[go: up one dir, main page]

SE526711C2 - Nya stammar av Bifidobacterium med förmåga att överleva i magtarmkanalen och producera glutamin in vivo, samt kompositioner och användningar därav - Google Patents

Nya stammar av Bifidobacterium med förmåga att överleva i magtarmkanalen och producera glutamin in vivo, samt kompositioner och användningar därav

Info

Publication number
SE526711C2
SE526711C2 SE0300245A SE0300245A SE526711C2 SE 526711 C2 SE526711 C2 SE 526711C2 SE 0300245 A SE0300245 A SE 0300245A SE 0300245 A SE0300245 A SE 0300245A SE 526711 C2 SE526711 C2 SE 526711C2
Authority
SE
Sweden
Prior art keywords
cure
strains
bifidobacterium
dsm
strain
Prior art date
Application number
SE0300245A
Other languages
English (en)
Other versions
SE0300245L (sv
SE0300245D0 (sv
Inventor
Goeran Molin
Siv Ahrne
Bengt Jeppsson
Original Assignee
Probi Ab
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Probi Ab filed Critical Probi Ab
Priority to SE0300245A priority Critical patent/SE526711C2/sv
Publication of SE0300245D0 publication Critical patent/SE0300245D0/sv
Priority to PCT/SE2004/000098 priority patent/WO2004067731A1/en
Priority to DK04705562.9T priority patent/DK1587913T3/da
Priority to AU2004208084A priority patent/AU2004208084B2/en
Priority to PL378435A priority patent/PL212096B1/pl
Priority to EP04705562A priority patent/EP1587913B1/en
Priority to ZA200505777A priority patent/ZA200505777B/en
Priority to ES04705562T priority patent/ES2362496T3/es
Priority to US10/543,604 priority patent/US7947482B2/en
Priority to BRPI0407176A priority patent/BRPI0407176B8/pt
Priority to DE602004031079T priority patent/DE602004031079D1/de
Priority to RU2005127331/13A priority patent/RU2352628C2/ru
Priority to CA2514659A priority patent/CA2514659C/en
Priority to AT04705562T priority patent/ATE496115T1/de
Priority to JP2006502776A priority patent/JP4540664B2/ja
Priority to CNB2004800088252A priority patent/CN100558883C/zh
Publication of SE0300245L publication Critical patent/SE0300245L/sv
Publication of SE526711C2 publication Critical patent/SE526711C2/sv

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
    • A61K35/66—Microorganisms or materials therefrom
    • A61K35/74—Bacteria
    • A61K35/741—Probiotics
    • A61K35/744—Lactic acid bacteria, e.g. enterococci, pediococci, lactococci, streptococci or leuconostocs
    • A61K35/745—Bifidobacteria
    • A23L1/3014—
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23L—FOODS, FOODSTUFFS OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT OTHERWISE PROVIDED FOR; PREPARATION OR TREATMENT THEREOF
    • A23L33/00—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof
    • A23L33/10—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof using additives
    • A23L33/135—Bacteria or derivatives thereof, e.g. probiotics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A61P1/12—Antidiarrhoeals
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A61P1/14—Prodigestives, e.g. acids, enzymes, appetite stimulants, antidyspeptics, tonics, antiflatulents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A61P1/16—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system for liver or gallbladder disorders, e.g. hepatoprotective agents, cholagogues, litholytics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P13/00—Drugs for disorders of the urinary system
    • A61P13/12—Drugs for disorders of the urinary system of the kidneys
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/30—Drugs for disorders of the nervous system for treating abuse or dependence
    • A61P25/32—Alcohol-abuse
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P29/00—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P39/00—General protective or antinoxious agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P41/00—Drugs used in surgical methods, e.g. surgery adjuvants for preventing adhesion or for vitreum substitution
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
    • C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
    • C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor
    • C12N1/205—Bacterial isolates
    • C12R1/01—
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23V—INDEXING SCHEME RELATING TO FOODS, FOODSTUFFS OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES AND LACTIC OR PROPIONIC ACID BACTERIA USED IN FOODSTUFFS OR FOOD PREPARATION
    • A23V2400/00—Lactic or propionic acid bacteria
    • A23V2400/51—Bifidobacterium
    • A23V2400/529—Infantis
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12R—INDEXING SCHEME ASSOCIATED WITH SUBCLASSES C12C - C12Q, RELATING TO MICROORGANISMS
    • C12R2001/00—Microorganisms ; Processes using microorganisms
    • C12R2001/01—Bacteria or Actinomycetales ; using bacteria or Actinomycetales
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
    • Y02A—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE
    • Y02A50/00—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE in human health protection, e.g. against extreme weather
    • Y02A50/30—Against vector-borne diseases, e.g. mosquito-borne, fly-borne, tick-borne or waterborne diseases whose impact is exacerbated by climate change

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Nutrition Science (AREA)
  • Food Science & Technology (AREA)
  • Polymers & Plastics (AREA)
  • Addiction (AREA)
  • Neurology (AREA)
  • Neurosurgery (AREA)
  • Psychiatry (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Pain & Pain Management (AREA)
  • Diabetes (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Obesity (AREA)

Description

525 711 tensiv cancer kemoterapi (Anderson et al., Cancer 1998; 83:l433-9). Näringstillskott av glutamin efter intensiv fysisk träning har också minskat frekvensen av infektio- ner, speciellt övre luftvägs infektioner (Castell, Amino Acids 2001; 20(1):49-61). pà immunodepression har dock ej ännu fastställts.
Den exakta effekten av glutamin En stor tekninsk svårighet med glutamin är att den under process och lagring lätt omvandlas till glutamin syra (glutamat), dvs glutamin är en relativt instabil substans som är svår att tillsätta formularingar avsedda för oral administration. Vidare så kommer oralt admini- strerat glutamin att till stor del omvandlas till gluta- minsyra i den sura mag-miljön och når aldrig tarmarna för absorption som glutamin.
Arginin förstärker immunologiska funktioner och be- främjar sårläkning. Administration av arginin har använts i post-operativa patienter och intensiv vàrds patienter.
I de flesta kliniska studier har arginin administrerats tillsammans med någon annan substans såsom RNA eller fiskolja. Det finns indikationer på att administration av arginin modulerar det post operativa immunsvaret. Daly, John E et al., Surgery ll2:55-67, näring berikad med arginin, RNA och omega 3 fettsyror hos 1992 visar att enteral patienter efter operation förbättrar immunförsvaret via olika mekanismer. Arginin reducerarantalet komplikationer hos patienter som får kemoterapi och stràlningsbehandling vid kirurgi (Tepaske et al., 2001; Lancet 358:696-701), och reducerar vistelsetiden för intensivvàrds patienter 1995; Critical Case MEDICIN 23:436-449).
En ökad överlevnad kunde observeras hos djur som (Bauer et al., fått arginin berikad diet. Kvantitativ koloni räkning och den beräknade procentuella andelen fortsatt viabla bakte- rier visade att förmågan att döda translokerade organis- mer ökade signifikant i djur som fått arginin (Adawi, D., et al., 1997, Hepatology 25:642-647).
Stammar tillhörande släktet Bifidobacterium, det vill säga bifidobakterier, förekommer ofta i stort antal :ÉOIJ-'a--Gä-Zñ 13:26 *.-':\ I-lo-"JrgazxisationkPàüfiï F-:Efvß-'a P-.pplicatiorLteztToInstrue-tor EZRA Süflá--IIÉ-Iåß .1 fram: uaFam;2y\s§* ovan c .unc u a zon o Q 1 uno. nano : o a .nun n n ~ mono » p nunnan I nur-nu nun-av i den humana tjocktarmen, speciellt hos ammade barn.
Bakterier av släktet Bifidobakterium betraktas som pro- biotiska, med vilket man menar levande bakterier som vid intag ger hälsobefrämjande effekter till värden. Ett stort antal bifidobakterier i tjocktarmen har páståtts ha hälsobefrämjande effekter. Den bakomliggande mekanismen för nämnda effekt är dock till största delen okänd.
Känd teknik Matteuzzi et al. (Inst. 1978; 129 B, 175-181] undersökte förmågan att utsöndra fria aminosyror till odlings mediet hos ett stort antal [Ann. Microbiol. Pasteur) bifido-bakterier med olika ursprung. De erhållna resulta- ten indikerade att flera bifidobakterie arter hade för- måga att syntetisera alla aminosyror som behövs för till- växt samt kunde utsöndra nämnda föreningar till odlings- mediet. B. thermophilum, B. bifidum och B. adolescentis var bäst pà att producera medan de aminosyror som oftast påträffades i odlingsmediet var i huvudsak alanin, valin och aspargin syra. Det spekulerades i att Bifidobacterium spp. spelar en roll i aminosyra metabolismen i mag-tarm- kanalen.
WO 01/83700 (Universitetet i Maryland) beskriver en sammansättning och metod for att behandla och förebygga gastro-íntestinal skada, neonatal nekrotisk enterokolit (NEC) och bakteriell sepsis. Sammansättningen inkluderar en kombination av Gram (+) bakterier, huvudsakligen Lac- tibacillus och Bifidobacterium, och glutamin, och skall administreras oralt eller naso-oralt. Sammansättningen sägs blockera translokation av bakteriella agens så som Gram (-) bakterier.
Glutamin som administreras intravenöst är väldigt effektivt men dyrt och komplicerat. Ett bättre sätt att administrera glutamin skulle såklart vara att använda en bakteriestam som har förmåga att producera substantiella mängder av glutamin i tarmen. Men inte förrän nu, har en sådan stam blivit beskriven. 2004-GE-28 13:26 V:\_No0rganisation\PRüBI A5\PATiflTï_NsFamily\SEï2i0Ü6348X21Dü6?48 ApplicaticnteztTøInstruttor FRA 3004-05-28 l.¿oc 526 711 Sammanfattning av uppfinningen Överraskande har nu specifika Bifidobaterium stammar som kan producera glutamin i ett odlingsmedium som efter- liknar betingelser som miljön i human tjocktarm hittats.
De nämnda stammarna kan därmed efter oral eller enteral administration användas för att producera glutamin in vivo hos ett däggdjur, främst en människa. En del av stammarna kan även producera arginin.
Kort beskrivning_av ritningarna Figur 1 är en schematisk representation av de elek- troforetiska bandmönsteren som erhålls genom RFLP (Rest- riction Fragment Length Polymorphism) av stammarna CURE 19, CURE 21, CURE 26, CURE 28 och CURE 29, vars kromo- somala DNA är kluvet med EcoRI respektive HindIII, följt av hybridisering med en DIG-märkt 420 bp lång probe (po- sition 506 till 926 enligt E. coli numrering) från l6S rRNA genen hos L. casei subsp. pseudoplantarum (DSM 20008) med hjälp av Southern blot hybridisering. DIG- märkt molekylvikts DNA standard II (Roche) och Molekyl- vikts DNA standard VI (Roche) användes som standard.
Figur 2 visar ett fotografi av separerade DNA frag- ment erhállna genomg klyvning av kromosomalt DNA från stammarna CURE 19 (spår 1), CURE 29 (spår 2) och CURE 28 (spår 3) med restriktionsenzymet EcoRI (Restriction Endo- nuclease Analysis, REA). Hög molekylärvikts DNA markör (BRL) och DNA molekylviktsmarkör VI (Roche) standard (spår 4). användes som Figur 3 visar ett fotografi av separerade DNA frag- ment erhållna genomg klyvning av kromosomalt DNA från stammarna CURE 19 (spår 2), CURE 28 (spår 3) och CURE 29 (spår 4) med restriktionsenzymet Hind III. Hög molekylär- vikts DNA markör (BRL) och DNA molekylviktsmarkör VI (Roche) (spår 1 och 5).
Figur 4 visar ett fotografi av separerade DNA frag- användes som standard ment erhållna genom klyvning av kromosomalt DNA från stammarna CURE 21 (spár 1) och CURE 26 (spår 2) med rest- riktionsenzymet EcoRI. Hög molekylärvikts DNA markör (MD, ïlüifhi-fßš-Zê 13:26 V:\, Noálrgarzlsation\PP.C1I?ï.
ApplicationteztToïnstrxictol' ERA 2OCI4-='1'.-~28 TLE E1\."_~'.VEL'IT\ !~ïoI~";UY.L1',=\SFQ\-_2 LFV) 2 Zlïílšsï- 526 711 USA) och DNA molekylviktsmarkör VI (Roche) användes som standard (spàr 3).
Figur 5 visar ett fotografi av separerade DNA frag- ment erhàllna genom klyvning av kromosomalt DNA från stammarna CURE 21 (spår 2) och CURE 26 riktionsenzymet Hind III. Hög molekylärvikts DNA markör (MD, USA) och DNA molekylviktsmarkör VI (Roche) som standard (spàr 1 och 4). (spår 3) med rest- användes Beskrivning av uppfinningen Uppfinningen avser en stam av släktet Bifidobacte- rium som har förmågan at överleva i tarmarna och dessutom producerar glutamin in vivo. Framförallt, produktion av glutamin i human tjocktarm. Överlevnaden i detta saman- hang betyder att bakterie stammarna har isolerats vid olika tillfällen Följaktligen kan bakterien växa och överleva i sin värd från fekala prover från en individ. under en viss tid. Bifidobakterie stammarna i uppfinnngen kan växa pá ett medium som har ett pH under 7, speciellt ,5-6,5. Rogosa agar är ett exempel på ett sådant medium, ett annat exempel är MRS.
Enligt en föredragen aspekt har de nya stammarna förmågan att assimilera ammoniak.
Uppfinningen avser speciellt stammar som tillhör ar- ten Bifidobacterium infantis.
Enligt en specifik aspekt omfattar uppfinningen ock- så stammar av släktet Bifidobacterium som har 16S rRNA gener på ett DNA fragment med en storlek på omkring 2840 kb, som genererats genom klyvning av kromosomalt DNA med Hind III, följt av separation av olika fragment på agaros geler med gelelektrofores, och genom hybridisering med en DIG-märkt 420 bp fragment probe (position 506-926, E. coli numrering) avl6S rRNA genen från L. casei subsp.
Pseudqplantarum DSM 20008 med Southern blot hybridise- ring. Ett exempel pà sådana stammar är stammarna, depone- rade i Deutsche Sammlung von Mikroorganismen und Zellkul- turen GmBH den 23e augusti, 2002, Bifidobacterium infan- tis CURE 19 (DSM 15158); Bifidobacterium infantis CURE 21 IàWO-í-ÜE-Zê 13:26 \=':\__t-iofï=rganis=ationïPR-DEZ A5\.IPATLNT\,__N<»E'an:í,lfi-.LS-Ekz:DÜäF-iašflwäfifi-:ê fipplicatiønteztTolxxst'ructor ERA iíïfJå -OÉ-ZS Liet" 526 711 6 (DSM l5l59); Bifidobacterium infantis CURE 26 Bifidobacterium infantis CURE 28 (DSM 15161); terium infantis CURE 29 (DSM 15162).
Enligt en annan aspekt så avser uppfinningen också (DSM 15160) Bifidobac- stammar av släktet Bifidobacterium som har 16S rRNA gener placerade på enkla DNA fragment med molekylstorlek på om- kring 895 kb, som genererats genom klyvning av kromoso- malt DNA med EcoRI, på agaros geler med gelelektrofores, och genom hybridise- följt av separation av olika fragment ring med en DIG-märkt 420 bp fragment probe (position 506-926, E. coli numrering) av16S rRNA genen från L. casei subsp. pseudoplantarum DSM 20008 med Southern blot hybridisering. Enligt en föredragen aspekt kan nämnda bakterie stam producera glutamin utan att reducera gluta- min syra.
Uppfinningen avser speciellt stammarna Bifidobacte- rium infantis CURE 21 och Bifidobacterium infantis CURE 26, som deponerades i Deutsche Sammlung von Mikroorganis- men und Zellkulturen GmBH den 23e augusti, 2002, och fick depositionsnumren DSM 15159 respektive DSM 15160, eller varianter därav. Nämnda stammar kan producera glutamin utan att reducera glutamin syra.
Enligt en annan aspekt omfattar uppfinningen också stammar av släktet Bifidobacterium som har 16S rRNA genen placerad på ett enkelt DNA fragment med en molekylstorlek pà omkring 3420 kb, som genererats genom klyvning av kro- mosomalt DNA med EcoRI, följt av separation av olika fragment pà agaros geler med gelelektrofores, och genom (P0- sition 506-926, E. coli numrering) avl6S rRNA genen från hybridisering med en DIG-märkt 420 bp fragment prob L. casei subsp. pseudoplantarum DSM 20008 med Southern blot hybridisering. Enligt en föredragen aspekt kan nämn- da stam producera arginin.
Uppfinningen avser även speciellt följande stammar, vilka alla deponerats i Deutsche Sammlung von Mikroorga- nismen und Zellkulturen GmBH den 23e augusti, 2002, fått depositionsnummer som är Bifidobacterium infantis Oíïh 2004-05-28 13:34 V:ï_HoOrganisation\P"" ' 5"' " ApplicationteztTcInstructoL ERA 2004-du-2 Uw. uu u u u u 4 uu en o. n n u n 526 711 n v - g o non c ou no 0 vc - u... n: n. .n a a u. .f av CURE 19, DSM 15158, Bifidobacterium infantis CURE 28, DSM 15161 och Bifidobacterium infantis CURE 29, DSM 15162, att producera glutamin även producera arginine. eller varianter därav. Nämnda stammar kan utöver De nya stammarna har alla isolerats ur faeces från unga barn och selekterats genom uppodling på agar vid ett pH under 7. Stammarna har löpande karakteriserats genom ribotypning och REA.
Ett annat syfte med uppfinningen är en komposition med innehåll av en eller flera stammar av de i uppfin- ningen förekommande stammarna av Bifidobacterium i kombi- nation med en bärare. Exembel pà bärare är havre välling, mjölksyrafermenterade livsmedel, inulin, laktulose, frukto-oligosackarider, resistent stärkelse, ß-glukaner och guargummi. Kostfiber bör tillsättas kompositionen för att förbättra bifidobakteriernas proliferation och öka produktionen av glutamin och arginin samt öka assimile- ringen av ammoniak (ammonia assimilation) i kolon. Kost- fiberna kan t ex vara inulin, frukto-oligosackarider, maltodextriner, ß-glukaner och guargummi. Således beskri- ver uppfinningen även en komposition liknande den be- skrivna men med tillsatts av kostfibrer.
Uppfinningens kompositioner såsom lösningar, tablet- ter, kapslar, pulver kan intas oralt (via munnen). De kan också tillföras som lavemang (enemas).
Uppfinningens komposition kan även vara en livs- medelskomposition där bäraren är ett livsmedel. De glu- tamin producerande Bifidobacterium stammarna kan ges till unga barn, äldre individer, idrottsmän/kvinnor och van- liga konsumenter som vill hålla sig i form, förbättra sin muskelfunktion och undvika immun dämpning efter träning.
De arginin producerande stammarna kan ges till vanliga konsumenter som vill hålla sig i form och undvika negativ påverkan på immun funktionen.
Uppfinningens komposition kan vara en farmaceutisk komposition där bäraren är en terapeutiskt godtagbar bä- rare. De glutaminproducerande stammarna såväl som de ar- EGfMI-OE-Zê lïzld V:\_H«JOrganisation\.PRORï ABï?àTL:1'í°*\ E-Ioïwnzï1yX:šE"~.21Gf:í1~1íš'-.2lüírëï-:ê Applicaticuateztïolnstrurtor' RKA ÉO-Crll-Otv-êâ '~/e*:~;ïf:r_» 2 éslndiacfiflor, nu q n a o o nu nu nu a o u n n n n ~ I annua- v .unn- upon gininproducerande stammarna kan dessutom användas i formuleringar för enteral nutrition.
Uppfinningens ammoniak assimilerande Bifidobacterium stammar kan ges till patienter med tillfällig njursvikt (kidney failure) som observerats hos patienter i inten- sivvàrd efter kirurgi och komplikationer eller efter and- ra sjukdomar som allvarliga infektioner, förgiftningar. I sådana fall kan njurfunktionen förväntas återkomma och en behandling med mål att reducera kväve mängden från tarmen kan göra att behovet för dialys undviks. Ammoniakassimi- lerande stammar kan ges till patienter med leversvikt och encephalopati t ex vid hepatit eller förgiftning eller som följd av alkoholmissbruk. i dessa situationer kommer en reducerad absorption av kväverika föreningar från tarmen att förbättra encephalopati och leverfunktion.
De ammoniakassimilerande Bifidobacterium stammarna kan ges till unga barn, äldre individer eller vanliga konsumenter med underliggande sjukdomar som hindrar ka- paciteten för omvandling av ammoniak till urea i levern eller har en ökad absorption av kväve från tarmen t ex patienter med liten eller moderat kronisk försämring av njur eller lever funktionen (njur- eller lever-svikt) men ännu utan behov av transplantation eller dialys.
Enligt en speciell aspekt kan uppfinningens komposi- tion också innehålla en eller flera Lactobacillus stam- mar.
Förutom de potentiellt (optional) gynnsamma effek- terna av Laktobacillerna per se kan nämnda bakterier skydda bifidobakterierna från de skadliga effekterna av syre.
Enligt en annan aspekt syftar uppfinningen till an- vändning av en eller flera stammar som tillhör släktet Bifidobacterium infantis för användning inom medicinsk behandling.
Uppfinningen omfattar användningen av en eller flera stammar av Bifidobacterium infantis CURE 19, DSM 15158; Bifidobacterium infantis CURE 21, DSM 15159; Bifidobac- 3004-4215--28 13:26 V:\ NeOrgarLis-ation\PPrï1RI AH'~.I~>.='X'I"'JN'P'=. BïoFaxnilyäSEY2?_:lí:6É!-1?s\2LiWJSR-flš App-licationteztTolnstructoi ERA ilal-'J-i-OB-ZS :wdz-k: 526 711 aa aaa a a aa a aa aa na a o a aa a a aa aa a a aa a a an a aa ana aaaa a o a a aa oaaoa n aa ana a a a a a a a a a a a a 4 g , a a aa a terium infantis CURE 26, DSM 15160; Bifidobacterium infantis CURE 28, DSM 15161; CURE 29, DSM 15162 eller varianter därav för fram- ställningen av läkemedel för behandling av intensiv- Bifidobacterium infantis vàrdspatienter med multipel organ kollaps och tarmsvikt för profylax hos patienter som genomgår kemoterapi och patienter med inflammatoriska sjukdomar och för postope- rativ administration efter större kirurgi.
Experiment Isolering av stammar Alla stammar isolerades ur faeces från små barn mellan en vecka och ett år gamla. Faeces proverna späddes (0,9 % [w/v] NaCl, 0,1 % [w/v] Tween 80, 0,02 % [w/v] tein-HCl) i spädningsserier och spreds på petriskàlar med sedan ut i spädningslösning [w/v] peptone, 0,1 % cys- Rogosa agar.
Isolaten selekterades med avseende pà deras förmåga att tillväxa på Rogosa agar, pH 5,4 och upprepad isole- ring med en individ. Isolaten plockades från petriskålar- na med Rogosa agar efter inkubation vid 37 °C i 72 tim- mar. De identifierades till släktnivå genom släktspecifik PCR (Roy et al 2000 FEMS Microbial Letters 191117-24) och till art nivå med l6S rDNA sekvensering (Pettersson et al 2002 Systematic and Applied Microbiology 23:332-336).
Stammarna kunde isoleras åtminstone vid två tillfällen från samma individ med en till fyra veckor mellan prov- tagningarna, vilket starkt indikerar att stammarna har en speciell förmåga att kolonisera mag-tarmkanalen. Stammar- na identifierades genom ribotypning, d v s "Restriction Fragment Length Polymorphism", RFLP, av l6S rRNA genen, och genom REA, d v s "Restriction Endonuclease Analysis".
Följande stammar isolerades: 1) Bifidobacterium infantis CURE 19; vilken kan växa på Rogosa agar och fermentera havre till viss grad med en "sur" lukt efter fermentationen. 526 711 2) Bifidobacterium infantis CURE 20; vilken kan växa pà Rogosa agar och fermentera havre till viss grad med en "sur" lukt efter fermentationen. 3) Bifidobacterium infantis CURE 21; vilken kan växa på Rogosa agar och fermentera havre till viss grad med en "sur" lukt efter fermentationen. 4) Bifidobacterium infantis CURE 22; vilken kan växa på Rogosa agar och fermentera havre till viss grad med en "behaglig" lukt efter fermentationen.
) Bifidobacterium infantis CURE 23; vilken kan växa på Rogosa agar och fermentera havre till viss grad med en "behaglig" lukt efter fermentationen. 6) Bifidobacterium infantis CURE 24; vilken kan växa på Rogosa agar och fermentera havre till viss grad med en "behaglig" lukt efter fermentationen. 7) Bifidobacterium infantis CURE 25; Rogosa agar och fermentera havre. 8) Bifidobacterium infantis CURE 26; Rogosa agar och fermentera havre. 9) Bifidobacterium infantis CURE 27; vilken kan växa pa vilken kan växa pa vilken kan växa på Rogosa agar och fermentera havre.
) Bifidobacterium infantis CURE 28; Rogosa agar och fermentera havre. 11) Bifidobacterium infantis CURE 29; Rogosa agar och fermentera havre. 12) Bifidobacterium infantis CURE 30; Rogosa agar och fermentera havre.
Glutaminproduktion De isolerade stammarna l-12 testades för produktion vilken kan växa pa vilken kan växa på vilken kan växa pa av glutamin i buljong genom följande förfarande.
Teststammarna odlades vid 37 °C i 4 dygn i ett od- lingsmedium (broth) som modifierats från mediet beskrivet av Mateuzzi et al (Ann. Microbiol. (Inst. Pasteur 1978, 129 B: 175-181). Odlingsmediet bestod av natrium acetat, 10 g/l; askorbinsyra, 10 g/l; ammoniumsulfat ((NHU2SO4), 5 g/l; di-kalium-vätefosfat (KZHPO4), 3 g/l; kalium di-vätefosfat (KHQPO4), 3 g/l; MgSO4 x 7H2O, 0,32 2004-ü5~Z8 13:26 V:\wNoOrgan1sation\PRO2} A ' "" RN¶\ fioFam¿šyí3EE2l0b634Eï2lü06343 Appl1catianteztToInstructcr ERA 3004-05-28 ' ffl 526 711 ll g/l; FGSO4 X 7H2O, 0,01 g/l; MHSO4 X H20, 0,007 g/l; NaCl, 0,01 g/l; jästextrakt, 0,5 g/l; glukos, 20 g/l; Tween 80, l ml/l. pH justerades med l M NaOH till 6,18-6,24 innan autoklavering.
Glutaminkoncentrationen i odlingsmediet mättes före ympningen med bakterierna och efter odling av test stam- men. Kulturen centrifugerades och sterilfiltrerades efter odling och den cell fria supernatanten frystes därefter vid - 80 °C. Aminosyrorna analyserades i en automatiserad analysutrustning (Biochrom 20, Pharmacia Biotech) efter tillsatts av sulfo-salicylsyra och pH justering med li- tiumhydroxid. Ökningen av glutamin och glutaminsyra koncentratio- nen i odlingsmediet efter odlingen av olika teststammar visas nedan i Tabell 1.
Tabell 1. Ökad koncentration av glutamin och reduktion/produktion av glutaminsyra i odlingsmediet efter odling av de testade Bifidobacterium stammarna.
Teststam Glutamin Glutaminsyra (umol/l) [reduktion (R), produktion (P) i pmol/l] B. imfaotie cuRE 19 53 (29-67)* R Bifidobacterium CURE 20 4,2 (3,5-4,s)§ R B. imfentie CURE 21 37 (36-38) * P 37 (31-41) Bifidobacterium CURE 22 16 (14-1) § R Bifidobacterium CURE 23 8,9 (8,1-9,6;§ R B. iofentie CURE 24 3,0 (o-5,9) § R B. infantis CURE 25 35 R B. infantis CURE 26 36 P 60 B. dentium CURE 27 7,4 R B. infantis CURE 28 35 R B. infantis CURE 29 28 R B. imfentie CURE 30 37 R " Medelvärdet av tre prov från tre olika odlingsförsök.
§ Medelvärdet av tvà prov från tvà olika odlingsförsök. 2004-05-26 13:26 Vzï. Nefllïrçaniï--iicïiQnkPWWZ-Z: ï-.HV ApplicacionteztTcilnstructøi' EïF-:ß Sslfifš-ff-"uiß 526 711 12 Alla test stammar producerade en del glutamin men endast sju av de 12 testade stammarna hade en relativt hög produktion av glutamin (>20 umol/1). För alla utom (CURE 21 och CURE 26) glutamin tillsammans med en stark reduktion av glutamin- två stammar skedde ökningen av syra i odlingsmediet. I de medium där inga bakterier tillsatts var startkoncentrationen av glutaminsyra 223 umol/1 medan innehållet av glutamin var noll. De tre stammarna CURE 20, CURE 23 och CURE 24 använde all tillgänglig glutaminsyra i mediet medan CURE 28 sänkte koncentrationen av glutaminsyra med 247 umol/l, CURE 29 med 220 pmol/l, CURE 22 med 187 pmol/1, CURE 19 med 128 umol/l, CURE 30 med 160 umol/l, CURE 27 med 151 umol/l och CURE 25 med 47 umol/l. Det är tänkbart att dessa bakterier omvandlar glutaminsyra till glutamin. Två stammar, CURE 21 och CURE 26, producerade glutamin utan att reducera koncentrationen av glutaminsyra i mediet. I motsats till de andra stammarna ökade dessa nivån av glutaminsyra i odlingsmediet.
Arginin Qroduktion Aminosyra produktionen från varje teststam mättes efter odling av teststammen vid 37 °C i 4 dygn i ett od- lingsmedium (broth) som modifierats från mediet beskrivet (Ann. Microbiol. (Inst. Pasteur 1978, 129 B: 175-181). Odlingsmediet bestod av : natriumacetat, g/1; askorbinsyra, 10 g/1; ammoniumsulfat ((NHU2SO4), g/l; di-kalium-vätefosfat (KZHPO4), 3 g/l; kalium di- vätefosfat (KHZPO4), 3 g/1; MgSO4 x 7H2O, 0,32 g/l; FeSO4 x 7H2O, 0,01 g/l; MnSO4x H20, 0,007 g/l; NaCl, 0,01 g/l; jästextrakt, 0,5 g/1; glukos, 20 g/1; Tween 80, 1 ml/l. pH justerades med 1 M NaOH till 6,18-6,24 innan autokla- vering. av Mateuzzi et al Aminosyrakoncentrationen i odlingsmediet mättes före ympningen med bakterierna och efter odling av test stam- men. Kulturen centrifugerades och sterilfiltrerades efter odling och den cell fria supernatanten frystes därefter vid - 80 °C. Aminosyrorna analyserades i en automatiserad 2Ff:4-f:*3--23 13:26 V:\_lvoürcjar.is=atí-aIflPFC-BI 'V- Apgulicationteztïfcïnstructor Eïêkè. 3SH'_.H!-»'13--2i., 526 711 0 co 1 .oo .aa .cI' : 0 o 0 I I uno 0 o 0 o I I I I 0 0 n v 0 0 9 o oo oo oo v canon: n 13 analysutrustning (Biochrom 20, Pharmacia Biotech) efter tillsatts av sulfo-salicylsyra och pH justering med li- tiumhydroxid. Ökningen av arginin och citrullin koncentrationen i odlingsmediet (broth) efter odlingen av olika teststammar visas nedan i Tabell 2.
Tabell 2. Ökad koncentration av arginin och citrullin i odlingsmediet efter odling av de testade stammarna.
Teststam Citrullin (umol/l) 52 (9,2-136)" Arginin (umol/1) B. infantis cunm 19 11 (8,8-14)" Bifidobacterium CURB 20 0§ 4,1 (4,4-3,7)§ B. imfemfie CURB 21 o " 0* Bifidobacterium CURB 22 0§ 6,3 (5,8-6,7)§ Bifidobacterium CURB 23 2,0 (0-3,9) § 6,1 (5,4-6,8) B infantis CUBB 24 o § 0§ B infantis CURE 25 0 4,2 B infantis CURE 26 2,6 0 B. dentium CURE 27 4,9 0,0 B infantis CURB 28 37 202 B infantis CURE 29 26 13 B infantis CURE 30 2,0 5,7 i! Medelvärdet av tre prov från tre olika odlingsförsök.
§ Medelvärdet av två prov från två olika odlingsförsök.
Tre av de 12 teststammarna ökade koncentrationen av arginin med mer än 10 pmol/l, dessa var CURE 19, CURE 28 och CURE 29. Två av de nämnda stammarna gav också upphov till en slående stark produktion av citrullin (> 100 umol/l), dessa var CURE 19 och CURE 28. Citrulline bildas antingen genom deaminering av arginine eller genom NO- syntetas och bildning av NO. Produktionen av citrullin återspeglar också produktionen av arginin i ett tidigare steg. Även andra aminosyror trängde ut i odlingsmediet vid tillväxten av teststammarna se tabell 3. CURE 21 produce- 2004-95-28 l3:26 V:\_HoOxfqanisiatiornPäOïl ApplicationtextTclnstructor ERA ïüüé-fifa-'êvi 'Lac-c 526 711 o uno 0 0 Ia n nr nu OI I l 0 n..o o l c c 0 o q I o u z b: :0'I: n o o o o v n u o o n 0 nu : . . . . :nu :ø-ø. .og :nn:flv: z: zf. . I . . c n o u o o no a; n nu 0 I 14 rade varken citrullin eller arginin men betydande mängder aspariginsyra och tyrosin. CURE 26 bildade ingen citrul- lin men små mängder arginin och ett brett spektrum av olika aminosyror. Dessutom var CURE 26 den enda teststam- men som ökade koncentrationen av prolin i odlingsmediet.
Alla teststammar bildade treonin.
TABELL 3. Ökning av aminosyrakoncentrationer (pmol/l) utöver glutamin, glutaminsyra, arginin och citrullin i odlingsmediet efter odling av de olika teststammarna.
Stam Thr Tyr Cys Asp Ala Gly Ile CURE 19 39 15 0 23 15 O O CURE 21 51 21 0 96 0 0 0 CURE 26 46 46 12 151 61 O 6 CURE 28 44 12 14 O O O 0 CURE 29 35 28 O 0 2 O 0 Thr- treonin; Tyr-tyrosin; Cys-cystein; Asp- aspariginsyra; Ala-alanin; Gly-glycin; Ile-isoleucine Värdena motsvarar medelvärden av tre eller tvá prov med ursprung från tre eller tvâ separata odlingsförsök.
Genotypisk identifiering åâê Stammarnas klyvningsmönster för kromosomalt DNA undersöktes med en restriktions endonukleas analys - REA - metod enligt Ståhl M, Molin G, Ahrne S & Ståhl S, International Journal of Systematic Bacteriology, 40: 189-193, 1990 som vidareutvecklats av Johansson M-L et al, International Journal of Systematic Bacteriology 45: 670-675, 1995. Schematiskt kan REA beskrivas enligt följande: Kromosomalt DNA från de i studien ingående stammarna preparerades och klyvdes med restriktionsendo- nukleaser. 0,75 ug av vardera DNA spjälkades (digested) vid 37 °C i 4 timmar med 10 enheter EcoRI och Hind III; varje endonukleas användes separat. De kluvna DNA frag- menten separeras storleksmässigt genom gelelektrofores 3104-05-28 13:26 V:\ Iloürganis-atíonwšäfwšï' ë'=_.>'s'-tï=í~'."ëïrlï"~._ NoïanxzïyRS-F-J1G?:614§ë?'iflJ!63ê-3 ApplitfationteztToInstructor ERA iüüá-Ofi-Zö Ldow; 526 711 med horisontellt nedsänkta agaros-geler (using submerged horizontal agarose slab gels). Gelerna bestod av 150 ml 0,9 % agaros (ultrapure DNA grade; low electroendo os- mosis; BioRad Laboratories, Richmond, USA) och gjöts som "slab" geler (150 x 235 mm). 0,2 pg av "High molecular weight" DNA markör (Bethesda Research Laboratories, MD, USA) tillsammans med 0,5 pg av en "DNA molecular weight marker VI (Roche, Tyskland)" användes som standards. Mi~ nimal bandbredds distorsion och maximal skärpa uppnàddes genom att ansätta provets DNA i "Ficoll loading" buffert (2 g Ficoll, 8 ml vatten, 0,25 % bromfenol).
Gelerna kördes vid konstant spänning på 40 V i 18 timmar vid ca 6-8 °C. Bufferten (89 mM Tris, 23 mM H3PO« 2 mM sodium EDTA, pH 8.3) recirkulerades under körningen.
Därefter infärgades gelerna i etidiumbromid (2 pg/ml) under 20 min och avfärgades därefter i destillerat vat- ten, framkallades (visualized) vid 302 nm med en UV tran- silluminator (UVP Inc., San Gabriel, USA) och fotografe- rades. Denna metod för gelelektrofores gav väldistribue~ rade och välseparerade band på ner till en molekylvikt av 1.2 x 106.
RFLP av 163 rRNA gen (ribotypningj Preparering av kromosomal och restriction endonuk- leas analys av kromosomalt DNA som beskrivits tidigare (Ståhl et al., 1990, Ståhl et al., 1994).
"Proben" bestod av ett 420 bp fragment (position 506 till 926, E. coli numrering) av l6S rRNA genen hos L. casei ssp pseudoplantarum DSM 20008, erhållen med PCR och märkt med DIG DNA märknings teknik enligt de instruktio~ ner som erhållits från tillverkaren (Boehringer Mannheim, Bromma, Sverige). Mängden "prob" som använts i reaktionen var 50 ng.
Southern blot hybridisation. Ett pg av det kromoso- mala DNA:t digererades med l0U av EcoRI och HindIII (Boehringer Mannheim) i 4 timmar vid 37 °C. Separation av restriktions fragmenten utfördes enligt Ståhl et al., 1994 med agarosgel-elektofores. DIG-märkt molekylärvikts 2004-05-28 13:26 V:\_No0rganisation\PRO3I Ahï?AT3NT\_NoFam:1y\Sï\210üê348\21ï063&G ApplicaciontextTcInstructor ERA 3004~05-28 l.áør 526 711 16 DNA markör II och molekylärvikts DNA markör VI användes som standards (Roche, Tyskland). DNA immobiliserades på ett positivt laddat nylon membran (Roche) genom upphett- ning till 120 °C i 30 minuter. Prehybridisering, hybridi- sering and kemoluminescent detektion med substratet CSPD® (Roche) utfördes enligt de instruktioner som erhållits från tillverkaren. Hybridiseringstemperaturen var 68 °C.
Analysen resulterade i ett enkelt band med en molekylär- vikt på cirka 2840 kb i för alla stammar (CURE 19, 21, 26, 28 and 29) då kromosomalt DNA klövs med Hind III.
Generna för l6S rRNA fanns pà ett enkelt band med en mo- lekylvikt pà ca 895 kb för stammarna CURE 21 and 26 då kromosomalt DNA klövs med EcoRI, medan ett annat enkelt band med en molekylvikt på ca 3420 kb erhölls för stam- marna CURE 19, 28 and 29.
Test in vivo Test 1. Effekt av Lactobacillus och Bifidobacterium stammar pà DDS inducad kolit hos råtta Syftet med studien var att jämföra effekterna av Lactobacillus and Bifidobacterium stammar på DDS Sodium Sulfate) (Dextran inducerad kolit hos råtta.
Sprague Dawley råttor delades upp i sex grupper, en kontrollgrupp (kolit utan administrering av bakterier och fem grupper till vilka olika bakteriestammar (Lactobacil- lus plantarum 299v, Lactobacillus paracasei 8700:2, Lac- tobacillus gasseri LGl, Bifidobacterium 3Bl and Bifido- bacterium infantis CURE 19, des. respectively) administrera- Bakterierna gavs oralt under 7 dagar innan induk- tionen av kolit (dag 0)och gavs kontinuerligt i ytterli- gare 7 dagar i kombination med DDS (5% w/v upplöst i vat- ten). Graden av kolit mättes dagligen genom Sjukdoms ak- tivitets index DAI). av prover gjordes dag 14 och translokation av bakterier (disease activity index, Insamling och kvantiteter i tarmen mättes.
I de grupper som fått Lactobacillus plantarum 299V, Bifidobacterium 3Bl and Bifidobacterium CURE 19, minskade DAI signifikant dag 4, 5, 6 och 7 i jämförelse med kon- iüüá-05-28 13:26 ïrä HøÜrqanisatíon\P9C åpplicationreztïolnstructnr ERA 2QO4~Û5 526 711 17 trollgruppen. Dessutom var DAI significant lägre hos den grupp som fått B. infantis CURE 19 i jämförelse med de grupper som fått Lactobacillus paracasei 8700:2 och Lactobacillus gasseri LG1 efter 6 och 7 dagar. I jämfö- relse med kontroll koliten var bakterietranslokationen till den mesenteriska lymfnoderna signifikant lägre hos alla grupperna liksom translokationen av Enterobacte- riaceae till levern.
Sammanfattningsvis kan oralt intag av bakteriestam- marna Lactobacillus plantarum 299v, Lactobacillus para- casei 8700:2, Lactobacillus gasseri LGl, Bifidobacterium 3Bl and Bifidobacterium infantis CURE 19 utöva positiva effecter genom att minska translokationen vid experimen- tell kolitmodell i råtta. Lactobacillus plantarum 299V, Bifidobacterium 3Bl and Bifidobacterium infantis CURE 19 visade de mest uppenbara effekterna på DAI hos den DDS inducerade koliten hos råttan. Bifidobacterium infantis CURE 19 var något mer effektiv på att motverka koliten än de övriga efter dag 6 och dag 7 vid behandlingen. Var god se figur 6.
Test 2. överlevnad av Lactobacillus och/eller Bifidobacterium i mag-tarmkanalen efter oralt intag Oralt intag av Lactobacillus eller Bifidobacterium bidrar med olika positiva effekter, t ex antibiotikaassocierad diarre 324:136l) Positiva effekter kan uppnås under förutsättning att förhindrar (D'Souza et al., 2002, BMJ bakterierna överlever den orala administrationen och har förmåga att överleva och tillväxa i tarmarna. För att finna lämpliga stammar som kan användas som probiotika administreras ett antal möjliga kandidatstammar till friska försökspersoner. Bestämning av frekvens av de administrerade stammarna i identifierar stammar med stor överlevnadsförmåga. Syftet med denna studie är att finna stammar som kan tillföras oralt och som har överlägsen förmåga att överleva och tillväxa i den mänskliga mag- tarmkanalen. ínfn-lxë--zs 13:26 v:ksof-:qarrisarionxaacsï; Af' 'i " -"«' '" íapplicatioriteztTclnstructcør Elïeä 'JÜfJ4~~-'J'í-»'»>I: L.«..-<_ 18 Studiedesign I fyra veckor skall fjorton frivilliga försöksperso- ner dricka en blandning av cirka 20 olika stammer av Lac- tobacillus och Bifidobacterium. Alla stammar är represen- tanter av stammar som förekommer hos människa eller finns i mjölksyraproducerande mat. Faecesprover tas före intag, efter 3 veckors intag och en vecka efter avslutat intag.
Bakteriefloran bestäms genom "viable count" (levande an- tal) och RAPD (Randomly Amplified Polymorphic DNA; Jo- hansson et al., 1995).
Slutsats Resultatet visar att de utvalda stammarna, d v s Bifidobacterium infantis CURE 19, DSM 15158; Bifidobac- terium CURE 21, DSM 15159; Bifidobacterium infantis CURE 26, DSM 15160; Bifidobacterium infantis CURE 28, DSM 15161; och Bifidobacterium infantis CURE 29, DSM 15162, kan överleva passagen genom magtarmkanalen efter oralt intag. Studier pá råtta visar också en potential för positiva effekter vid experimentellt framkallad kolit. :Éüüé-OE-Zë 13:34 V:\ NomfgarnsatiomPRfßP-ï ï«.Fx\_PA'Tí»l1~.'?"~, ï-IoL-"ami1y\.šE'-.2lflïffzšä1š-åši2lßüëš-âê ApplicationtefctTf/Ixlstrutftor ERA JOO-I-OFV-í/zš Vc-rsxífr-çn 2 äsxárad.dr.

Claims (20)

10 15 20 25 30 35 526 711 19 PATENTKRAV
1. Isolerad stam av Bifidobacterium med förmåga att överleva i mag-tarm kanalen och att producera glutamin in vivo.
2. Stam enligt krav l, med förmåga att assimilera ammoniak
3. Stam enligt krav 1 eller 2, varvid nämnda stam Tillhör släktet Bifidobacterium infantis.
4. Stam enligt något av kraven l-3, som har l6S rRNA generna lokaliserade pà enkla DNA fragment med mole- kylstorlekar av cirka 2840 kb erhållna genom klyvning av kromosomalt DNA med Hind III, med en efterföljande sepa- ration av fragmenten genom agarosgel-elektrofores och genom hybridisering med en DIG-märkt 420 bp fragment prob (position 506 till 926, E. av l6S rRNA genen hos L. casei subsp. pseudoplantarum DSM 20008 genom användning av Southern blot hybridisation. coli numrering)
5. Stam enligt något av kraven kraven 1-4, som har l6S rRNA generna lokaliserade på enkla DNA fragment med molekylstorlekar av cirka 895 kb erhållna genom klyvning av kromosomalt DNA med EcoRI, med en efterföljande sepa- ration av fragmenten med agarosgel-elektrofores och genom hybridisering med en DIG-märkt 420 bp fragment prob (po- sition 506 till 926, E. hos L. casei subsp. pseudoplantarum DSM 20008 genom an- coli numrering) av l6S rRNA genen vändning av Southern blot hybridisation. som har l6S rRNA generna lokaliserade pà enkla DNA fragment med molekyl- storlekar av cirka 3420 kb erhållna genom klyvning av kromosomalt DNA med_EcoRI, med en efterföljande separa- tion av fragmenten med agarosgel-elektrofores och genom hybridisering med en DIG-märkt 420 bp fragment prob (po- sition 506 till 926, E. av l6S rRNA genen hos L. casei subsp. pseudoplantarum DSM 20008 genom an- vändning av Southern blot hybridisation.
6. Stam enligt något av kraven 1-4, coli numrering) 2005-05-04 12:09 V:\ NoOrqanisation\ ApplicationtextToInstructor åka EDGE ,CBI A5\PATENT\ Moïami1y\SEï2l0Ü$3é8\2E006343 *E-04 Version 3 ändrad.doo 10 15 20 25 30 35 526 711 20
7. Stam enligt nàgot av kraven 1-5, som är stammen Bifidobacterium infantis CURE 21, DSM 15159, eller en variant därav med huvudsakligen samma REA-mönster, och samma förmåga att överleva i mag-tarm kanalen och att producera glutamin in vivo.
8. Stam enligt något av kraven 1-5, som är stammen Bifidobacterium infantis CURE 26, DSM 15160 eller en va- riant därav med huvudsakligen samma REA-mönster, och samma förmåga att överleva i mag-tarm kanalen och att producera glutamin in vivo.
9. Stam enligt något av kraven 1-4 och 6, med för- måga att producera arginine.
10. Stam enligt något av kraven 1-4, 6 and 9, som är stammen Bifidobacterium infantis CURE 19, DSM 15158, el- ler en variant därav med huvudsakligen samma REA-mönster, och samma förmåga att överleva i mag-tarm kanalen och att producera glutamin in vivo.
11. Stam enligt något av kraven 1-4, 6 and 9, som är stammen Bifidobacterium infantis CURE 28, DSM 15161, el- ler en variant därav med huvudsakligen samma REA-mönster, och samma förmåga att överleva i mag-tarm kanalen och att producera glutamin in vivo.
12. Stam enligt något av kraven 1-4, 6 and 9, som är stammen Bifidobacterium infantis CURE 29, DSM 15162, el- ler en variant därav med huvudsakligen samma REA-mönster, och samma förmåga att överleva i mag-tarm kanalen och att producera glutamin in vivo.
13. Komposition som innefattar en eller flera stam- mar av Bifidobacterium enligt kraven 1 till 12 i kombina- tion med en bärare.
14. Komposition enligt krav 13, k ä n n e t e c k - n a d av att bäraren är en havrevälling.
15. Komposition enligt krav 13 eller 14, k ä n n e - t e c k n a d av att även innehålla kostfiber.
16. Komposition enligt nàgot av kraven 13-15, k ä n n e t e c k n a d av att vara ett livsmedel. 2005-05-04 12:91 V:\_r~1o0rga.nisatíOIAPRGEI AB\PATENT"\__NL:E“«:."\11y\:?E\.210O63-18121006348 Applicrationteztffoïxvst'rucrtcr ERA :.IUi]5--O%Z»-04 Vezisllcvi 3 änciract-:Joc 10 15 20 25 30 711 21
17. Komposition enligt något av kraven 13-15, k ä n n e t e c k n a d av att vara en farmaceutisk sammansättning vari bäraren är en terapeutiskt acceptabel bärare.
18. Komposition enligt något av kraven 13-17, k ä n n e t e c k n a d av att även innehålla en eller flera Lactobacillus stammar.
19. En eller flera stammar enligt nàgot av kraven 1- 12 för användning som ett läkemedel.
20. Användning av en eller flera av stammarna Bifi- dobacterium infantis CURE 19, DSM 15158; Bifidobacterium infantis CURE 21, DSM 15159; Bifidobacterium infantis CURE 26, DSM 15160; Bifidobacterium infantis CURE 28, DSM 15161; Bifidobacterium infantis CURE 29, DSM 15162; eller en variant därav med samma REA~mönster, och samma förmåga att överleva i mag-tarm kanalen och att producera glu- tamin in vivo, för framställningen av ett lakemedel för behandling av intensivvárdspatienter med multipel organ kollaps och tarmsvikt (multiple organ dysfunction and intestinal failure) för profylax i kemoterapi patienter och patienter med inflammatoriska sjukdomar eller för postadministrativ tillförsel efter större kirurgiska ingrepp. 2005-05-04 12:01 V:'ulfloürganisariOnXPROEI AB*-.PATEIJ'I'\__r-Io!-"aiui 1y\5EJ\-.21Oü63-â6\_2TL3 AppiicatioritextTolnstructcz^ ERA .ïLl/ES-ßfiš--TJ-i “version 3 äuifirafítdoc-
SE0300245A 2003-01-31 2003-01-31 Nya stammar av Bifidobacterium med förmåga att överleva i magtarmkanalen och producera glutamin in vivo, samt kompositioner och användningar därav SE526711C2 (sv)

Priority Applications (16)

Application Number Priority Date Filing Date Title
SE0300245A SE526711C2 (sv) 2003-01-31 2003-01-31 Nya stammar av Bifidobacterium med förmåga att överleva i magtarmkanalen och producera glutamin in vivo, samt kompositioner och användningar därav
CNB2004800088252A CN100558883C (zh) 2003-01-31 2004-01-27 具有产生谷氨酰胺的能力的双歧杆菌属的新菌株
US10/543,604 US7947482B2 (en) 2003-01-31 2004-01-27 Strains of bifidobacterium having the ability to produce glutamine
DE602004031079T DE602004031079D1 (de) 2003-01-31 2004-01-27 Neue bifidobacterium-stämme mit der fähigkeit zur herstellung von glutamin
AU2004208084A AU2004208084B2 (en) 2003-01-31 2004-01-27 New strains of Bifidobacterium having the ability to produce glutamine
PL378435A PL212096B1 (pl) 2003-01-31 2004-01-27 Wyizolowane szczepy Bifidobacterium infantis i środek farmaceutyczny
EP04705562A EP1587913B1 (en) 2003-01-31 2004-01-27 New strains of bifidobacterium having the ability to produce glutamine
ZA200505777A ZA200505777B (en) 2003-01-31 2004-01-27 New strains of bifidobacterium having the ability to produce glutamine
ES04705562T ES2362496T3 (es) 2003-01-31 2004-01-27 Nuevas cepas de bifidobacterium que tienen la capacidad para producir glutamina.
PCT/SE2004/000098 WO2004067731A1 (en) 2003-01-31 2004-01-27 New strains of bifidobacterium having the ability to produce glutamine
BRPI0407176A BRPI0407176B8 (pt) 2003-01-31 2004-01-27 composições compreendendo uma ou mais cepas de bifidobacterium e seus usos
DK04705562.9T DK1587913T3 (da) 2003-01-31 2004-01-27 Nye stammer af Bifidobacterium, som har evnen til at producere glutamin
RU2005127331/13A RU2352628C2 (ru) 2003-01-31 2004-01-27 Новые штаммы бифидобактерий, обладающие способностью продуцировать глутамин
CA2514659A CA2514659C (en) 2003-01-31 2004-01-27 New strains of bifidobacterium having the ability to produce glutamine
AT04705562T ATE496115T1 (de) 2003-01-31 2004-01-27 Neue bifidobacterium-stämme mit der fähigkeit zur herstellung von glutamin
JP2006502776A JP4540664B2 (ja) 2003-01-31 2004-01-27 グルタミン産生能を有する新規のＢｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ菌株

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
SE0300245A SE526711C2 (sv) 2003-01-31 2003-01-31 Nya stammar av Bifidobacterium med förmåga att överleva i magtarmkanalen och producera glutamin in vivo, samt kompositioner och användningar därav

Publications (3)

Publication Number Publication Date
SE0300245D0 SE0300245D0 (sv) 2003-01-31
SE0300245L SE0300245L (sv) 2004-08-01
SE526711C2 true SE526711C2 (sv) 2005-10-25

Family

ID=20290264

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
SE0300245A SE526711C2 (sv) 2003-01-31 2003-01-31 Nya stammar av Bifidobacterium med förmåga att överleva i magtarmkanalen och producera glutamin in vivo, samt kompositioner och användningar därav

Country Status (16)

Country Link
US (1) US7947482B2 (sv)
EP (1) EP1587913B1 (sv)
JP (1) JP4540664B2 (sv)
CN (1) CN100558883C (sv)
AT (1) ATE496115T1 (sv)
AU (1) AU2004208084B2 (sv)
BR (1) BRPI0407176B8 (sv)
CA (1) CA2514659C (sv)
DE (1) DE602004031079D1 (sv)
DK (1) DK1587913T3 (sv)
ES (1) ES2362496T3 (sv)
PL (1) PL212096B1 (sv)
RU (1) RU2352628C2 (sv)
SE (1) SE526711C2 (sv)
WO (1) WO2004067731A1 (sv)
ZA (1) ZA200505777B (sv)

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2012048438A1 (es) 2010-10-14 2012-04-19 Universidad De Concepcion Alimento funcional probiótico adecuado para individuos inmunocomprometidos sometidos a tratamientos como quimioterapia y/o radioterapia
RU2699967C1 (ru) * 2018-12-25 2019-09-11 Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования "Астраханский государственный медицинский университет" Министерства здравоохранения Российской Федерации (ФГБОУ ВО Астраханский ГМУ Минздрава России) Способ комплексного лечения энтеральной недостаточности у детей с тяжелой термической травмой

Families Citing this family (12)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
ES2561584T3 (es) 2005-09-28 2016-02-29 Nordisk Rebalance A/S Tratamiento del SII usando como efectores de tratamiento tanto bacterias probióticas como cereales fermentados
CA2624660C (en) * 2005-10-06 2016-07-12 Probi Ab Use of lactobacillus for treatment of autoimmune diseases
CN105671120B (zh) * 2010-07-05 2019-02-19 株式会社明治 具有肠内腐败物质的减少作用的双歧杆菌
KR20130049671A (ko) 2011-11-04 2013-05-14 한미사이언스 주식회사 생리활성 폴리펩타이드 결합체 제조 방법
CN103131647B (zh) * 2011-11-29 2017-06-27 上海上药信谊药厂有限公司 婴儿双歧杆菌及其制剂
BR112014021388A2 (pt) 2012-02-29 2017-07-18 Ethicon Endo Surgery Inc composições de microbiota e métodos rela-cionados às mesmas
AR090281A1 (es) 2012-03-08 2014-10-29 Hanmi Science Co Ltd Proceso mejorado para la preparacion de un complejo polipeptidico fisiologicamente activo
WO2016070151A1 (en) 2014-10-31 2016-05-06 Whole Biome. Inc. Methods and compositions relating to microbial treatment and diagnosis of disorders
EP3675882A4 (en) 2017-08-30 2021-07-28 Pendulum Therapeutics, Inc. METHODS AND COMPOSITIONS FOR THE TREATMENT OF MICROBIOMA ASSOCIATED DISORDERS
CN108330166A (zh) * 2017-09-06 2018-07-27 深圳市百澳飞生物技术有限公司 一种酶制剂的饲用活性评估方法
EP3823651A4 (en) 2018-07-19 2022-04-27 Pendulum Therapeutics, Inc. METHODS AND COMPOSITIONS FOR MICROBIAL TRANSPLANTATION
US11045507B2 (en) 2019-02-21 2021-06-29 Ewelina Sosnowska-Turek Bifidobacterium animalis AMT30 strain and the composition containing the strain of Bifidobacterium animalis AMT30

Family Cites Families (21)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JPS59155321A (ja) 1983-02-25 1984-09-04 Riyoushiyoku Kenkyukai 整腸用製剤
DE3406772A1 (de) * 1984-02-24 1986-03-13 Angelo 8137 Berg Schuler Diaetetisches mittel zur herabsetzung der harnstoffkonzentration in koerperfluessigkeiten und seine herstellung
SE9002732D0 (sv) 1990-08-24 1990-08-24 Kabivitrum Ab Product containing growth factor
IT1254210B (it) 1992-02-10 1995-09-14 Simone Claudio De Composizioni dietetiche e/o farmaceutiche a base di batteri lattici liofilizzati, loro preparazione e impiego
JP3623977B2 (ja) * 1993-10-29 2005-02-23 明治乳業株式会社 潰瘍性大腸炎治療剤
JP4852681B2 (ja) * 1996-02-28 2012-01-11 雪印メグミルク株式会社 腸管内細胞溶解活性抑制剤
IT1288119B1 (it) * 1996-06-28 1998-09-10 Renata Maria Anna Ve Cavaliere Composizioni dietetiche da utilizzare nell'alimentazione per via enterica
RU2112034C1 (ru) * 1996-12-26 1998-05-27 Московский научно-исследовательский институт эпидемиологии и микробиологии им.Г.Н.Габричевского Штамм bifidobacterium infantis 73-15, используемый для приготовления бифидосодержащих бактерийных препаратов и продуктов лечебно-диетического питания
CN1099289C (zh) * 1997-08-01 2003-01-22 北京东方百信生物技术有限公司 改善肠道生态平衡的微生物制剂及其工艺
US6203797B1 (en) * 1998-01-06 2001-03-20 Stephen C. Perry Dietary supplement and method for use as a probiotic, for alleviating the symptons associated with irritable bowel syndrome
ID29150A (id) 1999-01-15 2001-08-02 Entpr Ireland Cs Penggunaan lactobacillus salivarius
ES2321797T3 (es) * 1999-08-05 2009-06-12 Societe Des Produits Nestle S.A. Bifidobacterias que previenen la diarrea causada por bacterias patogenicas.
US6468525B1 (en) * 1999-08-10 2002-10-22 Renew Life, Inc. Probiotic formulation
WO2001083700A2 (en) 2000-05-03 2001-11-08 University Of Maryland, Baltimore Oral gram(+) bacteria and glutamine composition for prevention and/or treatment of gastro-intestinal
WO2002003879A1 (en) * 2000-07-07 2002-01-17 First Circle Medical, Inc. Treatment of hiv using hyperthermia
JP2002186422A (ja) * 2000-12-22 2002-07-02 Morinaga Milk Ind Co Ltd ラクトバシラス・ガッセリ及びビフィドバクテリウム属の菌を含有する非発酵食品
FI109602B (sv) 2001-01-25 2002-09-13 Valio Oy Probiotkombination
WO2002062360A1 (en) 2001-02-06 2002-08-15 Societe Des Produits Nestle S.A. Endotoxin binding by lactic acid bacteria and bifidobacteria
US20030017192A1 (en) * 2001-06-19 2003-01-23 Hanny Kanafani Process for producing extended shelf-life ready-to-use milk compositions containing probiotics
PE20030284A1 (es) * 2001-07-26 2003-05-01 Alimentary Health Ltd Cepas de bifidobacterium
JP3364491B2 (ja) * 2002-07-25 2003-01-08 株式会社アトリエ・ド・フロマージュ ヨーグルトおよびその製造方法

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2012048438A1 (es) 2010-10-14 2012-04-19 Universidad De Concepcion Alimento funcional probiótico adecuado para individuos inmunocomprometidos sometidos a tratamientos como quimioterapia y/o radioterapia
RU2699967C1 (ru) * 2018-12-25 2019-09-11 Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования "Астраханский государственный медицинский университет" Министерства здравоохранения Российской Федерации (ФГБОУ ВО Астраханский ГМУ Минздрава России) Способ комплексного лечения энтеральной недостаточности у детей с тяжелой термической травмой

Also Published As

Publication number Publication date
WO2004067731A1 (en) 2004-08-12
ES2362496T3 (es) 2011-07-06
RU2352628C2 (ru) 2009-04-20
SE0300245L (sv) 2004-08-01
US20060269533A1 (en) 2006-11-30
CA2514659A1 (en) 2004-08-12
CN1777670A (zh) 2006-05-24
EP1587913B1 (en) 2011-01-19
JP2006516405A (ja) 2006-07-06
BRPI0407176A (pt) 2006-02-07
BRPI0407176B1 (pt) 2018-05-08
BRPI0407176B8 (pt) 2021-05-25
CN100558883C (zh) 2009-11-11
CA2514659C (en) 2014-07-08
US7947482B2 (en) 2011-05-24
PL212096B1 (pl) 2012-08-31
ZA200505777B (en) 2007-12-27
AU2004208084A1 (en) 2004-08-12
JP4540664B2 (ja) 2010-09-08
DE602004031079D1 (de) 2011-03-03
EP1587913A1 (en) 2005-10-26
RU2005127331A (ru) 2006-01-27
AU2004208084B2 (en) 2008-10-09
PL378435A1 (pl) 2006-04-03
ATE496115T1 (de) 2011-02-15
SE0300245D0 (sv) 2003-01-31
DK1587913T3 (da) 2011-04-11

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN114480229B (zh) 一种动物双歧杆菌乳亚种菌株wkb148及其产品与应用
CN112175864B (zh) 动物双歧杆菌及其选育方法和应用
WO1995033046A1 (en) Lactobacillus strains of human origin, their compositions and uses thereof
EP2179028A1 (en) A novel strain of bifidobacterium and active peptides against rotavirus infections
CN110373368B (zh) 一种长双歧杆菌菌株zj1及其应用
KR20200027855A (ko) 장내 항염증 및 균총 개선 활성을 갖는 락토바실러스 람노서스 균주
SE526711C2 (sv) Nya stammar av Bifidobacterium med förmåga att överleva i magtarmkanalen och producera glutamin in vivo, samt kompositioner och användningar därav
CN113832077A (zh) 鼠李糖乳杆菌及其应用
CN114774315A (zh) 鼠李糖乳杆菌菌株LRa05在制备增强免疫力制品和/或缓解湿疹制品方面的用途
CN117866831A (zh) 一种鼠李糖乳酪杆菌及其应用
CN113528367B (zh) 一株具有预防腹泻和降解胆固醇功能的凝结芽孢杆菌
CN117004538A (zh) 一种罗伊氏粘液乳杆菌及应用
CN110023484B (zh) 一种假小链状双歧杆菌及其培养方法和应用
CN114990030A (zh) 嗜酸乳杆菌la18及其在制备调节肠道菌群或免疫调节的产品方面的应用
CN106906165A (zh) 一种植物乳杆菌及其在制备预防便秘的食品中的应用
Pieniz et al. Evaluation of selenite bioremoval from liquid culture by Enterococcus species
CN111849827B (zh) 犬源产维生素b12乳酸菌及应用
CN104053766A (zh) 产生罗伊氏菌素的短乳杆菌
CN114574405B (zh) 植物乳杆菌菌株wka86及其在制备防治口臭制品方面的用途与制品
CN116333913A (zh) 一种唾液乳杆菌、含有其的益生菌组合物及其应用
OBISESAN Characterisation of lactic acid bacteria isolated from human breast milk and infant faeces as potential probiotics
CN119639611B (zh) 一种抗隐孢子虫合生元制剂及其制备方法和应用
RU2491332C1 (ru) Консорциум бифидобактерий для приготовления бактерийных препаратов и биологически активных добавок к пище, предназначенных для коррекции микрофлоры желудочно-кишечного тракта людей старше 14 лет, и способ его получения, биологически активная добавка к пище для коррекции микрофлоры желудочно-кишечного тракта людей старше 14 лет и бактериальный препарат для лечения дисбиотических состояний желудочно-кишечного тракта людей старше 14 лет

Legal Events

Date Code Title Description
NUG Patent has lapsed