RS61701B1

RS61701B1 - Jedinjenja amino-triazolopiridina i njihova upotreba u lečenju kancera

Info

Publication number: RS61701B1
Application number: RS20210447A
Authority: RS
Inventors: Maurice Raymond Verschoyle Finlay; Frederick Woolf Goldberg; Attilla Kuan Tsuei Ting
Original assignee: Astrazeneca Ab
Priority date: 2016-12-20
Filing date: 2017-12-19
Publication date: 2021-05-31
Also published as: PT3558997T; MA47079B1; NI201900062A; MX390535B; BR112019012217A2; CY1124239T1; EA201991399A1; DOP2019000168A; CA3046339A1; EP3558997B1; CN110177791B; PE20191474A1; NZ755222A; JP6883653B2; ZA201904695B; TWI776835B; AU2017384388B2; PL3558997T3; HRP20210548T1; JOP20190151A1

Description

Opis

OBLAST PRONALASKA

[0001] Specifikacija se uopšteno odnosi na jedinjenja supstituisanih amino-triazolopiridina i njihove farmaceutski prihvatljive soli. Ova jedinjenja i njihove farmaceutski prihvatljive soli selektivno moduliraju proteinsku kinazu zavisnu od DNK („DNK-PK“), i specifikacija se stoga takođe odnosi na upotrebu takvih jedinjenja i njihovih soli za lečenje ili prevenciju bolesti posredovanih putem DNK-PK, uključujući kancer. Specifikacija se dalje odnosi na kristalne oblike jedinjenja supstituisanih amino-triazolopiridina i njihove farmaceutski prihvatljive soli, farmaceutske kompozicije koje sadrže takva jedinjenja i soli; komplete koji sadrže takva jedinjenja i soli; postupke za proizvodnju takvih jedinjenja i soli; intermedijere korisne u proizvodnji takvih jedinjenja i soli; i na postupke za lečenje bolesti posredovane putem DNK-PK, uključujući kancer, koristeći takva jedinjenja i soli.

POZADINA PRONALASKA

[0002] DNK-PK je kompleks serin/treonin proteinske kinaze jedra sastavljen od katalitičke podjedinice DNK-PKcs i heterodimera Ku proteina (Ku70/Ku80). DNK-PK ima ključnu ulogu u popravci pucanja dvostrukih lanaca DNK (DSB), što služi za održanje njenog genomskog integriteta, i u procesu V(D)J rekombinacije, što dovodi do veoma raznovrsnog repertoara antitela/imunoglobulina i T ćelijskih receptora koji se mogu naći na B-, odnosno T-ćelijama. DNK-PK je takođe uključena u niz drugih bioloških procesa, uključujući modulaciju hromatinske strukture, održanje telomera, regulaciju transkripcije i odgovor na replikacioni stres (Smith i Jackson, 1999; Goodwin i Knudsen, 2014).

[0003] DSB DNK se smatraju najsmrtonosnijom lezijom na koju ćelija može naići. Radi suprotstavljanja ozbiljnim pretnjama koje predstavljaju DSB DNK, eukariotske ćelije su razvile nekoliko mehanizama za posredovanje u njihovoj popravci. Kod viših eukariota, dominantni mehanizam je spajanje nehomolognih krajeva (NHEJ) DNK. To je put popravke DSB sklon greškama koji obuhvata neposrednu ligaciju pokidanih krajeva DSB koja se javlja u svim fazama ćelijskog ciklusa, i poželjno se koristi tokom ranih faza G1/S, kada nije dostupan sestrinski hromatid predloška (Hartlerode i Scully, 2009). To je suprotno drugom značajnom putu popravke DSB, homolognoj rekombinaciji (HR), koja se javlja primarno u G2/M fazama ćelijskog ciklusa kada su dostupni neoštećeni sestrinski hromatidi (San Filippo et al. 2008). Ostali mehanizmi u osnovi odabira NHEJ ili HR za popravku DSB su nepotpuno definisani, mada se NHEJ koristi za popravku tupih, minimalno obrađenih krajeva DNK, pri čemu je resekcija 3' kraja potrebna da bi došlo do HR (Symington i Gautier, 2011). Resekcija kraja se kontroliše uzajamnim dejstvom BRCA1 i 53BP1, pri čemu 53BP1 podržava NHEJ putem suzbijanja resekcije kraja (Escribano-Diaz et al.2013).

[0004] NHEJ započinje prepoznavanjem i vezivanjem pokidanih krajeva DNK Ku70/Ku80 heterodimerom u obliku prstena, nakon čega se DNK-PKcs regrutuje putem interakcije sa Ku i DNK. Regrutacija DNK-PKcs olakšava prelazak Ku heterodimera u dvojnu spiralu DNK, što omogućava da DNK-PKcs služe kao veza za pokidane krajeve DNK i da spreče razgradnju putem egzonukleaza (Yoo i Dynan, 1999). Vezivanje za DNK pospešuje aktivaciju katalitičke aktivnosti DNK-PKcs. Možda i najvažniji supstrat DNK-PK je sama podjedinica kinaze, pošto je autofosforilacija ključna za regulisanje obrade krajeva DNK, inaktivaciju enzima i disocijaciju kompleksa (Chan et al.2002). Najbolje okarakterisana mesta za autofosforilaciju su Ser2056 i Thr2609 (Douglas et al. 2002). DNK-PKcs fosforiluje i menja aktivnost niza supstrata koji posreduju NHEJ, uključujući Artemis, Ku70, Ku80 i DNK ligazu 4 (Neal i Meek, 2011); takođe fosforiluje Ser139 na histonskoj varijanti H2AX (γH2AX); to je dobro poznati marker pucanja dvostrukih lanaca DNK (An et al.2010).

[0005] Pucanje dvostrukog lanca može da nastane endogeno putem proizvodnje reaktivnih vrsta kiseonika tokom metabolizma, ili putem razvojne V(D)J rekombinacije u imunološkom sistemu, i egzogeno putem jonizujuće radijacije, radiomimetičkih lekova kao što je bleomicin, i inhibitora topoizomeraze II kao što je etopozid i doksorubicin. Inhibitori DNK-PK će stoga verovatno povećati letalnost ovih agenasa. Inhibitori DNK-PK takođe mogu biti delotvorni i kao pojedinačni agensi kod tumora sa visokim endogenim nivoima oštećenja DNK nastalim usled kvara drugih puteva popravke DNK, poput HR i popravke pogrešnog sparivanja. Na primer, pokazalo se da su inhibitori DNK-PK delotvorni kao pojedinačni agensi protiv limfoma sa nedostatkom ATM (Riabinska et al.2013). ATM je značajan za popravku HR, a kada ćelije kancera imaju nedostatak ATM, ćelije su „zavisne od“ NHEJ za opstanak preživljavanja. Sintetička smrtonosna interakcija je takođe pokazana između DNK-PK i MSH3 (Deitlein et al.

2014). DNK-PK je član familije proteinskih kinaza srodnih sa fosfatidilinozitol 3-kinazom (PIKK) i inhibitori DNK-PK starije generacije poput NU7026, NU7441, KU-0060648 i CC-115 su imali lošu selektivnost u odnosu na druge članove porodice PIKK. Međutim, ova jedinjenja su pokazala terapeutski potencijal ciljanja DNK-PK konzistentan sa poznatim mehanizmima delovanja proteina DNK-PK. Na primer, NU7026 i KU-0060648 mogu da pojačaju citotoksičnost inhibitora topoizomeraze II (Willmore et al.2004; Munck et al.2012), a NU7441 je pojačavao dejstvo jonizujuće radijacije na modelima kancera dojke (Ciszewski et al. 2014). Ostale primene inhibitora DNK-PK u onkologiji mogu da uključuju ciljanje tumora sa visokim nivoima replikacionog stresa (Lin et al. 2014; Ashley et al. 2014; Buisson et al.

2015), bilo kao monoterapiju ili u kombinaciji sa drugim agensima kao što su Wee1, ATR ili CHK inhibitori, ili kao kombinovanu terapiju sa endokrinim agensima kod kancera prostate (Goodwin et al.2013) i dojke (Medunjanin et al.2010).

[0006] EP2527344 opisuje derivate piridin-2(1H)-ona koji su korisni kao lekovi za lečenje mijeloproliferativnih poremećaja, odbacivanja transplantata, imunološki posredovanih i inflamatornih bolesti.

[0007] US2013/245029 opisuje inhibitore TOR kinaze za lečenje ili prevenciju Juingovog sarkoma koji prekomerno eksprimira ETS.

[0008] WO2008/043031 opisuje 6-supstituisani 2-(benzimidazolil)purinske i purinonske derivate korisne za prevenciju i lečenje autoimunskih bolesti, inflamatornih bolesti, bolesti posredovane mastocitima i odbacivanja transplantata.

[0009] WO2009/122180 opisuje pirimidinske derivate korisne za lečenje različitih terapeutskih poremećaja kao inhibitore jedne ili više kinaza.

[0010] Shodno tome, postoji potreba za inhibitorima DNK-PK koji su selektivni, pokazuju dobru bioraspoloživost i pogodni su za doziranje.

SAŽETAK PRONALASKA

[0011] Ukratko, ova specifikacija opisuje, delimično, jedinjenje formule (I):

ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so, pri čemu:

R<1>je cikloheksil, tetrahidrofuranil ili oksanil prsten, od kojih je svaki opciono supstituisan sa jednom ili više grupa izabranih od hidroksil, metoksi i metil; i R<2>je vodonik ili metil.

[0012] Ova specifikacija takođe opisuje, delimično, farmaceutsku kompoziciju koja sadrži jedinjenje formule (I) ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so, i najmanje jedan farmaceutski prihvatljiv razblaživač ili nosač.

[0013] Ova specifikacija takođe opisuje, delimično, jedinjenje formule (I) ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so za upotrebu u terapiji.

[0014] Ova specifikacija takođe opisuje, delimično, jedinjenje formule (I) ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so, za upotrebu u lečenju kancera.

[0015] Ova specifikacija takođe opisuje, delimično, jedinjenje formule (I) ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so, za proizvodnju leka za lečenje kancera.

[0016] Ova specifikacija takođe opisuje, delimično, postupak za lečenje kancera kod toplokrvne životinje kojoj je potrebno takvo lečenje, koji obuhvata primenu na navedenoj toplokrvnoj životinji terapeutski delotvorne količine jedinjenja formule (I) ili njegove farmaceutski prihvatljive soli.

KRATAK OPIS SLIKA

[0017]

Slika 1 prikazuje XRPD za oblik A 7-metil-2-((7-metil-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-6-il)amino)-9-(tetrahidro-2H-piran-4-il)-7,9-dihidro-8H-purin-8-ona (jedinjenje A, primer 3).

Slika 2 prikazuje DSC za oblik A 7-metil-2-((7-metil-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-6-il)amino)-9-(tetrahidro-2H-piran-4-il)-7,9-dihidro-8H-purin-8-ona (jedinjenje A, primer 3).

Slika 3 prikazuje XRPD za oblik A 9-((1s,4s)-4-hidroksi-4-metilcikloheksil)-7-metil-2-((7-metil-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-6-il)amino)-7,9-dihidro-8H-purin-8-ona (jedinjenje B, primer 10).

Slika 4 prikazuje DSC za oblik A 9-((1s,4s)-4-hidroksi-4-metilcikloheksil)-7-metil-2-((7-metil-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-6-il)amino)-7,9-dihidro-8H-purin-8-ona (jedinjenje B, primer 10).

Slika 5 prikazuje inhibiciju rasta tumora na modelu mišjeg ksenografta pomoću 7-metil-2-((7-metil-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-6-il)amino)-9-(tetrahidro-2H-piran-4-il)-7,9-dihidro-8H-purin-8-ona (jedinjenje A, primer 3) u kombinaciji sa olaparibom. Slika 6 prikazuje in vitro aktivnost 7-metil-2-((7-metil-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-6-il)amino)-9-(tetrahidro-2H-piran-4-il)-7,9-dihidro-8H-purin-8-ona (jedinjenje A, primer 3) u kombinaciji sa AZD6738, koji je inhibitor ATR.

Slika 7 prikazuje in vitro aktivnost 7-metil-2-((7-metil-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-6-il)amino)-9-(tetrahidro-2H-piran-4-il)-7,9-dihidro-8H-purin-8-ona (jedinjenje A, primer 3) u kombinaciji sa AZD0156, koji je inhibitor ATM.

OPIS ILUSTRATIVNIH OTELOTVORENJA

[0018] Mnoga otelotvorenja iz pronalaska su prikazana u specifikaciji i biće jasna čitaocu sa znanjem i veštinama u struci.

[0019] U prvom otelotvorenju, obezbeđeno je jedinjenje formule (I):

ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, pri čemu:

R<1>je cikloheksil, tetrahidrofuranil ili oksanil prsten, svaki od kojih je opciono supstituisan sa jednom ili više grupa izabranih od hidroksil, metoksi i metil, i R<2>je vodonik ili metil.

[0020] Termin „cikloheksil prsten“ se odnosi na karbociklični prsten koji sadrži šest atoma ugljenika i nema heteroatome. 1-metoksicikloheks-4-il grupa i 4-metoksicikloheks-1-il grupa imaju istu strukturu, kako je prikazano u nastavku.

[0021] Cis-1-metoksi-cikloheks-4-il grupa je ekvivalentna cis-4-metoksi-cikloheks-1-il grupi i ima sledeću strukturu:

[0022] Iste konvencije važe i za druge cikloheksil grupe, na primer, 1-hidroksicikloheks-4-il grupu i 4-hidroksicikloheks-1-il grupu.

[0023] Termin „tetrahidrofuranil prsten“ uključuje tetrahidrofuran-3-il čija struktura je prikazana u nastavku.

[0024] Termin „oksanil prsten“ uključuje oksan-3-il i oksan-4-il grupu, čije strukture su prikazane u nastavku.

[0025] U prethodnim strukturama, isprekidana linija označava poziciju vezivanja relevantne grupe.

[0026] Oksanil prsten takođe može da se nazove tetrahidropiranil prsten. Slično tome, oksan-4-il prsten može da se nazove tetrahidropiran-4-il prsten, a oksan-3-il prsten može da se nazove tetrahidropiran-3-il prsten.

[0027] Kada se koristi termin „opcioni“, on označava da se sledeće svojstvo može, ali i ne mora javiti. Tako, upotreba termina „opciono“ uključuje slučajeve kada je svojstvo prisutno, kao i slučajeve kada svojstvo nije prisutno. Na primer, grupa „opciono supstituisana jednom metoksi grupom“ uključuje grupe sa metoksi supstituentom i bez njega.

[0028] Termin „supstituisani“ znači da je jedan ili više vodonika (na primer, 1 ili 2 vodonika, ili alternativno 1 vodonik) na naznačenoj grupi zamenjeno naznačenim supstituentima (na primer, 1 ili 2 supstituenta, ili alternativno 1 supstituent), pod uslovom da svi atomi koji nose supstituent zadržavaju dozvoljenu valentnost. Kombinacije supstituenata obuhvataju samo stabilna jedinjenja i stabilne sintetičke intermedijere. „Stabilni“ znači da su relevantno jedinjenje ili intermedijer dovoljno robusni da se izoluju i budu korisni bilo kao sintetički intermedijer ili kao agens koji ima potencijalnu terapeutsku upotrebljivost. Ako grupa nije opisana kao „supstituisana“ ili „opciono supstituisana“, treba je smatrati nesupstituisanom (tj. nijedan od vodonika na naznačenoj grupi nije zamenjen).

[0029] Termin „farmaceutski prihvatljivo“ se koristi da se naznači da je predmet (na primer, so, dozni oblik, razblaživač ili nosač) pogodan za upotrebu na pacijentima. Spisak primera farmaceutski prihvatljivih soli može se naći u priručniku Handbook of Pharmaceutical Salts: Properties, Selection and Use, P. H. Stahl i C. G. Wermuth, urednici, Weinheim/Zürich:Wiley-VCH/VHCA, 2002. Odgovarajuća farmaceutski prihvatljiva so jedinjenja formule (I) je, na primer, kisela adiciona so. Kisela adiciona so jedinjenja formule (I) može da se napravi dovođenjem jedinjenja u kontakt sa odgovarajućom neorganskom ili organskom kiselinom pod uslovima koji su poznati stručnjaku. Kisela adiciona so može, na primer, da se napravi koristeći neorgansku kiselinu izabranu iz grupe koja se sastoji od hlorovodonične kiseline, bromovodonične kiseline, sumporne kiseline i fosforne kiseline. Kisela adiciona so može da se napravi koristeći organsku kiselinu izabranu iz grupe koja se sastoji od trifluorsirćetne kiseline, limunske kiseline, maleinske kiseline, oksalne kiseline, sirćetne kiseline, mravlje kiseline, benzojeve kiseline, fumarne kiseline, sukcinske kiseline, vinske kiseline, mlečne kiseline, piruvinske kiseline, metansulfonske kiseline, benzensulfonske kiseline i para-toluensulfonske kiseline.

[0030] Stoga, u jednom otelotvorenju je obezbeđeno jedinjenje formule (I) ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, pri čemu farmaceutski prihvatljiva so predstavlja so hlorovodonične kiseline, bromovodonične kiseline, sumporne kiseline, fosforne kiseline, trifluorsirćetne kiseline, limunske kiseline, maleinske kiseline, oksalne kiseline, sirćetne kiseline, mravlje kiseline, benzojeve kiseline, fumarne kiseline, sukcinske kiseline, vinske kiseline, mlečne kiseline, piruvinske kiseline, metansulfonske kiseline, benzensulfonske kiseline ili para-toluensulfonske kiseline. U jednom otelotvorenju, obezbeđeno je jedinjenje formule (I) ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, pri čemu farmaceutski prihvatljiva so predstavlja so trifluorsirćetne kiseline, mravlje kiseline ili metansulfonske kiseline. U jednom otelotvorenju, obezbeđeno je jedinjenje formule (I) ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, pri čemu farmaceutski prihvatljiva so predstavlja so trifluorsirćetne kiseline ili metansulfonske kiseline. U jednom otelotvorenju, obezbeđeno je jedinjenje formule (I) ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, pri čemu farmaceutski prihvatljiva so predstavlja so metansulfonske kiseline. U jednom otelotvorenju, obezbeđeno je jedinjenje formule (I) ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, pri čemu farmaceutski prihvatljiva so predstavlja so mono-metansulfonske kiseline, tj. stehiometrija jedinjenja formule (I) prema metansulfonskoj kiselini je 1:1.

[0031] Dalje otelotvorenje pruža bilo koje od ovde definisanih otelotvorenja (na primer, otelotvorenje iz zahteva 1) uz uslov da je jedan ili više specifičnih primera (na primer, jedan, dva ili tri specifična primera) odabranih iz grupe koja se sastoji od primera 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12 i 13 pojedinačno poreknuto.

[0032] Dalje otelotvorenje pruža bilo koje od ovde definisanih otelotvorenja (na primer, otelotvorenje iz zahteva 1) uz uslov da je jedan ili više specifičnih primera (na primer, jedan, dva ili tri specifična primera) odabranih iz grupe koja se sastoji od primera 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 i 10 pojedinačno poreknuto.

[0033] Neke vrednosti varijabilnih grupa u formuli (I) su sledeće. Takve vrednosti mogu da se koriste u kombinaciji sa bilo kojom od definicija, zahteva (na primer, zahtev 1) ili ovde definisanih otelotvorenja kako bi se obezbedila dalja otelotvorenja.

a) R<1>je cikloheksil prsten koji je opciono supstituisan sa jednom ili više grupa izabranih od hidroksil, metoksi i metil, ili je R<1>tetrahidrofuranil ili oksanil prsten.

b) R<1>je cikloheksil prsten koji je opciono supstituisan sa jednom ili više grupa izabranih od hidroksil, metoksi i metil.

c) R<1>je tetrahidrofuranil ili oksanil prsten.

d) R<1>je cikloheksil prsten koji je opciono supstituisan sa jednom hidroksilnom ili metoksi grupom.

e) R<1>je cikloheksil prsten koji je opciono supstituisan hidroksilnom i metil grupom. f) R<1>je 1-metoksi-cikloheks-4-il, 1-hidroksi-cikloheks-4-il, 1-hidroksi-1-methilheks-4il ili 1-hidroksi-4-metil-cikloheks-4-il.

g) R<1>je 1-metoksi-cikloheks-4-il, 1-hidroksi-cikloheks-4-il ili 1-hidroksi-1-metilcikloheks-4il.

h) R<1>je 1-hidroksi-1-metil-cikloheks-4-il.

i) R<1>je cis-1-hidroksi-1-metil-cikloheks-4-il.

j) R<1>je cis-1-metoksi-ciklobut-4-il ili cis-1-hidroksi-cikloheks-4-il.

k) R<1>je cis-1-hidroksi-cikloheks-4-il.

l) R<1>je oksetanil prsten.

m) R<1>je oksetan-3-il.

n) R<1>je cikloheksil prsten.

o) R<1>je tetrahidrofuranil prsten.

p) R<1>je tetrahidrofuran-3-il.

1

q) R<1>je oksanil prsten.

r) R<1>je oksan-3-il.

s) R<1>je oksan-4-il.

t) R<2>je vodonik.

u) R<2>je metil.

[0034] U jednom otelotvorenju, obezbeđeno je jedinjenje formule (I) ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, pri čemu je jedinjenje izabrano iz grupe koja se sastoji od:

9-((1r,4r)-4-hidroksicikloheksil)-7-metil-2-((7-metil-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-6-il)amino)-7,9-dihidro-8H-purin-8-ona;

9-((1s,4s)-4-hidroksicikloheksil)-7-metil-2-((7-metil-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-6-il)amino)-7,9-dihidro-8H-purin-8-ona;

7-metil-2-((7-metil-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-6-il)amino)-9-(tetrahidro-2H-piran-4-il)-7,9-dihidro-8H-purin-8-ona;

2-((2,7-dimetil-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-6-il)amino)-7-metil-9-(tetrahidro-2H-piran-4-il)-7,9-dihidro-8H-purin-8-ona;

9-((1s,4s)-4-metoksicikloheksil)-7-metil-2-((7-metil-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-6-il)amino)-7,9-dihidro-8H-purin-8-ona;

9-((1r,4r)-4-metoksicikloheksil)-7-metil-2-((7-metil-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-6-il)amino)-7,9-dihidro-8H-purin-8-ona;

(S)-7-metil-2-((7-metil-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-6-il)amino)-9-(tetrahidro-2H-piran-3-il)-7,9-dihidro-8H-purin-8-ona;

(R)-7-metil-2-((7-metil-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-6-il)amino)-9-(tetrahidro-2H-piran-3-il)-7,9-dihidro-8H-purin-8-ona;

9-((1r,4r)-4-hidroksi-4-metilcikloheksil)-7-metil-2-((7-metil-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-6-il)amino)-7,9-dihidro-8H-purin-8-ona;

9-((1s,4s)-4-hidroksi-4-metilcikloheksil)-7-metil-2-((7-metil-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-6-il)amino)-7,9-dihidro-8H-purin-8-ona;

(S)-7-metil-2-((7-metil-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-6-il)amino)-9-(tetrahidrofuran-3-il)-7,9-dihidro-8H-purin-8-ona;

9-((1s,4s)-4-hidroksi-1-metilcikloheksil)-7-metil-2-((7-metil-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-6-il)amino)-7,9-dihidro-8H-purin-8-ona; i

9-cikloheksil-7-metil-2-((7-metil-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-6-il)amino)-7,9-dihidro-8H-purin-8-ona.

[0035] U jednom otelotvorenju, obezbeđeno je jedinjenje formule (I) ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, pri čemu je jedinjenje izabrano iz grupe koja se sastoji od:

9-((1r,4r)-4-hidroksi-4-metilcikloheksil)-7-metil-2-((7-metil-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-6-il)amino)-7,9-dihidro-8H-purin-8-ona; i

9-((1s,4s)-4-hidroksi-4-metilcikloheksil)-7-metil-2-((7-metil-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-6-il)amino)-7,9-dihidro-8H-purin-8-ona.

[0036] U jednom otelotvorenju, obezbeđeno je jedinjenje formule (I) ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, pri čemu je jedinjenje izabrano iz grupe koja se sastoji od:

7-metil-2-((7-metil-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-6-il)amino)-9-(tetrahidro-2H-piran-4-il)-7,9-dihidro-8H-purin-8-ona; i

[0037] U jednom otelotvorenju, obezbeđeno je jedinjenje formule (I) ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, pri čemu je jedinjenje 7-metil-2-((7-metil-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-6-il)amino)-9-(tetrahidro-2H-piran-4-il)-7,9-dihidro-8H-purin-8-on.

[0038] U jednom otelotvorenju, obezbeđeno je jedinjenje formule (I) ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, pri čemu je jedinjenje 9-((1r,4r)-4-hidroksi-4-metilcikloheksil)-7-metil-2-((7-metil-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-6-il)amino)-7,9-dihidro-8H-purin-8-on.

[0039] U jednom otelotvorenju, obezbeđeno je jedinjenje formule (I) ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, pri čemu je jedinjenje 9-((1s,4s)-4-hidroksi-4-metilcikloheksil)-7-metil-2-((7-metil-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-6-il)amino)-7,9-dihidro-8H-purin-8-on.

[0040] Jedinjenja i soli opisani u ovoj specifikaciji mogu da postoje u solvatisanom obliku i nesolvatisanom obliku. Na primer, solvatisani oblik može biti hidratni oblik, kao što je hemihidrat, monohidrat, dihidrat, trihidrat, ili njegova alternativna količina. Pronalazak obuhvata sve takve solvatisane i nesolvatisane oblike jedinjenja formule (I), naročito u meri u kojoj takvi oblici imaju inhibitorsku aktivnost DNK-PK, kako je, na primer, izmereno testovima koji su ovde opisani.

[0041] Atomi jedinjenja i soli opisanih u ovoj specifikaciji mogu da postoje kao njihovi izotopi. Pronalazak obuhvata sva jedinjenja formule (I) u kojima je atom zamenjen sa jednim ili više svojih izotopa (na primer, jedinjenje formule (I) gde je jedan ili više atoma ugljenika<11>C ili<13>C izotop ugljenika, ili gde je jedan ili više atoma vodonika<2>H ili<3>H izotop, ili gde je jedan ili više atoma azota<15>N izotop ili gde je jedan ili više atoma ugljenika<17>O ili<18>O izotop).

[0042] Jedinjenja i soli opisani u ovoj specifikaciji mogu da postoje u optički aktivnim ili racemskim oblicima usled jednog ili više asimetričnih atoma ugljenika. Pronalazak uključuje sve optički aktivne ili racemske oblike jedinjenja formule (I) koji poseduju inhibitorsku aktivnost DNK-PK, kako je, na primer, izmereno testovima koji su ovde opisani. Sinteza optički aktivnih oblika može da se sprovede standardnim tehnikama organske hemije koje su dobro poznate u struci, na primer, sintezom koristeći optički aktivne supstance, ili rezolucijom racemskog oblika.

[0043] Prema tome, u jednom otelotvorenju je obezbeđeno jedinjenje formule (I) ili njegova farmaceutski prihvatljiva so koje je pojedinačni optički izomer koji je u enantiomernom višku (%ee) od ≥ 95%, ≥ 98% ili ≥ 99%. U jednom otelotvorenju, pojedinačni optički izomer je prisutan u enantiomernom višku (%ee) ≥ 99%.

[0044] Neka od jedinjenja formule (I) mogu biti kristalna i mogu imati više od jednog kristalnog oblika. Podrazumeva se da otkriće obuhvata sve kristalne ili amorfne oblike, ili njihove smeše, pri čemu taj oblik poseduje svojstva korisna u inhibitorskoj aktivnosti DNK-PK. Dobro je poznato kako se određuje delotvornost kristalnog ili amorfnog oblika pomoću standardnih testova opisanih u nastavku.

[0045] Uopšteno je poznato da kristalne supstance mogu da se analiziraju koristeći konvencionalne tehnike, na primer, poput analize rendgenskom difrakcijom praha (nadalje XRPD) i diferencijalne skenirajuće kalorimetrije (DSC).

1

[0046] Na primer, jedinjenje iz primera 3, 7-metil-2-((7-metil-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-6-il)amino)-9-(tetrahidro-2H-piran-4-il)-7,9-dihidro-8H-purin-8-on, ispoljava kristaliničnost, i identifikovan je kristalni oblik, oblik A.

[0047] Shodno tome, u daljem aspektu je obezbeđen oblik A jedinjenja A (primer 3, 7-metil-2-((7-metil-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-6-il)amino)-9-(tetrahidro-2H-piran-4-il)-7,9-dihidro-8H-purin-8-on).

[0048] U skladu sa predmetnim otkrićem obezbeđen je kristalni oblik, oblik A jedinjenja A, koji ima obrazac XRPD sa najmanje jednim specifičnim pikom na oko 2-teta = 7,6°, kako je izmereno koristeći CuKa radijaciju.

[0049] U skladu sa predmetnim otkrićem obezbeđen je kristalni oblik, oblik A jedinjenja A, koji ima obrazac XRPD sa najmanje jednim specifičnim pikom na oko 2-teta = 18,7°, kako je izmereno koristeći CuKa radijaciju.

[0050] U skladu sa predmetnim otkrićem obezbeđen je kristalni oblik, oblik A jedinjenja A, koji ima obrazac XRPD sa najmanje dva specifična pika na oko 2-teta = 7,6° i 18,7°, kako je izmereno koristeći CuKa radijaciju.

[0051] U skladu sa predmetnim otkrićem obezbeđen je kristalni oblik, oblik A jedinjenja A, koji ima obrazac XRPD sa specifičnim pikovima na oko 2-teta = 7,6, 9,3, 11,7, 14,3, 15,1, 18,7, 23,2, 24,7, 26,4, 27,2°, kako je izmereno koristeći CuKa radijaciju.

[0052] U skladu sa predmetnim otkrićem obezbeđen je kristalni oblik, oblik A jedinjenja A, koji ima obrazac XRPD suštinski isti kao obrazac XRPD prikazan na slici 1.

[0053] U skladu sa predmetnim otkrićem obezbeđen je kristalni oblik, oblik A jedinjenja A, koji ima obrazac XRPD sa najmanje jednim specifičnim pikom na 2-teta = 7,6° plus ili minus 0,2° 2-teta, kako je izmereno koristeći CuKa radijaciju.

[0054] U skladu sa predmetnim otkrićem obezbeđen je kristalni oblik, oblik A jedinjenja A, koji ima obrazac XRPD sa najmanje jednim specifičnim pikom na 2-teta = 18,7° plus ili minus 0,2° 2-teta, kako je izmereno koristeći CuKa radijaciju.

[0055] U skladu sa predmetnim otkrićem obezbeđen je kristalni oblik, oblik A jedinjenja A, koji ima obrazac XRPD sa najmanje dva specifična pika na 2-teta = 7,6° i 18,7°, pri čemu navedene vrednosti mogu biti plus ili minus 0,2° 2-teta, kako je izmereno koristeći CuKa radijaciju.

[0056] U skladu sa predmetnim otkrićem obezbeđen je kristalni oblik, oblik A jedinjenja A, koji ima obrazac XRPD sa specifičnim pikovima na 2-teta = 7,6, 9,3, 11,7, 14,3, 15,1, 18,7, 23,2, 24,7, 26,4, 27,2°, pri čemu navedene vrednosti mogu biti plus ili minus 0,2° 2-teta, kako je izmereno koristeći CuKa radijaciju.

[0057] DSC analiza jedinjenja A, oblika A pokazuje endotermu topljenja sa početkom na oko 261,8°C plus ili minus 0,5°C i pikom na oko 262,7°C plus ili minus 0,5°C (Slika 2).

[0058] Jedinjenje iz primera 10, 9-((1s,4s)-4-hidroksi-4-metilcikloheksil)-7-metil-2-((7-metil-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-6-il)amino)-7,9-dihidro-8H-purin-8-on, ispoljava kristaliničnost i identifikovan je kristalni oblik, oblik A.

[0059] U skladu sa tim, u daljem aspektu je obezbeđen oblik A jedinjenja B (primer 10, 9-((1s,4s)-4-hidroksi-4-metilcikloheksil)-7-metil-2-((7-metil-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-6-il)amino)-7,9-dihidro-8H-purin-8-on).

[0060] U skladu sa predmetnim otkrićem obezbeđen je kristalni oblik, oblik A jedinjenja B, koji ima obrazac XRPD sa najmanje jednim specifičnim pikom na oko 2-teta = 8,8°, kako je izmereno koristeći CuKa radijaciju.

[0061] U skladu sa predmetnim otkrićem obezbeđen je kristalni oblik, oblik A jedinjenja B, koji ima obrazac XRPD sa najmanje jednim specifičnim pikom na oko 2-teta = 12,7°, kako je izmereno koristeći CuKa radijaciju.

[0062] U skladu sa predmetnim otkrićem obezbeđen je kristalni oblik, oblik A jedinjenja B, koji ima obrazac XRPD sa najmanje dva specifična pika na oko 2-teta = 8,8° i 12,7°, kako je izmereno koristeći CuKa radijaciju.

1

[0063] U skladu sa predmetnim otkrićem obezbeđen je kristalni oblik, oblik A jedinjenja B, koji ima obrazac XRPD sa specifičnim pikovima na oko 2-teta = 5,1, 8,8, 10,3, 12,7, 13,0, 13,8, 14,8, 16,5, 23,8, 24,2°, kako je izmereno koristeći CuKa radijaciju.

[0064] U skladu sa predmetnim otkrićem obezbeđen je kristalni oblik, oblik A jedinjenja B, koji ima obrazac XRPD suštinski isti kao obrazac rendgenske difrakcije praha prikazan na Slici 3.

[0065] U skladu sa predmetnim otkrićem obezbeđen je kristalni oblik, oblik A jedinjenja B, koji ima obrazac XRPD sa najmanje jednim specifičnim pikom na 2-teta = 8,8° plus ili minus 0,2° 2-teta, kako je izmereno koristeći CuKa radijaciju.

[0066] U skladu sa predmetnim otkrićem obezbeđen je kristalni oblik, oblik A jedinjenja B, koji ima obrazac XRPD sa najmanje jednim specifičnim pikom na 2-teta = 12,7° plus ili minus 0,2° 2-teta, kako je izmereno koristeći CuKa radijaciju.

[0067] U skladu sa predmetnim otkrićem obezbeđen je kristalni oblik, oblik A jedinjenja B, koji ima obrazac XRPD sa najmanje dva specifična pika na 2-teta = 8,8° i 12,7°, pri čemu navedene vrednosti mogu biti plus ili minus 0,2° 2-teta, kako je izmereno koristeći CuKa radijaciju.

[0068] U skladu sa predmetnim otkrićem obezbeđen je kristalni oblik, oblik A jedinjenja B, koji ima obrazac XRPD sa specifičnim pikovima na 2-teta = 5,1, 8,8, 10,3, 12,7, 13,0, 13,8, 14,8, 16,5, 23,8, 24,2°, pri čemu navedene vrednosti mogu biti plus ili minus 0,2° 2-teta, kako je izmereno koristeći CuKa radijaciju.

[0069] DSC analiza jedinjenja B, oblika A pokazuje endotermu topljenja sa početkom na oko 235,6°C plus ili minus 0,5°C i pikom na oko 236,9°C plus ili minus 0,5°C (Slika 4).

[0070] Kada se kaže da se predmetno otkriće odnosi na kristalni oblik oblika A jedinjenja A ili jedinjenja B, stepen kristaliničnosti je pogodno veći od oko 60%, pogodnije veći od oko 80%, poželjno veći od oko 90%, a još poželjnije veći od oko 95%. Najpoželjnije je da je stepen kristaliničnosti veći od oko 98%.

1

[0071] Podrazumeva se da se vrednosti 2-teta obrasca XRPD mogu malo razlikovati između mašina ili uzoraka, te tako navedene vrednosti ne treba tumačiti kao apsolutne.

[0072] Poznato je da se može dobiti obrazac XRPD koji ima jednu ili više grešaka merenja, u zavisnosti od uslova merenja (kao što je upotrebljena oprema ili mašina). Konkretno, opšte je poznato da intenzitet u obrascu XRPD može da varira u zavisnosti od uslova merenja. Stoga treba razumeti da jedinjenje A, oblik A i jedinjenje B, oblik A iz predmetnog otkrića nisu ograničeni na kristale koji daju obrasce XRPD identične sa obrascem XRPD koji je prikazan na Slikama 1 i 3, i svi kristali koji daju obrasce XRPD suštinski iste onima prikazanim na Slikama 1 i 3 spadaju u opseg predmetnog otkrića. Osoba sa znanjem i veštinama u oblasti XRPD može da prosudi o suštinskoj identičnosti XRPD obrazaca.

[0073] Osobe sa znanjem i veštinama u oblasti XRPD će razumeti da relativni intenzitet pika takođe može biti pod uticajem, na primer, zrna većih od 30 mikrona i neuniformnih proporcija, što može da utiče na analizu uzoraka. Stručnjak će takođe razumeti da na poziciju refleksije može da utiče precizna visina na kojoj uzorak naleže u difraktometru, i nulta kalibracija difraktometra. Površinska planarnost uzorka takođe može da ima mali uticaj. Stoga predstavljene podatke o obrascu difrakcije ne treba uzeti kao apsolutne vrednosti. (Jenkins, R i Snyder, R.L. 'Introduction to X-Ray Powder Diffractometry' John Wiley & Sons 1996; Bunn, C.W. (1948), Chemical Crystallography, Clarendon Press, London; Klug, H. P. i Alexander, L. E. (1974), X-Ray Diffraction Procedures).

[0074] Uopšteno, greška merenja ugla difrakcije u rendgenskom difraktogramu praha je približno plus ili minus 0,2° 2-teta, i takav stepen greške merenja treba uzeti u obzir prilikom razmatranja obrasca XRPD na slikama 1 i 3 i prilikom čitanja Tabela A i B. Nadalje, treba da bude jasno da intenzitet može da varira u zavisnosti od uslova eksperimenta i pripreme uzorka (poželjna orijentacija).

[0075] Jedinjenja formule (I) mogu, na primer, da se pripreme reakcijom jedinjenja formule (II):

1

ili njegove soli, gde je R<1>kako je definisano u bilo kom od ovde datih otelotvorenja, ili njegov zaštićeni oblik, i X je odlazeća grupa (na primer, atom halogena, kao što je atom hlora) sa jedinjenjem formule (III):

ili njegovom solju. Reakcija se pogodno obavlja u odgovarajućem rastvaraču (na primer, 1,4-dioksan) u prisustvu baze (na primer, cezijum karbonat) i opciono u prisustvu odgovarajućeg katalizatora (na primer, Brettphos 3. generacije) na odgovarajućoj temperaturi (na primer, temperatura u rasponu od oko 80-100°C).

[0076] Jedinjenja formule (II) ili (III), i njihove soli su stoga korisna kao intermedijeri u pripremi jedinjenja formule (I), i daju dalje otelotvorenje. U jednom otelotvorenju, obezbeđeno je jedinjenje formule (II), ili njegova so, pri čemu:

R<1>je cikloheksil, tetrahidrofuranil ili oksanil prsten, od kojih je svaki opciono supstituisan sa jednom ili više grupa izabranih od hidroksil, metoksi i metil;

i

X je odlazeća grupa.

[0077] U jednom otelotvorenju, X je atom halogena ili triflatna grupa. U jednom otelotvorenju, X je atom hlora.

1

[0078] U bilo kom od otelotvorenja u kojima se pominje jedinjenje formule (II) ili (III) ili njegova so, jasno je da takve soli ne moraju biti farmaceutski prihvatljive soli. Odgovarajuća so jedinjenja formule (II) ili (III) je, na primer, kisela adiciona so. Kisela adiciona so jedinjenja formule (II) ili (III) može da se napravi dovođenjem jedinjenja u kontakt sa odgovarajućom neorganskom ili organskom kiselinom u uslovima koji su poznati stručnjaku. Kisela adiciona so može, na primer, da se napravi koristeći neorgansku kiselinu izabranu iz grupe koja se sastoji od hlorovodonične kiseline, bromovodonične kiseline, sumporne kiseline i fosforne kiseline. Kisela adiciona so može da se napravi koristeći organsku kiselinu izabranu iz grupe koja se sastoji od trifluorsirćetne kiseline, limunske kiseline, maleinske kiseline, oksalne kiseline, sirćetne kiseline, mravlje kiseline, benzojeve kiseline, fumarne kiseline, sukcinske kiseline, vinske kiseline, mlečne kiseline, piruvinske kiseline, metansulfonske kiseline, benzensulfonske kiseline i para-toluensulfonske kiseline.

[0079] Stoga, u jednom otelotvorenju je obezbeđeno jedinjenje formule (II) ili (III) ili njegova so, pri čemu so predstavlja so hlorovodonične kiseline, bromovodonične kiseline, sumporne kiseline, fosforne kiseline, trifluorsirćetne kiseline, limunske kiseline, maleinske kiseline, oksalne kiseline, sirćetne kiseline, mravlje kiseline, benzojeve kiseline, fumarne kiseline, sukcinske kiseline, vinske kiseline, mlečne kiseline, piruvinske kiseline, metansulfonske kiseline, benzensulfonske kiseline ili para-toluensulfonske kiseline.

[0080] Jedinjenja formule (II) mogu, na primer, da se pripreme reakcijom jedinjenja formule

kada je R<1>kao što je definisano u bilo kom od ovde datih otelotvorenja, i X<1>je odlazeća grupa (na primer, atom joda, broma ili hlora ili triflatna grupa) sa metilujućim agensom. Odgovarajući metilujući agensi uključuju metil jodid, DMF-DMA.

[0081] Jedinjenja formule (IV) mogu, na primer, da se pripreme reakcijom jedinjenja formule (V):

1

kada je R<1>kao što je definisano u bilo kom od ovde datih otelotvorenja;

R<A>je vodonik; i

X<1>je odlazeća grupa (na primer, atom joda, broma ili hlora ili triflatna grupa) sa difenilfosforil azidom (DPPA). Reakcija se može izvesti pod standardnim uslovima koji su dobro poznati stručnjacima, na primer, DPPA, trietilamin, THF, refluks.

[0082] Jedinjenja formule (IV) i (V) su stoga korisna kao intermedijeri u pripremi jedinjenja formule (I) i daju dalje otelotvorenje.

[0083] Jedinjenja formule (IV) i (V) mogu da se pripreme postupcima koji su slični onima prikazanim u odeljku Primeri.

[0084] Jedinjenje formule (III) može, na primer, da se pripremi reakcijom jedinjenja formule

sa redukujućim agensom. Odgovarajući redukujući agensi uključuju 10% Pd/C i vodonik, 10% Pd/C i amonijum format, gvožđe/amonijum hlorid.

[0085] Jedinjenje formule (VI) može, na primer, da se pripremi reakcijom jedinjenja formule (VII):

2

sa reagensom za ciklizaciju. Odgovarajući reagensi za ciklizaciju uključuju anhidrid trifluorsirćetne kiseline.

[0086] Jedinjenje formule (VII) može, na primer, da se pripremi reakcijom jedinjenja formule

sa hidroksilamin hidrohloridom.

[0087] Jedinjenje formule (VIII) može, na primer, da se pripremi reakcijom jedinjenja formule

sa 1,1-dimetoksi-N,N-dimetilmetanaminom.

[0088] Podrazumeva se da neki od različitih supstituenata prstena u jedinjenjima iz predmetnog pronalaska mogu da se uvedu uz pomoć standardnih reakcija aromatične supstitucije ili mogu da nastanu uz pomoć modifikacije konvencionalnih funkcionalnih grupa bilo pre ili odmah nakon procesa koji su ovde pomenuti, a kao takvi su uključeni u procesni aspekt ovog pronalaska. Na primer, jedinjenja formule (I) mogu da se pretvore u dalja jedinjenja formule (I) pomoću standardnih reakcija aromatične supstitucije ili pomoću modifikacija konvencionalnih funkcionalnih grupa. Takve reakcije i modifikacije uključuju, na primer, uvođenje supstituenta pomoću neke reakcije aromatične supstitucije, redukcije supstituenta, alkilovanja supstituenta i oksidacije supstituenta. Pomenuti reagensi i reakcioni uslovi za takve procedure su dobro poznati u oblasti hemije. Posebni primeri reakcija aromatične supstitucije uključuju uvođenje nitro grupe koristeći koncentrovanu azotnu kiselinu, uvođenje acil grupe koristeći, na primer, acil halid i Luisovu kiselinu (poput aluminijum trihlorida) u uslovima po Fridel Kraftsu; uvođenje alkil grupe koristeći alkil halid i Luisovu kiselinu (poput aluminijum trihlorida) u uslovima po Fridel Kraftsu; i uvođenje halogene grupe. Posebni primeri modifikacija uključuju redukciju nitro grupe u amino grupu, na primer, pomoću katalitičkog hidrogenovanja sa nikl katalizatorom ili pomoću tretmana gvožđem u prisustvu hlorovodonične kiseline uz zagrevanje; oksidaciju alkiltio u alkil sulfinil ili alkil sulfonil.

[0089] Takođe treba da se zna da u nekim ovde pomenutim reakcijama može da bude neophodno/poželjno da se zaštiti bilo koja od osetljivih grupa u jedinjenjima. Slučajevi kada je zaštita neophodna ili poželjna i odgovarajući postupci za zaštitu su poznati stručnjacima za ovu oblast. Konvencionalne zaštitne grupe mogu da se koriste u skladu sa standardnom praksom (za ilustraciju vidite T.W. Green, Protective Groups in Organic Synthesis, John Wiley and Sons, 1991). Tako, ukoliko reaktanti uključuju grupe poput amino, karboksi ili hidroksi, može biti poželjno da se grupa zaštiti u nekim reakcijama koje su ovde navedene.

[0090] Jedinjenja formule (I), (II) i (III), i svi intermedijeri koji se koriste za njihovo dobijanje, mogu da se pripreme pomoću postupaka koji su slični onima prikazanim u odeljku Primeri.

Biološki testovi

[0091] Sledeći testovi su korišćeni za merenje dejstva ovde opisanih jedinjenja: a) test enzimske potentnosti DNKPK; b) test ćelijske potentnosti DNKPK. Prilikom opisa testova, generalno:

i. Korišćene su sledeće skraćenice; DMSO =dimetil sulfoksid; DTT= ditiotreitol; EDTA = etilen diamin tetrasirćetna kiselina, TR-FRET = transfer energije vremenski razložene fluorescencije, ATP = adenozin trifosfat, DTT = ditiotreitol, DNK = dezoksiribonukleinska kiselina, HEPES = (2-hidroksietil)-1-piperazin etansulfonska kiselina

ii. IC50vrednost je koncentracija testiranog jedinjenja koja inhibira 50% biološke aktivnosti.

Test a): Analiza enzimske potentnosti DNKPK (DNK-PK enz)

[0092] Inhibitorska aktivnost jedinjenja na DNKPK je utvrđena pomoću merenja TR-FRET fluorescentno obeleženog peptidnog supstrata koji prelazi u fosforilovani proizvod. Fluorescentno obeleženi peptidni supstrat je kupljen od kompanije Thermo Fisher Scientific. Polulogaritamske krive koncentracija-odgovor sa 12 tačaka, sa najvećom koncentracijom od 100 µM su dobijene od 10 mM osnovnih rastvora jedinjenja rastvorenog u DMSO-u koristeći Echo 555 (Labcyte Inc., Sunnyvale, CA). Svi testovi su izvedeni na belim Greiner pločama male zapremine sa 1536 bunarčića (Greiner Bio-One, UK), sa ukupnom reakcionom zapreminom od 3 µl i 1% (V/V) finalnom koncentracijom DMSO. Enzimi i supstrati su odvojeno dodati pločama sa jedinjenjem i inkubirani na sobnoj temperaturi. Reakcija kinaze je zatim prekinuta dodavanjem 3 µl zaustavnog pufera. Zaustavljene test ploče su očitane koristeći BMG Pherastar. IC50vrednosti su izračunate koristeći softver Genedata Screener® (Genedata, Inc., Basel, Švajcarska).

[0093] Ljudski DNKPK protein kompletne dužine je prečišćen iz HeLa ćelijskog ekstrakta jonskom izmenom. DNKPK protein je inicijalno inkubiran sa jedinjenjem tokom 30 minuta na sobnoj temperaturi u reakcionom puferu (50 mM Hepes pH 7,5, 0,01% Brij-35, 10 mM MgCl2, 1 mM EGTA, 1 mM DTT, 2 µg/ml DNK goveđeg timusa). Reakcija je zatim započeta dodavanjem ATP-a i fluorescentno obeleženog peptidnog supstrata (Fluorescein-EPPLSQEAFADLWKK, Thermo Fisher Scientific). Reakcija kinaze (18 µM ATP, 35 pM DNKPK, 1,6 µM peptidni supstrat) prekinuta je nakon 40 minuta dodavanjem 3 µl zaustavnog pufera (20 mM Tris pH 7,5, 0,02% natrijum azid, 0,01% Nonidet-P40, 20 µm EDTA, 4 nM Tb anti-fosfo-p53 [Ser15] antitela. Reakcija je inkubirana još sat vremena, i ploče su očitane na čitaču ploča BMG Pherastar.

[0094] Podaci su analizirani, i vrednosti IC50 su izračunate korišćenjem softvera Genedata Screener® (Genedata, Inc., Basel, Švajcarska). Vrednosti PIC50su izračunate kao negativni logaritam molarne koncentracije jedinjenja potrebne za 50% smanjenja izmerenog odgovora.

2

b) Analiza ćelijske potentnosti DNKPK (DNK-PK ćelija)

[0095] Jedinjenja ili DMSO (dimetil sulfoksid) prebačena su iz izvornih ploča koje sadrže jedinjenja sa 10 mM u 100% (V/V) DMSO ili 100% DMSO, direktno u ploče za ćelijski test koristeći Echo 555 akustični dozator (Labcyte Inc™). 10 mM osnovni rastvori jedinjenja su razblaženi 1:100 koristeći Agilent VPrep alat za tečnost sa fiksiranim vrhom i 96 glava (Agilent Technologies, Santa Clara, CA) radi dobijanja četiri intermedijerna razblaženja (10 mM, 100 µM, 1 µM, 10 nM). Ova 1:100 intermedijerna diluciona ploča je zatim korišćena od strane Echo za doziranje jedinjenja i DMSO direktno u ćelijske ploče sa 12 tačaka doznog raspona (30, 10, 3,125, 1,25, 0,3, 0,1, 0,03125, 0,0125, 0,003, 0,001, 0,0003125, 0,00003 µM) radi izračunavanja vrednosti IC50jedinjenja, sa ukupnom koncentracijom DMSO u testu od 0,3% (V/V).

[0096] Ćelijski ELISA test DNKPK je izveden u A549 ćelijskoj liniji. A549 ćelije su uzgajane u ćelijskom medijumu koji se sastoji od MEM-F12 (minimalni esencijalni medijum F12 Sigma br. D6421), 10% (v/v) fetalnog goveđeg seruma i 1% (V/V) 200 mM L-glutamina. Nakon sakupljanja, ćelije su prebačene u crne Costar ploče sa 384 bunarčića (br.3712, Corning) radi dobijanja 15.000 ćelija po bunarčiću u ukupnoj zapremini od 40 ul ćelijskog medijuma, i inkubirane preko noći na 37°C, 90% relativne vlažnosti i 5% CO2u rotirajućem inkubatoru. Greiner 781077 u potpunosti crne ELISA ploče velikog vezivanja sa 384 bunarčića su premazane sa 0,5 ug/ml DNKPK antitela (Abcam br. ab1832) u PBS/A preko noći na 4°C. Sutradan, Greiner ELISA ploče su isprane 3x sa PBS-T i blokirane sa 3% BSA/PBS tokom ∼2h, pre još 3x ispiranja sa PBS-T.

[0097] Testirana jedinjenja i referentne kontrole su dozirani direktno u ćelijske ploče koristeći Labcyte Echo 555 akustični dozator. Ćelijske ploče su zatim inkubirane tokom 1 h na 37°C pre dobijanja doze radijacije od 8 Gy (XRAD 320, visina tabele 65). Ćelije su inkubirane još 1 h pre uklanjanja ćelijskog medijuma. Pufer za lizu (interna priprema sa dodatkom koktela tableta inhibitora proteaze, Roche br. 04 693 116 001 i tableta inhibitora fosfataze, Roche br.

04906837001) doziran je sa 25 µl/bunarčiću i ploče su inkubirane na 4°C tokom 30 minuta. Ćelijski lizati (20 µl/bunarčiću) prebačeni su u ELISA ploče premazane DNKPK antitelom koristeći CyBio Felix platformu za rukovanje tečnošću, i ELISA ploče su inkubirane na 4°C preko noći.

[0098] Sutradan, ELISA ploče su isprane 3x sa PBS-T i dozirane sa internim pS2056-DNKPK antitelom (0,5 µg/ml u 3% BSA/PBS) sa 20 µl/bunarčiću. Ploče su inkubirane sa antitelom tokom 2 h na sobnoj temperaturi (RT) pre 3x ispiranja sa PBS-T. Kozje anti-zečje HRP sekundarno antitelo (razblaženje 1:2000 u 3% BSA/PBS; Cell Signaling br.7074) dozirano je sa 20 µl/bunarčiću, i ploče su inkubirane na RT tokom 1 h pre 3x ispiranja sa PBS-T.

[0099] QuantaBlu rastvor radnog supstrata (Thermo Scientific br. 15169, pripremljen prema uputstvu proizvođača) doziran je sa 20 µl/bunarčiću i ploče su inkubirane na RT tokom 1 h pre doze od još 20 µl/bunarčiću QuantaBlu zaustavnog rastvora obezbeđenog u kompletu (Thermo Scientific br. 15169). Intenzitet fluorescencije pojedinačnih bunarčića je utvrđen koristeći PerkinElmer EnVision čitač ploča.

Podaci su analizirani, i vrednosti IC50su izračunate korišćenjem softvera Genedata Screener® (Genedata, Inc., Basel, Švajcarska). Vrednosti PIC50su izračunate kao negativni logaritam molarne koncentracije jedinjenja potrebne za 50% smanjenja izmerenog odgovora.

c) Enzimski test TTK

[0100] Inhibitorna aktivnost jedinjenja na TTK je utvrđena u LanthaScreen® testu vezivanja Eu kinaze izvedenom pomoću ThermoFisher Scientific u okviru njihove SelectScreen® usluge za biohemijsko profilisanje kinaze. Format LanthaScreen® testa vezivanja Eu kinaze koristi vezivanje Alexa Fluor® konjugata ili „trejsera“ za kinazu, što se detektuje dodatkom Euobeleženog anti-tag antitela. Vezivanje trejsera i antitela za kinazu dovodi do visokog stepena FRET, dok zamena trejsera inhibitorom kinaze dovodi do gubitka FRET. Stepen FRET izmeren u testu se koristi za utvrđivanje vezivanja jedinjenja.

[0101] Krive koncentracija-odgovor trostrukog razblaženja jedinjenja sa 10 tačaka, sa najvećom koncentracijom od 10 µM su stvorene od 10 mM osnovnih rastvora jedinjenja rastvorenog u DMSO-u. Svi testovi su izvedeni na belim Greiner pločama male zapremine sa 384 bunarčića (kat. br.784207, Greiner), u ukupnoj zapremini reakcije od 16 µl i 1% (V/V) finalne koncentracije DMSO.3,84 µl pufera za kinazu (50 mM HEPES pH 7,5, 0,01% BRIJ-35, 10 mM MgCl2, 1 mM EGTA), 8 µl 2x smeše kinaza/antitelo (finalne koncentracije 5 nM TTK, 2 nM Eu-anti-GST, pripremljena u puferu za kinazu) i 4 µl 4x AlexaFluor® obeleženog rastvora trejsera (finalne koncentracije 30 nM trejser 236, pripremljeno u puferu za kinazu) odvojeno je dodato pločama sa jedinjenjem, stavljeno na tresilicu za ploče tokom 30 sekundi,

2

a zatim inkubirano 60 minuta na sobnoj temperaturi. Ploče su zatim očitane koristeći čitač fluorescentnih ploča. Vrednosti IC50su izračunate koristeći softver XLfit (IDBS Ltd, Surrey, UK), pri čemu je kriva postavljena za model broj 205 (sigmoidni model doza-odgovor).

d) Enzimski testovi Aurora-A, Aurora-B, JAK1, JAK2, JAK3

[0102] Inhibitorna aktivnost jedinjenja na AURKA, AURKB, JAK1, JAK2 i JAK3 je utvrđena u Z'-LYTE® testovima izvedenim od strane ThermoFisher Scientific u okviru njihove SelectScreen® usluge za biohemijsko profilisanje kinaze. Format Z-LYTE® biohemijskog testa koristi format kuplovanog enzima na bazi fluorescencije, i zasniva se na diferencijalnoj senzitivnosti fosforilovanih i nefosforilovanih peptida za proteolitičko cepanje. Peptidni supstrat je obeležen sa dva fluorofora - po jedan na svakom kraju - koji čine FRET par. U primarnoj reakciji, kinaza prenosi gama-fosfat ATP-a na jedan ostatak tirozina, serina ili treonina u sintetičkom FRET-peptidu. U sekundarnoj reakciji, proteaza specifična za mesto prepoznaje i otcepljuje nefosforilovane FRET-peptide. Fosforilacija FRET-peptida potiskuje cepanje putem razvojnog reagensa. Cepanje ometa FRET između donorskih (tj. kumarina) i akceptorskih (tj. fluoresceina) fluorofora na FRET-peptidu, dok neotcepljeni fosforilovani FRET-peptidi zadržavaju FRET. Za kvantifikaciju napretka reakcije koristi se raciometrijski postupak koji izračunava odnos (emisioni odnos) emisije donora prema emisiji akceptora nakon ekscitacije donorskog fluorofora na 400 nm. I otcepljeni i neotcepljeni FRET-peptidi doprinose signalima fluorescencije, pa tako i emisionom odnosu. Obim fosforilacije FRET-peptida može da se izračuna iz emisionog odnosa. Emisioni odnos će ostati nizak ako je FRET-peptid fosforilovan (tj. nema inhibicije kinaze), a biće visok ako je FRET-peptid nefosforilovan (tj. inhibicija kinaze).

[0103] Krive koncentracija-odgovor trostrukog razblaženja jedinjenja sa 10 tačaka, sa najvećom koncentracijom od 10 µM su stvorene od 10 mM osnovnih rastvora jedinjenja rastvorenog u DMSO-u. Svi testovi su izvedeni na crnim nevezujućim Corning pločama male zapremine sa 384 bunarčića (kat. br.4514, Corning), u ukupnoj reakcionoj zapremini od 10 µl i 1% (V/V) finalne koncentracije DMSO.2,4 µl pufera za kinazu (50 mM HEPES pH 7,5, 0,01% BRIJ-35, 10 mM MgCl2, 1 mM EGTA), 5 µl 2x smeše peptid/kinaza (objašnjeno u nastavku za svaku kinazu) i 2,5 µl 4x rastvora ATP (pripremljen u puferu za kinazu) dodato je odvojeno pločama sa jedinjenjem, stavljeno na tresilicu za ploče tokom 30 sekundi, a zatim inkubirano 60 minuta na sobnoj temperaturi. Reakcija kinaze je zatim prekinuta dodavanjem 5 µl

2

razvojnog reagensa (vlasništvo kompanije ThermoFisher Scientific). Test ploče su stavljene na tresilicu za ploče tokom 30 sekundi, inkubirane 60 minuta na sobnoj temperaturi, a zatim očitane koristeći čitač fluorescentnih ploča. Vrednosti IC50su izračunate koristeći softver XLfit (IDBS Ltd, Surrey, UK), pri čemu je kriva postavljena za model broj 205 (sigmoidni model doza-odgovor).

Aurora A (AurA): Smeša 2X AURKA (Aurora A) / Ser/Thr 01 (vlasništvo kompanije ThermoFisher Scientific) pripremljena je u 50 mM HEPES pH 7,5, 0,01% BRIJ-35, 10 mM MgCl2, 1 mM EGTA. Konačna reakcija kinaze od 10 µl se sastojala od 15 nM AURKA (Aurora A), 2 µM Ser/Thr 01 i 10 µM ATP (Km app) u 50 mM HEPES pH 7,5, 0,01% BRIJ-35, 10 mM MgCl2, 1 mM EGTA. Nakon 1 sata inkubacije reakcije kinaze, dodato je 5 µl razblaženja razvojnog reagensa 1:4096.

Aurora B (AurB): Smeša 2X AURKB (Aurora B) / Ser/Thr 01 (vlasništvo kompanije ThermoFisher Scientific) pripremljena je u 50 mM HEPES pH 7,5, 0,01% BRU-35, 10 mM MgCl2, 1 mM EGTA. Konačna reakcija kinaze od 10 µl se sastojala od 23 nM AURKB (Aurora B), 2 µM Ser/Thr 01 i 75 µM ATP (Km app izmereno kao 81 µM ATP) u 50 mM HEPES pH 7,5, 0,01% BRIJ-35, 10 mM MgCl2, 1 mM EGTA. Nakon 1 sata inkubacije reakcije kinaze, dodato je 5 µl razblaženja razvojnog reagensa 1:4096.

JAK1: Smeša 2X JAK1 / Tyr 06 (vlasništvo kompanije ThermoFisher Scientific) pripremljena je u 50 mM HEPES pH 6,5, 0,01% BRIJ-35, 10 mM MgCl2, 1 mM EGTA, 0,02% NaN3. Konačna reakcija kinaze od 10 µl se sastojala od 74 nM JAK1, 2 µM Tyr 06 i 75 µM ATP (Km app izmereno kao 87 µM ATP) u 50 mM HEPES pH 7,0, 0,01% BRIJ-35, 10 mM MgCl2, 1 mM EGTA, 0,01% NaN3. Nakon 1 sata inkubacije reakcije kinaze, dodato je 5 µl razblaženja razvojnog reagensa 1:128.

JAK2: Smeša 2X JAK2 / Tyr 06 (vlasništvo kompanije ThermoFisher Scientific) pripremljena je u 50 mM HEPES pH 7,5, 0,01% BRIJ-35, 10 mM MgCl2, 1 mM EGTA. Konačna reakcija kinaze od 10 µl se sastojala od 0,27 nM JAK2, 2 µM Tyr 06 i 25 µM ATP (Km app izmereno kao 31 µM ATP) u 50 mM HEPES pH 7,5, 0,01% BRIJ-35, 10 mM MgCl2, 1 mM EGTA. Nakon 1 sata inkubacije reakcije kinaze, dodato je 5 µl razblaženja razvojnog reagensa 1:128.

JAK3: Smeša 2X JAK3 / Tyr 06 (vlasništvo kompanije ThermoFisher Scientific) pripremljena je u 50 mM HEPES pH 7,5, 0,01% BRIJ-35, 10 mM MgCl2, 1 mM EGTA. Konačna reakcija kinaze od 10 µl se sastojala od 2,4 nM JAK3, 2 µM Tyr 06 i 10 µM ATP (Km app izmereno kao 14 µM ATP) u 50 mM HEPES pH 7,5, 0,01% BRIJ-35, 10 mM MgCl2, 1 mM EGTA. Nakon 1 sata inkubacije reakcije kinaze, dodato je 5 µl razblaženja razvojnog reagensa 1:128.

2

e) Model mišjeg ksenografta - kombinacija sa olaparibom

[0104] Ženkama scid miševa supkutano je transplantirano 5 miliona ćelija FaDu ATM KO ćelijske linije kancera ždrela bez ATM radi utvrđivanja in-vivo antitumorske aktivnosti DNK-PK inhibitora i njegove kombinacije sa olaparibom.

[0105] Životinje su prvobitno randomizovane u grupe od 15 kada su tumori dostigli zapreminu od 290 mm<3>i lečenje je započeto. Ovaj model tumora ima stopu gubitka tumora od 50%, gde je očekivano da do 8 životinja po grupi bude izgubljeno iz studijske analize usled spontane ulceracije njihovih tumora. Životinje su dva puta dnevno oralno dozirane jedinjenjem formule (I), pri čemu su obe oralne doze razdvojene po 8 h. Olaparib je dnevno doziran 1 h nakon prve dnevne doze jedinjenja formule (I). Tumori su mereni tri puta nedeljno pomoću kljunastog merila i zapremina tumora je izračunata koristeći formulu [dužina x širina<2>]/2, gde dužina i širina predstavljaju najduži, odnosno najkraći prečnik tumora. Olaparib je formulisan u 10% (m/V) DMSO/ 10% (m/V) HP-b-CD (Kleptose), 80% vode za rastvor za injekcije. Jedinjenja formule (I) formulisana su u 0,5% (m/V) hidroksipropil metilcelulozi (HPMC), 0,1% (V/V) Tween 80.

[0106] Rezultati ispitivanja primera 3 u testu e) prikazani su na slici 5. „qd“ znači doza jednom dnevno. „bid“ znači doza dva puta dnevno.

f) Testovi ćelijskog rasta - in vitro aktivnost kombinacije sa inhibitorom ATR ili ATM

[0107] Testovi ćelijskog rasta su korišćeni za utvrđivanje in vitro aktivnosti jedinjenja formule (I) i njegovih kombinacija sa inhibitorom ATR (AZD6738) i ATM (AZD0156).

[0108] FaDu ćelijska linija kancera ždrela je rutinski uzgajana u RPMI medijumu bez fenol crvenog (Sigma) sa dodatkom 10% fetusnog goveđeg seruma i 1% GlutaMAX (Thermo Fisher). Kulture su održavane na 37°C u vlažnoj atmosferi sa 5% CO2. Ćelije su odvojene koristeći TryLE Express rastvor (Thermo Fisher) i zasejane su sa 500 ćelija po bunarčiću u 70 µl medijuma za uzgajanje u dve ploče sa 384 bunarčića sa ravnim dnom (Greiner, kataloški broj 781090). Ćelije u test ploči su sledećeg dana (0. dan) tretirane primerom 3 (3 µM), AZD6738 (1 µM), AZD0156 (0,3 µM), kombinacijom inhibitorskih jedinjenja ili vehikulumom u

2

odgovarajućoj zapremini kao kontrolni eksperiment, koristeći Echo 555 alat za tečnost (Labcyte). Svi inhibitori su rekonstituisani u 100% DMSO vehikulumu.

[0109] Brojevi ćelija su utvrđeni koristeći SYTOX zeleno bojenje nukleinskih kiselina (Thermo Fisher, kataloški broj S7020). Ćelije su inkubirane sa 5 µl rastvora SYTOX zeleno (1:2500 u Tris-puferovanom fiziološkom rastvoru i 5 mM EDTA) tokom 1,5 sati na sobnoj temperaturi u mraku, a broj mrtvih ćelija je kvantifikovan koristeći Acumen skener velikog sadržaja (TTP LabTech). Ukupan broj ćelija je kvantifikovan nakon 16 sati inkubacije na sobnoj temperaturi u mraku sa 10 µl rastvora saponina (0,25% u Tris-puferovanom fiziološkom rastvoru i 5 mM EDTA) na Acumen.

[0110] Podaci su analizirani koristeći softver GeneData Screener (Assay Analyzer). Ukratko, broj živih ćelija je izračunat oduzimanjem broja mrtvih ćelija od ukupnog broja ćelija. Broj živih ćelija je normalizovan u odnosu na broj ćelija 0. dana. Ćelijski rast kao odgovor na inhibitorski tretman (% aktivnosti) utvrđen je unošenjem podataka na skalu 0 - 200% u odnosu na kontrolne eksperimente, gde 0% predstavlja izostanak promene u odnosu na kontrolu, 100% predstavlja potpunu inhibiciju ćelijskog rasta, a 200% predstavlja potpunu ćelijsku smrt. Podaci su prikazani kao srednji % aktivnosti ± SD tri nezavisna eksperimenta.

[0111] Rezultati ispitivanja primera 3 u testu f) prikazani su na slikama 6 i 7.

[0112] Primeri su ispitani u testovima a) b) c) i d) i uočeni su sledeći podaci. Dolenavedene vrednosti pIC50 su izračunati srednji rezultat najmanje 2 eksperimenta.

2

[0113] Iz izmerenih podataka se može videti da su primeri inhibitori DNK-PK koji su selektivni protiv ovih konkretnih ciljeva - TTK, JAK1, JAK2, JAK3, Aurora A, Aurora B. Poređenje enzimskih vrednosti pIC50 pokazuje da primeri imaju >3 log jedinice selektivnosti sa DNK-PK na druge prikazane ciljeve. To je jednako > 1000-strukoj selektivnosti između vrednosti IC50.

[0114] Jedinjenja se mogu dalje birati na osnovu daljih bioloških ili fizičkih svojstava koja se mogu meriti tehnikama koje su poznate u struci i koje mogu da se koriste u proceni ili odabiru jedinjenja za terapeutsku ili profilaktičku primenu.

[0115] Usled njihove inhibitorske aktivnosti DNK-PK, očekuje se da će jedinjenja formule (I) i njihove farmaceutski prihvatljive soli biti korisni u terapiji.

[0116] Utvrdili smo da jedinjenja formule (I) imaju snažnu antitumorsku aktivnost za koju se veruje da se postiže putem inhibicije DNK-PK.

[0117] Shodno tome, jedinjenja predmetnog pronalaska su korisna kao antitumorski agensi. Konkretno, jedinjenja predmetnog pronalaska su korisna kao antiproliferativni, apoptotski i/ili antiinvazivni agensi u zadržavanju i/ili lečenju bolesti čvrstih i/ili tečnih tumora. Konkretno, očekuje se da su jedinjenja predmetnog pronalaska korisna u prevenciji ili lečenju onih tumora koji su osetljivi na inhibiciju DNK-PK. Dalje, očekuje se da su jedinjenja iz predmetnog pronalaska korisna u prevenciji ili lečenju onih tumora koji su u potpunosti ili delimično posredovani sa DNK-PK. Jedinjenja se tako mogu koristiti za proizvodnju inhibitorskog efekta DNK-PK enzima kod toplokrvne životinje kojoj je potrebno takvo lečenje.

[0118] Kao što je ovde navedeno, inhibitori DNK-PK bi trebalo da imaju terapeutsku vrednost u lečenju proliferativnih bolesti kao što su kancer i naročito čvrsti tumori poput karcinoma i sarkoma i leukemija i limfoidni maligniteti, i naročito u lečenju, na primer, kancera dojke, kolorektuma, pluća (uključujući mikrocelularni kancer pluća, nemikrocelularni kancer pluća i bronhioalveolarni kancer) i prostate, i kancera žučnog kanala, kostiju, bešike, glave i vrata, bubrega, jetre, gastrointestinalnog tkiva, ezofaga, jajnika, pankreasa, kože, testisa, tiroidne žlezde, materice, grlića materice i vulve, i leukemija [uključujući hroničnu limfocitnu leukemiju (CLL), akutnu limfocitnu leukemiju (ALL) i hroničnu mijelogenu leukemiju (CML)], multiplog mijeloma i limfoma.

[0119] Antikancerogena dejstva koja su shodno tome korisna u lečenju kancera kod pacijenta uključuju, ali nisu ograničena na, antitumorska dejstva, stopu odgovora, vreme do progresije bolesti i stopu preživljavanja. Antitumorska dejstva ovde opisanog postupka lečenja uključuju, ali nisu ograničena na, inhibiciju rasta tumora, odlaganje rasta tumora, regresiju tumora, smanjivanje tumora, produženo vreme do ponovnog rasta tumora po prestanku lečenja, usporavanje progresije bolesti. Antikancerogena dejstva uključuju profilaktičko lečenje kao i lečenje postojeće bolesti.

[0120] Inhibitor DNA-PK ili njegova farmaceutski prihvatljiva so mogu takođe biti korisni u lečenju pacijenata sa kancerima, uključujući, bez ograničenja, hematološke malignitete kao što su leukemija, multipli mijelom, limfomi poput Hodžkinove bolesti, non-Hodžkinovih limfoma (uključujući limfom ćelija plašta) i mijelodisplastične sindrome, kao i čvrste tumore i njihove metastaze kao što je kancer dojke, kancer pluća (nemikrocelularni kancer pluća (NSCLC), mikrocelularni kancer pluća (SCLC), karcinom skvamoznih ćelija), kancer endometrijuma, tumore centralnog nervnog sistema kao što su gliomi, disembrioplastični neuroepitelni tumor, glioblastom multiforme, mešoviti gliomi, meduloblastom, retinoblastom, neuroblastom, germinom i teratom, kancere gastrointestinalnog trakta kao što su kancer želuca, kancer ezofagusa, hepatocelularni karcinom (jetre), holangiokarcinomi, karcinomi debelog creva i

1

rektuma, kanceri tankog creva, kanceri pankreasa, kancere kože kao što su melanomi (naročito metastatski melanom), tiroidne kancere, kancere glave i vrata i kancere pljuvačnih žlezda, prostate, testisa, jajnika, grlića materice, materice, vulve, bešike, bubrega (uključujući karcinom renalnih ćelija, onkocitom bistrih ćelija i renalni onkocitom), karcinome skvamoznih ćelija, sarkome kao što su osteosarkom, hondrosarkom, lejomiosarkom, sarkom mekog tkiva, Juingov sarkom, gastrointestinalni stromalni tumor (GIST), Kapošijev sarkom i pedijatrijske kancera kao što su rabdomiosarkomi i neuroblastomi. Kada se pominje „kancer“ to uključuje i nemetastatske kancere kao i metastatske kancere, tako da lečenje kancera uključuje lečenje i primarnih tumora i metastaza tumora.

[0121] „Inhibitorska aktivnost DNK-PK“ odnosi se na smanjenje aktivnosti DNK-PK kao direktan ili indirektan odgovor na prisustvo jedinjenja formule (I) ili njegove farmaceutski prihvatljive soli, u odnosu na aktivnost DNK-PK u odsustvu jedinjenja formule (I) ili njegove farmaceutski prihvatljive soli. Takvo smanjenje aktivnosti može biti usled direktne interakcije jedinjenja formule (I) ili njegove farmaceutski prihvatljive soli sa DNK-PK ili usled interakcije jedinjenja formule (I) ili njegove farmaceutski prihvatljive soli sa jednim ili više drugih faktora koji zauzvrat utiču na aktivnost DNK-PK. Na primer, jedinjenje formule (I) ili njegova farmaceutski prihvatljiva so može da smanji DNK-PK putem direktnog vezivanja za DNK-PK, izazivanjem (direktno ili indirektno) da drugi faktor smanji aktivnost DNK-PK ili (direktnim ili indirektnim) smanjivanjem količine DNK-PK prisutne u ćeliji ili organizmu.

[0122] Termin „terapija“ treba da ima svoje normalno značenje upravljanja bolešću kako bi se u potpunosti ili delimično ublažio jedan, neki ili svi njeni simptomi, ili kako bi se ispravila ili kompenzovala postojeća patologija. Termin „terapija“ takođe uključuje „profilaksu“, ako nije specifično drugačije naznačeno. Termin „terapeutski“ treba tumačiti na odgovarajući način.

[0123] Termin „profilaksa“ treba da ima svoje normalno značenje, i uključuje primarnu profilaksu za prevenciju razvoja bolesti i sekundarnu profilaksu kada se bolest već razvila i pacijent je privremeno ili trajno zaštićen od razbuktavanja ili pogoršanja bolesti ili razvoja novih simptoma povezanih sa bolešću.

[0124] Termin „lečenje“ se koristi naizmenično sa „terapija“. Slično tome, termin „lečiti“ može se razumeti kao „primenjivati terapiju“, pri čemu je „terapija“ kao što je ovde definisano.

2

[0125] U jednom otelotvorenju, obezbeđeno je jedinjenje formule (I) ili njegova farmaceutski prihvatljiva so za upotrebu u terapiji.

[0126] U jednom otelotvorenju, obezbeđena je upotreba jedinjenja formule (I) ili njegove farmaceutski prihvatljive soli u proizvodnji leka.

[0127] U jednom otelotvorenju, obezbeđeno je jedinjenje formule (I) ili njegova farmaceutski prihvatljiva so za upotrebu u lečenju bolesti posredstvom DNK-PK. U jednom otelotvorenju, navedena bolest posredovana putem DNK-PK je kancer. U jednom otelotvorenju, navedeni kancer je izabran iz grupe koja se sastoji od kolorektalnog kancera, glioblastoma, kancera želuca, kancera jajnika, difuznog limfoma velikih B-ćelija, hronične limfocitne leukemije, akutne mijeloidne leukemije, karcinoma skvamoznih ćelija glave i vrata, kancera dojke, kancera prostate, kancera bešike, hepatocelularnog karcinoma, mikrocelularnog karcinoma pluća i nemikrocelularnog karcinoma pluća. U jednom otelotvorenju, navedeni kancer je izabran iz grupe koja se sastoji od kolorektalnog karcinoma, glioblastoma, karcinoma želuca, karcinoma jajnika, difuznog limfoma velikih B-ćelija, hronične limfocitne leukemije, karcinoma skvamoznih ćelija glave i vrata i karcinoma pluća. U jednom otelotvorenju, navedeni kancer je kolorektalni kancer.

[0128] U jednom otelotvorenju, obezbeđeno je jedinjenje Formule (I) ili njegova farmaceutski prihvatljiva so za upotrebu u lečenju kancera.

[0129] U jednom otelotvorenju, obezbeđena je upotreba jedinjenja formule (I) ili njegove farmaceutski prihvatljive soli za proizvodnju leka za lečenje bolesti posredovane putem DNK-PK. U jednom otelotvorenju, navedena bolest posredovana putem DNK-PK je kancer. U jednom otelotvorenju, navedeni kancer je izabran iz grupe koja se sastoji od kolorektalnog kancera, glioblastoma, kancera želuca, kancera jajnika, difuznog limfoma velikih B-ćelija, hronične limfocitne leukemije, akutne mijeloidne leukemije, karcinoma skvamoznih ćelija glave i vrata, kancera dojke, kancera prostate, kancera bešike, hepatocelularnog karcinoma, mikrocelularnog karcinoma pluća i nemikrocelularnog karcinoma pluća. U jednom otelotvorenju, navedeni kancer je izabran iz grupe koja se sastoji od kolorektalnog karcinoma, glioblastoma, karcinoma želuca, karcinoma jajnika, difuznog limfoma velikih B-ćelija, hronične limfocitne leukemije, karcinoma skvamoznih ćelija glave i vrata i karcinoma pluća. U jednom otelotvorenju, navedeni kancer je kolorektalni kancer.

[0130] U jednom otelotvorenju, obezbeđena je upotreba jedinjenja formule (I) ili njegove farmaceutski prihvatljive soli za proizvodnju leka za lečenje kancera.

[0131] Ovde je opisan postupak za lečenje bolesti za koju je inhibicija DNK-PK od koristi kod toplokrvne životinje kojoj je potrebno takvo lečenje, koji obuhvata primenu na navedenoj toplokrvnoj životinji terapeutski delotvorne količine jedinjenja formule (I) ili njegove farmaceutski prihvatljive soli. U jednom slučaju, navedena bolest je kancer. U jednom slučaju, navedeni kancer je izabran iz grupe koja se sastoji od kolorektalnog kancera, glioblastoma, kancera želuca, kancera jajnika, difuznog limfoma velikih B-ćelija, hronične limfocitne leukemije, akutne mijeloidne leukemije, karcinoma skvamoznih ćelija glave i vrata, kancera dojke, kancera prostate, kancera bešike, hepatocelularnog karcinoma, mikrocelularnog karcinoma pluća i nemikrocelularnog karcinoma pluća. U jednom slučaju, navedeni kancer je izabran iz grupe koja se sastoji od kolorektalnog kancera, glioblastoma, kancera želuca, kancera jajnika, difuznog limfoma velikih B-ćelija, hronične limfocitne leukemije, karcinoma skvamoznih ćelija glave i vrata i kancera pluća. U jednom slučaju, navedeni kancer je kolorektalni kancer.

[0132] Termin „terapeutski delotvorna količina“ odnosi se na količinu jedinjenja formule (I), kako je opisano u bilo kom od ovde datih otelotvorenja, koja je delotvorna za pružanje „terapije“ ispitaniku ili za „lečenje“ bolesti ili poremećaja kod ispitanika. U slučaju kancera, terapeutski delotvorna količina može da izazove bilo koje promene koje mogu da se uoče ili izmere kod ispitanika, kako je opisano u prethodnoj definiciji za „terapiju“, „lečenje“ i „profilaksu“. Na primer, delotvorna količina može da smanji broj ćelija kancera ili tumora; smanji ukupnu veličinu tumora; inhibira ili zaustavi infiltraciju tumorskih ćelija u periferne organe uključujući, na primer, meko tkivo i kosti; inhibira i zaustavi metastazu tumora; inhibira i zaustavi rast tumora; ublaži u određenoj meri jedan ili više simptoma povezanih sa kancerom, smanji morbiditet i mortalitet; poboljša kvalitet života; ili dovede do kombinacije takvih efekata. Delotvorna količina može biti količina koja je dovoljna za smanjenje simptoma bolesti koja reaguje na inhibiciju aktivnosti DNK-PK. Kod lečenja kancera, delotvornost in vivo može, na primer, da se izmeri procenom trajanja preživljavanja, vremena do progresije bolesti (TTP), stope odgovora (RR), trajanja odgovora i/ili kvaliteta života. Kao što znaju stručnjaci, delotvorne količine mogu da variraju u zavisnosti od načina primene, upotrebe ekscipijensa i zajedničke upotrebe sa drugim agensima. Na primer, kada se koristi kombinovana terapija,

4

količina jedinjenja formule (I) ili njegove farmaceutski prihvatljive soli opisanih u ovoj specifikaciji i količina drugih farmaceutski aktivnih agensa su, u kombinaciji, zajedno delotvorne za lečenje ciljanog poremećaja kod životinje pacijenta. U ovom kontekstu, kombinovane količine su u „terapeutski delotvornoj količini“ ako su, kada se kombinuju, dovoljne za smanjenje simptoma bolesti koja reaguje na inhibiciju aktivnosti DNK-PK kako je prethodno opisano. Uobičajeno, takve količine stručnjak može da utvrdi, na primer, počevši od doznog raspona koji je opisan u ovoj specifikaciji za jedinjenje formule (I) ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so, i odobrenih ili na drugi način objavljenih doznih raspona drugih farmaceutski aktivnih jedinjenja.

[0133] „Toplokrvne životinje“ uključuju, na primer, ljude.

[0134] Ovde je opisan postupak za lečenje kancera kod toplokrvne životinje kojoj je potrebno takvo lečenje, koji obuhvata primenu na navedenoj toplokrvnoj životinji terapeutski delotvorne količine jedinjenja formule (I) ili njegove farmaceutski prihvatljive soli. U jednom slučaju, navedeni kancer je izabran iz grupe koja se sastoji od kolorektalnog kancera, glioblastoma, kancera želuca, kancera jajnika, difuznog limfoma velikih B-ćelija, hronične limfocitne leukemije, akutne mijeloidne leukemije, karcinoma skvamoznih ćelija glave i vrata, kancera dojke, kancera prostate, kancera bešike, hepatocelularnog karcinoma, mikrocelularnog karcinoma pluća i nemikrocelularnog karcinoma pluća. U jednom slučaju, navedeni kancer je izabran iz grupe koja se sastoji od kolorektalnog kancera, glioblastoma, kancera želuca, kancera jajnika, difuznog limfoma velikih B-ćelija, hronične limfocitne leukemije, karcinoma skvamoznih ćelija glave i vrata i kancera pluća. U jednom slučaju, navedeni kancer je kolorektalni kancer.

[0135] U bilo kom otelotvorenju u kome se kancer spominje u opštem smislu, navedeni kancer može biti izabran iz grupe koja se sastoji od kolorektalnog kancera, glioblastoma, kancera želuca, kancera jajnika, difuznog limfoma velikih B-ćelija, hronične limfocitne leukemije, akutne mijeloidne leukemije, karcinoma skvamoznih ćelija glave i vrata, kancera dojke, kancera prostate, kancera bešike, hepatocelularnog karcinoma, mikrocelularnog karcinoma pluća i nemikrocelularnog karcinoma pluća. Navedeni kancer takođe može biti izabran iz grupe koja se sastoji od kolorektalnog karcinoma, glioblastoma, karcinoma želuca, karcinoma jajnika, difuznog limfoma velikih B-ćelija, hronične limfocitne leukemije, karcinoma skvamoznih ćelija glave i vrata i karcinoma pluća.

[0136] U bilo kom otelotvorenju u kom se kancer spominje u uopštenom smislu, mogu važiti sledeća otelotvorenja:

U jednom otelotvorenju, kancer je kolorektalni kancer.

[0137] U jednom otelotvorenju, kancer je glioblastom.

[0138] U jednom otelotvorenju, kancer je kancer želuca.

[0139] U jednom otelotvorenju, kancer je kancer jednjaka.

[0140] U jednom otelotvorenju, kancer je kancer jajnika.

[0141] U jednom otelotvorenju, kancer je kancer endometrijuma.

[0142] U jednom otelotvorenju, kancer je kancer grlića materice.

[0143] U jednom otelotvorenju, kancer je difuzni limfom velikih B-ćelija.

[0144] U jednom otelotvorenju, kancer je hronična limfocitna leukemija.

[0145] U jednom otelotvorenju, kancer je akutna mijeloidna leukemija.

[0146] U jednom otelotvorenju, kancer je karcinom skvamoznih ćelija glave i vrata.

[0147] U jednom otelotvorenju, kancer je kancer dojke.

[0148] U jednom otelotvorenju, kancer je trostruko negativni kancer dojke.

[0149] U jednom otelotvorenju, kancer je kancer prostate.

[0150] U jednom otelotvorenju, kancer je kancer bešike.

[0151] „Trostruko negativni kancer dojke“ je bilo koji kancer dojke koji ne eksprimira gene za receptor estrogena, receptor progesterona i Her2/neu.

[0152] U jednom otelotvorenju, kancer je hepatocelularni karcinom.

[0153] U jednom otelotvorenju, kancer je kancer pluća.

[0154] U jednom otelotvorenju, kancer pluća je mikrocelularni karcinom pluća.

[0155] U jednom otelotvorenju, kancer pluća je nemikrocelularni karcinom pluća.

[0156] U jednom otelotvorenju, kancer je metastatski kancer.

[0157] U jednom otelotvorenju, metastatski kancer obuhvata metastaze centralnog nervnog sistema.

[0158] U jednom otelotvorenju, metastaze centralnog nervnog sistema obuhvataju moždane metastaze.

[0159] U jednom otelotvorenju, metastaze centralnog nervnog sistema obuhvataju leptomeningealne metastaze.

[0160] „Leptomeningealne metastaze“ se javljaju kada se kancer proširi na moždane ovojnice, slojeve tkiva koji pokrivaju mozak i kičmenu moždinu. Metastaze mogu da se prošire na moždane ovojnice putem krvi, ili mogu da putuju od moždanih metastaza, nošene cerebrospinalnom tečnošću (CSF) koja protiče kroz moždane ovojnice.

[0161] U jednom otelotvorenju, kancer je nemetastatski kancer.

[0162] Antikancerogeno lečenje opisano u ovoj specifikaciji može biti korisno kao jedina terapija, ili može obuhvatati, pored primene jedinjenja formule (I), konvencionalnu hirurgiju, radioterapiju ili hemoterapiju, ili kombinaciju takvih dodatnih terapija. Takva konvencionalna hirurgija, radioterapija ili hemoterapija može da se primenjuje istovremeno, sekvencijalno ili odvojeno od lečenja jedinjenjem formule (I).

[0163] Radioterapija može da uključuje jednu ili više sledećih kategorija terapije: i. eksternu radioterapiju koristeći elektromagnetnu radijaciju, i intraoperativnu radioterapiju koristeći elektromagnetnu radijaciju;

ii. internu radioterapiju ili brahiterapiju; uključujući intersticijalnu radioterapiju ili intraluminalnu radioterapiju; ili

iii. sistemsku radioterapiju, uključujući, ali bez ograničenja, jod 131 i stroncijum 89.

[0164] Stoga, u jednom otelotvorenju, obezbeđeno je jedinjenje formule (I), ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, i radioterapija, za upotrebu u lečenju kancera. U jednom otelotvorenju, kancer je NSCLC, SCLC, kancer bešike, prostate, jednjaka, glave i vrata, ili kancer dojke. U jednom otelotvorenju, kancer je glioblastom. U jednom otelotvorenju, kancer je metastatski kancer. U jednom otelotvorenju, metastatski kancer obuhvata metastaze centralnog nervnog sistema. U jednom otelotvorenju, metastaze centralnog nervnog sistema obuhvataju moždane metastaze. U jednom otelotvorenju, metastaze centralnog nervnog sistema obuhvataju leptomeningealne metastaze.

[0165] U jednom otelotvorenju, obezbeđeno je jedinjenje formule (I), ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, za upotrebu u lečenju kancera, pri čemu se jedinjenje formule (I), ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, primenjuje u kombinaciji sa radioterapijom. U jednom otelotvorenju, kancer je NSCLC, SCLC, kancer bešike, prostate, jednjaka, glave i vrata, ili kancer dojke. U jednom otelotvorenju, kancer je glioblastom. U jednom otelotvorenju, kancer je metastatski kancer. U jednom otelotvorenju, metastatski kancer obuhvata metastaze centralnog nervnog sistema. U jednom otelotvorenju, metastaze centralnog nervnog sistema obuhvataju moždane metastaze. U jednom otelotvorenju, metastaze centralnog nervnog sistema obuhvataju leptomeningealne metastaze.

[0166] U jednom otelotvorenju, obezbeđeno je jedinjenje formule (I), ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, i radioterapija, za upotrebu u istovremenom, sekvencijalnom ili zasebnom lečenju kancera. U jednom otelotvorenju, kancer je izabran od glioblastoma, kancera pluća (na primer, mikrocelularni kancer pluća ili nemikrocelularni kancer pluća), kancera dojke (na primer, trostruko negativni kancer dojke), kancera prostate, kancera bešike, kancera skvamoznih ćelija glave i vrata, kancera jednjaka, kancera grlića materice i kancera endometrijuma. U jednom otelotvorenju, kancer je glioblastom. U jednom otelotvorenju, kancer je metastatski kancer. U jednom otelotvorenju, metastatski kancer obuhvata metastaze centralnog nervnog sistema. U jednom otelotvorenju, metastaze centralnog nervnog sistema obuhvataju moždane metastaze. U jednom otelotvorenju, metastaze centralnog nervnog sistema obuhvataju leptomeningealne metastaze.

[0167] U jednom otelotvorenju, obezbeđeno je jedinjenje formule (I), ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, za upotrebu u lečenju kancera, pri čemu se jedinjenje formule (I) ili njegova farmaceutski prihvatljiva so primenjuje istovremeno, odvojeno ili sekvencijalno sa radioterapijom. U jednom otelotvorenju, kancer je izabran od glioblastoma, kancera pluća (na primer, mikrocelularni kancer pluća ili nemikrocelularni kancer pluća), kancera dojke (na primer, trostruko negativni kancer dojke), kancera prostate, kancera bešike, kancera skvamoznih ćelija glave i vrata, kancera jednjaka, kancera grlića materice i kancera endometrijuma. U jednom otelotvorenju, kancer je glioblastom. U jednom otelotvorenju, kancer je metastatski kancer. U jednom otelotvorenju, metastatski kancer obuhvata metastaze centralnog nervnog sistema. U jednom otelotvorenju, metastaze centralnog nervnog sistema obuhvataju moždane metastaze. U jednom otelotvorenju, metastaze centralnog nervnog sistema obuhvataju leptomeningealne metastaze.

[0168] Ovde je opisan postupak za lečenje kancera kod toplokrvne životinje kojoj je potrebno takvo lečenje, koji obuhvata primenu na navedenoj toplokrvnoj životinji jedinjenja formule (I) ili njegove farmaceutski prihvatljive soli i radioterapije, pri čemu su jedinjenje formule (I) ili njegova farmaceutski prihvatljiva so i radioterapija zajedno delotvorni u stvaranju antikancerogenog dejstva. U jednom slučaju, kancer je izabran od glioblastoma, kancera pluća (na primer, mikrocelularni kancer pluća ili nemikrocelularni kancer pluća), kancera dojke (na primer, trostruko negativni kancer dojke), kancera prostate, kancera bešike, kancera skvamoznih ćelija glave i vrata, kancera jednjaka, kancera grlića materice i kancera endometrijuma. U jednom slučaju, kancer je glioblastom. U jednom slučaju, kancer je metastatski kancer. U jednom slučaju, metastatski kancer obuhvata metastaze centralnog nervnog sistema. U jednom slučaju, metastaze centralnog nervnog sistema obuhvataju moždane metastaze. U jednom slučaju, metastaze centralnog nervnog sistema obuhvataju leptomeningealne metastaze.

[0169] Ovde je opisan postupak za lečenje kancera kod toplokrvne životinje kojoj je potrebno takvo lečenje, koji obuhvata primenu na navedenoj toplokrvnoj životinji jedinjenja formule (I) ili njegove farmaceutski prihvatljive soli i istovremenu, odvojenu ili uzastopnu primenu radioterapije, pri čemu su jedinjenje formule (I) ili njegova farmaceutski prihvatljiva so i radioterapija zajedno delotvorni u stvaranju antikancerogenog dejstva. U jednom slučaju, kancer je glioblastom. U jednom slučaju, kancer je metastatski kancer. U jednom slučaju, metastatski kancer obuhvata metastaze centralnog nervnog sistema. U jednom slučaju, metastaze centralnog nervnog sistema obuhvataju moždane metastaze. U jednom slučaju, metastaze centralnog nervnog sistema obuhvataju leptomeningealne metastaze.

[0170] U bilo kom otelotvorenju, radioterapija je izabrana iz grupe koja se sastoji od jedne ili više kategorija radioterapije koje su navedene pod tačkama (i) - (iii).

[0171] Hemoterapija može da uključuje jednu ili više od sledećih kategorija antitumorskih supstanci:

i. antineoplastični agensi i njihove kombinacije, kao što su DNK alkilujući agensi (na primer, cisplatin, oksaliplatin, karboplatin, ciklofosfamid, azotni iperiti poput ifosfamida, bendamustina, melfalana, hlorambucila, busulfana, temozolamida, i nitrozouree poput karmustina); antimetaboliti (na primer, gemcitabin i antifolati, kao što su fluoropirimidini kao što su 5-fluorouracil i tegafur, raltitreksed, metotreksat, citozin arabinozid i hidroksiurea); antitumorski antibiotici (na primer, antraciklini kao što su adriamicin, bleomicin, doksorubicin, lipozomski doksorubicin, pirarubicin, daunomicin, valrubicin, epirubicin, idarubicin, mitomicin-C, daktinomicin, amrubicin i mitramicin); antimitotski agensi (na primer, vinka alkaloidi, kao što je vinkristin, vinblastin, vindesin i vinorelbin, i taksoidi kao što su taksol i taksoter i inhibitori polokinaze); i inhibitori topoizomeraze (na primer, epipodofilotoksini, kao što su etopozid i tenipozid, amsakrin, irinotekan, topotekan i kamptotecin); inhibitori mehanizama popravke DNK kao što je CHK kinaza; inhibitori ATM (kao što su AZD0156 i AZD1390); inhibitori poli (ADP-riboza) polimeraze (PARP inhibitori, uključujući olaparib); i inhibitori Hsp90 kao što su tanespimicin i retaspimicin, inhibitori ATR kinaze (kao što je AZD6738); i inhibitori WEE1 kinaze (kao što je AZD1775/MK-1775);

ia. antineoplastični agensi i njihove kombinacije, kao što su DNK alkilujući agensi (na primer, cisplatin, oksaliplatin, karboplatin, ciklofosfamid, azotni iperiti poput ifosfamida, bendamustina, melfalana, hlorambucila, busulfana, temozolamida, i nitrozouree poput karmustina); antimetaboliti (na primer, gemcitabin i antifolati kao što

4

su fluoropirimidini, kao što su 5-fluorouracil i tegafur, raltitreksed, metotreksat, citozin arabinozid i hidroksiurea); antitumorski antibiotici (na primer, antraciklini kao što su adriamicin, bleomicin, doksorubicin, lipozomski doksorubicin, pirarubicin, daunomicin, valrubicin, epirubicin, idarubicin, mitomicin-C, daktinomicin, amrubicin i mitramicin); antimitotski agensi (na primer, vinka alkaloidi kao što su vinkristin, vinblastin, vindesin i vinorelbin, i taksoidi kao što su taksol i taksoter i inhibitori polokinaze); i inhibitori topoizomeraze (na primer, epipodofilotoksini kao što su etopozid i tenipozid, amsakrin, irinotekan, topotekan i kamptotecin); inhibitori mehanizama popravke DNK kao što je CHK kinaza; inhibitori ATM (kao što je AZD0156); inhibitori poli (ADP-riboza) polimeraze (PARP inhibitori, uključujući olaparib); i inhibitori Hsp90 kao što su tanespimicin i retaspimicin, inhibitori ATR kinaze (kao što je AZD6738); i inhibitori WEE1 kinaze (kao što je AZD1775/MK-1775);

ii. antiangiogeni agensi poput onih koji inhibiraju dejstvo vaskularnog endotelnog faktora rasta, na primer, antitelo protiv vaskularnog endotelnog faktora rasta bevacizumab, i na primer, inhibitor tirozin kinaze VEGF receptora kao što je vandetanib (ZD6474), sorafenib, vatalanib (PTK787), sunitinib (SU11248), aksitinib (AG-013736), pazopanib (GW 786034) i cediranib (AZD2171); jedinjenja poput onih objavljenih u Međunarodnim patentnim prijavama WO97/22596, WO 97/30035, WO 97/32856 i WO 98/13354; i jedinjenja koja deluju putem drugih mehanizama (na primer, linomid, inhibitori funkcije integrina αvβ3 i angiostatin), ili inhibitori angiopoetina i njihovih receptora (Tie-1 i Tie-2), inhibitori PDGF, inhibitori delta-sličnog liganda (DLL-4);

iii. imunoterapeutski pristupi, uključujući, na primer, ex vivo i in vivo pristup za povećanje imunogenosti ćelija pacijentovog tumora, kao što je transfekcija citokinima kao što je interleukin 2, interleukin 4 ili faktor stimulacije kolonija granulocitamakrofaga; pristupi za smanjenje T-ćelijske anergije ili funkcije regulatornih T-ćelija; pristup koji pojačava odgovor T-ćelija na tumore, kao što su blokirajuća antitela za CTLA4 (na primer, ipilimumab i tremelimumab), B7H1, PD-1 (na primer, BMS-936558 ili AMP-514), PD-L1 (na primer, MEDI4736 (durvalumab)) i agonistička antitela za CD137; pristupi koji koriste transficirane imunske ćelije kao što su citokinom transficirane dendritske ćelije; pristupi koji koriste citokinom transficirane ćelijske linije tumora, pristupi koji koriste antitela za antigene povezane sa tumorom, i antitela koja iscrpljuju ciljnu vrstu ćelija (npr. nekonjugovana anti-CD20 antitela kao što su rituksimab, radioobeležena anti-CD20 antitela beksar i zevalin, i anti-CD54 antitelo kampat); pristupi koji koriste antiidiotipska antitela; pristupi koji pojačavaju dejstvo ćelija prirodnih ubica; i pristupi koji koriste konjugate antitelo-toksin (npr. anti-CD33 antitelo milotarg); imunotoksini kao što je moksetumumab pasudotoks; agonisti zvonastog receptora 7 ili zvonastog receptora 9;

iv. pojačivači delotvornosti, kao što je leukovorin.

[0172] Stoga, u jednom otelotvorenju, obezbeđeno je jedinjenje formule (I) ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, i najmanje jedna dodatna antitumorska supstanca, za upotrebu u lečenju kancera. U jednom otelotvorenju, obezbeđeno je jedinjenje formule (I) ili njegova farmaceutski prihvatljiva so za upotrebu u lečenju kancera, pri čemu se jedinjenje formule (I) ili njegova farmaceutski prihvatljiva so primenjuje u kombinaciji sa dodatnom antitumorskom supstancom. U jednom otelotvorenju, koristi se jedna dodatna antitumorska supstanca. U jednom otelotvorenju, koriste se dve dodatne antitumorske supstance. U jednom otelotvorenju, koriste se tri ili više dodatnih antitumorskih supstanci.

[0173] U jednom otelotvorenju, obezbeđeno je jedinjenje formule (I) ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, i najmanje jedna dodatna antitumorska supstanca za upotrebu u istovremenom, odvojenom ili sekvencijalnom lečenju kancera. U jednom otelotvorenju, obezbeđeno je jedinjenje formule (I) ili njegova farmaceutski prihvatljiva so za upotrebu u lečenju kancera, pri čemu se jedinjenje formule (I) ili njegova farmaceutski prihvatljiva so primenjuje istovremeno, odvojeno ili sekvencijalno sa dodatnom antitumorskom supstancom.

[0174] Ovde je opisan postupak za lečenje kancera kod toplokrvne životinje kojoj je potrebno takvo lečenje, koji obuhvata primenu na navedenoj toplokrvnoj životinji jedinjenja formule (I) ili njegove farmaceutski prihvatljive soli i najmanje jedne dodatne antitumorske supstance, pri čemu su količine jedinjenja formule (I) ili njegove farmaceutski prihvatljive soli i dodatne antitumorske supstance zajedno delotvorne u stvaranju antikancerogenog dejstva.

[0175] Ovde je takođe opisan postupak za lečenje kancera kod toplokrvne životinje kojoj je potrebno takvo lečenje, koji obuhvata primenu na navedenoj toplokrvnoj životinji jedinjenja formule (I) ili njegove farmaceutski prihvatljive soli i istovremenu, odvojenu ili uzastopnu primenu najmanje jedne dodatne antitumorske supstance na navedenoj toplokrvnoj životinji, pri čemu su količine jedinjenja formule (I) ili njegove farmaceutski prihvatljive soli i dodatne antitumorske supstance zajedno delotvorne u stvaranju antikancerogenog dejstva.

[0176] U bilo kom slučaju, dodatna antitumorska supstanca je izabrana iz grupe koja se sastoji od jedne ili više antitumorskih supstanci koje su prethodno navedene pod tačkama (i) - (iv).

[0177] U jednom otelotvorenju, obezbeđeno je jedinjenje formule (I) ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, i najmanje jedan antineoplastični agens za upotrebu u lečenju kancera. U jednom otelotvorenju, obezbeđeno je jedinjenje formule (I) ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, za upotrebu u lečenju kancera, pri čemu se jedinjenje formule (I) ili njegova farmaceutski prihvatljiva so primenjuje u kombinaciji sa najmanje jednim antineoplastičnim agensom. U jednom otelotvorenju, antineoplastični agens je izabran sa spiska antineoplastičnih agenasa iz prethodne tačke (i).

[0178] U jednom otelotvorenju, obezbeđeno je jedinjenje formule (I) ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, i najmanje jedan antineoplastični agens za upotrebu u istovremenom, odvojenom ili sekvencijalnom lečenju kancera. U jednom otelotvorenju, obezbeđeno je jedinjenje formule (I) ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, za upotrebu u lečenju kancera, pri čemu se jedinjenje formule (I) ili njegova farmaceutski prihvatljiva so primenjuje istovremeno, odvojeno ili sekvencijalno sa najmanje jednim antineoplastičnim agensom. U jednom otelotvorenju, antineoplastični agens je izabran sa spiska antineoplastičnih agenasa iz prethodne tačke (i).

[0179] U jednom otelotvorenju, obezbeđeno je jedinjenje formule (I) ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, i najmanje jedna dodatna antitumorska supstanca izabrana iz grupe koja se sastoji od cisplatina, oksaliplatina, karboplatina, valrubicina, idarubicina, doksorubicina, pirarubicina, irinotekana, topotekana, amrubicina, epirubicina, etopozida, mitomicina, bendamustina, hlorambucila, ciklofosfamida, ifosfamida, karmustina, melfalana, bleomicina, olapariba, MEDI4736 (durvalumab), AZD1775, AZD6738, AZD1390 i AZD0156, za upotrebu u lečenju kancera.

[0180] U jednom otelotvorenju, obezbeđeno je jedinjenje formule (I) ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, i najmanje jedna dodatna antitumorska supstanca izabrana iz grupe koja se sastoji od cisplatina, oksaliplatina, karboplatina, valrubicina, idarubicina, doksorubicina,

4

pirarubicina, irinotekana, topotekana, amrubicina, epirubicina, etopozida, mitomicina, bendamustina, hlorambucila, ciklofosfamida, ifosfamida, karmustina, melfalana, bleomicina, olapariba, MEDI4736 (durvalumab), AZD1775 i AZD6738, za upotrebu u lečenju kancera.

[0181] U jednom otelotvorenju, obezbeđeno je jedinjenje formule (I) ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, i najmanje jedna dodatna antitumorska supstanca izabrana iz grupe koja se sastoji od cisplatina, oksaliplatina, karboplatina, doksorubicina, pirarubicina, irinotekana, topotekana, amrubicina, epirubicina, etopozida, mitomicina, bendamustina, hlorambucila, ciklofosfamida, ifosfamida, karmustina, melfalana, bleomicina, olapariba, AZD1775, AZD6738, AZD1390 i AZD0156, za upotrebu u lečenju kancera.

[0182] U jednom otelotvorenju, obezbeđeno je jedinjenje formule (I) ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, i najmanje jedna dodatna antitumorska supstanca izabrana iz grupe koja se sastoji od cisplatina, oksaliplatina, karboplatina, doksorubicina, pirarubicina, irinotekana, topotekana, amrubicina, epirubicina, etopozida, mitomicina, bendamustina, hlorambucila, ciklofosfamida, ifosfamida, karmustina, melfalana, bleomicina, olapariba, AZD1775 i AZD6738, za upotrebu u lečenju kancera.

[0183] U jednom otelotvorenju, obezbeđeno je jedinjenje formule (I) ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, i olaparib za upotrebu u lečenju kancera.

[0184] U jednom otelotvorenju, obezbeđeno je jedinjenje formule (I) ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, i AZD6738 za upotrebu u lečenju kancera.

[0185] U jednom otelotvorenju, obezbeđeno je jedinjenje formule (I) ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, i AZD0156 za upotrebu u lečenju kancera.

[0186] U jednom otelotvorenju, obezbeđeno je jedinjenje formule (I), ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, za upotrebu u lečenju kancera, pri čemu se jedinjenje formule (I), ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, primenjuju u kombinaciji sa najmanje jednom dodatnom antitumorskom supstancom izabranom iz grupe koja se sastoji od cisplatina, oksaliplatina, karboplatina, valrubicina, idarubicina, doksorubicina, pirarubicina, irinotekana, topotekana, amrubicina, epirubicina, etopozida, mitomicina, bendamustina, hlorambucila, ciklofosfamida, ifosfamida, karmustina, melfalana, bleomicina, olapariba, MEDI4736 (durvalumab), AZD1775, AZD6738, AZD1390 i AZD0156.

[0187] U jednom otelotvorenju, obezbeđeno je jedinjenje formule (I), ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, za upotrebu u lečenju kancera, pri čemu se jedinjenje formule (I), ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, primenjuju u kombinaciji sa najmanje jednom dodatnom antitumorskom supstancom izabranom iz grupe koja se sastoji od cisplatina, oksaliplatina, karboplatina, valrubicina, idarubicina, doksorubicina, pirarubicina, irinotekana, topotekana, amrubicina, epirubicina, etopozida, mitomicina, bendamustina, hlorambucila, ciklofosfamida, ifosfamida, karmustina, melfalana, bleomicina, olapariba, MEDI4736 (durvalumab), AZD1775 i AZD6738.

[0188] U jednom otelotvorenju, obezbeđeno je jedinjenje formule (I), ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, za upotrebu u lečenju kancera, pri čemu se jedinjenje formule (I) ili njegova farmaceutski prihvatljiva so primenjuje u kombinaciji sa olaparibom.

[0189] U jednom otelotvorenju, obezbeđeno je jedinjenje formule (I), ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, za upotrebu u lečenju kancera, pri čemu se jedinjenje formule (I) ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, primenjuje u kombinaciji sa AZD6738.

[0190] U jednom otelotvorenju, obezbeđeno je jedinjenje formule (I), ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, za upotrebu u lečenju kancera, pri čemu se jedinjenje formule (I), ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, primenjuje u kombinaciji sa AZD0156.

[0191] U jednom otelotvorenju, obezbeđeno je jedinjenje formule (I), ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, i najmanje jedna dodatna antitumorska supstanca izabrana iz grupe koja se sastoji od doksorubicina, irinotekana, topotekana, etopozida, mitomicina, bendamustina, hlorambucila, ciklofosfamida, ifosfamida, karmustina, melfalana, bleomicina i olapariba, za upotrebu u lečenju kancera.

[0192] U jednom otelotvorenju, obezbeđeno je jedinjenje formule (I), ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, za upotrebu u lečenju kancera, pri čemu se jedinjenje formule (I) ili njegova farmaceutski prihvatljiva so primenjuju u kombinaciji sa najmanje jednom dodatnom antitumorskom supstancom izabranom iz grupe koja se sastoji od doksorubicina, irinotekana,

4

topotekana, etopozida, mitomicina, bendamustina, hlorambucila, ciklofosfamida, ifosfamida, karmustina, melfalana, bleomicina i olapariba.

[0193] U jednom otelotvorenju, obezbeđeno je jedinjenje formule (I), ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, i najmanje jedna dodatna antitumorska supstanca izabrana iz grupe koja se sastoji od doksorubicina, irinotekana, topotekana, etopozida, mitomicina, bendamustina, hlorambucila, ciklofosfamida, ifosfamida, karmustina, melfalana i bleomicina, za upotrebu u lečenju kancera.

[0194] U jednom otelotvorenju, obezbeđeno je jedinjenje formule (I), ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, za upotrebu u lečenju kancera, pri čemu se jedinjenje formule (I) ili njegova farmaceutski prihvatljiva so primenjuju u kombinaciji sa najmanje jednom dodatnom antitumorskom supstancom izabranom iz grupe koja se sastoji od doksorubicina, irinotekana, topotekana, etopozida, mitomicina, bendamustina, hlorambucila, ciklofosfamida, ifosfamida, karmustina, melfalana i bleomicina.

[0195] U jednom otelotvorenju, obezbeđeno je jedinjenje formule (I), ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, za upotrebu u lečenju kancera, pri čemu se jedinjenje formule (I) ili njegova farmaceutski prihvatljiva so primenjuju u kombinaciji sa najmanje jednom dodatnom antitumorskom supstancom izabranom iz grupe koja se sastoji od doksorubicina, pirarubicina, amrubicina i epirubicina. U jednom otelotvorenju, kancer je akutna mijeloidna leukemija. U jednom otelotvorenju, kancer je karcinom dojke (na primer, trostruko negativni karcinom dojke). U jednom otelotvorenju, kancer je hepatocelularni karcinom.

[0196] U jednom otelotvorenju, obezbeđeno je jedinjenje formule (I), ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, i irinotekan, za upotrebu u lečenju kancera. U jednom otelotvorenju, obezbeđeno je jedinjenje formule (I), ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, za upotrebu u lečenju kancera, pri čemu se jedinjenje formule (I), ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, primenjuje u kombinaciji sa irinotekanom. U jednom otelotvorenju, kancer je kolorektalni kancer.

[0197] U jednom otelotvorenju, obezbeđeno je jedinjenje formule (I), ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, i FOLFIRI, za upotrebu u lečenju kancera. U jednom otelotvorenju, obezbeđeno je jedinjenje formule (I), ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, za upotrebu u lečenju kancera,

4

pri čemu se jedinjenje formule (I), ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, primenjuje u kombinaciji sa FOLFIRI. U jednom otelotvorenju, kancer je kolorektalni kancer.

[0198] FOLFIRI je dozni režim koji obuhvata kombinaciju leukovorina, 5-fluorouracila i irinotekana.

[0199] U jednom otelotvorenju, obezbeđeno je jedinjenje formule (I), ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, i R-CHOP, za upotrebu u lečenju kancera. U jednom otelotvorenju, obezbeđeno je jedinjenje formule (I) ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, za upotrebu u lečenju kancera, pri čemu se jedinjenje formule (I) ili njegova farmaceutski prihvatljiva so primenjuje u kombinaciji sa R-CHOP. U jednom otelotvorenju, kancer je non-Hodžkinov limfom.

[0200] R-CHOP je dozni režim koji obuhvata kombinaciju rituksimaba, ciklofosfamida, hidroksidaunomicina (doksorubicin hidrohlorid), onvavina (vinkristin) i prednizolona.

[0201] U jednom otelotvorenju, obezbeđeno je jedinjenje formule (I), ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, za upotrebu u lečenju kancera, pri čemu se jedinjenje formule (I) ili njegova farmaceutski prihvatljiva so primenjuje u kombinaciji sa olaparibom. U jednom otelotvorenju, kancer je kancer želuca.

[0202] U jednom otelotvorenju, obezbeđeno je jedinjenje formule (I) ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, za upotrebu u lečenju kancera, pri čemu se jedinjenje formule (I) ili njegova farmaceutski prihvatljiva so primenjuje u kombinaciji sa topotekanom. U jednom otelotvorenju, kancer je mikrocelularni karcinom pluća. U jednom otelotvorenju, obezbeđeno je jedinjenje formule (I) ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, za upotrebu u lečenju kancera, pri čemu se jedinjenje formule (I) ili njegova farmaceutski prihvatljiva so primenjuje u kombinaciji sa imunoterapijom. U jednom otelotvorenju, imunoterapiju predstavlja jedan ili više agensa prethodno navedenih pod tačkom (iii). U jednom otelotvorenju, imunoterapija je anti-PD-L1 antitelo (na primer, MEDI4736 (durvalumab)).

[0203] U jednom otelotvorenju, obezbeđena je farmaceutska kompozicija koja sadrži jedinjenje formule (I) i najmanje jednu dodatnu antitumorsku supstancu. U jednom otelotvorenju, farmaceutska kompozicija takođe sadrži najmanje jedan farmaceutski prihvatljiv razblaživač ili nosač. U jednom otelotvorenju, antitumorska supstanca je antineoplastični agens.

4

[0204] U jednom otelotvorenju, obezbeđena je farmaceutska kompozicija koja sadrži jedinjenje formule (I) i najmanje jednu dodatnu antitumorsku supstancu za upotrebu u lečenju kancera. U jednom otelotvorenju, farmaceutska kompozicija takođe sadrži najmanje jedan farmaceutski prihvatljiv razblaživač ili nosač. U jednom otelotvorenju, antitumorska supstanca je antineoplastični agens.

[0205] U skladu sa daljim otelotvorenjem, obezbeđen je komplet koji sadrži:

a) jedinjenje formule (I) ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so u prvom jediničnom doznom obliku;

b) dodatu antitumorsku supstancu u daljem jediničnom doznom obliku;

c) ambalažu koja sadrži pomenuti prvi i dalje jedinične dozne oblike; i opciono

d) uputstvo za upotrebu. U jednom otelotvorenju, antitumorska supstanca sadrži antineoplastični agens.

[0206] U bilo kom otelotvorenju u kom se pominje antineoplastični agens, antineoplastični agens je jedan ili više agensa prethodno navedenih pod tačkom (i).

[0207] Jedinjenja formule (I) i njihove farmaceutski prihvatljive soli mogu da se primenjuju kao farmaceutske kompozicije koje sadrže jedan ili više farmaceutski prihvatljivih razblaživača ili nosača.

[0208] Zato je, u jednom otelotvorenju, obezbeđena farmaceutska kompozicija koja sadrži jedinjenje formule (I) ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so, i najmanje jedan farmaceutski prihvatljiv razblaživač ili nosač.

[0209] Kompozicije mogu da budu u obliku koji je prikladan za oralnu upotrebu (na primer, kao tablete, lozenge, tvrde ili meke kapsule, vodene ili uljane suspenzije, emulzije, praškovi ili granule za disperziju, sirupi ili eliksiri), za topikalnu upotrebu (na primer, kao kremovi, masti, gelovi, ili vodeni ili uljani rastvori ili suspenzije), za primenu putem inhalacije (na primer, kao fino raspodeljeni prašak ili tečni aerosol), za primenu putem insuflacije (na primer, kao fino raspodeljeni prašak) ili za parenteralnu primenu (na primer, kao sterilni vodeni ili uljani rastvor za intravensko, supkutano ili intramuskularno doziranje) ili kao supozitorija za rektalno doziranje. Kompozicije mogu da se dobiju uz pomoć konvencionalnih procedura koristeći

4

konvencionalne farmaceutske ekscipijense, kao šta je već poznato u struci. Tako, kompozicije koje su namenjene za oralnu upotrebu mogu da sadrže, na primer, jedan ili više agensa za bojenje, zaslađivanje, aromu i/ili konzerviranje.

[0210] U jednom otelotvorenju, obezbeđena je farmaceutska kompozicija koja sadrži jedinjenje formule (I) ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so, i najmanje jedan farmaceutski prihvatljiv razblaživač ili nosač, za upotrebu u lečenju.

[0211] U jednom otelotvorenju, obezbeđena je farmaceutska kompozicija koja sadrži jedinjenje formule (I), ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so, i najmanje jedan farmaceutski prihvatljiv razblaživač ili nosač za upotrebu u lečenju kancera. U jednom otelotvorenju, navedeni kancer je izabran iz grupe koja se sastoji od kolorektalnog karcinoma, glioblastoma, karcinoma želuca, karcinoma jajnika, difuznog limfoma velikih B-ćelija, hronične limfocitne leukemije, akutne mijeloidne leukemije, karcinoma skvamoznih ćelija glave i vrata, karcinoma dojke, hepatocelularnog karcinoma, mikrocelularnog karcinoma pluća i nemikrocelularnog karcinoma pluća. U jednom otelotvorenju, navedeni kancer je izabran iz grupe koja se sastoji od kolorektalnog karcinoma, glioblastoma, karcinoma želuca, karcinoma jajnika, difuznog limfoma velikih B-ćelija, hronične limfocitne leukemije, karcinoma skvamoznih ćelija glave i vrata i karcinoma pluća. U jednom otelotvorenju, navedeni kancer je kolorektalni kancer.

[0212] Jedinjenje formule (I) će se uobičajeno primenjivati na toplokrvnoj životinji u jediničnoj dozi sa rasponom od 2,5-5000 mg/m<2>telesne površine životinje, ili oko 0,05-100 mg/kg, i to uobičajeno obezbeđuje terapeutski delotvornu dozu. Jedinični dozni oblik, poput tablete ili kapsule, uobičajeno sadrži, na primer 0,1-250 mg aktivnog sastojka. Dnevna doza obavezno varira u zavisnosti od domaćina koji se leči, konkretnog načina primene, svih terapija koje se zajedno primenjuju, i težine bolesti koja se leči. Shodno tome, lekar koji leči bilo kog konkretnog pacijenta može da odredi optimalnu dozu.

PRIMERI

[0213] Različita otelotvorenja su ilustrovana sledećim Primerima.

4

[0214] Ako nije drugačije naznačeno, početne supstance su bile komercijalno dostupne. Svi rastvarači i komercijalni reagensi bili su laboratorijskog kvaliteta i korišćeni su u primljenom stanju.

Prilikom pripreme Primera, uopšteno:

(i) Operacije su izvođene na sobnoj temperaturi (rt), tj. u rasponu od 17 do 25°C i u atmosferi inertnog gasa poput N2ili Ar, ako nije drugačije navedeno;

(ii) Uopšteno, tok reakcije je praćen tankoslojnom hromatografijom (TLC) i/ili analitičkom tečnom hromatografijom visokih performansi (HPLC ili UPLC) koja je uobičajeno kuplovana sa masenim spektrometrom (LCMS). Navedena vremena reakcije nisu nužno minimalno dostižna;

(iii) Po potrebi, organski rastvori su osušeni iznad anhidrovanog MgSO4ili Na2SO4, procedure obrade su sprovedene koristeći tradicionalne tehnike razdvajanja faza ili koristeći SCX kako je opisano u (xiii), uparavanja su izvedena bilo pomoću rotacionog uparavanja pod vakuumom ili u sistemu Genevac HT-4 / EZ-2 ili Biotage V10;

(iv) Prinosi, tamo gde su prisutni, nisu nužno maksimalno dostižni, a kada je potrebno, reakcije su ponavljane ako je bila potrebna veća količina reakcionog proizvoda;

(v) Uopšteno, strukture krajnjih proizvoda formule (I) potvrđene su nuklearnom magnetnom rezonancom (NMR) i/ili masenim spektrima; podaci za elektrosprej masene spektre su pribavljeni koristeći Waters Acquity UPLC kuplovan sa Waters masenim spektrometrom sa jednim kvadrupolom za dobijanje podataka o pozitivnim i negativnim jonima i, uopšteno, prijavljeni su samo joni koji se odnose na matičnu strukturu; vrednosti hemijskog pomaka protonske NMR su izmerene na delta skali koristeći Bruker AV500 spektrometar koji radi sa jačinom polja od 500 MHz, Bruker AV400 koji radi na 400 MHz ili Bruker AV300 koji radi na 300 MHz. Ako nije drugačije naznačeno, NMR spektri su dobijeni na 500 MHz u d6-dimetilsulfoksidu. Korišćene su sledeće skraćenice: s, singlet; d, dublet; t, triplet; q, kvartet; m, multiplet, br, širok; qn, kvintet;

(vi) Ako nije drugačije naznačeno, jedinjenja koja sadrže asimetrični atom ugljenika i/ili sumpora nisu razdvajana;

(vii) Intermedijeri nisu nužno bili u potpunosti prečišćeni, ali su njihove strukture i čistoća procenjeni pomoću TLC, analitičke HPLC/UPLC i/ili NMR analize i/ili masene spektrometrije;

(viii) Ako nije drugačije naznačeno, fleš hromatografija na koloni (fcc) izvedena je na Merck Kieselgel silicijum dioksidu (Art. 9385) ili na reversno faznom silicijum dioksidu (Fluka silika gel 90 C18) ili na kertridžima Silicycle (40-63 µm silicijum dioksid, težina 4 do 330 g) ili na Grace resolv kertridžima (4-120 g) ili na RediSep Rf 1.5 fleš kolonama ili na RediSep Rf Gold fleš kolonama visokih performansi (težina 150 - 415 g) ili na RediSep Rf Gold C18 reversno faznim kolonama (silicijum dioksid 20-40 µm) ručno ili automatski, koristeći sistem Isco CombiFlash Companion ili sličan sistem;

(ix) preparativna reversno fazna HPLC (RP HPLC) obavljena je na C18 reversno faznom silicijum dioksidu obično koristeći kolonu Waters XSelect CSH C18 (5 µm silicijum dioksid, prečnik 30 mm, dužina 100 mm) koristeći smeše opadajuće polarnosti kao eluent, na primer [sa 0,1% mravlje kiseline ili 0,3-5% vodenog rastvora amonijum hidroksida (d=0.91)] kao rastvarač A i acetonitril kao rastvarač B; uobičajena procedura bi bila sledeća: gradijent rastvarača tokom 10-20 minuta, sa 40-50 ml po minuti, od smeše rastvarača A, odnosno B 95:5 do smeše rastvarača A i B 5:95 (ili po potrebi alternativni odnos).

(x) Korišćeni su sledeći analitički postupci UPLC; uopšteno, reversno fazni C18 silicijum dioksid je korišćen sa protokom od 1 ml/minuti i detekcija je bila putem elektrosprej masene spektrometrije i beleženjem UV apsorbance na talasnoj dužini od 220-320 nm. Analitička UPLC je obavljena na CSH C18 reversno faznom silicijum dioksidu, koristeći kolonu Waters XSelect CSH C18 sa dimenzijama 2,1 x 50 mm i veličinom čestice od 1,7 mikrona. Korišćena je analiza gradijenta koristeći smeše opadajuće polarnosti kao eluent, na primer, opadajuće polarne smeše vode (sa 0,1% mravlje kiseline ili 0,1% amonijaka) kao rastvarač A i acetonitril kao rastvarač B. Uobičajeni 2-minutni analitički UPLC postupak koristi gradijent rastvarača tokom 1,3 minuta, sa približno 1 ml po minutu, od smeše rastvarača A, odnosno B 97:3 do smeše rastvarača A i B 3:97.

(xi) Kada su određena jedinjenja dobijena kao kisela adiciona so, na primer, monohidrohloridna so ili dihidrohloridna so, stehiometrija soli je zasnovana na broju i prirodi baznih grupa u jedinjenju, precizna stehiometrija soli uopšteno nije utvrđena, na primer, putem podataka iz elementarne analize;

(xii) Kada reakcija navodi upotrebu mikrotalasne pećnice, korišćen je jedan od sledećih mikrotalasnih reaktora: Biotage Initiator, Personal Chemistry Emrys Optimizer, Personal Chemistry Smithcreator ili CEM Explorer;

1

(xiii) Jedinjenja su prečišćena pomoću snažne katjonske izmenjivačke (SCX) hromatografije koristeći kolone Isolute SPE flash SCX-2 ili SCX-3 (International Sorbent Technology Limited, Mid Glamorgan, UK);

(xiv) Sledeći postupci preparativne hiralne HPLC su sprovedeni koristeći Gilson GX-281 HPLC i DAICEL CHIRALPAK IC (2 x 25 cm, 5 um) ili DAICEL CHIRALPAK IF (2 x 25 cm, 5 um); uopšteno, protok između 10-350 ml/minuti i detekcija je bila putem UV apsorbance na uobičajenoj talasnoj dužini od 254 nm. Koncentracija uzorka od oko 1-100 mg/ml korišćena je u odgovarajućoj smeši rastvarača sa zapreminom injekcije između 0,5-10 ml i vremenom rada od 10-150 minuta i tipičnom temperaturom pećnice od 25-35°C;

(xv) Sledeći postupci analitičke hiralne HPLC su sprovedeni koristeći Shimadzu UFLC i Daicel CHIRALPAK IC-3 (50 x 4,6 mm 3 um) ili Daicel CHIRALPAK IF-3 (50 x 4,6 mm 3 um); uopšteno, protok od 1 ml/minuti i detekcija je bila putem UV apsorbance na uobičajenoj talasnoj dužini od 254 nm. Koncentracija uzorka od oko 1 mg/ml korišćena je u odgovarajućem rastvaraču poput EtOH sa injekcionom zapreminom od oko 10 µl i vremenom rada od 10-60 minuta i tipičnom temperaturom pećnice od 25-35°C;

(xvi) Korišćeni su sledeći postupci preparativne hiralne superkritične tečne hromatografije (SFC); uopšteno, protok od oko 70 ml/minuti i detekcija je bila putem UV apsorbance na uobičajenoj talasnoj dužini od 254 nm. Koncentracija uzorka od oko 100 mg/ml korišćena je u odgovarajućem rastvaraču, poput MeOH, sa injekcionom zapreminom od oko 0,5 ml i vremenom rada od 10-150 minuta i tipičnom temperaturom pećnice od 25-35°C;

(xvii) Uopšteno, jedinjenja iz Primera i intermedijeri su nazvana koristeći ACD naziv, „Structure to Name“ deo ChemDraw Ultra (CambridgeSoft), Biovia Draw 2016 ili Open Eye OEChem 2.0.2;

(xviii) osim prethodno navedenih, korišćene su i sledeće skraćenice:

2

Intermedijer 1: (E)-N,N-dimetil-N'-(4-metil-5-nitropiridin-2-il)formimidamid

[0215]

[0216] 1,1-dimetoksi-N,N-dimetilmetanamin (26,0 ml, 196 mmol) dodat je u 4-metil-5-nitropiridin-2-amin (10,0 g, 65,3 mmol) u toluenu (100 ml) na rt. Reakciona smeša je zagrevana uz refluks tokom 2 h, i reakciona smeša je ostavljena da se ohladi na rt. Reakciona smeša je koncentrovana radi dobijanja naslovnog jedinjenja (13,5 g, 99%) kao žute čvrste supstance;<1>H NMR (400 MHz, DMSO) 2.53 (3H, d), 3.06 (3H, d), 3.17 (3H, s), 6.79 - 6.84 (1H, m), 8.69 (1H, s), 8.88 (1H, s); m/z MH<+>209.

Intermedijer 2: (E)-N-hidroksi-N'-(4-metil-5-nitropiridin-2-il)formimidamid

[0217]

[0218] Hidroksilamin hidrohlorid (9,01 g, 130 mmol) dodat je u (E)-N,N-dimetil-N'-(4-metil-5-nitropiridin-2-il)formimidamid (13,5 g, 64,8 mmol) u MeOH (100 ml) na rt. Reakciona smeša je zagrevana uz refluks tokom 1 h, i zatim ostavljena da se ohladi na rt. Reakciona smeša je podeljena između EtOAc (200 ml) i vode (100 ml). Organski sloj je izolovan i ispran zas.

vodenim rastvorom soli (50 ml), propušten kroz filter papir za razdvajanje faza i koncentrovan radi dobijanja naslovnog jedinjenja (11,9 g, 94%) kao žute čvrste supstance;<1>H NMR (400 MHz, DMSO) 2.52 (3H, s), 7.06 (1H, s), 7.89 (1H, d), 8.89 (1H, s), 10.10 (1H, d), 10.53 (1H, s); m/z MH<+>197.

Intermedijer 3: 7-metil-6-nitro-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin

[0219]

[0220] Anhidrid 2,2,2-trifluorsirćetne kiseline (10,1 ml, 72,8 mmol) dodat je u (E)-N-hidroksi-N'-(4-metil-5-nitropiridin-2-il)formimidamid (11,9 g, 60,7 mmol) u THF-u (100 ml) na 0°C. Reakciona smeša je mešana na rt tokom 18 h i zatim je koncentrovana. Dobijena sirova smeša je prečišćena putem fcc, uz eluiranje sa 0-100% EtOAc u heptanu, radi dobijanja nečiste bledonarandžaste čvrste supstance. Ova čvrsta supstanca je prekristalisana iz heptan:EtOAc, filtrirana i osušena pod vakuumom, zatim preneta u EtOAc (100 ml), isprana pomoću 0,1 M vod. HCl (50 ml), vode (50 ml) i zas. vodenog rastvora soli (50 ml). Organski sloj je propušten kroz filter papir za razdvajanje faza i koncentrovan pod vakuumom radi dobijanja naslovnog jedinjenja (3,42 g, 32%);<1>H NMR (400 MHz, DMSO) 2.67 (3H, s), 7.88 - 8.01 (1H, m), 8.73 (1H, s), 9.97 (1H, s); m/z MH<+>179.

Intermedijer 4: 7-metil-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-6-amin

[0221]

[0222] Pd/C (10%, vlažna podloga) (0,409 g, 3,84 mmol) dodat je u 7-metil-6-nitro-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin (3,42 g, 19,2 mmol) i amonijum format (6,05 g, 96,0 mmol) u etanolu (150 ml) na rt. Reakciona smeša je zagrevana uz refluks tokom 2 h. Reakciona smeša je ostavljena da se ohladi do rt, filtrirana i koncentrovana radi dobijanja naslovnog jedinjenja (2,60 g, 91%) kao bledosmeđe čvrste supstance;<1>H NMR (400 MHz, DMSO) 2.26 (3H, s), 5.00 (2H, s), 7.47 (1H, s), 8.10 (2H, d).

4

Intermedijer 5: 2,7-dimetil-6-nitro-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin

[0224] Smeša 2-hlor-4-metil-5-nitropiridina (1499 mg, 8,68 mmol), 5-metil-1,3,4-tiadiazol-2-amina (500 mg, 4,34 mmol) i N-etil-N-izopropilpropan-2-amina (1,51 ml, 8,68 mmol) u toluenu (5 ml) stavljena je u zaptivenu epruvetu i termalno zagrevana na 140°C tokom 2 dana. Reakciona smeša je ostavljena da se ohladi na rt i koncentrovana pod vakuumom. Sirova supstanca je prečišćena putem fcc, gradijent elucije 0 do 100% EtOAc u heptanu, radi dobijanja naslovnog jedinjenja (275 mg, 33%);<1>H NMR (400 MHz, DMSO) 2.51 (3H, s), 2.64 (3H, s), 7.78 (1H, s), 9.83 (1H, s); m/z MH<+>193.

Intermedijer 6: 2,7-dimetil-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-6-amin

[0225]

[0226] Voda (2,32 ml) je uz mešanje dodata u smešu 2,7-dimetil-6-nitro-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridina (312 mg, 1,62 mmol), gvožđa (544 mg, 9,74 mmol) i amonijum hidrohlorida (60,8 mg, 1,14 mmol) u EtOH (13,9 ml), i dobijena suspenzija je zagrevana na 90°C tokom 2 h. Ohlađena reakciona smeša je naneta na SCX kolonu od 10 g, isprana sa MeOH, zatim eluirana sa 1 M NH3/MeOH radi dobijanja sirovog proizvoda. Sirovi proizvod je prečišćen putem fcc, gradijent elucije 0 do 5% MeOH u DCM-u, radi dobijanja naslovnog jedinjenja (108 mg, 41%) kao bledožute čvrste supstance;<1>H NMR (400 MHz, DMSO) 2.24 (3H, s), 2.35 (3H, s), 4.90 (2H, s), 7.33 (1H, s), 8.00 (1H, s); m/z MH<+>163.

Intermedijer 7: (1r,4r)-4-((terc-butildimetilsilil)oksi)cikloheksanamin (trans-4-{[dimetil(2-metil-2-propanil)silil]oksi}cikloheksanamin)

[0227]

[0228] Imidazol (29,6 g, 434 mmol) je dodat u (trans)-4-aminocikloheksanol (20 g, 174 mmol) u DCM-u (200 ml). U porcijama je dodat TBDMS-Cl (39,3 g, 260 mmol), i reakciona smeša je mešana na rt tokom 18 h. Reakciona smeša je uparena do suva i ponovo rastvorena u EtOAc (200 ml) i redom isprana vodom (100 ml), 2 M vod. rastvorom NaOH (100 ml), vodom (100 ml) i zas. vodenim rastvorom soli (100 ml). Organski sloj je osušen iznad MgSO4, filtriran, i rastvarač je uklonjen pod vakuumom. Sirovi proizvod je prečišćen putem fcc, gradijent elucije 0 do 10% 1 M metanolni amonijak u DCM-u, radi dobijanja naslovnog jedinjenja (30 g, 75%) kao tamnozlatnog ulja;<1>H NMR (500 MHz, CDCl3) 0.05 (6H, s), 0.88 (9H, s), 1.05 - 1.22 (2H, m), 1.26 - 1.43 (2H, m), 1.44 - 1.76 (1H, br s) 1.76 - 1.81 (4H, m), 1.82 - 2.29 (1H, br s), 2.67 (1H, tt), 3.51 - 3.63 (1H, m).

Intermedijer 8: N-((1r,4r)-4-((terc-butildimetilsilil)oksi)cikloheksil)-2-hlor-5-nitropirimidin-4-amin (2-hlor-N-(trans-4-{[dimetil(2-metil-2-propanil)silil]oksi}cikloheksil)-5-nitro-4-pirimidinamin)

[0229]

[0230] 2,4-dihlor-5-nitropirimidin (20 g, 103 mmol), rastvoren u DCM-u (400 ml), ohlađen je na -78°C. Dodat je DIPEA (35,9 ml, 206 mmol), nakon čega je ukapavanjem dodat (1r,4r)-4-((terc-butildimetilsilil)oksi)cikloheksanamin (23,7 g, 103 mmol), rastvoren u DCM-u (50 ml). Reakciona smeša je mešana na -78°C tokom 30 minuta, zatim na rt tokom 18 h. Reakciona smeša je redom isprana vodom (200 ml) i zasićenim vodenim rastvorom soli (200 ml). Organski sloj je filtriran kroz filter papir za razdvajanje faza, i rastvarač je uklonjen pod vakuumom, i ostatak je trituriran u EtOAc:heptanu (∼1:1) i dobijena čvrsta supstanca je uklonjena filtracijom i osušena radi dobijanja naslovnog jedinjenja (32,0 g, 80%) kao bledonarandžaste čvrste supstance;<1>H NMR (500 MHz, CDCl3) 0.07 (6H, s), 0.90 (9H, s), 1.36 - 1.48 (2H, m), 1.49 - 1.6 (2H, m), 1.84 - 1.96 (2H, m), 2.06 - 2.19 (2H, m), 3.70 (1H, td), 4.17 - 4.3 (1H, m), 8.30 (1H, d), 9.03 (1H, s); m/z MH+ 387.

Intermedijer 9: N4-((1r,4r)-4-((terc-butildimetilsilil)oksi)cikloheksil)-2-hlorpirimidin-4,5-diamin (2-hlor-N∼4∼-(trans-4-{[dimetil(2-metil-2-propanil)silil]oksi}cikloheksil)-4,5-pirimidindiamin)

[0231]

[0232] Platina (10% na ugljeniku) (0,207 g, 1,06 mmol) je dodata u N-((1r,4r)-4-((tercbutildimetilsilil)oksi)cikloheksil)-2-hlor-5-nitropirimidin-4-amin (8,20 g, 21,2 mmol) u EtOAc (100 ml) na rt u atmosferi azota. Reakciona smeša je pročišćena vodonikom i mešana na rt tokom 18 h. Reakciona smeša je filtrirana, isprana pomoću EtOAc, i rastvarač je uklonjen pod vakuumom radi dobijanja naslovnog jedinjenja (7,40 g, 98%);<1>H NMR (500 MHz, CDCl3) 0.05 (6H, d), 0.89 (9H, d), 1.2 - 1.32 (2H, m), 1.51 (2H, tdd), 1.87 (2H, dd), 2.06 - 2.15 (2H, m), 2.91 (2H, br s), 3.63 (1H, ddd), 3.99 (1H, dtd), 4.90 (1H, d), 7.59 (1H, s); m/z MH+ 357.

Intermedijer 10: 9-((1r,4r)-4-((terc-butildimetilsilil)oksi)cikloheksil)-2-hlor-7,9-dihidro-8H-purin-8-on (2-hlor-9-(trans-4-{[dimetil(2-metil-2-propanil)silil]oksi}cikloheksil)-7,9-dihidro-8H-purin-8-on)

[0233]

[0234] N4-((1r,4r)-4-((terc-butildimetilsilil)oksi)cikloheksil)-2-hlorpirimidin-4,5-diamin (21,8 g, 61,1 mmol) stavljen je u balon u EtOAc (400 ml) na rt. Dodat je di(1H-imidazol-1-il)metanon (15,84 g, 97,71 mmol), i reakciona smeša je mešana na 70°C tokom 2 h. Otprilike polovina rastvarača je uklonjena pod vakuumom, i ostatak je ohlađen na ledu tokom 30 minuta. Dobijena čvrsta supstanca je uklonjena filtracijom i osušena radi dobijanja naslovnog jedinjenja (10,2 g, 44%) kao bledosmeđe čvrste supstance;<1>H NMR (500 MHz, CDCl3) 0.09 (6H, s), 0.90 (9H, s), 1.45 - 1.56 (2H, m), 1.81 (2H, d), 2.01 (2H, d), 2.45 (2H, qd), 3.75 (1H, ddd), 4.35 (1H, tt), 8.10 (1H, s) NH nije uočen; m/z MH<+>383.

Intermedijer 11: 9-((1r,4r)-4-(terc-butildimetilsililoksi)cikloheksil)-2-hlor-7-metil-7H-purin-8(9H)-on (2-hlor-9-(trans-4-{[dimetil(2-metil-2-propanil)silil]oksi}cikloheksil)-7-metil-7,9-dihidro-8H-purin-8-on)

[0235]

[0236] Natrijum hidrid (60%) (2,26 g, 56,4 mmol) je dodat u porcijama u 9-((1r,4r)-4-((tercbutildimetilsilil)oksi)cikloheksil)-2-hlor-7,9-dihidro-8H-purin-8-on (14,4 g, 37,6 mmol) u DMF-u (150 ml) na rt. Reakciona smeša je mešana tokom 30 minuta, ohlađena na ledu, a zatim je ukapavanjem dodat jodmetan (3,92 ml, 62,7 mmol). Reakciona smeša je mešana na rt tokom 1 h. Reakciona smeša je razblažena pomoću EtOAc (500 ml) i redom isprana vodom (3 x 200 ml) i zas. vodenim rastvorom soli (200 ml). Organski sloj je filtriran kroz filter papir za razdvajanje faza, i rastvarač je uklonjen pod vakuumom radi dobijanja naslovnog jedinjenja (10,4 g, 67%) kao svetlosmeđe čvrste supstance;<1>H NMR (500 MHz, CDCl3) 0.09 (6H, s), 0.90 (9H, s), 1.44 - 1.54 (2H, m), 1.78 (2H, d), 1.99 (2H, d), 2.43 (2H, qd), 3.43 (3H, s), 3.74 (1H, ddd), 4.36 (1H, tt), 7.98 (1H, s); m/z MH<+>397.

Intermedijer 12: 9-((1r,4r)-4-((terc-butildimetilsilil)oksi)cikloheksil)-7-metil-2-((7-metil-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-6-il)amino)-7,9-dihidro-8H-purin-8-on (9-(trans-4-{[tercbutil(dimetil)silil]oksi}cikloheksil)-7-metil-2-[(7-metil[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-6-il)amino]-7,9-dihidro-8H-purin-8-on)

[0237]

[0238] Cezijum karbonat (328 mg, 1,01 mmol) dodat je u 9-((1r,4r)-4-(tercbutildimetilsililoksi)cikloheksil)-2-hlor-7-metil-7H-purin-8(9H)-on (200 mg, 0,50 mmol) i 7-metil-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-6-amin (112 mg, 0,76 mmol) u 1,4-dioksanu (4 ml). Reakcija je degasirana ,i dodat je Brettphos pretkatalizator G3 (45,7 mg, 0,05 mmol). Reakciona smeša je mešana na 100°C tokom 18 h. Reakcija je zastala na ∼60% konverzije. Dodato je još 10% katalizatora i mešano je na 100°C tokom 2 h. Reakciona smeša je ohlađena na rt, razblažena dodatkom EtOAc (10 ml), filtrirana i koncentrovana do suva. Sirovi proizvod je prečišćen putem fcc, gradijent elucije 0 do 10% MeOH u DCM-u, radi dobijanja naslovnog jedinjenja (190 mg, 74%) kao smeđe čvrste supstance; m/z MH+ 509.

Primer 1: 9-((1r,4r)-4-hidroksicikloheksil)-7-metil-2-((7-metil-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-6-il)amino)-7,9-dihidro-8H-purin-8-on

[0239]

[0240] Konc. hlorovodonična kiselina (0,011 ml, 0,37 mmol) dodata je u 9-((1r,4r)-4-((tercbutildimetilsilil)oksi)cikloheksil)-7-metil-2-((7-metil-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-6-il)amino)-7,9-dihidro-8H-purin-8-on (190 mg, 0,37 mmol) u EtOH (5 ml) na rt. Reakciona smeša je mešana uz refluks tokom 1 h, a zatim je prečišćena preparativnom reversno faznom HPLC. Dobijeni nečisti proizvod je trituriran u MeCN, filtriran i osušen radi dobijanja naslovnog jedinjenja (55 mg, 37%) kao beličaste čvrste supstance;<1>H NMR (500 MHz, DMSO) 1.17 - 1.34 (2H, m), 1.68 (2H, d), 1.90 (2H, d), 2.21 - 2.33 (2H, m), 2.39 (3H, d), 3.28 (3H, s), 3.35 - 3.46 (1H, m), 4.11 (1H, ddt), 4.61 (1H, d), 7.63 - 7.71 (1H, m), 8.08 (1H, s), 8.36 (1H, s), 8.61 (1H, s), 9.15 (1H, s); m/z MH+ 395.

Intermedijer 13: etil 2-hlor-4-[(cis-4-hidroksicikloheksil)amino]pirimidin-5-karboksilat

[0241]

Kalijum karbonat (78 g, 565 mmol) dodat je u etil 2,4-dihlorpirimidin-5-karboksilat (50,0 g, 226 mmol) i cis-4-aminocikloheksanol hidrohlorid (34,3 g, 226 mmol) u acetonitrilu (700 ml) na rt u atmosferi vazduha. Reakciona smeša je mešana na rt tokom 16 h. Smeša je filtrirana kroz sloj celita. Filtrat je koncentrovan pod sniženim pritiskom. Talog je sakupljen filtracijom, ispran pomoću MeCN (100 ml) i osušen pod vakuumom radi dobijanja naslovnog jedinjenja (41,0 g, 61%) kao bele čvrste supstance;<1>H NMR (400 MHz, DMSO) 1.32 (3H, t), 1.42 - 1.58 (2H, m), 1.60 - 1.75 (6H, m), 3.66 (1H, d), 4.06 (1H, dd), 4.33 (2H, q), 4.57 (1H, d), 8.46 (1H, d), 8.63 (1H, s); m/z MH+ 300.

Intermedijer 14: 2-hlor-4-[(cis-4-hidroksicikloheksil)amino]pirimidin-5-karboksilna kiselina

[0242]

[0243] LiOH (9,75 g, 407 mmol) je dodat u etil 2-hlor-4-[(cis-4-hidroksicikloheksil)amino]pirimidin-5-karboksilat (61,0 g, 204 mmol) u THF-u (400 ml) i vodi (400 ml) na rt u atmosferi vazduha. Reakciona smeša je mešana na rt tokom 16 h. Smeša je koncentrovana pod sniženim pritiskom i podešena na pH=2 pomoću 2 M vod. HCl. Talog je sakupljen filtracijom, ispran vodom (500 ml) i osušen pod vakuumom radi dobijanja naslovnog jedinjenja (52 g, 94%) kao bele čvrste supstance;<1>H NMR (400 MHz, DMSO) 1.51 (2H, d), 1.58 - 1.75 (6H, m), 3.63 - 3.69 (1H, m), 4.00 - 4.07 (1H, m), 4.56 (1H, s), 8.59 (1H, s), 8.69 (1H, d), 13.82 (1H, s); m/z MH+ 272.

Intermedijer 15: 2-hlor-9-((1s,4s)-4-hidroksicikloheksil)-7,9-dihidro-8H-purin-8-on

[0244]

[0245] Trietilamin (28,2 ml, 202 mmol) je dodat u 2-hlor-4-[(cis-4-hidroksicikloheksil)amino]pirimidin-5-karboksilnu kiselinu (55,0 g, 202 mmol) u acetonitrilu (550 ml) na rt u atmosferi vazduha. Reakciona smeša je mešana na rt tokom 15 minuta. Dodat je DPPA (55,7 g, 202 mmol). Reakciona smeša je mešana na rt tokom 30 minuta, a zatim 6 h na 90°C. Reakciona smeša je sipana u vodu (4 l). Talog je sakupljen filtracijom, ispran vodom

1

(1 l) i osušen pod vakuumom radi dobijanja naslovnog jedinjenja (34,9 g, 64%) kao bele čvrste supstance; m/z MH+ 269.

Intermedijer 16: 2-hlor-9-((1s,4s)-4-hidroksicikloheksil)-7-metil-7,9-dihidro-8H-purin-8-on

[0246]

[0247] Jodmetan (31,7 g, 223 mmol) dodat je u 2-hlor-9-((1s,4s)-4-hidroksicikloheksil)-7,9-dihidro-8H-purin-8-on (30,0 g, 112 mmol), NaOH (22,3 g, 558 mmol) u THF-u (300 ml) i vodi (150 ml) na rt. Reakciona smeša je mešana na rt tokom 16 h. Reakciona smeša je koncentrovana pod vakuumom. Talog je sakupljen filtracijom, ispran vodom (250 ml) i osušen pod vakuumom radi dobijanja naslovnog jedinjenja (24,0 g, 76%) kao bele čvrste supstance;<1>H NMR (400 MHz, DMSO) 1.43 - 1.61 (4H, m), 1.79 (2H, d), 2.54 - 2.68 (2H, m), 3.34 (3H, s), 3.87 (1H, s), 4.15 - 4.21 (1H, m), 4.46 (1H, d), 8.34 (1H, s); m/z MH+ 283.

Primer 2: 9-((1s,4s)-4-hidroksicikloheksil)-7-metil-2-((7-metil-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-6-il)amino)-7,9-dihidro-8H-purin-8-on

[0248]

[0249] Brettphos pretkatalizator G3 (64,1 mg, 0,07 mmol) dodat je u 2-hlor-9-((1s,4s)-4-hidroksicikloheksil)-7-metil-7,9-dihidro-8H-purin-8-on (100 mg, 0,35 mmol), 7-metil-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-6-amin (62,9 mg, 0,42 mmol) i cezijum karbonat (230 mg, 0,71 mmol) u 1,4-dioksanu (3 ml) u atmosferi azota. Reakciona smeša je mešana na 100°C tokom

2

16 h. Sirovi proizvod je prečišćen preparativnom HPLC radi dobijanja naslovnog jedinjenja (102 mg, 73%) kao bele čvrste supstance;<1>H NMR (400 MHz, DMSO) 1.41 - 1.57 (4H, m), 1.74 - 1.85 (2H, m), 2.39 (3H, s), 2.58 - 2.74 (2H, m), 3.29 (3H, s), 3.84 - 3.91 (1H, m), 4.11 -4.24 (1H, m), 4.34 (1H, d), 7.69 (1H, s), 8.05 (1H, s), 8.37 (1H, s), 8.61 (1H, s), 9.13 (1H, s); m/z MH<+>395.

Intermedijer 17: etil 2-hlor-4-((tetrahidro-2H-piran-4-il)amino)pirimidin-5-karboksilat

[0250]

[0251] Kalijum karbonat (62,5 g, 452 mmol) dodat je u etil 2,4-dihlorpirimidin-5-karboksilat (40 g, 181 mmol) i tetrahidro-2H-piran-4-amin hidrohlorid (24,9 g, 181 mmol) u acetonitrilu (1000 ml). Reakciona smeša je mešana na rt tokom 16 h. Talog je sakupljen filtracijom, ispran pomoću THF-a (750 ml), i organski slojevi su uklonjeni pod sniženim pritiskom. Sirovi proizvod je prečišćen putem fcc, gradijent elucije 0 do 2% THF u DCM-u, radi dobijanja naslovnog jedinjenja (37,7 g, 73%) kao bledožute čvrste supstance;<1>H NMR (400 MHz, DMSO) 1.32 (3H, t), 1.54 - 1.63 (2H, m), 1.85 - 1.89 (2H, m), 3.46 (2H, td), 3.85 (2H, dt), 4.19 (1H, dtt), 4.31 (2H, q), 8.34 (1H, d), 8.64 (1H, s); m/z MH<+>286.

Intermedijer 18: 2-hlor-4-((tetrahidro-2H-piran-4-il)amino)pirimidin-5-karboksilna kiselina

[0252]

[0253] Rastvor LiOH (13,1 g, 547 mmol) u vodi (800 ml) uz mešanje je dodat u rastvor etil 2-hlor-4-((tetrahidro-2H-piran-4-il)amino)pirimidin-5-karboksilata (78,2 g, 273 mmol) u THF-u (800 ml). Reakciona smeša je mešana na rt tokom 3 h. Organski slojevi su uklonjeni pod sniženim pritiskom. Reakciona smeša je zakiseljena pomoću 2 M vod. HCl. Talog je sakupljen filtracijom, ispran vodom (500 ml) i osušen pod vakuumom radi dobijanja naslovnog jedinjenja (66,4 g, 92%) kao bele čvrste supstance;<1>H NMR (400 MHz, DMSO) 1.5 - 1.63 (2H, m), 1.85 - 1.95 (2H, m), 3.47 (2H, td), 3.85 (2H, dt), 4.08 - 4.26 (1H, m), 8.57 (1H, dd), 8.60 (1H, s), 13.76 (1H, s); m/z MH<+>258.

Intermedijer 19: 2-hlor-9-tetrahidro-2H-piran-4-il)-7,9-dihidro-8H-purin-8-on

[0254]

[0255] Trietilamin (25,4 g, 251 mmol) dodat je u 2-hlor-4-((tetrahidro-2H-piran-4-il)amino)pirimidin-5-karboksilnu kiselinu (64,8 g, 251 mmol) i DPPA (69,2 g, 251 mmol) u DMA (330 ml). Reakciona smeša je mešana na rt tokom 1 h, zatim mešana na 120°C tokom 16 h. Reakciona smeša je sipana na led (2 l), talog je sakupljen filtracijom, ispran vodom (400 ml) i osušen pod vakuumom radi dobijanja naslovnog jedinjenja (44,8 g, 70%) kao bele čvrste supstance;<1>H NMR (400 MHz, DMSO) 1.66 - 1.70 (2H, m), 2.43 (2H, td), 3.45 (2H, t), 3.97 (2H, dd), 4.42 (1H, tt), 8.14 (1H, s), 11.65 (1H, s); m/z MH<+>255.

Intermedijer 20: 2-hlor-7-metil-9-(tetrahidro-2H-piran-4-il)-7,9-dihidro-8H-purin-8-on

[0256]

4

[0257] Rastvor NaOH (31,0 g, 776 mmol) u vodi (80 ml) uz mešanje je dodat u rastvor 2-hlor-9-(tetrahidro-2H-piran-4-il)-7,9-dihidro-8H-purin-8-ona (39,5 g, 155 mmol) i MeI (48,5 ml, 776 mmol) u THF-u (720 ml). Reakciona smeša je mešana na rt tokom 16 h. Organski sloj je uklonjen pod sniženim pritiskom. Reakciona smeša je razblažena vodom. Talog je sakupljen filtracijom, ispran vodom (300 ml) i osušen pod vakuumom radi dobijanja naslovnog jedinjenja (32,5 g, 69%) kao bele čvrste supstance;<1>H NMR (400 MHz, DMSO) 1.67-1.71 (2H, m), 2.39 - 2.48 (2H, m), 3.37 (3H, s), 3.46 (2H, td), 3.97 (2H, dd), 4.45 (1H, tt), 8.37 (1H, s); m/z MH<+>269.

Primer 3: 7-metil-2-((7-metil-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-6-il)amino)-9-(tetrahidro-2H-piran-4-il)-7,9-dihidro-8H-purin-8-on

[0258]

[0259] Cezijum karbonat (24,3 g, 74,4 mmol) dodat je u 2-hlor-7-metil-9-(tetrahidro-2H-piran-4-il)-7,9-dihidro-8H-purin-8-on (10,0 g, 37,2 mmol) i 7-metil-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-6-amin (5,51 g, 37,2 mmol) u 1,4-dioksanu (200 ml). Dodat je Brettphos pretkatalizator G3 (1.69 g, 1,86 mmol), i dobijena suspenzija je snažno mešana na 100°C tokom 1 h. Dodato je još 1% katalizatora i mešano još 30 minuta. Reakciona smeša je ohlađena na rt, filtrirana, i čvrsta supstanca je isprana pomoću 10% MeOH u DCM-u (100 ml). Filtrat je odvojen, i rastvarač je uklonjen pod vakuumom. Dobijeni sirovi proizvod je prečišćen putem fcc, uz eluiranje pomoću 0-10% MeOH u DCM-u, zatim prekristalizacijom iz MeOH i DCM-a radi dobijanja naslovnog jedinjenja (7,59 g, 54%) kao čvrste supstance krem boje;<1>H NMR (400 MHz, DMSO) 1.63 -1.72 (2H, m), 2.40 (3H, s), 2.52 - 2.58 (2H, m), 3.31 (3H, s), 3.42 (2H, t), 3.97 (2H, dd), 4.42 (1H, tt), 7.70 (1H, s), 8.08 (1H, s), 8.37 (1H, s), 8.65 (1H, s), 9.11 (1H, s); m/z MH<+>381.

Oblik A

[0260] Konačni proizvod, 7-metil-2-((7-metil-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-6-il)amino)-9-(tetrahidro-2H-piran-4-il)-7,9-dihidro-8H-purin-8-on, analiziran je pomoću XRPD i DSC, i utvrđeno je da je kristalan. XRPD uzorka supstance dao je obrazac difrakcije kao što je prikazan na slici 1.7-metil-2-((7-metil-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-6-il)amino)-9-(tetrahidro-2H-piran-4-il)-7,9-dihidro-8H-purin-8-on oblik A je okarakterisan najmanje jednim pikom sa 2θ vrednošću 7,6° i 18,7°, izmereno koristeći CuKa radijaciju. Deset najistaknutijih pikova XRPD prikazano je u tabeli A.

Tabela A: Deset najistaknutijih XRPD pikova za 7-metil-2-((7-metil-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-6-il)amino)-9-(tetrahidro-2H-piran-4-il)-7,9-dihidro-8H-purin-8-on oblik A

Primer 4: 2-((2,7-dimetil-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-6-il)amino)-7-metil-9-(tetrahidro-2H-piran-4-il)-7,9-dihidro-8H-purin-8-on

[0261]

[0262] Cezijum karbonat (388 mg, 1,19 mmol) dodat je u jednoj porciji u 2-hlor-7-metil-9-(tetrahidro-2H-piran-4-il)-7,9-dihidro-8H-purin-8-on (160 mg, 0,60 mmol) i 2,7-dimetil

[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-6-amin (97 mg, 0,60 mmol) u 1,4-dioksanu (5 ml) na rt, i degasiran propuštanjem azota kroz smešu tokom 5 minuta. Dodat je Brettphos pretkatalizator G3 (54,0 mg, 0,06 mmol), i reakcija je zagrevana na 100°C tokom 2 h. Smeša je razblažena DCM-om i filtrirana. Organski sloj je uparen i ostatak je prečišćen putem fcc, gradijent elucije 0 do 5% MeOH u DCM-u, zatim trituracijom sa MeCN, radi dobijanja naslovnog jedinjenja (125 mg, 53%) kao čvrste supstance krem boje;<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) 1.69 - 1.79 (2H, m), 2.49 (3H, s), 2.58 (3H, s), 2.76 (2H, qd), 3.41 (3H, s), 3.55 (2H, t), 4.14 (2H, dd), 4.55 (1H, tt), 6.60 (1H, s), 7.43 (1H, s), 7.87 (1H, s), 9.60 (1H, s); m/z MH<+>395.

Intermedijer 21: etil 2-hlor-4-((4-oksocikloheksil)amino)pirimidin-5-karboksilat

[0263]

[0264] DIPEA (8,38 ml, 48,0 mmol) je ukapavanjem dodat u etil 2,4-dihlorpirimidin-5-karboksilat (8,84 g, 40 mmol) i 4-aminocikloheksan-1-on hidrohlorid (5,98 g, 40,0 mmol) u acetonitrilu (200 ml) na 0°C u periodu od 2 minuta. Reakciona smeša je mešana na rt tokom 16 h. Rastvarač je uklonjen pod sniženim pritiskom. Sirovi proizvod je prečišćen putem fcc, elucija pomoću 0-5% EtOAc u DCM-u, radi dobijanja naslovnog jedinjenja (6,13 g, 52%) kao bele čvrste supstance;<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) 1.41 (3H, t), 1.84 - 1.97 (2H, m), 2.28 -2.41 (2H, m), 2.44 - 2.62 (4H, m), 4.38 (2H, q), 4.53 - 4.66 (1H, m), 8.55 (1H, d), 8.72 (1H, s); m/z MH<+>298.

Intermedijer 22: 2-hlor-4-((4-oksocikloheksil)amino)pirimidin-5-karboksilna kiselina

[0265]

[0266] LiOH (0,981 g, 41,0 mmol) je dodat u jednoj porciji u etil 2-hlor-4-((4-oksocikloheksil)amino)pirimidin-5-karboksilat (6,10 g, 20,5 mmol) u THF-u (50 ml) i vodi (50 ml) na 0°C. Reakciona smeša je mešana na rt tokom 16 h. Organski rastvarač je uklonjen pod sniženim pritiskom. Reakciona smeša je zakiseljena pomoću 2 M vod. HCl. Talog je sakupljen filtracijom, ispran vodom (20 ml) i osušen pod vakuumom radi dobijanja naslovnog jedinjenja (3,50 g, 63%) kao bele čvrste supstance koja je korišćena bez daljeg prečišćavanja;<1>H NMR (400 MHz, DMSO) 1.79 - 1.93 (2H, m), 2.11 - 2.31 (4H, m), 2.50 - 2.63 (2H, m), 4.37 - 4.51 (1H, m), 8.60 (1H, s), 8.70 (1H, d), 13.90 (1H, s); m/z MH<+>270.

Intermedijer 23: 2-hlor-9-(4-oksocikloheksil)-7,9-dihidro-8H-purin-8-on

[0267]

[0268] Difenilfosforil azid (2,80 ml, 13,0 mmol) dodat je u jednoj porciji u 2-hlor-4-((4-oksocikloheksil)amino)pirimidin-5-karboksilnu kiselinu (3,5 g, 13,0 mmol) i Et3N (1,81 ml, 13,0 mmol) u THF-u (70 ml) na rt. Reakciona smeša je mešana na 80°C tokom 16 h. Rastvarač je uklonjen pod sniženim pritiskom. Sirovi proizvod je prečišćen putem fcc, elucija pomoću 0 - 40% EtOAc u DCM-u, radi dobijanja naslovnog jedinjenja (2,00 g, 58%) kao bele čvrste supstance;<1>H NMR (400 MHz, DMSO) 2.03 - 2.13 (2H, m), 2.25 - 2.36 (2H, m), 2.51 - 2.65 (2H, m), 2.65 - 2.77 (2H, m), 4.72 - 4.85 (1H, m), 8.15 (1H, s), 11.68 (1H, s); m/z MH<+>267.

Intermedijer 24: 2-hlor-7-metil-9-(4-oksocikloheksil)-7,9-dihidro-8H-purin-8-on

[0270] NaH (0,420 g, 10,5 mmol) dodat je u jednoj porciji u 2-hlor-9-(4-oksocikloheksil)-7,9-dihidro-8H-purin-8-on (2,8 g, 10,5 mmol) u DMF-u (50 ml) na 0°C. Reakciona smeša je mešana na rt tokom 30 minuta. Dodat je MeI (1,97 ml, 31,5 mmol), i reakciona smeša je mešana na rt tokom 16 h. Reakciona smeša je sipana u vodu (150 ml) i talog je sakupljen filtracijom, ispran vodom (50 ml) i osušen pod vakuumom radi dobijanja naslovnog jedinjenja (1,80 g, 61%) kao bele čvrste supstance koja je korišćena bez daljeg prečišćavanja;<1>H NMR (400 MHz, DMSO) 2.03 - 2.14 (2H, m), 2.26 - 2.36 (2H, m), 2.53 - 2.65 (2H, m), 2.65 - 2.78 (2H, m), 3.37 (3H, s), 4.76 - 4.89 (1H, m), 8.38 (1H, s); m/z MH<+>281.

Intermedijer 25: 2-hlor-9-(4-hidroksicikloheksil)-7-metil-7,9-dihidro-8H-purin-8-on

[0271]

[0272] NaBH4(121 mg, 3,21 mmol) dodat je u 2-hlor-7-metil-9-(4-oksocikloheksil)-7,9-dihidro-8H-purin-8-on (900 mg, 3,21 mmol) u MeOH (15 ml). Reakciona smeša je mešana na rt tokom 4 sata. Reakciona smeša je razblažena pomoću EtOAc (100 ml) i isprana vodom (100 ml). Organski sloj je osušen iznad Na2SO4, filtriran i uparen radi dobijanja naslovnog jedinjenja kao nepoznate smeše cis i trans izomera (800 mg, 88%) kao bele čvrste supstance;<1>H NMR (glavni izomer) (300 MHz, CDCl3) 0.83 - 0.90 (1H, m), 1.42 - 1.52 (2H, m), 1.78 - 1.87 (2H, m), 2.11 - 2.17 (2H, m), 2.41 - 2.58 (2H, m), 3.44 (3H, s), 3.78 - 3.87 (1H, m), 4.33 - 4.44 (1H, m), 8.02 (1H, s); m/z MH<+>283.

Intermedijer 26: 2-hlor-9-((1s,4s)-4-metoksicikloheksil)-7-metil-7,9-dihidro-8H-purin-8-on

[0273]

[0274] NaH (113 mg, 2,83 mmol) dodat je u 2-hlor-9-(4-hidroksicikloheksil)-7-metil-7,9-dihidro-8H-purin-8-on (800 mg, 2,83 mmol) u THF-u (15 ml) na 0°C. Smeša je mešana na rt tokom 1 h. Dodat je MeI (0,531 ml, 8,49 mmol). Reakciona smeša je mešana na rt tokom 5 h. Sirovi proizvod je prečišćen preparativnom HPLC radi dobijanja 2-hlor-9-((1r,4r)-4-metoksicikloheksil)-7-metil-7,9-dihidro-8H-purin-8-ona (220 mg, 26%) kao bele čvrste supstance i naslovnog jedinjenja (60 mg, 0,202 mmol, 7%) kao bele čvrste supstance;<1>H NMR (400 MHz, DMSO) 1.46 - 1.59 (4H, m), 1.95 - 2.05 (2H, m), 2.37 - 2.48 (2H, m), 3.26 (3H, s), 3.35 (3H, s), 3.40 - 3.45 (1H, m), 4.22 (1H, tt), 8.34 (1H, s); m/z MH<+>297.

Primer 5: 9-((1s,4s)-4-metoksicikloheksil)-7-metil-2-((7-metil-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-6-il)amino)-7,9-dihidro-8H-purin-8-on

[0275]

[0276] Brettphos pretkatalizator G3 (14 mg, 0,02 mmol) i 2-dicikloheksilfosfino-2',6'-di-ipropoksi-1,1'-bifenil (7,9 mg, 0,02 mmol) dodati su u 2-hlor-9-((1s,4s)-4-metoksicikloheksil)-7-metil-7,9-dihidro-8H-purin-8-on (50 mg, 0,17 mmol), 7-metil-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-6-amin (25,0 mg, 0,17 mmol) i cezijum karbonat (110 mg, 0,34 mmol) u 1,4-dioksanu (2 ml) u atmosferi azota. Reakciona smeša je mešana na 100°C tokom 4 h. Sirovi proizvod je prečišćen preparativnom HPLC radi dobijanja naslovnog jedinjenja (0,054 g, 78%) kao bele čvrste supstance;<1>H NMR (400 MHz, DMSO) 1.36 - 1.50 (4H, m), 1.90 - 1.99 (2H, m), 2.37 (3H, s), 2.38 - 2.50 (2H, m), 3.06 (3H, s), 3.29 (3H, s), 3.35 - 3.38 (1H, m), 4.10 - 4.23 (1H, m), 7.71 (1H, s), 8.07 (1H, s), 8.38 (1H, s), 8.66 (1H, s), 9.02 (1H, s); m/z MH<+>409.

Intermedijer 27: etil 2-hlor-4-((4-metoksicikloheksil)amino)pirimidin-5-karboksilat

[0277]

[0278] DIPEA (3,24 ml, 18,58 mmol) je dodata u etil 2,4-dihlorpirimidin-5-karboksilat (3,42 g, 15,5 mmol) i 4-metoksicikloheksan-1-amin (2,0 g, 15,5 mmol) u acetonitrilu (80 ml) na 0°C. Reakciona smeša je mešana na rt tokom 16 h. Rastvarač je uklonjen pod sniženim pritiskom. Sirovi proizvod je prečišćen putem fcc, elucija pomoću 0-5% EtOAc u petrol etru, radi dobijanja naslovnog jedinjenja (3,60 g, 74%) kao bele čvrste supstance;<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) 1.26 - 1.50 (4H, m), 1.38 (3H, t), 2.02 - 2.18 (4H, m), 3.15 - 3.27 (1H, m), 3.37 (3H, s), 4.04 - 4.18 (1H, m), 4.35 (2H, q), 8.34 (1H, d), 8.66 (1H, s); m/z MH<+>314.

Intermedijer 28: 2-hlor-4-((4-metoksicikloheksil)amino)pirimidin-5-karboksilna kiselina

[0279]

[0280] LiOH (0,549 g, 22,95 mmol) dodat je u etil 2-hlor-4-((4-metoksicikloheksil)amino)pirimidin-5-karboksilat (3,6 g, 11,5 mmol) u THF-u (25 ml) i vodi (25 ml) na 0°C. Reakciona smeša je mešana na rt tokom 16 h. Organski rastvarač je uklonjen

1

pod sniženim pritiskom, i smeša je zakiseljena pomoću 2 M vod. HCl. Dobijeni talog je sakupljen filtracijom, ispran vodom (20 ml) i osušen pod vakuumom radi dobijanja naslovnog jedinjenja (3,10 g, 95%) kao bele čvrste supstance koja je korišćena bez daljeg prečišćavanja;<1>H NMR (300 MHz, DMSO) 1.19 - 1.49 (4H, m), 1.91 - 2.04 (4H, m), 3.14 - 3.20 (1H, m), 3.25 (3H, s), 3.85 - 4.02 (1H, m), 8.51 (1H, d), 8.59 (1H, s), 13.8 (1H, s); m/z MH<+>286.

Intermedijer 29: 2-hlor-9-(4-metoksicikloheksil)-7,9-dihidro-8H-purin-8-on

[0281]

[0282] Difenilfosforil azid (2,34 ml, 10,9 mmol) dodat je u 2-hlor-4-((4-metoksicikloheksil)amino)pirimidin-5-karboksilnu kiselinu (3,1 g, 10,9 mmol) i Et3N (1,51 ml, 10,9 mmol) u THF-u (50 ml) na rt. Reakciona smeša je mešana na 80°C tokom 16 h. Reakciona smeša je razblažena vodom. Talog je sakupljen filtracijom, ispran vodom (150 ml) i osušen pod vakuumom radi dobijanja naslovnog jedinjenja (2,50 g, 82%) kao bele čvrste supstance koja je korišćena bez daljeg prečišćavanja;<1>H NMR (300 MHz, DMSO) 1.21 - 1.35 (2H, m), 1.79 (2H, dd), 2.13 (2H, dd), 2.15 - 2.35 (2H, m), 3.15 - 3.25 (1H, m), 3.28 (3H, s), 4.09 - 4.26 (1H, m), 8.13 (1H, s), 11.64 (1H, s); m/z MH<+>283.

Intermedijer 30: 2-hlor-9-(4-metoksicikloheksil)-7-metil-7,9-dihidro-8H-purin-8-on

[0283]

[0284] NaH (0,240 g, 6,01 mmol) dodat je u 2-hlor-9-(4-metoksicikloheksil)-7,9-dihidro-8H-purin-8-on (1,7 g, 6,01 mmol) u DMF-u (25 ml) na 0°C u atmosferi vazduha. Reakciona smeša

2

je mešana na 0°C tokom 30 minuta. Dodat je MeI (1,13 ml, 18,0 mmol). Reakciona smeša je mešana na rt tokom 5 h. Reakciona smeša je razblažena vodom. Talog je sakupljen filtracijom, ispran vodom (75 ml) i osušen pod vakuumom radi dobijanja naslovnog jedinjenja (1,33 g, 75%) kao bele čvrste supstance koja je korišćena bez daljeg prečišćavanja;<1>H NMR (300 MHz, DMSO) 1.17 - 1.37 (2H, m), 1.79 (2H, dd), 2.10 (2H, dd), 2.17 - 2.36 (2H, m), 3.15 - 3.24 (1H, m), 3.27 (3H, s), 3.35 (3H, s), 4.12 - 4.29 (1H, m), 8.35 (1H, s); m/z MH<+>297.

Primer 6: 9-((1r,4r)-4-metoksicikloheksil)-7-metil-2-((7-metil-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-6-il)amino)-7,9-dihidro-8H-purin-8-on

[0285]

[0286] Brettphos pretkatalizator G3 (45,8 mg, 0,05 mmol) dodat je u 2-hlor-9-(4-metoksicikloheksil)-7-metil-7,9-dihidro-8H-purin-8-on (150 mg, 0,51 mmol), 7-metil-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-6-amin (74,9 mg, 0,51 mmol) i cezijum karbonat (329 mg, 1,01 mmol) u 1,4-dioksanu (4 ml) u atmosferi azota. Reakciona smeša je mešana na 100°C tokom 16 h. Rastvarač je uklonjen pod sniženim pritiskom. Sirovi proizvod je prečišćen preparativnom HPLC radi dobijanja naslovnog jedinjenja (136 mg, 66%) kao bele čvrste supstance;<1>H NMR (400 MHz, DMSO) 1.21 (2H, qd), 1.75 (2H, dd), 2.07 (2H, dd), 2.30 (2H, qd), 2.41 (3H, s), 3.11 (1H, tt), 3.24 (3H, s), 3.30 (3H, s), 4.10 - 4.23 (1H, m), 7.71 (1H, s), 8.11 (1H, s), 8.38 (1H, s), 8.66 (1H, s), 9.21 (1H, s); m/z MH<+>409.

Intermedijer 31: etil 2-hlor-4-[[(3S)-tetrahidropiran-3-il]amino]pirimidin-5-karboksilat

[0287]

[0288] (3S)-tetrahidro-2H-piran-3-amin hidrohlorid (1,99 g, 14,5 mmol) u MeCN (10 ml) ukapavanjem je dodat u smešu DIPEA (6,30 ml, 36,2 mmol) i etil 2,4-dihlorpirimidin-5-karboksilata (3,2 g, 14,5 mmol) u MeCN (60 ml) na 0°C tokom 5 minuta u atmosferi vazduha. Reakciona smeša je mešana tokom 4 h, polako ostavljena da se zagreje na rt dok se ledeno kupatilo otapa. Reakciona smeša je mešana na rt tokom 18 h. Reakciona smeša je uparena do suva radi uklanjanja MeCN, razblažena sa EtOAc (100 ml) i isprana vodom, zatim zas. vodenim rastvorom soli. Organski sloj je osušen iznad MgSO4, filtriran i uparen radi dobijanja sirovog proizvoda. Sirovi proizvod je prečišćen putem fcc, elucija pomoću 0-40% EtOAc u heptanu, radi dobijanja naslovnog jedinjenja (3,24 g, 78%) kao žutog ulja;<1>H NMR (400 MHz, DMSO) 1.32 (3H, t), 1.49 - 1.6 (1H, m), 1.63 - 1.79 (2H, m), 1.83 - 1.94 (1H, m), 3.48 (1H, dd), 3.54 - 3.65 (2H, m), 3.74 (1H, dd), 4.08 - 4.19 (1H, m), 4.33 (2H, q), 8.57 (1H, d), 8.64 (1H, s); m/z [M-H]<->284.

Intermedijer 32: 2-hlor-4- [[(3S)-tetrahidropiran-3-il]amino] pirimidin-5-karboksilna kiselina

[0290] Litijum hidroksid hidrat (0,933 g, 22,23 mmol) dodat je u jednoj porciji u etil 2-hlor-4-[[(3S)-tetrahidropiran-3-il]amino]pirimidin-5-karboksilat (3,24 g, 11,1 mmol) u THF-u (20 ml) i vodi (20 ml) na 0°C. Reakciona smeša je mešana na rt tokom 16 h. Organski rastvarač je uklonjen pod vakuumom. Reakciona smeša je zakiseljena pomoću 2 M vod. HCl. Talog je sakupljen filtracijom, ispran vodom (50 ml) i sušen na vazduhu pod vakuumom preko noći. Dobijena bela čvrsta supstanca je dalje osušena pod vakuumom na 50°C tokom 24 h radi dobijanja naslovnog jedinjenja (2,40 g, 84%) kao bele čvrste supstance;<1>H NMR (400 MHz, DMSO) 1.55 (1H, dq), 1.61 - 1.77 (2H, m), 1.85 - 1.95 (1H, m), 3.45 (1H, dd), 3.59 (2H, t), 3.75 (1H, dd), 4.06 - 4.16 (1H, m), 8.60 (1H, s), 8.76 (1H, d), 13.62 (1H, s); m/z MH<+>258.

4

Intermedijer 33: (S)-2-hlor-9-(tetrahidro-2H-piran-3-il)-7,9-dihidro-8H-purin-8-on

[0291]

[0292] Difenilfosforil azid (2,00 ml, 9,29 mmol) dodat je u jednoj porciji u rastvor 2-hlor-4-[[(3S)-tetrahidropiran-3-il]amino]pirimidin-5-karboksilne kiseline (2,40 g, 9,29 mmol) i trietilamina (1,30 ml, 9,29 mmol) u THF-u (50 ml) na rt. Reakciona smeša je mešana na 80°C tokom 24 h. Reakciona smeša je ostavljena da se ohladi, a zatim sipana u vodu (40 ml). THF je uklonjen pod vakuumom, što je dovelo do nastanka belog taloga u vodi koji je dalje uklonjen filtracijom pod vakuumom, ispran vodom, osušen na vazduhu pod vakuumom tokom 2 h, zatim osušen pod vakuumom na 50°C radi dobijanja naslovnog jedinjenja (1,84 g, 78%) kao bele čvrste supstance;<1>H NMR (400 MHz, DMSO) 1.61 - 1.82 (2H, m), 1.88 - 1.99 (1H, m), 2.40 - 2.49 (1H, m), 3.3 - 3.37 (1H, m), 3.78 - 3.93 (3H, m), 4.2 - 4.32 (1H, m), 8.13 (1H, s), 11.63 (1H, s); m/z MH<+>255.

Intermedijer 34: 2-hlor-7-metil-9-[(3S)-tetrahidropiran-3-il]purin-8-on

[0293]

[0294] Natrijum hidrid (60%) (0,434 g, 10,9 mmol) dodat je u porcijama u (S)-2-hlor-9-(tetrahidro-2H-piran-3-il)-7,9-dihidro-8H-purin-8-on (1,84 g, 7,24 mmol) u DMF-u (25 ml) na 0°C. Reakciona smeša je mešana tokom 30 minuta, zatim je ukapavanjem dodat jodmetan (1,36 ml, 21,7 mmol). Reakciona smeša je mešana na 0°C tokom 1 h. Reakciona smeša je ugašena vodom (50 ml), i dobijeni talog je uklonjen filtracijom i osušen pod vakuumom radi dobijanja naslovnog jedinjenja (1,62 g, 83%) kao čvrste supstance krem boje;<1>H NMR (400 MHz, DMSO) 1.64 - 1.82 (2H, m), 1.90 - 1.98 (1H, m), 2.41 - 2.48 (1H, m), 3.32 - 3.38 (4H, m), 3.79 - 3.91 (3H, m), 4.25 - 4.34 (1H, m), 8.35 (1H, s); m/z MH<+>269

Primer 7: (S)-7-metil-2-((7-metil-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-6-il)amino)-9-(tetrahidro-2H-piran-3-il)-7,9-dihidro-8H-purin-8-on

[0295]

[0296] Cezijum karbonat (303 mg, 0,93 mmol) dodat je u 2-hlor-7-metil-9-[(3S)-tetrahidropiran-3-il]purin-8-on (125 mg, 0,47 mmol) i 7-metil-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-6-amin (68,9 mg, 0,47 mmol) u 1,4-dioksanu (4 ml). Reakcija je degasirana i dodat je Brettphos pretkatalizator G3 (42,2 mg, 0,05 mmol), i reakciona smeša je mešana na 100°C tokom 2 h. Reakcija je ohlađena na rt i koncentrovana. Čvrsta supstanca je ponovo rastvorena u DCM-u i filtrirana kroz celit. Filtrat je prečišćen putem fcc, elucija pomoću 0-8% MeOH u DCM-u, i dobijena čvrsta supstanca je triturirana dietil etrom, filtrirana i osušena pod vakuumom radi dobijanja naslovnog jedinjenja (110 mg, 62%) kao narandžaste čvrste supstance;<1>H NMR (400 MHz, DMSO) 1.62 - 1.74 (2H, m), 1.89 (1H, d), 2.41 (3H, s), 2.42 - 2.47 (1H, m), 3.19 - 3.26 (1H, m), 3.30 (3H, s), 3.76 - 3.86 (2H, m), 3.92 (1H, t), 4.22 - 4.32 (1H, m), 7.71 (1H, s), 8.11 (1H, s), 8.37 (1H, s), 8.65 (1H, s), 9.18 (1H, s); m/z MH<+>381.

Intermedijer 35: etil 2-hlor-4-[[(3R)-tetrahidropiran-3-il]amino]pirimidin-5-karboksilat

[0297]

[0298] (R)-tetrahidro-2H-piran-3-amin hidrohlorid (1,00 g, 7,27 mmol) u acetonitrilu (5 ml) ukapavanjem je dodat u smešu DIPEA (3,16 ml, 18,2 mmol) i etil 2,4-dihlorpirimidin-5-karboksilata (1,61 g, 7,27 mmol) u acetonitrilu (30 ml) na 0°C tokom 5 minuta u atmosferi vazduha. Dobijena suspenzija je mešana tokom 4 h, polako ostavljena da se zagreje na rt i mešana na rt preko noći. Reakciona smeša je uparena do suva radi uklanjanja MeCN, razblažena pomoću EtOAc (100 ml) i isprana vodom, zatim zas. vodenim rastvorom soli. Organski sloj je osušen iznad MgSO4, filtriran i uparen. Dobijeni sirovi proizvod je prečišćen putem fcc, gradijent elucije 0-50% EtOAc u heptanu, radi dobijanja naslovnog jedinjenja (0,936 g, 45%) kao žutog ulja;<1>H NMR (400 MHz, DMSO) 1.33 (3H, t), 1.57 (1H, dt), 1.71 (2H, dtd), 1.91 (1H, ddt), 3.48 (1H, dd), 3.55 - 3.66 (2H, m), 3.75 (1H, dd), 4.11 - 4.2 (1H, m), 4.33 (2H, q), 8.58 (1H, d), 8.65 (1H, s); m/z MH<+>286.

Intermedijer 36: 2-hlor-4-[[(3R)-tetrahidropiran-3-il]amino]pirimidin-5-karboksilna kiselina

[0300] Litijum hidroksid hidrat (276 mg, 6,57 mmol) dodat je u jednoj porciji u etil 2-hlor-4-[[(3R)-tetrahidropiran-3-il]amino]pirimidin-5-karboksilat (939 mg, 3,29 mmol) u THF-u (1,23 ml) i vodi (4,10 ml) na rt. Reakciona smeša je mešana na rt tokom 30 minuta. Organski rastvarač je uklonjen pod sniženim pritiskom. Reakciona smeša je zakiseljena pomoću 2 M vod. HCl. Dobijena bela čvrsta supstanca je filtrirana radi dobijanja naslovnog jedinjenja (806 mg, 95%) kao bele čvrste supstance koja je osušena pod vakuumom na 45°C preko noći;<1>H NMR (400 MHz, DMSO) 1.56 (1H, dq), 1.70 (2H, ddt), 1.91 (1H, ddt), 3.46 (1H, dd), 3.60 (2H, t), 3.76 (1H, dd), 4.12 (1H, d), 8.61 (1H, s), 8.77 (1H, d); m/z MH<+>258.

Intermedijer 37: 2-hlor-9-[(3R)-tetrahidropiran-3-il]-7H-purin-8-on

[0301]

[0302] Difenilfosforil azid (0,674 ml, 3,13 mmol) dodat je u jednoj porciji u rastvor 2-hlor-4-[[(3R)-tetrahidropiran-3-il]amino]pirimidin-5-karboksilne kiseline (806 mg, 3,13 mmol) i trietilamina (0,436 ml, 3,13 mmol) u THF-u (17,3 ml) na rt. Reakciona smeša je mešana na 80°C tokom 24 h, zatim je ostavljena da se ohladi i sipana u vodu (20 ml). THF je uklonjen pod vakuumom, što dovodi do nastanka belog taloga u vodi. Talog je sakupljen filtracijom i osušen pod vakuumom radi dobijanja naslovnog jedinjenja (565 mg, 71%) kao bele čvrste supstance;<1>H NMR (400 MHz, DMSO) 1.64 - 1.83 (2H, m), 1.93 (1H, d), 2.42 - 2.49 (1H, m), 3.35 (1H, dd), 3.8 - 3.92 (3H, m), 4.21 - 4.36 (1H, m), 8.13 (1H, s), 11.6 (1H, s); m/z MH<+>255.

Intermedijer 38: 2-hlor-7-metil-9-[(3R)-tetrahidropiran-3-il]purin-8-on

[0303]

[0304] Natrijum hidrid (60%) (133 mg, 3,33 mmol) dodat je u porcijama u 2-hlor-9-[(3R)-tetrahidropiran-3-il]-7H-purin-8-on (565 mg, 2,22 mmol) u DMF-u (5,13 ml) na 0°C. Reakciona smeša je mešana tokom 30 minuta, zatim je ukapavanjem dodat jodmetan (416 µl, 6,66 mmol). Reakciona smeša je mešana na temperaturi ledenog kupatila tokom 1 h. Reakciona smeša je ugašena vodom (50 ml) i dobijeni talog je uklonjen filtracijom i osušen preko noći radi dobijanja naslovnog jedinjenja (535 mg, 90%) kao bele čvrste supstance koja je neposredno korišćena u sledećem koraku;<1>H NMR (400 MHz, DMSO) 1.73 (2H, dddd), 1.94 (1H, d), 2.41 - 2.49 (1H, m), 3.34 - 3.38 (1H, m), 3.36 (3H, s), 3.81 - 3.92 (3H, m), 4.24 - 4.36 (1H, m), 8.36 (1H, s); m/z MH<+>269.

Primer 8: (R)-7-metil-2-((7-metil-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-6-il)amino)-9-(tetrahidro-2H-piran-3-il)-7,9-dihidro-8H-purin-8-on

[0306] Cezijum karbonat (364 mg, 1,12 mmol) dodat je u jednoj porciji u 7-metil-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-6-amin (83 mg, 0,56 mmol) i 2-hlor-7-metil-9-[(3R)-tetrahidropiran-3-il]purin-8-on (150 mg, 0,56 mmol) u 1,4-dioksanu (5 ml) na rt i degasiran je produvavanjem azota kroz smešu tokom 5 minuta. Dodat je Brettphos pretkatalizator G3 (51 mg, 0,06 mmol), i reakcija je zagrevana na 100°C tokom 2 h. Smeša je razblažena DCM-om i filtrirana. DCM sloj je uparen, a ostatak je prečišćen putem fcc, gradijent elucije 0 do 5% MeOH u DCM-u, zatim trituriran sa MeCN, filtriran i osušen pod vakuumom radi dobijanja naslovnog jedinjenja (92 mg, 43%) kao čvrste supstance krem boje;<1>H NMR (400 MHz, DMSO) 1.59 - 1.77 (2H, m), 1.90 (1H, d), 2.41 (3H, s), 2.43 - 2.49 (1H, m), 3.25 (1H, td), 3.31 (3H, s), 3.76 - 3.88 (2H, m), 3.92 (1H, t), 4.27 (1H, ddt), 7.72 (1H, s), 8.12 (1H, s), 8.37 (1H, s), 8.66 (1H, s), 9.19 (1H, s); m/z MH<+>381.

Intermedijer 39: 2-hlor-9-(4-hidroksi-4-metilcikloheksil)-7-metil-7,9-dihidro-8H-purin-8-on

[0307]

[0308] Metil magnezijum bromid (3M, 0,89 ml, 2,67 mmol) dodat je u 2-hlor-7-metil-9-(4-oksocikloheksil)-7,9-dihidro-8H-purin-8-on (500 mg, 1,78 mmol) u THF-u (10 ml) na 0°C u atmosferi azota. Reakciona smeša je mešana na rt tokom 4 h. Rastvarač je uklonjen pod sniženim pritiskom. Sirovi proizvod je prečišćen preparativnom HPLC radi dobijanja naslovnog jedinjenja (400 mg, 76%) kao bele čvrste supstance (smeša dijastereoizomera);<1>H NMR (glavni dijastereoizomer) (300 MHz, CDCl3) 1.30 (3H, s), 1.47 (1H, s), 1.51 - 1.74 (4H, m), 1.76 - 92 (2H, m), 2.62 - 2.83 (2H, m), 3.44 (3H, s), 4.26 - 4.50 (1H, m), 8.01 (1H, s); m/z MH<+>297.

Primer 9: 9-((1r,4r)-4-hidroksi-4-metilcikloheksil)-7-metil-2-((7-metil-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-6-il)amino)-7,9-dihidro-8H-purin-8-on i

Primer 10: 9-((1s,4s)-4-hidroksi-4-metilcikloheksil)-7-metil-2-((7-metil-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-6-il)amino)-7,9-dihidro-8H-purin-8-on

[0309]

[0310] Brettphos pretkatalizator G3 (169 mg, 0,20 mmol) i 2-dicikloheksilfosfino-2',6'-di-ipropoksi-1,1'-bifenil (94 mg, 0,20 mmol) dodati su u 2-hlor-9-(4-hidroksi-4-metilcikloheksil)-7-metil-7,9-dihidro-8H-purin-8-on (300 mg, 1,01 mmol), 7-metil-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-6-amin (180 mg, 1,21 mmol) i cezijum karbonat (659 mg, 2,02 mmol) u 1,4-dioksanu (5 ml) u atmosferi azota. Reakciona smeša je mešana na 100°C tokom 5 h. Sirovi proizvod je prečišćen preparativnom HPLC radi dobijanja 9-((1r,4r)-4-hidroksi-4-metilcikloheksil)-7-metil-2-((7-metil-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-6-il)amino)-7,9-dihidro-8H-purin-8-ona (73 mg, 18%) kao bele čvrste supstance;<1>H NMR (400 MHz, DMSO) 0.66 (3H, s), 1.33 - 1.45 (2H, m), 1.45 -1.57 (4H, m), 2.11 - 2.27 (2H, m), 2.33 (3H, s), 3.29 (3H, s), 3.99 - 4.13 (1H, m), 4.33 (1H, s), 7.71 (1H, s), 8.10 (1H, s), 8.38 (1H, s), 8.70 (1H, s), 8.97 (1H, s); m/z MH<+>409; i 9-((1s,4s)-4-hidroksi-4-metilcikloheksil)-7-metil-2-((7-metil-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-6-il)amino)-7,9-dihidro-8H-purin-8-ona (190 mg, 46%) kao bele čvrste supstance;<1>H NMR (400 MHz, DMSO) 1.15 (3H, s), 1.34 - 1.51 (4H, m), 1.66 (2H, d), 2.39 (3H, s), 2.57 - 2.73 (2H, m), 3.29 (3H, s), 4.04 (1H, s), 4.08 - 4.21 (1H, m), 7.70 (1H, s), 8.05 (1H, s), 8.38 (1H, s), 8.59 (1H, s), 9.14 (1H, s); m/z MH<+>409.

Oblik A

[0311] Konačni proizvod, 9-((1s,4s)-4-hidroksi-4-metilcikloheksil)-7-metil-2-((7-metil-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-6-il)amino)-7,9-dihidro-8H-purin-8-on, analiziran je pomoću XRPD i DSC i utvrđeno je da je kristalan. XRPD uzorka supstance dao je obrazac difrakcije kao što je prikazan na slici 3. 9-((1s,4s)-4-hidroksi-4-metilcikloheksil)-7-metil-2-((7-metil-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-6-il)amino)-7,9-dihidro-8H-purin-8-on oblik A je okarakterisan najmanje jednim pikom sa 2θ vrednošću 8,8° i 12,7°, izmereno koristeći CuKa radijaciju. Deset najistaknutijih pikova XRPD prikazano je u tabeli B. Tabela B: Deset najistaknutijih pikova XRPD za 9-((1s,4s)-4-hidroksi-4-metilcikloheksil)-7-metil-2-((7-metil-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-6-il)amino)-7,9-dihidro-8H-purin-8-on oblik A.

Intermedijer 40: etil 2-hlor-4-[[(3S)-tetrahidrofuran-3-il]amino]pirimidin-5-karboksilat

[0312]

1

[0313] DIPEA (4,74 ml, 27,1 mmol) dodat je ukapavanjem u etil 2,4-dihlorpirimidin-5-karboksilat (5 g, 22,6 mmol) i (S)-tetrahidrofuran-3-amin (1,97 g, 22,6 mmol) u acetonitrilu (100 ml) na 0°C tokom 2 minuta. Reakciona smeša je ostavljena da se zagreje na rt, zatim je mešana na rt tokom 16 h i koncentrovana pod vakuumom. Dobijeni sirovi proizvod je prečišćen putem fcc, gradijent elucije 0 do 5% EtOAc u petrol etru, radi dobijanja naslovnog jedinjenja (4,60 g, 75%) kao bele čvrste supstance;<1>H NMR (400 MHz, DMSO) 1.32 (3H, t), 1.83 - 1.95 (1H, m), 2.21 - 2.35 (1H, m), 3.65 (1H, dd), 3.69 - 3.92 (3H, m), 4.27 - 4.37 (2H, m), 4.57 -4.68 (1H, m), 8.44 (1H, d), 8.63 (1H, s); m/z MH<+>272.

Intermedijer 41: 2-hlor-4-[[(3S)-tetrahidrofuran-3-il]amino]pirimidin-5-karboksilna kiselina

[0314]

[0315] LiOH (0,811 g, 33,9 mmol) dodat je u jednoj porciji u etil 2-hlor-4-[[(3S)-tetrahidrofuran-3-il]amino]pirimidin-5-karboksilat (4,60 g, 16,93 mmol) u THF-u (50 ml) i vodi (25 ml) na 0°C. Reakciona smeša je ostavljena da se zagreje na rt, mešana na rt tokom 2 h, delimično koncentrovana pod vakuumom i zakiseljena pomoću 2 M vod. HCl. Nastali talog je izolovan filtracijom, ispran vodom (20 ml) i osušen pod vakuumom radi dobijanja naslovnog jedinjenja (3,50 g, 85%) kao bele čvrste supstance;<1>H NMR (400 MHz, DMSO) 1.81 - 1.93 (1H, m), 2.21 - 2.35 (1H, m), 3.60 - 3.68 (1H, m), 3.69 - 3.94 (3H, m), 4.56 - 4.68 (1H, m), 8.61 (1H, s), 8.65 (1H, s) 13.84 (1H, s); m/z MH<+>244.

Intermedijer 42: 2-hlor-9-[(3S)-tetrahidro-3-furanil]-7,9-dihidro-8H-purin-8-on

[0316]

2

[0317] Difenilfosforil azid (3,10 ml, 14,37 mmol) dodat je u jednoj porciji u 2-hlor-4-[[(3S)-tetrahidrofuran-3-il]amino]pirimidin-5-karboksilnu kiselinu (3,5 g, 14,4 mmol) i Et3N (2,00 ml, 14,4 mmol) u THF-u (100 ml) na rt. Reakciona smeša je zagrevana na 80°C tokom 2 dana. Rastvarač je uklonjen pod sniženim pritiskom. Dobijeni sirovi proizvod je prečišćen putem fcc, gradijent elucije 0 do 50% EtOAc u petrol etru, radi dobijanja naslovnog jedinjenja (3,20 g, 93%) kao bele čvrste supstance;<1>H NMR (400 MHz, DMSO) 2.16 - 2.32 (1H, m), 2.35 - 2.48 (1H, m), 3.81 - 3.92 (2H, m), 3.97 (1H, t), 4.10 (1H, q), 4.91 - 5.03 (1H, m), 8.14 (1H, s), 11.66 (1H, s); m/z MH<+>241.

Intermedijer 43: 2-hlor-7-metil-9-[(3S)-tetrahidro-3-furanil]-7,9-dihidro-8H-purin-8-on

[0318]

[0319] NaH (0,532 g, 13,30 mmol) dodat je u jednoj porciji u 2-hlor-9-[(3S)-tetrahidro-3-furanil]-7,9-dihidro-8H-purin-8-on (3,2 g, 13,30 mmol) u DMF-u (30 ml) na 0°C. Reakciona smeša je mešana na rt tokom 30 minuta. Dodat je Mel (2,49 ml, 39,9 mmol). Reakciona smeša je mešana na rt tokom 16 h, zatim ugašena vodom (5 ml) i koncentrovana pod vakuumom. Sirovi proizvod je prečišćen putem fcc, gradijent elucije 0 do 40% EtOAc u petrol etru, radi dobijanja naslovnog jedinjenja (2,90 g, 86%) kao žute čvrste supstance;<1>H NMR (400 MHz, DMSO) 2.18 - 2.32 (1H, m), 2.35 - 2.48 (1H, m), 3.36 (3H, s), 3.82 - 3.94 (2H, m), 3.98 (1H, t), 4.11 (1H, q), 4.95 - 5.07 (1H, m), 8.36 (1H, s); m/z MH<+>255.

Primer 11: (S)-7-metil-2-((7-metil-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-6-il)amino)-9-(tetrahidrofuran-3-il)-7,9-dihidro-8H-purin-8-on

[0320]

[0321] RuPhos Pd (13,96 mg, 0,02 mmol) dodat je u 2-hlor-7-metil-9-[(3S)-tetrahidro-3-furanil]-7,9-dihidro-8H-purin-8-on (85 mg, 0,33 mmol), 7-metil-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-6-amin (49,5 mg, 0,33 mmol), RuPhos (15,57 mg, 0,03 mmol) i Cs2CO3(326 mg, 1,00 mmol) u 1,4-dioksanu (1 ml). Reakciona smeša je mešana na 100°C tokom 16 h, zatim je ostavljena da se ohladi na sobnu temperaturu i koncentrovana pod vakuumom. Dobijeni sirovi proizvod je prečišćen fleš C18 hromatografijom, gradijent elucije 0 do 55% MeOH u vodi sa 0,1% mravlje kiseline, radi dobijanja naslovnog jedinjenja (87 mg, 71%) kao bele čvrste supstance;<1>H NMR (300 MHz, CD3OD) 2.30 - 2.40 (1H, m), 2.47 - 2.55 (1H, m), 2.51 (3H, s), 3.42 (3H, s), 3.87 (1H, q), 4.00 - 4.14 (2H, m), 4.20 (1H, q), 5.02 - 5.30 (1H, m), 7.64 (1H, s), 8.07 (1H, s), 8.33 (1H, s), 9.43 (1H, s), NH proton nije uočen; m/z MH<+>367.

Intermedijer 44: etil 2-hlor-4-((4-hidroksi-1-metilcikloheksil)amino)pirimidin-5-karboksilat

[0322]

[0323] DIPEA (4,28 ml, 24,5 mmol) je ukapavanjem dodat u etil 2,4-dihlorpirimidin-5-karboksilat (2,46 g, 11,1 mmol) i 4-amino-4-metil-cikloheksanol hidrohlorid (2,00 g, 11,1 mmol) u acetonitrilu (40 ml) na 0°C tokom 5 minuta. Reakciona smeša je ostavljena da se zagreje na rt, zatim je mešana na rt tokom 6 h i koncentrovana pod vakuumom, razblažena pomoću EtOAc (300 ml) i isprana zas. vodenim rastvorom soli (100 ml x 2). Organski sloj je izolovan i osušen iznad MgSO4i koncentrovan pod vakuumom. Dobijeni sirovi proizvod je prečišćen putem fcc, gradijent elucije 0 do 20% EtOAc u n-heptanu, radi dobijanja naslovnog jedinjenja (2,82 g, 81%) kao bledožute gume;<1>H NMR (400 MHz, DMSO) 1.36 - 1.44 (3H,

4

m), 1.44 - 1.58 (6H, m), 1.57 - 1.71 (1H, m), 1.72 - 2.13 (3H, m), 2.41 - 2.54 (2H, m), 3.63 -3.75 (1H, m), 4.36 (2H, q), 8.52 - 8.59 (1H, m), 8.67 (1H, d); m/z MH<+>314.

Intermedijer 45: 2-hlor-4-((4-hidroksi-1-metilcikloheksil)amino)pirimidin-5-karboksilna kiselina

[0324]

[0325] LiOH (0,43 g, 17,97 mmol) dodat je u jednoj porciji u etil 2-hlor-4-((4-hidroksi-1-metilcikloheksil)amino)pirimidin-5-karboksilat (2,82 g, 8,99 mmol) u THF-u (25 ml) i vodi (25 ml) na 0°C. Reakciona smeša je ostavljena da se zagreje na rt i mešana je na rt tokom 5 h, zatim delimično koncentrovana pod vakuumom i zakiseljena pomoću 2 M vod. HCl. Nastali talog je izolovan filtracijom, ispran vodom (20 ml) i osušen pod vakuumom radi dobijanja naslovnog jedinjenja (2,17 g, 85%) kao bele čvrste supstance;<1>H NMR (400 MHz, DMSO) 1.18 - 1.32 (2H, m), 1.34 - 1.52 (2H, m), 1.43 (3H, s), 1.52 - 1.79 (2H, m), 2.21 - 2.30 (2H, m), 3.37 - 3.49 (1H, m), 4.55 (1H, s), 8.59 (1H, d), 8.74 (1H, s), 13.85 (1H, s); m/z MH<+>286.

Intermedijer 46: 2-hlor-9-(4-hidroksi-1-metilcikloheksil)-7,9-dihidro-8H-purin-8-on

[0326]

[0327] Difenilfosforil azid (1,64 ml, 7,59 mmol) dodat je u jednoj porciji u 2-hlor-4-((4-hidroksi-1-metilcikloheksil)amino)pirimidin-5-karboksilnu kiselinu (2,17 g, 7,59 mmol) i Et3N (1,06 ml, 7,59 mmol) u THF-u (20 ml) na rt. Reakciona smeša je zagrevana na 80°C tokom 2 dana, a zatim je koncentrovana pod vakuumom. Dobijeni sirovi proizvod je prečišćen putem fcc, gradijent elucije 0 do 50% EtOAc u DCM-u, radi dobijanja naslovnog jedinjenja (1,79 g, 83%) kao bele čvrste supstance;<1>H NMR (400 MHz, DMSO) 1.09 - 1.25 (2H, m), 1.34 (3H, s), 1.36 - 1.64 (2H, m), 1.65 - 1.77 (2H, m), 3.17 (2H, d), 3.41 - 3.57 (1H, m), 4.07 -4.15 (1H, m), 8.10 (1H, d), 11.61 (1H, s); m/z MH<+>283.

Intermedijeri 47 i 48: 2-hlor-9-((1s,4s)-4-hidroksi-1-metilcikloheksil)-7-metil-7,9-dihidro-8H-purin-8-on i 2-hlor-9-((1r,4r)-4-hidroksi-1-metilcikloheksil)-7-metil-7,9-dihidro-8H-purin-8-on

[0328]

[0329] Rastvor NaOH (1,27 g, 31,66 mmol) u vodi (24 ml) uz mešanje je dodat u smešu 2-hlor-9-(4-hidroksi-1-metilcikloheksil)-7,9-dihidro-8H-purin-8-ona (1,79 g, 6,33 mmol), jodmetana (1,97 ml, 31,66 mmol) i tetrabutilamonijum bromida (0,204 g, 0,63 mmol) u DCM-u (40 ml) na rt. Reakciona smeša je mešana na rt tokom 16 h, zatim ekstrahovana DCM-om (3 x 50 ml). Kombinovani organski slojevi su osušeni iznad MgSO4, filtrirani i koncentrovani pod vakuumom. Dobijeni sirovi proizvod je prečišćen putem fcc, gradijent elucije 0 do 40% EtOAc u DCM-u, radi dobijanja naslovnih jedinjenja:

Sporedni proizvod 2-hlor-9-((1s,4s)-4-hidroksi-1-metilcikloheksil)-7-metil-7,9-dihidro-8H-purin-8-on (0,26 g, 14%) kao bela čvrsta supstanca;<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) 1.66 (3H, s), 1.67 - 1.85 (4H, m), 2.19 - 2.31 (2H, m), 2.91 - 3.02 (2H, m), 3.41 (3H, s), 3.89 - 3.99 (1H, m), 7.99 (1H, s), jedan zamenljivi proton nije uočen; m/z MH<+>297.

Glavni proizvod 2-hlor-9-((1r,4r)-4-hidroksi-1-metilcikloheksil)-7-metil-7,9-dihidro-8H-purin-8-on (1,44 g, 77%) kao bela čvrsta supstanca.;<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) 1.42 - 1.50 (2H, m), 1.51 (3H, s), 1.58 - 1.88 (2H, m), 1.88 - 2.00 (2H, m), 3.40 (3H, s), 3.52 - 3.63 (2H, m), 3.72 - 3.84 (1H, m), 7.99 (1H, s), jedan zamenljivi proton nije uočen; m/z MH<+>297.

Primer 12: 9-((1s,4s)-4-hidroksi-1-metilcikloheksil)-7-metil-2-((7-metil-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-6-il)amino)-7,9-dihidro-8H-purin-8-on

[0331] RuPhos Pd (5,64 mg, 6,74 µmol) dodat je u 2-hlor-9-((1s,4s)-4-hidroksi-1-metilcikloheksil)-7-metil-7,9-dihidro-8H-purin-8-on (40 mg, 0,13 mmol), 7-metil-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-6-amin (22 mg, 0,15 mmol), Cs2CO3(132 mg, 0,40 mmol) i RuPhos (6,3 mg, 0,01 mmol) u 1,4-dioksanu (4 ml). Reakciona smeša je mešana na 100°C tokom 3 h, ostavljena da se ohladi na rt i koncentrovana pod vakuumom. Sirovi proizvod je prečišćen fleš C18-fleš hromatografijom, gradijent elucije 0 do 90% MeOH u vodenom eluentu sa 0,1% mravlje kiseline, zatim dalje prečišćen preparativnom HPLC radi dobijanja naslovnog jedinjenja (20 mg, 36%) kao bele čvrste supstance;<1>H NMR (300 MHz, DMSO) 1.34 - 1.43 (2H, m), 1.43 (3H, s), 1.50 - 1.58 (2H, m), 1.96 (2H, t), 2.38 (3H, s), 2.78 - 2.83 (2H, m), 3.26 (3H, s), 3.60 - 3.61 (1H, m), 4.40 (1H, d), 7.70 (1H, m), 8.09 (1H, s), 8.37 (1H, s), 8.55 (1H, s), 9.04 (1H, s); m/z MH<+>409.

Intermedijer 49: etil 2-hlor-4-(cikloheksilamino)pirimidin-5-karboksilat

[0333] Cikloheksanamin (4,92 ml, 43,0 mmol) u acetonitrilu (30 ml) ukapavanjem je dodat u smešu DIPEA (11,2 ml, 64,5 mmol) i etil 2,4-dihlorpirimidin-5-karboksilata (9,5 g, 43,0 mmol) u acetonitrilu (200 ml) na 0°C tokom 5 minuta u atmosferi vazduha. Reakciona smeša je mešana na 0°C tokom 4 h, polako ostavljena da se zagreje na sobnu temperaturu dok se ledeno kupatilo otapa. Reakciona smeša je koncentrovana pod vakuumom, razblažena pomoću EtOAc (200 ml) i isprana vodom (75 ml) i zas. vodenim rastvorom soli (50 ml). Organski sloj je osušen iznad MgSO4i koncentrovan pod vakuumom. Dobijeni sirovi proizvod je prečišćen putem fcc, gradijent elucije 0 do 50% EtOAc u heptanu, radi dobijanja naslovnog jedinjenja (8,84 g, 73%) kao bezbojnog ulja koje je očvrsnulo stajanjem;<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) 1.24 - 1.35 (3H, m), 1.38 (3H, t), 1.38 -1.51 (2H, m), 1.63 (1H, dt), 1.75 (2H, dq), 1.92 - 2.02 (2H, m), 4.06 -4.21 (1H, m), 4.35 (2H, q), 8.36 (1H, d), 8.64 (1H, s); m/z: MH<+>284.

Intermedijer 50: 2-hlor-4-(cikloheksilamino)pirimidin-5-karboksilna kiselina

[0334]

[0335] Litijum hidroksid hidrat (2,61 g, 62,3 mmol) dodat je u jednoj porciji u etil 2-hlor-4-(cikloheksilamino)pirimidin-5-karboksilat (8,84 g, 31,2 mmol) u THF-u (50 ml) i vodi (50 ml) na 0°C. Reakciona smeša je mešana na rt tokom 16 h, zatim je delimično koncentrovana pod vakuumom i zakiseljena pomoću 2 M vod. HCl. Nastali talog je sakupljen filtracijom, ispran vodom (50 ml) i osušen pod vakuumom na 50°C tokom 2 dana radi dobijanja naslovnog jedinjenja (7,58 g, 95%) kao bele čvrste supstance;<1>H NMR (400 MHz, DMSO) 1.18 - 1.45 (5H, m), 1.52 - 1.62 (1H, m), 1.64 - 1.73 (2H, m), 1.83 - 1.95 (2H, m), 3.91 - 4.04 (1H, m), 8.54 - 8.6 (2H, m), 13.74 (1H, s); m/z: MH<+>256.

Intermedijer 51: 2-hlor-9-cikloheksil-7,9-dihidro-8H-purin-8-on

[0336]

[0337] Difenilfosforil azid (6,39 ml, 29,6 mmol) dodat je u jednoj porciji u rastvor 2-hlor-4-(cikloheksilamino)pirimidin-5-karboksilne kiseline (7,58 g, 29,6 mmol) i trietilamina (4,1 ml, 29,6 mmol) u THF-u (150 ml) na rt. Reakciona smeša je mešana na 80°C tokom 26 h. Reakciona smeša je ostavljena da se ohladi na rt, zatim sipana u vodu (80 ml) i dobijena smeša je delimično koncentrovana pod vakuumom. Nastali talog je sakupljen filtracijom, ispran vodom i osušen pod vakuumom preko noći na 50°C radi dobijanja naslovnog jedinjenja (7,69 g, 103%) kao bele čvrste supstance;<1>H NMR (400 MHz, DMSO) 1.12 - 1.27 (1H, m), 1.36 (2H, qd), 1.63 - 1.7 (1H, m), 1.71 - 1.79 (2H, m), 1.79 - 1.88 (2H, m), 2.18 (2H, qd), 4.14 (1H, tt), 8.11 (1H, s), 11.57 (1H, s); m/z MH<+>253.

Intermedijer 52: 2-hlor-9-cikloheksil-7-metil-7,9-dihidro-8H-purin-8-on

[0338]

[0339] Natrijum hidrid (60%) (0,261 g, 6,53 mmol) dodat je u porcijama u 2-hlor-9-cikloheksil-7,9-dihidro-8H-purin-8-on (1,1 g, 4,35 mmol) u DMF-u (10 ml) na 0°C. Reakciona smeša je mešana tokom 30 minuta, zatim je ukapavanjem dodat jodmetan (0,817 ml, 13,16 mmol). Reakciona smeša je mešana na 0°C tokom 1 h, zatim ugašena vodom (50 ml) i dobijeni talog je sakupljen filtracijom i osušen pod vakuumom preko noći radi dobijanja naslovnog jedinjenja (1,08 g, 93%) kao čvrste supstance krem boje;<1>H NMR (400 MHz, DMSO) 1.21 (1H, ddd), 1.38 (2H, tdd), 1.65 (1H, d), 1.74 (2H, d), 1.83 (2H, d), 2.09 - 2.26 (2H, m), 3.30 (3H, s), 4.18 (1H, tt), 8.34 (1H, s); m/z MH<+>267.

Primer 13: 9-cikloheksil-7-metil-2-((7-metil-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-6-il)amino)-7,9-dihidro-8H-purin-8-on

[0340]

[0341] Cezijum karbonat (733 mg, 2,25 mmol) dodat je u jednoj porciji u 2-hlor-9-cikloheksil-7-metil-7,9-dihidro-8H-purin-8-on (300 mg, 1,12 mmol) i 7-metil-[1,2,4]triazolo[1,5a]piridin-6-amin (167 mg, 1,12 mmol) u 1,4-dioksanu (8 ml) na rt. Reakcija je degasirana propuštanjem azota kroz smešu tokom 5 minuta. Dodat je Brettphos pretkatalizator G3 (102 mg, 0,11 mmol) i reakcija je zagrevana na 100°C tokom 2 h. Smeša je razblažena DCM-om i filtrirana. Filtrat je koncentrovan pod vakuumom i ostatak je prečišćen putem fcc, gradijent elucije 0 do 5% MeOH u DCM-u, zatim dalje prečišćen trituracijom sa MeCN i osušen pod vakuumom na 45°C preko noći radi dobijanja naslovnog jedinjenja (233 mg, 55%) kao čvrste supstance krem boje;<1>H NMR (400 MHz, DMSO) 1.16 (1H, q), 1.33 (2H, q), 1.62 (1H, d), 1.71 (2H, d), 1.80 (2H, d), 2.14 - 2.3 (2H, m), 2.42 (3H, s), 3.31 (3H, s), 4.16 (1H, ddd), 7.71 (1H, s), 8.11 (1H, s), 8.37 (1H, s), 8.60 (1H, s), 9.20 (1H, s); m/z MH<+>379.

Reference

[0342]

An J i sar. DNA-PKcs plays a dominant role in the regulation of H2AX phosphorylation in response to DNA damage and cell cycle progression. BMC Mol Biol 2010; 11: 18 Ashley AK. DNA-PK phosphorylation of RPA32 Ser4/Ser8 regulates replication stress checkpoint activation, fork restart, homologous recombination and mitotic catastrophe. DNA Repair 2014; 21: 131-139

Buisson R et al. Distinct but concerted roles of ATR, DNA-PK and Chk1 in countering replication stress during S phase. Molecular Cell 2015; 59: 1011-1024

Chan DW et al. Autophosphorylation of the DNA-dependent protein kinase catalytic subunit is required for rejoining of DNA double-strand breaks. Genes Dev 2002; 16: 2333-2338

Ciszewski WM et al. DNA-PK inhibition by NU7441 sensitizes breast cancer cells to ionizing radiation and doxorubicin. Breast Cancer Res Treat 2014; 143: 47-55 Deitlein F et al. A functional cancer genomics screen identifies a druggable synthetic lethal interaction between MSH3 and PRKDC. Cancer Discovery 2014; 4: 592-605 Douglas P et al. Identification of in vitro and in vivo phosphorylation sites in the catalytic subunit of the DNA dependent protein kinase. Biochem J 2002; 368: 243-251 Escribano-Diaz C.et al. A cell cycle dependentregulatory cicuit composed of 53BP1-RIF1 and BRCA1-CtIP controls DNA reapir pathway choice. Mol Cell 2013; 49: 872-883

Goodwin JF i Knudsen KE. Beyond DNA repair: DNA-PK function in cancer. Cancer Discovery 2014; 4: 1126-1139

Goodwin JF et al. A hormone-DNA repair circuit governs the response to genotoxic insult. Cancer Discovery 2013; 3: 1254-1271

Hartlerode AJ i Scully R. Mechanisms of double-strand break repair in somatic mammalian cells. Biochem J 2009; 423: 157-168

Lin Y-F et al. DNA-PKcs is required to maintain stability of Chk1 and claspin for optimal replication stress response. Nucleic Acids Res 2014; 42: 4463-4473

Medunjanin S et al. Interaction of the double strand break repair kinase DNA-PK and estrogen receptor alpha. Mol Biol Cell 2010; 21: 1620-1628

Munck JM et al. Chemosensitization of cancer cells by KU-0060648, a dual inhibitor of DNA-PK and PI-3K. Mol Cancer Ther 2012; 11: 1789-1798

Neal JA i Meek K. Choosing the right path: does DNA-PK help make the decision? Mutat Res 2011; 711: 73-86

Riabinska A et al. Therapeutic targeting of a robust non-oncogene addiction to PRKDC in ATM-defective tumors. Science Translational Medicine 2013; 189: 189ra78

San Filippo J et al. Mechanism of ukaryotic homologous recombination. Annu Rev Biochem 2008; 77: 229-257

Smith GCM i Jackson SP. The DNA dependent protein kinase. Genes and Development 1999; 13: 916-934

Symington LS i Gautier J. Double strand break end resection and repair pathway choice. Annu Rev Genet 2011; 45: 247-271

Willmore E et al. A novel DNA-dependent protein kinase inhibitor, NU7026, potentiates the cytotoxicity of topoisomerase II poisons used in the treatment of leukemia Blood 2004; 103: 4659-4665

Yoo S i Dynan WS. Geometry of a complex formed by double strand break repair proteins at a single DNA end: recruitment of DNA-PKcs induces inward translocation of Ku protein. Nucleic Acids Res 1999; 27: 4679-4686

1

2

Claims

Patentni zahtevi 1. Jedinjenje formule (I):

ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, pri čemu: R<1>je cikloheksil, tetrahidrofuranil ili oksanil prsten, svaki od kojih je opciono supstituisan sa jednom ili više grupa izabranih od hidroksil, metoksi i metil; i R<2>je vodonik ili metil.
2. Jedinjenje formule (I) ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, kako je prijavljeno u zahtevu 1, pri čemu, R<1>je oksanil.
3. Jedinjenje formule (I) ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, kako je prijavljeno u zahtevu 2, pri čemu, R<1>je oksan-4-il.
4. Jedinjenje formule (I) ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, kako je prijavljeno u zahtevu 1, pri čemu, R<1>je cikloheksil.
5. Jedinjenje formule (I) ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, kako je prijavljeno u zahtevu 4, pri čemu, R<1>je 1-hidroksi-1-metil-cikloheks-4-il.
6. Jedinjenje formule (I) ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, kako je prijavljeno u bilo kom od prethodnih zahteva, pri čemu, R<2>je vodonik.
7. Jedinjenje formule (I) ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, kako je prijavljeno u zahtevu 1, pri čemu je jedinjenje odabrano iz grupe koja se sastoji od: 9-((1r,4r)-4-hidroksicikloheksil)-7-metil-2-((7-metil-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-6-il)amino)-7,9-dihidro-8H-purin-8-ona; 9-((1s,4s)-4-hidroksicikloheksil)-7-metil-2-((7-metil-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-6-il)amino)-7,9-dihidro-8H-purin-8-ona; 7-metil-2-((7-metil-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-6-il)amino)-9-(tetrahidro-2H-piran-4-il)-7,9-dihidro-8H-purin-8-ona; 2-((2,7-dimetil-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-6-il)amino)-7-metil-9-(tetrahidro-2H-piran-4-il)-7,9-dihidro-8H-purin-8-ona; 9-((1s,4s)-4-metoksicikloheksil)-7-metil-2-((7-metil-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-6-il)amino)-7,9-dihidro-8H-purin-8-ona; 9-((1r,4r)-4-metoksicikloheksil)-7-metil-2-((7-metil-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-6-il)amino)-7,9-dihidro-8H-purin-8-ona; (S)-7-metil-2-((7-metil-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-6-il)amino)-9-(tetrahidro-2H-piran-3-il)-7,9-dihidro-8H-purin-8-ona; (R)-7-metil-2-((7-metil-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-6-il)amino)-9-(tetrahidro-2H-piran-3-il)-7,9-dihidro-8H-purin-8-ona; 9-((1r,4r)-4-hidroksi-4-metilcikloheksil)-7-metil-2-((7-metil-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-6-il)amino)-7,9-dihidro-8H-purin-8-ona; 9-((1s,4s)-4-hidroksi-4-metilcikloheksil)-7-metil-2-((7-metil-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-6-il)amino)-7,9-dihidro-8H-purin-8-ona; (S)-7-metil-2-((7-metil-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-6-il)amino)-9-(tetrahidrofuran-3-il)-7,9-dihidro-8H-purin-8-ona; 9-((1s,4s)-4-hidroksi-1-metilcikloheksil)-7-metil-2-((7-metil-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-6-il)amino)-7,9-dihidro-8H-purin-8-ona; i 9-cikloheksil-7-metil-2-((7-metil-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-6-il)amino)-7,9-dihidro-8H-purin-8-ona.
8. Jedinjenje formule (I), kako je prijavljeno u zahtevu 1, pri čemu je jedinjenje 7-metil-2-((7-metil-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-6-il)amino)-9-(tetrahidro-2H-piran-4-il)-7,9-dihidro-8H-purin-8-on ili njegova farmaceutski prihvatljiva so.
9. Jedinjenje formule (I), kako je prijavljeno u zahtevu 1, pri čemu je jedinjenje 7-metil-2-((7-metil-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-6-il)amino)-9-(tetrahidro-2H-piran-4-il)-7,9-dihidro-8H-purin-8-on. 4
10. Kristalno jedinjenje formule (I), kako je prijavljeno u zahtevu 8, pri čemu je kristalno jedinjenje 7-metil-2-((7-metil-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-6-il)amino)-9-(tetrahidro-2H-piran-4-il)-7,9-dihidro-8H-purin-8-on i ima obrazac XRPD koji sadrži pikove na 7,6° i 18,7° ± 0,2° 2-teta, kako je izmereno koristeći CuKa radijaciju.
11. Kristalno jedinjenje formule (I), kako je prijavljeno u zahtevu 10, pri čemu kristalno jedinjenje ima obrazac XRPD suštinski kao što je prikazan na slici 1, kako je izmereno koristeći CuKa radijaciju.
12. Kristalno jedinjenje formule (I), kako je prijavljeno u zahtevu 7, pri čemu je kristalno jedinjenje 9-((1s,4s)-4-hidroksi-4-metilcikloheksil)-7-metil-2-((7-metil-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-6-il)amino)-7,9-dihidro-8H-purin-8-on i ima obrazac XRPD koji sadrži pikove na 8,8° i 12,7° ± 0,2° 2-teta, kako je izmereno koristeći CuKa radijaciju.
13. Kristalno jedinjenje formule (I), kako je prijavljeno u zahtevu 12, pri čemu kristalno jedinjenje ima obrazac XRPD suštinski kao što je prikazan na slici 3, kako je izmereno koristeći CuKα radijaciju.
14. Farmaceutska kompozicija koja sadrži jedinjenje formule (I) ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so, kako je prijavljeno u bilo kom od zahteva 1 do 13, i najmanje jedan farmaceutski prihvatljiv razblaživač ili nosač.
15. Jedinjenje Formule (I) ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, kako je prijavljeno u bilo kom od zahteva 1 do 13, za upotrebu u terapiji.
16. Jedinjenje Formule (I) ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, kako je prijavljeno u bilo kom od zahteva 1 do 13, za upotrebu u lečenju kancera.
17. Jedinjenje formule (I) ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, kako je prijavljeno u bilo kom od zahteva 1 do 13, za upotrebu u lečenju kancera kako je prijavljeno u zahtevu 16, pri čemu se jedinjenje formule (I) ili njegova farmaceutski prihvatljiva so primenjuje u kombinaciji sa radioterapijom.
18. Jedinjenje formule (I) ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, kako je prijavljeno u bilo kom od zahteva 1 do 13, za upotrebu u lečenju kancera prema zahtevu 16, pri čemu se jedinjenje formule (I) ili njegova farmaceutski prihvatljiva so primenjuju u kombinaciji sa najmanje jednom dodatnom antitumorskom supstancom izabranom iz grupe koja se sastoji od cisplatina, oksaliplatina, karboplatina, valrubicina, idarubicina, doksorubicina, pirarubicina, irinotekana, topotekana, amrubicina, epirubicina, etopozida, mitomicina, bendamustina, hlorambucila, ciklofosfamida, ifosfamida, karmustina, melfalana, bleomicina, olapariba, MEDI4736 (durvalumab), AZD1775, AZD6738, AZD1390 i AZD0156.