TW200404563A - Composition and combination comprising a soy hypocotyl material and a plant sterol - Google Patents

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200404563 玖、發明說明： 【發明所屬之技術領域】 本發明係關於用以降低血液中低密度脂蛋白膽固醇及總 膽固醇濃度之組合物及方法，明確言之，本發明係關於本 有植物固醇，大豆蛋白，及異黃酮，及其組合之組合物， 其可用以降低血液中LDL-膽固醇及總膽固醇濃度，並預防 或減少動脈硬化症的發生。 【先前技術】 心血管疾病為發病率及死亡率之重要問題，特別是在美 國及西歐國家。發生心血管疾病有數種導因，包括對該疾 病有遺傳傾向者，性別，生活類型因素，諸如吸煙及飲食， 年齡，高血壓，及高血脂症，包括高膽固醇血症。這些因 素中（特別是高血脂症及高膽固醇血症）會產生動脈硬化 症，這是血管及心臟疾病的主因。 對人類血管疾病及冠狀心臟疾病而言，血液中含高膽固 醇濃度是一個主要危險因素，低密度脂蛋白膽固醇（後文稱 為fiLDL-膽固醇”）的增加及總膽固醇的增加直接與冠狀心 臟疾病危險性的增加有關，膽固醇及死亡率：30福挫昍潘 H： 30年的#縱，安德森（Anderson)，卡斯替利（Castelli)& 利威（Levy)，JAMA，257冊，第 2176-80 頁（1987)。 飲食中攝取大豆蛋白物質可降低冠狀心臟疾病的危險 性，其因可減少血清中膽固醇的含量所致。大豆蛋白物質 已知可降低動物血液中總膽固醇&LDL_膽固醇含量，近來 研究攝取大豆蛋白對人類血清脂肪中脂質之效果meta_分 -6- 200404563 析中顯示，飲食中大豆蛋白明顯與降低人體血清中總膽固 醇及LDL·膽目料度冑_，蛋白#血清脂龐 —?安德森，強恩斯特（Johnstone)，及谷克-尼威 爾（Cook-Newell)，新英格蘭醫藥雜誌，333冊，第5卷，276_82 頁（1995) 〇 攝取含於整個大豆中之化合物_植物固醇_亦已證明可降 低血液中循環性膽固醇總量及LDL膽固醇含量，食物植物 里释·代謝、優點及副作用緩林（Ling)&瓊恩斯（jones)， 生命科學·，第57: 3冊，第195_206頁（I995)。植物固醇係由 植物所產生的固醇，除了在固醇支鏈上第€：丛位置上含有某 些取代基外，其結構與膽固醇非常相似，一般植物固醇包 括如圖1所示之未飽和固醇麥胚固醇，菜油固醇，豆固 醇’及圖2所示其相對飽和之麥胚固烷醇（sit〇stan〇1)及菜油 固烷醇（campestanol)。植物固醇的食物來源為玉米油，大 豆油’及其他含有相當疏水性化合物之植物油。 圖3及4中所示之植物雌激素異黃酮是整個大豆中另一群 之化合物，近來已證明其為降低血液中LDL及總膽固醇濃 度之重要因子，純化濃縮異黃酮（特別是吉尼斯丹 (genistein))可抑制膽固醇的生化合成作用，並預防ldl膽固 醇的氧化作用，此為發展動脈硬化症的重要步騾，參考.， 韓國專利申請案97-20103 :氣化低密度脂I白-平滑肌μ 土.後.腊_酶卫之嫫介活化作用：細胞增殖作用及钟淑,怍 m :那特瑞吉恩（Natarajan)等人·，脂肪研究雜誌·36 : 9 第 2005-16 頁（1995 九月）。 O:\88\88645.DOC -7 - 200404563 人：正個大且產製大豆油’大豆蛋白及醫藥或食物補充組 j《慣用加X處理中，是將植物固醇，異黃酮及大豆蛋 刀開的。利用機械性或化學萃取作用將去殼大豆之植物 ^與大豆蛋白分開，而異黃酮會在含有脂肪及脂肪溶解 《大且油分液中，大豆油分液與所剩的大豆物質分離 去脂肪大豆物質”―用於大豆及蔬菜油中，其可進一步處理 形成製餅材料，人造奶油，及即磷脂。 去月曰肪大且物質(一般為去脂肪大豆薄片)可作為製備且 有實質含量之大豆蛋白物質(諸如大豆蛋白濃縮物及大豆 蛋白分離物)之起始物質，用以製備大豆蛋白產物之去脂肪 e且物質亦含有異黃酮，然而，製備大豆蛋白物質(諸如大 且蛋白濃縮物及大豆蛋白分離物）之慣用流程中，實質含量 :異黃_係利用醇類萃取或水溶液萃取，清洗大豆蛋白物 :後與大豆蛋白物質分離的，參考就纽 第3-6頁（大豆蛋白協會發行，1987)。 在商用產製大豆蛋白物質時，焦點是將異黃酮與大豆蛋 白物貝分離，因為當大豆蛋白物質中存有異黃酮時，常與 不艮風味，氣味及/或色澤有關，例如美國專利申請案 5,804,234揭示，將蛋白物質與吸收性樹脂混合後，可自大 旦物質巾纟除異黃酮之步冑，以製備車交佳風味之大豆蛋 白。利用醇萃取大豆蛋白物質是特別佳的，因為醇萃取作 用較水溶液萃取能產製出較佳風味之蔬菜蛋白物質，部分 原因係因醇類去除大豆蛋白物質中異黃酮相當有效果，參 考例如.，日本專利申請案63_245,648A。

O:\88\88645.DOC -8- 200404563 近來的努力焦點亦著重於自植物物質（特別是大豆及苜 蓿）中分離異黃酮，以提供一種對健康有益之純化異黃酮物 質。例如下列的專利申請案揭示各種自植物物質中分離異 黃酮之方法：美國專利申請案4,428,876;5,702,752; 5,679,806 ; 4,390,559 ; 4,366,248 ; 4,366,082 ; 4,264,509 ； 4,232，122 ; 4，157,984 ;日本專利申請案 1-258669A ; 5-170756A; 41-90720A; 62-126186A; 62-126185A;及PCT 專利申請案WO93/23069。分離的異黃酮化合物可用於醫藥 組合物或食物補充組合物中，以預防或治療各式有害健康 之症狀，包括降低增加之膽固醇含量，例如，美國專利申 請案 5,516,528 ; 5,424,331 ; 5,569,459 ; 5,654,011 及 PCT 專 利申請案WO93/23069中揭示分離異黃酮物質可用於醫藥 或食物補充組合物。 利用大豆成分之新方法及組合物，以提供明顯降低血液 中LDL與總膽固醇含量至明顯減少動脈硬化症及冠狀心臟 疾病仍是必須的。 【發明内容】 本發明一個主旨係提供含有大豆蛋白物質之組合物，其 中大豆蛋白物質乾重中至少含有49%大豆蛋白，至少一種 選自吉尼斯丹，丹吉因（daidzein)，格力西丹（glycitein)，生 機素A(biochanin A)，福馬尼丁（formononetin)及其相對之天 然存在之糖苷及糖謀共輛物之異黃酮，及一種植物固醇， 其中植物固醇至少為0.49%組合物重量百分比。 本發明另一個主旨係提供一種含有大豆蛋白物質之組合 O:\88\88645.DOC -9 - 200404563 物，其中大豆蛋白物質乾重中至少含有49%大豆蛋白，及 一種植物固醇，其中植物固醇為〇·49%組合物重量百分比。 另個主旨，本發明提供一種組合物，其包括至少一種 選自吉尼斯丹，丹吉因，格力西丹，生機素Α，福馬尼丁及 其相對之自然存在之糖甞及糖甞共軛物之異黃酮，及一種 植物固醇’其中植物固醇至少為0.49%組合物重量百分比。 本發明另個主旨係提供一種降低人體血液中LDL濃度及 總膽固醇含量之方法，其係同時投與人體大豆蛋白物質乾 重中至少含有49%大豆蛋白，一種選自吉尼斯丹，丹吉因， 格力西丹’生機素A ’才昌馬尼丁及其相對之天然存在之糖甞 及糖甞共輛物之異黃酮，及一種植物固醇，以降低人體血 液中LDL濃度及總膽固醇。同時投與的植物固醇含量為包 括土少疋同時投用之大豆蛋白物質，異黃酮，及植物固醇 組合總1之〇_49%。較佳的主旨中，植物固醇，大豆蛋白物 質，及異黃酮是同時投與人體，以預防或減少人體動脈硬 化症的發生。 本發明另個主旨係一種降低人類血液中LDL濃度及總膽 固醇含里之方法，其係同時投與人體至少含有49%大豆蛋 白物貝乾重大旦蛋白之大豆蛋白物質，及一種植物固醇， 以降低人體血液中LDL濃度及總膽固醇。同時投用之植物 固醇含量為至少包括同時投用大豆蛋白物質及植物固醇組 口總里之0.49%。較佳的主旨中，植物固醇及大豆蛋白物質 疋同時投與人體，以預防或減少人體動脈硬化症的發生。 本發明另個主旨係一種降低人類血液中低密度脂蛋白膽

O:\88\88645.DOC -10- 200404563 固醇及總膽固醇含量之方法，其中同時投與人體一種植物 固醇及一種選自吉尼斯丹，丹吉因，格力西丹，生機素A， 揭馬尼丁及其相對之自然存在之糖甞及糖苷共軛物異黃 酮，以降低人體血液中LDL濃度及總膽固醇。同時投與的 植物固醇含量為包括至少是同時投用之大豆蛋白物質，異 黃酮，及植物固醇組合總量之〇·49%。較佳的主旨中，同時 投與人體植物固醇及異黃酮，以預防或減少人體動脈硬化 症的發生。 本發明另個主旨是提供一種包括大豆子葉物質及植物固 醇之組合物，其中植物固醇至少為0·49%組合物重量百分 比。 【實施方式】 本專利說明書中所用”Mai”一詞代表”丙二醯基”，而"Ac，， 代表”乙醯基”，”減少”或其衍生字句為包括完全或部分抑制 專一性生物效應（文中係使用減少一詞）。另外，本專利說明 書中所用’，異黃酮”或，，植物雌激素”意指單一異黃酮或植物 雌激素兩者，或當，，異黃酮”或，，植物雌激素"定義為至少一種 選自一群異黃酮時，則為多種的異黃酮或植物雌激素。，，異 育酮糖苷π意指異黃酮邵分上共價鍵結碳水單體部分，，,異 黃酮糖苷共輛物”意指具有另一個分子部分（諸如酯）鍵結至 異黃酮糖苷碳水部分之異黃酮糖苷。另外本專利說明書中 所用”醫藥製劑’’為一種化合物或與賦型劑結合之混合物， 根據醫師的處方，該賦型劑能有效的傳送化合物，或將化 合物傳送至人體。”櫃檯製劑，，為一種化合物或與賦型劑結 O:\88\88645.DOC -11 - 200404563 合之混合物，其可有效的傳送化合物，或將化合物傳送至 人體，該賦型劑無須醫師處方即可投與人體。 本發明發現當人體同時投用有效含量之能促使膽固醇降 低之每種活性成分時，植物固醇與大豆蛋白物質及/或異黃 酮組合，可相乘性地降低人體血液中低密度脂蛋白膽固醇 及總膽固醇含量。因此，本發明的範圍係利用植物固醇（另 名為”植物留醇類”）大豆蛋白物質及/或選擇性異黃酮組 合，以降低血液中LDL及總膽固醇濃度之組合物及方法。 除此之外，因植物固醇與大豆蛋白物質及特別是與異黃酮 組合使用時，利用其可降低血液中LDL及總膽固醇濃度， 及抗氧化劑效應及路胺酸激酶抑制性的特性，進而可有效 預防或減少動脈硬化症的發生，因此，本發明的範圍亦包 括預防或減少動脈硬化症發生的組合物及方法。 組合物 在一個具體實例中，本發明组合物包括植物固醇與包括 至少為49%大豆蛋白物質乾重之大豆蛋白或至少一種選自 吉尼斯丹’丹吉因’格力西丹，生機素A，福馬尼丁，及其 自然形成之糖苷及糖替共輛物之異黃酮組合，或植物固醇 與異黃酮或大且蛋白物質兩者組合。大部分較佳的組合物 含所有三種成分，一種植物固醇，一種大豆蛋白物質，及 一種異黃酮，因此可相互利用每種成分的LDL及總膽固醇 降低效應。 另一個具體實例，本發明組合物包括一種植物固醇與大 豆子葉物質（主要含有約37%至約44%的大豆蛋白重量百分 O:\88\88645.DOC -12- 200404563 比）的組合，此大豆子葉/植物固醇組合物可另外包括至少一 種選自吉尼斯丹，丹吉因，格力西丹，生機素A，福馬尼丁， 及其天然形成之糖甞及糖苷共軛物之異黃酮。 植物固醇 用於組合物中的植物固醇包括飽和及未飽和植物固醇兩 者。用於本發明組合物較佳的未飽和植物固醇為圖丨中所示 《/5-麥胚脂醇，菜油固醇，及豆脂醇，而用於組合物中較 佳的飽和植物固醇為圖2中所示的菜油固燒醇及麥胚固燒 醇，未飽和万-麥胚脂醇，菜油固醇是特別佳。 本發明組合物植物固醇含量至少為組合物總重的 0.49%，更佳者約〇.5%至約99 5%之組合物總重，而最佳者 :約1%至約60%組合物總重。組合物中植物固醇的相對含 量端視組合物中是否含有大豆蛋白物質而^，假若組合物 中《有大且蛋白物質’通常組合物中植物固醇含量（组人物 總重的百分比)明顯低於不含大豆蛋白物質之組合物。口 大且蛋白物質 在-個具體實例中，本發明組合物所用大豆蛋白物質之 大豆蛋白物質中含有至少49%大豆蛋白含有物質乾重之大 且蛋白’較佳的大豆蛋白物質含有至少桃大豆蛋白（乾 為去脂大豆粉及大豆餅，其含有自49%大豆蛋白至約帆大 且蛋白重量比；大豆濃縮物’其含有自至少65%大豆蛋白 至約90%大豆蛋白重量比；及大豆蛋白分離物，其… 少9〇%大豆蛋白重量比。大豆蛋白濃縮物及大豆蛋白二 物係特別佳。另一個具體實例中，可用於本發明組合物中

O:\88\88645.DOC -13- 200404563 的大豆蛋白物質為大豆子葉物質。 本發明組合物中大豆蛋白物質的含量範圍自至 99.55%組合物總重’當組合物中包括大豆蛋白物質時，其 較佳係至少為組合物之主要物’更佳者存有自約训至^ 99-55%’甚至更佳者為自約75%至約99 55%，而最佳者為 自約80%至約99.5之組合物總重。假若組合物中不含異普 酮，則組合物中可始終含有大豆蛋白物質。 異黃酮 用於本發明組合物中之異黃酮為苷配基異黃酮吉尼斯 丹，丹吉因，格力西丹，生機素A，福馬尼丁（圖3中所示）， 及天然形成之糖苷及這些甞配基異黃酮糖苷共軛物，包括 吉尼斯丁（genistin) ’ 6"-0-Mal 吉尼斯丁，6"_〇_Ac 吉尼斯 丁，丹辛（daidzin)，6”-0-Mal 丹辛，6"_〇_Ac 丹辛，格力丁 (glycitin) ’及6"_〇-Mal格力丁（圖4中所示）。組合物中可用 一種或多種的異黃酮，甞配基異黃酮特別佳，因為其為異 黃酮中最具生物活性者。用於組合物中最佳的異黃酮為^ 尼斯丹，丹吉因，生機素A及/或福馬尼丁。 組合物中異黃酮的含量範圍自0%至約66%組合物總重。 當組合物中含有大豆蛋白物質時，組合物中的異黃酮含量 範圍自約0%至約15%的組合物總重，所存有的異黃酮最佳 含量自約0.0066%至約10%組合物總重，假若組合物中不含 大豆蛋白物質，組合物中都可含有異黃酮。 利用技藝中所熟知的流程及步騾製取上述所述之成分並 組合’以製備本發明組合物。 O:\88\88645.DOC -14 - 200404563 從植物體中，利用萃取及分離方法製取植物固哮，或利 用或學合成固醇的方式製取植物固醇，另一種方式是，萃 取含植物固醇之植物體中含足夠量植物固醇之油脂用於組 合物中，以提供組合物中所需含量之植物固醇，其中自植 物中所萃取之油脂係根據慣用方法回收植物油脂製取。 較佳的具體實例中，植物固醇係根據美國專利申請案 3,993,756(特別是範例1〇)所述之方法，獲自大豆油脂非息 化部分之大豆油脂，該文獻一併供本專利說明書參考。簡 而言之，含有約40-50%重量比植物固醇之大豆油脂之非息 化部分係製取自整個大豆，利用慣用的分解，去殼，製成 薄片，及萃取步騾自整個大豆中製取大豆油脂，利用慣用 大且油脂純化步驟純化大豆油脂，直至最終的去味步驟。 大豆油脂的去味作用於減壓2-3毫米汞柱下，於225°C-235 °C下進行，以便自大豆油脂中蒸餾及分離出含有植物固醇 之萃取物。將萃取物與甲醇及濃硫酸（重量比1克萃取物： 172克甲醇：0.019克硫酸）於65-70°C下加熱迴流3-4小時， 將萃取物中所含之游離脂肪酸轉換成甲酯，終止反應後， 減壓下去除甲醇，用8(M00°C的水清洗殘餘油狀物質，以 去除硫酸。而後在20-30毫米汞柱下，於170-190°C下，利用 蒸餾作用去除脂肪酸的甲酯，純化所得之殘餘物，以提供 含有40-50%植物固醇大豆油脂非皂化部分。非皂化部分中 之植物固醇為麥胚脂醇，菜油固醇及豆脂醇。非皂化部 份可進一步利用HPLC純化，以製取每個個別的植物固醇， 或較佳者，直接用於本發明植物固醇的來源。 O:\88\88645.DOC -15- 200404563 万-麥胚固醇亦可根據已知的步驟自其他數種的植物油 脂中萃取之，/3-麥胚固醇可根據安德森（Anders〇n)等人美 國化學學會雜詰·，48,2897(1926)所揭示的步驟自小麥種子 油月曰及玉米/由月曰中分離；利用格羅爾等人美國化學 學會雜誌，61，1901(1939)中所揭示的方法自裸麥種子油脂 中分離；利用威力斯（Wallis)有機化學雜誌，2,335(1937)中 所揭π的方法自棉花油脂中分離；利用山德威斯特 (Sandqvist)等人 Ber.64,2167(1931)中所述之方法自 中分離，以上文獻一併供本專利說明書參考。 根據費合茲（Fernholz)等人美國化學學會雜誌.， 63，1155(1941)中所提供之步騾，菜油固醇可自其他植物油 脂中萃取之，該文獻一併供本專利說明書參考。菜油固醇 亦可利用塔吉亞（Tarzia)等人，義大利Gazz化學·， 97，102(1967)及化學摘要.，67,328839(1967)中所述之步驟合 成之，該文獻一併供本專利說明書參考，豆固醇可自大豆 或葫蘆豆中分離。 利用氫化作用可自未飽和植物固醇製備飽和的植物固 醇，利用彳貝用氫化作用步驟，沒_麥胚固醇及豆固醇可轉換 成麥胚固烷醇’而菜油固醇可轉換成菜油固烷醇。 某些植物固醇為市售商品，因此可直接購買後用於本發 明級合物中，例如，菜油固醇及豆固醇可自亞爾瑞奇 (Aldrich)化學公司.，940威斯特聖保羅大道，米爾瓦其，威爾 康新購買。点•麥胚固醇及麥胚固烷醇可自夕格馬（Sigma) 化學公司，3050斯布魯斯街，聖路易士，密蘇里州。 O:\88\88645.DOC -16- 200404563 在一個具體實例中，大豆蛋白物質為去脂大豆蛋白粉或 細粒，大豆蛋白濃縮物，或大豆蛋白分離物，每種均含至 少49%的大豆蛋白重量百分比。為製取去脂大豆粉或大豆 細粒’根據慣用大且處理方法將整個大豆清洗，研磨，製 成薄片，並去脂，以產製去脂薄片，片狀物，粉狀物，或 塊狀物，從這些所製物質可製備大豆粉及大豆細粒。去脂 大豆薄片及大豆粉可為市售商品。根據慣用的處理方法， 將去脂大豆薄片，片狀物，粉狀物，或塊狀物持續的研磨 成細狀型態，以製備去脂大豆粉及去脂大豆細粒。去脂大 且粉研磨成大小為150 #或更小的顆粒（足夠讓顆粒通過 i〇〇號美國蒒網），而去脂大豆細粒研磨自大小15〇#至2〇〇〇 #(足夠讓顆粒通過10號至80號美國篩網）。去脂大豆粉及去 脂大且細粒含有自49%大豆蛋白至約65%大豆蛋白重量百 分比’大豆粉及大豆細粒其他成分主要為碳水化合物，大 且纖維’及灰份。去脂大豆粉及大豆細粒為市售商品，可 直接購買應用於本發明組合物中。 組合物中所用較佳的大豆蛋白物質為大豆蛋白濃縮物或 大豆蛋白分離物，其所含的大豆蛋白較大豆粉或細粒多。 大旦蛋白濃縮物含有自約65%大豆蛋白至約90%大豆蛋白 重1百分比，而大豆蛋白濃縮物其他成分主要為大豆纖維 及其他多醣類。可利用慣用之大豆蛋白濃縮物加工方法製 備本發明所用之大豆蛋白濃縮物，其包括⑴利用醇水溶液 (車父佳為乙醇或甲醇水溶液）清洗去脂大豆薄片或大豆粉； 利用大豆蛋白等電點之ρΗ(ρΗ 4·4-4·6)稀釋酸清洗去脂大 O:\88\88645.DOC -17- 200404563 蓴片或大二粕，或（ηι；)加熱帶有濕氣的去脂大豆薄片或大 豆粉，以變性蛋白，而後用水清洗大豆薄片或大豆粉。大 义蛋白/辰！偈物為市售商品，可直接購買應用於本發明組合 物。 用於本發明組合物更佳的大豆蛋白物質為大豆蛋白分離 物（另名為分離大豆备由、，_ 久义A白）疋加工大昱蛋白物質中具有最高 =大豆，白百分比。大豆蛋白分離物含有至少約90%大豆 蛋白重量百分比，而大豆蛋白分離物其他主要的成分為灰 份及水分。利用慣用形成大豆蛋白分離物之加工步驟製備 本發明組合物所用之大豆蛋白分離物，其中用pH自約6至約 11之水溶液（較佳為稀釋氫氧化納，氫氧㈣，或氧氧化铵 水岭液）卒取去脂大且薄片，而含有可溶性蛋白之萃取液與 不/合陡物貝（g如大且纖維及其他不溶性多醣類）分離，將所 萃取之分離pH值調整至大豆蛋白的等電點，較佳約pH 4.“.6，以沉澱蛋白質。將沉殿的蛋白質與萃取物的液體 邵分分開’以便將蛋白質與可溶性碳水化合物分開，而後 清洗分離的蛋白質…，產生大豆蛋白分離物。大豆蛋 白分離物為市售商品’可直接購買應用於本發明組合物中。 另一個具體實例，大豆蛋白物質為大豆子葉物質，其含 有约37%至約44%大豆蛋白重量百分比。為製取大豆子葉物 質，將整個大豆去殼，根據慣用大豆加工技術將大豆子葉 撥開，撥開子葉後，子葉㈣，將混合的大豆經足夠大小 的篩網選擇性去除較小的子葉，而分離出子葉，磨碎生的 子葉’以製備粉末或粉狀物。 O:\88\88645.DOC •18- 200404563 本發明組合物所用的異黃酮化合物為植物（諸如豆莢，苜 蓿，及葛藤（pueraria root)的根）中所發現自然形成的物質。 通常這些異黃酮的豆莢來源包括大豆，埃及豆，及各式其 他的豆莢與豆類，這些含異黃酮化合物的苜蓿來源包括紅 苜宿及地下苜宿。大豆為特別佳的異黃酮化合物來源（除了 大豆中不含有格力西丹及其醣苷）。 異黃酮化合物可自天然植物來源製備之，而利用技藝中 已知的流程可以合成方式製備異黃酮化合物，例如王 (Wong)(食品農業科學雜誌·，第13冊，304頁（1962))所揭示丹 吉因可自紅苜宿中分離得之，或可自格恩力（Ganguly)及塞 爾（Sarre)所提供之黴菌 Micromonospora halophytica 中分離 之，此兩篇文獻一併供本專利說明書參考。利用貝克（Baker) 等人（化學學會雜誌·，274頁（1933));威斯力（Wesley)等人 (Ber.第66冊，第685頁（1933))，麥海爾（Mahal)等人（化學學會 雜誌.，第1769頁（1934))，貝克等人（化學學會雜誌·，第1852 頁（1953))，或福克斯（Farkas)(Ber.第 90冊，第 2940 頁（1957)) 所提供之方法，以合成方式製備丹吉因，以上文獻一併供 本專利說明書參考。利用福克斯等人（Ber.，第92冊，第819 頁（1959))之方法可以合成方式製備異黃酮醣苷丹辛，該篇 文獻一併供本專利說明書參考。將丹辛與丙二醯基或乙醯 基酐進行慣用的息化作用後可製備丹吉因異黃酮醣苷共軛 物6’-Mal丹辛及6’-Ac-丹辛。 可藉由貝克（Baker)等人（化學學會雜誌3 115頁（1928));諾 瑞西哈克利（Narasimhachare)等人（J. Sci. Ind. Res·，第 12 O:\88\88645.DOC -19- 200404563 冊，第 287 頁（1953));優得（Yoder)等人（Proc· Iowa Acad. Sci·， 自61冊，第271頁（195 4));及吉姆普力恩（Zemplen)等人（Acta. Chim· Acda_ Sci· Hung·，第 19冊，第 277 頁（1959))所提供之方 法合成製備吉尼斯丹，以上所列文獻一併供本專利說明書 參考。異黃酮糖甞吉尼斯丁可以吉姆普力恩等人（Ber.，76B 冊’第1110頁（1943))之方法合成製備，該文獻一併供本專 利說明書參考。將吉尼斯丁與丙二醯基或乙醯基酐進行慣 用的息化作用後可分別製備吉尼斯丁異黃酮共輛物， 6’-0-Mal吉尼斯丁及6’-0-Ac-吉尼斯丁。 可利用貝克等人（自然169: 706(1952))所提供之方法合成 製備格力西丹，格力西丹亦可利用伯布（Pope)等人（化學及 工業（倫敦）第1092頁（1953))所提供之方法自紅苜蓿分離 之，該文獻一併供本專利說明書參考。利用威斯力等人 (Ber.66 : 685(1933))及克吉（Kagel)等人（Tetrahedron Letters， 第593頁（1962))所揭示的方法合成福馬尼丁，此二文獻一併 供本專利說明書參考。利用瓦爾茲（Walz) (Αηη·489 : 11 8(193 1))的方法可自大豆粉分離出福馬尼丁，或利用布瑞 力（Bradbury)等人（化學學會雜誌第3447頁（1951))所提供之 分法自目％中分離之。 在最佳的具體實例中，本發明組合物之異黃酮成分自大 旦蛋白物質回收，該大豆蛋白物質亦可用於組合物中，如 前所述’異黃酮是大豆中天然存在的化合物。在製備大豆 蛋白粉，細粒，濃縮物，及某些異黃酮之分離物可存於大 旦蛋白物質中。以適當加工技術處理前述之大豆蛋白物 O:\88\88645.DOC •20- 200404563 質，較以慣用加工之大豆蛋白物質所製得之大豆蛋白粉， 細濃缩物’或分離物中所含有的異黃酮含量明顯增加， 八阮之，醇類清洗或萃取大豆蛋白物質應避免，因為1 黃酮於醇類水溶液中的溶解度相當大，且大豆蛋白濃縮物 不應乂醇4 洗製備之，因為異黃酮需留於大豆蛋白物質 中，除此之外，以水溶液清洗大豆蛋白物質應減少，因為 清洗會去除大豆蛋白中的異黃酮。清洗（假若有需要）應於冷 藏至冰冷之溫度（自至45。〇下進行，以便增加異黃酮於 =中的不溶性，並減少清洗過程中異黃酮的流失。在用水 /目洗或萃取大旦蛋白物質之前，大豆蛋白物質中的異黃酮 應轉換成其#配基形式（如下所述），以減少於水中的溶解 度。上述所用保持大豆蛋白物質中異黃嗣的方法所製之大 豆蛋白物質中含有較多之異黃酮。 田f另—個具體實财，自植物物質中所分離天然存在之 7異黃嗣或異黃酮類可用於本發明組合物中。自植物物質中 :離天然存在之異黃酮的較佳方法是以醇類萃取植物物 質，以便自植物物質中取出異黃酉同，較佳是甲醇或乙醇， ^水錢’較佳為驗性水溶液。較佳者係在萃取異黃嗣化 合物之前’研磨植物物質，以便增加自植物物質中異黃酮 化合物的回收率。利用慣用分離步驟(諸如逆向高解析液態 層析r’HPLC”）可自萃取物中分離出異黃酮化合物。 在較佳的具體實例中，異黃酮化合物吉尼斯丹，吉尼斯 丁，6’-〇_Mal吉尼斯丁，6，_〇_^_吉尼斯丁，丹吉因，丹辛， 6 -Ο-Mal丹辛’ 6’_〇_Ac丹辛，格力西丹格力西丁，及

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6’-0-Mal格力西丁分離自大豆物質，較佳為市售大豆物質。 可分離出異黃酮化合物之大豆物質包括：大豆，去殼大豆， 大豆片，大豆粉，大豆細粒，大豆薄片（全脂或去脂），大豆 子葉，大豆醣，大豆蛋白濃縮物，大豆漿，大豆漿蛋白， 及大豆蛋白分離物。在一個具體實例中，以低分子量的有 機萃取溶劑（較佳者為醇類，乙酸乙酯，丙酮，或乙醚，而 最佳者為乙醇或甲醇水溶液）自大豆，去殼大豆，大豆片， 大豆粉，大豆細粒，大豆薄片，大豆蛋白濃縮物，大豆漿 蛋白，或大豆蛋白分離物中萃取出異黃酮，最佳的萃取劑 的pH為大豆蛋白的等電點（約pH 4至pH 5)，以減少被萃取 劑所萃取出之大豆蛋白含量。 含有異黃酮之萃取劑與不溶性大豆物質分開，以形成含 有高量異黃酮之萃取液，假若有需要，可濃縮萃取液去除 溶劑後，回收高含量異黃酮物質，藉此可製備固態高含量 異黃酮物質，其可用於本發明組合物及方法中。

在更佳的具體實例中，異黃酮可進一步與萃取液中其他 大豆物質分離，含有異黃酮萃取液可與能吸附萃取液中異 黃酮之物質接觸，再以溶劑將所吸附之異黃酮自吸附物質 上沖堤下來，該溶劑可使異黃酮自吸附物質上區別沖堤下 來。 在較佳的具體實例中，利用慣用逆向HPLC分離技術，可 將萃取液中的異黃酮與不純物分離。自大豆物質中萃取異 黃酮，並與萃取液中不溶性大豆物質分離後，過濾萃取液 以除不溶性物質，可進行HPLC分析。利用可釋放鍵結異黃 O:\88\88645.DOC -22- 200404563

酮及萃取液中不純物之特定吸附物質填充慣用市售HPLC 官柱，製備HPLC管柱。吸附物質為任何逆相HpLc填充物 質，然而，較佳的填充物質係根據負載能力，分離效果， 及價錢選定的。此一較佳的填充物質為可羅馬西爾 (Kr〇masil)cl8 16微米100填充珠，購自艾卡諾貝爾（Eka Nobel)，諾貝爾工業，瑞典。 過濾之萃取液通過填充之HPLC管柱，直至管柱所有的鍵 結位置均完全被異黃酮所飽和，其可自管柱流出之沖堤液 中檢測出異黃酮得知。而後用溶劑沖堤Ηριχ管柱進行分離 作用。在較佳的具體實例中，沖堤溶劑較佳者為極性溶劑， 諸如乙醇’甲_，乙酸乙酯，或乙腈，而較佳者為具有約 30%至約9G%醇類含量之水溶液，最佳者為約5()%，而最佳 的醇類為乙醇。 從管柱的沖堤液中分離收集異黃酮化合物及不純物，根 據慣用HPLC及分析化學技術，可自其他沖堤分液中鐘定出 含有異黃社沖堤分液，自f柱中收集含有異黃嗣之分 敗，利用蒸發作用去除溶劑中揮發含量（例如醇類），假若蒸 發作用可去除所有的溶劑，則可直接回收異黃酮化合物， 或是將所剩之溶劑（例如水）冰冷之，並將㈣之溶劑進行離 心作用或過濾，以回收異黃酮。 在特別佳的具體實例中，回收自植物物質之異普嗣醋2 共輛物及異黃酮醣料可換成其相對之㈣基異黃酮形 式。異黃酮糖答共輛物及異黃酮糖芬轉換成芬配基異黃酮 係受植物雌激素異黃s時萃取前先萃取的受質影響，、:自

O:\88\88645.DOC -23- 200404563 不溶性質物質中分離萃取液後所得豐含異黃酮影響。咸信 苷配基異黃酮化合物對降低血液中LDL及總膽固醇濃度， 及預防或減低動脈硬化的發生特別的有活性。從含水萃取 液中分離嘗配基異黃酮較分離其相對醣甞共軛物及醣甞形 式容易，因為替配基較不溶於水。 秀κ酮糖甘共輛物（例如6”-〇-Mal吉尼斯丁，6”-0-Ac吉 尼斯丁，6”-〇-Mal丹辛，6”-〇-Ac-丹辛，及6，，_〇-Mal格力西 丁）可轉換成其相對之醣苷（例如吉尼斯丁，丹辛，及格力西 丁），將含有異黃酮之萃取液或受質形成pH約為6至約13之 鹼性水溶液，較佳約pH 9至約pH u，並在溫度約2t：至約 121°C處理該鹼性水溶液一段轉換所需的足夠時間，較佳為 約25 C至約75 C，較佳約30分鐘至約5小時，更佳約3〇分鐘 至約1.5小時。將異黃酮醣嘗與能分切込仁万_醣苷結之酵素 (較佳為市售之貝他_配甞酶，阿爾法_或貝他-乳糖苷酶，果 膠酶，乳糖酶，或葡萄糖_澱粉酶）於該酵素活性之pH(較佳 為約pH 3至約pH 9)下，於溫度約25它至約75。〔）（較佳約翎 C至約65。〇反應一段足夠轉換的時間，一般約丨小時至約 24小時，較佳約丨小時至約3小時，可將異黃酮（例如吉尼斯 丁，丹辛，及格力西丁）轉換成其相對之苷配基形式（例如吉 尼斯丹，丹吉因，及格力西丹）。 " 利用慣用分離步驟可將：y：配基異黃酮與植物受質分離， 例如，利用低分子量的醇類萃取大豆或苜蓿受質後，可萃 取出嘗配基異黃酮，利用慣用再結晶作用或HpLc，可自朴 取液中分離出甞配基異黃酮。在較佳的具體實例 :

O:\88\88645.DOC -24- 200404563 豆受質所分離及用於本發明組合物或方法之異黃酮組合物 包括至少40%吉尼斯丹，至少15%丹吉因，及至少1%格力 西丹。在本發明另一個具體實例中，自大豆受質所分離及 用於本發明組合物或方法之異黃酮組合物包括至少85%吉 尼斯丹，至少5%丹吉因，及至少0.5%格力西丹。 用於本發明組合物中之數種異黃酮化合物為市售商品， 可購買得之，以調配本發明組合物，或用於本發明的方法 中。例如，吉尼斯丹，丹吉因，及格力西丹為市售商品， 可購自因多分（Indofine)化學公司，P.O.Box 473，塞馬威利 (Somerville)，紐澤西州08876。生機素A可購自米爾威其 (Milwaukee)，溫斯康辛州 53233。 植物固醇及大豆蛋白物質及/或異黃酮可一起添加成分 組合成本發明之組合物，較佳的方式為將各成分混合一 起。例如，將植物固醇及大豆蛋白物質及/或異黃酮置於攪 拌或混合容器中，混合這些物質一段完全混合所需之時間。 較佳的是將成分混合一起，致使所得之組合物所含之各 成分具有生物活性含量，雖然組合物不侷限於每種成分具 有生物活性含量，因為為了達到所要降低血中LDL及總膽 固醇濃度之效果，投用組合物的次數可多不只一次。較佳 組合物中含有約500毫克至約50克之植物固醇，而更佳約1 克至約10克至植物固醇。當組合物含有大豆蛋白物質時， 較佳為組合物中含有約5克至約100克之大豆蛋白物質，更 佳是組合物中含有約10克至約40克之大豆蛋白物質。當組 合物中含有異黃酮時，較佳為組合物中含有約10毫克至約 O:\88\88645.DOC -25- 200404563 1 〇〇〇毫克之異黃酮，更佳是組合物中含有約25毫克至約2〇〇 毫克之異黃酮。 在較佳的具體實例中，植物固醇及大豆蛋白物質及/或異 黃酉同可與適當之賦型劑調配成醫藥或櫃檯傳送系統。利用 技藝中所知之方法可製備含有植物固醇及大豆蛋白物質及 /或異黃酮之醫藥或櫃檯調配物，例如，本發明成分可調配 成錠片，膠囊，粉末，懸浮液，非經腸投藥用之溶液，諸 如靜脈，肌肉，及皮下方式投藥，以及利用一般及慣用的 載劑，键結劑，稀釋劑，及賦型劑調配成經皮適用之貼片 溶液。 用以調配根據本發明之醫藥或櫃檯調配物之惰性醫藥學 上可接受賦型劑包括澱粉，甘露醇，硫酸鈣，磷酸氫二鈣， 硬脂酸鎂，矽酸衍生物，及/或醣類，諸如蔗糖，乳糖及葡 萄糖。鍵結劑包括羧基甲基纖維素及其他纖維素衍生物， 動物膠，天然及合成膠，包括藻酸，諸如藻酸鈉，聚乙二 醇，蠟及其類似物。用於本發明之稀釋劑包括適當之油脂， 食鹽水，醣溶液，諸如右旋糖水溶液或葡萄糖水溶液，及 乙二醇類’諸如聚乙二醇或聚丙二醇。其他賦型劑包括油 酸鈉，乙酸鈉，硬脂酸鈉，氯化鈉，苯甲酸鈉，滑石粉\ 及硬脂酸鎂，及其類似物；分散劑包括瓊脂，碳酸鈣，碳 酸氫鈉，澱粉，黃素膠，及其類似物；及吸附載體，諸如 膨土及高嶺土。呈色劑及香料亦可添加至醫藥或櫃檯調配 物中。 在另-個較佳的具體實例中，將各種成分或其混合物以 Γ Afi O:\88\88645.DOC -26- 200404563 $品成分加入食品中，以製備含有植物固醇及大豆蛋白物 貝及/或兴更酮之飲食補充劑。可添加這些成分之食品包括 幾乎所有的食品’但較佳者為含有作為功能成分植物固醇 <大且蛋白物質或蔬菜油。例如，可添加植物固醇及大5 蛋白物質及/或異黃酮之食品包括（但不侷限於）肉類，諸2 碎肉’乳化肉’及滷肉；飲料’諸如營養性飲料，運動飲 料’蛋白質強化飲料，果汁’牛奶，牛奶替代物，及減肥 飲料，礼酪，諸如硬乳酪或軟乳酪，奶油乳酪，酸乳酪； 冷凍點心，諸如冰淇淋，冰牛奶，低脂冷凍點心，及非奶 類冷凍點心；優格；糖漿；布丁；麵包產品；沙拉醬；及 沾料及塗抹醬，諸如美奶茲及洋芋片沾料。最佳的植物固 醇及大豆蛋白物質（包含或不包含異黃嗣）是為泥狀物所形 成之乳化物，其特別可用於乳化的食品及飲料中，諸如沙 拉醬，優格，大且乳酪，乳化肉，及粉末飲料。 下列非限制性調配物說明包含植物固醇及大豆蛋白及/ 或異黃酮化合物之根據本發明组合物，及其用於根據本發 明之方法。 調配物 下歹〗凋配物1 -4說明包括用於本發明組合物之植物固醇 及大旦蛋白物質及/或異黃酮之醫藥或櫃檯調配物。 調配物1 動物膠膠囊 利用下列成分製備硬動物膠膠囊：異黃酮25_1〇〇毫克/膠 囊，植物固醇5〇〇-20〇〇毫克/膠囊；澱粉，NF 〇-1〇〇〇毫克/

O:\88\88645.DOC Γ -it 4 On 1 -27- 200404563 厘襄，澱粉可流動性粉末0-1000毫克/膠囊；聚矽氧液35〇 史〇20笔克/膠囊。混合成分，經篩網過篩，埴充至膠 中。 /、 / 調配物2 錠片 J用下列成分製備錠片：植物固醇25〇_5〇〇毫克/錠片·，大 '蛋白物質i_-2_毫克/錠片；微結晶纖維素2〇_3〇〇毫克 飧片；搬粉0-50毫克/錠片、硬脂酸鎂或硬脂酸〇_15毫克/ 叙片」二氧化珍，燻蒸〇·_毫克/錠片；二氧化珍，膠狀物 0 k克/锭片，及乳糖(MGG毫克/錠片。混合成分並壓鍵形 成錠片。 調配物3 懸浮液 利用下列成分製備懸浮液：異黃酮〇1_2⑼毫克毫升； 植物固醇250-2000毫克/5毫升；大豆蛋白物質5〇〇_ 2〇〇〇毫 克/5毫升；羧基甲基纖維素鈉50_7〇〇毫克/5毫升；苯甲酸鈉 〇-1〇毫克/5¾升；純水5毫升；及所需之香料及呈色劑。 調配物4 非經腸溶液 攪拌内含1.5%重量比之活性成分（活性成分為大豆蛋白 物質，植物固醇，及異黃酮，重量比例為5: 4: υ<1〇%體 積比之丙二醇及水落液，利用氯化鈉將該溶液製成等張濬 液，並無菌化。 下列調配物5-8為利用植物固醇及豐含用於根據本發_| O:\88\88645.DOC -28- 200404563 組合物異黃酮之大豆蛋白分離物所製成之飲食補充物。下 列豐含異黃酮之大豆蛋白分離物主要每克大豆蛋白中包本 約1至約7毫克之異黃酮化合物。 調配物5 即食飲料 利用下列成分製成即食飲料： 成分 水 豐含異黃酮大豆蛋白分離物 植物固醇 蔗糖 百分比組合物，f量电 75-82 10-15 3-5 5-8 可可 0.1-1 維生素/礦物質 香料 0.1-1 纖維素膠 0.1-0.5 即食飲料可製成每份8盎司，每份含有約20克大豆蛋白， 包括約20至約140毫克之異黃酮化合物及約6克之植物固 醇。 調配物6 粉末式飲料 比組合物，重量比 75-85 5-10 利用下列化合物製備粉末式飲料： 成分 豐含異黃酮大豆蛋白分離物 植物固醇

O:\88\88645.DOC -29- 蔗糖 8-15 Maltodextrin 1-5 維生素/礦物質 0.5-2 阿斯巴甜 0-0.5 香料 0-0.5 將3 0克粉末式飲料调配物添加至水中，製成每份含有約 23克大豆蛋白分離物，包括約23克至 合物及約2.5克之植物固醇。 調配物7 食物棒 利用下列成分製成食物棒： 約161毫克的異黃酮化 成分 百分比釦各物，重量电 豐含異黃酮大豆蛋白分離物 20-30 植物固醇 1-5 玉米糖漿 30-45 米糖漿固體 7-14 甘油 1-5 可可 2-7 圖覆化合物 15-25 食物棒每份70克，含有約15克大豆蛋白分離物，含有約 200404563 15至約1〇5毫克之異黃酮化合物及約2克植物固醇。 調配物8 大豆優格 利用下列成分製成大豆優格： Γ Λ A O:\88\88645.DOC -30 - 200404563 成百分比組合物，重量比 水 50-70 豐含異黃酮大豆蛋白分離物 5-15 植物固醇 5-15 蔗糖 3-8 玉米澱粉 1-5 葡萄糖 0.3-1 纖維素膠 1-3 培養液（優格） 0.01-0.1 水果 10-20 維生素/礦物質 0.05-0.3 大旦優格每份製成170克，每份含有約17克之大豆蛋白分 離物’含有約17至約170毫克異黃酮化合物及含有約17克植 物固醇。 方法 本發明亦關於以植物固醇及大豆蛋白物質及/或異黃酮 化合物降低人體血液中低密度脂蛋白膽固醇濃度之方法。 持績規律性（較佳為每日）的投與人體大豆蛋白物質及/或異 育酮化合物，可降低血液中LDL膽固醇及總膽固醇濃度， 植物固醇較佳者為如前所述之卜麥胚脂醇，菜油固醇，豆 固醇’麥胚S]㈣或菜油固燒醇。大豆蛋白物質則為大豆 子葉物質或大豆蛋白物質，其含有至少桃大豆蛋白物質 乾重之大且蛋白，每巧士 ^止 减如大1叔，大且細粒，濃縮物，或分 離物。異普綱化人你；强* 口 k自一種或多種如前所述之吉尼斯

O:\88\88645.DOC -31 - 200404563 丹’丹吉因，格力西丹，格力西丹，福馬尼丁，及其天然 形成之糖苷或糖苷共輛物。植物固醇及大豆蛋白物質及/或 異黃酮較佳係以如前所述之醫藥或櫃檯組合物或飲食補充 物投用之，端視投藥途徑的效率及/或接受度而定。 在某特定時間内，較佳為每日，同時投用或依序投用植 物固醇及大豆蛋白物質及/或異黃酮化合物，最佳者為同時 投用存於前述本發明發明組合物中之植物固醇及大豆蛋白 物貝及/或異黃酮化合物。另一種方式，植物固醇及大豆蛋 白及/或異黃酮化合物以個別的成分依序投用之，本專利說 明書中所用，，依序"一詞意指在某特定的一段時間内（例如一 天）個別投用各種的成分，但不侷限於立即個別依序投用 每種的成分。 人ta投用之植物固醇及大豆蛋白物質及/或異黃酮化合 物含量可有效的傳送至血液中，並降低血液中膽固醇濃 度。每種可降低血液中膽固醇濃度成分之劑量端視數種因 素而定，包括投用成分的個體高矮胖痩，投用成分人體血 液中膽固醇的濃度，及投用成分之途徑。根據持續性基礎， 有效降低血液中膽固醇之植物劑量為較佳是植物固醇投用 劑量自500毫克/天至50克/天，而更佳者自1克/天至$克/ 天。較佳地，假若投用，則所投用用以降低血液中膽固醇 之大豆蛋白物質的大豆蛋白物質劑量自5克/天至1〇〇克/ 天，更佳者為10克/天至30克/天。較佳地，若有投用異黃酮， 則有效降低血液中膽固之異黃酮投用劑量自1〇毫克/天至 1000毫克/天，更佳為自25毫克/天至200毫克/天。 O:\88\88645.DOC -32- 200404563 ，當同時投用降低LDL及總膽固醇濃度之含量時，植物固 醇及大豆蛋白物質及/或異黃酮可相互合作的降低人體血 液中膽固醇濃度。用於本發明之植物固醇，大豆蛋白物質， 及異黃酉同可降低人體血液中LDL及總膽固醇濃度之機制各 f不同，或者不同的機制間有重疊相同之處。咸信這些物 質降低膽固醇的機制與其他物質之此種機制相互作用，進 而加速其他物質降低膽固醇的機制。組合膽固醇減低成分 之降低膽固醇機制的加速活性造成血液中降低及總膽 =醇濃度之總降低量大於個別分開成分時ldl及總膽固醇 濃度所造成之降低量。 例如，同時投用植物固醇，大豆蛋白物質，及異黃酮的 某種機制可相乘性的降低血液中LDL及總膽固醇濃度，其 係結合某些各物質原有之降低膽固醇的機制。已知植物固 醇猎由避免腸吸收飲食中膽固醇，而影響膽固醇及膽酸間 的腸肝循環平衡。此減少在腸肝膽固醇循環調節上之膽固 醇回饋作用，是因肝臟需膽固醇合成膽酸。經由肝臟細胞 中LDL膽固醇受體，肝臟可自血液中獲取必要的膽固醇， 其可藉由投用植物固醇上調節（Upregulated)，或合成所需之 膽固醇。假若肝臟所需之膽固醇源自血液，則血液中2固 醇濃度會下降。 大豆蛋白可降低血液中LDL及總膽固醇濃度的某種已知 機制是增加糞便中膽酸的排泄量。增加糞便膽酸排泄量可 促使肝臟製造更多的膽酸，而膽酸的生成即是以膽固醇為 文負。如前所述，肝臟以血液中膽固醇生成膽酸，則可降 Γ Λ *7' Ή/

O:\88\8E645.DOC -33- 200404563 低血液中膽固醇的濃度。 口、、’且口扠用根據本發明之植物固醇及大豆蛋白可共同調整 腸肝膽固醇血中的平衡作用，進而導致明顯降低血液中 L及、、、心膽固醇濃度。利用植物固醇抑制腸吸收飲食膽固 醇㈢使肝臟缺少膽固醇，咸信部分可自血液取走膽固醇。 用大二蛋白促使糞便膽酸排泄的增加可加速肝臟膽固醇 勺缺 < 利用植物固醇以增加自肝臟去除膽固醇（為膽酸受 男）’此進一步可自血液中去除一部份的膽固醇。 本發明所用的異黃酮可與植物固醇組合，或與植物及大 :蛋白物質組合共同合作，而有效的降低咖及總膽固醇 /辰度邛刀係因為異黃酮可上調節（upregulate)或增加肝 既膽固醇受體的數目。本發明所用的異黃酮為吉尼斯 丹’丹吉因’格力西丹’福馬尼丁，生機素A，及其相對之 天然存在之糖甞及糖苷共軛物，其為植物雌激素，已知在 活體中具有雌激素的效果。雌激素增加肝臟咖膽固醇受 體的數目，其可明顯增加血漿進人至肝臟之咖膽固顆粒 澄清度。根據本發明，利用異黃酮的雌激素效應，增加上 調節（upregulation)或肝LDL膽固醇受體數目，與利用植物 固醇及/或大豆蛋白物質促使肝臟所需之膽固醇相配合 後，可明顯促使自血液進入肝臟膽固醇之澄清度。 然而，根據本發明方法不侷限於某特定的料，明確言 之，因為同時投用植物固醇，異黃酮，及/或大豆蛋白物^ 減低血液中LDL及總膽固醇濃度之機制有數種，例如，除 了增加膽酸排泄改變膽固醇血液平衡外， ” W大旦蛋白中含 34-

O:\88\88645.DOC 200404563 有高含量的精胺酸，可專-性作㈣蛋白f7s儲存單位 ^ ’可改變血清中胰增血糖素成血清姨島素，進而影響肝 臟中膽固醇的代謝，可增加血清中游離甲狀腺素，致^可 降低血液中的LDL及總膽固醇。植物固醇亦可利用其他抑 制腸吸收膽固醇外之機制減低膽固醇，因為利用直接注射 將植物固醇血流中，已證明可降低膽固醇。 本發明亦關於人體同時投用植物固醇及大豆蛋白物質， 以預防或減少動脈硬化症發生之方法，該大豆蛋白物質為 大旦子葉物質或大豆蛋白物質，其内含有至少49%大豆蛋 白重量百分比及/或至少一種選自吉尼斯丹，丹吉因，格力 西丹，福馬尼丁，生機素A，及其相對之天然存在之糖苷及 糖苷共軛物之異黃酮，較佳的植物固醇至少為一種石_麥胚 固醇，菜油固醇，豆固醇，麥胚固烷醇，及豆固烷醇。大 豆蛋白物質較佳者為大豆粉，大豆細粒，大豆蛋白濃縮物， 或大豆蛋白分離物。較佳的投藥及保存方法一如以相關的 植物固醇及大豆蛋白物質及/或異黃酮降低血液中L D L及總 膽固醇濃度所述。 如薊所述，當人體投用足夠促使降低膽固醇含量之植物 固醇及大豆蛋白物質及/或異黃酮之各種成分時，可有效地 共同降低血中LDL及總膽固醇濃度，血液中LDL膽固醇含量 的增加與動脈硬化症的發生有關，因為LDL膽固醇為形成 動脈硬化病灶的重要成分。因此，可降低LDL膽固醇之植 物固醇’大旦蛋白物質，及/或異黃酮之組合物可有效的預 防或減少動脈硬化症的發生。 O:\88\88645.DOC -35- 200404563 在較佳的具體實例中，不論是否投用大豆蛋白物質，同 時組合投用異黃酮與植物固醇，可預防或減少動脈硬化症 的發生’目為異黃酮除了可降低血液中LDL膽固醇濃度 外，兴頁酮提供抗-動脈硬化症活性。具體言之，這些異普 酮在血管中可提供對抗動脈硬化症重要的保護作用，異普 酮一特別是：y：配基異黃酮吉尼斯丹，丹吉因，生機素a，及 福馬尼丁一可抑制LDL膽固醇的氧化作用。ldl膽固醇的氧 化作用為形成動脈硬化症重要的步驟，因為ldl氧化作用 增加其動脈病因性。某些異黃酮，明確言之為吉尼斯丹， 丹吉因，及生機素A亦為酪胺酸激酶抑制劑，藉由抑制酵素 酪胺酸激酶活性，可抑制動脈硬化病灶及血栓的形成，因 此，同時投用植物固醇及至少一種根據本發明之異黃酮（包 口或不含大旦蛋白物質）可預防或減少動脈硬化症的發 生，因其兩者可相互合作降低血液中LDL及總膽固醇濃 度，並抑制形成及動脈硬化病灶成長之機制。 範例1 選擇5至50位男性進行臨床研究，這些男性患有中度至重 度的過膽固醇血症，例如其血液中總膽固醇含量為25〇毫克 /100¾升，或更雨。將這些男性分為5組，第一組投與3〇克 不含井頁酮之大旦蛋白分離飲食補充物（利用醇萃取去除 -、κ酮）（大且組）’第一組投與5克植物固醇飲食補充物， 其中含有植物固醇/3 _麥胚固醇（”植物固醇”組），第三組投 用75¾克異黃酮飲食補充物，其中含有異黃酮吉尼斯丹及 丹吉因（”異黃酮，，組），第四組投用含有3〇克分離大豆蛋白， O:\88\88645.DOC -36- 200404563 5克植物万-麥胚固醇，及75毫克異黃酮吉尼斯丹及丹吉因 之之飲食補充物（”組合”組），而第五組不投用飲食補充物（，， 控制”組）。這些實驗組之飲食中均不在提供異黃酮，植物 固醇及大旦蛋白的來源，兩組中亦不投用雌激素，此飲食 狀況持續6個月。 在開始此種飲食之前，測量病患血液中總膽固醇及低密 度月曰蛋白膽固醇含量之基準，纟組病患在才矣受此種相關飲 食6個月之後，再測定其血液中之含量基準，比較每組成員 中所得之結果，並比較研究開始前及結束後所得之結果。 組合投用植物固醇，大豆蛋白物質，及異黃酮顯示所降低 LDL及總膽固醇含量百分比大於投用大豆組，植物固醇 組，異黃酮組，及控制組所或總膽固醇含量。 上述範例係利用活性證明植物固醇及大豆蛋白物質及/ 或異黃酮之組合使用可降低人體血液中ldl膽固醇濃度。 範例2 選擇5至50位女性進行臨床研究，這些女性已停經，並診 斷為動脈硬化症患者，例如已診斷為動脈硬化病灶者，包 括狹窄症及閉森病灶。將這些女性分為5組，第一組投與3〇 克不含異黃酮之大豆蛋白分離飲食補充物（利用醇萃取去 除異黃酮）Γ大豆”組），第二組投與5克植物固醇飲食補充 物，其中含有植物固醇/5 _麥胚固醇（”植物固醇”組），第三 組投用75毫克異黃酮飲食補充物，其中含有異黃酮吉尼斯 丹及丹吉因（”異黃酮，，組），第四組投用含有3〇克分離大豆蛋 白，5克植物泠·麥胚固醇，及75毫克異黃酮吉尼斯丹及丹 O:\88\88645.DOC -37- 200404563 吉因之之飲食補充物（”組合”組），而第五組不投用飲食補充 物（”控制”組）。這些實驗組之飲食中均不在提供異黃酮，植 物固醇及大豆蛋白的來源，兩組中亦不投用雌激素，此飲 食狀況持續6個月。 在開始此種飲食之前，測量病患血液中總膽固醇；高密 度及低密度脂蛋白膽固醇含量之基準；及某選定血管（諸如 表面大腿動脈或肱動脈）中狹窄症與動脈硬化病灶之程 度，·以研究血管反應非-進展性（例如利用高解析超音波）。 各組病患在接受此種相關飲食6個月之後，再測定其血液中 之含量基準，比較每組成員中所得之結果，並比較研究開 始前及結束後所得之結果。組合投用植物固醇，大豆蛋白 物質，及異黃酮與增加的抗_動脈硬化活性有關，組合組相 較於大豆組、植物固醇組、異黃酮組及控制組而言，並沒 有治療顯示可有幅減少粥樣硬化症病灶及狹窄症或是減少 粥樣硬化症病灶或狹窄症的累積。 上述範例係利用活性證明植物固醇及大豆蛋白物質及/ 或兴η酮 < 組合使用可預防或減少人體動脈硬化病灶之笋 生。 又 【圖式簡單說明】 圖1為未飽和植物固醇麥胚固醇’菜油固醇，及豆固 醇之分子結構。 圖2為飽和植物固醇麥胚固醇，菜油固醇，及豆固醇 子結構。 77 圖3為本發明所用甞配基異黃酮之分子結構。

O:\88\88645.DOC -38- 200404563 圖4為異黃酮糖甞及異黃酮糖苷共軛物之分子結構。 O:\88\88645.DOC -39-

Claims (1)

1. 200404563 拾、申請專利範園： h 、種降低人體血液中總膽固醇及低密度脂蛋白膽固醇 又組合物，其包括 大豆子葉物質；及 植物固醇，其中植物固醇包括至少為0.49%之組合物 重量比。 •根據申請專利範圍第1項之組合物，另外包含至少一種 坟自口尼斯丹，丹吉因，格力西丹，生機素A，福馬尼 丁’及其天然存在糖苷及糖苷共軛物之異黃酮。 3·根據申請專利範圍第丨項之組合物，其中該植物固醇至 夕為/3 -麥胚脂醇，菜油固醇，豆固醇，麥胚固烷醇，或 菜油燒醇。 4· 一種降低人體血液中總膽固醇及低密度脂蛋白膽固醇 之組合，其包括 植物固醇及大豆子葉物質，其中植物固醇包括至少 〇 .49/〇重里计之植物固醇及大豆子葉物質組合含量。 5·根據申請專利範圍第4項之組合，另外包括一種選自吉 尼斯丹，丹吉因，格力西丹，生機素A，福馬尼丁，及 其天然存在糖苷及糖苷共軛物之異黃酮。 6·根據申請專利範圍第5項之組合，其中另外包括植物固 醇大二子葉物質，及異黃酮，以預防或減少動脈硬化 症的發生。 O:\88\88645.DOC