TARIFNAMEANTIKOR FORMULASYONLARIBULUSUN ALANIBu bulus, kesme ve sicakliga karsi stabil antikor formülasyonlariylailgilidir.BULUS HAKKINDA ON BILGIProteinler, geleneksel organik ve inorganik ilaçlara kiyassa daha büyük ve daha komplekstir (yani, kompleks üç boyutlu yapilara ek olarak çoklu fonksiyonel gruplara sahip) ve bu proteinlerin formülasyonlarinin `ozel problemleri vardir. Bir proteinin biyolojik olarak aktif kalmasi için, bir fomiülasyon, protein amino asitlerinin en az bir çekirdek sekansinin bozulmamis konformasyonel bütünlügünü korurken, ayni anda proteinin çoklu fonksiyonel gruplarini bozunmaya karsi korumalidir. Proteinler için bozunma yolaklari, kimyasal instabiliteyi (yani, yeni bir kimyasal antiteye yol açan bag olusumu ya da klevaji yoluyla protein modifikasyonunu kapsayan herhangi bir proses) ya da fiziksel iiistabiliteyi (yani, proteinin daha üst sira yapisinda degisiklikler) kapsayabilir. Kimyasal instabilite, deainidasyon, rasemizasyon, hidroliz, oksidasyon, beta eliininasyon ya da disültür degisiminden kaynaklanabilir. Fiziksel instabilite ömegindenatürasyon, agregasyon, presipitasyon ya da adsorpsiyondankaynaklanabilir. En yaygin üç protein degradasyon yolagi, protein agregasyonu, deamidasyon ve oksidasyondur. Cleland et al. CriticalReviews in Therapeutic Drug Carrier Systems lO(4): 307-377 (1993).CD20 inolekülü (insan B-lenfosidiyle sinirli farklilasma anti jeni ya da Bp35 olarak da adlandirilir), moleküler agirligi yaklasik 35 kD olan ve pre-B ve inatür B lenfositlerinin üzerinde yer alan bir hidrofobik transmembran proteindir (Valentine et al. (1989) J. Biol. Chem. 264(l9): 11282-11287 ve Einfield et al. (1988) EMBO J. 7(3):711- 717). CD20, periferal kandan veya lenfoid organlardan B hücrelerinin %90"indan fazlasinin yüzeyi üzerinde bulunur ve erken pre-B hücresi gelisimi esnasinda eksprese edilir ve plazma hücre farklilasmasina kadar kalir. CD20 hem normal B hücreleri hein de inalign B hücreleri üzerinde bulunur. Daha somut ifade etmek gerekirse, CD20, B hücreli non-Hodgkin lenfomasi (NHL) vakalarinin %90,indan fazlasinda eksprese edilir (Anderson et al. (1984) Blood 63(6):1424-1433), fakat hematOpoetik kök hücrelerde, pro-B hücrelerinde, normal plazma hücrelerinde ya da diger normal dokularda bulunmaz (Tedder et al. (1985) J. lmmunol. l35(2):973-979).CD20 proteininin 85 amino asitli karboksil-terminal bölgesi, sitoplazma içinde konumlanir. Bu bölgenin uzunlugu, sirasiyla 3, 3, 28, 15 ve 16 amino asitli nispeten kisa intrasitoplazmik bölgelere sahip IgM, IgD ve IgG agir zincirleri ya da histokompatibilite anti jenleri sinif II .alpha. ya da .beta zincirleri gibi baska B hücresine özgü yüzey yapilarininkiyle çelisir (Komaromy et al. (1983) NAR 11:6775-6785). Son 61 karboksil-terminal ainino asitleri arasindan21'i asidik artiklardir; yalnizca 2"i ise bazik artiklardir ve bu, bubölgenin kuvvetli net negatif yükse sahip olduguna isaret eder.GenBank Erisim Numarasi NP.sub.--690605'tir.CD20"nin B hücrelerinin aktivasyonu ve farklilasmasi prosesinde erken basamak(1ar)i regüle etmede rol oynayabilecegi (Tedder et al. (1986) Eur.J. lmmunol. 16:881-887) ve bir kalsiyum iyon kanali islevini görebilecegi (Tedder et al. (1990) J. Cell. Biochem. 14D: 195)düsünülmektedir.B hücrelerinin proliferasyonunu ve/veya farklilasmasini arttirma konusunda CD20"nin fiili fonksiyonuna iliskin belirsizlige ragmen, CD20, kanserlerde ve otoimmün bozukluklarda rol oynayan B hücrelerini kontrol etmek ya da öldürmek için antikor aracili tedaviye önemli bir hedef saglar. Daha somut ifade etmek gerekirse, NHL gibi tümör hücrelerinde CD20 ekspresyonu, onu, CD20-pozitif neoplastik hücrelere karsi terapötik ajanlari spesifik hedeflemek ainaciyla antikoraracili tedavi için öneinli bir hedef haline getirir.W02004/035607 nuinarali dokümanda 2F2 antikoru olarak tarif edilen HuMax-CD20TM (ofatumumab), B hücrelerinin hücre membraninda CD20 molekülünde hedef alinan bir tamamen insan IgGl, Kyüksek afiniteli antikorudur. HuMaX-CD20TM, non-Hodgkin lenfoma (NHL), kronik lenfositik lösemi (CLL) ve romatoid artrit (RA) tedavisi için klinik gelistirme asamasindadir. Bakiniz ayrica: Teeling et al., Blood, 104, pp 1793 (2004) ve Teeling et al., 1. Immunology, 177, pp 362-371 (2007).Terapötik kullanima uygun bir antikor için kesme ve sicakliga karsistabil bir farmasötik formülasyon formüle etmeye ihtiyaç vardir. Bu bulusun bir yapisinda, antikor, bir inonoklonal antikor olabilir. Bu bulusun baska bir yapisinda, antikor, bunlarla sinirli kalinaksizin ofatumumab, rituksimab, tositumoniab, okrelizuinab (2H7.V16), 11B8 ya da 7D8 (W02004/035607 nuinarali dokümanda açiklanmaktadir), C6 gibi WO 2005/ 103081 numarali dokümanda açiklanan bir anti- CD20 antikoru, IMMU-106 (Immunoinedics) gibi WO2003/68821 numarali dokümanda açiklanan bir anti-CD antikoru, AME- 1 3 3 (Applied Molecular Evolution/ Lilly) gibi W02004/103404 numarali dokümanda açiklanan bir anti-CD20 antikoru ve TRU-015 (Trubion Pharmaceuticals Inc) gibi US 2003/01 18592 numarali dokümanda açiklanan anti-CDZO antikoru da dahil bir anti-CD20 antikoru olabilir.BULUSUN OZETIBu bulus, bir kesme ve sicakliga karsi stabil aköz antikor formülasyonuyla ilgilidir.Bu bölgenin uzunlugu, sirasiyla 3, 3, 28, 15 ve 16 amino asitli nispeten kisa intrasitoplazmik bölgelere sahip IgM, IgD ve IgG agir zincirleri ya da histokompatibilite antijenleri sinif 11 .alpha. ya da beta. zincirleri gibi baska B hücresine özgü yüzey yapilarininkiyle çelisir (Komaromy et al. (1983) NAR 11:6775-6785). Son 61 karboksil-terminal amino asitleri arasindan 21°i asidik artiklardir; yalnizca 2°i ise bazik aitiklardir ve bu, bu bölgenin kuvvetli net negatif yükse sahip olduguna isaret eder. GenBank Erisim NumarasiNP.sub.--690605'tir.CD20"nin B hücrelerinin aktivasyonu ve farklilasmasi prosesinde erken basamak(lar)1 regüle etmede rol oynayabilecegi (Tedder et al. (1986) Eur.J. Immunol. 16:881-887) ve bir kalsiyum iyon kanali islevini görebilecegi (Tedder et al. (1990) J. Cell. Biochem. 14D: 195)düsünülniektedir.B hücrelerinin proliferasyonunu ve/veya farklilasmasini arttirma konusunda CD20'nin fiili fonksiyonuna iliskin belirsizlige ragmen, CD20, kaiiserlerde ve otoimmün bozukluklarda rol oynayan B hücrelerini kontrol etmek ya da öldürmek için antikor aracili tedaviye önemli bir hedef saglar. Daha somut ifade etmek gerekirse, NHL gibi tümör hücrelerinde CD20 ekspresyonu, onu, CD20-pozitif neoplastik hücrelere karsi terapötik a janlari spesifik hedeflemek amaciyla antikoraracili tedavi için önenili bir hedef haline getirir.US 2006/0246004 Al, 2-80C7de en az iki yillik bir raf ömrüne sahip olan ve B hücresi malignitesinin ve otoimmün hastaliklarin tedavisinde kullanilabilen, pH 5.0,da 40 mg/ml°de hu2H7 antikorunu, insan CD20"sini baglayan bir insanlastirilmis antikoru, 25 mM asetati, 150 mM trehalozu, %0.9"luk benzil alkolü, %0.02"lik polisorbat 20"yiiçeren bir sivi çok dozlu formülasyonu açiklamaktadir.W02004/035607 nuiiiarali doküinanda 2F2 antikoru olarak tarif edilen HuMax-CD20TM (ofatumumab), B hücrelerinin hücre membraninda CD20 molekülünde hedef aliiian bir tamamen insan IgGl, Kyüksek afiniteli antikorudur. HuMax-CDZOTM, non-Hodgkin leiifoma (NHL), kronik lenfositik lösemi (CLL) ve romatoid artrit(RA) tedavisi için klinik gelistirme asamasindadir. Bakiniz ayrica:Teeling et al., Blood, 104, pp 1793 (2004) ve Teeling et al., J. Iinmunology, 177, pp 362-371 (2007).Terap'ötik kullanima uygun bir antikor için kesine ve sicakliga karsi stabil bir farmasötik forinülasyon formüle etmeye ihtiyaç vardir. Bu bulusun bir yapisinda, antikor, bir monoklonal antikor olabilir. Bu bulusun baska bir yapisinda, antikor, bunlarla sinirli kalmaksizin ofatumumab, rituksimab, tosituinomab, okrelizumab (2H7.V16), 11B8 ya da 7D8 (W02004/035607 iiumarali dokümanda açiklanmaktadir), C6 gibi WO 2005/ 103081 numarali dokümanda açiklanan bir anti- CD20 antikoru, IMMU- 106 (Immunomedics) gibi W02003/68821 numarali dokümanda açiklanan bir anti-CD antikoru, AME- 1 3 3 (Applied Molecular Evolution/ Lilly) gibi W02004/ 103404 nuinarali dokümanda açiklanan bir anti-CD20 antikoru ve TRU-015 (Trubion Phannaceuticals Inc) gibi US 2003/0118592 numarali dokümanda açiklanan anti-CDZO antikoru da dahil bir anti-CD20 antikoru olabilir.BULUSUN OZETIBu bulus, bir kesme ve sicakliga karsi stabil aköz antikorformülasyonuyla ilgilidir.Bir özelliginde, bu bulus, terapötik açidan etkin ve etkili miktarda ofatumumab içeren bir ofatumumab formülasyonuyla ilgilidir; burada, formülasyon ek olarak 10 ilâ 100 mM sodyum asetat, 25 ilâ 100 mM sodyum klori'ir, %0,5 ilâ %5 arginin serbest bazi, 0,02 ilâ 0,2 mM EDTA, %0,01 ilâ %0,2 polisorbat 80 de içerir ve pH 5,0 ilâ 7,0"aayarlanir.Bu bulusun bir yapisinda, bulus, 20-300 mg/mL konsantrasyon araliginda bir ofatumumab içeren bir ofatumuinab forinülasyonuyla ilgilidir; burada, formülasyon ek olarak 50 1nM sodyuin asetat, 51 1nM sodyum klorür, %1 arginin serbest bazi, 0,05 1nM EDTA, %0,02polisorbat 80 de içerir ve pH 5,5"e ayarlanir.Yine baska bir yapisinda, bu bulus, forinülasyonun en az 2 yil süreyle stabilitesini korudugu bir anti-CD20 antikor formülasyonuyla ilgilidir. Bu bulusun baska bir yapisinda, bulus, formülasyonun en az 55°C seviyesine kadar sicakliklarda stabilitesini korudugu bir anti-CD20 antikor formülasyonuyla ilgilidir. Bu bulusun baska bir yapisinda, bulus, formülasyonun yaklasik 5°C sicaklikta en az 2 yil süreyle stabilitesini korudugu bir anti-CD20 antikor formülasyonuyla ilgilidir. Bu bulusun baska bir yapisinda, bulus, forinülasyonun yaklasik 25°C sicaklikta en az 3 ay süreyle stabilitesini korudugu bir anti-CD20 antikor formülasyonuyla ilgilidir. Bu bulusun baska bir yapisinda, bulus, formülasyonun yaklasik 40°C sicaklikta en az 1 ay süreyle stabilitesini korudugu bir anti-CD20 antikor formülasyonuyla ilgilidir. Bu bulusun baska bir yapisinda, bulus, formülasyonun yaklasik 55°C sicaklikta en az 1 gün süreyle stabilitesini korudugu bir anti-CD20 antikor formülasyonuyla ilgilidir. Bu bulusun baska bir yapisinda, bulus, formülasyonun biryandan çalkalanarak yaklasik 5°C ile 25°C, °C ile 35°C, 5°C ile 45°C, 10°C ile 25°C, 10°C ile 35°C, 10°C ile 45°C, 10°C ile 55°C, 20°C ile 35°C, 20°C ile 45°C ya da 20°C ile55°C sicaklik araliginda en az 1 gün süreyle stabilitesini korudugu biranti-CD20 antikor formülasyonuyla ilgilidir.Bu bulusun baska bir yapisinda, bulus, antikorun yaklasik 20-300 mg/mL, 50-300 mg/mL, 100-300 mg/mL, 150-300 mg/mL, 200-300 mg/mL ya da 250-300 mg/mL miktarinda bulundugu bir ofatumumabformülasyonuyla ilgilidir.Bu bulusun baska bir yapisinda, bulus, sodyuin asetatin yaklasik 50mM, 40mM, 45mM, 55mM ya da 60mM miktarinda bulundugu bir anti-CD20 antikor formülasyonuyla ilgilidir. Bu bulusun baska yapilarinda, sodyum asetat, 10 ilâ 100 mM, 20 ilâ 100 mM, 30 ilâ 100 mM, 40 ilâ 100 mM, 50 ilâ 100 mM, 60 ilâ 100 mM, 70 ilâ 100 mM, ilâ 80 mM, veya 30 ilâ 70 mM miktarinda bulunabilir.Yine baska bir yapisinda, bu bulus, formülasyonu yaklasik pH 5,5 seviyesine ayarlamak için asetik asidin (yaklasik 100 mM asetik asit) mevcut oldugu bir ofatumumab formülasyonuyla ilgilidir. Bu bulusun baska yapilarinda, pH degeri, pH 5,0, 5,5, 6,0, 6,5 ya da 7,0 seviyesine ayarlanabilir. Bu bulusun yine baska yapilarinda, pH degerini 5,0, 5,5, 6,0, 6,5 ya da 7,0"a ayarlamak için NaOH ya da HCl kullanilir.Yine baska bir yapisinda, bu bulus, sodyum klor'ûr'ûn yaklasik 51mM, 45mM, 46mM, 47mM, 48mM, 49mM, 50mM, 52mM, 53mM, 54mM, 55mM miktarinda bulundugu bir ofatumumab formülasyonuyla ilgilidir. Bu bulusun baska yapilarinda, sodyum klorür, 25 ilâ 100 mM, 35 ilâ 90 mM, 45 ilâ 80 mM, 25 ilâ 70 HM ya da 45 ilâ 70 mMmiktarinda bulunabilir.Bu bulusun baska bir yapisinda, bulus, arginin serbest bazinin yaklasik %1, %0,7, %1,3 ya da %2,0 miktarinda bulundugu bir ofatumumab formülasyonuyla ilgilidir. Bu bulusun baska yapilarinda, arginin serbest bazi %0,5 ile %5,0 arasinda, %0,5 ile %2,0 arasinda, %0,5 ile %2,5 arasinda, %0,5 ile %3,0 arasinda, %0,5 ile %3,5 arasinda, %0,5 ile %4,0 arasinda ya da %0,5 ile %4,5 arasinda bulunabilir.Bu bulusun baska bir yapisinda, bulus, EDTA°nm yaklasik 0,05 mM, 0,03 1nM, 0,04 mM ya da 0,06 mM miktarinda bulundugu bir ofatumumab formülasyonuyla ilgilidir. Bu bulusun baska yapilarinda, EDTA, 0,02 mM - 0,2 mM, 0,02 1nM - 0,1 mM, 0,02 1nM - 0,15 mM, 0,04 mM - 0,1 mM, 0,03 mM - 0,15 mM ya da 0,03 1nM - 0,2 mMmiktarinda bulunabilir.Bu bulusun baska bir yapisinda, bulus, polisorbat 80,in yaklasik %0,02, %0,015 ya da %0,025 miktarinda bulundugu bir ofatuinuinab foimülasyonuyla ilgilidir. Bu bulusun baska yapilarinda, polisorbat 80, %0,01 - %0,2, %0,01 - %0,15, %0,02 - %0,2, %0,02 - %0,15, %0,01 - %0,25 ya da %0,01 - %0,05 iniktarinda bulunabilir.Bu bulusta ayrica CD20 eksprese eden hücrelerin rol oynadigi bir hastaligi bir memeliye bu bulusa konu olan bir ofatumumab formülasyonunu uygulamak suretiyle tedavi etme amacina yönelik olan ve terapötik açidan etkin ve etkili miktarda bir anti-CD20 antikoru uygulama basamagini kapsayan bir yöntem de tarif edilmektedir; burada, formülasyon ek olarak 10 ilâ 100 1nM sodyum asetat, 25 ilâ 100 1nM sodyum klorür, %0,5 ilâ %5 arginin serbest bazi, 0,02 ilâ 0,2 1nM EDTA, %0,01 ilâ %0,2 polisorbat 80 de içerir10ve pH 5,0 ilâ 7,0 seviyesine ayarlanir. Tedavi edilebilecek (örnegin, iyilestirilebilecek) ya da önlenebilecek "CD20 eksprese eden hücrelerin rol oynadigi hastaliklara" örnek olarak, bunlarla sinirli kalmaksizin, tümorijenik hastaliklar ve iminün hastaliklar, örnegin otoimmün hastaliklar gösterilebilir. Tedavi edilebilecek ve/Veya önlenebilecek tümörijenik hastaliklara öriiek olarak prekürsör B hücreli lenfoblastik lösemi/lenfoma ve matür B hücreli neoplazmlar, örnegin B hücreli kronik lenfositik lösemi (CLL)/küçük lenfositik lenfoma (SLL), B hücreli proleiifositik lösemi, lenfoplazmasitik lenfoma, inantle hücreli lenfoma (MCL), düsük dereceli, ara dereceli ve yüksek dereceli FL dahil foliküler lenfoma (FL), kutanöz folikül merkezli lenfoma, marjinal zon B hücreli lenfoma (MALT tipi, nodal ve splenik tip), saçakli hücreli lösemi, diftüz büyük B hücreli lenfoma, Burkitt lenfomasi, plazmasitom, plazma hücreli miyelom, transplant- sonrasi lenfoproliferatif bozukluk, Waldenstrom makroglobulinemi ve anaplastik büyük hücreli lenfoma (ALCL) da dahil olinak üzere B hücreli lenfoma, örnegin NHL gösterilebilir. B hücreleri eksprese eden CD20"nin rol oynadigi, tedavi edilebilecek ve/veya önlenebilecek immün bozukluklara örnek olarak psoriyazis, psoriatik artrit, derinatit, sistemik skleroderina ve skleroz, inflamatuar bagirsak hastaligi (IBD), Crohn hastaligi, ülseratif kolit, respiratuar distres sendromu, menenjit, ensefalit, üveit, glomerülonefrit, egzama, astim, ateroskleroz, lökosit adezyon defekti, inultipl skleroz, Raynaud sendromu, S jogren sendromu, juvenil baslangiçli diyabet, Reiter hastaligi, Behçet hastaligi, immün kompleks nefriti, IgA nefropatisi, IgM polinöropatileri, immün-aracili trombositopeniler, örnegin akut idiyopatik trombositopenik purpura ve kronik idiyopatiktrombositopenik purpura, heinolitik anemi, myasthenia gravis, lupus11nefriti, sistemik lupus eritematozus, romatoid artrit (RA), atopik dermatit, pemfigus, Graves hastaligi, Hashiinoto tiroiditi, Wegener granülomatozu, Omenn sendromu, kronik böbrek yetmezligi, akut enfeksiyöz mononükleoz, HIV ve herpes virüs iliskili hastaliklar gösterilebilir. Ilave örnekler arasinda siddetli akut respiratuar distres sendromu ve koriyoretiiiit vardir. Yine baska örnekler, Epstein-Barr virüsü (EBV) gibi virüsle B hücrelerinin enfeksiyonunun sebepoldugu hastaliklar ve bozukluklardir. Yine bir baska örnek COAH"tir.Bu bulusta ayrica CD20 eksprese eden hücrelerin rol oynadigi bir hastaligi bir ineineliye bu bulusa konu olan bir ofatuinumab formülasyonunu uygulamak suretiyle tedavi etme amacina yönelik olan ve terapötik açidan etkin ve etkili miktarda bir anti-CD20 antikoru uygulama basamagini kapsayan bir yöntein de tarif edilniektedir; burada, formülasyon ek olarak 10 ilâ 100 mM sodyum asetat, 25 ilâ 100 mM sodyum klor'ûr, %O,5 ilâ %5 arginin serbest bazi, 0,02 ilâ 0,2 mM EDTA, %0,01 ilâ %0,2 polisorbat 80 de içerir ve pH 5,0 ilâ 7,0 seviyesine ayarlanir ve burada, stabil antikor formülasyonu bir memeliye oral, parenteral, intranazal, vajinal, rektal, lingual, sublingual, bukkal, transdermal, intravenöz ya da subkutanyoldan uygulanir.Bu bulusta ayrica CD20 eksprese eden hücrelerin rol oynadigi bir hastaligi bir memeliye 20-300 mg/mL konsantrasyon araliginda ofatumumab içeren bu bulusa konu olan bir ofatumumab formülasyonunu uygulamak suretiyle tedavi etme amacina yönelik olan bir yöntein de tarif edilmektedir; burada, formülasyon ek olarak50 mM sodyum asetat, 51 mM sodyum klorür, %1 arginin serbest12bazi, 0,05 mM EDTA, %0,02 polisorbat 80 de içerir ve pH 5,5seviyesine ayarlanir.Hein yukarida verilen tarifname özetinin hem de asagidaki detayli tanimin örnek niteliginde ve açiklama amaçli oldugu ve istemlerde talep edilen bulusu daha detayli açiklamak amaciyla sunuldugu anlasilacaktir.Ekli sekiller, bu bulusun daha iyi anlasilmasini saglamak amaciyla suiiulur ve bu patent spesifikasyoiiu içine dahil edilir ve onun bir parçasini olusturur; bulusun birkaç yapisini sekilli olarak gösterir vetarifnameyle birlikte, bulusun ilkelerini açiklama islevini görür.SEKILLERIN KISA TANIMISekil 1, 20 mg/mL konsantrasyonda anti-CD20 antikoru standart formülasyonunu (RefMat) (30 mM sitrat, lOOmM NaCl, pH 6,5) iki defa göstermektedir.Sekil 2, 20 mg/mL konsantrasyonda bulus konusu anti-CD20 antikoru formülasyonunun bir yapisini (PlatForm) (50 mM sodyum asetat, sodyum klorür (51 mM), %1 arginin serbest bazi, 0,05 mM EDTA, %0,02 polisorbat 80 ve pH degeri HCL"yle 5,5 seviyesine ayarlaninistir) iki defa göstermektedir. Sekil 3, bu bulusa konu olan bir formülasyon yapisi (PlatForm) ve standart formülasyon tamponlarinda (RefMat) anti-CD20 antikoru termal stabilitesiniii DSC yöntemiyle bir karsilastirmasiiii grafiksel olarak göstermektedir. DSC profilleriyle görüldügü gibi, iki formülasyoii termodiiiamikolarak benzerdir, çünkü görünür Tm'de degisiklik,13fonnülasyonlar arasinda 0,5°C seviyesinin altindadir.BULUSUN DETAYLI TANIMIBu bulusun bir yapisi, kesme ve sicakliga karsi stabil antikorformülasyonlariyla ilgilidir.Bu bulusun baska bir yapisinda, bulus, eszamanli yüksek sicaklik stres kosullari ve 55°C sicaklikta çalkalama kosullari altinda birformülasyon için beklenmedik stabilite görülmesini saglar.Bu bulusun bir ilave yapisi, bir standart formülasyona (örnegin 30 mM sitrat, lOOmM NaCl, pH 6,5) kiyasla daha stabil bir forniülasyondur. Bu bulusa konu olan formülasyon, stres kosullarina maruz kaldiginda presipitasyonda azalma gösterdi (berrak kaldi), fakat standart formülasyon topaklandi. Bu sonuç kestirilemez bir sonuçtu, çünkü DSC (diferansiyel taramali kalorimetri) profilleriyle görüldügügibi, iki formülasyon termodinamik olarak benzerdir.Bu bulusun tarifnamesinde, belirli terimler asagida açiklandigi gbiikullanilir."Protein formülasyonu" ya da "antikor formülasyonu" terimi, etkin maddelerin biyolojik aktivitesinin tartismasiz bir biçimde etkili olmasina izin vermek için uygun formlarda olan ve formülasyonun uygulandigi denekler için toksik ilave bilesenler içermeyenpreparatlara atif yapar.14"Farmasötik açidan kabul edilebilir" yardiinci maddeler (vehiküller, katki maddeleri), uygulanan etkin inaddeiiin etkin ve etkili bir dozunu saglamak için bir emeli denege makul sekilde uygulanabilecek olanlardir. Örnegin, yardimci madde konsantrasyonu, enjeksiyonkabul edilebilirligi için de anlamli ve önemlidir.Bir "stabil" formülasyon, saklama süresinin ardindan, içerisindeki proteinin esas olarak fiziksel ve/Veya kimyasal stabilitesini ve/veya biyolojik aktivitesini korudugu bir formülasyondur. Protein stabilitesini ölçme amacina yönelik çesitli farkli analitik teknikler sektörde mevcuttur ve 'Örnegin, "Peptide and Protein Drug Delivery, 247-301", "Vincent Lee Ed., Marcel Dekker, Inc., New York, NY., Pubs (1991)" ve "Jones, A. Adv. Drug Delivery Rey. 10: 29-90 (1993)" referanslarinda gözden geçilir. Stabilite, bir seçili süre boyunca bir seçilen sicaklikta ölçülebilir. Tercihen, formülasyon, ortam sicakliginda ya da 40°C sicaklikta en az 1 ay süreyle stabilitesini korur ve/Veya 2°C - 8°C sicaklikta en az 1 ilâ 2 yil süreyle stabilitesini korur. Ek olarak, ürünü dondurma (örnegin - 70°C sicakliga kadar) ve çözdürme isleminden sonra formülasyonun stabilolmasi istenir.Bir protein, renk ve/Veya berrakligin görsel olarak incelenmesi yoluyla gözlemlendigi ya da UV isik saçilimi (görünür agregatlari ölçer) veya boyut dislaina kromatografisi (SEC) yoluyla ölçüldügü gibi agregasyon, presipitasyon ve/Veya denatürasyonda herhangi bir degisiklik gösterinezse ya da çok az degisiklik gösterirse, bir biyofarmasötik formülasyonda "fiziksel stabilitesini korumus" olur.SEC, görünür agregatlar için bir prekürsör olmasi sart olinayan15çözünür agregatlari ölçer.Belirli bir zamanda kimyasal stabilite proteinin asagida açiklandigi gibi biyolojik aktivitesini korudugu düsünülecek sekilde ise, bir protein bir biyofarmas'otik formülasyonda "kimyasal stabilitesini korumus" olur. Kimyasal olarak bozunaii türler biyolojik açidii aktif ve kimyasal açidan instabil olabilir. Proteinin kimyasal olarak degistirilmis formlarini belirleyerek ve miktarlarini 'Ölçerek, kimyasal stabilite degerlendirilebilir. Kimyasal degisim, 'Örnegin SEC, SDS- PAGE ve/Veya matriks yardimli lazer desorpsiyon iyonizasyonu/ uçus zamani kütle spektrometrisi (MALDI/TOF MS) kullanilarak degerlendirilebilecek boyut modifikasyonunu (örnegin, kirpma) kapsayabilir. Baska kimyasal degisim tipleri arasinda `Örnegin iyon degisim kromatografisiyle degerlendirilebilecek (örnegin,deamidasyonun bir sonucu olarak ortaya çikan) yük degisimi vardir.Verilen bir zamanda bir antikorun biyolojik aktivitesinde degisiklik, örnegin bir anti jen baglanma eseyinde tayin edildigi gibi farmas'otik formülasyonun hazirlandigi zamanda gösterilen biyolojik aktivitenin yaklasik %103u (esey hatalari dahilinde) dahilinde ise, o antikor bir farmasötik formülasyonda "biyolojik aktivitesini korunmus" olur. Antikorlar için baska "biyolojik aktivite" eseyleri bu dokümandaasagida detayli açiklanmaktadir."Izotonik" terimi, ilgili formülasyonun insan kaniyla temelde ayiii ozmotik basinca sahip oldugu anlamina gelir. Bu bulusun bir yapisinda, bulus konusu izotonik formülasyonlar genellikle 250 ile350 mOsm araliginda bir ozmotik basinca sahip olacaktir. Bu bulusun16baska yapilarinda, bulus konusu izotonik formülasyonlar, 350 ile 450 mOsm araliginda bir ozmotik basinca sahip olacaktir. Yine baska bir yapisinda, bu bulusa konu olan izotonik formülasyonlar, 450 mOsm°nin üzerinde bir ozmotik basinca sahip olacaktir. Izotonisite, örnegin bir buhar basinci ya da buzla dondurma tipi ozmometrekullanilarak ölçülebilir.Bu dokümanda kullanildigi anlamiyla "tampon" terimi, asit-baz konjugat bileseiilerinin etkinligi yoluyla pH degerinde degisikliklere direnen bir tamponlanmis çözeltiye atif yapar. Bu bulusun bir yapisinda, bulus konusu tampon yaklasik 4,5 ile yaklasik 6,0 araliginda; bu bulusun baska bir yapisinda, yaklasik 4,8 ile yaklasik ,8 araliginda bir pH degerine ve bu bulusun bir ilave yapisinda, yaklasik 5,5 seviyesinde bir pH degeriiie sahiptir. pH degerini bu aralikta kontrol altinda tutacak tamponlara `Örnek olarak asetat (örnegin, sodyum asetat), süksinat (örnegin, sodyum süksinat), glukonat, histidin, sitrat ve baska organik asit tamponlari gösterilebilir. Bir dondurma-çözdürmeye karsi stabil olusum istenirse,tampon tercihen fosfat olmaz.Farmakolojik açidan, bu bulus baglaminda, bir antikorun "terapötik açidan etkin ve etkili bir miktari", tedavisinde antikorun etkin ve etkili oldugu bir bozuklugun 'onlemesinde ya da tedavisinde etkin ve etkili bir miktara atif yapar. Bir "bozukluk", antikor tedavisinden faydalanacak herhangi bir durumdur. Bu, memeliyi söz konusu bozukluga egilimli hale getiren patolojik durumlar da dahil kronik ve akut bozukluklari ya da hastaliklari kapsar. Bu bulusun tercih edilenbir yapisinda, "bozukluk", CD20 eksprese eden hücreleri kapsayan bir17hastaliktir.Bir "koruyucu", bakteriyel etkinligini temelde azaltmak amaciyla forinülasyona dahil edilebilecek olan ve bu yolla, örnegin çok- kullaniinli formülasyonun üretimini kolaylastiran bir bilesiktir. Potansiyel koruyuculara örnek olarak oktadesildimetilbenzil amonyum klorür, heksametonyum klorür, benzalkonyuin klorür (alkil gruplarinin uzun Zincirli bilesikler oldugu alkilbenzildimetilamoiiyum klorür karisimi) ve benzeltonyum klorür gösterilebilir. Baska koruyucu tipleri arasinda fenol, bütil ve benzil alkol gibi aromatik alkoller, metil veya propil paraben gibi alkil parabenler, katekol, resorsinol, sikloheksariol, 3-pentanol ve m-kresol vardir. Burada ençok tercih edilen koruyucu, benzil alkoldür."Antikor" terimi, en genis anlamiyla kullanilir ve spesifik olarak monoklonal antikorlari (tam boy monoklonal antikorlar dahil), poliklonal antikorlari, multispesifik antikorlari (ömegin, biSpesifik antikorlar) ve istenen biyolojik aktiviteyi gösterdikleri sürece antikorfragmanlarini kapsar."Antikor fragmanlari", bir tam-boy antikorun bir kismini, genellikle antijen baglanma ya da degisken bölgesini kapsar. Antikor fragmanlarina 'Örnek olarak Fab, Fab', F(ab')2 ve FV fragmanlari; diabody°ler; lineer antikorlar; tek-Zincirli antikor molekülleri ve ayrica, antikor fragmanlarindan olusturulan multispesifik antikorlargösterilebilir.Bu dokümanda kullaiiilaii "monoklonal antikor" terimi, büyük ölçüde18homojen antikorlardan olusan, yani popülasyonu olusturan münferit antikorlarin çok küçük miktarlarda bulunabilecek olasi dogada mevcut mutasyonlar hariç özdes oldugu bir popülasyondan elde edilen bir antikora atif yapar. Monoklonal antikorlar yüksek düzeyde spesifiktir ve tek bir antijenik yere yönlendirilirler. Ek olarak, normalde farkli determinantlara (epitoplar) karsi yönlendirilen farkli antikorlari kapsayan geleneksel (poliklonal) antikor preparatlarinin aksine, her bir monoklonal antikor, antijen üzerindeki tek bir detenninanta karsi yönlendirilir. Niteleyici "monoklonal" sözcügü, antikorun büyük ölçüde homojen bir antikor popülasyonundan elde edilmis oldugunu gösteren bir terimdir ve antikor üretiminin belirli bir yöntemle gerçeklestirilmesini zorunlu kilacak sekilde anlasilmamali ve yorumlanmamalidir. Örnegin, bu bulusa göre kullanilacak monoklonal antikorlar, ilk olarak "Kohler et al., Nature 256:495 (1975)" referansinda tanimlanan hibridom yöntemiyle hazirlanabilecegi gibi, rekombinan DNA yöntemleriyle de (bakiniz örnegin, ABD Patent No.: 4,816,567) hazirlanabilir. "Monoklonal antikorlar", örnegin "Clackson et al., Nature 352:624-626 (1991)" ve "Marks et al., J. Mol. Biol. 222z581-597 (1991)" referanslarinda açiklanan tekniklerkullanilarak faj antikor kütüphanelerinden de izole edilebilirler.Insan-disi antikorlarin (örnegin, murin antikorlari) "hümanize" formlari, insan-disi immünoglobulinden türetilmis minimum sekans içeren kimerik antikorlardir. Genelde, hümanize antikorlar, insan immünoglobulinleridir (alici antikor); bu immünoglobulinlerde, alicinin bir hiperdegisken bölgesinden artiklar, istenen spesifisite, afinite ve kapasiteye sahip fare, siçan, tavsan ya da insan-disi primatgibi bir insan-disi türün bir hiperdegisken bölgesinden artiklarla19(donör antikoru) ikame edilirler. Bazi durumlarda, insan immünoglobulinin FR artiklari, tekabül eden insan-disi artiklarla ikame edilir. Ek olarak, hümanize antikorlar, ne alici antikorda ne de donör antikorda bulunan artiklari içerebilirler. Bu modifikasyonlar, antikor performansini daha da iyilestirmek ve maksimize etmek için yapilirlar. Genelde, hümanize antikor, hiperdegisken bölgelerin hepsinin ya da hemen hemen hepsinin bir insan-disi immünoglobulininkine tekabül ettigi ve FR bölgelerinin hepsinin ya da hemen hemen hepsinin bir insan immünoglobulin sekansinin bölgeleri oldugu en az bir ve normalde iki degisken domainin hemen hemen hepsini kapsar. Hümanize antikor, istege bagli olarak, bir immünoglobulinin, normalde bir insan immünoglobulininin sabit bölgesinin (FC) en azindan bir kisinini da içerir. Ilave detayli bilgi için bakiniz: Jones et al., Nature 321z522-525 (1986); Riechmann et al., Nature 332z323-329 (1988) ve Presta, Curr. Op. Struct. Biol. 2:593- 596 (1992)."Tek zincirli FV" ya da "st" antikor fragmanlari, tek bir polipeptid zincirinde bulunan VH ve VL antikor domainleri içerirler. Genellikle, FV polipeptidi, ek olarak, VH ve VL domainleri arasinda sFV°nin anti jen baglanmasi için istenen yapiyi olusturmasini saglayan bir polipeptid baglayici da içerir. sFV hakkinda genel bilgi için bakiniz: Pluckthun in The Pharmacology of Monoclonal Antibodies, vol. 113, Rosenburg and Moore eds., Springer-Verlag, New York, pp. 269-315 (1994)."Diabody°ler" terimi, iki anti jen baglanma yeri bulunan ve her biriayni polipeptid zincirinde (VH ve VL) bir hafif zincir degisken20domaiiiine (VL) bagli halde bir agir zincir degisken domaini (VH) içeren küçük antikor fragmanlarina atif yapar. Ayni zincirde yer alan iki domain arasinda eslesme olmasini saglamak için çok kisa olan bir baglayici kullanilarak, domainler, baska bir zincirin tamamlayici domainleriyle eslesmeye ve iki adet anti jen baglanma yeri olusturmaya zorlanirlar. Diabody"ler, Ömegin EP 404.097, WO 93/ 11161 ve "Hollinger et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 90:6444- 6448 (1993)" referanslarinda daha ayrintili anlatilmaktadir.Bu patent basvurusu boyunca kullanilan "lineer antikorlar" ifadesi, " Zapata et al. Protein Eng. 8(10)21057-1062 (1995)" eserinde tanimlanan antikorlara atif yapar. Kisaca deginmek gerekirse, bu antikorlar, bir anti jen baglanma bölgesi çifti olusturan bir ardisik dizili Fd segmenti çifti (VH --CH --V m "CHI) içerirler. Lineer aiitikorlar,bispesifik ya da monospesifik olabilirler.Formüle edilen antikor tercihen temelde saftir ve arzu edildigi gibi temelde homojendir (yani, kontamine edici proteinler ve benzeri içermez). "Temelde saf" antikor, bilesimin toplam agirligi bazinda agirlik itibariyle en az yaklasik %90 oraninda, tercihen agirlik itibariyle en az yaklasik %95 oraninda antikor içeren bir bilesim anlamina gelir. "Temelde homojen" antikor, bilesimin toplam agirligi bazinda agirlik itibariyle en az yaklasik %99 oraninda antikor içerenbir bilesim anlamina gelir."Tedavi" sözcügü, hem terap'otik tedaviye hem de profilaktik ya da koruyucu tedbirlere atif yapar. Tedaviye ihtiyaci olan kisiler arasinda,halihazirda hastaliktan muztarip olanlarin yani sira, hastaligin21önlenmesi gereken kisiler de bulunur.Tedavi edilmesi amaçlanan "memeli", insanlar, evcil hayvanlar ve çiftlik hayvanlari ve hayvanat bahçesi, spor ya da pet hayvanlari, örnegin köpekler, atlar, kediler ve inekler de dahil memeli olaraksiniflandirilan her türlü hayvana isaret eder."Stres kosulu" terimi, bir protein için kimyasal ve fiziksel açidan istenmeyen nitelikte olan ve kabul edilemez protein stabilitesine neden olabilen bir ortama (örnegin, termal stres, kesme stresi, kimyasal stres)atif yapar.Boyut Dislama Kromatografisi, partiküllerin boyutlarina veyahidrodinainik haciinlerine göre ayrildigi bir kromatografik yöntemdir.Dinamik Isik Saçilimi, proteinin saçtigi isigin zamana bagimliligini ölçen bir yöntemdir. Genellikle, bu zamana bagimlilik islemdengeçirilerek bir molekülün hidrodinamik yariçapi elde edilir."DSC", diferansiyel taramali kalorimetreye atif yapar: DSC elde etme parametreleri, bunlarla sinirli kalmaksizin, asagida açiklananlar olabilir: 1 mg/ml protein, beher saatte 70°C tarama hizi ve 15 dakika ön-bekleme süresiyle 5°C ilâ 80°C sicaklik için tarama. Ilk önce bir tampon-tampon taramasi sonucu elde edilebilir ve ham verilerden çikartilabilir. Tampon için veriler düzeltilebilir ve protein konsantrasyonu için normalize edilebilir ve ardindan, grafik halinegetirilebilir. Agregasyon, tabançizgisi düzeltmesini önleyebilir.22Asagida verilen örnekler, bu bulusu ilaveten açiklama ve örneklendirme amacina yöiieliktir. Orneklerin bu bulusun kapsamini sinirlandirinasi hedefleiimez ve bu örnekler, bulusun daha iyianlasilmasina saglarlar.ÖRNEKLERBu bulus, bu bulusu açiklamak amaciyla sunulan asagidaki örneklerle ilaveten örneklendirilir. Bu örneklerin bulusun kapsamini sinirlandirmasi hedeflenmedigi gibi, sinirlandirdigi da düsünülemez. Asagida verilen Örnekler, standart teknikler kullanilarak gerçeklestirilir ve aksi detayli tarif edilmedikçe, bu standart teknikler, sektörde bilgi ve beceri sahibi kisilerce iyi bilinen ve onlarin rutinkullandiklari tekniklerdir.Ornek 1.1: Platform form'i'ilasyon tamponunun hazirlanmasiBu bulusun bir yapisinda, 4 litre asetat tainponu hazirlandi. Bulusun bu yapisinda, nihai tampon, 50 mM sodyum asetat, 0,05 mM EDTA, 51 mM NaCl, %1,0 Arginin, %0,02 Polisorbat 80, pH 5,5"ten olusmaktaydi. Tampon, sodyum asetat trihidrat, edetat disodyum (EDTA), polisorbat 80 ve L-arginin serbest bazinm 3,5L deiyonize su içine çözündürülmesi suretiyle hazirlandi. 3N HC] kullanilarak pH degeri 5,5 "e ayarlandiktan sonra, hacim 4,0L seviyesine getirildi ve tampon bir 0,45 um filtre ünitesi kullanilarak filtrelendi. Daha sonra, tampon, kullanilana kadar 2-8°C sicaklikta saklanabilir. Bu patent basvurusunda açiklanan formülasyon yüzdesi ("%"), "hacim itibariyleyüzdeye (%)" atif yapar.23Ornek 2.1: Bir Platform formülasyon tamponu içinde ofatumumabun hazirlanmasiBu bulusun bir yapisinda, ofatumumab, bir Platform formülasyonuna (50 mM Sodyum Asetat, 51 mM NaCl, 0,05mM EDTA, %0,02 Polisorbat 80 ve %1,0 Arginin (serbest-baz)) diafiltrelendi ve stabilite için konsantre edildi. Ofatumumab, üç inembranli, laboratuvar ölçekli bir teget akis sistemi kullanilarak platform formülasyonu içinde diafiltrelendi. Platform tamponuna diafiltrasyon isleminden sonra, ofatumumab, 179 mg/mL maksimum konsantrasyona kadar konsantre edildi. Prosesin tümünü tamamlamak yaklasik üç is günü sürdü ve verim %96,l"di. 179 mg/mL konsantrasyonun bir kisini, platform formülasyon tamponuyla seyreltildi ve böylece, ~20 - 179 mg/mLkonsantrasyon araligi test edilebildi.Ornek 3.1: Genel Görünüs'ûn (GA) Dogrudan Karsilastirmasi Için Standart Formülasyonda ve Platform Formülasyonundaofatumumabin hazirlanmasiBir anti-CD20 aiitikoru (ofatumumab), 12 haftalik bir zaman periyodu boyunca dogrudan karsilastirmada genel görünüs testleri için ve çalkalama deneyleri için 20 mg/mL konsantrasyonda standart formülasyonda ve platform (bu bulusun bir yapisi) formülasyonunda hazirlandi. Standart formülasyonda ve platform formülasyonunda anti- CD20 antikoru, bir düsük protein baglaninali 0,2 um membran filtre kullanilarak filtrelendi. Filtrasyondan sonra her bir formülasyon, 3 inL konsantrasyonda 5 cc flakonlara dolduruldu; flakonlar tipalandi ve temiz çekerocak altinda steril teknik kullanilarak sikistirmali kapaklakapatildi. Her formülasyonun iki flakonu, sicaklik kontrollü bir24çalkalayiciya konuldu. Flakonlar, 55°C sicaklikta 325 devir/dakika hizda çalkalandi. lsiyla çalkalama islemi esnasinda, genel görünüs, 42 saatlik zaman periyodu boyunca periyodik olarak Ornek 3.2"de tarif edildigi gibi gözlemlendi. Sekil 1 ve Sekil 2, 18,5 saat süreyle isiyla çalkalaina isleminden sonra sirasiyla standart formülasyonu ve platform formülasyonunu gösterir. Çalkalama çalismasinin genel görünüs sonuçlari, standart formülasyonun 55°C sicakliklarda çalkalama islemine tâbi tutuldugunda zaman içerisinde platformformülasyonuna kiyasla daha hizli partiküller olusturacagini gösterdi.Ornek 3.2: GA, 18,5 saat Çalkalama çalismasi-Genel Görünüs, ofatumumab, 20 ve 100 mg/mLAnti-CDZO mab çalkalama çalismasi numunelerinin genel görünüsü (GA) asagidaki tabloda sunulmaktadir. GA çalismasi, bir IgG antikor çözeltisi için kullanilabilecek olan ve renk, berraklik ve görünür partikülat maddeyi tarif eden bir genel yöntem kullanilarakgerçeklestirildi.Çalkalama Zaman Noktasi Görünüs BaslangiçStandart Berrak, Renksiz, 1-2 Partikül mevcutPlatform Berrak, Renksiz, Partikülsüz 18,5 saat Standart Berrak, Renksiz, Birkaç büyük partikül mevcutPlatform Berrak, Renksiz, Partikülsüz 42 saat Standart Bulanik, Renksiz, Birkaç büyük partikül mevcutPlatform Hafif bulanik, renksiz, partikülsüz 25Ornek 4: Standart tamponda ve platform tamponu içinde ofatumumab çözeltisinin termal stabilitesini DiferansiyelTaramali Kalorimetriyle (DSC) tayin etme.DSC yöntemiyle testi uygun sekilde tamamlamak amaciyla, tek basina ve proteinle birlikte tamponlarin tarama sonuçlari elde edildi. Standart formülasyonda ve platform formülasyonunda protein, Ornek 4.1"de tarif edildigi gibi 1 mg/mL seviyesine kadar seyreltildi. DSC parametreleri her taramadan önce 15 dakika dengeleine süresiyle beher saatte 70°C tarama hizinda 5°C - 80°C araliginda taramaya ayarlanarak veriler elde edildi. DSC numune hücresinin hacmi ~ 0,5 mL'dir. Tampon ve protein taramalari elde edildikten sonra, tampon taramalari protein taramasindan çikartilabilir. Numunelerde protein konsantrasyonu elde edilerek her taramada konsantrasyon için düzeltme yapildi (Bakiniz Ornek 4.2). Her formülasyonda ofatumumab için Tum °C, kat açilma baslangici, Tm, OC, denatürasyon sicakligi (geçis maksimumunda) ve Tl/z, °C, yari uzunlukta pik genisligi (tersiyer yapida degisiklikleri ve geçislerin pekisimini yansitir) degerleri elde edildi (bakiniz Ornek 4.3). Fiili DSC taramalari Sekil 3,te görülebilir. DSC sonuçlari temelinde, standart formülasyonda ya da platform formülasyonunda ofatumumab benzer DSC profillerine sahipti ve bundan dolayi, bunlarin benzer termalstabiliteye sahip olnialari beklenir.Ornek 4.1: Ofatumumab pH çalismasinin biyofizikselkarakterizasyonu için numune hazirlama: 26i. SEYRELTILER pH Tampon Baslangiç DSC için 1 mg/ml konsantrasyonu seviyesine seyreltme mg/ ml ml numune ml tampon6,5 Standart 30 inM sitrat, lOOmM NaCl 17 0,1 1,6F ormülasyon5,5 Platform 50 mM asetat, 51 inM NaCl, 0,05 20 0,075 1,43Formülasyonu inM EDTA, %1 Arg, 0,02 Tween-80 Ornek 4.2: A280 OLÇUMLERI pH Buffer Baslangiç 0,5 mg/ml seyreltinin konsantrasyonu 'ölçülen konsantrasyonu mg/ ml mg/ml mM*6,5 Standart 30 inM sitrat, 100 mM NaCl 17 0,517 0,00345F ormülasyon5,5 Platform 50 inM asetat, 51 inM NaCl, 0,05 20 0,444 0,00296Forinülasyonu inM EDTA, %1 Arg, %0,02 Tween-80 * DSC taramalariiii normalize etmek için kullanilir. Bir numune hazirlayiniz; tekabül eden tamponla blank hazirlayiniz ve 3 defa okuyuz. 1 cm küvet kullaniniz. Sönüm katsayisina (1,49) bölnieden önce A320 absorbansini çikartiniz. 5 Ornek 4.3: DSC sonuçlari Numune pH Tampon Tu", Tm, Ti/z, Notlar °C °C °C Standart 6,5 30 mM sitrat, 100 inM 62 68,8 2,9* Formülasyon NaCl Platform 5,5 50 mM asetat, 51 mM 60 68,4 3,2* Standart Formülasyonu NaCl, 0,05 inM EDTA, Forinülasyona %1 Arg, %0,02 Tween-80 benzer * Tuz degerleri manüel olarak tayin edildi. Agregasyonun eksotermik katkisi tabançizgisini saptirir ve böylece, bu degerler artifisyel olarak küçük olabilir. 27Bu bulusa konu olan anti-CD20 antikor formülasyonu, bir tüinorijenik bozuklugu, örnegin B hücreli lenfoma, örnegin NHL de dahil CD20 eksprese eden tümör hücrelerinin varligiyla karakterize edilen bir bozuklugu bulunan bir denegi tedavi etmek için kullanilabilir. Tedavi edilebilecek ve/veya önlenebilecek tüinörijenik hastaliklara örnek olarak prekürsör B hücreli lenfoblastik lösemi/lenfoma ve matür B hücreli neoplazmlar, örnegin B hücreli kronik lenfositik lösemi (CLL)/küçük lenfositik lenfoma (SLL), B hücreli prolenfositik lösemi, lenfoplazmasitik lenfoma, maiitle hücreli lenfoma (MCL), düsük dereceli, ara dereceli ve yüksek dereceli FL dahil foliküler lenfoma (FL), kutanöz folikül merkezli lenfoma, marjinal zon B hücreli lenfoma (MALT tipi, nodal ve splenik tip), saçakli hücreli lösemi, diftüz büyük B hücreli lenfoma, Burkitt lenfomasi, plazmasitom, plazina hücreli miyelom, transplant-sonrasi lenfoproliferatif bozukluk, Waldenstrom makroglobulinemi ve anaplastik büyük hücreli lenfoma (ALCL) da dahil olmak üzere B hücreli lenfoma, örnegin NHL gösterilebilir.B hücreli non-Hodgkin lenfomalarin ilave örnekleri lenfomatoid granülomatoz, priiner etüzyon lenfomasi, intravasküler büyük B hücreli lenfoma, mediastinal büyük B hücreli lenfoma, agir zincir hastaliklari (.gamma., .mu. ve alfa. hastaliklari dahil), immünosupresif ajanlarla tedavinin indükledigi lenfomalar, örneginsiklosporin-indüklü lenfoma ve inetotreksat-indüklü lenfomadir.Bu bulusa konu olan bir anti-CD20 antikor formülasyonu, Hodgkinlenfomasini tedavi etmek için kullanilabilir.CD20 eksprese eden hücrelerin rol oynadigi ve bu bulusa konu olan28bir anti-CDZO antikor formülasyonuyla tedavi edilecek ve/Veya önlenebilecek olan immün bozukluklara (hastaliklar) 'Örnek olarak otoimmün bozukluklar, örnegin psoriyazis, psoriatik artrit, dermatit, sistemik skleroderma ve skleroz, inflamatuar bagirsak hastaligi (IBD), Crohn hastaligi, ülseratif kolit, respiratuar distres sendromu, inenenjit, ensefalit, üveit, glomer'ülonefrit, egzama, astim, ateroskleroz, lökosit adezyon defekti, multipl skleroz, Raynaud sendromu, Sjogren sendromu, juvenil baslangiçli diyabet, Reiter hastaligi, Behçet hastaligi, immün kompleks nefriti, IgA nefropatisi, IgM polinöropatileri, immün-aracili trombositopeniler, örnegin akut idiyopatik trombositopenik purpura ve kronik idiyopatik trombositopenik purpura, hemolitik anemi, myasthenia gravis, lupus nefriti, sistemik lupus eritematozus, romatoid artrit (RA), atopik dermatit, pemfigus, Graves hastaligi, Hashimoto tiroiditi, Wegener granülomatozu, Omenn sendromu, kronik böbrek yetmezligi, akut enfeksiyöz mononükleoz, HIV ve herpes Virüs iliskili hastaliklar gösterilebilir. Ilave örnekler arasinda siddetli akut reSpiratuar distres sendromu ve koriyoretinit vardir. Ek olarak, baska hastaliklar ve bozukluklar arasinda, Epstein-Barr Virüsü (EBV) gibi virüsle B hücrelerinin enfeksiyonunun sebep oldugu, ya da aracilik ettigihastaliklar ve bozukluklar vardir.Otoantikorlar ve/Veya asiri B lenfosit aktivitesinin belirgin oldugu ve bu bulusa konu olan anti-CDZO antikor formülasyonuyla tedavi edilecek ve/Veya önlenebilecek olan inflamatuar, immün ve/Veya otoimmün bozukluklarin ilave ömekleri arasinda asagida sayilanlarvardir:29vaskülitler ve baska damar hastaliklari, örnegin mikroskopik polianjeit, Churg-Strauss sendromu ve baska ANCA-iliskili vaskülitler, poliarteritis nodoza, esansiyel kriyoglobulinemik vaskülit, kutanöz lökositoklastik vaskülit, Kawasaki hastaligi, Takayasu arteriti, dev hücreli arterit, Henoch-Schonlein purpura, primer veya izole serebral anjeit, eritema nodozum, troinboanjitis obliterans, trombotik trombositopenik purpura (hemolitik üremik sendrom dahil) ve kutan'oz l'okositoklastik vaskülit (ömegin, hepatit B, hepatit C, Waldenstrom makroglobulinenii, B-hücreli neoplaziler, romatoid artrit, S jogren sendromu ya da sistemic lupus eritematozusa sekonder) dahil sekonder vaskülitler; ilave örnekler olarak eritema nodozum, alerjik vaskülit, paniki'ilit, Weber-Christian hastaligi, purpura hiperglobulinemi ve Buerger hastaligi; cilt hastaliklari, örnegin kontakt dermatit, lineer IgA dermatozu, vitiligo, pyoderma gangrenosum, epiderinolizis bülloza akiza, pemfigus vulgaris (sikatrisyel pemfigoid ve büllöz pemfigoid dahil), alopesia areata (alopesia üniversalis ve alopesia totalis dahil), dermatitis herpetiformis, erythema multiforme ve kronik otoimmün ürtiker (anjiyonörotik ödem ve ürtikaryal vaskülit dahil); immün-iliskili sitopeniler, örnegin otoimmün nötropeni ve saf kirinizi hücre aplazisi; bag doku bozukluklari, örnegin CNS lupusu, diskoid lupus eritematozusu, CREST sendromu, karisik bag doku hastaligi, polimiyozit/dermatomiyozit, inklüzyon cisimcigi miyoziti, sekonder amiloidoz, kriyoglobulinemi tip I ve tip II, fibromiyalji, fosfolipid antikor sendromu, sekonder hemofili, nükseden polikondrit, sarkoidoz,kati insan sendromu ve romatizma atesi; bir ilave örnek olarak30eozinofil fasiiti; artritidler, örnegin ankilozan spondilit, juvenil kronik artrit, yetiskin Still hastaligi ve SAPHO sendromu; ilave örnekler olarak sakroileit, reaktif artrit, Still hastaligi ve gut; hematoloji bozukluklar, örnegin aplastik anemi, priiner hemolitik anemi (soguk aglutinin sendromu dahil), CLL veya sistemik lupus eritematozusa sekonder hemolitik anemi; POEMS sendromu, pernisiyöz anemi ve Waldeinstrom purpura hiperglobulinemi; ilave örnekler olarak agranülositoz, otoiminün nötropeni, Franklin hastaligi, Seligmann hastaligi, .mu-zincir hastaligi, timom ve lenfomalara sekonder paraneoplastik sendrom ve faktör VIII inhibitör olusumu; endokrinopatiler, örnegin poliendokrinopati ve Addison hastaligi; ilave örnekler olarak otoimmün hipoglisemi, otoimmün hipotiroidizm, otoimmün insülin sendromu, de Quervain tiroiditi ve insülin reseptör antikoru-aracili insülin direnci; hepato-gastrointestinal bozukluklar, örnegin çölyak hastaligi, Whipple hastaligi, primer biliyer siroz, kronik aktif hepatit ve primer sklerozan kolanjiit; bir ilave örnek olarak otoimmün gastrit; nefropatiler, örnegin hizli progresif glomerülonefrit, post-streptokokal nefrit, Goodpasture sendromu, inembranöz glomerülonefrit ve kriyoglobulinemik nefrit; bir ilave örnek olarak minimal degisiklik hastaligi; nörolojik bozukluklar, örnegin otoiinmün nöropatiler, mononöritis multipleks, Lambert-Eaton iniyastenik sendromu, Sydenham koresi, tabes dorsalis ve Guillain-Barr sendromu; ilave örnekler olarak miyelopati/tropikal spastik paraparezisi, myastenia graVis, akut inflamatuar deiniyelinizan polinöropative kronik inflamatuar demiyelinizan polinöropati; kardiyak ve31pulmoner bozukluklar, örnegin kronik obstrüktif akciger hastaligi (COPD), fibrozis olusturan alveolit, bronsiyolitis obliterans, alerjik aspergilloz, kistik fibroz, Loffler sendromu, miyokardit ve perikardit; ilave örnekler olarak hipersensitivite pnömoniti ve akciger kanserine sekonder paraneoplastik sendrom; alerjik bozukluklar, örnegin bronsiyal astim ve hiper- IgE sendromu; bir ilave örnek olarak amaurosis fugax; oftalinolojik bozukluklar, örnegin idiy0patik koriyoretinit; enfeksiyöz hastaliklar, örnegin parvovirüs B enfeksiyonu (eldiven ve çorap sendromu) ve jinekolojik-obstetrik bozukluklar, örnegin tekrarlayan düsük, tekrarlayan fetüs kaybi ve intrauterin büyüme geriligi; bir ilave örnek olarak jinekolojik neoplazmlara sekonder paraneoplastik sendrom; erkek üreme bozukluklari, örnegin testiküler neoplazmlara sekonder paraneoplastik sendrom ve transplantasyon-kaynakli bozukluklar, örnegin allogreft ve ksenogreft rejeksiyonu vegraft-versus-host hastaligi.CD20 eksprese eden hücrelerin rol oynadigi hastalik; ülseratif kolit, Crohn hastaligi, juvenil baslangiçli diyabet, multipl skleroz, örnegin akut idiyopatik trombositopenik purpura ve kronik idiyopatik trombositopenik purpura gibi immün-aracili trombositopeniler, hemolitik anemi (otoiminün heinolitik anemi dahil), myasthenia gravis, sistemik skleroz ve pemfigus vulgaris arasindan seçilen birintlamatuar, immün ve/veya otoimmün bozukluktur.32TARIFNAME IÇERISINDE ATIF YAPILAN REFERANSLARBasvuru sahibi tarafindan atif yapilan referanslara iliskin bu liste, yalnizca okuyucunun yardimi içindir ve Avrupa Patent Belgesinin bir kismini olusturmaz. Her ne kadar referanslarin derlenmesine büyükönem verilmis olsa da, hatalar veya eksiklikler engellenememektedirve EPO bu baglamda hiçbir sorumluluk kabul etmemektedir.Tarifname içerisinde atifta bulunulan patent dökümanlari:. WO 2004035607 A [0007] [0008] [00131 [00141- WO 2005103081 A [0008] [0014] - wo 200368821 A [0008] [00141 . wo 2004103404 A [0008] i0014i . us 20030118592 A [0008] [00141. US 20060246004 A1 [0012] . us 4816567 A [0048]. EP 404097 A [0051]- wo 9311161 A [0051]Tarifnamede belirtilen patentlestirilmemis literatür:- CLELAND et al. Critical Reviews in Therapeutic Drug Carrier Systems, 1993, vol. 10 (4), 307-377 [0002]o VALENTINE et al. J. Biol. Chein., 1989, vol. 264 (19), 11282-11287 [0003] o ElNFlELD et al. EMBO J., 1988, vol. 7 (3), 711-717 [0003]- ANDERSON et al. Blood, 1984, vol. 63 (6), 1424-1433 [0003]o TEDDER et al. J. Immunol., 1985, vol. 135 (2), 973-979 [0003]o KOMAROMY et al. NAR, 1983, vol. 11, 6775-6785 [0004] [0009]° TEDDER et al. Eur.J. Iinmunol., 1986, vol. 16, 881-887 [0005] [0010]° TEDDER et al. 1. Cell. Biochem., 1990, vol. 14D, 195 [0005] [0010]- TEELING et al. Blood, 2004, vol. 104, 1793 [0007] [0013]o TEELING et al. J. Immunology, 2007, vol. 177, 362-371 [0007] [0013]- Peptide and Protein Drug Delivery. Marcel Dekker, Inc, 1991, 247-301 id="p-38" [0038]' J ONES, A. Adv. Drug Delivery Rev., 1993, vol. 10, 29-90 [0038]° KOHLER et al. Nature, 1975, vol. 256, 495 [0048]9 CLACKSON et al. Nature, 1991, vol. 352, 624-626 [0048]0 MARKS et al. J. Mol. Biol., 1991, vol. 222, 581-597 [0048]' JONES et al. Nature, 1986, vol. 321, 522-525 [0049]° RIECHMANN et al. Nature, 1988, vol. 332, 323-329 [0049]- PRESTA. Curr. Op. Struct. Biol., 1992, vol. 2, 593-596 [0049]' PLUCKTHUN. The Pharmacology of Monoclonal Antibodies. Springer-Verlag, 1994, vol. 113, 269-315 [0050]° HOLLINGER et al. Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 1993, vol. 90, 6444-6448 id="p-51" [0051]- ZAPATA et al. Protein Eng., 1995, vol. 8 (10), 1057-1062 [0052] TR TR