RU2014104113A - Elisa для vegf - Google Patents

Abstract

1. Способ детекции селективных форм (VEGF) фактора роста эндотелия сосудов (VEGF) в биологическом образце, включающий стадии:(a) контактирования и инкубации биологического образца с реагентом захвата, иммобилизованным на твердой подложке, где реагент захвата представляет собой антитело, которое распознает тот же эпитоп, что и антитело 5C3 против VEGF человека, причем указанное моноклональное антитело специфично связывается с остатками, в количестве более чем 110, из VEGF человека;(b) отделение биологического образца от иммобилизованных реагентов захвата;(c) контактирование иммобилизованного молекулярного комплекса реагента захвата-мишени с детектируемым антителом, которое связывается с доменами VEGF, ответственными за связывание с рецептором KDR и/или FLT1, или которое связывается с эпитопом в VEGF1-110; и(d) измерение уровня VEGF, связанного с реагентами захвата, с использованием средства детекции для детектируемого антитела.2. Способ по п. 1, где биологический образец отобран у человека.3. Способ по п. 2, где человек представляет собой пациента с сосудистым, диабетическим или раковым заболеванием, и стадия измерения (d) дополнительно включает сравнение со стандартной кривой для определения уровня VEGF в сравнении с уровнем у здорового индивидуума.4. Способ по п. 1, где биологический образец представляет собой опухолевые лизаты, плазму, сыворотку или мочу.5. Способ по п. 1, где реагент захвата представляет собой моноклональное антитело 5C3.6. Способ по п. 1, где иммобилизованные реагенты захвата наносят в качестве покрытия на микротитрационный планшет.7. Способ по п. 1, где детектируемое антитело является непосредственно детектируемым.8. Способ

Claims (25)

1. Способ детекции селективных форм (VEGF₁₁₀₊) фактора роста эндотелия сосудов (VEGF) в биологическом образце, включающий стадии:

(a) контактирования и инкубации биологического образца с реагентом захвата, иммобилизованным на твердой подложке, где реагент захвата представляет собой антитело, которое распознает тот же эпитоп, что и антитело 5C3 против VEGF человека, причем указанное моноклональное антитело специфично связывается с остатками, в количестве более чем 110, из VEGF человека;

(b) отделение биологического образца от иммобилизованных реагентов захвата;

(c) контактирование иммобилизованного молекулярного комплекса реагента захвата-мишени с детектируемым антителом, которое связывается с доменами VEGF, ответственными за связывание с рецептором KDR и/или FLT1, или которое связывается с эпитопом в VEGF1-110; и

(d) измерение уровня VEGF₁₁₀₊, связанного с реагентами захвата, с использованием средства детекции для детектируемого антитела.

2. Способ по п. 1, где биологический образец отобран у человека.

3. Способ по п. 2, где человек представляет собой пациента с сосудистым, диабетическим или раковым заболеванием, и стадия измерения (d) дополнительно включает сравнение со стандартной кривой для определения уровня VEGF в сравнении с уровнем у здорового индивидуума.

4. Способ по п. 1, где биологический образец представляет собой опухолевые лизаты, плазму, сыворотку или мочу.

5. Способ по п. 1, где реагент захвата представляет собой моноклональное антитело 5C3.

6. Способ по п. 1, где иммобилизованные реагенты захвата наносят в качестве покрытия на микротитрационный планшет.

7. Способ по п. 1, где детектируемое антитело является непосредственно детектируемым.

8. Способ по п. 7, где детектируемое антитело амплифицируется с помощью люминесцентного реагента.

9. Способ по п. 8, где детектируемое антитело является биотинилированным, и средство детекции представляет собой авидин или стрептавидин-пероксидазу, и 3,3',5,5'-тетраметилбензидин.

10. Способ по п. 1, где детектируемое антитело представляет собой моноклональное антитело.

11. Способ по п. 10, где детектируемое антитело представляет собой мышиное моноклональное антитело.

12. Способ по п. 11, где иммобилизованное моноклональное антитело представляет собой антитело MAb 5C3, и детектируемое антитело представляет собой антитело MAb A4.6.1.

13. Набор реагентов иммуноанализа для детекции VEGF₁₁₀₊ в биологическом образце, включающий:

(a) антитело против VEGF человека, в качестве реагента захвата, где моноклональное антитело специфично связывается с остатками, в количестве более чем 110, из VEGF человека; и

(b) детектируемое антитело, в качестве реагента детекции, которое связывается с доменами VEGF, ответственными за

связывание с рецептором KDR и/или FLT1, или которое связывается с эпитопом в VEGF1-110.

14. Набор по п. 13, дополнительно включающий твердую подложку для реагентов захвата.

15. Набор по п. 14, где реагенты захвата иммобилизованы на твердой подложке.

16. Набор по п. 15, где реагенты захвата наносят в качестве покрытия на микротитрационный планшет.

17. Набор по п. 16, дополнительно включающий средства детекции для детектируемых антител.

18. Набор по п. 17, где средство детекции является колориметрическим.

19. Набор по п. 13, дополнительно включающий очищенный VEGF в качестве стандарта антигена.

20. Набор по п. 13, где реагент захвата в виде антитела представляет собой мышиное моноклональное антитело MAb 5C3, и детектируемое антитело представляет собой антитело MAb A4.6.1.

21. Антитело 5C3, получаемое из гибридомы 5C3.1.1 с депозитным номером PTA-7737 (или продуцируемое указанной гибридомой).

22. Антитело по п. 21, конъюгированное с детектируемой меткой.

23. Гибридома 5C3.1.1, депонированная в ATCC с депозитным номером PTA-7737.

24. Антитело, которое не связывается с VEGF 110, и которое связывается с тем же эпитопом, что и моноклональное антитело, продуцируемое гибридомной клеточной линией PTA-7737.

25. Моноклональное антитело по п. 24, которое конъюгировано с детектируемой меткой.