RU2011144119A

RU2011144119A - АНТИТЕЛА К FcRH5, ИХ ИММУНОКОНЪЮГАТЫ И СПОСОБЫ ИХ ПРИМЕНЕНИЯ

Info

Publication number: RU2011144119A
Application number: RU2011144119/10A
Authority: RU
Inventors: Кристи ЭЛКИНС; Эндрю Полсон; Аллен ЭБЕНС; Камелия АДАМС; Бин ЧЖЭН; Джагатх Р. ДЖУНУТУЛА; Джо-энн ХОНГО; Янь У
Original assignee: Дженентек, Инк.
Priority date: 2009-04-01
Filing date: 2010-03-31
Publication date: 2013-05-10

Claims

1. Антитело к FcRH5, состоящее из:

(а) по меньшей мере, одной последовательности HVR, выбираемой из следующей группы:

(i) HVR-L1, включающий последовательность KASQNVGSNVA (SEQ ID NO:28),

(ii) HVR-L2, включающий последовательность SASYRYS (SEQ ID NO:29),

(iii) HVR-L3, включающий последовательность QQYKTWT (SEQ ID NO:30),

(iv) HVR-H1, включающий последовательность GYTFTNYGMN (SEQ ID NO:37),

(v) HVR-H2, включающий последовательность NTYTGEPTYTDDFKG (SEQ ID NO:38),

(vi) HVR-H3, включающий последовательность ARRSIPYYYAMDY (SEQ ID NO:39); и

(б) по меньшей мере, одного варианта HVR, в котором последовательность такого варианта HVR включает модификацию, по меньшей мере, одного остатка последовательности SEQ ID NO:28, 29, 30, 37, 38 или 39.

2. Антитело по п.1, отличающееся тем, что остаток номер 9 в HVR-H1 представлен I.

3. Антитело по п.1, отличающееся тем, что, по меньшей мере, участок последовательности каркасного участка представлен консенсусной последовательностью каркасного участка человека.

4. Антитело по п.1, отличающееся тем, что указанная модификация представлена заменой, вставкой или делецией.

5. Антитело по п.1, отличающееся тем, что включает HVR-H2 с последовательностью SEQ ID NO:38.

6. Гуманизированное антитело к FcRH5, моновалентная аффинность которого к человеческому FcRH5 практически такая же, что и моновалентная аффинность мышиного антитела, включающего последовательность вариабельного домена легкой цепи и тяжелой цепи, как это указано на Фиг.9 (SEQ ID NO:18) и Фиг.10 (SEQ ID NO:20).

7. Гуманизированное антитело к FcRH5, моновалентная аффинность которого к человеческому FcRH5, по меньшей мере, в 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 или 10 раз больше, чем моновалентная аффинность мышиного или химерного антитела, включающего последовательность вариабельного домена легкой цепи и тяжелой цепи, как это указано на Фиг.9 (SEQ ID NO:18) и Фиг.10 (SEQ ID NO:20).

8. Гуманизированное антитело к FcRH5, моновалентная аффинность которого к человеческому FcRH5, по меньшей мере, в 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 55 или 60 раз меньше, чем моновалентная аффинность мышиного или химерного антитела, включающего последовательность вариабельного домена легкой цепи и тяжелой цепи, как это указано на Фиг.9 (SEQ ID NO:18) и Фиг.10 (SEQ ID NO:20).

9. Гуманизированное антитело к FcRH5, аффинность которого в его двухвалентной форме к человеческому FcRH5 практически такая же, что и аффинность мышиного антитела в его двухвалентной форме, включающего последовательность вариабельного домена легкой цепи и тяжелой цепи, как это указано на Фиг.9 (SEQ ID NO:18) и Фиг.10 (SEQ ID NO:20).

10. Гуманизированное антитело к FcRH5, аффинность которого в его двухвалентной форме к человеческому FcRH5, по меньшей мере, в 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 или 10 раз больше, чем аффинность мышиного или химерного антитела в его двухвалентной форме, включающего последовательность вариабельного домена легкой цепи и тяжелой цепи, как это указано на Фиг.9 (SEQ ID NO:18) и Фиг.10 (SEQ ID NO:20).

11. Гуманизированное антитело к FcRH5, аффинность которого к человеческому FcRH5 в его двухвалентной форме, по меньшей мере, в 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 55 или 60 раз меньше, чем аффинность мышиного или химерного антитела в его двухвалентной форме, включающего последовательность вариабельного домена легкой цепи и тяжелой цепи, как это указано на Фиг.9 (SEQ ID NO:18) и Фиг.10 (SEQ ID NO:20).

12. Гуманизированное антитело к FcRH5, аффинность которого к человеческому FcRH5 в его двухвалентной форме составляет 0,4 нМ.

13. Гуманизированное антитело к FcRH5 по п.12, отличающееся тем, что аффинность антитела в его двухвалентной форме к человеческому FcRH5 составляет 0,4 нМ±0,04.

14. Гуманизированное антитело к FcRH5, аффинность которого в его двухвалентной форме к человеческому FcRH5 составляет 0,2 нМ.

15. Гуманизированное антитело к FcRH5 по п.14, отличающееся тем, что аффинность антитела в его двухвалентной форме к человеческому FcRH5 составляет 0,2 нМ±0,02.

16. Гуманизированное антитело к FcRH5, аффинность которого в его двухвалентной форме к человеческому FcRH5 составляет 0,5 нМ.

17. Гуманизированное антитело к FcRH5 по п.16, отличающееся тем, что аффинность антитела в его двухвалентной форме к человеческому FcRH5 составляет 0,5 нМ±0,1.

18. Антитело по любому из пп.6-17, отличающееся тем, что аффинность связывания выражается в значении Kd.

19. Антитело по любому из пп.6-17, отличающееся тем, что аффинность связывания измеряется путем анализа Biacore или радиоиммуноанализа.

20. Антитело по п.1, включающее консенсусную последовательность каркасного участка подгруппы I человека.

21. Антитело по п.1, включающее консенсусную последовательность каркасного участка подгруппы III тяжелой цепи человека.

22. Антитело по п.21, отличающееся тем, что последовательность каркасного участка включает замену в положении 11, 12, 13, 18, 19, 20, 75, 78, 82, 82а, 83 и/или 34.

23. Антитело по п.22, отличающееся тем, что указанное замещение представлено L11V, V12K, V13K, L18V, R19K, L20V, K75V, V78A, N82I, N82aS, R83K и/или M34I.

24. Антитело по п.21, отличающееся тем, что последовательность каркасного участка включает замену в положении 12, 13, 34 и/или 78.

25. Антитело по п.24, отличающееся тем, что указанное замещение представлено V12K, V13K, M34I и/или V78A.

26. Гуманизированное антитело к FcRH5, ингибирующее рост клеток опухоли при его конъюгации с цитотоксическим агентом.

27. Антитело по любому из пп.1, 6-12, 14, 16 и 26, отличающееся тем, что гуманизированное антитело и химерное антитело являются моновалентными или двухвалентными.

28. Антитело по любому из пп.1, 6-12, 14, 16 и 26, отличающееся тем, что гуманизированное антитело и химерное антитело включают один участок Fab, присоединенный к участку Fc.

29. Антитело, включающее вариабельный домен тяжелой цепи, содержащий последовательность HVR1-HC, HVR2-HC и/или HVR3-HC, указанную на Фиг.12 (SEQ ID NO:37-39).

30. Антитело по п.29, отличающееся тем, что вариабельный домен включает последовательность FR1-HC, FR2-HC, FR3-HC и/или FR4-HC, указанную на Фиг.12 (SEQ ID NO:33-36).

31. Антитело по п.29 или 30, отличающееся тем, что оно включает последовательность СН1 и/или Fc, указанную на Фиг.12 (SEQ ID NO:40 и/или 41).

32. Антитело, включающее вариабельный домен легкой цепи, содержащий последовательность HVR1-LC, HVR2-LC и/или HVR3-LC, указанную на Фиг.12 (SEQ ID NO:28-30).

33. Антитело по п.32, отличающееся тем, что вариабельный домен включает последовательность FR1-LC, FR2-LC, FR3-LC и/или FR4-LC, указанную на Фиг.12 (SEQ ID NO:24-27).

34. Антитело по п.32 или 33, отличающееся тем, что включает последовательность CL1, указанную на Фиг.12 (SEQ ID NO:31).

35. Полипептид, включающий последовательность, отображенную на Фиг.11 (SEQ ID NO:21).

36. Полипептид, включающий последовательность, отображенную на Фиг.9 (SEQ ID NO:19).

37. Полипептид, включающий последовательность, отображенную на Фиг.11 (SEQ ID NO:22).

38. Полипептид, включающий последовательность, отображенную на Фиг.11 (SEQ ID NO:23).

39. Антитело, полученное согласно способу, включающему:

(а) культивацию клетки, экспрессирующей антитело, состоящее из вариабельного домена тяжелой цепи антитела по любому из пп.29-31 и вариабельного домена легкой цепи антитела по любому из пп.32-34; и

(б) изоляцию антитела из указанной культивированной клетки.

40. Антитело, включающее вариабельный домен тяжелой цепи антитела по любому из пп.29-31 и вариабельный домен легкой цепи антитела по любому из пп.32-34.

41. Антитело по п.40, отличающееся тем, что антитело моновалентное и включает участок Fc.

42. Антитело по п.40, отличающееся тем, что антитело является биспецифическим антителом.

43. Антитело по п.42, отличающееся тем, что антитело специфически связывается с CD3.

44. Антитело по п.43, отличающееся тем, что оно является антителом типа «выпуклость во впадине».

45. Антитело по п.44. отличающееся тем, что антитело агликозилировано.

46. Антитело по п.45, вырабатываемое в клетках-хозяевах Escherichia coli.

47. Антитело по п.45, отличающееся отсутствием одной или нескольких эффекторных функций Fc.

48. Антитело по п.47, отличающееся отсутствием активности АЗКЦ.

49. Антитело по п.1, отличающееся тем, что включает вариабельный домен легкой цепи, имеющий, по меньшей мере, 90% идентичность аминокислотной последовательности в сравнении с аминокислотной последовательностью, выбираемой из SEQ ID NO:19.

50. Антитело по п.1, отличающееся тем, что включает вариабельный домен тяжелой цепи, имеющий, по меньшей мере, 90% идентичность аминокислотной последовательности в сравнении с аминокислотной последовательностью, выбираемой из SEQ ID NO:21.

51. Антитело по п.1, отличающееся тем, что включает вариабельный домен тяжелой цепи, имеющий, по меньшей мере, 90% идентичность аминокислотной последовательности в сравнении с аминокислотной последовательностью, выбираемой из SEQ ID NO:22.

52. Антитело по п.1, отличающееся тем, что включает вариабельный домен тяжелой цепи, имеющий, по меньшей мере, 90% идентичность аминокислотной последовательности в сравнении с аминокислотной последовательностью, выбираемой из SEQ ID NO:23.

53. Антитело по п.1, отличающееся тем, что включает вариабельный домен тяжелой цепи, состоящий из одной, двух, трех или четырех аминокислотных последовательностей каркасных участков, выбираемых из SEQ ID NO:33, 34, 35 и 36.

54. Антитело по п.1, отличающееся тем, что включает вариабельный домен легкой цепи, состоящий из одной, двух, трех или четырех аминокислотных последовательностей каркасных участков, выбираемых из SEQ ID NO:24, 25, 26, 27 и 28.

55. Антитело по п.1, отличающееся тем, что включает вариабельный домен тяжелой цепи, состоящий из одной, двух, трех или четырех аминокислотных последовательностей каркасных участков, имеющий, по меньшей мере, 90% идентичность аминокислотной последовательности в сравнении с аминокислотными последовательностями, выбираемыми из SEQ ID NO:33, 34, 35 и 36.

56. Антитело по п.1, отличающееся тем, что включает вариабельный домен легкой цепи, состоящий из одной, двух, трех или четырех аминокислотных последовательностей каркасных участков, имеющий, по меньшей мере, 90% идентичность аминокислотной последовательности в сравнении с аминокислотными последовательностями, выбираемыми из SEQ ID NO:24, 25, 26, 27 и 28.

57. Антитело по п.49, отличающееся тем, что включает вариабельный домен тяжелой цепи, имеющий, по меньшей мере, 90% идентичность аминокислотной последовательности в сравнении с аминокислотной последовательностью, выбираемой из SEQ ID NO:21.

58. Антитело по п.49, отличающееся тем, что включает вариабельный домен тяжелой цепи, имеющий, по меньшей мере, 90% идентичность аминокислотной последовательности в сравнении с аминокислотной последовательностью, выбираемой из SEQ ID NO:22.

59. Антитело по п.49, отличающееся тем, что включает вариабельный домен тяжелой цепи, имеющий, по меньшей мере, 90% идентичность аминокислотной последовательности в сравнении с аминокислотной последовательностью, выбираемой из SEQ ID NO:23.

60. Антитело по п.50, отличающееся тем, что включает вариабельный домен легкой цепи, имеющий, по меньшей мере, 90% идентичность аминокислотной последовательности в сравнении с аминокислотной последовательностью, выбираемой из SEQ ID NO:19.

61. Антитело, связывающееся с FcRH5 и отличающееся тем, что включает вариабельный домен тяжелой цепи с идентичностью последовательности, равной, по меньшей мере, 90%, в сравнении с аминокислотной последовательностью SEQ ID NO:21.

62. Антитело, связывающееся с FcRH5 и отличающееся тем, что включает вариабельный домен тяжелой цепи с идентичностью последовательности, равной, по меньшей мере, 90%, в сравнении с аминокислотной последовательностью SEQ ID NO:22.

63. Антитело, связывающееся с FcRH5 и отличающееся тем, что включает вариабельный домен тяжелой цепи с идентичностью последовательности, равной, по меньшей мере, 90%, в сравнении с аминокислотной последовательностью SEQ ID NO:23.

64. Антитело, связывающееся с FcRH5 и отличающееся тем, что включает вариабельный домен легкой цепи с идентичностью последовательности, равной, по меньшей мере, 90%, в сравнении с аминокислотной последовательностью SEQ ID NO:19.

65. Антитело, связывающееся с FcRH5 и отличающееся тем, что включает вариабельный домен тяжелой цепи с идентичностью последовательности, равной, по меньшей мере, 90%, в сравнении с аминокислотной последовательностью SEQ ID NO:21, и вариабельный домен легкой цепи с идентичностью последовательности, равной, по меньшей мере, 90%, в сравнении с аминокислотной последовательностью SEQ ID NO:19.

66. Антитело, связывающееся с FcRH5 и отличающееся тем, что включает вариабельный домен тяжелой цепи с идентичностью последовательности, равной, по меньшей мере, 90%, в сравнении с аминокислотной последовательностью SEQ ID NO:22, и вариабельный домен легкой цепи с идентичностью последовательности, равной, по меньшей мере, 90%, в сравнении с аминокислотной последовательностью SEQ ID NO:19.

67. Антитело, связывающееся с FcRH5 и отличающееся тем, что включает вариабельный домен тяжелой цепи с идентичностью последовательности, равной, по меньшей мере, 90%, в сравнении с аминокислотной последовательностью SEQ ID NO:23, и вариабельный домен легкой цепи с идентичностью последовательности, равной, по меньшей мере, 90%, в сравнении с аминокислотной последовательностью SEQ ID NO:19.

68. Антитело, связывающееся с FcRH5 и включающее вариабельный домен тяжелой цепи с идентичностью последовательности, равной, по меньшей мере, 90%, в сравнении с аминокислотной последовательностью SEQ ID NO:20, и вариабельный домен легкой цепи с идентичностью последовательности, равной, по меньшей мере, 90%, в сравнении с аминокислотной последовательностью SEQ ID NO:18.

69. Антитело, связывающееся с FcRH5 и отличающееся тем, что оно включает вариабельный домен тяжелой цепи с идентичностью последовательности, равной, по меньшей мере, 90%, в сравнении с аминокислотной последовательностью SEQ ID NO:13, и вариабельный домен легкой цепи с идентичностью последовательности, равной, по меньшей мере, 90%, в сравнении с аминокислотной последовательностью SEQ ID NO:11.

70. Полинуклеотид, кодирующий антитело по любому из пп.1, 40, 57-59 и 68-69.

71. Вектор, включающий полинуклеотид по п.70.

72. Клетка-хозяин, включающая вектор по п.71.

73. Способ получения антитела к FcRH5, вкючающий: (а) культивацию клетки-хозяина, выбранной из группы эукариотических клеток и клеток СНО в условиях, подходящих для экспрессии полинуклеотида, кодирующего антитело, и (б) изоляцию антитела.

74. Антитело, связывающееся по существу с одной и той же антигенной детерминантой, что и антигенная детерминанта для антитела, включающего полипептид тяжелой цепи с аминокислотной последовательностью SEQ ID NO:21, SEQ ID NO:22 или SEQ ID NO:23 или консенсусной или вариантной последовательностью, основанной на указанных аминокислотных последовательностях.

75. Антитело по п.74, связывающееся по существу с одной и той же антигенной детерминантой, что и антигенная детерминанта для антитела, включающего полипептид легкой цепи с аминокислотной последовательностью SEQ ID NO:19 или консенсусной или вариантной последовательностью, основанной на указанных аминокислотных последовательностях.

76. Антитело по пп.1, 40, 57-59 и 68-69, отличающееся тем, что антитело связывается с одной и той же антигенной детерминантой, что и антитело, включающее вариабельный домен тяжелой цепи с последовательностью SEQ ID NO:21, SEQ ID NO:22 или SEQ ID NO:23 и вариабельный домен легкой цепи с последовательностью SEQ ID NO:19.

77. Антитело по любому из пп.1, 40, 57-59 и 68-69, отличающееся тем, что FcRH5 экспрессируется на поверхности клетки.

78. Антитело по п.77, отличающееся тем, что клетка представлена В-клеткой.

79. Антитело по п.78, отличающееся тем, что В-клетка связана с нарушением пролиферации В-клеток.

80. Антитело по п.78, отличающееся тем, что В-клетка связана с нарушением плазмацитов.

81. Антитело по п.79, отличающееся тем, что нарушение пролиферации В-клеток представлено раком.

82. Антитело по п.80, отличающееся тем, что нарушение плазмацитов представлено раком.

83. Антитело по п.81, отличающееся тем, что нарушения пролиферации В-клеток выбраны из следующего: лимфомы, неходжкинской лимфомы (НХЛ), агрессивной формы НХЛ, рецидивирующей агрессивной формы НХЛ, рецидивирующей вялотекущей НХЛ, рефракторной НХЛ, рефрактерной вялотекущей НХЛ, хронического лимфоцитарного лейкоза (ХЛЛ), мелкоклеточной лимфоцитарной лимфомы, лейкозы, волосатоклеточного лейкоза (ВКЛ), острого лимфоцитарного лейкоза (ОЛЛ) и лимфомы из клеток мантийной зоны.

84. Антитело по п.82, отличающееся тем, что нарушение плазмацитов выбрано из следующих заболеваний: моноклональных гаммапатий неопределенной значимости (МГНО), множественной миеломы (ММ), макроглобулинемии, болезни тяжелых цепей и системного амилоидоза легких цепей (AL), солитарной плазмацитомы, экстрамедуллярной плазмацитомы, множественной солитарной плазмацитомы, плазмаклеточного лейкоза, В-клеточной неходжкинской лимфомы, В-клеточного хронического лимфоцитарного лейкоза.

85. Антитело по пп.1, 40, 57-59 и 68-69, отличающееся тем, что оно является моноклональным антителом.

86. Антитело по п.85, отличающееся тем, что оно представлено фрагментом антитела, выбираемым из фрагментов Fab, Fab'-SH, Fv, scFv или (Fab')₂.

87. Антитело по п.85, отличающееся тем, что антитело гуманизировано.

88. Иммуноконъюгат, включающий антитело по пп.1, 40, 57-59 и 68-69, ковалентно присоединенное к цитотоксическому агенту.

89. Иммуноконъюгат по п.88, отличающийся тем, что цитотоксический агент выбран из токсина, химиотерапевтического агента, молекулы препарата, антибиотика, радиоактивного изотопа и нуклеазы.

90. Иммуноконъюгат по п.89, отличающийся тем, что иммуноконъюгат имеет формулу Ab-(L-D)p, где: (а) Ab является антителом по пп.1, 40, 57-59 и 68-69;

(б) L является линкером;

(в) D является молекулой препарата.

91. Иммуноконъюгат по п.90, отличающийся тем, что L выбран из 6-малеимидокапроила (МС), малеимидопропаноила (МР), валин-цитруллина (вал-цит), аланин-фенилаланина (ала-фен), р-аминобензилоксикарбонила (РАВ), N-сукцинимидил 4-(2-пиридилтио) пентаноата (SPP), N-сукцинимидил 4-(N-малеимидометил) циклогексан-1 карбоксилата (SMCC), эфира 4-(2-пиридилдитио)масляной кислоты и N-гидроксисукцинимида (SPDB) и N-сукцинимидил (4-йодоацетил) аминобензоата (SIAB).

92. Иммуноконъюгат по п.90, отличающийся тем, что D выбран из группы, включающей майтансиноид, ауристатин и долостатин.

93. Иммуноконъюгат по п.90, отличающийся тем, что D представляет собой ауристатин или долостатин, и D представляет собой лекарственное соединение формулы DE или DF:

где каждый R2 и R6 представляют собой метил,

каждый R3 и R4 представляют собой изопропил,

R7 представляет собой вторичный бутил,

каждый R8 независимо выбран из СН₃, O-СН₃, ОН и Н;

R9 представляет собой Н;

R10 представляет собой арил;

Z представляет собой -О- или -NH-;

R11 представляет собой Н, C₁-C₈-алкил или -(СН₂)₂-O-(СН₂)₂-O-(СН₂)₂-O-СН₃; R18 представляет собой -С(R8)₂-С(R8)₂-арил; и

(D)p варьирует приблизительно от 1 до 8,

при этом лекарственное соединение выбрано из ММАЕ и MMAF.

94. Иммуноконъюгат по п.88, где иммуноконъюгат представлен формулой Ab-(L-MMAE)p, где L представляет собой линкер, и р варьирует приблизительно от 2 до 5.

95. Иммуноконъюгат по п.88, где иммуноконъюгат представлен формулой Ab-(L-MMAF)p, где L представляет собой линкер, и р варьирует приблизительно от 2 до 5.

96. Иммуноконъюгат по п.94 или 95, где L включает вал-цит, МС, РАВ или МС-РАВ.

97. Иммуноконъюгат по п.90, где D представляет собой майтансиноид.

98. Иммуноконъюгат по п.97, где D выбран из DM1, DM3 и DM4.

99. Иммуноконъюгат по п.98, где р имеет значение 2-4 или 3-4.

100. Иммуноконъюгат по п.90, где иммуноконъюгат выбран из следующих структур

где Val является валином; Cit-цитруллином.

101. Фармацевтическая композиция, включающая иммуноконъюгат по п.90 и фармацевтически приемлемый носитель.

102. Применение антитела по любому из пп.1, 40, 57-59 и 68-69 для получения лекарственного средства для ингибирования роста клетки, экспрессирующей FcRH5.

103. Применение по п.102, где указанное антитело конъюгировано с цитотоксическим агентом.

104. Применение по п.102, где указанное антитело конъюгировано с препаратом-ингибитором роста.

105. Применение по п.102, где лекарственное средство дополнительно включает эффективное количество другого терапевтического агента.

106. Применение эффективного количества антитела по любому из пп.1, 40, 57-59 и 68-69 для получения лекарственного средства для лечения субъекта, страдающего раком.

107. Применение по п.106, где раковое заболевание выбрано из группы, включающей лимфому, неходжкинскую лимфому (НХЛ), агрессивную форму НХЛ, рецидивирующую агрессивную форму НХЛ, рецидивирующую вялотекущую НХЛ, рефракторную НХЛ, рефрактерную вялотекущую НХЛ, хронический лимфоцитарный лейкоз (ХЛЛ), мелкоклеточную лимфоцитарную лимфому, лейкоз, волосатоклеточный лейкоз (ВКЛ), острый лимфоцитарный лейкоз (ОЛЛ) и лимфому из клеток мантийной зоны.

108. Применение по п.106, где указанное антитело конъюгировано с цитотоксическим агентом.

109. Применение по п.106, где указанное антитело конъюгировано с препаратом-ингибитором роста.

110. Применение по п.106, где лекарственное средство дополнительно включает эффективное количество другого терапевтического агента.

111. Применение эффективного количества антитела по любому из пп.1, 40, 57-59 и 68-69 для получения лекарственного средства для лечения субъекта, страдающего нарушением пролиферации клеток.

112. Применение по п.111, где указанное нарушение пролиферации клеток представлено раком.

113. Применение по п.112, где указанное раковое заболевание выбрано из группы, включающей лимфому, неходжкинскую лимфому (НХЛ), агрессивную форму НХЛ, рецидивирующую агрессивную форму НХЛ, рецидивирующую вялотекущую НХЛ, рефракторную НХЛ, рефрактерную вялотекущую НХЛ, хронический лимфоцитарный лейкоз (ХЛЛ), мелкоклеточную лимфоцитарную лимфому, лейкоз, волосатоклеточный лейкоз (ВКЛ), острый лимфоцитарный лейкоз (ОЛЛ) и лимфому из клеток мантийной зоны.

114. Применение по п.111, где указанное антитело конъюгировано с цитотоксическим агентом.

115. Применение по п.111, где указанное антитело конъюгировано с препаратом-ингибитором роста.

116. Применение по п.111, где лекарственное средство дополнительно включает эффективное количество другого терапевтического агента.

117. Применение эффективного количества антитела по любому из пп.1, 40, 57-59 и 68-69 для получения лекарственного средства для ингибирования роста клетки, где рост указанной клетки, по меньшей мере, частично зависит от потенциирующего рост эффекта FcRH5.

118. Применение по п.117, где указанное антитело конъюгировано с цитотоксическим агентом.

119. Применение по п.117, где указанное антитело конъюгировано с препаратом-ингибитором роста.

120. Применение по п.117, где лекарственное средство дополнительно включает эффективное количество другого терапевтического агента.

121. Применение эффективного количества антитела по любому из пп.1, 40, 57-59 и 68-69 для получения лекарственного средства для терапевтического лечения опухоли у млекопитающего, где рост такой опухоли, по меньшей мере, частично зависит от потенциирующего рост эффекта FcRH5.

122. Применение по п.121, где указанная опухоль связана с лимфомой, неходжкинской лимфомой (НХЛ), агрессивной формой НХЛ, рецидивирующей агрессивной формой НХЛ, рецидивирующей вялотекущей НХЛ, рефракторной НХЛ, рефракторной вялотекущей НХЛ, хроническим лимфоцитарным лейкозом (ХЛЛ), мелкоклеточной лимфоцитарной лимфомой, лейкозом, волосатоклеточным лейкозом (ВКЛ), острым лимфоцитарным лейкозом (ОЛЛ) и лимфомой из клеток мантийной зоны.

123. Применение по п.121, где указанное антитело конъюгировано с цитотоксическим агентом.

124. Применение по п.121, где указанное антитело конъюгировано с препаратом-ингибитором роста.

125. Применение по п.121, где лекарственное средство дополнительно включает эффективное количество другого терапевтического агента.

126. Применение иммуноконъюгата по п.90 для получения лекарственного средства для ингибирования пролиферации В-клеток в условиях, допускающих связывание иммуноконъюгата с FcRH5.

127. Применение по п.126, где нарушение пролиферации В-клеток выбрано из следующего: лимфомы, неходжкинской лимфомы (НХЛ), агрессивной формы НХЛ, рецидивирующей агрессивной формы НХЛ, рецидивирующей вялотекущей НХЛ, рефракторной НХЛ, рефракторной вялотекущей НХЛ, хронического лимфоцитарного лейкоза (ХЛЛ), мелкоклеточной лимфоцитарной лимфомы, лейкоза, волосатоклеточного лейкоза (ВКЛ), острого лимфоцитарного лейкоза (ОЛЛ) и лимфомы из клеток мантийной зоны.

128. Применение по п.126, где В-клетка представлена ксенотрансплантатом.

129. Применение по п.126, где воздействие происходит в условиях in vitro.

130. Применение по п.126, воздействие происходит в условиях in vivo.

131. Применение по п.126, где лекарственное средство дополнительно включает эффективное количество другого терапевтического агента.

132. Применение по любому из пп.105, 110, 116, 120, 125 и 131, где терапевтический агент выбран из группы, включающей антитело, препарат химиотерапии, цитотоксический агент, ингибитор ангиогенеза, иммуносупрессант, пролекарство, цитокин, антагонист цитокина, цитотоксическую радиотерапию, кортикостероид, противорвотный препарат, противораковую вакцину, анальгетик или препарат-ингибитор роста.

133. Применение по п.132, где терапевтический агент выбран из группы, включающей следующие препараты: велкаде, ревлимид, тамоксифен, летрозол, экземестан, анастрозол, иринотекан, цетуксимаб, фулвестрант, винорелбин, эрлотиниб, бевацизумаб, винкристин, иматиниб, сорафениб, лапатиниб или трастузумаб, цисплатин, гемцитабин, метотрексат, винбластин, карбоплатин, паклитаксел, пеметрексед, 5-фторурацил, доксорубицин, бортезомиб, леналидомид, мелфалин, преднизон, дексаметазон или доцетаксел.

134. Антитело с добавленным в ходе рекомбинации одним или несколькими остатками несвязанной аминокислоты цистеином, отличающееся тем, что антитело с добавленным в ходе рекомбинации цистеином получают в ходе процесса замены одного или нескольких остатков аминокислот исходного антитела несвязанными остатками аминокислоты цистеин, при этом исходное антитело представлено антителом по пп.1, 40, 57-59 и 68-69.

135. Антитело по п.134, отличающееся тем, что одна или несколько несвязанных аминокислот цистеина имеют значение реакционной способности тиоловой группы в диапазоне от 0,6 до 1,0.

136. Антитело с добавленным в ходе рекомбинации цистеином по п.134, отличающееся тем, что антитело с добавленным в ходе рекомбинации цистеином более реакционноспособно с тиоловым реагентом, чем исходное антитело.

137. Антитело с добавленным в ходе рекомбинации цистеином по п.134, отличающееся тем, что процесс дополнительно включает определение реакционноспособности тиоловой группы антитела с добавленным в ходе рекомбинации цистеином путем реакции антитела с добавленным в ходе рекомбинации цистеином с тиоловым реагентом;

при этом антитело с добавленным в ходе рекомбинации цистеином является более реакционноспособным, чем исходное антитело, при реакции с тиоловым реагентом.

138. Антитело с добавленным в ходе рекомбинации цистеином по п.134, отличающееся тем, что один или несколько несвязанных остатков аминокислоты цистеин находятся в легкой цепи.

139. Антитело с добавленным в ходе рекомбинации цистеином по п.134, отличающееся тем, что оно представлено иммуноконъюгатом, включающим антитело с добавленным в ходе рекомбинации цистеином, ковалентно присоединенное к цитотоксическому агенту.

140. Антитело с добавленным в ходе рекомбинации цистеином по п.139, отличающееся тем, что цитотоксический агент выбран из токсина, химиотерапевтического агента, молекулы препарата, антибиотика, радиоактивного изотопа и нуклеазы.

141. Антитело с добавленным в ходе рекомбинации цистеином по п.134, отличающееся тем, что антитело ковалентно присоединено к захватываемой метке, метке для определения или твердому субстрату.

142. Антитело с добавленным в ходе рекомбинации цистеином по п.141, отличающееся тем, что антитело ковалентно присоединено к захватываемой метке биотину.

143. Антитело с добавленным в ходе рекомбинации цистеином по п.141, отличающееся тем, что антитело ковалентно присоединено к определяемой метке - флуоресцентному красителю.

144. Антитело с добавленным в ходе рекомбинации цистеином по п.143, отличающееся тем, что флуоресцентный краситель выбран из красителей флуоресцирующего типа, родаминового типа, дансила, лиссамина, цианина, фикоэритрина, техасского красного и их аналогов.

145. Антитело с добавленным в ходе рекомбинации цистеином по п.141, отличающееся тем, что антитело ковалентно присоединено к радионуклидной определяемой метке, выбираемой из ³H, ¹¹С, ¹⁴С, ¹⁸F, ³²P, ³⁵S, ⁶⁴Cu, ⁶⁸Ga, ⁸⁶Y, ⁹⁹Tc, ¹¹¹In, ¹²³I, ¹²⁴I, ¹²⁵I, ¹³¹I, ¹³³Xe, ¹⁷⁷Lu, ²¹¹At и ²¹³Bi.

146. Антитело с добавленным в ходе рекомбинации цистеином по п.141, отличающееся тем, что антитело ковалентно присоединено к определяемой метке посредством хелатообразующего лиганда.

147. Антитело с добавленным в ходе рекомбинации цистеином по п.146, отличающееся тем, что хелатообразующий лиганд выбран из DOTA, DOTP, DOTMA, DTPA и ТЕТА.

148. Антитело по любому из пп.1, 40, 57-59 и 68-69, включающее альбуминсвязывающий пептид.

149. Антитело по п.148, отличающееся тем, что альбуминсвязывающий пептид выбран из SEQ ID NO:47-51.

150. Антитело с добавленным в ходе рекомбинации цистеином, включающее одну или несколько несвязанных аминокислот цистеина в одном или нескольких положениях легкой цепи согласно нумерации по Kabat и в одном или нескольких положениях тяжелой цепи согласно нумерации по Kabat, а также в одном или нескольких положениях тяжелой цепи согласно нумерации EU в исходном антителе, при этом исходное антитело представлено антителом по пп.1, 40, 57-59 и 68-69.

151. Антитело по п.150, отличающееся тем, что оно выбрано из моноклонального антитела, биспецифического антитела, химерного антитела, человеческого антитела и гуманизированного антитела.

152. Антитело по п.150, представленное фрагментом антитела.

153. Антитело по п.152, отличающееся тем, что фрагмент антитела представлен Fab фрагментом.

154. Антитело по п.150, выбранное из химерного антитела, человеческого антитела или гуманизированного антитела.

155. Антитело по п.150, вырабатываемое бактериями.

156. Антитело по п.150, вырабатываемое в клетках СНО.

157. Антитело по п.150, отличающееся тем, что антитело включает последовательность тяжелой цепи, имеющую, по меньшей мере, 90% идентичность аминокислотной последовательности в сравнении с аминокислотной последовательностью SEQ ID NO:44.

158. Антитело по п.150, отличающееся тем, что антитело включает последовательность легкой цепи, имеющую, по меньшей мере, 90% идентичность аминокислотной последовательности SEQ ID NO:43, и последовательность тяжелой цепи, имеющую, по меньшей мере, 90% идентичность аминокислотной последовательности SEQ ID NO:44.

159. Антитело по п.150, отличающееся тем, что антитело включает последовательность тяжелой цепи, имеющую, по меньшей мере, 90% идентичность аминокислотной последовательности в сравнении с аминокислотной последовательностью SEQ ID NO:46.

160. Антитело по п.150, отличающееся тем, что антитело включает последовательность легкой цепи, имеющую, по меньшей мере, 90% идентичность аминокислотной последовательности SEQ ID NO:45, и последовательность тяжелой цепи, имеющую, по меньшей мере, 90% идентичность аминокислотной последовательности SEQ ID NO:46.

161. Антитело по п.150, отличающееся тем, что цистеин находится в положении 205 легкой цепи.

162. Антитело по п.150, отличающееся тем, что цистеин находится в положении 114 тяжелой цепи.

163. Антитело по п.150, отличающееся тем, что цистеин находится в положении 400 тяжелой цепи.

164. Конъюгат антитело-препарат, отличающийся тем, что антитело по п.150 ковалентно присоединено к молекуле препарата ауристатин или майтансиноид с образованием конъюгата антитело-препарат.

165. Конъюгат антитело-препарат по п.164, включающий антитело (Ab) и молекулу препарата ауристатин или майтансиноид (D), при этом антитело с добавленным в ходе рекомбинации цистеином присоединено через одну или несколько несвязанных аминокислот цистеина посредством линкерной молекулы (L) к D; соединение представлено следующей Формулой I:

где р равно 1, 2, 3 или 4.

166. Конъюгат антитело-препарат по п.165, отличающийся тем, что р равно 2.

167. Конъюгат антитело-препарат по п.165, отличающийся тем, что L имеет следующую формулу:

-Aa-Ww-Yy-

где А является расширяющей единицей (расширителем), которая ковалентным образом присоединяется к тиоловой группе цистеина, сконструированного с применением цистеина антитела (Ab);

а равно 0 или 1;

каждый W независимо представляет собой аминокислотную единицу;

w является целым числом в диапазоне от 0 до 12;

Y является спейсерной единицей, которая ковалентным образом присоединяется к молекуле препарата; и

y равно 0, 1 или 2.

168. Конъюгат антитело-препарат по п.167, имеющий формулу:

где РАВ является пара-аминобензилкарбамоилом, a R¹⁷ является двухвалентным радикалом, выбираемым из следующей группы: (СН₂)_r, С₃-С₈карбоциклил, O-(СН₂)_r, арилен, (СН₂)_r-арилен, -арилен-(СН₂)_r-, (СН₂)_r-(С₃-С₈карбоциклил), (С₃-С₈карбоциклил)-(СН₂)_r, С₃-С₈гетероциклил, (CH₂)_r-(С₃-С₈гетероциклил), -(С₃-С₈гетероциклил)-(СН₂)_r-, -(CH₂)_rC(O)NR^b(CH₂)_r-, -(CH₂CH₂O)_r-, -(CH₂CH₂O)_r-СН₂-, -(CH₂)_rC(O)NR^b(CH₂CH₂O)_r-, -(CH₂)_rC(O)NR^b(CH₂CH₂O)_r-CH₂-, -(CH₂CH₂O)_rC(O)NR^b(CH₂CH₂O)_r-, -(CH₂CH₂O)_rC(O)NR^b(CH₂CH₂O)_r-CH₂- и -(CH₂CH₂O)_rC(O)NR^b(CH₂)_r-; где R^b представлен Н, C₁-С₆алкилом, фенилом или бензилом; и r является целым числом в диапазоне от 1 до 10.

169. Конъюгат антитело-препарат по п.167, отличающийся тем, что W_w представлен валин-цитруллином.

170. Конъюгат антитело-препарат по п.167, отличающийся тем, что R¹⁷ представлен (CH₂)₅ или (СН₂)₂.

171. Конъюгат антитело-препарат по п.167, имеющий формулу:

.

172. Конъюгат антитело-препарат по п.171, отличающийся тем, что R¹⁷ представлен (СН₂)₅ или (CH₂)₂.

173. Конъюгат антитело-препарат по п.171, имеющий формулу:

.

174. Конъюгат антитело-препарат по п.165, отличающийся тем, что L представлен SMCC, SPP, SPDB или ВМРЕО.

175. Конъюгат антитело-препарат по п.165, отличающийся тем, что D представлен ММАЕ, и имеет следующую структуру:

,

где волнистой линией указано место присоединения к линкеру L.

176. Конъюгат антитело-препарат по п.165, отличающийся тем, что D представлен MMAF и имеет следующую структуру:

,

177. Конъюгат антитело-препарат по п.165, отличающийся тем, что D представлен DM1 или DM4, которые имеют следующую структуру:

,

178. Конъюгат антитело-препарат по п.164, отличающийся тем, что антитело выбрано из моноклонального антитела, биспецифического антитела, химерного антитела, человеческого антитела, гуманизированного антитела и фрагмента антитела.

179. Конъюгат антитело-препарат по п.164, отличающийся тем, что антитело представляет собой Fab-фрагмент.

180. Конъюгат антитело-препарат, выбранный из соединений со следующей структурой:

где Val является валином; Cit-цитруллином; р равно 1, 2, 3 или 4; а Ab представлено антителом по п.150.

181. Конъюгат антитело-препарат по п.164, отличающийся тем, что ауристатин представлен ММАЕ или MMAF.

182. Конъюгат антитело-препарат по п.165, отличающийся тем, что L представлен MC-val-cit-PAB или МС.

183. Способ определения присутствия белка FcRH5 в образце, подозреваемом на содержание такого белка, включающий воздействие на указанный образец антителом по п.146 и определение связывания указанного антитела с белком FcRH5 в представленном образце, при этом связывание антитела с указанным белком является индикатором присутствия указанного белка в заданном образце.

184. Способ по п.183, отличающийся тем, что указанный образец включает клетки, подозреваемые на экспрессию указанного белка FcRH5.

185. Способ по п.183, отличающийся тем, что указанная клетка является В-клеткой.

186. Способ по п.183, отличающийся тем, что антитело ковалентно присоединено к метке, выбранной из флуоресцентного красителя, радиоизотопа, биотина или лиганда-комплексообразователя с металлами.

187. Фармацевтическая композиция, включающая антитело к FcRH5 по п.150 и фармацевтически приемлемый разбавитель, носитель или вспомогательное вещество.

188. Способ определения присутствия FcRH5 в биологическом образце, подозреваемом на содержание FcRH5, включающий воздействие на упомянутый образец антителом по любому из пп.1, 40, 57-59 и 68-69 и определение связывания упомянутого антитела с FcRH5 в образце, при этом такое связывание антитела с FcRH5 в образце является доказательством присутствия указанного белка в упомянутом образце.

189. Способ по п.188, отличающийся тем, что биологический образец получают от пациента, у которого подозревают наличие нарушения пролиферации В-клеток.

190. Способ по п.189, отличающийся тем, что нарушения пролиферации В-клеток выбрано из группы, включающей лимфому, неходжкинскую лимфому (НХЛ), агрессивную форму НХЛ, рецидивирующую агрессивную форму НХЛ, рецидивирующую вялотекущую НХЛ, рефракторную НХЛ, рефракторную вялотекущую НХЛ, хронический лимфоцитарный лейкоз (ХЛЛ), мелкоклеточную лимфоцитарную лимфому, лейкоз, волосатоклеточный лейкоз (ВКЛ), острый лимфоцитарный лейкоз (ОЛЛ) и лимфому из клеток мантийной зоны.

191. Способ связывания антитела по любому из пп.1, 40, 57-59 и 68-69 с клеткой, экспрессирующей FcRH5, включающий контакт указанной клетки с антителом по любому из пп.1, 40, 57-59 и 68-69.

192. Способ по п.191, отличающийся тем, что указанное антитело конъюгируют с цитотоксическим агентом.

193. Способ по п.191, отличающийся тем, что указанное антитело конъюгировано с препаратом-ингибитором роста.

194. Анализ для определения В-клеток, включающий:

(а) воздействие на клетки соединением конъюгата антитело-препарат по п.164; и

(б) определение степени связывания соединения конъюгата антитело-препарат с клетками.

195. Способ ингибирования пролиферации клеток, включающий воздействие на раковые В-клетки млекопитающего в среде с культурой клеток конъюгатом антитело-препарат по п.164, посредством которого ингибируется пролиферация раковых В-клеток.

196. Фармацевтическая композиция, включающая конъюгат антитело-препарат по п.164 и фармацевтически приемлемый разбавитель, носитель или вспомогательное вещество.

197. Применение фармацевтической композиции по п.196 для получения лекарственного средства для лечения рака.

198. Применение по п.197, где раковое заболевание выбрано из группы, включающей лимфому, неходжкинскую лимфому (НХЛ), агрессивную форму НХЛ, рецидивирующую агрессивную форму НХЛ, рецидивирующую вялотекущую НХЛ, рефракторную НХЛ, рефракторную вялотекущую НХЛ, хронический лимфоцитарный лейкоз (ХЛЛ), мелкоклеточную лимфоцитарную лимфому, лейкоз, волосатоклеточный лейкоз (ВКЛ), острый лимфоцитарный лейкоз (ОЛЛ) и лимфому из клеток мантийной зоны.

199. Применение по п.197, где лекарственное средство дополнительно включает эффективное количество цитотоксического агента.

200. Готовое изделие, включающее:

фармацевтическую композицию по п.196;

контейнер; и

вкладыш к упаковке или этикетку с указанием, что соединение может использоваться для лечения рака, характеризующегося гиперэкспрессией полипептида FcRH5.

201. Готовое изделие по п.200, отличающееся тем, что раковое заболевание выбрано из группы, включающей лимфому, неходжкинскую лимфому (НХЛ), агрессивную форму НХЛ, рецидивирующую агрессивную форму НХЛ, рецидивирующую вялотекущую НХЛ, рефракторную НХЛ, рефракторную вялотекущую НХЛ, хронический лимфоцитарный лейкоз (ХЛЛ), мелкоклеточную лимфоцитарную лимфому, лейкоз, волосатоклеточный лейкоз (ВКЛ), острый лимфоцитарный лейкоз (ОЛЛ) и лимфому из клеток мантийной зоны.

202. Способ получения соединения конъюгата антитело-препарат, содержащего антитело к FcRH5 (Ab) по п.150 и молекулу препарата ауристатин или майтансиноид (D), отличающийся тем, что антитело присоединяют через одну или несколько введенных в ходе рекомбинации аминокислот цистеина посредством линкерной молекулы (L) к D; соединение представлено следующей Формулой I:

где р равно 1, 2, 3 или 4; способ включает следующие этапы:

(а) реакцию добавленной в ходе рекомбинации группы цистеина антитела с линкерным реагентом с образованием промежуточного вещества антитело-линкер Ab-L; и

(б) реакцию Ab-L с активированной молекулой препарата D с образованием конъюгата антитело-препарат;

или включает следующие этапы:

(в) реакцию нуклеофильной группы молекулы препарата с линкерным реагентом с образованием промежуточного вещества препарат-линкер D-L; и

(г) реакцию D-L с добавленной в ходе рекомбинации группы цистеина антитела с образованием конъюгата антитело-препарат.

203. Способ по п.202, дополнительно включающий этап экспрессии антитела в клетках яичника китайского хомячка (СНО).

204. Способ по п.202, дополнительно включающий этап обработки экспрессируемого антитела восстановителем.

205. Способ по п.204, отличающийся тем, что восстановитель выбран из ТСЕР и DTT.

206. Способ по п.204, дополнительно включающий этап воздействия на экспрессируемое антитело окислителем, а затем - воздействия восстановителем.

207. Способ по п.206, отличающийся тем, что окислитель выбран из сульфата меди, дегидроаскорбиновой кислоты и воздуха.

208. Композиция, включающая антитело по любому из пп.1, 40, 57-59 и 68-69.

209. Композиция по п.208, отличающаяся тем, что композиция содержит носитель.