[go: up one dir, main page]

TR201816055T4 - İnsan CD3 bağlayıcı antikoru. - Google Patents

İnsan CD3 bağlayıcı antikoru. Download PDF

Info

Publication number
TR201816055T4
TR201816055T4 TR2018/16055T TR201816055T TR201816055T4 TR 201816055 T4 TR201816055 T4 TR 201816055T4 TR 2018/16055 T TR2018/16055 T TR 2018/16055T TR 201816055 T TR201816055 T TR 201816055T TR 201816055 T4 TR201816055 T4 TR 201816055T4
Authority
TR
Turkey
Prior art keywords
light chain
antibody
amino acid
cell
binding
Prior art date
Application number
TR2018/16055T
Other languages
English (en)
Inventor
Berthold Hendrik Bakker Alexander
Fokko Van Loo Pieter
Original Assignee
Merus Nv
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Merus Nv filed Critical Merus Nv
Publication of TR201816055T4 publication Critical patent/TR201816055T4/tr

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/2803—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the immunoglobulin superfamily
    • C07K16/2809—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the immunoglobulin superfamily against the T-cell receptor (TcR)-CD3 complex
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/395—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum
    • A61K39/39591—Stabilisation, fragmentation
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A61P35/02—Antineoplastic agents specific for leukemia
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/2851—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the lectin superfamily, e.g. CD23, CD72
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/20—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin
    • C07K2317/21—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin from primates, e.g. man
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/30—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency
    • C07K2317/31—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency multispecific
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/51—Complete heavy chain or Fd fragment, i.e. VH + CH1
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/515—Complete light chain, i.e. VL + CL
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/52—Constant or Fc region; Isotype
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/52—Constant or Fc region; Isotype
    • C07K2317/524—CH2 domain
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/52—Constant or Fc region; Isotype
    • C07K2317/526—CH3 domain
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/52—Constant or Fc region; Isotype
    • C07K2317/53—Hinge
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/55—Fab or Fab'
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
    • C07K2317/71—Decreased effector function due to an Fc-modification
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
    • C07K2317/73—Inducing cell death, e.g. apoptosis, necrosis or inhibition of cell proliferation
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
    • C07K2317/73—Inducing cell death, e.g. apoptosis, necrosis or inhibition of cell proliferation
    • C07K2317/734—Complement-dependent cytotoxicity [CDC]
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/90—Immunoglobulins specific features characterized by (pharmaco)kinetic aspects or by stability of the immunoglobulin
    • C07K2317/92—Affinity (KD), association rate (Ka), dissociation rate (Kd) or EC50 value
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/90—Immunoglobulins specific features characterized by (pharmaco)kinetic aspects or by stability of the immunoglobulin
    • C07K2317/94—Stability, e.g. half-life, pH, temperature or enzyme-resistance

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
  • Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)

Abstract

Mevcut buluş, bir ağır zincir ve hafif zincir içeren insan CD3 bağlayıcı antikorları ile ilgilidir, burada bahsedilen ağır zincir aşağıdaki amino asit dizisini içeren bir değişken bölge içerir: QVQLV QSGGG VVQPG RSLRL SCVAS GFTFS SYGMH WVRQA PGKGL EWVAA IWYX 1 X 2 RKQDY ADSVK GRFTI SRDNS KNTLY LQMNS LRAED TAVYY CTRGT GYNWF DPWGQ GTLVT VSS, 0-5 amino asit insersiyonları, delesyonlar, sübstitüsyonlar, eklenmeler veya bunların bir kombinasyonu ile birlikte. Buluş ayrıca yukarıda tanımlandığı gibi bir ağır zincire sahip olan bispesifik antikorlarla ilgilidir. Antikorun üretim yöntemleri, antikor üreten hücreler ve antikorun (tıbbi) kullanımları sağlanmaktadır.

Description

TARIFNAME INSAN CD3 BAGLAYICI ANTIKORU Bulus, antikorlar alani, özellikle terapötik antikorlar alani ile ilgilidir. Antikorlar insan tedavisinde kullanilabilir. Daha özel olarak bulus, bir tümörün tedavisi için antikorlara ve tercihen bispesifik antikorlara iliskindir. Insan CD3'üne baglanan monoklonal antikorlar, insanlarda terapötik kullanim için gelistirilen ilk antikorlar arasindaydi. Monoklonal CD3 baglayici antikorlar, örnegin, transplant reddinde, ömegin immün supressif nitelikleri için kullanilir. T hücreleri üzerinde CD3 için bispesifik olan ve kanser hücreleri üzerinde bir yüzey hedef antijeni olan antikorlar, T-hücresi reseptör spesifitesi, kostimülasyon veya peptit antijeni sunumundan bagimsiz olarak herhangi bir T-hücresini bir kanser hücresine baglayabilmektedir. Bu tür bispesifik T-hücresi angajman antikorlari, çesitli kanserlerin ve neoplastik büyümelerin tedavisinde büyük umut vermektedir. antikorlarin olusturulmasinda yapi tasi olarak görev yapacak uygun adaylar olan adlandirilmistir; bu mAb'lerin VH ve VL dizileri, Sekil 22'de açiklanmaktadir. Hem 3056 hem de 3896 CD3 mAb'leri, fonksiyonel aktivite açisindan iyi özelliklere sahiptir. Insan T-hücre hatlari üzerinde CD3/TCR eksprese edilen hücre yüzeyine, iyi bilinen fare anti-CD3 antikoru mOKT3'ün afinitesinden büyük ölçüde daha düsük bir afinite (KD) ile baglanirlar, bu da CD3POS hücreleri üzerinde akis sitometrik analizinde daha düsük bir ortalama Iloresan yogunlugu ile sonuçlanir. Benzer sekilde, doku kültürü plakalari üzerinde hareketsizlestirildiginde, mOKT3 ile karsilastirildiginda T-hücresi proliferasyonunu daha az ölçüde indüklerler. 01574-P-0002 Teoriye bagli kalmaksizin, bir bispesifik T-hücresi angajman formatinda mOKT3'ün afinitesinden büyük ölçüde daha az olan bir CD3 afinitesinin tercih edildigine inanilmaktadir. Bispesifik antikorun, tümör antijenine baglanma afinitesinden daha düsük bir atinite ile CD3'e baglanmasi tercih edilir. Teoriye bagli kalmaksizin, afinitedeki bu farkliligin, tümör hücrelerinin, bispesifik antikor tarafindan tercihli opsonizasyonuna izin verdigine, böylece bunlarin, civarda bulunan NK ve/veya T hücreleri dahil olmak üzere immün efektör hücreleri tarafindan tahrip edilmesi için etiketlendigine inanilmaktadir. Bulus sahipleri, 3056 antikoru ile elde edilen sonuçlarin partiden partiye degiskenlik sergiledigini gözlemlemistir. Bu durum bulus sahiplerinin sasirtmistir, çünkü degiskenlik, antikor 3056 ile ayni VH-dizisine, ancak farkli bir hafif` zincire yaratmamistir. Bulusun bir amaci, esas olarak ayni CD3 baglayici özelliklerine sahip olan ve miktar olarak degil ama büyük ölçüde daha iyi özelliklere sahip olan 3056 antikorunun bir varyantini saglamaktir. BULUSUN KISA AÇIKLAMASI Bulus, insan CD3'üne baglanan bir antikor saglar; bu antikor, bir agir zincir ve hafif zincir içerir; burada bahsedilen agir zincir, asagidaki bir amino asit dizisini içeren bir degisken bölge içerir: XIXZ ile belirtilen pozisyon disindaki ve CDR bölgeleri disindaki pozisyonlardan baska bir veya daha fazla pozisyonda 0-5 amino asit sübstitüsyonu ile; XiîNvexzîA; 01574-P-0002 X1 = N ve X2 = T; X1 : H ve X2 : G; X = D ve X2 = G; veya X1 = H ve X2 = A; ve bahsedilen hafif zincir, 0-5 amino asit sübstitüsyonlari ile sekil 23A'n1n Ol2/IgVK1-39 hafif zincir degisken bölgesini içerir. Asagidaki bir amino asit dizisini kodlayan bir nükleik asit molekülü tarif edilmistir: 0-10, tercihen 0-5 amino asit insersiyonlari, delesyonlari, sübstitüsyonlari, eklenmeleri veya bunlarin X1X2 ile belirtilen pozisyon haricinde bir veya daha fazla pozisyonda bir kombinasyonu ile; X1 = N ve X2 = A; X1 : N ve X2 : T; X1 = S ve X2 = G; X1 = H ve X2 = G; X1 = D ve X2 = G; veya X1 : H ve X2 : A. Burada tarif edilen bir antikorda X1 ve X2 kombinasyonu, tercihen X1 = N ve X2 = Ayrica, antikoru eksprese eden ve/Veya nükleik asit molekülünü içeren bir hücre tarif edilmektedir. Bulusa ait bir antikor, aksi belirtilmedikçe, tercihen bir bispesifik antikordur. Bispesifik antikor tercihen en az insan CD3'üne baglanir. Ek olarak, bispesifik antikor tercihen insan tümör hücreleri üzerinde tercihen eksprese edilen en az bir 01574-P-0002 yüzey molekülüne baglanir. Tercih edilen bir uygulamada, bispesifik antikor CLEC12A, CS-l, EGFR, EGFRvIII, EPCAM, DLL3, LGR5, MSLN, FOLRl, FOLR3, HER2, HM1.24, MCSP veya PSMAjya baglanir. Daha fazla tercih edilen bir uygulamada, bispesifik antikor CLEClZA'ya baglanir. Ayrica, bulusa ait bir antikor içeren farmasötik bir bilesim tarif edilmektedir. Ayrica, bir etiket, tercihen bir in vivo görüntüleme için bir etiket içeren bulusa ait bir antikor da tarif edilmektedir. Ayrica, bir tümöre sahip olan veya bulusa göre bir bispesifik antikorun hastaya uygulanmasini içeren bir tümöre sahip olma riski tasiyan bir hastanin tedavisi için bir yöntem tarif edilinektedir. Ayrica, bir tümöre sahip olan veya bir tümör riski tasiyan bir hastanin tedavisinde kullanim için bulusa ait bir bispesifik antikor tarif edilmektedir. Ayrica, bir tümöre sahip olan veya bir tümör riski tasiyan bir hastanin tedavisi için bir ilacin hazirlanmasi için bulusa ait bir antikorun kullanimi açiklanmaktadir. Tercih edilen bir uygulamada tümör, bir CLEC12A pozitif tümördür. BULUSUN DETAYLI AÇIKLAMASI Bulusa ait bir antikor tercihen bir bispesifik antikordur. Bispesifik antikor en azindan insan CD3'üne baglanir. Ek olarak, bispesifik antikor tercihen insan tümör hücreleri üzerinde eksprese edilen en az bir yüzey molekülüne baglanir. Tercih edilen bir uygulamada bispesifik antikor, BCMA, CD19, CD20, CD30, CD33, EPCAM, DLL3, LGRS, MSLN, FOLRl, FOLR3, HER2, HM1.24, MCSP veya PSMA,ya baglanir. Özellikle tercih edilen bir uygulamada, bispesifik antikor CLEC12A'ya baglanir. 01574-P-0002 BCMA ayrica Tümör Nekroz Faktörü Reseptör Süper Familyasi, Üye 17 (TNFRSF17); TNFRSF13A2; B Hücre Maturasyon Antijeni; BCM; B-Hücre Maturasyon Faktörü; B-Hücre Maturasyon Proteini; CD269 veya CD269 Antijen. CD19 ayrica CD19 Molekül; T-Hücre Yüzey Antijeni Leu-12; CD19 Antijeni; CVID3; Farklilasma Antijen CD19; B4; B-Lenfosit Yüzey Antijeni B4; B- Lenfosit Antijen CD19. Ids: HGNC: 1633; Entrez Gene: 930; Ensembl: CD20 ayrica Membrani Kateden 4-Domain, Alt Familya A, Üye 1 (MS4A1); MS4A2; CD20; S7; Lökosit Yüzey Antijeni Leu-16; B-Lenfosit Antijeni CD20; Bp35; B-Lenfosit Hücre Yüzey Antijeni B1; CD20 Antijeni; CD20 Reseptörü; CVIDS; B-Lenfosit Yüzey Antijeni B1; 81; Membrani Kateden 4-D0main, Alt CD30 ayrica Tümör Nekroz Faktörü Reseptör Süper Familyasi, Üye 8 Lenfosit Aktivasyon Antijeni CD30; Tümör Nekroz Faktörü Reseptör P28908 anlamina gelir. CD33 ayrica CD33 Molekül; SIGLEC-3; CD33 Antijeni (Gp67); Miyeloid Hücre Yüzey Antijeni CD33; Sialik Asit Baglama Ig-Like Lectin 3; Siglec-3; SIGLEC3; 01574-P-0002 CD38 ayrica CD38 Molekülü; TlO; CD38 Antijen (P45); CADPr Hidrolaz l; ADP-Ribosil Siklaz 1; ADP-Ribosil SiklaZ/Siklik ADP-Riboz Hidrolaz; NAD(+) Nucleozid; EC 3.2.2.5; Döngüsel ADP-Riboz Hidrolaz l; CD38 Antijen. Ids: UniProtKB: P28907 anlamina gelir. CD44 ayrica CD44 Molekülü (Hint Kan Grubu); IN; MDU2; CD44 Antijen (Homing Fonksiyonu ve Hint Kan Grubu Sistemi); MDU3; CDW44; MIC4; CSPG8; Kondroitin Sülfat Proteoglikan 8; HCELL; Hematopoetik Hücre E- Ve L-Selectin Ligand; MC56; Ekstraselüler Matriks Reseptörü III; Pgpl; Heparan Sülfat Proteoglikan; Hücre Yüzeyi Glikoprotein CD44; Hiyalüronat Reseptörü; epican; Fagositik Glikoprotein 1; Homing Fonksiyonu ve Hint Kan Grubu Sistemi; ECMR-III; CDW44; HUTCH-I; Epican; LHR; PGP l; CD44 Antijeni; PGP-I; CP90 Lenfosit Homing/Yapisma Reseptörü; Fagositik Glikoprotein l; Hermes Antijen. Ids: HGNC: 1681; Entrez Gene: 960; Ensembl: CD123 ayrica Hücre Bölme Döngüsü 123; Hücre Bölme Döngüsü 123 Homolog; Cerevisiae); FLJl4640; Kromozom 10 Açik Okuma Çerçevesi 7. lds: HGNC: UniProtKB: 075794 anlamina gelir. CD; CD138; SDC; Heparan Sülfat Proteoglikan Fibroblast Büyüme Faktörü Reseptörü; Sindekan Proteoglikan 1; Sindekan; 01574-P-0002 CEA ayrica Karsinoembriyonik Antijen-Iliskili Hücre Yapisma Molekülü 5 (CEACAM5); Mekonyum Antijen 100; CD66e; Karsinoembriyonik Antijen; CLEC12A ayrica C-Tipi Lektin Domain Ailesi 12, Üye A; C-Tipi Lektin Protein CLL-l; MICL; Dendritik Hücre-Iliskili Lektin 2; C-Tipi Lektin Süper Familyasi; Miyeloid Inhibitör C-Tipi Lektin-Benzeri Reseptör; C-Tipi Lektin-Benzeri Molekül-1; CLL-l; DCALZ; CLLl; C-Tipi Lektin-Benzeri Molekül 1; DCAL-2; Reseptör hücre lektini, reseptör alt familyasi L, üye 1 (KLRL1); CD371 (Bakker Zhang W. et al. GenBankTM access.n0: AF247788; A.S. Marshall, et al. J Biol UniProtKB: Q5QGZ9. CLEC12A, CD34 negatif veya CD34 düsük eksprese eden lösemik kök hücreler (yan popülasyon) (A.B. Bakker et al. Cancer Res 2004, 64, Cells 2613059) dahil olinak üzere, lösemik blast hücreleri ve lösemik kök hücrelerde, akut miyeloid lösemide (AML) eksprese edilen bir antijendir. CLEC12A'nin ekpresyonunun, hematopoietik soya, özellikle de periferik kan ve kemik iliginde miyeloid hücreler, diger bir deyisle granülositler, monositler ve dendritik hücre prekürsörleri ile sinirli oldugu düsünülmektedir. Daha da önemlisi, CLAP12A hematopoietik kök hücrelerde yoktur. Bu ekspresyon profili, CLEC12A'yi AML'de özellikle olumlu bir hedef haline getirmektedir. CLECl2A'nin tam uzunluktaki formu, diger birçok izoformda bulunmayan, 10 amino asidin ek bir hücre içi gerilmesini içeren ve tamamen miyeloid ekspresyon profilini (yüzey ekspresyonu ve mRNA seviyesi) gösteren 275 amino asit kalintisini içerir. 'CLEC12A" terimi ya da bunun fonksiyonel esdegeri, yukarida referans olarak verilen tüm (birlesme veya mutasyon) varyantlari ve Bakker et al. 01574-P-0002 802'da tarif edildigi gibi siki iniyeloid ekspresyon profilini (hem yüzey ekspresyon düzeyinde hem de mRNA düzeyinde) koruyan izoformlarini ifade eder. Bulusun A CLEC12A baglayici antikoru insan CLECl2A°ya baglanir. Burada CLEC12A'ya atifta bulunuldugunda, aksi belirtilmedikçe, referans insan CLEC 12A'ya yöneliktir. CD3 (farklilasma 3 kümesi) T-hücresi ko-reseptörü bir protein kompleksidir ve dört ayri zincirden olusur. Memelilerde, kompleks bir CD3y zinciri, bir CD3ö zinciri ve iki CD3e zincirini içerir. Bu zincirler, T lenfositlerinde bir aktivasyon sinyali olusturmak için T-hücresi reseptörü (TCR) ve Ç-zinciri olarak bilinen bir molekülle iliskilidir. TCROL, TCRB, Ç-zinciri ve CD3 molekülleri birlikte TCR kompleksi içerir. CD3, T hücreleri üzerinde eksprese edilir. CD3'e baglanan bir antikor, bir CD3-y zincirini, bir CD3ö zincirini, bir CD3e zincirini veya bir CD3Ö/CD38 veya CD3y/CD38 kombinasyonunu baglayabilir. Mevcut bulusun CD3 baglayici antikoru, CD3& zincirini baglar. CD3e, çesitli takma adlar altinda bilinmektedir, bunlarin bazilari: "CD3e Molekülü, Epsilon (CD3-TCR Kompleksi)"; "CD3e Antijen, Epsilon Polipeptit (TiT3 Kompleksi)"; T Hücre Yüzey Antijeni T3/Leu-4 Epsilon Zinciri; T3E; T-Hücre Antijen Reseptör Kompleksi, T3 Epsilon Alt-birimi; CD3e Antijen; CD3-Epsilon 3; IMD18; TCRE. CD3E Gen için lds, HGNC: 1674; Entrez Gene: 916; Ensembl: hedefleyen bispesifik CD3 baglayici antikorlarin, T hücrelerini anormal hücrelere almada etkili oldugu gösterilmistir. Dolayisiyla, mevcut bulusa göre bir (bispesifik) antikor, tercihen CD3e'yi baglanan bir agir/hafif zincir kombinasyonunu içerir. Bulusa ait bir CD3 baglayici antikor, insan CD3'ü baglar. Burada CD3'e referans verildiginde, aksi belirtilmedikçe referans insan CD3'üne yöneliktir. 01574-P-0002 CS-l ayrica Sitrat Sentaz; EC 2.3.3.1; Sitrat Sentaz, Mitokondriyal; EC 2.3.3. lds: UniProtKB: 075390 olarak da adlandirilmaktadir. EGFR ayrica Epidermal Büyüme Faktörü Reseptörü; Eritroblastik Lösemi Viral (V-Erb-B) Onkogen Homolog (Avian); ERBBl; PIG61; Proto-Onkogen C-ErbB- 1; Avian Eritroblastik Lösemi Viral (V-Erb-B) Onkogen Homologu; Reseptör Tirosin-Protein Kinaz ErbB-l; Hücre Büyümesini Inhibe Eden Protein 40; Hücre Epidermal Büyüme Faktörü Reseptörü (Avian Eritroblastik Lösemi Viral (V-Erb- B) Onkogen Homologu) olarak da adlandirilmaktadir. Ids: HGNC: 3236; Entrez Delta benzeri 3 (DLL3) ayrica Delta-Benzeri 3); Drosophila Delta Homolog 3; Delta3; Delta (Drosophila)-Benzeri 3; SCDOl olarak da adlandirilmaktadir. LGR5, G Protein Baglanmis Reseptör 5 içeren Lösin bakimindan zengin tekrardir. Gen veya protein için alternatif isimler, G Protein Baglanmis Reseptör 5 içeren Lösin bakimindan zengin tekrari; Protein Baglanmis Reseptör 5 içeren Lösin bakimindan zengin tekrar; G-Protein Baglanmis Reseptör HG38; G-Protein Baglanmis Reseptör 49; G-Protein Baglanmis Reseptör 67; GPR67; GPR49; Orphan G Protein-Baglanmis Reseptör HG38; G-Protein Baglanmis Reseptör 49; GPR49; HG38 ve FEX°dir. LGR5'i baglanan bulusun bir proteini veya antikoru, insan LGR5`ini baglar. Bulusun LGR5 baglayici proteini veya antikoru, insan ve diger memeli ortologlar arasindaki dizi ve tersiyer yapi benzerliginden ötürü, bu tür bir ortologii da baglar ancak sart degildir. Insan LGR5 proteini ve onu 01574-P-0002 MSLN veya mezotelin ayrica Mezotelin; Ön-Pro-Megakaryosit-Potansiyel Faktörü; CAKl Antijeni; MPF; Çözünebilir MPF Mezotelin Iliskili Protein; Megakaryosit Potansiyel Faktörü ve SMRP olarak da adlandirilmaktadir. MSLN için Ids sunlardir: HGNC: 7371; Entrez Gene: 10232; Ensembl: Polat reseptörü l ayrica FOLR1;F01atReseptörü 1 Folat Reseptörü 1; Yumurtalik Tümör-Iliskili Antijen MOV18; Yetiskin Folat Baglayici Protein; Folat Reseptörü, Yetiskin; KB Hücreleri FBP; FR-alfa; FOLR; FBP; Folat Baglayici Proteini; ve Folat Reseptörü 1 olarak da adlandirilmaktadir. FOLRl için Ids, HGNC: 3791; P15328"dir. Polat reseptörü 3 ayrica FOLR3; Polat Reseptörü 3 (Gama); FR-Gama; Polat Reseptörü 3; Gama-HFR; ve FR-G olarak da adlandirilmaktadir. FOLR3 için Ids EPCAM ayrica Epitel Hücre Yapisma Molekülü; EGP40; M4Sl; ESA; MIC18; KS 1/4; Tümör-Iliskili Kalsiyum Sinyal Transdüseri 1; MK-l; TACSTDl; Insan Epitelyal Glikoprotein-Z; TROPl; Membran Bileseni, Kromozom 4, Yüzey Marker (35kD Glikoprotein); Adenokarsinoma-Iliskili Antijen; EGP; Hücre Yüzeyi Glikoprotein Trop-l; Ep-CAM; Epitelyal Glikoprotein 314; GA733-2; Antijeni; KSA; Epitel Hücre Yüzey Antijeni; DIARS; Epitelyal Glikoprotein; HNPCCS; hEGP314; Monoklonal Antikor AUAl ile Tanimlanan Antijen; KS Antijen; EGP-2; ACSTD] olarak da adlandirilmaktadir. Ids: HGNC: 11529; 01574-P-0002 P16422. HER2 ayrica V-Erb-B2 Avian Eritroblastik Lösemi Viral Onkogen Homolog 2; ERBB2; CD340; NGL; HER-2; HER-2/neu2; NEU2; TKRl; Nöro/Glioblastoma Türetilmis Onkogen Homologu; C-Erb B2/Neu Proteini; Metastatik Lenf Nodu Gen 19 Protein; herstatin; Proto-Onkogen C-ErbB-2; Nöroblastoma/Glioblastoma Türetilmis Onkogen Homologu; Proto-Onkogen Neu; Reseptör Tirosin-Protein Kinaz ErbB-Z; Tirozin Kinaz-Tipi Hücre Yüzey Reseptörü HER2; V-Erb-BZ Eritroblastik Lösemi Viral Onkogen Homolog 2, Neuro/Glioblastoma Onkogen 2.7.10; V-Erb-BZ Avian Eritroblastik Lösemi Viral Onkogen Homolog 2 (Neuro/Glioblastoma Türetilmis Onkojen Homologu) olarak da adlandirilmaktadir. lds: HGNC: 3430; Entrez Gene: 2064; Ensembl: HM1.24 ayrica BST2; Kemik Iligi Stromal Hücre Antijeni 2; TETHERIN; BST- Antijen; NPC-A-7 olarak da adlandirilmaktadir. Ids: HGNC: 1119; Entrez Gene: MCSP ayrica Sperm Mitokondri-lliskili Sistein Bakimindan Zengin Protein (SMCP); MCSP; MCS; Mitokondriyal Kapsül Selenoprotein; HSMCSGENI; Sperm Mitokondriyal Iliskili Sistein Bakimindan Zengin Protein olarak da adlandirilmaktadir. Ids: HGNC: 6962; Entrez Gene: 4184; Ensembl: PSMA ayrica Folat Hidrolaz (Prostat-Spesifik Membran Antijeni) 1; FOLHI; NAALADl; FOLH; MGCP; Glutamat Karboksipeptidaz 11; N-Asetillenmis-Alfa Baglantili Asidik Dipeptidaz I; PSM; NAALADase I; PSMA; EC 3.4.17.21; Glutamat Karboksilaz 11; GCP2; Hücre Büyüme-Inhibitör Gen 27 Protein; 01574-P-0002 NAALADase l; Folilpoli-Gama-Glutamat Karboksipeptidaz; Glutamat Karboksipeptidaz 2; Membran Glutamat Karboksipeptidaz; N-Asetillenmis Alfa Baglantili Asidik Dipeptidaz l; Pteroilpoli-Gama-Glutamat Karboksipeptidaz; Prostat Spesifik Membran Antijen Varyanti F; FGCP; Folat hidrolaz l; GCPIl; Prostat Özel Membran Antijeni olarak da adlandirilmaktadir. Ids: HGNC: 3788; QO4609. PSMA, ayrica PSMAl takma adiyla da bilinen Proteazom (Prosome, Macropain) Alt birim, Alfa Tipi, 1 ile karistirilmamalidir. Erisim numaralari, bir hedefin tanimlanmasi için baska bir yöntem saglamak için verilir, örnegin, proteinin bagli olan gerçek dizisi, örnegin bazi kanserlerde veya benzerlerinde meydana gelenler gibi kodlama genindeki bir mutasyon nedeniyle degisebilir. Antijen baglanma bölgesi, antijeni ve bazi antijen pozitif immün veya tümör hücreleri tarafindan eksprese edilenler gibi çesitli varyantlarini baglar. Burada bir gene, bir proteine referans verildiginde, referans tercihen genin veya proteinin insan formudur. Burada bir gen ya da proteine referans verildiginde, dogal gen veya proteine ve tümörlerde, kanserlerde ve benzerlerinde tespit edilebilen, tercihen insan tümörlerinde, kanserlerde ve benzerlerinde tespit edilebilen gen veya proteinin varyant formlari ile ilgilidir. Bulusa ait bir bispesifik antikor tercihen insan BCMA, CDl9, CD20, CD30, EPCAM, DLL3, LGR5, MSLN, FOLRl, FOLR3, HER2, HM1.24, MCSP, PSMA proteini veya bunun bir varyantina baglanir. Antijen baglayici agir/hafif zincir kombinasyonunun tercihen antijenin hücre disi bölümünü bagladigini söylemek gereksizdir. Bulusa göre bir bispesifik antikor tercihen insan CLEC12A'ya veya bunun bir varyantina baglanir. Bulusa göre tercih edilen bir bispesifik antikor, Insan CD3 ve insan CLEC12A ya da bunun bir varyantina baglanir. 01574-P-0002 HGNC, HUGO Gen terminoloji komitesini temsil eder. Kisaltmanin ardindan gelen sayi, gen tarafindan kodlanan gen ve proteinin HGNC veri tabanindan alinabilecegi erisim numarasidir. Entrez Gene, gen tarafindan kodlanan gen veya protein üzerindeki bilgilerin NCBI'den (Ulusal Biyoteknoloji Bilgi Merkezi) veri tabanindan alinabilecegi erisim numarasini veya gen kimligini saglar. Ensemble, gen tarafindan kodlanan gen veya protein üzerindeki bilgilerin, Ensemble veri tabanindan elde edilebildigi katilim numarasini saglar. Ensembl, EMBL-EBI ve Wellcome Trust Sanger Enstitüsü arasinda seçilen ökaryotik genomlarda otomatik ek açiklamalar üreten ve sürdüren bir yazilim sistemi gelistirmek için ortak bir projedir. Bulus, insan CD3'üne baglanan bir antikor saglar; bu antikor, bir agir zincir ve hafif zincir içerir; burada bahsedilen agir zincir, asagidaki bir amino asit dizisini içeren bir degisken bölge içerir: X1X2 ile belirtilen pozisyon disindaki ve CDR bölgeleri disindaki pozisyonlardan baska bir veya daha fazla pozisyonda 0-5 amino asit sübstitüsyonu ile; X1 = N ve X2 = T; X1 = H ve X2 = G; X1=D ve X2 = G; veya X1 : H ve X2 2 A; ve bahsedilen hafif zincir, 0-5 amino asit sübstitüsyonlari ile sekil 23A'nin OlZ/lgVKl -39 hafif zincir degisken bölgesini içerir. Ayrica, Sekil 23A'da O-lO, tercihen 0-5 amino asit insersiyonlari, delesyonlari, sübstitüsyonlari, eklenmeleri veya bunlarin bir kombinasyonu ile gösterildigi gibi bir OlZ/IgVyl-39*Ol gen segmentinin amino asit dizisini içeren bir hafif zincir degisken bölgesi içeren bir hafif zincir tarif edilmektedir. "012 hafif zincir" 01574-P-0002 ifadesi, tarifname boyunca, Sekil 23A'da 0-10, tercihen 0-5 amino asit insersiyonlari, delesyonlari, sübstitüsyonlari, eklenmeleri veya bunlarin bir kombinasyonu ile gösterildigi gibi bir Ol2/IgVyl-39*01 gen segmentinin ainino asit dizisini içeren bir hafif zincir degisken bölgesini içeren bir hafif zincir" için kisaltma olarak kullanilacaktir. IgVy1-39 Immunoglobulin Degisken Kappa 1-39 Gen için kisaltmadir. Gen ayrica Immunoglobulin Kappa Degiskeni 1-39; amino asit dizisi, Sekil 23A'da verilmistir. Bu, V-bölgesinin dizisini listeler. V- bölgesi, bes J-bölgesinden biriyle birlestirilebilir. Sekil 23B ve 23C, bir J-bölgesi ile kombinasyon halinde lgVK1-39 için tercih edilen iki diziyi tarif eder. Birlestirilmis diziler, lGKVl-39/jkl ve lGKVl-39/jk5 olarak gösterilir, alternatif tabanina göre dünya çapinda web imgt.org adresindeki terminoloj i). Hafif zincir degisken bölge içeren 012/IgVK1-39*01'in bir germ hatti dizisi olmasi tercih edilir. Ayrica, hafif zincir degisken bölgesini içeren IGJK1*01 veya /IGJK5*01'in bir germ hatti dizisi olmasi tercih edilir. Tercih edilen bir uygulamada, IGKV1-39/jk1 veya IGKV1-39/jk5 hafif zincir degisken bölgeleri germ hatti dizileridir. Tercih edilen bir uygulamada, hafif zincir degisken bölgesi bir germ hatti OlZ/IgVKl-39*01 içerir. Tercih edilen bir uygulamada, hafif zincir degisken bölgesi, kappa hafif zincir lgVyl-39*01/lGJyl*Ol veya lgVyl- 39*01/lGJy5*01 içerir. Tercih edilen bir uygulamada bir lgVicl- 39*Ol/IGJK1*Ol,dir. Hafif zincir degisken bölgesi tercihen bir germ hatti kappa hafif zincir lgVK1-39*Ol/IGJK1*01 veya germ hatti kappa hafif zincir IgVKl- Bir 012 hafif zincirine sahip bir antikor üreten matur B hücreleri, çogunlukla, germ hatti dizisine, diger bir deyisle organizmanin lenfoid olmayan hücrelerindeki normal diziye göre bir veya daha fazla mutasyon geçirmis bir hafif zincir üretirler. Bu mutasyonlardan sorumlu proses genellikle somatik (hiper)mutasyon olarak adlandirilir. Ortaya çikan hafif zincir, afinite olgunlastirilmis bir hafif zincir 01574-P-0002 olarak adlandirilir. Bu türlü hafif zincirler, bir 012 germ hatti dizisinden türetildiginde OlZ'den türetilen hafif zincirlerdir. Bu tarifnamede, "012 hafif zincirleri" ifadesi, Ol2'den türetilen hafif zincirleri içerecektir. Somatik hipermutasyonun getirdigi mutasyonlar elbette laboratuvarda yapay olarak da sunulabilir. Laboratuvarda ayrica, miktarlari disinda, hafif zincirin özelliklerini aynen etkilemeksizin baska mutasyonlar da verilebilir. Bir hafif zincir, Sekil 23A, sekil 23B veya sekil 23C`de, 0-10, tercihen 0-5 amino asit insersiyonlari, delesyonlari, sübstitüsyonlari, eklenmeleri veya bunlarin bir kombinasyonu ile belirtilen bir dizi içerdiginde en az bir 012 hafif zinciridir. Tercih edilen bir 7, 0-6, 0-5, 0-4 amino asit insersiyonlari, delesyonlari, sübstitüsyonlari, eklenmeleri veya bunlarin bir kombinasyon ile gösterildigi gibi bir dizi içeren bir hafif zincirdir. Tercih edilen bir uygulamada, 012 hafif zinciri, Sekil 23A'da, insersiyonlari, delesyonlari, sübstitüsyonlari, eklenmeleri veya bunlarin bir kombinasyonu ile belirtilen bir dizi içeren bir hafif zincirdir. Tercih edilen bir uygulamada, Ol2 hafif` zinciri, Sekil 23A, sekil 23B'de veya Sekil 23C'de 0-2, daha tercihen 0-1, en çok tercihen 0 amino asit insersiyonlari, delesyonlari, sübstitüsyonlari, eklenmeleri veya bunlarin bir kombinasyonu ile belirtilen bir hafif zincirdir. Tercih edilen bir uygulamada, 012 hafif zinciri, sekil 23A veya sekil 23B'de bahsedilen ainino asit insersiyonlari, delesyonlari, sübstitüsyonlari, eklenmeleri veya bunlarin bir kombinasyonu ile belirtilen bir dizi içeren bir hafif zincirdir. Tercih edilen bir uygulamada, hafif zincir, sekil 23B'nin dizisini içerir. Antikor tercihen bispesifik bir antikordur. Bispesifik antikor tercihen CD3'e baglanan bir agir zincir degisken bölge/hafif zincir degisken bölgesi (VH/VL) kombinasyonuna ve CD3 üzerinde bir antijenden baska bir antijene baglanan ikinci bir VH/VL kombinasyonuna sahiptir. Tercih edilen bir uygulamada, antijen, bir tümör antijendir. Tercih edilen bir uygulamada, bahsedilen birinci VH/VL kombinasyonundaki VL, bahsedilen ikinci VH/VL kombinasyonundaki VL'ye benzerdir. Daha fazla tercih edilen bir uygulamada, birinci ve ikinci VH/VL 01574-P-0002 kombinasyonlarindaki VL'ler özdestir. Tercih edilen bir uygulamada, bispesifik antikor, bir baska antijeni, tercihen bir tümör antijenine baglanan CD3 ve bir H/L zincir kombinasyonuna baglanan bir agir/hafif (H/L) zincir kombinasyonuna sahip olan bir tam uzunluklu antikordur. Tercih edilen bir uygulamada, bahsedilen birinci H/L zincir kombinasyonundaki hafif zincir, bahsedilen ikinci H/L zincir kombinasyonundaki hafif zincire benzerdir. Daha çok tercih edilen bir uygulamada, birinci ve ikinci H/L zincir kombinasyonlarindaki hafif zincirler özdestir, diger bir deyisle benzer veya özdes bir insan hafif zinciri, fonksiyonel antijen baglanma alanlarina sahip antikorlar olusturmak için farkli agir zincirleri bir araya getirilebilen bir hafif zincir olan "ortak hafif zincir" olarak adlandirilir. Tercih edilen bir uygulamada, bahsedilen birinci H/L zincir kombinasyonundaki hafif zincir, bahsedilen ikinci H/L zincir kombinasyonundaki hafif zincir degisken bölgeye benzer bir hafif zincir degisken bölgesi içerir. Daha çok tercih edilen bir uygulamada, birinci ve ikinci H/L- zincir kombinasyonlarindaki hafif zincir degisken bölgeleri özdestir, yani benzer veya özdes bir insan hafif zincir degisken bölgesi, fonksiyonel antijen baglanma alanlarina sahip antikorlar olusturmak için farkli agir zincir degisken bölgeleri ile bir araya getirilebilen hafif` zincir degisken bölge olan "ortak hafif zincir degisken bölge" olarak adlandirilir. Bir ortak hafif zincir degisken bölgesini içeren hafif zincir, tercihen ortak bir hafif zincirdir. Hafif zincir tercihen, burada baska bir yerde tanimlandigi gibi sekil 23A'da 0-5 amino asit sübstitüsyonlari ile gösterildigi gibi bir OlZ/lgVKl-39*01 gen segmentinin amino asit dizisini içeren bir hafif zincir degisken bölgesi içerir. Tercihen, ortak hafif zincir bir germ hatti dizisine sahiptir. Tercih edilen bir germ hatti dizisi, insan repertuarinda siklikla kullanilan ve iyi termodinamik stabiliteye, verime ve çözünürlüge sahip olan bir hafif zincir degisken bölgedir. Tercih edilen bir germ hatti hafif zincir, yukarida belirtildigi gibi 012'dir. OlZ/IgVKl-39 için tercih edilen bir dizi, sekil 23A'da verilmistir. Bu V-bölgesi dizisini listeler. Sekil 23B ve 23C, bir J-bölgesi ile kombinasyon halinde IgVKl-39 için tercih edilen iki diziyi tarif eder. Birlestirilen diziler lGKVl-39/jkl ve lGKVl-39/jk5 olarak belirtilmistir; alternatif isimler IgV1-39*01/IGJK1*01 veya IgVKl- 39*01/IGJK5*01'dir. 01574-P-0002 OlZ/lgVK1-39*01 hafif degisken bölgesinin bir gerrn hatti dizisi olmasi tercih edilir. Hafif zincir degisken bölge içeren OlZ/lgVKl -39*01 'in bir germ hatti dizisi olmasi tercih edilir. Ayrica, hafif zincir degisken bölgesini içeren IGJK*01 veya /IGJK5*Ol'in bir germ hatti dizisi olmasi tercih edilir. Tercih edilen bir uygulamada, lGKVl-39/jk1 veya IGKV1-39/jk5 hafif zincir degisken bölgeleri germ hatti dizileridir. Bispesifik antikorun Ol2 hafif zinciri, tercihen yukarida belirtildigi gibi bir 012 hafif zinciridir. Bir tümör antijeni, ekspresyonunun paterni ile tanimlanir. Tümör spesifik bir antijen, tipik olarak, yalnizca tümörün hücreleri üzerinde bulunur ve dogum sonrasi, tercihen yetiskin Insan vücudunda herhangi baska bir hücrede degildir. Tümör iliskili bir antijen tipik olarak bir tümörün hücreleri üzerinde ve ayrica dogum sonrasi, tercihen yetiskin insan vücudunda bazi normal hücrelerde bulunur. Burada kullanilan bir tümör antijeni tipik olarak tümör spesifik veya tümörle iliskili bir antijendir. Tümör antijenleri onkojenik sürece dahil olabilir veya olmayabilir. Saglikli bireylerde "normal" proteinden farkli olabilir veya olmayabilir. Çesitli tümör spesifik antijenlerin daha sonra bazi baska tümör-disi hücreler üzerinde de eksprese edildigi gösterilmistir. Tercih edilen tümör antijenleri, hücre yüzeyinde eksprese edilen ve bir ekstra hücresel kisma sahip olan tümör antijenleridir. Antikor, tipik olarak antijenin bir ekstra hücresel bölümüne baglanir. Burada kullanildigi sekliyle "antikor" terimi, bir antijen üzerinde bir epitopa baglanan bir veya daha fazla domain içeren proteinlerin immünoglobulin sinifina ait olan bir proteinli molekül anlamina gelir, burada bu domainler, bir antikorun degisken bölgesi ile türetme homolojisinden türetilir veya paylasilir. Antikorlar tipik olarak her biri iki agir zincir ve iki hafif zincir ile temel yapisal birimlerden yapilir. Terapötik kullanim için antikorlar, tercihen hastanin dogal antikorlarina mümkün oldugu kadar yakindir (örnegin insan hastalar için insan antikorlari). Antikor baglanmasi, spesifite ve afinite açisindan ifade edilebilir. Spesifite, hangi antijenin veya epitopunun baglanma domaini tarafindan spesifik olarak 01574-P-0002 baglandigini belirler. Afinite, belirli bir antijen veya epitopa baglanmanin mukavemeti için bir ölçüdür. Baglanma veya "spesifik olarak tanima", en az lxlOe-6 M, lxlOe-7 M, 1x10e-8 M veya en az lxlOe-9 M'nin afiniteleri (KD) ile baglanma olarak tanimlanir. Terapötik uygulamalar için antikorlar, lxlOe-lO M veya daha yüksek afiniteler olabilir. Mevcut bulusun antikorlari tipik olarak bispesifik antikorlar ve insan IgG altsinifidir. Tercihen, mevcut bulusun antikorlari insan IgGl alt sinifina sahiptir. En çok tercih edilen haliyle, mevcut bulusun antikorlari, tam uzunluktaki IgG molekülleridir. Bulus ayrica bulusa ait bir antikorun bir türevini ve/veya analogunu saglar. Bu tür bir türev ve/veya analog, bulusa ait bir antikorun VH/VL domainlerine sahiptir, tercihen burada baska bir yerde tanimlandigi gibi ortak hafif zincir degisken bölgesi içerir. Uygun türevler, tek zincirli Fv-fragmanlari, monokodiler, VHH ve Fab-fragmanlaridir. Türevler, bir antikorun bir agir zincirinin CH2 ve CH3 domainine kaynastirilabilir. Türev ayrica tercihen agir bir antikorun CHl domainini ve bir antikorun hafif zincirinin Ci_ domainini içerir. Türev, ayrica, bir multivalent formatta, tercihen bir bispesifik formatta da olabilir, burada bir antikorun VH/V L domainlerinden biri, bulusun CD3'üne baglanan bir agir zincir degisken bölge/hafif zincir degisken bölge (VH/VL) kombinasyonunu ve en azindan CD3 antijeni olmayan bir antijene baglanan bir antikorun en az bir baska VH/VL domainini içerir. Bir antikorun en az bir baska VH/VL domaini tercihen bir tümör antijenine, tercihen CLEClZA'ya baglanir. Multivalent formatlar, örnegin VH/VL alanlari arasinda uygun ve/veya konvansiyonel peptit baglayici veya aralayici içeren veya içermeyen bir füzyon proteini olarak türev üretilerek kolaylikla üretilebilir. Bir "bispesifik antikor", CD3'e baglanan bir agir zincir degisken bölge/hafif zincir degisken bölge (VH/VL) kombinasyonu ve CD3'ten baska bir antijeni, tercihen bir tümör antijenini baglayan ikinci bir VH/VL kombinasyonu içeren, yukarida tarif edilen bir antikordur. Tercih edilen bir uygulamada, bahsedilen birinci VH/VL kombinasyonundaki VL, bahsedilen ikinci VH/VL kombinasyonundaki VL'ye benzerdir. Daha fazla tercih edilen bir uygulamada, birinci ve ikinci VH/VL kombinasyonlarindaki VL'ler özdestir. Tercih edilen bir uygulamada, 01574-P-0002 bispesifik antikor, bir baska antijeni, tercihen bir tümör antijenini baglayan bir agir/hafif zincir kombinasyonunu ve CD3'ü baglayan bir agir/hafif zincir kombinasyonunu içeren tam uzunlukta bir antikordur. Agir/hafif zincir kombinasyonunun antijene baglanmasi, agir/hafif zincir kombinasyonunun degisken bölgesinde antij en baglayici alan araciligiyla elde edilir. Bulus ayrica Spiess, C., et al., (Alternative molecular formats and therapeutic applications for bispecific antibodies. Mol. Immunol. (2015) http: alternatif bispesifik formatlar da saglar. Iki H/L kombinasyonuna sahip klasik antikor olinayan bispesifik antikor formatlari, en azindan agir zincir degisken bölgesi ve bulusun hafif zincir degisken bölgesinden olusan bir degisken doinaine sahiptir. Bu degisken domain, bir tek Zincirli Fv-fragmani, monobody, bir VHH ve ikinci baglama aktivitesini saglayan bir Fab-fragmanina baglanabilir. Bispesifik antikor terimi, daha genis bir terimle, "bir agir zincir degisken bölgesi ve bulusa ait bir hafif zincir degisken bölgesine sahip olan CD3'ü baglayan bir immünoglobulin degisken domaini içeren bir bispesifik baglayici proteini ve baska bir antijeni baglayan bir antijen baglayici (poli) peptit" ile degistirilebilir. Bu uygulamada, baglayici (poli) peptit, Spiess et al. (supra) tarafindan belirtildigi gibi tercihen bir(poli) peptittir. Bulusun bispesifik bir antikorunda, CD3 baglayici H/L zincir kombinasyonundaki hafif zincir, tercihen, H3'ün disinda bir antijeni, tercihen bir tümör antijenini baglayabilen H/L zincir koinbinasyonundaki hafif zincire benzerdir. Daha çok tercih edilen bir uygulamada, hem H/L zincir kombinasyonlarindaki hafif zincir özdestir, diger bir deyisle bahsedilen insan hafif zinciri, antikor olusturmak için fonksiyonel antijen baglanma domainleri ile farkli agir zincirleri birlestirilebilen bir hafif zincir olan "ortak hafif zincir" olarak adlandirilir. Tercihen, ortak hafif zincir bir germ hatti dizisine sahiptir. Tercih edilen bir gerrn hatti dizisi, insan repertuarinda siklikla kullanilan ve iyi termodinamik stabiliteye, verime ve çözünürlüge sahip olan bir hafif zincir degisken bölgedir. Tercih edilen bir genn hatti hafif zinciri 012, tercihen yeniden düzenlenmis germ hatti insan kappa hafif zinciri lgVKl-39*01/IGJK1**01 veya 01574-P-0002 bunun bir fragmani veya fonksiyonel bir esdegeridir (diger bir deyisle ayni lgVK (terminolojiye göre hafif zincir" terimi, bispesifik antikordaki iki hafif zincire (veya bunun VL bölümüne) karsilik gelir. Tam uzunluktaki antikorun baglanma spesifitesi etkilenmezken, iki hafif zincir (veya bunun VL bölümü) ayni olabilir veya bazi amino asit dizisi farkliliklarina sahip olabilir. Örnek olarak, özdes olmayan ancak halen islevsel olarak esdeger olan hafif zincirler hazirlamak veya bulmak için burada kullanilan ortak hafif zincirler tanimi kapsamindadir; öm., konservatif amino asit degisikliklerini ve bölgelerdeki amino asit degisikliklerini dahil ederek ve test ederek agir zincir ve benzeri ile eslestirildiginde baglanma spesifitesine katkida bulunmaz veya kismen katkida bulunur. 'Ortak hafif zincir', 'ortak VL', kullanildigi veya kullanilmadigi terimlerin hepsi birbirinin yerine kullanilmaktadir. Tercihen, ortak hafif zincir bir germ hatti dizisine sahiptir. Tercih edilen bir germ hatti dizisi, insan repertuarinda siklikla kullanilan bir hafif zincir degisken bölgedir. Tercih edilen bir germ hatti hafif zinciri 012, tercihen yeniden düzenlenmis germ hatti insan kappa hafif zinciri lgVK1-39*01/IGJK1**01 veya bunun bir fragmani veya fonksiyonel bir esdegeridir (diger bir deyisle ayni lgVK (terminolojiye göre 39 hafif zincir veya kisa huVKl-39 terimleri, uygulama boyunca birbirinin yerine kullanilabilir. Açiktir ki, teknikte uzman kisiler, "ortak" teriminin, ayrica, amino asit dizisinin özdes olmadigi hafif zincirin fonksiyonel esdegerleri anlamina geldigini kabul edecektir. Bahsedilen hafif zincirin birçok varyanti mevcut olup, burada fonksiyonel baglanma bölgelerinin olusumunu esas olarak etkilemeyen mutasyonlar (delesyonlar, sübstitüsyonlar, insersiyonlar ve/veya eklenmeler) mevcuttur. Bu bulusun hafif zinciri, yukarida belirtilen 0-5 amino asit sübstitüsyonlarina sahip bir hafif zincir de olabilir. 01574-P-0002 Bulusa ait bir antikor tercihen bir lgG antikorudur, tercihen bir lgGl antikorudur. Bulusa göre 'tam uzunluklu lgG' terimi, tam olarak intakt bir IgG'nin tüm islevlerine sahip olmasi zorunlu olmayan esasen komple bir IgG'yi içeren sekilde tanimlanir. Süpheye mahal vermemek için, tam uzunlukta bir lgG, iki agir ve iki hafif zincir içerir. Her zincir, CHl, CH2, CH3, VH ve CL, VL olarak adlandirilan domainlere ayrilabilen sabit (C) ve degisken (V) bölgeleri içerir. Bir lgG antikoru, Fab bölümünde yer alan degisken bölge alanlari araciligiyla antijene baglanir ve baglandiktan sonra, çogunlukla Fc bölümü boyunca sabit domainler araciligiyla immün sisteminin molekülleri ve hücreleri ile etkilesime girebilir. Bulusa göre tam uzunluklu antikorlar, arzu edilen özellikleri saglayan mutasyonlarin mevcut olabildigi lgG moleküllerini kapsar. Tam uzunluklu lgG, herhangi bir bölgenin önemli bölümlerinin delesyonarina sahip olinainalidir. Bununla birlikte, bir veya birkaç amino asit kalintisinin silindigi lgG molekülleri, sonuçta ortaya çikan lgG molekülünün baglanma özelliklerini esasen degistirmeksizin, "tam uzunluklu lgG" terimi içine dahil edilir. Örnegin, bu tür lgG molekülleri, tercihen CDR olmayan bölgelerde, 1 ila 10 amino asit kalintisi arasinda bir delesyona sahip olabilir, burada silinmis amino asitler, IgG'nin baglanma spesifisitesi için esas teskil etmez. Tam uzunluktaki lgG antikorlari, elverisli yari ömürleri ve immünojenisite nedenlerinden dolayi tamamen otolog (insan) inoleküllere yakin kalma arzusu nedeniyle kullanilir. IgGl, insandaki uzun dolasim yari ömrü nedeniyle tercih edilir. Insanlarda immünojenisiteyi önlemek veya kaçinmak için, bulusa göre bispesifik tam uzunluklu IgG antikorunun bir insan lgG] olmasi tercih edilir. kombinasyonu) veya antikorun kolunun bir birinci antijene baglandigi, diger H/L kombinasyonu veya diger kolun, ikinci bir antijene baglandigi anlamina gelir, burada birinci ve ikinci antijenler ayni degildir. Bir antijen, tipik olarak bir antikor için bir hedef olarak hizmet eden bir moleküldür. Mevcut bulusta, bir antijenin, bir bireyin bir hücresinin membrani üzerinde eksprese edilen bir protein olmasi 01574-P-0002 tercih edilir. Mevcut bulusa göre, bahsedilen birinci ve ikinci antijenler, tercihen iki farkli hücre tipi üzerinde bulunan iki farkli molekül üzerinde bulunur. bölümün içeren agir zincir/hafif zincir kombinasyonu anlainina gelir. Endojen immün hücrelerini alarak ve aktive ederek sitotoksisiteye aracilik eden bispesifik antikorlar, yeni nesil antikor terapötiklerinin ortaya çikmakta olan bir sinifidir. Bu, bir molekülde hedef hücreler (yani, tümör hücreleri) ve efektör hücreler (yani T hücreleri, NK hücreleri ve makrofajlar) için antijen baglayici spesifitelerinin zincir kombinasyonunun, anormal (tümör) hücreler üzerinde CLEC12A antijenine baglandigi bispesifik antikorlar saglanirken, ikinci agir/halit` zincir kombinasyonu, immün efektör hücreler üzerinde CD3'ü baglar. Bulus, bispesifik IgG antikorlan saglar, burada bir agir/hafif zincir kombinasyonu, CLEC12A'y1 ya da 10 amino asidin yukarida belirtilen ek hücre içi gerilmesini barindmnayan fonksiyonel CLEC12A esdegerleri de dahil olmak üzere fonksiyonel bir esdegerini spesifik olarak tanir. Bir agir/hafif zincir kombinasyonunun, CLEC12A'nin tam uzunlukta formunu bagladigi bir bispesifik lgG antikoru tercih edilir. Tümör antijeni baglanan agir/hafif zincir kombinasyonunun tümör antijeninin hücre disi bölüinünü bagladigini söylemek gereksizdir. birbirinin yerine kullanilabilir. Bir antikor tarafindan antijen baglanmasi, tipik olarak, antikorun tamamlayicilik bölgeleri ve hem antijenin hem de degisken domainin spesifik üç boyutlu 01574-P-0002 yapisinin araciligiyla saglanir; burada rastgele, spesifik olmayan antikorlarin yapisinasina karsin bu iki yapinin hassas bir sekilde baglanmasina olanak saglanir (bir kilit ve anahtarin etlikesimine benzer). Bir antikor tipik olarak bir antijenin bir epitopunu tanidigi için ve bu tür epitop diger proteinlerde de mevcut olabildigi için, mevcut bulusa ait CD3 veya CLEClZA'ya baglanan antikorlar, diger proteinleri de ayni epitopu içeriyorsa diger proteinleri de taniyabilir. Dolayisiyla, protein(ler)e baglanmasini hariç tutmaz. Bulusa ait antikorda CD3'e baglanan bir agir/hafif zincir kombinasyonu, dogum sonrasi, tercihen yetiskin bir insanda hücrelerin zarindaki diger proteinlere baglanmaz. Bulusa ait CLEClZA'ya baglanan bir agir/hafif zincir kombinasyonu, dogum sonrasi, tercihen yetiskin bir insanda hücre ineinbraninda diger proteinlere baglanmaz. CD3 ve bir tümör antijenine baglanan mevcut bulusa göre bir bispesifik antikor, asagida daha ayrintili olarak belirtildigi gibi en az 1x10e-6 M baglanma afinitesi ile CD3'e (tercihen efektör hücreler üzerinde CD3) baglanir. Tercih edilen bir uygulamada CD3 baglanma afinitesi 1x10e-6 M-lxlOe-lO M, tercihen lxlOe-7 M - 1x10e-9 M'dir. CD3 ve bir tümör antijenine baglanan mevcut bulusa göre bir bispesifik antikor, tümör antijenine tercihen CD3'e baglandigi afiniteden daha yüksek bir baglanma afinitesi ile baglanir. Tercih edilen bir uygulamada, tümör antijeninin tüinör hücreleri üzerindeki baglanma afinitesi, CD3'e baglanma afinitesinden en az 2 kez, daha tercihen 4 kez daha tercihen 6 kez veya 10 kat daha yüksektir. Tercih edilen bir uygulamada, tümör antijen baglanma afinitesi lxlOe-6 M-1x10e-10 M, tercihen lxlOe-7 M-lxlOe-IO M, daha tercihen en az lxlOe-8, tercihen en az 1x10e-9'dur. Tercihen, belirtilen tümör antijenine baglanma atinitesinden en az 2 kez, daha tercihen 4 kez daha tercihen 6 veya 10 kez daha düsük bir CD3 afinitesi ile kombinasyon halindedir. Tercih edilen bir uygulamada, tümör antijen baglanma afinitesi 1x 1 Oe-8-1x 1 Oe- 1 O'dur. 01574-P-0002 Burada kullanildigi sekliyle "aberan hücreler" terimi, tümör hücreleri, daha spesifik olarak hematolojik kökenli tümör hücreleri, örnegin miyelodisplastik sendromlara (MDS) ve akut iniyeloid lösemi (AML) tümör hücreleri veya kronik miyelojenöz lösemi (KML) hücreleri gibi lösemik hücrelere neden olan hücreler gibi ön lösemik hücreleri de içerir. Burada kullanildigi haliyle "immün efektör hücre" veya "efektör hücre" terimi, bir hedef hücrenin canliligini etkilemek üzere aktive edilebilen memeli immün sistemindeki hücrelerin dogal repertuarinda bulunan bir hücreye karsilik gelir. Immün efektör hücreleri, dogal katil (NK) hücreler gibi lenfoid kökenli hücreleri, sitotoksik T hücreleri ya da B hücreleri, ayrica miyeloid kökenli hücreler dahil olmak üzere T hücreleri, monositler veya makrofajlar gibi immün efektör hücreler olarak kabul edilebilir, dendritik hücreler ve nötrofilik granülositleri içerir. Dolayisiyla, bahsedilen efektör hücre tercihen bir NK hücresi, bir T hücresi, bir B hücresi, bir monosit, bir makrofaj, bir dendritik hücre veya bir nötrofilik granülosittir. Bulusa göre, efektör hücrelerin aberan hücrelere alinmasi, immün efektör hücrelerinin aberan hedef hücrelere yakin bir yere getirilmesi anlamina gelir, söyle ki efektör hücreler direkt olarak aberan hücreleri öldürebilir veya dolayli olarak öldürülmesini baslatirlar. CD3 baglayici bir antikorun, efektör hücrelerin yüzeyinde CD3'e baglanmasi tercih edilir. Bulusa ait insan CD3'üne baglanan bir antikor, bir amino asit dizisini içeren bir agir zincir degisken bölgesini içerir: XIXZ ile belirtilen pozisyon disindaki ve CDR bölgeleri disindaki pozisyonlardan baska bir veya daha fazla pozisyonda 0-5 amino asit sübstitüsyonu ile; 01574-P-0002 X1=NveX2=A; XlzNveX2:T; Xi=HveX2=G; X1=DveX2=G; veya X1=HveX2=A. Agir zincir degisken bölgesi, belirtilen amino asit dizisine göre 0-5 amino asit sübstitüsyonuna sahip olabilir. Belirtilen diziye göre amino asit sübstitüsyonlari, elbette X1X2 ile belirtilen pozisyonlardan baska ve CDR bölgeleri disindaki pozisyonlardadir. XiXz ile gösterilen pozisyonlarda sadece gösterilen amino asitlere izin verilir. Tercih edilen bir uygulamada, agir zincir degisken bölgesi, belirtilen XIXZ disinda ve CDR bölgeleri disinda amino asit dizisine göre belirtilen pozisyonlardan farkli pozisyonlarda 0-4, tercihen 0-3, tercihen 0-2, tercihen 0-1 ve tercihen 0 amino asit sübstitüsyonu içerir. Bir insersiyon, eklenme, delesyon veya sübstitüsyonun bir kombinasyonu, hizali dizilerin lO'dan fazla, tercihen 5'ten fazla pozisyonda farkli olmamasi durumunda talep edilen bir kombinasyondur. Hizali dizilerden birindeki bosluk, diger dizide atlanan kadar miktarda amino asit için de geçerlidir. Amino asit insersiyonlari, delesyonlari, sübstitüsyonlari, eklenmeleri veya bunlarin kombinasyonu, tercihen agir zincir degisken bölgesinin CDR3 bölgesinde, tercihen agir zincir degisken bölgesinin CDR] ve/Veya CDR2 bölgesinde bulunmaz. Tercih edilen bir uygulamada, agir zincir degisken bölgesi, belirtilen diziye göre bir delesyon, eklenme veya insersiyon içermez. Bu uygulamada, agir zincir degisken bölgesi, belirtilen amino asit dizisine göre 0-5 amino asit sübstitüsyonlarina sahip olabilir. Bir amino asit sübstitüsyonu tercihen konservatif bir amino asit sübstitüsyonudur. Bulusa ait insan CD3'üne baglanan bir antikor, asagidaki bir amino asit dizisini içeren bir agir zincir degisken bölgesi içerir: 01574-P-0002 .'Izi'Iii'Igîi *' ;"'w X1X2 ile belirtilen pozisyon disindaki ve CDR bölgeleri disindaki pozisyonlardan baska bir veya daha fazla pozisyonda 0-5 amino asit sübstitüsyonu ile; X1 = N ve X2 = A; X1 = N ve X2 = T; X1 = H ve X2 = G; X1 = D ve X2 = G; veya sayilari ile tanimlanan bir amino asit dizisini içeren bir agir zincir degisken bölgesini içeren bir antikordur. Agir zincir degisken bölgesi tercihen 5196; 5197; sayilariyla tanimlanan bir amino asit dizisini içerir. Antikorun agir zincir degisken bölgesi, tercihen sekil 12'de gösterildigi gibi 5196 sayisiyla taniinlanan bir amino asit dizisini içerir. Bulus ayrica, agir zincir ve agir zincirin degisken zincirinin asagidaki bir amino asit dizisini içerdigi bir agir zincir ve bir hafif zincir içeren, bulusa ait insan CD3'üne baglanan bir bispesifik antikor saglar: X1X2 ile belirtilen pozisyon disindaki ve CDR bölgeleri disindaki pozisyonlardan baska bir veya daha fazla pozisyonda 0-5 amino asit sübstitüsyonu ile; X1 = N ve X2 = T; X1 = H Ve X2 = G; 01574-P-0002 X1: D ve X2 = G; veya X1 : H ve X2 : A, Hafif zincir, burada baska bir yerde tanimlandigi gibi ortak bir hafif zincirdir. Bispesifik antikor ayrica bir baska antijeni, tercihen bir tümör antijenine baglanan bir agir zincir ve hafif zincir kombinasyonunu içerir. Baska bir antijene baglanan agir zincir ve hafif zincir kombinasyonunun hafif zinciri, tercihen burada baska bir yerde tanimlandigi gibi ortak bir hafif zincirdir. Asagidaki amino asit dizisini içeren bir agir zincir degisken bölgesini içeren agir zincir: .u ;'JiiiJ-Çgîâ :-î, :. :. ::z-i : .. ,î :. :-4.52 .`.":'Z 3: X1X2 ile belirtilen ve CDR bölgeleri disindaki pozisyonlardan baska bir veya daha fazla pozisyonda 0-5 amino asit sübstitüsyonu ile; X1 : N ve X2 : A; X1 = N ve X2 = T; X1 = H ve X2 = G; X1 = D ve X2 = G; veya sayilari ile tanimlanan bir amino asit dizisini içeren bir agir zincir degisken bölgesini içeren bir agir zincirdir. Bispesifik antikorun agir zincir degisken ve 25'de tasvir edildigi gibi 5694 sayilariyla tanimlanan bir amino asit dizisini içerir. Bispesitîk antikorun agir zincir degisken bölgesi, tercihen sekil 12'de gösterildigi gibi 5196 sayisiyla tanimlanan bir amino asit dizisini içerir. Asagidaki bir amino asit dizisini içeren bir agir zincir degisken bölgesini içeren, bulusun bir bispesifik antikoru: 01574-P-0002 X1X2 ile belirtilen pozisyon disindaki ve CDR bölgeleri disindaki pozisyonlardan baska bir veya daha fazla pozisyonda 0-5 amino asit sübstitüsyonu ile; X1 = N ve X2 = A; X1 = N ve X2 = T; X1 = H ve X2 = G; X1 = D ve X2 = G; veya X1 = H ve X2 = A, tercihen ayrica insan CLEClZA'ya baglanan bir agir/hafif zincir kombinasyonunu içerir. Tercih edilen bir uygulamada, insan CLEClZA'ya baglanan agir/hafif zincir kombinasyonunun agir zinciri, asagidaki bir amino asit dizisini içeren bir degisken bölge içerir: 0-10, tercihen 0-5 amino asit insersiyonlari, delesyonlar, sübstitüsyonlar, eklenmeler veya bunlarin bir kombinasyonu ile. Insan CLEClZA'sina baglanan agir/haIif zincir kombinasyonunun agir zincir degisken bölgesi, belirtilen amino asit dizisine göre 0-10, tercihen 0-5 amino asit insersiyonlari, delesyonlari, sübstitüsyonlari, eklenmeleri veya bunlarin bir kombinasyona sahip olabilir. Tercih edilen bir uygulamada, agir zincir degisken tercihen 0-2, tercihen 0-1 ve tercihen 0 amino asit insersiyonlari, delesyonlari, 01574-P-0002 sübstitüsyonlari, eklenmeleri veya bunlarin bir kombinasyonunu içerir. Bir insersiyon, delesyon, eklenme veya sübstitüsyon kombinasyonu, hizali dizilerin 'ten fazla pozisyonda farklilik göstermemesi halinde talep edilen bir kombinasyondur. Hizali dizilerden birindeki bosluk, diger dizide atlanan kadar miktarda amino asit için de geçerlidir. Burada tarif edildigi gibi bir CD3 agir zincir degisken bölgesinde bir amino asit insersiyonu, delesyonu, sübstitüsyonu, eklenmesi veya kombinasyonu tercihen birakir. A50 modifiye edilirse, tercihen bir S, Y, M veya bir Q ile sübstitüe edilir. Eger D59 modifiye edilirse, tercihen bir Y veya bir E ile sübstitüe edilir, ancak D59'un L, 1, V, F, R, A, , N, H, S, T ile sübstitüsyonu de mümkündür. A61 modifiye edilirse, tercihen N, 1, H, Q, L, R, Y, E, S, T, D, K, V ile sübstitüe edilir. Eger F 105 modifiye edilirse, tercihen bir Y veya bir M ile sübstitüe edilir. Bulus uygun oldugu düsünülinektedir. ASO, D59, A61 ve F105 pozisyonlarindaki diger spesifik sübstitüsyonlar da uygundur, fakat CD3 baglanmasini etkilemek zorunda degildir. Tablo 2, sütun 2'de ortaya konan amino asit sübstitüsyonunu listeler. Sütun 3'te de geri kazanilmis olanlar belirtilir. Dahil edilen ancak geri kazanilmayan amino asit yer degistirmelerinin, antikoru etkiledigi ve arzu edilmedigi düsünülür. Örnegin bir A501 mutasyonu arzu edilmez. Tolere edilmis amino asit sübstitüsyonlari, depolainadan sonra CIEX-HPLC ile birlikte örnek 5A'da tarif edilen yöntem kullanilarak kolayca bulunabilir. Amino asit insersiyonu, delesyonu, sübstitüsyonu, eklenmesi veya bunlarin kombinasyonu tercihen agir ve hafif zincirin baglanma interfazinda yapilmaz. Bir amino asit, H/L zincir etkilesiminin interfazinda degistirilirse, diger zincirdeki karsilik gelen amino asitlerin degisime uyacak sekilde degistirilmesi tercih edilir. Bir amino asidin insersiyonu veya eklenmesi tercihen bir prolin insersiyonu veya eklenmesini gerektirmez. 01574-P-0002 Bir amino asit eklenmesi prensip olarak bir insersiyon ile ayni olabilir. Bir polipeptit zincirinin uçlarindan birine bir amino asit eklenmesi bazen bir insersiyon olarak kabul edilmez, ancak kesin bir eklenme (uzama) olarak kabul edilir. Mevcut bulus için hem bir zincir içinde hem de uçlardan birindeki bir eklenme, bir insersiyon olarak kabul edilir. Amino asit insersiyonlari, delesyonlari, sübstitüsyonlari, eklenmeleri veya bunlarin kombinasyonu, tercihen agir zincir degisken bölgesinin CDR3 bölgesinde, tercihen agir zincir degisken bölgesinin CDRl veya CDR2 bölgesinde bulunmaz. Tercih edilen bir uygulamada, agir zincir degisken bölgesi, belirtilen diziye göre bir delesyon, eklenme veya insersiyon içermez. Bu uygulamada, agir zincir degisken bölgesi, belirtilen amino asit dizisine göre 0-5 amino asit sübstitüsyonuna sahip olabilir. Bir amino asit sübstitüsyonu tercihen konservatif bir amino asit sübstitüsyonudur. Bulusa ait bir VH7ye baglanan CD37ün CDRl, CDR2 ve CDR3'ü tercihen CDRl için GFTFSSYG (IMGT'ye göre), CDR2 için baglanan CLEC12A`nin CDRl, CDR2 ve CDR3'ü tercihen CDRl için GYTFTSYY, CDR2 için lNPSGGST ve CDR3 için GTTGDWFDY amino asit dizisini içerir. Hafif zincir degisken bölgesi tercihen bir germ hatti 012 degisken bölge V- seginenti içerir. Tercih edilen bir uygulamada, hafif zincir degisken bölgesi, kappa hafif zincir V-segmenti lgVKl-39*Ol'i içerir. Özellikle tercih edilen bir uygulamada, hafif zincir degisken bölgesi, kappa hafif zincir IgVKl- uygulamada, hafif zincir degisken bölgesi, bir germ hatti kappa hafif zincir Bulusun bispesifik bir antikorunda, hafif zincirin hem agir zincir/hafif zincir kombinasyonlari için ayni olmasi tercih edilir. Bu türlü hafif bir zincir ayrica 01574-P-0002 terimi, antikorun baglanma spesifitesini korurken özdes veya bazi ainino asit dizisi farkliliklarina sahip olabilen hafif zincirlere deginmektedir. Örnek olarak, özdes olmayan ancak halen islevsel olarak esdeger olan hafif zincirler hazirlamak veya bulmak için burada kullanilan ortak hafif zincirler tanimi kapsamindadir; örn., konservatif amino asit degisikliklerini ve bölgelerdeki amino asit degisikliklerini dahil ederek ve test ederek agir zincir ve benzeri ile eslestirildiginde baglanma spesifitesine katkida bulunmaz veya kismen katkida bulunur. 'Ortak hafif zincir', 'ortak VL', 'tek hafif zincir', 'tek VL' terimlerinin terimlerin hepsi birbirinin yerine kullanilmaktadir. Bu bulusun bir yönü, ortak hafif zincir olarak, fonksiyonel antijen baglayici alanlarina sahip antikorlar olusturmak için farkli agir zincirlerle birlestirilebilen bir insan hafif zincirinin Nissim et al. 1994). Tercihen, ortak hafif zincir bir germ hatti dizisine sahiptir. Tercih edilen bir germ hatti dizisi, insan repertuarinda siklikla kullanilan bir hafif zincir degisken bölgedir ve birçok farkli VH bölgelerini eslestirmek için üstün bir kabiliyete sahiptir ve iyi bir termodinamik stabiliteye, verime ve çözünürlüge sahiptir. Tercih edilen bir uygulamada, ortak hafif zincir, bir germ hatti OlZ/IgVKl-39*01 içeren bir hafif zincir degisken bölgesini içerir. Tercih edilen bir uygulamada, hafif zincir degisken bölgesi, kappa hafif zincir lgVKl-39*01/lGJKl*Ol veya 39*Ol/IGJK1*01 içerir. Hafif zincir degisken bölgesi tercihen bir germ hatti kappa hafif zincir IgVK1-39*01/IGJK1*01 veya germ hatti kappa hafif zincir IgVKl- 39*01/IGJK5*01 içerir. Tercih edilen bir uygulamada bir germ hatti IgVKl- 39*01/IGJK1*01 içerir. Açiktir ki, teknikte uzman kisiler, "ortak" teriminin, ayrica, amino asit dizisinin özdes olmadigi hafif zincirin fonksiyonel esdegerleri anlainina geldigini kabul edecektir. Bahsedilen hafif zincirin birçok varyanti mevcut olup, burada fonksiyonel baglanma bölgelerinin olusumunu esas olarak 01574-P-0002 etkilemeyen mutasyonlar (delesyonlar, sübstitüsyonlar, insersiyonlar ve/Veya eklenmeler) mevcuttur. Tercih edilen bir uygulamada, hafiI` zincir degisken bölgesi 0-5 amino asit sübstitüsyonlu DlQMT QSPSS LSASV GDRVT ITCRA SQSIS SYLNW YQQKP GKAPK LLIYA ASSLQ SGVPS RFSGS GSGTD FTLTI SSLQP EDFAT YYCQQ SYSTP PTFGQ GTKVE IK veya DIQMT QSPSS LSASV GDRVT ITCRA SQSIS SYLNW YQQKP GKAPK LLIYA ASSLQ SGVPS RFSGS GSGTD FTLTI SSLQP EDFAT YYCQQ SYSTP PITFG QGTRL EIK amino asit dizisini içerir. Tercih edilen bir uygulamada, hafif zincir degisken bölgesi, belirtilen amino asit dizisine göre 0-4, tercihen 0-3, tercihen 0-2, tercihen 0-1 ve tercihen 0 amino asit sübstitüsyonu içerir. Bir insersiyon, delesyon, eklenme veya Sübstitüsyon kombinasyonu, hizali dizilerin 5'ten fazla pozisyonda farklilik göstermeinesi halinde talep edilen bir kombinasyondur. Hizali dizilerden birindeki bosluk, diger dizide atlanan kadar miktarda amino asit için de geçerlidir. Tercih edilen bir uygulamada, hafif zincir degisken bölgesi DIQMT QSPSS LSASV GDRVT ITCRA SQSIS SYLNW YQQKP GKAPK LLIYA ASSLQ SGVPS RFSGS GSGTD FTLTI SSLQP EDFAT YYCQQ SYSTP PTFGQ GTKVE IK veya DIQMT QSPSS LSASV GDRVT ITCRA SQSIS SYLNW YQQKP GKAPK LLIYA ASSLQ SGVPS RFSGS GSGTD FTLTI SSLQP EDFAT YYCQQ SISTEMI PITFG QGTRL EIK amino asit dizisini içerir. Tercih edilen bir uygulamada, hafif zincir degisken bölgesi, DlQMT QSPSS LSASV GDRVT ITCRA SQSIS SYLNW YQQKP'yi içerir GKAPK LLIYA ASSLQ SGVPS RFSGS GSGTD FTLTI SSLQP EDFAT YYCQQ SYSTP PTFGQ GTKVE lK amino asit dizisini içerir. Bir baska tercih edilen uygulamada, hafif zincir degisken bölgesi DlQMT QSPSS LSASV GDRVT ITCRA SQSIS SYLNW YQQKP GKAPK LLIYA ASSLQ SGVPS RFSGS GSGTD FTLTI SSLQP EDFAT YYCQQ SYSTP PITFG QGTRL EIK amino asit dizisini içerir. Amino asit insersiyonlari, delesyonlari, sübstitüsyonlari, eklenmeleri veya bunlarin kombinasyonu tercihen hafif zincir degisken bölgesinin CDR3 bölgesinde degildir, tercihen agir zincir degisken bölgesinin CDRl veya CDR2 01574-P-0002 bölgesinde degildir. Tercih edilen bir uygulamada, agir zincir degisken bölgesi, belirtilen diziye göre bir delesyon, eklenme veya insersiyon içermez. Bu uygulamada, agir zincir degisken bölgesi, belirtilen ainino asit dizisine göre 0-5 amino asit sübstitüsyonuna sahip olabilir. Bir amino asit sübstitüsyonu tercihen konservatif bir amino asit sübstitüsyonudur. Bulusa ait bir antikorun hafif bir zincirinin CDRl, CDR2 ve CDR3'ü tercihen sirasiyla CDRl - QSISSY, CDRZ - AAS, CDR3 - QQSYSTP, diger bir deyisle IGKV1-39'un CDR'lerini (IMGT'ye göre) içerir. Yukarida belirtildigi gibi, bulusun antikorunun bir bispesifik antikor olmasi tercih edilir. Tercih edilen bir uygulamada, bispesifik antikor, burada belirtildigi gibi bir CD3 baglayici agir/hafif zincir kombinasyonunu ve bir tümör antijenine baglanan bir agir/hafif zincir koinbinasyonunu içerir. Tercih edilen bir uygulamada, tümör antij en baglayici agir/hafif zincir kombinasyonu CLEC l2A'a baglanir. Mevcut bulusun bir (bispesifik) antikorunun sabit bölgesi tercihen bir insan sabit bölgesidir. Sabit bölge, dogal olarak meydana gelen bir insan antikorunun sabit bölgesi ile bir veya daha fazla, tercihen 10'dan fazla olmayan, tercihen en fazla 5 amino asit farkliligi içerebilir. Burada üretilen çesitli antikor degisken domainleri, bir insan antikoru degisken domain kütüphanesinden türetilir. Bu degisken domainler insana aittir. Benzersiz CDR bölgeleri, insanlardan türetilebilir, sentetik olabilir veya baska bir organizmadan türetilebilir. Bulusa ait bir antikor veya bispesifik antikor tercihen bir insan veya insanlastirilmis antikordur. Teknikte antikor üretmek için çesitli yöntemler mevcuttur. Antikorlar, tipik olarak, antikoru kodlayan nükleik asidi eksprese eden bir hücre tarafindan üretilir. Antikor üretimi için uygun hücreler bir hibridoma hücresi, bir Çin hamsteri yumurtalik (CHO) hücresi, bir NSO hücresi veya bir PER-C6 hücresidir. Özellikle tercih edilen bir uygulamada, bahsedilen hücre bir CHO hücresidir. 01574-P-0002 Çesitli kurumlar ve sirketler, örnegin klinik kullanim için genis çapli antikor üretimi için hücre hatlari gelistirmistir. Bu tür hücre hatlarinin sinirlayici olmayan örnekleri CHO hücreleri, NSO hücreleri veya PER.C6 hücreleridir. Bu hücreler, proteinlerin üretimi gibi baska amaçlar için de kullanilir. Proteinlerin ve antikorlarin endüstriyel ölçekte üretimi için gelistirilen hücre hatlari, burada ayrica endüstriyel hücre hatlari olarak adlandirilmaktadir. Ayrica, bulusa ait bir antikoru üreten ve gelistiren bir endüstriyel hücre dizisi tarif edilmektedir. Ayrica, bu bulusa uygun bir antikor ve/Veya burada tarif edilen bir nükleik asidi içeren bir hücre de tarif edilmektedir. Bahsedilen hücre tercihen bir hayvan hücresi, daha tercihen bir memeli hücresi, daha tercihen bir primat hücresi, en çok tercihen bir insan hücresidir. Buradaki amaç dogrultusunda, uygun bir hücre, bulusa ait bir antikoru ve/Veya tarif edildigi gibi bir nükleik asidi içeren ve tercihen üretebilen herhangi bir hücredir. Ayrica, bulusa ait bir antikor içeren bir hücre tarif edilmektedir. Tercihen bahsedilen hücre (tipik olarak in vitro, izole edilmis veya rekombinant bir hücre) bahsedilen antikoru üretir. Tercih edilen bir uygulamada, bahsedilen hücre bir hibridoma hücresi, bir Çin hamsteri yumurtalik (CHO) hücresi, bir NSO hücresi veya bir PER.C6 hücresidir. Özellikle tercih edilen bir uygulamada, bahsedilen hücre bir CHO hücresidir. Ayrica, tarif edildigi gibi bir hücre içeren bir hücre kültürü tarif edilmektedir. Çesitli kurumlar ve sirketler, örnegin klinik kullanim için büyük ölçekli antikor üretimi için hücre hatlari gelistirmistir. Bu tür hücre hatlarinin sinirlayici olmayan örnekleri CHO hücreleri, NSO hücreleri veya PER.C6 hücreleridir. Bu hücreler, proteinlerin üretimi gibi baska amaçlar için de kullanilir. Proteinlerin ve antikorlarin endüstriyel ölçekte üretimi için gelistirilen hücre hatlari, burada ayrica endüstriyel hücre hatlari olarak adlandirilmaktadir. Dolayisiyla, ayrica, bulusa ait bir antikorun üretimi için büyük ölçekli antikor üretimi için gelistirilmis bir hücre hattinin kullanimi açiklanmaktadir. Ayrica, bir VH, bir VL ve/veya agir ve hafif bir zincirini kodlayan bir nükleik asit molekülü içeren bir antikor üretmek için bir hücre tarif edilmektedir. Tercihen bahsedilen 01574-P-0002 nükleik asit molekülü, Sekil 24'te 5196 sayisi ile tanimlanan bir VH'yi, Sekil 24'te 4327 sayisi ile tanimlanan bir VH'yi kodlayan bir nükleik asit molekülünü veya bunlarin bir kombinasyonunu kodlamaktadir. Ayrica burada bir hücrenin kültürlenmesini ve bahsedilen antikorun bahsedilen kültürden hasat edilmesini içeren bir antikor üretmek için bir yöntem tarif edilmektedir. Tercihen bahsedilen hücre serumsuz bir ortamda kültürlenir. Tercihen bahsedilen hücre süspansiyon büyümesi için adapte edilmistir. Ayrica, bulusa ait bir antikor üretmek için bir yöntem ile elde edilebilen bir antikor tarif edilmektedir. Antikor tercihen kültür ortamindan saflastirilir. Tercihen bahsedilen antikor afinitede saflastirilir. Tarif edilen bir hücre, örnegin bir hibridoma hücre hatti, bir CHO hücresi, bir 293F hücresi, bir NSO hücresi veya klinik amaçlar için antikor üretimi için uygunlugu ile bilinen bir baska hücre tipidir. Özellikle tercih edilen bir uygulamada, bahsedilen hücre bir insan hücresidir. Tercihen, bir adenovirüs El bölgesi tarafindan dönüstürülen bir hücre veya bunun fonksiyonel bir esdegeridir. Bu türlü bir hücre hattinin tercih edilen bir örnegi PER.C6 hücre hatti veya bunun bir esdegeridir. Özellikle tercih edilen bir uygulamada, bahsedilen hücre bir CHO hücresi veya bunun bir varyantidir. Tercihen bir antikorun ekspresyonu için bir Glutamin sentaz (GS) vektör sisteminin kullanilmasini saglayan bir varyanttir. Ayrica bir hücrenin kültürlenmesini ve bahsedilen antikorun bahsedilen kültürden hasat edilmesini içeren bir antikor üretilmesi için bir yöntem tarif edilmektedir. Tercihen bahsedilen hücre serumsuz bir ortamda kültürlenir. Tercihen bahsedilen hücre süspansiyon büyümesi için adapte edilmistir. Ayrica, bulusa ait bir antikor üretmek için bir yöntem ile elde edilebilen bir antikor tarif edilmektedir. Antikor tercihen kültür ortamindan saflastirilir. Tercihen bahsedilen antikor afinitede saflastirilir. 01574-P-0002 Bispesifik antikorlar, tipik olarak, antikoru kodlayan nükleik asidi eksprese eden hücreler tarafindan üretilmektedir. Bu durumda hücre, bispesifik antikoru olusturan farkli hafif ve agir zincirleri eksprese eder. Bu amaçla hücre iki farkli agir zincir ve en az bir hafif zinciri eksprese eder. Modifiye edilmemis agir zincirler, dimerler olusturmak üzere birbiriyle eslesebildiginden, bu hücreler tipik olarak bispesifik antikora (heterodimer) ek olarak iki monoklonal antikor (homodimerler) üretir. Üretilen antikorlardaki muhtemel agir/hafif zincir kombinasyonlarinin sayisi, hücre iki veya daha fazla hafif zincir eksprese ettiginde artar. Yukarida bahsedilen "ortak hafif zincir" olan farkli antikor türlerinin (farkli agir ve hafif zincirlerin kombinasyonlari) sayisinin azaltilmasi tercih edilir. Bir ortak bir hafif zincir ve iki agir zincirin esit miktarlarini eksprese eden bir antikor üreten hücre tipik olarak %50 bispesifik antikor ve inonospesifik antikorlarin her birinin (diger bir deyisle, ayni agir hafif zincir kombinasyonlarina sahip) %25'ini üretir. Bispesifik antikorun veya tam tersi monospesifik antikorlarin üretimini desteklemek için çesitli yöntemler yayinlanmistir. Mevcut bulusta, hücrenin, ilgili monospesifik antikorlarin üretimi üzerinde bispesifik antikor üretimini desteklemesi tercih edilir. Bu, tipik olarak, agir zincirlerin sabit bölgesinin, homodiinerizasyon üzerinden heterodimerizasyonu (diger bir deyisle diger agir/hafif zincir kombinasyonunun agir zinciri ile dimerizasyon) destekleyecek sekilde modifiye edilmesiyle elde edilir. Tercih edilen bir uygulamada, bulusun bispesifik antikoru, uyumlu heterodimerizasyon domainlerine sahip iki farkli immünoglobulin agir zincirini içerir. Çesitli uyumlu heterodimerizasyon domainleri, teknikte tarif edilmistir (örnegin, Gunasekaran et domainleri tercihen uyumlu immünoglobulin agir zincir CH3 heterodimerizasyon domainleridir. Teknik, agir zincirlerin hetero-dimerizasyonunun gerçeklestirilebilecegi çesitli yollari tarif eder. Bir yol, "knob into hole" bispesifik et al. - Genentech). 01574-P-0002 yayinlanmistir) yöntemleri ve araçlari, uyumlu heterodimerizasyon domainlerini kullanarak bispesifik antikorlarin üretilmesi için açiklanmistir. Bu araçlar ve yöntemler de mevcut bulusta uygun sekilde kullanilabilir. Spesifik olarak, esasen sadece bispesifik tam uzunluklu IgG molekülleri üretmek için tercih edilen mutasyonlar, birinci CH3 domaininde ('KK-varyant' agir zinciri) L351K ve T366K (Kabat numaralandirmasi) amino asit sübstitüsyonlari ve ikinci domainde ('DE-varyant' agir zincir) L351D ve L368E amino asit sübstitüsyonlari veya DE-varyanti ve KK-Varyantinin tercihen heterodimerleri (diger bir deyisle 'DEKK' bispesifik molekülleri olarak adlandirilir) olusturmak üzere eslestirildigi (DEDE homodimerleri) veya KK-varyant agir zincirlerinin (KKKK homodimerleri) homodimerizasyonu, agir zincirler arasindaki CH3-CH3 arayüzünde yüklenen kalintilar arasindaki güçlü itmeye bagli olarak ortaya çikmaktadir. Bir uygulamada, CD3'e baglanan degisken domaini içeren agir zincir/hafif zincir kombinasyonu, agir zincirin bir KK varyantini içerir. Bu uygulamada CD3 disinda bir antijene baglanan degisken domaini içeren agir zincir/hafif zincir kombinasyonu, agir zincirin bir DE varyantini içerir. Tercih edilen bir uygulamada CD3 disindaki antijen CLEC12A'dir. Tercih edilen bir uygulamada, CLEC12A'ya baglanan degisken domainin VH'si, Sekil 24'te gösterildigi gibi MF4327_VH'dir. Bazi antikorlar, örnegin Fc-reseptör etkilesimini azaltmak veya Clq baglanmasini azaltmak için CH2/alt mentese bölgesinde modifiye edilir. Bazi uygulamalarda bulusa ait antikor, bir mutant CH2 ve/veya alt mentese alanina sahip bir IgG antikorudur, böylece bispesifik IgG antikorunun bir Fc-gama reseptörüne etkilesimi azalir. Bu türlü bir mutant CH2 ve/veya alt mentese alani tercihen 235 ve/veya 236 pozisyonlarinda (Kabat numaralandiiinasi) bir amino sübstitüsyonu, tercihen bir L235G ve/veya G236R sübstitüsyonunu içerir. 01574-P-0002 Bulus ayrica, buna ihtiyaç duyan hastaya insan CD3'üne baglanan bir agir zincir ve hafif zincir içeren bir bispesifik antikorun uygulanmasini içeren, bir hastada kanser veya bir kanser riskinin tedavi edilmesine yönelik bir yöntemi tarif eder; bölgeye sahiptir: 0-10, tercihen 0-5 amino asit insersiyonlari, delesyonlari, sübstitüsyonlari, eklenmeleri veya bunlarin X1X2 ile belirtilen pozisyon haricinde bir veya daha fazla pozisyonda bir kombinasyonu ile; X1 = N ve X2 = A; X1 2 S ve X2 = G; X1 : H ve X2 : G; X1: D ve X2 = G; veya X1=HveX2=A;Ve bir tümör antijenine baglanan bir agir zincir - hafif zincir (H/L) kombinasyonudur. Hafif zincir tercihen ortak bir hafif zincir degisken bölgesini içerir. Bahsedilen ortak hafif zincir degisken bölgesi tercihen bir OlZ/IgVK1-39 hafif zincir degisken bölgesini içerir. Bahsedilen hafif zincir degisken bölgesi tercihen bir germ hatti OlZ/IgVK1-39*01 degisken bölgesidir. Bahsedilen hafif` zincir degisken bölgesi tercihen, kappa hafif zincir IgVKl-39*0]/IGJK1*01 veya lgVKl- 39*01/IGJK5*01 içerir. Hafif` zincir degisken bölgesi tercihen, germ hatti kappa hafif zincir IgVKl-39*Ol/lGJKl*Ol veya lgVKl-39*Ol/IGJK5*01 içerir. Bahsedilen hafif zincir degisken bölgesi tercihen asagidaki amino asit dizisini içerir. 0-5 amino asit insersiyonlari, delesyonlari, sübstitüsyonlari, eklenmeler veya bunlarin bir kombinasyonu ile DIQMT QSPSS LSASV GDRVT ITCRA 01574-P-0002 SQSIS SYLNW YQQKP GKAPK LLIYA ASSLQ SGVPS RFSGS GSGTD FTLTI SSLQP EDFAT YYCQQ SYSTP PTFGQ GTKVE IK veya DIQMT QSPSS LSASV GDRVT ITCRA SQSIS SYLNW YQQKP GKAPK LLIYA ASSLQ SGVPS RFSGS GSGTD FTLTI SSLQP EDFAT YYCQQ SYSTP PITFG QGTRL EIK. Tercihen, bir tümör antijenine baglanan agir zincir/hafif zincir (H/L) zincir kombinasyonu CLEC 12A'ya baglanir. Antikor tercihen bir insan veya insanlastirilmis antikordur. Tercihen antikor, uyumlu heterodimerizasyon domainine sahip iki farkli immünoglobulin agir zincirini içerir. Bahsedilen uyumlu heterodimerizasyon domainleri tercihen uyumlu immünoglobulin agir zincir CH3 heterodimerizasyon domainleridir. Bahsedilen bispesifik antikor tercihen bir mutant CH2 ve/Veya alt mentese domainine sahip bir lgG antikorudur, böylece bispesifîk IgG antikorunun bir PC- gaina reseptörü ile etkilesimi azalir. Mutant CH2 ve/veya alt mentese doinaini tercihen 235 ve/veya 236 pozisyonlarinda (Kabat numaralandirmasi), tercihen bir L235G ve/veya G236R sübstitüsyonunda bir amino sübstitüsyonu içerir. Antikor tercihen bir ortak hafif zincir içerir. Ayrica, insan CD3'üne baglanan bir bispesifik antikor da saglanmistir; bu antikor, bir agir zincir ve hafif zincir içerir; burada bahsedilen agir zincir, asagidaki amino asit dizisini içeren bir degisken bölge içerir: X1X2 ile belirtilen pozisyon disindaki ve CDR bölgeleri disindaki pozisyonlardan baska bir veya daha fazla pozisyonda 0-5 amino asit sübstitüsyonu ile; X1 : N ve X2 : A; X1 = H ve X2 = G; X1 = D ve X2 = G; veya 01574-P-0002 X1 = H ve X2 = A; ve bahsedilen hafif zincir, 0-5 amino asit sübstitüsyonlari ile sekil 23A'nin OlZ/lgVKl-39 hafif zincir degisken bölgesini ve bir tümör antij enine baglanan bir agir zincir ve hafif zinciri içerir. Ayrica tarif edilen bir hastanin tedavisinde kullanim için bulusa ait bir antikor veya bulusun bir türevi veya bulusun bir farmasötik bilesimi açiklanmaktadir. Bir tümöre sahip olan veya sahip olma riski olan bir hastanin tedavisi için, antikorun bulusun bir bispesifik antikoru olmasi tercih edilir. Tercihen CD3 baglayici antikor, bir tüinör antijenine baglanan bir agir/hafif zincir kombinasyonunu içerir. Bispesifik antikor tercihen bir CD3/CLEC12A baglayici antikordur. CDS/tümör antijen bispesifik antikorlari ve kati veya hematolojik tüinörlerin tedavisinde kullaniin için bu tür bispesifik antikorlari içeren farmasötik bilesimler tarif edilmektedir. Tercih edilen kati tümörler epitelyal kökenlidir; ovaryan ve endometriyal tümörler gibi jinekolojik kanser; prostat kanseri, beyin kanseri veya herhangi bir diger kati tümördür. Ayrica, bulusun bir CD3/tümör antijen bispesifik antikoru veya bunun bir türevi veya çesitli lösemi ve miyeloid kökenli lösemik hastaliklarin ve ayrica B hücre lenfomalari tedavisinde kullanim için bu tür bispesifik antikoru veya türevini içeren farmasötik bilesimler da tarif edilmektedir. Tedavi edilebilen hastaliklar arasinda miyeloid lösemi veya akut miyeloid lösemi (AML), miyelodisplastik sendrom (MDS) ve kronik miyelojenöz lösemi (KML) ve Hodgkin lenfomalari ve çogu Hodgkin olmayan lenfomalar gibi lösemik hastaliklar yer alir. Ayrica B- ALL; T-ALL, manto hücre lenfomasi da bulusun antikoru ile tedavi için tercih edilen hedeflerdir. Dolayisiyla, ayrica miyelodisplastik sendrom (MDS), kronik miyelojenöz lösemi (KML), multipl miyelom (MM) veya tercihen akut miyeloid löseminin (AML) tedavisinde bir ilaç olarak kullanilmak üzere bulusa göre bir bispesifik tam uzunluklu IgG antikoru tarif edilmektedir. Ayrica, bulusa uygun bir bispesifik IgG antikorunun, MDS, CML, MM veya tercihen AML'nin tedavisi 01574-P-0002 veya önlenmesi için bir ilacin hazirlanmasinda kullanimi açiklanmaktadir. Tümör antijeninin CLEClZA olmasi tercih edilir. Bulusa göre bir hastaya uygulanacak antikor miktari tipik olarak terapötik pencerede, yani terapötik bir etki elde etmek için yeterli bir miktar kullanildiginda, miktar yan etkilerin kabul edilemez bir kapsamina neden olan bir esik degerinden fazla degildir. Arzu edilen bir terapötik etki elde etmek için gerekli olan antikor miktari ne kadar düsükse, terapötik pencere tipik olarak daha büyük olacaktir. Bu nedenle, düsük dozajda yeterli terapötik etkiler uygulayan bulusa ait bir antikor tercih edilir. Avrupa ve ABD'de her yil AML ile yaklasik 30.000 hasta teshis edilmektedir. Bu hastalarin çogu 60 yas veya daha büyüktür. Daha büyük yas AML'de öneinli bir negatif belirleyicidir ve yogun tedavi görmüs yasli AML hastalarinin uzun süreli sagkalimi (5 yil) yaklasik %10'dur. Indüksiyon kemoterapisinde remisyona giren hemen hemen tüm hastalarda, 3 yil içinde hastalik progresyonu gözlenir. Mevcut post remisyon tedavisi, eger varsa, AML'li daha yasli hastalarda degeri sinirli göstermistir. Bu nedenle, rezidüye dirençli löseminin önemli bir yükü kalir ve ilaca dirençli lösemik hücrelerin hayatta kalan alt popülasyonu hizla rekürrens meydana getirir. Kemoterapiye yanit vermeyen AML tümör hücrelerinin tam remisyonlari indükleme ve sürdürme çabalarini hedeflemek için tamamen farkli etki tarzlarina sahip yeni tip ilaçlara ihtiyaç vardir. Yasli AML hastalarinin kemoterapi kombinasyonu ile tam remisyon (CR) saglanabilirse de, yanit veya sagkalim ilerlemesi büyük bir arastirma zorlugu olarak kalmistir. AML'li yasli hastalarda 65 randomize klinik çalismanin (15.110 hasta) yeni yayinlanmis bir ag meta-analizinde, degistirilmis arastirma indüksiyonu rejimlerinin çogu, daunorubisin ve sitarabin ile geleneksel 3 + 7 indüksiyon rejimine kiyasla benzer veya daha kötü etkinlik profillerine sahiptir. AML'nin bu standart tedavisi yüksek morbidite ve hatta mortalite ile iliskilidir. Kemoterapi sonrasi kalan lösemik kök hücreler nedeniyle CR hastalarin çogunlugunda relaps görülmektedir. Kabul 01574-P-0002 edilemez düzeyde toksisite nedeniyle daha fazla doz yogunlasmasi sinirlidir. Özellikle daha az toksisiteye sahip yeni tedavi modalitelerine olan acil ihtiyaç, özellikle AML'li yasli hastalarda ortaya çikmaktadir. Kemoterapiye yanit vermeyen AML tedavisi, T hücrelerinin hastanin kendi immün sisteminden AML tümör hücrelerine ve ardindan bir bispesifik antikor kullanilarak T hücrelerinin tümöre özgü spesifik aktivasyonuna yönlendirilmesiyle saglanabilir. Bu proses ayrica "T-hücre baglanma yaklasimi" olarak da bilinir. Bu sekilde, hastalarin iminün sistemi AML tümör hücrelerine saldirmak ve imha etmek için güçlendirilir ve yeniden hedeflenir. Mevcut bulus, T hücrelerini AML tümör hücrelerine dogru sekilde yönlendiren ve böylece AML tümör hücre lizisi indükleyen CD3XCLEC12A bispesifik lgG antikorlari saglar. CD3XCLEC12A bispesifik antikorlar, AML hastalarinin prognozunu iyilestirmek için AML blastlari ve lösemik kök hücreleri spesifik olarak ortadan kaldiran daha az yan etki ile hedefe yönelik bir tedavidir. CLEC12A, normal hematopoietik kök hücrelerde degil, lösemik kök hücrelerde (LSC) eksprese edildiginden, bu antijene karsi yönlendirilen terapinin, normal kök hücreyi korurken LSC'yi ortadan kaldirmasi beklenir. Bu tam uzunluklu IgG bispesifik antikorlar, relaps ve/veya refrakter AML hastalarinda klinik olarak degerlendirilir. Klinik etkinlik, kemik iliginde AML blast indirgemesi kullanilarak objektif bir yanit kriteri olarak analiz edilir. AML için etkili bir bispesifik lgG, su anda tedavi edilmeyen büyük bir hasta segmenti için yeni bir terapötik seçenek sunmaktadir. Dayanikli remisyonlar elde etmenin bir yolunu saglamanin yani sira, bu tedavi seçenegi de remisyon sirasinda uygulandiginda AML için bir iyilestirici potansiyele sahiptir. Minimal Rezidüel Hastalik (MRD) durumlarinda büyük olasilikla en büyük etkiye sahip olacaktir. Beklenen sonuç, MRD'nin ortadan kaldirilmasi nedeniyle relaps yüzdesinin düsmesidir. Dolayisiyla, bu yeni tedavi modalitesinin AML hastasi için etkisi, daha az bir relaps yüzdesi ile daha az toksik bir tedavi olacaktir ve bu da daha iyi bir yasam kalitesi ile iliskili sonuçlarin iyilestirilmesine neden olacaktir. 01574-P-0002 Teknikte tarif edilen 15C3 ve 3056 antikorlari ayni agir zincir degisken bölgesini paylasir ancak hafif zincir degisken bölgesinde farklilik gösterir. Antikorun baglanma potansiyelindeki parti varyasyonuna karsi antikor 3056 antikor yiginlarinda gözlenmistir. Bu, 15C3 antikoru için rapor edilmemistir. Antikorlar hafif zincirde farkli oldugundan, davranistaki farkliligin nedeni farkli hafif zincir olabilir. SDS-sayfasi, 3056 antikorunun ayrica daha az aktif antikora sahip partiler halinde de intakt ortaya çikarmistir. Antikorlarin degisken domainlerinin 3D- modellemesi, iki antikor arasinda VH/VL domaininin katlanmasinda bazi degisiklikler göstermistir. Bu degisiklikler, antikorlarin farkli davranislarini açiklayabileceginden, deneyler, antikor 3056'n1n VH/VL domainin daha fazla benzer 15C3'e katlanmasini saglamak üzere tasarlanmistir. Ne yazik ki, bu, 15C3 ve 3056 antikorlari arasindaki farkliliklari açiklamamistir. Izo-elektrik odaklama (IEF) sadece antikorun yüksek izo-elektrik noktasinda ana banda baglanan 15C3 (3055) ve 3056 arasinda küçük farkliliklar ortaya çikarmistir. Daha sonra, CIEX- HPLC kullanarak, yük varyantlarinin ayrilmasina izin veren bir kromatografik teknik, partiye bagli olarak, 303 antikoru için genis bir elüsyon profiline sahip çok kompleks bir tutma spektrumuna, bunun 15C3 (3055) için gözlenen profile zit olarak ortaya çiktigini göstermistir. Ayrica, 3056 modelinin zaman içinde önemli ölçüde degistigi bulunmustur, bu da 3056 antikorunun dogal olarak kararsiz oldugunu göstermektedir. Yalnizca, 3056ýVH zincirinin bir veya iki spesifik pozisyonda degistirildigi varyantlar tasarlandiginda, davranis degismistir. Davranis, istikrarsizlik, hiçbir baglayici aktivite olmamasi, önemli bir partiden partiye degiskenligine baglanma arasinda degismistir. 3056 agir zinciri, 3056 antikorunun gözlenen yük heterojenitesinde rol oynayabilecek olan CDR2 bölgesi, WYNGRKQ'da bir NG deamidasyon motifi içerir. 15C3 ve 3056 Fabsinin silico modellemesinde, HCDR2 bölgesinde NG deamidasyon motifinin katlanmasinda önemli bir farklilik ortaya çikmamistir. Bu, bu motifin 3056 antikorunun gözlenen instabilitesinde yer almasina karsi çikmistir. Bununla birlikte sasirtici bir sekilde, istemlerde belirtildigi gibi 01574-P-0002 degisiklikler büyük ölçüde gözlemlenen bulusa ait antikorlarin partiden partiye varyasyonuna indirgenmistir. Bulus ayrica, CD3'e baglanan bir degisken domain ve CLEC12A'ya baglanan bir degisken domain içeren bir antikor saglar; burada CLEC12A'ya baglanan degisken domain, 0-10, tercihen 0-5 amino asit insersiyonlari, delesyonlari, sübstitüsyonlari, eklenmeleri veya bunlarin bir kombinasyonu ile Sekil 24'teki 4327 sayilari ile tanimlanan amino asit dizisini içeren bir VH'ye sahiptir, ve CD3'e baglanan degisken domain, veya 54 ve 55 pozisyonlari disinda ve CDR bölgeleri disinda bir veya daha fazla pozisyonda 0-5 amino asit sübstitüsyonu ile 5192, dizisini içeren bir VH'ye sahiptir. Hafif zincir tercihen sekil 23, tercihen 23B'de gösterildigi gibi amino aside sahip bir degisken domaini içerir. Bulus ayrica, CD3'e baglanan bir degisken domain ve CLEC12A'ya baglanan bir degisken domain içeren bir antikor saglamaktadir; burada CLEClZA'ya baglanan degisken domain, 0-10, tercihen 0-5 amino asit insersiyonlari, delesyonlari, sübstitüsyonlari, eklenmeleri veya bunlarin bir kombinasyonu ile Sekil 24'te gösterildigi gibi 4327 sayilari ile tanimlanan amino asit dizisini içeren bir VH'ye sahiptir, ve CD3'e baglanan degisken domain, veya 54 ve 55 pozisyonlari disinda ve CDR bölgeleri disinda bir veya daha fazla pozisyonda 0-5 ainino asit sübstitüsyonu ile sekil 12,de 5196 sayisi ile tanimlanan amino asit dizisini içeren bir VH'ye sahiptir. disinda bir ya da daha fazla pozisyonda 0-5 amino asit sübstitüsyonu ile sekil 12 ve 25'te gösterildigi gibi 5694 sayilariyla tanimlanan amino asit dizisine sahiptir. CD3'e baglanan degisken domain, tercihen, 54 ve 55 pozisyonlari disinda ve CDR bölgeleri disinda bir veya daha fazla pozisyonda 0-5 amino asit sübstitüsyonlari ile sekil 12'de gösterildigi gibi 5196 sayisi ile tanimlanan amino asit dizisine sahiptir. Tercih edilen bir uygulamada, agir zincir degisken bölgesi, belirtilen 01574-P-0002 amino asit dizisine göre 0-4, tercihen 0-3, tercihen 0-2, tercihen 0-1 ve tercihen O amino asit sübstitüsyonu içerir. CD3 agir zinciri için, belirtilen amino asit sübstitüsyonlari, 54 ve 55 pozisyonlari disinda ve CDR bölgeleri disinda pozisyonlarda bulunur. Bir insersiyon, eklenme, delesyon veya sübstitüsyonun bir kombinasyonu, hizali dizilerin 10'dan fazla, tercihen 5'ten fazla pozisyonda farkli olmamasi durumunda talep edilen bir kombinasyondur. Hizali dizilerden birindeki bosluk, diger dizide atlanan kadar miktarda amino asit için de geçerlidir. Bulus ayrica, CD3'e baglanan bir degisken domain ve CLEC12A'ya baglanan bir degisken domain içeren bir antikor saglamaktadir; burada CLEC12A'ya baglanan degisken domain, Sekil 24'te gösterildigi gibi 4327 sayilari ile tanimlanan amino asit dizisini içeren bir VH'ye sahiptir, ve CD3'e baglanan degisken domain, sekil VH'ye sahiptir. CD3'e baglanan degisken domainin agir zinciri, tercihen, 5196; 5694 sayilariyla tanimlanan amino asit dizisine sahiptir. CD3'e baglanan degisken domain, tercihen, sekil 12'de gösterildigi gibi 5196 sayisi ile tanimlanan amino asit dizisine sahiptir. SEKILLERIN KISA AÇIKLAMASI Sekil 1. PG3055 ve PG3056'nin IEF'si Sekil 2. PG3055 ve PG3056'nin CEX-HPLC analizi Sekil 3. CEX-HPLC analizi ile analiz edilen PG3055 ve PG3056'nin partiden partiye degiskenligine ve stabilitesi. Sol zamana göre 3055 partileri, zamana göre 3056 partileri, 3 ay boyunca -80°C'de saklanan üst örnekler, 2-8°C'de saklanan alt örnekler. ortami içinde 2-8°C veya 37°C'de 7 gün süreyle inkübasyon üzerine satlastirilmis 01574-P-0002 inkübe edildi. Sekil 5. Sol: PG3056 Fab'in degisken domainlere göre homojen modeli, açik gri renkte VL, siyahta VH, açik gri renkte HCDR1-3 halkalari. HCDR2'de deamidasyon motifini olusturan Asn54 ve Gly55 kalintilari belirtilmistir. Sag: PG3 055 (açik gri) ve PG3056 (koyu gri) Fabsin homoloji modellerinin yerlesimi. hizalanmasi üzerinde CD3'e baglanma için akis sitometrisi analizi, karsilastirma kontrolü olarak dahil edildi. MF3056'nin VH'sinin hizalanmasi HPB-ALL hücreleri üzerinde CD3'e baglanma için akis sitometrisi analizi, referans kontrol olarak dahil edildi. Sekil 11. PG3891`in CEX-HPLC analizi baglanma için akis sitoinetrisi analizi, PG3056 referans kontrolü olarak dahil Sekil 14. PG5196p06`nin [EF analizi Sekil 15. PG5196'nin CEX-HPLC kromatogrami ALL) ve CLEClZA'ya (HL-60) baglanmasi aktivasyon marker CD69'un yukari-regülasyonu ile yansitilan CLEClZA-spesifik aktivasyonunu korumustur. bsAb ve kontrol IgGs 1000 ng/mL'de test edildi. T hücre aktivasyon akisi sitometri verileri, CD4+ veya CD8+ T-hücresi 01574-P-0002 popülasyonlari içindeki CD69-pozitif hücrelerin yüzdesi olarak ekprese edilir. HD] ve HD2, farkli saglikli donörlerden elde edilen T hücrelerini kullanarak iki farkli deneyi yansitir. Sekil 19. Immobilize ve CLEC12A protein (B)°nin on ve off oranlarini gösteren sensorgramlar. Sensorgramlar, zamanin bir fonksiyonu olarak (saniye cinsinden), yaniti (yapay birimlerde çipe bagli protein miktari) gösterir. Her iki panelde, antijen (renk olarak) konsantrasyon araligi kullanilarak elde edilen sensogramlar ve BIAevaluation yazilimi (siyah olarak) kullanilarak gerçeklestirilen ilgili egri parçalari gösterilmektedir. Sekil 20. Primer AML hasta numunesi, ko-kültürünün baslangicinda (gün : 0) akis sitometrisi analizi ile CLEC12A ekspresyonu ve T hücrelerinin fraksiyonlari ve AML blastlari için fenotiplenmistir. 5196x4327 DM-Fc bsAb ile 7 günlük ko- kültür veya fraksiyonun izotip kontrolü sonrasi, toplam T hücre sayisi ve AML blastlari akis sitometrisi analizi ile ölçüldü. Sekil 21. Örnek 9'da açiklandigi gibi DSC analizi. dizisi (VH). Patent yayini, antikor 15C3'ün iki varyantini açiklar. Her iki varyant, ayni agir zincir degisken domainine sahiptir, ancak bu agir zincir degisken domaini, iki farkli hafif zincir degisken domaini ile birlestirilir. Burada, 15C3 antikoruna atifta bulunuldugunda, bu sekilde gösterildigi gibi hafif zincir degisken domaini L2 ile kombinasyon halinde bu sekilde belirtilen agir zincir degisken domainine sahip bir antikora referans verilmektedir. 15C3 VH arti L2 hafif zincirinin Fab ürünü burada ayrica MF3055 olarak anilir. PG3056 antikoru, bu sekilde tasvir edildigi gibi, hafif zincir degisken bölge Sekil 23 Bulusun antikoru tercihen ortak bir hafif zincire sahiptir. A) Ortak hafif zincir, tercihen bu sekilde IGKV1-39 dizisi olarak belirtilen amino asit dizisini içerir. B) Tercih edilen bir uygulamada, genel hafif zincir, lGKV1-39/jk1 veya 01574-P-0002 lGKVl-39/jk5 olarak belirtilen amino asit dizisini içerir. Özellikle tercih edilen bir uygulamada, ortak hafif zincir, bu sekilde gösterildigi gibi lGKVl-39/jkl'in amino asit dizisini içerir. Sekil 24. Bir anti-CLEC12A baglayici antikor Fab (MF4327) ve bir anti-tetanoz toksoidi (TT) baglama Fab (MF1337) VH bölgesinin amino asit dizisinin VH bölgesinin amino asit dizisi. Sekil 23'te belirtilen ortak hafif zincirin amino asit dizisi ile birlikte, bu VH'ler, sirasiyla CLEC12A ve tetanoz toksoidine baglanan Fabs MF4327 ve MF1337'nin degisken domainlerini olusturur. Sekil 25. MF5196'nin CD3 baglayici varyantlarinin örnekleri, tümü yeniden dizisi beliitilmistir. akis sitometrisi ile analiz edildigi gibi HPB-ALL hücreleri üzerinde membran ile eksprese edilen CD3'e sekil 23B'de gösterildigi gibi bir ortak hafif zincir. Sekil 27. PG5661 CIEX-HPLC kromatogrami. Sekil 28 Yeniden düzenlenmis insan IGKVl-39/IGKJ1 VL bölgesinden olusan sahiptir. Sekil 29 HPB-ALL hücrelerinde membrani ile eksprese edilen CD3'e PG-formati baglanmasi; tüm bu örnekler CD3'e baglanmistir. ÖRNEKLER Burada kullanildigi sekliyle "MFXXXX", X, bagimsiz olarak 0-9 arasinda bir sayidir, VH'nin, 4 basamak ile tanimlanan amino asit dizisine sahip oldugu bir degisken domaini içeren bir Fab'i belirtir. Aksi belirtilmedikçe degisken domainin hafif zincir degisken bölgesi tipik olarak 23B olan tipik olarak bir sekil 23 dizisine sahiptir. "MFXXXX VH", 4 basamak ile tanimlanan VH'nin amino asit dizisini belirtir. MF ayrica bir hafif zincirin sabit bir bölgesini ve normal olarak bir hafif 01574-P-0002 zincirin sabit bir bölgesi ile etkilesime giren bir agir zincirin sabit bölgesini içerir. PG, özdes agir ve hafif zincirleri içeren bir monospesifik antikoru belirtir. PB, iki farkli agir zincire sahip bispesifik bir antikora deginmektedir. Agir zincirlerin degisken bölgesi farklidir ve tipik olarak ayrica CH3 bölgesi farklidir, burada agir zincirlerden biri, CH3 alaninin bir KK mutasyonuna sahiptir ve digeri, CH3 alaninin tamamlayici DE mutasyonuna sahiptir (referans için bakiniz Örnek 1: 3055 ve 3056 mAb'lerin yük heterojenligi Izo-elektrik odaklama (lEF), lGVKl-39/JK1 ortak hafif zincir ile eslestirilmis MF3056 VH'yi içeren tam boyda bir lgGl monoklonal antikoru olan PG3056'nin tam boyda bir IgGl 15C3 VL2 - IGKVl-l3 hafif zinciri ile eslestirilmis ayni VH'yi içeren monoklonal antikor olan ve PG3055"in pl ve yük heterojenitesini belirlemek için kullanildi. Bu amaçla, 6-11 pI araligindaki bir Focusgel (Webscientific, cat # 1006-03), 10°C'ye sogutulmus bir sogutma plakasi ile donatilmis bir GE Healthcare Multiphor II elektroforez ünitesi üzerinde gerçeklestirilmistir. Muamele edilmemis numunenin 10 ug'si, yüksek bir pI aralik markerinin (GE Healthcare, kat # 17047301V) yanindaki örnek yuvasina yüklenmistir. Elektroforez programi üç asamadan olusuyordu; ilk önce 500 V'de için bir odaklama fazi. Sonuç olarak jel, kolloidal koomassie boyasi (Pierce, cat# 24590) kullanilarak sabitlendi ve boyandi. PG3056 ve PG3055'in IEF analizi, Sekil 1'de belirtilen jel ile sonuçlanmistir. PG3055 için bir ana bant, bir uydu bandinda, daha yüksek bir pI degerinde (~9), gözlemlenmistir. PG3056 benzer bir IEF paterni sergiledi, ancak hafif yüksek pI degerlerinde ve biraz daha daginik ana bantta idi. Her iki lgG, ortogonal bir yöntem kullanilarak yük heterojenligini analiz etmek için katyon degisim kromatogratisi HPLC (CEX-HPLC) kullanilarak analiz edilmistir. CEX-HPLC, ortam sicakliginda bir SP STAT 7 um kolon ve bir 01574-P-0002 UV/Vis detektörü ile donatilmis bir Dionex HPLC sistemi üzerinde gerçeklestirilmistir. 10 ug numune enjekte edildi; antikor yük varyantlarini ayirmak için artan NaCl konsantrasyonu ile 25 mM fosfat tamponu pH 6.0 gradyani kullanildi. Veriler Chromeleon yazilimi kullanilarak analiz edildi. PG3 055 ve PG3056'nin CEX-HPLC kromatogramlari, Sekil 2'de gösterilmektedir. PG3055, IgG'nin asidik ve bazik izoformlarini temsil eden küçük piklerim yaninda 18.8 dakikalik bir ana pik göstermektedir. Sasirtici bir sekilde, PG3056'nin kromatogrami, büyük bir zaman araligi boyunca çoklu pikler içerir; lGKV1-13 hafif zincirine (PG3055) sahip lgG ile karsilastirildiginda, lGVKl- 39/JK1 ortak hafif` zincir anti-CD3 antikorunun (PG3056) yük heterojenitesini önemli ölçüde arttirmaktadir. CEX-HPLC ayrica partinin partikül degiskenligini ve anti-CD3 antikorlarinin stabilitesini degerlendirmek için kullanilmistir. Her iki antikor da 2-8°C'de 3 aydan uzun süre depolandiktan sonra ve -80°C'de uzun süreli depolandiktan sonra analiz edildi. PG3055 örneklerinin bindirmesi (Sekil 3, sol), numuneler arasinda küçük bir farkin gözlemlendigini göstermektedir; küçük zirvelerin 17.1 dakika ve 19.8 dakikadaki nispi pik alanlari, uzun bir süre boyunca 2-8°C'de depolama üzerine hafifçe degisir. PG3056 numuneleri arasinda gözlemlenen farkliliklar (Sekil 3 sag) çok daha önemlidir. 20.4 dakikadaki pik 2-8°C'de depolandiginda önemli ölçüde azalirken, 18.4 dakikalik pik, numunenin ana pik olina derecesine kadar artar. IgG'nin diger asidik izoformlarini temsil eden diger erken ayristirma pikleri de pik alaninda nispi bir artis gösterir, örn. 16.4 dakikadaki pik. 2-8°C'de uzun süreli depolamadan sonra CEX-HPLC kromatogramlarinda gözlemlenen degisiklikler, IGVK1-39/JK1 ortak hafif zincirini içeren anti-CD3 antikorunun bu kosullar altinda depolanirken stabil degilken, 15C3 VL2 - IGKV1-13 hafif zinciri içeren PG3055 antikorunun çok daha stabil oldugunu gösterir. 01574-P-0002 Örnek 2: PG3056 antikor partisinin antijen baglanmasi üzerindeki partiden partiye varyasyonuna etkisi Serum varliginda anti-CD3 antikorlarinin stabilitesini degerlendirmek için, PG takviye edilen yedi gün 37°C'de inkübe edildi. Bu analizde bir izotip kontrol IgG (PG1207) dahil edildi. Yedi gün sonra IgGsn CD3'e baglanmasi, saglikli donörden türetilmis, MACS ile saflastirilmis T hücreleri üzerinde akis sitometrisi analizi ile degerlendirildi. Ayni ortam içinde 2-8°C'de yedi gün boyunca depolanan PG3055 ve PG30566 karsilastirma amaciyla akis sitometrisi analizine dahil edildi. Tüm antikorlarin CD3 baglanmasi, IMDM + %10 PES içinde seyreltilmis, 10, 1, 0.1 ve 0.01 ng/mL konsantrasyonlarinda test edildi. Baglanmis antikorlar, daha önce varliginda 2-8°C'de inkübe edildiginde T hücrelerine benzer baglanma PG3055 37°C) 37°C'de yedi günlük bir inkübasyondan etkilenmezken, PG3056'nin T hücreleri üzerindeki CD3'e baglanmasi önemli ölçüde azalmistir Sonuç olarak, PG3056, IGVK1-39/JK1 ortak hafif zincirini içeren anti-CD3 antikoru, 7 gün boyunca 37°C'de inkübasyon serumundan sonra CD3'e güçlü bir sekilde indirgenmis bir baglanma gösterdi. Aksine, PG3055 antikoru ayni kosullar altinda tam CD3 baglanmasini korumustur. Örnek 3: PG3055 ve PG3056 antikorlari arasindaki fark nedir? PG3055 ve PG3056 antikorlari, özdes dizilere sahiptir, ancak bu hafif zincir degisken bölgesi içindir. Görünüse göre, ortak hafif zincir, antikorun diger amino 01574-P-0002 asit dizileri baglaminda ve özellikle de yakin temasta oldugu agir zincir degisken bölgesi ile iyi çalismaz. 3056 antikorunun eksikligini denemek ve düzeltmek için en açik yol, ortak hafif zincirin, 3055 antikorundaki hafif zincire daha benzer hale getirilmesi için herhangi bir sekilde degistirilip degistirilemeyecegini görmek olacaktir. Ayrica, PG3056 antikorunun hafif zinciri, CD3 molekülüne baglanan antij en baglanma sahasinin bir parçasi olarak seçilmemistir. Bu amaçla agir zincir degisken bölgesi seçilmistir. Bu, ortak hafif zincirin, ana antikor PG3055'te hafif zincirden daha fazla yakin yapilip yapilamayacagini görmek için bir baska PG3055 ve PG3056 degisken bölgelerinin farkli hafif zincirlerinin sonucu olarak farklilastiklari yerleri bulmak için Fab bölgeleri modellenmistir. PG3056 ve PG3055'in Fab bölgesinin bir homoloji modeli, MODELLER kullanilarak gruplarindan optimal enerji skoru ile bir model yapi seçilmistir. Yan zincir optimizasyonu ve enerji minimizasyon algoritmalari, hedef diziden farklilik gösteren sablon yan Zincirlerini degistirmek için kullanildi. 3055 ve 3056 Fabsin homoloji modelleri, Yasara (http://Www.yasara.org) kullanilarak görsel olarak incelenmistir. PG3055 ve PG3056 modelleri (Sekil 5, sagdaki resim), hafif zincirin dizi farkliliklarinin sadece birkaç yapisal degisiklige neden oldugunu göstermektedir; hafif zincirin bazi bölümlerinin agir zincire göre oryantasyonu, iki lgG arasinda bir dereceye kadar degistirilir. Degistirilen parçalar dogal olarak daha az stabil olabilir ve gözlemlenen stabilite farkliliklarinin temel nedeni olabilir. Alternatif olarak, degisen bölümler farkli heterojenlik indükleyen proseslere az çok duyarli olabilir. Bilinen ve bilinmeyen çesitli islemler PG3056 antikorunun gözlemlenen özelliklerinin sebebi olabilir. Enzimatik ve enziinatik olmayan modifikasyonlar arasinda disülfür baglarinin olusumu, glikozilasyon, N- terminali glutamin siklizasyonu, C-terminal lisin isleme, deamidasyon, oksidasyon, glikasyon bulunur ve peptid bag bölünmesi heterojenlige neden olan prosesler arasindadir (Liu et al. Journal of Pharmaceutical Sciences, Vol. 97, 01574-P-0002 heterojenitesi, hücre içi prosesler, hücre disi prosesler, örnegin serum, asit ve/veya hücre kültür ortami içinde gerçeklestirilebilir. Heterojenite ayrica, yüksek sicaklik veya yogun isiga maruz kalma gibi farkli stresli kosullar altinda, saflastirma prosesi, depolama sirasinda, tamponlar ile inkübasyon ile dahil edilebilir. Modelleme, PG3056 degisken bölgesinin mutasyon çabalarina odaklanmak için belirli bir amino aside veya bölgeye isaret etmemistir. PG3055 ve PG3056 homoloji modelleri arasindaki gözlemlenen farkliliklar minördür. Mevcut bulusta, PG3056 antikorunun hafif zincirinin amino asit dizisini degistirmeye gerek olmadigi bulunmustur. Agir zincirin adaptasyonu, agir zincir, ortak hafif zincir ile bir degisken bölgede mevcut olsa bile, iyi baglanma özelliklerine, iyi stabiliteye ve iyi uniforinluga sahip bir antikor üretebilir. Asagida daha ayrintili olarak örneklenecegi gibi, sasirtici bir sekilde agir zincirin CDR2 bölgesindeki spesifik degisikliklerin baglanmaya karsi tolere edildigi ve antikora arzu edilen stabilite ve uniformlugu sagladiginin kesfedildigi bulunmustur. Degisiklikler, agir zincirin CDR2 bölgesinde bir NG deaminasyon motifinde bir ve Gly55 kalintilari içerir. Kalintilar, Sekil 5'te gösterildigi gibi her iki antikorda da yüzeye maruz kalinaktadir. Asparajin yan zinciri için biraz farkli bir oryantasyonla, yapisal pozisyon ve yüzey maruziyeti, her iki molekülde çok benzerdir. Motifin her iki antikorda da yüzeye maruz kaldigi ve bu sayede çevreye kolayca ulasabilecegi ve P3056'ya karsi PG3055'deki HCDR2 NG motifinin katlanmasinda önemli bir fark olmadigi göz önüne alindiginda, Asn54'ün Asn54'te daha fazla deamidasyonunun mümkün olmadigi düsünülebilir, PG3056, farkli PG3 056 partilerinin gözlenen baglanma varyasyonu için temel nedendir. 01574-P-0002 Örnek 4: PG3056 varyantlarinin üretilmesi ve karakterizasyonu PG3056'nin CIEX-HPLC ile analitik karakterizasyonu, lGG'nin oldukça heterojen oldugunu gösterdi. Bu heterojenite, CD3xCLEC12A bispesifik lgG'nin CIEX- HPLC bazli saflastirilmasini engelleyebildiginden, MF3056 Fab'un CIEX-HPLC profilini gelistirmeyi amaçladik. MF3056'n1n agir zincir degisken bölgesi, PG3056 heterojenligine katkida bulunabilecek birçok kalinti ve/veya motif içerir. Bunlar C-terminal lisin kalintisi, HCDRZ'de bir NG asparajin deamidasyon motifi ve HCDR3'te bir asit degiskenli DP motifidir (MF3056_VH'nin VH 3-33 germ hatti dizisine karsi hizalanmasi için Sekil 6'ya bakiniz). Her ne kadar silico modellemesi HCDR2 NG motifine, gözlemlenen heterojenite için olasi bir neden olarak hiç rastlanmadiysa da, bu post-translasyonel modifikasyon motifinden yoksun olan MF3056'n1n VH'lerinin varyantlari tanimlamaya çalisilmistir ve buna paralel olarak gelistirilmis CIEX-HPLC tutma profili ve gelistirilmis stabilite gösterilebilir. Bu amaçla, MF3056'nin VH'nin eksprese edildi ve HPB-ALL hücreleri üzerinde membran ile eksprese edilen tarif edildigi gibi FACS prosedürüne göre) ile test edildi. Asagidaki sonuçlar elde edilmistir (Sekil 8): Bu sonuçlar PG3873 ve PG3905 varyantlarinin CD3 baglanmasini tamamen kaybettigini, CD3'e çok düsük baglanmamn ise PG3872 varyanti için korundugunu göstermektedir. Indirgenmis heterojenlik ve indirgenmis immünojenisiteye sahip gelistirilmis varyantlar elde etmek için alternatif bir yaklasim olarak, MF3056'nin VH'SI, tek 01574-P-0002 tek veya birlestirilmis amino asit sübstitüsyonlari yaparak çesitli kalintilarda VH3-33 dizisine dogru gerdirilmistir. MF3056_VH'nin asagidaki varyantlari MF3891_VH (Sekil 9). Yine, bu VH varyantlarini ve ortak hafif zinciri (MF3874_VH, MF3878_VH, eksprese edildi ve yukarida tarif edilen CD3 baglanmasi için test edildi. Asagidaki sonuçlar elde edildi (Sekil 10): Sekil lO'da gösterildigi gibi, tüm bireyler (PG, germ çizgili varyantlar, tam CD3 baglanma kapasitesini korudu. Daha sonra PG3891, germlinasyonun indirgenmis heterojeniteye neden olup olmadigini degerlendirmek için CIEX-HPLC (örnek 1'de tarif edildigi gibi) ile analiz edildi. Sekil ll'de gösterildigi gibi, PG389l'in CIEX-HPLC profili yine önemli bir yük heterojenligi sergilemistir. Tek tek germlinasyon varyantlari için benzer CIEX- HPLC profilleri elde edildi (veriler gösterilmemistir). PG3056'nin yük heterojenitesini indirgemek için bir sonraki girisimde, HCDRZ NG motitini tasimayan MF3056_VH varyantlari üretilmistir (Sekil 12). Bu VH varyantlarini ve ortak hafif zinciri (MF5192-5197_VH) içeren Fabs, tam uzunluklu monoklonal IgG (PG sayilari) olarak üretildi ve eksprese edildi ve yukarida tarif edildigi gibi akis sitometrisi ile HPB-ALL hücreleri üzerinde membran ile eksprese edilen CD3'e baglanma açisindan test edildi. Bu analiz karsilastirilabilir CD3 baglanmasini muhafaza ettigini gösterirken, diger tüm test edilmis MF3056 varyantlarinin önemli ölçüde indirgenmis oldugunu (PG5192, 01574-P-0002 olmadigini göstermistir. PG5196 mAb'nin yük heterojenitesini degerlendirmek için, izoelektrik odaklama, örnek 1'de tarif edildigi gibi gerçeklestirilmistir. Jelin lekelenmesinden sonra, PG5196 için yüksek bir pI degerinde minör bir uydu bandi ile yüksek pI degerinde bir dar bant gözlenmistir. (bkz. Sekil 14). PG5196'n1n yük heterojenligini daha ayrintili olarak degerlendirmek için, CIEX- HPLC, örnek 1'de tarif edilen prosedüre göre gerçeklestirildi, elde edilen kromatogram, Sekil 15'te gösterildi. Kromatogram, öncesinde 16.9 dakikada küçük bir pik ile 19 dakikalik bir korunma süresine sahip bir ana pik gösterir. Sasirtici bir sekilde, bu veriler PG5196'nin PG3056 ile karsilastirildiginda öneinli ölçüde gelistirilmis bir yük heterojenite profili sergiledigini göstermektedir. Örnek 5: Faj gösterim seçimlerini kullanarak PG5196'nin ek varyantlarinin üretilmesi MFS 196 VH'ye dayanarak, faj gösterim kütüphaneleri benzer sekilde indirgenmis yük heterojenligine sahip ek CD3 baglama Fabs elde etmek amaciyla tasarlandi. Yeniden düzenlenmis insan lGKVl-39/lGKJl VL bölgesini (De Kruif et al., potansiyel olarak ainino asit sübstitüsyonlarini içeren MF5196 tabanli VH bölgelerinin bir koleksiyonu VH/VL arayüzünü gelistirebilir. Özel sübstitüsyonlar ve pozisyon basina izin verilen alternatif amino asitler, Tablo 1'de gösterilmektedir. Mutasyonlu pozisyonda, belirtilen amino asitlerin yani sira belirtilen tüm sübstitüsyonlar esit bir oranda dahil edilmistir. 01574-P-0002 Amino asit ve Bölge Pozisyon basina dahil edilen MF 5196_VH'de pozisyon sübstitüsyonlar H35 FR2 FYASN ASO FR2 ILFYNRQSK N54 HCDR2 H A55 HCDR2 GTN D59 HCDRZ LIVFYRANEHST A61 FR3 FNIHQLRYE STDKV W104 HCDR3 MFYHLIV F105 HCDR3 WMYHLIV Bu faj gösterim kütüphanelerinden elde edilen bakteriyofajlar, teknikte uzman kisilerce bilinen prosedürler kullanilarak HBP-ALL hücreleri ve/veya rekoinbinant insan CD3ös-Fc proteini kullanilarak bir veya iki turda seçilmistir. Baglanma fajlari kimyasal olarak elüte edildi ve bakterileri tekrar enfekte etmek için kullanildi. Bir dizi hayatta kalan bakteri kolonileri toplandiktan sonra, fajlar kurtarildi ve hücre sitometrisi ile eksprese edilen CD3/TCR komplekslerine hücre sitometrisi ile baglanmak için tarandi. Koloni PCR, VH bölgelerini amplifiye etmek ve dizilemek üzere CD3 baglanmasini gösteren tüm fajlar için gerçeklestirildi. VH genlerinin analizi, hangi sübstitüsyon varyantlarinin CD3 baglanmasini korudugunu ortaya çikarmistir. Seçilen MF5196_VH varyantlari asagidaki sübstitüsyonlara sahiptir: QSYL içine A50, LIVFRANEHST içine D59, NIHQLRYESTDKV içine A61 ve/Veya MY içine F . Aksine, Tablo 01574-P-0002 kalintilarinin CD3 baglanmasi için kritik amino asitler oldugunu göstermektedir. örnekleri, tümü yeniden düzenlenmis insan IGKVl-39/IGKJ1 VL bölgesi ile kombinasyon halindedir. Bu MF`lerin VH dizileri Sekil 25'te listelenmistir. Bu MF varyantlarinin, yukarida tarif edildigi gibi akis sitometrisi yoluyla HPB-ALL hücreleri üzerindeki membran ile eksprese edilen CD3'e baglanma için monospesifik lgG formatinda test edilmesi, bu örneklerin CD3'e baglandigini göstermistir (Sekil 26). Içsel stabilitenin bir örnegi olarak, PG5661, örnek 1'de tarif edilen prosedüre göre ClEX-HPLC ile analiz edildi, elde edilen kromatogram, Sekil 27'de gösterildi. Kromatogram, PG5196 için gösterildigi gibi profile benzer ~20 dakikalik bir korunma süresine sahip bir ana pik noktasini göstermektedir. Amino asit ve MF 51969ye dahil edilen Sübstitüsyonlarla bulunan MF5196_VH'de sübstitüsyonlar CD3 baglanma MF5196 pozisyon varyantlari. ASO ILFYNRQSK QSYL D59 LIVFYRANEHST LIVFRANEHST A6] FNIHQLRYESTDKV NIHQLRYESTDKV F105 WMYHLIV MY 01574-P-0002 Örnek SB MF5196 VH'ye dayanarak, faj gösterim kütüphaneleri ilave stabil CD3 baglayici Fabs elde etmek amaciyla tasarlandi. Yeniden düzenlenmis insan lGKVl- varyantlarini içeren faj gösterim kütüphaneleri olusturuldu. Bu faj gösterim kütüphanelerden alinan bakteriyofajlar, teknikte uzman kisilerce bilinen prosedürler kullanilarak HBP-ALL hücreleri ve/veya rekombinant insan CD3ös-FC proteini kullanilarak bir veya iki turda seçilmistir. Baglanma fajlari kimyasal olarak elüte edildi ve bakterileri tekrar enfekte etmek için kullanildi. Bir dizi hayatta kalan bakteri kolonileri toplandiktan sonra, fajlar kurtarildi ve hücre sitometrisi ile eksprese edilen CD3/TCR komplekslerine hücre sitometrisi ile baglanmak için tarandi. Koloni PCR, VH bölgelerini amplifiye etmek ve dizilemek üzere CD3 baglanmasini gösteren tüm fajlar için gerçeklestirildi. MF5196_VH'nin ortaya çikan ek CD3 baglayici varyantlarinin örnekleri, tümü yeniden düzenlenmis insan lGKVl-39/IGKJ1 VL bölgesi ile kombinasyon halinde Bu MF varyantlarinin, HPB-ALL hücreleri üzerindeki membran ile sentezlenmis CD3'e baglanmak için monospesifik IgG formatinda test edilmesi, yukarida tarif edildigi gibi akis sitometrisi ile, tüm bu örneklerin CD3'e bagli oldugunu göstermistir (Sekil 29). Örnek 6 CD3XCLEC12A bispesifik IgG formatinda MF5196 Fab'in fonksiyonel karakterizasyonu MF5196 Fab'in fonksiyonel aktivitesini incelemek için, bu CD3 Fab ve MF3056 CD3 Fab, sabit kol olarak CLEC12A Fab MF4327 ile birlikte eksprese edildi. 01574-P-0002 bispesifik lgG formatinda, 235-236 pozisyonlarindaki alt mentese/CH2 mühendisligi (Fc bölgesinde DM-Fc, CH2 çift mutasyon olarak adlandirilir) dahil sayili patent basvurusunda verilmistir. Ilk olarak, 5196x4327 DM-Fc bsAb'nin CD3 ve CLEC12A'ya baglanmasi CD3+ HPB-ALL hücreleri ve CLEC12A+ HL- daha önce tarif edilen prosedürlere göre). 3056x432? DM-Fc bsAb referans olarak dahil edildi ve kontrol disi bir IgGl izotip kontrolü, PG1337, kontrol olarak dahil edildi (Sekil 16). Her iki CD3XCLEC12A DM-Fc bsAbs baglanmis membran, 5196x4327 DM-Fc bsAb için biraz gelistirilmis baglanma ile CD3 ve HPB-ALL eksprese etmistir. test edildi. Ilk olarak, saglikli donör dingin T-hücreleri ile T hücre uyarici patentte tarif edilen prosedüre göre elde edildi. Saflastirilmis dingin T-hücreleri daha sonra bir efektörde %10 insan serumunda (HS) lösemi türevli HL-60 hücre boyunca 5: l'lik hedef hücre orani. 3056x4327 DM-Fc bsAb referans olarak dahil edildi. Negatif kontrol kiyaslama lgGs olarak bir izotip kontrol lgG (kontrol lgG) (MF 5196) baglanitr ve tetanoz toksoidini (TT) ikinci kolla (MF 1337) baglanir ve MF5196 tarafindan potansiyel hedef disi indüklenen aktiviteyi incelemek için dahil edilir. bsAb ve kontrol IgGs 1,000 ng/mL'de test edildi. T-hücresi aktivasyon verileri CD4-pozitif veya CBS-pozitif T-hücre popülasyonu içindeki bsAb, CD69 erken aktivasyonu markerinin yukari regülasyonu ile yansitildigi gibi, CD69 ve CD8 T hücrelerinin aktivasyonunu indüklemistir. Ayrica 01574-P-0002 regülasyonunu indüklemis, ancak bu 5196x4327 DM-Fc bsAb'ye kiyasla daha az Ölçüde gerçeklesmistir. CD69'un hem T-hücresi alt kümeleri üzerinde regülasyonunu indüklemedigi için CLEC12A antijen spesifik idi. spesifik aktivasyonunu indükleme kapasitesine sahip oldugunu gösterdi, bu . 5196x4327 DM-Fc bsAb indüklü T-hücresi aktivasyonu, kontrol 5196x1337 DM-Fc bsAb'nin T- hücresi aktivasyonunu indüklemedigi için spesifik CLEC12A idi. Birlikte ele alindiginda, bu, HCDRZN'nin bir amino asit sübstitüsyonuna, MF 5 196 F ab°a CD3 baglanmasi ile sonuçlandigmi, CLEC12A'ya spesifik T-hücresi aktivasyonunun tamamen korundugunu göstermektedir. aktivasyonunun kapsaminin hedef hücre lizisini indüklemek için yeterli olup olmadigini arastirmak için, HL-60 hücreleri karboksifloresein diasetat sukasimidil ester (CFSE) ile etiketlendi ve T hücreleri efektörde saglikli donörden alinan hücreler: %10 HS varliginda Szl'lik hedef hücre orani ile birlikte kültürlendi. Potansiyel hedef disi lizis incelemek için 5196x1337 CD3xTT DM-Fc bsAb dahil edildi. Bispesifik lgG'ler, 1,000 ng/ml'den baslayarak 4-kat seyreltme araliginda test edildi. Iki gün sonra, hayatta kalan CFSE-pozitif HL-60 hücreleri, akis sitometrisi ile ölçüldü. Sonuçlar, PBS kontrol kosulu ile ilgili spesifik lizis yüzdesi olarak ifade edildi (Sekil 18). lizisi indükleme kapasitesini tamamen korudugunu gösterdi. Sasirtici bir sekilde, 01574-P-0002 bsAb'nin etkili bir sekilde CLEC12A antijene spesifik T-hücresi aktivasyonu ve CLEC12A + HL-60 hücrelerinin lizisi nedeniyle islevsel oldugunu göstermistir. gelismis bir potense sahip oldugunu göstermistir. TlOO kullanilarak yüzey plazmon rezonansi (SPR) teknolojisi ile ölçülmüstür. Bir anti-insan IgG fare monoklonal antikoru (Becton and Dickinson, cat. Nr 555784), serbest ainin kimyasi (NHS/EDC) kullanilarak bir CMS sensör çipinin yüzeyleri birlestirildi. Daha sonra 5196x4327 DM-Fc bsAb bu sensör yüzeyine yakalandi. Ardindan, rekombinant saflastirilmis antijenler insan CLEC12A (Sino Biological ölçülmesi için bir konsantrasyon araliginda sensör yüzeyi üzerinden geçirildi. Her döngüden sonra, sensör yüzeyi bir HCl darbesi ile yeniden üretildi ve 5196x4327 DM-Fc bsAb tekrar yakalandi. Elde edilen sensörgramlardan, on- ve off-oranlar BlAevaluation yazilimi kullanilarak belirlendi. ve CD3 için 177 nM'lik bir afiniteye sahip oldugunu göstermistir. Bu, CLEC12A kolunun afinitesinin 5196x4327 DM-Fc bsAb'deki insan CD3 baglanma kolunun afinitesinden ~60 kat daha yüksek oldugunu gösterdi. 01574-P-0002 Tablo 3: insan CD3 ve insan CLEC 12A'ya baglanma için on- ve off-oranlar ve afînite degerleri. Deger, üç ölçümün ortalamasidir. KD: afînite (denge ayrisma) Antijen KD (M) CD3ös-Fc 177 x 10'9 için 5196x4327 DM-Fc bsAb'nin etkinligi Örnek 6'da, 5196x4327 DM-Fc bsAb'nin, saglikli donörden türetilmis T hücreleri tarafindan HL-60 hedef hücre lizisini güçlü bir sekilde indükledigi gösterilmistir, bsAb'nin, 521 hedef oranina etki eden otolog AML hastasindan elde edilen T hücreleri tarafindan AML blastinin lizisini indükleme kapasitesine sahip oldugunu gösterdi. Burada, bir CD3xCLEC12A DM-Fc bsAb'nin, daha spesifik olarak düsük etki ile AML blastlarinin primer AML numunelerine lizisini indüklemek için etkinligi oranlari incelenmistir. Tani airasinda alinan AML hasta numuneleri (AML FAB siniflandirmalarindan ve 7AAD için akis sitometrik analizi ile T hücreleri ve AML blastlarinin fraksiyonlari için karakterize edildi. Analiz edilen AML numuneleri, 1:7-lz40 arasinda degisen bir hedef orana sahipti. Daha sonra, birincil AML hasta kemik iligi numuneleri, %10 normal HS arti 20 01574-P-0002 CD3 WT-Fc Ab (tüm antikorlar, 1,000 ng/mL'de) bulunmaktadir. Yedi günlük bir kültürden sonra, T-hücresi genislemesi ve AML blast öldürme prosesi, 0. günde kullanilanla ayni isaretleyiciler kullanilarak akis sitometrik analizi ile belirlendi. Sonuçlar, PBS kosuluna göre katlama T-hücresi genislemesi veya AML blast lizis frekansi olarak ifade edildi. genislemesini (5-30 kat T hücre genislemesi) indükledigini (Tablo 4 ve Sekil 20) göstermistir. Daha da önemlisi, bu veriler, 5196x4327 DM-Fc bsAb'nin, etkili bir sekilde, test edilen primer AML hasta numunelerinin (%26-88) 5/5'inde hastanin AML tümör hücrelerinin indüklenmis lizisleri, AML numunelerinde bile, hedef oranlara çok düsük bir efektörle test ettigini göstermistir. Hasta# 0. günde AML FAB % Blast Katlama T hücresi E:T orani siniflandirmasi öldürme (7 gün genisletme (7 gün 5196x4327 DM-Fc bsAb'nin T hücre proliferasyonunu ve AML blast lizisini indükleme etkinligi, tani sirasinda alinan ilave AML hasta numunelerinde analiz edildi. 01574-P-0002 Tanida sirasinda alinan AML hasta numuneleri (AML FAB siniflandirmalarindan ve 7AAD için akis sitometrik analizi ile T hücrelerinin fraksiyonlari ve AML blastlari için karakterize edildi. Analiz edilen AML numuneleri, 1:3-1197 arasinda degisen bir hedef orana sahipti. Daha sonra, primer AML hasta numuneleri, örnek 8'de açiklandigi gibi kültürlendi. Test edilen kosullar arasinda PBS, izotip pozitif kontrol CD3 WT-Fc Ab (200 ng/mL'deki tüm antikorlar) bulunur. Yedi ve on günlük bir kültür T-hücresi genislemesi ve AML blast öldürme prosesinden sonra, 0. gününde kullanilanla ayni markerler kullanilarak akis sitometrik analizi ile belirlendi. Sonuçlar, PBS kosuluna göre katlanan T-hücresi genislemesi veya AML blast lizis frekansi olarak ifade edildi. Bu veriler, 10 gün sonra etkili bir sekilde T-hücresi genislemesini (7-226-kat T hücre genislemesi) indükledigini göstermistir. Daha da önemlisi, bu veriler, 5196x4327 DM-Fc bsAb'nin, etkili bir sekilde, test edilen primer AML hasta numunelerinin (%38-99) 6/8'inde hastanin AML tümör hücrelerinin indüklenmis lizisleri, AML numunelerinde bile, 1:45- 1:97 hedef oranlara çok düsük bir efektörle test ettigini göstermistir. Hasta 0. AML FAB AML risk %Blast Katlama T E:T (10 gün genislemesi orani sonra) (10 gün sonra) 01574-P-0002 Hasta 0. AML FAB AML risk %Blast Katlama T E:T (10 gün genislemesi orani sonra) (10 gün sonra) Diferansiyel tarama kalorimetrisi (DSC), burada tarif edilen IgGsn domainlerinin termo stabilitesini Ölçmek için kullanildi. DSC deneyleri, Origin v7.0 (VPViewer ve VPAnalyzer) yazilimi kullanilarak MicroCal VP-DSC üzerinde gerçeklestirilmistir. Antikorlara ilk olarak pH 6.5'te bir 10 mM fosfat, 150 mM NaCl tamponuna karsi diyaliz yapilmistir. lgG örnekleri, UV emilimi ile belirlenen sekilde 0.25 mg/mL'lik bir protein konsantrasyonunda analiz edildi, diyaliz tainponu referans numune olarak kullanildi. Taramalar, l°C/dk tarama hizinda 50°C - 95°C arasinda degisti ve GraphPad Prism 5 ve Microsoft Excel 2010 yazilimi kullanilarak analiz edildi. Yabani tip (WT) IgGl'in DSC analizi, Sekil 21'de gösterildigi gibi iki pik ile sonuçlandi (CH2 | CH3 için WT | WT olarak gösterilmistir). 70.9°C'de Tml, CH2 domainin erimesine karsilik gelirken, 85.0°C'deki (T1112) pik, Fabs ve CH3 domainin erimesini temsil eder. CH2 domaininde (DM | WT) iki mutasyon (L235G, G236R) içeren ayni Fabsia sahip bir lgGl'in DSC grafigi, 85.0°C`de çok benzer bir Tm2 pikini göstermektedir. Ancak Tml zirvesi 73.5°C'ye kaymistir, bu mutasyonlarin CH2 domainin stabilitesini önemli ölçüde arttirdigini göstermektedir. CH2 domaini sadece bir WT lgGl'in degil, ayrica bir CH3 ile 01574-P-0002 üretilen bispesifik lgGl'in en kirilgan domaini olmadigi için, L235G, G236R ile üretilen CH2 domainin, bu CH2 mutasyonlari tasiyan CD3XCLEC12A bispesifik 01574-P-0002 - «1 no 585 m. 9.30 W m .25 m ..5 a. - 51' g "7 01574-P-0002 01574-P-0002 Konsensüs Konsensüs î-' i '- _› " :~ I.î:« :IISHJ' I I' ..3 1-21 - Konsensüs 0 2 4 6 8 10 lgG konsantrasyonu (ugiml) 01574-P-0002 ~'_`I`L'AL'.Ii 'lIGFE'T J. :I-?LIIIC I'" Konsensüs (Ji: .] 01574-P-0002 15060 12500 2 7500 -.- PG3SS3 5000 -o- PGSSEM 0 2 4 6 8 10 R 3. îî'n Jr." - *'*_ _ _SEUJ ' I_ J;- _ ý_i mic 01574-P-0002 (15319& `.`H ' L.' (1?)1'. ' 'HH Konsensüs (13"` ± 4- -o- PGS192tHG) 500 4/ ( ) -.- PGS194(HTJ ° `-0- CtrllgG D 2 4 6 8 10 01574-P-0002 GJ iMarkör 3 P65196 .204 7.35 ' 3.15 m 8.45 w .25, .15:21 %41 01574-P-0002 HL-so HPB-ALL -i- PGIJGT 0 4 e 3 10 4 10 Sekil I7 4: III CUlIgG g 5 5" g 5196x133? 01574-P-0002 Sekii IQ 9: b 9 › 9: o; 0 G . 1._ ,,_ _- 7 L _ I _ __ _ _ _W' : Kontrol !96 5196x432? 3058x132?' 5196:(1 337 01574-P-0002 . 93% 97% CLECIÄÂl EKSDFÖSYÜÜU 1' EOtiD 3, 0.00000 ' ' 4 Sicaklik (°C) A Tinl (°C) T1112 (°C) 01574-P-0002 Sekil 23A SekHZßB 01574-P-0002 HPhle TH (li l".II'ÂHFL If'jl-Ilîî l -JFVH'I'LJ Konsensüs i; i ::iii 01574-P-0002 01574-P-0002 25000 20000 -I- PG5198 15000 10000 -9 PGSGSO 5000 'E- PGSB48 0 5 10 15 . -0- Kontrol IgG 20000 15000 -I- PGS196 -O- PGSBZB .9. Kontrol igG 0 5 10 15 01574-P-0002 1000-4 500] ` 01574-P-0002 Konsensüs Konsensüs Konsensüs 01574-P-0002 20000 15000 PGS 96 gwooo -0- Kontrol IgG 0 5 10 15 20000 15000 -I- PG5196 .5. Kontrol igG 0 5 10 15 TR TR TR TR TR TR TR TR TR TR TR TR

Claims (4)

ISTEMLER
1. Insan CD3'üne baglanan bir antikordur, bu antikor, bir agir zincir ve hafif zincir içerir, burada bahsedilen agir zincir, asagidaki bir amino asit dizisini içeren bir degisken bölge içerir: X1X2 ile belirtilen disindaki ve CDR bölgeleri disindaki pozisyonlardan baska bir veya daha fazla pozisyonda 0-5 amino asit sübstitüsyonu ile; X1 = N ve X2 = A; X1 = N ve X2 = T; X1 = H ve X2 = G; X1 :Dve X2=G; veya X1 : H ve X2 = A; ve bahsedilen hafif zincir, 0-5 amino asit sübstitüsyonlari ile sekil 23A*nin OlZ/lgVKl-39 hafif zincir degisken bölgesini içerir.
2. Istem l”e göre bir antikordur, burada bahsedilen hafif zincir degisken bölgesi bir germ hatti OlZ/IgVKl-39*01 degisken bölgedir.
3. Istem Z'ye göre bir antikordur, burada hafif zincir degisken bölgesi kappa
4. Istem 3'e göre bir antikordur, burada hafif zincir degisken bölgesi, germ hatti kappa hafif zincir lgVKl-39*Ol/IGJK1*01 veya lgVKl- 39*01/IGK5*01 içerir. . istem l'e göre bir antikordur, burada bahsedilen hafif zincir degisken hafif zincir degisken bölgesi 0-5 amino asit insersiyonlari, delesyonlari sübstitüsyonlari, eklenmeleri ve bunlarin kombinasyonlari ile DIQMT QSPSS LSASV GDRVT ITCRA SQSIS SYLNW YQQKP GKAPK LLIYA ASSLQ SGVPS RFSGS GSGTD FTLTI SSLQP EDFAT YYCQQ SYSTP PTFGQ GTKVE IK veya DIQMT QSPSS LSASV GDRVT ITCRA SQSIS SYLNW YQQKP GKAPK LLIYA ASSLQ SGVPS RFSGS GSGTD FTLTI SSLQP EDFAT YYCQQ SYSTP PITFG QGTRL EIK amino asit dizisini içerir. istemler 1-5,ten herhangi birine göre bir antikordur, bir bispesifik antikordur. Istem 6'ya göre bir bispesifik antikordur, istemler 1 ila 5 ”ten herhangi birine göre bir H/L zinciri kombinasyonu ve bir tümör antijenine baglanan bir H/L zinciri kombinasyonu içerir. Istem 7'ye göre bir bispesifik antikordur, burada bir tümör antijenine baglanan bahsedilen H/L zinciri kombinasyonu CLECIZA'yi baglar. istemler 1-8,den herhangi birine göre bir antikor veya bir bispesifik antikordur, bir insan sabit bölgesi ve insan degisken domainleri içerir. istemler 6-9”dan herhangi birine göre bir bispesiiik antikordur, uyumlu heterodimerizasyon domainlerine sahip iki farkli immünoglobulin agir zinciri içerir. Istem 10'a göre bir bispesifik antikordur, burada bahsedilen uyumlu heterodimerizasyon domainleri, uyumlu immünoglobulin agir zincir CH3 heterodimerizasyon domainleridir. Istemler 6-ll,den herhangi birine göre bir bispesifik antikordur, burada bahsedilen bispesifik antikor, bir mutant CH2 ve/veya alt mentese domainine sahip bir IgG antikorudur, böylece bispesifik IgG antikorunun bir F c-gama reseptörü ile etkilesimi azalir. Istem lZ'ye göre bir bispesifik antikordur, burada mutant CH2 ve/veya alt mentese domaini, 235 ve/veya 236 pozisyonunda (Kabat numaralandirmasi) bir amino sübstitüsyonu, tercihen bir L235G ve/veya G236R sübstitüsyonu içerir. Istemler 6-12”den herhangi birine göre bir bispesifik antikordur, 0-5 amino asit insersiyonu, delesyonlari, sübstitüsyonlari, eklenmeleri veya bunlarin bir kombinasyonu ile sekil 23A'nin bir OlZ/IgVKl-39 hafif zincir degisken bölgesini içerir. Istemler l-l4lten herhangi birine göre bir antikordur, ihtiyaci olan bir hastanin tedavisinde kullanim içindir.
TR2018/16055T 2015-07-10 2016-07-08 İnsan CD3 bağlayıcı antikoru. TR201816055T4 (tr)

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
EP15176355 2015-07-10

Publications (1)

Publication Number Publication Date
TR201816055T4 true TR201816055T4 (tr) 2018-11-21

Family

ID=53673007

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
TR2018/16055T TR201816055T4 (tr) 2015-07-10 2016-07-08 İnsan CD3 bağlayıcı antikoru.

Country Status (23)

Country Link
US (4) US9914777B2 (tr)
EP (3) EP3345928B1 (tr)
JP (3) JP7010811B2 (tr)
KR (1) KR102709815B1 (tr)
CN (1) CN108026174B (tr)
AU (1) AU2016293942B2 (tr)
CA (1) CA2991880C (tr)
CY (1) CY1120849T1 (tr)
DK (1) DK3115376T3 (tr)
EA (1) EA201890028A1 (tr)
ES (2) ES2812303T3 (tr)
HR (1) HRP20181802T1 (tr)
HU (1) HUE042039T2 (tr)
IL (2) IL321912A (tr)
LT (1) LT3115376T (tr)
MX (2) MX2018000344A (tr)
PL (1) PL3115376T3 (tr)
PT (1) PT3115376T (tr)
RS (1) RS57928B1 (tr)
SI (1) SI3115376T1 (tr)
SM (1) SMT201800562T1 (tr)
TR (1) TR201816055T4 (tr)
WO (1) WO2017010874A1 (tr)

Families Citing this family (81)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
HRP20191409T1 (hr) 2012-04-20 2019-11-15 Merus Nv Postupci i sredstva za proizvodnju heterodimernih ig-sličnih molekula
PT2900694T (pt) 2012-09-27 2018-11-13 Merus Nv Anticorpos de igg biespecíficos como ativadores de células t
US10844127B2 (en) 2014-02-28 2020-11-24 Merus N.V. Antibodies that bind EGFR and ErbB3
IL274151B (en) 2015-05-21 2022-07-01 Harpoon Therapeutics Inc Trispecific binding proteins and methods of use
LT3115376T (lt) 2015-07-10 2018-11-12 Merus N.V. Antikūnai, kurie jungiasi su žmogaus cd3
WO2017069628A2 (en) 2015-10-23 2017-04-27 Merus N.V. Binding molecules that inhibit cancer growth
CN119060177A (zh) 2016-05-20 2024-12-03 哈普恩治疗公司 单结构域血清白蛋白结合蛋白质
WO2017220988A1 (en) 2016-06-20 2017-12-28 Kymab Limited Multispecific antibodies for immuno-oncology
US20180164221A1 (en) 2016-12-07 2018-06-14 Progenity Inc. Gastrointestinal tract detection methods, devices and systems
CA3054632A1 (en) 2017-03-30 2018-10-04 Progenity, Inc. Treatment of a disease of the gastrointestinal tract with an immune modulatory agent released using an ingestible device
WO2018182422A1 (en) 2017-03-31 2018-10-04 Merus N.V. Erbb-2 and erbb3 binding bispecific antibodies for use in the treatment f cells that have an nrg1 fusion gene
WO2018201051A1 (en) 2017-04-28 2018-11-01 Novartis Ag Bcma-targeting agent, and combination therapy with a gamma secretase inhibitor
US20200055948A1 (en) 2017-04-28 2020-02-20 Novartis Ag Cells expressing a bcma-targeting chimeric antigen receptor, and combination therapy with a gamma secretase inhibitor
CN111148764B (zh) 2017-05-17 2025-08-12 美勒斯公司 用于乳腺癌的ErbB-2/ErbB-3双特异性抗体与内分泌治疗的组合
EP3409322A1 (en) 2017-06-01 2018-12-05 F. Hoffmann-La Roche AG Treatment method
EP3642229A1 (en) 2017-06-21 2020-04-29 Gilead Sciences, Inc. Multispecific antibodies that target hiv gp120 and cd3
WO2019000223A1 (en) 2017-06-27 2019-01-03 Nanjing Legend Biotech Co., Ltd. ENABLERS OF IMMUNE EFFECTOR CELLS OF CHIMERIC ANTIBODIES AND METHODS OF USE THEREOF
CN113896797B (zh) 2017-08-01 2023-05-09 Ab工作室有限公司 双特异性抗体及其用途
AU2018312816B2 (en) 2017-08-09 2021-05-27 Merus N.V. Antibodies that bind EGFR and cMET
WO2019035938A1 (en) 2017-08-16 2019-02-21 Elstar Therapeutics, Inc. MULTISPECIFIC MOLECULES BINDING TO BCMA AND USES THEREOF
IL315737A (en) 2017-10-13 2024-11-01 Harpoon Therapeutics Inc B-cell maturation antigen-binding proteins
EP3694529B1 (en) 2017-10-13 2024-06-26 Harpoon Therapeutics, Inc. Trispecific proteins and methods of use
CN111629749A (zh) 2017-10-18 2020-09-04 诺华股份有限公司 用于选择性蛋白质降解的组合物和方法
MX2020004948A (es) 2017-11-15 2020-11-11 Novartis Ag Receptor de antígeno quimérico que selecciona como diana bcma, receptor de antígeno quimérico que selecciona como diana cd19 y terapias de combinación.
WO2019108900A1 (en) 2017-11-30 2019-06-06 Novartis Ag Bcma-targeting chimeric antigen receptor, and uses thereof
JP2021504413A (ja) * 2017-12-01 2021-02-15 メルス ナムローゼ フェンノートシャップ 組み合わせ治療のための二重特異性抗体及びｉｌ−１５の使用
US11667713B2 (en) 2017-12-28 2023-06-06 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Cytotoxicity-inducing therapeutic agent
EP3737408A1 (en) 2018-01-08 2020-11-18 Novartis AG Immune-enhancing rnas for combination with chimeric antigen receptor therapy
WO2019139987A1 (en) 2018-01-09 2019-07-18 Elstar Therapeutics, Inc. Calreticulin binding constructs and engineered t cells for the treatment of diseases
AU2019215031B2 (en) 2018-01-31 2025-10-09 Novartis Ag Combination therapy using a chimeric antigen receptor
TWI804572B (zh) * 2018-02-09 2023-06-11 日商小野藥品工業股份有限公司 雙特異性抗體
US20200399383A1 (en) 2018-02-13 2020-12-24 Novartis Ag Chimeric antigen receptor therapy in combination with il-15r and il15
WO2019178362A1 (en) 2018-03-14 2019-09-19 Elstar Therapeutics, Inc. Multifunctional molecules that bind to calreticulin and uses thereof
MX2020010267A (es) * 2018-03-30 2020-11-06 Merus Nv Anticuerpo multivalente.
WO2019224715A1 (en) * 2018-05-23 2019-11-28 Pfizer Inc. Antibodies specific for cd3 and uses thereof
US12227565B2 (en) 2018-06-20 2025-02-18 Biora Therapeutics, Inc. Method of formulating a pharmaceutical composition comprising administering an immune modulator to the small intestine
US20230041197A1 (en) 2018-06-20 2023-02-09 Progenity, Inc. Treatment of a disease of the gastrointestinal tract with an immunomodulator
DE202019005887U1 (de) 2018-07-03 2023-06-14 Marengo Therapeutics, Inc. Anti-TCR-Antikörpermoleküle und Verwendungen davon
US20210171909A1 (en) 2018-08-31 2021-06-10 Novartis Ag Methods of making chimeric antigen receptor?expressing cells
SI3844267T1 (sl) 2018-08-31 2025-10-30 Novartis Ag Postopki izdelave celic, ki izražajo receptorje himernega antigena
US12195544B2 (en) 2018-09-21 2025-01-14 Harpoon Therapeutics, Inc. EGFR binding proteins and methods of use
WO2020069028A1 (en) 2018-09-25 2020-04-02 Harpoon Therapeutics, Inc. Dll3 binding proteins and methods of use
CN111116753A (zh) * 2018-10-30 2020-05-08 上海泰因生物技术有限公司 一种双特异性抗体的制备方法
WO2020106754A1 (en) 2018-11-19 2020-05-28 Progenity, Inc. Methods and devices for treating a disease with biotherapeutics
WO2020130829A1 (en) 2018-12-20 2020-06-25 Merus N.V. Clec12axcd3 bispecific antibodies and methods for the treatment of disease
US12463463B2 (en) 2019-01-28 2025-11-04 Ab Therapeutics, Inc. Bispecific antibodies and uses thereof
AU2020224681A1 (en) 2019-02-21 2021-09-16 Marengo Therapeutics, Inc. Antibody molecules that bind to NKp30 and uses thereof
AU2020226893B2 (en) 2019-02-21 2025-02-27 Marengo Therapeutics, Inc. Multifunctional molecules that bind to T cell related cancer cells and uses thereof
KR20210134339A (ko) 2019-02-25 2021-11-09 노파르티스 아게 바이러스 전달을 위한 메조다공성 실리카 입자 조성물
EP3942025A1 (en) 2019-03-21 2022-01-26 Novartis AG Car-t cell therapies with enhanced efficacy
TW202039578A (zh) * 2019-03-29 2020-11-01 荷蘭商美勒斯公司 Cd3結合分子
CN114605546A (zh) * 2019-03-29 2022-06-10 美勒斯公司 Cd3结合分子
WO2020210678A1 (en) 2019-04-12 2020-10-15 Novartis Ag Methods of making chimeric antigen receptor-expressing cells
EP3959320A1 (en) 2019-04-24 2022-03-02 Novartis AG Compositions and methods for selective protein degradation
TWI889320B (zh) * 2019-07-05 2025-07-01 日商小野藥品工業股份有限公司 以pd-1/cd3雙特異性蛋白質所進行之血液性癌症治療
CA3147103A1 (en) 2019-07-19 2021-01-28 Oncoresponse, Inc. Immunomodulatory antibodies and methods of use thereof
US20220281977A1 (en) * 2019-07-30 2022-09-08 Ono Pharmaceutical Co., Ltd. Bispecific antibody
BR112022003143A2 (pt) 2019-08-19 2022-05-17 Merus Nv Tratamento de câncer com uma combinação de um anticorpo que se liga ao lgr5 e ao egfr e um inibidor de topoisomerase i.
KR20220069961A (ko) * 2019-09-13 2022-05-27 메모리얼 슬로안 케터링 캔서 센터 항-cd371 항체 및 그의 용도
MX2022006391A (es) 2019-11-26 2022-06-24 Novartis Ag Receptores de antigeno quimerico que se unen a bcma y cd19 y usos de los mismos.
WO2021119482A1 (en) 2019-12-13 2021-06-17 Progenity, Inc. Ingestible device for delivery of therapeutic agent to the gastrointestinal tract
CA3166629A1 (en) 2020-01-03 2021-07-08 Marengo Therapeutics, Inc. Anti-tcr antibody molecules and uses thereof
PH12022552283A1 (en) 2020-02-27 2024-01-22 Novartis Ag Methods of making chimeric antigen receptor-expressing cells
BR112022016633A2 (pt) 2020-02-27 2022-12-13 Novartis Ag Métodos para produzir células que expressam receptor de antígeno quimérico
TWI799824B (zh) 2020-03-31 2023-04-21 日商中外製藥股份有限公司 Ｄｌｌ３靶向之多特異性抗原結合分子及其用途
KR20230005281A (ko) 2020-04-24 2023-01-09 메뤼스 엔.페. Lgr5 및 egfr에 결합하는 항체를 사용하는 암의 치료
CA3185455A1 (en) 2020-06-11 2021-12-16 Novartis Ag Zbtb32 inhibitors and uses thereof
IL300489A (en) 2020-08-21 2023-04-01 Novartis Ag Compositions and methods for in vivo production of CAR expressing cells
KR20230120125A (ko) 2020-12-15 2023-08-16 메뤼스 엔.페. Lgr5 및 egfr에 결합하는 항체를 사용하는 암의 치료
KR20240004462A (ko) 2021-04-08 2024-01-11 마렝고 테라퓨틱스, 인크. Tcr에 결합하는 다기능성 분자 및 이의 용도
US20240384293A1 (en) 2021-04-27 2024-11-21 Novartis Ag Viral vector production system
JP2024525916A (ja) * 2021-07-20 2024-07-12 エイビーエル バイオ インク． 抗ｃｌｌ－１抗体及びその用途
CN117858901A (zh) 2021-08-20 2024-04-09 诺华股份有限公司 制备表达嵌合抗原受体的细胞的方法
TW202321309A (zh) 2021-10-06 2023-06-01 荷蘭商美勒斯公司 使用至少結合ｅｇｆｒ之抗體治療免疫檢查點抑制劑治療之具高ｅｇｆｒ表現的癌症
WO2024088987A1 (en) 2022-10-26 2024-05-02 F. Hoffmann-La Roche Ag Combination therapy for the treatment of cancer
EP4608983A1 (en) 2022-10-26 2025-09-03 Novartis AG Lentiviral formulations
TW202434635A (zh) * 2022-11-03 2024-09-01 美商翰森生物有限責任公司 多特異性抗體及其醫藥用途
TW202432605A (zh) 2022-12-23 2024-08-16 荷蘭商美勒斯公司 使用至少結合ｅｇｆｒ的抗體和免疫檢查點抑制劑組合治療癌症
AU2023418141A1 (en) 2022-12-28 2025-07-17 Merus N.V. Treatment of cancer with a combination of an antibody that binds egfr and cytotoxic drugs
WO2025097015A1 (en) * 2023-11-01 2025-05-08 Fred Hutchinson Cancer Center Clec2a-binding therapeutics
WO2025109119A1 (en) 2023-11-22 2025-05-30 Priothera Sas Methods of treatment with multispecific antigen-binding proteins in combination with s1p receptor modulators

Family Cites Families (56)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
GB8308235D0 (en) 1983-03-25 1983-05-05 Celltech Ltd Polypeptides
US4816567A (en) 1983-04-08 1989-03-28 Genentech, Inc. Recombinant immunoglobin preparations
US4801687A (en) 1986-10-27 1989-01-31 Bioprobe International, Inc. Monoclonal antibody purification process using protein A
NZ226694A (en) 1987-10-28 1994-04-27 Oncogen Human immunoglobulin produced by recombinant dna techniques
US5151504A (en) 1989-11-17 1992-09-29 E. R. Squibb & Sons, Inc. Method for purification of monoclonal antibodies
GB9022543D0 (en) 1990-10-17 1990-11-28 Wellcome Found Antibody production
ES2199216T3 (es) 1991-07-15 2004-02-16 The Wellcome Foundation Limited Produccion de anticuerpos.
US5457035A (en) 1993-07-23 1995-10-10 Immunex Corporation Cytokine which is a ligand for OX40
US5731168A (en) 1995-03-01 1998-03-24 Genentech, Inc. Method for making heteromultimeric polypeptides
US20020062010A1 (en) 1997-05-02 2002-05-23 Genentech, Inc. Method for making multispecific antibodies having heteromultimeric and common components
ES2246069T3 (es) 1997-05-02 2006-02-01 Genentech, Inc. Procedimiento de preparacion de anticuerpos multiespecificos que tienen componentes comunes y multimericos.
EP1533380B1 (en) 1999-04-15 2009-11-04 Crucell Holland B.V. Recombinant protein production in a human cell comprising at least one E1 protein of adenovirus
DK1404872T3 (da) 2001-07-04 2007-02-19 Chromagenics Bv Fremgangsmåde til selektion af en DNA-sekvens med transkriptionsmodulerende aktivitet med en vektor indeholdende et element med en gentranskriptionsundertrykkende aktivitet
US20050130224A1 (en) 2002-05-31 2005-06-16 Celestar Lexico- Sciences, Inc. Interaction predicting device
DK1523496T3 (da) 2002-07-18 2011-10-17 Merus B V Rekombinant fremstilling af blanding af antistoffer
BRPI0406678A (pt) 2003-01-07 2005-12-20 Symphogen As Método para produzir proteìnas policlonais recombinantes
US20100069614A1 (en) 2008-06-27 2010-03-18 Merus B.V. Antibody producing non-human mammals
EP1636265A2 (en) 2003-06-25 2006-03-22 Crucell Holland B.V. Binding molecules for the treatment of myeloid cell malignancies
UA94211C2 (ru) 2004-06-03 2011-04-26 Новиммюн С.А. Выделенное полностью человеческое моноклональное cd3 антитело
US7728114B2 (en) 2004-06-03 2010-06-01 Novimmune S.A. Anti-CD3 antibodies and methods of use thereof
MX2007002856A (es) 2004-09-02 2007-09-25 Genentech Inc Metodos para el uso de ligandos receptores de muerte y anticuerpos c20.
US20060171929A1 (en) 2005-01-31 2006-08-03 The University Of Washington Regulation of dendritic cell functions by the DCAL-2 receptor
EP1871808A2 (en) 2005-03-31 2008-01-02 Xencor, Inc. Fc VARIANTS WITH OPTIMIZED PROPERTIES
WO2006106905A1 (ja) 2005-03-31 2006-10-12 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha 会合制御によるポリペプチド製造方法
AU2006291005A1 (en) 2005-09-12 2007-03-22 Novimmune S.A. Anti-CD3 antibody formulations
CA2646965C (en) 2006-03-24 2016-06-21 Jonathan H. Davis Engineered heterodimeric protein domains
WO2007147901A1 (en) 2006-06-22 2007-12-27 Novo Nordisk A/S Production of bispecific antibodies
WO2008027236A2 (en) 2006-08-30 2008-03-06 Genentech, Inc. Multispecific antibodies
US8290739B2 (en) 2006-10-20 2012-10-16 Amfit, Inc. Method for determining relative mobility of regions of an object
CN101802015B (zh) 2007-03-29 2015-05-06 根马布股份公司 双特异性抗体及其制造方法
EP2185701A4 (en) 2007-08-15 2011-03-02 Amunix Operating Inc COMPOSITIONS AND METHODS FOR ENHANCING THE PRODUCTION OF RECOMBINANT POLYPEPTIDES
US8536310B2 (en) 2007-10-17 2013-09-17 Arca Biopharma, Inc. Antibodies to CLL-1
US20090162359A1 (en) 2007-12-21 2009-06-25 Christian Klein Bivalent, bispecific antibodies
US8242247B2 (en) 2007-12-21 2012-08-14 Hoffmann-La Roche Inc. Bivalent, bispecific antibodies
US9266967B2 (en) 2007-12-21 2016-02-23 Hoffmann-La Roche, Inc. Bivalent, bispecific antibodies
WO2009089004A1 (en) 2008-01-07 2009-07-16 Amgen Inc. Method for making antibody fc-heterodimeric molecules using electrostatic steering effects
EP2245571B1 (en) 2008-02-05 2019-04-10 Zymeworks Inc. Methods for determining correlated residues in a protein or other biopolymer using molecular dynamics
WO2009157771A2 (en) 2008-06-27 2009-12-30 Merus B.V. Antibody producing non-human mammals
US20120020952A1 (en) 2009-01-26 2012-01-26 Genmab A/S Methods for producing mixtures of antibodies
EP2408817B1 (en) 2009-03-20 2016-03-16 F.Hoffmann-La Roche Ag Bispecific anti-her antibodies
AU2010245011B2 (en) 2009-04-27 2015-09-03 Oncomed Pharmaceuticals, Inc. Method for making heteromultimeric molecules
MY164121A (en) 2009-06-26 2017-11-30 Regeneron Pharma Readily isolated bispecific antibodies with native immunoglobulin format
US9493578B2 (en) 2009-09-02 2016-11-15 Xencor, Inc. Compositions and methods for simultaneous bivalent and monovalent co-engagement of antigens
JP5955781B2 (ja) 2010-02-08 2016-07-20 リジェネロン・ファーマシューティカルズ・インコーポレイテッドＲｅｇｅｎｅｒｏｎ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ， Ｉｎｃ． 共通の軽鎖のマウス
EP2569337A1 (en) 2010-05-14 2013-03-20 Rinat Neuroscience Corp. Heterodimeric proteins and methods for producing and purifying them
WO2012020096A1 (en) 2010-08-13 2012-02-16 Medimmune Limited Monomeric polypeptides comprising variant fc regions and methods of use
JP5997154B2 (ja) 2010-08-16 2016-09-28 ノビミューン エスアー 多重特異性多価抗体の生成方法
US9562109B2 (en) 2010-11-05 2017-02-07 Zymeworks Inc. Stable heterodimeric antibody design with mutations in the Fc domain
EP2688909A2 (en) 2011-03-25 2014-01-29 Glenmark Pharmaceuticals S.A. Hetero-dimeric immunoglobulins
CA2791109C (en) 2011-09-26 2021-02-16 Merus B.V. Generation of binding molecules
HRP20191409T1 (hr) 2012-04-20 2019-11-15 Merus Nv Postupci i sredstva za proizvodnju heterodimernih ig-sličnih molekula
PT2900694T (pt) * 2012-09-27 2018-11-13 Merus Nv Anticorpos de igg biespecíficos como ativadores de células t
JP6003513B2 (ja) * 2012-10-15 2016-10-05 株式会社Ihi 高温処理炉及び強化繊維の継ぎ方法
US10844127B2 (en) 2014-02-28 2020-11-24 Merus N.V. Antibodies that bind EGFR and ErbB3
KR102849905B1 (ko) 2014-02-28 2025-08-26 메뤼스 엔.페. ErbB-2와 ErbB-3에 결합하는 항체
LT3115376T (lt) 2015-07-10 2018-11-12 Merus N.V. Antikūnai, kurie jungiasi su žmogaus cd3

Also Published As

Publication number Publication date
US11739148B2 (en) 2023-08-29
AU2016293942A1 (en) 2018-02-01
IL256760A (en) 2018-03-29
HK1254029A1 (zh) 2019-07-12
US10266593B2 (en) 2019-04-23
US20180237523A1 (en) 2018-08-23
CA2991880A1 (en) 2017-01-19
JP7010811B2 (ja) 2022-02-10
MX2022008124A (es) 2022-08-08
CA2991880C (en) 2025-02-04
CY1120849T1 (el) 2019-12-11
RS57928B1 (sr) 2019-01-31
JP2022023228A (ja) 2022-02-07
PL3115376T3 (pl) 2019-01-31
JP7772759B2 (ja) 2025-11-18
JP7379446B2 (ja) 2023-11-14
EP3345928A1 (en) 2018-07-11
CN108026174A (zh) 2018-05-11
KR20180030856A (ko) 2018-03-26
EA201890028A1 (ru) 2018-08-31
SI3115376T1 (sl) 2018-12-31
US20240109966A1 (en) 2024-04-04
CN108026174B (zh) 2023-02-17
ES2812303T3 (es) 2021-03-16
MX2018000344A (es) 2018-03-14
US20160368988A1 (en) 2016-12-22
KR102709815B1 (ko) 2024-09-24
EP3757129A1 (en) 2020-12-30
US20190211100A1 (en) 2019-07-11
AU2016293942B2 (en) 2022-06-16
DK3115376T3 (en) 2018-11-26
NZ739165A (en) 2020-11-27
ES2693596T3 (es) 2018-12-12
JP2023181462A (ja) 2023-12-21
LT3115376T (lt) 2018-11-12
EP3345928B1 (en) 2020-06-24
WO2017010874A1 (en) 2017-01-19
HRP20181802T1 (hr) 2018-12-28
HUE042039T2 (hu) 2019-06-28
IL321912A (en) 2025-09-01
EP3115376A1 (en) 2017-01-11
US9914777B2 (en) 2018-03-13
SMT201800562T1 (it) 2018-11-09
EP3115376B1 (en) 2018-09-05
PT3115376T (pt) 2018-11-15
JP2018520169A (ja) 2018-07-26

Similar Documents

Publication Publication Date Title
JP7772759B2 (ja) ヒトｃｄ３結合抗体
CN111944050B (zh) 一种抗b7-h3抗体及其应用
US12435444B2 (en) Rabbit-derived antigen binding protein nucleic acid libraries and methods of making the same
KR20220070201A (ko) 항-pd-1 항체 및 이의 용도
KR20230169944A (ko) Mage-a4 펩티드-mhc 항원 결합 단백질
KR20240116828A (ko) 이중 mhc-표적화 t 세포 관여자
HK40043437A (en) Human cd3 binding antibody
NZ739165B2 (en) Human cd3 binding antibody
EA046108B1 (ru) Антитело, связывающее cd3 человека
HK1254029B (en) Human cd3 binding antibody