TR201908596T4 - Spiro-laktam NMDA reseptörü modülatörleri ve bunların kullanımları. - Google Patents

Abstract

NMD A reseptörü aktivitesinin modülasyonunda artmış potansiye sahip olan bileşikler açıklanır. Bu tür bileşikler depresyon ve ilgili rahatsızlıklar gibi durumlarına tedavisinde kullanıma yönelik tasarlanır. İntravenöz formülasyonlar dahil olmak üzere, bileşiklerin oral olarak kullanılabilir formülasyonları ve farmasötik olarak kabul edilebilir diğer dağıtım formları ayrıca açıklanır.

Description

TARIFNAME SPIRO-LAKTAM NMDA RESEPTÖRÜ MODÜLATÖRLERI VE BUNLARIN KULLANIMLARI ALTYAP I Bir N-metil-d-aspartat (NMDA) reseptörü, inter alfa, uyarici amino asitler glutamat ve glisin ve sentetik bilesik NMDAiya duyarli olan postsinaptik, iyonotropik bir reseptördür. NMDA reseptörü, iki degerli ve tek degerli iyonlarin her ikisinin reseptör ile iliskili bir kanal araciligiyla postsinaptik nöral hücreye akisini kontrol eder (Foster et al., Nature 1987, 329z395-396; Mayer et al., Trends iri Pharmacol. Sci. 1990, 11:254-260). NMDA reseptörü, nöronal yapi ve sinaptik baglanabilirligin belirtilmesindeki gelisim sirasinda kapsanmistir ve deneye dayali sinaptik modifikasyonlara dahil edilebilir. Ek olarak, NMDA reseptörlerinin ayrica uzun süreli potansiyalizasyon ve merkezi sinir sistemi rahatsizliklarina dahil edildigi düsünülür. NMDA reseptörü hafiza kazanimi, saklama ve ögrenme gibi birçok yüksek kognitif fonksiyonun altinda yatan sinaptik plastisitede, ayrica belirli kognitif yollarda ve agrinin algilanmasinda önemli bir rol oynar (Collingridge et al., The NMDA Receptor, Oxford University Press, 1994). Ek olarak NMDA reseptörlerinin belirli özelliklerii bunlarin bilincin kendisinin altinda yatan beyindeki bilgi islemeye dahil edilebildiklerini öne sürer. NMDA reseptörü, genis bir spektrumda CNS rahatsizliklarinda dahil edilir seklinde görülmesi nedeniyle özel ilgi çekmistir. Örnegin, inme veya travmatik yaralanmadan kaynaklanan beyin iskemisi sirasinda, hasar gören veya oksijenden yoksun nöronlardan fazla miktarlarda uyarici amino asit glutamat salinir. Bu fazla glutamat, bunlarin Iigand kapili iyon kanallarini açan NMDA reseptörlerine baglanir; böylece kalsiyum girisi protein degredasyonu ve hücre ölümü ile sonuçlanarak bir biyokimyasal kaskadi aktive eden yüksek bir seviyede intraselüler kalsiyum üretir. Eksitotoksisite olarak bilinen bu olayin, ayrica hipoglisemi ve kardiyak arrest ila epilepsi araliginda degisen diger rahatsizliklar ile iliskili nörolojik hasardan sorumlu oldugu düsünülür. Ek olarak, Huntington, Parkinson ve Alzheimer hastaliklarinin kronik nörodejenerasyonunda benzer dahil olma durumunu gösteren ön raporlar vardir. NMDA reseptörü aktivasyonunun, inme sonrasi konsülviyonlardan sorumlu oldugu gösterilmistir ve belirli epilepsi modellerinde NMDA reseptörü aktivasyonunun, nöbetlerin olusumuna yönelik gerekli oldugu gösterilmistir. NMDA reseptörünün nöropsikiyatrik dahiliyeti, NMDA reseptörü Ca** kanalinin hayvan anestetik PCP (fensiklidin) tarafindan blokajinin, insanlarda sizofreniye benzer psikotik bir durum meydana getirmesi nedeniyle ayrica fark edilmistir (Johnson, K. and Jones, 8., 1990 içinde incelenmistir). Ek olarak, NMDA reseptörlerinin ayrica belirli mekansal ögrenme türlerinde kapsanmistir. NMDA reseptörünün, postsinaptik membranda gömülü birkaç protein zincirinden olustuguna inanilir. Bugüne kadar kesfedilen alt birimlerin ilk iki türü, imkan dahilinde allosterik baglama alanlarinin çogunu içeren genis bir ekstraselüler bölge, Ca++ geçirgen olan bir gözenek veya kanal olusturmak amaciyla ilmek haline getirilen ve katlanan birkaç transmembran bölge ve bir karboksil terminal bölgesini olusturur. Kanalin açilmasi ve kapanmasi, çesitli Iigandlarin ekstraselüler yüzey üzerinde bulunan protein domenlerine (allosterik alanlara) baglanmasi araciligiyla düzenlenir. Ligandlarin baglanmasinin, sonuç olarak kanal açilmasi, kismen açilmasi, kismen kapanmasi veya kapanmasinda yansitilan genel protein yapisindaki bir üç boyutlu yapi degisikligini etkiledigi düsünülür. NMDA reseptörü bilesikleri, allosterik alanlar araciligiyla NMDA reseptörü üzerinde ikili (agonist/antagonist) etki uygulayabilir. Bu bilesikler tipik olarak "kismi agonistler" olarak ifade edilir. Ana alan Iigandinin varliginda, bir kismi agonist ligandin bir kisminin yerini degistirecektir ve böylece reseptör araciligiyla Ca*+ akisini azaltacaktir. Ana alan Iigandinin yoklugunda veya azaltilmis seviyede varliginda kismi agonist, reseptör kanali araciligiyla Ca++ akisini arttirmak üzere etki eder. NMDA reseptörlerinin glisin baglama alanini baglayabilen ve farmasötik faydalar saglayan yeni ve daha spesifik/potent bilesiklere yönelik bir ihtiyaç teknikte var olmaya devam eder. Ek olarak, bu tür bilesiklerin oral olarak dagitilabilen formlarina yönelik tibbi tekniklerde bir ihtiyaç var olmaya devam eder. KISA AÇIKLAMA Burada, en az kismen, NMDA modülatörleri olan bilesikler, örnegin, NMDA"nin kismi agonistleri saglanir. Örnegin. burada asagidaki formül ile temsil edilen bilesikler ve bunun farmasötik olarak kabul edilebilir tuzlari, stereoizomerleri ve N-oksitleri açiklanir: burada Rb H, halojen, hidroksil, siyano ve 01-06 alkilden (örnegin, H) olusan gruptan seçilir; R1 H veya C1-Cs alkildir; R2 H veya 01-05 alkildir; R3 H, C1-Ce alkil ve bir nitrojen koruma grubundan olusan gruptan seçilir; burada nitrojen koruma grubu, 9-fl0renilmetiloksikarbonil, tert-bütoksikarbonil, karbobenziloksikarbonil, p-metoksibenziloksikarbonil, asetil, trifloroasetil, benzoil, benzil, p-metoksibenzil, p-metoksifenil, 3,4-dimetoksibenzil, trifenilmetil, p- tolüensülfonil, -C(O)OR31 ve -C(O)R32'den olusan gruptan seçilir; burada R31, 01-06 alkil, C1-Cs haloalkil, 02-06 alkenil, CQ-Ce alkinil, Cg-Cm sikloalkil, -CH2-Cs-C10 sikloalkil, -CH2-fenil ve -CHz-piridilden olusan gruptan seçilir, burada yukarida bahsedilen herhangi bir sikloalkil istege bagli olarak, 1-3 bagimsiz olarak seçilen C1-03 alkil ile sübstitüe edilir ve burada fenil istege bagli olarak, bagimsiz olarak Ci-Cs alkil, 01-03 haloalkil, C1-C3 alkoksi, C1-Ca haloalkoksi, nitro, halo, SOzMe, siyano ve - OC(O)CH3`ten seçilen 1-2 sübstitüent ile sübstitüe edilir; R32, H, C1-Cs alkil, C1-Ce haloalkil, fenil ve piridilden olusan gruptan seçilir, burada fenil istege bagli olarak, bagimsiz olarak C1-C3 alkil, C1-C3 haloalkil, 01-03 alkoksi, 01-03 haloalkoksi, nitro, halo, SO2Me, siyano, and -OC(O)CH3'ten seçilen 1-2 sübstitüent ile sübstitüe edilir; R4 ve R5"in her biri bagimsiz olarak H, Ci-Cs alkil, X ve -Ci-Ce alkilen-Xiden olusan gruptan seçilir, burada X asagidaki unsurlardan olusan gruptan seçilir: (i) Cs-Cs sikloalkil; (ii) 5 ila 6 halka atomu içeren heteroaril, burada halka atomlarinin 1'i, 2'si veya 3'ü bagimsiz olarak N, NH, N(C1-03 alkil), O ve S'den olusan gruptan seçilir; (ii) 3 ila 6 halka atomu içeren heterosiklil, burada halka atomlarinin 1'i, 2'si veya 3`ü bagimsiz olarak N, NH, N(C1-C3 alkil), O ve S'den olusan gruptan seçilir; (iv) fenil; burada Cs-Cs sikloalkil and heterosiklilin her biri istege bagli olarak, bagimsiz olarak halojen, siyano, okso, 01-06 alkil, hidroksil, 01-06 alkoksi ve -N(R')R"den olusan gruptan seçilen 1-3 sübstitüent ile sübstitüe edilir; ve heteroaril ve fenilin her biri istege bagli olarak, bagimsiz olarak halojen, siyano, C1-C5 alkil, hidroksil, C1-C6 alkoksi ve - N(R')R"den olusan gruptan seçilen 1-3 sübstitüent ile sübstitüe edilir; veya R4 ve R5 baglandiklari nitrojen ile birlikte asagidakileri olusturur: 4 ila 6 halka atomu içeren heterosiklil; burada heterosiklil, en fazla iki halka heteroatomu (R4 ve R5'e baglanan nitrojen atomu dahil olarak) içerir ve ikinci halka heteroatomu, mevcut oldugunda, bagimsiz olarak N, NH, N(C1-03 alkil), O ve 8`den olusan gruptan seçilir; ve burada heterosiklil istege bagli olarak, bagimsiz olarak halojen, siyano, okso, Ci-Ce alkil, hidroksil, Ci-Cs alkoksi ve -N(R')R"den olusan gruptan seçilen 1-3 sübstitüent ile sübstitüe edilir; veya ila 6 halka atomu içeren heteroaril; burada heteroaril, en fazla dört halka heteroatomu (R4 ve Rs'e baglanan nitrojen atomu dahil olarak) içerir ve ek halka heteroatomun her biri, mevcut oldugunda, bagimsiz olarak N, NH, N(C1-03 alkil), O ve S olusan gruptan seçilir; ve burada heteroaril istege bagli olarak, bagimsiz olarak halojen, siyano, C1-C6 alkil, hidroksil, Ci-Ce alkoksi ve -N(R')R"den olusan gruptan seçilen 1-3 sübstitüent ile sübstitüe edilir; Rs, -OH, Ci-Cs alkoksi, -OC(O)-Ci-Ce alkil,-OC(O)fenil ve -N(R')R"den olusan gruptan seçilir; R' her görülmesine yönelik bagimsiz olarak H ve 01-06 alkilden seçilir; ve R7 H veya Ci-Cs alkildir. Ayrica burada açiklanan bir bilesigi ve farmasötik olarak kabul edilebilir bir eksipiyani içeren farmasötik olarak kabul edilebilir bilesimler saglanir. Örnegin, bu tür bilesimler bir hastaya oral veya intravenöz uygulamaya yönelik uygun olabilir. Ayrica burada, buna gereksinim duyan bir hastada depresyon, Alzheimer hastaligi, dikkat eksikligi bozuklugu, sizofreni veya anksiyetenin tedavi edilmesinin bir yönteminde kullanima yönelik açiklanan bir bilesik saglanir. Ayrica burada, buna gereksinim duyan bir hastada otizm, anksiyete, depresyon, bipolar bozukluk, dikkat eksikligi bozuklugu, dikkat eksikligi hiperaktivite bozuklugu (ADHD), sizofreni, psikotik bir bozukluk, psikotik bir semptom, sosyal geri çekilme, Obsesif kompülsif bozukluk, fobi, travma sonrasi stres sendromu, bir davranis bozuklugu, impulsif bir kontrol bozuklugu, bir madde kötüye kullanimi bozuklugu, bir uyku bozuklugu, bir hafiza bozuklugu, bir ögrenme bozuklugu, idrar kaçirma, multipl sistem atrofisi, progresif supranükleer palsi, Friedrich ataksisi, Down sendromu, frajil x sendromu, tüberöz skleroz, olivio-ponto-serebellar atrofi, serebral palsi, ilaca bagli optik nörit, iskemik retinopati, diyabetik retinopati, glukom, demans, AIDS demansi, Alzheimer hastaligi, Huntingt0n hastaligi, spastisite, kas segirmesi, kas spazmi, Tourette sendromu, epilepsi, serebral iskemi, felç, bir beyin tümörü, travmatik beyin yaralanmasi, ani kalp durmasi, omurilik hastaligi, spinal kord hasarlanmasi, periferal nöropati, akut nöropatik ve kronik nöropatik agridan olusan gruptan seçilen bir durumun tedavi edilmesinin bir yöntemi açiklanir. Bu tür yöntemler hastaya, açiklanan bir bilesigin veya bunun farmasötik olarak kabul edilebilir tuzlari, stereoizomerleri, N- oksitleri ve hidratlarinin farmasötik olarak etkili bir miktarinin uygulanmasini içerebilir. Tasarlanan bir yöntem depresyonun tedavi edilmesini içerir. Örnegin, depresyon majör depresif bozukluk, distimik bozukluk, psikotik depresyon, dogum sonrasi depresyon, mevsimsel duygu durum bozuklugu, bipolar bozukluk, mizaç bozuklugu veya bir kronik tibbi durumdan kaynaklanan depresyondan bir veya daha fazlasini içerebilir. Tasarlanan bir yöntem sizofreniyi tedavi edebilir. Bu tür sizofreni, örnegin, paranoid tip sizofreni, düzensiz tip sizofreni, katatonik tip sizofreni, ayrismamis tip sizofreni, kalinti tip sizofreni, post-sizofrenik depresyon veya basit sizofreni olabilir. SEKILLERIN KISA AÇIKLAMASI Sekil 1, bilesik X varliginda [3H]MK-801 baglanmasinin potansiyalizasyonu gösterir. Sekil 2, bilesik X kullanilarak hipokampal kesitlerde uzun süreli potansiyalizasyon sonuçlarini gösterir. DETAYLI AÇIKLAMA Bu tarifname genellikle NMDA'yi modüle edebilen bilesikler, örnegin, NlViDA antagonistleri veya kismi agonistleri ve bilesimler ve/veya açiklanan bilesiklerin kullanilmasinin yöntemleri ile ilgilidir. Tanimlar "Tedavi etme", durum, hastalik, bozukluk ve benzerinin iyilesmesi ile sonuçlanan herhangi bir etkiyi, örnegin zayiflatma, azaltma, modüle etme veya ortadan kaldirmayi içerir. Burada kullanildigi üzere "alkenil" terimi, burada örnegin sirasiyla C2-C6 alkenil ve 03- C4 alkenil olarak refere edilen 2-6 veya 3-4 karbon atomundan olusan düz veya dallanmis bir grup gibi en az bir karbon-karbon çift baga sahip olan doymamis bir düz veya dallanmis hidrokarbona refere eder. Örnek niteligindeki alkenil gruplari, bunlarla sinirli olmamak üzere, vinil, aIIiI, bütenil, pentenil ve benzerini içerir. Burada kullanildigi üzere "alkoksi" terimi bir oksijene (alkil-O-) bagli düz veya dallanmis bir alkil grubuna refere eder. Örnek niteligindeki alkoksi gruplari, bunlarla sinirli olmamak üzere, burada sirasiyla Ci-Cs alkoksi ve C2-Ce alkoksi olarak refere edilen 1-6 veya 2-6 karbon atomundan olusan alkoksilere refere eder. Örnek niteligindeki alkoksi gruplari, bunlarla sinirli olmamak üzere, metoksi, etoksi, izopropoksi ve benzerini içerir. Burada kullanilan "alkeniloksi" terimi bir oksijene (alkenil-O) bagli düz veya dallanmis bir alkenil grubuna refere eder. Örnek niteligindeki alkenoksi gruplari, bunlarla sinirli olmamak üzere, 3-6 karbon atomundan olusan bir alkenil grubuna sahip gruplari içerir (ayrica örnegin C3-C6 alkeniloksi olarak refere edilir). Örnek niteligindeki alkenoksi gruplari, bunlarla sinirli olmamak üzere, alliloksi, büteniloksi ve benzerini içerir. Burada kullanilan "alkiniloksi" terimi bir oksijene (alkinil-0)) bagli düz veya dallanmis bir alkinil grubuna refere eder. Örnek niteligindeki alkiniloksi gruplari, bunlarla sinirli olmamak üzere, Cs-Ce alkiniloksi, örnegin, propiniloksiyi içerir. Burada kullanildigi üzere "alkil" terimi, burada sirasiyla Ci-Cs alkil, Ci-C4 alkil ve C1-Cs alkil olarak refere edilen 1-6, 1-4, veya 1-3 karbon atomundan olusan düz veya dallanmis bir grup gibi doymus bir düz veya dallanmis hidrokarbona refere eder. Örnek niteligindeki alkil gruplari, bunlarla sinirli olmamak üzere, metil, etil, propil, izopropil, 2- metiI-1-propil, 2-metil-2-pr0pil, 2-metiI-1-bütil, 3-metiI-1-bütil, 3-metiI-2-bütil, 2,2-dimetil- 1-propil, 2-metiI-1-pentil, 3-metiI-1-pentil, 4-metiI-1-pentil, 2-metiI-2-pentil, 3-metiI-2- pentil, 4-metil-2-pentil, 2,2-dimetil-1-bütil, 3,3-dimetiI-1-bütil, 2-etiI-1-bütil, bütil, izobütil, t-bütil, pentil, izopentil, neopentil, hekzil ve benzerini içerir. Burada kullanildigi üzere "haloalkil" terimi, alkil grubunun bir veya daha fazla hidrojen atomunun bagimsiz olarak seçilen bir veya daha fazla halojen ile degistirildigi, doymus bir düz veya dallanmis alkil gruplarina refere eder. "Haloalkil" terimi, alkil grubunun tüm hidrojen atomlarinin bagimsiz olarak seçilen halojenler ile degistirildigi alkil gruplarini kapsar (bazen "perhalo" alkil gruplari olarak refere edilir). Örnek niteligindeki haloalkil gruplari, bunlarla sinirli olmamak üzere, CH2F, CH2CH20I, CF3, CHFCHzcl'yi içerir. Burada kullanildigi üzere "alkinil" terimi, burada sirasiyla Cz-Cs alkinil ve 03-06 alkinil olarak refere edilen 2-6 veya 3-6 karbon atomundan olusan düz veya dallanmis bir grup gibi en az bir karbon-karbon üçlü baga sahip olan doymamis bir düz veya dallanmis hidrokarbona refere eder. Örnek niteligindeki alkinil gruplari, bunlarla sinirli olmamak üzere, etinil, propinil, bütinil, pentinil, hekzinil, metilpropinil ve benzerini içerir. Burada kullanildigi üzere "köprülü sikloalkil" terimi, bitisik olmayan iki atomun bir CH2 veya CHzcHz grubu ile baglandigi 4- ila 7-üyeli bir monosiklik sikloalkil grubu olarak tanimlanir. Bir "köprülü sikloalkil" bir veya daha fazla kismen doymamis veya doymus fenil halkasina kaynasik olabilir. Köprülü karbosiklik gruplarinin örnekleri, bunlarla sinirli olmamak üzere, bisiklo[2.2.1]heptan , bisikl0[2.2.2]oktan, , bisikl0[2.2.2]0ktan ve benzerini içerir. Burada kullanildigi üzere "karbonil" terimi, kullanildigi üzere radikal -C(O)-'ya refere eder. Burada kullanildigi üzere "siyano" terimi radikal -CN'ye refere eder. "Nitro" terimi radikal -NOz'ye refere eder. "H" terimi hidrojene refere eder. Burada kullanildigi üzere "sikloalkoksi" terimi bir oksijene (sikloalkil-O-) bagli bir sikloalkil grubuna refere eder. Burada kullanildigi üzere "sikloalkil" terimi burada, örnegin, "CB-6 sikloalkil" veya "Cms sikloalkil" olarak refere edilen ve bir sikloalkandan derive edilen, örnegin 3-6, veya 4-6 karbondan olusan doymus veya kismen doymamis bir monosiklik hidrokarbon grubuna refere eder. Örnek niteligindeki sikloalkil gruplari, bunlarla sinirli olmamak üzere, siklohekzan, siklohekzan, siklopentan, siklobütan, siklopropan veya siklopentani içerir. Burada kullanildigi üzere "halo" veya "halojen" terimleri F, CI, Br veya I'ya refere edilir. Burada kullanildigi üzere "heteroaril" terimleri, nitrojen, oksijen ve sülfür gibi, bir veya daha fazla heteroatom, örnegin bir ila üç heteroatom içeren 4-6 üyeli monosiklik aromatik bir halka sistemine refere eder. Mümkün oldugunda, söz konusu heteroaril halkasi karbon veya nitrojen araciligiyla bitisik radikale baglanabilir. Heteroaril halkalarinin Örnekleri, bunlarla sinirli olmamak üzere, furan, tiyofen, pirol, tiyazol, oksazol, izotiyazol, izoksazol, imidazol, pirazol, triazol, piridin ve pirimidini içerir. "Heterosiklil" veya "heterosiklik grup" terimleri teknikte bilinir ve halka yapilari nitrojen, oksijen ve sülfür gibi bir ila üç heteroatom içeren, doymus veya kismen doymamis 4- ila 7-üyeli halka yapilarina refere eder. Bir "heterosikl" bir veya daha fazla kismen doymamis veya doymus fenil halkasina kaynasik olabilir. Heterosiklil gruplari örnekleri, bunlarla sinirli olmamak üzere, pirolidin, piperidin, morfolin, tiyomorfolin ve piperazini içerir. Burada kullanildigi üzere "heterosiklilalkoksi" terimi bir heterosiklil- alkiI-O-grubuna refere eder. "Heterosikliloksialkil" terimi bir heterosikIiI-O-alkil- grubuna refere eder. "Heterosikloksi" terimi bir heterosikIiI-O- grubuna refere eder. "Sikloalkiloksi" terimi bir sikloalkiI-O- grubuna refere eder. "Heteroariloksi" terimi bir heteroariI-O- grubuna refere eder. Burada kullanildigi üzere "hidroksi" ve "hidroksil" terimleri -OH radikaline refere eder. Burada kullanildigi üzere "okso" terimi =O radikaline refere eder. "Nitrojen koruma grubu" veya "amino koruma grubu" terimi teknikte bilinir ve burada kullanildigi üzere kovalent olarak bir amino (primer veya sekonder) grubunun bir nitrojen atomuna baglanan ve bir sentetik adim sirasinda geçici olarak amino grubunun reaktivitesini engelleyen ve sentetik adimin tamamlanmasi akabinde selektif olarak uzaklastirilan bir kimyasal kisma refere eder. Nitrojen koruma gruplari, örnegin, 9- Florenilmetiloksikarbonil (Fmoc), tert-bütoksikarbonil (Boc), karbobenziloksikarbonil (Cbz), p-metoksibenziloksikarbonil, asetil, trifloroasetil, benzoil, ftalimido, benzil (Bn), p- metoksibenzil, p-metoksifenil, 3,4-dimetoksibenzil, trifenilmetil, benziliden ve p- tolüensülfonili (Ts) içerir. Bazi düzenlemelerde nitrojen koruma grubu, asagidaki formüllerden birine sahip olabilir: burada tanimlandigi üzere -C(O)OR31 veya -C(O)R32. Mevcut tarifnamede kullanildigi üzere, "kismi NMDA reseptörü agonisti" terimi genellikle bir NMDA reseptörünün bir glisin baglama alanina baglanabilen bir bilesige refere eder; düsük konsantrasyonlarda bir NMDA reseptörü agonisti büyük oranda agonist olarak etki eder ve yüksek konsantrasyonlarda büyük oranda bir antagonist olarak etki eder. Bu konsantrasyonlar her bir "kismi agoniste yönelik deneysel olarak belirlenir. "Farmasötik olarak veya farmakolojik olarak kabul edilebilir", uygun oldugunda bir hayvana veya bir insana uygulanmasi durumunda, advers, alerjik veya istenmeyen diger bir reaksiyon olusturmayan moleküler varliklar ve bilesimleri içerir. Insan uygulamasina yönelik olarak hazirlanislarin, FDA Biyoloji Ofisi standartlari tarafindan gerekli görüldügü üzere sterilite, pirojenisite, genel güvenlik ve saflik standartlarini karsilamasi gerekir. Burada kullanildigi üzere "farmasötik olarak kabul edilebilir tasiyici" veya "farmasötik olarak kabul edilebilir eksipiyan" terimi, farmasötik uygulama ile uyumlu olan, tüm solventler, dispersiyon ortamlari, kaplamalar, izotonik ve absorpsiyon geciktirici ajanlar ve benzerlerine refere eder. Farmasötik olarak aktif maddelere yönelik bu tür ortamlarin ve ajanlarin kullanimi teknikte iyi bilinir. Bu bilesimler ayrica, tamamlayici, ek veya artmis terapötik fonksiyonlar saglayan diger aktif bilesikleri içerebilir. Burada kullanildigi üzere "farmasötik bilesim" terimi, bir veya daha fazla farmasötik olarak kabul edilebilir tasiyici ile birlikte formüle edilen, burada açiklandigi üzere en az bir bilesik içeren bir bilesime refere eder. "Kisi", "hasta" veya "özne" degistirilebilir bir sekilde kullanilir ve memeliler, tercihen fareler, siçanlar, diger kemirgenler, tavsanlar, köpekler, kediler, domuzlar, sigirlar, koyunlar, atlar veya primatlar dahil olmak üzere herhangi bir hayvani ve en çok tercih edildigi üzere insanlari içerir. Bulus bilesikleri, bir insan gibi bir memeliye uygulanabilir, ancak ayni zamanda veteriner tedavisine ihtiyaci olan bir hayvan gibi diger memelilere, örnegin, evcil hayvanlara (örnegin, köpekler, kediler ve benzeri), çiftlik hayvanlarina (örnegin, inekler, koyunlar, domuzlar, atlar ve benzeri) ve laboratuvar hayvanlarina (örnegin, siçanlar, fareler, kobaylar ve benzeri) uygulanabilir. Bulus yöntemleri ile tedavi edilen memeli, istenen bir sekilde örnegin agri veya depresyon tedavisinin istendigi bir memelidir. "M0dülasyon" antagonizm (örnegin, inhibisyon), agonizm, kismi antagonizm ve/veya kismi agonizmi içerir. Mevcut spesifikasyonda "terapötik olarak etkili miktar" terimi, arastirmaci, veteriner, tip doktoru veya diger klinisyen tarafindan istenen. bir doku. sistem. hayvan veya insanin biyolojik veya tibbi yanitini ortaya çikaracak olan söz konusu bilesigin miktari anlamina gelir. Bulus bilesikleri, bir hastaligi tedavi etmek üzere terapötik olarak etkili miktarlarda uygulanir. Alternatif olarak bir bilesigin terapötik olarak etkili bir miktari, bir depresyon semptomunun azaltilmasi ile sonuçlanan bir miktar gibi Istenen bir terapötik ve/veya profilaktik etkiyi elde etmek üzere gerekli miktardir. Burada kullanildigi üzere "farmasötik olarak kabul edilebilir tuz(lar)" terimi, mevcut bilesimlerde kullanilan bilesiklerde mevcut olabilen asidik veya bazik gruplarin tuzlarina refere eder. Dogada bazik olan mevcut bilesimlere dahil edilen bilesikler, çesitli inorganik ve organik asitler ile genis çesitlilikte tuzlari olusturabilir. Bu tür bazik bilesiklerin farmasötik olarak kabul edilebilir asit ilave tuzlarini hazirlamak üzere kullanilabilen asitler, toksik olmayan asit ilave tuzlari olusturanlar, diger bir deyisle, bunlarla sinirli olmamak üzere, malat, oksalat, klorid, bromid, iyodid, nitrat, sülfat, bisülfat, fosfat, asit fosfat, izonikotinat, asetat, Iaktat, salisilat, sitrat, tartrat, oleat, tannat, pantotenat, bitartrat, askorbat, süksinat, maleat, gentisinat, fumarat, glukonat, glukaronat, sakkarat, format, benzoat, glutamat, metansülfonat, etansülfonat, benzensülfonat, p-tolüensülfonat ve pamoat (diger bir deyisle, 1,1'-metilen-bis-(2- hidroksi-3-naft0at)) tuzlari dahil olarak, farmakolojik olarak kabul edilebilir anyonlari içeren tuzlardir. Dogada asidik olan mevcut bilesimlere dahil edilen bilesikler, farmakolojik olarak kabul edilebilir çesitli katyonlar ile baz tuzlarini olusturabilir. Bu tür tuzlarin örnekleri alkali metal veya toprak alkali metal tuzlari ve özellikle kalsiyum, magnezyum, sodyum, Iityum, çinko, potasyum ve demir tuzlarini içerir. Bir bazik veya asidik kisim içeren mevcut bilesimlere dahil edilen bilesikler ayrica, çesitli amino asitler ile farmasötik olarak kabul edilebilir tuzlari olusturabilir. Tarifname bilesikleri asidik ve bazik gruplarin her ikisini; örnegin, bir amino ve bir karboksilik asit grubunu içerebilir. Bu tür bir durumda bilesik, bir asit ilave tuz, bir zwitterion veya bir baz tuzu olarak mevcut olabilir. Tarifname bilesikleri bir veya daha fazla kiral merkez ve/veya çift bag içerebilir ve dolayisiyla geometrik izomerler, enantiyomerler veya diastereomerler gibi stereoizomerler olarak mevcut olabilir. Burada kullanildiginda "stereoizomerler" terimi, tüm geometrik izomerler, enantiyomerler veya diastereomerlerden olusur. Bu bilesikler, stereojenik karbon atomu etrafinda sübstitüentlerin konfigürasyonuna bagli olarak "R" veya "8" sembolleri ile gösterilebilir. Mevcut bulus bu bilesiklerin çesitli stereoizomerleri ve bunlarin karisimlarini kapsar. Stereoizomerler enantiyomerleri ve diastereomerleri içerir. Enantiyomerler veya diastereomerlerin karisimlari, terminolojide "(±)" olarak gösterilebilir ancak teknikte uzman kisi, bir yapinin dolayli olarak bir kiral merkezi belirtebilecegini anlayacaktir. Tarifname bilesikleri bir veya daha fazla kiral merkez ve/veya çift bag içerebilir ve dolayisiyla geometrik izomerler, enantiyomerler veya diastereomerler olarak mevcut olabilir. Enantiyomer ve diastereomerler "(+)," "(-)" sembolleri ile gösterilebilir. "R" veya "S" stereogenik karbon atom etrafinda sübstitüentlerin konfigürasyonuna dayalidir, ancak teknikte uzman kisi bir yapinin dolayli olarak bir kiral merkezi belirtebilecegini anlayacaktir. Bir karbon-kaibon çift bag etrafinda sübstitüentlerin düzenlenmesi veya bir sikloalkil veya heterosiklik halka etrafinda sübstitüentlerin düzenlenmesinden kaynaklanan geometrik izomerler, ayrica mevcut bulusun bilesikleri içinde mevcut olabilir. sembolü burada açiklandigi üzere tekli, çift veya üçlü bir bag olabilen bir bagi gösterir. Bir karbon-karbon çift bagin etrafindaki sübstitüentler "2" veya "E" konfigürasyonunda oldugu gibi gösterilir, burada "2" ve ''E" terimleri IUPAC standartlarina göre kullanilir. Aksi ifade edilmedikçe, çift baglari gösteren yapilar "E" ve "Z" izomerlerinin her ikisini kapsar. Bir karbon-karbon çift bag etrafindaki sübstitüentler alternatif olarak "cis" veya "trans" olarak refere edilebilir, burada "cls", çift bagin ayni tarafi üzerindeki sübstitüentleri temsil eder ve "trans", çift bagin karsi taraflari üzerindeki sübstitüentleri temsil eder. Bir karbosiklik halka etrafinda sübstitüentlerin düzenlenmesi ayrica "cis" veya "trans" olarak gösterilebilir. "Cis" terimi, halka düzleminin ayni tarafi üzerindeki sübstitüentleri temsil eder ve "trans" terimi halka düzleminin karsi taraflari üzerindeki sübstitüentleri temsil eder. Sübstitüentlerin, halka düzleminin ayni ve karsi taraflarinin her ikisi üzerinde bulundugu bilesiklerin karisimlari, "cis/trans" olarak gösterilir. Burada kullanildiginda "stereoizomerler" terimi, tüm geometrik izomerler, enantiyomerler veya diastereomerlerden olusur. Mevcut bulus bu bilesiklerin çesitli stereoizomerleri ve bunlarin karisimlarini kapsar. Mevcut bulus bilesiklerin ayri enantiyomerleri ve stereoizomerleri, asimetrik veya stereojenik merkezler içeren ticari olarak temin edilebilir baslangiç materyallerinden sentetik olarak veya rasemik karisimlarin hazirlanisi, akabinde teknikte uzman kisilerce iyi bilinen çözünürlük yöntemleri araciligiyla hazirlanabilir. Bu çözünürlük yöntemleri, (1) enantiyomerlerin bir karisiminin bir kiral yardimciya baglanmasi, diastereomerlerin ortaya çikan karisiminin optik olarak saf ürünün yeniden kristalizasyonu veya kromatografisi veya serbest birakilmasi araciligiyla yardimci maddeden ayrilmasi, (2) optik olarak aktif bir çözme ajani kullanilarak tuz olusumu, (3) kiral sivi kromatografik kolonlar üzerinde optik enantiyomerlerin karisiminin dogrudan ayrilmasi veya (4) steroselektif kimyasal veya enzimatik reaktifler kullanilarak kinetik çözünürlük ile örneklendirilir. Rasemik karisimlar ayrica, iyi bilinen yöntemler, örnegin kiraI-faz gaz kromatografisi veya bilesigin bir kiral solvent içinde kristalize edilmesi araciligiyla bunlarin bilesen enantiyomerleri içinde çözünebilir. Tek bir reaktifin yeni bir stereomerkez olusumu sirasinda veya önceden mevcut olan bir tanenin dönüsümü sirasinda stereoizomerlerin esit olmayan bir karisimini olusturdugu bir kimyasal veya enzimatik reaksiyon olan stereoselektif sentez, teknikte iyi bilinir. Stereoselektif sentez enantiyo- ve diastereoselektif dönüsümlerin her ikisini kapsar. Örnegin, bakiniz Carreira and Kvaerno, Classics in Stereoselective Synthesis, Wiley-VCH: Weinheim, 2009. Burada açiklanan bilesikler, su, etanol ve benzeri gibi farmasötik olarak kabul edilebilir solventler ile solvatli olmayan formlarin yani sira solvatli halde mevcut olabilir ve bulusun solvatli ve solvatli olmayan formlarin her ikisini kapsamasi amaçlanir. Bir düzenlemede bilesik amorftur. Bir düzenlemede bilesik tek bir polimorftur. Diger bir düzenlemede bilesik polimorflarin bir karisimidir. Diger bir düzenlemede bilesik bir kristalin formdadir. Bulus ayrica, bir veya daha fazla atomun genellikle dogada bulunan atomik kütle veya kütle numarasindan farkli olan bir atomik kütle veya kütle numarasina sahip olan bir atom ile degistirilmesi haricinde, burada belirtilenler ile ayni olan bulusun izotopik olarak etiketli bilesiklerini kapsar. Bulus bilesiklerine dahil edilebilen izotoplarin örnekleri sirasiyla, hidrojen, karbon, nitrojen, oksijen, fosfor, florin ve klorin, örnegin 2H, 3H, 130, 14C, 15N, 18O, 170, 31P, 32P, 358, 18F ve 36CI izotoplarini içerir. Örnegin bir bulus bilesigi, dötaryum ile degistirilen bir veya daha fazla H atomuna sahip olabilir. izotopik olarak etiketlenmis açiklanan belirli bilesikler (örnegin, 3H ve 14C ile etiketlenenler) bilesik ve/veya substrat dokusu dagilimi analizlerinde yararlidir. Tritiye (diger bir deyisle, 3H) ve karbon-14 (diger bir deyisle, 14C) izotoplar, hazirlanis kolayligi ve saptanabilirligi nedeniyle Özellikle tercih edilir. Ayrica, dötaryum (diger bir deyisle, 2H) gibi daha agir izotoplar ile sübstitüsyon, daha fazla metabolik stabiliteden (Örnegin, artmis in vivo yari-ömür veya azalmis dozaj gereksinimleri) kaynaklanan belirli terapötik avantajlar saglayabilir ve dolayisiyla bazi durumlarda tercih edilebilir. Bulusun izotopik olarak etiketlenmis bilesikleri genellikle, izotopik olarak etiketlenmemis bir reaktife yönelik izotopik olarak etiketlenmis bir reaktifin sübstitüe edilmesi araciligiyla örnegin, burada Örneklerde açiklananlar ile benzer prosedürler izlenerek hazirlanabilir. "Ön ilaç" terimi açiklanan bir bilesigi veya bunun farmasötik olarak kabul edilebilir bir tuzu, hidrati veya solvatini vermek üzere in vivo olarak dönüstürülen bilesiklere refere eder. Dönüsüm çesitli konumlarda (örnegin bagirsak lümeninde veya bagirsak, kari veya karaciger geçisi üzerinde) çesitli mekanizmalar (örnegin esteraz, amidaz, fosfataz, oksidatif ve veya indirgeyici metabolizma) araciligiyla meydana gelebilir. Ön ilaçlar teknikte iyi bilinir (örnegin, bakiniz Rautio, Kumpulainen, et al, Nature Reviews Drug Discovery 2008, 7, 255). Örnegin bir bulus bilesiginin veya bilesigin farmasötik olarak kabul edilebilir bir tuzu, hidrati veya solvatinin bir karboksilik asit fonksiyonel grubu içermesi halinde, bir ön ilaç (Ci-Cg)alkil, (Cz-C12)alkanoiloksimetil, 4 ila 9 karbon atomuna sahip 1-(alkan0il0ksi)etil, 5 ila 10 karbon atomuna sahip 1-metiI-1- (alkanoiloksi)-etil, 3 ila 6 karbon atomuna sahip alkoksikarboniloksimetil, 4 ila 7 karbon atomuna sahip 1-(alkoksikarboniloksi)etil, 5 ila 8 karbon atomuna sahip 1-metiI-1- (alkoksikarboniloksi)etil, 3 ila 9 karbon atomuna sahip N-(alkoksikarbonil)amin0metil, 4 ila 10 karbon atomuna sahip 1-(N-(alkoksikarbonil)amino)etil, 3-ftalidil, 4- krotonolaktonil, gama-bütirolakton-4-il, di-N,N-(01-C2)alkilamino(Cz-C3)alkil (örnegin [3- dimetilaminoetil), karbamoiI-(Ci-Cz)alkil, N,N-di(Cl-Cz)alkilkarbamoiI-(C1-C2)alkil ve piperidino-, pirolidino- veya morfolino(Cz-Cg)alkil gibi bir grup ile asit grubunun hidrojen atomunun degistirilmesi araciligiyla olusturulan bir ester içerebilir. Benzer bir sekilde bir bulus bilesiginin, bir alkol fonksiyonel grubu içermesi halinde, bir ön ilaç (C1-Cdalkanoiloksimetil, 1-((C1-Cs)alkanoiloksi)etil, 1-metiI-1-((Ci- Cs)alkanoiloksi)etil (Ci-C5)alkoksikarboniIoksimetil, N-(Ci-Cs)alk0ksikarbonilaminometil, süksinoil, (Ci-Ce)alkanoil, d-amino(Ci-C4)alkanoil, arilasil ve o-aminoasil veya o- aminoasiI-oi-aminoasil gibi bir grup ile alkol grubunun hidrojen atomunun degistirilmesi araciligiyla olusturulabilir, burada her bir d-aminoasil grubu bagimsiz olarak dogal olusumlu L-amino asitler, P(O)(OH)2, -P(O)(O(Ci-Ce)alkil)2 veya glikozilden (bir karbohidratin hemiasetal formunun bir hidroksil grubunun uzaklastirilmasindan kaynaklanan radikal) seçilir. Bir bulus bilesiginin bir amin fonksiyonel grubunu içermesi halinde, bir ön ilaç, örnegin, bir amid veya karbamat, bir N-asiloksiakil derivesi, bir (oksodioksolenil)metil derivesi, bir N-Mannich bazi, imin veya enamin olusumu araciligiyla olusturulabilir. Ek olarak bir sekonder amin, bir biyoaktif primer amin olusturmak üzere metabolik olarak klevaj edilebilir veya bir tersiyer amin, bir biyoaktif primer veya sekonder amin olusturmak Üzere metabolik olarak klevaj edilebilir Örnegin, bakiniz Simplicio, et al., Molecules 2008, 13, 519 ve buradaki referanslar. Bilesikler Açiklanan bilesikler, asagidaki formül ile temsil edilenleri ve bunun farmasötik olarak kabul edilebilir tuzlari, stereoizomerleri ve N-oksitlerini içerir: 2 R R, R3` R5 i N R1 R1 "5 0 N R3 O R6 (1) burada Rb H, halojen, hidroksil, siyano ve Ci-Ce alkilden (örnegin, H) olusan gruptan seçilir; R1 H veya Ci-Cs alkildir; R2 H veya C1-Cs alkildir; R3 H, C1-Cs alkil ve bir nitrojen koruma grubundan olusan gruptan seçilir; burada nitrojen koruma grubu, 9-florenilmetiloksikarbonil, tert-bütoksikarbonil, karbobenziloksikarbonil, p-metoksibenziloksikarbonil, asetil, trifloroasetil, benzoil, benzil, p-metoksibenzil, p-metoksifenil, 3,4-dimetoksibenzil, trifenilmetil, p- tolüensülfonil, -C(O)OR31 ve -C(O)R32"den olusan gruptan seçilir; burada R31, C1-Ca alkil, Ci-Cs haloalkil, Cz-Ce alkenil, Cz-Ce alkinil, Ca-Cio sikloalkil, -CHz-Cs-Cm sikloalkil, -CHg-fenil ve -CH2-piridilden olusan gruptan seçilir, burada yukarida bahsedilen herhangi bir sikloalkil istege bagli olarak, 1-3 bagimsiz olarak seçilen 01-03 alkil ile sübstitüe edilir ve burada fenil istege bagli olarak, bagimsiz olarak C1-C3 alkil, C1-C3 haloalkil, 01-03 alkoksi, 01-03 haloalkoksi, nitro, halo, SOzMe, siyano ve - OC(O)CH3"ten seçilen 1-2 sübstitüent ile sübstitüe edilir; R32, H, Ci-Cs alkil, Ci-Ce haloalkil, fenil ve piridilden olusan gruptan seçilir, burada fenil istege bagli olarak, bagimsiz olarak 01-03 alkil, C1-Cs haloalkil, C1-C3 alkoksi, C1-C3 haloalkoksi, nitro, halo, SOzMe, siyano ve -OC(O)CH3'ten seçilen 1-2 sübstitüent ile sübstitüe edilir; R4 ve Rs"in her biri bagimsiz olarak H, Ci-Cs alkil, X ve -Ci-Ce alkilen-X'den olusan gruptan seçilir, burada X asagidaki unsurlardan olusan gruptan seçilir: (i) C3-Cs sikloalkil; (ii) 5 ila 6 halka atomu içeren heteroaril, burada halka atomlarinin 1'i, 2'si veya 3'ü bagimsiz olarak N, NH, N(Ci-C3 alkil), O ve S'den olusan gruptan seçilir; (ii) 3 ila 6 halka atomu içeren heterosiklil, burada halka atomlarinin 1'i, 2'si veya 3'ü bagimsiz olarak N, NH, N(Ci-Cei alkil), O ve S"den olusan gruptan seçilir; (iv) fenil; burada Cs-Cs sikloalkil and heterosiklilin her biri istege bagli olarak, bagimsiz olarak halojen, siyano, okso, Ci-Ce alkil, hidroksil, C1-Ce alkoksi ve N(R')R"den olusan gruptan seçilen 1-3 sübstitüent ile sübstitüe edilir; ve heteroaril ve fenilin her biri istege bagli olarak, bagimsiz olarak halojen, siyano, Ci-Cs alkil, hidroksil, 01-05 alkoksi ve - N(R')R"den olusan gruptan seçilen 1-3 sübstitüent ile sübstitüe edilir; veya R4 ve R5 baglandiklari nitrojen ile birlikte asagidakileri olusturur: 4 ila 6 halka atomu içeren heterosiklil; burada heterosiklil, en fazla iki halka heteroatomu (R4 ve Rs'e baglanan nitrojen atomu dahil olarak) içerir ve ikinci halka heteroatomu, mevcut oldugunda, bagimsiz olarak N, NH, N(Ci-Ca alkil), O ve S'den olusan gruptan seçilir; ve burada heterosiklil istege bagli olarak, bagimsiz olarak halojen, siyano, okso, C1-C6 alkil, hidroksil, C1-Ce alkoksi ve -N(R')R"den olusan gruptan seçilen 1-3 sübstitüent ile sübstitüe edilir; veya ila 6 halka atomu içeren heteroaril; burada heteroaril, en fazla dört halka heteroatomu (R4 ve Rs'e baglanan nitrojen atomu dahil olarak) içerir ve ek halka heteroatomuri her biri, mevcut oldugunda, bagimsiz olarak N, NH, N(C1-Ca alkil), O ve S olusan gruptan seçilir; ve burada heteroaril istege bagli olarak, bagimsiz olarak halojen, siyano, C1-Ca alkil, hidroksil, C1-Ce alkoksi ve -N(R')R"den olusan gruptan seçilen 1-3 sübstitüent ile sübstitüe edilir; Rs, -OH, C1-Cs alkoksi, -OC(O)-C1-C6 alkiI,-OC(O)feniI ve -N(R')R"den olusan gruptan seçilir; R' her görülmesine yönelik bagimsiz olarak H ve 01-06 alkilden seçilir; ve R7 H veya C1-Cs alkildir. Bazi düzenlemelerde R1, H`dir. Diger düzenlemelerde R1, 01-05 alkil, örnegin, CH3'tür. Bazi düzenlemelerde R2, H`dir. Diger düzenlemelerde R2, C1-Cs alkil, örnegin, CH3'tür. Bazi düzenlemelerde R3, H`dir. Bazi düzenlemelerde R3, bir nitrojen koruma grubudur. Bazi düzenlemelerde R3, - C(O)OR31 formülüne sahiptir, burada R31 asagidaki unsurlardan olusan gruptan seçilir: C1-Cs alkil; C1-C3 haloalkil; Cz-Cs alkenil; Cz-Ce alkinil; Cs-Cm sikloalkil, burada 03-010 sikloalkil istege bagli olarak, bagimsiz olarak seçilen 1-3 C1-C3 alkil; -CHz-Cg-Cm sikloalkil ile sübstitüe edilir, burada 03-010 sikloalkil istege bagli olarak, bagimsiz olarak seçilen 1-3 C1-03 alkil ile sübstitüe edilir, -CHz-fenil, burada fenil istege bagli olarak, bagimsiz olarak C1-Ca alkil, 01-03 haloalkil, 01-03 alkoksi, C1-Cs haloalkoksi, nitro, halo, SOzMe, siyano ve -OC(O)CH3'ten seçilen 1-2 sübstitüent ile sübstitüe edilir; ve -CH2- piridil. Belirli düzenlemelerde R31, C1-Cs alkildir (örnegin, tert-bütil). Diger düzenlemelerde R3, C(O)R32 formülüne sahiptir, burada R32 asagidaki unsurlardan olusan gruptan seçilir: H; C1-Cs alkil; C1-Cs haloalkil; fenil, burada fenil istege bagli olarak, bagimsiz olarak 01-03 alkilden seçilen 1-2 sübstitüent ile sübstitüe edilir; 01-03 haloalkil; C1-C3 alkoksi; C1-C3 haloalkoksi; nitro; halo; 802MB. siyano; ve -OC(O)CH3; ve piridil. Belirli düzenlemelerde R32, C1-Cs alkildir (örnegin, -CH3 veya i'so-propil). Bazi düzenlemelerde R4 ve R5'in her biri bagimsiz olarak, H, 01-05 alkil, X ve -C1-Cs alkilen-X'ten olusan gruptan seçilir. Belirli düzenlemelerde R4 ve R5'in her biri bagimsiz olarak, H ve C1-C5 alkilden olusan gruptan seçilir. Diger düzenlemelerde R4 ve R5'in her biri bagimsiz olarak, H ve -C1-C5 alkilen-X'ten olusan gruptan seçilir. Belirli düzenlemelerde R4 ve R5, Hidir. Diger düzenlemelerde R4 ve R5"ten biri H'dir ve digeri - 01-05 alkilen-X"tir. Bu düzenlemelerden belirli olanlarinda, bilesikler asagidaki özelliklerden bir veya her ikisini (örnegin, her ikisini) içerebilir: (i) -C1-Cs alkilen-X, -CH2- X'tir; ve (ii) X, 5 ila 6 halka atomu içeren heteroaril veya fenildir, burada halka atomlarindan 1'i, 2'si veya 3 'ü bagimsiz olarak, N, NH, N(Cl-CS alkil), O ve S'den olusan gruptan seçilir; her biri istege bagli olarak, bagimsiz olarak halojen, siyano, C1- C5 alkil, hidroksil, 01-05 alkoksi ve -N(R')R"den olusan gruptan seçilen 1-3 sübstitüent ile sübstitüe edilir. Diger düzenlemelerde birlikte alinan R4 ve R5, daha önce ve burada herhangi bir yerde tanimlandigi üzere bir heterosiklik veya heteroaril halka olusturur. Belirli düzenlemelerde birlikte alinan R4 ve R5, örnegin, azetidinil, pirolidinil, pirazolidinil, izooksazolidinil, imidazolidinil, oksazolidinil, tiyazolidinil ve izotiyazolidinilden olusan gruptan seçilen bir halka ile bir heterosiklik halka olusturur. Belirli bir düzenlemede birlikte alinan R4 ve R5, bir pirolidinil halka olusturur. Belirli düzenlemelerde birlikte alinan R4 ve R5, örnegin, imidazolil, pirazolil, oksazolil, izoksazolil, tiyazolil, piridinil, diazinil, oksazinil ve tiyazinilden olusan gruptan seçilen bir halka ile bir heteroaril halka olusturur. Bazi düzenlemelerde R1 H'dir; R2 H`dir; R3 H'dir; ve birlikte alinan R4 ve R5 bir pirolidin halka olusturur. Bazi düzenlemelerde R1 H`dir; R2 H'dir; R3 H'dir; ve R4 ve R5 H"dir. Bazi düzenlemelerde R1 H veya CHg'tür; R2 H veya CHg'tür; R3 H'dir; ve birlikte alinan R4 ve R5 bir pirolidinil halka olusturur. Bazi düzenlemelerde R1, H veya CH3"tür; R2, H veya CH3`tür; R3 Hldir; ve R4 ve R5 H'dir. Bazi düzenlemelerde R1, H veya CHg'tür; R2, H veya CHg'tür; R3 H'dir; ve R4 ve R5"ten biri H'dir ve digeri -CH2-X'tir, burada X 5 ila 6 halka atomu içeren heteroaril veya fenildir, burada halka atomlarindan 1'i, 2,SI veya 3 'ü bagimsiz olarak, N, NH, N(C1-C3 alkil), O ve S`den olusan gruptan seçilir; her biri istege bagli olarak, bagimsiz olarak halojen, siyano, C1-Cs alkil, hidroksil, C1-Cs alkoksi ve -N(R')R"den olusan gruptan seçilen 1-3 sübstitüent ile sübstitüe edilir. Bazi düzenlemelerde R1 H veya CH3`tür; R2, H veya CHg'tür; R3 nitrojen koruma grubudur (örnegin, -C(O)OR31 veya -C(O)R32); ve birlikte alinan R4 ve R5 bir pirolidinil halka olusturur. Bazi düzenlemelerde R1 H veya CHg'tür; R2, H veya CHg'tür; R3 nitrojen koruma grubudur (örnegin, -C(O)OR31 veya -C(O)R32); ve R4 ve R5 H'dir. Bazi düzenlemelerde R1, H veya CHa'tür; R2, H veya CHa'tür; R3 -nitrojen koruma grubudur (örnegin, -C(O)OR31 veya -C(O)R32); ve R4 ve Rs"ten biri H'dir ve digeri -CHz-X"tir, burada X 5 ila 6 halka atomu içeren heteroaril veya fenildir, burada halka atomlarindan 1'i, 2"si veya 3 "ü bagimsiz olarak, N, NH, N(C1-03 alkil), O ve S'den olusan gruptan seçilir; her biri istege bagli olarak, bagimsiz olarak halojen, siyano, Ci-Cs alkil, hidroksil, C1-Ce alkoksi ve -N(R')R"den olusan gruptan seçilen 1-3 sübstitüent ile sübstitüe edilir. Bazi düzenlemelerde (yukarida açiklanan önceki düzenlemelerden herhangi bir dahil olmak üzere) R5, -OH, Ci-Ce alkoksi, -OC(O)-Ci-Cs alkil ve -OC(O)feniIden olusan gruptan seçilir. Belirli düzenlemelerde (yukarida açiklanan önceki düzenlemelerden herhangi bir dahil olmak üzere) Rs, -OH'dir. Diger düzenlemelerde (yukarida açiklanan önceki düzenlemelerden herhangi bir dahil olmak üzere) Rs, -NH2'dir. Bazi düzenlemelerde (yukarida açiklanan önceki düzenlemelerden herhangi bir dahil olmak üzere) R7, C1-C3 alkil, örnegin, CHg'tür. Bazi düzenlemelerde (yukarida açiklanan önceki düzenlemelerden herhangi bir dahil olmak üzere) Re, -OH veya -NHz'dir ve R7, Ci-Cs alkil, örnegin, CHs'tür. Bazi düzenlemelerde (yukarida açiklanan önceki düzenlemelerden herhangi bir dahil olmak üzere) Rb, H'dir. Bazi düzenlemelerde bilesik, Tablo 1'de ve/veya Örneklerde tanimlanan bilesiklerden seçilir. Belirli düzenlemelerde açiklanan bir bilesik, asagidaki formüle sahip olani içerir: 0 O NH2 NHZ 0 N N N N N N OH N OH H G H 0 ` H 0 0 OH A veya Mevcut tarifname bilesikleri ve bunlarin formülasyonlari birçok kiral merkeze sahip olabilir. Her bir kiral merkez bagimsiz olarak R, 8 veya R ve S*nin herhangi bir karisimi olabilir. Örnegin, bazi düzenlemelerde bir kiral merkez, yaklasik 10020 ile yaklasik 50:50 arasinda, yaklasik 10020 ile yaklasik 75:25 arasinda, yaklasik 10020 ile yaklasik 85:15 arasinda, yaklasik 10020 ile yaklasik 90:10 arasinda, yaklasik 10020 ile yaklasik 9525 arasinda, yaklasik 100:0 ile yaklasik 982 arasinda, yaklasik 100:0 ile yaklasik 99:1 arasinda, yaklasik 0:100 ile 50:50 arasinda, yaklasik 0:100 ile yaklasik 25:75 arasinda, yaklasik 0:100 ile yaklasik 15:85 arasinda, yaklasik 0:100 ile yaklasik 10:90 arasinda, yaklasik 0:100 ile yaklasik 5:95 arasinda, yaklasik 0:100 ile yaklasik 2:98 arasinda, yaklasik 0:100 ile yaklasik 1:99 arasinda, yaklasik 75:25 ile 25:75 arasinda ve yaklasik 50:50 bir R:S oranina sahip olabilir. Bir veya daha fazla izomerin (diger bir deyisle, R ve/veya 8) daha büyük bir oranini içeren açiklanan bilesiklerin formülasyonlari, açiklanan bilesikler veya bilesiklerin karisimdan olusan rasemik formülasyonlara göre artmis terapötik karakteristige sahip olabilir. Bazi durumlarda kimyasal formüller, ayrica düz kama veya kesikli kamaya bagli "-(R)-" veya "-(S)-" tanimlayiciyi içerir. Bu tanimlayicinin, diger üç sübstitüente bagli ve gösterilen R veya 8 konfigürasyonuna sahip olan bir metin karbonu (CH) göstermesi amaçlanir (bakiniz, örnegin, Tablo 1). Açiklanan bilesikler, NMDA reseptöründe etkili katyon kanali açilmasini saglayabilir, örnegin katyon kanalinin açilmasina yardimci olmak üzere NMDA reseptörünün glutamat alani ile baglanabilir veya iliskili olabilir. Açiklanan bilesikler, bir agonist olarak etki araciligiyla NMDA reseptörünü düzenlemek (açmak veya kapatmak) üzere kullanilabilir. Burada açiklandigi üzere bilesikler, glisin alani NMDA reseptörü kismi agonistleri olabilir. Bu baglamda kullanildigi üzere bir kismi agonistin, düsük bir konsantrasyonda analogun bir agonist olarak etki ettigi ve yüksek bir konsantrasyonda analogun bir antagonist olarak etki ettigi anlamina geldigi anlasilacaktir. Glisin baglama glutamat veya glutamatin rakip inhibitörleri tarafindan inhibe edilmez ve ayrica NMDA reseptöründe glutamat ile ayni alanda baglanmaz. Glisine yönelik ikinci ve ayri bir baglanma alani, NMDA reseptöründe mevcuttur. NMDA reseptörünün Iigand kapili iyon kanali, böylece, en az bu iki ayri allosterik alanin kontrolü altindadir. Açiklanan bilesikler, MDA reseptörünün glisin baglama alanina baglanabilir veya bunun ile iliskili olabilir. Bazi düzenlemelerde açiklanan bilesikler, mevcut olan NMDA reseptörü glisin alani kismi agonistlerinden 10 kat veya bundan daha fazla bir potansiye sahip olabilir. Açiklanan bilesikler yüksek bir terapötik indeks sergileyebilir. Burada kullanildigi üzere, terapötik indeks, popülasyonun %50'sinde bir toksisite olusturan dozun (diger bir deyisle, TDso), popülasyonun %50`sine yönelik minimum etkili doza (diger bir deyisle, EDso) oranina refere eder. Böylece, terapötik indeks = (TD50):(ED50) seklindedir. Bazi düzenlemelerde açiklanan bir bilesik, en az yaklasik 1021, en az yaklasik 50:1, en az yaklasik 100:1, en az yaklasik 200:1, en az yaklasik 500:1 veya en az yaklasik 1000:1 olan bir terapötik indekse sahip olabilir. Bilesimler Diger açilarda, açiklanan bilesikleri ve istege bagli olarak farmasötik olarak kabul edilebilir bir eksipiyani içeren formülasyonlar ve bilesimler saglanir. Bazi düzenlemelerde tasarlanan bir formülasyon, açiklanan bilesiklerin bir veya daha fazlasinin bir rasemik karisimini içerir. Tasarlanan formülasyonlar kullanima yönelik birçok formdan herhangi biri halinde hazirlanabilir. Örnek yoluyla ve sinirlama olmaksizin, bilesikler oral uygulamaya, subkütanöz enjeksiyona veya bir aktif ajanin bir hayvana uygulanmasina yönelik farmasötik teknikte bilinen diger yöntemlere yönelik uygun bir formülasyonda hazirlanabilir. Bir formülasyon içinde, burada açiklandigi üzere açiklanan bir bilesigin miktarlari, hastalik durumu, bireyin yasi, cinsiyeti ve kilosu gibi faktörlere göre degisiklik gösterebilir. Dozaj rejimleri optimum terapötik yaniti saglamak üzere ayarlanabilir. Örnegin, tek bir bolus uygulanabilir, birkaç bölünmüs doz zamanla uygulanabilir veya doz, terapötik durumun gerekliligi ile belirtildigi üzere orantili olarak azaltilabilir veya artirilabilir. Uygulama kolayligi ve dozajin homojenligine yönelik olarak, dozaj birimi formunda parenteral bilesimleri formüle etmek için bu özellikle avantajlidir. Burada kullanildigi üzere dozaj birimi formu, tedavi edilecek olan memeli öznelere yönelik birimsel dozajlar olarak uygun fiziksel olarak ayri birimlere refere eder; her bir birim gerekli farmasötik tasiyici ile iliskili olarak istenen terapötik etkiyi olusturmak üzere hesaplanan, aktif bilesigin önceden belirlenmis bir miktarini içerir. Bulusun dozaj birimi formlarina yönelik spesifikasyon, (a) seçilen bilesigin özgün karakteristikleri ve elde edilecek belirli terapötik etki ve (b) bireylerdeki duyarlilik tedavisine yönelik bu tür bir aktif bilesigin hazirlanma tekniginin dogasinda olan sinirlamalar ile belirlenir ve dogrudan bunlara baglidir. Terapötik bilesimler tipik olarak üretim ve saklama kosullari altinda steril ve stabil olmalidir. Bilesim bir solüsyon, mikroemülsiyon, lipozom veya yüksek ilaç konsantrasyonuna uygun istenen diger yapi olarak formüle edilebilir. Tasiyici, örnegin su, etanol, poliol (örnegin gliserol, propilen glikol ve sivi polietilen glikol ve benzeri) ve bunlarin uygun karisimlarini içeren bir dispersiyon ortami veya solvent olabilir. Uygun akiskanlik, örnegin, Iesitin gibi bir kaplamanin kullanimi, dispersiyon durumunda gerekli partikül boyutunun muhafaza edilmesi ve sürfaktanlarin kullanimi araciligiyla muhafaza edilebilir. Birçok durumda, örnegin, sekerler, polialkoller, örnegin mannitol, sorbitol veya sodyum klorid gibi izotonik ajanlarin bilesime dahil edilmesi tercih edilecektir. Enjekte edilebilir bilesimlerin uzun süreli absorpsiyonu, bilesime, örnegin monostearat tuzlari ve jelatin gibi absorpsiyonu geciktiren bir ajanin dahil edilmesi araciligiyla gerçeklesti rilebilir. Bilesikler, örnegin yavas salimli bir polimer içeren bir bilesim içinde zamanla salinan bir formülasyonda uygulanabilir. Bilesikler, implantlar ve mikrokapsüllenmis dagitim sistemleri dahil olmak üzere, bir kontrollü salim formülasyonu gibi hizli salima karsi bilesikleri koruyacak tasiyicilar ile hazirlanabilir. Etilen vinil asetat, polianhidritler, poliglikolik asit, kolajen, poliortoesterler, polilaktik asit ve polilaktik, poliglikolik kopolimerler (PLG) gibi biyoçözünür, biyouyumlu polimerler kullanilabilir. Bu tür formülasyonlarin hazirlanisina yönelik birçok yöntem, genellikle teknikte uzman kisilerce bilinir. Steril enjekte edilebilir solüsyonlar, gerekli oldugu üzere, yukarida siralanan içerik maddelerinden biri veya bir kombinasyonu ile uygun bir solvent içine bilesigin gerekli miktarda eklenmesi, akabinde filtreli sterilizasyon araciligiyla hazirlanabilir. Genellikle dispersiyonlar, aktif bilesigin yukarida siralananlar arasindan gerekli diger içerik maddelerini ve bazik bir dispersiyon ortamini içeren steril bir araca eklenmesi ile hazirlanir. Steril enjekte edilebilir solüsyonlarin hazirlanisina yönelik steril tozlar durumunda, tercih edilen hazirlanis yöntemleri, aktif içerik maddesinin bir tozunu ve bunun daha önce steril sekilde filtrelenmis bir solüsyonundan istenen herhangi bir ek içerik maddesini veren vakumla kurutma ve dondurarak kurutmadir. Bulusun alternatif bir açisina göre bir bilesik, bilesigin çözünürlügünü artiran bir veya daha fazla ek bilesik ile formüle edilebilir. Yöntemler Burada açiklanan bir bilesigin terapötik olarak etkili bir dozunun uygulanmasi araciligiyla buna gereksinim duyan bir hastadaki bir durumun tedavi edilmesine yönelik yöntemler açiklanir. Durum, mental bir durum olabilir. Örnegin, bir mental hastalik tedavi edilebilir. Bir sinir sistemi durumu tedavi edilebilir. Örnegin, merkezi sinir sistemini, periferik sinir sistemini ve/veya gözü etkileyen bir durum tedavi edilebilir. Nörodejeneratif hastaliklar tedavi edilebilir. Yöntemler, otizm, anksiyete, depresyon, bipolar bozukluk, dikkat eksikligi bozuklugu, dikkat eksikligi hiperaktivite bozuklugu (ADHD), sizofreni, psikotik bir rahatsizlik, psikotik bir semptom, sosyal geri çekilme, obsesif kompülsif bozukluk (OCD), fobi, travma sonrasi stres sendromu, bir davranis bozuklugu, impulsif bir kontrol bozuklugu, bir madde kötüye kullanimi bozuklugu (ömegin, bir geri çekilme semptomu, opiat bagimliligi, nikotin bagimliligi ve etanol bagimliligi), bir uyku bozuklugu, bir hafiza bozuklugu (örnegin, bir eksiklik, kayip veya yeni hatiralar olusturmaya dair azalan kabiliyet), bir ögrenme bozuklugu, idrar kaçirma, multipl sistem atrofisi, progresif supranükleer palsi, Friedrich ataksisi, Down sendromu, frajil x sendromu, tüberöz skleroz, olivio-ponto-serebellar atrofi, serebral palsi, ilaca bagli optik nörit, iskemik retinopati, diyabetik retinopati, glukom, demans, AIDS demans, Alzheimer hastaligi, Huntington hastaligi, spastisite, kas segirmesi, kas spazmi, Tourette sendromu, epilepsi, serebral iskemi, felç, bir beyin tümörü, travmatik beyin yaralanmasi, ani kalp durmasi, omurilik hastaligi, spinal kord hasarlanmasi, periferal nöropati, akut nöropatik agri ve kronik nöropatik agridan muzdarip hastalari tedavi etmek üzere bir bilesigin uygulanmasini içerir. Yaslanma, sizofreni, özel ögrenme bozukluklari, nöbetler, inme sonrasi konvülsiyonlar, beyin iskemisi, hipoglisemi, kardiyak arrest, epilepsi, migren, AIDS demansi, Huntington hastaligi, Parkinson hastaligi, erken evre Alzheimer hastaligi ve Alzheimer hastaligi ile iliskili bir hafiza bozuklugunun tedavi edilmesinin yöntemleri açiklanir. Sizofreninin tedavi edilmesine yönelik yöntemler açiklanir. Örnegin, paranoid tip sizofreni, düzensiz tip sizofreni, (diger bir deyisle, hebefrenik sizofreni), katatonik tip sizofreni, ayrismamis tip sizofreni, kalinti tip sizofreni, post-sizofrenik depresyon veya basit sizofreni, burada tasarlanan yöntemler ve bilesimler kullanilarak tedavi edilebilir. Psikotik rahatsizliklar ,örnegin sizoafektif rahatsizliklar, kuruntulu rahatsizliklar, kisa psikotik rahatsizliklar, paylasilmis psikotik rahatsizliklar ve kuruntular veya halüsinasyonlar ile psikotik rahatsizliklar ayrica burada tasarlanan yöntemler ve bilesimler kullanilarak tedavi edilebilir. Paranoid sizofreni, kuruntular ve isitsel halüsinasyonlarin mevcut oldugu, ancak düsünce bozuklugu, düzensiz davranis veya duygusal siglasmanin mevcut olmadigi durumda karakterize edilebilir. Kurutular eziyet verici ve/veya grandiyöz olabilir, ancak bunlara ek olarak kiskançlik, dinsellik veya somatizasyon gibi diger durumlar ayrica mevcut olabilir. Düzensiz tip sizofreni, düsünce bozuklugu ve tekdüze duygulanimin birlikte mevcut oldugu durumda karakterize edilebilir. Katatonik tip sizofreni, hastanin neredeyse hareketsiz oldugu veya ajite, amaçsiz hareket sergiledigi durumda karakterize edilebilir. Semptomlar katatonik stupor ve mumsu esnekligi içerebilir. Ayrismamis tip sizofreni, psikotik semptomlarin mevcut oldugu, ancak paranoid, düzensiz veya katatonik tiplere yönelik kriterlerin karsilanmadigi durumda karakterize edilebilir. Kalinti tip sizofreni, pozitif semptomlarin yalnizca düsük bir yogunlukta mevcut oldugu durumda karakterize edilebilir. Post-sizofrenik depresyon, bir depresif epizodun, düsük seviyede bazi sizofrenik semptomlarin hala mevcut olabildigi bir sizofrenik hastalik sonrasinda meydana geldigi durumda karakterize edilebilir. Basit sizofreni, herhangi bir psikotik epizod geçmisi olmadan belirgin negatif semptomlarin sinsi ve progresif gelisimi ile karakterize edilebilir. Yöntemler, bunlarla sinirli olmamak üzere, bipolar bozukluk, sinirda kisilik bozuklugu, ilaç zehirlenmesi ve ilaca bagli psikoz dahil olarak diger mental rahatsizliklarda mevcut olabilen psikotik semptomlarin tedavi edilmesine yönelik açiklanir. Örnegin, kuruntulu rahatsizlikta mevcut olabilen kuruntularin (tuhaf-olmayan) tedavi edilmesine yönelik yöntemler açiklanir. Ayrica, bunlarla sinirli olmamak üzere, sosyal anksiyete bozuklugu, kaçinmaci kisilik bozuklugu ve sizotipal kisilik bozuklugunu içeren durumlarda, sosyal geri çekilmenin tedavi edilmesine yönelik yöntemler açiklanir. Nöropatik agrinin tedavi edilmesine yönelik yöntemler açiklanir. Nöropatik agri akut veya kronik olabilir. Bazi durumlarda nöropatik agri, herpes, HIV, travmatik sinir hasari, inme, post-iskemi, fibromiyalji, refleks sempatik distrofi, kompleks bölgesel agri sendromu, spinal kord hasari, siyatik, fantom ekstremite agrisi, diyabetik nöropati ve kanser kemoterapötigine bagli nöropatik agri gibi bir durum ile iliskili olabilir. Agri giderimini artirmaya ve bir hastaya analjezi saglanmasina yönelik yöntemler ayrica açiklanir. Ayrica açiklanan yöntemler, buna gereksinim duyan bir hastada otizm ve/veya bir otizm spektrum bozuklugunun tedavi edilmesine yönelik, hastaya bir bilesigin etkili bir miktarinin uygulanmasini içeren bir yöntemi içerir. Buna gereksinim duyan bir hastada otizm semptomlarinin azaltilmasina yönelik, hastaya açiklanan bir bilesigin etkili bir miktarinin uygulanmasini içeren bir yöntem açiklanir. Örnegin, uygulama akabinde bilesik, göz temasindan kaçinma, sosyallesememe, dikkat eksikligi, düsük ruh hali, hiperaktivite, anormal ses hassasiyeti, uygunsuz konusma, bozulmus uyku ve perseverasyon gibi bir veya daha fazla otizm semptomunun görülme sikligini azaltabilir. Bu tür azalan görülme sikligi, tedavi edilmis birey veya tedavi edilmemis bir bireyde(bireylerde) görülme sikligina göre ölçülebilir. Burada ayrica, bir hücrenin burada açiklanan bir bilesigin etkili bir miktari ile temas ettirilmesini içeren, bir hücrede bir otizm hedef geni ifadesinin modüle edilmesinin bir yöntemi açiklanir. Otizm geni ifadesi, örnegin ABAT, APOE, CHRNA4, GABRA5,GFAP, GRIN2A, PDYN ve PENK arasindan seçilebilir. Sinaptik plastisite ile iliskili bir rahatsizliktan muzdarip olan bir hastada sinaptik plastisitenin modüle edilmesine dair, bir bilesigin etkili bir miktarinin hastaya uygulanmasini içeren bir yöntem açiklanir. Buna gereksinim duyan bir hastada, bir bilesigin uygulanmasini içeren, Alzheimer hastaliginin tedavi edilmesinin bir yöntemi veya örnegin, erken evre Alzheimer hastaligi beraberinde gelen, örnegin hafiza kaybinin tedavisi açiklanir. Ayrica burada, proteinin bir bilesigin etkili bir miktari ile temas ettirilmesi içeren, in-vitro veya in-vivo olarak (örnegin bir hücrede) bir Alzheimer amiloid proteininin (örnegin, beta amiloid peptid, örnegin izoform Aß1-42) modüle edilmesinin bir yöntemi açiklanir. Örnegin bir bilesik, bu tür amiloid proteininin apoptik nöral hücre ölümünün yani sira hipokampal kesitlerdeki uzun süreli potansiyalizasyonu inhibe etme kabiliyetini engelleyebilir. Açiklanan bir bilesik, buna gereksinim duyan bir Alzheimer hastasina nöropropektif özellikler saglayabilir, örnegin ileri evre Alzheimer ile iliskili nöronal hücre ölümü üzerinde terapötik bir etki saglayabilir. Burada açiklanan bir bilesigin uygulanmasini Içeren, depresyonun tedavi edilmesinin bir yöntemi açiklanir. Tedavi, davranis veya motor koordinasyonunu etkilemeden ve nöbet aktivitesini indüklemeden veya artirmadan depresyonu veya bir depresyon semptomunu hafifletebilir. Buna göre tedavi edilmesi beklenen örnek niteligindeki depresyon kosullari, bunlarla sinirli olmamak üzere, majör depresif bozukluk, distimik bozukluk, psikotik depresyon, dogum sonrasi depresyon, premenstrüal sendrom, premenstrüal disforik bozukluk, mevsimsel duygu durum bozuklugu (SAD), bipolar bozukluk (veya manik depresif bozukluk), mizaç bozuklugu ve kronik tibbi durumlar, örnegin kanser veya kronik agri, kemoterapi, kronik stres ve travma sonrasi stres bozukluklarindan kaynaklanan depresyonlari içerir. Ek olarak, herhangi bir depresyon formundan muzdarip olan hastalar çogu zaman anksiyeteye maruz kalir. Anksiyete ile iliskili çesitli semptomlar, digerlerinin yani sira korku, panik, kalp çarpintilari, nefes darligi, yorgunluk, mide bulantisi ve bas agrilarini içerir. Anksiyete veya bunun herhangi bir semptomu burada açiklandigi üzere bir bilesigin uygulanmasi araciligiyla tedavi edilebilir. Ayrica burada tedaviye dirençli hastalarda, örnegin en az bir veya en az iki diger bilesik veya terapötikten olusan uygun yollara yanit vermeyen ve/veya vermemis olan, bir mental veya merkezi sinir sistemi durumundan muzdarip hastalarda bir durumun tedavi edilmesinin yöntemleri açiklanir. Örnegin, burada a) istege bagli olarak hastanin tedaviye dirençli olarak tanimlanmasini ve b) söz konusu hastaya bir bilesigin etkili bir dozunun uygulanmasini içeren, tedaviye dirençli bir hastada depresyonun tedavi edilmesinin bir yöntemi açiklanir. Burada açiklanan bir bilesik bir hastanin akut tedavisine yönelik kullanilabilir. Örnegin bir bilesik, burada tasarlanan bir durumun belirli bir epizodunu (örnegin, siddetli bir epizod) tedavi etmek üzere bir hastaya uygulanabilir. Ayrica burada diger bir veya daha fazla aktif ajan ile kombinasyon halinde bir bilesigi içeren kombinasyon terapileri tasarlanir. Örnegin bir bilesik, trisiklik antidepresanlar, MAO-l'lar, SSRI'Iar ve ikili ve üçlü alim inhibitörleri ve/veya anksiyolitik ilaçlar gibi bir veya daha fazla antidepresan ile kombine edilebilir. Bir bilesik ile kombinasyon halinde kullanilabilen örnek niteligindeki ilaçlar Anafranil, Adapin, Aventyl, Elavil, Norpramin, Pamelor, Pertofrane, Sinequan, Surmontil, Tofranil, Vivactil, Parnate, Nardil, Marplan, Celexa, Lexapro, Luvox, Paxil, Prozac, Zoloft, Wellbutrin, Effexor, Remeron, Cymbalta, Desyrel (trazodon) ve Ludiomill'i içerir. Diger bir örnekte. bir bilesik bir antipsikotik ilaç ile kombine edilebilir. Antipsikotiklerin sinirlandirici olmayan örnekleri, bütirofenonlar, fenotiyazinler, tiyoksanten, klozapin, olanzapin, risperidon, kuetiapin, ziprasidon, amisülprid, azenapin, paliperidon, iloperidon, zotepin, sertindol, Iurasidon ve aripiprazolü içerir. Bir bilesik ve yukaridaki terapötiklerden bir veya daha fazlasinin kombinasyOnlarinin, uygun herhangi bir durumun tedavisine yönelik kullanilabilecegi ve antidepresanlar veya antipsikotikler olarak kullanim ile sinirli olmadigi anlasilmalidir. ÖRNEKLER Asagidaki örnekler açiklayici amaçlara yönelik saglanir. Asagidaki Tablo 1, tarifnamenin örnek niteligindeki bazi bilesiklerini gösterir ve bilesiklerin fizikokimyasal karakteristiklerini saglar. Bilesik 28-FNL-5 bir referans bilesik olarak gösterilir. Tablo 1. Bilesik Yapi Moleküler cLogP tPSA Agirlik (Da) Bilesik X 227 -1.94 96.7 Hac OH N u NH2 H 0 o Bilesik Y 213 -2.36 96.7 0 «zîNHz N H 0 Bilesik Z 281 -1.09 72.9 Bilesik 28-19 28-20 28-21 28-24 28-27 Yapi »i [i tu.. Hgi (H. CHS :m : 1.." sunun/,îgg !J __g I: ,IP ;9: ' 27 Moleküler Agirlik (Da) 423.5032 381.4665 341.4027 395.4931 395.4931 cLogP tPSA 0.634639 96.46 0.193514 90.39 -0.243061 113.17 0.610089 90.39 0.610089 90.39 28 Bilesik Yapi Moleküler cLogP tPSA Agirlik (Da) ÜN c ra' Hz m( ,_ "i-k \ . / xy' 'Fta` "Im" /\ \ we', HF `11** \ 'J` 0._ ,' 'i' CH& "u ` ii. _Ami-K 28-30 409.5197 1.02666 90.39 28-8 383.4824 0.808343 99.18 28-9 395.4931 0.789186 99.18 2S-FNL-1O 417.4986 1.28851 99.18 ?4: :nu-AÇ" /' \ __ iii . . ,. 'Y ` I 5 -g Bilesik 2S-FNL-11 2S-FNL-12 28-FNL-13 28-FNL-14 23-FNL-15 Yapi Moleküler Agwhk(Da) 317.3828 359.4195 387.4727 4094369 4094369 cLogP 0.005320 27 -0.384737 0.858785 -0.960294 -1 .65688 tPSA 81.67 89.95 89.95 138.1 138.1 Bilesik 2S-FNL-16 28-FNL-17 28-FNL-18 2S-FNL-19 28-FNL-2 2S-FNL-20 Yapi 0-. / "1 I '(8) "I .` î mum`` Ã` H "Fr< N' _.1 r G& H F 7[ . "ci-i, . mc Moleküler Agwhk(Da) 423.3444 361.3956 419.4748 433.3823 327.3761 389.4488 cLogP -2.94007 -1.88186 -0.35934 -1.6029 -0.659636 -0.696233 tPSA 120.59 115.73 124.96 107.45 113.17 115.73 31 Bilesik Yapi 1" Al C` #I'll-7A? M c "3: ,Çig-**vê ,u (Lg. isi-1:31 lif' -bgF'JiFii "q -.._\ `r Hi," ,92) \'.__J 28-FNL-21 (SJ-im H//j \ Hâ'r-J __< `\" HM 28-FNL-22, 28-16 "i" mc Açilis. ijioxît/JU . i` \.1 H i" › _M 1 ""19 mm: :NU 2S-FNL-23 Ö* '9;` 2S-FNL-24 LI" / J ::r "lüx fx 28-FNL-25 Moleküler Agirlik (Da) 213.2337 3133495 4054482 305.3324 375.4222 cLogP -2.3594 -1.07621 -0.769835 -2.01339 -1 .10673 tPSA 95.66 113.17 124.96 107.45 115.73 Bilesik Yapi Moleküler cLogP tPSA Agirlik (Da) af" iiic. ~ \,_. &7% 515:/ T`i ;iki ..1. :hkk HMI?' 28-FNL-26 281.350? 4.08968 72.88 Ü N , N' 6 :Tas r-i" /j 2)_ \ \ _ ' H-'th'R'i i HM` `cay 23 28-FNL-27 359.848 -0.648554 78.95 H( Ü «m .L '- / %Ü\ I_N"'\w.] U ÜD-QQ HC! HS." «N G J 1" HH` `ar 28-FNL-28 241.2869 -1.52625 95.66 0 H3C --rm 28-FNL-29 433.5013 0.051154 124.96 .."à 4 ç-'Njgé u, ;Is-J". " 7. \ . 1).? . "Lâ 28-FNL-3 2272603 -1 .94283 95.66 Bilesik 28-FNL-3O 2S-FNL-31 2S-FNL-32 28-FNL-33 2S-FNL-34 Yapi #71? :5: H !L /L` Hal_ i'SJ / !I t-Mi n .-.x I"Cil l 1 S,.- `H` v.." "s, «i "n f" , 1;.` \r__.u-c \... , &mg "`21 ot_ /Lhâ ,i-'n' ,SJ I "0. vr) ..1.21 var g" G; M. _: "1 I 5 "%...J H i) i... (R) mama& CH: / . 'x _ ,, q'iv) -- 1 .N " \ Ö - i_\ 0 o r Ha( . `n mi: 77/ M A 1-& 1;. s: ;4 G cn, Moleküler cLogP tPSA Agirlik (Da) 333.3855 -1.1924 107.45 403.4754 -0.285738 115.73 295.3773 -0.673104 72.88 341402? -0.243061 113.17 241.2869 -1.52625 95.66 34 Bilesik Yapi Moleküler cLogP tPSA Agirlik (Da) 28-FNL-35 295.3773 -0.673104 72.88 ;N ..J-.â /N /. ,gg-.N à 1 I "\I« HC! '-593 \ ll CH. C H I 0 2S-FNL-36 355.4293 0.173514 113.17 28-FNL-37 255.3134 -1.10968 95.66 28-FNL-38 309.4039 -0.256529 72.88 ::S-2x: Ho ...59; T] tir-i x cv.. ci -FNL-4 297.3501 -1 .08936 103.94 Bilesik 28-FNL-5 28-FNL-6 2S-FNL-7 28-FNL-8 28-FNL-9 Yapi Moleküler Agirlik (Da) 4264689 3263913 262.736 397.3899 ;je r:: 'x . . I w: ` ::i , 15'i" _'4 `L`, l` \ _3 "M/ 409.4006 cLogP tPSA -0.121843 134.65 -0.766518 118.96 -2.04971 101.45 -0.47485 81.67 -0.494007 81.67 Bilesik Yapi Moleküler cLogP tPSA Agirlik (Da) `/^\_(45_| › ':.nwýsa 'I I" "IM Örnek 1 - Silesik Xiin Sentez_i Sema 1. O 0 o OBn Adim 3 qu9 Adim-4 _ Adim /H __Adim 1 m 2 [H L HMDs T bu NaOH \ w OCH; i t. ":1 OH 5011; En" "j 09": 'BOCLO Bloi- BUM-Lll Bono Bozo `I 2 3 4 5 Adim_a_ EESCSL_ H Adim& , Adim _y_ Adim& Pd- C H'z In( n Frxi DTAD PP'i› N LLocO "IOBn `0 6 8. ci O 0 NH NH Adim 9 Nun" Adim 1. NI IIII LDCI Nmci T 'OH H` m 'IOH 8030 TFA O '0 Bilesik x 0 o 0 OH Adim F` OH Adim B U'WO OH Adimrc BrO OBi'i Adimeo 800 Oßn fBOCi 0 mm Üner CO NHB:›: NHBO: K9 tm" NHBO; "eo" HC' NH: HCI B C Im-D gs, 3R)-g-((tert-bi_itoksikarbonillaminol-3-hidroksibütanoik asidin (A) sentez_i Su (800 mL) ve 1,4-dioksan (500 mL) içinde karistirilmis bir L-treonin (SM1) (100 9, 0.84 mol) karisimina Na2C03 (178 9. 1.67 mol) eklenmistir ve 30 dakika boyunca oda sicakliginda karistirilmistir. Reaksiyon karisimi 0°C`ye sogutulmustur, Boc-anhidrit (219.6 9, 1.007 mol) damlatilarak eklenmistir ve karistirma 16 saat boyunca devam ettirilmistir. Baslangiç materyalinin tükenmesinden sonra (TLC ile), reaksiyon karisimi düsük basinç altinda konsantre edilmistir ve elde edilen kalinti, IN HCI (pH~4) kullanilarak nötr hale getirilmistir. Aköz katman EtOAc (2 x 250 mL) ile özütlenmistir. Ayrilmis organik ekstraktlar A'yi (160 g, %87) elde etmek üzere tuzlu su ile yikanmistir, anhidröz Na2804 üzerinde kurutulmustur, filtrelenmistir ve düsük basinç altinda konsantre edilmistir. 1H-NMR: (500 MHz, DMSO-ds): 6 6.30 (d, 1H), 407-401 (m, 1H), 3.90 (d, 1H), 1.99 (3, 1H), 1.42 (3, 9H), 1.09 (d, 3H). LCMS (mlz): 218.1 [M*-1] (gs, 3R)-3-(ben5iIoksi)-g-((tert-bt_itoksika_rbonil)amino)büt_anoik asjin (S) sentez_i DMF (600 mL) içinde karistirilmis bir A (100 9, 0.45 mol) solüsyonuna N2 atmosferi altinda -20°C'de parçalar halinde %60 NaH (36.5 9, 0.91 mol) eklenmistir ve 2 saat boyunca karistirilmistir. Buna benzil bromid (66.8 mL, 0.55 mol) damlatilarak eklenmistir ve reaksiyon karisimi 12 saat boyunca oda sicakliginda karistirilmistir. Baslangiç materyalinin tükenmesinden sonra (TLC ile), reaksiyon karisimi buz gibi soguk su ile söndürülmüstür ve dietil eter (2 x 250 mL) ile yikanmistir. Ayrilmis aköz katman IN HCI kullanilarak asit haline getirilmistir ve EtOAc (2 X 250 mL) ile özütlenmistir. Kombine edilmis organik katmanlar, B'yi (100 g, %71) elde etmek üzere anhidröz N82804 üzerinde kurutulmustur ve düsük basinç altinda konsantre edilmistir. (28, 3R)-benzil 3-(benziloksi)-2-((tert-bütoksikarbonil)amino)bütanoatin (C) sentezi DMF (400 mL) içinde karistirilmis bir B (100 9, 0.32 mol) solüsyonuna N2 atmosferi altinda K2003 (111.6 9, 0.81 mol) eklenmistir ve 30 dakika boyunca karistirilmistir. Buna benzil bromid (47.4 mL, 0.38 mol) damlatilarak eklenmistir ve oda sicakliginda 12 saat boyunca karistirilmistir. Reaksiyon karisimi buz gibi soguk su ile söndürülmüstür ve dietil eter (2 x 250 mL) ile özütlenmistir. Ayrilmis organik katman tuzlu su ile yikanmistir, anhidröz Na2804 üzerinde kurutulmustur ve düsük basinç altinda konsantre edilmistir. Ham materyal, C'yi (80 g, %62) elde etmek üzere %5 EtOAc/n- hekzan ile ayristirilarak silika jel kolon kromatografisi ile saflastirilmistir. 1H-NMR: (400 MHz, DMSO-de): ö 7.41-7.25 (m, 10H), 5.09 (5, 2H), 4.55450 (m, 1H), 4.34-4.30 (m, 1H), 2.09 (3, 3H), 1.42 (5, 9H), 1.15 (0, 3H). (28, 3R)-benzil 2-amino-3-(benziloksi)bütanoatin (Int-D) sentezi Metanol (100 mL) içinde karistirilmis bir C (80 9, 0.20 mol) solüsyona N2 atmosferi altinda metanolik HCI (70 mL) eklenmistir ve 12 saat boyunca karistirilmistir. Baslangiç materyalinin tükenmesinden sonra (TLC ile), reaksiyon karisimi düsük basinç altinda konsantre edilmistir. Ham materyal n-hekzan ile yikanmistir ve tuz olarak Int-D (45 g, %75) HCIlyi elde etmek üzere düsük basinç altinda kurutulmustur. 1H-NMR: (400 MHz, DMSO-de): ö 7.35-7.30 (m, 10H), 5.25 (q, 2H), 458-452 (m, 3H), 4.37 (Ci, 1H), 4.27 (br s, 1H), 415-410 (m, 1H), 1.30 (d, 3H). LCMS (mlz): 300.2 [M*+1] (S)-metil pirolidin-2-karboksilatin (2) sentezi Metanol (800 mL) içinde karistirilmis bir L-prolin 1 (100 9, 0.87 mol) solüsyonuna O°C`de yavas bir sekilde tiyonil klorid (76.9 mL, 1.04 mol) damlatilarak eklenmistir. Reaksiyon karisimi 12 saat boyunca reflükse isitilmistir. Baslangiç materyalinin tükenmesinden sonra (TLC ile), reaksiyon düsük basinç altinda konsantre edilmistir. Kalinti, 2'yi (143.9 g, HCl tuzu) elde etmek üzere n-hekzan ile yikanmistir. 1H-NMR: (400 MHz, CDCIs): 6 3.89 (5, 3H), 368-362 (m, 2H), 359-347 (m, 2H), 2.49- 2,37 (m, 1H), 227-205 (m, 3H). LCMS (mlz): 166 [M*+1] (8)-1-tert-bütil 2-metil pirolidin-1,2-dikarboksilatin (3) sentezi CH2CI2 (175 mL) içinde karistirilmis bir 2 (35 9, 0.22 mol) solüsyonuna O°C'de EtaN (90 mL, 0.65 mol), akabinde Boc-anhidrit (56.9 mL, 0.26 mol) eklenmistir. Reaksiyon karisimi 16 saat boyunca oda sicakliginda karistirilmistir. Baslangiç materyalinin tükenmesinden sonra (TLC ile), reaksiyon su (100 mL) ile seyreltilmistir ve CH2CI2 (2x 100 mL) ile özütlenmistir. Organik katman su ve tuzlu su ile yikanmistir, Na2804 üzerinde kurutulmustur ve konsantre edilmistir. Ham materyal, 3'ü (41 g, %95) elde etmek üzere %30 EtOAc/n-hekzan ile ayristirilarak silika jel kolon kromatografisi ile saflastirilmistir. 1H-NMR: (400 MHz, CDCIs): 6 425-421 (m, 1H), 3.75 (3, 3H), 357-326 (m, 2H), 2.29- 2.10 (m, 1H), 1.99-1.75 (m, 3H). 1.45 (8, 9H). LCMS (m/z): 130 [(M*+1)-Boc] 1-tert-bütil 2-metil 2-((benziloksi) metil) pirolidin-1, 2-dikarboksilatin (4) sentezi THF (800 mL) içinde karistirilmis bir 3 (100 9, 0.43 mol) solüsyonuna -78°C"de LIHMDS (873 mL, 0.87 mol) eklenmistir ve 1 saat boyunca karistirilmistir. Buna - 78°C'de BOM-klorid (93.2 mL, 0.65 mol) damlatilarak eklenmistir ve 2 saat boyunca - °C'de karistirilmistir. Baslangiç materyalinin tükenmesinden sonra (TLC ile), reaksiyon aköz NH4CI solüsyonu ile söndürülmüstür ve EtOAc ile özütlenmistir. Ayrilmis organik katman, 4"ü (180 g, ham) elde etmek üzere su ile yikanmistir, Na2804 üzerinde kurutulmustur ve konsantre edilmistir. Bu materyal ayrica saflastirma olmadan dogrudan sonraki adima yönelik alinmistir. LCMS (mlz): 250 [(M*+1)-Boc] 2- benziloksi)met_iI)-1-(tert-wtoksikarlgonil)pirolidin-2-karl_)oksilik asidin (5) sentezi Metanol (200 mL) içinde karistirilmis bir 4 (100 9, 0.28 mol) solüsyonuna oda sicakliginda 2N NaOH solüsyonu (300 mL) eklenmistir. Reaksiyon karisimi 4 saat boyunca reflükse isitilmistir. Baslangiç materyalinin tükenmesinden sonra (TLC ile), solvent düsük basinç altinda reaksiyondan buharlastirilmistir ve EtOAc (100 mL) seyreltilmistir. Aköz katman sitrik asit solüsyonu kullanilarak asit haline getirilmistir ve CH2CI2 (2x 250 mL) ile özütlenmistir. Ayrilmis organik katman. 5'i (60 g, %63) elde etmek üzere su ile yikanmistir, Na2804 üzerinde kurutulmustur ve konsantre edilmistir. 1H-NMR: (400 MHz, CDCI3)I 6 737-732 (m, 5H), 4.61 (3, 2H), 405-388 (m, 2H), 3.65- 3.42 (m, 2H), 254-246 (m, 2H), 1.95 (br s, 2H), 1.57 (3, 9H). LCMS (mlz): 334 [M*-1] 1-(tert-bütoksikarboniI)-2-(hidroksimetiI)pirolidin-2-karboksilik asidin (6) sentezi Metanol (300 mL) içinde karistirilmis bir 5 (10 9, 29.81 mmol) solüsyonuna oda sicakliginda %50 yas %10 Pd/C (5 g) eklenmistir ve Hz atmosferi (balon basinci) altinda 24 saat boyunca karistirilmistir. Baslangiç materyalinin tükenmesinden sonra (TLC ile), reaksiyon karisimi bir selit pedi araciligiyla filtrelenmistir ve ped metanol ile yikanmistir. Elde edilen filtrat, 6'yi (6 g, %82) elde etmek üzere düsük basinç altinda konsantre edilmistir. 1i-i-NMR: (400 MHz, DMSO-ds): 6 12.55 (br m, 1H), 3.99 (d, 1H), 3.88 (d, 1H), 7.65- 7.60 (m, 1H), 351-345 (m, 1H), 339-334 (m, 1H), 232-214 (m, 1H), 198-169 (m, 3H), 1.39 (5, 9H). tert-bütil 2-(((ZS, 3R)-1,3-bis(benziloksi)-1-oksobütan-Z-iI)karbamoil)-2- mroksimetilmirolidin-1-kzmaoksilgtin (7) sentez_i CH20I2 (100 mL) içinde karistirilmis bir 6 (3 9, 12.2 mmol) solüsyonuna Int-D (5.8 9, 14.6 mmol), EDCI.HCI (2.8 9, 14.6 mmol), akabinde HOBt (1.99 9, 14.6 mmol) ve DIPEA (4.8 9, 36.7 mmol) oda sicakliginda eklenmistir ve 16 saat boyunca karistirilmistir. Baslangiç materyalinin tükenmesinden sonra (TLC ile), reaksiyon karisimi su (100 mL) ile seyreltilmistir ve CH2CI2 (2 x 100 mL) ile özütlenmistir. Ayrilmis organik katman tuzlu su ile yikanmistir, anhidröz Na2804 üzerinde kurutulmustur, filtrelenmistir ve düsük basinç altinda konsantre edilmistir. Elde edilen ham materyal, 7'yi (1.6 9, %25) elde etmek üzere silika jel kolon kromatografisi ile saflastirilmistir. 1H-NMR: (400 MHz, DMSO-de): 6 825-812 (m, 1H), 731-727 (m, 10H), 5.85 (t, 1H), .14 (9, 2H), 454-449 (m, 2H), 4.31 (dd, 1H), 4.15-4.07 (m, 1H), 391-350 (m, 1H), 352-337 (m, 1H), 3.31-327 (m, 2H), 2.35-2.07 (m, 1H), 1.95-1.90 (m, 1H), 1.73-1.52 (m, 2H), 1.39-127 (m, 9H), 1.19-1.12 (m, 3H). Kütle (ESI): m/z 527.4 [M*+1] tert-bütil 2-((2$,3R)-1,3-bis(benziloksi)-1-oksobütan-Z-iI)-1-okso-gg diazaspiro[3.4]oktan-5-karboksilatin (8) sentezi THF (20 mL) içinde karistirilmis bir 7 (1.4 9, 2.65 mmol) solüsyonuna trifenilfosfin (1.1 9, 3.98 mmol) ve DTAD (1.2 9, 3.98 mmol) eklenmistir. Reaksiyon karisimi 16 saat boyunca oda sicakliginda karistirilmistir. Baslangiç materyalinin tükenmesinden sonra (TLC ile), reaksiyon düsük basinç altinda konsantre edilmistir. Ham materyal, 8-F1 (0.6 9) ve 8-F2*yi (0.55 9) elde etmek üzere silika jel kolon kromatografisi ile saflastirilmistir. (28, 3R)-2-(5-(tert-bütoksikarbonil)-1-okso-2.5-diazaspiro[3.4]oktan-2-il)-3- hidroksibütanoik asidin (9) sentezi Metanol (50 mL) içinde karistirilmis bir 8-F1 ve 8-F2 (0.6 9) solüsyonuna oda sicakliginda %10 Pd/C (120 mg) eklenmistir ve 6 saat boyunca Hz atmosferi (balon basinci) altinda karistirilmistir. Baslangiç materyalinin tükenmesinden sonra (TLC ile), reaksiyon karisimi bir selit pedi araciligiyla filtrelenmistir ve ped metanol ile yikanmistir. Filtrat ham ürünü elde etmek üzere düsük basinç altinda konsantre edilmistir, dietil eter kullanilarak tritürasyon beyazimsi bir kati olarak 9'u (0.3 9, %82) saglamistir. 1H-NMR: (500 MHz, DMSO-ds): 6 12.95 (br s, 1H), 4.97 (br s, 1H), 4.24420 (m. 1H), 414-407 (m, 1H), 3.84 (d, 1H), 3.53 (t, 1H), 3.41-3.35 (m, 1H), 327-322 (m, 1H), 214-208 (m, 2H), 1.84-1.80 (m, 2H), 1.42 (5, 9H), 1.24 (d, 3H). LCMS (mlz): 329.6 [M*+1] tert-bütil 2-((2$, 3R)-1-amino-3-hidroksi-1-oksobütan-2-il)-1-okso-2,5- diazaspiro[3.4]oktan-5-karboksiladin (10) sentezi CH2CI2 (100 mL) içinde karistirilmis bir 9 (5 9, 15.2 mmol) solüsyonuna amonyum klorid (2 9, 38.1 mmol), EDCI.HCI (3.5 9, 18.2 mmol), akabinde HOBt (5.9 9, 45.7 mmol) ve DIPEA (5.9 9, 45.7 mmol) oda sicakliginda eklenmistir ve 16 saat boyunca karistirilmistir. Baslangiç materyalinin tükenmesinden sonra (TLC ile), reaksiyon karisimi su (100 mL) ile seyreltilmistir ve CH2CI2 (2 x 100 mL) ile özütlenmistir. Ayrilmis organik katman tuzlu su ile yikanmistir, anhidröz Na2804 üzerinde kurutulmustur, filtrelenmistir ve düsük basinç altinda konsantre edilmistir. Ham materyal, beyazimsi bir kati olarak 10 (2.5 9, %51) elde etmek üzere Et20 (50 mL) ve n-pentan (50 mL) ile tritüre edilmistir. 1H-NMR: (400 MHz, DMSO-da): 6 7.51 (br s, 1H), 7.19 (br s, 1H), 4.64 (d, 1H), 4.07- 3.95 (m, 2H), 3.78 (m, 1H), 362-335 (m, 2H), 327-325 (m, 1H), 218-205 (m, 2H), 1.86-1.74 (m, 2H), 1.41 (3, 9H), 1.12 (d, 3H). LCMS (mlz): 328.2 [M*+1] (gs. 3R)-3-higroksi-g-(1-okso-2 5-diazas iro 3.4 oktan-2-il bütanamidin Bile ik X sentezi CH20I2 (25 mL) içinde karistirilmis bir 10 (2.2 9, 6.70 mmol) solüsyonuna 0°C'de TFA (7.6 9, 67 mmol) eklenmistir ve 2 saat boyunca oda sicakliginda karistirilmistir. Reaksiyon karisimi, TFA tuzu olarak bilesik X"i (2 g, %87) elde etmek üzere düsük basinç altinda konsantre edilmistir. 1H-NMR: (400 MHz, D20): ö 4.33-429 (m, 2H), 4.09 (d, 1H), 3.95 (d, 1H), 3.57-3.48 (m, 2H), 2.51-2.46 (m, 2H), 2.25-2.19 (m, 2H), 1.31 (d, 3H). LCMS (mlz): 455 [2M*+1] Örnek 2- Bilesik Z'nin sentezi Sema 3. EDCI HÜBT nm. - D O ' H.N,V Adim A HN î' ÂOIITI E "Na _' _J '%4 fî) 'oii 'HH iiii sivi: A ( "îgiii ;Adim (%014. ûdimz (310M- Adim: %&iJ/Er Adimi. C& ~ 8 JCI: wui_ iii iii- ci 3" '-t F' C "HM `5 wc 'TV l ' Boi'- CI 80( C' BI! . r C .. ' . _ Adim&- Adim: "î"l' '- 'Adin-is /NÄÇNUîÃL &d_›Im &WNWU @:û_› Lu ::l/7 _' / O JJ& ?waR nm: i_i niisiinc_a: Dioksariv HCI i. l .3 _F .1 I.`q Kosullariß Türk: I "I ;mm 5› l I_ji l Adim IC `NA Q? Q Ogg u / "OH BilesikZ 53°C HN'P'W II r'i adimi: Adim t 'H HNIJ( `I ~- ~- 0 Jif'›\ri\_. ON: D (gs. 3R)-g-((tert-@toksikaLbonillgminoi-S- hidroksibütanoik asjin (A) sentez_i Su (150 mL) ve THF (150 mL) içinde karistirilmis bir (28, 3R)-2-amin0-3- hidroksibütanoik asit (SM2) (30 9, 0.25 mol ) solüsyonuna NaHCOa (65 9, 0.75 mol), akabinde Boc-anhidrit (66 mL, 0.302 mol) 0°C'de eklenmistir. Reaksiyon karisimi 16 saat boyunca oda sicakliginda karistirilmist sonra (TLC ile), reaksiyon karisimi EtOAc (2 ir. Baslangiç materyalinin tükenmesinden x 150 mL) ile özütlenmistir. Aköz katman, 2N HCI kullanilarak asit haline getirilmistir ve akabinde %10 MeOH/CH2CI2 ile özütlenmistir. Ayrilmis organik ekstraktlar, A' yi (30 g, %63) elde etmek üzere anhidröz Na2804 üzerinde kurutulmustur, filtrelenmistir ve vakum altinda konsantre edilmistir. 1H-NMR: (400 MHz, cocig): 6 592-570 (m, 1H), 1.47 (3, 9H), 1.25 (d, 3H) LCMS (mlz): 218 [M*-1] 2H), 5.55 (d, 1H), 4.42 (br s, 1H), 4.29 (d, tert-bü_til ((28. 3R)-3-higlroksi-1-okso-1-(piroligin-1-iI)bütan-2-ill karbamatin QB) sentezi DMF (65 mL) içinde karistirilmis bir A (13 9, 59.36 mmol) solüsyonuna EDCI.HCI (12.5 9, 65.2 mmol), akabinde HOBt (8.8 9, 65.2 mmol) O°C`de eklenmistir. 5 dakika boyunca karistirma sonrasinda, reaksiyon karisimina DIPEA (306 mL. 0.17 mol), akabinde pirolidin (4.6 9, 65.2 mmol) eklenmistir ve karistirma diger bir 16 saat boyunca oda sicakliginda devam ettirilmistir. Reaksiyon karisimi su ile yikanmistir ve EtOAc (2x 100 mL) ile özütlenmistir. Organik katman tuzlu su ile yikanmistir, anhidröz N32804 üzerinde kurutulmustur vakum altinda konsantre edilmistir. Ham, B"yi (5 g, %31) elde etmek üzere kolon kromatografisi ile saflastirilmistir. 1H-NMR: (400 MHz, CDCIs): 6 5.51 (br s, 1H), 4.32 (d, 1H), 415-410 (m, 1H), 3.77- 3.74 (m, 1H), 355-346 (m, 3H), 199-194 (m, 2H), 191-185 (m, 2H), 1.47 (5. 9H), 1.26 (t, 1H), 1.29 (Ci, 3H). QR, 3S)-3-((tert-bi_itoksikarbonil)amino)-4-okso-4-(pirolidin-1-il)bütan-2-il asetatin (D) sentezi CH20I2 (40 mL) içinde karistirilmis bir B (4 9, 14.7 mmol) solüsyonuna Et3N (5.1 mL, 36.7 mmol), akabinde asetik anhidrit (1.7 9, 17.6 mmol) ve katalitik DMAP miktari 0°C"de eklenmistir. Reaksiyon karisimi 16 saat boyunca oda sicakliginda karistirilmistir. Baslangiç materyalinin tükenmesinden sonra (TLC ile), reaksiyon karisimi su ile seyreltilmistir ve organik katman ayrilmistir. Organik katman su ile yikanmistir, anhidröz Na2804 üzerinde kurutulmustur ve düsük basinç altinda konsantre edilmistir. Elde edilen ham kalinti, C'yi vermek üzere silika jel kolon kromatografisi ile saflastirilmistir. Buna 1,4-dioksan/HCI (20 mL) eklenmistir ve 2 saat boyunca oda sicakliginda karistirilmistir. Reaksiyon karisimi vakum altinda konsantre edilmistir ve kalinti, HCI tuzu olarak D'yi (3.5 9, %97) elde etmek üzere Et20 (2x 15 mL) ile yikanmistir. 1H-NMR: (500 MHz, DMSO-de) (Rotamerler): 6 8.49 (br s, 3H), 8.15 (br s. 1H), 5.14- .10 (m, 1H), 426-422 (m, 1H), 397-395 (m, 1H), 3.59 (3, 2H), 2.09 (3, 3H), 1.98 (5, 2H), 1.87-1.8O (m, 2H), 1.26 (d, 3H). LCMS (m/z): 215.1 [M*+1] Metil pirolidin-2-karboksilatin (1) sentezi Metanol (800 mL) içinde karistirilmis bir pirolidin-2-karboksilik asit (SM1) (100 9, 0.87 mol) solüsyonuna O°C'de yavas bir sekilde tiyonil klorid (76.9 mL, 1.04 mol) damlatilarak eklenmistir. Reaksiyon karisimi 12 saat boyunca reflükse isitilmistir. Baslangiç materyalinin tükenmesinden sonra (TLC ile), reaksiyon vakum altinda konsantre edilmistir. Kalinti n-Hekzan ile yikanmistir ve 1'i (143.9 g, HCI tuz) elde etmek üzere solvent damitilmistir. 1H-NMR: (400 MHz, CDCIa) (Rotamerler): 5 3.89 (5, 3H), 368-362 (m. 2H), 359-347 (m, 2H), 249-237 (m, 1H), 227-205 (m, 3H). LCMS (mlz): 166 [M*+1] 1-tert-bütil 2-metil pirolidin-1,2-dikarboksilatin (2) sentezi CH2CI2 (175 mL) içinde karistirilmis bir 1 (35 9, 0.22 mol) solüsyonuna Et3N (90 mL, 0.65 mol), akabinde Boc-anhidrit (56.9 mL, 0.26 mol) 0°C'de eklenmistir. Reaksiyon karisimi 16 saat boyunca oda sicakliginda karistirilmistir. Baslangiç materyalinin tükenmesinden sonra (TLC ile), reaksiyon su (100 mL) ile seyreltilmistir ve CH2CI2 (2x 100 mL) ile özütlenmistir. Organik katman su ve tuzlu su ile yikanmistir, Na2804 üzerinde kurutulmustur ve konsantre edilmistir. Ham materyal, 2'yi (41 g, %95) elde etmek üzere %30 EtOAc/Hekzan ile ayristirilarak silika jel kolon kromatografisi ile saflastirilmistir. 1H-NMR: (400 MHz, CDCIa) (Rotamerler): 6 425-421 (m, 1H), 3.75 (5, 3H), 357-326 (m, 2H), 2.29-2.10 (m, 1H), 199-175 (m, 3H), 1.45 (5, 9H). LCMS (mlz): 130 [(M*+1)-Boc] 1-tert-bütil 2-metil 2-((benziIoksi)metil)pirolidin-1,2-dikarboksilatin (3) sentezi THF (800 mL) içinde karistirilmis bir 2 (100 9, 0.43 mol) solüsyonuna -78°C'de LIHMDS (873 mL, 0.87 mol) eklenmistir ve 1 saat boyunca karistirilmistir. Buna - 78°C'de BOM-klorid (93.2 mL, 0.65 mol) damlatilarak eklenmistir ve -20°C'de 2 saat boyunca karistirilmistir. Baslangiç materyalinin tükenmesinden sonra (TLC ile), reaksiyon 0°C'de NH4CI ile söndürülmüstür. Ayrilmis organik katman, 3'ü (180 g, ham) elde etmek üzere su ile yikanmistir, Na2804 üzerinde kurutulmustur ve konsantre edilmistir. Bu materyal ayrica saflastirma olmadan dogrudan sonraki adima yönelik alinmistir. LCMS (mlz): 250 [(M*+1)-Boc] 2-((benziloksi)metiI)-1-(tert-bütoksikarbonil)pirolidin-2-karboksilik asidin (4) sentezi Metanol (200 mL) içinde karistirilmis bir 3 (100 9. 0.28 mol) solüsyonuna oda sicakliginda 2N NaOH solüsyonu (300 mL) eklenmistir. Reaksiyon karisimi 4 saat boyunca reflükse isitilmistir. Baslangiç materyalinin tükenmesinden sonra (TLC ile), solvent vakum altinda reaksiyondan buharlastirilmistir ve EtOAc (100 mL) ile seyreltilmistir. Aköz katman sitrik asit solüsyonu kullanilarak asit haline getirilmistir ve CHzCl2 (2x 250 mL) ile özütlenmistir. Ayrilmis organik katman, 4"i (60 g, %63) elde etmek üzere su ile yikanmistir, Na2804 üzerinde kurutulmustur ve konsantre edilmistir. 1H-NMR: (400 MHz, CDCIs) (Rotamerler): ö 7.37-7.32 (m, 5H), 4.61 (3, 2H), 405-388 (m, 2H), 3.65342 (m, 2H), 254-246 (m, 2H), 1.95 (br s, 2H), 1.57 (3, 9H). LCMS (mlz): 334 [M*-1] tert-bütil 2-(((ZS, 3R)-3-asetoksi-1-okso-1-(pirolidin-1-iI)bütan-2-il) karbamoil)-2- ((benziloksi)metil)pirolidin-1-karboksilatin (5) sentezi DMF (8 mL) içinde karistirilmis bir D (1 9, 2.90 mmol) solüsyonuna EDCI.HCI (0.63 9, 3.28 mmol), akabinde HOBt (0.44 9, 3.28 mmol) 0°C`de eklenmistir. 5 dakika boyunca karistirilmasi sonrasinda, reaksiyon karisimina DIPEA (1.3 mL, 7.46 mmol), akabinde bilesik 4 (0.74 9, 3.58 mmol) eklenmistir ve karistirma 16 saat boyunca oda sicakliginda devam ettirilmistir. Reaksiyon karisimi su ile yikanmistir ve EtOAc (2x 500 mL) ile özütlenmistir. Organik katman tuzlu su ile yikanmistir, anhidröz Na2804 üzerinde kurutulmustur vakum altinda konsantre edilmistir. Ham, 5 (0.6 9, %38) elde etmek üzere kolon kromatografisi ile saflastirilmistir. LCMS (mlz): 532 [M*+1] tert-bütil 2-(((ZS, 3R)-3-asetoksi-1-okso-1-(pirolidin-1-il)bütan-2-il) karbamoiI)-2- _(h_idroksimetil)pirolidin-1-kaLboksilatin (6) sentegi MeOH (40 mL) içinde karistirilmis bir 5 (4.5 9, 8.40 mmol) solüsyonuna atil atmosfer altinda yas %10 Pd/C (1.5 9) eklenmistir ve 4 saat boyunca H2 atmosferi (balon basinci) altinda karistirilmistir. ReaksiyOn karisimi, 6'yi (3.0 9, %81) elde etmek üzere selit pedi araciligiyla filtrelenmistir ve düsük basinç altinda konsantre edilmistir. LCMS (mlz): 442.5 [ivi++1] tert-bütil 2-((2S, 3R)-3-asetoksi-1-okso-1-(pirolidin-1-il)bütan-2-il)-1-okso-2,5- diazaspirol3.4lokt_an-5-kaLboksilat_in (7) sentez_i THF (25 mL) içinde karistirilmis bir 6 (3 9, 6.70 mmol) solüsyonuna trifenilfosfin (2 9, 7.40 mmol), akabinde DTAD (2.5 9, 10.2 mmol) eklenmistir. Reaksiyon karisimi 16 saat boyunca oda sicakliginda karistirilmistir. Baslangiç materyalinin tükenmesinden sonra (TLC ile), reaksiyon düsük basinç altinda konsantre edilmistir. Ham materyal, 7'yi (TPPO ile 1.2 9, %43) elde etmek üzere %10 MeOH/CH20I2 ile ayristirilarak silika jel kolon kromatografisi ile saflastirilmistir. 1H-NMR: (400 MHz, DMSO-ds): 6 525-519 (m, 1H), 4.65 (d, 1H), 351-357 (m, 3H), 347-342 (m, 2H), 3.41-325 (m, 4H), 2.05 (3, 4H), 1.95-1.71 (m, 7H), 1.42 (3, 10H). LCMS (mlz): 424.4 [M*+1] QR, 3S)-4-okso-3-(1-okso-2,5-diazaspiro[3.4]oktan-2-iI)-4-(pirolidin-1-il) bütari-2-il asetatin (8) sentezi 1,4-dioksan/HCI (5 mL) içinde karistirilmis bir 7 (0.4 9, 0.94 mmol) solüsyonu 0°C'ye sogutulmustur ve 1 saat boyunca oda sicakliginda karistirilmistir. Baslangiç materyalinin tükenmesinden sonra (TLC ile), reaksiyon karisimi düsük basinç altinda konsantre edilmistir. Ham materyal, 8 (0.22 9, %65) elde etmek üzere n-pentan, akabinde EtOAc ile yikanmistir. 1H-NMR: (400 MHz, D20): 6 4.62 (d, 1H), 4.41-4.29 (m, 2H), 4.24 (d, 1H), 3.89-3.77 (m, 3H), 354-349 (m, 3H), 257-252 (m, 1H), 2.49 (8, 3H), 242-200 (m, 8H), 1.30 (d, 3H). LCMS (mlz): 324.3 [M*+1] UPLC Safligi: %99.37 tert-bü_til 2-( (ZS. 3R)-3-hidroksi-1-okso-1-(pirolic_lin-1-il)bütan-g-iI)-1-okso-g,g diazaspirol3.4]oktan-5-karboksilatin (9) sentezi Aköz NH3 (2 mL) içinde bir 7 (0.15 9, 0.41 mmol) solüsyonu 4 saat boyunca oda sicakliginda karistirilmistir. Baslangiç materyalinin tükenmesinden sonra (TLC ile), reaksiyon CH2CI2 (75 mL) ile seyreltilmistir. Ayrilmis organik katman, 9'u (0.1 9, %76) elde etmek üzere anhidröz Na2804 üzerinde kurutulmustur ve düsük basinç altinda konsantre edilmistir. LCMS (mlz): 382 [M*+1] 2-((ZS, 3R)-3-hidroksi-1-okso-1-(pirolidin-1-illbütan-2-iI)-2,5-diazaspiro [3.410ktan- 1-on (Bilesik Z) sentezi CH20I2 (2 mL) içinde karistirilmis bir 9 (0.2 9, 0.63 mmol) solüsyonuna 0°C`de TFA (0.3 mL) eklenmistir ve 1 saat boyunca oda sicakliginda karistirilmistir. Reaksiyon karisimi vakum altinda konsantre edilmistir ve kalinti su ile seyreltilmistir ve CH2CI2 (2x 25 mL) ile özütlenmistir. Ayrilmis organik katman, TFA tuzu olarak bilesik Z'yi (0.2 9, %80) elde etmek üzere anhidröz Na2804 üzerinde kurutulmustur, filtrelenmistir ve vakum altinda konsantre edilmistir. 1H-NMR: (400 MHz, D20): 6 4.64 (t, 1H), 4.25421 (m, 1H), 4.09 (d, 1H), 3.99-3.87 (m, 1H), 3.70 (t, 2H), 355-347 (m, 5H), 252-234 (m, 2H), 2.25-222 (m, 2H), 208-198 (m, 5H), 1.25 (t, 3H). LCMS (mlz): 282.4 [M*+1] Sema ZS-I-I o o o o HHOH Ad'm 1 HO)_?-OH ""71 2 BiiO)_?-OH Ad'm 3 Bn0)_?- NH2 (80920 NHBoc NaHBnBr NHBoc KzcoanBr NHBoc ZS-A 2S-B zs-c 0 Adim 4 BnO_?~oi3n Eter.HCl NH2 HCI 28-D (28, 3R)-2-((tert-bütoksikarbonillamino)-3-hidroksibütanoik asit (ZS-A) sentezi: THF/su (500 mL/500 mL) içinde karistirilan bir L-treonin (50 g, 420 mol) solüsyonuna NaHCOa (111 9, 1.05 mol) eklenmistir ve 30 dakika boyunca oda sicakliginda karistirilmistir. Reaksiyon karisimi 0°C`ye sogutulmustur ve Boc-anhidrit (137 mL, 630 mmol) damlatilarak eklenmistir ve karistirma 16 saat boyunca oda sicakliginda devam ettirilmistir. Baslangiç materyalinin tükenmesinden sonra (TLC ile), reaksiyon karisimi düsük basinç altinda konsantre edilmistir ve elde edilen kalinti su (100 mL) ile seyreltilmistir ve IN HCI (pH~3). kullanilarak asit haline getirilmistir. Aköz katman EtOAc (2 x 250 mL) ile özütlenmistir. Kombine edilmis organik katman, koyu surup olarak bilesik 28-A"yi (80 g, %87) elde etmek üzerer tuzlu su (1 x 200 mL) ile yikanmistir, anhidröz Na2SO4 üzerinde kurutulmustur, filtrelenmistir ve düsük basinç altinda konsantre edilmistir. 1H-NMR: (500 MHz, DMSO-ds): 6 12.5 (br s, 1H), 6.30 (d. J = 8.5 Hz, 1H), 4.50 (br s, 1H), 405-402 (m, 1H), 388-386 (m, 1H), 1.39 (3, 9H), 1.08 (d, J = 6.0 Hz, 3H); LCMS m/z: 218.1 [M+-1] (gs. 3R)-3-(ben;iloksi)-g-((tert-bütoksikarbonil)amin0)bütanoik asit (ZS-B) sentezi: DMF (400 mL) içinde karistirilan bir 2S-A (40 g, 182 mmol) solüsyonuna N2 atmosferi altinda -20°C,de %60 NaH (182 g, 758 mmol) parçalar halinde eklenmistir ve 2 saat boyunca karistirilmistir. Buna, benzil bromid (66.8 mL, 0.55m0l) damlatilarak eklenmistir ve reaksiyon karisimi 3 saat boyunca oda sicakliginda karistirilmistir. Baslangiç materyalinin tükenmesinden sonra (TLC ile), reaksiyon karisimi buz gibi soguk su ile söndürülmüstür ve dietil eter (2 x 250 mL) ile yikanmistir. Ayrilmis aköz katman sitrik asit solüsyonu (100 mL) kullanilarak asit haline getirilmistir ve EtOAC (2 x 250 mL) ile özütlenmistir. Kombine edilmis organik katmanlar, koyu surup olarak bilesik ZS-B'yi (45 g, %80) elde etmek üzere anhidröz Na2804 üzerinde kurutulmustur ve düsük basinç altinda konsantre edilmistir. 1H-NMR: (500 MHz, DMSO-de): 6 12.64 (br s, 1H), 7.34-7.25 (m, 5H), 6.46 (d, J = 8.5 Hz, 1H), 4.53 (d, J = 11.5 Hz, 1H), 4.39 (d, J = 12.0 Hz, 1H), 400-398 (m, 2H), 1.39 (3, 9H), 1.15 (d, J = 6.0 Hz, 3H); (28, 3R)-benzil 3-(benziloksi)-2-((tert-bütoksikarbonil)amin0)bütanoat (ZS-C) sentezi: DMF (400 mL) içinde karistirilan bir bilesik ZS-B (45 g, 146 mmol) solüsyonuna N2 atmosferi altinda K2C03 (40 g, 292 mmol) eklenmistir ve 30 dakika boyunca karistirilmistir. Buna, O°C`de benzil bromid (21 mL, 175 mmol) damlatilarak eklenmistir ve 16 saat boyunca oda sicakliginda karistirilmistir. Reaksiyon karisimi buz gibi soguk su ile söndürülmüstür ve dietil eter (2 x 250 mL) ile özütlenmistir. Ayrilmis organik katman tuzlu su ile yikanmistir, anhidröz Na2804 üzerinde kurutulmustur ve düsük basinç altinda konsantre edilmistir. Ham materyal, koyu surup olarak bilesik ZS-C'yi (48 g, %82) elde etmek üzere %20 EtOAc/n-hekzan ile ayristirilarak silika jel kolon kromatografisi ile saflastirilmistir. 1H-NMR: (500 MHz, DMSO-de): ö 7.37-7.18 (m, 10H), 6.81 (d, J = 9.0 Hz, 1H), 5.08 (3, 2H), 4.49 (d, J = 12.0 Hz, 1H), 4.32 (d, J= 12.0 Hz, 1H), 4.25422 (m, 1H), 401-398 (m, 1H), 1.38 (5, 9H), 1.15 (d, J = 6.0 Hz, 3H) Kütle (ESI): m/z 399.4[M*+1]; (28, 3R)-benzil 2-amino-3-(benziloksilbütanoat (ZS-D) sentezi: Dietileter (50 mL) içinde karistirilan bir bilesik ZS-C (48 g, 120 mmol) solüsyonuna 0°C"de HCI (350 mL) ile doymus hale getirilen dietileter eklenmistir ve 10 saat boyunca oda sicakliginda karistirilmistir. Baslangiç materyalinin tükenmesinden sonra (TLC ile), reaksiyon karisimi düsük basinç altinda konsantre edilmistir. Ham materyal, yari kati (HCI tuzu) olarak bilesik ZS-D'yi (28 g, %77) elde etmek üzere dietil eter/n-pentan (50 mL/50 mL) ile tritüre edilmistir ve düsük basinç altinda kurutulmustur. 1H-NMR: (400 MHz, DMSO-de): 6 859 (s, 2H), 750-725 (m, 10H), 5.23 (d, J = 12.5 Hz, 1H), 5.16 (Ci, J :12.5 Hz, 1H), 4.54 (d, J =12.0 Hz, 1H), 4.36 (d, J= 12.0 Hz, 1H), 412-409 (m, 1H), 4.09-3.99 (m, 1H), 1.29 (d, J = 6.5 Hz, 3H) Kütle (ESI): m/z 299.4[M*+1]; Sema- 2S-I-2 OBn [HOH Adim 1 EHO\ Adim 2 m0\ Adim 3 0 Adim 4 _b _› \ _› E 0 800, [3 HCIO iBOCIigO "H 0 LiHMDS S NaOH MeOH BOC BOM-C| Bor; O 23 E ZS-F 28 G OBn OH 0 Adim 5 Ad 6 Mel-l _. %014 L. rk Adim 7 m" "g, N N N Pd-C/H i ZS-D. HATU Boc O 2 800 O BOC DIAD PPn3 Goco 2S-H 2S-I ZS-K Adim 8 Pd-CIH, (3:53 800 O Metil pirolidin-2-karboksilat (23-E) sentezi: Metanol içinde karistirilan bir L-prolin (50 g, 434 mmol) solüsyonuna 0°C`de tiyonil klorid (37.5 ml, 521 mmol) eklenmistir ve 16 saat boyunca 70°Ctye isitilmistir. Reaksiyon karisimi oda sicakligina getirilmistir ve koyu surup olarak (hidroklorid tuzu) olarak bilesik 28-E'yi (70 g, %99) elde etmek üzere vakum altinda konsantre edilmistir. 1H-NMR: (500 MHz DMSO- -:dö) ö 4. 15-4. 13 (m, 1H), 3. 65 (s, 3H), 3. 35- 3. 30 (m, 2H), 223-215 (m, 1H), 186-178 (m, 3H), 1.41 (5, 9H); LCMS m/z: 129 [M*+1] 1-tert-bütil 2-metil pirolidin-1,2-dikarboksilat (ZS-F) sentezi: CH20I2 (700 mL) içinde karistirilan bir bilesik ZS-E (70 g, 422 mmol) solüsyonuna O°Cyde Et3N (183 mL, 1.26 mol) eklenmistir ve 10 dakika boyunca karistirilmistir. Akabinde 0°Cide Boc-anhidrit (184 mL, 845 mmol) eklenmistir ve reaksiyon karisimi 16 saat boyunca oda sicakliginda karistirilmistir. Baslangiç materyalinin tükenmesinden sonra (TLC ile), reaksiyon su (200 mL) ile seyreltilmistir ve CH2CI2 (2 x 200 mL) ile özütlenmistir. Kombine edilmis organik katman sitrik asit (1 x 150 mL), tuzlu su (1 x 200 mL) ile yikanmistir. Organik katman, koyu surup olarak bilesik ZS-F yi (80 g, %83) elde etmek üzere %50 EtOAC/n-hekzan ile ayristirilarak kolon kromatografisi ile saflastirilmis ham bilesigi elde etmek üzere Na2804 üzerinde kurutulmustur ve düsük basinç altinda konsantre edilmistir. 1H-NMR: (400 MHz, DMSO-ds): 6 415-413 (m, 1H), 3.65 (3, 3H), 335-330 (m, 2H), 223-215 (m, 1H),1.86-1.78(m,3H), 1.41 (8, 9H); LCMS m/z: 229 [(M*+1)-Boc]. 1-tert-bütil 2-metil g-"bengiIoksi)metm_pirolidin-1,g-dikarboksilat (25-G) sentez_i: THF (250 mL) içinde karistirilan bir bilesik ZS-F (25 g, 109 mmol) solüsyonuna - °C'de LiHMDS (240 mL, 240 mmol) eklenmistir ve 2 saat boyunca karistirilmistir. Buna, -30°C'de damlatilarak BOM-klorid (23 mL, 163 mmol) eklenmistir ve 2 saat boyunca karistirilmistir. Baslangiç materyalinin tükenmesinden sonra (TLC ile), reaksiyon aköz NH4CI solüsyonu (100 mL) ile söndürülmüstür ve EtOAc (2 x 200 mL) ile özütlenmistir. Kombine edilmis organik katman su (2 x 150 mL), akabinde tuzlu su solüsyonu (2 x 100 mL) ile yikanmistir. Organik katman, koyu surup olarak bilesik 28- G'yi (30 g, %79) elde etmek üzere %10 EtOAc/n-hekzan ile ayristirilarak kolon kromatografisi ile saflastirilmis ham bilesigi elde etmek üzere N82804 üzerinde kurutulmustur ve konsantre edilmistir. 1H-NMR: (500 MHz, DMSO-ds): ö 7.36-722 (m, 5H), 459-448 (m, 2H), 402-388 (m, 1H), 3.63 (3, 3H), 3.49335 (m, 2H), 334-330 (m, 1H), 231-223 (m, 1H), 2.04-1.89 (m, 2H), 1.82-1.78 (m, 1H); LCMS m/z: 349.4 [(M*+1)-Boc] 2-((benziloksi)metiI)-1-(tert-bütoksikarbonil)pirolidin-2-karboksilik asit (ZS-H) sentezi: Metanol (70 mL) içinde karistirilan bir bilesik ZS-G (30 g, 86 mmol) solüsyonuna oda sicakliginda NaOH solüsyonu (70 mL H20 içinde 6.88 9) eklenmistir. Reaksiyon karisimi 16 saat boyunca 70°C'ye isitilmistir. Baslangiç materyalinin tükenmesinden sonra (TLC ile), solvent reaksiyondan düsük basinç altinda buharlastirilmistir ve EtOAc (2 x 200 mL) ile seyreltilmistir. Ayrilmis aköz katman, sitrik asit solüsyonu (pH~3) kullanilarak asit haline getirilmistir ve EtOAc (2 x 250 mL) ile özütlenmistir. Kombine edilmis organik katman, beyazimsi bir kati olarak bilesik ZS-H'yi (25 g, %868) elde etmek üzere n-hekzan ile tritüre edilmis hami elde etmek üzere Na2804 üzerinde kurutulmustur ve konsantre edilmistir. 1H-NMR: (400 MHz, DMSO-de): 6 12.35 (br s, 1H), 7.37-729 (m, 5H), 456-448 (m, 2H), 406-400 (m, 1H), 392-389 (m, 1H), 366-345 (m, 1H), 337-328 (m, 1H), 2.31- 2.20 (m, 1H), 2.05-1.97 (m, 1H), 187-175 (m, 2H), 1.38 (3, 9H); LCMS m/z: 335.3 [M*+1] 1-(tert-bütoksikarboniI)-g-(higlroksimetiI)piroIidin-2-karboksilik asit (gs-i) sentei Metanol (150 mL) içinde karistirilan bir bilesik 2S-H (25 g, 74 mmol) solüsyonuna oda sicakliginda %50 yas %10 Pd/C (7 g) eklenmistir ve Hz atmosferi altinda 10 saat boyunca karistirilmistir. Baslangiç materyalinin tükenmesinden sonra (TLC ile), reaksiyon karisimi bir selit pedi araciligiyla filtrelenmistir ve ped metanol ile yikanmistir (100 mL). Elde edilen filtrat, beyaz kati olarak bilesik ZS-I'yi (15 g, %828) elde etmek üzere düsük basinç altinda konsantre edilmistir. 1H-NMR: (400 MHz, DMSO-ds): 6 4.66 (br s, 1H), 396-383 (m, 1H), 363-359 (m, 1H), 349-341 (m, 1H), 334-325 (m, 1H), 230-217 (m, 1H), 195-172 (m, 3H), 1.38 (3, 9H). Kütle (ESI): m/z 245 [M*+1] fert-&til 2-(((28, 3R)-1,3- is(benziloksi)-1-oksowtan-g-il)kaLbamoil)-g mroksimetilmiroliginJ -kzmaoksilat (25-J) sentez_i: CH2CI2 (180 mL) içinde karistirilan bir bilesik ZS-I (18 9, 73.4 mmol) solüsyonuna oda sicakliginda DIPEA (40 mL, 220 mmol), ZS-D (21.9 9, 73.4 mmol), HATU (41.8 9, 110 mmol) eklenmistir ve 16 saat boyunca karistirilmistir. Baslangiç materyalinin tükenmesinden sonra (TLC ile), reaksiyon karisimi su (50 mL) ile seyreltilmistir ve CH2CI2 (2 x 100 mL) ile özütlenmistir. Kombine edilmis organik katman tuzlu su ile yikanmistir, anhidröz Na2804 üzerinde kurutulmustur. filtrelenmistir ve düsük basinç altinda konsantre edilmistir. Elde edilen ham materyal, soluk sari yogun surup olarak bilesik ZS-J'yi (20 g, %52) elde etmek üzere %30 EtOAc/n-hekzan ile ayristirilarak silika jel kolon kromatografisi ile saflastirilmistir. 1H-NMR: (400 MHz, DMSO-ds): 6 825-812 (m, 1H), 7.31-727 (m, 1OH), 5.85 (t, J= 4.8 Hz, 1H), 5.14 (3, 2H), 454-449 (m, 2H), 431-420 (m, 1H), 4.15407 (m, 1H), 3.91- 3.50 (m, 1H), 352-337 (m, 1H), 331-327 (m, 2H), 235-207 (m, 1H), 195-190 (m, 1H), 173-152 (m, 2H), 1.39 (8, 9H), 1.19 (d, J= 6.4 Hz, 3H); Kütle (ESI): m/z 527.4 [M*+1] tert-bütil 2-((28. 3R)-1,3-bis(benziloksi)-1-oksobütan-Z-il)-1-okso-2,5- diazaspirol3.4]oktan-5-karboksilat (ZS-K) sentezi: THF (100 mL) içinde karistirilan trifenilfosfin (24.7 9, 94 mmol) bir solüsyonuna oda sicakliginda DIAD (15.3 9, 75 mmol) eklenmistir ve 30 dakika boyunca karistirilmistir. Buna yavas bir sekilde (10 mL) THF içinde bilesik ZS-J (20 9, 37.9 mmol) eklenmistir ve reaksiyon karisimi 2 saat boyunca oda sicakliginda karistirilmistir. Baslangiç materyalinin tükenmesinden sonra (TLC ile), reaksiyon düsük basinç altinda konsantre edilmistir. Ham materyal, soluk sari yogun surup olarak bilesik ZS-K'yi (17 g, %88) elde etmek üzere %25 EtOAC/n-hekzan ile ayristirilarak silika jel kolon kromatografisi ile saflastirilmistir. 1H-NMR: (400 MHz, DMSO-ds): ö 7.33-726 (m, SH), 723-718 (m, 5H), 5.10 (8, 2H), 480-473 (m, 2H), 4.60 (3, 2H), 4.31 (3, 2H), 405-400 (m, 2H), 1.80-1.68 (m, 4H), 1.39 (5, 9H), 1.18 (d, J= 6.0 Hz, 3H); Kütle (ESI): m/z 509.4 [IVl++1] (28, 3R)-2-(5-(tert-bütoksikarbonil)-1-okso-2,5-diazaspiro[3.4]oktan-2-il)-3- Mroksiwtanoik asit (ZS-L) sentezi Metanol (100 mL) içinde karistirilan bir bilesik ZS-K (7 9, 13.7 mmol) solüsyonuna oda sicakliginda %10 Pd/C (4 g) eklenmistir ve Hz atmosferi altida 6 saat boyunca karistirilmistir. Baslangiç materyalinin tükenmesinden sonra (TLC ile), reaksiyon karisimi bir selit pedi araciligiyla filtrelenmistir ve ped metanol ile yikanmistir (50 mL). Elde edilen filtrat, beyaz kati olarak bilesik ZS-L'yi (4 g, %88) elde etmek üzere n- pentan (50 mL) ile tritüre edilmis ham ürünü elde etmek üzere düsük basinç altinda konsantre edilmistir. 1H-NMR: (500 MHz, DMSO-ds): 6 12.80 (br s, 1H), 478-473 (m, 1H), 4.21-4.19 (m, 1H), 4.09 (3, 2H), 3.55346 (m, 2H), 209-205 (m, 2H), 1.80 (d, J = 7.0 Hz, 1H), 1.38 (3, 9H), 135-128 (m, 2H), 1.17 (d, J= 6.5 Hz, 3H) LCMS m/z: 329.6 [M++1] Sema 2S-I-3 0 Adim 1 0 Adim 2 0 Adim 3 HqN BocHN ' BocHN & *OH (BDC)7O OH NH4C| &Nm DMFDMA 0 Adim 4 H N"4\\ Adim 5 N/\\ BOCHNJNAN/ "k/l /N _' TFAH N\/1L ,N NH20H.HCl BOC' o TFAIDCM 2 o 2s-0 2S-P 2S-O 2-((tert-bütoksikarbonil) amino) asetik asit (2S-M) sentezi: 1,4-Di0ksan/su (150 mL/75 mL) içinde karistirilan bir (15 g, 200 mmol) solüsyonuna Na2C03 (53 g, 500 mmol) eklenmistir. Akabinde 0°C'de yavas bir sekilde Boc-anhidrit (109 mL, 500 mmol) eklenmistir. Reaksiyon karisimi 12 saat boyunca oda sicakliginda karistirilmistir. Baslangiç materyalinin tükenmesinden sonra (TLC ile), reaksiyon karisimi düsük basinç altinda konsantre edilmistir. Ham kalinti, sitrik asit solüsyonu kullanilarak asit haline getirilmistir (pH~4) ve aköz katman EtOAc (2 x 150 mL) ile özütlenmistir. Kombine edilmis organik katman tuzlu su solüsyonu (2 x 100 mL) ile yikanmistir. Organik katman, beyaz kati olarak bilesik ZS-Myi (30 g, %857) elde etmek üzere anhidröz N82804 üzerinde kurutulmustur, filtrelenmistir ve vakum altinda konsantre edilmistir. Bu materyal ayrica saflastirma olmadan dogrudan sonraki adima yönelik kullanilmistir. 1H-NMR: (500 MHz, DMSO-da): 6 12.41 (br s, 1H), 7.04 (t, J = 5.5 Hz, 1H), 3.57 (d, J = .5 Hz, 2H), 1.37 (5, 9H): tert-bütil (2-amino-2-oksoetil) karbamat (ZS-N) sentezi: CH2CI2 (100 mL) içinde karistirilan bir ZS-M (10 9, 57.14 mmol) solüsyonuna O°C`de HOBt (15.43 9, 114 mmol), EDCI.HCI (21.8 9, 114 mmol), akabinde NH4CI (4.54 g, 85.71 mmol) ve DIPEA (30.7 mL, 171 mmol) eklenmistir. Reaksiyon karisimi 16 saat boyunca oda sicakliginda karistirilmistir. Baslangiç materyalinin tükenmesinden sonra (TLC ile), reaksiyon karisimi su (2 x 100 mL) ile yikanmistir. Organik katman, ham ürünü elde etmek üzere anhidröz Na2804 üzerinde kurutulmustur ve düsük basinç altinda konsantre edilmistir; bu %2 MeOH/CH20I2 ile ayristirilarak silika jel kolon kromatografisi ile saflastirilmistir. Daha sonra bilesik eter (25 mL) ile tritüre edilmistir ve çökeltilen kati, beyaz kati olarak 2S-N"yi (2 g, %20) elde etmek üzere filtrelenmistir. 1H-NMR: (500 MHz, DMSO-ds): 6 7.52 (br s, 1H), 7.17 (br s, 1H), 3.46 (d, J = 6.5 Hz, 2H), 1.38 (3, 9H); (gHert-lgütil (2-(((dimetiIamino)metilen)amin0)-g-oksoetil) karbamat (gs-0) sentezi: THF (70 mL) içinde karistirilan bir 2S-N (7 9, 40.22 mmol) solüsyonuna oda sicakliginda DMF.DMA (10.7 mL, 80.44 mmol) eklenmistir ve 2 saat boyunca 80°Ciye isitilmistir. Baslangiç materyalinin tükenmesinden sonra (TLC ile), reaksiyon karisimi kahverengi surup olarak ZS-O'yu (9 g, ham) elde etmek üzere düsük basinç altinda konsantre edilmistir. Bu ham materyal ayrica saflastirma olmadan dogrudan sonraki adima yönelik alinmistir. 1H-NMR: (500 MHZ, DMSO-ds): 6 6.72 (br s, 1H), 4.35 (5, 1H), 3.64 (Ci, J= 55 Hz, 2H), 3.09 (3, 1H), 1.42 (3, 9H); Kütle (ESI): m/z 230.2 [M*+1]; ten-@Im.2,4-oksadiazoI-5-il)metil) karbamat (ZS-Pt sentezi: Etanol (80 mL) içinde karistirilan bir ZS-O (9 g (ham), 39.30 mmol) solüsyonuna Nz atmosferi altinda hidroksilamin hidroklorid (5.45 9, 78.60 mmol) eklenmistir. Reaksiyon karisimi 90°C'ye isitilmistir ve 2 saat boyunca karistirilmistir. Baslangiç materyalinin tükenmesinden sonra (TLC ile) solvent düsük basinç altinda buharlastirilmistir ve ham kalinti su (75 mL) ile seyreltilmistir. Aköz katman DCM (3 x 100 mL) ile özütlenmistir. Kombine edilmis organik katman tuzlu su solüsyonu (1 x 100 mL) ile yikanmistir. Organik katman anhidröz Na2804 üzerinde kurutulmustur ve solvent, ham ürünü elde etmek üzere düsük basinç altinda konsantre edilmistir; bu, ZS-P (4 g. %51) elde etmek üzere %25 EtOAc/hekzan ile ayristirilarak silika jel kolon kromatografisi ile saflastirilmistir. 1H-NMR: (500 MHz, DMSO-de): 6 8.90 (5, 1H), 7.64 (5, 1H), 4.44 (3, 2H), 1.39 (3, 9H); LCMS m/z.' 198.4 [M'-1] (1&,4-0ksadiazol-5-il)metanamin (ZS-Q) sentezi: DCM (30 mL) içinde karistirilan bir ZS-P (1.1 9, 5.52 mmol) solüsyonuna 30 dakika boyunca 0°C`de trifloroasetik asit (2.1 mL, 27.63 mmol) eklenmistir. Reaksiyon karisimi 4 saat boyunca oda sicakliginda karistirilmistir. Baslangiç materyalinin tükenmesinden sonra (TLC ile), reaksiyon karisimi vakum altinda konsantre edilmistir. Ham kalinti, beyaz kati olarak 25-Q"yu (850 mg, %726) elde etmek üzere eter (20 mL) ile tritüre edilmistir. 1H-NMR: (400 MHz, DMSO-de): 6 9.13 (5, 1H), 8.90 (br s, 2H), 4.56 (3, 2H); LCMS (ESI): 100.4 [M*+1] Sema 2S-I-4 `i Adim-1  Adim›2 j Adim›3 ClH HzN / BocHN / BocHN O (Boc)20 O NHzNH2H2O NHNH? CH(OEt)3 28-R zs-s N'N Adim-4 N'N i \ I S BocHN H-N %0 EtOAc.HCl 2 `%0 2S-T ZS-U Metil (tert-bütoksikarbonillqIisinat (2S-R) sentezi: 1,4 dioksan/su (300 mL/200 mL) içinde karistirilan bir glisin metil ester hidroklorid (50 g, 400 mmol) solüsyonuna NazC03 (84.8 9, 800 mmol) eklenmistir ve 10 dakika boyunca oda sicakliginda karistirilmistir. Reaksiyon karisimi 0°C`ye sogutulmustur ve Boc-anhidrit (104 mL, 480 mmol) damlatilarak eklenmistir ve karistirma 16 saat boyunca oda sicakliginda devam ettirilmistir. Baslangiç materyalinin tükenmesinden sonra (TLC ile), reaksiyon karisimi düsük basinç altinda konsantre edilmistir ve elde edilen kalinti, su (100 mL) ile seyreltilmistir ve EtOAc (2 x 250 mL) ile özütlenmistir. Kombine edilmis organik katman tuzlu su (1 x 200 mL) ile yikanmistir ve organik katman, koyu surup olarak ZS-R'yi (64 g, %84) elde etmek üzere Na2804 üzerinde kurutulmustur, filtrelenmistir ve düsük basinç altinda konsantre edilmistir. 1H-NMR: (500 MHz, DMSO-de): 6 7.19 (t, J = 5.5 Hz, 1H), 3.67 (d, J = 6.0 Hz. 2H), 3.62 (3, 3H), 1.38 (8, 9H); LCMS m/z: 190.2 [M*+1] tert-bütil (2-hidrazinil-2-oksoetil)karbamat (ZS-S) sentezi: EtOH (100 mL) içinde bir ZS-R (20 g, 105 mmol) solüsyonuna oda sicakliginda hidrazin hidrat (15.8 9, 315 mmol) eklenmistir ve akabinde 6 saat boyunca 100°C'de karistirilmistir. Baslangiç materyalinin tükenmesinden sonra (TLC ile), etanol düsük basinç altinda buharlastirilmistir. Elde edilen ham materyal, beyaz kati olarak ZS-S'yi elde etmek üzere n-pentan/dietil eter (20 mL/20 mL) ile tritüre edilmistir. 1H-NMR: (400 MHz, DMSO-de): 6 8.91 (3, 1H), 6.88 (t, J = 5.5 Hz, 1H), 4.16 (3, 2H), 3.47 (d, J: 6.0 Hz, 2H), 1.37 (3, 9H); LCMS m/z: 190.2 [M*+1] tert-bütil 1 3 4-oksadiazol-2-il)metil) karbamat (ZS-T) sentez_i: Trietil ortoformat (140 mL) içinde bir ZS-S (14 g, 74 mmol solüsyonuna oda sicakliginda p-TSA (katalitik, 140 mg) eklenmistir ve akabinde 4 saat boyunca 80°C'de karistirilmistir. Baslangiç materyalinin tükenmesinden sonra (TLC ile), trietil ortoformat düsük basinç altinda buharlastirilmistir. Ham kalinti, beyazimsi bir kati olarak ZS-T'yi (6.1 9, %415) elde etmek üzere %20 EtOAc/hekzan ile ayristirilarak kolon kromatografisi ile saflastirilmistir. 1H-NMR: (400 MHz, DMSO-ds): 6 10.74 (3, 1H), 7.45 (3, 1H), 4.03 (s, 2H), 1.47 (3, 9H); LCMS m/z: 200.2 [M*+1] (1,3,4-oksadiazol-2-il)metanamin (ZS-U) sentezi: EtOAc (10 mL) içinde karistirilan bir ZS-T (5 g, 25 mmol) solüsyonuna O°C'de HCI (60 mL) ile doymus hale getirilen EtOAc eklenmistir ve 16 saat boyunca oda sicakliginda karistirilmistir. Baslangiç materyalinin tükenmesinden sonra (TLC ile), reaksiyon karisimi düsük basinç altinda konsantre edilmistir. Ham materyal, beyazimsi bir kati olarak (HCI tuzu) ZS-U'yu (3 g, %887) elde etmek üzere dietileter/n-pentan (25 mL/25 mL) ile tritüre edilmistir ve düsük basinç altinda kurutulmustur. 1H-NMR: (500 MHz, DMSO-de): 6 9.55 (br s, 2H), 7.99 (3, 1H), 3.90 (5, 2H); LCMS m/z.' 100 [M*+1] Sema 2S-l-5 Bn Ad 2 rîjçN 'N`Nl IITI I @Br Adim1 ©/\N3 Bn/N / + N / NaN3. DMF Etil but-2-in0at O EtO EIO O 2S-V 28-W1 28-W2 ,Bn Bn ,N`N N~N/ 1 3 II N / Adim N / LIOH EtO o HO O -W2 ZS-X2 (Azidometil) benzen (ZS-V) sentezi: Dimetil formamid (300 mL) içinde karistirilan bir benzil bromid (30 g, 175mm0l) solüsyonuna atil atmosfer altinda oda sicakliginda sodyum azid (45.6 9, 701 mmol) eklenmistir. Ortaya çikan reaksiyon karisimi 16 saat boyunca 70°C'de karistirilmistir. Reaksiyonun tamamlanmasinin gözlemlenmesi (TLC ile) akabinde, reaksiyon karisimi oda sicakligina getirilmistir; uçucular su (300 mL) ve eter (200 mL) ile seyreltilmistir. Ayrilmis organik katman (3 x 200 mL) sogutulmus su ile yikanmistir. Ayrilmis organik katman, beyazimsi bir kati olarak bilesik ZS-V'yi (18 g, ham) elde etmek üzere anhidröz Na2804 üzerinde kurutulmustur, filtrelenmistir ve düsük basinç altinda konsantre edilmistir. 1H-NMR: (400 MHz, CDCIa): ö 7.40-7.29 (m, 5H), 4.32 (5, 2H). Etil 1 -benziI-5-metil-1H-1,2,3-triazol-4-karboksilat (28-W2) sentezi Tolüen (80 mL) içinde karistirilan bir etil büt-2-inoat (8.0 g, 71.3 mmol) solüsyonuna atil atmosfer altinda oda sicakliginda 28-V (12.0 9, 107 mmol) eklenmistir. Ortaya çikan reaksiyon karisimi 100°C`ye isitilmistir ve 16 saat boyunca karistirilmistir. Reaksiyon karisimi oda sicakligina getirilmistir; uçucular düsük basinç altinda buna buharlastirilmistir, ham kalinti 2S-W1 ve 2S-W2'yi (8.2 9, %47.1) (kolon kromatografisi ile ayrilabilir) elde etmek üzere %40 EtOAc/hekzan ile ayristirilarak kolon kromatografisi ile saflastirilmistir. 1H-NMR: (400 MHz, CDCI3): ö 7.36-7.31 (m, 3H), 7.16 (t, J = 6.0 Hz, 2H), 5.53 (3, 2H), 4.43 (q, J = 7.2 Hz, 2H), 2.45 (3, 3H), 1.41 (t, J = 7.2 Hz, 3H); Kütle m/z: 246.3 [M++1] 1-benzil-5-metiI-1H-1,2,3-triazoI-4-karboksilik asit (ZS-X2) sentezi THF/H20 (82 mL/82 mL, 1:1) içinde karistirilan bir bilesik 28-W2 (8.2 9, 33.4 mmol) solüsyonuna oda sicakliginda LiOH.H20 (4.2 9, 0.4 mmol) eklenmistir ve 16 saat boyunca karistirilmistir. Reaksiyonun tamamlanmasi akabinde (TLC ile), uçucular düsük basinç altinda buharlastirilmistir. Kalinti aköz 2N HCI ile asit haline getirilmistir ve çökeltilen kati, beyazimsi bir kati olarak bilesik 28-X2'yi (7.0 9, %906) elde etmek üzere filtrelenmistir ve su (25 mL) ile yikanmistir, düsük basinç altinda kurutulmustur. 1H-NMR: (400 MHz, DMSO-de): 6 13.01 (br s, 1H), 740-732 (m, SH), 5.63 (3, 2H), 2.45 (3, 3H); Kütle m/z: 218.3 [M*+1]; Sema 2S-l-6 FM Adim 1 @N _› NÄCN Pd-C NÄ/NH? HCI 2S-Y Pirimidin-2-ilmetanamin (ZS-Y) sentezi: Metanol (50 mL) içinde karistirilan bir 2-siyanopirimidin (2.0 9, 19.0 mmol) solüsyonuna N2 atmosferi altinda %10Pd/C (300 mg), 12 N HCI (1.5 mL) eklenmistir. Reaksiyon karisimi 3 saat boyunca Hz atmosferi (balon basinci) altinda oda sicakliginda karistirilmistir. Baslangiç materyalinin tükenmesinden sonra (TLC ile), reaksiyon karisimi bir selit pedi araciligiyla filtrelenmistir ve ped metanol ile yikanmistir. Elde edilen filtrat, beyaz kati olarak bilesik 28-Y*yi (1.2 9, %44) elde etmek üzere dietil eter ile tritüre edilmis ham bilesigi elde etmek üzere düsük basinç altinda konsantre edilmistir. 1H-NMR: (500 MHz, DMSO-de): 6 8.87 (d, J = 5.0 Hz, 2H), 8.69 (br s, 2H), 7.52 (t, J = .0 Hz, 1H), 4.24 (5, 2H); Kütle (ESI): 110.3 [M*+1] Sema 2S-I-F' HO 0 OH Ad'mA HO 0 OH Ad'mB BnO 0 OH NH2 (80020 NHBoc NaHBnBr NHBoc zs-z 28-AA AdimC BnO O OBn Ad'mÜ BnO O OBn K2C03.BnBr NHBOC eter-HCI NHg HCl -AB 28-AC (S)-g-((tert-bütoksik:m)onil)ami_no)-3-higlroksimpanoik gsit (ZS-Z) sentez_i 1, 4 dioksan/H20 (350 mL/3OO mL) içinde karistirilan bir L-serin (76 g, 723 mmol) solüsyonuna 0°C'de NaOH (61 g, 1.51mol), Boc-anhidrit (190 mL, 868 mmol) eklenmistir. Reaksiyon karisimi 16 saat boyunca oda sicakliginda karistirilmistir. Baslangiç materyalinin tükenmesinden sonra (TLC ile), reaksiyon karisimi 2N HCI (pH~4) ile asit haline getirilmistir ve EtOAc (5x500 mL) ile özütlenmistir. Kombine edilmis organik ekstraktlar sari surup olarak ZS-Z'yi (100 g, %675) elde etmek üzere anhidröz Na2804 üzerinde kurutulmustur ve düsük basinç altinda konsantre edilmistir. 1H-NMR: (400 MHz, CDCI3): 6 6.54 (br s, 1H), 5.77 (br s, 1H), 435-404 (m, 1H), 3.87- 3.84 (m, 2H), 1.45 (3, 9H). (g)-3-(benziIoksi)-g-((tert-Qtoksikarponil)e_imino) manoLk asit (gs-AA) sentez_i DMF (650 mL) içinde karistirilan bir ZS-Z (50 g, 245 mmol) solüsyonuna -15°C'de NaH (%60) (23 g, 563 mmol) eklenmistir ve 2 saat boyunca karistirilmistir. Benzil bromid (32.8 mL, 269 mmol) yavas bir sekilde eklenmistir. Reaksiyon karisimi sicakligi oda sicakligina isitilmistir ve 12 saat boyunca karistirilmistir. Baslangiç materyalinin tükenmesinden sonra (TLC ile), reaksiyon karisimi sogutulmus su (200 mL) içine dökülmüstür ve dietileter (2x 250 mL) ile özütlenmistir. Aköz katman sitrik asit (pH~4) ile asit haline getirilmistir ve EtOAc (2x500 mL) ile özütlenmistir. Kombine edilmis organik katmanlar su (3x250 mL) ile yikanmistir. Organik ekstraktlar, kahverengi surup olarak 28-AA'yi (54 g, %75) elde etmek üzere anhidröz Na2804 üzerinde kurutulmustur, filtrelenmistir ve düsük basinç altinda konsantre edilmistir. 1H-NMR: (400 MHz, CDCI3)I ö 7.32-726 (m, 5H), 5.43 (Ci, J = 7.6 Hz, 1H), 4.70-4.46 (m, 1H), 4.45 (3, 2H), 4.13-3.91 (m, 1H), 3.73-3.70 (m, 1H), 1.44 (3, 9H). (Sl-benzil 3-(benziIoksi)-g-((tert-b_ütoksikarboniIlaminolgroganoat (ZS-AB) sentezi DMF (250 mL) içinde karistirilan bir 28-AA (36 g, 122 mmol) solüsyonuna 0°C`de Na2003 (20 g, 183 mmol) eklenmistir ve yavas bir sekilde benzil bromid (18 mL, 146 mmol) eklenmistir. Reaksiyon karisimi sicakligi oda sicakligina isitilmistir ve 12 saat boyunca karistirilmistir. Baslangiç materyalinin tükenmesinden sonra (TLC ile), reaksiyon karisimi sogutulmus su (200 mL) içine dökülmüstür ve dietileter (2x 250 mL) ile özütlenmistir. Kombine edilmis organik katmanlar su (3x250 mL) ile yikanmistir. Organik ekstraktlar, herhangi bir saflastirma olamadan dogrudan sonraki adima yönelik kullanilan, kahverengi surup olarak 28-AB'yi (42 g, %91) elde etmek üzere anhidröz N32804 üzerinde kurutulmustur, filtrelenmistir ve düsük basinç altinda konsantre edilmistir. (Sl-benzil 2-amino-3-(benziloksi)propanoat hidroklorid (ZS-AC) sentezi: HCI (50 mL) ile doymus hale getirilen eter içinde karistirilan bir 28-AB (10 9, 25.9 mmol) solüsyonu O°C`de eklenmistir ve 12 saat boyunca oda sicakliginda karistirilmistir. Elde edilen çökelti filtrelenmistir ve dietileter (2x100 mL) ile tritüre edilmistir. Filtrelenen bilesik, beyaz kati olarak 23-AC"yI (5 g, %60) elde etmek üzere vakum altinda kurutulmustur. 1H-NMR: (400 MHz, DMSO-de): 6 8.66 (s, 2H), 7.38-727 (m, 1OH), 529-522 (m, 2H), 4.57-4.44 (m, 3H), 3.91-3.81 (m, 2H) Sema 2S-I-8 OH OHH o o Ad'm _1_ Adim 2 03" Adim3 OH 0" OBn N'" N 0 zs -AC HATU . DIAD PF'h3 OBn pd_c'iH? N OH Bor: OBn BocO 800 O 2s-i 2s AD zs AE 23-AF tert-büt_il g-(((S)-1.3-bis(ben5iloksi)-1-oksoman-2-il)karbamoil)-g (hidroksimetil)pirolidin-1-karboksilat (ZS-AD) sentezi: CH2CI2 (50 mL) içinde karistirilan bir bilesik 28-! (5 9, 20.4 mmol) solüsyonuna 0°C'de DIPEA (10.7 mL, 61.2 mmol), 28-AC (5.8 9, 20.4 mmol), HATU (11.6 9, 30.6 mmol) eklenmistir ve 12 saat boyunca oda sicakliginda karistirilmistir. Baslangiç materyalinin tükenmesinden sonra (TLC ile), reaksiyon karisimi su (100 mL) ile seyreltilmistir ve CH20I2 (2 x 100 mL) ile özütlenmistir. Kombine edilmis organik katman sitrik asit (1 X 100 mL), akabinde tuzlu su solüsyonu (1 x 100 mL) ile yikanmistir. Organik katman anhidröz Na2804 üzerinde kurutulmustur, filtrelenmistir ve düsük basinç altinda konsantre edilmistir. Elde edilen ham materyal, sari koyu surup olarak bilesik 28-AD'yi (8 g, %765) elde etmek üzere %50 EtOAc/n-hekzan ile ayristirilarak silika jel kolon kromatografisi ile saflastirilmistir. 1H-NMR: (400 MHz, CDsOD): 6 733-724 (m, 10H), 523-511 (m, 2H), 472-466 (m, 2H), 450-444 (m, 1H), 418-391 (m, 2H), 3.75-3.70 (m, 2H), 365-340 (m, 2H), 2.34- 2.03 (m, 2H), 1.81-1.78 (m, 2H), 1.41 (3, 9H); Kütle (ESI): m/z 512.6 [M*+1] tert-bütil 2-((S)-1,3-bis(benziloksi)-1 -oksopropan-Z-ill-1-okso-2,5-diazaspiro [3.4]okt_an-5-karl_›oksilat (ZS-AE) sentez_i: THF (5 mL) içinde karistirilan bir trifenilfosfin (640 mg, 2.44 mmol) ssolüsyonuna oda sicakliginda DIAD (392 mg, 1.94 mmol) eklenmistir ve 15 dakika boyunca karistirilmistir, akabinde (5 mL) THF içinde bilesik 2SAD (500 mg, 0.97 mmol) yavas bir sekilde eklenmistir ve reaksiyon karisimi 2 saat boyunca oda sicakliginda karistirilmistir. Baslangiç materyalinin tükenmesinden sonra (TLC ile), reaksiyon düsük basinç altinda konsantre edilmistir. Ham materyal, sari sivi olarak bilesik 28-AE'yi (450 mg, %93) elde etmek üzere %2 MeOH/DCM ile ayristirilarak kolon kromatografisi ile saflastirilmistir. 1H-NMR: (400 MHz, CD30D): ö 7.34-727 (m, 1OH), 525-514 (m, 2H), 4.78-4.73 (m, 1H), 470-442 (m, 2H), 404-398 (m, 1H), 393-378 (m, 1H), 389-378 (m, 1H), 3.76- 3.68 (m, 1H), 345-335 (m, 2H), 220-209 (m, 2H), 1.90-1.78 (m, 2H), 1.46 (5, 9H) LCMS (ESI): m/z 495.5 [M*+1] 1-(tert-bütoksikarboniI)-2-(hidroksimetiIlpiroIidin-g-karboksilik asit (gs-A5 sentezi: Metanol (25 mL) içinde karistirilan bir bilesik 28-AE (500 mg, 1.01 mmol) solüsyonuna oda sicakliginda %50 yas %10 Pd/C (250 mg) eklenmistir ve 24 saat boyunca H2 atmosferi altinda karistirilmistir. Baslangiç materyalinin tükenmesinden sonra (TLC ile), reaksiyon karisimi bir selit pedi araciligiyla filtrelenmistir ve ped metanol ile yikanmistir (20 mL). Elde edilen filtrat, beyaz kati olarak bilesik 28-AF'yi (400 mg, ham) elde etmek üzere düsük basinç altinda konsantre edilmistir. 1H-NMR: (400 MHz, CD3OD): 6 492-487 (m, 1H), 428-407 (m, 3H), 363-360 (m, 1H), 355-340 (m, 2H), 230-225 (m, 2H), 1.95-1.87 (m, 2H), 1.47 (3, 9H); LCMS: 315.3 [M+1] Sema 2S-I-9 o o CbZ Chat 0 HM# Adim 1 HINFA( Adim 2 HN. 0 Adim 3 HN, 0 Adim 4 H7N. OH OMe ;ß (ÃOMQ _ HOME â› How; OH 3002 OH `,uz-ci OH TBDPS OTBDPS ::L OTBDPS 2 28-AG 28-AH 28-AI 28-AJ (Sl-metil 2-amino-3-hidroksipropanoat (ZS-AG) sentezi: Metanol (300 mL) içinde karistirilan bir L-serin (40 9, 0.38 mol) solüsyonuna 0°C`de SOCI2 (33.6 mL, 0.45 mol) damlatilarak eklenmistir ve 1 saat boyunca karistirilmistir. Ortaya çikan reaksiyon karisimi 24 saat boyunca reflükse tabi tutulmustur. Baslangiç materyalinin tükenmesinden sonra (TLC ile), reaksiyon karisimi, 28-AG'yi (59.18 9, ham) elde etmek üzere oda sicakligina isitilmistir ve vakum altinda konsantre edilmistir ve n-hekzan (2 x 200 mL) ile bosaltilmistir. 1H-NMR: (400 MHz, DMSO-ds): 6 8.62 (s, 3H), 4.08 (d, J= 3.2 Hz, 1H), 3.83 (d, J= 3.6 Hz, 2H), 3.78 (5, 3H); LCMS, mlz: 120.2 [M*-1] (S)-metil 2-(((benziloksi)karboniI)amino)-3-hidroksimpanoatQS-AH) sentezi: Su (100 mL) ve 1, 4-di0ksan (300 mL) içinde karistirilan bir bilesik 28-AG (40 9, 0.33 mol) solüsyonuna Na2CO3 (71.18 9, 0.67 mol) eklenmistir ve 30 dakika boyunca oda sicakliginda karistirilmistir. Reaksiyon karisimi 0°C`ye sogutulmustur, benzil kloroformat (68.5 9, 0.40mol) damlatilarak eklenmistir ve karistirma 8 saat boyunca oda sicakliginda devam ettirilmistir. Baslangiç materyalinin tükenmesinden sonra (TLC ile), reaksiyon karisimi EtOAc (200 mL) ile seyreltilmistir. Aköz katman EtOAc (2 x 200 mL) ile özütlenmistir. Ayrilmis organik ekstraktlar tuzlu su ile yikanmistir, anhidröz Na2804 üzerinde kurutulmustur, filtrelenmistir ve düsük basinç altinda konsantre edilmistir. Ham materyal, bilesik 28-AH'yi (53 g, %62) elde etmek üzere %20 EtOAc/n- hekzan ile ayristirilarak silika jel kolon kromatografisi ile saflastirilmistir; 1H-NMR: (400 MHz, DMSO-ds): 6 7.49 (d, J = 8 Hz, 1H), 7.37-7.29 (m, 5H), 5.04 (3, 2 H), 4.93 (t, J: 6 Hz, 1H), 418-413 (m, 1H), 3.78 (5, 3H), 367-356 (m, 2H) S-metil 2- benziloksi)karponil)amino)-3-((tert-bütildifenilsilil)oksi) manoat (ZS-AI) sentezi: DCM (700 mL) içinde karistirilan bir bilesik 28-AH (20 9, 79.20 mmol) solüsyonuna 0°Ctde imidazol(169, 237.6mm0l), akabinde N2 atmosferi altinda TBDPS (25.9 9, 95.04 mmol) eklenmistir ve 8 saat boyunca oda sicakliginda karistirilmistir. Baslangiç materyalinin tükenmesinden sonra (TLC ile), reaksiyon karisimi su (100 mL) ile seyreltilmistir ve aköz katman DCM (2 x 200 mL) ile özütlenmistir. Ayrilmis organik katman tuzlu su ile yikanmistir, anhidröz Na2804 üzerinde kurutulmustur ve düsük basinç altinda konsantre edilmistir. Ham materyal, bilesik 28-Al*yi (25 g, %64) elde etmek üzere %20 EtOAc/n-hekzan ile ayristirilarak silika jel kolon kromatografisi ile saflastirilmistir. 1H-NMR: (500 MHz, CDC13)I ö 7.23768 (m, 1H), 7.58 (d, J = 7 Hz, 3H), 7.44-7.37 (m, 9H), 7.34 (d, J = 7.5 Hz, 2H), 5.65 (d, J = 9 Hz, 1H), 5.12 (Ci, J = 2, 2H), 4.45 (d, J = 9 Hz, 1H), 4.10-4.07 (m, 1H), 391-388 (m, 1H), 3.74 (3, 3H). 1.04 (8, 9H); LCMS (m/z): 492.1 [M*-1] (8)-metil 2-amino-3-((tert-bütiIdifenilsilil)oksi)propanoat (28-AJ) sentezi: Etanol (250 mL) içinde karistirilan bir bilesik 28-AI (25 9, 51.12 mmol) solüsyonuna oda sicakliginda %50 yas %10 Pd/C (15 g) eklenmistir ve 8 saat boyunca H2 atmosferi (balon basinci) altinda karistirilmistir. Baslangiç materyalinin tükenmesinden sonra (TLC ile), reaksiyon karisimi bir selit pedi araciligiyla filtrelenmistir ve ped etanol ile yikanmistir. Elde edilen filtrat, sari sivi olarak bilesik 28-AJ'yi (18 g, %97) elde etmek üzere düsük basinç altinda konsantre edilmistir. 1H-NMR: (400 MHz, CDCI3): ö 7.66-7.61 (m, 4H), 7.43-7.36 (m, 6H), 400-397 (m, 2H), 3.74(s, 3H), 3.64 (t, J = 4 Hz, 1H), 2.65 (3, 2H), 1.04 (8, 9H); LCMS m/z: 358 [M*-1] Sema :3.1-10 osi HO m0" Adim 1 "051 Adim 2 Adim 3 Adim 4 _› N _› _b "3 O soci2 EtOH g 0 (Boc}20 `goc o LIHMDS ;1 OEI NaOH 800 O AK 2s AL :zs AM HO o 0 Adim 5 Filli Adim 5 Adim 7 N _ H N 0" zs o EDCI OBn DIAD PPh. iOBn pd_ -CiHz rii -IOH 805 O BOCO /' OBn BocO BocO 28-AN 2s A0 28-AP 25-AO Etil pirolidin-2-karboksilat hidroklorid (ZS-AK) sentezi: Etanol içinde karistirilan bir L-prolin (110 g, 956.5 mmol) solüsyonuna tiyonil klorid (141 ml, 1911.13 mmol) eklenmistir ve 16 saat boyunca reflükse tabi tutulmustur. Reaksiyon karisimi, hidroklorid tuzu (170 g, %99) olarak bilesik 28-AK'yI elde etmek üzere oda sicakligina getirilmistir ve vakum altinda konsantre edilmistir. 1H-NMR: (400 MHz, CDCIs): 6 415-410 (m, 2H), 3.68-3.62 (m, 2H), 359-347 (m, 2H), 2.49-2.37 (m, 1H), 2.27-2.05 (m, 3H), 1.18 (t, J = 3.6 Hz, 3H); LCMS, m/z: 143 [M*+1] 1-tert-bütil 2-etil pirolidin-1,2-dikarboksilat (ZS-AL) sentezi: CH20I2 (700 mL) içinde karistirilan bir bilesik 28-AK (70 9, 0.391 mol) solüsyonuna Et3N (170.7 mL, 1.22 mol), akabinde Boc-anhidrit (133 9, 0.61 mol) 0°C'de eklenmistir. Reaksiyon karisimi 12 saat boyunca oda sicakliginda karistirilmistir. Baslangiç materyalinin tükenmesinden sonra (TLC ile), reaksiyon su (100 mL) ile seyreltilmistir ve CH20I2 (2x 200 mL) ile özütlenmistir. Organik katman, koyu surup olarak bilesik 28- AL'yi (90 g, %90) elde etmek üzere su (1 x 150 mL), tuzlu su (1 x 200 mL) ile yikanmistir, Na2804 üzerinde kurutulmustur ve düsük basinç altinda konsantre edilmistir. 1H-NMR: (400 MHz, DMSO-ds): ö 4.15-4.10 (m, 2H), 409-402 (m, 1H), 3.36-329 (m, 2H), 225-213 (m, 1H), 187-176 (m, 3H), 1.40 (5, 9H), 1.18 (t, J= 3.6 Hz, 3H); LCMS, m/z: 144 [(M*+1)-Boc]; HPLC: %96.11 1-tert-bütil 2-etil 2-(1-hidroksietil)pirolidin-1,g-dikarboksilat (ZSAM) sentezi: THF (50 mL) içinde karistirilan bir 28-AL (5 9, 20.5 mmol) solüsyonuna -20°C'de LIHMDS (203 mL, 20.5 mmol) eklenmistir ve 1 saat boyunca karistirilmistir. Buna, asetaldehit (1.2 mL, 20.5 mmol) -20°C'de damlatilarak eklenmistir ve 1 saat boyunca - °C'de karistirilmistir. Baslangiç materyalinin tükenmesinden sonra (TLC ile), reaksiyon aköz NH4CI solüsyonu ile söndürülmüstür ve EtOAc (1 x 50 mL) ile özütlenmistir. Ayrilmis organik katman, soluk sari surup olarak bilesik 28-AM'yi (1.8 9, %30) elde etmek üzere %10 EtOAc/hekzan ile ayristirilarak kolon kromatografisi ile saflastirilmis ham bilesigi elde etmek üzere NaZSO4 üzerinde kurutulmustur ve konsantre edilmistir. 1H-NMR: (500 MHz, DMSO-de): 6 5.10 (d, J = 8.5 Hz, 1H), 4.54-4.36 (m, 2H), 4.05- 3.99 (m, 2H), 3.60-349 (m, 1H), 197-174 (m, 4H), 1.40 (5, 9H), 1.18, 1.15 (dd, J= 7.5 Hz, 6.5 Hz, 3H), 0.96 (d, J = 9.5 Hz, 3H); LCMS, m/z: 188 [(M*+1)-Boc] 1-(tert-bütoksikarbonil)-2-(1-hidroksietiI)pirolidin-2-karboksilik asit (ZS-AN) sentezi: Metanol (30 mL) içinde karistirilan bir bilesik 2S-AM (10 9, 34.8 mmol) solüsyonuna O°C`de NaOH (2.7 9, 69.6 mmol), HzO/THF (30 mL/30 mL)) eklenmistir. Reaksiyon karisimi 5 saat boyunca 80°Clye isitilmistir. Baslangiç materyalinin tükenmesinden sonra (TLC ile), solvent düsük basinç altinda buharlastirilmistir. Aköz katman sitrik asit solüsyonu kullanilarak asit haline getirilmistir ve EtOAc (2x 100 mL) ile özütlenmistir. Ayrilmis organik katman. kahverengi yapiskan kati olarak bilesik 28-AN'yi (4.8 9, %533) elde etmek üzere su (1 x 50 mL) ile yikanmistir, Na2804 üzerinde kurutulmustur ve konsantre edilmistir. 1H-NMR: (500 MHz, DMSO-ds): 6 460-454 (m, 1H), 3.98 (d, J = 10.0 Hz, 1H), 3.90- 3.77 (m, 2H), 3.44-3.34 (m, 1H), 201-168 (m, 4H), 1.40 (3, 9H), 1.26 (d, J = 10.0 Hz, 3H); LCMS, m/z: 258 (M*-1); HPLC (saflik): %91.? tert-bü_til 2-(((28,3R)-1.3-bis(benziloksi)-1-oksobütan-Z-iIlkarbamoil)-2-(1- wroksiempiroligin-1-karboksilat (gs-A0) sentez_i: CH2CI2 (50 mL) Içinde karistirilan bir bilesik 23-AN (2.0 9, 7.72 mmol) solüsyonuna 0°C'de DIPEA (4.2 mL, 22.4 mmol), EDCI.HCI (2.2 9, 11.5 mmol), akabinde HOBt (1.5 9, 11.5 mmol), bilesik D (2.8 9, 8.35 mmol) eklenmistir ve 12 saat boyunca karistirilmistir. Baslangiç materyalinin tükenmesinden sonra (TLC ile), reaksiyon karisimi su (30 mL) ile seyreltilmistir ve CH2CI2 (2 x 50 mL) ile özütlenmistir. Kombine edilmis organik katman tuzlu su (2 x 50 mL) ile yikanmistir, anhidröz N82804 üzerinde kurutulmustur, filtrelenmistir ve düsük basinç altinda konsantre edilmistir. Elde edilen ham materyal, renksiz sivi olarak bilesik 23-A0'yu (1.5 9, %36) elde etmek üzere %25 EtOAc/n-hekzan ile ayristirilarak silika jel kolon kromatografisi ile saflastirilmistir. 1H-NMR: (400 MHz, DMSO-ds): 6 8.47 (t, J = 8.8 Hz, 1H), 731-719 (m, 10H), 5.73- .58 (m, 1H), 5.18 (5, 2H), 4.64 (5, 2H), 460-449 (m, 1H), 4.29 (d, J = 12.0 Hz, 1H), 4.15-4.12 (m, 1H), 3.59359 (m, 1H), 3.24-3.13 (m, 1H), 171-160 (m, 2H), 1.43-1.38 (m, 2H), 1.35 (5, 9H), 1.18 (d, J = 6.0 Hz, 3H). 1.04 (d, J= 6.4 Hz, 3H); Kütle (ESI): m/z 540 [iyi-_11 tert-bütil 2-((2S,3R)-1,3-bis(benziloksi)-1-oksobütan-2-il)-1-metil-3-okso-2,5- diazaspiro[3.4]oktan-5-karboksilat (ZS-AP) sentezi: THF (30 mL) içinde karistirilan bir trifenilfosfin (1.45 9, 5.53 mmol) solüsyonuna oda sicakliginda DIAD (1.12 9, 5.53 mmol) eklenmistir ve 30 dakika boyunca karistirilmistir. Buna yavas bir sekilde (10 mL) THF içinde bilesik 28-A0 (1.5 9, 2.77 mmol) eklenmistir ve reaksiyon karisimi 2 saat boyunca oda sicakliginda karistirilmistir. Baslangiç materyalinin tükenmesinden sonra (TLC ile), reaksiyon düsük basinç altinda konsantre edilmistir. Ham materyal, soluk sari surup olarak bilesik ZS-AP'yi (800 mg, %57) elde etmek üzere %20 EtOAc/hekzan ile ayristirilarak silika jel kolon kromatografisi ile saflastirilmistir. 1H-NMR: (400 MHz, DMSO-de): ö 7.33-7.18 (m, 10H), 5.07 (3, 2H), 4.61 (5, 2H), 4.38- 4.31 (m, 1H), 3.77-3.75 (m, 1H), 328-324 (m, 1H), 267-266 (m, 1H), 222-212 (m, 1H), 1984.92 (m, 3H), 1.72-1.60 (m, 1H), 1.40 (3, 9H), 1.18 (d, J = 5.6 Hz, SH), 1.13 (Ci, J = 6.4 Hz, 3H) Kütle (ESI): m/z 523 [M*+1] _(2S.3R)-g-(5-(tert-bi_itoksikarboniI)-1-metiI-3-okso-2,5-diazasgiro|3.4|oktan-2-iI)-3- hidroksibütanoik asit (ZS-AQ) sentezi: Metanol (30 mL) içinde karistirilan bir bilesik 28-AP (900mg) solüsyonuna oda sicakliginda %10 Pd/C (300 mg) eklenmistir ve 16 saat boyunca Hz atmosferi (balon basinci) altinda karistirilmistir. Baslangiç materyalinin tükenmesinden sonra (TLC ile), reaksiyon karisimi bir selit pedi araciligiyla filtrelenmistir ve metanol (10 mL) ile yikanmistir. Elde edilen filtrat, sari koyu surup olarak bilesik 23-AQ'yu (480 mg. %82) elde etmek üzere düsük basinç altinda konsantre edilmistir. 1H-NMR: (400 MHz, DMSO-ds): 61280 (br s, 1H), 5.11-4.96 (m, 1H), 4.83-4.04 (m, 3H), 3.40-3.35 (m, 1H), 2.11 (s, 3H), 210-203 (m, 2H), 1.46 (5, 9H), 143-139 (m, BH). LCMS: 342 [M4] 69 Sema ZS-l-II 0" Adim 1 Adim 2 CE' Adim 3 H 0 Adim 4 _'o _'. 0 ~ 0 800' M _' soci EIOH (BOCJ20 BÜC MeMgBr 00051 TFA zsrAR zsýAs ZSIAT 05: Adim 5 05 Adirn s 05( Adim 7 g:: Adim 8 N O Pd`C.'H2 H 1800130 `B LIHMOS. éoco akoi NaOH °° BOM-CI ZS~AU zs AV 28-AW 28-AX o OBn OH Adim 9 %34# Adim 10 Mao::: Adim 11 Nm. 08n Adim 12 N _›/` 28 0 EDCI N "OBn . l 0 BOC . Pd'C HZ B O nDIAD.PPh3 PdvCIH Boco Boco OC 1 -AY 25-AZ ZS-BA ZS-BB OH Niii-i` N "OH | 0 B ZSIBC Etil 5-oksopirolidin-2-karboksilat (ZS-AR) sentezi: Etanol (100 mL) içinde karistirilan bir 5-0ksopirolidin-2-karb0ksilik asit (10 9, 77.4 mmol) solüsyonuna 0°C'de tiyonil klorid (6.7 mL, 92.9 mmol) eklenmistir. Reaksiyon karisimi 16 saat boyunca oda sicakliginda karistirilmistir. Baslangiç materyalinin tükenmesinden sonra (TLC ile), solventler reaksiyon karisiminda vakum altinda uzaklastirilmistir. Kalinti EtOAc (50 mL) ile seyreltilmistir ve K2C03 üzerinde karistirilmistir. Organik katman anhidröz Na2804 üzerinde kurutulmustur ve düsük basinç altinda konsantre edilmistir. Elde edilen ham materyal, bilesik 28-AR'yi (9 g, %74) elde etmek üzere silika jel kolon kromatografisi ile saflastirilmistir. 1H-NMR: (400 MHz, DMSO-de): 6 7.98 (br s, 1H), 4.16 (t, 3H), 2.37-2.30 (m, 1H), 2.15 (q, 2H), 2.03-1.97 (m, 1H), 1.22 (t, 3H); LCMS, mlz: 157.9 [M++1] 1-tert-bütil 2-etil 5-Ok50pirolidin-1,2-dikarboksilat (ZS-AS) sentezi: CH2C|2 (90 mL) içinde karistirilan bir bilesik 28-AR (9 9, 57.3 mmol) solüsyonuna O°C'de DMAP (7.0 9, 57.3 mmol), akabinde Eth (15.9 mL, 114.6 mmol) ve Boc- anhidrit (36.7 mL, 171.9 mmol) eklenmistir. Reaksiyon karisimi 16 saat boyunca oda sicakliginda karistirilmistir. Reaksiyon karisimi CH2CI2 (50 mL) ile seyreltilmistir ve aköz 1N HCI solüsyonu, akabinde tuzlu su ile yikanmistir. Ayrilmis organik katman anhidröz Na2804 üzerinde kurutulmustur ve vakum altinda konsantre edilmistir. Elde edilen ham materyal, bilesik 2S-AS'yi (12 g, %82) elde etmek üzere %50 EtOAc/Hekzan ile ayristirilarak kolon kromatografisi ile saflastirilmistir. 1H-NMR: (400 MHz, DMSO-de): 6 4.61 (dd, 1H), 4.19 (q, 2H), 246-240 (m, 2H), 2.37- 2.25 (m, 1H), 1.91-1.85 (m, 1H), 1.42 (5, 9H), 1.22 (t, 3H). Etil 2-((tert-büt0ksikarbonil)amino)-5-oksohekzanoat (ZS-AT) sentezi: THF (120 mL) içinde karistirilan bir bilesik 28-AS (12 9, 46.6 mmol) solüsyonuna atil atmosfer altinda O°C7de MeMgBr (eter içinde 3M) (20.2 mL, 60.6 mmol) eklenmistir ve 2 saat boyunca karistirilmistir. Baslangiç materyalinin tükenmesinden sonra (TLC ile), reaksiyon karisimi aköz NH4CI solüsyonu ile söndürülmüstür ve aköz katman EtOAc (2 x 200 mL) ile özütlenmistir. Kombine edilmis organik ekstraktlar anhidröz Na2804 üzerinde kurutulmustur ve düsük basinç altinda konsantre edilmistir. Elde edilen ham kalinti, bilesik 28-AT*yi (10 g, %79) elde etmek üzere %20 EtOAc/Hekzan ile ayristirilarak silika jel kolon kromatografisi ile saflastirilmistir. 1H-NMR: (400 MHz, CDCIs): 6 5.14 (br s, 1H), 4.23 (q, 2H), 262-247 (m, 2H), 2.17 (3, 4H), 191-182 (m, 1H), 1.45 (3, 1OH), 1.26 (t, 3H). Etil 5-metilpirolidin-2-karboksilat (ZS-AU & 23-AV) sentezi: CH2CI2 (100 mL) içinde karistirilan bir bilesik 28-AT (10 g, 36.7mmol) solüsyonuna 0°C'de TFA (14.89 mL, 194.6 mmol) eklenmistir. 2 saat boyunca oda sicakliginda karistirilmasi akabinde, reaksiyon karisimi bilesik 28-AU'yu elde etmek üzere düsük basinç altinda konsantre edilmistir. Elde edilen materyal N2 atmosferi altinda etanol (100 mL) ve %10 Pd/C (%50 yas, 3 g) içinde çözünmüstür. Reaksiyon karisimi 16 saat boyunca Hz atmosferi (balon basinci) altinda karistirilmistir. Reaksiyon karisimi bir selit pedi araciligiyla filtrelenmistir ve filtrat, bilesik 28-AV'yi (15 g, ham) elde etmek Üzere düsük basinç altinda konsantre edilmistir. Bu materyal ayrica saflastirma olmadan dogrudan sonraki adima yönelik alinmistir. LCMS, m/z: 158.1 [M*+1] 1-tert-bütil 2-etil 5-metilpirolidin-1,2-dikarboksilat (ZS-AW) sentezi: CH2CI2 (150 mL) içinde karistirilan bir bilesik 28-AV (30 g, 191 mmol) solüsyonuna 0°Cide DMAP (23.3 9, 191 mmol), akabinde EtsN (79.8 mL, 573 mmol) ve Boc-anhidrit (104 mL, 477 mmol) eklenmistir. Reaksiyon karisimi 16 saat boyunca oda sicakliginda karistirilmistir. Reaksiyon karisimi CH20I2 (50 mL) ile seyreltilmistir ve su (2x150 mL), akabinde tuzlu su ile yikanmistir. Ayrilmis organik katman anhidröz Na2804 üzerinde kurutulmustur ve vakum altinda konsantre edilmistir. Elde edilen ham materyal, soluk sari sivi olarak bilesik 28-AW'yi (30 9, %61.22) elde etmek üzere %6 EtOAc/hekzan ile ayristirilarak kolon kromatografisi ile saflastirilmistir. 1H-NMR: (500 MHz, DMSO-de): 6 413-386 (m, 4H), 2.15 (d, J = 3.5 Hz, 1H), 1.99- 1.82 (m, 2H), 1.52 (t, J= 4.5 Hz,1H),1.38(s,9H), 1.24 (t, J = 5.5 Hz, 3H), 1.16 (d, J = 6.5 Hz, 3H). LCMS, m/z: 258 [(M*+1) 1-tert-bütil 2-etil 2-((benziIoksi)metiI)-5-metiIpirolidin-1.2-dikarboksilat (ZS-AX) THF (70 mL) içinde karistirilan bir bilesik 28-AW (8.0 9, 31.12 mmol) solüsyonuna - 78°C'de LIHMDS (59 mL, 41.72 mmol) eklenmistir ve 2 saat boyunca karistirilmistir. Buna damlatilarak BOM-klorid (6.56 mL, 41.72 mmol) eklenmistir ve -30°C'de 2 saat boyunca karistirilmistir. Baslangiç materyalinin tükenmesinden sonra (TLC ile), reaksiyon aköz NH4CI solüsyonu (20 mL) ile söndürülmüstür ve DCM (30 mL) ile özütlenmistir. Ayrilmis organik katman, soluk sari sivi olarak bilesik 28-AX 'i (11 g, %942) elde etmek üzere %10 EtOAc/Hekzan ayristirilarak kolon kromatografisi ile saflastirilmis ham materyali elde etmek üzere Na2804 üzerinde kurutulmustur ve konsantre edilmistir. 1H-NMR: (500 MHz, DMSO-de): ö 7.33725 (m, 5H). 4.38 (Ci, J = 10.5 Hz, 2H), 4.08- 3.98 (m, 1H), 3.88 (d. J = 95 Hz, 2H), 220-208 (m, 2H), 1.38 (8, 9H), 137-129 (m, 4H), 1.19 (t, J= 7.5 Hz, 3H), 1.14-1.10 (m, 3H); LCMS, mlz: 378 (M*+1) 2-((benziloksi) metil)-1-(tert-bütoksikarbonil)-5-metilpirolidin-2-karboksilik asit (ZS-AY) sentezi: CH30H/THF (22 mL/20 mL) içinde karistirilan bir 25-AX (11 9, 29.17 mmol) solüsyonuna oda sicakliginda 2N NaOH solüsyonu (33 mL) eklenmistir. Reaksiyon karisimi 8 saat boyunca 65°C'ye isitilmistir. Baslangiç materyalinin tükenmesinden sonra (TLC ile), solvent reaksiyondan düsük basinç altinda buharlastirilmistir ve EtOAc (50 mL) ile seyreltilmistir. Aköz katman sitrik asit solüsyonu kullanilarak asit haline getirilmistir ve CH2C|2 (2x 100 mL) ile Özütlenmistir. Ayrilmis organik katman, bilesik 28-AY"yi (8 g, %80) elde etmek üzere su (1 x 50 mL) ile yikanmistir, Na2804 üzerinde kurutulmustur ve konsantre edilmistir. 1H-NMR: (400 MHz, DMSO-ds): 6 12.58 (3, 1H), 7.34-7.28 (m, 5H), 454-447 (m, 2H), 4.05-3.87 (m, 2H), 3.70-362 (m, 1H), 228-208 (m, 3H), 1.46-1.37 (m. 1H), 1.28 (8, 9H): LCMS, mlz: 350 [M*+1] 1-(tert-bütoksikarboniI)-2-(hidroksimetiI)-5-metilpirolidin-2-karboksilik asit (28- A2) sentezi: Metanol (40 mL) içinde karistirilan bir bilesik 28-AY (8 9, 1.45 mmol) solüsyonuna N2 atmosferi altinda %10Pd/C (4 g) eklenmistir. Reaksiyon karisimi 16 saat boyunca Hz atmosferi (balon basinci) altinda oda sicakliginda karistirilmistir. Baslangiç materyalinin tükenmesinden sonra (TLC ile), reaksiyon karisimi bir selit pedi araciligiyla filtrelenmistir ve ped metanol ile yikanmistir. Elde edilen filtrat, beyaz kati olarak bilesik 2S-AZ'yI (4.5 9, %752) elde etmek üzere n-pentan ile tritüre edilmis ham bilesigi elde etmek üzere düsük basinç altinda konsantre edilmistir. 1H-NMR: (500 MHz, DMSO-ds): 6 12.37 (br s, 1H), 4.61 (br s, 1H), 3.95-385 (m, 3H), 218-206 (m, 3H), 1.44-1.41 (m, 1H), 1.38 (3, 9H), 1.09 (d, J = 6.0 Hz, 3H); LCMS (ESI): mlz 260 [M*+1] tert-bütil 2-(((28,3R)-1,3-bis(benziloksi)-1-oksobütan-Z-il)karbamoiI)-2- _(h_idroksimetil)-5-metiIpiroligin-1-karboksilat (ZS-BA) sentez_i: DCM (30 mL) içinde karistirilan bir bilesik 28-AZ (3 9, 11.58 mmol) solüsyonuna O°C'de N,N-diizopropiletilamin (6 mL, 34.7 mmol), Int D (5 9, 13.8 mmol), akabinde EDCI (2.7 9, 13.8 mmol), HOBT (1.9 9, 13.8 mmol) eklenmistir ve 16 saat boyunca oda sicakliginda karistirilmistir. Baslangiç materyalinin tükenmesinden sonra (TLC ile), reaksiyon karisimi su (20 mL) ile seyreltilmistir. Ayrilmis organik katman doymus NaHC03 solüsyonu (1x50 mL), 2N HCI solüsyonu (30 mL), akabinde tuzlu su solüsyonu (1x40 mL) ile yikanmistir. Ayrilmis organik katman, soluk sari sivi olarak bilesik ZS-BA"yi (2 g, %325) elde etmek üzere kolon kromatografisi ile saflastirilmis ham bilesigi elde etmek üzere anhidröz Na2SO4 üzerinde kurutulmustur ve düsük basinç altinda konsantre edilmistir. 1H-NMR: (500 MHz, DMSO-de): ö 7.30-7.17 (m, 10H), 516-510 (m, 2H), 4.50 (t, J = .2 Hz, 2H), 4.28 (t, J = 12.0 Hz, 1H), 4.13-4.07 (m, 1H), 3.95 (5, 2H), 210-185 (m, 4H), 1.40-1.35(m,1H), 1.30 (3, 9H), 1.18, 1.16 (dd, J = 6.4 Hz, 6H); LCMS (ESI): m/z 440.3 [M*+1] tert-bütil 2-((28,3R)-1,3-bis(benziloksi)-1-oksobütan-Z-il)-6-metiI-1-okso-Z, 5- diazaspirol3.4'loktan-5-kaLboksilat (ZS-BB) sentezi: THF (10 mL) içinde karistirilan bir bilesik ZS-BA (1.0 9, 1.85 mmol) solüsyonuna trifenilfosfin (0.935 9, 4.62 mmol) ve DIAD (0.75 9, 3.70 mmol) eklenmistir. Reaksiyon karisimi 8 saat boyunca oda sicakliginda karistirilmistir. Baslangiç materyalinin tükenmesinden sonra (TLC ile), reaksiyon karisimi düsük basinç altinda konsantre edilmistir. Ham materyal, sari sivi olarak bilesik ZS-BB'yi (0.8 9, %51) elde etmek üzere %20 EtOAc/hekzan ayristirilarak silika jel kolon kromatografisi ile saflastirilmistir. 1H-NMR: (400 MHz, DMSO-de): ö 7.30-7.17 (m, 10H), 5.17(s, 2H), 4.79, 4.76 (dd, J = 6.0 Hz, 2H), 4.73 (3, 2H), 431-418 (m, 2H), 3.84 (t, J = 6.8 Hz, 2H), 2.12 (I, J: 6.8 Hz, 1H),1.98-1.91 (m, 2H), 1.39 (s, 9H), 1.32, 1.25 (dd, J = 6.0 Hz, 6.4 Hz, 3H), 1.18, 1.09 (dd, J= 6.0 Hz, 6.4 Hz, 3H); LCMS (ESI):m/z 523.3 [M*+1] (28, 3R)-2-(5-(tert-bütoksikarboniI)-6-metiI-1-okso-2,5-diazaspiro[3.4] oktan-2-il)- 3-hidroksibütanoik asit (ZS-BC) sentezi: Metanol (20 mL) içinde karistirilan bir bilesik 2S-BB (1 9, 1.91 mmol) solüsyonuna N2 atmosferi altinda %10Pd/C (400 mg) eklenmistir. Reaksiyon karisimi 16 saat boyunca Hz atmosferi (balon basinci) altinda oda sicakliginda karistirilmistir. Baslangiç materyalinin tükenmesinden sonra (TLC ile), reaksiyon karisimi bir selit pedi araciligiyla filtrelenmistir ve ped metanol ile yikanmistir. Elde edilen filtrat, beyaz kati olarak bilesik 2S-BC'yi (0.80 9, ham) elde etmek üzere düsük basinç altinda konsantre edilmistir. 1H-NMR: (400 MHz, DMSO-de): 6 12.75 (br s, 1H), 4.80-4.73 (m, 3H), 420-405 (m, 2H), 3.40, 3.36 (dd, J = 6.8 Hz, 1H), 221-213 (m, 1H), 206-199 (m, 2H), 1.53 (t, J = 6.0 Hz, 1H), 1.40 (5, 9H), 1.11. 1.10 (dd, J = 4.8 Hz, 5.2 Hz. 6H); LCMS (ESI): mlz 343.3 [M*+1] Sema 2S-I-12 HO HO HO OEt Adim 1 Adim 2 Adim 3 H 0 N 0 ' OEt _ 0" _› N N," 08 ' n `Bos LiHMDS. ?:1 akoz NaOH "t 0 2S-D.HATU I 0 CH3CHO 3000 800 Boc "'OBn 23-AW 25-80 2348& 2SIBF O 0 Adim 4 m OBn Adim5 m OH N" 4 Nii i- DIAD PPh3 'î' "'OBn pd_c,'H2 N ---OH 0 I 0 BOC BOC zs-BG 2S-BH 1-tert-wl 2-etil g-(1-higroksiet_il)-5-metilpirolic_lin-1.2-dikarboksilat (ZS-BD! sentezi: THF (200 mL) içinde karistirilan bir 25-AW (20 9, 77.8 mmol) solüsyonuna -20°C"de damlatilarak LiHMDS (84 mL, 155 mmol) eklenmistir ve 30 dakika boyunca karistirilmistir. Buna damlatilarak asetaldehit (8.77 mL, 155mm0l) eklenmistir ve 3 saat boyunca oda sicakliginda karistirilmistir. Baslangiç materyalinin tükenmesinden sonra (TLC ile), reaksiyon aköz NH4CI solüsyonu(100 mL) ile söndürülmüstür ve DCM (2 x 150 mL) ile özütlenmistir. Kombine edilmis organik katman tuzlu su solüsyonu (1 x 150 mL) ile yikanmistir. Ayrilmis organik katman, renksiz surup olarak bilesik ZS-BD'yi (16 g, %231) elde etmek üzere %30 EtOAc/Hekzan ile ayristirilarak kolon kromatografisi ile saflastirilmis ham materyali elde etmek üzere NaZSO4 üzerinde kurutulmustur ve konsantre edilmistir. 1H-NMR: (500 MHz, DMSO-de): 6 733-725 (m, 5H),4.38 (d, J = 10.5 Hz, 2H), 4.08- 3.98 (m, 1H), 3.88 (d, J = 9.5 Hz, 2H), 220-208 (m, 2H), 1.38 (3, 9H), 1.37-1.29 (m, 4H), 1.19 (t, J= 7.5 Hz,3H),1.14-1.10(m.3H); LCMS m/z: 378 (M*+1) 1-(tert-bütoksikarbonil)-2-(1-hidroksietiI)-5-metilpirolidin-2-karboksilik asit (28- BE) sentezi: EtOH/THF (10 mL/20 mL) içinde karistirilan bir bilesik ZS-BD (15 g, 49 mmol) solüsyonuna oda sicakliginda su (10 mL) içinde NaOH (3.98 9, 99 mmol) eklenmistir. Reaksiyon karisimi 4 saat boyunca 90°C`ye isitilmistir. Baslangiç materyalinin tükenmesinden sonra (TLC ile), solvent reaksiyondan düsük basinç altinda buharlastirilmistir ve sitrik asit (pH~4) kullanilarak asit haline getirilmistir. Aköz katman DCM (2 x 200 mL) ile özütlenmistir ve kombine edilmis organik katman tuzlu su solüsyonu (1 x 150 mL) ile yikanmistir. Ayrilmis organik katmanN32804 üzerinde kurutulmustur ve kahverengi surup olarak bilesik 2S-BE'yi (8.2 9, %607) elde etmek üzere %40 EtOAc/n-hekzan ile ayristirilarak kolon kromatografisi ile saflastirilmis, elde edilen ham bilesige konsantre edilmistir. 1H-NMR: (500 MHz, DMSO-de): 6 12.15 (br s, 2H), 4.54-4.50 (m, 1H), 403-402 (m, 1H), 217-177 (m, 3H), 1.41(s, 9H), 1.39-1.09 (m, SH), 0.99-094 (m, 3H); LCMS m/z.' 272.4 [M'-1] tert-bütil 2-(((2$,3R)-1,3-bis(benziloksi)-1-oksobütan-Z-iI)karbamoiI)-2-(1- hidroksitiI)-5-metilpirolidin-1-karboksilat (ZS-BF) sentezi: DCM (100 mL) içinde karistirilan bir 2S-BE (8 9, 29.3 mmol) solüsyonuna 0°C'de N,N- diizopropiletilamin (15.12 mL, 87 mmol), 28-D (12.13 9, 40.6 mmol), akabinde HATU (16.59, 43.5 mmol) eklenmistir ve 12 saat boyunca oda sicakliginda karistirilmistir. Baslangiç materyalinin tükenmesinden sonra (TLC ile), reaksiyon karisimi su (100 mL) ile seyreltilmistir. Ayrilmis organik katman sitrik asit solüsyonu (1 x 75 mL), akabinde tuzlu su solüsyonu (1x100 mL) ile yikanmistir. Organik katman, soluk sari sivi olarak bilesik 28-BF"yi (119, %684) elde etmek üzere %40 EtOAc/n-hekzan ile ayristirilarak kolon kromatografisi ile saflastirilmis ham bilesigi elde etmek üzere anhidröz Na2804 üzerinde kurutulmustur ve düsük basinç altinda konsantre edilmistir. 1H-NMR: (400 MHz, DMSO-de): ö 7.31-7.19 (m, 10H), 514-506 (m. 2H), 4.59-4.48 (m, 3H), 431-426 (m, 1H), 405-400 (m, 2H), 1984.89 (m, 2H), 1.41 (5, 9H), 1.39-1.35 (m, 3H), 1.28-1.17 (m, 6H), 1.16-1.00 (m, 3H); LCMS (ESI): 555.6 [M*+1] tert-bütil 2-((2S, 3R)-1,3-bis(benziloksi)-1-oksobütan-2-il)-1,6-dimetil-3-okso-2,5- diazaspirol3.4]oktan-5-karboksilat (ZS-BG) sentezi: THF (10 mL) içinde karistirilan bir trifenilfosfin (3.5 9, 13.5 mmol) solüsyonuna DIAD (2.72 9, 13.5 mmol) parçalar halinde eklenmistir ve 20 dakika boyunca oda sicakliginda karistirilmistir. Buna oda sicakliginda yavas bir sekilde THF (10 mL) içinde bilesik 28- BF (3 9, 5.4 mmol) eklenmistir ve 3 saat boyunca karistirilmistir. Baslangiç materyalinin tükenmesinden sonra (by LCMS), reaksiyon karisimi düsük basinç altinda konsantre edilmistir. Ham materyal, sari sivi olarak bilesik 2S-BG'yi (2.5 9, %865) elde etmek üzere %20 EtOAc/hekzan ile ayristirilarak silika jel kolon kromatografisi ile saflastirilmistir. 1H-NMR: (400 MHz, DMSO-de):ö7.39-7.18 (m, 10H), 5.19-5.10(m, 2H), 4.78-4.49 (m, 3H), 4.34-4.25 (m, 2H), 385-376 (m, 1H), 2.10-1 .69 (m, 4H), 1.40 (s,9H), 1.35-1.26 (m, 3H), 1.18-1.12 (m, 6H); (2S,3R)-2-(5-(tert-bütoksikarboniI)-1,6-dimetiI-3-okso-2,5-diazaspiro[3.4] oktan-2- il)-3-hidroksibütanoik asit (ZS-BH) sentezi: Metanol (20 mL) içinde karistirilan bir bilesik 23-36 (2 9, 3.72 mmol) solüsyonuna N2 atmosferi altinda %10 kuru Pd/C (200 mg) eklenmistir. Reaksiyon karisimi 12 saat boyunca oda sicakliginda H2 atmosferi altinda karistirilmistir. Baslangiç materyalinin tükenmesinden sonra (TLC ile), reaksiyon karisimi bir selit pedi araciligiyla filtrelenmistir ve ped metanol ile yikanmistir (10 mL). Elde edilen filtrat, sari kati olarak bilesik 2S-BH'yi (1.8 9, %604) elde etmek üzere düsük basinç altinda konsantre edilmistir. 1H-NMR: (400 MHz, DMSO-ds): 6 12.72 (br s, 1H), 5.11-4.97 (m, 1H), 4.30-4.15(m,2H), 3.916,76 (m, 2H), 2.18-1.90 (m,3H), 1.40 (3, 9H), 1.37-129 (m, 1H), 1.26-1.22(m, 3H), 1.21-1.1O (m, 6H); LCMS (ESI): 357.5 [M*+1] Sema ZS-I-I 3 Boc Boc Boc O HN_ 0 Adim 1 H/N//E Adim 2 :tv/12) Adim 3 CIH kiri/,K _› N ..I/(OH prolidin ._ NO (CH-JCOJZO -_ b dioksan.HCI 1_ 0 'OH ÖH ` ÖAc OAC 2S-A 28-BI 28-8J 2S-BK tert-bütil ((28, 3R)-3-hidroksi-1-okso-1-(pirolidin-1-il) bütan-Z-il) karbamat (ZS-BI) sentezi DMF (65 mL) içinde karistirilan bir bilesik ZS-A (13 9, 59.36 mmol) solüsyonuna 0°C"de EDCI.HCI (12.5 9, 65.2 mmol), akabinde HOBt (8.8 9, 65.2 mmol) eklenmistir. 5 dakika boynca karistirilmasi akabinde, DIPEA (30.6 mL, 0.17 mol), akabinde pirolidin (4.6 9, 65.2 mmol) reaksiyon karisimina eklenmistir ve karistirma diger bir 16 saat boyunca oda sicakliginda devam ettirilmistir. Reaksiyon karisimi su ile yikanmistir ve EtOAc (2x 100 mL) ile özütlenmistir. Organik katman tuzlu su ile yikanmistir, anhidröz Na2804 üzerinde kurutulmustur vakum altinda konsantre edilmistir. Ham, bilesik 28-Bl'yi (5 g, %31) elde etmek üzere kolon kromatografisi ile saflastirilmistir. 1H-NMR: (400 MHz, CDCI3): 65.51 (br s, 1H), 4.32 (Ci, 1H), 415-410 (m, 1H), 3.77- 3.74 (m, 1H), 355-346 (m, 3H), 1.99-1.94 (m, 2H), 1.91-1.85 (m, 2H), 1.47 (5, 9H), 1.26 (t, 1H), 1.29 (d, 3H). (2R, 3S)-3-((tert-bütoksikarboniI)amino)-4-okso-4-(pirolidin-1-iI)bütan-2-il asetat (2S-BJ ve 2S-BK) sentezi: CH2CI2 (40 mL) içinde karistirilan bir bilesik ZS-Bl (4 9, 14.7 mmol) solüsyonuna 0°Cide Eth (5.1 mL, 36.7 mmol), akabinde asetik anhidrit (1.7 9, 17.6 mmol) ve katalitik miktarda DMAP eklenmistir. Reaksiyon karisimi 16 saat boyunca oda sicakliginda karistirilmistir. Baslangiç materyalinin tükenmesinden sonra (TLC ile), reaksiyon karisimi su ile seyreltilmistir ve organik katman ayrilmistir. Organik katman su ile yikanmistir, anhidröz Na2804 üzerinde kurutulmustur ve düsük basinç altinda konsantre edilmistir. Elde edilen ham kalinti, bilesik ZS-BJ'yi vermek üzere silika jel kolon kromatografisi ile saflastirilmistir. Buna 1, 4-di0ksan/HCI (20 mL) eklenmistir ve 2 saat boyunca oda sicakliginda karistirilmistir. Reaksiyon karisimi vakum altinda konsantre edilmistir ve elde edilen materyal, HCI tuzu olarak bilesik ZS-BK'yi (3.5 9, %97) elde etmek üzere 520 (2x 15 mL) ile yikanmistir. 1H-NMR: (500 MHz, DMSO-de) (Rotamerler): 6 8.49 (br s, 3H), 8.15 (br s, 1H), 5.14- .10 (m, 1H), 426-422 (m, 1H), 3.97395 (m, 1H), 3.59 (8, 2H), 2.09 (5, 3H), 1.98 (5, 2H), 187-180 (m, 2H), 1.26 (d, 3H). LCMS (ESI): 215.1 [M*+1]. Sema ZS-l-M Boc Boc HN_ O Adim1 HN' O Ad._m›2 *ij/(N JKOH fm 3, EDCI :_ O_› Eter.HCl -_ OBn OBn OB ZS-B ZS-BL ZS-BM tert-bütil ((28, 3R)-3-(benziloksi)-1-okso-1-(pirolidin-1-il)bütan-2-il) karbamat (ZS- BL) sentezi: DCM (80 mL) içinde karistirilan bir bilesik ZS-B (8 9, 25.8 mmol) solüsyonuna N,N- diizopropiletilamin (11 mL, 87.4 mmol), pirolidin (2.5 mL, 35.4 mmol), akabinde EDCI (7.39 9, 38.7 mmol), HOBT (5.2 9, 38.7 mmol) O°C`de eklenmistir ve 16 saat boyunca oda sicakliginda karistirilmistir. Baslangiç materyalinin tükenmesinden sonra (TLC ile), reaksiyon karisimi su (20 mL) ile seyreltilmistir. Ayrilmis organik katman doymus NaHC03 solüsyonu (1x25 mL), akabinde tuzlu su solüsyonu (1x30 mL) ile yikanmistir. Ayrilmis organik katman, beyaz kati olarak bilesik 28-BL"yi (8 g, %86) elde etmek üzere %1 MeOH/DCM ile ayristirilarak kolon kromatografisi ile saflastirilmis ham bilesigi elde etmek üzere anhidröz N32804 üzerinde kurutulmustur ve düsük basinç altinda konsantre edilmistir. 1H-NMR: (400 MHz, DMSO-de): 6 734-724 (m, 5H), 6.57 (d, J = 4.0 Hz, 1H), 4.53, 4.44 (dd, J = 12.0 Hz, 12.0 Hz, 2H), 432-428 (m, 1H), 3.74 (t, J = 6.0 Hz, 1H), 3.58- 3.53 (m, 1H), 342-338 (m, 1H), 328-324 (m, 2H), 1.82-1.70 (m, 4H), 1.37 (5, 9H), 1.11(d,J= 6.4 Hz, 3H) Kütle (ESI): m/z 363.4 [M*+1]. (28, 3R)-2-amino-3-(benziloksi)-1-(pirolidin-1-il)bütan-1-on (ZS-BM) sentezi: HCI (30 mL) ile doymus hale getirilen eter içinde karistirilan bir bilesik 2S-BL (6 9, 16.52 mmol) solüsyonu 0°C'de eklenmistir ve 2 saat boyunca oda sicakliginda karistirilmistir. Baslangiç materyalinin tükenmesinden sonra (TLC ile), reaksiyon karisimi beyaz kati olarak bilesik ZS-BM'yi (4 g, %93) elde etmek üzere pentan (15 mL) ile tritüre edilmis ham bilesigi elde etmek üzere düsük basinç altinda konsantre edilmistir. 1H-NMR: (500 MHz, DMSO-de): 6 8.25 (3, 2H), 736-729 (m, 5H), 4.58, 4.48 (dd, J = 12.0, 11.5 Hz, 2H), 4.12 (1, J = 4.5 Hz, 1H), 3.87 (I, J = 5.5 Hz, 1H), 360-357 (m, 1H), 337-333 (m, 3H), 178-170 (m, 4H), 1.22 (d, J = 6.5 Hz, SH). Kütle (ESI): 263.3[M*+1]. Sema 2S-1 OBn @40.1 N I Boc o ZS-H Adim 3 _› Pdi'C. HZ o OCH;i o OCH3 HNII/ Adim2 HNII/ _› Adim 1 _› Thr-OMe 0 0" AozO o OAC N N `BocoBn éoc 08" 28-1 28-2 O OCHfg o HN"` Adim 4 OCH3 OAc ' N " o DTAD. PPhB 'î' -iiOAc l 8000 800 OH -3 2S-FNL-1 tert-BütiI2-((benziloksi)metiI)-2-(((28,3R)-3-hidroksi-1-metoksi-1-oksobütan-2- il)karbamoil) pirolidin-1-karboksilat (ZS-1) sentezi: CH2C|2 (10 mL) içinde karistirilmis bir bilesik 2S-H (2.0 9, 5.97 mmol) solüsyonuna DIPEA (2.6 mL, 14.92 mmol), akabinde HATU (2.26 9, 5.94 mmol) 0°C'de eklenmistir ve 10 dakika boyunca karistirilmistir. CH20I2 (10mL) içinde bir metil 2-amino-3- hidroksibütanoat hidroklorid (1 9, 5.97 mmol) solüsyonu O°C`de reaksiyon karisimina eklenmistir. Ortaya çikan reaksiyon karisimi oda sicakligina isitilmistir ve karistirma diger bir 3 saat boyunca devam ettirilmistir. Uçucular düsük basinç altinda buharlastirilmistir. Elde edilen kalinti su (25 mL) ile seyreltilmistir ve CH2CI2 (2 x 75mL) ile özütlenmistir. Organik katman anhidröz Na2804 üzerinde kurutulmustur ve düsük basinç altinda konsantre edilmistir. Ham, bir sivi olarak bilesik 28-1'i (1.8 9. %67) elde etmek üzere %4OEtOAc/Hekzan ile ayristirilarak silika jel kolon kromatografisi ile saflastirilmistir. 1H-NMR: (400 MHz, DMSO-ds): ö 7.38-7.31 (m, 5H), 5.16 (br s, 1H), 4.54 (3, 2H), 4.28- 4.26 (m, 1H), 417-412 (m, 1H), 384-382 (m, 1H), 3.62 (3, 3H), 354-351 (m, 1H), 232-227 (m, 4H), 184-178 (m, 2H), 1.42 (3, 9H), 1.06 (d, 3H); LCMS m/z: 451.6 [M*+1] tert-BütiI-2-(((28.3R)-3-gsetoksi-1-metoksi-1-oksobütan-Z-ilikarbamoili-Z- ((benziloksilmetillpiroligin-1-karboksilat (ZS-2) sentez_i: CH2CI2 (15 mL) içinde karistirilmis bir bilesik 28-1 (1.0 9, 2.22 mmol) solüsyonuna 0°C'de atil atmosfer altinda Et3N (0.34 mL, 2.44 mmol) damlatilarak eklenmistir. Buna, 0°Cide A020 (0.27 mL, 2.64 mmol), akabinde DMAP (50 mg, 0.40 mmol) eklenmistir ve 2 saat boyunca oda sicakliginda karistirilmistir. Reaksiyon karisimi su ile seyreltilmistir ve aköz katman with CHzClz (2 x 25 mL) ile özütlenmistir. Kombine edilmis organik ekstraktlar, bir sivi olarak bilesik 28-2'yi (0.8 9, %73) elde etmek üzere anhidröz Na2804 üzerinde kurutulmustur ve düsük basinç altinda konsantre edilmistir. 1H-NMR: (400 MHz, DMSO-ds): 6 741-734 (m, 5H), 526-524 (m, 1H), 4.54 (5, 2H), 406-397 (m, 1H), 378-372 (m, 1H), 3.62 (5, 3H), 352-349 (m, 1H), 2.68 (s, 6H), 234-231 (m, 1H), 1.87 (5, 3H), 1.78-1.74 (m, 2H), 1.42 (5, 6H), 1.14 (d, 3H). Kütle m/z: 493.8 [M*+1] tert-BütiI-2-(((28. 3R)-3-asetoksi-1-metoksi-1-oksobütan-2-il)karbamoiI)-2- (mroksimetillpirolidin-1-karboksilai('_2$-3) sentezi: EtOAc (15 mL) içinde karistirilmis bir bilesik 28-2 (0.8 9, 1.62 mmol) solüsyona %10 Pd-C (0.15 9) eklenmistir ve 24 saat boyunca Hz atmosferi (balon basinci) altinda oda sicakliginda karistirilmistir. Reaksiyon karisimi bir selit pedi ile filtrelenmistir ve EtOAc ile yikanmistir. Filtrat düsük basinç altinda konsantre edilmistir. Ham bilesik, bir sivi olarak bilesik 28-3"ü (0.5 9, %77) elde etmek üzere %40 EtOAc/hekzan ile ayristirilarak silika jel kolon kromatografisi ile saflastirilmistir. 1H-NMR: (500 MHz, DMSO-de): 6 8.16 (br s, 1H), 578-574 (m, 1H), 5.23 (d, J = 9.5 Hz, 1H), 464-458 (m, 1H), 403-398 (m, 1H), 3.61 (5, 3H), 3.52 (d, J = 10.0 Hz, 1H), 3.43 (d, J = 6.5 Hz, 1H), 229-227 (m, 1H), 1.96-1.94 (m, 4H), 1.74-1.68 (m, 2H), 1.38- 1.30 (m, 9H), 1.14 (d, J = 6.5 Hz, 3H); LCMS m/z: 403.6 [M++1] tert-BütiI-2-((2S,3R)-3-asetoksi-1-metoksi-1-oksobütan-2-iI)-1-okso-2,5-diaza spir0[3.4]oktan-5-karboksilat (28-FNL-1) sentezi: THF (15 mL) içinde karistirilmis bir bilesik 28-3 (0.35 9, 0.87mmol) solüsyonuna oda sicakliginda PPh3 (274 mg, 1.04 mmol) eklenmistir ve atil atmosfer altinda 30 dakika boyunca karistirilmistir. Akabinde reaksiyon karisimi 0°C'ye sogutulmustur, reaksiyon karisimina DTAD (0.22 9, 0.95 mmol) eklenmistir ve oda sicakligina isitilmistir ve karistirma diger bir 20 saat boyunca devam ettirilmistir. Bu, doymus sitrik asit ile söndürülmüstür ve doymus NaCI solüsyonu ile yikanmistir ve EtOAc (2 x 20mL) ile özütlenmistir. Kombine edilmis organik ekstrakt anhidröz Na2804 üzerinde kurutulmustur ve düsük basinç altinda konsantre edilmistir. Elde edilen ham materyal, bir sivi olarak NRX-1076'yi (ZS-FNL-1) (160 mg, %48) elde etmek üzere %40 EtOAc/Hekzan ile ayristirilarak silika jel kolon kromatografisi ile saflastirilmistir. 1H-NMR: (400 MHz, DMSO-ds): ö 5.21-5.18 (m, 1H), 4.57 (Ci, 1H), 3.82 (d, 1H), 3.64 (d, 3H), 3.42 (d, 2H), 324-321 (m, 1H), 214-211 (m, 2H), 1.97 (5, 3H), 1.84-1.78 (m, 2H), 1.37 (5, 9H), 1.18 (d, 3H); Kütle mIz: 383.1 [M-1] Sema 28-): 0 OH Adimi NHg Adim 2 NH_. Adim 3 @Nm WNU ~ii "Ni-j. NH Cl N "OH TFA MNO_ OH iio butiril N '200 o klorid 010 BocO nc ZS-L ZS-FNL-2 2S-FNL-3 ZS-FNL-S Adim 4 ` zs-xz O NH, N -I'OH "t \ O 0 N=N 28 FNL 5 tert-bütil 2-((28, 3R)-1-amino-3-hidroksi-1-oksobütan-Z-il)-1-okso-2,5- diazaspiroI3.4'loktan-5-kaLboksilat (ZS-FNILZ) sentez_i: CH20I2 (5 mL) içinde karistirilan bir bilesik 2S-L (500 mg, 1.52 mmol) solüsyonuna DIPEA (0.8 mL, 4.57 mmol), EDCI.HCI (350 mg, 1.82 mmol), akabinde HOBt (280 mg, 1.82 mmol), NH4C| (161 mg, 3.04 mmol) O°C`de eklenmistir ve 16 saat boyunca oda sicakliginda karistirilmistir. Baslangiç materyalinin tükenmesinden sonra (TLC ile), reaksiyon karisimi su (10 mL) ile seyreltilmistir ve CH20I2 (2 x 30 mL) ile özütlenmistir. Kombine edilmis organik katman sitrik asit solüsyonu (2 x 30 mL) ile yikanmistir. Organik katman anhidröz Na2804 üzerinde kurutulmustur, filtrelenmistir ve düsük basinç altinda konsantre edilmistir. Elde edilen ham materyal, renksiz sivi olarak bilesigi (2S-FNL-2) (200 mg, %40) elde etmek üzere %2 MeOH/DCM ile ayristirilarak silika jel kolon kromatografisi ile saflastirilmistir. 1H-NMR: (500 MHz DMSO- -ds). ö 7. 53 (s, 2H), 4.59 (3, 1H), 4.02 (3, 1H), 3.77-3.70 (m, 2H), 3.62353 (m, 2H), 3.46333 (m, 1H), 2.17-2.03 (m, 2H), 1.88-1.71 (m, 2H), 1.38 (8, 9H), 1.18 (d, J= 6.5 Hz, 3H); Kütle (ESI): 328.3 [M*+1] _(28.3Rl-3-higroksi-g-(1-okso-g.5-diazaspiror3.4loktaL-2-illbütanamid (gs-Fm& sentezi: CH2CI2 (5 mL) içinde karistirilan bir bilesik (ZS-FNL-Z) (200 mg, 0.61 mmol) solüsyonuna 0"C'de TFA (0.5 mL, 6.1 mmol) eklenmistir ve 3 saat boyunca oda sicakliginda karistirilmistir. Reaksiyonun tamamlanmasindan (TLC ile) sonra, reaksiyon karisimi beyaz kati olarak (TFA tuzu) bilesigi (2S-FNL-3) elde etmek üzere n-pentan/dietileter (5 mL/5 mL) ile tritüre edilmis, elde edilen ham bilesige düsük basinç altinda konsantre edilmistir. 1H-NMR: (400 MHz, D20): ö 4.33429 (m, 2H), 4.09 (Ci, 1H), 3.95 (d, 1H), 3.57-3.48 (m, 2H), 2.51-2.46 (m, 2H), 225-219 (m, 2H), 1.31 (d, 3H); LCMS, m/z.' 455 [2M++1] _(2S.3R)-3-hidroksi-g-(5-izobütiril-1-okso-g.5-diazaspiro[3.4]oktan-g-il) bütanamid (2S-FNL-4) sentezi: CH20I2 (10 mL) içinde karistirilan bir (28-FNL-3) (500 mg (ham), 2.20 mmol) solüsyonuna TEA (1 mL, 7.70 mmol), akabinde SMS (256 mg, 2.42 mmol) 0°C`de eklenmistir ve 16 saat boyunca oda sicakliginda karistirilmistir. Baslangiç materyalinin tükenmesinden sonra (TLC ile), reaksiyon karisimi su (10 mL) ile seyreltilmistir ve CH2CI2 (2 x 30 mL) ile özütlenmistir. Kombine edilmis organik katman sitrik asit solüsyonu (2 x 30 mL) ile yikanmistir. Organik katman anhidröz N82804 üzerinde kurutulmustur, filtrelenmistir ve düsük basinç altinda konsantre edilmistir. Elde edilen ham materyal, beyaz kati olarak (ZS-FNL-4) (100 mg, %152) elde etmek üzere %2 MeOH/DCM ile ayristirilarak silika jel kolon kromatografisi ile saflastirilmistir. 1H-NMR: (500 MHz, D20): 6 454-452 (m, 1H), 4.41-4.37 (m, 1H), 4.27 (d, J = 3.6 Hz, 1H), 4.04 (I, J = 6.5 Hz, 1H), 3.85372 (m, 1H), 3.71366 (m, 1H), 2.92287 (m, 1H), 2.38227 (m, 2H), 212-205 (m, 2H), 1.30 (d, J= 6.5 Hz, 3H), 1.14 (d, J = 6.5 Hz, 6H); Kütle (ESI): 298.3 [M*+1] (28, 3R)-2-(5-(1-benzil-5-metiI-1H-1,2,3-triazoI-4-karbonil)-1-okso-2,5- diazaspiro[3.4]oktan-2-il)-3-hidroksibütanamid (28-FNL-5) sentezi: CH2CI2 (10 mL), DMF (0.1 mL) içinde karistirilan bir ZS-X2 (200 mg, 0.92 mmol) solüsyonuna O°C'de oksalil klorid (0.16 mL, 1.84 mmol) eklenmistir. Reaksiyon karisimi oda sicakligina isitilmistir ve 2 saat boyunca karistirilmistir. Uçucular, asit klorid (300 mg, ham) saglamak üzere N2 atmosferi altinda düsük basinç altinda buharlastirilmistir. DCM (5 mL) içinde karistirilmis bir asit klorid (300 mg, ham) solüsyonuna 0°C'de (28- FNL-3) (220 mg, 0.92 mmol), N, N-diizopropiletilamin (0.53 mL, 2.76 mmol) eklenmistir. Ortaya çikan reaksiyon karisimi 1 saat boyunca oda sicakliginda karistirilmistir. Baslangiç materyalinin tükenmesinden sonra (TLC ile), reaksiyon karisimi su (10 mL) ile seyreltilmistir ve CH2CI2 (2 x 20 mL) ile özütlenmistir. Kombine edilen organik ekstraktlar, soluk kahverengi kati olarak bilesik (23-FNL-5) (200 mg, %486) elde etmek üzere %3 MeOH/CH2CI2 ile ayristirilarak silika jel kolon kromatografisi ile saflastirilmis ham ürünü elde etmek üzere tuzlu su solüsyonu (2 x 10 mL) ile yikanmistir ve Na2804 üzerinde kurutulmustur, düsük basinç altinda konsantre edilmistir. 1H-NMR: (500 MHz, DMSO-ds): 6 7.77 (3, 2H), 788-731 (m, SH), 7.18 (d, J = 7.5 Hz, 2H), 5.65 (3, 2H), 4.89 (d, J = 5.5 Hz, 1H), 4.76 (d, J = 4.0 Hz, 1H), 4.07-3.91 (m, 4H), 3.62-3.48 (m, 1H), 2.39 (3, SH), 226-212 (m, 2H), 198-191 (m, 2H), 1.13 (d, J = 6.5 Hz, 3H); LCMS m/z: 427.6 [M*+1]; HPLC: %955 (her iki enantiyomer) Sema 2.822: \ l hr OMe). tUCI Boco { Bono , H 8000 ZS-H 4 2846 0 Adim -4 NîOCt-h_› Adims Wii-g::: Adim- 5 N`CH: MeOH NH- N NH-, [JT/&D PPh 3 ._ 5092 :09 "El0 ZS-FNL-G ?Sw NL-7 tert-bütil 2-((benziIoksi)metil)-2-(((28,3R)-3-hidroksi-1-metoksi-1-oksobütan-2- il)karlgmoil)pirolic_lin-1 -karboksilat_('_28-4) sentezi CH2CI2 (500 mL) içinde karistirilan bir bilesik ZS-H (50 9, 0.15 mol) solüsyonuna metil 2-amin0-3-hidroksibütanoat (23.8 9, 0.18 mol), EDCI.HCI (34.2 9, 0.18 mol), akabinde HOBt (24.1 9, 0.18 mol) ve DIPEA (57.8 9, 0.45 mol) oda sicakliginda eklenmistir ve 2 saat boyunca karistirilmistir. Baslangiç materyalinin tükenmesinden sonra (TLC ile), reaksiyon karisimi su (250 mL) ile seyreltilmistir ve CH2CI2 (2 x 250 mL) ile özütlenmistir. Ayrilmis organik katmanlar su, tuzlu su ile yikanmistir, anhidröz Na2804 üzerinde kurutulmustur, filtrelenmistir ve düsük basinç altinda konsantre edilmistir. Elde edilen ham materyal, açik yesil sivi olarak bilesik 28-4 (53 g, %789) elde etmek üzere %50 EtOAc/Hekzan ile ayristirilarak silika jel kolon kromatografisi ile saflastirilmistir. OBII Den O NOBIIO OH 0 OH Adim -1 R, Adim 2 Adim 3 ;1 N _' N 4' OCHE ' _' N ' - l . Ac 0 ..i i " 0 Bab0 "IQ/.(6 " Q tert-bütil 2-(((2$,3R)-3-asetoksi-1-metoksi-1-oksobütan-Z-il)karbamoil)-2- ((benziloksi)metil)pirolidin-1-karboksilat (ZS-5) sentezi: CH2CI2 (150 mL) içinde karistirilan bir bilesik 28-4 (15 9, 33.3 mmol) solüsyonuna DlPEA (6.4 9, 49.9 mmol), akabinde asetik anhidrit (4 9, 39.9 mmol) ve DMAP (408 mg, 3.33 mmol) oda sicakliginda eklenmistir ve 2 saat boyunca karistirilmistir. Baslangiç materyalinin tükenmesinden sonra (TLC ile), reaksiyon karisimi su (100 mL) ile seyreltilmistir ve CH2Cl2 (2 x 100 mL) ile özütlenmistir. Ayrilmis organik katman, açik kahverengi sivi olarak bilesik 28-5'i (16 g, ham) elde etmek üzere tuzlu su ile yikanmistir, anhidröz Na2804 üzerinde kurutulmustur, filtrelenmistir ve düsük basinç altinda konsantre edilmistir. 1H-NMR: (400 MHz, CDCIa): 6 7.35 ((1, 5H), 547-544 (m, 1H), 4.80 (dd, 1H), 464-451 (m, 2H), 4.15-4.11 (m, 1H), 386-383 (m, 1H), 3.75 (3, 4H), 354-350 (m, 2H), 2.42- 3.38 (m, 1H), 1.91-1.85 (m, 5H), 1.45-1.41 (m, 10H), 1.27 (d, 2H); LCMS (ESI): 492 [M*] tert-bütil 2-(((28,3R)-3-asetoksi-1-metoksi-1-oksobütan-Z-il)karbamoil)-2- (Mroksimetiipiroligind -kaLboksilat (ZS-6) sentez_i: Metanol (100 mL) ve EtOAc (100 mL) içinde karistirilan bir bilesik 28-5 (16 9, 32.5 mmol) solüsyonuna Kömür (3 g) üzerinde %10 Pd oda sicakliginda eklenmistir ve 4 saat boyunca Hz atmosferi (balon basinci) altinda karistirilmistir. Baslangiç materyalinin tükenmesinden sonra (TLC ile), reaksiyon karisimi bir selit pedi araciligiyla filtrelenmistir ve ped metanol ile yikanmistir. Elde edilen filtrat, kahverengi koyu surup olarak bilesik 23-6"yi (10 g, ham) elde etmek üzere düsük basinç altinda konsantre edilmistir. Bu materyal ayrica saflastirma olmadan dogrudan sonraki adima yönelik kullanilmistir. (g)-tert-l_:›ütil 2-(1-metoksi-1-oksobüt-g-en-g-ill-1-okso-2,5-diazasgiro|3.4| oktan-5- karboksilat (ZS-7) sentezi: THF (50 mL) içinde karistirilan bir bilesik 28-65 (10 9, 24.8 mmol) solüsyonuna trifenilfosfin (13 9, 49.7 mmol) ve DTAD (11.15 9, 37.3 mmol) eklenmistir. Reaksiyon karisimi 16 saat boyunca oda sicakliginda karistirilmistir. Baslangiç materyalinin tükenmesinden sonra (TLC ile), reaksiyon düsük basinç altinda konsantre edilmistir. Ham materyal, bilesik 28-7'yi (2 9, %24.8) elde etmek üzere %40 EtOAc/hekzan ile ayristirilarak silika jel kolon kromatografisi ile saflastirilmistir. tert-bütil 2-(1,3-diamino-1-oksobütan-Z-il)-1-okso-2.5-diazaspirol3.4]oktan-5- karboksilMS-FNL-G) sentez_i: Metanol.NH3 (50 mL) içinde bir bilesik 28-7 (2 9, 6.16 mmol) solüsyonu 4 saat boyunca oda sicakliginda karistirilmistir. Baslangiç materyalinin tükenmesinden sonra (TLC ile), reaksiyon karisimi düsük basinç altinda konsantre edilmistir. Elde edilen ham materyal, beyaz kati olarak (ZS-FNL-G) (0.35 9, %166) elde etmek üzere Et20 (25 mL) ve n- pentan (25 mL) ile yikanmistir. 1H-NMR: (500 MHz, DMSO-de): 5 7.70 (br s, 1H), 7.07 (5, 1H), 3.85 (d, 1H), 3.73 (cl, 1H), 3.42-338 (m, 2H), 329-325 (m, 1H), 3.12-307 (m, 1H), 2.09 (t, 2H), 1.95 (br s, 1H), 1.84-1.81 (m, 2H), 1.93 (3, 9H), 1.12 (d, 1H), 0.99 (d, 2H); LCMS (ESI) m/z: 327.3 [M*+1] 3-amino-2-(1-0kso-2,5-diazaspiro[3.4]oktan-2-il)bütanamid (ZS-FNL-7) sentezi: CH2CI2 (10 mL) içinde karistirilan bir (28-FNL-6) (0.25 9, 0.76 mmol) solüsyonuna eter.HCl (5 mL) oda sicakliginda eklenmistir ve 4 saat boyunca karistirilmistir. Buna, 1, 4-dioksan-HCI (5 mL) eklenmistir ve karistirma 2 saat boyunca devam ettirilmistir. Baslangiç materyalinin tükenmesinden sonra (TLC ile), solvent reaksiyondan düsük basinç altinda uzaklastirilmistir ve elde edilen ham materyal, beyazimsi bir kati olarak (28-FNL-7) (0.11 9, %635) elde etmek üzere ACN (25 mL) ve 520 (25 mL) ile yikanmistir. 1H-NMR: (400 MHz, D20): 5 469-455 (m, 1H), 4.12-3.86 (m, 3H), 362-351 (m, 2H), 2.56223 (m, 2H), 225-221 (m, 2H), 1.52-1.43 (m, 3H). LCMS (ESI) m/z: 227.2 [M++1]; UPLC (Saflik): %97.96 Sema 28-3: O 0 0 OH Adim 1 NH\)\ Adim 2 NH\)\ Ni-- â NU' . 'Im gîOH 'BU-NH; m g: -I 8000 BocO ZS-L 25-8 ZS-FNL-S tert-bütil2-((2$.3R)-3-h idro ksi-1 -(izobütilamino)-1-oksobütan-Z-il -1 -okso-2 5- diazaspiro [3.4] oktan-5-karboksilat (gs-8) sentez_i: CH20|2 (10 mL) içinde karistirilan bir bilesik ZS-L (300 mg, 0.91 mmol) solüsyonuna DIPEA (354 mg, 2.74 mmol), EDCI.HCI (210 mg, 1.09 mmol), akabinde HOBt (165 mg, 1.09 mmol), izobütilamin (80 mg, 1.09 mmol) O°C'de eklenmistir ve 16 saat boyunca oda sicakliginda karistirilmistir. Baslangiç materyalinin tükenmesinden sonra (TLC ile), reaksiyon karisimi su (10 mL) ile seyreltilmistir ve CH2C|2 (2 x 30 mL) ile özütlenmistir. Kombine edilmis organik katman tuzlu su (2 x 30 mL) ile yikanmistir, anhidröz Na2804 üzerinde kurutulmustur, filtrelenmistir ve düsük basinç altinda konsantre edilmistir. Elde edilen ham materyal, beyaz kati olarak bilesik 2S-8 (250 mg, %715) elde etmek üzere %2 MeOH/DCM ile ayristirilarak silika jel kolon kromatografisi ile saflastirilmistir. 1H-NMR: (400 MHz, DMSO-ds): 6 8.02 (I, J = 5.2 Hz, 1H), 4.37 (5, 2H), 4.04 (1, J = 5.6 Hz, 1H), 4.00 (d, J= 5.6 Hz, 1H), 3.77-3.72 (m, 1H), 3.61 (d, J = 6.0 Hz, 1H), 3.44338 (m, 1H), 298-284 (m, 3H), 219-208 (m, 3H), 1.84-1.79 (m, 1H), 1.42 (5, 9H), 1.39 (d, J = 5.5 Hz, 3H), 0.84 (d, J = 6.4 Hz, 6H); Kütle (ESI): m/z 384.4 [M*+1] (28,3R)-3-hidroksi-N-izobütiI-2-(1-okso-2,5-diazaspiro[3.4]oktan-2-il) bütanamid (2S-FNL-8) sentezi: CH2CI2 (5 mL) içinde karistirilan bir bilesik 28-8 (250 mg, 0.65 mmol) solüsyonuna O°C`de TFA (0.6 mL, 6.52 mmol) eklenmistir ve 3 saat boyunca oda sicakliginda karistirilmistir. Reaksiyonun tamamlanmasi akabinde (TLC ile), reaksiyon karisimi beyaz bir kati olarak (TFA tuzu) (ZS-FNL-8) (125 mg, 67.9 %) elde etmek üzere n- pentan/dietileter (3 x 5 mL) ile tritüre edilmis ham bilesigi elde etmek üzere düsük basinç altinda konsantre edilmistir. 1H-NMR: (500 MHz, D20): 6 4.26 (3, 2H), 4.09 (t, J = 8.0 Hz, 1H), 3.95 (t, J = 7.5 Hz, 1H), 356-351 (m, 2H), 3.14-3.06 (m, 2H), 250-243 (m, 2H), 225-221 (m, 2H), 1.85- 1.82 (m, 1H), 1.30 (Ci, J = 5.5 Hz, 3H), 0.96 (d, J = 7.0 Hz, 6H); Kütle (ESI): m/z 284.3 [M++1] Sema 23-41: 0 / N OH Adimt EX; OZHJLÜ Adim:: 0?)de .. HTFA ":1 "'OH siklobütil ?Çaki 9030 amin ZS-L 5-9 28- FNL- n tert-bütil 2-((2$,3R)-1-((siklobütilmetil)amino)-3-hidroksi-1-oksobütan-2-il)-1-okso- 2,5-diazaspiro[3.410ktan-5-karboksilat (ZS-9) sentezi: CH2CI2 (10 mL) içinde karistirilan bir bilesik 28-L (500 mg, 1.52 mmol) solüsyonuna DIPEA (0.8 mL, 4.57 mmol), EDCI.HCI (350 mg, 1.82 mmol), akabinde HOBt (280 mg, 1.82 mmol), siklobütilamin (155 mg, 1.82 mmol) O°C'de eklenmistir ve 16 saat boyunca oda sicakliginda karistirilmistir. Baslangiç materyalinin tükenmesinden sonra (TLC ile), reaksiyon karisimi su (10 mL) ile seyreltilmistir ve ayrilmis organik katman sitrik asit (2 x 20 mL), tuzlu su (2 x 20 mL) ile yikanmistir. Kombine edilmis organik katmanlar anhidröz Na2804 üzerinde kurutulmustur, filtrelenmistir ve düsük basinç altinda konsantre edilmistir. Elde edilen ham materyal, renksiz surup olarak bilesik bilesik ZS- 9'u (250 mg, %415) elde etmek üzere %80 EtOAc/n-hekzan ile ayristirilarak silika jel kolon kromatografisi ile saflastirilmistir. 1H-NMR: (500 MHz, DMSO-ds): 6 8.20 (t, J = 11.5 Hz, 1H), 4.53 (5, 2H), 4.03 (t. J = 7.5 Hz, 1H), 3.88 (I, J = 8.5 Hz, 2H), 341-333 (m, 2H), 332-324 (m, 2H), 2.41-2.33 (m, 3H), 232-227 (m, 2H), 224-217 (m, 2H), 210-190 (m, 2H), 1.68 (t, J = 8.5 Hz, 2H), 1.40 (3, 9H), 1.18 (Ci, J= 6.4 Hz, 3H); Kütle (ESI): m/z 396.4 [M*+1] (gs. 3R)-N-(siklolgütilmetil)-3-hidroksi-g-( 1-okso-g,5-diazaspiro[3.410ktan-2_- mpütanamid (gS-FNL-Q) sentez_i: CH20I2 (5 mL) içinde karistirilan bir bilesik 28-9 (250 mg, 0.63 mmol) solüsyonuna 0°C`de TFA (0.5 mL, 5.06 mmol) eklenmistir ve 3 saat boyunca oda sicakliginda karistirilmistir. Reaksiyonun tamamlanmasi akabinde (TLC ile), reaksiyon karisimi higroskopik beyaz kati olarak (TFA tuzu) (28-FNL-9) (90 mg, %48.3) elde etmek üzere dietileter ( 5 mL) ile tritüre edilmis ham bilesigi elde etmek üzere düsük basinç altinda konsantre edilmistir. 1H-NMR: (500 MHz,D20): 6 4.23 (5, 2H), 4.08 (t, J = 7.0 Hz, 1H), 3.94 (t, J = 8.5 Hz, H), 356-351 (m, 2H), 332-324 (m, 2H), 256-253 (m, 3H), 248-243 (m, 2H), 2.25- 2.21 (m, 2H), 207-188 (m, 2H), 1.71 (t, J= 8.5 Hz, 2H), 1.28 (d, J = 6.4 Hz, 3H); Kütle (ESI): m/z 296.3 [M*+1]; Sema 28-53: 0 OH Adimt Adim 2 g:@_- ~~ ..::Q N "'OH BnNH› I Boc O BocN 2S-L 0-28 FNL- 10 28- FNL-11 klorid O 0 AcCI N "'OH EN "OH 0 A0 %00 2S-FNL-12 23-FNL-13 Adim A014 izobütiril tert-bütil 2-((2S,3R)-1-(benzilamino)-3-hidroksi-1-oksobütan-2-iI)-1-okso-2, 5- diazaspiro[3.4]oktan-5-karboksilat (28-FNL-10) sentezi: CHZCIz (15 mL) içinde karistirilan bir bilesik ZS-L (1 9, 3.04 mmol) solüsyonuna DIPEA (1.6 mL, 9.14 mmol), EDCI.HCI (700 mg, 3.66 mmol), akabinde HOBT (560 mg, 3.66 mmol), benzilamin (325 mg, 3.04 mmol) O°Clde eklenmistir ve 16 saat boyunca oda sicakliginda karistirilmistir. Baslangiç materyalinin tükenmesinden sonra (TLC ile), reaksiyon karisimi su (20 mL) ile seyreltilmistir ve CH20I2 (2 x 30 mL) ile özütlenmistir. Kombine edilmis organik katman sitrik asit solüsyonu (2 x 30 mL) ile yikanmistir ve organik katman anhidröz Na2804 üzerinde kurutulmustur, filtrelenmistir ve düsük basinç altinda konsantre edilmistir. Elde edilen ham materyal, beyaz kati olarak (28- FNL-10) (800 mg, %635) elde etmek üzere %5 MeOH/DCM ile ayristirilarak silika jel kolon kromatografisi ile saflastirilmistir. 1H-NMR: (400 MHz, CDsOD): ö 7.38-720 (m, SH), 4.62460 (m, 1H), 449-443 (m, 2H), 4.33425 (m, 1H), 4.04 (d, J = 5.6 Hz, 1H), 396-392 (m, 1H), 3.51-3.45 (m. 1H), 3.43-3.31 (m, 1H), 231-221 (m, 2H), 198-186 (m, 2H), 1.39 (s, 9H), 124-122 (m, 3H); Kütle (ESI): m/z 418.4 [M*+1]; HPLC:%91.8 (her iki izomer) (ZS, 3R)-N-benzil-3-hidroksi-Z-(1-okso-2,5-diazaspiro[3.4loktan-2-il) bütanamid (28-FNL-11) sentezi: CH2CI2 (10 mL) içinde karistirilan bir (ZS-FNL-10) (700 mg, 1.67 mmol) solüsyonuna 0°C,de TFA (1.9 mL, 16.7 mmol) eklenmistir ve 4 saat boyunca oda sicakliginda karistirilmistir. Reaksiyonun tamamlanmasi akabinde (TLC ile), reaksiyon karisimi beyaz bir kati olarak (TFA tuzu) (28-FNL-11) (400 mg, %75.63) elde etmek üzere n- pentan/dietileter (5 mL/5 mL) ile tritüre edilmis ham bilesigi elde etmek üzere düsük basinç altinda konsantre edilmistir. 1H-NMR: (400 MHZ, D20): 6 745-734 (m, 5H), 4.45 (5, 2H), 429-421 (m, 2H), 4.06- 3.85 (m, 2H), 3.52-3.47 (m, 2H), 245-235 (m, 2H), 222-216 (m, 2H), 124-120 (m, 3H); Kütle (ESI): m/z 318.4 [M*+1]; HPLC: %89.1 (her iki izomer). (gS.3R)-g-(5-aset_iI-1-okso-Z 5-diazas iro 3.4 oktan-Z-il -N-benzil-3- hidroksibütanamid_(28-FNL-12) sentezi: CH2CI2 (10 mL) karistirilan bir (23-FNL-11) (240 mg, 0.75 mmol) solüsyonuna oda sicakliginda TEA (0.31 mL, 2.25 mmol) eklenmistir. Akabinde 0°C`de yavas bir sekilde asetil klorid (0.1 mL, 0.9 mmol) eklenmistir ve 2 saat boyunca oda sicakliginda karistirilmistir. Baslangiç materyalinin tükenmesinden sonra (TLC ile), reaksiyon karisimi su (5 mL) ile seyreltilmistir ve CH2C|2 (2 x 20 mL) ile özütlenmistir. Kombine edilmis organik katman sitrik asit solüsyonu (1 x 20 mL), tuzlu su (1 x 20 mL) ile yikanmistir. Ayrilmis organik katman anhidröz Na2804 üzerinde kurutulmustur, filtrelenmistir ve düsük basinç altinda konsantre edilmistir. Elde edilen ham materyal, beyazimsi bir kati olarak (ZS-FNL-12) (90 mg, %334) elde etmek üzere %2 MeOH/DCM ile ayristirilarak silika jel kolon kromatografisi ile saflastirilmistir. 1H-NMR: (400 MHz, CDsOD): ö 7.32-7.20 (m, SH), 4.58455 (m, 1H), 4.52-4.42 (m, 2H), 436-422 (m, 1H), 4.08-3.93 (m, 1H), 3.70365 (m, 2H), 364-353 (m, 2H), 2.32- 2.22 (m, 2H), 2.20 (5, 3H), 204-195 (m, 2H), 1.22-1.20 (m, 3H); Kütle (ESI): m/z 360.3 [M*+1]; HPLC:%97.5 (her iki izomer) (28,3R)-N-benziI-3-hidroksi-2-(5-izobütiriI-1-Okso-2,5-diazaSpiro[3.4] oktan-Z-iI) bütanamigl WRX-2563) (gS-FNL-13) sentez_i: CH2CI2 (10 mL) içinde karistirilan bir (ZS-FNL-11) (244 mg, 0.76 mmol) solüsyonuna 0°C1de TEA (0.37 mL, 2.66 mmol) eklenmistir. Akabinde Int-F (89 mg, 0.84 mmol) eklenmistir ve 2 saat boyunca oda sicakliginda karistirilmistir. Reaksiyonun tamamlanmasi akabinde (TLC ile), reaksiyon karisimi su (10 mL) ile seyreltilmistir ve CH2CI2 (2 x 20 mL) ile özütlenmistir. Kombine edilmis organik katman sitrik asit solüsyonu (2 x 30 mL) ile yikanmistir ve organik katman anhidröz N82304 üzerinde kurutulmustur, filtrelenmistir ve düsük basinç altinda konsantre edilmistir. Elde edilen ham materyal, beyazimsi bir kati olarak (28-FNL-13) (150 mg, %51) elde etmek üzere %60 EtOAc/n-hekzan ile ayristirilarak silika jel kolon kromatografisi ile saflastirilmistir. 1H-NMR: (400 MHz, CD30D)I ö 7.35-7.20 (m, 5H), 4.82449 (m, 1H), 446-431 (m, 1H), 429-403 (m, 1H), 390-370 (m, 2H), 3.69-3.57 (m, 2H), 346-331 (m, 1H), 2.77- 2.73 (m, 1H), 228-221 (m, 2H), 2.06-1.97 (m, 2H), 1.22 (d, J = 6.8 Hz, 3H), 108-098 (m, GH): Kütle (ESI): m/z 388.4 [M*+1]; HPLC: %952 (her iki izomer) Sema 2S-6: Adim 1 NJ "O 28- O HATU Boc O Boc O ZS-FNL~14 tert-bütil 2-((28, 3R)-1-(((1,2,4-oksadiazoI-5-il)metil) amino)-3-hidroksi-1- oksobütan-Z-iI)-1-okso-2,5-diazaspiro[3.4]oktan-5-karboksilat (28-FNL-14) sentezi: DMF (10 mL) içinde karistirilan bir bilesik ZS-L (600 mg, 1.82 mmol) solüsyonuna DIPEA (708 mg, 5.48 mmol), ZS-Q (290 mg, 1.82 mmol) HATU (761 mg, 2.00 mmol) 0°C`de eklenmistir ve 16 saat boyunca oda sicakliginda karistirilmistir. Baslangiç materyalinin tükenmesinden sonra (TLC ile), reaksiyon karisimi su (50 mL) ve EtOAc (100 mL) ile seyreltilmistir. Organik katman su (2 x 50 mL), akabinde tuzlu su solüsyonu (2 X 30 mL) ile yikanmistir. Organik katman anhidröz Na2804 üzerinde kurutulmustur, filtrelenmistir ve düsük basinç altinda konsantre edilmistir. Elde edilen ham materyal %2 MeOH/DCM ile ayristirilarak silika jel kolon kromatografisi ile saflastirilmistir. Elde edilen kati, beyaz kati olarak (28-FNL-14) (100 mg, %135) elde etmek üzere eter/n-pentan (5 mL/5 mL) ile tritüre edilmistir. 1H-NMR: (400 MHz, CDsOD): 6 8.61 (5, 1H), 4.85 (8, 2H), 4.78463 (m, 1H), 4.59455 (m, 1H), 430-425 (m, 1H), 352-346 (m, 2H), 3.43-329 (m, 1H), 231-223 (m, 2H), 1.96-1.88 (m, 2H), 1.45 (5, 9H), 126-120 (m, 3H); Kütle (ESI): m/z 410.4 [M*+1]; HPLC:%98.14 (her iki izomer) Sema 2.317: 0 o Ni/NÜ o N/Ns OH Ad -1 I NU( im N... NH\/L`O Adim-2 N". NH\)`O 'S ~~IOH 2sueop N ...OH TFA N "OH BocO éoco TFF/!t O 2S-L ZS-FNL-IE› 2SIFNL716 tert-bütil 2-((ZS,3R)-1-(((1,3,4-oksadiazoI-2-iI)metiI)amino)-3-hidroksi-1- oksobütan-Z-il)-1-okso-2,5-diazaspiro[3.4]oktan-5-karboksilat (28-FNL-15) sentezi: DMF (10 mL) içinde karistirilan bir bilesik ZS-L (1 9, 3.04 mmol) solüsyonuna DIPEA (1.58 mL, 9.12 mmol), BOP reaktifi (2.01 9, 4.56 mmol), akabinde 28-U (496 mg, 3.64 mmol) 0°Clde eklenmistir ve 16 saat boyunca oda sicakliginda karistirilmistir. Baslangiç materyalinin tükenmesinden sonra (TLC ile), reaksiyon karisimi su (100 mL) ile seyreltilmistir ve EtOAc (2 x 30 mL) ile özütlenmistir. Kombine edilmis organik katman tuzlu su solüsyonu (2 x 50 mL) ile yikanmistir ve organik katman anhidröz N32804 üzerinde kurutulmustur, filtrelenmistir ve düsük basinç altinda konsantre edilmistir. Elde edilen ham materyal, beyazimsi bir kati olarak (ZS-FNL-15) (67 mg, %5.4) elde etmek üzere %80 EtOAc/n-hekzan ile ayristirilarak silika jel kolon kromatografisi, akabinde preparatif HPLC saflastirma ile saflastirilmistir. 1H-NMR: (400 MHz, DMSO-de): 6 10.92 (5, 1H), 7.83 (3, 1H), 497-488 (m, 2H), 4.07 (d, J = 7.2 Hz, 2H), 3.83-3.65 (m, 2H), 3.57-3.40 (m, 1H), 3.38-325 (m, 2H), 2.15-2.01 (m, 2H), 183-180 (m, 2H), 1.40 (3, 9H), 1.22 (d, J = 6.4 Hz, 3H) Kütle (ESI): m/z 410.4 [M*+1]; HPLC:%90.6 (28,3R)-N-((1.3,4-oksadiazoI-2-il)metil)-3-hidroksi-2-(1 -okso-2,5- diazaspiro[3.4]oktan-2-il)bütanamid (28-FNL-16) sentezi: CH20I2 (5 mL) içinde karistirilan bir bilesik (28-FNL-15) (70 mg, 0.71 mmol) solüsyonuna 0°C`de TFA (195 mg, 1.71 mmol) eklenmistir ve 1 saat boyunca oda sicakliginda karistirilmistir. Reaksiyonun tamamlanmasi akabinde (TLC ile), reaksiyon karisimi beyazimsi bir kati olarak (TFA tuzu) bilesik (28-FNL-16) (60 mg, %845) elde etmek üzere n-pentan/dietileter (5 mL/5 mL) ile tritüre edilmis ham bilesigi elde etmek üzere düsük basinç altinda konsantre edilmistir. 1H-NMR: (400 MHz,, D20): 6 7.83 (s, 1H), 5.20-5.10 (m, 1H), 4.80 (3, 1H), 4.39-4.30 (m, 2H), 4.13-4.04 (m, 2H), 3.53-3.48 (m, 2H), 2.44-2.41 (m, 2H), 2.21-2.16 (m, 2H), 1.31 (01, J = 6.4 Hz, 3H); Mass (ESI): m/z 310.1 [M*+1]; HPLC: %90.99 Sema 23-& 0 0 B 08" Adim- `l Adim -2 N'" 0 n Step-3 ., _› NI Asetil \N "03" , .' N -i'OBn TFA -iOBn KI d  O Pd C.H2 I OI'I 8000 O 2SIK 2810 28-11 0 OH @Np Adim- 4 îîblwo N ' OH /g 0 Int-F EDCI N 0 28-12 28 FNL-17 Benzil (28, 3R)-3-(benziloksi)-2-(1-okso-2,5-diazaspiro[3.4]0ktan-2-il) bütanoat (8) sentezi: DCM (10 mL) içinde karistirilan bir bilesik ZS-K (800 mg, 1.57 mmol) solüsyonuna O°Cide TFA (1.2 mL) eklenmistir ve 2 saat boyunca oda sicakliginda karistirilmistir. Baslangiç materyalinin tükenmesinden sonra (TLC ile), reaksiyon karisimi dogrudan sonraki adima yönelik kullanilmis, beyazimsi bir kati olarak (HCI tuzu) bilesik 28-10 (500 mg, %78) elde etmek üzere düsük basinç altinda konsantre edilmistir. 1H-NMR: (500 MHz, D20)Z 6 7.48 (m, 5H), 724-721 (m, 5H), 5.29 (s, 2H), 4.96 (3, 2H), 4.80-4.62 (m, 1H), 4.29-4.18 (m, 2H), 4.01-3.89 (m, 1H), 3.52-3.46 (m, 2H), 243-238 (m, 2H), 224-214 (m, 2H), 135-128 (m, 3H); LCMS: 408 [M*+1] Benzil (28, 3R)-2-(5-asetiI-1-okso-2,5-diazaspiro[3.4]oktan-2-iI)-3-(benziloksi) bütanoat (28-11) sentezi: DCM (5 mL) içinde karistirilan bir bilesik 25-10 (500 mg, 1.22 mmol) solüsyonuna TEA (0.46 mL, 3.36 mmol), akabinde asetil klorid (0.1 mL, 1.47 mmol) 0°C`de eklenmistir ve 2 saat boyunca oda sicakliginda karistirilmistir. Baslangiç materyalinin tükenmesinden sonra (TLC ile), reaksiyon karisimi su (10 mL) ile seyreltilmistir. Organik katman anhidröz N32804 üzerinde kurutulmustur, filtrelenmistir ve düsük basinç altinda konsantre edilmistir. Elde edilen ham materyal, beyaz kati olarak bilesik 28-11 (300 mg, %545) elde etmek üzere %2 MeOH/DCM ile ayristirilarak silika jel kolon kromatografisi ile saflastirilmistir. 1H-NMR: (400 MHz, CDsOD): 736-729 (m, SH), 726-716 (m, SH), 5.13 (3, 2H), 4.59 (8, 2H), 432-429 (m, 2H), 4.16413 (m, 1H), 365-361 (m, 1H), 3.60346 (m, 2H), 221-209 (m, 2H), 2.02 (3, 3H), 201-191 (m, 2H), 1.21 (d, J= 6.4 Hz, 3H); LCMS: 451.3 [M*+1] (gs. 3R)-2-(5-asetiI-1-okso- ,5-diazaspirol3.4]oktan-2-il)-3-higroksibütanoik aiit (28-12) sentezi: Metanol (30 mL) Içinde karistirilan bir bilesik 28-11 (1 9, 2.22 mmol) solüsyonuna %10 Pd/C (500 mg) oda sicakliginda eklenmistir ve 24 saat boyunca Hz atmosferi altinda karistirilmistir. Baslangiç materyalinin tükenmesinden sonra (TLC ile), reaksiyon karisimi bir selit pedi araciligiyla filtrelenmistir ve ped metanol ile yikanmistir (20 mL). Elde edilen filtrat, beyazimsi bir kati olarak bilesik 23-12'yi (500 mg, %833) elde etmek üzere düsük basinç altinda konsantre edilmistir. 1H-NMR: (400 MHz, CD30D): ö 4.35-4.30 (m, 1H), 429-417 (m, 1H), 409-404 (m, 1H), 376-367 (m, 1H), 359-348 (m, 1H), 334-331 (m, 1H), 229-224 (m, 2H), 2.15 (5, 3H), 204-196 (m, 2H), 1.28 (Ci, J= 6.4 Hz, 3H); LCMS m/z: 270.4 [M*+1] (gs. 3R)-2-(5-asetiI-1-okso-2,5-diazaspirol3.4]oktan-2-iI)-3-hidroksi-N-(pirimidin-Z- ilmetil)l_3ütanamid (gS-FNL-17) sentez_i: DCM (15 mL) içinde karistirilan bir bilesik 28-12 (700 mg, 2.59 mmol) solüsyonuna DIPEA (1.35 mL, 7.77 mmol), ZS-Y (410 mg, 2.84 mmol), EDCI (593 mg, 3.1 mmol), akabinde HOBT (474 mg, 3.1 mmol) O°C`de eklenmistir ve 16 saat boyunca oda sicakliginda karistirilmistir. Baslangiç materyalinin tükenmesinden sonra (TLC ile), reaksiyon karisimi su (40 mL) ile seyreltilmistir. Organik katman anhidröz Na2804 üzerinde kurutulmustur, filtrelenmistir ve düsük basinç altinda konsantre edilmistir. Elde edilen ham materyal, beyaz kati olarak (ZS-FNL-17) (100 mg, %10?) elde etmek üzere %3 MeOH/DCM ile ayristirilarak silika jel kolon kromatografisi ile saflastirilmistir. 1H-NMR: (400 MHz, D20): 6 8.78 (d, J = 5.2 Hz, 2H), 7.49 (t, J = 5.2 Hz, 1H), 4.79 (3, 2H), 455-447 (m, 1H), 440-437 (m, 2H), 379-356 (m, 3H), 237-226 (m, 2H), 2.14- 2.03 (m, 2H), 2.01 (5, 3H), 1.28 (d, J = 6.4 Hz, 3H); Kütle (ESI): m/z 362.4 [M*+1]; HPLC: %923 (her iki izomer) Sema 2.519: 0 0 0 OH Adim1 NH N- Adim2 N" N- oç 2 @(1 H) 2 3( H) ;4 "'OH 28-YEDCI 5" "'OH N TFA u "'OH N Boc 0 Seo O TFAO 28-L ZS-FNL-ls 2S-FNL-19 O NH N_ Adima N"- \: _. 00 H N / izobütiril 0 O klorid tert-bütil 2-((28,3R)-3-hidroksi-1-okso-1-((pirimidin-2-ilmetiI)amino) bütan-Z-il)-1- okso-2,5-diazaspiro[3.4]oktan-5-karboksilat (2S-FNL-18) sentezi: ZS-FNL-ZO CH2CI2 (30 mL) içinde karistirilan bir bilesik ZS-L (1 9, 3.04 mmol) solüsyonuna DIPEA (1.63 mL, 9.14 mmol), EDCI.HCI (696 mg, 3.64 mmol), akabinde HOBT (558 mg, 3.64 mmol), ZS-Y (241 mg, 3.34 mmol) O°C'de eklenmistir ve 16 saat boyunca oda sicakliginda karistirilmistir. Baslangiç materyalinin tükenmesinden sonra (TLC ile), reaksiyon karisimi su (30 mL) ile seyreltilmistir. Organik katman sitrik asit solüsyonu (2 x 30 mL), akabinde tuzlu su solüsyonu (2 x 25 mL) ile yikanmistir. Organik katman anhidröz N82804 üzerinde kurutulmustur, filtrelenmistir ve düsük basinç altinda konsantre edilmistir. Elde edilen ham materyal, beyaz kati olarak (28-FNL-18) (800 mg, %63) elde etmek üzere %5 MeOH/DCM ile ayristirilarak silika jel kolon kromatografisi ile saflastirilmistir. 1H-NMR: (400 MHZ, CDSOD): 6 8.72 (t, J = 4.8 Hz, 2H), 7.36 (t, J= 4.8 Hz, 1H), 4.81- 4.76 (m, 1H), 462-449 (m, 1H), 434-429 (m, 1H), 418-403 (m, 2H), 3.56 (d, J = 5.6 Hz, 2H), 3.52346 (m, 1H), 230-225 (m, 2H), 197-188 (m. 2H), 1.46 (5. 9H), 1.31- 1.28 (m, 3H); Kütle (ESI): m/z 420.4 [M*+1]; HPLC:%99.6 (her iki izomer) (gS.3R)-3-higlroksi-g-(1-okso-g.5-diazaspirol3.4ioktan-2-iI)-N-(pirimidin-g-ilmetm bütanamid (gS-FNL-19) sentez_i: CHzCI2 (5 mL) içinde karistirilan bir (28-FNL-18) (280 mg, 0.66 mmol) solüsyonuna O°C"de TFA (0.3 mL, 4.0 mmol) eklenmistir ve 4 saat boyunca oda sicakliginda karistirilmistir. Reaksiyonun tamamlanmasi akabinde (TLC ile), reaksiyon karisimi beyaz bir kati olarak (TFA tuzu) (ZS-FNL-19) (95 mg, %446) elde etmek üzere n- pentan/dietil eter (5 mL/5 mL) ile tritüre edilmis ham bilesigi elde etmek üzere düsük basinç altinda konsantre edilmistir. 1H-NMR: (500 MHz, D20): 6 8.81 (d, J= 4.5 Hz, 2H), 7.53 (t, J = 5.0 Hz, 1H), 480-465 (m, 2H), 4.46 (d, J = 6.0 Hz, 1H), 436-431 (m, 2H), 4.10 (d, J = 7.5 Hz, 1H), 3.95 (t, J = 8.0 Hz, 1H), 358-349 (m, 1H), 251-240 (m, 2H), 226-217 (m, 2H), 1.34 (d, J = 6.0 Hz, 3H); Kütle (ESI): m/z 320.3 [M*+1] (gS,3R)-3-hidroksi-g-(S-izobütiriI-1-okso-2.5-diazaspirol3.410ktan-2-iI)-N- (pirimidin-2-ilmetil)bütanamid (25-FNL-20) sentezi: CH2CI2 (5 mL) içinde karistirilan bir (ZS-FNL-19) (300 mg, 0.94 mmol) solüsyonuna TEA (0.4 mL, 2.82 mmol), akabinde SM-4 (120 mg, 1.12 mmol) O"C'de eklenmistir ve 2 saat boyunca oda sicakliginda karistirilmistir. Reaksiyonun tamamlanmasi akabinde (TLC ile), reaksiyon karisimi su (10 mL) ile seyreltilmistir ve CH20I2 (2 x 20 mL) ile özütlenmistir. Kombine edilmis organik katman anhidröz Na2804 üzerinde kurutulmustur, filtrelenmistir ve düsük basinç altinda konsantre edilmistir. Elde edilen ham materyal, beyaz kati olarak (28-FNL-20) (100 mg, %273) elde etmek üzere %2 MeOH/DCM ile ayristirilarak silika jel kolon kromatografisi ile saflastirilmistir. 1H-NMR: (400 MHz, CD30D): 6 8.73 (I, J = 5.2 Hz, 2H), 7.36 (t, J = 4.8 Hz, 1H), 4.83- 4.55 (m, 1H), 451-429 (m, SH). 421-402 (m, 1H), 375-369 (m, 1H), 364-360 (m, 1H), 3.31-3.30(m, 1H), 2.79-2.72 (m, 1H), 228-225 (m, 2H), 2.08-1.97 (m, 2H), 1.31 (d, J = 6.4 Hz, 3H), 1.07-1.02 (m, GH). Kütle (ESI): m/z 390.4 [M*+1], HPLC: %97.75 Sema 28-10: OH 0 Adim 1 W". Adim 2 OMe Ad'm 3 _* N " OMe OTBDPS MeOH NHs Boc OTBDPS BocO zs-i 23-13 25'" o 0 0 @N "GNHV Adim 4 @Mr &NHZ Adim 5 WM GNHZ N N ' . . 'H 1 0 orsops TBAF i OH H n OH Boc Bo<:0 0 23-15 2545 28-FNL-21 tert-Bütil g-(HS)-3-((tert-bütildifeniIsilil)oksi)-1-metoksi-1-oksompan-g il)karl_3amoil)-g-(hic_lroksimetgipiroligin-1-karpoksilat (gs-13): CH2CI2 (110 mL) içinde karistirilan bir bilesik ZS-l (11 9, 44.89 mmol) solüsyonuna bilesik 28-AJ (16.07 9, 44.89 mmol), HATU (20.4 9, 53.68 mmol), akabinde DIPEA (17.37 9, 0.13 mol) oda sicakliginda eklenmistir ve 10 saat boyunca karistirilmistir. Baslangiç materyalinin tükenmesinden sonra (TLC ile), reaksiyon karisimi su (100 mL) ile seyreltilmistir ve CH2CI2 (2 x 100 mL) ile özütlenmistir. Ayrilmis organik katman tuzlu su ile yikanmistir, anhidröz Na2804 üzerinde kurutulmustur, filtrelenmistir ve düsük basinç altinda konsantre edilmistir. Elde edilen ham materyal, sari sivi olarak bilesik 28-13'ü (16 g, %61) elde etmek üzere silika jel kolon kromatografisi ile saflastirilmistir. 1H-NMR: (500 MHz, CDCI3): 6 758-737 (m, 1OH), 4.67 (5, 1H), 412-408 (m, 2H), 3.93(s, 1H), 3.75 (8, SH), 3.72-364 (m, 2H), 2.8 (s, 1H), 2.35 (3, 1H), 2.04 (5, 1H), 1.98-1.82 (m, 3H), 1.25 (5, 9H), 1.03 (5, 9H); Kütle (ESI): m/z 583.5[M*-1]. tert-bütil 2-((S)-3-((tert-bütiIdifenilsilil)oksi)-1-metoksi-1-0ksogrogan-2-ill-1-okso- 2,5-diazaspiro[3.4ioktan-5-karpoksilat_(gS-14) sentez_i: THF (20 mL) içinde karistirilan bir bilesik 28-13 (1.6 9, 2.73 mmol) solüsyonuna trifenilfosfin (0.994 9, 4.10 mmol) ve DTAD (0.788 9. 3.00 mmol) eklenmistir. Reaksiyon karisimi 8 saat boyunca oda sicakliginda karistirilmistir. Baslangiç materyalinin tükenmesinden sonra (TLC ile), reaksiyon karisimi su ile seyreltilmistir ve EtOAc (2x 30 mL) ile özütlenmistir. Ayrilmis organik katman anhidröz Na2804 üzerinde kurutulmustur, filtrelenmistir ve düsük basinç altinda konsantre edilmistir. Ham materyal, sari yapiskan bilesik olarak bilesik 28-14'ü (0.8 9, %51) elde etmek üzere silika jel kolon kromatografisi ile saflastirilmistir. 1H-NMR: (400 MHz, CDCIs): 6 763-758 (m, 4H), 7.45730 (m, 6H), 4.1 (s, 3H), 3.80- 3.67 (m, 4H), 356-344 (m, 3H), 204-195 (m, 4H), 1.59 (s, 9H). 1.04 (s, 9H). Kütle (ESI): m/z 567.4 [M*+1] fert-[itü g-((S)-1-gmino-3-((tert-bütildifenilsilil)oksi)-1-oksompan-g-HH -okso- 2,5-diazaspiro[3.4ioktan-5-karpoksilat (28-15) sentez_i: Metanol (50 mL) içinde karistirilan bir bilesik 28-14 (6 g) solüsyonuna 0°C'de metanolik amonyak (50 mL)) eklenmistir ve 12 saat boyunca oda sicakliginda karistirilmistir. Baslangiç materyalinin tükenmesinden sonra (TLC ile), reaksiyon karisimi düsük basinç altinda konsantre edilmistir ve ham kalinti soluk sari bir kati olarak bilesik-ZS- 'i (1 g, %17) elde etmek üzere %40 EtOAczhekzan ile ayristirilarak silika jel kolon kromatografisi ile saflastirilmistir. 1H-NMR: (400 MHz, CDCI3)I 6 8.27 (3, 1H), 787-763 (m, 4H), 745-736 (m, 7H), 5.37 (3, 1H), 456-454 (m, 1H), 3.82 (d, J = 5.2 Hz, 1H), 3.44 (t, J = 7.6 Hz, 2H), 3.35 (d, J = .2 Hz, 1H), 3.21 (3, 1H), 209-206 (m, 2H), 2.03 (d, J = 4.8 Hz, 2H), 1.44 (3, 9H), 1.08 (5, 9H). LCMS (MIZ) m/z: 214 [M*+1]. tert-bütil 2-((S)-1-amino-3-hidroksi-1-oksompan-Z-iIH-okso-2,5-diazasgiro [3.4loktan-5-karboksilat (gs-16) sentez_i: THF (10 mL) içinde karistirilan bir bilesik 23-15 (19, 1.81 mmol) solüsyonuna 0°C`de TBAF (0.943 9, 3.62 mmol) eklenmistir ve reaksiyon karisimi yavas bir sekilde oda sicakligina isitilmistir ve 2 saat boyunca karistirilmistir. Baslangiç materyalinin tükenmesinden sonra (TLC ile), reaksiyon karisimi su (5 mL) ile seyreltilmistir ve EtOAc (2x 15 mL) ile özütlenmistir. Ayrilmis organik katman tuzlu su ile yikanmistir, anhidröz Na2804 üzerinde kurutulmustur, filtrelenmistir ve düsük basinç altinda konsantre edilmistir. Elde edilen ham materyal, beyaz kati olarak 28-16'yi (0.139, %23) elde etmek üzere %3 MeOHzDCM ile ayristirilarak silika jel kolon kromatografisi ile saflastirilmistir. 1H-NMR: (400 MHz, D20): 6 4.53 (t, J = 6.8 Hz, 1H), 4.03 (d, J = 4.8, 1H), 3.96391 (m, 2H), 3.85 (t, J = 5.8 Hz, 1H), 3.82 (5, 2H), 2.30 (t, J = 4Hz, 2H), 215-182 (m, 2H), 1.49 (3, 9H). LCMS (M/Z) m/z: 314.2 [M*+1] (28)-3-hidroksi-2-(1 -okSO-2, 5-diazaspiro[3.4]Oktan-2-il)propanamid (28-FNL-21) sentezi: CH2CI2 (3 mL) içinde karistirilan bir 28-16 (0.13 9, 0.415 mmol) solüsyonuna 0°C'de TFA (1 mL) eklenmistir ve 2 saat boyunca oda sicakliginda karistirilmistir. Reaksiyon karisimi TFA tuzu olarak (ZS-FNL-21) (100 mg, ham) elde etmek üzere düsük basinç altinda konsantre edilmistir. 1H-NMR: (400 MHz, D20): 6 4.58 (t, J = 5.8 Hz, 1H), 409-403 (m, 3H), 3.92 (d, J = 7.2 Hz, 1H), 357-352 (m, 2H), 255-241 (m, 2H), 228-219 (m, 2H); LCMS (MIZ) m/z: 214[M*+1]. Sema 2S-11: 0 N OH ' NH4CIEDCI ( BOC O 8050 23-AF 2S-FNL-22 tert-büt_il g-((S)-1 -amino-3-hidroksi-1-oksopr_opan-g-il)-1-okso-;S-diazasgiro [3.4]oktan-5-karboksilat (28-FNL-22) sentezi: DCM (10 mL) içinde karistirilan bir bilesik 2S-AF (250 mg, 0.79 mmol) solüsyonuna DIPEA (0.5 mL, 2.38 mmol), EDCI (181 mg, 0.94 mmol), HOBT (127 mg, 0.94 mmol), akabinde NH4CI (84.5 mg, 1.58 mmol) O°C'de eklenmistir ve 12 saat boyunca oda sicakliginda karistirilmistir. Baslangiç materyalinin tükenmesinden sonra (TLC ile), reaksiyon karisimi su (20 mL) ile seyreltilmistir ve sitrik asit (1 x 30 mL), akabinde tuzlu su solüsyonu (1 x 30 mL) ile yikanmistir. Organik katman anhidröz Na2804 üzerinde kurutulmustur, filtrelenmistir ve düsük basinç altinda konsantre edilmistir. Elde edilen ham materyal, sari koyu surup olarak (28-FNL-22) (150 mg, %607) elde etmek üzere %5 MeOH/DCM ile ayristirilarak silika jel kolon kromatografisi ile saflastirilmistir. 1H-NMR: (400 MHz, CDsOD): 6 413-407 (m, 2H), 3.96-3.88 (m, 1H), 3.87-3.77 (m H), 3.63-347 (m, 2H), 3.44-3.30 (m, 1H), 2.31-226 (m, 2H), 1.97-1.88 (m, 2H), 1.47 (8, 9H); LCMS (ESI): m/z 314.3 [M*+1]; HPLC: %98.38 Sema IIS-12: %54" 'îî Adim 1 :BENI 'II-S* Adim 2 "Ozîzl'l-Sý 28YEDCI `N OHN _N` TFA :PEN OHN _N\ B°° 0 zs FNL- 23 -" ZS-FNL-24 Adim 3 MM" Ilmi-»IN izobütiril S OH N\_ klorid 0 2S-FNL-25 tert-bütil 2-((S)-3-hidroksi-1-0kso-1-((pirimidin-2-ilmetil)amino)propan-2-il)-1- okso-2,5-diazaspiro[3.4]oktan-5-karboksilat (2S-FNL-23) sentezi: DCM (25 mL) içinde karistirilan bir bilesik 28-AF (1.3 9, 4.14 mmol) solüsyonuna DIPEA (2.15 mL, 12.42 mmol), HOBT (760 mg, 4.96 mmol), EDCI (1 9, 4.96 mmol), akabinde ZS-Y (715 mg, 4.96 mmol) O°C'de eklenmistir ve 16 saat boyunca oda sicakliginda karistirilmistir. Baslangiç materyalinin tükenmesinden sonra (TLC ile), reaksiyon karisimi su (50 mL) ile seyreltilmistir. Organik katman sitrik asit (1 x 30 mL), akabinde bikarbonat solüsyonu (1 x 30 mL) ile yikanmistir. Organik katman anhidröz Na2804 üzerinde kurutulmustur, filtrelenmistir ve düsük basinç altinda konsantre edilmistir. Elde edilen ham materyal, beyaz kati olarak (28-FNL-23) (800 mg, %50) elde etmek üzere %2 MeOH/DCM ile ayristirilarak silika jel kolon kromatografisi ile saflastirilmistir. 1H-NMR: (400 MHz, CD30D): ö 8.75-8.71 (m, 2H), 7.37-7.34 (m, 1H), 4.66449 (m, 2H), 427-424 (m, 1H), 4.19-4.14 (m, 1H), 403-399 (m, 1H), 397-392 (m, 1H), 3.66- 3.54 (m, 1H), 349-345 (m, 1H), 3.40336 (m, 1H), 232-227 (m, 2H), 197-188 (m, 2H), 1.47 (5, 9H); Kütle (ESI): m/z 406.4 [M*+1]. HPLC:%97.1 (23)-3-hidroksi-2-(1-okso-2,5-diazaspiro[3.4]oktan-2-iI)-N-(pirimidin-2-ilmetil) propanamid (28-FNL-24) sentezi: DCM (5 mL) içinde karistirilan bir bilesik (ZS-FNL-23) (350 mg, 0.86 mmol) solüsyonuna 0°C'de TFA (985 mg, 0.86 mmol) eklenmistir ve 3 saat boyunca oda sicakliginda karistirilmistir. Reaksiyon karisimi beyaz kati olarak (ZS-FNL-24) (250 mg, %954) elde etmek üzere oda sicakligina getirilmistir ve vakum altinda konsantre edilmistir. 1H-NMR: (400 MHz, D20): 6 8.84 (d, J= 5.2 Hz, 2H), 7.55 (t, J = 4.8 Hz, 1H), 490-467 (m, 3H), 410-406 (m, 3H), 394-392 (m, 1H), 357-351 (m, 2H), 254-243 (m, 2H), 228-219 (m, 2H); LCMS: m/z 306.4 [M*+1]; HPLC: %90.07. (28)-3-hidroksi-2-(5-izobütiril-1-okso-2,5-diazaspiro[3.410ktan-2-il)-N-(pirimidin-2- ilmetil)propanamid (2S-FNL-25) sentezi: DCM (5 mL) içinde karistirilan bir bilesik (28-FNL-24) (500 mg, 1.63 mmol) solüsyonuna 0°C'de TEA (0.7 mL, 4.91 mmol) eklenmistir. Akabinde yavas bir sekilde lnt-F (207 mg, 1.95 mmol) eklenmistir ve 3 saat boyunca oda sicakliginda karistirilmistir. Baslangiç materyalinin tükenmesinden sonra (TLC ile), reaksiyon karisimi su (20 mL) ile seyreltilmistir. Organik katman sitrik asit (1 x 30 mL), akabinde tuzlu su solüsyonu (1 X 30 mL) ile yikanmistir. Organik katman anhidröz Na2804 üzerinde kurutulmustur, filtrelenmistir ve düsük basinç altinda konsantre edilmistir. Elde edilen ham materyal, beyaz kati olarak (28-FNL-25) (100 mg, %16.23) elde etmek üzere %5 MeOH/DCM ile ayristirilarak silika jel kolon kromatografisi ile saflastirilmistir. 1H-NMR: (400 MHz, CD30D): 6 8.73 (t, J = 4.8 Hz, 2H), 7.37 (d, J = 5.2 Hz, 1H), 4.56- 4.51 (m, 2H), 4.32-429 (m, 1H), 4.17-4.12 (m, 1H), 405-398 (m, 2H), 374-368 (m, 1H), 363-358 (m, 1H), 3.57-3.51 (m, 1H), 277-269 (m, 1H), 2.31226 (m, 2H), 2.08- 1.95 (m, 2H), 105-098 (m, 6H): LCMS: m/z 376.4 [M*+1]; HPLC: %896 (her iki izomer) Sema 25-13: ,En O 4 0 Adim 1 [Nis/:SH: Adim 2 ÜÇrîi'O Adim 3 N OH N N. / O "DCI HOBt Boc/ Pd- C' H-. BDC/ Mitsunobu Boc O Ko ulu '305 28-51( bAcNO 'OACD s ZSH 2817 2518 2319 N/\. \_J OAc Adim 6 I Dioksan.HCI AkozNH: zs 20 23 FNL 26o ZS-FNL-Z'/ tert-bütil 2-(((2$,3R)-3-asetoksi-1-okso-1-(pirolidin-1-il)bütan-2-I)karbamoiI)-2- ((benziloksi)metil)pirolidin-1-karboksilat (28-17) sentezi: DMF (8 mL) içinde karistirilan bir bilesik 28-BK (1 9, 2.90 mmol) solüsyonuna EDCI.HCI (0.63 9, 3.28 mmol), akabinde HOBt (0.44 9, 3.28 mmol) O°C'de eklenmistir. dakika boyunca karistirildiktan sonra, DIPEA (1.3 mL, 7.46 mmol), akabinde bilesik 2S-H (0.74 9, 3.58 mmol) reaksiyon karisimina eklenmistir ve karistirma diger bir 16 saat boyunca oda sicakliginda devam ettirilmistir. Reaksiyon karisimi su ile yikanmistir ve EtOAc (2x 500 mL) ile özütlenmistir. Organik katman tuzlu su ile yikanmistir, anhidröz N82804 üzerinde kurutulmustur vakum altinda konsantre edilmistir. Ham, bilesik 2S-17'yi (0.6 9, %38) elde etmek üzere kolon kromatografisi ile saflastirilmistir. 1H-NMR: (400 MHz, CDCI3) (Rotamers): 67.34 (3, 5H), 5.37-5.34 (m, 1H), 484-480 (m, 1H), 472-465 (m, 2H), 409-402 (m, 1H), 391-387 (m, 1H), 365-361 (m, 3H), 3.52-3.46 (m, 3H), 2.41 (br s. 1H), 2.22-2.15 (m, 1H), 1.98 (d, 5H), 187-184 (m. 4H), 150-142 (m, 9H). LCMS m/z: 532 [M*+1]. 0 NS O "'OAC tert-bütil 2-(((28,3R)-3-asetoksi-1-okso-1-(pirolidin-1-il)bütan-2-l)karbamoil)-2- (hidroksimetil)pirolidin-1-karboksilat (28-18) sentezi: MeOH (40 mL) içinde karistirilan bir bilesik 28-17 (4.5 9, 8.40 mmol) solüsyonuna inert atmosfer altinda yas %10 Pd/C (1.5 9) eklenmistir ve 4 saat boyunca H2 atmosferi (balon basinci) altinda karistirilmistir. Reaksiyon karisimi, bilesik 23-18'i (3.0 9, %81) elde etmek üzere selit pedi ile filtrelenmistir ve düsük basinç altinda konsantre edilmistir. LCMS m/z: 442.5 [M*+1]. tert-bütil 2-((2$,3R)-3-asetoksi-1-okso-1-(pirolidin-1-il)bütan-2-il)-1-okso-2,5- diazaspiro[3.4]oktan-5-karboksilat (ZS-19) sentezi: THF (25 mL) içinde karistirilan bir bilesik 28-18 (3 9, 6.70 mmol) solüsyonuna trifenilfosfin (2 9, 7.40 mmol), akabinde DTAD (2.5 9, 10.2 mmol) eklenmistir. Reaksiyon karisimi 16 saat boyunca oda sicakliginda karistirilmistir. Baslangiç materyalinin tükenmesinden sonra (TLC ile), reaksiyon düsük basinç altinda konsantre edilmistir. Ham materyal bilesik 28-19'u (TPPO ile 1.2 9, %43) elde etmek üzere %10 MeOH/CH2CI2 ile ayristirilarak silika jel kolon kromatografisi ile saflastirilmistir. 1H-NMR: (400 MHz, DMSO-ds): 6 525-519 (m, 1H), 4.65 (d, 1H), 361-357 (m, 3H), 347-342 (m, 2H), 341-325 (m, 4H), 2.05 (5, 4H), 1.95-1.71 (m, 7H), 1.42 (5, 10H). LCMS m/z: 424.4 [M*+1]. tert-bütil 2-((2S,3R)-3-hidroksi-1-okso-1-(pirolidin-1-il)bütan-2-il)-1-okso-2,5- diazaspiro[3.4]oktan-5-karboksilat (28-20) sentezi: Aköz NH3 (2 mL) içinde bir bilesik 23-19 (0.15 9, 0.41 mmol) solüsyonu 4 saat boyunca oda sicakliginda karistirilmistir. Baslangiç materyalinin tükenmesinden sonra (TLC ile), reaksiyon CH2CI2 (75 mL) ile seyreltilmistir. Ayrilmis organik katman bilesik 28-20'yi (0.1 9, %76) elde etmek üzere anhidröz N82804 üzerinde kurutulmustur ve düsük basinç altinda konsantre edilmistir. LCMS m/z: 382 [M*+1] . 2-((2$,3R)-3-hidroksi-1-okso-1-(pirolidin-1-il)bütan-2-iI)-2,5 diazaspiro[3.4] oktan- 1-on. (28-FNL-26) sentezi: CH2CI2 (2 mL) içinde karistirilan bir bilesik 28-20 (0.2 9, 0.63 mmol) solüsyonuna O°C`de TFA (0.3 mL) eklenmistir ve 1 saat boyunca oda sicakliginda karistirilmistir. Reaksiyon karisimi vakum altinda konsantre edilmistir. Elde edilen kalinti su ile seyreltilmistir ve CH2CI2 (2x 25 mL) ile özütlenmistir. Ayrilmis organik katman, TFA tuzu olarak (ZS-FNL-26) (0.2 9, %80) elde etmek üzere anhidröz Na2804 üzerinde kurutulmustur, filtrelenmistir ve vakum altinda konsantre edilmistir. 1H-NMR: (400 MHz, D20): 6 4.64 (t, 1H), 425-421 (m, 1H), 4.09 (d, 1H), 399-387 (m, 1H), 3.70 (t, 2H), 355-347 (m, 5H), 252-234 (m, 2H), 225-222 (m, 2H), 208-198 (m, 5H), 1.25 (t, 3H). LCMS (ESI) mIz: 282.4 [M*+1]. QR.3S)-4-okso-3-(1-okso-2,5-diazaspiroI3.410ktan-2-ill-4-(piroliçin-1-il) bütan-M asetat (28-FNL-27) sentezi: 1,4-dioksan/HCI (5 mL) içinde karistirilan bir bilesik 28-19 (0.4 9, 0.94 mmol) solüsyonu O°C`ye sogutulmustur ve 1 saat boyunca oda sicakliginda karistirilmistir. Baslangiç materyalinin tükenmesinden sonra (TLC ile), reaksiyon karisimi düsük basinç altinda konsantre edilmistir. Elde edilen ham materyal (28-FNL-27) (0.22 9, %65) elde etmek üzere n-pentan, akabinde EtOAC ile yikanmistir. 1H-NMR: (400 MHZ, D20): 6 4.62 (d, 1H), 441-429 (m, 2H), 4.24 (d, 1H), 389-377 (m, 3H), 354-349 (m, 3H), 257-252 (m, 1H), 249 (s, 3H), 242-200 (m, 8H), 1.30 (d, 3H). LCMS m/z: 324.3 [M*+1]. HPLC Saflik: %99.37. Sema .78-142 0 0 O 0 H N""" Adim 1 NHL› Adim 2 NHZ N OH *4 Niii'Ii g NIII"' Boc H Boc TFA O ZS-AQ 25.21 2S-FNL-28 tert-bütil 2-((2$,3R)-1-amino-3-hidroksi-1-oksobütan-2-il)-6-metil-1-okso-2,5- diazaspiro[3.4]oktan-5-karb0ksilat (28-21) sentezi: CH2CI2 (15 mL) içinde karistirilan bir bilesik 28-AQ (480mg, 1.40 mmol) solüsyonuna DIPEA (543 mg, 4.20 mmol), EDCI.HCI (382 mg, 2.0 mmol), akabinde HOBt (280 mg, 2.0 mmol), NH4CI (111mg, 2.0 mmol) 0°C`de eklenmistir ve 16 saat boyunca oda sicakliginda karistirilmistir. Baslangiç materyalinin tükenmesinden sonra (TLC ile), reaksiyon karisimi su (20 mL) ile seyreltilmistir ve CH20I2 (2 X 30 mL) ile özütlenmistir. Kombine edilmis organik katman tuzlu su (2 x 50 mL) ile yikanmistir, anhidröz Na2804 üzerinde kurutulmustur, filtrelenmistir ve düsük basinç altinda konsantre edilmistir. Elde edilen ham materyal, renksiz koyu surup olarak bilesik 28-211 (150mg, %31) elde etmek üzere %2 MeOH/DCM ile ayristirilarak silika jel kolon kromatografisi ile saflastirilmistir. 1H-NMR: (500 MHz, DMSO-de): 6500488 (m, 1H), 405-394 (m, 4H), 3.37 (t, J= 10.5 Hz, 2H), 210-193 (m, 4H), 1.45 (3, 9H), 1.39-127 (m, 1H), 1.24-1.16 (m, 6H); Kütle (ESI): m/z 364.3 [IVI*+Na] (28, 3R)-3-hidroksi-2-(1-metiI-3-okso-2,5-diazaspiro[3.4]oktan-2-il) bütanamid (28- FNL-28) sentezi: CH2CI2 (5 mL) içinde karistirilan bir bilesik 28-21 (150 mg, 0.43 mmol) solüsyonuna O°Cide TFA (0.4 mL, 4.39 mmol) eklenmistir ve 2 saat boyunca oda sicakliginda karistirilmistir. Reaksiyonun tamamlanmasi akabinde (TLC ile), reaksiyon karisimi yapiskan kati olarak (TFA tuzu) (2S-FNL-28) (100 mg, %65?) elde etmek üzere dietileter/n-pentan (5 mL/5 mL) ile tritüre edilmis ham bilesigi elde etmek üzere düsük basinç altinda konsantre edilmistir. HPLC (saflik): %997 1H-NMR: (400 MHz, D20): ö4.50-4.46 (m, 3H), 363-349 (m, 2H), 256-249 (m, 2H), 235-229 (m, 2H), 1.57 (d, J = 6.8 Hz, 3H), 1.36 (Ci, J = 6.0 Hz, 3H); Kütle (ESI): m/z 483.1 [2M*+1] Sema 23-15: m 0 OH _N Ni ..... Adim 1 Adim 2 O NHI N "OH EDCI "OH N, _N N"' | NH ~i0H Y 23-AQ 23 FNL 29 TFA O Nm) n Adim 3 NH _D N..ii izobutiril N i-IOH klorid o 0 2S~FNL~31 tert-bütil 2-((2R, 38)-3-hidroksi-1-okso-1-((pirimidin-2-ilmetil)amino) bütan-2-ill-1- metil-3-okso-2,5-diazaspirol3.41oktan-5-kaLboksiIat (ZS-FNILZQ) sentez_i: 2S-FNL-30 CH2CI2 (15 mL) içinde karistirilan bir bilesik 28-AQ (500 mg, 1.46 mmol) solüsyonuna DIPEA (0.76 mL, 4.38 mmol), EDCI.HCI (334 mg, 1.75 mmol), HOBt (334 mg, 1.75 mmol), akabinde 2S-Y (252 mg, 1.75 mmol) 0°C'de eklenmistir ve 16 saat boyunca oda sicakliginda karistirilmistir. Baslangiç materyalinin tükenmesinden sonra (TLC ile), reaksiyon karisimi su (20 mL) ile seyreltilmistir ve CHZCIZ (2 x 30 mL) ile özütlenmistir. Kombine edilmis organik katman sitrik asit solüsyonu (20 mL), NaHCO3 (1 x 30 mL), akabinde tuzlu su (1 x 50 mL) ile yikanmistir. Organik katman anhidröz Na2804 üzerinde kurutulmustur, filtrelenmistir ve düsük basinç altinda konsantre edilmistir. Elde edilen ham materyal, beyaz kati olarak (23-FNL-29) (200 mg, %316) elde etmek üzere %2 MeOH/DCM ile ayristirilarak silika jel kolon kromatografisi ile saflastirilmistir. 1H-NMR: (400 MHz, CD30D): ö 8.74-8.70 (m, 2H), 7.37-7.32 (m, 1H), 4.72443 (m, SH), 424-414 (m, 1H), 4.10-3.88 (m, 2H),3.52-3.36 (m, 2H), 222-219 (m, 2H), 2.01- 1.94 (m, 1H), 1.88-1.79 (m, 1H), 1.45-1.41 (m, 3H), 1.40 (3, 9H), 129-126 (m. 3H), Kütle (ESI): 434.5 [M*+1], HPLC:%92.8 _(28.3Rl-3-higroksi-g-(1-met_iI-3-okso-2.5-diazaspirol3.4]oktan-2-iI)-N-(pirimidin-2- ilmetil)bütanamid (28-FNL-30) sentezi: DCM (10 mL) içinde karistirilan bir bilesik (28-FNL-29) (250 mg, 0.57 mmol) solüsyonuna N2 atmosferi altinda TFA (0.44 mL) eklenmistir ve 2 saat boyunca oda sicakliginda karistirilmistir. Baslangiç materyalinin tükenmesinden sonra (TLC ile), reaksiyon karisimi düsük basinç altinda konsantre edilmistir. Elde edilen ham materyal, yari kati (TFA tuzu) olarak (ZS-FNL-30) (180 mg, %947) elde etmek üzere dietileter/n- pentan (5 mL/5 mL) ile tritüre edilmistir ve düsük basinç altinda kurutulmustur. 1H-NMR: (400 MHz, D20): 6 8.82 (d, J= 2.0 Hz, 2H), 7.53 (t, J = 4.8 Hz, 1H), 467-462 (m, 2H), 444-440 (m, 1H), 434-432 (m, 2H), 3.61-356 (m, 2H), 251-220 (m, 4H), 1.55-1.46 (m, 3H), 132-129 (m, 3H) LCMS (ESI) : m/z 333.3 HPLC: %907 (gS.3R)-3-higroksi-g-(S-izobütiril-1-met_iI-3-okso-g.5-diazaspirol3.4] oktan-2-il)-N- _(_pirimidin-2-iImeti_l)pütanamid_(._28-FNL-31) sentez_i: DCM (5 mL) içinde karistirilan bir bilesik (2S-FNL-30) (150 mg, 0.45 mmol) solüsyonuna TEA (0.18 mL, 1.35 mmol), akabinde izobütiril klorid (57 mg, 0.54 mmol) 0°C"de N2 atmosferi altinda eklenmistir ve 2 saat boyunca oda sicakliginda karistirilmistir. Baslangiç materyalinin tükenmesinden sonra (TLC ile), reaksiyon karisimi su (5 mL) ile seyreltilmistir ve CH2C|2 (2 x 10 mL) ile özütlenmistir. Kombine edilmis organik katman anhidröz Na2SO4 üzerinde kurutulmustur, filtrelenmistir ve düsük basinç altinda konsantre edilmistir. Elde edilen ham materyal, yari kati olarak (28-FNL-31) (85 mg, %47) elde etmek üzere %2 MeOH/DCM ile ayristirilarak silika jel kolon kromatografisi ile saflastirilmistir. 1H-NMR: (400 MHz, CDsOD): 6 8.73 (d, J= 4.8 Hz, 2H), 7.36 (t, J: 4.8 Hz, 1H), 4.83- 4.54 (m, 3H), 4.35-4.32 (m, 1H), 4.22-4.11 (m, 1H), 393-388 (m, 1H), 376-371 (m, 1H), 367-360 (m, 2H), 281-276 (m, 1H), 221-207 (m, 3H), 1.96-1.91 (m, 1H), 1.29- 1.26 (m, 6H), 105-102 (m, 6H) LCMS (ESI) : m/z 404.4 HPLC:%93.57 Sema 25-16: HO m Adim 1 BCBÇHON Adim 2 OH _i. i N ZS-BM DTAD Bos' O 'OBn 'OBn 287AN 0-28 22 28-23 Adim 3 Adim 4 N 0N\ 3 Pd- CIHZ l 00 i'OH 287 24 287 FNL7 32 tert-bütil 2-(((28,3R)-3-(benziloksi)-1-okso-1-(pirolidin-1-il)bütan-2-il) karbamoil)-2- (1 -higroksietiipiroligind -kaLboksilat (ZS-22) sentezi: CH20I2 (50 mL) içinde karistirilan bir bilesik 2S-AN (2.5 9, 9.65 mmol) solüsyonuna bilesik ZS-BM (2.7 9, 10.6 mmol), EDCI.HCI (2.7 9, 14.4 mmol), akabinde HOBt (1.9 9, 14.4 mmol) ve DlPEA (5.3 mL, 28.9 mmol) O°C'de eklenmistir ve 12 saat boyunca karistirilmistir. Baslangiç materyalinin tükenmesinden sonra (TLC ile), reaksiyon karisimi su (30 mL) ile seyreltilmistir ve CH2CI2 (2 x 50 mL) ile özütlenmistir. Ayrilmis organik katman tuzlu su ile yikanmistir, anhidröz Na2804 üzerinde kurutulmustur, filtrelenmistir ve düsük basinç altinda konsantre edilmistir. Elde edilen ham materyal, renksiz sivi olarak bilesik 28-22'yi (3.5 9, %73) elde etmek üzere %2 MeOH/DCM ile ayristirilarak silika jel kolon kromatografisi ile saflastirilmistir. 1H-NMR: (500 MHz, DMSO-ds): 6 8.11 (Ci, J = 9.0 Hz, 1H), 7.82 (d, J = 8.5 Hz, 1H), 733-726 (m, SH), 6.56 (3, 1H), 468-463 (m, 1H), 4.56 (5, 2H), 380-374 (m, 1H), 355-333 (m, 5H), 1.76-1.66 (m, 7H), 1.40 (3, 9H), 1.37-1.24 (m, 2H), 108-097 (m, 6H). Kütle (ESI): m/z 504 [M*+1]. tert-bü_til 2-((ZS,3R)-3-(ben;iloksi)-1-okso-1-(piroligin-1-iI)bütan-2-il)-1-metiI-3- okso-g,5-diazaspiro[3.4]oktan-5-karboksilat (23-23) sentez_i: THF (50 mL) içinde karistirilan bir bilesik 28-22 (3.5 9, 6.95 mmol) solüsyonuna trifenilfosfin (3.6 9, 13.9 mmol) ve DTAD (3.2 9, 13.9 mmol) eklenmistir. Reaksiyon karisimi 16 saat boyunca oda sicakliginda karistirilmistir. Baslangiç materyalinin tükenmesinden sonra (TLC ile), reaksiyon düsük basinç altinda konsantre edilmistir. Ham materyal, soluk sari sivi olarak bilesik 2S-23'ü (1.0 9, %30) elde etmek üzere %30 EtOAc/hekzan ile ayristirilarak silika jel kolon kromatografisi ile saflastirilmistir. 1H-NMR: (500 MHz, DMSO-ds): 6 763-754 (m, 1H), 741-724 (m, 4H), 460-437 (m, 3H), 3.98 (d, J = 10.0 Hz, 1H), 3.91 (d, J = 7.0 Hz, 1H), 3.77 (d, J = 7.0 Hz, 2H), 3.44- 3.34 (m, 4H), 201-191 (m, 2H), 185-168 (m, 6H), 1.40 (3, 9H), 1.20-1.11 (m, 6H). Kütle (ESI): m/z 486.6 [M*+1]. (23, 3R)-2-(5-(tert-bütoksikarbonil)-1-okso-2,5-diazaspiro[3.4]oktan-2-il)-3- hidroksibütanoik asit (23-24) sentezi: Metanol (30 mL) içinde karistirilan bir bilesik 28-23 (1 g) solüsyonuna oda sicakliginda %10 Pd/C (400 mg) eklenmistir ve 12 saat boyunca Hz atmosferi (balon basinci) altinda karistirilmistir. Baslangiç materyalinin tükenmesinden sonra (TLC ile), reaksiyon karisimi bir selit pedi araciligiyla filtrelenmistir ve ped metanol ile yikanmistir. Elde edilen filtrat beyaz kati olarak bilesik 28-24"ü (230 mg, %28) elde etmek üzere düsük basinç altinda konsantre edilmistir. 1H-NMR: (500 MHz, DMSO-ds): 6 4.79 (br s, 1H), 4.34 (br s, 1H), 4.27 (d, J = 8.5 Hz, 1H), 403-395 (m, 1H), 3.78 (d, J = 6.5 Hz, 1H), 3.67-363 (m, 1H), 353-349 (m, 2H), 3.39 (t, J = 9.0 Hz, 2H), 204-167 (m, 8H), 1.36 (3, 9H), 1.26 (d, J = 6.0 Hz, 3H), 1.08, 1.06 (dd, J= 6.5 Hz, 3H). LCMS: 396.4 [M*+1]. 2-((2S, 3R)-3-hidroksi-1-okso-1-(pirolidin-1-il)bütan-2-il)-3-metil-2,5- diazaspiro[3.4]oktan-1 -on (28-FNL-32) sentezi: CH2C|2 (2 mL) içinde karistirilan bir bilesik 28-24 (230 mg, 0.58 mmol) solüsyonuna 0°C1de TFA (0.44 mL, 5.82 mmol) eklenmistir ve 2 saat boyunca oda sicakliginda karistirilmistir. Reaksiyonun tamamlanmasi akabinde (TLC ile), reaksiyon karisimi yapiskan kati olarak (TFA tuzu) pentan ve dietil eter (5 mL/5 mL) (210 mg, %92) ile tritüre edilen (23-FNL-32) elde etmek üzere düsük basinç altinda konsantre edilmistir. 1H-NMR: (400 MHz, D20): 6 4.27 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 4.07-4.03 (m, 1H), 401-397 (m, 1H), 352-348 (m, 1H), 339-335 (m, 2H), 332-320 (m, 3H), 2.16 (I, J = 7.6 Hz, 2H), 206-196 (m, 2H), 1.89-1.80 (m, 2H), 1.78-1.74 (m, 2H), 1.43 (Ci, J = 6.4 Hz, 3H), 1.06 (d, J = 6.0 Hz, 3H); Sema 28-] 7: 0 MM OH Adim 1 _'MNWO Adim 2 TMNWO N "OH "OH . | 0 EDCl Nchi OH TFA Boc zs-sc 28-FNL-33 28-FNL-34 tert-bütil 2-((28, 3R)-1-amino-3-hidroksi-1-oksobütan-Z-il)-6-metil-1-okso-Z, 5- diazaspiro[3.4]oktan-5-karboksilat (ZS-FNL-33) sentezi: DCM (25 mL) içinde karistirilan bir bilesik ZS-BC (1.5 9, 4.38 mmol) solüsyonuna N,N- diizopropiletilamin (2.35 mL, 13.14 mmol), NH4CI (310 mg, 8.76 mmol), akabinde EDCI (1 9, 5.25 mmol), HOBT (793 mg, 5.25 mmol) 0°C`de eklenmistir ve 16 saat boyunca oda sicakliginda karistirilmistir. Baslangiç materyalinin tükenmesinden sonra (TLC ile), reaksiyon karisimi su (20 mL) ile seyreltilmistir. Ayrilmis organik katman sitrik asit solüsyonu (1 x 30 mL), akabinde tuzlu su solüsyonu (1 x 30 mL) ile yikanmistir. Organik katman, beyaz kati olarak bilesik (28-FNL-33) (600 mg, %41) elde etmek üzere %5 MeOH/DCM ile ayristirilarak kolon kromatografisi ile saflastirilmis ham bilesigi elde etmek üzere anhidröz Na2SO4 üzerinde kurutulmustur ve düsük basinç altinda konsantre edilmistir. 1H-NMR: (400 MHz, CD30D): 6 424-417 (m, 1H), 403-399 (m, 3H), 367-346 (m, 1H), 240-199 (m, 3H), 1.68-1.62 (m, 1H), 1.46 (3, 9H), 1.24-1.18 (m, 6H); LCMS (ESI): mlz 342.5 [M*+1] (gs, 3R)-3-hidroksi-2-(6-metiI-1-okso-Z.5-diazaspirol3.4]0ktan-2-il) bütanamid (ZS- FNL-34l sentezi: DCM (10 mL) içinde karistirilan bir bilesik (28-FNL-33) (200 mg, 0.58 mmol) solüsyonuna O°C`de N2 atmosferi altinda trifloroasetik asit (0.5 mL) eklenmistir. Reaksiyon karisimi 2 saat boyunca oda sicakliginda karistirilmistir. Baslangiç materyalinin tükenmesinden sonra (TLC ile), reaksiyon karisimi, beyaz kati olarak (23- FNL-34) (100 mg, %71) elde etmek üzere n-pentan (10mL) ile tritüre edilmis ham ürünü elde etmek üzere düsük basinç altinda konsantre edilmistir. 1H-NMR: (400 MHz, D20): 6 435-427 (m, 2H), 408-393 (m, 3H), 258-252 (m, 1H), 248-244 (m, 2H), 1.92-1.86 (m, 1H), 1.51, 1.48 (dd, J = 6.8 Hz, 6.4 Hz, 3H), 1.31, 1.28 (dd, J= 6.0 Hz, 6.4 Hz, 3H); LCMS (ESI): 241.3 [M*+1] Sema 2. -18: OH 0" 0 N _› N N'" _› ZS-BMEDCI '809 éoco --iosn DTAD-Pphe 28-AZ 28-25 0 A_›dim3 WM f Adim4 TMMH OONG PdJC Boco "'OH 28-27 2S-FNL-35 tert-bütil 2-(((2$, 3R)-3-(benziloksi)-1-okso-1-(pirolidin-1-illbütan-Z-il) karbamoil)- g-(hicjroksimet_il)-5-metilpiroliign-1-karboksilat (25-25) sentez_i: DCM (20 mL) içinde karistirilan bir bilesik 28-AZ (1.1 9, 4.28 mmol) solüsyonuna N,N- diizopropiletilamin (2.2 mL, 12.8 mmol), ZS-BM (1.2 9, 4.78 mmol), akabinde EDCI (2.45 9, 12.8 mmol), HOBT (1.7 9, 12.8 mmol) 0°C`de eklenmistir ve 12 saat boyunca oda sicakliginda karistirilmistir. Baslangiç materyalinin tükenmesinden sonra (TLC ile), reaksiyon karisimi su (10 mL) ile seyreltilmistir. Ayrilmis organik katman doymus NaHC03 solüsyonu (1 x25 mL), akabinde tuzlu su solüsyonu (1x30 mL) ile yikanmistir. Ayrilmis organik katman, yogun bir beyaz surup olarak bilesik 2S-25'i (1.2 9, %57) elde etmek üzere %5 MeOH/DCM ile ayristirilarak kolon kromatografisi ile saflastirilmis ham bilesigi elde etmek üzere anhidröz N82804 üzerinde kurutulmustur ve düsük basinç altinda konsantre edilmistir. 1H-NMR: (400 MHz, DMSO- -Zd5) ö 7 93 (t, J = 7.6 Hz, 1H), 771-726 (m, 5H), 5.30 (br s, 1H), 465-461 (m, 1H), 4.57 (3, 2H), 393-385 (m, 2H), 357-334 (m, 2H), 317-309 (m, 2H), 2.07-1.94 (m, 2H), 177-173 (m, 4H), 136-128 (m, 10H), 1.20 (8, 9H); LCMS: m/z 504.7 [M*+1]. tert-bütil 2-((2$, 3R)-3-(benziloksi)-1-okso-1-(pirolidin-1-il) bütan-2-iI)-6-metiI-1- okso-2,5-diazaspiro[3.4]oktan-5-karboksilat (28-26) sentezi: THF (10 mL) içinde karistirilan bir bilesik 28-25 (0.6 9, 1.19 mmol) solüsyonuna trifenilfosfin (0.46 9, 1.78 mmol) ve DTAD (0.4 9, 1.78 mmol) eklenmistir. Reaksiyon karisimi 16 saat boyunca oda sicakliginda karistirilmistir. Baslangiç materyalinin tükenmesinden sonra (TLC ile), reaksiyon karisimi su (10 mL) ile seyreltilmistir. Ayrilmis organik katman tuzlu su solüsyonu (1x30 mL) ile yikanmistir. Ayrilmis organik katman, beyaz kati olarak bilesik 28-26'yi (0.2 9, %35) elde etmek üzere %2 MeOH/DCM ile ayristirilarak kolon kromatografisi ile saflastirilmis ham bilesigi elde etmek üzere anhidröz Na2804 üzerinde kurutulmustur ve düsük basinç altinda konsantre edilmistir. 1H-NMR: (500 MHz, DMSO-dö): 6 763-726 (m, 5H), 4.52 (5, 2H), 391-377 (m, 3H), 356-336 (m, 4H), 235-211 (m, 4H), 194-168 (m, 6H), 1.39 (5, 9H), 1.13, 1.09 (dd, J = 6.0 Hz, 5.5 Hz, 3H), 1.04 (d, J= 6.5 Hz, 3H); LCMS: m/z 486.6 [M*+1]. tert-bütil 2-((28I 3R)-3-(benziloksi)-1-okso-1-(piroligin-1-iI)bütan-2-il -6-metiI-1- okso-2,5-diazaspiro[3.4]0ktan-5-kgrboksilat (28-27) sentezi: Metanol (20 mL) içinde karistirilan bir bilesik 28-26 (1.5 9, 3.09 mmol) solüsyonuna N2 atmosferi altinda %10Pd/C (200 mg) eklenmistir. Reaksiyon karisimi Hz atmosferi (balon basinci) altinda 4 saat boyunca oda sicakliginda karistirilmistir. Baslangiç materyalinin tükenmesinden sonra (TLC ile), reaksiyon karisimi bir selit pedi araciligiyla filtrelenmistir ve ped metanol ile yikanmistir. Elde edilen filtrat beyaz kati olarak bilesik 28-27'yi (0.9 9, %909) elde etmek üzere kolon kromatografisi ile saflastirilmis ham bilesigi elde etmek üzere düsük basinç altinda konsantre edilmistir. 1H-NMR: (500 MHz, CDCIa): 6 4.11 (d. J= 7.0 Hz, 1H), 396-390 (m. 1H), 3.73 (5, 2H), 3.49 (d, J = 13.0 Hz, 2H), 3.40-3.34 (m, 2H), 250-228 (m, 4H), 2.17-1.82 (m, 6H), 1.53 (5, 9H), 152-141 (m, SH), 1.36-1.18 (m, 3H); LCMS: 396.5 [M*+1]. 2-((28, 3R)-3-hidroksi-1-okso-1 -(pirolidin-1-il)bütan-2-iI)-6-metiI-2,5- diazaspirol3.4]oktan-1-on (28-FNL-35) sentezi: Metanol (10 mL) içinde karistirilan bir bilesik 28-27 (0.18 9, 0.45 mmol) solüsyonuna N2 atmosferi altinda O°C'de TFA (3 mL) eklenmistir. Baslangiç materyalinin tükenmesinden sonra (TLC ile), reaksiyon karisimi beyaz kati olarak (2S-FNL-35) (0.1 9, %746) elde etmek üzere n-pentan (10 mL) ile tritüre edilmis ham bilesigi elde etmek üzere düsük basinç altinda konsantre edilmistir. 1H-NMR: (400 MHZ, DMSO-ds): 6 9.99 (br s, 1H), 9.57 (br s, 1H), 4.32 (d, J = 7.6 Hz, 1H), 3.93 (t, J = 6.0 Hz, 1H), 381-375 (m, 3H), 351-346 (m, 2H), 3.30 (t, J = 6.8 Hz, 2H), 229-220 (m, 3H), 1.93-1.75 (m, 4H), 168-163 (m, 1H), 1.34 (d, J = 6.8 Hz, 3H), 1.13 (Ci, J = 6.4 Hz, 3H); Kütle (ESI): m/z 296.3 [M*+1] Sema 2S-I 9: O 0 0 OH Adim 1 NHZ Adim 2 NH; Niiim ' I NI """ _› Ni iiiii 'î "'OH EDCI. NH.,C| 'î' "'OH TFA H »ioii CO o 80 A ZS-BH 28-FNL-38 28-FNL-37 ten-!MI 2-((28.3R)-1-amino-3-higroksi-1-oksobütan-Z-il -1 6-dimetiI-3-okso-2 5- diazaspirol3.4'lokta_in-5-kaiboksilat (2S-FNL-36) sentez_i: CH20I2 (50 mL) içinde karistirilan bir bilesik 28-BH (1.8 9, 5.05 mmol) solüsyonuna DIPEA (2.62 mL, 15.15 mmol), EDCI (1.92 9, 10.1 mmol), HOBt (1.36 9, 10.1 mmol), akabinde NH4CI (803mg, 15.15mmol) O°C'de eklenmistir ve 12 saat boyunca oda sicakliginda karistirilmistir. Baslangiç materyalinin tükenmesinden sonra (TLC ile), reaksiyon karisimi su (30 mL) ile seyreltilmistir. Ayrilmis organik katman sitrik asit solüsyonu (1 x 50 mL), akabinde tuzlu su solüsyonu (1 x 50 mL) ile yikanmistir. Organik katman, beyaz kati olarak (ZS-FNL-36) (468 mg, %26) elde etmek üzere %4 MeOH/DCM ile ayristirilarak kolon kromatografisi ile saflastirilmis ham bilesigi elde etmek üzere anhidröz Na2804 üzerinde kurutulmustur ve düsük basinç altinda konsantre edilmistir. 1H-NMR: (400 MHz, DMSO-de):ö7.25 (s, 2H), 492-448 (m, 1H), 4.34-4.01(m, 1H), 397-372 (m, 3H), 2.32-1.88 (m,3H), 158-151 (m, 1H), 1.41(s, 9H), 136-120 (m, 6H), 1.16-1.07 (m, 3H); LCMS (ESI): 356.4 [M++1]; HPLC:%99.19 (gSßRi-g-H.6-dimetil-3-okso-2,5-diazaspiroi3.410ktan-2-iI)-3-higroksi @tanamig (ZS-FNL-37) sentezi: DCM (5 mL) içinde karistirilan bir (28-FNL-36) (200 mg, 0.56 mmol) solüsyonuna O°C`de TFA (0.45 mL, 5.63 mmol) eklenmistir ve 2 saat boyunca oda sicakliginda karistirilmistir. Baslangiç materyalinin tükenmesinden SOnra (TLC ile), reaksiyon karisimi düsük basinç altinda konsantre edilmistir. Ham materyal, higroskopik beyaz kati olarak (TFA tuzu) (28-FNL-37) (140 mg, %98) elde etmek üzere dietil eter/n- pentan (50 mL/50 mL) ile tritüre edilmistir ve düsük basinç altinda kurutulmustur. 1H- NMR: (400 MHz, D20):ö4.42-4.36 (m, 1H), 4.34-428 (m, 1H), 4.27-4.15 (m, 1H), 4.07- 4.01 (m, 1H), 257-249 (m, 1H), 2.46236 (m, 2H), 2.01-1.90 (m, 1H), 156-150 (m, 6H), 1.32-1.29 (m, 3H); LCMS (ESI): 256.4 [M*+1]; HPLC (ELSD):%93.86. Sema 28-20: %3: Adim 1 Isgîoû Adim 2 MM0 ND 28 BM "OBn DIAD PPh: "'OBn Boco Boco Boco 2S-BE 28-28 28-29 Adim 3 009 Adim4 ::lg Pd- C/H2 B°° O TFAO 28-30 28-FNL-3B tert-bütil2-(((ZS, 3Rl-3-(benziloksil-1-okso-1-(pirolidin-1-iI)bütan-g-il) arpamoill-g (1 -hidroksietiI)-5-metiIpirolidin-1-karboksilat (23-28) sentez_i: DMF (20 mL) içinde karistirilan bir bilesik ZS-BE (2 9, 7.32 mmol) solüsyonuna N,N- diizopropiletilamin (6.7 mL, 36.5 mmol), 2S-BM (2.6 9, 8.7 mmol), akabinde HATU (3.39, 8.7 mmol) O°Cide eklenmistir ve 16 saat boyunca oda sicakliginda karistirilmistir. Baslangiç materyalinin tükenmesinden sonra (TLC ile), reaksiyon karisimi su (100 mL) ve EtOAc (200 mL) ile seyreltilmistir. Ayrilmis organik katman sodyum bikarbonat solüsyonu (2 x 75 mL). sitrik asit solüsyonu (2 x 50 mL). akabinde tuzlu su solüsyonu (1x 50 mL) ile yikanmistir. Ayrilmis organik katman soluk sari sivi olarak bilesik 28-281 (1 g, %27) elde etmek üzere %40 EtOAc/n-hekzan ile ayristirilarak kolon kromatografisi ile saflastirilmis ham bilesigi elde etmek Üzere anhidröz Na2804 üzerinde kurutulmustur ve düsük basinç altinda konsantre edilmistir; LCMS (ESI):518 [M*+1] tert-bütil 2-((2S,3R)-3-(benziloksi)-1-okso-1-(pirolidin-1-il)bütan-2-iI)-1,6-dimetiI-3- okso-z,5-diaza5piro[3.4]oktan-5-karboksilat (28-29) sentezi: THF (10 mL) içinde karistirilan bir trifenilfosfin (1.5 g, 5.7 mmol) solüsyonuna DIAD (976 mg, 4.8 mmol) parçalar halinde eklenmistir ve 20 dakika boyunca oda sicakliginda karistirilmistir. Buna THF (10 mL) içinde bilesik 28-28 (1 9, 1.93 mmol) yavas bir sekilde oda sicakliginda eklenmistir ve 4 saat boyunca karistirilmistir. Baslangiç materyalinin tükenmesinden sonra (by LCMS), reaksiyon karisimi düsük basinç altinda konsantre edilmistir. Ham materyal, sari sivi olarak bilesik 25-29"u (500 mg, %63) elde etmek üzere %30 EtOAc/hekzan ile ayristirilarak silika jel kolon kromatografisi ile saflastirilmistir. 1H-NMR: (400 MHZ, CDCI3):ö7.69-7.66 (m, 1H), 748-743 (m, 1H), 732-729 (m, SH), 4.68 (s, 2H), 4.46-4.40 (m,1H), 426-405 (m, 2H), 3.97-391 (m,0.5H), 387-381 (m, 0.5H), 358-353 (m, 1H), 3.40332 (m, 2H), 2.16-2.11 (m, 1H), 2.04-1.90 (m, 2H), 1.80-1.71 (m, 2H), 1.41 (3, 9H), 132-121 (m, 10H), 1.17-1.15 (m, SH). LCMS (ESI): 500 [M*+1]. tert-bütil2- 28 3R)-3-higroksi-1-okso-1-(pirolic_lin-1Jüwtan-g-HH .G-gimetiI-3- okso-2.5-diazaspiro[3.4]0ktan-5-karboksilat (28-30) sentezi: Metanol (5 mL) içinde karistirilan bir bilesik 25-29 (200 mg, 0.40 mmol) solüsyonuna N2 atmosferi altinda %10 Pd/C (50 mg) eklenmistir. Reaksiyon karisimi Hz atmosferi altinda 4 saat boyunca oda sicakliginda karistirilmistir. Baslangiç materyalinin tükenmesinden sonra (TLC ile), reaksiyon karisimi bir selit pedi araciligiyla filtrelenmistir ve ped metanol ile yikanmistir (10 mL). Elde edilen filtrat sari surup olarak bilesik 28-30"u (100 g, %61) elde etmek üzere %1 MeOH/DCM ile ayristirilarak kolon kromatografisi ile saflastirilmis ham bilesigi elde etmek üzere düsük basinç altinda konsantre edilmistir. 1H-NMR: (400 MHz, DMSO-de): 6 4.93 (d, J: 5.6 Hz, 1H), 4.26 (Ci, J= 9.2 Hz, 0.5 H), 4.17 (d,J = 7.2 Hz, 0.5 H), 402-399 (m, 1H), 391-366 (m,3H), 333-330 (m, 1H), 355-350 (m, 1H), 319-316 (m, 1H), 2.69 (3, 1H), 2.13-2.03 (m, 1H), 199-157 (m 3H), 1.81-1.75 (m, 2H), 156-150 (m, 1H), 1.39 (5, 9H), 1.19 (d. J = 5.6 Hz, 3H). 1.13 (d, J = 6.4 Hz, 6H), LCMS: 410.5 [M++1]. 2-((28,3R)-3-hidroksi-1-okso-1-(pirolidin-1-il)bütan-2-iI)-3,6-dimetiI-2,5- diazaspirol3.4]oktan-1-on (28-FNL-38) sentezi: DCM (20 mL) içinde karistirilan bir bilesik 28-30 (300 mg, 0.73 mmol) solüsyonuna O°C7de N2 atmosferi altinda TFA (418 mg, 3.66mm0l) eklenmistir. Reaksiyon karisimi 4 saat boyunca oda sicakliginda karistirilmistir. Baslangiç materyalinin tükenmesinden sonra (TLC ile), reaksiyon karisimi koyu surup olarak (28-FNL-38) (140 mg, %46) elde etmek üzere preparatif HPLC yöntemi ile saflastirilmis ham ürünü elde etmek üzere düsük basinç altinda buharlastirilmistir. 1H-NMR: (400 MHz, D20):ö4.53-4.46 (m, 1H), 434-422 (m, 2H), 4.03 (Ci, J = 6.4 Hz, 1H), 3.68 (5, 2H), 352-341 (m,2H), 244-237 (m, 3H), 2.03-1.94 (m, 5H), 1.56 (d, J= 6.4 Hz, 6H), 1.27 (d, J = 6.0 Hz, 3H). LCMS (ESI): 310 [M*+1]. Sema ZS-I-l 5 ne Adim 1 W Adim 2 08" Adim 3 âit? N H-28 AC EDCI 6080# DiAD F'Ph /`N oan Pd- ClH 53°C/ Oßii Ece 0 BocN 0 zs si: zs aN zs so zs ap tert-bü_til g-(((S)-1,3-l_)is(bengiloksi)-1-oksoman-g-illkarbamoiIl-g-(1- Mroksietill-S-metiIpirolidin-1-kaLboksilat (ZS-BN! sentezi: DCM (30 mL) içinde karistirilan bir 23-BE (3 9, 10.98 mmol) solüsyonuna N,N- diizopropiletilamin (5.73 mL, 32.96 mmol), 28-AC (3.75 9, 13.17 mmol), akabinde HATU (5 9, 13.17 mmol) 0°C`de eklenmistir ve 16 saat boyunca oda sicakliginda karistirilmistir. Baslangiç materyalinin tükenmesinden sonra (TLC ile), reaksiyon karisimi su (20 mL) ile seyreltilmistir. Ayrilmis organik katman tuzlu su solüsyonu (30 mL) ile yikanmistir. Organik katman, kahverengi koyu surup olarak bilesik 2S-BN'yi (2.9 9, %49) elde etmek üzere %20 EtOAc/n-hekzan ile ayristirilarak kolon kromatografisi ile saflastirilmis ham bilesigi elde etmek üzere anhidröz N32804 üzerinde kurutulmustur ve düsük basinç altinda konsantre edilmistir. 1H-NMR: (500 MHz, DMSO-ds): 6 8.50 (m, 1H), 783-727 (m, 10H), 568-560 (m, 1H), 522-509 (m, 2H), 4.72-4.43 (m, 3H), 389-363 (m, SH), 2.28-1.78 (m, BH), 1.45-1.42 (m, 1H), 1.36 (3, 9H), 126-104 (m, 6H); LCMS (ESI): m/z 541.6 [M*+1] tert-bütil 2-((S)-1,3-bis(benziloksi)-1-oksopropan-Z-il)-1,6-dimetil-3-okso-2,5- diazaspirol3.4'loktan-5-kaLboksilat (ZS-BO) sentezi: Kuru THF (30 mL) içinde karistirilan bir trifenilfosfin (3.51 9, 13.42 mmol) solüsyonuna DIAD (2.21 9, 10.74 mmol) parçalar halinde eklenmistir ve 15 dakika boyunca oda sicakliginda karistirilmistir. Çökeltilen bu solüsyona, kuru THF (15 mL) içinde 28-BN (2.9 9, 5.37 mmol) yavas bir sekilde oda sicakliginda eklenmistir ve 16 saat boyunca karistirilmistir. Baslangiç materyalinin tükenmesinden sonra (TLC ile), reaksiyon karisimi düsük basinç altinda konsantre edilmistir. Ham materyal %30 di etileter/n- pentan ile tritüre edilmistir. Filtrat, kahverengi koyu surup olarak ZS-BO'yu (2.5 9, %892) elde etmek üzere %30 EtOAc/hekzan ile ayristirilarak silika jel kolon kromatografisi ile saflastirilmis ham bilesigi elde etmek üzere düsük basinç altinda konsantre edilmistir. 1H-NMR: (500 MHz, DMSO-dö): 6 738-725 (m, 1OH), 522-515 (m, 2H), 4.80-4.73 (m, 2H), 456-443 (m, 2H), 3.92-360 (m, 3H), 1.89183 (m, 3H), 1.50-1.44 (m, 1H), 1.40 (s,9H),1.22-1.18(s.3H),1.16-1.13(m,3H); LCMS (ESI): mlz 523.6 [M*+1] (23)-2-(5-(tert-bütoksikarboniI)-1,6-cjimetil-3-okso-g.5-diazaspirol3.41 oktan-2-il)-3- hidroksipropanoik asit (ZS-BP) sentezi: Metanol (50 mL) içinde karistirilan ZS-BO (2.5 9, 4.78 mmol) solüsyonuna N2 atmosferi altinda %10 Pd/C (800 mg) eklenmistir. Reaksiyon karisimi H2 atmosferi altinda 16 saat boyunca oda sicakliginda karistirilmistir. Baslangiç materyalinin tükenmesinden sonra (TLC ile), reaksiyon karisimi bir selit pedi araciligiyla filtrelenmistir ve ped metanol ile yikanmistir (30 mL). Elde edilen filtrat yapiskan kati olarak ZS-BP'yi (900 mg, %56.2) elde etmek üzere n-pentan (30 mL) ile tritüre edilmis hami elde etmek üzere düsük basinç altinda konsantre edilmistir. 1H-NMR: (400 MHz DMSO- -:da) 6 4. 78- 4. 75 (m, 1H), 4.24-4.18 (m, 1H), 386-381 (m, 1H), 380-372 (m, 2H), 3.64359 (m, 1H), 215-193 (m, 3H), 1.55-1.50 (m, 1H), 1.39 (5, 9H), 1.24-1.10 (m, 6H); LCMS (ESI): mlz 343.3 [M*+1] Sema 28-21: N" î:: Adim 1N'îC:- lzopropilamin. Boc O HATU BOCO 28-AF 2S-FNL-39 tert-bütil 2-((S)-3-hidroksi-1-(izopropilamin0)-1-oksopropan-Z-iI)-1-okso-2,5- diazaspirol3.4loktan-5-kaiboksilat (ZS-FNL-39) sentez_i: CH2CI2 (10 mL) içinde karistirilan bir 28-AF (200 mg, 0.63 mmol) solüsyonuna DIPEA (0.32 mL, 1.90 mmol), izopropil amin (0.08 mL, 0.94 mmol), HATU (287 mg, 0.75 mmol) 0°C'de eklenmistir ve 5 saat boyunca oda sicakliginda karistirilmistir. Baslangiç materyalinin tükenmesinden sonra (TLC ile), reaksiyon karisimi su (10 mL) ile seyreltilmistir. Ayrilmis organik katman sitrik asit (1 x 20 mL), akabinde tuzlu su solüsyonu (1 x 20 mL) ile yikanmistir. Organik katman anhidröz Na2804 üzerinde kurutulmustur, filtrelenmistir ve düsük basinç altinda konsantre edilmistir. Elde edilen ham materyal beyaz kati olarak (ZS-FNL-39) (150 mg. %672) elde etmek üzere preparatif HPLC saflastirmasi ile saflastirilmistir. 1H-NMR: (400 MHz DMSO- de): 6 7.76 (d, J: 84 Hz,1H),5.01-4.91 (m, 1H), 4.70 (t, J= 6.0 Hz, 1H), 414-407 (m, 1H), 399-380 (m, 2H), 378-361 (m, 2H), 358-335 (m, 2H), 220-205 (m, 2H), 1.85-1.77 (m, 2H), 1.43 (8, 9H), 110-100 (m, 6H) Kütle (ESI): m/z 356.6 [M*+1] HPLC: %99.27 120 Sema 25-22: 0 O /-Ph OH NH Adim 1 N""" _› Niiiii 'T' ` 'OH EDCI. Benilamin T "'OH Boco BocO 2S-BH 28-FNL-40 tert-bütil 2-((28,3R)-1 -(benzilamino)-3-hidroksi-1-oksobütan-2-ill-1,6-dimetiI-3- okso-Z,5-diazaspiro[3.4]oktan-5-karboksilat (28-FNL-40) sentezi: CH2CI2 (10 mL) içinde karistirilan bir ZS-BH (250 mg, 0.70 mmol) solüsyonuna DIPEA (0.36 mL, 2.11 mmol), EDCI (161 mg, 0.84 mmol), HOBt (129 mg, 0.84 mmol), akabinde benzilamin (82 mg, 0.77 mmol) O°C'de eklenmistir ve 12 saat boyunca oda sicakliginda karistirilmistir. Baslangiç materyalinin tükenmesinden sonra (TLC ile), reaksiyon karisimi su (10 mL) ile seyreltilmistir. Ayrilmis organik katman, beyazimsi bir kati olarak (28-FNL-40) (55 mg, %16) elde etmek üzere %5 MeOH/DCM ile ayristirilarak kolon kromatografisi ile saflastirilmis ham bilesigi elde etmek üzere anhidröz Na2804 üzerinde kurutulmustur ve düsük basinç altinda konsantre edilmistir. 1H-NMR: (400 MHz, DMSO- de): 6 7. 31- 7. 20 (m, 5H), 4.92-4.87 (m, 1H), 4.64-4.55 (m, 1H), 4.46-4.37 (m, 2H), 4.22-4.10 (m, 1H), 4.02-3.90 (m, 2H), 239-195 (m, 3H), 1.70- 1.60 (m, 1H), 1.37 (3, 9H), 1.30-122 (m, 9H); LCMS (ESI): m/z 446.56 [M*+1]; HPLC: %89.54 Sema 28-23: 0 ,-< :-F Adim 1 NH Ni ----- mm" ?:4 EDCI. 4 floro N -i OH benilamin I Boco Boc ZS-BH 28-FNL-41 . tert-bü_til 2-((2$.3R)-1-((4-florobenziI)amino)-3-higlroksi-1-oksobütan-g-ill-1.6- dimetiI-3-okso-2,5-diazaspiro[3.4]oktan-5-karboksilat (2S-FNL-41) sentezi: CH2CI2 (10 mL) içinde karistirilan bir ZS-BH (500 mg, 1.40 mmol) solüsyonuna DIPEA (0.73 mL, 4.21 mmol), EDCI (321 mg, 1.68 mmol), HOBt (257 mg, 1.68 mmol), akabinde 4-floro benzilamin (175 mg, 1.40 mmol) 0°C'de eklenmistir ve 12 saat boyunca oda sicakliginda karistirilmistir. Baslangiç materyalinin tükenmesinden sonra (TLC ile), reaksiyon karisimi su (15 mL) ile seyreltilmistir. Ayrilmis organik katman sitrik asit solüsyonu (1 X 25 mL), akabinde tuzlu su solüsyonu (1 x 25 mL) ile yikanmistir. Organik katman, beyaz kati olarak (ZS-FNL-41) (150 mg, %23.07) elde etmek üzere %5 MeOH/DCM ile ayristirilarak kolon kromatografisi, akabinde preparatif HPLC saflastirmasi ile saflastirilmis ham bilesigi elde etmek üzere anhidröz Na2804 üzerinde kurutulmustur ve düsük basinç altinda konsantre edilmistir. 1H-NMR: (400 MHz, CDsOD): ö 7.34-7.30 (m, 2H), 702-698 (m, 2H), 465-459 (m, 1H), 455-436 (m, 2H), 434-420 (m, 1H), 4.12-3.99 (m, 2H), 239-231 (m, 1H), 2.19- 2.01 (m, 2H), 171-162 (m, 1H), 1.40 (3, 9H), 1.29-1.13 (m, 9H): LCMS (ESI): mlz 464.5 [M*+1]; HPLC: %96.32 Sema 28-24: / o @0 Adim1 NH Nii-i-i EDCI. 4- N "'OH metoksi | O Boco benilamin BOC ZS-BH 28-FNL-42 tert-bü_til 2-((2$.3R)-3-hidroksi-1-((4-metoksibengil)amino)-1-oksobütan-g-ill-1,6- dimetiI-3-okso-2,5-diazaspiro[3.4]oktan-5-karboksilat (23-FNL-42) sentezi: CH20I2 (10 mL) içinde karistirilan bir ZS-BH (250 mg, 0.70 mmol) solüsyonuna DIPEA (0.36 mL, 2.11 mmol), EDCI (161 mg, 0.84 mmol), HOBt (129 mg, 0.84 mmol), akabinde 4-met0ksi benzilamin (106 mg, 0.77 mmol) 0°C'de eklenmistir ve 12 saat boyunca oda sicakliginda karistirilmistir. Baslangiç materyalinin tükenmesinden sonra (TLC ile), reaksiyon karisimi su (10 mL) ile seyreltilmistir. Ayrilmis organik katman sitrik asit solüsyonu (1 x 20 mL), akabinde tuzlu su solüsyonu (1 x 25 mL) ile yikanmistir. Organik katman, beyazimsi bir kati olarak (28-FNL-42) (60 mg, %179) elde etmek üzere %5 MeOH/DCM ile ayristirilarak kolon kromatografisi ile saflastirilmis ham bilesigi elde etmek üzere anhidröz Na2804 üzerinde kurutulmustur ve düsük basinç altinda konsantre edilmistir. 1H-NMR: (400 MHz, CDsOD): 6 7.24 (d, J = 1.6 Hz, 2H), 6.85 (d, J = 1.6 Hz, 2H), 4.64- 4.58 (m, 1H), 439-428 (m, 1H), 4.21-4.08 (m, 2H), 406-399 (m, 1H), 3.98388 (m, 1H), 3.83 (3, 3H), 239-228 (m, 1H), 222-213 (m, 1H), 209-197 (m, 1H), 1.71-1.61 (m, 1H), 1.40 (3, 9H), 131-122 (m, 9H); LCMS (ESI): mlz 476.6 [M*+1]; HPLC: %90.29 Sema 25-25: 0 0 OH NH Nll'i" LM› Nuh-i Y T .. OH l-IATU. ' T "'OH O izopropil Boc am'" 8000 ZS-BH 2S-FNL-43 tert-bütil 2-((2S,3R)-3-hidroksi-1-(izopropilamino)-1-oksobütan-2-iI)-1,6-dimetiI-3- okso-2,5-diazaspiro[3.4]oktan-5-karboksilat (28-FNL-43) sentezi: CH20I2 (10 mL) içinde karistirilan bir ZS-BH (500 mg, 1.40 mmol) solüsyonuna O°C`de DIPEA (0.73 mL, 4.21 mmol), izopropil amin (100 mg, 1.68 mmol), HATU (798 mg, 2.1 mmol) eklenmistir ve 12 saat boyunca oda sicakliginda karistirilmistir. Baslangiç materyalinin tükenmesinden sonra (TLC ile), reaksiyon karisimi su (10 mL) ile seyreltilmistir. Ayrilmis organik katman sitrik asit solüsyonu (15 mL), akabinde tuzlu su solüsyonu (15 mL) ile yikanmistir. Organik katman, beyaz kati olarak (28-FNL-43) (100 mg, %18) elde etmek üzere %2 MeOH/DCM ile ayristirilarak kolon kromatografisi, akabinde preparatif HPLC saflastirmasi ile saflastirilmis ham bilesigi elde etmek üzere anhidröz Na2804 üzerinde kurutulmustur ve düsük basinç altinda konsantre edilmistir. 1H-NMR: (400 MHZ, D20): 6 442-389 (m, 5H), 238-204 (m, 3H), 1.77-1.72 (m, 1H), 1.40 (3, 9H), 1.36-1.17 (m, 15H) LCMS (ESI): mlz 398.5 [M*+1]; HPLC: %93.36 Sema 25-26: 0 Adim 1 NH\`/ Niiiii- HATU, tert- N "'OH bütilamin I 0 Bono Boc ZS-BH 28-FNL-44 tert-bütil 2-((2$,3R)-1-(tert-bütilamino)-3-hidroksi-1-oksobütan-Z-iIH,6-dimetiI-3- okso-2,5-diazaspirol3.4]oktan-5-karboksilat (28-FNL-44) sentezi: CH2CI2 (10 mL) içinde karistirilan bir ZS-BH (500 mg, 1.40 mmol) solüsyonuna O°C"de DlPEA (0.62 mL, 3.51 mmol), fert-bütil amin (125 mg, 1.68 mmol), HATU (798 mg, 2.1 mmol) eklenmistir ve 12 saat boyunca oda sicakliginda karistirilmistir. Baslangiç materyalinin tükenmesinden sonra (TLC ile), reaksiyon karisimi su (10 mL) ile seyreltilmistir. Ayrilmis organik katman sitrik asit solüsyonu (15 mL), akabinde tuzlu su solüsyonu (15 mL) ile yikanmistir. Organik katman, beyaz kati olarak (28-FNL-44) (100 mg, %17.13) elde etmek üzere %2 MeOH/DCM ile ayristirilarak kolon kromatografisi, akabinde preparatif HPLC saflastirmasi ile saflastirilmis ham bilesigi elde etmek üzere anhidröz Na2804 üzerinde kurutulmustur ve düsük basinç altinda konsantre edilmistir. 1H-NMR: (500 MHz, 00300): 6 4.53-4.50 (m, 1H), 4.08-3.99 (m, 2H), 382-379 (m, 1H), 238-234 (m, 1H), 220-217 (m, 2H), 209-201 (m, 1H), 1.71-1.67 (m, 1H), 1.40 (8, 9H), 1.38 (5, 9H), 1.33-1.21 (m, 9H); LCMS (ESI): mlz 412.5 [M*+1]; HPLC: %93.91 Sema 28-27: AdimT fî& EDCI, 4- fioro OH BocN benzililamin 28-813 28-FNL›45 tert-bütil 2-((S)-1-((4-florobenzil)amino)-3-hidroksi-1-oksopropan-Z-iI)-1, 6-dimetil- 3-okso-2,5-diazaspiro[3.4]oktan-5-karboksilat (ZS-FNL-45) sentezi: DCM (10 mL) içinde karistirilan bir ZS-BP (200 mg, 0.58 mmol) solüsyonuna N,N- diizopropiletilamin (0.3 mL, 1.75 mmol), EDCI (133 mg. 0.69 mmol), HOBT (93 mg, 0.69 mmol), akabinde 4-floro benzilamin (79.7 mg, 0.63 mmol) 0°C'de eklenmistir ve 16 saat boyunca oda sicakliginda karistirilmistir. Baslangiç materyalinin tükenmesinden sonra (TLC ile), reaksiyon karisimi su (20 mL) ile seyreltilmistir. Ayrilmis organik katman sitrik asit (20 mL), akabinde tuzlu su solüsyonu (30 mL) ile yikanmistir. Ayrilmis organik katman, koyu surup olarak (28-FNL-45) (46 mg, %17.7) elde etmek üzere %3 MeOH/DCM ile ayristirilarak kolon kromatografisi ile saflastirilmis ham bilesigi elde etmek üzere anhidröz Na2804 üzerinde kurutulmustur ve düsük basinç altinda konsantre edilmistir. 1H-NMR: (500 MHz, DMSO-ds): 6 863-859 (m, 1H), 7.30-726 (m, 2H), 7.15-7.07 (m, 2H), 507-500 (m, 1H), 4.31-4.21 (m, 3H), 389-362 (m, 4H), 2.13-1.84 (m, 3H), 1.58- 1.52(m,1H), 1.36 (3, 9H), 1.32-120 (m, 3H), 1.18-1.13 (m, 3H): LCMS (ESI): mlz 450.5 [M*+1] HPLC: %93 Sema 28-28: Adim 1 krizi? HATU. BocN SIKIO BocN O butilamin 2S-BP 28-FNL-46 tert-bütil 2-((S)-1-((4-florobenzil)amino)-3-hidroksi-1-oksopropan-Z-iI)-1, 6-dimetil- 3-okso-2,5-diazaspiro[3.4]oktan-5-karboksilat (2S-FNL-46) sentezi: DCM (15 mL) içinde karistirilan bir 2S-BP (500 mg, 1.46 mmol) solüsyonuna N,N- diizopropiletilamin (0.76 mL, 4.38 mmol), siklobütilamin (124 mg, 1.75 mmol), akabinde HATU (665 mg, 1.75 mmol) 0°C"de eklenmistir ve 16 saat boyunca oda sicakliginda karistirilmistir. Baslangiç materyalinin tükenmesinden sonra (TLC ile), reaksiyon karisimi su (20 mL) ile seyreltilmistir. Ayrilmis organik katman sitrik asit (20 mL), akabinde tuzlu su solüsyonu (30 mL) ile yikanmistir. Organik katman, beyazimsi bir kati olarak (28-FNL-46) (110 mg, %19) elde etmek üzere %3 MeOH/DCM ile ayristirilarak kolon kromatografisi ile saflastirilmis ham bilesigi elde etmek üzere 125 anhidröz Na2804 üzerinde kurutulmustur, filtrelenmistir ve düsük basinç altinda konsantre edilmistir. 1H-NMR: (400 MHz, DMSO-de): 6 8.23 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 4.98-4.83 (m, 1H), 4.30- 4.13 (m, 2H), 395-376 (m, 2H), 3.72-3.66 (m, 2H), 249-189 (m, 3H), 154-154 (m, 3H), 1.48 (3, 9H), 1.19-1.12 (m, 1OH); LCMS (ESI): m/z 396.5 [M*+1] HPLC: %96.63 Örnek 3 - [3H] MK-801 baglama analizi Yöntemler Analizler Moskal et al içinde açiklandigi sekilde yürütülmüstür. (Moskal, J.R., Kuo, A.G., Weiss, C., Wood, P.L., O'Connor Hanson, A., Kelso, S., Harris, R.B., Disterhoft, J.F., 2005. GLYX-13: a monoclonal antibody-derived peptide that acts as an N-methyl- D-aspartate receptor modulator. Neuropharmacology. 49, 1077-87) Iyice yikanmis siçan kortikal membranlarina (200 ug) [3H]MK-801 baglanma (5 nM; 22.5 Ci / mmol) potansiyalizasyonu, artan konsantrasyonlarda test bilesikleri ve 50uM glutamat varliginda dengesiz kosullar (15 dakika @ 25°C) altinda ölçülmüstür. Herhangi bir glisin Iigandi yoklugunda ve 30uM 5,7 DCKA varliginda sifir seviyeleri belirlenmistir. Maksimal stimülasyon 1 mM glisin varliginda ölçülmüstür ve 50uM glutamat tüm numunelerde mevcut olmustur. Test bilesikleri araciligiyla [3H]MK-801 baglanmasinin kolaylastirilmasi, 3 parametreli bir yanita karsi log agonist denklemi (Graph pad Prism, ABD) kullanilarak hesaplanmistir ve potansi (pM cinsinden ifade edilen E050) ve maksimal aktivitesi (maksimal stimülasyon %'si) test bilesigine yönelik hesaplanmistir. Sonuçlar Tablo 2'de ve Sekil 1'de gösterildigi üzere, bilesik X'e yönelik pECöO ve maksimal aktivite -7.4 ve %38'dir. Tablo 2. Bilesik pEC50 Aktivite (%) X -7.4 38 126 Tablo 3. Ek Biyolojik Veriler Bile [3H] Birlestiri Birlestirilm Birlestiri Birlestiri Birlestiri Birlestiri Birlestiri sik MK- lmis is Aktivite lmis lmis lmis lmis lmis 801 Aktivite Verileri: Aktivite Aktivite Aktivite Aktivite Aktivite bagla Verileri: LTP Verileri: Verileri: Verileri: Verileri: Verileri: nma LTP Konsantra LTP, Porsolt Porsolt Porsolt Doz analizi Artisi syonu Anlamli Yüzdür Dozu Dozu, Sonrasi :EC50 (Yüzde) (uM) (8) veya me (mg/kg) yöntem Porsolt (M) Anlamli Süresi Süresi degil inhibisy (Saat) (NS) on (Yüzde) - 5.43E- 130 1 S 80 3 IV 1 FNL 08 -3 - 80 0.1 NS FNL -21 - 1.1E- FNL 08 -7 - 3.49E- FNL 12 -27 - 100 0.1 S 73 1 PO 1 FNL -34 Örnek 4- Hipokampal Kesitlerde Uzun Süreli Potansiyalizasyon Yöntemler Analizler Zhang et al içinde açiklandigi sekilde yürütülmüstür. (Zhang, X.L., Sullivan, J.A., Moskal, J.R., Stanton, P.K., 2008. A NMDA receptor glisin site partial agonist, GLYX-13, simultaneously enhances LTP and reduces LTD at Schaffer collateraI-CA1 synapses in hippocampus. Neuropharmacology. 55, 1238-50) Sprague-Dawley siçanlar (12-18 günlük; Taconic Farms) izofluran ile derin bir sekilde uyutulmustur ve baslari kesilmistir. Siçan beyinleri hizli bir sekilde çikarilmistir, asagidakileri içeren (mM cinsinden), buz soguklugunda yapay serebrospinal akiskan (ACSF, 2-4°C) içine daldirilmistir: 124 NaCI, 4 KCI, 2 MgSO4, 2 CaCI2, 1.25 NaH2PO4, 26 NaHCOS, 10 glukoz; pH 7.4'te, sürekli olarak %95 O2/%5 CO2 ile gaz verilmistir). Siçan beyinleri mezyal çizgiden bölünmüstür, ön Ioblar kesilmistir ve ayri hemisferler siyanoakrilat kullanilarak, kesme islemi sirasinda sürekli olarak %95 O2/%5 CO2 ile gaz uygulanan buz soguklugunda ACSF içinde daldirilan bir katman üzerine yapistirilmistir. Koronal kesitler (400 um kalinliginda) bir Vibratome (Leica VT12008) kullanilarak kesilmistir ve 32 ± 0.5°C'de oksijenlenmis ACSF ile 3 mI/dakikada sürekli olarak perfüze edilen Haas-tipi bir arayüzey kayit haznesine aktarilmadan önce minimum bir saat boyunca oda sicakliginda inkübasyona yönelik bir arayüzey tutma haznesine aktarilmistir. Düsük dirençli kayit elektrotlari, ince duvarli borosilikat camdan (ACSF ile doldurma sonrasinda 1-2 MQ) yapilmistir ve alan uyarici postsinaptik potansiyelleri (fEPSP"Ier) kaydetmek üzere CA1 alani bölgesinin stratum radiatumunda Schaffer kollateral terminasyon alaninin apikal dendritik bölgesine yerlestirilmistir. Çift kutuplu bir paslanmaz çelik uyarici elektrot (FHC C0.), CA3 stratum radiatumdaki Schaffer kollateral-komisüral lifler üzerine yerlestirilmistir ve her biri 30 saniye (50-100 pA; 100 us süre) olmak üzere sabit akim uyarici yogunlugu yaklasik olarak yari-maksimal fEPSP'Ieri uyarmistir. fEPSP egimi, maksimum negatif sapmanin %20"si ila 80'inden lineer interpolasyon ile LTP indüksiyonu öncesinde ve sonrasinda ölçülmüstür ve egimlerin bir deneyin baslamasindan önce en az 15 dakika boyunca ± %10 içinde stabil oldugu dogrulanmistir. Test bilesiginin (1 uM) banyo uygulamasi, LTP'yi ortaya çikarmak üzere Schaffer kollateral stimulus dizilerinin uygulamasindan 30 dakika önce uygulanmistir. LTP, 200 ms'lik bir patlama-arasi aralikta uygulanan, her biri 10 X 100 Hz/5 puls patlamasi olmak üzere dört tane yüksek frekansli teta patlama uyarici dizisi ile Schaffer kollateral aksonlarin stimülasyonu ile indüklenmistir. Her bir dizi süre bakimindan 2 saniyedir ve diziler 15 saniyelik araliklar ile uygulanmistir. Sinyaller bir Multiclamp 7OOB amplifikatör kullanilarak kaydedilmistir ve bir Digidata 1322 (Axon Instruments, ABD) ile sayisallastirilmistir. Veriler IBM uyumlu bir kisisel bilgisayarda pCIamp yazilimi (versiyon 9, Axon Instruments) kullanilarak analiz edilmistir. Sonuçlar Sekil 2'de gösterildigi üzere, 1 pM"de test edilen bilesik X, CA1 piramidal nöronlarda kaydedilen siçan Schaffer kollateral ile uyarilmis NMDA e.p.s.c.s'nin yüksek frekansli stimülasyonu sonrasinda uzun süreli potansiyalizasyonu amrmistir. TR TR TR TR TR

Claims (1)

1.