[go: up one dir, main page]

RS63381B1 - Vakcine protiv respiratornih virusa - Google Patents

Vakcine protiv respiratornih virusa

Info

Publication number
RS63381B1
RS63381B1 RS20220654A RSP20220654A RS63381B1 RS 63381 B1 RS63381 B1 RS 63381B1 RS 20220654 A RS20220654 A RS 20220654A RS P20220654 A RSP20220654 A RS P20220654A RS 63381 B1 RS63381 B1 RS 63381B1
Authority
RS
Serbia
Prior art keywords
hcov
mrna
rna
vaccine
cov
Prior art date
Application number
RS20220654A
Other languages
English (en)
Inventor
Giuseppe Ciaramella
Sunny Himansu
Original Assignee
Modernatx Inc
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Family has litigation
First worldwide family litigation filed litigation Critical https://patents.darts-ip.com/?family=58558175&utm_source=google_patent&utm_medium=platform_link&utm_campaign=public_patent_search&patent=RS63381(B1) "Global patent litigation dataset” by Darts-ip is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 International License.
Application filed by Modernatx Inc filed Critical Modernatx Inc
Publication of RS63381B1 publication Critical patent/RS63381B1/sr

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A61P31/14—Antivirals for RNA viruses
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/12—Viral antigens
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/12—Viral antigens
    • A61K39/155—Paramyxoviridae, e.g. parainfluenza virus
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/12—Viral antigens
    • A61K39/215—Coronaviridae, e.g. avian infectious bronchitis virus
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/08—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from viruses
    • C07K16/10—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from viruses from RNA viruses
    • C07K16/102—
    • C07K16/11—
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/51—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising whole cells, viruses or DNA/RNA
    • A61K2039/53—DNA (RNA) vaccination
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/555—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by a specific combination antigen/adjuvant
    • A61K2039/55511—Organic adjuvants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/555—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by a specific combination antigen/adjuvant
    • A61K2039/55511—Organic adjuvants
    • A61K2039/55555—Liposomes; Vesicles, e.g. nanoparticles; Spheres, e.g. nanospheres; Polymers
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/60—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characteristics by the carrier linked to the antigen
    • A61K2039/6018—Lipids, e.g. in lipopeptides
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/70—Multivalent vaccine
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
    • C07K2317/76—Antagonist effect on antigen, e.g. neutralization or inhibition of binding
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2760/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA ssRNA viruses negative-sense
    • C12N2760/00011—Details
    • C12N2760/18011—Paramyxoviridae
    • C12N2760/18034—Use of virus or viral component as vaccine, e.g. live-attenuated or inactivated virus, VLP, viral protein
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2760/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA ssRNA viruses negative-sense
    • C12N2760/00011—Details
    • C12N2760/18011—Paramyxoviridae
    • C12N2760/18311—Metapneumovirus, e.g. avian pneumovirus
    • C12N2760/18334—Use of virus or viral component as vaccine, e.g. live-attenuated or inactivated virus, VLP, viral protein
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2760/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA ssRNA viruses negative-sense
    • C12N2760/00011—Details
    • C12N2760/18011—Paramyxoviridae
    • C12N2760/18411—Morbillivirus, e.g. Measles virus, canine distemper
    • C12N2760/18434—Use of virus or viral component as vaccine, e.g. live-attenuated or inactivated virus, VLP, viral protein
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2760/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA ssRNA viruses negative-sense
    • C12N2760/00011—Details
    • C12N2760/18011—Paramyxoviridae
    • C12N2760/18511—Pneumovirus, e.g. human respiratory syncytial virus
    • C12N2760/18534—Use of virus or viral component as vaccine, e.g. live-attenuated or inactivated virus, VLP, viral protein
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2760/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA ssRNA viruses negative-sense
    • C12N2760/00011—Details
    • C12N2760/18011—Paramyxoviridae
    • C12N2760/18611—Respirovirus, e.g. Bovine, human parainfluenza 1,3
    • C12N2760/18634—Use of virus or viral component as vaccine, e.g. live-attenuated or inactivated virus, VLP, viral protein
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2770/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA ssRNA viruses positive-sense
    • C12N2770/00011—Details
    • C12N2770/20011—Coronaviridae
    • C12N2770/20034—Use of virus or viral component as vaccine, e.g. live-attenuated or inactivated virus, VLP, viral protein
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
    • Y02A—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE
    • Y02A50/00—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE in human health protection, e.g. against extreme weather
    • Y02A50/30—Against vector-borne diseases, e.g. mosquito-borne, fly-borne, tick-borne or waterborne diseases whose impact is exacerbated by climate change

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Pulmonology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Communicable Diseases (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
  • Medicinal Preparation (AREA)

Description

Opis
OSNOV
[0001] Respiratorna bolest je medicinski termin koji obuhvata patološka stanja koja utiču na organe i tkiva koja omogućavaju razmenu gasova u višim organizmima i obuhvata stanja gornjih disajnih puteva, traheje, bronhija, bronhiola, alveola, pleure i pleuralne šupljine, i disajnih nerava i mišića. Respiratorne bolesti se kreću od blagih i samoograničavajućih, kao što je obična prehlada, do onih, po život opasnih, kao što su bakterijska pneumonija, plućna embolija, akutna astma i kancer pluća. Respiratorne bolesti su čest i značajan uzrok bolesti i smrti širom sveta. U SAD se svake godine javlja oko milijardu "običnih prehlada". Respiratorna stanja su među najčešćim razlozima za hospitalizaciju dece.
[0002] Humani metapneumovirus (hMPV) je virus sa negativnom jednolančanom RNK koji pripada rodu Pneumovirinae i porodici Paramyxoviridae i blisko je povezan sa ptičijim metapneumovirusom (AMPV) podgrupe C. Prvi put je izolovan 2001. godine u Holandiji upotrebom tehnike RAP-PCR (RNK PCR sa proizvoljnim prajmerom) za identifikaciju nepoznatih virusa uzgajanih u kulturi ćelija. hPMV je drugi, odmah nakon RSV, značajan uzročnik virusnih bolesti donjeg respiratornog trakta (LRI) kod male dece. Izgleda da je sezonska epidemiologija hMPV slična onoj kod RSV, ali deluje da je incidenca infekcije i bolesti znatno niža.
[0003] Virus parainfluence tipa 3 (PIV3) je, kao i hMPV, virus sa negativnom jednolančanom RNK koji pripada rodu Pneumovirinae i porodici Paramyxoviridae i predstavlja glavni uzrok sveprisutnih akutnih respiratornih infekcija kod odojčadi i u ranom detinjstvu. Njegova incidenca dostiže vrhunac oko 4-12 meseci starosti, a virus je odgovoran za 3-10% hospitalizacija, uglavnom za bronhiolitis i pneumoniju. PIV3 može da bude fatalan, a u nekim slučajevima je povezan sa neurološkim bolestima, kao što su febrilni napadi. Može da dovede i do preoblikovanja disajnih puteva, značajnog uzroka morbiditeta. U regionima u razvoju u svetu, odojčad i mala deca su u najvećem riziku od mortaliteta, bilo od primarne virusne infekcije PIV3 ili sekundarnih posledica, kao što su bakterijske infekcije. Human virusi parainfluence (hPIV) tipa 1, 2 i 3 (hPIV1, hPIV2, odnosno hPIV3) su, kao i hMPV, odmah nakon RSV, značajan uzročnik virusnih LRI kod male dece.
[0004] RSV je, takođe, virus sa negativnom jednolančanom RNK koji pripada rodu Pneumovirinae i porodici Paramyxoviridae. Kod odraslih, simptomi uglavnom liče na infekciju sinusa ili uobičajenu prehladu, mada infekcija može da bude i asimptomatska. Kod starijih odraslih osoba (npr., >60 godina), infekcija RSV može da progreduje u bronhiolitis ili pneumoniju.
Simptomi kod dece su često ozbiljniji, i uključuju bronhiolitis i pneumoniju. Procenjuje se da se u SAD većina dece inficira virusom RSV do treće godine. Virion RSV se sastoji od unutrašnjeg nukleokapsida sačinjenog od virusne RNK vezane za nukleoprotein (N), fosfoprotein (P) i veliki polimerazni protein (L). Nukleokapsid je okružen matriksnim proteinom (M) i inkapsuliran je lipidnim dvoslojem u koji su ugrađeni virusni fuzioni (F) i vezujući (G) proteini, kao i mali hidrofobni protein (SH). Virusni genom kodira i dva nestrukturna proteina (NS1 i NS2), koji inhibiraju aktivnost interferona tipa I, kao i protein M-2.
[0005] Stalni zdravstveni problemi povezani sa virusima hMPV, PIV3 i RSV izazivaju zabrinutost na međunarodnom nivou, naglašavajući važnost razvoja efektivnih i bezbednih kandidata za vakcinu protiv ovih virusa.
[0006] Uprkos decenijama istraživanja, trenutno ne postoji ni jedna vakcina (Sato and Wright, Pediatr. Infect. Dis, J. 2008;27(10 Suppl):S123-5). Međutim, kako bi se postigao cilj pravljenja vakcina protiv serotipova hPIV-1, 2 i 3, na primer, korišćena je rekombinantna tehnologija i vakcina je dobijena u obliku nekoliko živih-atenuisanih intranazalnih vakcina. Konkretno, u fazi I kliničkih ispitivanja nađeno je da su dve vakcine protiv hPIV-3 imunogene i dobro podnošljive. Sa kandidatima za vakcine protiv hPIV1 i hPIV2 ostvaren je manji napredak (Durbin and Karron, Clinical infectious diseases: an official publication of the Infectious Diseases Society of America 2003;37(12):1668-77).
[0007] Virus malih boginja (MeV) je, kao hMPV, PIV3 i RSV, virus sa negativnom jednolančanom RNK koji uzrokuje male boginje, infekciju respiratornog sistema. MeV pripada rodu Morbillivirus, porodici Paramyxoviridae. Ljudi su prirodni domaćini virusa; nije poznato da postoji životinjski rezervoar. Simptomi malih boginja uključuju groznicu, kašalj, curenje iz nosa, crvene oči i opšti, makulopapularni, eritemski osip. Virus je veoma zarazan, a širi se kašljanjem.
[0008] Pored hMPV, PIV, RSV i MeV, poznato je da i betakoronavirusi izazivaju respiratorne bolesti. Betakoronavirusi (BetaCoVs) su jedan od četiri roda koronavirusa potporodice Coronavirinae u porodici Coronaviridae, reda Nidovirales. To su virusi sa omotačem, sa pozitivnom jednolančanom RNK zoonotskog porekla. Rodovi koronavirusa su svi sačinjeni od različitih virusnih linija, pri čemu rod betakoronavirusa sadrži četiri takve linije. BetaCoVs od najvećeg kliničkog značaja za ljude su OC43 i HKU1 linije A, SARS-CoV linije B i MERS-CoV linije C. MERS-CoV je prvi betakoronavirus koji pripada liniji C za koji je poznato da inficira ljude.
[0009] Koronavirus bliskoistočnog respiratornog sindroma (MERS-CoV), ili EMC/2012 (HCoV-EMC/2012), u početku označen kao novi koronavirus 2012 ili samo novi koronavirus, prvi put je prijavljen 2012. godine nakon sekvenciranja genoma virusa izolovanog iz uzoraka sputuma osobe koja se razbolela tokom epidemije novog gripa 2012. godine. Od jula 2015, slučajevi MERS-CoV su prijavljeni u više od 21 zemlje. Epidemije MERS-CoV su izazvale ozbiljnu zabrinutost širom sveta, naglašavajući važnost razvoja efektivnih i bezbednih kandidata za vakcinu protiv MERS-CoV.
[0010] Teški akutni respiratorni sindrom (SARS) pojavio je u Kini 2002. godine i raširio na druge zemlje pre nego što je stavljen pod kontrolu. Zbog zabrinutosti zbog mogućeg ponovnog pojavljivanja ili namernog oslobađanja SARS koronavirusa, započet je razvoj vakcine.
[0011] Vakcinacija dezoksiribonukleinskom kiselinom (DNA) je tehnika koja se upotrebljava za stimulisanje humoralnih i ćelijskih imunskih odgovora na strane antigene, kao što su hMPV antigeni i/ili PIV antigeni i/ili RSV antigeni. Direktno ubrizgavanje genetski konstruisane DNK (npr., gole plazmidne DNK) u živog domaćina rezultuje malim brojem njegovih ćelija koje direktno proizvode antigen, što dovodi do razvoja zaštitnog imunološkog odgovora. Kod ove tehnike, međutim, javljaju se potencijalni problemi, uključujući mogućnost insercione mutageneze, koja bi mogla da dovede do aktivacije onkogena ili inhibicije tumor-supresorskih gena.
[0012] Shim et al., BMC Immunol, 11:65 (2010) opisuje da intranazalna imunizacija plazmidnom DNK koja kodira protein šiljka (eng. spike) SARS-CoV/polietileniminskim nanočesticama izaziva antigen-specifični humoralni i ćelijski imunski odgovor kod miševa BALB/c.
[0013] Du et al., Virology, 353(1), 6-16 (2006) opisuje da je rekombinantni adeno-asocirani virus koji eksprimira receptor-vezujući domen proteina S SARS-CoV sposoban da izazove stvaranje neutrališućih antitela kod miševa BALB/c.
SUŠTINA PRONALASKA
[0014] Na osnovu prikaza koji je dat u ovom dokumentu, predmetni pronalazak obezbeđuje vakcinu na bazi informacione RNK (iRNK) betakoronavirusa (BetaCoV) koja sadrži najmanje jedan polinukleotid iRNK koji ima otvoreni okvir čitanja koji kodira najmanje jedan antigeni polipeptid BetaCoV; pri čemu je najmanje jedan antigeni polipeptid BetaCoV (a) protein šiljka (S) ili njegov imunogeni fragment, ili (b) subjedinica S1 ili subjedinica S2 proteina S ili njen imunogeni fragment; pri čemu je vakcina protiv BetaCoV formulisana u lipidnoj nanočestici, gde lipidna nanočestica sadrži 40-60% katjonskog lipida, 5-15% nekatjonskog lipida, 1-2% PEG lipida i 30-50% holesterola.
[0015] U drugom aspektu, predmetni pronalazak obezbeđuje vakcinu na bazi iRNK BetaCoV prema pronalasku za upotrebu u postupku za prevenciju i/ili lečenje bolesti BetaCoV kod subjekta.
[0016] Predmetni pronalazak i neki njegovi poželjni primeri izvođenja prikazani su u priloženim patentnim zahtevima.
DETALJAN OPIS
[0017] Tehničke informacije navedene u nastavku mogu u nekim pogledima da prevazilaze obim pronalaska, koji je definisan isključivo priloženim patentnim zahtevima. Dodatne tehničke informacije su obezbeđene da bi se konkretni pronalazak stavio u širi tehnički kontekst i da bi se ilustrovao mogući tehnički razvoj povezan sa njim.
[0018] Pored toga, usputna pozivanja na postupke za lečenje tela čoveka ili životinje hirurškim ili terapijskim i dijagnostičkim postupcima koji se primenjuju na telu čoveka ili životinje ne treba da se tumače kao da zahtevaju zaštitu za te postupke kao takve, već ih treba tumačiti kao pozivanje na proizvode, konkretno supstance ili kompozicije, za upotrebu u bilo kom od ovih postupaka.
[0019] U ovom dokumentu obezbeđene su vakcine na bazi ribonukleinske kiseline (RNK) koje se zasnivaju na saznanju da informaciona RNK (iRNK) može bezbedno da usmeri ćelijsku mašineriju tela da proizvodi skoro svaki protein od interesa, od prirodnih proteina do antitela i drugih potpuno novih proteinskih konstrukata koji mogu imati terapijsku aktivnost unutar i izvan ćelija. Vakcine na bazi iRNK predmetnog prikaza mogu da se koriste za indukovanje balansiranog imunskog odgovora protiv BetaCoV (npr., MERS-CoV, SARS-CoV, HCoV-OC43, HCoV-229E, HCoV-NL63, HCoV-NL, HCoV-NH i/ili HCoV-HKU1), koji obuhvata i ćelijski i humoralni imunitet, bez rizika od mogućnosti insercione mutageneze, na primer. hMPV, PIV, RSV, MeV, BetaCoV (npr., MERS-CoV, SARS-CoV, HCoV-OC43, HCoV-229E, HCoV-NL63, HCoV-NL, HCoV-NH i HCoV-HKU1) i njihove kombinacije su ovde označeni kao "respiratorni virusi". Prema tome, termin "RNK vakcine protiv respiratornih virusa" obuhvata hMPV RNK vakcine, PIV RNK vakcine, RSV RNK vakcine, MeV RNK vakcine, BetaCoV RNK vakcine, i bilo koju kombinaciju dve ili više hMPV RNK vakcina, PIV RNK vakcina, RSV RNK vakcina, MeV RNK vakcina i BetaCoV RNK vakcina.
[0020] RNK (tj., iRNK) vakcine mogu da se koriste u različitim kontekstima u zavisnosti od prevalencije infekcije, ili stepena ili nivoa nezadovoljene medicinske potrebe. RNK (tj., iRNK) vakcine imaju superiorna svojstva u tome što proizvode mnogo veće titrove antitela i proizvode odgovore ranije od komercijalno dostupnih antivirusnih terapijskih tretmana. Bez želje za vezivanjem za neku određenu teoriju, smatra se da su RNK (tj., iRNK) vakcine, kao iRNK polinukleotidi, bolje dizajniranje da proizvode odgovarajuću konformaciju proteina nakon translacije, budući da RNK (tj., iRNK) vakcine kooptiraju prirodnu ćelijsku mašineriju. Za razliku od tradicionalnih vakcina, koje se proizvode ex vivo i mogu da pokrenu neželjene ćelijske odgovore, RNK (tj., iRNK) vakcine se prezentuju ćelijskom sistemu na prirodniji način.
[0021] Iznenađujuće, u nekim aspektima, pokazano je i da efikasnost iRNK vakcina može značajno da se poboljša kada se kombinuju sa flagelinskim adjuvansom, posebno, kada se jedna ili više iRNK koje kodiraju antigen kombinuje sa iRNK koja kodira flagelin.
[0022] RNK (tj., iRNK) vakcine kombinovane sa flagelinskim adjuvansom (tj., iRNK-kodirani flagelinski adjuvans) imaju superiorna svojstva u tome što proizvode mnogo veće titrove antitela i proizvode odgovore ranije od komercijalno dostupnih formulacija vakcina. Bez želje za vezivanjem za neku određenu teoriju, smatra se da su RNK (tj., iRNK) vakcine, kao iRNK polinukleotidi, bolje dizajniranje da proizvode odgovarajuću konformaciju proteina nakon translacije, i u slučaju antigena i u slučaju adjuvansa, budući da RNK (tj., iRNK) vakcine kooptiraju prirodnu ćelijsku mašineriju. Za razliku od tradicionalnih vakcina, koje se proizvode ex vivo i mogu da pokrenu neželjene ćelijske odgovore, RNK (tj., iRNK) vakcine se prezentuju ćelijskom sistemu na prirodniji način.
[0023] Neki primeri izvođenja predmetnog prikaza obezbeđuju RNK (tj., iRNK) vakcine koje uključuju najmanje jedan RNK (tj., iRNK) polinukleotid koji ima otvoreni okvir čitanja koji kodira najmanje jedan antigeni polipeptid ili njegov imunogeni fragment (npr., imunogeni fragment koji može da indukuje imunski odgovor na antigeni polipeptid) i najmanje jedan RNK (tj., iRNK polinukleotid) koji ima otvoreni okvir čitanja koji kodira flagelinski adjuvans.
[0024] U nekim primerima izvođenja, najmanje jedan flagelinski polipeptid (npr., kodirani flagelinski polipeptid) je flagelinski protein. U nekim primerima izvođenja, najmanje jedan flagelinski polipeptid (npr., kodirani flagelinski polipeptid) je imunogeni flagelinski fragment. U nekim primerima izvođenja, najmanje jedan flagelinski polipeptid i najmanje jedan antigeni polipeptid su kodirani jednim RNK (tj., iRNK) polinukleotidom. U drugim primerima izvođenja, svaki od najmanje jednog flagelinskog polipeptida i najmanje jednog antigenog polipeptida je kodiran različitim RNK polinukleotidima.
[0025] U nekim primerima izvođenja najmanje jedan flagelinski polipeptid ima najmanje 80%, najmanje 85%, najmanje 90%, ili najmanje 95% identičnosti sa flagelinskim polipeptidom koji ima sekvencu identifikovanu bilo kojom od SEQ ID NO: 54-56.
[0026] Ovde je obezbeđena, u nekim primerima izvođenja, vakcina na bazi ribonukleinske kiseline (RNK) (tj., iRNK), koja sadrži najmanje jedan (npr., najmanje 2, 3, 4 ili 5) RNK (tj., iRNK) polinukleotid koji ima otvoreni okvir čitanja koji kodira najmanje jedan (npr., najmanje 2, 3, 4 ili 5) antigeni polipeptid BetaCoV (npr., MERS-CoV, SARS-CoV, HCoV-OC43, HCoV-229E, HCoV-NL63, HCoV-NL, HCoV-NH, HCoV-HKU1). Ovde, upotreba termina "antigeni polipeptid" obuhvata imunogene fragmente antigenog polipeptida (imunogeni fragment koji indukuje (ili koji može da indukuje) imunski odgovor na BetaCoV, osim ako nije drugačije naznačeno.
[0027] Ovde je obezbeđena, u nekim primerima izvođenja, i vakcina na bazi RNK (tj., iRNK) koja sadrži najmanje jedan (npr., najmanje 2, 3, 4 ili 5) RNK polinukleotid koji ima otvoreni okvir čitanja koji kodira najmanje jedan (npr., najmanje 2, 3, 4 ili 5) antigeni polipeptid BetaCoV (npr., MERS-CoV, SARS-CoV, HCoV-OC43, HCoV-229E, HCoV-NL63, HCoV-NL, HCoV-NH, HCoV-HKU1) ili njegov imunogeni fragment, vezan za signalni peptid.
[0028] Dalje je ovde prikazana, u nekim slučajevima, nukleinska kiselina (npr., DNK) koja kodira najmanje jedan (npr., najmanje 2, 3, 4 ili 5) BetaCoV (npr., MERS-CoV, SARS-CoV, HCoV-OC43, HCoV-229E, HCoV-NL63, HCoV-NL, HCoV-NH, HCoV-HKU1) RNK (npr., iRNK) polinukleotid.
[0029] Dalje, ovde je prikazana, u nekim slučajevima, vakcina za upotrebu u postupku indukcije imunskog odgovora kod subjekta, gde postupak obuhvata davanje subjektu vakcine koja sadrži najmanje jedan (npr., najmanje 2, 3, 4 ili 5) RNK (tj., iRNK) polinukleotid koji ima otvoreni okvir čitanja koji kodira najmanje jedan (npr., najmanje 2, 3, 4 ili 5) antigeni polipeptid BetaCoV (npr., MERS-CoV, SARS-CoV, HCoV-OC43, HCoV-229E, HCoV-NL63, HCoV-NL, HCoV-NH, HCoV-HKU1).
BetaCoV
[0030] U pronalasku, RNK (tj., iRNK) vakcina sadrži najmanje jedan RNK (tj., iRNK) polinukleotid koji ima otvoreni okvir čitanja koji kodira najmanje jedan antigeni polipeptid BetaCoV. U nekim primerima izvođenja, BetaCoV je MERS-CoV. U nekim primerima izvođenja, BetaCoV je SARS-CoV. U nekim primerima izvođenja, BetaCoV je HCoV-OC43. U nekim primerima izvođenja, BetaCoV je HCoV-229E. U nekim primerima izvođenja, BetaCoV je HCoV-NL63. U nekim primerima izvođenja, BetaCoV je HCoV-HKU1. U pronalasku, najmanje jedan antigeni polipeptid je strukturni protein betakoronavirusa. U nekim primerima izvođenja, strukturni protein betakoronavirusa je protein šiljka (S). U nekim primerima izvođenja, strukturni protein betakoronavirusa je subjedinica S1 ili subjedinica S2 proteina šiljka (S) ili njen imunogeni fragment.
[0031] Zbog njihovih svojstava površinske ekspresije, smatra se da vakcine koje sadrže RNK polinukleotide koji kodiraju strukturne proteine imaju poželjnu imunogenu aktivnost i stoga mogu da budu najpogodnije za upotrebu u vakcinama prema ovom pronalasku.
[0032] Pronalazak obezbeđuje vakcine protiv betakoronavirusa (npr., MERS-CoV, SARS-CoV, HCoV-OC43, HCoV-229E, HCoV-NL63, HCoV-NL, HCoV-NH, HCoV-HKU1 ili njihova kombinacija) koje uključuju najmanje jedan RNK (tj., iRNK) polinukleotid koji ima otvoreni okvir čitanja koji kodira najmanje jedan antigeni polipeptid betakoronavirusa (npr., MERS-CoV, SARSCoV, HCoV-OC43, HCoV-229E, HCoV-NL63, HCoV-NL, HCoV-NH, HCoV-HKU1). Ovde su obezbeđene i pan-betakoronavirusne vakcine. Prema tome, vakcina protiv betakoronavirusa koja sadrži RNK (tj., iRNK) polinukleotid koji ima otvoreni okvir čitanja koji kodira bilo koji jedan, dva, tri ili četiri od MERS-CoV, SARS-CoV, HCoV-OC43, HCoV-229E, HCoV-NL63, i HCoV-HKU1, na primer, može da bude efektivna protiv bilo kog od, bilo koje kombinacije, ili svih od, MERS-CoV, SARS-CoV, HCoV-OC43, HCoV-229E, HCoV-NL63, HCoV-NL, HCoV-NH i HCoV-HKU1. I drugi betakoronavirusi su obuhvaćeni predmetnim prikazom.
[0033] U nekim primerima izvođenja, najmanje jedan antigeni polipeptid je strukturni protein MERS-CoV. U nekim primerima izvođenja, strukturni protein MERS-CoV je protein šiljka (S) (videti, npr., Coleman CM et al. Vaccine 2014;32:3169-74). U nekim primerima izvođenja, strukturni protein MERS-CoV je subjedinica S1 ili subjedinica S2 proteina šiljka (S) ili njen imunogeni fragment (Li J et al. Viral Immunol 2013;26(2):126-32; He Y et al. Biochem Biophys Res Commun 2004;324(2):773-81).
[0034] U nekim primerima izvođenja, najmanje jedan antigeni polipeptid MERS-CoV sadrži aminokiselinsku sekvencu identifikovanu bilo kojom od SEQ ID NO: 24-28 ili 33 (Tabela 11). U nekim primerima izvođenja, aminokiselinska sekvenca antigenog polipeptida MERS-CoV je, ili je fragment, ili je homolog ili varijanta koja ima najmanje 80% (npr., 85%, 90%, 95%, 98%, 99%) identičnosti sa aminokiselinskom sekvencom identifikovanom bilo kojom od SEQ ID NO: 24-28 ili 33 (tabela 11).
[0035] U nekim primerima izvođenja, najmanje jedan antigeni polipeptid MERS-CoV je kodiran sekvencom nukleinske kiseline identifikovanom bilo kojom od SEQ ID NO: 20-23 (Tabela 10).
[0036] U nekim primerima izvođenja, najmanje jedan (npr., iRNK) polinukleotid MERS-CoV RNK je kodiran sekvencom nukleinske kiseline, ili fragmentom nukleotidne sekvence, identifikovanim bilo kojom od SEQ ID NO: 20-23 (Tabela 10). U nekim primerima izvođenja, najmanje jedan RNK (npr., iRNK) polinukleotid MERS-CoV sadrži sekvencu nukleinske kiseline, ili fragment nukleotidne sekvence, identifikovan bilo kojom od SEQ ID NO: 65-68 (Tabela 10).
[0037] U nekim primerima izvođenja, najmanje jedan antigeni polipeptid je dobijen iz MERS-CoV soja Riyadh_14_2013, 2cEMC/2012, ili Hasa_1_2013.
[0038] U nekim primerima izvođenja, najmanje jedan antigeni polipeptid je strukturni protein SARS-CoV. U nekim primerima izvođenja, strukturni protein SARS-CoV je protein šiljka (S). U nekim primerima izvođenja, strukturni protein SARS-CoV je subjedinica S1 ili subjedinica S2 proteina šiljka (S) ili njen imunogeni fragment.
[0039] U nekim primerima izvođenja, najmanje jedan antigeni polipeptid SARS-CoV sadrži aminokiselinsku sekvencu identifikovanu bilo kojom od SEQ ID NO: 29, 32 ili 34 (Tabela 11). U nekim primerima izvođenja, aminokiselinska sekvenca antigenog polipeptida SARS-CoV je, ili je fragment, ili je homolog ili varijanta koja ima najmanje 80% (npr., 85%, 90%, 95%, 98%, 99%) identičnosti sa aminokiselinskom sekvencom identifikovanu bilo kojom od SEQ ID NO: 29, 32 ili 34 (Tabela 11).
[0040] U nekim primerima izvođenja, najmanje jedan antigeni polipeptid je strukturni protein HCoV-OC43. U nekim primerima izvođenja, strukturni protein HCoV-OC43 je protein šiljka (S). U nekim primerima izvođenja, strukturni protein HCoV-OC43 je subjedinica S1 ili subjedinica S2 proteina šiljka (S) ili njen imunogeni fragment.
[0041] U nekim primerima izvođenja, najmanje jedan antigeni polipeptid HCoV-OC43 sadrži aminokiselinsku sekvencu identifikovanu bilo kojom od SEQ ID NO: 30 (Tabela 11). U nekim primerima izvođenja, aminokiselinska sekvenca antigenog polipeptida HCoV-OC43 je, ili je fragment, ili je homolog ili varijanta koja ima najmanje 80% (npr., 85%, 90%, 95%, 98%, 99%) identičnosti sa aminokiselinskom sekvencom identifikovanom bilo kojom od SEQ ID NO: 30 (Tabela 11).
[0042] U nekim primerima izvođenja, antigeni polipeptid je strukturni protein HCoV-HKU1. U nekim primerima izvođenja, strukturni protein HCoV-HKU1 je protein šiljka (S). U nekim primerima izvođenja, strukturni protein HCoV-HKU1 je subjedinica S1 ili subjedinica S2 proteina šiljka (S) ili njen imunogeni fragment.
[0043] U nekim primerima izvođenja, najmanje jedan antigeni polipeptid HCoV-HKU1 sadrži aminokiselinsku sekvencu identifikovanu bilo kojom od SEQ ID NO: 31 (Tabela 11). U nekim primerima izvođenja, aminokiselinska sekvenca antigenog polipeptida HCoV-HKU1 je, ili je fragment, ili je homolog ili varijanta koja ima najmanje 80% (npr., 85%, 90%, 95%, 98%, 99%) identičnosti sa aminokiselinskom sekvencom identifikovanom bilo kojom od SEQ ID NO: 31 (Tabela 11).
[0044] U nekim primerima izvođenja, otvoreni okvir čitanja RNK (tj., iRNK) vakcine ima optimizovane kodone.
[0045] U nekim primerima izvođenja, a RNK (tj., iRNK) vakcina dodatno sadrži adjuvans.
[0046] Tabele 4, 7, 12 i 15 daju pristupni brojevi od interesa Nacionalnog centra za biotehnološke informacije (NCBI). Treba razumeti da se izraz "aminokiselinska sekvenca iz tabela 4, 7, 12 i 15" odnosi na aminokiselinsku sekvencu identifikovanu jednim ili većim brojem pristupnih brojeva NCBI navedenih u tabelama 4, 7, 12 i 15.
[0047] Neki primeri izvođenja predmetnog prikaza obezbeđuju vakcinu koja uključuje najmanje jedan polinukleotid ribonukleinske kiseline (RNK) (npr., iRNK) koji ima otvoreni okvir čitanja koji kodira najmanje jedan antigeni polipeptid (tj., najmanje jedan antigeni polipeptid BetaCoV, npr., odabran od MERS-CoV, SARS-CoV, HCoV-OC43, HCoV-229E, HCoV-NL63, HCoV-NL, HCoV-NH i HCoV-HKU1), najmanje jednu 5' terminalnu kapu i najmanje jednu hemijsku modifikaciju, formulisanu u lipidnoj nanočestici.
[0048] U nekim primerima izvođenja, 5' terminalna kapa je 7mG(5')ppp(5')NlmpNp.
[0049] U nekim primerima izvođenja, najmanje jedna hemijska modifikacija je odabrana od pseudouridina, N1-metilpseudouridina, N1-etilpseudouridina, 2-tiouridina, 4'-tiouridina, 5-metilcitozina, 5-metiluridina, 2-tio-1-metil-1-deaza-pseudouridina, 2-tio-1-metil-pseudouridina, 2-tio-5-aza-uridina, 2-tio-dihidropseudouridina, 2-tio-dihidrouridina, 2-tio-pseudouridina, 4-metoksi-2-tio-pseudouridina, 4-metoksi-pseudouridina, 4-tio-1-metil-pseudouridina, 4-tiopseudouridina, 5-aza-uridina, dihidropseudouridina, 5-metoksiuridina i 2'-O-metil uridina. U nekim primerima izvođenja, hemijska modifikacija je na 5-poziciji uracila. U nekim primerima izvođenja, hemijska modifikacija je N1-metilpseudouridin. U nekim primerima izvođenja, hemijska modifikacija je N1-etilpseudouridin.
[0050] U pronalasku, lipidna nanočestica sadrži katjonski lipid, PEG-modifikovani lipid, holesterol i nekatjonski lipid. U nekim primerima izvođenja, katjonski lipid je jonizabilni katjonski lipid, a nekatjonski lipid je neutralni lipid. U nekim primerima izvođenja, katjonski lipid je odabran iz grupe koja se sastoji od 2,2-dilinoleil-4-dimetilaminoetil-[1,3]-dioksolana (DLin-KC2-DMA), dilinoleil-metil-4-dimetilaminobutirata (DLin-MC3-DMA), di((Z)-non-2-en-1-il) 9-((4-(dimetilamino)butanoil)oksi)heptadekandioata (L319), (12Z,15Z)-N,N-dimetil-2-nonilhenikoza-12,15-dien-1-amina (L608) i N,N-dimetil-1-[(1S,2R)-2-oktilciklopropil]heptadekan-8-amina (L530).
[0051] U nekim primerima izvođenja, lipid je
[0052] U nekim primerima izvođenja, lipid je
[0053] U nekim primerima izvođenja, lipidna nanočestica sadrži jedinjenja formule (I) i/ili formule (II), razmatrane u nastavku teksta.
1
[0054] U nekim primerima izvođenja, RNK (tj., iRNK) vakcina protiv respiratornih virusa prema pronalasku formulisana je u lipidnoj nanočestici koja sadrži jedinjenje odabrano od jedinjenja 3, 18, 20, 25, 26, 29, 30, 60, 108-112 i 122, koja su opisana u nastavku.
[0055] Neki primeri izvođenja predmetnog prikaza obezbeđuju vakcinu koja uključuje najmanje jedan RNK (tj., iRNK) polinukleotid koji ima otvoreni okvir čitanja koji kodira najmanje jedan antigeni polipeptid (tj., najmanje jedan antigeni polipeptid BetaCoV, npr., odabran od MERS-CoV, SARS-CoV, HCoV-OC43, HCoV-229E, HCoV-NL63, HCoV-NL, HCoV-NH i HCoV-HKU1), pri čemu najmanje 80% (npr., 85%, 90%, 95%, 98%, 99%) uracila u otvorenom okviru čitanja ima hemijsku modifikaciju, pri čemu je vakcina formulisana u lipidnoj nanočestici (tj., lipidna nanočestica sadrži katjonski lipid, PEG-modifikovani lipid, holesterol i nekatjonski lipid).
[0056] U nekim primerima izvođenja, 100% uracila u otvorenom okviru čitanja ima hemijsku modifikaciju. U nekim primerima izvođenja, hemijska modifikacija se nalazi na poziciji 5 uracila. U nekim primerima izvođenja, hemijska modifikacija je N1-metil pseudouridin. U nekim primerima izvođenja, 100% uracila u otvorenom okviru čitanja ima N1-metil pseudouridin na poziciji 5 uracila.
[0057] U nekim primerima izvođenja, otvoreni okvir čitanja RNK (tj., iRNK) polinukleotida kodira najmanje dva antigena polipeptida (tj., najmanje dva antigena polipeptida BetaCoV, npr., odabrana od MERS-CoV, SARS-CoV, HCoV-OC43, HCoV-229E, HCoV-NL63, HCoV-NL, HCoV-NH i HCoV-HKU1). U nekim primerima izvođenja, otvoreni okvir čitanja kodira najmanje pet ili najmanje deset antigenih polipeptida. U nekim primerima izvođenja, otvoreni okvir čitanja kodira najmanje 100 antigenih polipeptida. U nekim primerima izvođenja, otvoreni okvir čitanja kodira 2-100 antigenih polipeptida.
[0058] U nekim primerima izvođenja, vakcina sadrži najmanje dva RNK (tj., iRNK) polinukleotida, od kojih svaki ima otvoreni okvir čitanja koji kodira najmanje jedan antigeni polipeptid (tj., najmanje jedan antigeni polipeptid BetaCoV, npr., odabran od MERS-CoV, SARS-CoV, HCoV-OC43, HCoV-229E, HCoV-NL63, HCoV-NL, HCoV-NH i HCoV-HKU1). U nekim primerima izvođenja, vakcina sadrži najmanje pet ili najmanje deset RNK (tj., iRNK) polinukleotida, od kojih svaki ima otvoreni okvir čitanja koji kodira najmanje jedan antigeni polipeptid ili njegov imunogeni fragment. U nekim primerima izvođenja, vakcina sadrži najmanje 100 RNK (tj., iRNK) polinukleotida, od kojih svaki ima otvoreni okvir čitanja koji kodira najmanje jedan antigeni polipeptid. U nekim primerima izvođenja, vakcina sadrži 2-100 RNK (tj., iRNK) polinukleotida, od kojih svaki ima otvoreni okvir čitanja koji kodira najmanje jedan antigeni polipeptid.
[0059] U nekim primerima izvođenja, najmanje jedan antigeni polipeptid (tj., najmanje jedan antigeni polipeptid BetaCoV, npr., odabran od MERS-CoV, SARS-CoV, HCoV-OC43, HCoV229E, HCoV-NL63, HCoV-NL, HCoV-NH i HCoV-HKU1) je fuzionisan sa signalnim peptidom. U nekim primerima izvođenja, signalni peptid je odabran od: signalnog peptida HulgGk (METPAQLLFLLLLWLPDTTG; SEQ ID NO: 15); signalnog peptida epsilon-1 teškog lanca IgE (MDWTWILFLVAAATRVHS; SEQ ID NO: 16); signalne sekvence PRM japanskog encefalitisa (MLGSNSGQRVVFTILLLLVAPAYS; SEQ ID NO: 17), signalne sekvence proteina VSVg (MKCLLYLAFLFIGVNCA; SEQ ID NO: 18) i signalne sekvence JEV japanskog encefalitisa (MWLVSLAIVTACAGA; SEQ ID NO: 19).
[0060] U nekim primerima izvođenja, signalni peptid je fuzionisan sa N-krajem najmanje jednog antigenog polipeptida. U nekim primerima izvođenja, signalni peptid je fuzionisan sa C-krajem najmanje jednog antigenog polipeptida.
[0061] U nekim primerima izvođenja, najmanje jedan antigeni polipeptid (tj., najmanje jedan antigeni polipeptid BetaCoV, npr., odabran od MERS-CoV, SARS-CoV, HCoV-OC43, HCoV-229E, HCoV-NL63, HCoV-NL, HCoV-NH i HCoV-HKU1) sadrži mutirano N-vezano glikozilatno mesto.
[0062] Pronalazak obezbeđuje iRNK vakcinu kao što je prikazano u patentnim zahtevima formulisanu u lipidnoj nanočestici.
U nekim primerima izvođenja, nanočestica ima srednji prečnik od 50-200 nm. U nekim primerima izvođenja, katjonski lipid je jonizabilni katjonski lipid, a nekatjonski lipid je neutralni lipid. U nekim primerima izvođenja, katjonski lipid je odabran od 2,2-dilinoleil-4-dimetilaminoetil-[1,3]-dioksolana (DLin-KC2-DMA), dilinoleil-metil-4-dimetilaminobutirata (DLin-MC3-DMA), i di((Z)-non-2-en-1-il) 9-((4-(dimetilamino)butanoil)oksi)heptadekandioata (L319).
[0063] U nekim primerima izvođenja, lipidna nanočestica sadrži jedinjenja formule (I) i/ili formule (II), kako se razmatra u nastavku.
[0064] U nekim primerima izvođenja, lipidna nanočestica sadrži jedinjenja 3, 18, 20, 25, 26, 29, 30, 60, 108-112, ili 122, kako se razmatra u nastavku.
[0065] U nekim primerima izvođenja, nanočestica ima vrednost polidisperznosti manju od 0.4 (npr., manju od 0.3, 0.2 ili 0.1).
[0066] U nekim primerima izvođenja, nanočestica ima neto neutralno naelektrisanje na neutralnoj pH vrednosti.
[0067] U nekim primerima izvođenja, vakcina protiv respiratornih virusa je multivalentna.
[0068] Neki slučajevi predmetnog prikaza obezbeđuju postupke za indukovanje antigenspecifičnog imunskog odgovora kod subjekta, koji obuhvataju davanje subjektu bilo koje od ovde obezbeđenih RNK (npr., iRNK) vakcina u količini koja je efektivna u stvaranju antigenspecifičnog imunskog odgovora.
[0069] U nekim slučajevima, antigen-specifični imunski odgovor obuhvata T-ćelijski odgovor ili B-ćelijski odgovor.
[0070] U nekim slučajevima, postupak za stvaranje antigen-specifičnog imunskog odgovora obuhvata davanje subjektu jedne doze (bez buster doze) RNK (npr., iRNK) vakcine predmetnog prikaza.
[0071] U nekim slučajevima, postupak dalje obuhvata davanje subjektu druge (buster) doze RNK (npr., iRNK) vakcine. Mogu da se primene i dodatne doze RNK (npr., iRNK) vakcine.
[0072] U nekim slučajevima, subjekti ispoljavaju stopu serokonverzije od najmanje 80% (npr., najmanje 85%, najmanje 90%, ili najmanje 95%) nakon prve doze ili druge (buster) doze vakcine. Serokonverzija je vremenski period tokom koga se specifično antitelo razvija i postaje detektabilno u krvi. Nakon što dođe do serokonverzije, virus može da se detektuje ispitivanjem krvi na antitelo. Tokom infekcije ili imunizacije, antigeni ulaze u krv, i imunski sistem počinje da proizvodi antitela kao odgovor. Pre serokonverzije, sam antigen može, ali ne mora, da bude detektabilan, ali antitela se smatraju odsutnim. Tokom serokonverzije, antitela su prisutna, ali još uvek nisu detektabilna. U bilo kom trenutku nakon serokonverzije, antitela mogu da budu detektovana u krvi, ukazujući na prethodnu ili aktuelnu infekciju.
[0073] U nekim slučajevima, RNK (npr., iRNK) vakcina se daje subjektu intradermalnom ili intramuskularnom injekcijom.
[0074] Neki slučajevi predmetnog prikaza obezbeđuju postupke za indukovanje antigenspecifičnog imunskog odgovora kod subjekta, koji uključuju davanje subjektu RNK (npr., iRNK) vakcine u količini koja je efektivna u stvaranju antigen-specifičnog imunskog odgovora kod subjekta. Antigen-specifični imunski odgovori kod subjekta mogu da se odrede, u nekim slučajevima, procenom titra antitela (za titar antitela koje se vezuje za antigeni polipeptid hMPV, PIV3, RSV, MeV i/ili BetaCoV) nakon davanja subjektu bilo koje od RNK (npr., iRNK) vakcina predmetnog prikaza. U nekim slučajevima, titar antitela protiv antigenog polipeptida koji subjekt proizvodi povećava se za najmanje 1 log u odnosu na kontrolu. U nekim slučajevima, titar antitela protiv antigenog polipeptida koji subjekt proizvodi povećava se za 1-3 loga u odnosu na kontrolu.
[0075] U nekim slučajevima, titar antitela protiv antigenog polipeptida proizveden kod subjekta povećava se najmanje 2 puta u odnosu na kontrolu. U nekim slučajevima, titar antitela protiv antigenog polipeptida proizveden kod subjekta povećava se najmanje 5 puta u odnosu na kontrolu. U nekim slučajevima, titar antitela protiv antigenog polipeptida proizveden kod subjekta povećava se najmanje 10 puta u odnosu na kontrolu. U nekim slučajevima, titar antitela protiv antigenog polipeptida proizveden kod subjekta povećava se 2-10 puta u odnosu na kontrolu.
[0076] U nekim slučajevima, kontrola je titar antitela protiv antigenog polipeptida proizveden kod subjekta kome nije data RNK (npr., iRNK) vakcina predmetnog prikaza. U nekim slučajevima,
1
kontrola je titar antitela protiv antigenog polipeptida proizveden kod subjekta kome je data živa atenuisana ili inaktivisana hMPV, PIV3, RSV, MeV i/ili BetaCoV vakcina (videti, npr., Ren J. et al. J of Gen. Virol 2015; 96: 1515-1520), ili je kontrola titar antitela protiv antigenog polipeptida proizveden kod subjekta kome je data rekombinantna ili prečišćena hMPV, PIV3, RSV, MeV i/ili BetaCoV vakcina na bazi proteina. U nekim slučajevima, kontrola je titar antitela protiv antigenog polipeptida proizveden kod subjekta kome je data hMPV, PIV3, RSV, MeV i/ili BetaCoV vakcina na bazi virusu-sličnih čestica (VLP) (videti, npr., Cox RG et al., J Virol 2014 Jun; 88(11): 6368-6379).
[0077] U nekim slučajevima prikaza, RNK (npr., iRNK) vakcina predmetnog prikaza se daje subjektu u efektivnoj količini (količina koja je efektivna u indukovanju imunskog odgovora). U nekim slučajevima, efektivna količina je doza ekvivalentna smanjenju doze koja predstavlja standard nege od najmanje 2 puta, najmanje 4 puta, najmanje 10 puta, najmanje 100 puta, najmanje 1000 puta rekombinantne hMPV, PIV3, RSV, MeV i/ili BetaCoV proteinske vakcine, pri čemu je titar antitela protiv antigenog polipeptida proizveden kod subjekta ekvivalentan titru antitela protiv antigenog polipeptida proizvedenom kod kontrolnog subjekta kome je data doza koja je standard nege rekombinantne hMPV, PIV3, RSV, MeV i/ili BetaCoV proteinske vakcine, prečišćene hMPV, PIV3, RSV, MeV i/ili BetaCoV proteinske vakcine, žive atenuisane hMPV, PIV3, RSV, MeV i/ili BetaCoV vakcine, inaktivisane hMPV, PIV3, RSV, MeV i/ili BetaCoV vakcine, ili hMPV, PIV3, RSV, MeV i/ili BetaCoV VLP vakcine. U nekim slučajevima, efektivna količina je doza ekvivalentna smanjenju od 2-1000 puta doze koja predstavlja standard nege rekombinantne hMPV, PIV3, RSV, MeV i/ili BetaCoV proteinske vakcine, pri čemu je titar antitela protiv antigenog polipeptida proizveden kod subjekta ekvivalentan titru antitela protiv antigenog polipeptida proizvedenom kod kontrolnog subjekta kome je data doza koja predstavlja standard nege rekombinantne hMPV, PIV3, RSV, MeV i/ili BetaCoV proteinske vakcine, prečišćene hMPV, PIV3, RSV, MeV i/ili BetaCoV proteinske vakcine, žive atenuisane hMPV, PIV3, RSV, MeV i/ili BetaCoV vakcine, inaktivisane hMPV, PIV3, RSV, MeV i/ili BetaCoV vakcine, ili hMPV, PIV3, RSV, MeV i/ili BetaCoV VLP vakcine.
[0078] U nekim slučajevima, kontrola je titar antitela protiv antigenog polipeptida proizveden kod subjekta kome je data vakcina na bazi virusu-sličnih čestica (VLP) koja sadrži strukturne proteine hMPV, PIV3, RSV, MeV i/ili BetaCoV.
[0079] U nekim primerima izvođenja, iRNK vakcina pronalaska je formulisana u količini koja je efektivna u indukovanju antigen-specifičnog imunskog odgovora kod subjekta.
[0080] U nekim primerima izvođenja, efektivna količina je ukupna doza od 25 µg do 1000 µg, ili 50 µg do 1000 µg. U nekim primerima izvođenja, efektivna količina je ukupna doza od 100 µg. U nekim primerima izvođenja, efektivna količina je doza od 25 µg data subjektu ukupno dva puta.
U nekim primerima izvođenja, efektivna količina je doza od 100 µg data subjektu ukupno dva puta. U nekim primerima izvođenja, efektivna količina je doza od 400 µg data subjektu ukupno dva puta. U nekim primerima izvođenja, efektivna količina je doza od 500 µg data subjektu ukupno dva puta.
[0081] U nekim primerima izvođenja, efikasnost (ili efektivnost) iRNK vakcine je veća od 60%.
[0082] Efikasnost vakcine može da se proceni upotrebom standardnih analiza (videti, npr., Weinberg et al., J Infect Dis, 2010 Jun 1;201(11):1607-10). Na primer, efikasnost vakcine može da se meri dvostruko zaslepljenim, randomizovanim, klinički kontrolisanim studijama. Efikasnost vakcine može da se izrazi kao proporcionalno smanjenje stope javljanja bolesti (AR) između nevakcinisane (ARU) i vakcinisane (ARV) kohorte u studiji i može da se izračuna iz relativnog rizika (RR) od bolesti u vakcinisanoj grupi upotrebom sledećih formula:
Efikasnost = (ARU-ARV)/ARU x 100;
i
Efikasnost = (1-RR) x 100.
[0083] Slično tome, efektivnost vakcine može da se oceni upotrebom standardnih analiza (videti, npr., Weinberg et al., J Infect Dis, 2010 Jun 1;201(11):1607-10). Efektivnost vakcine je procena kako vakcina (za koju se možda već pokazalo da ima visoku efikasnost vakcine) smanjuje oboljevanje u populaciji. Pomoću ove mere može da se proceni neto ravnoteža koristi i štetnih efekata programa vakcinacije, a ne samo same vakcine, u prirodnim uslovima, a ne u kontrolisanom kliničkom ispitivanju. Efektivnost vakcine je proporcionalna efikasnosti vakcine (potencija), ali je takođe pod uticajem toga koliko su dobro ciljne grupe u populaciji imunizovane, kao i drugih faktora koji nisu povezani sa vakcinom, koji utiču na stvarne ishode hospitalizacija, ambulantnih poseta, ili na troškove. Na primer, može da se koristi retrospektivna analiza kontrole slučajeva, u kojoj se upoređuju stope vakcinacije između skupa zaraženih slučajeva i odgovarajućih kontrola. Efektivnost vakcine može da se izrazi kao razlika u stopi, uz korišćenje odnosa šanse (OR) za razvoj infekcije uprkos vakcinaciji:
Efektivnost = (1-OR) x 100.
[0084] U nekim primerima izvođenja, efikasnost (ili efektivnost) RNK (tj., iRNK) vakcine je najmanje 65%, najmanje 70%, najmanje 75%, najmanje 80%, najmanje 85%, ili najmanje 90%.
[0085] U nekim primerima izvođenja, vakcina imunizuje subjekat protiv BetaCoV (npr., odabran od MERS-CoV, SARS-CoV, HCoV-OC43, HCoV-229E, HCoV-NL63, HCoV-NL, HCoV-NH i HCoV-HKU1), do 2 godine. U nekim primerima izvođenja, vakcina imunizuje subjekat protiv
1
BetaCoV (npr., odabran od MERS-CoV, SARS-CoV, HCoV-OC43, HCoV-229E, HCoV-NL63, HCoV-NL, HCoV-NH i HCoV-HKU1), više od 2 godine, više od 3 godine, više od 4 godine, ili 5-10 godina.
[0086] U nekim primerima izvođenja, subjekat je star oko 5 godina ili mlađi. Na primer, subjekat može da bude starosti između oko 1 godine i oko 5 godina (npr., oko 1, 2, 3, 5 ili 5 godina), ili starosti između oko 6 meseci i oko 1 godine (npr., oko 6, 7, 8, 9, 10, 11 ili 12 meseci). U nekim primerima izvođenja, subjekat ima oko 12 meseci ili je mlađi (npr., 12, 11, 10, 9, 8, 7, 6, 5, 4, 3, 2 meseca ili 1 mesec). U nekim primerima izvođenja, subjekat ima oko 6 meseci ili je mlađi.
[0087] U nekim primerima izvođenja, subjekat je rođen u terminu (npr., oko 37-42 nedelje). U nekim primerima izvođenja, subjekat je rođen prevremeno, na primer, sa oko 36 nedelja gestacije ili ranije (npr., oko 36, 35, 34, 33, 32, 31, 30, 29, 28, 27, 26 ili 25 nedelja). Na primer, subjekat je možda rođen sa oko 32 nedelje gestacije ili ranije. U nekim primerima izvođenja, subjekat je rođen prevremeno između oko 32 nedelje i oko 36 nedelja gestacije. Kod takvih subjekata, RNK (npr., iRNK) vakcina može da se primeni kasnije u životu, na primer, u uzrastu od oko 6 meseci do oko 5 godina, ili starijem.
[0088] U nekim primerima izvođenja, subjekat je trudan (npr., u prvom, drugom ili trećem trimestru) kada mu se daje RNK (tj., iRNK) vakcina. Prema tome, predmetni prikaz obezbeđuje RNK (tj., iRNK) vakcine za imunizaciju majke kako bi se poboljšalo prenošenje zaštite od virusa sa majke na dete.
[0089] U nekim primerima izvođenja, subjekat je mlada odrasla osoba starosti između oko 20 godina i oko 50 godina (npr., starosti oko 20, 25, 30, 35, 40, 45 ili 50 godina).
[0090] U nekim primerima izvođenja, subjekat je stariji subjekat starosti oko 60 godina, starosti oko 70 godina, ili stariji (npr., starosti oko 60, 65, 70, 75, 80, 85 ili 90 godina).
[0091] U nekim primerima izvođenja, subjekat ima hroničnu plućnu bolest (npr., hroničnu opstruktivnu bolest pluća (COPD) ili astmu). Dva oblika COPD uključuju hronični bronhitis, koji uključuje dugotrajni kašalj sa sluzi, i emfizem, koji uključuje oštećenje pluća tokom vremena. Prema tome, subjekat kome se daje RNK (tj., iRNK) vakcina može da ima hronični bronhitis ili emfizem.
[0092] U nekim primerima izvođenja, subjekat je bio izložen BetaCoV (npr., odabran od MERS-CoV, SARS-CoV, HCoV-OC43, HCoV-229E, HCoV-NL63, HCoV-NL, HCoV-NH i HCoV-HKU1); subjekat je inficiran BetaCoV (npr., odabran od MERS-CoV, SARS-CoV, HCoV-OC43, HCoV-229E, HCoV-NL63, HCoV-NL, HCoV-NH i HCoV-HKU1); ili je subjekat u riziku od infekcije sa BetaCoV (npr., odabran od MERS-CoV, SARS-CoV, HCoV-OC43, HCoV-229E, HCoV-NL63, HCoV-NL, HCoV-NH i HCoV-HKU1).
1
[0093] U nekim primerima izvođenja, subjekat je imunokompromitovan (ima narušen imunski sistem, npr., ima imunski poremećaj ili autoimunski poremećaj).
[0094] U nekim primerima izvođenja ovde opisane vakcine na bazi nukleinske kiseline su hemijski modifikovane. U drugim primerima izvođenja vakcine na bazi nukleinske kiseline su nemodifikovane.
[0095] Prikaz se dalje odnosi na kompoziciju za, ili na postupak vakcinacije subjekta koji obuhvata davanje subjektu vakcine na bazi nukleinske kiseline koja sadrži jedan ili više RNK polinukleotida koji imaju otvoreni okvir čitanja koji kodira prvi antigeni polipeptid, pri čemu se doza od između 10 µg/kg i 400 µg/kg vakcine na bazi nukleinske kiseline daje subjektu. U nekim slučajevima doza RNK polinukleotida je 1-5 µg, 5-10 µg, 10-15 µg, 15-20 µg, 10-25 µg, 20-25 µg, 20-50 µg, 30-50 µg, 40-50 µg, 40-60 µg, 60-80 µg, 60-100 µg, 50-100 µg, 80-120 µg, 40-120 µg, 40-150 µg, 50-150 µg, 50-200 µg, 80-200 µg, 100-200 µg, 120-250 µg, 150-250 µg, 180-280 µg, 200-300 µg, 50-300 µg, 80-300 µg, 100-300 µg, 40-300 µg, 50-350 µg, 100-350 µg, 200-350 µg, 300-350 µg, 320-400 µg, 40-380 µg, 40-100 µg, 100-400 µg, 200-400 µg, ili 300-400 µg po dozi. U nekim slučajevima, vakcina na bazi nukleinske kiseline daje se subjektu intradermalnom ili intramuskularnom injekcijom. U nekim slučajevima, vakcina na bazi nukleinske kiseline daje se subjektu nultog dana. U nekim slučajevima, druga doza vakcine na bazi nukleinske kiseline daje se subjektu dvadeset prvog dana.
[0096] U nekim slučajevima, doza od 25 mikrograma RNK polinukleotida uključena je u vakcinu na bazi nukleinske kiseline datu subjektu. U nekim slučajevima, doza 100 mikrograma RNK polinukleotida uključena je u vakcinu na bazi nukleinske kiseline datu subjektu. U nekim slučajevima, doza 50 mikrograma RNK polinukleotida uključena je u vakcinu na bazi nukleinske kiseline datu subjektu. U nekim slučajevima, doza od 75 mikrograma RNK polinukleotida uključena je u vakcinu na bazi nukleinske kiseline datu subjektu. U nekim slučajevima, doza od 150 mikrograma RNK polinukleotida uključena je u vakcinu na bazi nukleinske kiseline datu subjektu. U nekim slučajevima, doza od 400 mikrograma RNK polinukleotida uključena je u vakcinu na bazi nukleinske kiseline datu subjektu. U nekim slučajevima, doza od 200 mikrograma RNK polinukleotida uključena je u vakcinu na bazi nukleinske kiseline datu subjektu. U nekim slučajevima, RNK polinukleotid akumulira se na 100 puta većem nivou u lokalnom limfnom čvoru u poređenju sa udaljenim limfnim čvorom. U drugim slučajevima vakcina na bazi nukleinske kiseline je hemijski modifikovana, a u drugim slučajevima vakcina na bazi nukleinske kiseline nije hemijski modifikovana.
[0097] Prikaz se dalje odnosi na vakcinu na bazi nukleinske kiseline koja sadrži jedan ili više RNK polinukleotida koji imaju otvoreni okvir čitanja koji kodira prvi antigeni polipeptid, pri čemu RNK polinukleotid ne uključuje stabilizacioni element, i farmaceutski prihvatljiv nosač ili ekscipijens,
1
pri čemu adjuvans nije uključen u vakcinu. U nekim slučajevima, stabilizacioni element je histonska struktura drška-petlja. U nekim slučajevima, stabilizacioni element je sekvenca nukleinske kiseline koja ima povećan sadržaj GC u odnosu na sekvencu divljeg tipa.
[0098] Prikaz se dalje odnosi na vakcine na bazi nukleinske kiseline koje sadrže jedan ili više RNK polinukleotida koji imaju otvoreni okvir čitanja koji kodira prvi antigeni polipeptid, pri čemu je RNK polinukleotid prisutan u formulaciji za in vivo primenu kod domaćina, što daje titar antitela superioran u odnosu na kriterijum za seroprotekciju za prvi antigen za prihvatljiv procenat humanih subjekata. U nekim slučajevima, titar antitela koji proizvode iRNK vakcine prikaza je neutrališući titar antitela. U nekim slučajevima neutrališući titar antitela je veći nego kod proteinske vakcine. U drugim slučajevima, neutrališući titar antitela koji proizvode iRNK vakcine pronalaska je veći nego kod proteinske vakcine sa adjuvansom. U sledećim slučajevima, neutrališući titar antitela koji proizvode iRNK vakcine prikaza je 1000-10000, 1200-10000, 1400-10 000, 1500-10000, 1000-5000, 1000-4000, 1800-10000, 2000-10000, 2000-5000, 2000-3000, 2000-4000, 3000-5000, 3000-4000, ili 2000-2500. Neutrališući titar se tipično izražava kao najviše razređenje seruma potrebno za postizanje 50% redukcije broja plaka.
[0099] Prikazane su i vakcine na bazi nukleinske kiseline koje sadrže jedan ili više RNK polinukleotida koji imaju otvoreni okvir čitanja koji kodira prvi antigeni polipeptid, pri čemu je RNK polinukleotid prisutan u formulaciji za in vivo primenu kod domaćina za izazivanje dugotrajnijeg visokog titra antitela od titra antitela izazvanog iRNK vakcinom koja ima stabilišući element ili je formulisana sa adjuvansom i kodira prvi antigeni polipeptid. U nekim slučajevima, RNK polinukleotid je formulisan da proizvede neutrališuća antitela unutar jedne nedelje od jedne primene. U nekim slučajevima, adjuvans je odabran od katjonskog peptida i imunostimulatorne nukleinske kiseline. U nekim slučajevima, katjonski peptid je protamin.
[0100] Prikaz se dalje odnosi na vakcine na bazi nukleinske kiseline koje sadrže jedan ili više RNK polinukleotida koji imaju otvoreni okvir čitanja koji sadrži najmanje jednu hemijsku modifikaciju ili opciono ne sadrži nukleotidnu modifikaciju, otvoreni okvir čitanja koji kodira prvi antigeni polipeptid, pri čemu je RNK polinukleotid prisutan u formulaciji za in vivo primenu kod domaćina tako da nivo ekspresije antigena kod domaćina značajno prevazilazi nivo ekspresije antigena proizveden iRNK vakcinom koja ima stabilišući element ili je formulisana sa adjuvansom i kodira prvi antigeni polipeptid.
[0101] Prikaz se dalje odnosi na vakcine na bazi nukleinske kiseline koje sadrže jedan ili više RNK polinukleotida koji imaju otvoreni okvir čitanja koji sadrži najmanje jednu hemijsku modifikaciju ili opciono ne sadrži nukleotidnu modifikaciju, otvoreni okvir čitanja koji kodira prvi antigeni polipeptid, pri čemu vakcina ima najmanje 10 puta manje RNK polinukleotida nego što je potrebno
1
da bi nemodifikovana iRNK vakcina proizvela ekvivalentan titar antitela. U nekim slučajevima, RNK polinukleotid je prisutan u dozi od 25-100 mikrograma.
[0102] Prikaz dalje uključuje postupke za stvaranje, održavanje ili obnavljanje antigene memorije na soj respiratornog virusa kod individue ili populacije individua koji uključuju davanje navedenoj individui ili populaciji buster vakcine za antigenu memoriju na bazi nukleinske kiseline koja sadrži (a) najmanje jedan RNK polinukleotid, gde navedeni polinukleotid sadrži najmanje jednu hemijsku modifikaciju ili opciono ne sadrži nukleotidnu modifikaciju i dva ili više kodonoptimizovana otvorena okvira čitanja, gde navedeni otvoreni okviri čitanja kodiraju set referentnih antigenih polipeptida, i (b) opciono farmaceutski prihvatljiv nosač ili ekscipijens. U nekim slučajevima, vakcina se primenjuje kod individue putem koji je odabran iz grupe koja se sastoji od intramuskularne primene, intradermalne primene i subkutane primene. U nekim slučajevima, korak primene obuhvata dovođenje u kontakt mišićnog tkiva subjekta sa uređajem pogodnim za injektovanje kompozicije. U nekim slučajevima, korak primene obuhvata dovođenje u kontakt mišićnog tkiva subjekta sa uređajem pogodnim za injektovanje kompozicije u kombinaciji sa elektroporacijom.
[0103] Prikaz dalje uključuje postupke za vakcinaciju subjekta koji obuhvataju davanje subjektu jedne doze između 25 ug/kg i 400 ug/kg vakcine na bazi nukleinske kiseline koja sadrži jedan ili više RNK polinukleotida koji imaju otvoreni okvir čitanja koji kodira prvi antigeni polipeptid u efektivnoj količini za vakcinaciju subjekta.
[0104] Prikaz se dalje odnosi na vakcine na bazi nukleinske kiseline koje sadrže jedan ili više RNK polinukleotida koji imaju otvoreni okvir čitanja koji sadrži najmanje jednu hemijsku modifikaciju, otvoreni okvir čitanja koji kodira prvi antigeni polipeptid, pri čemu vakcina ima najmanje 10 puta manje RNK polinukleotida nego što je potrebno da nemodifikovana iRNK vakcina proizvede ekvivalentni titar antitela. U nekim slučajevima, RNK polinukleotid je prisutan u dozi od 25-100 mikrograma.
[0105] Prikaz se dalje odnosi na vakcine na bazi nukleinske kiseline koje sadrže RNK polinukleotid formulisan u LNP koji ima otvoreni okvir čitanja koji ne sadrži nukleotidne modifikacije (nemodifikovan), otvoreni okvir čitanja koji kodira prvi antigeni polipeptid, pri čemu vakcina ima najmanje 10 puta manje RNK polinukleotida nego što je potrebno da nemodifikovana iRNK vakcina koja nije formulisana u LNP proizvede ekvivalentni titar antitela. U nekim slučajevima, RNK polinukleotid je prisutan u dozi od 25-100 mikrograma.
[0106] Podaci prikazani u primerima pokazuju značajno pojačane imunske odgovore pri upotrebi formulacija prema pronalasku. I hemijski modifikovana i nemodifikovana RNK vakcina su korisne prema pronalasku. Iznenađujuće, za razliku od izveštaja prethodnog stanja tehnike koji ukazuju da je za proizvodnju vakcina poželjno koristiti hemijski nemodifikovanu iRNK formulisanu u nosaču,
1
u ovom dokumentu je opisano da hemijski modifikovane iRNK-LNP vakcine zahtevaju mnogo nižu efektivnu dozu iRNK od nemodifikovane iRNK, tj., deset puta nižu od nemodifikovane iRNK kada je formulisana u nosačima različitim od LNP. I hemijski modifikovana i nemodifikovana RNK vakcina prema pronalasku proizvode bolji imunski odgovor od iRNK vakcina formulisanih u drugačijem lipidnom nosaču.
[0107] Prikaz dalje uključuje postupak za lečenje starijeg subjekta u dobu od 60 godina ili starijeg, koji obuhvata davanje subjektu vakcine na bazi nukleinske kiseline koja sadrži jedan ili više RNK polinukleotida koji imaju otvoreni okvir čitanja koji kodira antigeni polipeptid u efektivnoj količini za vakcinaciju subjekta.
[0108] Prikaz uključuje postupak za lečenje mladog subjekta, starosti 17 godina ili mlađeg, koji obuhvata davanje subjektu vakcine na bazi nukleinske kiseline koja sadrži jedan ili više RNK polinukleotida koji imaju otvoreni okvir čitanja koji kodira antigeni polipeptid respiratornog virusa u efektivnoj količini za vakcinaciju subjekta.
[0109] Prikaz obuhvata postupak za lečenje odraslog subjekta koji obuhvata davanje subjektu vakcine na bazi nukleinske kiseline koja sadrži jedan ili više RNK polinukleotida koji imaju otvoreni okvir čitanja koji kodira antigeni polipeptid respiratornog virusa u efektivnoj količini za vakcinaciju subjekta.
[0110] Prikaz uključuje postupak za vakcinaciju subjekta kombinovanom vakcinom koja uključuje najmanje dve sekvence nukleinske kiseline koje kodiraju respiratorne antigene, pri čemu je doza u vakcini kombinovana terapijska doza, kod koje je doza svake pojedinačne nukleinske kiseline koja kodira antigen subterapijska doza. U nekim slučajevima, kombinovana doza je 25 mikrograma RNK polinukleotida u vakcini na bazi nukleinske kiseline datoj subjektu. U nekim slučajevima, kombinovana doza je 100 mikrograma RNK polinukleotida u vakcini na bazi nukleinske kiseline datoj subjektu. U nekim slučajevima kombinovana doza je 50 mikrograma RNK polinukleotida u vakcini na bazi nukleinske kiseline datoj subjektu. U nekim slučajevima, kombinovana doza je 75 mikrograma RNK polinukleotida u vakcini na bazi nukleinske kiseline datoj subjektu. U nekim slučajevima, kombinovana doza je 150 mikrograma RNK polinukleotida u vakcini na bazi nukleinske kiseline datoj subjektu. U nekim slučajevima, kombinovana doza je 400 mikrograma RNK polinukleotida u vakcini na bazi nukleinske kiseline datoj subjektu. U nekim slučajevima, subterapijska doza svake pojedinačne nukleinske kiseline koja kodira antigen je 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, ili 20 mikrograma. U drugim slučajevima, vakcina na bazi nukleinske kiseline je hemijski modifikovana, a u drugim primerima izvođenja vakcina na bazi nukleinske kiseline nije hemijski modifikovana.
[0111] U poželjnim aspektima, vakcine prema pronalasku (tj., LNP-inkapsulirane iRNK vakcine) proizvode profilaktički- i/ili terapijski-efikasne nivoe, koncentracije i/ili titrove antigen-
2
specifičnih antitela u krvi ili serumu vakcinisanog subjekta. Kako je ovde definisano, termin titar antitela se odnosi na količinu antigen-specifičnih antitela proizvedenih u subjektu, npr., humanom subjektu. U ilustrativnim primerima izvođenja, titar antitela je izražen kao inverzna vrednost najvećeg razblaženja (u seriji razblaženja) koje još uvek daje pozitivan rezultat. U ilustrativnim primerima izvođenja, titar antitela se određuje ili meri enzimski-vezanim imunosorbentnim testom (ELISA). U ilustrativnim primerima izvođenja, titar antitela se određuje ili meri testom neutralizacije, npr., mikroneutralizacionim testom. U određenim aspektima, titar antitela se izražava kao razmera, kao što je 1:40, 1:100, itd.
[0112] U ilustrativnim primerima izvođenja pronalaska, efikasna vakcina proizvodi titar antitela veći od 1:40, veći od 1:100, veći od 1:400, veći od 1:1000, veći od 1:2000, veći od 1:3000, veći od 1:4000, veći od 1:500, veći od 1:6000, veći od 1:7500, veći od 1:10 000. U ilustrativnim primerima izvođenja, titar antitela se proizvodi ili dostiže za 10 dana nakon vakcinacije, za 20 dana nakon vakcinacije, za 30 dana nakon vakcinacije, za 40 dana nakon vakcinacije, ili za 50 ili više dana nakon vakcinacije. U ilustrativnim primerima izvođenja, titar se proizvodi ili dostiže nakon jedne doze vakcine date subjektu. U drugim primerima izvođenja, titar se proizvodi ili dostiže nakon više doza, npr., nakon prve i druge doze (npr., buster doze).
[0113] U ilustrativnim aspektima pronalaska, antigen-specifična antitela se mere u jedinicama µg/ml ili se mere u jedinicama IU/L (međunarodne jedinice po litru) ili mlU/ml (mili međunarodne jedinice po ml). U ilustrativnim primerima izvođenja pronalaska, efikasna vakcina proizvodi >0.5 µg/ml, >0.1 µg/ml, >0.2 µg/ml, >0.35 µg/ml, >0.5 µg/ml, >1 µg/ml, >2 µg/ml, >5 µg/ml ili >10 µg/ml. U ilustrativnim primerima izvođenja pronalaska, efikasna vakcina proizvodi >10 mlU/ml, >20 mlU/ml, >50 mlU/ml, >100 mlU/ml, >200 mlU/ml, >500 mlU/ml ili > 1000 mlU/ml. U ilustrativnim primerima izvođenja, nivo ili koncentracija antitela se proizvodi ili dostiže za 10 dana nakon vakcinacije, za 20 dana nakon vakcinacije, za 30 dana nakon vakcinacije, za 40 dana nakon vakcinacije, ili za 50 ili više dana nakon vakcinacije. U ilustrativnim primerima izvođenja, nivo ili koncentracija se proizvodi ili dostiže nakon jedne doze vakcine date subjektu. U drugim primerima izvođenja, nivo ili koncentracija se proizvodi ili dostiže nakon više doza, npr., nakon prve i druge doze (npr., buster doze). U ilustrativnim primerima izvođenja, nivo ili koncentracija antitela se određuje ili meri enzimski-vezanim imunosorbentnim testom (ELISA). U ilustrativnim primerima izvođenja, nivo ili koncentracija antitela se određuje ili meri testom neutralizacije, npr., mikroneutralizacionim testom.
[0114] Detalji različitih primera izvođenja prikaza prikazani su u opisu u nastavku teksta. Druga svojstva, ciljevi i prednosti prikaza biće očigledni iz opisa i iz patentnih zahteva.
KRATAK OPIS CRTEŽA
[0115] Gore navedeni i drugi ciljevi, svojstva i prednosti biće očigledni iz sledećeg opisa konkretnih primera izvođenja prikaza, kako je ilustrovano na pratećim crtežima na kojima se slične referentne karakteristike odnose na iste delove u različitim perspektivama. Crteži nisu nužno u razmeri, već se naglasak stavlja na ilustrovanje principa različitih primera izvođenja prikaza.
Sl. 1 je šematski prikaz jednog primera konstrukta RNK (npr. iRNK) vakcine predmetnog prikaza. Konstrukt prikazuje fuzioni protein cele dužine humanog metapneumovirusa i humanog respiratornog sincicijalnog virusa dobijen iz sojeva divljeg tipa (The Journal of General Virology.2008;89(Pt 12):3113-3118).
Sl. 2A-2C su grafikoni koji prikazuju nivoe antitela specifičnih za fuzioni protein hMPV u serumu miševa imunizovanih hMPV iRNK vakcinom 0. dana (Sl.2A), 14. dana (Sl.2B) i 35. dana (Sl. 2C) nakon imunizacije. Miševi su imunizovani jednom dozom (2 µg ili 10 µg) 0. dana i data im je buster doza (2 µg ili 10 µg) 21. dana. Antitela specifična za fuzioni protein hMPV detektovana su za obe doze 35. dana sve do razblaženja seruma od 1:10000.
Sl. 3A-3C su grafikoni koji prikazuju rezultat izotipizacije IgG u serumu miševa imunizovanih hMPV iRNK vakcinama. Nivoi IgG2a (Sl. 3A) i IgG1 (Sl. 3B) antitela specifičnih za fuzioni protein hMPV u serumu mereni su testom ELISA. Sl.3C pokazuje da iRNK vakcina na bazi hMPV fuzionog proteina indukuje mešani Th1/Th2 citokinski odgovor sa pomakom ka Th1.
Sl. 4 je grafikon koji prikazuje in vitro neutralizaciju soja hMPV B2 (TN/91-316) upotrebom seruma miševa imunizovanih iRNK vakcinom koja kodira fuzioni protein hMPV. Mišji serum dobijen od miševa koji su primili dozu od 10 µg ili 2 µg sadržao je hMPV-neutrališuća antitela.
Sl. 5A-5C su grafikoni koji prikazuju odgovor Th1 citokina indukovan pulom hMPV fuzionih peptida (15-meri-5O (preklapanje)) u splenocitima izolovanim iz miševa imunizovanih hMPV iRNK vakcinama. Medijum bez virusa je korišćen kao negativna kontrola i bio je uključen konkanavalin A (ConA, pozitivna kontrola za stimulaciju splenocita). Ispitivani citokini uključivali su IFN-γ (Sl.5A), IL-2 (Sl.5B) i IL12 (Sl.5C).
Sl. 6A-6E su grafikoni koji prikazuju odgovor Th2 citokina indukovan pulom hMPV fuzionih peptida (15-meri-5O (preklapanje)) u splenocitima izolovanim iz miševa imunizovanih hMPV iRNK vakcinama. Medijum bez virusa je korišćen kao negativna kontrola i bio je uključen i konkanavalin A. Ispitivani citokini uključivali su IL-10 (Sl.6A), TNF-α (Sl.6B), IL4 (Sl.6C), IL-5 (Sl.6D) i IL-6 (Sl.6E).
Sl. 7A-7C su grafikoni koji prikazuju Th1 odgovor indukovan inaktivisanim virusom hMPV u splenocitima izolovanim iz miševa imunizovanih hMPV iRNK vakcinom. Medijum bez virusa je korišćen kao negativna kontrola i bio je uključen i konkanavalin A. Ispitivani citokini uključivali su IFN-γ (Sl.7A), IL-2 (Sl.7B) i IL12 (Sl.7C).
Sl. 8A-8E su grafikoni koji prikazuju Th2 odgovor indukovan inaktivisanim virusom hMPV u splenocitima izolovanim iz miševa imunizovanih hMPV iRNK vakcinom. Medijum bez virusa je korišćen kao negativna kontrola i bio je uključen i konkanavalin A. Ispitivani citokini uključivali su IL-10 (Sl.8A), TNF-α (Sl.8B), IL4 (Sl.8C), IL-5 (Sl.8D) i IL-6 (Sl.8E).
Sl. 9A-9B su grafikoni koji prikazuju rezultate eksperimenata izlaganja pamučnog pacova antigenu. Upotrebljene su dve različite doze hMPV iRNK vakcine (doze od 2 µg ili 10 µg) za imunizaciju pamučnih pacova pre izlaganja antigenu. hMPV iRNK vakcine su snizile titar virusa u plućima i nosu pamučnog pacova, pri čemu je doza od 10 µg bila efektivnija u snižavanju titra virusa. Upotreba doze od 10 µg rezultovala je u 100% zaštiti u plućima i snižavanjem titra virusa od ~2 log u nosu. Upotreba doze od 2 µg rezultovala je u snižavanju titra virusa od 1 log u plućima i izostankom snižavanja titra virusa u nosu. Vakcina je primenjena 0. dana, a buster doza je primenjena 21. dana.
Sl. 10 je grafikon koji prikazuje histopatologiju pluća pamučnih pacova koji su primili hMPV iRNK vakcine. Patologija povezana sa bolešću pojačanom vakcinom nije zapažena u imunizovanim grupama.
Sl. 11 je grafikon koji prikazuje neutrališući titar antitela za hMPV kod pamučnih pacova koji su primili hMPV iRNK vakcine (doze od 2 µg ili 10 µg) 35. i 42. dana nakon imunizacije.
Sl. 12 je grafikon koji prikazuje virusno opterećenje pluća i nosa kod pamučnih pacova podvrgnutih veštačkoj infekciji sojem hMPV/A2 nakon imunizacije naznačenim iRNK vakcinama (hMPV iRNK vakcina ili hMPV/PIV iRNK kombinovana vakcina). Vakcinisani pamučni pacovi su pokazali snižena virusna opterećenja pluća i nosa nakon veštačke infekcije, u poređenju sa kontrolom.
2
Sl. 13 je grafikon koji prikazuje virusno opterećenje pluća i nosa kod pamučnih pacova podvrgnutih veštačkoj infekciji sojem PIV3 nakon imunizacije naznačenim iRNK vakcinama (PIV iRNK vakcina ili hMPV/PIV kombinovana vakcina). Vakcinisani pamučni pacovi su pokazali snižena virusna opterećenja pluća i nosa nakon veštačke infekcije, u poređenju sa kontrolom.
Sl. 14 je grafikon koji prikazuje neutrališući titar antitela za hMPV kod pamučnih pacova koji su primili različite doze hMPV iRNK vakcina ili hMPV/PIV kombinovanih iRNK vakcina 42. dana nakon imunizacije. Doze vakcina su naznačene u tabeli 9.
Sl. 15 je grafikon koji prikazuje neutrališući titar antitela za PIV3 kod pamučnih pacova koji su primili različite doze PIV iRNK vakcina ili hMPV/PIV kombinovanih iRNK vakcina 42. dana nakon imunizacije. Doze vakcina su naznačene u tabeli 9.
Sl. 16 je grafikon koji prikazuje rezultat histopatologije pluća pamučnih pacova koji su imunizovani hMPV iRNK vakcinama, PIV iRNK vakcinama ili hMPV/PIV kombinovanim iRNK vakcinama kako je naznačeno u tabeli 9. Uočena je niska učestalost pojave alevolitisa i intersticijalne pneumonije, što ukazuje na nepostojanje pojačanja hMPV-povezanih bolesti zavisnog od antitela (ADE).
Sl. 17 je grafikon koji prikazuje recipročne neutrališuće titrove antitela protiv MERS-CoV kod miševa imunizovanih iRNK vakcinom protiv betakoronavirusa koja kodira protein šiljka MERS-CoV cele dužine, 0, 21, 42. i 56. dana nakon imunizacije.
Sl. 18 je grafikon koji prikazuje recipročne neutrališuće titrove antitela protiv MERS-CoV kod miševa imunizovanih iRNK vakcinom protiv betakoronavirusa koja kodira protein šiljka MERS-CoV cele dužine, ili subjedinicu S2 proteina šiljka. Protein šiljka cele dužine indukovao je snažniji imunski odgovor u poređenju sa samom subjedinicom S2.
Sl. 19A-19C su grafikoni koji prikazuju virusno opterećenje u nosu i grlu, bronhoalveolarnom ispirku (BAL), ili plućima novozelandskih belih zečeva 4 dana nakon izlaganja MERS-CoV. Novozelandski beli zečevi su imunizovani jednom dozom od 20 µg (0. dan) ili dve doze od 20 µg (0. i 21. dan) MERS-CoV iRNK vakcine koja kodira protein šiljka cele dužine pre podvrgavanja veštačkoj infekciji. Sl. 19A pokazuje da dve doze MERS-CoV iRNK vakcine rezultuju snižavanjem virusnog opterećenja od 3 log u nosu i dovode do potpune zaštite u grlu novozelandskih belih zečeva. Sl. 19B pokazuje da dve doze MERS-CoV iRNK vakcine rezultuju snižavanjem virusnog opterećenja od 4 log u BAL novozelandskih belih zečeva. Sl. 19C pokazuje da jedna doza MERS-CoV iRNK vakcine rezultuju snižavanjem virusnog opterećenja od 2 log, dok dve doze MERS-CoV iRNK vakcine rezultuju snižavanjem virusnog opterećenja većim od 4 log u plućima novozelandskih belih zečeva.
Sl. 20A-20B su slike i grafikoni koji prikazuju virusno opterećenje ili replikativni virus detektovan PCR metodom u plućima novozelandskih belih zečeva 4 dana nakon veštačke infekcije sa MERS-CoV. Novozelandski beli zečevi su imunizovani jednom dozom od 20 µg (0. dan, grupa 1a) MERS-CoV iRNK vakcine koja kodira protein šiljka cele dužine, dve doze od 20 µg (0. i 21. dan, grupa 1b) MERS-CoV iRNK vakcine koja kodira protein šiljka cele dužine, ili placebo (grupa 2) pre veštačke infekcije. Sl. 20A pokazuje da dve doze od 20 µg MERS-CoV iRNK vakcine redukuju preko 99% (2 log) virusa u plućima novozelandskih belih zečeva. Sl.20B pokazuje da grupa novozelandskih belih zečeva koja je primila 2 doze od 20 µg MERS-CoV iRNK vakcine nije imala nikakvu detektabilnu replikaciju virusa MERS-CoV u plućima.
Sl. 21 je grafikon koji prikazuje neutrališuće titrove antitela protiv MERS-CoV kod novozelandskih belih zečeva imunizovanih MERS-CoV iRNK vakcinom koja kodira protein šiljka cele dužine. Imunizacija novozelandskih belih zečeva sprovedena je kao što je opisano na Sl.21A-21C. Rezultati pokazuju da dve doze od 20 µg MERS-CoV iRNK vakcine indukuju značajnu količinu neutrališućih antitela protiv MERS-CoV (EC50između 500-1000). MERS-CoV iRNK vakcina indukovala je titar antitela koji je 3-5 puta bolji od bilo koje druge vakcine ispitivane u istom modelu.
DODATNI DETALJNI OPIS
[0116] Predmetni prikaz obezbeđuje, u nekim primerima izvođenja, vakcine koje sadrže RNK (tj., iRNK) polinukleotide koji kodiraju antigeni polipeptid betakoronavirusa (npr., koronavirus bliskoistočnog respiratornog sindroma (MERS-CoV), SARS-CoV, humani koronavirus (HCoV)-OC43, HCoV-229E, HCoV-NL63, HCoV-NL, HCoV-NH (New Haven) i HCoV-HKU1) (videti, npr., Esper F. et al. Emerging Infectious Diseases, 12(5), 2006; i Pyrc K. et al. Journal of Virology, 81(7):3051-57, 2007). U nekim primerima izvođenja, RNK (tj., iRNK) vakcina sadrži adjuvans, kao što je flagelinski adjuvans, kao što je ovde obezbeđeno.
[0117] RNK (tj., iRNK) vakcine (tj., BetaCoV RNK vakcina), u nekim primerima izvođenja, mogu da se koriste za indukciju balansiranog imunskog odgovora, koji obuhvata i ćelijski i humoralni imunitet, bez mnogih rizika koji su povezani sa DNK vakcinacijom.
2
Humani metapneumovirus (hMPV)
[0118] hMPV pokazuje suštinsku homologiju površinskih glikoproteina sa respiratornim sincicijalnim virusom (RSV). Fuzioni protein (F) hMPV je srodan drugim fuzionim proteinima paramiksovirusa i izgleda da ima homologne regione koji mogu da imaju slične funkcije. Aminokiselinska sekvenca fuzionog proteina hMPV sadrži svojstva karakteristična za druge F proteine paramiksovirusa, uključujući pretpostavljeno mesto isecanja i potencijalna N-vezana mesta glikozilacije. Fuzioni proteini paramiksovirusa se sintetišu kao neaktivni prekursori (F0) koje proteaze ćelije-domaćina isecaju na biološki fuziono-aktivne domene F1 i F2 (videti, npr., Cseke G. et al. Journal of Virology 2007;81(2):698-707), hMPV ima jedno pretpostavljeno mesto isecanja, nasuprot dva mesta uspostavljena kod F RSV, i deli samo 34% identičnosti aminokiselinske sekvence sa F RSV. F2 je vanćelijski i vezan je za F1 preko disulfida. Fuzioni proteini su glikoproteini tipa I koji postoje kao trimeri, sa dva 4-3 heptadna ponovka na N- i C-terminalnim regionima proteina (HR1 i HR2), koji obrazuju alfa-spirale tipa upredene zavojnice. Ove upredene zavojnice postaju približene u antiparalelnoj konfiguraciji kada protein podlegne konformacionoj promeni u fuzogenom stanju. U blizini N-terminalnog heptadnog ponovka postoji hidrofobni fuzioni peptid N, za koji se smatra da se ubacuje u membranu ciljne ćelije, dok povezivanje heptadnih ponovaka približava transmembranski domen, indukujući fuziju membrane (videti, npr., Baker, KA et al. Mol. Cell 1999;3:309-319).
[0119] Ovaj mehanizam je predložen za brojne različite viruse, uključujući RSV, virus influence i humani virus imunodeficijencije. Fuzioni proteini su glavne antigene determinante svih poznatih paramiksovirusa i drugih virusa koji imaju slične fuzione proteine kao što je humani virus imunodeficijencije, virus influence i virus ebole.
Virus humane parainfluence tipa 3 (PIV3)
[0120] Virusi parainfluence pripadaju porodici Paramyxoviridae. To su virusi sa omotačem sa genomom u vidu negativne jednolančane RNK. Virusi parainfluence pripadaju potporodici Paramyxoviridae, koja je podeljena na tri roda: Respirovirus (PIV-1, PIV-3, i Sendai virus (SeV)), Rubulavirus (PIV-2, PIV-4 i virus zauški) i Morbillivirus (virus malih boginja, virus goveđe kuge i virus štenećaka (CDV)). Njihov genom, negativni lanac molekula RNK dužine ~15 500 nukleotida, kodira dva glikoproteina omotača, hemaglutinin-neuraminidazu (HN), fuzioni protein (F ili F0), koji se iseca na subjedinice F1 i F2, matriksni protein (M), nukleokapsidni protein (N) i nekoliko nestrukturnih proteina uključujući virusnu replikazu (L). Svi virusi parainfluence, osim PIV-1, eksprimiraju nestrukturni V protein koji blokira signalizaciju putem IFN u inficiranoj ćeliji i stoga deluje kao faktor virulencije (videti, npr., Nishio M et al. J Virol.2008;82(13):6130-38).
2
[0121] Hemaglutinin-neuraminidaza (HN) PIV3, strukturni protein, nalazi se na omotaču virusa, gde je neophodan za vezivanje i ulazak u ćeliju. Prepoznaje i vezuje se za receptore koji sadrže sijalinsku kiselinu na površini ćelije-domaćina. Kao neuraminidaza, HN uklanja sijalinsku kiselinu sa virusnih čestica, sprečavajući samo-agregaciju virusa, i podstičući efikasno širenje virusa. Osim toga, HN podstiče aktivnost fuzionog (F ili F0) proteina, doprinoseći njegovoj penetraciji kroz površinu ćelije-domaćina.
[0122] Fuzioni protein (PIV3 F) PIV3 se nalazi na omotaču virusa, gde je neophodan za vezivanje i ulazak u ćeliju. F protein je inicijalno neaktivan, ali proteolitičkim cepanjem prelazi u aktivne oblike, F1 i F2, koji su povezani disulfidnim vezama. Ovo se dešava kada se protein HN veže za svoj receptor na površini ćelije-domaćina. Tokom ranih faza infekcije, glikoprotein F posreduje u penetraciji ćelije-domaćina fuzijom virusnog omotača sa plazma membranom. U kasnijim stadijumima infekcije, F protein olakšava fuziju inficiranih ćelija sa susednim neinficiranim ćelijama, što dovodi do formiranja sincicijuma i širenja infekcije.
[0123] Matriksni protein (M) PIV3 se nalazi u omotaču virusa i učestvuje u sklapanju virusa. On interaguje sa nukleokapsidom i glikoproteinima omotača, gde olakšava pupljenje potomstva virusa putem interakcija sa specifičnim mestima na citoplazmatskom repu virusnih glikoproteina i nukleokapsida. Takođe ima ulogu u transportu virusnih komponenti do mesta pupljenja virusa.
[0124] Fosfoprotein (P) PIV3 i veliki polimerazni protein (L) PIV3 se nalaze u nukleokapsidu gde obrazuju deo RNK polimeraznog kompleksa. L protein, virusna RNK polimeraza zavisna od RNK, olakšava transkripciju genoma, dok ribozomi ćelije-domaćina translatiraju virusnu iRNK u virusne proteine.
[0125] V PIV3 je nestrukturni protein koji blokira signalizaciju putem IFN u inficiranoj ćeliji, delujući tako kao faktor virulencije.
[0126] Nukleoprotein (N) PIV3 inkapsidira genom u odnosu od 1 N na 6 ribonukleotida, štiteći ga od nukleaza. Nukleokapsid (NC) ima spiralnu strukturu. Inkapsidirana genomska RNK naziva se NC i služi kao matrica za transkripciju i replikaciju. Tokom replikacije, inkapsidacija pomoću PIV3 N povezana je sa sintezom RNK i svi proizvodi replikacije su otporni na nukleaze. PIV3 N homo-multimerizuje kako bi formirao nukleokapsid i vezuje se za virusnu genomsku RNK. PIV3 N vezuje protein P i tako pozicionira polimerazu na matrici.
Respiratorni sincicijalni virus (RSV)
[0127] RSV je virus sa negativnom jednolančanom RNK iz roda Pneumovirinae. Virus je prisutan u najmanje dve antigene podgrupe, poznate kao grupa A i grupa B, primarno nastale zbog razlika u površinskim G glikoproteinima. Dva površinska glikoproteina RSV - G i F – posreduju u vezivanju sa, i vezivanju za ćelije respiratornog epitela. Površinski glikoproteini F posreduju u
2
spajanju susednih ćelija. Ovo dovodi do formiranja sincicijalnih ćelija. RSV je najčešći uzrok bronhiolitisa. Većina inficiranih odraslih osoba razvija blage simptome slične prehladi kao što su kongestija, niska temperatura i pištanje u grudima. Odojčad i mala deca mogu da imaju ozbiljnije simptome kao što su bronhiolitis i pneumonija. Bolest može da se prenosi među ljudima kontaktom sa respiratornim sekretima.
[0128] Genom RSV kodira najmanje tri površinska glikoproteina, uključujući F, G i SH, četiri nukleokapsidna proteina, uključujući L, P, N i M2, i jedan matriksni protein, M. Glikoprotein F usmerava penetraciju virusa fuzijom između viriona i ćelijske membrane domaćina. Glikoprotein G je transmembranski glikoprotein tipa II i predstavlja glavni protein za vezivanje. SH je kratki integralni membranski protein. Matriksni protein M se nalazi u unutrašnjem sloju lipidnog dvosloja i pomaže u formiranju viriona. Nukleokapsidni proteini L, P, N i M2 modulišu replikaciju i transkripciju RSV genoma. Smatra se da glikoprotein G vezuje i stabilizuje virusnu česticu na površini ćelija bronhijalnog epitela, dok glikoprotein F interaguje sa ćelijskim glikozaminoglikanima kako bi posredovao u fuziji i isporuci sadržaja viriona RSV u ćelijudomaćina (Krzyzaniak MA et al. PLoS Pathog 2013;9(4)).
Virus malih boginja (MeV)
[0129] Molekularna epidemiološka ispitivanja i virusološki nadzor značajno doprinose kontroli i prevenciji malih boginja. Gotovo polovina smrti povezanih sa malim boginjama u svetu događa se u Indiji, i podaci virusološkog nadzora su još uvek nekompletni za mnoge regione ove zemlje. Prethodne studije su dokumentovale prisustvo genotipa D4, D7 i D8 virusa malih boginja u Indiji, a genotipovi D5, D9, D11, H1 i G3 su detektovani u susednim zemljama. Nedavno, u Indiji je detektovan genotip B3 MeV (Kuttiatt VS et al. Emerg Infect Dis.2014;20(10): 1764-66).
[0130] Glikoproteinski kompleks paramiksovirusa posreduje u vezivanju receptora i fuziji membrane. Konkretno, fuzioni (F) protein MeV obavlja fuziju membrane, nakon vezivanja proteina hemaglutinina (HA) za receptor (Muhlebach MD et al. Journal of Virology 2008; 82(22):11437-45). Gen MeV P kodira tri proteina: P, esencijalni polimerazni kofaktor, i V i C, koji imaju višestruke funkcije, ali nisu neophodni za propagaciju virusa u kultivisanim ćelijama. V ima zajednički amino-terminalni domen sa P, ali ima karboksi-terminalni domen koji vezuje cink, dok se C translatira sa preklapajućeg okvira čitanja. Protein MeV C je infektivni faktor. Tokom replikacije, protein P vezuje dolazeće monomerne proteine nukleokapsida (N) svojim amino-terminalnim domenom i pozicionira ih za sklapanje u nascentni ribonukleokapsid. Aminoterminalni domen proteina P je nativno nesavijen (Deveaux P et al. Journal of Virology 2004;78(21):11632-40).
Betakoronavirusi (BetaCoV)
2
[0131] MERS-CoV. MERS-CoV je virus sa pozitivnom jednolančanom RNK iz roda Betacoronavirus. Genomi su filogenetski klasifikovani u dve klade, kladu A i kladu B. Ima izražen tropizam za bronhijalne epitelne ćelije bez cilija, izbegava urođeni imunski odgovor i antagonizuje proizvodnju interferona (IFN) u inficiranim ćelijama. Dipeptil peptidaza 4 (DDP4, poznata i kao CD26) identifikovana je kao funkcionalni ćelijski receptor za MERS-COV. Njena enzimska aktivnost nije neophodna za infekciju, mada je njena aminokiselinska sekvenca visoko očuvana među vrstama i eksprimira se u humanom bronhijalnom epitelu i bubrezima. Većina inficiranih osoba razvija teške akutne respiratorne bolesti, koje uključuju groznicu, kašalj i kratak dah, a virus može da bude fatalan. Bolest se može preneti među ljudima, uglavnom među onima u bliskom kontaktu.
[0132] Genom MERS-CoV kodira najmanje četiri jedinstvena pomoćna proteina, kao što su 3, 4a, 4b i 5, dva proteina replikaze (otvoreni okvir čitanja 1a i 1b) i četiri glavna strukturna proteina, uključujući proteine šiljka (S), omotača (E), nukleokapsida (N) i membranske (M) proteine (Almazan F et al. MBio 2013;4(5):e00650-13). Pomoćni proteini imaju uloge u replikaciji MERS-CoV koje nisu od suštinskog značaja, ali su verovatno strukturni proteini ili antagonisti interferona, modulišući in vivo efikasnost replikacije i/ili patogenezu, kao u slučaju SARS-CoV (Almazan F et al. MBio 2013;4 (5):e00650-13; Totura AL et al. Curr Opin Virol 2012;2(3):264-75; Scobey T et al. Proc Natl Acad Sci USA 2013;110(40):16157-62). Ostali proteini MERS-CoV održavaju različite funkcije u replikaciji virusa. Protein E je, na primer, uključen u virulenciju, a delecija gena koji kodira E rezultuje virusima sposobnim za replikaciju i defektnim u propagaciji ili atenuisanim virusima (Almazan F et al. MBio 2013;4(5):e00650-13). Protein S je posebno bitan u posredovanju u vezivanju virusa za ćelije koje eksprimiraju receptor dipeptidil peptidazu-4 (DPP4) preko domena za vezivanje receptora (RBD) u subjedinici S1, dok subjedinica S2 naknadno posreduje u ulasku virusa putem fuzije virusa i membrana ciljne ćelije. (Li F. J Virol 2015;89(4):1954-64; Raj VS et al. Nature 2013;495(7440):251-4).
[0133] U nekim primerima izvođenja, MERS-CoV vakcina prema ovom prikazu sadrži RNK (tj., iRNK) polinukleotid koji kodira protein S. U nekim primerima izvođenja, MERS-CoV vakcina prema ovom prikazu sadrži RNK (tj., iRNK) polinukleotid koji kodira subjedinicu S1 proteina S. U nekim primerima izvođenja, MERS-CoV vakcina prema ovom prikazu sadrži RNK (tj., iRNK) polinukleotid koji kodira subjedinicu S2 proteina S.
[0134] U nekim primerima izvođenja, MERS-CoV vakcina predmetnog prikaza sadrži RNK (tj., iRNK) polinukleotid koji kodira protein S (S, S1 i/ili S2), protein E, protein N i protein M.
[0135] U nekim primerima izvođenja, MERS-CoV vakcina predmetnog prikaza sadrži RNK (tj., iRNK) polinukleotid koji kodira protein S (S, S1 i/ili S2) i protein E. U nekim primerima izvođenja, MERS-CoV vakcina predmetnog prikaza sadrži RNK (tj., iRNK) polinukleotid koji
2
kodira protein S (S, S1 i/ili S2) i protein N. U nekim primerima izvođenja, MERS-CoV vakcina predmetnog prikaza sadrži RNK (tj., iRNK) polinukleotid koji kodira protein S (S, S1 i/ili S2) i protein M.
[0136] U nekim primerima izvođenja, MERS-CoV vakcina predmetnog prikaza sadrži RNK (tj., iRNK) polinukleotid koji kodira protein S (S, S1 i/ili S2), protein E i protein M. U nekim primerima izvođenja, MERS-CoV vakcina predmetnog prikaza sadrži RNK (tj., iRNK) polinukleotid koji kodira protein S (S, S1 i/ili S2), protein E i protein N. U nekim primerima izvođenja, MERS-CoV vakcina predmetnog prikaza sadrži RNK (tj., iRNK) polinukleotid koji kodira protein S (S, S1 i/ili S2), protein M i protein N.
[0137] MERS-CoV vakcina može da sadrži, na primer, najmanje jedan RNK (tj., iRNK) polinukleotid koji ima otvoreni okvir čitanja koji kodira najmanje jedan antigeni polipeptid MERS-CoV identifikovan bilo kojom od SEQ ID NO: 24-38 ili 33 (Tabela 11; videti takođe aminokiselinske sekvence iz tabele 12).
[0138] MERS-CoV vakcina može da sadrži, na primer, najmanje jedan RNK (tj., iRNK) polinukleotid kodiran nukleinskom kiselinom (npr., DNK) identifikovanom bilo kojom od SEQ ID NO: 20-23 (Tabela 10).
[0139] Predmetni prikaz nije ograničen na određeni soj MERS-CoV. Soj MERS-CoV koji je upotrebljen u vakcini može da bude bilo koji soj MERS-CoV. Neograničavajući primeri sojeva MERS-CoV za upotrebu kako je ovde prikazano uključuju Riyadh_14_2013, i 2cEMC/2012, Hasa_1_2013.
[0140] SARS-CoV. Genom SARS-CoV uključuje pozitivnu jednolančanu RNK dužine približno 29 700 nukleotida. Opšta organizacija genoma SARS-CoV je slična onoj kod drugih koronavirusa. Referentni genom uključuje 13 gena, koji kodiraju najmanje 14 proteina. Dva velika preklapajuća okvira čitanja (ORF) obuhvataju 71% genoma. Ostatak ima 12 potencijalnih ORF, uključujući gene za strukturne proteine S (protein šiljka), E (mali protein omotača), M (protein membrane) i N (nukleokapsidni protein). Drugi potencijalni ORF kodiraju jedinstvene pretpostavljene SARS-CoV-specifične polipeptide kojima nedostaje očigledna sličnost sekvence sa poznatim proteinima. Detaljna analiza genoma SARS-CoV objavljena je u J Mol Biol 2003; 331: 991-1004.
[0141] U nekim primerima izvođenja, SARS-CoV vakcina predmetnog prikaza sadrži RNK (tj., iRNK) polinukleotid koji kodira protein S (S, S1 i/ili S2), protein E, protein N i protein M.
[0142] U nekim primerima izvođenja, SARS-CoV vakcina predmetnog prikaza sadrži RNK (tj., iRNK) polinukleotid koji kodira protein S (S, S1 i/ili S2) i protein E. U nekim primerima izvođenja, SARS-CoV vakcina predmetnog prikaza sadrži RNK (tj., iRNK) polinukleotid koji kodira protein S (S, S1 i/ili S2) i protein N. U nekim primerima izvođenja, SARS-CoV vakcina predmetnog prikaza sadrži RNK (tj., iRNK) polinukleotid koji kodira protein S (S, S1 i/ili S2) i protein M.
[0143] U nekim primerima izvođenja, SARS-CoV vakcina predmetnog prikaza sadrži RNK (tj., iRNK) polinukleotid koji kodira protein S (S, S1 i/ili S2), protein E i protein M. U nekim primerima izvođenja, SARS-CoV vakcina predmetnog prikaza sadrži RNK (tj., iRNK) polinukleotid koji kodira protein S (S, S1 i/ili S2), protein E i protein N. U nekim primerima izvođenja, SARS-CoV vakcina predmetnog prikaza sadrži RNK (tj., iRNK) polinukleotid koji kodira protein S (S, S1 i/ili S2), protein M i protein N.
[0144] SARS-CoV vakcina može da sadrži, na primer, najmanje jedan RNK (tj., iRNK) polinukleotid koji ima otvoreni okvir čitanja koji kodira najmanje jedan antigeni polipeptid SARS-CoV identifikovan bilo kojom od SEQ ID NO: 29, 32 ili 34 (Tabela 11; videti takođe aminokiselinske sekvence iz tabele 12).
[0145] Predmetni prikaz nije ograničen na određeni soj SARS-CoV. Soj SARS-CoV koji je upotrebljen u vakcini može da bude bilo koji soj SARS-CoV.
[0146] HCoV-OC43. Humani koronavirus OC43 je virus sa omotačem, sa pozitivnom jednolančanom RNK vrste Betacoronavirus-1 (rod Betacoronavirus, potporodica Coronavirinae, porodica Coronaviridae, red Nidovirales). Identifikovana su četiri genotipa HCoV-OC43 (A do D), pri čemu je genotip D najverovatnije nastao rekombinacijom. Sekvenciranje celog genoma dva genotipa C i D sojeva i "bootscan" analiza pokazali su rekombinantne događaje između genotipa B i C pri stvaranju genotipa D. Od 29 identifikovanih sojeva nijedan ne pripada starijem genotipu A. Zajedno sa HCoV-229E, vrste u rodu Alphacoronavirus, HCoV-OC43 su među poznatim virusima koji izazivaju uobičajenu prehladu. Oba virusa mogu da izazovu ozbiljne infekcije donjeg respiratornog trakta, uključujući pneumoniju kod odojčadi, starijih i imunokompromitovanih osoba, kao što su one pod hemoterapijom i one sa HIV-AIDS.
[0147] HCoV-HKU1. Humani koronavirus HKU1 (HCoV-HKU1) je virus sa pozitivnom jednolančanom RNK sa genom HE, koji ga izdvaja kao grupu 2, ili betakoronavirus. Otkriven je u januaru 2005. godine kod dva pacijenta u Hong Kongu. Genom HCoV-HKU1 je poliadenilisana RNK dužine 29926 nukleotida. Sadržaj GC je 32%, najniži među svim poznatim koronavirusima. Organizacija genoma je ista kao kod drugih koronavirusa grupe II, sa karakterističnim redosledom gena 1a, 1b, HE, S, E, M i N. Dalje, geni za pomoćne proteine su prisutni između gena S i E (ORF4) i na poziciji gena N (ORF8). TRS se verovatno nalazi unutar sekvence MUCUAAAC, koja prethodi svakom ORF osim E. Kao kod virusa sijalodakrioadenitisa i virusa mišjeg hepatitisa (MHV), translacija proteina E se verovatno odvija preko unutrašnjeg mesta ulaska u ribozom. 3' netranslatirani region sadrži predviđenu strukturu drška-petlja neposredno nishodno od N ORF (pozicija nukleotida 29647 do 29711). Dalje nishodno, prisutna je struktura pseudočvora na
1
poziciji nukleotida 29708 do 29760. Obe strukture RNK su očuvane u grupi II koronavirusa i ključne su za replikaciju virusa.
[0148] HCoV-NL63. RNK genom humanog koronavirusa NL63 (HCoV-NL63) dug je 27553 nukleotida, sa poli(A) repom (Sl.1). Sa sadržajem GC od 34%, HCoV-NL63 ima jedan od najnižih sadržaja GC među koronavirusima, kod kojih sadržaj GC varira od 32 do 42%. Netranslatirani regioni od 286 i 287 nukleotida su prisutni na 5', odnosno 3' kraju. Geni za koje se predviđa da kodiraju proteine S, E, M i N nalaze se u 3' delu genoma HCoV-NL63. Gen HE, koji je prisutan kod nekih koronavirusa grupe II, je odsutan, i postoji samo jedan, monocistronski ORF (ORF3) za pomoćne proteine smešten između gena S i E. Subgenomske iRNK se generišu za sve ORF (S, ORF3, E, M, i N), i jezgarna sekvenca TRS HCoV-NL63 je definisana kao AACUAAA. Ova sekvenca se nalazi ushodno od svakog ORF osim ORF E, koji sadrži suboptimalnu jezgarnu sekvencu AACUAUA. Zanimljivo je da se sekvenca od 13 nukleotida sa odličnom homologijom sa vodećom sekvencom nalazi ushodno od suboptimalne TRS E. Povezivanje ove sekvence od 13 nukleotida sa vodećom sekvencom može da deluje kao kompenzatorni mehanizam za poremećenu interakciju vodeća sekvenca-TRS/telo sekvence-TRS.
[0149] HCoV-229E. Humani koronavirus 229E (HCoV-229E) je vrsta virusa sa pozitivnom jednolančanom RNK iz roda Alphacoronavirus potporodice Coronavirinae, u porodici Coronaviridae, reda Nidovirales. Zajedno sa humanim koronavirusom OC43, odgovoran je za uobičajenu prehladu. HCoV-NL63 i HCoV-229E su dva od četiri humana koronavirusa koja cirkulišu širom sveta. Ova dva virusa su jedinstvena po svom međusobnom odnosu. Filogenetski, virusi su mnogo srodniji jedan sa drugim, nego sa bilo kojim drugim humanim koronavirusom, pa ipak dele samo 65% identičnost sekvence. Osim toga, virusi koriste različite receptore za ulaženje u ciljnu ćeliju. HCoV-NL63 je povezan sa krupom kod dece, dok svi znaci ukazuju na to da virus verovatno izaziva običnu prehladu kod zdravih odraslih osoba. HCoV-229E je dokazani virus uobičajene prehlade kod zdravih odraslih osoba, tako da verovatno oba virusa indukuju uporedive simptome kod odraslih, iako se njihov način infekcije razlikuje (HCoV-NL63 i HCoV-229E su dva od četiri humana koronavirusa koja cirkulišu širom sveta. Ova dva virusa su jedinstvena po svom međusobnom odnosu. Filogenetski, virusi su mnogo srodniji jedan sa drugim, nego sa bilo kojim drugim humanim koronavirusom, pa ipak dele samo 65% identičnost sekvence. Osim toga, virusi koriste različite receptore za ulaženje u ciljnu ćeliju. HCoV-NL63 je povezan sa krupom kod dece, dok svi znaci ukazuju na to da virus verovatno izaziva običnu prehladu kod zdravih odraslih osoba. HCoV-229E je dokazani virus uobičajene prehlade kod zdravih odraslih osoba, tako da verovatno oba virusa indukuju uporedive simptome kod odraslih, iako se njihov način infekcije razlikuje (Dijkman R. et al. J Formos Med Assoc. 2009 Apr;108(4):270-9).
2
Kombinovane vakcine
[0150] Primeri izvođenja predmetnog prikaza takođe obezbeđuju kombinovane RNK (tj., iRNK) vakcine. "Kombinovana RNK (tj., iRNK) vakcina" predmetnog prikaza odnosi se na vakcinu koja sadrži najmanje jedan (npr., najmanje 2, 3, 4, ili 5) RNK (tj., iRNK) polinukleotid koji ima otvoreni okvir čitanja koji kodira kombinaciju bilo koja dva ili više (ili svih) antigenih polipeptida odabranih od antigenih polipeptida hMPV, antigenih polipeptida PIV3, antigenih polipeptida RSV, antigenih polipeptida MeV i antigenih polipeptida BetaCoV (npr., odabranih od MERS-CoV, SARS-CoV, HCoV-OC43, HCoV-229E, HCoV-NL63, HCoV-NL, HCoV-NH i HCoV-HKU1). U pronalasku, najmanje jedan iRNK polinukleotid kodira najmanje jedan antigeni polipeptid BetaCoV.
[0151] U nekim primerima izvođenja, kombinovana RNK (tj., iRNK) vakcina sadrži RNK (tj., iRNK) polinukleotid koji kodira antigeni polipeptid hMPV, antigeni polipeptid PIV3, antigeni polipeptid RSV, antigeni polipeptid MeV i antigeni polipeptid BetaCoV (npr., odabran od MERS-CoV, SARS-CoV, HCoV-OC43, HCoV-229E, HCoV-NL63, HCoV-NL, HCoV-NH i HCoV-HKU1).
[0152] U nekim primerima izvođenja, kombinovana RNK (tj., iRNK) vakcina sadrži RNK (tj., iRNK) polinukleotid koji kodira antigeni polipeptid hMPV i antigeni polipeptid BetaCoV.
[0153] U nekim primerima izvođenja, kombinovana RNK (tj., iRNK) vakcina sadrži RNK (tj., iRNK) polinukleotid koji kodira antigeni polipeptid PIV3 i antigeni polipeptid BetaCoV (npr., odabran od MERS-CoV, SARS-CoV, HCoV-OC43, HCoV-229E, HCoV-NL63, HCoV-NL, HCoV-NH i HCoV-HKU1).
[0154] U nekim primerima izvođenja, kombinovana RNK (tj., iRNK) vakcina sadrži RNK (tj., iRNK) polinukleotid koji kodira antigeni polipeptid RSV i antigeni polipeptid BetaCoV (npr., odabran od MERS-CoV, SARS-CoV, HCoV-OC43, HCoV-229E, HCoV-NL63, HCoV-NL, HCoV-NH i HCoV-HKU1).
[0155] U nekim primerima izvođenja, kombinovana RNK (tj., iRNK) vakcina sadrži RNK (tj., iRNK) polinukleotid koji kodira antigeni polipeptid MeV i antigeni polipeptid BetaCoV (npr., odabran od MERS-CoV, SARS-CoV, HCoV-OC43, HCoV-229E, HCoV-NL63, HCoV-NL, HCoV-NH i HCoV-HKU1).
[0156] U nekim primerima izvođenja, kombinovana RNK (tj., iRNK) vakcina sadrži RNK (tj., iRNK) polinukleotid koji kodira antigeni polipeptid hMPV, antigeni polipeptid PIV3, antigeni polipeptid RSV i antigeni polipeptid BetaCoV (npr., odabran od MERS-CoV, SARS-CoV, HCoV-OC43, HCoV-229E, HCoV-NL63, HCoV-NL, HCoV-NH i HCoV-HKU1).
[0157] U nekim primerima izvođenja, kombinovana RNK (tj., iRNK) vakcina sadrži RNK (tj., iRNK) polinukleotid koji kodira antigeni polipeptid hMPV, antigeni polipeptid PIV3, antigeni polipeptid MeV i antigeni polipeptid BetaCoV (npr., odabran od MERS-CoV, SARS-CoV, HCoV-OC43, HCoV-229E, HCoV-NL63, HCoV-NL, HCoV-NH i HCoV-HKU1).
[0158] U nekim primerima izvođenja, kombinovana RNK (tj., iRNK) vakcina sadrži RNK (tj., iRNK) polinukleotid koji kodira antigeni polipeptid hMPV, antigeni polipeptid RSV, antigeni polipeptid MeV i antigeni polipeptid BetaCoV (npr., odabran od MERS-CoV, SARS-CoV, HCoV-OC43, HCoV-229E, HCoV-NL63, HCoV-NL, HCoV-NH i HCoV-HKU1).
[0159] U nekim primerima izvođenja, kombinovana RNK (tj., iRNK) vakcina sadrži RNK (tj., iRNK) polinukleotid koji kodira antigeni polipeptid PIV3, antigeni polipeptid RSV, antigeni polipeptid MeV i antigeni polipeptid BetaCoV (npr., odabran od MERS-CoV, SARS-CoV, HCoV-OC43, HCoV-229E, HCoV-NL63, HCoV-NL, HCoV-NH i HCoV-HKU1).
[0160] U nekim primerima izvođenja, kombinovana RNK (tj., iRNK) vakcina sadrži RNK (tj., iRNK) polinukleotid koji kodira antigeni polipeptid hMPV, antigeni polipeptid PIV3 i antigeni polipeptid BetaCoV (npr., odabran od MERS-CoV, SARS-CoV, HCoV-OC43, HCoV-229E, HCoV-NL63, HCoV-NL, HCoV-NH i HCoV-HKU1).
[0161] U nekim primerima izvođenja, kombinovana RNK (tj., iRNK) vakcina sadrži RNK (tj., iRNK) polinukleotid koji kodira antigeni polipeptid hMPV, antigeni polipeptid RSV i antigeni polipeptid BetaCoV (npr., odabran od MERS-CoV, SARS-CoV, HCoV-OC43, HCoV-229E, HCoV-NL63, HCoV-NL, HCoV-NH i HCoV-HKU1).
[0162] U nekim primerima izvođenja, kombinovana RNK (tj., iRNK) vakcina sadrži RNK (tj., iRNK) polinukleotid koji kodira antigeni polipeptid hMPV, antigeni polipeptid MeV i antigeni polipeptid BetaCoV (npr., odabran od MERS-CoV, SARS-CoV, HCoV-OC43, HCoV-229E, HCoV-NL63, HCoV-NL, HCoV-NH i HCoV-HKU1).
[0163] U nekim primerima izvođenja, kombinovana RNK (tj., iRNK) vakcina sadrži RNK (tj., iRNK) polinukleotid koji kodira antigeni polipeptid PIV3, antigeni polipeptid RSV i antigeni polipeptid BetaCoV (npr., odabran od MERS-CoV, SARS-CoV, HCoV-OC43, HCoV-229E, HCoV-NL63, HCoV-NL, HCoV-NH i HCoV-HKU1).
[0164] U nekim primerima izvođenja, kombinovana RNK (tj., iRNK) vakcina sadrži RNK (tj., iRNK) polinukleotid koji kodira antigeni polipeptid RSV, antigeni polipeptid MeV i antigeni polipeptid BetaCoV (npr., odabran od MERS-CoV, SARS-CoV, HCoV-OC43, HCoV-229E, HCoV-NL63, HCoV-NL, HCoV-NH i HCoV-HKU1).
[0165] Druge kombinovane vakcine protiv respiratornih virusa na bazi RNK (tj., iRNK) su obuhvaćene predmetnim prikazom.
[0166] Otkriveno je da su ovde opisane iRNK vakcine superiorne u odnosu na postojeće vakcine na nekoliko načina. Prvo, isporuka pomoću lipidnih nanočestica (LNP) je superiorna u odnosu na druge formulacije uključujući pristup na bazi protamina opisan u literaturi i nisu potrebni dodatni
4
adjuvansi. Upotreba LNP omogućava efektivnu isporuku hemijski modifikovane ili nemodifikovane iRNK vakcine. Dosatno je ovde pokazano da su i modifikovana i nemodifikovana iRNK vakcina formulisana u LNP superiorne u odnosu na konvencionalne vakcine u značajnom stepenu. U nekim primerima izvođenja iRNK vakcine pronalaska su superiorne u odnosu na konvencionalne vakcine za faktor od najmanje 10 puta, 20 puta, 40 puta, 50 puta, 100 puta, 500 puta ili 1000 puta.
[0167] Iako su napravljeni pokušaji da se proizvedu funkcionalne RNK vakcine, uključujući iRNK vakcine i samoreplikativne RNK vakcine, terapijska efikasnost ovih RNK vakcina još uvek nije u potpunosti utvrđena. Prilično iznenađujuće, pronalazači su otkrili, u skladu sa aspektima pronalaska, klasu formulacija za isporuku iRNK vakcina in vivo koja rezultuje značajno poboljšanim, i u mnogim aspektima, sinergističkim, imunološkim odgovorima, uključujući pojačano stvaranje antigena i proizvodnju funkcionalnih antitela sa sposobnošću neutralizacije. Ovi rezultati mogu da se postignu čak i kada se daju značajno niže doze iRNK u poređenju sa iRNK dozama koje se koriste u drugim klasama formulacija na bazi lipida. Formulacije pronalaska su pokazale značajne neočekivane in vivo imunološke odgovore dovoljne da se utvrdi efikasnost funkcionalnih iRNK vakcina kao profilaktičkih i terapijskih agenasa. Pored toga, samoreplikativne RNK vakcine se oslanjaju na puteve virusne replikacije kako bi isporučile dovoljno RNK do ćelije za izazivanje imunogenog odgovora. Formulacije pronalaska ne zahtevaju replikaciju virusa da bi proizvele dovoljno proteina kako bi rezultirale jakim imunološkim odgovorom. Dakle, iRNK pronalaska nisu samoreplikativne RNK i ne uključuju komponente neophodne za replikaciju virusa.
[0168] Pronalazak uključuje, u nekim aspektima, iznenađujući nalaz da formulacije lipidnih nanočestica (LNP) značajno poboljšavaju efektivnost iRNK vakcina, uključujući hemijski modifikovane i nemodifikovane iRNK vakcine. Efikasnost iRNK vakcina formulisanih u LNP ispitana je in vivo korišćenjem nekoliko različitih antigena. Ovde predstavljeni rezultati pokazuju neočekivanu superiornu efikasnost iRNK vakcina formulisanih u LNP u odnosu na druge komercijalno dostupne vakcine.
[0169] Pored obezbeđivanja poboljšanog imunološkog odgovora, formulacije pronalaska stvaraju brži imunološki odgovor sa manje doza antigena od drugih ispitivanih vakcina. Formulacije iRNK-LNP prema pronalasku takođe proizvode kvantitativno i kvalitativno bolje imunološke odgovore od vakcina formulisanih u drugačijim nosačima.
[0170] Ovde opisani podaci pokazuju da su formulacije pronalaska proizvele značajna neočekivana poboljšanja u odnosu na postojeće antigene vakcine. Pored toga, iRNK-LNP formulacije pronalaska su superiornije od drugih vakcina čak i kada je doza iRNK niža nego kod drugih vakcina.
[0171] Dve doze od 20 µg MERS-CoV iRNK LNP vakcine značajno smanjuju virusno opterećenje i indukuju značajnu količinu neutrališućih antitela protiv MERS-CoV (EC50između 500-1000). MERS-CoV iRNK vakcina je indukovala titar antitela koji je 3-5 puta bolji nego kod bilo koje druge vakcine ispitane u istom modelu.
[0172] LNP korišćene u ovde opisanim studijama su ranije korišćene za isporuku siRNA u različitim životinjskim modelima, kao i kod ljudi. S obzirom na zapažanja u vezi sa isporukom siRNA pomoću LNP formulacija, činjenica da su LNP korisne u vakcinama je prilično iznenađujuća. Uočeno je da terapijska isporuka siRNA formulisane u LNP izaziva nepoželjan inflamatorni odgovor povezan sa prolaznim IgM odgovorom, što tipično dovodi do smanjenja proizvodnje antigena i kompromitovanog imunološkog odgovora. Za razliku od nalaza uočenih sa siRNA, ovde je pokazano da LNP-iRNK formulacije pronalaska stvaraju povećane nivoe IgG, dovoljne za profilaktičke i terapijske postupke, a ne za prolazne IgM odgovore.
Nukleinske kiseline/polinukleotidi
[0173] Vakcine protiv respiratornih virusa, kako su ovde date, sadrže najmanje jedan (jedan ili više) polinukleotid ribonukleinske kiseline (RNK) (tj., iRNK) koji ima otvoreni okvir čitanja koji kodira najmanje jedan antigeni polipeptid BetaCoV (npr., odabran od MERS-CoV, SARS-CoV, HCoV-OC43, HCoV-229E, HCoV-NL63, HCoV-NL, HCoV-NH i HCoV-HKU1). Termin "nukleinska kiselina" uključuje bilo koje jedinjenje i/ili supstancu koja sadrži polimer nukleotida (nukleotidni monomer). Ovi polimeri su označeni kao polinukleotidi. Prema tome, termini "nukleinska kiselina" i "polinukleotid" se koriste kao sinonimi.
[0174] Nukleinske kiseline mogu da budu, ili mogu da uključuju, na primer, ribonukleinske kiseline (RNK), dezoksiribonukleinske kiseline (DNK), treozne nukleinske kiseline (TNA), glikolne nukleinske kiseline (GNA), peptidne nukleinske kiseline (PNA), zaključane nukleinske kiseline (LNA, uključujući LNA koja ima β-D-ribo konfiguraciju, α-LNA koja ima α-L-ribo konfiguraciju (dijastereomer LNA), 2'-amino-LNA koja ima 2'-amino funkcionalizaciju i 2'-amino-α-LNA koja ima 2'-amino funkcionalizaciju), etilenske nukleinske kiseline (ENA), cikloheksenil nukleinske kiseline (CeNA) ili himere ili njihove kombinacije.
[0175] Polinukleotidi predmetnog pronalaska funkcionišu kao informaciona RNK (iRNK). "Informaciona RNK" (iRNK) se odnosi na bilo koji polinukleotid koji kodira (najmanje jedan) polipeptid (prirodni, neprirodni, ili modifikovani polimer aminokiselina) i može da bude translatiran kako bi proizveo kodirani polipeptid in vitro, in vivo, in situ ili ex vivo. Stručnjak u ovoj oblasti će znati da, osim ako nije drugačije navedeno, u polinukleotidnoj sekvenci prikazanoj u ovoj prijavi u reprezentativnoj DNK sekvenci biće navedeni "T" ostaci, ali kada sekvenca predstavlja RNK (npr., iRNK), "T" ostaci će biti zamenjeni "U" ostacima. Prema tome, bilo koji od RNK polinukleotida kodiranih pomoću DNK identifikovane određenim identifikacionim brojem sekvence može takođe da sadrži odgovarajuću RNK (npr., iRNK) sekvencu kodiranu pomoću DNK, gde je svako "T" iz sekvence DNK zamenjeno sa "U."
[0176] Osnovne komponente molekula iRNK tipično uključuju najmanje jedan kodirajući region, 5' netranslatirani region (UTR), 3' UTR, 5' kapu i poli-A rep. Polinukleotidi predmetnog prikaza mogu da funkcionišu kao iRNK, ali mogu da se razlikuju od iRNK divljeg tipa po svojim funkcionalnim i/ili strukturnim karakteristikama dizajna, koje služe za prevazilaženje postojećih problema efektivne ekspresije polipeptida korišćenjem terapeutika zasnovanih na nukleinskim kiselinama.
[0177] U nekim primerima izvođenja, RNK polinukleotid RNK (tj., iRNK) vakcine kodira 2-10, 2-9, 2-8, 2-7, 2-6, 2-5, 2-4, 2-3, 3-10, 3-9, 3-8, 3-7, 3-6, 3-5, 3-4, 4-10, 4-9, 4-8, 4-7, 4-6, 4-5, 5-10, 5-9, 5-8, 5-7, 5-6, 6-10, 6-9, 6-8, 6-7, 7-10, 7-9, 7-8, 8-10, 8-9 ili 9-10 antigenih polipeptida. U nekim primerima izvođenja, RNK (tj., iRNK) polinukleotid vakcine protiv respiratornih virusa kodira najmanje 10, 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90 ili 100 antigenih polipeptida. U nekim primerima izvođenja, RNK (tj., iRNK) polinukleotid vakcine protiv respiratornih virusa kodira najmanje 100 ili najmanje 200 antigenih polipeptida. U nekim primerima izvođenja, RNK polinukleotid vakcine protiv respiratornih virusa kodira 1-10, 5-15, 10-20,15-25, 20-30, 25-35, 30-40, 35-45, 40-50, 1-50, 1-100, 2-50 ili 2-100 antigenih polipeptida.
[0178] Polinukleotidi predmetnog prikaza, u nekim primerima izvođenja, imaju optimizovane kodone. Postupci za optimizaciju kodona su poznati u stanju tehnike i mogu da se upotrebe kako je ovde dato. Optimizacija kodona, u nekim primerima izvođenja, može da se koristi za usklađivanje učestalosti kodona u ciljnim organizmima i organizmima domaćinima kako bi se osiguralo pravilno savijanje; menjanje sadržaja GC da bi se povećala stabilnost iRNK ili smanjile sekundarne strukture; minimiziranje kodona tandemskih ponovaka ili baznih nizova koji mogu da naruše konstrukciju ili ekspresiju gena; prilagođavanje transkripcionih i translacionih kontrolnih regiona; ubacivanje ili uklanjanje sekvenci za transport proteina; uklanjanje/dodavanje mesta za post-translacione modifikacije u kodiranom proteinu (npr. glikozilatna mesta); dodavanje, uklanjanje ili mešanje proteinskih domena; umetanje ili brisanje restrikcionih mesta; modifikovanje mesta vezivanja ribozoma i mesta degradacije iRNK; prilagođavanje brzine translacije kako bi se omogućilo pravilno savijanje različitih domena proteina; ili smanje ili eliminisanje problematične sekundarne strukture unutar polinukleotida. Alati, algoritmi i servisi za optimizaciju kodona su poznati u struci - neograničavajući primeri uključuju servise GeneArt (Life Technologies), DNA2.0 (Menlo Park CA) i/ili vlasničke metode. U nekim primerima izvođenja, sekvenca otvorenog okvira čitanja (ORF) je optimizovana korišćenjem algoritama optimizacije.
[0179] U nekim primerima izvođenja, kodon optimizovana sekvenca ima manje od 95% identičnosti sekvence, manje od 90% identičnosti sekvence, manje od 85% identičnosti sekvence, manje od 80% identičnosti sekvence, ili manje od 75% identičnosti sekvence sa prirodnom sekvencom ili sekvencom divljeg tipa (npr., prirodnom sekvencom ili sekvencom divljeg tipa iRNK koja kodira polipeptid ili protein od interesa (npr., antigeni protein ili antigeni polipeptid)).
[0180] U nekim primerima izvođenja, kodon-optimizovana sekvenca ima između 65% i 85% (npr., između oko 67% i oko 85%, ili između oko 67% i oko 80%) identičnosti sekvence sa prirodnom sekvencom ili sekvencom divljeg tipa (npr., iRNK sekvencom koja je prirodna ili divljeg tipa koja kodira polipeptid ili protein od interesa (npr., antigeni protein ili polipeptid)). U nekim primerima izvođenja, kodon-optimizovana sekvenca ima između 65% i 75%, ili oko 80% identičnosti sekvence sa prirodnom sekvencom ili sekvencom divljeg tipa (npr., iRNK sekvencom koja je prirodna ili divljeg tipa koja kodira polipeptid ili protein od interesa (npr., antigeni protein ili polipeptid)).
[0181] U nekim primerima izvođenja kodon-optimizovana RNK (tj., iRNK) može, na primer, da bude ona u kojoj su nivoi G/C obogaćeni. G/C-sadržaj molekula nukleinske kiseline može da utiče na stabilnost RNK. RNK koja ima povećanu količinu ostataka guanina (G) i/ili citozina (C) može da bude funkcionalno stabilnija od nukleinskih kiselina koje sadrže veliku količinu adeninskih (A) i timinskih (T) ili uracilskih (U) nukleotida. WO02/098443 opisuje farmaceutsku kompoziciju koja sadrži iRNK stabilizovanu modifikacijama sekvence u translatiranom regionu. Zbog degeneracije genetskog koda, modifikacije funkcionišu putem zamene postojećih kodona onima koji podstiču veću stabilnost RNK bez menjanja rezultujuće aminokiseline. Pristup je ograničen na kodirajuće regione RNK.
Antigeni/antigeni polipeptidi
[0182] U nekim primerima izvođenja, antigeni polipeptid (tj., antigeni polipeptid BetaCoV) je duži od 25 aminokiselina i kraći od 50 aminokiselina. Polipeptidi uključuju proizvode gena, prirodne polipeptide, sintetičke polipeptide, homologe, ortologe, paraloge, fragmente i druge ekvivalente, varijante i analoge gore navedenog. Polipeptid može da bude pojedinačni molekul ili može da bude multi-molekulski kompleks kao dimer, trimer ili tetramer. Polipeptidi mogu da sadrže i jednolančane polipeptide ili višelančane polipeptide, kao što su antitela ili insulin, i mogu da budu međusobno udruženi ili povezani. Najčešće, disulfidne veze se nalaze u višelančanim polipeptidima. Termin "polipeptid" može da se primeni i na aminokiselinske polimere u kojima je najmanje jedan aminokiselinski ostatak veštački hemijski analog odgovarajuće prirodne aminokiseline.
[0183] "Varijanta polipeptida" je molekul koji se razlikuje po svojoj aminokiselinskoj sekvenci u odnosu na nativnu sekvencu ili referentnu sekvencu. Varijante aminokiselinske sekvence mogu da imaju supstitucije, delecije, insercije, ili kombinaciju bilo koja dva ili tri elementa od gore navedenog, na određenim položajima u aminokiselinskoj sekvenci, u poređenju sa nativnom sekvencom ili referentnom sekvencom. Obično, varijante imaju najmanje 50% identičnosti sa nativnom sekvencom ili referentnom sekvencom. U nekim primerima izvođenja, varijante imaju najmanje 80% identičnosti ili najmanje 90% identičnosti sa nativnom sekvencom ili referentnom sekvencom.
[0184] U nekim primerima izvođenja obezbeđeni su "mimici varijante". "Mimik varijante" sadrži najmanje jednu aminokiselinu koja bi oponašala aktiviranu sekvencu. Na primer, glutamat može da posluži kao mimik fosforo-treonina i/ili fosforo-serina. Alternativno, mimici varijante mogu da rezultuju deaktivacijom ili inaktivisanim proizvodom koji sadrži mimik. Na primer, fenilalanin može da deluje kao inaktivirajuća zamena za tirozin, ili alanin može da deluje kao inaktivirajuća zamena za serin.
[0185] "Ortolozi" se odnose na gene različitih vrsta koji su evoluirali iz zajedničkog predačkog gena specijacijom. Normalno, ortolozi zadržavaju istu funkciju tokom evolucije. Identifikacija ortologa je važna za pouzdano predviđanje funkcije gena u novo-sekvenciranim genomima.
[0186] "Analozi" uključuju varijante polipeptida koje se razlikuju po jednoj ili više promena aminokiselina, na primer, supstitucijama, dodacima ili delecijama aminokiselinskih ostataka, koje su očuvale jedno ili više svojstava roditeljskog ili početnog polipeptida.
[0187] Predmetni prikaz obezbeđuje nekoliko tipova kompozicija koje su zasnovane na polinukleotidu ili polipeptidu, uključujući varijante i derivate. Ovo uključuje, na primer, supstitucione, insercione, delecione i kovalentne varijante i derivate. Termin "derivat" je sinonim za termin "varijanta" i uopšteno se odnosi na molekul koji je modifikovan i/ili promenjen na bilo koji način u odnosu na referentni molekul ili početni molekul.
[0188] Kao takvi, polinukleotidi koji kodiraju peptide ili polipeptide koji sadrže supstitucije, insercije i/ili adicije, delecije i kovalentne modifikacije u odnosu na referentne sekvence, posebno polipeptidne sekvence koje su ovde prikazane, uključeni su u obim ovog prikaza. Na primer, oznake sekvence ili aminokiseline, kao što su jedan ili više lizina, mogu da se dodaju peptidnim sekvencama (npr. na N-terminalnim ili C-terminalnim krajevima). Oznake sekvence mogu da se koriste za detekciju, prečišćavanje ili lokalizaciju peptida. Lizini mogu da se koriste za povećanje rastvorljivosti peptida ili za omogućavanje biotinilacije. Alternativno, aminokiselinski ostaci locirani na karboksi- i amino-terminalnim regionima aminokiselinske sekvence peptida ili proteina mogu opciono da budu izbrisani čime se dobijaju skraćene sekvence. Određene aminokiseline (npr. C-terminalni ostaci ili N-terminalni ostaci) alternativno mogu da budu deletirane u zavisnosti od upotrebe sekvence, kao na primer, ekspresija sekvence kao dela veće sekvence koja je rastvorljiva ili vezana sa čvrstu podlogu.
[0189] "Supstitucione varijante" su, kada se odnose na polipeptide, one kod kojih je najmanje jedan aminokiselinski ostatak iz prirodne ili početne sekvence uklonjen i drugačija aminokiselina ubačena na njegovo mesto na istoj poziciji. Supstitucije mogu biti pojedinačne, gde je samo jedna aminokiselina u molekulu supstituisana, ili mogu biti višestruke, gde su dve ili više (npr. 3, 4 ili 5) aminokiselina supstituisane u istom molekulu.
[0190] Kako se ovde koristi, izraz "konzervativna aminokiselinska supstitucija", odnosi se na supstituciju aminokiseline koja je normalno prisutna u sekvenci drugom aminokiselinom slične veličine, naelektrisanja ili polariteta. Primeri konzervativnih supstitucija uključuju supstituciju nepolarnog (hidrofobnog) ostatka kao što su izoleucin, valin i leucin drugim nepolarnim ostatkom. Slično, primeri konzervativnih supstitucija uključuju supstituciju jednog polarnog (hidrofilnog) ostatka drugim, kao što su zamene arginina i lizina, zamene glutamina i asparagina, i zamene glicina i serina. Dodatno, supstitucija baznog ostatka kao što je lizin, arginin ili histidin drugim, ili supstitucija jednog kiselog ostatka kao što je asparaginska kiselina ili glutaminska kiselina drugim kiselim ostatkom su dodatni primeri konzervativnih supstitucija. Primeri nekonzervativnih supstitucija uključuju supstituciju nepolarnog (hidrofobnog) aminokiselinskog ostatka, kao što su izoleucin, valin, leucin, alanin, metionin, za polarni (hidrofilni) ostatak, kao što su cistein, glutamin, glutaminska kiselina ili lizin i/ ili polarnog ostatka za nepolarni ostatak.
[0191] "Karakteristike" su, kada se odnose na polipeptid ili polinukleotid, definisane kao različite komponente molekula zasnovane na sekvenci aminokiselina, odnosno nukleotida. Karakteristike polipeptida kodiranih polinukleotidima uključuju površinske manifestacije, lokalni konformacioni oblik, nabore, petlje, polu-petlje, domene, polu-domene, mesta, krajeve, i bilo koju jednu ili više njihovih kombinacija.
[0192] Kako se ovde koristi kada se odnosi na polipeptide, termin "domen" se odnosi na motiv polipeptida koji ima jednu ili više prepoznatljivih strukturnih ili funkcionalnih karakteristika ili svojstava (npr. kapacitet vezivanja, funkciju mesta za interakcije protein-protein).
[0193] Kako se ovde koristi kada se odnosi na polipeptide, termin "mesto", kada se odnosi na primere izvođenja zasnovane na aminokiselinama, koristi se kao sinonim za "aminokiselinski ostatak" i "bočni lanac amino kiseline". Kako se ovde koristi kada se odnosi na polinukleotide, termin "mesto", kada se odnosi na primere izvođenja zasnovane na nukleotidima, koristi se kao sinonim za "nukleotid". Mesto predstavlja poziciju unutar peptida ili polipeptida ili polinukleotida koja može da bude modifikovana, manipulisana, izmenjena, derivatizovana ili varirana u okviru molekula na bazi polipeptida ili polinukleotida.
4
[0194] Kako se ovde koriste, termini "krajevi" ili "kraj", kada se odnose na polipeptide ili polinukleotide odnose se na krajnji deo polipeptida, odnosno polinukleotida. Takav krajnji deo nije ograničen samo na prvo ili poslednje mesto polipeptida ili polinukleotida, već može da uključuje dodatne aminokiseline ili nukleotide u krajnjim regionima. Molekuli zasnovani na polipeptidima mogu se okarakterisati kao da imaju i N-kraj (završen aminokiselinom sa slobodnom amino grupom (NH2)) i C-kraj (završen aminokiselinom sa slobodnom karboksilnom grupom (COOH)). Proteini su u nekim slučajevima sačinjeni od više polipeptidnih lanaca spojenih disulfidnim vezama ili nekovalentnim silama (multimeri, oligomeri). Ovi proteini imaju višestruke N- i C-krajeve. Alternativno, krajevi polipeptida mogu da budu modifikovani tako da počinju ili se završavaju, u zavisnosti od slučaja, ostatkom koji nije zasnovan na polipeptidu, kao što je organski konjugat.
[0195] Kao što će stručnjaci iz ove oblasti znati, proteinski fragmenti, funkcionalni proteinski domeni i homologni proteini se takođe smatraju obuhvaćenim polipeptidima od interesa. Na primer, ovde je obezbeđen bilo koji proteinski fragment (što znači polipeptidna sekvenca koja je kraća za najmanje jedan aminokiselinski ostatak od referentne polipeptidne sekvence, ali je inače identična) referentnog proteina koji ima dužinu od 10, 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90, 100, ili više od 100 aminokiselina. U drugom primeru, bilo koji protein koji uključuje niz od 20, 30, 40, 50 ili 100 (kontinualnih) aminokiselina koje su 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 95% ili 100% identične bilo kojoj od ovde opisanih sekvenci može da se koristi u skladu sa prikazom. U nekim primerima izvođenja, polipeptid uključuje 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10 ili više mutacija kao što je prikazano u bilo kojoj od sekvenci koje su ovde date ili se na njih poziva. U drugom primeru, bilo koji protein koji uključuje niz od 20, 30, 40, 50 ili 100 aminokiselina koje su više od 80%, 90%, 95% ili 100% identične bilo kojoj od ovde opisanih sekvenci, gde protein ima niz od 5, 10, 15, 20, 25 ili 30 aminokiselina koje su manje od 80%, 75%, 70%, 65% do 60% identične bilo kojoj od ovde opisanih sekvenci može da se koristi u skladu sa prikazom.
[0196] Molekuli polipeptida ili polinukleotida ovog prikaza mogu da dele određeni stepen sličnosti ili identičnosti sekvence sa referentnim molekulima (npr. referentnim polipeptidima ili referentnim polinukleotidima), na primer, sa molekulima opisanim u stanju tehnike (npr. konstruisanim ili dizajniranim molekulima ili molekulima divljeg tipa). Termin "identičnost", kao što je poznato u tehnici, odnosi se na odnos između sekvenci dva ili više polipeptida ili polinukleotida, kako je određeno upoređivanjem sekvenci. U tehnici, identičnost takođe označava stepen srodnosti sekvenci između dve sekvence kao što je određeno brojem podudaranja između nizova dva ili više aminokiselinskih ostataka ili ostataka nukleinske kiseline. Identičnost meri procenat identičnih podudaranja između manje od dve ili više sekvenci sa poravnanjima praznina (ako ih ima) kojima se bavi određeni matematički model ili računarski program (npr. "algoritmi"). Identičnost srodnih peptida može se lako izračunati poznatim metodama. "% identičnosti", kako se primenjuje na polipeptidne ili polinukleotidne sekvence, definisan je kao procenat ostataka (aminokiselinskih ostataka ili ostataka nukleinske kiseline) u kandidatskoj aminokiselinskoj sekvenci ili sekvenci nukleinske kiseline koji su identični sa ostacima u aminokiselinskoj sekvenci ili sekvenci nukleinske kiseline druge sekvence nakon poravnanja sekvenci i uvođenja praznina, ako je potrebno, da bi se postigao maksimalni procenat identičnosti. Metode i kompjuterski programi za poravnanje su dobro poznati u tehnici. Identičnost zavisi od izračunavanja procentualne identičnosti, ali se može razlikovati u vrednosti zbog praznina i kazni uvedenih u proračun. Uopšteno, varijante određenog polinukleotida ili polipeptida imaju najmanje 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, ali manje od 100% identičnosti sekvence sa tim konkretnim referentnim polinukleotidom ili polipeptidom kako je određeno programima i parametrima za poravnanje sekvenci koji su ovde opisani i poznati stručnjacima u ovoj oblasti. Takvi alati za poravnanje uključuju one iz BLAST paketa (Stephen F. Altschul, et al. (1997). "Gapped BLAST and PSI-BLAST: a new generation of protein database search programs," Nucleic Acids Res. 25:3389-3402 ). Još jedna popularna tehnika lokalnog poravnanja zasnovana je na Smith-Waterman algoritmu (Smith, T.F. & Waterman, M.S. (1981) "Identification of common molecular subsequences." J. Mol. Biol.
147:195-197). Opšta tehnika globalnog poravnanja zasnovana na dinamičkom programiranju je Needleman-Wunsch algoritam (Needleman, S.B. & Wunsch, C.D. (1970) "A general method applicable to the search for similarities in the amino acid sequences of two proteins." J. Mol. Biol., 48:443-453). Nedavno je razvijen algoritam brzog optimalnog globalnog poravnanja sekvence (FOGSAA) koji navodno proizvodi globalno poravnanje nukleotidnih i proteinskih sekvenci brže od drugih optimalnih metoda globalnog poravnanja, uključujući Needleman-Wunsch algoritam. Ostali alati su ovde opisani, posebno u definiciji "identičnosti" u nastavku.
[0197] Kako se ovde koristi, termin "homologija" se odnosi na ukupnu srodnost između polimernih molekula, npr. između molekula nukleinske kiseline (npr. molekula DNK i/ili molekula RNK) i/ili između molekula polipeptida. Polimerni molekuli (npr. molekuli nukleinske kiseline (npr. molekuli DNK i/ili molekuli RNK) i/ili molekuli polipeptida) koji dele granični nivo sličnosti ili identičnosti određen poravnanjem odgovarajućih ostataka, nazivaju se homologni. Homologija je kvalitativni termin koji opisuje odnos između molekula i može se zasnivati na kvantitativnoj sličnosti ili identičnosti. Sličnost ili identičnost je kvantitativni termin koji definiše stepen podudaranja sekvenci između dve upoređene sekvence. U nekim primerima izvođenja, smatra se da su polimerni molekuli "homologni" jedan drugom ako su njihove sekvence najmanje 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70 %, 75%, 80%, 85%, 90%, 95% ili 99% identične ili slične. Termin "homologan" se nužno odnosi na poređenje između najmanje dve sekvence (polinukleotidne ili polipeptidne sekvence). Dve polinukleotidne sekvence se smatraju homolognim ako su polipeptidi koje kodiraju najmanje 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 95% ili čak 99% identični za najmanje jedan niz od najmanje 20 aminokiselina. U nekim primerima izvođenja, homologne polinukleotidne sekvence se karakterišu sposobnošću da kodiraju niz od najmanje 4-5 jedinstveno specificiranih aminokiselina. Za polinukleotidne sekvence kraće od 60 nukleotida, homologija je određena sposobnošću da kodiraju niz od najmanje 4-5 jedinstveno specificiranih aminokiselina. Dve proteinske sekvence se smatraju homolognim ako su proteini najmanje 50%, 60%, 70%, 80% ili 90% identični za najmanje jedan niz od najmanje 20 aminokiselina.
[0198] Homologija implicira da su upoređene sekvence u evoluciji divergirale od zajedničkog porekla. Termin "homolog" se odnosi na prvu sekvencu aminokiselina ili sekvencu nukleinske kiseline (npr. gen (DNK ili RNK) ili sekvencu proteina) koja je povezana sa drugom sekvencom aminokiselina ili sekvencom nukleinske kiseline time što potiču od zajedničke predačke sekvence. Termin "homolog" se može primeniti na odnos između gena i/ili proteina razdvojenih događajem specijacije ili na odnos između gena i/ili proteina razdvojenih događajem genetske duplikacije. "Ortolozi" su geni (ili proteini) različitih vrsta koji su evoluirali iz zajedničkog predačkog gena (ili proteina) specijacijom. Tipično, ortolozi zadržavaju istu funkciju tokom evolucije. "Paralozi" su geni (ili proteini) povezani duplikacijom unutar genoma. Ortolozi zadržavaju istu funkciju tokom evolucije, dok paralozi razvijaju nove funkcije, čak i ako su one povezane sa originalnom.
[0199] Termin "identičnost" se odnosi na ukupnu srodnost između polimernih molekula, na primer, između polinukleotidnih molekula (npr. molekula DNK i/ili molekula RNK) i/ili između polipeptidnih molekula. Izračunavanje procenta identičnosti dve sekvence polinukleinske kiseline, na primer, može da se izvede poravnavanjem dve sekvence u svrhu optimalnog poređenja (npr. praznine se mogu uvesti u jednu ili obe od prve i druge sekvence nukleinske kiseline radi optimalnog poravnanja i neidentične sekvence se mogu zanemariti u svrhu poređenja). U određenim primerima izvođenja, dužina sekvence koja je poravnata u svrhu poređenja je najmanje 30%, najmanje 40%, najmanje 50%, najmanje 60%, najmanje 70%, najmanje 80%, najmanje 90%, na najmanje 95% ili 100% dužine referentne sekvence. Zatim se porede nukleotidi na odgovarajućim pozicijama nukleotida. Kada poziciju u prvoj sekvenci zauzima isti nukleotid kao na odgovarajućoj poziciji u drugoj sekvenci, onda su molekuli identični na toj poziciji. Procenat identičnosti između dve sekvence je funkcija broja identičnih pozicija koje dele sekvence, uzimajući u obzir broj praznina i dužinu svake praznine, koju treba uvesti za optimalno poravnanje dve sekvence. Poređenje sekvenci i određivanje procenta identičnosti između dve sekvence može se postići korišćenjem matematičkog algoritma. Na primer, procenat identičnosti između dve sekvence nukleinske kiseline može da se odredi upotrebom metoda kao što su one opisane u Computational Molecular Biology, Lesk, A. M., ed., Oxford University Press, New York, 1988;
4
Biocomputing: Informatics and Genome Projects, Smith, D. W., ed., Academic Press, New York, 1993; Sequence Analysis in Molecular Biology, von Heinje, G., Academic Press, 1987; Computer Analysis of Sequence Data, Part I, Griffin, A. M., and Griffin, H. G., eds., Humana Press, New Jersey, 1994; and Sequence Analysis Primer, Gribskov, M. and Devereux, J., eds., M Stockton Press, New York, 1991. Na primer, procenat identičnosti između dve sekvence nukleinskih kiselina može da se odredi upotrebom algoritma autora Meyers i Miller (CABIOS, 1989, 4:11-17), koji je ugrađen u program ALIGN (verzija 2.0) korišćenjem tabele ostatka težine PAM120, kazne za dužinu praznine od 12 i kazne za prazninu od 4. Procenat identičnosti između dve sekvence nukleinskih kiselina može alternativno da se odredi korišćenjem GAP programa u softverskom paketu GCG upotrebom matrice NWSgapdna.CMP. Metode koje se obično koriste za određivanje procenta identičnosti između sekvenci uključuju, ali nisu ograničene na one otkrivene u Carillo, H., and Lipman, D., SIAM J Applied Math., 48:1073 (1988). Tehnike za određivanje identičnosti su kodifikovane u javno dostupnim kompjuterskim programima. Primeri računarskog softvera za određivanje homologije između dve sekvence uključuju, ali nisu ograničeni na, programski paket GCG, Devereux, J., et al., Nucleic Acids Research, 12(1), 387 (1984)), BLASTP, BLASTN, i FASTA Altschul, S. F. et al., J. Molec. Biol., 215, 403 (1990)).
Multiproteinske i višekomponentne vakcine
[0200] Predmetni prikaz obuhvata vakcine protiv respiratornih virusa koje sadrže veći broj RNK (tj., iRNK) polinukleotida, od kojih svaki kodira jedan antigeni polipeptid, kao i vakcine protiv respiratornih virusa koje sadrže jedan RNK (tj., iRNK) polinukleotid koji kodira više od jednog antigenog polipeptida (npr., kao fuzioni polipeptid). Dakle, kompozicija vakcine koja sadrži RNK (tj., iRNK) polinukleotid koji ima otvoreni okvir čitanja koji kodira prvi antigeni polipeptid i RNK (tj., iRNK) polinukleotid koji ima otvoreni okvir čitanja koji kodira drugi antigeni polipeptid obuhvata (a) vakcine koje sadrže prvi RNK polinukleotid koji kodira prvi antigeni polipeptid i drugi RNK polinukleotid koji kodira drugi antigeni polipeptid, i (b) vakcine koje sadrže jedan RNK polinukleotid koji kodira prvi i drugi antigeni polipeptid (npr., kao fuzioni polipeptid). RNK (tj., iRNK) vakcine prema ovom prikazu, u nekim primerima izvođenja, sadrže 2-10 (npr.2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ili 10), ili više, RNK polinukleotida koji imaju otvoreni okvir čitanja, od kojih svaki kodira drugačiji antigeni polipeptid (ili jedan RNK polinukleotid koji kodira 2-10 ili više različitih antigenih polipeptida). Antigeni polipeptidi mogu da budu izabrani od antigenih polipeptida hMPV, PIV3, RSV, MEV i BetaCoV (npr., odabrani od MERS-CoV, SARS-CoV, HCoV-OC43, HCoV-229E, HCoV-NL63, HCoV-NL, HCoV-NH i HCoV-HKU1). U pronalasku, najmanje jedan iRNK polinukleotid kodira najmanje jedan antigeni polipeptid BetaCoV.
[0201] U nekim primerima izvođenja, višekomponentna vakcina sadrži najmanje jedan RNK (tj., iRNK) polinukleotid koji kodira najmanje jedan antigeni polipeptid fuzionisan sa signalnim peptidom (npr. bilo koji od SEQ ID NO: 15-19). Signalni peptid može da bude fuzionisan na N-kraju ili C-kraju antigenog polipeptida. Antigeni polipeptid fuzionisan sa signalnim peptidom može da bude izabran od antigenih polipeptida hMPV, PIV3, RSV, MEV i BetaCoV (npr., izabran između MERS-CoV, SARS-CoV, HCoV-OC43, HCoV-229E, HCoV-NL63, HCoV-NL, HCoV-NH i HCoV-HKU1).
Signalni peptidi
[0202] U nekim primerima izvođenja, antigeni polipeptidi kodirani RNK (tj., iRNK) polinukleotidima respiratornog virusa sadrže signalni peptid. Signalni peptidi, koji sadrže 15-60 N-terminalnih aminokiselina proteina, obično su potrebni za translokaciju kroz membranu na sekretornom putu i, prema tome, univerzalno kontrolišu ulazak većine proteina i kod eukariota i kod prokariota u sekretorni put. Signalni peptidi generalno obuhvataju tri regiona: N-terminalni region različite dužine, koji obično sadrži pozitivno naelektrisane aminokiseline; hidrofobni region; i kratki karboksi-terminalni peptidni region. Kod eukariota, signalni peptid nascentnog prekursorskog proteina (pre-protein) usmerava ribozom ka membrani hrapavog endoplazmatičnog retikuluma (ER) i pokreće transport rastućeg peptidnog lanca kroz njega radi obrade. Obrada u ER proizvodi zrele proteine, pri čemu se signalni peptid iseca sa prekursorskih proteina, tipično pomoću ER-rezidentne signalne peptidaze ćelije-domaćina, ili oni ostaju neisečeni i funkcionišu kao membransko sidro. Signalni peptid takođe može da olakša usmeravanje proteina na ćelijsku membranu. Signalni peptid, međutim, nije odgovoran za konačno odredište zrelog proteina. Sekretorni proteini koji nemaju dodatne adresne oznake u svojoj sekvenci se podrazumevano izlučuju u spoljašnje okruženje. Tokom poslednjih godina, razvijen je napredniji pogled na signalne peptide, koji pokazuje da su funkcije i imunodominacija određenih signalnih peptida mnogo raznovrsniji nego što se ranije smatralo.
[0203] Vakcine protiv respiratornih virusa prema ovom prikazu mogu da sadrže, na primer, RNK (tj., iRNK) polinukleotide koji kodiraju veštački signalni peptid, pri čemu je sekvenca koja kodira signalni peptid funkcionalno povezana i nalazi se u okviru čitanja sa kodirajućom sekvencom antigenog polipeptida. Dakle, vakcine protiv respiratornih virusa prema ovom prikazu, u nekim primerima izvođenja, proizvode antigeni polipeptid koji sadrži antigeni polipeptid (tj. BetaCoV) fuzionisan sa signalnim peptidom. U nekim primerima izvođenja signalni peptid je fuzionisan sa N-krajem antigenog polipeptida. U nekim primerima izvođenja, signalni peptid je fuzionisan sa C- krajem antigenog polipeptida.
4
[0204] U nekim primerima izvođenja, signalni peptid fuzionisan sa antigenim polipeptidom je veštački signalni peptid. U nekim primerima izvođenja, veštački signalni peptid fuzionisan sa antigenim polipeptidom kodiran RNK (tj., iRNK) vakcinom dobijen je od imunoglobulin proteina, npr., signalni peptid IgE ili signalni peptid IgG. U nekim primerima izvođenja, signalni peptid fuzionisan sa antigenim polipeptidom kodiran RNK (tj., iRNK) vakcinom je signalni peptid epsilon-1 teškog lanca Ig (IgE HC SP) koji ima sekvencu: MDWTWILFLVAAATRVHS (SEQ ID NO: 16). U nekim primerima izvođenja, signalni peptid fuzionisan sa antigenim polipeptidom kodiran RNK (tj., iRNK) vakcinom je signalni peptid HAH regiona V-III IgGk lanca (IgGk SP) koji ima sekvencu METPAQLLFLLLLWLPDTTG (SEQ ID NO: 15). U nekim primerima izvođenja, signalni peptid je odabran od: signalne sekvence PRM japanskog encefalitisa (MLGSNSGQRVVFTILLLLVAPAYS; SEQ ID NO: 17), signalne sekvence proteina VSVg (MKCLLYLAFLFIGVNCA; SEQ ID NO: 18) i signalne sekvence JEV japanskog encefalitisa (MWLVSLAIVTACAGA; SEQ ID NO: 19).
[0205] U nekim primerima izvođenja, antigeni polipeptid kodiran RNK (tj., iRNK) vakcinom sadrži aminokiselinsku sekvencu identifikovanu bilo kojom od SEQ ID NO: 5-8, 12-13, 24-34, 47-50 ili 54-56 (Tabele 3, 6, 11, 14 ili 17; videti takođe aminokiselinske sekvence iz tabela 4, 7, 12 ili 15) fuzionisanu sa signalnim peptidom identifikovanim bilo kojom od SEQ ID NO: 15-19 (Tabela 8). Ovde opisani primeri nisu namenjeni da budu ograničavajući, i bilo koji signalni peptid za koji je u stanju tehnike poznato da olakšava usmeravanje proteina ka ER zbog obrade i/ili da usmerava protein ka ćelijskoj membrani, može da se koristi u skladu sa predmetnim prikazom.
[0206] Signalni peptid može da ima dužinu od 15-60 aminokiselina. Na primer, signalni peptid može da ima dužinu od 15, 16,17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, ili 60 aminokiselina. U nekim primerima izvođenja, signalni peptid ima dužinu od 20-60, 25-60, 30-60, 35- 60, 40-60, 45- 60, 50-60, 55-60, 15-55, 20-55, 25-55, 30-55, 35-55, 40-55, 45-55, 50-55, 15-50, 20-50, 25-50, 30-50, 35-50, 40-50, 45-50, 15-45, 20-45, 25-45, 30-45, 35-45, 40-45, 15-40, 20-40, 25-40, 30-40, 35-40, 15-35, 20-35, 25-35, 30-35, 15-30, 20-30, 25-30, 15-25, 20-25, ili 15-20 aminokiselina.
[0207] Signalni peptid se tipično iseca sa nascentnog polipeptida na spoju za isecanje tokom obrade u ER. Zreli antigeni polipeptid proizveden pomoću RNK (tj., iRNK) vakcine protiv respiratornih virusa predmetnog prikaza obično ne sadrži signalni peptid.
Hemijske modifikacije
4
[0208] Vakcine protiv respiratornih virusa predmetnog prikaza, u nekim primerima izvođenja, sadrže najmanje RNK (tj., iRNK) polinukleotid koji ima otvoreni okvir čitanja koji kodira najmanje jedan antigeni polipeptid koji sadrži najmanje jednu hemijsku modifikaciju.
[0209] Izrazi "hemijska modifikacija" i "hemijski modifikovan" odnose se na modifikaciju u odnosu na adenozinske (A), guanozinske (G), uridinske (U), timidinske (T) ili citidinske (C) ribonukleozide ili dezoksiribnukleozide u najmanje jednom elementu od njihovog položaja, obrasca, procenta ili populacije. Uopšteno, ovi termini se ne odnose na modifikacije ribonukleotida u prirodnim 5'-terminalnim grupama iRNK kape. Što se tiče polipeptida, termin "modifikacija" se odnosi na modifikaciju u odnosu na kanonski skup od 20 aminokiselina. Polipeptidi, kao što je ovde dato, takođe se smatraju "modifikovanim", ako sadrže aminokiselinske supstitucije, insercije ili kombinaciju supstitucija i insercija.
[0210] Polinukleotidi (tj., RNK polinukleotidi, tj., iRNK polinukleotidi), u nekim primerima izvođenja, sadrže razne (više od jedne) različite modifikacije. U nekim primerima izvođenja, određeni region polinukleotida sadrži jednu, dve ili više (opciono različitih) nukleozidnih ili nukleotidnih modifikacija. U nekim primerima izvođenja, modifikovani RNK polinukleotid (tj. modifikovani iRNK polinukleotid), uveden u ćeliju ili organizam, pokazuje smanjenu degradaciju u ćeliji, odnosno organizmu, u odnosu na nemodifikovani polinukleotid. U nekim primerima izvođenja, modifikovani RNK polinukleotid (tj. modifikovani iRNK polinukleotid), uveden u ćeliju ili organizam, može da pokazuje smanjenu imunogenost u ćeliji, odnosno organizmu (npr., smanjeni urođeni odgovor).
[0211] Modifikacije polinukleotida uključuju, bez ograničenja, one koje su ovde opisane. Polinukleotidi (tj. RNK polinukleotidi, tj., iRNK polinukleotidi) mogu da sadrže modifikacije koje se javljaju u prirodi, koje se ne javljaju u prirodi ili polinukleotid može da sadrži kombinaciju modifikacija koje se javljaju u prirodi i koje se ne javljaju u prirodi. Polinukleotidi mogu da uključuju bilo koju korisnu modifikaciju, na primer, šećera, nukleobaze ili internukleozidne veze (npr. vezujućeg fosfata, fosfodiestarske veze ili fosfodiestarskog osnovnog lanca).
[0212] Polinukleotidi (tj., RNK polinukleotidi, tj., iRNK polinukleotidi), u nekim primerima izvođenja, sadrže neprirodne modifikovane nukleotide koji se uvode tokom sinteze ili nakon sinteze polinukleotida da bi se postigle željene funkcije ili svojstva. Modifikacije mogu da budu prisutne na internukleotidnim vezama, purinskim ili pirimidinskim bazama ili šećerima. Modifikacija može da se uvede hemijskom sintezom ili enzimom polimerazom na kraju lanca ili bilo gde drugde u lancu. Bilo koji od regiona polinukleotida može da bude hemijski modifikovan.
[0213] Predmetni prikaz obezbeđuje modifikovane nukleozide i nukleotide polinukleotida (tj. RNK polinukleotide, tj., iRNK polinukleotide). "Nukleozid" se odnosi na jedinjenje koje sadrži molekul šećera (npr. pentozu ili ribozu) ili njegov derivat u kombinaciji sa organskom bazom (npr.
4
purinom ili pirimidinom) ili njenim derivatom (koji se ovde takođe naziva "nukleobaza"). "Nukleotid" se odnosi na nukleozid koji uključuje fosfatnu grupu. Modifikovani nukleotidi se mogu sintetisati bilo kojim korisnim postupkom, kao što je, na primer, hemijski, enzimski ili rekombinantno, kako bi se uključio jedan ili više modifikovanih ili neprirodnih nukleozida. Polinukleotidi mogu da sadrže region ili regione povezanih nukleozida. Takvi regioni mogu da imaju varijabilne veze osnovnog lanca. Veze mogu da budu standardne fosfdioestarske veze, u kom slučaju bi polinukleotidi sadržali regione nukleotida.
[0214] Uparivanje baza modifikovanih nukleotida obuhvata ne samo standardne parove baza adenozin-timin, adenozin-uracil ili gvanozin-citozin, već i parove baza formirane između nukleotida i/ili modifikovanih nukleotida koji sadrže nestandardne ili modifikovane baze, pri čemu raspored donora vodonične veze i akceptora vodonične veze dozvoljava vodoničnu vezu između nestandardne baze i standardne baze ili između dve komplementarne nestandardne strukture baze. Jedan primer takvog nestandardnog uparivanja baza je uparivanje baza između modifikovanog nukleotida inozina i adenina, citozina ili uracila. Bilo koja kombinacija baze/šećera ili linkera može da bude ugrađena u polinukleotide predmetnog prikaza.
[0215] Modifikacije polinukleotida (tj., RNK polinukleotida, tj., iRNK polinukleotida) koje su korisne u vakcinama predmetnog prikaza uključuju, ali nisu ograničene na sledeće: 2-metiltio-N6-(cis-hidroksiizopentenil)adenozin; 2-metiltio-N6-metiladenozin; 2-metiltio-N6-treonil karbamoiladenozin; N6-glicinilkarbamoiladenozin; N6-izopenteniladenozin; N6-metiladenozin; N6-treonilkarbamoiladenozin: 1,2'-O-dimetiladenozin; 1-metiladenozin; 2'-O-metiladenozin; 2'-O-riboziladenozin (fosfat); 2-metiladenozin; 2-metiltio-N6 izopenteniladenozin; 2-metiltio-N6-hidroksinorvalil karbamoiladenozin; 2'-O-metiladenozin; 2'-O-riboziladenozin (fosfat); izopenteniladenozin; N6-(cis-hidroksiizopentenil)adenozin; N6,2'-O-dimetiladenozin; N6,2'O-dimetiladenozin; N6,N6,2'-O-trimetiladenozin; N6,N6-dimetiladenozin; N6-acetiladenozin; N6-hidroksinorvalilkarbamoiladenozin; N6-metil-N6-treonilkarbamoiladenozin; 2-metiladenozin; 2-metiltio-N6-izopenteniladenozin; 7-deaza-adenozin; N1-metil-adenozin; N6, N6(dimetil)adenin; N6-cis-hidroksi-izopentenil-adenozin; α-tio-adenozin; 2(amino)adenin; 2(aminopropil)adenin; 2(metiltio) N6 (izopentenil)adenin; 2-(alkil)adenin; 2-(aminoalkil)adenin; 2-(aminopropil)adenin; 2-(halo)adenin; 2-(halo)adenin; 2-(propil)adenin; 2'-amino-2'-dezoksi-ATP; 2'-azido-2'-dezoksi-ATP; 2'-dezoksi-2'-a-aminoadenozin TP; 2'-dezoksi-2'-a-azidoadenozin TP; 6 (alkil)adenin; 6 (metil)adenin; 6-(alkil)adenin; 6-(metil)adenin; 7(deaza)adenin; 8 (alkenil)adenin; 8(alkinil)adenin; 8(amino)adenin; 8(tioalkil)adenin; 8-(alkenil)adenin; 8-(alkil)adenin; 8-(alkinil)adenin; 8-(amino)adenin; 8-(halo)adenin; 8-(hidroksil)adenin; 8-(tioalkil)adenin; 8-(tiol)adenin; 8-azido-adenozin; aza adenin; deaza adenin; N6(metil)adenin; N6-(izopentil)adenin; 7-deaza-8-aza-adenozin; 7-metiladenin; 1-deazaadenozin TP; 2'fluoro-N6-Bz-dezoksiadenozin
4
TP; 2'-OMe-2-amino-ATP; 2'O-metil-N6-Bz-dezoksiadenozin TP; 2'-a-etiniladenozin TP; 2-aminoadenin; 2-aminoadenozin TP; 2-amino-ATP; 2'-a-trifluorometiladenozin TP; 2-azidoadenozin TP; 2'-b-etiniladenozin TP; 2-bromoadenozin TP; 2'-b-trifluorometiladenozin TP; 2-hloroadenozin TP; 2'-dezoksi-2',2'-difluoroadenozin TP; 2'-dezoksi-2'-a-merkaptoadenozin TP; 2'-dezoksi-2'-a-tiometoksiadenozin TP; 2'-dezoksi-2'-b-aminoadenozin TP; 2'-dezoksi-2'-bazidoadenozin TP; 2'-dezoksi-2'-b-bromoadenozin TP; 2'-dezoksi-2'-b-hloroadenozin TP; 2'-dezoksi-2'-b-fluoroadenozin TP; 2'-dezoksi-2'-b-jodoadenozin TP; 2'-dezoksi-2'-bmerkaptoadenozin TP; 2'-dezoksi-2'-b-tiometoksiadenozin TP; 2-fluoroadenozin TP; 2-jodoadenozin TP; 2-merkaptoadenozin TP; 2-metoksi-adenin; 2-metiltio-adenin; 2-trifluorometiladenozin TP; 3-deaza-3-bromoadenozin TP; 3-deaza-3-hloroadenozin TP; 3-deaza-3-fluoroadenozin TP; 3-deaza-3-jodoadenozin TP; 3-deazaadenozin TP; 4'azidoadenozin TP; 4'-karbociklični adenozin TP; 4'-etiniladenozin TP; 5'homo-adenozin TP; 8-aza-ATP; 8-bromoadenozin TP; 8-trifluorometiladenozin TP; 9-deazaadenozin TP; 2-aminopurin; 7-deaza-2,6-diaminopurin; 7-deaza-8-aza-2,6-diaminopurin; 7-deaza-8-aza-2-aminopurin; 2,6-diaminopurin; 7-deaza-8-aza-adenin, 7-deaza-2-aminopurin; 2-tiocitidin; 3-metilcitidin; 5-formilcitidin; 5-hidroksimetilcitidin; 5-metilcitidin; N4-acetilcitidin; 2'-O-metilcitidin; 2'-O-metilcitidin; 5,2'-O-dimetilcitidin; 5-formil-2'-O-metilcitidin; lizidin; N4,2'-O-dimetilcitidin; N4-acetil-2'-O-metilcitidin; N4-metilcitidin; N4,N4-dimetil-2'-OMe-citidin TP; 4-metilcitidin; 5-aza-citidin; pseudo-izo-citidin; pirolo-citidin; α-tio-citidin; 2-(tio)citozin; 2'-amino-2'-dezoksi-CTP; 2'-azido-2'-dezoksi-CTP; 2'-dezoksi-2'-a-aminocitidin TP; 2'-dezoksi-2'-a-azidocitidin TP; 3 (deaza) 5 (aza)citozin; 3(metil)citozin; 3-(alkil)citozin; 3-(deaza) 5 (aza)citozin; 3-(metil)citidin; 4,2'-O-dimetilcitidin; 5(halo)citozin; 5(metil)citozin; 5(propinil)citozin; 5 (trifiuorometil)citozin; 5-(alkil)citozin; 5-(alkinil)citozin; 5-(halo)citozin; 5-(propinil)citozin; 5-(trifluorometil)citozin; 5-bromo-citidin; 5-jodo-citidin; 5-propinil citozin; 6-(azo)citozin; 6-aza-citidin; aza citozin; deaza citozin; N4 (acetil)citozin; 1-metil-1-deaza-pseudoizocitidin; 1-metil-pseudoizocitidin; 2-metoksi-5-metil-citidin; 2-metoksi-citidin; 2-tio-5-metil-citidin; 4-metoksi-1-metilpseudoizocitidin; 4-metoksi-pseudoizocitidin; 4-tio-1-metil-1-deaza-pseudoizocitidin; 4-tio-1-metil-pseudoizocitidin; 4-tio-pseudoizocitidin; 5-aza-zebularin; 5-metil-zebularin; pirolopseudoizocitidin; zebularin; (E)-5-(2-bromo-vinil)citidin TP; 2,2'-anhidro-citidin TP hidrohlorid; 2'fluor-N4-Bz-citidin TP; 2'fluoro-N4-acetil-citidin TP; 2'-O-metil-N4-acetil-citidin TP; 2'O-metil-N4-Bz-citidin TP; 2'-a-etinilcitidin TP; 2'-a-trifluorometilcitidin TP; 2'-b-etinilcitidin TP; 2'-b-trifluorometilcitidin TP; 2'-dezoksi-2',2'-difluorocitidin TP; 2'-dezoksi-2'-a-merkaptocitidin TP; 2'-dezoksi-2'-a-tiometoksicitidin TP; 2'-dezoksi-2'-b-aminocitidin TP; 2'-dezoksi-2'-b-azidocitidin TP; 2'-dezoksi-2'-b-bromocitidin TP; 2'-dezoksi-2'-b-hlorocitidin TP; 2'-dezoksi-2'-b-fluorocitidin TP; 2'-dezoksi-2'-b-jodocitidin TP; 2'-dezoksi-2'-b-merkaptocitidin TP; 2'-dezoksi-2'-b-
4
tiometoksicitidin TP; 2'-O-metil-5-(1-propinil)citidin TP; 3'-etinilcitidin TP; 4'-azidocitidin TP; 4'-karbociklični citidin TP; 4'-etinilcitidin TP; 5-(1-propinil)ara-citidin TP; 5-(2-hloro-fenil)-2-tiocitidin TP; 5-(4-aminofenil)-2-tiocitidin TP; 5-aminoalil-CTP; 5-cijanocitidin TP; 5-etinilaracitidin TP; 5-etinilcitidin TP; 5'-homo-citidin TP; 5-metoksicitidin TP; 5-trifluorometil-citidin TP; N4-amino-citidin TP; N4-benzoil-citidin TP; pseudoizocitidin; 7-metilguanozin; N2,2'-O-dimetilguanozin; N2-metilguanozin; viozin; 1,2-O-dimetilguanozin; 1-metilguanozin; 2'-O-metilguanozin; 2'-O-ribozilguanozin (fosfat); 2'-O-metilguanozin; 2'O-ribozilguanozin (fosfat); 7-aminometil-7-deazaguanozin; 7-cijano-7-deazaguanozin; arheozin; metilviozin; N2,7-dimetilguanozin; N2,N2,2'-O-trimetilguanozin; N2,N2,7-trimetilguanozin; N2,N2-dimetilguanozin; N2,7,2'-O-trimetilguanozin; 6-tio-guanozin; 7-deaza-guanozin; 8-oksoguanozin; N1-metil-guanozin; α-tio-guanozin; 2(propil)guanin; 2-(alkil)guanin; 2'-amino-2'-dezoksi-GTP; 2'-azido-2'-dezoksi-GTP; 2'-dezoksi-2'-a-aminoguanozin TP; 2'-dezoksi-2'-aazidoguanozin TP; 6(metil)guanin; 6-(alkil)guanin; 6-(metil)guanin; 6-metil-guanozin; 7(alkil)guanin; 7 (deaza)guanin; 7(metil)guanin; 7-(alkil)guanin; 7-(deaza)guanin; 7-(metil)guanin; 8 (alkil)guanin; 8(alkinil)guanin; 8 (halo)guanin; 8(tioalkil)guanin; 8-(alkenil)guanin; 8-(alkil)guanin; 8-(alkinil)guanin; 8-(amino)guanin; 8-(halo)guanin; 8-(hidroksil)guanin; 8-(tioalkil)guanin; 8-(tiol)guanin; aza guanin; deaza guanin; N (metil)guanin; N-(metil)guanin; 1-metil-6-tio-guanozin; 6-metoksi-guanozin; 6-tio-7-deaza-8-aza-guanozin; 6-tio-7-deaza-guanozin; 6-tio-7-metil-guanozin; 7-deaza-8-aza-guanozin; 7-metil-8-okso-guanozin; N2,N2-dimetil-6-tio-guanozin; N2-metil-6-tio-guanozin; 1-Me-GTP; 2'fluoro-N2-izobutilguanozin TP; 2'O-metil-N2-izobutil-guanozin; TP; 2'-a-etinilguanozin TP; 2'-atrifluorometilguanozin TP; 2'-b-etinilguanozin TP; 2'-b-trifluorometilguanozin TP; 2'-dezoksi-2',2'-difluoroguanozin TP; 2'-dezoksi-2'-a-merkaptoguanozin TP; 2'-dezoksi-2'-atiometoksiguanozin TP; 2'-dezoksi-2'-b-aminoguanozin TP; 2'-dezoksi-2'-b-azidoguanozin TP; 2'-dezoksi-2'-b-bromoguanozin TP; 2'-dezoksi-2'-b-hloroguanozin TP; 2'-dezoksi-2'-bfluoroguanozin TP; 2'-dezoksi-2'-b-jodoguanozin TP; 2'-dezoksi-2'-b-merkaptoguanozin TP; 2'-dezoksi-2'-b-tiometoksiguanozin TP; 4'-azidoguanozin TP; 4'-karbociklični guanozin TP; 4'-etinilguanozin TP; 5'-homo-guanozin TP; 8-bromo-guanozin TP; 9-deazaguanozin TP; N2-izobutil-guanozin TP; 1-metilinozin; inozin; 1,2'-O-dimetilinozin; 2'-O-metilinozin; 7-metilinozin; 2'-O-metilinozin; epoksikjuozin; galaktozil-kjuozin; manozilkjuozin; kjuozin; aliamino-timidin; aza timidin; deaza timidin; dezoksi-timidin; 2'-O-metiluridin; 2-tiouridin; 3-metiluridin; 5-katoksimetiluridin; 5-hidroksiuridin; 5-metiluridin; 5-taufinometil-2-tiouridin; 5-taurinometiluridin; dihidrouridin; pseudouridin; (3-(3-amino-3-karboksipropil)uridin; 1-metil-3-(3-amino-5-karboksipropil)pseudouridin; 1-metilpseduouridin; 1-metil-pseudouridin; 2'-O-metiluridin; 2'-O-metilpseudouridin; 2'-O-metiluridin; 2-tio-2'-O-metiluridin; 3-(3-amino-3karboksipropil)uridin; 3,2'-O-dimetiluridin; 3-metil-pseudo-uridin TP; 4-tiouridin; 5-(karboksihidroksimetil)uridin; 5-(karboksihidroksimetil)uridin metil estar; 5,2'-O-dimetiluridin; 5,6-dihidro-uridin; 5-aminometil-2-tiouridin; 5-karbamoilmetil-2'-O-metiluridin; 5-karbamoilmetiluridin; 5-karboksihidroksimetiluridin; 5-karboksihidroksimetiluridin metil estar; 5-karboksimetilaminometil-2'-O-metiluridin; 5-karboksimetilaminometil-2-tiouridin; 5-karboksimetilaminometil-2-tiouridin; 5-karboksimetilaminometiluridin; 5-karboksimetilaminometiluridin; 5-karbamoilmetiluridin TP; 5-metoksikarbonilmetil-2'-O-metiluridin; 5-metoksikarbonilmetil-2-tiouridin; 5-metoksikarbonilmetiluridin; 5-metoksiuridin; 5-metil-2-tiouridin; 5-metilaminometil-2-selenouridin; 5-metilaminometil-2-tiouridin; 5-metilaminometiluridin; 5-metildihidrouridin; 5-oksisirćetna kiselina-uridin TP; 5-oksisirćetna kiselina-metil estar-uridin TP; N1-metil-pseudo-uridin; uridin 5-oksisirćetna kiselina; uridin 5-oksisirćetna kiselina metil estar; 3-(3-amio-3-karboksipropil)-uridin TP; 5-(izopentenilaminometil)- 2-tiouridin TP; 5-(izopentenilaminometil)-2'O-metiluridin TP; 5-(izopentenilaminometil)uridin TP; 5-propinil uracil; α-tio-uridin; 1 (aminoalkilaminokarboniletilenil)-2(tio)-pseudouracil; 1 (aminoalkilaminokarboniletilenil)-2,4-(ditio)pseudouracil; 1 (aminoalkilaminokarboniletilenil)-4 (tio)pseudouracil; 1 (aminoalkilaminokarboniletilenil)-pseudouracil; 1 (aminokarboniletilenil)-2(tio)-pseudouracil; 1 (aminokarboniletilenil)-2,4-(ditio)pseudouracil; 1 (aminokarboniletilenil)-4 (tio)pseudouracil; 1 (aminokarboniletilenil)-pseudouracil; 1 supstituisani 2(tio)-pseudouracil; 1 supstituisani 2,4-(ditio)pseudouracil; 1 supstituisani 4 (tio)pseudouracil; 1 supstituisani pseudouracil; 1-(aminoalkilaminokarboniletilenil)-2-(tio)-pseudouracil; 1-metil-3-(3-amino-3-karboksipropil)pseudouridin TP; 1-metil-3-(3-amino-3-karboksipropil)pseudo-UTP; 1-metil-pseudo-UTP; 2 (tio)pseudouracil; 2' dezoksi uridin; 2' fluorouridin; 2-(tio)uracil; 2,4-(ditio)psuedouracil; 2'metil, 2'amino, 2'azido, 2'fluro-guanozin; 2'-amino-2'-dezoksi-UTP; 2'-azido-2'-dezoksi-UTP; 2'-azido-dezoksiuridin TP; 2'-O-metilpseudouridin; 2'dezoksi uridin; 2'fluorouridin; 2'-dezoksi-2'-a-aminouridin TP; 2'-dezoksi-2'-a-azidouridin TP; 2-metilpseudouridin; 3(3 amino-3 karboksipropil)uracil; 4(tio)pseudouracil; 4-(tio)pseudouracil; 4-(tio)uracil; 4-tiouracil; 5 (1,3-diazol-1-alkil)uracil; 5 (2-aminopropil)uracil; 5(aminoalkil)uracil; 5 (dimetilaminoalkil)uracil; 5 (guanidinijumalkil)uracil; 5(metoksikarbonilmetil)-2-(tio)uracil; 5 (metoksikarbonil-metil)uracil; 5 (metil) 2(tio)uracil; 5(metil) 2,4(ditio)uracil; 5(metil) 4(tio)uracil; 5 (metilaminometil)-2 (tio)uracil; 5 (metilaminometil)-2,4 (ditio(uracil; 5 (metilaminometil)-4 (tio)uracil; 5 (propinil)uracil; 5 (trifluorometil)uracil; 5-(2-aminopropil)uracil; 5-(alkil)-2-(tio)pseudouracil; 5-(alkil)-2,4 (ditio)pseudouracil; 5-(alkil)-4(tio)pseudouracil; 5-(alkil)pseudouracil; 5-(alkil)uracil; 5-(alkinil)uracil; 5-(alilamino)uracil; 5-(cijanoalkil)uracil; 5-(dialkilaminoalkil)uracil; 5-(dimetilaminoalkil)uracil; 5-(guanidinijumalkil)uracil; 5-(halo)uracil; 5-(1,3-diazol-1-alkil)uracil;
1
5-(metoksi)uracil; 5-(metoksikarbonilmetil)-2-(tio)uracil; 5-(metoksikarbonil-metil)uracil; 5-(metil) 2(tio)uracil; 5-(metil) 2,4(ditio)uracil; 5-(metil) 4(tio)uracil; 5-(metil)-2-(tio)pseudouracil; 5-(metil)-2,4 (ditio)pseudouracil; 5-(metil)-4 (tio)pseudouracil; 5-(metil)pseudouracil; 5-(metilaminometil)-2 (tio)uracil; 5-(metilaminometil)-2,4(ditio)uracil; 5-(metilaminometil)-4-(tio)uracil; 5-(propinil)uracil; 5-(trifluorometil)uracil; 5-aminoalil-uridin; 5-bromo-uridin; 5-jodouridin; 5-uracil; 6(azo)uracil; 6-(azo)uracil; 6-aza-uridin; aliamino-uracil; aza uracil; deaza uracil; N3 (metil)uracil; pseudo-UTP-1-2-etanska kiselina; pseudouracil; 4-tio-pseudo-UTP; 1-karboksimetil-pseudouridin; 1-metil-1-deaza-pseudouridin; 1-propinil-uridin; 1-taurinometil-1-metil-uridin; 1-taurinometil-4-tio-uridin; 1-taurinometil-pseudouridin; 2-metoksi-4-tiopseudouridin; 2-tio-1-metil-1-deaza-pseudouridin; 2-tio-1-metil-pseudouridin; 2-tio-5-aza-uridin; 2-tio-dihidropseudouridin; 2-tio-dihidrouridin; 2-tio-pseudouridin; 4-metoksi-2-tio-pseudouridin; 4-metoksi-pseudouridin; 4-tio-1-metil-pseudouridin; 4-tio-pseudouridin; 5-aza-uridin; dihidropseudouridin; (±)1-(2-hidroksipropil)pseudouridin TP; (2R)-1-(2-hidroksipropil)pseudouridin TP; (2S)-1-(2-hidroksipropil)pseudouridin TP; (E)-5-(2-bromovinil)ara-uridin TP; (E)-5-(2-bromo-vinil)uridin TP; (Z)-5-(2-bromo-vinil)ara-uridin TP; (Z)-5-(2-bromo-vinil)uridin TP; 1-(2,2,2-trifluoroetil)-pseudo-UTP; 1-(2,2,3,3,3-pentafluoropropil)pseudouridin TP; 1-(2,2-dietoksietil)pseudouridin TP; 1-(2,4,6-trimetilbenzil)pseudouridin TP; 1-(2,4,6-trimetil-benzil)pseudo-UTP; 1-(2,4,6-trimetilfenil)pseudo-UTP; 1-(2-amino-2-karboksietil)pseudo-UTP; 1-(2-aminoetil)pseudo-UTP; 1-(2-hidroksietil)pseudouridin TP; 1-(2-metoksietil)pseudouridin TP; 1-(3,4-bistrifluorometoksibenzil)pseudouridin TP; 1-(3,4-dimetoksibenzil)pseudouridin TP; 1-(3-amino-3-karboksipropil)pseudo-UT P; 1-(3-amino-propil)pseudo-UTP; 1-(3-ciklopropil-prop-2-inil)pseudouridin TP; 1-(4-amino-4-karboksibutil)pseudo-UTP; 1-(4-amino-benzil)pseudo-UTP; 1-(4-amino-butil)pseudo-UTP; 1-(4-amino-fenil)pseudo-UTP; 1-(4-azidobenzil)pseudouridin TP; 1-(4-bromobenzil)pseudouridin TP; 1-(4-hlorobenzil)pseudouridin TP; 1-(4-fluorobenzil)pseudouridin TP; 1-(4-jodobenzil)pseudouridin TP; 1-(4-metansulfonilbenzil)pseudouridin TP; 1-(4-metoksibenzil)pseudouridin TP; 1-(4-metoksibenzil)pseudo-UTP; 1-(4-metoksi-fenil)pseudo-UTP; 1-(4-metilbenzil)pseudouridin TP; 1-(4-metil-benzil)pseudo-UTP; 1-(4-nitrobenzil)pseudouridin TP; 1-(4-nitro-benzil)pseudo-UTP; 1(4-nitro-fenil)pseudo-UTP; 1-(4-tiometoksibenzil)pseudouridin TP; 1-(4-trifluorometoksibenzil)pseudouridin TP; 1-(4-trifluorometilbenzil)pseudouridin TP; 1-(5-aminopentil)pseudo-UTP; 1-(6-amino-heksil)pseudo-UTP; 1,6-dimetil-pseudo-UTP; 1-[3-(2-{2-[2-(2-aminoetoksi)-etoksi]-etoksi}-etoksi)-propionil]pseudouridin TP; 1-{3-[2-(2-aminoetoksi)-etoksi]-propionil}pseudouridin TP; 1-acetilpseudouridin TP; 1-alkil-6-(1-propinil)-pseudo-UTP; 1-alkil-6-(2-propinil)-pseudo-UTP; 1-alkil-6-alil-pseudo-UTP; 1-alkil-6-etinil-pseudo-UTP; 1-
2
alkil-6-homoalil-pseudo-UTP; 1-alkil-6-vinil-pseudo-UTP; 1-alilpseudouridin TP; 1-aminometilpseudo-UTP; 1-benzoilpseudouridin TP; 1-benziloksimetilpseudouridin TP; 1-benzil-pseudo-UTP; 1-biotinil-PEG2-pseudouridin TP; 1-biotinilpseudouridin TP; 1-butil-pseudo-UTP; 1-cijanometilpseudouridin TP; 1-ciklobutilmetil-pseudo-UTP; 1-ciklobutil-pseudo-UTP; 1-cikloheptilmetil-pseudo-UTP; 1-cikloheptil-pseudo-UTP; 1-cikloheksilmetil-pseudo-UTP; 1-cikloheksil-pseudo-UTP; 1-ciklooktilmetil-pseudo-UTP; 1-ciklooktil-pseudo-UTP; 1-ciklopentilmetil-pseudo-UTP; 1-ciklopentil-pseudo-UTP; 1-ciklopropilmetil-pseudo-UTP; 1-ciklopropil-pseudo-UTP; 1-etil-pseudo-UTP; 1-heksil-pseudo-UTP; 1-homoalilpseudouridin TP; 1-hidroksimetilpseudouridin TP; 1-izo-propil-pseudo-UTP; 1-Me-2-tio-pseudo-UTP; 1-Me-4-tiopseudo-UTP; 1-Me-alfa-tio-pseudo-UTP; 1-metansulfonilmetilpseudouridin TP; 1-metoksimetilpseudouridin TP; 1-metil-6-(2,2,2-trifluoroetil)pseudo-UTP; 1-metil-6-(4-morfolino)-pseudo-UTP; 1-metil-6-(4-tiomorfolino)-pseudo-UTP; 1-metil-6-(supstituisani fenil)pseudo-UTP; 1-metil-6-amino-pseudo-UTP; 1-metil-6-azido-pseudo-UTP; 1-metil-6-bromo-pseudo-UTP; 1-metil-6-butil-pseudo-UTP; 1-metil-6-hloro-pseudo-UTP; 1-metil-6-cijano-pseudo-UTP; 1-metil-6-dimetilamino-pseudo-UTP; 1-metil-6-etoksi-pseudo-UTP; 1-metil-6-etilkarboksilat-pseudo-UTP; 1-metil-6-etil-pseudo-UTP; 1-metil-6-fluoro-pseudo-UTP; 1-metil-6-formil-pseudo-UTP; 1-metil-6-hidroksiamino-pseudo-UTP; 1-metil-6-hidroksi-pseudo-UTP; 1-metil-6-jodo-pseudo-UTP; 1-metil-6-izo-propil-pseudo-UTP; 1-metil-6-metoksi-pseudo-UTP; 1-metil-6-metilamino-pseudo-UTP; 1-metil-6-fenil-pseudo-UTP; 1-metil-6-propil-pseudo-UTP; 1-metil-6-terc-butil-pseudo-UTP; 1-metil-6-tritluorometoksi-pseudo-UTP; 1-metil-6-trifluorometil-pseudo-UTP; 1-morfolinometilpseudouridin TP; 1-pentil-pseudo-UTP; 1-fenilpseudo-UTP; 1-pivaloilpseudouridin TP; 1-propargilpseudouridin TP; 1-propil-pseudo-UTP; 1-propinil-pseudouridin; 1-p-tolil-pseudo-UTP; 1-terc-butil-pseudo-UTP; 1-tiometoksimetilpseudouridin TP; 1-tiomorfolinometilpseudouridin TP; 1-trifluoroacetilpseudouridin TP; 1-trifluorometil-pseudo-UTP; 1-vinilpseudouridin TP; 2,2'-anhidro-uridin TP; 2'-bromo-dezoksiuridin TP; 2'-F-5-metil-2'-dezoksi-UTP; 2'-OMe-5-Me-UTP; 2'-OMe-pseudo-UTP; 2'-a-etiniluridin TP; 2'-a-triluorometiluridin TP; 2'-b-etiniluridin TP; 2'-btriluorometiluridin TP; 2'-dezoksi-2',2'-difluorouridin TP; 2'-dezoksi-2'-a-merkaptouridin TP; 2'-dezoksi-2'-a-tiometoksiuridin TP; 2'-dezoksi-2'-b-aminouridin TP; 2'-dezoksi-2'-b-azidouridin TP; 2'-dezoksi-2'-b-bromouridin TP; 2'-dezoksi-2'-b-hlorouridin TP; 2'-dezoksi-2'-b-fluorouridin TP; 2'-dezoksi-2'-b-jodouridin TP; 2'-dezoksi-2'-b-merkaptouridin TP; 2'-dezoksi-2'-btiometoksiuridin TP; 2-metoksi-4-tio-uridin; 2-metoksiuridin; 2'-O-metil-5-(1-propinil)uridin TP; 3-alkil-pseudo-UTP; 4'-azidouridin TP; 4'-karbociklični uridin TP; 4'-etiniluridin TP; 5-(1-propinil)ara-uridin TP; 5-(2-furanil)uridin TP; 5-cijanouridin TP; 5-dimetilaminouridin TP; 5'-homo-uridin TP; 5-jodo-2'-fluoro-dezoksiuridin TP; 5-feniletiniluridin TP; 5-trideuterometil-6deuterouridin TP; 5-trifluorometil-uridin TP; 5-vinilarauridin TP; 6-(2,2,2-trifluoroetil)-pseudo-UTP; 6-(4-morfolino)-pseudo-UTP; 6-(4-tiomorfolino)-pseudo-UTP; 6-(supstituisani-fenil)-pseudo-UTP; 6-amino-pseudo-UTP; 6-azido-pseudo-UTP; 6-bromo-pseudo-UTP; 6-butilpseudo-UTP; 6-hloro-pseudo-UTP; 6-cijano-pseudo-UTP; 6-dimetilamino-pseudo-UTP; 6-etoksi-pseudo-UTP; 6-etilkarboksilat-pseudo-UTP; 6-etil-pseudo-UTP; 6-fluoro-pseudo-UTP; 6-formil-pseudo-UTP; 6-hidroksiamino-pseudo-UTP; 6-hidroksi-pseudo-UTP; 6-jodo-pseudo-UT P; 6-izo-propil-pseudo-UTP; 6-metoksi-pseudo-UTP; 6-metilamino-pseudo-UTP; 6-metilpseudo-UTP; 6-fenil-pseudo-UTP; 6-fenil-pseudo-UTP; 6-propil-pseudo-UTP; 6-terc-butilpseudo-UTP; 6-trifluorometoksi-pseudo-UTP; 6-trifluorometil-pseudo-UTP; alfa-tio-pseudo-UTP; pseudouridin 1-(4-metilbenzensulfonska kiselina) TP; pseudouridin 1-(4-metilbenzojeva kiselina) TP; pseudouridin TP 1-[3-(2-etoksi)]propionska kiselina; pseudouridin TP 1-[3-{2-(2-[2-(2-etoksi)-etoksi]-etoksi)-etoksi}]propionska kiselina; pseudouridin TP 1-[3-{2-(2-[2-{2(2-etoksi)-etoksi}-etoksi]-etoksi)-etoksi}]propionska kiselina; pseudouridin TP 1-[3-{2-(2-[2-etoksi]-etoksi)-etoksi}]propionska kiselina; pseudouridin TP 1-[3-{2-(2-etoksi)-etoksi}] propionska kiselina; pseudouridin TP 1-metilfosfonska kiselina; pseudouridin TP 1-metilfosfonska kiselina dietil estar; pseudo-UTP-N1-3-propionska kiselina; pseudo-UTP-N1-4-butanska kiselina; pseudo-UTP-N1-pentanska kiselina; pseudo-UTP-N1-6-heksanska kiselina; pseudo-UTP-N1-7-heptanska kiselina; pseudo-UTP-N1-metil-p-benzojeva kiselina; pseudo-UTP-N1-p-benzojeva kiselina; vibutozin; hidroksivibutozin; izoviozin; peroksivibutozin; nepotpuno modifikovani hidroksivibutozin; 4-demetilviozin; 2,6-(diamino)purin; 1-(aza)-2-(tio)-3-(aza)-fenoksazin-1-il; 1,3-(diaza)-2-(okso)-fentiazin-1-il; 1,3-(diaza)-2-(okso)-fenoksazin-1-il; 1,3,5-(triaza)-2,6-(dioksa)-naftalen; 2 (amino)purin; 2,4,5-(trimetil)fenil; 2'metil, 2'amino, 2'azido, 2'fluro-citidin; 2'metil, 2'amino, 2'azido, 2'fluro-adenin; 2'metil, 2'amino, 2'azido, 2'fluro-uridin; 2'-amino-2'-dezoksiriboza; 2-amino-6-hloro-purin; 2-aza-inozinil; 2'-azido-2'-dezoksiriboza; 2'fluoro-2'-dezoksiriboza; 2'-fluoro-modifikovane baze; 2'-O-metil-riboza; 2-okso-7-aminopiridopirimidin-3-il; 2-okso-piridopirimidin-3-il; 2-piridinon; 3 nitropirol; 3-(metil)-7-(propinil)izokarbostirilil; 3-(metil)izokarbostirilil; 4-(fluoro)-6-(metil)benzimidazol; 4-(metil)benzimidazol; 4-(metil)indolil; 4,6-(dimetil)indolil; 5 nitroindol; 5 supstituisani pirimidini; 5-(metil)izokarbostirilil; 5-nitroindol; 6-(aza)pirimidin; 6-(azo)timin; 6-(metil)-7-(aza)indolil; 6-hloro-purin; 6-fenil-pirolo-pirimidin-2-on-3-il; 7-(aminoalkilhidroksi)-1-(aza)-2-(tio)-3-(aza)-fentiazin-1-il; 7-(aminoalkilhidroksi)-1-(aza)-2-(tio)-3-(aza)-fenoksazin-1-il; 7-(aminoalkilhidroksi)-1,3-(diaza)-2-(okso)-fenoksazin-1-il; 7-(aminoalkilhidroksi)-1,3-(diaza)-2-(okso)-fentiazin-1-il; 7-(aminoalkilhidroksi)-1,3-(diaza)-2-(okso)-fenoksazin-1-il; 7-(aza)indolil; 7-(guanidinijumalkilhidroksi)-1-(aza)-2-(tio)-3-(aza)-fenoksazinl-il; 7-(guanidinijumalkilhidroksi)-1-(aza)-2-(tio)-3-(aza)-fentiazin-1-il; 7-(guanidinijumalkilhidroksi)-
4
1-(aza)-2-(tio)-3-(aza)-fenoksazin-1-il; 7-(guanidinijumalkilhidroksi)-1,3-(diaza)-2-(okso)-fenoksazin-1-il; 7-(guanidinijumalkil-hidroksi)-1,3-(diaza)-2-(okso)-fentiazin-1-il; 7-(guanidinijumalkilhidroksi)-1,3-(diaza)-2-(okso)-fenoksazin-1-il; 7-(propinil)izokarbostirilil; 7-(propinil)izokarbostirilil, propinil-7-(aza)indolil; 7-deaza-inozinil; 7-supstituisani 1-(aza)-2-(tio)-3-(aza)-fenoksazin-1-il; 7-supstituisani 1,3-(diaza)-2-(okso)-fenoksazin-1-il; 9-(metil)-imidizopiridinil; aminoindolil; antracenil; bis-orto-(aminoalkilhidroksi)-6-fenil-pirolo-pirimidin-2-on-3-il; bis-orto-supstituisani-6-fenil-pirolo-pirimidin-2-on-3-il; difluorotolil; hipoksantin; imidizopiridinil; inozinil; izokarbostirilil; izoguanizin; N2-supstituisani purini; N6-metil-2-aminopurin; N6-supstituisani purini; N-alkilovani derivat; naftalenil; nitrobenzimidazolil; nitroimidazolil; nitroindazolil; nitropirazolil; nubularin; O6-supstituisani purini; O-alkilovani derivat; orto-(aminoalkilhidroksi)-6-fenil-pirolo-pirimidin-2-on-3-il; orto-supstituisani-6-fenilpirolo-pirimidin-2-on-3-il; oksoformicin TP; para-(aminoalkilhidroksi)-6-fenil-pirolo-pirimidin-2-on-3-il; para-supstituisani-6-fenil-pirolo-pirimidin-2-on-3-il; pentacenil; fenantracenil; fenil; propinil-7-(aza)indolil; pirenil; piridopirimidin-3-il; piridopirimidin-3-il, 2-okso-7-aminopiridopirimidin-3-il; pirolo-pirimidin-2-on-3-il; pirolopirimidinil; pirolopirizinil; stilbenzil; supstituisani 1,2,4-triazoli; tetracenil; tubercidin; ksantin; ksantozin-5'-TP; 2-tio-zebularin; 5-aza-2-tio-zebularin; 7-deaza-2-amino-purin; piridin-4-on ribonukleozid; 2-amino-ribozid-TP; formicin A TP; formicin B TP; pirolozin TP; 2'OH-ara-adenozin TP; 2'-OH-ara-citidin TP; 2'OH-ara-uridin TP; 2'OH-ara-guanozin TP; 5-(2-karbometoksivinil)uridin TP; i N6-(19-aminopentaoksanonadecil)adenozin TP.
[0216] U nekim primerima izvođenja, polinukleotidi (tj., RNK polinukleotidi, tj., iRNK polinukleotidi) uključuju kombinaciju najmanje dve (npr., 2, 3,4 ili više) gore pomenutih modifikovanih nukleobaza.
[0217] U nekim primerima izvođenja, modifikovane nukleobaze u polinukleotidima (tj., RNK polinukleotidima, tj., iRNK polinukleotidima) su odabrane iz grupe koja se sastoji od pseudouridina (ψ), N1-metilpseudouridina (m<1>ψ), N1-etilpseudouridina, 2-tiouridina, 4-tiouridina, 5-metilcitozina, 2-tio-1-metil-1-deaza-pseudouridina, 2-tio-1-metil-pseudouridina, 2-tio-5-azauridina, 2-tio-dihidropseudouridina, 2-tio-dihidrouridina, 2-tio-pseudouridina, 4-metoksi-2-tiopseudouridina, 4-metoksi-pseudouridina, 4-tio-1-metil-pseudouridina, 4-tio-pseudouridina, 5-azauridina, dihidropseudouridina, 5-metoksiuridina i 2'-O-metil uridina. U nekim primerima izvođenja, polinukleotidi (tj., RNK polinukleotidi, tj., iRNK polinukleotidi) uključuju kombinaciju najmanje dve (npr., 2, 3,4 ili više) gore pomenutih modifikovanih nukleobaza.
[0218] U nekim primerima izvođenja, modifikovane nukleobaze u polinukleotidima (tj., RNK polinukleotidima, tj., iRNK polinukleotidima) su odabrane iz grupe koja se sastoji od 1-metilpseudouridina (m<1>ψ), 5-metoksi-uridina (mo<5>U), 5-metil-citidina (m<5>C), pseudouridina (ψ), α-tioguanozina i α-tio-adenozina. U nekim primerima izvođenja, polinukleotidi uključuju kombinaciju najmanje dve (npr., 2, 3,4 ili više) gore pomenutih modifikovanih nukleobaza.
[0219] U nekim primerima izvođenja, polinukleotidi (tj., RNK polinukleotidi, tj., iRNK polinukleotidi) sadrže pseudouridin (ψ) i 5-metil-citidin (m<5>C). U nekim primerima izvođenja, polinukleotidi (tj., RNK polinukleotidi, tj., iRNK polinukleotidi) sadrže 1-metil-pseudouridin (m<1>ψ). U nekim primerima izvođenja, polinukleotidi (tj., RNK polinukleotidi, tj., iRNK polinukleotidi) sadrže 1-metil-pseudouridin (m<1>ψ) i 5-metil-citidin (m<5>C). U nekim primerima izvođenja, polinukleotidi (tj., RNK polinukleotidi, tj., iRNK polinukleotidi) sadrže 2-tiouridin (s<2>U). U nekim primerima izvođenja, polinukleotidi (tj., RNK polinukleotidi, tj., iRNK polinukleotidi) sadrže 2-tiouridin i 5-metil-citidin (m<5>C). U nekim primerima izvođenja, polinukleotidi (tj., RNK polinukleotidi, tj., iRNK polinukleotidi) sadrže metoksi-uridin (mo<5>U). U nekim primerima izvođenja, polinukleotidi (tj., RNK polinukleotidi, tj., iRNK polinukleotidi) sadrže 5-metoksi-uridin (mo<5>U) i 5-metil-citidin (m<5>C). U nekim primerima izvođenja, polinukleotidi (tj., RNK polinukleotidi, tj., iRNK polinukleotidi) sadrže 2'-O-metil uridin. U nekim primerima izvođenja polinukleotidi (tj., RNK polinukleotidi, tj., iRNK polinukleotidi) sadrže 2'-O-metil uridin i 5-metil-citidin (m<5>C). U nekim primerima izvođenja, polinukleotidi (tj., RNK polinukleotidi, tj., iRNK polinukleotidi) sadrže N6-metil-adenozin (m<6>A). U nekim primerima izvođenja, polinukleotidi (tj., RNK polinukleotidi, tj., iRNK polinukleotidi) sadrže N6-metiladenozin (m<6>A) i 5-metil-citidin (m<5>C).
[0220] U nekim primerima izvođenja, polinukleotidi (tj., RNK polinukleotidi, tj., iRNK polinukleotidi) su ravnomerno modifikovani (npr., potpuno modifikovani, modifikovani duž cele sekvence) određenom modifikacijom. Na primer, polinukleotid može da bude ravnomerno modifikovan 5-metil-citidinom (m<5>C), što znači da su svi citozinski ostaci u sekvenci iRNK zamenjeni 5-metil-citidinom (m<5>C), Slično, polinukleotid može da bude ravnomerno modifikovan na bilo kom tipu nukleozidnog ostatka prisutnog u sekvenci zamenom modifikovanim ostatkom kao što su oni navedeni u prethodnom tekstu.
[0221] Ilustrativne nukleobaze i nukleozidi koji imaju modifikovan citozin uključuju N4-acetilcitidin (ac4C), 5-metil-citidin (m<5>C), 5-halo-citidin (npr., 5-jodo-citidin), 5-hidroksimetil-citidin (hm5C), 1-metil-pseudoizocitidin, 2-tio-citidin (s2C) i 2-tio-5-metil-citidin.
[0222] U nekim primerima izvođenja, modifikovana nukleobaza je modifikovani uridin. Ilustrativne nukleobaze i u nekim primerima izvođenja, modifikovana nukleobaza je modifikovani citozin. Nukleozidi koji imaju modifikovani uridin uključuju 5-cijano uridin i 4'-tio uridin.
[0223] U nekim primerima izvođenja, modifikovana nukleobaza je modifikovani adenin. Ilustrativne nukleobaze i nukleozidi koji imaju modifikovani adenin uključuju 7-deaza-adenin, 1-metil-adenozin (m1A), 2-metil-adenin (m2A) i N6-metil-adenozin (m6A).
[0224] U nekim primerima izvođenja, modifikovana nukleobaza je modifikovani guanin. Ilustrativne nukleobaze i nukleozidi koji imaju modifikovani guanin uključuju inozin (I), 1-metilinozin (m1I), viozin (imG), metilviozin (mimG), 7-deaza-guanozin, 7-cijano-7-deaza-guanozin (preQ0), 7-aminometil-7-deaza-guanozin (preQ1), 7-metil-guanozin (m7G), 1-metil-guanozin (m1G), 8-okso-guanozin, 7-metil-8-okso-guanozin.
[0225] Polinukleotidi predmetnog prikaza mogu da budu delimično ili potpuno modifikovani celom dužinom molekula. Na primer, jedan ili više ili svi nukleotidi datog tipa (npr., purin ili pirimidin, ili bilo koji jedan ili više ili svi A, G, U, C) mogu da budu ravnomerno modifikovani u polinukleotidu prikaza, ili u datom unapred određenom regionu njegove sekvence (npr., u iRNK uključujući ili isključujući poliA rep). U nekim primerima izvođenja, svi nukleotidi X u polinukleotidu predmetnog prikaza (ili u datom regionu njegove sekvence) su modifikovani nukleotidi, pri čemu X može da bude bilo koji od nukleotida A, G, U, C, ili bilo koji od kombinacija A+G, A+U, A+C, G+U, G+C, U+C, A+G+U, A+G+C, G+U+C ili A+G+C.
[0226] Polinukleotid može da sadrži od oko 1% do oko 100% modifikovanih nukleotida (ili u odnosu na ukupni sadržaj nukleotida, ili u odnosu na jedan ili više tipova nukleotida, tj., bilo koji ili više od A, G, U ili C) ili bilo koji procenat između ovih vrednosti (npr., od 1% do 20%, od 1% do 25%, od 1% do 50%, od 1% do 60%, od 1% do 70%, od 1% do 80%, od 1% do 90%, od 1% do 95%, od 10% do 20%, od 10% do 25%, od 10% do 50%, od 10% do 60%, od 10% do 70%, od 10% do 80%, od 10% do 90%, od 10% do 95%, od 10% do 100%, od 20% do 25%, od 20% do 50%, od 20% do 60%, od 20% do 70%, od 20% do 80%, od 20% do 90%, od 20% do 95%, od 20% do 100%, od 50% do 60%, od 50% do 70%, od 50% do 80%, od 50% do 90%, od 50% do 95%, od 50% do 100%, od 70% do 80%, od 70% do 90%, od 70% do 95%, od 70% do 100%, od 80% do 90%, od 80% do 95%, od 80% do 100%, od 90% do 95%, od 90% do 100%, i od 95% do 100%). Bilo koji preostali procenat se pripisuje nemodifikovanom A, G, U, ili C.
[0227] Polinukleotidi mogu da sadrže najmanje 1% i najviše 100% modifikovanih nukleotida, ili bilo koji procenat između ovih vrednosti, kao što je najmanje 5% modifikovanih nukleotida, najmanje 10% modifikovanih nukleotida, najmanje 25% modifikovanih nukleotida, najmanje 50% modifikovanih nukleotida, najmanje 80% modifikovanih nukleotida, ili najmanje 90% modifikovanih nukleotida. Na primer, polinukleotidi mogu da sadrže modifikovani pirimidin kao što je modifikovani uracil ili citozin. U nekim primerima izvođenja, najmanje 5%, najmanje 10%, najmanje 25%, najmanje 50%, najmanje 80%, najmanje 90% ili 100% uracila u polinukleotidu je zamenjeno modifikovanim uracilom (npr., 5-supstituisanim uracilom). Modifikovan uracil može da bude zamenjen jedinjenjem koje ima jednu jedinstvenu strukturu, ili može da bude zamenjen mnoštvom jedinjenja koja imaju različite strukture (npr., 2, 3, 4 ili više jedinstvenih struktura). U nekim primerima izvođenja, najmanje 5%, najmanje 10%, najmanje 25%, najmanje 50%, najmanje 80%, najmanje 90% ili 100% citozina u polinukleotidu je zamenjeno modifikovanim citozinom (npr., 5-supstituisanim citozinom). Modifikovani citozin može da bude zamenjen jedinjenjem koje ima jednu jedinstvenu strukturu, ili može da bude zamenjen mnoštvom jedinjenja koja imaju različite strukture (npr., 2, 3, 4 ili više jedinstvenih struktura).
[0228] Prema tome, u nekim primerima izvođenja, RNK (tj., iRNK) vakcine sadrže 5'UTR element, opciono kodon-optimizovani otvoreni okvir čitanja, i 3'UTR element, poli(A) sekvencu i/ili poliadenilacioni signal pri čemu RNK nije hemijski modifikovana.
[0229] U nekim primerima izvođenja, modifikovana nukleobaza je modifikovani uracil. Ilustrativne nukleobaze i nukleozidi koji imaju modifikovani uracil uključuju pseudouridin (ψ), piridin-4-on ribonukleozid, 5-aza-uridin, 6-aza-uridin, 2-tio-5-aza-uridin, 2-tio-uridin (s<2>U), 4-tiouridin (s<4>U), 4-tio-pseudouridin, 2-tio-pseudouridin, 5-hidroksi-uridin (ho<5>U), 5-aminoalil-uridin, 5-halo-uridin (npr., 5-jodo-uridin ili 5-bromo-uridin), 3-metil-uridin (m<3>U), 5-metoksi-uridin (mo<5>U), uridin 5-oksisirćetnu kiselinu (cmo<5>U), metil estar uridin 5-oksisirćetne kiseline (mcmo<5>U), 5-karboksimetil-uridin (cm<5>U), 1-karboksimetil-pseudouridin, 5-karboksihidroksimetil-uridin (chm<5>U), 5-karboksihidroksimetil-uridinmetil estar (mchm<5>U), 5-metoksikarbonilmetil-uridin (mcm<5>U), 5-metoksikarbonilmetil-2-tio-uridin (mcm<5>s<2>U), 5-aminometil-2-tio-uridin (nm<5>s<2>U), 5-metilaminometil-uridin (mnm<5>U), 5-metilaminometil-2-tiouridin (mnm<5>s<2>U), 5-metilaminometil-2-seleno-uridin (mnm<5>se<2>U), 5-karbamoilmetil-uridin (ncm<5>U), 5-karboksimetilaminometil-uridin (cmnm<5>U), 5-karboksimetilaminometil-2-tio-uridin (cmnm<5>s<2>U), 5-propinil-uridin, 1-propinil-pseudouridin, 5-taurinometil-uridin (τm<5>U), 1-taurinometil-pseudouridin, 5-taurinometil-2-tio-uridin(τm<5>s<2>U), 1-taurinometil-4-tiopseudouridin, 5-metil-uridin (m<5>U, tj., koji ima nukleobazu dezoksitimin), 1-metil-pseudouridin (m<1>ψ), 5-metil-2-tio-uridin (m<5>s<2>U), 1-metil-4-tio-pseudouridin (m<1>s<4>ψ), 4-tio-1-metilpseudouridin, 3-metil-pseudouridin (m<3>ψ), 2-tio-1-metil-pseudouridin, 1-metil-1-deazapseudouridin, 2-tio-1-metil-1-deaza-pseudouridin, dihidrouridin (D), dihidropseudouridin, 5,6-dihidrouridin, 5-metil-dihidrouridin (m<5>D), 2-tio-dihidrouridin, 2-tio-dihidropseudouridin, 2-metoksi-uridin, 2-metoksi-4-tio-uridin, 4-metoksi-pseudoufidin, 4-metoksi-2-tio-pseudouridin, N1-metil-pseudouridin, 3-(3-amino-3-karboksipropil)uridin (acp<3>U), 1-metil-3-(3-amino-3-karboksipropil)pseudouridin (acp<3>Ψ), 5-(izopentenilaminometil)uridin (inm<5>U), 5-(izopentenilaminometil)-2-tio-uridin (inm<5>S<2>U), α-tio-uridin, 2'-O-metil-uridin (Um), 5,2'-O-dimetil-uridin (m<5>Um), 2'-O-metil-pseudouridin (ψm), 2-tio-2'-O-metil-uridin (s<2>Um), 5-metoksikarbonilmetil-2'-O-metil-uridin (mcm<5>Um), 5-karbamoilmetil-2'-O-metil-uridin (ncm<5>Um), 5-karboksimetilaminometil-2'-O-metil-uridin (cmnm<5>Um), 3,2'-O-dimetil-uridin (m<3>Um), i 5-(izopentenilaminometil)-2'-O-metil-uridin (inm<5>Um), 1-tio-uridin, dezoksitimidin, 2'F-ara-uridin, 2'-F-uridin, 2'-OH-ara-uridin, 5-(2-karbometoksivinil) uridin, i 5-[3-(1-E-propenilamino)]uridin.
[0230] U nekim primerima izvođenja, modifikovana nukleobaza je modifikovani citozin. Ilustrativne nukleobaze i nukleozidi koji imaju modifikovani citozin uključuju 5-aza-citidin, 6-aza-citidin, pseudoizocitidin, 3-metil-citidin (m<3>C), N4-acetil-citidin (ac<4>C), 5-formil-citidin (f<5>C), N4-metil-citidin (m<4>C), 5-metil-citidin (m<5>C), 5-halo-citidin (npr., 5-jodo-citidin), 5-hidroksimetil-citidin (hm<5>C), 1-metil-pseudoizocitidin, pirolo-citidin, pirolo-pseudoizocitidin, 2-tio-citidin (s<2>C), 2-tio-5-metil-citidin, 4-tio-pseudoizocitidin, 4-tio-1-metil-pseudoizocitidin, 4-tio-1-metil-1-deaza-pseudoizocitidin, 1-metil-1-deaza-pseudoizocitidin, zebularin, 5-azazebularin, 5-metil-zebularin, 5-aza-2-tio-zebularin, 2-tio-zebularin, 2-metoksi-citidin, 2-metoksi-5-metil-citidin, 4-metoksi-pseudoizocitidin, 4-metoksi-1-metil-pseudoizocitidin, lizidin (k2C), αtio-citidin, 2'-O-metil-citidin (Cm), 5,2'-O-dimetil-citidin (m<5>Cm), N4-acetil-2'-O-metil-citidin (ac<4>Cm), N4,2'-O-dimetil-citidin (m<4>Cm), 5-formil-2'O-metil-citidin (f<5>Cm), N4,N4,2'-O-trimetilcitidin (m<4>2Cm), 1-tio-citidin, 2'-F-ara-citidin, 2'-F-citidin i 2'-OH-ara-citidin.
[0231] U nekim primerima izvođenja, modifikovana nukleobaza je modifikovani adenin. Ilustrativne nukleobaze i nukleozidi koji imaju modifikovani adenin uključuju 2-amino-purin, 2,6-diaminopurin, 2-amino-6-halo-purin (npr., 2-amino-6-hloro-purin), 6-halo-purin (npr., 6-hloropurin), 2-amino-6-metil-purin, 8-azido-adenozin, 7-deaza-adenin, 7-deaza-8-aza-adenin, 7-deaza-2-amino-purin, 7-deaza-8-aza-2-amino-purin, 7-deaza-2,6-diaminopurin, 7-deaza-8-aza-2,6-diaminopurin, 1-metil-adenozin (m<1>A), 2-metil-adenin (m<2>A), N6-metil-adenozin (m<6>A), 2-metiltio-N6-metil-adenozin (ms<2>m<6>A), N6-izopentenil-adenozin (i<6>A), 2-metiltio-N6-izopenteniladenozin (ms<2>i<6>A), N6-(cis-hidroksiizopentenil)adenozin (io<6>A), 2-metiltio-N6-(cishidroksiizopentenil)adenozin (ms<2>io<6>A), N6-glicinilkarbamoil-adenozin (g<6>A), N6-treonilkarbamoil-adenozin (t<6>A), N6-metil-N6-treonilkarbamoil-adenozin m<6>t<6>A), 2-metiltio-N6-treonilkarbamoil-adenozin (ms<2>g<6>A), N6,N6-dimetil-adenozin (m<6>2A), N6-hidroksinorvalilkarbamoil-adenozin (hn<6>A), 2-metiltio-N6-hidroksinorvalilkarbamoil-adenozin (ms<2>hn<6>A), N6-acetil-adenozin (ac<6>A), 7-metil-adenin, 2-metiltio-adenin, 2-metoksi-adenin, α-tioadenozin, 2'-O-metil-adenozin (Am), N6,2'-O-dimetil-adenozin (m<6>Am), N6,N6,2'-O-trimetiladenozin (n<6>2Am), 1,2'-O-dimetil-adenozin (m<1>Am), 2'-O-riboziladenozin (fosfat) (Ar(p)), 2-amino-N6-metil-purin, 1-tio-adenozin, 8-azido-adenozin, 2'-F-ara-adenozin, 2'-F-adenozin, 2'-OH-ara-adenozin i N6-(19-amino-pentaoksanonadecil)-adenozin.
[0232] U nekim primerima izvođenja, modifikovana nukleobaza je modifikovani guanin. Ilustrativne nukleobaze i nukleozidi koji imaju modifikovani guanin uključuju inozin (I), 1-metilinozin (m<1>I), viozin (imG), metilmiozin (mimG), 4-demetil-viozin (imG-14), izoviozin (imG2), vibutozin (yW), peroksivibutozin (o2yW), hidroksivibutozin (OhyW), nepotpuno modifikovani hidroksivibutozin (OhyW*), 7-deaza-guanozin, kjuozin (Q), epoksikjuozin (oQ), galaktozilkjuozin (galQ), manozil-kjuozin (manQ), 7-cijano-7-deaza-guanozin (preQo), 7-aninometil-7-deaza-guanozin (preQ1), arheozin (G+), 7-deaza-8-aza-guanozin, 6-tio-guanozin, 6-tio-7-deazaguanozin, 6-tio-7-deaza-8-aza-guanozin, 7-metil-guanozin (m<7>G), 6-tio-7-metil-guanozin, 7-metil-inozin, 6-metoksi-guanozin, 1-metil-guanozin (m<1>G), N2-metil-guanozin (m<2>G), N2,N2-dimetil-guanozin (m<2>2G), N2,7-dimetil-guanozin (m<2,7>G), N2, N2,7-dimetil-guanozin (m<2,2,7G>), 8-okso-guanozin, 7-metil-8-okso-guanozin, 1-metil-6-tio-guanozin, N2-metil-6-tio-guanozin, N2,N2-dimetil-6-tio-guanozin, α-tio-guanozin, 2'-O-metil-guanozin (Gm), N2-metil-2'-O-metilguanozin (m<2>Gm), N2,N2-dimetil-2'-O-metil-guanozin (m<2>2Gm), 1-metil-2'-O-metil-guanozin (m<1>Gm), N2,7-dimetil-2'-O-metil-guanozin (m<2,7>Gm), 2'-O-metil-inozin (Im), 1,2'-O-dimetilinozin (m<1>Im), 2'-O-ribozilguanozin (fosfat) (Gr(p)), 1-tio-guanozin, O6-metil-guanozin, 2'-F-araguanozin i 2'-F-guanozin.
Mutanti N-vezanih glikozilacionih mesta
[0233] N-vezani glikani virusnih proteina imaju značajne uloge u modulaciji imunskog odgovora. Glikani mogu da budu važni za održavanje odgovarajućih antigenskih konformacija, štiteći potencijalne epitope za neutralizaciju i mogu da utiču na proteolitičku osetljivost proteina. Neki virusi imaju pretpostavljena N-vezana glikozilatna mesta. Delecija ili modifikacija N-vezanog glikozilatnog mesta može da poboljšati imunski odgovor. Dakle, predmetni prikaz obezbeđuje, u nekim primerima izvođenja, RNK (tj., iRNK) vakcine koje sadrže nukleinske kiseline (tj., iRNK) koje kodiraju antigene polipeptide koji sadrže deleciju ili modifikaciju na jednom ili više N-vezanih glikozilacionih mesta.
In vitro transkripcija RNK (tj., iRNK)
[0234] Vakcine protiv respiratornih virusa predmetnog prikaza sadrže najmanje jedan RNK polinukleotid, kao što je iRNK (tj., modifikovana iRNK). iRNK, na primer, se transkribuje in vitro sa DNK matrice, označene kao "in vitro transkripciona matrica". U nekim primerima izvođenja, in vitro transkripciona matrica kodira 5' netranslatirani (UTR) region, sadrži otvoreni okvir čitanja, i kodira 3' UTR i poliA rep. Konkretna kompozicija sekvence nukleinske kiseline i dužina in vitro transkripcione matrice zavisiće od iRNK kodirane matricom.
[0235] "5' netranslatirani region" (5'UTR) se odnosi na region iRNK koji se nalazi neposredno ushodno (tj., 5') od start kodona (tj., prvog kodona iRNK transkripta translatiranog ribozomom) koji ne kodira polipeptid.
[0236] "3' netranslatirani region" (3'UTR) se odnosi na region iRNK koji se nalazi neposredno nishodno (tj., 3') od stop kodona (tj., kodona iRNK transkripta koji signalizira završetak translacije) koji ne kodira polipeptid.
[0237] "Otvoreni okvir čitanja" je kontinuirani niz DNK koji počinje start kodonom (npr., metionin (ATG)), i završava se stop kodonom (npr., TAA, TAG ili TGA) i kodira polipeptid.
[0238] "PoliA rep" je region iRNK koji se nalazi nishodno, npr., neposredno nishodno (tj., 3'), od 3' UTR koji sadrži višestruke, uzastopne adenozin monofosfate. PoliA rep može da sadrži 10 do 300 adenozin monofosfata. Na primer, poliA rep može da sadrži 10, 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90, 100, 110, 120, 130, 140, 150, 160, 170, 180, 190, 200, 210, 220, 230, 240, 250, 260, 270, 280, 290 ili 300 adenozin monofosfata. U nekim primerima izvođenja, poliA rep sadrži 50 do 250 adenozin monofosfata. U relevantnim biološkim okruženjima (npr., u ćelijama, in vivo) poli(A) rep funkcioniše tako što štiti iRNK od enzimske degradacije, npr., u citoplazmi, i pomaže u terminaciji transkripcije, transportu iRNK iz nukleusa i translaciji.
[0239] U nekim primerima izvođenja, polinukleotid uključuje 200 do 3000 nukleotida. Na primer, polinukleotid može da uključuje 200 do 500, 200 do 1000, 200 do 1500, 200 do 3000, 500 do 1000, 500 do 1500, 500 do 2000, 500 do 3000, 1000 do 1500, 1000 do 2000, 1000 do 3000, 1500 do 3000, ili 2000 do 3000 nukleotida.
Flagelinski adjuvansi
[0240] Flagelin je monomerni protein od približno 500 aminokiselina koji polimerizuje da bi formirao flagele povezane sa kretanjem bakterija. Flagelin eksprimiraju različite bakterije sa flagelama (Salmonella typhimurium na primer) kao i bakterije bez flagela (kao što je Escherichia coli). U detektovanju flagelina ćelijama urođenog imunskog sistema (dendritske ćelije, makrofagi, itd.) posreduje Toll-u sličan receptor 5 (TLR5) kao i Nod-slični receptori (NLR) Ipaf i Naip5. Utvrđeno je da TLR i NLR igraju ulogu u aktivaciji urođenog imunskog odgovora i adaptivnog imunskog odgovora. Kao takav, flagelin ima efekat adjuvansa u vakcini.
[0241] Sekvence nukleotida i aminokiselina koje kodiraju poznate polipeptide flagelina su javno dostupne u bazi podataka NCBI GenBank. Poznate su sekvence flagelina iz S. Typhimurium, H. Pylori, V. Cholera, S. marcesens, S. flexneri, T. Pallidum, L. pneumophila, B. burgdorferi, C. difficile, R. melloti, A. tumefaciens, R. lupini, B. clarridgeiae, P. Mirabilis, B. subtilus, L. monocytogenes, P. aeruginosa i E. coli, između ostalih.
[0242] Polipeptid flagelina, kako se ovde koristi, odnosi se na protein flagelina pune dužine, njegove imunogene fragmente i peptide koji imaju najmanje 50% sekvence identične sa proteinom flagelina ili njegovim imunogenim fragmentima. Primeri flagelinskih proteina uključuju flagelin iz Salmonella typhi (UniPro ulazni broj: Q56086), Salmonella typhimurium (A0A0C9DG09),
1
Salmonella enteritidis (A0A0C9BAB7) i Salmonella choleraesuis (Q6V2X8) i SEQ ID NO: 54-56 (Tabela 17). U nekim primerima izvođenja, polipeptid flagelina ima najmanje 60%, 70%, 75%, 80%, 90%, 95%, 97%, 98% ili 99% identičnosti sekvence sa proteinom flagelina ili njegovim imunogenim fragmentima.
[0243] U nekim primerima izvođenja, polipeptid flagelina je imunogeni fragment. Imunogeni fragment je deo proteina flagelina koji izaziva imunski odgovor. U nekim primerima izvođenja, imunski odgovor je TLR5 imunski odgovor. Primer imunogenog fragmenta je protein flagelina u kome je ceo ili deo zglobnog regiona deletiran ili zamenjen drugim aminokiselinama. Na primer, antigeni polipeptid može da bude umetnut u zglobni region. Zglobni region su hipervarijabilni regioni flagelina. Zglobni regioni flagelina se takođe nazivaju "D3 domen ili region", "domen ili region propelera", "hipervarijabilni domen ili region" i "varijabilni domen ili region". "Najmanje deo zglobnog regiona", kako se ovde koristi, odnosi se na bilo koji deo zglobnog regiona flagelina, ili na ceo zglobni region. U drugim primerima izvođenja imunogeni fragment flagelina je C-terminalni fragment flagelina od 20, 25, 30, 35 ili 40 aminokiselina.
[0244] Monomer flagelina formiraju domeni D0 do D3. D0 i D1, koji formiraju dršku, sačinjeni su od tandemskih dugih alfa spirala i visoko su očuvani među različitim bakterijama. Domen D1 uključuje nekoliko nizova aminokiselina koje su korisne za aktivaciju TLR5. Ceo domen D1 ili jedan ili više aktivnih regiona unutar domena su imunogeni fragmenti flagelina. Primeri imunogenih regiona unutar domena D1 uključuju ostatke 88-114 i ostatke 411-431 (u FliC flagelinu bakterije Salmonella typhimurium. Unutar 13 aminokiselina u regionu 88-100, dozvoljeno je najmanje 6 supstitucija između flagelina salmonele i drugih flagelina, tako da aktivacija TLR5 ostane očuvana. Dakle, imunogeni fragmenti flagelina uključuju sekvence slične flagelinu koje aktiviraju TLR5 i sadrže motiv od 13 aminokiselina koji je 53% ili više identičan sekvenci salmonele za ostatke 88-100 u FliC (LQRVRELAVQSAN; SEQ ID NO: 84).
[0245] U nekim primerima izvođenja, RNK (tj., iRNK) vakcina uključuje RNK koja kodira fuzioni protein flagelina i jednog ili više antigenih polipeptida. "Fuzioni protein", kako se ovde koristi, odnosi se na povezivanje dve komponente konstrukta. U nekim primerima izvođenja, karboksikraj antigenog polipeptida je fuzionisan ili vezan za amino-kraj polipeptida flagelina. U drugim primerima izvođenja, amino-kraj antigenog polipeptida je fuzionisan ili vezan za karboksi-kraj polipeptida flagelina. Fuzioni protein može da uključuje, na primer, jedan, dva, tri, četiri, pet, šest ili više flagelinskih polipeptida vezanih za jedan, dva, tri, četiri, pet, šest ili više antigenih polipeptida. Kada su dva ili više polipeptida flagelina i/ili dva ili više antigena polipeptida povezana, takav konstrukt se može nazvati "multimerom".
[0246] Svaka od komponenti fuzionog proteina može da bude direktno povezana jedna sa drugom ili mogu da budu povezane preko linkera. Na primer, linker može da bude aminokiselinski linker.
2
Aminokiselinski linker kodiran RNK (tj., iRNK) vakcinom za povezivanje komponenti fuzionog proteina može da uključuje, na primer, najmanje jednog člana izabranog iz grupe koja se sastoji od lizinskog ostatka, ostatka glutaminske kiseline, serinskog ostatka i argininskog ostatka. U nekim primerima izvođenja, linker ima dužinu od 1-30, 1-25, 1-25, 5-10, 5, 15 ili 5-20 aminokiselina.
[0247] U drugim primerima izvođenja RNK (tj., iRNK) vakcina uključuje najmanje dva odvojena RNK polinukleotida, jedan koji kodira jedan ili više antigenih polipeptida i drugi koji kodira flagelinski polipeptid, pri čemu su najmanje dva RNK polinukleotida ko-formulisana u nosaču kao što je lipidna nanočestica.
RNK (tj., iRNK) vakcine širokog spektra
[0248] Mogu da postoje situacije u kojima su osobe izložene riziku od infekcije sa više od jednog soja hMPV, PIV3, RSV, MeV i/ili BetaCoV (uključujući MERS-CoV, SARS-CoV, HCoV-OC43, HCoV-229E, HCoV-NL63, HCoV-NL, HCoV-NH i/ili HCoV-HKU1). RNK (tj., iRNK) terapijske vakcine su posebno podložne kombinovanim pristupima vakcinacije zbog brojnih faktora uključujući, ali ne ograničavajući se na, brzinu proizvodnje, sposobnost brze adaptacije vakcina za prilagođavanje uočenoj geografskoj pretnji, i slično. Štaviše, budući da vakcine koriste ljudsko telo za proizvodnju antigenog proteina, vakcine su pogodne za proizvodnju većih, složenijih antigenih proteina, omogućavajući pravilno savijanje, površinsku ekspresiju, prezentaciju antigena, itd., kod humanog subjekta. Za zaštitu od više od jednog soja hMPV, PIV3, RSV, MeV i/ili BetaCoV (uključujući MERS-CoV, SARS-CoV, HCoV-OC43, HCoV-229E, HCoV-NL63, HCoV-NL, HCoV-NH i/ili HCoV-HKU1), može da se primeni kombinovana vakcina koja uključuje RNK (tj., iRNK) koja kodira najmanje jedan antigeni polipeptid protein (ili njegov antigeni deo) prvog respiratornog virusa i dalje uključuje RNK koja kodira najmanje jedan antigeni polipeptid protein (ili njegov antigeni deo) drugog respiratornog virusa. RNK (tj., iRNK) može da bude ko-formulisana, na primer, u jednoj lipidnoj nanočestici (LNP) ili može da bude formulisana u odvojenim LNP za zajedničku primenu.
Vakcine za upotrebu u postupcima lečenja
[0249] RNK (tj., iRNK) vakcine protiv respiratornih virusa mogu da se koriste kao terapijski ili profilaktički agensi, same ili u kombinaciji sa drugom vakcinom/vakcinama. One mogu da se koriste u medicini za sprečavanje i/ili lečenje respiratorne bolesti/infekcije. Predmetni pronalazak obezbeđuje iRNK vakcinu definisanu u patentnim zahtevima za upotrebu u postupku za sprečavanje i/ili lečenje bolesti BetaCoV kod subjekta. U ilustrativnim aspektima, RNK (tj., iRNK) vakcine predmetnog prikaza se koriste da obezbede profilaktičku zaštitu od BetaCoV (uključujući MERS-CoV, SARS-CoV, HCoV-OC43, HCoV-229E, HCoV-NL63, HCoV-NL, HCoV-NH i/ili HCoV-HKU1). Profilaktička zaštita od BetaCoV (uključujući MERS-CoV, SARS-CoV, HCoV-OC43, HCoV-229E, HCoV-NL63, HCoV-NL, HCoV-NH i/ili HCoV-HKU1) može da se postigne nakon primene RNK (tj., iRNK) vakcine predmetnog prikaza. RNK (tj., iRNK) vakcine protiv respiratornih virusa predmetnog prikaza mogu da se koriste za lečenje ili prevenciju virusnih "ko-infekcija" koje uključuju dve ili više respiratornih infekcija. Vakcine mogu da se primene jednom, dva puta, tri puta, četiri puta ili više, ali je verovatno dovoljno primeniti vakcinu jednom (opciono praćeno jednom buster dozom). Moguće je, iako manje poželjno, da se vakcina primeni kod inficirane osobe da bi se postigao terapijski odgovor. Doziranje će možda morati da se prilagodi u skladu sa tim.
[0250] Ovde je prikazan postupak za izazivanje imunskog odgovora kod subjekta protiv hMPV, PIV3, RSV, MeV i/ili BetaCoV (uključujući MERS-CoV, SARS-CoV, HCoV-OC43, HCoV-229E, HCoV-NL63, HCoV-NL, HCoV-NH i/ili HCoV-HKU1). Postupak uključuje davanje subjektu RNK (npr., iRNK) vakcine protiv respiratornih virusa koja sadrži najmanje jedan RNK (npr., iRNK) polinukleotid koji ima otvoreni okvir čitanja koji kodira najmanje jedan antigeni polipeptid hMPV, PIV3, RSV, MeV i/ili BetaCoV (uključujući MERS-CoV, SARS-CoV, HCoV-OC43, HCoV-229E, HCoV-NL63, HCoV-NL, HCoV-NH i/ili HCoV-HKU1), indukujući time kod subjekta imunski odgovor specifičan za antigeni polipeptid hMPV, PIV3, RSV, MeV i/orBetaCoV (uključujući MERS-CoV, SARS-CoV, HCoV-OC43, HCoV-229E, HCoV-NL63, HCoV-NL, HCoV-NH i/ili HCoV-HKU1) ili njegov imunogeni fragment, pri čemu se titar antitela protiv antigenog polipeptida kod subjekta povećava nakon vakcinacije u odnosu na titar antitela protiv antigenog polipeptida kod subjekta vakcinisanog profilaktički efektivnom dozom tradicionalne vakcine protiv hMPV, PIV3, RSV, MeV i/ili BetaCoV (uključujući MERS-CoV, SARS-CoV, HCoV-OC43, HCoV-229E, HCoV-NL63, HCoV-NL, HCoV-NH i/ili HCoV-HKU1). "Antitelo protiv antigenog polipeptida" je serumsko antitelo koje se specifično vezuje za antigeni polipeptid. U nekim slučajevima, RNK (npr., iRNK) vakcina (npr., hMPV, PIV3, RSV, MeV i/ili BetaCoV (uključujući MERS-CoV, SARS-CoV, HCoV-OC43, HCoV-229E, HCoV-NL63, HCoV-NL, HCoV-NH i/ili HCoV-HKU1 RNK vakcina) sposobna da izazove imunski odgovor daje se intramuskularno putem kompozicije koja uključuje jedinjenje prema formuli (I), (IA), (II), (IIa), (IIb), (IIc), (IId) ili (IIe) (npr., jedinjenje 3, 18, 20, 25, 26, 29, 30, 60, 108-112, ili 122).
[0251] Profilaktički efektivna doza je terapijski efektivna doza koja sprečava infekciju virusom na klinički prihvatljivom nivou. U nekim primerima izvođenja, terapijski efektivna doza je doza navedena u umetku pakovanja za vakcinu. Tradicionalna vakcina, kako se ovde koristi, odnosi se na vakcinu koja nije RNK (npr. iRNK) vakcina prema ovom pronalasku. Na primer, tradicionalna
4
vakcina uključuje, ali nije ograničena na vakcine protiv živih/atenuisanih mikroorganizama, vakcine protiv ubijenih/inaktivisanih mikroorganizama, subjedinične vakcine, vakcine protiv proteinskih antigena, DNK vakcine, VLP vakcine, itd. U ilustrativnim primerima izvođenja, tradicionalna vakcina je vakcina koja je dobila regulatorno odobrenje i/ili je registrovana od strane nacionalnog regulatornog tela za lekove, na primer Uprave za hranu i lekove (FDA) u Sjedinjenim Državama ili Evropske agencije za lekove (EMA).
[0252] U nekim slučajevima titar antitela protiv antigenog polipeptida kod subjekta je povećan za 1 log do 10 log nakon vakcinacije u odnosu na titar antitela protiv antigenog polipeptida kod subjekta vakcinisanog profilaktički efektivnom dozom tradicionalne vakcine protiv hMPV, PIV3, RSV, MeV i/ili BetaCoV (uključujući MERS-CoV, SARS-CoV, HCoV-OC43, HCoV-229E, HCoV-NL63, HCoV-NL, HCoV-NH i/ili HCoV-HKU1).
[0253] U nekim slučajevima titar antitela protiv antigenog polipeptida kod subjekta je povećan za 1 log, 2 log, 3 log, 5 log ili 10 log nakon vakcinacije u odnosu na titar antitela protiv antigenog polipeptida kod subjekta vakcinisanog profilaktički efektivnom dozom tradicionalne vakcine protiv hMPV, PIV3, RSV, MeV i/ili BetaCoV (uključujući MERS-CoV, SARS-CoV, HCoV-OC43, HCoV-229E, HCoV-NL63, HCoV-NL, HCoV-NH i/ili HCoV-HKU1).
[0254] Ovde je prikazan postupak za izazivanje imunskog odgovora kod subjekta protiv hMPV, PIV3, RSV, MeV i/ili BetaCoV (uključujući MERS-CoV, SARS-CoV, HCoV-OC43, HCoV-229E, HCoV-NL63, HCoV-NL, HCoV-NH i/ili HCoV-HKU1). Postupak uključuje davanje subjektu RNK (npr., iRNK) vakcine protiv respiratornih virusa koja sadrži najmanje jedan RNK (npr., iRNK) polinukleotid koji ima otvoreni okvir čitanja koji kodira najmanje jedan antigeni polipeptid hMPV, PIV3, RSV, MeV i/ili BetaCoV (uključujući MERS-CoV, SARS-CoV, HCoV-OC43, HCoV-229E, HCoV-NL63, HCoV-NL, HCoV-NH i/ili HCoV-HKU1) ili njegov imunogeni fragment, indukujući time kod subjekta imunski odgovor specifičan za antigeni polipeptid hMPV, PIV3, RSV, MeV i/orBetaCoV (uključujući MERS-CoV, SARS-CoV, HCoV-OC43, HCoV-229E, HCoV-NL63, HCoV-NL, HCoV-NH i/ili HCoV-HKU1) ili njegov imunogeni fragment, pri čemu je imunski odgovor kod subjekta ekvivalentan imunskom odgovoru kod subjekta vakcinisanog tradicionalnom vakcinom protiv hMPV, PIV3, RSV, MeV i/ili BetaCoV (uključujući MERS-CoV, SARS-CoV, HCoV-OC43, HCoV-229E, HCoV-NL63, HCoV-NL, HCoV-NH i/ili HCoV-HKU1) pri nivou doze koji je 2 puta do 100 puta veći od onog u RNK (npr., iRNK) vakcini.
[0255] U nekim slučajevima, imunski odgovor kod subjekta je ekvivalentan imunskom odgovoru kod subjekta vakcinisanog tradicionalnom vakcinom pri nivou doze koji je 2, 3, 4, 5, 10, 50, 100 puta veći od onog u hMPV, PIV3, RSV, MeV i/ili BetaCoV (uključujući MERS-CoV, SARSCoV, HCoV-OC43, HCoV-229E, HCoV-NL63, HCoV-NL, HCoV-NH i/ili HCoV-HKU1) RNK (npr., iRNK)vakcini.
U nekim slučajevima imunski odgovor kod subjekta je ekvivalentan imunskom odgovoru kod subjekta vakcinisanog tradicionalnom vakcinom pri nivou doze koji je 10-100 puta, ili 100-1000 puta veći od onog u hMPV, PIV3, RSV, MeV i/ili BetaCoV (uključujući MERS-CoV, SARS-CoV, HCoV-OC43, HCoV-229E, HCoV-NL63, HCoV-NL, HCoV-NH i/ili HCoV-HKU1) RNK (npr., iRNK) vakcini.
[0256] U nekim slučajevima imunski odgovor se procenjuje određivanjem titra [protein] antitela kod subjekta.
[0257] U nekim slučajevima imunski odgovor kod subjekta je ekvivalentan imunskom odgovoru kod subjekta vakcinisanog tradicionalnom vakcinom pri nivou doze koji je 2, 3, 4, 5, 10, 50, 100 puta veći od onog u hMPV, PIV3, RSV, MeV i/ili BetaCoV (uključujući MERS-CoV, SARS-CoV, HCoV-OC43, HCoV-229E, HCoV-NL63, HCoV-NL, HCoV-NH i/ili HCoV-HKU1) RNK (npr., iRNK) vakcini davanjem subjektu RNK (npr., iRNK) vakcine protiv respiratornih virusa koja sadrži najmanje jedan RNK (npr., iRNK) polinukleotid koji ima otvoreni okvir čitanja koji kodira najmanje jedan antigeni polipeptid hMPV, PIV3, RSV, MeV i/ili BetaCoV (uključujući MERS-CoV, SARS-CoV, HCoV-OC43, HCoV-229E, HCoV-NL63, HCoV-NL, HCoV-NH i/ili HCoV-HKU1), čime se kod subjekta izaziva imunski odgovor specifičan za antigeni polipeptid ili njegov imunogeni fragment, gde se imunski odgovor kod subjekta indukuje 2 dana do 10 nedelja ranije u odnosu na imunski odgovor indukovan kod subjekta vakcinisanog profilaktički efektivnom dozom tradicionalne vakcine protiv hMPV, PIV3, RSV, MeV i/ili BetaCoV (uključujući MERS-CoV, SARS-CoV, HCoV-OC43, HCoV-229E, HCoV-NL63, HCoV-NL, HCoV-NH i/ili HCoV-HKU1). U nekim slučajevima, imunski odgovor kod subjekta je indukovan kod subjekta vakcinisanog profilaktički efektivnom dozom tradicionalne vakcine pri nivou doze koji je 2 puta do 100 puta veći od onog kod RNK (tj., iRNK) vakcine.
[0258] U nekim slučajevima, imunski odgovor kod subjekta se indukuje 2 dana ranije, ili 3 dana ranije, u odnosu na imunski odgovor indukovan kod subjekta vakcinisanog profilaktički efektivnom dozom tradicionalne vakcine.
[0259] U nekim slučajevima imunski odgovor kod subjekta se indukuje 1 nedelju, 2 nedelje, 3 nedelje, 5 nedelja, ili 10 nedelja ranije, u odnosu na imunski odgovor indukovan kod subjekta vakcinisanog profilaktički efektivnom dozom tradicionalne vakcine.
[0260] Ovde je prikazan i postupak za izazivanje imunskog odgovora kod subjekta protiv hMPV, PIV3, RSV, MeV i/ili BetaCoV (uključujući MERS-CoV, SARS-CoV, HCoV-OC43, HCoV-229E, HCoV-NL63, HCoV-NL, HCoV-NH i/ili HCoV-HKU1) davanjem subjektu RNK (npr., iRNK) vakcine protiv respiratornih virusa koja ima otvoreni okvir čitanja koji kodira prvi antigeni polipeptid, pri čemu RNK polinukleotid ne uključuje stabilizacioni element, i pri čemu adjuvans nije ko-formulisan ili primenjen zajedno sa vakcinom.
Terapijske i profilaktičke kompozicije
[0261] Predmetni pronalazak obezbeđuje iRNK vakcinu definisanu u patentnim zahtevima za upotrebu u postupku sprečavanja i/ili lečenja bolesti BetaCoV kod subjekta.
[0262] U nekim primerima izvođenja, vakcina protiv respiratornih virusa koja sadrži RNK (tj., iRNK) polinukleotidi kao što je ovde opisano može da se primeni kod subjekta (npr., kod subjekta sisara, kao što je humani subjekat), i RNK (tj., iRNK) polinukleotidi se translatiraju in vivo kako bi se proizveo antigeni polipeptid.
[0263] RNK (tj., iRNK) vakcine protiv respiratornih virusa mogu da budu indukovane na translaciju polipeptida (npr., antigena ili imunogena) u ćeliji, tkivu ili organizmu. U nekim primerima izvođenja, takva translacija se odvija in vivo, iako takva translacija može da se odvija ex vivo, u kulturi ili in vitro. U nekim primerima izvođenja, ćelija, tkivo ili organizam se dovode u kontakt sa efektivnom količinom kompozicije koja sadrži RNK (tj., iRNK) vakcinu protiv respiratornih virusa koja sadrži polinukleotid koji ima najmanje jedan translatabilni region koji kodira antigeni polipeptid.
[0264] "Efektivna količina" RNK (tj., iRNK) vakcine protiv respiratornih virusa se obezbeđuje na osnovu, bar delimično, ciljnog tkiva, ciljnog tipa ćelija, načina primene, fizičkih karakteristika polinukleotida (npr., veličine i stepena modifikacije nukleozida) i drugih komponenti vakcine, i drugih determinanti. Uopšteno, efektivna količina kompozicije RNK (tj., iRNK) vakcine protiv respiratornih virusa obezbeđuje indukovani ili pojačani imunski odgovor kao funkciju proizvodnje antigena u ćeliji, poželjno efikasniji od kompozicije koja sadrži odgovarajući nemodifikovani polinukleotid koji kodira isti antigen ili peptidni antigen. Povećana proizvodnja antigena može se pokazati povećanom transfekcijom ćelija (procenat ćelija transficiranih RNK, npr. iRNK, vakcinom), povećanom translacijom proteina sa polinukleotida, smanjenom degradacijom nukleinske kiseline (što je pokazano, na primer, produženim trajanjem translacije proteina sa modifikovanog polinukleotida), ili izmenjenim imunskim odgovorom ćelije-domaćina specifičnim za antigen.
[0265] U nekim primerima izvođenja, RNK (tj., iRNK) vakcine (uključujući polinukleotide i njima kodirane polipeptide) u skladu sa predmetnim prikazom mogu da se upotrebe za lečenje BetaCoV (uključujući MERS-CoV, SARS-CoV, HCoV-OC43, HCoV-229E, HCoV-NL63, HCoV-NL, HCoV-NH i/ili HCoV-HKU1).
[0266] RNK (tj., iRNK) vakcine protiv respiratornih virusa mogu da se primene profilaktički ili terapijski kao deo šeme aktivne imunizacije zdravih osoba ili rano u infekciji tokom faze inkubacije ili tokom aktivne infekcije nakon pojave simptoma. U nekim primerima izvođenja, količina RNK (tj., iRNK) vakcine predmetnog prikaza koja se primenjuje na ćeliji, tkivu ili subjektu može da bude količina koja je efektivna za imunsku profilaksu.
[0267] RNK (tj., iRNK) vakcine protiv respiratornih virusa mogu da se primene sa drugim profilaktičkim ili terapijskim jedinjenjima. Kao neograničavajući primer, profilaktičko ili terapijsko jedinjenje može da bude adjuvans ili buster. Kako se ovde koristi, kada se odnosi na profilaktičku kompoziciju, kao što je vakcina, termin "buster" se odnosi na dodatnu primenu profilaktičke (vakcinalne) kompozicije. Buster (ili buster vakcina) može da bude data posle ranije primene profilaktičke kompozicije. Vreme primene između inicijalne primene profilaktičke kompozicije i buster doze može da bude, ali nije ograničeno na 1 minut, 2 minuta, 3 minuta, 4 minuta, 5 minuta, 6 minuta, 7 minuta, 8 minuta, 9 minuta, 10 minuta, 15 minuta, 20 minuta 35 minuta, 40 minuta, 45 minuta, 50 minuta, 55 minuta, 1 čas, 2 časa, 3 časa, 4 časa, 5 časova, 6 časova, 7 časova, 8 časova, 9 časova, 10 časova, 11 časova, 12 časova, 13 časova, 14 časova, 15 časova, 16 časova, 17 časova, 18 časova, 19 časova, 20 časova, 21 čas, 22 časa, 23 časa, 1 dan, 36 časova, 2 dana, 3 dana, 4 dana, 5 dana, 6 dana, 1 nedelju, 10 dana, 2 nedelje, 3 nedelje, 1 mesec, 2 meseca, 3 meseca, 4 meseca, 5 meseci, 6 meseci, 7 meseci, 8 meseci, 9 meseci, 10 meseci, 11 meseci, 1 godinu, 18 meseci, 2 godine, 3 godine, 4 godine, 5 godina, 6 godina, 7 godina, 8 godina, 9 godina, 10 godina, 11 godina, 12 godina, 13 godina, 14 godina, 15 godina, 16 godina, 17 godina, 18 godina, 19 godina, 20 godina, 25 godina, 30 godina, 35 godina, 40 godina, 45 godina, 50 godina, 55 godina, 60 godina, 65 godina, 70 godina, 75 godina, 80 godina, 85 godina, 90 godina, 95 godina ili više od 99 godina. U nekim primerima izvođenja, vreme primene između inicijalne primene profilaktičke kompozicije i buster doze može da bude, ali nije ograničeno na 1 nedelju, 2 nedelje, 3 nedelje, 1 mesec, 2 meseca, 3 meseca, 6 meseci ili 1 godinu.
[0268] U nekim primerima izvođenja, RNK (tj., iRNK) vakcine protiv respiratornih virusa mogu da se primene intramuskularno ili intradermalno, slično primeni inaktivisane vakcine poznatoj u stanju tehnike.
[0269] RNK (npr. iRNK) vakcine protiv respiratornih virusa mogu da se upotrebe u različitim postavkama u zavisnosti od prevalence infekcije ili stepena ili nivoa neispunjene medicinske potrebe. RNK (tj., iRNK) vakcine imaju superiorna svojstva po tome što proizvode mnogo veće titrove antitela i proizvode odgovore ranije od komercijalno dostupnih antivirusnih agenasa/kompozicija.
[0270] Ovde su prikazane farmaceutske kompozicije koje uključuju RNK (npr. iRNK) vakcine protiv respiratornih virusa i kompozicije i/ili komplekse RNK (npr. iRNK) vakcina opciono u kombinaciji sa jednim ili više farmaceutski prihvatljivih ekscipijenasa.
[0271] RNK (tj., iRNK) vakcine protiv respiratornih virusa mogu da budu formulisane ili primenjene same ili zajedno sa jednom ili više drugih komponenata.
[0272] U nekim primerima izvođenja, vakcine protiv respiratornih virusa (tj., iRNK) ne uključuju adjuvans (one su bez adjuvansa).
[0273] RNK (tj., iRNK) vakcine protiv respiratornih virusa mogu da budu formulisane ili primenjene u kombinaciji sa jednim ili više farmaceutski prihvatljivih ekscipijenasa. U nekim primerima izvođenja, vakcinalne kompozicije sadrže najmanje jednu dodatnu aktivnu supstancu, kao što je, na primer, terapijski aktivna supstanca, profilaktički aktivna supstanca, ili kombinacija obe. Vakcinalne kompozicije mogu da budu sterilne, bez pirogena ili i sterilne i bez pirogena. Opšta razmatranja o formulaciji i/ili proizvodnji farmaceutskih agenasa, kao što su vakcinalne kompozicije, mogu da se nađu, na primer, u delu Remington: The Science and Practice of Pharmacy 21st ed., Lippincott Williams & Wilkins, 2005.
[0274] U nekim slučajevima, RNK (npr. iRNK) vakcine protiv respiratornih virusa daju se ljudima, humanim pacijentima ili subjektima. U svrhu predmetnog prikaza, izraz "aktivni sastojak" uopšteno se odnosi na RNK (npr., iRNK) vakcine ili u njima sadržane polinukleotide, na primer, RNK polinukleotide (npr., iRNK polinukleotide) koji kodiraju antigene polipeptide.
[0275] Formulacije ovde opisanih vakcinalnih kompozicija protiv respiratornih virusa mogu da se pripreme bilo kojim postupkom poznatim, ili naknadno razvijenim u oblasti farmakologije. Uopšteno, takvi preparativni postupci uključuju korak dovođenja aktivnog sastojka (tj., iRNK polinukleotida) u vezu sa ekscipijensom i/ili jednim ili većim brojem ostalih pomoćnih sastojaka, i zatim, ako je neophodno i/ili poželjno, deljenja, oblikovanja i/ili pakovanja proizvoda u željenu jednodoznu ili višedoznu jedinicu.
[0276] Relativne količine aktivnog sastojka, farmaceutski prihvatljivog ekscipijensa, i/ili bilo kojih dodatnih sastojaka u farmaceutskoj kompoziciji prema prikazu variraće, u zavisnosti od identiteta, veličine, i/ili stanja subjekta koji se leči i dalje u zavisnosti od puta kojim se kompozicija primenjuje. Na primer, kompozicija može da sadrži između 0.1% i 100%, npr., između 0.5 i 50%, između 1-30%, između 5-80%, najmanje 80% (tež./tež.) aktivnog sastojka.
[0277] RNK (tj., iRNK) vakcine protiv respiratornih virusa mogu da budu formulisane upotrebom jednog ili većeg broja ekscipijenasa za: (1) povećanje stabilnosti; (2) povećanje transfekcije ćelija; (3) omogućavanje produženog ili odloženog oslobađanja (npr., iz depo formulacije); (4) promenu biološke raspodele (npr., usmeravanje na specifična tkiva ili tipove ćelija); (5) povećanje translacije kodiranog proteina in vivo; i/ili (6) promenu profila oslobađanja kodiranog proteina (antigena) in vivo.
Stabilišući elementi
[0278] Nađeno je da prirodni eukariotski iRNK molekuli sadrže stabilišuće elemente, uključujući, ali bez ograničenja, netranslatirane regione (UTR) na svom 5'-kraju (5'UTR) i/ili na svom 3'-kraju (3'UTR), pored drugih strukturnih svojstava, kao što je struktura 5'-kape ili 3'-poli(A) repa. I 5'UTR i 3'UTR se tipično transkribuju sa genomske DNK i predstavljaju elemente nezrele iRNK. Karakteristična strukturna svojstva zrele iRNK, kao što je 5'-kapa i 3'-poli(A) repa se obično dodaju na transkribovanu (nezrelu) iRNK tokom obrade iRNK. 3'-poli(A) rep je obično niz adeninskih nukleotida dodat na 3'-kraj transkribovane iRNK. On može da sadrži do oko 400 adeninskih nukleotida. U nekim primerima izvođenja dužina 3'-poli(A) repa može da bude esencijalni element u pogledu stabilnosti pojedinačne iRNK.
[0279] U nekim primerima izvođenja RNK (tj., iRNK) vakcina može da uključuje jedan ili više stabilišućih elemenata. Stabilišući elementi mogu da uključuju, na primer, histonsku strukturu drške-petlje. Identifikovan je protein koji vezuje strukturu drške-petlje (SLBP), protein od 32 kDa. On je udružen sa histonskom drškom-petljom na 3'-kraju histonskih informacija i u jedru i u citoplazmi. Njegov nivo ekspresije regulisan je ćelijskim ciklusom; dostiže vrhunac tokom S-faze, kada su nivoi histonske iRNK takođe povišeni. Pokazano je da je protein ključan za efikasnu obradu 3'-kraja histonske pre-iRNK pomoću U7 snRNP. SLBP nastavlja da bude udružen sa strukturom drške-petlje nakon obrade, i tada stimuliše translaciju zrelih histonskih iRNK u histonske proteine u citoplazmi. RNK-vezujući domen SLBP je konzerviran kod metazoa i protozoa; njegovo vezivanje za histonsku dršku-petlju zavisi od strukture petlje. Minimalno vezujuće mesto uključuje najmanje tri nukleotida 5' i dva nukleotida 3' u odnosu na dršku-petlju.
[0280] U nekim primerima izvođenja, RNK (tj., iRNK) vakcine uključuju kodirajući region, najmanje jednu histonsku dršku-petlju i opciono, poli(A) sekvencu ili poliadenilacioni signal. Poli(A) sekvenca ili poliadenilacioni signal uopšteno treba da poboljšaju nivo ekspresije kodiranog proteina. Kodirani protein, u nekim primerima izvođenja, nije histonski protein, reporterski protein (npr. luciferaza, GFP, EGFP, β-galaktozidaza, EGFP), ili marker ili selekcioni protein (npr. alfaglobin, galaktokinaza i ksantin:guanin fosforibozil transferaza (GPT)).
[0281] U nekim primerima izvođenja, kombinacija poli(A) sekvence ili poliadenilacionog signala i najmanje jedne histonske drške-petlje, iako oba predstavljaju alternativne mehanizme u prirodi, deluje sinergistički kako bi povećala ekspresiju proteina iznad nivoa uočenog sa bilo kojim od pojedinačnih elemenata. Utvrđeno je da sinergistički efekat kombinacije poli(A) i najmanje jedne histonske stabljike drške-petlje ne zavisi od redosleda elemenata ili dužine poli(A) sekvence.
[0282] U nekim primerima izvođenja, RNK (tj., iRNK) vakcina ne sadrži histonski nishodni element (HDE). "Histonski nishodni element" (HDE) uključuje polinukleotidni niz bogat purinom od približno 15 do 20 nukleotida 3' od prirodnih drški-petlji, koji predstavlja mesto vezivanja za U7 snRNA, koja je uključena u obradu histonske pre-iRNK u zrelu histonsku iRNK. U idealnom slučaju, inventivna nukleinska kiselina ne uključuje intron.
[0283] U nekim primerima izvođenja, RNK (tj., iRNK) vakcina može, ali ne mora da sadrži sekvencu pojačivača i/ili promotora, koja može da bude modifikovana ili nemodifikovana ili koja može da bude aktivirana ili inaktivirana. U nekim primerima izvođenja, histonska drška-petlja uopšteno potiče od histonskih gena i uključuje intramolekularno uparivanje baza dve susedne delimično ili potpuno obrnute komplementarne sekvence razdvojene spejserom, i uključuje (npr. sastoji se od) kratku sekvencu, koja formira petlju strukture. Područje neuparene petlje obično ne može da se upari ni sa jednim od elemenata drške-petlje. Češće se javlja u RNK, kao ključna komponenta mnogih sekundarnih struktura RNK, ali može biti prisutna i u jednolančanoj DNK. Stabilnost strukture drške-petlje generalno zavisi od dužine, broja nepodudaranja ili izbočina i sastava baze uparenog regiona. U nekim primerima izvođenja može doći do kolebljivog uparivanja baza (nije uparivanje baza prema Watson-Crick-u). U nekim primerima izvođenja, najmanje jedna sekvenca histonske drške-petlje obuhvata dužinu od 15 do 45 nukleotida.
[0284] U drugim primerima izvođenja RNK (tj., iRNK) vakcina može da ima uklonjenu jednu ili više sekvenci bogatih AU. Ove sekvence, koje se ponekad nazivaju AURES, su destabilizujuće sekvence koje se nalaze u 3'UTR. AURES mogu da se uklone iz RNK (tj. iRNK) vakcina. Alternativno, AURES mogu da ostanu u RNK (tj. iRNK) vakcini.
Formulacije nanočestica
[0285] U pronalasku, RNK (tj., iRNK) vakcine protiv respiratornih virusa su formulisane u lipidnoj nanočestici. U nekim primerima izvođenja, RNK (tj., iRNK) vakcine protiv respiratornih virusa su formulisane u lipidnoj nanočestici koja uključuje nekatjonski lipid kao što je, ali bez ograničenja, holesterol ili dioleoil fosfatidiletanolamin (DOPE).
[0286] Na formulaciju lipidne nanočestice može da utiče, ali bez ograničenja, izbor komponente katjonskog lipida, stepen zasićenosti katjonskog lipida, priroda PEGilacije, odnos svih komponenti i biofizički parametri kao što je veličina. U jednom primeru kod Semple et al. (Nature Biotech.
2010 28:172-176), formulacija lipidne nanočestice je sačinjena od 57.1% katjonskog lipida, 7.1% dipalmitoilfosfatidilholina, 34.3% holesterola i 1.4% PEG-c-DMA. Kao drugi primer, menjanje kompozicije katjonskog lipida može efektivnije da isporuči siRNA u različite antigen-prezentujuće ćelije (Basha et al. Mol Ther.201119:2186-2200).
[0287] U nekim primerima izvođenja, odnos lipida prema RNK (tj., iRNK) u lipidnim nanočesticama može da bude 5:1 do 20:1, 10:1 do 25:1, 15:1 do 30:1 i/ili najmanje 30:1.
[0288] U nekim primerima izvođenja, odnos PEG u formulacijama lipidnih nanočestica može da bude povećan ili smanjen i/ili dužina ugljeničnog lanca PEG lipida može da bude modifikovana
1
sa C14 na C18 kako bi se promenila farmakokinetika i/ili biološka raspodela formulacija lipidnih nanočestica.
[0289] U pronalasku, lipid sadrži katjonski lipid kao što je, ali bez ograničenja, DLin-DMA, DLin-D-DMA, DLin-MC3-D MA, DLin-KC2-D MA, DODMA i amino alkoholni lipidi. Amino alkoholni katjonski lipidi mogu da budu lipidi opisani u, i/ili napravljeni postupcima opisanim u SAD patentnoj objavi br. US20130150625. Kao neograničavajući primer, katjonski lipid može da bude 2-amino-3-[(9Z,12Z)-oktadeka-9,12-dien-1-iloksi]-2-{[(9Z,2Z)-oktadeka-9,12-dien-1-iloksi]metil}propan-1-ol (jedinjenje 1 u US20130150625); 2-amino-3-[(9Z)-oktadec-9-en-1-iloksi]-2-{[(9Z)-oktadec-9-en-1-iloksi]metil}propan-1-ol (jedinjenje 2 u US20130150625); 2-amino-3-[(9Z,12Z)-oktadeka-9,12-dien-1-iloksil-2-[(oktiloksi)metil]propan-1-ol (jedinjenje 3 u US20130150625); i 2-(dimetilamino)-3-[(9Z,12Z)-oktadeka-9,12-dien-1-iloksi]-2-{[(9Z,12Z)-oktadeka-9,12-dien-1-iloksi]metil}propan-1-ol (jedinjenje 4 u US20130150625); ili bilo koja farmaceutski prihvatljiva so ili stereoizomer navedenog. U pronalasku, iRNK vakcina je formulisana u lipidnoj nanočestici kao što je definisano u priloženim patentnim zahtevima.
[0290] Formulacije lipidnih nanočestica tipično sadrže lipid, posebno, jonizabilni katjonski lipid, na primer, 2,2-dilinoleil-4-dimetilaminoetil-[1,3]-dioksolan (DLin-KC2-DMA), dilinoleil-metil-4-dimetilaminobutirat (DLin-MC3-DMA), ili di((Z)-non-2-en-1-il) 9-((4-(dimetilamino)butanoil)oksi)heptadekandioat (L319), i dodatno sadrže neutralni lipid, sterol i molekul koji može da smanji agregaciju čestica, na primer PEG ili PEG-modifikovani lipid.
[0291] Primeri neutralnih lipida uključuju, bez ograničenja, DSPC, POPC, DPPC, DOPE i SM. Primer sterola je holesterol. U nekim primerima izvođenja, PEG ili PEG-modifikovani lipid sadrži molekul PEG prosečne molekulske težine od 2000 Da. U nekim primerima izvođenja, PEG ili PEG-modifikovani lipid sadrži molekul PEG prosečne molekulske težine manje od 2000, na primer oko 1500 Da, oko 1000 Da, ili oko 500 Da. Neograničavajući primeri PEG-modifikovanih lipida uključuju PEG-distearoil glicerol (PEG-DMG) (ovde označen i kao PEG-C14 ili C14-PEG), PEG-cDMA (dalje diskutovan u Reyes et al. J. Controlled Release, 107,276-287 (2005)).
[0292] U nekim primerima izvođenja, formulacije lipidnih nanočestica uključuju 60% katjonskog lipida odabranog od 2,2-dilinoleil-4-dimetilamino etil-[1,3]-dioksolana (DLin-KC2-DMA), dilinoleil-metil-4-dimetilaminobutirata (DLin-MC3-DMA) i di((Z)-non-2-en-1-il) 9-((4-(dimetilamino)butanoil)oksi)heptadekandioata (L319), 7.5% neutralnog lipida, 31 % sterola i 1.5% PEG ili PEG-modifikovanog lipida na molarnoj bazi.
[0293] U nekim primerima izvođenja, formulacije lipidnih nanočestica uključuju 50% katjonskog lipida odabranog od 2,2-dilinoleil-4-dimetilamino etil-[1,3]-dioksolana (DLin-KC2-DMA), dilinoleil-metil-4-dimetilaminobutirata (DLin-MC3-DMA) i di((Z)-non-2-en-1-il) 9-((4-
2
(dimetilamino)butanoil)oksi)heptadekandioata (L319), 10% neutralnog lipida, 38.5% sterola i 1.5% PEG ili PEG-modifikovanog lipida na molarnoj bazi.
[0294] U nekim primerima izvođenja, formulacije lipidnih nanočestica uključuju 57.2% katjonskog lipida odabranog od 2,2-dilinoleil-4-dimetilaminoetil-[1,3]-dioksolana (DLin-KC2-DMA), dilinoleil-metil-4-dimetilaminobutirata (DLin-MC3-D M A), i di((Z)-non-2-en-1-il) 9-((4-(dimetilamino)butanoil)oksi)heptadekandioata (L319), 7.1% neutralnog lipida, 34,3% sterola i 1.4% PEG ili PEG-modifikovanog lipida na molarnoj bazi.
[0295] U nekim primerima izvođenja, molarni odnos lipida je 50/10/38.5/1.5 (mol% katjonski lipid/neutralni lipid, npr., DSPC/hol/PEG-modifikovan lipid, npr., PEG-DMG, PEG-DSG ili PEG-DPG), ili 57.2/7.1/34.3/1.4 (mol% katjonski lipid/neutralni lipid, npr., DPPC/hol/PEG-modifikovani lipid, npr., PEG-cDMA).
[0296] Neograničavajući primeri kompozicija lipidnih nanočestica i postupaka za njihovo pravljenje opisani su, na primer, u Semple et al. (2010) Nat Biotechnol 28:172-176; Jayarama et al. (2012), Angew. Chem. Int. Ed., 51: 8529-8533; i Maier et al. (2013) Molecular Therapy 21,1570-1578.
[0297] U pronalasku, formulacije lipidnih nanočestica koje su ovde opisane su lipidne nanočestice sa 4 komponente. Lipidna nanočestica sadrži katjonski lipid, nekatjonski lipid, PEG lipid i strukturni lipid. U pronalasku, lipidna nanočestica sadrži 40-60% katjonskog lipida, 5-15% nekatjonskog lipida, 1-2% PEG lipida i 30-50% strukturnog lipida. Kao neograničavajući primer, lipidna nanočestica može da sadrži 50% katjonskog lipida, 10% nekatjonskog lipida, 1.5% PEG lipida i 38.5% strukturnog lipida. U nekim primerima izvođenja, katjonski lipid može da bude bilo koji ovde opisani katjonski lipid, kao što je, ali bez ograničenja, DLin-KC2-D MA, DLin-MC3-DMA i L319. U pronalasku, strukturni lipid je holesterol.
[0298] U pronalasku, ovde opisane formulacije lipidnih nanočestica sadrže katjonski lipid, nekatjonski lipid, PEG lipid i strukturni lipid. Kao neograničavajući primer, lipidne nanočestice sadrže 50% katjonskog lipida DLin-KC2-DMA, 10% nekatjonskog lipida DSPC, 1.5% PEG lipida PEG-DOMG i 38.5% strukturnog lipida holesterola. Kao neograničavajući primer, lipidne nanočestice sadrže 50% katjonskog lipida DLin-MC3-DMA, 10% nekatjonskog lipida DSPC, 1.5% PEG lipida PEG-DOMG i 38.5% strukturnog lipida holesterola. Kao neograničavajući primer, lipidne nanočestice sadrže 50% katjonskog lipida DLin-MC3-DMA, 10% nekatjonskog lipida DSPC, 1.5% PEG lipida PEG-DMG i 38.5% strukturnog lipida holesterola.
[0299] Relativne količine aktivnog sastojka, farmaceutski prihvatljivog ekscipijensa, i/ili bilo kojih dodatnih sastojaka u vakcinalnoj kompoziciji mogu da variraju, u zavisnosti od identiteta, veličine, i/ili stanja subjekta koji se leči i dalje u zavisnosti od puta kojim će se kompozicija primeniti. Na primer, kompozicija može da sadrži između 0.1% i 99% (tež./tež.) aktivnog sastojka.
Na primer, kompozicija može da sadrži između 0.1% i 100%, npr., između .5 i 50%, između 1-30%, između 5-80%, najmanje 80% (tež./tež.) aktivnog sastojka.
[0300] U nekim primerima izvođenja, kompozicija RNK (tj., iRNK) vakcine protiv respiratornih virusa može da sadrži ovde opisani polinukleotid, formulisan u lipidnoj nanočestici koja sadrži MC3, holesterol, DSPC i PEG2000-DMG, pufer trizodijum citrat, saharozu i vodu za injekcije. Kao neograničavajući primer, kompozicija sadrži: 2.0 mg/mL supstance leka, 21.8 mg/mL MC3, 10.1 mg/mL holesterola, 5.4 mg/mL DSPC, 2.7 mg/mL PEG2000-DMG, 5.16 mg/mL trizodijum citrata, 71 mg/mL saharoze i 1.0 mL vode za injekcije.
[0301] U nekim primerima izvođenja, nanočestica (tj., lipidna nanočestica) ima srednji prečnik od 10-500 nm, 20-400 nm, 30-300 nm, 40-200 nm. U nekim primerima izvođenja, nanočestica (tj., lipidna nanočestica) ima srednji prečnik od 50-150 nm, 50-200 nm, 80-100 nm ili 80-200 nm.
Lipozomi, lipopleksi i lipidne nanočestice
[0302] U pronalasku, ovde opisane formulacije lipidnih nanočestica sadrže katjonski lipid, nekatjonski lipid, PEG lipid i holesterol. Kao neograničavajući primer, lipidne nanočestice sadrže oko 50% katjonskog lipida DLin-KC2-DMA, oko 10% nekatjonskog lipida DSPC, oko 1.5% PEG lipida PEG-DOMG i oko 38.5% strukturnog lipida holesterola. Kao neograničavajući primer, lipidne nanočestice sadrže oko 50% katjonskog lipida DLin-MC3-DMA, oko 10% nekatjonskog lipida DSPC, oko 1.5% PEG lipida PEG-DOMG i oko 38.5% strukturnog lipida holesterola. Kao neograničavajući primer, lipidne nanočestice sadrže oko 50% katjonskog lipida DLin-MC3-DMA, oko 10% nekatjonskog lipida DSPC, oko 1.5% PEG lipida PEG-DMG i oko 38.5% strukturnog lipida holesterola.
[0303] Kao neograničavajući primer, katjonski lipid može da bude odabran od (20Z,23Z)-N,N-dimetilnonakoza-20,23-dien-10-amina, (17Z,20Z)-N,N-dimemilheksakoza-17,20-dien-9-amina, (1Z,19Z)-N5N-dimetilpentakoza-16,19-dien-8-amina, (13Z,16Z)-N,N-dimetildokoza-13,16-dien-5-amina, (12Z,15Z)-N,N-dimetilhenikoza-12,15-dien-4-amina, (14Z,17Z)-N,N-dimetiltrikoza-14,17-dien-6-amina, (15Z,18Z)-N,N-dimetiltetrakoza-15,18-dien-7-amina, (18Z,21Z)-N,N-dimetilheptakoza-18,21-dien-10-amina, (15Z,18Z)-N,N-dimetiltetrakoza-15,18-dien-5-amina, (14Z,17Z)-N,N-dimetiltrikoza-14,17-dien-4-amina, (19Z,22Z)-N,N-dimetiloktakoza-19,22-dien-9-amina, (18Z,21Z)-N,N-dimetilheptakoza-18,21-dien-8-amina, (17Z,20Z)-N,N-dimetilheksakoza-17,20-dien-7-amina, (16Z,19Z)-N,N-dimetilpentakoza-16,19-dien-6-amina, (22Z,25Z)-N,N-dimetilhentriakonta-22,25-dien-10-amina, (21Z,24Z)-N,N-dimetiltriakonta-21,24-dien-9-amina, (18Z)-N,N-dimetilheptakos-18-en-10-amina, (17Z)-N,N-dimetilheksakos-17-en-9-amina, (19Z,22Z)-N,N-dimetiloktakoza-19,22-dien-7-amina, N,N-dimetilheptakozan-10-amina, (20Z,23Z)-N-etil-N-metilnonakoza-20,23-dien-10-amina, 1-
4
[(11Z,14Z)-1-nonilikoza-11,14-dien-1-il] pirolidina, (20Z)-N,N-dimetilheptakos-20-en-10-amina, (15Z)-N,N-dimetil eptakos-15-en-10-amina, (14Z)-N,N-dimetilnonakos-14-en-10-amina, (17Z)-N,N-dimetilnonakos-17-en-10-amina, (24Z)-N,N-dimetiltritriakont-24-en-10-amina, (20Z)-N,N-dimetilnonakos-20-en-10-amina, (22Z)-N,N-dimetilhentriakont-22-en-10-amina, (16Z)-N,N-dimetilpentakos-16-en-8-amina, (12Z,15Z)-N,N-dimetil-2-nonilhenikoza-12,15-dien-1-amina, (13Z,16Z)-N,N-dimetil-3-nonildokoza-13,16-dien-1-amina, N,N-dimetil-1-[(1S,2R)-2-oktilciklopropil]eptadekan-8-amina, 1-[(1S,2R)-2-heksilciklopropil]-N,N-dimetilnonadekan-10-amina, N,N-dimetil-1-[(1S,2R)-2-oktilciklopropil]nonadekan-10-amina, N,N-dimetil-21-[(1S,2R)-2-oktilciklopropil]henikozan-10-amina, N,N-dimetil-1-[(1S,2S)-2-{[(1R,2R)-2-pentilciklopropil]metil}ciklopropil]nonadecan-10-amina, N,N-dimetil-1-[(1S,2R)-2-oktilciklopropil]heksadekan-8-amina, N,N-dimetil-[(1R,2S)-2-undecilciklopropil]tetradekan-5-amina, N,N-dimetil-3-{7-[(1S,2R)-2-oktilciklopropil]heptil} dodekan-1-amina, 1-[(1R,2S)-2-heptilciklopropil]-N,N-dimetiloktadekan-9-amina, 1-[(1S,2R)-2-decilciklopropil]-N,N-dimetilpentadekan-6-amina, N,N-dimetil-1-[(1S,2R)-2-oktilciklopropil]pentadekan-8-amina, R-N,N-dimetil-1-[(9Z,12Z)-oktadeka-9,12-dien-1-iloksi]-3-(oktiloksi)propan-2-amina, S-N,N-dimetil-1-[(9Z,12Z)-oktadeka-9,12-dien-1-iloksi]-3-(oktiloksi)propan-2-amina, 1-{2-[(9Z,12Z)-oktadeka-9,12-dien-1-iloksi]-1-[(oktiloksi)metil]etil}pirolidina, (2S)-N,N-dimetil-1-[(9Z,12Z)-oktadeka-9,12-dien-1-iloksi]-3-[(5Z)-okt-5-en-1-iloksi]propan-2-amina, 1-{2-[(9Z,12Z)-oktadeka-9,12-dien-1-iloksi]-1-[(oktiloksi)metil]etil}azetidina, (2S)-1-(heksiloksi)-N,N-dimetil-3-[(9Z,12Z)-oktadeka-9,12-dien-1-iloksi]propan-2-amina, (2S)-1-(heptiloksi)-N,N-dimetil-3-[(9Z,12Z)-oktadeka-9,12-dien-1-iloksi]propan-2-amina, N,N-dimetil-1-(noniloksi)-3-[(9Z,12Z)-oktadeka-9,12-dien-1-iloksi]propan-2-amina, N,N-dimetil-1-[(9Z)-oktadec-9-en-1-iloksi]-3-(oktiloksi)propan-2-amina; (2S)-N,N-dimetil-1-[(6Z,9Z,12Z)-oktadeka-6,9,12-trien-1-iloksi]-3-(oktiloksi)propan-2-amina, (2S)-1-[(11Z,14Z)-ikoza-11,14-dien-1-iloksi]-N,N-dimetil-3-(pentiloksi)propan-2-amina, (2S)-1-(heksiloksi)-3-[(11Z,14Z)-ikoza-11,14-dien-1-iloksi]-N,N-dimetilpropan-2-amina, 1-[(11Z,14Z)-ikoza-11,14-dien-1-iloksi]-N,N-dimetil-3-(oktiloksi)propan-2-amina, 1-[(13Z,16Z)-dokoza-l3,16-dien-1-iloksi]-N,N-dimetil-3-(oktiloksi)propan-2-amina, (2S)-1-[(13Z,16Z)-dokoza-13,16-dien-1-iloksi]-3-(heksiloksi)-N,N-dimetilpropan-2-amina, (2S)-1-[(13Z)-dokos-13-en-1-iloksi]-3-(heksiloksi)-N,N-dimetilpropan-2-amina, 1-[(13Z)-dokos-13-en-1-iloksi]-N,N-dimetil-3-(oktiloksi)propan-2-amina, 1-[(9Z)-heksadec-9-en-1-iloksi]-N,N-dimetil-3-(oktiloksi)propan-2-amina, (2R)-N,N-dimetil-H(1-metoiloktil)oksi]-3-[(9Z,12Z)-oktadeka-9,12-dien-1-iloksi]propan-2-amina, (2R)-1-[(3,7-dimetiloktil)oksi]-N,N-dimetil-3-[(9Z,12Z)-oktadeka-9,12-dien-1-iloksi]propan-2-amina, N,N-dimetil-1-(oktiloksi)-3-({8-[(1S,2S)-2-{[(1R,2R)-2-pentilciklopropil]metil}ciklopropil]oktil}oksi)propan-2-amina, N,N-dimetil-1-{[8-(2oktilciklopropil)oktil]oksi}-3-(oktiloksi)propan-2-amina i (11E,20Z,23Z)-N,N-dimetilnonakoza-11,20,2-trien-10-amina ili njihove farmaceutski prihvatljive soli ili stereoizomera.
[0304] U nekim primerima izvođenja, LNP formulacije RNK (npr., iRNK) vakcina mogu da sadrže PEG-c-DOMG u molarnom odnosu lipida od 1.5%.
[0305] U nekim primerima izvođenja, farmaceutska kompozicije RNK (tj., iRNK) vakcina mogu da uključuju najmanje jedan od PEGilovanih lipida opisanih u međunarodnoj objavi br. WO2012099755.
[0306] U nekim primerima izvođenja, LNP formulacija može da sadrži PEG-DMG 2000 (1,2-dimiristoil-sn-glicero-3-fosfoetanolamin-N-[metoksi(polietilenglikol)-2000). U nekim primerima izvođenja, LNP formulacija može da sadrži PEG-DMG 2000, katjonski lipid poznat u tehnici, DSPC i holesterol. Kao neograničavajući primer, LNP formulacija može da sadrži PEG-DMG 2000, DLin-DMA, DSPC i holesterol. Kao još jedan neograničavajući primer LNP formulacija može da sadrži PEG-DMG 2000, DLin-DMA, DSPC i holesterol u molarnom odnosu od 2:40:10:48 (videti npr., Geall et al., Nonviral delivery of self-amplifying RNA (e.g., mRNA) vaccines, PNAS 2012; PMID: 22908294).
[0307] Ovde opisane lipidne nanočestice mogu da budu napravljene u sterilnom okruženju.
[0308] Formulacije nanočestica mogu da sadrže fosfatni konjugat. Fosfatni konjugat može da poveća in vivo vremena cirkulacije i/ili da poveća ciljanu isporuku nanočestice. Kao neograničavajući primer, fosfatni konjugati mogu da uključuju jedinjenje bilo koje od formula opisanih u međunarodnoj prijavi br. WO2013033438.
[0309] Formulacija nanočestica može da sadrži polimerni konjugat. Polimerni konjugat može da bude konjugat rastvorljiv u vodi. Polimerni konjugat može da ima strukturu kao što je opisano u SAD patentnoj prijavi br. 20130059360. U nekim primerima izvođenja, polimerni konjugati sa polinukleotidima predmetnog prikaza mogu da budu napravljeni upotrebom postupaka i/ili segmentiranih polimernih reagenasa opisanih u SAD patentnoj prijavi br.20130072709. U nekim primerima izvođenja, polimerni konjugat može da ima bočne grupe koje sadrže prstenaste fragmente kao što su, ali bez ograničenja, polimerni konjugati opisani u SAD patentnoj objavi br. US20130196948.
[0310] Formulacije nanočestica mogu da sadrže konjugat za poboljšanje isporuke nanočestica predmetnog prikaza kod subjekta. Pored toga, konjugat može da inhibira fagocitni klirens nanočestica kod subjekta. U jednom aspektu, konjugat može da bude "auto" peptid dizajniran od peptida humane membrane CD47 (npr., "auto" čestice opisane u Rodriguez et al. (Science 2013 339, 971-975)). Kao što su pokazali Rodriguez et al., sopstveni peptidi su odložili klirens nanočestica posredovan makrofagima, što je poboljšalo isporuku nanočestica. U sledećem aspektu, konjugat može da bude membranski protein CD47 (npr., videti Rodriguez et al. Science 2013339, 971-975). Rodriguez et al. su pokazali da, slično kao i "auto" peptidi, CD47 može da poveća odnos cirkulišućih čestica kod subjekta u poređenju sa kodiranim peptidima i nanočesticama obloženim sa PEG.
[0311] U nekim primerima izvođenja, RNK (tj., iRNK) vakcine predmetnog prikaza su formulisane u nanočesticama koje sadrže konjugat za poboljšanje isporuke nanočestica predmetnog prikaza kod subjekta. Konjugat može da bude membranski protein CD47 ili konjugat može da potiče od membranskog proteina CD47, kao što je prethodno opisani "auto" peptid. U nekim primerima izvođenja, nanočestica može da sadrži PEG i konjugat CD47 ili njegov derivat. U nekim primerima izvođenja, nanočestica može da sadrži i ovde opisani "auto" peptid i membranski protein CD47.
[0312] U nekim primerima izvođenja, "auto" peptid i/ili CD47 protein mogu da budu konjugovani sa česticom nalik virusu ili pseudovirionom, kao što je ovde opisano za isporuku RNK (tj., iRNK) vakcine predmetnog prikaza.
[0313] U nekim primerima izvođenja, farmaceutske kompozicije RNK (tj., iRNK) vakcine sadrže polinukleotide predmetnog prikaza i konjugat koji može da ima razgradivu vezu. Neograničavajući primeri konjugata uključuju aromatični fragment koji sadrži jonizabilni atom vodonika, fragment spejsera i polimer rastvorljiv u vodi. Kao neograničavajući primer, farmaceutske kompozicije koje sadrže konjugat sa razgradivom vezom i postupci za isporuku takvih farmaceutskih kompozicija opisani su u SAD patentnoj objavi br. US20130184443.
[0314] Formulacije nanočestica mogu da budu nanočestice ugljenih hidrata koje sadrže ugljenohidratni nosač i RNK (tj., iRNK) vakcinu. Kao neograničavajući primer, ugljenohidratni nosač može da uključuje, ali nije ograničen na anhidridom modifikovan fitoglikogen ili materijal tipa glikogena, fitoglikogen oktenil sukcinat, fitoglikogen beta-dekstrin, anhidridom modifikovan fitoglikogen beta-dekstrin. (Videti npr., međunarodnu objavu br. WO2012109121).
[0315] Formulacije nanočestica predmetnog prikaza mogu da budu obložene surfaktantom ili polimerom da bi se poboljšala isporuka čestice. U nekim primerima izvođenja, nanočestica može da bude obložena hidrofilnom oblogom, kao što su, ali bez ograničenja, PEG obloge i/ili obloge koje imaju neutralno površinsko naelektrisanje. Hidrofilne obloge mogu da pomognu u isporuci nanočestica sa većim opterećenjima lekom kao što su, ali bez ograničenja, RNK (tj., iRNK) vakcine u centralni nervni sistem. Kao neograničavajući primer, nanočestice koje sadrže hidrofilnu oblogu i postupci za pravljenje takvih nanočestica opisani su u SAD patentnoj objavi br. US20130183244.
[0316] Formulacije lipidnih nanočestica mogu da se poboljšaju zamenom katjonskog lipida biorazgradivim katjonskim lipidom koji je poznat kao brzo eliminišuća lipidna nanočestica (reLNP). Pokazalo se da se jonizabilni katjonski lipidi, kao što su, ali bez ograničenja, DLinDMA, DLin-KC2-DMA i DLin-MC3-D MA, akumuliraju tokom vremena u plazmi i tkivima i mogu da predstavljaju potencijalni izvor toksičnosti. Brzi metabolizam brzo eliminišućih lipida može da poboljša podnošljivost i terapijski indeks lipidnih nanočestica za red veličine sa doze od 1 mg/kg na dozu od 10 mg/kg kod pacova. Uključivanje enzimski razgradive estarske veze može da poboljša profil degradacije i metabolizma katjonske komponente, uz istovremeno održavanje aktivnosti reLNP formulacije. Estarska veza može da bude interno locirana unutar lipidnog lanca ili može da bude terminalno locirana na kraju lipidnog lanca. Unutrašnja estarska veza može da zameni bilo koji ugljenik u lipidnom lancu.
[0317] U nekim primerima izvođenja, unutrašnja estarska veza može da se nalazi sa jedne ili druge strane zasićenog ugljenika.
[0318] U nekim primerima izvođenja, imunski odgovor može da bude izazvan isporukom lipidnih nanočestica koje mogu da uključuju nanovrstu, polimer i imunogen. (SAD objava br.
20120189700 i međunarodna objava br. WO2012099805). Polimer može da inkapsulira nanovrste ili da delimično inkapsulira nanovrste. Imunogen može da bude rekombinantni protein, modifikovana RNK i/ili ovde opisani polinukleotid. U nekim primerima izvođenja, lipidna nanočestica može da bude formulisana u vakcini kao što je, ali bez ograničenja, vakcina protiv patogena.
[0319] Lipidne nanočestice mogu da budu konstruisane da menjaju svojstva površine čestica tako da lipidne nanočestice mogu da prodru kroz mukoznu barijeru. Sluz se nalazi na mukoznom tkivu kao što je, ali bez ograničenja, oralno (npr., bukalne i ezofagusne membrane i tkivo krajnika), oftalmološko, gastrointestinalno (npr., želudac, tanko crevo, debelo crevo, kolon, rektum), nazalno, respiratorno (npr., nazalne, faringealne, trahealne i bronhijalne membrane), genitalno (npr., vaginalne, cervikalne i uretralne membrane). Smatra se da su nanočestice veće od 10-200 nm koje su poželjne zbog veće efikasnosti inkapsulacije leka i sposobnosti da obezbede kontinuiranu isporuku širokog spektra lekova prevelike da bi brzo difundovale kroz mukozne barijere. Sluz se kontinuirano izlučuje, izliva, odbacuje ili digestira i reciklira, tako da većina zarobljenih čestica može da se ukloni iz tkiva sluzokože u roku od nekoliko sekundi ili nekoliko časova. Velike polimerne nanočestice (200 nm-500 nm u prečniku) koje su gusto obložene polietilen glikolom niske molekulske težine (PEG) difundovale su kroz sluz samo 4 do 6-struko niže od istih čestica koje difunduju u vodi (Lai et al. PNAS 2007104(5):1482-487; Lai et al. Adv Drug Deliv Rev.2009 61(2): 158-171). Transport nanočestica može da se odredi upotrebom brzina permeacije i/ili tehnika fluorescentne mikroskopije uključujući, ali bez ograničenja, oporavak fluorescencije posle foto-obezbojavanja (FRAP) i praćenje više čestica u visokoj rezoluciji (MPT). Kao neograničavajući primer, kompozicije koje mogu da prodru kroz mukoznu barijeru mogu da se naprave kao što je opisano u SAD pat. br. 8,241,670 ili međunarodnoj patentnoj objavi br. WO2013110028.
[0320] Lipidna nanočestica konstruisana da prodre kroz sluz može da sadrži polimerni materijal (tj. polimerno jezgro) i/ili konjugat polimer-vitamin i/ili tri-blok kopolimer. Polimerni materijal može da uključuje, ali nije ograničen na, poliamine, polietre, poliamide, poliestere, polikarbamate, poliuree, polikarbonate, poli(stirene), poliimide, polisulfone, poliuretane, poliacetilene, polietilene, polietilenimine, poliizocijanate, poliakrilate, polimetakrilate, poliakrilonitrile i poliarilate. Polimerni materijal može da bude biorazgradiv i/ili biokompatibilan. Neograničavajući primeri biokompatibilnih polimera opisani su u međunarodnoj patentnoj objavi br. WO2013116804. Polimerni materijal može dodatno da bude ozračen. Kao neograničavajući primer, polimerni materijal može da bude ozračen gama zracima (videti npr., međunarodnu prijavu br. WO201282165). Neograničavajući primeri specifičnih polimera uključuju poli(kaprolakton) (PCL), polimer etilen vinil acetata (EVA), poli(mlečnu kiselinu) (PLA), poli(L-mlečnu kiselinu) (PLLA), poli(glikolnu kiselinu) (PGA), poli(mlečnu kiselinu-ko-glikolnu kiselinu) (PLGA), poli(L-mlečnu kiselinu-ko-glikolnu kiselinu) (PLLGA), poli(D,L-laktid) (PDLA), poli(L-laktid) (PLLA), poli(D,L-laktid-ko-kaprolakton), poli(D,L-laktid-ko-kaprolakton-ko-glikolid), poli(D,L-laktid-ko-PEO-ko-D,L-laktid), poli(D,L-laktid-ko-PPO-ko-D,L-laktid), polialkil cijanoakralat, poliuretan, poli-L-lizin (PLL), hidroksipropil metakrilat (HPMA), polietilenglikol, poli-L-glutaminsku kiselinu, poli(hidroksi kiseline), polianhidride, poliortoestre, poli(estarske amide), poliamide, poli(estarske etre), polikarbonate, polialkilene, kao što su polietilen i polipropilen, polialkilen glikole, kao što je poli(etilen glikol) (PEG), polialkilen okside (PEO), polialkilen tereftalate, kao što je poli(etilen tereftalat), polivinil alkohole (PVA), polivinil etre, polivinil estre, kao što je poli(vinil acetat), polivinil halogenidi kao što je poli(vinil hlorid) (PVC), polivinilpirolidon, polisiloksane, polistiren (PS), poliuretane, derivatizovane celuloze kao što su alkil celuloze, hidroksialkil celuloze, etri celuloze, estri celuloze, nitro celuloze, hidroksipropilceluloza, karboksimetilceluloza, polimere akrilnih kiselina, kao što su poli(metil(met)akrilat) (PMMA), poli(etil(met)akrilat), poli(butil(met)akrilat), poli(izobutil(met)akrilat), poli(heksil(met)akrilat), poli(izodecil(met)akrilat), poli(lauril(met)akrilat), poli(fenil(met)akrilat) poli(metil akrilat), poli(izopropil akrilat), poli(izobutil akrilat), poli(oktadecil akrilat) i kopolimeri i njihove smeše, polidioksanon i njegove kopolimere, polihidroksialkanoate, polipropilen fumarat, polioksimetilen, poloksamere, poli(orto)estre, poli(buternu kiselinu), poli(valerinsku kiselinu), poli(laktid-ko-kaprolakton), PEG-PLGA-PEG i trimetilen karbonat, polivinilpirolidon. Lipidna nanočestica može da bude obložena ili povezana sa kopolimerom kao što je, ali bez ograničenja, blok kopolimer (kao što je granati polietar-poliamid blok kopolimer opisan u međunarodnoj objavi br. WO2013012476), i (poli(etilen glikol))-(poli(propilen oksid))-(poli(etilen glikol)) triblok kopolimer (videti, npr., SAD objavu 20120121718 i SAD objavu 20100003337 i SAD pat. br.8,263,665). Kopolimer može da bude polimer koji se generalno smatra bezbednim (GRAS) i formiranje lipidne nanočestice može da bude takvo da se ne stvaraju novi hemijski entiteti. Na primer, lipidna nanočestica može da sadrži poloksamere koji oblažu PLGA nanočestice bez formiranja novih hemijskih entiteta, koje su i dalje sposobne da brzo prodru kroz ljudsku sluz (Yang et al. Angew. Chem. Int. Ed. 2011 50:2597-2600). Neograničavajući skalabilni postupak za proizvodnju nanočestica koje mogu da prodiru kroz humanu sluz opisan je kod Xu et al. (videti, npr., J Control Release 2013,170(2):279-86).
[0321] Vitamin iz konjugata polimer-vitamin može da bude vitamin E. Vitaminski deo konjugata može da bude supstituisan drugim pogodnim komponentama kao što su, ali bez ograničenja, vitamin A, vitamin E, drugi vitamini, holesterol, hidrofobni fragment, ili hidrofobna komponenta drugih surfaktanata (npr. lanci sterola, masne kiseline, lanci ugljovodonika i lanci alkilen oksida).
[0322] Lipidne nanočestice konstruisane da prodiru kroz sluz mogu da uključuju agense za izmenu površine kao što su, ali bez ograničenja, polinukleotidi, anjonski proteini (npr. goveđi serumski albumin), surfaktanti (npr. katjonski surfaktanti kao što je na primer dimetildioktadecil-amonijum bromid), šećeri ili derivati šećera (npr. ciklodekstrin), nukleinske kiseline, polimeri (npr. heparin, polietilen glikol i poloksamer), mukolitički agensi (npr. N-acetilcistein, mugvort, bromelain, papain, klerodendrum, acetilcistein, bromheksin, karbocistein, eprazinon, mesna, ambroksol, sobrerol, domiodol, letostein, stepronin, tiopronin, gelsolin, timozin β4 dornaza alfa, nelteneksin, erdostein) i različite DNaze uključujući rhDNazu. Agens za izmenu površine može da bude ugrađen ili upleten u površinu čestice ili odložen (npr. oblaganjem, adsorpcijom, kovalentnom vezom, ili drugim postupkom) na površinu lipidne nanočestice (videti npr., SAD objavu 20100215580 i SAD objavu 20080166414 i US20130164343).
[0323] U nekim primerima izvođenja, lipidne nanočestice koje prodiru kroz sluz mogu da sadrže najmanje jedan ovde opisani polinukleotid. Polinukleotid može da bude inkapsuliran u lipidnu nanočesticu i/ili izložen na površini čestice. Polinukleotid može da bude kovalentno kuplovan sa lipidnom nanočesticom. Formulacije lipidnih nanočestica koje prodiru kroz sluz mogu da sadrže mnoštvo nanočestica. Dalje, formulacije mogu da sadrže čestice koje mogu da interaguju sa sluzi i da promene strukturna i/ili adhezivna svojstva okolne sluzi kako bi se smanjila mukoadhezija, što može da poveća isporuku lipidnih nanočestica koje prodiru kroz sluz u mukozno tkivo.
[0324] U nekim primerima izvođenja, lipidne nanočestice koje prodiru kroz sluz mogu da budu hipotonična formulacija koja sadrži oblogu koja olakšava prodiranje kroz sluz. Formulacija može da bude hipotonična za epitel u koji se isporučuje. Neograničavajući primeri hipotoničnih formulacija mogu da se nađu u međunarodnoj patentnoj objavi br. WO2013110028.
[0325] U nekim primerima izvođenja, u cilju poboljšanja isporuke kroz mukoznu barijeru formulacija RNK (npr., iRNK) vakcine može da sadrži ili da bude hipotonični rastvor. Utvrđeno je da hipotonični rastvori povećavaju brzinu kojom mukoinertne čestice, kao što su, ali bez ograničenja, čestice koje prodiru kroz sluz, uspevaju da dođu do površine vaginalnog epitela (videti npr., Ensign et al. Biomaterials 201334(28):6922-9).
[0326] U nekim primerima izvođenja, takve formulacije mogu takođe da budu konstruisane ili kompozicije izmenjene tako da se pasivno ili aktivno usmeravaju na različite tipove ćelija in vivo, uključujući, ali bez ograničenja, hepatocite, imunske ćelije, tumorske ćelije, endotelne ćelije, antigen-prezentujuće ćelije i leukocite (Akinc et al. Mol Ther. 2010 18:1357-1364; Song et al., Nat Biotechnol.2005 23:7M-717; Judge et al., J Clin Invest.2009 119:661-673; Kaufmann et al., Microvasc Res 201080:286-293; Santel et al., Gene Ther 200613:1222-1234; Santel et al., Gene Ther 2006 13:1360-1370; Gutbier et al., Pulm Pharmacol, Ther. 201023:334-344; Basha et al., Mol. Ther. 2011 19:2186-2200; Fenske and Cullis, Expert Opin Drug Deliv.2008 5:25-44; Peer et al., Science. 2008319:627-630; Peer and Lieberman, Gene Ther. 201118:1127-1133). Jedan primer pasivnog usmeravanja formulacija na ćelije jetre uključuje formulacije lipidnih nanočestica na bazi DLin-DMA, DLin-KC2-DMA i DLin-MC3-DMA, za koje je pokazano da se vezuju za apolipoprotein E i podstiču vezivanje i preuzimanje ovih formulacija u hepatocite in vivo (Akinc et al. Mol Ther.2010 18:1357-1364). Formulacije mogu takođe da budu selektivno usmerene kroz ekspresiju različitih liganda na svojoj površini, kao što je ilustrovano, ali nije ograničeno, folatom, transferinom, N-acetilgalaktozaminom (GalNAc), i pristupima usmerenim na antitelo (Kolhatkar et al., Curr Drug Discov Technol. 2011 8:197-206; Musacchio and Torchilin, Front Biosci. 2011 16:1388-1412; Yu et al., Mol Membr Biol. 201027:286-298; Patil et al., Crit Rev Ther Drug Carrier Syst. 2008 25:1-61; Benoit et al., Biomacro molecules.2011 12:2708-2714; Zhao et al., Expert Opin Drug Deliv. 2008 5:309-319; Akinc et al., Mol Ther.201018:1357-1364; Srinivasan et al., Methods Mol Biol.2012 820:105-116; Ben-Arie et al., Methods Mol Biol. 2012 757:497-507; Peer 2010 J Control Release.20:63-68; Peer et al., Proc Natl Acad Sci USA.2007 104:4095-4100; Kim et al., Methods Mol Biol. 2011 721:339-353; Subramanya et al., Mol Ther.
201018:2028-2037; Song et al., Nat Biotechnol. 2005 23:709-717; Peer et al., Science. 2008 319:627-630; Peer and Lieberman, Gene Ther.2011 18:1127-1133).
[0327] U nekim primerima izvođenja, RNK (tj., iRNK) vakcine predmetnog prikaza mogu da budu formulisane za kontrolisano oslobađanje i/ili ciljanu isporuku. Kako se ovde koristi, "kontrolisano oslobađanje" se odnosi na profil oslobađanja farmaceutske kompozicije ili jedinjenja koji je u skladu sa određenim obrascem oslobađanja za postizanje terapijskog ishoda. U nekim primerima izvođenja, RNK (tj., iRNK) vakcine mogu da budu inkapsulirane u agens za isporuku koji je ovde opisan i/ili poznat u tehnici za kontrolisano oslobađanje i/ili ciljanu isporuku. Kako se ovde koristi,
1
termin "inkapsulirati" znači zatvoriti, okružiti ili obložiti. Kada se odnosi na formulaciju jedinjenja prikaza, inkapsulacija može da bude suštinska, potpuna ili delimična. Termin "suštinski inkapsuliran" znači da najmanje više od 50, 60, 70, 80, 85, 90, 95, 96, 97, 98, 99, 99.9, 99.9 ili više od 99.999% farmaceutske kompozicije ili jedinjenja prikaza može da bude zatvoreno, okruženo ili obloženo u agensu za isporuku. "Delimična inkapsulacija" znači da manje od 10, 10, 20, 30, 40, 50 ili manje farmaceutske kompozicije ili jedinjenja prikaza može da bude zatvoreno, okruženo ili obloženo u agensu za isporuku. Pogodno, inkapsulacija može da se odredi merenjem otpuštanja ili aktivnosti farmaceutske kompozicije ili jedinjenja prikaza upotrebom fluorescencije i/ili elektronske mikrografije. Na primer, najmanje 1, 5, 10, 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 85, 90, 95, 96, 97, 98, 99, 99.9, 99.99 ili više od 99.99% farmaceutske kompozicije ili jedinjenja prikaza je inkapsulirano u agensu za isporuku.
[0328] U nekim primerima izvođenja, formulacija sa kontrolisanim otpuštanjem može da uključuje, ali nije ograničena na tri-blok kopolimere. Kao neograničavajući primer, formulacija može da uključuje dva različita tipa tri-blok kopolimera (međunarodna objava br. WO2012131104 i WO2012131106).
[0329] U nekim primerima izvođenja, RNK (tj., iRNK) vakcine mogu da budu inkapsulirane u lipidnu nanočesticu ili brzo eliminišuću lipidnu nanočesticu, a lipidne nanočestice ili brzo eliminišuće lipidne nanočestice mogu zatim da se inkapsuliraju u polimer, hidrogel i/ili hirurški zaptivač koji je ovde opisan i/ili poznat u tehnici, Kao neograničavajući primer, polimer, hidrogel ili hirurški zaptivač može da bude PLGA, etilene vinil acetat (EVAc), poloksamer, GELSITE<®>(Nano-therapeutics, Inc. Alachua, FL), HYLENEX<®>(Halozyme Therapeutics, San Diego CA), hirurški zaptivači kao što su polimeri fibrinogena (Ethicon Inc. Cornelia, GA), TISSELL<®>(Baxter International, Inc Deerfield, IL), zaptivači na bazi PEG i COSEAL<®>(Baxter International, Inc Deerfield, IL).
[0330] U nekim primerima izvođenja, lipidna nanočestica može da bude inkapsulirana u bilo koji polimer poznat u tehnici koji može da obrazuje gel kada se ubrizga u subjekat. Kao još jedan neograničavajući primer, lipidna nanočestica može da bude inkapsulirana u polimernu matricu koja može da bude biorazgradiva.
[0331] U nekim primerima izvođenja, formulacija RNK (tj., iRNK) vakcine za kontrolisano oslobađanje i/ili ciljanu isporuku može takođe da uključuje najmanje jednu oblogu za kontrolisano oslobađanje. Obloge za kontrolisano oslobađanje uključuju, ali nisu ograničene na, OPADRY<®>, polivinilpirolidon/vinil acetatni kopolimer, polivinilpirolidon, hidroksipropil metilcelulozu, hidroksipropil celulozu, hidroksietil celulozu, EUDRAGIT RL<®>, EUDRAGIT RS<®>i derivate celuloze kao što su vodene disperzije etilceluloze (AQUACOAT<®>i SURELEASE<®>).
2
[0332] U nekim primerima izvođenja, formulacija RNK (tj., iRNK) vakcine za kontrolisano oslobađanje i/ili ciljanu isporuku može da sadrži najmanje jedan razgradivi poliestar koji može da sadrži polikatjonske bočne lance. Razgradivi poliestri uključuju, ali nisu ograničeni na, poli(serinski estar), poli(L-laktid-ko-L-lizin), poli(4-hidroksi-L-prolin estar) i njihove kombinacije. U nekim primerima izvođenja, razgradivi poliestri mogu da uključuju konjugaciju sa PEG da bi se formirao PEGilovani polimer.
[0333] U nekim primerima izvođenja, formulacija RNK (tj., iRNK) vakcine za kontrolisano oslobađanje i/ili ciljanu isporuku koja sadrži najmanje jedan polinukleotid može da sadrži najmanje jedan PEG i/ili derivat polimera povezan sa PEG, kao što je opisano u SAD patentu br.
8,404,222.
[0334] U nekim primerima izvođenja, formulacija RNK (tj., iRNK) vakcine za kontrolisano oslobađanje isporuku koja sadrži najmanje jedan polinukleotid može da bude polimerni sistem za kontrolisano oslobađanje opisan u US20130130348.
[0335] U nekim primerima izvođenja, RNK (tj., iRNK) vakcine predmetnog prikaza mogu da budu inkapsulirane u terapijsku nanočesticu, ovde označene kao "RNK (npr., iRNK) vakcine u vidu terapijske nanočestice". Terapijske nanočestice mogu da budu formulisane postupcima koji su ovde opisani i poznati u struci kao što su, ali bez ograničenja, međunarodne objave br. WO2010005740, WO2010030763, WO2010005721, WO2010005723, WO2012054923, SAD objave br. US20110262491, US20100104645, US20100087337, US20100068285, US20110274759, US20100068286, US20120288541, US20130123351 i US20130230567 i SAD patenti br.8,206,747, 8,293,276, 8,318,208 i 8,318,211. U nekim primerima izvođenja, terapijske polimerne nanočestice mogu da budu identifikovane postupcima opisanim u SAD objavi br. US20120140790.
[0336] U nekim primerima izvođenja, RNK (npr., iRNK) vakcina u vidu terapijske nanočestice može da bude formulisana za produženo oslobađanje. Kako se ovde koristi, "produženo oslobađanje" se odnosi na profil oslobađanja farmaceutske kompozicije ili jedinjenja koji je u skladu sa brzinom oslobađanja tokom određenog vremenskog perioda. Vremenski period može da uključuje, ali nije ograničen na, časove, dane, nedelje, mesece i godine. Kao neograničavajući primer, nanočestica sa produženim oslobađanjem može da sadrži polimer i terapijski agens kao što su, ali bez ograničenja, polinukleotidi predmetnog prikaza (videti međunarodnu objavu br.
2010075072 i SAD objave br. US20100216804, US20110217377 i US20120201859). U još jednom neograničavajućem primeru, sa produženim oslobađanjem može da sadrži agense koji omogućavaju trajnu bioraspoloživost, kao što su, ali bez ograničenja, kristali, makromolekulski gelovi i/ili suspenzije čestica (videti SAD patentnu objavu br. US20130150295).
[0337] U nekim primerima izvođenja, RNK (npr., iRNK) vakcine u vidu terapijske nanočestice mogu da budu formulisane tako da budu specifične za ciljno mesto. Kao neograničavajući primer, terapijske nanočestice mogu da uključuju kortikosteroid (videti međunarodnu objavu br. WO2011084518). Kao neograničavajući primer, terapijske nanočestice mogu da budu formulisane u nanočestice opisane u međunarodnim objavama br. WO2008121949, WO2010005726, WO2010005725, WO2011084521 i SAD objavama br. US20100069426, US20120004293 i US20100104655.
[0338] U nekim primerima izvođenja, nanočestice predmetnog prikaza mogu da sadrže polimernu matricu. Kao neograničavajući primer, nanočestica može da sadrži dva ili više polimera, kao što su, ali bez ograničenja, polietileni, polikarbonati, polianhidridi, polihidroksikiseline, polipropilfumerati, polikaprolaktoni, poliamidi, poliacetali, polietri, poliestri, poli(ortoestri), policijanoakrilati, polivinil alkoholi, poliuretani, polifosfazeni, poliakrilati, polimetakrilati, policijanoakrilati, poliuree, polistireni, poliamini, polilizin, poli(etilen imin), poli(serin estar), poli(L-laktid-ko-L-lizin), poli(4-hidroksi-L-prolin estar) ili njihove kombinacije.
[0339] U nekim primerima izvođenja, terapijska nanočestica sadrži diblok kopolimer. U nekim primerima izvođenja, diblok kopolimer može da uključuje PEG u kombinaciji sa polimerom, kao što su, ali bez ograničenja, polietileni, polikarbonati, polianhidridi, polihidroksikiseline, polipropilfumerati, polikaprolaktoni, poliamidi, poliacetali, polietri, poliestri, poli(ortoestri), policijanoakrilati, polivinil alkoholi, poliuretani, polifosfazeni, poliakrilati, polimetakrilati, policijanoakrilati, poliuree, polistireni, poliamini, polilizin, poli(etilen imin), poli(serin estar), poli(L-laktid-ko-L-lizin), poli(4-hidroksi-L-prolin estar) ili njihove kombinacije. U još jednom primeru izvođenja, diblok kopolimer može da bude diblok kopolimer sa visokim X, kao što su oni opisani u međunarodnoj patentnoj objavi br. WO2013120052.
[0340] Kao neograničavajući primer, terapijska nanočestica sadrži PLGA-PEG blok kopolimer (videti SAD objavu br. US20120004293 i SAD patent br. 8,236,330). U drugom neograničavajućem primeru, terapijska nanočestica je stelt nanočestica koja sadrži diblok kopolimer PEG i PLA ili PEG i PLGA (videti SAD patent br.8,246,968 i međunarodnu objavu br. WO2012166923). U još jednom neograničavajućem primeru, terapijska nanočestica je stelt nanočestica ili stelt nanočestica specifična za cilj, kao što je opisano u SAD patentnoj objavi br. US20130172406.
[0341] U nekim primerima izvođenja, terapijska nanočestica može da sadrži mutiblok kopolimer (videti npr., SAD pat. br.8,263,665 i 8,287,910 i SAD patentnu objavu br. US20130195987).
[0342] U još jednom neograničavajućem primeru, lipidna nanočestica sadrži blok kopolimer PEG-PLGA-PEG (videti npr., termosenztivni hidrogel (PEG-PLGA-PEG) je upotrebljen kao vehikulum za isporuku gena TGF-beta1 kod Lee et al. Thermosensitive Hydrogel as a Tgf-β1 Gene Delivery
4
Vehicle Enhances Diabetic Wound Healing. Pharmaceutical Research, 200320(12): 1995-2000; kao sistem za kontrolisanu isporuku gena kod Li et al. Controlled Gene Delivery System Based on Thermosensitive Biodegradable Hydrogel, Pharmaceutical Research 2003 20(6):884-888; i Chang et al., Non-ionic amphiphilic biodegradable PEG-PLGA-PEG copolymer enhances gene delivery efficiency in rat skeletal muscle. J Controlled Release. 2007 118:245-253). RNK (tj., iRNK) vakcine predmetnog prikaza mogu da budu formulisane u lipidnim nanočesticama koje sadrže PEG-PLGA-PEG blok kopolimer.
[0343] U nekim primerima izvođenja, terapijska nanočestica može da sadrži mutiblok kopolimer (videti npr., SAD patent br.8,263,665 i 8,287,910 i SAD patentnu objavu br. US20130195987).
[0344] U nekim primerima izvođenja, ovde opisani blok kopolimeri mogu da budu uključeni u polijonski kompleks koji sadrži nepolimernu micelu i blok kopolimer. (Videti npr., SAD objavu br. 20120076836).
[0345] U nekim primerima izvođenja, terapijska nanočestica može da sadrži najmanje jedan akrilni polimer. Akrilni polimeri uključuju, ali nisu ograničeni na, akrilnu kiselinu, metakrilnu kiselinu, kopolimere akrilne kiseline i metakrilne kiseline, kopolimere metil metakrilata, etoksietil metakrilate, cijanoetil metakrilate, amino alkil metakrilatni kopolimer, poli(akrilnu kiselinu), poli(metakrilnu kiselinu), policijanoakrilate i njihove kombinacije.
[0346] U nekim primerima izvođenja, terapijske nanočestice mogu da sadrže najmanje jedan poli(vinil estar) polimer. Poli(vinil estar) polimer može da bude kopolimer kao što je nasumični kopolimer. Kao neograničavajući primer, nasumični kopolimer može da ima strukturu kao što su one opisane u međunarodnoj prijavi br. WO2013032829 ili SAD patentnoj objavi br US20130121954. U nekim primerima izvođenja, poli(vinil estar) polimeri mogu da budu konjugovani sa ovde opisanim polinukleotidima.
[0347] U nekim primerima izvođenja, terapijska nanočestica može da sadrži najmanje jedan diblok kopolimer. Diblok kopolimer može da bude, ali nije ograničen na, kopolimer poli(mlečna) kiselina-poli(etilen)glikol (videti, npr., međunarodnu patentnu objavu br. WO2013044219). Kao neograničavajući primer, terapijska nanočestica može da bude upotrebljena za lečenje kancera (videti međunarodnu objavu br. WO2013044219).
[0348] U nekim primerima izvođenja, terapijske nanočestice mogu da sadrže najmanje jedan katjonski polimer koji je ovde opisan i/ili poznat u tehnici.
[0349] U nekim primerima izvođenja, terapijske nanočestice mogu da sadrže najmanje jedan polimer koji sadrži amin, kao što su, ali bez ograničenja, polilizin, polietilen imin, poli(amidoamin) dendrimeri, poli(beta-amino estri) (videti, npr., SAD patent br.8,287,849) i njihove kombinacije.
[0350] U nekim primerima izvođenja, ovde opisane nanočestice mogu da sadrže amin katjonski lipid kao što su oni opisani u međunarodnoj patentnoj prijavi br. WO2013059496. U nekim primerima izvođenja, katjonski lipidi mogu da imaju amino-aminski ili amino-amidni fragment.
[0351] U nekim primerima izvođenja, terapijske nanočestice mogu da sadrže najmanje jedan razgradivi poliestar koji može da sadrži polikatjonske bočne lance. Razgradivi poliestri uključuju, ali nisu ograničeni na, poli(serin estar), poli(L-laktid-ko-L-lizin), poli(4-hidroksi-L-prolin estar) i njihove kombinacije. U nekim primerima izvođenja, razgradivi poliestri mogu da uključuju konjugaciju sa PEG kako bi se obrazovao PEGilovani polimer.
[0352] U nekim primerima izvođenja, sintetički nanonosači mogu da sadrže imunostimulatorni agens za poboljšanje imunskog odgovora nastalo isporukom sintetičkog nanonosača. Kao neograničavajući primer, sintetički nanonosač može da sadrži Th1 imunostimulatorni agens, koji može da poboljša odgovor imunskog sistema zasnovan na Th1 (videti međunarodnu objavu br. WO2010123569 i SAD objavu br. US20110223201).
[0353] U nekim primerima izvođenja, sintetički nanonosači mogu da budu formulisani za ciljano oslobađanje. U nekim primerima izvođenja, sintetički nanonosač je formulisan tako da oslobađa polinukleotide na specifičnom pH i/ili nakon željenog vremenskog intervala. Kao neograničavajući primer, sintetička nanočestica može da bude formulisana tako da oslobađa RNK (npr., iRNK) vakcine nakon 24 časa i/ili na pH od 4.5 (videti međunarodne objave br. WO2010138193 i WO2010138194 i SAD objave br. US20110020388 i US20110027217).
[0354] U nekim primerima izvođenja, sintetički nanonosači mogu da budu formulisani za kontrolisano i/ili produženo oslobađanje ovde opisanih polinukleotida. Kao neograničavajući primer, sintetički nanonosači za produženo oslobađanje mogu da budu formulisani postupcima koji su poznati u tehnici, opisani u ovom dokumentu i/ili opisani u međunarodnoj objavi br. WO2010138192 i SAD objavi br.20100303850.
[0355] U nekim primerima izvođenja, RNK (tj., iRNK) vakcina može da bude formulisana za kontrolisano i/ili produženo oslobađanje pri čemu formulacija sadrži najmanje jedan polimer koji predstavlja polimer sa kristalnim bočnim lancem (CYSC). CYSC polimeri su opisani u SAD patentu br.8,399,007.
[0356] U nekim primerima izvođenja, nanočestica može da bude optimizovana za oralnu primenu. Nanočestica može da sadrži najmanje jedan katjonski biopolimer kao što je, ali bez ograničenja, kitosan ili njegov derivat. Kao neograničavajući primer, nanočestica može da bude formulisana postupcima opisanim u SAD objavi br.20120282343.
[0357] U nekim primerima izvođenja, LNP sadrže lipid KL52 (amino-lipid opisan u objavi SAD prijave br. 201210295832. Aktivnost i/ili bezbednost (izmerena ispitivanjem jednog ili više od ALT/AST, broja belih krvnih zrnaca i indukcije citokina, na primer) primene LNP može da bude poboljšana ugradnjom takvih lipida. LNP koje sadrže KL52 mogu da se primene intravenski i/ili u jednoj ili više doza. U nekim primerima izvođenja, primena LNP koje sadrže KL52 rezultuje jednakom ili poboljšanom ekspresijom iRNK i/ili proteina u poređenju sa LNP koje sadrže MC3.
[0358] U nekim primerima izvođenja, RNK (tj., iRNK) vakcina može da bude isporučena upotrebom manjih LNP. Takve čestice mogu da imaju prečnik od manje od 0.1 um do 100 nm, kao što je, ali bez ograničenja, manje od 0.1 um, manje od 1.0 um, manje od 5 um, manje od 10 um, manje od 15 um, manje od 20 um, manje od 25 um, manje od 30 um, manje od 35 um, manje od 40 um, manje od 50 um, manje od 55 um, manje od 60 um, manje od 65 um, manje od 70 um, manje od 75 um, manje od 80 um, manje od 85 um, manje od 90 um, manje od 95 um, manje od 100 um, manje od 125 um, manje od 150 um, manje od 175 um, manje od 200 um, manje od 225 um, manje od 250 um, manje od 275 um, manje od 300 um, manje od 325 um, manje od 350 um, manje od 375 um, manje od 400 um, manje od 425 um, manje od 450 um, manje od 475 um, manje od 500 um, manje od 525 um, manje od 550 um, manje od 575 um, manje od 600 um, manje od 625 um, manje od 650 um, manje od 675 um, manje od 700 um, manje od 725 um, manje od 750 um, manje od 775 um, manje od 800 um, manje od 825 um, manje od 850 um, manje od 875 um, manje od 900 um, manje od 925 um, manje od 950 um, manje od 975 um, ili manje od 1000 um.
[0359] U nekim primerima izvođenja, RNK (tj., iRNK) vakcine mogu da budu isporučene upotrebom manjih LNP, koje mogu da imaju prečnik od oko 1 nm do oko 100 nm, od oko 1 nm do oko 10 nm, oko 1 nm do oko 20 nm, od oko 1 nm do oko 30 nm, od oko 1 nm do oko 40 nm, od oko 1 nm do oko 50 nm, od oko 1 nm do oko 60 nm, od oko 1 nm do oko 70 nm, od oko 1 nm do oko 80 nm, od oko 1 nm do oko 90 nm, od oko 5 nm do oko 100 nm, od oko 5 nm do oko 10 nm, oko 5 nm do oko 20 nm, od oko 5 nm do oko 30 nm, od oko 5 nm do oko 40 nm, od oko 5 nm do oko 50 nm, od oko 5 nm do oko 60 nm, od oko 5 nm do oko 70 nm, od oko 5 nm do oko 80 nm, od oko 5 nm do oko 90 nm, oko 10 do oko 50 nm, od oko 20 do oko 50 nm, od oko 30 do oko 50 nm, od oko 40 do oko 50 nm, od oko 20 do oko 60 nm, od oko 30 do oko 60 nm, od oko 40 do oko 60 nm, od oko 20 do oko 70 nm, od oko 30 do oko 70 nm, od oko 40 do oko 70 nm, od oko 50 do oko 70 nm, od oko 60 do oko 70 nm, od oko 20 do oko 80 nm, od oko 30 do oko 80 nm, od oko 40 do oko 80 nm, od oko 50 do oko 80 nm, od oko 60 do oko 80 nm, od oko 20 do oko 90 nm, od oko 30 do oko 90 nm, od oko 40 do oko 90 nm, od oko 50 do oko 90 nm, od oko 60 do oko 90 nm i/ili od oko 70 do oko 90 nm.
[0360] U nekim primerima izvođenja, takve LNP se sintetišu upotrebom postupaka koji obuhvataju mikrofluidne miksere. Primeri mikrofluidnih miksera mogu da uključuju, ali nisu ograničeni na, interdigitalni mikromikser sa prorezom, uključujući, ali ne ograničavajući se na one koje proizvodi Microinnova (Allerheiligen bei Wildon, Austrija) i/ili mikromikser sa mešačem tipa riblje kosti (SHM) (objavljen je Zhigaltsev, I.V. et al., Bottom-up design and synthesis of limit size lipid nanoparticle systems with aqueous and triglyceride cores using millisecond microfluidic mixing (Langmuir. 2012. 28:3633-40; Bellveau, N.M. et al., Microfluidic synthesis of highly potent limit-size lipid nanoparticles for in vivo delivery of siRNA. Molecular Therapy-Nucleic Acids. 2012. 1:e37; Chen, D. et al., Rapid discovery of potent siRNA-containing lipid nanoparticles enabled by controlled microfluidic formulation. J Am Chem Soc. 2012.
134(16):6948-51). U nekim primerima izvođenja, postupci za generisanje LNP koji uključuju SHM, dalje obuhvataju mešanje najmanje dva ulazna toka pri čemu se mešanje odvija haotičnom advekcijom indukovanom mikrostrukturom (MICA). Prema ovom postupku, tokovi fluida teku kroz kanale prisutne u obliku riblje kosti izazivajući rotacioni tok i uvijanje fluida jednog oko drugog. Ovaj postupak može takođe da uključuje površinu za mešanje fluida pri čemu površina menja orjentaciju tokom kruženja fluida. Postupci za generisanje LNP upotrebom SHM uključuju one opisane i objavama SAD prijava br.2004/0262223 i 2012/0276209.
[0361] U nekim primerima izvođenja, RNK (tj., iRNK) vakcina predmetnog prikaza može da bude formulisana u lipidnim nanočesticama stvorenim upotrebom mikromiksera kao što je, ali bez ograničenja, interdigitalni mikromikser sa prorezom (SIMM-V2) ili standardni interdigitalni mikromikser sa prorezom (SSIMM) ili katerpilar (CPMM) ili mlaznica sa sudarajućim strujama (IJMM) sa Instituta za mikrotehnologiju Mainz GmbH, Mainz, Nemačka).
[0362] U nekim primerima izvođenja, RNK (tj., iRNK) vakcine predmetnog prikaza mogu da budu formulisane u lipidnim nanočesticama stvorenim upotrebom tehnologije mikrofluida (videti, npr., Whitesides, George M. The Origins and the Future of Microfluidics. Nature, 2006442: 368-373; i Abraham et al., Chaotic Mixer for Microchannels. Science, 2002 295: 647-651). Kao neograničavajući primer, kontrolisana mikrofluidna formulacija uključuje pasivni postupak za mešanje tokova protoka vođenih stabilnim pritiskom u mikro kanalima pri niskom Reynoldsovom broju (videti, npr., Abraham et al. Chaotic Mixer for Microchannels. Science, 2002295: 647-651).
[0363] U nekim primerima izvođenja, RNK (tj., iRNK) vakcine predmetnog prikaza mogu da budu formulisane u lipidnim nanočesticama stvorenim upotrebom mikromiksera u vidu čipa kao što su, ali bez ograničenja, oni kompanije Harvard Apparatus (Holliston, MA) ili Dolomite Microfluidics (Royston, UK). Mikromikser u vidu čipa može da se upotrebi za brzo mešanje dva ili više fluidnih tokova mehanizmom razdvajanja i ponovnog kombinovanja.
[0364] U nekim primerima izvođenja, RNK (tj., iRNK) vakcine prikaza mogu da budu formulisane za isporuku upotrebom mikrosfera za inkapsulaciju leka opisanih u međunarodnoj patentnoj objavi br. WO2013063468 ili SAD patentu br.8,440,614. Mikrosfere mogu da sadrže jedinjenje formule (I), (II), (III), (IV), (V) ili (VI) kao što je opisano u međunarodnoj patentnoj objavi br. WO2013063468. U nekim primerima izvođenja, aminokiseline, peptidi, polipeptidi, lipidi (APPL) su korisni u isporuci RNK (tj., iRNK) vakcina prikaza u ćelije (videti međunarodnu patentnu objavu br. WO2013063468).
[0365] U nekim primerima izvođenja, RNK (tj., iRNK) vakcine prikaza mogu da budu formulisane u lipidnim nanočesticama koje imaju prečnik od oko 10 do oko 100 nm kao što je, ali bez ograničenja, oko 10 do oko 20 nm, oko 10 do oko 30 nm, oko 10 do oko 40 nm, oko 10 do oko 50 nm, oko 10 do oko 60 nm, oko 10 do oko 70 nm, oko 10 do oko 80 nm, oko 10 do oko 90 nm, oko 20 do oko 30 nm, oko 20 do oko 40 nm, oko 20 do oko 50 nm, oko 20 do oko 60 nm, oko 20 do oko 70 nm, oko 20 do oko 80 nm, oko 20 do oko 90 nm, oko 20 do oko 100 nm, oko 30 do oko 40 nm, oko 30 do oko 50 nm, oko 30 do oko 60 nm, oko 30 do oko 70 nm, oko 30 do oko 80 nm, oko 30 do oko 90 nm, oko 30 do oko 100 nm, oko 40 do oko 50 nm, oko 40 do oko 60 nm, oko 40 do oko 70 nm, oko 40 do oko 80 nm, oko 40 do oko 90 nm, oko 40 do oko 100 nm, oko 50 do oko 60 nm, oko 50 do oko 70 nm oko 50 do oko 80 nm, oko 50 do oko 90 nm, oko 50 do oko 100 nm, oko 60 do oko 70 nm, oko 60 do oko 80 nm, oko 60 do oko 90 nm, oko 60 do oko 100 nm, oko 70 do oko 80 nm, oko 70 do oko 90 nm, oko 70 do oko 100 nm, oko 80 do oko 90 nm, oko 80 do oko 100 nm i/ili oko 90 do oko 100 nm.
[0366] U nekim primerima izvođenja, lipidne nanočestice mogu da imaju prečnik od oko 10 do 500 nm.
[0367] U nekim primerima izvođenja, lipidna nanočestica može da ima prečnik veći od 100 nm, veći od 150 nm, veći od 200 nm, veći od 250 nm, veći od 300 nm, veći od 350 nm, veći od 400 nm, veći od 450 nm, veći od 500 nm, veći od 550 nm, veći od 600 nm, veći od 650 nm, veći od 700 nm, veći od 750 nm, veći od 800 nm, veći od 850 nm, veći od 900 nm, veći od 950 nm ili veći od 1000 nm.
[0368] Nanočestice predmetnog prikaza mogu dalje da uključuju hranljive materije kao što su, ali bez ograničenja, one čiji nedostaci mogu da dovedu do opasnosti po zdravlje od anemije do defekata neuralne cevi (videti, npr., nanočestice opisane u međunarodnoj patentnoj objavi br. WO2013072929). Kao neograničavajući primer, hranljiva materija može da bude gvožđe u obliku fero soli, feri soli ili elementalnog gvožđa, joda, folne kiseline, vitamina ili mikronutrijenata.
[0369] U nekim primerima izvođenja RNK (tj., iRNK) vakcina može da bude udružena sa katjonskim ili polikatjonskim jedinjenjima, uključujući protamin, nukleolin, spermin ili spermidin, ili druge katjonske peptide ili proteine, kao što su poli-L-lizin (PLL), poliarginin, bazni polipeptidi, peptidi koji prodiru u ćelije (CPPs), uključujući HIV-vezujuće peptide, HIV-1 Tat (HIV), peptide poreklom od Tat, Penetratin, peptide poreklom od ili analoge VP<22>, Erns pestivirusa, HSV, VP<22>(Herpes simpleks), MAP, KALA ili domeni transdukcije proteina (PTDs), PpT620, peptidi bogati prolinom, peptidi bogati argininom, peptidi bogati lizinom, MPG-peptid/peptidi, Pep-1, L-oligomeri, kalcitoninski peptid/peptidi, peptidi koji potiču iz Antennapedia (posebno iz vrste Drosophila antennapedia), pAntp, plsl, FGF, Laktoferin, Transportan, Buforin-2, Bac715-24, SynB, SynB(1), pVEC, peptidi poreklom od hCT, SAP, histoni, katjonski polisaharidi, na primer kitosan, polibren, katjonski polimeri, npr. polietilenimin (PEI), katjonski lipidi, npr. DOTMA: [1-(2,3-sioleiloksi)propil)]-N,N,N-trimetilamonijum hlorid, DMRIE, di-C14-amidin, DOTIM, SAINT, DC-hol, BGTC, CTAP, DOPC, DODAP, DOPE: Dioleil fosfatidiletanol-amin, DOSPA, DODAB, DOIC, DMEPC, DOGS: Dioktadecilamidoglicilspermin, DIMRI: Dimiristooksipropil dimetil hidroksietil amonijum bromid, DOTAP: dioleoiloksi-3-(trimetilamonio)propan, DC-6-14: O,O-ditetradekanoil-N-.alfa.-trimetilamonioacetil)dietanolamin hlorid, CLIP 1: rac-[(2,3-dioktadeciloksipropil)(2-hidroksietil)]-dimetilamonijum hlorid, CLIP6: rac-[2(2,3-diheksadeciloksipropiloksimetiloksi)etil]-trimetilamonijum, CLIP9: rac-[2(2,3-diheksadeciloksipropiloksisukciniloksi)etil]-trimetilamonijum, oligofektamin, ili katjonski ili polikatjonski polimeri, npr. modifikovane poliaminokiseline, kao što su polimeri betaaminokiselina ili reverzni poliamidi, itd., modifikovani polietileni, kao PVP (poli(N-etil-4-vinilpiridinijum bromid)), itd., modifikovani akrilati, kao pDMAEMA (poli(dimetilaminoetil metilakrilat)), itd., modifikovani amidoamini kao pAMAM (poli(amidoamin)), itd., modifikovani polibetaminoestar (PBAE), kao 1,4 butandiol diakrilat-ko-5-amino-1-pentanol polimeri modifikovani na diaminskom kraju, itd., dendrimeri, kao polipropilaminski dendrimeri ili dendrimeri na bazi pAMAM, itd., poliimin(i), kao PEI: poli(etilenimin), poli(propilenimin), itd., polialilamin, polimeri na bazi šećernog osnovnog lanca, kao polimeri na bazi ciklodekstrina, polimeri na bazi dekstrana, kitosan, itd., polimeri na bazi osnovnog lanca silana, kao kopolimeri PMOXA-PDMS itd., blokpolimeri koji se sastoje od kombinacije jednog ili više katjonskih blokova (npr. odabranih od katjonskog polimera kao što je prethodno pomenuto) i jednog ili više hidrofilnih ili hidrofobnih blokova (npr. polietilenglikol), itd.
[0370] U drugim primerima izvođenja RNK (tj., iRNK) vakcina nije udružena sa katjonskim ili polikatjonskim jedinjenjima.
[0371] U nekim primerima izvođenja, nanočestica sadrži jedinjenja formule (I):
ili njihovu so ili izomer, pri čemu:
R1je odabran iz grupe koja se sastoji od C5-30alkila, C5-20alkenila, -R*YR", -YR" i -R"M'R';
R2i R3su nezavisno odabrani iz grupe koja se sastoji od H, C1-14alkila, C2-14alkenila, -R*YR", -YR" i -R*OR", ili R2i R3, zajedno sa atomom za koji su vezani, formiraju heterocikl ili karbocikl;
R4je odabran iz grupe koja se sastoji od C3-6karbocikla, -(CH2)nQ, -(CH2)nCHQR, -CHQR, -CQ(R)2, i nesupstituisanog C1-6alkila, gde je Q odabran od karbocikla, heterocikla, -OR, -O(CH2)nN(R)2, -C(O)OR,
-OC(O)R, -CX3, -CX2H, -CXH2, -CN, -N(R)2,
-C(O)N(R)2,-N(R)C(O)R, -N(R)S(O)2R, -N(R)C(O)N(R)2, -N(R)C(S)N(R)2, -N(R)R8, -O(CH2)nOR, -N(R)C(=NR9)N(R)2, -N(R)C(=CHR9)N(R)2, -OC(O)N(R)2, -N(R)C(O)OR, -N(OR)C(O)R, -N(OR)S(O)2R, -N(OR)C(O)OR, -N(OR)C(O)N(R)2, -N(OR)C(S)N(R)2, -N(OR)C(=NR9)N(R)2, -N(OR)C(=CHR9)N(R)2, -C(=NR9)N(R)2, -C(=NR9)R, -C(O)N(R)OR i -C(R)N(R)2C(O)OR, i svaki n je nezavisno odabran od 1, 2, 3, 4 i 5;
svaki R5je nezavisno odabran iz grupe koja se sastoji od C1-3alkila, C2-3alkenila i H; svaki R6je nezavisno odabran iz grupe koja se sastoji od C1-3alkila, C2-3alkenila i H; M i M' su nezavisno odabrani od -C(O)O-, -OC(O)-, -C(O)N(R')-,
-N(R')C(O)-, -C(O)-, -C(S)-, -C(S)S-, -SC(S)-, -CH(OH)-, -P(O)(OR')O-, -S(O)2-, -S-S-, aril grupe i heteroaril grupe;
R7je odabran iz grupe koja se sastoji od C1-3alkila, C2-3alkenila i H;
R8je odabran iz grupe koja se sastoji od C3-6karbocikla i heterocikla;
R9je odabran iz grupe koja se sastoji od H, CN, NO2, C1-6alkila, -OR, -S(O)2R, -S(O)2N(R)2, C2-6alkenila, C3-6karbocikla i heterocikla;
svaki R je nezavisno odabran iz grupe koja se sastoji od C1-3alkila, C2-3alkenila i H; svaki R' je nezavisno odabran iz grupe koja se sastoji od C1-18alkila, C2-18alkenila, -R*YR", -YR" i H;
svaki R" je nezavisno odabran iz grupe koja se sastoji od C3-14alkila i C3-14alkenila; svaki R* je nezavisno odabran iz grupe koja se sastoji od C1-12alkila i C2-12alkenila; svaki Y je nezavisno C3-6karbocikl;
svaki X je nezavisno odabran iz grupe koja se sastoji od F, Cl, Br i I; i
m je odabran od 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12 i 13.
[0372] U nekim primerima izvođenja, podgrupa jedinjenja formule (I) uključuje ona u kojima, kada R4predstavlja -(CH2)nQ, -(CH2)nCHQR, -CHQR, ili -CQ(R)2, tada (i) Q nije -N(R)2kada je n 1, 2, 3, 4 ili 5, ili (ii) Q nije 5, 6, ili 7-člani heterocikloalkil kada je n 1 ili 2.
1
[0373] U nekim primerima izvođenja, još jedna podgrupa jedinjenja formule (I) uključuje ona u kojima
[0374] R1je odabran iz grupe koja se sastoji od C5-30alkila, C5-20alkenila, -R*YR", -YR" i -R"M'R';
[0375] R2i R3su nezavisno odabrani iz grupe koja se sastoji od H, C1-14alkila, C2-14alkenila, -R*YR", -YR", i -R*OR", ili R2i R3, zajedno sa atomom za koji su vezani, formiraju heterocikl ili karbocikl;
[0376] R4je odabran iz grupe koja se sastoji od C3-6karbocikla, -(CH2)nQ, -(CH2)nCHQR, -CHQR, -CQ(R)2, i nesupstituisanog C1-6alkila, gde je Q odabran od C3-6karbocikla, 5- do 14-članog heteroarila koji ima jedan ili više heteroatoma odabranih od N, O i S, -OR, -O(CH2)nN(R)2, -C(O)OR, -OC(O)R, -CX3, -CX2H, -CXH2, -CN, -C(O)N(R)2, -N(R)C(O)R, -N(R)S(O)2R, -N(R)C(O)N(R)2,-N(R)C(S)N(R)2, -CRN(R)2C(O)OR, -N(R)R8, -O(CH2)nOR, -N(R)C(=NR9)N(R)2, -N(R)C(=CHR9)N(R)2, -OC(O)N(R)2, -N(R)C(O)OR, -N(OR)C(O)R, -N(OR)S(O)2R, -N(OR)C(O)OR, -N(OR)C(O)N(R)2, -N(OR)C(S)N(R)2, -N(OR)C(=NR9)N(R)2, -N(OR)C(=CHR9)N(R)2, -C(=NR9)N(R)2, -C(=NR9)R, -C(O)N(R)OR, i 5- do 14-članog heterocikloalkila koji ima jedan ili više heteroatoma odabranih od N, O, i S koji je supstituisan jednim ili većim brojem supstituenata odabranih od okso (=O), OH, amino, monoili di-alkilamino, i C1-3alkila, i svaki n je nezavisno odabran od 1, 2, 3, 4 i 5;
svaki R5je nezavisno odabran iz grupe koja se sastoji od C1-3alkila, C2-3alkenila i H; svaki R6je nezavisno odabran iz grupe koja se sastoji od C1-3alkila, C2-3alkenila i H; M i M' su nezavisno odabrani od -C(O)O-, -OC(O)-, -C(O)N(R')-, -N(R')C(O)-, -C(O)-, -C(S)-, -C(S)S-, -SC(S)-, -CH(OH)-, -P(O)(OR')O-, -S(O)2-, -S-S-, aril grupe i heteroaril grupe;
R7je odabran iz grupe koja se sastoji od C1-3alkila, C2-3alkenila i H;
R8je odabran iz grupe koja se sastoji od C3-6karbocikla i heterocikla;
R9je odabran iz grupe koja se sastoji od H, CN, NO2, C1-6alkila, -OR, -S(O)2R, -S(O)2N(R)2, C2-6alkenila, C3-6karbocikla i heterocikla;
svaki R je nezavisno odabran iz grupe koja se sastoji od C1-3alkila, C2-3alkenila i H; svaki R' je nezavisno odabran iz grupe koja se sastoji od C1-18alkila, C2-18alkenila, -R*YR", -YR" i H;
svaki R" je nezavisno odabran iz grupe koja se sastoji od C3-14alkila i C3-14alkenila; svaki R* je nezavisno odabran iz grupe koja se sastoji od C1-12alkila i C2-12alkenila; svaki Y je nezavisno C3-6karbocikl;
svaki X je nezavisno odabran iz grupe koja se sastoji od F, Cl, Br i I; i
m je odabran od 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12 i 13,
2
ili soli ili izomere navedenog.
[0377] U nekim primerima izvođenja, još jedan podgrupa jedinjenja formule (I) uključuje ona u kojima
R1je odabran iz grupe koja se sastoji od C5-30alkila, C5-20alkenila, -R*YR", -YR" i -R"M'R';
R2i R3su nezavisno odabrani iz grupe koja se sastoji od H, C1-14alkila, C2-14alkenila, -R*YR", -YR", i -R*OR", ili R2i R3, zajedno sa atomom za koji su vezani, formiraju heterocikl ili karbocikl;
R4je odabran iz grupe koja se sastoji od C3-6karbocikla, -(CH2)nQ, -(CH2)nCHQR, -CHQR, -CQ(R)2i nesupstituisanog C1-6alkila, gde je Q odabran od C3-6karbocikla, 5- do 14-članog heterocikla koji ima jedan ili više heteroatoma odabranih od N, O i S, -OR, -O(CH2)nN(R)2, -C(O)OR, -OC(O)R, -CX3, -CX2H, -CXH2, -CN, -C(O)N(R)2, -N(R)C(O)R, -N(R)S(O)2R, -N(R)C(O)N(R)2, -N(R)C(S)N(R)2, -CRN(R)2C(O)OR, -N(R)R8,
-O(CH2)nOR, -N(R)C(=NR9)N(R)2, -N(R)C(=CHR9)N(R)2, -OC(O)N(R)2, -N(R)C(O)OR, -N(OR)C(O)R, -N(OR)S(O)2R, -N(OR)C(O)OR, -N(OR)C(O)N(R)2, -N(OR)C(S)N(R)2, -N(OR)C(=NR9)N(R)2, -N(OR)C(=CHR9)N(R)2, -C(=NR9)R, -C(O)N(R)OR, i -C(=NR9)N(R)2, i svaki n je nezavisno odabran od 1, 2, 3, 4 i 5; i pri čemu je Q 5- do 14-člani heterocikl i (i) R4je -(CH2)nQ u kome je n 1 ili 2, ili (ii) R4je -(CH2)nCHQR u kome je n 1, ili (iii) R4je -CHQR, i -CQ(R)2, tada je Q ili 5- do 14-člani heteroaril ili 8- do 14-člani heterocikloalkil;
svaki R5je nezavisno odabran iz grupe koja se sastoji od C1-3alkila, C2-3alkenila i H; svaki R6je nezavisno odabran iz grupe koja se sastoji od C1-3alkila, C2-3alkenila i H; M i M' su nezavisno odabrani od -C(O)O-, -OC(O)-, -C(O)N(R')-, -N(R')C(O)-, -C(O)-, -C(S)-, -C(S)S-, -SC(S)-, -CH(OH)-, -P(O)(OR')O-, -S(O)2-, -S-S-, aril grupe i heteroaril grupe;
R7je odabran iz grupe koja se sastoji od C1-3alkila, C2-3alkenila i H;
R8je odabran iz grupe koja se sastoji od C3-6karbocikla i heterocikla;
R9je odabran iz grupe koja se sastoji od H, CN, NO2, C1-6alkil, -OR, -S(O)2R, -S(O)2N(R)2, C2-6alkenila, C3-6karbocikla i heterocikla;
svaki R je nezavisno odabran iz grupe koja se sastoji od C1-3alkila, C2-3alkenila i H; svaki R' je nezavisno odabran iz grupe koja se sastoji od C1-18alkila, C2-18alkenila, -R*YR", -YR" i H;
svaki R" je nezavisno odabran iz grupe koja se sastoji od C3-14alkila i C3-14alkenila; svaki R* je nezavisno odabran iz grupe koja se sastoji od C1-12alkila i C2-12alkenila; svaki Y je nezavisno C3-6karbocikl;
svaki X je nezavisno odabran iz grupe koja se sastoji od F, Cl, Br i I; i
m je odabran od 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12 i 13,
ili soli ili izomere navedenog.
[0378] U nekim primerima izvođenja, još jedan podgrupa jedinjenja formule (I) uključuje ona u kojima
R1je odabran iz grupe koja se sastoji od C5-30alkila, C5-20alkenila, -R*YR", -YR", i -R"M'R';
R2i R3su nezavisno odabrani iz grupe koja se sastoji od H, C1-14alkila, C2-14alkenila, -R*YR", -YR", i -R*OR", ili R2i R3, zajedno sa atomom za koji su vezani, formiraju heterocikl ili karbocikl;
R4je odabran iz grupe koja se sastoji od C3-6karbocikla, -(CH2)nQ, -(CH2)nCHQR, -CHQR, -CQ(R)2, i nesupstituisanog C1-6alkila, gde je Q odabran od C3-6karbocikla, 5- do 14-članog heteroarila koji ima jedan ili više heteroatoma odabranih od N, O, i S, -OR, -O(CH2)nN(R)2, -C(O)OR, -OC(O)R, -CX3, -CX2H, -CXH2, -CN, -C(O)N(R)2, -N(R)C(O)R, -N(R)S(O)2R, -N(R)C(O)N(R)2, -N(R)C(S)N(R)2, -CRN(R)2C(O)OR, -N(R)R8,
-O(CH2)nOR, -N(R)C(=NR9)N(R)2, -N(R)C(=CHR9)N(R)2, -OC(O)N(R)2, -N(R)C(O)OR, -N(OR)C(O)R, -N(OR)S(O)2R, -N(OR)C(O)OR, -N(OR)C(O)N(R)2, -N(OR)C(S)N(R)2, -N(OR)C(=NR9)N(R)2, -N(OR)C(=CHR9)N(R)2, -C(=NR9)R, -C(O)N(R)OR, i -C(=NR9)N(R)2, i svaki n je nezavisno odabran od 1, 2, 3, 4 i 5;
svaki R5je nezavisno odabran iz grupe koja se sastoji od C1-3alkila, C2-3alkenila i H; svaki R6je nezavisno odabran iz grupe koja se sastoji od C1-3alkila, C2-3alkenila i H; M i M' su nezavisno odabrani od -C(O)O-, -OC(O)-, -C(O)N(R')-, -N(R')C(O)-, -C(O)-, -C(S)-, -C(S)S-, -SC(S)-, -CH(OH)-, -P(O)(OR')O-, -S(O)2-, -S-S-, aril grupe i heteroaril grupe;
R7je odabran iz grupe koja se sastoji od C1-3alkila, C2-3alkenila i H;
R8je odabran iz grupe koja se sastoji od C3-6karbocikla i heterocikla;
R9je odabran iz grupe koja se sastoji od H, CN, NO2, C1-6alkila, -OR, -S(O)2R, -S(O)2N(R)2, C2-6alkenila, C3-6karbocikla i heterocikla;
svaki R je nezavisno odabran iz grupe koja se sastoji od C1-3alkila, C2-3alkenila i H; svaki R' je nezavisno odabran iz grupe koja se sastoji od C1-18alkila, C2-18alkenila, -R*YR", -YR" i H;
svaki R" je nezavisno odabran iz grupe koja se sastoji od C3-14alkila i C3-14alkenila; svaki R* je nezavisno odabran iz grupe koja se sastoji od C1-12alkila i C2-12alkenila;
4
svaki Y je nezavisno C3-6karbocikl;
svaki X je nezavisno odabran iz grupe koja se sastoji od F, Cl, Br i I; i
m je odabran od 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12 i 13,
ili soli ili izomere navedenog.
U nekim primerima izvođenja, još jedan podgrupa jedinjenja formule (I) uključuje ona u kojima
R1je odabran iz grupe koja se sastoji od C5-30alkila, C5-20alkenila, -R*YR", -YR", i -R"M'R';
R2i R3su nezavisno odabrani iz grupe koja se sastoji od H, C2-14alkila, C2-14alkenila, -R*YR", -YR", i -R*OR", ili R2i R3, zajedno sa atomom za koji su vezani, formiraju heterocikl ili karbocikl;
R4je -(CH2)nQ ili -(CH2)nCHQR, gde je Q -N(R)2, i n je odabran od 3, 4 i 5;
svaki R5je nezavisno odabran iz grupe koja se sastoji od C1-3alkila, C2-3alkenila i H; svaki R6je nezavisno odabran iz grupe koja se sastoji od C1-3alkila, C2-3alkenila i H; M i M' su nezavisno odabrani od -C(O)O-, -OC(O)-, -C(O)N(R')-, -N(R')C(O)-, -C(O)-, -C(S)-, -C(S)S-, -SC(S)-, -CH(OH)-, -P(O)(OR')O-, -S(O)2-, -S-S-, aril grupe i heteroaril grupe;
R7je odabran iz grupe koja se sastoji od C1-3alkila, C2-3alkenila i H;
svaki R je nezavisno odabran iz grupe koja se sastoji od C1-3alkila, C2-3alkenila i H; svaki R' je nezavisno odabran iz grupe koja se sastoji od C1-18alkila, C2-18alkenila, -R*YR", -YR" i H;
svaki R" je nezavisno odabran iz grupe koja se sastoji od C3-14alkila i C3-14alkenila; svaki R* je nezavisno odabran iz grupe koja se sastoji od C1-12alkila i C1-12alkenila; svaki Y je nezavisno C3-6karbocikl;
svaki X je nezavisno odabran iz grupe koja se sastoji od F, Cl, Br i I; i
m je odabran od 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12 i 13,
ili soli ili izomere navedenog.
[0379] U nekim primerima izvođenja, još jedan podgrupa jedinjenja formule (I) uključuje ona u kojima
R1je odabran iz grupe koja se sastoji od C5-30alkila, C5-20alkenila, -R*YR", -YR", i -R"M'R';
R2i R3su nezavisno odabrani iz grupe koja se sastoji od C1-14alkila, C2-14alkenila, -R*YR", -YR", i -R*OR", ili R2i R3, zajedno sa atomom za koji su vezani, formiraju heterocikl ili karbocikl;
R4je odabran iz grupe koja se sastoji od -(CH2)nQ, -(CH2)nCHQR, -CHQR, i -CQ(R)2, gde je Q -N(R)2, i n je odabran od 1, 2, 3, 4 i 5;
svaki R5je nezavisno odabran iz grupe koja se sastoji od C1-3alkila, C2-3alkenila, i H; svaki R6je nezavisno odabran iz grupe koja se sastoji od C1-3alkila, C2-3alkenila, i H; M i M' su nezavisno odabrani od -C(O)O-, -OC(O)-, -C(O)N(R')-, -N(R')C(O)-, -C(O)-, -C(S)-, -C(S)S-, -SC(S)-, -CH(OH)-, -P(O)(OR')O-, -S(O)2-, -S-S-, aril grupe i heteroaril grupe;
R7je odabran iz grupe koja se sastoji od C1-3alkila, C2-3alkenila i H;
svaki R je nezavisno odabran iz grupe koja se sastoji od C1-3alkila, C2-3alkenila i H; svaki R' je nezavisno odabran iz grupe koja se sastoji od C1-18alkila, C2-18alkenila, -R*YR", -YR", i H;
svaki R" je nezavisno odabran iz grupe koja se sastoji od C3-14alkila i C3-14alkenila; svaki R* je nezavisno odabran iz grupe koja se sastoji od C1-12alkila i C1-12alkenila; svaki Y je nezavisno C3-6karbocikl;
svaki X je nezavisno odabran iz grupe koja se sastoji od F, Cl, Br i I; i
m je odabran od 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12 i 13,
ili soli ili izomere navedenog.
[0380] U nekim primerima izvođenja, podgrupa jedinjenja formule (I) uključuje jedinjenja formule (IA):
ili so ili izomer navedenog, gde je I odabran od 1, 2, 3, 4 i 5; m je odabran od 5, 6, 7, 8, i 9; M1je veza ili M'; R4je nesupstituisani C1-3alkil, ili -(CH2)nQ, gde je Q OH, -NHC(S)N(R)2, -NHC(O)N(R)2, -N(R)C(O)R, -N(R)S(O)2R, -N(R)R8, -NHC(=NR9)N(R)2, -NHC(=CHR9)N(R)2, -OC(O)N(R)2, -N(R)C(O)OR, heteroaril ili heterocikloalkil; M i M' su nezavisno odabrani od -C(O)O-, -OC(O)-, -C(O)N(R')-, -P(O)(OR')O-, -S-S-, aril grupe i heteroaril grupe; i R2i R3su nezavisno odabrani iz grupe koja se sastoji od H, C1-14alkila i C2-14alkenila.
[0381] U nekim primerima izvođenja, podgrupa jedinjenja formule (I) uključuje jedinjenja formule (II):
ili so ili izomer navedenog, gde je I odabran od 1, 2, 3, 4 i 5; M1je veza ili M'; R4je nesupstituisani C1-3akil, ili -(CH2)nQ, gde je n 2, 3, ili 4, i Q je OH, -NHC(S)N(R)2, -NHC(O)N(R)2, -N(R)C(O)R, -N(R)S(O)2R, -N(R)R8, -NHC(=NR9)N(R)2, -NHC(=CHR9)N(R)2, -OC(O)N(R)2, -N(R)C(O)OR, heteroaril ili heterocikloalkil; M i M' su nezavisno odabrani od -C(O)O-, -OC(O)-, -C(O)N(R')-, -P(O)(OR')O-, -S-S-, acil grupe i heteroaril grupe; i R2i R3su nezavisno odabrani iz grupe koja se sastoji od H, C1-14alkila i C2-14alkenila.
[0382] U nekim primerima izvođenja, podgrupa jedinjenja formule (I) uključuje jedinjenja formule (IIa), (IIb), (IIc), ili (IIe):
ili so ili izomer navedenog, gde je R4kao što je ovde opisano.
[0383] U nekim primerima izvođenja, podgrupa jedinjenja formule (I) uključuje jedinjenja formule (IId):
ili so ili izomer navedenog, pri čemu je n 2, 3, ili 4; i m, R', R" i R2do R6su kao što je ovde opisano. Na primer, svaki od R2i R3može nezavisno da bude odabran iz grupe koja se sastoji od C5-14alkila i C5-14alkenila.
[0384] U nekim primerima izvođenja, podgrupa jedinjenja formule (I) uključuje jedinjenja formule (IIa), (IIb), (IIc), ili (IIe):
ili so ili izomer navedenog, pri čemu je R4kao što je ovde opisano.
[0385] U nekim primerima izvođenja, podgrupa jedinjenja formule (I) uključuje jedinjenja formule (IId):
ili so ili izomer navedenog, gde je n 2, 3, ili 4; i m, R', R" i R2do R6su kao što je ovde opisano. Na primer, svaki od R2i R3može nezavisno da bude odabran iz grupe koja se sastoji od C5-14alkila i C5-14alkenila.
[0386] U nekim primerima izvođenja, jedinjenje formule (I) je odabrano iz grupe koja se sastoji od:
(Jedinjenje 7),
1
(Jedinjenje 14),
11
e nene ,
12
e nene ,
1
(Jedinjenje 35),
14
(Jedinjenje 42),
1
(Jedinjenje 49),
1
(Jedinjenje 56),
1
.
[0387] U sledećim primerima izvođenja, jedinjenje formule (I) je odabrano iz grupe koja se sastoji od:
(Jedinjenje 62),
1
.
[0388] U nekim primerima izvođenja, jedinjenje formule (I) je odabrano iz grupe koja se sastoji od:
e nene ,
1
(Jedinjenje 75),
11
e nene ,
e nene ,
(Jedinjenje 96),
11
(Jedinjenje 102),
(Jedinjenje 109),
11
(Jedinjenje 116),
11
(Jedinjenje 123),
11
(Jedinjenje 129),
11
e nene ,
11
,
12
,
(Jedinjenje 156),
(Jedinjenje 161),
12
,
12
(Jedinjenje 179),
12
,
12
,
12
e nene ,
12
e nene ,
1
e nene ,
11
e nene ,
12
1
,
i soli i izomera navedenog.
[0389] U nekim primerima izvođenja, nanočestica sadrži sledeće jedinjenje:
(Jedinjenje 233)
ili soli i izomere navedenog.
1 4
[0390] U nekim primerima izvođenja, prikaz prezentuje kompoziciju nanočestica, koja uključuje lipidnu komponentu, koja sadrži jedinjenje kao što je ovde opisano (npr., jedinjenje prema formuli (I), (IA), (II), (IIa), (IIb), (IIc), (IId) ili (IIe)).
[0391] U nekim primerima izvođenja, prikaz prezentuje farmaceutsku kompoziciju koja sadrži kompoziciju nanočestica prema prethodnim primerima izvođenja i farmaceutski prihvatljiv nosač. Na primer, farmaceutska kompozicija se hladi u frižideru ili zamrzava u cilju skladištenja i/ili transporta (npr., skladišti se na temperaturi od 4 °C ili nižoj, kao što je temperatura između oko -150 °C i oko 0 °C ili između oko -80 °C i oko -20 °C (npr., oko -5 °C, -10 °C, -15 °C, -20 °C, -25 °C,-30 °C, -40 °C, -50 °C, -60 °C, -70 °C, -80 °C, -90 °C, -130 °C ili -150 °C). Na primer, farmaceutska kompozicija je rastvor koji se hladi u frižideru u cilju skladištenja i/ili transporta na, na primer, oko -20° C, -30 °C, -40 °C, -50 °C, -60 °C, -70 °C, ili -80 °C.
[0392] Prikaz takođe uključuje postupke za sintezu jedinjenja formule (I), (IA), (II), (IIa), (IIb), (IIc), (IId) ili (IIe) i postupke za pravljenje kompozicija nanočestica koje uključuju lipidnu komponentu koje sadrže jedinjenje formule (I), (IA), (II), (IIa), (IIb), (IIc), (IId) ili (IIe).
Načini primene vakcine
[0393] RNK (tj., iRNK) vakcine protiv respiratornih virusa pronalaska mogu da se primene bilo kojim putem koji rezultuje terapijski efektivnim ishodom. Oni uključuju, ali nisu ograničeni na intradermalnu, intramuskularnu i/ili subkutanu primenu. Predmetni pronalazak obezbeđuje vakcine za upotrebu u postupku prevencije i/ili lečenja bolesti BetaCoV, gde postupak obuhvata davanje RNK (tj., iRNK) vakcina subjektu kome je to potrebno. Tačna količina koja je potrebna variraće od subjekta do subjekta, u zavisnosti od vrste, uzrasta, i opšteg stanja subjekta, težine bolesti, konkretne kompozicije, načina njene primene, njenog načina delovanja, i slično. Kompozicije RNK (tj., iRNK) vakcina protiv respiratornih virusa prema pronalasku su obično formulisane u obliku jedinične doze zbog lakoće primene i ujednačenosti doze. Jasno je, međutim, da o ukupnoj dnevnoj upotrebi kompozicije RNK (tj., iRNK) vakcine prema pronalasku može da odluči nadležni lekar u okviru razumne medicinske procene. Specifična terapijska dejstva, profilaktički efektivni, ili odgovarajući dozni nivoi za snimanje za svakog konkretnog pacijenta zavisiće od raznih faktora uključujući poremećaj koji se leči i težinu poremećaja; aktivnosti specifičnog jedinjenja koje se primenjuje; specifične kompozicije koja se primenjuje; uzrasta, telesne težine, opšteg zdravlja, pola i dijete pacijenta; vremena primene, puta primene i brzine izlučivanja specifičnog jedinjenja koje se primenjuje; trajanja lečenja; lekova koji se koriste u kombinaciji ili istovremeno sa specifičnim jedinjenjem koje se primenjuje; i sličnih faktora dobro poznatih u oblasti medicine.
1
[0394] U nekim primerima izvođenja, kompozicije RNK (tj., iRNK) vakcina protiv respiratornih virusa prema pronalasku mogu da se primene u nivoima doze dovoljnim za isporuku 0.0001 mg/kg do 100 mg/kg, 0.001 mg/kg do 0.05 mg/kg, 0.005 mg/kg do 0.05 mg/kg, 0.001 mg/kg do 0.005 mg/kg, 0.05 mg/kg do 0.5 mg/kg, 0.01 mg/kg do 50 mg/kg, 0.1 mg/kg do 40 mg/kg, 0.5 mg/kg do 30 mg/kg, 0.01 mg/kg do 10 mg/kg, 0.1 mg/kg do 10 mg/kg, ili 1 mg/kg do 25 mg/kg, telesne težine subjekta dnevno, jednom ili više puta dnevno, nedeljno, mesečno, itd., kako bi se dobilo željeno terapijsko, dijagnostičko, profilaktičko dejstvo, ili dejstvo snimanja (videti, npr., opseg jediničnih doza opisan u međunarodnoj objavi br WO2013078199). Željena doza može da se isporuči tri puta dnevno, dva puta dnevno, jednom dnevno, svaki drugi dan, svaki treći dan, svake nedelje, svake dve nedelje, svake tri nedelje, svake četiri nedelje, svaka 2 meseca, svaka tri meseca, svakih 6 meseci, itd. U nekim primerima izvođenja, željena doza može da se isporuči korišćenjem više primena (npr. dve, tri, četiri, pet, šest, sedam, osam, devet, deset, jedanaest, dvanaest, trinaest, četrnaest, ili više primena). Kada se koristi više primena, mogu da se koriste podeljeni režimi doziranja, kao što su oni koji su ovde opisani. U ilustrativnim primerima izvođenja, kompozicije RNK (tj., iRNK) vakcina protiv respiratornih virusa prema pronalasku mogu da se daju u dozama dovoljnim za isporuku 0.0005 mg/kg do 0.01 mg/kg, npr., oko 0.0005 mg/kg do oko 0.0075 mg/kg, npr., oko 0.0005 mg/kg, oko 0.001 mg/kg, oko 0.002 mg/kg, oko 0.003 mg/kg, oko 0.004 mg/kg ili oko 0.005 mg/kg.
[0395] U nekim primerima izvođenja, kompozicije RNK (tj., iRNK) vakcina protiv respiratornih virusa prema pronalasku mogu da se daju jednom ili dva puta (ili više) u doznim nivoima dovoljnim za isporuku 0.025 mg/kg do 0.250 mg/kg, 0.025 mg/kg do 0.500 mg/kg, 0.025 mg/kg do 0.750 mg/kg, ili 0.025 mg/kg do 1.0 mg/kg.
[0396] U nekim primerima izvođenja, kompozicije RNK (tj., iRNK) vakcina protiv respiratornih virusa prema pronalasku mogu da se daju dva puta (npr., 0. dana i 7. dana, 0. dana i 14. dana, 0. dana i 21. dana, 0. dana i 28. dana, 0. dana i 60. dana, 0. dana i 90. dana, 0. dana i 120. dana, 0. dana i 150. dana, 0. dana i 180. dana, 0. dana i 3 meseca kasnije, 0. dana i 6 meseci kasnije, 0. dana i 9 meseci kasnije, 0. dana i 12 meseci kasnije, 0. dana i 18 meseci kasnije, 0. dana i 2 godine kasnije, 0. dana i 5 godina kasnije, ili 0. dana i 10 godina kasnije) u ukupnoj dozi od, ili u doznim nivoima dovoljnim za isporuku ukupne doze od 0.0100 mg, 0.025 mg, 0.050 mg, 0.075 mg, 0.100 mg, 0.125 mg, 0.150 mg, 0.175 mg, 0.200 mg, 0.225 mg, 0.250 mg, 0.275 mg, 0.300 mg, 0.325 mg, 0.350 mg, 0.375 mg, 0.400 mg, 0.425 mg, 0.450 mg, 0.475 mg, 0.500 mg, 0.525 mg, 0.550 mg, 0.575 mg, 0.600 mg, 0.625 mg, 0.650 mg, 0.675 mg, 0.700 mg, 0.725 mg, 0.750 mg, 0.775 mg, 0.800 mg, 0.825 mg, 0.850 mg, 0.875 mg, 0.900 mg, 0.925 mg, 0.950 mg, 0.975 mg, ili 1.0 mg. Više i niže doze i učestalost primene su obuhvaćene predmetnim prikazom. Na primer,
1
kompozicija RNK (tj., iRNK) vakcina protiv respiratornih virusa prema pronalasku može da se primeni tri ili četiri puta.
[0397] U nekim primerima izvođenja, kompozicije RNK (tj., iRNK) vakcina protiv respiratornih virusa prema pronalasku mogu da se daju dva puta (npr., 0. dana i 7. dana, 0. dana i 14. dana, 0. dana i 21. dana, 0. dana i 28. dana, 0. dana i 60. dana, 0. dana i 90. dana, 0. dana i 120. dana, 0. dana i 150. dana, 0. dana i 180. dana, 0. dana i 3 meseca kasnije, 0. dana i 6 meseci kasnije, 0. dana i 9 meseci kasnije, 0. dana i 12 meseci kasnije, 0. dana i 18 meseci kasnije, 0. dana i 2 godine kasnije, 0. dana i 5 godina kasnije, ili 0. dana i 10 godina kasnije) u ukupnoj dozi od, ili u doznim nivoima dovoljnim za isporuku ukupne doze od 0.010 mg, 0.025 mg, 0.100 mg ili 0.400 mg.
[0398] U nekim primerima izvođenja, RNK (tj., iRNK) vakcina protiv respiratornih virusa prema pronalasku za upotrebu u postupku vakcinacije subjekta daje se subjektu kao pojedinačna doza od između 10 µg/kg i 400 µg/kg vakcine na bazi nukleinske kiseline (u efektivnoj količini za vakcinaciju subjekta). U nekim primerima izvođenja RNK (tj., iRNK) vakcina pronalaska za upotrebu u postupku vakcinacije subjekta daje se subjektu kao pojedinačna doza od između 10 µg i 400 µg vakcine na bazi nukleinske kiseline (u efektivnoj količini za vakcinaciju subjekta). U nekim primerima izvođenja, RNK (tj., iRNK) vakcina protiv respiratornih virusa prema pronalasku za upotrebu u postupku vakcinacije subjekta daje se subjektu kao pojedinačna doza od 25-1000 µg (npr., pojedinačna doza iRNK koja kodira antigen hMPV, PIV3, RSV, MeV i/ili BetaCoV). U nekim primerima izvođenja, RNK (tj., iRNK) vakcina protiv respiratornih virusa prema pronalasku daje se subjektu kao pojedinačna doza od 25, 50, 100, 150, 200, 250, 300, 350, 400, 450, 500, 550, 600, 650, 700, 750, 800, 850, 900, 950 ili 1000 µg. Na primer, RNK (tj., iRNK) vakcina protiv respiratornih virusa prema pronalasku može da se da subjektu kao pojedinačna doza od 25-100, 25-500, 50-100, 50-500, 50-1000, 100-500, 100-1000, 250-500, 250-1000, ili 500-1000 µg. U nekim slučajevima, RNK (tj., iRNK) vakcina protiv respiratornih virusa prema pronalasku za upotrebu u postupku vakcinacije subjekta daje se subjektu kao dve doze od, čija kombinacija je jednaka 25-1000 µg RNK (tj., iRNK) vakcine protiv respiratornih virusa.
[0399] Ovde opisana farmaceutska kompozicija RNK (tj., iRNK) vakcine protiv respiratornih virusa može da bude formulisana u ovde opisani dozni oblik, kao što je intranazalni, intratrahealni, ili injektabilni (npr., intravenski, intraokularni, intravitrealni, intramuskularni, intradermalni, intrakardijačni, intraperitonealni i subkutani).
Formulacije RNK (npr., iRNK) vakcine protiv respiratornih virusa i postupci za upotrebu
[0400] Predmetni pronalazak obezbeđuje iRNK vakcinu definisanu u patentnim zahtevima za upotrebu u postupku prevencije i/ili lečenja bolesti BetaCoV kod subjekta.
1
[0401] Tehničke informacije navedene u nastavku mogu u nekim aspektima da prevaziđu obim pronalaska, koji je definisan isključivo priloženim patentnim zahtevima. Dodatne tehničke informacije obezbeđuju se da bi se konkretni pronalazak stavio u širi tehnički kontekst i da bi se ilustrovao mogući povezani tehnički razvoj.
[0402] Pored toga, usputne reference na postupke za lečenje ljudskog ili životinjskog tela hirurškim ili terapijskim i dijagnostičkim postupcima koji se primenjuju na ljudskom ili životinjskom telu ne treba da se tumače kao da zahtevaju zaštitu za takve postupke kao takve, već ih umesto toga treba tumačiti kao da se odnose na proizvode, posebno supstance ili kompozicije, za upotrebu u bilo kom od ovih postupaka.
[0403] Predmetni prikaz obezbeđuje formulacije RNK (npr. iRNK) vakcine protiv respiratornih virusa, pri čemu je RNK (npr. iRNK) vakcina formulisana u efektivnoj količini da proizvede imunski odgovor specifičan za antigen kod subjekta (npr. proizvodnja antitela specifičnih za antigeni polipeptid hMPV, PIV3, RSV, MeV i/ili BetaCoV). "Efektivna količina" je doza RNK (npr. iRNK) vakcine koja je efektivna da proizvede antigen-specifičan imunski odgovor. Ovde su takođe opisani postupci za izazivanje antigen-specifičnog imunskog odgovora kod subjekta. U nekim slučajevima, antigen-specifičan imunski odgovor se karakteriše merenjem titra antitela protiv antigenog polipeptida hMPV, PIV3, RSV, MeV i/ili BetaCoV proizvedenog kod subjekta kome je data RNK (npr. iRNK) vakcina protiv respiratornih virusa kao što je ovde opisano. Titar antitela je mera količine antitela unutar subjekta, na primer, antitela koja su specifična za određeni antigen (npr. antitela protiv antigenog polipeptida hMPV, PIV3, RSV, MeV i/ili BetaCoV) ili epitop antigena. Titar antitela se obično izražava kao inverzna vrednost najvećeg razblaženja koje daje pozitivan rezultat. Enzimski imunosorbentni test (ELISA) je uobičajeni test za određivanje titra antitela, na primer.
[0404] U nekim slučajevima, titar antitela se koristi za procenu da li je subjekat imao infekciju ili da bi se utvrdilo da li je potrebna imunizacija. U nekim slučajevima, titar antitela se koristi da bi se odredila jačina autoimunog odgovora, da bi se utvrdilo da li je potrebna dodatna imunizacija, da bi se utvrdilo da li je prethodna vakcina bila efektivna i da bi se identifikovale bilo koje nedavne ili prethodne infekcije. U skladu sa predmetnim prikazom, titar antitela može da se koristi za određivanje jačine imunskog odgovora indukovanog kod subjekta RNK (npr. iRNK) vakcinom protiv respiratornih virusa.
[0405] U nekim slučajevima, titar antitela protiv antigenog polipeptida (npr. antitela protiv antigenog polipeptida hMPV, PIV3, RSV, MeV i/ili BetaCoV) proizveden kod subjekta se povećava za najmanje 1 log u odnosu na kontrolu. Na primer, titar antitela protiv antigenog polipeptida proizvedenog kod subjekta može da bude povećan za najmanje 1.5, najmanje 2, najmanje 2.5 ili najmanje 3 log u odnosu na kontrolu. U nekim slučajevima, titar antitela protiv
1
antigenog polipeptida proizveden kod subjekta je povećan za 1, 1.5, 2, 2.5 ili 3 log u odnosu na kontrolu. U nekim slučajevima, titar antitela protiv antigenog polipeptida proizveden kod subjekta je povećan za 1-3 log u odnosu na kontrolu. Na primer, titar antitela protiv antigenog polipeptida proizveden kod subjekta može da bude povećan za 1-1.5, 1-2, 1-2.5, 1-3, 1.5-2, 1.5-2.5, 1.5-3, 2-2.5, 2-3, ili 2.5-3 log u odnosu na kontrolu.
[0406] U nekim slučajevima, titar antitela protiv antigenog polipeptida (npr., antitela protiv antigenog polipeptida hMPV, PIV3, RSV, MeV i/ili BetaCoV) proizveden u subjektu je povećan najmanje 2 puta u odnosu na kontrolu. Na primer, titar antitela protiv antigenog polipeptida proizveden kod subjekta može da se poveća najmanje 3 puta, najmanje 4 puta, najmanje 5 puta, najmanje 6 puta, najmanje 7 puta, najmanje 8 puta, najmanje 9 puta, ili najmanje 10 puta u odnosu na kontrolu. U nekim slučajevima, titar antitela protiv antigenog polipeptida proizveden kod subjekta je povećan 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ili 10 puta u odnosu na kontrolu. U nekim slučajevima, titar antitela protiv antigenog polipeptida proizveden kod subjekta je povećan 2-10 puta u odnosu na kontrolu. Na primer, titar antitela protiv antigenog polipeptida proizvedenog kod subjekta može da bude povećan 2-10, 2-9, 2-8, 2-7, 2-6, 2-5, 2-4, 2-3, 3-10, 3-9, 3-8, 3-7, 3-6, 3-5, 3-4, 4-10, 4-9, 4-8, 4-7, 4-6, 4-5, 5-10, 5-9, 5-8, 5-7, 5-6, 6-10, 6-9, 6-8, 6-7, 7-10, 7-9, 7-8, 8-10, 8-9, ili 9-10 puta u odnosu na kontrolu.
[0407] U nekim slučajevima, kontrola je titar antitela protiv antigenog polipeptida (npr., antitela protiv antigenog polipeptida hMPV, PIV3, RSV, MeV i/ili BetaCoV) proizveden kod subjekta kod koga nije primenjena RNK (npr. iRNK) vakcina protiv respiratornih virusa prema ovom pronalasku. U nekim slučajevima, kontrola je titar antitela protiv antigenog polipeptida (npr., antitela protiv antigenog polipeptida hMPV, PIV3, RSV, MeV i/ili BetaCoV) proizveden kod subjekta kod koga je primenjena živa atenuisana hMPV, PIV3, RSV, MeV i/ili BetaCoV vakcina. Atenuisana vakcina je vakcina proizvedena smanjenjem virulencije vijabilnog (živog) virusa. Atenuisani virus se menja na način koji ga čini bezopasnim ili manje virulentnim u odnosu na živi, nemodifikovani virus. U nekim slučajevima, kontrola je titar antitela protiv antigenog polipeptida (npr., antitela protiv antigenog polipeptida hMPV, PIV3, RSV, MeV i/ili BetaCoV) proizveden kod subjekta kome je data inaktivisana hMPV, PIV3, RSV, MeV i/ili BetaCoV vakcina. U nekim slučajevima, kontrola je titar antitela protiv antigenog polipeptida (npr., antitela protiv antigenog polipeptida hMPV, PIV3, RSV, MeV i/ili BetaCoV) proizveden kod subjekta kome je data rekombinantna ili prečišćena hMPV, PIV3, RSV, MeV i/ili BetaCoV proteinska vakcina. Rekombinantne proteinske vakcine obično uključuju proteinske antigene koji su ili proizvedeni u heterolognom ekspresionom sistemu (npr. bakterije ili kvasac) ili prečišćeni iz velikih količina patogenog organizma. U nekim slučajevima, kontrola je titar antitela protiv antigenog polipeptida (npr., antitela protiv antigenog polipeptida hMPV, PIV3, RSV, MeV i/ili BetaCoV) proizveden
1
kod subjekta kome je data hMPV, PIV3, RSV, MeV i/ili BetaCoV vakcina na bazi virusu-sličnih čestica (VLP). Na primer, hMPV VLP vakcina koja se koristi kao kontrola može da bude hMPV VLP, koja sadrži (ili se sastoji od) virusnih matriksnih proteina (M) i fuzionih (F) proteina, generisanih ekspresijom virusnih proteina u ćelijama epitela humanog embrionalnog bubrega (293-F) prilagođenim na rast u suspenziji (videti, npr., Cox RG et al., J Virol.2014, Jun; 88(11): 6368-6379).
[0408] U nekim slučajevima, efektivna količina RNK (tj. iRNK) vakcine protiv respiratornih virusa je doza koja je smanjena u poređenju sa dozom koja predstavlja standard nege rekombinantne hMPV, PIV3, RSV, MeV i/ili BetaCoV proteinske vakcine. "Standard nege", kako je ovde prikazano, odnosi se na smernice za medicinsko ili psihološko lečenje i može da bude opšti ili specifičan. "Standard nege" određuje odgovarajuće lečenje na osnovu naučnih dokaza i saradnje između medicinskih profesionalaca uključenih u lečenje datog stanja. To je postupak dijagnostikovanja i lečenja koji lekar/kliničar treba da prati za određenu vrstu pacijenta, bolesti ili kliničkih okolnosti. "Doza koja predstavlja standard nege", kako je ovde prikazano, odnosi se na dozu rekombinantne ili prečišćene hMPV, PIV3, RSV, MeV i/ili BetaCoV proteinske vakcine, ili žive atenuisane ili inaktivisane hMPV, PIV3, RSV, MeV i/ili BetaCoV vakcine koju bi lekar/kliničar ili drugi medicinski stručnjak dao subjektu za lečenje ili prevenciju hMPV, PIV3, RSV, MeV i/ili BetaCoV, ili stanja povezanog sa hMPV, PIV3, RSV, MeV i/ili BetaCoV, uz pridržavanje smernica za standard nege za lečenje ili prevenciju hMPV, PIV3, RSV, MeV i/ili BetaCoV, ili stanja povezanog sa hMPV, PIV3, RSV, MeV i/ili BetaCoV.
[0409] U nekim slučajevima, titar antitela protiv antigenog polipeptida (npr., antitela protiv antigenog polipeptida hMPV, PIV3, RSV, MeV i/ili BetaCoV) proizveden kod subjekta kome je data efektivna količina RNK (npr. iRNK) vakcine protiv respiratornog virus je ekvivalentan titru antitela protiv antigenog polipeptida (npr., antitela protiv antigenog polipeptida hMPV, PIV3, RSV, MeV i/ili BetaCoV) proizvedenom u kontrolnom subjektu kome je data doza koja predstavlja standard nege rekombinantne ili prečišćene hMPV, PIV3, RSV, MeV i/ili BetaCoV proteinske vakcine ili žive atenuisane ili inaktivisane hMPV, PIV3, RSV, MeV i/ili BetaCoV vakcine.
[0410] U nekim slučajevima, efektivna količina RNK (npr. iRNK) vakcine protiv respiratornih virusa je doza koja je ekvivalentna najmanje 2-strukom smanjenju doze koja predstavlja standard nege rekombinantne ili prečišćene hMPV, PIV3, RSV, MeV i/ili BetaCoV proteinske vakcine. Na primer, efektivna količina RNK (npr. iRNK) vakcine protiv respiratornih virusa može da bude doza ekvivalentna najmanje 3-strukom, najmanje 4-strukom, najmanje 5-strukom, najmanje 6-strukom, najmanje 7-strukom, najmanje 8-strukom, najmanje 9-strukom ili najmanje 10-strukom smanjenju doze koja predstavlja standard nege rekombinantne ili prečišćene hMPV, PIV3, RSV,
14
MeV i/ili BetaCoV proteinske vakcine. U nekim slučajevima, efektivna količina RNK (npr. iRNK) vakcine protiv respiratornih virusa je doza ekvivalentna smanjenju od najmanje 100 puta, najmanje 500 puta ili najmanje 1000 puta doze koja predstavlja standard nege rekombinantne ili prečišćene hMPV, PIV3, RSV, MeV i/ili BetaCoV proteinske vakcine. U nekim slučajevima, efektivna količina RNK (npr. iRNK) vakcine protiv respiratornih virusa je doza ekvivalentna smanjenju od 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 20, 50, 100, 250, 500 ili 1000 puta doze koja predstavlja standard nege rekombinantne ili prečišćene hMPV, PIV3, RSV, MeV i/ili BetaCoV proteinske vakcine. U nekim slučajevima, titar antitela protiv antigenih polipeptida proizveden kod subjekta kod koga je primenjena efektivna količina RNK (npr. iRNK) vakcine protiv respiratornih virusa je ekvivalentan titru antitela protiv antigenih polipeptida proizvedenom kod kontrolnog subjekta kome je data doza koja predstavlja standard nege rekombinantne ili proteinske hMPV, PIV3, RSV, MeV i/ili BetaCoV proteinske vakcine ili žive atenuisane ili inaktivisane hMPV, PIV3, RSV, MeV i/ili BetaCoV vakcine. U nekim slučajevima, efektivna količina RNK (npr. iRNK) vakcine protiv respiratornih virusa je doza ekvivalentna smanjenju od 2 do 1000 puta (npr. 2 puta do 100 puta, 10 puta do 1000 puta) doze koja predstavlja standard nege rekombinantne ili prečišćene hMPV, PIV3, RSV, MeV i/ili BetaCoV proteinske vakcine, pri čemu je titar antitela protiv antigenih polipeptida proizveden kod subjekta ekvivalentan titru antitela protiv antigenih polipeptida proizvedenom kod kontrolnog subjekta koji je primio dozu koja predstavlja standard nege rekombinantne ili prečišćene hMPV, PIV3, RSV, MeV i/ili BetaCoV proteinske vakcine ili žive atenuisane ili inaktivisane hMPV, PIV3, RSV, MeV i/ili BetaCoV vakcine.
[0411] U nekim slučajevima, efektivna količina RNK (npr. iRNK) vakcine protiv respiratornih virusa je doza ekvivalentna smanjenju od 2 do 1000, 2 do 900, 2 do 800, 2 do 700, 2 do 600, 2 do 500, 2 do 400, 2 do 300, 2 do 200, 2 do 100, 2 do 90, 2 do 80, 2 do 70, 2 do 60, 2 do 50, 2 do 40, 2 do 30, 2 do 20, 2 do 10, 2 do 9, 2 do 8, 2 do 7, 2 do 6, 2 do 5, 2 do 4, 2 do 3, 3 do 1000, 3 do 900, 3 do 800, 3 do 700, 3 do 600, 3 do 500, 3 do 400, 3 do 3 do 00, 3 do 200, 3 do 100, 3 do 90, 3 do 80, 3 do 70, 3 do 60, 3 do 50, 3 do 40, 3 do 30, 3 do 20, 3 do 10, 3 do 9, 3 do 8, 3 do 7, 3 do 6, 3 do 5, 3 do 4, 4 do 1000, 4 do 900, 4 do 800, 4 do 700, 4 do 600, 4 do 500, 4 do 400, 4 do 4 do 00, 4 do 200, 4 do 100, 4 do 90, 4 do 80, 4 do 70, 4 do 60, 4 do 50, 4 do 40, 4 do 30, 4 do 20, 4 do 10, 4 do 9, 4 do 8, 4 do 7, 4 do 6, 4 do 5, 4 do 4, 5 do 1000, 5 do 900, 5 do 800, 5 do 700, 5 do 600, 5 do 500, 5 do 400, 5 do 300, 5 do 200, 5 do 100, 5 do 90, 5 do 80, 5 do 70, 5 do 60, 5 do 50, 5 do 40, 5 do 30, 5 do 20, 5 do 10, 5 do 9, 5 do 8, 5 do 7, 5 do 6, 6 do 1000, 6 do 900, 6 do 800, 6 do 700, 6 do 600, 6 do 500, 6 do 400, 6 do 300, 6 do 200, 6 do 100, 6 do 90, 6 do 80, 6 do 70, 6 do 60, 6 do 50, 6 do 40, 6 do 30, 6 do 20, 6 do 10, 6 do 9, 6 do 8, 6 do 7, 7 do 1000, 7 do 900, 7 do 800, 7 do 700, 7 do 600, 7 do 500, 7 do 400, 7 do 300, 7 do 200, 7 do 100, 7 do 90, 7 do 80, 7 do 70, 7 do 60, 7 do 50, 7 do 40, 7 do 30, 7 do 20, 7 do 10, 7 do 9, 7 do 8, 8 do 1000, 8 do 900, 8 do 800, 8 do 700, 8 do 600, 8 do 500, 8 do 400, 8 do 300, 8 do 200, 8 do 100, 8 do 90, 8 do 80, 8 do 70, 8 do 60, 8 do 50, 8 do 40, 8 do 30, 8 do 20, 8 do 10, 8 do 9, 9 do 1000, 9 do 900, 9 do 800, 9 do 700, 9 do 600, 9 do 500, 9 do 400, 9 do 300, 9 do 200, 9 do 100, 9 do 90, 9 do 80, 9 do 70, 9 do 60, 9 do 50, 9 do 40, 9 do 30, 9 do 20, 9 do 10, 10 do 1000, 10 do 900, 10 do 800, 10 do 700, 10 do 600, 10 do 500, 10 do 400, 10 do 300, 10 do 200, 10 do 100, 10 do 90, 10 do 80, 10 do 70, 10 do 60, 10 do 50, 10 do 40, 10 do 30, 10 do 20, 20 do 1000, 20 do 900, 20 do 800, 20 do 700, 20 do 600, 20 do 500, 20 do 400, 20 do 300, 20 do 200, 20 do 100, 20 do 90, 20 do 80, 20 do 70, 20 do 60, 20 do 50, 20 do 40, 20 do 30, 30 do 1000, 30 do 900, 30 do 800, 30 do 700, 30 do 600, 30 do 500, 30 do 400, 30 do 300, 30 do 200, 30 do 100, 30 do 90, 30 do 80, 30 do 70, 30 do 60, 30 do 50, 30 do 40, 40 do 1000, 40 do 900, 40 do 800, 40 do 700, 40 do 600, 40 do 500, 40 do 400, 40 do 300, 40 do 200, 40 do 100, 40 do 90, 40 do 80, 40 do 70, 40 do 60, 40 do 50, 50 do 1000, 50 do 900, 50 do 800, 50 do 700, 50 do 600, 50 do 500, 50 do 400, 50 do 300, 50 do 200, 50 do 100, 50 do 90, 50 do 80, 50 do 70, 50 do 60, 60 do 1000, 60 do 900, 60 do 800, 60 do 700, 60 do 600, 60 do 500, 60 do 400, 60 do 300, 60 do 200, 60 do 100, 60 do 90, 60 do 80, 60 do 70, 70 do 1000, 70 do 900, 70 do 800, 70 do 700, 70 do 600, 70 do 500, 70 do 400, 70 do 300, 70 do 200, 70 do 100, 70 do 90, 70 do 80, 80 do 1000, 80 do 900, 80 do 800, 80 do 700, 80 do 600, 80 do 500, 80 do 400, 80 do 300, 80 do 200, 80 do 100, 80 do 90, 90 do 1000, 90 do 900, 90 do 800, 90 do 700, 90 do 600, 90 do 500, 90 do 400, 90 do 300, 90 do 200, 90 do 100, 100 do 1000, 100 do 900, 100 do 800, 100 do 700, 100 do 600, 100 do 500, 100 do 400, 100 do 300, 100 do 200, 200 do 1000, 200 do 900, 200 do 800, 200 do 700, 200 do 600, 200 do 500, 200 do 400, 200 do 300, 300 do 1000, 300 do 900, 300 do 800, 300 do 700, 300 do 600, 300 do 500, 300 do 400, 400 do 1000, 400 do 900, 400 do 800, 400 do 700, 400 do 600, 400 do 500, 500 do 1000, 500 do 900, 500 do 800, 500 do 700, 500 do 600, 600 do 1000, 600 do 900, 600 do 800, 600 do 700, 700 do 1000, 700 do 900, 700 do 800, 800 do 1000, 800 do 900, ili 900 do 1000 puta doze koja predstavlja standard nege rekombinantne hMPV, PIV3, RSV, MeV i/ili BetaCoV proteinske vakcine. U nekim slučajevima, titar antitela protiv antigenog polipeptida proizveden kod subjekta je ekvivalentan titru antitela protiv antigenog polipeptida proizvedenom kod kontrolnog subjekta koji je primio dozu koja predstavlja standard nege rekombinantne ili prečišćene hMPV, PIV3, RSV, MeV i/ili BetaCoV proteinske vakcine ili žive atenuisane ili inaktivisane hMPV, PIV3, RSV, MeV i/ili BetaCoV vakcine. U nekim slučajevima, efektivna količina je doza ekvivalentna smanjenju od (ili ekvivalentna najmanje smanjenju od) 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90, 100, 110, 120, 130, 140, 150, 160, 170, 1280, 190, 200, 210, 220, 230, 240, 250, 260, 270, 280, 290, 300, 310, 320, 330, 340, 350, 360, 370, 380, 390, 400, 410, 420, 430, 440, 450, 4360, 470, 480, 490, 500, 510, 520, 530, 540, 550, 560, 5760, 580, 590, 600, 610, 620, 630, 640, 650, 660, 670, 680, 690, 700, 710, 720, 730, 740, 750, 760, 770, 780, 790, 800, 810, 820, 830, 840, 850, 860, 870, 880, 890, 900, 910, 920, 930, 940, 950, 960, 970, 980, 990, ili 1000 puta doze koja predstavlja standard nege rekombinantne hMPV, PIV3, RSV, MeV i/ili BetaCoV proteinske vakcine. U nekim slučajevima, titar antitela protiv antigenog polipeptida proizveden kod subjekta je ekvivalentan titru antitela protiv antigenog polipeptida proizvedenom kod kontrolnog subjekta koji je primio dozu koja predstavlja standard nege rekombinantne ili prečišćene hMPV, PIV3, RSV, MeV i/ili BetaCoV proteinske vakcine ili žive atenuisane ili inaktivisane hMPV, PIV3, RSV, MeV i/ili BetaCoV vakcine.
[0412] U nekim slučajevima, efektivna količina RNK (npr., iRNK) vakcine protiv respiratornih virusa je ukupna doza od 50-1000 µg. U nekim slučajevima, efektivna količina RNK (npr., iRNK) vakcine protiv respiratornih virusa je ukupna doza od 50-1000, 50-900, 50-800, 50-700, 50-600, 50-500, 50-400, 50-300, 50-200, 50-100, 50-90, 50-80, 50-70, 50-60, 60-1000, 60- 900, 60-800, 60-700, 60-600, 60-500, 60-400, 60-300, 60-200, 60-100, 60-90, 60-80, 60-70, 70-1000, 70- 900, 70-800, 70-700, 70-600, 70-500, 70-400, 70-300, 70-200, 70-100, 70-90, 70-80, 80-1000, 80-900, 80-800, 80-700, 80-600, 80-500, 80-400, 80-300, 80-200, 80-100, 80-90, 90-1000, 90-900, 90-800, 90-700, 90-600, 90-500, 90-400, 90-300, 90-200, 90-100, 100-1000, 100-900, 100-800, 100-700, 100-600, 100-500, 100-400, 100-300, 100-200, 200-1000, 200-900, 200-800, 200-700, 200-600, 200-500, 200-400, 200-300, 300-1000, 300-900, 300-800, 300-700, 300-600, 300-500,300-400, 400-1000, 400-900, 400-800, 400-700, 400-600, 400-500, 500-1000, 500-900, 500-800, 500-700, 500-600, 600-1000, 600-900, 600-900, 600-700, 700-1000, 700-900, 700-800, 800-1000, 800-900, ili 900-1000 µg. U nekim slučajevima, efektivna količina RNK (npr., iRNK) vakcine protiv respiratornih virusa je ukupna doza od 50, 100, 150, 200, 250, 300, 350, 400, 450, 500, 550, 600, 650, 700, 750, 800, 850, 900, 950 ili 1000 µg. U nekim slučajevima, efektivna količina je doza od 25-500 µg data subjektu ukupno dva puta. U nekim slučajevima, efektivna količina RNK (npr., iRNK) vakcine protiv respiratornih virusa je doza od 25-500, 25-400, 25-300, 25-200, 25-100, 25-50, 50-500, 50-400, 50-300, 50-200, 50-100, 100-500, 100-400, 100-300, 100-200, 150-500, 150-400, 150-300, 150-200, 200-500, 200-400, 200-300, 250-500, 250-400, 250-300, 300-500, 300-400, 350-500, 350-400, 400-500 ili 450-500 µg data subjektu ukupno dva puta. U nekim slučajevima, efektivna količina RNK (npr., iRNK) vakcine protiv respiratornih virusa je ukupna doza od 25, 50, 100, 150, 200, 250, 300, 350, 400, 450, ili 500 µg, data subjektu ukupno dva puta.
[0413] Ovaj prikaz nije ograničen u svojoj primeni na detalje konstrukcije i raspored komponenti date u sledećem opisu ili ilustrovane na crtežima. Prikaz ima mogućnost drugih primera izvođenja i praktikovanja ili sprovođenja na različite načine. Takođe, frazeologija i terminologija korišćena ovde služe za opis i ne treba ih smatrati ograničavajućim. Upotreba izraza "koji uključuje", "koji sadrži" ili "koji ima", "koji obuhvata", "uključujući" i njihove varijacije ovde, ima za cilj da obuhvati stavke koje su navedene nakon njih i njihove ekvivalente, kao i dodatne stavke.
14
PRIMERI
Primer 1: Proizvodnja polinukleotida
[0414] Prema predmetnom prikazu, proizvodnja polinukleotida i/ili njihovih delova ili regiona može da se ostvari upotrebom postupaka navedenih u međunarodnoj objavi WO2014/152027, pod nazivom "Manufacturing Metods for Production of RNA Transcripts".
[0415] Postupci prečišćavanja mogu da uključuju one navedene u međunarodnoj objavi WO2014/152030 i međunarodnoj objavi WO2014/152031.
[0416] Postupci detekcije i karakterizacije polinukleotida mogu da se izvedu kako je navedeno u međunarodnoj objavi WO2014/144039.
[0417] Karakterizacija polinukleotida prikaza može da se ostvari upotrebom mapiranja polinukleotida, sekvenciranja reverznom transkriptazom, analize raspodele naelektrisanja, detekcije RNK nečistoća, ili bilo koje kombinacije dve ili više gore navedenih metoda. "Karakterizacija" obuhvata određivanje sekvence RNK transkripta, određivanje čistoće RNK transkripta, ili određivanje heterogenosti naelektrisanja RNK transkripta, na primer. Takvi postupci su navedeni, na primer, u međunarodnoj objavi WO2014/144711 i međunarodnoj objavi WO2014/144767.
Primer 2: Sinteza himernih polinukleotida
[0418] Prema predmetnom prikazu, dva regiona ili dela himernog polinukleotida mogu da budu spojena ili povezana upotrebom hemije trifosfata. Prvi region ili deo od 100 nukleotida ili manje se hemijski sintetiše sa 5' monofosfatom i terminalim 3'dezOH ili blokiranim OH, na primer. Ako je region duži od 80 nukleotida, on može da se sintetiše kao dva lanca za ligaciju.
[0419] Ako se prvi region ili deo sintetiše kao ne-poziciono modifikovani region ili deo upotrebom in vitro transkripcije (IVT), može da usledi konverzija 5' monofosfata sa naknadnim dodavanjem kape na 3' kraj.
[0420] Monofosfatne zaštitne grupe mogu da budu odabrane od bilo kojih poznatih u tehnici.
[0421] Drugi region ili deo himernog polinukleotida može da se sintetiše upotrebom hemijske sinteze ili postupaka IVT. Postupci IVT mogu da uključuju RNK polimerazu koja može da koristi prajmer sa modifikovanom kapom. Alternativno, kapa do 130 nukleotida može da bude hemijski sintetisana i spojena sa IVT regionom ili delom.
[0422] Kada su u pitanju postupci ligacije, trebalo bi da se ligacijom pomoću DNK T4 ligaze, praćenom obradom DNazom lako izbegne konkatenacija.
[0423] Nije neophodno da ceo himerni polinukleotid bude proizveden sa fosfatno-šećernim osnovnim lancem. Ako jedan od regiona ili delova kodira polipeptid, tada takav region ili deo može da sadrži fosfatno-šećerni osnovni lanac.
[0424] Ligacija se zatim izvodi korišćenjem bilo koje poznate "klik" hemije, "ortoklik" hemije, "solulink" hemije, ili drugih hemija biokonjugata poznatih stručnjacima.
Sintetički put
[0425] Himerni polinukleotid može da se napravi upotrebom serije polaznih segmenata. Takvi segmenti uključuju:
(a) 5' segment sa kapom i zaštitom koji sadrži normalan 3'OH (SEG.1)
(b) 5' trifosfatni segment, koji može da uključuje kodirajući region polipeptida i normalan 3'OH (SEG.2)
(c) 5' monofosfatni segment za 3'-kraj himernog polinukleotida (npr., rep) koji sadrži kordicepin ili nema 3'OH (SEG.3)
[0426] Nakon sinteze (hemijske ili IVT), segment 3 (SEG.3) može da se tretira kordicepinom, a zatim pirofosfatazom da bi se dobio 5' monofosfat.
[0427] Segment 2 (SEG. 2) može zatim da se ligira za SEG. 3 upotrebom RNK ligaze. Ligirani polinukleotid se zatim prečišćava i tretira pirofosfatazom kako bi se otcepio difosfat. Obrađeni konstrukt SEG.2-SEG. 3 može zatim da se prečisti i da se SEG. 1 ligira na 5' kraj. Može da se izvede dodatni korak prečišćavanja himernog polinukleotida.
[0428] Kada himerni polinukleotid kodira polipeptid, ligirani ili spojeni segmenti mogu da se predstave kao: 5'UTR (SEG.1), otvoreni okvir čitanja ili ORF (SEG.2) i 3'UTR+PoliA (SEG.3).
[0429] Prinosi svakog koraka mogu da budu čak 90-95%.
Primer 3: PCR za proizvodnju cDNA
[0430] PCR procedure za pripremu cDNA mogu da se izvedu upotrebom 2x KAPA HIFI<™>HotStart ReadyMix kompanije Kapa Biosystems (Woburn, MA). Ovaj sistem uključuje 2x KAPA ReadyMix 12.5 µl; direktni prajmer (10 µM) 0.75 µl; reverzni prajmer (10 µM) 0.75 µl; matričnu cDNA 100 ng; i dH2O za razblaživanje do 25.0 µl. Reakcioni uslovi mogu da budu 95 °C tokom 5 min. Reakcija može da se izvodi u 25 ciklusa od 98 °C tokom 20 sekundi, zatim 58 °C tokom 15 sekundi, zatim 72 °C tokom 45 sekundi, zatim 72 °C tokom 5 min, zatim 4 °C do završetka.
[0431] Reakcija može da se prečisti upotrebom kompleta PURELINK<™>PCR Micro Kit (Carlsbad, CA) kompanije Invirogen prema uputstvima proizvođača (do 5 µg). Reakcije većeg obima mogu da zahtevaju prečišćavanje upotrebom proizvoda većeg kapaciteta. Nakon čišćenja, cDNA može da se kvantifikuje upotrebom NANODROP<™>i analizira elektroforezom na agaroznom gelu kako
14
bi se potvrdilo da cDNA ima očekivanu veličinu. cDNA zatim može da se podvrgne analizi sekvenciranjem pre prelaska na reakciju in vitro transkripcije.
Primer 4: In vitro transkripcija (IVT)
[0432] Reakcija in vitro transkripcije generiše RNK polinukleotide. Takvi polinukleotidi mogu da sadrže region ili deo polinukleotida prikaza, uključujući hemijski modifikovane RNK (npr., iRNK) polinukleotide. Hemijski modifikovani RNK polinukleotidi mogu da budu ravnomerno modifikovani polinukleotidi. Reakcija in vitro transkripcije koristi prilagođenu smešu nukleotid trifosfata (NTP). NTP mogu da sadrže hemijski modifikovane NTP, ili smešu prirodnih i hemijski modifikovanih NTP, ili prirodne NTP.
[0433] Tipična reakcija in vitro transkripcije uključuje sledeće:
1) Matrična cDNA 1.0 µg
2) 10x pufer za transkripciju (400 mM Tris-HCl pH 2.0 µl
8.0, 190 mM MgCl2, 50 mM DTT, 10 mM
spermidin)
3) Prilagođeni NTP (25mM svaki) 0.2 µl
4) Inhibitor RNaze 20 U
5) T7 RNK polimeraza 3000 U
6) dH2O do 20.0 µl i
7) Inkubacija na 37 °C tokom 3 časa-5 časova.
[0434] Sirova smeša za IVT može da se skladišti na 4 °C preko noći za prečišćavanje narednog dana. Zatim može da se upotrebi 1 U DNaze bez RNaze za digestiju originalne matrice. Posle 15 minuta inkubacije na 37 °C, iRNK može da se prečisti upotrebom kompleta MEGACLEAR<™>Kit kompanije Ambion (Austin, TX) prema uputstvima proizvođača. Komplet može da prečisti do 500 µg RNK. Nakon prečišćavanja, RNK polinukleotid može da se kvantifikuje upotrebom NanoDrop i da se analizira elektroforezom na agaroznom gelu kako bi se potvrdilo da RNK polinukleotid ima odgovarajuću veličinu i da nije došlo do degradacije RNK.
Primer 5: Enzimsko dodavanje kape
[0435] Dodavanje kape na RNK polinukleotid se izvodi na sledeći način pri čemu smeša uključuje: IVT RNK 60 µg-180µg i dH2O do 72 µl. Smeša se inkubira na 65 °C tokom 5 minuta kako bi se RNK denaturisala, a zatim se odmah prebacuje na led.
14
[0436] Protokol zatim uključuje mešanje 10x pufera za dodavanje kape (0.5 M Tris-HCl (pH 80) 60 mM KCI, 12.5 mM MgCl2) (10.0 µl); 20 mM GTP (5.0 µl); 20 mM S-adenozil metionin (2.5 µl); inhibitor RNaze (100 U); 2'-O-metiltransferaza (400U); enzim za dodavanje kape vakcinije (guanilil transferaza) (40 U); dH2O (do 28 µl); i inkubaciju na 37 °C tokom 30 minuta za 60 µg RNK ili do 2 časa za 180 µg RNK.
[0437] RNK polinukleotid može zatim da se prečisti upotrebom kompleta MEGACLEAR<™>Kit kompanije Ambion (Austin, TX) prema uputstvima proizvođača. Nakon prečišćavanja, RNK polinukleotid može da se kvantifikuje upotrebom NANODROP<™>(ThermoFisher, Waltham, MA) i da se analizira elektroforezom na agaroznom gelu kako bi se potvrdilo da RNK polinukleotid ima odgovarajuću veličinu i da nije došlo do degradacije RNK. Proizvod RNK polinukleotid može takođe da se sekvencira PCR reakcijom reverzne transkripcije kako bi se generisala cDNA za sekvenciranje.
Primer 6: Reakcija dodavanja poliA repa
[0438] Bez poli-T u cDNA, reakcija dodavanja poli-A repa mora da se izvede pre čišćenja finalnog proizvoda. Ovo se obavlja mešanjem IVT RNK sa kapom (100 µl); inhibitora RNaze (20 U); 10x pufera za dodavanje repa (0.5 M Tris-HCl (pH 8.0), 2.5 M NaCl, 100 mM MgCl2) (12.0 µl); 20 mM ATP (6.0 µl); poli-A polimeraze (20 U); dH2O do 123.5 µl i inkubacijom na 37 °C tokom 30 min. Ako je poli-A rep već u transkriptu, onda reakcija dodavanja repa može da se preskoči i da se nastavi direktno na prečišćavanje kompletom MEGACLEAR<™>kit kompanije Ambion (Austin, TX) (do 500 µg). Poli-A polimeraza može da bude rekombinantni enzim eksprimiran u kvascu.
[0439] Treba razumeti da procesivnost ili integritet reakcije dodavanja poliA repa možda neće uvek rezultovati preciznom veličinom poliA repa. Stoga su poliA repovi od približno između 40-200 nukleotida, npr., oko 40, 50, 60, 70, 80, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 150-165, 155, 156, 157, 158, 159, 160, 161, 162, 163, 164 ili 165 nukleotida obuhvaćeni obimom predmetnog prikaza.
Primer 7; Prirodne 5' kape i analozi 5' kape
[0440] Dodavanje 5'-kape polinukleotida može da se obavi istovremeno sa reakcijom in vitro transkripcije upotrebom sledećih hemijskih analoga RNK kape, kako bi se generisala struktura 5'-guanozinske kape prema protokolima proizvođača: 3'-O-Me-m7G(5')ppp(5')G [ARCA kapa]; G(5')ppp(5')A; G(5')ppp(5')G; m7G(5')ppp(5')A; m7G(5')ppp(5')G (New England BioLabs, Ipswich, MA). Dodavanje 5'-kape na modifikovanu RNK može da se obavi posle transkripcije upotrebom enzima za dodavanje kape virusa vakcinije kako bi se dobila struktura "Cap 0": m7G(5')ppp(5')G (New England BioLabs, Ipswich, MA). Struktura Cap 1 može da se generiše
14
upotrebom enzima za dodavanje kape virusa vakcinije, kao i 2'-O metil-transferaze za generisanje: m7G(5')ppp(5')G-2'-O-metil. Struktura Cap 2 može da se dobije iz strukture Cap 1 nakon 2'-O-metilacije 5'-drugog pre poslednjeg nukleotida upotrebom 2'-O metil-transferaze. Struktura Cap 3 može da se dobije iz strukture Cap 2 nakon 2'-O-metilacije 5'-trećeg pre poslednjeg nukleotida upotrebom 2'-O metil-transferaze. Enzimi poželjno potiču iz rekombinantnog izvora.
[0441] Kada se transfektuju u sisarske ćelije, modifikovane iRNK su stabilne između 12-18 časova ili više od 18 časova, npr., 24, 36, 48, 60, 72 ili više od 72 časa.
Primer 8: Testovi dodavanja kape
Testiranje ekspresije proteina
[0442] Polinukleotidi (npr., iRNK) koji kodiraju polipeptid, koji sadrže bilo koju od ovde navedenih kapa, mogu da se transfektuju u ćelije u jednakim koncentracijama. Količina proteina koja je izlučena u medijum kulture može da se ispita ELISA testom na 6, 12, 24 i/ili 36 časova posle transfekcije. Sintetički polinukleotidi koji dovode do izlučivanja većih nivoa proteina u medijum odgovaraju sintetičkom polinukleotidu sa strukturom kape sa većom translacionom kompetentnošću.
Analiza čistoće sinteze
[0443] Čistoća RNK (npr., iRNK) polinukleotida koji kodiraju polipeptid, koji sadrže bilo koju od ovde navedenih kapa, može da se uporedi upotrebom denaturišuće elektroforeze na gelu agarozaurea ili HPLC analize. RNK polinukleotidi sa jednom, konsolidovanom elektroforetskom trakom odgovaraju proizvodu veće čistoće u poređenju sa polinukleotidima sa više traka ili sa prugastim trakama. Hemijski modifikovani RNK polinukleotidi sa jednim HPLC pikom takođe odgovaraju proizvodu veće čistoće. Reakcija stavljanja kape sa većom efikasnošću obezbeđuje čistiju populaciju polinukleotida.
Analiza citokina
[0444] RNK (npr., iRNK) polinukleotidi koji kodiraju polipeptid, koji sadrže bilo koju od ovde opisanih kapa mogu da budu transficirani u ćelije u višestrukim koncentracijama. Količina proinflamatornih citokina, kao što su TNF-alfa i IFN-beta, izlučenih u medijum za kulturu može da se ispita ELISA testom na 6, 12, 24 i/ili 36 časova posle transfekcije. RNK polinukleotidi koji rezultuju izlučivanjem viših nivoa proinflamatornih citokina u medijum odgovaraju polinukleotidima koji sadrže imuno-aktivirajuću strukturu kape.
Efikasnost reakcije dodavanja kape
14
[0445] RNK (npr., iRNK) polinukleotidi koji kodiraju polipeptid, koji sadrže bilo koju od ovde opisanih kapa mogu da budu analizirani u pogledu efikasnosti reakcije dodavanja kape pomoću LC-MS posle obrade nukleazom. Obrada nukleazom polinukleotida sa kapom daje smešu slobodnih nukleotida i strukture zatvorene 5'-5-trifosfatne kape koja može da se detektuje pomoću LC-MS. Količina proizvoda sa kapom na LC-MS spektrima može da se izrazi kao procenat ukupnih polinukleotida iz reakcije i odgovara efikasnosti reakcije dodavanja kape. Struktura kape sa većom efikasnošću reakcije stavljanja kape ima veću količinu proizvoda sa kapom, određeno pomoću LC-MS.
Primer 9: Elektroforeza na agaroznom gelu modifikovanih RNK ili RT PCR proizvoda
[0446] Pojedinačni RNK polinukleotidi (200-400 ng u zapremini od 20 µl) ili reverzno transkribovani PCR proizvodi (200-400 ng) mogu da se nanesu u bunarčić na nedenaturišućem 1.2% agaroznom E-gelu (Invirogen, Carlsbad, CA) i razdvajaju 12-15 minuta, prema protokolu proizvođača.
Primer 10: Nanodrop modifikovana kvantifikacija RNK i UV spektralni podaci
[0447] Hemijski modifikovani RNK polinukleotidi u TE puferu (1 µl) se koriste za očitavanja Nanodrop UV apsorbance kako bi se kvantifikovao prinos svakog polinukleotida iz hemijske sinteze ili in vitro reakcije transkripcije.
Primer 11: Formulacija modifikovane iRNK upotrebom lipidoida
[0448] RNK (npr., iRNK) polinukleotidi mogu da budu formulisani za in vitro eksperimente mešanjem polinukleotida sa lipidoidom u određenom odnosu pre dodavanja ćelijama. In vivo formulacija može da zahteva dodavanje dodatnih sastojaka kako bi se olakšala cirkulacija kroz telo. Da bi se ispitala sposobnost ovih lipidoida da formiraju čestice pogodne za rad in vivo, kao polazna tačka može da se upotrebi standardni postupak formulacije koji se koristi za formulacije siRNA-lipidoida. Nakon formiranja čestice, dodaje se polinukleotid i ostavlja da se integriše sa kompleksom. Efikasnost inkapsulacije se određuje upotrebom standardnih testova isključivanja boje.
Primer 12: Studija imunogenosti (Referentni primer)
[0449] Predmetna studija je dizajnirana kako bi se ispitala imunogenost kod miševa hMPV vakcine-kandidata koja sadrži iRNK polinukleotid koji kodira fuzioni (F) glikoprotein, glavni površinski glikoprotein G, ili njihovu kombinaciju, dobijene iz hMPV.
[0450] Miševi su imunizovani intravenski (IV), intramuskularno (IM), ili intradermalno (ID) vakcinama-kandidatima. Vakcine-kandidati su hemijski modifikovane ili nemodifikovane.
14
Ukupno četiri imunizacije su primenjene u intervalima od 3 nedelje (tj., 0, 3, 6. i 9. nedelje), i serumi su sakupljani posle svake imunizacije do nedelja 33-51. Titrovi serumskih antitela protiv fuzionog (F) glikoproteina ili glavnog površinskog glikoproteina (G) određeni su ELISA testom. Serumi sakupljeni od svakog miša tokom nedelja 10-16 su spojeni, i prečišćen je ukupni IgG. Prečišćena antitela su upotrebljena za imunoelektronsku mikroskopiju, ispitivanje afiniteta antitela i ispitivanje in vitro zaštite.
Primer 13: Veštačka infekcija glodara sa hMPV (Referentni primer)
[0451] Predmetna studija je dizajnirana kako bi se ispitala efikasnost kod pamučnih pacova hMPV vakcina-kandidata protiv letalne veštačke infekcije upotrebom hMPV vakcine koja sadrži iRNK koja kodira fuzioni (F) glikoprotein, glavni površinski glikoprotein G, ili kombinaciju oba antigena dobijena iz hMPV. Pamučni pacovi se podvrgavaju veštačkoj infekciji letalnom dozom hMPV.
[0452] Životinje su imunizovane intravenski (IV), intramuskularno (IM), ili intradermalno (ID) 0. nedelje i 3. nedelje hMPV vakcinama-kandidatima sa i bez adjuvansa. Vakcine-kandidati su hemijski modifikovane ili nemodifikovane. Životinje su zatim podvrgnute veštačkoj infekciji letalnom dozom hMPV 7. nedelje IV, IM ili ID putem. Krajnja tačka studije predstavlja, 13. dana nakon infekcije, smrt ili eutanaziju životinja. Životinje koje ispoljavaju ozbiljnu bolest, što se određuje gubitkom težine >30%, ekstremnom letargijom ili paralizom, su eutanazirane. Telesna temperatura i težina su merene i beležene svakodnevno.
[0453] U eksperimentima u kojima se upotrebljava formulacija lipidne nanočestice (LNP), formulacija može da uključuje katjonski lipid, nekatjonski lipid, PEG lipid i strukturni lipid u odnosima 50:10:1.5:38.5. Katjonski lipid je DLin-KC2-DMA (50 mol%) ili DLin-MC3-DMA (50 mol%), nekatjonski lipid je DSPC (10 mol%), PEG lipid je PEG-DOMG (1.5 mol%) i strukturni lipid je holesterol (38.5 mol%), na primer.
Primer 14: Imunogenost hMPV iRNK vakcine kod miševa BALB/c (Referentni primer)
[0454] Predmetna studija je dizajnirana kako bi se ispitala imunogenost kod miševa BALB/c hMPV vakcina koje sadrže iRNK polinukleotid koji kodira fuzioni (F) glikoprotein hMPV. iRNK polinukleotid kodira fuzioni protein cele dužine i sadrži nukleotidnu sekvencu divljeg tipa dobijenu iz A2a soja hMPV. Miševi su podeljeni u 3 grupe (n=8 za svaku grupu) i imunizovani intramuskularno (IM) sa PBS, dozom od 10 µg iRNK vakcina koje kodiraju fuzioni protein hMPV, ili dozom od 2 µg iRNK vakcina koje kodiraju fuzioni protein hMPV. Sprovedene su ukupno dve imunizacije u intervalima od 3 nedelje (tj., 0. nedelje i 3. nedelje), i serumi su sakupljeni posle svake imunizacije prema rasporedu opisanom u tabeli 1. Titrovi serumskih antitela protiv fuzionog glikoproteina hMPV određeni su ELISA testom, a antitela su detektovana u serumima sakupljenim
1
od 14. dana, pa nadalje. Obe ispitivane doze vakcine indukovale su uporedive nivoe imunskog odgovora kod miševa (Sl.2A-2C).
[0455] Dodatno, serumi miševa su upotrebljeni za izotipizaciju IgG (Sl. 3A-3C). U serumima miševa detektovani su i IgG1 i IgG2a specifični za fuzioni protein hMPV. iRNK vakcina protiv fuzionog proteina hMPV indukovala je i odgovore citokina Th1 i Th2, sa pomakom ka Th1.
[0456] Serumi miševa imunizovanih dozama od 10 µg ili 2 µg iRNK vakcine protiv fuzionog proteina hMPV sadrže neutrališuća antitela. Sposobnost ovih antitela da neutrališu B2 soj hMPV takođe je ispitana. Serumi koji sadrže antitela uspešno su neutralisali virus B2 hMPV (Sl.4).
Primer 15: Stimulacija T-ćelija (Referentni primer)
[0457] Predmetna studija je dizajnirana kako bi se ispitala stimulacija T-ćelija u splenocitima miševa imunizovanih iRNK vakcinama koje kodiraju fuzioni protein hMPV, kako je ovde opisano. Imunizacija miševa BALB/c sprovedena je kao što je opisano u primeru 14. Splenociti svake grupe su spojeni i podeljeni na dva dela. Jedan deo splenocita svake grupe miševa je stimulisan medijumom bez hMPV, konkanavalinom A ili peptidnim pulom fuzionog proteina hMPV koji sadrži 15-mere (dužine 15 aminokiselina); dok je drugi deo splenocita svake grupe miševa stimulisan medijumom bez hMPV, konkanavalinom A ili inaktivisanim virusom hMPV. Izlučeni citokini miševa mereni su upotrebom testa Meso Scale Discovery (MSD).
[0458] Mereni su citokini specifični za Th1 ili Th2 odgovore. Za Th1 odgovor, detektovani su IFN-γ, IL2 i IL12 iz splenocita stimulisanih peptidnim pulom fuzionog proteina hMPV na nivou uporedivom sa nivoom konkanavalina A (Sl.5A-5C). Kod Th2 odgovora, peptidni pul fuzionog proteina hMPV indukovao je sekreciju detektabilnih IL10, TNF-α, IL4 i IL, ali ne i IL5, dok je konkavalin A stimulisao izlučivanje svih gore pomenutih Th2 citokina (Sl. 6A-6E) na mnogo višem nivou.
[0459] Nasuprot tome, inaktivisani virus hMPV indukovao je samo izlučivanje IL2 u Th1 odgovoru uporedivo sa onim kod konkavalina A (Sl. 7A-7C). Kod Th2 odgovora, inaktivisani virus hMPV indukovao je izlučivanje detektabilnih IL10, TNF-α, IL4 i IL6, ali ne i IL5, dok je konkavalin A stimulisao izlučivanje svih gore pomenutih Th2 citokina (Sl. 8A-8E) na mnogo višem nivou.
Primer 16: Veštačka infekcija glodara sa hMPV kod pamučnih pacova imunizovanih iRNK vakcinom koja kodira fuzioni protein hMPV (Referentni primer)
[0460] Predmetna studija je dizajnirana kako bi se kod pamučnih pacova ispitala efikasnost hMPV vakcina protiv letalne veštačke infekcije. Upotrebljene su iRNK vakcine koje kodiraju fuzioni
1 1
protein hMPV. iRNK polinukleotid kodira fuzioni protein cele dužine i sadrži nukleotidnu sekvencu divljeg tipa dobijenu iz A2a soja hMPV.
[0461] Pamučni pacovi su imunizovani intramuskularno (IM) 0. nedelje i 3. nedelje iRNK vakcinama koje kodiraju fuzioni protein hMPV dozom od 2 µg ili 10 µg za svaku imunizaciju. Životinje su zatim podvrgnute veštačkoj infekciji letalnom dozom hMPV u 7. nedelji posle inicijalne imunizacije IV, IM ili ID putem. Krajnja tačka studije predstavlja, 13. dana nakon infekcije, smrt ili eutanaziju životinja. Mereni su titrovi virusa u nosevima ili plućima pamučnih pacova. Rezultati (Sl. 9A i 9B) pokazuju da doza od 10 µg iRNK vakcine štiti pamučne miševe 100% u plućima i drastično smanjuje titar virusa u nosu nakon veštačke infekcije (smanjenje od ~2 log). Osim toga, doza od 2 µg iRNK vakcine pokazala je smanjenje od 1 log titra virusa u plućima pamučnih pacova podvrgnutih veštačkoj infekciji.
[0462] Dalje, histopatologija pluća pamučnih pacova koji su imunizovani i podvrgnuti veštačkoj infekciji nije pokazala patologiju povezanu sa vakcinom pojačanom bolešću (Sl.10).
Primer 17: Studija imunogenosti (Referentni primer)
[0463] Predmetna studija je dizajnirana kako bi se kod miševa ispitala imunogenost PIV3 vakcinakandidata koje sadrže iRNK polinukleotid koji kodira hemaglutinin-neuraminidazu ili fuzioni protein (F ili F0) dobijen iz PIV3.
[0464] Miševi su imunizovani intravenski (IV), intramuskularno (IM), ili intradermalno (ID) vakcinama-kandidatima. Vakcine-kandidati su hemijski modifikovane ili nemodifikovane. Sprovedene su ukupno četiri imunizacije u intervalima od 3 nedelje (tj., 0, 3, 6. i 9. nedelje), i serumi su sakupljeni nakon svake imunizacije do nedelja 33-51. Titrovi serumskih antitela protiv hemaglutinina-neuraminidaze ili fuzionog proteina (F ili F0) izmereni su ELISA testom. Serumi sakupljeni od svakog miša tokom 10-16. nedelje su, opciono, spojeni, i ukupni IgG su prečišćeni. Prečišćena antitela su upotrebljena za imunoelektronsku mikroskopiju, ispitivanje afiniteta antitela i ispitivanje in vitro zaštite.
Primer 18: Veštačka infekcija glodara sa PIV3 (Referentni primer)
[0465] Predmetna studija je dizajnirana kako bi se kod pamučnih pacova ispitala efikasnost PIV3 vakcina-kandidata protiv letalne veštačke infekcije upotrebom PIV3 vakcine koja sadrži iRNK koja kodira hemaglutinin-neuraminidazu ili fuzioni protein (F ili F0) dobijen iz PIV3. Pamučni pacovi su podvrgnuti veštačkoj infekciji letalnom dozom PIV3.
[0466] Životinje su imunizovane intravenski (IV), intramuskularno (IM), ili intradermalno (ID) 0. nedelje i 3. nedelje PIV3 vakcinama-kandidatima sa i bez adjuvansa. Vakcine-kandidati su hemijski modifikovane ili nemodifikovane. Životinje su zatim podvrgnute veštačkoj infekciji
1 2
letalnom dozom PIV37. nedelje IV, IM ili ID putem. Krajnja tačka studije predstavlja, 13. dana nakon infekcije, smrt ili eutanaziju životinja. Životinje koje ispoljavaju ozbiljnu bolest, što se određuje gubitkom težine >30%, ekstremnom letargijom ili paralizom, su eutanazirane. Telesna temperatura i težina su merene i beležene svakodnevno.
[0467] U eksperimentima u kojima je upotrebljena formulacija lipidnih nanočestica (LNP), formulacija može da uključuje katjonski lipid, nekatjonski lipid, PEG lipid i strukturni lipid u odnosima 50:10:1.5:38.5. Katjonski lipid je DLin-KC2-DMA (50 mol%) ili DLin-MC3-DMA (50 mol%), nekatjonski lipid je DSPC (10 mol%), PEG lipid je PEG-DOMG (1.5 mol%) i strukturni lipid je holesterol (38.5 mol%), na primer.
Primer 19: Veštačka infekcija pamučnih pacova sa hMPV/PIV (Referentni primer)
[0468] Predmetna studija je dizajnirana kako bi se kod pamučnih pacova ispitala efikasnost hMPV iRNK vakcina-kandidata, PIV3 iRNK vakcina-kandidata, ili kombinovanih hMPV/PIV iRNK vakcina-kandidata protiv letalne veštačke infekcije upotrebom soja PIV3 ili soja hMPV/A2. Dizajn studije prikazan je u tabeli 9.
[0469] Pamučni pacovi starosti 10-12 nedelja podeljeni su u 12 grupa (n=5), i svaka grupa je vakcinisana iRNK vakcinom naznačenom u tabeli 9. PIV3 vakcina sadrži iRNK koja kodira hemaglutinin-neuraminidazu ili fuzioni protein (F ili F0) dobijen iz PIV3. hMPV iRNK vakcina kodira fuzioni protein hMPV cele dužine. Kombinovana hMPV/PIV iRNK vakcina je smeša PIV3 vakcine i hMPV vakcine u odnosu 1:1.
[0470] Pamučni pacovi su imunizovani intramuskularno (IM) 0. nedelje i 3. nedelje vakcinamakandidatima u dozama naznačenim u tabeli 9. Pamučni pacovi imunizovani hMPV iRNK vakcinama ili kombinovanim hMPV/PIV iRNK vakcinama podvrgnuti su veštačkoj infekciji letalnom dozom soja hMPV/A2 u 7. nedelji IM putem. Pamučni pacovi imunizovani PIV iRNK vakcinama ili kombinovanim hMPV/PIV iRNK vakcinama podvrgnuti su veštačkoj infekciji letalnom dozom soja PIV3 u 7. nedelji IM putem.
[0471] Krajnja tačka studije predstavlja, 13. dana nakon infekcije, smrt ili eutanaziju životinja. Životinje koje ispoljavaju ozbiljnu bolest, što se određuje gubitkom težine >30%, ekstremnom letargijom ili paralizom, su eutanazirane. Telesna temperatura i težina su merene i beležene svakodnevno.
[0472] Procenjeni su virusni titrovi hMPV/A2 (Sl. 12) ili PIV3 (Sl. 13) u plućima i nosu. Procenjena je histopatologija pluća pamučnih pacova koji su imunizovani i podvrgnuti veštačkoj infekciji da bi se odredilo postoji li patologija povezana sa vakcinom pojačanom bolešću. Ocenjeni su neutrališući titrovi antitela u serumu imunizovanih pamučnih pacova 0. i 42. dana nakon imunizacije (Sl.11).
1
[0473] Izmereni su neutrališući titrovi antitela protiv hMPV/A2 (Sl. 14) ili PIV3 (Sl. 15) u uzorcima seruma imunizovanih pamučnih pacova 42 dana nakon imunizacije. Sve ispitivane iRNK vakcine snažno su indukovale neutrališuća antitela pamučnih pacova. Procenjivana je i histopatologija pluća imunizovanih pamučnih pacova (Sl.16). Uočena je niska pojava alevolitisa i intersticijalne pneumonije, što ukazuje da nema antitelo-zavisnog pojačanja (ADE) bolesti povezanih sa hMPV ili PIV.
Primer 20: Ispitivanje imunogenosti betacoronavirusa
[0474] Predmetna studija je dizajnirana kako bi se kod zečeva ispitala imunogenost vakcinakandidata protiv betakoronavirusa (npr., MERS-CoV, SARS-CoV, HCoV-OC43, HCoV-229E, HCoV-NL63, HCoV-NL, HCoV-NH ili HCoV-HKU1 ili njihova kombinacija) koje sadrže iRNK polinukleotid koji kodira protein šiljka (S), subjedinicu S1 (S1) proteina šiljka, ili subjedinicu S2 (S2) proteina šiljka dobijenih iz betakoronavirusa (npr., MERS-CoV, SARS-CoV, HCoV-OC43, HCoV-229E, HCoV-NL63, HCoV-NL, HCoV-NH ili HCoV-HKU1).
[0475] Zečevi su vakcinisani 0. i 3. nedelje intravenskim (IV), intramuskularnim (IM), ili intradermalnim (ID) putem. Jedna grupa je ostala nevakcinisana, a jednoj je dat inaktivisani betakoronavirus. Serum je sakupljen od svakog zeca 1, 3. (pre doziranja) i 5. nedelje. Pojedinačno uzeta krv je ispitivana na anti-S, anti-S1 ili anti-S2 aktivnost pomoću testa neutralizacije virusa u sve tri vremenske tačke, i samo su spojeni uzorci iz 5. nedelje ispitivani Western blot metodom upotrebom inaktivisanog betakoronavirusa (npr., inaktivisanog MERS-CoV, SARS-CoV, HCoV-OC43, HCoV-229E, HCoV-NL63, HCoV-NL, HCoV-NH ili HCoV-HKU1).
[0476] U eksperimentima u kojima je upotrebljena formulacija lipidnih nanočestica (LNP), formulacija može da uključuje katjonski lipid, nekatjonski lipid, PEG lipid i strukturni lipid u odnosima 50:10:1.5:38.5. Katjonski lipid je DLin-KC2-DMA (50 mol%) ili DLin-MC3-DMA (50 mol%), nekatjonski lipid je DSPC (10 mol%), PEG lipid je PEG-DOMG (1.5 mol%) i strukturni lipid je holesterol (38.5 mol%), na primer.
Primer 21: Veštačka infekcija betakoronavirusom
[0477] Predmetna studija je dizajnirana kako bi se kod zečeva ispitala efikasnost vakcinakandidata protiv betakoronavirusa (npr., MERS-CoV, SARS-CoV, HCoV-OC43, HCoV-HKU1 ili njihova kombinacija) protiv letalne veštačke infekcije upotrebom vakcine protiv betakoronavirusa (npr., MERS-CoV, SARS-CoV, HCoV-OC43, HCoV-HKU1 ili njihova kombinacija) koja sadrži iRNK koja kodira protein šiljka (S), subjedinicu S1 (S1) proteina šiljka, ili subjedinicu S2 (S2) proteina šiljka dobijene iz betakoronavirusa (npr., MERS-CoV, SARS-CoV, HCoV-OC43, HCoV-229E, HCoV-NL63, HCoV-NL, HCoV-NH ili HCoV-HKU1). Zečevi
1 4
su podvrgnuti veštačkoj infekciji letalnom dozom (10xLD90; ~100 jedinica koje formiraju plake; PFU) betakoronavirusa (npr., MERS-CoV, SARS-CoV, HCoV-OC43, HCoV-229E, HCoV-NL63, HCoV-NL, HCoV-NH ili HCoV-HKU1).
[0478] Upotrebljene su ženke zečeva starosti 6-8 nedelja u grupama od 10. Zečevi su vakcinisani 0. i 3. nedelje IM, ID ili IV putem primene. Vakcine-kandidati su hemijski modifikovane ili nemodifikovane. Zečji serum je ispitivan testom mikroneutralizacije (videti primer 14). Zečevi su zatim podvrgnuti veštačkoj infekciji sa ~1 LD90 betakoronavirusa (npr., MERS-CoV, SARS-CoV, HCoV-OC43, HCoV-229E, HCoV-NL63, HCoV-NL, HCoV-NH ili HCoV-HKU1) u 7. nedelji IN, IM, ID ili IV putem primene. Krajnja tačka studije predstavlja, 13. dana nakon infekcije, smrt ili eutanaziju životinja. Životinje koje ispoljavaju ozbiljnu bolest, što se određuje gubitkom težine >30%, ekstremnom letargijom ili paralizom, su eutanazirane. Telesna temperatura i težina su merene i beležene svakodnevno.
Primer 22: Test mikroneutralizacije
[0479] Devet serijskih 2-strukih razblaženja (1:50 -1:12 800) zečjeg seruma napravljeno je u 50 µl medijuma za rast virusa (VGM) sa tripsinom u mikrotitarskim pločama sa 96 bunarčića. Pedeset mikrolitara virusa koji sadrže ~50 pfu betakoronavirusa (npr., MERS-CoV, SARS-CoV, HCoV-OC43, HCoV-229E, HCoV-NL63, HCoV-NL, HCoV-NH ili HCoV-HKU1) dodato je u razblaženja seruma i ostavljeno da se inkubira 60 minuta na sobnoj temperaturi (RT). Bunarčići pozitivne kontrole sa virusom bez seruma i bunarčići negativne kontrole bez virusa ili seruma su uključeni u triplikatu na svakoj ploči. Za vreme inkubiranja smeša serum-virus, pripremljena je suspenzija pojedinačnih ćelija psećeg bubrega Madin-Darby tripsinizacijom (Gibco 0.5% tripsin goveđeg pankreasa u EDTA) konfluentnog monosloja i suspendovane ćelije su prenete u epruvetu za centrifugiranje od 50 ml, prelivene sterilnim PBS-om i pažljivo promešane. Ćelije su zatim staložene na 200 g tokom 5 minuta, supernatant je aspiriran i ćelije su resuspendovane u PBS-u. Ova procedura je jednom ponovljena i ćelije su resuspendovane u koncentraciji od 3 x 10<5>/ml u VGM sa svinjskim tripsinom. Zatim je 100 µl ćelija dodato u smeše serum-virus i ploče su inkubirane na 35 °C u CO2tokom 5 dana. Ploče su fiksirane 80% acetonom u fosfatno-puferisanom fiziološkom rastvoru (PBS) 15 minuta na RT, osušene na vazduhu i zatim blokirane 30 minuta rastvorom koji sadrži PBS sa 0.5% želatina i 2% FCS. Antitelo na proteine S, protein S1 ili protein S2 je razblaženo u PBS-u sa 0.5% želatina/ 2% FCS/0.5% Tween 20 i inkubirano na RT 2 časa. Bunarčići su isprani i dodat je kozji anti-mišji IgG konjugovan sa peroksidazom rena, što je praćeno sa još 2 časa inkubacije. Posle ispiranja, dodat je O-fenilendiamin dihidrohlorid i neutrališući titar je definisan kao titar seruma koji smanjuje razvoj boje za 50% u poređenju sa bunarčićima pozitivne kontrole.
1
Primer 23: Studija imunogenosti MERS CoV vakcine kod miševa
[0480] Predmetna studija je dizajnirana kako bi se kod miševa ispitala imunogenost MERS-CoV vakcina-kandidata koje sadrže iRNK polinukleotid koji kodira protein šiljka (S) cele dužine, ili subjedinicu S2 (S2) proteina šiljka dobijene iz MERS-CoV.
[0481] Miševi su vakcinisani dozom od 10 µg MERS-CoV iRNK vakcine koja kodira protein šiljka (S) MERS-CoV cele dužine, ili subjedinicu S2 (S2) proteina šiljka 0. i 21. dana. Serumi su sakupljeni od svakog miša 0, 21, 42. i 56. dana. Pojedinačno uzete krvi su ispitivane na anti-S, anti-S2 aktivnost pomoću testa neutralizacije virusa u sve četiri vremenske tačke.
[0482] Kao što je prikazano na Sl. 17, MERS-CoV vakcina koja kodira protein S pune dužine indukovala je snažan imunski odgovor nakon buster doze 21. dana. Dalje, vakcina protiv proteina S pune dužine stvorila je mnogo više neutrališuće titrove antitela u poređenju sa onom koja sadrži samo S2 (Sl.18).
Primer 24: Studija imunogenosti MERS CoV vakcine kod novozelandskih belih zečeva
[0483] Predmetna studija je dizajnirana kako bi se ispitala imunogenost MERS-CoV iRNK vakcina-kandidata koje kodiraju protein šiljka (S) cele dužine. Novozelandski beli zečevi upotrebljeni u ovoj studiji težili su oko 4-5 kg. Zečevi su podeljeni u tri grupe (grupa 1a, grupa 1b i grupa 2, n=8). Zečevi u grupi 1a su imunizovani intramuskularno (IM) jednom dozom od 20 µg MERS-CoV iRNK vakcine koja kodira protein šiljka cele dužine 0. dana. Zečevi u grupi 1b su imunizovani intramuskularno (IM) jednom dozom od 20 µg MERS-CoV iRNK vakcine koja kodira protein šiljka cele dužine 0. dana, i ponovo 21. dana (buster doza). Grupa 2 je primila placebo (PBS). Imunizovani zečevi su zatim podvrgnuti veštačkoj infekciji i uzorci su sakupljeni 4 dana posle veštačke infekcije. Određena su virusna opterećenja u plućima, bronhoalveolarnom ispirku (Bal), nosu i grlu zečeva, npr., kvantitativnom PCR metodom. U tkivima pluća zečeva detektovan je i replikativni virus. Ocenjena je histopatologija pluća i određeni su neutrališući titrovi antitela u uzorcima seruma zečeva.
[0484] Dve doze od 20 µg MERS-CoV iRNK vakcine rezultovale su smanjenjem od 3 log virusnog opterećenja u nosu i dovele do potpune zaštite u grlu novozelandskih belih zečeva (Sl.
19A). Dve doze od 20 µg MERS-CoV iRNK vakcine takođe su rezultovale smanjenjem od 4 log virusnog opterećenja u BAL novozelandskih belih zečeva (Sl.19B). Jedna doza od 20 µg MERS-CoV iRNK vakcine rezultovala je smanjenjem virusnog opterećenja od 2 log, dok su dve doze od 20 µg MERS-CoV iRNK vakcine rezultovale smanjenjem većim od 4 log virusnog opterećenja u plućima novozelandskih belih zečeva (Sl.19C).
1
[0485] Rezultati kvantitativne PCR metode pokazuju da dve doze od 20 µg MERS-CoV iRNK vakcine redukuju preko 99% (2 log) virusa u plućima novozelandskih belih zečeva (Sl.20A). U plućima nije detektovan replikativni virus (Sl.20B).
[0486] Dalje, kao što je prikazano na Sl. 21, dve doze od 20 µg MERS-CoV iRNK vakcine indukovale su značajnu količinu neutrališućih antitela protiv MERS-CoV (EC50između 500-1000). MERS-CoV iRNK vakcina je indukovala titar antitela koji je 3-5 puta bolji nego kod bilo koje druge vakcine ispitane u istom modelu.
Primer 25: Studija imunogenosti (Referentni primer)
[0487] Predmetna studija je dizajnirana kako bi se kod miševa ispitala imunogenost MeV vakcinakandidata koje sadrže iRNK polinukleotid koji kodira protein hemaglutinin (HA) MeV, fuzioni (F) protein MeV ili kombinaciju oba.
[0488] Miševi su imunizovani intravenski (IV), intramuskularno (IM), ili intradermalno (ID) vakcinama-kandidatima. Sprovedene su do tri imunizacije u intervalima od 3 nedelje (tj., 0, 3, 6. i 9. nedelje), i serumi su sakupljeni nakon svake imunizacije do nedelja 33-51. Titrovi serumskih antitela protiv HA proteina MeV ili F proteina MeV određeni su ELISA testom.
Primer 26: Veštačka infekcija glodara sa MeV (Referentni primer)
[0489] Predmetna studija je dizajnirana kako bi se kod transgenih miševa ispitala efikasnost MeV vakcina-kandidata protiv letalne veštačke infekcije upotrebom MeV vakcine koja sadrži iRNK koja kodira HA protein MeV ili F protein MeV. Transgeni miševi eksprimiraju humani receptor CD46 ili signalni molekul aktivacije limfocita (SLAM) (označen i kao CD150). Ljudi su jedini prirodni domaćin za infekciju MeV, pa su stoga za ovu studiju potrebne transgene linije. CD46 je regulatorni protein komplementa koji štiti tkivo domaćina from od taloženja komplementa vezivanjem za komponente komplementa C3b i C4b. Njegova ekspresija na ćelijskim linijama mišjih fibroblasta i limfoidnim ćelijskim linijama čini ove inače otporne ćelije podložnim infekciji MeV, a ekspresija CD46 na ćelijama primata predstavlja paralelu kliničkom tropizmu MeV infekcije kod ljudi i primata izuzev ljudi (Rail GF et al. PNAS USA 1997;94 (9):4659-63). SLAM je membranski glikoprotein tipa 1 koji pripada superfamiliji imunoglobulina. Eksprimira se na površini aktiviranih limfocita, makrofaga i dendritskih ćelija i smatra se da igra važnu ulogu u signalizaciji limfocita. SLAM je receptor i za sojeve divljeg tipa i za vakcinalne sojeve MeV (Sellin CI et al. J Virol.2006;80(13):6420-29),
[0490] CD46 ili SLAM/CD150 transgeni miševi su podvrgnuti veštačkoj infekciji letalnom dozom MeV. Životinje su imunizovane intravenski (IV), intramuskularno (IM), ili intradermalno (ID) 0. nedelje i 3. nedelje MeV vakcinama-kandidatima sa i bez adjuvansa. Životinje su zatim
1
podvrgnute veštačkoj infekciji letalnom dozom MeV u 7. nedelji IV, IM ili ID putem. Krajnja tačka studije predstavlja, 13. dana nakon infekcije, smrt ili eutanaziju životinja. Životinje koje ispoljavaju ozbiljnu bolest, što se određuje gubitkom težine >30%, ekstremnom letargijom ili paralizom, su eutanazirane. Telesna temperatura i težina su merene i beležene svakodnevno.
[0491] U eksperimentima u kojima je upotrebljena formulacija lipidnih nanočestica (LNP), formulacija može da uključuje katjonski lipid, nekatjonski lipid, PEG lipid i strukturni lipid u odnosima 50:10:1.5:38.5. Katjonski lipid je DLin-KC2-DMA (50 mol%), nekatjonski lipid je DSPC (10 mol%), PEG lipid je PEG-DOMG (1.5 mol%) i strukturni lipid je holesterol (38.5 mol%), na primer.
Tabela 1. Raspored uzimanja krvi u studijama imunogenosti hMPV (Referentni primer)
Ukupno n=24
[0492] Svaka od ovde opisanih sekvenci obuhvata hemijski modifikovanu sekvencu ili nemodifikovanu sekvencu koja ne uključuje nukleotidne modifikacije.
1
�
�
11
��
�
��
�
Tabela 3. Aminokiselinske sekvence hMPV (Referentni primer)
1
O is Sekvenca SE
Tabela 4. NCBI pristupni brojevi hMPV (Aminokiselinske sekvence) (Referentni primer)
1
tup
1
1 tup
1
tup
11
tup
12
tup
1
tup
14
1
1
1
1
1
1
11
Tabela 5. Sekvence nukleinske kiseline PIV3 (Referentni primer)
1 2
1 Opis Sekvenca SEQ
14
Opis Sekvenca SEQ
iRNK sekvence PIV3
1
1 Opis Sekvenca SEQ
1
Opis Sekvenca SEQ
Tabela 6. Aminokiselinske sekvence PIV3 (Referentni primer)
1
Tabela 7. NCBI Pristupni brojevi PIV3 (Sekvence nukleinske kiseline i aminokiselinske sekvence) (Referentni primer)
1
1
11
12
1 O f f f f f f f f f f f f f f f f f f f f f f f f f P
P
14
1
1
1
Tabela 8. Signalni peptidi
Tabela 9. Dizajn studije veštačke infekcije pamučnih pacova sa hMPV/PIV (Referentni primer)
1
60
Tabela 10. Sekvenca nukleinske kiseline betakoronavirusa
1
Soj Sekvenca nukleinske kiseline SE
2
So Sekvenca nukleinske kiseline SE
21
Soj Sekvenca nukleinske kiseline SE
22
So Sekvenca nukleinske kiseline SE
2
So Sekvenca nukleinske kiseline SE
24
Soj Sekvenca nukleinske kiseline SE
iRNK sekvence betakoronavirusa
2
Soj Sekvenca nukleinske kiseline SE
2
Soj Sekvenca nukleinske kiseline SE
2
So Sekvenca nukleinske kiseline SE
2
Soj Sekvenca nukleinske kiseline SE
2
So Sekvenca nukleinske kiseline SE
21
Tabela 11. Aminokiselinske sekvence betakoronavirusa
So Aminokiselinska sekvenca SE
21
So Aminokiselinska sekvenca SE
21
So Aminokiselinska sekvenca SE
21
Tabela 12. Aminokiselinske sekvence glikoproteina šiljka cele dužine (Homo sapiens sojevi)
21
GenBank Zemlja Datum Datum Naziv virusa
Pristup prikupljanja puštanja
21
GenBank Zemlja Datum Datum Naziv virusa
Pristup prikupljanja puštanja
AGV08408 Saudijska 2012/06/19 2013/09/17 koronavirus bliskoistočnog respiratornog
21
GenBank Zemlja Datum Datum Naziv virusa
22
GenBank Zemlja Datum Datum Naziv virusa
Pristup prikupljanja puštanja
22
GenBank Zemlja Datum Datum Naziv virusa
Pristup prikupljanja puštanja
Tabela 13. Sekvence nukleinske kiseline MeV (Referentni primer)
22
ID
22
Opis Sekvenca SEQ ID
22
ID
22
ID
22
Opis Sekvenca SEQ ID
2
21 ID
22
Opis Sekvenca SEQ ID
2
24 ID
2
ID
2
Opis Sekvenca SEQ ID
2
ID
2
ID
2
Opis Sekvenca SEQ ID
24
ID
ID
24
Opis Sekvenca SEQ ID
Tabela 15. NCBI Pristupni brojevi MeV (Aminokiselinske sekvence) (Referentni primer)
24
24
24
24 Tip Naziv virusa GenBank Pristup
24
2
21
22
2
24 tup
2
tup
2
2
2 Ti N i i G B k Pi
2
2
21
22
2
24
Tabela 16. Sekvence nukleinske kiseline flagelina
2 ID
2
Naziv Sekvenca SEQ ID
2
Naziv Sekvenca SEQ ID
Tabela 17. Aminokiselinske sekvence flagelina
2
2
�
21
22
�
��
�
Tabela 19. Mutantne sekvence nukleinske kiseline humanog metapneumovirusa (Referentni primer)
2
Soj Sekvenca nukleinske kiseline SEQ
2
Soj Sekvenca nukleinske kiseline SEQ
2
So Sekvenca nukleinske kiseline SE
2
So Sekvenca nukleinske kiseline SE
2
Soj Sekvenca nukleinske kiseline SEQ
21
Soj Sekvenca nukleinske kiseline SEQ
22
Soj Sekvenca nukleinske kiseline SEQ
2
Soj Sekvenca nukleinske kiseline SEQ
24
So Sekvenca nukleinske kiseline SE
2
Soj Sekvenca nukleinske kiseline SEQ
2
2
2 Soj Sekvenca nukleinske kiseline SEQ
2
Soj Sekvenca nukleinske kiseline SEQ
2
21 Soj Sekvenca nukleinske kiseline SEQ
22
So Sekvenca nukleinske kiseline SE
2
Soj Sekvenca nukleinske kiseline SEQ
24
So Sekvenca nukleinske kiseline SE
2
So Sekvenca nukleinske kiseline SE
2
Soj Sekvenca nukleinske kiseline SEQ
2
Soj Sekvenca nukleinske kiseline SEQ
2
Soj Sekvenca nukleinske kiseline SEQ
2
So Sekvenca nukleinske kiseline SE
1 Soj Sekvenca nukleinske kiseline SEQ
2
Soj Sekvenca nukleinske kiseline SEQ
Soj Sekvenca nukleinske kiseline SEQ
4
Soj Sekvenca nukleinske kiseline SEQ
Soj Sekvenca nukleinske kiseline SEQ

Claims (13)

  1. Patentni zahtevi 1. Vakcina protiv betakoronavirusa (BetaCoV) na bazi informacione RNK (iRNK) koja sadrži najmanje jedan iRNK polinukleotid koji ima otvoreni okvir čitanja koji kodira najmanje jedan antigeni polipeptid BetaCoV; naznačena time, što je najmanje jedan antigeni polipeptid BetaCoV (a) protein šiljka (S) ili njegov imunogeni fragment, ili (b) subjedinica S1 ili subjedinica S2 proteina S ili njen imunogeni fragment; pri čemu je BetaCoV vakcina formulisana u lipidnoj nanočestici, gde lipidna nanočestica sadrži 40-60% katjonskog lipida, 5-15% nekatjonskog lipida, 1-2% PEG lipida i 30-50% holesterola.
  2. 2. Vakcina prema patentnom zahtevu 1, naznačena time, što otvoreni okvir čitanja kodira protein S.
  3. 3. Vakcina prema patentnom zahtevu 1, naznačena time, što otvoreni okvir čitanja kodira subjedinicu S1 ili subjedinicu S2 proteina S.
  4. 4. Vakcina prema bilo kom od patentnih zahteva 1-3, naznačena time, što BetaCoV predstavlja MERS-CoV, SARS-CoV, HCoVOC43, HCoV-229E, HCoV-NL63 ili HCoV-HKU1.
  5. 5. Vakcina prema bilo kom od patentnih zahteva 1-4, naznačena time, što najmanje jedan iRNK polinukleotid sadrži 5' netranslatirani region (UTR), 3' UTR, 5' kapu i poli(A) rep.
  6. 6. Vakcina prema patentnom zahtevu 5, naznačena time, što je 5' kapa 5'-terminalna kapa 7mG(5')ppp(5')NlmpNp.
  7. 7. Vakcina prema bilo kom od patentnih zahteva 1-6, naznačena time, što najmanje jedan iRNK polinukleotid sadrži najmanje jednu hemijsku modifikaciju; gde opciono najmanje jedna hemijska modifikacija predstavlja modifikaciju tipa N1-metilpseudouridina ili modifikaciju tipa N1-etilpseudouridina.
  8. 8. Vakcina prema patentnom zahtevu 7, naznačena time, što najmanje 80% uracila u otvorenom okviru čitanja ima hemijsku modifikaciju.
  9. 9. Vakcina prema bilo kom od patentnih zahteva 1-8, naznačena time, što je katjonski lipid jonizabilni katjonski lipid, a nekatjonski lipid je neutralni lipid.
  10. 10. Vakcina prema patentnom zahtevu 9, naznačena time, što je neutralni lipid odabran od DSPC, DPPC, POPC, DOPE i SM.
  11. 11. Vakcina prema bilo kom od patentnih zahteva 1-10, naznačena time, što lipidna nanočestica sadrži jedinjenje od jedinjenja 3, 18, 20, 25, 26, 29, 30, 60, 108-112 ili 122:
    (Jedinjenje 29), 1
    , ili 2 (Jedinjenje 122).
  12. 12. Vakcina prema bilo kom od patentnih zahteva 1-11 za upotrebu u postupku prevencije i/ili lečenja bolesti BetaCoV kod subjekta.
  13. 13. Vakcina za upotrebu prema patentnom zahtevu 12, naznačena time, što se vakcina daje subjektu intradermalnom ili intramuskularnom injekcijom.
RS20220654A 2015-10-22 2016-10-21 Vakcine protiv respiratornih virusa RS63381B1 (sr)

Applications Claiming Priority (10)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US201562245031P 2015-10-22 2015-10-22
US201562244802P 2015-10-22 2015-10-22
US201562244813P 2015-10-22 2015-10-22
US201562244946P 2015-10-22 2015-10-22
US201562244837P 2015-10-22 2015-10-22
US201562247362P 2015-10-28 2015-10-28
US201562247297P 2015-10-28 2015-10-28
US201562247394P 2015-10-28 2015-10-28
US201562247483P 2015-10-28 2015-10-28
EP20164728.6A EP3718565B1 (en) 2015-10-22 2016-10-21 Respiratory virus vaccines

Publications (1)

Publication Number Publication Date
RS63381B1 true RS63381B1 (sr) 2022-08-31

Family

ID=58558175

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
RS20220654A RS63381B1 (sr) 2015-10-22 2016-10-21 Vakcine protiv respiratornih virusa

Country Status (18)

Country Link
US (13) US10064934B2 (sr)
EP (5) EP4349404A3 (sr)
CY (1) CY1125368T1 (sr)
DE (1) DE20164728T1 (sr)
DK (1) DK3718565T3 (sr)
ES (1) ES2922760T3 (sr)
HR (1) HRP20220872T1 (sr)
HU (1) HUE059127T2 (sr)
LT (1) LT3718565T (sr)
MA (2) MA47016A (sr)
MD (1) MD3718565T2 (sr)
PL (1) PL3718565T3 (sr)
PT (1) PT3718565T (sr)
RS (1) RS63381B1 (sr)
SI (1) SI3718565T1 (sr)
SM (1) SMT202200361T1 (sr)
TW (1) TW201729835A (sr)
WO (1) WO2017070626A2 (sr)

Families Citing this family (199)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2012019630A1 (en) 2010-08-13 2012-02-16 Curevac Gmbh Nucleic acid comprising or coding for a histone stem-loop and a poly(a) sequence or a polyadenylation signal for increasing the expression of an encoded protein
WO2012116715A1 (en) 2011-03-02 2012-09-07 Curevac Gmbh Vaccination in newborns and infants
WO2012116714A1 (en) 2011-03-02 2012-09-07 Curevac Gmbh Vaccination in elderly patients
US9464124B2 (en) 2011-09-12 2016-10-11 Moderna Therapeutics, Inc. Engineered nucleic acids and methods of use thereof
WO2013120499A1 (en) * 2012-02-15 2013-08-22 Curevac Gmbh Nucleic acid comprising or coding for a histone stem-loop and a poly (a) sequence or a polyadenylation signal for increasing the expression of an encoded pathogenic antigen
MX362981B (es) 2012-03-27 2019-02-28 Curevac Ag Moleculas artificiales de acido nucleico para la expresion mejorada de proteina o peptido.
PT3019619T (pt) 2013-07-11 2021-11-11 Modernatx Inc Composições que compreendem polinucleótidos sintéticos que codificam proteínas relacionadas com crispr e sgarn sintéticos e métodos de utilização
PL3981437T3 (pl) 2014-04-23 2025-02-24 Modernatx, Inc. Szczepionki z kwasem nukleinowym
ES2937963T3 (es) 2015-07-21 2023-04-03 Modernatx Inc Vacunas de enfermedad infecciosa
US11364292B2 (en) 2015-07-21 2022-06-21 Modernatx, Inc. CHIKV RNA vaccines
HK1256498A1 (zh) 2015-07-30 2019-09-27 Modernatx, Inc. 聚肽表位 rna
US11564893B2 (en) 2015-08-17 2023-01-31 Modernatx, Inc. Methods for preparing particles and related compositions
ES2969082T3 (es) 2015-09-17 2024-05-16 Modernatx Inc Compuestos y composiciones para la administración intracelular de agentes terapéuticos
WO2017070624A1 (en) 2015-10-22 2017-04-27 Modernatx, Inc. Tropical disease vaccines
MA46080A (fr) 2015-10-22 2019-07-10 Modernatx Inc Vaccins à base d'acide nucléique contre le virus varicelle-zona (vzv)
MA46316A (fr) 2015-10-22 2021-03-24 Modernatx Inc Vaccin contre le cytomégalovirus humain
EP4349404A3 (en) 2015-10-22 2024-06-19 ModernaTX, Inc. Respiratory virus vaccines
AU2016342376A1 (en) 2015-10-22 2018-06-07 Modernatx, Inc. Sexually transmitted disease vaccines
FI3368507T3 (fi) 2015-10-28 2023-03-21 Acuitas Therapeutics Inc Uusia lipidejä ja lipidinanopartikkeliformulaatioita nukleiinihappojen annostelemiseksi
LT3386484T (lt) 2015-12-10 2022-06-10 Modernatx, Inc. Gydomųjų medžiagų sudėtis ir pristatymo metodai
US10799463B2 (en) 2015-12-22 2020-10-13 Modernatx, Inc. Compounds and compositions for intracellular delivery of agents
US10465190B1 (en) 2015-12-23 2019-11-05 Modernatx, Inc. In vitro transcription methods and constructs
US10799573B2 (en) * 2016-03-30 2020-10-13 Regents Of The University Of Minnesota Pertussis vaccines and methods of making and using
JP7088911B2 (ja) 2016-05-18 2022-06-21 モデルナティエックス インコーポレイテッド リラキシンをコードするポリヌクレオチド
WO2017201342A1 (en) 2016-05-18 2017-11-23 Modernatx, Inc. Polynucleotides encoding jagged1 for the treatment of alagille syndrome
WO2017201332A1 (en) * 2016-05-18 2017-11-23 Modernatx, Inc. Polynucleotides encoding acyl-coa dehydrogenase, very long-chain for the treatment of very long-chain acyl-coa dehydrogenase deficiency
US12385034B2 (en) 2016-06-24 2025-08-12 Modernatx, Inc. Methods and apparatus for filtration
AU2017326423B2 (en) 2016-09-14 2023-11-09 Modernatx, Inc. High purity RNA compositions and methods for preparation thereof
EP3528821A4 (en) 2016-10-21 2020-07-01 ModernaTX, Inc. HUMAN CYTOMEGALOVIRUS VACCINE
WO2018081318A1 (en) * 2016-10-25 2018-05-03 The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services Prefusion coronavirus spike proteins and their use
US12491261B2 (en) 2016-10-26 2025-12-09 Acuitas Therapeutics, Inc. Lipid nanoparticle formulations
US10925958B2 (en) 2016-11-11 2021-02-23 Modernatx, Inc. Influenza vaccine
WO2018107088A2 (en) * 2016-12-08 2018-06-14 Modernatx, Inc. Respiratory virus nucleic acid vaccines
EP3555289A1 (en) 2016-12-13 2019-10-23 ModernaTX, Inc. Rna affinity purification
WO2018151816A1 (en) 2017-02-16 2018-08-23 Modernatx, Inc. High potency immunogenic compositions
CA3055653A1 (en) 2017-03-15 2018-09-20 Modernatx, Inc. Lipid nanoparticle formulation
MX2019011004A (es) 2017-03-15 2020-08-10 Modernatx Inc Compuestos y composiciones para la administracion intracelular de agentes terapeuticos.
EP3595713A4 (en) * 2017-03-15 2021-01-13 ModernaTX, Inc. RESPIRATORY SYNCYTIAL VIRUS Vaccine
US11576961B2 (en) 2017-03-15 2023-02-14 Modernatx, Inc. Broad spectrum influenza virus vaccine
US11752206B2 (en) * 2017-03-15 2023-09-12 Modernatx, Inc. Herpes simplex virus vaccine
US11045540B2 (en) 2017-03-15 2021-06-29 Modernatx, Inc. Varicella zoster virus (VZV) vaccine
DK3596042T3 (da) 2017-03-15 2022-04-11 Modernatx Inc Krystalformer af aminolipider
EP3595676A4 (en) 2017-03-17 2021-05-05 Modernatx, Inc. RNA VACCINES AGAINST ZOONOSES
AU2018249533C1 (en) 2017-04-04 2023-10-12 Institute For Research In Biomedicine Self-assembling protein nanostructures displaying paramyxovirus and/or pneumovirus f proteins and their use
US11905525B2 (en) 2017-04-05 2024-02-20 Modernatx, Inc. Reduction of elimination of immune responses to non-intravenous, e.g., subcutaneously administered therapeutic proteins
IL315224A (en) 2017-05-08 2024-10-01 Gritstone Bio Inc Neoantigen alphavirus vectors
WO2018213789A1 (en) 2017-05-18 2018-11-22 Modernatx, Inc. Modified messenger rna comprising functional rna elements
US12077501B2 (en) 2017-06-14 2024-09-03 Modernatx, Inc. Compounds and compositions for intracellular delivery of agents
MA49421A (fr) 2017-06-15 2020-04-22 Modernatx Inc Formulations d'arn
WO2018232355A1 (en) * 2017-06-15 2018-12-20 Modernatx, Inc. Rna antibodies
CA3073020A1 (en) 2017-08-16 2019-02-21 Acuitas Therapeutics, Inc. Lipids for use in lipid nanoparticle formulations
EP3668522B1 (en) * 2017-08-18 2024-09-11 ModernaTX, Inc. Efficacious mrna vaccines
WO2019036685A1 (en) 2017-08-18 2019-02-21 Modernatx, Inc. METHODS FOR HPLC ANALYSIS
EP3668971B8 (en) 2017-08-18 2024-05-29 ModernaTX, Inc. Rna polymerase variants
EP3668977A4 (en) 2017-08-18 2021-04-21 Modernatx, Inc. HPLC ANALYTICAL PROCESSES
WO2019046809A1 (en) 2017-08-31 2019-03-07 Modernatx, Inc. METHODS OF MANUFACTURING LIPID NANOPARTICLES
WO2019055807A1 (en) 2017-09-14 2019-03-21 Modernatx, Inc. RNA VACCINES AGAINST ZIKA VIRUS
EP3714045A1 (en) * 2017-11-22 2020-09-30 Modernatx, Inc. Polynucleotides encoding propionyl-coa carboxylase alpha and beta subunits for the treatment of propionic acidemia
EP3746090A4 (en) 2018-01-29 2021-11-17 ModernaTX, Inc. RSV RNA Vaccines
IL319091A (en) 2018-06-06 2025-04-01 Massachusetts Inst Technology Circular RNA for translation in eukaryotic cells
EP3853202A1 (en) 2018-09-19 2021-07-28 ModernaTX, Inc. Compounds and compositions for intracellular delivery of therapeutic agents
JP7640452B2 (ja) 2018-09-19 2025-03-05 モデルナティエックス インコーポレイテッド 高純度ｐｅｇ脂質及びそれらの使用
CA3113025A1 (en) 2018-09-19 2020-03-26 Modernatx, Inc. Peg lipids and uses thereof
CA3113651A1 (en) 2018-09-20 2020-03-26 Modernatx, Inc. Preparation of lipid nanoparticles and methods of administration thereof
US20210322575A1 (en) 2018-09-28 2021-10-21 Nutcracker Therapeutics, Inc. Lipid nanoparticle formulations comprising lipidated cationic peptide compounds for nucleic acid delivery
US12331320B2 (en) 2018-10-10 2025-06-17 The Research Foundation For The State University Of New York Genome edited cancer cell vaccines
US11351242B1 (en) 2019-02-12 2022-06-07 Modernatx, Inc. HMPV/hPIV3 mRNA vaccine composition
CN113795579A (zh) 2019-02-20 2021-12-14 摩登纳特斯有限公司 用于共转录加帽的rna聚合酶变体
US11851694B1 (en) 2019-02-20 2023-12-26 Modernatx, Inc. High fidelity in vitro transcription
EP3938507A4 (en) 2019-03-11 2023-02-22 ModernaTX, Inc. PROCEDURE FOR IN VITRO FED BATCH TRANSCRIPTION
US12070495B2 (en) 2019-03-15 2024-08-27 Modernatx, Inc. HIV RNA vaccines
CA3134944A1 (en) * 2019-03-25 2020-10-01 Ohio State Innovation Foundation Engineered mrna sequences and uses thereof
MY208001A (en) 2019-05-20 2025-04-03 Valneva Se A subunit vaccine for treatment or prevention of a respiratory tract infection
EP3972653A1 (en) 2019-05-22 2022-03-30 Massachusetts Institute of Technology Circular rna compositions and methods
JP7638972B2 (ja) 2019-09-19 2025-03-04 モデルナティエックス インコーポレイテッド 治療薬の細胞内送達のための分岐状尾部脂質化合物及び組成物
WO2021113777A2 (en) * 2019-12-04 2021-06-10 Orna Therapeutics, Inc. Circular rna compositions and methods
CN115515628A (zh) 2019-12-11 2022-12-23 美国政府(由卫生和人类服务部的部长所代表) 腮腺炎和麻疹病毒免疫原及其用途
KR20220133224A (ko) * 2020-01-28 2022-10-04 모더나티엑스, 인크. 코로나바이러스 rna 백신
CN115103682A (zh) * 2020-01-30 2022-09-23 摩登纳特斯有限公司 呼吸道病毒免疫组合物
US11241493B2 (en) 2020-02-04 2022-02-08 Curevac Ag Coronavirus vaccine
US12194089B2 (en) 2020-02-04 2025-01-14 CureVac SE Coronavirus vaccine
AU2021216443A1 (en) * 2020-02-07 2022-09-08 RNAimmune, Inc. Composition and method of mRNA vaccines against novel coronavirus infection
JP7438604B2 (ja) 2020-02-07 2024-02-27 モデルナティエックス インコーポレイテッド ＳＡＲＳ－ＣＯＶ－２ ｍＲＮＡドメインワクチン
WO2021160881A1 (en) * 2020-02-14 2021-08-19 Etherna Immunotherapies Nv Intranasal mrna vaccines
US20230136960A1 (en) * 2020-03-19 2023-05-04 Nature's Toolbox, Inc. Novel MRNA-Based COVID-19 Multi-Valent Vaccine and Methods of Scaled Production of the Same
WO2021202923A1 (en) 2020-04-02 2021-10-07 Nektar Therapeutics Immunomodulator for the prevention and treatment of coronovirus infection and other conditions
JP2023521662A (ja) * 2020-04-03 2023-05-25 グリットストーン バイオ インコーポレイテッド 感染症抗原及びワクチン
RU2747762C1 (ru) * 2020-04-05 2021-05-13 Илья Владимирович Духовлинов Вакцина для профилактики или лечения коронавирусной инфекции на основе генетической конструкции
FI20205382A1 (en) * 2020-04-09 2021-05-07 Niemelae Erik Method for preventing the spreading and lowering the infection rate of pathogens
EP4132478A1 (en) 2020-04-09 2023-02-15 Finncure Oy Mimetic nanoparticles for preventing the spreading and lowering the infection rate of novel coronaviruses
US12194157B2 (en) 2020-04-09 2025-01-14 Finncure Oy Carrier for targeted delivery to a host
TW202204622A (zh) * 2020-04-09 2022-02-01 大陸商蘇州艾博生物科技有限公司 針對冠狀病毒之核酸疫苗
US20240269266A1 (en) * 2020-04-14 2024-08-15 The Regents Of The University Of California Broad-spectrum multi-antigen pan-coronavirus vaccine
US20230310582A1 (en) * 2020-04-14 2023-10-05 Duke University Sars-2 spike protein designs, compositions and methods for their use
IL297419B2 (en) 2020-04-22 2025-02-01 BioNTech SE Coronavirus vaccine
WO2021222304A1 (en) * 2020-04-27 2021-11-04 Modernatx, Inc. Sars-cov-2 rna vaccines
KR102756774B1 (ko) * 2020-05-08 2025-01-21 한림대학교 산학협력단 코로나 바이러스 억제용 펩타이드 및 그 용도
CN115867313A (zh) * 2020-05-12 2023-03-28 格雷菲克斯公司 作为疫苗抗原的工程化冠状病毒刺突蛋白、其设计和用途
WO2021159130A2 (en) * 2020-05-15 2021-08-12 Modernatx, Inc. Coronavirus rna vaccines and methods of use
IL298362A (en) * 2020-05-20 2023-01-01 Flagship Pioneering Innovations Vi Llc Coronavirus antigen compositions and their uses
BR112022024248A2 (pt) * 2020-05-29 2023-10-10 CureVac SE Vacinas de combinação à base de ácido nucleico
EP4175982A1 (en) 2020-06-30 2023-05-10 Fondazione Toscana Life Sciences Neutralizing antibodies to sars coronavirus-2
TW202208400A (zh) * 2020-07-07 2022-03-01 英屬開曼群島商先知生物科技股份有限公司 來自ｓａｒｓ–ｃｏｖ–２之保守肽抗原決定基於開發廣泛型ｃｏｖｉｄ–１９疫苗之用途
US20230248818A1 (en) * 2020-07-08 2023-08-10 The Trustees Of The University Of Pennsylvania Nucleoside-modified RNA for Inducing an Immune Response Against SARS-CoV-2
EP4179112A4 (en) 2020-07-13 2024-11-20 The Board of Trustees of the Leland Stanford Junior University Systems and methods to assess rna stability
EP4182297B1 (en) 2020-07-16 2025-09-03 Acuitas Therapeutics, Inc. Cationic lipids for use in lipid nanoparticles
MX2023001782A (es) 2020-08-12 2023-05-22 Actym Therapeutics Inc Vacunas, productos terapéuticos y plataformas de administración de arn a base de bacterias inmunoestimuladoras.
US11406703B2 (en) 2020-08-25 2022-08-09 Modernatx, Inc. Human cytomegalovirus vaccine
CA3170743A1 (en) 2020-08-31 2022-03-03 Susanne RAUCH Multivalent nucleic acid based coronavirus vaccines
WO2022047427A2 (en) 2020-08-31 2022-03-03 The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University Systems and methods for producing rna constructs with increased translation and stability
US12419948B2 (en) 2020-08-31 2025-09-23 The Broad Institute, Inc. Immunogenic compositions and use thereof
EP4217371A1 (en) 2020-09-25 2023-08-02 ModernaTX, Inc. Multi-proline-substituted coronavirus spike protein vaccines
IL321500A (en) 2020-10-09 2025-08-01 Univ Texas Pre-stabilized hmpv f proteins
US12458604B2 (en) 2020-10-14 2025-11-04 The Trustees Of The University Of Pennsylvania Methods of lipid nanoparticle manufacture and compositions derived therefrom
WO2022099003A1 (en) 2020-11-06 2022-05-12 Sanofi Lipid nanoparticles for delivering mrna vaccines
CA3205569A1 (en) 2020-12-22 2022-06-30 CureVac SE Rna vaccine against sars-cov-2 variants
WO2022137133A1 (en) * 2020-12-22 2022-06-30 Curevac Ag Rna vaccine against sars-cov-2 variants
IL303976B2 (en) * 2020-12-22 2025-07-01 CureVac SE RNA vaccine against SARS-CoV-2 variants
WO2022135993A2 (en) * 2020-12-22 2022-06-30 Curevac Ag Pharmaceutical composition comprising lipid-based carriers encapsulating rna for multidose administration
US12329811B2 (en) 2021-01-11 2025-06-17 Modernatx, Inc. Seasonal RNA influenza virus vaccines
US20250276056A1 (en) * 2021-01-14 2025-09-04 Raphael Paul Viscidi Cytolytic t cell immunotherapy for highly pathogenic coronaviruses
AU2022208057A1 (en) * 2021-01-15 2023-08-03 Modernatx, Inc. Variant strain-based coronavirus vaccines
US20220226465A1 (en) 2021-01-18 2022-07-21 ConserV Bioscience Coronavirus Immunogenic Compositions, Methods and Uses Thereof
JP2025505052A (ja) 2021-01-24 2025-02-20 デイヴィッド フォレスト マイケル Ａｔｐ合成酵素の阻害剤－美容および治療への使用
US11524023B2 (en) 2021-02-19 2022-12-13 Modernatx, Inc. Lipid nanoparticle compositions and methods of formulating the same
AU2022237382A1 (en) 2021-03-15 2023-09-28 Modernatx, Inc. Therapeutic use of sars-cov-2 mrna domain vaccines
JP2024512669A (ja) 2021-03-31 2024-03-19 フラグシップ パイオニアリング イノベーションズ ブイ，インコーポレーテッド タノトランスミッションポリペプチド及び癌の処置におけるそれらの使用
EP4070814A1 (en) 2021-04-07 2022-10-12 Lama France Sars-cov-2 polypeptides and uses thereof
WO2022221335A1 (en) * 2021-04-13 2022-10-20 Modernatx, Inc. Respiratory virus combination vaccines
WO2022232648A1 (en) 2021-04-29 2022-11-03 The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services Prefusion-stabilized lassa virus glycoprotein complex and its use
US20240228595A1 (en) * 2021-05-11 2024-07-11 Yale University Methods for Monoclonal Antibody Generation
US20220363937A1 (en) 2021-05-14 2022-11-17 Armstrong World Industries, Inc. Stabilization of antimicrobial coatings
TW202248421A (zh) * 2021-06-11 2022-12-16 亞諾法生技股份有限公司 信使核糖核酸疫苗與在個體中誘發抗原特異性免疫反應之方法
CN113249408B (zh) * 2021-06-23 2021-11-02 深圳湾实验室 一种靶向激活体液免疫和细胞免疫的核酸疫苗载体构建及应用
WO2023275538A1 (en) 2021-06-28 2023-01-05 Diosynvax Ltd Beta-coronavirus vaccines
US20240350640A1 (en) 2021-06-30 2024-10-24 Jenkem Technology Co., Ltd. (Tianjin) Polyethylene glycol lipid and use thereof
CN114149337B (zh) 2021-07-07 2022-04-29 天津键凯科技有限公司 一种用于核酸递送的新型可电离脂质及其lnp组合物
EP4366768A4 (en) * 2021-07-09 2025-05-21 ModernaTX, Inc. Pan-human coronavirus vaccines
WO2023019181A1 (en) * 2021-08-11 2023-02-16 Modernatx, Inc. Sars-cov-2 lipid nanoparticle vaccine formulations
EP4384214A2 (en) 2021-08-11 2024-06-19 Rnaimmune, Inc. Composition and methods of mrna vaccines against novel coronavirus infection
CA3230031A1 (en) 2021-09-03 2023-03-09 Patrick Baumhof Novel lipid nanoparticles for delivery of nucleic acids
WO2023044346A2 (en) 2021-09-14 2023-03-23 Ausper Biopharma Co., Ltd. Vaccines for coronavirus prevention and treatment
CN119013040A (zh) 2021-10-06 2024-11-22 迪奥辛瓦克斯有限公司 冠状病毒疫苗
EP4412644A1 (en) 2021-10-06 2024-08-14 DIOSynVax Ltd Influenza vaccines
US20240425454A1 (en) * 2021-10-22 2024-12-26 Seqirus Inc. Ionizable cationic compound
JP2024539512A (ja) 2021-10-22 2024-10-28 セイル バイオメディシンズ インコーポレイテッド Ｍｒｎａワクチン組成物
US20250027108A1 (en) 2021-10-29 2025-01-23 CureVac SE Improved circular rna for expressing therapeutic proteins
EP4426343A1 (en) * 2021-11-05 2024-09-11 Sanofi Respiratory syncytial virus rna vaccine
JP2024542173A (ja) 2021-11-09 2024-11-13 アクティム・セラピューティクス・インコーポレイテッド マクロファージを処置に適している表現型に変換するための免疫刺激細菌および処置のための対象の同定のためのコンパニオン診断法
WO2023086961A1 (en) 2021-11-12 2023-05-19 The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services Sars-cov-2 spike fused to a hepatitis b surface antigen
CN118488834A (zh) 2021-11-23 2024-08-13 赛欧生物医药股份有限公司 细菌源性脂质组合物和其用途
WO2023094980A1 (en) 2021-11-23 2023-06-01 Fondazione Toscana Life Sciences Antibodies to coronavirus
US20230167157A1 (en) 2021-11-29 2023-06-01 Arabian Gulf University ANTIGENIC DETERMINANTS PROTECTIVE IMMUNITY, SERODIAGNOSTIC AND MULTIVALENT SUBUNITS PRECISION VACCINE AGAINST SARS-CoV-2
US12186387B2 (en) 2021-11-29 2025-01-07 BioNTech SE Coronavirus vaccine
IT202100030398A1 (it) 2021-12-01 2023-06-01 Pomona Ricerca Srl Minibody come vaccini per l’hiv
WO2023104904A2 (en) 2021-12-08 2023-06-15 Genclis The sars-cov-2 and variants use two independent cell receptors to replicate
US20240415954A1 (en) 2021-12-16 2024-12-19 Hcemm Nonprofit Kft. Vaccine preparation
WO2023114943A2 (en) 2021-12-16 2023-06-22 Acuitas Therapeutics, Inc. Lipids for use in lipid nanoparticle formulations
US12529047B1 (en) 2021-12-21 2026-01-20 Modernatx, Inc. mRNA quantification methods
EP4469091A1 (en) 2022-01-28 2024-12-04 CureVac SE Nucleic acid encoded transcription factor inhibitors
KR102465349B1 (ko) 2022-02-25 2022-11-11 주식회사 테르나테라퓨틱스 신규 이온화 지질 및 이를 포함하는 지질 나노입자
WO2023178182A1 (en) 2022-03-16 2023-09-21 10X Genomics, Inc. Compositions and methods for detection and treatment of coronavirus infection
WO2023196898A1 (en) 2022-04-07 2023-10-12 The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services Beta globin mimetic peptides and their use
US20250302939A1 (en) 2022-05-10 2025-10-02 The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Vaccine for human t-lymphotropic virus-1
JP2025517508A (ja) 2022-05-25 2025-06-05 キュアバック エスイー 核酸ベースのワクチン
US12297285B2 (en) 2022-06-24 2025-05-13 Orna Therapeutics, Inc. Circular RNA encoding chimeric antigen receptors targeting BCMA
US11878055B1 (en) 2022-06-26 2024-01-23 BioNTech SE Coronavirus vaccine
WO2024077191A1 (en) 2022-10-05 2024-04-11 Flagship Pioneering Innovations V, Inc. Nucleic acid molecules encoding trif and additionalpolypeptides and their use in treating cancer
DE202023106198U1 (de) 2022-10-28 2024-03-21 CureVac SE Impfstoff auf Nukleinsäurebasis
WO2024097259A1 (en) 2022-11-01 2024-05-10 RNAimmune, Inc. Composition and methods for mrna vaccines against novel omicron coronavirus infections
TW202440929A (zh) 2022-12-14 2024-10-16 加拿大商普羅維登斯治療控股公司 用於感染性疾病的組合物和方法
US20240238473A1 (en) 2023-01-09 2024-07-18 Beth Israel Deaconess Medical Center, Inc. Recombinant nucleic acid molecules and their use in wound healing
US20240252520A1 (en) 2023-01-09 2024-08-01 Beth Israel Deaconess Medical Center, Inc. Therapeutic agents and their use for treating chronic wounds
WO2024151687A1 (en) 2023-01-09 2024-07-18 Flagship Pioneering Innovations V, Inc. Genetic switches and their use in treating cancer
IT202300000924U1 (it) 2023-01-23 2024-12-22 Philomena Dove Cucitura all-up leggins seamless
AU2024212425A1 (en) 2023-01-27 2025-08-07 Sail Biomedicines, Inc. A modified lipid composition and uses thereof
EP4673165A1 (en) 2023-03-02 2026-01-07 Krystal Biotech, Inc. Interleukin-2 and interleukin-12 for cancer therapy
WO2024184626A2 (en) 2023-03-03 2024-09-12 Diosynvax Ltd Coronavirus vaccines
EP4678177A1 (en) 2023-03-03 2026-01-14 The University of Osaka Arenavirus vaccine
DE112024001143T5 (de) 2023-03-08 2025-12-18 CureVac SE Neue lipid-nanopartikel-formeln für die abgabe von nukleinsäuren
WO2024199114A1 (en) * 2023-03-24 2024-10-03 Starna Therapeutics Nucleic acids encoding therapeutic polypeptides and lipid nanoparticle composition comprising the nucleic acids
WO2024209218A1 (en) 2023-04-05 2024-10-10 Diosynvax Ltd Coronavirus vaccines inducing broad immunity against variants
WO2024220712A2 (en) 2023-04-19 2024-10-24 Sail Biomedicines, Inc. Vaccine compositions
WO2024230934A1 (en) 2023-05-11 2024-11-14 CureVac SE Therapeutic nucleic acid for the treatment of ophthalmic diseases
WO2024249626A1 (en) 2023-05-30 2024-12-05 The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services Hiv-1 envelope triple tandem trimers and their use
WO2025003976A2 (en) * 2023-06-29 2025-01-02 Seqirus Inc. Recombinant virus-like particles
WO2025019352A2 (en) * 2023-07-14 2025-01-23 Modernatx, Inc. Mers-cov mrna vaccines
WO2025036956A1 (en) 2023-08-14 2025-02-20 Ethris Gmbh Non-systemic mrna administration
WO2025046393A1 (en) 2023-08-25 2025-03-06 Fondazione Per L’Istituto Oncologico Di Ricerca (Ior) Reagents against human endogenous retroviruses to target cancer cells
WO2025072383A1 (en) 2023-09-25 2025-04-03 The Broad Institute, Inc. Viral open reading frames, uses thereof, and methods of detecting the same
WO2025083402A1 (en) 2023-10-16 2025-04-24 Diosynvax Ltd Coronavirus vaccines
GB202315888D0 (en) 2023-10-17 2023-11-29 Diosynvax Ltd Influenza vaccines
WO2025097055A2 (en) 2023-11-02 2025-05-08 The Broad Institute, Inc. Compositions and methods of use of t cells in immunotherapy
WO2025129158A1 (en) 2023-12-15 2025-06-19 The Broad Institute, Inc. Engineered arc delivery vesicles and uses thereof
WO2025144938A1 (en) 2023-12-26 2025-07-03 Emmune, Inc. Systems for nucleic acid transfer
WO2025166202A1 (en) 2024-01-31 2025-08-07 Modernatx, Inc. Lipid nanoparticle compositions comprising sialic acid derivatives and the uses thereof
WO2025259931A1 (en) 2024-06-14 2025-12-18 Orbital Therapeutics, Inc. Compositions and methods for rna circularization
WO2026006203A2 (en) 2024-06-24 2026-01-02 Orbital Therapeutics, Inc. Compositions and methods for making circular rna
WO2026017917A1 (en) 2024-07-19 2026-01-22 Ethris Gmbh Rnas with reduced ribosomal frameshift expression products

Family Cites Families (475)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US3906092A (en) 1971-11-26 1975-09-16 Merck & Co Inc Stimulation of antibody response
US4790987A (en) 1985-11-15 1988-12-13 Research Corporation Viral glycoprotein subunit vaccine
CA1335429C (en) 1986-03-07 1995-05-02 Geoffrey L. Smith Processes for the production of hcmv glycoproteins, antibodies thereto and hcmv vaccines, and recombinant vectors therefor
NZ224422A (en) 1987-05-05 1990-11-27 Molecular Eng Ass Composition adapted for intranasal immunisation against viral infection comprising a glycoprotein complexed with a lipid
US5169628A (en) 1988-04-22 1992-12-08 The Upjohn Company Chimeric glycoproteins containing immunogenic segments of human parainfluenza virus type 3
EP1026253B2 (en) 1989-03-21 2012-12-19 Vical Incorporated Expression of exogenous polynucleotide sequences in a vertebrate
GB9200117D0 (en) 1992-01-06 1992-02-26 Connaught Lab Production of recombinant chimeric proteins for vaccine use
WO1993014778A1 (en) 1992-01-23 1993-08-05 Vical, Inc. Ex vivo gene transfer
IL112820A0 (en) 1994-03-07 1995-05-26 Merck & Co Inc Coordinate in vivo gene expression
WO1995026204A1 (en) 1994-03-25 1995-10-05 Isis Pharmaceuticals, Inc. Immune stimulation by phosphorothioate oligonucleotide analogs
EP0802980A1 (en) 1994-06-02 1997-10-29 Chiron Corporation Nucleic acid immunization using a virus-based infection/transfection system
US5795587A (en) 1995-01-23 1998-08-18 University Of Pittsburgh Stable lipid-comprising drug delivery complexes and methods for their production
US6019980A (en) 1995-06-07 2000-02-01 Connaught Laboratories Limited Nucleic acid respiratory syncytial virus vaccines
US6214966B1 (en) 1996-09-26 2001-04-10 Shearwater Corporation Soluble, degradable poly(ethylene glycol) derivatives for controllable release of bound molecules into solution
EP0855184A1 (en) 1997-01-23 1998-07-29 Grayson B. Dr. Lipford Pharmaceutical composition comprising a polynucleotide and an antigen especially for vaccination
US7208161B1 (en) 1997-05-23 2007-04-24 The United States Of America, Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services Production of attenuated parainfluenza virus vaccines from cloned nucleotide sequences
AU7983198A (en) 1997-06-23 1999-01-04 Ludwig Institute For Cancer Research Improved methods for inducing an immune response
JP2001519162A (ja) 1997-10-07 2001-10-23 ユニバーシティ・オブ・メリーランド・バイオテクノロジー・インスティチュート 動物細胞にｒｎａを導入して発現させる方法
WO1999033982A2 (en) 1997-12-23 1999-07-08 Chiron Corporation Human genes and gene expression products i
US6514948B1 (en) 1999-07-02 2003-02-04 The Regents Of The University Of California Method for enhancing an immune response
ES2238799T3 (es) 1999-09-09 2005-09-01 Curevac Gmbh Transferencia de arn-m.
WO2001023002A1 (en) 1999-09-30 2001-04-05 National Jewish Medical And Research Center Method for inhibition of pathogenic microorganisms
US7060291B1 (en) 1999-11-24 2006-06-13 Transave, Inc. Modular targeted liposomal delivery system
US6998115B2 (en) 2000-10-10 2006-02-14 Massachusetts Institute Of Technology Biodegradable poly(β-amino esters) and uses thereof
US7708915B2 (en) 2004-05-06 2010-05-04 Castor Trevor P Polymer microspheres/nanospheres and encapsulating therapeutic proteins therein
US20030232061A1 (en) 2001-10-18 2003-12-18 Fouchier Ronaldus Adrianus Maria Recombinant parainfluenza virus expression systems and vaccines comprising heterologous antigens derived from metapneumovirus
CN1524088B (zh) 2001-01-19 2012-11-07 维洛诺瓦蒂夫公司 在易感哺乳动物中引起呼吸道疾病的病毒
ES2340499T3 (es) 2001-06-05 2010-06-04 Curevac Gmbh Arnm de antigeno tumoral estabilizado con un contenido de g/c aumentado.
EP1412065A2 (en) 2001-07-27 2004-04-28 President And Fellows Of Harvard College Laminar mixing apparatus and methods
WO2003028657A2 (en) 2001-10-03 2003-04-10 The Johns Hopkins University Compositions for oral gene therapy and methods of using same
DE10162480A1 (de) 2001-12-19 2003-08-07 Ingmar Hoerr Die Applikation von mRNA für den Einsatz als Therapeutikum gegen Tumorerkrankungen
WO2003072720A2 (en) 2002-02-21 2003-09-04 Medimmune Vaccines, Inc. Recombinant parainfluenza virus expression systems and vaccines comprising heterologous antigens derived from metapneumovirus
WO2003092665A2 (en) 2002-05-02 2003-11-13 Massachusetts Eye And Ear Infirmary Ocular drug delivery systems and use thereof
DE10221836A1 (de) 2002-05-16 2003-12-04 Lohmann Animal Health Gmbh Attenuierung von Metapneumovirus
DE10229872A1 (de) 2002-07-03 2004-01-29 Curevac Gmbh Immunstimulation durch chemisch modifizierte RNA
WO2004010935A2 (en) 2002-07-25 2004-02-05 Medimmune, Inc. Methods of treating and preventing rsv, hmpv, and piv using anti-rsv, anti-hmpv, and anti-piv antibodies
WO2004076645A2 (en) 2003-02-27 2004-09-10 University Of Massachusetts Compositions and methods for cytomegalovirus treatment
EP2494986A1 (en) 2003-04-25 2012-09-05 MedImmune Vaccines, Inc. Metapneumovirus strains and their use in vaccine formulations and as vectors for expression of antigenic sequences and methods for propagating virus
KR20110097971A (ko) 2003-04-25 2011-08-31 메디뮨 백신즈, 인코포레이티드 메타뉴모바이러스 유래 이종 항원을 포함하는 재조합 파라인플루엔자 바이러스 발현 시스템 및 백신
WO2005009346A2 (en) 2003-06-24 2005-02-03 Mirus Corporation Inhibition of gene function by delivery of polynucleotide-based gene expression inhibitors to mammalian cells in vivo
KR100992646B1 (ko) 2003-07-09 2010-11-05 제이에스알 가부시끼가이샤 파장판
DE10335833A1 (de) 2003-08-05 2005-03-03 Curevac Gmbh Transfektion von Blutzellen mit mRNA zur Immunstimulation und Gentherapie
TW200515917A (en) 2003-09-15 2005-05-16 Us Government Methods and compositions for the generation of a protective immune response against SARS-COV
WO2005072710A2 (en) 2004-01-28 2005-08-11 Johns Hopkins University Drugs and gene carrier particles that rapidly move through mucous barriers
MXPA06011871A (es) 2004-04-15 2007-10-08 Chiasma Inc Composiciones capaces de facilitar la penetracion a traves de una barrera biologica.
CA2568838A1 (en) 2004-06-04 2005-12-15 Institut Pasteur Nucleic acids, polypeptides, methods of expression, and immunogenic compositions associated with sars corona virus spike protein
DE102004035227A1 (de) 2004-07-21 2006-02-16 Curevac Gmbh mRNA-Gemisch zur Vakzinierung gegen Tumorerkrankungen
DE102004042546A1 (de) 2004-09-02 2006-03-09 Curevac Gmbh Kombinationstherapie zur Immunstimulation
WO2006056027A1 (en) 2004-11-29 2006-06-01 The Council Of The Queensland Institute Of Medical Research Human cytomegalovirus immunotherapy
ES2407979T3 (es) 2004-12-10 2013-06-17 Kala Pharmaceuticals, Inc. Copolímeros de bloques de poli(éter-anhídrido) funcionalizados
US9068969B2 (en) 2004-12-28 2015-06-30 Ptc Therapeutics, Inc. Cell based methods and systems for the identification of RNA regulatory sequences and compounds that modulate their functions
GB0504436D0 (en) 2005-03-03 2005-04-06 Glaxosmithkline Biolog Sa Vaccine
EP2287608B1 (en) 2005-03-11 2014-01-08 Firalis SAS Biomarkers for cardiovascular side-effects induced by cox-2 inhibitory compounds
ATE440117T1 (de) 2005-04-01 2009-09-15 Intezyne Technologies Inc Polymermicellen für die arzneistoffzufuhr
CA2603940A1 (en) 2005-04-08 2006-10-19 Nancy Ulbrandt Antibodies against mammalian metapneumovirus
WO2006110776A2 (en) 2005-04-12 2006-10-19 Nektar Therapeutics Al, Corporation Polyethylene glycol cojugates of antimicrobial agents
MX2007016314A (es) 2005-06-16 2008-03-10 Nektar Therapeutics Al Corp Conjugados que tienen un enlace degradable y reactivos polimericos utiles en la preparacion de tales conjugados.
EP4174179B1 (en) 2005-08-23 2025-05-07 The Trustees of the University of Pennsylvania Rna containing modified nucleosides and methods of use thereof
CA2624291A1 (en) 2005-10-03 2007-04-12 Seneca College Of Applied Arts & Technology Nucleic acid immunological composition for human metapneumovirus
AU2006338210A1 (en) 2005-12-14 2007-08-23 The Board Of Regents Of The University Of Oklahoma RNA virus vaccines and methods
DE102006007433A1 (de) 2006-02-17 2007-08-23 Curevac Gmbh Adjuvanz in Form einer Lipid-modifizierten Nukleinsäure
CN101420984B (zh) 2006-02-21 2013-01-02 尼克塔治疗公司 嵌段可降解聚合物及由其制备的轭合物
WO2007123793A2 (en) 2006-04-04 2007-11-01 Stc.Unm Swellable particles for drug delivery
FR2899902B1 (fr) 2006-04-18 2012-01-27 Agronomique Inst Nat Rech Proteines de fusion proteine n d'un virus de la famille des paramyxoviridae-proteine d'interet et leurs utilisations pour la vaccination et la vectorisation intra-cellulaire.
US8367113B2 (en) 2006-05-15 2013-02-05 Massachusetts Institute Of Technology Polymers for functional particles
EP2046954A2 (en) 2006-07-31 2009-04-15 Curevac GmbH NUCLEIC ACID OF FORMULA (I): GIXmGn, OR (II): CIXmCn, IN PARTICULAR AS AN IMMUNE-STIMULATING AGENT/ADJUVANT
ATE498393T1 (de) 2006-09-08 2011-03-15 Univ Johns Hopkins Zusammensetzungen zur transportintensivierung durch die schleimhaut
US20110135645A1 (en) 2006-10-04 2011-06-09 The Scripps Research Institute Human antibodies neutralizing human metapneumovirus
CN101583379B (zh) 2006-10-05 2013-04-03 约翰斯霍普金斯大学 使用优良聚合物纳米粒子的水溶性差药物的水可分散性口服，肠胃外和局部制剂
DE102006051516A1 (de) 2006-10-31 2008-05-08 Curevac Gmbh (Basen-)modifizierte RNA zur Expressionssteigerung eines Proteins
US8399007B2 (en) 2006-12-05 2013-03-19 Landec Corporation Method for formulating a controlled-release pharmaceutical formulation
CA2671925A1 (en) 2006-12-21 2008-07-10 Stryker Corporation Sustained-release formulations comprising crystals, macromolecular gels, and particulate suspensions of biologic agents
DE102007001370A1 (de) 2007-01-09 2008-07-10 Curevac Gmbh RNA-kodierte Antikörper
WO2009030254A1 (en) 2007-09-04 2009-03-12 Curevac Gmbh Complexes of rna and cationic peptides for transfection and for immunostimulation
US20090162395A1 (en) 2007-09-26 2009-06-25 Crowe Jr James E Vaccine for rsv and mpv
HUE035101T2 (hu) 2007-09-28 2018-05-02 Pfizer Ráksejtek célzása nanorészecskék alkalmazásával
WO2009046739A1 (en) 2007-10-09 2009-04-16 Curevac Gmbh Composition for treating prostate cancer (pca)
WO2009046738A1 (en) 2007-10-09 2009-04-16 Curevac Gmbh Composition for treating lung cancer, particularly of non-small lung cancers (nsclc)
KR101483715B1 (ko) 2008-01-31 2015-01-19 큐어백 게엠바하 면역증강제／애주번트인 화학식（ＮｕＧｌＸｍＧｎＮｖ）ａ를 포함하는 핵산 및 이의 유도체
WO2009127230A1 (en) 2008-04-16 2009-10-22 Curevac Gmbh MODIFIED (m)RNA FOR SUPPRESSING OR AVOIDING AN IMMUNOSTIMULATORY RESPONSE AND IMMUNOSUPPRESSIVE COMPOSITION
PL2285350T3 (pl) 2008-06-16 2018-03-30 Pfizer Inc. Sposoby otrzymywania funkcjonalizowanych kopolimerów dwublokowych stanowiących środki kierujące do stosowania przy wytwarzaniu nanocząstek terapeutycznych
WO2010005725A2 (en) 2008-06-16 2010-01-14 Bind Biosciences, Inc. Therapeutic polymeric nanoparticles comprising vinca alkaloids and methods of making and using same
US8613951B2 (en) 2008-06-16 2013-12-24 Bind Therapeutics, Inc. Therapeutic polymeric nanoparticles with mTor inhibitors and methods of making and using same
ES2765240T3 (es) 2008-06-16 2020-06-08 Pfizer Nanopartículas poliméricas cargadas de fármaco y procedimientos de fabricación y uso de las mismas
US20100087337A1 (en) 2008-09-10 2010-04-08 Bind Biosciences, Inc. High Throughput Fabrication of Nanoparticles
WO2010037408A1 (en) 2008-09-30 2010-04-08 Curevac Gmbh Composition comprising a complexed (m)rna and a naked mrna for providing or enhancing an immunostimulatory response in a mammal and uses thereof
AU2015210364B2 (en) 2008-10-09 2017-03-09 Arbutus Biopharma Corporation Improved amino lipids and methods for the delivery of nucleic acids
EP2350043B9 (en) 2008-10-09 2014-08-20 TEKMIRA Pharmaceuticals Corporation Improved amino lipids and methods for the delivery of nucleic acids
CN111909020A (zh) 2008-11-10 2020-11-10 阿布特斯生物制药公司 用于递送治疗剂的脂质和组合物
US8734853B2 (en) 2008-11-17 2014-05-27 University Of North Texas Health Science Center At Fort Worth HDL particles for delivery of nucleic acids
US20100216804A1 (en) 2008-12-15 2010-08-26 Zale Stephen E Long Circulating Nanoparticles for Sustained Release of Therapeutic Agents
US20120101148A1 (en) 2009-01-29 2012-04-26 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. lipid formulation
WO2010088927A1 (en) 2009-02-09 2010-08-12 Curevac Gmbh Use of pei for the improvement of endosomal release and expression of transfected nucleic acids, complexed with cationic or polycationic compounds
EP2411049B1 (en) 2009-03-27 2020-01-15 Academia Sinica Methods and compositions for immunization against virus
JP5622254B2 (ja) 2009-03-31 2014-11-12 国立大学法人東京大学 二本鎖リボ核酸ポリイオンコンプレックス
KR20120022984A (ko) 2009-04-21 2012-03-12 셀렉타 바이오사이언시즈, 인크. Ｔｈ１ 편향 반응을 제공하는 면역나노치료법
US8460680B2 (en) * 2009-04-24 2013-06-11 National Health Research Institutes Polyvalent chimeric rubella virus-based vaccines
US8287910B2 (en) 2009-04-30 2012-10-16 Intezyne Technologies, Inc. Polymeric micelles for polynucleotide encapsulation
KR20240015723A (ko) 2009-05-05 2024-02-05 알닐람 파마슈티칼스 인코포레이티드 지질 조성물
MX357630B (es) 2009-05-27 2018-07-17 Selecta Biosciences Inc Nanoportadores sintéticos objetivo con liberación sensible al ph de agentes inmunomoduladores.
CA2764609C (en) 2009-06-10 2018-10-02 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Improved cationic lipid of formula i
US9937196B2 (en) 2009-06-19 2018-04-10 University Of Maryland, College Park Genomic sequence of avian paramyxovirus type 2 and uses thereof
AU2010264686A1 (en) 2009-06-24 2012-01-19 Glaxosmithkline Biologicals S.A. Vaccine
EP2449114B9 (en) 2009-07-01 2017-04-19 Protiva Biotherapeutics Inc. Novel lipid formulations for delivery of therapeutic agents to solid tumors
CA2766907A1 (en) 2009-07-06 2011-01-13 Novartis Ag Self replicating rna molecules and uses thereof
US20110053829A1 (en) 2009-09-03 2011-03-03 Curevac Gmbh Disulfide-linked polyethyleneglycol/peptide conjugates for the transfection of nucleic acids
CN102712935B (zh) 2009-11-04 2017-04-26 不列颠哥伦比亚大学 含有核酸的脂质粒子及相关的方法
US8449916B1 (en) 2009-11-06 2013-05-28 Iowa State University Research Foundation, Inc. Antimicrobial compositions and methods
GB0920304D0 (en) 2009-11-20 2010-01-06 Medical Res Council Novel liposome nanoparticles for tumour magnetic resonance imaging
ES2666559T3 (es) 2009-12-01 2018-05-07 Translate Bio, Inc. Entrega del mrna para la aumentación de proteínas y enzimas en enfermedades genéticas humanas
WO2011069529A1 (en) 2009-12-09 2011-06-16 Curevac Gmbh Mannose-containing solution for lyophilization, transfection and/or injection of nucleic acids
JP5898627B2 (ja) 2009-12-15 2016-04-06 バインド セラピューティックス インコーポレイテッド エポチロンを含む治療用ポリマーナノ粒子ならびにそれを製造および使用する方法
EP2512487A4 (en) 2009-12-15 2013-08-07 THERAPEUTIC POLYMERNANOPARTICLES WITH CORTICOSTEROIDS AND METHOD FOR THE PRODUCTION AND USE THEREOF
EP2515942B1 (en) 2009-12-15 2020-02-12 Pfizer Inc. Therapeutic polymeric nanoparticle compositions with high glass transition temperature or high molecular weight copolymers
DE102009058769A1 (de) 2009-12-16 2011-06-22 MagForce Nanotechnologies AG, 10589 Temperaturabhängige Aktivierung von katalytischen Nukleinsäuren zur kontrollierten Wirkstofffreisetzung
EP2525815B1 (en) 2010-01-24 2015-02-25 Novartis AG Irradiated biodegradable polymer microparticles
US20110262491A1 (en) 2010-04-12 2011-10-27 Selecta Biosciences, Inc. Emulsions and methods of making nanocarriers
EP2387999A1 (en) 2010-05-21 2011-11-23 CureVac GmbH Histidine-containing solution for transfection and/or injection of nucleic acids and uses thereof
JP2013531634A (ja) 2010-05-24 2013-08-08 メルク・シャープ・エンド・ドーム・コーポレイション オリゴヌクレオチド送達のための新規なアミノアルコールカチオン性脂質
EA030813B1 (ru) 2010-05-26 2018-10-31 Селекта Байосайенсиз, Инк Способы генерации антительного иммунного ответа и увеличения местной индукции иммунных цитокинов при использовании синтетических наноносителей, соединенных с адъювантами
WO2011150320A2 (en) 2010-05-27 2011-12-01 University Of Georgia Research Foundation, Inc. Activators of innate immunity
EP2575767B1 (en) 2010-06-04 2017-01-04 Sirna Therapeutics, Inc. Novel low molecular weight cationic lipids for oligonucleotide delivery
BRPI1001959A2 (pt) 2010-06-15 2012-03-06 Instituto De Pesquisas Tecnológicas Do Est. S. Paulo S/a - Ipt Nanocarreadores coloidais para ativos hidrofílicos e processo de produção
WO2011163483A2 (en) 2010-06-25 2011-12-29 Massachusetts Institute Of Technology Polymers for biomaterials and therapeutics
KR101130137B1 (ko) 2010-07-02 2012-03-28 연세대학교 산학협력단 발광다이오드 모듈
US9192661B2 (en) 2010-07-06 2015-11-24 Novartis Ag Delivery of self-replicating RNA using biodegradable polymer particles
BR112013000244A2 (pt) 2010-07-06 2016-05-17 Novartis Ag lipossomas com lipídeos apresentando pka vantajoso para administração de rna
PT2591114T (pt) * 2010-07-06 2016-08-02 Glaxosmithkline Biologicals Sa Imunização de mamíferos de grande porte com doses baixas de arn
US9770463B2 (en) * 2010-07-06 2017-09-26 Glaxosmithkline Biologicals Sa Delivery of RNA to different cell types
LT3243526T (lt) 2010-07-06 2020-02-10 Glaxosmithkline Biologicals S.A. Rnr pristatymas, skirtas keleto imuninio atsako paleidimui
ES2558106T3 (es) 2010-07-30 2016-02-02 Curevac Ag Formación de complejos de ácidos nucleicos con componentes catiónicos disulfuro-reticulados para la transfección e inmunoestimulación
EP2600901B1 (en) 2010-08-06 2019-03-27 ModernaTX, Inc. A pharmaceutical formulation comprising engineered nucleic acids and medical use thereof
WO2012021516A2 (en) 2010-08-09 2012-02-16 The Trustees Of The University Of Pennsylvania Nanoparticle-oligonucletide hybrid structures and methods of use thereof
WO2012019630A1 (en) 2010-08-13 2012-02-16 Curevac Gmbh Nucleic acid comprising or coding for a histone stem-loop and a poly(a) sequence or a polyadenylation signal for increasing the expression of an encoded protein
WO2012024233A2 (en) 2010-08-14 2012-02-23 The Regents Of The University Of California Zwitterionic lipids
WO2012024629A1 (en) 2010-08-20 2012-02-23 Selecta Biosciences, Inc. Synthetic nanocarrier vaccines comprising proteins obtained or derived from human influenza a virus hemagglutinin
EP4066857B1 (en) * 2010-08-31 2022-12-21 GlaxoSmithKline Biologicals SA Pegylated liposomes for delivery of immunogen-encoding rna
PL4066819T3 (pl) 2010-08-31 2023-06-05 Glaxosmithkline Biologicals Sa Małe liposomy do dostarczania rna kodującego immunogen
WO2012031046A2 (en) 2010-08-31 2012-03-08 Novartis Ag Lipids suitable for liposomal delivery of protein-coding rna
US10307372B2 (en) 2010-09-10 2019-06-04 The Johns Hopkins University Rapid diffusion of large polymeric nanoparticles in the mammalian brain
CN104531812A (zh) 2010-10-01 2015-04-22 现代治疗公司 设计核酸及其使用方法
JP2013543844A (ja) 2010-10-22 2013-12-09 バインド セラピューティックス インコーポレイテッド 高分子コポリマーを含む治療用ナノ粒子
US20120121718A1 (en) 2010-11-05 2012-05-17 The Johns Hopkins University Compositions and methods relating to reduced mucoadhesion
DK2640426T3 (en) 2010-11-16 2016-05-02 Selecta Biosciences Inc Immunostimulating Oligonucleotides
WO2012089231A1 (en) * 2010-12-30 2012-07-05 Okairòs Ag Paramyxovirus vaccines
US20120177701A1 (en) 2010-12-31 2012-07-12 Selecta Biosciences, Inc. Compositions comprising immunostimulatory nucleic acids and related methods
EP3202760B1 (en) 2011-01-11 2019-08-21 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Pegylated lipids and their use for drug delivery
US20120189700A1 (en) 2011-01-19 2012-07-26 Zoraida Aguilar Nanoparticle Based Immunological Stimulation
CA2825722A1 (en) 2011-01-28 2012-08-02 Medimmune, Llc Expression of soluble viral fusion glycoproteins in mammalian cells
WO2012109121A1 (en) 2011-02-07 2012-08-16 Purdue Research Foundation Carbohydrate nanoparticles for prolonged efficacy of antimicrobial peptide
WO2012116715A1 (en) 2011-03-02 2012-09-07 Curevac Gmbh Vaccination in newborns and infants
WO2012116714A1 (en) 2011-03-02 2012-09-07 Curevac Gmbh Vaccination in elderly patients
US8710200B2 (en) 2011-03-31 2014-04-29 Moderna Therapeutics, Inc. Engineered nucleic acids encoding a modified erythropoietin and their expression
ES2820369T3 (es) 2011-03-31 2021-04-20 Ingell Tech Holding B V Composiciones biodegradables adecuadas para liberación controlada
AU2012237262A1 (en) 2011-03-31 2013-11-14 Ingell Technologies Holding B.V. Biodegradable compositions suitable for controlled release
WO2012158736A1 (en) 2011-05-17 2012-11-22 modeRNA Therapeutics Engineered nucleic acids and methods of use thereof for non-human vertebrates
US8691750B2 (en) 2011-05-17 2014-04-08 Axolabs Gmbh Lipids and compositions for intracellular delivery of biologically active compounds
WO2012166923A2 (en) 2011-05-31 2012-12-06 Bind Biosciences Drug loaded polymeric nanoparticles and methods of making and using same
CN103857387B (zh) 2011-06-02 2017-03-15 加利福尼亚大学董事会 膜包封的纳米颗粒及使用方法
ES2663360T3 (es) * 2011-06-08 2018-04-12 Translate Bio, Inc. Lípidos escindibles
US8916696B2 (en) 2011-06-12 2014-12-23 City Of Hope Aptamer-mRNA conjugates for targeted protein or peptide expression and methods for their use
US9655845B2 (en) 2011-07-06 2017-05-23 Glaxosmithkline Biologicals, S.A. Oil-in-water emulsions that contain nucleic acids
RU2014104090A (ru) 2011-07-06 2015-08-20 Новартис Аг Липосомы с эффективным соотношением n:p для доставки молекул phk
CN103732211B (zh) 2011-07-21 2017-03-01 禾大国际股份公开有限公司 支化的聚醚‑聚酰胺嵌段共聚物及其制造与使用方法
WO2013019648A1 (en) 2011-07-29 2013-02-07 Selecta Biosciences, Inc. Control of antibody responses to synthetic nanocarriers
BR112014004585A2 (pt) 2011-08-26 2017-06-13 Arrowhead Res Corp polímeros de poli(éster vinílico) para liberação de ácido nucleico in vivo
EP2750712A2 (en) 2011-08-31 2014-07-09 Mallinckrodt LLC Nanoparticle peg modification with h-phosphonates
SI2750707T1 (sl) 2011-08-31 2019-02-28 Glaxosmithkline Biologicals Sa Pegilirani liposomi za dostavo imunogen-kodirajoče RNA
US9464124B2 (en) 2011-09-12 2016-10-11 Moderna Therapeutics, Inc. Engineered nucleic acids and methods of use thereof
WO2013039861A2 (en) 2011-09-12 2013-03-21 modeRNA Therapeutics Engineered nucleic acids and methods of use thereof
US20150017245A1 (en) 2011-09-22 2015-01-15 Bind Therapeutics, Inc. Methods of treating cancers with therapeutic nanoparticles
US9375388B2 (en) 2011-09-23 2016-06-28 Indian Institute Of Technology, Bombay Nanoparticle based cosmetic composition
BR112014007852B1 (pt) 2011-10-03 2021-11-03 Moderna Therapeutics, Inc Polinucleotídeo isolado modificado e composição farmacêutica
CA2872033A1 (en) 2011-10-11 2013-04-18 Novartis Ag Recombinant self-replicating polycistronic rna molecules
CA2852064A1 (en) 2011-10-14 2013-04-18 Stc.Unm Porous nanoparticle-supported lipid bilayers (protocells) for targeted delivery including transdermal delivery of cargo and methods thereof
PT3597644T (pt) 2011-10-18 2021-11-03 Dicerna Pharmaceuticals Inc Lípidos catiónicos de amina e suas utilizações
EP2770980A4 (en) 2011-10-25 2015-11-04 Univ British Columbia LOW SIZE LIPID NANOPARTICLES AND METHODS THEREOF
NZ747501A (en) 2011-10-27 2020-05-29 Massachusetts Inst Technology Amino acid derivatives functionalized on the n-terminal capable of forming drug encapsulating microspheres
AU2012328457A1 (en) 2011-10-28 2014-04-24 Presage Biosciences, Inc. Methods for drug delivery
WO2013078199A2 (en) 2011-11-23 2013-05-30 Children's Medical Center Corporation Methods for enhanced in vivo delivery of synthetic, modified rnas
EP2785326A2 (en) 2011-11-29 2014-10-08 The University of North Carolina at Chapel Hill Geometrically engineered particles and methods for modulating macrophage or immune responses
WO2013086373A1 (en) 2011-12-07 2013-06-13 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Lipids for the delivery of active agents
US20140343129A1 (en) 2011-12-14 2014-11-20 Moderna Therapeutics, Inc. Modified nucleic acids, and acute care uses thereof
EP2791364A4 (en) 2011-12-14 2015-11-11 Moderna Therapeutics Inc PROCESS FOR RESPONSE TO A BIOLOGICAL THREAT
PL2791160T3 (pl) 2011-12-16 2022-06-20 Modernatx, Inc. Kompozycje zmodyfikowanego mrna
WO2013090601A2 (en) 2011-12-16 2013-06-20 Massachusetts Institute Of Technology Compact nanoparticles for biological applications
JP2015510495A (ja) 2011-12-21 2015-04-09 モデルナ セラピューティクス インコーポレイテッドＭｏｄｅｒｎａ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ，Ｉｎｃ． 器官または器官移植片の生存可能性または寿命を延長する方法
EP2798064B1 (en) 2011-12-30 2016-08-31 Cellscript, Llc Making and using in vitro-synthesized ssrna for introducing into mammalian cells to induce a biological or biochemical effect
WO2013105101A1 (en) 2012-01-13 2013-07-18 Department Of Biotechnology Solid lipid nanoparticles entrapping hydrophilic/ amphiphilic drug and a process for preparing the same
RU2598627C2 (ru) 2012-01-19 2016-09-27 Дзе Джонс Хопкинс Юниверсити Композиции на основе наночастиц с улучшенным проникновением через слизистые оболочки
US9416090B2 (en) 2012-02-03 2016-08-16 Rutgers, The State University Of New Jersey Polymeric biomaterials derived from phenolic monomers and their medical uses
CN104245745B (zh) 2012-02-09 2017-03-29 生命技术公司 亲水性聚合物颗粒及其制备方法
JP2015513788A (ja) 2012-02-10 2015-05-14 イー・アイ・デュポン・ドウ・ヌムール・アンド・カンパニーＥ．Ｉ．Ｄｕ Ｐｏｎｔ Ｄｅ Ｎｅｍｏｕｒｓ Ａｎｄ Ｃｏｍｐａｎｙ 高度ｘジブロックコポリマーの製造、精製及び使用
WO2013120499A1 (en) 2012-02-15 2013-08-22 Curevac Gmbh Nucleic acid comprising or coding for a histone stem-loop and a poly (a) sequence or a polyadenylation signal for increasing the expression of an encoded pathogenic antigen
WO2013120497A1 (en) 2012-02-15 2013-08-22 Curevac Gmbh Nucleic acid comprising or coding for a histone stem-loop and a poly(a) sequence or a polyadenylation signal for increasing the expression of an encoded therapeutic protein
US10398905B2 (en) 2012-02-19 2019-09-03 Nvigen, Inc. Uses of porous nanostructure in delivery
US10322089B2 (en) 2012-03-14 2019-06-18 The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University Nanoparticles, nanoparticle delivery methods, and systems of delivery
JP6211054B2 (ja) 2012-03-29 2017-10-11 シャイアー ヒューマン ジェネティック セラピーズ インコーポレイテッド 脂質誘導される中性ナノ粒子
US10501512B2 (en) 2012-04-02 2019-12-10 Modernatx, Inc. Modified polynucleotides
HK1206779A1 (en) 2012-04-02 2016-01-15 Modernatx, Inc. Modified polynucleotides for the production of nuclear proteins
US9283287B2 (en) 2012-04-02 2016-03-15 Moderna Therapeutics, Inc. Modified polynucleotides for the production of nuclear proteins
US10501513B2 (en) 2012-04-02 2019-12-10 Modernatx, Inc. Modified polynucleotides for the production of oncology-related proteins and peptides
CA2876155C (en) * 2012-06-08 2022-12-13 Ethris Gmbh Pulmonary delivery of mrna to non-lung target cells
CA2873274C (en) 2012-06-08 2021-06-01 Ethris Gmbh Pulmonary delivery of messenger rna
US9512456B2 (en) 2012-08-14 2016-12-06 Modernatx, Inc. Enzymes and polymerases for the synthesis of RNA
WO2014093924A1 (en) 2012-12-13 2014-06-19 Moderna Therapeutics, Inc. Modified nucleic acid molecules and uses thereof
DK2922554T3 (en) 2012-11-26 2022-05-23 Modernatx Inc Terminalt modificeret rna
EP2929035A1 (en) * 2012-12-07 2015-10-14 Shire Human Genetic Therapies, Inc. Lipidic nanoparticles for mrna delivering
WO2014089239A1 (en) 2012-12-07 2014-06-12 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Improved nucleic acid lipid particle formulations
US20150315541A1 (en) 2012-12-13 2015-11-05 Moderna Therapeutics, Inc. Modified polynucleotides for altering cell phenotype
WO2014136086A1 (en) 2013-03-08 2014-09-12 Novartis Ag Lipids and lipid compositions for the delivery of active agents
WO2014160463A1 (en) 2013-03-13 2014-10-02 The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health & Human Services Prefusion rsv f proteins and their use
EP2968391A1 (en) 2013-03-13 2016-01-20 Moderna Therapeutics, Inc. Long-lived polynucleotide molecules
US20160184458A1 (en) 2013-03-14 2016-06-30 Shire Human Genetic Therapies, Inc. Mrna therapeutic compositions and use to treat diseases and disorders
EP2971010B1 (en) 2013-03-14 2020-06-10 ModernaTX, Inc. Formulation and delivery of modified nucleoside, nucleotide, and nucleic acid compositions
US20160032316A1 (en) 2013-03-14 2016-02-04 The Trustees Of The University Of Pennsylvania Purification and Purity Assessment of RNA Molecules Synthesized with Modified Nucleosides
HUE055044T2 (hu) * 2013-03-14 2021-10-28 Translate Bio Inc MRNS-kódolt ellenanyagok bejuttatására szolgáló eljárások és készítmények
US10077439B2 (en) 2013-03-15 2018-09-18 Modernatx, Inc. Removal of DNA fragments in mRNA production process
US11377470B2 (en) 2013-03-15 2022-07-05 Modernatx, Inc. Ribonucleic acid purification
WO2014172045A1 (en) 2013-03-15 2014-10-23 The University Of British Columbia Lipid nanoparticles for transfection and related methods
ES2795249T3 (es) * 2013-03-15 2020-11-23 Translate Bio Inc Mejora sinérgica de la administración de ácidos nucleicos a través de formulaciones mezcladas
US9693958B2 (en) 2013-03-15 2017-07-04 Cureport, Inc. Methods and devices for preparation of lipid nanoparticles
WO2014144711A1 (en) 2013-03-15 2014-09-18 Moderna Therapeutics, Inc. Analysis of mrna heterogeneity and stability
US8980864B2 (en) 2013-03-15 2015-03-17 Moderna Therapeutics, Inc. Compositions and methods of altering cholesterol levels
WO2014144153A2 (en) 2013-03-15 2014-09-18 Ohio State Innovation Foundation Metapneumovirus immunogens and related materials and methods
US20160032273A1 (en) 2013-03-15 2016-02-04 Moderna Therapeutics, Inc. Characterization of mrna molecules
US10138507B2 (en) 2013-03-15 2018-11-27 Modernatx, Inc. Manufacturing methods for production of RNA transcripts
WO2014144767A1 (en) 2013-03-15 2014-09-18 Moderna Therapeutics, Inc. Ion exchange purification of mrna
TW201534578A (zh) 2013-07-08 2015-09-16 Daiichi Sankyo Co Ltd 新穎脂質
PT3019619T (pt) 2013-07-11 2021-11-11 Modernatx Inc Composições que compreendem polinucleótidos sintéticos que codificam proteínas relacionadas com crispr e sgarn sintéticos e métodos de utilização
SG11201510746WA (en) 2013-08-21 2016-03-30 Curevac Ag Respiratory syncytial virus (rsv) vaccine
CN105451779A (zh) 2013-08-21 2016-03-30 库瑞瓦格股份公司 增加rna编码蛋白表达的方法
CN105473157A (zh) 2013-08-21 2016-04-06 库瑞瓦格股份公司 组合疫苗
US20160194625A1 (en) 2013-09-03 2016-07-07 Moderna Therapeutics, Inc. Chimeric polynucleotides
EP3041938A1 (en) 2013-09-03 2016-07-13 Moderna Therapeutics, Inc. Circular polynucleotides
US10023626B2 (en) 2013-09-30 2018-07-17 Modernatx, Inc. Polynucleotides encoding immune modulating polypeptides
EP3052511A4 (en) 2013-10-02 2017-05-31 Moderna Therapeutics, Inc. Polynucleotide molecules and uses thereof
WO2015051214A1 (en) 2013-10-03 2015-04-09 Moderna Therapeutics, Inc. Polynucleotides encoding low density lipoprotein receptor
CA2927393A1 (en) 2013-10-18 2015-04-23 Moderna Therapeutics, Inc. Compositions and methods for tolerizing cellular systems
KR20160091350A (ko) 2013-11-29 2016-08-02 더 트러스티스 오브 더 유니버시티 오브 펜실바니아 중동 호흡기 증후군 코로나바이러스(MERS-CoV) 백신
WO2015085318A2 (en) 2013-12-06 2015-06-11 Moderna Therapeutics, Inc. Targeted adaptive vaccines
WO2015095346A1 (en) 2013-12-19 2015-06-25 Novartis Ag Lipids and lipid compositions for the delivery of active agents
PL3083556T3 (pl) * 2013-12-19 2020-06-29 Novartis Ag Lipidy i kompozycje lipidowe dla dostarczania środków czynnych
KR102399799B1 (ko) 2013-12-30 2022-05-18 큐어백 아게 인공 핵산 분자
CA2927254C (en) 2013-12-30 2023-10-24 Curevac Ag Artificial nucleic acid molecules
US10821175B2 (en) 2014-02-25 2020-11-03 Merck Sharp & Dohme Corp. Lipid nanoparticle vaccine adjuvants and antigen delivery systems
WO2015143335A1 (en) * 2014-03-20 2015-09-24 The University Of North Carolina At Chapel Hill Methods and compositions for chimeric coronavirus spike proteins
PL3981437T3 (pl) * 2014-04-23 2025-02-24 Modernatx, Inc. Szczepionki z kwasem nukleinowym
EP3157573A4 (en) 2014-06-19 2018-02-21 Moderna Therapeutics, Inc. Alternative nucleic acid molecules and uses thereof
AU2015289583A1 (en) 2014-07-16 2017-02-02 Modernatx, Inc. Chimeric polynucleotides
AU2015289573A1 (en) 2014-07-17 2017-02-02 Modernatx, Inc Terminal modifications of polynucleotides
EP3236998A1 (en) 2014-12-24 2017-11-01 The U.S.A. as represented by the Secretary, Department of Health and Human Services Recombinant metapneumovirus f proteins and their use
EP3247363A4 (en) 2015-01-21 2018-10-03 Moderna Therapeutics, Inc. Lipid nanoparticle compositions
EP3253373B1 (en) 2015-02-08 2020-03-18 Tongli Biomedical Co., Ltd. Lipid nanoparticles and uses thereof
WO2016138160A1 (en) * 2015-02-24 2016-09-01 The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services Middle east respiratory syndrome coronavirus immunogens, antibodies, and their use
WO2016164762A1 (en) 2015-04-08 2016-10-13 Moderna Therapeutics, Inc. Polynucleotides encoding low density lipoprotein receptor egf-a and intracellular domain mutants and methods of using the same
WO2016201377A1 (en) 2015-06-10 2016-12-15 Moderna Therapeutics, Inc. Targeted adaptive vaccines
WO2017011773A2 (en) 2015-07-15 2017-01-19 Modernatx, Inc. Codon-optimized nucleic acids encoding antibodies
WO2017015457A1 (en) 2015-07-21 2017-01-26 Modernatx, Inc. Ebola vaccine
ES2937963T3 (es) 2015-07-21 2023-04-03 Modernatx Inc Vacunas de enfermedad infecciosa
US20190008887A1 (en) 2015-07-30 2019-01-10 ModernaTX Inc. Multimeric mrna
HK1256498A1 (zh) 2015-07-30 2019-09-27 Modernatx, Inc. 聚肽表位 rna
US11564893B2 (en) 2015-08-17 2023-01-31 Modernatx, Inc. Methods for preparing particles and related compositions
US20180237849A1 (en) 2015-08-17 2018-08-23 Modernatx, Inc. Rna mapping/fingerprinting
JP2018533547A (ja) 2015-09-16 2018-11-15 株式会社新日本科学 ワクチン組成物
ES2969082T3 (es) 2015-09-17 2024-05-16 Modernatx Inc Compuestos y composiciones para la administración intracelular de agentes terapéuticos
ES2810701T5 (es) 2015-10-05 2024-07-11 Modernatx Inc Procedimientos para la administración terapéutica de medicamentos de ácido ribonucleico mensajero
WO2017066789A1 (en) 2015-10-16 2017-04-20 Modernatx, Inc. Mrna cap analogs with modified sugar
MA46080A (fr) 2015-10-22 2019-07-10 Modernatx Inc Vaccins à base d'acide nucléique contre le virus varicelle-zona (vzv)
AU2016342376A1 (en) 2015-10-22 2018-06-07 Modernatx, Inc. Sexually transmitted disease vaccines
EP4349404A3 (en) 2015-10-22 2024-06-19 ModernaTX, Inc. Respiratory virus vaccines
WO2017070620A2 (en) 2015-10-22 2017-04-27 Modernatx, Inc. Broad spectrum influenza virus vaccine
WO2017070624A1 (en) 2015-10-22 2017-04-27 Modernatx, Inc. Tropical disease vaccines
WO2017070618A1 (en) 2015-10-22 2017-04-27 Modernatx, Inc. Cancer vaccines
MX2018004917A (es) 2015-10-22 2019-04-01 Modernatx Inc Vacuna de virus sincitial respiratorio.
MA46316A (fr) 2015-10-22 2021-03-24 Modernatx Inc Vaccin contre le cytomégalovirus humain
WO2017070623A1 (en) 2015-10-22 2017-04-27 Modernatx, Inc. Herpes simplex virus vaccine
EP3368089B1 (en) 2015-10-26 2025-11-05 Translate Bio Ma, Inc. Nanoparticle formulations for delivery of nucleic acid complexes
FI3368507T3 (fi) 2015-10-28 2023-03-21 Acuitas Therapeutics Inc Uusia lipidejä ja lipidinanopartikkeliformulaatioita nukleiinihappojen annostelemiseksi
US20180312545A1 (en) 2015-11-09 2018-11-01 Curevac Ag Optimized nucleic acid molecules
LT3386484T (lt) 2015-12-10 2022-06-10 Modernatx, Inc. Gydomųjų medžiagų sudėtis ir pristatymo metodai
WO2017106799A1 (en) 2015-12-17 2017-06-22 Modernatx, Inc. POLYNUCLEOTIDES ENCODING METHYLMALONYL-CoA MUTASE
US10799463B2 (en) 2015-12-22 2020-10-13 Modernatx, Inc. Compounds and compositions for intracellular delivery of agents
US10465190B1 (en) 2015-12-23 2019-11-05 Modernatx, Inc. In vitro transcription methods and constructs
EP3405579A1 (en) 2016-01-22 2018-11-28 Modernatx, Inc. Messenger ribonucleic acids for the production of intracellular binding polypeptides and methods of use thereof
EA201892250A1 (ru) 2016-04-05 2019-03-29 Янссен Вэксинс Энд Превеншн Б.В. Вакцина против rsv
EP4233898A3 (en) 2016-05-04 2023-11-01 CureVac SE Influenza mrna vaccines
EP3452101A2 (en) 2016-05-04 2019-03-13 CureVac AG Rna encoding a therapeutic protein
SG11201809381XA (en) 2016-05-18 2018-12-28 Modernatx Inc Polynucleotides encoding interleukin-12 (il12) and uses thereof
EP3458108A4 (en) 2016-05-18 2020-04-22 ModernaTX, Inc. POLYNUCLEOTIDES ENCODING A CYSTIC FIBROSIS TRANSMEMBRANE CONDUCTANCE REGULATOR FOR THE TREATMENT OF CYSTIC FIBROSIS
JP7210287B2 (ja) 2016-05-18 2023-01-23 モダーナティエックス・インコーポレイテッド Ｉｉ型シトルリン血症の治療のためのシトリンをコードするポリヌクレオチド
JP7114485B2 (ja) 2016-05-18 2022-08-08 モデルナティエックス インコーポレイテッド ファブリー病の治療のためのα－ガラクトシダーゼＡをコードするポリヌクレオチド
JP2019519601A (ja) 2016-05-18 2019-07-11 モダーナティエックス・インコーポレイテッドＭｏｄｅｒｎａＴＸ， Ｉｎｃ． 急性間欠性ポルフィリン症の治療のためのポルホビリノゲン脱アミノ酵素をコードするポリヌクレオチド
MA45037A (fr) 2016-05-18 2019-03-27 Modernatx Inc Polythérapie à base d'arnm pour le traitement du cancer
WO2017201342A1 (en) 2016-05-18 2017-11-23 Modernatx, Inc. Polynucleotides encoding jagged1 for the treatment of alagille syndrome
EP3458105B1 (en) 2016-05-18 2024-01-17 Modernatx, Inc. Polynucleotides encoding galactose-1-phosphate uridylyltransferase for the treatment of galactosemia type 1
JP7088911B2 (ja) 2016-05-18 2022-06-21 モデルナティエックス インコーポレイテッド リラキシンをコードするポリヌクレオチド
US20190382774A1 (en) 2016-05-18 2019-12-19 Modernatx, Inc. Polyribonucleotides containing reduced uracil content and uses thereof
EP3458106A4 (en) 2016-05-18 2020-03-18 Modernatx, Inc. POLYNUCLEOTIDS FOR CODING LIPOPROTEIN LIPASE FOR TREATING HYPERLIPIDEMIA
WO2017201332A1 (en) 2016-05-18 2017-11-23 Modernatx, Inc. Polynucleotides encoding acyl-coa dehydrogenase, very long-chain for the treatment of very long-chain acyl-coa dehydrogenase deficiency
EP3468537A1 (en) 2016-06-14 2019-04-17 Modernatx, Inc. Stabilized formulations of lipid nanoparticles
JP7086870B2 (ja) 2016-06-30 2022-06-20 アルブータス・バイオファーマー・コーポレイション メッセンジャーｒｎａを送達するための組成物及び方法
AU2017326423B2 (en) 2016-09-14 2023-11-09 Modernatx, Inc. High purity RNA compositions and methods for preparation thereof
EP3528821A4 (en) 2016-10-21 2020-07-01 ModernaTX, Inc. HUMAN CYTOMEGALOVIRUS VACCINE
WO2018081318A1 (en) 2016-10-25 2018-05-03 The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services Prefusion coronavirus spike proteins and their use
CA3042015A1 (en) 2016-10-26 2018-05-03 Modernatx, Inc. Messenger ribonucleic acids for enhancing immune responses and methods of use thereof
WO2018081462A1 (en) 2016-10-26 2018-05-03 Modernatx, Inc. Methods and compositions for rna mapping
KR20190093816A (ko) 2016-10-26 2019-08-26 큐어백 아게 지질 나노입자 mRNA 백신
US11583504B2 (en) 2016-11-08 2023-02-21 Modernatx, Inc. Stabilized formulations of lipid nanoparticles
US10925958B2 (en) 2016-11-11 2021-02-23 Modernatx, Inc. Influenza vaccine
WO2018107088A2 (en) 2016-12-08 2018-06-14 Modernatx, Inc. Respiratory virus nucleic acid vaccines
EP3555289A1 (en) 2016-12-13 2019-10-23 ModernaTX, Inc. Rna affinity purification
US11524066B2 (en) 2016-12-23 2022-12-13 CureVac SE Henipavirus vaccine
US20180243225A1 (en) 2017-01-25 2018-08-30 Modernatx, Inc. Ebola/marburg vaccines
WO2018144778A1 (en) 2017-02-01 2018-08-09 Modernatx, Inc. Polynucleotide secondary structure
CN110505877A (zh) 2017-02-01 2019-11-26 摩登纳特斯有限公司 Rna癌症疫苗
SG11201906969PA (en) 2017-02-01 2019-08-27 Modernatx Inc Immunomodulatory therapeutic mrna compositions encoding activating oncogene mutation peptides
WO2018151816A1 (en) 2017-02-16 2018-08-23 Modernatx, Inc. High potency immunogenic compositions
WO2018157009A1 (en) 2017-02-24 2018-08-30 Modernatx, Inc. Nucleic acid-based therapy of muscular dystrophies
US11045540B2 (en) 2017-03-15 2021-06-29 Modernatx, Inc. Varicella zoster virus (VZV) vaccine
MX2019011004A (es) 2017-03-15 2020-08-10 Modernatx Inc Compuestos y composiciones para la administracion intracelular de agentes terapeuticos.
US11752206B2 (en) 2017-03-15 2023-09-12 Modernatx, Inc. Herpes simplex virus vaccine
EP3595713A4 (en) 2017-03-15 2021-01-13 ModernaTX, Inc. RESPIRATORY SYNCYTIAL VIRUS Vaccine
US11576961B2 (en) 2017-03-15 2023-02-14 Modernatx, Inc. Broad spectrum influenza virus vaccine
CA3055653A1 (en) 2017-03-15 2018-09-20 Modernatx, Inc. Lipid nanoparticle formulation
EP3595676A4 (en) 2017-03-17 2021-05-05 Modernatx, Inc. RNA VACCINES AGAINST ZOONOSES
US20200038499A1 (en) 2017-03-22 2020-02-06 Modernatx, Inc. Rna bacterial vaccines
US11905525B2 (en) 2017-04-05 2024-02-20 Modernatx, Inc. Reduction of elimination of immune responses to non-intravenous, e.g., subcutaneously administered therapeutic proteins
US20200054737A1 (en) 2017-04-26 2020-02-20 Modema TX, Inc. Herpes simplex virus vaccine
MA49421A (fr) 2017-06-15 2020-04-22 Modernatx Inc Formulations d'arn
WO2018232355A1 (en) 2017-06-15 2018-12-20 Modernatx, Inc. Rna antibodies
EP3668977A4 (en) 2017-08-18 2021-04-21 Modernatx, Inc. HPLC ANALYTICAL PROCESSES
EP3668522B1 (en) 2017-08-18 2024-09-11 ModernaTX, Inc. Efficacious mrna vaccines
WO2019036685A1 (en) 2017-08-18 2019-02-21 Modernatx, Inc. METHODS FOR HPLC ANALYSIS
EP3668971B8 (en) 2017-08-18 2024-05-29 ModernaTX, Inc. Rna polymerase variants
WO2019046809A1 (en) 2017-08-31 2019-03-07 Modernatx, Inc. METHODS OF MANUFACTURING LIPID NANOPARTICLES
WO2019055807A1 (en) 2017-09-14 2019-03-21 Modernatx, Inc. RNA VACCINES AGAINST ZIKA VIRUS
DK3703658T3 (da) 2017-10-31 2022-07-18 Astrazeneca Ab Lipidnanopartikler til administration af modificeret rna, der koder for et vegf-a-polypeptid
US20190192646A1 (en) 2017-11-03 2019-06-27 Modernatx, Inc. Salmonella vaccines
JP2021504445A (ja) 2017-11-21 2021-02-15 モデルナティーエックス， インコーポレイテッド エプスタイン−バーウイルスワクチン
EP3746090A4 (en) 2018-01-29 2021-11-17 ModernaTX, Inc. RSV RNA Vaccines
WO2019202035A1 (en) 2018-04-17 2019-10-24 Curevac Ag Novel rsv rna molecules and compositions for vaccination
AU2019293244A1 (en) 2018-06-27 2021-02-11 Modernatx, Inc. Personalized cancer vaccine epitope selection
JP2022500443A (ja) 2018-09-13 2022-01-04 モデルナティーエックス， インコーポレイテッド 進行性家族性肝内胆汁うっ滞障害を処置するための修飾ｍＲＮＡ
JP7640452B2 (ja) 2018-09-19 2025-03-05 モデルナティエックス インコーポレイテッド 高純度ｐｅｇ脂質及びそれらの使用
CA3113025A1 (en) 2018-09-19 2020-03-26 Modernatx, Inc. Peg lipids and uses thereof
EP3853202A1 (en) 2018-09-19 2021-07-28 ModernaTX, Inc. Compounds and compositions for intracellular delivery of therapeutic agents
CA3113651A1 (en) 2018-09-20 2020-03-26 Modernatx, Inc. Preparation of lipid nanoparticles and methods of administration thereof
EP3876947A4 (en) 2018-11-07 2022-08-31 ModernaTX, Inc. RNA CANCER VACCINES
MX2021009245A (es) 2019-01-31 2021-11-12 Modernatx Inc Metodos de preparacion de nanoparticulas lipidicas.
US11351242B1 (en) 2019-02-12 2022-06-07 Modernatx, Inc. HMPV/hPIV3 mRNA vaccine composition
US11851694B1 (en) 2019-02-20 2023-12-26 Modernatx, Inc. High fidelity in vitro transcription
CN113795579A (zh) 2019-02-20 2021-12-14 摩登纳特斯有限公司 用于共转录加帽的rna聚合酶变体
EP3938507A4 (en) 2019-03-11 2023-02-22 ModernaTX, Inc. PROCEDURE FOR IN VITRO FED BATCH TRANSCRIPTION
US12070495B2 (en) 2019-03-15 2024-08-27 Modernatx, Inc. HIV RNA vaccines
BR112021018526A2 (pt) 2019-03-19 2021-11-23 Arcturus Therapeutics Inc Método de fabricação de nanopartículas de rna encapsuladas em lipídio
CA3142352A1 (en) 2019-05-31 2020-12-03 Modernatx, Inc. Expanded t cell assay
BR112022002548A2 (pt) 2019-08-14 2022-06-14 Modernatx Inc Processos para purificar produtos a jusante de transcrição in vitro
WO2021050864A1 (en) 2019-09-11 2021-03-18 Modernatx, Inc. Human cytomegalovirus vaccine
JP7638972B2 (ja) 2019-09-19 2025-03-04 モデルナティエックス インコーポレイテッド 治療薬の細胞内送達のための分岐状尾部脂質化合物及び組成物
EP4031666A4 (en) 2019-09-19 2023-11-15 ModernaTX, Inc. CAP GUIDES AND THEIR USE FOR RNA MAPPING
CN110974954B (zh) 2019-12-24 2021-03-16 珠海丽凡达生物技术有限公司 一种用于增强核酸疫苗免疫效果的脂质纳米颗粒及其制备方法
WO2021142306A1 (en) 2020-01-10 2021-07-15 Modernatx, Inc. Variational autoencoder for biological sequence generation
US10953089B1 (en) 2020-01-27 2021-03-23 Novavax, Inc. Coronavirus vaccine formulations
US20210228707A1 (en) 2020-01-28 2021-07-29 Modernatx, Inc. Coronavirus rna vaccines
CN115103682A (zh) 2020-01-30 2022-09-23 摩登纳特斯有限公司 呼吸道病毒免疫组合物
TW202139976A (zh) 2020-01-31 2021-11-01 美商現代公司 製備脂質奈米顆粒之方法
JP7438604B2 (ja) 2020-02-07 2024-02-27 モデルナティエックス インコーポレイテッド ＳＡＲＳ－ＣＯＶ－２ ｍＲＮＡドメインワクチン
CN113416259B (zh) 2020-02-10 2023-04-18 中国科学院微生物研究所 一种β冠状病毒抗原、其制备方法和应用
CN115515627A (zh) 2020-02-11 2022-12-23 美国政府(由卫生和人类服务部的部长所代表) SARS-CoV-2疫苗
EP4103228A1 (en) 2020-02-13 2022-12-21 Institut Pasteur Nucleic acid vaccine against the sars-cov-2 coronavirus
CN111303254A (zh) 2020-02-20 2020-06-19 北京新创生物工程有限公司 新型冠状病毒（SARS-CoV-2）抗原检测试剂盒
CN110974950B (zh) 2020-03-05 2020-08-07 广州恩宝生物医药科技有限公司 一种用于预防SARS-CoV-2感染的腺病毒载体疫苗
CN110951756B (zh) 2020-02-23 2020-08-04 广州恩宝生物医药科技有限公司 表达SARS-CoV-2病毒抗原肽的核酸序列及其应用
CN111218458B (zh) 2020-02-27 2020-11-20 珠海丽凡达生物技术有限公司 编码SARS-CoV-2病毒抗原的mRNA和疫苗及疫苗的制备方法
CN111218459B (zh) 2020-03-18 2020-09-11 中国人民解放军军事科学院军事医学研究院 一种以人复制缺陷腺病毒为载体的重组新型冠状病毒疫苗
CN111088283B (zh) 2020-03-20 2020-06-23 苏州奥特铭医药科技有限公司 mVSV病毒载体及其病毒载体疫苗、一种基于mVSV介导的新冠肺炎疫苗
CN112023035A (zh) 2020-04-07 2020-12-04 中国医学科学院医学生物学研究所 一种以SARS-CoV-2病毒S蛋白RBD区为抗原的纳米疫苗及其制备
CN114206827B (zh) 2020-04-09 2023-05-23 苏州艾博生物科技有限公司 脂质纳米颗粒组合物
WO2021211343A1 (en) 2020-04-13 2021-10-21 Modernatx, Inc. Zika virus mrna vaccines
US20230173060A1 (en) 2020-04-14 2023-06-08 The Regents Of The University Of California Large sequence pan-coronavirus vaccine compositions
BR112022019793A2 (pt) 2020-04-22 2022-12-13 BioNTech SE Vacina para o coronavírus
WO2021222304A1 (en) 2020-04-27 2021-11-04 Modernatx, Inc. Sars-cov-2 rna vaccines
US20240342269A1 (en) 2020-05-07 2024-10-17 Translate Bio, Inc. Optimized nucleotide sequences encoding sars-cov-2 antigens
CN112695057B (zh) 2020-05-11 2022-04-26 广东珩达生物医药科技有限公司 Sars-cov-2抗原多肽及其重组腺相关病毒和在制备疫苗中的应用
JP2023526284A (ja) 2020-05-15 2023-06-21 トランスレイト バイオ， インコーポレイテッド ｍＲＮＡ送達のための脂質ナノ粒子製剤
WO2021159130A2 (en) 2020-05-15 2021-08-12 Modernatx, Inc. Coronavirus rna vaccines and methods of use
US20230142529A1 (en) 2020-05-15 2023-05-11 Modernatx, Inc. Rna formulations for high volume distribution
WO2021237084A1 (en) 2020-05-21 2021-11-25 Modernatx, Inc. Methylene blue stabilized mrna compositions
US20230287437A1 (en) 2020-06-05 2023-09-14 Modernatx, Inc. Bacterial strains for dna production
US10906944B2 (en) 2020-06-29 2021-02-02 The Scripps Research Institute Stabilized coronavirus spike (S) protein immunogens and related vaccines
CN111978377B (zh) 2020-07-09 2022-05-31 苏州和锐生物科技有限公司 Covid-19抗原、制备方法和应用
CN112043825B (zh) 2020-07-13 2023-12-05 中国医学科学院医学生物学研究所 一种基于新型冠状病毒突刺蛋白s1区域预防新型冠状病毒感染的亚单位疫苗
CN111848753B (zh) 2020-07-20 2022-03-15 中国科学院过程工程研究所 新型冠状病毒抗原表位及其应用
CN112028976A (zh) 2020-08-05 2020-12-04 上海裕隆生物科技有限公司 2019新型冠状病毒刺突蛋白受体结合结构域蛋白及应用
AU2021320426A1 (en) 2020-08-06 2023-03-23 Modernatx, Inc. Compositions for the delivery of payload molecules to airway epithelium
CN111939250B (zh) 2020-08-17 2022-07-29 郑州大学 一种预防covid-19的疫苗及其制备方法
US11406703B2 (en) 2020-08-25 2022-08-09 Modernatx, Inc. Human cytomegalovirus vaccine
CA3170743A1 (en) 2020-08-31 2022-03-03 Susanne RAUCH Multivalent nucleic acid based coronavirus vaccines
CN112048005B (zh) 2020-09-04 2022-09-09 江苏省中国科学院植物研究所 新型冠状病毒s蛋白片段多倍体及其制备方法、检测试剂盒、疫苗及药物
CN112094327A (zh) 2020-09-25 2020-12-18 军事科学院军事医学研究院军事兽医研究所 基于新型冠状病毒rbd-sd1蛋白的截短体及其应用
CN112266411B (zh) 2020-09-25 2022-06-24 北京诺思兰德生物技术股份有限公司 一种新型冠状病毒疫苗及其应用
EP4217371A1 (en) 2020-09-25 2023-08-02 ModernaTX, Inc. Multi-proline-substituted coronavirus spike protein vaccines
JP2023544197A (ja) 2020-10-06 2023-10-20 トランスレイト バイオ， インコーポレイテッド 脂質ナノ粒子の改善された方法および製剤
CN112226445B (zh) 2020-10-20 2021-05-11 成都欧林生物科技股份有限公司 编码SARS-CoV-2病毒刺突蛋白的核酸及其的应用
CN112546211A (zh) 2020-10-23 2021-03-26 嘉晨西海(杭州)生物技术有限公司 基于mRNA的针对冠状病毒和流感病毒的联合疫苗及其制备方法
CN112220920B (zh) 2020-10-30 2023-06-13 上海泽润生物科技有限公司 一种重组新型冠状病毒疫苗组合物
CN112358533B (zh) 2020-10-30 2023-07-14 上海泽润生物科技有限公司 重组刺突蛋白及其制备方法和用途
WO2022099003A1 (en) 2020-11-06 2022-05-12 Sanofi Lipid nanoparticles for delivering mrna vaccines
CA3194325A1 (en) 2020-11-06 2022-05-12 Danilo Casimiro Lipid nanoparticles for delivering mrna vaccines
US20240041785A1 (en) 2020-11-16 2024-02-08 BioNTech SE Compositions and methods for stabilization of lipid nanoparticle mrna vaccines
EP4244237A4 (en) 2020-11-16 2025-01-15 University of Florida Research Foundation, Incorporated Scaffolded antigens and engineered sars-cov-2 receptor-binding domain (rbd) polypeptides
CN112480217B (zh) 2020-11-30 2022-04-08 广州阿格纳生物医药制造有限公司 基于SARS-CoV-2的S抗原蛋白的疫苗和组合物
CN112626089B (zh) 2020-12-08 2022-03-11 杭州百凌生物科技有限公司 一种SARS-CoV-2病毒S蛋白受体结合区域编码基因、抗体及应用
WO2022137133A1 (en) 2020-12-22 2022-06-30 Curevac Ag Rna vaccine against sars-cov-2 variants
CN112794884B (zh) 2020-12-28 2022-02-18 中国科学院微生物研究所 新型冠状病毒蛋白、制备方法及中和抗体检测试剂盒
CN112321688B (zh) 2021-01-06 2021-03-26 广东华南疫苗股份有限公司 稳定的冠状病毒重组蛋白二聚体及其表达载体
US12329811B2 (en) 2021-01-11 2025-06-17 Modernatx, Inc. Seasonal RNA influenza virus vaccines
AU2022207495A1 (en) 2021-01-15 2023-08-03 Modernatx, Inc. Variant strain-based coronavirus vaccines
AU2022208057A1 (en) 2021-01-15 2023-08-03 Modernatx, Inc. Variant strain-based coronavirus vaccines
IL305644A (en) 2021-03-05 2023-11-01 Modernatx Inc Vlp enteroviral vaccines
AU2022237382A1 (en) 2021-03-15 2023-09-28 Modernatx, Inc. Therapeutic use of sars-cov-2 mrna domain vaccines
EP4313072A1 (en) 2021-03-26 2024-02-07 ModernaTX, Inc. Pertussis vaccine
EP4314000A1 (en) 2021-03-31 2024-02-07 ModernaTX, Inc. Synthesis of trinucleotide and tetranucleotide caps for mrna production
US20240229109A1 (en) 2021-04-01 2024-07-11 Modernatx, Inc. Methods for identification and ratio determination of rna species in multivalent rna compositions
JP2024515035A (ja) 2021-04-01 2024-04-04 モデルナティエックス インコーポレイテッド ｍＲＮＡによる抗体構造及びアイソタイプの粘膜発現
WO2022221335A1 (en) 2021-04-13 2022-10-20 Modernatx, Inc. Respiratory virus combination vaccines
WO2022221336A1 (en) 2021-04-13 2022-10-20 Modernatx, Inc. Respiratory syncytial virus mrna vaccines
CA3216490A1 (en) 2021-04-13 2022-10-20 Modernatx, Inc. Epstein-barr virus mrna vaccines
EP4322994A1 (en) 2021-04-14 2024-02-21 ModernaTX, Inc. Influenza-coronavirus combination vaccines
US20220370616A1 (en) 2021-04-23 2022-11-24 Modernatx, Inc. Stabilized formulations
TW202308658A (zh) 2021-04-23 2023-03-01 美商現代公司 異喹啉穩定之脂質奈米粒子調配物
EP4329731A1 (en) 2021-04-29 2024-03-06 ModernaTX, Inc. Lyophilization methods for preparing lipid formulated therapeutics
US20220363937A1 (en) 2021-05-14 2022-11-17 Armstrong World Industries, Inc. Stabilization of antimicrobial coatings
WO2022245888A1 (en) 2021-05-19 2022-11-24 Modernatx, Inc. Seasonal flu rna vaccines and methods of use
US20240285754A1 (en) 2021-06-14 2024-08-29 Modernatx, Inc. Mrna vaccines encoding flexible coronavirus spike proteins
EP4355891A4 (en) 2021-06-14 2025-09-24 Modernatx Inc VACCINES AGAINST CORONAVIRUS GLYCOSYLATION VARIANTS
US20240218353A1 (en) 2021-06-17 2024-07-04 Modernatx, Inc. Alternative rna purification strategies
WO2023283645A1 (en) 2021-07-09 2023-01-12 Modernatx, Inc. Pan-human coronavirus domain vaccines
WO2023283642A2 (en) 2021-07-09 2023-01-12 Modernatx, Inc. Pan-human coronavirus concatemeric vaccines
EP4366768A4 (en) 2021-07-09 2025-05-21 ModernaTX, Inc. Pan-human coronavirus vaccines
EP4381059A1 (en) 2021-08-02 2024-06-12 ModernaTX, Inc. Extraction-less reverse phase (rp) chromatography of mrna encapsulated in lipid nanoparticles for mrna purity assessment
WO2023019181A1 (en) 2021-08-11 2023-02-16 Modernatx, Inc. Sars-cov-2 lipid nanoparticle vaccine formulations
WO2023018773A1 (en) 2021-08-11 2023-02-16 Modernatx, Inc. Lipid nanoparticle formulations and methods of synthesis thereof
EP4384613A1 (en) 2021-08-13 2024-06-19 ModernaTX, Inc. Multicolumn chromatography mrna purification
WO2023056401A1 (en) 2021-10-01 2023-04-06 Modernatx, Inc. Rna formulations for high volume distribution, and methods of using the same for treating a disease or condition caused by or associated with human cytomegalovirus
US20250011798A1 (en) 2021-10-18 2025-01-09 Modernatx, Inc. Markerless dna production
US20250051736A1 (en) 2021-10-18 2025-02-13 Modernatx, Inc. Custom bacterial strain for recombinant protein production
WO2023069625A1 (en) 2021-10-20 2023-04-27 Modernatx, Inc. Drug product surrogate solutions
WO2023076658A1 (en) 2021-11-01 2023-05-04 Modernatx, Inc. Mass spectrometry of mrna
EP4426855A1 (en) 2021-11-05 2024-09-11 ModernaTX, Inc. Methods of purifying dna for gene synthesis
WO2023092069A1 (en) 2021-11-18 2023-05-25 Modernatx, Inc. Sars-cov-2 mrna domain vaccines and methods of use
EP4226938A3 (en) 2021-11-29 2023-11-01 BioNTech SE Coronavirus vaccine
US12186387B2 (en) 2021-11-29 2025-01-07 BioNTech SE Coronavirus vaccine
US20250360194A1 (en) 2021-12-08 2025-11-27 Modernatx, Inc. Herpes simplex virus mrna vaccines
EP4448777A1 (en) 2021-12-15 2024-10-23 ModernaTX, Inc. Determination of encapsulation efficiency of lipid nanoparticles
US20250084397A1 (en) 2022-01-04 2025-03-13 Modernatx, Inc. Methods of purifying dna for gene synthesis
WO2023137149A1 (en) 2022-01-14 2023-07-20 Modernatx, Inc. In vitro transcription dna purification and recycling
WO2023135439A1 (en) 2022-01-17 2023-07-20 Institut Pasteur Boosting sars-cov-2 immunity with a lentiviral-based nasal vaccine
WO2023147092A2 (en) 2022-01-28 2023-08-03 BioNTech SE Coronavirus vaccine
EP4473107A1 (en) 2022-02-03 2024-12-11 ModernaTX, Inc. Continuous precipitation for mrna purification
US20250235531A1 (en) 2022-02-09 2025-07-24 Modernatx, Inc. Mucosal administration methods and formulations
WO2023196914A1 (en) 2022-04-08 2023-10-12 Modernatx, Inc. Influenza nucleic acid compositions and uses thereof
EP4508242A1 (en) 2022-04-11 2025-02-19 ModernaTX, Inc. Detection of mrna purity in a mixture
US20250250551A1 (en) 2022-04-14 2025-08-07 Modernatx, Inc. Rna polymerase variants
US20250251391A1 (en) 2022-04-15 2025-08-07 Modernatx, Inc. Ribosomal engagement potency assay
WO2023212696A1 (en) 2022-04-29 2023-11-02 Modernatx, Inc. Lyophilized human cytomegalovirus vaccines
WO2023225524A1 (en) 2022-05-17 2023-11-23 Modernatx, Inc. Preparation of highly concentrated mrna
EP4544074A1 (en) 2022-06-24 2025-04-30 ModernaTX, Inc. Methods of producing rna
WO2024010993A1 (en) 2022-07-06 2024-01-11 Modernatx, Inc. Primer design for cell-free dna production
EP4554617A1 (en) 2022-07-13 2025-05-21 ModernaTX, Inc. Norovirus mrna vaccines
WO2024026005A1 (en) 2022-07-28 2024-02-01 Modernatx, Inc. Methods of rna purification
WO2024030369A1 (en) 2022-08-01 2024-02-08 Modernatx, Inc. Extraction-less reverse phase (rp) chromatography for mrna purity assessment
WO2024050483A1 (en) 2022-08-31 2024-03-07 Modernatx, Inc. Variant strain-based coronavirus vaccines and uses thereof
WO2024097874A1 (en) 2022-11-03 2024-05-10 Modernatx, Inc. Chemical stability of mrna

Also Published As

Publication number Publication date
PT3718565T (pt) 2022-07-20
EP4349404A3 (en) 2024-06-19
US12403336B2 (en) 2025-09-02
WO2017070626A3 (en) 2017-08-03
US20240335526A1 (en) 2024-10-10
US20180326045A1 (en) 2018-11-15
ES2922760T3 (es) 2022-09-20
WO2017070626A2 (en) 2017-04-27
CY1125368T1 (el) 2025-05-09
US10702600B1 (en) 2020-07-07
MA52645B1 (fr) 2022-06-30
DE20164728T1 (de) 2021-09-30
EP3718565B1 (en) 2022-04-27
US12208288B2 (en) 2025-01-28
EP3364983A2 (en) 2018-08-29
US20190240317A1 (en) 2019-08-08
US20190216917A1 (en) 2019-07-18
HUE059127T2 (hu) 2022-10-28
SI3718565T1 (sl) 2022-08-31
US10702599B2 (en) 2020-07-07
MA52645A (fr) 2021-03-24
EP4349404A2 (en) 2024-04-10
EP3718565A1 (en) 2020-10-07
US10933127B2 (en) 2021-03-02
US20200282046A1 (en) 2020-09-10
US12403335B2 (en) 2025-09-02
US20240366748A1 (en) 2024-11-07
SMT202200361T1 (it) 2022-11-18
EP4349405A2 (en) 2024-04-10
US10543269B2 (en) 2020-01-28
US10272150B2 (en) 2019-04-30
US20240350617A1 (en) 2024-10-24
US11872278B2 (en) 2024-01-16
EP4349405A3 (en) 2024-06-19
US20200197510A1 (en) 2020-06-25
MA47016A (fr) 2018-08-29
US10064934B2 (en) 2018-09-04
US20240366749A1 (en) 2024-11-07
US20250121220A1 (en) 2025-04-17
EP3364983A4 (en) 2019-10-23
US12409347B2 (en) 2025-09-09
HRP20220872T1 (hr) 2022-12-23
MD3718565T2 (ro) 2022-09-30
LT3718565T (lt) 2022-06-10
EP4011451A1 (en) 2022-06-15
TW201729835A (zh) 2017-09-01
US12521577B2 (en) 2026-01-13
DK3718565T3 (da) 2022-06-20
US20200405844A1 (en) 2020-12-31
US20250121221A1 (en) 2025-04-17
PL3718565T3 (pl) 2022-09-19
US20170340725A1 (en) 2017-11-30

Similar Documents

Publication Publication Date Title
US12409347B2 (en) Betacoronavirus mRNA vaccines
JP7803621B2 (ja) ヒトサイトメガロウイルスワクチン
JP7330590B2 (ja) 水痘帯状疱疹ウイルス（ｖｚｖ）のための核酸ワクチン
JP2023015151A (ja) 呼吸器合胞体ウイルスワクチン
JP7384512B2 (ja) 広域インフルエンザウイルスワクチン
HK40038642B (en) Respiratory virus vaccines
HK40076103A (en) Metapneumovirus mrna vaccines
HK40038642A (en) Respiratory virus vaccines