生通過該細胞單層之層狀流動圖形 有效減少未攪許之邊界層。 … 以100 μΜ試驗化合物濃度及以14c_甘露醇進行該渗透研 究以追縱單層之整體性。所有實驗在抓進行6g分鐘。對 該擴散室之供給側及接收側在〇、3〇及6〇分鐘取樣。藉 HPLC或液體閃爍計數分㈣品之試驗化合物及甘露醇濃 度。計算滲透係數（Kp)，單位為cm/秒。 此分析中， 利用性指標-。

Kp值大於約i〇xlo-6 cm/秒被視為有利的生物 此分析中試驗之本發明化合物展現κ p值在約 99256.doc -86- 200533348 15x10 cm/秒至約50χ1〇-6 cm/秒之範圍内典型上在約汕 xlO·6 cm/秒至約 40x10-6 cm/秒之間。 實例52:於大鼠中藥理動力學研究 於〇 · 1 %乳酸中在p Η約5至約6之間製備試驗化合物之水 溶液調配物。雄性史帕谷_達利（Sprague_Dawiey)大鼠（cd 種，查理士河實驗室，威明頓，MA)以2·5毫克/公斤劑量 經靜脈内投藥（IV)或以5毫克/公斤劑量經口灌注（ρ〇)投藥 φ 而投予試驗化合物。投藥體積對IV為1毫升/公斤及對Ρ0投 藥為2毫升/公斤。自投藥前、及投藥後2(僅IV)、5、15及 30分鐘及1、2、4、8及24小時自動物連續收集血液樣品。 藉液體層析-質譜儀分析（LC-MS/MS)(MDS sciex， 4000, Applied Bi〇system，Foster City，CA)以下限濃度❻ 克/毫升測定血液血漿中試驗化合物濃度。 使用 WinNonlm(版本（ο」，？__，—η view， CA)藉非區隔分析（對IV為模型2〇1及對p〇為模型2〇〇)評估 # 標準藥理動力學參數。血液血漿中試驗化合物濃度對時間 之曲線中最大偉稱為Cmax。藉線性梯形規則計算自投予該 最後可偵測到濃度之時間之濃度對時間曲線下方之面積 (AUC(O-t))。口服生物利用性（F(%))，亦即對p〇投藥之 AUC(O-t)對IV投藥之AUC(O-t)之劑量-公稱化比例計算如 下·· F(%)=AUCP0/AUCivx劑量 ίν/劑量 ρ〇χ100〇/〇 此刀析中展現較大值之參數、AUC(〇_t)及F(%)之試 驗化合物預期當口服投藥時具有更高之生物利用性。此分 99256.doc -87- 200533348 析中試驗之本發明化合物之Cmax值自約0·05至約〇35微克/ 毫升之範圍内，典型上約〇」至約〇·35微克/毫升，及 AUC(O-t)值範圍在約ο.β至約〇8微克·小時/毫升，典型 上自、力0 · 2 5至約〇 · 8微克·小時/毫升。例如，實例1化合物 之Cmax值為0.254微克/毫升，AUC(〇_t)值為〇·732微克·小 柃/毫升及大鼠模型中口服生物利用性約1⑽％。

雖然本發明已參考特定具體例加以描述，但熟知本技藝 者應了解在不脫離本發明確實精神及範圍内可作各種變化 及可取代對等物。此外，對本發明目的、精神及範圍可做 ❹修飾以適用特定狀況、物質、物質組合物、方法、發 =或各步驟。所有此等修正欲包含在本發明申請專: -圍内。此外’前述引述之所有公報、專利及專 亚於本文公參考，即便可個別併入供參考。

99256.doc 88-

Claims (1)

1. 200533348 十、申請專利範圍： 1· 一種下式⑴之化合物：

   R2

   Rl為氫、鹵基、羥基、Cw烷基，或Ci、4烷氧美 R為c3_4烧基或C3-6環烧基；且 w係選自： (0下式（II)之基： .厂一\ -卜N X * \^/ (Π) 其中X為： NC(〇)Ra，其中Ra*CN3烷基或四氫吱喃基， 中烷基係視情況經-OH*。"烷氧基取代； S(〇)2;或 NS(〇)2Rb，其中Rb為視情況經-oh、Cw烧 基、C5,6環烷基或-SCOh-Cw烷基取代之曱基； (U)下式（III)之基：

   ⑽ 其中- 99256.doc 200533348 Ry為-〇H4cN3烷氧基； P為0或1 ; η為1或2 ;且 Υ為： N(Re)C(0)Rd，其中Rc為氫或c13烷基，且Rd為 視情況經-oHic!·3烷氧基取代之c1-3烷基，或 NReS(0)2Rf，其中V為氫且Rf為視情況經

   -OH、Ci-3烷氧基、C5-6環烷基或_S(0)2-Ci3烷基 取代之CN3烷基； 及 (出）下式（IV)之基： ':T^qZ (IV) 其中 R為氫、Ci·3烧基或以-OH或Cu烧氧基取代之c23 烧基； m為1或2 ; q為1或2，其條件為m與q之總合不等於4 ;且 Z為： NC(〇)Rg，其中Rg為視情況經_〇H或Cw烷氧基 取代之C 1 _ 3烧基’ S ( 0 ) 2 ;或 NS(〇)2Rh，其中Rh為視情況經-oh、Cw烷氧 基、C%6環烷基或-S(0)2-Cb3烷基取代之甲基； 99256.doc 200533348 2〇 或=醫藥可接受性鹽或溶劑化物或立體異構物。 如请求項1之化合物，其中R1為氫或_基。 3· 士口請求項1之化合物 ’其中R2為異丙基或C4_5環烷基。 4· 如請求項1之化合物 其中W為式（η)之基。 5。 如請求項4之化合物 ’其中Ra為cN3烷基且妒為甲基。 6. 女口請求項1之化合物 ’其中w為式（111)之基。 7。 女口請求項6之化合物 ’其中P為0。 8〇 如請求項6之化合物 ，其中η為1。 9。 士口請求項1之化合物 ’其中W為式之基。 10. 如請求項1之化合物 其中m為1且q為1。 11. 如請求項1之化合物 ，其中： R1為氫或鹵基； R為C3_4燒基或c4-5環烧基；且 w係選自由以下組成之群組： ⑴式（II)之基，其中X為NC(〇)CH3、s(〇)2或 ns(〇)2Ch3 ; (π)式（III)之基，其中P為〇，ngl且Y為 NCH3C(〇)CH3 ;及 (Hi)式（IV)之基’其中R為甲基，m為1，q為1且z為 NC(〇）CH3、s(o)2 或 ns(o)2ch3。 12·如請求項化合物，其中w為式（II)之基，其中X為 NC(〇)CH3、s(o)2或 ns(o)2ch3。 13 ·如請求項1之化合物，其中該化合物係選自： 1-異丙基-1H-钊唑-3-羧酸{(is，3R，5R)-8-[2，（4-乙醯基 99256.doc 200533348 哌畊-1_基）乙基]-8-氮雜雙環[3·2·1]辛-3-基}醯胺； 1-異丙基-111-卩?卜坐-3-羧酸{(18,311，511)-8-[2-(4-(四氫呋 喃-2-羰基）哌畊-1-基）乙基]-8-氮雜雙環[3.2.1]辛-3-基}醯 胺； 1-異丙基-1Η-叫唑-3-羧酸{(18,311，511)-8-[2-(1，1-二氧 代-1λ6-硫嗎啉-4-基）乙基]-8-氮雜雙環[3·2·1]辛-3-基}醯 胺； 1-異丙基-1Η-啕唑-3-羧酸{(lS，3R，5R)-8-[2_(4-甲烷磺 醯基哌畊-1-基）乙基]-8-氮雜雙環[3·2·1]辛-3-基}醯胺； 1-異丙基-1Η-4丨唑-3-羧酸{(18,3尺，511)-8-[2_(4-環己基 甲烷磺醯基哌畊-1-基）乙基]-8-氮雜雙環[3·2· 1]辛-3-基} 醯胺； 1-異丙基-lH-β 唑-3-羧酸{(lS，3R，5R)-8-[2-(4-甲烷磺 醯基甲烷磺醯基哌畊-1-基）乙基]-8-氮雜雙環[3·2·1]辛-3-基}醯胺； 1-異丙基-1Η4丨唑-3-羧酸{(lS，3R，5R)-8-[2-(3-(乙醯基 甲基胺基）吡咯啶-1-基）乙基]-8-氮雜雙環[3·2·1]辛-3-基} 醯胺； — 1-異丙基-1Η-吲唑-3-羧酸{(lS，3R，5R)-8-[2-(3-(乙醯基 胺基）吡咯啶-1-基）乙基]-8-氮雜雙環[3.2.1]辛-3-基}醯 胺； 1-異丙基-1H-M丨唑-3-羧酸{(lS，3R，5R)-8-[2-((R)-3-(乙 醯基胺基）峨咯啶-1-基）乙基]-8-氮雜雙環[3.2.1 ]辛-3-基} 商藍胺， - 99256.doc 200533348 1-異丙基-1H-W 唑-3-羧酸{(lS，3R，5R)-8-[2-（（s)-3-(乙 醯基胺基）吡咯啶-1-基）乙基]-8-氮雜雙環[3·2·1]辛_3_基} 醯胺； 1-異丙基-1Η-啕唑-3-羧酸{(lS，3R，5R)-8-{2-[3-((S)-2-羥丙醯基胺基）吡咯啶-l-基]乙基}-8-氮雜雙瓖[3·2·1]辛-3-基}醯胺； 1-異丙基-1Η-啕唑-3-羧酸{(lS，3R，5R)-8-{2-[(3S，4S)_ 3-(乙醯基甲基胺基）-4-羥基吡咯啶-1-基]乙基卜8_氮雜雙 環[3.2.1]辛-3-基}醯胺； 1-異丙基 _1H-吲唑-3-羧酸{(1S，3R，5R)-8-[2-((r)_3-乙 烷磺醯基胺基吡咯啶-1-基）乙基]-8-氮雜雙環[3.2·1]辛-3-基}醯胺； 1-異丙基-1H-啕唑-3-羧酸{(lS，3R，5R)-8-[2-((R)_3-環 己基甲烷磺醯基胺基吡咯啶-1-基）乙基]-8-氮雜雙環 [3·2·1]辛-3-基}醯胺； 1-異丙基-111-吲唑-3-羧酸（（13,311，51〇-8-{2-[3-(乙醯基 甲基胺基）°辰％-1-基]乙基卜8-氮雜雙環[3.2·1]辛-3-基）酿 胺； — 1-異丙基-1Η-啕唑-3-羧酸{(is，3R，5R)-8-[2-(3 -乙醯基 胺基哌啶-1-基）乙基]-8-氮雜雙環[3.2.1]辛-3-基}醯胺； 1-異丙基-1H-啕唑-3-羧酸{(is，3R，5R)-8_[2-(3 -甲烷磺 基胺基旅。疋-1-基）乙基]-8-氮雜雙環[3.2.1]辛-3-基}酸 胺； 1-異丙基-1H-吲唑-3-羧酸{(1S，3R，5R)_8_[2_((S)3-甲烷 99256.doc 200533348 磺醯基胺基哌啶-卜基）乙基]-8_氮雜雙環[3.2·1]辛-3-基} 醯胺； 1-異丙基-1Η-Η丨唑-3-羧酸{(lS，3R，5R)-8-[2-((S)-3-乙 烷磺醯基胺基哌啶-1-基）乙基]-8 -氮雜雙環[3.2.1]辛-3-基}醯胺； 1-異丙基-1H-W 唑-3-羧酸{(lS，3R，5R)-8-〇((S)-3-甲 烧磺酿基甲烧磺醯基胺基派σ定-1-基）乙基]-8 -氮雜雙環 [3.2.1] 辛-3-基}醯胺； 1-異丙基 唑-3-羧酸（（13,311，5反)-8_{2-[(1-乙醯基 叶匕嘻淀-3-基）甲基胺基]乙基} - 8-氮雜雙環[3 _2.1]辛-3-基） 醯胺； 1-異丙基-1H-H卜坐-3_叛酸（（lS，3R，5R)-8-{2-[((R)-l -乙 醯基叶[:洛11 定-3-基）甲基胺基]乙基}-8-氮雜雙環[3.2.1]辛_ 3 -基）酿胺； 1-異丙基-1H-H 卜坐-3-緩酸（（1S，3R，5R)_8-{2_[((s)-1-乙 醯基ρ比洛σ定-3-基）曱基胺基]乙基}-8-氮雜雙環[3.2.1]辛_ 3-基}醯胺；： 1-異丙 4 -1Η-吲唑-3-羧酸{(lS，3R，5R)_8_y[(l -甲烷 石頁S篮基峨^7各咬-3-基）甲基胺基]乙基卜§_氮雜雙環[3 2 1] 辛-3-基）醯胺； 1-異丙基-1H-吲唑-3-羧酸（（lS，3R，5R)，8-{2q((Ryu 火元石頁臨基ρ比17各咬-3 -基）甲基胺基]乙基丨_ 8 _氮雜雙環 [3.2.1] 辛-3-基）S& 胺； 1-異丙基-1H-啕唑-3-羧酸 99256.doc 200533348 代四氫-1λ6-噻吩-3-基）甲基胺基]乙基卜8-氮雜雙環 [3·2·1]辛-3-基）醯胺； 1-異丙基-111-啕唑-3-羧酸（（18,311，511)-8-{2-[(1，卜二氧 代四氫-1λό-噻吩-3-基）-(2-羥乙基）胺基]乙基}-8-氮雜雙 環[3.2.1]辛-3-基）醯胺； 1-異丙基-1H- 4丨唑-3 -羧酸（（13,311，511)-8-{2-[(卜乙醯 基-旅°定-3-基）甲基胺基]乙基}-8-氮雜雙環[3.2.1]辛-3-基）醯胺； 1-異丙基-1H-啕唑-3_羧酸（（18,311，511)-8-{2-[(1，1-二氧 代六氫-1 λ6-嘍喃-4-基）甲基胺基]乙基卜8-氮雜雙環 [3.2.1]辛-3-基）酿胺； 1-異丙基-1Η-4丨唑_3_羧酸（（13,311，511)-8-{2-[(卜甲烷磺 醯基哌啶-3-基）甲基胺基]乙基卜8-氮雜雙環[3·2·ΐ]辛-3-基）醯胺； 5-氟-1-異丙基唑-3-羧酸{(lS，3R，5R)_8-[2-(4-乙 醯基哌畊-1-基）乙基]-8-氮雜雙環[3.2.1]辛-3-基}醯胺； 1-丙基唾-夂羧酸{(lS，3R，5R)-8-[2-(4-乙醯基哌 畊-1-基）乙基]-8-氮雜雙環[321]辛_3_基}醯胺； 1-丁基-1H-4卜坐 _3-羧酸（（1S，3R，5R)_8_[2-(4-乙醯基哌 畊-1-基）乙基]-8-氮雜雙環[321]辛_弘基）醯胺； 1-¾ 丁基·1Η-α 唑羧酸（（1s，3r，5r>8_[2_(4-乙醯基 哌畊-1-基）乙基]-8、氮雜雙環[3 21]辛_3_基）醯胺； 1-壞戊基-111-吲唑-3-羧酸（（18,311，511>8_[2气4_乙醯基 哌畊-1-基·）乙基]-8·氮雜雙環[321]辛_3_基）醯胺； 99256.doc 200533348 1-異丙基-1H-啕唑-3-羧酸{(18,3ίΙ，5Γ〇-8-[2-((ϊ〇-3-(乙 醯基甲基胺基）吡咯啶-1-基）乙基]-8-氮雜雙環[3·2·1]辛-3-基}醯胺； 1·異丙基-1Η-蚓唑-3-羧酸{(lS，3R，5R)-8-[2-((S)-3-(乙 醯基甲基胺基）吡咯啶-1-基）乙基]-8-氮雜雙環[3。2.1]辛-3 -基}酿胺， 1-異丙基-1H-W 唑-3-羧酸（（lS，3R，5R)-8-{2-[((S)-l-甲 烷磺醯基吡咯啶-3-基）甲基胺基]乙基}-8-氮雜雙環 [3.2.1] 辛-3-基）醯胺； 1-異丙基-1H-W 唑-3-羧酸（（lS，3R，5R)·8-{2-[(RHl，l-二氧代-四氫-lλ6-噻吩-3-基）甲基胺基]乙基}-8-氮雜雙環 [3.2.1] 辛-3-基）醯胺； 1-異丙基-1H-啕唑-3-羧酸（（lS，3R，5R)-8-{2-[(SHl，l-二氧代-四氫-1λ6-噻吩-3-基）甲基胺基]乙基}-8-氮雜雙環 [3.2.1] 辛-3-基）醯胺；及 其醫藥可接受性鹽及溶劑化物及立體異構物。 14.如請求項1之化合物，其中該化合物係選自： 1-異丙 ί-1H-啕唑-3-羧酸{(lS，3R，5R)-8-[2-(4-乙醯基 哌畊-1-基）乙基]-8-氮雜雙環[3.2.1]辛-3-基}醯胺； 1-異丙基-1H-⑼唑-3_ 羧酸{(lS，3R，5R)-8-[2-(l，l-二氧 代-1 λ6-硫嗎啉-4·基）乙基]-8-氮雜雙環[3.2.1]辛-3-基}醯 胺； 1-異丙基-1Η-吲唑-3-羧酸{(lS，3R，5R)-8-[2-(4-甲烷磺 醯基哌畊-1-基）乙基]-8-氮雜雙環[3.2.1]辛-3-基}醯胺； 99256.doc 200533348 1-異丙基丨唑-3_ 羧酸 Uls，3R，5R)-8-[2-(3-(乙醯 基-甲基-胺基）吡咯啶-1-基）乙基]-8·氡雜雙環[3·2·1]辛_3 基}酿胺； 1-異丙基 _1Η-峋唑-3·羧酸{(1s，3R，5R)-8_[2-((r)_3_(乙 酿基甲基胺基基）乙基]氮雜雙環[3 2 1]辛 3-基}醯胺； 1-異丙基-1H-峋唑-3-羧酸{(1S，3R，5r)_8_k(s) 3 (乙

   酸基甲基胺基比嘻咬-卜基）乙基氮雜雙環[3 2 1 ]辛 3-基}醯胺； 1-異丙基-1H-4 唑-3-羧酸{(1S，3R 5W q μ w ，κ)·8-[2_[(1·乙醯 基-外匕洛唆-3-基）-甲基胺基]乙基]-8 -氣雜雙環[3 2 1 ]辛 基}醯胺； 1_異丙基-1H-蚓唑-3-羧酸{(1S，3R，5只、。「 吟8_[2_隊)]-乙 酉盘基比洛°定-3-基）甲基胺基]乙基] <雜雙環[3.2.1]辛· 3-基}醯胺； 1-異丙基-1Η-吲唑-3-羧酸{(1S，3R π、 醯基-吡咯啶：3-基）甲基胺基]乙基]n私 一 4雖雙環[3.2.11去 3-基}醯胺； 」〒_ 甲貌磺 、氣雜雙環[321]辛_ 卜異丙基-1H-4丨唑-3-羧酸（（1S，3R， 醯基-吡咯啶-3-基）曱基胺基]乙基}_8 3-基）醯胺； 卜異丙基-1H-4卜坐-3-魏酸（（1S，3R5 烧績驢基p比洛唆-3 -基）甲基胺基] [3·2·1]辛-·3 -基）酿胺， 99256.doc 200533348 1-異丙基σ坐-3-象酸（（lS，3R，5R)-8-{2-[((S)-l -甲 烷磺醯基吡咯啶-3-基）甲基胺基]乙基卜8-氮雜雙環 [3·2·1]辛-3-基）醯胺； 1-異丙基-1Η-卩?丨嗤-3 -竣酸{(lS，3R，5R)-8-[2，（（l，l-〆乳 代四氫-1λ6-噻吩-3-基）甲基胺基）乙基]-8-氮雜雙環 [3.2.1]辛-3-基}醯胺； 1-異丙基-1Η-喇唑-3-羧酸{(lS，3R，5R)-8-|>((R)-(l，卜 二氧代-四氫-lλ6-噻吩-3-基）甲基胺基）乙基]-8_氮雜雙環 [3·2·1]辛-3-基}醯胺； 1-異丙基 _1Η-β 唑-3-羧酸{(lS53R，5R)-8-[2_((SHl，卜 一氧代四氫-lλ6-σ塞吩-3-基）甲基胺基）乙基]_§·氮雜雙環 [3·2·1]辛-3-基}醯胺；及 其醫藥可接受性鹽及溶劑化物及立體異構物。 15·如請求項1之化合物，其中該化合物為異丙基-1 η- Θ丨 咬-3_緩酸{(15,311，511)-8-[2-(4-乙醯基17底_-1_基）乙基]-8- 氮雜雙環[3·2·1]辛-3-基}醯胺，或其醫藥可接受性鹽或 溶劑化物。· 16· —種醫藥組合物，包括治療有效量之如請求項1至μ中 任一項之化合物及醫藥可接受性載劑。 18 17.如請求们至15中任—項之化合物，其仙於治療。 一種如請求項1至15中任一頂之朴人仏m ’、 任項之化合物用於製造醫藥之 用途。 19. 物與 99256.doc -10- 200533348 2〇·如請求項19之用途， 動之障礙。 〒°亥疾病或症狀為腸胃道減少螺 項之化合物之方法，該 21. 一種製備如請求項丨至^令彳壬 方法包括使式5之化合物：

   或其鹽或立體異構物或其經保護衍生物血膝心胺在 运原劑存在下反應，獲得式⑴之化合物或其醫^接受 性鹽或溶劑化物或立體異構物。 22· —種以如請求項21之方法製備之產物。 23· 一種下式5之化合物：

   5 其中R1為氫、鹵基、羥基、Cl 4烷基或Cw烷氧基，且R2 為Gw院基-或C3·6環烷基；或其鹽或立體異構物或經保護 衍生物。 24· 一種製備如請求項1至15中任一項之化合物之方法，該 方法包括使下式2之化合物： 〇

   OH R2 99256.doc 2 -11 - 200533348 與下式10之化合物： h2n y 在醯胺偶合條件下反應，獲得式⑴之化合物或其醫藥可 接受性鹽或溶劑化物或立體異構物。 25.

   26. 一種製備（18,3尺，511)_3_胺基_8_氮雜雙環[321]辛烷_8_羧 酉文弟三丁酯之方法，該方法包括使3_氧代-8-氮雜雙環 [3.2.1]辛烷_8_羧酸第三丁酯與至少⑽量之甲酸銨在過 渡金屬觸料在下反應，獲得（1S，3R,5R)_3H8_氮雜 雙環[3·2，1]辛烷-8_羧酸第三丁酯。 -種研究包括5-ητ4受體之生物系統或樣品 方法包括： $

   (a)使生物系統或樣品與如請求項1 合物接觸；及 至15中任一項之 化 ⑻測定化合物在該生物系統或樣 上引起之作用。 99256.doc 200533348 七、 指定代表圖： (一) 本案指定代表圖為：（無） (二) 本代表圖之元件符號簡單說明： 八、 本案若有化學式時，請揭示最能顯示發明特徵的化學式：

   (I)

   99256.doc