RU2822550C9

RU2822550C9 - Антитело против клаудина 18.2 и его применение

Info

Publication number: RU2822550C9
Application number: RU2021129727A
Authority: RU
Inventors: Ян Ян; Ху ГЭ; Вэйкан ТАО
Original assignee: Цзянсу Хэнжуй Медицин Ко., Лтд.; Шанхай Хэнжуй Фармасьютикал Ко., Лтд.
Priority date: 2019-04-01
Filing date: 2020-03-31
Publication date: 2024-08-27

Abstract

Изобретение относится к области биохимии, в частности к антителу, которое специфично связывается с клаудином 18.2. Также раскрыты молекула нуклеиновой кислоты, кодирующая указанное антитело; клетка-хозяин, содержащая указанную молекулу нуклеиновой кислоты; конъюгат указанного антитела; фармацевтическая композиция, содержащая указанное антитело. Раскрыты способ лечения заболевания и способ иммунологического анализа, в которых применяют указанное антитело. Изобретение позволяет эффективно лечить заболевания, ассоциированные с клаудином 18.2. 7 н. и 12 з.п. ф-лы, 3 ил., 16 табл., 3 пр.

Description

Данная заявка заявляет приоритет по патентной заявке 2019102578536, поданной 1 апреля 2019 года, которая включена в данный документ посредством ссылки во всей своей полноте.

Область изобретения

Настоящее изобретение относится к области лекарственных средств на основе антител. Конкретно, настоящее раскрытие относится к антителам против клаудина 18.2 и их применениям.

Предшествующий уровень техники

Согласно описаниям в данном документе предложена только общая информация о настоящем раскрытии, и они не обязательно составляют предшествующий уровень техники.

Клаудин-18 (CLDN18) представляет собой белок, кодируемый человеческим геном клаудина 18, и принадлежит к семейству белков плотных контактов в клетках. Клаудин-18 может контролировать поток молекул между слоями клеток.

Белок клаудин-18 структурно включает четыре трансмембранные области и две внеклеточные петли, при этом N-конец и С-конец находятся внутри цитоплазмы. Клаудин-18 имеет два варианта сплайсинга, клаудин 18.1 и клаудин 18.2. Данные две последовательности отличаются друг от друга только восьмью аминокислотами в первой внеклеточной петле. Клаудин 18.1 экспрессируется и распределен образом, отличным от клаудина 18.2. Клаудин 18.1 селективно экспрессируется в нормальных клетках легкого, тогда как экспрессия клаудина 18.2 в высокой степени ограничена в нормальных клетках, но часто эктопически активируется и сверхэкспрессируется во множестве опухолей (рак желудка, рак легкого, рак поджелудочной железы и т.д.). Клаудин 18.2 считается возможной терапевтической мишенью в случае рака желудка и других типов рака. Открытие данной мишени также предлагает новый вариант лечения рака желудка.

Краткое изложение сущности изобретения

Согласно настоящему раскрытию предложено антитело против клаудина 18.2.

В некоторых воплощениях антитело против клаудина 18.2, как описано выше, содержит вариабельную область тяжелой цепи и вариабельную область легкой цепи, где:

i) вариабельная область тяжелой цепи содержит такую же последовательность HCDR1, HCDR2 и HCDR3, как последовательности в вариабельной области тяжелой цепи, как показано в SEQ ID NO: 3, и вариабельная область легкой цепи содержит такую же последовательность LCDR1, LCDR2 и LCDR3, как последовательности в вариабельной области легкой цепи, как показано в SEQ ID NO: 4; или

ii) вариабельная область тяжелой цепи содержит такую же последовательность HCDR1, HCDR2 и HCDR3, как последовательности в вариабельной области тяжелой цепи, как показано в SEQ ID NO: 5, и вариабельная область легкой цепи содержит такую же последовательность LCDR1, LCDR2 и LCDR3, как последовательности в вариабельной области легкой цепи, как показано в SEQ ID NO: 6. В некоторых воплощениях антитело против клаудина 18.2, как описано выше, содержит вариабельную область тяжелой цепи и вариабельную область легкой цепи, где:

iii) вариабельная область тяжелой цепи содержит HCDR1, HCDR2 и HCDR3, как показано в SEQ ID NO: 9, SEQ ID NO: 10 и SEQ ID NO: 11, соответственно, и вариабельная область легкой цепи содержит LCDR1, LCDR2 и LCDR3, как показано в NO: 12, SEQ ID NO: 13 и SEQ ID NO: 14, соответственно; или

iv) вариабельная область тяжелой цепи содержит HCDR1, HCDR2 и HCDR3, как показано в SEQ ID NO: 15, SEQ ID NO: 16 и SEQ ID NO: 17, соответственно, и вариабельная область легкой цепи содержит LCDR1, LCDR2 и LCDR3, как показано в NO: 18, SEQ ID NO: 19 и SEQ ID NO: 20, соответственно.

Специалисты в данной области должны понимать, что номера пунктов, такие как i), ii), a), b) и т.д., предложены только с целью того, чтобы сделать перечисляемые технические решения или элементы более понятными и легко идентифицируемыми, но не ограничивают каким-либо образом следующие технические решения или элементы. Когда используется один и тот же номер пункта, это не означает, что следующие технические решения или элементы являются одними и теми же.

В некоторых воплощениях антитела против клаудина 18.2, как описано выше, антитело против клаудина 18.2 представляет собой мышиное антитело, химерное антитело или гуманизированное антитело.

(v) вариабельная область тяжелой цепи обладает по меньшей мере 90%-ной, 92%-ной, 94%-ной, 95%-ной, 96%-ной, 97%-ной, 98%-ной, 99%-ной, 100%-ной идентичностью с вариабельной областью тяжелой цепи, как показано в SEQ ID NO: 3 или 24, и вариабельная область легкой цепи обладает по меньшей мере 90%-ной, 92%-ной, 94%-ной, 95%-ной, 96%-ной, 97%-ной, 98%-ной, 99%-ной, 100%-ной идентичностью с вариабельной областью легкой цепи, как показано в SEQ ID NO: 4 или 21; или

(vi) вариабельная область тяжелой цепи обладает по меньшей мере 90%-ной, 92%-ной, 94%-ной, 95%-ной, 96%-ной, 97%-ной, 98%-ной, 99%-ной, 100%-ной идентичностью с вариабельной областью тяжелой цепи, как показано в SEQ ID NO: 5 или 31, и вариабельная область легкой цепи обладает по меньшей мере 90%-ной, 92%-ной, 94%-ной, 95%-ной, 96%-ной, 97%-ной, 98%-ной, 99%-ной, 100%-ной идентичностью с вариабельной областью легкой цепи, как показано в SEQ ID NO: 6 или 28.

(1) аминокислотная последовательность вариабельной области тяжелой цепи представляет собой такую, как показано в SEQ ID NO: 3, или обладает по меньшей мере 90%-ной идентичностью с SEQ ID NO: 3, и аминокислотная последовательность вариабельной области легкой цепи представляет собой такую, как показано в SEQ ID NO: 4, или обладает по меньшей мере 90%-ной идентичностью с SEQ ID NO: 4;

(2) аминокислотная последовательность вариабельной области тяжелой цепи представляет собой такую, как показано в SEQ ID NO: 24, или обладает по меньшей мере 90%-ной идентичностью с SEQ ID NO: 24, и аминокислотная последовательность вариабельной области легкой цепи представляет собой такую, как показано в SEQ ID NO: 21, или обладает по меньшей мере 90%-ной идентичностью с SEQ ID NO: 21;

(3) аминокислотная последовательность вариабельной области тяжелой цепи представляет собой такую, как показано в SEQ ID NO: 5, или обладает по меньшей мере 90%-ной идентичностью с SEQ ID NO: 5, и аминокислотная последовательность вариабельной области легкой цепи представляет собой такую, как показано в SEQ ID NO: 6, или обладает по меньшей мере 90%-ной идентичностью с SEQ ID NO: 6; или

(4) аминокислотная последовательность вариабельной области тяжелой цепи представляет собой такую, как показано в SEQ ID NO: 31, или обладает по меньшей мере 90%-ной идентичностью с SEQ ID NO: 31, и аминокислотная последовательность вариабельной области легкой цепи представляет собой такую, как показано в SEQ ID NO: 28, или обладает по меньшей мере 90%-ной идентичностью с SEQ ID NO: 28.

В некоторых воплощениях антитела против клаудина 18.2, как описано выше, антитело против клаудина 18.2, представляет собой гуманизированное антитело, и данное гуманизированное антитело содержит каркасную область, происходящую из каркасной области человеческого антитела, или вариант каркасной области, и данный вариант каркасной области имеет максимум 10 обратных мутаций на каждой из каркасной областей легкой цепи и/или каркасной области тяжелой цепи антитела человека.

В некоторых воплощениях каркасная область тяжелой цепи антитела человека представляет собой такую, как каркасная область вариабельной области тяжелой цепи, как показано в аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 24, или вариабельная область легкой цепи антитела человека представляет собой такую, как каркасная область вариабельной области легкой цепи, как показано в аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 21; или каркасная область тяжелой цепи антитела человека представляет собой такую, как каркасная область вариабельной области тяжелой цепи, как показано в аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 31, или вариабельная область легкой цепи антитела человека представляет собой такую, как каркасная область вариабельной области легкой цепи, как показано в аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 28.

В некоторых воплощениях предпочтительно вариант каркасной области содержит мутацию(и), выбранную(ые) из нижеследующего (а) или (b):

(a) одна или более обратных мутаций аминокислот 22S, 85I или 87Н, содержащихся в вариабельной области легкой цепи, и/или одна или более обратных мутаций, выбранных из группы, состоящей из 48I, 82Т и 69М, содержащихся в вариабельной области тяжелой цепи; или

(b) одна или более обратных мутаций аминокислот, выбранных из группы, состоящей из 4L и 22S, содержащихся в вариабельной области легкой цепи, и/или одна или более обратных мутаций, выбранных из группы, состоящей из 38K, 40R, 481, 66K, 67А, 69, 71L и 73K, содержащихся в вариабельной области тяжелой цепи.

В некоторых воплощениях антитела против клаудина 18.2, как описано выше, вариант каркасной области содержит мутацию(ии), выбранную(ые) из следующих (а-1) или (b-1):

(а-1) обратные мутации аминокислот 22S, 85I и 87Н, содержащиеся в вариабельной области легкой цепи, и обратные мутации аминокислот 48I и 82Т, содержащиеся в вариабельной области тяжелой цепи; или

(b-1) обратная мутация аминокислоты 4L, содержащаяся в вариабельной области легкой цепи.

В некоторых воплощениях антитела против клаудина 18.2, как описано выше, в котором:

(vii) последовательность вариабельной области тяжелой цепи представляет собой такую, как показано в SEQ ID NO: 3, и последовательность вариабельной области легкой цепи представляет собой такую, как показано в SEQ ID NO: 4; или

(viii) последовательность вариабельной области тяжелой цепи представляет собой такую, как показано в SEQ ID NO: 24, 25, 26 или 27, и последовательность вариабельной области легкой цепи представляет собой такую, как показано в SEQ ID NO: 21, 22 или 23; или

(ix) последовательность вариабельной области тяжелой цепи представляет собой такую, как показано в SEQ ID NO: 5, и последовательность вариабельной области легкой цепи представляет собой такую, как показано в SEQ ID NO: 6; или

(x) последовательность вариабельной области тяжелой цепи представляет собой такую, как показано в SEQ ID NO: 31, 32, 33 или 34, и последовательность вариабельной области легкой цепи представляет собой такую, как показано в SEQ ID NO: 28, 29 или 30;

В некоторых воплощениях антитела против клаудина 18.2, как описано выше, антитело против клаудина 18.2 или его антигенсвязывающий фрагмент содержат вариабельную область тяжелой цепи и вариабельную область легкой цепи, как показано ниже:

(xi) последовательность вариабельной области тяжелой цепи, как показано в SEQ ID NO: 31, и последовательность вариабельной области легкой цепи, как показано в SEQ ID NO: 29; или

(xii) последовательность вариабельной области тяжелой цепи, как показано в SEQ ID NO: 26, и последовательность вариабельной области легкой цепи, как показано в SEQ ID NO: 23.

В некоторых воплощениях антитела против клаудина 18.2, как описано выше, вариабельная область легкой цепи и вариабельная область тяжелой цепи могут представлять собой комбинацию вариабельных областей легкой и тяжелой цепей, как показано в следующей таблице:

В некоторых воплощениях антитела против клаудина 18.2, как описано выше, антитело дополнительно содержит константную(ые) область(и) антитела. В некоторых конкретных воплощениях константная область тяжелой цепи антитела выбрана из группы, состоящей из константной(ых) области(ей) lgG1, lgG2, lgG3 и lgG4 и их варианта(ов), и константная область легкой цепи антитела выбрана из группы, состоящей из константной(ых) области(ей) каппа, лямбда цепи антитела человека и их варианта(ов). В некоторых конкретных воплощениях антитело содержит последовательность константной области тяжелой цепи, как показано в SEQ ID NO: 7, и последовательность константной области легкой цепи, как показано в SEQ ID NO: 8. В некоторых воплощениях антитело содержит тяжелую цепь, обладающую по меньшей мере 90%-ной, 92%-ной, 94%-ной, 95%-ной, 96%-ной, 97%-ной, 98%-ной, 99%-ной, 100%-ной идентичностью с аминокислотной последовательностью, как показано в SEQ ID NO: 35 или 42, и легкую цепь, обладающую по меньшей мере 90%-ной, 92%-ной, 94%-ной, 95%-ной, 96%-ной, 97%-ной, 98%-ной, 99%-ной, 100%-ной идентичностью с аминокислотной последовательностью, как показано в SEQ ID NO: 36 или 39; или

тяжелую цепь, обладающую по меньшей мере 90%-ной, 92%-ной, 94%-ной, 95%-ной, 96%-ной, 97%-ной, 98%-ной, 99%-ной, 100%-ной идентичностью с аминокислотной последовательностью, как показано в SEQ ID NO: 37 или 49, и/или легкую цепь, обладающую по меньшей мере 90%-ной, 92%-ной, 94%-ной, 95%-ной, 96%-ной, 97%-ной, 98%-ной, 99%-ной, 100%-ной идентичностью с аминокислотной последовательностью, как показано в SEQ ID NO: 38 или 46.

В некоторых воплощениях антитело против клаудина 18.2, как описано выше, содержит:

(c) тяжелую цепь, как показано в последовательности SEQ ID NO: 35, и/или легкую цепь, как показано в последовательности SEQ ID NO: 36;

(d) тяжелую цепь, как показано в последовательности SEQ ID NO: 42, 43, 44 или 45, и/или легкую цепь, как показано в последовательности SEQ ID NO: 39, 40 или 41;

(e) тяжелую цепь, как показано в последовательности SEQ ID NO: 37, и/или легкую цепь, как показано в SEQ ID NO: 38; или

(f) тяжелую цепь, как показано в последовательности SEQ ID NO: 49, 50, 51 или 52, и/или легкую цепь, как показано в SEQ ID NO: 46, 47 или 48.

В некоторых воплощениях антитела против клаудина 18.2, как описано выше, антитело конкурирует с антителом против клаудина 18.2 или его антигенсвязывающим фрагментом, как описано выше, за связывание с человеческим клаудином 18.2.

тяжелую цепь, как показано в аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 44, и легкую цепь, как показано в последовательности SEQ ID NO: 41; или

тяжелую цепь, как показано в аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 49, и легкую цепь, как показано в последовательности SEQ ID NO: 47.

Согласно еще одному аспекту настоящего раскрытия также предложена молекула нуклеиновой кислоты, которая кодирует антитело против клаудина 18.2, как описано выше.

Согласно еще одному аспекту настоящего раскрытия также предложен экспрессионный вектор, содержащий молекулу нуклеиновой кислоты, как описано выше.

Согласно еще одному аспекту настоящего раскрытия также предложена клетка-хозяин, которая содержит молекулу нуклеиновой кислоты, как описано выше, или экспрессионный вектор, как описано выше, предпочтительно клетка представляет собой бактериальную клетку, клетку гриба, животную клетку насекомого или клетку млекопитающего.

Согласно еще одному аспекту настоящего раскрытия также предложен конъюгат антитело-лекарственное средство, который образован в результате образования конъюгата антитела против клаудина 18.2, как описано выше, с цитотоксическим лекарственным средством.

Согласно еще одному аспекту настоящего раскрытия также предложен конъюгат антитело-лекарственное средство, содержащий или состоящий из антитела против клаудина 18.2, как описано выше, ковалентно связывающийся с цитотоксическим лекарственным средством.

В некоторых воплощениях согласно настоящему раскрытию предложен способ получения антитела против клаудина 18.2, как описано выше.

В некоторых воплощениях согласно настоящему раскрытию предложен способ получения конъюгата антитело против клаудина 18.2-лекарственное средство, как описано выше.

В некоторых воплощениях согласно настоящему раскрытию предложена фармацевтическая композиция, содержащая терапевтически эффективное количество антитела против клаудина 18.2, как описано выше, или молекулы нуклеиновой кислоты, как описано выше, или конъюгата антитело-лекарственное средство, как описано выше, и один или более фармацевтически приемлемых носителей, разбавителей, буферов или вспомогательных веществ.

В некоторых воплощениях согласно настоящему раскрытию предложен способ иммунологического анализа или выявления клаудина 18.2, включающий стадию приведения упомянутого выше антитела против клаудина 18.2 в контакт с анализируемым образцом.

В некоторых воплощениях согласно настоящему раскрытию предложено применение антитела против клаудина 18.2, как описано выше, для получения реагента для иммунологического анализа человеческого клаудина 18.2.

В некоторых воплощениях согласно настоящему раскрытию предложено антитело против клаудина 18.2, как описано выше, для применения в иммунологическом анализе или выявления клаудина 18.2.

В некоторых воплощениях согласно настоящему раскрытию предложен набор, содержащий антитело против клаудина 18.2, как описано выше.

В некоторых воплощениях согласно настоящему раскрытию предложено применение антитела против клаудина 18.2, как описано выше, или молекулы нуклеиновой кислоты, как описано выше, или конъюгата антитело-лекарственное средство, как описано выше, или фармацевтической композиции, как описано выше, для получения лекарственного средства для лечения рака или опухоли, где рак или опухоль предпочтительно представляет собой позитивный в отношении клаудина 18.2 рак или злокачественную опухоль, более предпочтительно представляет собой плоскоклеточный рак головы и шеи, рак головы и шеи, рак головного мозга, глиому, мультиформную глиобластому, нейробластому, рак центральной нервной системы, нейроэндокринную опухоль, карциному гортаноглотки, рак носоглотки, рак пищевода, рак щитовидной железы, злокачественную мезотелиому плевры, рак легкого, рак молочной железы, рак печени, гепатоцеллюлярную опухоль, гепатоцеллюлярную карциному, рак печени и желчного пузыря, рак поджелудочной железы, рак желудка, рак желудочно-кишечного тракта, рак кишечника, рак толстой кишки, рак толстой и прямой кишки, рак почки, светлоклеточную карциному почки, рак яичника, рак эндометрия, рак шейки матки, рак мочевого пузыря, рак предстательной железы, рак яичка, рак кожи, меланому, лейкоз, лимфому, рак кости, хондросаркому, миелому, множественную миелому, миелодиспластический синдром, миелопролиферативную опухоль, плоскоклеточный рак, саркому Юинга, системный амилоидоз легкой цепи и рак из клеток Меркеля; лимфома выбрана из группы, состоящей из: лимфомы Ходжкина, неходжкинской лимфомы, диффузной В-крупноклеточной лимфомы, фолликулярной лимфомы, первичной медиастинальной В-крупноклеточной лимфомы, мантийноклеточной лимфомы, мелкоклеточной лимфоцитарной лимфомы, В-крупноклеточной лимфомы с высоким содержанием Т-клеток/гистиоцитов и лимфоплазмоцитарной лимфомы; рак легкого выбран из группы, состоящей из: немелкоклеточного рака легкого и мелкоклеточного рака легкого; и лейкоз выбран из группы, состоящей из: хронического миелоидного лейкоза, острого миелоидного лейкоза, лимфоцитарного лейкоза, лимфобластного лейкоза, острого лимфобластного лейкоза, хронического лимфоцитарного лейкоза и миелоидного лейкоза.

В некоторых воплощениях согласно настоящему раскрытию предложен способ лечения заболевания, ассоциированного с клаудином 18.2, включающий введение субъекту терапевтически эффективного количества антитела против клаудина 18.2, как описано выше, или молекулы нуклеиновой кислоты, как описано выше, или конъюгата антитело-лекарственное средство, как описано выше, или фармацевтической композиции, как описано выше, где заболевание предпочтительно представляет собой рак или опухоль; более предпочтительно позитивный в отношении клаудина 18.2 рак или злокачественная опухоль, более предпочтительно, выбраны из группы, состоящей из нижеследующего: плоскоклеточный рак головы и шеи, рак головы и шеи, рак головного мозга, глиома, мультиформная глиобластома, нейробластома, рак центральной нервной системы, нейроэндокринная опухоль, карцинома гортаноглотки, рак носоглотки, рак пищевода, рак щитовидной железы, злокачественная мезотелиома плевры, рак легкого, рак молочной железы, рак печени, гепатоцеллюлярная опухоль, гепатоцеллюлярная карцинома, рак печени и желчного пузыря, рак поджелудочной железы, рак желудка, рак желудочно-кишечного тракта, рак кишечника, рак толстой кишки, рак толстой и прямой кишки, рак почки, светлоклеточная карцинома почки, рак яичника, рак эндометрия, рак шейки матки, рак мочевого пузыря, рак предстательной железы, рак яичка, рак кожи, меланома, лейкоз, лимфома, рак кости, хондросаркома, миелома, множественная миелома, миелодиспластический синдром, миелопролиферативная опухоль, плоскоклеточный рак, саркома Юинга, системный амилоидоз легкой цепи и рак из клеток Меркеля. Более предпочтительно, лимфома выбрана из группы, состоящей из: лимфомы Ходжкина, неходжкинской лимфомы, диффузной В-крупноклеточной лимфомы, фолликулярной лимфомы, первичной медиастинальной В-крупноклеточной лимфомы, мантийноклеточной лимфомы, мелкоклеточной лимфоцитарной лимфомы, В-крупноклеточной лимфомы с высоким содержанием Т-клеток/гистиоцитов и лимфоплазмоцитарной лимфомы; рак легкого выбран из группы, состоящей из: немелкоклеточного рака легкого и мелкоклеточного рака легкого; и лейкоз выбран из группы, состоящей из: хронического миелоидного лейкоза, острого миелоидного лейкоза, лимфоцитарного лейкоза, лимфобластного лейкоза, острого лимфобластного лейкоза, хронического лимфоцитарного лейкоза и миелоидного лейкоза.

В некоторых воплощениях терапевтически эффективное количество относится к 0,1 мг - 3000 мг или 1 мг - 1000 мг антитела против клаудина 18.2, как описано выше, или конъюгата антитело-лекарственное средство, как описано выше, содержащегося в однократной дозе композиции.

В некоторых воплощениях согласно настоящему раскрытию предложены антитело против клаудина 18.2, как описано выше, или молекула нуклеиновой кислоты, как описано выше, или конъюгат антитело-лекарственное средство, как описано выше, или фармацевтическая композиция, как описано выше, для применения в лечении заболевания, ассоциированного с клаудином 18.2, где заболевание предпочтительно представляет собой рак или опухоль; более предпочтительно, клаудин 18.2-позитивный рак или злокачественную опухоль, более предпочтительно выбранную из группы, состоящей из нижеследующего: плоскоклеточный рак головы и шеи, рак головы и шеи, рак головного мозга, глиома, мультиформная глиобластома, нейробластома, рак центральной нервной системы, нейроэндокринная опухоль, карцинома гортаноглотки, рак носоглотки, рак пищевода, рак щитовидной железы, злокачественная мезотелиома плевры, рак легкого, рак молочной железы, рак печени, гепатоцеллюлярная опухоль, гепатоцеллюлярная карцинома, рак печени и желчного пузыря, рак поджелудочной железы, рак желудка, рак желудочно-кишечного тракта, рак кишечника, рак толстой кишки, рак толстой и прямой кишки, рак почки, светлоклеточная карцинома почки, рак яичника, рак эндометрия, рак шейки матки, рак мочевого пузыря, рак предстательной железы, рак яичка, рак кожи, меланома, лейкоз, лимфома, рак кости, хондросаркома, миелома, множественная миелома, миелодиспластический синдром, миелопролиферативная опухоль, плоскоклеточный рак, саркома Юинга, системный амилоидоз легкой цепи и рак из клеток Меркеля. Более предпочтительно, лимфома выбрана из группы, состоящей из: лимфомы Ходжкина, неходжкинской лимфомы, диффузной В-крупноклеточной лимфомы, фолликулярной лимфомы, первичной медиастинальной В-крупноклеточной лимфомы, мантийноклеточной лимфомы, мелкоклеточной лимфоцитарной лимфомы, В-крупноклеточной лимфомы с высоким содержанием Т-клеток/гистиоцитов и лимфоплазмоцитарной лимфомы; рак легкого выбран из группы, состоящей из: немелкоклеточного рака легкого и мелкоклеточного рака легкого; и лейкоз выбран из группы, состоящей из: хронического миелоидного лейкоза, острого миелоидного лейкоза, лимфоцитарного лейкоза, лимфобластного лейкоза, острого лимфобластного лейкоза, хронического лимфоцитарного лейкоза и миелоидного лейкоза.

В некоторых воплощениях рак представляет собой рак желудка, рак пищевода, рак легкого или рак поджелудочной железы.

В некоторых воплощениях антитело или конъюгат антитело-лекарственное средство могут, как описано выше, играть терапевтическую роль в раковых заболеваниях с высоким, средним и низким уровнем экспрессии клаудина 18.2, как описано выше.

Антитело против клаудина 18.2 и конъюгат антитело-лекарственное средство, предложенные в настоящем раскрытии, обладают превосходной аффинностью в отношении антигенов клеточной поверхности, благоприятной эндоцитозной эффективностью, сильной эффективностью ингибирования опухоли и более широким спектром фармацевтического применения и подходят для клинического применения в качестве лекарственного средства.

Описание графических материалов

Фиг. 1: результаты анализа FACS (от англ. fluorescence-activated cell sorting - сортировка клеток с активированной флуоресценцией) связывания гуманизированных антител с человеческим клаудином 18.2 на клеточном уровне.

Фиг. 2: анализ эндоцитоза гуманизированных антител в клетках NUGC4.

Фиг. 3А-Фиг. 3С: выявление ADCC (от англ. antibody-dependent cell-mediated cytotoxicity - антителозависимая клеточная цитотоксичность)-эффекта антител в клетках NUGC4 с разными уровнями экспрессии клаудина 18.2. На Фиг. 3А показано выявление ADCC-эффекта антител, оказываемого на клетки NUGC4 дикого типа (с низким уровнем экспрессии клаудина 18.2); На Фиг. 3В показано выявление ADCC-эффекта антител, оказываемого на клетки NUGC4, со средним уровнем экспрессии клаудина 18.2; На Фиг. 3С показано выявление ADCC-эффекта антител, оказываемого на клетки NUGC4, с высоким уровнем экспрессии клаудина 18.2.

Подробное описание изобретения

Терминология

Для более легкого понимания настоящего раскрытия некоторые технические и научные термины конкретно определены ниже. Если в данном документе явным образом не определено иное, все другие технические и научные термины, используемые в данном документе, имеют значение, обычно подразумеваемое специалистами в области, к которой принадлежит настоящее раскрытие.

Трехбуквенные коды и однобуквенные коды для аминокислот, используемые в настоящем раскрытии, представляют собой такие, как описано в J. Biol. Chem, 243, р.3558 (1968).

Термин «цитотоксическое лекарственное средство» относится к веществу, которое ингибирует или предотвращает функцию клеток и/или приводит к гибели или разрушению клеток. Цитотоксическое лекарственное средство включает соединения, которые могут быть использованы для уничтожения клеток, такие как токсины, химиотерапевтические средства и другие.

Термин «токсин» относится к любому веществу, способному оказывать вредное воздействие на рост или пролиферацию клеток, и такое вещество может представлять собой низкомолекулярный токсин и его производное из бактерий, грибов, растений или животных, включая производные камптотецина, такие как экзатекан, майтанзиноиды и их производные (CN101573384), такие как DM1, DM3, DM4, орлистатин F (AF) и их производные, такие как MMAF, ММАЕ, 3024 (WO 2016/127790 А1, соединение 7), дифтерийный токсин, экзотоксин, цепь А рицина, цепь А абрина, модецин, α-сарцин, токсический белок Aleutites fordii, токсический белок диантин, токсический белок Phytolaca americana (PAPI, РАРИ и PAP-S), ингибитор Momordica charantia, курцин, кротин, ингибитор Sapaonaria officinalis, гелонин, митогеллин, рестриктоцин, феномицин, эномицин и трихотецены.

Термин «химиотерапевтическое лекарственное средство» представляет собой соединение, которое может быть использовано для лечения опухолей. Такое определение также включает антигормональные средства, способные модулировать, уменьшать, блокировать или ингибировать гормональные действия, которые могли бы стимулировать рост опухоли, и обычно представлены в виде системной или системной терапии. Они могут представлять собой сами гормоны. Примеры химиотерапевтических средств включают алкилирующие агенты, такие как тиотепа; циклосфамид (CYTOXAN™); алкилсульфонат, такой как бусульфан, импросульфан и пиросульфан; азиридин, такой как бенаодопа, карбоквон, метуредопа и уредопа; азиридин и метиламеламин, включая алтретамин, триэтиленмеламин, триэтиленфосфорамид, триэтилентиофосфорамид и триметилолмеламин; азотистые иприты, такие как хлорамбуцил, хлорнафазин, хлорфосфамид, эстрамустин, ифосфамид, мехлорэтамин, мехлорэтаминоксид; мелфалан, новембицин фенестерин, преднимустин, трофосфамид, урамустин; нитрозомочевины, такие как кармустин, хлорозотоцин, фотемустин, ломустин, нимустин, ранимустин; антибиотики, такие как кларитромицин, актиномицин, аутрамицин, азасерин, блеомицин, кактиномицин, калихеамицин, карабицин, хромомицин, карцинофилин, хромомицин, актиномицин D, даунорубицин, деторубицин, 6-диазо-окси-L-норлейцин, доксорубицин, эпирубицин, эзорубицин, идарубицин, марцелломицин, митомицин, микофеноловая кислота, ногаламицин, оливомицин, пепломицин, потфиромицин, пуромицин, квеламицин, родорубицин, стрептонигрин; стрептозоцин, туберцидин, убенимекс, циностатин, зорубицин; антиметаболиты, такие как метотрексат, 5-FU; аналоги фолиевой кислоты, такие как деноптерин, метотрексат, птероптерин, триметрексат; аналоги метотрексата, такие как флударабин, 6-меркаптоптрерин, тиометоптерин, тиогуаноптерин; аналоги пиримидина, такие как анцитабин, азацитидин, 6-азуридин, кармофур, кармофур, цитарабин, дидезоксиуридин, доксилуридин, эноцитабин, фторуридин, 5-FU; андрогены, такие как калустерон, дростанолон пропионат, эпитиостанол, мепитиостан, тестолактон; антиадренергические средства, такие как аминоглутетимид, митотан, трилостан; добавки фолиевой кислоты, такие как фролиновая кислота; глюкурон; альдофосфамидгликозид; аминолевулиновую кислоту; амсакрин; бестрабуцил; биаснтрен; эдатраксат; дефофамин; колхицин; диазихинон; эльфомитин; эллиптиния ацетат; этоглуцид; галлия нитрат; гидроксимочевину; лентинан; лонидамин; митогуазон; митоксантрон; мопидамол; нитракрин; пинтостатин; фенамет; пирарубицин; подофиллиновую кислоту; 2-этилгидразид; прокарбазин; PSK®; разоксан; сизофиран; спирогерманий; кетокислоту Alternaria tenuis; трииминхинон; 2,2',2''-трихлортриэтиламин; уретан; винбластин амид; дакарбазин; маннит иприт; митобронитол; дибромспирт бересклета; пипоброман; гацитозин; арабинозид («Ara-С»); циклофосфамид; тиотепу; таксаны, такие как паклитаксел (TAXOL®, Bristol-Myers Squibb Oncology, Princeton, NJ) и доцетаксел (TAXOTERE®, Rhone-Poulenc Rorer, Antony, Франция); хлорамбуцил; гемцитабин; 6-тиогуанин; меркаптопурин; метотрексат; аналоги платины, такие как цисплатин и карбоплатин; винбластин; платинау; этопозид (VP-16); ифосфат; митомицин С; митоксантрон; винкристин; винорельбин; навельбин; новантрон; тенипозид; даунорубицин; аминоптерин; кселоду; ибандронат; СРТ-11; ингибитор топоизомеразы RFS2000; дифторметилорнитин (ДФМО); ретиноевую кислоту; эсперамицины; капецитабин; и фармацевтически приемлемые соли, кислоты или производные любого из приведенных выше веществ. Данное определение также включает антигормональные средства, которые могут модулировать или ингибировать воздействие гормонов на опухоли. Например, антиэстрогены включают тамоксифен, ралоксифен, ингибитор ароматазы 4(5)-имидазол, 4-гидроксилтамоксифен, триоксифен, кеоксифен, LY117018, онапристон и торемифен (Fareston); и антиандрогены, такие как флутамид, нилутамид, бикалутамид, лейпролид и гозерелин; и фармацевтически приемлемые соли, кислоты или производные любого из указанных выше веществ.

В том виде, в котором он используется в данном документе, термин «антитело» относится к иммуноглобулину, и полное антитело представляет собой структуру из четырех пептидных цепей, образованную двумя идентичными тяжелыми цепями, соединенными с двумя идентичными легкими цепями межцепочечной(ыми) дисульфидной(ыми) связью(ями). Константные области тяжелой цепи иммуноглобулина демонстрируют разные составы и расположение аминокислот, следовательно, представляют разную антигенность. Соответственно, иммуноглобулины могут быть подразделены на пять типов, или называемых изотипами иммуноглобулинов, а именно IgM, IgD, IgG, IgA и IgE, и соответствующие тяжелые цепи представляют собой μ, δ, γ, α и ε, соответственно. В соответствии со своим аминокислотным составом шарнирной области и числом и локализацией дисульфидных связей тяжелой цепи, один и тот же тип lg может быть подразделен на разные подтипы; например, IgG может быть подразделен на lgG1, lgG2, lgG3 и lgG4. Легкие цепи могут быть подразделены на цепь κ или λ, с учетом разных константных областей. Каждый из пяти типов IgG может иметь цепь каппа или цепь лямбда.

Последовательности, примерно из 110 аминокислот, рядом с N-концом тяжелой и легкой цепей антитела являются высоковариабельными, известны как вариабельные области (области Fv); остальные аминокислотные последовательности близко к С-концу являются относительно стабильными, известны как константные области. Вариабельная область включает 3 гипервариабельные области (HVR - от англ. hypervariable region) и 4 каркасные области (FR - от англ. framework region) с относительно консервативными последовательностями. Данные три гипервариабельные области, которые определяют специфичность антитела, также известны как области, определяющие комплементарность (CDR - от англ. complementarity determining region). Каждая вариабельная область легкой цепи (VL) и каждая вариабельная область тяжелой цепи (VH) состоит из трех областей CDR и четырех областей FR, расположенных от N-конца к С-концу в следующем порядке: FR1, CDR1, FR2, CDR2, FR3, CDR3 и FR4. Данные три области CDR легкой цепи относятся к LCDR1, LCDR2 и LCDR3; и данные три области CDR тяжелой цепи относятся к HCDR1, HCDR2 и HCDR3.

Антитела по настоящему раскрытию включают мышиные антитела, химерные антитела и гуманизированные антитела.

В том виде, в котором он используется в данном документе, термин «мышиное антитело» относится к моноклональным антителам против человеческого клаудина 18.2, полученным в соответствии со знанием и умениями в данной области. Во время получения анализируемому субъекту инъецируют клаудин 18.2 или его эпитоп в качестве антигена, и затем выделяют гибридому, экспрессирующую антитело, которое имеет желаемую последовательность или функциональные характеристики. В предпочтительном воплощении настоящего раскрытия мышиное антитело против клаудина 18.2 или его антигенсвязывающий фрагмент дополнительно сдержит константную область легкой цепи мышиной цепи κ, λ или ее вариант или дополнительно содержит константную область тяжелой цепи мышиного lgG1, lgG2, lgG3 или ее вариант.

Термин «химерное антитело» представляет собой антитело, полученное в результате слияния вариабельной области мышиного антитела вместе с константной областью человеческого антитела, и такое антитело может смягчать иммунный ответ, вызываемый мышиным антителом. Для создания химерного антитела сначала создают гибридому, секрет и рующую специфичное мышиное моноклональное антитело, и ген вариабельной области клонируют из мышиной гибридомы. Затем клонируют ген константной области из человеческого антитела при необходимости. Ген вариабельной области мыши соединяют с геном константной области человека с образованием химерного гена, который может впоследствии быть вставлен в экспрессионный вектор. Наконец, молекула химерного антитела будет экспрессироваться в эукариотической или прокариотической системе. В предпочтительном воплощении настоящего раскрытия легкая цепь антитела химерного антитела дополнительно содержит константную область легкой капа, лямбда цепи человека или ее вариант. Тяжелая цепь антитела химерного антитела против клаудина 18.2 дополнительно содержит константную область тяжелой цепи человеческого lgG1, lgG2, lgG3, lgG4 или ее вариант, предпочтительно содержит константную область тяжелой цепи человеческого lgG1, lgG2, lgG3, lgG4 или ее вариант, предпочтительно содержит константную область тяжелой цепи человеческого lgG1, lgG2 или lgG4 или содержит константную область тяжелой цепи lgG1, lgG2 или lgG4 с мутацией(ями) аминокислоты (как например, мутация L234A и/или L235A, и/или мутация S228P).

Термин «гуманизированное антитело», также известное как антитело с прививкой CDR, относится к антителу, созданному посредством прививания последовательностей CDR, не являющихся человеческими, в каркасы вариабельной области человеческого антитела, а именно, антителу, полученному в разных типах последовательностей каркасов антитела зародышевой линии человека. Гуманизированные антитела могут преодолевать гетерологичные ответы, вызываемые химерными антителами, которые несут большое число гетерологичных белковых компонентов. Такие последовательности каркасов могут быть получены из общедоступной базы данных ДНК, охватывающей последовательности генов антитела зародышевой линии, или опубликованные ссылки. Например, последовательности ДНК зародышевой линии генов вариабельной области тяжелой и легкой цепей человека могут быть найдены в базе данных последовательностей зародышевой линии человека «VBase» (доступной на www.mrccpe.com.ac.uk/vbase), а также в Kabat, ЕА, et al. 1991 Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5th Ed. Для того, чтобы избежать снижения активности, вызываемого сниженной иммуногенностью, последовательности каркасов в вариабельной области человеческого антитела могут подвергаться минимальным обратным мутациям или обратным мутациям с сохранением активности. Гуманизированные антитела по настоящему раскрытию также относятся к гуманизированным антителам, на которых осуществляют созревание аффинности CDR посредством дрожжевого дисплея.

В одном воплощении настоящего раскрытия антитело или его антигенсвязывающий фрагмент дополнительно содержит константную область легкой цепи, происходящую из человеческой или мышиной цепи κ, λ, или ее вариант, или дополнительно содержит константную область тяжелой цепи, происходящую из человеческих или мышиных lgG1, lgG2, lgG3, lgG4, или ее вариант; предпочтительно содержит константную область тяжелой цепи, происходящую из человеческого lgG1, lgG2 или lgG4, или варианта lgG1, lgG2 или lgG4 с мутацией(ями) аминокислоты(от) (как например, мутация L234A и/или L235A, и/или мутация S228P).

В том виде, в котором он описан в данном документе, «варианты» константной области тяжелой цепи и константной области легкой цепи человеческого антитела относятся к вариантам константной области тяжелой и легкой цепей, раскрытым в предшествующем уровне технике, которые не изменены в структуре и функции вариабельных областей антитела. Типичные варианты включают варианты константных областей тяжелой цепи lgG1, lgG2, lgG3 или lgG4, полученные посредством сайт-направленного конструирования и аминокислотных замен на константной области тяжелой цепи. Конкретные замены представляют собой, например, мутацию YTE, мутацию L234A и/или L235A, мутацию S228P и/или мутации, приводящие к получению структуры «выступ-во-впадину» (что приводит к тому, что тяжелая цепь антитела имеет комбинацию выступ-Fc и впадина-Fc). Оказалось, что данные мутации придают антителу новые свойства, не оказывая влияния на функцию вариабельной области антитела.

Термины «человеческое антитело (Humab)», «антитело, происходящее из человека», «полноразмерное человеческое антитело» и «полное человеческое антитело» используют взаимозаменяемо, и они могли бы представлять собой антитела, происходящие из человека, или антитела, полученные из генетически модифицированного организма, который «сконструирован» любым способом, известным в данной области, для получения специфичных человеческих антител в ответ на стимуляцию антигеном. В некоторых технологиях элементы локусов тяжелой и легкой цепей человека вводят в линии клеток, происходящие из линий эмбриональных стволовых клеток, в которых эндогенные локусы тяжелой и легкой цепей являются мишенью для нарушения. Трансгенные организмы могут синтезировать человеческие антитела, специфичные к человеческим антигенам, и данные организмы могут быть использованы для получения гибридом, которые секретируют человеческие антитела. Человеческое антитело может также представлять собой такое антитело, в котором тяжелая и легкая цепи кодируются нуклеотидными последовательностями, происходящими из одного или более источников ДНК человека. Полноразмерные человеческие антитела могут быть также сконструированы с помощью методов генной или хромосомной трансфекции и технологии фагового дисплея или сконструированы из В-клеток, активированных in vitro, все из способов известны в данной области.

Термины «полноразмерное антитело», «целое антитело» и «полное антитело» используются взаимозаменяемо в данном документе и относятся к антителу в по существу полной форме, которое отличается от антигенсвязывающих фрагментов, определенных ниже. Термин конкретно относится к антителам, которые содержат константные области в легкой и тяжелой цепях. «Антитело» по настоящему раскрытию включает «полноразмерные антитела» и их антигенсвязывающий фрагменты.

В некоторых воплощениях полноразмерное антитело по настоящему раскрытию включает полноразмерные антитела, образованные посредством связывания вариабельной области легкой цепи с константной областью легкой цепи, и связывания вариабельной области тяжелой цепи с константной областью тяжелой цепи, как показано ниже в таблице в комбинации легкой и тяжелой цепей. Специалисты в данной области могут выбрать константную область легкой цепи и константную область тяжелой цепи из разных источников антител в соответствии с фактической необходимостью, такую как происходящая из человеческого антитела константная область легкой цепи и константная область тяжелой цепи.

Термин «антигенсвязывающий фрагмент» или «функциональный фрагмент» относится к одному или более фрагментам антитела, которые сохраняют способность специфично связываться с антигеном (например, клаудином 18.2). Показано, что фрагменты полноразмерного антитела могут использоваться для достижения функции связывания антигена. Примеры связывающих фрагментов, включенных в термин «антигенсвязывающий фрагмент» антитела, включают: (i) фрагмент Fab, моновалентный фрагмент, состоящий из доменов VL, VH, CL и СН1; (ii) фрагмент F(ab')₂, бивалентный фрагмент, образованный двумя фрагментами Fab, соединенными дисульфидным мостиком в шарнирной области, (iii) фрагмент Fd, состоящий из доменов VH и СН1; (iv) фрагмент Fv, состоящий из доменов VH и VL одного плеча антитела; (v) dsFv, антигенсвязывающий фрагмент, образованный VH и VL посредством межцепочечных дисульфидных связей; и (vi) диатело, биспецифичное антитело и мультиспецифичное антитело, содержащее фрагменты, такие как scFv, dsFv и Fab. Кроме того, домен VL и домен VH фрагмента Fv связаны синтетическим линкером с образованием одной белковой цепи, которая представляет собой моно валентную молекулу, образованную в результате объединения домена VL и VH (называемую одноцепочечным Fv (scFv); см., например, Bird et al. (1988) Science 242: 423-426; и Huston et al (1988) Proc. Natl. Acad. Sci USA85:5879-5883). Подразумевается, что такие одноцепочечные антитела также включены в термин «антигенсвязывающий фрагмент» антитела. Такие фрагменты антитела получают, используя общепринятые методики, известные в данной области, и подвергаются скринингу в отношении функциональных фрагментов посредством использования того же способа, как способ для интактного антитела. Антигенсвязывающие участки могут быть получены посредством технологии генной инженерии или посредством ферментативного или химического разрушения интактного иммуноглобулина. Антитела могут находиться в виде разных изотипов, например, антитела IgG (например, подтип lgG1, lgG2, lgG3 или lgG4), lgA1, lgA2, IgD, IgE или IgM.

Fab представляет собой фрагмент антитела, обладающий антигенсвязывающей активностью, полученный посредством обработки молекулы антитела IgG ферментом, обладающим такой же активностью, как папаин.

F(ab')₂ представляет собой фрагмент антитела с антигенсвязывающей активностью, полученный в результате расщепления IgG ферментом с такой же активностью, как пепсин.

Fab' представляет собой фрагмент антитела, обладающий антигенсвязывающей активностью, полученный в результате расщепления упомянутого выше F(ab')₂.

Кроме того, Fab' может быть получен посредством вставки ДНК, кодирующей фрагмент Fab', в экспрессионный вектор и введения данного вектора в хозяина.

Термин «одноцепочечное антитело», «одноцепочечный Fv» или «scFv» относится к молекуле, содержащей вариабельный домен тяжелой цепи антитела (или область; VH), соединенный с вариабельным доменом легкой цепи антитела (или областью; VL) посредством линкера. Такие молекулы scFv имеют общую структуру NH₂-Vl-линкер-VH-COOH или NH₂-VH-линкер-VL-COOH. Другие линкеры, которые могут быть использованы в настоящем раскрытии, описаны следующими документами, такими как, но не ограниченными: Holliger et al. (1993) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 90: 6444-6448; Alfthan et al. (1995), Protein Eng. 8:725-731; Choi et al. (2001), Eur. J. Immunol. 31:94-106; Hu et al. (1996), Cancer Res. 56:3055-3061; Kipriyanov et al. (1999), J. Mol. Biol. 293:41-56 and Roovers et al. (2001), Cancer Immunol.

Диатело представляет собой фрагмент антитела, в котором scFv или Fab димеризован, и оно представляет собой фрагмент антитела, обладающий двухвалентной антигенсвязывающей активностью. При двухвалентной антигенсвязывающей активности два антигена могут быть одинаковыми или разными.

Биспецифичное и мультиспецифичное антитело относятся к антителу, которое может связываться с двумя или более антигенами или антигенными детерминантами.

dsFv получают посредством осуществления замены одного аминокислотного остатка в каждом из VH и VL остатком цистеина, и затем соединения полипептидов с заменой дисульфидной связью между двумя остатками цистеина. Аминокислотные остатки, подлежащие замене остатком цистеина, могут быть выбраны на основе предсказания трехмерной структуры антитела в соответствии с известными способами (например, Protein Engineering, 7, 697 (1994)).

Термин «отличие по аминокислоте» или «мутация аминокислоты» относится к изменениям или мутациям аминокислоты в варианте белка или полипептида, по сравнению с исходным белком или полипептидом, включая 1, 2, 3 или более вставок, делеций или замен аминокислот, исходя из исходного белка или полипептида.

Термин «каркас антитела» или «FR область» относится к части вариабельного домена, или VL или VH, которая служит каркасом для антигенсвязывающих петель (CDR) данного вариабельного домена. По существу, это представляет собой вариабельный домен без CDR.

Термин «область, определяющая комплементарность», «CDR» или «гипервариабельная область» относится к одной из шести гипервариабельных областей, присутствующих в вариабельном домене антитела, которые главным образом содействуют связыванию антигена. Обычно, три CDR (HCDR1, HCDR2, HCDR3) находятся в каждой вариабельной области тяжелой цепи, и три CDR (LCDR1, LCDR2, LCDR3) в каждой вариабельной области легкой цепи. Границы аминокислотных последовательностей CDR могут быть определены с помощью любых из множества хорошо известных схем, включая критерии нумерации «Kabat» (см. Kabat et al. (1991), «Sequences of Proteins of Immunological Interest», 5th edition, Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, MD), критерии нумерации «Chothia» (см. Al-Lazikani et al., (1997) JMB 273:927-948) и критерии нумерации ImMunoGenTics (IMGT) (Lefranc MP, Immunologist, 7, 132-136 (1999); Lefranc, MP, etc., Dev. Comp. Immunol., 27, 55-77 (2003)) и т.п. Например, в случае классического формата, следуя критериям Kabat, аминокислотные остатки CDR в вариабельном домене тяжелой цепи (VH) пронумерованы как 31-35 (HCDR1), 50-65 (HCDR2) и 95-102 (HCDR3); и аминокислотные остатки CDR в вариабельном домене легкой цепи (VL) пронумерованы как 24-34 (LCDR1), 50-56 (LCDR2) и 89-97 (LCDR3). В соответствии с критериями Chothia аминокислотные остатки CDR в VH пронумерованы как 26-32 (HCDR1), 52-56 (HCDR2) и 95-102 (HCDR3); и аминокислотные остатки в VL пронумерованы как 26-32 (LCDR1), 50-52 (LCDR2) и 91-96 (LCDR3). Объединяя как Kabat, так и Chothia для определения CDR, CDR состоят из аминокислотных остатков 26-35 (HCDR1), 50-65 (HCDR2) и 95-102 (HCDR3) в VH человека и аминокислотных остатков 24-34 (LCDR1), 50-56 (LCDR2) и 89-97 (LCDR3) в VL человека. В соответствии с критериями IMGT аминокислотные остатки CDR в VH приблизительно пронумерованы как 26-35 (CDR1), 51-57 (CDR2) и 93-102 (CDR3), и аминокислотные остатки CDR в VL приблизительно пронумерованы как 27-32 (CDR1), 50-52 (CDR2) и 89-97 (CDR3). В соответствии с критериями IMGT области CDR антитела могут быть определены, используя программу IMGT/DomainGapAlign.

Термин «эпитоп» или «антигенная детерминанта» относится к сайту на антигене, с которым связывается иммуноглобулин или антитело (например, конкретный сайт на молекуле клаудина 18.2). Эпитопы обычно включают по меньшей мере 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14 или 15 последовательных или непоследовательных аминокислот в уникальной третичной конформации. См., например, Epitope Mapping Protocols in Methods in Molecular Biology, Vol. 66, ed. G.E. Morris, Ed. (1996).

Термин «специфично связываются с», «селективно связываются с», «селективно связывающий» или «специфично связывающий» относится к связыванию антитела с заданным эпитопом на антигене. Обычно антитело связывается с аффинностью (KD) меньше чем примерно 10^-8 М, например, меньше чем примерно 10^-9 М, 10^-10 М, 10^-11 М, 10^-12 М или даже меньше.

Термин «KD» относится к константе равновесия диссоциации для конкретного взаимодействия антитело-антиген. Обычно антитело по настоящему раскрытию связывается с клаудином 18.2 или его эпитопом с константой равновесия диссоциации (KD) меньше чем примерно 10^-7 М, например, меньше чем примерно 10^-8 М или 10^-10 М, например, аффинность антитела в настоящем раскрытии в отношении антигена клеточной поверхности определяли посредством измерения значения KD способом FACS.

Когда термин «конкуренция» используется в контексте антигенсвязывающих белков, которые конкурируют за один и тот же эпитоп, он означает, что между антигенсвязывающими белками происходит конкуренция, которая определяется анализом, в котором антигенсвязывающий белок, подлежащий тестированию (например, антитело или его функциональный фрагмент), предотвращает или ингибирует (например, уменьшает) специфичное связывание референсного антигенсвязывающего белка (например, лиганда или референсного антитела) с общим антигеном (например, антигеном клаудин 18.2 или его фрагментом). Множество типов анализов конкурентного связывания доступно для определения того, конкурирует ли один антигенсвязывающий белок с другим. Данные анализы представляют собой, например, твердофазный прямой или непрямой радиоиммунологический анализ (RIA - от англ. radioimmunoassay), твердофазный прямой или непрямой иммуноферментный анализ (EIA - от англ. enzyme immunoassay), конкурентный «сэндвич»-анализ (см., например, Stahli et al, 1983, Methods in Enzymology 9: 242-253); твердофазный прямой EIA с биотином-авидином (см., например, Kirkland et al, 1986, J. Immunol. 137: 3614-3619); твердофазный прямой анализ на основе мечения, твердофазный прямой «сэндвич»-анализ на основе мечения (см., например, Harlow and Lane, 1988, Antibodies, A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Press); твердофазный прямой RIA на основе мечения меткой I^-125 (см., например, Morel et al, 1988, Molec. Immunol. 25: 7-15); твердофазный прямой RIA на основе мечения с биотином-авидином (см., например, Cheung, et al, 1990, Virology 176: 546-552); и прямой RIA на основе мечения (Moldenhauer et al, 1990, Scand. J. Immunol. 32: 77-82). Обычно анализ включает применение очищенного антигена, способного связываться с твердой поверхностью или клеткой, который загружают как немеченым тестируемым антигенсвязывающим белком, так и меченым референсным антигенсвязывающим белком. Конкурентное ингибирование определяется измерением количества метки, связанной с твердой поверхностью или с клеткой, в присутствии тестируемого антигенсвязывающего белка. Обычно, тестируемый антигенсвязывающий белок находится в избытке. Антигенсвязывающие белки, идентифицируемые посредством конкурентного анализа (конкуренция с антигенсвязывающим белком), включают: антигенсвязывающие белки, которые связываются с тем же эпитопом, что и референсный антигенсвязывающий белок; и антигенсвязывающие белки, которые связываются с эпитопом, который достаточно близок к эпитопу, с которым связывается референсный антигенсвязывающий белок, где данные два эпитопа пространственно мешают друг другу, препятствуя связыванию. Дополнительные подробности относительно способов определения конкурентного связывания предложены в данном документе в разделе Примеры. Обычно, когда конкурирующий антигенсвязывающий белок находится в избытке, он будет ингибировать (например, уменьшать) по меньшей мере на 40-45%, 45-50%, 50-55%, 55-60%, 60-65%, 65-70%, 70-75% или 75% или даже больше специфичное связывание референсного антигенсвязывающего белка с общим антигеном. В некоторых случаях связывание ингибируется по меньшей мере на 80-85%, 85-90%, 90-95%, 95-97% или 97% или даже больше.

Термин «молекула нуклеиновой кислоты», в том виде, в котором он используется в данном документе, относится к молекулам ДНК и молекулам РНК. Молекула нуклеиновой кислоты может быть одноцепочечной или двухцепочечной, и предпочтительно является двухцепочечной ДНК или одноцепочечной мРНК или модифицированной мРНК. Нуклеиновая кислота является «функционально связанной», когда она находится в функциональной взаимосвязи с другой последовательностью нуклеиновой кислоты. Например, промотор или энхансер функционально связан с кодирующей последовательностью, если он влияет на транскрипцию данной кодирующей последовательности.

Термин «идентичность» аминокислотных последовательностей относится к проценту аминокислотных остатков, которые идентичны у первой и второй последовательности при выравнивании данных аминокислотных последовательностей (введение гэпов при необходимости) для достижения максимального процента идентичности последовательностей, и любая консервативная замена не считается частью идентичности последовательностей. Для определения процента идентичности аминокислотных последовательностей, выравнивание может быть достигнуто множеством путей в объеме данной области, например, используя имеющееся в открытом доступе программное обеспечение, такое как программное обеспечение BLAST, BLAST-2, ALIGN, ALIGN-2 или Megalign (DNASTAR). Специалисты в данной области могут определять параметры, подходящие для измерения выравнивания, включая любой алгоритм, требуемый для достижения максимального выравнивания по всей длине сравниваемых последовательностей.

Термин «экспрессионный вектор» относится к молекуле нуклеиновой кислоты, способной транспортировать другую нуклеиновую кислоту, с которой она связана. В одном воплощении вектор представляет собой «плазмиду», которая относится к петле кольцевой двухцепочечной ДНК, в которую могут быть лигированы дополнительные сегменты ДНК. В еще одном воплощении вектор представляет собой вирусный вектор, в котором дополнительные сегменты ДНК могут быть лигированы в вирусный геном. Векторы, раскрытые в данном документе, способны к саморепликации в клетке-хозяине, в которую их вводят (например, бактериальные векторы, имеющие бактериальный репликатор, и эписомальные векторы млекопитающего), или могли бы быть интегрированы в геном клетки-хозяина при введении в клетку-хозяина и, таким образом, реплицируются вместе с геномом хозяина (например, векторы млекопитающего, не являющиеся эписомальными).

Способы получения и очистки антител и их антигенсвязывающих фрагментов хорошо известны в данной области, например, Antibodies: a Laboratory Manual, Cold Spring Harbor, New York, chapters 5-8 and 15. Например, мыши могут быть иммунизированы человеческим клаудином 18.2 или его фрагментом, и полученные антитела могут быть затем ренатурированы, очищены и секвенированы в отношении аминокислотных последовательностей посредством использования традиционных способов, хорошо известных в данной области. Антигенсвязывающие фрагменты также могут быть получены традиционными способами. Антитела или их антигенсвязывающие фрагменты по настоящему раскрытию конструируют, включая одну или более каркасных областей человека на области CDR, происходящие из антитела, не являющегося человеческим. Последовательности FR зародышевой линии человека могут быть получены из ImMunoGeneTics (IMGT) посредством вебсайта http://imgt.cines.fr или из The Immunoglobulin Facts Book, 2001, ISBN 012441351, посредством выравнивания против последовательностей базы данных генов вариабельных областей антител зародышевой линии человека, используя программное обеспечение МОЕ.

Термин «клетка-хозяин» относится к клетке, в которую был введен экспрессионный вектор. Клетки-хозяева могут включать клетки бактерий, микроорганизмов, растений или животных. Бактерии, чувствительные к трансформации, включают члены Enterobacteriaceae, такие как штаммы Escherichia coli или Salmonella; Bacillaceae, как например Bacillus subtilis; Pneumococcus; Streptococcus и Haemophilus influenzae. Подходящие микроорганизмы включают Saccharomyces cerevisiae и Pichia pastoris. Подходящие линии животных клеток-хозяев включают СНО (от англ. Chinese Hamster Ovary Cell Line - линия клеток яичника китайского хомячка), клетки 293 и клетки NS0.

Антитела или их антигенсвязывающие фрагменты по настоящему раскрытию могут быть получены и очищены общепринятыми способами. Например, последовательности кДНК, кодирующие тяжелую и легкую цепи, можно клонировать и рекомбинировать в экспрессионный вектор. Вектором, экспрессирующим рекомбинантный иммуноглобулин, можно стабильно трансфицировать клетки-хозяева. В качестве более рекомендованного предшествующего уровня техники, экспрессионные системы млекопитающих могут приводить к гликозилированию антител, особенно на высоко консервативных N-концевых участках в области Fc. Получали стабильные клоны посредством экспрессии антитела, специфично связывающегося с человеческим клаудином 18.2. Позитивные клоны могут быть размножены в биореакторах для получения антител. Культуральную среду, в которую было секретировано антитело, можно очищать традиционными методиками. Например, очистку можно проводить на колонке с сефарозой FF с белком А или G, которая была уравновешена буфером. Компоненты неспецифичного связывания вымывают. Связанное антитело элюируют с помощью градиента рН, и фрагменты антитела выявляют посредством SDS-PAGE (от англ. sodium dodecyl sulphate-polyacrylamide gel electrophoresis - электрофорез в полиакриламидном геле в присутствии додецилсульфата натрия) и затем объединяют. Антитела можно фильтровать и концентрировать, используя обычные методики. Растворимые смеси и мультимеры можно эффективно удалять обычными методиками, такими как гель-фильтрация или ионный обмен. Затем полученный продукт сразу же замораживают, например, при -70°C, или могут быть лиофилизированы.

Термин «введение», «осуществление дозирования» и «обработка» при применении к животному, человеку, субъекту эксперимента, клетке, ткани, органу или биологической жидкости, относится к приведению экзогенного фармацевтического, терапевтического, диагностического средства или композиции в контакт с животным, человеком, субъектом, клеткой, тканью, органом или биологической жидкостью. Термины «введение», «осуществление дозирования» или «обработка» могут относиться, например, к терапевтическим, фармакокинетическим, диагностическим, исследовательским и экспериментальным способам. Обработка клетки охватывает приведение реагента в контакт с клеткой, а также приведение реагента в контакт с жидкостью, данная жидкость, в свою очередь, находится в контакте с клеткой. Термин «введение», «осуществление дозирования» или «обработка» также означает обработки in vitro или ex vivo, например клетки, реагентом, диагностическим, связывающим соединением или другой клеткой. Термин «лечение», при применении к субъекту-человеку, субъекту ветеринарии или субъекту исследования, относится к терапевтическому лечению, профилактическим или превентивным мерам, к исследовательским и диагностическим применениям.

Термин «лечить» означает введение терапевтического средства, такого как композиция, содержащая любое из антител или их антигенсвязывающих фрагментов по настоящему раскрытию, внутрь или наружно пациенту, имеющему один или более симптомов заболевания, в отношении которого данное терапевтическое средств обладает известной терапевтической активностью. Типично средство вводят в количестве, эффективном для облегчения одного или более симптомов заболевания у пациента или популяции, подлежащих лечению, вызывая регрессию или ингибируя прогрессирование такого(их) симптома(ов) до какой-либо клинически измеряемой степени. Количество терапевтического средства, которое является эффективным для облегчения какого-либо конкретного симптома заболевания (также называемое «терапевтически эффективным количеством»), может варьировать в зависимости от разных факторов, таких как патологическое состояние, возраст и масса тела пациента, и способности лекарственного средства вызывать желаемый ответ у пациента. Был ли облегчен симптом заболевания можно оценить посредством любого клинического измерения, обычно используемого лечащими врачами или другими квалифицированными медицинскими работниками, для оценки тяжести или статуса прогрессирования того симптома. В то время как одно воплощение настоящего раскрытия (например, способ лечения или продукт изготовления) может не быть эффективным в облегчении целевого(ых) симптома(ов) заболевания у каждого пациента, оно должно облегчать целевой(ые) симптом(ы) заболевания у статистически значимого числа пациентов, как определено любым статистическим критерием, известным в данной области, таким как t-критерий Стьюдента, критерий хи-квадрат, U-критерий Манна и Уитни, критерий Краскела-Уоллиса (Н-критерий), критерий Джонкхира-Терпстры и критерий Уилкоксона.

Термин «консервативная модификация» или «консервативная замена или замещение» относится к заменам аминокислот в белке другими аминокислотами, имеющими похожие характеристики (например, заряд, размер боковых цепей, гидрофобность/гидрофильность, конформация и жесткость остова и т.д.), таким образом, что данные изменения могут часто происходить без изменения биологической активности белка. Специалисты в данной области осознают, что в общем одна единственная аминокислотная замена в заменимой области полипептида существенно не изменяет биологическую активность (см., например, Watson et al. (1987) Molecular Biology of the Gene, The Benjamin/Cummings Pub. Co., page 224, 4th edition). Кроме того, замены структурно или функционально похожих аминокислот с меньшей вероятностью нарушат биологическую активность. Типичные консервативные замены изложены ниже в таблице с названием «Типичные аминокислотные консервативные замены».

Термин «эффективное количество» или «эффективная доза» относится к количеству лекарственного средства, соединения или фармацевтической композиции, необходимому для получения какого-либо одного или более полезных или желательных результатов. Для профилактических применений полезные или желательные результаты включают исключение или снижение риска, ослабление тяжести или задержку начала заболевания, включая биологические, гистологические и поведенческие проявления патологического состояния, его осложнения и промежуточные патологические фенотипы на протяжении развития данного патологического состояния. Для терапевтических применений полезные или желательные результаты включают клинические результаты, такие как уменьшение частоты возникновения разных состояний, ассоциированных с антигеном-мишенью по настоящему раскрытию, или улучшение одного или более симптомов состояния, уменьшение дозировки других средств, требующихся для лечения патологического состояния, усиление эффективности другого средства и/или задержка прогрессирования патологического состояния, ассоциированного с антигеном-мишенью по настоящему раскрытию, у пациентов.

Термин «экзогенный» относится к веществам, которые образуются вне организмов, клеток или человека, в зависимости от обстоятельств.

Термин «эндогенный» относится к веществам, которые образуются в организмах, клетках или организме человека, в зависимости от обстоятельств.

Термин «идентичность» относится к сходству последовательностей между двумя полинуклеотидными последовательностями или между двумя полипептидными последовательностями. Когда положение в обеих из данных двух последовательностей, подлежащих сравнению, занято одной и той же мономерной субъединицей - основанием или аминокислотой - например, если положение в каждой из двух молекул ДНК занято аденином, тогда данные молекулы являются гомологичными в данном положении. Процент идентичности двух последовательностей является функцией числа совпадающих или гомологичных положений, являющихся общими у данных двух последовательностей, деленного на число сравниваемых положений и затем умноженного на 100. Например, при оптимальном выравнивании двух последовательностей, если 6 из 10 положений в данных двух последовательностях совпадают или являются гомологичными, тогда данные две последовательности обладают 60%-ной гомологией; если 95 из 100 положений в двух последовательностях совпадают или являются гомологичными, тогда данные две последовательности обладают 95%-ной гомологией. Обычно, когда выравнивают две последовательности, сравнение проводят с получением максимального процента идентичности. Например, сравнение можно проводить посредством алгоритма BLAST, в котором параметры алгоритма выбраны для предоставления максимального совпадения между каждой последовательностью по всей длине каждой референсной последовательности. Следующие ссылки относятся к алгоритму BLAST, часто используемому для анализа последовательностей: алгоритм BLAST (BLAST ALGORITHMS): Altschul, SF et al., (1990) J. Mol. Biol. 215:403-410; Gish, W. et al., (1993) Nature Genet. 3:266-272; Madden, TL et al., (1996) Meth. Enzymol. 266:131-141; Altschul, SFet al., (1997) Nucleic Acids Res. 25:3389-3402; Zhang, J. et al. (1997) Genome Res. 7:649-656. Другие общепринятые алгоритмы BLAST, такие как алгоритмы, имеющиеся у NCBI BLAST, также хорошо известны специалистам в данной области.

В том виде, в котором они используются в данном документе, выражения «клетка», «клеточная линия» и «клеточная культура» используются взаимозаменяемо, и все такие обозначения включают потомство. Таким образом, термины «трансформант» и «трансформированная клетка» включают первичные исследуемые клетки и полученные из них культуры без учета числа переносов. Также следует понимать, что все потомство не может быть с точностью идентичным по содержанию ДНК вследствие целенаправленных или случайных мутаций. Включено потомство с мутациями, которое имеет такую же функцию или обладает такой же биологической активностью, как показано в исходно трансформированных клетках. Когда предполагаются отличающиеся обозначения, это будет явно понятно из контекста.

Термин «выделенный» относится к тому случаю, когда молекула по существу не содержит других биологических молекул, таких как нуклеиновые кислоты, белки, липиды, углеводы или другие вещества, такие как обломки клеток и среда для выращивания. В общем, термин «выделенный» не предназначен для обозначения полного отсутствия данных веществ или отсутствия воды, буферов или солей, если они не находятся в количестве, которое значимо мешает экспериментальному или терапевтическому применению соединения, как описано в данном документе.

Термин «возможный» или «возможно» означает, что событие или ситуация, которая следует, может происходить, но не обязательно происходит, и описание включает примеры, в которых событие или ситуация происходит или не происходит.

Термин «фармацевтическая композиция» относится к составу смеси одного или более соединений согласно настоящему раскрытию или их физиологически/фармацевтически приемлемой соли или пролекарства и других химических компонентов, таких как физиологически/фармацевтически приемлемые носители и вспомогательные вещества. Целью фармацевтической композиции является содействие введению в организм, облегчение поглощения активного вещества и оказание, таким образом, биологического действия.

Термин «фармацевтически приемлемый носитель» относится к любому неактивному веществу, подходящему для применения в композиции для доставки антител или антигенсвязывающих фрагментов. Носитель может представлять собой антиадгезивное средство, связывающее средство, покрывающий агент, разрыхлитель, наполнитель или разбавитель, консервант (такой как антиоксидант, антибактериальное или противогрибковое средство), подсластитель, средство, препятствующее поглощению, увлажнитель, эмульгатор, буфер и т.п. Примеры подходящих фармацевтически приемлемых носителей включают воду, этанол, полиол (такой как глицерин, пропиленгликоль, полиэтиленгликоль и т.п.), декстрозу, растительное масло (такое как оливковое масло), физиологический раствор, буфер, забуференный физиологический раствор и изотонический агент, как например, сахара, полиол, сорбит и хлорид натрия.

Кроме того, настоящее раскрытие включает средство лечения заболевания, ассоциированного с клетками, позитивными в отношении антигена-мишени (такого как клаудин 18.2), средство, содержащее антитело против клаудина 18.2 или его антигенсвязывающий фрагмент по настоящему раскрытию в качестве активного вещества.

В настоящем раскрытии отсутствует конкретное ограничение в отношении заболевания, связанного с клаудином 18.2, при условии, что данное заболевание связано с клаудином 18.2. Например, терапевтический ответ, индуцированный молекулой по настоящему раскрытию, включает: (1) предотвращение связывания клаудина 18.2 с его рецептором/лигандом, посредством связывания молекулы по настоящему раскрытию с человеческим клаудином 18.2, или (2) уничтожение опухолевых клеток, сверхэкспрессирующих клаудин 18.2. Таким образом, молекулы по настоящему раскрытию, когда содержатся в препаратах и композициях, подходящих для терапевтических применений, очень полезны для таких людей, у которых есть опухоли или раковые заболевания, предпочтительно меланома, рак толстой кишки, рак молочной железы, рак легкого, рак желудка, рак кишечника, рак почки, немелкоклеточный рак легкого, рак мочевого пузыря и т.д.

Кроме того, настоящее раскрытие относится к способам иммунодетекции или определения антигенов-мишеней (например, клаудина 18.2), реагентам для иммунодетекции или определения антигенов-мишеней (например, клаудина 18.2), способам иммунодетекции или определения клеток, экспрессирующих антигены-мишени (например, клаудин 18.2), и диагностическим средствам для осуществления диагностики заболеваний, ассоциированных с клетками, позитивными в отношении антигена-мишени (например, клаудина 18.2), содержащим антитело или фрагмент антитела по настоящему раскрытию, которое специфично распознает антиген-мишень (например, человеческий клаудин 18.2) и связывается с его внеклеточными аминокислотными последовательностями или третичной структурой, в качестве активного вещества.

В настоящем раскрытии способ выявления или измерения количества антигена-мишени (например, клаудина 18.2) может представлять собой любой известный способ. Например, он включает способ иммунологического анализа или иммунодетекции.

Способ иммунологического анализа или иммунодетекции представляет собой способ выявления или измерения количества антитела или антигена с меченым антигеном или антителом. Примеры способов иммунологического анализа или иммунодетекции включают иммунологический способ с использованием антитела, меченного радиоактивным веществом (RIA), иммуноферментный анализ (EIA или ELISA), флуоресцентный иммунологический анализ (FIA - от англ. fluorescence immunoassay), иммунолюминесцентный анализ, вестерн-блоттинг, физико-химический способ и т.д.

Упомянутые выше заболевания, связанные с клаудин 18.2-позитивными клетками, могут быть диагностированы посредством выявления или измерения клаудин 18.2-экспрессирующих клеток с использованием антител или фрагментов антител по настоящему раскрытию.

Клетки, экспрессирующие полипептид, можно выявлять известными способами иммунодетекции, предпочтительно посредством иммунопреципитации, окрашивания клеток флуоресцентными красителями, иммуногистохимического окрашивания и т.п. Кроме того, можно использовать способ, такой как способ окрашивания на основе флюоресцирующих антител с использованием системы FMAT8100HTS (Applied Biosystem).

В настоящем раскрытии образцы, подлежащие выявлению или измерению в отношении антигена-мишени (например, клаудина 18.2), конкретным образом не ограничены, в том случае, если они могут содержать клетки, экспрессирующие антиген-мишень (например, клаудин 18.2), как например, ткани, клетки, кровь, плазма, сыворотка, секреция поджелудочной железы, моча, кал, тканевая жидкость или культуральная среда.

В зависимости от требуемого способа диагностики, диагностическое средство, содержащее моноклональное антитело или фрагмент антитела по настоящему раскрытию, могло бы также содержать реагенты для проведения реакции антиген-антитело или реагенты для выявления данной реакции. Реагенты для проведения реакции антиген-антитело включают буферы, соли и т.п. Реагенты для выявления включают реагенты, обычно используемые в способах иммунологического анализа или иммунодетекции, например, меченое вторичное антитело, которое распознает моноклональное антитело, фрагмент антитела или его конъюгат, и субстрат, соответствующий метке.

Подробности одного или более воплощений настоящего раскрытия изложены в приведенном выше описании. Предпочтительные методы и материалы описаны ниже, несмотря на то, что любой метод или материал, похожий или идентичный методу или материалу, описанному в данном документе, можно использовать на практике или в анализе настоящего раскрытия. На примере описания изобретения и формулы изобретения, другие признаки, цели и преимущества настоящего раскрытия станут очевидными. В описании изобретения и формуле изобретения форма единственного числа включает аспекты во множественном числе, если контекстом явным образом не продиктовано иное. Если в данном документе явным образом не определено иное, все технические и научные термины, используемые в данном документе, имеют значение, обычно подразумеваемое специалистами в области, к которой принадлежит данное раскрытие. Все патенты и публикации, приведенные в описании изобретения, включены посредством ссылки. Следующие примеры представлены для более полной иллюстрации предпочтительных воплощений настоящего раскрытия. Данные примеры не следует рассматривать как ограничивающие каким-либо образом объем настоящего раскрытия, и объем настоящего раскрытия определяется формулой изобретения.

Примеры

Пример 1: Конструирование линии клеток, экспрессирующих на высоком уровне клаудин 18.2

Реагент для трансфекции липофектамин 3000 использовали для трансфекции лентивирусной экспрессионной векторной плазмидой pCDH-hClaudin18.2 и пакующим вектором лентивирусной системы pVSV-G, pCMV-dR8.91, клеток 293Т, упаковывающих вирус; супернатант культуральной среды, содержащей вирус, собирали, фильтровали и центрифугировали при сверхвысокой скорости; концентрированный вирус использовали для инфицирования линии перстневидных клеток карциномы желудка человека NUGC4, подвергали скринингу с пуромицином в течение двух-трех недель и затем сортировали посредством сортировки одиночных клеток FACS.

Уровень экспрессии клаудина 18.2 определяли в соответствии с баллом опухоли IHC (от англ. ImmunoHistoChemistry - иммуногистохимия). Клетки с уровнем экспрессии клаудина 18.2, эквивалентным уровню экспрессии клаудина 18.2 опухолей с баллом IHC 3, считаются клетками с высоким уровнем экспрессии, и клетки с уровнем экспрессии клаудина 18.2, эквивалентным уровню экспрессии клаудина 18.2 опухолей с баллом IHC 2, считаются клетками со средним уровнем экспрессии. Экспрессию клаудина 18.2 на поверхности клеток NUGC4, инфицированных лентивирусом, выявляли посредством FACS-выявления, и отбирали моноклональные клеточные линии NUGC4/hClaudin18.2 с самым высоким уровнем экспрессии клаудина 18.2. В то же время, экспрессию клаудина 18.2 на поверхности клеток NUGC4 дикого типа выявляли посредством FACS, и отбирали клональные клеточные линии NUGC4 со средним уровнем экспрессии клаудина 18.2. NUGC4 дикого типа представляли собой клетки с низким уровнем экспрессии клаудина 18.2.

Отобранные моноклональные клеточные линии размножали и культивировали, и замораживали и хранили для последующих анализов.

Последовательность клаудина 18.2 Genbank: NP_001002026: (SEQ ID NO: 1)

ДНК-последовательность клаудина 18.2: (SEQ ID NO: 2)

Пример 2: Получение моноклонального антитела против человеческого клаудина 18.2

1. Иммунизация

Моноклональные антитела против клаудина 18.2 получали посредством иммунизации мышей

Для эксперимента использовали самок белых мышей, SJL, в возрасте 6-8 недель (Beijing Charles River Experimental Animal Technology Co., Ltd., номер лицензии на производство животных: SCXK (Пекин) 2012-0001). Среда кормления: уровень SPF (от англ. specific pathogen free - свободный от специфической патогенной микрофлоры). После приобретения мышей держали в лабораторных условиях в течение 1 недели, с 12/12-часовым циклом свет/темнота, при температуре 20-25°C; влажности 40-60%. Затем мышей, которые были адаптированы к окружающей среде, иммунизировали в соответствии со следующими схемами. Антиген иммунной системы представлял собой клетку huClaudin18.2-HEK293 (клеточная линия HEK-293, стабильно трансфицированная плазмидой с человеческим клаудином 18.2).

Протокол иммунизации: перед первичной иммунизацией с использованием клеток мышам инъецировали внутрибрюшинно (в.б.) адъювант TiterMax® Gold (Sigma кат. № Т2684), 0,1 мл/мышь; Спустя один час, каждой мыши инъецировали внутрибрюшинно (в.б.) клеточную жидкость, разведенную до концентрации 1×10⁸/мл 0,1 мл физиологического раствора. После равномерного распределения клеток посредством пипетирования, их инокулировали в сутки 0, сутки 14, сутки 28, сутки 42 и сутки 56. Образцы крови собирали в сутки 21, 35, 49 и 63; титр антител в мышиной сыворотке определяли способом ELISA (от англ. enzyme-linked immunosorbent assay - твердофазный иммуноферментный анализ). После 4-5 иммунизаций мыши с высоким титром антител в сыворотке, который имел тенденцию к достижению плато, отбирали для слияния со спленоцитом. За трое суток до слияния со спленоцитом 1×10⁷ клеток инъецировали внутрибрюшинно (в.б.) для повторной иммунизации.

2. Слияние со спленоцитом

Клетки гибридомы получали посредством слияния лимфоцитов селезенки с клетками миеломы Sp2/0 (АТСС® CRL-8287^™), используя способ слияния, опосредованный ПЭГ (полиэтиленгликоль). Клетки гибридомы ресуспендировали в полной среде (среда IMDM, содержащая 20% FBS (от англ. Fet al Bovine Serum - фетальная телячья сыворотка), 1×НАТ и 1×OPI) при плотности 0,5×10⁶ - 1×10⁶/мл, засевали в 96-луночный планшет в количестве 100 мкл/лунка, инкубировали при 37°C и 5% CO₂ в течение 3-4 суток, добавляли 100 мкл/лунка полной среды HAT и поддерживали на протяжении еще 3-4 суток до образования клонов. Супернатант удаляли, добавляли в него 200 мкл/лунка полной среды НТ (среда IMDM, содержащая 20% FBS, 1×НТ и 1×OPI), инкубировали при 37°C, 5% CO₂ в течение 3 суток и затем подвергали ELISA-выявлению.

3. Скрининг клеток гибридомы

В соответствии с плотностью роста клеток гибридомы, супернатант культуры выявляли способом связывания ELISA. Отбирали клетки, которые обладают сильной способностью связывания с клетками huClaudin18.2-HEK293, одновременно не связываются с клетками HEK293, и затем размножали и подвергали криоконсервации в свое время; субклонирование проводили от двух до трех раз до тех пор, пока не был получен клон одиночной клетки.

Клетки после каждого субклонирования также анализировали посредством анализа связывания клеток. Клоны гибридомы получали посредством осуществления скрининга посредством указанного выше анализа. Антитела дополнительно получали способом на основе клеточной культуры, не содержащей сыворотку. Антитела очищали в соответствии с примером очистки и использовали в примерах анализа.

Пример 3: Гуманизация мышиных антител

Отбирали моноклональные линии клеток гибридомы mAb901 и mAb902 с высокой активностью in vitro; последовательности моноклональных антител клонировали и затем гуманизировали, подвергали рекомбинантной экспрессии и оценивали в отношении активности.

Процедуры клонирования последовательностей из гибридомы выглядели следующим образом. Клетки гибридомы собирали в логарифмическую фазу роста. РНК выделяли посредством Тризола (Invitrogen, 15596-018) в соответствии с инструкцией набора и подвергали обратной транскрипции посредством обратной транскриптазы PrimeScript™ (Takara, кат. №2680А). кДНК, полученные в результате обратной транскрипции, амплифицировали посредством ПЦР (полимеразная цепная реакция) с использованием набора праймеров к мышиному lg (Novagen, ТВ326 Rev. В0503), и амплифицированные продукты направляли в компанию для секвенирования. Аминокислотные последовательности, соответствующие полученным последовательностям ДНК, показаны в SEQ ID NO: 3-6;

Мышиная вариабельная область тяжелой цепи mAM901 (SEQ ID NO: 3)

Мышиная вариабельная область легкой цепи mAM901 (SEQ ID NO: 4)

Мышиная вариабельная область тяжелой цепи mAM902 (SEQ ID NO: 5)

Мышиная вариабельная область легкой цепи mAM902 (SEQ ID NO: 6)

Указанные выше мышиные вариабельные области тяжелой и легкой цепей соответственно связывали с константной областью тяжелой цепи человеческого lgG1 и константной областью легкой каппа-цепи человека, как описано ниже, таким образом, чтобы образовались химерные антитела ch1901 и ch1902.

Константную область выбирали из следующих последовательностей:

Константная область тяжелой цепи человеческого антитела IgG 1 (SEQ ID NO: 7)

Константная область легкой каппа-цепи человека: (SEQ ID NO: 8)

Мышиные моноклональные антитела гуманизировали, как раскрыто во многих документах в данной области. Кратко, исходные (мышиное антитело) константные домены заменяли человеческими константными доменами, и последовательности антител зародышевой линии человека выбирали на основе гомологии мышиных и человеческих антител для проведения прививания CDR. В настоящем изобретении молекулы-кандидаты с благоприятной активностью выбирали для гуманизации, и результаты выглядят следующим образом.

1. Области CDR мышиного антитела

Аминокислотные остатки CDR VH/VL в таблице 4 определяли и аннотировали по критериям нумерации Kabat.

Последовательности CDR мышиных антител показаны в Таблице 4:

2. Выбор последовательностей FR областей зародышевой линии человека

На основе полученной типичной структуры CDR VH/VL мышиного антитела последовательности вариабельных областей тяжелой и легкой цепей сравнивали с базой данных антител зародышевой линии с получением матрицы зародышевой линии человека с высокой гомологией. Каркасная область легкой цепи зародышевой линии человека происходила из гена легкой каппа-цепи человека.

2.1 Гуманизация и дизайн обратных мутаций mAb1901

Соответствующее антитело зародышевой линии человека выбирали для гуманизации мышиного антитела mAb1901. Области CDR мышиного антитела mAb1901 прививали на выбранную гуманизируемую матрицу с получением гуманизированных вариабельных областей. Последовательность гуманизированной вариабельной области тяжелой цепи, как показано в SEQ ID NO: 24, и последовательность вариабельной области легкой цепи, как показано в SEQ ID NO: 21, объединяли с константными областями IgG с образованием интактного антитела. В то же время, область FR в области V гуманизированного антитела подвергали обратной мутации, и иллюстративные обратные мутации и комбинации выглядят следующим образом:

Соответствующая вариабельная область тяжелой цепи, указанная в приведенной выше таблице, может быть связана с константной областью тяжелой цепи человеческого lgG1, как показано в SEQ ID NO: 7, с образованием тяжелой цепи полноразмерного антитела, и вариабельная область легкой цепи может быть связана с константной областью легкой цепи к человека, как показано в SEQ ID NO: 8, с образованием легкой цепи полноразмерного антитела. В других воплощениях вариабельная область тяжелой цепи и вариабельная область легкой цепи также могут быть отдельно связаны с другой константной областью тяжелой цепи и константной областью легкой цепи с образованием полноразмерного антитела.

2.2 Гуманизация и дизайн обратных мутаций mAb1902

Соответствующее антитело зародышевой линии человека выбирали для гуманизации мышиного антитела mAb1902. Области CDR мышиного антитела mAb1902 прививали на выбранную матрицу для гуманизации с получением гуманизированных вариабельных областей. Последовательность гуманизированной вариабельной области тяжелой цепи представляет собой такую, как показано в SEQ ID NO: 31, и последовательность вариабельной области легкой цепи представляет собой такую, как показано в SEQ ID NO: 28, и затем их рекомбинировали с константными областями IgG с образованием интактного антитела. В то же время, область FR в области V гуманизированного антитела подвергали обратной мутации, и способы осуществления и комбинации иллюстративных обратных мутаций выглядят следующим образом:

Соответствующая вариабельная область тяжелой цепи, указанная в приведенной выше таблице, может быть связана с константной областью тяжелой цепи человеческого lgG1, как показано в SEQ ID NO: 7, с образованием тяжелой цепи полноразмерного антитела, и вариабельная область легкой цепи может быть связана с константной областью легкой цепи к человека, как показано в SEQ ID NO: 8, с образованием легкой цепи полноразмерного антитела.

В качестве примера, полноразмерная последовательность антитела выглядит следующим образом:

химерное антитело ch1901:

тяжелая цепь ch1901: (SEQ ID NO: 35)

легкая цепь ch1901 (SEQ ID NO: 36)

химерное антитело ch1902:

тяжелая цепь ch1902 (SEQ ID NO: 37)

легкая цепь ch1902 (SEQ ID NO: 38)

Последовательности легкой и тяжелой цепи полноразмерного антитела выглядят следующим образом:

Последовательности легкой и тяжелой цепей полноразмерного антитела выглядят следующим образом:

Антитело положительного контроля по настоящему раскрытию представляло собой IMAB-362 (доступно из WO2016166122):

Тяжелая цепь IMAB-362 (SEQ ID NO: 53)

Легкая цепь IMAB-362 (SEQ ID NO: 54)

Упомянутые выше антитела клонировали, экспрессировали и очищали посредством общепринятых способов клонирования и рекомбинантной экспрессии генов.

Биологическая оценка in vitro

Пример анализа 1: Анализ связывания ELISA на клеточном уровне

Клеточный анализ ELISA использовали для выявления свойства связывания антител против клаудина 18.2. Клетки NUGC4, стабильно экспрессирующие клаудин 18.2, культивировали в 96-луночном планшете для клеток (Corning, 3599) до тех пор, пока плотность роста клеток не достигала 90%, 4%-ный параформальдегид добавляли для фиксации клеток на протяжении 1 часа. Планшет три раза промывали буфером PBST (PBS (от англ. Phosphate buffered saline - фосфатно-солевой буферный раствор), содержащий 0,05% Tween-20, рН 7,4), и затем блокировали посредством добавления 200 мкл/лунка 5%-ного обезжиренного молока (сухое обезжиренное молоко Bright), разведенного PBS, в качестве блокирующего раствора и инкубировали в инкубаторе при 37°C в течение 2,5 часов или при 4°C в течение ночи (16-18 часов). После блокирования блокирующий раствор отбрасывали, и планшет 3 раза промывали буфером PBST, добавляли 50 мкл/лунка анализируемых антител, разведенных разбавителем образца (PBS, содержащий 1%-ное обезжиренное молоко, рН 7,4) и помещали в инкубатор при 37°C на 2 часа. После окончания инкубации планшет 5 раз промывали PBST, добавляли 100 мкл/лунка вторичного антитела козы против человеческого антитела, меченного HRP (от англ. horseradish peroxidase - пероксидаза хрена) (Jackson Immuno Research, кат. №109-035-003), разведенного разбавителем образца, и инкубировали при 37°C в течение 1 часа. После промывки планшета PBST 6 раз добавляли 50 мкл/лунка хромогенного субстрата ТМВ (от англ. tetramethylbenzidine - тетраметилбензидин) (KPL, кат. №52-00-03), инкубировали при комнатной температуре в течение 10-15 мин, и добавляли 50 мкл/лунка 1М H₂SO₄ для остановки реакции. Значение поглощения считывали посредством микропланшет-ридера MD Versa Мах ТМ при 450 нм, и рассчитывали значение ЕС₅₀ (от англ. half maximal effective concentration - полумаксимальная эффективная концентрация), показывающее связывание антитела против клаудина 18.2, с клаудином 18.2 (Результаты показаны ниже в таблице).

Пример анализа 2: Анализ связывания антител на клеточном уровне

Клеточную суспензию, 1×10⁶/мл, получали посредством клеток NUGC4, стабильно экспрессирующих клаудин 18.2, и буфер FACS (2% фетальная телячья сыворотка) (Gibco, 10099141) в PBS (Sigma, Р4417-100ТАВ), рН 7,4) добавляли в 96-луночный круглодонный планшет (Corning, 3795) в количестве 100 мкл/лунка. После центрифугирования для удаления супернатанта разные концентрации анализируемых антител против клаудина 18.2, разведенных буфером FACS, добавляли в количестве 50 мкл/лунка и инкубировали в течение 1 часа в холодильнике при 4°C в темноте. После центрифугирования и промывки буфером FACS при 300g 3 раза рабочую концентрацию антитела против человеческого IgG (H+L), покрытого Alexa Fluor 488 (invitrogen, А-11013), добавляли и инкубировали в холодильнике при 4°C в темноте в течение 40 минут. После центрифугирования и промывки буфером FACS при 300g 3 раза среднее геометрическое интенсивности флуоресценции измеряли на проточном цитометре BD FACS Cantoll, и рассчитывали значение ЕС50, показывающее связывание антитела против клаудина 18.2 с клетками NUGC4, стабильно экспрессирующими клаудин 18.2. Результаты показаны на Фиг. 1.

Пример анализа 3: анализ эндоцитоза антител

Анализируемое антитело против клаудина 18.2, предварительно меченное DyLight 488 NHS Ester (thermofisher, 46403), добавляли в клетки NUGC4, 1×10⁶/мл, стабильно экспрессирующие клаудин 18.2, в конечной концентрации 5 мкг/мл и помещали на лед для инкубации в течение 1 часа в темноте, центрифугировали и промывали 3 раза предварительно охлажденным буфером FACS (2% фетальная телячья сыворотка в PBS, рН 7,4), после удаления супернатанта, добавляли предварительно нагретую полную среду и помещали в инкубатор для клеток при 37°C, 5% CO₂. Клетки вынимали, спустя 0, 0,5, 1, 2 и 4 часа, соответственно, и помещали на лед в темноте. После того, как все образцы собирали, центрифугировали при 300g при низкой температуре, добавляли элюирующий буфер (глицин 0,05 М, 0,1 М хлорид натрия, рН 1,7) и инкубировали при комнатной температуре в течение 7 минут. Образцы центрифугировали и промывали буфером FACS при 300 g один раз, среднее геометрическое интенсивности флуоресценции измеряли на проточном цитометре BD FACS Cantoll, и рассчитывали эффективность эндоцитоза антитела против клаудина 18.2 в отношении клеток NUGC4, стабильно экспрессирующих клаудин 18.2. Результаты показывают (см. Фиг. 2), что гуманизированные антитела обладают благоприятной эффективностью эндоцитоза.

Пример анализа 4: Определение аффинности антитела на основе проточной цитометрии

В день тестирования клетки HEK293/hClaudin18.2 собирали в 96-луночный планшет с U-образным дном, с 1×10⁵ - 2×10⁵ клеток на лунку. Добавляли антитело против клаудина 18.2 с исходной концентрацией 5 мкг/мл, 2х градиентными разведениями (12 точек концентраций) и инкубировали при 4°C в течение 1 часа. Положительный контроль представлял собой IMAB362, и лунка без антитела была установлена как отрицательный контроль. Антитело удаляли посредством центрифугирования, и затем добавляли 100 мкл/лунка антитела против человеческого Fc IgG, конъюгированного с FITC (200х), инкубировали при 4°C в течение 30 минут в темноте, два раза промывали PBS+2% FBS и готовили для выявления посредством проточной цитометрии. BD FACS Cantoll запускали и предварительно нагревали, новый анализ осуществляли посредством программного обеспечения BD FACSDiva. Выявляли образец отрицательного контроля HEK293/hClaudin18.2, и напряжение FSC и SSC доводили до соответствующих значений и сохраняли. Холостой образец В и стандартную кривую 1 выявляли соответственно в соответствии с инструкциями к набору Quantum™ FITC-5 MESF. Напряжение FITC доводили до соответствующего значения и сохраняли. Образцы в 96-луночном планшете с U-образным дном выявляли при сохраненном напряжении, и записывали данные. Программное обеспечение Flowjo использовали для анализа экспериментальных данных с получением значения Geo Mean, и стандартную кривую MESF-Geo Mean аппроксимировали в соответствии с инструкциями к набору Quantum™ FITC-5 MESF. Молярные концентрации антитела против клаудина 18.2, связывающегося с клетками HEK293/hClaudin18.2, и концентрации свободного антитела рассчитывали в соответствии со значением флуоресценции антитела против человеческого Fc IgG, конъюгированного с FITC, и Bmax и константу диссоциации KD антитела рассчитывали посредством использования способа на основе построения графика Скэтчарда. Результаты показаны в Таблице 15.

Пример анализа 5: Оценка ADCC-эффекта антитела

Разные клетки NUGC4 (с высоким, средним и низким уровнем экспрессии клаудина 18,2) расщепляли, центрифугировали при 1000 об./мин. и ресуспендировали для осуществления подсчета. Клетки ресуспендировали в RPMI 1640, не содержащей феноловый красный (Gibco, кат. №11835-030), содержащей 10% FBS (фетальная телячья сыворотка со сверхнизким уровнем IgG, Новая Зеландия, Gibco, 1921005PJ), 3×10⁵ клеток/мл. 25 мкл клеток добавляли в каждую лунку 96-луночного планшета (Corning, 3903), 7500 клеток/лунка. Антитело разводили в упомянутой выше среде, не содержащей феноловый красный, с получением 3х разбавленного раствора антитела, и 25 мкл/лунка антитела добавляли к планшету для клеток и инкубировали в инкубаторе при 37°C, 5% CO₂ в течение 0,5 часа.

Эффекторные клетки (FcrR3A-V158-NFAT-RE-Jurkat клетки) собирали, центрифугировали при 1000 об/мин и ресуспендировали для осуществления подсчета. Клетки ресуспендировали в RPMI 1640, не содержащей феноловый красный, содержащей 10% FBS (фетальная телячья сыворотка со сверхнизким уровнем IgG, Новая Зеландия) в количестве 3×10⁶ клеток/мл, и 25 мкл клеток добавляли в аналитический планшет (7,5×10⁴ клеток/лунка) и инкубировали в инкубаторе при 37°C, 5% CO₂ в течение 6 часов.

75 мкл/лунка Bright-Glo (Promega, Е2610) добавляли в каждую лунку аналитического планшета, и хемилюминесценцию выявляли посредством микропланшет-ридера (PerkinElmer, VITOR3).

Результаты показывают (см. Таблицу 16 и Фиг. 3А - Фиг. 3С), что как антитело h1901-11, так и h1902-5 демонстрируют очень сильную ADCC-активность в клетках NUGC4, экспрессирующих клаудин 18.2 на низком, среднем и высоком уровнях.

--->

ПЕРЕЧЕНЬ ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТЕЙ

<110> JIANGSU HENGRUI MEDICINE CO., LTD.;

SHANGHAI HENGRUI PHARMACEUTICAL CO., LTD.

<120> АНТИТЕЛО ПРОТИВ КЛАУДИНА 18.2 И ЕГО ПРИМЕНЕНИЕ

<130> 702029CPCP

<140> PCT/CN2020/082369

<141> 2020-03-31

<150> 201910257853.6

<151> 2019-04-01

<160> 54

<170> SIPOSequenceListing 1.0

<210> 1

<211> 261

<212> Белок

<213> Homo sapiens

<220>

<221> Пептид

<223> Белок клаудин 18.2

<400> 1

Met Ala Val Thr Ala Cys Gln Gly Leu Gly Phe Val Val Ser Leu Ile

1 5 10 15

Gly Ile Ala Gly Ile Ile Ala Ala Thr Cys Met Asp Gln Trp Ser Thr

20 25 30

Gln Asp Leu Tyr Asn Asn Pro Val Thr Ala Val Phe Asn Tyr Gln Gly

35 40 45

Leu Trp Arg Ser Cys Val Arg Glu Ser Ser Gly Phe Thr Glu Cys Arg

50 55 60

Gly Tyr Phe Thr Leu Leu Gly Leu Pro Ala Met Leu Gln Ala Val Arg

65 70 75 80

Ala Leu Met Ile Val Gly Ile Val Leu Gly Ala Ile Gly Leu Leu Val

85 90 95

Ser Ile Phe Ala Leu Lys Cys Ile Arg Ile Gly Ser Met Glu Asp Ser

100 105 110

Ala Lys Ala Asn Met Thr Leu Thr Ser Gly Ile Met Phe Ile Val Ser

115 120 125

Gly Leu Cys Ala Ile Ala Gly Val Ser Val Phe Ala Asn Met Leu Val

130 135 140

Thr Asn Phe Trp Met Ser Thr Ala Asn Met Tyr Thr Gly Met Gly Gly

145 150 155 160

Met Val Gln Thr Val Gln Thr Arg Tyr Thr Phe Gly Ala Ala Leu Phe

165 170 175

Val Gly Trp Val Ala Gly Gly Leu Thr Leu Ile Gly Gly Val Met Met

180 185 190

Cys Ile Ala Cys Arg Gly Leu Ala Pro Glu Glu Thr Asn Tyr Lys Ala

195 200 205

Val Ser Tyr His Ala Ser Gly His Ser Val Ala Tyr Lys Pro Gly Gly

210 215 220

Phe Lys Ala Ser Thr Gly Phe Gly Ser Asn Thr Lys Asn Lys Lys Ile

225 230 235 240

Tyr Asp Gly Gly Ala Arg Thr Glu Asp Glu Val Gln Ser Tyr Pro Ser

245 250 255

Lys His Asp Tyr Val

260

<210> 2

<211> 3350

<212> ДНК

<213> Homo sapiens

<220>

<221> ген

<223> клаудин 18.2

<400> 2

agaattgcgc tgtccacttg tcgtgtggct ctgtgtcgac actgtgcgcc accatggccg 60

tgactgcctg tcagggcttg gggttcgtgg tttcactgat tgggattgcg ggcatcattg 120

ctgccacctg catggaccag tggagcaccc aagacttgta caacaacccc gtaacagctg 180

ttttcaacta ccaggggctg tggcgctcct gtgtccgaga gagctctggc ttcaccgagt 240

gccggggcta cttcaccctg ctggggctgc cagccatgct gcaggcagtg cgagccctga 300

tgatcgtagg catcgtcctg ggtgccattg gcctcctggt atccatcttt gccctgaaat 360

gcatccgcat tggcagcatg gaggactctg ccaaagccaa catgacactg acctccggga 420

tcatgttcat tgtctcaggt ctttgtgcaa ttgctggagt gtctgtgttt gccaacatgc 480

tggtgactaa cttctggatg tccacagcta acatgtacac cggcatgggt gggatggtgc 540

agactgttca gaccaggtac acatttggtg cggctctgtt cgtgggctgg gtcgctggag 600

gcctcacact aattgggggt gtgatgatgt gcatcgcctg ccggggcctg gcaccagaag 660

aaaccaacta caaagccgtt tcttatcatg cctcaggcca cagtgttgcc tacaagcctg 720

gaggcttcaa ggccagcact ggctttgggt ccaacaccaa aaacaagaag atatacgatg 780

gaggtgcccg cacagaggac gaggtacaat cttatccttc caagcacgac tatgtgtaat 840

gctctaagac ctctcagcac gggcggaaga aactcccgga gagctcaccc aaaaaacaag 900

gagatcccat ctagatttct tcttgctttt gactcacagc tggaagttag aaaagcctcg 960

atttcatctt tggagaggcc aaatggtctt agcctcagtc tctgtctcta aatattccac 1020

cataaaacag ctgagttatt tatgaattag aggctatagc tcacattttc aatcctctat 1080

ttcttttttt aaatataact ttctactctg atgagagaat gtggttttaa tctctctctc 1140

acattttgat gatttagaca gactccccct cttcctccta gtcaataaac ccattgatga 1200

tctatttccc agcttatccc caagaaaact tttgaaagga aagagtagac ccaaagatgt 1260

tattttctgc tgtttgaatt ttgtctcccc acccccaact tggctagtaa taaacactta 1320

ctgaagaaga agcaataaga gaaagatatt tgtaatctct ccagcccatg atctcggttt 1380

tcttacactg tgatcttaaa agttaccaaa ccaaagtcat tttcagtttg aggcaaccaa 1440

acctttctac tgctgttgac atcttcttat tacagcaaca ccattctagg agtttcctga 1500

gctctccact ggagtcctct ttctgtcgcg ggtcagaaat tgtccctaga tgaatgagaa 1560

aattattttt tttaatttaa gtcctaaata tagttaaaat aaataatgtt ttagtaaaat 1620

gatacactat ctctgtgaaa tagcctcacc cctacatgtg gatagaagga aatgaaaaaa 1680

taattgcttt gacattgtct atatggtact ttgtaaagtc atgcttaagt acaaattcca 1740

tgaaaagctc actgatccta attctttccc tttgaggtct ctatggctct gattgtacat 1800

gatagtaagt gtaagccatg taaaaagtaa ataatgtctg ggcacagtgg ctcacgcctg 1860

taatcctagc actttgggag gctgaggagg aaggatcact tgagcccaga agttcgagac 1920

tagcctgggc aacatggaga agccctgtct ctacaaaata cagagagaaa aaatcagcca 1980

gtcatggtgg cctacacctg tagtcccagc attccgggag gctgaggtgg gaggatcact 2040

tgagcccagg gaggttgggg ctgcagtgag ccatgatcac accactgcac tccagccagg 2100

tgacatagcg agatcctgtc taaaaaaata aaaaataaat aatggaacac agcaagtcct 2160

aggaagtagg ttaaaactaa ttctttaaaa aaaaaaaaaa gttgagcctg aattaaatgt 2220

aatgtttcca agtgacaggt atccacattt gcatggttac aagccactgc cagttagcag 2280

tagcactttc ctggcactgt ggtcggtttt gttttgtttt gctttgttta gagacggggt 2340

ctcactttcc aggctggcct caaactcctg cactcaagca attcttctac cctggcctcc 2400

caagtagctg gaattacagg tgtgcgccat cacaactagc tggtggtcag ttttgttact 2460

ctgagagctg ttcacttctc tgaattcacc tagagtggtt ggaccatcag atgtttgggc 2520

aaaactgaaa gctctttgca accacacacc ttccctgagc ttacatcact gcccttttga 2580

gcagaaagtc taaattcctt ccaagacagt agaattccat cccagtacca aagccagata 2640

ggccccctag gaaactgagg taagagcagt ctctaaaaac tacccacagc agcattggtg 2700

caggggaact tggccattag gttattattt gagaggaaag tcctcacatc aatagtacat 2760

atgaaagtga cctccaaggg gattggtgaa tactcataag gatcttcagg ctgaacagac 2820

tatgtctggg gaaagaacgg attatgcccc attaaataac aagttgtgtt caagagtcag 2880

agcagtgagc tcagaggccc ttctcactga gacagcaaca tttaaaccaa accagaggaa 2940

gtatttgtgg aactcactgc ctcagtttgg gtaaaggatg agcagacaag tcaactaaag 3000

aaaaaagaaa agcaaggagg agggttgagc aatctagagc atggagtttg ttaagtgctc 3060

tctggatttg agttgaagag catccatttg agttgaaggc cacagggcac aatgagctct 3120

cccttctacc accagaaagt ccctggtcag gtctcaggta gtgcggtgtg gctcagctgg 3180

gtttttaatt agcgcattct ctatccaaca tttaattgtt tgaaagcctc catatagtta 3240

gattgtgctt tgtaattttg ttgttgttgc tctatcttat tgtatatgca ttgagtatta 3300

acctgaatgt tttgttactt aaatattaaa aacactgtta tcctacagtt 3350

<210> 3

<211> 120

<212> Белок

<213> Mus musculus

<220>

<221> Домен

<223> Вариабельная область тяжелой цепи мышиного антитела mAb1901

<400> 3

Glu Val Gln Leu Met Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Lys Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp Tyr

20 25 30

Gly Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Glu Met Gly Leu Glu Trp Ile

35 40 45

Ala Tyr Ile Ser Arg Gly Ser Ser Thr Ile Tyr Tyr Ala Asp Thr Val

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Met Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Leu Phe

65 70 75 80

Leu Gln Met Thr Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Gly Gly Tyr Asp Thr Arg Asn Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln

100 105 110

Gly Thr Ser Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 4

<211> 113

<212> Белок

<213> Mus musculus

<220>

<221> Домен

<223> Вариабельная область легкой цепи мышиного антитела mAb1901

<400> 4

Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Val Ser Ala Gly

1 5 10 15

Glu Lys Val Thr Met Ser Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asn Ser

20 25 30

Gly Asn Gln Lys Asn Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln

35 40 45

Pro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Gly Ala Ser Thr Arg Ala Ser Gly Val

50 55 60

Pro Asp Arg Phe Thr Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr

65 70 75 80

Ile Ser Ser Val Gln Ala Glu Asp Leu Ala Ile Tyr His Cys Gln Asn

85 90 95

Asp Leu Tyr Tyr Pro Leu Thr Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Leu

100 105 110

Lys

<210> 5

<211> 118

<212> Белок

<213> Mus musculus

<220>

<221> Домен

<223> Вариабельная область тяжелой цепи мышиного антитела mAb1902

<400> 5

Glu Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Ala Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala

1 5 10 15

Ser Val Lys Leu Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ile Phe Thr Ser Tyr

20 25 30

Trp Met His Trp Val Lys Gln Arg Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile

35 40 45

Gly Met Ile His Pro Asn Ser Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Glu Lys Phe

50 55 60

Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Leu Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Met Gln Leu Ser Ser Leu Pro Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Leu Lys Thr Gly Asn Ser Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr

100 105 110

Thr Leu Thr Val Ser Ser

115

<210> 6

<211> 113

<212> Белок

<213> Mus musculus

<220>

<221> Домен

<223> Вариабельная область легкой цепи мышиного антитела mAb1902

<400> 6

Asp Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Thr Val Thr Ala Gly

1 5 10 15

Glu Lys Val Thr Met Ser Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asn Ser

20 25 30

Gly Asn Gln Lys Asn Tyr Leu Thr Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln

35 40 45

Pro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val

50 55 60

Pro Asp Arg Phe Thr Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr

65 70 75 80

Ile Ser Ser Val Gln Ala Glu Asp Leu Ala Ile Tyr Tyr Cys Gln Asn

85 90 95

Ala Tyr Thr Tyr Pro Phe Thr Phe Gly Ser Gly Thr Lys Leu Glu Ile

100 105 110

Lys

<210> 7

<211> 330

<212> Белок

<213> Homo sapiens

<220>

<221> Домен

<223> Константная область тяжелой цепи человеческого антитела IgG1

<400> 7

Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys

1 5 10 15

Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr

20 25 30

Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser

35 40 45

Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser

50 55 60

Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr

65 70 75 80

Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys

85 90 95

Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys

100 105 110

Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro

115 120 125

Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys

130 135 140

Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp

145 150 155 160

Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu

165 170 175

Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu

180 185 190

His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn

195 200 205

Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly

210 215 220

Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu

225 230 235 240

Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr

245 250 255

Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn

260 265 270

Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe

275 280 285

Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn

290 295 300

Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr

305 310 315 320

Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys

325 330

<210> 8

<211> 107

<212> Белок

<213> Homo sapiens

<220>

<221> Домен

<223> Константная область легкой каппа-цепи человеческого антитела

<400> 8

Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu

1 5 10 15

Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe

20 25 30

Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln

35 40 45

Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser

50 55 60

Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu

65 70 75 80

Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser

85 90 95

Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys

100 105

<210> 9

<211> 5

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> Домен

<223> mAb1901 HCDR1

<400> 9

Asp Tyr Gly Ile His

1 5

<210> 10

<211> 17

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> Домен

<223> HCDR2 mAb1901

<400> 10

Tyr Ile Ser Arg Gly Ser Ser Thr Ile Tyr Tyr Ala Asp Thr Val Lys

1 5 10 15

Gly

<210> 11

<211> 11

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> Домен

<223> HCDR3 mAb1901

<400> 11

Gly Gly Tyr Asp Thr Arg Asn Ala Met Asp Tyr

1 5 10

<210> 12

<211> 17

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> Домен

<223> LCDR1 mAb1901

<400> 12

Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asn Ser Gly Asn Gln Lys Asn Tyr Leu

1 5 10 15

Ala

<210> 13

<211> 7

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> Домен

<223> LCDR2 mAb1901

<400> 13

Gly Ala Ser Thr Arg Ala Ser

1 5

<210> 14

<211> 9

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> Домен

<223> LCDR3 mAb1901

<400> 14

Gln Asn Asp Leu Tyr Tyr Pro Leu Thr

1 5

<210> 15

<211> 5

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> Домен

<223> HCDR1 mAb1902

<400> 15

Ser Tyr Trp Met His

1 5

<210> 16

<211> 18

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> Домен

<223> HCDR2 mAb1902

<400> 16

Met Ile His Pro Asn Ser Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Glu Lys Phe Lys

1 5 10 15

Gly Arg

<210> 17

<211> 9

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> Домен

<223> HCDR3 mAb1902

<400> 17

Leu Lys Thr Gly Asn Ser Phe Asp Tyr

1 5

<210> 18

<211> 17

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> Домен

<223> LCDR1 mAb1902

<400> 18

Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asn Ser Gly Asn Gln Lys Asn Tyr Leu

1 5 10 15

Thr

<210> 19

<211> 7

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> Домен

<223> LCDR2 mAb1902

<400> 19

Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser

1 5

<210> 20

<211> 9

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> Домен

<223> LCDR3 mAb1902

<400> 20

Gln Asn Ala Tyr Thr Tyr Pro Phe Thr

1 5

<210> 21

<211> 113

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> Домен

<223> VL1

<400> 21

Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly

1 5 10 15

Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asn Ser

20 25 30

Gly Asn Gln Lys Asn Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln

35 40 45

Pro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Gly Ala Ser Thr Arg Ala Ser Gly Val

50 55 60

Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr

65 70 75 80

Ile Ser Ser Leu Gln Ala Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Asn

85 90 95

Asp Leu Tyr Tyr Pro Leu Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile

100 105 110

Lys

<210> 22

<211> 113

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> Домен

<223> VL2

<400> 22

Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly

1 5 10 15

Glu Arg Ala Thr Ile Ser Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asn Ser

20 25 30

Gly Asn Gln Lys Asn Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln

35 40 45

Pro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Gly Ala Ser Thr Arg Ala Ser Gly Val

50 55 60

Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr

65 70 75 80

Ile Ser Ser Leu Gln Ala Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Asn

85 90 95

Asp Leu Tyr Tyr Pro Leu Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile

100 105 110

Lys

<210> 23

<211> 113

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> Домен

<223> VL3

<400> 23

Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly

1 5 10 15

Glu Arg Ala Thr Ile Ser Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asn Ser

20 25 30

Gly Asn Gln Lys Asn Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln

35 40 45

Pro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Gly Ala Ser Thr Arg Ala Ser Gly Val

50 55 60

Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr

65 70 75 80

Ile Ser Ser Leu Gln Ala Glu Asp Val Ala Ile Tyr His Cys Gln Asn

85 90 95

Asp Leu Tyr Tyr Pro Leu Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile

100 105 110

Lys

<210> 24

<211> 120

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> Домен

<223> VH1

<400> 24

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp Tyr

20 25 30

Gly Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ala Tyr Ile Ser Arg Gly Ser Ser Thr Ile Tyr Tyr Ala Asp Thr Val

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Gly Gly Tyr Asp Thr Arg Asn Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln

100 105 110

Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 25

<211> 120

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> Домен

<223> VH2

<400> 25

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp Tyr

20 25 30

Gly Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ala Tyr Ile Ser Arg Gly Ser Ser Thr Ile Tyr Tyr Ala Asp Thr Val

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Thr Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Gly Gly Tyr Asp Thr Arg Asn Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln

100 105 110

Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 26

<211> 120

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> Домен

<223> VH3

<400> 26

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp Tyr

20 25 30

Gly Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile

35 40 45

Ala Tyr Ile Ser Arg Gly Ser Ser Thr Ile Tyr Tyr Ala Asp Thr Val

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Thr Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Gly Gly Tyr Asp Thr Arg Asn Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln

100 105 110

Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 27

<211> 120

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> Домен

<223> VH4

<400> 27

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp Tyr

20 25 30

Gly Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ala Tyr Ile Ser Arg Gly Ser Ser Thr Ile Tyr Tyr Ala Asp Thr Val

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Met Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Thr Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Gly Gly Tyr Asp Thr Arg Asn Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln

100 105 110

Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 28

<211> 113

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> Домен

<223> VL11

<400> 28

Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly

1 5 10 15

Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asn Ser

20 25 30

Gly Asn Gln Lys Asn Tyr Leu Thr Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln

35 40 45

Pro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val

50 55 60

Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr

65 70 75 80

Ile Ser Ser Leu Gln Ala Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Asn

85 90 95

Ala Tyr Thr Tyr Pro Phe Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile

100 105 110

Lys

<210> 29

<211> 113

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> Домен

<223> VL12

<400> 29

Asp Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly

1 5 10 15

Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asn Ser

20 25 30

Gly Asn Gln Lys Asn Tyr Leu Thr Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln

35 40 45

Pro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val

50 55 60

Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr

65 70 75 80

Ile Ser Ser Leu Gln Ala Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Asn

85 90 95

Ala Tyr Thr Tyr Pro Phe Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile

100 105 110

Lys

<210> 30

<211> 113

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> Домен

<223> VL13

<400> 30

Asp Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly

1 5 10 15

Glu Arg Ala Thr Ile Ser Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asn Ser

20 25 30

Gly Asn Gln Lys Asn Tyr Leu Thr Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln

35 40 45

Pro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val

50 55 60

Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr

65 70 75 80

Ile Ser Ser Leu Gln Ala Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Asn

85 90 95

Ala Tyr Thr Tyr Pro Phe Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile

100 105 110

Lys

<210> 31

<211> 118

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> Домен

<223> VH11

<400> 31

Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala

1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr

20 25 30

Trp Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Arg Leu Glu Trp Met

35 40 45

Gly Met Ile His Pro Asn Ser Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Glu Lys Phe

50 55 60

Lys Gly Arg Val Thr Ile Thr Arg Asp Thr Ser Ala Ser Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Leu Lys Thr Gly Asn Ser Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr

100 105 110

Thr Val Thr Val Ser Ser

115

<210> 32

<211> 118

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> Домен

<223> VH12

<400> 32

Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala

1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr

20 25 30

Trp Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Arg Leu Glu Trp Met

35 40 45

Gly Met Ile His Pro Asn Ser Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Glu Lys Phe

50 55 60

Lys Gly Arg Val Thr Leu Thr Leu Asp Lys Ser Ala Ser Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Leu Lys Thr Gly Asn Ser Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr

100 105 110

Thr Val Thr Val Ser Ser

115

<210> 33

<211> 118

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> Домен

<223> VH13

<400> 33

Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala

1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr

20 25 30

Trp Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Arg Leu Glu Trp Ile

35 40 45

Gly Met Ile His Pro Asn Ser Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Glu Lys Phe

50 55 60

Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Leu Asp Lys Ser Ala Ser Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Leu Lys Thr Gly Asn Ser Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr

100 105 110

Thr Val Thr Val Ser Ser

115

<210> 34

<211> 118

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> Домен

<223> VH14

<400> 34

Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala

1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr

20 25 30

Trp Met His Trp Val Lys Gln Arg Pro Gly Gln Arg Leu Glu Trp Ile

35 40 45

Gly Met Ile His Pro Asn Ser Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Glu Lys Phe

50 55 60

Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Leu Asp Lys Ser Ala Ser Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Leu Lys Thr Gly Asn Ser Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr

100 105 110

Thr Val Thr Val Ser Ser

115

<210> 35

<211> 450

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> Цепь

<223> Тяжелая цепь ch1901

<400> 35

Glu Val Gln Leu Met Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Lys Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp Tyr

20 25 30

Gly Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Glu Met Gly Leu Glu Trp Ile

35 40 45

Ala Tyr Ile Ser Arg Gly Ser Ser Thr Ile Tyr Tyr Ala Asp Thr Val

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Met Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Leu Phe

65 70 75 80

Leu Gln Met Thr Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Gly Gly Tyr Asp Thr Arg Asn Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln

100 105 110

Gly Thr Ser Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val

115 120 125

Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala

130 135 140

Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser

145 150 155 160

Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val

165 170 175

Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro

180 185 190

Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys

195 200 205

Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp

210 215 220

Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly

225 230 235 240

Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile

245 250 255

Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu

260 265 270

Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His

275 280 285

Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg

290 295 300

Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys

305 310 315 320

Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu

325 330 335

Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr

340 345 350

Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu

355 360 365

Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp

370 375 380

Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val

385 390 395 400

Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp

405 410 415

Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His

420 425 430

Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro

435 440 445

Gly Lys

450

<210> 36

<211> 220

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> Цепь

<223> Легкая цепь ch1901

<400> 36

Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Val Ser Ala Gly

1 5 10 15

Glu Lys Val Thr Met Ser Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asn Ser

20 25 30

Gly Asn Gln Lys Asn Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln

35 40 45

Pro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Gly Ala Ser Thr Arg Ala Ser Gly Val

50 55 60

Pro Asp Arg Phe Thr Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr

65 70 75 80

Ile Ser Ser Val Gln Ala Glu Asp Leu Ala Ile Tyr His Cys Gln Asn

85 90 95

Asp Leu Tyr Tyr Pro Leu Thr Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Leu

100 105 110

Lys Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp

115 120 125

Glu Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn

130 135 140

Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu

145 150 155 160

Gln Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp

165 170 175

Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr

180 185 190

Glu Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser

195 200 205

Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys

210 215 220

<210> 37

<211> 448

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> Цепь

<223> Тяжелая цепь ch1902

<400> 37

Glu Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Ala Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala

1 5 10 15

Ser Val Lys Leu Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ile Phe Thr Ser Tyr

20 25 30

Trp Met His Trp Val Lys Gln Arg Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile

35 40 45

Gly Met Ile His Pro Asn Ser Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Glu Lys Phe

50 55 60

Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Leu Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Met Gln Leu Ser Ser Leu Pro Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Leu Lys Thr Gly Asn Ser Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr

100 105 110

Thr Leu Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro

115 120 125

Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly

130 135 140

Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn

145 150 155 160

Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln

165 170 175

Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser

180 185 190

Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser

195 200 205

Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr

210 215 220

His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser

225 230 235 240

Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg

245 250 255

Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro

260 265 270

Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala

275 280 285

Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val

290 295 300

Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr

305 310 315 320

Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr

325 330 335

Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu

340 345 350

Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys

355 360 365

Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser

370 375 380

Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp

385 390 395 400

Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser

405 410 415

Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala

420 425 430

Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys

435 440 445

<210> 38

<211> 220

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> Цепь

<223> Легкая цепь ch1902

<400> 38

Asp Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Thr Val Thr Ala Gly

1 5 10 15

Glu Lys Val Thr Met Ser Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asn Ser

20 25 30

Gly Asn Gln Lys Asn Tyr Leu Thr Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln

35 40 45

Pro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val

50 55 60

Pro Asp Arg Phe Thr Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr

65 70 75 80

Ile Ser Ser Val Gln Ala Glu Asp Leu Ala Ile Tyr Tyr Cys Gln Asn

85 90 95

Ala Tyr Thr Tyr Pro Phe Thr Phe Gly Ser Gly Thr Lys Leu Glu Ile

100 105 110

Lys Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp

115 120 125

Glu Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn

130 135 140

Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu

145 150 155 160

Gln Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp

165 170 175

Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr

180 185 190

Glu Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser

195 200 205

Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys

210 215 220

<210> 39

<211> 220

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> Цепь

<223> L1

<400> 39

Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly

1 5 10 15

Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asn Ser

20 25 30

Gly Asn Gln Lys Asn Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln

35 40 45

Pro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Gly Ala Ser Thr Arg Ala Ser Gly Val

50 55 60

Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr

65 70 75 80

Ile Ser Ser Leu Gln Ala Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Asn

85 90 95

Asp Leu Tyr Tyr Pro Leu Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile

100 105 110

Lys Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp

115 120 125

Glu Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn

130 135 140

Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu

145 150 155 160

Gln Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp

165 170 175

Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr

180 185 190

Glu Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser

195 200 205

Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys

210 215 220

<210> 40

<211> 220

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> Цепь

<223> L2

<400> 40

Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly

1 5 10 15

Glu Arg Ala Thr Ile Ser Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asn Ser

20 25 30

Gly Asn Gln Lys Asn Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln

35 40 45

Pro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Gly Ala Ser Thr Arg Ala Ser Gly Val

50 55 60

Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr

65 70 75 80

Ile Ser Ser Leu Gln Ala Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Asn

85 90 95

Asp Leu Tyr Tyr Pro Leu Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile

100 105 110

Lys Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp

115 120 125

Glu Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn

130 135 140

Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu

145 150 155 160

Gln Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp

165 170 175

Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr

180 185 190

Glu Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser

195 200 205

Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys

210 215 220

<210> 41

<211> 220

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> Цепь

<223> L3

<400> 41

Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly

1 5 10 15

Glu Arg Ala Thr Ile Ser Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asn Ser

20 25 30

Gly Asn Gln Lys Asn Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln

35 40 45

Pro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Gly Ala Ser Thr Arg Ala Ser Gly Val

50 55 60

Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr

65 70 75 80

Ile Ser Ser Leu Gln Ala Glu Asp Val Ala Ile Tyr His Cys Gln Asn

85 90 95

Asp Leu Tyr Tyr Pro Leu Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile

100 105 110

Lys Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp

115 120 125

Glu Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn

130 135 140

Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu

145 150 155 160

Gln Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp

165 170 175

Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr

180 185 190

Glu Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser

195 200 205

Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys

210 215 220

<210> 42

<211> 450

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> Цепь

<223> H1

<400> 42

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp Tyr

20 25 30

Gly Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ala Tyr Ile Ser Arg Gly Ser Ser Thr Ile Tyr Tyr Ala Asp Thr Val

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Gly Gly Tyr Asp Thr Arg Asn Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln

100 105 110

Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val

115 120 125

Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala

130 135 140

Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser

145 150 155 160

Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val

165 170 175

Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro

180 185 190

Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys

195 200 205

Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp

210 215 220

Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly

225 230 235 240

Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile

245 250 255

Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu

260 265 270

Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His

275 280 285

Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg

290 295 300

Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys

305 310 315 320

Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu

325 330 335

Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr

340 345 350

Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu

355 360 365

Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp

370 375 380

Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val

385 390 395 400

Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp

405 410 415

Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His

420 425 430

Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro

435 440 445

Gly Lys

450

<210> 43

<211> 450

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> Цепь

<223> H2

<400> 43

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp Tyr

20 25 30

Gly Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ala Tyr Ile Ser Arg Gly Ser Ser Thr Ile Tyr Tyr Ala Asp Thr Val

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Thr Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Gly Gly Tyr Asp Thr Arg Asn Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln

100 105 110

Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val

115 120 125

Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala

130 135 140

Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser

145 150 155 160

Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val

165 170 175

Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro

180 185 190

Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys

195 200 205

Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp

210 215 220

Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly

225 230 235 240

Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile

245 250 255

Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu

260 265 270

Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His

275 280 285

Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg

290 295 300

Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys

305 310 315 320

Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu

325 330 335

Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr

340 345 350

Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu

355 360 365

Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp

370 375 380

Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val

385 390 395 400

Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp

405 410 415

Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His

420 425 430

Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro

435 440 445

Gly Lys

450

<210> 44

<211> 450

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> Цепь

<223> H3

<400> 44

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp Tyr

20 25 30

Gly Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile

35 40 45

Ala Tyr Ile Ser Arg Gly Ser Ser Thr Ile Tyr Tyr Ala Asp Thr Val

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Thr Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Gly Gly Tyr Asp Thr Arg Asn Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln

100 105 110

Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val

115 120 125

Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala

130 135 140

Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser

145 150 155 160

Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val

165 170 175

Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro

180 185 190

Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys

195 200 205

Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp

210 215 220

Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly

225 230 235 240

Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile

245 250 255

Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu

260 265 270

Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His

275 280 285

Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg

290 295 300

Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys

305 310 315 320

Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu

325 330 335

Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr

340 345 350

Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu

355 360 365

Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp

370 375 380

Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val

385 390 395 400

Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp

405 410 415

Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His

420 425 430

Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro

435 440 445

Gly Lys

450

<210> 45

<211> 450

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> Цепь

<223> H4

<400> 45

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp Tyr

20 25 30

Gly Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ala Tyr Ile Ser Arg Gly Ser Ser Thr Ile Tyr Tyr Ala Asp Thr Val

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Met Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Thr Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Gly Gly Tyr Asp Thr Arg Asn Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln

100 105 110

Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val

115 120 125

Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala

130 135 140

Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser

145 150 155 160

Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val

165 170 175

Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro

180 185 190

Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys

195 200 205

Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp

210 215 220

Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly

225 230 235 240

Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile

245 250 255

Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu

260 265 270

Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His

275 280 285

Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg

290 295 300

Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys

305 310 315 320

Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu

325 330 335

Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr

340 345 350

Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu

355 360 365

Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp

370 375 380

Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val

385 390 395 400

Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp

405 410 415

Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His

420 425 430

Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro

435 440 445

Gly Lys

450

<210> 46

<211> 220

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> Цепь

<223> L11

<400> 46

Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly

1 5 10 15

Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asn Ser

20 25 30

Gly Asn Gln Lys Asn Tyr Leu Thr Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln

35 40 45

Pro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val

50 55 60

Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr

65 70 75 80

Ile Ser Ser Leu Gln Ala Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Asn

85 90 95

Ala Tyr Thr Tyr Pro Phe Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile

100 105 110

Lys Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp

115 120 125

Glu Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn

130 135 140

Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu

145 150 155 160

Gln Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp

165 170 175

Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr

180 185 190

Glu Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser

195 200 205

Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys

210 215 220

<210> 47

<211> 220

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> Цепь

<223> L12

<400> 47

Asp Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly

1 5 10 15

Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asn Ser

20 25 30

Gly Asn Gln Lys Asn Tyr Leu Thr Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln

35 40 45

Pro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val

50 55 60

Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr

65 70 75 80

Ile Ser Ser Leu Gln Ala Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Asn

85 90 95

Ala Tyr Thr Tyr Pro Phe Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile

100 105 110

Lys Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp

115 120 125

Glu Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn

130 135 140

Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu

145 150 155 160

Gln Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp

165 170 175

Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr

180 185 190

Glu Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser

195 200 205

Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys

210 215 220

<210> 48

<211> 220

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> Цепь

<223> L13

<400> 48

Asp Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly

1 5 10 15

Glu Arg Ala Thr Ile Ser Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asn Ser

20 25 30

Gly Asn Gln Lys Asn Tyr Leu Thr Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln

35 40 45

Pro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val

50 55 60

Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr

65 70 75 80

Ile Ser Ser Leu Gln Ala Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Asn

85 90 95

Ala Tyr Thr Tyr Pro Phe Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile

100 105 110

Lys Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp

115 120 125

Glu Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn

130 135 140

Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu

145 150 155 160

Gln Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp

165 170 175

Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr

180 185 190

Glu Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser

195 200 205

Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys

210 215 220

<210> 49

<211> 448

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> Цепь

<223> H11

<400> 49

Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala

1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr

20 25 30

Trp Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Arg Leu Glu Trp Met

35 40 45

Gly Met Ile His Pro Asn Ser Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Glu Lys Phe

50 55 60

Lys Gly Arg Val Thr Ile Thr Arg Asp Thr Ser Ala Ser Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Leu Lys Thr Gly Asn Ser Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr

100 105 110

Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro

115 120 125

Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly

130 135 140

Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn

145 150 155 160

Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln

165 170 175

Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser

180 185 190

Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser

195 200 205

Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr

210 215 220

His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser

225 230 235 240

Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg

245 250 255

Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro

260 265 270

Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala

275 280 285

Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val

290 295 300

Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr

305 310 315 320

Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr

325 330 335

Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu

340 345 350

Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys

355 360 365

Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser

370 375 380

Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp

385 390 395 400

Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser

405 410 415

Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala

420 425 430

Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys

435 440 445

<210> 50

<211> 448

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> Цепь

<223> H12

<400> 50

Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala

1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr

20 25 30

Trp Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Arg Leu Glu Trp Met

35 40 45

Gly Met Ile His Pro Asn Ser Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Glu Lys Phe

50 55 60

Lys Gly Arg Val Thr Leu Thr Leu Asp Lys Ser Ala Ser Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Leu Lys Thr Gly Asn Ser Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr

100 105 110

Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro

115 120 125

Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly

130 135 140

Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn

145 150 155 160

Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln

165 170 175

Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser

180 185 190

Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser

195 200 205

Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr

210 215 220

His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser

225 230 235 240

Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg

245 250 255

Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro

260 265 270

Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala

275 280 285

Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val

290 295 300

Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr

305 310 315 320

Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr

325 330 335

Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu

340 345 350

Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys

355 360 365

Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser

370 375 380

Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp

385 390 395 400

Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser

405 410 415

Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala

420 425 430

Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys

435 440 445

<210> 51

<211> 448

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> Цепь

<223> H13

<400> 51

Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala

1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr

20 25 30

Trp Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Arg Leu Glu Trp Ile

35 40 45

Gly Met Ile His Pro Asn Ser Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Glu Lys Phe

50 55 60

Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Leu Asp Lys Ser Ala Ser Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Leu Lys Thr Gly Asn Ser Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr

100 105 110

Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro

115 120 125

Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly

130 135 140

Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn

145 150 155 160

Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln

165 170 175

Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser

180 185 190

Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser

195 200 205

Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr

210 215 220

His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser

225 230 235 240

Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg

245 250 255

Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro

260 265 270

Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala

275 280 285

Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val

290 295 300

Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr

305 310 315 320

Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr

325 330 335

Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu

340 345 350

Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys

355 360 365

Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser

370 375 380

Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp

385 390 395 400

Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser

405 410 415

Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala

420 425 430

Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys

435 440 445

<210> 52

<211> 448

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> Цепь

<223> H14

<400> 52

Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala

1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr

20 25 30

Trp Met His Trp Val Lys Gln Arg Pro Gly Gln Arg Leu Glu Trp Ile

35 40 45

Gly Met Ile His Pro Asn Ser Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Glu Lys Phe

50 55 60

Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Leu Asp Lys Ser Ala Ser Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Leu Lys Thr Gly Asn Ser Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr

100 105 110

Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro

115 120 125

Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly

130 135 140

Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn

145 150 155 160

Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln

165 170 175

Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser

180 185 190

Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser

195 200 205

Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr

210 215 220

His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser

225 230 235 240

Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg

245 250 255

Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro

260 265 270

Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala

275 280 285

Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val

290 295 300

Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr

305 310 315 320

Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr

325 330 335

Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu

340 345 350

Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys

355 360 365

Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser

370 375 380

Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp

385 390 395 400

Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser

405 410 415

Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala

420 425 430

Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys

435 440 445

<210> 53

<211> 448

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> Цепь

<223> Тяжелая цепь IMAB-362

<400> 53

Gln Val Gln Leu Gln Gln Pro Gly Ala Glu Leu Val Arg Pro Gly Ala

1 5 10 15

Ser Val Lys Leu Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr

20 25 30

Trp Ile Asn Trp Val Lys Gln Arg Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile

35 40 45

Gly Asn Ile Tyr Pro Ser Asp Ser Tyr Thr Asn Tyr Asn Gln Lys Phe

50 55 60

Lys Asp Lys Ala Thr Leu Thr Val Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Met Gln Leu Ser Ser Pro Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Thr Arg Ser Trp Arg Gly Asn Ser Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr

100 105 110

Thr Leu Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro

115 120 125

Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly

130 135 140

Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn

145 150 155 160

Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln

165 170 175

Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser

180 185 190

Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser

195 200 205

Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr

210 215 220

His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser

225 230 235 240

Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg

245 250 255

Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro

260 265 270

Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala

275 280 285

Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val

290 295 300

Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr

305 310 315 320

Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr

325 330 335

Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu

340 345 350

Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys

355 360 365

Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser

370 375 380

Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp

385 390 395 400

Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser

405 410 415

Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala

420 425 430

Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys

435 440 445

<210> 54

<211> 220

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> Цепь

<223> Легкая цепь IMAB-362

<400> 54

Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Thr Val Thr Ala Gly

1 5 10 15

Glu Lys Val Thr Met Ser Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asn Ser

20 25 30

Gly Asn Gln Lys Asn Tyr Leu Thr Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln

35 40 45

Pro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val

50 55 60

Pro Asp Arg Phe Thr Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr

65 70 75 80

Ile Ser Ser Val Gln Ala Glu Asp Leu Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Asn

85 90 95

Asp Tyr Ser Tyr Pro Phe Thr Phe Gly Ser Gly Thr Lys Leu Glu Ile

100 105 110

Lys Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp

115 120 125

Glu Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn

130 135 140

Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu

145 150 155 160

Gln Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp

165 170 175

Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr

180 185 190

Glu Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser

195 200 205

Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys

210 215 220

<---

Claims

1. Антитело, которое специфично связывается с клаудином 18.2, содержащее вариабельную область тяжелой цепи и вариабельную область легкой цепи, в котором:

iii) вариабельная область тяжелой цепи содержит HCDR1, HCDR2 и HCDR3, как показано в SEQ ID NO: 9, SEQ ID NO: 10 и SEQ ID NO: 11, соответственно, и вариабельная область легкой цепи содержит LCDR1, LCDR2 и LCDR3, как показано в SEQ ID NO: 12, SEQ ID NO: 13 и SEQ ID NO: 14, соответственно; или

iv) вариабельная область тяжелой цепи содержит HCDR1, HCDR2 и HCDR3, как показано в SEQ ID NO: 15, SEQ ID NO: 16 и SEQ ID NO: 17, соответственно, и вариабельная область легкой цепи содержит LCDR1, LCDR2 и LCDR3, как показано в SEQ ID NO: 18, SEQ ID NO: 19 и SEQ ID NO: 20, соответственно.

2. Антитело, которое специфично связывается с клаудином 18.2, по п. 1, которое представляет собой мышиное антитело, химерное антитело или гуманизированное антитело.

3. Антитело, которое специфично связывается с клаудином 18.2, по п. 1 или 2, содержащее вариабельную область тяжелой цепи и вариабельную область легкой цепи, в котором:

1) аминокислотная последовательность вариабельной области тяжелой цепи представляет собой такую, как показано в SEQ ID NO: 3, и аминокислотная последовательность вариабельной области легкой цепи представляет собой такую, как показано в SEQ ID NO: 4;

2) аминокислотная последовательность вариабельной области тяжелой цепи представляет собой такую, как показано в SEQ ID NO: 24, и аминокислотная последовательность вариабельной области легкой цепи представляет собой такую, как показано в SEQ ID NO: 21;

3) аминокислотная последовательность вариабельной области тяжелой цепи представляет собой такую, как показано в SEQ ID NO: 5, и аминокислотная последовательность вариабельной области легкой цепи представляет собой такую, как показано в SEQ ID NO: 6; или

4) аминокислотная последовательность вариабельной области тяжелой цепи представляет собой такую, как показано в SEQ ID NO: 31, и аминокислотная последовательность вариабельной области легкой цепи представляет собой такую, как показано в SEQ ID NO: 28.

4. Антитело, которое специфично связывается с клаудином 18.2, по п. 3, которое представляет собой гуманизированное антитело, содержащее каркасную область, происходящую из человеческого антитела, или вариант каркасной области, и данный вариант каркасной области имеет 1-10 обратную(ых) мутацию(ий) на каркасной области легкой цепи и/или каркасной области тяжелой цепи антитела человека;

где вариант каркасной области содержит мутацию(ии), выбранную(ые) из указанных ниже а) или b):

(a) одна или более обратных мутаций, выбранных из группы, состоящей из: 22S, 85I и 87Н, содержащихся в вариабельной области легкой цепи, и/или одна или более обратных мутаций, выбранных из группы, состоящей из: 48I, 82Т и 69М, содержащихся в вариабельной области тяжелой цепи; или

(b) одна или более обратных мутаций, выбранных из группы, состоящей из: 4L и 22S, содержащихся в вариабельной области легкой цепи, и/или одна или более обратных мутаций, выбранных из группы, состоящей из: 38K, 40R, 48I, 66K, 67A, 69L, 71L и 73K, содержащихся в вариабельной области тяжелой цепи;

более предпочтительно, вариант каркасной области содержит мутацию(ии), выбранную(ые) из следующих ниже а-1) или b-1):

a-1) обратные мутации аминокислот 22S, 85I и 87Н, содержащиеся в вариабельной области легкой цепи, и обратные мутации аминокислот 48I и 82Т, содержащиеся в вариабельной области тяжелой цепи; или

b-1) обратная мутация 4L, содержащаяся в вариабельной области легкой цепи; обратная мутация 82Т, содержащаяся в вариабельной области тяжелой цепи, где «82» указывает на положение 82А в соответствии с критериями Kabat.

5. Антитело, которое специфично связывается с клаудином 18.2, по п. 3, которое содержит вариабельную область тяжелой цепи и вариабельную область легкой цепи, как показано ниже:

vii) последовательность вариабельной области тяжелой цепи, как показано в SEQ ID NO: 3, и последовательность вариабельной области легкой цепи, как показано в SEQ ID NO: 4; или

viii) последовательность вариабельной области тяжелой цепи, как показано в SEQ ID NO: 24, 25, 26 или 27, и последовательность вариабельной области легкой цепи, как показано в SEQ ID NO: 21, 22 или 23; или

ix) последовательность вариабельной области тяжелой цепи, как показано в SEQ ID NO: 5, и последовательность вариабельной области легкой цепи, как показано в SEQ ID NO: 6; или

x) последовательность вариабельной области тяжелой цепи, как показано в SEQ ID NO: 31, 32, 33 или 34, и последовательность вариабельной области легкой цепи, как показано в SEQ ID NO: 28, 29 или 30.

6. Антитело, которое специфично связывается с клаудином 18.2, по п. 3, где антитело, которое специфично связывается с клаудином 18.2, или его антигенсвязывающий фрагмент содержит вариабельную область тяжелой цепи и вариабельную область легкой цепи, как показано ниже:

viii) последовательность вариабельной области тяжелой цепи, как показано в SEQ ID NO: 31, и последовательность вариабельной области легкой цепи, как показано в SEQ ID NO: 29; или

ix) последовательность вариабельной области тяжелой цепи, как показано в SEQ ID NO: 26, и последовательность вариабельной области легкой цепи, как показано в SEQ ID NO: 23.

7. Антитело, которое специфично связывается с клаудином 18.2, по п. 3, которое дополнительно содержит константную область тяжелой цепи и константную область легкой цепи; где константная область тяжелой цепи выбрана из группы, состоящей из: константной(ых) области(ей) lgG1, lgG2, lgG3 и lgG4 человека и их варианта(ов), константная область легкой цепи выбрана из группы, состоящей из: константной(ых) области(ей) цепи κ и λ антитела человека и их варианта(ов).

8. Антитело, которое специфично связывается с клаудином 18.2, по п. 3, где антитело, которое специфично связывается с клаудином 18.2, содержит константную область тяжелой цепи, как показано в SEQ ID NO: 7, и константную область легкой цепи, как показано в SEQ ID NO: 8.

9. Антитело, которое специфично связывается с клаудином 18.2, по п. 3, где антитело, которое специфично связывается с клаудином 18.2, содержит тяжелую цепь, как показано в SEQ ID NO: 35 или 42, и легкую цепь, как показано в SEQ ID NO: 36 или 39; или

тяжелую цепь, как показано в SEQ ID NO: 37 или 49, и легкую цепь, как показано в SEQ ID NO: 38 или 46.

10. Антитело, которое специфично связывается с клаудином 18.2, по п. 3, содержащее:

c) тяжелую цепь, как показано в SEQ ID NO: 35, и легкую цепь, как показано в SEQ ID NO: 36;

d) тяжелую цепь, как показано в SEQ ID NO: 42, 43, 44 или 45, и легкую цепь, как показано в SEQ ID NO: 39, 40 или 41;

e) тяжелую цепь, как показано в SEQ ID NO: 37, и легкую цепь, как показано в SEQ ID NO: 38; или

f) тяжелую цепь, как показано в SEQ ID NO: 49, 50, 51 или 52, и легкую цепь, как показано в SEQ ID NO: 46, 47 или 48.

11. Антитело, которое специфично связывается с клаудином 18.2, по п. 3, содержащее:

тяжелую цепь, как показано в SEQ ID NO: 44, и легкую цепь, как показано в SEQ ID NO: 41; или

тяжелую цепь, как показано в SEQ ID NO: 49, и легкую цепь, как показано в SEQ ID NO: 47.

12. Молекула нуклеиновой кислоты, кодирующая антитело, которое специфично связывается с клаудином 18.2, по любому из пп. 1-11.

13. Клетка-хозяин для получения антитела, которое специфично связывается с клаудином 18.2, содержащая молекулу нуклеиновой кислоты по п. 12.

14. Конъюгат антитело-лекарственное средство для лечения заболевания, ассоциированного с клаудином 18.2, который представляет собой конъюгат антитело-лекарственное средство, образованный посредством образования конъюгата антитела, которое специфично связывается с клаудином 18.2, по любому из пп. 1-11 с цитотоксическим лекарственным средством.

15. Фармацевтическая композиция для лечения заболевания, ассоциированного с клаудином 18.2, содержащая терапевтически эффективное количество антитела, которое специфично связывается с клаудином 18.2, по любому из пп. 1-11 или молекулы нуклеиновой кислоты по п. 12 или конъюгата антитело-лекарственное средство по п. 14 и один или более фармацевтически приемлемых носителей, разбавителей, буферов или вспомогательных веществ.

16. Способ иммунологического анализа или выявления клаудина 18.2, включающий: стадию приведения антитела, которое специфично связывается с клаудином 18.2, по любому из пп. 1-11 в контакт с образцом, подлежащим анализу.

17. Способ лечения заболевания, ассоциированного с клаудином 18.2, включающий введение субъекту терапевтически эффективного количества антитела, которое специфично связывается с клаудином 18.2, по любому из пп. 1-11 или молекулы нуклеиновой кислоты по п. 12 или конъюгата антитело-лекарственное средство по п. 14 или фармацевтической композиции по п. 15, где заболевание представляет собой опухоль.

18. Способ по п. 17, где заболевание выбрано из группы, состоящей из нижеследующего: рак головы и шеи, рак пищевода, рак легкого, рак молочной железы, рак печени, рак печени и желчного пузыря, рак поджелудочной железы, рак желудка, рак толстой и прямой кишки и рак яичника.

19. Способ по п. 18, где рак легкого выбран из группы, состоящей из немелкоклеточного рака легкого и мелкоклеточного рака легкого.