SU904519A3 - Способ получени тетрадекапептида - Google Patents

Description

(54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ТЕТРАДЕКАПЕПТИДА

1

Изобретение относитс  к получению ново го тетрадекапептида, биологически активного соединени , которое может найти применение в биологии и медицине.

Известеи способ получени  пептидов пу-5

тем одновременного отщеплени  защитных групп и полимерной смолы от пептидной смолы обработкой соответствующей пептидной смолы фтористоводородной кислотой в присутствии анизола или метил меркаптана 1.ю

Цель изобретени  - получение нового тетрадекапептида .

Поставленна  . цель достигаетс  тем, что согласно способу получени  тетрадекапептида

формулыIJJ

H-D-VaI-Glv-Cys-Lys--Asp-Phe-Phe-Trp-Lys-Thr-Phe-Thr-Ser-Cys-OH (I)

соединение формулы

R-D-V:al-Gly-Cys(R,)-Lys(R2)-Asp-Phe-Phe-Trp (R«)-Lys(Rj)-Thr(Rs)-Phe-(ll) -Thr(R3)-Ser(R4)-Cys(Rt)X, где R - водород или 777ег-бутило15сикарбо}шл;25

RI - водород или меток сибензил; R2 - водород, или о-хлорбензилоксикарбонил;

Rs.Ra - каждый, водород или бензил; X - ОСНг-фенил-смола обрабатывают фтористоводородной кислотой в присутствии анизола или метилмеркаптана.

Пример 1. N-rper-Бутилоксикарбонил-Ь-цистеинил (5-п-метоксибензил)-метилированна  полистирольна  смола.

К 500 мл N1 N-диметилформамида, содержащего цезиевую соль N -трег-бутилоксикарбонил- (З-и-метоксибензил)-цистеина, полученную из 9,06 г (26,5 моль) свободной кислоты, добавл ют 51,0 г хлорметилированной полистирольной смолы (0,75 ммоль/г).. Смесь перемещивают при комнатной температуре 6 дн. Смолу отфильтровьюают, последовательно промывают 3 раза смесью 90% диметилформамида и 10% воды, 3 раза 95%-ным этанолом и 3 оаза даметилформамидом. К смоле, суспендированной в 500 мл диметилформамида, добавл ют раствор 10,5 г ацетата цези . Смесь перемешивают 6 щ при комнатной температуре. Смолу отфильтровывают, промьтают последователь 39 но 1 раз водным диметилформамидом 3 раза смесью 90% диметилформамида и 10% воды, 3 раза.95%-ным этанолом 3 раза хлористым метиленом , 3 раза 95%-ным этанолом и 3 раза хлороформом . Малую часть смолы удал ют 4-кратным суспендированием в хлороформе, декантиру  каждый раз жидкость. Затем смолу высушивают в вакууме при 40° С в течение нота, получают 44,8 г тетрадекапептида. Анализ показывает содержание 0,25 ммоль цистеина на 1 г смолы. Цистеин определ ют в виде цистеиновой кислоты, полученной при кислотном гидролизе смесью диоксана и концентрированной хлористоводородной кислоты 1:1, к которой добавл ют небольшое количество диметилсульфоксида. П р и м е р 2. М-грег-Бугилоксикарбонил -0-валил-глицил-Ь(8-п-метоксибензил)-цистеигош-b (N -о-хлорбензилокси-карбонил)-лкзил -L-аспарагинил- L-фенилалаиил- L-фенилаланил-L- (формил) триптофил- L- {N -о- хлорбензилокси карбонил) -лизил- Ь (о-бензил) -трео1шл- L-фeш лаланил-1- (о-бензил)-трео:гал-С- (о-бензил)-серил -L- (S-«- метоксибензил) -цистеинил-метилированна  полистирольна  смола. Продукт, полученный в примере 1 (7,0 г) загружают в реакщюнный сосуд прибора Бекмана 990 дл  автоматического синтеза пептидов и двенадцать из остальных тринадцати аминокислот добавл ют в этот автоматический прибор. Полученную защище}шую тридекапептидную смолу раздел ют на дзе равны порции и концевой остаток ввод т в одну из этих порций. Примен вшиес  аминокислоты, а также последовательность их применени , следующие N- трет- Бутилоксикарбонил- (о- бензил) -L-серин; Ы-трег-бутилоксикарбонил- (о-бензил)-L-треонин; N- трет- бутилоксикарбонил- L-фенилаланин; N-7 peг-бyтилoкcикapбoнил- (о-бензнл)-L-треонин; N- трет- бутилоксикарбонил- N -о-хлорбензил оксикарбонлл-L-лизин; N -rper-бутилоксикарбонил- (N-формил)-L-триптофан; М-грег-бутилоксикарбонил-L-фенилаланин; М-трег- бутилоксикарбонил-L-аспарагин и-нитрофениловый эфир; N-Jper-бутилоксикарбонил-N -о-хлорбензил- ok сикарбонил- L-лизин; N-77 er-бутилоксикарбонил- ( и-метоксибензил )-1-цистеин; 1 1-7рег- бутилоксикарбонил-глицин; М-грег-бутилоксикарбонил-О-валин. Последовательность отщеплени  защитных групп, нейтрализации, сочетани  и нового сочетани  дл  введени  каждой аминокислоты в пептид следующа 1 .Три промывки хлороформом (10 мл/г смолы), по 3 мин кажда ; 2.Удаление бутилоксикарбоновой группы двукратной обработкой, кажда  20 мин, смесью 29% трифторуксусной кислоты, 48% хлороформа, 6% тризтилсилана и 17% хлористого метила (10 мл/г смолы); 3.Три промывки, но 3 мин кажда , хлороформом (10 мл/г смолы); 4.Одна промьшка 3 мин хлористым метиленом (10 мл/г смолы); 5.Три промывки, по 3 мин кажда , смесью 90% 7р г-бутилового спирта и 10% трег-амилового спирта (10 мл/г смолы); 7.Нейтрализаци  трем  обработками, по 3 мин кажда , 3%-ным триэтиламином в хлористом метилене; 8.Три промывки, по 3 мин кажда , хлористым метиленом (10 мл/г смолы); 9.Три промьшки, по 3 мин кажда , смесью 90% трег-бутилового спирта и 10% грег-амилового спирта (10 мл/г смолы); 10.Три промьтки, по 3 мин кажда , хлористым метиленом (10 мл/г смолы); 11.Добавление 1,0 Ммоль/г смолы, защищегагой аминокислоты и 1,0 ммоль/г смолы NI N-дициклoгeкcилкapбoмидal в 10 мл/г смолы хлористого метилена с последующим перемешиванием в течение 120 мин; 12.Трехкратна  промывка 3 мин кажда , хлористым метиленом (10 мл/г смолы); 13.Три промывки, по 3 мин кажда , смесью 90% бутилового спирта и 10% трет-амилового спирта (10 мл/г смолы); 14.Три промывки, по 3 мин кажда ., хлористым метиленом (10 кш/г смолы); 15.Нейтрализаци  трем  обработками, по 3 мин кажда , 3%-ным триэтиламином в хлористом метилене (10 мл/г смолы); 16.Три промывки, по 3 мин кажда , хлористым метиленом (10 мл/г смолы); 17.Три промьтки, по 3 мин кажда , смесью 90% трег-бутилового спирта и 10% грег-амилового спирта (10 мл/г смолы); 18.Три промьшки, по 3 мин кажда , хлористым метиленом (10 мл/г смолы); 19.Три промывки, по 3 мин кажда , диметилформамидом; 20.Добавление 1,0 ммоль/г смолы, защищенной аминокислоты и 1,0 ммоль смолы . NiN-дициклогексилкарбодиимида в 10 мл/г смолы смеси диметилформамида и хлористого метилена 1:1 с последуюищм перемешиванием в течение 120 мин; 21. Три промьшки, по 3 мин кажда , дим .етилформамидом (10 мл/г смолы); 22. Три промывки, по 3 мин кажда , хлористым метиленом (10 мл/г смолы);

Claims (1)

1. Формула изобретения Способ получения тетрадекапептида формулы I H-D-Val-GIy-Cys—Lys-Asp-Phe-Phe-Trp-Lys-Thr-Phe-Thr-Ser-Cys-OH, отличающийся тем, что соединение формулы II R-D-Vaf-Gly-Cys(Ri)-Lys(R₂)-Asp-Phe-Phe-Trp(R_s)-Lys(R₂)-Thr(R₃)-Phe-Thr(R₃)-Ser(R₄)-Cys(Ri)X, где R - водород или трет-бутилоксикарбонил;

   Rj — водород или метоксибензил;

   R₂ — водород или о-хлорбензилоксикарбонил;

   R₃,R₄ — каждый, водород или бензил;

   R₅ - водород или формил;

   X — ОСН₂-фенил-смола обрабатывают фтористоводородной кислотой . в присутствии анизола или метилмеркаптана.