[go: up one dir, main page]

RU2408379C2 - Anti-inflammatory and antineoplastic anticoagulant - Google Patents

Anti-inflammatory and antineoplastic anticoagulant Download PDF

Info

Publication number
RU2408379C2
RU2408379C2 RU2009107800/15A RU2009107800A RU2408379C2 RU 2408379 C2 RU2408379 C2 RU 2408379C2 RU 2009107800/15 A RU2009107800/15 A RU 2009107800/15A RU 2009107800 A RU2009107800 A RU 2009107800A RU 2408379 C2 RU2408379 C2 RU 2408379C2
Authority
RU
Russia
Prior art keywords
heparin
inflammatory
compound
activity
anticoagulant
Prior art date
Application number
RU2009107800/15A
Other languages
Russian (ru)
Other versions
RU2009107800A (en
Inventor
Татьяна Генриховна Толстикова (RU)
Татьяна Генриховна Толстикова
Ирина Васильевна Сорокина (RU)
Ирина Васильевна Сорокина
Наталья Анатольевна Жукова (RU)
Наталья Анатольевна Жукова
Дмитрий Сергеевич Баев (RU)
Дмитрий Сергеевич Баев
Ирина Юрьевна Понеделькина (RU)
Ирина Юрьевна Понеделькина
Елена Сергеевна Лукина (RU)
Елена Сергеевна Лукина
Эльвира Азаматовна Хайбрахманова (RU)
Эльвира Азаматовна Хайбрахманова
Виктор Николаевич Одиноков (RU)
Виктор Николаевич Одиноков
Усеин Меметович Джемилев (RU)
Усеин Меметович Джемилев
Original Assignee
Учреждение Российской Академии Наук Институт Нефтехимии И Катализа Ран
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Учреждение Российской Академии Наук Институт Нефтехимии И Катализа Ран filed Critical Учреждение Российской Академии Наук Институт Нефтехимии И Катализа Ран
Priority to RU2009107800/15A priority Critical patent/RU2408379C2/en
Publication of RU2009107800A publication Critical patent/RU2009107800A/en
Application granted granted Critical
Publication of RU2408379C2 publication Critical patent/RU2408379C2/en

Links

Landscapes

  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)

Abstract

FIELD: medicine, pharmaceutics.
SUBSTANCE: there is offered the administration of heparin conjugated with 2-aminoethanesulfonic acid (taurine) of formula
Figure 00000009
(1), synthesised with a condensing reagent - water-soluble 1-ethyl-3[3 (dimethylamino)propyl]carbodiimide as an anti-inflammatory and antineoplastic anticoagulant.
EFFECT: compound surpasses heparin in anticoagulating ability, has high anti-inflammatory activity, while antineoplastic activity is comparable with the effect of antineoplastic preparations (doxorubicin, cyclophosphan, vincristine).
5 tbl, 4 ex

Description

Изобретение предназначено для использования в медицине и касается средства, обладающего антикоагулянтным, противовоспалительным и противоопухолевым свойствами.The invention is intended for use in medicine and relates to agents having anticoagulant, anti-inflammatory and antitumor properties.

Заявляемое средство является конъюгатом (I) гепарина и 2-аминоэтансульфоновой кислоты (таурина) (Понеделькина И.Ю., Одиноков В.Н., Лукина Е.С. Сибагатуллин Н.Г., Суфияров И.Ф., Серик Е.М., Джемилев У.М. Способ получения конъюгатов гепарина. // Пат. № 2298406), относится к классу гликозаминогликанов (ГАГ), которые известны своей высокой биологической активностью.The inventive tool is a conjugate of (I) heparin and 2-aminoethanesulfonic acid (taurine) (Ponedelkina I.Yu., Odinokov V.N., Lukina E.S. Sibagatullin N.G., Sufiyarov I.F., Serik E.M. ., Dzhemilev UM. The method of producing heparin conjugates. // Pat. No. 2298406), belongs to the class of glycosaminoglycans (GAG), which are known for their high biological activity.

Figure 00000001
Figure 00000001

В организме ГАГ являются компонентом внеклеточного матрикса и выполняют регуляторные функции, взаимодействуя с внеклеточными макромолекулами, белками плазмы крови, компонентами клеточной мембраны, внутриклеточными структурами [Sugahara К., Kitagawa H. Recent advances in the study of the biosynthesis and functions of sulfated glycosaminoglycans // Curr. Opin. Struct. Biol., 2000. - V.10 (5). - P.518-527; Vieira T.C., Costa-Filho A., Salgado N.C., Allodi S., Valente A.P., Nasciutti L.E., Silva L.C. Acharan sulfate, the new glycosaminoglycan from Achatina fulica Bowdich 1822. Structural heterogeneity, metabolic labeling and localization in the body, mucus and the organic shell matrix // Eur. J. Biochem., 2004. - V.271. - P.845-854]. В частности, гепарин (II) является кофактором антитромбина III и вместе с ним ингибирует активность тромбина, факторов IXa, Ха, XIa и XIIa системы свертывания крови, калликреина [Марри Р., Греннер Д., Мейес П. и др. Биохимия человека: В 3 т. Т.2. Пер. с англ. - М.: Мир, 1993].In the body, GAGs are a component of the extracellular matrix and perform regulatory functions by interacting with extracellular macromolecules, plasma proteins, components of the cell membrane, intracellular structures [Sugahara K., Kitagawa H. Recent advances in the study of the biosynthesis and functions of sulfated glycosaminoglycans // Curr. Opin. Struct. Biol., 2000 .-- V.10 (5). - P.518-527; Vieira T.C., Costa-Filho A., Salgado N.C., Allodi S., Valente A.P., Nasciutti L.E., Silva L.C. Acharan sulfate, the new glycosaminoglycan from Achatina fulica Bowdich 1822. Structural heterogeneity, metabolic labeling and localization in the body, mucus and the organic shell matrix // Eur. J. Biochem., 2004 .-- V.271. - P.845-854]. In particular, heparin (II) is a cofactor of antithrombin III and together with it inhibits the activity of thrombin, factors IXa, Xa, XIa and XIIa of the blood coagulation system, kallikrein [Murray R., Grenner D., Meyes P. et al. Human biochemistry: In 3 t. T. 2. Per. from English - M .: Mir, 1993].

Figure 00000002
Figure 00000002

Гепарин участвует в клеточной пролиферации, стимулирует миграцию эндотелиальных клеток в капиллярах, образует электростатические комплексы с белками-регуляторами воспаления, принимает участие в контроле рецепторных взаимодействий, имеются данные о наличии у гепарина иммуномоделирующей активности [Иммунология: В 3 т. Т.3. Пер. с англ. / Под ред. У.Пола. - М.: Мир, 1987-1989. - С.170-231]. Известно о способности гепарина воздействовать на каскад комплемента, который принимает активное участие в развитии воспалительной реакции [Галебская Л.В., Соловцова И.Л., Рюмина Е.В. Модификация протеолитического каскада комплемента под действием экзогенного гепарина // Вопр. медицинской химии. 2001. - Т.47. - № 1. - С.91-97].Heparin is involved in cell proliferation, stimulates the migration of endothelial cells in the capillaries, forms electrostatic complexes with protein-regulators of inflammation, takes part in the control of receptor interactions, there is evidence of the presence of immunomodulating activity in heparin [Immunology: B 3 T. T.3. Per. from English / Ed. U. Paul. - M.: Mir, 1987-1989. - S. 170-231]. It is known about the ability of heparin to influence the cascade of complement, which takes an active part in the development of the inflammatory reaction [Galebskaya L.V., Solovtsova I.L., Ryumina E.V. Modification of the proteolytic complement cascade under the action of exogenous heparin // Vopr. medical chemistry. 2001. - T. 47. - No. 1. - S.91-97].

Известно, что биологическая активность гепарина зависит от степени сульфатированности молекулы. Наличие большого количества сульфатных групп придает существенный отрицательный заряд молекулам гепарина, что облегчает избирательное связывание с активными центрами рецепторных белков [Essentials of Glycobiology / Edit. by Varki A., Cummings R., Esko J., Freeze H. et al. - La Jolla, California: CSHL Press, 1991. - 653 p.; Ishida K., Wierzba M.K., Teruya Т., Simizu S., Osada H. Novel heparin sulfate mimetic compounds as antitumor agents. // Chem. Biol. 2004. - V.11. - P.367-377]. Дополнительные возможности для усиления биологической активности гепарина открываются в результате введения в его молекулу различных фармакофорных групп, что не только обеспечивает комплексное действие конъюгата, но и повышает биодоступность фармакофоров. Высокая перспективность данного подхода была показана на конъюгатах нестероидных противовоспалительных средств (НПВС) с аминокислотами - ибупрофен-лизин, индометацин-фенилаланин, индометацин-глицин и др. Было установлено, что некоторые конъюгаты природных аминокислот с НПВС не уступают по активности исходным противовоспалительным препаратам, в десятки раз менее токсичны и не обладают гастротоксичностью [Аникина Л.В. Биологическая активность амидов индометацина, напроксена, ибупрофена и природных аминокислот. Диссер. на соиск. уч. ст. к.б.н. - Томск, 2002]. Использование аминокислот для модификации природных ГАГ через образование амидной связи по карбоксильной группе остатка уроновой кислоты обеспечивает образование устойчивых и в то же время высокоактивных конъюгатов ГАГ с новыми биологическими свойствами.The biological activity of heparin is known to depend on the degree of sulfation of the molecule. The presence of a large number of sulfate groups gives a significant negative charge to heparin molecules, which facilitates selective binding to the active centers of receptor proteins [Essentials of Glycobiology / Edit. by Varki A., Cummings R., Esko J., Freeze H. et al. - La Jolla, California: CSHL Press, 1991 .-- 653 p .; Ishida K., Wierzba M.K., Teruya T., Simizu S., Osada H. Novel heparin sulfate mimetic compounds as antitumor agents. // Chem. Biol. 2004. - V.11. - P.367-377]. Additional opportunities for enhancing the biological activity of heparin are opened as a result of the introduction of various pharmacophore groups into its molecule, which not only provides the complex effect of the conjugate, but also increases the bioavailability of pharmacophores. The high promise of this approach was shown on conjugates of non-steroidal anti-inflammatory drugs (NSAIDs) with amino acids - ibuprofen-lysine, indomethacin-phenylalanine, indomethacin-glycine, etc. It was found that some conjugates of natural amino acids with NSAIDs are not inferior in activity to the original anti-inflammatory drugs, in dozens of times less toxic and do not have gastrotoxicity [Anikina L.V. Biological activity of amide indomethacin, naproxen, ibuprofen and natural amino acids. Disser. for a job. student Art. Ph.D. - Tomsk, 2002]. The use of amino acids to modify natural GAG through the formation of an amide bond at the carboxyl group of the uronic acid residue provides the formation of stable and at the same time highly active GAG conjugates with new biological properties.

В этой связи перспективным фармакофором для модификации гепарина являяется серусодержащая 2-аминоэтансульфоновая кислота - таурин (III), который является продуктом метаболизма цистеина и метионина.In this regard, a sulfur-containing 2-aminoethanesulfonic acid, taurine (III), which is a product of the metabolism of cysteine and methionine, is a promising pharmacophore for the modification of heparin.

Figure 00000003
Figure 00000003

Таурин является модулятором большого числа физиологических процессов в организме, принимает участие в синтезе других аминокислот, обмене натрия, калия, кальция и магния. Он также действует как нейромедиатор, оказывает прямое кардиотоническое действие и сосудорасширяющий эффект за счет влияния на синтез простациклинов, снижает агрегацию тромбоцитов, замедляет гипергликемический апоптоз эндотелиоцитов. Таурин также входит в состав основного компонента желчи, где осуществляет конъюгацию желчных кислот, предотвращая холестаз. Из литературных данных также известно о мембраностабилизирующем и антиоксидантном действии таурина [Lourenco R., Camilo M.E. Taurine: a conditionally essential amino acid in humans? An overview in health and disease. Nutr. Hosp., 2002. - V.17 (6). - P.262-270].Taurine is a modulator of a large number of physiological processes in the body, takes part in the synthesis of other amino acids, the metabolism of sodium, potassium, calcium and magnesium. It also acts as a neurotransmitter, has a direct cardiotonic effect and a vasodilating effect due to the effect on the synthesis of prostacyclins, reduces platelet aggregation, slows down hyperglycemic apoptosis of endotheliocytes. Taurine is also part of the main component of bile, where it conjugates bile acids, preventing cholestasis. From the literature data it is also known about the membrane-stabilizing and antioxidant effects of taurine [Lourenco R., Camilo M.E. Taurine: a conditionally essential amino acid in humans? An overview in health and disease. Nutr. Hosp., 2002 .-- V.17 (6). - P.262-270].

Задачей изобретения является расширение спектра терапевтического действия потенциального лекарственного средства. Она решается применением конъюгата (I) гепарина с 2-аминоэтансульфоновой кислотой (таурином) в качестве антикоагулянтного средства с противовоспалительной и противоопухолевой активностью.The objective of the invention is to expand the therapeutic spectrum of a potential drug. It is solved by the use of conjugate (I) of heparin with 2-aminoethanesulfonic acid (taurine) as an anticoagulant with anti-inflammatory and antitumor activity.

Конъюгат (I) и способ его получения известны. Гепарин извлекают из фармакопейного препарата путем осаждения в этанол (содержание серы - 13.9-14.6%, соотношение сахаридных звеньев с NHSO3H и NHAc-группами - 70-80/20-30). Конъюгат (I) синтезируют по приведенной в работе методике, заключающейся в реакции гепарина (II) с таурином III в водной среде в присутствии 1-этил-3-[3-(диметиламино)пропил]карбодиимида (КДИ) как конденсирующего реагента, рН 4.7-4.8, Т 20-25°С, 1 ч, соотношение реагентов (II):(III):КДИ=1:1.5:5 (Пат. РФ № 2298406). Содержание остатков таурина в конъюгате (I) ~50% мол. в расчете на дисахаридное звено.Conjugate (I) and a method for its preparation are known. Heparin is extracted from the pharmacopoeial preparation by precipitation into ethanol (sulfur content - 13.9-14.6%, the ratio of saccharide units to NHSO 3 H and NHAc groups - 70-80 / 20-30). The conjugate (I) is synthesized according to the method described in the reaction consisting in the reaction of heparin (II) with taurine III in an aqueous medium in the presence of 1-ethyl-3- [3- (dimethylamino) propyl] carbodiimide (CDI) as a condensing reagent, pH 4.7 -4.8, T 20-25 ° C, 1 h, the ratio of reagents (II) :( III): CDI = 1: 1.5: 5 (US Pat. RF No. 2298406). The content of taurine residues in the conjugate (I) is ~ 50 mol%. calculated on the disaccharide link.

Аналогом заявленного соединения по антикоагулянтному действию является фармакопейный гепарин [Машковский М.Д. Лекарственные средства. - M.: Новая волна, 2006. С.475-477].An analogue of the claimed compounds for anticoagulant action is pharmacopoeial heparin [Mashkovsky M.D. Medicines - M .: New Wave, 2006. S. 475-477].

Биологическая активность соединения (I) изучалась путем определения противосвертывающего, противовоспалительного и противоопухолевого действия. В качестве препарата сравнения с антикоагулянтным действием брали фармакопейный гепарин (5000 ЕД в 1 мл; ОАО "Синтез"). Референсным препаратом с противовоспалительным эффектом являлся ибупрофен (таблетки в оболочке по 0.2 г, ОАО "Татхимфармпрепараты"). В качестве эталона противоопухолевого действия использовали стандартную схему полихимиотерапии АСОР (циклофосфан, доксорубицин, винкристин и преднизолон) [Гершанович М.Л., Филов В.А., Акимов М.А., Акимов А.А. Введение в фармакотерапию злокачественных опухолей - СПб.: Сотис, 1999. С.105]. Статистическую обработку данных проводили методами параметрической статистики с использованием пакета программ "Statistika 6.0". Результаты считали достоверными при р<0,05 по критерию Стьюдента.The biological activity of compound (I) was studied by determining the anticoagulant, anti-inflammatory and antitumor effects. As a comparison drug with anticoagulant action, pharmacopoeial heparin (5000 IU in 1 ml; OJSC "Synthesis") was taken. The reference drug with an anti-inflammatory effect was ibuprofen (0.2 g coated tablets, OAO Tatkhimpharmpreparaty). As a standard for antitumor activity, the standard ACOP polychemotherapy regimen (cyclophosphamide, doxorubicin, vincristine and prednisolone) was used [M. Gershanovich, V. Filov, M. A. Akimov, A. A. Akimov. Introduction to the pharmacotherapy of malignant tumors - St. Petersburg: Sotis, 1999. P.105]. Statistical data processing was performed using parametric statistics methods using the Statistika 6.0 software package. The results were considered reliable at p <0.05 by student criterion.

Антикоагулянтную активность соединения (I) определяли через 20 мин после его внутрибрюшинного введения (доза 50 мг/кг) путем определения протромбинового времени по стандартной методике с использованием набора реактивов "Техпластин-тест" ("Технология-стандарт") и коагулометра "clot 1A" ("Hospitex"). Препарат сравнения - гепарин - вводили аналогичным способом в дозах 5 и 50 мг/кг. Контрольным животным вводили эквивалентный объем физиологического раствора. Установлено, что соединение I превосходит фармакопейный гепарин по противосвертывающей активности (таблица 1).The anticoagulant activity of compound (I) was determined 20 minutes after its intraperitoneal administration (dose of 50 mg / kg) by determining prothrombin time using a standard method using the Tehplastin-test reagent kit (Technology-Standard) and the clot 1A coagulometer ("Hospitex"). The comparison drug heparin was administered in a similar manner at doses of 5 and 50 mg / kg. The control animals were injected with an equivalent volume of saline. It was found that compound I is superior to pharmacopoeial heparin in anticoagulant activity (table 1).

Для определения противовоспалительной активности использовали стандартные модели воспаления, вызванного каррагенином и гистамином [Руководство по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологических веществ. М.: Ремедиум, 2000. С.240]. Соединение (I) вводили внутрибрюшинно в дозе 50 мг/кг. Препарат сравнения ибупрофен (таблетки в оболочке по 0,2 г, ОАО "Татхимфармпрепараты") вводили тем же способом в дозах 15 и 50 мг/кг. Противовоспалительный эффект оценивали по уменьшению, по сравнению с контролем, индекса отека, который рассчитывали в процентах как отношение разности здоровой и воспаленной лапы к массе здоровой. Результаты, полученные на обеих моделях, свидетельствуют о высокой противовоспалительной активности соединения I, сравнимой с активностью ибупрофена (таблицы 2, 3).To determine the anti-inflammatory activity, standard models of inflammation caused by carrageenin and histamine were used [Guide to the experimental (preclinical) study of new pharmacological substances. M .: Remedium, 2000. P.240]. Compound (I) was administered intraperitoneally at a dose of 50 mg / kg. The ibuprofen reference drug (0.2 g coated tablets, Tatkhimpharmpreparat OJSC) was administered in the same manner at doses of 15 and 50 mg / kg. The anti-inflammatory effect was evaluated by reducing, compared with the control, the edema index, which was calculated as a percentage as the ratio of the difference between a healthy and inflamed paw to a healthy mass. The results obtained in both models indicate a high anti-inflammatory activity of compound I, comparable with the activity of ibuprofen (tables 2, 3).

Исследование противоопухолевой активности проводили на мышах с перевиваемой карциномой легких Льюис. Соединение I вводили однократно внутрибрюшинно в дозе 50 мг/кг в растворе 0,9% хлорида натрия с эмульгатором Tween 80. Группе сравнения вводили однократно парентерально комплекс противоопухолевых препаратов (доксорубицин, циклофосфан, винкристин, преднизолон), контрольным мышам - раствор 0,9% хлорида натрия с эмульгатором Tween 80. Противоопухолевый эффект определяли по динамике изменения объема первичных узлов, а также по индексу торможения роста опухоли, который определяли как отношение разности массы опухоли в контрольной и опытной группах к массе опухоли в контроле. Установлено, что соединение I обладает значимой противоопухолевой активностью, сравнимой с эффектом противоопухолевых препаратов, применяемых по схеме АСОР (таблицы 4, 5).A study of antitumor activity was performed in mice with transplantable Lewis lung carcinoma. Compound I was administered once intraperitoneally at a dose of 50 mg / kg in a solution of 0.9% sodium chloride with a Tween 80 emulsifier. The control group was administered once a parenteral complex of anticancer drugs (doxorubicin, cyclophosphamide, vincristine, prednisolone), and 0.9% solution of control mice sodium chloride with Tween 80 emulsifier. The antitumor effect was determined by the dynamics of changes in the volume of the primary nodes, as well as by the tumor growth inhibition index, which was determined as the ratio of the difference in tumor mass in the control and experimental groups to ma Behold the tumor in the control group. It was found that compound I has significant antitumor activity comparable to the effect of antitumor drugs used according to the ACOP scheme (tables 4, 5).

Таким образом, новое соединение - конъюгат гепарина с таурином формулы (I) - можно рассматривать как перспективный антикоагулянтный агент, обладающий противовоспалительным и противоопухолевым свойствами.Thus, the new compound - the conjugate of heparin with taurine of the formula (I) - can be considered as a promising anticoagulant agent with anti-inflammatory and antitumor properties.

Данное изобретение иллюстрируется примерами.The invention is illustrated by examples.

Пример 1. Исследование антикоагулянтного действия соединения I.Example 1. The study of the anticoagulant effect of compound I.

Эксперимент проводили на беспородных мышах массой 25-30 г (по 6 особей в группе). Соединение I вводили внутрибрюшинно в растворе 0,9% хлорида натрия с эмульгатором Tween 80 в дозе 50 мг/кг (молярная доля гепарина в соединении I - 39,4). Референсным препаратом являлся фармакопейный гепарин (раствор гепарина с активностью 5000 ЕД в 1 мл; ОАО "Синтез"), который вводили аналогично двум группам мышей в дозах 5 и 50 мг/кг (1 мг = 130 ЕД). Обе дозы лежат в интервале рекомендуемых терапевтических доз для человека (3340 и 33400 ЕД соответственно) [Машковский М.Д. Лекарственные средства. М.: Новая волна, 2006. С.475-477]. Раствор гепарина готовили путем разведения стандартного препарата физиологическим раствором до необходимой концентрации и вводили внутрибрюшинно по 0.2 мл/10 г массы. Контрольным животным вводили эквивалентный объем физиологического раствора с эмульгатором Tween 80. Через 20 мин после введения агентов животных умерщвляли путем мгновенной декапитации. Собранную кровь стабилизировали цитратом натрия (9:1), центрифугировали в течение 7 мин при 1000 об/мин. Полученную плазму повторно центрифугировали 15 мин при 3000 об/мин и определяли протромбиновое время с использованием набора реактивов "Техпластин-тест" ("Технология-стандарт") и коагулометра "clot 1А" ("Hospitex") по стандартной методике.The experiment was carried out on outbred mice weighing 25-30 g (6 animals per group). Compound I was administered intraperitoneally in a solution of 0.9% sodium chloride with Tween 80 emulsifier at a dose of 50 mg / kg (the molar fraction of heparin in compound I was 39.4). The reference drug was pharmacopoeial heparin (heparin solution with an activity of 5000 IU in 1 ml; Synthesis OJSC), which was administered analogously to two groups of mice at doses of 5 and 50 mg / kg (1 mg = 130 IU). Both doses are in the range of recommended therapeutic doses for humans (3340 and 33400 units, respectively) [Mashkovsky M.D. Medicines M.: New wave, 2006. S. 475-477]. A heparin solution was prepared by diluting the standard preparation with physiological saline to the required concentration and 0.2 ml / 10 g of mass was administered intraperitoneally. The control animals were injected with an equivalent volume of physiological saline with Tween 80 emulsifier. 20 minutes after the administration of the agents, the animals were killed by instant decapitation. The collected blood was stabilized with sodium citrate (9: 1), centrifuged for 7 min at 1000 rpm. The resulting plasma was re-centrifuged for 15 min at 3000 rpm and the prothrombin time was determined using the Techplastin-test reagent kit (Technology Standard) and the clot 1A coagulometer (Hospitex) according to the standard method.

В табл.1 приведены значения протромбинового времени, отражающие антикоагулянтные свойства агентов.Table 1 shows the values of prothrombin time reflecting the anticoagulant properties of agents.

Таблица 1Table 1 Влияние соединения I на время свертывания крови у мышейThe effect of compound I on blood clotting time in mice ГруппаGroup Протромбиновое время, сProthrombin time, s Соединение ICompound I 20,88**20.88 ** Гепарин 5 мг/кгHeparin 5 mg / kg 10,94*10.94 * Гепарин 50 мг/кгHeparin 50 mg / kg 16,20**16.20 ** КонтрольThe control 8,048.04 ** р<0.001; * р<0.01 относительно контроля** p <0.001; * p <0.01 relative to control

Сравнение данных показывает, что антикоагулянтная активность соединения I превышает эффект референс препарата в дозах 5 и 50 мг/кг соответственно в 2 и в 1.2 раза. Таким образом, соединение I превосходит фармакопейный гепарин по противосвертывающей активности.A comparison of the data shows that the anticoagulant activity of compound I exceeds the reference effect of the drug in doses of 5 and 50 mg / kg, respectively, 2 and 1.2 times. Thus, compound I is superior to pharmacopoeial heparin in anticoagulant activity.

Пример 2. Исследование противовоспалительного действия соединения I на каррагениновой модели воспаления.Example 2. The study of the anti-inflammatory effect of compound I on a carrageenan model of inflammation.

В опыте использовали 72 беспородных мышей самцов массой 22-28 г. Животных делили на 4 группы. Соединение I вводили внутрибрюшинно в дозе 50 мг/кг в растворе хлорида натрия 0,9% с эмульгатором Tween 80 (за три приема). В качестве референс препарата использовали противовоспалительный препарат ибупрофен (таблетки в оболочке по 0,2 г, ОАО "Татхимфармпрепараты") в дозах 15 и 50 мг/кг с аналогичным режимом введения. Доза 50 мг/кг является действующей дозой ибупрофена у мышей [Колла В.Э., Сыропятов Б.Я. Дозы лекарственных средств и химических соединений для лабораторных животных. М.: Медицина, 1998. С.52]. Контрольным животным вводили эквивалентный объем физиологического раствора.In the experiment, 72 outbred mice of males weighing 22-28 g were used. Animals were divided into 4 groups. Compound I was administered intraperitoneally at a dose of 50 mg / kg in a 0.9% sodium chloride solution with Tween 80 emulsifier (in three doses). The anti-inflammatory drug ibuprofen (0.2 g coated tablets, OAO Tatkhimpharmpreparaty) at doses of 15 and 50 mg / kg with a similar administration regimen was used as the reference drug. A dose of 50 mg / kg is the current dose of ibuprofen in mice [Koll V.E., Syropyatov B.Ya. Doses of drugs and chemical compounds for laboratory animals. M .: Medicine, 1998. S.52]. The control animals were injected with an equivalent volume of saline.

Через 1 час после первого введения агентов (1/3 часть дозы) всем мышам субпланарно в подушечку задней лапы вводили 1% водный раствор каррагенина (флогоген) в объеме 0.05 мл. Введение агентов повторяли дважды с интервалами 1 час. Через 3 часа после последнего введения животных умерщвляли путем кранио-цервикальной дислокации, отсекали задние лапы ниже голеностопного сустава и определяли массу каждой. На основании этих данных рассчитывали индекс отека, который определяли в процентах как отношение разности масс здоровой и воспаленной лапы к массе здоровой. Противовоспалительный эффект оценивали по разнице индексов отека в контрольной и опытной группах. Результаты представлены в табл.2.1 hour after the first injection of agents (1/3 of the dose), all mice were subplanarly injected with a 1% aqueous solution of carrageenin (phlogogen) in a volume of 0.05 ml into the paw pad of the hind paw. The administration of agents was repeated twice at 1 hour intervals. 3 hours after the last injection, the animals were euthanized by craniocervical dislocation, the hind legs were cut off below the ankle joint and the weight of each was determined. Based on these data, the edema index was calculated, which was determined as a percentage as the ratio of the mass difference between healthy and inflamed paws to healthy mass. The anti-inflammatory effect was evaluated by the difference in the edema indices in the control and experimental groups. The results are presented in table.2.

Figure 00000004
Figure 00000004

Как видно из таблицы, введение соединения I вызвало достоверное снижение каррагенинового отека лапы у мышей. Отмеченный антифлогогенный эффект (35%) был выше, чем у фармакопейного ибупрофена в дозе 15 мг/кг (18%) и приближался к эффекту референс препарата в дозе 50 мг/кг (43%), что свидетельствует о выраженном противовоспалительном действии соединения I.As can be seen from the table, the administration of compound I caused a significant decrease in carrageenin paw edema in mice. The marked antiflogogenic effect (35%) was higher than that of pharmacopoeial ibuprofen at a dose of 15 mg / kg (18%) and was close to the effect of the drug reference at a dose of 50 mg / kg (43%), which indicates a pronounced anti-inflammatory effect of compound I.

Пример 3. Исследование противовоспалительного действия соединения I на гистаминовой модели воспаления.Example 3. The study of the anti-inflammatory effect of compound I on the histamine model of inflammation.

Гистаминовую модель воспаления воспроизводили аналогично описанной выше каррагениновой модели [Руководство по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологических веществ. М.: Ремедиум. 2000. С.240]. В качестве флогогена использовали 0.1% водный раствор гистамина в объеме 0.05 мл.The histamine model of inflammation was reproduced similarly to the carrageenin model described above [Guide to the experimental (preclinical) study of new pharmacological substances. M .: Remedium. 2000. P.240]. A 0.1% aqueous solution of histamine in a volume of 0.05 ml was used as phlogogen.

В табл.3 приведены данные противовоспалительного эффекта агентов, полученные на гистаминовой модели.Table 3 shows the data on the anti-inflammatory effect of the agents obtained in the histamine model.

Figure 00000005
Figure 00000005

Сравнение данных показывает, что при воспалении, индуцированном гистамином, соединение I проявляет противовоспалительную активность, не уступающую эффекту референс препарата в действующей дозе 50 мг/кг (58% против 55%).Comparison of the data shows that with histamine-induced inflammation, compound I exhibits anti-inflammatory activity that is not inferior to the effect of the drug reference in the current dose of 50 mg / kg (58% versus 55%).

Пример 4. Исследование противоопухолевой активности соединения I на перевиваемой карциноме легких Льюис.Example 4. The study of the antitumor activity of compound I on transplantable Lewis lung carcinoma.

Мышам линии С57В 1/6 (30 шт.) производили внутримышечную перевивку суспензии 5×106 опухолевых клеток солидной карциномы легких Льюис в объеме 0.1 мл (перевивочный материал из коллекции опухолевых штаммов Института цитологии и генетики СО РАН). Соединение I вводили однократно внутрибрюшинно в дозе 50 мг/кг в растворе 0.9% хлорида натрия с эмульгатором Tween 80. Группе сравнения вводили однократно парентерально комплекс противоопухолевых препаратов по стандартной схеме АСОР: доксорубицин (4 мг/кг), циклофосфан (50 мг/кг), винкристин (0.1 мг/кг), преднизолон (5 мг/кг). Контрольным мышам - раствор 0.9% хлорида натрия с эмульгатором Tween 80.1/6 C57B mice (30 pcs.) Were intramuscularly inoculated with a suspension of 5 × 10 6 tumor cells of solid Lewis lung carcinoma in a volume of 0.1 ml (inoculation material from the collection of tumor strains of the Institute of Cytology and Genetics SB RAS). Compound I was administered once intraperitoneally at a dose of 50 mg / kg in a solution of 0.9% sodium chloride with a Tween 80 emulsifier. The comparison group was administered once parenterally the anticancer complex according to the standard ASOR scheme: doxorubicin (4 mg / kg), cyclophosphamide (50 mg / kg) , vincristine (0.1 mg / kg), prednisone (5 mg / kg). Control mice received a solution of 0.9% sodium chloride with Tween 80 emulsifier.

На 2-е, 3-й, 5-е, 7-е и 8-е сутки после введения определяли объем опухолей путем измерений размеров первичного узла по трем взаимно перпендикулярным направлениям. На 9-е сутки мышей умерщвляли дислокацией шейного отдела позвоночника и подсчитывали индекс торможения роста опухоли, который определяли как отношение разности массы опухоли в контрольной и опытной группах к массе опухоли в контроле.On the 2nd, 3rd, 5th, 7th and 8th day after administration, the volume of tumors was determined by measuring the size of the primary node in three mutually perpendicular directions. On the 9th day, mice were sacrificed by dislocation of the cervical spine and the tumor growth inhibition index was calculated, which was determined as the ratio of the difference in tumor mass in the control and experimental groups to the tumor mass in the control.

Изменение объемов трансплантатов карциномы легких Льюис под влиянием вводимых агентов показано в табл.4.The change in the volume of Lewis lung carcinoma grafts under the influence of the administered agents is shown in Table 4.

Figure 00000006
Figure 00000006

Установлено, что соединение I достоверно задерживало рост опухоли в течение 8 дней после введения. Величины индексов торможения роста опухоли для обеих групп, отражающие противоопухолевую активность, приведены в табл. 5.It was found that compound I significantly inhibited tumor growth for 8 days after administration. The values of the tumor growth inhibition indices for both groups, reflecting the antitumor activity, are given in table. 5.

Таблица 5Table 5 Значения индексов торможения роста опухоли в опытной и референсной группахTumor growth inhibition indices in the experimental and reference groups ГруппаGroup Торможение роста опухоли, %Inhibition of tumor growth,% 2 сут2 days 3 сут3 days 5 сут5 days 7 сут7 days 8 сут8 days Соединение ICompound I 4242 3636 2121 2323 2626 АСОРASOR 3939 3434 3535 4040 3434

Данные табл.5 показывают, что соединение I при однократном парентеральном введении в дозе 50 мг/кг проявляет заметное противоопухолевое действие, сравнимое с действием противоопухолевых препаратов, применяемых по схеме АСОР. Таким образом, показано, что соединение I обладает противоопухолевой активностью.The data in Table 5 show that, with a single parenteral administration at a dose of 50 mg / kg, it exhibits a noticeable antitumor effect, comparable to the action of antitumor drugs used according to the ACOP scheme. Thus, it was shown that compound I has antitumor activity.

Claims (1)

Применение конъюгата гепарина с 2-аминоэтансульфоновой кислотой формулы
Figure 00000007

в качестве антикоагулянтного средства с противовоспалительной и противоопухолевой активностью.
The use of a conjugate of heparin with 2-aminoethanesulfonic acid of the formula
Figure 00000007

as an anticoagulant with anti-inflammatory and antitumor activity.
RU2009107800/15A 2009-03-04 2009-03-04 Anti-inflammatory and antineoplastic anticoagulant RU2408379C2 (en)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
RU2009107800/15A RU2408379C2 (en) 2009-03-04 2009-03-04 Anti-inflammatory and antineoplastic anticoagulant

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
RU2009107800/15A RU2408379C2 (en) 2009-03-04 2009-03-04 Anti-inflammatory and antineoplastic anticoagulant

Publications (2)

Publication Number Publication Date
RU2009107800A RU2009107800A (en) 2010-09-10
RU2408379C2 true RU2408379C2 (en) 2011-01-10

Family

ID=42800153

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
RU2009107800/15A RU2408379C2 (en) 2009-03-04 2009-03-04 Anti-inflammatory and antineoplastic anticoagulant

Country Status (1)

Country Link
RU (1) RU2408379C2 (en)

Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4727063A (en) * 1982-12-28 1988-02-23 Sclavo Depolymerized and supersulfated heparin, process for its preparation and pharmaceutical compositions
EP1731131A1 (en) * 2004-03-29 2006-12-13 Kringle Pharma Inc. Hgf production accelerator containing heparin-like oligosaccharide
RU2298406C2 (en) * 2005-02-28 2007-05-10 Институт нефтехимии и катализа РАН Method for preparing heparin conjugates

Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4727063A (en) * 1982-12-28 1988-02-23 Sclavo Depolymerized and supersulfated heparin, process for its preparation and pharmaceutical compositions
EP1731131A1 (en) * 2004-03-29 2006-12-13 Kringle Pharma Inc. Hgf production accelerator containing heparin-like oligosaccharide
RU2298406C2 (en) * 2005-02-28 2007-05-10 Институт нефтехимии и катализа РАН Method for preparing heparin conjugates

Non-Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
[он-лайн] [найдено 2009-12-22]. Найдено из базы данных PAJ. *
МИХАЙЛОВ И.Б. Настольная книга врача по клинической фармакологии. - СПб.: Фолиант, 2001, с.404-408, 475. *

Also Published As

Publication number Publication date
RU2009107800A (en) 2010-09-10

Similar Documents

Publication Publication Date Title
US11433136B2 (en) Polyacetal polymers, conjugates, particles and uses thereof
Liang et al. Enzyme-assisted peptide folding, assembly and anti-cancer properties
Wilkinson et al. Inhibition of carbonic anhydrases with glycosyltriazole benzene sulfonamides
Wu et al. Self-assembled gemcitabine prodrug nanoparticles show enhanced efficacy against patient-derived pancreatic ductal adenocarcinoma
EP3941481B1 (en) Compositions comprising a phosphorus derivative of nicotinamide riboside and methods for modulation of nicotinamide adenine dinucleotide
Gomez-Garcia et al. Probing carbohydrate-lectin recognition in heterogeneous environments with monodisperse cyclodextrin-based glycoclusters
WO2017162108A1 (en) Pillararene complex, preparation method, pharmaceutical composition and use thereof
CN101940564A (en) Water-soluble coenzyme Q10 combination and preparation method thereof
CN114341148B (en) Anti-aging and anti-inflammatory prodrugs and methods of use thereof
US20220144880A1 (en) Compositions comprising a phosphorus derivative of nicotinamide riboside and methods for modulation of nicotinamide adenine dinucleotide
CN111840561B (en) Application of S100A9 inhibitor in the preparation of medicaments for the treatment of pancreatitis
Zhan et al. Construction of GSH-triggered cationic fluoropolymers as two-in-one nanoplatforms for combined chemo-gene therapy
CN101428016B (en) Uses of di-indole methyl hydride and its derivant in treating rheumatoid arthritis
CN110054660A (en) A kind of preparation and application of the breast cancer targeting lipids material of fructose modification
CN111205231B (en) Lead compound as ANKRD22 inhibitor and application thereof
RU2408379C2 (en) Anti-inflammatory and antineoplastic anticoagulant
WO1988000048A1 (en) Drug for prophylaxis and treatment of hepatopathy
CN104666247A (en) Heparin-modified cleavable adriamycin liposome preparation and preparation method thereof
Zhao et al. Responsive calcium-derived nanoassemblies induce mitochondrial disorder to promote tumor calcification
CN101926788B (en) Cardiovascular/cerebral and ophthalmological medicines, and preparation and use thereof
Oiry et al. Synthesis and in vitro anti-HIV activity in human monocyte-derived macrophages of 2-oxothiazolidine-4 (R)-carboxylic acid derivatives
ES2237683T3 (en) MEDICINAL PRODUCT, CONTAINING AN EFFECT OF GLUTATION METABOLISM TOGETHER WITH ALPHA-LIPOIC ACID IN THE SUBSTITUTIVE THERAPY OF THE KIDNEY.
Hao et al. Platinum twin and triplet drugs improve chemoimmunotherapy
Chen et al. A novel multifunctional nanoparticles formed by molecular recognition between AS1411 aptamer and redox-responsive paclitaxel-nucleoside analogue prodrug for combination treatment of β-lapachone and paclitaxel
De La Cruz et al. Click, release, and fluoresce: in-vivo generation of CO with concomitant synthesis of a fluorescent reporter

Legal Events

Date Code Title Description
MM4A The patent is invalid due to non-payment of fees

Effective date: 20110305