SK882003A3

SK882003A3 - 16alpha-substituted steroid compounds, pharmaceutical composition comprising same and their use

Info

Publication number: SK882003A3
Application number: SK88-2003A
Authority: SK
Inventors: Jordi Mestres; Hubert Jan Jozef Loozen; Gerrit Herman Veeneman
Original assignee: Akzo Nobel Nv
Priority date: 2000-07-28
Filing date: 2001-07-23
Publication date: 2003-07-01
Also published as: CZ2003270A3; JP2004505093A; WO2002010188A1; AR029989A1; BR0112791A; AU2001282016B2; US20040043976A1; NO20030419L; HRP20030060A2; PL366235A1; PE20020331A1; AU8201601A; CN1444596A; ATE294812T1; US20100029603A1; ZA200300417B; NO20030419D0; MXPA03000845A; EP1307471A1; HUP0301592A2

Description

Oblasť techniky ,

Vynález sa týka 16a-substituovaných steroidných zlúčenín, spôsobu aktivovania estrogénových receptorov takouto zlúčeninou a použitia takejto zlúčeniny na výrobu lieku na liečenie súvisiace s interakciou estrogén-receptor.

Doterajší stav techniky

Steroidné zlúčeniny s estrogénnym účinkom našli svoje dlhotrvajúce uplatnenie v liečbe rozličných lekárskych indikácií a v životospráve v spojení s antikoncepčnými účelmi. Napriek dávnej histórii tejto oblasti techniky, stále pretrváva potreba účinnejších, bezpečnejších a ekonomickejších zlúčenín, ako sú tie, ktoré existujú. Táto potreba je ešte naliehavejšia z pohľadu pokroku v starostlivosti o zdravie v iných oblastiach, čo viedlo k narastajúco dlhšej dobe života. Toto je obzvlášť problémom žien, u ktorých nastane v menopauze drastický pokles estrogénových hormónov, pričom tento pokles má negatívne následky na pevnosť kostí a kardioväskulárne funkcie. Na estrogénnu liečbu sú najviac dostupné účinné estrogénne 16a-substituované estragénové steroidy, ktoré sú opísané napríklad v Fevig a kol. (v Steroids 51 : PP 471 - 497, 1988), DE 2757157, US 3,704,253 a v Takikawa a kol. (v Res. Steroids zväzok 7, strany 291 - 299, 1977). Taktiež 7α,11βdisubstituované estragóny sú známe z Tedesco a kol. (v Bioorganic & Medicinal Chemistry Letters, zväzok 7, číslo 22, strany 2919 - 2924, 1997), avšak, v tejto oblasti sú ešte stále možné ďalšie vylepšenia. Nájdenie subtypov estrogénových receptorov, ktorými sú α-subtyp (ER a) a β-subtyp (ER β) takýchto receptorov ponúka možnosť selektívnejšej aktivácie jedného konkrétneho subtypu týchto dvoch receptorov, imanentné majúcej za následok účinnejšiu liečbu alebo liečbu s menším množstvom vedľajších účinkov. Konkrétne Ιδβ-ηηβίνΙ-βείπ^όην sú opísané v González a kol. (Steroids, zväzok 40; 171 - 187; 1982), ale zlúčeniny so 16β4ωη1Ίr r ŕ r

-2guráciou všeobecne nemajú priaznivý selektívny účinok zlúčeniny podľa vynálezu.

Predkladaný vynález je založený na nájdení zlúčenín, ktoré sú neočakávane selektívne pre estrogénový receptor a-subtypu.

I ,

Podstata vynálezu

Podstatou vynálezu sú 16a-substituované steroidné zlúčeniny všeobecného vzorca I

(O kde bodkovaný kruh (takzvaný A-kruh) je plne nasýtený, plne aromatický alebo nasýtený kruh s Δ5-10 dvojitou väzbou;

R¹ je (Ci-C3)alkyl alebo (C₂-C3)alkenyl, a každá z týchto skupín môže byť substituovaná jedným alebo viacerými halogénmi;

R² je (CrC^alkyl, (C2-C4)alkenyl alebo metylén, a každá z týchto skupín môže byť substituovaná jedným alebo viacerými halogénmi;

R³ je metyl alebo etyl.

Väzby v polohe 3 a 7, pre ktoré stereochémia vo všeobecnom vzorci I nie jé špecifikovaná, môže nezávisle byť buď v a alebo v β polohe vzhľadom na kostru steroidu. Zrejme, keď je R² metylén myslí sa, že väzba v polohe 11 nie je v β konfigurácii.

Výhodným halogénom pre R² je chlór alebo fluór.

Výhodným výberom R² je (Ci-C₂)alkyl alebo vinyl.

Samozrejme, vynález sa týka taktiež prekurzorov zlúčenín určených vyššie.

Prekurzor je určený ako zlúčenina, ktorá v tele príjemcu konvertuje na zlúčeninu, určenú všeobecným vzorcom I. Najmä hydroxyskupiny znázornené vo e β

-3C <* vzorcoch vyššie môžu byť napríklad substituované alkyľoxy, alkenyl*oxy, acyl*oxy, aroyloxy, alk*oxykarbonyloxy, sulfonylovou skupinou alebo fosfátovou skupinou, pričom dĺžka uhlíkového reťazca skupín označených hviezdičkou (*) nie je považovaná za ostro ohraničenú, zatiaľ čo aroyl všeobecne zahrnuje fenyl, pyridinyl alebo pyrimidyl. Výhodné prekurzory sú estery karboxylových kyselín alebo alkylétery na jednej alebo obidvoch hydroxylových skupinách, a výhodnejšie prekurzory sú estery (C2-C₆)-karboxylových kyselín, akými sú napríklad estery (izo)butánovej kyseliny, alebo (C-i-C^alkylétery. DÍžka alkylovej, alkenylovej a acylovej skupiny je vybratá v závislosti od požadovaných vlastností prekurzorov, pričom prekurzory s dlhším raťazcom, napríklad laurylovým alebo kaproylovým reťazcom, sú vhodnejšími na prípravky na postupné uvoľňovanie a na skladovateľné prípravky. Je známe, že takéto substituenty spontánne hydrolyzujú alebo sú enzymaticky hydrolyzované na voľné hydroxylové substituenty na kostre zlúčeniny. Takéto prekurzory budú mať biologický účinok porovnateľný so zlúčeninami, na ktoré v tele príjemcu konvertujú. Účinná zlúčenina, na ktorú sa prekurzor konvertuje sa nazýva základná zlúčenina. Nástup účinku a trvanie účinku, takisto ako aj distribúcia prekurzora v tele sa môže líšiť v závislosti od vlastností základnej zlúčeniny. Pre iné typy prekurzorov by to malo byť realizované tak, že hydroxylové skupiny uvedené vo všeobecnom vzorci I môžu byť umiestnené na dané miesto prostredníctvom metabolického systému príjemcu. Hydroxylové skupiny sú pre afinitu k estrogénovým receptorom nevyhnutné. Preto zlúčeniny, ktoré zodpovedajú všeobecnému vzorcu I, avšak im chýba jedna alebo obidve hydroxylové skupiny sú taktiež považované za súčasť predkladaného vynálezu, pričom takéto zlúčeniny sú označené ako prekurzory.

Ďalšie výrazy použité v opise majú nasledovný význam: alkyl je rozvetvená alebo nerozvetvená alkylová skupina, akou je napríklad metyl, etyl, propyl, butyl alebo sek-butyl;

alkenyl je rozvetvená alebo nerozvetvená alkenylová skupina, akou je napríklad etenyl, 2-butenyl, atď.;

halogén znamená fluór, chlór, bróm a jód;

aroyl je arylkarbonyl, akým je napríklad benzoylová skupina;

aryl je mono- alebo polycyklický, homo- alebo heterocyklický aromatický kruhový r Γ r, e ť e

-4systém;

acyl je alkylkarbonylová skupina.

Predpony (C1-C4), (C2-C4), atď. majú zvyčajný význam, ktorý sa týka obmedzenia významu uvedenej skupiny na takú, ktorá má 1 až 4, 2 až 4 atď.

uhlíkových atómov.

Selektívny profil estrogénovo-receptorovej aktivity zlúčenín podľa predkladaného vynálezu ich robí vhodnými na použitie na liečenie. Zlúčeniny sú vhodné ako zdokonalené estragóny v takom zmysle, že môžu byť použité na liečenie súvisiace s interakciou estrogén-receptor, akými sú tie na antikoncepciu alebo na liečenie alebo prevenciu benígnej hypertrofie prostaty, kardiovaskulárnych porúch, menopauzálnych ťažkostí, osteoporózy, od estrogénu závislej kontroly nádoru alebo chorôb centrálneho nervového systému, akými sú napríklad depresia alebo Alzheimerova choroba.

Preto sa vynález vzťahuje na použitie zlúčenín podľa vynálezu na výrobu lieku na selektívnu liečbu súvisiacu s interakciou estrogén-receptor. Selektívna liečba súvisiaca s interakciou estrogén-receptor sa uskutoční aktiváciou a-subtypu estrogénových receptorov. Takýto liek môže byť použitý na liečenie chorôb súvisiacich s interakciou estrogén-receptor, akými sú napríklad peri- a/alebo postmenopauzálne ťažkosti a tento liek je taktiež všeobecne vhodný v oblasti hormonálnej substitučnej terapie (HRT). Liečba zahrnuje podanie zlúčeniny podľa vynálezu organizmu s oboma subtypmi receptorov. Vynález taktiež poskytuje spôsob liečenia pre selektívne aktivovanie estrogénových receptorov a-subtypu, zahrnujúceho podanie zlúčeniny podľa vynálezu vo vhodnom množstve príjemcovi. Takýto spôsob liečenia je vhodný pre lekárske indikácie peri- a/alebo postmenopauzálnych (klimakterických) ťažkostí a osteoporózy, napr. spôsob liečby v oblasti hormonálnej substitučnej terapie.

Organizmom, ktorý môže byť príjemcom selektívnej estrogénovej liečby, môže byť zviera alebo ľudská bytosť a zvyčajne to bude samica zvieraťa alebo žena, ktorá potrebuje estrogénovú liečbu.

Podaniu zlúčeniny podľa vynálezu bude do veľkej miery nápomocná výroba farmaceutických prostriedkov. Predkladaný vynález sa preto vzťahuje taktiež na farmaceutický prostriedok zahrnujúci zlúčeninu podľa vynálezu spolu s

d p e >

-5farmaceuticky prijateľnou pomocnou látkou.

Z inej stránky sa vynález vzťahuje na použitie zlúčeniny podľa vynálezu na výrobu lieku s antikoncepčným účinkom. Teda, vynález taktiež prislúcha k lekárskej indikácii antikoncepcie, t.j. k spôsobu antikoncepcie, zahrnujúcemu podanie zlúčeniny podľa vynálezu vo vhodnom množstve príjemcovi, ktorým je žena alebo samica zvieraťa, progestagénu a estragónu tak, ako je to bežné v danej oblasti techniky, pričom estragónom je zlúčenina, ktorá bola opísaná vyššie (vo vhodnej farmaceutickej dávkovej forme).

Zlúčeniny podľa vynálezu môžu byť vyrobené rôznymi spôsobmi, ktoré sú známe v oblasti organickej chémie steroidov. Zavedenie 16a metylovej alebo etylovej skupiny do steroidov sa jednoducho robí spôsobmi známymi z literatúry týkajúcej sa organickej syntézy. Všeobecne sa anión v polohe C16 môže vytvoriť pôsobením na C-17-ketóny vhodnými bázami, akými sú napríklad soli alkalických kovov organických sekundárnych amínov (diizopropylamín alebo hexametyldisilazán). Pôsobenie týchto aniónov s alkylačnými činidlami, akými sú napríklad alkylhalogenidy vedie k požadovaným 16a-alkylovaným steroidom.

Alternatívne spôsoby alkylácie sa dajú uskutočniť napríklad tak, že sa začína konverziou C17-karbonylového steroidu na zodpovedajúci hydrazón, potom nasleduje tvorba C16-aniónu, alkylácia, ,po ktorej nasleduje oslobodenie karbonylu štiepením hydrazónu. Alternatívne sa anión v polohe 16 vytvorí konjugačnou redukciou A15-én-17-ónového steroidu s alkalickými kovmi. Špecifickejšie syntézne cesty, ktoré môžu byť použité, sú ilustrované v schémach a v príkladoch.

Esterové prekurzory môžu byť vytvorené esterifikáciou zlúčenín s voľnými hydroxylovými skupinami pomocou reakcie s vhodnými acylchloridmi v pyridíne.

Spôsoby prípravy farmaceutických prostriedkov sú opísané v štandardnom odkaze Gennaro a kol., Remmington's Pharmaceutical Sciences, (18. vydanie, Mack publishing Company, 1990, pozri najmä časť 8: Pharmaceutical Preparations and Their Manufacture (Farmaceutické prípravky a ich výroba)) a vhodné pomocné látky sú dostupné napr. v Handbook of Pharmaceutical Excipients (2. vydanie, vydavatelia A. Wade a P. J. Weller; American Pharmaceutical Association; Washington; The Pharmaceutical Press; London, 1994). Zmes zlúčeniny podľa vynálezu a farmaceutický prijateľnej pomocnej látky môže byť stlačená do tuhých

-6č r r.

» · · * ŕ r e c _r f *> r dávkových foriem, akými sú napríklad pilulky, tablety, alebo môže byť spracovaná do kapsúl alebo čapíkov. Prostredníctvom farmaceutický prijateľných kvapalín môžu byť zlúčeniny podľa predkladaného vynálezu použité ako injekčné prípravky vo forme roztokov, suspenzií, emulzií, alebo ako sprej, napr. nazálny sprej. Na vytvorenie dávkových jednotiek, napr. tabliet je potrebné uvažovať aj o použití bežných prísad, akými sú napríklad plnivá, farbivá, polymérne spojivá a im podobné. Vo všeobecnosti môže byť použitá akákoľvek farmaceutický prijateľná prísada, ktorá neinterferuje s funkčnou skupinou účinných zlúčenín. Zlúčeniny podľa vynálezu môžu byť zahrnuté v implantáte, vaginálnom krúžku, náplasti, géli a v akýchkoľvek iných prípravkoch na pomalé uvoľňovanie.

Vhodné nosiče, s ktorými prípravky môžu byť podávané zahrnujú laktózu, škrob, celulózové deriváty a im podobné, alebo ich zmesi, použité vo vhodných množstvách.

Spôsob liečby podľa predkladaného vynálezu zahrnuje podanie zlúčeniny určenej vyššie (vo vhodnej farmaceutickej dávkovej forme), zvieraťu alebo človeku.

Vhodné dávkové množstvo predkladaných zlúčenín bude z normálneho rozsahu pre estrogénne zlúčeniny, napr. z rozsahu od 0,01 od 100 mg na podanie.

Vynález je ďalej doložený odkazmi na niekoľko neobmedzujúcich príkladov a im zodpovedajúcim schém vzorcov.

Príklady uskutočnenia vynálezu

Čísla zlúčenín sa vzťahujú k zodpovedajúcim štruktúrnym vzorcom v schémach 1 a 2.

Schéma 1

e e e * “ « e e ^c ' r *> c n r o

<10 a,b)

Cll a,b)

Všetky NMR spektrá boli zaznamenané v roztokoch v CDCI3 na 400 MHz spektrometri.

Zlúčenina 2

K zmesi 15 g Ιΐβ-metyldienolónu (zlúčenina 1) a 14 g imidazolu v 150 ml DMF sa pri teplote 0 °C po kvapkách pridal roztok 13 mi ŕerc-butyldimetylsilylchioridu v 20 ml dietyléteru. Po 2-hodinovom miešaní reakcia prebehla kompletne. Pridala sa voda a produkt sa extrahoval etylacetátom. Takto získaný materiál sa čistil prechodom cez krátky stĺpec naplnený oxidom kremičitým, čo poskytlo 17 g zlúčeniny 2; R_f 0,56 (zmes heptán/etylacetát 7/3), NMR δ 1,1 (d, 3, 11 β CH₃), 0,91 (s, 3, I8-CH3), 3,55 (m, 1, 17aH), 5,80 (m, 1, H4), 6,21 (s, 2, H6, H7).

p ŕ r r r f. n r

-8Zlúčenina 3

K roztoku 20,5 g steroidu 2 a 2 g octanu meďnatého v 500 ml suchého THF sa pri teplote -30 °C po kvapkách pridalo 40 ml 22% roztoku metylmagnéziumchloridu v THF v priebehu % hodiny. Reakčná zmes sa následne miešala ďalšiu ¹Λ hodinu a potom sa vliala do roztoku 30 ml koncentrovanej kyseliny sírovej v 100 ml vody. Zmes sa miešala ďalších 16 hodín, potom sa pridalo 19 g NaOAc a produkt sa extrahoval etylacetátom. 7a-izomér sa čistil prechodom cez krátky stĺpec naplnený oxidom kremičitým, čo poskytlo 8,5 g čistej zlúčeniny 3, Rf 0,45 (zmes heptán/etylacetát 1/1), 7p-izomér s R_f 0,42; NMR δ 1,07 (d, 3, 11p-CH₃), 0,88 (s, 3, I8-CH3), 0,78 (d, 3, 7a-CH₃).

Zlúčenina 4

Zmes 5,5 g zlúčeniny 3, 15 ml pyridínu, 4,7 m, acetanhydridu a 40 mg DMAP sa 1 hodinu miešala pri teplote miestnosti. Potom sa pridala voda a produkt sa extrahoval etylacetátom. Organická vrstva sa premyla 2N HCI, aby sa tak odstránil pyridín a potom sa premyla vodou. Zvyšok, získaný po sušení a skoncentrovaní sa použil ako taký v nasledujúcom kroku. R_f 0,59 (zmes heptán/etylacetát 1/1), NMR: δ 1,06 (d, 3, 11β-ΟΗ₃), 0,92 (s, 3, 18-CH₃), 0,78 (d, 3, 7cc-CH₃), 2,04 (s, 3, acetát), 4,56 (dd, 1, H 17a), 5,84 (široký s, 1, H4)

Zlúčenina 5

K roztoku 6,2 g zlúčeniny 4 v 180 ml suchého acetonitrilu sa pridalo 1,6 g LiBr, a potom sa pridalo 8 g CuBr₂. Po dvojhodinovom miešaní bola aromatizačná reakcia úplná. Zmes sa zriedila 400 ml vody a extrahovala sa etylacetátom. Organická vrstva sa premyla vodou a 5% vodným roztokom NaHCO₃ a vysušila sa a skoncentrovala. Chromatografické čistenie poskytlo 4,2 g zlúčeniny 5, Rf 0,67 (zmes heptán/etylacetát 1/1), NMR δ 0,84 (d, 3, 11β-ΟΗ₃), 0,93 (s, 3, 18-CH₃), 0,81 (d, 3, 7a-CH₃), 2,05 (s, 3, acetát), 4,64 (dd, 1, H17a) 6,52 (d, 1, H4), 6,62 (AB, 1, H2), 7,03 (AB, 1, H1).

r r * *

-9Zlúčenina 6

K roztoku 4,2 g zlúčeniny 5 v 20 ml DMF sa pri teplote 0 °C pridalo 1,7 g imidazolu, a potom sa pridalo 2,2 g TBDMS-CI. Zmes sa miešala niekoľko hodín pri teplote miestnosti a po ukončení silylácie sa vliala do 150 ml vody. Produkt sa extrahoval etylacetátom. Takto získaný produkt sa nechal prejsť krátkym stĺpcom naplneným oxidom kremičitým, čo poskytlo 4,5 g zlúčeniny 6, Rf 0,77 (zmes heptán/etylacetát 7/3), NMR δ 0,84 (d, 3, 11β-ΟΗ₃), 0,94 (s, 3, I8-CH3), 0,80 (d, 3, 7a-CH₃), 0,98 (s, 9, terc-C₄H₉Si), 0,18 (s, 6, Si(CH₃)₂), 2,06 (s, 3, acetát), 4,64 (dd, 1, H17a), 6,49 (d, 1, H4), 6,59 (AB, 1, H2), 7,00 (AB, 1, H1).

Zlúčenina 7

K miešanej suspenzii 400 mg LiAIH₄ v 20 ml THF sa po kvapkách pridal roztok 5,4 g zlúčeniny 6 v 10 ml THF. Po 15-minútovom miešaní bola redukciá úplná a na zmes sa nechalo najskôr pôsobiť 1,1 ml nasýteného Na2SO4, a potom 8 g Na2SO₄, a potom nasledovala filtrácia cez Celite a skoncentrovanie, čo poskytlo

4,5 g zlúčeniny 7, Rf 0,50 (zmes heptán/etylacetát 7/3), NMR δ 0,85 (d, 3, 11 β-ΰΗ₃), 0,90 (s, 3, 18-CH₃), 0,80 (d, 3, 7cc-CH₃), 0,97 (s, 9, ŕerc-C₄H₉Si), 0,18 (s, 6, Si(CH₃)₂), 3,70 (dd, 1, H17a).

Zlúčenina 8

K roztoku 4,5 g zlúčeniny 7 a 3,4 g NMO v 50 ml acetónu sa pridalo 100 mg TPAP. Po 1-hodinovom miešaní bola oxidácia úplná. K reakčnej zmesi sa pridalo 5 g silikagélu, a potom sa pridalo 90 ml heptánu. Zmes sa miešala 15 minút a potom sa prefiltrovala cez Celite. Filtrát sa skoncentroval a nechal sa prejsť vrstvou oxidu kremičitého, čo poskytlo 3,7 g zlúčeniny 8, Rf 0,66 (zmes heptán/etylacetát 7/3), NMR δ 0,86 (2xd, 6, 7α+11β-ΰΗ₃), 1,01 (s, 3, 18-CH₃), 0,98 (s, 9, ŕerc-C₄H₉Si), 0,19 (s, 6, Si(CH₃)₂), 6,53 (d, 1, H4), 6,62 (AB, 1, H2), 7,01 (AB, 1, H1).

Zlúčenina 9a

K roztoku 2,66 ml 1M LiHMDS v 10 ml THF sa pri teplote -45 °C po kvapkách

- 10pridal roztok 1 g steroidu 8 a 0,64 ml DMPU v 20 ml suchého THF. Po miešaní ďalšiu % hodinu pri teplote -45 °C sa pridalo 0,20 ml metyljodidu a pokračovalo sa v miešaní pri teplote -20 °C, pokým nebola alkylácia úplná (½ hodiny). Potom sa pridalo 200 ml 10% vodného NH₄CI a produkt sa extrahoval etylacetátom. Použitím ďalšieho čistenia materiálu pomocou chromatografie sa získalo 0,88 g alkylovaného materiálu 9a. R_f 0,70 (zmes heptán/etylacetát 7/3), NMR δ 0,86 (2xd, 6, 7α+11βCH₃), 1,05 (s, 3, 18-CHs), 0,97 (s, 9 terc-C₄H₉Si), 0,19 (s, 6, Si(CH₃)₂) 1,14 (d, 3, 16aCH₃), 6,53 (d, 1, H4), 6,62 (AB, 1, H2), 7,01 (AB, 1, H1).

Zlúčenina 9b

Príprava sa uskutočnila takým istým postupom, ako bol opísaný pre zlúčeninu 9a, avšak použitím 0,25 ml etyljodidu ako alkylačného činidla. Reakčná zmes sa niekoľko hodín miešala pri teplote miestnosti, aby bola reakcia úplná. Chromatografia poskytla 0,84 g zlúčeniny 9b, R_f 0,75 (zmes heptán/etylacetát 7/3), NMR δ 0,86 (2xd, 6, 7α+11β-ΟΗ₃), 1,05 (s, 3, 19-CH₃), 0,97 (s, 9, terc-C₄H₉Si), 0,96 (t, 3, 16a CH₃CH₂-), 0,19 (s, 6, Si(CH₃)₂), 6,53 (d, 1, H4), 6,62 (AB, 1, H2), 7,01 (AB, 1.H1).

Zlúčenina 10a

Roztok acetylidu lítneho sa pripravil pridávaním 10,3 ml 1,6 M BuLi/hexán po kvapkách k roztoku 0,67 ml 1,2-dibrómeténu v 20 ml suchého THF pri teplote -60 °C. Po miešaní počas ďalšej 1/2 hodiny sa pridal roztok 0,88 g zlúčeniny 9a v 5 ml THF a reakčná zmes sa postupne ohriala na teplotu miestnosti. Po 1-hodinovom miešaní bola reakcia úplná a zmes sa vliala do 10% vodného roztoku NH₄CI. Produkt sa extrahoval etylacetátom a čistil sa prostredníctvom chromatografie, čo poskytlo 790 mg zlúčeniny 10a, Rf 0,23 (zmes heptán/etylacetát 9/1), NMR δ 0.80 (d, 3, 7aCH₃), 0,87 (d, 3, 11βΟΗ₃), 1,05 (s, 3, 19-CH₃), 0,97 (s, 9, ŕerfc-C₄H₉Si), 0,19 (s, 6, Si(CH₃)₂), 1,20 (d, 3, 16aCH₃), 2,68 (s, 1, acetylén).

Zlúčenina 10b

Reakcia sa uskutočnila takým istým spôsobom, ako bol opísaný pre c e e r>

-11 zlúčeninu 10a, použitím 0,84 g zlúčeniny 9b, čo poskytlo 710 mg zlúčeniny 10b, Rf 0,24 (zmes heptán/etylacetát 9/1), NMR δ 0,79 (d, 3, 7aCH₃), 0,88 (d, 3, 11 pCH₃), 0,98 (t, 3, 16a CH₃CH₂-), 0,96 (s, 9, terc-C₄H₉Si), 0,19 (s, 6, Si(CH₃)₂)), 2,65 (s, 1, acetylén).

Zlúčenina 11a

K roztoku 790 mg zlúčeniny 10a v 1 ml THF sa pridalo 2,5 ml 1M TBAF v THF. Po 10-minútovom miešaní bolo odstránenie ochranných skupín úplné. Pridala sa voda a produkt sa extrahoval do etylacetátu a na záver sa čistil prechodom cez vrstvu oxidu kremičitého. Takto získaný materiál sa trituroval so zmesou heptándiizopropylétér (1/1), čo poskytlo 480 mg v podstate čistej zlúčeniny 11a, Rf 0,31 (zmes heptán/etylacetát 7/3), teplota topenia 204 až 205 °C, NMR δ 6,81 (d, 3,7aCH₃), 0,88 (d, 3, 11βΟΗ₃), 1,05 (s, 3, 18-CH₃), 1,20 (d, 3, 16aCH₃), 2,69 (s, 1, acetylén).

Zlúčenina 11b

Zlúčenina 11b sa pripravila podobne ako zlúčenina 11a, použitím 710 mg zlúčeniny 10b. Zrážanie konečného produktu zo zmesi etanol/voda poskytlo 430 mg v podstate čistej zlúčeniny 11b, R_f 0,30 (zmes heptán/etylacetát 7/3), NMR δ 0,80 (d, 3, 7aCH₃), 0,88 (d, 3, 11βΟΗ₃), 1,00 (t, 3, 16a CH₃CH₂-), 1,06 (s, 3, 18-CH₃) 2,65 (s, 1, acetylén).

Príklad 2

Syntéza zlúčeniny (3a,11 β, 16a, 17β)-16-metyl-11-(2-propenyl)-19-norpregn5(10)-én-20-ín-3,17-diol ( zlúčenina 27) je opísaná s odkazom na schému 2 (ďalšia strana).

Schéma 2 o

(14) r e * *

Zlúčenina 13

K roztoku 17,3 g Cul a 3,84 g LiCI v 250 ml suchého THF sa pridalo pri teplote -70 °C 90,6 ml 1M roztoku alylmagnéziumbromidu v dietyléteri. Po miešaní počas ďalších 20 minút sa pridalo 11,4 ml trimetylchlórsilánu, nasledovaného roztokom 7,5 g steroidu 12 v 100 ml THF. Teplota reakčnej zmesi sa po celý čas udržiavala pod -60 °C. Po 1-hodinovom miešaní sa reakcia stlmila vliatím do e · e r

- 13nasýteného vodného roztoku NH4CI. Produkt sa extrahoval etylacetátom a následne sa čistil pomocou stĺpcovej chromatografie, čo poskytlo 6,25 g zlúčeniny 13 vo forme bezfarebného oleja. NMR 5,20 (m, CH alyl); 5,0 (CH₂, alyl); 3,04 (m, H11).

Zlúčenina 14

K roztoku 9,6 g zlúčeniny 13 v zmesi 100 ml metanolu a 30 ml metylénchloridu, obsahujúcej 800 mg NaOH, sa pridalo 0,4 g bórhydridu sodného pri teplote 0 - 5 °C. Po 1,5-hodinovom miešaní bola reakcia úplná a na zmes sa pôsobilo 20 ml acetónu počas % hodiny.

Reakčná zmes sa potom vliala do vody a extrahovala sa etylacetátom, čo poskytlo 9,5 g zlúčeniny 14. NMR 3,59 (t, CHOH); 2,98 (m, H11), 0,92 (s, CH₃).

Zlúčenina 15

K roztoku 9,5 g zlúčeniny 14 v 100 ml acetónu sa pridalo 8 ml 6N HCI. Po 2hodinovom miešaní sa zmes zneutralizovala s NaHCO3 a skoncentrovala sa do malého objemu, zriedila sa vodou a extrahovala sa etylacetátom. Toto poskytlo 8,2 g zlúčeniny 15 vo forme bezfarebného amorfného materiálu. NMR 5,68 (m, H4);

3,10 (m, H11); 3,65 (m, CHOH).

Zlúčenina 16

K 500 ml kvapalného NH3 sa pri teplote -70 °C pridal roztok 8,2 g zlúčeniny 15 v 100 ml suchého THF. Na túto zmes sa pôsobilo množstvom lítium kovu (asi 500 mg) pokiaľ modré zafarbenie reakčnej zmesi nezotrvalo prinajmenšom 15 minút. Reakcia sa stlmila prídavkom časti NH₄CI. Zvyšok, ktorý zostal po odparení NH3 sa zriedil vodou a extrahoval sa etylacetátom. Chromatografické čistenie poskytlo 4,0 g zlúčeniny 16 vo forme bezfarebného oleja; Rf 0,55 (zmes heptán/etylacetát 1/1 objemovo).NMR 2,80 (ab, CH₂ na C4); 0,93 (s, CH₃).

Zlúčenina 17

K roztoku 4,0 g zlúčeniny 16 v 80 ml metanolu sa pridalo 6 ml trimetylortoformiátu, nasledovaného 0,8 g kyseliny toluénsulfónovej. Po 2-hodinovom miešaní bola ketalizácia dokončená. Na zmes sa pôsobilo 6 ml pyridínu a

- 14skoncentrovala sa do malého objemu. Zostávajúce časti sa zriedili vodou a extrahovali sa etylacetátom. Zvyšok 4,7 g, pozostával s takmer čistej zlúčeniny 17; tlc, Rf 0,78 (zmes heptán/etylacetát 1/1, objemovo). NMR 3,22, 3,25 (2x s, OCH₃).

Zlúčenina 18

K roztoku 33 g zlúčeniny 17 v 50 ml acetónu sa pridalo 6 g molekulového sita (4A), nasledovaného 3,2 g A/-metylmorfolín-/V-oxidu a 150 mg tetrapropylamóniumrutenistanu. Zmes sa miešala 1 hodinu. K reakčnej zmesi sa pridalo 5 g silikagélu, potom 50 ml heptánu a zmes sa miešala ďalších 5 minút. Zmes sa prefiltrovala pomocou odsávačky, a po čiastočnom skoncentrovaní sa vložila do etylacetáte, premyla sa vodou a skoncentrovala sa. Zvyšok sa nechal prejsť krátkym stĺpcom naplneným oxidom kremičitým a poskytol 2,9 g zlúčeniny 18. R_f 0,52 (zmes heptán/etylacetát 7/3). NMR 1,02 (s, CH₃).

Zlúčenina 19

Lítiumacetylid na etinyláciu sa pripravil z dibrómeténu a butylítia. K roztoku 0,74 ml 1,2-dibrómeténu v 20 ml THF sa pridalo pri teplote -70 °C 11 ml 1,6M roztoku BuLi v hexáne. Po 15-minútovom miešaní sa pridal roztok 800 mg zlúčeniny 18 v 2 ml THF. Zmes sa ponechala, aby sa v priebehu 15-tich minút ohriala na teplotu miestnosti a po ďalších 15-tich minútach pri teplote miestnosti sa reakcia stlmila vodou a produkt sa extrahoval etylacetátom. Skoncentrovanie, nasledované prechodom cez krátky stĺpec naplnený oxidom kremičitým poskytlo 810 mg zlúčeniny 19 vo forme bieleho amorfného materiálu. Rf 0,48 (zmes heptán/etylacetát 7/3), Rf východiskový materiál 0,52. NMR 2,61 (s, acetylén).

Zlúčenina 20

K suspenzii 3,2 g zlúčeniny 19 v 60 ml etanolu sa pridalo 0,16 g kyseliny šťavelovej v 16 ml vody. Zmes sa miešala 2,5 hodiny a postupne sa stala homogénnou. Na reakčnú zmes sa pôsobilo s NaHCO₃ a skoncentrovala sa na malý objem. Potom sa pridala voda a produkt sa extrahoval etylacetátom. Takto izolovaný surový produkt sa nechal prejsť krátkym silikagélovým stĺpcom a potom sa vykryštalizoval z diizopropyléteru, čo poskytlo 2,3 g zlúčeniny 20, teplota topenia

- 15136 °C. R_f 0,66 (zmes heptán/etylacetát 1/1). NMR 2,78 (ab, 2, H4); 2,61 (s, acetylén).

Zlúčeniny 21,22

K roztoku 1 g zlúčeniny 20 v 12 ml THF sa pridalo 1,6 g lítium-tri-terc-butoxyalumíniumhydridu. Po 1-hodinovom miešaní pri teplote miestnosti sa na zmes pôsobilo vodou a zneutralizovala sa prídavkom 2N HCI. Produkt sa extrahoval etylacetátom a potom sa podrobil chromatografii na silikagéli (zmes heptán/etylacetát 8/2 ako eluent). To poskytlo 0,56 g 3β alkoholu 21 (teplota topenia 121 až 123 °C) a 0,24 g 3a alkoholu 22 (teplota topenia 84 až 87 °C). Rf 0,53 (zlúčenina 21) a 0,45 (zlúčenina 22), zmes heptán/etylacetát 1/1. NMR (3aOH), 3,82 (m, CHOH); (3βΟΗ), 4,08 (m, CHOH).

Zlúčenina 23

K roztoku hexametyldisilazidu lítneho (pripravený z 1,9 ml 1,6M roztoku BuLihexán a 0,71 ml hexametyldisilazánu v 4 ml suchého THF) sa pridal pri teplote -40 °C 1 g zlúčeniny 18 a 0,7 ml MPU v 5 ml THF. Zmes sa miešala 0,5 hodiny pri teplote -40 °C a potom sa striekačkou pridalo 225 μΙ CH3I. Po miešaní počas ďalšej 0,5 hodiny pri teplote -40 °C bola reakcia úplná. Zmes sa zriedila vodou a extrahovala etylacetátom. Chromatografia takýmto spôsobom izolovaného surového produktu poskytla 1,3 g zlúčeniny 23, R_f 0,43 (zmes heptán/etylacetát 8/2). NMR

1,10 (d, 3, 16aCH₃), 1,06 (s, 3, CH₃), 3,23 (2xs, 6, OCH₃), 5,0 (m, 2, alyl CH₂), 5,78 (m, 1, alyl CH).

Zlúčenina 24

Podľa spôsobu uvedeného pri príprave zlúčeniny 19, bolo premenených 1,3 g zlúčeniny 23 na požadovanú zlúčeninu 24, čo poskytlo 1,2 g, Rf 0,46 (zmes heptán/etylacetát 7/3), Rf (zlúčenina 23) 0,55. NMR 2,66 (s, 1, acetylén), 1,06 (s, 3, CH₃), 1,17 (d, 3, 16aCH₃).

Zlúčenina 25 < Γ

-16t> r e

Κ roztoku 800 mg zlúčeniny 24 v 20 ml etanolu sa pridal roztok 80 mg kyseliny šťavelovej v 5 ml vody. Zmes sa miešala 1 hodinu a potom sa zneutralizovala prídavkom NaHCO₃. Po zriedení vodou a extrakcii etylacetátom zostala vo forme kryštalického materiálu 0,7 g zlúčeniny 25. R_f 0,47 (zmes heptán/etylacetát 7/3). NMR 2,78 (AB, 2, H4), 1,08 (s, 3, CH₃), 1,18 (d, 3, 16aCH₃), 2,67 (s, 1, acetylén).

Zlúčeniny 26, 27

K roztoku 725 mg zlúčeniny 25 v 20 ml zmesi etanol a THF 1/1 sa pridalo 130 mg bórhydridu sodného. Po 1-hodinovom miešaní sa pridali 2 ml acetónu, aby sa tak zničil prípadný prebytok činidla. Po 15-tich minútach sa zmes vliala do vody a produkt sa extrahoval etylacetátom. Takto získaný materiál sa čistil pomocou chromatografie na silikagéli, s použitím zmesi metylénchlorid-acetón alebo zmesi hexán-etylacetát ako eluenta. Toto poskytlo 300 mg zlúčeniny 27 (3a-OH) a 75 mg zlúčeniny 26 (3β-ΟΗ). Rf (zlúčenina 26) 0,47 (zmes metylénchlorid/acetón 95/5). Rf (zlúčenina 27) 0,54 (zmes metylénchlorid/acetón 95/5). NMR (zlúčenina 27) 3,82 (m, 1, 3βΗ), 2,75 (s, 1, acetylén), 1,06 (s, 3, CH₃), 1,17 (d, 3, 16aCH₃); (zlúčenina 26)4,07 (m, 1, 3βΗ), 2,76 (s, 1, acetylén), 5,01 (m, 2, CH₂ alyl), 5,78 (m, 1, CH-alyl).

Príklad 3

Zlúčeniny sa testovali na estrogénovú receptorovú aktivitu vo väzbovej skúške a v transaktivačnej skúške.

Stanovenie kompetitívnej väzby na cytoplazmatický ľudský estrogénový receptor a alebo β z rekombinantných CHO buniek sa používa na odhad relatívnej afinity (účinnostný pomer) testovanej zlúčeniny k estrogénovým receptorom prítomným v cytosóle rekombinantných buniek vaječníkov čínskeho škrečka (CHO), stabilne transfektovaných ľudským estrogénovým receptorom a (hERa) alebo β receptorom (ϊιΕΡβ), v porovnaní s estradiolom (E2).

Estrogénny a antiestrogénny účinok zlúčenín sa stanovuje v in vitro bioskúške s rekombinantnými bunkami vaječníkov čínskeho škrečka (CHO), stabilne ko-transfektovaných ľudským estrogénovým receptorom a (hERa) alebo β r Γ ff

- 17receptorom (hERp), potkaním oxytocínovým promótorom (RO) a luciferázovým reportérovým génom (LUC). Estrogénna aktivita (účinnostný pomer) testovanej zlúčeniny stimulovať transaktiváciu enzýmu luciferáza, sprostredkovaná prostredníctvom estrogénových receptorov hERa alebo hERp je porovnávaná so štandardným estrogénom estradiolom. Antiestrogénny účinok (účinnostný pomer) testovanej zlúčeniny inhibovať transaktiváciu enzýmu luciferáza, sprostredkovanú prostredníctvom estrogénových receptorov hERa alebo hERp pomocou estrogénu estradiolu je porovnávaná so štandardom ICI 164,384 (= (7a,17p)-/V-butyl-3,17dihydroxy-/V-metylestra-1,3,5(10)-trién-7-undekánamid).

Výsledky

Kvantitatívny parameter pre agonistovú selektivitu sa získa vydelením percentuálneho agonistového účinku pre ER a percentuálnym agonistovým účinkom pre ER β. Zlúčenina 11a má agonistovú selektivitu pre estrogénový receptor a voči estrogénovému receptoru β viac ako 86-násobnú. Zlúčenina 26 má agonistovú selektivitu pre ER a voči ER β viac ako 59-násobnú. Zlúčenina 27 má agonistovú selektivitu 88,3-násobnú.

.'CC c π

Claims

PATENTOVÉ NÁROKY pp M 'di

1. 16a-substituované steroidné zlúčeniny všeobecného vzorca I

HO (I) kde bodkovaný kruh je plne nasýtený, plne aromatický alebo nasýtený kruh s Δ5-10 dvojitou väzbou;

R¹ je (Ci-C₃)alkyl alebo (C₂-C₃)alkenyl, a každá z týchto skupín môže byť substituovaná jedným alebo viacerými halogénmi;

R² je (C₁-C₄)alkyl, (C₂-C4)alkenyl alebo metylén, a každá z týchto skupín môže byť substituovaná jedným alebo viacerými halogénmi;

R³ je metyl alebo etyl.

I
2. 16a-substituované steroidné zlúčeniny podľa nároku 1, kde halogény pre R¹ a R² sú vybrané zo skupiny pozostávajúcej z chlóru alebo fluóru.
3. 16a-substituované steroidné zlúčeniny podľa nároku 1 alebo 2, kde R² je (Ci-C₂)alkyl alebo vinyl.
4. 16a-substituované steroidné zlúčeniny podľa nároku 1 na použitie v terapii.
5. Použitie 16a-substituovaných steroidných zlúčenín podľa nároku 4 na výrobu lieku na liečenie súvisiace s interakciou estrogén-receptor, kde liečením je selektívna liečba pre estrogénový receptor a.

• » r r p r. r f

-196. Použitie podľa nároku 4 na výrobu lieku na liečenie súvisiace s interakciou estrogén-receptor, kde liečením je hormonálna substitučná terapia alebo antikoncepcia.
7. 16a-substituované steroidné zlúčeniny podľa nároku 1 na použitie na selektívnu aktiváciu estrogénových receptorov a-subtypu.
8. 16a-substituované steroidné zlúčeniny podľa nároku 1 na hormonálnu substitučnú terapiu alebo antikoncepciu.
9. Farmaceutický prostriedok, vyznačujúci sa tým, že obsahuje účinné množstvo 16a-substituovanej steroidnej zlúčeniny podľa nároku 1 spolu s farmaceutický prijateľnou pomocnou látkou.