RU2015149979A

RU2015149979A - Способ очистки белка фактора роста

Info

Publication number: RU2015149979A
Application number: RU2015149979A
Authority: RU
Inventors: Густав ГИЛЛЬЯМ; Стефан ВИНГЕ; Майя ТИМЕЙЕР
Original assignee: Октафарма Аг
Priority date: 2010-03-30
Filing date: 2011-03-30
Publication date: 2019-01-15
Also published as: JP2016190856A; CA2793143A1; ZA201207228B; JP2013523690A; EP2552948A1; WO2011121031A1; CN105859870A; US9453045B2; BR112012024956A2; MX2012011065A; CA2793143C; US10214575B2; ES2670827T3; EP2552948B1; US20170051028A1; DK3040346T3; RU2571926C2; EP3040346A1; ES2596727T3; AU2011234532B2

Claims

1. Способ очистки фактора роста гепатоцитов в последовательности очистки, применяющей хроматографию, отличающийся тем, что

- по меньшей мере, одна хроматография осуществляется с использованием многомодальной смолы, содержащей отрицательно заряженный лиганд в виде 2-(бензоиламино)бутановой кислоты,

- фактор роста гепатоцитов связывается с многомодальной смолой при pH в интервале 4-6,2, и

- фактор роста гепатоцитов элюируется при pH >6,3.

2. Способ по п. 1, где многомодальная смола включает компоненты, связанные с матрицей, и компоненты, способные взаимодействовать с фактор роста гепатоцитов в смеси посредством ионных взаимодействий и взаимодействий других типов, таких как водородные связи и гидрофобное взаимодействие.

3. Способ по п. 1 или 2, где смесь, включающая фактор роста гепатоцитов, представляет собой раствор.

4. Способ по п. 1, где фактор роста гепатоцитов представляет собой рекомбинантный фактор роста гепатоцитов.

5. Способ по п. 1, где фактор роста гепатоцитов элюируется с помощью изменения pH >6,3.

6. Способ по п. 1, где элюцию осуществляют с помощью изменения pH или с помощью элюирующего агента, включающего аминокислоту, содержащую основную боковую цепь, и/или высокой ионной силы в элюирующем буфере.

7. Способ по п. 6, где концентрация элюирующего агента находится в интервале от примерно 0,1 M до примерно 2,0 M.

8. Способ по п. 1, где фактор роста гепатоцитов связывается с мнгомодальной смолой при pH от примерно 4,0 до примерно 6,0, и фактор роста гепатоцитов элюируется с многомодальной смолы при pH 6,5 или выше, в частности, при pH примерно 7,0.

9. Способ по п. 1, где используется буферное вещество, включающее цитрат натрия, ацетат натрия, HEPES, причем буферное вещество предпочтительно выбрано из группы, состоящей из цитрата натрия, гистидина, 2-(4-(2-гидроксиэтил)-1-пиперазинил)этансульфокислоты (HEPES), 2-(N-морфолино)этансульфокислоты (MES), основания Tris и ацетата натрия, в частности, в интервале pH от примерно 4 до примерно 8.

10. Способ по п. 1, где неионный детергент присутствует в любом из используемых буферов, причем неионный детергент предпочтительно выбран из группы, состоящей из полисорбатов (полисорбат 20, 40, 60, 80) и Pluronic F68.

11. Способ по пп. 8-10, где аминокислота, содержащая основную боковую цепь, представляет собой аргинин, лизин и/или гистидин.

12. Способ по п. 1, где используются буферы, включающие примерно 0,1 M - 2 M хлорида натрия, или может использоваться 0,1 M - 2 M моногидрохлорид аргинина в стадии промывки при pH в интервале 4,0-6,0 перед элюцией фактора роста гепатоцитов.

13. Способ по п. 1, отличающийся тем, что для отмывки многомодальной смолы от загрязнителей и для удержания фактора роста гепатоцитов перед его высвобождением применяется промывочный буфер, отличающийся тем, что он включает аминокислоту, содержащую основную боковую цепь и/или соль, выбранную согласно рядам Гофмейстера.

14. Способ по п. 1, отличающийся тем, что многомодальная хроматографическая смола выбрана из следующих коммерчески доступных смол HEP Hypercel™; PPA Hypercel™; Capto Adhere™; Capto MMC™; МЕР Hypercel™.

15. Способ по п. 1, включающий следующие стадии:

- применение катионной многомодальной смолы, такой как Capto MMC;

- стадия на основе химической инактивации для оболочечных вирусов, в частности, инактивация с использованием растворителя/детергента, применяющая три-н-бутилфосфат и Triton X-100, как раскрыто в EP-A-131 740;

- применение аффинной смолы на основе лиганда, экспрессируемого в дрожжах;

- применение катионообменной смолы, такой как SP Sepharose или Resource S;

- стадия удаления патогенов фильтрацией со средним размером пор примерно 20 нм, как например у Planova 20N;

- стадия замены буфера и/или концентрирования, как, например, ультрафильтрация с использованием приблизительной границы пропускания 1-5 кДа;

- применение смолы для эксклюзионной хроматографии, такой как Superdex 75.

16. Способ по п. 15, отличающийся тем, что стадию многомодальной хроматографии объединяют со стадией аффинной хроматографии, где аффинность обеспечивается лигандом на основе белка, экспрессируемого в дрожжах, и тем, что чистота продукта, полученного в результате использования смолы аффинной

хроматографии, составляет более чем 90%.

17. Способ по п. 16, отличающийся тем, что осуществляют дополнительную(ые) стадию(стадии) хроматографии, выбранную из эксклюзионной хроматографии, анионообменной хроматографии, катионообменной хроматографии, хроматографии на основе гидрофобного взаимодействия и аффинной хроматографии с иммобилизованным металлом, отличающийся тем, что чистота конечного продукта составляет более чем 99%.

18. Способ по п. 1, отличающийся тем, что последовательность очистки дополнительно включает стадии удаления/инактивации патогенов, включающие стадию химической инактивации, стадию удаления на основе размера, хроматографические стадии или их комбинации, которые основаны на различных физиологических свойствах, направленных на удаление патогенов.