RU2187333C2

RU2187333C2 - Вакцина для защиты свиней от репродуктивного и респираторного синдрома и способ защиты свиней

Info

Publication number: RU2187333C2
Application number: RU98118186/13A
Authority: RU
Inventors: Ричард ХЕССИ
Original assignee: Шеринг Корпорейшн
Priority date: 1996-03-01
Filing date: 1997-02-26
Publication date: 2002-08-20
Also published as: WO1997031651A1; ZA971663B; CA2248182C; JPH11506122A; EE04741B1; PL328627A1; AR006023A1; AU2277497A; SK119498A3; HUP9901958A2; CO4600644A1; HUP9901958A3; BR9708443A; BG102809A; KR19990087432A; EP0894007A1; CA2248182A1; CN1165342C; MY115070A; KR100297537B1

Abstract

Изобретение относится к области ветеринарии. Вакцина получена из вирусного агента NEB-1-Р94, хранящегося в Американской коллекции типовых культур под регистрационным номером VR-2525. Способ защиты свиней предусматривает введение им данной вакцины в эффективном количестве. Изобретение позволяет значительно снизить гибель поросят и заражение вакцинированных свиноматок. 2 с. и 5 з.п. ф-лы, 4 табл.

Description

Настоящее изобретение относится к вакцине для лечения репродуктивного и респираторного синдрома у свиней (PRRS).

В 1987 году свиноводческая отрасль в Соединенных Штатах столкнулась с неизвестным инфекционным заболеванием, которое нанесло ему серьезный экономический удар. Появились сообщения о синдроме заболевания в Европе, включая Германию, Бельгию, Нидерланды, Испанию и Англию.

Заболевание характеризовалось поражением репродуктивной функции, болезнями дыхательных путей и различными клиническими симптомами, включая потерю аппетита, жар, одышку и умеренные неврологические симптомы. Основным компонентом синдрома является поражение репродуктивной функции, который проявляется как преждевременные роды, выкидыши на поздних стадиях, слабость новорожденных поросят, рождение мертвых поросят, мумификацию плода в утробе, замедление процесса опороса и задержка возврата периода течки. Клинические симптомы болезни дыхательных путей наиболее проявляются у молочных свиней в возрасте до 3 недель, но имеются сообщения об их возникновении на всех стадиях выращивания свиней. Пораженные поросята медленно растут, их волосяной покров грубеет, у них возникает затрудненность дыхания ("глухие удары") и увеличивается смертность.

Синдром заболевания описан с применением большого количества различных терминов, включая такие как "таинственная болезнь свиней" (MSD), "синдром эпидемических выкидышей и респираторных нарушений у свиней" (PEARS), "синдром бесплодия и респираторных нарушений у свиней" (SIRS). Обычно используемое в настоящее время название - репродуктивный и респираторный синдром у свиней (PRRS); этот термин будет применяться по всему тексту настоящей патентной заявки.

Объектом изобретения является создание вакцины, защищающей свиней от клинических заболеваний, вызванных PRRS. Другой объект - создание вакцины, которая, будучи введена свиньям при разведении их в стаде, уменьшает наличие PRRS в популяции.

КРАТКОЕ ОПИСАНИЕ СУЩНОСТИ ИЗОБРЕТЕНИЯ
Объектом настоящего изобретения является создание новой вакцины, защищающей свиней от клинического заболевания, вызванного вирусом репродуктивного и респираторного синдрома (PRRS).

Следующим объектом настоящего изобретения является создание вакцины, защищающей свиней против штамма NEB-1 вируса PRRS.

Еще одним объектом изобретения является создание способа защиты свиней от клинического заболевания, вызванного вирусом репродуктивных и респираторных нарушений у свиней.

Следующий объект настоящего изобретения - получение вируса в вакцине, фенотипические характеристики которого позволяют отличить его от вируса PRRS дикого типа.

ПОДРОБНОЕ ОПИСАНИЕ СУЩНОСТИ ИЗОБРЕТЕНИЯ
Изобретение относится к созданию композиции, содержащей ослабленный вирус репродуктивного и респираторного синдрома у свиней (PRRS), который перед использованием в вакцинации модифицирован путем лабораторной обработки.

Кроме того, композиция имеет фенотипические свойства, позволяющие использовать ее в диагностических целях для того, чтобы отличить свинью, которая природно инфицирована вирусом PRRS, от животных, которые обнаруживают только вакцинный штамм. Изолят NEB-1-P94 вируса PRRS хранится в Американской коллекции типовых культур, регистрационный VB-2525 ("American Type Culture Collection, Accession VP-2525).

Вирулентный изолят вируса PRRS получен из образцов ткани от мертвой свиньи, представленных в Лаборатории диагностики университета штата Небраска. Гомогенат ткани из мертвой свиньи был инокулирован на первичные альвеолярные макрофаги свиньи, и наличие вируса было определено по цитопатическим эффектам на инокулированных культурах и отсутствию их на контрольных культурах. Изолированный вирус (обозначенный NEB-1) был последовательно охарактеризован в качестве вируса PRRS на основании его физических свойств (чувствительности к хлороформу и эфиру, плавучей плотности и недостатка гемагглютинирующей активности), реактивности по отношению к специфичным антителам и данных генетического анализа. Инокуляция вирусом поросят-сосунков привело к респираторному заболеванию, сопровождающемуся сильным жаром, измененным дыханием и патологией в легких, соответствующей вирусной интерстициальной пневмонии. Кроме того, результатом инокуляции вирусом беременных свиноматок явилось поражение репродуктивной функции, характеризующееся мумификацией плодов в утробе, рождением мертвых поросят и слабых поросят, которые впоследствии умерли. Респираторное и репродуктивное поражение, вызванное этим вирусом, было типично для синдрома, переносимого вирусом PRRS.

Вирус NEB-1 был ослаблен путем серийного пересева в культуре ткани. Сначала вирус был пересеян путем инокуляции первичных культур альвеолярного макрофага свиньи (SAM) (для первых двух пересевов), а затем путем серийного пересева на клетках МА104 (предоставляемых компанией Microbiological associates, Inc. , Rockville, MD) до общего числа пересевов 94. Во время этого процесса клоны вируса были изолированы посредством очистки до отдельных бляшек и исследованы на фенотипические свойства. Вакцинный клон, обозначенный NEB-1-P94, был отобран с учетом ослабленного развития на альвеолярных макрофагах свиньи, отсутствия реактивности на PRRS-специфичное моноклональное антитело SDOW17 (АТСС НВ 10997) и отсутствия возникновения заболевания у поросят и беременных свиноматок. Количество вируса NEB-1-P94 увеличили в объеме на клетках МА104 и заморозили в качестве модельного вируса для посева, также обозначенного PRRS-MSV-94-1, с целью дальнейшего использования при разработке вакцин.

Вакцину готовили, используя в качестве субстрата клетки МА104 (хотя можно использовать альтернативные клеточные линии, которые поддерживают развитие вируса PRRS, например клетки MARC 145 (предоставляемые Dr. Wang, Agriculture Research Station, Clay Center NE)). Клетки МА104 вырастили до получения монослоя в подходящих сосудах для культивирования клеток, например, роллерных флаконах размером 850 см², с использованием минимально необходимой среды Игла (ЕМЕМ), содержащей 5-10% бычьей сыворотки, 30 мМ HEPES (N-2-гидроксиэтилпиперазин-N'-2-этансульфоновая кислота, 2мМ L-глютамин и антибиотики, например 30 мкм/мл гентамицина). Можно также использовать альтернативные среды для культур тканей, которые способны поддерживать рост клеток МА104, например, модифицированную Дульбекко необходимую среду (DMEM), Medium 199 или другие. Монослои клеток МА104 инокулировали вирусом NEB-1-P94 при множественности заражения (MOI) в соотношении от 1:5 до 1:1000 и предпочтительно в соотношении 1: 10. После инкубирования в течение 3-5 дней при 37^oC, культуральные супернатантные жидкости были собраны путем декантирования.

Вирусные жидкости титровали путем проведения серийных разбавлений в ЕМЕМ с вышеупомянутыми добавками и инокуляции, по меньшей мере, 4 репликатных лунок с монослоем клеток МА104 или MARS 145 на 96-луночном планшете для культуры ткани, в количестве 0,2 мл на лунку. Культуры инкубировали в течение 5 дней при 37^oС и содержании СО₂ 3-5% в увлажненной камере и изучали с целью обнаружения цитопатических эффектов. Титры (50% конечных точек) подсчитывали в соответствии с методами Spearman'а и Karber'a (Methods in Virology, Volume IV, K. Maramorosch и H. Koprowski (Eds). Academic Press, New York, 1977). Клетки можно зафиксировать с помощью 80% ацетона и тестировать на отсутствие реактивности по отношению к моноклональным антителам VО17 или ЕР147 (предоставленных Dr.E.Nelson, South Dakota State University, Brookings, SD) (ожидаемый позитивный результат) для того, чтобы подтвердить фенотипическую идентичность вируса.

Для приготовления убитой вакцины вирусные жидкости инкубировали с инактивирующим химическим агентом. Примерами инактивирующих агентов являются формальдегид, глутаровый альдегид, бинарный этиленимин или бета-пропиолактон. Затем вирусные жидкости хранили при 4^oС до тех пор, пока не приступали к получению вакцины. Вакцину готовили путем смешивания вирусных жидкостей (содержащих от 10⁶ до 10⁹ ТСD₅₀ вируса; основано на титрах предварительной инактивации) с физиологически приемлемым разбавителем (таким как ЕМЕМ, сбалансированный солевой раствор Hank'a, фосфатно-солевой буфер) и иммуностимулирующим адьювантом (например, минеральным маслом, растительным маслом, гидроксидом алюминия, сапонином, не-ионными детергентами, скваленом, блок-сополимерами или другими соединениями, известными специалисту и используемыми по отдельности или в комбинации). Доза вакцины обычно находилась в диапазоне между 1 и 5 мл.

Для получения живой вакцины вирусные жидкости хранили в замороженном виде при температуре -50^oС или ниже до момента использования. Вирусные жидкости с содержанием TC1D₅₀ в пределах 10^4,0 - 10^7,0 и преимущественно с содержанием его 10^6,0 разбавляли физиологически приемлемым разбавителем (таким как ЕМЕМ, сбалансированный солевой раствор Hank'a, фосфатно-солевой буфер) и физиологически приемлемой смесью соединений, предназначенной для стабилизации вируса. Соединения, которые, как известно специалисту, могут применяться для стабилизации вирусов по отдельности или в комбинации, включают сахарозу, лактозу, N-Z амин, глютатион, неопептон, желатин, декстран и триптон. Вакцину до использования хранили в замороженном виде (при температуре -50^oС или ниже) или лиофилизированном виде (при температуре 4^oС). Обычно величина дозы вакцины находилась в пределах 1-5 мл, предпочтительно 2 мл.

Для профилактики заболевания, вызванного PRRS, вакцину свинье вводили орально, интраназально или парентерально. Примерами парентерального введения являются внутрикожное, внутримышечное, внутривенное, внутрибрюшинное и подкожное введение.

При введении в виде раствора, предлагаемую вакцину можно приготовить в форме водного раствора, сиропа, эликсира или настойки. Такие препараты известны специалисту и готовятся путем растворения антигена и остальных соответствующих добавок в подходящих системах растворителей. Эти растворители включают воду, физиологический раствор, этанол, этиленгликоль, глицерин, Al-жидкость и т. д. К известным специалисту пригодным добавкам относятся сертифицированные красители, ароматизаторы, подсластители и антимикробные консерванты, такие как тимерозал (этилмеркуритиосалицилат натрия). Такие растворы можно стабилизировать, например, добавлением частично гидролизованного желатина, сорбитола или клеточной культуральной среды, и можно перевести в буфер известными специалисту способами, применяя известные реагенты, такие как гидрофосфат натрия, дигидрофосфат натрия, гидрофосфат калия и/или дигидрофосфат калия.

Жидкие препараты могут также представлять собой суспензии и эмульсии. Приготовление суспензий, например в коллоидной мельнице, и эмульсий, например в гомогенизаторе, известно в технике.

Парентеральные дозировочные формы, предназначенные для инъекции в жидкие среды организма, требуют соблюдения определенных значений изотоничности и рН, соответствующих этим значениям в жидких средах организма свиньи. Парентеральные препараты необходимо также стерилизовать перед применением.

Изотоничность можно довести до нужного уровня хлоридом натрия и другими солями. Для увеличения растворимости ингредиентов композиции и стабильности раствора могут быть применены другие растворители, такие как этанол или пропиленгликоль. Дополнительные виды используемых в предлагаемой форме добавок могут включать декстрозу, общепринятые антиоксиданты и хелатообразующие агенты, например этилендиаминтетрауксусную кислоту (EDTA).

Повторную вакцинацию можно провести через две-четыре недели после начальной иммунизации. Для профилактики поражения репродуктивной функции вакцинацию обычно проводят в сроки от 6 недель перед до 1 недели после случки. Для предотвращения заболеваний дыхательных путей у поросят, вакцинация может быть осуществлена в таком раннем возрасте как 3 недели. Ответ организма на вакцинацию можно контролировать путем измерения титра антитела, направленного против вируса PRRS, с помощью твердофазного иммуноферментного анализа (ELISA), анализа с нейтрализацией сыворотки, непрямой иммунофлюоресценции или Вестерн-блоттинга.

Вакцинный штамм имеет фенотипические свойства, которые позволяют использовать его для диагностики инфекции у свиней, вызванной PRRS дикого типа, в отличие от случаев, когда свиньи подвергаются воздействию лишь вакцинного штамма.

Животных, подвергнутых воздействию разных штаммов вируса PRRS, можно отличить от животных, на которых воздействовали только вакцинным штаммом NEB-1-Р94, путем оценки ответа антител на эпитоп, распознаваемый с помощью моноклонального антитела (Mab) SDOW17. Наличие антител, реактивных по отношению к эпитопу SDOW17, является показателем воздействия вируса дикого типа.

В качестве завершения оценки реакции антител на эпитоп SDOW17 можно использовать конкурентный анализ ELISA. На планшеты (96-луночные) наносили покрытие из NEB-1-вируса PRRS (или других вирусов PRRS, экспрессирующих эпитоп SDOW17). Затем планшеты инкубировали со свиной сывороткой из испытуемых животных и моноклональным антителом SDOW17, меченным ферментом (например, конъюгированным с пероксидазой хрена). Способность свиных сывороток распознавать эпитоп SDOW17 оценивали по ингибированию связывания с планшетом Mab SDOW17, меченного ферментом, причем ингибирование определяли по отсутствию изменения цвета ферментного субстрата. С другой стороны, можно использовать прямой анализ ELISA. Аминокислотная последовательность, содержащая эпитоп SDOW17, может быть получена как синтетический пептид или с помощью методов экспрессии рекомбинантной ДНК в соответствующей векторной системе, такой как E.coli. Планшеты с покрытием из антигена SDOW17 инкубировали со свиной сывороткой. Связывание антител свиньи с антигеном SDOW17 определяли путем инкубирования с антисвиными иммуноглобулиновыми антисыворотками, конъюгированными с ферментом, вслед за чем следовали инкубирование с ферментным субстратом и оценка изменения цвета.

Детально изобретение описано в нижеследующих примерах. Сведущему специалисту будет ясно, что на практике возможны модификации материалов и методов без отклонения от цели и сущности этого описания.

Пример 1
Установление фенотипической характеристики NEB-1-P94 по развитию на альвеолярных макрофагах.

Вакцинный штамм вируса NEB-1-P94 после пяти пересевов из заготовленного посевного материала анализировали по развитию МА104, MARC 145 и альвеолярных макрофагов свиньи. Альвеолярные макрофаги свиньи (SAM) были получены путем бронхо-альвеолярного промывания физиологическим раствором и последующего центрифугирования для получения клеток в виде шариков. Макрофаги вновь суспендировали в ЕМЕМ с добавлением 10% бычьей эмбриональной сыворотки и 50 мкг/мл гентамицина и поместили на 96-луночные планшеты для культур тканей в количестве около 7 • 10⁴ клеток на лунку. Клетки МА104 и MARC 145 нанесли на 96-луночные планшеты для культур тканей в среде (ЕМЕМ, содержащей 10% бычьей эмбриональной сыворотки, 30 мМ HEPES, 2 мМ L-глутамина и 50 мкг/мл гентамицина). Вирус NEB-1-P94 или родительский вирус NEB-1 последовательно развели в среде и по 0,2 мл каждого из растворов инокулировали репликатные лунки 96-луночных планшетов, причем лунки содержали SAM, MA104 или MARC 145. Культуры инкубировали в течение 5 дней при 37^oС в увлажненной камере, содержащей 3-5% CO₂, и исследовали на наличие цитопатических эффектов, типичных для вируса PRRS. Титры (50% конечных точек) были подсчитаны методом Spearman и Karber. NEB-1-P94 показал уменьшенные или не поддающиеся измерению титры на трех раздельных культурах SAM в сравнении с титрами, полученными на клетках MA104 и MARC 145 (таблица 1). Это является фенотипическим изменением по сравнению с родительским штаммом, который показывает одинаковые титры на всех тестируемых культурах. Поэтому ослабленное развитие на альвеолярных макрофагах свиньи представляет собой селективный фенотипический маркер для вакцинного штамма NEB-1-P94.

Пример 2
Установление фенотипической характеристики NEB-1-P94 по отсутствию вирулентности у свиньи
Четыре гнотобионтных поросенка (в возрасте от 7 до 10 дней) от свиноматок, серонегативных по отношению к вирусу PRRS, были инокулированы заготовленным посевным материалом вируса NEB-1-P94 (10^5,3 ТСID₅₀/мл) интраназально (3 мл/ноздрю). Поросята наблюдались с целью выявления клинических признаков заболевания дыхательных путей, и вакцинный штамм вируса был вновь выделен из сыворотки через пять дней после инокуляции. Сыворотку от первой группы свиней использовали для интраназальной инокуляции гнотобионтных свиней второй группы, которых контролировали таким же образом. Этот процесс был повторен для всех пяти серийных обратных пассажей в поросятах, чтобы определить, может ли вакцинный вирус вернуться в вирулентное состояние. Вакцинный вирус извлекли из каждого последовательного пассажа животного, однако, у гнотобионтных свиней не наблюдалось респираторного заболевания. Дополнительно, вирус, выделенный из пятого обратного пассажа свиньи, был интраназально инокулирован в обычных поросят в возрасте 1 недели и трех недель (каждому поросенку было введено около 10^5,3 ТСID₅₀/мл). За животными наблюдали в течение 42 дней после инокуляции вируса и никаких клинических признаков болезни (например, сильного, продолжительного жара, нарушений дыхания, повреждений в легких), сопутствующих инфицированию вирулентным PRRS, не было обнаружено. Поэтому пришли к заключению, что вирус NEB-1-P94 не является вирулентным для возбуждения респираторного заболевания у поросят.

Затем вирус NEB-1-P94 был проверен на его способность вызывать нарушение репродуктивной функции. Свиноматок, серонегативных в отношении PRRS, со сроком беременности 85 дней, инокулировали интраназально (3 мл/ноздрю) вакцинным штаммом из заготовленного посевного материала (10^4,5 TCID₅₀/мл). Все свиноматки опоросились в положенное им время, и 96% поросят родились живыми и здоровыми. Для сравнения, контрольные, не-инокулированные свиноматки дали приплод, где живы и здоровы были 87% поросят. Таким образом, вакцинный штамм не вызвал поражения репродуктивной функции, типичного для вирулентного вируса PRRS (смотри пример 4). Эти данные подтвердили авирулентный фенотип вакцинного штамма NEB-1-P94.

Пример 3
Установление фенотипической характеристики NEB-1-P94 по реактивности по отношению к моноклональным антителам, специфичным к вирусу PRRS
Клетки МА104, инфицированные родительским штаммом NEB-1 или вакцинным штаммом вируса NEB-1-P94, проверили на реактивность по отношению к моноклональным антителам, специфичным к вирусу PRRS, при помощи непрямой иммунофлюоресценции. Говоря вкратце, 96-луночные планшеты с монослоем клеток МА104 зафиксировали посредством 80% ацетона в течение 10 минут через два дня после инфицирования каждым вирусом. Затем монослои инкубировали с моноклональными антителами SDOW17, VО17 или ЕР147. После промывания определяли реактивность моноклонального антитела по отношению к каждому вирусу путем инкубирования с анти-мышиными IgG, конъюгированными с флюоресцеином изотиоцианатом, последующего промывания и оценки флюоресценции при помощи микроскопии. Для родительского штамма NEB-1 была отмечена позитивная флюоресценция со всеми тремя моноклональными антителами (см. таблицу 2). Однако вакцинный штамм NEB-1-P94 утратил реактивность по отношению к моноклональному антителу SDOW17, но дал позитивный результат с другими моноклональными антителами. Эти данные указывают на то, что штамм NEB-1-P94 не обнаруживает экспрессии эпитопа, распознаваемого с помощью моноклонального антитела SDOW17. Отсутствие реактивности по отношению к этому моноклональному антителу, вероятнее всего, означает генетическую мутацию в последовательности РНК у NEB-1-P94, которая привела к изменению аминокислотной последовательности в участке белка нуклеокапсида, распознаваемом при помощи SDOW17.

Пример 4
Профилактика поражения репродуктивной функции при помощи вакцинации свиноматок штаммом NEB-1-P94
Вакцину приготовили путем инокуляции монослоя клеток МА104 в роллерных флаконах штаммом NEB-1-P94 (4 пассажа из заготовленного посевного материала) при множественности поражения приблизительно 1:10 в среде ЕМЕМ, содержащей 10% бычьей эмбриональной сыворотки, 2 мМ L-глутамина и 30 мкг/мл гентамицина. Культуры инкубировали в течение трех дней при 37^oС и затем супернатантные жидкости собрали посредством декантирования. Вирусные жидкости разбавили в количестве 50% по объему стабилизатором (75 г/л триптона, 30 г/л декстрана, 2 г/л желатина, 100 г/л лактозы, 2 г/л глютамата натрия, 1,05 г/л КН₂PO₄, 2,5 г/л К₂НРO₄, 10 г/л альбуминовой фракции V), заморозили и лиофилизировали. Вакцину вновь увлажнили стерильной деионизированной водой и по 2 мл ее (10^5,1 ТСID₅₀/мл) ввели внутримышечно подсвинкам за 4-6 недель перед случкой.

На 85-й день беременности вакцинированных и контрольных не-вакцинированных подсвинков интраназально заразили вирусом NEB-1 (около 10^6,3 ТСID₅₀/мл). Животных наблюдали на протяжении семи недель после опороса с целью установить смерть зародыша или новорожденного, связанную с вирусом PRRS. Виремия, вызванная вирусом PRRS, развилась у 11 из 12 контрольных свиноматок (92%) и у 100% их рожденных живыми поросят. Инфицирование вирусом PRRS во время беременности привело к потере 16% поросят, родившихся мертвыми (большая мумификация плода и преждевременные роды) в контрольной группе (см. таблицу 4), тогда как у вакцинированных свиноматок умерло лишь 6% поросят. В дополнение к этому, результатом вакцинации явилось 50%-ное снижение рождения слабых и дрожащих поросят и 94%-ное уменьшение числа новорожденных поросят с малым весом (весящих меньше чем 2 фунта при рождении) по сравнению с контролем. Вакцинация предотвращала врожденное поражение вирусом PRRS, что доказывается отсутствием PRRS в крови и тканях всех поросят от иммунизированных свиноматок и примерно 55%-ной профилактикой гибели поросят в возрасте до 7 недель (см. таблицу 3) по сравнению с контролем. Статистически заметное предотвращение гибели поросят и вирусной инфекции у вакцинированных свиноматок и их потомства наглядно продемонстрировало эффективность этой вакцины для профилактики тех форм поражения репродуктивной функции, которые вызваны вирусом PRRS.

Пример 5
Профилактика заболевания дыхательных путей при помощи вакцинации свиноматок вирусом NEB-1-P94
Вакцину приготовили путем инокуляции монослоя клеток МА104 в роллерных флаконах вирусом NEB-1-P94 (при 4 пассажах из заготовленного посевного материала) с множественностью заражения приблизительно 1:10 в среде ЕМЕМ, содержащей 10% бычьей эмбриональной сыворотки, 2 мМ L-глутамина и 30 мкг/мл гентамицина. Культуры инкубировали в течение пяти дней при 37^oС и затем супернатантные жидкости собрали посредством декантирования. Вирусные жидкости разбавили в количестве 50% по объему стабилизатором (75 г/л триптона, 30 г/л декстрана, 2 г/л желатина, 100 г/л лактозы, 2 г/л глутамата натрия, 1,05 г/л КН₂РO₄, 2,5 г/л К₂НРO₄, 10 г/л альбуминовой фракции), заморозили и лиофилизировали. Вакцину вновь увлажнили стерильной деионизированной водой и 1 мл (10^4,9 TCID₅₀/мл) ввели внутримышечно поросятам, серонегативным в отношении PRRS, в возрасте трех недель.

Четыре недели спустя после вакцинации поросята были заражены вирулентным PRRS-вирусом NEB-1 интраназально, как описано для подсвинков (пример 4). Поросят наблюдали для обнаружения симптомов респираторного заболевания в течение 14 дней после заражения. У всех невакцинированных контрольных поросят развились клинические симптомы респираторного заболевания, а сравнение показало, что у вакцинированных животных это случилось в 3/40 (8%) случаев. Вакцинация обусловила статистически заметное снижение лихорадочных состояний, респираторных симптомов и клинических болезней у вакцинированных животных по сравнению с контрольными (см. таблицу 4). Это исследование ясно показало эффективность вакцины для профилактики у молодых свиней заболеваний дыхательных путей, вызванных вирусом PRRS.

Claims

1. Вакцина для защиты свиней от репродуктивного и респираторного синдрома, содержащая изолят NEB-1-Р94 вируса PRRS, хранящийся в Американской коллекции типовых культур под регистрационным номером VR-2525.

2. Вакцина по п.1, имеющаяся в форме живой, убитой или модифицированной живой (ослабленной) вакцины.

3. Вакцина по п.2, в которой вирусный агент является модифицированным живым (ослабленным) и имеется в жидком, замороженном или высушенном виде.

4. Вакцина по п.1, содержащая вирус в количестве 10^4,0 - 10^9,0 TCID₅₀ вируса PRRS на мл.

5. Вакцина по п.1, в которой ослабленный вирус можно отличить от диких форм вируса по отсутствию реактивности по отношению к моноклональному антителу SDOW17 и отсутствию эффективного развития на клетках альвеолярных макрофагах свиньи.

6. Способ защиты свиней от клинического заболевания, вызванного вирусом репродуктивного и респираторного синдрома, предусматривающий введение свинье эффективного количества вакцины по п.1 в случае, когда необходимо принять меры предосторожности против заболевания, вызванного вышеупомянутым вирусом.

7. Способ по п. 6, согласно которому вакцину вводят орально, интраназально, внутримышечно, внутрикожно, внутривенно или подкожно.