Claims (27)
1. Экспрессионная кассета, включающая последовательность, кодирующую секреторный сигнал инсулина, оперативно связанный с гетерологичной последовательностью, кодирующей полипептид.1. An expression cassette comprising a sequence encoding an insulin secretory signal operably linked to a heterologous sequence encoding a polypeptide.
2. Экспрессионная кассета по п.1, где секреторный сигнал инсулина имеет аминокислотную последовательность, представленную как SEQ ID NO:l.2. The expression cassette according to claim 1, where the secretory signal of insulin has the amino acid sequence represented as SEQ ID NO: l.
3. Экспрессионная кассета по п.1, где секреторным сигналом инсулина является модифицированный секреторный сигнал инсулина, включающий модификации секреторного сигнала инсулина, имеющего аминокислотную последовательность, представленную как SEQ ID NO:l, где упомянутые модификации не оказывают неблагоприятного влияния на биологическую активность секреторного сигнала инсулина.3. The expression cassette according to claim 1, where the secretory signal of insulin is a modified secretory signal of insulin, including modifications of the secretory signal of insulin having the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: l, where these modifications do not adversely affect the biological activity of the secretory signal of insulin .
4. Экспрессионная кассета по любому из пп.1-3, где гетерологичная последовательность кодирует полипептид, выбранный из гормонов, цитокинов, агонистов рецепторов, антагонистов рецепторов, феромонов и ферментов.4. The expression cassette according to any one of claims 1 to 3, wherein the heterologous sequence encodes a polypeptide selected from hormones, cytokines, receptor agonists, receptor antagonists, pheromones and enzymes.
5. Экспрессионная кассета по п.4, где полипептид является гормоном роста.5. The expression cassette according to claim 4, where the polypeptide is a growth hormone.
6. Экспрессионная кассета по п.4, где полипептид является соматотропином.6. The expression cassette according to claim 4, where the polypeptide is somatotropin.
7. Экспрессионная кассета по любому из пп.1-6, дополнительно включающая один или несколько регуляторных элементов, делающих возможной дискретную экспрессию гетерологичной последовательности.7. The expression cassette according to any one of claims 1 to 6, further comprising one or more regulatory elements making discrete expression of a heterologous sequence possible.
8. Вектор, включающий экспрессионную кассету по любому из пп.1-7.8. A vector comprising an expression cassette according to any one of claims 1 to 7.
9. Рекомбинантная клетка, которая включает экспрессионную кассету по любому из пп.1-7.9. Recombinant cell, which includes an expression cassette according to any one of claims 1 to 7.
10. Рекомбинантная клетка по п.9, где клеткой является бактериальная клетка, дрожжевая клетка, клетка насекомого или млекопитающего.10. The recombinant cell according to claim 9, where the cell is a bacterial cell, a yeast cell, an insect or mammalian cell.
11. Рекомбинантная клетка по п.10, где клеткой является клетка млекопитающего.11. The recombinant cell of claim 10, where the cell is a mammalian cell.
12. Клетка млекопитающего по п.11, где клеткой является крысиный миобласт (L6).12. The mammalian cell of claim 11, wherein the cell is rat myoblast (L6).
13. Способ получения полипептида, который включает культивирование рекомбинантной клетки по любому из пп.9-12 в условиях, делающих возможными экспрессию и секрецию полипептида и необязательно выделение полипептида.13. A method for producing a polypeptide, which comprises culturing a recombinant cell according to any one of claims 9 to 12 under conditions enabling expression and secretion of the polypeptide and optionally isolation of the polypeptide.
14. Капсула, предназначенная для имплантации в организм хозяина, где данная капсула включает полупроницаемую мембрану, заключающую в себе рекомбинантные клетки по любому из пп.9-12.14. A capsule intended for implantation in the host organism, where this capsule includes a semipermeable membrane containing recombinant cells according to any one of claims 9-12.
15. Капсула по п.14, где полупроницаемой мембраной является альгинат-поли-L-лизин-альгинатная (АРА) мембрана.15. The capsule of claim 14, wherein the semipermeable membrane is an alginate-poly-L-lysine-alginate (ARA) membrane.
16. Способ введения полипептида хозяину, где упомянутый способ включает введение хозяину экспрессионной кассеты по любому из пп. 1-7.16. A method of administering a polypeptide to a host, wherein said method comprises administering to the host an expression cassette according to any one of claims. 1-7.
17. Способ введения полипептида хозяину, где данный способ включает имплантацию хозяину капсулы по п.14 или 15.17. A method of administering a polypeptide to a host, wherein the method comprises implanting a capsule according to claim 14 or 15 to the host.
18. Способ по п.16 или 17, где хозяином является животное или человек.18. The method according to clause 16 or 17, where the owner is an animal or human.
19. Способ по п.18, где хозяином является животное, относящееся к домашнему скоту.19. The method according to p, where the owner is an animal related to livestock.
20. Способ по п.19, где животным, относящимся к домашнему скоту, является свинья.20. The method according to claim 19, where the animal related to livestock is a pig.
21. Способ введения соматотропина свинье, где способ включает имплантацию свинье капсулы, включающей полупроницаемую мембрану, заключающую в себе рекомбинантные клетки, причем упомянутые рекомбинантные клетки включают и экспрессируют экспрессионную кассету, включающую последовательность, кодирующую секреторный сигнал инсулина, оперативно связанную с гетерологичной последовательностью, кодирующей соматотропин, где упомянутая мембрана является проницаемой для экспрессируемого соматотропина.21. A method for administering somatotropin to a pig, wherein the method comprises implanting a pig capsule comprising a semipermeable membrane containing recombinant cells, said recombinant cells comprising and expressing an expression cassette comprising a sequence encoding an insulin secretory signal operably linked to a heterologous sequence encoding somatotropin where said membrane is permeable to expressed growth hormone.
22. Способ по п.21, где секреторный сигнал инсулина имеет аминокислотную последовательность, представленную как SEQ ID NO:l.22. The method according to item 21, where the secretory signal of insulin has the amino acid sequence represented as SEQ ID NO: l.
23. Способ по п.21, где секреторным сигналом инсулина является модифицированный секреторный сигнал инсулина, включающий модификации секреторного сигнала инсулина, имеющего аминокислотную последовательность, представленную как SEQ ID NO:l, где упомянутые модификации не оказывают неблагоприятного влияния на биологическую активность секреторного сигнала инсулина.23. The method according to item 21, where the secretory signal of insulin is a modified secretory signal of insulin, which includes modifications of the secretory signal of insulin having the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: l, where these modifications do not adversely affect the biological activity of the secretory signal of insulin.
24. Способ по любому из пп.21-23, где рекомбинантными клетками являются клетки млекопитающего.24. The method according to any one of paragraphs.21-23, where the recombinant cells are mammalian cells.
25. Способ по п.24, где клетками млекопитающего являются крысиные миобласты (L6).25. The method according to paragraph 24, where the mammalian cells are rat myoblasts (L6).
26. Способ по любому из пп.21-25, где полупроницаемой мембраной является альгинат-поли-L-лизин-альгинатная (АРА) мембрана.26. The method according to any one of paragraphs.21-25, where the semipermeable membrane is an alginate-poly-L-lysine-alginate (ARA) membrane.
27. Способ по любому из пп.21-26, где свинье имплантируют одну или несколько капсул, достаточных для достижения секреции соматотропина на уровне, составляющем, по меньшей мере, 30 нг/мл.27. The method according to any one of claims 21 to 26, wherein the pig is implanted with one or more capsules sufficient to achieve growth hormone secretion at a level of at least 30 ng / ml.