RS63467B1 - Cgrp antagonistički peptidi - Google Patents

Description

Opis

OBLAST TEHNIKE

[0001] Ovo otkriće se odnosi na CGRP antagonističke peptide, kao i na srodne kompozicije i postupke.

POZADINA PRONALASKA

[0002] Migrena je iscrpljujuće stanje koje karakterišu rekurentni napadi često snažne pulsirajuće glavobolje, obično istovremeno sa mučninom i osetljivošću na svetlo i zvuk. Migrenama često prethodi fokalni neurološki simptom koji se naziva aura. Trenutni standard za lečenje migrene je upotreba lekova klase triptana. Međutim, kod približno 30% pacijenata ne postiže se olakšanje sa triptanima. Pored toga, triptani su kontraindikovani kod osoba sa migrenom sa velikim rizikom od kardiovaskularnih bolesti (npr. dijabetes, gojaznost i hiperholesterolemija). Tako, i dalje postoji potreba za novim terapeutskim modelima za lečenje migrene.

[0003] Peptid srodan kalcitonin genu (calcitonin gene related peptide, CGRP) predstavlja peptid dužine 37 aminokiselina dobijen alternativnim splajsovanjem kalcitonin gena. CGRP učestvuje u mnogim fiziološkim i patofiziološkim stanjima. Otkriveno je da skraćeni peptidi (npr. CGRP(8-37) ili CGRP(27-37)) mogu da deluju kao antagonisti na CGRP receptoru. Ti peptidi su bili korisni kao istraživački alat, ali takvi peptidi nisu praćeni u kliničkim ispitivanjima. Pokušaji dobijanja leka usmereni na nepeptidne male molekule dali su nekoliko jedinjenja koja su dospela do kliničkog razvoja, kao što su olcegepant i telcagepant. Uprkos uočenoj delotvornosti u lečenju migrene, ovi programi su obustavljeni, najviše usled problema vezanih za toksičnost po jetru. U skorije vreme, napori da se razvije lek koji su usmereni na CGRP put za migrenu su se ponovo fokusirali na monoklonska antitela na CGRP ili njegov receptor.

[0004] Receptor CGRP je sedam transmembranskih CLR (receptor nalik kalcitoninu) u kompleksu sa RAMP1 (peptid koji modulira receptorsku aktivnost 1). Pored receptora CGRP, CGRP takođe aktivira receptore adrenomedulina (AM) AM1 i AM2 (CLR+RAMP2, odnosno CLR+RAMP3) pri većim koncentracijama. Smatra se da receptori AM imaju dejstvo na reprodukciju; kardiovaskularnu i renalnu funkciju; inflamaciju i druga stanja. Selektivni antagonist CGRP-R sa smanjenom aktivnošću na receptorima AM smanjio bi rizik od neželjenih događaja usled ometanja AM signalizacije.

[0005] Yan et al., J. Pept. Sci.2011, 17, 383-386 otkrivaju antagoniste CGRP na bazi peptida koji su fokusirani na CGRP(27-37). Antagonisti CGRP na bazi peptida iz Yan et al., J. Pept. Sci. 2011, 17, 383-386 ne bave se selektivnošću receptora CGRP i AM.

REZIME PRONALASKA

[0006] U jednom aspektu, ovo otkriće sadrži jedinjenje formule (I) ili njegovu so:

gde je m 0, 1, 2, 3, 4, ili 5; p je 0, 1, 2, ili 3; A je jednostruka ili dvostruka veza ugljenikugljenik; Ar<1>je 5- ili 6-člani heteroaril, pri čemu je svaki opciono supstituisan sa jednim ili više supstituenata, a svaki supstituent je nezavisno halogen, nitro, C1-C4alkil, C1-C4hidroksialkil, ORa, ili N(RaRa'), gde je svaki Ranezavisno H ili C1-C4alkil i svaki Ra'je nezavisno H ili C1-C4alkil; Ar<2>je aril ili 5- ili 6-člani heteroaril, pri čemu je svaki opciono supstituisan sa jednim ili više supstituenata, svaki supstituent je nezavisno halogen, cijano, nitro, C1-C4alkil, C1-C4aminoalkil, C1-C4hidroksialkil, ORb, N(RbRb'), C(O)-N(RbRb'), ili NH-C(O)-N(RbRb'), pri čemu je svaki Rbnezavisno H ili C1-C4alkil i svaki Rb'je nezavisno H ili C1-C4alkil; Ar<3>je aril ili 5- ili 6-člani heteroaril, pri čemu je svaki opciono supstituisan sa jednim ili više supstituenata, svaki supstituent je nezavisno halogen, C1-C4alkil, C1-C4hidroksialkil, ORc, ili N(RcRc'), pri čemu je svaki Rcnezavisno H ili C1-C4alkil i svaki Rc'je nezavisno H ili C1-C4alkil; svaki R<1>je nezavisno C1-C4alkil, C1-C4aminoalkil, C1-C4hidroksialkil, ORd, ili C(O)-N(RdRd'), pri čemu je svaki Rdnezavisno H ili C1-C4alkil i svaki Rd'je nezavisno H ili C1-C4alkil; R<2>je -(CH2)n-R, pri čemu je n 0, 1, 2, ili 3 i R je N(CH3)2, NH(CH(CH3)2), NH-C(O)-CH(NH2)-(CH2)4-N(CH3)2, NH-C(O)-CH2-(OCH2CH2)2-NH2, 3-amino-1,2,4-triazol-5-il, N(CH2CH3)2, ili guanidin supstituisan sa CH3; i svaki R<3>je nezavisno halogen, C1-C4alkil, ili ORf, pri čemu je svaki Rfnezavisno H ili C1-C4alkil.

[0007] U drugom aspektu, ovo otkriće obuhvata farmaceutsku kompoziciju koja sadrži jedinjenje formule (I) kako je ovde opisano i farmaceutski prihvatljiv nosač.

[0008] U još jednom aspektu, ovo otkriće obuhvata farmaceutsku kompoziciju koja je ovde opisana za lečenje migrene ili za upotrebu u lečenju migrene, postupku koji obuhvata primenu na pacijentu kome je to potrebno delotvorne količine farmaceutske kompozicije koja je ovde opisana.

[0009] Druge karakteristike, ciljevi i prednosti biće jasni iz opisa i zahteva.

DETALJAN OPIS PRONALASKA

[0010] Otkriće se generalno odnosi na CGRP antagonističke peptide i na njihovu upotrebu u lečenju migrene. Konkretno, ovo otkriće se zasniva na neočekivanom otkriću da su neki peptidi antagonisti CGRP koji ispoljavaju poboljšanu potentnost za receptor CGRP i mogu delotvorno da se koriste za lečenje migrene. U određenim otelotvorenjima, CGRP antagonistički peptidi su selektivniji za receptor CGRP u odnosu na receptor AM2. U određenim otelotvorenjima, CGRP antagonistički peptidi imaju poboljšanu rastvorljivost. U određenim otelotvorenjima, CGRP antagonistički peptidi imaju poboljšanu bioraspoloživost.

[0011] U nekim otelotvorenjima, CGRP antagonistički peptidi koji su ovde opisani su peptidi formule (I) ili njihove farmaceutski prihvatljive soli:

U formuli (I), m je 0, 1, 2, 3, 4, ili 5; p je 0, 1, 2, ili 3; A je jednostruka ili dvostruka veza ugljenik-ugljenik; Ar<1>je 5- ili 6-člani heteroaril, pri čemu je svaki opciono supstituisan sa jednim ili više supstituenata, i svaki supstituent je nezavisno halogen (npr. F, Cl, Br ili I), nitro, C1-C4alkil, C1-C4hidroksialkil (npr. CH2OH), ORa, ili N(RaRa'), pri čemu je svaki Ranezavisno H ili C1-C4alkil i svaki Ra'je nezavisno H ili C1-C4alkil; Ar<2>je aril ili 5- ili 6-člani heteroaril, pri čemu je svaki opciono supstituisan sa jednim ili više supstituenata, svaki supstituent je nezavisno halogen, cijano, nitro, C1-C4alkil, C1-C4aminoalkil (npr. CH2NH2), C1-C4hidroksialkil, ORb, N(RbRb'), C(O)-N(RbRb'), ili NH-C(O)-N(RbRb'), pri čemu je svaki Rbnezavisno H ili C1-C4alkil i svaki Rb'je nezavisno H ili C1-C4alkil; Ar<3>je aril ili 5- ili 6-člani heteroaril, pri čemu je svaki opciono supstituisan sa jednim ili više supstituenata, svaki supstituent je nezavisno halogen, C1-C4alkil, C1-C4hidroksialkil, ORc, ili N(RcRc'), pri čemu je svaki Rcnezavisno H ili C1-C4alkil i svaki Rc'je nezavisno H ili C1-C4alkil; svaki R<1>je nezavisno C1-C4alkil, C1-C4aminoalkil, C1-C4hidroksialkil, ORd, ili C(O)-N(RdRd'), pri čemu je svaki nezavisno RdH ili C1-C4alkil i svaki Rd'je nezavisno H ili C1-C4alkil; R<2>je -(CH2)n-R, pri čemu je n 0, 1, 2, ili 3 i R je N(CH3)2, NH(CH(CH3)2), NH-C(O)-CH(NH2)-(CH2)4-N(CH3)2, NH-C(O)-CH2-(OCH2CH2)2-NH2, 3 -amino-1,2,4-triazol-5-il, N(CH2CH3)2, ili guanidin supstituisan sa CH3; i svaki R<3>je nezavisno halogen, C1-C4alkil, ili ORf, pri čemu je svaki Rfnezavisno H ili C1-C4alkil.

[0012] Termin „alkil“ se odnosi na zasićeni, linearni ili razgranati ugljovodonični ostatak, kao što je -CH3ili -CH(CH3)2. Termin „cikloalkil“ odnosi se na zasićeni, ciklični ugljovodonični ostatak, kao što je cikloheksil. Termin „heterocikloalkil“ odnosi se na zasićeni, ciklični ostatak koji ima najmanje jedan heteroatom prstena (npr. N, O ili S), kao što je 4-tetrahidropiranil. Termin „aril“ odnosi se na ugljovodonični ostatak koji ima jedan ili više aromatičnih prstenova. Primeri za aril ostatak uključuju fenil (Ph), fenilen, naftil, naftilen, pirenil, antril i fenantril. Termin „heteroaril“ odnosi se na ostatak koji ima jedan ili više aromatičnih prstenova koji sadrže najmanje jedan heteroatom (npr. N, O ili S). Primeri za heteroaril ostatak uključuju furil, furilen, fluorenil, pirolil, tienil, oksazolil, imidazolil, tiazolil, piridinil, pirimidinil, hinazolinil, hinolil, izohinolil i indolil.

[0013] U nekim otelotvorenjima, aminokiselinski ostatak vezan za Ar<1>C(O) može biti D-Val.

[0014] U nekim otelotvorenjima, Ar<1>može biti piridinil, oksazolil, tiazolil, imidazolil, pirimidinil, pirolil ili triazolil, pri čemu je svaki opciono supstituisan sa jednim ili više supstituenata, kao što su F, Cl, NO2, CH3, CH2OH ili NH2.

[0015] U nekim otelotvorenjima, Ar<2>može biti fenil ili piridinil, pri čemu je svaki opciono supstituisan sa jednim ili više supstituenata, kao što su CH2NH2, C(O)NH2, OH, CN, CH2OH, NH2ili NH-C(O)-NH2.

[0016] U nekim otelotvorenjima, Ar<3>može biti piridinil.

[0017] U nekim otelotvorenjima, R<1>može biti OH, C(O)NH2ili CH2NH2. U takvim otelotvorenjima, m u formuli (I) može biti 1.

[0018] U nekim otelotvorenjima, n u R<2>u formuli (I) može biti 0, 1 ili 2.

[0019] U nekim otelotvorenjima, p u formuli (I) je 0.

[0020] Primeri jedinjenja formule (I) uključuju ona koja su navedena u Tabeli 1 ispod.

Jedinjenja 1, 3 do 5, 7, 11 do 13, 16 do 23, 26, 29, 31 do 34, 36, 37, 47 do 53 i 56 nisu obuhvaćena pronalaskom i data su samo u ilustrativne svrhe.

Tabela 1

1

[0021] Osim ako nije drugačije naznačeno, šifra aminokiseline u Tabeli 1 odnosi se na njen L-izomer. Na primer, Orn se odnosi na L-ornitin, 3Pal se odnosi na 3-(3-piridil)-L-alanin, Dhp se odnosi na 3,4-dehidro-L-prolin, a Phe(2-Cbm) se odnosi na 3-(2-karbamoil)fenil-L-alanin.

[0022] Primeri jedinjenja su jedinjenja formule (I), gde je m jednako 1, p je 0, Ar<3>je 3-piridinil, a, Ar<1>, Ar<2>, R<1>, n, i R su prikazani u Tabeli 2 u nastavku. Jedinjenja 1, 3 do 5, 7, 11 do 13, 16 do 23, 26, 29, 31 do 34, 36, 37, 47 do 53 i 56 nisu obuhvaćena pronalaskom i data su samo u ilustrativne svrhe.

Tabela 2

1

[0023] Jedinjenja formule (I) mogu da se naprave postupcima koji su poznati u struci ili postupcima koji su ovde opisani. Primeri 1-5 u nastavku daju detaljan opis kako su jedinjenja 1-70 zapravo pripremljena.

[0024] Ovo otkriće takođe obuhvata farmaceutske kompozicije koje sadrže terapeutski delotvornu količinu najmanje jednog (npr. dva ili više) od CGRP antagonističkih peptida koji su ovde opisani (tj. jedinjenja formule (I)) ili njegove farmaceutski prihvatljive soli kao aktivan sastojak, kao i najmanje jedan farmaceutski prihvatljiv nosač (npr. adjuvans ili razblaživač). Primeri za farmaceutski prihvatljive soli uključuju kisele adicione soli, npr. soli nastale reakcijom sa halogenovodoničnim kiselinama (kao što su hlorovodonična kiselina ili bromovodonična kiselina), mineralnim kiselinama (kao što su sumporna kiselina, fosforna kiselina i azotna kiselina) i alifatičnim, alicikličnim, aromatičnim ili heterocikličnim sulfonskim ili karboksilnim kiselinama (kao što su mravlja kiselina, sirćetna kiselina, propionska kiselina, sukcinska kiselina, glikolna kiselina, mlečna kiselina, jabučna kiselina, vinska kiselina, limunska kiselina, benzojeva kiselina, askorbinska kiselina, maleinska kiselina, hidroksimaleinska kiselina, piruvinska kiselina, p-hidroksibenzojeva kiselina, pamoinska kiselina, metansulfonska kiselina, etansulfonska kiselina, hidroksietansulfonska kiselina, halobenzensulfonska kiselina, trifluorsirćetna kiselina, trifluormetansulfonska kiselina, toluensulfonska kiselina i naftalensulfonska kiselina).

[0025] Nosač u farmaceutskoj kompoziciji mora biti „prihvatljiv“ u smislu da je kompatibilan sa aktivnim sastojkom kompozicije (i, poželjno, sposoban je da stabilizuje aktivni sastojak) i nije štetan po ispitanika koji se leči. Jedan ili više solubilizatora može da se koristi u vidu farmaceutskih nosača za isporuku aktivnog CGRP antagonističkog peptida. Primeri za druge nosače uključuju koloidni silicijum oksid, magnezijum stearat, celulozu, natrijum lauril sulfat i hinolin žutu br.10.

[0026] Farmaceutska kompozicija koja je ovde opisana može opciono da sadrži najmanje jedan dodatni aditiv izabran od dezintegransa, veziva, lubrikansa, arome, konzervansa, boje i bilo koje smeše prethodnog. Primeri tih i drugih aditiva mogu se pronaći u "Handbook of Pharmaceutical Excipients"; Ed. A.H. Kibbe, 3. izd., American Pharmaceutical Association, USA i Pharmaceutical Press UK, 2000.

[0027] Farmaceutska kompozicija koja je ovde opisana može da se prilagodi za parenteralnu, oralnu, topikalnu, nazalnu, rektalnu, bukalnu ili sublingvalnu primenu ili za primenu putem respiratornog trakta, npr. u obliku aerosola ili finog praha suspendovanog u vazduhu. Termin „parenteralna“, kako se ovde koristi, odnosi se na supkutanu, intrakutanu, intravensku, intramuskularnu, intraartikularnu, intraarterijsku, intrasinovijalnu, intrasternalnu, intratekalnu, intralezionu, intraperitonealnu, intraokularnu, intraauralnu ili intrakranijalnu injekciju, kao i na svaku pogodnu tehniku infuzije. U nekim otelotvorenjima, kompozicija može biti u obliku tableta, kapsula, praškova, mikročestica, granula, sirupa, suspenzija, rastvora, nazalnog spreja, transdermalnih flastera ili supozitorija.

[0028] U nekim otelotvorenjima, farmaceutska kompozicija koja je ovde opisana može da sadrži CGRP antagonistički peptid koji je ovde opisan koji je rastvoren u vodenom rastvoru. Na primer, kompozicija može da sadrži vodeni rastvor natrijum hlorida (npr. koji sadrži 0,9 mas.% natrijum hlorida) koji služi kao razblaživač.

[0029] Pored toga, ovo otkriće obuhvata CGRP antagonistički peptid kako je prethodno prikazan za lečenje migrene ili za proizvodnju leka za takvo lečenje, ili za upotrebu u lečenju. Ta upotreba može da obuhvata primenu na pacijentu kome je to potrebno delotvorne količine farmaceutske kompozicije koja je ovde opisana. „Delotvorna količina“ se odnosi na količinu farmaceutske kompozicije koja je potrebna za prenošenje terapeutskog dejstva ispitaniku koji

1

se leči. Delotvorne doze će varirati, kao što je poznato stručnjacima za oblast, u zavisnosti od vrste bolesti koje se leče, načina primene, korišćenja ekscipijenasa i mogućeg zajedničkog korišćenja sa drugim terapeutskim lečenjem.

[0030] Kako se ovde koriste, termini „lečenje“ i „lečiti“ odnose se na preokretanje, ublažavanje, odlaganje pojave ili inhibiciju napredovanja migrene ili jednog ili više njenih simptoma, kako je ovde opisano. U nekim otelotvorenjima, CGRP antagonistički peptidi, kako su prethodno prikazani, mogu da se primene nakon nastanka jednog ili više simptoma. U drugim otelotvorenjima, CGRP antagonistički peptidi, kako su prethodno prikazani, mogu da se primene kada nema simptoma. Na primer, CGRP antagonistički peptid, kako je prethodno prikazan, može da se primeni na podložnom pojedincu pre pojave simptoma (npr. uzimajući u obzir istoriju simptoma i/ili genetske ili druge faktore podložnosti). Primena takođe može da se nastavi nakon što su simptomi otklonjeni, na primer, da bi se sprečilo ili odložilo njihovo ponovno javljanje.

[0031] Uobičajena doza ovde opisanog CGRP antagonističkog peptida može da varira u širokom rasponu i zavisiće od različitih faktora, kao što su individualne potrebe svakog pacijenta i način primene. Dnevne doze (npr. za supkutanu primenu) mogu, na primer, biti najmanje oko 0,5 mg (npr. najmanje oko 1 mg, najmanje oko 5 mg, najmanje oko 10 mg ili najmanje oko 15 mg) i/ili najviše oko 100 mg (npr. najviše oko 75 mg, najviše oko 50 mg, najviše oko 20 mg ili najviše oko 15 mg) CGRP antagonističkog peptida. Stručnjak ili lekar mogu da razmatraju relevantne varijacije tog doznog raspona i praktične primene, kako bi se prilagodili datoj situaciji.

[0032] U nekim otelotvorenjima, farmaceutska kompozicija koja je ovde opisana može da se primenjuje jednom dnevno. U nekim otelotvorenjima, farmaceutska kompozicija može da se primenjuje više od jednom dnevno (npr. dva puta dnevno, tri puta dnevno ili četiri puta dnevno).

[0033] Sledeći primeri su ilustrativni i ne treba da predstavljaju ograničenje.

Primeri

Opšti postupci sinteze

1. Derivati aminokiselina

1

[0034] Derivati aminokiselina su kupljeni od komercijalnih dobavljača (kao što su Aapptec, Chem Impex International, EMD Millipore, PPL, PepTech i Peptides International), osim Fmoc-Orn(iPr,Boc)-OH. Fmoc-Orn(iPr,Boc)-OH je pripremljen na sledeći način:

50,0 g (105,8 mmol) Fmoc-Orn(Boc)-OH rastvoreno je u 100 ml dihlormetana (DCM). Zatim je dodato 100 ml trifluorsirćetne kiseline (TFA). Reakciona smeša je mešana na magnetnoj mešalici tokom 1 sata i rastvarači su upareni. Kako bi se uklonio višak TFA, ostatak je rekonstituisan u DCM-u i uparen nekoliko puta. Uljani ostatak je rastvoren u 400 ml MeOH i 100 ml acetona, pa je dodato 30 ml sirćetne kiseline. Reakciona smeša je žustro mešana i dodato je 120,0 g (0,57 mol, 5,4 ekv.) čvrstog NaBH(OAc)3u porcijama od 10 g sve dok Fmoc-Orn-OH nije potrošen (oko 2 sata, praćeno pomoću analitičke HPLC). Rastvarači su zatim upareni, i dobijeni čvrsti ostatak je korišćen u sledećem koraku bez prečišćavanja.

[0035] Ostatak koji je dobijen u prethodnom koraku je rastvoren u 100 ml vode, i pH rastvora je podešen na oko 9,5 pomoću čvrstog Na2CO3.100 ml t-BuOH je zatim dodato u reakcionu smešu mešanu na magnetnoj mešalici. Zatim je u porcijama dodavan Boc2O (60,0 g, 275 mmol, 2,6 ekv.) u 100 ml t-BuOH tokom 10 sati. pH reakcione smeše je održavan na oko 9,5 pomoću dodavanja zasićenog Na2CO3(vod.). Nakon što je dodata poslednja porcija Boc2O, reakciona smeša je mešana još 9 sati. Reakciona smeša je razblažena sa 1 l vode i ekstrahovana sa 2 × 200 ml heksana. Vodena faza je zakiseljena pomoću 2 M HCl, i proizvod je ekstrahovan dietil etrom (3 × 300 ml). Kombinovani organski ekstrakti su temeljno isprani pomoću 2 M HCl (3 × 200 ml) i vodom, i zatim su osušeni iznad anhidrovanog MgSO4. Agens za sušenje je uklonjen filtracijom i rastvarač je uparen. Dobijeni čvrsti ostatak je tretiran petrol etrom, dekantovan je i osušen pod vakuumom. Kristalni proizvod je rastvoren u 200 ml t-BuOH i liofilizovan. Dobijeno je 41,8 g (84 mmol, prinos 79,5%) liofilizovanog derivata.

2. Sinteza peptida

[0036] Smole su kupljene od komercijalnih dobavljača (npr. PCAS BioMatrix Inc. i EMD Millipore). Karboksilne kiseline za uvođenje N-terminalne acil grupe su nabavljene od AstaTech, ChemBridge Corp. Frontier Scientific, J&W Pharmalab, Oakwood Products i TCI America. Svi dodatni reagensi, hemikalije i rastvarači su kupljeni od kompanije Sigma-Aldrich i VWR

1

[0037] Jedinjenja koja su ovde opisana su sintetisana standardnim postupcima hemije peptida u čvrstoj fazi koristeći Fmoc metodologiju. Peptidi su sastavljeni ručno ili automatski koristeći sintetizator peptida Tribute (Protein Technologies Inc., Tucson, Arizona) ili sintetizator peptida Applied Biosystems 433A, ili kombinacijom ručne i automatske sinteze.

[0038] Preparativna HPLC je obavljena na sistemu Waters Prep LC koristeći PrepPack uložak Delta-Pack C18, 300Å, 15 µm, 47 × 300 mm sa protokom od 100 ml/min i/ili na koloni Phenomenex Luna C18, 100Å, 5 µm, 30 × 100 mm sa protokom od 40 ml/min.

Analitička reversno fazna HPLC je obavljena na tečnom hromatografu Agilent Technologies 1200rr serije koristeći kolonu Agilent Zorbax C18, 1,8 µm, 4,6 × 110 mm sa protokom od 1,5 ml/min. Analize finalnih jedinjenja su obavljene na hromatografu Agilent Technologies 1200 serije putem reversno fazne HPLC na koloni Phenomenex Gemini 110Å C18, 3 µm, 2 × 150 mm sa protokom od 0,3 ml/min. Maseni spektri su snimljeni na elektrosprej masenom spektrometru MAT Finnigan LCQ. Osim ako nije drugačije navedeno, sve reakcije su obavljene na sobnoj temperaturi. Sledeće reference daju dalje smernice za opštu eksperimentalnu postavku, kao i za raspoloživost potrebnih polaznih supstanci i reagensa: Kates, S.A., Albericio, F., Eds., Solid Phase Synthesis: A Practical Guide, Marcel Dekker, New York, Basel, 2000; Greene, T.W., Wuts, P.G.M., Protective Groups in Organic Synthesis, John Wiley Sons Inc., 2. izdanje, 1991; Stewart, J.M., Young, J.D., Solid Phase Synthesis, Pierce Chemical Company, 1984; Bisello, et al., J. Biol. Chem.1998, 273, 22498-22505; Merrifield, J. Am. Chem. Soc.1963, 85, 2149-2154; i Chang i White P.D., 'Fmoc Solid Phase Peptide Synthesis: a Practical Approach', Oxford University Press, Oxford, 2000.

[0039] Sledeće zaštitne grupe su korišćene za zaštitu datih funkcionalnih grupa bočnog lanca aminokiselina: Pbf (2,2,4,6,7-pentametildihidrobenzofuran-5-sulfonil) za Arg; tBu (t-butil) za Tyr i Asp; Boc (t-butoksikarbonil) za Dab, Orn, Orn(iPr) i Lys; i Trt (tritil) za Cys.

[0040] Kuplovanje aminokiselina zaštićenih pomoću Fmoc na sintetizatoru Tribute je posredovano sa HBTU/NMM u DMF-u, osim za derivate cisteina koji su kuplovani sa DIC/HOBt u DMF-u. Tokom sinteze su korišćeni pojedinačni ciklusi od 30-60 minuta sa 5-strukim viškom aktiviranih aminokiselina zaštićenih pomoću Fmoc. Uklanjanje Fmoc zaštitne grupe je praćeno pomoću UV analize. Obavljena su višestruka (do 10 puta, po potrebi) dvominutna ispiranja peptidne smole sa 20% piperidina u DMF-u.

1

[0041] Protokoli ciklusa koje navodi kompanija Applied Biosystems korišćeni su na sintetizatoru 433A. Kuplovanje je posredovano sa HATU/DIPEA ili DIC/HOBt u DMF-u/NMP-u. Korišćeno je pojedinačno kuplovanje od 35-50 minuta sa 4-strukim viškom aktiviranih aminokiselina zaštićenih pomoću Fmoc. Uklanjanje Fmoc zaštitne grupe je praćeno pomoću UV, i postignuto je jednim 20-minutnim ispiranjem sa 20% piperidina/NMP.

[0042] DIC/HOBt posredovano kuplovanje u DMF-u je korišćeno za sve aminokiseline u manuelnom režimu. Tokom sinteze su korišćeni pojedinačni ciklusi od najmanje 2 sata sa 3-strukim viškom aktiviranih aminokiselina zaštićenih pomoću Fmoc. Završetak kuplovanja je ispitivan ninhidrinskim (Kajzerovim) testom. Uklanjanje Fmoc zaštitne grupe je postignuto jednim 30-minutnim ispiranjem peptidne smole sa 20% piperidina u DMF-u

[0043] Nakon završetka sinteze peptida, peptidne smole su isprane DCM-om i osušene pod vakuumom. Smole su tretirane sa TFA koja sadrži različite količine H2O (do 10%) i diizopropilsilana (TIS; do 4%) tokom 2 sata radi uklanjanja zaštitnih grupa bočnog lanca uz istovremeno cepanje peptida sa smole. Peptidi su filtrirani, taloženi dietil etrom i dekantovani. Kako bi se dobili peptidi sa disulfidnim mostovima, talog je rastvoren u čistoj TFA ili AcOH, i rastvor je zatim sipan u 10% acetonitril u vodi. U nekim slučajevima, dodatna količina acetonitrila je dodata za solubilizaciju supstrata. Linearni peptid je oksidisan sa 0,1 M I2u MeOH ili AcOH. Rastvor za oksidaciju je dodavan ukapavanjem do pojave trajne žute boje. Višak joda je redukovan askorbinskom kiselinom. pH je zatim podešen na oko 4 pomoću koncentrovanog amonijaka. Dobijeni rastvor je nanet direktno na HPLC prep kolonu i eluiran gradijentom komponente B koja je prikazana u Tabeli 3 ispod.

[0044] Svi sirovi peptidi su prečišćeni puferom T koji je prikazan u Tabeli 3. Frakcije sa čistoćom većom od 90%, kako je utvrđeno pomoću reversno fazne analitičke HPLC, objedinjene su i ponovo nanete na kolonu i eluirane sa puferom T, što daje soli trifluoracetate. U nekim slučajevima, obavljeno je dodatno prečišćavanje puferom C koji je prikazan u Tabeli 3. Za dobijanje hidrohlorida, frakcije iz ciklusa sa puferom T ili C su ponovo nanete na kolonu i kolona je isprana sa 3-5 zapremina 0,1 M natrijum hlorida u 1 mM HCl. Finalni proizvod je eluiran puferom H koji je prikazan u Tabeli 3. Frakcije su objedinjene i liofilizovane. Tako pripremljena jedinjenja obično imaju čistoću najmanje oko 90%.

1

Tabela 3. Sastavi pufera za preparativnu HPLC

[0045] U nastavku su date sinteze određenih primera jedinjenja formule (I) koja su ovde opisana.

Primer 1: Sinteza jedinjenja 30

[0046] Peptid je sastavljen ručno polazeći od 3,0 g (1,95 mmol) MBHA smole Fmoc-Rink amida (EMD Millipore, kataloški broj 855003, 0,65 mmol/g). Korišćena su DIC/HOBt posredovana kuplovanja u DMF-u. Tokom sinteze su korišćeni pojedinačni ciklusi od najmanje 2 sata sa 3-strukim viškom aktiviranih aminokiselina zaštićenih pomoću Fmoc. Završetak kuplovanja je ispitivan nihidrinskim testom. Uklanjanje Fmoc zaštitne grupe je postignuto jednim 30-minutnim ispiranjem peptidne smole sa 20% piperidina u DMF-u. Sledeći derivati aminokiselina su korišćeni za sastavljanje peptida vezanog za smolu: Fmoc-3Pal-OH, Fmoc-Cys(Trt)-OH, Fmoc-Phe-OH, Fmoc-Pro-OH, Fmoc-Gly-OH, Fmoc-Val-OH, Fmoc-Asp(tBu)-OH, Fmoc-Orn(iPr,Boc)-OH, Fmoc-Cys(Trt)-OH, Fmoc-Phe(2-Cbm)-OH i Fmoc-D-Val-OH. Nakon što je sastavljen fragment peptida 1-11, smola je zatvorena oksazol-2-karboksilnom kiselinom/DIC/HOBt (4 ekv.), temeljno isprana DCM-om i osušena pod vakuumom. Sirovi linearni peptid je otcepljen sa smole pomoću 50 ml TFA/H2O/TIS 96:2:2 (V/V/V) tokom 2 sata. Nakon što je rastvarač uparen, sirovi peptid je taložen dietil etrom i dekantovan. Talog je rastvoren u 1 l 1% vodenog rastvora TFA i oksidisan sa 0,1 M I2/MeOH. Rastvor za oksidaciju je dodavan ukapavanjem do pojave trajne žute boje. Višak joda je redukovan čvrstom askorbinskom kiselinom. pH je zatim podešen na oko 4 pomoću koncentrovanog amonijaka. Dobijeni rastvor je nanet direktno na HPLC prep kolonu i prečišćen je puferom T. Frakcije sa čistoćom >90%, kako je utvrđeno reversno faznom analitičkom HPLC, objedinjene su i ponovo nanete na kolonu. Kolona je ekvilibrisana sa 1 mM HCl, isprana sa 3 zapremine 0,1 mM NaCl u 1 mM HCl i jedinjenje je eluirano puferom H, dajući hidrohlorid. Frakcije su objedinjene i liofilizovane. Dobijeno je 1009,8 mg (0,63 mmol, 32,3% ukupno na osnovu 89,6% sadržaja peptida) belog peptidnog praha (jedinjenje 30).

2

[0047] Pomoću analitičke HPLC određeno je da je čistoća proizvoda 90,7%. Uočeni i izračunati MS podaci (tj. M+H) dati su u Tabeli 4 ispod.

Primer 2: Sinteza jedinjenja 40

[0048] Sinteza čvrste faze za ovaj peptid je obavljena na sintetizatoru peptida Tribute koristeći Fmoc strategiju. Polazna smola je bila 0,23 g (0,15 mmol) Rink amid MBHA smole (EMD Millipore, kataloški broj 855003, 100-200 meša, 0,65 mmol/g). Dic/HOBt posredovana kuplovanja u DMF-u su korišćena za sve aminokiseline, osim za N-terminalnu oksazol-2-karboksilnu kiselinu za koju je bio potreban HBTU/NMM postupak kuplovanja. Tokom sinteze su korišćeni pojedinačni ciklusi od 2 sata sa 3-strukim viškom aktiviranih aminokiselina zaštićenih pomoću Fmoc. Fmoc zaštitna grupa je uklonjena tretiranjem 20% piperidinom u DMF-u, 1 × 5 min i 1 × 25 min. Sledeći derivati aminokiselina su uzastopno korišćeni za sastavljanje peptida vezanog za smolu: Fmoc-3Pal-OH, Fmoc-Cys(Trt)-OH, Fmoc-3Pal-OH, Fmoc-Pro-OH, Fmoc-Gly-OH, Fmoc-Val-OH, Fmoc-Asp(tBu)-OH, Fmoc-Orn(iPr,Boc)-OH, Fmoc-Cys(Trt)-OH, Fmoc-Phe(2-Cbm)-OH i Fmoc-D-Val-OH. N-terminalna acil grupa je uvedena tretiranjem fragmenta peptida (1-11) vezanog za smolu prethodno aktiviranom smešom oksazol-2-karboksilne kiseline (0,5 mmol), HBTU (0,5 mmol) i DIEA (1,0 mmol) u DMF-u tokom 4 sata. Finalna sastavljena peptidna smola je isprana DCM-om i osušena pod vakuumom. Sirovi linearni peptid je otcepljen iz smole pomoću 25 ml TFA/H2O/TIS (94:3:3, V/V/V) tokom 2,5 sati. Rastvarač je uparen pod vakuumom i sirovi peptid je taložen dietil etrom. Talog je sakupljen filtracijom i zatim rastvoren u 400 ml 0,1% TFA u 5% ACN i oksidisan sa 0,1 M I2/AcOH. Rastvor joda je dodat ukapavanjem sve dok se nije zadržala žuta boja. Višak joda je redukovan zasićenim rastvorom askorbinske kiseline u vodi. Dobijeni rastvor je nanet direktno na preparativnu HPLC kolonu i prečišćen je puferom T. Frakcije sa čistoćom >90%, kako je utvrđeno reversno faznom analitičkom HPLC, objedinjene su i liofilizovane na liofilizatoru. Dobijeno je 80,2 mg (45,0 µmol, ukupan prinos 30% na osnovu 80% procenjenog sadržaja peptida) belog peptidnog praha (jedinjenje 40).

[0049] Pomoću analitičke HPLC određeno je da je čistoća proizvoda 96,8%. Uočeni i izračunati MS podaci (tj. M+H) dati su u Tabeli 4 ispod.

Primer 3: Sinteza jedinjenja 62

[0050] Peptid je sastavljen ručno polazeći od 3,0 g (1,77 mmol) Rink amid MBHA smole (Novabiochem, kataloški broj 8.55003, 0,59 mmol/g), koristeći SPPS sa visokom temperaturom (75°C, vodeno kupatilo Lauda E100, SPPS reakciona posuda sa plaštom od 50 ml). Tokom sinteze su korišćeni pojedinačni ciklusi od najmanje 15 minuta sa najviše 4-strukim viškom prethodno aktiviranih aminokiselina zaštićenih pomoću Fmoc (HOBt, DIC, nema prethodne aktivacije za Fmoc-Orn(iPr,Boc)-OH) . Fmoc zaštitna grupa je uklonjena jednim 2x 5-minutnim ispiranjem peptidne smole 25% piperidinom u DMF-u. Sledeći derivati aminokiselina su korišćeni za sastavljanje peptida vezanog za smolu: Fmoc-3Pal-OH, Fmoc-Cys(Trt)-OH, Fmoc-Phe-OH, Fmoc-Pro-OH, Fmoc-Gly-OH, Fmoc-Val-OH, Fmoc-Asp(tBu)-OH, Fmoc-Orn(iPr,Boc)-OH, Fmoc-Cys(Trt)-OH, i Fmoc-D-Val-OH. Nakon što je sastavljen fragment peptida 1-11, smola je zatvorena 3,5-difluorpikolinskom kiselinom/HATU/DIPEA (4 ekv.), temeljno isprana sa MeOH i osušena pod vakuumom. Sirovi linearni peptid je otcepljen sa smole pomoću 75 ml TFA/H2O/TIS 96:2:2 (V/V/V) tokom 2 sata. Nakon što je rastvarač uparen, sirovi peptid je taložen dietil etrom i dekantovan. Talog je rastvoren u 1 l 10% MeCN u 0,5% vodenom rastvoru TFA i oksidisan sa 0,05 M I2/AcOH. Rastvor za oksidaciju je dodavan ukapavanjem do pojave trajne žute boje. Višak joda je redukovan 1 M askorbinskom kiselinom. Dobijeni rastvor je nanet direktno na HPLC prep kolonu i prečišćen modifikovanim puferom T (komponenta A: 0,01% TFA, komponenta B: 95% acetonitril u 0,01% TFA). Frakcije sa čistoćom >95%, kako je utvrđeno pomoću reversno fazne analitičke HPLC, objedinjene su i ponovo nanete na kolonu. Kolona je ekvilibrisana sa 1 mM HCl, isprana sa 3 zapremine 0,1 mM NaCl u 1 mM HCl, i jedinjenje je zatim eluirano puferom H, dajući hidrohloridnu so. Frakcije su objedinjene i liofilizovane. Dobijeno je 583 mg (0,63 mmol, 20% ukupno na osnovu 87,3% sadržaja peptida i 98,8% čistoće) belog peptidnog praha (jedinjenje 62).

[0051] Pomoću analitičke HPLC određeno je da je čistoća proizvoda 98,8%. Uočeni i izračunati MS podaci (tj. M+H) dati su u Tabeli 4 ispod.

Primer 4: Sinteza jedinjenja 65

[0052] Jedinjenje je sastavljeno na čvrstoj fazi kombinacijom ručne i automatske sinteze. C-terminalni tripeptid je prvo sintetisan ručno polazeći od 7,3 g (3,5 mmol) Fmoc-Rink amid Chem Matrix smole (Biotage, kataloški broj 7-600-1310-25, 0,48 mmol/g). HATU/DIPEA posredovano kuplovanje u DMF-u je korišćeno za 3Pal i Phe(3-Cbm), a DIC/HOBt posredovano kuplovanje u DMF-u je korišćeno za Cys. Tokom sinteze su korišćeni pojedinačni ciklusi od najmanje 2 sata sa 3-strukim viškom aktiviranih aminokiselina zaštićenih pomoću Fmoc. Završetak kuplovanja je ispitivan nihidrinskim testom. Uklanjanje Fmoc zaštitne grupe je postignuto sa 30% piperidinom u DMF-u koristeći dva ispiranja od 5, odnosno 25 minuta. Sledeći derivati aminokiselina su korišćeni za sastavljanje peptida vezanog za smolu: Fmoc-3Pal-OH, Fmoc-Cys(Trt)-OH i Fmoc-Phe(3-Cbm)-OH. Sinteza je nastavljena na sintetizatoru 433A sa jednom osminom (0,44 mmol) smole. Korišćena su HATU/DIPEA ili DIC/HOBt (za Cys) posredovana kuplovanja u NMP-u/DMF-u. Tokom sinteze su korišćeni pojedinačni ciklusi od najmanje 30 minuta sa do 5-strukim viškom aktiviranih aminokiselina zaštićenih pomoću Fmoc. Uklanjanje Fmoc zaštitne grupe je postignuto jednim 30-minutnim ispiranjem peptidne smole sa 20% piperidina u NMP-u. Sledeći derivati aminokiselina su korišćeni za završetak sastavljanja peptida vezanog za smolu: Fmoc-Dhp-OH, Fmoc-Gly-OH, Fmoc-Val-OH, Fmoc-Asp(tBu)-OH, Fmoc-Orn(iPr,Boc)-OH, Fmoc-Cys(Trt)-OH, Fmoc-Phe(2-Cbm)-OH i Fmoc-D-Val-OH. Nakon što je sastavljen fragment peptida 1-11, smola je zatvorena ručno oksazol-2-karboksilnom kiselinom/HATU/DIPEA (4 ekv.), temeljno isprana DCM-om i osušena pod vakuumom. Sirovi linearni peptid je otcepljen sa smole pomoću 50 ml TFA/H2O/TIS 90:8:2 (V/V/V) tokom 2 sata. Rastvarač je uparen i sirovi peptid je nataložen sa MTBA, centrifugiran i dekantovan. Talog je rastvoren u 15 ml AcOH i sipan u 250 ml 10% (V/V) vodenog acetonitrila i oksidisan sa 0,1 M I2/MeOH. Rastvor za oksidaciju je dodavan ukapavanjem do pojave trajne žute boje. Višak joda je redukovan čvrstom askorbinskom kiselinom. pH je zatim podešen na oko 4 pomoću koncentrovanog amonijaka. Dobijeni rastvor je nanet direktno na HPLC prep kolonu i prečišćen puferom T (vidite tabelu iznad). Frakcije sa čistoćom >90%, kako je utvrđeno pomoću reversno fazne analitičke HPLC, objedinjene su i liofilizovane. Dobijeno je 116,2 mg (0,06 mmol, 14,1% ukupno na osnovu 78,5% sadržaja peptida) belog peptidnog praha (jedinjenje 65).

[0053] Pomoću analitičke HPLC određeno je da je čistoća proizvoda 98,3%. Uočeni i izračunati MS podaci (tj. M+H) dati su u Tabeli 4 ispod.

Tabela 4

2

2

Primer 5: Sinteza jedinjenja 1-29, 31-39, 41-61, 63, 64 i 66-70

[0054] Jedinjenja 1-29, 31-39, 41-61, 63, 64 i 66-70 su sintetisana koristeći postupke opisane u primerima 1-4. Jedinjenja 1, 3 do 5, 7, 11 do 13, 16 do 23, 26, 29, 31 do 34, 36, 37, 47 do 53 i 56 nisu obuhvaćena pronalaskom i data su samo u ilustrativne svrhe.

[0055] Uočeni i izračunati MS podaci (tj. M+H) jedinjenja 1-70 sažeti su u Tabeli 4.

Primer 6: Antagonistička aktivnost za CGRP receptor izmerena pomoću cAMP testa [0056] Agonisti CGRP receptora povećavaju intracelularni ciklični adenozin monofosfat (cAMP). Antagonisti CGRP receptora mogu da smanje agonističko dejstvo. Antagonistička aktivnost je ispitana merenjem cikličnog adenozin monofosfata (cAMP) koristeći ćelijsku liniju koja stabilno eksprimira hCGRP receptor (GeneBLAzer<®>CALCRL:RAMP1-CRE-bla Freestyle<™>293F, Invitrogen). Ćelije koje eksprimiraju hCGRP su držane u DMEM-u sa velikim sadržajem glukoze sa GlutaMAX<™>koji sadrži 10% (V/V) FBS-a, 0,1 mM NEAA, 25 mM HEPES, 5 ug/ml blasticidina, 100 ug/ml higromicina i 400 ug/ml geneticina na 37°C u 5% CO2u humidifikovanoj atmosferi. Za merenje cAMP, ćelije su jednom isprane sa 5 ml 1X PBS, medijum za održavanje ćelija je zamenjen složenim puferom ((CB): DMEM koji sadrži 0,1% BSA i 0,5 mM IBMX), i boce su inkubirane tokom 1 sata na 37°C u 5% CO2u humidifikovanoj atmosferi. Ćelije su uklonjene iz boca za uzgajanje koristeći pufer za neenzimsku ćelijsku disocijaciju i sakupljene su u CB. Reakcija je obavljena na belim pločama male zapremine sa 384 bunarčića (Greiner) sa gustinom od 10.000 ćelija/bunarčiću. Ćelije su izložene različitim koncentracijama antagonističkih jedinjenja tokom 30 minuta u prisustvu fiksne koncentracije agonista (humani α-CGRP). Nivoi cAMP su izmereni koristeći kompetitivni cAMP imunološki test na bazi HTRF (homogena vremenski razložena fluorescencija) (komplet cAMP Dynamic 2, Cisbio), prema uputstvu proizvođača. Izračunat je odnos očitavanja na 665 nm i 615 nm vremenski razložene fluorescencije (RFU) i model odgovora na koncentraciju sa četiri parametra i jednim mestom vezivanja: (MIN+((MAX-MIN)/(1+((EC50/x)^Hill)))), korišćen je da se izvrši nelinearna regresiona analiza, koja daje krivu odgovora na koncentraciju. Prijavljeni parametri uključuju potentnost antagonista IC50

2

(koncentracija koja izaziva pola maksimalne inhibicije agonističkog odgovora za antagonistička jedinjenja) i efikasnost (%MPE: procenat maksimalnog mogućeg dejstva).

[0057] Jedinjenja 1-70 i tri referentna peptidna jedinjenja su testirana u prethodnom testu. Tri referentna peptidna jedinjenja su: (1) Bz(4-F)-D-Val-Tyr-c(Cys-Agp-Asp-Val-Gly-Pro-Phe-Cys)-3Pal-NH2(„referentno jedinjenje 1“, tj. jedinjenje 36 u Yan et al., J. Pept. Sci.2011, 17, 383-386), (2) Bz-D-Val-Tyr-c(Cys-Dpr-Asp-Val-Gly-Pro-Phe-Cys)-3Pal-NH2(„referentno jedinjenje 2“, jedinjenje 33 u Yan et al., J. Pept. Sci.2011, 17, 383-386) i (3) H-Val-Thr-His-Arg-Leu-Ala-Gly-Leu-Leu-Ser-Arg-Ser-Gly-Gly-Val-Val-Lys-Asn-Asn-Phe-Val-Pro-Thr-Asn-Val-Gly-Ser-Lys-Ala-Phe-NH2(„referentno jedinjenje 3“, humani α-CGRP(8-37)-NH2antagonist). Rezultati su sažeti u Tabeli 5 ispod.

[0058] Kao što je prikazano u Tabeli 5, jedinjenja 1-70 generalno pokazuju poboljšanu potentnost u poređenju sa referentnim jedinjenjima 1-3.

Primer 7: Antagonistička aktivnost za AM2 receptor izmerena pomoću cAMP testa [0059] Antagonistička aktivnost za adrenomedulinski receptor AM2 je utvrđena koristeći postupak koji je prethodno opisan u primeru 6, uz sledeće izmene. Umesto GeneBLAzer<®>CALCRL:RAMP1-CRE-bla Freestyle<™>293F ćelija,

GeneBLAzer<®>CALCRL:RAMP3-CRE-bla Freestyle<™>293F ćelije su korišćene za ispitivanje aktivnosti hAM2 receptora. Agonist je bio humani adrenomedulin, umesto α-CGRP.

[0060] Jedinjenja 1-70 i tri referentna peptidna jedinjenja opisana u primeru 6 su testirani u ovom testu. Rezultati su sažeti u Tabeli 5 ispod. U Tabeli 5, odnos selektivnosti za hCGRP u odnosu na hAM2 je izračunat kao hAM2-R IC50/hCGR-P-R IC50.

[0061] Kao što je prikazano u Tabeli 5, većina jedinjenja 1-70 je pokazala poboljšanu selektivnost za hCGRP receptor u odnosu na hAM2 receptor u poređenju sa referentnim jedinjenjima 1-3. Jedinjenja 1, 3 do 5, 7, 11 do 13, 16 do 23, 26, 29, 31 do 34, 36, 37, 47 do 53 i 56 nisu obuhvaćena pronalaskom i data su samo u ilustrativne svrhe.

Tabela 5.

2

2

2

[0062] Druga otelotvorenja su u opsegu sledećih zahteva.

Claims (16)

1. Patentni zahtevi 1. Jedinjenje formule (I) ili njegova farmaceutski prihvatljiva so:

   pri čemu m je 0, 1, 2, 3, 4, ili 5; p je 0, 1, 2, ili 3; A je jednostruka ili dvostruka veza ugljenik-ugljenik; Ar<1>je 5- ili 6-člani heteroaril, pri čemu je svaki opciono supstituisan sa jednim ili više supstituenata, svaki supstituent je nezavisno halogen, nitro, C1-C4alkil, C1-C4hidroksialkil, ORa, ili N(RaRa'), gde je svaki Ranezavisno H ili C1-C4alkil i svaki Ra'je nezavisno H ili C1-C4alkil; Ar<2>je 5- ili 6-člani heteroaril, pri čemu je svaki opciono supstituisan sa jednim ili više supstituenata, i svaki supstituent je nezavisno halogen, cijano, nitro, C1-C4alkil, C1-C4aminoalkil, C1-C4hidroksialkil, ORb, N(RbRb'), C(O)-N(RbRb'), ili NH-C(O)-N(RbRb'), gde je svaki Rbnezavisno H ili C1-C4alkil i svaki Rb'je nezavisno H ili C1-C4alkil; Ar<3>je aril ili 5- ili 6-člani heteroaril, pri čemu je svaki opciono supstituisan sa jednim ili više supstituenata, pri čemu je svaki supstituent nezavisno halogen, C1-C4alkil, C1-C4hidroksialkil, ORc, ili N(RcRc'), gde je svaki Rcnezavisno H ili C1-C4alkil i svaki Rc'je nezavisno H ili C1-C4alkil; svaki R<1>je nezavisno C1-C4alkil, C1-C4aminoalkil, C1-C4hidroksialkil, ORd, ili C(O)-N(RdRd'), gde je svaki Rdnezavisno H ili C1-C4alkil i svaki Rd'je nezavisno H ili C1-C4alkil; R<2>je -(CH2)n-R, gde je n jednako 0, 1, 2 ili 3, a R je N(CH3)2, NH(CH(CH3)2), NH-C(O)-CH(NH2)-(CH2)4-N(CH3)2, NH-C(O)-CH2-(OCH2CH2)2-NH2, 3-amino-1,2,4-triazol-5-il, N(CH2CH3)2ili guanidin supstituisan sa CH3; i svaki R<3>je nezavisno halogen, C1-C4alkil, ili ORf, gde je svaki Rfnezavisno H ili C1-C4alkil.
2. 2. Jedinjenje iz zahteva 1, pri čemu je Ar<1>piridinil, oksazolil, tiazolil, imidazolil, pirimidinil, pirolil ili triazolil, pri čemu je svaki opciono supstituisan sa jednim ili više supstituenata, i svaki supstituent je nezavisno F, Cl, NO2, CH3, CH2OH ili NH2.
3. 3. Jedinjenje iz zahteva 1, pri čemu je Ar<2>fenil ili piridinil, pri čemu je svaki opciono supstituisan sa jednim ili više supstituenata, svaki supstituent je nezavisno CH2NH2, C(O)NH2, OH, CN, CH2OH, NH2ili NH-C(O)-NH2.
4. 4. Jedinjenje iz zahteva 1, pri čemu, Ar<3>je piridinil.
5. 5. Jedinjenje iz zahteva 1, pri čemu, m je 1.
6. 6. Jedinjenje iz zahteva 5, pri čemu, R<1>je OH, C(O)NH2ili CH2NH2.
7. 7. Jedinjenje iz zahteva 1, pri čemu, n je 0, 1 ili 2.
8. 8. Jedinjenje iz zahteva 1, pri čemu, p je 0.
9. 9. Jedinjenje iz zahteva 1, pri čemu, jedinjenje je oksazol-2-karbonil-D-Val-Phe(2-Cbm)-c(Cys-Orn(iPr)-Asp-Val-Gly-Pro-Phe-Cys)-3Pal-NH2.
10. 10. Jedinjenje iz zahteva 1, pri čemu, jedinjenje je Pikolinoil-D-Val-Tyr-c(Cys-Dab(Et2)-Asp-Val-Gly-Pro-Phe-Cys)-3Pal-NH2; Pikolinoil-D-Val-Tyr-c(Cys-Dab(iPr)-Asp-Val-Gly-Pro-Phe-Cys)-3Pal-NH2; Pikolinoil(5-F)-D-Val-Tyr-c(Cys-Orn(iPr)-Asp-Val-Gly-Pro-Phe-Cys)-3Pal-NH2; Pikolinoil-D-Val-Tyr-c(Cys-Orn(Et2)-Asp-Val-Gly-Pro-Phe-Cys)-3Pal-NH2; Pikolinoil(5-F)-D-Val-Phe(2-Cbm)-c(Cys-Orn(iPr)-Asp-Val-Gly-Dhp-3Pal-Cys)-3Pal-NH2; Pikolinoil(5-F)-D-Val-Phe(2-Cbm)-c(Cys-Orn(iPr)-Asp-Val-Gly-Pro-3Pal-Cys)-3Pal-NH2; Oksazol-2-karbonil-D-Val-Phe(2-Cbm)-c(Cys-Orn(iPr)-Asp-Val-Gly-Pro-3Pal-Cys)-3Pal-NH2; Oksazol-2-karbonil-D-Val-Phe(2-Cbm)-c(Cys-Orn(iPr)-Asp-Val-Gly-Dhp-Phe(3-CH2NH2)-Cys)-3Pal-NH2; Oksazol-2-karbonil-D-Val-Phe(2-Cbm)-c(Cys-Orn(iPr)-Asp-Val-Gly-Dhp-4Aph-Cys)-3Pal-NH2; Oksazol-2-karbonil-D-Val-Phe(2-Cbm)-c(Cys-Orn(iPr)-Asp-Val-Gly-Dhp-4Uph-Cys)-3Pal-NH2; Pikolinoil(5-F)-D-Val-Tyr-c(Cys-Orn(iPr)-Asp-Val-Gly-Pro-Phe(4-CH2OH)-Cys)-3Pal-NH2; Pikolinoil(3,5-F2)-D-Val-Tyr-c(Cys-Orn(iPr)-Asp-Val-Gly-Pro-Phe-Cys)-3Pal-NH2; Pikolinoil(5-F)-D-Val-Phe(2-Cbm)-c(Cys-Orn(iPr)-Asp-Val-Gly-Dhp-Phe(4-CH2OH)-Cys)-3Pal-NH2; Oksazol-2-karbonil-D-Val-Phe(2-Cbm)-c(Cys-Orn(iPr)-Asp-Val-Gly-Pro-Phe(4-CH2OH)-Cys)-3Pal-NH2; Oksazol-2-karbonil-D-Val-Phe(2-Cbm)-c(Cys-Orn(iPr)-Asp-Val-Gly-Dhp-Phe(3-Cbm)-Cys)-3Pal-NH2; Pikolinoil(5-F)-D-Val-Phe(2-Cbm)-c(Cys-Orn(iPr)-Asp-Val-Gly-Dhp-Phe(2-Cbm)-Cys)-3Pal-NH2; Oksazol-2-karbonil-D-Val-Tyr-c(Cys-Orn(iPr)-Asp-Val-Gly-Dhp-Phe(3-Cbm)-Cys)-3Pal-NH2; Pikolinoil(5-F)-D-Val-Tyr-c(Cys-Orn(iPr)-Asp-Val-Gly-Dhp-Phe(3-Cbm)-Cys)-3Pal-NH2; ili Pikolinoil-D-Val-Tyr-c(Cys-Orn(iPr)-Asp-Val-Gly-Dhp-Phe(4-CH2OH)-Cys)-3Pal-NH2.
11. 11. Farmaceutska kompozicija koja sadrži jedinjenje iz bilo kog od zahteva 1 do 10 i farmaceutski prihvatljiv nosač.
12. 12. Farmaceutska kompozicija iz zahteva 11, pri čemu kompozicija sadrži vodeni rastvor.
13. 13. Farmaceutska kompozicija iz zahteva 12, pri čemu kompozicija sadrži vodeni rastvor natrijum hlorida.
14. 14. Farmaceutska kompozicija iz zahteva 13, pri čemu vodeni rastvor sadrži oko 0,9 mas.% natrijum hlorida.
15. 15. Jedinjenje iz bilo kog od zahteva 1 do 10 za lečenje migrene ili upotrebu u lečenju migrene.
16. 16. Jedinjenje izabrano od: Pikolinoil-D-Val-Tyr-c(Cys-Orn-Asp-Val-Gly-Pro-Phe(4-CH2OH)-Cys)-3Pal-NH2; ili Pikolinoil(3,5-F2)-D-Val-Tyr-c(Cys-Arg-Asp-Val-Gly-Pro-Phe-Cys)-3Pal-NH2; ili Bz(4-F)-D-Val-Tyr-c(Cys-Arg-Asp-Val-Gly-Pro-3Pal-Cys)-3Pal-NH2; ili Bz(4-F)-D-Val-Tyr-c(Cys-Dpr-Asp-Val-Gly-Pro-Phe(3-Cbm)-Cys)-3Pal-NH2; ili Bz(4-F)-D-Val-Phe(2-Cbm)-c(Cys-Arg-Asp-Val-Gly-Pro-Phe-Cys)-3Pal-NH2. Izdaje i štampa: Zavod za intelektualnu svojinu, Beograd, Kneginje Ljubice 5