SK15442000A3 - Kompozícia obsahujúca l-karnitín alebo alkanoyl-l-karnitín a nikotínamid adenín dinukleotid a/alebo nikotínamid adenín dinukleotid fosfát - Google Patents

Description

Oblasť techniky

Tento vynález sa týka kompozície, ktorá vykazuje pôsobenie na metabolizmus ako aj na vykonávanie energie kostrových svalov a na reguláciu pohybu svalov a koordináciu na centrálnej úrovni prostredníctvom zosilnenia účinkov na úrovni periférnych svalov aj centrálneho nervového systému. Podľa toho môže kompozícia prijať formu a pôsobiť ako diétny doplnok alebo aktuálny liek v závislosti na podpornom alebo preventívnom pôsobení, alebo výslovne terapeutickom pôsobení, pričom kompozícia sa využíva vo vzťahu k jednotlivcom, ktorým je podávaná.

Doterajší stav techniky

Obzvlášť ako diétny doplnok alebo preventívny prostriedok je kompozícia podľa vynálezu vhodná najmä pre uľahčenie adaptácie kostrových svalov jednotlivcov prispievajúc k intenzívnej, dlhodobej fyzickej aktivite a zmierneniu pocitu svalovej únavy a vyčerpania u astenických osôb, aj pri celkovej neprítomnosti akejkoľvek formy viac alebo menej intenzívnej fyzickej aktivity.

Každý, kto vykonáva športové aktivity, či už profesionálne alebo ako amatér, si praje v krátkom čase dosiahnuť a potom udržovať čo možno najviac maximálny stupeň adaptácie kostrových svalov pre zvládnutie intenzívnej fyzickej aktivity po čo najdlhšie obdobie. Hľadanie tohto optimálneho stavu telesnej kondície môže viesť k nenáležitému používaniu liečiv, najmä steroidov. Je dobre známe, že také liečivá môžu zvyšovať syntézu proteínov a následne napomáhať rastu svalovej hmoty vo väčšej miere než môže byť dosiahnutá tréningom alebo diétou. Použitie týchto liečiv je však nedovolené a nesporne škodlivé, ak je vykonávané v profesionálnom športe.

Jasne potom jediná cesta pre dosiahnutie vyššie uvedeného cieľa je riadne absolvovať príslušný tréningový program spojený s príslušnými diétami znásobený prostredníctvom dodania príslušných diétnych doplnkov.

Pod pojmom „asténia“ sa tu rozumie difúzna skupina nešpecifických syndrómov typická pre stresové životné podmienky obvykle prevažujúce najmä vo väčšine mestských a prímestských častí a v zastavaných oblastiach a zahrňujúca obrovské množstvá ľudí bez ohľadu na faktory vzťahujúce sa vek a sociálny stav, vyznačujúce sa nedostatkom alebo stratou svalovej sily s ľahkou vyčerpanosťou a nezodpovedajúcou reakciou na podráždenia.

Keď sa použije výslovne terapeutické činidlo je jednou významnou aplikáciou kompozície podľa vynálezu liečba syndrómu chronickej vyčerpanosti a Parkinsonovej choroby a syndrómu podobnému idiopatickému parkinsonizmu spôsobenému podávaním nedovolených liečiv.

Syndróm chronickej vyčerpanosti (CFS), oficiálne po prvý raz popísaný v roku 1988 vAnnals of Internal Medicíne, je ochorením vyznačujúcim sa stupňom únavy nevysvetleným nejakou inou príčinou, často oveľa intenzívnejším než sa vyskytuje pri veľmi vážnych ochoreniach, ako sú tumory a AIDS, a zoslabujúcim do takej miery, že spôsobuje viac než 50 % zníženie pracovnej aktivity a normálnych sociálnych vzťahov v trvaní dlhšom než 6 mesiacov.

Podľa kritéria načrtnutého v Annals of Internal Medicine (december 1994) na diagnostikovanie syndrómu chronickej vyčerpanosti musia byť u pacienta prítomné trvalo po dobu 6 mesiacov aspoň štyri z nasledujúcich ôsmych symptómov:

1. neuropsychologické poruchy ako je strata pamäti, neprimeraná podráždenosť, mentálna konfúzia, ťažkosti pri myslení a koncentrácii;

2. pharyngitída;

3. palpačne bolestivé cervikálne alebo axiláme lymfatické uzliny;

4. bolesti svalov;

5. migračná bolesť kĺbov avšak bez akéhokoľvek opuchnutia kĺbov;

6. celkové bolesti hlavy rôzneho typu, charakteristická a prudká bolesť pri každej bolesti hlavy u pacienta pred ochorením;

7. poruchy spánku vyznačujúce sa insomniou alebo hypersomniou;

8. celková vyčerpanosť a malátnosť trvajúca 24 hodín alebo viac po fyzickej aktivite na úrovni, ktorá bola predtým ľahko tolerovaná.

Je dobre známe, že Parkinsonova choroba je vo všeobecnosti považovaná za idiopatický stav, symptómy parkinsonizmu môžu vychádzať z nadmerného prijatia liečiv, ako je fenotiazin. butyrofenóny a rezerpín. Nedávno bol skúmaný parkinsonizmus pri nadmernom prijatí liekov ich injekčným podaním so zlúčeninami podobnými meperidínu, zvýšená syntéza ktorých bola vytvorená 1 -metyl-4-fenyl1,2,3,6-tetrahydropyridínom (MPTP) a 1-metyl-4-fenyl-propoxy-piperidínom (MPPP).

V skutočnosti 1-metyl-4-fenyl-1,2,3,6-tetrahydropyridín (MPTP alebo NMPTP) a 1-metyl-4-fenyl-propoxy-piperidín (MPPP) selektívne ničia dopaminergické neuróny v subtantia nigra a vyvolávajú syndróm u človeka a iných primátov než je človek, ktorý môže byť úplne podobný idiopatickej Parkinsonovej chorobe pokiaľ ide o jej klinické, patologické a biochemické aspekty a jej farmakologické odpovede.

Podobnosť medzi idiopatickou Parkinsonovou chorobou a MPTP- vyvolaným parkinsonizmom je tak veľká, že bola stanovená ako postulát (Burns et al.: The neurotoxicity of 1-metyl-4-fenyl-1,2,3,6-tetrahydropyridine in the monkey and man. Can. J. Neur. Sci., 1J., n.1 (supplement), 166-168, February 1984), aby tento parkinsonizmus „mohol vytvárať viac než model. MPTP-vyvolaný parkinsonizmus predpokladá zdanlivú toxickú príčinu u Parkinsonovej choroby.“

Voľba terapie pre zvládnutie Parkinsonovej choroby je bežne založená na podávaní levo-dopa (L-dopa), metabolického prekurzora dopamínu, ktorý sám nie je schopný prechádzať krvnými bariérami v mozgu.

Keďže levo-dopa je extenzívne metabolizovaný predtým než je schopný dosiahnuť miesta pôsobenia v mozgu, má byť podávaný vo veľmi vysokých dávkach. L-dopa je teda podávaný spolu s cardidopa, inhibítorom dopadekarboxylázy, ktorý zabraňuje systémovému metabolizmu levo-dopa predtým než posledne uvedený dosiahne mozog.

Keď je levo-dopa podávaný samostatne, môžu sa vyskytnúť vedľajšie účinky ako napr. anorexia, nausea a vomitívna alebo ortostatická hypotenzia, ktoré sú však podstatne miernejšie, keď je podávaná aj carbidopa.

Po niekoľkých mesiacoch terapie s L-dopa sú však, aj pri spoločnom podávaní s dekarboxylačným inhibítorom, možné a časté ďalšie, veľmi nepríjemné vedľajšie účinky dyskinetické pohyby tváre, trupu a končatín. Začiatok takých pohybov indikuje vo väčšine prípadov, že dávka lieku dosiahla kritickú hodnotu, ktorá nesmie byť prekročená.

Potom je silne viditeľná potreba podporného / preventívneho / terapeutického činidla, ktoré ako výsledok svojej účinnosti, podstatnej netoxickosti a straty vedľajších účinkov, môže byť bezpečne použité takým širokým rozsahom užívateľov v prípadoch, kedy je jednoducho potrebný zodpovedajúci doplnok potravy a aj v prípadoch začiatku symptómov vyššie uvedených patologických stavov.

Podstata vynálezu

Tieto viaceré ciele - vytvorenie podporného, preventívneho a výslovne terapeutického činidla - sú dosiahnuté prostredníctvom kompozície podľa vynálezu, ktorá pozostáva, ako bude podrobne dalej popísané, z novej kombinácie obsahujúcej ako svoju základné zložku L-carnitín alebo nižší C2-C6 alkanoyl L-carnitín alebo ich farmakologicky prijateľné soli a nikotínamid adenín dinukleotid (NADH) alebo prekurzor NADH a/ alebo nikotínamid adenín dinukleotid fosfát, redukovaný tvar (NADPH).

Uplynulo veľa desaťročí od základného objavu (Fritz I. B.: The metabolic consequences of the effects of carnitine on long-chain fatty acid oxidation. Ed. F.C. Gran, New York, Academic Press, 1968, str. 39-63), že L-carnitín je špecifický v zohrávaní vitálnej fyziologickej úlohy ako nosič mastných kyselín s dlhým reťazcom naprieč vnútornou mitochondriálnou membránou do mitochondriálnej matrice, ktorá je miestom ich oxidácie a keďže primárny nedostatok L-carnitínu bol prvý raz označený (Engel and Angelini, Science, 1973, 179: 899-902) ako príčina niektorej, niekedy fatálnej, hoci mimoriadne sa vyskytujúcej formy myopatie (myopatia ukladania lipidov), bol to obrovský pokrok v našom poznaní patologických dôsledkov primárneho a sekundárneho nedostaku L-carnitínu, a opačne, terapeutickej a nutričnej hodnoty exogénneho dodávania L-carnitínu.

Carnitín je prítomný vo všetkých biologických tkanivách v relatívne vysokých koncentráciách ako voľný carnitín a nižších koncentráciách vo forme acylcarnitínov, ktoré sú metabolickými produktami reverzibilnej reakcie.

acyl CoA + carnitín acylcarnitín + CoASH katalyzovanej troma skupinami enzýmov, t.j. transferázami, ktoré sa medzi sebou líšia podľa ich špecifickosti k reakčným substrátom: skupina carnitín acetyl transferázy (CAT), ktorej substrátom sú acylové skupiny s krátkym reťazcom (ako je acetyl a propionyl); skupina carnitín oktanoyl transferázy (COT), ktorej substrát zahrňuje acylové skupiny so stredne dlhým reťazcom; a skupina carnitín palmitoyl transferázy (CPT), ktorej substrát zahrňuje acylové skupiny s dlhým reťazcom.

Dôležitá úloha carnitínu pri pomocnom metabolizme, s významným odkazom na jeho obmedzenú biosyntézu, slúži pre vysvetlenie toho, ako sa môže nedostatok carnitínu vyskytovať ako sekundárny prípad v rôznych patologických funkciách týkajúcich sa rôznych orgánov a systémov. Rozšírenie klinického spektra sa odráža vo zvýšení počtu terapeutických možností týkajúcich sa nedostatku tejto prírodnej zlúčeniny; celý rozsah a dosah nedostatku bol odhalený vtedy, keď bolo pozorované, že náhradná terapia L-carnitínom dramaticky obracia klinický obraz u pacientov trpiacich myopatiou ukladania lipidov. Administrácia pre potraviny a liečivá (FDA) nesúhlasí iba so zaradením L-carnitínu medzi „osamelé liečivá“, ale tiež ho zahrňuje do zoznamu „život zachraňujúcich“ liečiv.

Napredovanie našich poznatkov o patologických dôsledkoch primárneho a sekundárneho nedostatku L-carnitínu bolo doprevádzané veľmi podstatným vzostupom vedeckých a patentových publikácií hlavne sústredených na L-carnitín a do značne menšej miery na niektoré acylcarnitíny.

Obmedzujúc sa na čiastočný prieskum patentovej situácie bolo navrhnuté použitie L-carnitínu v kardiovaskulárnej oblasti na liečbu srdcových arytmií a nedostatočné prekrvenie srdca (US 4 656 191), ischemickú chorobu srdca a srdcovú anoxiu (US 4 649 159); v oblasti porúch metabolizmu lipidov na liečbu hyperlipidémií a hyperlipoproteinémií (US 4 315 944) a na normalizáciu pomerov HDL:LDL:VLDL, ktoré nie sú v norme (US 4 255 449); v oblasti celkovej parenterálnej výživy (US 4 254 147 a US 4 320 145); v nefrológii proti myasténii a pri začiatku svalových kŕčov spôsobených stratami carnitínu pri dialýze u pacientov s chronickou urémiou podrobujúcich sa pravidelnej hemodialyzačnej liečbe (US 4 272 549); proti toxickým účinkom vyvolaných protirakovinovými činidlami ako je adriamycín (US 4 400 371 a US 4 713 370) a halogenovanými anestetikami ako je halothán (US 4 780 308); na liečbu venostáz (US 4 415 589); proti zhoršeniu veľkého počtu biochemických a správania sa týkajúcich parametrov u starších osôb (US 4 474 812); na normalizáciu hladín faktora triglyceridov a hladín faktora tumorovej nekrózy (TNF-α) u pacientov s AIDS a u asymptomatických HIVpozitívnych pacientov.

Bolo tiež navrhnuté použitie L-carnitínu v kombinácii s inými aktívnymi zložkami, ako je kombinácia L-carnitínu s koenzýmom Q10 so širokým spektrom metabolického / antisklerotického pôsobenia (US 4 599 232).

Pokiaľ ide o alkanoyl L- carnitín, použitie acetyl L-carnitínu je známe pri liečbe ochorení centrálneho nervového systému, najmä Alzheimerovej choroby (US 4 346 107) a pri liečbe diabetickej neuropatie (US 4 751 242), zatiaľ čo

L-carnitín bol navrhnutý na liečbu periférnej vaskulopatie (US 4 343 816) a nedostatočného prekrvenia srdca (US 4 194 006).

Rovnakým dielom komplexu je aktivita vykazovaná nikotínamid adenín dinukletidovým koenzýmom (NADH), ktorého úloha u energetickej hladiny je dobre známa.

Jeho funkcia v respiračnom reťazci je podstatná pre prenos elektrónov v mitochondriálnom systéme a v jednotke ATP. Dve NADH dehydrogenázy boli izolované z vnútornej mitochondriálnej matrice. Jedna z nich s nižšou molekulovou hmotnosťou (mol. hmotn. 78 000), ktorá je pravdepodobne podjednotkou väčšieho komplexu (mol. hmotn. asi 300 000) vyzerá ako prirodzene sa vyskytujúca funkčná forma tohto systému.

Rôzne komplexy nachádzajúce sa vo vnútornej mitochondriálnej membráne vytvárajú reťazec oxidačných systémov, ktoré prechádzajú pod názov reťazec cytochrómu a koenzýmu Q10 a umožňujú elektrónom, aby boli prenášané zo systému s nižším potenciálom do systému s vyšším potenciálom pri použití kyslíka a jednotky ATP. To je v skutočnosti od respiračného reťazca, že sa získava od oxidačnej fosforylácie, ktorá vedie od NADH k vytvoreniu ATP.

NADH spolu s komplexmi cytochrómu a koenzýmu Q10 sú prvky potrebné pre transformáciu energie k ATP a NADH, čo je považované za začiatok tohto reťazca u hlavného podmieňujúceho prvku v tomto procese.

Enzymatická funkcia NADH celkom zistiteľná u reakcie energetického typu v jednotke ATP, ale nedávno bolo ukázané, že NADH pôsobí ako koenzým potrebný u quinodihydroxy-pteridín reduktázy (DHPR), aby u nej postupovala biosyntéza H4biopterinu.

Možnosť stimulovania biosyntézy H4-biopterinu a zvyšovanie jeho koncentrácie v mozgu bolo nedávno navrhnuté ako spôsob zvyšovania L-dopa a teda dopamínu, ktorého nedostatky na nachádzajú u chorôb ako parkinsonizmus, tieto nedostatky sú považované ako zapríčiňujúce parkinsonizmovú neuropatiu. Ak L-dopa môže pôsobiť ako prekurzor dopamínu a potom sa metabolický transformuje na posledne uvedenú látku, to isté sa nestane v prípade tyrozínu, ktorý môže byť tiež považovaný za prekurzor schopný viesť k vytvoreniu L-dopa bez prítomnosti tyrozín hydroxylázy. Redukcia u tohto enzýmu bola v skutočnosti zistená u ľudí trpiacich parkinsonizmom na úrovni subtancia nigra. Redukcia u hydroxytyrozínu by mohla byť naviac doprevádzaná so silnou redukciou u H4-biopterínu, konezýmu potrebného pre syntézu hydroxytyrozínu. Keďže H4-biopterín neprechádza krvnými bariérami v mozgu a priame podávanie H4-biopterínu teda nie je možné, zdá sa byť naopak užitočným použiť stimuláciu vytvorenia H4-biopterínu podávaním koenzýmu potrebného pre aktivitu quinodihydroxy-pteridín reduktázy (DHPR) u jednotky H4biopterínu, o ktorého funkcii je známe, že ju vykonáva NADH. Podávanie NADH teda aktivuje DHPR vedúce k vytvoreniu H4-biopterínu potrebného obratom pre aktivovanie tyrozín hydroxylázy tak, aby sa dosiahla novosyntéza dopa.

Klinické pokusy na báze intravenózneho podávania NADH jednotlivcom trpiacim Parkinsonovou chorobou potvrdzujú platnosť teoretických predpokladov s

načrtnutých vyššie, ukazujúc výrazné zlepšenie symptómov Parkinsonovej choroby u subjektov takto liečených.

Rozsiahle porovnateľné výsledky boli dosiahnuté u orálneho podávania NADH, pri ktorom boli podávané po dlhšiu dobu sa uvolňujúce gastrointestinálne kapsule tak, aby sa vyhlo kyslému prostrediu žalúdka, ktoré môže viesť k rýchlej redukcii u hladín NADH.

Klinické zlepšenia u Alzheimerovej choroby a u syndrómu chronickej vyčerpanosti (CFS) boli tiež pri podávaní NADH zaznamenané (Birkmayer J.G., Annals Clin. Lb. Sci., 26, 1 1996).

Na základe vlastností zlúčenín popísaných vyššie bola stanovená možnosť interakcie medzi nimi prostriedkami sérií testov vykonaných na kombináciách Lcarnitínu alebo jeho alkanoylových derivátoch a NADH a/alebo NADPH. Prostriedkami týchto testov vykonaných na týchto nových kombináciách boli pozorované prekvapujúco neočakávané synergické interakcie medzi komponentmi kombinácií, ktoré oli absolútne nepredpovedateľné na základe našich farmakologických poznatkov o L-carnitíne alebo jeho alkanoylových derivátoch a NADH a NADPH.

Kompozícia podľa vynálezu zahrňuje v kombinácii nasledujúce komponenty :

a) L-carnitín alebo alkanoyl L-carnitín, v ktorom alkanoylová skupina s priamym alebo rozvetveným reťazcom má 2-8 atómov uhlíka, a prednostne 2-6 atómov uhlíka, alebo jednu z jeho farmakologicky prijateľných solí;

b) NADH alebo prekurzor NADH a/alebo NADPH; a

c) farmakologicky prijateľný excipient.

Prednostne prekurzorom NADH je nikotínamid.

Hmotnostný pomer a) ku b) je všeobecne v rozpätí od 1:0,01 do 1:1, a prednostnejšie by mal byť od 1:0,05 do 1:0,5, napríklad hmotnostný pomer môže byť 1:0,1.

Alkanoyl L-carnitín by mal byť prednostne vybraný zo skupiny obsahujúcej acetyl L-carnitín, propionyl L-carnitín, butyryl L-carnitín, valeryl L-carnitín a izovaleryl Lcarmtín. Acetyl L-carnitín a propionyl L-carnitín sú značne preferované.

Na účely tohto vynálezu sa rozumie, že L-carnitín, acetyl L-carnitín, propionyl L-carnitín a izovaleryl L-carnitín v týchto zlúčeninách sú vo forme vnútorných solí.

Pod farmakologicky prijateľnými soľami L-carnitínu alebo alkanoyl L-carnitínu sa rozumie akákoľvek ich soľ s kyselinou, u ktorých nevznikajú nežiadúce toxické alebo vedľajšie účinky. Tieto kyseliny sú dobre známe farmakológom a odborníkom vo farmácii.

Neobmedzujúcimi príkladmi takých solí sú: chorid, bromid, jodid, aspartát, kyselina aspartátová, citrát, kyselina citrónová, vínnan, fosfát, kyselina fosforečná, fumarát, kyselina fumárová, glycerofosfát, glukóza fosfát, laktát, maleát, kyselina maleinová, orotát, oxalát, kyselina šťavelová, kyselina sírová, trichlóracetát, trifluoracetát a metánsulfonát.

Zoznam farmakologicky prijateľných solí schválených FDA bol uvedený v Int. J. Pharm. 33, (1986), 201-217, ktorý je tu zahrnutý referenciou.

Kompozícia podľa vynálezu môže ďalej obsahovať vitamíny, koenzýmy, minerálne látky a antioxidanty.

Kompozícia podľa vynálezu v jednotkovej dávkovej forme obsahuje napríklad 100-500 mg a) L-carnitínu alebo alkanoyl L-carnitínu alebo ekvivalentné množstvo jednej z ich farmakologicky prijateľných solí a hmotnostné množstvo b) NADH alebo NADPH také, že hmotnostný pomer a) : b) je v rozpätí od 1:0,01 do 1.Ί, a prednostne od 1:0,02 do 1:0,2.

Pre zjednodušenie sa bude ďalej hovoriť len o kombinácii L-carnitínu a NADH, tým sa však rozumie, že kombinácie L-carnitínu a NADPH alebo vyššie uvedené

ΙΟ alkanoyl L-carnitíny a NADH a/alebo NADPH sú rovnako účinné, plne dosahujúce ciele tohto vynálezu.

Príklady uskutočnenia vynálezu

Toxikologické testy

U carnitínu a NADH je známe, že majú len obmedzenú toxicitu a dobrú schopnosť tolerancie. Tieto priaznivé vlastnosti boli potvrdené intravenóznym podávaním kombinácie do 100 mg/kg L-carnitínu a 5 mg/kg NADH potkanom a myšiam. V dlhodobých testoch na toxicitu bola orálne podávaná kombinácia 250 mg/kg L-carnitínu a 10 mg NADH dobre tolerovaná a nebola príčinou ani úmrtnosti alebo toxicity alebo netolerancie u liečených zvierat. Chemické vyšetrenia krvi a histologické vyšetrenia rôznych orgánov na konci liečby neodhalili žiadne abnormality v porovnaní s kontrolnými zvieratami, čím bola potvrdená dobrá tolerancia skúmanej kombinácie.

Testy na zvýšenie svalových enzýmov po dlhodobom výkone

Na stanovenie účinku carnitínu a NADH ako aj kombinácie týchto dvoch látok na koncentráciu mitochondriálnych enzýmov týkajúcich sa svalového výkonu boli vykonané testy na určenie, či aktivita týchto mitochondriálnych enzýmov v gastroknémovom svale potkanov podrobeným dlhodobému svalovému výkonu mohla byť zvýšená v porovnaní s kontrolnými zvieratami vzhľadom na väčšie energetické požiadavky nutné pri dlhodobej svalovej námahe. Ku koncu skupina potkanov Wistar bola podrobená svalovému cvičeniu ich umiestnením do prístroja Rotaroid (Basile, Como, Taliansko) s rýchlosťou 20 m/min po dobu 120 minút denne (Benzi G., J. Appl. Physiol., 38, 565, 1975). Aktivita svalového enzýmu bola stanovená po siedmich alebo po tridsiatich dňoch cvičenia bol izolovaný a homogenizovaný gastroknémový sval u každého potkana (Oscai L.B., J. Biol. Med., 245, 6968, 1971). Stanovené enzýmy boli citrát syntetáza, izocitrát dehydrogenáza a sukcinát dehydrogenáza.

Výsledky získané v týchto testoch ukázali, že kombinácia carnitínu a NADH bola schopná vyvolať veľmi výrazné zvýšenie enzýmovej aktivity po len siedmich dňoch cvičenia, zatiaľ čo pri tomto pozorovaní neboli zistené žiadne zmeny vyvolané ani carnitínom ani NADH podávaných samostatne v porovnaní s kontrolnými svalmi.

II

Silný synergický účinok tridsiatich dňoch cvičenia:	týchto dvoch produktov bol snáď	viac zjavný
Liečba	Počet dní	Citrát	Izocitrát	Sukcinát
	cvičenia	syntetáza	dehydrogenáza	dehydrogenáza
Kontrolné	0	20,9 ± 1,4	2,25 ± 0,31	3,70 ± 0,22
Kontrolné	7	22,1 ±1,6	2,30 ± 0,20	3,90 ±0,19
Kontrolné	30	29,9 ±2,1	3,33 ± 0,20	5,20 ± 0,30
Carmtín 250 mg/kg	0	20,8 ± 0,95	3,05 ±0,19	3,35 ± 0,35
Carnitín 250 mg/kg	7	22,6 ±1,9	2,85 ± 0,31	3,85 ±0,45
Camitín 250 mg/kg	30	30,1 ± 0,95	2,98 ±0,16	4,90 ± 0,33
NADH 10 mg/kg	0	21,5 ± 1,4	2,35 ±0,29	3,60 ± 0,21
NADH 10 mg/kg	7	30,5 ±2.5	3,65 ±0,55	4,15 ±0,45
NADH 10 mg/kg	30	33,6 ±2,1	3,55 ±0,36	5,40 ± 0,45
Carnitín 250 mg/kg +
NADH 10 mg/kg	0	21,4 ±1,9	2,15±0,18	3,80 ± 0,22
Carnitín 250 mg/kg +
NADH 10 mg/kg	7	47,7 ± 3,92	5,1 ±0,29	7,15 ±0,30
Carnitín 250 mg/kg +
NADH 10 mg/kg	30	75,9 ± 3,51	6,3 ±0,5	9,25 ± 0,65

(*)) Enzymatická aktivita je vyjadrená ako pmol substrátu použitého za min/g hmotnosti tkaniva

Testy na zvýšenie ATP koncentrácií po hypoxii v papilárnych svaloch králikov Tieto testy boli použité na stanovenie, či L-carnitín a NADH alebo ich kombinácia je schopná udržiavať koncentrácie ATP v papilárnom svale srdca králikov po vystavení králikov hypoxii, u ktorej je známe, že vedie k odčerpaniu tejto energetickej zlúčeniny. Testy boli vykonané na novozélandských králikoch, ktoré dostali intravenózne injekcie L-carnitínu (100 mg/kg) aj NADH (10 mg/kg) podávaných samostatne, ako aj kombinácie týchto dvoch látok denne po tri za sebou idúce dni.

Ďalšiu skupinu tvorila kontrolná skupina, ktorá nedostávala žiadnu liečbu. Ku koncu tretieho dňa liečby boli všetky zvieratá usmrtené, ich srdcia boli extrahované a časti papilárneho svalu, ktoré merali 1 mm v priemere a mali hrúbku 4,5 mm, boli izolované. Tkanivá takto izolované boli premyté v termostatickom kúpeli 100 % nasýteným roztokom kyslíka, Experimentálna hypoxia bola potom vytvorená zavedením do kúpeľa 100 % dusíka namiesto kyslíka. Obsah ATP papilárneho svalu bol analyzovaný použitím metódy popísanej Strehlerom B.L. (Strehler B.L., Methods in Enzymology III, New York Acad. Press, 871, 1957). Analýza bola vykonaná na vzorkách tkaniva udržovaných pri normálnom premývaní po dobu 90 minút a po dobe hypoxie tiež trvajúcej 90 minút.

Tieto testy ukázali, že koncentrácie ATP sa podstatne líšili u kontrolných zvierat a u zvierat liečených samostatným carnitínom alebo samostatným NADH U zvierat liečených kombináciou carnitínu a NADH bola zistená na druhej strane úplná ochrana proti redukcii ATP vyvolanej hypoxiou.

Tieto testy potom umožnili odhaliť schopnosť kombinácie L-carnitínu a NADH pre ochranu ATP prítomného v papilárnom svale proti redukcii vyvolanej hypoxiou do tej miery, ktorá sa nemohla dosiahnuť samostatným L-carnitínom alebo samostatným NADH, ale ktorá sa prekvapujúco môže dosiahnuť ich kombináciou.

Koncentrácia ATP (mól/g tkaniva)

Liečba	Pred hypoxiou	Po hypoxii
Kontrolné	1,54 ±0,31	0,40 ± 0,051
Carnitín 100 mg/kg	1,65 ±0,26	0,55 ± 0,031
NADH 10 mg/kg	1,60 ±0,30	0,65 ± 0,044
Carnitín 100 mg/kg + NADH 10 mg/kg	1,90 ±0,37	1,52 ±0,061

Testy na schopnosť L-carnitínu a NADH stimulovať tvorbu dopamínu

Tieto testy boli vykonané na kultúrach neuroblastomóvej bunky s bunkovou koncentráciou v rozpätí od 15-30 do 60 miliónov, s 200 pg NADH/ml alebo s 2 mg/ml L-carnitínu alebo s kombináciou týchto dvoch zložiek.

Vytvorenie dopamínu vyvolané NADH a L-carnitínom bolo analyzované HPLC podľa mayerovej metódy (Mayer G.S., Strong R.F., Current separation 4, 44, 1982) modifikovanej Jonssonom a Kellerom (Jonsson G., Holman H., Adams R. N., Central adrenalíne neurones. Ed. De Fuxe_pergamon Press, 59, 1980; Keller R., Oke A., Mefford L., Life Sciences, 19, 995, 1976). Výsledky týchto testov ukazujú, že pridanie NADH k bunkovej kultúre účinne vyvoláva zvýšenie vytvorenia dopamínu vzhľadom k počtu prítomných buniek.

Výrazne väčšie zvýšenie bolo však získané, ak samostatný L-carnitín, ktorý vytvára len veľmi jemný účinok, je pridaný k roztoku NADH. Synergický účinok je potom u týchto testov tiež značný.

Percentá zvýšenia syntézy dopamínu v kultúrach neuroblastómových buniek inkubovaných s NADH alebo s carnitínom ako funkcia počtu inkubovaných buniek (v miliónoch)

	Počet buniek	%	Počet buniek	%	Počet buniek	%
Liečba	(milióny)	zvýšenia	(milióny)	zvýšenia	(milióny)	zvýšenia
NADH 100 pg/ml	15	4,5	30	31,5	60	45,5
NADH 200 pg/ml	15	11,8	30	40,6	60	55,6
Carnitín 1 pg/ml	15	-	30	2,1	60	5,6
Carnitín 2 pg/ml	15	-	30	3,3	60	6,6
NaDH 100 pg/ml +
Carnitín 1 pg/ml	15	6,6	30	45,2	60	50,6
NADH 200 pg/ml +
NADH 100 pg/ml	15	18,4	30	56,4	60	70,5

MTPT (1-metyl-4-fenyl-1,2,3,6-tetrahydropyridín) test

Použitie MTPT ako neurotoxínu aktívneho najmä na úrovni neuroskeletového systému môže byť významným experimentálnym modelom pre štúdium parkinsonizmu a jeho biochemickej a klinickej patogenézy.

U opice aj u myši vysoké dávky MPTP (40 mg /kg) vyvolávajú hypokinetické a bradykinetické symptómy typické pre Parkinsonovu chorobu sprevádzané stúpajúcou redukciou dopa a jeho metabolitov. V týchto testoch bolo skúmané, či poškodenie správania a pohyblivosti vyvolané MPTP u myši, ako aj koncentrácie dopamínu môžu byť modifikované a upravené podávaním NADH alebo L-carnitínu podávaných samostatne alebo kombinácie oboch látok.

Na tieto testy boli použité čierne myši kmeňa C57 BE/6 s telesnou hmotnosťou 20 g; jedna skupina týchto myší bola udržovaná ako kontrolná, zatiaľ čo ďalšie skupiny dostali podkožné dve injekcie po 40 mg/kg MPTP v intervale 24 hodín. Tri týždne po injekčnom podaní MPTP bola vyhodnotená pohyblivosť všetkých liečených zvierat a kontrolných zvierat. Taktiež bol vykonaná analýza obsahu dopa po troch týždňoch liečby MPTP. Liečba s NADH a carnitínom bola urobená tesne pred začiatkom testu pohyblivosti; pohyblivosť bola analyzovaná použitím plexisklovej komory, cez ktorú priečne prechádzali v dvoch rôznych výškach dva infračervené lúče podľa postupu popísaného Archerom (Archer T., Frederikson A., Psychofarmacology, 88, 141, 1986).

Redukcia pohyblivosti vyvolaná pri MTPT bola u kontrolných myší väčšia než 80 % a pohyblivosť pri samostatne podávaných NADH a L-carnitíne bola redukovaná okolo 60 % a 70 %, pričom pri kombinácii týchto dvoch látok bola pohyblivosť navrátená späť na prakticky normálne hladiny (20 % redukcia). Predmetom záujmu boli tiež koncentrácie dopa v priečne pruhovaných svaloch, ktoré boli redukované okolo 90 % u kontrolných myší, ktorým bolo podávané MPTP, ale u liečených myší boli takmer normálne hladiny. V týchto testoch tiež, zatiaľ čo účinok samostatne podávaného L-carnitínu bol takmer zanedbateľný a pri NADH bol rovný 40 %, kombinácia navrátila dopa späť na hladiny veľmi blízke koncentráciám normálne sa nachádzajúcich v tkanive.

Niektoré príklady kompozícií podľa vynálezu sú zaznamenané nižšie:

1) L-carnitín vnútorná soľ	200 mg
NADH	5 mg
2) L-carnitín vnútorná soľ	200 mg
NADH	10 mg
3) Acetyl L-carnitín vnútorná soľ	250 mg
NADH	5 mg
4) Acetyl L-carnitín vnútorná soľ	500 mg
NADH	10 mg
5) Propionyl L-carnitín vnútorná soľ	250 mg
NADH	5 mg
6) L-carnitín vnútorná soľ	200 mg
NADH	5 mg
Koenzým Q10	20 mg
Pyridoxín	3 mg
Selén	20 mg
Zinok	2 mg
7) L-carnitín vnútorná soľ	200 mg
NADH	5 mg
Koenzým Q10	20 mg
Taurín	10 mg
Inozín	100 mg
Creatín	100 mg
Kyselina piruvová	10 mg

ľ/ upravené

Claims (12)

1. Kompozícia zahrňujúca:

a) alkanoyl L-carnitín, v ktorom alkanoylové skupina, priama alebo rozvetvená, má 2 až 8 atómov uhlíka, prednostne 2 až 6 atómov uhlíka, alebo jeho farmakologicky prijateľné soli;

b) nikotínamid vybraný zo skupiny obsahujúcej nikotínamid, nikotínamid adenín dinukleotid, redukovaný tvar (NADH) a nikotínamid adenín dinukleotid fosfát, redukovaný tvar (NADPH); a

c) farmakologicky prijateľný excipient.

2. Kompozícia podľa nároku 1,vyznačujúca sa tým, že hmotnostný pomer

a): b) je od 1:0,01 do 1:1.

3. Kompozícia podľa nároku 2, vyznačujúca sa tým, že hmotnostný pomer a): b) je od T.0,02 do 1:0,2.

4. Kompozícia podľa nároku 3, vyznačujúca sa tým, že hmotnostný pomer a): b) je 1:0,1.

5. Kompozícia podľa nárokov 1 až 4, vyznačujúca sa tým, že alkanoyl Lcarnitín je vybraný zo skupiny obsahujúcej acetyl L-carnitín, propionyl L-carnitín, butyryl L-carnitín, valeryl L-carnitín a izovaleryl L-carnitín.

6. Kompozícia podľa niektorého z predcházajúcich nárokov, vyznačujúca sa t ý m, že farmakologicky prijateľné soli sú vybrané zo skupiny obsahujúcej: chlorid, bromid, jodid, aspartát, kyselinu aspartátovú, citrát, kyselinu citrónovú, vínnan, fosfát, kyselinu fosforečnú, fumarát, kyselinu fumárovú, glycerofosfát, glukóza fosfát, laktát, maleát, kyselinu maleinovú, orotát, oxalát, kyselinu šťavelovú, kyselinu sírovú, trichlóracetát, trifluóracetát a metánsulfonát.

7. Kompozícia podľa niektorého z predchádzajúcich nárokov, ktorá ďalej zahrňuje vitamíny, koenzýmy, minerálne látky a antioxidanty.

8. Kompozícia podľa nároku 1, v jednotkovej dávkovej forme, ktorá zahrňuje 100 500 mg a) alkanoyl L-carnitínu alebo ekvivalentné množstvo jeho farmakologicky prijateľných solí a množstvo b) niktotínamid adenín dinukleotidu, prekurzoru mkotínamid adenín dinukleotidu alebo nikotínamis adenín dinukleotid fosfátu tak, že hmotnostný pomer a); b) je od 1:0,01 do 1:1.

9. Kompozícia podľa nároku 3, v jednotkovej dávkovej forme, ktorá zahrňuje 100 500 mg a) alkanoyl L-carnitínu alebo ekvivalentné množstvo jeho farmakologicky prijateľných solí a množstvo b) niktotínamid adenín dinukleotidu, prekurzoru nikotínamid adenín dinukleotidu alebo nikotínamis adenín dinukleotid fosfátu tak, že hmotnostný pomer a): b) je od 1:0,02 do 1:0,2.

10. Kompozícia podľa niektorého z predchádzajúcich nárokov, podávaná orálne a vo forme diétneho doplnku.

11. Kompozícia podľa niektorého z predchádzajúcich nárokov, podávaná orálne alebo parenterálne vo forme lieku.

12. Použitie

a) L-carnitínu alebo alkanoyl L-carnitínu, v ktorom alkanoylová skupina, priama alebo rozvetvená, má 2 až 8 atómov uhlíka, prednostne 2 až 6 atómov uhlíka, alebo ich farmakologicky prijateľných solí;

b) nikotínamid vybraný zo skupiny obsahujúcej nikotínamid, nikotínamid adenín dinukleotid, redukovaný tvar (NADH) a nikotínamid adenín dinukleotid fosfát, redukovaný tvar (NADPH); a

c) farmakologicky prijateľný excipient, pre prípravu kompozície na liečbu Parkinsonovej choroby a nedovolených liečiv vyvolávajúcich parkinsonizmus.