[go: up one dir, main page]

RU2698727C9 - Ковалентные линкеры в конъюгатах антитело-лекарственное средство, способы их получения и применение - Google Patents

Ковалентные линкеры в конъюгатах антитело-лекарственное средство, способы их получения и применение Download PDF

Info

Publication number
RU2698727C9
RU2698727C9 RU2018108613A RU2018108613A RU2698727C9 RU 2698727 C9 RU2698727 C9 RU 2698727C9 RU 2018108613 A RU2018108613 A RU 2018108613A RU 2018108613 A RU2018108613 A RU 2018108613A RU 2698727 C9 RU2698727 C9 RU 2698727C9
Authority
RU
Russia
Prior art keywords
group
pab
compound
mmol
alkynyls
Prior art date
Application number
RU2018108613A
Other languages
English (en)
Other versions
RU2698727C1 (ru
Inventor
Чан Цзян ХУАН
Цзяньминь ФАН
Хуэй Е
Лэчжи ЧЖАН
Original Assignee
Рс Биотекнолоджиз, Инк.
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Рс Биотекнолоджиз, Инк. filed Critical Рс Биотекнолоджиз, Инк.
Publication of RU2698727C1 publication Critical patent/RU2698727C1/ru
Application granted granted Critical
Publication of RU2698727C9 publication Critical patent/RU2698727C9/ru

Links

Images

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6801—Drug-antibody or immunoglobulin conjugates defined by the pharmacologically or therapeutically active agent
    • A61K47/6803—Drugs conjugated to an antibody or immunoglobulin, e.g. cisplatin-antibody conjugates
    • A61K47/68031—Drugs conjugated to an antibody or immunoglobulin, e.g. cisplatin-antibody conjugates the drug being an auristatin
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/41—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having five-membered rings with two or more ring hetero atoms, at least one of which being nitrogen, e.g. tetrazole
    • A61K31/425—Thiazoles
    • A61K31/426—1,3-Thiazoles
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/535—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with at least one nitrogen and one oxygen as the ring hetero atoms, e.g. 1,2-oxazines
    • A61K31/5375—1,4-Oxazines, e.g. morpholine
    • A61K31/5383—1,4-Oxazines, e.g. morpholine ortho- or peri-condensed with heterocyclic ring systems
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/395—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/06—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/54—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic compound
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/54—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic compound
    • A61K47/545—Heterocyclic compounds
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6801—Drug-antibody or immunoglobulin conjugates defined by the pharmacologically or therapeutically active agent
    • A61K47/6803—Drugs conjugated to an antibody or immunoglobulin, e.g. cisplatin-antibody conjugates
    • A61K47/68033—Drugs conjugated to an antibody or immunoglobulin, e.g. cisplatin-antibody conjugates the drug being a maytansine
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6801—Drug-antibody or immunoglobulin conjugates defined by the pharmacologically or therapeutically active agent
    • A61K47/6803—Drugs conjugated to an antibody or immunoglobulin, e.g. cisplatin-antibody conjugates
    • A61K47/68035—Drugs conjugated to an antibody or immunoglobulin, e.g. cisplatin-antibody conjugates the drug being a pyrrolobenzodiazepine
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6801—Drug-antibody or immunoglobulin conjugates defined by the pharmacologically or therapeutically active agent
    • A61K47/6803—Drugs conjugated to an antibody or immunoglobulin, e.g. cisplatin-antibody conjugates
    • A61K47/6811—Drugs conjugated to an antibody or immunoglobulin, e.g. cisplatin-antibody conjugates the drug being a protein or peptide, e.g. transferrin or bleomycin
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6835—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site
    • A61K47/6851—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site the antibody targeting a determinant of a tumour cell
    • A61K47/6855—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site the antibody targeting a determinant of a tumour cell the tumour determinant being from breast cancer cell
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6835—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site
    • A61K47/6851—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site the antibody targeting a determinant of a tumour cell
    • A61K47/6869—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site the antibody targeting a determinant of a tumour cell the tumour determinant being from a cell of the reproductive system: ovaria, uterus, testes, prostate
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6889—Conjugates wherein the antibody being the modifying agent and wherein the linker, binder or spacer confers particular properties to the conjugates, e.g. peptidic enzyme-labile linkers or acid-labile linkers, providing for an acid-labile immuno conjugate wherein the drug may be released from its antibody conjugated part in an acidic, e.g. tumoural or environment
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/2896—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against molecules with a "CD"-designation, not provided for elsewhere
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/32—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against translation products of oncogenes
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K5/00—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • C07K5/02—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing at least one abnormal peptide link
    • C07K5/0205—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing at least one abnormal peptide link containing the structure -NH-(X)3-C(=0)-, e.g. statine or derivatives thereof
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K5/00—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • C07K5/04—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing only normal peptide links
    • C07K5/06—Dipeptides
    • C07K5/06008—Dipeptides with the first amino acid being neutral
    • C07K5/06017—Dipeptides with the first amino acid being neutral and aliphatic
    • C07K5/06034—Dipeptides with the first amino acid being neutral and aliphatic the side chain containing 2 to 4 carbon atoms
    • C07K5/06052—Val-amino acid
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K7/00—Peptides having 5 to 20 amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • C07K7/02—Linear peptides containing at least one abnormal peptide link

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Reproductive Health (AREA)
  • Oil, Petroleum & Natural Gas (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Crystallography & Structural Chemistry (AREA)
  • Medicinal Preparation (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)

Abstract

Группа изобретений относится к медицине и касается линкер-активного агента для получения конъюгата антитело-лекарственное средство, содержащего соединение формулы I или его фармацевтически приемлемую соль. Группа изобретений также касается конъюгата нацеливающая группировка-лекарственное средство для лечения HER2-положительного рака у субъекта; способа лечения HER2-положительного рака у субъекта, включающего введение субъекту, нуждающемуся в таком лечении, конъюгата нацеливающая группировка-лекарственное средство. Группа изобретений обеспечивает снижение скорости разложения противоракового коньюгата по сравнению с известными коньюгатами. 3 н. и 10 з.п. ф-лы, 3 пр., 7 ил., 4 табл.

Description

Перекрестная ссылка на смежную заявку
Настоящая заявка претендует на приоритет предварительной заявки США, серийный №62/205,121, поданной 14 августа 2016 г., которая полностью включена в настоящий документ посредством ссылки, включая любые фигуры, таблицы и рисунки.
Предшествующий уровень техники
Конъюгаты антитело-лекарственное средство (ADC, Antibody drug conjugate), быстро растущий класс таргетных терапевтических средств, представляет новый перспективный подход в направлении улучшения как селективности, так и цитотоксической активности противораковых лекарственных средств. Примером лекарственного средства ADC, одобренного для терапевтического применения в США, является брентуксимаб ведотин (ADCETRIS®), представляющий собой химерное антитело к CD30, конъюгированное с монометилауристатином Е, применяемый в лечении анапластической крупноклеточной лимфомы и лимфомы Ходжкина.
Один из традиционных способов, применяемых в дизайне конъюгатов антитело-лекарственное средство (ADC), включает связывание молекул лекарственного средства с тиольными группами цепей антитела посредством линкерной группировки. Свободные тиольные группы получают в результате разрыва цистеиновых межцепьевых дисульфидных связей антитела посредством реакции восстановления. Типичное антитело содержит 4 межцепьевые дисульфидные связи (2 между тяжелыми цепями и 2 между тяжелыми и легкими цепями). Эти межцепьевые дисульфиды могут быть селективно восстановлены дитиотрейтолом, трис(2-карбоксиэтил)фосфином или другими слабыми восстанавливающими агентами с получением в результате 8 реакционноспособных сульфгидрильных групп для конъюгации. Этот способ позволяет присоединить к определенному антителу до восьми молекул лекарственного средства.
За счет факта разрыва по меньшей мере двух дисульфидных связей ADC, сконструированные с использованием этого принципа, нестабильны после поступления в кровообращение, и поэтому период полувыведения этих ADC будет сокращен. В результате недавних разработок дизайна и синтеза ADC адаптирован другой подход, а именно основанный на ковалентном соединении двух тиольных групп посредством агента сочетания, в результате чего устанавливаются мостики между двумя тяжелыми цепями и между тяжелыми и легкими цепями определенного антитела. В настоящее время усилия по освоению такого подхода главным образом сосредоточены на разработке дизайна структуры агента сочетания, не только имеющего функциональные группы для образования ковалентной мостиковой связи между двумя тиольными группами, но также охватывающего необходимые компоненты, способствующие специфическим видам биологической активности.
В более ранних исследованиях в этой области для взаимодействия с двумя тиольными группами, образовавшимися в результате разрыва дисульфидной связи, использовали бис-малеимиды. Ковалентное связывание между малеимидами и тиолами представляет собой классическую реакцию алкенового преобразования. Реакции образования мостиковой связи между тиолами, исследованные в более недавнее время, также основаны на этом принципе, где в иллюстративные реакции вовлечены малеимиды, бис-малеимиды и малеимиды с галогеновыми заместителями. К настоящему времени, однако, линкерные композиции, образующие тиольные мостиковые связи, ограничены только соединениями на основе малеимида и часто не предназначены для применения в ADC для таргетной терапии опухолей. Например, описанные ранее способы ковалентного связывания тиолов, включающие использование подобных соединений на основе малеимида, не предназначены для этих областей применения в сочетании с активными агентами, такими как нацеленные на опухоль молекулы лекарственных средств, белки или полипептиды (см., например, публикацию заявки на патент РСТ № WO 2013132268). В других способах, в которых конкретно раскрыты применения ADC в направленной доставке терапевтического препарата в область опухоли, где используют соединения на основе малеимида, не используют механизм ковалентной мостиковой связи с тиолами, в котором один линкер одновременно взаимодействует с двумя тиольными группами, как предложено в настоящем изобретении (см., например, публикацию заявки на патент Китая CN 103933575).
Краткое описание изобретения
В настоящем изобретении предложены новые и обладающие преимуществом линкеры для связывания антитела с другим соединением. В дополнение к линкерам, структурный синтез и применение которых описаны в настоящем документе, в заявленном изобретении также предложены конъюгаты антитела с активным агентом и области их применения, например, область применения в конъюгатах антитело-лекарственное средство.
В некоторых воплощениях изобретения предложен линкер-активный агент, имеющий структуру формулы I:
Figure 00000001
или его фармацевтически приемлемая соль,
где:
R1 и R2 представляют собой функциональные группы, которые могут взаимодействовать с тиолами;
L1, L2, L представляют собой линкер или могут отсутствовать;
М представляет собой линкерную группу;
Q представляет собой активный агент или может отсутствовать;
m представляет собой целое число от 0 до 6;
n представляет собой целое число от 0 до 8.
В некоторых воплощениях изобретения R1 и R2 независимо выбраны из
Figure 00000002
и их производных.
В некоторых воплощениях изобретения предложен конъюгат нацеливающей группировки с линкером-активным агентом, имеющий структуру формулы II:
Figure 00000003
или его фармацевтически приемлемая соль,
А представляет собой нацеливающую группировку;
L1, L2, L представляют собой линкер или отсутствуют;
М представляет собой линкерную группу;
Q представляет собой активный агент или отсутствует;
m представляет собой целое число, выбранное из чисел от 0 до 6;
n представляет собой целое число, выбранное из чисел от 0 до 8;
каждый из R3 и R4 независимо выбран из:
Figure 00000004
их производных или отсутствует.
При использовании в настоящем документе ссылка на отсутствие означает, что объект не присутствует.
Краткое описание графических материалов
На Фиг. 1 схематично показана ковалентная мостиковая связь между тиолами, образованная в результате взаимодействия линкера с двумя соседними тиольными группами разорванной или восстановленной дисульфидной связи антитела.
На Фиг. 2 представлено изображение электрофореза в ДСН-ПААГ иллюстративного ADC с антителом к Her-2, содержащего моноклональное антитело к Her-2, конъюгированное с цитотоксином, полученного с использованием Mc-VC-PAB-MMAE.
На Фиг. 3 показана хроматограмма гидрофобной интерактивной хроматографии (ГИХ)-высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ) MSL-C31.
На Фиг. 4 показаны результаты электрофореза MSL-C75 в ДСН-ПААГ в восстанавливающих условиях.
На Фиг. 5 показана хроматограмма ГИХ-ВЭЖХ MSL-C75.
На Фиг. 6 показан результат электрофореза в ДСН-ПААГ в восстанавливающих условиях для а) чистого антитела, b) CD59-C78.
На Фиг. 7 показана хроматограмма ГИХ-ВЭЖХ CD59-C78.
Подробное описание изобретения
Следующее ниже подробное описание приведено со ссылкой на сопроводительные графические материалы, на которых изображены не имеющие ограничительного характера и неисчерпывающие воплощения изобретения. Эти воплощения описаны достаточно подробно, чтобы обеспечить специалистам в данной области техники возможность осуществления изобретения на практике, и понятно, что можно использовать другие воплощения и выполнить другие изменения без отклонения от сущности или объема изобретения. Поэтому следующее ниже подробное описание не следует рассматривать в ограничительном смысле, и объем изобретения определен только прилагаемой формулой изобретения. Все патенты, заявки на патенты, предварительные заявки и публикации, относящиеся к настоящему документу или цитируемые в нем, полностью включены в него путем ссылки, включая все фигуры и таблицы, в той степени, в которой они явным образом не соответствуют положениям данного описания.
В настоящем изобретении предложены новые и обладающие преимуществом линкерные молекулы, способные к ковалентному связыванию с двумя свободными тиолами антитела посредством одного конца линкера и присоединению к активному агенту на другом конце линкера. В настоящем документе также предложены конъюгаты антитела с активным агентом, включающие, например, конъюгаты антитело-лекарственное средство (ADC). В некоторых воплощениях изобретения предложенные в настоящем документе ADC включают в себя противораковое лекарственное средство в качестве активного агента.
Определения
Ниже приведены используемые в настоящем документе сокращения распространенных органических соединений:
ВОС трет-бутоксикарбонил
Fmoc 9-флуоренилметоксикарбонил
°С температура в градусах по стоградусной шкале
DIPEA диизопропилэтиламин
ДМФ N,N'-диметилформамид
К. Т. комнатная температура
EtOH этанол
ч час
Et3N триэтиламин
HOBt N-гидроксибензотриазол
Преп-ВЭЖХ препаративная высокоэффективная жидкостная хроматография
NaHCO3 бикарбонат натрия
DCC дициклогексилкарбодиимид
MeCN ацетонитрил
EDC 1-этил-3-(3-диметиламинопропил)карбодиимид
DIC N,N'-диизопропилкарбодиимид
DEA диэтиламин
K2CO3 карбонат калия
М моль/литр
мл миллилитр
MgSO4 сульфат магния
ТГФ тетрагидрофуран
CH2Cl2 дихлорметан
NaCl хлорид натрия
NaSO4 сульфат натрия
HCl хлористоводородная кислота
ЖХ-МС жидкостная хроматография с масс-спектрометрией
CHCl3 трихлорметан
NaAc ацетат натрия
Ac2O уксусный ангидрид
ТФУ трифторуксусная кислота
NaOH гидроксид натрия
Термин «активный агент», используемый в соответствии с настоящим изобретением, включает любое природное или синтетическое вещество, оказывающее физиологическое действие при введении животному. Активный агент можно применять в соответствии с изобретением для лечения, например, теплокровных животных, в частности млекопитающих, включая людей, ветеринарных животных и сельскохозяйственных животных. Активный агент может действовать на желаемую мишень или может быть визуализирован на ней внутри или на поверхности тела животного, включая опухолевую ткань.
Неограничивающими примерами «активных агентов» являются лекарственные средства, действующие на синаптические области или области нейроэффекторных соединений; общие и локальные анестетики; снотворные и седативные средства; лекарственные средства для лечения расстройств психики, таких как депрессия и шизофрения; противоэпилептические и противосудорожные средства; лекарственные средства для лечения болезни Паркинсона и Гентингтона, возрастных изменений и болезни Альцгеймера; антагонисты возбуждающих аминокислот, нейротрофические факторы и нейрорегенеративные агенты; трофические факторы; лекарственные средства, нацеленные на лечение травмы центральной нервной системы (ЦНС) или инсульта; лекарственные средства для лечения бактериальных, вирусных и/или микробных инфекций, таких как грипп, ВИЧ, герпес, ветряная оспа и т.п.; антацидные и противовоспалительные лекарственные средства; химиотерапевтические агенты для лечения паразитарных инфекций и заболеваний, вызванных микроорганизмами; иммуносупрессивные средства; противораковые лекарственные средства; гормоны и антагонисты гормонов; тяжелые металлы и антагонисты тяжелых металлов; антагонисты неметаллических токсических агентов; цитостатические агенты; агенты визуализации и другие диагностические вещества; иммуноактивные и иммунореактивные агенты; трансмиттеры и соответствующие агонисты рецепторов и антагонисты рецепторов; ингибиторы транспорта; антибиотики; спазмолитики; антигистаминные средства; средства против тошноты; релаксанты; стимуляторы; смысловые и антисмысловые олигонуклеотиды; церебральные сосудорасширяющие средства; психотропные средства; противоманиакальные средства; сосудорасширяющие и сосудосуживающие средства; гипотензивные средства; лекарственные средства для лечения мигрени; гипергликемические и гипогликемические средства; минералы и нутритивные средства; средства против ожирения; анаболики; антигистаминные средства и их смеси.
«Антитело», также известное как иммуноглобулин, представляет собой крупный белок Y-образной формы, используемый иммунной системой для идентификации и нейтрализации чужеродных элементов, таких как бактерии и вирусы. Антитело имеет четыре полипептидные цепи, две идентичные тяжелые цепи и две идентичные легкие цепи, соединенные цистеиновыми дисульфидными связями.
«Моноклональное антитело» представляет собой моноспецифическое антитело, где все молекулы антитела идентичны, поскольку они вырабатываются идентичными иммунными клетками, которые все представляют собой клоны уникальной родительской клетки. Моноклональные антитела могут быть получены путем слияния клеток миеломы с клетками селезенки от мыши (или В-лимфоцитами от кролика), которая была иммунизирована желаемым антигеном, с последующей очисткой полученных в результате гибридом такими методами, как аффинная очистка. Рекомбинантные моноклональные антитела могут быть вероятнее получены в вирусах или дрожжевых клетках, чем у мышей, методами, включающими методы клонирования репертуара или фагового дисплея/дрожжевого дисплея, клонирования сегментов генов иммуноглобулинов с созданием библиотек антител с незначительно различающимися аминокислотными последовательностями, из которых могут быть получены антитела желаемой специфичности. Полученные в результате антитела можно производить в широком масштабе путем ферментации.
Химерные или гуманизированные антитела представляют собой антитела, содержащие комбинацию исходных (обычно мышиных) и человеческих последовательностей ДНК, используемых в процессе рекомбинации, например, таких, в которых ДНК мыши, кодирующая связывающий участок моноклонального антитела, объединена с продуцирующей антитело ДНК человека с образованием частично мышиного, частично человеческого моноклонального антитела. Полностью гуманизированные антитела получают с помощью трансгенных мышей (сконструированных методами генной инженерии для выработки человеческих антител) или библиотек фагового дисплея.
«Линкер» представляет собой группировку с двумя активными концами, одним для связывания или ассоциации иным путем биологической группировки или ее фрагмента, такой как антитело (или его фрагмент), а другим - для конъюгации с активными агентом, таким как цитотоксин.
«Цитотоксин» представляет собой соединение, которое в присутствии клетки, такой как раковая клетка, является токсичным или индуцирует ключевые функциональные изменения в этой клетке.
При использовании в настоящем документе «алкил» относится к прямоцепочечной или разветвленной углеводородной цепи, которая является полностью насыщенной (т.е. не содержит двойные или тройные связи). Алкильная группа может иметь от 1 до 9 атомов углерода (везде, где он встречается в данном документе, числовой диапазон, такой как «от 1 до 9», относится к каждому целому числу в данном диапазоне; например, «от 1 до 9 атомов углерода» означает, что алкильная группа может содержать 1 атом углерода, 2 атома углерода, 3 атома углерода и т.д., вплоть до 9 атомов углерода включительно, хотя настоящее определение также охватывает случаи, когда термин «алкил» встречается без обозначения числового диапазона). Алкильная группа может также представлять собой алкил среднего размера, имеющий от 1 до 9 атомов углерода. Типичные алкильные группы включают, но никоим образом не ограничены ими, метил, этил, пропил, изопропил, бутил, изобутил, третичный бутил, пентил, гексил и т.п.
При использовании в настоящем документе «алкенил» относится к прямоцепочечной или разветвленной углеводородной цепи, содержащей одну или более двойных связей. Алкенильная группа может иметь от 2 до 9 атомов углерода, хотя настоящее определение также охватывает случаи, где термин «алкенил» встречается без обозначения числового диапазона. Алкенильная группа может также представлять собой алкенил среднего размера, имеющий от 2 до 9 атомов углерода. Алкенильная группа может также представлять собой низший алкенил, имеющий от 2 до 4 атомов углерода. Алкенильная группа может быть обозначена как «С2-4 алкенил» или подобными обозначениями. Только в качестве примера «С2-4 алкенил» указывает на наличие от двух до четырех атомов углерода в алкенильной цепи, т.е. алкенильная цепь выбрана из этенила, пропен-1-ила, пропен-2-ила, пропен-3-ила, бутен-1-ила, бутен-2-ила, бутен-3-ила, бутен-4-ила, 1-метил-пропен-1-ила, 2-метил-пропен-1-ила, 1-этил-этен-1-ила, 2-метил-пропен-3-ила, бута-1,3-диенила, бута-1,2-диенила и бута-1,2-диен-4-ила. Типичные алкенильные группы включают, но никоим образом не ограничены ими, этенил, пропенил, бутенил, пентенил и гексенил и т.п.
При использовании в настоящем документе «алкинил» относится к прямоцепочечной или разветвленной углеводородной цепи, содержащей одну или более тройных связей. Алкинильная группа может иметь от 2 до 9 атомов углерода, хотя настоящее определение также охватывает случаи, где термин «алкинил» встречается без обозначения числового диапазона. Алкинильная группа может также представлять собой алкинил среднего размера, имеющий от 2 до 9 атомов углерода. Алкинильная группа может также представлять собой низший алкинил, имеющий от 2 до 4 атомов углерода. Алкинильная группа может быть обозначена как «С2-4 алкинил» или подобными обозначениями. Только в качестве примера «С2-4 алкинил» указывает на наличие от двух до четырех атомов углерода в алкинильной цепи, т.е. алкинильная цепь выбрана из этинила, пропин-1-ила, пропин-2-ила, бутин-1-ила, бутин-3-ила, бутин-4-ила и 2-бутинила. Типичные алкинильные группы включают, но никоим образом не ограничены ими, этинил, пропинил, бутинил, пентинил и гексинил и т.п.
Термин «ароматический» относится к кольцу или системе колец, имеющих конъюгированную π-электронную систему, и включает как карбоциклические ароматические (например, фенил), так и гетероциклические ароматические группы (например, пиридин). Этот термин включает моноциклические или полициклические группы с конденсированными кольцами (т.е. кольцами, имеющими общие соседние пары атомов) при условии, что полная кольцевая система является ароматической.
При использовании в настоящем документе «циклоалкил» означает полностью насыщенное карбоциклическое кольцо или систему колец. Примеры включают без ограничений циклопропил, циклобутил, циклопентил и циклогексил.
При использовании в настоящем документе «гетероарил» относится к ароматическому кольцу или системе колец (т.е. к двум или более конденсированных колец, имеющих два общих соседних атома), которые содержат один или более гетероатомов, то есть элементов, отличающихся от атомов углерода, включающих без ограничений атом азота, кислорода и серы в кольцевой структуре. Когда гетероарил представляет собой систему колец, каждое кольцо в системе является ароматическим. Гетероарильная группа может иметь 5-18 атомов-членов кольца (т.е. число атомов, составляющих кольцевую структуру, включая атомы углерода и гетероатомы), хотя настоящее определение также охватывает термин «гетероарил» без указания числового диапазона. Примеры гетероарильных колец включают без ограничений фурил, тиенил, фталазинил, пирролил, оксазолил, тиазолил, имидазолил, пиразолил, изоксазолил, изотиазолил, триазолил, тиадиазолил, пиридинил, пиридазинил, пиримидинил, пиразинил, триазинил, хинолинил, изохинолинил, бензимидазолил, бензоксазолил, бензотиазолил, индолил, изоиндолил и бензотиенил.
При использовании в настоящем документе гетероциклил означает неароматическое циклическое кольцо или систему колец, содержащие по меньшей мере один гетероатом в кольцевой структуре. Гетероциклилы могут быть соединены вместе в конденсированной, мостиковой или спиро-соединенной системе. Гетероциклилы могут иметь любую степень насыщенности при условии, что по меньшей мере одно кольцо в системе колец является неароматическим. Гетероатом(-ы) может(-гут) присутствовать либо в неароматическом, либо в ароматическом кольце в системе колец. Гетероциклильная группа может иметь от 3 до 20 атомов-членов кольца (т.е. число атомов, составляющих кольцевую структуру, включая атомы углерода и гетероатомы), хотя настоящее определение также охватывает термин «гетероциклил» без указания числового диапазона. Гетероциклильная группа может также представлять собой гетероциклил среднего размера, имеющий от 3 до 10 членов кольца. Гетероциклильная группа может также представлять собой гетероциклил, имеющий от 3 до 6 членов кольца. Примеры гетероциклильных колец включают без ограничений азепинил, акридинил, карбазолил, циннолинил, диоксоланил, имидазолинил, имидазолидинил, морфолинил, оксиранил, оксепанил, тиепанил, пиперидинил, пиперазинил, диоксопиперазинил, пирролидинил, пирролидонил, пирролидинонил, 4-пиперидонил, пиразолинил, пиразолидинил, 1,3-диоксинил, 1,3-диоксанил, 1,4-диоксинил, 1,4-диоксанил, 1,3-оксатионил, 1,4-оксатиинил, 1,4-оксатианил, 2Н-1,2-оксазинил, триоксанил, гексагидро-1,3,5-триазинил, 1,3-диоксолил, 1,3-диоксоланил, 1,3-дитиолил, 1,3-дитиоланил, изоксазолинил, изоксазолидинил, оксазолинил, оксазолидинил, оксазолидинонил, тиазолинил, тиазолидинил, 1,3-оксатиоланил, индолинил, изоиндолинил, тетрагидрофуранил, тетрагидропиранил, тетрагидротиофенил, тетрагидротиопиранил, тетрагидро-1,4-тиазинил, тиаморфолинил, дигидробензофуранил, бензимидазолидинил и тетрагидрохинолин.
(Гетероциклил)алкил представляет собой гетероциклильную группу, соединенную в качестве заместителя посредством алкиленовой группы. Примеры включают без ограничений имидазолинилметил ииндолинилэтил.
Линкер/активный агент
В одном аспекте в настоящем изобретении предложен линкер-активный агент, который может быть представлен формулой I:
Figure 00000005
или его фармацевтически приемлемая соль,
где:
L1, L2, L представляют собой линкер или отсутствуют;
М представляет собой линкерную группу;
Q представляет собой активный агент или отсутствует;
m представляет собой целое число, выбранное из чисел от 0 до 6;
n представляет собой целое число, выбранное из чисел от 0 до 8;
каждый из R1 и R2 представляют собой функциональную группу, которая может взаимодействовать с тиолом.
В некоторых воплощениях изобретения каждая из двух функциональных групп, взаимодействующих с тиолом, может независимо содержать малеимид, атом галогена, галоген-замещенные функциональные группы, алканаль, алканон, сульфонил-алкен, силан, изоцианат или норборнен, но обе они не могут представлять собой малеимид, и обе не могут представлять собой атом галогена.
В конкретных воплощениях изобретения каждый из R1 и R2 независимо выбран из:
Figure 00000006
Figure 00000007
и их производных;
где в данном воплощении изобретения R5, R6 и R7 независимо выбраны из Н, атома галогена, С1-С6 алкилов, С2-С6 алкенилов, С2-С6 алкинилов, ароматических групп, гетероарилов, С3-С9 циклоалкилов, С3-С9 гетероциклила, полиэтиленгликоля, NO2, CN, SCN, OR8, SR9, NR10R11, C(=O)R12, C(=O)OR8, C(=O)NR10R11, C(=S)OR8, C(=S)NR10R11, C(=S)SR9, NR10(C=O)R12, NR10(C=S)NR10R11, O(C=O)NR10R11, SO2R9, S(=O)2OR8 и их комбинаций, где R8, R9, R10, R11, R12 независимо выбраны из H, С1-С6 алкила, С2-С6 алкенилов, С2-С6 алкинилов и их комбинаций.
X представляет собой атом галогена; в некоторых воплощениях изобретения X может представлять собой F, Cl, Br или I;
R1 и R2 могут быть одинаковыми или разными;
В некоторых воплощениях изобретения М выбран, например, из C-R5, N, В, Р, Si-R5, ароматических групп, гетероарилов, циклоалкилов и (гетероциклил)алкилов, R5 выбран из Н, C1-C6 алкилов, С2-С6 алкенилов и С2-С6 алкинилов.
В других воплощениях изобретения М выбран из группы, состоящей из
Figure 00000008
Figure 00000009
Figure 00000010
Figure 00000011
Figure 00000012
В некоторых воплощениях изобретения М выбран из
Figure 00000013
Figure 00000014
В некоторых воплощениях изобретения Q представляет собой активный агент, выбранный из группы, состоящей из агентов, связывающих тубулин, алкилирующих агентов ДНК, интеркаляторов ДНК, ингибиторов ферментов, иммуномодуляторов, пептидов и нуклеотидов.
В некоторых воплощениях изобретения Q выбран из группы, состоящей из майтанзиноидов, ауристатинов, калихеамицинов, доксорубицинов, дуокармицинов и пирролобензодиазепинов (PBD).
В некоторых воплощениях изобретения Q выбран из ММАЕ, MMAF, димера PBD, DM1 и DM4. Активный агент может представлять собой, например, любой из агентов, раскрытых в WO 2013085925 А1, которая полностью включена в настоящий документ посредством ссылки. «Лекарственное средство» и «активный агент» используют в настоящем документе взаимозаменяемо.
В некоторых воплощениях изобретения каждая из внутренних линкерных группировок L1, L2 независимо выбрана из С1-С6 алкилов, С2-С6 алкенилов, С2-С6 алкинилов, ароматических групп, гетероарилов, С3-С9 циклоалкилов, С3-С9 гетероциклила, полиэтиленгликоля, О, S, NR6, С(=O), С(=O)O, C(=O)NR6, C=NR6, C(=S)O, C(=S)NR6, C(=S)S, NR6(C=O), NR6(C=S)NR7, O(C=O)NR6, S(=O)2 и любой их комбинации;
где в данном воплощении изобретения R6 и R7 независимо выбраны из Н, C1-C6 алкилов, С2-С6 алкенилов и С2-С6 алкинилов.
В других воплощениях изобретения каждый из L1, L2 независимо выбран из:
Figure 00000015
Figure 00000016
Figure 00000017
Figure 00000018
или отсутствует.
В некоторых воплощениях изобретения каждый из L1, L2 независимо выбран из:
Figure 00000019
или отсутствует.
L представляет собой линкер, соединяющий активный агент Q с линкерной группой М. В некоторых воплощениях изобретения L включает нерасщепляемое звено, в других воплощениях изобретения L включает расщепляемое звено. Конъюгат линкер-активный агент может иметь один линкер, два линкера, три линкера, четыре линкера, пять линкеров или шесть линкеров.
В некоторых воплощениях изобретения L независимо выбран из C1-C9 алкилов, С2-С9 алкенилов, С2-С9 алкинилов, ароматических групп, гетероарилов, С3-С9 циклоалкилов, С3-С9 гетероциклила, полиэтиленгликоля, О, S, NR8, С(=O), С(=O)O, C(=O)NR8, C=NR8, C(=S)O, C(=S)NR8, C(=S)S, NR8(C=O), NR8(C=S)NR9, O(C=O)NR8, S(=O)2, Val-Cit-PAB, Val-Ala-PAB, Val-Lys(Ac)-PAB, Phe-Lys-PAB, Phe-Lys(Ac)-PAB, D-Val-Leu-Lys, Gly-Gly-Arg, Ala-Ala-Asn-PAB, Ala-PAB, PAB и любой их комбинации.
В данном воплощении изобретения R8 и R9 независимо выбраны из Н, C1-C6 алкилов, С2-С6 алкенилов и С2-С6 алкинилов.
В некоторых воплощениях изобретения L отсутствует. Когда L отсутствует, активный агент Q соединен непосредственно с М.
В некоторых воплощениях изобретения L независимо выбран из группы, состоящей из:
Figure 00000020
Figure 00000021
Figure 00000022
Figure 00000023
Figure 00000024
Figure 00000025
Figure 00000026
Figure 00000027
Figure 00000028
Figure 00000029
Figure 00000030
Figure 00000031
Figure 00000032
Figure 00000033
Figure 00000034
Figure 00000035
или отсутствует.
В некоторых воплощениях изобретения L независимо выбран из следующих групп:
Figure 00000036
Figure 00000037
Figure 00000038
Figure 00000039
Figure 00000040
Figure 00000041
Figure 00000042
или отсутствует.
В некоторых воплощениях изобретения конъюгат линкер-активный агент имеет следующую структуру формулы I:
Figure 00000043
В некоторых воплощениях изобретения конъюгат линкер-активный агент имеет следующую структуру формулы I:
Figure 00000044
В некоторых воплощениях изобретения конъюгат линкер-активный агент имеет следующую структуру формулы I:
Figure 00000045
В некоторых воплощениях изобретения конъюгат линкер-активный агент имеет следующую структуру формулы I:
Figure 00000046
В некоторых воплощениях изобретения конъюгат линкер-активный агент имеет следующую структуру формулы I:
Figure 00000047
В некоторых воплощениях изобретения конъюгат линкер-активный агент имеет следующую структуру формулы I:
Figure 00000048
В некоторых воплощениях изобретения конъюгат линкер-активный агент имеет следующую структуру формулы I:
Figure 00000049
В некоторых воплощениях изобретения конъюгат линкер-активный агент имеет следующую структуру формулы I:
Figure 00000050
В некоторых воплощениях изобретения конъюгат линкер-активный агент имеет следующую структуру формулы I:
Figure 00000051
В некоторых воплощениях изобретения конъюгат линкер-активный агент имеет следующую структуру формулы I:
Figure 00000052
В некоторых воплощениях изобретения конъюгат линкер-активный агент имеет следующую структуру формулы I:
Figure 00000053
В некоторых воплощениях изобретения конъюгат линкер-активный агент имеет следующую структуру формулы I:
Figure 00000054
В другом аспекте в настоящем изобретении предложен конъюгат антитело-лекарственное средство, имеющий следующую формулу II:
Figure 00000055
или его фармацевтически приемлемая соль,
А представляет собой нацеливающую группировку;
S представляет собой атом серы тиольной группы нацеливающей группировки;
L1, L2, L представляют собой линкер или отсутствуют;
М представляет собой линкерную группу;
Q представляет собой активный агент или отсутствует;
m представляет собой целое число, выбранное из чисел от 0 до 6;
n представляет собой целое число, выбранное из чисел от 0 до 8; и
каждый из R3 и R4 образован в результате взаимодействия между S и функциональной группой, которая может взаимодействовать с тиолами.
В некоторых воплощениях изобретения функциональные группы, взаимодействующие с тиолом, могут независимо содержать малеимид, атом галогена, галоген-замещенные функциональные группы, алканаль, алканон, сульфонил-алкен, силан, изоцианат или норборнен, но обе они не могут представлять собой малеимид, и обе не могут представлять собой атом галогена.
В некоторых воплощениях изобретения каждый из R3 и R4 образуется независимо в результате взаимодействия между тиольной группой и группой, выбранной из
Figure 00000056
Figure 00000057
и их производных.
где в данном воплощении изобретения R5, R6 и R7 независимо выбраны из Н, атом галогена, C1-C6 алкилов, С2-С6 алкенилов, С2-С6 алкинилов, ароматических групп, гетероарилов, С3-С9 циклоалкилы, С3-С9 гетероциклил, полиэтиленгликоль, NO2, CN, SCN, OR8, SR9, NR10R11, C(=O)R12, C(=O)OR8, C(=O)NR10R11, C(=S)OR8, C(=S)NR10R11, C(=S)SR9, NR10(C=O)R12, NR10(C=S)NR10R11, O(C=O)NR10R11, SO2R9, S(=O)2OR8 и их комбинации, где R8, R9, R10, R11, R12 независимо выбраны из H, С1-С6 алкила, С2-С6 алкенилов, С2-С6 алкинилов и их комбинаций.
В некоторых воплощениях изобретения R3 и R4 имеют 10 или менее, предпочтительно 5 или менее атомов углерода, являются циклическими и/или содержат кетоновую группу.
В конкретных воплощениях изобретения каждый из R3 и R4 независимо выбран из:
Figure 00000058
и их производных. В одном воплощении изобретения R3 и R4 способны связывать 2 сульфгидрильные группы и образовывать легкие-тяжелые цепи антитела более стабильно.
Когда R3 или R4 отсутствует, L1 или L2 конъюгированы непосредственно с нацеливающей группировкой.
R3 и R4 могут быть одинаковыми или разными.
Только R3 представляет собой
Figure 00000059
, R3 и R4 могут быть одинаковыми.
В некоторых воплощениях изобретения М выбран, например, из C-R5, N, В, Р, Si-R5, ароматических групп, гетероарилов, циклоалкилов и (гетероциклил)алкилов, R5 выбран из Н, С1-С6 алкилов, С2-С6 алкенилов и С2-С6 алкинилов. В других воплощениях изобретения М выбран из группы, состоящей из
Figure 00000060
Figure 00000061
Figure 00000062
Figure 00000063
Figure 00000064
В некоторых воплощениях изобретения М выбран из
Figure 00000065
,
Figure 00000066
В некоторых воплощениях изобретения Q представляет собой активный агент, выбранный из группы, состоящей из агентов, связывающих тубулин, алкилирующих агентов ДНК, интеркаляторов ДНК, ингибиторов ферментов, иммуномодуляторов, пептидов и нуклеотидов. «Лекарственное средство» и «активный агент» используют в настоящем документе взаимозаменяемо.
В некоторых воплощениях изобретения Q выбран из группы, состоящей из майтанзиноидов, ауристатинов, калихеамицинов, доксорубицинов, дуокармицинов и PBD.
В некоторых воплощениях изобретения Q выбран из ММАЕ, MMAF, PBD, DM1 и DM4. Активный агент может представлять собой, например, любой из агентов, раскрытых в WO 2013085925 А1, которая полностью включена в настоящий документ посредством ссылки.
В некоторых воплощениях изобретения каждая из внутренних сшивающих группировок L1, L2 независимо выбрана из С1-С6 алкилов, С2-С6 алкенилов, С2-С6 алкинилов, ароматических групп, гетероарилов, С3-С9 циклоалкилов, С3-С9 гетероциклила, полиэтиленгликоля, О, S, NR6, С(=O), С(=O)O, C(=O)NR6, C=NR6, C(=S)O, C(=S)NR6, C(=S)S, NR6(C=O), NR6(C=S)NR7, O(C=O)NR6, S(=O)2 и любой их комбинации;
где в данном воплощении изобретения R6 и R7 независимо выбраны из Н, С1-С6 алкилов, С2-С6 алкенилов и С2-С6 алкинилов.
В других воплощениях изобретения каждый из L1 и L2 независимо выбран из:
Figure 00000067
Figure 00000068
Figure 00000069
Figure 00000070
или отсутствует.
В некоторых воплощениях изобретения каждый из L1 и L2 независимо выбран из:
Figure 00000071
или отсутствует.
L представляет собой линкер, соединяющий лекарственное средство Q с линкерной группой М. В некоторых воплощениях изобретения L включает нерасщепляемое звено, в других воплощениях изобретения L включает расщепляемое звено. Конъюгат антитело-лекарственное средство может иметь один линкер, два линкера, три линкера, четыре линкера, пять линкеров или шесть линкеров.
В некоторых воплощениях изобретения L независимо выбран из С1-С9 алкилов, С2-С9 алкенилов, С2-С9 алкинилов, ароматических групп, гетероарилов, С3-С9 циклоалкилов, С3-С9 гетероциклила, полиэтиленгликоля, О, S, NR8, С(=O), С(=O)O, C(=O)NR8, C=NR8, C(=S)O, C(=S)NR8, C(=S)S, NR8(C=O), NR8(C=S)NR9, O(C=O)NR8, S(=O)2, Val-Cit-PAB, Val-Ala-PAB, Val-Lys(Ac)-PAB, Phe-Lys-PAB, Phe-Lys(Ac)-PAB, D-Val-Leu-Lys, Gly-Gly-Arg, Ala-Ala-Asn-PAB, Ala-PAB, PAB и любой их комбинации;
где в данном воплощении изобретения R8 и R9 независимо выбраны из Н, C1-C6 алкилов, С2-С6 алкенилов и С2-С6 алкинилов.
В некоторых воплощениях изобретения L отсутствует. Когда L отсутствует, активный агент Q соединен непосредственно с М.
В некоторых воплощениях изобретения L независимо выбран из группы, состоящей из:
Figure 00000072
Figure 00000073
Figure 00000074
Figure 00000075
Figure 00000076
Figure 00000077
Figure 00000078
Figure 00000079
Figure 00000080
Figure 00000081
Figure 00000082
Figure 00000083
Figure 00000084
Figure 00000085
Figure 00000086
Figure 00000087
или отсутствует.
В некоторых воплощениях изобретения L независимо выбран из следующих групп:
Figure 00000088
Figure 00000089
Figure 00000090
Figure 00000091
Figure 00000092
Figure 00000093
Figure 00000094
Figure 00000095
или отсутствует.
А представляет собой нацеливающую группировку. В некоторых воплощениях изобретения А представляет собой антитело; фрагмент, имитатор или вариант антитела; белковый лиганд; белковый каркас; пептид или низкомолекулярный лиганд. Фрагмент антитела может представлять собой, например, Fab, Fab', (Fab')2 или scFv, Fv.
Примеры опухолеассоциированных антигенов, которые могут быть нацеленными в соответствии с заявленным изобретением, включают без ограничений опухолеассоциированные антигены (1)-(36), перечисленные ниже. Приведено название, альтернативное название и номер доступа по GenBank каждого из приведенных примеров антигена. Нуклеиново-кислотные и белковые последовательности, соответствующие этим примерам опухолеассоциированных антигенов, можно найти в публично доступных базах данных, таких как GenBank.
(1) BMPR1B (рецептор типа 1В костного морфогенетического белка, номер доступа GenBank NM_001203);
(2) Е16 (LAT1, SLC7A5, номер доступа GenBank bandit _00: 3486);
(3) STEAPI (эпителиальный антиген простаты с шестью трансмембранными доменами, номер доступа GenBank NM_012449);
(4) 0772Р (СА125, MUC16, номер доступа GenBank AF361486);
(5) MPF (MPF, MSLN, SMR, фактор стимуляции мегакариоцитов, мезотелин, номер доступа GenBank NM_005823);
(6) Napi3b (NAP1-3B, NPTIIb, SLC34A2, член (фосфат натрия) член 2 семейства 34 растворимых носителей, натрийзависимый переносчик фосфатов 3b II типа, номер доступа GenBank NM_006424);
(7) Sema5b (FLJ10372, KIAA1445, Mm.42015, SEMA5B, SEMAG, семафорин 5b Hlog, сема-домен, трансмембранный домен (TM) и короткий цитоплазматический домен с семью тромбоспондиновыми повторами (I типа и II типа), (семафорин) 5b, номер доступа GenBank АВ040878);
(8) ген PSCA hlg (2700050C12Rik, C530008016Rik, RIKEN CDNA2700050C12, RIKENcDNA2700050C12, номер доступа GenBank AY358628);
(9) ETBR (рецептор эндотелина В, номер доступа GenBank AY275463);
(10) MSG783 (RNF124, псевдобелок FLJ20315, номер доступа GenBank NM_017763);
(11) STEAP2 (HGNC_8639, IPCA-1, PCANAP I, STAMP I, STEAP2, STMP, гены I, связанные с раком простаты, белок I, ассоциированный с раком простаты, эпителиальный антиген 2 простаты с шестью трансмембранными доменами, белок простаты с шестью трансмембранными доменами, номер доступа GenBank AF455138);
(12) TrpM4 (BR22450, FLJ20041, TRPM4, TRPM4B, катионный канал, действующий по механизму транзиторного рецепторного потенциала, подсемейство М, член 4, номер доступа GenBank NM_017636);
(13) CRIPTO (CR, CRI, CRGF, CRIPTO, TDGFI, фактор роста тератомы, номер доступа GenBank NP_003203 или NM_003212);
(14) CD21 (CR2 (рецептор комплемента типа 2) или C3DR (C3d/рецептор вируса ЕВ) или Hs.73792, номер доступа GenBank М26004);
(15) CD79b (CD79B, CD79 β, IGb (иммуноглобулин, родственный β), В29, номер доступа GenBank NM_000626);
(16) FcRH2 (IFGP4, IRTA4, SPAPIA (содержащие заякоренные домены SH2 белков фосфатаз Ia), SPAP1B, SPAP 1С, номер доступа GenBank NM_030764);
(17) HER2 (ErbB2, номер доступа GenBank MI1730);
(18) NCA (СЕАСАМ6, номер доступа GenBank М18728);
(19) MDP (DPEPI, номер доступа GenBank ВС017023);
(20) IL20Ra (IL20Ra, ZCYT0R7, номер доступа GenBank AF184971);
(21) Бревикан (BCAN, ВЕНАВ, номер доступа GenBank AF229053);
(22) EphB2R (DRT, ERK, Hek5, ЕРНТ3, Tyro5, номер доступа GenBank NM_004442);
(23) ASLG659 (B7h, номер доступа GenBank AX092328);
(24) PSCA (прежнее название антиген стволовой клетки простаты, номер доступа GenBank AJ297436);
(25) GEDA (номер доступа GenBank AY260763);
(26) BAFF-R (рецептор фактора активации В-лимфоцитов, рецептор 3 BLyS, BR3, номер доступа GenBank AF116456);
(27) CD22 (рецептор изоформы CD22-B рецептора В-лимфоцитов, номер доступа GenBank AK026467);
(28) CD79a (CD79A, CD79a, иммуноглобулин, родственный α, способный к ковалентным взаимодействиям с Ig (CD79B) и образованию комплекса с молекулами IgM на поверхности трансдуцированных В-лимфоцитов, в который вовлечен сигнальный специфический белок В-лимфоцитов, номер доступа GenBank NP_001774.1);
(29) CXCR5 (рецептор 1 лимфомы Беркитта, сопряженный с G-белком рецепторный хемокин, активируемый CXCL13, играет роль в миграции лимфоцитов и гуморальной защите, возможно, влияет на инфекцию ВИЧ-2, СПИД, лимфому, миелому и лейкоз, номер доступа GenBank NP_001701.1);
(30) HLA-D0B (бета-субъединица молекулы главного комплекса гистосовместимости (ГКГ) II (антиген Ia), который связывает пептиды и презентирует их Т-лимфоцитам CD4+ в пейеровых бляшках, номер доступа GenBank NP_002111.1);
(31) Р2Х5 (Р2Х ионный канал 5, гейтируемый лигандом пуринергического рецептора, внеклеточный АТФ-гейтируемый ионный канал, может быть вовлечен в синаптическую передачу и нейрогенез, его дефект может лежать в основе патофизиологии идиопатической нестабильности детрузора, номер доступа GenBank NP_002552.2);
(32) CD72 (антиген CD72 дифференцировки В-лимфоцитов, Lyb-2, номер доступа GenBank NP_001773.I);
(33) LY64 (лимфоцитарный антиген 64 (RP105), семейство мембранных белков с лейцин-богатым повтором I типа (LRR), регулирует активацию В-лимфоцитов, апоптоз и утрату функций, может быть вовлечен в повышение активности у пациентов с системной красной волчанкой, номер доступа GenBank NP_005573.1);
(34) FcRHI (белок, подобный Fc 1 рецептору, рецептор предполагаемого Fc домена иммуноглобулина, содержащий Ig-подобные домены С2 типа и домены ITAM, может играть роль в дифференцировке В-лимфоцитов, номер доступа GenBank NP_443170.1);
(35) IRTA2 (рецептор 2, ассоциированный с транслокацией, суперсемейства иммуноглобулинов, предполагаемый иммунный рецептор, может играть роль в развитии В-лимфоцитов и в развитии лимфомы; генетические нарушения, вызванные транслокацией, встречаются при некоторых злокачественных В-лимфоцитарных опухолях, номер доступа GenBank NP_112571.1);
(36) TENB2 (предполагаемый трансмембранный протеогликан, и относящийся к факторам роста EGF/семейству херегулина и фоллистатина, номер доступа GenBank AF179274).
В некоторых воплощениях изобретения А представляет собой гуманизированное моноклональное антитело, нацеленное на опухолеассоциированный антиген. Гуманизированное антитело может представлять собой без ограничений: трастузумаб (антитело к HER2), пертузумаб (антитело к HER2), ритуксимаб (антитело к CD20), алемтузумаб (антитело к CD52), бевацизумаб (антитело к фактору роста эндотелия сосудов (VEGF)), адалимумаб (антитело к фактору некроза опухоли (ФНО) альфа), цетуксимаб (антитело к рецептору эпидермального фактора роста (EGFR)), аматуксимаб (антитело к мезотелину), блинатумомаб (антитело к CD19), брентуксимаб (антитело к CD30), сертолизумаб пегол (антитело к ФНО альфа), панитумумаб (антитело к EGFR), нимотузумаб (антитело к EGFR), гемтузумаб (антитело к CD33), голимумаб (антитело к ФНО альфа), ибритумомаб (антитело к CD20), инфликсимаб (антитело к ФНО альфа), ипилимумаб (антитело к CTLA-4), офатумумаб (антитело к CD20) и тозитумомаб (антитело к CD20).
В некоторых воплощениях изобретения конъюгат антитело-лекарственное средство имеет следующую структуру формулы II:
Figure 00000096
В некоторых воплощениях изобретения конъюгат антитело-лекарственное средство имеет следующую структуру формулы II:
Figure 00000097
В некоторых воплощениях изобретения конъюгат антитело-лекарственное средство имеет следующую структуру формулы II:
Figure 00000098
В некоторых воплощениях изобретения конъюгат антитело-лекарственное средство имеет следующую структуру формулы II:
Figure 00000099
В некоторых воплощениях изобретения конъюгат антитело-лекарственное средство имеет следующую структуру формулы II:
Figure 00000100
В некоторых воплощениях изобретения конъюгат антитело-лекарственное средство имеет следующую структуру формулы II:
Figure 00000101
В некоторых воплощениях изобретения конъюгат антитело-лекарственное средство имеет следующую структуру формулы II:
Figure 00000102
В некоторых воплощениях изобретения конъюгат антитело-лекарственное средство имеет следующую структуру формулы II:
Figure 00000103
В некоторых воплощениях изобретения конъюгат антитело-лекарственное средство имеет следующую структуру формулы II:
Figure 00000104
В некоторых воплощениях изобретения конъюгат антитело-лекарственное средство имеет следующую структуру формулы II:
Figure 00000105
В некоторых воплощениях изобретения конъюгат антитело-лекарственное средство имеет следующую структуру формулы II:
Figure 00000106
В некоторых воплощениях изобретения конъюгат антитело-лекарственное средство имеет следующую структуру формулы II:
Figure 00000107
В некоторых воплощениях изобретения А включает без ограничений трастузумаб.
Области терапевтического применения
В некоторых воплощениях изобретения конъюгаты заявленного изобретения обеспечивают лечение злокачественных опухолей, включающих без ограничения карциному, лимфому, бластому, саркому и лейкоз или лимфоидные злокачественные опухоли. Более конкретные примеры таких злокачественных опухолей включают плоскоклеточный рак (например, эпителиальный плоскоклеточный рак), рак легкого, включающий мелкоклеточный рак легкого, немелкоклеточный рак легкого, аденокарциному легкого и плоскоклеточную карциному легкого, рак брюшины, печеночно-клеточный рак, рак желудочно-кишечного тракта или желудка, включая желудочно-кишечный рак, рак поджелудочной железы, глиобластому, рак шейки матки, рак яичника, рак полости рта, рак печени, рак мочевого пузыря, рак мочевыводящих путей, гепатому, рак молочной железы, включающий, например, HER2-положительный рак молочной железы, рак ободочной кишки, рак прямой кишки, колоректальный рак, карциному эндометрия или матки, карциному слюнной железы, рак почки или почечно-клеточный рак, рак предстательной железы, рак вульвы, рак щитовидной железы, карциному печени, карциному анальной области, карциному полового члена, меланому, множественную миелому и В-клеточную лимфому, рак головного мозга, злокачественные опухоли органов головы и шеи и ассоциированные метастазы.
Конъюгаты заявленного изобретения можно также применять для доставки активных агентов для лечения ряда других состояний, включающих без ограничений воспалительные расстройства, аутоиммунные расстройства, расстройства нервной системы и сердечно-сосудистые расстройства.
Области диагностического применения
В других воплощениях изобретения конъюгат заявленного изобретения содержит в качестве активного агента обнаружимое химическое соединение. Обнаружимое химическое соединение может представлять собой, например, агент визуализации. Агент может представлять собой синтетический или натуральный препарат и способен отражать или испускать свет при длине волны, при которой его можно обнаружить при помощи приемлемого оборудования для визуализации и/или диагностики, такого как микроскоп. Неограничивающие примеры приемлемых агентов визуализации включают органические красители, пищевые красители и флуоресцентные красители.
Таким образом, в одном воплощении заявленного изобретения предложен способ диагностики, который включает приведение в контакт исследуемого образца, подозреваемого на наличие интересующего анализируемого вещества, с конъюгатом антитело-лекарственное средство заявленного изобретения, в котором нацеливающая группировка селективно связывается с интересующим анализируемым веществом, a Q представляет собой обнаружимое химическое соединение и/или химическое соединение, с которым будет связываться одно или более дополнительных химических соединений, при этом сами указанные дополнительные химические соединения представляют собой обнаружимые химические соединения, и где указанный способ дополнительно включает анализ исследуемого образца для определения присутствия обнаружимого химического соединения, которое будет указывать на наличие интересующего анализируемого вещества. В одном воплощении изобретения анализируемое вещество представляет собой HER2 или другой антиген, ассоциированный с раком. Этот способ может быть выполнен либо in vivo, либо in vitro.
Биологическая активность конъюгатов
Оценку эффективности и токсичности конъюгатов заявленного изобретения можно проводить известными способами. Например, токсикологические свойства конкретного соединения или подгруппы соединений, имеющих определенные общие химические группировки, могут быть установлены путем определения токсичности in vitro в отношении линии клеток, такой как линия клеток млекопитающего и предпочтительно человека. На основании результатов таких исследований часто можно предсказать токсичность у животных, таких как млекопитающие, или более конкретно у людей. Альтернативно токсичность конкретных соединений можно определить известными способами в биологической модели, такой как мыши, крысы, кролики, собаки или обезьяны.
Эффективность конкретного соединения может быть установлена признанными в данной области техники способами, такими как способы in vitro, биологические модели или клинические исследования с участием людей. Признанные в данной области техники способы in vitro существуют почти для каждого класса состояния, включая состояния, разрешаемые посредством соединений, раскрытых в настоящем документе, включающие злокачественную опухоль, сердечно-сосудистое заболевание, различные нарушения иммунной системы и инфекционные заболевания. Аналогичным образом для установления эффективности химических соединений для лечения таких состояний можно использовать приемлемые биологические модели. При выборе модели для определения эффективности обычный специалист в данной области техники может руководствоваться уровнем техники по выбору соответствующей модели, дозы, пути и схемы введения.
Количественное определение комплексов, предложенных в настоящем документе, можно проводить на основании аффинности связывания и специфичности к желаемой мишени любым из способов, традиционно используемых для количественного определения антител. Количественное определение эффективности комплексов в качестве противораковых средств можно проводить любым из способов, традиционно используемых для количественного определения цитостатических/цитотоксических агентов, таких как анализы активности на клеточных культурах, ксенотрансплантатах и т.п.
Используя преимущества настоящего описания, обычный специалист в данной области техники не будет испытывать затруднений с учетом своих навыков и имеющейся литературы при определении приемлемых методов количественного определения; при определении на основании результатов этих анализов приемлемых доз для испытания в качестве противораковых средств с участием людей и при определении на основании результатов этих испытаний приемлемых доз для применения для лечения злокачественных опухолей у людей.
Лекарственные формы и введение
Композиции заявленного изобретения в дополнение к описанным в настоящем документе комплексам содержат физиологически приемлемый носитель и/или разбавитель, позволяющий транспортировать комплексы к мишени в организме животного после введения. Носитель и/или разбавитель может, как правило, представлять собой любую приемлемую среду, с помощью которой можно достичь желаемой цели, и которая не влияет на способность конъюгатов к направлению к желаемой мишени и к транспортировке активного агента к этой мишени для получения желаемого эффекта. В частности, носитель и/или разбавитель не должен приводить к ухудшению фармакологической активности активного агента и способности комплекса к направлению к желаемой мишени внутри или на поверхности тела животного. Предпочтительно указанный носитель и/или разбавитель выбран/выбраны из воды, физиологически приемлемых водных растворов, содержащих соли, и/или буферных растворов и любого другого раствора, приемлемого для введения животному. Такие носители и разбавители хорошо известны специалисту в данной области техники и могут представлять собой, например, дистиллированную воду, деионизированную воду, чистую или ультрачистую воду, солевой раствор, фосфатно-солевой буферный раствор (ФСБ), растворы, содержащие обычные буферные агенты, совместимые с другими компонентами системы доставки лекарственных средств, и т.д.
Композиции можно вводить субъекту способами, включающими без ограничений: (а) введение посредством пероральных путей, включающее введение в капсуле, таблетке, грануле, спрее, сиропе или других таких формах; (b) введение посредством не пероральных путей, включающее введение в виде водной суспензии, масляного препарата и т.п. или в виде капельной клизмы, суппозитория, бальзама, мази и т.п.; введение посредством инъекции подкожно, интраперитонеально, внутривенно, внутримышечно, внутрикожно и т.п.; а также (с) введения местным путем; (d) введение ректальным путем или (е) введение вагинальным путем, в зависимости от того, что считают приемлемым специалисты в данной области техники для приведения соединения по настоящему воплощению изобретения в контакт с живой тканью; и (f) введение посредством лекарственных форм контролируемого высвобождения, депо-препаратов и систем доставки с помощью инфузионных насосов.
В качестве дополнительных примеров таких способов введения и в качестве дополнительного описания способов введения в настоящем документе раскрыты различные способы введения раскрытых соединений и фармацевтических композиций, включая способы введения посредством внутриглазных, интраназальных и внутрисуставных путей.
В конкретных воплощениях изобретения комплексы по данному изобретению можно включать в лекарственные формы в виде растворов для внутривенного введения или в виде лиофилизированных концентратов для восстановления для приготовления внутривенных растворов (для восстановления, например, физиологическим раствором, 5% раствором декстрозы или подобными изотоническими растворами). Как правило, их будут вводить путем внутривенной инъекции или инфузии. Обычный специалист в области изготовления фармацевтических лекарственных форм, в частности лекарственной формы противораковых антител, не будет испытывать затруднений при разработке подходящих лекарственных форм с учетом своих навыков и имеющейся литературы.
Примеры
Ниже следуют примеры, которые иллюстрируют методики для осуществления изобретения на практике. Эти примеры не следует рассматривать как имеющие ограничительный характер.
ПРИМЕР I синтез конъюгатов линкер-активный агент
ПРИМЕР I-1 синтез соединения 9
Figure 00000108
i) Et3N, МеОН, К. Т., 2 ч; ii) NaH, ТГФ, К. Т., 5 ч; iii) Хлористо-водородная кислота, 1,4-диоксан, К. Т., 16 ч; iv) NaHCO3, Н2О/ТГФ, К. Т., 3 ч; v) HOBt, DIC, DIPEA, ДМФ, К. Т., 12 ч; vi) Et3N, CH2Cl2, К. Т., 2 ч.
Синтез соединения 2
Раствор 1,3-диамино-2-пропанола (3,15 г, 0,035 моль) и Et3N (4,85 мл, 0,035 моль) в метаноле (120 мл) нагревали до 45°С. К раствору медленно добавляли по каплям (Вос)2O (17,05 г, 0,078 моль) в метаноле (80 мл). Реакционный раствор перемешивали при 45°С в течение 30 мин. После дополнительного перемешивания при комнатной температуре в течение 1,5 ч растворитель удаляли при пониженном давлении. Неочищенный продукт экстрагировали диэтиловым эфиром (200 мл×3) и высушивали над сульфатом натрия с получением соединения 2 (9,94 г, 97,8%) в виде белого порошка. ЖХ-МС m/z (электрораспыление (ЭР)+), 291,19 (М+Н)+.
Синтез соединения 3
трет-Бутилбромацетат (5,41 мл, 33,5 ммоль) добавляли к раствору соединения 2 (3,89 г, 13,4 ммоль) в безводном ТГФ (40 мл) при комнатной температуре. Впоследствии к этому раствору добавляли гидрид натрия (60% дисперсия в минеральном масле, 2,42 г, 60,5 ммоль). Смесь фильтровали через 5 часов. Фильтрат выпаривали, и остаток очищали колоночной хроматографией (петролейный эфир : этилацетат составляет от 10:1 до 5:1) с получением продукта 3 (3,96 г, 73,1%) в виде белого твердого вещества. ЖХ-МС m/z (ЭР+), 405,26 (М+Н)+.
Синтез соединения 4
5 мл хлористо-водородной кислоты добавляли к перемешанному раствору соединения 3 (1,0 г, 2,5 ммоль) в 1,4-диоксане (10 мл) при комнатной температуре. Реакция была завершена через 16 часов. Затем растворитель удаляли с получением белого неочищенного продукта (384,2 мг, 69,8%). Продукт 4 мог быть использован в следующей стадии без очистки. ЖХ-МС m/z (ЭР+), 221,05 (М+Н)+.
Синтез соединения 5
Акрилоилхлорид (267 мкл, 3,3 ммоль) добавляли к раствору соединения 4 (242,1 мг, 1,1 ммоль) в смеси насыщенного раствора бикарбоната натрия/ТГФ (об./об. составляет 1:1, 20 мл) при 0°С. Полученную в результате смесь энергично перемешивали при 0°С. Через 10 минут раствор оставляли для подогрева до комнатной температуры и проводили реакцию в течение 3 часов. Смесь подкисляли хлористоводородной кислотой до достижения рН<4. Смесь экстрагировали этилацетатом (50 мл×2). Органические слои объединяли и промывали насыщенным раствором хлорида натрия (40 мл), высушивали над безводным сульфатом магния, фильтровали и удаляли растворитель. Твердый остаток очищали препаративной ВЭЖХ с получением продукта 5 в виде серого порошка (196,0 мг, 69,6%). ЖХ-МС m/z (ЭР+), 257,12 (М+Н)+.
Синтез соединения 7
К перемешанному раствору соединения 5 (25,6 мг, 0,10 ммоль) и DIPEA (16,5 мкл, 0,10 ммоль) в безводном ДМФ (6 мл) при 0°С добавляли HOBt (14,9 мг, 0,11 ммоль) и DIC (13,9 мг, 0,11 ммоль). Через 15 минут к раствору добавляли соединение 6 (20,5 мг, 0,09 ммоль). Реакционную смесь оставляли для подогрева до комнатной температуры и перемешивали в течение ночи. Смесь разбавляли водой (10 мл) и экстрагировали этилацетатом (20 мл×3). Объединенные органические слои высушивали над безводным сульфатом магния, и растворитель удаляли в вакууме. Неочищенный продукт очищали колоночной хроматографией (петролейный эфир : этилацетат составляет 3:1) с получением соединения 7 в виде белого твердого вещества (24,3 мг, 62,6%). ЖХ-МС m/z (ЭР+), 467,22 (М+Н)+.
Синтез соединения 9
Соединение 7 (140,1 мг, 0,3 ммоль) растворяли в 5 мл CH2Cl2 и охлаждали до 0°С в ледяной бане. К полученной в результате смеси добавляли Et3N (1 мг, 0,01 ммоль) и соединение 8 (73,7 мг, 0,1 ммоль) и оставляли для перемешивания на 30 минут. Раствор оставляли для подогрева до комнатной температуры и перемешивали еще в течение 1,5 часов. Растворитель удаляли при пониженном давлении, и твердый остаток очищали препаративной ВЭЖХ с получением соединения 9 в виде белого порошка (90 мг, 74,8%). ЖХ-МС m/z (ЭР+), 291,19 (М+Н)+.
ПРИМЕР I-2 синтез соединения 17
Figure 00000109
i) Et3N, CH2Cl2, К. Т., 5 ч; ii) Et3N, ТГФ, К. Т., 4 ч; iii) CH2Cl2, К. Т., 12 ч; iv) ТФУ, CH2Cl2, К. Т., 3 ч; V) K2CO3, H2O/EtOAc, К. Т., 5 ч; vi) HOBt, DIC, DIPEA, ДМФ, К. Т., 24 ч.
Синтез соединения 11
Соединение 10 (263,3 мг, 1,15 ммоль) растворяли в CH2Cl2 (15 мл), к полученной в результате смеси добавляли Et3N (5,9 мкл, 0,04 ммоль) и соединение 6 (300,1 мг, 0,39 ммоль) при 0°С. Раствор оставляли для подогрева до комнатной температуры и выдерживали в течение 5 часов. Растворитель удаляли в вакууме, и неочищенный продукт очищали препаративной ВЭЖХ с получением соединения 11 (193,2 мг, 49,7%) в виде белого твердого вещества. ЖХ-МС m/z (ЭР+), 994,43 (М+Н)+.
Синтез соединения 13
К смеси соединения 12 (0,45 г, 4,2 моль) и Et3N (8 мл, 0,06 моль) в ТГФ (15 мл) добавляли по каплям раствор
2-(трет-бутоксикарбонилоксиимино)-2-фенилацетонитрила (2,1 г, 8,3 моль) в ТГФ (30 мл) при 0°С. После полного добавления раствор оставляли для подогрева до комнатной температуры и оставляли для перемешивания в течение 4 часов. Реакционную смесь концентрировали до масла при пониженном давлении и добавляли CH2Cl2 (50 мл). Смесь промывали гидроксидом натрия (5%, 30 мл) и раствором хлорида натрия (30 мл). Органический слой высушивали над сульфатом натрия и концентрировали при пониженном давлении. Неочищенный продукт очищали колоночной хроматографией (силикагель, МеОН: CH2Cl2 составляет 1:10, об./об.) с получением соединения 13 в виде желтого масла (803,1 мг, 60,7%). ЖХ-МС m/z (ЭР+), 304,22 (М+Н)+.
Синтез соединения 14
Ангидрид янтарной кислоты (265,2 мг, 2,65 ммоль) добавляли к раствору соединения 13 (800,1 мг, 2,65 ммоль) в CH2Cl2 (10 мл). Смесь перемешивали при комнатной температуре в течение ночи, а затем концентрировали до масла при пониженном давлении. Неочищенный продукт очищали колоночной хроматографией (силикагель, МеОН : CH2Cl2 составляет 1:8, об./об.) с получением соединение 14 (506,5 мг, 47,6%) в виде серого масла. ЖХ-МС m/z (ЭР+), 404,24 (М+Н)+.
Синтез соединения 15
Соединение 14 (503,5 мг, 1,25 ммоль) растворяли в CH2Cl2 (10 мл) вместе с трифторуксусной кислотой (2 мл). Раствор оставляли для взаимодействия на 3 часа при комнатной температуре. Растворитель удаляли при пониженном давлении с получением соединения 15 в виде серого масла (190,2 мг, 75,1%) без дополнительной очистки. ЖХ-МС m/z (ЭР+), 204,13 (М+Н)+.
Синтез соединения 16
К смеси карбоната калия (68,3 мг, 0,5 ммоль) в воде (5 мл) и соединения 15 (67,2 мг, 0,33 ммоль) в этилацетате (10 мл) добавляли по каплям раствор акрилоилхлорида (53,6 мкл, 0,67 ммоль) в этилацетате (10 мл) при 0°С. Полученную в результате смесь перемешивали при 0°С в ледяной бане в течение 10 минут, а затем оставляли для взаимодействия при комнатной температуре на 5 часов. Смесь подкисляли хлористоводородной кислотой до достижения рН<5. Смесь экстрагировали этилацетатом (20 мл×2). Органические слои объединяли и промывали насыщенным раствором хлорида натрия (20 мл), высушивали над безводным сульфатом магния, фильтровали и удаляли растворитель. Твердый остаток очищали колоночной хроматографией (МеОН : CH2Cl2 составляет 10:1) с получением продукта 16 в виде желтого масла (63,1 мг, 61,7%). ЖХ-МС m/z (ЭР+) 312,15 (М+Н)+.
Синтез соединения 17
Соединение 16 (22,2 мг, 0,07 ммоль), HOBt (9,7 мг, 0,07 ммоль) и DIC (11 мкл, 0,07 ммоль) растворяли в 8 мл ДМФ и охлаждали до 0°С в ледяной бане. Впоследствии к смеси добавляли соединение 11 (59,1 мг, 0,06 ммоль) и DIPEA (12,4 мкл, 0,07 ммоль). Раствор оставляли для подогрева до комнатной температуры и оставляли для взаимодействия на 24 часов. Полученную в результате смеси концентрировали и очищали препаративной ВЭЖХ с получением соединения 17 (11,3 мг, 39,5%) в виде белого твердого вещества. ЖХ-МС m/z (ЭР+), 1287,56 (М+Н)+.
ПРИМЕР I-3 синтез соединения 25
Figure 00000110
i) HOBt, DIPEA, пиридин, ДМФ, К. Т., 32 ч; ii) DEA, ДМФ, К. Т., 2 ч; iii) Et3N, CH2Cl2, К. Т., 4 ч; iv) Et3N, CH2Cl2, К. Т., 12 ч; v) EDCl, HOBt, DIPEA, CH2Cl2, К. Т., 24 ч. Синтез соединения 20
К перемешанному раствору 18 (191,6 мг, 0,25 ммоль) в безводном ДМФ (15 мл) при 0°С в атмосфере азота добавляли HOBt (33,8 мг, 0,25 ммоль) и соединение 19 (197,3 мг, 0,26 ммоль). Через 15 минут добавляли пиридин (3 мл) и DIPEA (52,4 мкл, 0,30 ммоль), и реакцию проводили в течение 30 минут при 0°С. Затем реакционную смесь оставляли для подогрева до комнатной температуры и перемешивали в течение 3 часов. Смесь дополняли DIPEA (52,4 мкл, 0,30 ммоль) и проводили реакцию в течение 32 часов. После завершения реакции растворитель удаляли при пониженном давлении. Остаток очищали колоночной хроматографией (МеОН : CH2Cl2 составляет 20:1) с получением соединения 20 (126,4 мг, 37,5%) в виде белого твердого вещества. ЖХ-МС m/z (ЭР+), 1344,77 (М+Н)+.
Синтез соединения 21
Диэтиламин (4 мл, 38,8 ммоль) добавляли к раствору соединения 20 (126,4 мг, 0,1 ммоль) в ДМФ (8 мл) при комнатной температуре. После перемешивания в течение 2 часов растворитель удаляли при пониженном давлении с получением неочищенного продукта 21(104,1 мг, 99%). Продукт мог быть использован в следующей стадии без очистки. ЖХ-МС m/z (ЭР+), 1123,72 (М+Н)+.
Синтез соединения 23
Раствор акрилоилхлорида (7,31 мл, 90,00 ммоль) в безводном CH2Cl2 (50 мл) добавляли по каплям к смеси соединения 22 (2,64 г, 20,00 ммоль) и Et3N (16,60 мл; 120,00 ммоль) в безводном CH2Cl2 (60 мл) при 0°С в атмосфере аргона. Раствор оставляли для подогрева до комнатной температуры и проводили реакцию в течение 4 часов. Затем смесь обрабатывали насыщенным раствором бикарбоната натрия (150 мл) и раствором хлорида натрия (150 мл) и экстрагировали CH2Cl2 (150 мл×3). Объединенные органические слои высушивали над безводным сульфатом магния, и растворитель удаляли в вакууме. Неочищенный продукт очищали колоночной хроматографией (петролейный эфир : этилацетат составляет 10:1) с получением соединения 23 в виде белого твердого вещества (4,88 г, 83,0%). ЖХ-МС m/z (ЭР+), 295,10 (М+Н)+.
Синтез соединения 24
К раствору соединения 23 (444,1 мг, 1,5 ммоль) и Et3N (0,23 мл, 1,66 ммоль) в CH2Cl2 (30 мл) добавляли по каплям меркаптоуксусную кислоту (0,23 мл, 3,32 ммоль) в CH2Cl2 (5 мл) в ледяной бане. После полного добавления раствор оставляли для подогрева до комнатной температуры и оставляли для перемешивания в течение ночи. Растворитель удаляли в вакууме, и остаток очищали колоночной хроматографией (МеОН : CH2Cl2 составляет 60:1-30:1) с получением соединения 24 в виде желтого масла (1,72 г, 36,87%). ЖХ-МС m/z (ES), 385,10 (M-H)-.
Синтез соединения 25
Соединение 24 (22,2 мг, 0,057 ммоль), HOBt (9,3 мг, 0,069 ммоль) и EDCl (16,5 мг, 0,086 ммоль) растворяли в 5,0 мл CH2Cl2. Впоследствии к смеси добавляли соединение 21 (64,5 мг, 0,063 ммоль) и DIPEA (20,3 мкл, 0,104 ммоль). Раствор оставляли для подогрева до комнатной температуры и оставляли для взаимодействия на 24 часа. Полученный в результате раствор разделяли препаративной ВЭЖХ с получением соединение 25 в виде белого твердого вещества (25,3 мг, 29,7%). ЖХ-МС m/z (ES+), 1479,80 (М+Н)+.
ПРИМЕР I-4 синтез соединения 31
Figure 00000111
i) HOBt, DIPEA, пиридин, ДМФ, К. Т., 24 ч; ii) DEA, ДМФ, К. Т., 2,5 ч; iii) Et3N, CH2Cl2, К. Т., 12 ч; iv) DIC, HOBt, DIPEA, ДМФ, К. Т., 24 ч.
Синтез соединения 27
К раствору соединения 18 (194,2 мг, 0,25 ммоль) в безводном ДМФ (15 мл) при 0°С в атмосфере азота добавляли HOBt (34,2 мг, 0,25 ммоль) и соединение 26 (200,3 мг, 0,28 ммоль). После перемешивания в течение 15 минут добавляли пиридин (3 мл) и DIPEA (53,1 мкл, 0,32 ммоль), и оставляли для взаимодействия на 30 минут при 0°С. Затем реакционную смесь оставляли для подогрева до комнатной температуры на 3 часа. Смесь дополняли DIPEA (53,1 мкл, 0,32 ммоль) и проводили реакцию еще в течение 24 часов. После завершения реакции смесь концентрировали в вакууме. Неочищенный продукт очищали колоночной хроматографией с получением соединения 27 (126,2 мг, 37,0%) в виде белого твердого вещества. ЖХ-МС m/z (ЭР+), 1398,75 (М+Н)+.
Синтез соединения 28
Диэтиламин (4 мл) добавляли к раствору соединения 27 (126,2 мг, 0,09 ммоль) в ДМФ (8 мл) при комнатной температуре. После перемешивания в течение 2,5 часов растворитель удаляли при пониженном давлении с получением неочищенного продукта 28 (73,3 мг, 68,9%), который можно использовать без дополнительной очистки. ЖХ-МС m/z (ЭР+), 1176,68 (М+Н)+.
Синтез соединения 30
К раствору соединения 29 (1,87 г, 7,5 ммоль) и Et3N (104 мкл, 0,75 ммоль) в CH2Cl2 (40 мл) добавляли по каплям меркаптоуксусную кислоту (103,9 мкл, 1,5 ммоль) в CH2Cl2 (10 мл) при 0°С. После полного добавления раствор оставляли для подогрева до комнатной температуры и оставляли для перемешивания в течение ночи. Растворитель удаляли в вакууме, и остаток очищали колоночной хроматографией с получением соединения 30 в виде белого твердого вещества (1,72 г, 36,87%). ЖХ-МС m/z (ЭР-), 342,11(М-Н)\
Синтез соединения 31
Соединение 30 (22,2 мг, 0,065 ммоль), HOBt (8,8 мг, 0,065 ммоль) и DIC (11 мкл, 0,065 ммоль) добавляли к ДМФ (8 мл) и охлаждали до 0°С в ледяной бане. К раствору добавляли соединение 28 (63,7 мг, 0,054 ммоль) и DIPEA (12,4 мкл, 0,054 ммоль). Смесь оставляли для подогрева до комнатной температуры и оставляли для взаимодействия на 24 часов. Остаток очищали колоночной хроматографией (МеОН : CH2Cl2 составляет от 60:1 до 30:1) с получением соединения 31 в виде белого твердого вещества (11,3 мг, 39,5%). ЖХ-МС m/z (ЭР+), 1499,78 (М+Н)+.
ПРИМЕР I-5 синтез соединения 36
Figure 00000112
i) K2CO3, EtOAc/H2O, К. Т., 2 ч; ii) EDCl, ДМФ, К. Т., 12 ч; iii) DIPEA, ДМФ, К. Т., 12 ч; iv) EDCl, HOBt, DIPEA, ДМФ, К. Т., 24 ч.
Синтез соединения 33
2,4-Диаминобензойную кислоту 32 (501,8 мг, 3,3 ммоль) диспергировали в этилацетате (20 мл) и добавляли раствор карбоната калия (9,0 г, 66 ммоль) в воде (20 мл). К смеси осторожно добавляли акрилоилхлорид (1 мл, 13 ммоль), в результате чего образовался светло-коричневый осадок. Затем реакционную смесь оставляли до достижения комнатной температуры, в результате чего осадок растворялся. Через 2 часа реакция была завершена. Органический слой отбрасывали, и водный слой подкисляли 5% хлористоводородной кислотой с образованием остатка при рН<4. Остаток фильтровали, промывали петролейным эфиром и разбавляли этилацетатом. Затем органический слой высушивали над безводным сульфатом магния, фильтровали и удаляли в вакууме. Твердый остаток суспендировали в воде, фильтровали и тщательно промывали диэтиловым эфиром с получением продукта 33 (670,2 мг, 78%) в виде серого порошка. ЖХ-МС m/z (ЭР+), 261,09 (М+Н)+.
Синтез соединения 34
Соединение 33 (260,1 мг, 1,0 ммоль) и EDCl (210,9 мг, 1,1 ммоль), N-гидроксисукцинимид (126,6 мг, 1,1 ммоль) растворяли в ДМФ (14 мл). Раствор перемешивали в течение ночи при комнатной температуре. После завершения реакции растворитель удаляли при пониженном давлении. Твердый остаток очищали колоночной хроматографией с CH2Cl2/MeOH (10:1) в качестве элюента с получением продукта 34 в виде светло-коричневого твердого вещества (273 мг, 76,4%). ЖХ-МС m/z (ЭР+), 358,11 (М+Н)+.
Синтез соединения 35
К раствору 4-аминомасляной кислоты (82,4 мг, 0,8 ммоль) и DIPEA (489 мкл, 2,8 ммоль) в ДМФ (10 мл) и добавляли раствор соединения 34 (260,7 мг, 0,73 ммоль) в ДМФ (10 мл) при 0°С в ледяной бане. Смесь перемешивали в течение 10 минут при 0°С, а затем перемешивали при комнатной температуре в течение ночи. Растворитель удаляли в вакууме после того, как реакция была завершена. Твердый остаток очищали колоночной хроматографией (CH2Cl2: МеОН составляет 10:1, об./об.) с получением соединения 35 (192,3 мг, 76,2%). ЖХ-МС m/z (ЭР+), 346,14 (М+Н)+.
Синтез соединения 36
HOBt (14,9 мг, 0,11 ммоль), EDCl (21,1 мг, 0,11 ммоль) и DIPEA (19,2 мкл, 0,11 ммоль) добавляли к перемешанному раствору 35 (34,5 мг, 0,1 ммоль) в безводном ДМФ (10 мл) при 0°С. Через 15 минут добавляли соединение 21 (112,3 мг, 0,1 ммоль). Реакционную смесь оставляли для подогрева до комнатной температуры и перемешивали в течение 24 часов. К смеси добавляли воду (15 мл) и экстрагировали этилацетатом (20 мл×3). Объединенные органические слои высушивали над безводным сульфатом магния, фильтровали и удаляли в вакууме. Неочищенный продукт очищали колоночной хроматографией (CH2Cl2 : МеОН составляет 10:1, об./об.) с получением соединения 36 в виде белого твердого вещества (56,5 мг, 39%). ЖХ-МС m/z (ЭР+), 1450,84 (М+Н)+.
ПРИМЕР I-6 синтез соединения 43
Figure 00000113
i) DMAP, CH2Cl2, К. Т., 1 ч; ii) NaOH, EtOH/H2O, 80°C, 2 ч; iii) EDCl, HOBt, DIPEA, ДМФ, К. Т., 18 ч; (iv) EEDQ, CH2Cl2, МеОН, К. Т., 18 ч.
Синтез соединения 38
В круглодонную колбу емкостью 100 мл помещали раствор соединения 37 (1,05 г, 6,9 ммоль) и DMAP (1,94 г, 15,9 ммоль) в CH2Cl2 (20 мл) добавляли по каплям акрилоилхлорид (1,38 г, 15,2 ммоль) при перемешивании при 0°С. Реакционную смесь перемешивали в течение 1 часа при комнатной температуре. Реакционную смесь гасили добавлением воды (50 мл) и экстрагировали CH2Cl2 (20 мл×3). Органическую фазу объединяли, промывали насыщенным раствором бикарбоната натрия (30 мл) и раствором хлорида натрия (30 мл), высушивали над безводным сульфатом натрия и фильтровали. Фильтрат концентрировали при пониженном давлении с получением соединения 38 (1,51 г, 85,8%) в виде светло-желтого полутвердого вещества. ЖХ-МС m/z (ЭР+), 253,04 (М+Н)+.
Синтез соединения 39
Соединение 38 (1,56 г, 5,94 ммоль) и 4-аминобутановую кислоту (673,0 мг, 6,53 ммоль) растворяли в EtOH (15 мл) вместе с гидроксидом натрия (713,3 мг, 17,82 ммоль) в воде (15 мл). Реакционную смесь перемешивали в течение 2 часов при 80°С. После охлаждения до комнатной температуры растворитель концентрировали при пониженном давлении. Смесь подкисляли до рН менее 7 хлористоводородной кислотой (0,5 н.). Твердое вещество собирали фильтрованием, промывали водой (10 мл×2) и высушивали с получением соединения 39 (490,2 мг, 25,8%) в виде беловатого твердого вещества. ЖХ-МС m/z (ЭР+), 320,03 (М+Н)+.
Синтез соединения 41
Соединение 39 (230,1 мг, 0,72 ммоль), HOBt (116,7 мг, 0,86 ммоль), EDCl (151,8 мг, 0,79 ммоль) и DIPEA (279,2 мг, 2,2 ммоль) добавляли к ДМФ (20 мл) и перемешивали при 0°С в ледяной бане. Через 1 час к раствору добавляли соединение 40 (149,1 мг, 0,79 ммоль). Смесь оставляли для подогрева до комнатной температуры и оставляли для взаимодействия на 18 часов. Реакционную смесь разбавляли раствором хлорида натрия (50 мл), экстрагировали этилацетатом (20 мл×3). Органические слои объединяли и высушивали безводным сульфатом натрия, фильтровали и концентрировали. Остаток очищали колоночной хроматографией (МеОН : CH2Cl2 составляет 200/1 ~10/1, об./об.) с получением соединения 41 в виде желтого твердого вещества (97,3 мг, 27,6%). ЖХ-МС m/z (ЭР+), 490,23 (М+Н)+.
Синтез соединения 43
Раствор соединения 41 (90,1 мг, 0,18 ммоль), EEDQ (54,6 мг, 0,22 ммоль) в смеси безводного CH2Cl2 (7 мл) и безводного МеОН (0,07 мл) перемешивали в течение 1 часа при комнатной температуре. Впоследствии добавляли соединение 42 (133,5 мг, 0,184 ммоль). Реакционную смесь перемешивали дополнительно в течение 18 часов. Реакционную смесь концентрировали в вакууме и очищали препаративной ВЭЖХ с получением соединения 43 (12,3 мг, 5,6%) в виде белого твердого вещества. ЖХ-МС m/z (ЭР+), 1197,51 (М+Н)+.
ПРИМЕР I-7 синтез соединения 49
Figure 00000114
i) HCl (г), МеОН, 0°C, 2 ч; ii) пиридин, 100°C, 2 ч; iii) NaOH, ТГФ/H2O, К. Т., 4 ч; iv) EDCl, HOBt, DIPEA, ДМФ, К. Т., 18 ч; v) EEDQ, CH2Cl2/MeOH, К. Т., 18 ч.
Синтез соединения 45
В раствор соединения 44 (1,13 г, 6,53 ммоль) в метаноле (30 мл) вводили хлористоводородную кислоту (газ) при перемешивании при 0°С. Реакционную смесь перемешивали в течение 2 часов при 0°С. Смесь концентрировали, и остаток растворяли в воде (50 мл). Смесь доводили до рН 8 насыщенным раствором бикарбоната натрия, экстрагировали этилацетатом (20 мл×3). Органический слой объединяли и высушивали безводным сульфатом натрия, фильтровали. Фильтрат концентрировали с получением соединения 45 (710,1 мг, 65,1%) в виде желтого твердого вещества. ЖХ-МС m/z (ЭР+), 168,07 (М+Н)+.
Синтез соединения 46
Акрилоилхлорид (947,1 мг, 10,47 ммоль) добавляли по каплям к раствору соединения 45 (700,5 мг, 4,19 ммоль) в пиридине (20 мл) при перемешивании при 0°С в ледяной бане. Реакционную смесь перемешивали в течение 2 часов при 100°С. После охлаждения до комнатной температуры реакционную смесь концентрировали при пониженном давлении. Остаток очищали колоночной хроматографией (МеОН : CH2Cl2 составляет 200/1 ~10/1, об./об.) с получением соединения 46 (520,4 мг, 45,2%) в виде желтого твердого вещества. ЖХ-МС m/z (ЭР+), 276,09 (М+Н)+.
Синтез соединения 47
Смесь соединения 46 (510,2 мг, 1,85 ммоль), гидроксида натрия (370,6 мг, 9,26 ммоль), ТГФ (10 мл) и воды (10 мл) перемешивали в течение 4 часов при комнатной температуре. После завершения реакции смесь концентрировали и доводили рН до 7 хлористоводородной кислотой (1 н). Соединение 47 (360,2 мг, 74,1%) собирали фильтрованием в виде беловатого твердого вещества. ЖХ-МС m/z (ЭР+), 262,07 (М+Н)+.
Синтез соединения 48
Соединение 47 (120,5 мг, 0,5 ммоль), HOBt (4,7 мг, 0,6 ммоль), EDCl (96,8 мг, 0,5 ммоль) и DIPEA (178,1 мг, 1,4 ммоль) добавляли к ДМФ (10 мл) и перемешивали при 0°С в ледяной бане. Через 1 час к раствору добавляли соединение 40 (95,1 мг, 0,5 ммоль). Смесь оставляли для подогрева до комнатной температуры и оставляли для взаимодействия на 18 часов. Реакционную смесь разбавляли раствором хлорида натрия (20 мл), экстрагировали этилацетатом (10 мл×3). Органические слои объединяли и высушивали безводным сульфатом натрия, фильтровали и концентрировали. Остаток очищали колоночной хроматографией (МеОН : CH2Cl2 составляет 100/1~20/1, об./об.) с получением соединения 41 в виде беловатого твердого вещества (71 мг, 35,8%). ЖХ-МС m/z (ЭР+), 432,07 (М+Н)+.
Синтез соединения 49
Соединение 48 (60,2 мг, 0,14 ммоль), EEDQ (41,3 мг, 0,17 ммоль) растворяли в смеси безводного CH2Cl2 (6 мл) и безводного МеОН (0,06 мл) и оставляли для перемешивания в течение 1 часа при комнатной температуре. К раствору добавляли соединение 42 (100,9 мг, 0,14 ммоль). Реакционную смесь перемешивали дополнительно в течение 18 часов. Реакционную смесь концентрировали при пониженном давлении и очищали препаративной ВЭЖХ с получением соединения 49 (12,4 мг, 7,61%) в виде белого твердого вещества. ЖХ-МС m/z (ЭР+), 1139,45 (М+Н)+.
ПРИМЕР I-8 синтез соединения 55
Figure 00000115
i) Et3N, МеОН, К. Т., 3 ч; ii) Na2CO3, ТГФ/H2O, К. Т., 3 ч; iii) HOBt, DIC, DIPEA, ДМФ, К. Т., 12 ч; iv) ТФУ, CH2Cl2, К. Т., 3 ч; v) Et3N, CH2Cl2, К. Т., 2 ч; vi)
Синтез соединения 50
Et3N (332,7 мкл, 2,4 ммоль) добавляли к раствору соединения 4 (440,0 мг, 2 ммоль) в МеОН (10 мл) при 45°С. Затем добавляли раствор (Вос)2O (436,2 мг, 2 ммоль) в МеОН (10 мл). Полученную в результате смесь энергично перемешивали при 45°С в течение 30 минут с последующим перемешиванием при комнатной температуре в течение 2 часов. Затем растворитель удаляли, остаток промывали хлористоводородной кислотой (5%, 10 мл), насыщенным раствором хлорида натрия (15 мл) и экстрагировали этилацетатом (10 мл×3). Органический слой высушивали над безводным сульфатом магния, фильтровали и удаляли в вакууме. Твердый остаток перекристаллизовывали смесью петролейный эфир/этилацетат (10 мл, об.:об. составляет 2:1,) с получением соединения 50 (375,4 мг, 75,6%) в виде белого порошка. ЖХ-МС m/z (ЭР+), 249,15 (М+Н)+.
Синтез соединения 51
Акрилоилхлорид (121 мкл, 1,5 ммоль) добавляли к раствору соединения 50 (248,0 мг, 1,0 ммоль) в смеси насыщенного раствора бикарбоната натрия/ТГФ (об./об. составляет 1:1, 20 мл) при 0°С. Полученную в результате смесь энергично перемешивали при 0°С в течение 10 мин. Раствор оставляли для подогрева до комнатной температуры и проводили реакцию в течение 3 часов. Смесь подкисляли хлористоводородной кислотой до достижения рН менее 4. Смесь экстрагировали этилацетатом (20 мл×3). Органические слои объединяли и промывали насыщенным раствором хлорида натрия (30 мл), высушивали над безводным сульфатом магния, фильтровали и удаляли растворитель. Твердый остаток очищали препаративной ВЭЖХ с получением продукта 51 (176,1 мг, 58,3%) в виде серого масла. ЖХ-МС m/z (ЭР+), 303,16 (М+Н)+.
Синтез соединения 52
Соединение 51 (30,2 мг, 0,1 ммоль), HOBt (14,7 мг, 0,11 ммоль) и DIC (13,9 мг, 0,11 ммоль) растворяли в безводном ДМФ (6 мл) и охлаждали до 0°С в ледяной бане. Через 15 мин к смеси добавляли соединение 6 (20,5 мг, 0,09 ммоль) и DIPEA (19,2 мкл, 0,11 ммоль). Раствор оставляли для подогрева до комнатной температуры и перемешивали в течение ночи. Смесь разбавляли водой (10 мл) и экстрагировали этилацетатом (20 мл×3). Объединенные органические слои высушивали над безводным сульфатом магния, и растворитель удаляли в вакууме. Неочищенный продукт очищали колоночной хроматографией (CH2Cl2 : МеОН составляет 20:1, об./об.) с получением соединения 52 в виде белого твердого вещества (28,2 мг, 60,7%). ЖХ-МС m/z (ЭР+), 513,26 (М+Н)+.
Синтез соединения 53
Раствор соединения 52 (28,2 мг, 0,06 ммоль) в трифторуксусной кислоте (1,0 мл) в CH2Cl2 (5 мл) перемешивали в течение 3 часов при комнатной температуре. Растворитель удаляли при пониженном давлении с получением соединения 53 (20,4 мг, 88,2%) в виде серого твердого вещества, которое можно было использовать в следующей стадии без дополнительной очистки. ЖХ-МС m/z (ЭР+), 413,21 (М+Н)+.
Синтез соединения 54
Соединение 53 (41,2 мг, 0,1 ммоль) растворяли в 10 мл ДМФ и охлаждали до 0°С в ледяной бане. Et3N (6,9 мкл, 0,05 ммоль) и соединение 8 (73,7 мг, 0,1 ммоль) добавляли по каплям к раствору и оставляли для перемешивания в течение 30 минут. Раствор оставляли для подогрева до комнатной температуры и перемешивали еще в течение 5 часов. Смесь концентрировали при пониженном давлении, и остаток очищали препаративной ВЭЖХ с получением соединения 54 (73 мг, 63,6%) в виде белого порошка. ЖХ-МС m/z (ЭР+), 1148,47 (М+Н)+.
Синтез соединения 55
Бромацетилбромид (150,0 мг, 0,75 ммоль) добавляли к раствору соединения 54 (573,7 мг, 0,5 ммоль) в ДМФ (10 мл) при 0°С. Полученную в результате смесь перемешивали при 0°С в течение 10 минут, а затем оставляли для перемешивания при комнатной температуре еще на 3 часа. К смеси добавляли воду (20 мл) и экстрагировали этилацетатом (20 мл×3). Объединенные органические слои концентрировали, и остаток очищали препаративной ВЭЖХ с получением соединения 55 (421 мг, 66,4%) в виде желтого порошка. ЖХ-МС m/z (ЭР+), 1270,38 (М+Н)+.
ПРИМЕР I-9 синтез соединения 59
Figure 00000116
i) K2CO3, H2O/EtOAc, К. Т., 5 ч; ii) CHCl3, кипячение с обратным холодильником, 12 ч; iii) Ac2O, NaAc, 100°С, 2 ч; iv) HOBt, DIC, DIPEA, ДМФ, К. Т., 24 ч.
Синтез соединения 56
К смеси карбоната калия (51,2 мг, 0,37 ммоль) в воде (5 мл) и соединения 15 (50,0 мг, 0,25 ммоль) в этилацетате (10 мл) медленно добавляли по каплям раствор акрилоилхлорида (16 мкл, 0,2 ммоль) в этилацетате (8 мл) при 0°С. После завершения добавления полученную в результате смесь перемешивали при 0°С в ледяной бане дополнительно в течение 10 минут. Затем смесь оставляли для подогрева до комнатной температуры и проводили реакцию в течение 5 часов. Смесь подкисляли хлористоводородной кислотой до достижения рН менее 5. Смесь экстрагировали этилацетатом (15 мл×3). Объединенные органические слои промывали насыщенным раствором хлорида натрия (15 мл), высушивали над безводным сульфатом магния, фильтровали и удаляли растворитель. Твердый остаток очищали колоночной хроматографией (МеОН : CH2Cl2 составляет 8:1) с получением продукта 56 (26,2 мг, 40,1%) в виде серого масла. ЖХ-МС m/z (ЭР+), 258,14 (М+Н)+.
Синтез соединения 57
Соединение 56 (26,0 мг, 0,10 ммоль) перемешивали в CHCl3(10 мл), к смеси добавляли малеиновый ангидрид (28,1 мг, 0,11 ммоль). Реакционную смесь нагревали с обратным холодильником в течение 12 часов. После охлаждения до комнатной температуры, выпавший в осадок твердый продукт фильтровали и промывали CHCl3 (30 мл×3) с получением соединения 57 (20,1 мг, 59,1%) в виде белого твердого вещества. ЖХ-МС m/z (ЭР+), 356,14 (М+Н)+.
Синтез соединения 58
Раствор соединения 57 (20,1 мг, 0,054 ммоль) и ацетата натрия (6,3 мг, 0,047 ммоль) в уксусном ангидриде (10 мл) нагревали до 100°С в течение 2 часов. Как только реакция была завершена, реакционный раствор медленно наливали в колотый лед при перемешивании и добавляли ледяную воду. Твердое вещество выпадало в осадок после 1 часа перемешивания. Твердый остаток фильтровали и промывали ледяной водой (15 мл×3) с получением соединения 58 (9,1 мг, 46,1%) в виде белого твердого вещества. ЖХ-МС m/z (ЭР+), 338,13 (М+Н)+.
Синтез соединения 59
Соединение 58 (8,1 мг, 0,02 ммоль), HOBt (3,25 мг, 0,02 ммоль) и DIC (3,7 мкл, 0,02 ммоль) растворяли в 5 мл ДМФ и охлаждали до 0°С в ледяной бане. Впоследствии к смеси добавляли соединение 11 (20,1 мг, 0,02 ммоль) и DIPEA (4,1 мкл, 0,02 ммоль). Раствор оставляли для подогрева до комнатной температуры и оставляли для взаимодействия на 24 часов. Полученную в результате смесь концентрировали и очищали препаративной ВЭЖХ с получением соединения 59 (9,3 мг, 34,9%) в виде белого твердого вещества. ЖХ-МС m/z (ЭР+), 1313,53 (М+Н)+.
ПРИМЕР I-10 синтез соединения 64
Figure 00000117
i) ДМФ, 80°C, 6 ч; ii) K2CO3, EtOAc/H2O, К. Т., 5 ч; iii) Ac2O, NaAc, 90°С, 3 ч; iv) HOBt, DIC, DIPEA, ДМФ, К. Т., 24 ч.
Синтез соединения 60
К раствору соединения 32 (140,0 мг, 0,9 ммоль) в ДМФ (6 мл) добавляли по каплям малеиновый ангидрид (89,8 мг, 0,9 ммоль). Смесь перемешивали при 60°С в течение 6 часов, а затем концентрировали до масла при пониженном давлении. Соединение 60 (белое твердое вещество, 209,1 мг, 90,7%) было получено путем перекристаллизации из этилацетата (5 мл). ЖХ-МС m/z (ЭР+), (М+Н)+ 251,06.
Синтез соединения 61
К смеси карбоната калия (201,3 мг, 1,4 ммоль) в воде (15 мл) и соединения 60 (209,1 мг, 0,9 ммоль) в этилацетате (20 мл) добавляли по каплям раствор акрилоилхлорида (90 мкл, 1,1 ммоль) в этилацетате (10 мл) при 0°С. После полного добавления смесь оставляли для подогрева до комнатной температуры и проводили реакцию в течение 5 часов. Смесь подкисляли хлористоводородной кислотой до достижения рН менее 5. Смесь экстрагировали этилацетатом (20 мл×2). Органические слои объединяли и промывали насыщенным раствором хлорида натрия (20 мл), высушивали над безводным сульфатом магния и фильтровали. Растворитель удаляли в вакууме с получением соединения 61 (201,0 мг, 82,7%) в виде серого твердого вещества, которое можно было использовать в следующей стадии без дополнительной очистки. ЖХ-МС m/z (ЭР+), (М+Н)+ 304,07.
Синтез соединения 62
К раствору неочищенного соединения 61 (201,0 мг, 0,7 ммоль) в уксусном ангидриде (30 мл) добавляли ацетат натрия (60,5 мг, 0,7 ммоль). Смесь перемешивали при 90°С в течение 3 часов. Реакционную смесь наливали в ледяную воду и перемешивали в течение 30 мин и экстрагировали этилацетатом (20 мл×3). Объединенные органические слои концентрировали и очищали препаративной ВЭЖХ с получением соединения 62 (92,2 мг, 48,6%) в виде белого твердого вещества. ЖХ-МС m/z (ЭР+), (М+Н)+287,06.
Синтез соединения 64
Соединение 62 (57,0 мг, 0,2 ммоль), HOBt (27,2 мг, 0,2 ммоль), DIC (29,3 мкл, 0,2 ммоль) и DIPEA (0,2 ммоль, 33,1 мкл) добавляли к ДМФ (6 мл). Через 30 мин добавляли соединение 63 (109,8 мг, 0,15 ммоль) и добавляли при 0°С. Затем смесь оставляли для подогрева при комнатной температуры на 24 часа. Раствор концентрировали и очищали препаративной ВЭЖХ с получением соединения 64 (94,8 мг, 47,6%) в виде белого твердого вещества. ЖХ-МС m/z (ЭР+), 1000,53 (М+Н)+.
ПРИМЕР I-11 синтез соединения 69
Figure 00000118
i) ДМФ, кипячение с обратным холодильником, 12 ч; iii) Ac2O, NaAc, кипячение с обратным холодильником, 6 ч; iii) ДМФ, 80°С, 12 ч; iv) HOBt, DIC, DIPEA, NMP, К. Т., 36 ч.
Синтез соединения 66
К раствору соединения 65 (145,0 мг, 1,0 ммоль) в ДМФ (6 мл) медленно добавляли по каплям малеиновый ангидрид (89,8 мг, 0,9 ммоль). Смесь нагревали с обратным холодильником в течение 12 часов. После охлаждения до комнатной температуры выпавший в осадок твердый продукт фильтровали и промывали CH2Cl2 (20 мл×3) с получением соединения 66 (110,2 мг, 45,1%) в виде белого твердого вещества. ЖХ-МС m/z (ЭР+), 244,02 (М+Н)+.
Синтез соединения 67
Смесь соединения 66 (110,2 мг, 0,5 ммоль) и ацетата натрия (14,2 мг, 0,2 ммоль) в уксусном ангидриде (10 мл) нагревали с обратным холодильником в течение 6 часов. Как только реакция была завершена, реакционную смесь медленно наливали в колотый лед при перемешивании и добавляли ледяную воду. Твердый остаток выпадал в осадок после 1 часа перемешивания. Твердый остаток фильтровали и промывали ледяной водой (10 мл×3) с получением соединения 67 (87,3 мг, 85,7%) в виде белого твердого вещества. ЖХ-МС m/z (ЭР+), 226,01 (М+Н)+.
Синтез соединения 68
Ангидрид янтарной кислоты (38,8 мг, 0,4 ммоль) добавляли к смеси соединения 67 (87,3 мг, 0,4 ммоль) в ДМФ (6 мл). Смесь перемешивали при 80°С в течение ночи, а затем концентрировали до масла при пониженном давлении. Неочищенный продукт очищали препаративной ВЭЖХ с получением соединения 68 (45,0 мг, 35,7%) в виде белого твердого вещества. ЖХ-МС m/z (ЭР+), 326,02 (М+Н)+.
Синтез соединения 69
Соединение 68 (45,0 мг, 0,14 ммоль), HOBt (19,0 мг, 0,14 ммоль), DIC (20,5 мкл, 0,14 ммоль) и DIPEA (23,2 мкл, 0,14 ммоль) добавляли к ДМФ (10 мл) и перемешивали при 0°С в ледяной бане в течение 1 часа. К раствору добавляли соединение 63 (76,9 мг, 0,11 ммоль). Смесь оставляли для подогрева до комнатной температуры и оставляли для взаимодействия на 36 часов. Реакционную смесь очищали препаративной ВЭЖХ с получением соединения 69 (64,3 мг, 44,3%) в виде белого твердого вещества. ЖХ-МС m/z (ЭР+), 1039,49 (М+Н)+.
ПРИМЕР I-12 синтез соединения 74
Figure 00000119
i) Et3N, н-бутанол, 90°С, 18 ч, ii) Et3N, CH2Cl2, К. Т., 18 ч, iii) EDCl, HOBt, DIPEA, ДМФ, К. Т., 18 ч, iv) EEDQ, CH2Cl2, МеОН, К. Т., 18 ч.
Синтез соединения 71
Соединение 69 (1,0 г, 6,10 ммоль) и 4-аминобутановую кислоту (691,9 мг, 6,71 ммоль) и триэтиламин (3,09 г, 30,5 ммоль) растворяли в н-бутаноле (30 мл). Реакционную смесь перемешивали в течение 18 часов при 90°С. После охлаждения до комнатной температуры растворитель концентрировали при пониженном давлении. Остаток разбавляли водой (100 мл) и экстрагировали этилацетатом (30 мл×3). Органическую фазу объединяли и высушивали над безводным сульфатом натрия, фильтровали и концентрировали. Остаток очищали колоночной хроматографией (МеОН : CH2Cl2 составляет 200/1 ~10/1, об./об.) с получением соединения 71 в виде желтого твердого вещества (482,3 мг, 34,3%). ЖХ-МС m/z (ЭР+), 231,06 (М+Н)+.
Синтез соединения 72
Акрилоилхлорид (947,2 мг, 10,47 ммоль) добавляли по каплям к раствору соединения 71 (450,5 мг, 1,95 ммоль) и ТЭА (590,8 мг, 5,85 ммоль) в CH2Cl2 (20 мл) при перемешивании при 0°С в ледяной бане. Реакционную смесь перемешивали в течение 18 часов при комнатной температуре. Реакционную смесь гасили добавлением воды (50 мл) и экстрагировали CH2Cl2 (20 мл×3). Органический слой объединяли, промывали раствором хлорида натрия (30 мл), высушивали над безводным сульфатом натрия, фильтровали и концентрировали с получением соединения 72 (255,4 мг, 46%) в виде желтого твердого вещества. ЖХ-МС m/z (ЭР+), 285,07 (М+Н)+.
Синтез соединения 73
Соединение 3 (155,7 мг, 0,547 ммоль), HOBt (88,7 мг, 0,656 ммоль), EDCl (115,4 мг, 0,602 ммоль) и DIPEA (212,1 мг, 1,64 ммоль) добавляли к ДМФ (10 мл) и перемешивали при 0°С в ледяной бане в течение 1 часа. К раствору добавляли соединение 40 (113,3 мг, 0,602 ммоль). Смесь оставляли для подогрева до комнатной температуры и оставляли для взаимодействия на 18 часов. Реакционную смесь разбавляли раствором хлорида натрия (30 мл), экстрагировали CH2Cl2 (10 мл×3). Органический слой объединяли и высушивали над безводным сульфатом натрия, фильтровали и концентрировали. Остаток очищали колоночной хроматографией (МеОН : CH2Cl2 составляет 200/1-10/1, об./об.) с получением соединения 73 в виде желтого твердого вещества (90,2 мг, 36,2%). ЖХ-МС m/z (ЭР+), 455,17 (М+Н)+.
Синтез соединения 74
Раствор соединения 73 (85,4 мг, 0,19 ммоль), EEDQ (55,4 мг, 0,23 ммоль) в смеси безводного CH2Cl2 (7 мл) и безводного МеОН (0,07 мл) перемешивали в течение 1 часа при комнатной температуре. Впоследствии добавляли соединение 42 (135,7 мг, 0,19 ммоль). Реакционную смесь перемешивали дополнительно в течение 18 часов. Реакционную смесь концентрировали в вакууме и очищали препаративной ВЭЖХ с получением соединения 74 (19,1 мг, 6,7%) в виде белого твердого вещества. ЖХ-МС m/z (ЭР+), 1162,45 (М+Н)+.
Figure 00000120
Figure 00000121
ПРИМЕР II получение конъюгатов антитело-лекарственное средство
Общая методика конъюгации
Диэтилентриаминпентауксусную кислоту (DTPA) (1 мМ) и 3,0-5,0 экв. трис-(2-карбоксиэтил)фосфина (ТСЕР) (10 мМ) добавляли к антителу (10 мг/мл) в пробирке для ПЦР и перемешивали в течение 1 часа для восстановления дисульфидных связей на антителе. К реакционной смеси добавляли различные количества конъюгата линкер-активный агент и перемешивали встряхиванием в течение ночи с помощью вихревой мешалки. Все реакции проводили при комнатной температуре. Полученные в результате продукты анализировали в гель-электрофорезе (ДСН-ПААГ) и ГИХ (гидрофобной интерактивной хроматографии)-ВЭЖХ.
Конъюгат антитело-лекарственное средство анализировали методом электрофореза в ДСН-ПААГ в восстанавливающих условиях: исследуемые образцы, смешанные с буферным раствором, наносили на 8%-15% акриламидные гели и делали фотоснимки гелей с помощью системы визуализации UVP BioDoc-it.
Полосы (больше или равно 50 кДа) были видны на дорожках 2 и 3, что позволяет предположить, что конъюгация (Н, L) посредством мостиковых связей с тиолами была эффективной. Полосы при 75 кДа представляют фрагмент, состоящий из тяжелой и легкой цепи, связанных одной парой мостиковых тиолов (LH). Две тяжелые цепи были связаны одной или двумя парами мостиковых тиолов, которые образовывали полосы при 100 кДа (НН). Полосы при 125 кДа представляют собой фрагмент, в котором только одна мостиковая связь между тяжелой и легкой цепью не образовалась (LHH). Наконец, полосы при 150 кДа выявляют образование полного мостикового антитела (LHHL).
Конъюгат антитело-лекарственное средство анализировали ГИХ-ВЭЖХ в следующих условиях: колонка ВЭЖХ: колонка TSK-GEL бутил-NPR 4,6-35 мм; буфер А: 75% фосфат натрия (20 мМ, рН 7,0), 25% изопропанол (об./об.); буфер В: фосфат натрия (20 мМ, рН 7,0), сульфат аммония (1,5 мМ); скорость потока: 1,0 мл/мин.
Оценка конъюгатов антитело-лекарственное средство in vitro
В первый день линию опухолевых клеток из линий клеток рака яичника человека, такую как OVCAR3, высевали в количестве 5000 клеток в 100 мкл культуральной среды в 96-луночный культуральный планшет (Cellstar). Клетки инкубировали в CO2 инкубаторе с насыщением влагой при 37°С в течение ночи. На второй день готовили серийные разведения двух ADC MSL-31 и MSL-75, конъюгированных посредством ковалентных тиольных связей, и добавляли в лунки 96-луночного планшета, содержащие 100 мкл на лунку клеток OVCAR3. Первоначальная концентрация конъюгата составляла 100000 нг/мл, и его разводили до 0,001 нг/мл. Клетки OVCAR3 с добавлением ADC инкубировали при 37°С в течение 72 часов. Впоследствии жизнеспособность опухолевых клеток, обработанных ADC, конъюгированным посредством ковалентных тиольных связей, измеряли на считывающем устройстве для планшетов (BIO-RAD iMark SpectraMax L от компании Molecular device), используя набор реагентов для определения жизнеспособности клеток Cell Counting Kit-8 (DOJINDO, CK04) в соответствии с протоколом производителя. Значение 50% ингибирования роста клеток IC50 рассчитывали с помощью программного обеспечения для подбора кривой Graphpad.
ПРИМЕР II-1 получение msl-c31
DTPA (1 мМ) и 5,0 экв. ТСЕР (10 мМ) добавляли к антителу к MSL (10 мг/мл) в пробирке для ПЦР. Смесь перемешивали встряхиванием на вихревой мешалке в течение 1 часа для восстановления дисульфидных связей на антителе. Впоследствии к реакционным смесям добавляли 25% ДМСО. Соединение 31 (5,0 экв., 10 мМ) добавляли к реакционным смесям и перемешивали встряхиванием на вихревой мешалке в течение ночи. Все реакции проводили при комнатной температуре. После завершения реакции смесь загружали в центрифужную пробирку для ультрафильтрации Millipore емкостью 4 мл и промывали три раза ФСБ, затем собирали реакционные смеси. На Фиг. 2 показано, что продукты (дорожка справа) ковалентной конъюгации по меньшей мере одной пары сульфгидрильных групп будут мигрировать медленнее, чем тяжелая (Н) или легкая (L) цепь отдельно (показано на дорожке слева). В результате ковалентной конъюгации тяжелой и легкой цепей образовывалась полоса 75 кДа (HL); в результате ковалентной конъюгации двух тяжелых цепей образовывалась полоса 100 кДа (НН). На хроматограмме ГИХ-ВЭЖХ наблюдали 3 пика, представляющих долю лекарственного средства на антитело (DAR, drug antibody ratio) 3, 4 и 5 соответственно. DAR полученного в результате MSL-C31 составляла 3,60 на основании результатов ГИХ-ВЭЖХ (Фиг. 3).
На Фиг. 2 показан результат электрофореза в ДСН-ПААГ в восстанавливающих условиях для а) чистого антитела, b) MSL-C31, продукта ковалентной конъюгации с тиолом.
На Фиг. 3 показана хроматограмма ГИХ-ВЭЖХ MSL-C31.
ПРИМЕР II-2 получение msl-c75
DTPA (1 мМ) и 5,0 экв. ТСЕР (10 мМ) добавляли к антителу к MSL (10 мг/мл) в пробирке для ПЦР. Смесь перемешивали встряхиванием на вихревой мешалке в течение 1 часа для восстановления дисульфидных связей на антителе. Впоследствии к реакционным смесям добавляли 25% ДМСО. 5,0 экв. соединения 75 (5,0 экв., 10 мМ) добавляли к реакционным смесям и перемешивали встряхиванием на вихревой мешалке в течение ночи. Все реакции проводили при комнатной температуре. После завершения реакции смесь загружали в центрифужную пробирку для ультрафильтрации Millipore емкостью 4 мл и промывали три раза ФСБ, затем собирали реакционные смеси. Образцы подвергали анализу методом электрофореза. Результаты электрофореза в ДСН-ПААГ в восстанавливающих условиях представлены на Фиг. 4. На дорожке слева нанесено чистое антитело, а на дорожке справа нанесен ковалентный конъюгат MSL-C75. DAR полученного в результате MSL-C75 составляла 3,87 на основании результатов ГИХ-ВЭЖХ.
На Фиг. 4 показаны результаты электрофореза MSL-C75 в ДСН-ПААГ в восстанавливающих условиях.
На Фиг. 5 показана хроматограмма ГИХ-ВЭЖХ MSL-C75.
В таблице 2 приведены значения IC50 двух образцов: ADC-C31 и ADC-C75, протестированных на клетках рака яичника человека.
Figure 00000122
ПРИМЕР II-3 получение cd59-c78
DTPA (1 мМ) и 5,0 экв. ТСЕР (10 мМ) добавляли к антителу к CD59 (10 мг/мл) в пробирке для ПЦР. Смесь перемешивали встряхиванием на вихревой мешалке в течение 1 часа для восстановления дисульфидных связей на антителе. Впоследствии к реакционным смесям добавляли 25% ДМСО. Соединение 78 (5,0 экв., 10 мМ) добавляли к реакционным смесям и перемешивали встряхиванием на вихревой мешалке в течение ночи. Все реакции проводили при комнатной температуре. После завершения реакции смесь загружали в центрифужную пробирку для ультрафильтрации Millipore емкостью 4 мл и промывали три раза ФСБ. DAR полученного в результате CD59-C78 составляла 3,66 на основании результатов ГИХ-ВЭЖХ.
На Фиг. 6 показан результат электрофореза в ДСН-ПААГ в восстанавливающих условиях для а) очищенного антитела, b) CD59-C78. На Фиг. 7 показана хроматограмма ГИХ-ВЭЖХ CD59-C78.
ПРИМЕР II-4 получение конъюгата her2-c78
DTPA (1 мМ) и 5,0 экв. ТСЕР (10 мМ) добавляли к антителу к Her2 (10 мг/мл) в пробирке для ПЦР. Смесь перемешивали встряхиванием на вихревой мешалке в течение 1 часа для восстановления дисульфидных связей на антителе. Впоследствии к реакционным смесям добавляли 25% ДМСО. Соединение 75 (5,0 экв., 10 мМ) добавляли к реакционным смесям и перемешивали встряхиванием на вихревой мешалке в течение ночи. Все реакции проводили при комнатной температуре. После завершения реакции смесь загружали в центрифужную пробирку для ультрафильтрации Millipore емкостью 4 мл и промывали три раза ФСБ.
Исследование стабильности конъюгата HER2-C78
Для определения степени распада ADC ковалентной тиольной конъюгации по сравнению со стандартной тиольной конъюгацией для исследования стабильности использовали три образца ADC, приготовленных с помощью описанных выше методик твердофазного иммуносорбентного анализа (ELISA). ELISA выполняли по следующему плану: сначала внеклеточный домен (ECD) Her2 (100 нг) наносили в виде покрытия в каждую лунку 96-луночного планшета; затем периферическую кровь человека, обработанную конъюгатом антитело к Her2-Mc-VC-PAB-MMAE (полученным стандартной тиольной конъюгацией), конъюгатом антитело к Her2-Di-Mc-VC-PAB-MMAE (полученным конъюгацией посредством би-малеимида-тиола) и конъюгатом антитело к Her2-PY-QJ2-ADC (Her2-С78, полученным ковалентной тиольной конъюгацией по данному изобретению) инкубировали в лунке с нанесенным покрытием, чтобы дать возможность связывания с ECD Her-2. Наконец, количество ADC к her2, связанного с антигеном Her2-ECD, измеряют на основании связывания с антителом к IgG человека, конъюгированным со стрептавидином/пероксидазой хрена, которая впоследствии катализирует преобразование хромогенного субстрата орто-фенилендиамина (OPD) в окрашенный продукт. Результаты показывают, что в течение 3 дней инкубации с образцами периферической крови степень распада ADC в результате стандартной тиольной конъюгации составляла 26,7%, для 2го ADC с бималеимид-тиольной конъюгацией она составляла 18,9%, а для 3го ADC по данному изобретению она составляла 5,1%. Степень распада ADC с ковалентным линкером по данному изобретению является самой низкой среди трех ADC, как показано ниже в таблице 3.
Figure 00000123
Примечания: Антитело к Her2-Mc-VC-PAB-MMAE было получено традиционной тиольной конъюгацией (ссылка 1) и антитело к Her2-Di-Mc-VC-PAB-MMAE было получено ковалентной конъюгацией с использованием структуры и методики, описанных в заявке на патент (ссылка 2). Значения DAR обоих конъюгатов были сопоставимы со значениями для Her2-С78.
ПРИМЕР III - Активность конъюгатов антитело-лекарственное средство
Конъюгаты антитело-лекарственное средство заявленного изобретения в одном воплощении изобретения можно использовать для специфического нацеливания на опухолевые клетки и связывания с опухолеассоциированными антигенами на поверхности этих опухолевых клеток. Комплекс ADC-антиген будет проникать в опухолевую клетку посредством эндоцитоза и высвобождает нагрузку после слияния эндосомы комплекса ADC-антиген с лизосомами. Высвобождаемая нагрузка ингибирует ключевые функции опухолевой клетки и/или уничтожать опухолевые клетки. Если нагрузки высвобождаются на поверхности клеток или вблизи опухолевых клеток, опухолевая клетка может быть также уничтожена посредством обходного пути.
Таким образом, в изобретении предложены различные комплексы белок-лекарственное средство, которые ингибируют рост опухолевых клеток и/или их дифференцировку. Эти соединения, содержащие различные виды активных нагрузок, можно применять как для лечения новообразований, аутоиммунных расстройств и воспаления, так и для различения опухолевых или стволовых клеток.
ПРИМЕР III-1 - Активность против опухолей
В одном воплощении заявленного изобретения в конъюгатах антитело-лекарственное средство (ADC) объединены свойства уникального нацеливания mAb со способностью к уничтожению раковых клеток цитотоксическими лекарственными средствами, что позволяет ADC быть активными противоопухолевыми агентами. Кроме того, использование ковалентной тиольной конъюгации в соответствии с заявленным изобретением повышает стабильность ADC, ограничивая разложение ADC в кровообращении, за счет чего снижается их токсичность. В данном примере представлены данные, показывающие лечение рака человека с применением ADC, полученных, как описано выше, у бестимусных мышей с имплантированными клетками рака молочной железы человека (MDA-MB-231).
Чтобы определить биологическую функцию различных ADC с ковалентными или стандартными конъюгатами, mAb к Her-2 конъюгировали посредством тиола путем стандартной конъюгации или ковалентной тиольной конъюгации с тем же линкером и цитотоксином. Бестимусным мышам имплантировали линию клеток рака человека (MDA-MB-231) и вводили ADC (0, 2,5, 5,0 и 10 мг/кг) посредством интраперитонеальной инъекции после достижения объема опухоли около 100 кубических миллиметров. Объемы опухоли контролировали раз в 3 дня, и по окончании 21-дневного периода животных умерщвляли, и опухоли вырезали и взвешивали.
В таблице 4 ниже приведено сравнение эффективности стандартных ADC с ADC, полученными коавлентной тиольной конъюгацией, введенных бестимусным мышам, которым были имплантированы раковые клетки молочной железы человека.
Figure 00000124
Ссылки
1. Yao Xuejing, Jing Jiang, Xin Wang, Changjiang Huang Dong Li, Kuan Xie, Qiaoyu Xu, Hongwen Li, Zhuanglin Li, Liguang Lou and Jianmin Fang, 2015. A novel humanized anti-her2 antibody conjugated with MMAE exerts potent anti-tumor activity, Breast Cancer Research & Treatment, 153(1): 123-133.
2. An Deqiang et al., 2014 07 23
Figure 00000125
CN 103933575 A.

Claims (122)

1. Линкер-активный агент для получения конъюгата антитело-лекарственное средство, содержащий
Figure 00000126
или его фармацевтически приемлемую соль,
где R1 и R2 представляют собой функциональные группы, которые могут взаимодействовать с тиолами;
L1, L2, L представляют собой линкер или могут отсутствовать;
М представляет собой линкерную группу;
Q представляет собой активный агент;
m представляет собой целое число от 0 до 6;
n представляет собой целое число от 0 до 8, при этом n не представляет собой 0;
каждый R1 и R2 содержит по меньшей мере одну группу, выбранную из группы, состоящей из малеимида, атома галогена, галоген-замещенных функциональных групп, алканаля, алканона, сульфонил-алкена, силана, изоцианата,
Figure 00000127
и их производных, где R5, R6 и R7 независимо выбраны из группы, состоящей из Н, атома галогена, С1-С6 алкилов, С2-С6 алкенилов, С2-С6 алкинилов, ароматических групп, гетероарилов, С3-С9 циклоалкилов, C3-C9 гетероциклила, полиэтиленгликоля, NO2, CN, SCN, OR8, SR9, NR10R11, C(=O)R12, C(=O)OR8, C(=O)NR10R11, C(=S)OR8, C(=S)NR10R11, C(=S)SR9, NR10(C=O)R12, NR10(C=S)NR10R11, O(C=O)NR10R11, SO2R9, S(=O)2OR8 и их комбинаций, где R8, R9, R10, R11, R12 независимо выбраны из группы, состоящей из Н, C1-C6 алкила, C1-C6 алкенилов, C2-C6 алкинилов и их комбинаций;
и R1 и R2 оба не могут быть малеимидом, и R1 и R2 оба не могут быть атомом галогена;
М выбран из группы, состоящей из C-R5, N, В, Р, Si-R5, ароматических групп, гетероарилов, циклоалкилов и (гетероциклил)алкилов, где R5 выбран из группы, состоящей из Н, C1-C6 алкилов, C2-C6 алкенилов и С2-С6 алкинилов;
L1 и L2 независимо выбраны из группы, состоящей из C1-C6 алкилов, С2-С6 алкенилов, С2-С6 алкинилов, ароматических групп, гетероарилов, С3-С9 циклоалкилов, C3-C9 гетероциклилов, полиэтиленгликоля, О, S, NR6, С(=O), С(=O)O, C(=O)NR6, C=NR6, C(=S)O, C(=S)NR6, C(=S)S, NR6(C=O), NR6(C=S)NR7, O(С=O)NR6, S(=O)2 и их комбинаций, и R6 и R7 независимо выбраны из группы, состоящей из Н, C1-C6 алкилов, C2-C6 алкенилов и C2-C6 алкинилов;
L содержит нерасщепляемое звено и/или расщепляемое звено, и L содержит C1-C9 алкил, C2-C9 алкенил, C2-C9 алкинил, ароматическую группу, гетероарил, С3-С9 циклоалкил, С3-С9 гетероциклил, полиэтиленгликоль, О, S, NR8, С(=O), С(=O)O, C(=O)NR8, C=NR8, C(=S)O, C(=S)NR8, C(=S)S, NR8(C=O), NR8(C=S)NR9, O(С=O)NR8, S(=O)2, Val-Cit-PAB, Val-Ala-PAB, Val-Lys(Ac)-PAB, Phe-Lys-PAB, Phe-Lys(Ac)-PAB, D-Val-Leu-Lys, Gly-Gly-Arg, Ala-Ala-Asn-PAB, Ala-PAB, РАВ или их комбинацию, где R8 и R9 независимо выбраны из группы, состоящей из Н, C1-C6 алкилов, C2-С6 алкенилов и С2-С6 алкинилов; и
Q выбран из группы, состоящей из агентов, связывающих тубулины, алкилирующих агентов ДНК, интеркаляторов ДНК, ингибиторов ферментов, иммуномодуляторов, пептидов и нуклеотидов.
2. Линкер-активный агент по п. 1, где R1 и R2 независимо выбраны из группы, состоящей из
Figure 00000128
и норборнена и их производных, и X выбран из группы, состоящий из F, Cl, Br и I.
3. Линкер-активный агент по п. 1 или 2, где R1 и R2 являются разными.
4. Линкер-активный агент по п. 1 или 2, где Q выбран из группы, состоящей из майтанзиноидов, ауристатинов, калихеамицинов, доксорубицинов, дуокармицинов и пирролобензодиазепинов.
5. Линкер-активный агент по п. 1 или 2, где структура формулы I представляет собой любую, выбранную из группы, состоящей из:
Figure 00000129
Figure 00000130
Figure 00000131
Figure 00000132
Figure 00000133
Figure 00000134
Figure 00000135
Figure 00000136
Figure 00000137
Figure 00000138
Figure 00000139
Figure 00000140
6. Конъюгат нацеливающая группировка-лекарственное средство для лечения HER2-положительного рака у субъекта, имеющий следующую формулу:
Figure 00000141
или его фармацевтически приемлемая соль,
где L1, L2, L представляют собой линкер или могут отсутствовать;
М представляет собой линкерную группу;
Q представляет собой активный агент;
m представляет собой целое число от 0 до 6;
n представляет собой целое число от 0 до 8, при этом n не представляет собой 0;
А представляет собой нацеливающую группировку, где А содержит моноклональное антитело, фрагмент антитела, белковый лиганд, белковый каркас, пептид или низкомолекулярный лиганд, где фрагмент антитела выбран из группы, состоящей из Fab, Fab', (Fab')2, scFv и Fv;
S представляет собой атом серы тиольной группы нацеливающей группировки; и
каждый из R3 и R4 образован в результате взаимодействия между S и функциональной группой, которая может взаимодействовать с тиолами, и R3 и R4 являются разными, и где каждый R3 и R4 образуется независимо в результате взаимодействия между тиольной группой и группой, выбранной из группы, состоящей из
Figure 00000142
и их производных, где
R5, R6 и R7 независимо выбраны из группы, состоящей из Н, атома галогена, C1-C6 алкилов, С2-С6 алкенилов, C2-С6 алкинилов, ароматических групп, гетероарилов, С3-С9 циклоалкилов, С3-С9 гетероциклила, полиэтиленгликоля, NO2, CN, SCN, OR8, SR9, NR10R11, C(=O)R12, C(=O)OR8, C(=O)NR10R11, C(=S)OR8, C(=S)NR10R11, C(=S)SR9, NR10(C=O)R12, NR10(C=S)NR10R11, O(C=O)NR10R11, SO2R9, S(=O)2OR8 и их комбинаций, где R8, R9, R10, R11, R12 независимо выбраны из группы, состоящей из Н, C1-С6 алкила, С2-С6 алкенилов, С2-С6 алкинилов и их комбинаций, и X выбран из группы, состоящей из F, Cl, Br и I;
М выбран из группы, состоящей из C-R5, N, В, Р, Si-R5, ароматических групп, гетероарилов, циклоалкилов и (гетероциклил)алкилов, и где R5 выбран из группы, состоящей из Н, C1-С6 алкилов, C2-C6 алкенилов и С2-С6 алкинилов;
L1 и L2 независимо выбраны из группы, состоящей из C1-С6 алкилов, С2-С6 алкенилов, С2-С6 алкинилов, ароматических групп, гетероарилов, С3-С9 циклоалкилов, С3-С9 гетероциклилов, полиэтиленгликоля, О, S, NR6, С(=O), С(=O)O, C(=O)NR6, C=NR6, C(=S)O, C(=S)NR6, C(=S)S, NR6(C=O), NR6(C=S)NR7, O(C=O)NR6, S(=O)2 и их комбинаций, и R6 и R7 независимо выбраны из группы, состоящей из Н, C1-С6 алкилов, С2-С6 алкенилов и С2-С6 алкинилов;
L содержит нерасщепляемое звено и/или расщепляемое звено, и L содержит C1-C9 алкил, С2-С9 алкенил, С2-С9 алкинил, ароматическую группу, гетероарил, С3-С9 циклоалкил, С3-С9 гетероциклил, полиэтиленгликоль, О, S, NR8, С(=O), С(=O)O, C(=O)NR8, C=NR8, C(=S)O, C(=S)NR8, C(=S)S, NR8(O=O), NR8(С=S)NR9, O(C=O)NR8, S(=O)2, Val-Cit-PAB, Val-Ala-PAB, Val-Lys(Ac)-PAB, Phe-Lys-PAB, Phe-Lys(Ac)-PAB, D-Val-Leu-Lys, Gly-Gly-Arg, Ala-Ala-Asn-PAB, Ala-PAB, РАВ или их комбинацию, где R8 и R9 независимо выбраны из группы, состоящей из Н, C1-C6 алкилов, С2-С6 алкенилов и С2-С6 алкинилов; и
Q выбран из группы, состоящей из агентов, связывающих тубулины, алкилирующих агентов ДНК, интеркаляторов ДНК, ингибиторов ферментов, иммуномодуляторов, пептидов и нуклеотидов.
7. Конъюгат нацеливающая группировка-лекарственное средство по п. 6, где каждый из R3 и R4 независимо выбран из группы, состоящей из:
Figure 00000143
и их производных.
8. Конъюгат нацеливающая группировка-лекарственное средство по п. 6 или 7, где структура формулы II представляет собой любую, выбранную из группы, состоящей из:
Figure 00000144
Figure 00000145
Figure 00000146
Figure 00000147
Figure 00000148
Figure 00000149
Figure 00000150
Figure 00000151
Figure 00000152
Figure 00000153
Figure 00000154
Figure 00000155
9. Способ лечения патологического состояния у субъекта, включающий введение субъекту, нуждающемуся в таком лечении, конъюгата нацеливающая группировка-лекарственное средство по любому из пп. 6-8, где указанное патологическое состояние представляет собой HER2-положительный рак.
10. Способ по п. 9, где А представляет собой антитело или его фрагмент, связывающиеся с HER2, и указанный фрагмент выбран из группы, состоящей из Fab, Fab', (Fab')2, scFv и Fv.
11. Способ по п. 9 или 10, где Q представляет собой цитотоксин.
12. Способ по п. 9 или 10, где субъект представляет собой человека.
13. Способ по п. 9 или 10, где рак представляет собой рак молочной железы.
о
hw
w
Is-
00
o>
<o
CM
DC
I t*
L , L , L представляют собой линкер или могут отсутствовать;
М представляет собой линкерную группу;
Q представляет собой активный агент;
m представляет собой целое число от 0 до 6;
п представляет собой целое число от 0 до 8, при этом п не представляет собой 0;
I 2
каждый R и R* содержит по меньшей мере одну группу, выбранную из группы,
состоящей из малеимида, атома галогена, галоген-замещенных функциональных групп,
алканаля, алканона, сульфонил-алкена, силана, изоцианата,
Figure 00000156
и их производных, где R5, R6 и R7 независимо выбраны из группы, состоящей из Н,
атома галогена, С|-С$ алкилов, С2-Сб алкенилов, С2-С6 алкинилов, ароматических
групп, гетероарилов, С3-С9 циклоалкилов, С3-С9 гетероциклила, полиэтиленгликоля,
N02, CN, SCN, OR8, SR9, NR10Rn, C(=0)R12, C(=0)0R8, C(=O)NR10Ru, C(=S)OR8, C(=S)
NR1^1 \ C(=S)SR9, NR10(C=O)R12, NR10(C=S)NR10r‘ \ O(C=O)NR10R1 \ S02R9, S(=0)20R8
и их комбинаций, где R8, R9, R10, R11, R12 независимо выбраны из группы, состоящей
из Н, СрСб алкила, СрСб алкенилов, С2-Сб алкинилов и их комбинаций;
и R1 и R2 оба не могут быть малеимидом, и R1 и R2 оба не могут быть атомом
галогена;
М выбран из группы, состоящей из C-R5, N, В, Р, Si-R5, ароматических групп,
гетероарилов, циклоалкилов и (гетероциклил)алкилов, где R5 выбран из группы,
состоящей из Н, CpCg алкилов, С2-Сб алкенилов и С2-С5 алкинилов;
L1 и L2 независимо выбраны из группы, состоящей изС(-С6 алкилов, С2-С6 алкенилов,
С2-Сб алкинилов, ароматических групп, гетероарилов, С3-С9 циклоалкилов, С3-С9
гетероциклилов, полиэтиленгликоля, О, S, NR6, С(=О), С(=0)0, C(=0)NR6, C=NR6, С(=
S)0, C(=S)NR6, C(=S)S, NR6(C=0), NR6(C=S)NR7,0(C=0)NR6, S(=0)2 и их комбинаций,
и R6 и R7 независимо выбраны из группы, состоящей из Н, СрС6 алкилов, С2-Сб
алкенилов и С2-С6 алкинилов;
L содержит нерасщепляемое звено и/или расщепляемое звено, и L содержит С1-С9
алкил, С2-С9 алкенил, С2-С9 алкинил, ароматическую группу, гетероарил, С3-С9
циклоалкил, С3-С9 гетероцикл ил, полиэтиленгликоль, О, S, NR8, С(=0), С(=0)0, С(=0)
NR8, C-NR8, C(=S)0, C(=S)NR°, C(=S)S, NRe(C=0), NRe(C=S)NRv, 0(C=0)NRs, S(=0)2,
Val-Cit-RVB, Val-Ala-PAB, Val-Lys(Ac)-PAB, Phe-Lys-PAB, Phe-Lys(Ac)-PAB, D-Val-Leu-
Lys, Gly-Gly-Arg, Ala-Ala-Asn-PAB, Ala-PAB, PAB или их комбинацию, где R8 и R9
независимо выбраны из группы, состоящей из Н, СрСб алкилов 02-Сб алкенилов и
С2-Сб алкинилов; и
Q выбран из группы, состоящей из агентов, связывающих тубулины, алкилирующих
агентов ДНК, интеркаляторов ДНК, ингибиторов ферментов, иммуномодуляторов,
8/rw
;
с
ь
(
«
<
«
I
Р
CN
1^
00
о»
to
см
э
ОС
Стр .: 2
RU2018108613A 2015-08-14 2016-08-15 Ковалентные линкеры в конъюгатах антитело-лекарственное средство, способы их получения и применение RU2698727C9 (ru)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US201562205121P 2015-08-14 2015-08-14
US62/205,121 2015-08-14
PCT/US2016/046987 WO2017031034A2 (en) 2015-08-14 2016-08-15 Covalent linkers in antibody-drug conjugates and methods of making and using the same

Publications (2)

Publication Number Publication Date
RU2698727C1 RU2698727C1 (ru) 2019-08-29
RU2698727C9 true RU2698727C9 (ru) 2022-03-30

Family

ID=58052236

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
RU2018108613A RU2698727C9 (ru) 2015-08-14 2016-08-15 Ковалентные линкеры в конъюгатах антитело-лекарственное средство, способы их получения и применение

Country Status (15)

Country Link
US (2) US10537644B2 (ru)
EP (2) EP3334462B8 (ru)
JP (1) JP6714687B2 (ru)
KR (1) KR102097876B1 (ru)
CN (3) CN107921030B (ru)
AU (1) AU2016308539B2 (ru)
CA (1) CA2994853C (ru)
DK (1) DK3334462T3 (ru)
ES (1) ES2907651T3 (ru)
HU (1) HUE057906T2 (ru)
PL (1) PL3334462T3 (ru)
PT (1) PT3334462T (ru)
RU (1) RU2698727C9 (ru)
TW (1) TWI715611B (ru)
WO (1) WO2017031034A2 (ru)

Families Citing this family (25)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN107743494B (zh) 2015-06-02 2022-04-29 诺和诺德股份有限公司 具有极性重组延伸体的胰岛素
MA43348A (fr) 2015-10-01 2018-08-08 Novo Nordisk As Conjugués de protéines
US10864279B2 (en) * 2016-12-16 2020-12-15 Industrial Technology Research Institute Linker-drug and antibody-drug conjugate (ADC) employing the same
CN106946926A (zh) * 2017-02-27 2017-07-14 西北大学 一种具有多齿氨羧类二聚体螯合剂及其制备方法、应用和分离介质
CA3051173A1 (en) 2017-03-10 2018-09-13 Quiapeg Pharmaceuticals Ab Releasable conjugates
MA49339A (fr) * 2017-04-05 2020-02-12 Novo Nordisk As Conjugués insuline-fc à extension oligomère
CN109232464B (zh) * 2017-07-10 2022-11-15 上海新理念生物医药科技有限公司 噁二唑型连接子及其应用
CN120248019B (zh) * 2017-12-15 2026-02-03 四川科伦博泰生物医药股份有限公司 生物活性物偶联物及其制备方法和用途
WO2019157772A1 (zh) * 2018-02-13 2019-08-22 和元生物技术（上海）股份有限公司 抗trailr2抗体-毒素-偶联物及其在抗肿瘤治疗中的药物用途
TW202003044A (zh) 2018-03-09 2020-01-16 瑞典商奎亞培格製藥公司 可釋放之抗體結合物
CN110507824A (zh) * 2018-05-21 2019-11-29 荣昌生物制药（烟台）有限公司 一种抗间皮素抗体及其抗体药物缀合物
CN112220933A (zh) * 2018-07-03 2021-01-15 烟台迈百瑞国际生物医药股份有限公司 抗体-t2毒素缀合物及其用途
US11357828B2 (en) 2018-09-12 2022-06-14 Quiapeg Pharmaceuticals Ab Releasable GLP-1 conjugates
JP2022512057A (ja) * 2018-12-17 2022-02-02 栄昌生物制薬（烟台）股▲分▼有限公司 抗体薬物複合体のためのリンカーおよびその使用
JP7167163B2 (ja) 2019-05-20 2022-11-08 煙台邁百瑞国際生物医薬股▲ふん▼有限公司 抗体－薬物コンジュゲートの中間体のワンポット合成法による製造プロセス
CN111620927B (zh) * 2019-05-20 2022-11-11 烟台迈百瑞国际生物医药股份有限公司 一种抗体药物偶联物中间体的一锅法制备工艺
FR3096259B1 (fr) * 2019-05-20 2023-12-15 Mc Saf conjugués anticorps-médicament et leur utilisation en thérapie
CN111670053B (zh) * 2019-05-20 2023-08-22 烟台迈百瑞国际生物医药股份有限公司 一种抗体药物偶联物中间体的一锅法制备工艺
FR3101541B1 (fr) * 2019-10-04 2021-10-22 Mc Saf conjugués anticorps-médicament et leur utilisation en thérapie
CN114053426B (zh) * 2020-07-30 2024-06-18 成都科岭源医药技术有限公司 一种双药链接组装单元及双药靶向接头-药物偶联物
CN115105607B (zh) * 2021-03-22 2024-12-20 成都科岭源医药技术有限公司 一种用于adc的双药-接头的制备方法及其用途
CN117801107A (zh) 2022-09-30 2024-04-02 上海迪诺医药科技有限公司 苯并氮杂卓衍生物、含其的偶联物及其应用
WO2025003392A1 (en) * 2023-06-28 2025-01-02 Université De Tours Bioconjugation systems and uses thereof
WO2025031305A1 (zh) * 2023-08-04 2025-02-13 泰诚思(上海)生物医药有限公司 双联烯连接子、连接子与药物缀合物、抗体偶联药物及其用途
WO2025140548A1 (zh) * 2023-12-29 2025-07-03 杭州尚健生物技术有限公司 一种免疫缀合物及其用途

Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2013085925A1 (en) * 2011-12-05 2013-06-13 Igenica, Inc. Antibody-drug conjugates and related compounds, compositions, and methods
CA2898939A1 (en) * 2013-01-23 2014-07-31 Newbio Therapeutics, Inc. Tridentate linkers and use thereof

Family Cites Families (13)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US2615887A (en) * 1952-10-28 Reaction products of nitriles
US20030215395A1 (en) * 2002-05-14 2003-11-20 Lei Yu Controllably degradable polymeric biomolecule or drug carrier and method of synthesizing said carrier
US7282590B2 (en) * 2004-02-12 2007-10-16 The Research Foundation Of State University Of New York Drug conjugates
US6998978B2 (en) 2004-04-29 2006-02-14 International Business Machines Corporation Method and apparatus for responding to medical alerts
BRPI0510883B8 (pt) * 2004-06-01 2021-05-25 Genentech Inc composto conjugado de droga e anticorpo, composição farmacêutica, método de fabricação de composto conjugado de droga e anticorpo e usos de uma formulação, de um conjugado de droga e anticorpo e um agente quimioterapêutico e de uma combinação
US7947839B2 (en) * 2004-12-01 2011-05-24 Genentech, Inc. Heterocyclic-substituted bis-1,8 naphthalimide compounds, antibody drug conjugates, and methods of use
CA2726050A1 (en) * 2008-05-30 2009-12-10 Siemens Medical Solutions Usa, Inc. Achievement of high therapeutic index through molecular imaging guided targeted drug treatment
JP2015510877A (ja) * 2012-03-09 2015-04-13 ユーシーエル ビジネス パブリック リミテッド カンパニー 抗体の化学修飾
WO2013185117A1 (en) * 2012-06-07 2013-12-12 Ambrx, Inc. Prostate-specific membrane antigen antibody drug conjugates
FR3008408B1 (fr) 2013-07-11 2018-03-09 Mc Saf Nouveaux conjugues anticorps-medicament et leur utilisation en therapie
US9526676B2 (en) * 2013-10-30 2016-12-27 Dentsply Sirona Inc. Polymerizable resins containing a 1,3,5-hexahydro-1,3,5-triazine moiety, methods of making, and dental compositions containing the same
CN106573074B (zh) * 2014-06-02 2022-04-12 里珍纳龙药品有限公司 生物活性分子偶联物、试剂和制备方法及其治疗用途
EP3209334A2 (en) * 2014-10-20 2017-08-30 Igenica Biotherapeutics, Inc. Novel antibody-drug conjugates and related compounds, compositions, and methods of use

Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2013085925A1 (en) * 2011-12-05 2013-06-13 Igenica, Inc. Antibody-drug conjugates and related compounds, compositions, and methods
CA2898939A1 (en) * 2013-01-23 2014-07-31 Newbio Therapeutics, Inc. Tridentate linkers and use thereof

Non-Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
ALBERS AE., et al., Exploring the effects of linker composition on site-specifically modified antibody-drug conjugates.Eur J Med Chem. 2014 Dec 17;88:3-9. doi: 10.1016/j.ejmech.2014.08.062. Epub 2014 Aug 23. *
LAMBERT JM., et al., Ado-trastuzumab Emtansine (T-DM1): an antibody-drug conjugate (ADC) for HER2-positive breast cancer.J Med Chem. 2014 Aug 28;57(16):6949-64. doi: 10.1021/jm500766w. Epub 2014 Jul 10. *
LAMBERT JM., et al., Ado-trastuzumab Emtansine (T-DM1): an antibody-drug conjugate (ADC) for HER2-positive breast cancer.J Med Chem. 2014 Aug 28;57(16):6949-64. doi: 10.1021/jm500766w. Epub 2014 Jul 10. ALBERS AE., et al., Exploring the effects of linker composition on site-specifically modified antibody-drug conjugates.Eur J Med Chem. 2014 Dec 17;88:3-9. doi: 10.1016/j.ejmech.2014.08.062. Epub 2014 Aug 23. *

Also Published As

Publication number Publication date
EP3981433A1 (en) 2022-04-13
EP3334462B8 (en) 2022-04-20
KR20180030993A (ko) 2018-03-27
WO2017031034A2 (en) 2017-02-23
CA2994853A1 (en) 2017-02-23
US10772965B2 (en) 2020-09-15
HUE057906T2 (hu) 2022-07-28
KR102097876B1 (ko) 2020-04-06
CN107921030A (zh) 2018-04-17
RU2698727C1 (ru) 2019-08-29
AU2016308539A1 (en) 2018-02-15
CA2994853C (en) 2023-06-27
EP3334462A4 (en) 2019-08-07
HK1251182A1 (zh) 2019-01-25
US10537644B2 (en) 2020-01-21
DK3334462T3 (da) 2022-02-14
AU2016308539B2 (en) 2019-01-24
CN107921030B (zh) 2024-07-02
US20180055948A1 (en) 2018-03-01
CN114939174A (zh) 2022-08-26
JP6714687B2 (ja) 2020-06-24
EP3334462A2 (en) 2018-06-20
TWI715611B (zh) 2021-01-11
CN114939174B (zh) 2024-06-28
BR112018002033A2 (pt) 2018-11-06
EP3334462B1 (en) 2022-01-19
ES2907651T3 (es) 2022-04-25
US20180169250A1 (en) 2018-06-21
WO2017031034A3 (en) 2017-03-30
PT3334462T (pt) 2022-03-01
WO2017031034A4 (en) 2017-05-04
JP2018529646A (ja) 2018-10-11
TW201718025A (zh) 2017-06-01
CN118743763A (zh) 2024-10-08
PL3334462T3 (pl) 2022-05-09

Similar Documents

Publication Publication Date Title
RU2698727C9 (ru) Ковалентные линкеры в конъюгатах антитело-лекарственное средство, способы их получения и применение
US20240269315A1 (en) Drug conjugate and use thereof
ES2885686T3 (es) Conjugados anticuerpo-fármaco hidrófilos
CN104244718A (zh) 抗体-药物缀合物以及相关化合物、组合物和方法
WO2021190586A1 (zh) B7h3抗体-依喜替康类似物偶联物及其医药用途
ES2998692T3 (en) Anti-met antibodies and uses thereof
HK40066766A (en) Covalent linkers in antibody-drug conjugates and methods of making and using the same
TWI908142B (zh) Nectin-4抗體及抗體藥物結合物
BR112018002033B1 (pt) Agente ligante-ativo, conjugado de anticorpo-fármaco e seus usos
US20240390509A1 (en) Antibody-drug conjugate, preparation method therefor, and pharmaceutical use thereof
RU2806049C9 (ru) Конъюгаты анти-her2 бипаратопных антител-лекарственных веществ и способы их применения
RU2806049C2 (ru) Конъюгаты анти-her2 бипаратопных антител-лекарственных веществ и способы их применения
TW202515913A (zh) Nectin-4抗體及抗體藥物結合物
KR101704379B1 (ko) 항체-약물 접합체 및 그 제조방법
IL307317A (en) Dna toxic dimer compound and conjugate thereof
HK1251182B (en) Covalent linkers in antibody-drug conjugates and methods of making and using the same
EA040940B1 (ru) Гидрофильные конъюгаты антитело-лекарственное средство

Legal Events

Date Code Title Description
TH4A Reissue of patent specification