TR201808820T4 - Nükleer görüntüleme ve radyoterapi için şelatörlerin etkili sentezi: bileşimler ve uygulamalar. - Google Patents

Abstract

Şelatör-hedefleme ligandı konjugatlarının yeni sentez yöntemleri, söz konusu konjugatları içeren bileşimler ve söz konusu konjugatların terapötik ve tanı uygulamaları ele alınmaktadır. Bileşimler arasında opsiyonel olarak bir veya birden fazla metal iyonlarına şelatlanan şelatör-hedefleme ligandı konjugatları bulunur. Bu bileşimleri yüksek saflıkta sentezleme yöntemleri de verilmektedir. Ayrıca, bu yeni bileşimleri kullanan bir denekte hastalığı görüntüleme, tedavi ve teşhis etme yöntemleri, örneğin denekteki tümörü görüntüleme yöntemleri ve miyokardiyal iskeminin teşhis yöntemleri de açıklanmaktadır.

Description

TARIFNAME NÜKLEER GÖRÜNTÜLEME VE RADYOTERAPI içiN SELATÖRLERIN ETKILI SENTEZI: BILESIMLER VE UYGULAMALAR Bulusun arka plani 1. Bulusun alani Bu bulus, genel olarak, kimyasal sentez, görüntüleme, radyoterapi, etiketleme, kemoterapi, tibbi tedavi, kardiyovasküler hastalik tedavisi ve kanser tedavisi alanlari ile ilgilidir. Daha özel olarak bulus, selatör hedefleme Iigandi konjugatlarinin sentezlenmesine iliskin yeni yöntemler ile ilgilidir. Burada, sulu yöntemlerle hazirlanan selatör hedefleme konjugatlarina kiyasla yüksek saflikta selatör hedefleme Iigandlari saglayan organik sentez yöntemleri sunulmaktadir. Bu konjugatlari kullanarak bir bölgeyi görüntüleme yöntemlerinin yani sira, bu konjugatlari hazirlamak için gereken kitler de burada ortaya konmaktadir. Yukarida bahsedilen konjugatlari içeren bilesimleri kullanarak deneklerdeki hastaliklari (ör. kanserler, kardiyovasküler hastaliklar, enfeksiyonlar ve enflamasyon) teshis ve tedavi etme yöntemleri de açiklanmaktadir. 2. Ilgili teknigin tarifi Biyomedikal görüntüleme, sadece deneklerde hastalik teshisine yardimci olmak için degil, ayni zamanda vücudun normal yapisini ve islevini daha iyi anlamak için hekimler ve arastirmacilar tarafindan yaygin olarak kullanilan çesitli yöntemler içermektedir.

Görüntüleme yöntemlerinin örnekleri arasinda PET, SPECT, gama kamera ile görüntüleme, BT, MR, ultrason, ikili görüntüleme ve optik görüntüleme bulunmaktadir.

Birçok durumda, bir denekteki belirli bir bölgenin optimal görüntülenmesi, denege belirli bir ajanin uygulanmasini gerektirir. Teknesyum (99mTc), demir, gadolinyum, renyum, manganez, kobalt, indiyum, platin, bakir, galyum veya rodyum gibi inorganik metallerin birçok görüntüleme ajaninin degerli bir bileseni oldugu kanitlanmistir.

Moleküllerin inorganik metallerle etiketlenmesi, metalin belirli bilesiklerin örnegin oksijen, kükürt ve nitrojen atomlarinin kombinasyonlarina selatlanmasiyla saglanabilir.

Kükürt kolloid, dietilentriaminpentaasetik asit (DTPA, 04), etilendiamintetraasetik asit (EDTA, 04) ve gibi selatörler bu amaçla kullanilmistir. Bununla birlikte, bu sekilde selatlanan inorganik metaller, vücuttan hizla atilmalari nedeniyle, görüntülemedeki kullanisliliklari sinirlidir.

Görüntüleme ajanlari için tercih edilen radyoaktif etiket; avantajli yari ömrü (6 saat), üretim kolayligi, genis çapta ulasilabilirlik, düsük enerji (140 keV) ve düsük maliyet nedeniyle teknesyumdur (99mTc). 99mTc gibi izotoplarin yari ömrünün daha uzun olmasi, radyoaktif isaretli amino asitlerin yerinde siklotron veya özel bir radyokimya laboratuvari olmadan hastanelere gönderilmesini kolaylastirir. Bununla birlikte, görüntüleme amaciyla ilaçlara 99'"Tc eklemek genellikle zordur. 188Re, dozimetrik ve görüntülemeye yönelik amaçlarla yüksek (3 enerjisi (2,1 MeV), kisa fiziksel yari ömrü (16,9 saat) ve 155 keV gama isini emisyonundan dolayi görüntüleme ve potansiyel terapötik kullanim için iyi özelliklere sahiptir. 188Re'nin fiziksel yari ömrünün kisa olmasi, uzun ömürlü radyonüklitlere kiyasla daha yüksek dozlari mümkün kilar. Ayrica, kisa yari ömür, radyoaktif atik tasima ve depolama sorunlarini azaltir. Özellikle 18BRe, 99"'Tc jeneratöre benzer bir dahili jeneratör sisteminden temin edilebilir. 188Re, onu klinik kullanim için çok uygun hale getiren bir yayar; bu yüzden, 99mTc görüntülerine dayali olarak olusturulan dozimetrinin mevcut standart radyoizotop Y-90 kullanilarak üretilenlerden daha dogru olmasi beklenir.

Pozitron emisyon tomografisi (PET) kullanarak görüntüleme söz konusu oldugunda PET radyosentezi hizli olmalidir, zira radyoizotop uzun süreli kimyasal sentez sirasinda bozunacak ve radyosentez sirasinda radyasyona maruz kalma riski artabilecektir.

Siklotron bazli izleyiciler, yerel siklotron erisilebilirligi ve yüksek maliyeti nedeniyle sinirlidir. Gida ve Ilaç Dairesi (FDA), merkezi ticari tesislerde iyi kontrol edilen kosullar altinda radyofarmasötik üretimine izin vermekte ve bunlari uygulandiklari yerel kliniklere dagitmaktadir. Benzer sekilde, iyi kontrol edilen bir tesiste üretilebilen radyonüklit jeneratör sistemleri, geçerli FDA prosedürleri bakimindan benimsenmis olup uzun ve basarili bir klinik uygulama geçmisine sahiptir. Jeneratör, nispeten uzun ömürlü bir ana izotopun görüntüleme için kullanilan kisa ömürlü bir kiz izotopa bozundugu bir ana-kiz nüklit çifti kullanir. Siklotron tesisinde üretilen ana izotop bir klinik tesise gönderilebilir ve kiz izotopu buradan klinik kullanim için yerinde ayristirilabilir. 68Ga yüksek bir pozitron yayma miktarina (toplam bozunumunun %89'u) sahiptir, dolayisiyla bu radyonüklitle ilgili temel husus, pozitron araligina (enerjisine), imha edici fotonlarin non-kolineeritesine, temel özelliklerine, dedektörün büyüklügüne ve geometrisine ve rekonstrüksiyon algoritmasi seçimine bagli olan mekansal çözünürlügüdür. Dedektör tasariminin özellikleri, fiziksel özellikler ve bunlarin sistemin mekansal çözünürlügü üzerindeki etkileri, pek çok yazar tarafindan kapsamli bir sekilde ele alinmis ve sürekli bir donanim optimizasyonu saglanmistir. 68Ga'nin maksimum mean = 0,25 MeV) daha yüksek olsa da mekansal çözünürlük üzerinde Monte Carlo analizi kullanilarak yapilan bir çalisma, PET dedektörlerinin 3 mm'lik uzaysal çözünürlügü varsayildiginda, 18F'nin ve 68Ga'nin konvansiyonel yari-doruk genisliginin (FWHM) yumusak dokuda ayirt edilemez (3,01 mm ve 3,09 mm) oldugunu göstermistir. Bu, mevcut klinik tarayicilarin 5 ila 7 mm düzeyindeki mekansal çözünürlügü ile 68Ga bazli izleyicilerin kullanildigi görüntüleme kalitesinin 18F bazli ajanlarinki kadar iyi olabilecegine isaret etmektedir ve bu durum, baskalarini potansiyel 68Ga bazli görüntüleme ajanlarini arastirmaya tesvik etmistir. Ayrica, 68Ga bazli PET ajanlari önemli bir ticari potansiyele sahiptir, zira izotop sahada 6**Ge jeneratörden (275 günlük yari ömür) üretilebilir ve 1**F veya 13N gibi siklotron bazli PET izotoplarina uygun bir alternatif islevi görebilir.

Görüntüleme ajanlarinin sentetik preparatlari söz konusu oldugunda, bu tür ajanlar sulu (islak) kosullarda hazirlanirken ajanlarin saflastirilmasi bazen sorun teskil edebilir. 8qu kosullarda saflastirma, örnegin, boyut dislama kromatografisi veya belirli molekül agirligi ayirma sinirlarina sahip membranlar ile diyaliz kullanilarak saglanabilir; örnegin, diyaliz, 1000 g/mol veya daha yüksek molekül agirlikli türleri ayristirmada tipik olarak en etkilisidir. Bununla birlikte, bu saflastirma yöntemi genellikle sadece istenen ajani degil, ayni zamanda zardan geçebilen diger türleri de izole eder. Safsizliklarin görüntüleme ajanlarina dahil edilmesi, görüntüleme ajanlarinin gelecekteki uygulamalarinda, özellikle de görüntülemeye yönelik ve/veya terapötik kullanimlarda sorun yaratabilir. Örnegin, radyonüklit içeren bir görüntüleme ajani (“dogru" görüntüleme ajani) saf oldugu düsünülürken aslinda yine radyonüklit içeren safsizliklar barindiriyorsa safsizliklarin varligi nedeniyle “dogru" görüntüleme ajaninin uygun sekilde ölçülmesi veya saptanmasi engellenebilir veya yanlis degerlendirilebilir.

Organik bilesiklerin organik ortamlarda sentezlenmesine yönelik olarak organik çözücülere ve koruyucu gruplarin kullanimina basvuran yöntemler, tipik olarak, bilesiklerin saflastirilmasinda sulu saflastirmalara kiyasla iyilestirmeler sunar. Koruyucu gruplarin kurulumu, korunacak sentez sirasinda çesitli fonksiyonel ara ürün gruplarina izin verir ve bu ara ürünlerin saflastirilmasini kolaylastirir. Organik çözücülerin kullanildigi çesitli saflastirma yöntemleri, görüntüleme ajanlari gibi istenen bilesiklerin çok az safsizlik ile ayrismasini ve izole edilmesini mümkün kilar. Ayrica, molekül agirliklari 1000 g/molün altinda olan türler genellikle organik kimya saflastirma yöntemleri kullanilarak kolayca saflastirilabilir. Sulu saflastirmaya kiyasla organik sentez ve saflastirmanin sundugu avantajlar göz önüne alindiginda, görüntüleme ajanlarini organik olarak sentezleme ve saflastirma yöntemleri muhtemelen sulu saflastirma yoluyla elde edilenlerden daha yüksek saflikta ajanlari ortaya çikaracaktir.

Bugüne kadar, bazi görüntüleme ajanlari sadece sulu yöntemlerle hazirlanmistir. Bu ajanlarda bulunan safsizliklar, görüntülemeye yönelik ve/veya terapötik ajanlar olarak kullanilmaktan uzaklasabilmektedir. Dolayisiyla, bu ve diger ajanlarin daha yüksek saflikta ajanlarin elde edilmesine imkan verecek sekilde sentetik organik teknikler kullanilarak hazirlanmasina ihtiyaç vardir.

Bulusun özeti Mevcut bulus sahipleri, belirli düzenlemelerde bir selatörün ve bir hedefleme Iigandinin (hedefleme parçasi olarak da adlandirilir) konjugatlari olan ajanlari sentezlemenin yeni yöntemlerini tanimlamistir. Bu tür ajanlar, örnegin, görüntüleme, teshis ve/veya tedavi amaçli kullanilabilir. Gerek organik (çözücü) gerekse islak (sulu) sentez ve saflastirma yöntemleri tarif edilmis ve organik sentez ve saflastirma yöntemlerinin islak kimya ile hazirlanmis / saflastirilmis olanlardan daha yüksek saflikta bilesikler ile sonuçlandigi gösterilmistir. Yüksek safliktaki bilesikler, örnegin, klinik uygulama için daha iyi adaylardir.

Ayrica, mevcut bulusa konu olan bazi bilesikler ve yöntemler, (1) bir selatörün bir hedefleme Iigandina konjugasyonu için elverisli bölgeler ve (2) bir metal iyonuna selatlama için kullanilabilir atomlar bakimindan genis ölçüde esneklik ve seçicilik sunmaktadir.

Dolayisiyla, bu bulusun genel bir özelligi, bir selatör-hedefleme Iigandi konjugatinin sentezlenmesine yönelik olarak asagidakileri kapsayan bir yöntem öngörür: 1 R2 R3 4 en az bir fonksiyonel grup içeren en az bir hedefleme Iigandi; burada selatör etilendisisteindir (EC) ve burada etilendisisteinin iki tiyol grubu ve iki amin grubu korunur; yani, burada: - A ve D'den her biri korunmus bir tiyoldur; - B ve C'den her biri tersiyer amindir; - E ve F'den her biri -COOH'dir; - R1, R2, R3 ve R4'ten her biri H'dir; - X, -CH2-CH2-'dir ve - konjugasyon, selatörün A, D, E veya F'si ile her bir hedefleme Iigandinin en az bir korunmamis fonksiyonel grubu arasindadir; - A, D ve hedefleme ligandi ögelerinden en az biri, korunmus bir fonksiyonel grup içerir, - hedefleme Iigandinin en az bir fonksiyonel grubu korunmamistir, - hedefleme ligandi, glikozu taklit eden bir ajandir.

Konjugatlar tek bir hedefleme ligandi veya birden fazla hedefleme Iigandi içerebilir.

Bazi düzenlemelerde, konjugat iki hedefleme ligandi içerir. Hedefleme ligandlari ayni olabilir veya farkli türlerde olabilir. Hedefleme Iigandlarinin türleri asagida daha ayrintili olarak ele alinmistir.

Burada ele alinan yöntemler, 19 Nisan 2007'de dosyalanan nesredilmemis ABD Genel olarak, bu bulusa konu olan yöntemler organik ortamda gerçeklesir. Burada kullanildigi haliyle “organik ortam”, bir veya daha fazla organik çözücü içeren çözeltileri ve saflastirma yöntemlerini ifade eder. Bu bulusa konu olan yöntemler için çözücü tercihleri, teknikte uzman kisilerce malumdur. Çözücü tercihleri, örnegin, tüm reaktiflerin çözünebilmesini kolaylastiracak olmalarina veya örnegin, istenen reaksiyonu en kolay sekilde gerçeklestirecek olmalarina (özellikle de reaksiyonun isleyisi biliniyorsa) bagli olabilir. Çözücüler arasinda, örnegin, polar çözücüler ve/veya polar olmayan çözücüler bulunabilir. Çözücülerden biri, dimetilsülfoksit gibi bir polar aprotik çözücü olabilir. Çözücü tercihlerine, bunlarla sinirli olmamakla birlikte, dimetilformamit, dimetilsülfoksit, dioksan, metanol, etanol, heksan, metilen klorür, tetrahidrofuran ve/veya asetonitril dahildir. Bazi düzenlemelerde, çözücüler arasinda etanol, dimetilformamit ve/veya dioksan bulunur.

Herhangi bir özel reaksiyon veya saflastirma prosedürü için birden fazla çözücü tercih edilebilir. Tercih edilen herhangi bir çözücü, suyla da karistirilabilir; bu, örnegin, bir veya daha fazla reaktifin çözünebilirligini arttirmak için yapilabilir.

Bazi düzenlemelerde, sadece bir selatör ve bir hedefleme Iigandi arasindaki konjugasyon, organik sentez yoluyla (yani organik ortamda) gerçeklesir. Bazi düzenlemelerde, sadece bir selatörün sentezi, organik sentez yoluyla gerçeklesir.

Bazi düzenlemelerde, sadece bir valent metal iyonunun selasyonu, organik sentez yoluyla gerçeklesir. Bazi düzenlemelerde, bu asamalardan herhangi biri veya daha fazlasi, organik sentez yoluyla gerçeklesir.

Teknikte uzman kisilerce bilinen herhangi bir selatör (yani bir veya daha fazla metal iyonunu selatlama veya baglama kabiliyetine sahip bir bilesik), mevcut bulusa konu olan metodolojiden yararlanilarak kullanilabilir ve örnek selatörler burada daha ayrintili olarak tarif edilmistir. Selatörler tipik olarak bir veya daha fazla metal iyonuna iyonik bag yoluyla baglanir. Bazi düzenlemelerde, selatör; DTPA (dietilentriaminpentaasetik asit), bir veya daha fazla amino asit veya bu gruplardan birinin veya daha fazlasinin herhangi bir kombinasyonunu içerir. Bazi düzenlemelerde, bir veya daha fazla amino asit, glisin ve sisteinden olusan gruptan seçilir. Bazi düzenlemelerde, selatör; disistein, triglisin sistein ve trisistein glisinden olusan gruptan seçilir. Amino asit sayisi ve tercihleri, organik ortamlardaki çözünebilirlikleriyle sinirlanabilir. Bazi düzenlemelerde, selatör, etilendisisteindir (EC).

Hedefleme ligandlari da burada daha ayrintili olarak açiklanmaktadir. Bir selatör, teknikte uzman kisilerce bilinen herhangi bir mod (ör. kovalent bag, iyonik bag, datif bag, iyon çifti) araciligiyla bir hedefleme Iigandina konjuge edilebilirse de (yani kimyasal olarak tutturulur veya baglanirsa da) baglanti tipik olarak kovalent bag içerir.

Mevcut bulusa konu olan yöntemler ayrica en az bir saflastirma asamasi içerebilir.

Herhangi bir bilesik, teknikte uzman kisilerce bilinen herhangi bir yöntemle saflastirilabilir. Teknikte uzman kisiler, bu gibi yöntemlere ve bu yöntemlerin ne zaman kullanilabilecegine asinadir. Örnegin, belirli bir bilesige ulasmayi amaçlayan çok asamali bir sentezde, her sentetik asamadan sonra, her birkaç asamadan sonra, sentez boyunca çesitli anlarda ve/veya sentezin en sonuna gelindiginde bir saflastirma asamasi gerçeklestirilebilir. Bazi yöntemlerde, bir veya daha fazla saflastirma asamasi; silika jel kolon kromatografisi, HPLC (yüksek performansli sivi kromatografisi) ve LC (sivi kromatografisi) grubundan seçilen teknigi içerir. Bazi düzenlemelerde, saflastirma yöntemleri, boyut dislama kromatografisini ve/veya diyalizi özellikle hariç tutar.

Saflastirma yöntemleri asagida daha ayrintili olarak açiklanmaktadir.

Bazi düzenlemelerde, konjuge olmayan selatörler ve/veya selatör-hedefleme Iigandi konjugatlari, sulu metodoloji ile olusturulan bu bilesiklere göre çok yüksek saflikta sentetik organik yöntemler vasitasiyla üretilir. Örnegin, bu bulusun bazi düzenlemelerinde, organik yöntemlerle olusturulmus konjuge olmayan bir selatör, korunmamis bir selatör, korunmus bir selatör, bir selatör-hedefleme Iigandi konjugati veya metal iyonu etiketli bir selatör-hedefleme Iigandi konjugati (veya selatör, koruyucu grup, hedefleme Iigandi ve metal iyonu kombinasyonu içeren herhangi bir bilesik), sulu ürün için yaklasik %50 ila yaklasik %70 arasindaki safliga kiyasla, yaklasik %90 ila yaklasik %999 arasinda saftir. Bazi düzenlemelerde, organik yöntemlerle olusturulmus konjuge olmayan bir selatör, korunmamis bir selatör, korunmus bir selatör, bir selatör- hedefleme Iigandi konjugati veya metal iyonu etiketli bir selatör-hedefleme Iigandi konjugati (veya selatör, koruyucu grup, hedefleme Iigandi ve metal iyonu kombinasyonu içeren herhangi bir bilesik) yaklasik veya en az daha yüksek bir oranda veya bunlardan türetilebilen herhangi bir aralikta saftir. Bazi düzenlemelerde, aralik, yaklasik %70 ila yaklasik %99,9'dur. Bazi düzenlemelerde, aralik, yaklasik %75 ile yaklasik %99,9'dur. Bazi düzenlemelerde, aralik, yaklasik %80 ila yaklasik %99,9'dur. Bazi düzenlemelerde, aralik, yaklasik %85 ila yaklasik %99,9'dur. Bazi düzenlemelerde, aralik, yaklasik %90 ila yaklasik %99,9'dur.

Bazi düzenlemelerde, aralik, yaklasik %95 ila yaklasik %99,9'dur.

Burada tarif edildigi gibi, fonksiyonel gruplar, teknikte uzman kisilerce bilinen herhangi bir türden olabilir. ”Fonksiyonel grup” terimi, genel olarak, teknikte uzman kisilerin kimyasal açidan reaktif gruplari nasil siniflandirdiklarini ifade eder. Sinirlayici olmayan örnekler arasinda alken, alkin, aril (ör. fenil, piridinil), alkol, aldehit, keton, azit, halojen, ester, - COOH, -NH2, tiyol, bir sekonder amin, bir tersiyer amin, -S-, -S(O)- ve -S(O)2- yer alir.

Bazi düzenlemelerde, en az bir fonksiyonel grup; C, H, 0, N, P ve S'den olusan gruptan seçilen bir atom içerir. A, B, C, D, E ve/veya F konumlari, bir veya daha fazla fonksiyonel grup (ör. -COOH, -NH2, tiyol, bir sekonder amin, bir tersiyer amin, -8-, -S(O)- veya - S(O)2-) içerebilir. Bazi düzenlemelerde, hedefleme ligandinin en az birfonksiyonel grubu; 0, N, S ve P'den olusan gruptan seçilen bir atom içerir. Hedefleme ligandinin fonksiyonel grubu, örnegin, amino, amido, tiyol, hidroksil, eter, ester, karbonil, karboksilik asit, sülfonamido, tiyoeter, tiyoester ve tiyokarbonilden olusan gruptan seçilebilir.

Hem hedefleme ligandi hem de selatör tipik olarak bir veya daha fazla fonksiyonel gruba sahip olacaktir. Korunmus bir fonksiyonel grup olusturmak için kullanilabilecek fonksiyonel gruplar ve koruyucu ajanlar burada tarif edilmistir. Teknikte uzman kisiler, burada tarif edildigi gibi, herhangi bir fonksiyonel grubun gerektikçe koruyucu ajan kullanilarak korunabilecegini anlayacaktir. Böylelikle, bir fonksiyonel grup, korunmus (ör. -NH-Cbz gibi korunmus bir amin) veya ”serbest" olarak da adlandirildigi üzere korunmamis (-NH2 gibi) olabilir. Teknikte uzman kisilerce bilindigi gibi, koruyucu gruplar sulu sentezlerde degil, organik sentezlerde kullanilir.

Ayrica, bazi düzenlemelerde, bir veya daha fazla koruyucu grup ayrilabilir. Bir koruyucu grubun ayrilmasi, burada tarif edilen herhangi bir yöntem veya sentez sirasinda, herhangi bir zamanda yapilabilir; ancak, tipik olarak, koruyucu grup artik gerekli olmadiginda ve korunan fonksiyonel grubun ”ortaya çikmasi” istendiginde gerçeklestirilir. Burada tarif edilen herhangi bir yöntemde, burada tarif edilen bir selatörü içeren herhangi bir bilesik (ör. bir selatör-hedefleme ligandi konjugati, metal iyonu etiketli bir selatör-hedefleme ligandi konjugati) herhangi bir koruyucu grup içermeyebilir veya bir veya daha fazla koruyucu grup içerebilir. Örnegin, bir bölge, koruyucu grup içermeyen veya bir veya daha fazla koruyucu grup içeren metal iyonu etiketli bir selatör-hedefleme ligandi konjugati kullanilarak görüntülenebilir.

Bazi düzenlemelerde, hedefleme Iigandi, bir ayrilan grup içerir. “Ayrilan grup” terimi, genel olarak, amin, alkol veya tiyol nükleofil gibi bir nükleofil ile kolaylikla yer degistirebilen gruplari ifade eder. Bu tür ayrilan gruplar iyi bilinmektedir ve örnegin, karboksilatlar, N-hidroksisüksinimit, N-hidroksibenzotriazol, halojenürler, triflatlar, tosilatlar, mesilatlar, alkoksiler, tiyoalkoksiler, sülfoniller ve benzerlerini içerir.

Baska düzenlemelerde, selatörün üç veya daha fazla fonksiyonel grubu birbiriyle selat olusturur. Tipik olarak, üç veya dört atom birbiriyle selat olusturur. Bazi Örnegin, üç tiyoeter ve bir sekonder amin, N83 selati olusturabilir. Bazi düzenlemelerde, etilendisistein ile oldugu gibi, selat, N282 selatidir. Selatlar, teknikte uzman kisilerce bilinen herhangi bir türden olabilir ve burada ayrica tarif edilmistir. N ve S'nin yani sira, oksijen gibi diger atomlar da selat içerebilir.

Burada kullanildigi sekliyle “selat", isim veya fiil olarak kullanilabilir. Isim olarak “selat", bir veya daha fazla metal iyonunu selatlayabilen ya da bir veya daha fazla metal iyonuna selatlanan bir veya daha fazla atomu ifade eder. Metal iyonlari burada daha ayrintili olarak açiklanmaktadir. Bazi düzenlemelerde, bir selata sadece tek bir metal iyonu koordine olur. Sinirlayici olmayan bir “selat” örnegine “N282” selati dahildir. Bunun anlami, bir selatörün iki azot atomunun ve iki kükürt atomunun a) bir veya daha fazla metal iyonuna selatlanabilir olmasi ya da b) bir veya daha fazla metal iyonuna koordine (veya selatlanir) olmasidir. Dolayisiyla, bazi düzenlemelerde, selat, N282'dir. Selat içeren bir bilesik, bir selatördür. Tipik olarak, bir selatöre sadece tek bir metal iyonu selatlanir.

Bir selatör-hedefleme Iigandi konjugatinin sentezlenmesine yönelik olarak bulusa konu olan yöntemde, A ve D'den her biri, korunmus bir tiyoldur. Tiyol, en az bir tiyol koruyucu ajan kullanilarak en az bir asamada korunabilir. Tiyol koruyucu ajani, teknikte uzman kisilerce bilinenlerden herhangi biri olabilir. Örnegin, tiyol koruyu ajan; alkil halojenür, benzil halojenür, benzoil halojenür, sülfonil halojenür, trifenilmetil halojenür, metoksitrifenilmetil halojenür ve sisteinden olusan bir gruptan seçilebilir.

Bazi düzenlemelerde, en az bir amin, en az bir amin koruyucu ajan kullanilarak bir veya daha fazla asamada korunabilir. Amin koruyucu ajanlar, teknikte uzman kisilerce bilinenlerden herhangi biri olabilir. Örnegin, amin koruyucu grup; benzilkloroformat, p-nitro-klorobenzilformat, etilkloroformat, di-tert-bütil-dikarbonat, trifenilmetil klorür ve metoksitrifenilmetil klorürden olusan gruptan seçilebilir.

Bazi düzenlemelerde, selatör, etilendisisteindir. Bir etilendisistein-hedefleme Iigandi konjugatinin sentezinde selatör olarak etilendisistein kullanilirken etilendisisteinin iki tiyol grubu, en az bir tiyol koruyucu ajan kullanilarak (ör. bir tiyol koruyucu ajanin iki veya daha fazla esdegeri kullanilarak) korunur ve baska bir asamada, etilendisisteinin iki amin grubu, en az bir amin koruyucu ajan kullanilarak (ör. bir amin koruyucu ajanin iki veya daha fazla esdegeri kullanarak) korunur. Tiyol gruplari amin gruplarindan daha reaktif oldugundan, her ikisi de baslangiçta korunmamis (“serbest”) iken, amin gruplari korunmadan önce tipik olarak tiyol gruplari korunacaktir.

Belirtildigi gibi, selatör ve bir hedefleme Iigandi arasindaki konjugasyon, teknikte uzman kisilerce bilinen herhangi bir yöntem ve kimyasal bag yoluyla gerçeklesebilir. Yani, hedefleme Iigandi, teknikte uzman kisilerce bilinen herhangi bir yöntemle, bir veya daha fazla selatöre konjuge edilebilir veya baglanabilir. Bazi düzenlemelerde, selatör ve hedefleme Iigandi arasindaki konjugasyon, tek bir asamada (yani, “tek-kap” reaksiyonunda) gerçeklesir. Teknikte uzman kisilerce bilindigi gibi, bu tek asamali reaksiyonlar, zaman tasarrufu sagladiklari, atik reaktifleri ve ürün kaybini en aza indirmeye yardimci olduklari için tercih edilir. A, D, E ve/veya F'den herhangi biri, bir hedefleme Iigandi konjugasyonuna katilabilir. Buna ilaveten, A, B, C, D, E ve/veya F'den herhangi biri selasyona katilabilir. Ayrica, A, D, E ve/veya F'den herhangi biri, hem selasyona hem de konjugasyona katilabilir. Bu esneklik, örnegin, seçilen bir hedefleme Iigandinin reaktivitesine, istenen konjugasyonun seçiciligine, reaktiflerin çözünebilirligine, selasyon için tercih edilen metal iyonuna vs. bagli olarak selatörlerin çesitli sekillerde manipüle olmasini mümkün kilar. Her zaman olmamakla birlikte tipik olarak, konjugasyon, selasyondan önce gerçeklesir.

Tipik olarak, bir türden hedefleme Iigandi bir selatöre konjuge edilir, ancak çok sayida hedefleme Iigandi tek bir selatöre konjuge edilebilir. Çogunlukla, selatör-hedefleme Iigandi konjugatlarinin organik sentezi sirasinda, selatör ve hedefleme Iigandi arasinda oldugu gibi, biri nükleofil islevi görürken digeri elektrofil islevi görür ve böylece konjügasyon, kovalent bag yoluyla gerçeklesir. Kovalent bag, teknikte uzman kisilerce bilinen herhangi bir türden olabilir. Bazi düzenlemelerde, kovalent bag; amit bagi, eter bagi, ester bagi, tiyoeter bagi, tiyoester bagi, sülfonamido bagi ve karbon-karbon bagindan olusan gruptan seçilir. Karbon-karbon bagi tipik olarak tek bir bagdir, ancak ikili veya üçlü bir bag da olabilir. Selatörler ve hedefleme ligandlari, elektrofil islevi görürken, konjugasyon sirasinda halojenler ve sülfoniller gibi ayrilan grup islevi gören fonksiyonel gruplar içerebilir. Bazi düzenlemelerde, konjugasyon; karboksilik asit, amin ve tiyolden olusan gruptan seçilen selatörün bir veya daha fazla fonksiyonel grubunda gerçeklesir. Hedefleme Iigandlari ayrica, -NH2 gibi, bir elektrofilik selatör ile konjugasyona katilabilecek nükleofilik gruplar da içerebilir. Konjugasyon modlari asagida daha ayrintili olarak ele alinmistir.

Bazi düzenlemelerde selatör-hedefleme Iigandi konjugati ayrica, selatör ve hedefleme kolaylastiran bir reaktif grubu olusturarak selatör ve hedefleme Iigandi arasinda daha kolay konjugasyon saglayabilir. Baglayici, teknikte uzman kisilerce bilinen herhangi bir türden olabilir. Baglayici, baslangiçta, selatöre veya hedefleme Iigandina baglanabilir. Bir baglayici, selatöre baglanirken; baska bir baglayici, hedefleme Iigandina baglanabilir ve böylece iki baglayici daha sonra biriestirilebilir. Teknikte uzman kisiler, bu bulusa konu olan yöntemler için kullanilabilen baglayici türlerini taniyacaktir. Bazi düzenlemelerde, baglayici; peptit, glutamik asit, aspartik asit, bromo etilasetat, etilen diamin, Iisin ve bu gruplardan bir veya daha fazlasinin herhangi bir kombinasyonundan olusan gruptan seçilir.

Bazi düzenlemelerde, E ve F'den her biri, bagimsiz olarak -COOH, -NH2 veya tiyolden olusan gruptan seçilir. Bazi düzenlemelerde, E ve F'den her biri -COOH'dir.

Bazi düzenlemelerde, en az bir hedefleme Iigandinin konjugasyonu, E ve/veya F'de gerçeklesir. Bazi düzenlemelerde, A ve D'den her biri, konjugasyondan önce en az bir koruyucu grupla korunur.

Teknikte uzman bir kisinin takdir edecegi üzere, bir selatörün bir hedefleme Iigandina iki bilesik bir araya gelebilecek sekilde konjuge edilmesi için selatörün en az bir fonksiyonel grubu ve hedefleme Iigandinin en az bir fonksiyonel grubu “serbest" (yani, bir koruyucu grupla korunmamis) olmalidir.

Selatör ayrica bir aralayici (X) içerebilir. Bazi açilardan, bir aralayicinin kullanilmasi, selatlama atomlarinin bir metal iyonunu selatlamak için uygun sayida olmasini ve yönlendirilmesini mümkün kilar. Teknikte uzman kisiler bu bulusa konu olan yöntemler için kullanilabilecek aralayici türlerine asinadir ve aralayici örnekleri asagida açiklanmaktadir. Örnegin, n'nin 1-100 araliginda oldugu (-CH2-)n gibi bir alkil aralayici kullanilabilir. Bu bulusa konu olup etilen aralayici içeren yöntemlerde kullanilabilecek bir selatör türü etilendisisteindir (EC). Bazi düzenlemelerde, X; -CH2-C(O)-, -C(O)-CH2-, - CH2-CH2-C(O)- veya -C(O)-CH2-CH2-'dir ve B ve/veya C bir sekonder amindir. Bu düzenleme, tipik olarak, B ya da C'nin digerinden daha az nükleofilik olmasiyla sonuçlanir. Örnegin, B, C ve F birlikte -NH-C(O)-CH2-CH2-NH- olarak tarif edilirse C konumundaki sekonder amin, B'deki sekonder aminden daha nükleofilik olacaktir. Bu nedenle C daha reaktif olacak ve bu da C konumundaki bir hedefleme Iigandinin seçici konjugasyonuyla sonuçlanacaktir. Bazi düzenlemelerde, A ve D veya E ve F konumlarindan her biri, C'deki konjugasyondan önce en az bir koruyucu grupla korunur.

Amit baglarini kullanmanin bir özelligi; B, C ve L birlikte -NH-C(O)-CH2-CH2-NH-'yi olusturdugunda oldugu gibi, bir metal iyonunun bir selatöre selatlandigi reaksiyonlarin genellikle asidik ortamlarda gerçeklesmesinde yatar. Amit baglari asidik ortamlarda bozunmaya karsi nispeten dirençlidir ve dolayisiyla bu selasyon reaksiyonlari sirasinda, selatörde yapisal stabilite saglar. Bu nedenle, B ve/veya C ile birlikte olan X, amit bagi içerebilir.

Bir metal iyonuna selatlanan selatör-hedefleme Iigandi konjugatlari, örnegin, burada tarif edildigi gibi, görüntüleme ve/veya teshis ajanlari olarak islev görebilir. Bunlar ayrica terapötik ajanlar olarak veya ikili teshis ve tedaviye yönelik veya ikili görüntüleme ve tedaviye yönelik ajanlar olarak da islev görebilir. Dolayisiyla, bazi düzenlemelerde, bu bulusa konu olan yöntemler ayrica, metal iyonu etiketli bir selatör-hedefleme Iigandi konjugatinin olusturulmasi için bir metal iyonunun bir selatöre selasyonunu içerir. Metal iyonu, teknikte uzman bir kisinin bildiklerinden herhangi biri olabilir. Metal iyonu “soguk” (radyoaktif olmayan) bir metal iyonu veya bir radyonüklid olabilir. Sinirlayici olmayan örneklerde, metal iyonu; teknesyum iyonu, bakir iyonu, indiyum iyonu, talyum iyonu, galyum iyonu, arsenik iyonu, renyum iyonu, holmiyum iyonu, itriyum iyonu, samaryum iyonu, selenyum iyonu, stronsiyum iyonu, gadolinyum iyonu, bizmut iyonu, demir iyonu, manganez iyonu, Iütesyum iyonu, kobalt iyonu, platin iyonu, kalsiyum iyonu ve rodyum iyonundan olusan gruptan seçilebilir. Soguk metal iyonu, örnegin, Cu-62, As-72, Re-187, ve rodyum iyonundan olusan gruptan seçilebilir.

Metal iyonu bir radyonüklit veya teknikte uzman kisilerce bilinen herhangi bir radyonüklit olabilir. Radyonüklit, bazi düzenlemelerde, 99"'Tc, 188Re, 1%Re, 153Sm, ve 84Cu'dan olusan gruptan seçilebilir. Bazi düzenlemelerde, metal iyonu 99mTc'dir.

Metal iyonu 99mTc olarak seçilmisse, örnegin, bu yöntem ayrica bir indirgen maddenin ilave edilmesini içerebilir. indirgen madde, teknikte uzman kisilerce bilinenlerden herhangi biri olabilir. Bazi düzenlemelerde, indirgen madde; ditiyonit iyonu, kalay iyonu ve demir iyonundan olusan gruptan seçilen bir iyon içerir. Bazi düzenlemelerde, metal iyonu 188Re'dir. Diger düzenlemelerde, metal iyonu 68Ga'dir.

Bu bulusa konu olan yöntemde metal iyonu kullanildiginda, metal iyonu, burada tarif edildigi gibi, teknikte uzman kisilerce bilinen herhangi bir selata selatlanabilir.

Teknikte uzman kisiler, metal iyonlarinin örnegin metal türüne, valansina ve selasyon için kullanilabilir atomlara bagli olarak degisen sayida atoma selatlandigini bilir. Örnegin, selatörün üç veya dört atomu bir metal iyonuna selatlanabilir. Bazi düzenlemelerde, selatli bir metal iyonu 99mTc olabilir. Bazi düzenlemelerde, selatli bir metal iyonu 186Re olabilir. Bazi düzenlemelerde, selatli bir metal iyonu 187Re olabilir. seçilebilir. Bazi düzenlemelerde, bu selatlardan herhangi biri veya daha fazlasi selat olmayabilir. Bazi düzenlemelerde, N38 selat degildir. Bazi düzenlemelerde, selat N282, örnegin, etilendisisteindir. Bu bulusa konu olan yöntemler ayrica, hedefleme ligandinin A, B, C, D, E ve/veya F ile bir metal iyonuna selatlanmaya katildigi, metal iyonu etiketli bir selatör-hedefleme Iigandi konjugati sentezini içerebilir. Metal iyonlari, selasyon ve hedefleme Iigandlari asagida daha ayrintili olarak ele alinmistir. Bazi düzenlemelerde, metal iyonu görüntülenebilir. Görüntüleme, teknikte uzman kisilerce bilinen herhangi bir yöntemle yapilabilir. Görüntüleme yöntemlerinin örnekleri, asagidaki tarifnamede uzun uzadiya ele alinmistir ve bunlara PET ile SPECT dahildir.

Yukarida belirtildigi gibi, organik sentez yoluyla hazirlanan metal iyonu etiketli selatör- hedefleme Iigandi konjugatlari, tipik olarak, sulu preparatlar yoluyla elde edilenlerden daha yüksek safliklara sahiptir. Örnegin, mevcut bulusun bazi düzenlemelerinde, organik yöntemlerle olusturulan metal iyonu etiketli selatör-hedefleme Iigandi konjugati, sulu ürün için yaklasik %50 ila yaklasik %70 arasindaki safliga kiyasla, yaklasik %90 ila yaklasik %99,9 arasinda saftir. Bazi düzenlemelerde, organik yöntemlerle sentezlenen metal iyonu etiketli selatör-hedefleme Iigandi konjugati, yaklasik veya en az yüksek bir oranda veya bunlardan türetilebilen herhangi bir aralikta saftir.

Burada tarif edilen herhangi bir selatör, bir metal iyonuna selatlanabilir. Korunmus bir selatör veya korunmamis bir selatör kullanilabilir. Selatör, saflastirilmadan önce veya saflastirildiktan sonra selatlanabilir.

Bazi düzenlemelerde, metal iyonu etiketli bir selatör-hedefleme Iigandi konjugatinin olusturulmasi asagidakileri kapsar: (a) burada tarif edildigi gibi bir selatör-hedefleme Iigandi konjugatindan en az bir koruyucu grubun ayrilmasi ve (b) bir metal iyonunun selatör-hedefleme Iigandi konjugatinin selatörüne selatlanmasi.

Bazi düzenlemelerde, metal iyonu etiketli bir selatör-hedefleme Iigandi konjugatinin olusturulmasi asagidakileri kapsar: (a) asagidaki formüle sahip bir selatörün elde edilmesi: 8/ `"C burada selatör etilendisisteindir (EC) ve burada etilendisisteinin iki tiyol grubu ve iki amin grubu korunur; yani, burada: - A ve D'den her biri korunmus bir tiyoldur; - B ve C'den her biri tersiyer amindir; - E ve F'den her biri -COOH'dir; - R1, R2, R3 ve R4'ten her biri H'dir; - X, -CH2-CH2-'dir; (b) bir selatör-hedefleme Iigandi konjugatinin olusturulmasi için selatörün bir hedefleme Iigandina konjuge edilmesi; (c) selatör-hedefleme Iigandi konjugatindan en az bir koruyucu grubun ayrilmasi ve (d) burada tarif edildigi gibi bir metal iyonunun selatÖr-hedefleme Iigandi konjugatinin selatörüne selatlanmasi.

Gerçekten de burada tarif edilen ve bir veya daha fazla koruyucu grup içeren herhangi bir bilesigin belirli herhangi bir yöntemde bir veya daha fazla koruyucu grubun ayrilmasina maruz kalabilecegi öngörülmektedir. Bir koruyucu grup, burada tarif edildigi gibi, bir selatör-hedefleme Iigandi konjugatinin bir metal iyonuna selatlanmasindan önceki veya sonraki bir veya daha fazla asamada, örnegin, selatör kismindan, hedefleme Iigandi kismindan veya her iki kisimdan ayrilabilir. Koruyucu gruplar, kurulum ve ayirma islemleri de dahil olmak üzere, burada daha ayrintili olarak açiklanmaktadir.

Diger düzenlemelerde, metal iyonu etiketli bir selatör-hedefleme Iigandi konjugatinin olusturulmasi asagidakileri kapsar: (a) metal iyonu etiketli bir selatörün olusturulmasi için bir metal iyonunun burada tarif edildigi gibi bir selatöre selatlanmasi; (b) metal iyonu etiketli selatörün bir hedefleme Iigandina konjuge edilmesi ve (c) metal iyonu etiketli selatör-hedefleme Iigandi konjugatindan bir veya daha fazla koruyucu grubun ayrilmasi.

Mevcut bulusun bazi düzenlemeleri, korunmus bir selatörün sentezlenmesine yönelik olarak asagidakileri kapsayan bir yöntem öngörmektedir: (a) asagidaki formüle sahip bir selatörün elde edilmesi: burada selatör etilendisisteindir (EC) ve burada etilendisisteinin iki tiyoI grubu ve iki amin grubu korunur; yani, burada: - A ve D'den her biri korunmus bir tiyoldur; - B ve C'den her biri tersiyer amindir; - E ve F'den her biri -COOH'dir; - R1, R2, R3 ve R4'ten her biri H'dir; - X, -CH2-CH2-'dir ve (b) karboksilik asit koruyucu ajan, amin koruyucu ajan veya tiyol koruyucu ajan kullanilarak, sirasiyla, -COOH, -NH2 veya tiyolün korunmasi.

Mevcut bulusa konu olan herhangi bir sentetik yöntem söz konusu oldugunda, yöntem, organik bir ortamda gerçeklestirilebilir. Korunmus selatör, korunmus etilendisistein olabilir.

Yöntem ayrica bir saflastirrna asamasini, bir metal iyonunun selatlanmasini içeren bir selasyon asamasini, en az bir koruyucu grubun ayrilmasini veya bu asamalarin herhangi bir kombinasyonunu içerebilir. (Burada tarif edilen herhangi bir yöntem, gerçekten de bir saflastirma asamasini, bir metal iyonunun selatlanmasini içeren bir selasyon asamasini, en az bir koruyucu grubun ayrilmasini veya bu asamalarin herhangi bir kombinasyonunu içerebilir.) Bu veya burada tarif edilen herhangi bir yöntemde, korunmus selatör, yaklasik %80 ila yaklasik %99,9 oraninda saf olabilir. Örnegin, korunmus selatör, yaklasik %80 ila yaklasik %90 oraninda saf olabilir. Yukarida gösterilen çekirdek yapisina sahip bir selatör içeren, bu veya burada tarif edilmis herhangi bir yöntemde, A ve D'den her biri -NH2 oldugunda, ne B ne de C sekonder veya tersiyer amin olabilir.

Konjugat, yaklasik %80 ve yaklasik %99,9 arasinda saf olabilir. Konjugat, yaklasik %90 ve yaklasik %99,9 arasinda saf olabilir. Konjugat ayrica, metal iyonu etiketli bir selatör-hedefleme Iigandi konjugati olarak da tanimlanabilir. Konjugat ayrica, 99mTc-EC-glukozamin, 186Re-EC-glukozamin veya 187Re-EC-glukozamin olarak da tanimlanabilir. veya molekül parçasi olarak tanimlanmaktadir. Teknikte uzman bir kisi, mevcut bulus baglaminda hedefleme Iigandlari olarak kullanilabilen sayisiz ajana asina olacaktir.

Hedefleme Iigandi, teknikte uzman kisilerce bilinen bu moleküllerden herhangi biri olabilir. Hedefleme ligandlarinin sinirlayici olmayan örnekleri arasinda dokuya özgü bir ligand, bir antimikrobiyal, bir antifungal veya bir görüntüleme ajani yer alir.

Mevcut bulusa göre, bir selatör-hedefleme ligandi konjugatini sentezleme yönteminde kullanilan hedefleme ligandi, glikozu taklit eden bir ajandir. Glikozu taklit eden ajanlarin sinirlayici olmayan örnekleri arasinda deoksiglukoz, glukozamin, tetraasetile glukozamin, neomisin, kanamisin, gentamisin, paromisin, amikasin, tobramisin, netilmisin, ribostamisin, sisomisin, mikromisin, lividomisin, dibekasin, izepamisin, astromisin ve aminoglikozit bulunur. Belirli düzenlemelerde, glikozu taklit eden ajan, glukozamindir.

Diger düzenlemeler, bir denegi teshis veya tedavi etmeye yönelik bir yöntemde kullanilmasi amaçlanan bir bilesige dairdir; burada bilesik, bir selatör ve glikozu taklit eden bir ajan arasindaki bir konjugattir; burada glikozu taklit eden ajan, glukozamin veya deoksiglukozdur ve burada selatör ve glikozu taklit eden ajan, amit bag veya ester bagi yoluyla konjuge edilir; burada bilesik, istem 1 veya 3'teki yöntemle ([b] ve [d] arasindan seçilen bir metal iyonuyla etiketlenir ve burada konjugatin safligi, yaklasik %70 (a/a) ve yaklasik %99,9 (a/a) arasindadir ve burada teshis veya tedavi edilecek hastalik miyokardiyal enfarktüs, miyokardiyal iskemi, konjestif kalp yetmezligi, kardiyomiyopati, valvüler kalp hastaligi, aritmi veya angina pektoristir. Bazi düzenlemelerde, metal iyonu etiketli selatör konjugati, yaklasik %90 ila yaklasik %99,9 arasinda saftir. Bazi düzenlemelerde, metal iyonu etiketli selatör konjugati, yaklasik %80 ila yaklasik %99,9 arasinda saftir. Bazi düzenlemelerde, metal iyonu etiketli selatör konjugati, yaklasik %70 ila yaklasik %99,9 arasinda saftir. Metal iyonu etiketli selatör konjugati etilendisistein içerir. Metal iyonu, örnegin, yukarida belirtilen metal iyonlarindan herhangi biri olabilir.

Denek, kardiyovasküler hastalik varligini degerlendirmek için kullanilan bir memeli veya hayvan modelleri gibi herhangi bir denek olabilir. Memeli, örnegin, bir insan veya maymun türünün bir üyesi olabilir. Hayvan modelleri arasinda köpekler, kediler, siçanlar, fareler veya tavsanlar yer alir. Tercih edilen düzenlemelerde, denek, kardiyovasküler hastaligi oldugu bilinen veya süphesi tasiyan bir insandir.

Denek, örnegin, miyokardiyal iskemiyi veya miyokardiyal enfarktüsü düsündüren bulgular veya semptomlar ile bir klinige basvuran bir hasta olabilir. Hastaligin teshisi için denegin kalbinin görüntülenmesi, burada belirtilen yöntemlerden herhangi biri kullanilarak sentezlenen metal iyonu etiketli bir selatör-hedefleme ligandi konjugatinin denege farmasötik olarak etkili bir miktarda uygulanmasini gerektirebilir. Görüntüleme, teknikte uzman kisilerce bilinen herhangi bir görüntüleme yöntemi kullanilarak gerçeklestirilebilir.

Belirli düzenlemelerde, görüntüleme, PET veya SPECT gibi radyonüklit bazli görüntüleme teknolojisinin kullanilmasini gerektirir. Belirli düzenlemelerde, metal iyonu etiketli radyonüklit-hedefleme ligandi konjugati 99m-Tc-EC-glukozamindir. Glukozamin, viabl miyokardiyal dokudan aktif olarak alinmamakta olup daha ziyade iskemi bölgeleri için hedefe özgüdür. Iskeminin siddeti, teknikte uzman kisilerce bilinen herhangi bir yöntem kullanilarak ölçülen sinyalin büyüklügüne göre görsel olarak degerlendirilebilir veya derecelendirilebilir. Bazi düzenlemelerde, ikinci bir görüntüleme ajani kullanilarak kalbin görüntülenmesi öncesinde, sirasinda veya sonrasinda, burada belirtilen konjugatlardan herhangi biri kullanilarak görüntüleme gerçeklestirilir. Örnegin, ikinci görüntüleme ajani, normal miyokardiyal perfüzyon (iskemik olmayan doku) bölgesini tanimlayacak sekilde sintigrafi ile görüntülenen talyum olabilir.

Miyokardiyal perfüzyon SPECT'i (MP8), dinlenme ve stres uygulamali bir stres yöntemi (egzersiz veya farmakolojik) ve radyofarmasötiklerin görüntülenmesinin bir kombinasyonundan olusur. Talyum, miyokardiyal perfüzyon görüntüleme için mükemmel fizyolojik özelliklere sahiptir. Egzersiz boyunca, koroner dolasimdan ilk geçis sirasinda yüksek oranda ekstrakte edilen, viabl miyokarda yönelik kan akisi ile talyum tutulumu arasinda dogrusal bir iliski gösterilmistir; bununla birlikte, çok yüksek akis seviyelerinde, tutulumda bir “azalma” meydana gelir. Baglanmamis bir potasyum analogu olarak talyum zamanla redistribe olur. Ilk distribüsyon, bölgesel miyokardiyal perfüzyonla orantilidir ve ekilibriyumda talyum distribüsyonu, bölgesel potasyum havuzuyla orantili olup viabl miyokardi yansitir. Talyum redistribüsyonunun mekanizmalari, hipoperfüze olmakla birlikte viabl miyokard ve normal zonlar ile baslangiçta hipoperfüze zonlara yönelik wash-in arasindaki diferansiyel yikanma oranlaridir. Talyumun yikanma orani, miyokardiyal hücre ile kan arasindaki konsantrasyon gradyanidir. Dinlenmenin veya düsük seviyeli egzersiz enjeksiyonunun ardindan, kandaki talyum klirensi yavaslar. Yeterli stres seviyelerine ulasmayan normal hastalarda, diffüz iskemiyi taklit eden, düsük diffüz yikanma oranlari görülebilir. Hiperinsülinemik durumlar, viabl miyokardin yeterince önemsenmemesine yol açacak sekilde, redistribüsyonu yavaslatir; bu nedenle, talyum enjeksiyonundan önce ve sonraki 4 saat boyunca aç kalinmasi önerilir.

Bundan dolayi, talyum ile kombinasyon halindeki bir viabl ajan olarak EC-G kullanilirsa Iskemik olmakla birlikte viyabl alan durumundaki ilgili hassas bölgeyi Metal iyonu etiketli selatör-hedefleme Iigandi konjugatlarindan herhangi birinin kullanildigi görüntüleme, ayni zamanda, kardiyak izozimlerin ölçümü veya kardiyak kateterizasyon gibi diger teshis yöntemleri ile birlikte de gerçeklestirilebilir. Görüntüleme, semptomlarin baslamasindan sonra çesitli araliklarla yapilabilir veya zaman içinde miyokardiyal perfüzyondaki degisiklikleri degerlendirmek için gerçeklestirilebilir.

Diger düzenlemeler, bir bilesigin uygulandigi bir denegin kalbini görüntülemeye yönelik bir yönteme dairdir; burada bilesik, bir selatör ve glikozu taklit eden bir ajan arasindaki bir konjugattir; burada glikozu taklit eden ajan, glukozamin veya deoksiglukozdur ve burada selatör ve glikozu taklit eden ajan, amit bag veya ester bagi yoluyla konjuge edilir; burada bilesik, istem 1 veya 3'teki yöntemle ([b] ve [d] asamalariyla) elde iyonuyla etiketlenir ve burada konjugatin safligi, yaklasik %70 (a/a) ve yaklasik %99,9 (a/a) arasindadir; burada konjugatin safligi, özel olarak, yaklasik %80 (a/a) ve yaklasik %99,9 (a/a) arasinda veya yaklasik %90 (a/a) ve yaklasik %99,9 (ala) arasindadir ve kalpte lokalize olan metal iyonu etiketli selatör-hedefleme Iigandi konjugatindan sinyal tespit etmeye yöneliktir. Bazi düzenlemelerde, metal iyonu etiketli selatör-hedefleme Iigandi konjugati, yaklasik %90 ila yaklasik %99,9 arasinda saftir.

Metal iyonu etiketli selatör-hedefleme Iigandi konjugati etilendisistein içerir.

Sinyal, teknikte uzman kisilerce bilinen herhangi bir yöntemle tespit edilebilir. Bu tür yöntemlerin sinirlayioi olmayan örnekleri arasinda PET, PET/CT, CT, SPECT, SPECT/CT, MR, optik görüntüleme ve ultrason bulunmaktadir.

Denek bir memeli veya kus türü gibi herhangi bir denek olabilir. Belirli düzenlemelerde, memeli, bir insandir. Görüntülenecek bölge kalptir.

Bazi düzenlemelerde, görüntüleme yöntemi ayrica, denegi bir hastalik bakimindan degerlendirmek için bir veya daha fazla ilave teshis veya görüntüleme prosedürünün gerçeklestirilmesini kapsar. Diger düzenlemelerde, görüntüleme yöntemi ayrica, ikili görüntüleme ve tedaviyi gerçeklestirme yöntemi olarak tanimlanir.

Bazi düzenlemelerde, tedavi edilecek hastalik; miyokardiyal enfarktüs, konjestif kalp yetmezligi, kardiyomiyopati, valvüler kalp hastaligi, aritmi ve angina pektoris arasindan seçilen bir kardiyovasküler hastaliktir.

Bu tarifnamede ele alinan herhangi bir düzenlemenin bulusun kullanimina iliskin herhangi bir yönteme veya bilesige göre uygulanabilecegi ve bunun tam tersi de öngörülmüstür.

Burada kullanildigi haliyle “organik ortam”, bir veya daha fazla organik çözücü (burada ayrica “çözücü” olarak da adlandirilir) içeren çözeltileri (ör. reaksiyon çözeltileri) ve saflastirma yöntemlerini ifade eder. Bu bulusa konu olan yöntemler için çözücü tercihleri, teknikte uzman kisilerce malumdur. Çözücü tercihleri, örnegin, tüm reaktiflerin çözünebilmesini kolaylastiracak olmalarina veya örnegin, istenen reaksiyonu en kolay sekilde gerçeklestirecek olmalarina (özellikle de reaksiyonun isleyisi biliniyorsa) bagli olabilir. Çözücüler arasinda, örnegin, polar çözücüler ve polar olmayan çözücüler bulunabilir. Çözücü tercihlerine, bunlarla sinirli olmamakla birlikte, dimetilformamit, dimetilsülfoksit, dioksan, metanol, etanol, heksan, metilen klorür ve asetonitril dahildir. Tercih edilen bazi düzenlemelerde, çözücüler arasinda etanol, dimetilformamit ve dioksan bulunur. Herhangi bir özel reaksiyon veya saflastirma prosedürü için birden fazla çözücü tercih edilebilir. Tercih edilen herhangi bir çözücü, suyla da (yani, sulu bir bilesen ile) karistirilabilir; su, tipik olarak, tüm reaktiflerin çözünebilirligini arttirmak için eklenir. Bazi düzenlemelerde, organik ortamin organik bileseni, sulu bilesene kiyasla, hacimce yaklasik veya en az olarak tanimlanmaktadir. Örnegin, iki veya daha fazla molekül ve/veya atom, tek bir molekül olusturacak sekilde, kovalent bag yoluyla birbiriyle konjuge edilebilir. Iki molekül, dogrudan baglanti (ör. bilesiklerin kovalent bag yoluyla dogrudan baglandigi) yoluyla birbirine konjuge edilebilir veya bilesikler, dolayli baglanti (ör. iki bilesigin kovalent bag yoluyla tek bir molekül olusturacak sekilde bir veya daha fazla baglayiciya baglandigi) yoluyla konjuge edilebilir. Diger durumlarda, bir metal atomu, bir selasyon etkilesimi vasitasiyla bir moleküle konjuge edilebilir. reaktif gruplari nasil siniflandirdiklarini ifade eder. Fonksiyonel gruplarin sinirlayici olmayan örnekleri arasinda karbon-karbon baglari (tek, çift ve üçlü baglar dahil), hidroksil (veya alkol), amin, sülfhidril (veya tiyol), amit, eter, ester, tiyoeteri tiyoester. karboksilik asit ve karbonil gruplari bulunmaktadir. Burada kullanildigi sekliyle “amin” ve “amino" kelimeleri ve “hidroksi” ve “hidroksil” gibi diger benzer sözcük çiftleri ayni fonksiyonel kismi ifade eder ve dolayisiyla birbirinin yerine kullanilir. Burada kullanildigi sekliyle “amin”, -NHz ve -NH-'den birini veya ikisini birden ifade edebilir.

Burada kullanildigi sekliyle “selat”, isim veya fiil olarak kullanilabilir. Isim olarak “selat”, bir veya daha fazla metal iyonunu selatlayabilen ya da bir veya daha fazla metal iyonuna selatlanan bir veya daha fazla atomu ifade eder. Tercih edilen düzenlemelerde, bir selata sadece tek bir metal iyonu koordine olur. Sinirlayici olmayan bir ”selat” örnegi “N282” selatidir. Bunun anlami, bir selatörün iki azot atomunun ve iki kükürt atomunun a) bir veya daha fazla metal iyonuna selatlanabilir olmasi ya da b) bir veya daha fazla metal iyonuna (tercihen sadece tek bir metal iyonuna) koordine (veya selatlanir) olmasidir. Fiil olarak konjugatina koordine olma veya selatlanma sürecini ifade eder.

Burada kullanildigi sekliyle “konjuge olmayan selatör", bir hedefleme ligandina konjuge olmayan bir selatörü ifade eder.

Burada kullanildigi sekliyle “korunmamis selatör”, herhangi bir koruyucu grubu içermeyen bir selatörü ifade eder.

Burada kullanildigi sekliyle “korunmus selatör”, en az bir koruyucu grubu içeren bir selatörü ifade eder.

Burada kullanildigi sekliyle “korunmamis hedefleme Iigandi”, herhangi bir koruyucu grubu içermeyen bir hedefleme ligandini ifade eder.

Burada kullanildigi sekliyle “korunmus hedefleme Iigandi”, en az bir koruyucu grubu içeren bir hedefleme ligandini ifade eder. elektron çifti tasiyan atomlari ifade eder. Bu terimler teknikte iyi bilinmektedir ve -NH2, tiyolat, karbanyon ve alkolati (hidroksil olarak da bilinir) kapsar. ifade eder. Elektrofilik gruplari, tipik olarak, kismi bir pozitif yüke sahiptir. Bu terim teknikte iyi bilinmektedir ve bir halojen, sülfonil veya bir kuaterner amino grubu gibi bir ayrilan gruba baglanmis bir karbonun karbonunu içerir. kolaylikla yer degistirebilen gruplari ifade eder. Bu tür ayrilan gruplar iyi bilinmektedir ve karboksilatlar, N-hidroksisüksinimit, N-hidroksibenzotriazol, halojen (halojenürler), triflatlar, tosilatlar, mesilatlar, alkoksi, tiyoalkoksi, sülfoniller ve benzerlerini içerir.

Burada kullanildigi sekliyle “alkil” veya “alk”, 1-30 karbon barindiran, opsiyonel olarak alken veya alkin baglari içeren, düz, dalli veya siklik bir karbon-karbon veya hidrokarbon zincirini ifade eder. “Düsük alkil”, 1-4 karbon içeren alkil radikallerini ifade eder. Düsük alkillerin sinirlayici olmayan örnekleri arasinda metil, etil, propil, bütil ve izopropil bulunur. “Sübstitüe alkil", teknikte uzman kisilerce bilinen en az bir atom ile sübstitüe edilmis bir alkil radikalini ifade eder. Bazi düzenlemelerde, bir veya daha fazla sübstitüent; hidrojen, halojen, okso (ör. eter), hidroksi, alkoksi, sililoksi, sikloalkil, asil, aril, asetil, karbonil, tiyokarbonil, siyano, azido, amido, aminokarbonil, amino, -NH-alkil, -N(alkil)2, -NH-sikloalkil, -N(sikl0alkil)2, -NH- aril, -N(aril)2, trialkilsililoksi, asiloksi, asilamino, bis-asilamino, ester, NO, N02 ve sülfodan (ör. tiyoeter, tiyoester, sülfonamido, sülfonil) olusan gruptan seçilebilir. gruptan seçilenler dahil olup bunlarla sinirli olmamak üzere, bir karbosiklik aromatik grubunu veya furil, furanil, tiyenil, piridil, pirrolil, oksazolil, tiazolil, imidazolil, pirazolil, pirazolinil, pirazolidinil, izoksazolil, izotiazolil, oksadiazolil, triazolil, tiadiazolil, piridazinil, pirimidinil, pirazinil, triazinil, tritianil, indolizinil, indolil, izoindolil, indolinil, tiyofenil, indazolil, benzimidazolil, benztiyazolil, purinil, kuinolizinil, kinolinil, izokinolinil, innolinil, ftalazinil, kinazolinil, kinoksalinil, naftiridinil, pteridinil karbazolil, akridinil, fenazinil fenotiyazonil, fenoksazinilden olusan gruptan seçilenler dahil olup bunlarla sinirli olmamak üzere, bir heterosiklik aromatik grubunu ve bu gruplardan birinin veya daha fazlasinin herhangi bir kombinasyonunu veya türevini ifade eder.

Bu basvuruda tanimlandigi gibi, “aril” gruplari, bagimsiz olarak sübstitüentler halinde bir veya daha fazla fonksiyonel grup içerebilir. Bazi düzenlemelerde, sübstitüentler; hidrojen, alkil, halojen, okso (ör. eter), hidroksi, alkoksi, sililoksi, sikloalkil, asil, aril, asetil, karbonil, tiyokarbonil, siyano, amido, aminokarbonil, amino, -NH-alkil, -N(alkil)2, - NH-sikloalkil, -N(sikloalkil)2, -NH-aril, -N(aril)2, trialkilsililoksi, asiloksi, asilamino, bis- asilamino, ester, NO, N02 ve sülfodan (ör. tiyoeter, tiyoester, sülfonamido, sülfonil) olusan gruptan seçilebilir. Ayrica, bu sübstitüentlerden herhangi biri, daha önce tarif edildigi gibi sübstitüentler ile de sübstitüe edilebilir.

Burada kullanilan “sikloalkil” terimi, üç veya daha fazla atomun karbosikliklerini veya heterosikllerini ifade eder; bunlarin halka atomlari opsiyonel olarak C, 8, 0 veya N ile sübstitüe edilebilir ve bu halka atomlar sübstitüent olarak bir veya daha fazla fonksiyonel grup içerebilir. Sübstitüentler, bazi düzenlemelerde, hidrojen, alkil, halojen, okso (ör. eter), hidroksi, alkoksi, sililoksi, sikloalkil, asil, aril, asetil, karbonil, tiyokarbonil, siyano, azido, amido, aminokarbonil, amino, -NH-alkil, -N(alkil)2, -NH-sikloalkil, -N(sikloalkil)2, - NH-aril, -N(aril)2, trialkilsililoksi, asiloksi, asilamino, bis-asilamino, ester, NO, N02 ve sülfodan (ör. tiyoeter, tiyoester, sülfonamido, sülfonil) olusan gruptan seçilebilir. treonin gibi dogal olarak olusan amino asitlerin D-stereoizomerleri) ve bunlarin türevlerini ifade eder. oi-Amino asitler, bir amino grubunu, bir karboksil grubunu, bir hidrojen atomunu ve “yan zincif' olarak adlandirilan ayirt edici bir grubu baglayan bir karbon atomunu içerir.

Omurgalarinda ek bir metilen grubu içeren amino asitler genellikle ß-amino asitler olarak adlandirilir. Dogal olarak olusan amino asitlerin yan zincirleri teknikte iyi bilinmektedir ve bunlara, örnegin, hidrojen (ör. glisindeki gibi), alkil (ör. alanin, valin, lösin, izolösin ve prolindeki gibi), sübstitüe alkil (ör. treonin, serin, metionin, sistein, aspartik asit, asparagin, glutamik asit, glutamin, arjinin ve Iizindeki gibi), arilalkil (ör. fenilalanin ve triptofandaki gibi), sübstitüe arilalkil (ör. tirozindeki gibi) ve heteroarilalkil (ör. histidindeki gibi) dahildir. Dogal olmayan amino asitler de teknikte bilinmektedir ve örnegin, Williams (1989); Evans vd. konmustur. Mevcut bulus, dogal olmayan amino asitlerin yan zincirterini de içerir. aminleri ifade eder; burada, hidrojenlerin biri (primer), ikisi (sekonder) veya üçü (tersiyer) karbon ile degistirilmistir ve burada sözü edilen karbon baska herhangi bir atoma baglanabilir. Bazi düzenlemelerde, söz konusu karbon (C), yukarida gösterilen formüldeki X'e, bir hidrokarbon grubuna (ör. -CH2-), -CH(E)(CHAR veya bir -C(O)- grubuna dahildir ve A, D, E, F, X, R1, R2, R3 ve R4 burada tanimlandigi gibidir.

Burada tarif edilen bilesikler, bir veya daha fazla asimetrik merkez içerebilir ve bundan dolayi, rasematlar ve rasemik karisimlar, tek enantiyomerler, diastereomerik karisimlar ve birbirinden ayri diasteromerler olarak meydana gelebilir. Burada tarif edilen tüm bilesiklerin muhtemel tüm stereoizomerleri, aksi belirtilmedikçe, bu bulusun kapsaminda degerlendirilmektedir. Bilesiklerin kiral merkezleri, IUPAC 1974 Tavsiyeleri'nce tanimlandigi gibi, 8- veya R-konfigürasyonuna sahip olabilir. Bu bulusun tüm bu izomerik formlari kapsamasi öngörülmüstür.

Hak iddiasina konu olan bulusun sentezlenmis bilesiklerden herhangi birinin tuzlarini da kapsamasi amaçlanmistir. Burada kullanildigi sekliyle “tuz(lar)” terimi, inorganik ve/veya organik asitler ve bazlar ile olusturulmus asidik ve/veya bazik tuzlar olarak anlasilmalidir. Zvitteriyonlarin (dahili veya iç tuzlar), alkilamonyum tuzlari gibi kuaterner amonyum tuzlarinda oldugu gibi burada kullanildigi sekliyle ““tuz(lar)” terimine dahil olduklari anlasilmalidir. Farmasötik olarak kabul edilebilir, nontoksik tuzlar asagida açiklandigi sekilde tercih edilmektedir, ancak örnegin izolasyon veya saflastirma adimlarindaki gibi baska tuzlar da faydali olabilir.

Asit katki tuzlarinin sinirlandirici olmayan örnekleri arasinda asetat, adipat, aljinat, aspartat, benzoat, benzensülfonat, bisülfat, bütrat, sitrat, kamforat, kamforsülfonat, siklopentanpropionat, diglükonat, dodesilsülfat, etansülfonat, fumarat, glükoheptanoat, gliserofosfat, hemisülfat, heptanoat, heksanoat, hidroklorür, hidrobromür, hidroiyodür, 2-hidr0ksietansülf0nat, Iaktat, maleat, metansülfonat, 2-naftalensülfonat, nikotinat, oksalat, pektinat, persülfat, 3-fenilpr0pionat, pikrat, pivalat, propionat, süksinat, tartrat, tiyosiyanat, tosilat ve undekanoat bulunur, fakat bunlarla sinirli degildir.

Bazik tuzlarin sinirlandirici olmayan örnekleri arasinda amonyum tuzlari; sodyum, lityum ve potasyum tuzlari gibi alkali metal tuzlari; kalsiyum ve magnezyum tuzlari gibi toprak alkalin metal tuzlari; aminler (öm., disikloheksilamin, t-bütilamin ve t-amilamin gibi alkilaminler, ikame edilmis alkilaminler, benzilamin gibi aril-alkilaminler, dialkilaminler, N- metil glükamin (özellikle N-metil D-glükamin) gibi ikame edilmis dialkilaminler, trialkilaminler ve ikame edilmis trialkilaminler) gibi organik bazlar içeren tuzlar; ve arginin, lizin ve benzeri gibi amino asitler içeren tuzlar bulunur fakat bunlarla sinirli degildir. Bazik azot içeren gruplar düsük alkil halidler (öm. metil, etil, propil ve bütil klorürler, bromürler ve iyodürler), dialkil sülfatlar (örn. dimetil, dietil, dibütil ve diamil sülfatlar), uzun Zincirli halidler (örn. desil, lauril, mirtistil ve stearil klorürler, bromürler ve iyodürler), arilalkil halidler (örn. benzil ve fenetil bromürler) ve teknikte bilinen digerleri gibi maddelerle kuaternize edilebilir.

Istemlerde ve/veya tarifnamede “içeren" kelimesiyle beraber kullanilan “bir” kelimesi, anlamlarina da uygundur.

Bu basvuru içerisinde “yaklasik" ifadesi, degerin cihaz, degeri saptamakta kullanilan yöntem veya çalisma denekleri arasindaki varyasyon için dogal hata varyasyonunu içerdigini göstermekte kullanilir. Örnegin “yaklasik” ifadesi %10 içinde, tercihen %5 içinde, daha tercihen %1 içinde ve en fazla tercihen %O,5 içinde olabilir.

Istemlerde “veya” terimi, sadece alternatifleri ifade ettigi açikça belirtilmedikçe veya alternatifler karsilikli olarak münhasir olmadikça “ve/veya” anlaminda kullanilir, ancak bildirim sadece alternatifleri ve “ve/veya” terimini ifade eden bir tanimi destekler.

Bu tarifname ve istem(ler)de kullanildigi sekilde, “kapsayan” (ve “kapsar” gibi çekimleri), “sahip” (ve “sahip olan” gibi çekimleri), “dahil” (ve “dahildir" gibi çekimleri) veya "içeren” (ve “içerir” gibi çekimleri) kelimeleri kapsayici veya açik uçludur ve belirtilmemis ilave unsurlari veya yöntem adimlarini dislamaz.

Mevcut bulusun diger amaçlari, özellikleri ve avantajlari asagidaki ayrintili tanimla netlesecektir. Ancak ayrintili tanimin ve spesifik örneklerin, bulusa ait tercih edilen düzenlemeleri gösterse de sadece örnekleme yoluyla verildigi bilinmelidir.

Qizimlerin kisa tanimi Asagidaki çizimler mevcut tarifnamenin bir kismini olusturmaktadir ve mevcut bulusun belli özelliklerini de göstermek üzere dahil edilmistir. Burada verilen spesifik düzenlemelerin ayrintili tanimiyla beraber bu çizimlerden bir veya daha fazlasina referansla bulus daha iyi anlasilabilir.

SEKIL 1. Etilendisistein-gIukozaminin (EC-G) organik sentezinin sinirlayici olmayan örnegi.

SEKIL 2. Renyum-etilendisistein-glukozaminin (Re-EC-G) organik sentezinin sinirlayici olmayan örnegi.

SEKIL 3. Re-EC-G ve bir Ienfoma hücre dizisi kullanilan [3H]Timidin birlestirme deneyi.

SEKIL 4. EC-G'nin ham biçimde veya hazir HPLC ile saflastirilmis biçimde hücresel aliminin karsilastirilmasi.

SEKIL 5. EC-G kütle spektrometrisi.

SEKIL 6. 68Ga-EC-G'nin radyo-TLC'si (ince katman kromatografi). (a) organik yöntemlerle sentezlenmis 68Ga-EC-G; (b) sulu yöntemlerle sentezlenmis 68Ga-EC-G; (c) serbest 68Ga.

SEKIL 7. 68Ga-EC-G'nin analitik radyo-HPLC'sI. (a) UV tespiti; (b) Nal tespiti.

SEKIL 8A ve SB. Radyo-TLC'de gösterildigi gibi köpek serumundaki 68Ga-EC-G stabilitesi. (a) 68Ga-EC-G (0,7 mg/ 100 uL köpek serumunda süre = 60 dak.; (e) süre = 120 dak.; (f) BBGa-EC-BSA.

SEKIL 9. Protein baglama deneyinde analiz edildigi üzere köpek serumundaki 68Ga- EC-G stabilitesi.

SEKIL 10. Meme kanseri hücre dizisi 13762'de 68Ga etiketli bilesiklerin in vitro alim çalismasi.

SEKIL 11. Meme tümörü bulunan siçanlarda 99mTc-EC-ESMOLOL türevinin (11 MBq/siçan ( düzlemsel görüntüleri. H/UM = 15-45 dakikada kalp/üst mediasten sayim yogunlugu (sayi/piksel) oranlari.

SEKIL 12. Yeni Zelanda beyaz tavsaninda 88Ga-EC-TML PET görüntüleme.

SEKIL 13. Etilendisistein-glukozaminin (EC-G) organik sentezinin sinirlayici olmayan örnegi.

Aciklavici düzenlemelerin tanimi Mevcut bulus sahipleri opsiyonel olarak bir veya daha fazla metal iyonuna selatlanan selatör hedefleme Iigandi konjugatlarinin hazirlanmasi için yeni sentetik yöntemler tanimlamistir. Mevcut bulus ayrica konjuge olmayan selatörler, korunmus selatörler (yani bir veya birden fazla fonksiyonel grubun bir koruyucu ajan ile korundugu selatörler) ve metal iyonu etiketli selatörler (yani bir veya birden fazla metal iyonuna selatlanan selatörler) gibi selatörlerin sentezini saglamaktadir. Bu sentetik yöntemler genellikle organik çözücülerin kullanimini ve sentetik organik prosedürlerle saflastirma yöntemlerini içerir. yöntemlerinden ele edilen bilesikler, özellikle islak kimyayla hazirlanan bilesiklere kiyasla yüksek safliktadir. Mevcut bulusta kullanilan selatör etilendisisteindir. Bilesiklere selatlanan metal iyonlari bilesigi ayrica görüntüleme, teshis veya terapötik alanlarinda faydali kilabilir.

Bilesikler, sentez yöntemleri ve kullanim alanlari asagida tanimlanmaktadir.

A. Selatör Teknikte uzman kisiler bir veya daha fazla metal iyonunu selatlayabilen bilesikleri (“selatörler”) taniyacaktir. Mevcut bulusun yönteminde kullanilan selatörler genellikle bir veya daha fazla metal iyonuna selatlanabilen bir veya daha fazla atom içerir. Bir selatör, tipik olarak bir metal iyonuna selatlanir.

Metal iyonunun selatöre selatlanmasi, teknikte uzman kisilerce bilinen herhangi bir yöntemle yapilabilir. Selatlama yöntemleri (koordinasyon olarak da anilir) asagida daha ayrintili olarak açiklanmaktadir. Selatlamada kullanilan atomlar teknikte uzman kisilerce bilinmektedir ve tipik olarak 0, N veya S'yi içerir. Tercih edilen düzenlemelerde, selatlamada kullanilan atomlar N ve S'den olusan gruptan seçilir.

Tercih edilen belli düzenlemelerde, metal iyonu burada “selat” olarak anilan ve N82, N28, S4, N282, N38 ve NSs'ten olusan gruptan seçilen bir grup atoma selatlanir.

Selatlama ayrica selatör ve hedefleme Iigandi arasinda da gerçeklesebilir-yani, hem selatör hem hedefleme Iigandi ayni metal iyonunu selatlayan atomlara destek olabilir.

Belli düzenlemelerde, selatör bir veya daha fazla amino asit içeren bilesiklerden olusur. Amino asitler tipik olarak sistein ve glisinden olusan gruptan seçilir. Örnegin, selatör üç sistein ve bir glisin veya üç glisin ve bir sistein içerebilir. Yukarida ele alindigi gibi, aralayici bir amino asidi digerine baglayabilir.

Selatörlerin genel olarak çesitli fonksiyonel gruplar içerdigi teknikte uzman kisilerce iyi bilinmektedir. Söz konusu fonksiyonel gruplarin sinirlayici olmayan örnekleri arasinda hidroksi, tiyol, amin, amido ve karboksilik asit bulunur. 1. Bis-aminoetanetivol (BAT) dikarboksilik asitler Mevcut bulusta kullanilan selatör olan etilendisistein (EC), bis-aminoetanetiyol (BAT) dikarboksilik asittir. BAT dikarboksilik asitler tetradentat Iigand görevi görebilir ve ayni zamanda diaminoditiyol (DADT) bilesik olarak bilinmektedir. Söz konusu bilesiklerin, oksoteknetyum grubunu iki tiyoI-sülfür ve iki amin-azot atomuna etkin biçimde baglama esasina göre sabit Tc(V)O-k0mpleksleri olusturdugu bilinmektedir. 99mTc etiketli dietilester (99mTc-L,L-ECD), beyin ajani olarak bilinmektedir. 99mTc-L,L- etilenedisistein (99mTc-L,L-EC) bunun en polar metabolitidir ve idrarda hizla ve etkin biçimde bosaltildigi kesfedilmistir. Dolayisiyla, 99mTc-L,L-EC renal fonksiyon ajani olarak kullanilmistir. (Verbruggen vd. 1992). Indiyum, renyum, galyum, bakir, holmiyum, platin, gadolinyum, Iütesyum, itriyum, kobalt, kalsiyum ve arsenik gibi diger metaller de EC gibi BAT dikarboksilik asitlere selatlanabilir. 2. Aralayicilar Mevcut bulusta kullanilan selatör olan etilendisistein (EC), iki amino asidi aralayici ile baglar. Söz konusu aralayicilar teknikte uzman kisilerce iyi bilinmektedir. Bu aralayicilar genel olarak, tüm bilesige bir veya daha fazla metal iyonunun selatöre selatlanmasini kolaylastirabilecek ilave esneklik saglar.

B. Koruyucu gruplar Çok fonksiyonlu bir bilesikte seçilmis bir reaktif bölgede kimyasal bir reaksiyon yürütülecegi zaman, çogunlukla diger reaktif bölgeler geçici olarak bloke edilmelidir. Burada kullanildigi sekilde “koruyucu grup", bu geçici blokajda kullanilan grup olarak tanimlanmaktadir.

Dolayisiyla Koruyucu grubun fonksiyonu, serbest (diger bir deyisle korunmasiz) fonksiyonel grubun sonraki reaksiyonlari için serbest olma gerekliligi ile tutarsiz biçimde reaksiyon gösterecegi ve islevsellestirileceginden veya serbest fonksiyonel grubun reaksiyona müdahale edeceginden dolayi iyi gitmeyecek sonraki reaksiyonlar sirasinda bir veya birden fazla fonksiyonel grubu (örn., -NH2, -SH, -COOH) korumaktir. Teknikte uzman kisiler koruyucu grup kullaniminin sentetik organik kimyada yaygin oldugunu bilmektedir.

Bilesiklerin sentezi sirasinda çesitli fonksiyonel gruplar, sentezin çesitli asamalarinda koruyucu ajanlar kullanilarak korunmalidir. “Koruyucu ajan", koruyucu grubun kurulmasinda kullanilir. Dolayisiyla, tipik bir prosedürde, koruyucu ajan korunacak bir fonksiyonel grup içeren bir bilesikle karistirilir ve koruyucu ajan bu fonksiyonel grupla bir kovalent bag olusturur. Bu sekilde fonksiyonel grup, koruyucu ajanla olusan kovalent bag yoluyla koruyucu bir grupla “korunur” (ve etkin biçimde tepkisizlestirilir). Çok sayida fonksiyonel grup, uygun biçimde seçilmis koruyucu ajanlarla bir veya birden fazla adimda korunabilir. Söz konusu uygun seçim, teknikte uzman kisilerce anlasilmaktadir. Söz konusu seçim çogunlukla korunacak fonksiyonel gruplarin degisken reaktivitesine dayanmaktadir: dolayisiyla tipik olarak daha az reaktif gruplar (amin gibi) korunmadan önce daha fazla reaktif gruplar (sülfür/tiyol gibi) korunmaktadir.

Bu asamayi gerçeklestirmek için teknikte uzman kisilerce iyi bilinen bir dizi yöntem mevcuttur. Koruyucu ajanlar, reaktiviteleri, kurulum ve kullanimlari için bkz. öm., Greene ve Wuts (1999). Ayni koruyucu grup ayni veya farkli fonksiyonel gruptan/gruplardan bir veya birden fazlasini korumakta kullanilabilir. Koruyucu grup kurulumunun sinirlayici olmayan örnekleri asagida tanimlanmaktadir. tür her fonksiyonel grubun korundugu anlamina gelmez. Benzer biçimde, burada kullanildigi sekilde ”korunmus selatör” ifadesi selatörün her fonksiyonel grubunun korundugunu belirtmez.

Mevcut bulusun yönteminin uygulanmasi sirasinda kullanilip üretilen bilesikler hem korunan hem korunmayan (veya “serbest”) biçimde degerlendirilmektedir. Teknikte uzman kisiler, istenen bir dönüsüm için gerekli fonksiyonel gruplarin korumasiz olmasi gerektigini anlayacaktir.

Ihtiyaç kalmayan koruyucu grup, teknikte uzman kisilerce iyi bilinen yöntemlerle uzaklastirilir. Koruyucu grubu uzaklastiran ajanlar ve kullanimlari için bkz. örn., Greene ve Wuts (1999). Koruyucu grubu uzaklastirmakta kullanilan ajanlar genellikle, koruyucu grubu uzaklastiran ajanlar olarak anilir. Koruyucu gruplar genellikle, teknikte uzmanlarca iyi bilinen koruyucu grubu uzaklastiran ajanlari kullanan yöntemlerle çabucak uzaklastirilabilmektedir (teknikte uzman kisilerce bilindigi gibi). Örnegin asetat ester ve karbamat koruyucu gruplari hafif asidik veya bazik kosullarla kolayca uzaklastirilir, ancak benzil ve benzoil ester koruyucu gruplari daha güçlü asidik veya bazik kosullar gerektirmektedir. Koruyucu grubu uzaklastiran belirli ajanlarin bazi koruyucu gruplari uzaklastirirken digerlerini uzaklastirmadigi, koruyucu grubu uzaklastiran diger ajanlarin ise çesitli tiplerde koruyucu gruplari çesitli türlerdeki fonksiyonel gruplardan uzaklastirdigi iyi bilinmektedir. Örnegin sivi amonyak ve sodyum kullanan Birch indirgeme reaksiyonlari (asagida tanimlandigi gibi) benzil gruplarini tiyollerden (veya bilhassa sülfürden) veya karbamat gruplarini azottan uzaklastirir ancak asetat gruplarini oksijenden uzaklastirmaz. Dolayisiyla koruyucu grubu uzaklastiran birinci ajan bir koruyucu grup tipini uzaklastirmada, sonrasinda ise koruyucu grubu uzaklastiran ikinci ajan ikinci bir koruyucu grup tipini uzaklastirmada kullanilabilir ve böyle devam eder.

Teknikte uzman kisiler koruyucu grubu uzaklastiran ajan kullanarak koruyucu grup uzaklastirmanin uygun düzenine asinadir. Öm. bkz., Greene ve Wuts (1999). Koruyucu grup uzaklastirmanin sinirlayici olmayan örnekleri asagida ele alinmaktadir.

Amin koruyucu gruplari teknikte uzman kisilerce iyi bilinmektedir. Örnegin bkz.

Greene ve Wuts (1999), Bölüm 7. Bu koruyucu gruplar, teknikte uzman kisilerce iyi bilinen koruyucu ajanlarla olusturulabilir. Bu gruplarin uzaklastirilmasi da teknikte uzman kisilerce iyi bilinmektedir.

Bazi düzenlemelerde, amin koruyucu grubu t-bütoksikarbonil, benziloksikarbonil, formil, tritil, asetil, trikloroasetil, dikloroasetil, kloroasetil, trifloroasetil, difloroasetil, floroasetil, benzil kloroformat, 4-fenilbenziloksikarbonil, 2-metilbenziloksikarbonil, 4- etoksibenziloksikarbonil, 4-fl0robenziloksikarbonil, 4-klorobenziloksikarb0nil, 3- klorobenziloksikarbonil, 2-klorobenziloksikarbonil, 2,4-diklorobenziloksikarbonil, 4- bromobenziloksikarbonil, 3-br0m0benziloksikarbonil, 4-nitrobenziIoksikarbonil, 4- siyanobenziloksikarbonil, 2-(4-ksenil)izopr0p0ksikarb0nil, 1 ,1 -d ifenilet-l-iloksikarbonil, 1 ,1- difenilprop-1-iloksikarbonil, 2-fenilprop-2-iloksikarbonil, 2-(p-toluil)pr0p-2-il0ksikarbonil, siklopentaniloksikarbonil, 1-metilsiklopentaniloksikarbonil, sikloheksaniloksikarbonil, 1- metilsikloheksaniloksikabonil, 2-metilsikloheksaniloksikarbonil, 2-(4- toluilsülfonil)et0ksikarbonil, 2-(metilsüIfonil)etoksikarb0nil, 2-(trifenilfosfino)et0ksikarbonil, florenilmetoksikarbonil, 2-(trimetiIsilil)etoksikarbonil, alliloksikarbonil, 1- (trimetilsililmetil)prop-1-eniloksikarbonil, 5-benzisoksalilmetoksikarbonil, 4- asetoksibenziloksikarbonil, 2,2,2-trikloroetoksikarbonil, 2-etiniI-2-pr0p0ksikarbonil, siklopropilmetoksikarbonil, 4-(desiloksiI)benziloksikarbonil, izobomiloksikarbonil, 1- piperidiloksikarbonil ve 9-fl0renilmetil karbonattan olusan gruptan seçilebilir.

Bazi düzenlemelerde, amin korumasinin koruyucu ajani benzilkloroformat, p-nitro- klorobenzilformat, etilkloroformat, di-tert-bütil-dikarbonat, trifenilmetil klorür ve metoksitrifenilmetil klorürden olusan gruptan seçilir. Tercih edilen bir düzenlemede koruyucu grup, koruyucu ajan benziloksikloroformatla kurulan benziloksikarbonildir.

Tiyol koruyucu gruplari teknikte uzman kisilerce iyi bilinmektedir. Örnegin bkz.

Greene ve Wuts (1999), Bölüm 6. Bu koruyucu gruplar, teknikte uzman kisilerce iyi bilinen koruyucu ajanlarla olusturulabilir. Bu gruplarin uzaklastirilmasi da teknikte uzman kisilerce iyi bilinmektedir.

Bazi düzenlemelerde, tiyol koruyucu grubu asetamidometil, benzamidometil, 1- etoksietil, benzoil, trifenilmetil, t-bütil, benzil, adamantil, siyanoetil, asetil ve trifloroasetilden olusan gruptan seçilebilir.

Bazi düzenlemelerde tiyol korumasinin koruyucu ajani alkil halojenür, benzil halojenür, benzoil halojenür, sülfonil halojenür, trifenilmetil halojenür, metoksitrifenilmetil halojenür ve sisteinden olusan bir gruptan seçilir. Bu koruyucu ajanlari sinirlayici olmayan örnekleri arasinda etil halojenürler, propil halojenürler ve asetil halojenürler bulunur.

Halojenürler örnegin kloro, bromo veya iyodo Içerebilir. Tercih edilen bir düzenlemede koruyucu grup, koruyucu ajan benzil klorürle kurulan benzildir.

Hidroksi (veya alkol) koruyucu gruplari teknikte uzman kisilerce iyi bilinmektedir. Örnegin bkz. Greene ve Wuts (1999), Bölüm 2. Bu koruyucu gruplar, teknikte uzman kisilerce iyi bilinen koruyucu ajanlarla olusturulabilir. Bu gruplarin uzaklastirilmasi da teknikte uzman kisilerce iyi bilinmektedir.

Uygun bir hidroksi koruyucu grubu esterlerden veya eterlerden olusan gruptan seçilebilir.

Asetat, benzoil, tert-bütilkarbonil ve trifloroasetil gruplari gibi esterler asidik veya bazik kosullarla uzaklastirilabilir. Metoksi, etoksi ve tri-benzilmeti gibi esterler daha güçlü asidik veya bazik kosullarla uzaklastirilabilir. Tercih edilen bir koruyucu grup, bir asetat esteridir.

Karbonil koruyucu gruplari teknikte uzman kisilerce iyi bilinmektedir. Örnegin bkz.

Greene ve Wuts (1999), Bölüm 4. Söz konusu koruyucu gruplar örnegin ketonlari veya aldehitleri veya esterlerde bulunan karbonili, amidleri, esterleri ve benzerlerini koruyabilir.

Bu koruyucu gruplar, teknikte uzman kisilerce iyi bilinen koruyucu ajanlarla olusturulabilir.

Bu gruplarin uzaklastirilmasi da teknikte uzman kisilerce iyi bilinmektedir.

Bazi düzenlemelerde, karbonil koruyucu grubu dimetilasetal, dimetilketal, diizopropilasetal, diizopropilketal, enaminler ve enol eterlerden olusan gruptan seçilebilir.

Karboksilik asit koruyucu gruplari teknikte uzman kisilerce iyi bilinmektedir. Örnegin bkz. Greene ve Wuts (1999), Bölüm 5. Bu gruplarin uzaklastirilmasi da teknikte uzman kisilerce iyi bilinmektedir.

Uygun bir karboksilik asit koruyucu grubu örnegin amidlerden veya esterlerden olusan gruptan seçilebilir. Sülfonamid, para-nitroanilin, benzilamid ve benzoilamid asidik kosullarda hidrolize edilebilir. Metil ester, etil ester ve benzil ester asidik veya bazik kosullarda hidrolize edilebilir. Tercih edilen bir koruyucu grup, bir amiddir.

C. Metal iyonlari Yukarida ileri sürüldügü gibi, mevcut bulusun belirli düzenlemeleri bir veya birden fazla metal iyonunun selatlanmasinda islev görecek olan bilesimlerle ilgilidir.

Hedefleme ligandlari bir veya birden fazla metal iyonunun selatlanmasina da katilabilir. “Metal iyonu" burada bir veya birden fazla atom veya molekülle kovalent olmayan bag gibi bir bag kurabilen bir metal iyonunu belirtecek sekilde tanimlanmaktadir. Diger atom(lar) veya molekül(ler) negatif yüklü olabilir.

Teknikte uzman kisilerce bilinen metal iyonlarinin, bilesimlere dahil oldugu öngörülmektedir. Teknikte uzman kisiler, metal iyonlarina ve bunlarin uygulanmasina iyonu, bir selenyum iyonu, bir talyum iyonu, bir manganez iyonu, bir kobalt iyonu, bir platin iyonu, bir renyum iyonu, bir kalsiyum iyonu ve bir rodyum iyonundan olusan gruptan seçilebilir. Örnegin metal iyonu radyonüklit olabilir. Radyonüklit, radyoaktivite sergileyen yapay veya dogal kökenli bir izotoptur. Bazi düzenlemelerde, radyonüklit düzenlemelerde, metal iyonu renyum veya 9gmTc, 188Re veya 68Ga gibi bir radyonükleittir. Asagida açiklandigi gibi, indirgen maddenin 99mTc gibi bir radyonükleide eslik etmesi gerekebilir. Söz konusu indirgen maddelerin sinirlayici olmayan örnekleri arasinda ditiyonit iyonu, kalay iyonu ve demir iyonu bulunur.

Daha iyi görüntüleme özelliklerine ve daha düsük fiyata bagli olarak, 123I, 131', 67Ga ve 111In etiketli bilesikleri mümkün oldugunda ilgili 99mTc etiketli bilesiklerle degistirme tesebbüslerinde bulunulmustur. Avantajli fiziksel özelliklerin yanisira asiri düsük fiyata ( bagli olarak, radyofarmasötiklerin etiketlenmesinde ggmTc tercih edilmistir.

Insanlarda optimal radyogörüntüleme için bir dizi faktör göz önünde bulundurulmalidir.

Tespitin verimliligini en üst seviyeye çikarmak için 100 ila 200 keV araliginda gama enerjisi yayan bir metal iyonu tercih edilmektedir. “Gama yayinlayicisi” burada herhangi bir aralikta gama enerjisi yayan bir ajan olarak tanimlanmaktadir. Teknikte uzman kisiler, gama yayinlayicisi olan çesitli metal iyonlarini taniyacaktir. Hastaya absorbe edilen radyasyon dozunu en düsük seviyeye indirmek için, radyonükleidin fiziksel yari ömrü görüntüleme prosedürünün izin verdigi kisalikta olmalidir. incelemelerin herhangi bir günde ve günün herhangi bir saatinde yapilabilmesi için klinik alanda daima el altinda bir radyonükleit kaynagi bulundurulmasi faydali olacaktir. 99”'Tc'nin tercih edilen radyonükleit olmasinin sebebi 140 keV'de gama radyasyonu yaymasi, 6 saatlik fiziksel yari ömre sahip olmasi ve sahada molibdenum-99/teknesyum-99m jeneratör kullanarak kolayca elde edilebilmesidir. Teknikte uzman kisiler, insanlarda optimal radyogörüntülemeyi saptama yöntemlerini taniyacaktir.

Mevcut bulusun belirli düzenlemelerinde metal iyonu terapötik bir metal iyonudur. Örnegin bazi düzenlemelerde metal iyon, beta yayinlayicisi olan bir terapötik radyonükleittir. Burada tanimlandigi gibi, beta yayinlayicisi herhangi bir aralikta beta enerjisi yayan herhangi bir ajandir. Beta yayinlayicisi örnekleri arasinda Re-188, Re- gama yayinlayicisi olabilir veya olmayabilir. Teknikte uzman kisiler, kanser gibi hiperproliferatif hastaligin tedavisinde beta yayinlayicilarin kullanimina asina olacaktir.

Diger düzenlemelerde metal iyonu, beta yayinlayicisi veya gama yayinlayicisi olmayan terapötik bir metal iyonudur. Örnegin terapötik metal iyonu platin, kobalt, bakir, arsenik, selenyum, kalsiyum veya talyum olabilir. Bu terapötik metal iyonlarini içeren bilesimler hiperproliferatif hastaliklar, kardiyovasküler hastaliklar, enfeksiyonlar ve enflamasyon gibi hastaliklarin tedavisine yönelik yöntemlerde uygulanabilir. Hiperproliferatif hastaliklara örnek olarak kanser verilebilir. Bilesimleri içeren ikili kemoterapi ve radyasyon tedavisi yürütme yöntemleri asagida ayrintili olarak ele alinmaktadir.

D. Hedefleme Iigandlari veya molekül parçasi olarak tanimlanmaktadir. Mevcut bulusa göre hedefleme ligandi, glikozu taklit eden bir ajandir.

Selatöre tek bir hedefleme Iigandi veya bu tür birden fazla hedefleme Iigandi konjuge edilebilir. Bu düzenlemelerde, burada öne sürülen selatörlere herhangi bir sayida hedefleme Iigandi konjuge edilebilir. Belirli düzenlemelerde, bir konjugat tek bir hedefleme Iigandi içerebilir. Diger düzenlemelerde, bir konjugat sadece iki hedefleme ligandi içerebilir. Daha baska düzenlemelerde bir hedefleme Iigandi üç veya daha fazla hedefleme Iigandi içerebilir. Konjugatin iki veya daha fazla hedefleme Iigandi içerdigi herhangi bir kosulda, hedefleme Iigandlari ayni veya farkli olabilir.

Hedefleme Iigandlari selatöre örnegin kovalent baglar, iyonik baglar ve hidrojen baglari gibi herhangi bir biçimde baglanabilir. Örnegin, hedefleme Iigandi selatöre herhangi bir boyda bir amid baglantisi, ester baglantisi veya karbon-karbon bag baglantisi ile baglanabilir.

Selatöre iki veya daha fazla hedefleme Iigandi baglanirsa, bag modlari ayni veya farkli olabilir. Diger düzenlemelerde baglanti bir baglayici içerir. Bu baglayicilarin sinirlayici olmayan örnekleri arasinda peptitler, glutamik asit, aspartik asit, bromo etilasetat, etilen diamin, Iizin ve bu gruplardan bir veya birden fazlasinin herhangi bir kombinasyonu bulunur. Teknikte uzman bir kisi, bu ajanlarin kimyasini ve bu ajanlari hak iddiasina konu olan bulusun selatörlerine Iigand olarak konjuge etme yöntemlerini taniyacaktir. Bilesiklerin sentez yöntemleri, konjugasyon modlari dahil, asagida ayrintili olarak ele alinmaktadir.

Hedefleme ligandlari ve bilesiklerle konjugasyona iliskin bilgiler ABD Patenti Glikozu taklit eden aianlar Glikozu taklit eden ajanlarin hedefleme ligandi olarak dahil edildigi öngörülmektedir.

Söz konusu ajanlar “glikoz analoglari” veya “glikoz türevleri" olarak da kabul edilebilir.

Glikoz, canli organizmalarca glikoliz yolagi boyunca kullanilir. Neomisin, kanamisin, gentamisin, amikasin, tobramisin, netilmisin, ribostamisin, sisomisin, mikromisin, verilen bir gruba aittir.

Yapisal açidan, glikozu taklit eden ajanlar genellikle bir glikoz halka yapisina sahiptir.

Ancak, pentoz halka yapisina sahip olan, yine de glikozu taklit eden bir ajan olarak görülebilecek puromisin gibi istisnalar mevcuttur.

Fonksiyonel açidan aminoglikozitler, yapisal olarak glikozla benzer olma ve dolayisiyla fonksiyonel olarak glikozu taklit eden ajanlar olarak kabul edilme özellikleri nedeniyle glikoliz yolagini tikayan antibiyotikler olarak kullanilir. Bu aminoglikozitler görüntüleme çalismalarinda kullanildiginda, saptanabilir bir farmakolojik etki yoktur.

Amerikan Kalitim Sözlügü dördüncü baskisinda ifade edildigi sekilde, “taklit” kelimesi benzerlikleri nedeniyle glikolitik yolak boyunca fonksiyonel olarak kullanilir ve glikoliz yolagini tikar. Dolayisiyla aminoglikozitlerin, yapisal ve fonksiyonel açidan glikozu taklit ettigi veya glikoz gibi davrandigi kabul edilmektedir.

Kimyasal yapilarin PubChem Veritabani (NCBI) tanimlayici CID numaralari ile beraber sinirlayici olmayan örnekleri asagida verilmektedir: Amikasin CID 37768; Aminoglikozit Aminoglikozitlerle glikoliz tikamayi tanimlayan referanslar arasinda örnegin, Tachibana Glikozu taklit eden tercih edilen ajanlar veya sekerler arasinda neomisin, kanamisin, gentamisin, paromisin, amikasin, tobramisin, netilmisin, ribostamisin, sisomisin, mikromisin, lividomisin, dibekasin, isepamisin, astromisin ve glikoz ve glukozamin aminoglikozitleri bulunur.

E. Sentez yöntemleri 1. Bilesim reaktiflerinin kaynagi Bilesimleri hazirlamakta kullanilan reaktifler herhangi bir kaynaktan elde edilebilir. Teknikte uzman kisilerce çok sayida kaynak bilinmektedir. Örnegin reaktifler Sigma-Aldrich Chemical Company (Miwaukee, Wl) gibi ticari kaynaklardan, kimyasal sentezden veya dogal kaynaklardan elde edilebilir. Örnegin, radyonüklit saticilarindan biri Cambridge uzman kisilerce bilinen herhangi bir teknikle izole edilebilir ve saflastirilabilir. Baglanmamis serbest metal iyonlari, örnegin iyon degistirme reçinesi ile veya transselatör (örn. glikoheptonat, glukonat, glusarat veya asetilasetonat) eklenerek uzaklastirilabilir. 2. Aktif farmasötik icerik (API) olarak bir ara ürün kullanimi Belli bilesiklerin glukozamin kisminda disülfür olusumu ve anomerik merkezin nükleofilik saldirisi sikintiya yol açabilir. Bu istenmeyen reaksiyonlar EC-glukozamindeki (EC-G) tiyol gruplarinda ve/veya amino gruplarinda gerçeklesebilir: bunlar EC-G istikrarsizligina yol açabilecek baslica yan reaksiyonlardir. Ayrica, primer EC-G ürününü elde etmek için Na/NH3 ile koruyucu grup uzaklastirma adiminin genellikle düsük olan verimi safligin düsük olmasina yol açabilir (bkz. SEKIL 1 ve 13). Buna göre, mevcut bulusun sentez ara ürünlerinin aktif farmasötik içerik (API) olarak kullanilmasi tercih edilebilir. Örnegin asagida gösterilenler gibi, belli preparatlarda ara ürün olan EC-G analoglari API olarak kullanilabilir.

Bu analoglar, belirli düzenlemelerde ölçek büyütme sürecinde yüksek saflik getirebilir. 514 {. ::1- x_ :::in HC! nu' :iL'I H.i ^i`›.". '-J-i HU 4 l H .H ' r( \ - L ,C \ f) 1 IP.: JH Lg` .› N_ ;C 'i` 'i` `32 (::Ht - -J `: _ ':1 `i› i'j Ht'i 37:- - " 'î` 'f` .F "` L, F. ._. _t '› i~ "l r; «3 j. '“ I' I 3 , .ijif ` ,3 H` ` :4 "li/'i, `l "u/'C ` `î A. x *In «MH "H .1' Ü) ( 3. Saflastirma prosedürleri ve saflik tavinleri Yukarida belirtildigi gibi, teknikte uzman kisiler bilesikleri saflastirma yöntemlerine asina olacaktir. Burada kullanildigi gibi. “saflastirma” kelimesi materyalin saflastirma öncesi safligina kiyasla safliktaki ölçülebilir artisi ifade etmektedir. Her bilesigin saflastirilmasi, nihai ürünlerin saflastirilmasi kadar ara ürünlerin de saflastirilmasi dahil olmak üzere, ekseriyetle mümkündür. Saflastirma adimi asagida açiklanan genel metodolojilere her zaman dahil edilmez, ancak teknikte uzman kisiler bilesiklerin ekseriyetle herhangi bir adimda saflastirilabilecegini anlayacaktir.

Saflastirma yöntemleri örnekleri arasinda jel filtrasyonu, boyut dislama kromatografisi (jel filtrasyonu kromatografisi, jel permeasyon kromatografisi veya moleküler dislama olarak da anilir), diyaliz, distilasyon, tekrar kristallestirme, süblimasyon, türevlendirme, elektroforez, silika jel kolon kromatografisi ve normal faz HPLC ile ters faz HPLC dahil yüksek performansli sivi kromatografisi (HPLC) bulunur. Belli düzenlemelerde, boyut dislama kromatografisi ve/veya diyaliz, bilesiklerin saflastirma biçimleri olarak özellikle hariç tutulur. Bilesiklerin örnegin silika jel kolon kromatografisi veya HPLC ile saflastirilmasi, istenen bilesikleri çogunlukla bilesiklerin diger yöntemlerle saflastirilmasindan daha yüksek olan çok yüksek saflikta sunma faydasini verir. Bilesiklerin radyokimyasal safligi da saptanabilir. Radyokimyasal safligi saptama yöntemleri teknikte iyi bilinmektedir ve radyoaktivite saptama yöntemleriyle (örn., otoradyografi analizleri) beraber kromatografik yöntemleri içerir.

Organik ve islak metodolojilerle yapilmis ve çesitli yöntemlerle saflastirilmis bilesiklerin safligini karsilastirma örnekleri asagida verilmektedir.

Bilesiklerin safligini saptama yöntemleri teknikte uzman kisilerce iyi bilinmektedir ve sinirlayici olmayan örneklerle sunlari içermektedir: otoradyografi, kütle spektroskopisi, erime noktasini saptama, ultraviyole analizi, renk ölçüm analizi, (HPLC), ince tabaka kromatografisi ve nükleer manyetik rezonans (NMR) analizi (1H ve 130 NMR içerir, fakat bunlarla sinirli degildir). Bazi düzenlemelerde, renk ölçüm yöntemi selatörün veya selatör-hedefleme Iigandi konjugatinin safligini titre etmekte kullanilabilir. Örnegin, tiyoI-benzil eklentisinin (yani benzil grubu tarafindan korunan bir tiyol fonksiyonel grubu) olusturulmasi veya iyot kullanilarak oksidasyon reaksiyonu yürütülmesi, selatörün veya selatör-hedefleme Iigandi konjugatinin safligini saptamakta kullanilabilir. Bir düzenlemede, bilinmeyen bir bilesigin safligi, bilinen safliktaki bir bilesikle karsilastirilarak saptanabilir: bu karsilastirma, ölçümü bilinmeyenin safligini tanimlayan bir oran biçiminde olabilir. Çesitli cihazlardaki (öm, spektrofotometreler, HPLC'Ier, NMR'Ier) yazilim ve teknikte uzman kisilerce bilinen diger yöntemler, bu saptamalarin yapilmasinda teknikte uzman kisilere yardimci olabilir.

Belirli düzenlemelerde, bilesiklerin safliginin saptanmasi için asagidaki sinirlayici olmayan parametreler kullanilabilir: Kolon: Primesep100, 4,6 x 150 mm, 5 um, ortam sicakligi Hareketli faz (A): H20 ve %0,025 TFA Hareketli faz (B): asetonitril ve %0,025 TFA Izokratik çalisma: 1,0 cma/dak'da ( Tespit: ELSD, SEDEX75, 500, Mevcut bulusun belirli düzenlemelerinde, bilesigin saflastirilmasi tüm safsizliklari uzaklastirmaz. Bazi düzenlemelerde söz konusu safsizliklar tanimlanabilir. 4. Selatör elde etme Selatör hazirlama ve elde etme yöntemleri teknikte uzman kisilerce iyi bilinmektedir. Örnegin selatörler ticari kaynaklardan, kimyasal sentezden veya dogal kaynaklardan elde edilebilir.

Bazi düzenlemelerde, selatör etilendisistein (EC) içerebilir. Etilendisistein (EC) hazirlanmasi ABD Patent No. 6.692.724'te tanimlanmaktadir. Kisaca, EC önceden tanimlanmis yöntemlere (Ratner ve Clarke, 1937; Blondeau vd., 1967) göre iki asamali bir sentezde hazirlanabilir. Öncül, L-tiyazolidin-4-karboksilik asit sentezlenmis ve ardindan EC hazirlanmistir. Etilendisisteinin oksidasyonunu önlemek için bilesime antioksidan eklemek de çogunlukla önemlidir. Mevcut bulusla beraber kullanim için tercih edilen antioksidan C vitaminidir (askorbik asit). Ancak, tokoferol, piridoksin, tiyamin veya rutin gibi diger antioksidanlarin da faydali olabilecegi düsünülmektedir.

Selatörler de aralayicilarla birlestirilen amino asitler içerebilir. Söz konusu aralayici, yukarida tanimlandigi üzere, etilen gibi bir aIkiI aralayici içerebilir.

Amid baglar da bir veya daha fazla amino asidi birlestirerek bir selatör olusturabilir.

Söz konusu selatörlerin hazirlanmasi için sentetik yöntemler örnekleri arasinda kati faz sentez ve çözelti faz sentez bulunur. Söz konusu yöntemler örnegin Bodansky, 1993 ve Grant, 1992'de tanimlanmaktadir. . `îielatör-hedefleme quandi koniuqatlarinin orqanik sentezi Tercih edilen bir düzenlemede, mevcut bulus ayrica selatör-hedefleme Iigandi konjugatlarini organik olarak sentezlemek için bir yöntem sunmaktadir. Yöntem, örnegin, yukarida tanimlanmis etilendisistein (EC) gibi bir selatör elde edip her iki serbest tiyolu korumak için EC'yi organik ortam içinde bir tiyol koruyucu grupla karistirarak ortaya çikan S-S`-bis-korumaIi-EC'yi, daha sonra her iki serbest amini korumak için organik/sulu ortamda amino koruyucu grupla karistirarak S-S'-bis- korumali-N,N'-bis-korumali-EC elde etmeyi içerir. Tiyol gruplari azot gruplarindan daha reaktiftir; dolayisiyla tiyol gruplari genellikle daha önce korunur. Yukarida tanimlandigi gibi, teknikte uzman kisiler selatördeki fonksiyonel gruplarin türlerine bagli olarak koruyucu gruplarin uygun siralanmasina asina olacaktir. Bu korunan EC daha sonra burada tanimlanmis herhangi bir türde hedefleme Iigandina, burada tanimlanmis herhangi bir konjugasyon moduyla konjuge edilir ve ardindan tiyol ve amino koruyucu gruplar çikarilarak selatör hedefleme Iigandi konjugati saglanir.

Belirli düzenlemelerde, selatörle hedefleme Iigandi arasindaki konjugasyon tek asamada gerçeklesir. Özel düzenlemelerde, konjugasyon selatörün hedefleme ligandiyla kovalent baglantisini içerir, burada kovalent baglanti tek asamada gerçeklesmektedir. Yukarida belirtildigi gibi, söz konusu tek asamali prosedürler süreyi, reaktifleri, atiklari ve ürün kaybini minimize ettikleri için tercih edilmektedir.

Bu yöntemle sentezlenen selatör-hedefleme Iigandi konjugatlari, ardindan burada tanimlanan her tür metal iyonuna selatlanabilir. Söz konusu selatlama yöntemleri teknikte uzman kisilerce iyi bilinmektedir ve burada tanimlanmistir. Metal iyonlarinin selatör-hedefleme Iigandi konjugatlarina selatlanmasi yöntemlerinin örnekleri, örnegin ABD Patent No. 6.692.724'te tanimlanmaktadir. Burada tanimlanan, metal iyonunun selatöre selatlandigi yöntemler ayrica metal iyonunun selatör-hedefleme Selatör-hedefleme Iigandi konjugatlarini organik sentez kullanarak mevcut bulusun yöntemleri yoluyla sentezlemenin faydalari arasinda, örnegin, sulu sentezle elde edilen konjugatlara göre yüksek saflikta konjugatlar elde etmek ve küçük moleküllü (örn., 1000 g/mol veya altinda) bilesiklerin etkin Sentezi ve saflastirilmasi bulunur. Bu faydalar görüntüleme, teshis ve/veya terapötik deneylerde ve/veya klinik denemelerde kullanilabilen konjugatlar saglar. 6. Metal ivonuna selatlanmis selatör-hedefleme quandi koniuqatlarinin orqanik sentezi Tercih edilen diger bir düzenlemede, mevcut bulus ayrica metal iyonuna selatlanmis selatör-hedefleme ligandi konjugatlarini görüntüleme, teshis veya terapötik kullanim için organik olarak sentezleme yöntemi sunmaktadir. Yöntem, örnegin öncelikle EC gibi bir selatör elde etmeyi içermektedir. EC daha sonra bir rady0nüklit olabilecek bir metal iyonuyla veya burada tanimlanan diger bir metal iyonuyla karistirilarak N282 selati yoluyla EC'ye selatlanabilir. Öm. bkz. SEKIL 2. Diger selatlama yöntemleri (örn., tüm 0, N ve S kombinasyonu selatlari) burada tanimlanmaktadir ve selatlama burada tanimlanan tüm yöntemlerle gerçeklesebilir. Sinirlayici olmayan örneklerde, teknesyum, indiyum, renyum, galyum, bakir, holmiyum, platin, gadolinyum, Iütesyum, itriyum, kobalt, kalsiyum ve arsenik gibi metaller EC gibi bir selatörie selatlanabilir. Metal iyonuna selatlanan EC (“selatli EC”) daha sonra, metal iyonuna selatlanmis bir selatör-hedefleme ligandi konjugati olusturmak için bir organik ortamda, opsiyonel olarak bir veya daha fazla koruyucu grupla korunan bir hedefleme Iigandiyla karistirilir. Konjugasyon modu burada tanimlanan herhangi bir mod olabilir ve tek asamada veya birden fazla asamada gerçeklesebilir.

Metal iyonu etiketli selatör-hedefleme ligandi konjugatlarini organik sentez kullanarak mevcut bulusun yöntemleri yoluyla sentezlemenin faydalari arasinda, örnegin, sulu sentezle elde edilen konjugatlara göre yüksek saflikta konjugatlar elde etmek ve küçük moleküllü (örn., 1000 g/mol veya altinda) bilesiklerin etkin sentezi ve saflastirilmasi bulunur. Bu faydalar görüntüleme, teshis ve/veya terapötik deneylerde ve/veya klinik denemelerde kullanilabilen konjugatlar saglar. 7. Selatör-hedefleme liqandi koniuqatlarinin sulu sentezi Mevcut bulus ayrica selatör-hedefleme ligandi konjugatlarini sulu ortamda sentezlemek için bir yöntem sunmaktadir. Selatör-hedefleme ligandi konjugatlari genel olarak, organik ortamlarda sentezlenen söz konusu veya benzeri ürünlerin nispi safligini karsilastirma yöntemi olarak hazirlanmistir. Yöntem, örnegin öncelikle EC gibi bir selatör elde etmeyi içermektedir. EC daha sonra bazik sulu çözelti içinde çözünür ve burada tanimlanan herhangi bir türde baglama ajanlari eklenir. Daha sonra bu çözeltiye hedefleme ligandi eklenerek selatör-hedefleme ligandi konjugati olusturulur. 8. Metal ivonuna selatlanmis selatör-hedefleme quandi koniuqatlarinin sulu sentezi Mevcut bulus ayrica metal iyonuna selatlanmis selatör-hedefleme ligandi konjugatlarinin sulu ortamda sentezlenmesi için bir yöntem saglamaktadir. Yukarida belirtilen sulu sentez gibi, metal iyonuna selatlanmis selatör-hedefleme ligandlari konjugatlari organik ortamlarda sentezlenen söz konusu veya benzer ürünlerin nispi safligini karsilastirma yöntemi olarak hazirlanmistir. Yöntem bir düzenlemede, yukarida belirtildigi gibi bir metal iyonuna selatlanmis bir selatör elde etmekle baslamaktadir (“Metal iyonuna Selatlanmis Selatör-Hedefleme Ligandi Konjugatlarinin Organik Sentezi”). Metal iyonuna selatlanmis bu selatör, örnegin yukarida tanimlanan selatli EC olabilir. Selatlama, burada tanimlanan herhangi bir yöntemle gerçeklesebilir.

Selatlanmis EC bazik sulu çözelti içinde çözünebilir ve burada tanimlanan baglama ajanlari burada tanimlanan herhangi bir türde hedefleme ligandiyla berber eklenerek metal iyonuna selatlanmis bir selatör-hedefleme ligandi konjugati olusturulur. 9. Selatörün hedefleme quandi ile koniuqasvonu Mevcut bulus, (opsiyonel olarak bir metal iyonuna selatlanmis) selatöre hedefleme ligandi konjuge etme yöntemlerini öngörmektedir. Hedefleme ligandi burada tanimlanan herhangi bir türde olabilir. Teknikte uzman kisiler hedefleme Iigandlarinin çesitli fonksiyonel gruplara konjuge edilmesi yöntemlerine asina olacaktir. Çok yaygin biçimde, selatör ve hedefleme ligandi arasinda oldugu gibi, biri nükleofil islevi görürken digeri elektrofil islevi görür ve böylece konjügasyon, kovalent bag yoluyla gerçeklesir. Söz konusu kovalent baglarin sinirlayici olmayan örnekleri arasinda bir amid bag, bir ester bag, bir tiyoester bag ve bir karbon-karbon bag bulunur. Tercih edilen düzenlemelerde, konjugasyon bir amid veya ester bag yoluyla gerçeklesir. Bazi düzenlemelerde, konjugasyon; karboksilik asit, amin ve tiyolden olusan gruptan seçilen selatörün bir veya daha fazla fonksiyonel grubunda gerçeklesir. Selatörler ve hedefleme ligandlari, elektrofil islevi görürken, konjugasyon sirasinda halojenler ve sülfoniller gibi ayrilan grup islevi gören fonksiyonel gruplar içerebilir. Hedefleme ligandlari ayrica, -NH2 gibi, bir elektrofilik selatör ile konjugasyona katilabilecek nükleofilik gruplar da içerebilir.

Baglama ajanlari, burada kullanildigi gibi, selatörün hedefleme Iigandina baglanmasini kolaylastiran reaktiflerdir. Söz konusu ajanlar teknikte uzman kisilerce iyi bilinmektedir ve mevcut bulusun yöntemlerinin belirli düzenlemelerinde kullanilabilir. Baglama ajani örnekleri arasinda sülfo-N-hidroksisüksinimid (sülfo-NHS), dimetilaminopiridin (DMAP), diazabisikl ve disikloheksilkarbodiimid (DCC) bulunur fakat bunlarla sinirli degildir. Diger karbodiimidler de baglama ajani olarak düsünülmektedir. Baglama ajanlari, örnegin Bodansky, 1993 ve Grant, 1992'de ele alinmaktadir. Bu baglama ajanlari, konjugasyonu kolaylastirmak için tek basina veya birbirleriyle veya diger ajanlarla kombinasyon halinde kullanilabilir. Hedefleme Iigandi bir baglama ajani ile konjuge edildiginde genellikle üre olusturulur. Üre yan ürünü, filtrasyonla uzaklastirilabilir. Konjuge edilen ürün daha sonra, örnegin, silika jel kolon kromatografisi veya HPLC ile saflastirilabilir.

Genel olarak, mevcut bulusla beraber kullanilacak Iigandlar, EC gibi bir selatörün bir veya daha fazla fonksiyonel grubuna konjuge edilebilen fonksiyonel gruplara sahip olacaktir. Örnegin, bir hedefleme Iigandi, konjugati olusturmak için bir selatörün serbest aminiyle reaksiyona girecek halojenli bir konuma sahip olabilir. Fonksiyonel gruplar mevcut degilse veya optimal bir fonksiyonel grup mevcut degilse bile yine de istenen bir Iigand, etilenediamin, amino propanol, dietilenetriamin, aspartik asit, poliaspartik asit, glutamik asit, poliglutamik asit, sistein, glisin veya Iizin gibi bir baglayici eklenerek EC gibi bir selatöre konjuge edilebilir. Örnegin, ABD Patenti 6.737.247 mevcut bulusla kullanilabilecek çesitli baglayicilari açiklamaktadir. ABD Patenti 5.605.672, mevcut bulusta baglayici olarak kullanilabilecek çesitli “tercih edilen omurgalari" açiklamaktadir. Belli düzenlemelerde, selatör bir baglayiciya konjuge edilebilir ve baglayici hedefleme Iigandina konjuge edilir. Diger düzenlemelerde birden fazla baglayici kullanilabilir; örnegin selatör bir baglayiciya konjuge edilebilir ve baglayici ikinci bir baglayiciya konjuge edilir, ikinci baglayici da hedefleme Iigandina konjuge edilir. Belirli düzenlemelerde, beraber konjuge edilen iki, üç, dört veya daha fazla baglayici bir selatörle hedefleme Iigandinin konjuge edilmesinde kullanilabilir. Ancak bir selatörle hedefleme Iigandinin konjuge edilmesinde genellikle tek bir baglayici kullanilmasi tercih edilir.

EC gibi bazi selatörler suda çözünebilir. Bazi düzenlemelerde bulusun bir metal iyonuna selatlanan selatör-hedefleme Iigandi konjugati suda çözünebilir. Mevcut bulusla beraber kullanilan hedefleme Iigandlarinin çogu suda çözünebilir veya selatöre konjuge edildiginde suda çözünen bir bilesik olusturacaktir. Hedefleme kullanilabilir. Baglayicilar, örnegin alifatik veya aromatik alkole, amine, peptide veya karboksilik aside eklenebilir. Baglayicilar, örnegin poli amino asitler (peptitler) veya glutamik asit, aspartik asit veya Iizin gibi amino asitler olabilir. Tablo 2'de belirli fonksiyonel ilaç gruplari için tercih edilen baglayicilar gösterilmektedir.

Opsiyonel olarak bir veya daha fazla valent metal iyonuna selatlanan selatör-hedefleme ligandi konjugatlarini organik sentez kullanarak mevcut bulusun yöntemleri yoluyla sentezlemenin faydalari arasinda, örnegin, sulu sentezle elde edilen konjugatlara göre yüksek saflikta konjugatlar elde etmek ve küçük moleküllü (örn., 1000 g/mol veya altinda) bilesiklerin etkin sentezi ve saflastirilmasi bulunur. Bu faydalar görüntüleme, teshis ve/veya terapötik deneylerde ve/veya klinik denemelerde kullanilabilen konjugatlar saglar.

Bag Iayicilar Fonksiyonel Ilaç Grubu Baglayici Örnek Alifatik veya fenolik-OH EC-poli(glutamik asit) (MW estradiol, topotekan, poli(aspartik asit) (MW etoposid 2000-15.000) veya bromo etilasetat veya EC-glutamik asit veya EC-aspartik asit.

Alifatik veya aromatik-NH2 EC-poli(glutamik asit) (MW doksorubisin, mitomisin veya peptit ?SO-15.000) veya EC- C, endostatin, anneksin poli(aspartik asit) (MW 2000- V, LHRH, oktreotid, VIP .000) veya EC-glutamik asit (mono veya diester) veya EC-aspartik asit.

Karboksilik asit veya peptit Etilen diamin, Iizin metotreksat, folik asit . Metal iyonunun selatlanmasi Mevcut bulus ayrica bir veya daha fazla metal iyonunun bir selatöre veya selatör- hedefleme ligandi konjugatina selatlanmasi (koordinasyon olarak da anilir) yöntemlerini öngörmektedir. Söz konusu selatlama asamalari organik ortamda gerçeklesebilir. Belli düzenlemelerde selatlama sulu ortamda gerçeklesir. Belli düzenlemelerde, selatör ve hedefleme Iigandinin her biri metal iyonunun selatlanmasina katkida bulunabilir. Tercih edilen düzenlemelerde, metal iyonu sadece selatöre selatlanir. Selatlanan metal iyonu, örnegin iyonik bag, kovalent bag veya koordine kovalent bag (datif bag olarak da anilir) yoluyla baglanabilir. Söz konusu koordinasyon yöntemleri teknikte uzman kisilerce iyi bilinmektedir. Bir düzenlemede, metal iyonunun selatör içeren bir çözeltiye karistirilmasiyla koordinasyon meydana gelebilir. Diger bir düzenlemede, metal iyonunun selatör-hedefleme Iigandi konjugati içeren bir çözeltiye karistirilmasiyla koordinasyon meydana gelebilir. Bir düzenlemede, etilendisistein (EC) gibi bir selatörün olusturdugu N282 selat yoluyla, hedefleme Iigandi ile beraber veya olmaksizin selatöre selatlama yapilir. Selatör ve hedefleme Iigandinin ikisi de, metal iyonla selatlama öncesinde veya sonrasinda bir veya daha fazla koruyucu grupla korunabilir.

Selatlama, selatlamada kullanilabilen bir selatör veya hedefleme Iigandinin herhangi bir atomunda veya fonksiyonel grubunda gerçeklesebilir. Selatlama, örnegin bir veya daha fazla N, S, 0 veya P atomunda gerçeklesebilir. Selatlama gruplarinin sinirlayici olmayan düzenlemelerde, metal iyonu üç veya dört atoma selatlanir. Bazi düzenlemelerde, selatlama bir veya daha fazla tiyol, amin veya karboksilik asit fonksiyonel grubu arasinda meydana gelir. Belli düzenlemelerde, selatlama glutamatin, aspartatin, glutamat analogunun veya aspartat analogunun bir karboksil kismina yapilabilir. Bu düzenlemeler poli(glutamat) veya poli(aspartat) selatörlere selatlanan çok sayida metal iyonunu içerebilir. Bazi düzenlemelerde metal iyonu, dokuya özgü Iigandin karboksil gruplari gibi bir hedefleme ligandina selatlanabilir. Tercih edilen düzenlemelerde, selatlama selatörün bir veya daha fazla tiyol grubu ve bir veya daha fazla amin grubu arasindadir.

Sinirlayici olmayan bazi örneklerde, metal iyonu teknesyum, indiyum, renyum, galyum, bakir, holmiyum, platin, gadolinyum, Iütesyum, itriyum, kobalt, kalsiyum, arsenik veya bunlarin bir izotopu olabilir. Burada tanimlanan bir metal iyonu mevcut bulusun bir bilesigine selatlanabilir. 6. Indirgen maddeler Mevcut bulusun amaçlarina uygun olarak, metal iyonu teknesyum oldugunda Tc'nin +4 oksidasyon halinde olmasi tercih edilir. Bu amaçla kullanilacak tercih edilen indirgen madde, Tc'yi +4 oksidasyon haline indirmek için kalay iki klorür (anI2) biçimindeki kalay iki iyondur. Ancak ditiyonit iyon veya demir iyonu gibi diger indirgen maddelerin, mevcut bulusla beraber faydali olabilecegi öngörülmektedir. Ayrica indirgen maddenin kati faz indirgen madde olabilecegi öngörülmektedir. Kolloid olusumunu engellemek için gerekli oldugundan, indirgen maddenin miktari önemli olabilir. Örnegin, yaklasik 100 ila yaklasik 11 GBq ( Tc perteknetat için yaklasik 10 ila yaklasik 100 ug SnClz kullanilmasi tercih edilmektedir. En fazla tercih edilen miktar, yaklasik Tc perteknetat ve yaklasik 2 mL salin için yaklasik 0,1 mg SnClz'dir. Bu, genellikle 5 hastada kullanmaya yetecek miktarda Tc-EC-hedefleme ligandi konjugati üretir.

F. Görüntüleme yöntemi örnekleri Teknikte uzman kisilerce çok sayida görüntüleme amaçli nükleer tip teknigi bilinmektedir.

Bu teknikler, raportörün sinyalini ölçmek üzere mevcut bulusun görüntüleme yöntemleri baglaminda uygulanabilir. Örnegin gama kamera ile görüntüleme, raportörden alinan sinyali ölçmekte kullanilabilecek bir görüntüleme yöntemi olarak düsünülmektedir. Teknikte uzman kisiler, gama kamera ile görüntüleme uygulamasinin tekniklerine asina olacaktir (bkz. örn., Kundra vd., 2002). Bir düzenlemede, bir sinyalin ölçümü 111-ln-oktreotid- SSRTZA raportör sisteminin gama kamera görüntülemesinin kullanimini içerebilir. 2. PET ve SPECT Radyonüklit görüntüleme yöntemleri (pozitron emisyon tomografisi (PET)); tek foton emisyon bilgisayarli tomografi (SPECT), radyonüklit etiketli radyoaktif izleyicilerin konumunu ve konsantrasyonunu saptayan teshis amaçli kesitsel görüntüleme teknikleridir.

CT ve MR tümörlerin konumu ve boyutuna iliskin oldukça anatomik bilgi sagliyor olsa da, bu görüntüleme yöntemleri invazif Iezyonlari ödemden, radyasyon nekrozundan, derecelendirmeden veya gliyozisten yeterince ayirt edemez. PET ve SPECT, metabolik aktiviteyi ölçerek tümörleri lokalize ve karakterize etmekte kullanilabilir.

PET ve SPECT, hücrenin yasayabilirligi gibi hücresel düzeyde bilgi saglar. PET'te hastaya, madde vücut içinde ilerledikçe izlenebilecek pozitronlar yayan hafif radyoaktif bir madde yutturulur veya enjekte edilir. Örnegin, yaygin bir uygulamada hastalara pozitron yayicilariyla beraber glikoz verilir ve çesitli görevleri yürüten beyinleri izlenir. Beyin çalisirken glikoz kullandigindan, PET görüntüsü beyin aktivitesinin yüksek oldugu yerleri gösterir.

Tek foton emisyon bilgisayarli tomografi veya SPECT, PET ile yakindan ilgilidir. Ikisi arasindaki baslica fark, SPECT'in pozitron yayici madde yerine düsük enerjili foton yayan bir radyoaktif izleyici kullanmasidir. SPECT koroner arter hastaliginin teshisi açisindan degerlidir ve ABD'de halen her yil 2,5 milyon kadar SPECT kalp çalismasi yapilmaktadir. 6BGa gibi pozitron yayicilarla etiketlenir. SPECT radyofarmasötikler yaygin olarak 99'"Tc, 201Tl ve 67Ga gibi pozitron yayicilarla etiketlenir. Beyin görüntüleme ile ilgili olarak, PET ve SPECT radyofarmasötikler kan-beyin-bariyeri geçirgenligi (BBB), serebral perfüzyon ve metabolizma reseptör-baglanma ile antijen-antikor baglanmaya göre siniflandirilir (Saha normal beyin hücreleri ile dislanir fakat degismis BBB nedeniyle tümör hücrelerine girer. dolayisiyla normal beyine nüfuz eder. Önemli reseptör-baglama SPECT radyofarmasötikler arasinda [123I]QNE, [123I]IBZM, ve [123I]iomazenil bulunur. Bu izleyiciler belirli reseptörlere baglidir ve reseptör ile ilgili hastaliklarin degerlendirilmesinde önemlidir.

Bilgisayarli tomografi (CT), mevcut bulus baglaminda bir görüntüleme yöntemi olarak düsünülmektedir. Çesitli açilardan bir dizi, bazen binden fazla röntgen çekip bunlari bilgisayarla birlestiren CT, vücudun herhangi bir kisminin üç boyutlu görüntüsünün olusturulmasini mümkün kilmistir. Bilgisayar her açidan ve her derinlikten iki boyutlu dilimleri görüntülemek üzere programlanmistir.

CT'de bir radyoopak kontrast maddenin intravenöz enjeksiyonu, ilk CT taramalari tanilayici olmadiginda yumusak doku maddesinin tanimlanmasi ve tarifine yardimci olabilir. Benzer biçimde, kontrast maddeler yumusak doku veya kemik lezyonunun vaskülaritesini degerlendirmeye yardimci olur. Örnegin kontrast maddelerin kullanimi, tümör ile bitisigindeki vasküler yapilarin iliskisini tarif etmeye yardimci olabilir.

CT kontrast maddeleri arasinda örnegin iyotlu kontrast ortam bulunur. Bu maddelere örnek olarak iyotalamat, iyoheksol, diatrizoat, iyopamidol, etiyodol ve iyopanoat verilebilir. Gadolinyum maddelerin de CT kontrast madde olarak kullanildigi bildirilmistir (bkz. örn., Henson vd., 2004). Örnegin gadopentat maddeler CT kontrast madde olarak kullanilmistir (Strunk ve Schild, 2004'te ele alinmistir). 4. Manyetik rezonans görüntüleme (MR) Manyetik rezonans görüntüleme (MR), CT'den daha yeni olan ve görüntü olusturmak için yüksek dirençli miknatis ve radyo frekansi sinyalleri kullanan bir görüntüleme yöntemidir. Biyolojik dokulardaki en bol moleküler tür, sudur. Görüntüleme deneylerinde sinyalin nihayetinde yükselmesini saglayan, su proton çekirdeklerinin kuantum mekanik “dönüsü"dür. MR'da, görüntülenecek numune güçlü bir statik manyetik alana (1-12 Tesla) yerlestirilir ve numunede net miknatislama olusturmak için dönüsler radyo frekansi (RF) radyasyon atimi ile uyarilir. Daha sonra çesitli manyetik alan egimleri ve diger RF atimlari dönüsleri etkileyerek kayitli sinyallere mekansal bilgileri kodlar. Bu sinyalleri toplayip analiz ederek, CT görüntüsü gibi normalde iki boyutlu dilimler halinde görüntülenen üç boyutlu bir görüntü hesaplamak mümkündür.

MR görüntülemede kullanilan kontrast maddeler, diger görüntüleme tekniklerinde kullanilanlardan farklidir. Amaçlari, benzer sinyal özelliklerine sahip doku bilesenlerini ayirt etmeye yardimci olmak ve (T1-agirlikli spin-eko MR görüntülerinde daha güçlü bir sinyal ve T2-agirlikli görüntülerde daha az yogun bir sinyal olusturacak) gevseme sürelerini kisaltmaktir. MR kontrast maddeleri örnekleri arasinda gadolinyum selatlari, manganez selatlari, krom selatlari ve demir partikülleri bulunur.

Hem CT, hem MR doku sinirlarini ve vasküler yapiyi ayirt etmeye yardimci olacak anatomik bilgi saglar. MR'in, CT'ye kiyasla dezavantajlari arasinda düsük hasta toleransi, kalp pillerinde ve implante edilmis diger belli metal cihazlarda kontrendikasyonlar ve devinimin de eksik olmadigi çesitli sebeplerle iliskili artefaktlar bulunur (Alberico vd., 2004). Diger taraftan, CT hizlidir, iyi tolere edilir ve kolay erisilebilir ancak MR'den düsük kontrast çözünürlügüne sahiptir ve iyotlu kontrast ve iyonlastirici radyasyon gerektirir (Alberico vd., 2004). CT ve MR'nin dezavantaji, iki görüntüleme yönteminin de hücresel seviyede fonksiyonel bilgi saglamadigidir. Örnegin iki yöntem de hücrenin yasayabilirligine iliskin bilgi vermez.

. Optik görüntüleme Optik görüntüleme, tibbin belli alanlarinda genis kabul gören diger bir görüntüleme yöntemidir. Örnekler arasinda hücresel bilesenlerin optik etiketlenmesi ve floresin anjiyografi ile indosiyanin yesili anjiyografisi gibi anjiyografi bulunur. Optik görüntüleme örnekleri floresin, bir floresin türevi, indosiyanin yesili, Oregon yesili, bir Oregon yesili türevi, rodamin yesili, bir rodamin yesili türevi, bir eosin, bir eritrosin, Texas kirmizisi, bir Texas kirmizisi türevi, malakit yesili, nanogold sülfosüksinidil ester, dalgali mavi, kumarin türevi, naftalin, piridiloksazol türevi, dalgali sari boya veya dapoksil boyadir. 6. Ultrason Genis kabul görmüs diger bir biyomedikal görüntüleme yöntemi ultrasondur. Ultrason görüntüleme, vücuttaki yumusak doku yapilarinin gerçek zamanli kesitsel ve hatta üç boyutlu görüntülerini ve kan akisi bilgilerini saglamak için noninvaziv biçimde kullanilmistir. Kan damarlarinin, dokularin ve organlarin görüntüleri yüksek frekansli ses ve bilgisayarla olusturulur.

Kan akisinin ultrason görüntülemesi, kan damarinin büyüklügü ve derinligi gibi çesitli faktörlerle kisitlanabilir. Nispeten yakin tarihli bir gelisme olan, ultrason kontrast maddeleri gri tondaki görüntüleri ve Doppler sinyallerini artirmaya yardimci olarak bu kisitlamalari engellemek için tasarlanmis perflorin ve perflorin analoglarini içerir. 7. Ikili görüntüleme prosedürleri Mevcut bulusun belirli düzenlemeleri, bir denekteki bir bölgenin, görüntüleme parça- selatör-metal iyonu kompleksindeki ilk sinyalle ikinci sinyalin ölçülmesini içeren iki görüntüleme yöntemi ile görüntülenmesi yöntemleri ile ilgilidir. Ilk sinyal metal iyonundan ve ikinci sinyal görüntüleme parçasindan alinir. Yukarida belirtildigi gibi, teknikte uzman kisilerce bilinen görüntüleme yöntemleri mevcut görüntüleme yöntemlerinin bu düzenlemelerinde uygulanabilir.

Görüntüleme yöntemleri, mevcut bulusun bilesiminin tanisal olarak etkili bir miktarini içeren bilesimin uygulanmasindan önce veya sonraki herhangi bir zamanda yürütülebilir. Örnegin görüntüleme çalismalari, mevcut bulusun ikili görüntüleme bilesiminin uygulanmasi sirasinda veya sonrasindaki herhangi bir zamanda gerçeklestirilebilir. Bazi düzenlemelerde, ilk görüntüleme yöntemi ikili görüntüleme maddesinin uygulanmasiyla es zamanli baslayarak veya ikili görüntüleme maddesinin uygulanmasindan yaklasik 1 saniye, 1 saat, 1 gün veya daha uzun bir süre sonra veya belirtilen bu sürelerin arasinda herhangi bir zamanda gerçeklestirilir.

Ikinci görüntüleme yöntemi ilk görüntüleme yöntemiyle es zamanli olarak veya ilk görüntüleme yöntemi sonrasi herhangi bir zaman gerçeklestirilebilir. Örnegin ikinci görüntüleme yöntemi, ilk görüntüleme yönteminin tamamlanmasindan yaklasik 1 saniye, 1 saat, 1 gün veya daha uzun bir süre sonra veya belirtilen bu sürelerin arasinda herhangi bir zamanda gerçeklestirilir. Mevcut bulusun belirli düzenlemelerinde, ilk ve ikinci görüntüleme yöntemleri, maddenin uygulanmasinin ardindan ayni zamanda baslayacak sekilde es zamanli olarak gerçeklestirilir. Teknikte uzman bir kisi, mevcut bulusla öngörülen çesitli görüntüleme yöntemlerinin uygulanisina asina olacaktir.

Mevcut ikili görüntüleme yöntemlerinin bazi düzenlemelerinde, ayni görüntüleme cihazi ilk görüntüleme yöntemini ve ikinci görüntüleme yöntemini uygulamakta kullanilir. Diger düzenlemelerde, ikinci görüntüleme yöntemini kullanmak için farkli bir görüntüleme cihazi kullanilir. Teknikte uzman bir kisi ilk görüntüleme yöntemini ve ikinci görüntüleme yöntemini uygulamakta kullanilabilecek görüntüleme cihazlarini taniyacak ve becerikli uzman bu cihazlarin görüntü olusturmakta kullanimini taniyacaktir.

Yukarida belirtildigi gibi, mevcut bulusun bilesimlerinin düzenlemeleri yukarida belirtilen bir selatöre selatlanan bir metal iyonu içerir. Bazi düzenlemelerde, metal iyonu bir radyonüklittir. Mevcut bulusun sagladigi radyoaktif etiketli maddeler, bilesikler ve bilesimler, uygun miktarda radyoaktivite ile verilir. Örnegin, 99mTc radyoaktif komplekslerinin olusturulmasinda, genellikle mL'de yaklasik 0,0004 gigabekerel (GBq) ila yaklasik 11 GBq (mL'de yaklasik 0,01 miliküri (mCi) ile yaklasik konsantrasyonlarda radyoaktivite içeren çözeltilerde radyoaktif kompleksler olusturulmasi tercih edilmektedir.

Mevcut bulusla verilen radyoaktif etiketli görüntüleme maddeleri, memeli vücudunda bölgelerin görüntülenmesinde kullanilabilir. Bu bulusa uygun olarak, görüntüleme ajanlari, teknikte uzman kisilerce bilinen herhangi bir yöntemle enjekte edilebilir. Örnegin enjeksiyon tek birim enjektabl dozda yapilabilir. Teknikte uzman kisilerce bilinen yaygin tasiyicilardan herhangi biri, örnegin steril salin çözeltisi veya plazma, enjeksiyonluk bilesiklerin hazirlanmasi için radyoaktif etiketleme sonrasinda kullanilabilir. Genellikle, uygulanacak bir birim doz yaklasik 0,0004 GBq ila yaklasik 11 GBq (yaklasik , tercihen 0,4 GBq ila yaklasik radyoaktivite içerir. Birim dozajda enjekte edilecek çözelti yaklasik 0,01 mL ila yaklasik 10 mL araligindadir.

Mevcut bulusun bir bilesiminin tanisal olarak etkili bir miktari intravenöz yoldan uygulandiktan sonra görüntüleme yürütülebilir. Denekteki organ veya tümör gibi bir bölgenin görüntülenmesi, istendigi takdirde, hastaya radyoaktif etiketli reaktif verildikten saatler sonra veya daha uzun bir süre sonra gerçeklestirilebilir. Çogu durumda, uygulanan dozun yeter miktari görüntülenecek bölgede saatin yaklasik 0,1'inde toplanir. Yukarida belirtildigi gibi, görüntüleme teknikte uzman kisilerce bilinen herhangi bir yöntemle yapilabilir. Örnekler arasinda PET, SPECT ve gama sintigrafisi bulunur. Gama sintigrafisinde radyoaktif etiket gama radyasyonu yayan bir radyonüklittir ve radyoaktif izleyici, gama radyasyonu saptama kamerasiyla tespit edilir. Görüntülenen bölge, radyoaktif izleyicinin patolojik bir bölgede sinirlandirilmak üzere seçilmesi (pozitif kontrast) veya, alternatif olarak, radyoaktif izleyicinin söz konusu patolojik bölgelerde sinirlandirilmamak üzere özellikle seçilmesi (negatif kontrast) sayesinde tespit edilebilir.

H. Kitler Mevcut bulusun belirli düzenlemeleri genellikle görüntüleme veya tanilama ajani hazirlama kitleriyle ilgilidir. Örnegin, bazi düzenlemelerde kitte önceden belirlenmis miktarda selatör-hedefleme Iigandi konjugati içeren bir veya daha fazla mühürlü kap bulunur. Bazi düzenlemelerde, kitte ayrica metal iyonu içeren mühürlü bir kap bulunur. Örnegin metal iyonu radyonüklit veya soguk metal iyonu olabilir.

Mevcut bulusun bir kitinde, mevcut bulusun önceden belirlenmis miktarda bir selatörünü ve bilesigi metal iyonuyla etiketlemek üzere yeterli miktarda indirgen maddeyi kapsayan mühürlü bir flakon bulunabilir. Mevcut bulusun bazi düzenlemelerinde, kitte radyonüklit olan bir metal iyonu bulunur. Diger belirli düzenlemelerde, radyonüklit 99mTc'dir. Mevcut bulusun diger düzenlemelerinde selatör, bu basvurunun diger kisimlarinda ele alinan hedefleme Iigandlarindan herhangi biri olabilecek bir hedefleme ligandina konjuge edilir.

Kitte ayrica örnegin, ozmotik baisnci ayarlayan farmasötik olarak kabul edilebilir tuzlar, tamponlar, koruyucular ve benzerleri gibi konvansiyonel farmasötik yardimci maddeler bulunabilir.

Belirli düzenlemelerde, selatör parçasinin oksidasyonunu önlemek için bilesime bir antioksidan eklenir. Belli düzenlemelerde antioksidan C vitaminidir (askorbik asit). Ancak tokoferol, piridoksin, tiyamin veya rutin gibi teknikte uzman kisilerce bilinen diger antioksidanlarin da kullanilabilecegi düsünülmektedir. Kitin bilesenleri sivi, donmus veya kati formda olabilir. Tercih edilen bir düzenlemede, kit bilesenleri Iiyofilize formda verilir.

Soguk (yani radyoaktivite içermeyen) hizli kit, ticari ürün kabul edilmektedir. Flakona API ve dolgu malzemeleri (henüz test edilmemis maddeler) ile perteknetat eklenmesiyle soguk hizli kit radyodiyagnostik amaca hizmet edebilir. Teknoloji, teknikte uzman kisilerce “çalkala ve vur" olarak bilinmektedir. Radyofarmasötiklerin hazirlanma süresi 15 dakikadan az olacaktir. Ayni kit, farkli görüntüleme uygulamalari için farkli metallerle selatlanabilecek selatörleri veya selatör-hedefleme ligandi konjugatlarini da kapsayabilir. Örnegin PET için bakir-61 (3,3 saat yari ömür); MR için gadolinyum. Soguk kit, hastalik tedavisi için bizzat ön ilaç olarak kullanilabilir. Örnegin kit dokuya özgü hedef görüntüleme ve tedavide uygulanabilir.

Mevcut bulusun belirli özellikleri, terapötik parçanin mevcut bulusun bir selatörüne konjuge edildigi bilesimlerle ilgilidir. Metal iyonu bir selatöre veya hem selatör hem konjuge hedefleme ligandina selatlandiginda, belli düzenlemelerdeki mevcut bulus bilesimi ikili görüntüleme ve tedavide faydali olabilir. Belirli özel düzenlemelerde terapötik parça, denegin hiperproliferatif hastaliginin tedavisi veya önlenmesinde faydali oldugu bilinen veya bundan süphelenilen madde olan bir parçadir. Denek bir hayvan, örnegin memeli olabilir. Belirli özel düzenlemelerde, denek bir insandir.

Mevcut bulusun diger düzenlemelerinde, metal iyonu terapötik bir metal iyonudur iyonu selati hiperproliferatif hastaligin tedavisi veya önlenmesinde uygulanabilecek terapötik bir madde (görüntüleme maddesinden ziyade) olan bir ajandir.

Hiperproliferatif hastalik burada anormal hücre çogalmasi veya anormal hücre döngüsü ile iliskili bir hastalik olarak tanimlanmaktadir. Örnegin hiperproliferatif hastalik kanser olabilir.

Burada kullanildigi üzere "kanser” terimi, doku içindeki hücrelerin kontrolsüz ve kademeli olarak çogalmasi seklinde tanimlanir. Becerikli bir uzman, neoplazma veya malignite veya tümör gibi es anlamli terimleri bilmektedir. Mevcut bulusun yöntemleriyle her tür kanserin tedavi edilebilecegi düsünülmektedir. Örnegin kanser, meme kanseri, akciger kanseri, over kanseri, beyin kanseri, karaciger kanseri, serviks kanseri, kolon kanseri, böbrek kanseri, cilt kanseri, bas ve boyun kanseri, kemik kanseri, yemek borusu kanseri, mesane kanseri, rahim kanseri, mide kanseri, pankreas kanseri, testis kanseri, Ienfoma veya lösemi olabilir.

Mevcut bulusun diger düzenlemelerinde, kanser metastatik kanserdir.

J. Ikili kemoterapi ve radyasyon tedavisi (“Radyokemoterapi”) Mevcut bulusun belirli düzenlemelerinde, mevcut bulusun bilesimleri ikili kemoterapi ve radyasyon terapisine (radyokemoterapi) uygundur. Örnegin, burada öne sürüldügü üzere selatör terapötik bir metal iyonu olan bir metal iyonuna ve terapötik bir parça (anti-kanser parçasi gibi) olan bir hedefleme Iigandina selatlanabilir. Diger bir örnekte, terapötik bir metal iyonu hem selatöre, hem selatörün hedefleme Iigandi konjugatina selatlanabilir. Örnegin metal iyonu, beta yayinlayicisi olabilir. Burada tanimlandigi gibi, beta yayinlayicisi herhangi bir aralikta beta enerjisi yayan herhangi bir ajandir. Beta yayinlayicilari örnekleri kisi kanser gibi hiperproliferatif hastaligin tedavisinde kullanilan bu ajanlara asina olacaktir.

Teknikte uzman bir kisi, bilesiklerin uygulanmasinda geçerli kemoterapötik protokollerin ve radyasyon terapisi protokollerinin tasarimina asina olacaktir. Asagida belirtildigi gibi, bu ajanlar kanser gibi bir hiperproliferatif hastaligin tedavisine yönelik diger terapötik yöntemlerle birlikte kullanilabilir. Ayrica teknikte uzman bir kisi, denege verilmek üzere uygun doz seçimine asina olacaktir. Protokol tek bir doz veya birden fazla doz içerebilir. Hasta, toksisite ve teknikte uzman kisilerin asina oldugu protokoller kullanilan tedaviye verdigi cevap açisindan izlenecektir.

K. Farmasötik preparatlar Mevcut bulusun farmasötik bilesimleri, mevcut bulusun bir bilesiminin terapötik veya tanisal olarak etkili bir miktarini içerir. “Farmasötik veya farmakolojik olarak kabul edilebilir”, insan gibi bir hayvana uygulandiginda advers, alerjik veya diger istenmeyen reaksiyonlar sergilemeyen moleküler maddeler ve bilesimlere isaret eder. Teknikte uzman kisiler, mevcut bildirimin isiginda, terapötik olarak etkili veya tanisal olarak etkili bilesimlerin hazirlanmasini Remington's Pharmaceutical Sciences, 18th Ed. Mack Printing Company, 1990 tarafindan gösterildigi sekliyle biliyor olacaktir. Ayrica, hayvanlara (örn., insanlara) uygulamada, preparatlarin FDA Biyolojik Standartlar Bürosu'nun istedigi sterilite, pirojenisite, genel güvenlik ve saflik standartlarini karsilamasi gerektigi anlasilacaktir.

Burada kullanildigi gibi, “terapötik olarak etkili bir miktar içeren bir bilesim” veya her tür çözücüleri, dagitim ortamlarini, kaplamalari, yüzeyaktif maddeleri, antioksidanlari, koruyuculari (örn., antibakteriyel maddeler, antifungal ajanlar), izotonik maddeleri, absorpsiyon geciktirici maddeleri, tuzlari, koruyuculari, ilaçlari, ilaç stabilizatörlerini, jelleri, baglayicilari, yardimci maddeleri, disintegrasyon maddelerini, yaglayicilari, tatlandiricilari, çesnileri, boyalari, benzeri maddeleri ve bunlarin kombinasyonlarini içerir. Konvansiyonel tasiyicilarin etkin bilesenle uyumsuz olmasi hariç, mevcut bilesimlerde kullanilmalari düsünülmektedir.

Mevcut bulusun bilesimleri, kati, sivi veya aerosol biçimde uygulanmalarina ve enjeksiyon gibi uygulama yollari için steril olmasi gerekip gerekmedigine göre farkli türlerde tasiyicilar içerebilir. Mevcut bulusun bilesimleri intravenöz, intradermal, intraarterial, intraperitoneal, intralezyonal, intrakraniyal, intraartiküler, intraprostatik, intraplevral, intratrakeal, intranazal, intravitreal, intravajinal, intrarektal, topikal, intratümoral, intramüsküler, intraperitoneal, subkütan, subkonjunktival, intravesiziküler, mukozal, intraperikardiyal, intraumbilikal, intraoküler, oral, topikal, lokal yoldan, enjeksiyon, infüzyon, sürekli infüzyon, hedef hücrelerin dogrudan lokalize perfüzyon banyosu, kateter, Iavaj yoluyla, Iipid bilesimlerde (örn., Iipozomlar) veya diger bir yöntemle veya yukaridakilerin teknikte uzman kisilerce bilinen herhangi bir kombinasyonuyla uygulanabilir.

Mevcut bulusun bir bilesiminin hastaya uygulanan gerekli gerçek miktari vücut agirligi, kosullarin ciddiyeti, görüntülenecek doku, tedavi edilen hastalik türü, önceki veya es zamanli görüntüleme veya terapötik müdahaleler, hastanin idyopatisi ve uygulama yolu gibi fiziksel ve fizyolojik faktörlere göre saptanabilir. Uygulamadan sorumlu pratisyen, her durumda, bilesimdeki etkin bilesen konsantrasyonunu ve her bir denege uygun dozu saptayacaktir.

Belli düzenlemelerde, farmasötik bilesimler örnegin selatör-metal iyonu selatinin en az yaklasik %O,1'ini içerebilir. Diger düzenlemelerde, etkin bilesen birim agirliginin yaklasik %2 ila yaklasik %75'ini veya örnegin yaklasik %25 ile %60 arasini ve burada elde edilebilen herhangi bir araligi içerebilir. Sinirlayici olmayan diger örneklerde, bir doz ayrica uygulama basina yaklasik 0,1 mg/kg/vücut agirligi ila yaklasik 1000 mg/kg/vücut agirligi veya bu aralik içinde herhangi bir miktar veya 1000 mg/kg/vücut agirligindan yüksek bir miktar içerebilir.

Her durumda, bilesim bir veya birden fazla bilesenin oksidasyonunu geciktirmek için çesitli antioksidanlar içerebilir. Buna ilaveten, mikroorganizmalarin aksiyonunun önlenmesi parabenler (örn., metilparabenler, propilparabenler), klorobutanol, fenol, sorbik asit, timerosal veya kombinasyonlari dahil fakat bunlarla sinirli olmayan çesitli antibakteriyel ve antifungal ajanlar gibi koruyucularla gerçeklestirilebilir.

Mevcut bulusun bilesimleri serbest baz, nötr veya tuz formunda formüle edilebilir.

Farmasötik olarak kabul edilebilir tuzlar içinde örnegin sodyum, potasyum, amonyum, kalsiyum veya demir hidroksitler gibi inorganik bazlardan; veya izopropilamin, trimetilamin, histidin veya prokain gibi organik bazlardan elde edilmis serbest karboksil gruplariyla olusturulan tuzlari içerir.

Bilesimin sivi formda oldugu düzenlemelerde, tasiyici su, etanol, poliol (öm., gliserol, propilen glikol, sivi polietilen glikol, vs), Iipitler (örn., trigliseritler, bitkisel yaglar, Iipozomlar) ve bunlarin kombinasyonlari gibi fakat bunlarla sinirli olmayan bir çözücü veya dagitim ortami olabilir. Uygun akiskanlik, örnegin lesitin gibi bir kaplama kullanimiyla; gerekli partikül boyutunun örnegin sivi poliol veya Iipitler gibi tasiyicilara dagilimla korunmasiyla; örnegin hidroksipropilselüloz gibi yüzeyaktiflerin kullanimiyla; veya söz konusu yöntemlerin kombinasyonlariyla korunabilir. Çogu durumda, örnegin seker, sodyum klorür veya bunlarin kombinasyonlari gibi izotonik ajanlar eklenmesi tercih edilecektir.

Filtrelenmis sterilizasyon gibi teknikler kullanilarak steril enjektabl çözeltiler hazirlanabilir. Genellikle dagilimlar, sterilize çesitli etkin bilesenlerin ve/veya diger bilesenlerin, temel dagilim ortamini içeren steril bir kapta birlestirilmesiyle hazirlanir.

Steril enjektabl çözeltilerin, süspansiyonlarin veya emülsiyonlarin hazirlanmasi için steril tozlarla ilgili olarak, tercih edilen hazirlama yöntemleri önceden steril filtrelenmis sivi ortamindan etkin bilesenin bir tozu arti istenen ilave bilesenleri veren vakumda kurutma veya dondurarak kurutma teknikleridir. Gerekirse, sivi ortam uygun biçimde tamponlanmali ve sivi seyreltici yeterli salin veya glikozla enjeksiyon öncesinde izotonik hale getirilmelidir. Dogrudan enjeksiyon için yüksek yüksek konsantre bilesimler hazirlanmasi da düsünülmekte olup burada çözücü olarak DMSO (dimetilsülfoksit) kullaniminin son derece hizli penetrasyon saglayarak aktif maddeleri küçük bir alanda yüksek konsantrasyonda iletecegi öngörülmektedir.

Bilesim, üretim ve saklama kosullarinda stabil olmali ve bakteri ve mantar gibi mikroorganizmalarin kirletme etkisine karsi korunmalidir. Endotoksin kontaminasyonunun güvenli bir seviyede minimumda, örnegin 0,5 ng/mg proteinin altinda tutulmasi kabul görecektir.

Belirli düzenlemelerde, enjektabl bir bilesimin uzun süreli absorpsiyonu, örnegin alüminyum monostearat, jelatin veya bunlarin kombinasyonlari gibi absorpsiyon geciktirici ajan bilesimlerinde kullanimla gerçeklestirilebilir.

L. Birlesimsel terapi Mevcut bulusun belirli özellikleri, terapötik bir parça olan hedefleme Iigandina konjuge edilen bir selatör içeren bilesimlerle ilgilidir. Diger düzenlemelerde selatör, terapötik bir amino asit dizisi olan bir amino asit dizisi içerir.

Bu bilesimler diger bir ajan veya terapi yöntemiyle beraber, kanser ve kardiyovasküler hastalik gibi hastaliklarin tedavisinde uygulanabilir. Mevcut bulusun bu bilesimleriyle yapilan tedavi, dakikalar ila haftalar alan araliklarda diger tedavi yöntemlerinin önünde veya ardinda yürütülebilir. Baska bir ajanin uygulandigi düzenlemelerde, iki uygulama arasinda fazla zaman geçmemesi, böylece ajanlarin hücre üzerinde faydali bir birlesik etki sürdürebilmeleri saglanacaktir. Örnegin, mevcut bulusun bilesimleriyle büyük ölçüde es zamanli (yani, yaklasik bir dakikadan az zaman içinde) ayni ajanin iki, üç, dört veya daha fazla dozunun uygulanabilecegi düsünülmektedir. Diger açilardan, mevcut bulusun bir bilesiminin terapötik bir miktarinin uygulanmasinin yaklasik 1dakika ila yaklasik 48 saat veya üstü öncesi ve/veya sonrasinda veya burada belirtilmeyen herhangi bir süre öncesi ve/veya sonrasinda terapötik bir ajan veya yöntem uygulanabilir. Diger belli düzenlemelerde, cerrahi veya gen tedavisi gibi baska bir terapötik yöntem uygulanmasinin yaklasik 1 gün ila yaklasik 21 gün öncesi ve/veya sonrasinda mevcut bulusun bir bilesimi uygulanabilir. Bazi durumlarda ise, ilgili uygulamalar arasinda birkaç hafta (örn., yaklasik 1 ila 8 hafta veya daha fazla) geçtiginde tedavinin zaman araliginin büyük ölçüde uzatilmasi istenebilir.

Asagida gösterildigi gibi, mevcut bulusun bir konjugatinin “A” olarak belirlendigi ve baska bir terapötik ajan veya yöntem olabilecek ikinci ajanin “B" oldugu çesitli kombinasyonlar kullanilabilir: Mevcut bulusun bilesimlerinin bir hastaya uygulanmasi, bu ajanlarin toksisitesini, varsa, göz önünde bulundurarak genel kemoterapötik uygulama protokollerini izleyecektir. Gerektikçe tedavi döngülerinin tekrarlanmasi beklenmektedir. Ayrica, tanimlanan ajanla beraber çesitli standart terapilerin ve cerrahi müdahalenin uygulanabilecegi düsünülmektedir. Bu tedaviler arasinda ilave farmakoretapi (kanser kemoterapisi gibi), ilave radyoterapi, immünoterapi, gen terapisi ve cerrahi bulunur fakat bunlarla sinirli degildir. 1. Kemoteragi Kanser tedavileri ayrica kimyasal ve radyasyon esasli tedavileri ile çesitli kombinasyon terapileri içerir. Kombinasyon tedavilerinde örnegin, cisplatin (CDDP), karboplatin, prokarbazin, mekloretamin, siklofosfamid, kamptotesin, ifosfamid, melfalan, klorambusil, busulfan, nitrozüre, daktinomisin, daunorubicin, doksorubisin, bleomisin, plikomisin, mitomisin, etoposid (VP16), tamoksifen, raloksifen, östrojen reseptor baglayici maddeler, taksol, gemsitabien, navelbin, farnesiI-protein tansferaz inhibitörleri, transplatin, 5-fluor0ürasil, vinkristin, vinblastin ve metotreksat, veya yukaridakilerin analog veya türetilmis varyantlari bulunur. 2. Radyoteragi DNA hasarina yol açan ve kapsamli olarak kullanilmis diger faktörler arasinda yaygin biçimde y-isini, X-isini ve/veya radyoizotoplarin tümör hücrelerine yönlendirilmis uygulamasi olarak bilinen faktörler bulunur. DNA'ya hasar veren diger faktör formlarinin mikrodalgalar ve UV isinimi oldugu düsünülmektedir. Tüm bu faktörler DNA'da, DNA'nin öncüllerinde, DNA replikasyonu ve onariminda ve kromozomlarin birlesimi ve korunmasinda genis bir hasara yol açiyor olmasi mümkündür. X isinlarinin dozaj araliklari araliklari genistir ve izotopun yari ömrüne, yayilan radyasyonun gücü ve tipine ve neoplastik hücrelerin alimina baglidir. Hücreye uygulanan “temas etmis” ve “maruz kalmis" terimleri, burada terapötik bir yapi ve kemoterapötik veya radyoterapötik ajanin hedef hücreye uygulandigi veya hedef hücre ile dogrudan yakin biçimde yerlestirildigi prosesi tanimlamakta kullanilir. Hücre ölümünü veya durgunlugunu saglamak için her iki madde birlesik miktarda hücreye verilerek hücre öldürülür veya bölünmesi önlenir. 3. Immünoteragi Immünoterapötikler kanser hücrelerini hedefleyip yok etmek için genellikle, immün etkileyici hücrelerin kullanimina dayanir. immün etkileyici, örnegin bir tümör hücresinin yüzeyindeki isarete özgü bir antikor olabilir. Antikor tek basina bir tedavi etkileyicisi görevi görebilir veya etkin biçimde hücre öldürmek üzere baska hücreler kullanabilir. Antikor ayrica bir ilaç veya toksine (kemoterapötik, radyonükleotid, risin A zinciri, kolera toksini, bogmaca toksini, vs.) konjuge edilebilir ve sadece bir hedefleme ajani görevi görebilir. Alternatif olarak etkileyici madde, tümör hücresi hedefi ile dogrudan veya dolayli etkilesime giren bir yüzey molekülü tasiyan bir Ienfosit olabilir. Çesitli etkileyici hücreler arasinda sitotoksik T hücreleri ve NK hücreleri bulunur.

Buna göre immünoterapi, gen tedavisi ile beraber birlesik terapinin bir parçasi olarak kullanilabilir. Birlesik terapiye yönelik genel yaklasim asagida ele alinmaktadir. Genel olarak, tümör hücresi hedeflemeye uygun, yani', diger hücrelerin büyük kisminda bulunmayan bir isaret tasimalidir. Pek çok tümör isareti mevcuttur ve bunlar mevcut bulus baglaminda hedeflemeye uygun olabilir. Yaygin tümör isaretleri arasinda karsinoembrionik antijen, prostata özgü antijen, üriner tümör iliskili antijen, fetal antijen, tirosinaz (p97), gp68, TAG-72, HMFG, Sialyl Lewis Antijeni, MucA, MucB, PLAP, östrojen reseptörü, Iaminin reseptörü, erb B ve p155 bulunur. 4. Genler Yine diger bir düzenlemede ikincil terapi, terapötik bilesimin mevcut bulusun terapötik ajanlarindan önce, sonra veya ayni zamanda uygulandigi bir gen terapisidir. Bir gen ürününü kodlayan bir vektörle beraber mevcut bulusun bir bilesiminin terapötik miktarda uygulanmasi, hedef dokular üzerinde birlesik anti-hiperproliferatif bir etki olusturacaktir.

. Cerrahi Kanser hastalarinin yaklasik %60'i önleyici, tanilayici veya evreleme, iyilestirici ve palyatif cerrahi gibi cerrahilere maruz kalmaktadir. iyilestirici cerrahi, mevcut bulusun tedavisi, kemoterapi, radyoterapi, hormon tedavisi, gen tedavisi, immünoterapi ve/veya alternatif terapiler gibi diger tedavilerle beraber kullanilabilen bir kanser tedavisidir. Iyilestirici cerrahi, kanserli dokunun tümünün veya bir kisminin fiziksel olarak çikarildigi, kesildigi ve/veya yok edildigi rezeksiyonu kapsar. Tümör rezeksiyonu tümörün en azindan bir kisminin fiziksel olarak çikarilmasina isaret eder. Tümör rezeksiyonuna ilaveten, cerrahi tedavi lazer cerrahisini, kriyocerrahiyi, elektrocerrahiyi ve miskopik olarak kontrol edilen cerrahiyi (Mohs cerrahisi) kapsar. Mevcut bulusun ayrica yüzeysel kanserlerin, prekanserlerin veya az miktarda normal dokunun çikarilmasiyla beraber kullanilabilecegi düsünülmektedir.

M. Mevcut bulusun diger düzenlemeleri Bir açidan, mevcut bulus genellikle en az üç fonksiyonel gruptan olusan EC gibi bir selatörün sentezlenmesi yöntemiyle ilgili olup yöntem bir selatör elde etmeyi ve asagidakilerden birini kapsamaktadir: (a) selatörün en az bir adet birinci fonksiyonel grubunu birinci koruyucu ajan ile koruyarak ilk korunmus selatörü olusturmak; veya (b) selatörü bir metal iyonuna selatlayarak metal iyonu etiketli bir selatör olusturmak.

Bunun gibi, burada tanimlanan tüm sentez yöntemleri burada tanimlanan bir organik ortamda yer alabilir. Yöntem ayrica burada tanimlandigi gibi en az bir saflastirma adimi içerebilir. Mevcut bulusun yöntemlerinde kullanilabilen selatörler, fonksiyonel gruplar, metal iyonlari ve selatlama ve konjugasyon modlari teknikte uzman kisilerce bilinmektedir ve burada tanimlanmistir. Selatör ayrica burada tanimlanmis olan, etilen gibi bir aralayici içerebilir. Söz konusu selatörler, selatör-hedefleme ligandi konjugatlarinin hazirlanmasi için faydali ara ürünlerdir.

Bazi düzenlemelerde, yöntem selatörün en az bir fonksiyonel grubunu birinci koruyucu ajan ile koruyarak ilk korunmus selatörü olusturmayi içerir. Belli düzenlemelerde, birinci fonksiyonel grup bir tiyol fonksiyonel grubudur. Belli düzenlemelerde, birinci koruyucu ajan bir tiyol koruyucu ajanidir. Diger düzenlemelerde, tiyol koruyucu ajan; alkil halojenür, benzil halojenür, benzoil halojenür, sülfonil halojenür, trifenilmetil halojenür, metoksitrifenilmetil halojenür ve sisteinden olusan bir gruptan seçilir.

Yöntem, bazi düzenlemelerde ikinci bir fonksiyonel grubu ikinci bir koruyucu ajan ile koruyarak ikinci korunmus selatörü olusturmayi içerebilir. Belli düzenlemelerde birinci fonksiyonel grup en az bir tiyol fonksiyonel grubu ve ikinci fonksiyonel grup en az bir amin fonksiyonel grubu içerir. Bazi düzenlemelerde, tiyol fonksiyonel grubu önce bir tiyol koruyucu ajanla korunur ve ardindan amin fonksiyonel grubu bir amin koruyucu ajanla korunur. Diger düzenlemelerde, amin koruyucu ajan benzilkloroformat, p-nitro- klorobenzilformat, etilkloroformat, di-tert-bütiI-dikarbonat, trifenilmetil klorür ve metoksitrifenilmetil klorürden olusan gruptan seçilebilir. Hazirlanacak bir selatör örnegi etilendisistein içermekte olup, burada etilendisisteinin iki tiyol grubu tiyol koruyucu ajanin iki esdegeri ile korunur ve ardindan etilendisisteinin iki amin grubu amin koruyucu ajanin iki esdegeri ile korunur. Tiyol gruplari amin gruplarindan daha reaktif oldugundan, amin gruplari korunmadan önce tipik olarak tiyol gruplari korunacaktir.

Diger düzenlemelerde yöntem ayrica, burada tanimlanmis olan, bir veya daha fazla koruyucu grubu içeren bilesimden bir veya daha fazla koruyucu grubun çikarilmasini içerir. Koruyucu gruplar, burada tarif edildigi gibi, bir selatör-hedefleme ligandi konjugatinin bir metal iyonuna selatlanmasindan önceki veya sonraki bir veya daha fazla asamada, Örnegin, selatör kismindan, hedefleme Iigandi kismindan veya her iki kisimdan ayrilabilir. Koruyucu gruplar, kurulum ve ayirma islemleri de dahil olmak üzere, burada daha ayrintili olarak açiklanmaktadir.

Mevcut bulusun herhangi bir bilesimi, teknikte uzman kisilerce bilinen herhangi bir yöntemle saflastirilabilir. Saflastirma yöntemleri burada daha ayrintili olarak açiklanmaktadir. Bazi düzenlemelerde, ilk korunmus selatör, yaklasik %90 ila yaklasik %99,9 arasinda saftir. Bazi düzenlemelerde, ikinci korunmus selatör, yaklasik %90 ila yaklasik %99,9 arasinda saftir.

Bazi düzenlemelerde, mevcut bulusun yöntemleri ayrica bir selatörün bir hedefleme selatör-hedefleme Iigandi konjugati olusturmak için en az bir fonksiyonel grup içerir. Bazi düzenlemelerde hedefleme Iigandinin fonksiyonel grubu, selatöre konjugasyonu öncesinde en az bir koruyucu ajan ile korunur. Bazi düzenlemelerde, en az bir fonksiyonel grup bir karboksilik asit fonksiyonel grubudur. Bazi düzenlemelerde selatörün ve hedefleme selatlanmasi, teknikte uzman kisilerce bilinen herhangi bir yöntemle yapilabilir.

Mevcut bulusun selatör-hedefleme Iigandi konjugati ayrica, burada tanimlandigi gibi selatörle hedefleme ligandi arasinda bir baglayici içerebilir. Yukarida belirtildigi gibi, hedefleme Iigandi teknikte uzman kisilerce bilinen herhangi bir türde olabilir ve söz konusu Iigandlar burada daha ayrintili olarak ele alinmistir.

Mevcut bulusun diger genel özellikleri, bir metal iyonu etiketli selatör-hedefleme Iigandi konjugatinin sentezlenmesine yönelik olarak asagidakileri kapsayan bir yöntem öngörür: (a) en az bir koruyucu ajan ile korunan en az üç fonksiyonel grup içeren korunmus bir selatör elde edilmesi; (b) bir selatör-hedefleme ligandi konjugatinin olusturulmasi için korunmus selatörün bir hedefleme Iigandina konjuge edilmesi; (c) selatör-hedefleme Iigandi konjugatindan en az bir koruyucu grubun ayrilmasi; (d) bir metal iyonunun selatör-hedefleme Iigandi konjugatinin selatörüne selatlanmasi; ve (e) kalan koruyucu gruplarin ayrilmasi.

Selatör, koruyucu ajanlar, fonksiyonel gruplar, konjugasyon modu, hedefleme Iigandi, koruyucu grubu ayirma yöntemi, selatlama modu ve metal iyonu burada tanimlanmis herhangi bir tür olabilir. Yöntem, burada tanimlandigi gibi organik bir ortamda gerçeklesebilir. Yöntem, burada tanimlandigi gibi bir veya daha fazla saflastirma adimi içerebilir. Bazi düzenlemelerde hedefleme Iigandinin en az bir fonksiyonel grubu, konjugasyonu öncesinde en az bir koruyucu ajan ile korunur. Tercih edilen düzenlemelerde, selatörün üç veya dört atomu selatlamada kullanilabilir.

Mevcut bulusun diger genel özellikleri, bir metal iyonu etiketli selatör-hedefleme Iigandi konjugatinin sentezlenmesine yönelik olarak asagidakileri kapsayan bir yöntem öngörür: (a) en az üç fonksiyonel grup içeren bir selatör elde edilmesi; (b) metal iyonu etiketli bir selatörün olusturulmasi için bir metal iyonunun bir selatöre selatlanmasi; (c) metal iyonu etiketli selatörün bir hedefleme Iigandina konjuge edilmesi.

Selatör, fonksiyonel gruplar, konjugasyon modu, hedefleme Iigandi, selatlama modu ve metal iyonu burada tanimlanmis herhangi bir tür olabilir. Yöntem, burada tanimlandigi gibi organik bir ortamda gerçeklesebilir. Yöntem, burada tanimlandigi gibi bir veya daha fazla saflastirma adimi içerebilir. Bazi düzenlemelerde hedefleme ajan ile korunur. Yöntem ayrica tüm koruyucu gruplarin metal iyonu etiketli selatör- hedefleme Iigandi konjugatindan ayrilmasini içerebilir. Yöntem ayrica, bazi düzenlemelerde hedefleme Iigandinin en az bir fonksiyonel grubunun, konjugasyon öncesinde en az bir koruyucu ajan ile korundugunu öngörmektedir.

Mevcut bulus ayrica bir görüntüleme ajani, bir kemoterapötik ajan veya bir radyo/kemoterapötik ajan hazirlamak için, bir veya daha fazla mühürlü kap ve mühürlü kaplarin bir veya birden fazlasinda burada tanimlanan herhangi bir bilesimden önceden belirlenmis bir miktar içeren kitler öngörmektedir. Mevcut bulus ayrica, bazi düzenlemelerde, burada tanimlanan herhangi bir bilesimi içeren bir kemoterapötik veya radyo/kemoterapötik görüntüleme ajani öngörmektedir.

Bazi düzenlemelerde, mevcut bulus denegin görüntülenmesi veya tedavisi için, denege burada tanimlanan herhangi bir bilesimden farmasötik olarak etkili bir miktar verilmesini içeren bir yöntem öngörmektedir. Denek bir memeli, örnegin insan olabilir.

N. Bilinen veya süphelenilen kalp hastaligi olan bir denekte tani, tedavi veya qörüntüleme yontemleri Mevcut bulusun düzenlemeleri ayrica genellikle bilinen veya süphelenilen kalp hastaligi olan bir denekte uygulanacak tani, tedavi veya görüntüleme yöntemleri ile ilgilidir. Denek bir memeli veya kus türü gibi herhangi bir denek olabilir. Memeli, örnegin köpek, kedi, siçan, fare veya insan olabilir. Tercih edilen düzenlemelerde, denek, kardiyovasküler hastaligi oldugu bilinen veya süphesi tasiyan bir insandir.

Kardiyovasküler hastalik herhangi bir kalp veya kan damari hastaligi olabilir. Kan damari koroner damar veya koroner damar disinda bir damar olabilir. Damar atardamar, toplardamar, atar damarcik, küçük damar veya kilcal damar olabilir.

Kardiyovasküler hastaliklarin örnekleri arasinda miyokardiyal enfarktüs, miyokardiyal iskemi, angina pektoris, konjestif kalp yetmezligi, kardiyomiyopati (konjenital veya edinilmis), aritmi veya valvüler kalp hastaligi gibi kalp hastaliklari bulunur. Belirli düzenlemelerde, denekte miyokardiyal iskemi bulundugu bilinmekte veya süphelenilmektedir.

Denek, örnegin, miyokardiyal iskemiyi veya miyokardiyal enfarktüsü düsündüren bulgular veya semptomlar ile bir klinige basvuran bir hasta olabilir. Hastaligin teshisi için denegin kalbinin görüntülenmesi, burada belirtilen yöntemlerden herhangi biri kullanilarak sentezlenen metal iyonu etiketli bir selatör-hedefleme Iigandi konjugatinin denege farmasötik olarak etkili bir miktarda uygulanmasini gerektirebilir. Görüntüleme, teknikte uzman kisilerce bilinen herhangi bir görüntüleme yöntemi kullanilarak gerçeklestirilebilir.

Belirli düzenlemelerde, görüntüleme, PET veya SPECT gibi radyonüklit bazli görüntüleme teknolojisinin kullanilmasini gerektirir. Belirli düzenlemelerde, metal iyonu etiketli radyonüklit-hedefleme Iigandi konjugati 99m-TC-EC-glukozamindir. Glukozamin viabl miyokardiyal dokudan aktif olarak alinmaktadir. Iskemik miyokard alanlari daha az konjugat alir veya hiç almaz. Iskeminin siddeti, teknikte uzman kisilerce bilinen herhangi bir yöntem kullanilarak ölçülen sinyalin büyüklügüne göre görsel olarak degerlendirilebilir veya derecelendirilebilir. Bazi düzenlemelerde, ikinci bir görüntüleme yöntemi kullanilarak kalbin görüntülenmesi öncesinde, sirasinda veya sonrasinda, burada belirtilen konjugatlardan herhangi biri kullanilarak görüntüleme gerçeklestirilir. Örnegin, ikinci görüntüleme yöntemi talyum sintigrafisi olabilir.

Miyokardiyal perfüzyon SPECT'i (MP8), dinlenme ve stres uygulamali bir stres yöntemi (egzersiz veya farmakolojik) ve radyofarrnasötiklerin görüntülenmesinin bir kombinasyonundan olusur. Talyum, miyokardiyal perfüzyon görüntüleme için mükemmel fizyolojik özelliklere sahiptir. Egzersiz boyunca, koroner dolasimdan ilk geçis sirasinda yüksek oranda ekstrakte edilen, viabl miyokarda yönelik kan akisi ile talyum tutulumu arasinda dogrusal bir iliski gösterilmistir; bununla birlikte, çok yüksek akis seviyelerinde, tutulumda bir “azalma” meydana gelir. Baglanmamis bir potasyum analogu olarak talyum zamanla redistribe olur. Ilk distribüsyon, bölgesel miyokardiyal perfüzyonla orantilidir ve ekilibriyumda talyum distribüsyonu, bölgesel potasyum havuzuyla orantili olup viabl miyokardi yansitir. Talyum redistribüsyonunun mekanizmalari, hipoperfüze olmakla birlikte viabl miyokard ve normal zonlar ile baslangiçta hipoperfüze zonlara yönelik wash-in arasindaki diferansiyel yikanma oranlaridir. Talyumun yikanma orani, miyokardiyal hücre ile kan arasindaki konsantrasyon gradyanidir. Dinlenmenin veya düsük seviyeli egzersiz enjeksiyonunun ardindan, kandaki talyum klirensi yavaslar. Yeterli stres seviyelerine ulasmayan normal hastalarda, diffüz iskemiyi taklit eden, düsük diffüz yikanma oranlari görülebilir. Hiperinsülinemik durumlar, viabl miyokardin yeterince önemsenmemesine yol açacak sekilde, redistribüsyonu yavaslatir; bu nedenle, talyum enjeksiyonundan önce ve sonraki 4 saat boyunca aç kalinmasi önerilir. Bundan dolayi, talyum ile kombinasyon halindeki bir viabl ajan olarak EC-G kullanilirsa viyabl alan durumundaki ilgili hassas Mevcut bulusa ait metal iyonu etiketli selatör-hedefleme Iigandi konjugatlarindan herhangi birinin kullanildigi görüntüleme, ayni zamanda, kardiyak izozimlerin ölçümü veya kardiyak kateterizasyon gibi diger teshis yöntemleri ile birlikte de gerçeklestirilebilir. Görüntüleme, semptomlarin baslamasindan sonra çesitli araliklarla yapilabilir veya zaman içinde miyokardiyal perfüzyondaki degisiklikleri degerlendirmek için gerçeklestirilebilir.

O. Örnekler Asagidaki örnekler bulusun sinirlayici olmayan belirli yönlerini göstermek üzere eklenmistir. Teknikte uzman kisiler, asagidaki örneklerde açiklanan tekniklerin bulus sahibi tarafindan, bulusun uygulanmasinda iyi is görmek üzere kesfedilmis teknikleri temsil ettigini takdir etmelidir.

Asagidaki rakamlar, kimyasal yapilar ve sentetik detaylar belirli bilesikleri vermektedir.

N,N-Etilendisistein-qlukozaminin (EC-G) bir orqanik sentezinin sinirlavici olmayan örnegi. Bkz. SEKIL 1.

Adim 1: S,S`-Bis-benziI-N,N'-etilendisistein (Bz-EC) sentezi Sistein-HCI (30 gr), suda ( eklenmis ve reaksiyon karisimi gece boyunca oda sicakliginda karistirilmistir. Daha sonra pridin (25 mL) eklenmis ve bir çökelti olusturulmustur. Kristaller ayrilarak etanolle (50 mL) yikanmis, ardindan Buchner hunisi ile süzülmüstür. Kristaller petrol eteri ( ile ögütülmüs, tekrar süzülmüs ve kurutulmustur. Öncül, L-tiyazolidin-4-karboksiIik asit (ergime noktasi sivi amonyak ( içinde çözünüp geriye döndürülmüstür. Kalici bir mavi renk elde edilene kadar dakika boyunca sodyum metal eklenmistir. Mavi çözeltiye amonyum klorür eklenmis, çözücüler kuruyana kadar buharlastirilmistir. Kalinti suda ( çözünmüs ve pH derecesi konsantre HCI ile 2'ye getirilmistir. Bir çökelti olusturulmus, süzülmüs ve suyla ( yikanmistir. Kati madde kalsiyum klorür kurutma kabinda kurutulmustur. Daha sonra 10,7 gr EC haziiianmistir (ergime noktasi . EC yapisi H-1 ve içinde çözünmüstür. Benzil klorür (5,063 9, 40 mmol) dioksan (30 mL) içinde çözünmüs ve karistirilmistir. Reaksiyon 30 dakika süreyle karistirilmistir. Çözeltinin pH derecesi konsantre HCI ile 2'ye ayarlanmistir. Çökelti süzülüp suyla yikanmis ve trifloroasetik asitten tekrar kristallestirilerek %79,0 (3,5454 gr), ergime noktasi (bildirilen 229- vermistir. Bz-EC yapisi H-1 ve C-13 NMR ile dogrulanmistir.

Adim 2: S,S'-Bis-benziI-N,Ni-bis-CBZ etilendisistein (Cbz-Bz-EC) sentezi ve pH derecesi 1N NaOH ile 10'a getirilmistir. Nihai sulu hacim 30 mL'dir. Benzil kloroformat ( içinde çözünmüs ve karistirilmistir.

Kati Na2C03 eklenerek pH derecesi 10'a getirilmistir. Reaksiyon karisimi 2 saat boyunca karistirilmis ve fazla benzil kloroformati (CBZ) çikarmak için dietil eterle ekstrakte edilmistir. 8qu katmanin pH derecesi 1 N HCI ile 2'ye getirilmis ve etil asetatla ekstrakte edilmistir. Organik katman magnezyum sülfat üzerinde kurutulmus ve çözücü buharlastirilmistir Kalinti, CH2CI2:asetik asit (99:1) ile ayristirilmis silika jel kolonu (3,127 gr) elde edilmistir. Cbz-Bz-EC yapisi H-1 ve C-13 NMR ile dogrulanmistir.

Adim 3: S,S'-Bis-benziI-N,N'-bis-CBZ etilenedisistein-qlukozamin (tetra acetate) koniuqat (Cbz-Bz-EC-G-4-Ac) sentezi Karistirilmis diklorometan (22 mL) sisesine Cbz-Bz-EC (2,1467 g, 3 mmol) eklenmistir. Bunu disikloheksilkarbodiimid (DCC) (2,476 9, 12 mmol) ve dimetilaminopiridin (1,466 9, 12 mmol) izlemistir. Karisima tetraasetilatli glukozamin hidroklorür ( (Oakwood Products Inc., West Columbia, SC) eklenmis ve tamamen çözünene kadar karistirilmistir. 4-Ac-G-HCI yapisi H-1 ve C-13 NMR ile dogrulanmistir. Reaksiyon gece boyunca oda sicakliginda karistirilmistir. Su ( eklenmis ve kati madde süzülmüstür. Filtrat magnezyum sülfat üzerinde kurutulmus ve çözücü buharlastirilmistir Ürün, hareketli jel kolon kromatografisi ile saflastirilmistir. Ürün, %664 izole verimdir (2,7382 g).

Cbz-Bz-EC-G-4-Ac, H-1 ve C-13 NMR ile ve kütle spektrometrisiyle dogrulanmistir.

Adim 4: N,N'-etilendisistein-qIukozamin (EC-G) sentezi Cbz-Bz-EC-G-4-Ac (687,7 mg, 0,5 mmol) sivi amonyak (20 mL) içinde çözünmüs ve sodyum parçalari (223 mg, 10 mmol) eklenmistir. Sodyumun tümü eklendikten sonra reaksiyon karisimi 20 dakika boyunca koyu mavi renge bürünmüstür. Amonyum klorür (641,9 mg, 12 mmol) yavasça eklenmis ve koyu mavi çözelti renksizlesmistir. Sivi amonyak, azotla uzaklastirilmistir. Kati ürün kalintisi suda çözünmüs ve gece boyunca EC-G bis-asetillenmis bilesikteki H-1 ve 0-13 NMR, kütle spektrumlariyla beraber elde edilmistir. Moleküler iyon 861 olup matris 187 ve ana iyon içermektedir. Baslica iyon (%100), su kaybi nedeniyle 656'dir. EC-G bis-asetillenmis bilesik (200 mg) sodyum karbonat içinde çözünüp 2 saat karistirilarak daha fazla saflastirilmistir. Ürün EC-G daha sonra liyofilize edilerek 70 mg agirlik vermistir.

Ardindan EC-G'deki H-1 NMR ve C-13 NMR elde edilmistir. EC-G'deki C-13NMR 16 ana karbon pik göstermistir. EC-G'nin hidrofilisitesi ve kütle spektrometri kolonunda tutunma egilimi nedeniyle kütle spektrumlarinin elde edilmesi güçtür. Ancak EC-G bis- asetillenmis bilesik EC-G'den daha az hidrofilik oldugundan EC-G bis-asetillenmis kütle spektrumlari elde edilebilmistir. EC-G kütle spektrumlari, eksik hidroliz prosedürü nedeniyle EC-G bis-asetillenmis bilesikte küçük bir safsizlik oldugunu göstermektedir.

EC-G'deki H-1 ve 0-13 NMR, EC-G'nin tahmin edilen degerlerine yakindir. EC-G'nin simetrik yapisi için 10 karbon pik beklense de glukozamin 6 karbon yerine 12 karbona sahiptir, bu da glukozaminin iki konfigürasyonu oldugunu öne sürmektedir. H-1 NMR deneysel degerleri tahmin edilen degerlerden farkli bir profile sahip gibi görünmektedir; ancak glukozaminin C-13 NMR deneysel degerleri, öngörülen glukozamin degerlerine yakindir. Buna göre, EC-G iki konfigürasyona sahip görünmektedir.

Re-EC ve korumali qlukozamin kullanilarak orqanik 187Re-EC-G sentezinin sinirlayici olmayan örnegi Bkz. sekil 2.

Yapi ve lipofilisite benzerligi nedeniyle 187Re-EC-G, ggmTc-EC için referans standart olarak kullanilmistir. Soguk Re-EC-G sentezi, SEKIL 2'de gösterilmektedir. Karistirilan etanol çözeltisine, azot altindaki 50 mL sisede 10 mL etanole küçük metal sodyum yongalari (144,8 mg, 6,3 mmol) yavasça eklenmistir. Sodyum metali çözündükten sonra EC (536,8 mg, 2,0 mmol) eklenmistir. Reaksiyon karisimi oda sicakliginda 1 saat karistirilarak EC-Na tuzu olusturulmustur. Trifenilfosfin renyum klorür (ReOCI3(PPh3)2, 1,8329 9, 2'nin zeytin yesili rengi, orman yesiline dönmüstür.

Reaksiyon karisimi 1 saat karistirilmis ve ardindan 30 dakika geriye döndürülmüstür.

Reaksiyon karisimi daha sonra süzülmüs ve filtrat kuruyana kadar buharlastirilarak gri-mor bir Re-EC (818,4 mg, %80 verim) tozu vermistir. Re-EC yapisi H-1, C-13 NMR ve kütle spektrometrisi ile dogrulanmistir. Re, 185 ve 187 olarak iki izomerik moleküler agirliga sahiptir. Dolayisiyla göze çarpar biçimde 40:60 oranla iki ana iyon göstermektedir.

Karistirilmis dimetilformamid (4 mL) çözücüsüne Re-EC (116,9 mg, 0,25 mmol) ve ardindan eklenmistir.

Ardindan disikloheksilkarbodiimid (DCC) (123,8 mg, 0,6 mmol) eklenmistir. Reaksiyon karisimi 1 saat süreyle karistirilmistir. Tetraasetillenmis glukozamin (4-Ac-G-HCI) (184,9 mg, 0,5 mmol) eklenmis, ardindan reaksiyon oda sicakligina gece boyunca karistirilmistir. Su (1 mL) eklenmis, ardindan reaksiyon 1 saat daha oda sicakliginda karistirilmistir. Reaksiyon karisimi indirgenmis basinç altinda buharlastirilmistir. Su (5 mL) ve ardindan kloroform (5 mL) eklenmistir. Su katmani ayrilip liyofilizlenerek ham koyu kahverengi bir kati madde elde edilmistir. Kati madde Sephadex G-50 kullanilarak kolon kromatografisi ile saflastirilmis ve soguk Re-EC-G (128,4 mg, %65 verim) vermistir. Soguk Re-EC-G yapisi H-1, C-13 NMR ve kütle spektrometrisi ile dogrulanmistir. Yine, Re-kompleksi 40:60 oranla iki ana iyon göstermektedir.

Soguk Re-EC-G'deki H-1 ve C-13 NMR degeri öngörülen NMR spektrometrisine benzerdir. EC-G (5 mg), kalay(ll) klorürde (0,1 mg) 99"'Tc (perteknetat) (0,037 GBq (1 mCi)) ile etiketlenmistir. HPLC analizi soguk Re-EC-G'nin tutulma süresinin 99mTc- EC-G'ninki ile benzer oldugunu göstermistir.

Sulu reaksiyonda EC ve glukozamin ile EC-G sentezi EC ( içinde çözünmüstür. Bu renksiz çözeltiye sülfo-N-hidroksisüksinid (sülfo-NHS, 173,7 mg, 0,8 mmol) ve 1-etil-3-(3-dimetilaminopropil) karbodiimid-HCI (EDAC) (Aldrich Chemical Co, Milwaukee, Wl) (153,4 mg, 0,8 mmol) eklenmistir. Ardindan D-Glukozamin hidroklorür tuzu (Sigma Chemical Co., St Louis, M0) (345 mg, 1,6 mmol) eklenmistir. pH degeri 8 olarak ölçülmüstür. Karisim oda sicakliginda 16 saat süreyle karistirilmis ve ardindan 500'de kesilen Spectra/PCR moleküler gözenekli membranla 24 saat boyunca diyalizle ayrilmistir (Spectrum Medical Industries Inc., Houston, TX). Diyalizin ardindan, ürün 0,45 um Naylon-filtre ile süzülmüs ve liyofilizatör ile dondurarak kurutulmustur (Labconco, Kansas City, MO). Ham ürün 300-400 mg agirliga sahiptir. EC-G'deki H-1 NMR benzer yapilar göstermistir; ancak karisim organik EC-G kadar saf görünmemektedir. Element analizi, EC ile glukozamin arasinda farkli reaksiyon oranlariyla EC-G safliginin %63-77 arasinda oldugunu göstermistir. Prep-HPLC (7,8 X 300 mm C-18 kolon, Waters) (akis hizi: 0,5 cm3/dak ( kullanilarak ham ürün saflastirilmistir, 180-240 mg (verim %60). Prep-HPLC sonrasi EC- G'deki H-1 ve C-13 NMR, mono EC-G veya EC-glukozamin, sülfo-NHS ve EDAC safsizliklarini ileri sürerek ilave pikler göstermistir. Ham EC-G'nin Prep-HPLC saflastirmasi kimyasal saflikta kademeli gelismeler vermistir; ancak ham EC-G kalay(ll) klorürde 99mTc ile etiketlendiginde, glukonatin transselatör olarak kullanilmasiyla %95'ten yüksek 99”'Tc- EC-G radyokimyasal safligi elde edilebilir (radyo-TLC ve HPLC analizinde gösterildigi gibi). 8qu yöntem ve orqanik yöntem yoluyla sentezlenen ürünleri karsilastiran hücresel alim çalismasi EC-G biyolojik aktivitesinin daha fazla validasyonu için in vitro hücre kültürü deneyleri yürütülmüstür. Kisaca, çesitli zaman araliklarinda 99"'Tc-EC-G (0,07 MBq/kuyucuk (2 pCi/kuyucuk) ile inkübe edilen tümör hücrelerinde (50.000 hücre/kuyucuk) hücresel alim saptanmistir. Hücresel alim deneyi ham (saflastirilmamis) EC-G ve prep-HPLC saflastirilmis EC-G arasinda belirgin bir fark göstermemistir (SEKIL 4) In vitro stabilite çalismalari hücre kültürü kullanilarak veya EC-G'yi suda çözündürerek saptanmistir. 99"'Tc-EC-G kullanan hücresel alimda, 2-4 hafta sonra %10-15 düsüs gözlenmistir.

EC-G'nin su içindeki faydali ömrü 17,26 gün olarak hesaplanmistir. In vivo görüntüleme çalismalari, sulu ve organik reaksiyonlardan sentezlenen EC-G arasinda belirgin bir fark göstermemistir.

Sulu reaksiyonda Re-EC ve glukozamin ile soguk Re-EC-G sentezi Re-EC (255,8 mg. 0,5 mmol) (Örnek 2'deki), NaOH (1 N, içinde çözündürülmüstür.

Bu koyu eflatun çözeltiye sülfo-NHS (217,1 mg, 1 mmol) ve D-glukozamin hidroklorür tuzu (Sigma Chemical Co., St. Louis, M0) (431,3 mg, 2 mmol) eklenmistir. Ardindan 1-Etil-3-(3- dimetilaminopropil)karbodiimid-HCI (EDAC) (Aldrich Chemical Co., Milwaukee, WI) (191,7 mg, 1 mmol) eklenmistir. Ölçülen pH degeri 8'den büyüktür. Karisim 16 saat süreyle oda sicakliginda karistirilmistir. Karisim 500'de kesilen Spectra/FOR moleküler gözenekli membranla 24 saat boyunca diyalizle ayrilmistir (Spectrum Medical Industries Inc., Houston, TX). Diyalizin ardindan, ürün süzülmüs ve liyofilizatör ile dondurularak kurutulmustur (Labconco, Kansas City, M0). Ham ürün 276 mg agirliga sahiptir. Sulu Re- EC-G'deki H-1 NMR benzer bir yapi göstermistir; ancak organik Re-EC-G bilesige kiyasla safsizliklara dair kanitlar görülmektedir. Organik soguk Re-EC-G bilesiginin HPLC analizi 272 nm'de bir pik göstermistir; ancak sulu soguk Re-EC-G iki pike sahiptir. 8qu soguk Re- EC-G'deki piklerden biri organik soguk Re-EC-G bilesigine karsilik gelmektedir (sirasiyla Glukozaminin (aktif farmasötik icerik) kantitatif analizi D-Glukozamin, renk ölçüm deneyleri için türevlendirilmistir. Kisaca, karistirma yoluyla yeni hazirlanmis sulu 1 N NaOH ( çözeltisindeki D-glukozamin hidroklorür sonra kristallesme baslamis ve karisim gece boyunca sogutulmustur. Çökeltilmis ürün daha sonra süzülerek soguk suyla (60 mL) ve ardindan EtOH-Et20 (121) karisimi ile yikanarak 2-deoksi-2-[p-metoksibenziliden(amino)]-D-glukopiranoz (D- 166 °C vermistir. H-1 NMR yapiyi dogrulamistir.

Ham EC-G (50 mg), 1 N NaOH ile hidrolizlenmistir. Reaksiyon karisimina anisaldehid eklenmistir. 2 saat sonra reaksiyon karisimi kloroform ile ekstrakte edilmistir.

Reaksiyona girmemis anisaldehid içeren kloroform katmani azotla buharlastirilmistir.

Reaksiyona girmis anisaldehid agirligi, D-glukozamin-anisaldehid eklentisindeki glukozamin miktarini saptamakta kullanilmistir.

EC-G'de kantitatif EC analizi Ham EC-G (50 mg), 1 N NaOH ile hidrolizlenmistir. Benzil klorür dioksan (30 mL) içinde çözündürülmüs ve ardindan, karistirilmis karisima eklenmistir. Reaksiyon 2 saat karistirilmis ve kloroformla ekstrakte edilmistir. Reaksiyona girmemis benzil klorür içeren kloroform katmani azotla buharlastirilmistir. Reaksiyona girmis benzil klorür agirligi, EC-G'deki EC miktarini saptamakta kullanilmistir (Tablo 3).

EC-G'de kantitatif sülfo-NHS ve EDAC analizi UV 272 nm'de standart sülfo-NHS egrisi olusturulmustur. Ham EC-G, suda çözündürülmüstür. Standart egriden, UV 272 nm'de EC-G içindeki sülfo-NHS miktari saptanmistir. Tablo 3'te gösterilen toplam EC-G agirligindan EC, glukozamin ve sülfo-NHS çikarilarak 1-etiI-3-(3-dimetilaminopropil) karbodiimid-HCI (EDAC) miktari saptanmistir.

Glikoz fosforilasvonu denevinin kantitatif analizi EC-G'nin glikoz fosforilasyon prosesini degerlendirmek üzere in vitro heksokinaz deneyi kullanilmistir. Bir kit (Sigma Chemical Company, M0) kullanilarak florodeoksiglikoz (FDG, 1,0 mg), EC-G (1,0 mg), D-glukozamin (G, 1,0 mg) ve D-glikoz (2,5 mg) 1 mL (EC-G, G) veya suda çözündürülmüstür. Bundan 200 uL ayrilmis ve 2.5 mL suda seyreltilmistir. Ardindan 100 uL alikot ayrilmis ve çözelti içinde 900 |JL InfinityTM Glikoz Reaktifi ile birlestirilerek üç dakika boyunca 37 °C'de inkübe edilmistir. Fosforlanmis glikoz ve NADH daha sonra , Glukozaminin (aktif farmasötik içerik) EC-G (sulu reaksiyondan sentezlenmis) icindeki kimvasal vapi denevi Glukozamin miktarini saptamak üzere bir renk ölçüm deneyi kullanilmistir. Bakir sülfat ( ve sodyum potasyum tartrat (10 g NaOH içeren 100 mL suda 34,69) çözeltisi hazirlanmistir. Gözle görünür kirmizi bakir oksit çökeltisi kalmayana kadar bazik bakir tartrat çözeltisi ile EC-G (25 mg) ve glukozamin (standart) eklenmistir. EC-G içindeki glukozamin miktari, titrasyon hacminden saptandigi üzere 8,7 mg'dir (%35 ag/ag) (Tablo 3).

Alternatif olarak, Öenek 5'te açiklandigi gibi, yeni hazirlanmis sulu 1N NaOH eklenmis ve ardindan karisima p-anisaldehid (17 mL, 0,14 mol) eklenmistir. 30 dakika sonra kristallesme baslamis ve karisim gece boyunca sogutulmustur. Çökeltilmis ürün süzülerek soguk suyla (60 mL) ve ardindan EtOH-Etzo (1:1) karisimi ile yikanarak 2-deoksi-2-[p-metoksibenziliden(amino)]-D-glukopiranoz (D-glukozamin- vermistir. Ham EC-G (50 mg), 1 N NaOH ile hidrolizlenmistir. Reaksiyon karisimina anisaldehid eklenmistir. 30 dakika sonra kristallesme baslamis ve karisim gece boyunca sogutulmustur. Çökeltilen ürün süzülüp soguk suyla yikanmis ve ergime noktasi .

Glukozamin ve EC'nin EC-G'deki kalitatif analizi (sulu reaksiyondan sentezlenmis) Teorik deger Bilesik Moleküler Agirlik Yüzde (agirlik/agirlik) (%1 00) (%65) EC 268 Glukozamin (G) 179 Deneysel deger Bilesik Yüzde Yöntem (agirlik/agirlik) EC-G'deki EC %30 renk ölçümü EC-G'deki G %35 renk ölçümü EC-G'deki Sülfo-NHS %34 UV (268 nm) EDAC %1 hesaplama Etilendisisteinin (selatör) EC-G (sulu reaksivondan sentezlenmis) icindeki kimyasal yapi deneyi EC-G safligini saptamak için iki yöntem kullanilmistir. Ilk yöntemde ECmiktarini saptamak için bir renk ölçümü deneyi yapilmistir. Iyot çözeltisi (0,1 mol/L) (1000 mL suda 36 g KI ile beraber 13 g) hazirlanmis ve Iyot çözeltisine EC-G (25,2 mg) ile EC (25 mg) (standart) eklenmistir. Standart EC'de soluk beyaz kati ürün çökeltilmis, ancak EC-G'de hiç bir çökelti kaydedilmemistir. Bir titrasyon yöntemi (sarimsi renk (5 dakikadan uzun kalir)) kullanilarak EC-G'deki EC miktari saptanmistir. Kullanilan her bir 1 mL iyot çözeltisi, 13,4 mg EC'ye esittir. EC-G'deki EC miktari 7,6 mg'dir (%30,2 ag/ag).

Ikinci yöntemde, tiyoI-EC-G eklentisinin ergime noktasinin ölçümü yapilmistir. Örnek 1 S,S,-Bis-benzil-N,N'-etilendisistein (Bz-EC) sentezini özetlemektedir. Kisaca, EC 40 mmol) dioksan (30 mL) içinde çözünmüs ve karistirilmis bir karisima eklenmistir. dakika sonra çözeltinin pH derecesi konsantre HCI ile 2'ye ayarlanmistir. Çökelti süzülüp suyla yikanmis ve trifloroasetik asitteri tekrar kristallestirilmistir. Verim %79,0 (3,5454 g), ergime noktasi olarak hesaplanmistir. Ham EC-G (50 mg) daha sonra 1 N NaOH ile hidrolizlenmis ve benzil klorür (40 mg) eklenmistir. Reaksiyon karisimi 30 dakika karistirilmistir. Çözeltinin pH derecesi konsantre HCI ile 2'ye ayarlanmistir. Çökelti süzülüp suyla yikanmis ve EC- benzil eklentisi, ergime noktasi vermistir.

Sülfo-N-hidroksisüksinimidin (Sülfo-NHS) EC-G (sulu reaksiyondan sentezlenmis) icindeki kimvasal vapi denevi N-hidroksisüksinimid (sülfo-NHS) deneyi, UV (268 nm) ile saptanmistir. UV 268 nm'de standart sülfo-NHS egrisi üretilmistir. Bu UV absorbansi altinda, EC-G ve EDAC için yetersiz absorbans gözlenmistir. Suda ham EC-G (50 ug/mL) çözünmüs ve absorbans .

Radvokimvasal saflik ve vapi denevi Ince tabaka kromatografisi (TLC) ve yüksek performansli sivi kromatografisi (HPLC) kullanilarak radyokimyasal yapi saptanmistir. TLC deneyinde, sentezlenmis sulu ve organik EC-G, 99mTc ile etiketlenmis ve silika jel kolonu emdirilmis TLC seridinde (ITLC- SG) saptanarak radyo-TLC tarayici ile taranmistir. 99mTc-EC-G'nin (sulu sentezden) ve referans standardin (organik sentezden 99mTc-EC-G) alikonma faktörü (Rf) degerleri 0,8'dir (amonyum asetat (1 M):metan0l; 4:1 veya salin ile saptanmis). HPLC deneyinde organik ve sulu sentezlenmis EC-G'nin kimyasal safligi sirasiyla %95.64 ve %90,52'dir.

Organik reaksiyondan sentezlenen EC-G, sulu reaksiyondan sentezlenen EC-G'den daha saftir. Organik ve sulu sentezlenmis EC-G 99mTc ile etiketlenmis ve C-18 ters faz kolonunda (Waters, yari-prep, 7,8 x 300 mm) yüklenmistir (20 uL, 1 mg/mL EC-G). 99”'TC-EC-G ve soguk Re-EC-G (organik sentezdeki referans standart) alikonma süresi 210 nm UV'de saptanmis). Organik ve sulu sentezlenmis 99"'Tc-EC-G, UV dalga boyu (210 nm) ile saptanmistir ve es radyoaktif detektör bulgulari yukarida belirtilen araliklar içindedir. In vitro hücre kültürü deneyleri Re-EC-G'nin doz yanit egrisi olusturdugunu (SEKIL 3) ve insan lenfoma hücrelerine karsi etkili oldugunu göstermistir.

- HPLC ve TLC ile ölçülen 99mTc-EC-G'nin radyokimyasal safligi sulu sentezlenmis EC-G'de %95'ten büyük olup organik sentezlenmis EC-G'nin radyokimyasal safligina oldukça yakindir.

- Renk ölçümü ve element analizi ile ölçülen etiketsiz sulu EC-G'nin kimyasal safligi %60-70 araligindadir. EC-G bilesigindeki (sulu veya organik sentez olduguna bakilmaksizin) tüm safsizliklar renk ölçümü deneyleri ve UV spektrometrisiyle, % ag/ag bazinda açikça glukozamin (%35), EC (%30), sülfo-NHS (%34) ve EDAC (%1) olarak tanimlanmistir.

- UV 210 nm'de HPLC ile ölçülen etiketsiz sulu EC-G'nin kimyasal safligi etiketsiz organik EC-G ile, sirasiyla %90,52 ve %95,64 degerlerinde olumlu olarak mukayese edilebilmektedir.

- Sulu 99mTc-EC-G'nin alikonma süresi 272 nm'de HPLC ile ölçülen soguk Re- EC-G araligindadir.

- Sulu EC-G'deki NMR (1H, 13C), soguk Re-EC-G araligindadir.

- Etiketsiz organik EC-G, etiketli organik EC-G ve soguk Re-EC-G, referans - Biyolojik deneyler (in vitro alim ve in vivo görüntüleme), sulu ve organik sentezlenmis EC-G arasinda belirgin bir fark göstermemistir. 68Ga-EC-G'nin saflik analizi Hem organik, hem sulu yöntemle sentezlenen 88Ga-EC-G radyo-TLC yoluyla analiz edilmistir. SEKIL 6 organik ürünün (a) sulu ürüne (b) karsi yüksek safligini göstermektedir. SEKIL 7, 0-18 kolonu (Puresil, 4.6x150 mm, Waters, Milford, MA) üzerinde yürütülen ve 0,5 cm3/dak ( akis hizinda suyla ayristirilan saflastirmayi temsil eder. Saptama islemi UV ve Nal ile yapilmistir. 68Ga-EC-G'nin stabilite analizi SEKIL 8, radyo-TLC ile gösterildigi gibi köpek serumundaki 68Ga-EC-G stabilite çalismasinin sonuçlarini göstermektedir. 100 uL köpek serumuna 100 uL 68Ga-EC-G süreyle inkübe edilmistir. Ardindan her numuneye 200 uL MeOH eklenmis ve piridin:EtOH:su = 1224; Whatman #1 kagit içeren bir sistemle elüsyon öncesinde vortekslenmistir. (a) 68Ga-EC-G (0,7 mg/ 60 dak.; (e) süre = 120 dak.; (f) 68Ga-EC-BSA.

SEKIL 9, protein baglama deneyinde analiz edildigi gibi köpek serumundaki 88Ga-EC- G stabilite çalismasinin sonuçlarini göstermektedir. Kontrol numunesi, köpek serumunda 68Ga-EC-sigir serum albümini (BSA) ile inkübe edilmistir. 100 uL köpek serumuna eklenmis ve eklenerek numune vortekslenmis, 1 dakika süreyle santrifüjlenmis ve üst fazla çökeltinin her birinin sayimi yapilmistir. Çökeltide saptanan sayilar 68Ga-EC-G ile köpek seru mu proteinleri arasindaki baglama derecesini göstermektedir.

Protein baglama orani 2 saat sonra %18.6'dan %51.5'e çikarak BBGa-EC-G'nin hedefleme potansiyelini göstermistir.

Meme kanseri hücre dizisi 13762'de 68Ga etiketli bilesiklerin in vitro qüncelleme Çalismasi SEKIL 10, meme kanseri hücre dizisi 13762'de 68Ga etiketli bilesiklerin in vitro alim çalismasi sonuçlarini göstermektedir. 13762 hücrelerinde 68Ga-EC ve 68Ga-EC-G'nin hücresel alimi (. 68Ga-EC-G hücresel alimi 0,5-2 saat içinde kontrol 68Ga-EC'ye göre büyük ölçüde (p < 0,01) yüksektir.

Kardivovasküler hastaligin qörüntülenmesi SEKIL 11, meme tümörü bulunan siçanlarda bir 99mTc-EC-ESMOLOL türevinin (11 MBq/siçan ( düzlemsel sintigrafi görüntülerini göstermektedir.

Sayilar 15-45 dakikada kalp/üst mediasten (H/UM) sayim yogunlugu (sayi/piksel) oranlaridir. SEKIL 11'deki dizi profili, lateral konumdaki dokulara kiyasla yüksek kalp bölgesi sayi/piksel orani göstermektedir. Bu sonuçlar 99mTc-EC-ESMOLOL'un kalp bölgesini görüntülemekte sasirtici ölçüde etkili oldugunu kanitlamaktadir. SEKIL 12, Yeni Zelanda beyaz tavsaninin 68Ga-EC-TML PET görüntüleme sonuçlarini göstermektedir. Tavsana 68Ga-EC-trimetil Iizin (EC-TML) verilmistir. PET koronal görüntüleri, 68Ga-EC-TML enjeksiyonundan 45 dakika sonra elde edilmistir (sirt-karin sirasiyla). Kalpteki yüksek alim fark edilmis olup, EC- TML'nin yag asidi metabolizmasiyla ilgili oldugunu öne sürmektedir.

Ec-G'nin bir EC-BenzhidroI-Cbz-Glukozamin Ara Ürünü yoluyla Orqanik Sentezinin Sinirlayici Olmayan Örnegi (bkz. SEKIL 13) EC-Benzhidrol-Cbz-Glukozamin etil asetat içinde çözünebilir ve MTBE veya n-Heksan eklenerek çökeltilebilir. Bu, EC-G elde etme yöntemlerinin birinde sondan bir önceki saf bir tür elde etme yöntemi olarak düsünülmüstür. Bu tritürasyon tedavisi öncesinde EC- BenzhidroI-Cbz-Glukozamin safligi (HPLC) yaklasik %64'tür. Tritürasyon sonrasindaki saflik yaklasik %68 (MTBE) veya %65-%80'dir (n-Heksan). Ürünü saflastirmak için düsünülen diger bir yöntem biyotaj kartusu kullanimi olup bunun sebebi, bu kartuslardaki silika jelin parlama sinifi silika jelden daha aktif olmasidir.

Kromatografiye alternatif olarak farkli çözücü sistemler kullanilarak baska saflastirma teknikleri ve prosedürleri de denenmis olup. sonuçlari asagidaki Tablo 4'te gösterilmektedir. Farkli çözücü sistemlerinde çökeltme denenmistir. EC-Benzhidrol- Cbz seçilen bir çözücüde (A) çözünmüs ve daha yüksek hacimdeki bir es çözücüye (B) yavasça yüklenmistir. Ancak, saflik degisiklikleri önemsiz oldugu için sonuçlar bu yaklasimin diger yöntemler kadar etkili olacagini göstermemistir. Seçilen çözücü sistemlerinin çesitli çökelti oranlarinda kullanilmasiyla tritürasyonlar denenmistir.

Tritürasyon sonuçlari ayrica materyalin belli uygulamalar için yeterince saf olmadigini öne sürmektedir. Kolon kromatografisi de denenmis ve kosullar önceki haftaya göre degistirilmistir (15:1 silika: ham, silika üzerinde kuru yüklü). Bu yöntem materyalin ilimli toparlanmasina (%55A'dan %75A'ya) izin vermemistir.

Claims (1)

1. ISTEMLER Selatör-hedefleme Iigandi konjugati sentezleme yöntemi olup, yöntem asagidaki adimi içermektedir: organik bir ortamda formülün bir selatörünü 1 R 2 R3 en az bir fonksiyonel grup içeren en az bir hedefleme Iigandina konjuge etmek; burada selatör etilendisisteindir (EC) ve burada etilendisisteinin iki tiyol grubu ve iki amin grubu korunur; yani, burada: A ve D'den her biri korunmus bir tiyoldur; B ve C'den her biri tersiyer amindir; R1, R2, R3 ve R4'ten her biri H'dir; X, -CHz-CHz-'dir ve konjugasyon, selatörün A, D, E veya F'si ile her bir hedefleme Iigandinin en az bir korunmamis fonksiyonel grubu arasindadir; A, D ve hedefleme Iigandi ögelerinden en az biri, korunmus bir fonksiyonel grup içerir, hedefleme Iigandinin en az bir fonksiyonel grubu korunmamistir, hedefleme Iigandi, glikozu taklit eden bir ajandir. Istem 1'in yöntemi olup burada organik ortam polar veya polar olmayan bir çözücü içerir, özellikle organik ortam dimetilformamid. dimetilsülfoksit, dioksan, metanol, etanol, heksan, metilen klorür, asetonitril, tetrahidrofuran veya bunlarin bir karisimini içerir. istem 1'in yöntemi olup, yöntem ayrica en az bir saflastirma adimi (b) içerir, burada saflastirma adimi (b) silika jel kolon kromatografisi, HPLC veya bunlarin bir kombinasyonunu içerir, yöntem ayrica opsiyonel olarak asagidaki adimlardan herhangi birini içerir: metal iyonunu selatöre selatlayarak selatörle glikozu taklit eden ajan arasinda bir metal iyonu etiketli konjugat olusturmak, ve her koruma grubunu bir veya daha fazla adimda ayirmak. Istem 3'ün yöntemi olup, yöntem adim (b) ve (d) ile beraber ayrica asagidaki adimi içerir: metal iyonunu Selatöre selatlayarak selatörle glikozu taklit eden ajan arasinda bir metal iyonu etiketli konjugat olusturmak, özellikle burada metal iyonu etiketli bir konjugatin olusturulmasi asagidaki adimlari içerir: konjugattan en az bir koruma grubunun ayrilmasi; ve bir metal iyonunun konjugat selatörüne selatlanmasi; veya yöntem ayrica asagidaki adimlari içerir: metal iyonu etiketli bir selatörün olusturulmasi için bir metal iyonunun selatöre selatlanmasi; metal iyonu etiketli selatörün glikozu taklit eden bir ajana konjuge edilmesi; ve selatörle glikozu taklit eden ajan arasindaki metal iyonu etiketli konjugattan en az bir koruma grubunun ayrilmasi. Istem 4'ün yöntemi olup, burada metal iyonu bir teknesyum iyonu, bir bakir iyonu, bir indiyum iyonu, birtalyum iyonu, bir galyum iyonu, bir arsenik iyonu, bir renyum iyonu, bir holmiyum iyonu, bir itriyum iyonu, bir a samaryum iyonu, bir selenyum iyonu, bir stronsiyum iyonu, bir gadolinyum iyonu, bir bizmut iyonu, bir demir iyonu, bir manganez iyonu, bir Iütesyum iyonu, bir kobalt iyonu, bir platin iyonu, bir kalsiyum iyonu veya bir rodyum iyonudur veya burada metal iyonu Istem 5'in yöntemi olup, yöntem ayrica asagidaki adimi içerir: bir indirgen madde eklenmesi. Istem 1'in yöntemi olup, burada glikozu taklit eden ajanin en 2 bir fonksiyonel grubu 0, N, S ve P içerir, özellikle en az bir fonksiyonel grup amino, amido, tiyol, hidroksil, eter, ester, karbonil, karboksilik, sülfonamido, tiyoeter, tiyoester veya tiyokarbonil bir gruptur. istem 1'in yöntemi olup, burada (i) A, B, C ve D'nin herhangi üç veya dört tanesi birlikte bir N282 selati olusturur, veya (ii) A ve D korunan tiyoller olup alkil halid, benzil halid, benzoil halid, sülfonil halid, trifenilmetil halid, metoksitrifenilmetil halid veya sistein ile korunmaktadir. istem 1'in yöntemi olup, burada selatör ve glikozu taklit eden ajan arasindaki konjugat ayrica selatör ve glikozu taklit eden ajan arasinda bir baglayici içerir, özellikle burada baglayici bir peptit, glutamik asit. aspartik asit, bromo etilasetat, etilen diamin, lizin veya bu gruplardan bir veya birden fazlasinin herhangi bir kombinasyonudur veya burada selatör glikozu taklit eden birden fazla ajana konjuge edilmistir. Istem 1'in yöntemi olup, burada glikozu taklit eden ajan deoksiglukoz, glukozamin, tetraasetile glukozamin, neomisin, kanamisin, gentamisin, paromisin, amikasin, tobramisin, netilmisin, ribostamisin, sisomisin, mikromisin, Iividomisin, dibekasin, izepamisin, astromisin veya aminoglikozittir. istem 1 veya 10'un yöntemi olup, burada istem 1'in formülünde A ve D benzhidroI-korumali tiyol gruplaridir, B ve C Cbz-korumali ikincil amino gruplaridir (-NH-), R1, R2, R3 ve R4'ten her biri H'dir; X, -CH2-CH2-'dir, konjugasyon E ile F (her ikisi de -COOH) ve iki hedefleme ligandinin korunmayan iki birincil amino grubu arasindadir, burada hedefleme Iigandlari glikozu taklit eden iki ajandir ve glikozu taklit eden ajanlarin her biri korunmayan glukozaminlerdir, burada organik ortam DMF'dir ve burada, konjugasyon reaksiyonu gerçeklestirildikten sonra, ara konjugatin Na/NH3'e tabi tutulmasiyla A ila D'deki koruyucu gruplar uzaklastirilarak korunmayan konjugat (EC-G) elde edilir. Bir hastaligin teshis veya tedavi yönteminde kullanilan bir bilesik olup; burada bilesik, bir selatör ve glikozu taklit eden bir ajan arasindaki bir konjugattir; burada glikozu taklit eden ajan, glukozamin veya deoksiglukozu içerir ve burada selatör ve glikozu taklit eden ajan, amit bag veya ester bagi yoluyla konjuge edilir; burada bilesik, istem 1 veya 3'teki yöntemle ((b) ve (d) asamalariyla) elde edilebilir; iyonuyla etiketlenir ve burada konjugatin safligi, yaklasik %70 (ag/ag) ve yaklasik %99,9 (ag/ag) arasindadir, burada özellikle konjugatin safligi yaklasik %80 (ag/ag) ve yaklasik %99,9 (ag/ag) arasinda veya yaklasik %90 (ag/ag) ve yaklasik %99,9 (ag/ag) arasindadir ve burada teshis veya tedavi edilecek hastalik miyokardiyal enfarktüs, miyokardiyal iskemi, konjestif kalp yetmezligi, kardiyomiyopati, valvüler kalp hastaligi, aritmi veya angina pektoristir. Istem 12'nin kullanim için bilesik olup, burada metal iyonu bir radyonükleittir veya burada insan üzerinde kullanilmaktadir. Istem 12'nin kullanimi için bilesik olup, burada hastalik teshis yöntemi br bölgenin PET, PET/CT, CT, SPECT, MR, SPECT/CT, optik görüntüleme veya ultrason yoluyla görüntülenmesini içerir. Istem 12 kullanimi için bilesik olup, burada hastalik teshis yöntemi kalbin görüntülenmesini içerir. Istem 12'nin kullanimi için bilesik olup, burada kullanim, kalbin görüntülenmesini içeren bir hastalik teshisi yöntemidir ve hastalik miyokardiyal enfarktüs, miyokardiyal iskemi veya angina pektoristir. Istem 12'nin kullanimi için bilesik olup, burada metal iyonu etiketli bilesik 99'“Tc-EC-glukozamin, 188Re-EOglukozamin veya 187Re-EOglukozamindir. Bilesik verilen bir denegin kalbini görüntüleme yöntemi olup, burada bilesik, bir selatör ve glikozu taklit eden bir ajan arasindaki bir konjugattir; burada glikozu taklit eden ajan, glukozamin veya deoksiglukozu içerir ve burada selatör ve glikozu taklit eden ajan, amit bag veya ester bagi yoluyla konjuge edilir; burada bilesik, istem 1 veya 3'teki yöntemle ((b) ve (d) asamalariyla) elde edilebilir; burada konjugat QgrnTc, 68Ga, 18aRe, platin ve 187Re arasindan seçilen bir metal iyonuyla etiketlenir ve burada konjugatin safligi, yaklasik %70 (ag/ag) ve yaklasik %99,9 (ag/ag) arasindadir, burada özellikle konjugatin safligi yaklasik %80 (ag/ag) ve yaklasik %99,9 (ag/ag) arasinda veya yaklasik %90 (ag/ag) ve yaklasik %99,9 (ag/ag) arasindadir ve burada yöntem kalbin görüntülenmesini içerir.