RS61407B1 - Jedinjenja za pospešivanje rasta kose i/ili inhibiranje ili odlaganje gubitka kose kod ljudi, i kompozicije za takve upotrebe - Google Patents

Description

Opis

OBLAST OVOG PRONALASKA

[0001] Ovaj pronalazak se bavi upotrebom jedinjenja za pospešivanje rasta kose i/ili inhibiranje ili odlaganje gubitka kose kod ljudi, i kompozicijama za takvu upotrebu koje obuhvataju takva jedinjenja kao aktivne sastojke.

STANJE TEHNIKE

[0002] Pojam sandalovina se odnosi na klasu stabala od drveća roda Santalum. Esencijalno ulje sandalovine se obično ekstrahuje parnom destilacijom stabla od zrelog drveća sandalovine, i predstavlja dobro poznatu visoko cenjenu komponentu za parfeme.

[0003] Među brojnim različitim upotrebama u oblasti kozmetike, uglavnom koje se odnose na visoko cenjene mirise, ulje sandalovine je takođe predmet patentnih objava koje se odnose na galenske i empirijske preparate za brojne različite upotrebe, koji obuhvataju generički tretman gubitka kose i perut, kao što je na primer patentna objava CN1075250A koja opisuje medicinski ekstrakt, koji je zapravo definisan kao kineski lek, koji obuhvata sandalovinu pomešanu sa pupoljkom cveta magnolije, cvetom ruže, korenom sladića, praškom kore božura, kempferijom, ljiljanom, herbom asari, ginsengom i korenom anđelike.

[0004] CN102000293 i CN103735443 opisuju slične kineske lekove, od kojih je prvi napravljen od mešavine sandalovine, korena anđelike, semenja rizoma kaempferije, talka, svetog bosiljka, prirodnog indiga i narda, a drugi je napravljen od mešavine sandalovine, korena cveta rastućeg flisa, iglica bora i crvene kadulje, koji se primenjuju na kosu.

[0005] Za suštinski sličnu generičku upotrebu, indijska patentna objava IN00177MU2002A opisuje kompoziciju za sprečavanje opadanja koja obuhvata ulje sandalovine pomešano sa kokosovim uljem, uljem eukaliptusa, uljem karanfilića, uljem lavande i uljem ruzmarina.

[0006] Za takve empirijske preparate, konkretna uloga svakog sastojka kao pomešanog u konačnom ulju nije definisana u takvim objavama, tako da ni konkretna uloga sastojka ulja sandalovine u tim mešavinama , bilo u funkciji mirisa ili nečeg drugog, nije određena.

[0007] U svakom slučaju, glavne komponente ulja sandalovine su α-santalol i β-santalol, koji su alkoholi koji u principu pokazuju lanac seskviterpenskog tipa. Strukturna formula α-santalola je:

karakteriše terminalna grupa triciklohept-3-ila ili biciklohept-2-ila, redom.

[0008] Sa druge strane, jedinjenje poznato kao sandalore je sintetičko sredstvo za davanje mirisa koje miriše slično kao sandalovina i koje se samim tim koristi u parfemima, omekšivačima i sredstvima za čišćenje kože u ulozi manje skupog sastojka koji imitira miris sandalovine. Sandalore, kao i strukturno slično jedinjenje čiji je naziv brahmanol, su alkoholi čija je hemijska struktura prilično drugačija od pomenutih sastojaka prirodnog ulja sandalovine, odnosno, α-santalola i β-santalola.

[0009] Zapravo sandalore, ili sandal pentanol, formule:

i brahmanol, ili sandal ciklopentan, formule:

su sintetički molekuli i oba karakteriše terminalna grupa ciklopenten-1-ila i nemaju seskviterpenski lanac. Oni su takođe predmet patentnih objava koje se odnose na tretmane kose u kozmetičkim formulacijama kao što su šamponi i regeneratori za kosu, međutim koriste se samo kao parfemi, zapravo zbog konkretne svrhe upotrebe njihovog svojstva imitiranja mirisa visoko cenjene sandalovine. Na primer EP1561476 opisuje kompozicije dezodoransa za poboljšanje efekata dezodoransa pri čemu, među brojnim supstancama i brojnim upotrebama, upotreba sandalore i brahmanola je takođe opisana u funkciji dezodoransnih mirisa u proizvodima za negu kose kao što su šamponi, regeneratori, proizvodi za ispiranje kose, sredstva za bojenje kose, sredstva za trajne talase, vosak, sprej za kosu i pena. Mirisni materijali prirodnog porekla koji se upotrebljavaju kao mirisi u EP1561476 uključuju ulje sandalovine, a sandalore i brahmanol su definisani kao trgovinski nazivi gore pomenutih materijala, što znači da prema ovom dokumentu nema razlike između mirisa koji obezbeđuje prirodni ekstrakt i njegovih sintetičkih zamena.

[0010] EP1346720 se odnosi na kompoziciju dezodoransa za boju kose sličnog opsega. Ne postoji opis u takvim objavama, čak ni generički, takvih sintetičkih sredstava za davanje mirisa za tretman gubitka kose, ili za pospešivanje rasta kose.

[0011] Prema Busse et al., A Synthetic Sandalwood Odorant Induces Wound-Healing Processes in Human Keratinocytes via the Olfactory Receptor OR2AT4, Journal of Investigative Dermatology, 2014, 134: 2823-2832, sandalore i brahmanol su identifikovani kao agonisti kutanog receptora za miris OR2AT4, i pronađeno je da izazivaju Ca<2+>signale u kultivisanim humanim keratinocitima. Dugoročna stimulacija keratinocita sa sandalore pozitivno utiče na proliferaciju ćelija, migraciju i regeneraciju više slojeva keratinocita u in vitro ispitivanju rane u vidu ogrebotine, a stimulacija sandalore-om pojačava epidermalno zarastanje rana u kulturama organa kože čoveka.

[0012] Prema Busse et al., opisani su dokazi da prirodno ulje sandalovine i druga sintetička sredstva za davanje mirisa sandalovine nisu agonisti receptora za miris OR2AT4 i ne pokazuju isti efekat epidermalnog zarastanja rana.

[0013] Ekspresija receptora za miris (OR) nije ograničena na nazalni epitelijum ali je takođe prisutna u različitim humanim tkivima, videti Feldmesser E, Olender T, Khen M, Yanai I, Ophir R, Lancet D., Widespread ectopic expression of olfactory receptor genes. BMC Genomics.2006 May 22;7:121; Zhang X, Firestein S., Nose thyself: individuality in the human olfactory genome. Genome Biol.

2007;8(11):230; Flegel C, Manteniotis S, Osthold S, Hatt H, Gisselmann G., Expression profile of ectopic olfactory receptors determined by deep sequencing. PLoS One.2013;8(2):55368). Brojna ispitivanja su opisala fiziološke uloge za OR u različitim tipovima humanih ćelija (Kang N, Koo J. Oflactory receptors in non-chemosensory tissues. BMB Rep.2012 Nov;45(11):612-22) kao što su spermatozoe (Spehr M, Gisselmann G, Poplawski A, Riffell JA, Wetzel CH, Zimmer RK, Hatt H. Identification of a testicular odorant receptor mediating human sperm chemotaxis. Science.2003 Mar 28;299(5615):2054-8; Veitinger T, Riffell JR et al, Chemosensory Ca2+ dynamics correlate with diverse behavioural phenotypes in human sperm. J Biol Chem.2011 May 13;286(19):17311-25), epitelijalne ćelije prostate (Neuhaus EM, Zhang W, Gelis L, Deng Y, Noldus J, Hatt H. Activation of an Olfactory Receptor Inhibits Proliferation of Prostate Cancer Cells. J Biol Chem.2009;284(24):16218-16225), i enterohromafinske ćelije crevne flore (Braun T, Voland P, Kunz L, Prinz C, Gratzl M. Enterochromaffin cells of the human gut: sensors for spices and odorants. Gastroenterology.2007 May;132(5):1890-901).

KRATAK SADRŽAJ OVOG PRONALASKA

[0014] Prema ovom pronalasku, iznenađujuće je pronađeno da rast kose može biti pospešen, i da gubitak kose može biti inhibiran ili odložen, na koži glave čoveka upotrebom jedinjenja opšte formule (I):

u kojoj:

R1i R2zajedno formiraju dvostruku vezu, ili R1i R2zajedno formiraju ciklopropilnu grupu; R3, R4su isti ili različiti i nezavisno izabrani od vodonika, metila, ili R3i R4zajedno formiraju dvostruku vezu;

R5, R6su isti ili različiti i nezavisno izabrani od vodonika, metila; ili R5i R6zajedno formiraju dvostruku vezu, ili R5i R6zajedno formiraju ciklopropilnu grupu;

R7= metil, ili etil;

R8= vodonik, ili metil.

[0015] U okviru opsega nove upotrebe prema ovom pronalasku, poželjna jedinjenja formule (I), uključujući gore pomenuti sandal pentanol (jedinjenje 1) i sandal ciklopentan (jedinjenje 5), su prijavljene u tabeli ispod:

[0016] Predmet ovog pronalaska su takođe kompozicije za upotrebu u pospešivanju rasta kose, i/ili inhibiranju ili odlaganju gubitka kose, pogodne za topikalnu primenu na koži glave čoveka, u kojima se jedno ili više jedinjenja formule (I) koriste kao aktivni sastojci, poželjno u količini između 0,1 i 10 masenih % (mas.%), formulisanih sa sastojcima pogodnim za topikalnu primenu.

[0017] Kompozicije ovog pronalaska su pogodne i za kozmetičku i za terapeutsku upotrebu u pospešivanju rasta kose i/ili lečenju gubitka kose na koži glave čoveka, pri čemu je najmanje jedno jedinjenje opšte formule (I) obuhvaćeno kao aktivni sastojak.

DETALJAN OPIS OVOG PRONALASKA

[0018] Kako bi se najbolje razumele karakteristike i prednosti ovog pronalaska, u nastavku su opisani njegovi neograničavajući praktični primeri. Komponente su nazvane prema INCI nomenklaturi.

PRIMERI PRIMER 1

LOSION

[0019]

PRIMER 2

MASKA PRE ŠAMPONA

[0020]

PRIMER 3

STILIZUJUĆI GEL ZA OJAČAVANJE

[0021]

PRIMER 4

REGENERATOR ZA OJAČAVANJE KOSE

[0022]

PRIMER 5

ŠAMPON ZA REVITALIZACIJU

[0023]

PRIMER 6 PENA

[0024]

KRATAK OPIS CRTEŽA

[0025] Uz pozivanje na Fig.1 do 5 crteža u prilogu,

Fig.1 prikazuje slike imunofluorescencije uzete od uzoraka tkiva kože glave čoveka i folikula kose (HF).

Fig.2 prikazuje dijagram koji se odnosi na izduživanje osovine dlake.

Fig.3 prikazuje dijagram koji se odnosi na ciklus rasta kose, uz određenije pozivanje na fazu katagena.

Fig.4 prikazuje dijagram koji se odnosi na proliferaciju i apoptozu keratinocita matrice kose.

Fig.5 prikazuje dijagram koji se odnosi na katagenom-pospešujući faktor rasta TGFβ2.

[0026] Crteži 1 do 5 se bave rezultatima dobijenim u narednom eksperimentalnom ispitivanju, pa su zbog toga detaljno opisani u opisu u nastavku.

EKSPERIMENTALNO ISPITIVANJE

[0027] Pomenuto jedinjenje 1 prema ovom pronalasku, tj. sandal pentanol, je izabrano od jedinjenja formule (I) kako bi se ispitalo zbog eksperimentalnih svrha u nastavku. Sandal pentanol je nazvan Sandalore u dijagramima sa crteža 2-5.

Dizajn ispitivanja

[0028] Kao prva faza, tehnika standardne imunofluorescencije je upotrebljena na delovima tkiva kože glave čoveka zdravih davalaca kako bi se ocenilo da li je OR2AT4 eksprimiran na folikulama kose glave čoveka (HF).

[0029] Zatim, kako bi se ocenilo da li stimulacija OR2AT4 može da utiče na rast kose kod čoveka, mikrodisecirane HF su tretirane sandal pantanolom u koncentraciji od 500 µM, jer je izvedeno merenje agonista i izduživanje osovine dlake (videti Philpott et al., 1990). Pored toga, ispitivanje kinaze je izvedeno kako bi se identifikovalo koji signalizirajući putevi su uključeni u konkretnu stimulaciju OR2AT4 sandal pentanolom.

[0030] Nakon toga, kako bi se potvrdilo da je produženi efekat anagena sandal pentanola konkretan, HF kultura organa je izvedena pomoću sandal pentanola kao agonista i specifičnog antagonista, Phenirat-a (fenoksietil izobutirat), sintetičkog mirisa, videti gore pomenuto pozivanje na Busse et al.

[0031] HF su tretirane ili nosačem, sandal pentanolom, Phenirat-om ili mešavinom sandal pentanola i Phenirat-a. Kako bi se analizirao ciklus kose, Ki67/TUNEL su izvedeni i upotrebljeni da bi se procenio rezultat ciklusa kose i proliferacija i apoptoza keratinocita matrice kose.

[0032] Pored toga, TGFβ2, potentni katagenski induktor, je ispitivan u odnosu na ista gore pomenuta jedinjenja.

[0033] Kako bi se ekspresija OR2AT4 nizvodno regulisala u humanim HF i kako bi se ispitao efekat ovoga kod rasta kose, HF su transfektovane sa OR2AT4-siRNK.

[0034] qRT-PCR i analize (imuno-)histomorfometrijom su korišćene kako bi se uspešno potvrdila siRNK-posredovana nizvodna regulacija OR2AT4 gena i proteina u mikrodiseciranim HF. Konačno, kako bi se ispitalo kako nokdaun R2AT4 utiče na rast kose kod čoveka, Ki67/TUNEL imunofluorescencija je korišćena kako bi se kvantifikovao rezultat ciklusa kose i proliferacija i apoptoza keratinocita matrice.

[0035] Kako bi se proverilo da li nokdaun može da utiče na indukciju katagena, TGFβ2 ekspresija je analizirana imunofluorescencijom.

Materijali i postupci

Uzorci tkiva

[0036] Slepoočna i normalna koža glave sa potiljka je uzeta od zdravih davalaca (u starosnom opsegu od 38 – 69 godina) koji su imali rutinsku operaciju zatezanja lica nakon informisanog pristanka i etičkog odobrenja.

Imunofluorescencija

[0037] OCT ugrađeni uzorci su secirani na delove (6 µm debljina) kriostatom. Delovi su bili fiksirani u 4% paraformaldehidu, prethodno inkubiranom sa 10% kozjeg seruma (za OR2AT4) ili 5% kozjeg seruma 0,3% Tritton X-100 (za pocepane kaspaze 3) i inkubirani odgovarajućim primarnim antitelom na 4°C tokom noći (1/100 za OR2AT4 i 1/400 za pocepanu kaspazu 3). Inkubacija sekundarnog antitela je izvedena na sobnoj temperaturi tokom 45 minuta. Kontrabojenje sa DAPI (1 µg/mL) je izvedeno kako bi se vizualizovala jezgra. Za TGFb2, uzorci su fiksirani u acetonu a endogene peroksidaze su blokirane sa 3% H2O2. Nakon ove faze sledi avidin-biotin blokirajuća faza i pre-inkubacija sa TNB puferom (Tris HCl+NaCl+Casein). Odgovarajuće primarno antitelo je inkubirano na 4°C tokom noći (1/1000 za TGFb2). Inkubacija sekundarnog antitela je izvedena na sobnoj temperaturi tokom 45 minuta pre upotrebe kompleta za pojačavanje signala tiramida (Perkin Elmer). Kontrabojenje sa DAPI je izvedeno kako bi se vizualizovala jezgra. Da bi se obojile apoptičke i proliferujuće ćelije, koristili smo komplet apoptag (Merck Milipore) prema protokolu proizvođača nakon čega je usledilo bojenje Ki67. Primarno antitelo je inkubirano tokom noći (Ki67, 1/20) nakon faze TdT-enzima. Sekundarno antitelo je inkubirano tokom 45 min na sobnoj temperaturi posle fluorescentno-obeležene anti-Digoksigenin faze apoptag kompleta. Kontrabojenje sa DAPI je izvedeno da bi se vizualizovala jezgra. Negativne kontrole su izvedene izostavljanjem primarnog antitela. Slike su snimljene pomoću Keyence fluorescentnog mikroskopa (Osaka, Japan) čime se održava vreme izloženosti konstantnog skupa tokom slikanja za dalje analize. HF kultura organa

[0038] Uzorci kože glave čoveka su dobijena nakon postupka zatezanja lica i upotrebljeni istog dana za mikrodiseciranje HF kože glave humanog anagena. Mikrodisecirane HF kože glave kod čoveka su kultivisane na 37°C sa 5% CO2u minimalno podloge William's E (Gibco, Life technologies) sa dodatkom 2mM L-glutamina (Gibco), 10ng/ml hidrokortizona (Sigma-Aldrich), 10µg/ml insulina (Sigma- Aldrich) i 1% mešavine penicilina/streptomicina (Gibco) (WEM) kako je prethodno opisano (Philpott, 1990;

Kloepper, 2010; Langan et al, 2015).

1) Hemijska stimulacija humanih mikrodiseciranih HF OR2AT4 sandal pentanolom (agonistom) i Phenirat-om (antagonistom)

[0039] Nakon 24h inkubacije, WEM podloga je zamenjena, a HF su tretirane odgovarajućim supstancama tokom 6 dana nakon eksperimentalnih uslova. HF su tretirane ili nosačem (0,1% DMSO), sandal pentanolom (500 µM), Phenirat-om (u odnosu 1:1 sa agonistom), ili mešavinom sandal pentanol+Phenirat.

[0040] Phenirat je dodat 30 min pre sandal pentanola. Izduživanje osovine dlake je mereno dnevno pomoću invertnog binokularnog mikroskopa (Philpott et al., 1990), a podloga kulture je menjana svakog drugog dana. HF su zatim ugrađeni u kriomatricu (Fisher Scientific), a zatim brzinski zamrznuti u tečnom azotu. Delovi debljine 6 µm su izrezani kriostatom i čuvani na -80°C radi dalje imunohistohemijske analize.

Kvantitativna (imuno-)histomorfometrija

[0041] Intenzitet bojenja je procenjen u dobro definisanim referentnim oblastima kvantitativnom (imuno-)histomorfometrijom, kako je prethodno opisano (Bertolini et al., 2014) pomoću NIH IMAGE softvera (NIH, Bethesda, MD, SAD).

Statističke analize

[0042] Svi podaci su izraženi kao srednja vrednost ± SEM i analizirani su jednosmernim Anova ili Kruskall Wallis ispitivanjem kada su više od dve grupe poređene i Studentovim t-testom ili Mann-Whitney testom kada je tretman sandal pentanolom upoređen sa nosačem (Graph Pad Prism 6, GraphPad Software, San Diego, CA, USA).

REZULTATI

[0043] Rezultati su opisani uz pozivanje na priložene crteže Fig.1 do 5.

1) Humane HF eksprimiraju receptor mirisa 2AT4

[0044] Prvo je istraženo prisustvo receptora mirisa 2AT4 (OR2AT4) u HF. OR2AT4 je primećen u keratinocitima anagenskih HF kože glave čoveka suprabulbarnog spoljašnjeg omotača korena (ORS), kako je pokazano imunofluorescencijom na Fig.1. Slike A) do D) sa Fig.1 predstavljaju OR2AT4 imunofluorescenciju u HF na koži glave čoveka (videti sliku A i odgovarajuća uvećanja) i mikrodisecirane HF (videti slike B-D i odgovarajuća uvećanja) od tri različita davaoca (n=3). CTS označava omotač vezivnog tkiva, DP označava dermalnu papilu, HM označava matricu kose, IRS unutrašnji omotač korena, ORS spoljašnji omotač korena, HS osovinu dlake, HB bulba kose, HF folikule kose. Isprekidane linije ocrtavaju IRS (unutrašnji omotač korena), ORS (spoljašnji omotač korena) i DP (dermalna papila).

[0045] Fig.1 prikazuje da je OR2AT4 izražen u keratinocitima anagskih HF kože glave čoveka suprabulbarnog spoljašnjeg omotača korena (ORS) i u suprabulbarnom i bulbarnom ORS, i keratinocitima vrhova matrice kose u mikrodiseciranim anagenskim HF.

[0046] Mikrodisecirane anagenske HF (Philpott model) su otkrile OR2AT4 ćelije u bulbi kose, naime u ORS i vrhovima matrice kose (HM), videti Fig.1B, pored karakteristične suprabulbarne intrafolikularne ekspresije, videti Fig.1D.

2) Specifična stimulacija OR2AT4 sandal pentanolom pospešuje izduživanje osovine dlake i inhibira apoptički signalizirajući put

[0047] Da bi se proverilo da li aktivacija OR2AT4 može da utiče na ciklus kose humane HF, mikrodisecirane humane HF su specifično stimulisane potencijalnim agonistom, sandal pentanolom. Efekat tretmana sandal pentanolom je procenjen merenjem izduživanja osovine dlake u poređenju sa nosačem.

[0048] HF izduživanje je izmereno u kultivisanim mikrodiseciranim HF. Srednja vrednost ±SEM, n=18 HF za svakog davaoca, 2 davaoca, Studentov t-test, Graph Pad Prism 6. Uprkos inter-individualnim razlikama, rezultati su otkrili da sandal pentanol u koncentraciji od 500µM stimuliše izduživanje osovine dlake kultivisanih mikrodiseciranih HF dobijenih od dva davaoca, kako je prikazano na dijagramu Fig.2 koji prijavljuje % izduživanja nasuprot dana kulture, sandalore u poređenju sa nosačem.

3) Aktivacija OR2AT4 sandal pentanolom značajno odlaže indukciju katagena i smanjuje apoptozu u keratinocitima matrice kose kod čoveka

[0049] Da bi se istražila specifičnost ovog efekta na rast kose OR2AT4 stimulacije sandal pentanolom, mikrodisecirane HF su bile kultivisane sandal pentanolom i/ili Phenirat-om, i ciklus kose je izveo analizu po fazama kako je prethodno opisano (Kloepper, 2010; Langan et al, 2015). Rezultat ciklusa kose je izmeren i u tretiranim i HF nosača nakon 6 dana kulture. N=16-24 HF-ova od 3 pacijenta, srednja vrednost ±SEM, Kruskal Wallis-ov test i Dunn-ov test višestrukog poređenja kao post hoc test, ns, Mann-Whitney test, #p<0,05, Graph Pad Prism 6.

[0050] Dobijeni rezultati znače da je specifična stimulacija OR2AT4 samim sandal pentanolom u koncentraciji od 500µM odložila indukovanje katagena u tretiranim HF u poređenju sa nosačem nakon 6 dana kulture, kako je prikazano na dijagramu sa Fig.3. Nasuprot tome, obe uporedne reference sam Phenirat i mešavina sandal pentanola data zajedno sa Phenirat-om nisu produžile anagen u tretiranim HF u poređenju sa nosačem. Podaci ukazuju da stimulacija OR2AT4 sandal pentanolom pospešuje odlaganje kategena, dok na ove efekte, kada se koristi Phenirat, OR2AT4 inhibicija ima suprotan efekat.

[0051] Da zaključimo, Fig.3 prikazuje da jedinjenje ovog pronalaska značajno odlaže razvoj katagena.

4) Sandal pentanol značajno smanjuje apopotozu keratinocita u matrici kose

[0052] Uz pozivanje na dokaze sa Fig.4, da bi se istražilo da li sandal pentanol utiče na proliferaciju i apoptozu keratinocita u matrici kose, izvedeno je Ki67/TUNEL bojenje. Proliferišući (dijagram sa Fig.4A) i apoptički (dijagram sa Fig.4B) keratinociti iz matrice kose su prebrojani u matrici kose tretiranih i HF nosača. Reprezentativne slike Ki67/TUNEL su prikazane na Fig.4 od C do E. Srednja vrednost ±SEM, n=18-21 HF od 33 pacijenta, Kruskal-Wallis-ov test i Dunn-ov test višestrukog poređenja kao post hoc test, **p<0,01, ***p<0,001, Mann-Whitney-ov test #p<0,05, Graph Pad Prism 6.

[0053] Nakon 6-dneven kulture, proliferacija keratinocita iz matrice kose nije promenila HF tretirane sandal pentanolom ili samim Phenirat-om. Međutim, zajednička primena specifičnog antagonista OR2AT4, Phenirat-a, zajedno sa sandal pentanolom je izazvala značajno smanjenje proliferacije keratinocita u matrici kose kako je prikazano na Fig.4A.

[0054] Tretman sandal pentanolom je značajno smanjio apoptozu keratinocita u matrici kose, dok je zajednička primena sandal pentanol+Phenirat značajno povećala apoptozu keratinocita u matrici kose, kako je prikazano na Fig.4B.

5) Specifična stimulacija OR2AT4 sandal pentanolom značajno je smanjila katagenom-pospešujući faktor rasta TGFβ2

[0055] Uz pozivanje na dokaze sa Fig.5, da bi se dalje istražilo kako OR agonist i antagonist utiču na rast HF, ekspresija relevantnog katagenom-pospešujućeg faktora rasta tokom fiziološkog humanog HF ciklusa tj.TGFβ2 (Soma et al., 2002), je ispitana u proksimalnim OR. Nakon tretmana od 6 dana sandal pentanolom, primećeno je značajno smanjenje u ekspresiji TGFβ2 na proteinskom nivou, dok nijedna promena nije detektovana blokiranjem receptora Phenirat-om. U ovom slučaju zajednička primena sandal pentanola sa Phenirat-om je pokazala uporediv rezultat dobijen primenom samog sandal pentanola, kako je prikazano na dijagramu na Fig.5A. Ekspresija TGFβ2 je izmerena u keratinocitima ORS i u tretiranim i HF nosača.

[0056] Odgovarajuće reprezentativne slike TGFβ2 imunofluorescencije su prikazane na Fig.5, B (nosač), C (Sandalore), D (Sandalore+ Phenirat).

[0057] TGFβ2 ekspresija je kvantifikovana pomoću Image J. Srednja vrednost ±SEM, n=14-22 HF od 2 pacijenta, Kruskal-Wallis-ovog i Dunn-ovog testa višestrukog poređenja kao post hoc testa, *p<0,05, ***p<0,001, i Mann-Whitney-ovog testa, ns. Graph Pad Prism 6.

Zaključci

[0058] Gornji rezultati u celosti prikazuju da OR2AT4 predstavlja modulator rasta kose a jedinjenje ovog pronalaska predstavlja agens za produžavanje anagena. Stimulacija OR2AT4 jedinjenjem ovog pronalaska povećava izduživanje osovine dlake i odlaže fazu prelaza katagena, dok se taj efekat ne dobija OR2AT4 inhibitorom Phenirat, i suštinski kontrareaguje kada se jedinjenje ovog pronalaska daje

Claims (16)

1. zajedno sa Phenirat-om. [0059] Stimulacija OR2AT4 jedinjenjem ovog pronalaska modulira apoptičke signalizirajuće puteve i značajno smanjuje apoptozu u keratinocitima matrice kose kod čoveka, dok se ovaj efekat ne dobija sa Phenirat-om i suštinski kontrareaguje kada se jedinjenje ovog pronalaska primenjuje zajedno sa Phenirat-om. Stimulacija OR2AT4 jedinjenjem ovog pronalaska značajno smanjuje relevantni katagenom-pospešujući faktor rasta, dok se ovaj efekat ne dobija sa Phenirat-om. [0060] Uopšteno govoreći, eksperimentalni dokazi pokazuju da jedinjenja formule (I) kako je gore definisano mogu efektivno da se upotrebljavaju za pospešivanje rasta kose i/ili inhibiranje ili odlaganje gubitka kose na koži glave čoveka. Patentni zahtevi 1. Kozmetička upotreba jedinjenja opšte formule (I):

   u kojoj: R1i R2zajedno formiraju dvostruku vezu, ili R1i R2zajedno formiraju ciklopropilnu grupu; R3, R4su isti ili različiti i nezavisno izabrani od vodonika, metila, ili R3i R4zajedno formiraju dvostruku vezu; R5, R6su isti ili različiti i nezavisno izabrani od vodonika, metila; ili R5i R6zajedno formiraju dvostruku vezu, ili R5i R6zajedno formiraju ciklopropilnu grupu; R7= metil, ili etil; R8= vodonik, ili metil, za pospešivanje rasta kose i/ili inhibiranje ili odlaganje gubitka kose na koži glave čoveka.
2. 2. Upotreba prema zahtevu 1 naznačena time, što jedinjenje formule (I) predstavlja 3-metil-5-(2,2,3-trimetilciklopent-3-en-1-il)pentan-2-ol.
3. 3. Upotreba prema zahtevu 1 naznačena time, što jedinjenje formule (I) predstavlja (4Z)-3-metil-5-(2,2,3-trimetilciklopent-3-en-1-il)pent-4-en-2-ol.
4. 4. Upotreba prema zahtevu 1 naznačena time, što jedinjenje formule (I) predstavlja 1-metil-2-((1,2,2-trimetilbiciklo(3.1,0)heks-3-il)metil)-ciklopropanmetanol.
5. 5. Upotreba prema zahtevu 1 naznačena time, što jedinjenje formule (I) predstavlja (E)-3,3-dimetil-5-(2,2,3-trimetilciklopent-3-en-1-il)pent-4-en-2-ol.
6. 6. Upotreba prema zahtevu 1 naznačena time, što jedinjenje formule (I) predstavlja 2-metil-4-(2,2,3-trimetil-3-ciklopenten-1-il)butanol.
7. 7. Upotreba prema zahtevu 1 naznačena time, što jedinjenje formule (I) predstavlja (E)-2-etil-4-(2,2,3-trimetilciklopent-3-en-1-il)but-2-en-1-ol.
8. 8. Upotreba prema zahtevu 1 naznačena time, što jedinjenje formule (I) predstavlja (E)-2-metil-4-(2,2,3-trimetil-3-ciklopenten-1-il)-2-buten-1-ol.
9. 9. Kozmetička upotreba kozmetičke kompozicije za pospešivanje rasta kose i/ili inhibiranje ili odlaganje gubitka kose na koži glave čoveka, pri čemu pomenuta kozmetička kompozicija kao aktivni sastojak obuhvata najmanje jedinjenje formule (I):

   u kojoj R1i R2zajedno formiraju dvostruku vezu, ili R1i R2zajedno formiraju ciklopropilnu grupu; R3, R4su isti ili različiti i nezavisno izabrani od vodonika, metila, ili R3i R4zajedno formiraju dvostruku vezu; R5, R6su isti ili različiti i nezavisno izabrani od vodonika, metila; ili R5i R6zajedno formiraju dvostruku vezu, ili R5i R6zajedno formiraju ciklopropilnu grupu; R7= metil, ili etil; R8= vodonik, ili metil.
10. 10. Kozmetička upotreba kozmetičke kompozicije prema zahtevu 9 naznačena time, što kao aktivni sastojak obuhvata najmanje jedinjenje formule (I) u količini između 0,1 i 10 masenih % (mas.%), formulisano sa sastojcima pogodnim za topikalnu primenu.
11. 11. Kozmetička upotreba kozmetičke kompozicije prema zahtevu 9 naznačena time, što jedinjenje formule (I) predstavlja 3-metil-5-(2,2,3-trimetilciklopent-3-en-1-il)pentan-2-ol i/ili 2-metil-4-(2,2,3-trimetil-3-ciklopenten-1-il)butanol.
12. 12. Jedinjenja opšte formule (I):

    u kojoj: R1 i R2 zajedno formiraju dvostruku vezu, ili R1 i R2 zajedno formiraju ciklopropilnu grupu; R3, R4 su isti ili različiti i nezavisno izabrani od vodonika, metila, ili R3 i R4 zajedno formiraju dvostruku vezu; R5, R6 su isti ili različiti i nezavisno izabrani od vodonika, metila; ili R5 i R6 zajedno formiraju dvostruku vezu, ili R5 i R6 zajedno formiraju ciklopropilnu grupu; R7 = metil, ili etil; R8 = vodonik, ili metil, za terapeutsku upotrebu u pospešivanju rasta kose i/ili lečenju gubitka kose na koži glave čoveka.
13. 13. Farmaceutska kompozicija za upotrebu u pospešivanju rasta kose i/ili lečenju gubitka kose na koži glave čoveka, naznačena time, što kao aktivni sastojak obuhvata jedinjenje opšte formule (I):

    u kojoj: R1 i R2 zajedno formiraju dvostruku vezu, ili R1 i R2 zajedno formiraju ciklopropilnu grupu; R3, R4 su isti ili različiti i nezavisno izabrani od vodonika, metila, ili R3 i R4 zajedno formiraju dvostruku vezu; R5, R6 su isti ili različiti i nezavisno izabrani od vodonika, metila; ili R5 i R6 zajedno formiraju dvostruku vezu, ili R5 i R6 zajedno formiraju ciklopropilnu grupu; R7 = metil, ili etil; R8 = vodonik, ili metil.
14. 14. Farmaceutska kompozicija za upotrebu prema zahtevu 13 naznačena time, što kao aktivni sastojak obuhvata najmanje jedinjenje formule (I) u količini između 0,1 i 10 masenih % (mas.%), formulisano sa sastojcima pogodnim za topikalnu primenu.
15. 15. Farmaceutska kompozicija za upotrebu prema zahtevu 13 naznačena time, što kao aktivni sastojak obuhvata jedinjenje 3-metil-5-(2,2,3-trimetilciklopent-3-en-1-il)pentan-2-ol.
16. 16. Farmaceutska kompozicija za upotrebu prema zahtevu 13 naznačena time, što kao aktivni sastojak obuhvata jedinjenje 2-metil-4-(2,2,3-trimetil-3-ciklopenten-1-il)butanol.