SK16752000A3 - Biologicky odbraten algintov gly s predenm uvoovanm - Google Patents

Description

Oblasť techniky

Predkladaný vynález sa týka prípravkov s predĺženým uvoľňovaním, ktoré používajú biologicky odbúrateľné perly z alginátového gélu alebo oneskorené gély, a spôsobov ich výroby.

Doterajší stav techniky

Dostupnosť rekombinantných proteínov vďaka pokrokom v technológiách genetického a bunečného inžinierstva rozvinula používanie proteínov ako liečiv pre terapeutické aplikácie. Veľa ochorení alebo chorôb liečených farmaceutickými proteínami vyžaduje na dosiahnutie najúčinnejšieho terapeutického výsledku trvalú hladinu proteínu. Ale u väčšiny proteínových liečiv je vďaka obecne krátkemu biologickému poločasu nutné časté podávanie. Tieto opakované injekcie sú podávané v rôznych intervaloch, čo má za následok kolísanie hladín liečiva pri významnej telesnej a finančnej záťaži pacientov. Pretože mnoho chorôb lepšie odpovedá na riadené hladiny liečiva, je potrebné riadené uvoľňovanie liečiva na zaistenie dlhšieho obdobia trvalého uvoľňovania. Takéto liečivá s predĺženým uvoľňovaním by pacientovi zaistili nielen zosilnený profylaktický, terapeutický alebo diagnostický účinok, ale tiež zníženie častého opakovania injekcií, ako aj celkových nákladov na liečenie.

Súčasné pokusy o udržanie liečivých hladín medzi dávkami u ľudí alebo zvierat zahŕňajú použitie biologicky odbúrateľných polymérov ako matrice pre riadenie uvoľňovania liečiva. Napríklad patent Veľkej Británie č. 1 388 580 popisuje použitie hydrogélov pre pretrvávajúce uvoľňovanie inzulínu. Patent • · ·· ···· ·· ··· ·· · · · · • ···· ··· ···· · • · ···· ··· ··· · ·· ·· ·· ··

Spojených Štátov č. 4 789 550 popisuje použitie alginátových mikrotoboliek potiahnutých polylyzínom pre podávanie proteínu opúzdrením živých buniek. Pokusy s predĺženým uvoľňovaním tiež používali aniontové alebo kationtové polymérové prípravky * obkolesené iontovými polymérami opačného náboja pre opúzdrenie buniek schopných produkovať biologicky aktívne prípravky, viď • patent Spojených Štátov č. 4 744 933. Podobne boli tiež popísané mnohonásobné povlaky aniontových alebo kationtových zosietených polymérov ako prostriedkov na dosiahnutie riadeného uvoľňovania, viď patent Spojených Štátov č. 4 690 682 a 4 789

516. Okrem toho ďalšie pokusy popisujú použitie samotných alginátov alebo alginátov potiahnutých ďalšími biologicky odbúrateľnými polymérami pre riadené uvoľňovanie polypeptídových prípravkov alebo ich kationtových precipitátov, viď dokumenty PCT WO 96/00081, PCT WO 95/29664 a PCT WO 96/03116.

Tieto pokusy ale poskytli nedostatočné prostriedky na to, aby bolo dosiahnuté podávanie s predĺženým uvoľňovaním požadovaných proteínových liečiv. Je všeobecne známe, že použitie určitých biologických odbúrateľných polymérov, napríklad koglykolídu polylaktídu, v podmienkach in vivo prejavuje vysoký počiatočný pulz v uvoľňovaní liečiva (Johnson, 0. et al., Náture Med., 2(7) : 795, 1996). Okrem toho je všeobecne známe, že proteíny použité so súčasnými formami prípravkov s predĺženým uvoľňovaním môžu prekonať denaturáciu a stratiť svoju biologickú aktivitu pri expozícii opúzdrovacími činidlami. Tieto prípravné postupy používajú organické rozpúšťadlá, ktoré môžu mať škodlivé účinky na vybratý proteín. Konečne, ako je pojednané nižšie, použitie samotného alginátu nezaistilo požadované riadené uvoľňovanie proteínu nevyhnutné pre účinné terapeutické výsledky.

Obecne sú algináty dobre známe, prirodzene sa vyskytujúce aniontové polysacharidy zložené z 1,4-naviazanej • · ·· ···· ·· ··· ·· ···· • ···· ··· ···· · * · ······· ··· · ·· ·· ·· ··· beta-D-mannurónovej kyseliny a alfa-L-gulurónovej kyseliny (Smidsrod, 0. et al., Trends in Biotechnol., 8, 71-78, 1990, Aslani, P. et al., J. Microencapsulation, 13(5), 601-614, 1996). Typicky algináty kolísajú od 70 % mannurónovej kyseliny a 30 % gulurónovej kyseliny ku 30 % mannurónovej kyseliny a 70 % gulurónovej kyseliny (Smidsrod, vyššie). Algínová kyselina je vo vode nerozpustná, zatiaľ kým soli tvorené s monovalentnými iontami, ako je sodík, draslík a amonium, sú vo vode rozpustné (McDowell, R.H., Properties of Alginates, Londýn, Alginate Industries Ltd., 4. vydanie, 1977). Je známe, že polyvalentné kationty reagujú s alginátami a spontánne tvoria gély.

Algináty majú celý rad aplikácií, ako napríklad potravinárske aditíva, lepidlá, farmaceutické tablety a obväzy rán. Algináty boli tiež doporučené pre proteínové separačné techniky. Napríklad Gray, C.J. et al., (Biotechnology and Bioengineering, 31, 607-612, 1988) zachytávali inzulín na zinkové/vápnikové alginátové gély pre oddelenie inzulínu od iných sérových proteínov.

Tiež bolo dobre preukázané, že alginátové matrice sú dobré ako systémy pre podávanie liekov, viď napríklad patent Spojených štátov č. 4 695 463, ktorý popisuje žuvaciu gumu s alginátovým základom ako systém pre podávanie liečiv a pre farmaceutické prípravky. Alginátové perly boli použité pre riadené uvoľňovanie rôznych proteínov ako sú : receptor nádorového nekrotického faktoru v kationtových alginátových perlách potiahnutých polykationtami (Wee, S.F., Proceed. Intern. Symp. Control. Rel. Bioact. Mater., 21, 730 - 31, 1994), transformujúci rastový faktor opúzdrený v alginátových perlách (Puolakkainen, P.A. et al., Gastroenterology, 107, 1319 - 1326, 1994), angiogenné faktory zachytené vo vápnikových alginátových perlách (Downs, E.C. et al., J. of Cellular Physiology, 152, 422 - 429, 1992), albumín zachytený v chitosanových alginátových mikrotobolkách (Polk, A. et al., J.

- 4 ·· ···· • · ···· ) · · I ·· ·· • · ··

Pharmaceutical Sciences, 83(2), 178 - 185, 1994), chitosanové vápnikové alginátové perly potiahnuté polymérami (Okhamafe, A.O. et al., J. Microecapsul., 13(5), 497 - 508, 1996), hemoglobulín opúzdrený chitosanovými vápnikovými alginátovými perlami (Huguet, M.L. et al., J. Applied Polymér Science, 51, 1427 - 1432, 1994, Huguet, M.L. et al., Process Biochemistry, 31, 746 - 751, 1996) a interleukín-2 opúzdrený v alginátových chitosanových mikrosférach (Liu, L.S., et al., Proceed. Intern. Symp. Control., Rel. Bioact. Mater., 22, 542 - 543, 1995).

Systémy používajúce perly z alginátového gélu alebo perly alginátového/vápnikového gélu pre zachytenie proteínov trpia nedostatkom akéhokoľvek predĺženého či pretrvávajúceho uvoľňovania vďaka rýchlemu uvľňovaniu proteínu z alginátových perál (Liu, L. et al., J. Control. Rel., 43, 65 - 74, 1997).

Aby sa zabránilo takému rýchlemu uvoľňovaniu, veľký počet vyššie uvedených systémov skúšal použiť polykationtové polymérové povlaky (napríklad polylyzín, chitosan), aby sa spomalilo uvoľňovanie proteínu z alginátových perál (viď napríklad Wheatley, M.A. et al.,

43, 2123 - 2135, 1991), Wee, S.F.

al., vyššie, Wee, S.F. et al., Controlled Release Society, 22, 566 - 567, 1995 a Lim et al., vyššie.

J. Applied Polymér Science, et al., vyššie, Liu, L.S. et

Polykationty, ako je polylyzín, sú pozitívne nabité polyelektrolytmi, ktoré interagujú s negatívne nabitými alginátovými molekulami za vzniku polyelektrolytových komplexov, ktoré pôsobia ako difúzne bariéry na povrchu perál. Za použitia polykationtov môžu nastať problémy v tom, že :

1) takéto prípravky môžu byť vďaka polykationtom cytotoxické (Huguet, M.L. et al., vyššie, Zimmermann, Ulrich, Electrophoresis, 13, 269, 1992, Bergmann, P. et al., Clinical Science, 67, 35, 1984),

2) polykationty sú náchylné k oxidácii,

3) perly s polykationtovým povlakom majú tendenciu k tomu, že sú nerozrušiteľné a v tele pribúdajú, • ·· ···· ·· • · · · · · · • ···· ··· ···· · • · ······· ··· · ·· ·· ·· ···

4) tieto prípravky sú vytvárané za pomoci prácnych poťahovacích postupov, ktoré zahŕňajú mnohonásobné poťahovanie polykationtovým polylyzínom (Padol, et al., Proceed. Intern. Symp. Control. Rel. Bioact. Mater., 2, 216, 1986) a

5) iontové interakcie medzi proteínom a polykationtami môžu mať za následok stratu proteínovej aktivity alebo spôsobia nestabilitu proteínu.

Francesco et al. (Patent Spojených Štátov č. 5 336 668, a odkazy tu uvedené) popisujú celkové a parciálne estery kyseliny algínovej, tvorené rôznymi postupmi a majúce zaujímavé farmaceutické kvality. Je popísané, ako môžu byť estery kyseliny algínovej použité ako biologicky odbúrateľné plastové materiály pre zdravotne-chirurgické použitie, ako aditíva pre celý rad polymérových materiálov alebo môžu byť použité pri príprave rôznych liečiv. Možné použitie esterov kyseliny algínovej v prípravkoch s predĺženým uvoľňovaním nie je pojednané, ani ne sú popísané esteralginátové hydrogély.

Nightlinger et al., (Proceed, Intern. Symp. Control. Rel. Bioact. Mater., 22, 738 - 739, 1995) popisujú mikrosféry esterifikovanej hyalurónovej kyseliny (HA), ktorá má schopnosť riadeného uvoľňovania. Odkazy sa obecne obracajú na rôzne rýchlosti degradácie derivátov HA a popisujú, ako sa ester rozlomí aby uvoľnil skupiny alkoholu a HA. Nie je tu žiadna diskúzia týkajúca sa toho, ako alebo či sa samotná HA kostra rozloží na polymérové jednotky o nižšej molekulovej hmotnosti.

Aby bol použiteľný systém pre podávanie liekov s predĺženým uvolňovaním založený na polysacharidoch, musí byť polysacharid biologicky odbúrateľný na netoxické produkty. Bolo zistené, že určité systémy alginátového gélu, aj keď sú účinné pre zaistenie predĺženého uvoľňovania liečiva, majú za následok hrbolček (alebo uzlík) v mieste injekcie spôsobený pomalým rozpadom gélu. V terapeutickom usporiadaní zahŕňajúcom nízke ·· ···· • · ···« • · · ι ·· ·· dávky lieku a riedke injekcie by to nemusel byť hlavný problém. Ale v liečebnom usporiadaní zahŕňajúcom vysoké dávky liečiva a častejšie injekcie môže byť tento výsledok odradzujúci. Musia byť vyvinuté prostriedky pre zvýšenie rýchlosti rozpadu alginátového gélu v mieste injekcie.

Stále teda trvá potreba vyvinúť farmaceutické formulácie, ktoré vytvoria univerzálnejšie a účinnejšie prípravky s predĺženým uvoľňovaním pre klinické aplikácie. Trvalé dlhodobé uvoľňovanie môže priniesť prínos mnohým rekombinantným alebo prirodzeným proteínom, a teda zaistí účinnejšie klinické výsledky.

Predkladaný vynález poskytuje takéto postupy. Farmaceutické prípravky používajúce biologicky odbúrateľné častice alginátového gélu alebo gély podľa predkladaného vynálezu sú schopné zaistiť zvýšenú biologickú dostupnosť, ochranu proteínov, zníženú degradáciu a pomalé uvoľňovanie pri zvýšenej proteínovej stabilite a účinnosti. Farmaceutické prípravky podľa predkladaného vynálezu tiež poskytujú jednoduchý, rýchly a nenákladný spôsob riadeného uvoľňovania rekombinantného proteínu pre účinné profylaktické, terapeutické alebo diagnostické výsledky.

Podstata vynálezu

Predkladaný vynález vychádza zo štúdií používajúcich nemodifikované alginátové (skupina aniontových polysacharidov) hydrogély pre predĺžené uvoľňovanie proteínov. Tieto nemodifikované alginátové hydrogély obsahujúce proteín (viď súčasne prejednávané prihlášky Spojených Štátov 08/857 913 a 08/912 902) sú tvorené tak, aby predlžovali dobu uvoľňovania, pričom látky môžu byť naplnené do striekačky a ponechané do tvorby neskoršieho gélu v tej istej striekačke, pretože bolo zistené, že tieto gély je možné injikovať. Po jedinej • ·· ···· ·· • · · · · · · • ···· · · · ····· • · ··»···· ··· · ·· ·· ·· ··· subkutánnej injekcii je na modeloch hlodavcov po mnoho dní pozorovaný a preukázaný zotrvalý výskyt proteínu, ale v mieste injekcie zostáva po dlhé časové obdobie hmatateľný hrbolček alebo uzlík s malými zmenami vo velkosti. Tento uzlík sa skladá z alginátového hydrogélu naplneného vodou a jeho veľkosť je funkciou objemu gélu, ktorý je injikovaný. V mieste injekcie tiež zostávajú gélové perly.

Predkladaný vynález sa teda týka novej skupiny biologicky kompatibilných polysacharidových hydrogélov, napríklad esteralginátových hydrogélov, pre predĺžené uvoľňovanie terapeutických proteinov. Neočakávané esteralginátové hydrogély, okrem toho, že zdieľajú vlastnosti nemodifikovaných alginátov, čo sa týka gelovatenia, injikovateľnosti a predĺženého uvoľňovania, v mieste injekcie nezanechávajú uzlík, čo značí, že esteralginátové hydrogély sú biologicky odbúrateľné alebo rozložiteľné a sú postupne resorbované do okolitých tkanív s malou reakciou v mieste injekcie.

Prípravky podľa predkladaného vynálezu obsahujú estery kyseliny algínovej alebo ich deriváty iontovo zosietené v hydrogélovú (vodu zadŕžajúcu) matricu obsahujúcu terapeutické agens, ako napríklad proteín.

Predkladaný vynálezs sa ďalej týka spôsobu produkcie biologicky odbúrateľných prípravkov s predĺženým uvoľňovaním.

Predkladaný vynález sa ďalej týka použitia esteralginátových materiálov v tekutých zmesiach pre časovo oddialené gelovatenie v tele.

Predkladaný vynález sa ďalej týka prípravkov, kde esteralginátové hydrogély sú vo forme perál alebo mikrosfér pre predĺžené uvoľňovanie aktívnych agens, výhodne terapeutických proteinov.

·· ···· ·· • · · · · · ···· · • · · · · · • · · · · · ·· ·· ·· ·

V jednom uskutočnení predkladaného vynálezu poskytujú esteralginátové hydrogély prípravky pre aplikáciu na cieľové miesta v tele pacienta. Tieto prípravky sú použiteľné : na prevenciu alebo inhibíciu tvorby tkanivových adhézií po chirurgických výkonoch a traumatoch, ako doplnok tkanív, najmä pre doplnenie mäkkých a tvrdých tkanív, k vyplneniu obmedzeného priestoru rezorbovateľným materiálom, ako skelet pre rast tkaniva a ako krytie rán.

V ďaľšom uskutočnení poskytujú esteralginátové hydrogély zariadenie pre implantáciu do organizmu obsahujúce aktívne agens, pričom agens môže byť či naviazané alebo nenaviazané na alginátový polymér.

V ďaľšom uskutočnení prípravky s esteralginátovými hydrogélmi podľa predkladaného vynálezu poskytujú spôsob zlepšenia biologickej dostupnosti aktívneho agens v prípravku.

Konečne prípravky s esteralginátovými hydrogélmi podľa predkladaného vynálezu ďalej poskytujú spôsob dosiahnutia v podstate konštantnej hladiny v krvi pacienta pretrvávajúce po určité obdobie.

Prípravky

Hydrofílne polyméry vrátane alginátov a ich derivátov môžu byť získané z rôznych komerčných, prirodzených alebo syntetických zdrojov v obore dobre známych. Termín hydrofíIny polymér sa užíva v tomto popise tak, že sa vzťahuje k polymérom vo vode rozpustných alebo polymérom majúcich tendenciu k absorpcii vody. Odborníkovi sú hydrofílne polyméry dobre známe. Hydrofílne polyméry bez obmedzenia zahŕňajú polyanionty, vrátane aniontových polysacharidov, ako napríklad alginát, karboxymetylamylóžu, soli polyakrylovej kyseliny, soli polymetakrylové kyseliny, kopolymér anhydridu etylénmaleínovej

- 9 ·· ···· • · ····

I · · · ·· ·· kyseliny (polovičný dextransulfát, heparín, 2,3-dikarboxycelulózu, ester), karboxymetylcelulózu, karboxymetyldextran, karboxycelulózu, trikarboxycelulózu, karboxylovanú arabskú gumu, karboxylovaný karagenán, pektín, karboxypektín, karboxylovanú tragantovú gumu, karboxylovanú xantanovú gumu, peptosanpolysulfát, karboxylovaný škrob, karboxymetylchitín/chitosan, curdlan, inositolhexasulfát, b-cyklodextrinsulfát, kyselinu hyalurónovú, chondroitín-6-sulfát, dermatansulfát, heparínsulfát, karboxymetylškrob, karagenán, polygalakturonát, karboxylovanú guarovú gumu, polyfosfát, polyaldehydokarbonovú kyselinu, poly-l-hydroxy-l-sulfonát-propen-2, kopolystyrénmaleínovú kyselinu, agarózu, mezoglykán, sulfopropylované polyvinylalkoholy, celulózosulfát, protaminsulfát, fosfoguarovú gumu, polyglutámovú kyselinu, polyaspargovú kyselinu, polyaminokyseliny, ich deriváty alebo kombinácie. Odborník vie o ďalších rôznych hydrofílnych polyméroch, ktoré sa týkajú oblasti predkladaného vynálezu.

Podobne môžu byť získané viazané polyvalentné kovové ionty z rôznych komerčných, prirodzených alebo syntetických zdrojov v obore dobre známych. Kovové ionty môžu konkrétne, ale bez obmedzenia, zahŕňať hliník, báryum, vápnik, železo, mangán, horčík, stroncium a zinok. Výhodne sú kovové ionty vápnik a zinok alebo ich soli, ako acetát zinočnatý, acetát vápenatý alebo chloridy. Môžu byť tiež použité malé molekuly a soli rozpustné vo vode, ako napríklad síran amonný, acetón, etanol a glycerol.

Alkoholy alifatického radu pre použitie ako esterifikčná zložka karboxylových skupín ' algínovej kyseliny podľa predkladaného vynálezu sú napríklad teké, ktoré obsahujú maximálne 34 uhlíkových atómov, môžu byť saturované alebo nesaturované, a môžu byť eventuálne tiež substituované ďalšími voľnými alebo funkčne modifikovanými skupinami, . ako sú ·· ···· ··

- 10 • · ··· · · ···· • •Φ · · · ·· ······· · ··· · • · ···· ·· aminoskupiny, hydroxyskupiny, aldehydové skupiny, ketoskupiny, merkaptoskupiny, karboxylové skupiny, a alebo skupiny odvodené z týchto skupín, ako hydroxykarbylové skupiny alebo dihydrokarbylaminové skupiny (termín hydrokarbyl môže ďalej značiť nielen monovalentné radikály uhlovodíkov napríklad typu ^Cn^H2n-x' ^ale bivalentné alebo trivalentné radikály, ako napríklad alkyleny^,,-C_riH₂ alebo alkylideny = 0_ηΗ_=η), éterové alebo esterové skupiny, acetalové alebo ketalové skupiny, tioéterové alebo tioesterové skupiny a esterifikované karboxyskupiny alebo karbamidové skupiny či karbamidové skupiny substituované jednou alebo dvomi hydroxyskupinami, nitrilovými skupinami alebo halogénmi.

Vo vyššie uvedených skupinách obsahujúcich hydrokarbylové radikály, sú tieto radikály výhodne nižšie alifatické radikály, ako napríklad heteroatómy, ako kyslík, dusík a síra. Prednosť sa dáva alkoholom substituovaným jednou alebo dvomi z vyššie uvedených funkčných skupín.

Alkoholy z vyššie uvedenej skupiny výhodne používané za podmienok podľa predkladaného vynálezu sú alkoholy s maximálne 12 a osobitne s maximálne 6 uhlíkovými atómami, v ktorých hydrokarbylové radikály vo vyššie uvedených aminoskupinách, éterových skupinách, esterových skupinách, tioéterových skupinách, tioesterových skupinách, acetalových skupinách, ketalových skupinách predstavujúcich alkylové skupiny s maximálne 4 uhlíkovými atómami, a tiež v esterifikovaných karboxyskupinách alebo substituovaných karbamidových skupinách hydroxykarbylových skupín sú alkylové skupiny s rovnakým počtom uhlíkových atómov, a v ktorých aminoskupiny alebo karbamidové skupiny môžu byť alkylenaminoskupiny alebo alkylenkarbamidové skupiny s maximálne 8 uhlíkovými atómami. Z týchto alkoholov sú na prvom mieste uvedené saturované a nesubstituované alkoholy, ako sú metyl, etyl, propyl, izopropylalkoholy, n-butylalkohol, izobutyl, terc.-butylalkoholy, amyl-, pentyl-, hexyl-, oktyl-, • · ·· · β · · • ···· · • · ··· · ·· ···· • · · • fl · ♦ · · • · · · • fl ·· • · • · • · • · · • · ··

- 11 nonyl-, a dodecylalkoholy, a predovšetkým alkoholy s lineárnym reťazcom, ako n-oktyl- alebo n-dodecylalkoholy. Zo substituovaných alkoholov tejto skupiny by mali byť uvedené bivalentné alkoholy, ako etylenglykol, propylénglykol alebo butylénglykol, trivalentné alkoholy ako glycerín, aldehydalkoholy ako tartronalkohol, karboxyalkoholy ako kyselina mliečna, napríklad kyselina alfa-oxypropionová, kyselina glykolová, kyselina jablčná, kyselina vinná, kyselina citrónová, aminoalkoholy, ako aminoetanol, aminopropanol, n-aminobutanol a ich dimetylové a dietylové deriváty aminovej skupiny, cholín, pyrolidinyletanol, piperidinyletanol, piperazinyletanol a zodpovedajúce deriváty n-propyl alebo n-butylakoholov, monotioetylénglykol alebo jeho alkylové deriváty, napríklad etylderivát merkaptoskupiny.

Z vyšších nasýtených alifatických alkoholov zasluhujúcich si špeciálne uvedenie sú to napríklad acetylalkohol a myristylalkohol, ale pre účely predkladaného vynálezu sú osobitne dôležité vyššie nesaturované alkoholy s jednou alebo dvojitými väzbami, ako sú najmä tie, ktoré sú obsiahnuté v mnohých esenciálnych olejoch a ktoré majú afinitu k terpénom, ako je citronelol, geraniol, nerol, nerolidol, farnesol, fytol.

Z nižších nenasýtených alkoholov by mala byť pozornosť venovaná propargylalkoholu.

Alifatické alkoholy, ktoré by mali byť uvedené predovšetkým, sú alkoholy s iba jedným benzénovým zvyškom a alifatickým reťazcom s maximálne 4 uhlíkovými atómami, v ktorých tiež benzénový zvyšok môže byť substituovaný 1 až 3 metylovými skupinami alebo hydroxyskúpinami alebo atómami halogénov, najmä chlórom, brómom alebo jódom a v ktorých môže byť alifatický reťazec substituovaný jednou alebo viacerými funkčnými skupinami vybratými zo skupiny zahŕňajúce voľné • · ·· ···· ·· ·· · · · · e · · ··· ··· ·· • ··· · · · · · · · • · · · · · « · ··· · ·· ·· ·· ·

- 12 atómov, eventuálne nižšími alkylovými aminoskupiny alebo mono- alebo diemetylové skupiny alebo pyrolidinové či piperidinové skupiny. Z týchto alkoholov sú výhodné najmä benzylakokohol a fenetylalkohol. Alkoholy cykloalifatické alebo alifatické cykloalifatického radu môžu pochádzať od mono alebo polycyklických uhlovodíkov a môžu mať maximálne 34 uhlíkových atómov. Z alkoholov pochádzajúcich z cyklických jednokruhových uhlovodíkov si špeciálne uvedenie zaslúžia tie s maximálne 12 uhlíkovými atómami, s kruhmi obsahujúcimi výhodne 5 až 7 uhlíkových substituované napríklad jednou až tromi skupinami, ako sú metylové skupiny, etylové skupiny, propylové alebo izopropylové skupiny. Špecifické alkoholy z tejto skupiny sú cyklohexanol, cyklohexandiol, 1,2,3-cyklohexantriol a 1,3,5-cyklohexantriol (floroglucitol), inositol, alkoholy odvodené od p-metánu, ako karvomentol, mentol, alfa a gama-terpineol, 1-terpineol, alkoholy známe ako terpineol, 1,4- a 1,8-terpín. Alkoholy odvodené z uhlovodíkov s kondenzovanými kruhmi sú napríklad tie z thujanovej, pinanovej a kamfanovej skupiny, najmä thujanol, sabinolpinolhydrát, D a L-borneol a D a L-izoborneol.

Patria sem tiež alkoholy pochádzajúce z esterifikačnej reakcie zlúčenín obsahujúcich epoxyskupiny s alginátmi (viď napríklad patent Spojených Štátov č. 2 463 824 a patent Spojených Štátov č. 2 426 125).

Celkovú a čiastočnú esterovú. skupinu obsahujúcu polyanionty podľa predkladaného vynálezu sú obecne kyselé polysacharidy, kde glykozidový kyslík je pripojený v pozícii beta ku karbonylovému uhlíku esteru. Bez väzby na nejaký špecifický mechanizmus toto usporiadanie skupín umožňuje rozpad polymérového reťazca prostredníctvom beta-eliminačného mechanizmu, ktorý môže nastať za fyziologických podmienok.

Estery algínovej kyseliny podľa predkladaného vynálezu sú ·· ···· ··· · ·· ·· ··

- 13 zložené zo zvyškov kyseliny mannurónovej (m-COOH alebo m-COO anión) a zvyškov kyseliny gulurónovej (g-COOH alebo g-COO anión) spojených spolu glykozidickými éterovými kyslíkovými väzbami podľa nasledujúceho obecného vzorca I :

-(M)nl-(M')n2-(G)n3-(G')n4-(A)n5- I kde :

M je zvyšok kyselina mannurónovej, m-COOH alebo m-COO anión,

M' je zvyšok esteru kyseliny mannurónovej, m-COORl,

G je zvyšok kyseliny gulurónovej, g-COOH alebo g-COO anión,

G' je zvyšok esteru kyseliny gulurónovej, g-COOR2,

A predstavuje jednotky reťazca non-g alebo non-m, ako sú sacharidy, produkty oxidácie sacharidov, alebo alifatické, aromatické, aralifatické, alaromatické, cykloalifatické radikály, ktoré môžu byť substituované a prerušené heteroatómami pripojenými v reťazci alebo na koncoch reťazca, nl, n2, n3, n4 a n5 sú celé čísla predstavujúce priemerný relatívny počet inkorporovaných jednotiek,

R1 a R2 sú nezávisle alifatické, aromatické, aralifatické, alaromatické, cykloalifatické radikály, ktoré môžu byť substituované a prerušené heteroatómami, a deriváty (napríklad kde hydroxyskupiny sú acetylované a reagujú s izokyanátmi) a ich farmaceutický prijateľné soli.

V esteroch podľa predkladaného vynálezu je žiadúce, aby R1 = R2 = alifatický alebo alaromatický radikál a ďalej, aby 100 (n2+n4)/(nl+n2+n3+n4) bol od 1 do 99 % (mol.), výhodne 5 až 50 % (mol.), výhodnejšie 6 až 30 % (mol.), ešte výhodnejšie 6 až 15 % (mol.) a najvýhodnejšie 7 až 12 % (mol.) a

100n5/(nl+n2+n3+n4+n5) je výhodne menej ako 10 % (mol.).

V parciálnych esteroch podľa vynálezu môžu byť neesterifikované karboxyskupiny udržiavané voľné alebo môžu byť premenené na soli. Báze pre tvorbu týchto solí sú vyberané • · ·· ···· ·· • · · · · · ··· ···· · · · · · · · ··· · ·· ·· podľa konečného použitia produktu. Anorganické soli môžu byt tvorené z alkalických kovov, ako je draslík a najmä sodík a amónium, alebo môžu pochádzať z kovov alkalických zemín, ako je vápnik alebo horčík alebo hliník.

Osobitný význam majú soli s organickými bázami, najmä bázické azozlúčeniny, a teda alifatické, aralifatické, cykloalifatické alebo heterocyklické aminy. Tieto amonné soli môžu pochádzať z terapeuticky prijateľných aminov alebo netoxických, ale terapeuticky neaktívnych aminov alebo z aminov s terapeutickým účinkom. Čo sa týka prvého typu, výhodné sú alifatické aminy, napríklad mono-, di- a tri-alkylaminy s alkylovými skupinami s maximálne 8 uhlíkovými atómami alebo arylalkylaminy s rovnakým počtom uhlíkových atómov v alifatickej časti a kde aryl značí benzenovú skupinu eventuálne substituovanú 1 až 3 metylovými skupinami alebo atómami halogénov alebo hydroxyskupinami. Biologicky neaktívne báze pre tvorbu solí môžu tiež byť cyklické, ako monocyklické alkylenaminy s cyklami o 4 až 6 uhlíkových atómoch, eventuálne prerušené v cykle heteroatómami vybratými zo skupiny tvorenej dusíkom, kyslíkom a sírou, ako piperazín alebo morfolín, alebo môžu byť substituované, napríklad aminoskupinou alebo hydroxyskupinou, ako je aminoetanol, etylendiamol, etylendiamin, efedrín alebo cholín.

Stupeň a typ esterifikácie môže byť riadený syntetickými metódami v obore známymi. Výhodne sú alginátové estery pripravené ošetrením kvartérnych amonných solí kyseliny algínovej zvyčajnými alkylačnými činidlami v aprotickom organickom rozpúšťadle ako napríklad dimetylsulfoxidu. Výsledné estery sú výhodne estery monovalentných alkoholov ako napríklad nižších alkylových, ako etyl alebo aralkyl, ako benzyl alebo ich zmesí. Môžu sa tiež tvoriť estery reakciou kyseliny algínovej so zlúčeninami obsahujúcimi oxiran alebo epoxyskupinu, ako napríklad etylén alebo propylénoxid.

···· · · » · · 4 ·· ··

- 15 Tiež sa dajú tvoriť kvartérne amonné soli parciálnych esterov, napríklad soli tetraalkylamonia s vyššie uvedeným počtom uhlíkových atómov a výhodne soli tohoto typu, v ktorých štvrtá alkylová skupina má 1 až 4 uhlíkové atómy, napríklad metylová skupina.

Stupeň esterifikácie (vyjadrený v % (mol.)) kyseliny algínovej sa vzťahuje k požadovanej rýchlosti rozpadu gélu v tkanive pacienta. Táto rýchlosť gélu je obecne vo vzťahu k požadovanej rýchlosti uvoľňovania aktívneho agens z gélu, čo je po dobu 5 rokov alebo menej, zvyčajne 2 dni až 270 dní, zvyčajnejšie 2 dni až 180 dní, zvyčajnejšie 2 dni až 90 dní. Stupeň esterifikácie (DE) je od 1 do 99 % (mol.), výhodne od 5 do 50 % (mol.), výhodnejšie od 6 do 30 % (mol.), ešte výhodnejšie od 6 do 15 % (mol.) a najvýhodnejšie od 7 do 12 % (mol.).

Termín pufor alebo pufrovací roztok, používaný v popise, sa týka použitia anorganických alebo organických kyselín alebo ich kombinácie na prípravu pufrovacieho roztoku, ako je v obore známe. Anorganické kyseliny v rozsahu predkladaného vynálezu zahŕňajú halid vodíku (napríklad kyselinu chlorovodíkovú), kyselinu fosforovú, kyselinu dusičnú alebo kyselinu sírovú. Ďalšie anorganické kyseliny sú odborníkovi dobre známe a sú tu braté do úvahy. Organické kyseliny v rozsahu vynálezu zahŕňajú alifatické karboxylové kyseliny a aromatické kyseliny ako napríklad kyselinu mravenčiu, kyselinu uhličitú, kyselinu kyselinu kyselinu maslovú, akrylovú, kyselinu glutárovú, kyselinu kyselinu kyselinu octovú, kyselinu propionovú, valérovú, kyselinu kapronovú, malónovú, kyselinu jantárovú, adipovú, kyselinu maleínovú, kyselinu fumarovú, glycín alebo kyselinu fenolsulfonovú. Ďaľšie organické kyseliny sú odborníkovi dobre známe.

Termín biologicky aktívne agens, používaný v tomto • ·· ···· ·· • · · · · · · popise, sa týka rekombinantných alebo prirodzene sa vyskytujúcich proteínov, ľudských alebo zvieracích, použiteľných pre profylaktické, terapeutické alebo diagnostické aplikácie, ako aj agens nevychádzajúcich z proteínov, ako sú malé molekuly. Biologicky aktívne agens môžu byť prirodzené, syntetické, polosyntetické agens alebo ich deriváty. Biologicky aktívne agens podľa predpokladaného vynálezu musí sa dať precitipovať. Uvažuje sa o celom rade biologicky aktívnych agens. To bez obmedzenia zahŕňa hormóny, cytokiny, hemopoetické faktory, rastové faktory, faktory pôsobiace proti obezite, trofické* faktory, protizápalové faktory a enzýmy (viď tiež patent Spojených Štátov č. 4 695 463 pre ďaľšie príklady použiteľných biologicky aktívnych agens). Odborník je ľahko schopný adaptovať požadované biologicky aktívne agens do prípravku podľa predkladaného vynálezu.

Tieto proteíny bez obmedzenia zahŕňajú interferóny (viď patenty Spojených Štátov č. 5 372 808, 5 541 293, 4 897 471 a 4 695 623, týmto zahrnuté formou odkazu vrátane obrázkov), interleukiny (viď patent Spojených Štátov č. 5 075 222, týmto zahrnutý formou odkazu vrátane obrázkov), erytropoetíny (viď patenty Spojených štátov č. 4 703 008, 5 441 868, 5 618 698, 5 547 933 a 5 621 080, týmto zahrnuté formou odkazu vrátane obrázkov), granulocytové kolónie stimulujúce faktor (viď patenty Spojených Štátov č. 4 810 643, 4 999 291, 5 581 476, 5 582 823 a PCT publikácie č. 94/17185, týmto zahrnuté formou odkazu vrátane obrázkov), faktor kmeňovej bunky (PCT publikácie č. 91/05795, 92/17505 a 95/17206, týmto zahrnuté formou odkazu vrátane obrázkov) a proteín OB (viď PCT publikácie č. 96/40912, 96/05309, 97/00128, 97/01010 a 97/06816, týmto zahrnuté formou odkazu vrátane obrázkov). Okrem toho, biologicky aktívne agens môžu tiež bez obmedzenia zahŕňať produkty pôsobiace proti obezite, inzulín, gastrín, prolaktín, adrenokortikotropný hormón (ACTH), hormón stimulujúci štítnu žľazu (TSH), luteinizačný hormón (LH), hormón stimulujúci folikuly (FSH), • · · · • · · · · • · · · · » ·· ··

- 17 • · ···· ·· ···· ·· ľudský choriogonadotropín (HCG), motilín, interferóny (alfa, beta, gama), interleukíny (IL-1 až IL-12), nádorový nekrotický faktor (TNF), proteín viažuci nádorový nekrotický faktor (TNF-bp), neurotrofický modzgový faktor (BDNF), gliový neurotrofický faktor (GDNF), neurotrofický faktor 3 (NT3), fibroblastové rastové faktory (FGF), neurotrofický rastový faktor (NGF), kostné rastové faktory ako osteoprotegeríny (OPG), rastové faktory podobné inzulínu (IGF), faktor stimulujúci makrofágovú kolóniu (M-CSF), faktor stimulujúci kolónie makrofágov a granulocytov (GM-CSF), megakeratinocytový rastový faktor (MGDF), trombopoetín, doštičkový rastový faktor (PGDF), rastové faktory stimulujúce kolónie (CSF), kostný (BMP), superoxid-dismutáza (SOD), plazminogénu (TPA), urokináza, streptokináza a kalikreín. Termín proteíny, ako sa tu používa, zahŕňa peptidy, polypeptidy, konsenzné molekuly, analógy, deriváty alebo ich kombinácie.

morfogenetický proteín tkanivový aktivátor aktívnych agens ako napríklad

Deriváty biologicky aktívnych agens môžu zahŕňať pripojenie jednej alebo viacej chemických skupín ku skupine proteínu. Bolo objavené, že chemické modifikácie biologicky poskytnú za určitých podmienok ďaľšie výhody, zvýšenie stability a doby cirkulácie terapeutického proteínu a zníženú imunogeničnosť. Odborník bude schopný vybrať požadovanú chemickú modifikáciu na základe požadovaného dávkovania, dobe cirkulácie, rezistencie k proteolýze, terapeutického použitia a ďalších zreteľoch.

biologicky prostredí, podmienené

Termín biologická odbúrateľnosť (biodegradabilita) v tomto popise sa týka rozpadu molekuly s vyššou molekulovou hmotnosťou konkrétneho polyméru na menší počet jednotiek v raťezci, t.j. rozpad na jednotky o nižšej molekulovej hmotnosti. Termín odbúrateľný gél sa vzťahuje k rozptýleniu gélu v v ktorom bol použitý, pričom rozptýlenie je rozpadom molekúl základných polymérov s vyššou

·· · · ·· ···· f · · ·· · · ·· molekulovou hmotnosťou, čo má za následok menej jednotiek v polymérovom reťazci.

Komplexy

Proteíny, analógy alebo deriváty môžu byť podávané v komplexu s väzobným prípravkom. Tento väzobný prípravok môže mať vplyv na predĺženie doby cirkulácie proteínu, analógu alebo derivátu alebo zvýšenie aktivity biologicky aktívneho agens. Takýto prípravok môže byť proteín (alebo synonymne peptid), derivát, analóg alebo ich kombinácia. Napríklad väzobný proteín pre proteín OB je receptor proteínu OB alebo jeho časť, ako napríklad jeho rozpustná časť. Ďal’šie väzobné proteíny môžu byť zistené vyšetrením proteínu OB alebo proteínu podľa výberu v sére alebo môžu byť empiricky testované na prítomnosť väzby. Takáto väzba typicky neinterferuje so schopnosťou proteínu OB alebo analógu či derivátu viazať sa na endogénny receptor proteínu OB alebo uskutočniť signálnu transdukciu. Okrem proteínu OB budú väzobné komplexy tiež použiteľné rovnako tak pre ďaľšie terapeutické proteíny podľa predpokladaného vynálezu. Odborníci sú schopní zistiť vhodné väzobné proteíny pre použitie podľa predpokladaného významu.

Podobne precipitačné činidlá použité pre precipitáciu biologicky aktívneho agens môžu byť získané z rôznych komerčných, prirodzených alebo syntetických zdrojov, ktoré sú v obore dobre známe. Precipitačné činidlá bez obmedzenia zahŕňajú polyvalentné kovové ionty alebo ich soli, ako acetáty, citráty, chloridy, uhličitany, hydroxidy, oxaláty, tartráty alebo ich hydroxidy, kyseliny alebo vo vode rozpustné polyméry. Konkrétne kovové ionty môžu bez obmedzenia zahŕňať hliník, báryum, vápnik, železo, mangán, horčík, stroncium a zinok. Výhodne kovový iont je zinok alebo jeho soli, ako acetátchlorid. Môžu byť tiež použité vo vode rozpustné malé molekuly a soli, ako napríklad síran amonný, acetón, etanol a glycerol.

• · • · · ·

- 19 ·· ···· • · · · · · • · · · · • · · · · · • · · · · · ·· ·· ·· ·

Čo sa týka vo vode rozpustných polymérov, tieto bez obmedzenia zahŕňajú polyetylénglykol, kopolyméry etylénglykol/ propylénglykolu, karboxymetylcelulózu, dextran, polyvinylalkohol, polyvinylpyrolidón, poly-1,3-dioxolán, poly1,3-6-trioxan, kopolyméry anhydridu etylénmaleínovej kyseliny, polyaminokyseliny, dextran, poly(n-vinylpyrolidón), polyetylénglykol, homopolyméry propylénglykolu, kopolyméry polypropylénoxid/etylénoxidu, polyoxyetylované polyoly, polyvinylalkoholsukcinát, glycerín, etylénoxidy, propylénoxidy, poloxaméry, alkoxylované kopolyméry, vo vode rozpustné polyanionty, deriváty alebo ich kombinácie. Vo vode rozpustný polymér môže mať akúkoľvek molekulovú hmotnosť a môže byť rozvetvený alebo nerozvetvený. Napríklad výhodná molekulová hmotnosť polyetylénglykolu je medzi približne 700 kD a približne 100 kD pre ľahkú manipuláciu a účinnosť precipitácie.

V závislosti na požadovanom terapeutickom profile môžu byť použité iné veľkosti a typy precipitačných činidiel (napríklad požadované trvanie predĺženého uvoľňovania, účinok, biologická aktivita, ľahkosť manipulácie, stupeň antigeničnosti alebo jej nedostatok a ďalšie známe účinky požadovaného precipitačného činidla na terapeutický proteín alebo analóg). Odborník si uvedomuje ďalšie precipitačné činidlá, ktoré sú v rozsahu vynálezu.

Naviac prípravky podľa predkladaného vynálezu môžu tiež zahŕňať dodatočné excipienty nevyhnutné pre stabilizáciu biologicky aktívneho agens alebo hydrofilného polyméru. Tie môžu byť obsiahnuté v pufri a môžu bez obmedzenia zahŕňať konzervačné činidlá.

Farmaceutické prípravky

Farmaceutické prípravky s predĺženým uvoľňovaním podľa predkladaného vynálezu môžu byť podávané perorálne (napríklad ·· ······ · · « • · · ·· · ···· • · · · · · β · 0 • 000· · 0 0 · · 0 0 · • 0 ···· ··· • · · · ·· ·· 0 0 0 0 0

- 20 tobolky ako napríklad tvrdé tobolky a mäkké tobolky, pevné prípravky ako napríklad granule, tablety, pilulky, pastilky alebo zdravotné bonbóny, oblátky s práškom, pelety, prášok a lyofilizované formy, tekuté prípravky ako napríklad suspenzie) a prípravky pre parenterálne podávanie (napríklad intramuskulárne, subkutánne, transdermálne, viscerálne, i.v. (intravenózne), i.p. (intraperitoneálne), intraarteriálne, intrathekálne, intrakapsulárne_ŕ intraorbitálne, injikovateľné, pľúcne, nazálne, rektálne a prípravky na vstrebávanie maternicovou sliznicou.

Obecne vynález zahŕňa farmaceutické prípravky s predĺženým uvoľňovaním obsahujúce účinné množstvo proteínu alebo odvodených produktov, s prípravkami pre predĺžené uvoľňovanie podľa vynálezu spolu s farmaceutický prijateľnými riedidlami, konzervačnými činidlami, rozpúšťadlami, emulgátormi, adjuvans alebo nosičmi potrebnými pre podávanie. Viď PCT 97/01331 zahrnutý formou odkazu. Optimálna farmaceutická formulácia pre požadované biologicky aktívne agens bude odborníkom určená v závislosti na spôsobe podávania a požadovanom dávkovaní. Príklady farmaceutických prípravkov sú popísané v publikácii Remington's Pharmaceutical Sciences (Mack Publishing Co., 18. vyd., Easton, PA, 1435-1712, 1990).

Vďaka tixotrópnej povahe formulácie oneskoreného gélu môžu byť použité injekčné striekačky pre subkutánne podávanie. Prípravok môže byž gelovatený v striekačke pre neskoršiu injekciu. Toto gelovatenie sa môže uskutočňovať oneskoreným, t.j. časové oddialeným spôsobom. Časovanie je riadené rozumným nastavením množstva gelatinačného činidla a protónového donoru v zmesi, ak je nutné. Takýto prípravok bude použitý pre neskoršie opätovné gelovatenie v organizme po injekcii. Termín tixotrópny, ako sa tu používa, sa týka viskozity gelovej zmesi, ktorá sa znižuje pod tlakom, napríklad piestom injekčnej striekačky, čím zmes môže pretekať, napríklad ihlou striekačky, a potom znova vytvoriť gél v mieste injekcie.

• · ····

- 21 Koncepcia oneskoreného gelovatenia môže byť tiež aplikovaná na plnenie striekačky, kedy je prípravok gélu s predĺženým uvoľňovaním naplnený do striekačky a predvolený čas v striekačke gelovatí, napríklad niekoľko minút až mnoho hodín po naplnení. Tým sa zabráni problému plnenia injekčnej striekačky látkou, ktorá už zgelovatela. Tieto vopred naplnené striekačky môžu byť uskladnené pre neskoršie injekcie pacientom.

Zložky, ktoré môžu byť potrebné pre podávanie zahŕňajú riedidlá s rôznym obsahom pufrov (napríklad Tris-HCL, acetát), pH a iontové sily, aditíva, ako napríklad surfaktanty a rozpúšťadlá (napríklad Tween 80, HCO-60, polysorbát 80), antioxidanty (napríklad kyselina askorbová, glutation, metabisulfid sodný), ďalšie polysacharidy (napríklad karboxymetylcelulóza, alginát sodný, hyaluronát sodný, protaminsulfát, polyetylénglykol), konzervačné činidlá (napríklad Thimersol, benzylalkohol, metylparabén, propylparabén) a nosičove látky či plnidlá (napríklad laktóza, manit), inkorporácia látky do partikulárneho prípravku polymérovej zlúčeniny ako napríklad polyméry alebo kopolyméry polymliečnej/polyglykolovej kyseliny atď. alebo kombinované s lipozómami. Ako zložka pre podávanie môže byť tiež použitá kyselina hyalurónová a tá môže ešte ďalej podporovať predĺžené zotrvávanie agens v obehu. Okrem toho prípravky s predĺženým uvoľňovaním podľa predkladaného vynálezu môžu byť tiež dispergované s olejmi (napríklad sezámový olej, kukuričný olej, rastlinný olej) alebo ich zmesi s fosfolipidami (napríklad lecitín) či triglycerídy mastných kyselín so stredne dlhým reťazcom (napríklad Miglyol 812) za vzniku olejovej suspenzie.

Prípravky podľa predkladaného vynálezu môžu byť tiež dispergované s dispergačnými činidlami, ako napríklad vo vode rozpustné polysacharidy (napríklad manit, laktóza, glukóza, škroby), kyselina hyalurónová, glycín, fibrín, kolagén a anorganické soli (napríklad chlorid sodný).

• · ···

- 22 • · ·· ·· ···· • · ·· ·· • · ·· • · · • · · ' • · · ·· ···

Okrem toho sa tiež predpokladá použitie mechanických zariadení na podávanie prípravkov s predĺženým uvoľňovaním podľa predkladaného vynálezu navrhnutých pre pľúcne podávanie terapeutických produktov, vrátane, ale bez obmedzenia, nebulizérov, inhalátorov odmeriavajúcich dávku a práškových inhalátorov, ktoré sú odborníkovi všetky známe.

Zložky prípravku potrebné na podávanie môžu mat vplyv na fyzikálny stav, stabilitu, rýchlosť uvoľňovania in vivo a rýchlosť in vivo clearancie predkladaných proteínov a derivátov. Odborníkovi sú známe príslušné zložky prípravku potrebné pre podávanie alebo príslušné mechanické zariadenia pre použitie v závislosti na terapeutickom použití, spôsobe podávania, požadovanom dávkovaní, dobe cirkulácie, rezistencii k proteolýze, proteínovej stabilite a ďalších dôvodoch.

Spôsoby použitia

Terapeutické použitie

Terapeutické použitie závisí na použitom biologicky aktívnom agens. Odborník ľahko upraví požadované aktívne agens podľa predkladaného vynálezu pre jeho zamýšľané terapeutické použitie. Terapeutické použitie pre tieto agens je ďalej detailnejšie uvedené v nasledujúcich publikáciách, týmto zahrnutých formou odkazu vrátane obrázkov. Terapeutické použitia zahŕňajú, ale bez obmedzenia, použitie proteínov ako (viď patenty Spojených Štátov č. 5 372 808, 5 541 293, 4 897 471 a 4 695 623, týmto zahrnuté formou odkazu vrátane obrázkov), interleukíny (viď patent Spojených Štátov č. 5 075 222, týmto zahrnutý formou odkazu vrátane obrázkov), erytropoetíny (viď patenty Spojených Štátov č. 4 703 008, 5 441 868, 5 618 698, 5 547 933 a 5 621 080, týmto zahrnuté formou odkazu vrátane obrázkov)', granulocytové kolónie stimulujúce faktor (viď patenty Spojených Štátov č. 4 999 291, • · ····

- 23 ···· • 4 4

4 4

4 4 4 • 4 44

581 476, 5 582 823, 4 810 643 a PCT publikácie č. 94/17185, týmto zahrnuté formou odkazu vrátane obrázkov), faktor kmeňovej bunky (PCT publikácie č. 91/05795, 92/17505 a 95/17206, týmto zahrnuté formou odkazu vrátane obrázkov) a proteín OB (viď PCT publikácie Č. 96/40912, 96/05309, 97/00128, 97/01010 a 97/06816, týmto zahrnuté formou odkazu vrátane obrázkov).

Okrem toho, terapeutické použitia podľa predpokladaného vynálezu zahŕňajú použitie biologicky aktívnych agens ako sú bez obmdzenia produkty pôsobiace proti obezite, inzulín, gastrín, prolaktín, adrenokortikotropný hormón (ACTH), hormón stimulujúci štítnu žľazu (TSH), luteinizačný hormón (LH), hormón stimulujúci folikuly (FSH), ľudský choriogonadotropín (HCG), motilín, interferóny (alfa, beta, gama), interleukíny (IL-1 až IL-2), nádorový nekrotický faktor (TNF), proteín viažuci nádorový nekrotický faktor (TNF-bp), neurotrofický modzgový faktor (BDNF), gliový neurotrofický faktor (GDNF), neurotrofický faktor 3 (NT3), fibroblastové rastové faktory (FGF), neurotrofický rastový faktor (NGF), kostné rastové faktory ako osteoprotegeríny (OPG), rastové faktory podobné inzulínu (IGF), faktor stimulujúci makrofágovú kolóniu (M-CSF), faktor stimulujúci kolónie makrofágov a granulocytov (GM-CSF), megakeratinocytový rastový faktor (MGDF), trombopoetín, doštičkový rastový faktor (PGDF), rastové faktory stimulujúce kolónie (CSF), kostný morfogenetický proteín (BMP), superoxid-dismutáza (SOD), tkanivový aktivátor plazminogénu (TPA), urokináza, streptokináza a kalikreín. Termín proteíny, ako sa tu používa, zahŕňa peptidy, polypeptidy, konsenzné molekuly, analógy, deriváty alebo ich kombinácie. Okrem toho môžu byť prípravky podľa vynálezu tiež použité pre výrobu jedného alebo viacej liečiv alebo zmiernenie chorobného stavu, ktorý je biologicky aktívnym agens určené liečiť.

·· ···· ·· • · · · · · • · · · · · · • · · · · · e ·· ·· ·· ···

Príklad terapeutického použitia môže byť tiež dosiahnutie oxygenácie krvi a zníženie resorpcie kosti alebo zníženie osteoporózy bez úbytku hmotnosti.

Kombinované terapie

Prípravky podľa vynálezu môžu byť použité v spojení s inou liečbou, ako je zmenená diéta a cvičenie. Ďaľšie liečivá, ako sú lieky použiteľné na liečenie diabetu (napríklad inzulín, eventuálne amylín), cholesterol a lieky znižujúce krvný tlak (ako napríklad lieky, ktoré znižujú hladiny krvných lipidov alebo iné kardiovaskulárne lieky), lieky zvyšujúce aktivitu (napríklad amfetamíny), diuretiká (pre vylučovanie tekutín) a potláčatelia chuti. Ich podávanie môže byť súčasné alebo môžu byť podávané jeden po druhom. Okrem toho predkladaný spôsob môže byť použitý v spojení s chirurgickými výkonmi, ako napríklad kozmetickými chirurgickými výkonmi zameranými na zmenu celkového vzhľadu tela (napríklad liposukcie alebo laserové chirurgické výkony zamerané na redukciu telesnej hmoty alebo implantačné chirurgické výkony zamerané na zväčšenie telesnej hmoty). Zdravotný prínos kardiologických chirurgických výkonov, ako napríklad bypassov alebo iných chirurgických výkonov zameraných na zmiernenie škodlivého stavu spôsobeného blokádou krvných ciev tukovými depozitmi, ako sú napríklad arteriálne plaky, môže byť zosilnený súčasným použitím a spôsobov. Môžu byť tiež použité žlčových kameňov, ako napríklad ultrazvukovými alebo laserovými metódami, a to či pred, v priebehu alebo po kúre predkladaným terapeutickým spôsobom. Okrem tohoto môžu byť predkladané spôsoby použité ako doplnok chirurgických výkonov alebo liečby zlomených kostí, poškodených svalov alebo ďaľšej liečby, ktorá môže byť zlepšená zosilnením slabej tkanivovej hmoty.

predkladaných prípravkov spôsoby na odstránenie • · fl ···· · ·

- 25 ·· ···· ·· • · · fl • · · fl • · · · fl • · · · fl • fl ·· ··

Dávkovanie dávkovanie požadovaného

Odborník je schopný určiť účinné prostredníctvom podávania lieku a pozorovaním terapeutického účinku. Dávka prípravku s predĺženým uvoľňovaním je množstvo nevyhnutné pre dosiahnutie účinnej koncentrácie biologicky aktívneho agnes in vivo po dané časové obdobie. Dávky a výhodná frekevencia podávania prípravku s predĺženým uvoľňovaním kolísa podľa typu biologicky aktívneho agens, požadovanej doby uvoľňovania, cieľovej choroby, požadovanej frekvencii podávania lieku, predmetného živočíšneho druhu a ďaľších faktoroch. Výhodná formulácia molekuly bude taká, aby dávka približne medzi 0,10 /ug/kg/deň až 100 mg/kg/deň poskytla požadovaný terapeutický účinok.

Účinné dávkovanie môže byť určené s použitím diagnostických pomôcok v priebehu času. Ako príklad poskytuje predkladaný vynález dávkovanie proteínu OB. Napríklad diagnostika pre meranie množstva proteínu OB v krvi (alebo plazme či sére) môže byť najskôr použitá pre určenie endogénnych hladín proteínu OB. Takýto diagnostický nástroj môže byť vo forme protilátkového testu, ako napríklad protilátkový sendvičový” test. Najskôr je kvantifikované množstvo endogénneho proteínu OB a je stanovená východzia hodnota. Sú určované terapeutické dávky, zatiaľ kým kvantifikácia endogénneho a exogénneho proteínu OB (t.j. proteínu, analógu alebo derivátu nájdeného v tele, či vytvoreného organizmom alebo podaného) trvá v priebehu terapie. Napríklad môže byť zo začiatku potrebná relatívne vysoká dávka, dokiaľ nie je pozorovaný terapeutický prínos, a potom sú použité nižšie dávky na udržanie terapeutického prínosu.

Príklady uskutočnenia vynálezu

Materiál a metódy • · ····

- 26 ··· · ·· ···· ·· • · · · · · • · · · ι • · · · · · • · · · · ·

Materiál

Alginát vo forme alginátu sodného môže byť nájdený zo zdrojov v obore dobre známych, proteín OB a GCSF sú od firmy Amgen Inc., d’aľšie chemikálie sú zo zdrojov v obore známych.

Príprava častíc/ perál alginátového hydrogélu

Príprava častíc a perál alginátového hydrogélu, s proteínami a bez proteínov, je detailne popísaná v súčasne prejednávanej prihláške Spojených Štátov 08/842 756, týmto zahrnutej formou odkazu.

Príprava oneskoreného gélu

Príprava oneskorených alginátových hydrogélov, s proteínami a bez proteínov, je detailne popísaná v súčasne prejednávanej prihláške Spojených Štátov 08/857 913 a 08/912 902, týmto zahrnutých formou odkazu.

Nasledujúce príklady sú uvedené pre celkovejšie vysvetlenie a iluštráciu vynálezu, ale nie sú zamýšľané ako obmedzujúce jeho rozsah. Okrem toho, s ohladom na vyššie uvedený popis alebo nižšie uvedené príklady, odborník je schopný vykonať nevyhnutné zmeny popisov pre účely produkcie vo veľkom merítku.

Príklad 1

Tento príklad popisuje prípravu esteralginátov použitých v predkladanom vynáleze.

Príprava A : tetrabutylamonium (TBA) alginát

Živica sulfónovéj kyseliny (Bio-rad, AG MP-50) je ·· ···· ·· · ·· ···· • · · ··· ·· • ···· e · · · · · · • · ······ ··· · ·· ·· ·· ·

- 27 konvertovaná na formu tetrabutylamonia (TBA) ošetrením s tetrabutylamoniumhydroxidom (Aldrich) s použitím periodického postupu pri izbovej teplote. K roztoku 10 g sodnej soli kyseliny algínovej v 800 ml destilovanej vody je pridané 60 ml sulfónovej živice (Bio-rad, AG MP-50) vo forme tetrabutylamónnej soli. Zmes je miešaná 0,5 hodiny pri izbovej teplote. Živica je odstránená filtráciou a premytá destilovanou vodou. TBA alginát vo filtráte je izolovaný lyofilizáciou (výťažok 16,8 g) a potvrdený NMR.

Príprava B : parciálny etylester kyseliny algínovej, stupeň esterifikácie (DE) = 30 % (mol.).

g (14,4 mmol jednotiek TBA) TBA alginátu je rozpustených v 500 ml dimetylsulfoxidu (D?SO) pri izbovej teplote. Potom je pridaných 673 mg jódoetánu (4,3 mmol, Aldrich). Zmes je 15 hodín miešaná v 30° C, a potom ochladená na izbovú teplotu.

K tomuto roztoku je pomaly pridávaný roztok 2 g NaCl v 20 ml vody, aby bolo TBA celkom konvertované na sodnú soľ. Po miešaní 15 až 30 minút je roztok pomaly vlievaný do 1500 ml etylacetátu. Precipitát je zobratý filtráciou a trikrát premytý acetónom/vodou (8:1 objem/objem) a trikrát acetónom, a potom je usušený vo vákuu. Zlúčenina je opäť rozpustená v M 100 ml destilovanej vody a pH je upravené na 6,5 za pomoci 0,2 % NaHCO₃ v 0° C. Roztok je potom dialyzovaný (limit MW 8000) cez noc proti destilovanej vode v 4° C, a potom lyofilizovaný. Výťažok parciálneho esteru je 2,8 g a stupeň esterifikácie je 30 + 1 % pH NMR, ako vnútorný štandard maleimid).

Príprava C : celkový a parciálny etylester kyseliny algínovej, DE = 100 %, 50 %, 20 %, 10 % a 5 %.

Príprava týchto zlúčenín je podobná príprave popísanej v príprave B okrem toho, že množstvo pridaného jódoetánu je upravené tak, aby bol dosiahnutý požadovaný stupeň esterifikácie.

• · ·· ···· ·· · ·· · · · · · · ·· • · · ··· ··· • ···· ··· ···· · • · · · · · ··· ··· · ·· ·· ·· ··«

- 28 Príprava D : parciálne propyl-, hexyl-, oktyl- a dodecylestery kyseliny algínovej.

Prípravy sú podobné postupom popísaným v prípravách B a C vyššie, ale jódoetán je substituovaný 1-jódopropánom, 1-jódohexánom, 1-jódooktánom alebo 1-jódododekánom, čo sa každého týka.

Príprava E : parciálny benzyester kyseliny algínovej,

DE = 30 %.

2,5 g TBA alginátu (5,99 mmol jednotiek TBA) je rozpustených v z-'200 ml DMSO pri izbovej teplote. Je pridaných 307 mg benzylbromidu (1,8 mmol, Aldrich) a 30 mg TBA jodidu (Aldrich). Zmes je 15 hodín miešaná v 30° C, a potom ochladená na izbovú teplotu. K tomuto roztoku je pomaly pridávaný roztok 0,6 g NaCl v 10 ml vody, aby bolo TBA celkom konvertované na sodnú soľ. Po miešaní 15 až 30 minút je roztok pomaly vlievaný do 500 ml etylacetátu. Precipitát je zobratý filtráciou a trikrát premytý acetónom/vodou (8 : 1 objem/objem) a trikrát acetónom, a potom je usušený vo vákuu. Zlúčenina je opäť rozpustená v .60 ml destilovanej vody a pH je upravené na z^-* 6,5 za pomoci 0,2 % NaHCO₃ v 0° C, a potom je zlúčenina dialyzovaná (limit MW 8000) cez noc proti destilovanej vode v 4° C. Výťažok parciálneho esteru je 1,3 g a stupeň esterif ikácie je 30 ± 1 % (^ΧΗ NMR, ako vnútorný štandard maleimid).

Príprava F : celkový a parciálny benzylester kyselina algínovej s odlišným DE.

Príprava týchto zlúčenín je podobná príprave popísanej v príprave E okrem toho, že množstvo pridaného benzylbromidu a TBA jodidu je upravené tak, aby bol dosiahnutý požadovaný stupeň esterifikácie.

·· ···· • I ···· • · 4 ·· ··

- 29 Príklad 2

Nasledujúci príklad ukazuje prípravu etylesteralginátového (DE =15 % (mol.) a 10 % (mol.)) gélu obsahujúceho proteínové liečivo (leptín) a in vitro predĺžené uvoľňovanie proteínu z tohoto gélu.

100 mg/ml leptínu (lOmM Tris HCI, pH 8,8, pH upravené z 8,0 na 8,8 s IM NaOH) a 6 % etylesteralginát (15 % (mol.), lOmM Tris HCI, pH 8,6) sú chladené v ľadovom kúpeli. 0,5 ml leptínu je pridané k 0,18 ml 6 % etylesteralginátu a zmes je miešaná v ľadovom kúpeli 10 až 15 minút, konečné pH je 8,6 až 8,8. K tejto zmesi je pridaných 16 /Ul suspenzie IM CaCO₃ a výsledná suspenzia je dobre premiešaná. K tejto suspenzii je po kvapkách pridávaný za miešania 100 /Ul roztoku 0,lM ZnCl₂, potom je pridaná voda na doplnenie objemu na 1 ml. Zmes je kompletne premiešaná a držaná v ľadovom kúpeli 10 až 20 minút. Potom je do tejto zmesi dôkladne zamiešané 56 jal roztoku 1,68M á-glukonolaktónu (Aldrich). Konečná zmes (50 mg/ml leptín, 1 % etylesteralginát, 0,1 ml) je naliata do vnútrajšku eppendorfovej skúmavky a ponechaná cez noc v 4° C gelovatieť. Po nočnom uskladnení bolo uskutočnené in vitro uvoľnenie v lOmM histidínovom pufri, pH 7,4. Liaty gél s 15 % (mol.) stupňom esterifikácie prejavuje minimálne počiatočné pulzné uvoľnenie a celkom konštantné uvoľňovanie leptínu vykazujúce 60 % uvoľnenie počas šiestich dní. Liaty gél s 10 % (mol.) stupňom esterifikácie prejavuje minimálne počiatočné pulzné uvoľnenie a celkom konštantné uvoľňovanie leptínu vykazujúce 55 % uvoľnenia počas šiestich dní.

Príklad 3

Tento príklad ukazuje prípravu hexylesteralginátového (DE =15 % (mol.) a 10 % (mol.)) gélu obsahujúceho proteínové liečivo (leptín) a in vitro predĺžené uvoľňovanie proteínu z • · ·· ···· ·· «·· ·· ···· ······· · ··· · • · · · · · ·· ··· · ·· ·· ·· · tohoto gélu.

Tento príklad je uskutočnený podobným spôsobom, ako je popísaný v príklade 2 okrem užitia etylesteralginátu.

Hexylesteralginátový gél s 15 % (mol.) a 10 % (mol.) stupňami esterifikácie prejavuje minimálne počiatočné pulzné uvoľnenie a prejavuje predĺžené uvoľňovanie vykazujúce 50 % vuoľnenie počas šiestich dní.

Príklad 4

Nasledujúci príklad ukazuje prípravu etylesteralginátového (DE = 15 % (mol.)) gélu obsahujúceho proteínové liečivo (Zn-leptín) a in vitro predĺžené uvoľňovanie proteínu z tohoto gélu.

K 0,75 ml roztoku 4 % (hmotnosť/objem) etylesteralginátu (15 % (mol.)) je pridaných 7,5 jal IM Tris HCl, pH 8,0, 33 zUl 0,5M PIPES, pH 6,8 a 8,5 /il 0,lM ZnCl₌. Zmes je dobre premiešaná. K tomuto roztoku je pridaných 675 xil. Zn-leptínovej suspenzie (100 mg/ml) a zmes je dôkladne miešaná. Do tejto zmesi je dôkladne zamiešaných 24 /il suspenzie IM CaCO₃ a 70 jul roztoku 1,68M á-glukonolaktónu. 0,1 ml konenčnej zmesi je naliaté do vnútrajšku eppendorfovej skúmavky a ponechané cez noc v 4° C gelovatieť. Po nočnom uskladnení bolo uskutočnené in vitro uvoľnenie v lOmM histidínovom pufri, pH 7,4. Liaty etylesteralginátový gél s 15 % (mol.) stupňom esterifikácie prejavuje malé počiatočné pulzné uvoľnenie a predĺžené uvoľňovanie leptínu vykazujúce 65 % uvoľnenie počas štyroch dní.

·· ······ • · · · · · • ······ · · • · · · · · ··· · ·· ·· • · ··

Príklad 5

Nasledujúci príklad ukazuje prípravu etylesteralginátového DE = 30 % (mol.)) gélu obsahujúceho proteínové liečivo (GCSF) a in vitro predĺžené uvoľňovanie proteinu z tohot gélu.

K 0,5 ml roztoku 2,39 % etylesteralginátu (30 % (mol.)) je pridaných 100 jul 0,lM acetátového pufru (pH 4,5), 104 jul GCSF (48,2 mg/ml, HCI ph 3) a 246 ml destilovanej vody. Zmes je dobre premiešaná. Do tejto zmesi je dôkladne zamiešané 10 >ul suspenzie IM CaHPO^ a 40 ,ul roztoku 1,68M <í-glukonolaktónu. 0,2 ml konečnej zmesi sú naliate do vnútrajšku eppendorfovej skúmavky a ponechané cez noc v 4° C gelovatieť. Po nočnom uskladnení gélu bolo uskutočnené in vitro uvoľnenie v 10mM Tris pufri, pH 7,5. Liaty etylesteralginátový gél s 30 % (mol.) stupňom esterifikácie prejavuje menej ako 5 % počiatočné pulzné uvoľnenie a predĺžené uvoľňovanie leptínu vykazujúce 20 % uvoľnenie počas jedného dňa a 40 % uvoľnenie počas 2 dní.

Príklad 6

Nasledujúci príklad ukazuje prípravu etylesteralginátového (DE = 30 % (mol.)) gélu obsahujúceho proteínové liečivo (GCSF) a in vitro predĺžené uvoľňovanie proteinu z tohoto gélu.

Tento príklad je uskutočnený podobným postupom, aký je popísaný v príklade 5, okrem toho, že etylester je nahradený benzylesteralginátom. Esteralginát gelovatí počas doby nočného uloženia.. Benzylesteralginátový gél s 30 % stupňom esterifikácie prejavuje menej ako 5 % počiatočné pulzné uvoľnenie a predĺžené uvoľňovanie leptínu vykazujúce 40 % uvoľnenie počas jedného dňa a 80 % uvoľnenie počas 2 dní.

• · ·· ···· ·· ··· ·· · · · · • ···· · · · · · · · • · ····· ··· · ·· ·· ·· ·

Príklad 7

Tento príklad ukazuje prípravu perál z etylesteralginátu.

Gélové perly sú pripravené pridávaním roztoku 2 % esteralginátu po kvapkách do roztoku lOOmM chloridu vápenatého (destilovaná voda alebo pufor IM Tris HCl, pH 7,0). Vytvorené perly sú premyté destilovanou vodou alebo pufrom. Perly sú pripravené s použitím či 30 % alebo 50 % stupňom esterifikácie.

Príklad 8

Tento príklad ukazuje prípravu esteralginátových perál obsahujúcich leptín.

Perly sú pripravené pridávaním roztoku 25 mg/ml leptínu v 2 % etylesteralginátu (Tris HCl, pH 8,7) po kvapkách do roztoku lOOmM chloridu vápenatého a 25mM chloridu zinočnatého. Perly sú pripravené s použitím 30 % stupňa esterifikácie. Perly vykazujú predĺžené uvoľňovanie leptínu in vitro.

Príklad 9

Tento príklad ukazuje rozpad (alebo degradáciu) molekúl esteralginátov s vysokou molekulovou hmotnosťou v pufroch s neutrálnym fyziologickým pH.

% roztok esteralginátu je rozpustený či vo fosfátovom pufri (0,IM fosfát sodný, pH 6,8) alebo v O,1M Tris pufri (pH 7,0) a inkubovaný v 37° C. Rozpad molekulovej hmotnosti je určovaný meraním znižovania viskozity roztoku (Brookfield, 25° C) vo vybratých časových intervaloch. Bolo objavené, že nemodifikovaný alginát sodný je relatívne stabilný, pretože jeho viskozita sa znížila iba o 5 % počas 8 dní (fosfátový pufor), ale u etyl- a benzylesterov kyseliny algínovej (DE = • · ·· ···· ·· ·· 9 · · ···· • · · ··· · » • ···· e · · · · · · • · ······ ··· · ·· ·· ·· ·

- 33 30 %) viskozita poklesla o 35 % počas 8 dní v rovnakom pufri. Stupeň degradácie esterov kyseliny algínovej je tiež závislý na stupni esterifikácie, napríklad u etylesteru nižšieho stupňa esterifikácie (DE = 15 %) viskozita poklesla o 25 % počas 8 dní. Teda rozpad molekulovej hmotnosti má priamy vzťah ku stupni esterifikácie.

Príklad 10

Tento príklad ukazuje in vivo degradáciu (alebo postupný úbytok) esteralginátových hydrogélov bez proteínu a hydrogélov obsahujúcich proteín.

Esteralginátové gély sú pripravené podobným spôsobom aký je popísaný v príklade 3, ale konečná zmes je nabratá do striekačky a ponechaná gelovatieť v striekačke v 4° C cez noc. Potom je in j ikované 10 jtil gélu subkutánne do zadnej časti krku myší (Charles River, samice staré 12 týždňov, BDF1, 20 g, 5 myší v skupine) a miesto je periodicky chirurgicky vyšetrované na rôznych členoch skupiny.

Pri použití etyl- a benzylesteralginátové materiály s DE = 30 % ukazujú výsledky štúdie s jedným miestom injekcie, že esteralginátový hydrogél vymizne počas 2 týždňov. Pri použití etylesteralginátového gélu s DE = 15 % sa gély vyskytujú ešte 30. a 61. deň, ale majú menšiu veľkosť. Pri použití etylesteralginátového gélu s DE = 5 % sa gély vyskytujú ešte

30. a 61. deň, s malým zmenšením veľkosti. Pri použití nesubstituovaného alginátu sodného pretrváva gél relatívne bez zmeny po 61. dni.

Rýchlosť úbytku esteralginátových gélov s proteínom alebo bez proteínu je rovnaká.

• * ······ ·· ··· · · · ··· ······· · ··· · · • · · · · · ··· ··· · ·· ·« ·· ·· ·

Príklad 11

Tento príklad poskytuje dáta o strate hmotnosti a farmakokinetická dáta pre esteralginátové hydrogély obsahujúce leptín u laboratorného potkana.

Esteralginátové gély sú pripravené podobným spôsobom aký je popísaný v príklade 4, ale konečná zmes je nabratá do striekačky a ponechaná gelovatieť v striekačke v 4° C cez noc. Potkanom je podaná dávka ako bolus 0 mg/kg (kontroly) a 100 mg/kg, potom sú sedem dní sledované krvné hladiny a úbytok hmotnosti.

Výsledky ukázali : esteralginát s DE = 5 % (mol.) prejavoval rovnomernú krvnú hladinu - 2000 ng/ml po 3 dni, potom hladina klesla na 2 ť 3 ng/ml po ďalšie 3-4 dni, esteralginát s DE =15 % (mol.) prejavoval rovnomernú krvnú hladinu r-' 2000 ng/ml po 2 dni, potom hladina klesla na 2 3 ng/ml v 5 dňoch, esteralginát s DE = 30 % (mol.) prejavoval rovnomernú krvnú hladinu X 2000 ng/ml 1 deň, ktorá sa znížila na 2 r-⁷ 3 ng/ml v 4 dňoch, krvná hladina suspenzie Zn-leptínu vrcholila za 12 hodín, a potom sa znížila na 1-2 ng/ml v 6 dňoch. U všetkých zvierat sa prejavila strata hmotnosti ukazujúca, že Zn-leptín je aktívny.

Výsledky tiež ukázali, že inkorporácia Zn-leptínu do etylesteralginátových gélov (DE =5 % (mol.) a 15 % (mol.)) temer zdvojnásobila (faktor 1,8 - 1,9) oblasť pod krivkou (AUC) Zn-leptínu, čo svedčí pre zdvojenie biologickej dostupnosti, a použitie etylesteralginátového gélu (DE = 30 % (mol.)) ukázalo rovnakú biologickú dostupnosť Zn-leptínu, na základe

AUC.

Claims (30)

1. Prípravok s predĺženým uvoľňovaním s oneskoreným gélom vyznačujúci sa tým, že obsahuje :

I

a) hydrofílny polymér,

b) biologicky aktívne agens, a

c) aspoň jeden naviazaný polyvaletný kovový iont, pričom gél je biologicky odbúrateľný.

2. Prípravok s predĺženým uvoľňovaním podľa nároku 1 vyznačujúci sa tým, že naviazaný polyvalentný kovový iont je zmes naviazaného a nenaviazaného polyvalentného iontu.

3. Prípravok s predĺženým uvoľňovaním s oneskoreným gélom podľa nároku 1 vyznačujúci sa tým, že ďalej obsahuje excipienty na stabilizáciu biologicky aktívneho agens alebo hydrofílneho polyméru.

4. Prípravok podľa nároku 1 vyznačujúci sa tým, že naviazaný polyvalentný kovový iont je soľ vybratá zo skupiny obsahujúcej acetáty, fosfáty, laktáty, tartráty, citráty, chloridy, uhličitany alebo ich hydroxidy.

5. Prípravok podľa nároku 4 vyznačujúci sa tým, že kovový iont je vybratý zo skupiny obsahujúcej mangán, stroncium, železo, horčík, vápnik, báryum, meď, hliník alebo zinok.

6. Prípravok podľa nároku 5 vyznačujúci sa tým, že kovový iont je vápnik.

00 0000 • · · • · · • · · ·

00 ·· • · · • · 0

00 00 0

7. Prípravok podľa nároku 1 vyznačujúci sa tým, že darca protónu je z kyselého zdroja.

8. Prípravok podľa nároku 7 vyznačujúci sa tým, že kyselý zdroj je vybratý zo skupiny obsahujúcej pufre, estery, pomaly sa rozpúšťajúce kyseliny alebo laktóny.

9. Prípravok podľa nároku 1 vyznačujúci sa tým, že hydrofíIny polymér je polyaniont.

10.Prípravok podľa nároku 1 vyznačujúci sa tým, že hydrofílny polymér je polysacharid.

11. Prípravok podľa nároku 10 vyznačujúci sa tým, že polysacharid je kyselý polysacharid.

12. Prípravok podľa nároku 11 vyznačujúci sa tým, že polysacharid je alginát.

13. Prípravok podľa alginát obsahuje aspoň 30 % nároku 12 gulurónovej vyznačujúci kyseliny.

sa tým, že

14. Prípravok podľa nároku 12 vyznačujúci sa tým, že alginát tvorí aspoň 0,05 % (hmotnostných).

15. Prípravok podľa nároku 1 vyznačujúci sa tým, že biologicky aktívne agens obsahuje proteín a prípravok preukazuje zlepšenú biologickú dostupnosť.

·· ···· ·· • · · · · · • · · · · · · • · · · · · · ·· ·· ·· ·· ·

16. Prípravok podľa nároku 15 vyznačujúci sa tým, že obsah proteínu je aspoň 0,001 mg/ml.

17. Prípravok podľa nároku 15 vyznačujúci sa tým, že proteín je vybratý zo skupiny obsahujúcej hemopoetické faktory, faktory stimulujúce kolónie, faktory pôsobiace proti obezite, rastové faktory, trofické faktory a protizápalové faktory.

18. Prípravok podľa nároku 15 vyznačujúci sa tým, že proteín je vybratý zo skupiny obsahujúcej leptín, G-CSF, SCF, BDNF, GDNF, NT3, GM-CSF, IL-lra, IL2, TNF-bp, MGDF, OPG, interferóny, erytropoetín, KGF, inzulín a ich analógy alebo deriváty.

19. Prípravok podľa biologicky aktívne agens agens.

nároku 1 vyznačujúci sa tým, že je komplexované biologicky aktívne

20. Prípravok podľa nároku 19 vyznačujúci sa tým, že komplexované biologicky aktívne agens je precipitovaný proteín.

21. Prípravok podľa nároku 20 vyznačujúci sa tým, že precipitovaný proteín je precipitát zinok-leptínu.

22. Spôsob výroby prípravku s oneskoreným gélom s predĺženým uvoľňovaním, pričom gél je biologicky odbúrateľný, vyznačujúci sa tým, že spôsob zahŕňa kroky :

a) zmiešanie biologicky aktívneho agens a hydrofílneho polyméru v rozpúšťadle za vzniku prvej zmesi, • ·· ···· ·· • · · · · · · • · · · · · ··· ··· · ·· ·· ·· ···

b) primiešanie aspoň jedného naviazaného polyvalentného kovového iontu k prvej zmesi za vzniku druhej zmesi.

23. Spôsob podľa nároku 22 vyznačujúci sa tým, že ďalej obsahuje krok

c) primiešanie k druhej zmesi aspoň jedného donoru protónov schopného uvoľnenia naviazaného polyvalentného kovového iontu.

J

24. Spôsob podľa nároku 22 vyznačujúci sa tým, že prvá zmes je koncentrovaná pred primiešaním donoru protónov alebo naviazaného polyvalentného kovového iontu.

25. Spôsob podľa nároku 22 vyznačujúci sa tým, že naviazaný polyvalentný kovový iont je soľ vybratá zo skupiny obsahujúcej acetáty, fosfáty, laktáty, tartráty, citráty, chloridy, uhličitany alebo ich hydroxidy.

26. Spôsob podľa nároku 22 vyznačujúci sa tým, že uvedený spôsob zaisťuje v podstate konštantnú krvnú hladinu biologicky aktívneho agens po časové obdobie u pacienta.

27. Prípravok podľa nároku 24 vyznačujúci sa tým, že kovový iont je vybratý zo skupiny obsahujúcej mangán, stroncium, železo, horčík, vápnik, báryum, meď, hliník alebo zinok.

28. Prípravok podľa nároku 26 vyznačujúci sa tým, že kovový iont je vápnik.

• · ···· ·· ···· • · · • · · • · · · • · · · ·· ·· ·· · • · ·· • · · • · · • · · ·· ·· ·

- 39

29. Prípravok podľa nároku 23 vyznačujúci sa darca protónu je z kyselého zdroja.

30. Prípravok podľa nároku 28 vyznačujúci sa pomaly sa rozpúšťajúca kyselina je vybratá zo obsahujúcej pufre, estery, pomaly sa rozpúšťajúce tým, že tým, že skupiny kyseliny alebo laktóny.

31. Prípravok podľa nároku kyselý zdroj je J-glukonolaktón. 20 vyznačujúci sa tým, že 32. Prípravok podľa nároku hydrofílny polymér je polyaniont. , 22 vyznačujúci sa tým. že 33. Prípravok podľa nároku hydrofílny polymér je polysacharid. 22 vyznačujúci sa tým. že 34. Prípravok podľa nároku 32 vyznačujúci sa tým. že

polysacharid je kyselý polysacharid.

35. Prípravok podľa nároku polysacharid je alginát. 33 vyznačujúci sa tým, že 36. Prípravok podľa nároku 34 vyznačujúci sa tým. že alginát obsahuje aspoň 30 % gulurónovej kyseliny. 37. Prípravok podľa nároku 34 vyznačujúci sa tým, že

alginát tvorí aspoň 0,05 % (hmotnostných).

·· ···· ·· • · · · · ·

38. Prípravok podľa nároku 22 vyznačujúci sa tým, že biologicky aktívne agens obsahuje proteín.

• · · · · · • · · · · · ·· ·· ·· · í 39. Prípravok podľa nároku 37 vyznačujúci sa tým, že obsah proteínu je aspoň 0,001 mg/ml.

*

40. Prípravok podľa nároku 37 vyznačujúci sa tým, že proteín je vybratý zo skupiny obsahujúcej hemopoetické faktory, faktory stimulujúce kolónie, faktory pôsobiace proti obezite, rastové faktory, trofické faktory a protizápalové faktory.

41. Prípravok podľa nároku 37 vyznačujúci sa tým, že proteín je vybratý zo skupiny obsahujúcej leptín, G-CSF, SCF, BDNF, GDNF, NT3, GM-CSF, IL-lra, IL2, TNF-bp, MGDF, OPG, interferóny, erytropoetín, KGF, inzulín a ich analógy a deriváty.

42. Prípravok podľa nároku 22 vyznačujúci sa tým, že biologicky aktívne agens je komplexované biologicky aktívne agens. 43. Prípravok podľa nároku 41 vyznačujúci sa tým, že

komplexované biologicky aktívne agens je precipitovaný proteín.

44. Prípravok podľa nároku precipitovaný proteín je precipitát

42 vyznačujúci zinok-leptín.

sa tým, že • · ···· ·· ···· • fl • · · · · · • · · · fl fl · · · · · • · fl · fl · • fl ·· ·· ·

- 41 45. Spôsob podľa nároku 22 vyznačujúci sa tým, že ďalej obsahuje krok izolácie prípravku s predĺženým uvoľňovaním.

46. Prípravok s predĺženým uvoľňovaním vyznačujúci sa tým, že bol vyrobený spôsobom podľa nárokov 22 alebo 44.

47. Farmaceutický prípravok vyznačujúci sa tým, že obsahuje prípravok s predĺženým uvoľňovaním podľa nárokov 1, 2, 3 alebo 45 vo farmaceutický prijateľnom nosiči, riedidle alebo adjuvans.

48. Farmaceutický prípravok podľa nároku 46 vyznačujúci sa tým, že prípravok je v injekčnej striekačke.

49. Spôsob indikovanej liečby vyznačujúci sa tým, že sa lieči prípravkom s predĺženým uvoľňovaním podľa nárokov l, 2, 3, alebo 45 vo farmaceutický prijateľnom nosiči, riedidle alebo adjuvans.

50. Spôsob liečby chorobného stavu vybratého zo skupiny obsahujúcej nadmernú hmotnosť, diabetes, vysokú hladinu krvných lipidov, arteriálnu sklerózu, arteriálne pláty, redukciu alebo prevenciu tvorby žlčových kameňov, nedostatočnú slabú tkanivovú hmotu, nedostatočnú citlivosť na inzulín, a modzgovú mŕtvicu, vyznačujúci sa tým, že používa prípravok s predĺženým uvoľňovaním podľa nárokov 1,2, 3 alebo 45 vo farmaceutický prijateľnom nosiči, riedidle alebo adjuvans, pričom biologicky aktívne agens je leptin, jeho analóg alebo derivát.

• 4*4 ·· ···· ··

4 4 4 · · · ··· 4 4 4 4 4 • 4 · 4 4 4 4

44 44 44 ·44

51. Spôsob liečby chorobného stavu vybratého zo skupiny obsahujúcej deficit hemopoetických buniek, infekcií a neutropenií vyznačujúci sa tým, že používa prípravok s predĺženým uvoľňovaním podľa nárokov 1, 2, 3 alebo 45 vo farmaceutický prijateľnom nosiči, riedidle alebo adjuvans, pričom biologicky aktívne agens je G-CSF, jeho analóg alebo derivát.

52. Spôsob liečby zápalu vyznačujúceho sa tým, že používa prípravok s predĺženým uvoľňovaním podľa nárokov 1, 2, 3, alebo 45 vo farmaceutický prijateľnom nosiči, riedidle alebo adjuvans, pričom biologicky aktívne agens je IL-lra, jeho analóg alebo derivát.

53. Prípravok s predĺženým uvoľňovaním vyznačujúci sa tým, že obsahuje :

a) hydrofíIny polymér,

b) biologicky aktívne agens, a

c) aspoň jedno precipitačné činidlo, pričom biologicky aktívne agens je spoločne precipitované s * hydrofílnym polymérom, pričom prípravok je vo forme gélovej častice a častica je biologicky odbúrateľná.

54. prípravok podľa nároku 52 vyznačujúci sa tým, že precipitačné činidlo je vybraté zo skupiny obsahujúcej polyvalentný kovový iont alebo soli, acetáty, citráty, chloridy, uhličitany alebo ich hydroxidy.

B B BB BBBB BB

BBB B B BBBB

B BBBB B B B BBB B

B B B B B B B B

BBB B BB BB BB

55. Prípravok podľa nároku 53 vyznačujúci sa tým, že kovový iont je vybratý zo skupiny obsahujúcej mangán, stroncium, železo, horčík, vápnik, báryum, meď, hliník alebo zinok.

J / 56. Prípravok podľa nároku 52 vyznačujúci sa tým, že precipitačné činidlo je vybraté zo skupiny obsahujúcej zinok, vápnik alebo ich kombináciu.

57. prípravok podľa nároku 52 vyznačujúci sa tým, že hydrofílny polymér je polysacharid.

58. Prípravok podľa nároku 56 vyznačujúci sa tým, že polysacharid je alginát.

59. Spôsob výroby prípravku s predĺženým uvoľňovaním vyznačujúci sa tým, že zahŕňa kroky :

a) rozpustenie biologicky aktívneho agens a hydrofílneho polyméru v rozpúšťadle za vzniku prvej zmesi,

b) rozpustenie aspoň jedného precipitačného činidla v rozpúšťadle za vzniku druhej zmesi,

c) spoločná precipitácia biologicky aktívneho agens s hydrofílnym polymérom za vzniku spoločne precipitovanej gélovej častice, pričom častica je biologicky odbúrateľná.

60. Spôsob podľa nároku 58 vyznačujúca sa tým, že ďalej obsahuje krok izolácie spoločnej precipitovanej častice.

• · · ···· ·· ·· · · · 9 9 9

9 9999 99 9 9 9 9 9

9 9 9 9 9 9 9 9

999 9 99 99 99

61. Prípravok s predĺženým uvoľňovaním vyznačujúci sa tým, že je vyrobený spôsobom podľa nároku 59.

j

62. Farmaceutický prípravok podľa nároku 52 vyznačujúci sa »

* tým, že prípravok je vo farmaceutický prijateľnom nosiči, riedidle alebo adjuvans.

63. Spôsob indikovanej liečby vyznačujúci sa tým, že sa lieči prípravkom s predĺženým uvoľňovaním podľa nárokov 52 vo faramceuticky prijateľnom nosiči, riedidle alebo adjuvans.