TW200424190A

TW200424190A - Bicyclic derivatives for the treatment of abnormal cell growth

Info

Publication number: TW200424190A
Application number: TW092135744A
Authority: TW
Inventors: John Charles Kath; Zhengyu Liu; Maria Steflik Brown; Steven Mark Winter; Susan Jane Truesdell; Ruby Anthea Szewc
Original assignee: Pfizer Prod Inc
Priority date: 2002-12-18
Filing date: 2003-12-17
Publication date: 2004-11-16
Also published as: PE20040905A1; CN1729001A; EP1575592A1; RU2005119172A; JP2006513179A; CA2510323A1; ZA200504147B; KR20050085749A; NO20053483D0; BR0317433A; NL1025044A1; NL1025044C2; PL377686A1; MXPA05006335A; AR042480A1; WO2004054585A1; NO20053483L; AU2003303045A1; GT200300286A; PA8592801A1

Description

200424190 玖、發明說明：【發明所屬之技術領域】本發明係關於一種新穎雙環衍生物，其有用於哺乳動物中治療異常細胞生長，如癌症。本發明亦關於一種使用此等化合物於哺乳動物中治療異常細胞生長之方法，特別是人類，以及含有此等化合物之醫藥組成物。【先前技術】經由DNA之一部分之轉形成為致癌基因，細胞可成為癌症性的係已知（即，基因之活化導致惡性腫瘤細胞之形成）。弁多致癌基因編碼能夠引起細胞轉形之異常酪胺酸激酶之蛋白質，或者，正常原型-致癌基因性酪胺酸激酶之過度表現亦可造成增殖性病症，有時造成惡性表現型。文為絡胺酸激酶為跨越細胞膜之酵素並具有生長因子 (如上皮生長因子）之細胞外結合主體、穿越膜主體，及細胞内部分，其功能為作為一種激酶在蛋白質中礎酸化專一性路胺酸殘基，因而促使細胞增殖。受器絡胺酸激酶之例子包括 c-erbB-2 (HER2)、〇met、tie-2、PDGFr、FGFi^ VEGFR，已知此等激酶經常在一般人類癌症中異常地表現，例如乳癌；胃腸癌，如結腸' 直腸或胃癌；白血病；及卵巢、支 •氣管或胰臟癌。ERBB2 (蛋白質絡胺酸激酶erbB2先趨物（亦為所知之c-erbB-2蛋白質先趨物或激酶相關轉形蛋白質 erbB2))為一種編碼上皮生長因子受器（EGFIl)家族之膜結合性受器酿胺S夂激轉之原型致癌基因（pr〇t〇〇nc〇gene)係著名的’其在數種开> 式之癌症中過度表現，如乳房、印巢、

O:\89\89306 DOC 200424190 胃、胰臟及結腸直腸癌。ErbB2於腫瘤細胞增殖、腫瘤侵襲及種瘤移轉中及樂物抗性上具有一種可能的角色。因此，受器酪胺酸激酶抑制劑已被認定為有用於哺乳類癌症細胞生長之選擇性抑制劑。例如，爾伯斯它汀 (erbstatin)，一種酪胺酸激酶抑制劑，選擇性地減弱無胸腺裸鼠中移植表現上皮生長因子酪胺酸激酶（EGFR)2人類乳腺上皮細胞癌之生長，但在不會表現EGF受器之其它癌症之生長上並無效果。因此，本發明之化合物為特定受器酪胺酸激酶之選擇性抑制劑，其在異常細胞生長之治療中為有用的，特別是哺乳動物之癌症。除了受器絡胺酸激酶，本發明化合物亦可展示抗各種其它非受器酪胺酸激酶之抑制活性（例如：lek、src、abl)或絲胺酸/羥丁胺酸激酶（例如： cyclin依賴性激酶）。各種其它化合物，如苯乙烯衍生物，亦已顯示具有酪胺酸激酶抑制性質，近來，已有5個歐洲專利公告案，即 EP 0 566 226 A1 (1993年 1〇月 2〇日公告）、Ep 〇 6〇2 851 Al(i994 年6月22日公告）、EP 〇 635 5〇7 A1 (测年工月25日公幻、 EP 0 6j5 498 A1 (1995年 1 月 25 日公告）及EP 〇 52〇 722 A1 (1992 年12月30日公告）’指出某些雙環街生物，特別是啥唾琳衍生物’具有來自其絡胺酸激酶抑制性質之抗癌症性質。又，世界專利申請案W〇似觸2⑽2年叩則公告）指出某一又單及雙％芳基及雜芳基化合物作為酪胺酸激酶抑制劑係有用於抑制異常細胞增殖。世界專利申請案 WO 96/16960 (1996年 6月 6 日公告）、W〇 96/09294 (1996 年 3

O:\89\89306.DOC 200424190 月6日公告）、w〇97/30034 (1997年8月21日公告）、W〇 98/02434 (1998年 1 月 22 日公告）、WO 98/02437 (1998年 1 月 22 日公告）及W〇98/02438 (1998年1月22日公告），亦指出經取代雙環雜芳族衍生物於相同目的上為有用的酪胺酸激酶抑制劑。其它指出抗癌症化合物之專利申請案為世界專利申請案 WO 00/44728 (2000年 8月 3 日公告）、EP 1029853A1 (2000年8月23日公告）及WO 01/98277 (2001年12月12日公告）’此所有專利案皆以參考文獻完整併入本文中。【發明内容】本發明係關於式1化合物

或其醫藥上可接受鹽、溶劑化物或前藥，其中： R1為選自Η及CVQ烷基組成之群； r2為選自Η、CVC1G烷基、CrC6烷氧基及Cl_C6經基烧基組成之群； R3為選自H、CVC6烷基、羥基烷基及c(〇)〇r4組成之群’其中R4為選自Η及C「C6烷基組成之群； V為選自-C(〇）〇H及-(CWk-NWR8組成之群，其中m

O:\89\89306.DOC -9- 200424190 為〇至3之整數；R6&R7各自獨立選自烷基組成之烷基）組成之群；且其中式1化合物另可選擇經羥基或〇-葡萄糖醛酸取代基取代。本發明亦關於一種經由微生物生物轉化製備式丨化合物之方法，其包含於適合該微生物之營養培養基中將E_2-曱氧基-Ν-(3-μ、[3-甲基-4_(6-甲基_σ比啶基氧基）_苯基胺基]圭唑啉-6-基卜烯丙基）乙醯胺或其鹽與微生物之培養接觸並分離此化合物。本發明亦關於一種製備式1化合物之方法，其包含於活體内製備化合物之步驟。本發明亦關於一種製備式1化合物之方法，其包含合成製備式1化合物之步驟。本發明亦關於一種製備Ε-Ν-(3-{4-[3-羥基甲基-4-(6-甲基-°比啶-3-基氧基）_苯基胺基p喹唑啉基卜烯丙基甲氧基乙醯胺之方法，其包含將微生物白色鏈黴菌 (Streptomyces albulus)於適合該微生物之營養培養基中與 E-2-甲氧基-N-(3-{4-[3 -甲基-4-(6-甲基比啶基氧基）_笨基胺基]-喹唑啉-6-基卜烯丙基）乙醯胺甲烷磺酸鹽接觸並分離Ε-Ν-(3-{4-[3-羥基甲基-4-(6-甲基比啶基氧基 > 苯基胺基]-喧唾琳-6-基卜稀丙基）-2 -甲氧基乙醯胺。本發明亦關於一種製備E-N-(3-{4-[4-(6-羥基甲基-吡咬 -3-基氧基）-3-甲基-苯基胺基]-喹唑啉_6-基卜烯丙基甲氧基乙醯胺之方法，其包含將微生物龜裂鏈黴菌 O:\89\89306.DOC -10 - 200424190 (Streptomyces rimosus)於適合該微生物之營養培養基中與 E-2-曱氧基-N-(3-{4-[3-甲基-4-(6-甲基j比啶基氧基）-苯基胺基]*^圭°坐琳-6 -基卜烯丙基）乙酿胺甲烧確酸鹽接觸並分離Ε-Ν-(3-{4-[4-(6-羥基甲基-σ比啶基氧基卜曱基-苯基胺基l·喹唑啉-6-基}-烯丙基）-2-甲氧基乙醯胺。本發明亦關於一種於哺乳動物中治療異常細胞生長（如癌症）之方法，包含投與該哺乳動物有效治療異常細胞生長之式1化合物之量。本發明亦關於一種於哺乳動物中治療異常細胞生長之方法，其包含投與該哺乳動物有效治療異常細胞生長之式i化合物之量與選自有絲分裂抑制劑、烷化劑、抗代謝劑、生長因子抑制劑、放射線、細胞週期抑制劑、酵素、拓樸異構酶（t〇P〇isomerase)抑制劑、生物反應修試劑、抗體、細胞毋素、抗買爾^劑及抗雄性素劑組成之群中選出之抗癌劑合併投與。本發明進一步關於一種於哺乳動物中治療異常細胞生長之醫藥組成物，包含有效治療異常細胞生長之式1化合物之量，及一種醫藥上容許載劑。本發明另關於一種測定是否病患已投與甲氧基 -N-(3-{4-[3-甲基-4-(6-甲基比啶基氧基 > 苯基胺基]_喹唑啉-6-基卜烯丙基）乙醯胺之方法，此方法包含測定獲自病患之血漿、尿液、膽汁或糞便樣本中是否顯示出前述式i化合物之存在。本發明亦關於一種治療異常細胞生長之套組，其包含a) O:\89\89306.DOC -11 - 200424190 含有式Hb合物之醫藥組合物及醫藥容許載劑、溶劑或稀釋劑；及b)描述使用此醫藥組合物於治療異常細胞生長之說明書。本發明係關於式1化合物

或其醫藥上可接受鹽、溶劑化物或前藥，其中： R1為選自Η及<^-(：6烷基組成之群； V為選自Cl_Cl(^基、Cl_c6；^氧基及Ci_C6M基烧基組成之群； R為選自H、Cl-C0烷基、CVG羥基烷基及c(〇)〇R4組成之群，其中R4為選自^!及（^-(：6烷基組成之群； R)為選自-C(〇）〇h及-(CW)m_NRiR8&成之群，其中m 為〇至攻整數’· R6&r7各自獨立選自H&c「以基組成之群’且其中 R8為選自 Cl_C6減及-C(C)Hcr6(：r7)^q (Ci_C6 …土）、且成之群，且其中式1化合物另可選擇經羥基或〇-葡萄糖醛酸取代基取代。於:具體實施例中，式1化合物為實質上純的，式i化合物之實貝上純的型式可由下列方式獲得，例如化學合成、活體中或生物轉化，如下列之詳細陳述。

O:\89\89306.DOC -12- 200424190 於一特定具體實施例中，式1化合物之R1為Η，R2為羥基甲基，R3為甲基，且R5為-CH2NHC(0)CH2〇CH3。於另一特定具體實施例中，R1為Η，R2為曱基，R3為羥基曱基，且R5 為-CH2NHC(〇）CH2〇CH3。於另一特定具體實施例中，R1為H，R2為甲基，R3為曱基，且R5為-C(〇）〇H。於另一特定具體實施例中，R1為Η，R2為甲基，R3為 -COOH，且 R5 為-CH2NHC(〇）CH2〇CH3。於另一特定具體實施例中，其中式1化合物另含有一個羥基取代基，R1為Η，R2為甲基，R3為甲基，且R5為 -CH2NHC(0)CH2〇CH3。於一具體實施例中，羥基部分為在如下所示分子之括弧部分中之一取代基：

於另一特定具體實施例中，其中式1化合物另含有一個羥基取代基，R1為Η，R2為甲基，R3為羥基甲基，且R5為 -CH2NHC(〇）CH2〇CH3。於一具體實施例中，羥基部分為在如下所示分子之括弧部分中之一取代基：

O:\89\89306.DOC -13- 200424190 於另一特定具體實施例中，R1為Η，R2為羥基甲基，R3 為曱基，且R5為-CH2NHC(〇）CH2〇H。於另一特定具體實施例中，式1化合物另含有一個-〇-葡萄糖醛酸取代基。於一具體實施例中-0-葡萄糖醛酸取代基係於喹唑啉環上；於一具體實施例中，在笨基胺基基團之,，苯基”部分上；於一具體實施例中，在吡啶環上；及於一具體貫施例中，在附著於喹唑琳環之苯基之丙烯酸鏈上。本發明之特佳化合物包括選自下例組成之群： N-(3-{4-[3-經基甲基-4-(6_甲基-吼啶基氧基）_苯基胺基l·喧嗤啉-6-基}-烯丙基）-2-甲氧基乙醯胺； N-(3-{4-[4-(6-羥基甲基^比啶-3-基氧基甲基-苯基胺基]-啥唾啉-6-基卜烯丙基）-2-甲氧基乙醯胺； 3_{4-[3-甲基-4-(6-甲基比啶基氧基）_苯基胺基]_喹唑琳-6-基}-丙烯酸； 5 (4 {6-[3-(2-甲氧基_乙酉&基胺基_丙烯基）_啥。坐琳基胺基]-2-甲基-苯氧基比啶-2-羧酸； 2-羥基-Ν-(3-{4-[3-羥基甲基_4·(6_曱基比啶_3_基氧基）_ 苯基胺基]-喹唑啉-6-基}-烯丙基）乙醯胺；及前述化合物之醫藥上可接受鹽、前藥、水合物及溶劑化物。式^化合物可存有順式(Ζ)或反式⑻兩種幾何異構物形式，於本發明之-較佳具體實施例中，式i化合物為£幾何異構物。本發明之化合物可用於作為試管内或活體内代謝研究之 O:\89\89306.DOC -14- 200424190 分析標準或作為新化合物本體化學合成或生物合成之中間物，代謝物可以固體分離或於溶液中。本發明之化合物亦可用於辨識已投與E-2-甲氧基_N_(3-{心[3-甲基-心（6-甲基_ 。比啶-3-基氧基）_苯基胺基]_喹唑啉_心基卜烯丙基）乙醯胺或其醫藥上可接受鹽或前藥之病患。為辨識已投與E_2-甲氧基-N-(3-{4-[3-甲基-4-(6-曱基比啶基氧基）_苯基胺基]_ 喹唑啉-6-基卜烯丙基）乙醯胺或其醫藥上可接受鹽或前藥之病患，自病患採取血清、尿液、糞便或膽汁樣品，且分析此樣品中一或多種本發明化合物之存在。一種分析本發明化合物之方法，其係使用色層分析及質譜分析，其它分析方法為此項技藝中彼等熟習此藝者熟知者，本發明之一或多種化合物存在於血清、尿液、糞便或膽汁樣品中指出已投與E_2_曱氧基-N_(3-{ZK弘曱基·4_(6_ 曱基比啶基氧基）_苯基胺基]-喹唑啉-6-基卜烯丙基）乙醯胺或其醫藥上可接受鹽或前藥，或前藥之鹽。本發明之治療方法中，可直接投於本發明化合物於病患中，如以錠劑投與，或此化合物可藉由病患體内透過代謝作用產生而投與。此外，經代謝作用產生本發明化合物之化合物投與途彳空及劑量可依所欲而變化，以獲得活體内所欲本發明化合物之濃度及產生率。本發明亦關於一種以微生物生物轉化製備式丨化合物之方法，其包含於適合該微生物之營養培養基中以E-2•曱氧基-N-(3-{4-[3-甲基-4-(6-甲基-处啶-3-基氧基）_苯基胺基]_ 啥°坐琳基卜烯丙基）乙醯胺或其鹽接觸微生物之培養物 O:\89\89306.DOC -15- 200424190 並分離此化合物。於”體男' 方匕例中，此微生物為放線菌（actinomycete)，且於一具體實施例中為黴菌。本發明亦關於一種製備E-N-(3_{4-[3-羥基甲基-4-(6-甲基-吨啶-3-基氧基）_笨基胺基卜喹唑啉_6_基卜烯丙基）_2_曱氧基乙S&胺之方法，其包含：於適合該微生物之營養培養基中以E-2-甲氧基-N-(3-{4-[3-甲基-‘（6_甲基_σ比啶_3_基氧基）-苯基胺基]-喹唑啉-6-基卜烯丙基）乙醯胺之甲烷磺酸鹽接觸Μ生物白色放線菌（Strept〇myces albulus)之培養物並分離E-N_(3-{4-[3-羥基甲基-心（6-甲基-吡啶基氧基）_苯基胺基]-喹唑啉-6-基}-烯丙基>2_甲氧基乙醯胺。於一較佳具體實施例中，適合白色放線菌之營養培養基為IOWA培養基。本發明亦關於一種製備匕1(3-{4-[4气6-羥基曱基^比啶 -3-基氧基）-3-曱基-苯基胺基μ喹唑啉基卜烯丙基>2_甲氧基乙醯胺之方法，其包含於適合該微生物之營養培養基中以Ε-2-甲氧基甲基-4-(6_甲基」比啶_3_基氧基）-苯基胺基]-喹唑啉-6-基卜烯丙基）乙醯胺之甲烷磺酸鹽接觸微生物龜裂鏈黴菌之培養物並分離Ε-Ν-(3-{4_[4^6-· 基甲基^比啶-3-基氧基）-3-曱基-苯基胺基卜喹唑啉-6-基卜浠丙基）-2-甲氧基乙酸胺。於一較佳具體實施例中’適合龜裂鏈黴菌之營養培養基為IOWA培養基。本發明亦關於一種製備式1化合物之方法，其包含於活體 O:\89\89306.DOC -16- 200424190 内製備化合物之步驟（即，此化合物於體内產生）。本發明亦關於—種製備式1化合物之方法，其包含合成製備化合物之步驟。 & 本毛月亦關於一種治療哺乳動物中異常細胞生長之方、括人颁其包含投與該哺乳動物式1化合物之量，如上定義’或其醫藥上可接受鹽、溶劑化物、水合物或前藥，其於治療異常細胞生長上為有效的。於本方法之一具體實施例中’此異常細胞生長為癌症，包括(但未限於)肺癌、骨癌胰癌、皮膚癌、頭及頸癌、皮膚或眼内黑色素瘤、子呂疡_巢癌、直腸癌、肛門區癌、胃癌、結腸癌、乳癌、輸卵&癌、子宮内膜癌、子宮頸癌、陰道癌、陰門癌、霍奇金氏病（H〇dgkin，s Disease)、食道癌、小腸癌、内分泌系統癌、甲狀腺癌、副甲狀腺癌、腎上腺癌、軟組織肉瘤、尿這癌、陰莖癌、前列腺癌、慢性或急性白血病、淋巴細月生淋巴’瘤、膀胱癌、腎臟或輸尿管癌、腎細胞癌、腎盂癌、中樞神經系統（CNS)腫瘤、原始⑽淋巴瘤、脊轴腫瘤、腦幹神經膠質瘤、腦下垂體腺瘤，或一或多種前述癌症之合併。該方法之另一具體實施例中，該異常細胞生長為良性增殖性疾病，包括(但未限於)乾癬、良性前列腺肥大或再狹窄化（restenosis)。本發明亦關於-種於鳴乳動物中治療異常細胞生長之方法，其包含投與該哺乳動物一種式丨化合物之量，或其醫藥上可接受鹽、溶劑化物或前藥，即治療異常細胞生長之有效量並合併-種抗腫瘤劑’其選自由有絲分裂抑制劑、浐

O:\89\89306.DOC -17- 化劑、抗代謝物、插入性抗週期抑制劑、睹丰案±長因子抑制劑、細胞抗體、二：素、拓樸異構酶抑制劑、生物反應調節劑、、〜素、抗贺爾蒙及抗雄性素組成之群。 :月亦關於-種治療哺乳動物中異常細胞生長之醫藥旦物，包f人類，其包含一種如上定義之式！化合物之 ^或其西藥上可接受鹽、溶劑化物或前藥，即治療異常細胞生長之有效量，及醫藥上容許載劑。於該組合物之一具體實施例中，該異常細胞生長為癌症，包括(但未限於）肺癌月癌、胰癌、皮膚癌、頭及頸癌、皮膚或眼内黑色素瘤、子宮癌、卵巢癌、直腸癌、肛門區癌、胃癌、結腸癌、乳癌、輸印管癌、子宮内膜癌、子宮頸癌、陰道癌、陰門癌隹奇金氏病、食道癌' 小腸癌、内分泌系統癌、甲狀腺癌、副甲狀腺癌、腎上腺癌、軟組織肉瘤、尿道癌、陰莖癌、前列腺癌、慢性或急性白血病、淋巴細胞性淋巴瘤、膀胱癌、腎臟或輸尿管癌、腎細胞癌、腎盂癌、中樞神經系統（CNS)腫瘤、原始CNS淋巴瘤、脊軸腫瘤、腦幹神經膠質瘤、腦下垂體腺瘤，或一或多種前述癌症之合併。該醫藥組合物之另一具體實施例中，該異常細胞生長為良性增殖性疾病，包括（但未限於）乾癬、良性前列腺肥大或再狹窄化。本發明亦關於一種於哺乳動物中治療異常細胞生長之醫藥組合物’包括人類’其包含如上定義之式1化合物之量，或其醫藥上可接受鹽、溶劑化物或前藥，即有效治療異常細胞生長之量並與醫藥上容許載劑及抗腫瘤劑合併，抗腫 O:\89\89306.DOC -18- 200424190 瘤劑選自有絲分裂抑制劑、烧化劑、抗代謝物、插入性抗生素、生長因子抑制劑、細胞週期抑制劑、酵素、拓樸異構酶抑制劑、生物反應調㈣、抗賀爾蒙及抗雄性素組成之群。本發明亦關於-種於哺乳動物中治療與血管生成有關之病症，包括人類，其包含投與該哺乳動物如上定義之式工化合物之量，或其醫藥上可接受鹽 '溶劑化物或前藥，即有效治療該病症之量。此病症包括皮膚性腫瘤如黑色素瘤；眼病症如年齡㈣性料化、推祕II㈣病症候群，及由於增殖性糖尿性視網膜病之視網膜新血管生成；類風濕性關節炎；骨損失症如骨質疏鬆症、派吉特氏病（Paget，s disease)、惡性體液性高鈣血症、腫瘤轉移至骨之高鈣血症，及由於糖皮質固醇治療引起之骨質疏鬆症；冠狀動脈狹窄；及某些微生物感染，包括彼等與選自腺病毒、漢他病毒、博氏疏螺旋菌（Borrelia burgd〇rferi)、耶爾森氏菌屬 (Yersinia spp.)、百日咳博德氏桿菌（B〇rdeteiia pertussis)及 A群連群菌有關之微生物病原。本發明亦關於一種於哺乳動物治療異常細胞生長之方法 (及種醫樂組合物），其包含式1化合物之量，或其醫藥上可接文鹽、溶劑化物或前藥，及一或多種選自抗血管生成劑、訊號傳導抑制劑及抗增殖劑之量，其量為於治療該異常細胞生長上共同有效量。抗血管生成劑，如MMP_2(基質-金屬蛋白酶2)抑制劑、 MMP-9(基質-金屬蛋白酶9)抑制劑，及c〇X-n(環氧酶⑴抑

O:\89\89306.DOC ，19- 200424190 制劑，可與式1化合物聯合用於本文所述方法及醫藥組合物中。有用之COX-II抑制劑之例包括CELEBREX™ (阿利考曰 ’ alecoxib)、伐地考昔（vaidecoxib)及羅非考昔（rofecoxib)。有用之基質金屬蛋白酶抑制劑之例描述於W〇96/33 172 (1996 年 10 月 24 日公告）、w〇 96/27583 (1996 年 3 月 7 日公告）、歐洲專利申請案973 04971.1 (1997年7月8日申請）、歐洲專利申請案99308617.2 (1999年10月29曰申請）、w〇 98/07697 (1998年 2 月 26 日公告）、WO 98/03510 (1998年 1 月 29 日公告）、WO 98/34918(1998 年 8 月 13 日公告）、WO 98/34915 (1998年 8 月 13 日公告）、W0 98/33768 (1998年 8 月 ό 曰公告）、WO 98/30566 (1998年7月16日公告）、歐洲專利申請案606,046 (1994年7月13日公告）、歐洲專利申請案

93 1，788 (1999 年 7 月 28 曰公告）、w〇 90/05719 (1990年 5 月 31 曰么告）、WO 99/52910 (1999 年 1〇月 21 日公告）、WO 99/52889 (1999年 10月21 日公告）、w〇 99/29667 〇999年6 月17日公告）、PCT國際申請案PCT/IB98/〇ul3 〇998年7月 21曰申請）、歐洲專利中請案99302232.1 (1999年3月25曰申請）、英國專利申請案9912961.1 (1999年6月3曰申請）、美國暫時申請案60/14Μ64 (1999年8月12日申請）、美國專利案 5,863,949號（丨999年1月26日授與）、美國專利案M6MH) 號（1999年1月19日授與），及歐洲專利公告78〇,386號年6月25曰公告），所有此等於本文中完整併入參考文獻中。較佳MMP韻MMP,制劑為㈣具有極少或不具抑制MMP」之活性*，更力口者為彼等選擇抑制MMP-2及/或 O:\89\89306.DOC -20 - 200424190 蛋白酶（即 MMP-1、MMP-3、一7、MMP-8、MMP-10、 MMP-9相對於其它基質-金屬 MMP-4、MMP-5、MMP-6、 MMP-11、MMP-12及 MMP-13)。 MMP抑制⑼之-些特定例有用☆與本發明化合物合併使用者為 AG_3340、R〇 32-3555、Rs 13-〇83〇,及下列化合物： 3-[[4-(心氟-苯氧基）-苯磺醯基]_(1_羥基胺曱醯基_環戊基）-胺基]-丙酸； 3-外-3-[4-(4-氟-苯氧基）_笨磺醯基胺基]_8_氧_雙環[3·21] 辛烷-3-羧酸羥基醯胺； (2R，3R)卜[4-(2-氯-4-氟-苄氧基>苯磺醯基]_3_羥基甲基-哌啶-2-羧酸羥基醯胺； 4-[4-(4-氟-苯氧基）-苯績醯基胺基]-四氫_派喃-4-叛酸羥基醯胺； 3- [[4-(4-氟-苯氧基）-苯磺醯基]-(1-羥基胺甲醯基-環丁基）-胺基]-丙酸； 4- [4-(4-氯-苯氧基）_苯績醯基胺基]·•四氫-哌喃-4-羧酸羥基醯胺； 3-[4-(4 -氯-苯氧基）-苯續Si基胺基]'•四氫-σ辰喃-3-竣酸經基醯胺； (2R，3R)卜[4_(4-氟_2-甲基-苄氧基l·苯磺醯基]-3-羥基-3-曱基-哌啶-2-羧酸經基酿胺； 3-[[4-(4 -氟-苯氧基）-苯磺酷基]-(1-經基胺甲酿基-1-甲基 -乙基）-胺基l·丙酸； 3-[[4-(4-氟-苯氧基）_笨磺醯基]_(4-羥基胺甲醯基-四氫- O:\89\89306.DOC -21 - 200424190 旅喃-4 -基）-胺基]-丙酸； 3 —外-3-[4-(4-氣-苯氧基 >苯磺醯基胺基卜心氧-雙環[m] 辛烷-3-羧酸羥基醯胺； j-内-3-[4-(4-氟-苯氧基）_苯磺醯基胺基]_8_氧-雙環[3.2 1] 辛烧-3 -魏酸經基胺；及 3-[4-(4-氟-苯氧基）_苯磺醯基胺基]_四氫-呋喃羧酸羥基醯胺；及該化合物之醫藥上可接受鹽、溶劑化物及前藥。式1化合物及其醫藥上可接受鹽、溶劑化物及前藥亦可與訊號傳導抑制劑合併使用，例如可抑制EGFR(上皮生長因子受器）反應之藥劑，如EGFR抗體、EGF抗體，及為EGFr 抑制劑之分子；VEGF (血管内皮生長因子）抑制劑；及erbB2 受器抑制劑’如結合至erbB2受器之有機分子或抗體，例如 HERCEPTIN™ (Genentech, Inc. of South San Francisco, California，USA) 〇 EGFR抑制劑例如描述於w〇 95/19970( 1995年7月27日公告）、WO 98/14451 (1998年4月 9 日公告）、W〇 98/0243 4(1998 年1月22曰公告）及美國專利案5,747,498號（1998年5月5曰頒行）。EGFR-抑制劑包括（但未限於）藥劑如單株抗體c225 及抗 EGFR 22Mab (ImClone Systems Incorporated of New York, New York，USA)、化合物 ZD-1 839 (AstraZeneca)、 BIBX-1382 (Boehringer Ingelheim) - MDX-447 (Medarex Inc. of Annandale，New Jersey，USA)及OLX-103 (Merck & Co. of Whitehouse Station, New Jersey，USA)、VRCTC-310 (Ventech Research)及 EGF 融合毒素（Seragen Inc. of O:\89\89306.DOC -22- 200424190

Hopkinton，Massachusettes) 〇 VEGF抑制劑，例如 SU-5416及 SU-6668 (Sugen Inc. of South San Francisco, California，USA)，亦可與式 1 化合物合併，VEGF抑制劑例如描述於W〇99/24440 (1999年5月20曰公告）、PCT國際申請案PCT/IB99/00797 (1999年5月3曰申請）' WO 95/21613 (1995 年 8 月 17 日公告）、WO 99/61422 (1999 年12月2曰公告）、美國專利案5,834,504號（1998年11月10曰頒行）、WO 98/50356 (1998年11月12日公告）、美國專利案 5,883，113號（1999年3月16日頒行）、美國專利案5,886,020號 (1999年3月23曰頒行）、美國專利案5,792,783號（1998年8月11 曰頒行）、WO 99/10349 (1999年3月 4 曰公告）、WO 97/32856 (1997年9月12日公告）、WO 97/22596 (1997年6月26日公告）、 WO 98/54093 (1998年 12月 3 日公告）、WO 98/0243 8 (1998年 1 月22日公告）、WO 99/16755 (1999年4月8日公告），及WO 98/02437 (1998年1月22日公告），所有此等文獻皆完整併入本文參考文獻中。一些特定VEGF抑制劑之例為IM862 (Cytran Inc. of Kirkland, Washington, USA) ； Genentech, Inc. of South San Francisco，California之抗-VEGF單株抗體；及血管酵素（angiozyme)，一種來自 Ribozyme (Boulder, Colorado)及 Chiron (Emeryville，California)之合成核酵素。

ErbB2受器抑制劑，如 GW-282974 (Glaxo Wellcome pic)，及單株抗體 AR-209 (Aronex Pharmaceuticals Inc. of The Woodlands，Texas，USA)及 2B-1 (Chiron)，可與式 1 化合物合併投與。如erbB2抑制劑包括彼等描述於WO 98/02434 (1998 O:\89\89306DOC -23 - 200424190 年1月22日公告）、w〇 99/35146 (觸年了月i5日公告）、彻 "/j51j2 0999年 7月 15 日公告）、WO 98/02437 (1998年 1 月 22 △ 口）WO 97/υ60 (1997年 4月 17 日公告）、wo 95/1997〇 ( 年7月27日公告）、美國專利案5,587,458號（1996年12 月一4日頒仃），及美國專利案5,877,3〇5號（MM年3月2曰頒订）’其#-者完整併人本文參考文獻―。纟發明中有用之 ErbB2受器抑制劑亦描述於美國臨時中請案⑽1丨'μ工號， 1999年1月27日申請，及美國臨時申請案6〇/ιΐ7,346號，年1月27日申明，兩者皆完整併入本文參考文獻中。可與本發明&合物一起使用《其它抗增殖劑包括酵素法尼基（farnesyl)蛋白質轉移酶之抑制劑及酪胺酸激酶之抑制劑，包括下列美國專利案揭示及主張之化合物： 09/221946 (1998年12月28日提出申請）、09/454058 (1999年 12月2日提出申請）、〇9/5〇1163 (2〇〇〇年2月9日提出申請）、 09/539930 (2000年 3 月 31 日提出中請）、09/202796 (1997年 5 月22日提出申請）、09/384339 (1999年8月26日提出申請），及09/383755 (1999年8月26日提出申請）；及下列美國臨時專利申請案所揭示及主張之化合物：6〇/1682〇7 (丨㊀的年^ 月30日提出申請）、6〇/17〇119(1999年12月10日提出申請）、 60/177718 (2000年 1 月 21 日提出申請）、60/168217 (1999年 11月30日提出申請），及60/200834 (2000年5月1日提出申請）。前述每一專利申請案及臨時專利申請案皆完整併入本文參考文獻中。式1化合物亦可與其它有用於治療異常細胞或癌症生長 O:\89\89306.DOC -24- 200424190 之樂劑-起使用，包括（但未限於）能夠增進抗腫瘤免疫反應之藥劑，如CTLA4(細胞毒性淋巴細胞抗原4)抗體，及能夠阻斷CTLA4之其它藥劑；及抗增瘦劑如其它法尼基蛋白質轉移酶抑制劑，例如之前描述於【先前技術】冑分中引用之法尼基蛋白質轉移酶抑制劑。可使用於本發明之專一性 CTLA4抗體包括彼等描述於美國臨時專利申請案 60/1 13,647 (1998年12月23日提出申請）者，其完整併入:文參考文獻中。本文所使用之”異常細胞生長”，除韭扠除非另有指明，否則係指獨立於正常規律機制外之細胞生具也玍長（例如喪失接觸抑制作用）。此包括異常生長者為：（1)經表頦空 V ^工衣現大變酪胺酸激酶或受器酪胺酸激酶過度表現所增殖之腫瘤細胞（腫瘤）；（2)其它增殖性疾病中發生異常酪胺酸激酶活化作用之良性及惡性細胞；（4)由受器酪胺酸激酶活化作用增殖之腫瘤；（5) 經異常絲胺酸/羥丁胺酸激酶活化作用所增殖之任何腫瘤（6) 其中發生異常絲胺酸/羥丁胺酸激酶活化 »卜π /η*禮殖之其它增殖疾病之良性及惡性細胞。如本文中使用之”治療|，一詞，除非另有說明，否則意指反轉、減輕、抑制病症或病況之進展，或預防病症或二於該詞使用時，或此等病症或病況之一或容 ' 7裡症狀。如本文使用之”治療”一詞，除非另有說明，係指如上直接定義之治療作用。如本文中使用之〃齒”一詞，除非另有說明，否則包括氟、氯、溴或碘，較佳鹵基為氟基及氯基。 O:\89\89306.DOC -25- 200424190 。司，除非另有說明，本文中使用之π烷基否則係指包部分）或分支至少3個碳原括直鏈、環狀之飽和單價烴基（包括單、或多广部份。應了解包括環狀部分之該院基必須含：子0 如本文〒便用之”環 -，除非另有說明，否則音指包括據環狀之飽和單價_^0 # ^ 6 … 貝k基（包括早或多環）部分。如本文中使用之”烯基"一 $，除非另有說明，否則包括如上疋義之烷基中具有至少—個碳-碳雙鍵。否則包括如本文中使用之”炔基，，—詞，除非另有說明如上定義之烧基中具有至少_個碳_碳三鍵。否則包括如本文中使用之”芳基”―詞，除非另有說明H匕何生自移除-個氫之芳香族烴之有機基，如苯基或蔡基^ 如本文中使用之”燒氧基|,_詞，除非另有說明，否則包括-Ο-烷基，其中烷基如上所定義。

Me 3思‘甲基’ Et”意指乙基，及” Ac”意指乙酿基。如本文中使用之西藥上可接党鹽（類）π之詞組，除非另有說明’否則包括酸或驗基之鹽類’其可存於本發明化合物中。本舍明之化合物巾為驗基性質者能夠與各種無機及有機酸形成各式各樣的鹽類。可使用之酸以製備此種鹼性化 σ物之面藥上容許加成鹽者為彼等形成無毒性酸加成鹽之化口物，即含有藥理學上容許陰離子之鹽，如鹽酸鹽、溴酉文I蛾^鹽、硝酸鹽、硫酸鹽、重硫酸鹽、鱗酸鹽、酸式磷酸鹽、異菸鹼酸鹽、乙酸鹽、乳酸鹽、水楊酸鹽、檸棣酸鹽、酸式檸檬酸鹽、酒石酸鹽、泛酸鹽、重酒石酸、 O:\89\89306.DOC -26- 200424190 抗权血‘鹽、琥珀酸鹽、順丁烯二酸鹽、龍膽酸鹽、反丁稀二酸鹽、葡糖酸鹽、葡萄糖醛酸鹽、糖酸鹽、曱酸鹽、苯曱I鹽、麩胺酸鹽、甲烷磺酸鹽、乙烷磺酸鹽、苯磺酸鹽、對-甲笨磺酸鹽及酸羥萘酸鹽[即1，Γ·亞甲基-雙-(2-羥基 -3-奈酸鹽）]之鹽類。包括鹼基部份之本發明之化合物，如胺基可形成含各種胺基酸之醫藥上可接受鹽，與上述酸力口成。如本文中使用之”實質上純的” 一詞組，除非另有說明，否則係指化合物之純度其中該化合物至少為9〇%之純度，且於一具體實施例中至少為95%，於—具體實施例中為99% 之純度。本發明之彼等化合物為酸性性質者能夠與各種藥理學上容許陽離子形成鹼性鹽，此等鹽類之例子包括鹼金屬鹽或鹼土金屬鹽，且具體而言為本發明化合物之鈣、鎂、鈉及鉀鹽。包含於本發明化合物中之某些官能基可經生物電子等排基取代，即具有相似母體空間位或電子需求之基，但展現出不同或改良的生理化學或其它性質。適當例為此項技藝中彼等熟習此藝人士習知者’包括（但未限於）描述於等人之部分，Chem. Rev，1996, 96, 3 147-3 176及其所引用之參考文獻。本發明之化合物可具有非對稱中心且可存有不同鏡像異構物及非對映異構物型式。本發明係關於本發明化合物之所有光學異構物及立體異構物之用途，及其混合物，及於

O:\89\89306.DOC -27- 200424190 所有可施用或含有此等化合物之醫藥組合物或治療方法。式1化合物亦可以互變異構物存在，本發明係關於所有此等互變異構物及其混合物之用途。本^明目標亦包括經同位素標示之化合物，及其醫藥上可接叉鹽、溶劑化物及前藥，其與彼等式1中列舉者相同，但貫際上有—或多個原子經具有原子量或質量數不同於自然界中通爷發現者之原子所置換。可被併入本發明化合物中之同位素例子包括氫、碳、氮、氧、磷、氟及氯之同位素，例如分別為2H、3H、13c、14c、15N、180、17〇、35s、 1 8 jp χ 3 6 p i 。本發明之化合物、其前藥及該前藥之醫藥上可接受鹽’含有前述同位素及域其它原子之同位素者包含於本各明之乾嚀中。本發明之某些同位素標示化合物，例如彼等放射活性同位素為3H及被併入者，有用於藥物及/ 或受質組織分布續给。$ 3 呻忒驗肌，即H，及碳-14，即14c，為同位素特別車乂铨奋易用於製備及偵測者。此外，具有較重同位 = 代如氣’即H ’可提供某些由於較大代謝穩定性造成。療k點，例如增加活體中半生期或降低劑量需求， =此於某些情況下可為較佳。本發明式！化合物之同位素性標不化合物及並治》越 ” 1 ’、般可經執行下列流程及/或實施例和製備例中所揭示之牛一之^驟而製備，經由取代容易接近的同位素標示試劑於非同位素標示試劑。本务明亦涵括含右、△ # 有/口療、、、田囷感染之醫藥組合物及方法，其透過投與式1化合物之前 ^ 昇有自由胺基、酿基或羧某之式1化合物可經韓彳卜Α 乂轉化成則柰。前藥包括其中胺基酸殘基，

O:\89\89306.DOC -28- 200424190 或二或多個多胜肽鏈（例如，二、三或四）胺基酸殘基為透過酸胺或酯鍵結至式I化合物之自由胺基、羥基或羧基之共 4貝結合。胺基酸殘基包括（但未限於）2〇個自然發生的胺基酸’通常以3個字母符號命名，並亦包括4-羥基脯胺酸、羥基離胺酸、第莫辛（demosine)、異第莫辛、3-甲基組胺酸、正纈胺酸、β-丙胺酸、γ_胺基丁酸、瓜胺酸（citrunine)高半胱胺酸、高絲胺酸、烏胺酸及甲硫胺酸颯，亦涵括前藥之額外型式。例如，自由羧基可衍生為醯胺或烷基酯，使用包括（但未限於）半琥珀酸酯、磷酸酯、二曱基胺基乙酸酯，及碌醯氧基甲基氧基羰基可誘導自由羥基基團，如

Advanced Drug Delivery Reviews，1996，19，115 中所摘述者’亦包括羥基及胺基基團之胺基甲酸酯前藥，如羥基之碳酸酯前藥、磺酸酯前藥及硫酸酯。羥基之衍生，如（乙醯氧基）甲基及（乙烯氧基）乙基酯，其中乙醯基可為烷基酯，可選擇經包括（但未限於）醚、胺及羧酸官能性者取代，或醯基基團中為上述胺基酸酯者亦包括於此。此型之前藥描述於J· Med· Chem· 1996, 3 9，10。自由胺亦衍生為醯胺、磺酸胺或磷酿胺’所有此等前藥部分可併入基團包括（但未限於）醚、胺及羧酸官能性。

O:\89\89306.DOC -29· 200424190

5dv g R5 較佳製備本發明化合物之一般合成方法於下列參考文獻中提供··美國專利案5,747,498 (1998年5月5日頒行）、美國專利案申請序號08/953078 (1997年1〇月17日提出申請）、 W〇 98/02434 (1998年 1 月 22 曰公告）、w〇 98/02438 (1998年 1 月22日公告）、WO 96/40142 (1996年12月19日公告）、WO 96/09294 (1996年 3月 6 日公告）、WO 97/03069 (1997年 1 月 30 日公告）、W〇 95/19774 (1995 年 7月 27 日公告）及 W0 97/13771

O:\89\89306 DOC -30- 200424190 0997年4月17日公告）。額外的步驟為於W〇_44728 (?000 年8月3日公告）、ΕΡΠ)29853Α1(2_年8月23日公告）及w〇〇咖7 (2001年12月12曰公告)。前述專利案及專利申請案完整併人本文參考文獻中。某些起始材料可依據此項技蟄中熟習此藝者熟習之方法製備且某些合成改質可依據此項技藝中熟習此藝者㈣之方法進行。製備卜射嗤琳銅之標準步驟提供於Steven議，T. M.，Kazmi⑽_，f.，

Leonard, N. J., J. 〇rg. Chem. 1986, 51, 5, p. 616 〇 le#^bHeck 對偶描述於Heck et. al· 0rganic Reacti〇ns，i982, ”，⑷或 Cabri et· al· in Ace Chem Res 1995, 28, 2。起始材料，其合成並非特定於上述者，可為市售商品或可使用此項技藝中熟習此藝者已知之方法製備。上述所討論之每一反應或流程圖之圖解說明中，除非另有2明否則壓力並非重要的，壓力由約〇·5大氣壓至約5大氣壓為一般可接受的，即，較佳約丨大氣壓為方便地。芩考上列流程圖1，式1化合物可由式D化合物（其中r5如上定義）與式E化合物（其中Ri、反2及及3如上定義）對偶而製備，於無水溶劑中，特別是選，冰二曱基曱醯胺）、 DME(乙二醇二甲基醚）、DCE(二氯乙烷）及第三丁醇之溶劑，及酚，或前述溶劑之混合物，溫度在約5〇_15〇它之範圍中約1小時至約48小時。式E之雜芳氧基苯胺可以此項技藝中4習此藝者已知之方法製備，如對應硝基中間產物之還原。芳族硝基基團之還原可以下列摘述之方法進行： 1954, p. 5149 ；

Brown, R. K.? Nelson, N. A. J. 〇rg. Chem O:\89\89306.DOC -31 - 200424190

Yuste，R.，Saldana，M，Wails，F·，Tet· Lett· 1982，23，2, ρ· 147 ;或於WO 96/09294 ’參考上述者。適當雜芳氧基硝基笨衍生物可由鹵确基苯先趨物經由鹵化物以適當醇之親核置換如描述於 Dinsmore，C.J. et. al.，Bioorg. Med· Chem.

Lett·，7, 10, 1997, 1345 ; L〇Upy，A· et. al.，Synth· Commim·， 20，18，1990, 2855 ;或 Bmnelle，d. J.，Tet. Lett·，25, 32, 1984, 3 3 83而製備。式E化合物（其中Ri為Cl_c6烷基基團）可經具有1^(211(0)之母體苯胺之還原性胺化而製備。式D化合物可由處理式C化合物而製備，其中ζι為一活性基團，如溴基、碘基、-A或-OTf(其為-〇s〇2CF3)，或活性基團之先趨物，如NCh、NH2或OH，與對偶搭檔，如末端炔、末端烯、乙烯鹵、乙烯錫烷、乙烯曱硼烷、烷基曱硼烷，或烷基或烯基鋅反應物。式c化合物可經由以氯化試劑如p〇ci3、 SOCh或C1C(0)C(〇)C1/DMF於鹵化溶劑中處理式B化合物製備，溫度範圍由約60°C至約i5〇t於約2至24小時之間，依次可以芳氧化鈉於溶劑如芳族酚中處理，溫度範圍由25它至90 C。於式C及D中’ ，其中為芳基基團，如笨基0 對R5基團之標準操作，任_幻化合物可轉化成另一幻化合物’ Α等方法為此項技藝中熟習此藝者所熟知，包括 a)aT. W. Greene and P.Q.M. Wuts, "Protective Groups ir Organic Synthesis'·, Second Edhion, J〇hn Wiley and s〇ns

NeWY喊1991中摘述之方法移除保護基；及級或二級胺、硫醇或醇置換離去基（¾化物、甲伽S旨、tosylate

O:\89\89306DOC -32- 200424190 等）以分別形成二級或三級胺、硫醚或§旨。式1化合物為驗性性曾去7 1 1貝考可與各種無機及有機酸形成各式各樣不同之鹽類。雖‘然此等鹽必須為醫藥上容許於投與動物者’其通常為於實際操作上初始分離之式i化合物。來自反應此。物為邊藥上不可接受鹽者然後以鹼性試劑簡單轉換後者至自由驗性化合物並隨後轉換自由驗基至醫藥上容許酸加成鹽，經由以實質上等量之選擇礦物或有機酸於水溶性溶劑或於適當有機溶劑介質（如甲醇或乙醇）中處理驗}•生化口物可輕易製備本發明之驗化合物之酸加成鹽。經由小心揮發此溶劑，可輕易獲德所欲固體產物，亦可由自由驗於有機溶劑之溶液中經由加人適#礦物或有機酸之溶液，沉殿所欲之酸鹽。本貝上為S文性之式丨化合物可以各種藥理學上容許陽離子开/成驗ί·生鹽，此等鹽之例子包括鹼金屬或驗土金屬鹽，特別疋鈉及鉀鹽。此等鹽全經由習用技術製備，作為反應試劑之化學驗以製備本發明之醫藥上可接受鹽者為彼等與式1之酉文f生化合物形成無毒鹼性化合物，此等無毒鹼性鹽包括彼等衍生自藥理學上容許陽離子如鈉、鉀、鈣及鎂等。可由以含有所欲藥理學上容許陽離子之水溶性溶液處理對應之酸性化合物輕易製備此等鹽，然後揮發生成之溶液至乾燥，較佳於減虔了。或I，其亦可經由混合酸性化合物之低級烷醇溶液與所欲鹼金屬烷氧化物一起製備，然後以别述相同方式揮發生成之溶液至乾燥。於任一情形中，實施反應試劑之化學計量為較佳，以確保反應之完成及所欲

O:\89\89306.DOC -33- 200424190 終產物之最大量，由於、丰毛月之早一化合物可包括多於一種酸或鹼性部分，本發口口 a i化口物於早一化合物中可包括早、二或三鹽。本电明之化合物為致癌及前致癌性蛋白質赂胺酸激酶之咖家族之強效抑制劑，特別^她，因此為所有適用於哺乳動物中作為抗增㈣之治㈣途⑽如抗錢），特別是人類。具體而纟’本發明之化合物有用於預防及治療各種 ^類過度增殖性病症如賴、腎臟、膀胱、乳房、胃、印巢、結腸直腸、前列腺、胰臟、肺、陰門、甲狀腺、肝臟上皮細胞癌、肉瘤、神經膠質瘤、頭及頸之性惡性及良性腫瘤’及其它過度增殖病況如皮膚之良性過度增生⑽如乾癬）及前列腺之良性過度增生（例如Βρη)，此外，預期本發明之化合物可具有抗白血病及淋巴樣惡性之活性。本發明化合物亦可有用於治療其它病症，異常表現配位體/受器交互作用或活化或與各種蛋白質酪胺酸基酶相關之訊號傳遞。此等病症可包括彼等神經元、神經膠質細胞、星狀細胞、下視丘，及其它腺體的、巨唑細胞、上皮的、基質的及囊胚腔性質者，其中涉及erbB酪胺酸基酶之異常功能、表現、活化或訊號傳遞。此外，本發明化合物可具有炎症性、血管生成性及免疫病症之治療效用，及已鑑別及尚未鑑別之與路胺酸激酶有關者，其可經本發明化人物抑制。本發明化合物亦可作為E-2-曱氧基_ν_(3·{4-[3-甲基 -4-(6 -曱基-π比唆-3-基氧基）-苯基胺基]-啥σ坐琳基卜稀丙 O:\89\89306.DOC -34- 200424190 基）乙醯胺代謝之有用生物標記，且可進一步用於測定其於哺乳動物（如人類）中之吸收及代謝降解率。式1化合物於活體外之活性可由下列步驟測定。 c-erbB2激酶試驗相似於Schrang et. al.八⑽丨.⑴⑻以瓜211， 199)，p2〕3-239 先前所述者，以 100 mL 每孔〇 25 mg/mL p〇ly (Glu，Tyr) 4 · 1 (PGT)(Sigma Chemical Co.，St· Louis，M〇) 於PBS (碟酸鹽緩衝食鹽水）於37 t隔夜培育塗覆Nunc MaxiSorp 96孔平盤，以吸取方式移除過多pGT，並以清洗缓

衝液（0.1% Tween 20於PBS)洗滌平盤3次，激酶反應於50 mL 之50 mM HEPES (pH 7.5)中進行，其含125 mM氯化鈉、10 mM 氯化鎮、0· 1 mM原飢酸納、1 mM ATP、0.48 mg/mL (24 ng/ 孔）c-erbB2細胞間主體。erbB2酪胺酸激酶（胺基酸674-1255) 之細胞間主體以GST功能蛋白質於桿狀病毒（Baculovirus) 中表現並經結合及自經麩胱甘肽塗覆之小珠洗析而純化，將於DMSO(二曱亞颯）中之化合物加入得到最終DMSO濃度約2.5%。經由添加ATP(三碟酸腺苷）起始碟酸化並於室溫持續震盪進行6分鐘。經由吸取反應混合物終止激酶反應並隨後以清洗緩衝液（參閱上述）洗滌。以每孔50 mL之HRP-共軛 PY54 (Oncogene Science Inc. Uniondale，NY)抗填酸絡胺酸抗體，於阻斷緩衝液（3% BS A及0·05°/。Tween 20於PBS)稀釋至0.2 mg/mL培育25分鐘測量磷酸化PGT。經吸取移除抗體，並以清洗缓衝液洗滌平盤4次，經由TMB微孔過氧化酶受質（Kirkegaard and Perry，Gaithersburg，MD)之添加而發展定量顏色訊號，每孔50 mL ’並經由0·09 M硫酸之添加而 O:\89\89306.DOC -35 - 200424190 終止反應，每孔5 0 mL。於4 5 0 nm測量吸收以估算鱗酸化。對照組之訊號一般為0.6-1.2吸收單位，每孔必須無PGT受質之背景且培育時間為1 0分鐘之比例。由相對於無抑制劑之孔中訊號之降低而鑑別出抑制劑並測定對應50%抑制所需化合物之濃度之1C5〇值。本文之示例化合物，相當於式1，具有< 10 μΜ抗erbB2激酶之IC5〇值。式1化合物於活體内之活性，可經由試驗化合物相對於對照組之腫瘤生長抑制量測定，依據Corbett T.H·等人之方法，丨’Tumor Induction Relationships in Development of Transplantable Cancers of the Colon in Mice for Chemotherapy Assays，with a Note on Carcinogen Structure’’，Cancer Res” 35, 2434-2439 (1975)及Corbett T.H·，et al·，’’A Mouse Colon-tumor

Model for Experimental Therapy11, Cancer Chemother. Rep. (Part 2)"，5, 169-186 (1975)，以些微改質，測量各種化合物之腫瘤生長抑制效果。左側腹皮下（sc)注射懸浮於0.1 ml RPMI 1640培養基中之1-5百萬對數相培養腫瘤細胞（鼠FRE-ErbB2 細胞或人類SK-OV3卵巢上皮細胞癌細胞）以誘導腫瘤，經過充足時間使腫瘤成為可觸摸後（體積100-150 mm3/5-6 mm直徑），以試驗化合物處理試驗動物（無胸腺雌鼠）（調配成10至 15 mg/ml於5 Gelucire之濃度）經腹腔注射（ip)或口服（po)途徑投與，每日一或二次，連續7至1 0日。為測定抗腫瘤效果，以Vernier測徑器橫架2直徑之毫米單位測定腫瘤，並使用下式計算腫瘤體積（mm3):腫瘤體積（mm3)=(長度 X [寬度]2)/2，依據 Geran，R.I·，et al. ’’Protocols for Screening Chemical O:\89\89306.DOC -36- 200424190

Agents and Natural Products Against Animal Tumors and Other

Biological Systems”，Third Edition，Cancer Chemother· Rep·，3, 1-104 (1972)所述方法。結果以抑制百分比呈現，如下式：抑制（％) = (TuW對照組—TuW試驗組）/TuW對照組X 100%，側腹位之腫瘤植入提供各種化療劑之可再現的劑量/反應效果，且測量方法（腫瘤直徑）為評估腫瘤生長率之可靠方法。本發明化合物（下文指稱為π活性化合物”）之投與可以任何可輸送化合物至活性位之方法完成，此等方法包括口服途徑、十二指腸内途徑、腸胃道外注射（包括靜脈内、皮下、肌肉内或點滴注射）、局部及直腸投與。活性化合物之投與量會依據欲治療之標的、病症或病況之嚴重性、投與速率、化合物之性質及指示醫師之判斷而變化，然而，有效劑量為每日每公斤體重約0·001至約1〇〇mg 之範圍，較佳為約1至約3 5 mg/kg/日，於單次或分劑投與。 7〇1^§之人類時，此量可為約〇.〇5至約7§/日，較佳約〇.2至約 2.5 g/曰，於某些情形，劑量範圍低於前述範圍之下限可能較為適宜，而於其它情形，可使用不會引起任何有害副作用之較大劑量，惟，將此等較大劑量首先先分成數次小劑量於該日投與。本發明亦有例地提供套組於消費者治療疾病之使用，此套組包含a)—種醫藥組合物，其包含本發明化合物及醫藥谷a午載劑、媒劑或稀釋劑；及b)描述於使用醫藥組合物以治療特定疾病之方法之說明書。便利應用使用之”套組”包括含有分別單位劑型之容器， O:\89\89306DOC -37- 200424190 如分開的瓶子或分開的羯包，此容器可為本項技藝中已知的任何習㈣狀或形式，其由醫藥上容許材料製成，例如紙或厚紙板、玻璃或塑职飞土縢瓶或亞、可重複密封袋（例如，放置於不同溶劑中維持”再壌混” β 具滿之叙劑），或根據治療療程擠壓出包裝之含個別劑量之吸期代〈及塑袋（blister pack)。使用之容哭可依據涉及之確實劑型而變化，例如一般不會使用習用；紙板盒以盛裝液體懸浮液。可能的話，於單—包裝中一起使用多於-種容器於市販單一劑型，例如，錠劑可含於瓶中’其依序置於盒中。此等套組之例稱為吸塑袋，吸塑袋為包裝卫業中熟知者且廣泛用於醫藥單位劑型（旋劑、膠囊劑等）之包裝，吸塑袋 -般由相對上硬的材料薄片，覆蓋較佳為透明的可塑形材料之落片組成。於包裝過程期間，可塑射I片中形成凹處，凹處具有所包裝之個別錠劑或膠囊之體積及形狀或可具有適應所包裝之多鍵劑及/或膠囊之體積及形狀。其次，因此鍵劑或缪囊置於凹處且㈣目反方向之笛面上密封此相對上硬的材料層以抗可塑性落1中形成凹處。如結果，依所欲者個別密封或共同密封錠劑或谬囊劑，於可_及薄層間之凹處。較佳地，薄層之強度為以手施用壓力於凹處可自吸塑袋移除鍵劑或膠囊劑之強度，藉由在薄層凹處形成開口，然後錠劑或膠囊劑可經由該開口移除。理想：為提供一書面記憶輔助’其令書面記憶輔助為對 4師、藥#1師或病患之—種含有資訊及/或說明之形式，例如鄰接鍵劑或膝囊劑之數量型式藉由數量對應療程曰數特

O:\89\89306.DOC -38- 200424190 定應吞食之錠劑或膠囊劑或含有相同資訊之卡片。此等記賴：之例為印在卡片上之曰層，例如仿照”第一週，星期々、、生期二、·.·’’···等，，，第二週，星期一、星期二、.·.，，等。其它各種記憶辅助將容易明瞭的，於投與日取用之，，每日劑置可為單-錠劑或膠囊劑或數鍵劑或膠囊劑。套、、且之另一特疋具體貫施例為設計的分配器以分配每日刈里，分配較佳裝配有記憶辅助，以進一步促進療程之完成。此等記憶輔助之例為一機械計數裝置，其指出已分配之每日劑量數。此記憶輔助之另一例為電池電力微晶：記憶連結一液體結晶解讀，或可聽到的提醒訊號，例如讀出以取用之最後每曰劑量之曰期及/或當下一劑要取用時提醒病患。、於套組之再另一具體實施例中，此醫藥組合物亦可含有可與本發明化合物合併使用之另外化合物，或此套組可含有2種醫藥組合物：一者含有本發明化合物且另一者含有可與本發明化合物合併使用之另外化合物。可使用活性化合物作為單獨治療或可涉及一或多種其它抗瘤物質，例如彼等選自如有絲分裂抑制劑，例如長春新鹼（vinblastine); 烷化劑，例如西鉑（cispiatin)、卡翻 (carboplatin)及環磷醯胺；抗代謝劑，例如氟嘴咬二洞 (5-fluoroiiracil)、胞嘧啶阿拉伯糖苷及羥基脲，或，例如較佳抗代謝劑之一揭示於歐洲專利申請案239362 f#如 N-(5-[N-(3,4-二氫-2 -甲基基喧嗤琳-6-基曱基）n甲某胺基]-2 -σ塞吩甲酿基）-L -麵胺酸，生長因子抑制劑；細胞週 O:\89\89306.DOC -39- 200424190 期抑制劑；插入性抗生素，例如阿黴素（adriamycin)及博萊黴素（ble〇mycin);酵素，例如干擾素；及抗賀爾蒙，例如抗雌激素如NolvadexTM塔莫西芬（tam〇xifen)，或，例如抗睪固_如Casodex™ 氰基_3_(4_氟苯基磺醯基羥基甲基-3’-(三氟曱基）丙丙醯胺苯）。此種共同治連續或分開給藥之方式給予個別治療成分而達成。门時 q w樂組合物，例如可為適合口服投藥之型式如旋劑、膝囊劑、丸劑、粉劑、持續釋放調配物、溶液、懸浮液，非:月左射如無菌溶液、懸浮液或乳劑，局部投藥如油膏 =霜劑，或i腸投藥如检劑。f藥組合物可以適於精確記量之單-投藥之單一劑型。醫藥組合物將包括習用截且如本發明之化合物作為活性成分。此外， /、可I括其匕藥物或醫藥劑、載劑、佐劑等。本發明化合物與其它化合物或化合物㈤之組合投藥音二此等化合物可-起以組合物投與或為相同單位劑型^ 部份投與，於相同時間或不同時間投與。之IS:胃道投藥型式包括活性成分於無菌水溶液中兩要夜’例如丙二醇水溶液或葡萄糖水溶液，視而要，此專劑型可適於經緩衝的。適當醫藥载劑包括惰性稀釋劑或溶劑。禎雲！， A及各種有機黏二:醫藥組合物可為含有其它成分如調味料、 Λ 、形劑等。因此’於口服投藥時，含有各稽劑之錠劑，如7 3有各種賦形溫一知可使用#檬酸與各種崩散劑一起，如. 褐澡酸及某些複切酸如歲卷、 3、、σ σ M如庶糖、明膠及阿

O:\89\89306.DOC -40- 200424190 拉伯膠。此外，潤滑劑如硬脂酸鎂、月桂基硫酸鈉及滑石通常使用於製作錠劑用途。相似型式之固體組合物亦可使用於軟及硬填充明膠膠囊。因此較佳材料包括乳糖或牛奶糖及高分子量聚乙二醇。於口服投藥時水溶液懸浮劑或酏劑為所欲的，其中之活性成分可與各種甜味劑或調味劑、增色劑或染劑合併，及視需要之乳化劑或懸浮劑，與稀釋劑如水、乙醇、丙二醇、甘油，或其合劑合併。對於此項技藝中彼等熟習此藝者而言，具特定量之活性化合物之各種醫藥組合物之製法為已知，或顯而易見，例如參閱雷明頓氏製藥科學（Remington’s Pharmaceutical Sciences， Mack Publishing Company，Easter，Pa.，15th Edition (1975)) 〇下列提供之實施例及製備例進一步說明及示例本發明之化合物及此等化合物之製法。應瞭解無意以任何方式由下列實施例及製備例限制本發明之範疇。下列實施例具有單一對掌中心之分子，除非有特別提及，否則存有外消旋混合物，彼等具有2或多個對掌中心之分子，除非有特別提及，否則存有非對映異構物之外消旋混合物，此項技藝中熟習此藝者可以已知方法獲得單一之鏡像異構物。於下列製備例及實施例中所指之HPLC色層分析處，其使用 Waters Alliance HPLC system (2690 + 996光電二極管陣列）。使用 Waters 717 autosampler，996 PDA，600 controller 執行預備HPLC，關於色圖步驟之其它細節由下列實施例提供。本發明之化合物可依據上列流程圖所示合成製備，或 O:\89\89306.DOC -41 - 200424190 者，其可使用如下所述之此項技藝中熟習此藝者已知的生物轉化技術製備。【實施方式】實施例1 生物轉化之一般方法此項技藝中彼等熟習此藝者可藉由將要轉形之物質，與各種活微生物或衍生自微生物的酵素，與其它必要的反應物，於適合化學交互作用發生之條件下進行接觸。隨後，分離反應產物並純化彼等感興趣之對象以說明其化學結構及物理及生物學性質。此酵素可以下列方式呈現··純化的試劑、初製提取物或細胞分解物、完整細胞、溶液、懸浮液、共價附著於支撐表面，或包埋於可滲透基質（例如，洋菜膠或褐藻酸鹽小珠）。此物質及其它必要反應物（例如水、空氣、共同因子）依化學性質提供。一般而言，反應於一或多種液體相中進行，水及溶液/或有機溶液，以促進反應物及產物之質量轉移，此反應可或可不於無菌下進行。監測反應過程之情況及反應產物之分離將依據反應系統及反應物及產物之化學性質而變化，且此項技藝中熟習此藝者可明瞭此等變化。下列為執行好氧性生物轉化之實驗室規模法之2個實 J '、可由此項技藝中熟習此藝者運用而產生有興趣之 =物。將營養培養基（例如，胸A培養基：葡萄糖、酵囷提取物4酸氫二鉀、氯化鈉、大豆粉、水；調整至 & pH)加至或多個培養瓶（例如，發酵管或燒觀中），然

O:\89\89306.DOC -42- 200424190 經蒸汽滅菌。每-瓶無菌接種來自凌脂培養生長之經洗淨細胞或芽孢之懸浮液，或來自生物轉化微生物之液體營養 σ養基之肉ΓΜσ養基。A瓶子架在用來發酵及搖晃之震盈器上（例如於100-300卬^^走轉操作），於適當溫度下（例如 2〇-4(TC)，於足以促進微生物生長至適當族群大小之時間 ⑼如W天）α將轉形之母體化合物（即，受質）溶解於水中或適當易混合水的溶劑中(例如二甲亞颯、二甲基甲醯胺、乙醇ψ醇）力4生物轉化瓶中，無菌加入生成的溶液以達到所欲受質濃度（例如OIW mg/mL)。將投與瓶架在前述震蘆器並震蘯，直到受質經微生物代謝轉化成產物（例如日）。生物轉化瓶之内容可以機械處理（例如經過遽或離心)以自水溶液相分離未溶解固體及細胞或於提取所欲化合物之理想pH值下提取（與水可互溶的有機溶劑包括（但未限於)二t«曱烷或乙酸乙酯若分離，此固體彳以適當的與水可互溶的有機溶劑提取（例如甲醇）’自瓶中回收固體及水溶液相内容物之溶劑提取’合併，並使用適合的方法濃縮，例如固相提取並於減麼下乾燥。將此初產物再溶解於能夠與純化方法相容之溶劑中（例如，乙腈、甲醇、水，或肌C移動相）。±物轉化產物之分離及純化可經由（但未限於）下列方式完成：固相提取（SPE)隨後經反相高效率液體色層分析法（HPLC)。於色層分析分離時可監測生物轉化產物，例如，經由uv_吸收及光電二極管陣列光譜輪廓。保留含有有興趣之產物之 HPLC移動相遽份並使㈣當方法自移動相提取產物，例如

O:\89\89306.DOC -43 - 200424190 spE後乾燥或於提取所欲化合物之理想pH值下以與水互溶的有機溶劑提取後之真空乾燥。回收自SPE提取之溶劑洗析液，過濾，移除固體，並於減壓下濃縮產生乾燥的純化生物轉化產物。此分離產物之化學結構以質譜（MS)及核磁共振（NMR)測定。實施例2 以微生物生物轉化製備E-N-(3-{4-[3-羥基曱基-4-(6-甲基-°比°定-3-基氧基）-苯基胺基]-啥α坐琳-6-基卜烯丙基）-2 -甲氧基乙酿胺將5〇毫升（5 0 mL)之IOWA培養基（無水葡萄糖，20 g ;酵母菌提取物，5g;磷酸氫二鉀，5g;氯化鈉，5g;大豆粉， 5 g ;蒸餾水，1 L ;以1 N氫氣酸調整至ρΗ 7·2)加至29個每一個250mL之艾倫麥爾（Erlenmeyer)燒瓶，以泡沫塞封閉並經於15psig及121C蒸氣滅fe20分鐘。3個燒瓶無菌接種〇.5 mL·低溫儲存（-80°C )之白色鏈黴菌群（ATCC 12757)菌絲體，將經接種燒瓶垂直架在旋轉震盪器上（2吋震盪距離）並以21〇 rp m展i ’於2 9 C 2天（接種階段）’然後，將5 接種階段培養物無菌轉移至剩下的26個燒瓶中之每一個（生物轉化階段），將經接種生物轉化燒瓶垂直架在旋轉震盪器σ寸震遺距離）並以210rpm震盪，於29°C 2天。將2-甲氧基-Ν-(3-{4-〇甲基- 4-(6 -甲基比淀-3-基氧基）_苯基胺基]-噎唾琳-心基卜烯丙基）乙醯胺之甲烷磺酸鹽（即，受質）溶解於二甲亞石風 (10mg/mL)，於26個生物轉化瓶之每一者中。無菌操作加入 0·5 mL之生成溶液得到〇·ΐ mg/mL (26個燒瓶中共為13〇 mg) O:\89\89306.DOC -44- 200424190 之初始受質濃度。再次將投與燒瓶垂直架在旋轉震盪器並於210 rpm及29°C另震盪3天。於3天生物轉化期結束後，合併所有生物轉化燒瓶之内容物。以1N氫氧化納將全部肉汁培養基之pH值調整至8.5，生成之肉汁培養基以等量乙酸乙酯提取，有機相使用旋轉揮發器濃縮（40°C水浴），然後於減塵下使其乾燥（Savant Speedvac，低熱，全真空設定）。將二甲亞颯（0.4 mL)加入殘餘物中然後裝載至事先調整的Waters C18 SepPak(5 g)以進行固相提取（依製造商說明書預先調整裝載盒），裝載後，管柱以24mL蒸餾水洗滌隨後以24 mL之 25%甲醇於水，然後以24 mL之50%甲醇於水移除不要的物質，有興趣的化合物以24 mL之75%甲醇於水洗析，75°/〇甲醇於水之濾份於減壓下乾燥（Savant Speedvac，低溫設定，全真空設定）隔夜。每管加入曱醇，將殘餘物合併（約0.6 mL) 於反相高效率液體色層分析（HPLC方法1)以分離有興趣之化合物。 HPLC方法1_ 管柱： Waters SymmetryPrep (3185μ19χ3 00 mm· 移動相： 0-20 min直線梯度 90 : 10至50 : 50超過20分鐘；於20.5分鐘前進至10 : 90 ; 維持於10:90中7分鐘(水溶液緩衝液[5 mM乙酸胺，pH 4.5] :乙腈）流動速度：12 mL/min. 偵測：於254 nm之UV吸收；光電二極管陣列於200-400 nm 流動時間：27 min. 標題化合物具有約17.2分鐘之保留時間，收集含標題化合物之HPLC濾份，洗析液之pH以IN NaOH調整至8.6，然後以等量二氣甲烷提取2次，取整數量之有機相於氮氣流下 O:\89\89306.DOC -45 - 200424190 乾燥（4〇°C水浴）並懸浮於甲醇中以進行反相高效率液體色層分析（HPLC方法2)之分析。於此分析試驗中，有興趣化合物之保留時間約14.7分鐘，於相同試驗中母化合物之洗析約19.3分鐘。 HPLC方法2_ 管柱： Waters Symmetry C18 5 μ ' 2.1 χ 150 mm. 移動相： 0-20 min直線梯度 90 ·· 10至50 : 50超過20分鐘；於20.5分鐘前進至10 : 90 ; 維持於10 : 90中7分鐘(水溶液緩衝液[5 mM乙酸胺， ρΗ4·5]:乙腈）流動速度·· 0.3 mL/min. 偵測：於254 nm之UV吸收；光電二極管陣列於200-400 nm 流動時間：30 min. 有機相使用旋轉揮發器濃縮（40°C水浴），然後於減壓下使其乾燥（Savant Speedvac，低溫設定，全真空設定）。分離呈黃色粉末之有興趣化合物（15.6 mg)。其於242.6 nm、312.5 nm及3 47 nm具有UV光吸收最大值 (λ·χ)，質譜：m/z= 486·5。 lH (CD3OD) ： δ 8.78 (s5 1HX 8.65 (d5 J=1.6 Hz5 1H)5 8.45 (d? J=2.8 Hz? 1H)，8.23 (dd，JN8.7, 1.6 Hz，1H)，8.02 (d，J=2.8 Hz，1H)，7.98 (dd，J=8.7, 2.8 Hz，1H)，7·85 (d，J=8.7 Hz，lH)，7.81 (dd，J=8.7, 2.8 Hz，1H)，7.78 (d，J=8.7, 1H)，7.21 (d，J=8.7 Hz，1H) 6.78 (d，J=15.9 Hz，1H)，6.64 (dt，J=15.9, 5.6 Hz， 1H)，4.74 (s，2H)，4.14 (dd，J二5.6, 1.2Hz，2H)，3.98 (s，2H)· 3·48 (s，3H)，2.73 (s，3H)。13C (CD3OD) 5 171.6, 161.2, 160.9, 160.5, 154.8, 151.1，150.4, 150.0, 139.0, 137.9, 134.8, 134.6, 134.3, 132.9, 132.7, 130.8, 128.9, 128.2, 125·9, 125.7, 121.2, 120.0, 119.9, 114.3, 71.7, 58.8, 58.7, 40.6, 18.9。實施例3 O:\89\89306.DOC -46- 200424190 E-N-(3-{4-[4-(6-羥基曱基-σ比啶-3-基氧基）-3-甲基-苯基胺基]-喹唑啉_6-基}-烯丙基）-2-甲氧基乙醯胺之製備：使用實施例2所述步驟含下列註明之不同處製備所欲化合物E-N-(3-{4-[4-(6-羥基甲基比唆-3-基氧基）-3 -甲基-苯基胺基]-喹唑琳-6-基}-烯丙基）-2-甲氧基乙醯胺·· 所使用之微生物為龜裂鏈黴菌（ATCC 23955)菌絲體（而非白色鏈徽菌（ATCC 127 5 7)菌絲體），投與之燒瓶另震盪5 曰（而非3日），標題化合物具有約18.5分鐘之保留時間，使用實施例2之HPLC方法1，收集HPLC濾份後（自HPLC方法 1)，然後以等量二氣曱烷提取洗析液（不需執行pH值之調整）。依據第二高效率液體色層分析（HPLC方法2)，有興趣之化合物具有約15.3分鐘之保留時間，相同試驗中，洗析之母化合物於約19·3分鐘，收集呈黃色粉末之有興趣化合物（10.4 mg) 〇化合物於242.6 nm、312·5 nm及3 47 nm具有UV-光吸收最大值（λ·χ)，質譜分析：m/z = 48 6.5。 !H (CD3OD) ： 5 8.53 (s5 1H)5 8.40 (d51=12 Hz5 1H)? 8.22 (d5 J=2.8 Hz? 1H)，8·03 (dd，J=8.7, 2.0 Hz，1H)，7.72 (d，J=2.8 Hz，1H)，7.76 (d，J=8.7 Hz， 1H)，7.64 (dd，J=8.7, 2.8 Hz，lH)，7.54 (d，J=8.7 Hz，1H)，7.41 (dd，J=8.7, 2.8 Hz, 1H)，7.04 (d，J=8.7 Hz，1H)，6.76 (d，JN15.9 Hz，1H)，6.53 (dt，J=15.9, 5.6 Hz，1H)，4.70 (s，2H)，4.12 (m，2H)，3.99 (s，2H), 3.48 (s，3H)，2.29 (s，3H)。 i3C (CD3OD) 5171·6, 159.3, 155.1，154.3, 153.7, 151.2, 147.1，138·0, 136.7, 135.3, 131·9, 130.7, 130·1，128.5, 127.0, 126·0, 125.4, 123.1，122·2, 120.4, 120.3, 115.5, 71.7, 64.2, 58·6, 40.6, 15.4。 O:\89\89306.DOC -47- 200424190 實施例4 E-3-{4-[3-甲基-4-(6-甲基-°比唆-3-基氧基）-苯基胺基]-啥唑啉-6-基}-丙烯酸之製備於冷卻（〇°C)之NaH(4.8 g，60%，0.12 mol)於無水DMF(60 ml) 之攪拌懸浮液中逐滴加入PhOH(11.3 g，0.12 mol)於乾DMF (50 mL)之溶液，添加後，分部加入ζμ氯-6_碘喹唑啉（29 g，0.1 mol)，之後，移除冰浴並將生成溶液於室溫攪拌15 ^，以水終止反應（300 mL)，以Et〇Ac(400 mL)提取沉殿產物，分隔的有機層以aq· NaOH、水、鹽水提取，於Na2S04上乾燥並濃縮，得到呈灰色固體之6-碘-4-苯氧基喹唑啉（32.9 g , 94%) ’自EtOAc結晶得到白色柔軟及短針形晶體。如於前段所述方式製備之6-碘-4-苯氧基喹唑啉（3.5g ’ 1〇 mmol)、丙烯酸甲酯（6 g，70 mmol)、Pd(〇Ac)2(140 mg，0.62 mmol)及 Ph3P(320 mg，1.22 mmol)於 Et3N/DMF 之混合物以 N2清洗並將壓力反應瓶蓋緊，然後此反應於丨丨〇油浴攪拌加熱’薄層色層分析指出此反應於3小時後完成，然後將產物混合物轉移至圓底燒瓶並以Ns流洗淨以移除丙稀酸甲酯，然後將殘餘物溶於乙酸乙酯中，以水、鹽水洗蘇，於硫酸納上乾燥並濃縮，得到呈黃色固體之粗產物Ε_3-(4-苯氧基-喹唑啉-6-基丙烯酸甲酯，於2次產量中自乙酸乙酯再結晶生產出2_3 g(70%)之淡黃色結晶固體。自釗ί又獲彳于之產物（E-3-(4 -苯氧基·喧σ坐琳基）_丙烤酸甲酯）（3 07 mg，1 mm〇l)及所欲苯胺（215 mg，1 mm〇1)一起於紛（2 g)中’並將生成混合物於丄⑻它油浴加熱而獲得清澈 O:\89\89306.DOC -48- 200424190 溶液’加入20小時後，於減壓下蒸餾棕色溶液以移除酚，殘餘物被分層於稀釋的NaOH及二氯甲烷間，以鹽水洗滌分開的有機層，於硫酸鈉上乾燥並濃縮，得到粗產物，其經色層分析純化得到純的E-3-{4-[3 -甲基-4-(6-甲基j比啶-3-基氧基）-苯基胺基]-喹唑啉基卜丙烯酸甲酯（48〇 mg)。反流甲酯（450 mg，1 mmol)與 LiOH· Η2〇（0·63 g，15 mmol) 於甲醇/水（10/1 ml)之混合物3 h，冷卻反應後，以乙酸（0.9 g， 15 mmol)於2 mL之HA中和至ΡΗ 6.0，最先獲得清澈溶液且之後沈澱呈黃色固體之酸產物，其經真空過濾收集並乾燥得到呈黃色固體之終產物E-3-{4-[3-甲基-4-(6-甲基-吼啶 -3-基氧基）-苯基胺基]-喹唑啉基卜丙烯酸（280 mg，68%)。 (CD3OD) ： δ 2.24 (s, 3H), 2.48 (s, 3H)5 6.70 (d, J=16 Hz, 1H), 6.98 (d?

1H)，7.28 (m，2H)，7.6 (m，1H)，7.69 (m，1H)，7·76 (m，1H)，7·78 (d，J=16 Hz， 1H)，8.1 (m，2H)，8.5 (s，1H)，8.6 (d，1H)。m/z (ES+)(M+1) 413.4。HPLC

Rt=4.831分鐘。本發明之化合物亦可以E-2-甲氧基-N-(3-{4-[3-曱基 -4-(6-甲基-°比°定-3-基氧基）_苯基胺基]奎唾琳_6-基}-烯丙基）乙酿胺之代谢物之混合物產生，其結構如下所示。

例如，Ε-2 -甲氧基-Ν-(3-{4-[3 -甲基_4_(6•甲基-°比咬-3-基氧基）-苯基胺基l·喹唑啉-6-基}-烯丙基）乙醯胺可培育於 O:\89\89306.DOC -49- 200424190 鼠、大鼠、猴、犬及人類肝臟組織製備（薄片、均質物、肝細胞、微粒體）或以重組酵素（例如含昆蟲細胞微粒體之人類 CYP)。可收集膽汁、尿液及血漿樣品，並另收集獲得代謝物之混合物之樣品，然後此等樣品可歷經HPLC分離，經標準儀器使用技術如質譜、NMR及UV分析。 O:\89\89306.DOC -50-

Claims

拾、申請專利範園： 1 ·—種式1化合物，

5二醫藥上可接受鹽、溶劑化物或前藥，其中為選自H&Ci_C6烷基組成之群；基一、C™ 及一為k自Η、CVC6炫基、Ci_C6經基及c⑼〇r4組成之群，5其中R4為選自Η及Cl_W基組成之群； R5為選自-C(0)0H及-(CR6R7)m_NRiR8組成之群，其中m 為〇至3之整數；R6AR7各自獨立選自烧基組成之群，且其中R8為選自Ci-C6烷基及-CCOXCI^CIl7：^ 0(Ci-C6烷基）組成之群；其令式1化合物另可選擇經羥基或〇-葡萄糖醛酸取代基取代。 2·如申請專利範圍第1項之化合物，其中R1為Η，R2為羥基甲基，R3為甲基，且 R5為 _CH2NHC(〇)CH2〇CH3。 3.如申請專利範圍第1項之化合物，其中R1為Η，R2為曱基， R3為羥基曱基，且R5為-CH2NHC(0)CH20CH3。 O:\89\89306.DOC 200424190 4·如申請專利範圍第1項之化合物，其中以為η，R2為〒基， R'為甲基，且 _C(〇)〇H。 5.如申請專利範圍第1項之化合物，其中Ri為η，R2為甲基， R3 為-COOH，且 R5 為 _CH2NHC(0)CH2〇CH3。 6·如申請專利範圍第1項之化合物，其中式丨化合物另含有羥基取代基，且其中R1為η，R2為甲基，R3為甲基，且R5 為-CH2NHC(0)CH20CH3。 7.如申請專利範圍第1項之化合物，其中式1化合物另含有羥基取代基，且其中R1為Η，R2為甲基，R3為羥基甲基，且 R)為-CH2NHC(0)CH20CH3。 8·如申請專利範圍第1項之化合物，其中R1為Η，R2為羥基 T*，R、f*，aR)、-CH2NHC(〇)CH2〇H。 9·如申請專利範圍第1項之化合物，其中式丨化合物另含有〇-葡萄糖醛酸取代基。 1 〇·如申請專利範圍第1項之化合物，其中該化合物實質上為純質。 11. 一種治療哺乳動物異常細胞生長之方法，其包含投與該哺乳動物有效治療異常細胞生長量之申請專利範圍第1 項之化合物。 12· —種治療哺乳動物異常細胞生長之醫藥組合物，其包含有效治療異常細胞生長量之申請專利範圍第1項之化合物，及醫藥上容許載劑。 13· —種測定病患是否已服用E-2_曱氧基-Ν-(3-{4_[3_甲基 4 (6-甲基_。比。定-3-基氧基）-苯基胺基]_喧嗤琳—心基卜烯 O:\89\89306.DOC -2 - 丙基）乙醯胺之方法尿液、膽汁或糞便樣項化合物之存在。八 Η 7ρη -中是否顯示出有申請專利範圍第 Μ.-種治療異常細胞生長之套組，其包含a) 一種醫藥組成物’其含有如申請專利範圍第1項之化合物及醫藥容許載劑、媒劑或稀釋劑；及b)描述使用此醫藥組合物治療異常細胞生長之方法之使用說明書。 O:\89\89306.DOC 200424190 柒、指定代表圖： (一) 本案指定代表圖為：（無） (二) 本代表圖之元件代表符號簡單說明·· 捌、本案若有化學式時，請揭示最能顯示發明特徵的化學式：

O:\89\89306.DOC