RU2268933C1 - ШТАММ Haemophilus parasuis СК-1 - ВОЗБУДИТЕЛЬ ГЕМОФИЛЕЗНОГО ПОЛИСЕРОЗИТА СВИНЕЙ ДЛЯ ИЗГОТОВЛЕНИЯ ДИАГНОСТИЧЕСКИХ И ВАКЦИННЫХ ПРЕПАРАТОВ - Google Patents
ШТАММ Haemophilus parasuis СК-1 - ВОЗБУДИТЕЛЬ ГЕМОФИЛЕЗНОГО ПОЛИСЕРОЗИТА СВИНЕЙ ДЛЯ ИЗГОТОВЛЕНИЯ ДИАГНОСТИЧЕСКИХ И ВАКЦИННЫХ ПРЕПАРАТОВ Download PDFInfo
- Publication number
- RU2268933C1 RU2268933C1 RU2004111867/13A RU2004111867A RU2268933C1 RU 2268933 C1 RU2268933 C1 RU 2268933C1 RU 2004111867/13 A RU2004111867/13 A RU 2004111867/13A RU 2004111867 A RU2004111867 A RU 2004111867A RU 2268933 C1 RU2268933 C1 RU 2268933C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- strain
- vaccine
- parasuis
- gps
- polyserositis
- Prior art date
Links
- 229960005486 vaccine Drugs 0.000 title claims abstract description 56
- 241000606807 Glaesserella parasuis Species 0.000 title claims abstract description 33
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 title claims abstract description 8
- 206010036141 Polyserositis Diseases 0.000 title claims description 12
- 230000001717 pathogenic effect Effects 0.000 title description 4
- 241000282898 Sus scrofa Species 0.000 title description 2
- 108010054404 Adenylyl-sulfate kinase Proteins 0.000 title 1
- 102100039024 Sphingosine kinase 1 Human genes 0.000 title 1
- 244000052769 pathogen Species 0.000 title 1
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims description 25
- 231100000676 disease causative agent Toxicity 0.000 claims description 22
- 241000606790 Haemophilus Species 0.000 claims description 2
- 241000606752 Pasteurellaceae Species 0.000 claims description 2
- 230000036403 neuro physiology Effects 0.000 claims 1
- 230000001755 vocal effect Effects 0.000 claims 1
- 230000002163 immunogen Effects 0.000 abstract description 18
- 230000002779 inactivation Effects 0.000 abstract description 12
- 230000000890 antigenic effect Effects 0.000 abstract description 11
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 abstract description 8
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 abstract description 7
- 239000008272 agar Substances 0.000 abstract description 7
- 239000007788 liquid Substances 0.000 abstract description 6
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 abstract description 4
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 abstract description 4
- 244000005700 microbiome Species 0.000 abstract description 4
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 3
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract description 3
- 238000003860 storage Methods 0.000 abstract description 2
- 238000012258 culturing Methods 0.000 abstract 1
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 24
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 18
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 16
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 14
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 14
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 14
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 12
- 239000000839 emulsion Substances 0.000 description 12
- 229940031551 inactivated vaccine Drugs 0.000 description 12
- 241000282887 Suidae Species 0.000 description 10
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 10
- 241000700198 Cavia Species 0.000 description 9
- 238000005303 weighing Methods 0.000 description 9
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 8
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 8
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 7
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 7
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 7
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 7
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 7
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 7
- 230000036512 infertility Effects 0.000 description 6
- 238000002255 vaccination Methods 0.000 description 6
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 5
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 description 5
- 230000000721 bacterilogical effect Effects 0.000 description 5
- 229940041514 candida albicans extract Drugs 0.000 description 5
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 5
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 5
- 239000003102 growth factor Substances 0.000 description 5
- 230000003053 immunization Effects 0.000 description 5
- 238000002649 immunization Methods 0.000 description 5
- 239000000463 material Substances 0.000 description 5
- 230000001575 pathological effect Effects 0.000 description 5
- 239000012138 yeast extract Substances 0.000 description 5
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 4
- 206010034107 Pasteurella infections Diseases 0.000 description 4
- 206010035664 Pneumonia Diseases 0.000 description 4
- 206010039438 Salmonella Infections Diseases 0.000 description 4
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 4
- 238000000034 method Methods 0.000 description 4
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 4
- 201000005115 pasteurellosis Diseases 0.000 description 4
- 238000011321 prophylaxis Methods 0.000 description 4
- 206010039447 salmonellosis Diseases 0.000 description 4
- 241000606748 Actinobacillus pleuropneumoniae Species 0.000 description 3
- 238000009631 Broth culture Methods 0.000 description 3
- 108010014172 Factor V Proteins 0.000 description 3
- XJLXINKUBYWONI-NNYOXOHSSA-O NADP(+) Chemical compound NC(=O)C1=CC=C[N+]([C@H]2[C@@H]([C@H](O)[C@@H](COP(O)(=O)OP(O)(=O)OC[C@@H]3[C@H]([C@@H](OP(O)(O)=O)[C@@H](O3)N3C4=NC=NC(N)=C4N=C3)O)O2)O)=C1 XJLXINKUBYWONI-NNYOXOHSSA-O 0.000 description 3
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 3
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 3
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 3
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 3
- BTIJJDXEELBZFS-QDUVMHSLSA-K hemin Chemical compound CC1=C(CCC(O)=O)C(C=C2C(CCC(O)=O)=C(C)\C(N2[Fe](Cl)N23)=C\4)=N\C1=C/C2=C(C)C(C=C)=C3\C=C/1C(C)=C(C=C)C/4=N\1 BTIJJDXEELBZFS-QDUVMHSLSA-K 0.000 description 3
- 229940025294 hemin Drugs 0.000 description 3
- 230000036039 immunity Effects 0.000 description 3
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 3
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 3
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 3
- 210000000689 upper leg Anatomy 0.000 description 3
- 241000606750 Actinobacillus Species 0.000 description 2
- 208000035473 Communicable disease Diseases 0.000 description 2
- WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N Formaldehyde Chemical compound O=C WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- SIKJAQJRHWYJAI-UHFFFAOYSA-N Indole Chemical compound C1=CC=C2NC=CC2=C1 SIKJAQJRHWYJAI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000606856 Pasteurella multocida Species 0.000 description 2
- 230000004523 agglutinating effect Effects 0.000 description 2
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 2
- 239000002775 capsule Substances 0.000 description 2
- 238000011161 development Methods 0.000 description 2
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 2
- 210000002216 heart Anatomy 0.000 description 2
- 230000000521 hyperimmunizing effect Effects 0.000 description 2
- 231100000636 lethal dose Toxicity 0.000 description 2
- 230000000877 morphologic effect Effects 0.000 description 2
- 229950006238 nadide Drugs 0.000 description 2
- 230000007918 pathogenicity Effects 0.000 description 2
- 201000006509 pleuropneumonia Diseases 0.000 description 2
- 230000002265 prevention Effects 0.000 description 2
- 238000011160 research Methods 0.000 description 2
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 2
- GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N Alpha-Lactose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](CO)O[C@H](O)[C@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N 0.000 description 1
- NOWKCMXCCJGMRR-UHFFFAOYSA-N Aziridine Chemical class C1CN1 NOWKCMXCCJGMRR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000035143 Bacterial infection Diseases 0.000 description 1
- 102000016938 Catalase Human genes 0.000 description 1
- 108010053835 Catalase Proteins 0.000 description 1
- 208000003322 Coinfection Diseases 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N D-Glucitol Natural products OC[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N D-Mannitol Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-JGWLITMVSA-N D-glucitol Chemical compound OC[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-JGWLITMVSA-N 0.000 description 1
- RWSOTUBLDIXVET-UHFFFAOYSA-N Dihydrogen sulfide Chemical compound S RWSOTUBLDIXVET-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 1
- 101000576973 Homo sapiens Mitochondrial-processing peptidase subunit beta Proteins 0.000 description 1
- 206010061218 Inflammation Diseases 0.000 description 1
- AHLPHDHHMVZTML-BYPYZUCNSA-N L-Ornithine Chemical compound NCCC[C@H](N)C(O)=O AHLPHDHHMVZTML-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 1
- KDXKERNSBIXSRK-YFKPBYRVSA-N L-lysine Chemical compound NCCCC[C@H](N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N Lactose Natural products OC[C@H]1O[C@@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)C(O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N 0.000 description 1
- 206010024769 Local reaction Diseases 0.000 description 1
- 239000004472 Lysine Substances 0.000 description 1
- KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N Lysine Natural products NCCCCC(N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229930195725 Mannitol Natural products 0.000 description 1
- 102100025298 Mitochondrial-processing peptidase subunit beta Human genes 0.000 description 1
- 241000204031 Mycoplasma Species 0.000 description 1
- BAWFJGJZGIEFAR-NNYOXOHSSA-N NAD zwitterion Chemical compound NC(=O)C1=CC=C[N+]([C@H]2[C@@H]([C@H](O)[C@@H](COP([O-])(=O)OP(O)(=O)OC[C@@H]3[C@H]([C@@H](O)[C@@H](O3)N3C4=NC=NC(N)=C4N=C3)O)O2)O)=C1 BAWFJGJZGIEFAR-NNYOXOHSSA-N 0.000 description 1
- AHLPHDHHMVZTML-UHFFFAOYSA-N Orn-delta-NH2 Natural products NCCCC(N)C(O)=O AHLPHDHHMVZTML-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- UTJLXEIPEHZYQJ-UHFFFAOYSA-N Ornithine Natural products OC(=O)C(C)CCCN UTJLXEIPEHZYQJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000004316 Oxidoreductases Human genes 0.000 description 1
- 108090000854 Oxidoreductases Proteins 0.000 description 1
- 239000004793 Polystyrene Substances 0.000 description 1
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 1
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 1
- 108010046334 Urease Proteins 0.000 description 1
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 1
- 239000013543 active substance Substances 0.000 description 1
- 230000004520 agglutination Effects 0.000 description 1
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 description 1
- 230000002421 anti-septic effect Effects 0.000 description 1
- 229940088710 antibiotic agent Drugs 0.000 description 1
- 229940064004 antiseptic throat preparations Drugs 0.000 description 1
- 238000004500 asepsis Methods 0.000 description 1
- 208000022362 bacterial infectious disease Diseases 0.000 description 1
- 244000052616 bacterial pathogen Species 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N beta-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N 0.000 description 1
- 230000036760 body temperature Effects 0.000 description 1
- 150000001720 carbohydrates Chemical class 0.000 description 1
- 235000014633 carbohydrates Nutrition 0.000 description 1
- 239000006285 cell suspension Substances 0.000 description 1
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 1
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 1
- 238000002512 chemotherapy Methods 0.000 description 1
- 239000007330 chocolate agar Substances 0.000 description 1
- 230000001332 colony forming effect Effects 0.000 description 1
- 238000011109 contamination Methods 0.000 description 1
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 1
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 1
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 description 1
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 description 1
- 230000002964 excitative effect Effects 0.000 description 1
- 230000029142 excretion Effects 0.000 description 1
- 238000004299 exfoliation Methods 0.000 description 1
- 210000000416 exudates and transudate Anatomy 0.000 description 1
- 238000009313 farming Methods 0.000 description 1
- 238000000855 fermentation Methods 0.000 description 1
- 230000004151 fermentation Effects 0.000 description 1
- 230000002538 fungal effect Effects 0.000 description 1
- 239000007789 gas Substances 0.000 description 1
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 1
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 1
- 229910000037 hydrogen sulfide Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000005847 immunogenicity Effects 0.000 description 1
- 239000012535 impurity Substances 0.000 description 1
- PZOUSPYUWWUPPK-UHFFFAOYSA-N indole Natural products CC1=CC=CC2=C1C=CN2 PZOUSPYUWWUPPK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- RKJUIXBNRJVNHR-UHFFFAOYSA-N indolenine Natural products C1=CC=C2CC=NC2=C1 RKJUIXBNRJVNHR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000004054 inflammatory process Effects 0.000 description 1
- 238000011081 inoculation Methods 0.000 description 1
- 238000007912 intraperitoneal administration Methods 0.000 description 1
- 210000001503 joint Anatomy 0.000 description 1
- 238000003771 laboratory diagnosis Methods 0.000 description 1
- 239000008101 lactose Substances 0.000 description 1
- 230000002045 lasting effect Effects 0.000 description 1
- 210000004072 lung Anatomy 0.000 description 1
- 239000006166 lysate Substances 0.000 description 1
- 239000000594 mannitol Substances 0.000 description 1
- 235000010355 mannitol Nutrition 0.000 description 1
- 238000012768 mass vaccination Methods 0.000 description 1
- 210000005015 mediastinal lymph node Anatomy 0.000 description 1
- 210000002418 meninge Anatomy 0.000 description 1
- 230000000813 microbial effect Effects 0.000 description 1
- 244000000010 microbial pathogen Species 0.000 description 1
- 244000005706 microflora Species 0.000 description 1
- 239000002480 mineral oil Substances 0.000 description 1
- 235000010446 mineral oil Nutrition 0.000 description 1
- 210000004400 mucous membrane Anatomy 0.000 description 1
- 239000013642 negative control Substances 0.000 description 1
- 229930027945 nicotinamide-adenine dinucleotide Natural products 0.000 description 1
- 229960003104 ornithine Drugs 0.000 description 1
- 231100000255 pathogenic effect Toxicity 0.000 description 1
- 210000003516 pericardium Anatomy 0.000 description 1
- 210000004303 peritoneum Anatomy 0.000 description 1
- 238000007747 plating Methods 0.000 description 1
- 210000004224 pleura Anatomy 0.000 description 1
- 238000003752 polymerase chain reaction Methods 0.000 description 1
- 229920002223 polystyrene Polymers 0.000 description 1
- 235000015277 pork Nutrition 0.000 description 1
- 239000013641 positive control Substances 0.000 description 1
- 230000000069 prophylactic effect Effects 0.000 description 1
- 238000001303 quality assessment method Methods 0.000 description 1
- 210000002345 respiratory system Anatomy 0.000 description 1
- 230000000405 serological effect Effects 0.000 description 1
- 210000002151 serous membrane Anatomy 0.000 description 1
- 230000000392 somatic effect Effects 0.000 description 1
- 239000000600 sorbitol Substances 0.000 description 1
- 238000009331 sowing Methods 0.000 description 1
- 241000894007 species Species 0.000 description 1
- 210000000952 spleen Anatomy 0.000 description 1
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 1
- 210000000115 thoracic cavity Anatomy 0.000 description 1
- 238000011282 treatment Methods 0.000 description 1
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 description 1
- 230000001018 virulence Effects 0.000 description 1
- 210000001835 viscera Anatomy 0.000 description 1
- 239000002569 water oil cream Substances 0.000 description 1
Landscapes
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
Abstract
Изобретение относится к ветеринарной микробиологии и биотехнологии. Штамм депонирован в коллекции штаммов микроорганизмов ФГУ ВГНКИ под регистрационным номером Haemophilus parasuis СК-1-ДЕП. Штамм является вирулентным в нативном виде и обладает антигенной и иммуногенной активностью после инактивации. При выращивании на жидкой питательной среде на основе бульона PPLO в течение 12 часов штамм накапливается в титре 9,3-9,7 Ig КОЕ/см3. Штамм сохраняет свои свойства при хранении в полужидком агаре при 4-6°С в течение месяца, а в лиофилизированном состоянии при 4-6°С в течение 1 года. Штамм обладает высокой биологической, антигенной и иммуногенной активностью, сохраняет свои нативные иммунобиологические свойства после инактивации и пригодные для изготовления высокоэффективных диагностических и вакцинных препаратов. 4 табл.
Description
Изобретение относится к области ветеринарной микробиологии и биотехнологии и может быть использовано при разработке и изготовлении средств диагностики и специфической профилактики гемофилезного полисерозита свиней (ГПС).
В настоящее время под влиянием массовой вакцинации животных, применения химиопрепаратов, антибиотиков и других веществ, приведших к нарушению биоценоза, существенно изменилась не только этиологическая структура инфекционных заболеваний, но и роль различных серовариантов в их возникновении и развитии. В результате все более широкое распространение получают условно-патогенные микроорганизмы, болезнетворное действие которых ранее игнорировалось или рассматривалось как эксвизитное. Среди этих болезней определенное место занимает ГПС (болезнь Глессера), который регистрируется преимущественно у поросят отъемного возраста.
ГПС - инфекционная болезнь, характеризующаяся серозно-фибринозным воспалением перикарда, плевры, брюшины, суставов и мозговых оболочек. Возбудителем этого заболевания являются гемофильные бактерии Haemophilus parasuis (H.parasuis), представляющие собой мелкие 0,5×0,2-0,3 мкм полиморфные грамотрицательные не образующие спор палочки. Они являются постоянными обитателями слизистых оболочек верхних дыхательных путей многих видов животных. Вирулентные штаммы H.parasuis образуют капсулу. В мазках H.parasuis располагаются в виде палочек и коротких цепочек. Растут в аэробных условиях на питательных средах с добавлением дрожжевого экстракта, сыворотки крови или лизата цельной крови, а также на шоколадном агаре. Серологически различают 15 сероваров по соматическому антигену и 5 серогрупп (А, В, С, D, N) по капсульному. Самыми вирулентными и распространенными в Европе и Северной Америке являются серовары №1, 2, 4, 5 и 7. Несколько реже встречаются серовары №3, 12, 13 и 14.
Источником ГПС служат больные и переболевшие поросята, а также свиноматки-бактерионосители. Заражение ГПС происходит, в основном, аэрогенным путем. Важную роль в возникновении ГПС играют иммунологический фон у поросят, предшествующее переболевание вирусными болезнями, а также различные факторы, снижающие общую резистентность организма животных. Часто ГПС протекает в виде смешанной инфекции с энзоотической пневмонией и другими микоплазмозами.
Диагноз на ГПС ставят на основании эпизоотологических, клинических, патологоанатомических данных и результатов лабораторных исследований [1-13].
ГПС имеет широкое распространение во многих странах с развитым свиноводством и наносит отрасли значительный экономический ущерб.
С 2000 по 2003 гг. выполнена работа по мониторингу бактериальных инфекций поросят на территории Российской Федерации. Проведено обследование 19 хозяйств в 11 регионах России. Бактериологически обследовали 2346 образцов патологического материала от 391 головы павших и вынужденно убитых поросят в возрасте от 1 сут до 5 мес. H.parasuis и Actinobacillus pleuropneumonie изолировали из 1,35% проб патологического материала. Несмотря на незначительный процент выделения возбудителей ГПС и актинобациллезной плевропневмонии, в некоторых обследованных хозяйствах отход поросят отъемного возраста от этих заболеваний достигал 22,8% к общему числу павших отъемышей. Лечение больных гемофилезным полисерозитом поросят с помощью лекарственных средств экономически себя не оправдало, поскольку переболевшие животные резко отставали в росте и погибали в более поздние сроки от образования фибринозных спаек между серозными оболочками внутренних органов [14].
По этой причине вакцинопрофилактика ГПС занимает ведущее место в комплексе противоэпизоотических мер, направленных на борьбу с этим заболеванием. Для профилактики ГПС используют инактивированные вакцины, полученные из вирулентных штаммов гемофил, подвергнутых инактивации с помощью различных химических препаратов.
Известен штамм H.parasuis неустановленного серотипа - возбудитель ГПС для изготовления инактивированной вакцины [15].
Известен штамм H.parasuis неустановленного серотипа - возбудитель ГПС для изготовления инактивированной вакцины [16].
Известен штамм H.parasuis неустановленного серотипа - возбудитель ГПС для изготовления инактивированной вакцины [17].
Известен штамм H.parasuis серотипа А - возбудитель ГПС для изготовления инактивированной вакцины [18].
Известен штамм H.parasuis серотипа D - возбудитель ГПС для изготовления инактивированной вакцины [18].
Известен штамм H.parasuis НТ серотипа D - возбудитель ГПС для изготовления инактивированной вакцины [19].
Известен штамм H.parasuis серотипа А - возбудитель ГПС для изготовления инактивированной вакцины [20].
Известен штамм H.parasuis серотипа С - возбудитель ГПС для изготовления инактивированной вакцины [20].
Известен штамм H.parasuis серотипа «DB-28» - возбудитель ГПС для изготовления инактивированной вакцины [21].
Известен штамм H.parasuis серотипа «DB-30» - возбудитель ГПС для изготовления инактивированной вакцины [21].
Общим недостатком известных штаммов является низкая противоэпизоотическая эффективность изготовленных на их основе вакцинных препаратов.
В связи с этим задача отбора и изучения эпизоотических изолятов возбудителя ГПС в целях получения новых производственных штаммов H.parasuis для изготовления диагностических и вакцинных препаратов остается актуальной.
В задачу создания настоящего изобретения входило получить новый производственный штамм H.parasuis - возбудитель ГПС, обладающий высокой биологической, антигенной и иммуногенной активностью, сохраняющий свои нативные иммунобиологические свойства после инактивации и пригодный для изготовления чувствительных и высокоспецифических диагностикумов и высокоиммуногенных вакцинных препаратов, способных защитить свиное поголовье от эпизоотического возбудителя ГПС, циркулирующего на территории Российской Федерации.
Технический результат от использования предлагаемого изобретения заключается в расширении арсенала штаммов H.parasuis - возбудителей ГПС, обладающих высокой биологической, антигенной и иммуногенной активностью, сохраняющих свои нативные иммунобиологические свойства после инактивации и пригодных для изготовления высокоэффективных диагностических и вакцинных препаратов.
Указанный технический результат достигнут получением штамма H.parasuis СК-1 (авторское наименование «штамм «СК-1») - возбудителя ГПС. Штамм является новым, ранее неизвестным.
Исходная культура для получения штамма «СК-1» была выделена из патологического материала вынужденно убитых поросят в возрасте 45 суток с признаками ГПС, поступивших из ЗАО «Северный ключ» Самарской области.
Полученный штамм депонирован во Всероссийской государственной коллекции штаммов микроорганизмов, используемых в ветеринарии и животноводстве, Федерального государственного учреждения «Всероссийский государственный центр качества и стандартизации лекарственных средств для животных и кормов» (ФГУ ВГНКИ) МСХ РФ 6 января 2004 года под регистрационным номером Haemophilus parasuis СК-1-ДЕП.
Штамм «СК-1» обладает высокой антигенной и иммуногенной активностью. Экспериментально подтверждена возможность его использования для изготовления инактивированной эмульсионной вакцины против ГПС, создающей напряженный и продолжительный иммунитет у вакцинированных животных.
Штамм «СК-1» характеризуется следующими признаками и свойствами.
Происхождение штамма
Штамм «СК-1» относится к виду Haemophilus parasuis (семейство Pasteurellaceae, род Haemophilus).
Выделен в лаборатории микробиологии ФГУ ВНИИЗЖ в ноябре 2002 г. от больных гемофилезным полисерозитом поросят в возрасте 45 суток.
Морфологические свойства
Штамм «СК-1» обладает морфологическими признаками, характерными для данных микроорганизмов. Клетки штамма «СК-1» овальные, сферические или палочковидные, по размеру обычно менее 1 мкм в ширину и различные по длине, иногда образуют нити, обнаруживают заметный плеоморфизм, образуют капсулу, неподвижные.
При окраске по Граму клетки штамма «СК-1» окрашиваются отрицательно.
Культуральные свойства
Штамм «СК-1» растет на средах сложного состава только в присутствии фактора роста V (NAD - никотинамидадениндинуклеотид или NADP - никотинамидадениндинуклеотид-фосфат). Оптимальная температура 35-37°С.
При росте на жидкой питательной среде на основе бульона PPLO (для плевропневмониеподобных организмов) фирмы Difco, содержащей 10% свежеприготовленного дрожжевого экстракта (фактора роста V), в течение 24 часов штамм «СК-1» образует незначительное равномерное помутнение среды.
При росте на плотных питательных средах, изготовленных на основе бульона PPLO (фирма Difco) и содержащих 1,5% агара (фирма Difco) и 10% свежеприготовленного дрожжевого экстракта, штамм «СК-1» формирует характерный рост колоний H.parasuis: мелкие, диаметром 0,5-2 мм, круглые, выпуклые, с гладкой блестящей поверхностью колонии в «S» форме.
Ферментативные (биохимические) свойства
Штамм «СК-1» обладает биохимическими свойствами, характерными для вида H.parasuis, образует каталазу, оксидазу, не образует уреазу, сероводород и индол. Ферментирует без образования газа углеводы: глюкозу, сахарозу, лактозу, маннит; не ферментирует сорбит, лизин и орнитин.
Биотехнологическая характеристика
Штамм «СК-1» является вирулентным в нативном виде и обладает антигенной и иммуногенной активностью после инактивации.
Штамм «СК-1» предназначен для изготовления инактивированной вакцины против ГПС. При выращивании на жидкой питательной среде на основе бульона PPLO (фирма Difco), содержащей 10% свежеприготовленного дрожжевого экстракта (фактор роста V), в течение 12 часов штамм «СК-1» накапливается в титре 9,3-9,7 Ig колониеобразующих единиц в 1 см3 (КОЕ/см3).
Штамм «СК-1» сохраняет свои свойства при хранении в полужидком агаре при температуре 4-6°С в течение месяца, а в лиофилизированном состоянии при температуре 4-6°С в течение 1 года.
Патогенность
Штамм «СК-1» является патогенным для лабораторных и естественно-восприимчивых животных.
Внутрибрюшинное заражение морских свинок массой 300-350 г суспензией штамма «СК-1», содержащей 2 млрд. КОЕ/см3, вызывает заболевание животных через 2 суток, а через 3-5 суток - их гибель.
При заражении белых мышей массой 16-18 г разведениями суточных бульонных культур ЛД50 для штамма «СК-1» составила 398 млн. микробных клеток (м.к.).
При заражении белых мышей массой 16-18 г суспензией клеток штамма «СК-1», выращенного на плотной питательной среде, Ig ЛД50 штамма «СК-1» для белых мышей составляет 9,7 (5,01×109).
Серологические свойства
Штамм «СК-1» обладает агглютинирующей активностью в отношении антител переболевших или иммунизированных животных в реакции агглютинации (РА). При иммунизации лабораторных и естественно-восприимчивых животных формалинизированный цельноклеточный антиген штамма «СК-1» индуцирует образование специфических антител, выявляемых в РА, в разведении 1:200-1:3200.
Дополнительные признаки и свойства
Иммуногенная активность - 100%.
Патогенность - выражена.
Вирулентность - выражена.
Контагиозность - выражена.
Свободен от контаминации грибной микрофлорой, бактериями других видов и вирусами.
На основании полученных данных можно утверждать, что штамм «СК-1» по биохимическим, антигенным и иммуногенным свойствам является оригинальным, ранее неизвестным штаммом. Для снижения его эпизоотической опасности необходима своевременная профилактика вновь возникающих очагов болезни, а для этого необходима высокоактивная и безвредная вакцина.
По мнению заявителя, предлагаемый штамм обладает признаками патентоспособности «новизна» и « изобретательский уровень».
Сущность предлагаемого изобретения пояснена примерами его исполнения, которые не ограничивают его объем.
Пример 1.
Исходная культура для получения штамма «СК-1» была выделена из патологического материала (легкое, эксудат грудной полости, заглоточные и средостенные лимфоузлы, селезенка, сердце, кровь из сердца) вынужденно убитых поросят в возрасте 45 суток с признаками гемофилезного полисерозита, поступивших из ЗАО «Северный ключ» Самарской области.
Штамм «СК-1» был выделен в лаборатории ФГУ ВНИИЗЖ с использованием плотных питательных сред, изготовленных на основе бульона PPLO (фирма Difco), содержащих 1,5% агара (фирма Difco), 10% свежеприготовленного дрожжевого экстракта и 1% гемина.
Выделенная чистая культура изолята была идентифицирована по культуральным и биохимическим свойствам и в полимеразной цепной реакции как H.parasius (таблица 1) и заложена на хранение в виде супсензии бактериальных клеток с концентрацией 10 млрд. м.к./см3 в желатин-сахарозной среде, лиофильно высушенной под вакуумом. Штамм хранится при температуре - 40°С.
Штамм освежают 1-2 раза в год (12 мес.). Концентрация культуры за 12 мес. хранения снижалась менее чем на 0,5 Ig КОЕ/см3, при этом стабильно сохраняется активность в РА и иммуногенная активность.
Полученному штамму бактерий H.parasuis присвоено авторское наименование «СК-1».
Пример 2.
Для изготовления диагностического антигена H.parasuis используют штамм «СК-1». Лиофилизированную культуру штамма «СК-1» суспендируют в 1 см3 PPLO бульона, содержащего ростовые факторы (раствор NADP - 1%, раствор гемина - 1%) и засевают во флаконы с 20 см3 PPLO бульона. Флаконы инкубируют в термостате при 37°С в течение 24 часов.
24-часовую бульонную культуру штамма «СК-1» высевают на чашки с PPLO агаром, содержащим ростовые факторы (раствор NADP - 1%, раствор гемина - 1%). Посевы инкубируют в термостате при 37°С в течение 24 часов.
Выросшую на каждой чашке культуру смывают стерильным 0,9% физиологическим раствором в объеме 5 см3, затем трижды отмывают, центрифугируя суспензию при 1000 g. Осевшие клетки ресуспендируют в стерильном физ. растворе и доводят концентрацию клеток до 10 млрд. м.к./см3 по стандарту мутности. В полученную суспензию вносят формалин до конечной концентрации 0,2% и инкубируют смесь в термостате при 37°С в течение 24 часов. Суспензию проверяют на полноту инактивации высевом на чашку с PPLO агаром.
Инактивированные клетки осаждают центрифугированием при 1000 g. По стандарту мутности доводят концентрацию антигена до 20 млрд. м.к./см3 в физ. растворе.
Для получения гипериммунной сыворотки используют молодых кроликов массой 2,5-3,0 кг. Кроликов иммунизируют один раз в неделю, начиная с дозы 0,5 см3 антигена (концентрация 20 млрд. м.к./см3) с адъювантом Фрейнда (в отношении 1:1) подкожно. Все последующие инъекции делают внутривенно в возрастающих дозах: 1, 2 и 3 см3. Последнюю дозу (3 см3) повторяют 4 раза. Через 1 неделю после 8-й инъекции кроликов обескровливают.
Активность антигена определяют в количественной РА, которую проводят в полистироловых планшетах или пробирках с использованием гипериммунных сывороток крови кролика, содержащих антитела против штамма «СК-1» (положительные контрольные сыворотки). Нормальную сыворотку крови кролика используют в качестве отрицательного контроля.
Антиген считают активным, если в РА с гомологичной сывороткой он образует видимые невооруженные глазом агглютинаты при концентрации 5×107 м.к./см3 (7,69 log2) и выше. При этом с нормальной (неиммунной) сывороткой кролика реакция отсутствует.
Специфичность антигена определяют также в количественной РА, но с сыворотками, содержащими антитела к бактериям Pasteurella multocida и Actinobacillus pleuropneumoniae. Антиген HPs не дает положительной реакции с сыворотками, иммунными к названным выше видам бактерий (таблица 2).
Таким образом, результаты РА свидетельствуют о специфичности антигена, полученного из штамма «СК-1».
Пример 3.
Для изготовления инактивированной эмульсионной вакцины против ГПС суточную бульонную культуру из штамма «СК-1», выращенную в аппарате АК-210 (объем 10 л), стерильно переливают в стеклянную емкость для инактивации, в которую вносят раствор димера этиленимина (ДЭИ) в количестве, обеспечивающем его конечную концентрацию в суспензии 1% по активному веществу. Инактивацию проводят при постоянном перемешивании, рН в пределах 7,6-7,8 и температуре 36-37°С в течение 24 часов.
После окончания процесса инактивации суспензию охлаждают до 2-8°С и исследуют на полноту инактивации. Полученный антиген очищают от балластных примесей и ДЭИ известными для специалиста методами. После этого антиген соединяют с масляным адъювантом.
В качестве масляного адъюванта используют Montanide ISA-70 (фирма «SEPPIC», Франция). Масляный адъювант и инактивированный антиген смешивают в соотношении (мас.%) 70:30 на гомогенизаторе в течение 4-5 минут при скорости вращения винта 3000 об./мин, при этом получают однородную эмульсию белого цвета типа «вода-масло».
Полученная вакцина имеет оптимальный компонентный состав, мас.%:
| Антигенный материал из штамма «СК-1» | 30,0 |
| Масляный адъювант | 70,0 |
Содержание антигена в вакцине в указанных выше пределах является его эффективным количеством в препарате, обеспечивающим достижение технического результата.
Готовую эмульсионную вакцину собирают в одну стерильную емкость, фасуют в стеклянные флаконы и контролируют в соответствии с техническими условиями.
Вакцина представляет собой эмульсию белого цвета слегка вязкой консистенции. При хранении вакцины допускается незначительное отслоение минерального масла на поверхности эмульсии. При встряхивании вакцины однородность эмульсии восстанавливается.
Полученную вакцину контролируют на безвредность и стерильность.
Определение безвредности проводят на 10 белых мышах массой 16-18 г. Из пяти флаконов с вакциной отбирают с соблюдением правил асептики и антисептики по 5 см3 содержимого и объединяют в общий объем. Объединенную пробу (25 см3) используют для проверки на безвредность. Препарат вводят животным подкожно в область спины в объеме 0,5 см3. Наблюдение за животными производят в течение 10 сут. Вакцину считают безвредной, если все животные, взятые в опыт, остаются живыми и клинически здоровыми в течение срока наблюдения.
Стерильность вакцины определяют в соответствии с ГОСТ 280885-89 «Препараты биологические. Методы бактериологического контроля стерильности».
Антигенную активность каждой серии вакцины проверяют на морских свинках массой 350-400 г. Вакцину вводят двукратно с интервалом 20-25 суток 10 морским свинкам внутримышечно в области бедра в объеме 0,5 см3. Через 14 суток после второй вакцинации у морских свинок отбирают пробы крови, выдерживают при температуре 37°С, отделяют сыворотку и исследуют на наличие антител к бактериям H.parasuis в РА. Серию вакцины считают прошедшей контроль на антигенную активность, если титр специфических антител в РА не ниже 1:200. Результаты исследований представлены в таблицах 4 и 5.
Вакцину применяют для профилактической иммунизации свиней против гемофилезного полисерозита. Вакцина способствует образованию активного иммунитета против гемофилезного полисерозита через 21 сутки после 2-кратного применения препарата длительностью не менее 6 месяцев.
Пример 4.
Проведена оценка качества инактивированной эмульсионной вакцины против ГПС из штамма «СК-1», изготовленной так, как описано в примере 3.
Проверку вакцины проводили по следующим показателям:
бактериологический контроль стерильности, определение безвредности вакцины и ее иммуногенной активности.
Бактериологический контроль стерильности
Пробы вакцины посеяли на жидкую и плотную среду Сабуро, МПА, МПБ - по 3 пробирки, на МППБ - по 2 пробирки и 2 флакона, среду Эндо - по 3 чашки.
Для выявления аэробов высевали 0,5 см3 вакцины в одну пробирку и 2 см3 в один флакон, а для выявления анаэробов - соответственно по 1 и 5 см3.
Пробирки, бактериологические чашки, флаконы с посевами на всех средах, кроме Сабуро, выдерживали в термостате при (37±0,5)°С, на среде Сабуро при (21±1,0)°С в течение 7 суток.
По истечении указанного срока делали пересев, за исключением посевов на МПА, среду Эндо, агар Сабуро.
Пересевали пробы на те же питательные среды и в тех же объемах, что и при посеве. Вторичные посевы выдерживали 7 суток.
Одновременно проводили контроль стерильности сред. Результаты первичного и повторного посевов оценивали путем макроскопического исследования посевов.
Рост микроорганизмов на питательных средах с посевами отсутствовал.
Определение безвредности вакцины
Безвредность вакцины проверяли на 10 белых мышах массой 16-18 г. Препарат вводили подкожно в области спины в объеме 0,5 см3. Наблюдение за животными вели в течение 10 суток. Все животные, взятые в опыт, остались живыми и клинически здоровыми в течение срока наблюдения.
Безвредность вакцины проверяли на 4 подсвинках 4-месячного возраста. Препарат вводили 2 животным внутримышечно за ухом в объеме 3 см3 (трехкратная доза) и 2 животным внутримышечно за ухом в объеме 5 см3 (пятикратная доза).
В течение 10 суток наблюдения отклонений со стороны общего состояния организма четырех подсвинков, взятых в опыт, не наблюдали.
Местная реакция на введение препарата отсутствовала.
Определение иммуногенности.
Иммуногенную активность вакцины проверяли на 20 морских свинках массой 300-350 г.
Вакцину вводили однократно внутримышечно в области бедра по 0,2 см3. Через 21 сутки после иммунизации 10 вакцинированных и 10 контрольных (невакцинированных) морских свинок заражали внутрибрюшинно предварительно оттитрованной смертельной дозой возбудителя ГПС, штамм «СК-1», в объеме 0,5 см3 подкожно.
В течение 4 суток контрольные свинки пали, а опытные оставались живы в течение 10 суток после гибели контроля.
Исследование показали, что вакцина из штамма «СК-1» стерильна, безвредна и иммуногенна.
Пример 5.
Эффективность вакцины против ГПС из штамма «СК-1» проверена в составе ассоциированной инактивированной эмульсионной вакцины против пастереллеза, сальмонеллеза и ГПС. Иммуногенную активность ассоциированной вакцины проверили на 10 морских свинках массой 300-350 г.
Вакцину вводили однократно внутримышечно во внутреннюю поверхность бедра по 0,2 см3. Через 21 сутки после иммунизации 5 вакцинированных и 5 контрольных (невакцинированных) морских свинок заразили внутрибрюшинно предварительно оттитрованной смертельной дозой возбудителя ГПС из штамма «СК-1» в объеме 0,5 см3.
В течение 4 суток контрольные свинки пали, а опытные оставались живы в течение 10 суток после гибели контроля.
Следовательно, испытуемая вакцина иммуногенна по гемофилезному компоненту.
Пример 6.
Эффективность вакцины против ГПС из штамма «СК-1» проверена в составе ассоциированной инактивированной эмульсионной вакцины против пастереллеза, сальмонеллеза и ГПС в условиях промкомплекса «Кузнецовский» Московской области на 580 головах свиноматок во время производственной апробации ассоциированного препарата.
Вакцину применяли согласно временному наставлению. После применения вакцины поствакцинальных осложнений и прорывов иммунитета у животных не отмечено.
Пример 7.
Эффективность вакцины против ГПС из штамма «СК-1» проверена в составе ассоциированной инактивированной эмульсионной вакцины против пастереллеза, сальмонеллеза и ГПС в условиях неблагополучного по ГПС ОАО «Ильиногорское» Нижегородской области на свиноматках во время производственной апробации ассоциированного препарата. Вакцину применяли согласно временному наставлению. Общее количество привитых животных составило: опытных - 292 головы, контрольных - 285 голов.
Наблюдение за привитыми животными показало:
1. Отклонений со стороны общего состояния организма опытных и контрольных животных на инъекцию биопрепарата не наблюдали.
2. Температура тела и основные физиологические показатели оставались в пределах нормы.
3. Сыворотки крови свиноматок в количестве 20 проб исследовали в ФГУ ВНИИЗЖ до иммунизации и через 25 дней после введения второй дозы вакцины.
4. Сыворотки крови свиноматок, иммунизированных против сальмонеллеза, пастереллеза и ГПС, были положительными.
Результаты испытаний показали, что вакцина безвредна, обладает достаточной иммуногенной активностью и может быть использована для специфической профилактики.
Таким образом, приведенная выше информация свидетельствует о выполнении при использовании предлагаемого изобретения следующей совокупности условий:
- штамм «СК-1»-возбудитель ГПС, воплощающий предлагаемое изобретение, предназначен для использования в сельском хозяйстве, а именно в ветеринарной микробиологии и биотехнологии;
- для предлагаемого изобретения в том виде, как оно охарактеризовано в независимом пункте формулы изобретения, подтверждена возможность его осуществления с помощью описанных в заявке или известных до даты приоритета средств и методов;
- штамм «СК-1», полученный в соответствии с предлагаемым изобретением, обладает высокой биологической, антигенной и иммуногенной активностью в нативном виде и после инактивации, пригоден для изготовления высокоспецифичных и чувствительных диагностикумов и высокоиммуногенных и безвредных вакцинных препаратов и расширяет арсенал новых производственных штаммов H.parasuis - возбудителей ГПС.
Следовательно, предлагаемый штамм соответствует условию патентоспособности «промышленная применимость».
Источники информации
1. Glässer К. Untersuchungen uber die Schweineseuche mit besonderer Berücksichtigung ihrer Äntiologie und Pathologie (studies on poliserositis in swine with special regard to etiology and pathology) - Deutsch. Tieärztl W. - Schr., 1910, 18, 729-733.
2. Nicolet J., Scholl E. Haemophilus infections. In: Leman A.D., Clock R. etai., (Eds). Diseases of swine. 5th edn. Iowa State Univ. Press. Ames IA, 1981, pp.368-377.
3. Nicolet J., Morozumi Т., Bloch J., Proposal for a serological classification of Haemophilus parasuis. - Proc. Int. Pig. Vet. Soc., Barcelona, 1986, p.260.
4. Сидоров М.И., Скородумов Д.И. Гемофилезы животных. - М., Агропромиздат, 1986, 82-104.
5. Nielsen R. Pathogenicity and Immunity studies of Haemophilus parasuis Serotypes. - Acta Vet. scand., 1993, 34,2, 193-198.
6. Hill H., Conner J.F. et.al. Haemophilus parasuis. Part I. Agri-Practice, 1993a, 14 (3), 3, 19-23.
7. Hill H., Conner J.F. et.al. Haemophilus parasuis. Part II. Agri-Practice, 1993b, 14(4), 34-39.
8. Hill H., Conner J.F. et.al. Haemophilus parasuis. Part III. Agri-Practice, 1993с, 14 (5), 5-9.
9. Segal J. Enfermedad de Glasser: conceptos generales de la infection por Haemophilus parasuis. - Med. Vet, 1996, V.13, N11, 595-605.
10. Определитель бактерий Берджи: В 2-х т. М.: Мир, 1997. - Т.1. - С.200-203.
11. Скородумов Д.И. Актинобациллезная (гемофилезная) плевропневмония и гемофилезный полисерозит свиней (этиология, лабораторная диагностика, основы специфической профилактики актинобациллезной плевропневмонии). - Автореф. дисс... доктора вет. наук. Москва, 1997. - 40 с.
12. Определитель нетривиальных патогенных грамотрицательных бактерий. - М.: Мир, 1999. - С.498-500.
13. Гаффаров Х.З., Романов Е.А. Инфекционные болезни свиней и современные средства борьбы с ними. - Казань, 2003. - С.73-77.
14. Гусев В.В., Приходько С.М. и соавт. Мониторинг бактериальных инфекций в промышленном свиноводстве. - Ветеринария, 2004. - №2. - С.7-8.
15. Baehler J.R., Burgisser H. et al. Infection Haemophilus parasuis chez le pore. Schweiz. Arch. Tierheilkd., 1974. - 116. - P.183-188.
16. Nielsen R., Danielsen V. An outbreak of Glässer's disease. Studies on etiology, serology and effect of vaccination. Nord.Vet.Med., 1975. - 27. - P.20-25.
17. Сидоров М.А. и соавт. Иммуногенность вакцины против гемофилезного полисерозита поросят. - Доклады ВАСХНИЛ, 1980. - 8. - С.30.
18. Тарасенок Н.И. Изучение возбудителя гемофилезного полисерозита поросят. - Ветеринария, 1989. - 11. - С.36-39.
19. ТУ 10-09-110-91 от 29.04.91 г. «Формолвакцина гидроокись-алюминиевая против гемофилезного полисерозита поросят».
20. Толяронок Г.Е. Этиология и профилактика полисерозита свиней. - Автореф. дисс... канд. вет. наук. Минск, 1998, 20 с.
21. Гаффаров Х.З., Ефимова М.А. и соавт. Антигенная активность ассоциированной вакцины против гемофилезного полисерозита, трансмиссивного гастроэнтерита и отечной болезни поросят-отъемышей на лабораторных животных. - Ветеринарный врач, 2003. №3(15), С.41-43.
| Таблица 1 Биохимические свойства штамма «СК-1» |
|||||||||
| Название теста | Оценка реакции | ||||||||
| «СК-1» | по определителю Берджи | ||||||||
| Каталаза | + | + | |||||||
| Оксидаза | - | ||||||||
| Гемин (X) | - | - | |||||||
| NADP (V) | + | + | |||||||
| β-гемолиз | - | - | |||||||
| Индол | - | - | |||||||
| Уреаза | - | - | |||||||
| Сероводород | - | d | |||||||
| Глюкоза | + | + | |||||||
| Лактоза | + | d | |||||||
| Сорбит | - | - | |||||||
| Маннит | + | - | |||||||
| Сахароза | + | + | |||||||
| Лизин | - | - | |||||||
| Орнитин | - | - | |||||||
| Примечание: «+» - положительная реакция «-« - отрицательная реакция «d» - вариабельная реакция |
|||||||||
| Таблица 2 Специфичность антигена H.parasuis, штамм «СК-1» |
|||||||||
| Сыворотки крови кролика, специфические к изолятам | Антигены (титры антител сывороток в РА, выраженные в Ig) | ||||||||
| СК-1 | Ил-1 | Ш-1 | К-1 | РМ №115 | РМ №656 | РМ №9 | |||
| СК-1 (H.parasuis) | 3200* | 400 | - | - | - | - | - | ||
| Ил-1 (H.parasuis) | 400 | 1600 | - | - | - | - | - | ||
| Ш-1 (A.pleuropneumoniae) | - | - | 1600 | - | - | - | - | ||
| К-1 (A.pleuropneumoniae) | - | - | - | 1600 | - | - | - | ||
| P.multocida N115 | - | - | - | - | 3200 | 400 | 200 | ||
| P.multocida N656 | - | - | - | - | 400 | 3200 | 200 | ||
| P.multocida N9 | - | - | - | - | 400 | 200 | 3200 | ||
| Контроль ** | - | - | - | - | - | - | - | ||
| Примечание: * - величина, обратная разведению сыворотки; ** - неиммунная сыворотка крови кролика; «-« - негативная реакция. |
|||||||||
| Таблица 3 Результаты исследований в РА сывороток крови морских свинок, иммунизированных инактивированной эмульсионной вакциной из штамма «СК-1» |
||||||
| № пробы | Титры специфических антител в РА | |||||
| До вакцинации | После первой вакцинации | После второй вакцинации | ||||
| 1 | - | 400* | 800 | |||
| 2 | - | 100 | 400 | |||
| 3 | - | 200 | 800 | |||
| 4 | - | 100 | 400 | |||
| 5 | - | 100 | 800 | |||
| Примечание: « » - величина, обратная разведению сыворотки; «-« - негативная реакция. |
||||||
| Таблица 4 Результаты исследований в РА сывороток крови свиней разного возраста, иммунизированных инактивированной эмульсионной вакциной из штамма «СК-1» |
||||||
| Группа животных | Возраст животного | Титр антител до вакцинации | Титр агглютинирующих антител после вакцинации (21 сут) | |||
| Супоросные свиноматки | 50* | 800 | ||||
| 100 | 800 | |||||
| 25 | 3200 | |||||
| 150 | 800 | |||||
| 200 | 1600 | |||||
| 25 | 3200 | |||||
| 50 | 800 | |||||
| - | 3200 | |||||
| 100 | 1600 | |||||
| 50 | 3200 | |||||
| 100 | 400 | |||||
| 25 | 800 | |||||
| 50 | 800 | |||||
| 150 | 800 | |||||
| Отъемыши | 70 сут. | 25 | 400 | |||
| 100 | 400 | |||||
| 25 | 800 | |||||
| 50 | 800 | |||||
| 25 | 200 | |||||
| 25 | 800 | |||||
| Контрольные животные | невакцинированные | 25 | - | |||
| 25 | - | |||||
| Примечание: «*» - величина, обратная разведению сыворотки, «-« - негативная реакция. |
||||||
Claims (1)
- Штамм Haemophilus parasuis CK-1 - возбудитель гемофилезного полисерозита свиней семейства Pasteurellaceae, рода Haemophilus, вида Haemophilus parasuis, коллекция ФГУ ВГНКИ Haemophilus parasuis CK-1-ДЕП, для изготовления диагностических и вакцинных препаратов.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2004111867/13A RU2268933C1 (ru) | 2004-04-21 | 2004-04-21 | ШТАММ Haemophilus parasuis СК-1 - ВОЗБУДИТЕЛЬ ГЕМОФИЛЕЗНОГО ПОЛИСЕРОЗИТА СВИНЕЙ ДЛЯ ИЗГОТОВЛЕНИЯ ДИАГНОСТИЧЕСКИХ И ВАКЦИННЫХ ПРЕПАРАТОВ |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2004111867/13A RU2268933C1 (ru) | 2004-04-21 | 2004-04-21 | ШТАММ Haemophilus parasuis СК-1 - ВОЗБУДИТЕЛЬ ГЕМОФИЛЕЗНОГО ПОЛИСЕРОЗИТА СВИНЕЙ ДЛЯ ИЗГОТОВЛЕНИЯ ДИАГНОСТИЧЕСКИХ И ВАКЦИННЫХ ПРЕПАРАТОВ |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2004111867A RU2004111867A (ru) | 2005-10-20 |
| RU2268933C1 true RU2268933C1 (ru) | 2006-01-27 |
Family
ID=35862815
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU2004111867/13A RU2268933C1 (ru) | 2004-04-21 | 2004-04-21 | ШТАММ Haemophilus parasuis СК-1 - ВОЗБУДИТЕЛЬ ГЕМОФИЛЕЗНОГО ПОЛИСЕРОЗИТА СВИНЕЙ ДЛЯ ИЗГОТОВЛЕНИЯ ДИАГНОСТИЧЕСКИХ И ВАКЦИННЫХ ПРЕПАРАТОВ |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| RU (1) | RU2268933C1 (ru) |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN103215208A (zh) * | 2013-04-18 | 2013-07-24 | 广西壮族自治区兽医研究所 | 副猪嗜血杆菌培养基 |
| RU2555530C2 (ru) * | 2008-03-28 | 2015-07-10 | Новартис Тиргезундхайт АГ | СПОСОБ ИДЕНТИФИКАЦИИ ПОЛИПЕПТИДОВ И БЕЛКОВ H.parasuis |
-
2004
- 2004-04-21 RU RU2004111867/13A patent/RU2268933C1/ru active
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| ТАРАСЕНОК Н.И., Изучение возбудителя гемофилезного полисерозита поросят, Ветеринария, 1989, № 11, с.36-39. СИДОРОВ М.А. и др., Иммуногенность вакцины против гемофилезного полисерозита поросят, Доклады ВАСХНИЛ, 1980, вып.8, с.30. * |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2555530C2 (ru) * | 2008-03-28 | 2015-07-10 | Новартис Тиргезундхайт АГ | СПОСОБ ИДЕНТИФИКАЦИИ ПОЛИПЕПТИДОВ И БЕЛКОВ H.parasuis |
| CN103215208A (zh) * | 2013-04-18 | 2013-07-24 | 广西壮族自治区兽医研究所 | 副猪嗜血杆菌培养基 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| RU2004111867A (ru) | 2005-10-20 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Klieneberger‐Nobel | Micro‐organisms of the pleuropneumonia group | |
| Springer et al. | Histomoniasis in gnotobiotic chickens and turkeys: biological aspects of the role of bacteria in the etiology | |
| RU2429012C1 (ru) | Способ изготовления ассоциированной вакцины против колибактериоза, стрептококкоза и энтерококковой инфекции телят и поросят | |
| RU2268933C1 (ru) | ШТАММ Haemophilus parasuis СК-1 - ВОЗБУДИТЕЛЬ ГЕМОФИЛЕЗНОГО ПОЛИСЕРОЗИТА СВИНЕЙ ДЛЯ ИЗГОТОВЛЕНИЯ ДИАГНОСТИЧЕСКИХ И ВАКЦИННЫХ ПРЕПАРАТОВ | |
| RU2159127C1 (ru) | Вакцина против псевдомоноза пушных зверей | |
| RU2269570C2 (ru) | Штамм haemophilus parasuis ил-1 - возбудитель гемофилезного полисерозита свиней для изготовления диагностических и вакцинных препаратов | |
| Davis | Bacteriological and experimental observations on focal infections | |
| RU2099084C1 (ru) | Вакцина против стрептококкоза и пастереллеза нутрий | |
| RU2425148C2 (ru) | Штамм brucella abortus уф-1 для приготовления биологических препаратов для диагностики и специфической профилактики бруцеллеза сельскохозяйственных животных | |
| RU2388489C1 (ru) | Способ изготовления вакцины ассоциированной против псевдомоноза и энтерококковой инфекции нутрий | |
| RU2098127C1 (ru) | Ассоциированная вакцина "нековак" против некробактериоза крупного рогатого скота | |
| RU2538158C1 (ru) | Способ изготовления вакцины, ассоциированной против эшерихиоза, стрептококкоза и стафилококкоза крупного рогатого скота | |
| RU2831198C1 (ru) | Средство специфической профилактики против клинических и субклинических маститов коров | |
| RU2179861C2 (ru) | Вакцина против стрептококкоза крупного рогатого скота | |
| Wherry et al. | Inhalation experiments on influenza and pneumonia, and on the importance of spray-borne bacteria in respiratory infections | |
| RU2818959C1 (ru) | Штамм бактерии Pasteurella multocida "РМ - В" для изготовления биопрепаратов для специфической профилактики пастереллеза (геморрагической септицемии) крупного рогатого скота, вызванного пастереллой серогруппы В | |
| RU2099081C1 (ru) | Способ получения вакцины для профилактики стрептококкоза нутрий | |
| RU2098128C1 (ru) | Ассоциированная вакцина "овикон" против инфекционных заболеваний конечностей овец | |
| RU2316345C1 (ru) | Способ изготовления вакцины ассоциированной против колибактериоза, сальмонеллеза, стрептококкоза и энтерококковой инфекции нутрий | |
| RU2853357C1 (ru) | Штамм Escherichia coli "19-СД", используемый для изготовления вакцины против маститов коров | |
| RU2218395C2 (ru) | ШТАММ БАКТЕРИЙ Proteus vulgaris № 25, ИСПОЛЬЗУЕМЫЙ ДЛЯ ИЗГОТОВЛЕНИЯ ИММУННЫХ ПРЕПАРАТОВ | |
| RU2799603C1 (ru) | Штамм "SA-21" бактерии рода Streptococcus вида Streptococcus agalactiae для изготовления биопрепаратов для специфической профилактики мастита коров | |
| RU2149183C1 (ru) | Штамм бактерий brucella abortus, используемый для изготовления диагностических и профилактических биопрепаратов против бруцеллеза животных | |
| RU2099083C1 (ru) | Способ получения вакцины против стрептококкоза и пастереллеза нутрий | |
| RU2221864C2 (ru) | Штамм бактерий klebsiella pneumoniae, депонированный в вгнки под № 23 мгавмиб-деп, для производства вакцины против клебсиеллеза молодняка сельскохозяйственных животных |