[go: up one dir, main page]

RS63928B1 - Jedinjenja i metode za modulaciju smn2 - Google Patents

Jedinjenja i metode za modulaciju smn2

Info

Publication number
RS63928B1
RS63928B1 RS20221176A RSP20221176A RS63928B1 RS 63928 B1 RS63928 B1 RS 63928B1 RS 20221176 A RS20221176 A RS 20221176A RS P20221176 A RSP20221176 A RS P20221176A RS 63928 B1 RS63928 B1 RS 63928B1
Authority
RS
Serbia
Prior art keywords
modified
modified oligonucleotide
nucleosides
certain embodiments
oligomeric compound
Prior art date
Application number
RS20221176A
Other languages
English (en)
Inventor
Frank Rigo
Thazha P Prakash
Punit P Seth
Original Assignee
Ionis Pharmaceuticals Inc
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Family has litigation
First worldwide family litigation filed litigation Critical https://patents.darts-ip.com/?family=60952211&utm_source=google_patent&utm_medium=platform_link&utm_campaign=public_patent_search&patent=RS63928(B1) "Global patent litigation dataset” by Darts-ip is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 International License.
Application filed by Ionis Pharmaceuticals Inc filed Critical Ionis Pharmaceuticals Inc
Publication of RS63928B1 publication Critical patent/RS63928B1/sr

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/11—DNA or RNA fragments; Modified forms thereof; Non-coding nucleic acids having a biological activity
    • C12N15/113—Non-coding nucleic acids modulating the expression of genes, e.g. antisense oligonucleotides; Antisense DNA or RNA; Triplex- forming oligonucleotides; Catalytic nucleic acids, e.g. ribozymes; Nucleic acids used in co-suppression or gene silencing
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07H—SUGARS; DERIVATIVES THEREOF; NUCLEOSIDES; NUCLEOTIDES; NUCLEIC ACIDS
    • C07H21/00—Compounds containing two or more mononucleotide units having separate phosphate or polyphosphate groups linked by saccharide radicals of nucleoside groups, e.g. nucleic acids
    • C07H21/02—Compounds containing two or more mononucleotide units having separate phosphate or polyphosphate groups linked by saccharide radicals of nucleoside groups, e.g. nucleic acids with ribosyl as saccharide radical
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
    • A61K31/7088—Compounds having three or more nucleosides or nucleotides
    • A61K31/7125—Nucleic acids or oligonucleotides having modified internucleoside linkage, i.e. other than 3'-5' phosphodiesters
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/0012—Galenical forms characterised by the site of application
    • A61K9/0019—Injectable compositions; Intramuscular, intravenous, arterial, subcutaneous administration; Compositions to be administered through the skin in an invasive manner
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P21/00—Drugs for disorders of the muscular or neuromuscular system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P21/00—Drugs for disorders of the muscular or neuromuscular system
    • A61P21/02—Muscle relaxants, e.g. for tetanus or cramps
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/28—Drugs for disorders of the nervous system for treating neurodegenerative disorders of the central nervous system, e.g. nootropic agents, cognition enhancers, drugs for treating Alzheimer's disease or other forms of dementia
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
    • C12N2310/10—Type of nucleic acid
    • C12N2310/11—Antisense
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
    • C12N2310/30—Chemical structure
    • C12N2310/31—Chemical structure of the backbone
    • C12N2310/315—Phosphorothioates
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
    • C12N2310/30—Chemical structure
    • C12N2310/32—Chemical structure of the sugar
    • C12N2310/321—2'-O-R Modification
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
    • C12N2310/30—Chemical structure
    • C12N2310/32—Chemical structure of the sugar
    • C12N2310/322—2'-R Modification
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
    • C12N2310/30—Chemical structure
    • C12N2310/33—Chemical structure of the base
    • C12N2310/334—Modified C
    • C12N2310/3341—5-Methylcytosine
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
    • C12N2310/30—Chemical structure
    • C12N2310/35—Nature of the modification
    • C12N2310/351—Conjugate
    • C12N2310/3515—Lipophilic moiety, e.g. cholesterol
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
    • C12N2310/30—Chemical structure
    • C12N2310/35—Nature of the modification
    • C12N2310/352—Nature of the modification linked to the nucleic acid via a carbon atom
    • C12N2310/3521—Methyl
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
    • C12N2310/30—Chemical structure
    • C12N2310/35—Nature of the modification
    • C12N2310/352—Nature of the modification linked to the nucleic acid via a carbon atom
    • C12N2310/3525—MOE, methoxyethoxy
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2320/00—Applications; Uses
    • C12N2320/30—Special therapeutic applications
    • C12N2320/33—Alteration of splicing

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Neurology (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Neurosurgery (AREA)
  • Orthopedic Medicine & Surgery (AREA)
  • Physical Education & Sports Medicine (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Dermatology (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Plant Pathology (AREA)
  • Pain & Pain Management (AREA)
  • Hospice & Palliative Care (AREA)
  • Psychiatry (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Saccharide Compounds (AREA)
  • Steroid Compounds (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)

Description

Opis
Oblast pronalaska
[0001] Ovde su data jedinjenja i kompozicije za modulaciju SMN2.
POZADINA
[0002] Proksimalna spinalna mišićna atrofija (SMA) je genetski, neurodegenerativni poremećaj koji karakteriše gubitak spinalnih motornih neurona. SMA je autozomno recesivna bolest ranog početka i trenutno je vodeći uzrok smrti kod novorođenčadi. Ozbiljnost SMA varira među pacijentima i zbog toga je klasifikovana u tri tipa. SMA tipa I je najteži oblik sa početkom pri rođenju ili u roku od 6 meseci i obično dovodi do smrti u roku od 2 godine. Deca sa tipom I SMA ne mogu da sede ili hodaju. SMA tipa II je srednji oblik i pacijenti mogu da sede, ali ne mogu da stoje ili hodaju. Pacijenti sa SMA tipa III, hroničnim oblikom bolesti, obično razvijaju SMA nakon 18 meseci života (Lefebvre et al., Hum. Mol. Genet., 1998, 7, 1531-1536).
[0003] Molekularna osnova SMA je uzrokovana gubitkom obe kopije gena 1 motornog neurona za preživljavanje (SMN1), koji može biti poznat i kao SMN telomerni, protein koji je deo multi-proteinskog kompleksa za koji se smatra da je uključen u biogenezu snRNP i reciklažu. Skoro identičan gen, SMN2, koji može biti poznat i kao SMN Centromerni, postoji u dupliranom regionu na hromozomu 5q13 i modulira težinu bolesti. Ekspresija normalnog SMN1 gena rezultira isključivo ekspresijom proteina motornog neurona preživljavanja (SMN). Iako SMN1 i SMN2 imaju potencijal da kodiraju isti protein, SMN2 sadrži translatorno tihu mutaciju na poziciji 6 eksona 7, što rezultira neefikasnim uključivanjem eksona 7 u SMN2 transkriptima. Dakle, preovlađujući oblik SMN2 je skraćena verzija, kojoj nedostaje ekson 7, koji je nestabilan i neaktivan (Cartegni i Krainer, Nat. Genet., 2002, 30, 377-384). Ekspresija SMN2 gena dovodi do približno 10-20% SMN proteina i 80-90% nestabilnog/nefunkcionalnog SMNdelta7 proteina. SMN protein igra dobro utvrđenu ulogu u sastavljanju splajsozoma i takođe može posredovati u prometu mRNK u aksonu i nervnom terminisu neurona.
[0004] Antisens tehnologija je efikasno sredstvo za moduliranje ekspresije jednog ili više specifičnih genskih proizvoda, uključujući alternativne proizvode splajsovanja, i jedinstveno je korisna u brojnim terapijskim, dijagnostičkim i istraživačkim aplikacijama. Princip koji stoji iza antisens tehnologije je da antisens jedinjenje, koje se hibridizuje sa ciljnom nukleinskom kiselinom, modulira aktivnosti ekspresije gena kao što su transkripcija, splajsovanje ili translacija kroz jedan od brojnih antisens mehanizama. Specifičnost sekvence antisens jedinjenja čini ih izuzetno atraktivnim kao alate za validaciju cilja i funkcionalizaciju gena, kao i terapeutike za selektivno modulisanje ekspresije gena uključenih u bolest.
[0005] WO 2015/051283 se odnosi na kompozicije i metode za lečenje amiotrofične lateralne skleroze.
[0006] US 2013/289092 se odnosi na jedinjenja i metode za moduliranje interakcije između proteina i ciljnih nukleinskih kiselina.
[0007] US 2016/068845 se odnosi na modulaciju ekspresije protein kinaze miotonične distrofije (DMPK).
REZIME
[0008] Ovde je obezbeđeno oligomerno jedinjenje koje sadrži modifikovani oligonukleotid koji se sastoji od 14-25 povezanih nukleozida, pri čemu je modifikovani oligonukleotid komplementaran sa SMN2 pre-mRNK; i pri čemu najmanje jedan nukleozid modifikovanog oligonukleotida sadrži 2'-O-(N-alkil acetamid) modifikovani šećerni deo.
[0009] Ovde je takođe obezbeđen modifikovani oligonukleotid koji se sastoji od 18 povezanih nukleozida i koji ima sekvencu nukleobaze SEK ID BR: 3, pri čemu svaki nukleozid modifikovanog oligonukleotida sadrži 2'-O-(N-metil acetamid) modifikovani deo šećera, i pri čemu je svaka internukleozidna veza modifikovanog oligonukleotida izabrana između fosforotioatne internukleozidne veze i fosfodiestarske internukleozidne veze.
[0010] Ovde je takođe obezbeđen modifikovani oligonukleotid koji se sastoji od 18 do 20 povezanih nukleozida koji sadrže sekvencu nukleobaze SEK ID BR: 1, pri čemu svaki od 18 nukleozida modifikovanog oligonukleotida sadrži 2'-O-(N-metil acetamid) modifikovani deo šećera, i pri čemu je svaka internukleozidna veza modifikovanog oligonukleotida izabrana između fosforotioatne internukleozidne veze i fosfodiestarske internukleozidne veze.
[0011] Ovde je takođe obezbeđena farmaceutska kompozicija koja sadrži oligomerno jedinjenje ili modifikovani oligonukleotid pronalaska i najmanje jedan farmaceutski prihvatljiv nosač ili razblaživač.
[0012] Ovde je takođe obezbeđeno oligomerno jedinjenje, modifikovani oligonukleotid ili farmaceutska kompozicija pronalaska, za upotrebu u postupku lečenja Spinalne mišićne atrofije kod pacijenta.
[0013] Ovo otkriće obezbeđuje jedinjenja i kompozicije za modulaciju SMN2 pre-mRNK. Ovo otkriće takođe obezbeđuje jedinjenja i kompozicije korisne, na primer, za lečenje, prevenciju ili ublažavanje jednog ili više simptoma Spinalne mišićne atrofije.
[0014] U određenim izvođenjima, predmetno otkriće obezbeđuje oligomerna jedinjenja koja sadrže ili se sastoje od modifikovanih oligonukleotida koji imaju jedan ili više 2'-O-(N-alkil acetamid) ili 2'-O-(N-metil acetamid) modifikovanih delova šećera i komplementarna su sa SMN pre-mRNK. Modifikovani oligonukleotidi koji imaju jedan ili više 2'-O-(N-alkil acetamid) ili 2'-O-(N-metil acetamid) modifikovanih delova šećera imaju pojačano ćelijsko preuzimanje i/ili farmakološku aktivnost u mišićnom tkivu. Pošto je SMN2 eksprimiran u mišićnom tkivu, modifikovani oligonukleotidi koji imaju jednu ili više 2'-O-(N-alkil acetamid) modifikacija će imati poboljšanu aktivnost u mišićnom tkivu.
[0015] Ovde su data jedinjenja korisna za modulaciju obrade SMN2 od pre-mRNK. Jedinjenja obuhvataju modifikovane oligonukleotide koji sadrže 2'-O-(N-alkil acetamid) ili 2'-O-(N-metil acetamid) modifikovane delove šećera. U određenim izvođenjima, modifikovani oligonukleotidi sadrže 2'-O-(N-metil acetamid) ili 2'-O-(N-metil acetamid) modifikovane delove šećera. U određenim izvođenjima, jedinjenja pronalaska moduliraju splajsovanje premRNK. Modifikovani oligonukleotidi koji imaju jedan ili više 2'-O-(N-alkil acetamid) ili 2'-O-(N-metil acetamid) modifikovanih delova šećera takođe imaju poboljšanu farmakološku aktivnost za modulaciju SMN2 pre-mRNK. Na primer, u određenim izvođenjima, modifikovani oligonukleotidi koji imaju jedan ili više 2'-O-(N-alkil acetamid) ili 2'-O-(N-metil acetamid) modifikovanih delova šećera usmerenih na SMN2 pre-mRNK povećavaju uključivanje eksona 7 u većoj meri od modifikovanih oligonukleotida kojima nedostaje jedan ili više 2'-O-(N-alkil acetamid) ili 2'-O-(N-metil acetamid) modifikovanih delova šećera.
[0016] Takođe su obezbeđena jedinjenja koja sadrže modifikovani oligonukleotid koji sadrži 2'-O-(N-alkil acetamid) ili 2'-O-(N-metil acetamid) modifikovane delove šećera za upotrebu u terapiji.
[0017] Predmetno otkriće obezbeđuje sledeća neograničavajuća numerisana izvođenja:
Izvođenje 1: Oligomerno jedinjenje koje sadrži modifikovani oligonukleotid koji se sastoji od 14-25 povezanih nukleozida, pri čemu je modifikovani oligonukleotid komplementaran sa SMN2 pre-mRNK; i pri čemu najmanje jedan nukleozid modifikovanog oligonukleotida ima strukturu Formule I:
pri čemu je Bx nukleobaza;
i R<1>za svaki nukleozid Formule I je nezavisno izabran između: metila, etila, propila i izopropila.
Izvođenje 2: Oligomerno jedinjenje iz izvođenja 1, gde je Bx izabran između adenina, guanina, citozina, timina, uracila i 5-metil citozina.
Izvođenje 3: Oligomerno jedinjenje iz izvođenja 1 ili 2, pri čemu je R<1>metil.
Izvođenje 4: Oligomerno jedinjenje bilo kojeg iz izvođenja 1-3, pri čemu svaki od najmanje 2 nukleozida modifikovanog oligonukleotida ima strukturu nezavisno izabranu iz Formule I.
Izvođenje 5: Oligomerno jedinjenje bilo kojeg iz izvođenja 1-3, pri čemu svaki od 7 nukleozida modifikovanog oligonukleotida ima strukturu nezavisno izabranu iz Formule I.
Izvođenje 6: Oligomerno jedinjenje bilo kojeg iz izvođenja 1-3, pri čemu svaki od 8 nukleozida modifikovanog oligonukleotida ima strukturu nezavisno izabranu iz Formule I.
Izvođenje 7: Oligomerno jedinjenje bilo kojeg iz izvođenja 1-3, pri čemu svaki od 9 nukleozida modifikovanog oligonukleotida ima strukturu nezavisno izabranu iz Formule I.
Izvođenje 8: Oligomerno jedinjenje bilo kojeg iz izvođenja 1-3, pri čemu svaki od 10 nukleozida modifikovanog oligonukleotida ima strukturu nezavisno izabranu iz Formule I.
Izvođenje 9: Oligomerno jedinjenje bilo kojeg iz izvođenja 1-3, pri čemu svaki od 11 nukleozida modifikovanog oligonukleotida ima strukturu nezavisno izabranu iz Formule I.
Izvođenje 10: Oligomerno jedinjenje bilo kojeg iz izvođenja 1-3, pri čemu svaki od 12 nukleozida modifikovanog oligonukleotida ima strukturu nezavisno izabranu iz Formule I.
Izvođenje 11: Oligomerno jedinjenje bilo kojeg iz izvođenja 1-3, pri čemu svaki od 13 nukleozida modifikovanog oligonukleotida ima strukturu nezavisno izabranu iz Formule I.
Izvođenje 12: Oligomerno jedinjenje bilo kojeg iz izvođenja 1-3, pri čemu svaki od 14 nukleozida modifikovanog oligonukleotida ima strukturu nezavisno izabranu iz Formule I.
Izvođenje 13: Oligomerno jedinjenje bilo kojeg iz izvođenja 1-3, pri čemu svaki od 15 nukleozida modifikovanog oligonukleotida ima strukturu nezavisno izabranu iz Formule I.
Izvođenje 14: Oligomerno jedinjenje bilo kojeg iz izvođenja 1-3, pri čemu svaki od 16 nukleozida modifikovanog oligonukleotida ima strukturu nezavisno izabranu iz Formule I.
Izvođenje 15: Oligomerno jedinjenje bilo kojeg iz izvođenja 1-3, pri čemu svaki od 17 nukleozida modifikovanog oligonukleotida ima strukturu nezavisno izabranu iz Formule I.
Izvođenje 16: Oligomerno jedinjenje bilo kojeg iz izvođenja 1-3, pri čemu svaki od 18 nukleozida modifikovanog oligonukleotida ima strukturu nezavisno izabranu iz Formule I.
Izvođenje 17: Oligomerno jedinjenje bilo kojeg iz izvođenja 1-3, pri čemu svaki od 19 nukleozida modifikovanog oligonukleotida ima strukturu nezavisno izabranu iz Formule I.
Izvođenje 18: Oligomerno jedinjenje bilo kojeg iz izvođenja 1-3, pri čemu svaki od 20 nukleozida modifikovanog oligonukleotida ima strukturu nezavisno izabranu iz Formule I.
Izvođenje 19: Oligomerno jedinjenje bilo kojeg iz izvođenja 1-18, pri čemu R<1>od najmanje jednog nukleozida koji ima strukturu Formule I je metil.
Izvođenje 20: Oligomerno jedinjenje bilo kojeg iz izvođenja 1-19, pri čemu je R<1>isti za sve nukleozide koji imaju strukturu Formule I.
Izvođenje 21: Oligomerno jedinjenje koje sadrži modifikovani oligonukleotid koji se sastoji od 14-25 povezanih nukleozida, pri čemu je modifikovani oligonukleotid komplementaran sa SMN2 pre-mRNK; i pri čemu najmanje jedan nukleozid modifikovanog oligonukleotida sadrži 2'-O-(N-alkil acetamid) modifikovani šećerni deo.
Izvođenje 22: Oligomerno jedinjenje iz izvođenja 21, pri čemu je šećerni deo svakog nukleozida koji sadrži 2'-O-(N-alkil acetamid) modifikovani šećerni deo izabran od 2'-O-(N-metil acetamida) i 2'-O- (Netil acetamida).
Izvođenje 23: Oligomerno jedinjenje iz izvođenja 21 ili 22, pri čemu svaki od 7 nukleozida modifikovanog oligonukleotida sadrži nezavisno izabrani 2'-O-(N-alkil acetamid) modifikovani šećerni deo.
Izvođenje 24: Oligomerno jedinjenje iz izvođenja 21 ili 22, pri čemu svaki od 8 nukleozida modifikovanog oligonukleotida sadrži nezavisno izabrani 2'-O-(N-alkil acetamid) modifikovani šećerni deo.
Izvođenje 25: Oligomerno jedinjenje iz izvođenja 21 ili 22, pri čemu svaki od 9 nukleozida modifikovanog oligonukleotida sadrži nezavisno izabrani 2'-O-(N-alkil acetamid) modifikovani šećerni deo.
Izvođenje 26: Oligomerno jedinjenje iz izvođenja 21 ili 22, pri čemu svaki od 10 nukleozida modifikovanog oligonukleotida sadrži nezavisno izabrani 2'-O-(N-alkil acetamid) modifikovani šećerni deo.
Izvođenje 27: Oligomerno jedinjenje iz izvođenja 21 ili 22, pri čemu svaki od 11 nukleozida modifikovanog oligonukleotida sadrži nezavisno izabrani 2'-O-(N-alkil acetamid) modifikovani šećerni deo.
Izvođenje 28: Oligomerno jedinjenje iz izvođenja 21 ili 22, pri čemu svaki od 12 nukleozida modifikovanog oligonukleotida sadrži nezavisno izabrani 2'-O-(N-alkil acetamid) modifikovani šećerni deo.
Izvođenje 29: Oligomerno jedinjenje iz izvođenja 21 ili 22, pri čemu svaki od 13 nukleozida modifikovanog oligonukleotida sadrži nezavisno izabrani 2'-O-(N-alkil acetamid) modifikovani šećerni deo.
Izvođenje 30: Oligomerno jedinjenje iz izvođenja 21 ili 22, pri čemu svaki od 14 nukleozida modifikovanog oligonukleotida sadrži nezavisno izabrani 2'-O-(N-alkil acetamid) modifikovani šećerni deo.
Izvođenje 31: Oligomerno jedinjenje iz izvođenja 21 ili 22, pri čemu svaki od 15 nukleozida modifikovanog oligonukleotida sadrži nezavisno izabrani 2'-O-(N-alkil acetamid) modifikovani šećerni deo.
Izvođenje 32: Oligomerno jedinjenje iz izvođenja 21 ili 22, pri čemu svaki od 16 nukleozida modifikovanog oligonukleotida sadrži nezavisno izabrani 2'-O-(N-alkil acetamid) modifikovani šećerni deo.
Izvođenje 33: Oligomerno jedinjenje iz izvođenja 21 ili 22, pri čemu svaki od 17 nukleozida modifikovanog oligonukleotida sadrži nezavisno izabrani 2'-O-(N-alkil acetamid) modifikovani šećerni deo.
Izvođenje 34: Oligomerno jedinjenje iz izvođenja 21 ili 22, pri čemu svaki od 18 nukleozida modifikovanog oligonukleotida sadrži nezavisno izabrani 2'-O-(N-alkil acetamid) modifikovani šećerni deo.
Izvođenje 35: Oligomerno jedinjenje iz izvođenja 21 ili 22, pri čemu svaki od 19 nukleozida modifikovanog oligonukleotida sadrži nezavisno izabrani 2'-O-(N-alkil acetamid) modifikovani šećerni deo.
Izvođenje 36: Oligomerno jedinjenje iz izvođenja 21 ili 22, pri čemu svaki od 20 nukleozida modifikovanog oligonukleotida sadrži nezavisno izabrani 2'-O-(N-alkil acetamid) modifikovani šećerni deo.
Izvođenje 37: Oligomerno jedinjenje bilo kojeg iz izvođenja 21-36, pri čemu šećerni deo najmanje jedog nukleozida koji sadrži 2'-O-(N-alkil acetamid) modifikovani šećerni deo je 2'-O-(N-metil acetamid) ) modifikovani šećerni deo.
Izvođenje 38: Oligomerno jedinjenje bilo kojeg iz izvođenja 21-37, pri čemu N-alkil grupa svakog od 2'-O-(N-alkil acetamida) modifikovanih delova šećera je ista N-alkil grupa.
Izvođenje 39: Oligomerno jedinjenje bilo kojeg iz izvođenja 21-38, pri čemu svaki od 2'-O-(N-alkil acetamida) modifikovanih delova šećera je 2'-O-(N-metil acetamid) šećerni deo.
Izvođenje 40: Oligomerno jedinjenje bilo kojeg iz izvođenja 21-39, pri čemu svaki šećerni deo svakog nukleozida modifikovanog oligonukleotida je 2'-O-(N-metil acetamid) modifikovani šećerni deo.
Izvođenje 41: Oligomerno jedinjenje bilo kojeg iz izvođenja 1-40, pri čemu se modifikovani oligonukleotid sastoji od 16-23 povezanih nukleozida.
Izvođenje 42: Oligomerno jedinjenje bilo kojeg iz izvođenja 1-40, pri čemu se modifikovani oligonukleotid sastoji od 18-20 povezanih nukleozida.
Izvođenje 43: Oligomerno jedinjenje bilo kojeg iz izvođenja 1-41, pri čemu se modifikovani oligonukleotid sastoji od 16 nukleozida.
Izvođenje 44: Oligomerno jedinjenje bilo kojeg iz izvođenja 1-41, pri čemu se modifikovani oligonukleotid sastoji od 17 nukleozida.
Izvođenje 45: Oligomerno jedinjenje bilo kojeg iz izvođenja 1-41, pri čemu se modifikovani oligonukleotid sastoji od 18 nukleozida.
Izvođenje 46: Oligomerno jedinjenje bilo kojeg iz izvođenja 1-41, pri čemu se modifikovani oligonukleotid sastoji od 19 nukleozida.
Izvođenje 47: Oligomerno jedinjenje bilo kojeg iz izvođenja 1-41, pri čemu se modifikovani oligonukleotid sastoji od 20 nukleozida.
Izvođenje 48: Oligomerno jedinjenje bilo kojeg iz izvođenja 1-47, pri čemu modifikovani oligonukleotid sadrži najmanje jednu modifikovanu internukleozidnu vezu.
Izvođenje 49: Oligomerno jedinjenje bilo kojeg iz izvođenja 1-48, pri čemu modifikovani oligonukleotid sadrži najmanje jednu fosforotioatnu internukleozidnu vezu.
Izvođenje 50: Oligomerno jedinjenje iz izvođenja 49, pri čemu je svaka internukleozidna veza modifikovanog oligonukleotida izabrana između fosforotioatne internukleozidne veze i fosfatne internukleozidne veze.
Izvođenje 51: Oligomerno jedinjenje iz izvođenja 50, pri čemu fosfatna internukleozidna veza je fosfodiestarska internukleozidna veza.
Izvođenje 52: Oligomerno jedinjenje iz bilo kojeg od izvođenja 1-50, pri čemu svaka internukleozidna veza modifikovanog oligonukleotida je fosforotioatna internukleozidna veza.
Izvođenje 53: Oligomerno jedinjenje iz bilo kojeg od izvođenja 1-52, pri čemu modifikovani oligonukleotid sadrži najmanje jednu modifikovanu nukleobazu.
Izvođenje 54: Oligomerno jedinjenje iz bilo kojeg od izvođenja 1-53, pri čemu modifikovani oligonukleotid sadrži najmanje jedan 5-metil citozin.
Izvođenje 55: Oligomerno jedinjenje iz bilo kojeg od izvođenja 1-54, pri čemu je svaka nukleobaza modifikovanog oligonukleotida izabrana između timina, 5-metil citozina, citozina, adenina, uracila i guanina.
Izvođenje 56: Oligomerno jedinjenje iz bilo kojeg od izvođenja 1-55, pri čemu je svaki citozin modifikovanog oligonukleotida 5-metil citozin.
Izvođenje 57: Oligomerno jedinjenje iz bilo kojeg od izvođenja 1-56, pri čemu je svaka nukleobaza modifikovanog oligonukleotida izabrana između timina, 5-metil citozina, adenina i guanina.
Izvođenje 58: Oligomerno jedinjenje iz bilo kojeg od izvođenja 1-57, pri čemu je modifikovani oligonukleotid najmanje 70% komplementaran sa SMN2 pre-mRNK.
Izvođenje 59: Oligomerno jedinjenje iz bilo kojeg od izvođenja 1-57, pri čemu je modifikovani oligonukleotid najmanje 75% komplementaran sa SMN2 pre-mRNK.
Izvođenje 60: Oligomerno jedinjenje iz bilo kojeg od izvođenja 1-57, pri čemu je modifikovani oligonukleotid najmanje 80% komplementaran sa SMN2 pre-mRNK.
Izvođenje 61: Oligomerno jedinjenje iz bilo kojeg od izvođenja 1-57, pri čemu je modifikovani oligonukleotid najmanje 85% komplementaran sa SMN2 pre-mRNK.
Izvođenje 62: Oligomerno jedinjenje iz bilo kojeg od izvođenja 1-57, pri čemu je modifikovani oligonukleotid najmanje 90% komplementaran sa SMN2 pre-mRNK.
Izvođenje 63: Oligomerno jedinjenje iz bilo kojeg od izvođenja 1-57, pri čemu je modifikovani oligonukleotid najmanje 95% komplementaran sa SMN2 pre-mRNK.
Izvođenje 64: Oligomerno jedinjenje iz bilo kojeg od izvođenja 1-57, pri čemu je modifikovani oligonukleotid najmanje 100% komplementaran sa SMN2 pre-mRNK.
Izvođenje 65: Oligomerno jedinjenje iz bilo kojeg od izvođenja 1-64, pri čemu je modifikovani oligonukleotid komplementaran intronu 7 SMN2 pre-mRNK.
Izvođenje 66: Oligomerno jedinjenje iz bilo kojeg od izvođenja 1-64, pri čemu je modifikovani oligonukleotid komplementaran sa ISS-N1 od SMN2 pre-mRNK.
Izvođenje 67: Oligomerno jedinjenje iz bilo kojeg od izvođenja 1-64, pri čemu sekvenca nukleobaze modifikovanog oligonukleotida obuhvata sekvencu izabranu između SEK ID Brojeva 1, 2 ili 3.
Izvođenje 68: Oligomerno jedinjenje iz bilo kojeg od izvođenja 1-64, pri čemu sekvenca nukleobaze modifikovanog oligonukleotida obuhvata sekvencu izabranu između bilo kojeg od SEK ID Brojeva 12-239.
Izvođenje 69: Oligomerno jedinjenje iz bilo kojeg od izvođenja 1-64, pri čemu se sekvenca nukleobaze modifikovanog oligonukleotida sastoji od sekvence izabrane između bilo kojeg od SEK ID Brojeva 12-239.
Izvođenje 70: Oligomerno jedinjenje iz izvođenja 1-64, pri čemu je modifikovani oligonukleotid komplementaran eksonu od 7 SMN2 pre-mRNK.
Izvođenje 71: Oligomerno jedinjenje iz izvođenja 1-64, pri čemu je modifikovani oligonukleotid komplementaran intronu 6 od SMN2 pre-mRNK.
Izvođenje 72: Oligomerno jedinjenje bilo kojeg iz izvođenja 1-64, pri čemu je modifikovani oligonukleotid komplementaran eksonskom pojačivaču splajsovanja u eksonu 7 od SMN2 pre-mRNK.
Izvođenje 73: Oligomerno jedinjenje iz bilo kojeg od izvođenja 1-64, pri čemu je modifikovani oligonukleotid komplementaran aberantnom eksoničnom prigušivaču splajsovanja u eksonu 7 od SMN2 pre-mRNK.
Izvođenje 74: Oligomerno jedinjenje iz bilo kojeg od izvođenja 1-73, pri čemu oligomerno jedinjenje sadrži konjugovanu grupu.
Izvođenje 75: Oligomerno jedinjenje iz izvođenja 74, pri čemu konjugovana grupa sadrži lipidnu ili lipofilnu grupu.
Izvođenje 76: Oligomerno jedinjenje iz izvođenja 75, pri čemu je lipidna ili lipofilna grupa izabrana između: holesterola, C10-C26zasićene masne kiseline, C10-C26nezasićene masne kiseline, C10-C26alkila, triglicerida ili tokoferola, ili holne kiseline. Izvođenje 77: Oligomerno jedinjenje iz izvođenja 76, pri čemu je lipidna ili lipofilna grupa je zasićeni ugljovodonični lanac ili nezasićeni ugljovodonični lanac.
Izvođenje 78: Oligomerno jedinjenje iz bilo kojeg od izvođenja 75-77, pri čemu je lipid ili lipofilna grupa C16lipid.
Izvođenje 79: Oligomerno jedinjenje iz bilo kojeg od izvođenja 75-77, pri čemu je lipid ili lipofilna grupa C18lipid.
Izvođenje 80: Oligomerno jedinjenje iz bilo kojeg od izvođenja 75-77, pri čemu je lipid ili lipofilna grupa C16alkil.
Izvođenje 81: Oligomerno jedinjenje iz bilo kojeg od izvođenja 75-77, pri čemu je lipid ili lipofilna grupa C18alkil.
Izvođenje 82: Oligomerno jedinjenje iz izvođenja 76, pri čemu je lipidna ili lipofilna grupa holesterol.
Izvođenje 83: Oligomerno jedinjenje iz izvođenja 76, pri čemu je lipidna ili lipofilna grupa tokoferol.
Izvođenje 84: Oligomerno jedinjenje iz izvođenja 76, pri čemu je lipidna ili lipofilna grupa zasićeni
C16.
Izvođenje 85: Oligomerno jedinjenje iz bilo kojeg od izvođenja 74-84, pri čemu je konjugovana grupa vezana za modifikovani oligonukleotid na 5'-kraju modifikovanog oligonukleotida.
Izvođenje 86: Oligomerno jedinjenje iz bilo kojeg od izvođenja 74-85, pri čemu je konjugovana grupa vezana za modifikovani oligonukleotid na 3'-kraju modifikovanog oligonukleotida.
Izvođenje 87: Oligomerno jedinjenje iz bilo kojeg od izvođenja 74-86, pri čemu konjugovana grupa sadrži linker koji se može cepati.
Izvođenje 88: Oligomerno jedinjenje iz zvođenja 87 pri čemu linker koji se može cepati sadrži jedan ili više linker nukleozida.
Izvođenje 89: Oligomerno jedinjenje iz bilo kojeg od izvođenja 1-73 koje se sastoji od modifikovanog oligonukleotida. Izvođenje 90: Oligomerno jedinjenje iz bilo kojeg od izvođenja 74-88 koje se sastoji od modifikovanog oligonukleotida i konjugovane grupe.
Izvođenje 91: Oligomerno jedinjenje iz bilo kojeg od izvođenja 1-90, pri čemu oligomerno jedinjenje modulira splajsovanje SMN2 pre-mRNK.
Izvođenje 92: Oligomerno jedinjenje iz bilo kojeg od izvođenja 1-91, pri čemu je oligomerno jedinjenje jednolančano. Izvođenje 93: Oligomerno jedinjenje iz bilo kojeg od izvođenja 1-91, pri čemu je oligomerno jedinjenje upareno sa komplementarnim oligomernim jedinjenjem da bi se formiralo dvolančano jedinjenje.
Izvođenje 94: Oligomerno jedinjenje iz izvođenja 93, pri čemu komplementarno oligomerno jedinjenje sadrži konjugovanu grupu.
Izvođenje 95: Farmaceutska kompozicija koja sadrži oligomerno jedinjenje bilo kojeg od izvođenja 1-94 i najmanje jedan farmaceutski prihvatljiv nosač ili razblaživač.
Izvođenje 96: Oligomerno jedinjenje bilo kojeg od izvođenja 1 do 94 ili kompozicija iz izvođenja 95 za upotrebu u terapiji. Izvođenje 97:
Izvođenje 98: Jedinjenje iz bilo kojeg od izvođenja 1-94 ili 96, pri čemu SMN2 pre-mRNK je sekvenca nukleobaze izabrana iz bilo koje od SEK ID BR: 10, 11 ili 240.
DETALJAN OPIS
[0018] Podrazumeva se da su i prethodni opšti opis i sledeći detaljni opis samo primeri i objašnjenja i ne ograničavaju izvođenja, za koje se traži zaštita. Ovde upotreba jednine uključuje množinu osim ako nije drugačije navedeno. Kao što se ovde koristi, upotreba "ili" znači "i/ili" osim ako nije drugačije navedeno. Štaviše, upotreba termina "uključujući", kao i drugih oblika, kao što su "uključuje " i "uključeno", nije ograničavajuća.
[0019] Naslovi odeljaka koji se ovde koriste služe samo za organizacione svrhe i ne treba ih tumačiti kao ograničavanje opisanog predmeta.
[0020] Osim ako nije drugačije naznačeno, sledeći izrazi imaju sledeća značenja:
Kao što se ovde koristi, "SMN2 pre-mRNK" označava sekvencu RNK, uključujući sve eksone, introne i neprevedene regione, transkribovane iz DNK koja kodira humani SMN2. U određenim izvođenjima, DNK koja kodira SMN2 uključuje humanu SMN2 genomsku sekvencu datu u pristupnom broju GENBANK NT_006713.14 skraćenu od nukleotida 19939708_do 19967777, ovde kao SEK ID BR: 240. U određenim izvođenjima, SMN2 pre-mRNK sadrži SEK ID BR: 10. Nukleotidi
1-60 od SEK ID BR:10 predstavljaju deo introna 6, nukleotidi 61-114 SEK ID BR: 10 predstavljaju ekson 7, i nukleotidi 115-174 od SEK ID BR: 10 predstavljaju deo introna 7.
[0021] Kao što se ovde koristi, "ISS-N1" označava domen za utišavanje intronskog splajsovanja u intronu 7. U određenim izvođenjima, ISSN1 sadrži sekvencu nukleobaze SEK ID BR: 11.
[0022] Kao što se ovde koristi, "2'-deoksiribonukleozid" označava nukleozid koji sadrži 2'-H(H) furanozil šećerni deo, kao što se nalazi u prirodnim deoksiribonukleinskim kiselinama (DNK). U određenim izvođenjima, 2'-deoksiribonukleozid može da sadrži modifikovanu nukleobazu ili može da sadrži RNK nukleobazu (uracil).
[0023] Kao što se ovde koristi, "2'-supstituisani nukleozid" ili "2-modifikovani nukleozid" označava nukleozid koji sadrži 2'-supstituisani ili 2'-modifikovani šećerni deo. Kao što se ovde koristi, "2'-supstituisani" ili "2-modifikovani" u odnosu na šećerni deo označava šećerni deo koji sadrži najmanje jednu 2'-supstituentnu grupu koja nije H ili OH.
[0024] Kao što se ovde koristi, "antisens aktivnost" označava bilo koju detektabilnu i/ili merljivu promenu koja se može pripisati hibridizaciji antisens jedinjenja sa njegovom ciljnom nukleinskom kiselinom. U određenim izvođenjima, antisens aktivnost je smanjenje količine ili ekspresije ciljne nukleinske kiseline ili proteina kodiranog takvom ciljnom nukleinskom kiselinom u poređenju sa nivoima ciljne nukleinske kiseline ili nivoima ciljnog proteina u odsustvu antisens jedinjenja.
[0025] Kao štose ovde koristi, "antisens jedinjenje" označava jedinjenje koje sadrži antisens oligonukleotid i opciono jednu ili više dodatnih karakteristika, kao što je konjugovana grupa ili terminalna grupa.
[0026] Kao što se ovde koristi, "antisens oligonukleotid" označava oligonukleotid koji ima sekvencu nukleobaze koja je bar delimično komplementarna ciljnoj nukleinskoj kiselini.
[0027] Kao što se ovde koristi, "poboljšati" u odnosu na tretman znači poboljšanje najmanje jednog simptoma u odnosu na isti simptom u odsustvu tretmana. U određenim izvođenjima, poboljšanje je smanjenje težine ili učestalosti simptoma ili odloženi početak ili usporavanje progresije u ozbiljnosti ili učestalosti simptoma.
[0028] Kao što se ovde koristi, "biciklični nukleozid" ili "BNA" označava nukleozid koji sadrži biciklični šećerni deo. Kao što se ovde koristi, "biciklični šećer" ili "biciklični šećerni deo" označava modifikovani šećerni deo koji se sastoji od dva prstena, pri čemu je drugi prsten formiran preko mosta koji povezuje dva atoma u prvom prstenu i na taj način formira bicikličnu strukturu. U određenim izvođenjima, prvi prsten bicikličnog šećernog dela je furanozilni deo. U određenim takvim izvođenjima, furanozilni deoostatak je ribozilnideo-ostatak. U određenim izvođenjima, biciklični šećerni deo ne sadrži furanozilni deo.
[0029] Kao što se ovde koristi, "grupa grananja" označava grupu atoma koji imaju najmanje 3 pozicije koji su sposobni da formiraju kovalentne veze sa najmanje 3 grupe. U određenim izvođenjima, grupa grananja obezbeđuje mnoštvo reaktivnih mesta za povezivanje vezanih liganada sa oligonukleotidom preko konjugovanog linkera i/ili dela koji se može cepati.
[0030] Kao što je ovde korišćeno, "deo koji cilja ćeliju" označava konjugovanu grupu ili deo konjugovane grupe koji rezultira poboljšanim unosom u određeni tip ćelije i/ili distribucijom u određeno tkivo u odnosu na oligomerno jedinjenje kome nedostaje deo koji cilja ćeliju.
[0031] Kao što se ovde koristi, "deo koji se može cepati" označava vezu ili grupu atoma koja se cepa u fiziološkim uslovima, na primer, unutar ćelije, životinje ili čoveka.
[0032] Kao što se ovde koristi, "komplementaran" u odnosu na oligonukleotid znači da je najmanje 70% nukleobaza takvog oligonukleotida ili jednog ili više njegovih regiona i nukleobaza druge nukleinske kiseline ili jednog ili više njenih regiona sposobno da se međusobno poveže vodoničnim vezama kada su sekvenca nukleobaze oligonukleotida i druge nukleinske kiseline poravnate u suprotnim smerovima. Komplementarne nukleobaze označavaju nukleobaze koje su sposobne da formiraju vodonične veze jedna sa drugom. Komplementarni parovi nukleobaze uključuju adenin (A) i timin (T), adenin (A) i uracil (U), citozin (C) i guanin (G), 5-metil citozin (mC) i guanin (G). Komplementarni oligonukleotidi i/ili nukleinske kiseline ne moraju imati komplementarnost nukleobaza na svakom nukleozidu. Radije, neka neslaganja se tolerišu. Kako se ovde koristi, "potpuno komplementaran" ili "100% komplementaran" u odnosu na oligonukleotide znači da su takvi oligonukleotidi komplementarni drugom oligonukleotidu ili nukleinskoj kiselini na svakom nukleozidu oligonukleotida.
[0033] Kao što se ovde koristi, "konjugovana grupa" označava grupu atoma koja je direktno ili indirektno vezana za oligonukleotid. Konjugovane grupe uključuju konjugovani deo i konjugovani linker koji vezuje konjugovani deo za oligonukleotid.
[0034] Kao što se ovde koristi, "konjugovani linker" označava grupu atoma koja sadrži najmanje jednu vezu koja povezuje konjugovani deo sa oligonukleotidom.
[0035] Kao što se ovde koristi, "konjugovani deo" označava grupu atoma koja je vezana za oligonukleotid preko konjugovanog linkera.
[0036] Kao što se ovde koristi, "susedni" u kontekstu oligonukleotida se odnosi na nukleozide, nukleobaze, delove šećera ili internukleozidne veze koje su neposredno jedna uz drugu. Na primer, "kontinuirane nukleobaze" označavaju nukleobaze koje su neposredno jedna uz drugu u sekvenci.
[0037] Kao što se ovde koristi, "dvolančano antisens jedinjenje" označava antisens jedinjenje koje sadrži dva oligomerna jedinjenja koja su komplementarna jedno sa drugim i formiraju dupleks, i pri čemu jedno od dva navedena oligomerna jedinjenja sadrži antisens oligonukleotid.
[0038] Kao što se ovde koristi, "potpuno modifikovan" u odnosu na modifikovani oligonukleotid označava modifikovani oligonukleotid u kome je svaki šećerni deo modifikovan. "Uniformno modifikovan" u odnosu na modifikovani oligonukleotid označava potpuno modifikovan oligonukleotid u kome je svaki šećerni deo isti. Na primer, nukleozidi uniformno modifikovanog oligonukleotida mogu imati 2'-MOE modifikaciju, ali različite modifikacije nukleobaze, i internukleozidne veze mogu biti različite.
[0039] Kao što se ovde koristi, tzv. "gapmer" označava modifikovani oligonukleotid koji sadrži unutrašnji region koji ima više nukleozida koji sadrže nemodifikovane delove šećera pozicionirane između spoljašnjih regiona koji imaju jedan ili više nukleozida koji sadrže modifikovane delove šećera, pri čemu su nukleozidi koji su susedni sa spoljnim regionima svaki unutrašnji region sadrži modifikovani šećerni deo. Unutrašnji region se može nazvati "gap" i spoljašnji regioni se mogu nazvati "krilima".
[0040] Kao što se ovde koristi, "hibridizacija" označava uparivanje ili žarenje komplementarnih oligonukleotida i/ili nukleinskih kiselina. Iako nije ograničen na određeni mehanizam, najčešći mehanizam hibridizacije uključuje vodoničnu vezu, koja može biti tzv. "Watson-Crick" tzv. "Hoogsteen" ili obrnuta "Hoogsteen" vodonična veza, između komplementarnih nukleobaza.
[0041] Kao što se ovde koristi, "inhibiranje ekspresije ili aktivnosti" se odnosi na smanjenje ili blokadu ekspresije ili aktivnosti u odnosu na ekspresiju aktivnosti u netretiranom ili kontrolnom uzorku i ne ukazuje nužno na potpunu eliminaciju ekspresije ili aktivnosti.
[0042] Kao što se ovde koriste, termini "internukleozidna veza" označavaju grupu ili vezu koja formira kovalentnu vezu između susednih nukleozida u oligonukleotidu. Kao što se ovde koristi, "modifikovana internukleozidna veza" označava bilo koju internukleozidnu vezu koja nije prirodna, fosfatna internukleozidna veza. Nefosfatne veze se ovde pominju kao modifikovane internukleozidne veze. "Fosforotioatna veza" označava modifikovanu fosfatnu vezu u kojoj je jedan od nepremosnih atoma kiseonika zamenjen atomom sumpora. Fosforotioatna internukleozidna veza je modifikovana internukleozidna veza. Modifikovane internukleozidne veze uključuju veze koje sadrže abazične nukleozide. Kao što se ovde koristi, "abazični nukleozid" označava deo šećera u oligonukleotidu ili oligomernom jedinjenju koji nije direktno povezan sa nukleobazom. U određenim izvođenjima, abazični nukleozid je susedni sa jednim ili dva nukleozida u oligonukleotidu.
[0043] Kao što se ovde koristi "Isis 396443" označava oligonukleotid koji ima sledeću strukturu:
Tes<m>Ces Aes<m>Ces Tes Tes Tes<m>Ces Aes Tes Aes Aes Tes Ges<m>Ces Tes Ges Ge pri čemu "<m>C"
označava 5-metil citozin; "e" označava 2’-MOE modifikaciju; "C" označava citidin, "T" označava timidin, "A" označava adenozin, "G" označava guanozin, i "s" označava fosforotioatnu vezu. Isis 396443 se takođe pominje u tehnici kao Nusinersen i kao Ionis-SMNRx.
[0044] Kao što se ovde koristi, "linker-nukleozid" označava nukleozid koji povezuje, bilo direktno ili indirektno, oligonukleotid za konjugovani deo. Linker-nukleozidi se nalaze unutar konjugovanog linkera oligomernog jedinjenja. Linker-nukleozidi se ne smatraju delom oligonukleotidnog dela oligomernog jedinjenja čak i ako su u blizini oligonukleotida.
[0045] Kao što se ovde koristi, "nebiciklični modifikovani šećer" ili "nebiciklični modifikovani šećerni deo-ostatak" označava modifikovani šećerni deo koji sadrži modifikaciju, kao što je supstituent, koji ne formira most između dva atoma šećera da bi formirao drugi prsten.
[0046] Kao se ovde koristi, "povezani nukleozidi" su nukleozidi koji su povezani u kontinuiranoj sekvenci (tj. nema dodatnih nukleozida između onih koji su povezani).
[0047] Kao što se ovde koristi, "nepodudaranje" ili "nekomplementaran" označava nukleobazu prvog oligonukleotida koja nije komplementarna sa odgovarajućom nukleobazom drugog oligonukleotida ili ciljne nukleinske kiseline kada su prvo i drugo oligomerno jedinjenje u liniji-poravnati.
[0048] Kao što se ovde koristi, "MOE" znači metoksietil. "2’-MOE" označava grupu -OCH2CH2OCH3na poziciji 2’ furanozilnog prstena.
[0049] Kao što se ovde koristi, "motiv" označava obrazac nemodifikovanih i/ili modifikovanih delova-ostataka šećera, nukleobaza i/ili internukleozidnih veza, u oligonukleotidu.
[0050] Kao što se ovde koristi, "prirodno javljanje " znači pronađeno u prirodi.
[0051] Kao što se ovde koristi, "nukleobaza" označava nukleobazu koja se pojavljuje u prirodi ili modifikovanu nukleobazu. Kao što se ovde koristi, "nukleobaza koja se pojavljuje u prirodi" je adenin (A), timin (T), citozin (C), uracil (U) i guanin (G). Kao što se ovde koristi, modifikovana nukleobaza je grupa atoma koja je sposobna za uparivanje sa najmanje jednom prirodnom nukleobazom koja se pojavljuje u prirodi. Univerzalna baza je nukleobaza koja se može upariti sa bilo kojom od pet nemodifikovanih nukleobaza. Kao što se ovde koristi, "sekvenca nukleobaze" označava redosled susednih nukleobaza u nukleinskoj kiselini ili oligonukleotidu nezavisno od bilo koje modifikacije šećerne ili internukleozidne veze.
[0052] Kao što se ovde koristi, "nukleozid" označava jedinjenje koje sadrži nukleobazu i deo šećera. Nukleobaza i šećerni deo su svaki nezavisno, nemodifikovani ili modifikovani. Kao što se ovde koristi, "modifikovani nukleozid" označava nukleozid koji sadrži modifikovanu nukleobazu i/ili modifikovani šećerni deo.
[0053] Kao što se ovde koristi, "2'-O-(N-alkil acetamid)" označava -O-CH2-C(O)-NH-alkil grupu na 2' poziciji furanozil prstena.
[0054] Kao što se ovde koristi, "2'-O-(N-metil acetamid)" ili "2'-NMA" označava -O-CH2-C(O)-NH-CH3grupu na poziciji 2' furanozilnog prstena.
[0055] Kao što se ovde koristi, "oligomerno jedinjenje" označava jedinjenje koje se sastoji od oligonukleotida i opciono jednu ili više dodatnih karakteristika, kao što je konjugatna-konjugovana grupa ili terminalna grupa.
[0056] Kao što se ovde koristi, "oligonukleotid" označava lanac povezanih nukleozida povezanih preko internukleozidnih veza, pri čemu svaka nukleozidna i internukleozidna veza može biti modifikovana ili nemodifikovana. Osim ako nije drugačije naznačeno, oligonukleotidi se sastoje od 8-50 povezanih nukleozida. Kao što se ovde koristi, "modifikovani oligonukleotid" označava oligonukleotid, pri čemu je bar jedna nukleozidna ili internukleozidna veza modifikovana. Kao što se ovde koristi "nemodifikovani oligonukleotid" označava oligonukleotid koji ne sadrži nikakve nukleozidne modifikacije ili internukleozidne modifikacije.
[0057] Kao što se ovde koristi, "farmaceutski prihvatljiv nosač ili razblaživač" označava bilo koju supstancu pogodnu za primenu na životinji. Određeni takvi nosači omogućavaju da farmaceutske kompozicije budu formulisane kao, na primer, tablete, pilule, dražeje, kapsule, tečnosti, gelovi, sirupi, suspenzije i pastile za oralnu ingestiju od strane subjekta. U određenim izvođenjima, farmaceutski prihvatljiv nosač ili razblaživač je sterilna voda; sterilni fiziološki rastvor; ili sterilni puferski rastvor.
[0058] Kao što se ovde koristi, "farmaceutski prihvatljive soli" označavaju fiziološki i farmaceutski prihvatljive soli jedinjenja, kao što su oligomerna jedinjenja, tj. soli koje zadržavaju željenu biološku aktivnost matičnog jedinjenja i ne daju im neželjene toksikološke efekte.
[0059] Kao što se ovde koristi, "farmaceutska kompozicija" označava smešu supstanci pogodnih za primenjivanje na subjektu. Na primer, farmaceutska kompozicija može da sadrži antisens jedinjenje i sterilni vodeni rastvor. U određenim izvođenjima, farmaceutska kompozicija pokazuje aktivnost u testu slobodnog uzimanja u određenim ćelijskim linijama.
[0060] Kao što se ovde koristi, "fosforni deo" označava grupu atoma koja sadrži atom fosfora. U određenim izvođenjima, fosforni deo sadrži mono-, di- ili tri-fosfat ili fosforotioat.
[0061] Kao što se ovde koristi, "fosfodiestarska internukleozidna veza" označava fosfatnu grupu koja je kovalentno vezana za dva susedna nukleozida modifikovanog oligonukleotida.
[0062] Kao što se ovde koristi, "prekursorski transkript" označava kodirajuću ili nekodirajuću RNK koja se podvrgava obradi da bi se formirao obrađeni ili zreli oblik transkripta. Prekursorski transkripti uključuju, ali nisu ograničeni na pre-mRNKs, duge nekodirajuće RNKs, pri-miRNKs i intronske RNKs.
[0063] Kao što se ovde koristi, "obrada" u odnosu na prekursorski transkript označava konverziju prekursorskog transkripta da bi se formirao odgovarajući obrađeni transkript. Obrada prekursorskog transkripta uključuje, ali nije ograničena na događaje cepanja nukleaze na mestima obrade transkripta prekursora.
[0064] Kao što se ovde koristi, "prolek" označava terapijski agens u obliku van tela koji se konvertuje u drugačiji oblik unutar tela ili njegovih ćelija. Tipično, konverzija proleka u telu je olakšana delovanjem enzima (npr. endogenog ili virusnog enzima) ili hemikalija prisutnih u ćelijama ili tkivima i/ili fiziološkim uslovima.
[0065] Kao što se ovde koristi, "RNKi jedinjenje" označava antisens jedinjenje koje deluje, najmanje delimično, preko RISC ili Ago2 da modulira ciljnu nukleinsku kiselinu i/ili protein kodiran ciljnom nukleinskom kiselinom. RNAi jedinjenja uključuju, ali nisu ograničena na dvolančanu siRNK, jednolančanu RNK (ssRNK) i mikroRNK, uključujući imitatore mikroRNK. U određenim realizacijama, RNKi jedinjenje modulira količinu, aktivnost i/ili spajanje ciljne nukleinske kiseline. Termin RNKi jedinjenje isključuje antisens oligonukleotide koji deluju preko RNaze H.
[0066] Kao što se ovde koristi, termin "jednolančani" u odnosu na antisens jedinjenje označava takvo jedinjenje koje se sastoji od jednog oligomernog jedinjenja koje nije upareno sa drugim oligomernim jedinjenjem da bi se formirao dupleks. "Samokomplementaran" u odnosu na oligonukleotid označava oligonukleotid koji se najmanje delimično hibridizuje za sebe. Jedinjenje koje se sastoji od jednog oligomernog jedinjenja, pri čemu je oligonukleotid oligomernog jedinjenja samokomplementaran, je jednolančano jedinjenje. Jednolančano antisens ili oligomerno jedinjenje može biti sposobno da se veže za komplementarno oligomerno jedinjenje da bi se formirao dupleks.
[0067] Kao što se ovde koristi, "splajsovanje" označava proces kojim se pre-mRNK obrađuje da bi se formirala odgovarajuća mRNK. Splajsovanje uključuje, ali nije ograničeno na uklanjanje introna iz pre-mRNK i spajanje egzona.
[0068] Kao što se ovde koristi, "šećerni deo" označava nemodifikovani deo šećera ili modifikovani deo šećera. Kao što se ovde koristi, "nemodifikovani deo šećera" znači 2'-OH(H) furanozilni deo, kako je nađen u RNK ("nemodifikovani RNK deo šećera"), ili 2'-H(H) deo, kako je nađen u DNK ("nemodifikovani DNK deo šećera"). Nemodifikovani delovi šećera imaju po jedan vodonik na svakoj od pozicija 1’, 3’ i 4’, kiseonik na poziciji 3’ i dva vodonika na poziciji 5’. Kao što se ovde koristi, "modifikovani šećerni deo" ili "modifikovani šećer" označava modifikovani furanozilni šećerni deo ili surogat šećera. Kao što se ovde koristi, modifikovani furanozilni šećerni deo označava furanozilni šećer koji sadrži nevodonični supstituent umesto najmanje jednog vodonika nemodifikovanog dela šećera. U određenim izvođenjima, modifikovani furanozilni šećerni deo je 2-supstituisani deo šećera. Takvi modifikovani furanozilni šećerni delovi uključuju biciklične šećere i nebiciklične šećere. Kao što se ovde koristi, "šećer surogat" označava modifikovani šećerni deo koji nije furanozilni deo koji može da poveže nukleobazu sa drugom grupom, kao što je internukleozidna veza, konjugatna grupa ili terminalna grupa u oligonukleotidu. Modifikovani nukleozidi koji sadrže surogate šećera mogu biti ugrađeni u jednu ili više pozicija unutar oligonukleotida i takvi oligonukleotidi su sposobni da se hibridizuju sa komplementarnim oligomernim jedinjenjima ili nukleinskim kiselinama.
[0069] Kao što se ovde koristi, "transkript ciljnog prekursora" označava prekursorski transkript za koji je oligonukleotid dizajniran da hibridizuje. U određenim izvođenjima, ciljni prekursorski transkript je ciljna pre-mRNK. Kao što se ovde koristi, "ciljani obrađeni transkript" označava RNK koja je rezultat obrade odgovarajućeg ciljnog prekursorskog transkripta. U određenim izvođenjima, ciljni obrađeni transkript je ciljna mRNK. Kao što se ovde koristi, "ciljna pre-mRNK" označava pre-mRNK za koju je oligonukleotid dizajniran da hibridizuje. Kao što se ovde koristi, "ciljna mRNK" označava mRNK koja rezultira iz splajsovanja odgovarajuće ciljne pre-mRNK.
[0070] Kao što se ovde koristi, "terminalna grupa" označava hemijsku grupu ili grupu atoma koja je kovalentno vezana za terminus oligonukleotida.
Spinalna mišićna atrofija
[0071] SMA je genetski poremećaj koji karakteriše degeneracija motornih neurona kičme. SMA je uzrokovana homozigotnim gubitkom obe funkcionalne kopije SMN1 gena. Međutim, SMN2 gen ima potencijal da kodira isti protein kao SMN1 i tako prevaziđe genetski defekt kod pacijenata sa SMA. SMN2 sadrži translatorno tihu mutaciju (C T) na poziciji 6 eksona 7, što rezultira neefikasnim uključivanjem-inkluzijom eksona 7 u SMN2 transkriptima. Zbog toga je dominantni oblik SMN2, onaj kome nedostaje ekson 7, nestabilan i neaktivan. Prema tome, terapijska jedinjenja sposobna da modulišu SMN2 splajsovanje tako da bi povećan procenat SMN2 transkripata koji sadrže ekson 7 bio koristan za lečenje SMA. U određenim izvođenjima, modifikovani oligonukleotidi koji imaju jedan ili više 2'-O-(N-alkil acetamid) modifikovanih delova šećera imaju poboljšanu farmakološku aktivnost za modulaciju SMN2 pre-mRNK, uključujući povećanje procenta SMN2 transkripta koji sadrže ekson 7. U određenim izvođenjima, modifikovani oligonukleotidi koji imaju jedan ili više 2'-O-(N-metil acetamid) modifikovanih delova šećera imaju poboljšanu farmakološku aktivnost za modulaciju SMN2 pre-mRNK, uključujući povećanje procenta SMN2 transkripata koji sadrže ekson 7.
[0072] Iako se SMA generalno karakteriše degeneracijom motornih neurona kičme, SMN2 je sveprisutno izražen u ćelijama u celom telu, uključujući mišićne ćelije. U određenim izvođenjima, poboljšana aktivnost SMN u mišićnim ćelijama pruža terapjsku korist. U određenim izvođenjima, modifikovani oligonukleotidi koji imaju jedan ili više 2'-O-(N-alkil acetamid) modifikovanih delova šećera imaju poboljšanu ćelijsku distribuciju u tkivima u celom telu, uključujući mišićno tkivo. U određenim izvođenjima, modifikovani oligonukleotidi koji imaju jedan ili više 2'-O-(N-metil acetamid) modifikovanih delova šećera imaju poboljšanu ćelijsku distribuciju u tkivima u celom telu, uključujući mišićno tkivo.
[0073] U određenim izvođenjima, modifikovani oligonukleotidi koji imaju jedan ili više 2'-O-(N-alkil acetamid) modifikovanih delova šećera sadrže konjugat koji može dalje da poboljša ćelijsku distribuciju i/ili farmakološku aktivnost. U određenim izvođenjima, konjugat poboljšava distribuciju u mišićno tkivo. U određenim izvođenjima, konjugat je lipid.
[0074] U određenim izvođenjima modifikovani oligonukleotidi koji imaju jedan ili više 2'-O-(N-metil acetamid) modifikovanih delova šećera sadrže konjugat koji može dalje da poboljša ćelijsku distribuciju i/ili farmakološku aktivnost. U određenim izvođenjima, konjugat poboljšava distribuciju u mišićno tkivo. U određenim izvođenjima, konjugat je lipid.
[0075] Određene nukleobazne sekvence ciljane na SMN2 pre-mRNK su prikazane u neograničavajućoj tabeli ispod. Bilo koja od sekvenci nukleobaze u tabeli ispod može biti modifikovana sa šest ili više 2'-O-(N-alkil acetamid) modifikovanih delova šećera. Bilo koja od sekvenci nukleobaze u tabeli ispod može biti modifikovana sa šest ili više 2'-O-(N-metil acetamid) modifikovanih delova šećera.
[0076] Bilo koja od sekvenci nukleobaze u donjoj tabeli može biti modifikovana sa šest ili više 2’-O-(N-alkil acetamid) modifikovanih ostataka šećera i može sadržavati konjugiovani deo. Bilo koja od sekvenci nukleobaze u donjoj tabeli može biti modifikovana sa šest ili više 2’-O-(N-metil acetamid) modifikovanih ostataka šećera i može sadržavati konjugovani deo.
Sekvence nukleobaze koje ciljaju SMN2 pre-mRNK
(nastavak)
(nastavak)
(nastavak)
(nastavak)
(nastavak)
(nastavak)
Određena oligomerna jedinjenja koja sadrže NMA koja ciljaju SMN2 pre-mRNK
[0077] Podskripti u gornjoj tabeli: "x" predstavlja internukleozidnu vezu izabranu između fosforotioatne internukleozidne veze ili fosfatne internukleozidne veze, "n" predstavlja 2'-O-(N-metilacetamid) modifikovani nukleozid. Superskripti: "m" ispred C predstavlja 5-metilcistein.
[0078] U određenim izvođenjima, predmetno otkriće obezbeđuje modifikovane oligonukleotide koji sadrže sekvencu izabran između bilo kojeg od SEK ID BRi: 1, 2, 3, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, 118, 119, 120, 121, 122, 123, 124, 125, 126, 127, 128, 129, 130, 131, 132, 133, 134, 135, 136, 137, 138, 139, 140, 141, 142, 143, 144, 145, 146, 147, 148, 149, 150, 151, 152, 153, 154, 155, 156, 157, 158, 159, 160, 161, 162, 163, 164, 165, 166, 167, 168, 169, 170, 171, 172, 173, 174, 175, 176, 177, 178, 179, 180, 181, 182, 183, 184, 185, 186, 187, 188, 189, 190, 191, 192, 193, 194, 195, 196, 197, 198, 199, 200, 201, 202, 203, 204, 205, 206, 207, 208, 209, 210, 211, 212, 213, 214, 215, 216, 217, 218, 219, 220, 221, 222, 223, 224, 225, 226, 227, 228, 229, 230, 231, 232, 233, 234, 235, 236, 237, 238, 239, 241, 242, 243, 244, 245, 246, 247, 248, 249, 250, 251, 252, 253, 254, 255, 256, 257, 258, 259, 260, 261, 262, 263, 264, ili 265.
[0079] U određenim izvođenjima, predmetno otkriće obezbeđuje modifikovane oligonukleotide koji se sastoje od sekvence izabrane između bilo koje od SEK ID BRi: 1, 2, 3, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, 118, 119, 120, 121, 122, 123, 124, 125, 126, 127, 128, 129, 130, 131, 132, 133, 134, 135, 136, 137, 138, 139, 140, 141, 142, 143, 144, 145, 146, 147, 148, 149, 150, 151, 152, 153, 154, 155, 156, 157, 158, 159, 160, 161, 162, 163, 164, 165, 166, 167, 168, 169, 170, 171, 172, 173, 174, 175, 176, 177, 178, 179, 180, 181, 182, 183, 184, 185, 186, 187, 188, 189, 190, 191, 192, 193, 194, 195, 196, 197, 198, 199, 200, 201, 202, 203, 204, 205, 206, 207, 208, 209, 210, 211, 212, 213, 214, 215, 216, 217, 218, 219, 220, 221, 222, 223, 224, 225, 226, 227, 228, 229, 230, 231, 232, 233, 234, 235, 236, 237, 238, 239, 241, 242, 243, 244, 245, 246, 247, 248, 249, 250, 251, 252, 253, 254, 255, 256, 257, 258, 259, 260, 261, 262, 263, 264, or 265.
[0080] U određenim izvođenjima, predmetno otkriće obezbeđuje modifikovane oligonukleotide koji sadrže sekvencu izabranu između bilo kojeg od SEK ID BRi: 1, 2, 3, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, 118, 119, 120, 121, 122, 123, 124, 125, 126, 127, 128, 129, 130, 131, 132, 133, 134, 135, 136, 137, 138, 139, 140, 141, 142, 143, 144, 145, 146, 147, 148, 149, 150, 151, 152, 153, 154, 155, 156, 157, 158, 159, 160, 161, 162, 163, 164, 165, 166, 167, 168, 169, 170, 171, 172, 173, 174, 175, 176, 177, 178, 179, 180, 181, 182, 183, 184, 185, 186, 187, 188, 189, 190, 191, 192, 193, 194, 195, 196, 197, 198, 199, 200, 201, 202, 203, 204, 205, 206, 207, 208, 209, 210, 211, 212, 213, 214, 215, 216, 217, 218, 219, 220, 221, 222, 223, 224, 225, 226, 227, 228, 229, 230, 231, 232, 233, 234, 235, 236, 237, 238, 239, 241, 242, 243, 244, 245, 246, 247, 248, 249, 250, 251, 252, 253, 254, 255, 256, 257, 258, 259, 260, 261, 262, 263, 264, ili 265;
i pri čemu najmanje jedan, najmanje dva, najmanje tri, najmanje četiri, najmanje pet ili najmanje šest nukleozida modifikovanog oligonukleotida sadrži 2'-O-(N-metil acetamid) modifikovani šećerni deo.
[0081] U određenim izvođenjima, predmetno otkriće obezbeđuje modifikovane oligonukleotide koji se sastoje od sekvence izabrane između bilo koje od SEK ID BRi: 1, 2, 3, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, 118, 119, 120, 121, 122, 123, 124, 125, 126, 127, 128, 129, 130, 131, 132, 133, 134, 135, 136, 137, 138, 139, 140, 141, 142, 143, 144, 145, 146, 147, 148, 149, 150, 151, 152, 153, 154, 155, 156, 157, 158, 159, 160, 161, 162, 163, 164, 165, 166, 167, 168, 169, 170, 171, 172, 173, 174, 175, 176, 177, 178, 179, 180, 181, 182, 183, 184, 185, 186, 187, 188, 189, 190, 191, 192, 193, 194, 195, 196, 197, 198, 199, 200, 201, 202, 203, 204, 205, 206, 207, 208, 209, 210, 211, 212, 213, 214, 215, 216, 217, 218, 219, 220, 221, 222, 223, 224, 225, 226, 227, 228, 229, 230, 231, 232, 233, 234, 235, 236, 237, 238, 239, 241, 242, 243, 244, 245, 246, 247, 248, 249, 250, 251, 252, 253, 254, 255, 256, 257, 258, 259, 260, 261, 262, 263, 264, or 265; i pri čemu najmanje jedan, najmanje dva, najmanje tri, najmanje četiri, najmanje pet ili najmanje šest nukleozida modifikovanog oligonukleotida sadrži 2'-O-(N-metil acetamid) modifikovani šećerni deo.
Određene kombinovane administracije
[0082] U određenim izvođenjima, prvi agens koji sadrži jedinjenje opisano ovde se primenjuje zajedno sa jednim ili više sekundarnih agenasa. U određenim izvođenjima, takvi drugi agensi su dizajnirani da leče istu bolest, poremećaj ili stanje kao prvi agens koji je ovde opisan. U određenim izvođenjima, drugi agensi se daju zajedno sa prvim agensom da bi se proizveo kombinovani efekat. U određenim realizacijama, drugi agensi se primenjuju zajedno sa prvim agensom da bi se proizveo sinergijski efekat. U određenim izvođenjima, zajednička primena-administracija prvog i drugog agensa dozvoljava upotrebu nižih doza nego što bi bile potrebne za postizanje terapijskog ili profilaktičkog efekta ako bi se agensi primenjivali kao nezavisna terapija.
[0083] U određenim izvođenjima, predmetno otkriće obezbeđuje primenu prvog antisens jedinjenja u CSF, u kombinaciji sa sistemskom dostavom drugog antisens jedinjenja. Sistemska primena i CSF primena likvora mogu se odvijati istovremeno, odvojeno ili uzastopno. U određenim izvođenjima, subjekt prima prvu dozu antisens jedinjenja u CSF, i nakon toga sistemski prima drugu dozu antisens jedinjenja. U određenim izvođenjima, antisens jedinjenje koje se primenjuje u CSF je Isis 396443. U određenim izvođenjima, antisens jedinjenje primenjeno u CSF je modifikovani oligonukleotid koji ima jedan ili više 2'-O-(N-alkil acetamid) modifikovanih delova šećera. U određenim izvođenjima, antisens jedinjenje koje se primenjuje u CSF je nekonjugovani modifikovani oligonukleotid koji ima jedan ili više 2'-O-(N-alkil acetamid) modifikovanih delova šećera.
[0084] U određenim izvođenjima, antisens jedinjenje koje se primenjuje sistemski je modifikovani oligonukleotid koji ima jedan ili više 2'-O-(N-alkil acetamid) modifikovanih delova šećera. U određenim izvođenjima, antisens jedinjenje koje se primenjuje sistemski je modifikovani oligonukleotid koji ima jedan ili više 2'-O-(N-metil acetamid) modifikovanih delova šećera. U određenim izvođenjima, antisens jedinjenje koje se primenjuje sistemski je modifikovani oligonukleotid koji ima jedan ili više 2'-O-(N-alkil acetamid) modifikovanih delova šećera i konjugovanu grupu. U određenim izvođenjima, antisens jedinjenje koje se primenjuje sistemski je modifikovani oligonukleotid koji ima jedan ili više 2'-O-(N-metil acetamid) modifikovanih delova šećera i konjugovanu grupu.
[0085] Administracija se može odvijati bilo kojim redosledom i sa različitom učestalošću. Na primer, subjekt može da primi sistemsku dozu modifikovanog oligonukleotida koji ima jedan ili više 2'-O-(N-alkil acetamid) ili 2'-O-(N-metil acetamid) modifikovanih delova šećera, i nakon toga dobije dozu antisens jedinjenja (npr. ISIS 396443) u CSF. Alternativno, subjekt može da primi sistemsku dozu modifikovanog oligonukleotida koji ima jedan ili više 2'-O-(N-alkil acetamid) ili 2'-O-(N-metil acetamid) modifikovanih delova šećera nakon što je primio dozu antisens jedinjenje (npr. ISIS 396443) u CSF. Alternativno, subjekt može istovremeno da primi dozu CSF antisens jedinjenja (npr. ISIS 396443) i sistemsku dozu modifikovanog oligonukleotida koji ima jedan ili više 2'-O-(Nalkil acetamida) ili 2'-O-(N-metil acetamid) modifikovani delovi šećera. Primena u CSF i sistemska primena može da se desi u različitim vremenskim tačkama i sa različitim učestalostima. Na primer, subjekt može da primi sistemsku primenu modifikovanog oligonukleotida koji ima jedan ili više 2'-O-(N-alkil acetamid) ili 2'-O-(N-metil acetamid) modifikovanih delova šećera na nedeljnoj ili mesečnoj osnovi, i prima CSF administraciju antisens jedinjenja (npr. ISIS 396443) u CSF jednom u četiri meseca ili jednom u šest meseci. U određenim izvođenjima u kojima je CSF doza antisens jedinjenja (npr. ISIS 396443) i sistemska doza modifikovanog oligonukleotida koji ima jedan ili više 2'-O-(N-alkil acetamid) ili 2'-O-(N-metil acetamid) modifikovanih šećernih delova se daju odvojeno, serijski ili uzastopno, primena takvih doza može biti razmaknuta za različita trajanja kao što su dnevno, nedeljno ili mesečno.
I. Određeni oligonukleotidi
[0086] Pronalazak obezbeđuje oligomerna jedinjenja koja sadrže oligonukleotide, koji se sastoji od povezanih nukleozida. Oligonukleotidi su modifikovani oligonukleotidi. Modifikovani oligonukleotidi sadrže najmanje jednu modifikaciju u odnosu na nemodifikovanu RNK ili DNK (tj. sadrže najmanje jedan modifikovani nukleozid (koji sadrži modifikovani šećerni deo i/ili modifikovanu nukleobazu) i/ili najmanje jednu modifikovanu internukleozidnu vezu).
A. Određeni modifikovani nukleozidi
[0087] Modifikovani nukleozidi sadrže modifikovani šećerni deo ili modifikovanu nukleobazu ili i modifikovani šećerni deo i modifikovanu nukleobazu.
1. Određene grupe šećera
[0088] U određenim izvođenjima, modifikovani delovi šećera su nebiciklični modifikovani delovi šećera. U određenim izvođenjima, modifikovani delovi šećera su biciklični ili triciklični delovi šećera. U određenim izvođenjima, modifikovani delovi šećera su surogati šećera. Takvi surogati šećera mogu da sadrže jednu ili više supstitucija koje odgovaraju onima drugih tipova modifikovanih delova šećera.
[0089] U određenim izvođenjima, modifikovani delovi šećera su nebiciklični modifikovani delovi šećera koji sadrže furanozilni prsten sa jednim ili više acikličnih supstituenata, uključujući, ali ne ograničavajući se na supstituente na 2’, 4’ i/ili 5’ pozicijama. U određenim izvođenjima jedan ili više acikličnih supstituenata nebicikličnih modifikovanih delova šećera su razgranati. Primeri 2'-supstituentskih grupa pogodnih za nebiciklične modifikovane delove šećera uključuju, ali nisu ograničeni na: 2'-O-(N-alkil acetamid), npr. 2'-O-(N-metil acetamid). Na primer, videti U.S. 6,147,200 i Prakash et al., Org. Lett., 5, 403-6 (2003). A "2’-O-(N-methyl acetamide)" ili "2’-NMA" modifikovani nukleozid je prikazan ispod:
[0090] U određenim izvođenjima, 2’-supstituentske grupe su izabrane između: 2’-F, 2’-OCH3("OMe" ili "O-meti"), 2’-O(CH2)2OCH3("MOE"), halo, alil, amino, azido, SH, CN, OCN, CF3, OCF3, O-C1-C10alkoksi, O-C1-C10supstituisanog alkoksi, O-C1-C10alkila, O-C1-C10supstituisanog alkila, S-alkila, N(Rm)-alkila, O-alkenila, S-alkenila, N(Rm)-alkenila, O-alkinila, S-alkinila, N(Rm)-alkinila, O-alkilenil-O-alkila, alkinila, alkarila, aralkil, O-alkarila, O-aralkila, O(CH2)2SCH3, O(CH2)2ON(Rm)(Rn) ili OCH2C(=O)-N(Rm)(Rn), gde su svaki Rmi Rn, nezavisno, H, amino zaštitna grupa, ili supstituisani ili nesupstituisani C1-C10alkil i 2'-supstituentske grupe opisane u Cook et al., U.S. 6,531,584; Cook et al., U.S. 5,859,221; i Cook et al., U.S. 6,005,087. Određena izvođenja ovih 2'-supstituentskih grupa mogu biti dalje supstituisane sa jednom ili više supstituentskih grupa koje su nezavisno izabrane između: hidroksil, amino, alkoksi, karboksi, benzila, fenila, nitro (NO2), tiola, tioalkoksi, tioalkila, halogena, alkila, arila, alkenila i alkinila. Primeri 4-supstituentskih grupa pogodnih za ne-biciklične modifikovane delove šećera uključuju ali nisu ograničeni na alkoksi (npr. metoksi), alkil i one opisane u Manoharan et al., WO 2015/106128. Primeri 5'-supstituentskih grupa pogodnih za nebiciklične modifikovane delove šećera uključuju, ali nisu ograničeni na: 5'-metil (R ili S), 5'-vinil i 5'-metoksi. U određenim izvođenjima, nebiciklični modifikovani šećeri sadrže više od jednog nepremošćavajućeg supstituenta šećera, na primer, 2’-F5’-metil šećerne delove i modifikovane delove šećera i modifikovane nukleozide opisane u Migawa et al., WO 2008/101157 i Rajeev et al., US2013/0203836.).
[0091] U određenim izvođenjima, 2'-supstituisani nukleozid ili 2'-nebicikličnii modifikovani nukleozid sadrži deo šećera koji sadrži nepremošćavajuću 2'-supstituentsku grupu izabranu od: F, NH2, N3, OCF3, OCH3, O(CH2)3NH2, CH2CH=CH2, OCH2CH=CH2, OCH2CH2OCH3, O(CH2)2SCH3, O(CH2)2ON(Rm)(Rn), O(CH2)2O(CH2)2N(CH3)2, i N-supstituisanog acetamida (OCH2C(=O)-N(Rm)(Rn)), gde su svaki Rmi Rn, nezavisno, H, amino zaštitna grupa, ili supstituisani ili nesupstituisani C1-C10alkil. U određenim izvođenjima, svaki Rmi R<n>je, nezavisno, H ili C1-C3alkil. U određenim izvođenjima, svaki Rmi Rnje, nezavisno, H ili metil.
[0092] U određenim izvođenjima, 2'-supstituisani nukleozid ili 2'-nebiciklični modifikovani nukleozid sadrži deo šećera koji sadrži nepremošćenu 2'-supstituentsku grupu izabranu od: F, OCF3, OCH3, OCH2CH2OCH3, O(CH2)2SCH3, O(CH2)2ON(CH3)2, O(CH2)2O(CH2)N(CH3)2, i OCH2C(=O)-N(H)CH3.
[0093] U određenim izvođenjima, 2'-supstituisani nukleozid ili 2'-nebiciklički modifikovani nukleozid sadrži šećerni deo koji sadrži nepremošćenu 2'-supstituentsku grupu izabranu od: F, OCH3, OCH2CH2OCH3, i OCH2C(=O)-N(H)CH3.
[0094] Nukleozidi koji sadrže modifikovane delove šećera, kao što su ne-biciklični modifikovani delovi šećera, mogu biti označeni popozicijom (pozicijama) supstitucije(supstitucija) na šećernom delu nukleozida. Na primer, nukleozidi koji sadrže 2'-supstituisane ili 2-modifikovane delove šećera se nazivaju 2'-supstituisani nukleozidi ili 2-modifikovani nukleozidi.
[0095] Određeni modifikovani delovi šećera sadrže premošćavajući supstituent šećera koji formira drugi prsten koji rezultira bicikličnim šećernim delom. U određenim takvim izvođenjima, biciklični šećerni deo sadrži most između 4’ i 2’ atoma furanoznog prstena. Primeri takvih supstituenata šećera za premošćavanje od 4’ do 2’ uključuju, ali nisu ograničeni na: 4’-CH2-2’, 4’-(CH2)2-2’, 4’-(CH2)3-2’, 4’-CH2-O-2’ ("LNA"), 4’-CH2-S-2’, 4’-(CH2)2-O-2’ ("ENA"), 4’-CH(CH3)-O-2’ (odnose se na "ograničeni etil" ili "cEt" kada je u S konfiguraciji), 4’-CH2-O-CH2-2’, 4’-CH2-N(R)-2’, 4’-CH(CH2OCH3)-O-2’ ("ograničeni MOE" ili "cMOE") i analoge od njih (videti, npr., Seth et al., U.S. 7,399,845, Bhat et al., U.S. 7,569,686, Swayze et al., U.S. 7,741,457, i Swayze et al., U.S. 8,022,193), 4’-C(CH3)(CH3)-O-2’ i analoge od njih (videti, npr., Seth et al., U.S. 8,278,283), 4’-CH2-N(OCH3)-2’ i analoge od njih (videti, npr., Prakash et al., U.S. 8,278,425), 4’-CH2-ON(CH3)2’ (videti, npr., Allerson et al., U.S. 7,696,345 i Allerson et al., U.S. 8,124,745), 4’-CH2-C(H)(CH3)-2’ (videti, npr., Zhou, et al., J. Org. Chem.,2009, 74, 118-134), 4’-CH2-C(=CH2)-2’ i analoge od njih (videti, npr., Seth et al., U.S. 8,278,426), 4’-C(RaRb)-N(R)-O-2’, 4’-C(RaRb)-O-N(R)-2’, 4’-CH2-O-N(R)-2’, i 4’-CH2-N(R)-O-2’, pri čemu je svaki R, Rai Rb, nezavisno, H, zaštitna grupa, ili C1-C12alkil (videti, npr. Imanishi et al., U.S. 7,427,672).
[0096] U određenim izvođenjima, takvi 4’ do 2’ mostovi nezavisno obuhvataju od 1 do 4 vezanih grupa nezavisno izabranih od : -[C(Ra)(Rb)]n-, -[C(Ra)(Rb)]n-O-, -C(Ra)=C(Rb)-, -C(Ra)=N-, -C(=NRa)-, -C(=O)-, -C(=S)-, -O-, -Si(Ra)2-, -S(=O)x-, i -N(Ra)-;
pri čemu:
x je 0, 1, ili 2;
n je 1, 2, 3, ili 4;
svaki Ra i R<b>su, nezavisno, H, zaštitna grupa, hidroksil, C1-C12alkil, supstituisani C1-C12alkil, C2-C12alkenil, supstituisani C2-C12alkenil, C2-C12alkinil, supstituisani C2-C12alkinil, C5-C20aril, supstituisani C5-C20aril, heterociklični radikal, supstituisani heterociklični radikal, heteroaril, supstituisani heteroaril, C5-C7aliciklični radikal, supstituisani C5-C7aliciklični radikal, halogen, OJ1, NJ1J2, SJ1, N3, COOJ1, acil (C(=O)-H), supstituisani acil, CN, sulfonil (S(=O)2-J1), ili sulfoksil (S(=O)-J1); i
svaki J1i J2je, nezavisno, H, C1-C12alkil, supstituisani C1-C12alkil, C2-C12alkenil, C2-C12alkenil, C2-C12alkinil, supstituisani C2-C12alkinil, C5-C20aril, supstituisani C5-C20aril, acil (C(=O)-H), supstituisani acil, heterociklični radikal, supstituisani heterociklični radikal, C1-C12aminoalkil, supstituisani C1-C12aminoalkil ili zaštitna grupa.
[0097] Dodatni biciklični delovi šećera su poznati u tehnici, videti, na primer: Freier et al., Nucleic Acids Research, 1997, 25(22), 4429-4443, Albaek et al., J. Org. Chem., 2006, 71, 7731-7740, Singh et al., Chem. Commun., 1998, 4, 455-456; Koshkin et al., Tetrahedron, 1998, 54, 3607-3630; Kumar et al., Bioorg. Med. Chem. Lett., 1998, 8, 2219-2222; Singh et al., J. Org. Chem., 1998, 63, 10035-10039; Srivastava et al., J. Am. Chem. Soc., 20017, 129, 8362-8379; Wengel et a., U.S. 7,053,207; Imanishi et al., U.S.
6,268,490; Imanishi et al. U.S. 6,770,748; Imanishi et al., U.S. RE44,779; Wengel et al., U.S. 6,794,499; Wengel et al., U.S.
6,670,461; Wengel et al., U.S. 7,034,133; Wengel et al., U.S. 8,080,644; Wengel et al., U.S. 8,034,909; Wengel et al., U.S.
8,153,365; Wengel et al., U.S. 7,572,582; i Ramasamy et al., U.S. 6,525,191;; Torsten et al., WO 2004/106356;Wengel et al., WO 1999/014226; Seth et al., WO 2007/134181; Seth et al., U.S. 7,547,684; Seth et al., U.S. 7,666,854; Seth et al., U.S. 8,088,746; Seth et al., U.S. 7,750,131; Seth et al., U.S. 8,030,467; Seth et al., U.S. 8,268,980; Seth et al., U.S. 8,546,556; Seth et al., U.S.
8,530,640; Migawa et al., U.S. 9,012,421; Seth et al., U.S. 8,501,805; and U.S. Patent Publication Nos. Allerson et al., US2008/0039618 and Migawa et al., US2015/0191727..
[0098] U određenim izvođenjima, biciklični delovi šećera i nukleozidi koji uključuju takve biciklične delove šećera su dalje definisani izomernom konfiguracijom. Na primer, LNA nukleozid (ovde opisan) može biti u ɑ-L konfiguraciji ili u β-D konfiguraciji.
LNA (β-D konfiguracija) ɑ-L-LNA (ɑ-L konfiguracija)
most= 4’-CH2-O-2’ most= 4’-CH2-O-2’
ɑ-L-metilenoksi (4'-CH2-O-2') ili ɑ-L-LNA biciklični nukleozidi su ugrađeni u antisens oligonukleotide koji su pokazali antisens aktivnost (Frieden et al., Nucleic Acids Research, 2003, 21, 6365- 6372). Ovde, opšti opisi bicikličnih nukleozida uključuju obe izomerne konfiguracije. Kada su pozicije specifičnih bicikličnih nukleozida (npr. LNA ili cEt) identifikovane u ovde prikazanim primerima izvođenja, oni su u β-D konfiguraciji, osim ako nije drugačije naznačeno.
[0099] U određenim izvođenjima, modifikovani šećerni delovi sadrže jedan ili više ne-premošćavajućih supstituenata šećera i jedan ili više premošćavajućih supstituenata šećera (npr. 5'-supstituisani i 4'-2' premošćeni šećeri).
[0100] U određenim izvođenjima, modifikovani delovi šećera su surogati šećera. U određenim takvim izvođenjima, atom kiseonika u ostatku šećera je zamenjen, npr., atomom sumpora, ugljenika ili azota. U određenim takvim izvođenjima, takvi modifikovani delovi šećera takođe sadrže premošćavajuće i/ili nepremosćavajuće supstituente kao što je ovde opisano. Na primer, određeni surogati šećera sadrže 4'-atom sumpora i supstituciju na 2'-poziciji (videti, npr., Bhat et al., U.S. 7,875,733 and Bhat et al., U.S. 7,939,677) i/ili 5’ poziciju.
[0101] U određenim izvođenjima, surogati šećera sadrže prstenove koji imaju više od 5 atoma. Na primer, u određenim izvođenjima, surogat šećera sadrži šestočlani tetrahidropiran ("THP"). Takvi tetrahidropirani mogu biti dalje modifikovani ili supstituisani. Nukleozidi koji sadrže takve modifikovane tetrahidropirane uključuju, ali nisu ograničeni na heksitol nukleinsku kiselinu ("HNA"), anitol nukleinsku kiselinu ("ANA"), manitol nukleinsku kiselinu ("MNA") (videti, npr.Leumann, CJ. Bioorg. & Med. Chem. 2002, 10, 841-854), fluoro HNA:
("F-HNA", videti, npr.Swayze et al., U.S. 8,088,904; Swayze et al., U.S. 8,440,803; Swayze et al., U.S. 8,796,437; i Swayze et al., U.S. 9,005,906; F-HNA se takođe može nazvati F-THP ili 3'-fluoro tetrahidropiranom), a nukleozidi koji sadrže dodatna modifikovana THP jedinjenja koja imaju formulu:
pri čemu, nezavisno, za svaki od navedenih modifikovanih THP nukleozida:
Bk je nukleobazna grupa-deo;
T3i T4su svaki, nezavisno, internukleozidna vezujuća grupa koja povezuje modifikovani THP nukleozid sa ostatkom oligonukleotida ili jedan od T3i T4je internukleozidna vezujuća grupa koja povezuje modifikovani THP nukleozid sa ostatkom oligonukleotida, i drugi od T3i T4je H, hidroksil zaštitna grupa, vezana konjugovana grupa, ili 5' ili 3'-terminalna grupa;
q1, q2, q3, q4, q5, q6i q7su svaki, nezavisno, H, C1-C6alkil, supstituisani C1-C6alkil, C2-C6 alkenil, supstituisani C2-C6alkenil, C2-C6alkinil ili supstituisani C2-C6alkinil; i
svaki od R1i R2je nezavisno izabran između: vodonika, halogena, supstituisanog ili nesupstituisanog alkoksi, NJ1J2, SJ1, N3, OC(=Ks)J1, OC(=Ks)NJ1J2, NJ3C(=Ks)NJ1J2i CN, gde je X O, S ili NJ1,i svaki J1, J2i J3je nezavisno H ili C1-C6alkil.
[0102] U određenim izvođenjima, obezbeđeni su modifikovani THP nukleozidi pri čemu su q1, q2, q3, q4, q5, q6i q7svaki H. U određenim izvođenjima, najmanje jedan od q1, q2, q3, q4, q5, q6i q7je različit od H. U određenim izvođenjima, najmanje jedan od q1, q2, q3, q4, q5, q6i q7je metil. U određenim izvođenjima, obezbeđeni su modifikovani THP nukleozidi pri čemu je jedan od R1i R2F. U određenim izvođenjima, R1je F i R2je H, u određenim izvođenjima, R<1>je metoksi i R<2>je H, i u određenim izvođenjima, R<1>je metoksietoksi i R2je H.
[0103] U određenim izvođenjima, surogati šećera sadrže prstenove koji imaju više od 5 atoma i više od jednog heteroatoma. Na primer, nukleozidi koji sadrže morfolino šećerne delove i njihova upotreba u oligonukleotidima su prikazani (vidieti npr. Braasch et al., Biochemistry, 2002, 41, 4503-4510 and Summerton et al., U.S. 5,698,685; Summerton et al., U.S. 5,166,315; Summerton et al., U.S. 5,185,444; and Summerton et al., U.S. 5,034,506). Kao što se ovde koristi, termin "morfolino" označava surogat šećera koji ima sledeću strukturu:
[0104] U određenim izvođenjima, morfolino može biti modifikovano, na primer dodavanjem ili izmenom različitih supstituentskih grupa iz gornje morfolino strukture. Takvi surogati šećera se ovde pominju kao "modifikovani morfolino".
[0105] U određenim izvođenjima, surogati šećera sadrže aciklične grupe. Primeri nukleozida i oligonukleotida koji sadrže takve aciklične surogate šećera uključuju, ali nisu ograničeni na: peptidnu nukleinsku kiselinu ("PNA"), acikličnu butil nukleinsku kiselinu (videti npr., Kumar et al., Org. Biomol. Chem., 2013, 11, 5853-5865), i nukleozidi i oligonukleotidi opisani u Manoharan et al., WO2011/133876.
[0106] Mnogi drugi biciklični i triciklični šećerni i šećerni surogat prstenasti sistemi su poznati u tehnici koji se mogu koristiti u modifikovanim nukleozidima).
2. Određene modifikovane nukleobaze
[0107] U određenim izvođenjima, modifikovani oligonukleotidi sadrže jedan ili više nukleozida koji sadrže nemodifikovanu nukleobazu. U određenim izvođenjima, modifikovani oligonukleotidi sadrže jedan ili više nukleozida koji sadrže modifikovanu nukleobazu.
[0108] U određenim izvođenjima, modifikovane nukleobaze su izabrane od: 5-supstituisanih pirimidina, 6-azapirimidina, alkil ili alkinil supstituisanih pirimidina, alkil supstituisanih purina, i N-2, N-6 i O-6 supstituisanih purina. U određenim izvođenjima modifikovane nukleobaze su izabrane od: 2-aminopropiladenina, 5-hidroksimetil citozina, ksantina, hipoksantina, 2-aminoadenina, 6-N-metilguanina, 6-N-metiladenina, 2-propiladenina, 2- tiouracila, 2-tiotimina i 2-tiocitozina, 5-propinil (-C C-CH3) uracila, 5-propinilcitozina, 6-azouracila, 6-azocitozina, 6-azotimina, 5-riboziluracila (pseudouracila), 4-8-tiouracila, 8-halo, 8-amino, 8-tiola, 8-tioalkila, 8-hidroksila, 8-aza i drugih 8-supstituisanih purina, 5-halo, naročito 5-bromo, 5-trifluorometila, 5-halouracila i 5-halocitozina, 7-metilguanina, 7-metiladenina, 2-F-adenina, 2-aminoadenina, 7-deazaguanina, 7-deazaadenina, 3-deazaguanina, 3-deazaadenina, 6-N-benzoiladenin, 2-N-izobutirilguanina, 4-N-benzoilcitozina, 4-N-benzoiluracila, 5-metil 4-N-benzoilcitozina, 5-metil 4-N-benzoiluracila, univerzalne baze, hidrofobne baze, promiskuitetne baze, baze proširene veličine i fluorisane baze.
Dalje modifikovane nukleobaze uključuju triciklične pirimidine, kao što su 1,3-diazafenoksazin-2-on, 1,3-diazafenotiazin-2-on i 9-(2-aminoetoksi)-1,3-diazafenoksazin-2-on (G-spona). Modifikovane nukleobaze takođe mogu uključivati one u kojima je baza purina ili pirimidina zamenjena drugim heterociklima, na primer 7-deaza-adenin, 7-deazaguanozin, 2-aminopiridin i 2-piridon. Dalje nukleobaze uključuju one otkrivene u Merigan et al., U.S. 3,687,808, one objavljene u The Concise Encyclopedia Of Polymer Science And Engineering, Kroschwitz, J.I., Ed., John Wiley & Sons, 1990, 858-859; Englisch et al., Angewandte Chemie, International Edition, 1991, 30, 613; Sanghvi, Y.S., Chapter 15, Antisense Research and Applications, Crooke, S.T. i Lebleu, B., Eds., CRC Press, 1993, 273-288; o one otkrivene u Poglavljima 6 i 15, Antisense Drug Technology, Crooke S.T., Ed., CRC Press, 2008, 163-166 and 442-443.
[0109] Publikacije koje podučavaju pripremu određenih od iznad navedenih modifikovanih nukleobaza kao i drugih modifikovanih nukleobaza uključuju bez ograničenja, Manoharan et al., US2003/0158403; Manoharan et al., US2003/0175906; Dinh et al., U.S.
4,845,205; Spielvogel et al., U.S. 5,130,302; Rogers et al., U.S. 5,134,066; Bischofberger et al., U.S. 5,175,273; Urdea et al., U.S.
5,367,066; Benner et al., U.S. 5,432,272; Matteucci et al., U.S. 5,434,257; Gmeiner et al., U.S. 5,457,187; Cook et al., U.S.
5,459,255; Froehler et al., U.S. 5,484,908; Matteucci et al., U.S. 5,502,177; Hawkins et al., U.S. 5,525,711; Haralambidis et al., U.S. 5,552,540; Cook et al., U.S. 5,587,469; Froehler et al., U.S. 5,594,121; Switzer et al., U.S. 5,596,091; Cook et al., U.S.
5,614,617; Froehler et al., U.S. 5,645,985; Cook et al., U.S. 5,681,941; Cook et al., U.S. 5,811,534; Cook et al., U.S. 5,750,692; Cook et al., U.S. 5,948,903; Cook et al., U.S. 5,587,470; Cook et al., U.S. 5,457,191; Matteucci et al., U.S. 5,763,588; Froehler et al., U.S. 5,830,653; Cook et al., U.S. 5,808,027; Cook et al., 6,166,199; i Matteucci et al., U.S. 6,005,096.
B. Određene modifikovane internukleozidne veze
[0110] U određenim izvođenjima, nukleozidi modifikovanih oligonukleotida mogu biti povezani zajedno korišćenjem bilo koje internukleozidne veze. Dve glavne klase internukleozidnih vezujućih grupa su definisane prisustvom ili odsustvom atoma fosfora. Reprezentativne internukleozidne veze koje sadrže fosfor uključuju, ali nisu ograničene na, fosfate, koji sadrže fosfodiestarsku vezu ("P=O") (takođe se pominju kao nemodifikovane veze ili veze koje se javljaju u prirodi), fosfotriestre, metilfosfonate, fosforoforamidate, i fosforotioatie ("P=S"), i fosforoditioate ("HS-P=S"). Reprezentativne internukleozidne vezujuće grupe koje ne sadrže fosfor uključuju, ali nisu ograničene na, metilenmetilimino (-CH2-N(CH3)-O-CH2-), tiodiestar, tionokarbamat (-O-C(=O)(NH)-S-); siloksan (-O-SiH2-O-); i N,N’-dimetilhidrazin (-CH2-N(CH3)-N(CH3)-). Modifikovane internukleozidne veze, u poređenju sa fosfatnim vezama koje se javljaju u prirodi, mogu se koristiti za promenu, tipično povećanje, otpornosti oligonukleotida na nukleazu. U određenim izvođenjima, internukleozidne veze koje imaju hiralni atom mogu biti pripremljene kao racemska smeša, ili kao zasebni enantiomeri. Reprezentativne hiralne internukleozidne veze uključuju ali nisu ograničene na alkilfosfonate i fosforotioate. Metode pripreme internukleozidnih veza koje sadrže fosfor i ne sadrže fosfor su dobro poznate stručnjacima u ovoj oblasti tehnike.
[0111] Neutralne internukleozidne veze uključuju, bez ograničenja, fosfotriestre, metilfosfonate,
MMI (3’CH2-N(CH3)-O-5’), amid-3 (3’-CH2-C(=O)-N(H)-5’), amid-4 (3’-CH2-N(H)-C(=O)-5’), formacetal (3’-O-CH2-O-5’), metoksipropil i tioformacetal (3’-S-CH2-O-5’). Dalje neutralne internukleozidne veze uključuju nejonske veze koje sadrže siloksan (dialkilsiloksan), karboksilat estar, karboksamid, sulfid, sulfonatni estar i amide (Videti na primer: Carbohydrate Modifications in Antisense Research; Y.S. Sanghvi and P.D. Cook, Eds., ACS Symposium Series 580; Chapters 3 and 4, 40-65). Dalje neutralne internukleozidne veze uključuju nejonske veze koje se sastoje od mešanih delova N, O, S i CH2komponenti.
C. Određeni motivi
[0112] Modifikovani oligonukleotidi u predmetnom pronalasku sadrže jedan ili više modifikovanih nukleozida koji sadrže modifikovani šećer. U određenim izvođenjima, modifikovani oligonukleotidi sadrže jedan ili više modifikovanih nukleozida koji sadrže modifikovanu nukleobazu. U određenim izvođenjima, modifikovani oligonukleotidi sadrže jednu ili više modifikovanih internukleozidnih veza. U takvim izvođenjima, modifikovani, nemodifikovani i drugačije modifikovani ostaci šećera, nukleobaze i/ili internukleozidne veze modifikovanog oligonukleotida definišu obrazac ili motiv. U određenim izvođenjima, obrasci šećernih delova, nukleobaza i internukleozidnih veza su nezavisni jedan od drugog. Prema tome, modifikovani oligonukleotid može biti opisan njegovim šećernim motivom, motivom nukleobaze i/ili motivom internukleozidne veze (kao što se ovde koristi, motiv nukleobaze opisuje modifikacije nukleobaza nezavisno od sekvence nukleobaza).
1. Određeni šećerni motivi
[0113] U određenim izvođenjima, oligonukleotidi sadrže jedan ili više tipova modifikovanog šećera i/ili nemodifikovanog dela šećera raspoređenih duž oligonukleotida ili njegovog regiona u definisanom uzorku ili šećernom motivu. U određenim slučajevima, takvi motivi šećera uključuju, ali nisu ograničeni na bilo koju od modifikacija šećera o kojima se ovde govori.
[0114] U određenim izvođenjima, modifikovani oligonukleotidi sadrže ili se sastoje od regiona koji ima gapmer motiv, koji se sastoji od dva spoljna regiona ili "krila" i centralnog ili unutrašnjeg regiona ili "gapa". Tri regiona gapmer motiva (5'-krilo, prazninagap i 3'-krilo) formiraju susednu sekvencu nukleozida pri čemu najmanje neki od ostataka šećera nukleozida svakog od krila razlikuju od najmanje neki od ostataka šećera nukleozida jaza-gapa pri čemu se bar neki od ostataka šećera nukleozida svakog krila razlikuju od najmanje nekih delova šećera nukleozida gapa. Konkretno, najmanje delovi šećera nukleozida svakog krila koji su najbliži praznini-gapu (3'-najnukleozid 5'-krila i 5'-najnukleozid 3'-krila) su modifikovani šećerni delovi i razlikuju se od ostataka šećera susednih gapa-praznina nukleozida, koji su nemodifikovani ostaci šećera, čime se definiše granica između krila i gapapraznina (tj. spoj krilo/praznina). U određenim izvođenjima, delovi šećera unutar praznine-gapa su isti jedan kao drugi. U određenim izvođenjima, gap uključuje jedan ili više nukleozida koji imaju šećerni deo- grupu koja se razlikuje od šećerne grupe jednog ili više drugih nukleozida praznine-gapa. U određenim izvođenjima, šećerni motivi dva krila su isti jedan kao drugi (simetrični gapmer). U određenim izvođenjima, šećerni motiv 5’krila se razlikuje od šećernog motiva 3’-krila (asimetrični gapmer).
[0115] U određenim izvođenjima, krila gapmera sadrže 1-5 nukleozide. U određenim izvođenjima, krila gapmera sadrže 2-5 nukleozide. U određenim izvođenjima krila gapmera sadrže 3-5 nukleozide. U određenim izvođenjima, nukleozidi gapmera su svi modifikovani nukleozidi.
[0116] U određenim izvođenjima, gap gapmera sadrži 7-12 nukleozida. U određenim izvođenjima gap gapmera sadrži 7-10 nukleozida. U određenim izvođenjima, gap gapmera sadrži 8-10 nukleozida. U određenim izvođenjima, gap gapmera sadrži 10 nukleozida. U određenom izvođenju, svaki nukleozid gap gepmera je nemodifikovani 2'-deoksi nukleozid.
[0117] U određenim izvođenjima, gapmer je deoksi gapmer. U takvim izvođenjima, nukleozidi na strani zazora-gapa svakog spoja krilo/razmak su nemodifikovani 2'-deoksi nukleozidi, i nukleozidi na stranama krila svakog spoja krilo/gap su modifikovani nukleozidi. U određenim takvim izvođenjima, svaki nukleozid praznine-gapa je nemodifikovani 2'-deoksi nukleozid. U određenim takvim izvođenjima, svaki nukleozid svakog krila je modifikovani nukleozid.
[0118] U određenim izvođenjima, modifikovani oligonukleotidi sadrže ili se sastoje od regiona koji ima potpuno modifikovan šećerni motiv. U takvim izvođenjima, svaki nukleozid potpuno modifikovanog regiona modifikovanog oligonukleotida sadrži modifikovani šećerni deo. U određenim takvim izvođenjima, svaki nukleozid u celom modifikovanom oligonukleotidu sadrži modifikovani šećerni deo. U određenim izvođenjima, modifikovani oligonukleotidi sadrže ili se sastoje od regiona koji ima potpuno modifikovan šećerni motiv, pri čemu svaki nukleozid unutar potpuno modifikovanog regiona sadrži isti modifikovani šećerni deo, koji se ovde pominje kao uniformno modifikovani šećerni motiv. U određenim izvođenjima, potpuno modifikovani oligonukleotid je uniformno modifikovan oligonukleotid. U određenim izvođenjima, svaki nukleozid uniformno modifikovanog oligonukleotida sadrži istu 2'-modifikaciju. U određenim izvođenjima, svaki nukleozid uniformno modifikovanog oligonukleotida sadrži 2'-O-(N-alkil acetamid) grupu. U određenim izvođenjima, svaki nukleozid uniformno modifikovanog oligonukleotida sadrži 2'-O-(N-metil acetamid) grupu.
2. Određeni motivi nukleobaze
[0119] U određenim izvođenjima, oligonukleotidi obuhvataju modifikovane i/ili nemodifikovane nukleotide raspoređene duž oligonukleotida ili regiona od njih u definisanom uzorku ili motivu. U određenim izvođenjima, svaka nukleobaza je modifikovana. U određenim izvođenjima, nijedna od nukleobaza nije modifikovana. U određenim izvođenjima, svaki purin ili svaki pirimidin je modifikovan. U određenim izvođenjima, svaki adenin je modifikovan. U određenim izvođenjima, svaki guanin je modifikovan. U određenim izvođenjima, svaki timin je modifikovan. U određenim izvođenjima, svaki uracil je modifikovan. U određenim izvođenjima, svaki citozin je modifikovan. U određenim izvođenjima, neke ili sve nukleobaze citozina u modifikovanom oligonukleotidu su 5-metilcitozini.
[0120] U određenim izvođenjima, modifikovani oligonukleotidi sadrže blok modifikovanih nukleobaza. U određenim takvim izvođenjima, blok je na 3'-kraju oligonukleotida. U određenim izvođenjima blok je unutar 3 nukleozida od 3'-kraja oligonukleotida. U određenim izvođenjima, blok je na 5'-kraju oligonukleotida. U određenim izvođenjima blok je unutar 3 nukleozida od 5'-kraja oligonukleotida.
[0121] U određenim izvođenjima, oligonukleotidi koji imaju gapmer motiv sadrže nukleozid koji sadrži modifikovanu nukleobazu. U takvim određenim izvođenjima, jedan nukleozid koji sadrži modifikovanu nukleobazu je u centralnom procepu-gapu oligonukleotida koji ima gapmer motiv. U određenim takvim izvođenjima, šećerni deo navedenog nukleozida je 2'-deoksiribozil deo. U određenim izvođenjima, modifikovana nukleobaza je izabrana od: 2-tiopirimidina i 5-propinpirimidina.
3. Određeni motivi internukleozidne veze
[0122] U određenim izvođenjima, oligonukleotidi sadrže modifikovane i/ili nemodifikovane internukleozidne veze raspoređene duž oligonukleotida ili njegovog regiona u definisanom uzorku ili motivu. U određenim izvođenjima, u suštini svaka internukleozidna vezujuća grupa je fosfatna internukleozidna veza (P=O). U određenim izvođenjima, svaka internukleozidna vezujuća grupa modifikovanog oligonukleotida je fosforotioat (P=S). U određenim izvođenjima, svaka internukleozidna vezujuća grupa modifikovanog oligonukleotida je nezavisno izabrana od fosforotioatne i fosfatne internukleozidne veze. U određenim izvođenjima, šećerni motiv modifikovanog oligonukleotida je gapmer i sve internukleozidne veze unutar gapa su modifikovane. U određenim takvim izvođenjima, neke ili sve internukleozidne veze u krilima su nemodifikovane fosfatne veze. U određenim izvođenjima, terminalne internukleozidne veze su modifikovane.
D. Određene dužine
[0123] U određenim izvođenjima, oligonukleotidi (uključujući modifikovane oligonukleotide) mogu imati bilo koji od različitih raspona dužina. U određenim izvođenjima, oligonukleotidi se sastoje od X do Y povezanih nukleozida, gde X predstavlja najmanji broj nukleozida u rasponu, i Y predstavlja najveći broj nukleozida u rasponu. U pronalasku, X i Y su svaki nezavisno izabrani od 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24 i 25; pod uslovom da je X≤Y. Na primer, u određenim izvođenjima, oligonukleotidi se sastoje od 14 do 15, 14 do 16, 14 do 17, 14 do 18, 14 do 19, 14 do 20, 14 do 21, 14 do 22,14 do 23, 14 do 24,14 do 25, 15 do 16,15 do 17, 15 do 18,15 do 19, 15 do 20,15 do 21, 15 do 22, 15 do 23, 15 do 24, 15 do 25, 16 do 17, 16 do 18, 16 do 19, 16 do 20, 16 do 21, 16 do 22, 16 do 23, 16 do 24, 16 do 25, 17 do 18, 17 do 19, 17 do 20,17 do 21, 17 do 22,17 do 23, 17 do 24,17 do 25, 18 do 19,18 do 20, 18 do 21,18 do 22, 18 do 23, 18 do 24, 18 do 25, 19 do 20, 19 do 21, 19 do 22, 19 do 23, 19 do 24, 19 do 25, 20 do 21, 20 do 22, 20 do 23, 20 do 24, 20 do 25, 21 do 22, 21 do 23, 21 do 24, 21 do 25, 22 do 23, 22 do 24, 22 do 25, 23 do 24, 23 do 25, ili 24 do 25 vezanih nukleozida.
E. Određeni modifikovani oligonukleotidi
[0124] U određenim izvođenjima, gornje modifikacije (šećer, nukleobaza, internukleozidna veza) su inkorporisane u modifikovani oligonukleotid. U određenim izvođenjima, modifikovane oligonukleotide karakterišu njihovi modifikacioni motivi i ukupne dužine. U određenim izvođenjima, takvi parametri su svaki nezavisni jedan od drugog. Zbog toga, osim ako nije drugačije naznačeno, svaka internukleozidna veza oligonukleotida koji ima gapmer šećerni motiv može biti modifikovana ili nemodifikovana i može, ali ne mora, da prati obrazac gapmer modifikacije od modifikacija šećera. Na primer, internukleozidne veze unutar krilnih regiona šećernog gapmera mogu biti iste ili različite jedna od druge i mogu biti iste ili različite od internukleozidnih veza regiona gapapraznine šećernog motiva. Slično, takvi šećerni gapmer oligonukleotidi mogu sadržati jednu ili više modifikovanih nukleobaza nezavisno od gapmer uzorka modifikacija šećera. Štaviše, u određenim slučajevima, oligonukleotid je opisan ukupnom dužinom ili rasponom i dužinama ili rasponima dužine dva ili više regiona (npr. regioni nukleozida koji imaju određene modifikacije šećera), u takvim okolnostima može biti moguće odabrati brojeve za svaki raspon koji rezultira u oligonukleotidu koji ima ukupnu dužinu izvan navedenog raspona. U takvim okolnostima oba elementa moraju biti zadovoljena. Na primer, u određenim izvođenjima, modifikovani oligonukleotid se sastoji od 15-20 povezanih nukleozida i ima motiv šećera koji se sastoji od tri regiona, A, B i C, pri čemu se region A sastoji od 2-6 povezanih nukleozida koji imaju specificirani šećerni motiv, region B se sastoji od 6-10 povezanih nukleozida koji imaju specificirani šećerni motiv, i region C se sastoji od 2-6 povezanih nukleozida koji imaju specificirani šećerni motiv. Takva izvođenja ne uključuju modifikovane oligonukleotide gde se A i C svaki sastoje od 6 povezanih nukleozida, i B se sastoji od 10 povezanih nukleozida (iako je taj broj nukleozida dozvoljen u okviru zahteva za A, B i C) jer je ukupna dužina takvih oligonukleotida 22, što prelazi gornju granicu ukupne dužine modifikovanog oligonukleotida (20). Ovde, ako je opis oligonukleotida tih u odnosu na jedan ili više parametara, takav parametar nije ograničen. Dakle, modifikovani oligonukleotid opisan samo kao da ima gapmer šećerni motiv bez daljeg opisa može imati bilo koju dužinu, motiv internukleozidne veze i motiv nukleobaze. Osim ako nije drugačije naznačeno, sve modifikacije su nezavisne od sekvence nukleobaze.
F. Sekvenca nukleobaze
[0125] U određenim izvođenjima, oligonukleotidi (nemodifikovani ili modifikovani oligonukleotidi) su dalje opisani njihovom sekvencom nukleobaze. U određenim izvođenjima oligonukleotidi imaju sekvencu nukleobaze koja je komplementarna drugom oligonukleotidu ili identifikovanoj referentnoj nukleinskoj kiselini, kao što je transkript ciljnog prekursora. U određenim takvim izvođenjima, region oligonukleotida ima sekvencu nukleobaze koja je komplementarna drugom oligonukleotidu ili identifikovanoj referentnoj nukleinskoj kiselini, kao što je transkript ciljnog prekursora. U određenim izvođenjima, sekvenca nukleobaze regiona ili cele dužine oligonukleotida je najmanje 50%, najmanje 60%, najmanje 70%, najmanje 80%, najmanje 90%, najmanje 95% ili 100% komplementarna drugom oligonukleotidu ili nukleinskoj kiselini, kao što je transkript ciljnog prekursora.
II. Određena oligomerna jedinjenja
[0126] U određenim izvođenjima, pronalazak obezbeđuje oligomerna jedinjenja, koja se sastoje od oligonukleotida (modifikovanog ili nemodifikovanog) i opciono jedne ili više konjugovanih grupa i/ili terminalnih grupa. Konjugovane grupe se sastoje od jednog ili više konjugovanih delova i konjugovanog linkera koji povezuje konjugovani deo sa oligonukleotidom. Konjugovane grupe mogu biti povezane za bilo koji ili oba kraja oligonukleotida i/ili na bilo koju unutrašnju poziciju. U određenim izvođenjima, konjugovane grupe su povezane za 2'-poziciju nukleozida modifikovanog oligonukleotida. U određenim izvođenjima, konjugovane grupe koje su povezane za jedan ili oba kraja oligonukleotida su terminalne grupe. U određenim takvim izvođenjima, konjugovane grupe ili terminalne grupe su povezane na 3' i/ili 5'-kraju oligonukleotida. U određenim takvim izvođenjima, konjugovane grupe (ili terminalne grupe) su povezane na 3'-kraju oligonukleotida. U određenim izvođenjima, konjugovane grupe su povezane blizu 3'-kraja oligonukleotida. U određenim izvođenjima, konjugovane grupe (ili terminalne grupe) su povezane na 5'-kraju oligonukleotida. U određenim izvođenjima, konjugovane grupe su povezane blizu 5'-kraja oligonukleotida.
[0127] Primeri terminalnih grupa uključuju, ali nisu ograničeni na konjugovane grupe, grupe za zatvaranje, fosfatne delove, zaštitne grupe, abazične nukleozide, modifikovane ili nemodifikovane nukleozide i dva ili više nukleozida koji su nezavisno modifikovani ili nemodifikovani.
A. Određene konjugovane grupe
[0128] U određenim izvođenjima, oligonukleotidi su kovalentno povezani za jednu ili više konjugovanih grupa. U određenim izvođenjima, konjugovane grupe modifikuju jedno ili više svojstava povezanog oligonukleotida, uključujući, ali ne ograničavajući se na farmakodinamiku, farmakokinetiku, stabilnost, vezivanje, apsorpciju, distribuciju u tkivu, ćelijsku distribuciju, ćelijsko preuzimanje, punjenje i klirens. U određenim izvođenjima, konjugovane grupe daju novo svojstvo povezanom oligonukleotidu, npr., fluoroforima ili reporterskim grupama koje omogućavaju detekciju oligonukleotida. Određene konjugovane grupe i konjugovani delovi su prethodno opisani, na primer: deo holesterola (Letsinger et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 1989, 86, 6553-6556), holne kiseline (Manoharan et al., Bioorg. Med. Chem. Lett., 1994, 4, 1053-1060), tioetra, npr.heksil-S-tritiltiola (Manoharan et al., Ann. N.Y. Acad. Sci., 1992, 660, 306-309; Manoharan et al., Bioorg. Med. Chem. Lett., 1993, 3, 2765-2770), tioholesterola (Oberhauser et al., Nucl. Acids Res., 1992, 20, 533-538), alifatičnog lanca npr., npr. do-dekan-diola ili undecil ostataka (Saison-Behmoaras et al., EMBO J., 1991, 10, 1111-1118; Kabanov et al., FEBS Lett., 1990, 259, 327-330; Svinarchuk et al., Biochimie, 1993, 75, 49-54), fosfolipida, npr. di-heksadecil-rac-glicerola ili trietil-amonijum 1,2-di-O-heksadecil-rac-glicero-3-H-fosfonata (Manoharan et al., Tetrahedron Lett., 1995, 36, 3651-3654; Shea et al., Nucl. Acids Res., 1990, 18, 3777-3783), lanca poliamina ili polietilen glikola (Manoharan et al., Nucleosides & Nucleotides, 1995, 14, 969-973), ili adamantan sirćetne kiseline, palmitil grupedela (Mishra et al., Biochim. Biophys. Acta, 1995, 1264, 229-237), oktadecilamin ili heksilamino-karbonil-oksiholesterol delaostatka (Crooke et al., J. Pharmacol. Exp. Ther., 1996, 277, 923-937), tokoferol grupe (Nishina et al., Molecular Therapy Nucleic Acids, 2015, 4, e220; i Nishina et al., Molecular Therapy, 2008, 16, 734-740), ili GalNAc klastera (npr., WO2014/179620).
[0129] U određenim izvođenjima, konjugovane grupe mogu biti izabrane od bilo kojeg od C22 alkila, C20 alkila, C16 alkila, C10 alkila, C21 alkila, C19 alkila, C18 alkila, C15 alkila, C14 alkila, C13 alkila, C12 alkila, C11 alkila, alkil, C 9 alkila, C8 alkila, C7 alkila, C6 alkila, C5 alkila, C22 alkenila, C20 alkenila, C16 alkenila, C10 alkenila, C21 alkenila, C19 alkenila, C18 alkenila, C15 alkenila, C14 alkenila, C13 alkenila, C12 alkenila, C11 alkenila, C9 alkenila, C8 alkenila, C7 alkenila, C6 alkenila ili C5 alkenila.
[0130] U određenim izvođenjima, konjugovane grupe mogu biti izabrane od bilo kojeg od C22 alkila, C20 alkila, C16 alkila, C10 alkila, C21 alkila, C19 alkila, C18 alkila, C15 alkila, C14 alkila, C13 alkila, C12 alkila, C11 alkila, C9 alkila, C8 alkila, C7 alkila, C6 alkila i C5 alkila, gde alkilni lanac ima jednu ili više nezasićenih veza.
1. Konjugovani delovi
[0131] Konjugovani delovi uključuju, bez ograničenja, interkalatore, reporterske molekule, poliamine, poliamide, peptide, ugljene hidrate (npr. GalNAc), vitaminske delove, polietilen glikole, tioetere, polietre, holesterole, tioholesterole, delove holne kiseline, folati, lipide, lipofilne grupe, fosfolipide, biotin, fenazin, fenantridin, antrahinon, adamantan, akridin, fluoresceine, rodamine, kumarine, fluorofore i boje.
[0132] U određenim izvođenjima, konjugovani deo-ostatak sadrži aktivnu lekovitu supstancu, na primer, aspirin, varfarin, fenilbutazon, ibuprofen, suprofen, fen-bufen, ketoprofen, (S)-(+)-pranoprofen, karprofen, dansilsarkozin, 2,3,5 trijodobenzojevu kiselinu, fingolimod, flufenaminsku kiselinu, folnu kiselinu, benzotiadiazid, hlorotiazid, diazepin, indo-meticin, barbiturat, cefalosporin, sulfa lek, antidijabetik, antibakterijski ili antibiotik.
2. Konjugovani linkeri
[0133] Konjugovani delovi su povezani za oligonukleotide preko konjugovanih linkera. U određenim oligomernim jedinjenjima, konjugovani linker je jednostruka hemijska veza (tj., konjugovani deo je povezan direktno za oligonukleotid preko jedne veze). U određenim oligomernim jedinjenjima, konjugovani deo je povezan za oligonukleotid preko složenijeg konjugovanog linkera koji sadrži jedan ili više konjugovanih veznih delova, koji su podjedinice koje čine konjugovani linker. U određenim izvođenjima, konjugovani linker sadrži lančanu strukturu, kao što je hidrokarbilni lanac, ili oligomer ponavljajućih jedinica kao što su etilen glikol, nukleozidi ili jedinice aminokiselina.
[0134] U određenim izvođenjima, konjugovani linker sadrži jednu ili više grupa izabranih od alkila, amino, okso, amida, disulfida, polietilen glikola, etra, tioetra i hidroksilamino. U određenim takvim izvođenjima, konjugovani linker sadrži grupe izabrane od grupa alkila, amino, okso, amida i etra. U određenim izvođenjima, konjugovani linker sadrži grupe izabrane od alkil i amid grupa. U određenim izvođenjima, konjugovani linker sadrži grupe izabrane od alkil i etarskih grupa. U određenim izvođenjima, konjugovani linker sadrži najmanje jedan fosforni deo. U određenim izvođenjima, konjugovani linker sadrži najmanje jednu fosfatnu grupu. U određenim izvođenjima, konjugovani linker uključuje najmanje jednu neutralnu vezujuću grupu.
[0135] U određenim izvođenjima, konjugovani linkeri, uključujući konjugovane linkere opisane iznad, su bifunkcionalni vezujući delovi, npr., oni koji su poznati u tehnici da su korisni za vezivanje konjugovanih grupa za matična jedinjenja, kao što su oligonukleotidi koji su ovde dati. Generalno, bifunkcionalni vezujući deo sadrži najmanje dve funkcionalne grupe. Jedna od funkcionalnih grupa je izabrana da se veže za određeno mesto na matičnom jedinjenju, i druga je izabrana da se veže za konjugovanu grupu. Primeri funkcionalnih grupa koje se koriste u bifunkcionalnoj vezujućoj grupi uključuju, ali nisu ograničeni na, elektrofile za reagovanje sa nukleofilnim grupama i nukleofile za reagovanje sa elektrofilnim grupama. U određenim izvođenjima, bifunkcionalni vezujući delovi sadrže jednu ili više grupa izabranih od amino, hidroksila, karboksilne kiseline, tiola, alkila, alkenila i alkinila.
[0136] Primeri konjugovanih linkera uključuju, ali nisu ograničeni na pirolidin, 8-amino-3,6-dioksaoktansku kiselinu (ADO), sukcinimidil 4-(N-maleimidometil) cikloheksan-1-karboksilat (SMCC) i 6-aminoheksansku kiselinu (AHEKS ili AHA). Drugi konjugovani linkeri uključuju, ali nisu ograničeni na, supstituisani ili nesupstituisani C1-C10alkil, supstituisani ili nesupstituisani C2-C10alkenil ili supstituisani ili nesupstituisani C2-C10alkinil, pri čemu neograničavajuća lista poželjnih supstituentnih grupa uključuje hidroksil, amino, alkoksi, karboksi benzil, fenil, nitro, tiol, tioalkoksi, halogen, alkil, aril, alkenil i alkinil.
[0137] U određenim izvođenjima, konjugovani linkeri sadrže 1-10 linker-nukleozida. U određenim izvođenjima, takvi linkernukleozidi su modifikovani nukleozidi. U određenim izvođenjima takvi linker-nukleozidi sadrže modifikovani šećerni deo. U određenim izvođenjima, linker-nukleozidi su nemodifikovani. U određenim izvođenjima, linker-nukleozidi sadrže opciono zaštićenu heterocikličnu bazu izabranu od purina, supstituisanog purina, pirimidina ili supstituisanog pirimidina. U određenim izvođenjima, deo koji se može cepati je nukleozid izabran od uracila, timina, citozina, 4-N-benzoilcitozina, 5-metilcitozina, 4-N-benzoil-5-metilcitozina, adenina, 6-N-benzoiladenina i 2. N-izobutirilguanina. Obično je poželjno da se linker-nukleozidi odcepe od oligomernog jedinjenja nakon što ono stigne do ciljnog tkiva. Shodno tome, linker-nukleozidi su obično povezani jedni sa drugima i sa ostatkom oligomernog jedinjenja preko veza koje se mogu cepati. U određenim izvođenjima, takve veze koje se mogu rascepiti su fosfodiestarske veze.
[0138] Ovde se, linker-nukleozidi ne smatraju delom oligonukleotida. Shodno tome, u izvođenjima u kojima oligomerno jedinjenje sadrži oligonukleotid koji se sastoji od određenog broja ili raspona povezanih nukleozida i/ili određenog procenta komplementarnosti sa referentnom nukleinskom kiselinom, i oligomerno jedinjenje takođe sadrži konjugovanu grupu koja sadrži konjugovani linker sadržavajući linker-nukleozide, ti linker-nukleozidi se ne računaju prema dužini oligonukleotida i ne koriste se u određivanju procenta komplementarnosti oligonukleotida za referentnu nukleinsku kiselinu. Na primer, oligomerno jedinjenje može da sadrži (1) modifikovani oligonukleotid koji se sastoji od 8-30 nukleozida i (2) konjugovanu grupu koja sadrži 1-10 linkernukleozida koji su susedni sa nukleozidom modifikovanog oligonukleotida.
Ukupan broj susednih povezanih nukleozida u takvom oligomernom jedinjenju je više od 30. Alternativno, oligomerno jedinjenje može da sadrži modifikovani oligonukleotid koji se sastoji od 8-30 nukleozida i bez konjugovane grupe. Ukupan broj susednih povezanih nukleozida u takvom oligomernom jedinjenju nije veći od 30. Osim ako nije drugačije naznačeno, konjugovani linkeri ne sadrže više od 10 linker-nukleozida. U određenim izvođenjima, konjugovani linkeri ne sadrže više od 5 linker-nukleozida. U određenim izvođenjima, konjugovani linkeri ne sadrže više od 3 linker-nukleozida. U određenim izvođenjima, konjugovani linkeri ne sadrže više od 2 linker-nukleozida. U određenim izvođenjima, konjugovani linkeri ne sadrže više od 1 linker-nukleozida.
[0139] U određenim izvođenjima, poželjno je da se konjugovana grupa odcepi od oligonukleotida. Na primer, u određenim okolnostima oligomerna jedinjenja koja sadrže određeni konjugovani deo bolje se preuzimaju od strane određenog tipa ćelije, ali kada se oligomerno jedinjenje preuzme, poželjno je da se konjugovana grupa odcepi da bi se oslobodio nekonjugovani ili roditeljski- matični oligonukleotid. Dakle, određeni konjugovani linkeri mogu sadržati jedan ili više delova koji se cepaju. U određenim izvođenjima, deo koji se može cepati je veza koja se može cepati. U određenim izvođenjima, deo koji se može cepiti je grupa atoma koja sadrži najmanje jednu vezu koja se može odvojiti. U određenim izvođenjima, deo koji se može odvojiti sadrži grupu atoma koji sadrže jednu, dve, tri, četiri ili više od četiri veze koje se mogu rascepiti. U određenim izvođenjima, deo koji se može cepati se selektivno cepa unutar ćelije ili subćelijskog odeljka, kao što je lizozom. U određenim izvođenjima, deo koji se može cepati se selektivno cepa endogenim enzimima, kao što su nukleaze.
[0140] U određenim izvođenjima, veza koja se može cepati se bira između: amida, estra, etra, jednog ili oba estra fosfodiestra, fosfatnog estra, karbamata ili disulfida. U određenim izvođenjima, veza koja se može cepati je jedan ili oba estra fosfodiestra. U određenim izvođenjima, deo koji se može cepiti sadrži fosfat ili fosfodiestar. U određenim izvođenjima, deo koji se može cepiti je fosfatna veza između oligonukleotida i konjugovani deo ili konjugovana grupa.
[0141] U određenim izvođenjima, deo koji se može cepati sadrži ili se sastoji od jednog ili više linker-nukleozida. U određenim takvim izvođenjima, jedan ili više linker-nukleozida su povezani jedan sa drugim i/ili sa ostatkom oligomernog jedinjenja preko veza koje se mogu cepati. U određenim izvođenjima, takve veze koje se mogu rascepiti su nemodifikovane fosfodiestarske veze. U određenim izvođenjima, deo koji se može cepati je 2'-deoksi nukleozid koji je vezan za 3' ili 5'-terminalni nukleozid oligonukleotida pomoću fosfatne internukleozidne veze i kovalentno vezan za ostatak konjugovanog linkera ili konjugovanog dela pmoću fosfatne ili ili fosforotioatne veze. U određenim takvim izvođenjima, deo koji se može cepati je 2'-deoksiadenozin.
3. Određeni konjugovani delovi koji ciljaju ćelije
[0142] U određenim izvođenjima, konjugovana grupa sadrži konjugovani deo koji cilja ćeliju. U određenim izvođenjima, konjugovana grupa ima opštu formulu:
pri čemu je n od 1 do oko 3, m je 0 kada je n 1, m je 1 kada je n 2 ili veće, j je 1 ili 0, i k je 1 ili 0.
[0143] U određenim izvođenjima, n je 1, j je 1 i k je 0. U određenim izvođenjima, n je 1, j je 0 i k je 1. U određenim izvođenjima, n je 1, j je 1 i k je 1. U određenim izvođenjima, n je 2, j je 1 i k je 0. U određenim izvođenjima, n je 2, j je 0 i k je 1. U određenim izvođenjima n je 2, j je 1 i k je 1. U određenim izvođenjima, n je 3, j je 1 i k je 0. U određenim izvođenjima, n je 3, j je 0 i k je 1. U određenim izvođenjima, n je 3, j je 1 i k je 1.
[0144] U određenim izvođenjima, konjugovane grupe sadrže delove koji ciljaju ćelije koji imaju najmanje jedan vezani ligand. U određenim izvođenjima, delovi koji ciljaju ćelije sadrže dva vezana liganda kovalentno povezana za razgranatu grupu. U određenim izvođenjima, delovi koji ciljaju ćelije sadrže tri vezana liganda kovalentno vezana za granastu grupu.
[0145] U određenim izvođenjima, konjugovane grupe sadrže deo koji cilja ćelije imajući formulu:
[0146] U određenim izvođenjima, konjugovane grupe sadrže deo koji cilja ćelije imajući formulu:
pri čemu je n ceo broj izabran od 1, 2, 3, 4, 5, 6 ili 7. U određenim izvođenjima, n je 1. U određenim izvođenjima, n je 2. U određenim izvođenjima, n je 3. U određenim izvođenjima, n je 4. U određenim izvođenjima, n je 5.
[0147] U određenim izvođenjima, konjugovane grupe sadrže deo koji cilja ćelije imajući formulu:
[0148] U određenim izvođenjima, konjugovane grupe sadrže deo koji cilja ćelije imajući formulu:
[0149] U određenim izvođenjima, konjugovane grupe sadrže deo koji cilja ćelije imajući formulu:
[0150] U određenim izvođenjima, konjugovane grupe sadrže deo koji cilja ćelije imajući formulu:
[0151] U određenim izvođenjima, konjugovane grupe sadrže deo koji cilja ćelije imajući formulu:
[0152] U određenim izvođenjima, oligomerna jedinjenja sadrže konjugovanu grupu koja je ovde opisana kao "LICA-1". LICA-1 ima formulu:
[0153] U određenim izvođenjima, oligomerna jedinjenja koja sadrže LICA-1 imaju formulu:
pri čemu je oligo oligonukleotid.
[0154] Reprezentativni patenti Sjedinjenih Država, publikacije patentnih prijava Sjedinjenih Država, publikacije međunarodnih prijava patenata i druge publikacije koje podučavaju pripremu određenih iznad navedenih konjugovanih grupa, oligomernih jedinjenja koja sadrže konjugovane grupe, vezice, konjugovane linkere, grupe za granjanje, ligande, delove koji se mogu cepati kao i druge modifikacije uključuju bez ograničenja, US 5,994,517, US 6,300,319, US 6,660,720, US 6,906,182, US 7,262,177, US 7,491,805, US 8,106,022, US 7,723,509, US 2006/0148740, US 2011/0123520, WO 2013/033230 and WO 2012/037254, Biessen et al., J. Med. Chem. 1995, 38, 1846-1852, Lee et al., Bioorganic & Medicinal Chemistry 2011,19, 2494-2500, Rensen et al., J. Biol. Chem. 2001, 276, 37577-37584, Rensen et al., J. Med. Chem. 2004, 47, 5798-5808, Sliedregt et al., J. Med. Chem. 1999, 42, 609-618, i Valentijn et al., Tetrahedron, 1997, 53, 759-770.
[0155] U određenim izvođenjima, oligomerna jedinjenja obuhvataju modifikovane oligonukleotide koji sadrže potpuno modifikovani šećerni motiv i konjugovanu grupu koja sadrži najmanje jedan, dva ili tri GalNAc liganda. U određenim izvođenjima antisens jedinjenja i oligomerna jedinjenja sadrže konjugovanu grupu koja se nalazi u bilo kojoj od sledećih referenci:
Lee, Carbohydr Res, 1978, 67, 509-514; Connolly et al., J Biol Chem, 1982, 257, 939-945; Pavia et al., Int J Pep Protein Res, 1983, 22, 539-548; Lee et al., Biochem, 1984, 23, 4255-4261; Lee et al., Glycoconjugate J, 1987, 4, 317-328; Toyokuni et al., Tetrahedron Lett, 1990, 31, 2673-2676; Biessen et al., J Med Chem, 1995, 38, 1538-1546; Valentijn et al., Tetrahedron, 1997, 53, 759-770; Kim et al., Tetrahedron Lett, 1997, 38, 3487-3490; Lee et al., Bioconjug Chem, 1997, 8, 762-765; Kato et al., Glycobiol, 2001, 11, 821-829; Rensen et al., J Biol Chem, 2001, 276, 37577-37584; Lee et al., Methods Enzymol, 2003, 362, 38-43; Westerlind et al., Glycoconj J, 2004, 21, 227-241; Lee et al., Bioorg Med Chem Lett, 2006, 16(19), 5132-5135; Maierhofer et al., Bioorg Med Chem, 2007, 15, 7661-7676; Khorev et al., Bioorg Med Chem, 2008, 16, 5216-5231; Lee et al., Bioorg Med Chem, 2011, 19, 2494-2500; Kornilova et al., Analyt Biochem, 2012, 425, 43-46; Pujol et al., Angew Chemie Int Ed Engl, 2012, 51, 7445-7448; Biessen et al., J Med Chem, 1995, 38, 1846-1852; Sliedregt et al., J Med Chem, 1999, 42, 609-618; Rensen et al., J Med Chem, 2004, 47, 5798-5808; Rensen et al., Arterioscler Thromb Vasc Biol, 2006, 26, 169-175; van Rossenberg et al., Gene Ther, 2004, 11, 457-464; Sato et al., J Am Chem Soc, 2004, 126, 14013-14022; Lee et al., J Org Chem, 2012, 77, 7564-7571; Biessen et al., FASEB J, 2000, 14, 1784-1792; Rajur et al., Bioconjug Chem, 1997, 8, 935-940; Duff et al., Methods Enzymol, 2000, 313,
297-321; Maier et al., Bioconjug Chem, 2003, 14, 18-29; Jayaprakash et al., Org Lett, 2010, 12, 5410-5413; Manoharan, Antisense Nucleic Acid Drug Dev, 2002, 12, 103-128; Merwin et al., Bioconjug Chem, 1994, 5, 612-620; Tomiya et al., Bioorg Med Chem, 2013, 21, 5275-5281; International applications WO1998/013381; WO2011/038356; WO1997/046098; WO2008/098788; WO2004/101619; WO2012/037254; WO2011/120053; WO2011/100131; WO2011/163121; WO2012/177947; WO2013/033230; WO2013/075035; WO2012/083185; WO2012/083046; WO2009/082607; WO2009/134487; WO2010/144740; WO2010/148013; WO1997/020563; WO2010/088537; WO2002/043771; WO2010/129709; WO2012/068187; WO2009/126933; WO2004/024757; WO2010/054406; WO2012/089352; WO2012/089602; WO2013/166121; WO2013/165816; U.S.Patents 4,751,219;8,552,163; 6,908,903; 7,262,177; 5,994,517; 6,300,319; 8,106,022; 7,491,805; 7,491,805; 7,582,744; 8,137,695; 6,383,812; 6,525,031; 6,660,720; 7,723,509; 8,541,548; 8,344,125; 8,313,772; 8,349,308; 8,450,467; 8,501,930; 8,158,601; 7,262,177; 6,906,182; 6,620,916; 8,435,491; 8,404,862; 7,851,615; Objavljene publikacije američke patentne prijave US2011/0097264; US2011/0097265; US2013/0004427; US2005/0164235; US2006/0148740; US2008/0281044; US2010/0240730; US2003/0119724; US2006/0183886; US2008/0206869; US2011/0269814; US2009/0286973; US2011/0207799; US2012/0136042; US2012/0165393; US2008/0281041; US2009/0203135; US2012/0035115; US2012/0095075; US2012/0101148; US2012/0128760; US2012/0157509; US2012/0230938; US2013/0109817; US2013/0121954; US2013/0178512; US2013/0236968; US2011/0123520; US2003/0077829; US2008/0108801; i US2009/0203132.
[0156] U određenim izvođenjima, jedinjenja pronalaska su jednolančana. U određenim izvođenjima, oligomerna jedinjenja su uparena sa drugim oligonukleotidom ili oligomernim jedinjenjem da bi se formirao dupleks, koji je dvolančan.
III. Određena antisens jedinjenja
[0157] U određenim izvođenjima, predmetni pronalazak obezbeđuje antisens jedinjenja, koja sadrže ili se sastoje od oligomernog jedinjenja koje sadrži antisens oliognukleotid, koji ima nukleobazne sekvence komplementarne sekvencama ciljne nukleinske kiseline. U određenim izvođenjima, antisens jedinjenja su jednolančana. Takva jednolančana antisens jedinjenja obično sadrže ili se sastoje od oligomernog jedinjenja koje sadrži ili se sastoji od modifikovanog oligonukleotida i opciono konjugovane grupe. U određenim izvođenjima, antisens jedinjenja su dvolančana. Takva dvolančana antisens jedinjenja sadrže prvo oligomerno jedinjenje koje ima region komplementaran ciljnoj nukleinskoj kiselini i drugo oligomerno jedinjenje koje ima region komplementaran prvom oligomernom jedinjenju. Prvo oligomerno jedinjenje takvih dvolančanih antisens jedinjenja obično sadrži ili se sastoji od modifikovanog oligonukleotida i opciono konjugovane grupe. Oligonukleotid drugog oligomernog jedinjenja takvog dvolančanog antisens jedinjenja može biti modifikovan ili nemodifikovan. Bilo jedno ili oba oligomerna jedinjenja dvolančanog antisens jedinjenja mogu da sadrže konjugovanu grupu. Oligomerna jedinjenja dvolančanih antisens jedinjenja mogu uključivati nekomplementarne previsoke-nadvišene nukleozide.
[0158] U određenim izvođenjima, oligomerna jedinjenja od antisens jedinjenja su sposobna da se hibridizuju sa ciljnom nukleinskom kiselinom, što dovodi do najmanje jedne antisens aktivnosti. U određenim izvođenjima, antisens jedinjenja selektivno utiču na jednu ili više ciljnih nukleinskih kiselina. Takva selektivna antisens jedinjenja sadrže nukleobaznu sekvencu koja se hibridizuje sa jednom ili više ciljnih nukleinskih kiselina, rezultirajući u jednoj ili više željenih antisens aktivnosti i ne hibridizuje se sa jednom ili više neciljnih nukleinskih kiselina ili se ne hibridizuje sa jednom ili više neciljnih nukleinskih kiselina na takav način da rezultira značajnom neželjenom antisens aktivnošću.
[0159] U određenim izvođenjima, hibridizacija antisens jedinjenja sa ciljnom nukleinskom kiselinom dovodi do promene obrade, npr., splajsovaanja, transkripta ciljnog prekursora. U određenim izvođenjima, hibridizacija antisens jedinjenja sa transkriptom ciljnog prekursora dovodi do inhibicije interakcije vezivanja između ciljne nukleinske kiseline i proteina ili druge nukleinske kiseline. U određenim takvim izvođenjima, hibridizacija antisens jedinjenja sa transkriptom ciljnog prekursora dovodi do promene translacije ciljne nukleinske kiseline.
[0160] Antisens aktivnosti se mogu posmatrati direktno ili indirektno. U određenim izvođenjima, posmatranje ili detekcija antisens aktivnosti uključuje posmatranje ili detekciju promene u količini ciljne nukleinske kiseline ili proteina kodiranog takvom ciljnom nukleinskom kiselinom, promenu u odnosu varijanti splajsovanja nukleinske kiseline ili proteina, i/ili fenotipska promena u ćeliji ili životinji.
IV. Određene ciljne nukleinske kiseline
[0161] Antisens jedinjenja mogu da sadrže ili se sastoje od oligonukleotida koji sadrži region koji je komplementaran sa ciljnom nukleinskom kiselinom. Ciljna nukleinska kiselina može biti DNK koja kodira SMN2, uključujući humanu genomsku sekvencu SMN2 datu u pristupnom broju GENBANK NT_006713.14 skraćenu od nukleotida 19939708_do 19967777, ovde kao SEK ID BR. 240. U određenim izvođenjima, ciljna nukleinska kiselina sadrži SEK ID BR: 10. Nukleotidi 1-60 od SEK ID BR: 10 predstavljaju deo introna 6 od pre-mRNK SMN2, nukleotidi 61-114 od SEK ID BR: 10 predstavljaju ekson 7 od SM2 pre-mRNK, i nukleotidi 115-174 od SEK ID BR: 10 predstavljaju deo introna 7 od SMN2 premRNK. U određenim izvođenjima, ciljna nukleinska kiselina sadrži ISS-N1 koja sadrži sekvencu nukleobaze SEK ID BR: 11.
A. Komplementarnost/nepodudarnosti sa ciljnom nukleinskom kiselinom
[0162] U određenim izvođenjima, antisens jedinjenja i/ili oligomerna jedinjenja sadrže antisens oligonukleotide koji su komplementarni ciljnoj nukleinskoj kiselini preko cele dužine oligonukleotida. U određenim izvođenjima, takvi oligonukleotidi su 99% komplementarni ciljnoj nukleinskoj kiselini. U određenim izvođenjima, takvi oligonukleotidi su 95% komplementarni ciljnoj nukleinskoj kiselini. U određenim izvođenjima, takvi oligonukleotidi su 90% komplementarni ciljnoj nukleinskoj kiselini. U određenim izvođenjima, takvi oligonukleotidi su 85% komplementarni ciljnoj nukleinskoj kiselini. U određenim izvođenjima, takvi oligonukleotidi su 80% komplementarni ciljnoj nukleinskoj kiselini. U određenim izvođenjima, antisens oligonukleotidi su najmanje 80% komplementarni ciljnoj nukleinskoj kiselini po celoj dužini oligonukleotida i sadrže region koji je 100% ili potpuno komplementaran ciljnoj nukleinskoj kiselini. U određenim takvim izvođenjima, region pune komplementarnosti je dužine od 6 do 20 nukleobaza. U određenim takvim izvođenjima, region pune komplementarnosti je dužine od 10 do 18 nukleobaza. U određenim takvim izvođenjima, region pune komplementarnosti je dužine od 18 do 20 nukleobaza.
[0163] U određenim izvođenjima, oligomerna jedinjenja i/ili antisens jedinjenja sadrže jednu ili više neusklađenih nukleobaza u odnosu na ciljnu nukleinsku kiselinu. U određenim takvim izvođenjima, antisens aktivnost protiv mete je smanjena takvim nepodudaranjem, ali je aktivnost protiv ne-cilja smanjena za veću količinu. Dakle, u određenim takvim izvođenjima selektivnost antisens jedinjenja je poboljšana. U određenim izvođenjima, nepodudaranje je specifično pozicionirano unutar oligonukleotida koji ima gapmer motiv. U određenim takvim izvođenjima, neusklađenost je na poziciji 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 ili 8 od 5'-kraja gap regiona. U određenim takvim izvođenjima, neusklađenost je na poziciji 9, 8, 7, 6, 5, 4, 3, 2, 1 od 3'-kraja gap regiona -zazora. U određenim takvim izvođenjima, neusklađenost je na poziciji 1, 2, 3 ili 4 od 5’-kraja regiona krila. U određenim takvim izvođenjima, neusklađenost je na poziciji 4, 3, 2 ili 1 od 3’-kraja regiona krila.
B. Modulacija procesiranja određenih ciljnih nukleinskih kiselina
[0164] Oligomerna jedinjenja pronalaska sadrže ili se sastoje od modifikovanog oligonukleotida koji je komplementaran transkriptu ciljnog prekursora, koji je ciljna pre-mRNK. U određenim izvođenjima, dovođenje u kontakt ćelije sa jedinjenjem komplementarnim transkriptu ciljnog prekursora modulira obradu transkripta ciljnog prekursora. U određenim takvim izvođenjima, rezultujući ciljni obrađeni transkript ima drugačiju sekvencu nukleobaze od ciljnog obrađenog transkripta koji se proizvodi u odsustvu jedinjenja. U određenim izvođenjima, ciljni prekursorski transkript je ciljna pre-mRNK i kontaktiranje ćelije sa jedinjenjem komplementarnim ciljnoj pre-mRNK modulira splajsovanje ciljne pre-mRNK. U određenim takvim izvođenjima, rezultujuća ciljna mRNK ima drugačiju sekvencu nukleobaze od ciljne mRNK koja se proizvodi u odsustvu jedinjenja. U određenim takvim realizacijama, egzon je isključen iz ciljne mRNK. U određenim izvođenjima, ekson je uključen u ciljnu mRNK. U određenim izvođenjima, isključenje ili uključivanje eksona indukuje ili sprečava besmisleno posredovano raspadanje ciljne mRNK, uklanja ili dodaje prevremeni terminacioni kodon iz ciljne mRNK, i/ili menja okvir čitanja ciljne mRNK.
C. Određene bolesti i stanja povezana sa određenim ciljnim nukleinskim kiselinama
[0165] U određenim izvođenjima, transkript ciljnog prekursora je povezan sa bolešću ili stanjem. U određenim takvim izvođenjima, oligomerno jedinjenje koje sadrži ili se sastoji od modifikovanog oligonukleotida koji je komplementaran transkriptu ciljnog prekursora se koristi za lečenje bolesti ili stanja. U određenim takvim izvođenjima, jedinjenje modulira obradu transkripta ciljnog prekursora da bi se proizveo koristan ciljni obrađen transkript. U određenim takvim izvođenjima, bolest ili stanje je povezano sa aberantnom obradom prekursorskog transkripta. U određenim takvim izvođenjima, bolest ili stanje je povezano sa aberantnim splajsovanjem pre-mRNK.
V. Određene farmaceutske kompozicije
[0166] U određenim izvođenjima, predmetni pronalazak obezbeđuje farmaceutske kompozicije koje sadrže jedno ili više antisens jedinjenja ili soli od njih. U određenim takvim izvođenjima, farmaceutska kompozicija sadrži pogodan farmaceutski prihvatljiv razblaživač ili nosač. U određenim izvođenjima, farmaceutska kompozicija sadrži sterilni fiziološki rastvor i jedno ili više antisens jedinjenja. U određenim izvođenjima, takva farmaceutska kompozicija se sastoji od sterilnog fiziološkog rastvora i jednog ili više antisens jedinjenja. U određenim izvođenjima, sterilni fiziološki rastvor je fiziološki rastvor farmaceutskog kvaliteta. U određenim izvođenjima, farmaceutska kompozicija sadrži jedno ili više antisens jedinjenja i sterilnu vodu. U određenim izvođenjima, farmaceutska kompozicija se sastoji od jednog antisens jedinjenja i sterilne vode. U određenim izvođenjima, sterilna voda je voda farmaceutskog kvaliteta. U određenim izvođenjima, farmaceutska kompozicija sadrži jedno ili više antisens jedinjenja i fiziološki rastvor puferovan fosfatom (PBS). U određenim izvođenjima, farmaceutska kompozicija se sastoji od jednog ili više antisens jedinjenja i sterilnog PBS. U određenim izvođenjima, sterilni PBS je PBS farmaceutskog kvaliteta.
[0167] U određenim izvođenjima, farmaceutske kompozicije sadrže jedno ili više ili antisens jedinjenje i jedan ili više ekscipijenata. U određenim takvim izvođenjima, ekscipijensi su izabrani od vode, rastvora soli, alkohola, polietilen glikola, želatina, laktoze, amilaze, magnezijum stearata, talka, silicijumove kiseline, viskoznog parafina, hidroksimetilceluloze i polivinilpirolidona.
[0168] U određenim izvođenjima, antisens jedinjenja mogu biti pomešana sa farmaceutski prihvatljivim aktivnim i/ili inertnim supstancama za pripremu farmaceutskih kompozicija ili formulacija. Kompozicije i metode za formulaciju farmaceutskih kompozicija zavise od brojnih kriterijuma, uključujući, ali ne ograničavajući se na, način primene, stepen bolesti ili dozu koja se primenjuje.
[0169] U određenim izvođenjima, farmaceutske kompozicije koje sadrže oligomerno jedinjenje i/ili antisens jedinjenje obuhvataju sve farmaceutski prihvatljive soli antisens jedinjenja, estre antisens jedinjenja ili soli takvih estara. U određenim izvođenjima, farmaceutske kompozicije koje sadrže antisens jedinjenja i/ili oligomerna jedinjenja koja sadrže jedan ili više antisens oligonukleotida, nakon primenjivanja na životinji, uključujući čoveka, su sposobne da obezbede (direktno ili indirektno) biološki aktivni metabolit ili njegov ostatak. Shodno tome, na primer, otkriće se takođe odnosi na farmaceutski prihvatljive soli antisens jedinjenja, prolekova, farmaceutski prihvatljivih soli takvih prolekova i drugih bioekvivalenata. Pogodne farmaceutski prihvatljive soli uključuju, ali nisu ograničene na, natrijumove i kalijumove soli. U određenim izvođenjima, prolekovi sadrže jednu ili više konjugovanih grupa povezanih za oligonukleotid, pri čemu je konjugovana grupa cepljena endogenim nukleazama unutar tela.
[0170] Lipidni delovi su korišćeni u terapijama nukleinskim kiselinama u različitim metodama. U određenim takvim metodama, nukleinska kiselina, kao što je antisens jedinjenje, se uvodi u prethodno formirane lipozome ili lipoplekse napravljene od smeša katjonskih lipida i neutralnih lipida. U određenim metodama, DNK kompleksi sa mono- ili polikatjonskim lipidima se formiraju bez prisustva neutralnog lipida. U određenim izvođenjima, lipidni deo je odabran da poveća distribuciju farmaceutskog agensa za određeno ćelijsko tkivo. U određenim izvođenjima, lipidni deo se bira da poveća distribuciju farmaceutskog agensa u masnom tkivu. U određenim izvođenjima, lipidni deo se bira da poveća distribuciju farmaceutskog agensa u mišićno tkivo.
[0171] U određenim izvođenjima, farmaceutske kompozicije sadrže sistem za isporuku. Primeri sistema za isporuku uključuju, ali nisu ograničeni na, lipozome i emulzije. Određeni sistemi za isporuku su korisni za pripremu određenih farmaceutskih kompozicija uključujući i one koje sadrže hidrofobna jedinjenja. U određenim izvođenjima,, koriste se određeni organski rastvarači kao što je dimetilsulfoksid.
[0172] U određenim izvođenjima, farmaceutske kompozicije sadrže jedan ili više molekula za isporuku specifičnih za tkivo dizajniranih da isporuče jedan ili više farmaceutskih agenasa predmetnog pronalaska u specifična tkiva ili tipove ćelija. Na primer, u određenim izvođenjima, farmaceutske kompozicije uključuju lipozome obložene antitelom specifičnim za tkivo.
[0173] U određenim izvođenjima, farmaceutske kompozicije sadrže sistem ko-rastvarača. Neki od takvih sistema ko-rastvarača sadrže, na primer, benzil alkohol, nepolarni surfaktant, organski polimer koji se meša sa vodom i vodenu fazu. U određenim izvođenjima, takvi sistemi ko-rastvarača se koriste za hidrofobna jedinjenja. Neograničavajući primer takvog sistema ko-rastvarača je VPD sistem ko-rastvarača, koji je rastvor apsolutnog etanola koji sadrži 3% w/v benzil alkohola, 8% w/v nepolarnog surfaktanta Polisorbata 80™ i 65 % w//v polietilen glikola 300. Proporcije takvih sistema ko-rastvarača mogu značajno varirati bez značajnog menjanja njihovih karakteristika rastvorljivosti i toksičnosti. Štaviše, identitet komponenti ko-rastvarača može da varira: na primer, drugi surfaktanti se mogu koristiti umesto Polisorbata 80™; veličina frakcije polietilen glikola može da varira; drugi biokompatibilni polimeri mogu zameniti polietilen glikol, npr. polivinil pirolidon; i drugi šećeri ili polisaharidi mogu zameniti dekstrozu.
[0174] U određenim izvođenjima, farmaceutske kompozicije se pripremaju za oralnu primenu. U određenim izvođenjima, farmaceutske kompozicije se pripremaju za bukalnu primenu. U određenim izvođenjima, farmaceutska kompozicija se priprema za primenu injekcijom (npr., intravenozno, subkutano, intramuskularno, itd.). U nekim od takvih izvođenja, farmaceutska kompozicija sadrži nosač i formulisana je u vodenom rastvoru, kao što je voda ili fiziološki kompatibilni puferi kao što su Henksov rastvor, Ringerov rastvor ili fiziološki slani pufer. U određenim izvođenjima, uključeni su i drugi sastojci (npr. sastojci koji pomažu u rastvorljivosti ili služe kao konzervansi). U određenim izvođenjima, suspenzije za injekcije se pripremaju korišćenjem odgovarajućih tečnih nosača, agenasa za suspendovanje i slično. Određeni farmaceutske kompozicije za injekcije su predstavljeni u jediničnom doznom obliku, na primer, u ampulama ili u kontejnerima za više doza. Određene farmaceutske kompozicije za injekcije su suspenzije, rastvori ili emulzije u uljanim ili vodenim nosačima i mogu sadržati agense za formulaciju kao što su agensi za suspendovanje, stabilizaciju i/ili disperziju. Određeni rastvarači pogodni za upotrebu u farmaceutskim kompozicijama za injekcije uključuju, ali nisu ograničeni na, lipofilne rastvarače i masna ulja, kao što su susamovo ulje, sintetički estri masnih kiselina, kao što su etil oleat ili trigliceridi, i lipozomi. Vodene suspenzije za injekcije mogu sadržati.
Neograničavajuće otkriće
[0175] Dok su određena jedinjenja, kompozicije i metode opisane ovde opisane sa specifičnošću u skladu sa određenim izvođenjima, sledeći primeri služe samo da ilustruju jedinjenja koja su ovde opisana i nemaju za cilj da ih ograniče.
[0176] Iako spisak sekvenci koji prati ovu dokumentaciju identifikuje svaku sekvencu ili kao "RNK" ili "DNK" prema potrebi, u stvarnosti, te sekvence mogu biti modifikovane bilo kojom kombinacijom hemijskih modifikacija. Stručnjak u ovoj oblasti lako će shvatiti da je takva oznaka kao "RNK" ili "DNK" za opisivanje modifikovanih oligonukleotida, u određenim slučajevima, proizvoljna. Na primer, oligonukleotid koji sadrži nukleozid koji sadrži 2’-OH šećernu grupu-deo i bazu timina se može opisati kao DNK koja ima modifikovani šećer (2'-OH umesto jednog 2'-H od DNK) ili kao RNK koja ima modifikovanu bazu (timin (metilovani uracil) umesto uracila od RNK). Shodno tome, sekvence nukleinskih kiselina koje su ovde date, uključujući, ali ne ograničavajući se na one u listi sekvenci, imaju za cilj da obuhvataju nukleinske kiseline koje sadrže bilo koju kombinaciju prirodne ili modifikovane RNK i/ili DNK, uključujući, ali ne ograničavajući se na takve nukleinske kiseline koje imaju modifikovane nukleobaze. Kao dalji primer i bez ograničenja, oligomerno jedinjenje koje ima sekvencu nukleobaze "ATCGATCG" obuhvata sva oligomerna jedinjenja koja imaju takvu sekvencu nukleobaze, bilo da je modifikovana ili nemodifikovana, uključujući, ali ne ograničavajući se na, takva jedinjenja koja sadrže RNK baze, kao što su ona koja imaju sekvencu "AUCGAUCG" i one koje imaju neke DNK baze i neke RNK baze kao što je "AUCGATCG" i oligomerna jedinjenja koja imaju druge modifikovane nukleobaze, kao što je "ATmCGAUCG", pri čemu mC označava bazu citozina koja sadrži metil grupu na poziciji 5.
[0177] Određena jedinjenja koja su ovde opisana (npr. modifikovani oligonukleotidi) imaju jedan ili više asimetričnih centara i tako dovode do enantiomera, dijastereomera i drugih stereoizomernih konfiguracija koje se mogu definisati, u smislu apsolutne stereohemije, kao (R) ili (S), kao ɑ ili β, kao što su anomere šećera, ili kao (D) ili (L), kao što su aminokiseline, itd. U jedinjenja koja su ovde data su svi takvi mogući izomeri, uključujući njihove racemske i optički čiste oblike, osim ako nije drugačije naznačeno. Slično, svi cis- i trans-izomeri i tautomerni oblici su takođe uključeni osim ako nije drugačije naznačeno. Oligomerna jedinjenja koja su ovde opisana uključuju hiralno čiste ili obogaćene smeše, kao i racemske smeše. Na primer, oligomerna jedinjenja koja imaju mnoštvo fosforotioatnih internukleozidnih veza uključuju takva jedinjenja u kojima je hiralnost fosforotioatnih internukleozidnih veza kontrolisana ili je nasumična.
[0178] Osim ako nije drugačije naznačeno, bilo koje jedinjenje, uključujući oligomerna jedinjenja, ovde opisano uključuje njegovu farmaceutski prihvatljivu so.
[0179] Ovde opisana jedinjenja uključuju varijacije u kojima je jedan ili više atoma zamenjeno sa neradioaktivnim izotopom ili radioaktivnim izotopom naznačenog elementa. Na primer, jedinjenja ovde koja sadrže atome vodonika obuhvataju sve moguće supstitucije deuterijuma za svaki od<1>H atoma vodonika. Izotopske supstitucije obuhvaćene jedinjenjima ovde uključuju, ali nisu ograničene na:<2>H ili<3>H umesto<1>H,<13>C ili<14>C umesto<12>C,<15>N umesto<14>N,<17>O ili<18>O umesto<16>O i<33>S,<34>S, 35 , ili<36>S umesto<32>S. U određenim izvođenjima, neradioaktivne izotopske supstitucije mogu dati nova svojstva oligomernom jedinjenju koja su korisna za upotrebu kao terapijsko ili istraživačko sredstvo. U određenim izvođenjima, radioaktivne izotopske supstitucije mogu učiniti jedinjenje pogodnim za istraživačke ili dijagnostičke svrhe kao što je snimanje.
PRIMERI
Neograničavajuće otkriće
[0180] Dok su određena jedinjenja, kompozicije i metode opisane ovde opisane sa specifičnošću u skladu sa određenim izvođenjima, sledeći primeri služe samo da ilustruju jedinjenja koja su ovde opisana i nemaju za cilj da ih ograniče.
Primer 1: Efekat modifikovanih oligonukleotida koji ciljaju SMN2 in vitro
[0181] Modifikovani oligonukleotidi koji sadrže 2’-MOE ili 2’-NMA modifikacije, prikazani u tabeli ispod, su testirani in vitro za njihove efekte na splajsovanje eksona 7 u SMN2.
[0182] Ćelijska linija fibroblasta pacijenta (GM03813: Cornell Institute) sa spinalnom mišićnom atrofijom (SMA) je postavljena u gustoći od 25.000 ćelija po bunarčiću-jažici i transfektovana je korišćenjem elektroporacije na 120V sa koncentracijom modifikovanog oligonukleotida navedenog u tabeli ispod. Posle perioda tretmana od približno 24 sata, ćelije su isprane sa DPBS puferom i lizirane. RNK je ekstrahovana korišćenjem Qiagen RNeasy prečišćavanja i nivoi mRNK su mereni pomoću qRT-PCR. Nivo SMN2 sa eksonom 7 je meren korišćenjem seta prajmera/sonde hSMN2vd#4_LTS00216_MGB; nivo SMN2 bez eksona 7 je meren korišćenjem hSMN2va#4_LTS00215_MGB; i nivo ukupnog SMN2 je meren korišćenjem HTS4210. Količine SMN2 sa i bez eksona 7 su normalizovane na ukupni SMN2. Rezultati su predstavljeni u tabeli ispod kao nivoi SMN2 sa eksonom 7 (+ ekson 7) u odnosu na ukupni SMN2 i nivoi SMN2 bez eksona 7 (ekson 7) u odnosu na ukupni SMN2. Kao što je ilustrovano u tabeli ispod, tretman sa modifikovanim oligonukleotidom koji sadrži 2'-NMA modifikacije pokazao je veće uključivanje eksona 7 (i smanjeno isključenje eksona 7) u poređenju sa modifikovanim oligonukleotidom koji sadrži 2'-MOE modifikacije u ćelijama fibroblasta pacijenata sa SMA.
Tabela 1: Modifikovani oligonukleotidi koji ciljaju humani SMN2
[0183] Subskripti u gornjoj tabeli: "s" predstavlja fosforotioatnu internukleozidnu vezu, "e" predstavlja 2'MOE modifikovani nukleozid, "n" predstavlja 2'-O-(N-metilacetamid) modifikovani nukleozid. Superskripti: "m" ispred C predstavlja 5-metilcitozin.
Tabela 2: Uključivanje i isključivanje eksona 7
Primer 2: Efekat modifikovanih oligonukleotida koji ciljaju SMN2 kod transgenih miševa
[0184] Tajvanski soj humanih transgenih miševa SMA tipa III (Jackson Laboratory, Bar Harbor, Maine) nemaju mišji SMN i homozigotni su za ljudski SMN2. Ovi miševi su opisani u Hsieh-Li et al., Nature Genet. 24, 66-70 (2000). Svaki miš je primio intracerebroventrikularni (ICV) bolus fiziološkog rastvora (PBS) ili jedinjenje 396443 ili jedinjenje 443305 (videti Primer 1) jednom dana 1. Svaka grupa za tretman se sastojala od 3-4 miša. Miševi su žrtvovani 7 dana kasnije, 7. dana. Ukupna RNK iz kičmene moždine i mozga je ekstrahovana i analizirana pomoću RT-qPCR, kao što je opisano u Primeru 1. Odnosi SMN2 sa eksonom 7 prema ukupnom SMN2 i SMN2 bez eksona 7 do ukupnog SMN2 su postavljeni na 1.0 za kontrolnu grupu tretiranu PBS. Normalizovani rezultati za sve grupe lečenja su predstavljeni u tabeli ispod. Kao što je ilustrovano u tabeli ispod, modifikovani oligonukleotid koji sadrži 2'-NMA modifikacije pokazao je veće uključivanje eksona 7 i manje isključenje eksona 7 od modifikovanog oligonukleotida koji sadrži 2'-MOE modifikacije in vivo.
Tabela 3: Uključivanje i isključivanje eksona 7
Primer 3: Efekat modifikovanih oligonukleotida koji ciljaju SMN2 kod transgenih miševa nakon sistemske primene [0185] Tajvanski humani transgeni miševi tipa III su primili intraperitonealnu (IP) injekciju fiziološkog rastvora (PBS), jedinjenja br. 396443 ili jedinjenja br. 443305 (videti Primer 1) jednom svakih 48 sati za ukupno četiri injekcije. Svaka grupa za tretman se sastojala od 3-4 miša. Miševi su žrtvovani 72 sata nakon poslednje doze. Sakupljena su različita tkiva uključujući jetru, dijafragmu, kvadricepse i srce, a izolovana je ukupna RNK. SMN2 sa i bez eksona 7 i ukupni nivoi SMN2 su mereni pomoću RT-qPCR kao što je opisano u Primerima 1 i 2, osim što su setovi prajmera/sonde za ovaj eksperiment oni opisani u Tiziano, et al., Eur J Humn Genet, 2010. Rezultati su predstavljeni u tabelama ispod. Rezultati pokazuju da je sistemska primena modifikovanog oligonukleotida koji sadrži 2’-NMA modifikacije rezultirala većim uključivanjem eksona 7 i manjim isključenjem eksona 7 nego modifikovanim oligonukleotidom koji sadrži 2’-MOE modifikacije.
Tabela 4: Uključenje i isključenje eksona 7
Tabela 5: ED50vrednosti (mg/kg) izračunate iz rezultata Tabele 4
Primer 4: Efekat modifikovanih oligonukleotida koji ciljaju SMN2 kod transgenih miševa
[0186] Tajvanski transgeni miševi tipa III su primili su ICV bolus fiziološkog rastvora (PBS) ili modifikovani oligonukleotid naveden u tabeli ispod. Svaka grupa za tretman sastojala se od 3-4 miša. Miševi su žrtvovani dve nedelje nakon doze. Sakupljeni su mozak i kičmena moždina svakog miša, i ukupna RNK je izolovana iz svakog tkiva. SMN2 sa i bez eksona 7 i ukupni nivoi SMN2 su mereni pomoću RT-qPCR kao što je opisano u Primerima 1 i 2, i rezultati su predstavljeni u tabelama ispod. Rezultati pokazuju da su modifikovani oligonukleotidi koji sadrže 2'-NMA modifikacije rezultirali većim uključenjem eksona 7 i manjim isključenjem eksona 7 od modifikovanog oligonukleotida koji sadrži 2'MOE modifikacije.
Tabela 6: Modifikovani oligonukleotidi koji ciljaju humani SMN2
[0187] Podskripti u gornjoj tabeli: "s" predstavlja fosforotioatnu internukleozidnu vezu, "e" predstavlja 2'MOE modifikovani nukleozid, "n" predstavlja 2'-O-(N-metilacetamid) modifikovani nukleozid. Superskripti: "m" ispred C predstavlja 5-metilcitozin.
Tabela 7: Uključenje i isključenje eksona 7
Primer 5: Efekat modifikovanih oligonukleotida koji ciljaju SMN2 kod transgenih miševa nakon sistemske primene
[0188] Tajvanski humani transgeni miševi tipa III primili su subkutanu injekciju fiziološkog rastvora (PBS) ili modifikovanog oligonukleotida navedenog u Primeru 4 jednom svakih 48-72 sata u ukupnom iznosu od 10-150 mg/kg nedeljno tokom tri nedelje. Svaka grupa za tretman sastojala se od 4 miša. Miševi su žrtvovani 72 sata nakon poslednje doze. Sakupljena su različita tkiva, i ukupna RNK je izolovana iz svakog tkiva. SMN2 sa i bez eksona 7 i ukupni nivoi SMN2 su mereni pomoću RT-qPCR kao što je opisano u Primerima 1 i 2, i rezultati su predstavljeni u tabelama ispod. Rezultati pokazuju da je sistemska primena modifikovanih oligonukleotida koji sadrže 2'-NMA modifikacije rezultirala većim uključenjem eksona 7 i manjim isključenjem eksona 7 nego modifikovanih oligonukleotida koji sadrži 2'-MOE modifikacije.
Tabela 8: Uključenje i isključenje eksona
Tabela 9: ED50vrednosti (mg/kg) izračunate iz rezultata Tabele 9
Primer 6: Efekat jedinjenja koja sadrže konjugovanu grupu i modifikovani oligonukleotid koji cilja SMN2 kod transgenih miševa nakon sistemske primene
[0189] Tajvanski humani transgeni miševi tipa III su tretirani subkutanom primenom sa 10-300 mg/kg/nedeljno modifikovanog oligonukleotida navedenog u tabeli ispod ili samog fiziološkog rastvora (PBS) tokom tri nedelje i žrtvovani 48-72 sata nakon poslednje doze. Bilo je 3-4 miša po grupi. Ukupna RNK iz različitih tkiva je ekstrahovana i RT-qPCR je izveden kao što je opisano u Primerima 1 i 2. Rezultati predstavljeni u tabeli ispod pokazuju da oligomerno jedinjenje koje sadrži C16 konjugat i 2'-NMA modifikacije pokazuje veće uključivanje eksona 7 i manje isključenje eksona 7 od ostalih testiranih jedinjenja.
Tabela 10: Modifikovani oligonukleotidi koji ciljaju humani SMN2
[0190] Podskripti u gornjoj tabeli: "s" predstavlja fosforotioatnu internukleozidnu vezu, "o" predstavlja fosfatnu internukleozidnu vezu, "d" predstavlja 2'-deoksinukleozid, "e" predstavlja 2'-MOE modifikovani nukleozid, "n" predstavlja 2'-O-(N-metilacetamid) modifikovani nukleozid. Superkripti: "m" ispred C predstavlja 5-metilcistein.
[0191] Struktura C16-HA je:
Tabela 11: Uključenje i isključenje eksona 7
Primer 7: Efekti odgovora na dozu oligomernih jedinjenja koja sadrže lipofilnu konjugovanu grupu in vivo
[0192] Oligomerna jedinjenja opisana u tabeli ispod su komplementarna i za humane i za mišje MALAT-1 transkripte. Njihovi efekti na ekspresiju MALAT-1 su testirani in vivo. Muški miševi sa gojaznošću izazvanom ishranom (DIO) su svaki primili intravensku injekciju, preko repne vene, oligomernog jedinjenja navedenog u tabeli ispod ili samo fiziološkog rastvora jednom nedeljno tokom dve nedelje. Svaka grupa za tretman se sastojala od tri ili četiri miša. Tri dana nakon poslednje injekcije, životinje su žrtvovane. Ekspresija MALAT-1 RNK u srcu analizirana pomoću RT-qPCR i normalizovana na ukupnu RNK korišćenjem tzv. "RiboGreen" (Thermo Fisher Scientific, Carlsbad, CA) je prikazana ispod. Prosečni rezultati za svaku grupu su prikazani kao procenat normalizovanih nivoa MALAT-1 RNK u odnosu na prosečne rezultate za životinje tretirane nosačem. Podaci u nastavku pokazuju da su oligomerna jedinjenja koja sadrže grupu lipofilnog konjugata bila snažnija u srcu u poređenju sa matičnim jedinjenjem koje ne sadrži lipofilnu konjugovanu grupu.
Tabela 12: Ekspresija MALAT-1 in vivo
[0193] Subscript "k" predstavlja cEt modifikovani biciklični deo šećera. Pogledati gornje tabele za dodatne subskrite i superskripte. Struktura "C16-HA-" je prikazana u Primeru 2. Struktura "Ole-HA-" je:
Primer 8: Efekti oligomernih jedinjenja koja sadrže lipofilnu konjugovanu grupu in vivo prateći različite puteve primene
[0194] Efekti Isis brojeva 556089 i 812134 (videti Primer 9) na ekspresiji MALAT-1 su testirani in vivo. Mužjaci divljeg tipa C57bl/6 miševa su primili ili intravensku (IV) injekciju, preko repne vene, ili subkutanu (SC) injekciju Isis br. 556089, Isis br.
812134, ili samo fiziološki rastvor. Svaka grupa za tretman se sastojala od četiri miša. Tri dana nakon injekcije, životinje su žrtvovane. Ekspresija MALAT-1 RNK analizirana iz srca pomoću RT-qPCR i normalizovana na ukupnu RNK korišćenjem RiboGreen-a (Thermo Fisher Scientific, Carlsbad, CA) je prikazana ispod. Prosečni rezultati za svaku grupu su prikazani kao procenat normalizovanih nivoa MALAT-1 RNK u odnosu na prosečne rezultate za tretirane nosače životinja. Podaci u nastavku pokazuju da je oligomerno jedinjenje koje sadrži grupu lipofilnog konjugata bilo snažnije u srcu u poređenju sa matičnim jedinjenjem koje ne sadrži grupu lipofilnu konjugovanu grupu.
Tabela 13: Ekspresija MALAT-1 in vivo
Primer 9: Efekti oligomernih jedinjenja koja sadrže lipofilnu konjugovanu grupu in vivo prateći različite puteve primene
[0195] Jedinjenja navedena u tabeli ispod su komplementarna sa CD36 i testirana su in vivo. Ženke divljeg tipa C57bl/6 miševa su primale ili intravensku injekciju ili intraperitonealnu injekciju jedinjenja ili samo fiziološkog nosača jednom nedeljno tokom tri nedelje. Svaka grupa za tretman sastojala se od četiri miša. Tri dana nakon poslednje injekcije, životinje su žrtvovane. Ekspresija CD36 mRNK analizirana iz srca i kvadricepsa pomoću RT-qPCR i normalizovana na ukupnu RNK korišćenjem RiboGreen-a (Thermo Fisher Scientific, Carlsbad, CA) je prikazana ispod. Prosečni rezultati za svaku grupu su prikazani kao procenat normalizovanih nivoa CD36 RNK u odnosu na prosečne rezultate za životinje tretirane nosačem. Podaci ispod pokazuju da je oligomerno jedinjenje koje sadrži lipofilnu konjugovanu grupu bilo snažnije i u srcu i u kvadricepsima u poređenju sa matičnim jedinjenjem koje ne sadrži lipofilnu konjugovanu grupu.
Tabela 14: Ekspresija CD36 in vivo
[0196] Videti gornje tabele za legendu.
Primer 10: Efekti oligomernih jedinjenja koja sadrže lipofilnu konjugovanu grupu in vivo
[0197] Oligomerna jedinjenja opisana u tabeli ispod su komplementarna transkriptu mitonično distrofne proteinske kinaze (DMPK) i kod ljudi i kod miša. Njihovi efekti na ekspresiju DMPK su testirani in vivo. Svaki divlji tip Balb/c miševa je primio intravensku injekciju oligomernog jedinjenja u dozi navedenoj u tabeli ispod ili samo fiziološki rastvor. Svaka životinja je primala jednu dozu nedeljno tokom 3<1⁄2>nedelje, ukupno 4 doze. Svaka grupa za tretman se sastojala od tri ili četiri miša. Dva dana nakon poslednje doze, životinje su žrtvovane. Ekspresija DMPK mRNK analizirana iz kvadricepsa pomoću RT-qPCR i normalizovana na ukupnu RNK korišćenjem RiboGreen-a (Thermo Fisher Scientific, Carlsbad, CA) je prikazana ispod. Prosečni rezultati za svaku grupu su prikazani kao procenat normalizovanih nivoa DMPK RNK u odnosu na prosečne rezultate za životinje tretirane nosačem. Unos "nd" znači da nema podataka. Podaci u nastavku pokazuju da su oligomerna jedinjenja koja sadrže lipofilno konjugovanu grupu bila snažnija u kvadricepsima u poređenju sa matičnim jedinjenjem koje ne sadrži lipofilno konjugovanu grupu.
Tabela 15: Ekspresija DMPK in vivo
[0198] Videti tabele iznad za legendu. Strukture "Chol-TEG-" i "Toco-TEG-" su prikazane u Primerima 1 i 2, respektivno.
[0199] "HA-Chol" je 2'-modifikacija prikazana u nastavku:
[0200] „HA-C10“ i „HA-C16“ su 2’-modifikacije prikazane u nastavku:
pri čemu n je 1 u supskriptu "HA-C10", i n je 7 u supskriptu "HA-C16".
Primer 11: Efekti oligomernih jedinjenja in vivo
[0201] Oligomerna jedinjenja opisana u tabeli ispod su komplementarna i za humane i za mišje MALAT1 transkripte. Njihovi efekti na ekspresiju MALAT-1 su testirani in vivo. Svaki divlji tip mužjaka C57bl/6 miševa je primio subkutanu injekciju oligomernog jedinjenja u dozi navedenoj u tabeli ispod ili samo nosač fiziološkog rastvora nosač 0, 4. i 10. dana perioda lečenja. Svaka grupa za tretman se sastojala od tri miša. Četiri dana nakon poslednje injekcije, životinje su žrtvovane. Ekspresija MALAT-1 RNK analizirana iz srca pomoću RT-qPCR i normalizovana na ukupnu RNK korišćenjem RiboGreen-a (Thermo Fisher Scientific, Carlsbad, CA) je prikazana ispod. Prosečni rezultati za svaku grupu su prikazani kao procenat normalizovanih nivoa MALAT-1 RNK u odnosu na prosečne rezultate za životinje tretirane nosačem. Podaci u nastavku pokazuju da su jedinjenja koja sadrže lipofilnu konjugovanu grupu bila snažnija u srcu u poređenju sa matičnim jedinjenjem koje ne sadrži lipofilnu konjugovanu grupu.
Tabela 16: Ekspresija MALAT-1 in vivo
[0202] Pogledati tabele iznad za legendu. Struktura "C16-HA-" je prikazana u Primeru 2.
[0203] Strukture "C16-2x-C6-" i "C16-2x-C3-" su:
pri čemu m = 2 u "C16-2x-C6-"; i m = 1 u "C16-2x-C3-";
struktura "C16-C6-" je:
i struktura "C16-C3-Ab-" je:

Claims (18)

Patentni zahtevi
1. Oligomerno jedinjenje koje sadrži modifikovani oligonukleotid koji se sastoji od 14 do 25 povezanih nukleozida, pri čemu je modifikovani oligonukleotid komplementaran sa SMN2 pre-mRNK; i pri čemu najmanje jedan nukleozid modifikovanog oligonukleotida sadrži 2'-O-(N-alkil acetamid) modifikovani šećerni deo.
2. Oligomerno jedinjenje prema patentnom zahtevu 1, pri čemu:
a. svaki od 7 nukleozida modifikovanog oligonukleotida sadrži 2'-O-(N-alkil acetamid) modifikovani šećerni deo;
b. svaki od 8 nukleozida modifikovanog oligonukleotida sadrži 2'-O-(N-alkil acetamid) modifikovani šećerni deo;
c. svaki od 9 nukleozida modifikovanog oligonukleotida sadrži 2'-O-(N-alkil acetamid) modifikovani šećerni deo;
d. svaki od 10 nukleozida modifikovanog oligonukleotida sadrži 2'-O-(N-alkil acetamid) modifikovani šećerni deo; e. svaki od 11 nukleozida modifikovanog oligonukleotida sadrži 2'-O-(N-alkil acetamid) modifikovani šećerni deo;
f. svaki od 12 nukleozida modifikovanog oligonukleotida sadrži 2'-O-(N-alkil acetamid) modifikovani šećerni deo;
g. svaki od 13 nukleozida modifikovanog oligonukleotida sadrži 2'-O-(N-alkil acetamid) modifikovani šećerni deo; h. svaki od 14 nukleozida modifikovanog oligonukleotida sadrži 2'-O-(N-alkil acetamid) modifikovani šećerni deo;
i. svaki od 15 nukleozida modifikovanog oligonukleotida sadrži 2'-O-(N-alkil acetamid) modifikovani šećerni deo;
j. svaki od 16 nukleozida modifikovanog oligonukleotida sadrži 2'-O-(N-alkil acetamid) modifikovani šećerni deo;
k. svaki od 17 nukleozida modifikovanog oligonukleotida sadrži 2'-O-(N-alkil acetamid) modifikovani šećerni deo;
l. svaki od 18 nukleozida modifikovanog oligonukleotida sadrži 2'-O-(N-alkil acetamid) modifikovani šećerni deo; m. svaki od 19 nukleozida modifikovanog oligonukleotida sadrži 2'-O-(N-alkil acetamid) modifikovani šećerni deo; ili n. svaki od 20 nukleozida modifikovanog oligonukleotida sadrži 2'-O-(N-alkil acetamid) modifikovani šećerni deo.
3. Oligomerno jedinjenje prema patentnom zahtevu 1 ili patentnom zahtevu 2, pri čemu:
a. svaki od 2'-O-(N-alkil acetamid) modifikovanih delova šećera je 2'-O-(N-metil acetamid) modifikovanog šećera; ili b. svaki šećerni deo svakog nukleozida modifikovanog oligonukleotida je 2'-O-(N-alkil acetamid) modifikovani šećerni deo; ili
c. svaki šećerni deo svakog nukleozida modifikovanog oligonukleotida je 2'-O-(N-metil acetamid) modifikovani šećerni deo.
4. Oligomerno jedinjenje prema bilo kojem od patentnih zahteva od 1 do 3, pri čemu:
a. modifikovani oligonukleotid se sastoji od: 16-23 povezanih nukleozida; ili
b. modifikovani oligonukleotid se sastoji od: 18-20 povezanih nukleozida.
5. Oligomerno jedinjenje prema bilo kojem od patentnih zahteva od 1 do 4, pri čemu:
a. modifikovani oligonukleotid se sastoji od 16 nukleozida;
b. modifikovani oligonukleotid se sastoji od 17 nukleozida;
c. modifikovani oligonukleotid se sastoji od 18 nukleozida;
d. modifikovani oligonukleotid se sastoji od 19 nukleozida; ili
e. modifikovani oligonukleotid se sastoji od 20 nukleozida.
6. Oligomerno jedinjenje prema bilo kojem od patentnih zahteva od 1 do 5, pri čemu svaka internukleozidna veza modifikovanog oligonukleotida je izabrana između fosforotioatne internukleozidne veze i fosfodiestarske internukleozidne veze, opciono pri čemu:
a. modifikovani oligonukleotid ima 5 fosfodiestarskih internukleozidnih veza;
b. modifikovani oligonukleotid ima 6 fosfodiestarskih internukleozidnih veza; ili
c. modifikovani oligonukleotid ima najmanje 6 fosfodiestarskih internukleozidnih veza.
7. Oligomerno jedinjenje prema bilo kojem od patentnih zahteva od 1 do 6, pri čemu modifikovani oligonukleotid sadrži najmanje jednu modifikovanu nukleobazu, opciono pri čemu modifikovani oligonukleotid sadrži najmanje jedan 5-metil citozin.
8. Oligomerno jedinjenje prema bilo kojem od patentnih zahteva od 1 do 7, pri čemu:
a. modifikovani oligonukleotid je najmanje 70% komplementaran sa SMN2 pre-mRNK;
b. modifikovani oligonukleotid je najmanje 75% komplementaran sa SMN2 pre-mRNK;
c. modifikovani oligonukleotid je najmanje 80% komplementaran sa SMN2 pre-mRNK;
d. modifikovani oligonukleotid je najmanje 85% komplementaran sa SMN2 pre-mRNK;
e. modifikovani oligonukleotid je najmanje 90% komplementaran sa SMN2 pre-mRNK;
f. modifikovani oligonukleotid je najmanje 95% komplementaran sa SMN2 pre-mRNK; ili
g. modifikovani oligonukleotid je 100% komplementaran sa SMN2 pre-mRNK.
9. Oligomerno jedinjenje prema bilo kojem od patentnih zahteva od 1 do 8, pri čemu oligomerno jedinjenje sadrži konjugovanu grupu, opciono pri čemu konjugovana grupa sadrži lipidnu ili lipofilnu grupu, opciono pri čemu:
a. lipidna ili lipofilna grupa je izabrana između: holesterola, C10-C26zasićene masne kiseline, C10-C26nezasićene masne kiseline, C10-C26alkila, triglicerida, tokoferola ili holne kiseline;
b. lipidna ili lipofilna grupa je zasićeni ugljovodonični lanac ili nezasićeni ugljovodonični lanac;
c. lipidna ili lipofilna grupa je C16alkil; ili
d. lipidna ili lipofilna grupa je zasićeni C16
10. Oligomerno jedinjenje prema bilo kojem od patentnih zahteva od 1 do 9, pri čemu je modifikovani oligonukleotid komplementaran sa ISS-N1 od SMN2 pre-mRNK.
11. Oligomerno jedinjenje prema bilo kojem od patentnih zahteva od 1 do 10, pri čemu sekvenca nukleobaze modifikovanog oligonukleotida sadrži sekvencu izabranu od SEK ID BRa 1, 2 ili 3, kao što je gde se sekvenca nukleobaze modifikovanog oligonukleotida sastoji od SEK ID BR: 3.
12. Oligomerno jedinjenje prema bilo kojem od patentnih zahteva od 1 do 11, pri čemu je oligomerno jedinjenje jednolančano.
13. Modifikovani oligonukleotid koji se sastoji od 18 povezanih nukleozida i ima nukleobaznu sekvencu nukleobaze SEK ID BR: 3, pri čemu svaki nukleozid modifikovanog oligonukleotida sadrži 2'-O-(N-metil acetamid) modifikovani šećerni deo, i pri čemu je svaka internukleozidna veza modifikovanog oligonukleotida izabrana između fosforotioatne internukleozidne veze i fosfodiestarske internukleozidne veze.
14. Modifikovani oligonukleotid koji se sastoji od 18 do 20 povezanih nukleozida koji sadrži sekvencu nukleobaze SEK ID BR: 1, pri čemu svaki od 18 nukleozida modifikovanog oligonukleotida sadrži 2'-O-(N-metil acetamid) modifikovani šećerni deo, i pri čemu je svaka internukleozidna veza modifikovanog oligonukleotida izabrana između fosforotioatne internukleozidne veze i fosfodiestarske internukleozidne veze.
15. Oligomerno jedinjenje prema bilo kojem od patentnih zahteva od 1 do 12, ili modifikovani oligonukleotid prema patentnom zahtevu 13 ili zahtevu 14, pri čemu je modifikovani oligonukleotid natrijumova so ili kalijumova so.
16. Farmaceutska kompozicija koja sadrži oligomerno jedinjenje prema bilo kojem od patentnih zahteva od 1 do 12 ili 15, ili modifikovani oligonukleotid prema bilo kojem od patentnih zahteva od 13 do 15, i najmanje jedan farmaceutski prihvatljiv nosač ili razblaživač.
17. Farmaceutska kompozicija prema patentnom zahtevu 16, pri čemu kompozicija sadrži farmaceutski prihvatljiv razblaživač, i farmaceutski prihvatljiv razblaživač je fiziološki rastvor puferovan fosfatom (PBS), opciono pri čemu se farmaceutska kompozicija sastoji od jedinjenja i PBS.
18. Oligomerno jedinjenje prema bilo kojem od patentnih zahteva od 1 do 12, ili 15, modifikovani oligonukleotid prema bilo kojem od patentnih zahteva od 13 do 15, ili farmaceutska kompozicija prema patentnom zahtevu 16 ili zahtevu 17, za upotrebu u metodi lečenja Spinalne Mišićne Atrofije kod pacijenta.
Izdaje i štampa: Zavod za intelektualnu svojinu, Beograd, Kneginje Ljubice 5
RS20221176A 2016-07-15 2017-07-17 Jedinjenja i metode za modulaciju smn2 RS63928B1 (sr)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US201662363195P 2016-07-15 2016-07-15
EP17828625.8A EP3484524B1 (en) 2016-07-15 2017-07-17 Compounds and methods for modulation of smn2
PCT/US2017/042463 WO2018014041A2 (en) 2016-07-15 2017-07-17 Compounds and methods for modulation of smn2

Publications (1)

Publication Number Publication Date
RS63928B1 true RS63928B1 (sr) 2023-02-28

Family

ID=60952211

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
RS20221176A RS63928B1 (sr) 2016-07-15 2017-07-17 Jedinjenja i metode za modulaciju smn2

Country Status (27)

Country Link
US (3) US20190323006A1 (sr)
EP (2) EP3484524B1 (sr)
JP (3) JP7197463B2 (sr)
KR (1) KR102556825B1 (sr)
CN (1) CN109844115B (sr)
AU (2) AU2017297622A1 (sr)
BR (1) BR112019000356A2 (sr)
CA (1) CA3030864A1 (sr)
CL (2) CL2019000115A1 (sr)
CO (1) CO2019001236A2 (sr)
DK (1) DK3484524T3 (sr)
ES (1) ES2935658T3 (sr)
FI (1) FI3484524T3 (sr)
HR (1) HRP20221378T1 (sr)
HU (1) HUE060831T2 (sr)
IL (2) IL308256A (sr)
LT (1) LT3484524T (sr)
MX (1) MX2019000619A (sr)
NZ (1) NZ750713A (sr)
PE (1) PE20190513A1 (sr)
PL (1) PL3484524T3 (sr)
PT (1) PT3484524T (sr)
RS (1) RS63928B1 (sr)
SG (1) SG11201900238UA (sr)
SI (1) SI3484524T1 (sr)
SM (1) SMT202200489T1 (sr)
WO (1) WO2018014041A2 (sr)

Families Citing this family (14)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US9885040B2 (en) 2013-04-12 2018-02-06 The Curators Of The University Of Missouri SMN2 element 1 antisense compositions and methods and uses thereof
WO2016040748A1 (en) 2014-09-12 2016-03-17 Ionis Pharmaceuticals, Inc. Compositions and methods for detection of smn protein in a subject and treatment of a subject
US10053465B2 (en) 2015-08-26 2018-08-21 Incyte Corporation Pyrrolopyrimidine derivatives as TAM inhibitors
LT3436461T (lt) 2016-03-28 2024-03-12 Incyte Corporation Pirolotriazino junginiai kaip tam inhibitoriai
CN111386273B (zh) 2017-09-27 2024-06-14 因赛特公司 可用作tam抑制剂的吡咯并三嗪衍生物的盐
CN113164398B (zh) 2018-06-29 2023-11-03 因赛特公司 Axl/mer抑制剂的制剂
MX2022000441A (es) * 2019-07-19 2022-03-25 Biogen Ma Inc Metodos para tratar o prevenir la atrofia muscular espinal.
WO2021030766A1 (en) * 2019-08-15 2021-02-18 Biogen Ma Inc. Combination therapy for spinal muscular atrophy
JP7737667B2 (ja) * 2019-09-18 2025-09-11 国立大学法人東京科学大学 核酸複合体
TW202140788A (zh) * 2020-02-28 2021-11-01 美商Ionis製藥公司 用於調節ｓｃｎ１ａ表現之化合物及方法
AR121446A1 (es) * 2020-02-28 2022-06-08 Ionis Pharmaceuticals Inc Compuestos y métodos para modular smn2
WO2021178779A1 (en) 2020-03-06 2021-09-10 Incyte Corporation Combination therapy comprising axl/mer and pd-1/pd-l1 inhibitors
CN117751190A (zh) * 2021-04-22 2024-03-22 美国微哲默理有限责任公司 用于调节sos基因表达的组合物和方法
FR3128873B1 (fr) 2021-11-10 2026-01-16 Biophytis Phytoecdysones et/ou dérivés de 20-hydroxyecdysone en combinaison avec un principe actif visant à restaurer l’expression SMN pour leur utilisation dans le traitement de l’amyotrophie spinale

Family Cites Families (124)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US3687808A (en) 1969-08-14 1972-08-29 Univ Leland Stanford Junior Synthetic polynucleotides
US5367066A (en) 1984-10-16 1994-11-22 Chiron Corporation Oligonucleotides with selectably cleavable and/or abasic sites
FR2575751B1 (fr) 1985-01-08 1987-04-03 Pasteur Institut Nouveaux nucleosides de derives de l'adenosine, leur preparation et leurs applications biologiques
US4751219A (en) 1985-02-05 1988-06-14 Nederlandse Centrale Organisatie Voor Toegepast-Natuur-Wetenschappelijk Onderzoek Synthetic glycolipides, a process for the preparation thereof and several uses for these synthetic glycolipides
US5185444A (en) 1985-03-15 1993-02-09 Anti-Gene Deveopment Group Uncharged morpolino-based polymers having phosphorous containing chiral intersubunit linkages
US5166315A (en) 1989-12-20 1992-11-24 Anti-Gene Development Group Sequence-specific binding polymers for duplex nucleic acids
US5034506A (en) 1985-03-15 1991-07-23 Anti-Gene Development Group Uncharged morpholino-based polymers having achiral intersubunit linkages
US5506337A (en) 1985-03-15 1996-04-09 Antivirals Inc. Morpholino-subunit combinatorial library and method
EP0366685B1 (en) 1987-06-24 1994-10-19 Howard Florey Institute Of Experimental Physiology And Medicine Nucleoside derivatives
US5175273A (en) 1988-07-01 1992-12-29 Genentech, Inc. Nucleic acid intercalating agents
US5134066A (en) 1989-08-29 1992-07-28 Monsanto Company Improved probes using nucleosides containing 3-dezauracil analogs
US5130302A (en) 1989-12-20 1992-07-14 Boron Bilogicals, Inc. Boronated nucleoside, nucleotide and oligonucleotide compounds, compositions and methods for using same
US5457191A (en) 1990-01-11 1995-10-10 Isis Pharmaceuticals, Inc. 3-deazapurines
US5459255A (en) 1990-01-11 1995-10-17 Isis Pharmaceuticals, Inc. N-2 substituted purines
US6005087A (en) 1995-06-06 1999-12-21 Isis Pharmaceuticals, Inc. 2'-modified oligonucleotides
US5681941A (en) 1990-01-11 1997-10-28 Isis Pharmaceuticals, Inc. Substituted purines and oligonucleotide cross-linking
US5859221A (en) 1990-01-11 1999-01-12 Isis Pharmaceuticals, Inc. 2'-modified oligonucleotides
US5587470A (en) 1990-01-11 1996-12-24 Isis Pharmaceuticals, Inc. 3-deazapurines
US5614617A (en) 1990-07-27 1997-03-25 Isis Pharmaceuticals, Inc. Nuclease resistant, pyrimidine modified oligonucleotides that detect and modulate gene expression
US5432272A (en) 1990-10-09 1995-07-11 Benner; Steven A. Method for incorporating into a DNA or RNA oligonucleotide using nucleotides bearing heterocyclic bases
US5948903A (en) 1991-01-11 1999-09-07 Isis Pharmaceuticals, Inc. Synthesis of 3-deazapurines
US5594121A (en) 1991-11-07 1997-01-14 Gilead Sciences, Inc. Enhanced triple-helix and double-helix formation with oligomers containing modified purines
JP3739785B2 (ja) 1991-11-26 2006-01-25 アイシス ファーマシューティカルズ，インコーポレイティド 修飾されたピリミジンを含有するオリゴマーを使用する増強された三重らせんおよび二重らせんの成形
TW393513B (en) 1991-11-26 2000-06-11 Isis Pharmaceuticals Inc Enhanced triple-helix and double-helix formation with oligomers containing modified pyrimidines
US5484908A (en) 1991-11-26 1996-01-16 Gilead Sciences, Inc. Oligonucleotides containing 5-propynyl pyrimidines
US5434257A (en) 1992-06-01 1995-07-18 Gilead Sciences, Inc. Binding compentent oligomers containing unsaturated 3',5' and 2',5' linkages
US5502177A (en) 1993-09-17 1996-03-26 Gilead Sciences, Inc. Pyrimidine derivatives for labeled binding partners
US5457187A (en) 1993-12-08 1995-10-10 Board Of Regents University Of Nebraska Oligonucleotides containing 5-fluorouracil
US5596091A (en) 1994-03-18 1997-01-21 The Regents Of The University Of California Antisense oligonucleotides comprising 5-aminoalkyl pyrimidine nucleotides
US5525711A (en) 1994-05-18 1996-06-11 The United States Of America As Represented By The Secretary Of The Department Of Health And Human Services Pteridine nucleotide analogs as fluorescent DNA probes
US6908903B1 (en) 1994-12-07 2005-06-21 Aletheon Pharmaceuticals, Inc. Cluster clearing agents
US6172045B1 (en) 1994-12-07 2001-01-09 Neorx Corporation Cluster clearing agents
WO1997020563A1 (en) 1995-11-22 1997-06-12 The Johns-Hopkins University Ligands to enhance cellular uptake of biomolecules
US20030119724A1 (en) 1995-11-22 2003-06-26 Ts`O Paul O.P. Ligands to enhance cellular uptake of biomolecules
CN1231675A (zh) 1996-09-26 1999-10-13 味之素株式会社 修饰的生理活性蛋白及含有该蛋白的药物组合物
USRE44779E1 (en) 1997-03-07 2014-02-25 Santaris Pharma A/S Bicyclonucleoside and oligonucleotide analogues
JP3756313B2 (ja) 1997-03-07 2006-03-15 武 今西 新規ビシクロヌクレオシド及びオリゴヌクレオチド類縁体
US6770748B2 (en) 1997-03-07 2004-08-03 Takeshi Imanishi Bicyclonucleoside and oligonucleotide analogue
US7572582B2 (en) 1997-09-12 2009-08-11 Exiqon A/S Oligonucleotide analogues
DE69829760T3 (de) 1997-09-12 2016-04-14 Exiqon A/S Bi- und tri-zyklische - nukleosid, nukleotid und oligonukleotid-analoga
US6794499B2 (en) 1997-09-12 2004-09-21 Exiqon A/S Oligonucleotide analogues
US6300319B1 (en) 1998-06-16 2001-10-09 Isis Pharmaceuticals, Inc. Targeted oligonucleotide conjugates
AU776362B2 (en) 1999-05-04 2004-09-09 Roche Innovation Center Copenhagen A/S L-ribo-LNA analogues
US6525191B1 (en) 1999-05-11 2003-02-25 Kanda S. Ramasamy Conformationally constrained L-nucleosides
US6383812B1 (en) 1999-05-28 2002-05-07 Academia Sinica Anti liver disease drug R-YEEE and method of synthesizing branched galactose-terminal glycoproteins
US8541548B2 (en) 1999-06-07 2013-09-24 Arrowhead Madison Inc. Compounds and methods for reversible modification of biologically active molecules
US20080281041A1 (en) 1999-06-07 2008-11-13 Rozema David B Reversibly Masked Polymers
US6147200A (en) 1999-08-19 2000-11-14 Isis Pharmaceuticals, Inc. 2'-O-acetamido modified monomers and oligomers
US7491805B2 (en) 2001-05-18 2009-02-17 Sirna Therapeutics, Inc. Conjugates and compositions for cellular delivery
WO2002043771A2 (en) 2000-12-01 2002-06-06 Cell Works Inc. Conjugates of glycosylated/galactosylated peptide
WO2002087541A1 (en) 2001-04-30 2002-11-07 Protiva Biotherapeutics Inc. Lipid-based formulations for gene transfer
US20030175906A1 (en) 2001-07-03 2003-09-18 Muthiah Manoharan Nuclease resistant chimeric oligonucleotides
US20030158403A1 (en) 2001-07-03 2003-08-21 Isis Pharmaceuticals, Inc. Nuclease resistant chimeric oligonucleotides
US20100240730A1 (en) 2002-02-20 2010-09-23 Merck Sharp And Dohme Corp. RNA Interference Mediated Inhibition of Gene Expression Using Chemically Modified Short Interfering Nucleic Acid (siNA)
EP1543019A2 (en) 2002-09-11 2005-06-22 Santaris Pharma A/S Modified pna molecules
EP1562971B1 (en) 2002-11-05 2014-02-12 Isis Pharmaceuticals, Inc. Polycyclic sugar surrogate-containing oligomeric compounds and compositions for use in gene modulation
AU2003295387A1 (en) 2002-11-05 2004-06-03 Isis Parmaceuticals, Inc. Modified oligonucleotides for use in rna interference
US7723509B2 (en) 2003-04-17 2010-05-25 Alnylam Pharmaceuticals IRNA agents with biocleavable tethers
CA2522637C (en) 2003-04-17 2014-01-21 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Modified irna agents
US7851615B2 (en) 2003-04-17 2010-12-14 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Lipophilic conjugated iRNA agents
WO2004101619A1 (ja) 2003-05-15 2004-11-25 Shionogi Co., Ltd. 機能的糖ペプチドの合理的設計および合成
WO2004106356A1 (en) 2003-05-27 2004-12-09 Syddansk Universitet Functionalized nucleotide derivatives
ES2382807T3 (es) 2003-08-28 2012-06-13 Takeshi Imanishi Nuevos ácidos nucleicos artificiales del tipo de enlace N-O con reticulación
AU2004274021B2 (en) 2003-09-18 2009-08-13 Isis Pharmaceuticals, Inc. 4'-thionucleosides and oligomeric compounds
CA2576233C (en) 2004-08-10 2016-03-15 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Conjugate comprising an antagomir and a ligand
WO2006031461A2 (en) 2004-09-09 2006-03-23 Isis Pharmaceuticals, Inc. Pyrrolidinyl groups for attaching conjugates to oligomeric compounds
US20060148740A1 (en) 2005-01-05 2006-07-06 Prosensa B.V. Mannose-6-phosphate receptor mediated gene transfer into muscle cells
EP1841867A1 (en) 2005-01-24 2007-10-10 Avaris AB COMPLEX CONTAINING SiRNA, ShRNA OR ANTISENSE MOLECULE AND FUNCTIONAL ENTITY, FOR IMPROVED SPECIFICITY AND DELIVERY
US7569686B1 (en) 2006-01-27 2009-08-04 Isis Pharmaceuticals, Inc. Compounds and methods for synthesis of bicyclic nucleic acid analogs
ES2516815T3 (es) 2006-01-27 2014-10-31 Isis Pharmaceuticals, Inc. Análogos de ácidos nucleicos bicíclicos modificados en la posición 6
US7666854B2 (en) 2006-05-11 2010-02-23 Isis Pharmaceuticals, Inc. Bis-modified bicyclic nucleic acid analogs
US7547684B2 (en) 2006-05-11 2009-06-16 Isis Pharmaceuticals, Inc. 5′-modified bicyclic nucleic acid analogs
BRPI0715375A2 (pt) 2006-08-18 2013-06-18 Hoffmann La Roche policonjugados para distribuiÇço in vivo de polinucleotÍdeos
US8658211B2 (en) 2006-08-18 2014-02-25 Arrowhead Madison Inc. Polyconjugates for in vivo delivery of polynucleotides
US20100190837A1 (en) 2007-02-15 2010-07-29 Isis Pharmaceuticals, Inc. 5'-Substituted-2-F' Modified Nucleosides and Oligomeric Compounds Prepared Therefrom
EP2604284A1 (en) 2007-02-16 2013-06-19 KTB Tumorforschungsgesellschaft mbH Receptor And Antigen Targeted Prodrug
US8877917B2 (en) 2007-04-23 2014-11-04 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Glycoconjugates of RNA interference agents
AU2008260277C1 (en) 2007-05-30 2014-04-17 Isis Pharmaceuticals, Inc. N-substituted-aminomethylene bridged bicyclic nucleic acid analogs
WO2008154401A2 (en) 2007-06-08 2008-12-18 Isis Pharmaceuticals, Inc. Carbocyclic bicyclic nucleic acid analogs
EP2176280B2 (en) 2007-07-05 2015-06-24 Isis Pharmaceuticals, Inc. 6-disubstituted bicyclic nucleic acid analogs
JP5572090B2 (ja) 2007-08-15 2014-08-13 アイシス ファーマシューティカルズ， インコーポレーテッド テトラヒドロピラン核酸類似体
WO2009067647A1 (en) 2007-11-21 2009-05-28 Isis Pharmaceuticals, Inc. Carbocyclic alpha-l-bicyclic nucleic acid analogs
CA2930393C (en) 2007-12-04 2022-11-29 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Carbohydrate conjugates as delivery agents for oligonucleotides
AU2009241591A1 (en) 2008-01-31 2009-11-05 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Optimized methods for delivery of DSRNA targeting the PCSK9 gene
WO2009100320A2 (en) 2008-02-07 2009-08-13 Isis Pharmaceuticals, Inc. Bicyclic cyclohexitol nucleic acid analogs
WO2009120878A2 (en) 2008-03-26 2009-10-01 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Non-natural ribonucleotides, and methods of use thereof
AU2009234266B2 (en) 2008-04-11 2015-08-06 Tekmira Pharmaceuticals Corporation Site-specific delivery of nucleic acids by combining targeting ligands with endosomolytic components
CA2737661C (en) 2008-09-23 2019-08-20 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Chemical modifications of monomers and oligonucleotides with cycloaddition
EP2356129B1 (en) 2008-09-24 2013-04-03 Isis Pharmaceuticals, Inc. Substituted alpha-l-bicyclic nucleosides
CA3033577A1 (en) 2008-11-10 2010-05-14 Arbutus Biopharma Corporation Novel lipids and compositions for the delivery of therapeutics
WO2010088537A2 (en) 2009-01-29 2010-08-05 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Improved lipid formulation
WO2010129709A1 (en) 2009-05-05 2010-11-11 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Lipid compositions
SMT201800499T1 (it) 2009-06-10 2018-11-09 Arbutus Biopharma Corp Formulazione lipidica migliorata
NZ597504A (en) 2009-06-15 2013-10-25 Alnylam Pharmaceuticals Inc Lipid formulated dsrna targeting the pcsk9 gene
EP2462153B1 (en) 2009-08-06 2015-07-29 Isis Pharmaceuticals, Inc. Bicyclic cyclohexose nucleic acid analogs
US8552163B2 (en) 2009-09-25 2013-10-08 Johns Hopkins University Liver-targeting agents and their synthesis
TWI391144B (zh) 2009-10-26 2013-04-01 Iner Aec Executive Yuan 一種定量肝殘餘功能的檢驗方法與其新穎肝受體造影檢驗藥劑
TWI388338B (zh) 2009-10-26 2013-03-11 Iner Aec Executive Yuan 對聚合醣鏈進行放射標誌以作為肝受體造影劑之方法
WO2011072290A2 (en) 2009-12-11 2011-06-16 The Regents Of The University Of Michigan Targeted dendrimer-drug conjugates
US9198972B2 (en) 2010-01-28 2015-12-01 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Monomers and oligonucleotides comprising cycloaddition adduct(s)
AU2011219941C1 (en) 2010-02-24 2015-05-07 Arrowhead Pharmaceuticals, Inc. Compositions for targeted delivery of siRNA
US20130109817A1 (en) 2010-03-26 2013-05-02 Mersana Therapeutics, Inc. Modified Polymers for Delivery of Polynucleotides, Method of Manufacture, and Methods of Use Thereof
US8349308B2 (en) 2010-03-26 2013-01-08 Mersana Therapeutics, Inc. Modified polymers for delivery of polynucleotides, method of manufacture, and methods of use thereof
US9102938B2 (en) 2010-04-01 2015-08-11 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. 2′ and 5′ modified monomers and oligonucleotides
WO2011133876A2 (en) 2010-04-22 2011-10-27 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Oligonucleotides comprising acyclic and abasic nucleosides and analogs
WO2011159836A2 (en) * 2010-06-15 2011-12-22 Isis Pharmaceuticals, Inc. Compounds and methods for modulating interaction between proteins and target nucleic acids
WO2011163121A1 (en) 2010-06-21 2011-12-29 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Multifunctional copolymers for nucleic acid delivery
JP5981428B2 (ja) * 2010-07-19 2016-08-31 アイオーニス ファーマシューティカルズ， インコーポレーテッドＩｏｎｉｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ，Ｉｎｃ． 筋緊張性ジストロフィー・プロテインキナーゼ（ｄｍｐｋ）発現の調整
CA2812046A1 (en) 2010-09-15 2012-03-22 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Modified irna agents
US8987377B2 (en) 2010-11-19 2015-03-24 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Poly(amide) polymers for the delivery of oligonucleotides
US8501930B2 (en) 2010-12-17 2013-08-06 Arrowhead Madison Inc. Peptide-based in vivo siRNA delivery system
AU2011343664B2 (en) 2010-12-17 2015-10-08 Arrowhead Pharmaceuticals, Inc. Galactose cluster-pharmacokinetic modulator targeting moiety for siRNA
BR122020024388B1 (pt) 2010-12-29 2021-09-21 F. Hoffmann-La Roche Ag Oligonucleotídeo e composição farmacêutica
US9315813B2 (en) 2011-06-21 2016-04-19 Alnylam Pharmaceuticals, Inc Compositions and methods for inhibition of expression of apolipoprotein C-III (APOC3) genes
BR112014004585A2 (pt) 2011-08-26 2017-06-13 Arrowhead Res Corp polímeros de poli(éster vinílico) para liberação de ácido nucleico in vivo
EP3453761A1 (en) 2011-08-29 2019-03-13 Ionis Pharmaceuticals, Inc. Oligomer-conjugate complexes and their use
WO2013075035A1 (en) 2011-11-18 2013-05-23 Alnylam Pharmaceuticals Rnai agents, compositions and methods of use thereof for treating transthyretin (ttr) associated diseases
TWI595885B (zh) 2012-05-02 2017-08-21 喜納製藥公司 包含四ｇａｌｎａｃ之新穎結合物及傳送寡核苷酸之方法
EP2844261B1 (en) 2012-05-02 2018-10-17 Sirna Therapeutics, Inc. SHORT INTERFERING NUCLEIC ACID (siNA) COMPOSITIONS
US9926559B2 (en) 2013-01-09 2018-03-27 Biogen Ma Inc. Compositions and methods for modulation of SMN2 splicing in a subject
KR20160002977A (ko) 2013-05-01 2016-01-08 아이시스 파마수티컬즈 인코포레이티드 조성물 및 방법
US10174328B2 (en) * 2013-10-04 2019-01-08 Translate Bio Ma, Inc. Compositions and methods for treating amyotrophic lateral sclerosis
WO2015106128A2 (en) 2014-01-09 2015-07-16 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. MODIFIED RNAi AGENTS
EP3797780B1 (en) 2014-04-17 2022-09-14 Biogen MA Inc. Compositions and methods for modulation of smn2 splicing in a subject

Also Published As

Publication number Publication date
CN109844115B (zh) 2023-06-30
JP2023027285A (ja) 2023-03-01
HUE060831T2 (hu) 2023-04-28
PL3484524T3 (pl) 2023-03-20
IL264216B2 (en) 2024-04-01
PE20190513A1 (es) 2019-04-10
CO2019001236A2 (es) 2019-02-19
JP2019525918A (ja) 2019-09-12
SMT202200489T1 (it) 2023-01-13
DK3484524T3 (da) 2022-12-12
CA3030864A1 (en) 2018-01-18
SG11201900238UA (en) 2019-02-27
US20220073914A1 (en) 2022-03-10
EP3484524B1 (en) 2022-11-09
CL2019003820A1 (es) 2020-07-10
BR112019000356A2 (pt) 2019-04-16
IL308256A (en) 2024-01-01
IL264216B1 (en) 2023-12-01
HRP20221378T1 (hr) 2023-01-06
CN109844115A (zh) 2019-06-04
EP3484524A4 (en) 2020-05-20
US20250179493A1 (en) 2025-06-05
IL264216A (en) 2019-02-28
JP2025063137A (ja) 2025-04-15
ES2935658T3 (es) 2023-03-09
US20190323006A1 (en) 2019-10-24
NZ750713A (en) 2025-12-19
AU2024205862A1 (en) 2024-09-12
LT3484524T (lt) 2022-12-27
EP3484524A2 (en) 2019-05-22
SI3484524T1 (sl) 2023-01-31
KR20190027907A (ko) 2019-03-15
MX2019000619A (es) 2019-08-01
EP4206213A1 (en) 2023-07-05
KR102556825B1 (ko) 2023-07-17
PT3484524T (pt) 2023-02-15
JP7197463B2 (ja) 2022-12-27
WO2018014041A2 (en) 2018-01-18
CL2019000115A1 (es) 2019-06-21
AU2017297622A1 (en) 2019-03-07
WO2018014041A3 (en) 2019-04-18
FI3484524T3 (fi) 2023-01-13

Similar Documents

Publication Publication Date Title
EP3484524B1 (en) Compounds and methods for modulation of smn2
CA3038891C (en) COMPOUNDS AND METHODS FOR REDUCING THE EXPRESSION OF TAU
US20220081689A1 (en) Compounds and Methods for Use in Dystrophin Transcript
CN112423767A (zh) 用于减少atxn2表达的化合物和方法
AU2017357760A1 (en) Compounds and methods for reducing ATXN3 expression
WO2020061497A1 (en) Compositions and methods for modulation of lmna expression
US20210315918A1 (en) Compounds and Methods for Modulation of Transcript Processing
AU2017205462A1 (en) Methods for reducing LRRK2 expression
HK40008058B (en) Compounds and methods for modulation of smn2
HK40008058A (en) Compounds and methods for modulation of smn2
HK40107010A (en) Compounds and methods for reducing tau expression
HK40116398A (en) Compounds and methods for reducing snca expression
HK40011819B (en) Compounds and methods for reducing tau expression
HK40011819A (en) Compounds and methods for reducing tau expression